TW397866B - Enzymatic processes for the resolution of enantiomeric mixtures of compounds useful as intermediates in the preparation of taxanes - Google Patents

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B7 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 五、發明説明（1 ) 本發明是有關化合物對映異構混合物之酵索解析法， 此化合物可充作紫杉烷製備之中間物，特別是製備其c-13側鏈含有雜環或環烷基之紫杉烷。 紫杉烷爲二萜烯化合物，可應用於薬學領域中。如， 含有雜環或環烷基在C_13側鏈之紫杉醇類似物可作爲 抗癌劑。此種紫杉醇類似物可經由半合成路徑製備，特別 是經由Θ —內醯胺或開鏈中間物與紫杉烷核心偶合在C 一 1 3上形成側鏈。由於這些類似物之立髏化學會影響其薬 學活性，因此使中間物內1醯胺及開鏈化合物，以及紫 杉烷終產物可有效地立體特異性製備之方法在技藝中一直 被尋求。 本發明提出使化合物之對映異構混合物，較好是外消 旋混合物可解析之有效方法，而此化合物可充作C 一 1 3 側鏈含有雜環或環烷基之紫杉烷在製備時之中間物，且因 此可用於立體特異地製備這些化合物。 特言之，本發明提出解析含有對映異構物I a及I b 之混合物I之方法，其中R1在I a及I b中相對於R2 係在順式位置，或其中R1在la及I b中相對於R 2係在 反式位置： R1 R2 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) (la) and

本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29*7公釐） 83. 3.10,000 經濟部中央標华局貝工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（2 ) 其中 R1是羥基：鹵；或一 0 — C (0) — R4，其中R4 是烷基，烯基，炔基，芳基，環烷基，環烯基或雜環基； R 2是雜環或環烷基：且 R3 是氣，R4· — C〈0) — 〇R4;或一 C (0) 一 R4，其中R4獨立選自上示之R 4基團； 此方法包括將該混合物I與可催化化合物I a或I b 中之一立體選擇性轉化成非對映異構型之酵索或微生物接 觸，並達成該轉化作用。 本發明也提出混合物I V解析之方法，混合物I V包 括對映異構物I V a及I V b : R2-Ta-C(0)-OR6 (IVa) and 及 R2-Tb-C(0)-〇R^ (IVb) 其中 T &是 w R1

=I -CH—CH —

W R1 f I 且 T b 是 一 CH—CH — ； ；或 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 訂 I I 银 --- (請先閱讀背面之注意事項再^本頁) A7 B7 五、發明説明（ τ β是

WICH

H W-ESO

是 b 且 T

JR

Is Η wf-c 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 其中R1在I V a及I Vb中，相對於W基團是在赤 式位fi，或其中R1在IVa及IVb中，相對於W基團 是在異赤式位置； W 是—NHR3 或—N3; R1是羥基：鹵；或一0 — C (Ο) — R4，其中R4 是烷基，烯基，炔基，芳基，環烷基，環烯基或雜環基： R 2是雜環基或環烷基； R3 是氫；R4; — C (〇) — OR4;或—C (0) —R4，其中R 4獨立選自如上R 4所示；且 R6是氫；或R4，當R4獨立選自如上R4所示； 此方法包括將該混合物I V與可催化該化合物I V a 或I V b之一立體選擇性轉化成非一對映異構型之酵素或 微生物接觸，並達成該轉化作用。 上述立體選擇性轉化作用之實例包括：立體選擇性水 解作用，立體選擇性酯化作用，立體選擇性酯基轉移作用 及立體選擇性脫鹵作用，特別是選擇性卞解作用或酯化作 用0 在I及I V化合物上之基團，如羥基在本發明之解析 I----------f------tT—^-----t (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000

(Ib(l)) •裝· A7 B7 五、發明説明（4 ) 法中可視所需保護之；接下來此種基團可視所需去保護。 本發明方法進一步描述於下。 鼴^對映異構物 以下的順式對映異構物對可以本發明之酶促方法分離

and (Ia(l)) 即，對映異構物I a及I b，其中R1在I a及I b中相 對於R 2係在順式位置。 較佳依據本發明方法如上述解析順式對映異構物之混 合物。 反式對映異構物 以下的反式對映異構物對可以本發明之酶促方法分離 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消费合作社印聚

and (Ia(2))

〇, R3 (lb(2)) 即，對映異構物I a及I b，其中R1在丨a及I b中相 對於R 2係呈反式位置。 83. 3.10,000 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 A 7 B7五、發明説明（5 ) 赤式對映县構物以下的赤式對映異構物對可以本發明之酶促方法分離 W Rl - ^ R2— CH —CH—C(0)-0R6 ’⑴） 及 W R1 R2— CH —CH—C(0)-0R6 aVb(1)) :或 R1 w • : R2— CH —CH一C(0)-0R6 W2)) 及 ψ W _2 » r R—CH—CH—C(0)-〇r6 CIVb(2)) I即對映異構物IVa及IVb，其中在IVa及 I V b中R1相對於W基團是在赤式位置。異赤式對映異構物以下的異赤式對映異構物對可以本發明之酶促方法分離： W R1M = T R 一 CH-CH—C(〇)-〇R6 (TVa(3))及 ----------抑衣------ΐτ------m --. (請先閲讀背面之注意事項再_本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3. 10,000 A7 B7

五、發明説明（6 ) Wf R2 — CH. R1f R2 — CH R1 !h—c(0)-〇r6 卿)) :或 W -CH—C(0)-0R6 (IVa(4)) 及 R1 w R2— CH—CH—C(0)-0Rg aVb(4)). 即，IVa及IVb對映異構物，其中R1在IVa及I V b中相對於W基團是在異赤式位置。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 解析混合物I之較佳方法 包括一內醯胺la及lb對映異構混合物之混合物 I ，較好以立體特異之水解，酯化或脫鹵作用解析。解析 含有對映異構物la (1)及lb (1)混合物I之特隹 方法：

、1T 嗥- 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

and 师)）

Rl4 R2

(Ib(l))

以形成含有化合物Ila ( 1 )及lib ( 1 )之混合物II 83. 3.10,000 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） A7 B7 五、發明説明（7 )

(Had)) ik

Rlb‘ .R2

〇， 其中 R 2是雜環基或環烷基；且 R3是氫；R4; —C (Ο) - OR4;或—C (0·) R4，其中R4是烷基，烯基，炔基，芳基，環烷基，環 烯基或雜環基： 此方法包括下列（i )， 或 步驟 經濟部中央橾準局員工消费合作社印製 之一： (i )其中 R1是一 0 — C (0) — R4，其中R4獨立選自上示 之R4;且1^1&或尺11>之一和R1相同，且1?1&或1?111另一 者是羥基； 步驟是在水及/或有機醇存在下，將該混合物I與可 催化混合物I立體選擇性水解成混合物π之酵素或微生物 接觸：或者 (i i )其中 R 1是羥基；且 1?1&或1^115之一是羥基，且另一者是R4— C ( 0 ) —0 —，其中R4獨立自上示之R4基團： 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 83. 3.10,000 -10 - A7 B7 五、發明説明（8 ) 步騍是在化合物ΠΙ存在下，將該混合物

R 4- C ( Ο ) - L (III ) 其中R4如上尺1&或1^11>所定義，且L是離去基團， 與可催化混合物I立體選擇性酯化成混合物II之酵素或微 生物接觸：或 (i i i )其中 R 1是鹵原子：且 R 1&或R 115之一是鹵，且另一者是羥基； 步驟包括在氫氧化物雜子供予體存在下，將該混合物 I與可催化混合物I立體選擇性脫鹵成混合物II之酵素或 微生物接觸。 上述方法可應用於解析本發明其他的對映異構混合物 ，然而以解析上述順式對映異構物I a ( 1 )及I b ( 1 〉爲較佳。 請- 先 閱 -¾ - 背 面 之 注 意 事 項 再f( 本 頁 裝 訂 經濟部中央標準局負工消费合作社印製 解析混合物IV之較佳方法 混合物I V較好經由立體選擇性水解，酯化，脫鹵或 酯基轉移作用而解析。解析包括對映異m體I v a ( 1 ) 及ivt) (1)之混合物IV之特佳方法： R3HN R1 i = R2—CH一CH—C(0)-OR6 (IVa(l)) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -11 - A7 B7 經濟部中央橾準局員工消費合作社印製 五、 發明説明（9 ) 及 r3hn r1 f V R2一CH一CH —C(Q)-OR6 (IVb(l)) 以 形 成 包括V a ( 1 ) 及 V b ( 1 )之混合物V : r3hn Rla R2—CH— -0H — C(0)-0R6 (Va(l)) 及 R3HN Rlb ▼ R2—CH— CH—€(〇h〇R6 (Vb(l)) 其 中 R 2是雜環或環烷基； R 3是氫；R 4 t C ( 0 ) —0 R 4 :或—C (0 ) — R 4 ，其中R 4是 焼基 ， 烯 基， 炔基，芳基，環烷 基，環 烯 基 或雜環基；且 R 6是氫；或K 4 , 其 中 R 4獨立選自上示之R4 基團： 此 方法包括下 列（ i ) ，( i i )或（i i ί )步驟 之 — • • ( i )其中 R 1是—〇一 C :(0) - -R 4 ，其中R 4獨立選自上示 之 R 4基圃 ·日 czs tan ， Μ. R 1<1或R lb之 —和 R 1相同且另一者是羥基： 步 驟包括將混 合物 I V 在水 及/或有機醇存在 下，與 可 催 化 混合物I V 立體 選 擇 性水解成混合物V之酵 素或微 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） 83. 3.10,000 請 先 閱 讀- 背 之 注 意 事 項 再 ί( 本 頁 裝 -12 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（10 ) 生物接觸：或者 (i i )其中 R 1是羥基；且 之—是羥基，且另一者是r4— c (〇) —〇 -，其中R4是獨立選自上示之r4基團；

步驟包括在化合物ΠΙ存在下，將混合物I V R 4 - C ( 〇 ) 一 L ( III ) 其中R4如Rla或Rlb所定義，且L是離去基團， 與可催化混合物IV立體選擇性酯化成混合物V之酵 素或微生物接觸：或者 (i i i )其中 R 1是鹵原子；且 尺^或尺^之一是鹵，且另一者是羥基； 步驟包括在氫氧化物離子供予體存在下，將混合物 IV與可催化混合物IV立體選擇性脫齒成混合物V之酵 素或微生物接觸。 將包括對映異構物IVa ( 1 )及IVb ( 1 )之混 合物IV解析之進一步特佳方法： R3HN R1 Ξ = R2—CH——CH—C(0)-0R6 (IVa(l)) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 83.3.10,000 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝

、1T -13 - 經濟部中央標準局員工消费合作社印製

A7 B7五、發明説明（11 ) 及 R3HN R1 R2—CH—CH — C(0)-0R6 (IVb(l)) 以形成包括化合物IVa ( 1 )及IVb ( 1 )之混合物 V I ： r3hn R1 R2—CH—CH —C(0)-0R6a (via(l)) 及 R3HN R2—CH—CH — C(0)-0R6b (Vlb(l)) 其中 R1是羥基；鹵；或一0 — C (0) —R4，其中R4 是烷基，烯基，炔基，芳基，環烷基，環烯基或雜環基； R 2是雜環基或環烷基；且 R3 是氫；R4; — C (0) — OR4;或—C (0) 一 R4，其中R4獨立選自上示之R4基團； 方法包括下列（i ) ，（ i i )或（i i i )步驟之 (i )其中 R 6是氫；且 R6a*R6b之一是氫且另一者是R -，其中R4獨立選 自上示之R 4基團； 此步驟係在式V II有機醇存在下，將該混合物I V 訂 辕 (請先閱讀背面之注意事項再本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3. 10,000 A7 B7 V II ) 五、發明説明（I2 ) R 4- Ο Η 其中R 4如上R 6&或R 6b所定義，與可催化混合物 1V立壢選擇性酯化成混合物VI之酵素或微生物接觸： 或者 (i i )其中 R6是R4，其中R4獨立選自上示之R4基團；且 R 或R 6b之一和R 6相同，且另一者是氫； 步驟包括在水存在下，將混合物I V與可催化混合物 IV立體選擇性水解成混合物VI之酵素或微生物接觸； 或者 (i i i )其中 R 6是R 4，其中R 4獨立選自上示之R 4基團；且 尺“或尺心之一和R6相同，且另一者是R7，其中 R7是烷基，烯基，炔基，芳基，環烷基，環烯基或雜環 基，除了 R7和R6不相同；

步驟包括在式V III有機醇存在下，将混合物I V R 7 - Ο Η ( V HI ) 其中R 7如上文般定義，與可催化混合物I V立體選 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210Χ297公釐） ----------裝------IT (請先閲讀背面之注意事項再5k本頁) 經濟部中央標準局貝工消资合作社印製 83. 3.10,000 15

經濟部中央標準局負工消費合作社印$L A7 __B7 _ 五、發明説明（13 ) 擇性酯基轉移作用成混合物VI之酵素或微生物接觸。 上述方法可用於解析本發明其他的對映異構混合物， 然而以解析上述對映異構物IVa ( 1 )及IVb ( 1 ) 爲較佳。 如此製備之化合物對，如II a ( 1 )及II b ( 1 )， 爲非對映異構的，且接下來可分離以生成具旋光性，較好 是光學上純的化合物。光學純度大於9 9 %，特別是以 9 9 . 5 %較佳。 本發明也提出混合物I或I V化合物，其實質上無其 他異構物，此化合物可以本發明方法製備。 所謂I立體選擇性轉化作用'如此中所用的係指相對 於另一者之一對映異構物之差別反應，即不對稱的對映選 擇性反應。另外，所謂的'^立體選擇性水解# ，'立體選 擇性酯化'，^立體選擇性脫鹵'及 '立體選擇性酯基轉 移#係指相對於另一者之一對映異構物分別的差別水解， 酯化，脫鹵及酯基轉移作用。 所謂'' 混合物'此名詞在此相關於對映異構化合物， 表示具有對映異構物相當（外消旋）或非相當量之混合物 0 所謂1解析'如此中所用表示部份，以及較好完全的 解析。 所謂"非對映異構型"如此中所用的表示源自對映異 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 83. 3.10,000 ----------t------IT------'i (請先閲讀背面之注意事項再^本頁) -16 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（14 ) 構對之一之化合物結構，其中至少一基團已被修飾，如此 該化合物不再是源自對映異構之另一化合物之鏡像。 所謂 '酶促過程^或、酶促方法"如此中所用的表示 本發明應用酵素或微生物之方法。 所謂、烷基，，、alkan，或、alk，如此中 單獨的或呈另一基團之部份，表示直及分支之鏈，視所需 經取代之烴基，含1至1 5個碳在正常鏈上，較好1至6 個碳，如甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，第三丁基， 異丁基，戊基，己基，異己基，庚基，4，4 一二甲基戊 基，辛基，2，2 ，4 一三甲基戊基，壬基，癸基，十一 碳基，十二碳基，其各種分支鏈異構物等。示例之取代基 包括一個以上選自下列之基團：鹵（尤其是氯），三鹵甲 基，烷氧基（如二個烷氧基取代基形成一個縮醛），芳基 如未經取代之芳基，烷基-芳基或齒芳基，環烷基如未經 取代之環烷基或烷基-環烷基，羥基，或經保護之'羥基， 羧基，烷氧羰基，烷胺基，烷羰胺基，胺基，芳羰胺基， 硝基，氰基，硫醇或烷硫基。 所謂 '烯基'此中單獨應用或爲另一基團之部份，表 示如烷基之視所需經取代之基團，進一步含有至少一個碳 碳雙鍵。示例之取代基包括一個以上如上述之烷基及/或 一個以上如上述之烷基取代基。 所謂 '炔基'此中單獨應用或爲另一基團之部份，表 示如上述烷基之視所需取代之基團，進一步含至少一個碳 碳參鍵。示例之取代基包括一個以上如上述之烷基及/或 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）~~: 83. 3.10,000 -17 - —i n I I I » 訂-^ ,/f · (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（l5 ) —個以上如上述之烷基取代基。 所謂*環烷基’如此中單獨應用或爲另一基團之部份 ，表示視所需經取代之飽和環狀烴基，含有1至3個環及 3至1 2個環碳，·較好3至8個環碳，如環丙基，環丁基 ，環戊基，環己基，環庚基，環辛基，環癸基，環十一碳 基及金剛烷基。示例之取代基包括一個以上如上述之烷基 ，及/或一個以上如上述之烷基取代基。 所謂'"環烯基'如此中單獨應用或爲另一基團之部份 ，表示如上述環烷基之視所需經取代之基團，進一步在環 系中含有至少一個碳碳雙鍵。示例之取代基包括一個以上 如上述之烷基及/或一個以上如上述之烷基取代基。 所謂 '芳基'或’a r'如此中單獨應用的或爲另一 基團之部份，表示視所需經取代之同環芳族基，較好是單 環或二環含由6至12個碳在環部位，如苯基，聯苯基， 某基，經取代之苯基，經取代之聯苯基或經取代之菜基。 示例之取代基（較好3個以下）包括一個以上的下列基團 :烷基，如未經取代之烷基，齒烷基，或環烷基一烷基， 鹵，烷氧基如未經取代之烷氧基或鹵烷氧基，羥基，芳氧 基如苯氧基，R4—羰基氧基，其中R4是如上文般定義， 烯丙基，環烷基，烷胺基，二烷胺基，醞胺基如烷基羰胺 基或芳基羰胺基，胺基，硝基，氟基，迖基，硫醇，R4 —羰基，其中R 4如上文般定義，或亞甲二氧基，其中亞 甲基可爲1或2個低碳烷基，1或2個芳基烯基，及/或 1或2個烷硫基所取代。特佳之芳基爲苯基及經取代之苯 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ~83.3.10,000 -18 - ----------裝------、訂------ f (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標华局員工消f合作社印製 A7 B7五、發明説明（16 ) 基，尤其是苯基爲一個以上羥基，烷基及/或烷氧基所取 代。 所謂、鹵〃或'h a 1 〇#如此中單獨應用或爲另一 基團之部份是指氯，溴，氟及碘。 |雜環基'或 '雜環的#如此中單獨使用或爲另一基 團之部份，表示視所需經取代之完全飽和或不飽和之單環 或二環，芳族或非芳族烴基，在至少一個環上有至少一個 雜原子，且較好在各環上有5或6個原子。雜環基較好在 環中有1或2個氧原子，1或2個硫原子及/或1至4個 氮原子，且可經由碳或雜原子鍵結至分子其餘部份。本例 之取代基包括一個以上下列基團：鹵，烷氧基，羥基，芳 基如苯基或鹵苯基，烷醯氧基，芳羰氧基如苄酿氧基，烷 基如芳烷萆，烷胺基，烷醯胺基，芳羰胺基，胺基，硝基 ，氛基及硫醇。示例之雜環基包括二_吩基，呋喃基，吡 咯基，吡啶基，咪唑基，吡咯啶基，六氫吡啶基，吖丁陡 基，蚓跺基，異蚓跺基，喹啉基，異II啉基，苯並瞎唑基 ，苯並嘴唑基，苯並咪唑基，苯並曙二唑基，及苯並呋喃 基。 所謂、羥基保護基'如此中所用的表示可保護自由態 羥基之基團（1經保護之羥基# )，其任應用保護作用之 反應後，可在不干擾分子其餘部份下移人。羥基之各樣保 護基及其合成可見於％ P r q t c t i V e G r d in b i η Ο r g a n i c Synthesis,’ by Τ.Ψ. Gveene, John iiley and Sons, 1981,或Fiser & Fiser。可供示例之羥基保護基包括： 請. 先 閱 讀- 背 Λ 之 注 項 再脣( 本 頁 裝 訂 本紙張尺度適用争國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 83.3.10,000 經濟部中央標準局月工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（17 ) 甲氧甲基，1—乙氧乙基，苄氧甲基，（/? 一三甲基矽烷 基乙氧基）甲基，四氫吡喃基，2，2，2~三氯乙氧羰 基，第三丁基（二苯基）矽烷基，三烷基矽烷基，三氯甲 氧羰基，及2，2，2 —三氯乙氧甲基。 起始物質 本發明方法之起始物可如此中實例所述般得到，或利 用類似美國專利案No. 0 7/8 2 2 1 0 1 5 (公告於 1 9 9 2年1月1 5日）所述方法。 起始混合物I或IV，可含有化合物I a及I b或 I V a及I V b之非對映立體異構物，然而較好此種化合 物在進行本發明酶促解析法前先分離。 較佳化合物 式I之順式化合物具有立體異構構型，其爲製備帶有 C 一 1 3側鏈之紫杉烷之較佳中間物。具有相同絕對立體 構型之混合物I及II化合物，相當於化合物I a，其中 R1是乙醯氧基，R2是呋喃基，且R3是氫於3 R，4 S 構型者爲特佳。 具有立體異構構型之式I V赤式化合物，爲製備帶有 C一13側鏈之紫杉烷之較佳中間物。具有相同絕對立體 構型之混合物IV，V及V I化合物，相當於式IVa ( 1 )化合物，其中R1是羥基，R 2是呋喃基，W是 — NHR3且R3是氫，且R6是氫於2 R，3 S構型者爲 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0X297公釐） 83.3. !〇,〇〇〇 -----------装------tr------1 -- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -20 - 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 A7 B7 五、發明説明（18 ) 較佳。於混合物I V中，Ta = r3hn r1 z : • — —CH —CH — 且T b = r3hn r1 f f —CH——CH一 爲較佳。 式I 点一內醯胺之解析爲較佳。 於本發明之化合物中，R1較好是烷醯氧基，如經取 代之烷醢氧基（如乙醯氧基），或羥基；R 2較好是呋喃 基或瞎吩基；且R3較好是氫，苯基，經取代之苯基，苯 基羰基，經取代之苯基羰基，烷基羰基，烯基羰基或烷氧 羰基如第三丁氧羰基。R 6較好是氫或Ci-6烷基如甲基。 酵素及微生物 應用於本發明方法中之酵素或微生物可爲具有如此中 所述立體選擇性轉化催化能力之任何酵素或微生物。各種 酵素，如酯酶，脂酶及蛋白酶，不論其來源或純度均適用 於本發明。酵素可呈動物或植物酵素型式或其混合物，微 生物之細胞，經壓碎之細胞，細胞萃取物，或爲合成來源 0 關於微生物之使用，本發明方法可利用具有此中所述 立體選擇性轉化催化能力之任何微生物細胞。細胞可爲完 整的濕細胞或乾細胞型式，後者如經冷凍乾燥，噴灑乾燥 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -21 - 經濟部中央標準局負工消费合作社印製 A7 ____B7 _ 五、發明説明（19 ) 或熱乾燥之細胞。細胞也可以經處理之細胞物質型式使用 ，如經瓦解之細胞或細胞萃取物。 酵索或微生物物質可以自由狀態型式應用，或固化在 載雅上（如聚合樹脂），如利用物理性吸附作用或捕集。 適合充份催化酵素來源之微生物種屬寅例包括：毛霉 靥（Mucor)，埃希氏菌屬（Escherichia)，葡萄球菌屬 (Staphylococcus) ，土壤桿菌靥（Agrobacteriura)， 不動桿菌屬（Acinetobacter)，根霉屬（Rhicopus)， 曲霉颶（Aspergillus)，諾卡氏菌靥（Nocardia)，鏈 霉菌属（S t r e p t 〇 m y c e s )，木霉屬（T r i c h 〇 d e r m a )，假 弱酵母屬（Candida)，紅酵母屬（Rhodotorula)，球擬 酵母屬（Torulopsis)，變形菌屬（Proteus)，芽孢桿 菌屬（Bacillus)，產驗菌屬（Alcaligenes)，假單胞 菌屬（Pseudomonas)，紅球菌羼（Rhodococcus)，短桿 菌屬（B r e v i b a c t e r i u m )，擬地霉靥（G e 〇 t r i c h u m )，腸 桿菌屬（Enterbacter)，色桿菌屬（Chronobacterium) ，節桿菌靥（Arthrobacter)，微桿菌屬（ M i c r 〇 b a c t e r i u m )，分枝旱菌屬（M y c 〇 b a c t e r i u m )，酵 母屬（Saccharomyces)，青霉屬（Penicillium)，甲燒 桿菌觸（Met:harobacterium)，葡萄孢饜（Botrytis) » 毛般菌屬（ChaetQmium)，蛇孢腔菌屬（Opliiobolus)， 枝孢觸（C 1 a e丨〇 s ρ 〇 r i u m )及其他。也可兜用經遺傳工程 之宿主細胞。 適用於本發明方法中之特異微生物包括粘稠色桿菌（ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 I.---------^------，訂------束 /|\ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -22 - 經濟部中央標準局貝工消f合作社印袋 A7 B7 五、發明説明（2〇 ) C. viscosum)，銅錄假單胞菌（P. aeuriginosa)如 ATCC 2 5 6 1 9，螢光假單胞菌（P. fluorescens )，惡臭假單胞菌（P. putida)如ATCC 3 1 3 0 3，卵狀假單胞菌（P. ovalis)，大腸桿菌（E • coli )，金黃色葡荀球菌（S. aureus)，糞產鹸菌（ A . faecalis)，灰色鏈霉菌（S. griseus) »洋想假單 胞菌（P. cepacia)，挪落假弱酵母（C. rugosa)如 ATCC 1 4 8 3 0 ，白地霉（G. candidum)如 ATCC 3 2 3 4 5，釘斑鏈霉菌（S. clavuligerus )，紅乎諾卡氏菌（Ν· erthropolis)，星狀諾卡氏菌（ N. asteraides)，草分枝桿菌（M. phlei) ’ 放射形土 壤桿菌（A. radiobacter〉，黑曲 S5(A· niger) » 米根 霉（R. oryzae)等。當應用本發明方法時，二種以上， 以及單一種類之微生物均可應用。 此中所用的ATC C係指美國標準菌種收集所之編號 » 1 2 3 0 1 » Parklawn Drive, Rockcille, Maryland 2 0852,有機物貯置用。 本發明之解析法可在所應用之微生物生長後進行，或 與之同時進行，而於後一例中可經由在原位之醱酵及解析 而成。微生物之生長可由精藝者之一來连成，如使用含有 營養物之適合的培養基，如含有碳源及粑源及痕量元素。 適用於本發明方法中之商品化酵素包括脂酶，如 Amano PS-30 (洋葱假單胞菌），Amano GC-20 (白地霉） ，AmanoAPF(黑曲霉），AraanoAK (假單胞菌），螢光 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -23 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 ___B7 五、發明説明（21 ) 假單孢菌脂海（Biocatalyst, Ltd.) ，Amano脂酶 P — 3 0 (假單孢菌靥），AraanoP(螢光假單胞菌），Araano AY-30 (圆柱假弱酵母），Amano N (雪白根霉），Amano R (青徽菌），Anano FAP (米根霉），Anano AP-12 (黑 曲霉）’AraanoMAP (墨黑毛霉），AmanoGC-4(白地霉 )，Sigma L- 0382及 L-3126 (豬胰臟），脂酶 0F ( Sepracor)，酯酶 3 0，0 0 0 (Gist-Brocarde)，K I D 脂酶（（Gist-Brocarde)，脂酶 R (地霉，Amano)， SigmaL-3001(麥芽），Sigraa L-1754 (圓柱假弱酵母〉 ，Sigma L-0763(粘稠色桿菌），及Amnao K-30(黑曲霉 )。另外，衍自動物組織之示例酵素包括來自豬肝之酯酶 ，來自胰臟之α -胰凝乳蛋白酶及胰酶，如豬胰脂酶（ Sigma)。當進行本發明方法時可應用二種以上，或單一 的酵素。 本發明較佳具體實例進一步以下列反應流程說明。而 爲了更明瞭，這些反應流程說明某些順式對映異構混合物· 之解析，要了解所述之具體實例也可用以解析本發明其他 的對映異構混合物。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0 X 25>7公釐） 83.3.10,000 —,— lli n .^1 n 訂 I n m - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) · 24 五、發明説明（22 ) A7 B7 反應流程I :以酯化作用解析 對胁里構混合物_ 產物 HC\ Λ、、 R2 R1 〜·· R?

N R4

C—L

N

(D

O (ΙΠ) HQ. ,R2

R O lb R3 R2 (Π)

•N o //

N R3 〇 R3 ^ R 1&或 R 1 b之一是 0 H :另一者=R4-c一a— R3hn oh —1 —r3hn R2-CH-CH-C-OR6 4 if R2-CH- II R 一C—L Ο - CIV) (ΙΠ) r3hN oh F τ r3hn R - CH — CH — c- OR6 II _ _ H2-CH Rla -CH-C-OR6 II o R1 f o R 或 R lb= 〇 H :另一者 CH-C-OR6 κ4-ξ-ο-" I---*------f------,1T------^ z— . (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 R3HN ri - R2 — CH — CH — C-OHIIo (IV) R3hn r! R2-ch- ch—c-ohJL· -o R4-oh (VO) 'R3HN ri R2-ch- ch-c-oiII o

r3hn _ R2-ch-ch—c-cII R1 R 6e 或 R6b=H :另一者 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -25 A7 B7 五、發明説明（23 ) 反應流程II 以酯基轉移作用解析 對映異構浪合物 R3HN Ri 一 r2-ch-ch-c -or6II (IV) 〇 r3hn

Rl R2 — CH — CH-C —OR6II -o R “或 R 6

R7—OH (VHI) 產物 —R3HN Rl R2—CH-CH-C -OR63IIo (VI)

R3HN ri R2—CH-CH-C -OR6b 一 ϋ 之一=R6;另一者=RY 混合物I及I V可如上反應流程I般，立體選擇性酯 化，且混合物I V可如上反應流程II般，立體選擇性酯化 (A )醯化作用 混合物I可選擇性酯化生成混合物II，且混合物I V 可選擇性酯化形成混合物V，利用式III之醯化劑進行： I I n I 束/1 . . ., (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

III R 4 — C ( 0 ) 於式III中，R 4可爲烷基，烯基，炔’·,；，芳基，環烷 基，環烯基或雜環基。在式ΙΠ中較佳之K ’基爲烷基，如 Ci-6烷基，尤其是甲基。L是離去基團·其可被置換形 成酯基。供示例之L基團包括鹵原子，羥适，烷氧基或烯 氧基。較佳之L爲烯氧基，最佳是匚：—括氧基，如 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 83.3.10,000 26 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 __________B7五、發明説明（24 ) CH2=CH _ 0 一 及 CH2=C (CH3) — 0 —。可達 成酯化作用的任何的式III醯化劑均可應用，而以醋酸異丙 烯酯及醋酸乙烯酯爲特佳。 (B )利用醇行酯化作用 利用式V II之有機醇可將混合物I v選擇性酯化成混 合物V I : R 4- 0 Η ( V II ) 於式V II中，R4可爲烷基，烯基，炔基，芳基，環 烷基，環烯基或雜環基。烷基，特別是C ϊ - 6烷基爲較佳 之R 4。 (C )以醇進行酯基轉移作用 利用式V III之醇，可將混合物I V選擇性酯基轉移成 混合物V I : R 7- 0 Η ( V III - 於式V II中，R 7可爲烷基，烯基，广基，芳基，環 烷基，環烯基或雜環基，除了 R 7和R 6並〃相同。較好R 7與R 7儘可能區別以有助接下來帶有R 7 0—(0) — 化合物自帶有R6— 0 — C (0)—化合疒中分離。因此 ，較好應用式V III之醇，其中R7基與R1‘基在分子量方面 I---,--------多------1T------'t (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3. 10,000 27 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 __B7_ 五、發明説明（25 ) 不同，或可將不同的物理或化學特性傳達到經酯基轉移之 酯上。 酯化作用（醯化作用）步驟（A )及酯化作用及酯基 轉移作用過程（B)及（C)，較好在有機溶劑中進行。 適用於這些方法中之示例之溶劑包括1 ，. 1，2 —三氯一 1 ，2 ，2 —三氟乙烷，甲苯，環己烷，苯，己烷，庚烷 ，異辛烷，辛烷，甲基乙基酮，甲基異丁基酮等。水較好 少量加入反應混合物中。當存在時，反應混合物中水之濃 度較好是由約〇. 0 1%至約1 %，依溶劑重量爲準，或 存在之濃度爲有機溶劑飽和時還少或相同。水之含量最好 爲以溶劑重量計之由約〇. 05%至約0. 5%。反應溶 液較好含有每毫升溶劑由約5至約2 5 0毫克之對映異構 起始化合物。

爲實行這些方法，化合物III，V II或V III加至反應介 質中。化合物III :混合物I或IV化合物之較佳莫耳濃度 比率爲由約1 : 1至約4 : 1 ;化合物V II:混合物IV 化合物之較佳莫耳濃度比率爲由約1:1至約4 :1:且 化合物V III :混合物I V化合物之較佳莫耳濃度比率爲由 約1 : 1至約4 : 1。 應用於本步驟中之酵素或微生物，較好是脂酶或酯酶 或可產生這些酵素之微生物。在這些步驟中特佳之酵素或 微生物爲來自假單胞菌之脂酶PS - 3 0，來自假單胞菌 之脂酶P — 3 0 ，來自青霉菌之脂酶R，來自雪白根霉之 脂酶OF，脂酶N，來自黑曲霉之脂酶APF，來自白地 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -28 - -裝— 亀 * (請先閲讀背面之注意事項再^本頁 、訂 束· A/ B7 五、發明説明（26 ) 霉之脂酶GC — 2 0，來自假單胞菌之脂酶AK，來自假 弱酵母之脂酶AY — 3 0，及螢光假單胞菌脂酶。 酵素可以其自由態型式，或經固化型式使用。本發明 較佳之具體實例爲酵素吸附在適合的載體上，如矽藻土（ 多孔的Celite Hyflo Supercel)，微孔的聚丙烯（Enka A c c u r e丨®聚丙烯粉末），或非離子聚合吸附劑，如 Amberlite® XAD-2(聚苯乙烯）或XAD-7 (聚丙烯 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 酸酯）來自 控制酵素粒 集。固化作 Hysflo Sup 乾燥，或於 劑於震盪槽 -吸附劑樹 由每毫升溶 儘可能最少 性而定。 利用含 細胞，也可 加入細胞及 進行這些步 之細胞，如 化之細胞， 。也可以經

Rohm及Haas Co.。當用來固化酵素時，載體可 子大小且避免酵素粒子當用於有機溶劑時之聚 用可完成之方式如：以冷丙酮於Celite ercel存在下沈澱酵素之水溶液，再予以眞空 非離子聚合吸附劑例中，則將酵素溶液與吸附 中培育，移去過量的溶液並在眞空下乾燥酵素 脂。酵素加入反應溶液中，較好可使濃度達到 液約5至約2 0 0毫克酵素範圍。雖希望使用 的酵素，但所需之用量仍依所使用酵素之比活 有具立體選擇性轉化催化活性之酵素之微生物 進行這些步驟。當使用微生物進行解析時，可 對映異構起始物至欲求之反應介質中而合宜地 驟。所使用之細胞可呈完整細胞型式，經乾燥 經冷凍乾燥，噴灑乾燥或熱乾燥之細胞，經固 或經有機溶劑（如丙酮或甲苯）處理過之細胞 處理之細胞物質型式使用，如經瓦解之細胞或 請 先 閲 背 之 注 意 事 項 再 本 頁 裝 訂 % 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 B7____五、發明説明（27 ) 細胞萃取物。也可應用如先前所述的，固化在Cel ite®或 Accurel®聚丙烯上之細胞萃取物。 反應介質之培育較好是在約4至約6 0°C間之溫度， 且最好是介於約3 0至5 0°C。反應時間可適合地變化， 依酵素之用量及比活性而定。經由增加反應溫度及/或酵 素用量可減短反應時間。 對映里搆混合物 反應流程III 以7k解作用解析_ 產物 C.

Π、 C一N (I) 〇 ,C一Ϊ

R3 >R2 V Η 2 0及/或 ---► 有機醇

(II) ----------裝------1T------1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

之 b 1 R 或 a TX R

C 1 4 R Η ο II U:. 1 另 準 標 家 國 國 |中 用 I適 度 -尺 I張 紙 一釐 公 97 2 83. 3.10,000 -30 - A7 Β7 五、發明説明（28 )

r3h^ 0-C(0)-R4 一 R2— CH-CH -C -OR6II (IV) ο R3HN p-C(0)-R4 R2— CH-CH -C -OR6II -o

R H 2 _0及/或 有機醇 R3HN ru : : R2—CH-CH -C -OR6IIo R3HN Rib R2— CH-CH -C -OR6IIo

〇 II C — 0 -;另一者=〇H (V) (請先閲讀嘴面之注意事項再填寫本頁) r3hn R1 R2—CH-CH -C -OR6IIo (IV) R3HN ri R2— CH-CH，C‘一〇R6ΙΓ -o

HoO R3HN ri Ξ 三 R2— CH-CH -C ~0R6a IIo (VI) R3HN ri R2—CH—CH -C -0R6b IIo 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

H R6aSR6b 之一二 R6;另一者 由反應流程III中可看出，使用水及/交有機醇，混合 物I及I V可分別立體選擇性水解成混台勹II及V，且利 用水混合物I V V可立體選擇性水解成況：:？物V I 。R 4 ，形成R 1之部份，且R 6在起始之對映势π化合物中，較 好是烷基，更好是C 1 - 6烷基，如甲基。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4現格（21〇X297公釐） 83. 3.10,000 31 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 83. 3.10,000 A7 B7 五、發明説明（29 ) 式I X化合物： R 8 - Ο Η (IX) 可充作有機醇，其中R8是烷基，烯基，炔基，芳基 ，環烷基，環烯基，或雜環基，且較好烷基如甲基。使用 有機醇IX可造成R4— C (〇）一OR8副產物酯之形成 。使用水爲水解劑可造成R4— C (0) — 0H副產物酸 之形成。當這些酸性副產物產生時，爲維持穩態之P Η値 ，可加入鹼，如，鹼金屬氫氧化物。當應用有機醇I X時， 較好加入可使混合物IX:混合物I或IV化合物之莫耳 濃度比率爲由約1:1至約4 :1之用量。 這些步驟中較好應用可催化立體選擇性水解之水可溶 性之酵素。在這些步驟中尤其適合的爲脂酶及酯酶，以及 胰酶及α —胰凝乳蛋白酶。這些酵素之粗製或經純化型式 ，呈自由態型式，或固化在載體上（如，在樹脂上，如 XAD—7，XAD—2或Accurel®樹脂）’均可應用 。在這些方法中特佳的是來自假單胞菌之脂酶P S 一 3 0 (洋葱假單胞菌）（Amano 1 n t，丨）’來自假單胞菌之脂 酶 P— 3 0 (Amano)，脂酶 GC-2 0 (白地霉）（

Amano lnt’1)，脂酶 N (雪白根霉）（Amano lnt’1) ’ 脂酶APF黑曲霉（Amano Ut，l)，脂酶AY — 3 0假 弱酵母（Amano)，脂酶AK假單胞菌（Amano Ut’l)， 螢光假單胞菌脂酶（Bio catalyst Ltd·) ’酯酶 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） I I ""I ~訂 1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -32 - 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 83. 3.10,000 A7 B7 五、發明説明（30 ) 3 〇 ’ 0 〇 〇 (Gist-Brocarde)，脂.酶 OF (Sepra.cor )，K I D 脂酶（Gist-Brocarde)，脂酶 R (根霉： Amano 丨 nt’l)及藉胰脂酶（Sigma chem)。 上述之水解較好在水性中進行，如經緩衝之水性介質 (如磷酸緩衝溶液）或於含有可相容或不相容有機溶劑之 水性介質中。如，反應可於二相溶劑系中進行，包栝有機 相，不相容於水，及水相。使用二相溶劑系句加强此種過 程之效率，其中受質物質不溶於水。 於二相溶劑中之有機相溶劑可爲不與水相容的任何有 機溶劑，如甲苯，環己烷，二甲苯，三氯三氟乙烷等。水 相以水爲合宜，較好是去離子水，或適合的水性緩衝溶液 ，尤其是磷酸鹽緩衝溶液。二相溶劑系較好含有約1 0至 9 0 %按體積計之有機相，及約9 0至1 0 %按體積計之 水相。 對映異構混合物起始物之含量，爲每毫升反應溶液有 由約0. 1至約10 0毫克，及一種以上酵素，含量爲每 毫克欲水解之起始物中有由約0 . 1至約1 0 0毫克酵素 ，以上較佳。 反應混合物較好調整及維持在約p Η 7 . Q ，較好利 用鹼金屬氫氧化物，碳酸鹽或重碳酸鹽水溶液。 反應時間可依酵素，溫度及酵素濃度而選擇。應用的 溫度爲由約4 °C至約6 0 °C爲較佳。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） ----------¥------、玎------嗥. '-. {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -33 - Α7 Β7 五、發明説明（31 ) 砭應流程I V，以脫鹵作 物 合 混 構 異 映 對 物 產

r3hn

X R2— CH—CH -C -OR6II (IV) 0 r3hn R2 — CH—CH -C -OR6II -o \ 1

Ί—N1 -C 氫氧化物 : 離子供予體 氫氧化物 --— 雒子供予體 ο R1 ,ο IN1 lev R2.R3R2、R3 g,. R3HN ru CH—CH -C -OR6II o (V) R3HN Rib T t R2-CH-CH -C -OR6 IIo I---------裝-- * - yf\ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 東 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

R 1£1或 R 1 b

X ;另一者=Ο H 由上反應流程I V所見，混合物I及丨v可分別選擇 性脫鹵成混合物II及V，其中X表示鹵原Λ ° 可達成這些反應的任何化合杓均可艽S氫氧化物離子 供予體。供示例的此種化合物選自水’齡4鹼土金屬氣氧 化物，如氫氧化鈉及鉀，及氫氧化銨如四S錢氛氧化物， 如式（R9) 4Ν0Η者，其中R9是氫或烷基，特別是氫 良紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -- 經濟部中央標準局貝工消f合作社印製 A7 _ B7___ 五、發明説明（32 ) 氧化鉀及水。加入之氫氧化物離子供予體量較好是可提供 氫氧化物離子供予體：混合物I或IV對映異構起始物之 莫耳濃度比率爲由約1:1至約4:1之量。 較好應用含有水及有機溶劑（如甲苯或己烷）之反應 介質。對映異構起始物之用量，較好爲每毫升溶劑有由約 1毫克至約1 0 0毫克。 應用於脫_反應之酵素或微生物較好選自假單胞菌屬 ，木霉屬，不動桿菌屬，產鹼菌屬，諾卡氏菌屬，分枝桿 菌屬，紅球菌屬，甲烷桿菌屬，變形菌屬，或衍自其中之 酵素，且用量較好是每毫克欲脫鹵起始物質有由約0 . 1 毫克至約1 0毫克酵素。 溫度較好應用由約4 °C至約5 0 °C。 分離 立體選擇性轉化作用之產物可以方法分離及純化，方 法如萃取，蒸餾，結晶，管柱層析等。 分離以本發明方法形'成之產物混合物之較佳方法是利 用液體-液體萃取法。 利用 紫杉烷爲二萜烯化合物，其中含有紮《";烷碳骨架：

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 I I H n I 訂 泉- -* (請先閱讀背面之注意事項再#寫本頁) -35 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 83.3.10,000 A7 ___B7 五、發明説明（33 ) 此骨架在其環系中含有乙烯不飽和現象。其中特別令[感 興趣的是具有上述碳骨架之紫杉烷，其中11，12_位 置經由乙嫌連接鍵結’且1 3 -位置含有一個側鍵。具藥 理活性之紫杉烷，如紫杉醇類似物，可充作抗腫瘤劑以治 療癌症患者，如卵巢癌，黑色素瘤，乳癌，結腸癌或肺癌 及白血病。 以本發明方法所得之經解析化合物，特別可充作中間 物以形成上述在紫杉烷骨架上之C-13側鏈。加入此種 側鏈於其中或其本身，可對紫杉烷產物傳達增加的或更欲 求之藥理活性，或是可形成更易轉化成具欲求藥理活性更 强或更欲求之紫杉烷之紫杉烷產物。 依據本發明所解析之化合物，可在用於側鏈形成前予 以修飾。如，含有疊氮化物基N3爲W基團之經解析化合 物，可以還原劑處理以形成胺基，其可予以取代。 用於側鏈形成之示例方法及應用此方法形成之紫杉烷 產物，包括述於下列者：歐洲專利案N 〇 . 534，708:美國專利案No. 08/ 080，704 (公告於1993年6月28日）：美國 專利案Ν〇· 0 8/ 0 2 9 ，819 (公告於1 9 9 3年 3月11日）：美國專利案No. 07/996,455 (公告於1992年12月24日）：美國專利案No. 08/062 ，687 (公告於 1993 年 5 月 20 日） ;美國專利案No. 0 7/9 8 1 ，151 (公告於 1992年11月24日）；及美國專利案No. 07/ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝. -36 - 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 A7 __ B7 五、發明説明（34 ) 995，443 (公告於1 992年12月23日）：以 上文件均列爲本案參考。 於本發明方法中，依適合或欲求的可應用或製備反應 物或產物之鹽或溶劑化物。 本發明方法以下列實例進一步說明。這些實例僅供說 明’且不欲在任一方面限制本專利範圍。 實例1 合成受質以解析（± )—順式—3 —乙醯氧基一4 _ ( 2l_一 B夫喃基）D丫丁 D定—2 —嗣 (A ) 製備N，N_— [ ( 2_— D夫喃基）甲基〕~ 2 ~ U夫喃甲烷亞胺

對裝配有溫度計及機械攪拌器之3升二頸圓底燒瓶中 ，加入2 -糠醛（呋喃甲叉，311毫升，3. 75莫耳 ，A丨d r i c h )及2 —丙醇（I P A，0 . 7 5升，試劑級 )。在撹拌下，一次加入1. 5升濃NH4〇H (約 〜3 0 %水溶液）（22. 2莫耳）。在前2小時中可見 放熱（〜3 5 °C )。生成之褐色粉末以過濾（Whatman 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -37 - ----------^裝------'訂------Λ * ♦ 、 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 83. 3.1 A7 B7 五、發明説明（35 )

No.1)分.離，水洗（1. 5升）再置30 °C，眞空下乾燥 一夜。此生成255. 3克（76. 1%產率）之標題的 氣糠/醯胺，爲褐色粉末（溶點（111?)=116 — 1 1 7°C)。標題氫糠/醯胺之Rf値爲〇. 5 (乙酸乙 酯（EtOAc)/ 己烷，1 : 1 ;UV 可見）。 (B )製備（土）一順式一 3 —乙醯氬某一4 — ( 2 >-眹喃基）吖丁啶-2 -酮 (i )史陶汀拿反應（Staudinger Rx)

★Ac"表示乙醯基（CH3— C (0)—) 、（±)，表示，就吖丁啶環上3_及4 -位置取代基而 言，順式對映異構物之外消旋物。 對裝配有溫度計’壓力平衡滴液漏斗$機械攪拌器之 2升3 —頸圓底燒瓶，加入上（A)步骹二氫糠醯胺標題 產物（8 〇 · 4 8克，〇 · 3 〇 〇莫耳）·乂乙酸乙酯（ 1 _ 〇升，試劑級）。此混合物在氬氣下卻至4 〇c，此 時一次加入二乙胺（5 0 . 2毫升，〇 . 6 〇莫耳，

Aldrich)。滴液漏斗中加入乙醯氧基乙运基氯（ 3 7 _ 〇毫升’ 〇 · 3 4 1莫耳’ Ald〇lch)及乙酸乙酯 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公麓） I---.------^------ίτ (請先閲讀背面之注$項再填寫本頁) 38 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（36 ) (0 · 5升，試劑級），且此溶液以1小時期間小心加入 。再2小時後，停止搅拌，且反應容器封好（Parafilro ®)並移至冷室（4°C)中歷1 5小時。令異質反 應混合物在搅拌下溫至2 2。(：（〜1小時），再轉移至 4. 〇升分液漏斗中，並以NH4CP水溶液（飽和的） (5 0 0毫升）洗滌。二層經由玻璃微纖維濾膜（

Whatman)過濾，以移去細碎之黑色懸浮液。移去微粒子 物質有助於相之分離。濾塊以乙酸乙酯潤濕（5 0毫升） ，且濾液再轉移至分液漏斗中，並移去水層（p H = 6 · 3 )。有機層再以另一份N Η 4 C β水溶液（飽和） ，（2 5 0 毫升；ρ Η 5 9 ) ，N a H C 0 3飽和水溶 液（4 0 0毫升：ρ Η = 8 . 6 )及N a C j?飽和水溶液 (4 0 0毫升；pH=7 . 0.)洗滌。有機層經由玻璃微 纖維濾膜（Whatman)過濾，並分成2等份（各7 5 0毫 升）。這些溶液可直接用於下一步驟。 (i i )去保護作用 Γ1 AC%, / ^

(±) - I

^—NH Ο 在氬蒸汽下，於二個2 . 0升之巴氏冶瓶中（各含有 10% P d / C (2X6. 〇〇克，八！':「1(：11)加入上 (B ) ( i )步驟中之有機層（2X7 5 0毫升）。此混 本&張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10 000 -· 39 - ' ------------ .- (請先聞讀背面之注意事項再^本頁)

、1T 泉，- Α7 Β7 五、發明説明（37 ) 合物以氣（4 a tm)在環境溫度下處壤1，天。催化劑經 由Celite®盤過濾移出，濾塊以乙酸乙醋潤濕（i 〇 〇 毫升）。濾液轉移至4. Q升分液漏斗中，再;以 1NHC5(500毫升，250毫升：ρΗ=〇 76 )洗二次。水性洗液混合，並以乙酸乙酷（5 〇 〇毫升） 再萃取，且有機層混合，並以N a HC 〇 3飽和水溶液（ 4 0 0毫升；PH=8. 3 4 )及NaC又飽和水溶液（ 4 0 0毫升；PH=7 · 5 )洗滌。有機層於MgS〇4 上（〜1 0 0克）乾燥，再以活性脫色炭（3 〇克， BDH)處理。1 5分鐘後，混合物經Celite®盤過濾， 並眞空濃縮至1 6 0毫升，冷卻一夜（4°C)，且沈澱的 固體經滤紙（Whatman No.1)過濾而分離。濾塊以二乙 醚及己烷潤濕（各1 0 0毫升），以於眞空乾燥後生成 35. 98克（61. 4%得自上氫糠醯胺之產率）標題 產物，（土）一順式一 3 —乙醯氧基一 4— (2 / —呋喃 基）吖丁啶一2_酮，爲白色針狀（mp 1 1 8 — 1 1 9°C) 〇HPLC定量分析證明在母液中有8. 10 克標題產物。因此得自上氫糠醯胺之活性奎率爲7 5 . 3 %。 官例2 立體選擇性水链（土）一順式~~ 3 —乙崆Η基一4 —( 2 ——眹喃基）吖丁啶一 2 -酮 應用於此實例中之受質爲外消旋物： 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（21〇Χ297公釐） ----------.裝— . · (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 83.3.10,000 -40 - A7 B7 五、發明説明（38 )

0 如實例1標題產物般製備。此實例之立體選擇性水解產物 爲化合物* (+ )—順式一乙醯氧基一 4 — ( 2 —咲喃基）D丫 丁啶一2 —酮： .裝-- - t a (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ACQ^

、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 〇 對掌性醋酸鹽（3 R ) (一）—順式—3 —羥基—4 一（ 2，一呋喃基）吖丁啶 —2 —酮： H0

NH 0 對掌性醇（3 S ) 立體選擇性水解進行如下。於1升 25mM磷酸鹽 緩衝溶液ρΗ7. 0中之反應混合物’製成含有1〇克受 質及1 0 0克來自假單胞菌之脂酶PS — 3 0 (Amano 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公羡） 83. 3. 10,000 41 A7 B7 五、發明説明（39 )

International Co.)。反應在 3 0°C，1 5 0 每分鐘轉 數（r pm)搅動下進行。反應中，反應混合物之pH値 以5N NaOH利用pH裝置維持在7. 0。水解反應 以高壓液相層析（HPLC)追踪。定基地取樣並以1 0 毫升乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯層分出並蒸發至乾，再以 HP LC分析（如下述）分析受質及產物濃度及產物之光 學純度。所得結果示於下表1中。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ’裝· 表1 反應時間 轉化作用 產率（¾ 產物II a之 (小時） U產物II b) 產物II a ) 光學純度（¾) 4 18 82 -- 8 34 66 -- 12 46 54 -- 16 51 49 >99.4 訂 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 過程中之對掌性HP LC分析 定期地於上述反應中取樣（1毫升），並以1. 0毫 升含於5 0毫升有螺蓋試管之乙酸乙酯萃取。移去乙酸乙 酯層（5毫升），在緩和的氮蒸汽下蒸發。殘留物溶於2 毫升移動相中（己烷：絕對乙醇；9 5 : 5)。移動相經 由0· 2微米 Lydex濾膜過濾，且約1毫升濾液轉移至 蜷曲小瓶中以作Η P L C分析。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 83.3.10,000 -42 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印装 A7 B7 五、發明説明（) Η P L C條件：

Hewlett Packard 1090色層譜

管柱：Ch i ra 丨 ca 1 AD 移動相：己烷：絕對乙醇，95 : 5 管柱溫度：環境溫度 流速：1毫升/分 偵測：2 1 0毫微米+ 外消旋醋酸鹽二個對映異構物之滯留時間，分別爲 23. 2分及28. 9分。外消旋醇二個對映異構物之滯 留時間，分別爲63. 9分及74. 8分。 實例3 立體選擇件水解（± )_順式_ 3 — 7.醯氣.基-4 -( 2 — D夫喃基）卩丫丁陡一2 —嗣，利用經固化之月旨酶 P S - 3 0醅素 所應用之受質，及所得之產物如上實例2 。 酵素的固化作用 於固化步驟中使用三種不同的載體：XAD—7 (

Amberlite XAD-7非離子聚合吸附劑，2 0 — 6 0孔筛之 聚两烧醋酸樹脂），X A D — 2 ( Amberlite XAD —非離 子聚合吸附劑，2 0 - 6 0孔篩聚苯乙烯樹脂），及 本紙張尺度適用中圉國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 I---------裝-- .yi\ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁

、1T 43 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（41 )

Accurel PP (聚丙烯樹脂2 0 0-4 0 0微米）。 粗製的Amano PS-30脂酶（1 0克）溶於2 5毫升蒸 餾水中，並以1 0 ，0 0 0 r p m離心1 0分鐘以得澄清 的上清液。載體（1. 3克）於2 5毫升小瓶中，以甲醇 洗5次，並加至燒瓶內之酵素溶液中，且在室溫下之迴轉 震遨槽中緩和搅動。以脂酶分析法（以S igma橄欖油乳液 爲受質）定期檢査酵素與載體之吸附作用，並利用留於濾 液中之蛋白質分析。利用XAD — 7 ，XAD — 2及 Accurel樹脂分別可得約6 8%，7 1%及9 8%之吸附 效率。於完全固化後（2 0 — 2 4小時），載體一酵素淤 漿經由Millipore濾膜過濾，且載體以約3 0 0毫升之蒸 餾水洗滌。接下來，含有經固化脂酶之載體，於室溫下之 眞空烘箱中乾燥。 經固化酵素之使用 於如上實例2之酶促水解反應中應用經固化之酵素。 反應混合物製備，其中含有3 0毫升2 5mM磷酸鹽緩衝 溶液P Η 7 . 0及如實例2所述之3 0 〇毫克受質， 3 0 0毫克上述製備之經固化的脂酶PS — 3 0。反應如 賁例2所述般進行。所得結果示於下表2中。 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 (請先閲讀背面之注項再填寫本页) .裝. 44 - 五、發明説明（42 ) 表2 經固化之 反應 轉化作用 產率（ 產物II a之 載體 時間 (產物II h%) 產物II a % )光學純麽（％ ) XAD-2 3 53 47 99.0 XAD-7 3 54 46 99.3 Accurel PP 3 51 49 99 . 5 官例4 立體選擇性水解（± )-順忒—3 —乙醯氣基一_4 —( 2 - — P关喃基）吖丁啶—2 —酾 所應用之受質，及所得之產物，如上實例2 °於此實 例中，進行許多反應其中應用來自不同來源的脂酶。 於各反應中，反應混合物在2 0毫升2 5^M磷酸鹽 緩衝溶液，P Η 7中含有1克粗製的脂酶及2 0 0毫克受 質。反應在25X下進行，利用ρΗ7. 〇之ΡΗ調整器 。所得結果示於下表3中。 83. 3.10,000 (請先閲讀背面之注意事項再^^本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 45 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（43 ) 表3 酵素 來源 脂ISPS-30,假單胞菌屬 Aman。Int. 脂酶AY-30,假弱酵母屬 Amano Int. 脂酶A K ,假單胞菌屬 A m a η 〇 Int. 螢光假單胞菌 B i o c a t a 1y s t Ltd. 豬胰臟脂酶 Sigma 酯酶3 0 , 0 0 0 G i s t - B r o c a r d e 脂酶0 F S e p r a c o r K 1 D脂酶 G i s t - B r 〇 c a r d e 脂酶R .地霉屬 A m a η o 1 n t . 反應時間 轉化作用 產率（. 產物II a之 (小時） (產物II b%) 產物II a % ) 光學純度（ 16 52 48 >99.5 8 55 45 99 . 0 16 53 47 99.3 16 55 45 98.9 19 52 48 99.8 24 5 1 49 95 8 56 44 99 . 5 48 52 48 95 24 56 44 99.0 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83.3.10,000 -46 - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

A7 ____B7 五、發明説明（44 ) 實例Fi 立體撰擇件乙醯化（_醋化）（± ) -順式—3 —羥基一4 —(2 <>一11夫喃基）D丫丁 D定—2 —兩 於此寅例中應用之受質爲外消旋物：

〇 以相當的外消旋醋酸鹽之化學水解（利用N a 2C〇3)而 製備。此實例之立體選擇性乙醯化作用產物爲下列化合物 ----------ά — • · /Mm% (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁 (+ ) _順式一 3 —羥基—4—( -2 —酮： _呋喃基）吖丁啶 、訂

經濟部中央標準局員工消費合作社印製

NH 〇 (_) 一順式_3_乙醯氧基一 4 — (2 / —呋喃基）吖 丁啶_ 2 —酮：

於此實例中，進行許多反應’其中應用不同來源之脂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 83. 3.10,000 -47 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 ________B7 五、發明説明（45 ) 酶以達到立體選擇性乙醯化作用。於各反應中，反應混合-物在2 5毫升甲苯中有1克粗製的脂酶及1 〇 〇毫克受質 ’ 8 〇 〇毫克醋酸異丙烯酯，及〇. 〇 5%水。反應在 3 〇eC，1 0 0 r pm之震盪槽上進行。產物及受質以 HP LC分析。所得之結果示於下表4中。 表4 酵素 來源 轉化 產率（ 產物II a之 (產物 產物II ^¾)光學純度i in II b%) 脂酶P S - 3 0 A m a η ο I π t . 52 48 99.5 脂酶A Υ - 3 0 A m a η ο I π t , 55 45 99 . 0 脂酶R A rn a η ο I n t . 51 49 96 . 8 螢光假單胞菌 54 46 98.8 Biocatalyst Inc. 脂酶OF Sepracor 52 48 99 . 0 豬胰臟脂酶 Sigma 54 46 98 . 0 寶例6 立體選擇件水解：各種酵素之評估 _ 所應用之受質，及所得之產物如上實例2。於各立體 選擇性水解反應中，製備反應混合物於2 G毫升2 5mM 磷酸鉀緩衝溶液，ρΗ7 · 0中’其中含2 0 〇毫克受質 及/克酵素（見表5之酵素）。反應在3 〇°C，1 5 0每 -48 - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝· 、νβ 83. 3.10,000 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 ____B7 五、發明説明（46 ) 分鐘轉數（r pm)携動下進行。於反應中，反應混合物 之pH値以IN N a 0H在pH調整器下維持。以高壓 液相層析追踪水解反應。定期取樣（1毫升），再以4毫 升乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯層分出，並蒸發至乾，再以 Η P L C分析受質及產物濃度，及產物之光學純度。結果 示於下表5中。 表5 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝.

*1T 醇奉 來源 反應 產率（ 產物II a 時間 產物II a%)之光學純 (小時） 度（¾) 脂酶P S - 3 0 A m a η ο I η t . 16 48 >99 . 5 脂酶A Υ - 3 0 A m a η ο I π t . 8 46 >99 脂酶A K A m a η ο I n t . 16 47 >99 螢光假單胞菌 16 45 >99 Biocatalyst Ltd. 豬胰臟脂酶 Sigma 19 47 98.8 酯酶3 0 , 0 0 0 Gist-Brocarde 24 35 99 脂酶0 F Sepracor 8 44 95 K1D脂酶 Gist-Brocarde 48 38 95 脂酶R A m a η ο I n t . 24 44 99 實例7 (土）一順式 一 3 酿氣某_ 4 _ (2 ^ -蛀喃某）吖 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210X297公釐） 83.3.10,000 -49 - A7 B7 五、發明説明（47 ) 丁啶一 2 —酮爲經固化之脂酶PS- 3 0解析之動力學 所應用 反應混 p Η 7 . 0 之受質，及所得之產物如上實例2般。 合物於8. 5升之25mM磷酸鉀緩衝溶液， 中含有8 5克受質，及8 5克來自假單胞菌屬 之脂酶 PS — 3 0 (Amano 丨 nternational Co.)。脂酶 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 P S - 3 0 中。反應在 進行。反應 p Η調整器 踪。定期採 乙酯層分出 ，以及產物 反應時間 (小時） 0 1 2 3 4 5 6 固化在Accura丨聚丙燦上，並用於反應混合物 3 0°C，1 5 0每分鐘轉數（r pm)攪拌下 中，反應混合物之PH値以5N NaOH在 下維持在7 · 〇。水解反應以高壓液相層析追 樣（1毫升）並以4毫升乙酸乙酯萃取。乙酸 ，蒸發至乾並以HP LC分析受質及產物濃度 之光學純度。所得結果示於下表6中。 表6 A-醋酸鹽 B-醋酸鹽 A-醇 (臺京/毫升）(毫克/畜幵）直_/毫升）_ fi ? B 9 0 .05 .19 痕量 痕量 • 95 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 袭. -訂 良，- 50 - A7 B7 五、發明説明（48 ) 反應時間 B-醇 B-醋酸鹽 .A-醇 (小時） (毫克/毫升） 光學純度（％) 光學純 0 0 50 >99 1 0 72 >99 2 0 89 . 6 >99 3 痕量 98 . 5 >99 4 痕量 98.5 >99 5 0.13 >99 97 6 0.13 >99 97 醋酸鹽'具以下結構：

(請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) B—醋酸鹽'具以下結構 0

AcO、

々-NH 經濟部中央標準局員工消t合作社印製 醇#具以下結構：

本紙張尺渡適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）. 83. 3.10,000 51 A7 B7 五、發明説明（49 ) 'B —醇*具以下結構：

實例8 立體選擇性醋化（± )—順式—3 —翔基一4_ 映喃某）吖丁啶—2 —酾 於此實例中，所應用之受質及所得之產物和實例5相 同。反應混合物在1 0毫升甲基乙基酮（MEK)中含有 2 0克受質，1克酵素（見表7 )及0 . 4毫升乙酸異丙 烯酯爲醯基供予體。反應在3 0。(：，1 5 0每分鐘轉數（ r p m )攪動下進行。酯化反應以高壓液相層析追踪（下 述）以決定受質及產物濃度，及產物之光學純度。所得結 果示於下表7中。 (讀先閲讀背面之注項各填寫本寅) .装. 訂ί. 卞· 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 83.3.10,000 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ' 52 - A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（ 50 ) 表7 酵奉 來渾 反應 對掌性醋酸鹽 時間 產率（¾) (小時） 脂酶P S - 3 0 A raa η ο I n t . 96 50.5 脂酶A Y - 3 0 A ma η ο I n t . 120 51 脂酶AK Ama η ο I n t . 120 49 脂酶0F Sepracor 96 49.5 酵奉 來源 醋酸鹽 對掌性 醇光 光純度 醇產率 純度 (¾) (¾) (%) 脂酶P S - 3 0 Araan o 1 n t . 99.5 49.5 99 脂酶A Y - 3 0 A m a η ο I n t . 99 49 99 脂酶AK A m a π ο I n t . 99 . 5 51 99 脂酶0F Sepracor 99.4 50 . 5 99 Η P L C方法 上實例中之變質及產物以Η Ρ L C分析。使用Nova Pak C18逆相管柱（3 . 9 XI 5 0毫米） 。移動相爲 15%乙睛/水，且流速爲1毫升/分。 偵測波長爲 2 2 7毫微米 。醇及醋酸鹽之滯留時間分別爲2 . 7分 14. 9 分。 對掌性醋酸鹽之光學純度以對掌性Η P L C決定。 用 Chiralpak AS管柱。移動相含有己烷： 乙醇（9 6 : 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83.3.10,000 ' 53 - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· A7 B7 五、發明説明（51 ) )，在1毫升/分鐘及環境溫度下使用。偵測波長爲 2 1 0毫微米。外消旋醋酸鹽二個對映異構物之滞留時間 分別爲23. 7公及20. 9分。外消旋醇二個對映異構 物之滯留時間分別爲63. 9分及74. 8分。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝·

、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 83. 3.10,000 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 54

Claims (1)

1. A8 B8 C8 D8 •申請專利範圍 附件 A: 第83104413號專利申請桌 ^ % 中文申請專利範圍修正本 民國88年6月修正 1 . 一種水解解析包括對映異構物I a及I b之混合 物I之方法，其中R1在I a及I b中相對於R 2係在順式 位置，或其中R1在I a及I b中相對於R 2係在反式位置 R1 .R2 與 〇 •N (la) R3

   以形成含有化合物n a及nb之混合物E，其中Rm與 11115在113及Π b中相對於R2係在順式位置，或其中 ri«與Rib在3及n b中相對於R2係在反式位置，且 在各例中均對應於混合物I之R1位置： —裝------訂------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

   Rlb 與 R2

   其中 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） A8 B8 C8 D8 •申請專利範圍 附件 A: 第83104413號專利申請桌 ^ % 中文申請專利範圍修正本 民國88年6月修正 1 . 一種水解解析包括對映異構物I a及I b之混合 物I之方法，其中R1在I a及I b中相對於R 2係在順式 位置，或其中R1在I a及I b中相對於R 2係在反式位置 R1 .R2 與 〇 •N (la) R3

   以形成含有化合物n a及nb之混合物E，其中Rm與 11115在113及Π b中相對於R2係在順式位置，或其中 ri«與Rib在3及n b中相對於R2係在反式位置，且 在各例中均對應於混合物I之R1位置： —裝------訂------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

   Rlb 與 R2

   其中 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 397S66六、申請專利範圍 A8 B8 C8 D8 R 1是C 烷醯氧基； Rls或R1*»之—和Rl相同另—者是經基； R 2是呋喃基或_吩基； R3是氫，苯基或經取代苯基； 此方法包括將該混合物丨，於水及/或有機醇存在下 ，與選自衍生自假單胞菌屬（Pseud〇m〇nas)，假弱酵母 屬（Candida)或根霉屬（Rhic〇pus)之脂酶，豬胰脂酶 ，小山羊（KID)脂酶，脂酶〇F，酯酶30000之 酶接觸以進行該轉化· 2，如申請專利範圍第1項之方法，其中含有對映異 構物I a (1)及lb (1)之混合物I被解析：R1、 .R2 與

   (la ⑴）

   Ob⑴） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 以形成含有化合物Π (1)及nb(i)之混合物H: 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

   與 (Ua ⑴） Rlb‘ .R2

   (nb(i)) 3.如申請專利範圍第2項之方法，其中在含 1 )及I b ( 1 )之混合物I中： R 2是呋喃基：且 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 A8337866 ?8 D8々、申請專利範圍 R 3是氫或苯基。 4 .如申請專利範圍第3項之方法，其中該混合物I 包括（±) —順式一 3 —乙醯氧基一4— (2 呋喃基 )吖丁啶一2-酮，該混合物Π包括（+)—順式一3— 乙醯氧基一 4 — (2 / —呋喃基）吖丁啶一2 —酮與（一 )—順式—3 —經基—4— (2 > —呋喃基）.ΠΥ 丁陡—2 —酮。 5. 姐申請專利範圍第1項之方法，其中該酶被固定 在載體上· 6. 如申請專利範圍第1項之方法，其中進一步將所 得混合物Π中之非對映異構化合物Π a與Π b以分離步驟 分離》 7. 如申請專利範圍第6項之方法，其中該分離步驟 是萃取，蒸餾，結晶，或管柱層析步驟。 8. 如申請專利範圍第1項之方法，其進一步包括製 備帶有C 一 1 3側鏈紫杉烷之步驟*其中該側鏈係使用混 合物π中非對映異構化合物Π a與Π b中至少一者所形成 〇 9. 一種酯化解析包括對映異構物I a及I b之混合 物I之方法，其中R1在I a及I b中相對於R 2係在順式 位置，或其中R1在I a及I b中相對於R 2係在反式位置 ---------it裝------ir------^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 申請專利範圍

   與 A8 B8 C8 D8

   以形成含有化合物Ha及nb之混合物H，其中Rle與 1111*在]1 a及Hb中相對於R2係在順式位置，或其中 R1»與Rlb在na及Π b中相對於R2係在反式位置，且 在各例中均對應於混合物I之R 1位置：

   與 R .R2 lb

   d------訂------r; (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 其中 R 1是羥基； 111&或11113之一是羥基，另一者是114—(：(0)-0 —，且R 4是C ι_β烷基； R 2是呋喃基或瞎吩基； R 3是氫，苯基或經取代苯基； 此方法包括將該混合物I ，於化合物II存在下： R C ( 0 ) 一 L m 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） — 397866 ABCD 六、申請專利範圍 其中R4如上中之定義，L爲離去基，與 選自衍生自假單胞菌屬（Pseudomonas)，假弱酵母屬（ Candida)或根霉屬（Rhicopus)之脂酶.，猪胰脂酶， 小山羊（K I D)脂酶，脂酶OF，酯酶30000之酶 接觸以進行該轉化· 10.如申請專利範圍第9項之方法，其中含有對映 異構物la (1)及lb(1)之混合物I被解析： 與 -N \

   _)) (1)及nb (1)之混合物Π : (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (Ia(l)) 以形成含有化合物Π

   與 (Πα(1)) Rlb‘ .R2

   (Ilb(l)) *1Τ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 11.如申請專利範圍第10項之方法 Ia(l)及Ib(l)之混合物中： R 2是呋喃基；且 R 3是氫或苯基》 1 2.如申請專利範圍第1 1項之力& 物I包括（±) —順式—3_羥基一 4 一 其中·在含 ’其中該混合 2 — —呋喃基 Μ氏張尺度適用申國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -5 397866 ABCD 、申請專利範圍 )吖丁啶一 2 羥基—4 _ ( 酮，該混合物ϋ包括（+ )—順式一 3 — 2 / -呋喃基）吖丁啶一 2 —酮與（一）_ 順式一 3 —乙醯氧基一4 一（2 — —呋喃基）吖丁啶~2 —酮， 1 定在載 1 所得混 驟分離 1 步驟是 1 製備帶 混合物 成* 且該化 3 .如 體上。 4 ·如 合物Π 合物m爲乙酸異丙烯酯· 申請專利範圍第9項之方法，其中該酶被固 申請專利範圍第9項之方法，其中進一步將 中之非對映異構化合物Π a與Π b以分離步 5 .如申請專利範圍第1 4項之方法，其中該分離 萃取，蒸餾，結晶，或管柱層析步驟· 6.如申請專利範圍第9項之方法，其進一步包括 有C - 1 3側鏈紫杉烷之步驟，其中該側鏈係使用 Π中非對映異構化合物ϋ a與π 中至少一者所形 {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、va 絲 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 6 〜β -