TW293843B

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Publication number: TW293843B
Application number: TW082100430A
Authority: TW
Original assignee: Chiron Corp
Priority date: 1991-12-23
Filing date: 1993-01-20
Publication date: 1996-12-21
Also published as: AU3467293A; CA2124795A1; US5618674A; EP0726963A1; JPH07502414A; EP0726963A4; WO1993013221A1

Description

A6 B6 293843 五、發明説明（） 1 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 本發明是核酸雜交分析之領域。特言之，其僳有關用於偵測衣原體之新穎的核酸探針。背景抟蓊砂眼衣原體是如砂眼、包涵體結膜炎、肺炎、腹股溝淋巴肉芽腫、及粘膜生殖道感染如子宮頸炎及尿道炎此類疾病之主要的人類病原。後一感染可發展成糸統性複合症，造成附睪炎、輸卵管炎、或肝周炎。 —裝- 美國專利案4, 731，325,公告於1985年 1月24日，掲示使用經選殖之衣原體一專一性DNA, 充作三明治式雜交分析中之探針。 PCT W 0 88/03957,公告於 1987 年11月24日，掲示可於砂眼衣原體雜交分析中充作探針茗rRNA序列。EPA 0 361 983,公告 IO. 於1989年10月2日，掲示可充作RNA模板終端一鍵結之探針構體之r R N A序列，以於雜交分析中偵測砂眼衣原體。PCT W 0 90/15159,公告於經濟部中央標準局员工消費合作社印製 1 990年5月3 1日，掲示rRNA探針及其用法，以於臨床樣品中偵測砂眼衣原體。 EPA 0336 412 A2,公告於1989 年4月6日，掲示衍自砂眼衣原體質體PCHL1之合成的寡核@酸，以充作偵測砂眼衣原體之雜交探針。 EPA 0 420 260 A2,公告於 1 989年9月29日，掲示設計自砂眼衣原體L1血清本紙張又度遇用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） A6 B6 293843 五、發明説明（2 ) (請先閱ΪΪ背面之注意事項再塡寫本頁) 變型之隠藏胞質核苷酸序列之捕獲探針及聚合酶鍵反應引子。共有的美國專利案No. 07/691, 639 ( 1991,4月25日）掲示砂眼衣原體主外膜蛋白質之多核苷酸，其可充作偵測衣原體之雜交探針。共有的美國專利案No. 4, 868,105中描述一種溶液相之核酸三明治式雜交分析法，其中欲分析之核酸先於第一容器中，先與溶液中之經標記探針組及捕獲探針組雜交。之後探針一分析物複合物再轉移至第二容器中，其中含有固化在固相上之探針，其實質上與捕獲探針之片段互補。片段與經固化之探針雜交，因此自溶液中移去複合物。令分析物呈經固化複合物之型式後可助於分析中接下來之分離步驟。最後，經過標記探針組之單股片段與經標記探針雜交後，可經由直接或間接得自標記物之訊號偵測含有分析物之複合物。經濟部中央標準局員工消費合作社印製共有的歐洲第二案（EPA) 88309 6976掲示與美國專利案4, 868,105中所述分析法不同之變化法。擴大作用中像使用核酸多體。這些核酸多體是分支之聚核苷酸，其經構築具有一段片段偽可專一地與分析物核酸雜交，或與結合至分析物上之核酸（分支或線型的 )雜交，並與專一雜交地經標記探針之第二片段交互作用。於應用多體之分析中，傺依循於第一容器中分析物與標記物或擴大探針組及捕獲探針組之雜交之第一步驟，再將複合物轉移至另一含有經固化核酸之容器，其俗可與捕'獲本纸張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公货）~ 2Q3843 A6 B6 五、發明説明（3 ) (請先閱讀脅面之注意事項再蟥寫本頁) 探針之片段雜交。多體再與經固化之複合物雜交，且經標記之探針再依序與多體上之第二片段交互作用雜交。由於多體可提供許多供標記探針粘附之位置，由是擴大訊號。所掲示之擴大子及捕獲探針序列有B型肝炎病原、淋病奈瑟氏球菌、於淋病奈瑟氏球菌中之青徽素及四環徽素抗性、及砂眼衣原體。於1990年7月27日公告之共有的美國專利案 No. 558, 897,描述可用於上述溶液相分析中之大的梳狀分支型多核苷酸多體之製備。此梳狀物在分析中較較小型多體可提供更多之訊號粘附作用。發明之捃示本發明一方面是用於衣原體三明治式雜交分析中充作擴大探針之合成的寡核替酸，其包括核苷酸序列實質上與核酸片段互補之第一片段，及核苷酸序列實質上與寡核苷酸多髏互補之第二片段。經濟部中央標準肩員工消费合作社印製本發明另一方面是於衣原體三明治式雜交分析中充作捕獲探針之合成的寡核旮酸，其包括核苷酸序列實質上與核酸互補之第一片段，及核苷酸序列實質上與結合至固相之寡核苷酸互補之第二片段。本發明另一方面是用於偵測樣品中有衣原體存在之溶液相三明治式分析法，其包括： (a)將樣品於雜交條件下與過量的下列接觸，（i )一種擴大探針寡核苷酸，其包括核苷酸序列實質上與衣本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公發） -5 - 293843 A6 B6 五、發明説明（4) (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 原髏核酸片段互補之第一片段，及核苷酸序列實質上與核酸多體之寡核苷酸單位片段之第二片段，及（ii) 一種捕獲探針寡核苷酸，包括核苷酸序列實質上與衣原體核酸片段互補之第一片段，及實質上與固化至固相上之寡核苷酸互補之第二片段； (b) 在雜交條件下將（a)步驟之産物與結合至固相上之該寡核苷酸接觸； (c) 之後分出未結合至固相之物質； (d) 在雜交條件下將（c)步驟之經結合産物與核酸多體接觸，該多體包括實質上互補於擴大探針多核苷酸之第二片段之至少一種寡核苷酸單位，及實質上互補於經標記寡核苷酸之許多第二種寡核苷酸單位； (e) 移去未結合之多體； (f) 在雜交條件下將（e)步驟之固相複合物産物與經標記之寡核苷酸接觸； < (g) 移去未結合之經標記之寡核苷酸；及經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (h )於（g )步驟之固相複合物産物中偵測標記物之存在。本發明另一方面是用於偵測衣原體之套組，包括用於偵測樣品中衣原體之套組，包括混合 (i ) 一組擴大探針寡核苷酸，其中擴大探針寡核苷酸包括核苷酸序列實質上與衣原體核酸片段互補之第一片段，及核苷酸序列實質上與核酸多體之寡核苷酸單位互補本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐）一 6 - 用·停2a 年月五、發明説明（之第二片段；’ (ϋ ) 一組捕獲探針寡核苷酸，其中捕獲探針寡核替酸包括核苷酸序列實質上與衣原體核酸互補之第一片段’ 及實質上與結合至固相之寡核苷酸互補之第二片段； (ϊϊ)核酸多體，該多體包括實質上互補於擴大探針多核苷酸第二片段之至少一種寡核苷酸單位，及實質上互補於經標記寡核苷酸之許多的第二寡核苷酸單位；及 (iv) —種經標記之寡核苷酸》基於此中所揭示的，這些及其他的具體實例對一般精藝者應是淺顯的。圖式簡單說明附圖.三明治雜交分析法，利用多個分析物特定之捕獲探針及擴大探針。如下所示序列表中符號之意義：請聞讀背之注意事項再填旁訂適度尺張紙 __I_ 本經濟部中央揉準局員工消費合作杜印裝家國國

293843 補充五、發明説明（代表意義 R...... g w...... A或 T/U s...... C或G Υ...... C或 T/U κ...... G或 T/U V...... A或C或G ;非T/U Η...... A或C或T/U ;非G D…… A或C或T/U;非C Β...... C或G或T/ϋ;非A Ν...... U或C或（；或T/丨丨）或（未知或茸它） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 實行本發之方法定義 '溶液相核酸雜交分析，意指於共有的美國專利案 Ν〇·4，868，105&ΕΡΑ883096976 中所述及申請專利範圍之分析技術· ''經修飾之核苷酸#意指可穩定地納入多核苷酸中之核苷酸單體，且其具有額外的官能基•較好*經修飾之核苷酸是5 —-胞嘧啶核苷，其中Ν4 -位置經修飾以提供官能性羥基· '擴大子多體f意指一種分支之多核笞酸，其可同時直接或間接地雜交至分析物核酸及許多多核苷酸交互作用上（即是另一多體之交互作用或經槺記探針之交互作用） •多證上之分支可由共價鍵結達成，且多«由二型寡核苷本纸浪尺度遴用中國國家揉隼（CNS〉Α4洗格（210Χ 297公釐） -7.-1 一經濟部中央標準局員工消費合作社印製 B6 ___ 五、發明説明（6) 酸單位，组合，其可分別雜交至分析物核酸或雜交至分析物核酸及許多經標記探針上。此種多體之組合物及製備，描述於EPA 883096976及美國糸列No. 5 58，897 (公告於1990年7月27日），其掲示均列為本案參考。 a擴大探針〃一語意意表分支或線型之多核苷酸，其經構築可具有與分析物核酸可專一性雜交之片段，且可與專一雜交至擴大多體之第二片段交互作用。 '"捕獲探針〃意指一種寡核苷酸，其具有可實質上與標的DNA之核苷酸序列互補之片段，及實質上與因此固化在固相之探針核苷酸序列互補之片段。 a大"於此中所用的傺描述本發明之梳狀分支多核苷酸，意指具有至少約15個分支位置及至少約20個經標記探針結合序列之交互作用之分子。 a梳狀〃於此中所用的是描述本發明分支多核苷酸之結構，意指具有線型架構之多核苷酸，並自骨架中伸出許側鏈。 a可解離之鍵結子分子〃意指可穩定納入多核苷酸鏈中之分子，且其包括可為化學處理或物理處理打斷或解離之共價鏈，如經由照射。此中所掲示的所有核酸序列均以5 /至3 ·*方向書寫出來。核苷酸之設計依IUPAC—IUB生化命名協會之核苷酸符號而定。 ___.---；----」----^---ο-----裝-------ST------0 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) _ 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公發）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（7 ) 溶液相雜交分析以下為溶液相三明治式雜交法之一般策略。分析物核酸與過量的二種單股核酸探針組，共置於微滴定孔洞中： (1)一組捕獲探針，各自具有實質上互補於分析物之第 1結合序列及實質上互補於結合庄固相載體上之核酸之第 2結合序列，如孔洞表面或珠粒，及（2) —組擴大探針 (分十或線型的），各自具有可專一地結合至分析物之第 1結合序列，及可專一地結合至多體片段之第二結合序列。生成的産物是經由其第一結合序列，二探針雜交交至分之三組份核酸複合物。探針之第二結合序列因未同時互補至分析物，故保留呈單股Η段。此複合物經由捕獲探針之第二結合序列而雜交至固化在固相表面之探針上。生成之産物包括經由雙體結合至固相表面之複合物，此雙體像由結合至固相表面之寡核苷酸及捕獲探針之第二結合序列所形成的。未結合之物質再自表面中除去，如利用洗滌。之後再於雜交條件下，將擴大作用多體加至經結合之複合物上，使多體可雜交至複合物擴大探針中可應用之第 2結合序列上。再自任何未結合多體中以洗滌分出所生成之複合物。於條件下再加入經標記之寡核苷酸，以雜交至多體之實質上互補的寡核苷酸單位上。再洗滌所生成之經固化經標記核酸複合物，以除去未結合之經標記寡核苷酸〇分析物核酸可得自各種來源，如生物流體或固體粒子，且可製備以用於各種方法之雜交分析中，如蛋白酶Κ/ 本纸張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（21ϋ X 297公竑） ——.—_----；—l·---ο-----裝------.玎------ο (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 一 9 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（8 ) SDS、離液序列高之塩類，等。同時，減小分析核酸平均大小是有益的，可採用酵素性、物理性或化學方法，如限制酶、音波震盪、化學降解（如金屬離子）等。片段可小至◦ . 1 k b ,通常至少約0 . 5 k b ,且可大於1 kb。於分析時分析物Η段呈單股型式。當Η段以單股型式自然存在，則變性將不需要。然而，當片段呈雙股型式，片段應予以變性。變性可以各種技術來進行，如鹸，通常為由約0 . 0 5至0 . 2 Μ之氫氧化物、甲醯胺、塩類、熱、酵素、或其混合。實質上互補於分析物片段之捕獲探針及擴大探針之第一結合序列，各自至少15個核苷酸，通常至少25個核苷酸，且不多過約5kb,通常不多過約1 kb,較好不多過約1 00個核旮酸。其通常約30個核苷酸。其通常經選擇以結合至分析物之不同序列上。第一結合序列可基於各種考慮來選擇。依據分析物之本質，將可箸眼於一致序列、與多型性有關之序列、特殊之表現型或基因型、特殊之品糸、或其他。所使用之不同擴大及捕獲探針之數目會影響分析之靈敏性，因為使用愈多的序列，由分析糸統提供之訊號愈大。再者，使用愈多之探針序列可使用更為迫切之雜交條件 ,由是減少偽陽性結果之發生。因此一組中探針之數目，為至少一種捕獲探針及至少一種擴大探針，更好是二種捕獲及二種擴大探針，且最好5 — 1 0 0種捕獲探針及5 — 1 0 0種擴大探針。 ^纸張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐)~ •IL——·--------l·——ο-----裝-------玎------ο (請先閱讀背面之注意事項再埸寫本頁) -10 - 經濟部中央標準居員工消费合作社印製 A6 B6_ 五、發明説明（9 ) 衣原體專一性寡核苷酸探針，如EPA 883096976中所述的，自衣原體PCHL2質體中設計而得（Palmer and Falkow，Plasmid，1 6 : 5 2 —62, 1 9 8 6)。於本發明中，自質體其他區域設計額外的探針，其改進足分析中由於有更多的捕獲探針序列可用來偵測受試有機體之存在，故有更高之靈敏度。標記及捕獲序列之排列，可由捕獲及標記序列之散置變化至成群。於下述實驗實例中，捕獲探針散置於標記探針中，但一般精藝者應可了解，於探針組設計上沒有限制之必要。選擇捕獲探針及擴大探針之第二結合序列，使其實質上分別互補於結合至固相表面之寡核苷酸，及多體之片段，且如此不為樣品/分析物中之内源片段遇到。第二結合序列可接於第一結合序列，或由中間之非互補序列隔開。若必要時探針可包括其他的非互補序列。這些非互補序列必須不可阻礙結合序列之結合，或造成非專一性結合。捕獲探針及擴大探針可以寡核苷酸合成步驟，或以選殖法製備，較好是前者。要了解，結合序列未必要完美的互補，以生成同二體。在許多狀況下，雜二體已足夠，其中少於10%之鹼基配對錯誤，可忽視5個以上核苷酸之環。因此，於此中所用的v互補〃意指確實之互補，其中在結合區中的每一鹼基確實地相當，且'''實質上互"意指9 0 %以上同質。經標記之寡核苷可包括實質上互補於多體重覆寡核奋 (請先閲讀背面之注意事哨再填寫本頁) .ο. —裝. 訂_ 6. 本紙張尺度通用中國国家標準（CNS>甲4規格（210 X 297公釐） -11 - A6 203843 ____B6___ 五、發明説明（10) 酸單位之序列。經標記之寡核苷酸包括一種以上之分子（ >標記物"），其直接或間接地提供可偵測之訊號。標記物可結合至實質上互補序列之個別成員，或可呈末端成員或具許多標記物之末端尾部型式存在。將標記物結合至寡核苷酸序列之各種方法，文獻中已有述。如見，Leary e-t a 1· > Proc. Natl. Acad. Sc i · USA (1983) 80:4050; Renz and Kurz，Nuc1. Acids Res. (1984) 12 = 3435; R~ i chardson and Gumpor t > Nuc1 . Acids Res. (1983) 11 : 6167； Smith et a 1 · , Nuc1 . Acids . Res· (1985) 13: 2399； Meinkoth and Wahl，Ana 1 . B i oohem. (1984) 138 :267。標記物可共價或非共價地結合至賁質上互補序列上。可應用之標記物包括放射核種、螢光劑、化學發光劑、染料、酵素、酵素受質、酵素輔因子、酵素抑制劑、酵素亞單位、金屬離子及其他。可説明之特殊標記物包括：螢光素、若丹明、德州紅、藻紅朊、缴形酮、魯米諾、 NADPH、《 — —半乳糖苷酶、薙菜過氣化酶、鹼性磷酸酶等。捕獲探針及擴大探針對預期莫耳分析物之比率，各自至少為化學計量，且較好過量。此比率較好至少約1 . 5 :1，且更好至少2:1。通常在由2:1至10s ：1 之範圍中。各個探針之濃度通常由約1 0_5至1 0_SM, 樣品核酸濃度由1 變化至1 Ο—2 Μ。分析中雑交

步驟通常花費1◦分至20小時，較好可在1小時内完成。雜交在略升高之溫度下進行，通常由約2 0¾至8 0 °C 本纸張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） ——----.----^----1---0-----裝------1T------0 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -12 - 經濟部中央標準肩員工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（11) ，更常是由約35Ί0至70t：，特別是65*0。雜交反應通常於水性介質中進行，持別是經缓衝之水性介質，其中包括有各種添加物。可應用之添加物包括低濃度之去污劑（0. 01 — 1%)、塩類、如檸檬酸鈉（ 0. 0 17至0. 17M)、Ficoll、聚乙烯吡咯啶_、載體核酸、載體蛋白質等。非水性溶劑可加至水性介質中，如二甲替甲醯胺、二甲亞硕、醇類、及甲醯胺。這些其他溶劑之含量通常由2至5 0%。可以溫度、塩濃度、溶劑条統及其他，控制雜交介質之迫切度。因此，依據重點序列之長度及本質，可變化迫切度。依據標記物之本質，可應用各種技術以偵測標記物之存在。於螢光劑時，可應用各種不同的螢光計。配合酵素，可提供螢光、化學發光或有色産物，且以螢光、化學發光、分光光度或目視法決定。已應用於免疫分析中之各種標記物，及可應用至免疫分析之技術，均可應用於本分析中。依據本發明，進行經擴大核酸雜交分析之套組，包括下列試劑之包裝組合：擴大探針或探針組；捕獲探針或探針組；擴大多體；及適當的經標記寡核苷酸。這些試劑通常於套組之分別容器之中。套組中也可包括將分析物變性之變性試劑、雜交缓衝溶液、洗液、酵素受質、陰性及陽性控制組、及進行分析之書寫指示。以下實例說明本發明。這些實例不欲以任何方式限制本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） ——.—.—^—l·—ο-----裝------·玎------0 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) -13 ™ 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 A6 _B6_ 五、發明説明（12 ) 本發明。窨例窨例I 梳狀分丰多核符酸之合成此實例説明具有15個分支位置及三個經檫記探針結合位置之側鏈伸展之梳狀分支多核苷酸之合成。此多核苷酸經設計可用於EPA 883096976所述之溶液相雜交方法中。寡核苷酸的所有化學合成，均於自動DNA合成儀上進行（Applied Biosystems，Inc.，（ABI) 3 8 ◦ B 機型 )。使用yS—気基乙基型之胺基磷酸酯化學，包括應用P-h〇stel〃試劑（ABN)之5 / -磷醯化作用。除了另有所示，使用標準的ABI策略。當指示使用許多循環時（如12値循環），於所示循環中應用由ABI提議之許多標準量之胺基磷酸酯。此中所附加的是於Applied Biosystems 380B 型 DNA 合成儀上進行 1. 2 及 6. 4 循環之程式。先製備以下結構之梳體： 3,T18(TTX,)15GTTTGTGG-5, I (RGTCAGTp-5,)15 其中χ/是分支的單體，且R是高碘酸塩可解離之鏈結子。以1. 2循環策略，使用33. 8毫克之胺丙基一衍生 (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) Ό -—裝·

•1T -ό. 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） -14 - A6 B6 五、發明説明（13) 化之胸苷控制孔玻璃（CPG) (20〇〇A,每克載體有7. 4微莫耳胸替），先合成經由15 (TTX — )重覆子之梳體部份。分支位置之核替酸具下式：

0 I .骨架其中R 2代表經濟部中央標準局員工消費合作社印製於合成梳體（不包括側鏈）時，/5 -氣酸酯單體於A、 C、 G及Τ時之濃度為0. 位置單體Ε為◦. 15Μ,及Ph〇stelr«試。於去保護作用過程中，利用逐步之流過以 /二氯甲烷進行去三苯甲基化作用。結論為乙酸基取代。如下於毎一分支單體位置處合成化式3 RGTCAGTp (SEQ ID NO: 鏈結子R及六鹼基側鏈伸展作用。手工進行去除（於上式中之R2 ),同時保留於合成中之CPG載體。於R2 =乙醯丙醯基之例 0 . 5 Μ水合胼於吡啶/冰醋酸（1 : 1 v 基乙基胺基磷 1 Μ ,於分支劑為◦ . 2 Μ 3 %三氣醋酸 5 / D Μ Τ 以 1)之可解離鹼基保護基之梳體相同管柱子時，引入 /ν)之溶液 ----------J----1--------裝------iT------ (請先閲讀背面之注意事項再irs本頁) 本紙張又度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -15 - A6 B6 293843 五、發明説明（14) ，並保持與CPG載體接觸9◦分鐘，並每15分鐘更新液體，再以吡啶/冰醋酸（1 : 1 v/v)及後的乙腈充份洗滌。一旦將可解離鏈結子R去保護後，可利用 6 . 4循環加入六鹼基側鏈之伸展。於這些合成中，胺基磷酸酯之濃度為〇.1M (除了 0 . 2 M R 及 Ph〇stelr* 試劑；R為 2, 3 —二（苄醯氧基）丁氧基）苯基）乙基一 2_氡乙基_N, N —二異丙基胺基磷酸2_ (4 — （4_ (2 —二甲氧基三苯甲基氣基）乙基）苯氧基酯）。以3%三氯醋酸/二氯甲烷之溶液，利用連缠流過以達成去三苯甲基作用，之後以甲苯/氯甲烷（1 : 1 v / v )溶液潤濕。於3 8 0及中利用C E N Η 3 "循環，自動地將分支之多核苷酸鏈自固相載體上除去。氫氧化銨溶液收集於4毫升有螺蓋之Wheaton小瓶中，並在 6 〇°C下加熱1 2小時以除去所有的鹼基保護基。冷卻至室溫後，溶劑於高速真空蒸發器中除去，殘留物則溶於 1 ◦ 〇微升水中。也利用自動合成儀，進行以下結構之3/骨架伸展（片段A )、側鏈伸展及連接模板/鏈結子： 3’架構伸展 3'-TCCGTATCCTGGGCACAGAGGTGCp-5. (SEQ ID N0:2) 側鏈本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） ——：—.—.—l·—0-----裝------·玎------0 (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 -16 - A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（15) 伸展 3，-GATGCG(TTCATGCTGTTGGTGTAG) 3-5 · (SEQ ID NO: 3) 用於鏈結 3 ’架構伸展之連接 3’-AAAAAAAAAAGCACCTp-5，（SEQ id N0:4) 模板用於鏈結側鏈伸展之連接模板 3，-CGCATCACTGAC-5，（SEQ ID N〇:5) 粗製的梳體以檫準的聚丙烯醯胺凝@ (7%加上7M 尿素，及1 X T B E操作缓衝溶液）方法純化。如下將3 架構伸展及側鍵伸展連接至梳體上。梳體 (4微微莫耳/微升）、3 架構伸展（6. 25微微莫 )、側鏈伸展（9 3 . 7 5微微莫耳/微升）、側鏈鏈結模板（7 5微徹莫耳/微升）及架構鏈結模板（5微微莫耳/微升）混合於ImM ATP/5mM DTT/ 50mM Tris-HCl, PH8. 〇/i〇mM MgCl2 /2mM亞精胺中，並加上〇. 5單位/微升之T4·多核苷核激酶。混合物於37它下培育2小時，再於水浴中加熱至95 t：,之後缓慢冷卻至3 5t!以下歴1 本表張><^遇用中國國家標準（CNS)甲4規格297公货） (請先閲讀背面之注意事項再蟥寫本頁) ο 丨裝， ,π. — o'. -17 - Α6 Β6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（16) 小時。加入2mM ATP、 10mM DTT、 14% 聚乙二醇，及〇. 2 1單位/撤升T4連接酶，混合物在 23t!下培育16 — 24小時。DNA沈澱於NaCi2/ 乙醇中，懸浮於水中，再接受如下之第二次連接作用。混合物調整至ImM ATP. 5 m M DTT、14%聚乙二醇、50mM Tris— HCj?、 pH7. 5、 1 〇 m M MgCPs、2mM亞精胺、〇· 5單位/徹升T4多核苷酸激酶且加入〇. 21單位/微升T4連接酶，且混合物於23 °C下培育16〜24小時。連接産物以聚丙烯醯胺凝膠電脈純化。經過鏈接及純化後，部份産物標以32P，並在R位置接受解離，條以Na I 〇4水溶液氧化1小時而達成。樣品有以PAGE分析以決定所納入之側鏈伸展數目，傜定量凝膠中帶上之放射活性標記物。發現産物共有4 5値經檫記之探針結合位置。啻例π 衣原體之DNA雜交分析於此實例中使用ν 5 X 1 〃經擴大的溶液相核酸三明治式雜交分析型式。* 5X1 〃之設計衍自型式應用二種多體的事實：（1)擴大探針具有可結合至衣原體DNA 之第一Η段（A)及可雜交至（2)擴大多體之第二片段 (Β),此擴大多體（2)具有可雜交至片段（Β)之第一片段（Bx)，及可雜交至經標記寡核苷酸（檫記探針 (請先閲讀背面之注意事項再項寫本頁) -ο. 丨裝. .1Τ. ό 本纸張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公辁） -18 - A6 B6 293843 五、發明説明（17) )之片段（C )五値交互作用。此中也可使用> 1 5 X 3 〃擴大之溶液相核酸三明治式雜交分析型式。15X3 〃之設計衍生自此型式應用二種多體的事實：（1 )擴大探針具有可結合至衣原體之第一片段（A),及可雜交至（2)擴大多體之第二片段 (B),此擴大多體具有可雜交至片段（B)之第一片段 (B¥)及15個片段（C)之交互作用，其中片段（C )雜交至三個經標記之寡核苷酸。擴大及捕獲探針片段於此分析中使用如下。設計二組探針，第一組包括掲示於EP 883096976中之捕獲及擴大探針，加上額外3 2個寡核苷酸序列充作捕獲或擴大探針。第二，另一組探針包括可充作捕獲探針之進一步的寡核苷酸序列，如此這些新的捕獲探針序列位於 EP 883096976探針及新的32寡核苷酸組（上述）間之質體上，且使用來自上述第一組之捕獲探針充作擴大探針，加上第I組之新擴大探針。這些序列，加上所描述之名稱列於下文。衣原體T紺擴大探針本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐）一 19 一 ——·---：----U-------ο-----裝------.玎------0 (請先閱讀背面之注意事項再塡.¾本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 223843 A6 B6 經濟部中央標準局g工消費合作社印製

五、發明説明（18) Chlaplkitl.2 (SEQ ID NO:5) TTCTTTAGATTTCTTAGITATTTCTTCAAA Chlaplkitl.3 (SEQ ID NO:6) CTCITTATTTAGATATAGAATTTCTTTTTT Chlaplkitl.4 (SEQ ID NO:7) GAGTTTAGAAGAATCCAGAAATTCAATGCG Chlaplkitl.6 (SEQ ID NO:8) TTCTATACATTTATCGATAGCTAACTCGAT Chlaplkitl.7 (SEQ ID NO:9) TTTCCAGTTCCTTGTACAAATGTACCGATT Chlaplkitl.8 (SEQ ID NO:10) CCTTAAAATATATGCAAGACTTTTAACGTT Chlaplkitl.10 (SEQ ID NO:11) CTTAGTTAATTTTCGTCTCTTTTTCGCAGC Chlaplkitl.il (SEQ ID NO :12) TGTAATCACCCAGTCGATAAATGTGTAAGC Chlaplkitl.12 (SEQ ID NO:13) CTTTGATGCATTTGGGAAGCGCATTTTTAT Chlaplkitl.14 (SEQ ID NO:14) GGATTCTATTTGATCTACCAAGATAGGACA Chlaplkitl.15 (SEQ ID NO:15) CTCTACAACGAACCCTTTATGTTTCCGTGT Chlaplkitl.16 (SEQ ID NO:16) TGGTGAATTAAAAGGTGTTAAGTCTATATC Chlaplkitl.18 (SEQ ID NO:17) GTAAATCCTAATGATCGGAGAAAGAGTTTG Chlaplkitl.19 (SEQ ID NO:18) ACGGTCTACTATTTGTGTTCCATTAGTCCA Chlaplkitl.20 (SEQ ID NO:19) AGTTCTAGTTGCCACTATTAAAAACGGTTG Chlaplkitl.22 (SEQ ID NO:20) AGCTTCTTTTCCACTAAACTCATACTTATT Chlaplkitl.23 (SEQ ID NO:21) GGATGTTTTATACCGCTTAACTCCATAAGC Chlaplkitl.24 (SEQ 工D NO:22) TAAGAATTCAGTTTTTGTAAAACGGATTCT Chlaplkitl.26 (SEQ ID ΝΟ··23) TCTGGATAAAACAACCCCTTTTGTGTTCCC Chlaplkitl.27 (SEQ 工D NO:24) GTAATTCGTTGCAGTCAGCAATCTTTGGAT Chlaplkitl.28 (SEQ ID NO:25) TGCTAATGCATGGTAATGAGATGAAAGAAA Chlaplkitl.30 (SEQ ID NO:26) CAATTTGGGAGATATCTTAATAGATTGACC -----------r--------------裝------IT (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） -20 - 五、發明説明（19) A6 B6

Chlaplkitl.31 (SEQ ID N0:27) TCTTCTTCCAAACTTCTGATTTTCAAGGTG Chlaplkitl.32 (SEQ ID NO:28) AGGACTTTTGATGAAGTGGCAGTTACTATA pCHL2.CLLA2C-2 (SEQ ID NO:29) TTCTTCAGCGCTACACACGCTCAAATCATC pCHL2.CLLA2C-3 (SEQ ID NO:30) ATTAAACGAGCGGAAAATGAAATTACTCAA pCHL2.CLLA2C-4 (SEQ ID NO:31) CGGAGATCTACGCAATGGATTTTCATTGTA pCHL2.CLLA2C-6 (SEQ ID NO :32) GCGAATAGAAAAAGTCTTTGCTATAGCACT pCHL2.CLLA2C-7 (SEQ ID NO:33) GAATATATCATAAATAGACCGGCCTCTAGC pCHL2.CLLA2C-8 (SEQ ID NO:34) TATACGAGCCAGCACTCCAATTTCTGACTG pCHL2.CLLA2C-10 (SEQ ID NO:35) GTATCCTGTTGGGAAGGCATCAAAGAAAGA pCHL2.CLLA2C-12 (SEQ ID NO：36) TGGCCTAGCTGCTATAATCACGAAATTACC pCHL2.CLLA2C-11 (SEQ ID NO :37) AGCTAAGATAACTCCTTTATCATCAATATC pCHL2.CLLA2C-14 (SEQ ID NO.-38) TCTACGCTGTTGAGTAACCGCAAGATTTAT pCHL2.CLLA2C-15 (SEQ ID NO:39) ACCTGCGCTCATTTCTAGAGATAGGAAACC pCHL2.CLLA2C-16 (SEQ ID NO:40) TGTTAAATTAGCAATAATCCGCTCAACAAT pCHL2.CLLA2C-18 (SEQ ID NO:41) TTCTTCTACTCGGAATAATTCTTCTTTAGA pCHL2.CLLA2C-19 (SEQ ID NO:42) ATAAAAATGTGATTCTCTAACTGTTTCTCC (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 0. -裝i -1T. 經濟部中央標準局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公货） -21 - A6 B6

五、發明説明（20 )捕傅探針 chlaplkitl.l (SEQ ID NO:43) ATTAATAGATTCTTGTTCTAATTGTTCCAT Chlaplkitl.5 (SEQ ID NO:44) TCTTCTAGATAACCAACCAAGCTGAATGGC Chlaplkitl.9 (SEQ ID NO:45) GTITAAGAACAAGTTTTCTGGCCAAGAATT Chlaplkitl.13 (SEQ ID NO:46) TTGGTATACATTTGCAGGCTTGATTACAAA Chlaplkitl.17 (SEQ ID NO:47) ATTTTCTTCGTCAGTTAAACCTTCCCATCC Chlaplkitl.21 (SEQ ID NO:48) TCCTAAATGGTATAAGGCTTCTAAAGCAGT Chlaplkitl.25 (SEQ.ID NO:49) TATCCATCCTTCAAATTGAAAACTATTTGA Chlaplkitl.29 (SEQ ID NO:50) AAGACCTATAACTTCTACCATCCCATTTTG pCHL2.CXTI-l (SEQ ID NO:51) GAAAACCGTATGAGAAACGGATCTAAGCTT PCHL2.CXTI-5 (SEQ ID NO :52) AAGCCTTCCCTTTATACGCTCAAGCAATAG pCHL2.CXTI-9 (SEQ ID NO:53) TTGATTCTCAGAGAACGTTGCTCGTCTTTT pCHL2.CXTI-17 (SEQ ID NO:54) ATCCCCTCTTTGTAATTTTTCACCAGATAT (請先閲讀背面之注意事項再項寫本頁) -装- •1T. 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

衣鹿體樑針組I 擴大樑針 Chlaplkit21.1 (SEQ 工D NO:55) ATTAATAGATTCTTGTTCTAATTGTTCCAT Chlaplkit21.5 (SEQ ID NO:56) TCTTCTAGATAACCAACCAAGCTGAATGGC Chlaplkit21.9 (SEQ 工D NO:57) GTTTAAGAACAAGTTTTCTGGCCAAGAATT Chlaplkit21.13 (SEQ ID NO:58) TTGGTATACATTTGCAGGCTTGATTACAAA Chlaplkit21.17 (SEQ ID NO:59) ATTTTCTTCGTCAGTTAAACCTTCCCATCC Chlaplkit21.21 (SEQ ID NO:60) TCCTAAATGGTATAAGGCTTCTAAAGCAGT Chlaplkit21.25 (SEQ ID NO:61) TATCCATCCTTCAAATTGAAAACTATTTGA ό 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公货） -22 - A6 B6 五、發明説明（21 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

Chlaplkit21.29 (SEQ ID NO :62) AAGACCTATAACTTCTACCATCCCATTTrG

Chlaplkitl.2 (SEQ ID NO：5)

TTCTTTAGATTTCTTAGTTATTTCTTCAAA

Chlaplkitl.3 (SEQ ID NO:6) CTCTTTATTTAGATATAGAATTTCTTTTTT

Chlaplkitl.4 (SEQ ID NO:7) GAGTTTAGAAGAATCCAGAAATTCAATGCG

Chlaplkitl.6 (SEQ ID NO:8) TTCTATACATTTATCGATAGCTAACTCGAT

Chlaplkitl.7 (SEQ ID NO:9) TTTCCAGTTCCTTGTACAAATGTACCGATT

Chlaplkitl.8 (SEQ ID NO :10) CCTTAAAATATATGCAAGACTTTTAACGTT

Chlaplkitl.io (SEQ ID NO:11) CTTAGTTAATTTTCGTCTCTTTTTCGCAGC

Chlaplkitl.il (SEQ ID NO:12) TGTAATCACCCAGTCGATAAATGTGTAAGC

Chlaplkitl.12 (SEQ ID NO:13) CTTTGATGCATTTGGGAAGCGCA.TTTTTAT

Chlaplkitl.14 (SEQ ID NO:14) GGATTCTATTTGATCTACCAAGATAGGACA

Chlaplkitl.15 (SEQ ID NO:15) CTCTACAACGAACCCTTTATGTTTCCGTGT

Chlaplkitl.16 (SEQ ID NO:16) TGGTGAATTAAAAGGTGTTAAGTCTATATC

Chlaplkitl.18 (SEQ ID NO:17) GTAAATCCTAATGATCGGAGAAAGAGTTTG

Chlaplkitl.19 (SEQ ID NO:18) ACGGTCTACTATTTGTGTTCCATTAGTCCA

Chlaplkitl.2 0 (SEQ ID NO:19) AGTTCTAGTTGCCACTATTAAAAACGGTTG

Chlaplkitl.22 (SEQ ID NO:20) AGCTTCTTTTCCACTAAACTCATACTTATT 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

Chlaplkitl.23 (SEQ ID NO:21) GGATGTTTTATACCGCTTAACTCCATAAGC

Chlaplkitl.24 (SEQ ID NO:22) TAAGAATTCAGTTTTTGTAAAACGGATTCT

Chlaplkitl.26 (SEQ ID NO:23) TCTGGATAAAACAACCCCTTTTGTGTTCCC

Chlaplkitl.27 (SEQ ID NO:24) GTAATTCGTTGCAGTCAGCAATCTTTGGAT

chlaplkitl.28 (SEQ ID NO:25) TGCTAATGCATGGTAATGAGATGAAAGAAA

Chlaplkitl.30 (SEQ ip NO:26) CAATTTGGGAGATATCTTAATAGATTGACC 本纸張尺度遇用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） -23 - 293843 A6 B6 五、發明説明（22)

Chlaplkitl.31 (SEQ ID NO:27) TCTTCTTCCAAACTTCTGATTTTCAAGGTG Chlaplkitl.32 (SEQ 工D NO:28) AGGACTTTTGATGAAGTGGCAGTTACTATA 捕楢探針

Chlaplkit2C.l (SEQ ID NO:63) ACTTTTTTAATAGCGGAGAATTTACTAATT Chlaplkit2C.2 (SEQ ID NO:64) GGATCGAAATGTAATACCGAAGAGAAAACC Chlaplkit2C.3 (SEQ ID NO:65) CCATGTCTATTTTTCCCAACAGTTATCTCA Chlaplkit2C.4 (SEQ ID NO:66) TTAGAAGACGATTCCTTCCTATTGATAAAC Chlaplkit2C.5 (SEQ ID NO:67) ATCACATCTGCGTCTTGCTCTATTTGACCG Chlaplkit2C.6 (SEQ ID NO:68) TCTCGCAAATCTGAAAGCATGGGAACTTTA Chlaplkit2C.7 (SEQ ID NO:69) GCTCTATCCTCAACTTTTCTAGATAGTTGG Chlaplkit2C.8 (SEQ ID NO:70) AAACAAACTATAGGAATGTTTAGCTCTGAG Chlaplkit2C.9 (SEQ 工D NO:71) AAACCTCTTAAGGTTCTAGATATATCTGCT Chlaplkit2C.10 (SEQ ID NO:72) TCATTTTGACGATTTTCTCCAACCGATGAG Chlaplkit2C.ll (SEQ 工D NO:73) ATCAACTGCAAGTAATCGATAAATATTACG Chlaplkit2C.12 (SEQ ID NO:74) ACTCGATCTTCTTTTCTCAGCAA.CCGGATC (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製因此，每一擴大探針除了實質上互補於衣原體序列之序列外，尚含有互補於擴大多體片段之3/伸展， AGGCATAGGACCCGTGTCTT (SEQ ID NO:75). 每一捕獲探針，除了實質上互補於衣原體DNA之序列外，尚含有互補於結合至固相之下游序列，且其與（本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公坌） -24 - 經濟部中央標準局貝工消費合作杜印製 A6 B6 五、發明説明（23) X T 1来）互補： CTTCTTTGGAGAAAGTGGTG (SEQ ID NO·· 76). 微滴定盤之製備如下。自Dynatech Inc.購得White Microlite 1 Removawell長條（聚苯乙嫌徹滴定盤，9 6 孔洞/盤）。各個孔洞充填以IN HC{200撤升，並在室溫下培育1 5 — 20分。之後以1 XPBS洗盤4 次，且吸取孔洞以移去液體。孔洞再充填以1 N NaOH2〇0微升，並於室溫下塔育15—20分。盤再次以1 X P B S洗4次，且吸取孔洞以移去液體。多（phe—lys)購自 Sigma Chemical Inc.。此多肽具1:1莫耳濃度比率之Phe:lys,且平均分子量為毎莫耳47, 900克。其具有309個胺基酸之平均長度，且含155胺/莫耳。1毫克/毫升之多肽溶液與2M NaCj/lxPBS混合至0.1毫克/ 毫升（PH6. ◦)之終濃度。取此溶液1〇〇微升加至各孔洞。盤再覆以塑膠膜以避免乾燥，並於3 0 °C下培育一夜。之後盤以1XPBS洗4次，並吸取孔洞以除去液體。

使用以下步驟以偶合寡核苷酸XT 1来至盤中。 XT1米之合成述於EPA 883096976。 2〇毫克的辛二酸二琥珀醯亞胺基酯溶於3 0 0微升的二甲替甲醯胺（DMF)中〇 26 OD2e〇單位之XT1米加至100微升的偶合緩衝溶液中（50mM磷酸鈉，pH 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） ——.---：----l·---.---ό-----裝------ΐτ------C (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) -25 - A6 B6 293843 五、發明説明（24) 7. 8)。再加偶合混合物至DSS — DMF溶液，並以磁性攪拌器攪拌30分。NAP — 25管柱，以10mM 磷酸鈉pH6. 5平衡。於4t：下，偶合混合物DSS — DMF溶液加至2毫升16mM礎酸鈉，pH6. 5中。混合物渦旋以混合，並填料至已平衡之NAP—25管柱中。以DSS—活化之XT1米 DNA以3. 5毫升 l〇mM礎酸鈉，pH6. 5溶離出管柱。 5. 60D2e。單位之經溶離的DSS —活化之XT1来 DNA加至150◦毫升5〇mM磷酸鈉，pH7. 8 中。此溶液取50微升加至各孔洞，且盤培育一夜。盤再以1XPBS洗4次，且吸取孔洞以除去液體。盤最終之汽滌完成如下。含0. 5% (w/v) SPS之200微升Ο. 2N NaOH加至各孔洞。盤再覆以塑膠膜並於65Ϊ：下培育60分。之後以1 X PBS洗盤4次，再吸取孔洞以除去液體。經汽滌之盤加上乾燥劑小珠貯於2 — 8 °C下。

樣品之製備包括，將成份體（elementary bodies， EB)之連續稀釋液加至各孔洞，使相當於由3 . 1 X 1〇-3至10_5EB /孔洞之範圍内，在10徹升之萃取缓衝溶液中（l〇mM Tr i s — HC5, PH8.〇 / Ο . 1 5 Μ NaCi2/10mM Ε D Τ A , ρ Η 8.0/1% S Ρ S /4 Ο微克/毫升經音波震盪之鮭魚精子DNA)。加入蛋白酶Κ於13微升萃取缓衝之溶液至各孔洞（4毫克蛋白酶Κ於4毫升萃取缓衝溶液中）本紙張又度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） ——：---.----.---l·---ο-----裝------.玎------ο (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -26 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 _B6_____ 五、發明説明（25) )。盤加蓋，並攪動以混合樣品，再於65π下培有：30 分鐘以釋出核酸。將衣原體專一性擴大及捕獲探針（上述）之摻合液加至各孔洞（5毫微徹莫耳/孔洞，於1 Ν N a Ο Η中）。盤加蓋，緩和攪動以混合試劑，再於6 51C下培育30 分。盤移出，室溫冷卻1 〇分。再加中和作用緩衝溶液至各孔洞（〇. 77Μ的3 — (Ν —嗎福啉基）丙烷磺酸/1.845Μ N a C 5 / 0 . 185M檸檬酸鈉）。盤加蓋，並於65Ό下培育2 —4小時。攪動各孔洞之内容物，以移去所有流體，孔洞再以洗滌缓衝溶液（0. l%SDS/0. 015M N a C ^ /0. 00 1 5M檸檬酸鈉）洗滌2次。再加擴大多體至各孔洞（1 0 0毫微微莫耳/孔洞，於 4XSSC/0. l%SDS/〇. 5% 阻斷試劑（B-oehringer Mannheim. Cait No . 1096176) ) 0 盤子力Π 蓋後並攪動以混合孔洞之内容物，盤再於5 5t：下培育3〇分鐘。内容物立即吸取出來，且盤如上述般洗滌2次。之後將掲示於EP 883096976中之鹼性隣酸酶標記探針加至各孔洞（2 0毫微微莫耳於4 0微升/ 孔洞）。經55t：下培育1 5分鐘後及室溫下5— 1 〇分鐘後，孔洞如上述地洗二次，再以0. 015M NaCJ2/0· 00 15M檸檬酸鈉洗3次。應用得自Lum i gen，Inc之酵素啓動之d i oxetane ( S- (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) -裝_ -11. < 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公货） -27 - 附民國82年月修訂 -: 第82100430 號專利申請案宁文説明書修正頁 r ' Λ Ab 修，!·丄 B6 ----本年月~9-- 加補充1? t 8 五、發明説明（26~)-吸1」一 chaap et al., Tet. Lett.l 9 1 9 8 7 ) 2 8 ： 1159-1162 及 EPA Pub· No· 0 2 5 4 0 5 1 。偵測步驟如下。力口 3 0微升之Lumiphos 5 3 0 ( Luraigen )至各孔洞。輕拍孔洞以使試劑落至底部，再緩和旋轉以將試劑均勻分佈於底部。孔洞加蓋，並在3 7 °C下培育4 0分鐘。試盤於Dynatech ML 1 0 0 0發光計中讀取。於反應中當產生之光完全稹分則示出產量。結果示於下表。以陰性控制組之平均値加2個標準偏差與樣品之平均値減2個標準偏差之間的差異（<?)來表示各標準樣品之結果。若大於0 ，樣品被視爲陽性。這些結果顯示有約104 EBs之璽敏度。 (請先閲讀背面之注念事項再塌寫本頁) .裝_ 訂. 經濟部中央標準局員工消費合作社印製本紙張又度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公坌）—28 - 鼸舞3A 1 f 82100430號專釣中請案中文说明書修正资 __^氏* 0-4年4月姜 __ss ___ 補充五 '發明説明（27 )--- (請先背面之注悉葶項再瑣寫本頁) 表_ 標準 tt E B 訊號偏斧 Δ_ lxlO5 .65.33 5.16 55.01 lxlO5 11： 96 0.99 7.74 5x10^ 7.54 '1.61 2.08 2.5xl04 3.71 0.16 1.15 1.25x10* 2 · 83 0.13 0.33 6xl03 2.28 0.32 -0 - 6 3xl03 1.72 0.2 -0.92 1 ：5xl03 1.64 0.2 -0.84 0 1.44 0.4 經濟部中夹«準局A工消合作：i卬··< 上述進行本發明模式之變化對精於生化學、核酸雜交分析及相閧領域之人士是淺顯的，且意欲包括在以下申請專利範圍之内。本纸張尺度通用ta困？櫺準（CNS) T <吡格（2HJ X 297公法） 2?- 293843 _________________\------- Ρ Υί條.!】屮五、發明説明 27- 如下所示序列表中符號之意義符號代表意義. R...... A或G . ψ...... A或 T/U s...... C或G γ...... C或 Τ/ϋ κ...... G或 T/U ν...... Α或C或G;非Τ/ϋ Η...... Α或C或Τ/13;非G D·_..·， A或G或Τ/ϋ;非C β · · * * C或G或Τ/ϋ;非A Ν…. (A或C或G或Τ/ϋ)或（未知或其它） (請先閱靖背面之注意事項再填寫本ί·) 訂

經濟部中央橾车局男工消费合作社印X 序列表 (1 )—般資料 (i )申請人：Sanchez_Pescad〇r， Ray 本紙張尺度遑用中國國家搮準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印制衣 A6 B6 五、發明説明（28)

Be s erne r » Diana J .

Urdea， Michael S. (i i)發明標題：用於溶液相三明治式雜交分析内之衣原體探針 (iii)序列數目：77 (i v)通訊住址 (A )收信人· Morrison & Foerster (B )街：755 Page Mill Road (C )市：Palo Alto (D )州：加州 (E )國家：U S A (F ) ZIP：94304-1018 (v )電腦可讀型式 (A)介質型式：Floppy disk (B )電腦·· I B Μ P C可相容 (C) 操作糸統：PC-DOS/MS—

DOS (D) 軟體：Patentln Release #1.0，Vers-ion #1-25 (v i )目前申請資料 (A) 申請編號：07/813, 587 (B) 立檔日期：22 — DEC— 1991 (C )分類： (viii)法律事務資料本纸張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) 丨裝， *1T. —30 - A6 B6 五、·發明説明（29) (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) (A) 名稱：Thomas E. Ciotti (B) 註册號：21, 013 (C) 參考/索引：22300 — 2 0 2 3 5. 0 0 (ix)電傳資料： (A) 電話：415 — 813 — 56〇〇 (B) 電報：415 — 494 — 0792 (C) 電傳：706141 (2 ) S E Q ID N0:1 之資料 (i )序列特性 (A)長度：24鹸基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列說明：SEQ ID N 0 ： 1 CGTGGAGACA CGGGTCCTAT GCCT 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2) SEQ ID N0:2之資料 (i )序列特性 (A)長度：60鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） -31 - A6 B6 203843 五、發明説明（30) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

Ui)序列説明：SEQ ID Ν Ο ： 2 ：

GATGTGGTTG TCGTACTTGA TGTGGTTGTC GTACTTGATG

TGGTTGTCGT ACTTGCGTAG (2 ) S E Q ID NO :3 之資料 (i )序列特性 (A)長度：1 6鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列説明：SEQ ID NO: 3: TCCACGAAAA AAAAAA (2 ) SEQ ID N0:4 之資料 (i )序列特性經·濟部中央標準局員工消費合作社印製 (A)長度：1 2鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列說明：SEQ ID Ν Ο ： 4 ： CAGTCACTAC GC 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） -32 - A6 B6 五、發明説明（31 ) (請先閲讀背面之注意事項再^、寫本頁) (2 ) S E Q ID N0:5之資料 (i )序列特性 (A)長度·· 30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID Ν Ο ： 5 ：

TTCTTTAGAT TTCTTAGTTA TTTCTTCAAA (2 ) S E Q ID NO :6 之資料 (i )序列特性 (A)長度：3 0龄基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型經濟部中央標準局員工消費合作社印製

(xi)序列説明：SEQ ID N 0 ： 6 ： CTCTTTATTT AGATATAGAA TTTCTTTTTT (2 ) S E Q ID N〇:7 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對本紙張尺度迺用中國國家標準（CNS)甲4規格（21ϋ X 297公釐） —33 - A6 B6 經濟部中央標準居員工消費合作社印製五、發明説明（32) (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列說明：S E Q ID Ν Ο ： 7 ： GAGTTTAGAA GAATCCAGAA ATTCAATGCG (2) SEQ ID NO:8之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式··核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列説明：S E Q ID Ν Ο ： 8 ： TTCTATACAT TTATCGATAG CTAACTCGAT (2 ) S E Q ID N〇:9 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID N 0 ： 9 ： (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝_ 訂_ 〇本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -34 - A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印5衣五、發明説明（33 ) TTTCCAGTTC CTTGTACAAA TGTACCGATT (2 ) S E Q ID N0:10 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹸基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID NO： 10： CCTTAAAATA TATGCAAGAC TTTTAACGTT (2 ) S E Q ID N0:11 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列說明：S E Q ID Ν Ο ： 1 1 ： CTTAGTTAAT TTTCGTCTCT TTTTCGCAGC (2 ) S E Q ID NO:12 之資料 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) —裝- .1T. c 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -35 - A6 B6 293843 五、發明説明（34 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列説明：SEQ ID NO： 12： TGTAATCACC CAGTCGATAA ATGTGTAAGC (2 ) S E Q ID NO :13 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 U i)序列說明：S E Q ID NO： 13：

CTTTGATGCA TTTGGGAAGC GCATTTTTAT 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2 ) S E Q ID NO :14之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性··單股本紙張又度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -36 - A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

五、發明説明（35 ) (D )拓撲學：線型 Ui)序列說明：SEQ ID NO： 14： GGATTCTATT TGATCTACCA AGATAGGACA (2 ) S E Q ID NO:15 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式··核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID NO： 15： CTCTACAACG AACCCTTTAT GTTTCCGTGT (2 ) S E Q ID N0:16 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學··線型 (xi)序列說明：SEQ ID NO： 16： TGGTGAATTA AAAGGTGTTA AGTCTATATC (請先閲背面之注意事項再塡寫本頁) 丨裝- 二ϊτ. —c 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -37 - A6 B6 293843 五、發明説明（36) (請先閱讀背面之注意事項再塥寫本頁) (2) SEQ ID NO:17之資料 (i )序列特性 (A)長度·· 30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(X i)序列説明：S E Q ID NO： 17： GTAAATCCTA ATGATCGGAG AAAGAGTTTG (2 ) S E Q ID N〇：18之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型經濟部中央標準局員工消費合作社印-

(xi)序列説明：SEQ ID NO： 18： ACGGTCTACT ATTTGTGTTC CATTAGTCCA (2 ) S E Q ID NO: 19 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -38 — A6 B6 五、發明説明（37) (請先閱讀背面之注意事項再塥寫本頁) (B )型式：核酸 (C )股性：單股 .(D )拓撲學：線型 Ui)序列説明：SEQ ID NO： 19：

AGTTCTAGTT GCCACTATTA AAAACGGTTG (2 ) S E a ID NO :20 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

Ui)序列説明：SEQ ID Ν Ο ： 2 0 ：

AGCTTCTTTT CCACTAAACT CATACTTATT (2 ) S E Q ID N0:21 之資料 (i )序列待性經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

Ui)序列説明：SEQ ID Ν Ο ： 2 1 ：本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -39 - A6 B6 五、發明説明（38 ) (請先閱讀背面之注意事項再塥寫本頁)

GGATGTTTTA TACCGCTTAA CTCCATAAGC (2 ) S E Q ID NO: 22 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

Ui)序列説明：SEQ ID N 0 ： 2 2 ： TAAGAATTCA GTTTTTGTAA AACGGATTCT (2 ) S E Q ID NO :23 之資料 (i )序列特性經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (A)長度：3◦鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(X i)序列説明：S E Q ID Ν Ο ： 2 3 ： TCTGGATAAA ACAACCCCTT TTGTGTTCCC (2 ) S E Q ID N〇:24 之資料本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） -40 - A6 B6 五、發明説明（39 ) (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) (i )序列特性 (A)長度：30鹸基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

Ui)序列說明：SEQ ID Ν Ο ： 2 4 ： GTAATTCGTT GCAGTCAGCA ATCTTTGGAT (2 ) S E Q ID N〇:25 之資料 (i )序列特性 (A )長度：3 0鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

Ui)序列說明：SEQ ID Ν Ο ： 2 5 ：

TGCTAATGCA TGGTAATGAG ATGAAAGAAA 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2 ) S E Q ID N〇:26 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） -41 - A6 B6 208843 五、發明説明（40) (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID Ν Ο ： 2 6 ：

CAATTTGGGA GATATCTTAA TAGATTGACC (2 ) S E Q ID NO:27 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID Ν Ο ： 2 7 ：

TCTTCTTCCA AACTTCTGAT TTTCAAGGTG (2) SEQ ID NO:28之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

Ui)序列説明：SEQ ID Ν Ο ： 2 8 ： AGGACTTTTG ATGAAGTGGC AGTTACTATA 本紙張又度迺用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公货） --J----1------------β------裝------訂------(' (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -42 - A6 B6 五、發明説明（41 ) (請先閲讀背面之注意事項再項寫本頁) (2 ) S E Q ID N0:29 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID Ν Ο ： 2 9 ：

TTCTTCAGCG CTACACACGC TAAATCATC (2) SEQ ID N0:30之資料 (i )序列特性 (A)長度：30齡基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型經濟部中央標準局員工消費合作社印製

(xi)序列說明：SEQ ID Ν Ο ： 3 0 ： ATTAAACGAG CGGAAAATGA AATTACTCAA (2) SEQ ID NO:31之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對本紙張尺度迺用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公發） -43 - A6 B6 五、發明説明（42 ) (請先閲背面之注意事項再塡寫本頁) (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID N 0 ： 3 1 ：

CGGAGATCTA CGCAATGGAT TTTCATTGTA (2 ) S E Q. ID N0:32 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列說明：SEQ ID Ν Ο ： 3 2 ： GCGAATAGAA AAAGTCTTTG CTATAGCACT 經濟部中央標準局員工消費合作社印制衣 (2 ) S E Q ID N〇:33 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列説明：S E Q ID N 0 ： 3 3 ：本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐〉 -44 - A6 B6 293843 五、發明説明（43) (請先閱讀背面之注意事項再塌寫本頁)

GAATATATCA TAAATAGACC GGCCTCTAGC (2 ) S E Q ID N0:34 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 •裝·

(xi)序列說明：SEQ ID N 0 ： 3 4 ： TATACGAGCC AGCACTCCAA TTTCTGACTG (2) SEQ ID N〇：35之資料 (i )序列待性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型經濟部中央標準局員工消費合作社印製

(X i)序列説明：S E Q ID Ν Ο ： 3 5 ： GTATCCTGTT GGGAAGGCAT CAAAGAAAGA (2) SEQ ID N0:36之資料本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（21ϋ X 297公釐） -45 - A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（44) (i )序列特性 (A )長度：3 ◦鹸基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 Ui)序列說明：SEQ ID N 0 ： 3 6 ： TGGCCTAGCT GCTATAATCA CGAAATTACC (2) SEQ ID NO:37之資料 (i )序列特性 (A)長度：30驗基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID N 0 ： 3 7 ： AGCTAAGATA ACTCCTTTAT CATCAATATC (2 ) S E Q ID N0:38 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹸基對 (B )型式··核酸 (C )股性：單股 (請先閲讀背面之注意事項再埙寫本頁) 本紙張又度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐）一 46 一 B6 五、發明説明（45 ) (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) (D )拓撲學：線型

(xi)序列說明：SEQ ID Ν Ο ： 3 8 ： TCTACGCTGT TGAGTAACCG CAAGATTTAT (2 ) S E Q ID NO:39 之資料 (i )序列特性 (A)長度：3 ◦鹸基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列說明：SEQ ID Ν Ο ： 3 9 ： ACCTGCGCTC ATTTCTAGAG ATAGGAAACC (2) SEQ ID N0:40之資料 (i )序列特性經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (A)長度：30鹸基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學··線型

Ui)序列説明：SECl ID Ν Ο ： 4 0 ： TGTTAAATTA GCAATAATCC GCTCAACAAT 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） -47 - A6 B6 293843 五、發明説明（46 ) (2 ) S E Q ID N0:41 之資料 (i )序列特性 (A)長度：3◦鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列説明：SECl ID N 0 ： 4 1 ： TTCTTCTACT CGGAATAATT CTTCTTTAGA (2 ) S E Q ID N0:42 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列説明：SEQ ID Ν Ο ： 4 2 ： ATAAAAATGT GATTCTCTAA CTGTTTCTCC (2) SEQ ID N0:43之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對本紙張又度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) —裝· .111 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -48 - A6 B6 五、發明説明（47 ) (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

U i)序列説明：S E Q ID N 0 ： 4 3 ： ATTAATAGAT TCTTGTTCTA ATTGTTCCAT (2) SEQ ID N0:44之資料 (i )序列特性 (A)長度：30驗基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

Ui)序列説明：SEQ ID Ν Ο ： 4 4 ：

TCTTCTAGAT AACCAACCAA GCTGAATGGC (2) SEQ ID N〇:45之資料經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (i )序列特性 (A)長度：30驗基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學··線型

Ui)序列說明：SEQ ID N 0 ： 4 5 ：本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公發） -49 - A6 B6 293843 五、發明説明（48 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

GTTTAAGAAC AAGTTTTCTG GCCAAGAATT (2 ) S E Q ID N0:46 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學··線型

U i)序列說明：S E Q ID Ν Ο ： 4 6 ： TTGGTATACA TTTGCAGGCT TGAATTACAAA (2) SEQ ID N0:47之資料 (i )序列特性經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (A)長度：30鹸基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列説明：SEQ ID N 0 ： 4 7 ： ATTTTCTTCG TCAGTTAAAC CTTCCCATCC (2) SEQ ID N〇:48之資料本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -50 - A6 B6 五、發明説明（49 ) (請先閲讀背面之注意事項再項寫本頁) (i)序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

Ui)序列說明：SEQ ID N 0 ： 4 8 ： TCCTAAATGG TATAAGGCTT CTAAAGCAGT (2 ) S E Q ID NO :49 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學··線型

(xi)序列說明：SEQ ID Ν Ο ： 4 9 ： TATCCATCCT TCAAATTGAA AACTATTTGA 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2 ) S E Q ID N〇:50 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公货） -51 - A6 B6 五、發明説明（50) (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID Ν Ο ： 5 0 ：

AAGACCTATA ACTTCTACCA TCCCATTTTG (2 ) S E Q ID NO:51 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID Ν Ο ： 5 1 ：

GAAAACCGTA TGAGAAACGG ATCTAAGCTT (2 ) S E Q ID NO:52 之資料 (i )序列特性經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (A)長度：30鹼基對 . (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(X i)序列説明：S E Q ID Ν Ο ： 5 2 ： AAGCCTTCCC TTTATACGCT CAAGCAATAG 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -52 - 經濟部中央標準局R工消費合作社印製 A6 B6_ 五、發明説明（51) (2 ) S E Q ID N0:53 之資料 (i )序列待性 (A)長度：30鹸基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學··線型 Ui)序列説明：SEQ ID Ν Ο ： 5 3 ： TTGATTCTCA GAGAACGTTG CTCGTCTTTT (2 ) S E Q ID N0:54 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式··核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID N 0 ： 5 4 ： ATCCCCTCTT TGTAATTTTT CACCAGATAT (2 ) S E Q ID N0:55 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (請先閱讀背面之注意事項再塡·'"本頁) 丨裝· *1T. 丄本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公發） -53 - A6 B6 293843 五、發明説明（52 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID N 0 ： 5 5 ：

ATTAATAGAT TCTTGTTCTA ATTGTTCCAT (2 ) S E Q ID N〇:56 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹸基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

Ui)序列說明：SEQ ID Ν Ο ： 5 6 ：

TCTTCTAGAT AACCAACCAA GCTGAATGGC (2) SEQ ID NO:57之資料 (i )序列特性經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (X i)序列說明：S E Q ID Ν Ο ： 5 7 ：本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公货） -54 - A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（53 ) GTTTAAGAAC AAGTTTTCTG GCCAAGAATT (2 ) S E Q ID NO: 58 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹸基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 Ui)序列説明：SEQ ID Ν Ο ： 5 8 ： TTGGTATACA TTTGCAGGCT TGATTACAAA (2 ) S E Q ID NO:59 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式··核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 Ui)序列説明：SEQ ID Ν Ο ： 5 9 ： ATTTTCTTCG TCAGTTAAAC CTTCCCATCC (2 ) S E Q. ID N0:60 之資料 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁)

T -裝. 訂. 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297 乂縫） ~ 55 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（54 ) (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(X i)序列說明：S E Q ID Ν Ο ： 6 0 ： TCCTAAATGG TATAAGGCTT CTAAAGCAGT (2) SEQ ID N0:61之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列說明：SEQ ID Ν Ο ： 6 1 ： TATCCATCCT TCAAATTGAA AACTATTTGA (2) SEQ ID NO:62之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹸基對 (B )型式：核酸 * ( C )股性：單股本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公绫）一 56 — ——!*----^----.---U----一------裝------.玎-------{, (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) ^93843 A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（55 ) (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID NO: 62: AAGACCTATA ACTTCTACCA TCCCATTTTG (2 ) S E Q ID NO :63 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID NO: 63: ACTTTTTTAA TAGCGGAGAA TTTACTAATT (2 ) S E Q ID N0:64 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 Ui)序列說明：SEQ ID N 0 ： 6 4 ： GGATCGAAAT GTAATACCGA AGAGAAAACC 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） ——L---·----U----i----4-----裝------.玎------痒 (請先閲讀背面之注意事項再項寫本頁) -57 - A6 B6 五、發明説明（56 ) (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本育) (2 ) S E Q ID N0:65 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹸基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

Ui)序列說明：SEQ ID N 0 ： 6 5 ： CCATGTCTAT TTTTCCCAAC AGTTATCTCA (2 ) S E Q. ID N〇:66 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型經濟部中央標準局員工消費合作社印製

(xi)序列說明：SEQ ID N 0 ： 6 6 ： TTAGAAGACG ATTCCTTCCT ATTGATAAAC (2 ) S E Q ID NO:67 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對本紙张尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） -58 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（57 ) (B )型式：核酸 (C )股性··單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID NO: 67:

ATCACATCTG CGTCTTGCTC TATTTGACCG (2 ) S E Q ID N〇:68 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對, (B )型式··核酸 (C )股性··單股 (D )拓撲學：線型

Ui)序列說明：SEQ ID Ν Ο ： 6 8 ： TCTCGCAAAT CTGAAAGCAT GGGAACTTTA (2) SEQ ID NO:69之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹸基對 (B )型式：核酸 CC )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列說明：SEQ ID Ν Ο ： 6 9 ：本紙張尺度迺用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公梦）一 59 — .1:----：----·---r---叫------^------.玎------{, (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) 經濟部中央標準居員工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明（58)

GCTCTATCCT CAACTTTTCT AGATAGTTGG (2 ) S E Q. ID NO: 70 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

Ui)序列說明：SEQ ID NO: 70: AAACAAACTA TAGGAATGTT TAGCTCTGAG (•2 ) S E Q ID N〇:71 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性··單股 (D )拓撲學：線型

(X i)序列說明：S E Q ID Ν Ο ： 7 1 ： AAACCTCTTA AGGTTCTAGA TATATCTGCT (2 ) S E Q. ID NO :72 之資料本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（21ϋ X 297公釐） ----------ί----1----1'-----裝------，可------^ (請先閲？Ϊ背面之注意事項再塡寫本頁) -60 - A6 B6 203843 五、發明説明（59 ) (i )序列特性 (A)長度：30鹸基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型 (xi)序列説明：SEQ ID NO: 72:

TCATTTTGAC GATTTTCTCC AACCGATGAG (2 ) S E Q ID N〇:73 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

Ui)序列說明：SEQ ID Ν Ο ： 7 3 ：

ATCAACTGCA AGTAATCGAT AAATATTACG (2 ) S E Q ID N0:74 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹸基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐）一 61 — (請先閲讀背面之注意事項再頌寫本頁) -裝- -11. 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（60 ) (D )拓撲學：線型 (X i)序列説明：S E Q ID Ν Ο ： 7 4 ： ACTCGATCTT CTTTTCTCAG CAACCGGATC (2 ) S E Q. ID NO:75 之資料 (i )序列待性 (A)長度：30鹸基對 (B )型式··核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學··線型 (xi)序列説明：SEQ ID Ν Ο ： 7 5 ： AGGCATAGGA CCCGTGTCTT (2 ) S E Q ID NO :76 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學··線型 (xi)序列説明：SEQ ID NO: 76: CTTCTTTGGA GAAAGTGGTG 本紙張尺度迺用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 乂 -—裝. *1T‘ -i -62 - A6 B6 293843 五、發明説明（61 ) (2 ) S E Q. ID NO: 77 之資料 (i )序列特性 (A)長度：30鹼基對 (B )型式：核酸 (C )股性：單股 (D )拓撲學：線型

(xi)序列說明：SEQ ID NO :77.: TGACTGR (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) .裝· •?τ· 經濟部中央標準局員工消費合作社印製本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（2i0 X 297公货〉一 63 -

Claims

7T、申請專利範圍附件1(A): 第82 1 0 0430號專利申請案中文申請專利範圍修正本民國85年1 0月修正 1 ·—種合成的寡核苷酸，其可作爲偵測衣原體之三明治式雜交分析中的擴大探釺，其係包含. 一種第一片段，其核苷酸序列係至少9 〇 %同質於衣原體質體DNA片段；及一種第二片段’其係至少9 0%同質於核酸多體之寡核苷酸序列，其中該第二片段不與衣原體質體DNA互捕 > 其中該至少9 0%同質於衣原體質體DNA片段的核苷酸序列係選自如下組成之類群： ttctttagatitcttagttatitcttcaaa_*Tseq ~ ID-NO :5 )', CTCTTTATTTAGATATAGAATTTCTTTTTT (SEQ ID NO :6), GAGTTTAGAAGAATCCAGAAATTCAATGCG (SEQ ID NO :7), TTCTATACATTTATCGATAGCTAACTCGAT (SEQ ID NO : 8 ), '° TTTCCAGTTCC1TGTACAAATGTACCGATT (SEQ ID NO:9), / 經濟部中央揉準局具工消費合作社印裝 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) j CCTTAAAATATATGCAAGACTTTTAACGTT (SEQ ID NO: 10), CTTAGTTAATTTTCGTCTCTTTTTCGCAGC (SEQ ID NO :11), TGTAATCACCCAGTCGATAAATGTGTAAGC (SEQ ID NO:12), CTTTGATGCATTTGGGAAGCGCATTTTTAT (SEQ ID NO:13), GGATTCTATrrGATCTACCAAGATAGGACA (SEQ ID NO:14), CTCTACftACGAACCCTTTATGITTTCCGTGT (SEQ ID NO: 15), TGGTGAATTAAAAGGTGTTAAGTCTATATC (SEQ ID NO:16), GTAAATCCTAATGATCGGAGAAAGAGTTTG (SEQ ID NO:17), ACGGTCTACTATTTGTGTTCCATTAGTCCA (SEQ ID NO :18), AGrrCTAGTTGCCACTATTAAAAACGGTTG (SEQ 工D NO:19>, AGCTTCTTTTCCACTAAACTCATACTTATT (SEQ ID NO:20), 本紙張尺度適用中國國家梯隼（CNS ) A4規格（21〇Χ：297公釐） 203843 A8 B8 C8 D8 申請專利範圍 _ GGATGTTTTATACCGCTTAACTCCATAAGC TAAGAATTCAGTTTTTGTAAAACGGATTCT TCTGGATAAAACAACCCCTTTTGTGTTCCC GTAATTCGTTGCAGTCAGCAATCTTTGGAT TGCTAATOCATGGTAATGAGATGAAAGAAA CAATTTGGGAGATATCTTAATAGATTGACC •TCTTCTTCCAAACTTCTGATTTTCAAGGTG AGGACTTTTGATGAAGTGGCAGTTACTATA ATTAATAGATTCTTGTTCTAATTGTTCCAT TCTTCTAGATAACCAACCAAGCTGAATGGC GTTTAAGAACAAGTTTTCTGGCCAAGAATT TTGGTATACATTTG CAGG CTTG ATTACAAA ATTTTCTTCGTCAGTTAAACCTTCCCATCC TCCTAAATGGTATAA^CTTCTAAAGCAGT TATCCATCCTTCAAAiTGAAAACTATTTGA AAGACCTATAACTTCTACCATCCCATTTTG (SEQ 工D N0:21}, (SEQ ID N0:22), (SEQ 工D NO:23), (SEQ ID N0:24), (SEQ ID NO:25), (SEQ 工D NO:26>, (SEQ ID NO:27), (SEQ·ID NO:2日）， (SEQ 工D NO:43), (SEQ ID NO:44), (SEQ ID NO:45), (SEQ ID NO:46), (SEQ ID NO:47), (SEQ ID NO:48), (SEQ 工D NO:49), (SEQ ID NO:50). 及 2.如申請專利範圍第1項之合成的寡核苷酸’其中該第二片段包括 ί；ίν AGGCATAGGACCCGTGTCTT (SEQ ID NO:75) 人 ^ n I I I 訂 I { (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 "3 .—種合成的寡核苷酸’其可充作偵測衣原體之三明治式雜交分析中的捕獲探針，其係包含一種第一片段，其核苷酸序列係至少9 0 %同質於衣原體質體DNA片段；及一種第二片段，其係至少9 0 %同質於經結合至固相上之寡核苷酸的核替酸序列，其中該第二片段不與衣原體質體D N A互補，其中該至少9 0 %同質於衣原體質體D N A片段的核苷酸序列係選自如下組成之類群：本紙张尺度適用中國國家榡準（CNS ) A4规格（210 X 297公釐） 2 B8 C8 D8 經濟部中央標準局貞工消費合作社印製

X、申請專利乾圍 ATTAATAGATTCTTGTTCTAAITGTTCCAT (SEQ ID NO : 55 }, TCTTCTAGATAACCAACCAAGCTGAATGGC (SEQ ID NO:56), | GTTTTAAGAACTVAGTTTTCTGGCCAAGAATT (SEQ ID NO: 57), '； TTGGTATACATTTGCAGGCTTGATTACAAA (SEQ ID NO :58), ATTTTCTTCGTCAGTTAAACCTTCCCATCC .(SEQ 工D NO :59 ), TCCTAAATGGTATAAGGCTTCTAAAGCAGT (SEQ ID NO: 60), TATCCATCCTTCLAAATTGAAAACTATTTGA (SEQ ID NO: 61), AAGACCTATAACTTCTACCATCCCATTTTG (SEQ ID NO:62), ACTITTTTAATAGCGGAGAATTTACTAATT (SEQ .ID NO: 63), GGATCGAAATGTAATACCGAAGAGAAAACC (SEQ 工D NO :64), CCATGTCTAmTTCCCAACAGTTATCTCA (SEQ ID NO : 65 > , TTAGAAGACGATTCCTTCCTATTGATAAAC (SEQ ID NO :S6), ATCACATCTGCGTCTTGCTCTATTTGACCG (SEQ ID NO:67), TCTCGCAAATCTGAAAGCATGGGAACTTTA (SEQ ID NO:S8), GCTCTATCCTCAACTTTTCTAGATAGTTGG (SEQ ID NO:69), AAACAAACTATAGGAATGTTTAGCTCTGAG (SEQ ID NO: 70), AAACCTCTTAAGGTTCTAGATATATCTGCT (SEQ ID NO:71), TCATTTTGACGATTTTCTCCAACCGATGAG (SEQ ID NO :72), Έ ATCAACTGCAAGTAATCGATAAATATTACG (SEQ ID NO :73), ACTCGATCTTCTTTTCTCAGCAACCGGATC (SEQ 工D NO :74). 4.如申請專利範圍第3項所述之合成的寡核苷酸，其中該第二片段包括 CTTCTTTGGAGAAAGTGGTG (SEQ ID NO:76)，； 5 · —組合成的寡核苷酸，其可充作偵測'衣原體之三明治式雜交分析中的擴大探針，其包含至少二種不同的寡核苜酸探針，其中每一個寡核苷酸探針係包含： —種第一片段，其核苷酸序列係至少9 0%同質於衣原體質體DNA片段；及一種第二片段，其係至少9 0%同質於核酸多體之寡核苷酸片段的核苷酸序列，其中該第二片段不與衣原體質本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） --------一裝-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -3 - A8 B8 . C8 _ D8 ____ 、申請專利範圍體D N A互補，其中該至少9 0%同質於衣原體質體DNA片段的核苷酸序列係選自如下組成之類群： ITCTTTAGAITTCTTAGTTATTTCTTCAAA (SEQ ID CTCTTTATTTAGATATAGAATTTCTTTTTT (SEQ ID GAGTTTAGAAGAATCCAGAAATTCAATGCG (SEQ ID TTCTATAGATTTATCGATAGCTAACTCGAT (SEQ ID TTTCCAGTTCCrrTGTACAAATGTACCGATT (SEQ ID CCTl'AAAATATATGCAAGACTTTTAACGTT (SEQ ID cttagttAattttcgtctctttttcgcagc (SEQ ID TGTAATCACCCAGTCGATAAATGTGTAAGC (SEQ ID CTTTGATGC^TTTGGGAAGCGCATTTTTAT (SEQ ID GGATTCTATTTGATCTACCAAGATAGGACA (SEQ ID CTCTACAACGAACCCTTTATGTTTCCGTGT (SEQ ID TGGTGAATTAAAAGGTGTTAAGTCTATATC (SEQ ID GTAAATCCTAATGATCGGAGAAAGAGTTTG (SEQ ID ACGGTCTACTATTTGTGTTCCATTAGTCCA (SEQ ID AGTTCTAGTTGCCACTATTAAAAACGGTTG (SEQ ID AGCTTCTTTTCCACTAAACTCATACTTATT (SEQ ID GGATGTTTTATACCGCTrAACTCCATAAGC (SEQ ID TAAGAATTCAGTTTTTGTAAAACGOATTCT {SEQ ID 經濟部中央標準局貝工消费合作社印裝 I ^^1 —I— - · I— - - - — Ili 1 ·Ι -八〆 I ----- n ----- V"™* (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) NO:5), NO:6), NO:7), NO：8), NO:9) / NO:10)/ NO:11)/ NO :12), NO :13) / NO：14), NO：15), NO:16), NO:17), NO:18), N0:19), NO :20), NO:2l), NO :22), NO.: 23), NO :24), NO:25), NO :2 6), NO :2 7), NO :2 8), NO :29), NO：3 0), NO :31), NO :3 2), NO :3 3), NO : 3 Ό , NO :3 5), NO :3 6), 一) TCTGGATAAAACAACCCCTTTTGTGTTCCC (SEQ ID GTAATTCGTTGCAGTCAGCAATCTTTGGAT (SEQ ID TGCTAATGCATGGTAATGAGATGAAAGAAA (SEQ ID CAATTTGGGAGATATCTTAATAGATTGACC (SEQ ID TCTTCTTCCAAACTTCTGATTTTCAAGGTG (SEQ ID AGGACTTTTGATGAAGTGGCAGTTACTATA (SEQ ID TTCTTCAGCGCTACACACGCTCAAATCATC (SEQ ID ATTAA.TVCGAGCGGAAAATGAAATTACTCAA (SEQ ID CG<3AGATCTACGCAATGG；\TTTTCATTGTA (SEQ ID GCGAATAGAAAAAGTCrITTGCTATAGCACT (SEQ ID GAATATATCATAAATAGACCGGCCTCTAGC (SEQ ID TATACGAGCCAGCACrCCAATTTCTGACTG (SEQ ID GTATCCTGTTGGGAAGGCATCAAAGAAAGA (SEQ ID TGGCCTAGCIX^CTATAATCACGAAATTACC (SEQ ID 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -4 - 298843 ts C8 D8•、申請專利範圍 ΙΛ AGCTAAGATAACTCCTTTATCATCAATATC (SEQ ID NO :37), TCTACGCTGTTGAGTAACCGCAAGATTTAT (SEQ ID NO :38), ACCTGCGCTCATTTCTAGAGATAGGAAACC (SEQ 工D NO:39), TGTrAAATTAGCAATAATCCGCTCAACAAT (SEQ ·工D NO ·· 4 0), TTCTTCTACTCGGAATAATTCTTCTTTAGA (SEQ ID NO:41), ATAAAAATGTGATTCTCTAACTGTTTCTCC (SEQ 工D NO :42). 及 6.如申請專利範圍第5項之一組合成的寡核苷酸其中該第二片段包括 AGGCATAGGACCCGTGTCTT (SEQ ID NO:75).\ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 7. —組合成的寡核苜酸，其可充作偵測衣原體之三明治式雜交分析中的捕獲探針，其包含至少二種不同的寡核苷酸探針，其中每一個寡核酸探針係包含： —種第一片段，其核苷酸序列係至少9 0 %同質於衣原體質體DNA片段；及一種第二片段，其係至少9 0%同質於經結合至固相、上之寡核苷酸的核苷酸序列，其中該第二片段不與衣原體質體D N A互補，其中該至少9 0%同質於衣原體質體DNA片段的核苷酸序列係選自如下組成之類群： ATTAATAGATTCTTGTTCTAATTGTTCCAT (SEQ ID NO :43), TCTTCTAGATAACCJVACCAAGCTGAATGGC (SEQ ID NO: 44), .GTTTAAGAACAAGTTTTCTGGCCAAGAATT (SEQ ID NO:45), TTGGTATACATTTGCAGGCTTGATTACAAA (SEQ ID NO :46), ATTTTCTTCGTCAGTTAAACCTTCCCATCC (SEQ ID NO :47), TCCTAAATGGTATAAGGCTTCTAAAGCAGT (SEQ ID NO :48), TATCCATCCTTCAAATTGAAAACTATTTGA (SEQ XD NO :49), 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -5 - A8 B8 C8 D8 6 及申請專利範圍 AAGACCTATAACTTCTACCATCCCATTTTG (SEQ ID NO :50}, GAAAACCGTATGAGAAACGGATCTAAGCTT (SEQ ID NO:51), AAGCCTTCCCTTTATACGCTCAAGCAATAG (SEQ ID NO :52), TTGATTCTC^GAGAACGTTGCTCGTCTTTT (SEQ ID NO :53),^ ATCCCCTCTTTCTAATTTTTCACCAGATAT (SEQ ID NO :54). -—**· -——I I. . — _______ 8.如申請專利範圍第7項之一組合成的寡核苷酸其中該第二片段包括 CTTCTTTGGAGAAAGTGGTG (SEQ ID NO:76). 9. 一組合成的寡核苷酸，其可充作偵測衣原體之三明治式雜交分析中的擴大探針，其包含至少二種不同的寡核苷酸探針，其中每一個寡核苷酸探針係包含一種第一片段，其核苷酸序列係至少9 0 %同質於衣原體質體DNA片段；及一種第二片段，其係至少9 0%同質於核酸多體之寡核苷酸片段的核苷酸序列，其中該第二片段不與衣原體質體D N A互補，其中該至少9 0%同質於衣原體質體DNA片段的核苷酸序列係選自如下組成的類群： ATTAATAGATTCTrrGTTCTAATTGTTCCAT (SEQ ID NO : 55 ), TCTTCTAGATAACCAACCAAGCTGAATGGC (SEQ ID NO:56), GTTTAAGAACAAGT,ITTCTGGCCAAGAATT (SEQ ID NO: 57), TTGGTATACATTTG CAGG CTTG ATT ACAAA (SEQ ID NO: 5Θ ), ATTTTCTTCGTCAGTTAAACCTTCCCATCC (SEQ ID NO :59), TCCTAAATGGTATAAGGCTTCTAAAGCAGT (SEQ ID NO :60), TATCCATCCITCAAATTGAAAACTATTTGA (SEQ ID NO :61), AAGACCTATAACTTCTACCATCCCATTTTG (SEQ ID NO:62), TTCTTTAGATTTCTTAGTTATTTCTTCAAA (SEQ ID NO：5), 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -{裟訂------^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局属工消費合作社印製 -6 - A8 Βδ C8 D8 άνχ 申請專利範圍 CTCTTTATTTAGATATAGAATTTCTTTTTT (SEQ GAGTTTAGAAGAATCCAGAAATTCAATGCG (SEQ TTCTATACATTTATCGATAGCTAACTCGAT (SEQ TTTCCAGTTCCTTGTACAAATGTACCGATT (SEQ ccttaaaatatatgcaagacttttXXcgtt—(S EQ— CTTAGTTAATTTTCGTCTCTTTTTCGCAGC (SEQ TGTAATCACCCAGTCGATAAAIXSTGTAAGC (SEQ CTITGATG CATTTGGG AAG CG CATTTTTAT (SEQ GGATTCTATTTGATCTACCAAGATAGGACA (SEQ CTCTACAACGAACCCTTTATGTTTCCGTGT (SEQ TGGTGAATTAAAAGGTGTTAAGTCTATATC (SEQ GTAAATCCTAATGATCGGAGAAAGAGTTTG (SEQ ACGGTCTACTATTTGTGTTCCATTAGTCCA (SEQ AGTTCTAGTTGCCACTATTAAAAACGGTTG (SEQ AGCTTCTTITCCACTAAACTCATACTTATT (SEQ GG ATGTTTTATACCGCTTAACTCCATAAGC (SEQ TAAGAATTCAGTTTTTGTAAAACGGATTCT (SEQ TCTGGATAAAACAACCCCTTTTGTGTTCCC (SEQ GTAATTCGTTGCAGTCAGCAATCTTTGGAT (SEQ TG CT AATG CATGGTAATG AG ATG AAAG AAA (SEQ CAATTTGGG AG ATATCTTAATAG ATTGACC (SEQ TCTTCTTCCAAACTTCTGATTTTCAAGGTG (SEQ AGGACTTTTGATGAAGTGGCAGTTACTATA (SEQ ID NO:6), ID NO:7), ID NO:8), ID NO :9 )., 工D NO:l〇), ID N0:1X)/ 工D NO :12), ID NO :13), ID NO:14), ID NO :15), ID NO :16), ID NO:17), ID NO :18), ID NO:19), ID N0：20), ID NO :21), 工D NO :22), ID NO :23), ID NO:24), ID NO:2S) , * ID NO :26), ID NO :27), ID NO :28). 及 (請先閣讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂經濟部中央揉準局貞工消費合作社印製 1 0 .如申請專利範圍第9項之一組合成的寡核苷酸，其中該第二片段包括 AGGCATAGGACCCGTGTCTT (SEQ ID NO:75).' 1 1 . 一組合成的寡核苷酸，其係充作偵測衣原體之三明治式雜交分析中的捕獲探針，其包含至少二種不同的寡核苷酸探針，其中每一個寡核苷酸探針包含：一種第一片段，其核苷酸序列係至少9 0%同質於衣原體質體DNA片段；及本紙張尺度逋用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -7 - A8 B8 C8 D8 經濟部中央標準局黃工消费合作社印裝六、申請專利範圍 —種第二片段，其係至少9 0 %同質於結合至固相上之寡核苷酸之核苷酸序列，其中該第二片段不與衣原體質體D N A互補，其中該至少9 0 %同質於衣原體質體D N A 片段的核苷酸序列係選自如下組成之類群： ACTTTTTTWVTAGCGGAGAA'hnrACTAATT ~(seq' ~ID_ ~N〇T63l / ggatcgaaatgtaataccgaagagaaaacc (SEQ ID NO:64) 9 CCA.TGTCTATTTTTCCCAACAGTTATCTCA (SEQ ID NO:65) t !J-Γ TTAGAAGACGATTCCTTCCTATTGATAAAC (SEQ ID NO:66) / ^ ATCACATCTGCGTCTTGCTCTATTTGACCG (SEQ ID NO:67) t <1' TCTCGCAAATCTGAAAGCATGGGAACTTTA (SEQ ID NO:68) / ^ GCTCTATCCTCAACTTTTCTAGATAGTTGG (SEQ ID NO :69), AAACAAACTATAGGAATGTTTAGCTCTGAG (SEQ ID NO :70) • AAACCTC^rTTVAGGTTCTAGATATATCTGCT (SEQ ID NO:71) • TCATTT1X3ACGATTTTCTCCAACCGATGAG (SEQ ID NO :72) t ATCAACTGCAAGTAATCGATAAATATTACG (SEQ ID NO :73) t ACTCGATCTTCTTTTCTCAGCAACCGGATC (SEQ 工P NO:74) • 1 ^12.如申請專利範圍第11 項之一組合成的寡核甘酸，其中該第二片段包括 CTTCTTTGGAGAAAGTGGTG (SEQ ID .Ν01 7 6 )*"' 1 3 . 一種偵測樣品中衣原體存在之溶液相二明治式雜交分析法’此方法包括 (a )在雜交條件下，將樣品與過量的下列接觸 ( i )擴大探針，包括如申請專利範圍第 5項之一組合成的寡核替酸’及（ϋ)捕獲探針’包括如申請專利範圍第 7 項之一組合成的寡核替酸； (b )在雜交條件下，將（a _____f /^XTC- \ AAteUi / -M A V, ..Vit \ )步驟產物與結合至固 --------(裝------订------1 一 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ^紙张尺度適用中國國家橾準(CNS ) A4規格（210x297公釐〉經濟部中央標準局貞工消費合作社印製 293843 έ88 C8 . _ D8 六、申請專利範圍相之該寡核苷酸接觸： (C )之後分離出未結合至固相之物質； (d )在雜交條件下，將（C )步驟所得之結合產物與核酸多體接觸，該多體包括至少一種寡核苷酸片段，其至少9 0%同質於擴大探針多核苷酸之第二片段，及多個寡核苷酸片段，其至少9 0%同質於經標記之寡核苷酸； (e)移出未結合之多體； (f )在雜交條件下，將（e )步驟之固相複合物產物與經標記之寡核苷酸接觸； (g) 移出未結合之經標記之寡核苷酸；及 (h) 於（g)步驟之囿相複合物產物中偵測標記物之存在。 1 4 .—種偵測樣品中衣原體存在之溶液相三明治式雜交分析法，此方法包括 (a )在雜交條件下，將樣品與過量的下列接觸，( i )擴大探針，包括如申請專利範圍第9項之一組合成的寡核苷酸，及（ϋ )捕獲探針，包括如申請專利範圍第 11項之一組合成的寡核Μ酸； (b )在雜交條件下，將（a )步驟產物與結合至固相之該寡核苷酸接觸； (c )之後分出未結合至固相上之物質； (d )在雜交條件下，將（c )步驟所得之結合產物與核酸多體接觸，該多體包括至少一種寡核苷酸片段，其本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ---------ί 裝------訂------ί i (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ^93843 A8 B8 C8 · -—__D8 六、申請專利範圍至少9 0%同質於擴大探針多核苷酸之第二片段，及多個第—寡核苷酸片段，其至少9 〇%同質於經標記之寡核苷酸； (S )除去未結合之多體； (ί )在雜交條件下’將（e )步驟之固相複合物產物與經檫記之寡核苷酸接觸； (g) 除去未結合之經檩記之寡核苷酸；及 t (h) 於（g)步驟之固相複合物產物中偵測標記物之存在。 1 5 _ —種偵測樣品中衣原體存在之溶液相三明治式雜交分析法，此方法包括 (a )在雜交條件下’將樣品與過量的下列接觸：（ i )擴大探針，其包括如申請專利範圍第9項之—組合成的寡核苷酸，及（ϋ )捕獲探針，包括如申請專利範圍第 7項之一組合成的寡核苷酸；經濟部中央梯隼局貝工消费合作社印製 (請先鬩讀背面之注意ί項再填寫本頁) (b )在雜交條件下，將（a )步驟產物與結合至固相之該寡核苷酸接觸； (c)之後分出未結合至固相之物質； (d )在雜交條件下，將（c )步驟所得之結合產物與核酸多體接觸，該多體包括至少一種寡核苷酸片段，其至少9 0%同質於擴大探針多核苷酸之第二片段，及多個第二寡核苷酸片段，其至少9 0%同質於經標記之寡核苷酸；本紙張尺度逋用中國國家梯承（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） 10 - 293843 A8 B8 · C8 D8 _ 六、申請專利範圍 (e)除去未結合的多體； (f )在雜交條件下，將（e )步驟之固相複合物產物與經標記之寡核苷酸接觸； (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) (g)除去未結合之經標記寡核苷酸；及 (h )於（g )步驟之固相複合物產物中偵測標^己物之存在。 1 6 . —種偵測樣品中衣原體存在之溶液相三明治式雜交分析法，此方法包括 (a)在雜交條件下，將樣品與過量之下列接觸：（ i )擴大探針，包括如申請專利範圔第5項之一組合成的寡核苷酸，及（ϋ )捕獲探針，包括如申請專利範圍第 11項之一組合成的寡核苷酸； (b )在雜交條件下，將（a )步驟產物與結合至固相之該寡核苷酸接觸； (c)之後分出未結合至固相之物質；經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (d )在雜交條件下，將（c )步驟所得之結合產物與核酸多體接觸，該多體包括至少一種寡核替酸片段，其至少9 0%同質於擴大探針多核苷酸之第二片段，及多個第二寡核苷酸片段，其至少9 0%同質於經檫記之寡核替酸； (e )除去未結合之多體； (f )在雜交條件下，將（e )步驟之固相複合物產物與經標記之寡核苷酸接觸：本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） " 293843 A8 B8 C8 D8 經濟部中央標準局wc工消費合作社印製六、申請專利範圍 (g) 移去未結合之經標記寡核苷酸：及 (h) 於（g)步驟之固相複合物產物中偵測標記物之存在。 1 7 ·—種用於偵測樣品中衣原體之套組，其包括下列之組合 (i) 一組擴大探針寡核苷酸，其包括如申請專利範圍第5項之一組合成的寡核苷酸； (ϋ )—組捕獲探針寡核苷酸，其包括如申請專利範圍第7項之一組合成的寡核苷酸； (iii )核酸多體，該多體包括至少一種寡核苷酸片段，其至少9 0%同質於擴大探針多核苷酸之第二片段，及至少一種第二寡核Μ酸片段，其至少9 0 %同質於經標記之寡核苷酸；及 (iv)經標記之寡核苷酸。 1 8 . —種偵測樣品中衣原體之套組，其包括下列之組合 (i )—組擴大探針寡核苷酸，其包括如申請專利範圍第5項之一組合成的寡核苷酸； (ϋ )—組擴大探針寡核苷酸，其包括如申請專利範圍第11項之一組合成的寡核替酸； (iii)核酸多體，該多體包括至少一種寡核苷酸，其至少9 0%同質於擴大探針多核苷酸之第二片段，及至少一種第二寡核苷酸片段，其至少9 0 %同質於經標記之寡 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂 i 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 12 - 經濟部中央標準局员工消費合作社印裝 233843 έ88 C8 - D8 ☆、申請專利範圍核苷酸；及 (iv)經標記之寡核苷酸。 1 9 . 一種偵測樣品中衣原體之套組，其包括下列之組合 (i ) 一組擴大探針寡核苷酸，其包括如申請專利範圍第9項之一組合成的寡核μ酸； (ϋ ) 一組擴大探針寡核@酸，其包括如申請專利範圍第7項之一組合成的寡核苷酸； (ii)核酸多體，該多體包括至少一種寡核苷酸，其至少9 0 %同質於擴大探針多核苷酸之第二片段，及至少一種第二寡核苷酸片段，其至少9 0%同質於經標記之寡核苷酸：及 (iv)經標記之寡核苷酸。 2 0 .—種偵測樣品中衣原體之套組，其包括下列之組合 (i ) 一組擴大探針寡核苷酸，其包括如申請專利範圍第9項之一組合成的寡核苷酸： (ϋ ) 一組擴大探針寡核苷酸，其包括如申請專利範圍第1 1項之一組合成的寡核替酸； (迅）核酸多體，該多體包括至少一種寡核苷酸，其至少9 0 %同質於擴大探針多核苷酸之第二片段，及至少一種第二寡核苷酸片段，其至少9 0%同質於經標記之寡核苷酸；及 (iv)經標記之寡核苷酸。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂 13 -