TW202542195A

TW202542195A - 用於調節Ｔａｕ表現之組成物及方法

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Publication number: TW202542195A
Application number: TW114100602A
Authority: TW
Inventors: 莎拉迪佛斯; 史嘉雷巴克; 邁伊賽耶爾; 利薩恩尼爾維斯基; 馬克辛歐西波夫; 理查克拉; 斯文米歇爾; 法蘭克亞辛斯基; 拉里薩羅斯基奇
Original assignee: 美商得納利醫療公司
Priority date: 2024-01-08
Filing date: 2025-01-07
Publication date: 2025-11-01

Abstract

描述微管相關蛋白tau(MAPT)反義寡核苷酸(ASO)和MAPT ASO接合物、以及使用MAPT ASO和MAPT ASO接合物治療神經退化性疾患(諸如，阿茲海默症)之方法。

Description

用於調節Ｔａｕ表現之組成物及方法

本發明係關於用於調節Tau表現之組成物及方法。相關申請案之交叉參照

本申請案主張於2024年1月8日提交的美國臨時申請案第63/618,798號之益處，其係以引用方式納入本文中。序列表

檔案DNL-038-03-WO_SeqListing.xml中寫入之序列表大小為237千位元組，創建於2025年1月6日，並且特此以引用方式納入。

阿茲海默症是一種進行性神經退化性疾患，目前是美國第七大致死原因，並且為失智症之最常見原因。阿茲海默症和其他神經退化性疾病的一個突出病理特徵為微管相關蛋白tau之異常聚集和包涵體形成。編碼tau之微管相關蛋白tau(MAPT)基因中之突變與和神經退化相關之tau蛋白病變有關。

活體內遞送基於核酸之分子(諸如，反義寡核苷酸)通常需要特定的靶向以到達某些組織或細胞類型。特別地，向非肝組織之遞送仍為一個障礙，並且限制了此類療法之使用。由於血腦屏障(BBB)的存在，向中樞神經系統(CNS)遞送寡核苷酸構成明顯的問題。將寡核苷酸遞送入中樞神經系統中之一種手段為鞘內遞送。然而，鞘內遞送為侵入性，具有較高風險的副作用，且常導致分布不均勻。

因此，對於活體內(特別是向CNS系統組織)遞送基於核酸之治療劑之新穎和改進之方法存在持續的需求。

本文中描述微管相關蛋白tau(MAPT)反義寡核苷酸(ASO)接合物，其包含至少一種MAPT反義寡核苷酸(ASO)和靶向轉鐵蛋白受體(TfR)之Fc多肽二聚體，其中該Fc多肽二聚體之Fc多肽係經修飾以與TfR結合。TfR在血腦屏障(BBB)上高度表現，而TfR自然地將轉鐵蛋白從血液轉移入腦中。所述之MAPT ASO接合物與TfR結合，運輸穿過BBB，以及將附接之MAPT ASO運輸穿過BBB。在一些具體例中，靶向TfR之Fc多肽二聚體進一步包含至少一個半胱胺酸取代以促進MAPT ASO之附接。在一些具體例中，Fc二聚體包含第一Fc多肽和第二Fc多肽，其中該第二Fc多肽包含與人類轉鐵蛋白受體1(TfR)特異性地結合之經修飾之恆定結構域，並且包含與SEQ ID NO：12具有至少70%序列同一性之序列，其中該第二Fc多肽與該第一Fc多肽形成Fc二聚體。

描述MAPT反義寡核苷酸(ASO)，其包含核酸序列：或，其中A_L、^mC_L、G_L以及T_L分別為腺嘌呤鎖核苷、5-甲基胞嘧啶鎖核苷、鳥嘌呤鎖核苷以及胸腺嘧啶鎖核苷；A、C、G以及T分別為去氧腺苷核苷、去氧胞苷核苷、去氧胍核苷以及去氧胸苷核苷；各p獨立地為硫代磷酸酯(PS)核苷間鍵聯或穩定化核苷間鍵聯，以及(P)_a、(P)_b以及(P)_c中之至少2者不為PS核苷間鍵聯；各x獨立地為PS核苷間鍵聯、磷酸二酯(PO)核苷間鍵聯或穩定化核苷間鍵聯；以及任何不為穩定化核苷間鍵聯之核苷間鍵聯為PS核苷間鍵聯或磷酸二酯核苷間鍵聯。穩定化核苷間鍵聯係獨立地選自由下列各者所組成群組：二硫代磷酸酯(PS2)核苷間鍵聯、磷醯胍(PN)核苷間鍵聯、甲磺醯基胺基磷酸酯(MsPA)核苷間鍵聯以及O-異丙基硫代磷酸酯(OiPS)核苷間鍵聯。

在一些具體例中，各p和x為PS核苷間鍵聯。

在一些具體例中，x _g、x _h以及x _i各自為PS核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _g為PS核苷間鍵聯，並且x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _g、x _h以及x _i各自為PN核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _g和x _h各自為PN核苷間鍵聯，並且x _i為PO核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _g和x _i各自為PN核苷間鍵聯，並且x _h為PO核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯，並且x _g為PO核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _h和x _i為PN核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _g、x _h以及x _i中之至少2者為PN核苷間鍵聯。

在一些具體例中，x _d、x _e以及x _f各自為PS核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _d和x _e為PN核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _d和x _e為PN核苷間鍵聯，並且x _f為PS核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _d為PS核苷間鍵聯，並且x _e和x _f各自為PS核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _d為PN核苷間鍵聯，並且x _e和x _f為PS核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _d、x _e以及x _f各自為PN核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _d和x _e各自為PN核苷間鍵聯，並且x _f為PO核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _d和x _f各自為PN核苷間鍵聯，並且x _e為PO核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _e和x _f各自為PN核苷間鍵聯，並且x _d為PO核苷間鍵聯。

在一些具體例中，x _d、x _e、x _f、x _g、x _h以及x _i各自為PS核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _d、x _e以及x _f各自為PS核苷間鍵聯，x _g為PS核苷間鍵聯，以及x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _d、x _e以及x _f為PS核苷間鍵聯，並且x _g、x _h以及x _i各自為PN核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _d和x _e為PN核苷間鍵聯，x _f為PS核苷間鍵聯，以及x _g、x _h以及x _i各自為PS核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _d和x _e為PN核苷間鍵聯，x _f為PS核苷間鍵聯，x _g為PS核苷間鍵聯，以及x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _d為PS核苷間鍵聯，x _e和x _f各自為PN核苷間鍵聯，x _g為PS核苷間鍵聯，以及x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _d為PN核苷間鍵聯，並且x _e和x _f各自為PS核苷間鍵聯，x _g為PS核苷間鍵聯，以及x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _d、x _e、x _f、x _g、x _h以及x _i各自為PN核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _d、x _e以及x _f各自為PN核苷間鍵聯，x _g和x _h各自為PN核苷間鍵聯，以及x _i為PO核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _d、x _e以及x _f各自為PN核苷間鍵聯，x _g和x _i各自為PN核苷間鍵聯，以及x _h為PO核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _d、x _e以及x _f各自為PN核苷間鍵聯，x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯，以及x _g為PO核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _d和x _e各自為PN核苷間鍵聯，並且x _f為PO核苷間鍵聯，以及x _g、x _h以及x _i各自為PN核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _d和x _f各自為PN核苷間鍵聯，並且x _e為PO核苷間鍵聯，以及x _g、x _h以及x _i各自為PN核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _e和x _f各自為PN核苷間鍵聯，並且x _d為PO核苷間鍵聯，以及x _g、x _h以及x _i各自為PN核苷間鍵聯。在一些具體例中，x _h和x _i或x _g、x _h以及x _i為PN核苷間鍵聯，並且x _d和x _e或x _d、x _e以及x _f為PN核苷間鍵聯。

在一些具體例中，MAPT ASO包含SEQ ID NO：111，並且：(a)p _a、p _b以及p _c為PS核苷間鍵聯；(b)p _a為穩定化核苷間鍵聯，並且p _b和p _c為PS核苷間鍵聯；(c)p _b為穩定化核苷間鍵聯，並且p _a和p _c為PS核苷間鍵聯；(d)p _a和p _b為穩定化核苷間鍵聯，並且p _c為PS核苷間鍵聯；(e)p _b和p _c為穩定化核苷間鍵聯，並且p _a為PS核苷間鍵聯；(f)p _a、p _b以及p _c為穩定化核苷間鍵聯；或(g)p _a和p _b為PS2核苷間鍵聯。

在一些具體例中，MAPT ASO包含SEQ ID NO：111，並且：(a)p _a為PS2核苷間鍵聯，並且p _b和p _c為PS核苷間鍵聯；(b)p _b為PS2核苷間鍵聯，並且p _a和p _c為PS核苷間鍵聯；(c)p _b為PN核苷間鍵聯，並且p _a和p _c為PS核苷間鍵聯；(d)p _a和p _b為PN核苷間鍵聯，並且p _c為PS核苷間鍵聯；(e)p _a和p _c為PS2核苷間鍵聯，並且p _c為PS核苷間鍵聯；(f)p _a和p _b為MsPA核苷間鍵聯，並且p _c為PS核苷間鍵聯；(g)p _a和p _b為OiPS核苷間鍵聯，並且p _c為PS核苷間鍵聯；(h)p _b和p _c為PN核苷間鍵聯，並且p _a為PS核苷間鍵聯；(i)p _a、p _b以及p _c為PN核苷間鍵聯；或(j)p _a、p _b以及p _c為MsPA核苷間鍵聯。

在一些具體例中，MAPT ASO包含SEQ ID NO：111，並且p _a和p _b為PS2核苷間鍵聯。在一些具體例中，MAPT ASO包含SEQ ID NO：111，並且：(a)x _h和x _i或x _g、x _h以及x _i為PN核苷間鍵聯，x _d和x _e或x _d、x _e以及x _f為PN核苷間鍵聯，以及p _a和p _b為PS2核苷間鍵聯；(b)x _d、x _e、x _h以及x _i為PN核苷間鍵聯，並且p _a和p _b為PS2核苷間鍵聯；(c)x _d、x _e、x _f、x _g、x _h以及x _i為PN核苷間鍵聯，並且p _a和p _b為PS2核苷間鍵聯；(d)x _d、x _e、x _h以及x _i為PN核苷間鍵聯，p _a和p _b為PS2核苷間鍵聯，以及所有其他核苷間鍵聯為PS鍵聯；或(e)x _d、x _e、x _f、x _g、x _h以及x _i為PN核苷間鍵聯，p _a和p _b為PS2核苷間鍵聯，並且所有所有其他核苷間鍵聯均為PS鍵聯。

在一些具體例中，MAPT ASO包含SEQ ID NO：111，並且p _b和p _c為PN核苷間鍵聯。在一些具體例中，MAPT ASO包含SEQ ID NO：111，並且：(a)x _h和x _i或x _g、x _h以及x _i為PN核苷間鍵聯，x _d和x _e或x _d、x _e以及x _f為PN核苷間鍵聯，以及p _b和p _c為PN核苷間鍵聯；(b)x _h和x _i為PN核苷間鍵聯，並且p _b和p _c為PN核苷間鍵聯；或(c)x _h和x _i為PN核苷間鍵聯，p _b和p _c為PN核苷間鍵聯，以及所有其他核苷間鍵聯為PS鍵聯。

在一些具體例中，MAPT ASO包含SEQ ID NO：111，並且p _a和p _b為MsPA核苷間鍵聯，或p _a、p _b以及p _c為MsPA核苷間鍵聯。在一些具體例中，MAPT ASO包含SEQ ID NO：111，並且：(a)x _h和x _i或x _g、x _h以及x _i為PN核苷間鍵聯，x _d和x _e或x _d、x _e以及x _f為PN核苷間鍵聯，以及p _a和p _b或p _a、p _b以及p _c為MsPA核苷間鍵聯；(b)x _g、x _h以及x _i為PN核苷間鍵聯，p _a、p _b以及p _c為MsPA核苷間鍵聯；(c)x _d、x _e、x _h以及x _i為PN核苷間鍵聯，並且p _a和p _b為MsPA核苷間鍵聯；(d)x _g、x _h以及x _i為PN核苷間鍵聯，p _a、p _b以及p _c為MsPA核苷間鍵聯，以及所有其他核苷間鍵聯為PS鍵聯；或(e)x _d、x _e、x _h以及x _i為PN核苷間鍵聯，p _a和p _b為MsPA核苷間鍵聯，以及所有其他核苷間鍵聯為PS鍵聯。

在一些具體例中，MAPT ASO包含SEQ ID NO：111，並且p _a和p _b為OiPS核苷間鍵聯，或p _a、p _b以及p _c為OiPS核苷間鍵聯。在一些具體例中，MAPT ASO包含SEQ ID NO：111，並且：(a)x _h和x _i或x _g、x _h以及x _i為PN核苷間鍵聯，x _d和x _e或x _d、x _e以及x _f為PN核苷間鍵聯，以及p _a和p _b或p _a、p _b以及p _c為OiPS核苷間鍵聯；(b)x _d、x _e、x _f、x _g、x _h以及x _i為PN核苷間鍵聯，以及p _a和p _b為OiPS核苷間鍵聯；或(c)x _d、x _e、x _f、x _g、x _h以及x _i為PN核苷間鍵聯，p _a和p _b為OiPS核苷間鍵聯，以及所有其他核苷間鍵聯為PS鍵聯。

在一些具體例中，MAPT ASO包含SEQ ID NO：111，並且經修飾之MAPT ASO包含：其中A_L、^mC_L、T_L以及G_L分別為腺嘌呤鎖核酸、5-甲基胞嘧啶鎖核酸、胸腺嘧啶鎖核酸；以及鳥嘌呤鎖核酸；A、C、T以及G分別為去氧腺苷、去氧胞苷、去氧胸苷、去氧鳥苷；s為PS核苷間鍵聯；n為PN核苷間鍵聯；t為PS2核苷間鍵聯；u為MsPA核苷間鍵聯，o為OiPS核苷間鍵聯。表示MAPT ASO之化學結構係如圖10、11、12、13以及14所示。MAPT ASO亦可為如圖10、11、12、13以及14所示之任何結構之鹽。

在一些具體例中，MAPT ASO包含SEQ ID NO：112，並且：(a)p _k、p _l、p _n以及p _o為穩定化核苷間鍵聯；(b)p _k、p _l、p _n以及p _o為穩定化核苷間鍵聯，並且p _j和p _m為PS核苷間鍵聯；(c)p _j、p _l以及p _o為穩定化核苷間鍵聯；(d)p _j、p _l以及p _o為穩定化核苷間鍵聯，並且p _k、p _m以及p _n為PS核苷間鍵聯；(e)p _l、p _m、p _n以及p _o為穩定化核苷間鍵聯；或(d)p _l、p _m、p _n以及p _o為穩定化核苷間鍵聯，並且p _j和p _k為PS核苷間鍵聯。

在一些具體例中，MAPT ASO包含SEQ ID NO：112，並且(a)p _k、p _l、p _n以及p _o為PN核苷間鍵聯；(b)p _k、p _l、p _n以及p _o為PN核苷間鍵聯，並且p _j和p _m為PS核苷間鍵聯；(c)p _j為PN鍵聯，並且p _l和p _o為PS2核苷間鍵聯；(d)p _j為PN鍵聯，p _l和p _o為PS2核苷間鍵聯，以及p _k、p _m以及p _n為PS核苷間鍵聯；(e)p _l和p _m為PS2核苷間鍵聯，並且p _n和p _o為PN核苷間鍵聯；或(d)p _l和p _m為PS2核苷間鍵聯，p _n和p _o為PN核苷間鍵聯，以及p _j和p _k為PS核苷間鍵聯。

在一些具體例中，MAPT ASO包含SEQ ID NO：112，並且經修飾之MAPT ASO包含：其中^mC_L、T_L以及G_L分別為5-甲基胞嘧啶鎖核苷、胸腺嘧啶鎖核苷以及鳥苷鎖核苷；A、C、T以及G分別為去氧腺苷、去氧胞苷、去氧胸苷以及去氧鳥苷；*為PS核苷間鍵聯；n為PN核苷間鍵聯；以及t為PS2核苷間鍵聯。

在一些具體例中，寡核苷酸含有5'端基，其中該5'端基可為，但不限於，磷酸二酯(PO)基、硫代磷酸酯(PS)基、二硫代磷酸酯(PS2)基、甲磺醯基-胺基磷酸酯(MsPA)基、環狀磷醯胍(PN)基、或O-異丙基硫代磷酸酯(OiPS)。在一些具體例中，寡核苷酸(或穩定之寡核苷酸)含有選自由下列各者所組成群組之5'端基：PO、PS以及PN。在一些具體例中，寡核苷酸(或穩定之寡核苷酸)含有PO 5'端基。在一些具體例中，寡核苷酸(或穩定之寡核苷酸)含有PS 5'端基。在一些具體例中，寡核苷酸(或穩定之寡核苷酸)含有PN 5'端基。在一些具體例中，寡核苷酸(或穩定之寡核苷酸)含有PS2 5'端基。在一些具體例中，寡核苷酸(或穩定之寡核苷酸)含有MsPA 5'端基。在一些具體例中，寡核苷酸(或穩定之寡核苷酸)含有OiPS 5'端基。

描述與靶向轉鐵蛋白受體(TfR)之Fc多肽二聚體接合之MAPT ASO。任何所述之MAPT ASO可與靶向TfR之Fc多肽二聚體接合。在一些具體例中，靶向TfR之Fc多肽二聚體包含第一Fc多肽和第二Fc多肽，其中該第二Fc多肽包含與人類轉鐵蛋白受體1(TfR)特異性地結合之經修飾之恆定域，以及其中該第二Fc多肽與該第一Fc多肽形成Fc二聚體。在一些具體例中，靶向TfR之Fc多肽二聚體包含不含有與人類轉鐵蛋白受體1(TfR)特異性地結合之經修飾之恆定域之第一Fc多肽，以及包含與TfR特異性地結合之經修飾之恆定域之第二Fc多肽，其中第一和第二Fc多肽形成Fc二聚體。在一些具體例中，第一Fc多肽、第二Fc多肽或第一和第二Fc多肽兩者係經修飾以降低效應子功能。在一些具體例中，第一Fc多肽和第二Fc多肽係經修飾以降低效應子功能。在一些具體例中，第一Fc多肽包含各自根據EU編號之位置239處之半胱胺酸、位置234處之A、位置235處之A以及位置329處之絲胺酸。在一些具體例中，第二Fc多肽包含各自根據EU編號之位置234處之A、位置235處之A以及位置329處之絲胺酸，並且包含與SEQ ID NO：12具有至少90%序列同一性之序列。

在一些具體例中，靶向TfR之Fc多肽二聚體進一步包含經由鉸鏈區與第一Fc多肽融合物以形成第一Fab-Fc融合多肽之非靶向之Fab(NTF)。在一些具體例中，靶向TfR之Fc多肽二聚體進一步包含經由鉸鏈區與第二Fc多肽融合以形成第二Fab-Fc融合多肽之NTF。在一些具體例中，靶向TfR之Fc多肽二聚體包含經由鉸鏈區與第一Fc多肽融合以形成第一Fab-Fc融合多肽之非靶向之Fab(NTF)，以及經由鉸鏈區與第二Fc多肽融合以形成第二Fab-Fc融合多肽之非靶向之Fab(NTF)，其中該第一和第二肽Fab-Fc融合多肽形成二聚體。在一些具體例中，第一和第二NTF各自包含重鏈片段和輕鏈，該重鏈片段包含SEQ ID NO：109或110，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：108。在一些具體例中，第一和第二NTF各自包含重鏈片段和輕鏈，該重鏈片段包含SEQ ID NO：130或131，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：129。在一些具體例中，鉸鏈區各自包含SEQ ID NO：121。

在一些具體例中，靶向TfR之Fc多肽二聚體進一步包含經由鉸鏈區與第一Fc多肽融合以形成NVBR-Fc融合多肽之非結合可變區(NBVR)。在一些具體例中，靶向TfR之Fc多肽二聚體進一步包含經由鉸鏈區與第二Fc多肽融合以形成NBVR-Fc融合多肽之NVBR。在一些具體例中，NVBR各自包含SEQ ID NO：109或110之可變區。在一些具體例中，絞鏈區各自包含SEQ ID NO：121。

MAPT ASO經由連接基與靶向TfR之Fc多肽二聚體連接。連接基可為發明所屬技術領域中可用的任何適合於將寡核苷酸與多肽連接之連接基。MAPT ASO可與第一Fc多肽、第二Fc多肽、第一NTF(若存在)及/或第二NTF(若存在)連接。在一些具體例中，MAPT ASO與第一Fc多肽、第二Fc多肽、第一NTF(若存在)及/或第二NTF(若存在)共價連接。在一些具體例中，MAPT ASO在位置239處之半胱胺酸處與第一Fc多肽連接。在一些具體例中，第一Fc多肽包含CH1域，並且MAPT ASO在位置114(根據Kabat編號)或位置124(根據EU編號)處之半胱胺酸處與第一Fc多肽連接(亦即，CH1域包含A114C取代或S124C取代)。在一些具體例中，MAPT ASO經由其5'端與第一Fc多肽連接。在一些具體例中，第一Fc多肽經由附接位置239處之半胱胺酸之連接基和MAPT ASO之5'端(或MAPT ASO之5'端基)與MAPT ASO連接，其中該連接基包含：，其中與化學結構中之鍵相交之「」表示化學結構中之波浪鍵相交之鍵與分子之其餘部分的附接點。

在一些具體例中，第二Fc多肽之經修飾之恆定域包含：位置153處之麩胺酸(E)、白胺酸(L)、絲胺酸(S)、纈胺酸(V)、色胺酸(W)或酪胺酸(Y)；位置157處之Y、苯丙胺酸(F)、W、甲硫胺酸(M)、脯胺酸(P)或V；位置159處之蘇胺酸(T)、天冬醯胺(N)或V；位置160處之E、異白胺酸(I)、P或V；位置161處之W；位置162處之丙胺酸(A)、I、V、絲胺酸(S)或T；位置163處之N、S、精胺酸(R)或T；位置186處之T、組胺酸(H)或S；位置188處之E、S、天冬胺酸(D)、甘胺酸(G)、T、P、麩醯胺(Q)、或R；位置189處之E或R；位置191處之Q；位置192處之Q；位置194處之F、H、離胺酸(K)、Y或W；位置197處之S、T或W；以及位置199處之S、C、P、M或W，並且參照SEQ ID NO：1編號。

在一些具體例中，第二Fc多肽之經修飾之恆定域包含：根據EU編號之位置380處之E、L、S、V、W或Y；位置384處之Y、F、W、M、P或V；位置386處之T、N或V；位置387處之E、I、P或V；位置388處之W；位置389處之A、I、V、S或T；位置390處之N、S、R或T；位置413處之T、H或S；位置415處之E、S、D、G、T、P、Q或R；位置416處之E或R；位置418處之Q；位置419處之Q；位置421處之F、H、K、Y或W；位置424處之S、T或W；以及位置426處之S、C、P、M或W。

在一些具體例中，第二Fc多肽之經修飾之恆定域包含：位置153處之E；位置157處之Y；位置159處之T；位置160處之E；位置161處之W；位置162處之A；位置163處之N；位置186處之T；位置188處之E；位置189處之E；位置191處之Q；位置192處之Q；位置194處之F；位置197處之S；以及位置199處之S，並且參照SEQ ID NO：1編號。

在一些具體例中，第二Fc多肽之經修飾之恆定域進一步包含根據EU編號之位置380處之E、位置384處之Y、位置386處之T、位置387處之E、位置388處之W、位置389處之A、位置390處之N、位置413處之T、位置415處之E、位置416處之E以及位置421處之F。

在一些具體例中，第二Fc多肽之經修飾之恆定域包含：根據EU編號之位置380處之E；位置384處之Y；位置386處之T；位置387處之E；位置388處之W；位置389處之A；位置390處之N；位置413處之T；位置415處之E；位置416處之E；位置418處之Q；位置419處之Q；位置421處之F；位置424處之S；以及位置426處之S。

在一些具體例中，第二Fc多肽進一步包含根據EU編號之位置366處之W，並且第一Fc多肽進一步包含根據EU編號之位置366處之絲胺酸、位置368處之A以及位置407處之纈胺酸。在一些具體例中，第二Fc多肽進一步包含根據EU編號之位置366處之絲胺酸、位置368處之A以及位置407處之纈胺酸，並且第一Fc多肽進一步包含根據EU編號之位置366處之W。

在一些具體例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列。在一些具體例中，第一Fc多肽包含SEQ ID NO：63或80之胺基酸序列。在一些具體例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列，並且第一Fc多肽包含SEQ ID NO：63或80之胺基酸序列。

在一些具體例中，第一和第二NTF各自包含重鏈可變區和輕鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO：109或110，並且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：108。

在一些具體例中，第一Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：100或101，並且第二Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：98或99。

某些具體例提供包含如本文中所述之MAPT ASO接合物和醫藥上可接受之載劑或稀釋劑之醫藥組成物。

某些具體例提供一種產生降低之Tau表現之神經元細胞之方法，該方法包含向該神經元細胞遞送如本文中所述之MAPT ASO接合物，其中該MAPT ASO降低內源性MAPT基因之表現水平。神經元細胞可為，但不限於，腦細胞、深層腦細胞或脊髓細胞。

某些具體例提供一種修飾神經元細胞以降低Tau表現之方法，該方法包含向該神經元細胞遞送如本文中所述之MAPT ASO接合物，其中該MAPT ASO降低內源性MAPT基因之表現水平。神經元細胞可為，但不限於，腦細胞、深層腦細胞或脊髓細胞。

某些具體例提供一種向有需求之人類對象之CNS或CNS細胞遞送MAPT ASO之方法，其包含向該對象投予如本文中所述之MAPT ASO接合物。

使用所述之MAPT ASO接合物向神經元細胞遞送MAPT ASO可用以治療神經退化性疾患。向神經元細胞遞送所述之MAPT ASO或可用以治療tau相關之神經退化性疾患。神經退化性疾患可為，但不限於，阿茲海默症。

某些具體例提供一種降低有需求之人類對象之MAPT信使核糖核酸(mRNA)表現或水平之方法，該方法包含向該人類對象投予如本文中所述之MAPT ASO接合物。

I. 定義在詳述本教導之前，應理解本揭露不限於特定的組成物或製程步驟，因為此等可改變。應注意，如在本說明書和所附申請專利範圍中所使用，單數形式「一(a)」、「一(an)」以及「該(the)」包括複數引用，除非前後文另有明確規定。因此，例如，「一個寡核苷酸」之提及包括複數個寡核苷酸等。連接詞「或」應按包含性意義解讀，亦即，等同於「及/或」，除非在前後文中包含性意義不合理。

一般來說，術語「約(about)」表示組成物之組分的數量沒有顯著改變，並且不會對組成物之活性或穩定性產生任何顯著影響。當說明書揭示某個參數的具體值時，該說明書應理解為以「約」該值的格式另外揭示該參數。當使用術語「約」和「大約(approximately)」來修飾數值或範圍中指定的量時，表示該數值以及發明所屬技術領域中之技術人員已知的值的合理偏差(例如，測量標準誤差邊際(SEM))(例如，±20%、±10%或±5%)皆在所述值的預期含義範圍內。

「包含(comprising)」或「包括(including)」一或多個所述要素之組成物或方法可包括未具體列出的其他要素。例如，「包含」或「包括」Fc多肽二聚體之組成物可單獨含有Fc多肽二聚體或含有Fc多肽二聚體與其他成分之組合。

值的範圍的指定包括該範圍內的或定義該範圍的所有整數，以及由該範圍內的整數所定義的所有次範圍。

「包含(comprise)」、「包含(comprises)」、「包含(comprising)」、「含有(contain)」、「含有(contains)」、「包含(containing)」、「包括(include)」、「包含(includes)」以及「包括(including)」之使用並非旨在限制，並且可包括未具體記載的其他要素。例如，「包含」或「包括」Fc多肽二聚體之組成物可單獨含有Fc多肽二聚體或含有Fc多肽二聚體與其他成分之組合。應理解前述一般描述和詳述僅是例示性和說明性的，並且不限制教導。若任何以引用方式納入的資料與本揭露之明示內容不一致，則以明示內容為準。

如本文中所使用，術語「抗體」是指具有經由其可變區與抗原特異性地結合之免疫球蛋白折疊之蛋白質。該術語涵蓋完整的多株抗體、完整的單株抗體、單鏈抗體、多特異性抗體(諸如，雙特異性抗體)、單特異性抗體、單價抗體、嵌合抗體、人源化抗體以及人類抗體。本文中所使用，術語「抗體」亦包括保留抗原結合特異性之抗體片段，包括但不限於Fab、F(ab’)₂、Fv、scFv以及二價scFv。抗體可含有分類為κ(kappa)或λ(lambda)之輕鏈。抗體可包含分類為γ(gamma)、μ(mu)、α(alpha)、δ(delta)或ε(ePSilon)之重鏈，進而分別定義免疫球蛋白類別IgG、IgM、IgA、IgD以及IgE。

當提及抗體重鏈恆定區中之殘基時，發明所屬技術領域中通常使用「EU編號方案」。針對SEQ ID NO：5(植株CH3C.35.23.2杵)，EU編號方案如下：

例示性免疫球蛋白(抗體)結構單元包含四聚體。各四聚體係由兩對多肽鏈所組成，各對具有一條「輕」鏈(約25 kD)和一條「重」鏈(約50至70 kD)。各鏈之N端定義主要負責抗原辨識之約100至110或更多個胺基酸之可變區。術語「可變輕鏈」(V_L)和「可變重鏈」(V_H)分別指此等輕鏈和重鏈。

術語「可變區」或「可變域」是指衍生自生殖系(germline)可變(V)基因、多樣性(D)基因或連接(J)基因(而非衍生自恆定(Cμ和Cδ)基因片段)之抗體重鏈或輕鏈中之結構域，並且該結構域賦予抗體與其抗原結合的特異性。通常，抗體可變區包含四個保守的「框架」區，其中散布著三個高度變異之「互補決定區」。

術語「互補決定區」或「CDR」是指各鏈中之三個高度變異區，其中斷由輕鏈和重鏈可變區建立的四個框架區。CDR主要負責抗體與抗原表位之結合。各鏈之CDR通常稱為CDR1、CDR2和CDR3(從N端開始按順序編號)，並且亦由其中特定CDR所在的鏈來辨識。因此，V_HCDR3或CDR-H3位於其被發現的抗體之重鏈可變區中，而V_LCDR1或CDR-L1為來自其被發現的抗體之輕鏈可變區的CDR1。

不同輕鏈或重鏈的「框架區」或「FR」在物種內相對保守。將抗體的框架區(亦即，組成輕鏈和重鏈之合併之框架區)用以在三維空間中定位和排列CDR。框架序列可從公共DNA資料庫或包括生殖系抗體基因序列的已發表之參考文獻中獲得。例如，人類重鏈和輕鏈可變區基因之生殖系DNA序列可在人類和小鼠序列的「VBASE2」生殖系可變基因序列資料庫中找到。

可使用發明所屬技術領域中之各種眾所周知的定義來確定CDR和框架區之胺基酸序列，例如，Kabat、Chothia、國際ImMunoGeneTics資料庫(IMGT)、AbM以及觀察到的抗原接觸(contact)(「接觸(Contact)」)。在一些具體例中，CDR係根據接觸之定義而確定的。參見，MacCallumet al., J. Mol. Biol.262:732-745, 1996。在一些具體例中，CDR係由Kaba、Chothia及/或接觸CDR定義而確定。

術語「Fd部分」是指免疫球蛋白重鏈之N端部分。通常，Fd部分包括重鏈可變(VH)區和重鏈恆定(CH1)區。

術語「Fab」是指由輕鏈可變區、輕鏈恆定區、重鏈可變區以及重鏈CH1恆定區所組成之抗原結合片段。

術語「單鏈可變片段」或「scFv」是指由經由多肽連接子連接在一起的重鏈可變區和輕鏈可變區所組成之抗原結合片段。連接子既可將V_H之N端與V_L之C端連接，也可將V_L之N端與V_H之C端連接。scFv缺少恆定區。

術語「表位」是指與分子(例如，抗體的CDR)特異性地結合之抗原區域，並且可包括幾個胺基酸或幾個胺基酸的部分，例如，5或6或更多個，例如，20或更多個胺基酸，或彼等胺基酸的部分。在一些情況下，表位包括(例如，來自碳水化合物、核酸或脂質之)非蛋白質組分。在一些情況下，表位為三維部分。因此，例如，當標靶為蛋白質時，表位可由連續之胺基酸(例如，線性表位)或來自由蛋白質折疊而接近的蛋白質不同部分的胺基酸(例如，不連續或構象表位)所組成。

如本文中所使用，在提及抗體而使用時，短語「辨識表位」意指抗體CDR與該表位上的抗原或含有該表位的抗原之一部分交互作用或特異性結合。

術語「特異性地結合」是指分子(例如，Fab或scFv)與樣本中的表位或標靶的結合比其與另一個表位或非標靶化合物(例如，結構不同之抗原)的結合具有更大的親和力、更大的強結合性(avidity)及/或更長的持續時間。在一些具體例中，與表位或標靶特異性地結合之Fab或scFv為與表位或標靶的結合比與其他表位或非標靶化合物的結合高至少5倍(例如，高至少6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、25倍、50倍、100倍、1000倍、10,000倍或更高的親和力之Fab或scFv。如本文中所使用，術語「特異性結合」、「特異性地結合」或「特異於」特定表位或標靶可例如以具有與其結合之表位或標靶之平衡解離常數K_D之分子展現，例如，10^-4M或更小，例如，10^-5M、10^-6M、10^-7M、10^-8M、10^-9M、10^-10M、10^-11M、10^-12M。技術人員將認知到，與來自一個物種之標靶的Fab或scFv特異性地結合亦可與該標靶之直系同源物特異性地結合。

本文中所使用之術語「結合親和力」是指二個分子之間(例如，Fab或scFv與抗原之間)之非共價交互作用之強度之非共價交互作用的強度。因此，例如，該術語可指Fab或scFv與抗原之間之1：1交互作用，除非另有說明或前後文清楚可知。結合親和力可藉由測量平衡解離常數(K_D)而測量，該平衡解離常數(K_D)是指解離速率常數(k_d，時間^-1)除以結合速率常數(k_a，時間^-1M^-1)。K_D可藉由測量複合體形成和解離之動力學而測量，例如，使用表面電漿子共振(SPR)法，例如，Biacore™系統；動力學排除測定法，例如，KinExA^®；以及BioLayer干涉測量法(例如，使用ForteBio^®Octet平台)。如本文中所使用，「結合親和力」不僅包括形式結合親和力，諸如，彼等反映Fab或scFv與抗原之間之1：1交互作用之親和力，也包括計算K_D之可能反映強結合之表觀親和力。

單株抗體及其片段(包括Fab和接合物)或其他生物實體通常係以單離形式提供。抗體(或其片段或接合物)通常至少含有50%w/w純的干擾蛋白及在其生產或純化中產生的其他污染物，但不排除抗體或Fab與過量的醫藥上可接受之載劑或其他旨在促進其使用之媒劑合併之可能性。抗體(或其片段或接合物)可為至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%w/w純的來自生產或純化的干擾蛋白和污染物。單離之抗體(或其片段或接合物)可為其純化後之剩餘之主要大分子種類。

如本文中所使用，術語「Fc區」是指天然存在的免疫球蛋白重鏈多肽之C端區域，該多肽係以Ig折疊為結構域為特徵。Fc多肽通常含有包括至少CH2結構域及/或CH3結構域之恆定區序列，並且可至少含有部分鉸鏈區。二個Fc多肽二聚化以形成Fc區或Fc片段。

術語「多肽」和「肽」是指單鏈中之胺基酸殘基之聚合物。該術語適用於其中一或多個胺基酸殘基為相應的天然存在的胺基酸之人工化學模擬物之胺基酸聚合物，以及天然存在的胺基酸聚合物和非天然存在的胺基酸聚合物。「蛋白質」可指多肽、多肽二聚體或多肽多聚體。蛋白質二聚體或多聚體之單鏈多肽可以共價鍵(例如，二硫鍵)或非共價交互作用連接。

為了將胺基酸取代分類成保守性或非保守性的目的，將胺基酸分組如下：群組I(疏水側鏈)：met、ala、val、leu、ile；群組II(中性親水側鏈)：cys、ser、thr；群組III(酸性側鏈)：asp、glu；群組IV(鹼性側鏈)：asn、gln、his、lys、arg；群組V(影響鏈定向之殘基)：gly、pro；以及群組VI(芳香族側鏈)：trp、tyr、phe。保守性取代涉及相同類別之胺基酸之間之取代。非保守性取代構成以另一個類別的成員交換其中一個類別的成員。

在二或更多個多肽序列的前後文中，術語「相同(identical)」或「同一性(identity)」百分比是指二或更多個相同或具有指定百分比的胺基酸殘基之序列或子序列，例如，如使用序列比較演算法或以手動排比和目視檢查所測量，在比較窗或指定區內比較和排比以進行對大對應(maximum correspondence)時，在特定區域有至少60%同一性、至少65%同一性、至少70%同一性、至少75%同一性、至少80%同一性、至少85%同一性、至少90%同一性、至少95%同一性或更高。對於多肽之序列比較，通常一個胺基酸序列作為參考序列，將候選序列與其進行比較。可使用發明所屬技術領域中之技術人員可用的各種方法進行排比，例如，視覺排比或使用利用已知演算法的公共可用的軟體以最大排比。此等程序包括BLAST程式、ALIGN、ALIGN-2(Genentech, South San Francisco, Calif.)或Megalign(DNASTAR)。發明所屬技術領域中之技術人員可決定採用達成最大排比之排比參數。為了本申請案中之多肽序列之序列比較，使用用於排比二個蛋白質序列之具有預設參數之BLASTP演算法標準蛋白質BLAST。

用以Kabat編號慣例最大程度排比之抗體或Fc多肽序列測定序列同一性百分比。排比後，若比較受試抗體區(例如，重鏈或輕鏈或Fc多肽的整個成熟可變區)與參考抗體的相同區域，則受試抗體區和參考抗體區之間之序列同一性百分比為受試抗體區和參考抗體區兩者中之相同胺基酸佔據的位置數除以二個區域的排比之位置之總數(不計算缺口)，乘以100以換算成百分比。

排比序列可使用演算法(其係使用預設缺口參數)(諸如，Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wisc.)中之BESTFIT、FASTA以及TFASTA)、或以檢查和最佳排比(亦即，造成在比較窗內之序列相似度百分比最高)而測定核酸序列同一性。序列同一性百分比之計算係藉由在比較窗內比較二個最佳排比之序列，測定二個序列中出現相同殘基之位置數以得出匹配之位置數，將匹配之位置數除以匹配和不匹配之位置之總數(不計算比較窗中之缺口)(亦即，窗大小)，以及將結果乘以100以得出序列同一性百分比。除非另有說明，否則二個序列之間之比較窗係由二個序列中之較短序列的整個長度定義。

經修飾之核苷間鍵聯為除了天然存在的磷酸酯鍵聯之外之核苷間鍵聯。下圖顯示連接經修飾之核苷間鏈聯之核苷5'和3'之糖基(包括在結構中)之經修飾之核苷間鍵聯。如本文中所使用，PN是指結構(b)。

本文中所使用的「穩定化核苷間鍵聯」是指專門引入寡核苷酸多肽接合物之寡核苷酸骨架中之經修飾之核苷間鍵聯，以除去軟點(例如，核酸酶敏感位點)、增加寡核苷酸的抗斷裂性、或以其他方式調節其引入之寡核苷酸及/或寡核苷酸多肽接合物之一或多種藥物動力學或藥效學性質。穩定化核苷間鍵聯不包括硫代磷酸酯或磷酸二酯。含有一或多個穩定化核苷間鍵聯之寡核苷酸及/或寡核苷酸多肽接合物(穩定之寡核苷酸)與具有相同寡核苷酸序列但不含有一或多個穩定化核苷間鍵聯之寡核苷酸或寡核苷酸多肽接合物相比，具有改善的性質。穩定之寡核苷酸和寡核苷酸多肽接合物與彼等僅具有硫代磷酸酯核苷間鍵聯或磷酸二酯和硫代磷酸酯核苷間鍵聯之組合之寡核苷酸和寡核苷酸多肽接合物相比，具有改善的性質。穩定之寡核苷酸除了含有穩定化核苷間鍵聯之外，還可含有硫代磷酸酯核苷間鍵聯及/或磷酸二酯核苷間鍵聯。在一些具體例中，寡核苷酸(例如，ASO；例如，缺口體(gapmer))中之一或多個硫代磷酸酯及/或磷酸二酯核苷間鍵聯係經穩定化核苷間鍵聯替換。在一些具體例中，一或多個硫代磷酸酯及/或磷酸二酯核苷間鍵聯可經一或多個處於或靠近寡核苷酸中被辨識為易受斷裂的位置(例如，軟點)之穩定化核苷間鍵聯替換。在一些具體例中，缺口體之翼區段中之一或多個硫代磷酸酯及/或磷酸二酯核苷間鍵聯係經穩定化核苷間鍵聯替換。在一些具體例中，缺口體之缺口區段中之一或多個硫代磷酸酯及/或磷酸二酯核苷間鍵聯係經穩定化核苷間鍵聯替換。可用作穩定化核苷間鍵聯的經修飾之核苷間鍵聯之實例包括，但不限於，二硫代磷酸酯、胺基磷酸酯、甲磺醯基胺基磷酸酯、膦酸酯、磷酸三酯以及磷醯胍(參見：Nucleic Acids Res., 47, 5465–5479(2019)；Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 116, 1229–1234(2019)；Nucleic Acids Research, 50(10), 5401–5423(2022)；Vasquez G., Nucleic Acid Therapeutics, 32(1), 40-50(2022)；以及Molecular Therapy: Nucleic Acids; 29: 176-188(2022))。可用作穩定化核苷間鍵聯之經修飾之核苷間鍵聯之其他實例包括但不限於WO 2017210647中所述之經修飾之核苷間鍵聯s1、s2、s3、s4、s5、s6、s7、s8、s8、s10、s11、s12、s13、s14、15、s16、s17或s18，其係以引用方式整體納入本文中。可用作穩定化核苷間鍵聯之經修飾之核苷間鍵聯之另外實例包括，但不限於，WO 2022099159中所述之經修飾之核苷間鍵聯n001、n002、n003、n004、n005、n006、n007、n008、n009、n010、n020、n025或n026。在一些具體例中，穩定化核苷間鍵聯係選自由PS2、MsPA、OiPS以及PN核苷間鍵聯所組成群組。

「LNA」是指在核糖環中之2'和4'位置之間包含橋之雙環核苷類似物(2'至4'雙環核苷酸類似物)，並且被稱為「鎖核酸」或「鎖核苷」。如本文中所使用，「LNA寡核苷酸」是指含有一或多個此類雙環核苷類似物的寡核苷酸。Biochemistry, 43(42):13233-13240(2004)。在一些具體例中，本文中提供之LNA具有以下結構，其中「鹼基」為核鹼基：。

「表現」是指細胞中之內源基因、異源基因或核酸區段或轉基因之轉錄及/或轉譯。例如，表現可指有義RNA(mRNA)或功能性RNA之轉錄和穩定累積。表現亦可指蛋白質的產生。

術語「醫藥上可接受」意指載劑、稀釋劑、賦形劑或助劑與調配物之其他成分相容，並且對其接受者無害。

術語「對象」、「個體」以及「患者」是指哺乳動物，包括但不限於，人類、非人靈長類動物、囓齒動物(例如，大鼠、小鼠以及天竺鼠)、兔子、牛、豬、馬以及其他哺乳動物種。在一些具體例中，對象為人類。術語「對象」包括接受預防性或治療性治療之人類和其他哺乳動物對象。

術語「疾病」或「病況」是指任何損害生理功能的異常狀況。此術語廣泛用於涵蓋任何生理功能受損的病症、疾病、異常、病理、病痛、病況或症候群，無論病因本質如何。

術語「治療(treat)」、「治療(treatment)」等意指採取方法來緩解或減輕對象的疾病或病況之一或多種症狀的數量、嚴重程度及/或頻率。治療通常是指獲得所欲藥理及/或生理效果。就預防或部分預防疾病、症狀或病況而言，其效果可為預防性的，但不一定必須為此。就疾病、病況、症狀或由該疾病、病症或病況引起的不良反應的部分或完全治癒而言，該效果可為治療性的。術語治療可包括：(a)預防可能易患疾病但尚未被診斷出患有該疾病的對象患有該疾病；(b)抑制疾病，亦即，阻止其發展；以及(c)緩解疾病，亦即，減輕或改善疾病及/或其症狀或病況。治療可指僅有治療性治療、僅有預防性治療、或治療性和預防性治療兩者。彼等需要治療者(有其需求之對象)可包括彼等已患有疾病或病況者或彼等欲預防疾病或病況者。治療可包括抑制疾病、病症或病況，例如，阻礙其進展；以及緩解疾病、病症或病況，例如，導致疾病、病症及/或病症的消退。治療疾病、病症或病況可包括改善特定疾病、病症或病況之至少一種症狀，即使潛在的病理生理學不受影響，例如，諸如，在不影響或消除症狀的潛在原因的情況下治療症狀。症狀的治療或改善可基於客觀或主觀參數。治療效果可與未接受治療的個體或個體庫(pool)比較，或與治療前或治療期間之不同時間的相同患者比較。

「藥理有效量」、「治療有效量」或簡稱「有效量」是指所述之活性醫藥成分或醫藥組成物產生預期之藥理、治療或預防結果的量(劑量)。「有效量」亦可指醫藥組成物中之例如賦形劑的量，該量足以達成該組成物的所欲性質。有效量可一或多次給予、施用或劑量給予。II. 概述

針對由基因異常或增加之蛋白質累積引起的CNS疾患之寡核苷酸療法正成為一種調節此類神經系統疾患之基因表現之日益流行之方法。血腦屏障(BBB)為對全身性地投予之寡核苷酸到CNS內相關作用部位之遞送之挑戰。鞘內(IT)遞送(其中向腦脊髓液(CSF)空間直接投予藥物)能夠繞過BBB。然而，此方法之一個限制為經由IT方法CSF直接遞送此等寡核苷酸療法無法達成整個CNS之均勻分布。

描述可向對象靜脈投予且促進MAPT ASO穿過BBB之運輸以及將MAPT ASO到CNS細胞之遞送之MAPT ASO接合物，其中該MAPT ASO可減弱腦和脊髓中之MAPT表現。MAPT ASO接合物包含與MAPT ASO連接之靶向轉鐵蛋白之Fc多肽二聚體。MAPT ASO與Fc多肽二聚體之接合可用以增加該分子向對象投予後之標靶效力。與未經接合之分子相比，Fc多肽二聚體-承載物(cargo)分子接合物具有增加之標靶效力。MAPT ASO包含當其與靶向轉鐵蛋白之Fc多肽二聚體連接時，會降低活體內血漿清除率及/或降解/斷裂之修飾。

在一些具體例中，所述之MAPT ASO接合物可減弱整個CNS區域(包括整個腦部區域，其包括深層腦部區域以及額葉、頂葉、顳葉、枕葉以及小腦)之MAPT表現。在一些具體例中，所述之MAPT ASO接合物可減弱多種CNS細胞類型中之MAPT表現，包括內皮細胞、神經元、星狀細胞、寡樹突細胞以及小神經膠質細胞。在一些具體例中，所述之MAPT ASO接合物可減弱脊髓中之MAPT表現。

在一些具體例中，所述之MAPT ASO接合物可減弱骨骼肌和心肌中之MAPT表現。骨骼肌、心肌以及橫膈膜肌之MAPT表現之減弱可用以治療神經肌肉疾患。

在全身投予後，所述之MAPT ASO接合物可向各種組織(包括CNS)遞送治療水平之MAPT ASO標靶。與單獨投予MAPT ASO(亦即，非靶向之遞送)相比，此靶向之遞送允許使用較低劑量之MAPT ASO。

描述包含靶向轉鐵蛋白受體(TfR)之Fc多肽二聚體和MAPT反義寡核苷酸(ASO)之MAPT ASO接合物，其中：(a) 該靶向TfR之Fc多肽二聚體包含：(i) 第一Fc多肽，其包含各自根據EU編號之位置239處之半胱胺酸、位置234處之A、位置235處之A以及位置329處之絲胺酸；(ii) 第二Fc多肽，其包含各自根據EU編號之位置234處之A、位置235處之A以及位置329處之絲胺酸，以及與人類轉鐵蛋白受體1(TfR)特異性地結合之經修飾之恆定域，其中該第二Fc多肽包含與SEQ ID NO：11或12具有至少90%序列同一性之序列，其中該第二Fc多肽與該第一Fc多肽形成Fc二聚體；以及(iii) 經由第一鉸鏈區與該第一Fc多肽融合以形成第一Fab-Fc融合多肽之第一非靶向之Fab(NTF)，以及經由第二鉸鏈區與該第二Fc多肽融合以形成第二Fab-Fc融合多肽之第二NTF，其中該第一和第二NTF各自包含SEQ ID NO：109或110，其中該等鉸鏈區各自包含SEQ ID NO：121；以及(b) 該MAPT ASO包含其中A_L、^mC_L、G_L以及T_L分別為腺嘌呤鎖核苷、5-甲基胞嘧啶鎖核苷、鳥苷鎖核苷以及胸腺嘧啶鎖核苷，A、C、G以及T分別為去氧腺苷核苷、去氧胞苷核苷、去氧胍核苷以及去氧胸苷核苷，各p獨立地為硫代磷酸酯(PS)核苷間鍵聯、二硫代磷酸酯(PS2)核苷間鍵聯、甲磺醯基胺基磷酸酯(MsPA)核苷間鍵聯、O-異丙基硫代磷酸酯(OiPS)核苷間鍵聯或磷醯胍(PN)核苷間鍵聯，各x獨立地為PN核苷間鍵聯、PS核苷間鍵聯或磷酸二酯(PO)核苷間鍵聯，以及任何不為PO、PS2、MsPA、OiPS或PN核苷間鍵聯之核苷間鍵聯為PS核苷間鍵聯；其中該第一Fc多肽經由連接基與MAPT ASO連接。

在一些具體例中，p _a、p _b以及p _c中之至少一者不為PS核苷間鍵聯。在一些具體例中，p _a、p _b以及p _c中之至少兩者不為PS核苷間鍵聯。

在一些具體例中，x _g、x _h以及x _i中之至少兩者為PN核苷間鍵聯。

在一些具體例中，MAPT ASO與第一Fc多肽之位置239處(EU編號)之半胱胺酸連接。在一些具體例中，MAPT ASO之5'端與第一Fc多肽之位置239處之半胱胺酸連接，其中該連接基為其中與化學結構中之鍵相交之「」表示化學結構中之波浪鍵相交之鍵與分子之其餘部分的附接點。

在一些具體例中，NTF包含SEQ ID NO：109或110和SEQ ID NO：108。

描述包含靶向轉鐵蛋白受體(TfR)之Fc多肽二聚體和MAPT反義寡核苷酸(ASO)之MAPT ASO接合物，其中：(a) 該靶向TfR之Fc多肽二聚體包括：(i) 第一Fc多肽，其包含各自根據EU編號之位置239處之半胱胺酸、位置234處之A、位置235處之A以及位置329處之絲胺酸，；(ii) 第二Fc多肽，其包含各自根據EU編號之位置234處之A、位置235處之A以及位置329處之絲胺酸，以及與人類轉鐵蛋白受體1(TfR)特異性地結合之經修飾之恆定域，其中該第二Fc多肽包含與SEQ ID NO：11或12具有至少90%序列同一性之序列，其中該第二Fc多肽與該第一Fc多肽形成Fc二聚體；(iii) 經由第一鉸鏈區與該第一Fc多肽融合以形成第一Fab-Fc融合多肽之第一非靶向之Fab(NTF)，以及經由第二鉸鏈區與該第二Fc多肽融合以形成第二Fab-Fc融合多肽之第二NTF，其中該第一和第二NTF各自包含SEQ ID NO：109或110，其中該等鉸鏈區各自包含SEQ ID NO：121；以及(b) 該MAPT ASO包含其中^mC_L、G_L以及T_L分別為5-甲基胞嘧啶、鳥苷以及胸腺嘧啶鎖核苷，A、C、G以及T分別為去氧腺苷核苷、去氧胞苷核苷、去氧胍核苷以及去氧胸苷核苷，各p獨立地為硫代磷酸酯(PS)核苷間鍵聯、二硫代磷酸酯(PS2)核苷間鍵聯、甲磺醯基胺基磷酸酯(MsPA)核苷間鍵聯、O-異丙基硫代磷酸酯(OiPS)核苷間鍵聯或磷醯胍(PN)核苷間鍵聯，以及p _a、p _b以及p _c中之至少兩者不為PS核苷間鍵聯，各x獨立地為PN核苷間鍵聯或PS核苷間鍵聯，以及x _g、x _h以及x _i中之至少2者為PN核苷間鍵聯，以及任何不為PS2、MsPA、OiPS或PN核苷間鍵聯之核苷間鍵聯為PS核苷間鍵聯；其中該第一Fc多肽經由連接基與MAPT ASO連接。

在一些具體例中，第二Fc多肽之經修飾之恆定域包含：根據EU編號之位置380處之E；位置384處之Y；位置386處之T；位置387之E；位置388處之W；位置389處之A；位置390處之N；位置413處之T；位置415處之E；位置416處之E；位置418處之Q；位置419處之Q；位置421處之F；位置424處之S；以及位置426之S。在一些具體例中，MAPT ASO與第一Fc多肽之位置239處(EU編號)之半胱胺酸連接。在一些具體例中，MAPT ASO之5'端與第一Fc多肽之位置239之半胱胺酸連接，其中該連接基為：其中與化學結構中之鍵相交之「」表示化學結構中之波浪鍵相交之鍵與分子之其餘部分的附接點。

在一些具體例中，NTF包含SEQ ID NO：109或110和SEQ ID NO：108。A. 靶向轉鐵蛋白受體(TfR)之Fc多肽二聚體

在一些具體例中，第一Fc多肽或第一Fab-Fc融合多肽包含與人類Fc多肽具有至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列。在一些具體例中，第一Fc多肽在根據EU編號之位置239、442、330以及289處包含半胱胺酸(亦即，Fc域包含S239C取代、S442C取代、A330C取代、K149C取代或T289C取代)。在一些具體例中，第一Fc多肽在根據EU編號之位置239處包含半胱胺酸。在一些具體例中，第一Fc多肽進一步包含CH1域(亦即，Fab-Fc融合多肽)，其中該CH1域包含在位置114(根據Kabat編號)或位置124(根據EU編號)處之半胱胺酸(亦即，第一Fc多肽包含A114C取代或S124C取代)。在一些具體例中，第一Fc多肽包含LALA-PS突變(各自根據EU編號之位置234處之A、位置235處之A以及位置329處之絲胺酸)。在一些具體例中，第一Fc多肽包含根據EU編號之位置239處之半胱胺酸、LALA-PS突變以及杵或臼突變。在一些具體例中，第一FC多肽包含LALA-PS突變以及杵或臼突變，並且進一步包括CH1域，其中該CH1域包含在位置114(根據Kabat編號)或位置124(根據EU編號)處之半胱胺酸。在一些具體例中，第一FC多肽包含與SEQ ID NO：47至48、51至54、61至63、66、73至77以及80中之任一者有至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性之序列。在一些具體例中，第一Fc多肽包含SEQ ID NO：63或80之胺基酸序列。在一些具體例中，第一Fc多肽包含位置239處之半胱胺酸、位置234處之A、位置235處之A以及位置329處之絲胺酸(各自按根據EU編號)，並且與SEQ ID NO：63或80具有至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%之序列同一性。在一些具體例中，第一Fc多肽包含由SEQ ID NO：63或80之胺基酸序列所組成之胺基酸序列。

在一些具體例中，第二Fc多肽之經修飾之恆定域包含：根據EU編號之位置380處之E；位置384處之Y；位置386處之T；位置387處之E；位置388處之W；位置389處之A；位置390處之N；位置413處之T；位置415處之E；位置416處之E；位置418處之Q；位置419處之Q；位置421處之F；位置424處之S；以及位置426處之S。在一些具體例中，第二Fc多肽或Fab-Fc融合多肽包含如參考SEQ ID NO：5編號之位置153處之E、位置157處之Y、位置159處之T、位置160處之E、位置161處之W、位置162處之A、位置163處之N、位置186處之T、位置188處之E、位置189處之E以及位置194處之F。在一些具體例中，第二Fc多肽之經修飾之恆定域包含：位置380處之E；位置384處之Y；位置386處之T；位置387處之E；位置388處之W；位置389處之A；位置390處之N；位置413處之T；位置415處之E；位置416處之E；位置418處之Q；位置419處之Q；位置421處之F；位置424處之S；以及位置A處之426(根據EU編號)，並且與SEQ ID NO：4、5、11或12具有至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性。在一些具體例中，第二Fc多肽包含如參考SEQ ID NO：5編號之位置153處之E、位置157處之Y、位置159處之T、位置160處之E、位置161處之W、位置162處之A、位置163處之N、位置186處之T、位置188處之E、位置189處之E以及位置194處之F，並且與SEQ ID NO：4、5、11或12具有至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性。在一些具體例中，第二Fc多肽包含LALA-PS突變(各自依據EU編號之位置234處之A、位置235處之A以及位置329處之絲胺酸)。在一些具體例中，第二Fc多肽包含LALA-PS突變以及杵或臼突變。在一些具體例中，第二Fc多肽之經修飾之恆定域包含：位置380處之E ；位置384處之Y；位置386處之T；位置387處之E；位置388處之W；位置389處之A；位置390處之N；位置413處之T；位置415處之E；位置416處之E；位置418處之Q；位置419處之Q；位置421處之F；位置424處之S；以及位置426處之S(根據EU編號)，並且與SEQ ID NO：4至29、36以及43至44中之任一者具有至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性。在一些具體例中，第二Fc多肽包含如參考SEQ ID NO：5編號之位置153處之E、位置157處之Y、位置159處之T、位置160處之E、位置161處之W、位置162處之A、位置163處之N、位置186處之T、位置188處之E、位置189處之E以及位置194處之F，並且與SEQ ID NO：4至29、36以及43至44中之任一者具有85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性。

在一些具體例中，第一FC多肽及/或第二FC多肽包含選自由下自各者所組成群組之一或多個突變或突變組(set)：杵突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之T139W)、臼突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之T139S、L141A以及Y180V)、一或多個調節效應子功能之突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之L7A、L8A及/或P102G或P102S(例如，L7A和L8A；L7A、L8A以及P102G；或L7A、L8A以及P102S))及/或一或多個增加血清穩定性之突變(例如，(i)如參考SEQ ID NO：5編號之M25Y、S27T以及T29E，或(ii)如參考SEQ ID NO：5編號之N207S及有或無M201L)。若第一Fc多肽含有杵突變，則第二Fc多肽含有臼突變。若第二Fc多肽含有杵突變，則第一Fc多肽含有臼突變。

在一些具體例中，第一和第二Fc多肽均含有一或多個降低效應子功能之突變。在一些具體例中，第一和第二Fc多肽各自含有LALA突變。在一些具體例中，第一和第二FC多肽各自含有LALA-PG突變。在一些具體例中，第一和第二Fc多肽各自含有LALA-PD突變。

在一些具體例中，第一Fc多肽或第二Fc多肽含有杵突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之T139W)。在一些具體例中，第二Fc多肽含有杵突變，並且與SEQ ID NO：5或6之序列具有至少85%同一性、至少90%同一性、至少95%同一性、至少96%同一性、至少97%同一性、至少98%同一性或至少99%同一性。在一些具體例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO：5或6之序列。

在一些具體例中，第一Fc多肽或第二Fc多肽含有杵突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之T139W)和一或多個調節效應子功能之突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之L7A、L8A及/或P102G或P102S(例如，L7A和L8A；L7A、L8A以及P102G；或L7A、L8A以及P102S))。在一些具體例中，第二Fc多肽含有杵突變和一或多個調節效應子功能之突變，並且與SEQ ID NO：7、9、11、8、10或12之序列具有至少85%同一性、至少90%同一性、至少95%同一性、至少96%同一性、至少97%同一性、至少98%同一性或至少99%同一性。在一些具體例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO：7、9或11之序列。在一些具體例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO：8、10或12之序列。

在一些具體例中，第一Fc多肽或第二Fc多肽含有杵突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之T139W)和一或多個增加血清穩定性之突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之M25Y、S27T以及T29E)。在一些具體例中，第二Fc多肽含有杵突變和一或多個增加血清穩定性之突變，與SEQ ID NO：13之序列具有至少85%同一性、至少90%同一性、至少95%同一性、至少96%同一性、至少97%同一性、至少98%同一性、或至少99%同一性。在一些具體例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO：13之序列。

在一些具體例中，第一Fc多肽或第二Fc多肽含有杵突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之T139W)和一或多個增加血清穩定性之突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之N207S及有或無M201L)。在一些具體例中，第二Fc多肽含有杵突變和一或多個增加血清穩定性之突變，並且與SEQ ID NO：14之序列具有至少85%同一性、至少90%同一性、至少95%同一性、至少96%同一性、至少97%同一性、至少98%同一性、或至少99%同一性。在一些具體例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO：14之序列。

在一些具體例中，第一Fc多肽或第二Fc多肽含有杵突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之T139W)、一或多個調節效應子功能之突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之L7A、L8A及/或P102G或P102S(例如，L7A和L8A；L7A、L8A以及P102G；或L7A、L8A以及P102S))以及一或多個增加血清穩定性之突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之M25Y、S27T以及T29E)。在一些具體例中，第二Fc多肽含有杵突變、一或多個調節效應子功能之突變、一或多個增加血清穩定性之突變，並且與SEQ ID NO：15或16之序列具有至少85%同一性、至少90%同一性、至少95%同一性、至少96%同一性、至少97%同一性、至少98%同一性、或至少99%同一性。在一些具體例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO：15或16之序列。

在一些具體例中，第一Fc多肽或第二Fc多肽含有杵突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之T139W)、一或多個調節效應子功能之突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之L7A、L8A及/或P102G或P102S(例如，L7A和L8A；L7A、L8A以及P102G；或L7A、L8A以及P102S))、一或多個增加血清穩定性之突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之N207S及有或無M201L)。在一些具體例中，第二Fc多肽含有杵突變、一或多個調節效應子功能之突變、一或多個增加血清穩定性之突變，並且與SEQ ID NO：17或18之序列具有至少85%同一性、至少90%同一性、至少95%同一性、至少96%同一性、至少97%同一性、至少98%同一性、或至少99%同一性。在一些具體例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO：17或18之序列。

在一些具體例中，第一Fc多肽或第二Fc多肽含有臼突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之T139S、L141A以及Y180V)。在一些具體例中，第二Fc多肽含有臼突變，並且與SEQ ID NO：19之序列具有至少85%同一性、至少90%同一性、至少95%同一性、至少96%同一性、至少97%同一性、至少98%同一性、或至少99%同一性。在一些具體例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO：19之序列。

在一些具體例中，第一Fc多肽或第二Fc多肽含有臼突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之T139S、L141A以及Y180V)和一或多個調節效應子功能之突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之L7A、L8A及/或P102G或P102S(例如，L7A和L8A；L7A、L8A以及P102G；或L7A、L8A以及P102S))。在一些具體例中，第二Fc多肽可含有臼突變和一或多個調節效應子功能之突變，並且與SEQ ID NO：20或21之序列具有至少85%同一性、至少90%同一性、至少95%同一性、至少96%同一性、至少97%同一性、至少98%同一性、或至少99%同一性。一些具體例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO：20或21之序列。

在一些具體例中，第一Fc多肽或第二Fc多肽含有臼突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之T139S、L141A以及Y180V)、一或多個增加血清穩定性之突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之M25Y、S27T以及T29E)。在一些具體例中，第二Fc多肽含有臼突變和一或多個增加血清穩定性之突變，並且與SEQ ID NO：22之序列具有至少85%同一性、至少90%同一性、至少95%同一性、至少96%同一性、至少97%同一性、至少98%同一性、或至少99%同一性。在一些具體例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO：22之序列。

在一些具體例中，第一Fc多肽或第二Fc多肽含有臼突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之T139S、L141A以及Y180V)和一或多個增加血清穩定性之突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之N207S及有無M201L)。在一些具體例中，第二Fc多肽含有臼突變和一或多個增加血清穩定性之突變，並且與SEQ ID NO：23之序列具有至少85%同一性、至少90%同一性、至少95%同一性、至少96%同一性、至少97%同一性、至少98%同一性、或至少99%同一性。在一些具體例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO：23之序列。

在一些具體例中，第一個Fc多肽或第二Fc多肽含有臼突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之T139S、L141A以及Y180V)、一或多個調節效應子功能之突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之L7A、L8A及/或P102G或P102S(例如，L7A和L8A；L7A、L8A以及P102G；或L7A、L8A以及P102S))、以及一或多個增加血清穩定性之突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之M25Y、S27T以及T29E)。在一些具體例中，第二Fc多肽含有臼突變、一或多個調節效應子功能之突變以及一或多個增加血清穩定性之突變，並且與SEQ ID NO：24或25之序列具有至少85%同一性、至少90%同一性、至少95%同一性、至少96%同一性、至少97%同一性、至少98%同一性、或至少99%同一性。在一些具體例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO：24或25之序列。

在一些具體例中，第一Fc多肽或第二Fc多肽含有臼突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之T139S、L141A以及Y180V)、一或多個調節效應子功能之突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之L7A、L8A及/或P102G或P102S(例如，L7A和L8A；L7A、L8A以及P102G；或L7A、L8A以及P102S))以及一或多個增加血清穩定性之突變(例如，如參考SEQ ID NO：5編號之N207S及有或無M201L)。在一些具體例中，第二Fc多肽含有臼突變、一或多個調節效應子功能之突變、以及一或多個突變之增加血清穩定性，並且與SEQ ID NO：26或27之序列具有至少85%同一性、至少90%同一性、至少95%同一性、至少96%同一性、至少97%同一性、至少98%同一性、或至少99%同一性。在一些具體例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO：26或27之序列。

在一些具體例中，第二Fc多肽之N端包含鉸鏈序列或鉸鏈序列之一部分(例如，第二Fc多肽之SEQ ID NO：49或50)。在一些具體例中，第一Fc多肽之N端進一步與CH1區(例如，SEQ ID NO：86、87或94)或NTF重鏈序列連接。

在一些具體例中，第二Fc多肽或第二Fab-Fc融合多肽包含與SEQ ID NO：4、5、6、7、9、11、50、86以及87中之任一者具有至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之序列，其中該多肽包含如參考SEQ ID NO：5編號之位置153處之E、位置157處之Y、位置159處之T、位置160處之E、位置161處之W、位置162處之A、位置163處之N、位置186處之T、位置188處之E、位置189處之E以及位置194處之F；以及第一Fc多肽或第一Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：54、63、66以及90中之任一者之序列。在一些具體例中，第二Fc多肽或第二Fab-Fc融合多肽包含如參考SEQ ID NO：5編號之位置192處之Q；位置193處之Q；位置197處之S；以及位置199處之S。在一些具體例中，第二Fc多肽或第二Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：7之序列，並且第一Fc多肽或第一Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：54之序列。在一些具體例中，第二Fc多肽或第二Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：9之序列，並且第一Fc多肽或第一Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：66之序列。在一些具體例中，第二Fc多肽或第二Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：11之序列，並且第一Fc多肽或第一Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：63之序列。

在一些具體例中，第一及/或第二Fe多肽之N端包括鉸鏈區(例如，TCPPCP(SEQ ID NO：121)、DKTHTCP(SEQ ID NO：91)或DKTHTCPPCP(SEQ ID NO：92))之全部或一部分。因此，在一些具體例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO：50之序列，並且第一Fc多肽包含SEQ ID NO：90之序列。

在某些具體例中，第二Fc多肽或第二Fab-Fc融合多肽包含與SEQ ID NO：6、8、10、12、43、44、49以及94中之任一者具有至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之序列，其中該多肽包含如參考SEQ ID NO：5編號之位置153處之E、位置157處之Y、位置159處之T、位置160處之E、位置161處之W、位置162處之A、位置163處之N、位置186處之T、位置188處之E、位置189處之E以及位置194處之F；以及第一Fc多肽或第一Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：48、77、78、80以及101中之任一者之序列。在一些具體例中，第二Fc多肽或第二Fab-Fc融合多肽包含如參考SEQ ID NO：5編號之位置192處之Q；位置193處之Q；位置197處之S；以及位置199處之S。在某些具體例中，第二Fc多肽或第二Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：8之序列，並且第一Fc多肽或第一Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：77之序列。在一些具體例中，第二Fc多肽或第二Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：10之序列，並且第一Fc多肽或第一Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：78之序列。在一些具體例中，第二Fc多肽或第二Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：12之序列，並且第一Fc多肽或第一Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：80之序列。在一些具體例中，第二Fc多肽或第二Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：49之序列，並且第一Fc多肽或第一Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：48之序列。在一些具體例中，第二Fc多肽或第二Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：94之序列，並且第一Fc多肽或第一Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：101之序列。在某些具體例中，第一及/或第二Fc多肽之N端包括鉸鏈區之一部分(例如，DKTHTCP(SEQ ID NO：91或DKTHTCPPCP(SEQ ID NO：92))。

在某些具體例中，第二Fc多肽或第二Fab-Fc融合多肽包含與SEQ ID NO：29、36以及44中之任一者具有至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之序列，其中該多肽包含位置153處之E、位置157處之Y、位置159處之T、位置160處之E、位置161處之W、位置162處之A、位置163處之N、位置186處之T、位置188處之E、位置189處之E以及位置194處之F(如參考SEQ ID NO：5編號)以及位置239處之Ser(根據EU編號)；以及第一Fc多肽或第一Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：47、48、51至54、61至63、66、73至78、80以及90中之任一者之序列。在一些具體例中，第二Fc多肽或第二Fab-Fc融合多肽包含如參考SEQ ID NO：5編號之位置192處之Q；位置193處之Q；位置197處之S；以及位置199處之S。在某些具體例中，第二Fc多肽或第二Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：29之序列，並且第一Fc多肽或第一Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：48、53、54、74或77之序列。在一些具體例中，第二Fc多肽或第二Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：36之序列，並且第一Fc多肽或第一Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：61、66、75或78之序列。在一些具體例中，第二Fc多肽或第二Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：44之序列，並且第一Fc多肽或第一Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：74或77之序列。

在某些具體例中，第二Fc多肽或第二Fab-Fc融合多肽包含與SEQ ID NO：44或49具有至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之序列，其中該多肽包含如參考SEQ ID NO：5編號之位置153處之E、位置157處之Y、位置159處之T、位置160處之E、位置161處之W、位置162處之A、位置163處之N、位置186處之T、位置188處之E、位置189處之E以及位置194處之F；以及第一Fc多肽或第一Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：48、73至75以及77中之任一者之序列。在某些具體例中，第二Fc多肽或第二Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：44之序列，並且第一Fc多肽或第一Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：77之序列。

在某些具體例中，第二Fab-Fc融合多肽包含與SEQ ID NO：4、5、7、9、50、86以及87中之任一者具有至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之序列，其中該多肽包含如參考SEQ ID NO：5編號之位置153處之E、位置157處之Y、位置159處之T、位置160處之E、位置161處之W、位置162處之A、位置163處之N、位置186處之T、位置188處之E、位置189處之E以及位置194處之F；以及第一Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：52、53以及61中之任一者之序列。

在某些具體例中，第二Fab-Fc融合多肽包含與SEQ ID NO：6、8、10、43、49以及94中之任一者具有至少85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之序列，其中該多肽包含如參考SEQ ID NO：5編號之位置153處之E、位置157處之Y、位置159處之T、位置160處之E、位置161處之W、位置162處之A、位置163處之N、位置186處之T、位置188處之E、位置189處之E以及位置194處之F；以及第一Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：73至75中之任一者之序列。

在一些具體例中，第二Fc多肽包含SEQ ID NO：11或12之胺基酸序列。在一些具體例中，第一Fc多肽包含根據EU編號(各自根據EU編號)之位置234處之A、位置235處之A、位置329處之絲胺酸、位置380處之E、位置384處之Y、位置386處之T、位置387處之E、位置388處之W、位置389處之A、位置390處之N、位置413處之T、位置415處之E、位置416處之E以及位置421處之F，並且與SEQ ID NO：11或12具有至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%或至少98%或至少99%同一性。在一些具體例中，第一Fc多肽包含由SEQ ID NO：11或12之胺基酸序列所組成之胺基酸序列。B. 非靶向之Fab

非靶向之Fab(NTF)包含輕鏈和重鏈，其中該輕鏈包含V_L區和輕鏈恆定區(CL)，並且重鏈包含V_H區和重鏈CH1恆定區。在一些具體例中，NTF不會與對象之天然存在之表位特異性地結合。在一些具體例中，NTF不會與給定之哺乳動物、哺乳動物組織或哺乳動物細胞類型中表現之抗原特異性地結合。抗原可為哺乳動物抗原或在哺乳動物中發現之抗原，諸如，來自傳染性生物體(諸如，病毒、細菌、真菌或寄生蟲)之抗原。哺乳動物可為但不限於非人靈長類動物、人類或囓齒動物(例如，小鼠)。

抗體與抗原之特異性結合是指親和力為至少10⁶M^-1。特異性結合在量級上可檢測到更高，並且可與發生在至少一個不相關標靶上之非特異性結合區分。非特異性結合通常是范德華力的結果。非靶向性並不意味著NTF不以任何親和力與任何抗原結合。相反地，在一些具體例中，NTF不展現與(a)哺乳動物細胞、哺乳動物組織或哺乳動物中之任何蛋白質或表位之特異性結合；(b)哺乳動物細胞或哺乳動物組織上之任何表面可及之蛋白質或表位；或(c)哺乳動物組織或哺乳動物中之任何血清可及之蛋白質或表位。

NTF包含三個輕鏈CDR和三個重鏈CDR。在一些具體例中，重鏈CDR(CDR-H1、CDR-H2以及CDR-H1)分別包含：SEQ ID NO：105、106或128和107，並且輕鏈CDR(CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L1)分別包含SEQ ID NO：102、103以及104。在一些具體例中，重鏈CDR(CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L1)分別包含SEQ ID NO：125、126或128和127，並且輕鏈CDR(CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L1)分別包含SEQ ID NO：122、123以及124。

在一些具體例中，NTF包含重鏈，其包含與SEQ ID NO：109或110之胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%、或100%同一性之胺基酸序列；以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：108之胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%、或100%同一性之胺基酸序列。

在一些具體例中，NTF包含重鏈，其包含與SEQ ID NO：130或131之胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%、或100%同一性之胺基酸序列；以及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：129之胺基酸序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或至少95%、或100%同一性之胺基酸序列。

在一些具體例中，NTF包含重鏈序列和輕鏈序列，該重鏈序列包含SEQ ID NO：109或110，並且該輕鏈序列包含SEQ ID NO：108之輕鏈序列。在一些具體例中，NTF包含重鏈序列和輕鏈序列，該重鏈序列包含SEQ ID NO：109，並且該輕鏈序列包含SEQ ID NO：108。在一些具體例中，NTF包含重鏈序列和輕鏈序列，該重鏈序列包含SEQ ID NO：110，並且該輕鏈序列包含SEQ ID NO：108。

在一些具體例中，NTF包含重鏈序列和輕鏈序列，該重鏈序列包含SEQ ID NO：130或131，並且該輕鏈序列包含SEQ ID NO：129。在一些具體例中，NTF包含重鏈序列和輕鏈序列，該重鏈序列包含SEQ ID NO：130，並且該輕鏈序列包含SEQ ID NO：129。在一些具體例中，NTF重鏈序列和輕鏈序列，該重鏈序列包含SEQ ID NO：131，並且該輕鏈序列包含SEQ ID NO：129。

在一些具體例中，NTF包括含有與SEQ ID NO：108之胺基酸序列至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%相同之胺基酸序列之輕鏈，並且含有與SEQ ID NO：109或110之胺基酸序列至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%相同之胺基酸序列之重鏈，以及包含SEQ ID NO：102(CDR-L1)、SEQ ID NO：103(CDR-L2)、SEQ ID NO：104(CDR-L3)、SEQ ID NO：105(CDR-H1)、SEQ ID NO：106(CDR-H2)以及SEQ ID NO：107(CDR-H3)，以及維持包含包括SEQ ID NO：108之輕鏈和包括SEQ ID NO：109或110之重鏈之NTF之非靶向性質。

在一些具體例中，NTF包含含有與SEQ ID NO：129之胺基酸序列至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%相同之胺基酸序列之輕鏈，並且含有與SEQ ID NO：130或131之胺基酸序列至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%相同之胺基酸序列之重鏈，以及包含SEQ ID NO：122(CDR-L1)、SEQ ID NO：123(CDR-L2)、SEQ ID NO：124(CDR-L3)、SEQ ID NO：125(CDR-H1)、SEQ ID NO：126(CDR-H2)以及SEQ ID NO：127(CDR-H3)，以及維持包含包括SEQ ID NO：129之輕鏈和包括SEQ ID NO：130或131之重鏈之NTF之非靶向性質。

NTF輕鏈及/或重鏈可含有一或多個有利於與一或多個承載物接合之修飾。修飾可為胺基酸取代或插置。胺基酸取代可為但不限於輕鏈之位置149(EU編號)處之離胺酸取代為半胱胺酸、輕鏈之位置156(EU編號)處之絲胺酸取代為半胱胺酸、重鏈之位置118(EU編號(根據Kabat編號之位置114))處之A取代為半胱胺酸、或重鏈之位置124(EU編號)處之絲胺酸取代為半胱胺酸、或其組合。

在一些具體例中，第一Fab-Fc融合多肽包含位置239處之半胱胺酸、位置234處之A、位置235處之A以及位置329處之絲胺酸(各自根據EU編號)，並且與SEQ ID NO：100或101具有至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一性。在一些具體例中，第一Fab-Fc融合多肽包含位置114(根據Kbat編號)或位置124(根據EU編號)處之半胱胺酸、位置234處之A、位置235處之A以及位置329(根據EU編號)處之絲胺酸。在一些具體例中，第二Fab-Fc融合多肽包含根據EU編號(各自根據EU編號)之位置234處之A、位置235處之A、位置329處之絲胺酸、位置380處之E、位置384處之Y、位置386之T、位置387處之E、位置388處之W，位置389處之A、位置390處之N、位置413處之T、位置415處之E、位置416處之E以及位置421處之F，並且與SEQ ID NO：98或99具有至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少有97%、至少98%或至少99%同一性。在一些具體例中，第一Fab-Fc包含由SEQ ID NO：100或101所組成之胺基酸序列。在一些具體例中，第二Fab-Fc包含由SEQ ID NO：98或99所組成之胺基酸序列。在一些具體例中，第一Fab-Fc包含由SEQ ID NO：100或101所組成之胺基酸序列，並且第二Fab-Fc包含由SEQ ID NO：98或99所組成之胺基酸序列。在一些具體例中，第一Fab-Fc包含由SEQ ID NO：100所組成之胺基酸序列，並且第二Fab-Fc包含由SEQ ID NO：98所組成之胺基酸序列。在一些具體例中，第一Fab-Fc包含由SEQ ID NO：100所組成之胺基酸序列，並且第二Fab-Fc包含由SEQ ID NO：99所組成之胺基酸序列。在一些具體例中，第一Fab-Fc包含由SEQ ID NO：101所組成之胺基酸序列，並且第二Fab-Fc包含由SEQ ID NO：98所組成之胺基酸序列。在一些具體例中，第一Fab-Fc包含由SEQ ID NO：101所組成之胺基酸序列，並且第二Fab-Fc包含由SEQ ID NO：99所組成之胺基酸序列。C. MAPT ASO

在一些具體例中，MAPT ASO之核鹼基序列包含SEQ ID NO：111之核鹼基序列(5' ACCTTAAGTATTACTTGC 3')。在一些具體例中，MAPT ASO之核鹼基序列係由SEQ ID NO：111之核鹼基序列所組成。

在一些具體例中，MAPT ASO之核鹼基序列包含SEQ ID NO：112之核鹼基序列(5' CTGTTAGACATTCATTCTC 3')。在一些具體例中，MAPT ASO之核鹼基序列係由SEQ ID NO：112之核鹼基序列所組成。

在一些具體例中，MAPT ASO經由寡核苷酸之5'端連接遞送載體(例如，靶向TfR之Fc多肽二聚體)(例如，遞送載體連接MAPT ASO之5'端)。

描述包含SEQ ID NO：111或112之MAPT ASO，並且當MAPT ASO與肽遞送載體(例如，靶向TfR之Fc多肽二聚體)時，具有減少MAPT ASO之非特異性血漿清除率及/或降解/斷裂之修飾。在一些具體例中，MAPT ASO為缺口體。在一些具體例中，MAPT ASO序列係由SEQ ID NO：111或112之核鹼基序列組成。

在一些具體例中，MAPT缺口體包含具有3、4或5個核苷之5'翼區段。在一些具體例中，MAPT缺口體包含具有3、4或5個核苷之3'翼區段。在一些具體例中，MAPT缺口體包含具有3、4或5個核苷之5'翼區段和具有3、4或5個核苷之3'翼區段。

在一些具體例中，MAPT缺口體包含具有3個核苷之5'翼區段。在一些具體例中，MAPT缺口體包含具有3個核苷之3'翼區段。在一些具體例中，MAPT缺口體包含具有3個核苷之5'翼區段和具有3個核苷之3'翼區段。

在一些具體例中，MAPT缺口體包含包括8至16個核苷之缺口區段。在一些具體例中，MAPT缺口體包含包括8、9、10、11、12、13、14、15或16個核苷之缺口區段。在一些具體例中，MAPT缺口體包含包括10至14個核苷之缺口區段。在一些具體例中，MAPT缺口體包含包括12個核苷之缺口區段。在一些具體例中，MAPT缺口體包含包括13個核苷之缺口區段。在一些具體例中，MAPT缺口體包含包括14個核苷之缺口區段。在一些具體例中，缺口區段中之各核苷包含2'-去氧核糖。

在一些具體例中，MAPT缺口體包括：X_a-Y_b-Z_c，其中a為2至5之整數，b為8至16之整數，以及c為2至5之整數，各X核苷包含經修飾之糖，各Y核苷具有2'去氧核糖，以及各Z核苷包含經修飾之糖。在一些具體例中，MAPT缺口體包含3-12-3缺口體。在一些具體例中，MAPT缺口體包含3-13-3缺口體。在一些具體例中，a和c各自為3，b為12，以及各X和Z核苷為LNA。

在一些具體例中，MAPT缺口體之翼核苷包含至少一個具有經修飾之糖(經修飾之核糖)之核苷。在一些具體例中，MAPT缺口體之5'翼區段、3'翼區段或5'和3'翼區段中之各核苷包含經修飾之糖。經修飾之糖可為，但不限於，2'-O-甲氧基乙基(MOE)糖部分或包含2'-4'橋之雙環糖部分。2'-4'橋可為，但不限於，-O-CH₂-(鎖核酸或鎖核苷(LNA))或-O-CH(CH)-(拘束乙基(cEt))。在一些具體例中，MAPT缺口體之各翼核苷包含雙環糖部分，該雙環糖部分包含-O-CH₂-2'-4'橋(LNA)。i. 核苷間鍵聯：

在一些具體例中，MAPT ASO中之各核苷間鍵聯包含經修飾之鍵聯(亦即，天然存在之磷酸鍵聯除外之鍵聯)。

在一些具體例中，MAPT ASO在MAPT ASO之與連接遞送載體之一端相對之一端包含至少二個穩定化核苷間鍵聯。若遞送載體與MAPT ASO之5'端連接，則MAPT ASO之3'端之至少二個核苷間鍵聯包含穩定化核苷間鍵聯。在一些具體例中，MAPT ASO進一步在5'端包含穩定化核苷間鍵聯。在一些具體例中，穩定化核苷間鍵聯相對於PS核苷間鍵聯具有增加之穩定性或核酸酶抗性。在一些具體例中，穩定化核苷間鍵聯為PN核苷間鍵聯。

在一些具體例中，MAPT ASO在3'端包含至少二個PN鍵聯(亦即，位置n-2(n減2)與n-1處之核苷之間之PN鍵聯以及位置n-1與n處之核苷之間之PN鍵聯，其中n為3'端核苷)。在一些具體例中，MAPT ASO進一步在5'端包含至少二個PN鍵聯(亦即，位置1和2處之核苷之間之PN鍵聯以及位置2和3處之核苷之間之PN鍵聯)。

在一些具體例中，MAPT ASO在3'端包含至少三個PN鍵聯(亦即，位置n-3與n-2處之核苷之間之PN鍵聯、位置n-2與n-1處之核苷之間之PN鍵聯以及位置n-1與n處之核苷之間之PN鍵聯，其中n為3'端核苷)。在一些具體例中，MAPT ASO進一步在5'端包含至少三個PN鍵聯(亦即，位置1與2處之核苷之間之PN鍵聯、位置2與3處之核苷之間之PN鍵聯以及位置3與4處之核苷之間之PN鍵聯)。

在一些具體例中，MAPT ASO在位置6至9處之核苷之間包含至少二個穩定化核苷間鍵聯。在一些具體例中，穩定化核苷間鍵聯相對於PS核苷間鍵聯具有增加之穩定性或核酸酶抗性。在一些具體例中，穩定化核苷間鍵聯位於辨識為MAPT ASO之軟點或分解代謝位點之位點處及/或附近。穩定化核苷間鍵聯可為，但不限於，PS2鍵聯、MsPA鍵聯、OiPS鍵聯或PN鍵聯。

在一些具體例中，MAPT ASO在位置6至9處之核苷之間包含至少二個PS2核苷間鍵聯。在一些具體例中，MAPT ASO在位置6與7處之核苷之間以及位置7與8處之核苷之間包含PS2核苷間鍵聯。

在一些具體例中，MAPT ASO在位置6至9處之核苷之間包含至少二個MsPA核苷間鍵聯。在一些具體例中，MAPT ASO在位置6與7處之核苷之間以及位置7與8處之核苷之間包含MsPA核苷間鍵聯。在一些具體例中，MAPT ASO在位置6與7處之核苷、位置7與8處之核苷以及位置8與9處之核苷之間包含MsPA核苷間鍵聯。

在一些具體例中，MAPT ASO在位置6至9處之核苷之間包含至少二個OiPS核苷間鍵聯。在一些具體例中，MAPT ASO在位置6與7處之核苷之間以及位置7與8處之核苷之間包含OiPS核苷間鍵聯。在一些具體例中，MAPT ASO在位置6與7處之核苷、位置7與8處之核苷以及位置8與9處之核苷之間包含OiPS核苷間鍵聯。

在一些具體例中，MAPT ASO在位置6至9處之核苷之間包含至少二個PN核苷間鍵聯。在一些具體例中，MAPT ASO在位置7與8處之核苷之間以及位置8與9處之核苷之間包含PN核苷間鍵聯。在一些具體例中，MAPT ASO在位置6與7處之核苷、位置7與8處之核苷以及位置8與9處之核苷之間包含PN核苷間鍵聯。

在一些具體例中，MAPT ASO包含：，其中(a)a為3至5之整數，b為8至16之整數，以及c為3至5之整數；(b)各X為包含經修飾之糖之核苷，各Y為具有2'去氧核糖之核苷，以及各Z為包含經修飾之糖之核苷；(c)X核苷之間之各核苷間鍵聯包含PS鍵聯或PN鍵聯，並且Z核苷之間之各核苷間鍵聯包含PN鍵聯；(d)X與Y核苷之間之核苷間鍵聯以及Y和Z核苷之間之核苷間鍵聯獨立地包含PS鍵聯或PN鍵聯；(e)Y核苷之間之各核苷間鍵聯包含經修飾之鍵聯，其中Yb包含二至三個鄰接之PS2鍵聯、二至三個鄰接之MsPA鍵聯、二至三個鄰接之OiPS鍵聯或兩至三個鄰接之PN鍵聯，以及其中Y核苷之間之其它核苷間鍵聯包含PS鍵聯。

在一些具體例中，a和c各自為3。在一些具體例中，a和c各自為3且b為10至14。在一些具體例中，a和c各自為3且b為12。在一些具體例中，a和c各自為3且b為13。

在一些具體例中，a和c各自為3且b為12至13，並且X核苷之間之各核苷間鍵聯包含PS鍵聯。

在一些具體例中，a和c各自為3且b為12至13，並且X核苷之間之各核苷間鍵聯包含PN鍵聯。

在一些具體例中，a和c各自為3且b為12至13，X核苷之間之各核苷間鍵聯包含PS鍵聯，X與Y核苷之間之核苷間鍵聯包含PS鍵聯，以及Y與Z核苷之間之核苷間鍵聯包含PS鍵聯。

在一些具體例中，a和c各自為3且b為12至13，X核苷之間之各核苷間鍵聯包含PS鍵聯，X與Y核苷之間之核苷間鍵聯包含PS鍵聯，以及Y與Z核苷之間之核苷間鍵聯包含PN鍵聯。

在一些具體例中，a和c各自為3且b為12至13，X核苷之間之各核苷間鍵聯包含PN鍵聯，X與Y核苷之間之核苷間鍵聯包含PS鍵聯，以及Y與Z核苷之間之核苷間鍵聯包含PS鍵聯。

在一些具體例中，a和c各自為3且b為12至13，並且X核苷之間之各核苷間鍵聯包含PN鍵聯，以及X與Y核苷之間之核苷間鍵聯包含PN鍵聯，以及Y與Z核苷之間之核苷間鍵聯包含PN鍵聯。缺口中具有 PS2 、 MsPA 、 OiPS 或 PN 鍵聯之缺口體

在一些具體例中，a和c各自為3且b為12至13，並且Yb包含二至三個鄰接之PS2鍵聯。在一些具體例中，Yb包含二個鄰接之PS2鍵聯。在一些具體例中，二個鄰接之PS2鍵聯在Yb之第3和第4個核苷之間以及第4與5個核苷之間。在一些具體例中，Yb包含三個鄰接之PS2鍵聯。

在一些具體例中，a和c各自為3且b為12至13，並且Yb包含二至三個鄰接之MsPA鍵聯。在一些具體例中，Yb包含二個鄰接之MsPA鍵聯。在一些具體例中，二個鄰接之MsPA鍵聯在Yb之第3與4個核苷之間以及第4與5個核苷之間。在一些具體例中，Yb包含三個鄰接之MsPA鍵聯。在一些具體例中，三個鄰接之MsPA鍵聯在Yb之第3與4個核苷之間、第4與5個核苷之間、第5與6個核苷之間。

在一些具體例中，a和c各自為3且b為12至13，並且Yb包含二至三個鄰接之OiPS鍵聯。在一些具體例中，Yb包含二個鄰接之OiPS鍵聯。在一些具體例中，二個鄰接之OiPS鍵聯在Yb之第3與4個核苷之間以及第4與5個核苷之間。在一些具體例中，Yb包含三個鄰接之OiPS鍵聯。在一些具體例中，三個鄰接之OiPS鍵聯在Yb之第3與4個核苷之間、第4與5個核苷之間、第5與6個核苷之間。

在一些具體例中，a和c各自為3且b為12至13，並且Yb包含二至三個鄰接之PN鍵聯。在一些具體例中，Yb包含二個鄰接之PN鍵聯。在一些具體例中，二個鄰接之PN鍵聯位於Yb之第4與5個核苷之間以及第5與6個核苷之間。在一些具體例中，Yb包含三個鄰接之PN鍵聯。

在一些具體例中，a和c各自為3且b為12至13，並且Yb包含二至四個穩定化核苷間鍵聯。在一些具體例中，Yb包含Yb之第2與3個核苷之間、第3與4個核苷之間、第10與11個核苷之間以及第11與12個核苷之間之PN鍵聯。在一些具體例中，Yb包含二個不同的穩定化核苷間鍵聯。在一些具體例中，Yb包含Yb之第1與2個核苷之間之PN鍵聯以及Yb之第3與4個核苷之間和第11與12個核苷之間之PS2鍵聯。在一些具體例中，Yb包含二個鄰接之PS2鍵聯和二個鄰接之PN鍵聯。在一些具體例中，二個鄰接之PS2鍵聯在Yb之第3與4個核苷之間以及第4與5個核苷之間，並且二個鄰接之PN鍵聯位在Yb之第10與11個核苷之間以及第11與12個核苷之間。

在一些具體例中，X_a或Z_c中之至少一個C核苷(若存在)包含5-甲基胞嘧啶。在一些具體例中，X_a或Z_c中之任何C核苷(若存在)包含5-甲基胞嘧啶。ii. 特定組合

在一些具體例中，a和c各自為3且b為12至13，X核苷之間之各核苷間鍵聯包含PS鍵聯，X與Y核苷之間之核苷間鍵聯包含PS鍵聯，Y和Z核苷之間之核苷間鍵聯包含PS鍵聯，連接Yb之第4與5個和第5與6個核苷之核苷間鍵聯包含PN鍵聯，以及X_a或Z_c中之任何C核苷(若存在)包含5-甲基胞嘧啶。

在一些具體例中，MAPT ASO包含：其中：A_L為腺嘌呤鎖核酸；^mC_L為5-甲基胞嘧啶鎖核酸；T_L為胸腺嘧啶鎖核酸；G_L為鳥嘌呤鎖核酸；A為去氧腺苷；C為去氧胞苷；T為去氧胸苷；G為去氧鳥苷；*為PS核苷間鍵聯；以及n為PN核苷間鍵聯(參見圖10)。

在一些具體例中，a和c各自為3且b為12，X核苷之間之各核苷間鍵聯包含PN鍵聯，X與Y核苷之間之核苷間鍵聯包含PN鍵聯，Y與Z核苷之間之核苷間鍵聯包含PN鍵聯，連接Yb之第3和4個核苷以及第4和5個核苷之核苷間鍵聯包含PS2鍵聯，以及X_a或Z_c中之任何C核苷(若存在)包含5-甲基胞嘧啶。

在一些具體例中，MAPT ASO包含：其中：A_L為腺嘌呤鎖核酸；^mC_L為5-甲基胞嘧啶鎖核酸；T_L為胸腺嘧啶鎖核酸；G_L為鳥嘌呤鎖核酸；A為去氧腺苷；C為去氧胞苷；T為去氧胸苷；G為去氧鳥苷；*為PS核苷間鍵聯；s₂ 為PS2核苷間鍵聯；以及n為PN核苷間鍵聯(參見圖11)。

在一些具體例中，a和c各自為3且b為12，X核苷之間之各核苷間鍵聯包含PN鍵聯，X與Y核苷之間之核苷間鍵聯包含PS鍵聯，Y與Z核苷之間之核苷間鍵聯包含PS鍵聯，連接Yb之第3和4個核苷以及第4與5個核苷之核苷間鍵聯包含PS2鍵聯，以及X_a或Z_c中之任何C核苷(若存在)包含5-甲基胞嘧啶。

在一些具體例中，MAPT ASO包含：其中：A_L為腺嘌呤鎖核酸；^mC_L為5-甲基胞嘧啶鎖核酸；T_L為胸腺嘧啶鎖核酸；G_L為鳥嘌呤鎖核酸；A為去氧腺苷；C為去氧胞苷；T為去氧胸苷；G為去氧鳥苷；*為PS核苷間鍵聯；s₂ 為PS2核苷間鍵聯；以及n為PN核苷間鍵聯(參見圖12)。

在一些具體例中，a和c各自為3且b為12，X核苷之間之各核苷間鍵聯包含PS鍵聯，X與Y核苷之間之核苷間鍵聯包含PS鍵聯，Y與Z核苷之間之核苷間鍵聯包含PN鍵聯，連接Yb之第3和4個核苷、第4和5個核苷以及第5和6個核苷之核苷間鍵聯包含MsPA鍵聯，以及X_a或Z_c _中之任何C核苷(若存在)包含5-甲基胞嘧啶。

在一些具體例中，MAPT ASO包含：其中：A_L為腺嘌呤鎖核酸；_mC_L為5-甲基胞嘧啶鎖核酸；T_L為胸腺嘧啶鎖核酸；G_L為鳥嘌呤鎖核酸；A為去氧腺苷；C為去氧胞苷；T為去氧胸苷；G為去氧鳥苷；*為PS核苷間鍵聯；u為MsPA核苷間鍵聯；以及n為PN核苷間鍵聯(參見圖13)。

在一些具體例中，a和c各自為3且b為12，X核苷之間之各核苷間鍵聯包含PN鍵聯，X與Y核苷之間之核苷間鍵聯包含PS鍵聯，Y與Z核苷之間之核苷間鍵聯包含PS鍵聯，連接Yb之第3和4個核苷以及第4和5個之核苷間鍵聯包含MsPA鍵聯，以及X_a或Z_c中之任何C核苷(若存在)包含5-甲基胞嘧啶。

在一些具體例中，MAPT ASO包含：其中：A_L為腺嘌呤鎖核酸；^mC_L為5-甲基胞嘧啶鎖核酸；T_L為胸腺嘧啶鎖核酸；G_L為鳥嘌呤鎖核酸；A為去氧腺苷；C為去氧胞苷；T為去氧胸苷；G為去氧鳥苷；*為PS核苷間鍵聯；u為MsPA核苷間鍵聯；以及n為PN核苷間鍵聯(參見圖14)。D.連接基

MAPT ASO可與第一Fc多肽、第二Fc多肽、第一NTF及/或第二NTF連接。在一些具體例中，MAPT ASO與第一Fc多肽、第二Fc多肽、第一NTF及/或第二NTF共價連接。第一Fc多肽、第二Fc多肽、第一NTF及/或第二NTF可含有胺基酸取代(例如，半胱胺酸取代)以促進MAPT ASO之附接。

在一些具體例中，MAPT ASO與第一Fc多肽連接。在一些具體例中，MAPT ASO與第一Fc多肽中之半胱胺酸殘基連接。在一些具體例中，第一Fc多肽中之半胱胺酸殘基包含位置239(根據EU編號)處之半胱胺酸取代。在一些具體例中，第一Fc多肽包含根據EU編號之位置239、442、330以及289處之半胱胺酸。在一些具體例中，第一Fab-Fc融合多肽中之半胱胺酸殘基包含在位置114(根據Kabat編號)或位置124(根據EU編號)處之半胱胺酸取代。

MAPT ASO可經由發明所屬技術領域中可用的任何適合於將寡核苷酸(例如，ASO，例如，缺口體)與多肽(例如，Fc多肽或Fab多肽)連接之連接基與第一Fc多肽、第二Fc多肽或第一NTF及/或第二NTF連接。在一些具體例中，連接基包含任何已知之連接基，其為能夠將寡核苷酸與多肽共價連接之雙功能連接子。

可使用眾所周知的化學交聯試劑和規程來產生寡核苷酸多肽接合物，該等化學交聯試劑和規程係通過連接基與寡核苷酸和多肽共價連接。例如，發明所屬技術領域中之技術人員已知有大量的化學交聯劑，其可用於將蛋白質與感興趣之劑交聯。例如，交聯劑可為異雙功能交聯劑，其可用於以逐步方式連接分子。異雙功能交聯劑提供設計更具體的偶聯方法以接合蛋白質之能力，從而減少不欲副反應(諸如，同源-蛋白聚合物)之發生。發明所屬技術領域中已知廣泛多種異雙功能交聯劑，包括但不限於N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)或其水溶性類似物N-羥基磺酸基琥珀醯亞胺(磺酸基-NHS)、琥珀醯亞胺基4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸酯(SMCC)、間馬醯亞胺苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯(MBS)；N-琥珀醯亞胺基(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸酯(SIAB)、琥珀醯亞胺基4-(對馬來醯亞胺基苯基)丁酸酯(SMPB)、1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)；4-琥珀醯亞胺基氧羰基-a-甲基-a-(2-吡啶二硫代)-甲苯(SMPT)、N-琥珀醯亞胺基 3-(2-吡啶二硫代)丙酸酯(SPDP)以及琥珀醯亞胺基6-[3-(2-吡啶二硫代)丙酸酯]己酸酯(LC-DPSP)。彼等具有N-羥基琥珀醯亞胺部分之交聯劑可作為N-羥基磺酸基琥珀醯亞胺類似物獲得，其通常具有較大的水溶性。此外，反而是可合成彼等在連接鏈內具有二硫橋之交聯劑以作為烷基衍生物，以減少活體內之連接基斷裂量。除了異源雙功能交聯劑外，還存在許多其他交聯劑，包括同源雙功能交聯劑和光反應性交聯劑。栓酸二琥珀醯亞胺酯(DSS)、雙馬來醯亞胺基己烷(BMH)以及庚二亞胺酸二甲酯.2HCl(DMP)為有用的同源雙功能交聯劑之實例，而雙-[B-(4-疊氮基柳基醯胺基)乙基]二硫化物(BASED)和N-琥珀醯亞胺基-6(4'-疊氮基-2'-硝基苯基-胺基)己酸酯(SANPAH)為有用的光反應性交聯劑之實例。

接合連接子之非限制性實例包括彼等於WO2023/279099和WO2023/056388中所述者，其中各者係以引用方式整體納入本文中。在一些具體例中，連接基包含如U.S. 6,214,345中所述之val-cit連接子，其係以引用方式整體納入本文中。在一些具體例中，連接基包含彼等於WO2020/028840和WO2022/212886中所述之連接基，其中各者係以引用方式整體納入本文中。其他連接子可包括彼等於Bioconjugate Chemistry 202334(11), 2096-2111中所述者。

連接基可附接多肽之任何區域(例如，與N端區域連接、與C端區域連接或與蛋白質內之胺基酸(諸如，半胱胺酸殘基或麩醯胺殘基)，只要寡核苷酸不防止第二Fc多肽與TfR結合即可。類似地，連接基可附接寡核苷酸之任何區域(例如，5'端、3'端或分子內之核酸殘基)，只要多肽不干擾寡核苷酸之功能性(例如，與目標核酸之互補結合)即可。例如，連接子可通過位於整個寡核苷酸中之任何數量的合成可行的點(諸如，寡核苷酸之3'或5'端殘基；糖部分；鹼基部分；或位於骨架內之殘基)附接寡核苷酸。在一些具體例中，連接子在寡核苷酸之5'端殘基附接寡核苷酸。

在一些具體例中，連接基包含間隔子。間隔子可為，但不限於，親水性間隔子。親水間隔子可為，但不限於，聚乙二醇(PEG)。

連接基可為可斷裂之連接基或不可斷裂之連接基。在一些具體例中，連接基為可斷裂的。可斷裂之連接基含有可斷裂之連接子。可斷裂之連接子包括，但不限於，核酸酶可斷裂之連接子、酸不穩定之連接子、肽酶敏感之連接子、光不穩定之連接子、二甲基連接子以及含二硫化物之連接子(Chari et al.,Cancer Res.52:127-131(1992)；美國專利第5,208,020號)。

在一些具體例中，連接基包含馬來醯亞胺。在一些具體例中，連接基具有以下結構：其中L'為二價、分支或未分支、飽和或不飽和之烴鏈，具有2至25個碳原子，其中一或多個(例如，1、2、3或4)碳原子可視需要地經(-O-)、(-NH-)、(-S-)、胺基酸、腙(-C(R')=N=N(R')-)、核苷酸、或3至12員二價雜環替換，其中，該鏈和任何3至12員二價雜環可視需要地經一或多個(例如，1、2、3或4個)取代基取代，該等取代基係獨立地經選自由(C₁-C₆)烷氧基、(C₃-C₆)環烷基、(C₁-C₆)烷醯基、(C₁-C₆)烷醯氧基、(C₁-C₆)烷氧基羰基、(C₁-C₆)烷硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、腙(=N=N(R')-)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基所組成群組；其中各R'獨立地為H或(C₁-C₆)烷基；其中標記為*之價態附接多肽，以及標記為**之價態附接MAPT ASO(或MAPT ASO之5'端基)。在另一個具體例中，L'為二價、分支或未分支、飽和或不飽和之鏈，具有2至25個選自碳、氧、氮以及硫之原子，其中該鏈包含一或多個二硫鍵聯。在另一個具體例中，L'為二價、分支或未分支、飽和或不飽和之鏈，具有2至25個選自碳、氧、氮以及硫之原子，其中該鏈包含在該鏈中或附加到該鏈之碳原子之一或多個腙基。在另一個具體例中，L'為二價、分支或未分支、飽和或不飽和之鏈，具有2至35個選自碳、氧、氮以及硫之原子，其中該鏈包含在該鏈中之一或多個胺基酸。在另一個具體例中，L'為二價、分支或未分支、飽和或不飽和之鏈，具有2至35個選自碳、氧、氮以及硫之原子，其中該鏈包含在鏈中之二肽。在另一個具體例中，L'為二價、分支或未分支、飽和或不飽和之鏈，具有2至35個選自碳、氧、氮以及硫之原子，其中該鏈包含在鏈中之二肽Val-Cit。在另一個具體例中，L'包含一或多個核苷酸。在另一個具體例中，L'包含二或更多個核苷酸。在另一個具體例中，L'包含三核苷酸基。在另一個具體例中，L'包含一或多個具有未經修飾之鹼基、未經修飾之糖基及/或未經修飾之磷酸酯基之核苷酸。

在一些具體例中，連接基包含以下結構：其中與化學結構中之鍵相交之「」表示化學結構中之波浪鍵相交之鍵與分子之其餘部分的附接點。在一些具體例中，標記為*之價態附接靶向TfR之Fc多肽二聚體，並且標記為**之價態附接MAPT ASO。在一些具體例中，標示為**之價態係通過MAPT ASO之5'端基附接MAPT ASO。在一些具體例中，標示為**之價態係通過MAPT ASO之5'端PO基附接MAPT ASO。在一些具體例中，標示為**之價態係通過MAPT ASO之5'端PS基附接MAPT ASO。在一些具體例中，標示為**價態係通過MAPT ASO之5'端PS2基附接MAPT ASO。在一些具體例中，標示為**之價態係通過MAPT ASO之5'端PN基附接MAPT ASO。在一些具體例中，標示為**之價態係通過MAPT ASO之5'端MsPA基附接MAPT ASO。在一些具體例中，標示為**之價態係通過MAPT ASO之5'端OiPS基附接MAPT ASO。

在一些具體例中，連接基包含：。其中與化學結構中之鍵相交之「」表示化學結構中之波浪鍵相交之鍵與分子之其餘部分的附接點。

在某些具體例中，穩定之寡核苷酸多肽接合物包含：，其中P為多肽，以及其中磷酸二酯(PO)基為寡核苷酸之5'端基。

在某些具體例中，穩定之寡核苷酸多肽接合物包含：,其中P為多肽，以及其中硫代磷酸酯(PS)基為寡核苷酸之5'端基。

在某些具體例中，穩定之寡核苷酸多肽接合物包含：,其中P為多肽，以及其中環狀磷醯胍(PN)基為寡核苷酸之5'端基。核酸

本文中描述編碼任何所述之Fc多肽、Fc多肽二聚體、NTF及/或Fab-Fc融合多肽之任何重鏈和輕鏈之核酸。視需要地，此類核酸進一步編碼訊號肽。核酸之編碼序列可與一或多個調控序列可操作地連接，以促進編碼序列在宿主細胞中之表現。此類調控序列包括但不限於啟動子、增強子、核醣體結合位點、轉錄終止訊號等。編碼重鏈和輕鏈之核酸可以單離之形式出現，或者可轉殖入一或多個載體中。核酸可藉由例如固態合成或重疊寡核苷酸之PCR而合成。編碼重鏈和輕鏈之核酸可連接成一個鄰接之核酸(例如，在表現載體內，或者可為分開的(例如，轉殖入自己的表現載體中)。

在一些具體例中，編碼Fc多肽、Fc多肽二聚體、NTF或Fab-Fc融合多肽之核酸包含編碼任何所述Fc多肽、Fc多肽二聚體、NTF及/或Fab-Fc融合多肽之胺基酸序列之核苷酸序列。可在表現載體中提供核酸序列以促進重鏈及/或輕鏈在宿主細胞中之表現。將核酸或含有該核酸之表現載體轉殖入宿主細胞中。接著，可使用宿主細胞產生NTF之重鏈及/或輕鏈。

在一些具體例中，編碼靶向TfR之Fc多肽二聚體之核酸包含編碼第一Fc融合多肽之第一核酸序列，以及編碼第二Fab-Fc融合多肽之第二核酸序列。在一些具體例中，第一核酸序列編碼SEQ ID NO：1、47至48、51至54、61至63、66、73至78、80以及90中之任一者；以及第二核酸序列編碼SEQ ID NO：4至29、36、43至44、及49至50中之任一者。

在一些具體例中，編碼靶向TfR之Fc多肽二聚體之核酸包含編碼第一Fab-Fc融合多肽之第一核酸序列、編碼第二Fab-Fc融合多肽之第二核酸序列以及編碼NTF輕鏈之第三核酸序列。在一些具體例中，第一核酸序列編碼SEQ ID NO：100至101和130至131中之任一者；第二核酸序列編碼SEQ ID NO：98至99中之任一者，以及第三核酸序列編碼SEQ ID NO：108和129中之任一者。

在一些具體例中，第一核酸序列包含SEQ ID NO：133或與SEQ ID NO：133具有至少75%同一性之序列；第二核酸序列包含SEQ ID NO：132或與SEQ ID NO：132具有至少75%同一性之序列；以及第三核酸序列包含SEQ ID NO：134或與SEQ ID NO：134具有至少75%同一性之序列。在一些具體例中，第一核酸序列包含SEQ ID NO：133；第二核酸序列包括SEQ ID NO：132，以及第三核酸序列包括SEQ ID NO：134。

製備所述之Fc多肽、Fc多肽二聚體、NTF、Fab-Fc融合多肽或抗體之方法包括，但不限於，在複數個宿主細胞中表現一或多種編碼Fc多肽、Fc多肽二聚體、NTF、Fab-Fc融合多肽或NTF之重鏈和輕鏈之核酸，在適合在細胞中表現Fc多肽、Fc多肽二聚體、NTF、Fab-Fc融合多肽或NTF之重鏈和輕鏈之條件下增殖細胞，以及純化Fc多肽、Fc多肽二聚體、NTF、Fab-Fc融合多肽或NTF之重鏈和輕鏈。Fc多肽、Fc多肽二聚體、Fab-Fc融合多肽、純化之NTF可與一或多種所述之MAPT ASO接合。

描述含有編碼所述之Fc多肽、Fc多肽二聚體、NTF、Fab-Fc融合多肽、或Fab之重鏈和輕鏈之核酸之細胞。細胞可為細菌細胞、酵母菌細胞、昆蟲細胞或哺乳動物細胞。細胞可用以表現Fc多肽、Fc多肽二聚體、NTF、或Fc多肽-NTF重鏈融合多肽。接著，可從細胞中單離表現之多肽，並且將其視需要地純化。使用方法

本文中所述之MAPT ASO接合物可用於多種目的，包括治療適應症。

在一些具體例中，MAPT ASO接合物係用以向表現轉鐵蛋白受體之標靶細胞類型遞送MAPT ASO。在一些具體例中，MAPT ASO接合物可用以將MAPT ASO運輸穿過內皮(例如，血腦屏障)，以供腦攝取。

在一些具體例中，描述降低對象之MAPT基因表現之方法，該方法包含向對象投予有效量的如本文中所述之MAPT ASO接合物或其組成物。在一些具體例中，提供用於降低對象細胞之MAPT基因表現之MAPT ASO接合物或其組成物。在某些具體例中，MAPT ASO與MAPT轉錄本結合並募集RNase H，其降解轉錄物。在某些具體例中，向細胞或對象投予所述之MAPT ASO接合物或其組成物會降低細胞或對象中之MAPT基因之表現。與對照組(例如，未投予如本文中所述之MAPT ASO、MAPT ASO接合物或組成物之細胞或對象)中之表現相比，或與投予MAPT ASO前之細胞或對象中之MAPT之表現水平相比，表現可降低超過10%、超過20%、超過30%、超過40%、超過50%、超過60%、超過70%、超過80%、超過90%、或超過95%。

例如，某些具體例提供MAPT ASO跨內皮之胞吞轉送方法，該方法包含使內皮(例如，血腦屏障(BBB))與如本文中所述之MAPT ASO接合物接觸。因此，某些具體例提供一種將MAPT ASO運輸穿過有此有需求之對象之BBB之方法，其包含向該對象投予如本文中所述之MAPT ASO接合物。在某些具體例中，提供如本文中所述之MAPT ASO接合物，以用於將MAPT ASO運輸穿過有需求之對象之BBB。在一些具體例中，本文中提供向CNS遞送MAPT ASO之方法。在一些具體例中，本文中提供向深層腦部區域(例如，皮質、腦幹、海馬迴、紋狀體、小腦、丘腦、尾殼核以及黑質)遞送MAPT ASO之方法。在一些具體例中，本文中提供向深部腦部區域和脊髓(例如，頸脊髓、腰脊髓)遞送MAPT ASO之方法。在一些具體例中，本文中提供向CNS和肌肉(例如，心臟和骨骼)遞送MAPT ASO之方法。在一些具體例中，本文中提供向CNS、周邊神經(例如，視網膜、坐骨神經)、肌肉(例如，四頭肌)以及其他周邊器官(例如，心臟、橫膈膜、脾臟、腸、肺、肝臟以及腎臟)遞送MAPT ASO之方法。

某些具體例亦提供調節有需求之對象之MAPT之表現之方法，其包含向該對象投予有效量的如本文中所述之MAPT ASO接合物。在一些具體例中，將本文中所述之MAPT ASO接合物用於調節對象之MAPT表現。在某些具體例中，MAPT在對象之腦細胞中表現。

可以治療有效量或劑量向對象投予如本文中所述之MAPT ASO或MAPT ASO接合物。然而，劑量可根據數種因素而改變，包括選擇之投予途徑、組成物之配製、患者反應、病況之嚴重程度、患者體重以及主診醫師(prescribing physician)之判斷。如個別患者所要求，劑量可隨時間增加或減少。

在多個具體例中，將如本文中所述之MAPT ASO或MAPT ASO接合物腸胃外投予。在一些具體例中，將MAPT ASO或MAPT ASO接合物靜脈投予。靜脈注射可由輸注進行，例如，歷時約10至約30分鐘，或歷時至少1 hr、2 hr或3 hr。在一些具體例中，將MAPT ASO或MAPT ASO接合物以靜脈推注投予。亦可使用輸注及推注投予之組合投予。

在一些腸胃外具體例中，將MAPT ASO或MAPT ASO接合物腹膜內、皮下、皮內或肌內投予。在一些具體例中，將MAPT ASO或MAPT ASO接合物皮內或肌內投予。在一些具體例中，將MAPT ASO或MAPT ASO接合物鞘內投予，例如，硬膜外投予，或腦室內投予。

在其他具體例中，可將如本文中所述之MAPT ASO或MAPT ASO接合物口服投予、肺部投予、鼻內投予、眼內投予或局部投予。亦可採用肺部投予，例如，使用吸入器或霧化器以及與氣溶膠化劑一起配製。

本文中所述之MAPT ASO和MAPT ASO接合物亦可用以治療、預防或改善與Tau相關疾病、病症以及病況。因此，在一些具體例中，本文中提供治療、預防或改善有需求之對象之與Tau相關之疾病、病症以及病況之方法。在某些具體例中，tau相關疾病為tau相關神經退化性疾患。在某些具體例中，tau相關疾病包括，但不限於，Tau蛋白病變、阿茲海默症、額顳葉失智症(FTD)、FTDP-17、進行性核上神經麻痺症(PSP)、慢性創傷性腦病變(CTE)、皮質基底神經節變性(CBD)、癲癇以及卓飛症候群(Dravet’s syndrome)。

據此，某些具體例提供治療有需求之對象之tau相關神經退化性疾患之方法，該方法包含向該對象投予如本文中所述之MAPT ASO、MAPT ASO接合物或組成物。

在某些具體例中，tau相關神經退化性症候群為阿茲海默症。因此，某些具體例提供一種治療阿茲海默症之方法，該方法包含向有需求之對象投予如本文中所述之MAPT ASO、MAPT ASO接合物或組成物。對象可能被診斷出患有阿茲海默症、被診斷出具有一或多種阿茲海默症症狀、或處於發展阿茲海默症或一或多種與阿茲海默症相關之症狀之風險。

描述向患者遞送MAPT ASO標靶之CNS組織之方法，其包含向對象投予任何所述之MAPT ASO接合物或醫藥組成物。在一些具體例中，MAPT ASO分布於整個CNS。在一些具體例中，MAPT ASO分布於腦部區域。腦部區域包括，但不限於，額葉、頂葉、顳葉、枕葉以及小腦。在一些具體例中，MAPT ASO分布於深層腦部區域。在一些具體例中，MAPT ASO分布於脊髓。在一些具體例中，MAPT ASO調節目標基因之表現。在一些具體例中，目標基因表現之調節為基因表現之抑制(亦即，基因減弱)。

在某些具體例中，對象為人類對象。醫藥組成物和套組

在一些具體例中，提供包含如本文中所述之MAPT ASO接合物之醫藥組成物和套組。A. 醫藥組成物

在發明所屬技術領域中之技術人員已知的任何數量的藥物製備和配製手冊中可找到用於製備如本文中所述之用途之調配物之導引。

在一些具體例中，醫藥組成物包含如本文中所述之MAPT ASO接合物，並且進一步包含一或多種醫藥上可接受之載劑及/或賦形劑。

在某些具體例中，組成物包含複數種如本文中所述之MAPT ASO接合物，其可為相同或不同的(例如，不同接合物之混合物)。

在一些具體例中，如本文中所述之MAPT ASO接合物包含與MAPT ASO接合物之一或多個胺基酸連接之1至8(1、2、3、4、5、6、7或8)個MAPT ASO。在一些具體例中，MAPT ASO接合物包含與該MAPT ASO接合物之胺基酸連接之一個(1)MAPT ASO。在一些具體例中，MAPT ASO接合物包含與該MAPT ASO接合物之二個胺基酸連接之二個(2)MAPT ASO。在一些具體例中，MAPT ASO接合物包含與該MAPT ASO接合物之一個胺基酸連接之二個(2)MAPT ASO。在一些具體例中，MAPT ASO接合物包含與該MAPT ASO接合物之四個胺基酸連接之四個(4)MAPT ASO。在一些具體例中，MAPT ASO接合物包含與該MAPT ASO接合物之二個胺基酸連接之四個(4)MAPT ASO(2個MAPT ASO與二個胺基酸中之各者連接)。在一些具體例中，MAPT ASO接合物包含與該MAPT ASO接合物之一個胺基酸連接之四個(4)MAPT ASO。

在一些具體例中，單一MAPT ASO附接靶向TfR之Fc二聚體或Fab-Fc二聚體。在一些具體例中，二或更多個MAPT ASO附接靶向TfR之Fc二聚體或Fab-Fc二聚體。二或更多個MAPT ASO可與單一連接基連接，或者二或更多個MAPT ASO亦可經由二或更多個連接基與靶向TfR之Fc二聚體或Fab-Fc二聚體連接。二或更多個連接基可為相同或不同。在一些具體例中，二個MAPT ASO附接靶向TfR之Fc二聚體或Fab-Fc二聚體。在一些具體例中，四個MAPT ASO接附靶向TfR之Fc二聚體或Fab-Fc二聚體。

在一些具體例中，1個MAPT ASO與單一連接基(L)連接。在一些具體例中，2個MAPT ASO與單一連接基(L)連接。在一些具體例中，二或更多個MAPT ASO與單一連接子(L)串聯連接。對於串聯連接，L可與第一MAPT ASO之5'端連接，並且第二MAPT ASO與第一MAPT ASO之3'端連接。或者，對於串聯連接，L可與第一MAPT ASO之3'端連接，並且第二MAPT ASO與第一MAPT ASO之5'端連接。第一和第二MAPT ASO可經由核酸連接子或非核酸可斷裂之連接子彼此連接。

在一些具體例中，二或更多個MAPT ASO與單一分支之連接子(L)連接。連接子可為分支之連接基，其中2或更多個寡核苷酸分別與單一連接基(L)(亦即，y為2或更大)連接。

在某些具體例中，組成物中之寡核苷酸與蛋白質之比率為為約1：1至約4：1。在某些具體例中，組成物中之寡核苷酸與蛋白質之比率為約1：1至約2：1。在某些具體例中，組成物中之寡核苷酸與蛋白質之比率為約1.23。在某些具體例中，組成物中之寡核苷酸與蛋白質之比率為約2：1至約3：1。在某些具體例中，組成物中之寡核苷酸與蛋白質之比率為約2.5。

如本文中所使用，術語「醫藥上可接受之載劑」包括生理上相容且較佳為不干擾或以其他方式抑制活性劑之活性之任何溶劑、分散介質或塗層。各種醫藥上可接受之賦形劑為眾所周知的。在一些具體例中，載劑適合於靜脈、鞘內、腦室內、肌內、口服、腹膜內、經皮、局部或皮下投予。醫藥上可接受之載劑可含有一或多種生理上可接受之化合物，其作用以例如穩定化組成物或增加或減少MAPT ASO接合物之吸收。生理上可接受之化合物可包括，例如，碳水化合物(諸如，葡萄糖、蔗糖、葡聚醣)、抗氧化劑(諸如，抗壞血酸或麩胱甘肽)螯合劑、低分子量蛋白質、減少活性劑之清除或水解之組成物，或賦形劑或其他穩定劑及/或緩衝劑。發明所屬技術領域中亦可得到其他醫藥上可接受之載劑及其調配物。

本文中所述之醫藥組成物可以發明所屬技術領域中之技術人員已知的方式來製造，例如，以傳統混合、溶解、製粒、製成糖衣丸、乳化、封裝、包埋或冷凍乾燥之手段。下列方法和賦形劑僅為例示性的，並且不以任何方式進行限制。

為了向對象投予，可藉由將本文中所述之MAPT ASO接合物與發明所屬技術領域中熟知的醫藥上可接受之載劑合併而配製。此類載劑使得化合物能夠配製成錠劑、丸劑、糖衣丸、膠囊、乳劑、親脂性和親水性懸浮液、液體、凝膠、糖漿、漿液、懸浮液等。可藉由將MAPT ASO接合物與固體賦形劑混合，視需要地研磨所得混合物，以及在加入合適的輔料(若需要)後加工顆粒混合物以獲得錠劑或糖衣丸芯，而獲得用於向對象投予之醫藥製劑。合適的賦形劑包括，例如，填充劑，諸如，糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纖維素製劑，諸如，例如，玉米澱粉、小麥澱粉、米澱粉、馬鈴薯澱粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉及/或聚乙烯吡咯啶酮。若需要，可加入崩解劑(諸如，交聯聚乙烯吡咯啶酮、瓊脂或海藻酸)或其鹽(諸如，海藻酸鈉)。

如上所述，如本文中所述之MAPT ASO接合物可配製成用於以注射(例如，以推注或持續輸注)進行腸胃外投予。對於注射，可將MAPT ASO接合物溶解、懸浮或乳化在水性或非水溶劑(諸如，植物油或其他類似油、合成脂肪酸甘油酯、高級脂肪酸之酯或丙二醇)中，而配製成製劑；以及若需要，與傳統加入劑，諸如，增溶劑、等滲劑、懸浮劑、乳化劑、穩定劑、防腐劑等。在一些具體例中，可在水溶液中配製MAPT ASO接合物，在生理上相容之緩衝液(諸如，漢克斯液(Hank’s solution)、林格氏液(Ringer’s solution)或生理鹽水緩衝液)中製備配製。用於注射之調配物可以單位劑量形式(例如，於安瓿中或於多劑量容器中)存在，和加入之防腐劑。組成物可採懸浮液、溶液或乳液於油性或水性媒劑中等形式，並且可含有配製劑(諸如，懸浮劑、穩定劑及/或分散劑)。

通常，用於活體內投予之醫藥組成物為無菌的。滅菌可根據發明所屬技術領域中已知之方法完成，例如，熱滅菌、蒸氣滅菌、無菌過濾或輻照。

本文中所述之醫藥組成物之劑量和所需藥物濃度可根據預期之特定用途而改變。適當的劑量或投予途徑之測定為發明所屬技術領域中之技術人員熟知的。合適的劑量亦如上所述。B. 套組

在一些具體例中，提供包含如本文中所述之MAPT ASO接合物之套組。在一些具體例中，套組係用於調節目標基因或序列(例如，在腦或中樞神經系統(CNS)中之表現之目標基因)之表現。在一些具體例中，套組係用於調節目標基因之表現。

在一些具體例中，套組進一步包含一或多種額外的治療劑。例如，在一些具體例中，套組包含如本文中所述之MAPT ASO接合物，並且進一步包含一或多種額外的治療劑。在一些具體例中，套組進一步包含用於實踐本文中所述之方法之指示(亦即，規程)(例如，使用套組以跨血腦屏障投予組成物之指示)。雖然教材通常包括書面或印刷材料，但並不限於此。本文中考慮了任何能夠儲存此類指示並將其傳達給最終用戶的媒介。此媒介包括但不限於電子儲存媒介(例如，磁碟、磁帶、盒式磁帶、晶片)、光學媒體(例如，CD-ROM)等。此類媒介可包括提供此類教料的網址。實施例實施例 1.OTV ： MAPT ASO 接合物之構築

i. Fab-Fc 二聚體融合物設計、轉殖 .將Fab-Fc二聚體融合物設計成含有：第一Fc多肽，其包含S239C半胱胺酸取代及臼和LALAPS突變(SEQ ID NO：63)；第二Fc多肽，其與該第一Fc多肽形成Fc二聚體且包含與轉鐵蛋白受體(35.23.2)、杵以及LALAPS突變(SEQ ID NO：11)特異性地結合之經修飾之恆定域，以及其中該第一與第二Fc多肽各自與非靶向之Fab(SEQ ID NO：108和109)融合。因此，第一Fab-Fc多肽融合物具有SEQ ID NO：100之序列，而第二Fab-Fc多肽融合物具有SEQ ID NO：98之序列。

另外，如本文中所述，Fc多肽之C端離胺酸殘基可在蛋白質產生期間由細胞機制全部或部分去除。因此，第一Fc多肽可包含SEQ ID NO：80，而第二Fc可包含SEQ ID NO：12。類似地，第一Fab-Fc多肽融合物可具有SEQ ID NO：101之序列，並且第二Fab-Fc多肽融合物可具有SEQ ID NO：99之序列。

藉由基因合成和Gibson組裝入哺乳動物表現載體pRK5中，而轉殖構築體。

ii. Fab-Fc 二聚體融合物蛋白表現及純化 .將載體與相應的輕鏈載體以1：1：2之杵：臼：輕鏈之比率共轉染至Expi293細胞。藉由將上清液上樣到蛋白A管柱上，而自條件培養基中純化表現之蛋白質。以10倍管柱體積之PBS(pH 7.4)洗滌管柱。以含有150 mM NaCl之50 mM檸檬酸鈉(pH 3.0)溶析蛋白質，並且立即以200 mM精胺酸、137 mM琥珀酸(pH 5.0)中和。藉由使用以200 mM精胺酸、137 mM琥珀酸(pH 5.0)作為電泳緩衝液之尺寸排除層析術(SEC)(GE Superdex200)，而進一步純化蛋白質。純化之蛋白質係由完整質量LC/MS確認，並且由SDS-PAGE和分析性HPLC-SEC確認為＞95%之純度。

iii. 經 5'- 馬來醯亞胺修飾之 ASO 之合成

經 5’- 胺基修飾之 ASO 之製備

固相寡核苷酸合成.遵循標準固相寡核苷酸合成規程，在MerMade 12(LGC)DNA/RNA合成儀上，以100 μmol規模進行寡核苷酸合成。所有鎖核酸(LNA)和去氧核糖核酸(DNA)亞磷醯胺均從Hongene Biotech Corporation購得，包括LNA-A(Bz)、LNA-5MeC(Bz)、LNA-T、LNA-G(dmf)、以及dA(Bz)、dC(Ac)、dT、dG(dmf)。將LNA-5MeC(Bz)溶於DCM/乙腈(1：1，v/v)之混合溶劑中，同時將其餘亞磷醯胺溶於乙腈中，並且加入分子篩(3 Å)。首先在UnyLinker CPG固體撐體上組裝母體反義寡核苷酸(ASO)序列，然後使用6-(三氟乙醯基胺基)-己基-(2-氰乙基)-(N,N-二異丙基)-亞磷醯胺(CAS：133975-85-6；Glen Research Cat.# 10-1916)於5'端附接胺基連接子。用於加入一個核苷酸(或非核酸)單元之合成循環係由四個獨立的步驟組成，亦即，脫三苯甲基(detritylation)、偶聯、氧化(或硫化)以及封端。使用5-乙硫基-1H-四唑(ETT，0.25 M於乙腈)作為活化劑溶液。採用PADS(苯乙醯基二硫化物)於50%吡啶/50%乙腈之0.2 M溶液以引入硫代磷酸酯鍵聯。100 μmol規模ASO合成之詳細規程係總結於下表 2A 至 2D。

合成後操控 .固相寡核苷酸合成完成後，以二乙胺(DEA)於乙腈之20%溶液去除磷酸酯保護基(2-氰乙基)1 hr。於45℃下，在NH₄OH/EtOH(3:1)中進行自固體撐體斷裂和核鹼基去保護(C&D)20 hr。藉由於減壓下離心蒸發而濃縮粗寡核苷酸溶液，並且將固體殘質於水復水以進行製備型HPLC純化。

以製備型 HPLC 純化 5'- 胺基 ASO.以離子對逆相HPLC純化粗5'-胺基ASO。詳細參數總結於表 3。收集適當的部分並凍乾，以得到純化5'-胺基ASO。

經 5'- 胺基修飾之 ASO 之合成 .下表 4和5所示之經5'-胺基修飾之ASO係根據上述一般方法合成的。

經 5'- 馬來醯亞胺修飾之 ASO 之製備 .一般流程：於室溫下，在ASO胺TEA鹽(30 mg，以OD計)於PBS緩衝液(TEKNOVA 10×PBS原液，pH 6.0，2.5 mL)之溶液中加入3-馬來醯亞胺基丙酸N-羥基琥珀醯亞胺酯(MCOSu，10 eq.)於DMF(2.5 mL)之溶液。將所得溶液於室溫下搖晃18 hr。完成後，溶液通過AKTA純25 M上之sephadex G25管柱(2.5×40 cm)以脫鹽，以3 mL/min用Milli Q水溶析，由UV 260/280和電導率監測。匯集適當的部分(fraction)並凍乾，以得到所需5'-馬來醯亞胺ASO。

iv. 生物接合 .首先，使用30莫耳當量的TCEP和2 mM EDTA在37℃下還原如上產生之含有用於接合之S239C半胱胺酸修飾之Fab-Fc二聚體融合物1 hr。由LC/MS確認還原。還原後，使用含有2 mM EDTA之1×PBS(pH 6.8)透析以去除剩餘的TCEP(例如，藉由透析而純化)，並且以50莫耳當量的dHAA於室溫下再氧化Fab-Fc二聚體融合物3 hr。由dHAA之LC/MS確認氧化。對於生物接合，於室溫下，在氧化之Fab-Fc二聚體融合物中加入1.2莫耳當量的如上經5'-馬來醯亞胺修飾之ASO1 hr。藉由使用Resource Q管柱(平衡緩衝液：50 mM Tris，pH 7.5，溶析緩衝液：50 mM Tris，pH 7.5+2 M NaCl)之陰離子交換層析術純化所得MAPT ASO接合物，而去除非所欲和未接合之產物。由LC/MS和SEC測定MAPT ASO接合物之純度。所得接合物被稱為OTV或OTV：MAPT。實施例 2. 針對 MAPT 基因之 ASO 之活體外篩選

對給定目標序列具有特異性之ASO序列之選擇係基於所選目標序列之分析以及對許多因素之確定，包括活體外和活體內效力以及肝毒性概況。

初步 MAPT ASO 篩選 .基於對標靶結合、特異性、功效以及安全性之電腦預測，進行393個與MAPT前mRNA(Ensembl ENST0000034429)及/或MAPTmRNA(refseq NM_001123066)SEQ ID NO：115 100%互補之MAPT ASO序列初步辨識。

測試MAPT特異性ASO在人類MiaPaCa-2和HDLM2細胞中之減弱功效。以濃度為5 µM之MAPT特異性ASO或對照寡核苷酸處理細胞，無需使用轉染試劑。三天治療後，細胞溶解。使用QuantiGene Singleplex測定法(ThermoFisher)分析MAPT和HPRT1 mRNA表現。將MAPT表現值標準化成HPRT1值，並且測定與模擬處理之細胞相比之減弱程度。

雙濃度篩選 .在MiaPaCa-2細胞中之雙濃度篩選(100 nM、1000 nM)測試55種在兩種測試之細胞株中均具有＞99.9%(5µM)之減弱功效之MAPT特異性ASO。三天治療後，細胞溶解。使用QuantiGene Singleplex測定法(ThermoFisher)分析MAPT和HPRT1 mRNA表現。將MAPT表現值標準化成HPRT1值，並且測定與模擬處理之細胞相比之減弱程度。選擇22種ASO來研究TLR9活化能力和濃度反應關係(IC₅₀測定)。

TLR9 活化能力之研究 .測試22種ASO以進行TLR9依賴性促發炎潛力。以MAPT特異性ASO、陽性對照以及陰性對照處理報告細胞株(HEK-Blue-hTLR9細胞，Invivogen)，無需使用濃度為5 µM之轉染試劑。20 hr後，在細胞中加入QUANTI-Blue™ Solution(Invivogen)。2 hr後測量光密度，以測定測試之ASO之TLR9活化能力。實施例 3. 活體內減弱篩選

根據下述用於活體內給藥(dosing)之流程合成包含SEQ ID NO：111之ASO。將ASO在無菌鹽水中稀釋，並且以每隻小鼠50 μg或100 μg之單劑量(總體積10 μL)經由腦室內(ICV)注射hTau小鼠(mTau^-/-)。基於活體內耐受性，測定50 μg或100 μg之劑量。

投予後兩週，採集組織(腦和脊髓)，並且收集末梢血液。如下所述測量腦和脊髓中之MAPT表現。以Trizol中之珠粒均質器將一塊額葉和頸部脊髓均質化，以進行批量(bulk)RNA單離。簡而言之，將均質之組織與氯仿一起培養3至5分鐘，以便離心後進行相分離。接著，將水相與異丙醇一起培養10分鐘，以使RNA沉澱，然後以75%乙醇洗滌且於無核酸酶之水中再懸浮。接著，藉由使用Express One-Step Superscript Kit之qPCR測量MAPT表現，並將其標準化成管家基因Gapdh之表現。亦藉由使用Express One-Step Superscript Kit之qPCR定量一組神經膠質活化標記(Aif1、Gfap、Tlr9、Itgax)，以測定ASO是否觸發慢性神經發炎反應。

50 μg之劑量下之ASO6使人類tau表現減弱76%。實施例 4. 活體內肝毒性篩選

評估ASO6之肝臟安全性。丙胺酸轉胺酶(ALT)、天冬胺酸轉胺酶(AST)以及乳酸去氫酶(LDH)為肝臟中含量豐富之酵素。當肝細胞受損時，它們會將此等酵素釋放到血液中。因此，測量血清ALT、AST以及LDH水平，以測定ASO是否會誘發肝損傷。

在無菌生理食鹽水中稀釋ASO，並且連續五天向野生型小鼠以每天20 mpk之劑量皮下投予。連續12天每天對小鼠稱重，並且在第5天、第8天以及第12天抽血。藉由使血液樣本凝固且隨後離心，而製備血清。接著，測量血清樣本中之ALT、AST以及LDH水平。投予ASO6後，ALT、AST以及LDH水平低。體重亦無太大變化。

為了測定內部胞嘧啶甲基化(亦即，甲基化ASO之缺口區域中之胞嘧啶)是否對ASO之肝臟安全概況產生影響，以5-甲基胞嘧啶替換ASO 6中之內部胞嘧啶。使用與上述相同之規程來分析肝臟安全性。5-甲基胞嘧啶之加入對ASO6之肝臟安全性僅有輕微的有益效果，亦即，肝臟酵素水平之輕微增加係由胞嘧啶甲基化改善。實施例 5. 活體內 ED50 篩選

在無菌鹽水中稀釋ASO6，並且以數個劑量(包括範圍為5和15 μg(0和50 μg數據來自先前的研究)，最終體積為10 μL)經由ICV注射向hTau(mTau^-/-)小鼠投予。

給藥後兩週，採集組織，並且根據上述規程經由批量RNA單離，隨後進行MAPT和Gapdh之qPCR，而測量腦和脊髓中之MAPT表現。觀察到活體內之ED₅₀分別為17.7 μg和13.1 μg。實施例 6. 活體內 ASO 半衰期測定

在無菌鹽水中稀釋ASO6，並且以25 μg之中等劑量(總體積10 μL)經由ICV注射向hTau(mTau^-/-)小鼠投予。投予後5和9週採集組織，以測定tau減弱之持續時間。根據上述規程，經由批次RNA單離，隨後進行MAPT和Gapdh之qPCR，以測量腦和脊髓中之MAPT表現。在腦和脊髓中持續至少9週MAPT減弱。實施例 7. 活體內大鼠腎毒性測定

大鼠被認為係用於檢測ASO介導之腎毒性之最敏感的物種，並且為用於風險評估的較佳物種，因為牠們可過度預測人類對腎毒性之敏感性。本研究之目的為測定在兩週大鼠研究中，重複劑量投予五種ASO6對腎功能和形態(肉眼(gross)和組織學評估)之效果(若有任何)。

在第1天和第8天，向五隻雄性Wistar Hannover大鼠(7至8週齡)投予兩次40 mg/kg皮下注射的對照ASO A、ASO6、A或鹽水(媒劑對照)；在第15天，將動物安樂死。在第1天和第8天以及在第5天、第10天以及第15天給藥前進行體重測量。在第1天和第8天給藥後進行臨床觀察。在第5天、第10天以及第15天採集血液樣本以測量血尿素氮(BUN)和肌酸酐作為腎功能之標記。在第15天，收集腎臟以進行顯微鏡評估，並且收集尿液以測量KIM-1：肌酸酐比作為腎損傷之指標。

ASO6在Wistar Hannover大鼠中之耐受性良好，其中在整個治療期間，臨床症狀或體重沒有變化。所有實驗組中之血清BUN和肌酸酐水平均在正常歷史範圍內，並且與媒劑對照相當。在第15天，尿液KIM-1：肌酸酐比率之變化被認為低於臨界值，並且變化幅度與在類似研究條件下之大鼠中常觀察到的變化幅度相同。

觀察到腎臟中之微觀的最小至輕度近曲小管上皮變性，伴隨最小的再生，以及最小至輕度間質、血管周及/或嗅小球旁單核細胞浸潤。基於嚴重程度最小至輕度，以及臨床症狀、體重以及血清和尿液腎臟生物標記(BUN、肌酸酐以及KIM-1)無相關的功能變化，此等微觀變化被認為是非不良的(non-adverse)。綜上所述，未發現對Wistar Han大鼠之腎功能或組織病理學有不良影響之證據。 實施例 8 ： MAPT ASO 之活體內效力和穩定性評估

將ASO SEQ ID NO：111進一步修飾，如下表 5所示：

在無菌鹽水中稀釋ASO，並且以每隻小鼠之單劑量為10或25 μg(總體積為10 μL)經由腦室內(ICV)向hTau小鼠(mTau^-/-)投予(根據下表 6)。給藥後10至14天(根據下表 6)，採集腦組織以測量相對MAPT RNA水平(根據下列組織均質化和qPCR流程)和總ASO濃度(根據下列組織均質化和總ASO測定法流程)。

結果如圖8(相對MAPT RNA水平)和圖9(總ASO)所示。此等結果暗示，與現有的對照MAPT ASO相比，ASO鹼基序列之效力增強，以及與未經修飾之版本(ASOM_unmod)相比，經修飾之ASO(例如，ASOM4和ASOM5)之組織穩定性增強，其應延長經修飾之ASO於活體內之作用持續時間。實施例 9 ：經修飾之 OTV ： MAPT 之活體內 OTV 腦攝取和 MAPT 減弱

周邊給藥 .根據上述流程合成以上依效力選定之五種經修飾之ASO，並且將其與TV蛋白生物接合以製造五種MAPT OTV分子(OTVM1、OTVM2、OTVM3、OTVM4、OTVM5)，以用於評估周邊靜脈投予後之腦中之tau減弱。

此外，將TfR^ms/hu敲入(knock-in)小鼠(參見美國專利第10,143,187號，其係以引用方式納入本文中)以25 mpk之該等OTV中之各者給藥一次。在無菌鹽水中稀釋MAPT OTV，並且靜脈投予。各劑前對小鼠稱重以測定適當的劑量。給藥後4、24和72 hr收集血漿，而給藥後一週收集末梢血漿和組織樣本(亦即，腦和肝臟)，以根據下列流程測定沉積到腦中之總全長ASO之水平(圖1和圖2)。

此外，將TfR^ms/hu敲入小鼠(參見美國專利第10,143,187號，其係以引用方式納入本文中)與有hTau^+/-(人類Tau)和mTau^-/-(小鼠Tau剔除(knockout))轉基因之小鼠交配，並且向所得小鼠投予4劑(第0天、第1週、第2週、第3週)或8劑(第0天、第3天、第7天、第10天、第14天、第17天、第21天、第24天)的該等MAPT OTV中之各者。在無菌鹽水中稀釋MAPT OTV，並且向小鼠靜脈投予。在給藥初始週和第3週前投予抗CD4以預防小鼠之抗藥物抗體反應。各劑前對小鼠稱重，以測定適當的劑量。在最終劑後一週收集腦樣本，以根據下列流程使用下述總ASO測定法測定腦中之ASO濃度(圖3)，以及相對於Gapdh和給藥鹽水之小鼠之人類Tau減弱之水平(圖4和圖5)。

接著，將此等值與使用相同的小鼠系來評估與未經修飾之ASO接合之OTV分子之腦攝取和標靶減弱之單獨研究比較。在此研究中，向小鼠投予1劑(第0天)或4劑(第0天、第1週、第2週、第3週)未經修飾之MAPT OTV。在無菌鹽水中稀釋MAPT OTV，並且向小鼠靜脈投予。在給藥之初始週和第3週前投予抗CD4以預防小鼠產生抗藥物抗體反應。各劑前對小鼠進行稱重，以測定適當的劑量。在最終劑後一週收集腦樣本，以根據下列流程使用總ASO測定法測定腦中之ASO濃度(圖6)，以及相對於Gapdh和給藥鹽水之小鼠之人類Tau減弱水平(圖7)。

綜上所述，此等結果證明，與未經修飾之MAPT OTV相比，經修飾之MAPT OTV具有優異的ASO腦攝取和標靶減弱。吾等觀察到一劑25mpk IV後一週之20至27 nM ASO腦攝取(經修飾之序列)(圖1和圖2)(與18 nM(未經修飾)(圖6)相比)；四劑25mpk IV後一週之33至53 nM ASO腦攝取劑量(經修飾之序列)(圖3)(與18 nM(未經修飾)(圖6)相比)，四劑25mpk IV後一週之腦中之53至75%的MAPT減弱(經修飾之序列)(圖4)(與21%(未經修飾)(圖7)相比)，以及八劑25mpk IV後一週之腦中之137 nM ASO腦攝取和84%的MAPT減弱(圖3和圖5)。活體內方法 方法

小鼠處理和組織收集 .經由靜脈(IV)尾靜脈注射(~200 μL總體積)向小鼠周邊投予治療性處理。為了收集活體血漿，經由頦下穿刺收集血液，並轉移到EDTA塗層管中。接著，於4℃下以12,700 rpm旋轉7 min，之後收集頂部血漿層。為了組織收集，以三溴乙醇麻醉動物，並且經由心臟穿刺將全血收集入EDTA塗層管中以進行血漿藥物濃度評估。將全血轉移到EDTA塗層管後，於4℃下以12,700 rpm旋轉7 min，之後收集頂部血漿層。接著，以5 mL/min之速率，經心臟對小鼠灌注冰冷之PBS 5 min。為了進行生化分析，收集組織、稱重、在乾冰上快速冷凍，以及接著於-80℃下儲存。

腦室內推注 (ICV) 手術 .如DeVos SL(“Direct intraventricular delivery of drugs to the rodent central nervous system” J Vis Exp 2013 May 12:(75):e50326；其係以引用方式納入本文中)中所述進行流程，並且簡要總結如下。在手術之準備中，將手術區以70%乙醇滅菌。以4%異氟烷麻醉小鼠。將小鼠之肩部至兩眼之間之毛髮剃掉，之後放置在趨觸性表面上。在2%之異氟烷之維持水平下，從頸底到兩眼之間做了切口。以過氧化氫清潔後，將針以1 mm/s之速率緩慢穿過頭骨。在使腦環繞針密封之2至3 min之後，以每秒1 µL之速率投予一劑10 µL ASO。將棉花棒抵住針底部的顱骨，以每秒1 mm之速率抬起針。將棉花棒在注射部位維持1 min，以限制藥物外洩。ICV推注後，縫合切口且以抗生素軟膏治療。將小鼠轉移到加熱之恢復墊上，並且觀察其是否完全恢復。手術後每天監測小鼠是否有疼痛、不適或感染。

用於藥物濃度測量和蛋白質測定法之組織均質 .藉由加入10倍體積的具有加入之cOmplete Protease Inhibitor (Roche #04693132001)和PhosStop(Roche 04906837001) 磷酸酶抑制劑之冷卻之1%NP40+PBS均質緩衝液，而將稱重之冷凍組織樣本加工以進行生化分析。使用1.5 mL Eppendorf 管中之3 mm碳化鎢珠粒將樣本均質，並且使用Qiagen TIssueLyzer II(Cat No./ID:85300)振盪(2×3 min，27 Hz)。對於蛋白質測定法，接著將樣本以17000×g 離心15 min，並且取出上清液且用於測定法。

用於 RNA 測量之組織均質化 .藉由加入10倍體積的Qiazol試劑，而將稱重之冷凍組織樣本加工以用於RNA測定法。使用2 mL Eppendorf管中之5 mm碳化鎢珠將樣本均質，並且使用Qiagen TIssueLyzer II(Cat No./ ID:85300)振盪(2×3 min，27 Hz)。溶解後，將樣本於室溫下培養5 min，接著加入氯仿。將樣本旋渦，於室溫下培養3 min，接著於4℃下以12000×g離心15 min。接著，單離水相。接著，藉由加入異丙醇、渦旋、於室溫下培養10 min，以及接著於4℃下以12000×g離心10 min以單離RNA。接著，將所得沉澱物懸浮於75%乙醇中，渦旋以及於4℃下以7500×g離心5 min。將最終沉澱物再懸浮於水中。

huIgG 測定法 .使用通用電化學發光免疫測定法(ECLIA)測量小鼠血漿和組織溶解產物中之人源化抗體的定量。簡而言之，在MSD GOLD 96孔之經鏈黴親和素塗佈之微量滴定盤(Meso Scale Discovery, Rockville, MD)中加入於測定稀釋劑中製備之工作濃度之生物素化之山羊抗人類IgG多株初級抗體(Southern Biotech, Birmingham, AL)，並且培養約1 hr。此培養和盤洗滌步驟後，在測定盤中加入準備之測試樣本(於適當處預稀釋樣本)和相關標準品，並且使其培養約1 hr。測試樣本培養和盤洗滌步驟後，在測定盤中加入工作濃度之於測定稀釋劑中之二級釕基化(SULFO-TAG)之山羊抗人類IgG抗體(Meso Scale Discovery, Rockville, MD)，並且培養約1 hr。盤洗滌後，加入1×MSD Read Buffer T(Meso Scale Discovery, Rockville, MD)以產生電化學發光(ECL)測定訊號，其係接著以ECL單位(ECLU)表示。所有測定反應步驟均於室溫下進行，並且在盤振盪器上振盪(於適當處)；以及所有測試樣本在測定盤中分析前以1：20之測定MRD預稀釋。隨後，藉由反算校準(CS)曲線，而將測定中產生之樣本ECLU訊號處理成濃度。以加權之四參數非線性邏輯迴歸擬合測定CS曲線，以用於計算未知/測試樣本的濃度。

總 ASO 測定法 .使用基於雜交之電化學發光免疫測定法(ECLIA)測量小鼠血漿和組織均質物中之總ASO(結合和游離形式)之定量。簡而言之，將工作濃度之與客製化生物素化和地高辛接合之反義探針(由Integrated DNA Technologies, Coralville, IA合成)與於TE緩衝液(含有1 mM EDTA之10 mM Tris-HCL)中之準備之測試樣本(於適當處預稀釋樣本)和相關標準品合併。將於TE緩衝液中之製備之樣本以1：1混合加入含有工作濃度之重組蛋白酶K酵素(ThermoFisher, Waltham, MA)之1×SSC緩衝液(Sigma-Aldrich, St. Luois, MO)中。接著，將雜交/酵素混合物於熱循環儀中切割(digest)、變性、黏合以及冷卻。混成產物培養後，在MSD GOLD 96孔經鏈黴親和素塗佈之微量滴定盤(Meso Scale Discovery, Rockville, MD)之孔中加入樣本，並且培養大約30 min。培養和盤洗滌步驟後，將工作濃度之於測定稀釋劑中之二級抗釕基化(SULFO-TAG)羊抗地高辛抗體(Novus Biologicals, Littleton, CO)加入盤中，並且培養大約30 min。盤洗滌後，接著加入1×MSD Read Buffer T(Meso Scale Discovery, Rockville, MD)以產生電化學發光(ECL)測定訊號，其係接著以ECL單位(ECLU)表示。所有測定反應步驟均於室溫下進行，並且在盤振盪器上搖盪(於適當處)；以及所有測試樣本在測定盤中分析前以1：20之測定MRD預稀釋。隨後，藉由反算校準(CS)曲線，而將測定中產生之樣本ECLU訊號處理成濃度。以加權之四參數非線性邏輯迴歸擬合測定(CS)曲線，以用於計算未知/測試樣本之濃度。

qPCR 分析 . 為了評估目標mRNA水平，對自組織溶解產物中提取之RNA運行qRT-PCR。使用Taqman探針(hMAPT、mGapdh)和Express One-Step Kit評估目標mRNA水平。對於各樣本，將hMAPT mRNA水平標準化成管家基因Gapdh。使用QuantStudio 6 Flex系統(Applied Biosystems)進行qRT-PCR，並且使用技術二重複測量各探針之平均CT值。接下來，計算相對於非ASO實驗組之德爾塔德爾塔(delta delta)CT(ΔΔCT)值，並且繪製成相對表現水平。實施例 10. 軟點辨識測定法

為了測定寡核苷酸(ASO)之分解代謝和生物轉化並進一步表徵本文中所述之寡核苷酸和寡核苷酸多肽接合物，必須開發一種穩定性測定法以辨識ASO之可能分解代謝位點(剪切位點)(本文中被稱為「軟點」)。將以下詳述之分解代謝測定法用以辨識潛在修飾之軟點，以便設計和提供更穩定的分子。例如，Basiri等人於Molecular Therapy: Nucleic Acids; 21: 725-736 (2020)中描述先前的寡核苷酸活體外測定方法。

組織均質化和培養—將冷凍之小鼠肝臟在含有1%NP-40之PBS緩衝液(pH 7.4)中以200 mg/ml的組織濃度均質化。將200 μL的均質物與1至2 mM濃度之ASO混合，於37℃下培養48 hr (於300 g振盪)。

樣本製備—在200 mL的培養之組織均質物中加入200 mL的10%磷酸，並且渦旋5 min。在各管中加入600 mL的Clarity OTX溶解上樣緩衝液(Phenomenex, PN AL0-8579)，並且渦旋5 min，隨後於4℃下以3200 rpm離心10 min。使用Clarity OTX SPE盤。表5顯示詳細流程。

以液相層析術和質譜法進行樣本分析。

液相層析法(LC)：使用Waters BEH寡核苷酸2.1×50mm管柱於70℃下以離子配對層析術進行ASO分離。流動相緩衝液A和B分別為水和具有100 mM六氟異丙醇(HFIP)和15 mM N,N-二異丙基乙胺(DIEA)。層析術係以0.3 mL/min，於下列梯度條件(min-%B)進行：0至5、1至5、6至50、6.1至95、7.1至95、7.2至5、10至5。總運行時間為10 min，並且LC輸出於0至1 min和7至10 min時轉移到廢液中。

質譜法(MS)：將用IDA法之高解析度MS用以辨識分解代謝物。已辨識之軟點—下表顯示根據本文中提供之方法辨識之軟點。一旦辨識出一或多個軟點，相關的核苷間鍵聯就經PS2、MsPA、OiPS或PN基替換。超過一個與軟點相鄰之核苷間鍵聯可經替換。為了改善ASO之穩定性，可在穩定性測試後根據需求重複此程序。 實施例 11. 活體內血漿藥物動力學

將ASO SEQ ID NO：111和112進一步修飾，如下表 9所示。

為了評估額外的寡核苷酸多肽接合物之藥物動力學(參見表7B)，如上所述，以10 mg/kg之濃度和靜脈注射向Sprague Dawley大鼠投予額外的接合物。所有寡核苷酸多肽接合物均以2 mL/kg之劑量體積投予。注射後0.25、4、24、48以及72 h收集血漿。如上所述測量血漿中之huIgG和ASO濃度。

結果於表10中所示。此等結果證明以各種位置和形式加入穩定化修飾持續改善huIgG清除率，以及以骨架修飾來修飾軟點處或附近可藉由保護或轉移剪切位點而調整ASO清除率。

以每隻小鼠單劑量(10 μL總體積)之經由腦室內(ICV)注射向hTau小鼠(mTau^-/-)投予ASO(未經接合)。採集腦組織來測量相對MAPT RNA水平。圖12所示結果證明橫跨測試之ASO之MAPT表現顯著減弱。

[圖1]說明經修飾之MAPT ASO OTV之血漿藥物動力學曲線。

[圖2]說明經修飾之MAPT ASO OTV之單劑量腦ASO濃度。

[圖3]說明經修飾之MAPT ASO OTV之多劑量腦ASO濃度。

[圖4]說明4劑經修飾之MAPT ASO OTV後之目標MAPT減弱(knockdown)。

[圖5]說明8劑經修飾之MAPT ASO OTV後之目標MAPT減弱。

[圖6]說明未經修飾之MAPT ASO OTV之腦ASO濃度。

[圖7]說明未經修飾之MAPT ASO OTV之目標MAPT減弱。

[圖8]說明MAPT ASO效力。

[圖9]說明腦組織中之ASO穩定性。

[圖10]表示MAPT ASO之一個具體例之化學結構圖。

[圖11]表示MAPT ASO之一個具體例之化學結構圖。

[圖12]表示MAPT ASO之一個具體例之化學結構圖。

[圖13]表示MAPT ASO之一個具體例之化學結構圖。

[圖14]表示MAPT ASO之一個具體例之化學結構圖。

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Claims

一種微管相關蛋白tau(MAPT)反義寡核苷酸(ASO)接合物，其包含靶向轉鐵蛋白受體(TfR)之Fc多肽二聚體和MAPT ASO，其中：(a) 該靶向TfR之Fc多肽二聚體包含(i) 第一Fc多肽；(ii) 第二Fc多肽，其中該第二Fc多肽包含與人類轉鐵蛋白受體1(TfR)特異性地結合之經修飾之恆定域，並且包含與SEQ ID NO：12具有至少90%序列同一性之序列，其中該第二Fc多肽與該第一Fc多肽形成Fc二聚體，(b) 該MAPT ASO包括：或其中A_L、^mC_L、G_L以及T_L分別為腺嘌呤鎖核苷、5-甲基胞嘧啶鎖核苷、鳥嘌呤鎖核苷以及胸腺嘧啶鎖核苷；A、C、G以及T分別為去氧腺苷核苷、去氧胞苷核苷或5-甲基去氧胞苷核苷、去氧胍核苷以及去氧胸苷核苷；各p獨立地為硫代磷酸酯(PS)核苷間鍵聯或穩定化核苷間鍵聯；各x獨立地為PS核苷間鍵聯、磷酸二酯(PO)核苷間鍵聯或穩定化核苷間鍵聯；以及任何不是穩定化核苷間鍵聯之核苷間鍵聯為PS核苷間鍵聯或磷酸二酯核苷間鍵聯；以及其中該第一Fc多肽與該MAPT ASO連接。
如請求項1之MAPT ASO接合物，其中該穩定化核苷間鍵聯係獨立地選自由下列各者所組成群組：二硫代磷酸酯(PS2)核苷間鍵聯、磷醯胍(PN)核苷間鍵聯、甲磺醯基胺基磷酸酯(MsPA)核苷間鍵聯以及O-異丙基硫代磷酸酯(OiPS)核苷間鍵聯。
如請求項1之MAPT ASO接合物，其中各p和x為PS核苷間鍵聯。
如請求項1或2之MAPT ASO接合物，其中(a)x _g、x _h以及x _i各自為PS核苷間鍵聯；(b)x _g為PS核苷間鍵聯，並且x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯；(c)x _g、x _h以及x _i各自為PN核苷間鍵聯；(d)x _g和x _h各自為PN核苷間鍵聯，並且x _i為PO核苷間鍵聯；(e)x _g和x _i各自為PN核苷間鍵聯，並且x _h為PO核苷間鍵聯；或(f)x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯，並且x _g為PO核苷間鍵聯。
如請求項1、2以及4中任一項之MAPT ASO接合物，其中：(a)x _d、x _e以及x _f各自為PS核苷間鍵聯；(b)x _d和x _e為PN核苷間鍵聯，並且x _f為PS核苷間鍵聯；(c)x _d為PS核苷間鍵聯，並且x _e和x _f各自為PN核苷間鍵聯；(d)x _d為PN核苷間鍵聯，並且x _e和x _f各自為PS核苷間鍵聯；(e)x _d、x _e以及x _f各自為PN核苷間鍵聯；(d)x _d和x _e各自為PN核苷間鍵聯，並且x _f為PO核苷間鍵聯；(e)x _d和x _f各自為PN核苷間鍵聯，並且x _e為PO核苷間鍵聯；或(f)x _e和x _f各自為PN核苷間鍵聯，並且x _d為PO核苷間鍵聯。
如請求項4或5之MAPT ASO接合物，其中：(a)x _d、x _e、x _f、x _g、x _h以及x _i各自為PS核苷間鍵聯(b)x _d、x _e以及x _f各自為PS核苷間鍵聯，x _g為PS核苷間鍵聯，以及x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯；(c)x _d、x _e和x _f各自為PS核苷間鍵聯，並且x _g、x _h以及x _i各自為PN核苷間鍵聯；(d)x _d和x _e為PN核苷間鍵聯，x _f為PS核苷間鍵聯，以及x _g、x _h以及x _i各自為PS核苷間鍵聯；(e)x _d和x _e為PN核苷間鍵聯，x _f為PS核苷間鍵聯，x _g為PS核苷間鍵聯，以及x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯；(f)x _d為PS核苷間鍵聯，x _e和x _f各自為PN核苷間鍵聯，x _g為PS核苷間鍵聯，以及x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯；(g)x _d為PN核苷間鍵聯，並且x _e和x _f各自為PS核苷間鍵聯，x _g為PS核苷間鍵聯，以及x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯；(h)x _d、x _e、x _f、x _g、x _h以及x _i各自為PN核苷間鍵聯；(i)x _d、x _e以及x _f各自為PN核苷間鍵聯，x _g和x _h各自為PN核苷間鍵聯，以及x _i為PO核苷間鍵聯；(j)x _d、x _e以及x _f各自為PN核苷間鍵聯，x _g和x _i各自為PN核苷間鍵聯，以及x _h為PO核苷間鍵聯；(k)x _d、x _e以及x _f各自為PN核苷間鍵聯，x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯，以及x _g為PO核苷間鍵聯；(l)x _d和x _e各自為PN核苷間鍵聯，並且x _f為PO核苷間鍵聯，以及x _g、x _h以及x _i各自為PN核苷間鍵聯；(m)x _d和x _f各自為PN核苷間鍵聯，並且x _e為PO核苷間鍵聯，以及x _g、x _h以及x _i各自為PN核苷間鍵聯；或(n)x _e和x _f各自為PN核苷間鍵聯，並且x _d為PO核苷間鍵聯，以及x _g、x _h以及x _i各自為PN核苷間鍵聯。
如請求項1至2和4至6中任一項之MAPT ASO接合物，其中該MAPT ASO包含SEQ ID NO：111，並且(a)p _a、p _b以及p _c為PS核苷間鍵聯；(b)p _a為穩定化核苷間鍵聯，並且p _b和p _c為PS核苷間鍵聯；(c)p _b為穩定化核苷間鍵聯，並且p _a和p _c為PS核苷間鍵聯；(d)p _a和p _b為穩定化核苷間鍵聯，並且p _c為PS核苷間鍵聯；(e)p _b和p _c為穩定化核苷間鍵聯，並且p _a為PS核苷間鍵聯；或(f)p _a、p _b以及p _c為穩定化核苷間鍵聯。
如請求項7之MAPT ASO接合物，其中(a)p _a為PS2鍵聯，並且p _b和p _c為PS核苷間鍵聯；(b)p _b為PS2鍵聯，並且p _a和p _c為PS核苷間鍵聯；(c)p _b為PN鍵聯，並且p _a和p _c為PS核苷間鍵聯；(d)p _a和p _b為PN核苷間鍵聯，並且p _c為PS核苷間鍵聯；(e)p _a和p _b為PS2核苷間鍵聯，並且p _c為PS核苷間鍵聯；(f)p _a和p _b為MsPA核苷間鍵聯，並且p _c為PS核苷間鍵聯；(g)p _a和p _b是OiPS核苷間鍵聯，並且p _c為PS核苷間鍵聯；(h)p _b和p _c為PN核苷間鍵聯，並且p _a為PS核苷間鍵聯；(i)p _a、p _b以及p _c為PN核苷間鍵聯；或(j)p _a、p _b以及p _c為MsPA核苷間鍵聯。
如請求項1之MAPT ASO接合物，其中該MAPT ASO包含下列寡核苷酸：其中：A_L為腺嘌呤鎖核苷；^mC_L為5-甲基胞嘧啶鎖核苷；T_L為胸腺嘧啶鎖核苷；G_L為鳥嘌呤鎖核苷；A為去氧腺苷；C為去氧胞苷；^mC為5-甲基去氧胞苷；T為去氧胸苷；G為去氧鳥苷；*為PS核苷間鍵聯；n為PN核苷間鍵聯；t為PS2核苷間鍵聯；u為MsPA核苷間鍵聯；o為OiPS核苷間鍵聯；以及P為PO核苷間鍵聯。
如請求項1至2和4至6中任一項之MAPT ASO接合物，其中該MAPT ASO包含SEQ ID NO：112，並且(a)p _k、p _l、p _n以及p _o為穩定化核苷間鍵聯；(b)p _k、p _l、p _n以及p _o為穩定化核苷間鍵聯，並且p _j和p _m為PS核苷間鍵聯；(c)p _j、p _l以及p _o為穩定化核苷間鍵聯；(d)p _j、p _l以及p _o為穩定化核苷間鍵聯，並且p _k、p _m以及p _n為PS核苷間鍵聯；(e)p _l、p _m、p _n以及p _o為穩定化核苷間鍵聯；或(d)p _l、p _m、p _n以及p _o為穩定化核苷間鍵聯，並且p _j和p _k為PS核苷間鍵聯。
如請求項10之MAPT ASO接合物，其中(a)p _k、p _l、p _n以及p _o為PN核苷間鍵聯；(b)p _k、p _l、p _n以及p _o為PN核苷間鍵聯，並且p _j和p _m為PS核苷間鍵聯；(c)p _j為PN鍵聯，並且p _l和p _o為PS2核苷間鍵聯；(d)p _j為PN鍵聯，p _l和p _o為PS2核苷間鍵聯，以及p _k、p _m以及p _n為PS核苷間鍵聯；(e)p _l和p _m為PS2核苷間鍵聯，並且p _n和p _o為PN核苷間鍵聯；或(d)p _l和p _m為PS2核苷間鍵聯，p _n和p _o為PN核苷間鍵聯，以及p _j和p _k為PS核苷間鍵聯。
如請求項1之MAPT ASO接合物，其中該MAPT ASO包含下列寡核苷酸：其中：^mC_L為5-甲基胞嘧啶鎖核苷；T_L為胸腺嘧啶鎖核苷；G_L為鳥苷鎖核苷；A為去氧腺苷；C為去氧胞苷；T為去氧胸苷；G為去氧鳥苷；*為PS核苷間鍵聯；n為PN核苷間鍵聯；以及t為PS2核苷間鍵聯。
如請求項1至12中任一項之MAPT ASO接合物，其中與TfR特異性地結合之該經修飾之恆定域包含根據EU編號之位置380處之麩胺酸、位置384處之Y、位置386處之T、位置387處之麩胺酸、位置388處之色胺酸、位置389處之丙胺酸、位置390處之N、位置413處之T、位置415處之麩胺酸、位置416處之麩胺酸以及位置421處之苯丙胺酸。
如請求項1至13中任一項之MAPT ASO接合物，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽包含至少一個半胱胺酸取代。
如請求項14之MAPT ASO接合物，其中至少一個半胱胺酸取代係選自由S239C取代、S442C取代、A330C取代、K149C取代或T289C取代所組成群組。
如請求項15之MAPT ASO接合物，其中該第一Fc多肽包含該至少一個半胱胺酸取代。
如請求項1至16中任一項之MAPT ASO，其中該MAPT ASO包含選自由下列各者所組成群組之5'端基：磷酸二酯基、硫代磷酸酯基、二硫代磷酸酯基、甲磺醯基胺基磷酸酯基、環磷醯鳥嘌呤基以及O-異丙基硫代磷酸酯基。
如請求項14至17中任一項之MAPT ASO接合物，其中該Fc二聚體係經由附接該至少一個半胱胺酸取代和該MAPT ASO之該5'端之連接基連接該MAPT ASO，其中該連接基為，其中標記為*之價態附接該靶向TfR之Fc多肽二聚體，並且標記為**之價態附接該MAPT ASO。
如請求項1至18中任一項之MAPT ASO接合物，其中該第一及/或該第二Fc多肽進一步包含一或多個調節效應子功能之突變。
如請求項19之MAPT ASO接合物，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽包含各自根據EU編號之位置234處之丙胺酸、位置235處之丙胺酸以及位置329處之絲胺酸或甘胺酸。
如請求項1至20中任一項之MAPT ASO接合物，其中該第一及/或該第二Fc多肽進一步包含一或多個增加血清穩定性之突變。
如請求項1至21中任一項之MAPT ASO接合物，其中該第二Fc多肽進一步包含根據EU編號之位置366處之色胺酸。
如請求項22之MAPT ASO接合物，其中該第一Fc多肽進一步包含根據EU編號之位置366處之絲胺酸、位置368處之丙胺酸以及位置407處之纈胺酸。
如請求項1至21中任一項之MAPT ASO接合物，其中該第二Fc多肽包含根據EU編號之位置366處之絲胺酸、位置368處之丙胺酸以及位置407處之纈胺酸。
如請求項24之MAPT ASO接合物，其中該第一Fc多肽進一步包含根據EU編號之位置366處之色胺酸。
如請求項1至12中任一項之MAPT ASO接合物，其中該第一Fc多肽包含SEQ ID NO：1、47至48、51至54、61至63、66、73至78、80以及90中之任一者之胺基酸序列；以及該第二Fc多肽包含SEQ ID NO：4至29、36、43至44、49以及50中之任一者之胺基酸序列。
如請求項26之MAPT ASO接合物，其中該第一Fc多肽包含SEQ ID NO：63或80之胺基酸序列；以及該第二Fc多肽包含SEQ ID NO：11或12之胺基酸序列。
如請求項1至27中任一項之MAPT ASO接合物，其中該第一Fc多肽係經由第一鉸鏈區與第一非靶向之Fab(NTF)融合以形成第一Fab-Fc融合多肽。
如請求項1至27中任一項之MAPT ASO接合物，其中該第二Fc多肽係經由第二鉸鏈區與第二NTF融合以形成第二Fab-Fc融合多肽。
如請求項1至27中任一項之MAPT ASO接合物，其中該第一Fc多肽係經由第一鉸鏈區與NTF融合以形成第一Fab-Fc融合多肽，以及該第二Fc多肽係經由第二鉸鏈區與第二NTF融合以形成第二Fab-Fc融合多肽。
如請求項28至30中任一項之MAPT ASO接合物，其中該第一Fab-Fc融合多肽及/或該第二Fab-Fc融合多肽包含至少一個半胱胺酸取代，視需要地，其中該半胱胺酸取代係選自由下列各者所組成群組：重鏈之位置114(根據Kabat編號)、重鏈之位置124(根據EU編號)；輕鏈之位置149(根據EU編號)、或輕鏈之位置156(根據EU編號)。
如請求項30或31之MAPT ASO接合物，其中該第一和第二NTF各自包含重鏈和輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：109或130，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：108或129；視需要地，其中該重鏈進一步包含鉸鏈區，該鉸鏈區包含SEQ ID NO：91、92、93或121。
如請求項30或31之MAPT ASO接合物，其中該第一Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：100或101，並且該第二Fab-Fc融合多肽包含SEQ ID NO：98或99。
一種MAPT ASO接合物，其包含靶向TfR之Fc多肽二聚體和至少一個MAPT ASO，其中：(a) 該靶向TfR之Fc多肽二聚體包含(i) 第一Fc多肽，(ii) 第二Fc多肽，其中該第二Fc多肽包含各自根據EU編號之位置234處之丙胺酸、位置235處之丙胺酸以及位置329處之絲胺酸，以及與人類轉鐵蛋白受體1(TfR)特異性地結合之經修飾之恆定域，並且包含與SEQ ID NO：12具有至少90%序列同一性之序列，其中第二Fc多肽與該第一Fc多肽形成Fc二聚體，(iii) 經由第一鉸鏈區與該第一Fc多肽融合以形成第一Fab-Fc融合多肽之第一非靶向之Fab(NTF)，以及經由第二鉸鏈區與第二Fc多肽融合以形成第二Fab-Fc融合多肽之第二NTF，(b) 該至少一個MAPT ASO包含或其中A_L、^mC_L、G_L以及T_L分別為腺嘌呤鎖核苷、5-甲基胞嘧啶鎖核苷、鳥嘌呤鎖核苷以及胸腺嘧啶鎖核苷；A、C、G以及T分別為去氧腺苷核苷、去氧胞苷核苷或5-甲基去氧胞苷核苷、去氧胍核苷以及去氧胸苷核苷；各p獨立地為硫代磷酸酯(PS)核苷間鍵聯或穩定化核苷間鍵聯；各x獨立地為PS核苷間鍵聯、磷酸二酯(PO)核苷間鍵聯或穩定化核苷間鍵聯；以及任何不是穩定化核苷間鍵聯之核苷間鍵聯均為PS核苷間鍵聯或磷酸二酯核苷間鍵聯；以及其中該第一Fab-Fc融合多肽及/或該第二Fab-Fc融合多肽包含至少一個半胱胺酸取代，以及其中該至少一個MAPT ASO經由連接子與該第一Fab-Fc融合多肽及/或該第二Fab-Fc融合多肽於該至少一個半胱胺酸取代接合。
一種MAPT ASO，其包含或其中A_L、^mC_L、G_L以及T_L分別為腺嘌呤鎖核苷、5-甲基胞嘧啶鎖核苷、鳥嘌呤鎖核苷以及胸腺嘧啶鎖核苷；A、C、G以及T分別為去氧腺苷核苷、去氧胞苷核苷或5-甲基去氧胞苷核苷、去氧胍核苷以及去氧胸苷核苷；各p獨立地為硫代磷酸酯(PS)核苷間鍵聯或穩定化核苷間鍵聯；各x獨立地為PS核苷間鍵聯、磷酸二酯(PO)核苷間鍵聯或穩定化核苷間鍵聯；以及任何不是穩定化核苷間鍵聯之核苷間鍵聯均為PS核苷間鍵聯或磷酸二酯核苷間鍵聯；以及其中該第一Fc多肽與該MAPT ASO連接。
如請求項29之MAPT ASO，其中該穩定化核苷間鍵聯係獨立地選自由下列各者所組成群組：二硫代磷酸酯(PS2)核苷間鍵聯、磷醯胍(PN)核苷間鍵聯、甲磺醯基胺基磷酸酯(MsPA)核苷間鍵聯以及O-異丙基硫代磷酸酯(OiPS)核苷間鍵聯。
如請求項35之MAPT ASO，其中各p和x為PS核苷間鍵聯。
如請求項35或36之MAPT ASO，其中(a)x _g、x _h以及x _i各自為PS核苷間鍵聯；(b)x _g為PS核苷間鍵聯，並且x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯；(c)x _g、x _h以及xi各自為PN核苷間鍵聯；(d)x _g和x _h各自為PN核苷間鍵聯，並且x _i為PO核苷間鍵聯；(e)x _g和x _i各自為PN核苷間鍵聯，並且x _h為PO核苷間鍵聯；或(f)x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯，並且x _g為PO核苷間鍵聯。
如請求項35、36以及38中任一項之MAPT ASO，其中：(a)x _d、x _e以及x _f各自為PS核苷間鍵聯；(b)x _d和x _e為PN核苷間鍵聯，並且x _f為PS核苷間鍵聯；(c)x _d為PS核苷間鍵聯，並且x _e和x _f各自為PN核苷間鍵聯；(d)x _d為PN核苷間鍵聯，並且x _e和x _f各自為PS核苷間鍵聯；(e)x _d、x _e以及x _f各自為PN核苷間鍵聯；(d)x _d和x _e各自為PN核苷間鍵聯，並且x _f為PO核苷間鍵聯；(e)x _d和x _f各自為PN核苷間鍵聯，並且x _e為PO核苷間鍵聯；或(f)x _e和x _f各自為PN核苷間鍵聯，並且x _d為PO核苷間鍵聯。
如請求項38或39之MAPT ASO，其中：(a)x _d、x _e、x _f、x _g、x _h以及x _i各自為PS核苷間鍵聯；(b)x _d、x _e以及x _f各自為PS核苷間鍵聯，x _g為PS核苷間鍵聯，以及x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯；(c)x _d、x _e以及x _f各自為PS核苷間鍵聯，並且x _g、x _h以及x _i各自為PN核苷間鍵聯；(d)x _d和x _e為PN核苷間鍵聯，x _f為PS核苷間鍵聯，以及x _g、x _h以及x _i各自為PS核苷間鍵聯；(e)x _d和x _e為PN核苷間鍵聯，x _f為PS核苷間鍵聯，x _g為PS核苷間鍵聯，以及x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯；(f)x _d為PS核苷間鍵聯，x _e和x _f各自為PN核苷間鍵聯，x _g為PS核苷間鍵聯，以及x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯；(g)x _d為PN核苷間鍵聯，並且x _e和x _f各自為PS核苷間鍵聯，x _g為PS核苷間鍵聯，以及x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯；(h)x _d、x _e、x _f、x _g、x _h以及x _i各自為PN核苷間鍵聯；(i)x _d、x _e以及x _f各自為PN核苷間鍵聯，x _g和x _h各自為PN核苷間鍵聯，以及x _i為PO核苷間鍵聯；(j)x _d、x _e以及x _f各自為PN核苷間鍵聯，x _g和x _i各自為PN核苷間鍵聯，以及x _h為PO核苷間鍵聯；(k)x _d、x _e以及x _f各自為PN核苷間鍵聯，x _h和x _i各自為PN核苷間鍵聯，以及x _g為PO核苷間鍵聯；(l)x _d和x _e各自為PN核苷間鍵聯，並且x _f為PO核苷間鍵聯，以及x _g、x _h以及x _i各自為PN核苷間鍵聯；(m)x _d和x _f各自為PN核苷間鍵聯，並且x _e為PO核苷間鍵聯，以及x _g、x _h以及x _i各自為PN核苷間鍵聯；或(n)x _e和x _f各自為PN核苷間鍵聯，並且x _d為PO核苷間鍵聯，以及x _g、x _h以及x _i各自為PN核苷間鍵聯。
如請求項35至36和38至40中任一項之MAPT ASO，其中該MAPT ASO包含SEQ ID NO：111，並且(a)p _a、p _b以及p _c為PS核苷間鍵聯；(b)p _a為穩定化核苷間鍵聯，並且p _b和p _c為PS核苷間鍵聯；(c)p _b為穩定化核苷間鍵聯，並且p _a和p _c為PS核苷間鍵聯；(d)p _a和p _b為穩定化核苷間鍵聯，並且p _c為PS核苷間鍵聯；(e)p _b和p _c為穩定化核苷間鍵聯，並且p _a為PS核苷間鍵聯；(f)p _a、p _b以及p _c為穩定化核苷間鍵聯。
如請求項41中任一項之MAPT ASO，其中(a)p _a為PS2鍵聯，並且p _b和p _c為PS核苷間鍵聯；(b)p _b為PS2鍵聯，並且p _a和p _c為PS核苷間鍵聯；(c)p _b為PN鍵聯，並且p _a和p _c為PS核苷間鍵聯；(d)p _a和p _b為PN核苷間鍵聯，並且p _c為PS核苷間鍵聯；(e)p _a和p _b為PS2核苷間鍵聯，並且p _c為PS核苷間鍵聯；(f)p _a和p _b為MsPA核苷間鍵聯，並且p _c為PS核苷間鍵聯；(g)p _a和p _b為OiPS核苷間鍵聯，並且p _c為PS核苷間鍵聯；(h)p _b和p _c為PN核苷間鍵聯，並且p _a為PS核苷間鍵聯；(i)p _a、p _b以及p _c為PN核苷間鍵聯；或(j)p _a、p _b以及p _c為MsPA核苷間鍵聯。
如請求項35之MAPT ASO，其中該MAPT ASO包含下列寡核苷酸：其中：A_L為腺苷鎖核酸；^mC_L為5-甲基胞嘧啶鎖核酸；T_L為胸苷鎖核酸；G_L為鳥苷鎖核酸；A為去氧腺苷；C為去氧胞苷；^mC為5-甲基去氧胞苷；T為去氧胸苷；G為去氧鳥苷；*為PS核苷間鍵聯；n為PN核苷間鍵聯；t為PS2核苷間鍵聯；u為MsPA核苷間鍵聯；o為OiPS核苷間鍵聯；以及P為PO核苷間鍵聯。
如請求項35至36和38至40中任一項之MAPT ASO接合物，其中該MAPT ASO包含SEQ ID NO：112，並且(a)p _k、p _l、p _n以及p _o為穩定化核苷間鍵聯；(b)p _k、p _l、p _n以及p _o為穩定化核苷間鍵聯，並且p _j和p _m為PS核苷間鍵聯；(c)p _j、p _l以及p _o為穩定化核苷間鍵聯；(d)p _j、p _l以及p _o為穩定化核苷間鍵聯，並且p _k、p _m以及p _n為PS核苷間鍵聯；(e)p _l、p _m、p _n以及p _o為穩定化核苷間鍵聯；或(d)p _l、p _m、p _n以及p _o為穩定化核苷間鍵聯，並且p _j和p _k為PS核苷間鍵聯。
如請求項44之MAPT ASO接合物，其中(a)p _k、p _l、p _n以及p _o為PN核苷間鍵聯；(b)p _k、p _l、p _n以及p _o為PN核苷間鍵聯，並且p _j和p _m為PS核苷間鍵聯；(c)p _j為PN鍵聯，並且p _l和p _o為PS2核苷間鍵聯；(d)p _j為PN鍵聯，p _l和p _o為PS2核苷間鍵聯，以及p _k、p _m和p _n為PS核苷間鍵聯；(e)p _l和p _m為PS2核苷間鍵聯，以及p _n和p _o為PN核苷間鍵聯；或(d)p _l和p _m為PS2核苷間鍵聯，p _n和p _o為PN核苷間鍵聯，以及p _j和p _k為PS核苷間鍵聯。
如請求項35之MAPT ASO接合物，其中該MAPT ASO包含下列寡核苷酸：其中：^mC_L為5-甲基胞嘧啶鎖核苷；T_L為胸腺嘧啶鎖核苷；G_L為鳥苷鎖核苷；A為去氧腺苷；C為去氧胞苷；T為去氧胸苷；G為去氧鳥苷；*為PS核苷間鍵聯；n為PN核苷間鍵聯；以及t為PS2核苷間鍵聯。
一種醫藥組成物，其包含如請求項1至34中任一項之MAPT ASO接合物或如請求項35至46中任一項之MAPT ASO以及醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
一種產生具有降低之tau表現之神經元細胞之方法，該方法包含向該神經元細胞遞送如請求項1至34中任一項之MAPT ASO接合物、如請求項35至46中任一項之MAPT ASO、或如請求項47之醫藥組成物，其中該MAPT ASO降低該神經元細胞中之內源性MAPT基因之表現水平。
一種修飾神經元細胞以降低tau表現之方法，該方法包含向該神經元細胞遞送如請求項1至34中任一項之MAPT ASO接合物、如請求項35至46中任一項之MAPT ASO、或如請求項47之醫藥組成物，其中該MAPT ASO降低內源性MAPT基因之表現水平。
一種修飾神經元細胞以降低tau表現之方法，該方法包含向該神經元細胞遞送如請求項1至34中任一項之MAPT ASO接合物、如請求項35至46中任一項之MAPT ASO、或如請求項47之醫藥組成物，其中該MAPT ASO特異性地降低該細胞中之MAPT轉錄物之表現水平。
如請求項50之方法，其中降低內源性MAPT之表現水平包含特異性地降低該細胞中之MAPT轉錄物之表現水平。
一種減少對象之脊髓細胞中之tau表現之方法，其包含以鞘內投予來投予如請求項1至34中任一項之MAPT ASO接合物、如請求項35至46中任一項之MAPT ASO、或如請求項47之醫藥組成物。
一種減少對象之tau表現之方法，其包含向該對象投予如請求項1至34中任一項之MAPT ASO接合物、如請求項35至46中任一項之MAPT ASO、或如請求項47之醫藥組成物。
如請求項53之方法，其中該對象之CNS中之tau表現降低。
如請求項53之方法，其中以鞘內投予或靜脈注射或靜脈輸注向該對象投予該MAPT ASO接合物、該MAPT ASO或該醫藥組成物。
如請求項48至55中任一項之方法，其中與未投予該醫藥組成物之水平相比，該MAPT ASO降低內源性MAPT基因之表現水平或降低MAPT mRNA轉錄物之水平至少約10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、或至少95%。
如請求項56之方法，其中該內源性MAPT基因之該表現或該MAPT轉錄物之該水平降低至少約50%。
如請求項56之方法，其中該內源性MAPT基因之該表現或該MAPT轉錄物之該水平降低至少約70%。
一種治療有需求之人類對象之tau相關神經退化性疾患之方法，該方法包含向該人類對象投予如請求項1至34中任一項之MAPT ASO接合物、如請求項35至46中任一項之MAPT ASO、或如請求項47之醫藥組成物。
如請求項59之方法，其中該tau相關神經退化性症候群為阿茲海默症。
一種治療阿茲海默症之方法，該方法包含向有需求之人類對象投予如請求項1至34中任一項之MAPT ASO接合物、如請求項35至46中任一項之MAPT ASO、或如請求項47之醫藥組成物。
一種降低有需求之人類對象之MAPT信使核糖核酸(mRNA)表現之方法，該方法包含向該人類對象投予如請求項1至34中任一項之MAPT ASO接合物、如請求項35至46中任一項之MAPT ASO、或如請求項47之醫藥組成物。
如請求項47之醫藥組成物，係用於向有需求之人類對象之CNS遞送MAPT ASO，其中該MAPT ASO降低內源性MAPT基因之表現水平。
如請求項47之醫藥組成物，係用於治療有需求之人類對象之tau相關神經退化性疾患。
如請求項64之醫藥組成物，其中該tau相關神經退化性疾患為阿茲海默症。
如請求項47之醫藥組成物，係用於降低有需求之人類對象之MAPT mRNA表現。
一種編碼Fc多肽二聚體之核酸序列，其包含編碼SEQ ID NO：1、47至48、51至54、61至63、66、73至78、80以及90中之任一者之第一核酸序列；以及編碼SEQ ID NO：4至29、36、43至44以及49至50中之任一者之第二核酸序列。
如請求項67之核酸序列，其中該第一核酸序列編碼第一Fab-Fc融合多肽，並且該第二核酸序列編碼第二Fab-Fc融合多肽。
如請求項68之核酸序列，其中該第一核酸序列編碼SEQ ID NO：100至101和130至131中之任一者；該第二核酸序列編碼SEQ ID NO：98至99中之任一者；以及其中該核酸序列序列進一步包含編碼SEQ ID NO：108或129之第三核酸序列。
如請求項69之核酸序列，其中該第一核酸序列包含SEQ ID NO：133或與SEQ ID NO：133具有至少75%同一性之序列；該第二核酸序列包含SEQ ID NO：132或與SEQ ID NO：132具有至少75%同一性之序列；以及該第三核酸序列包含SEQ ID NO：134或與SEQ ID NO：134具有至少75%同一性之序列。