TW202538052A - 組成物、乾燥試藥及保存組成物的方法 - Google Patents
組成物、乾燥試藥及保存組成物的方法Info
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Abstract
本發明揭露之一態樣相關之組成物含有：反應成分，其與成為生物樣本所含之測定對象之目標成分進行反應；海藻糖；及水分；相對於組成物之總重量，係含有該海藻糖0.2重量％以上且90重量％以下；及該水分1重量％且以上30重量％以下；該水分之重量為該海藻糖之重量的5倍以下。
Description
本發明係關於一種組成物及具備該組成物的乾燥試藥，以及保存該組成物的方法。
於臨床檢查、生物化學領域的研究等，一般會將生物樣本中之成分，藉由使用了酵素之光學檢測或電化學檢測來進行定性或定量。又，將生物樣本中的DNA進行複製及放大時亦一般會利用酵素反應。
於利用酵素的反應活性之情形時，酵素的反應活性變差因為會成為使用了酵素之試藥等的性能變差的原因，故應該避免。為了防止酵素的反應活性變差，使蛋白質之水溶液乾燥，以固體狀態來保管是有效的。
例如，專利文獻1中揭示有一種乾燥試藥，其係用以進行液體樣本所含之特定成分的定量分析者，該乾燥試藥含有菸鹼醯胺輔酵素，及用以將該乾燥試藥進行平滑化之平滑化劑；該乾燥試藥以該菸鹼醯胺輔酵素的增加或減少係利用使用紫外光區域之光的透射法所測定之方式構成。
[先前技術文獻]
[專利文獻1]日本特開2013-165709號公報
[發明所欲解決的課題]
如上述之先前技術係利用減少試藥中的水分含量，使試藥的穩定性改善。然而，考慮到對於載片試藥式之乾式化學技術的適用，雖較佳為以於乾燥試藥殘留有結合水，但若殘留有水分，則通常會變成容易劣化的試藥。因此，被期待有一種殘留結合水且同時提高乾燥試藥的保存穩定性之技術。又，從改善使用性之觀點來看，被期待有一種可室溫保管的試藥。
本發明一態樣之目的在於：提供一種含有特定量之水分且同時保存穩定性優異之試藥組成物。
[解決問題的技術手段]
為了解決上述課題，本發明一態樣相關之組成物含有：反應成分，其與成為生物樣本所含之測定對象之目標成分進行反應；海藻糖(trehalose)；及水分；相對於組成物之總重量，係含有該海藻糖0.2重量％以上且90重量％以下，及該水分1重量％且以上30重量％以下；該水分之重量為該海藻糖之重量的5倍以下。
[發明的效果]
根據本發明一態樣，可提供一種含有特定量之水分且同時保存穩定性優異之試藥組成物。
以下，對本發明一態樣詳細進行說明。另，本說明書中只要未特別註記，則表示數值範圍之「A～B」意指「A以上且B以下」。
[1.組成物]
本發明一態樣相關之組成物含有：反應成分，其與成為生物樣本所含之測定對象之目標成分進行反應；海藻糖；及水分；相對於組成物之總重量，係含有該海藻糖0.2重量％以上且90重量％以下，及該水分1重量％以上且30重量％以下；該水分之重量為該海藻糖之重量的5倍以下。
藉此，發揮以下之效果。首先，本發明一態樣相關之組成物，雖然可適用於使用了乾式化學技術之檢查試藥，但由於含有特定量之水分，故亦可適用至載片試藥式之乾式化學技術。
再者，乾式化學意指：製作試驗片，使用該試驗片來檢測生物樣本中的測定目標成分的乾式之檢查方式；該試驗片，係含有會與生物樣本所含之測定目標成分進行反應之反應成分的試藥組成物之層是形成於載片等之支持體上而成的試驗片。作為於患者床旁進行之POCT(Point Of Care Testing)，使用了乾式化學技術的檢查試藥是有效用的。
其次，本發明一態樣相關之組成物由於能藉由含有特定量的海藻糖來抑制組成物中的反應成分的劣化，故保存穩定性優異。因此，可將具備本發明一態樣相關之組成物的乾燥試藥於室溫以上進行保管。關於具備本發明一態樣相關之組成物的乾燥試藥於後敘述。
此處，本說明書中，該「生物樣本」意指：動物、植物、魚類、水生生物、菌類等生物的組成物、分泌物；存在於該生物內的病毒等之有機體；附著於該生物之有機體/無機體等。進一步更具體而言，意指生物的體液、血液、體內、體表面的組織物等。
本說明書中，該「成為生物樣本所含之測定對象之成分」，舉例而言，意指體液中之鈉等的無機離子；體液中的特定蛋白質；血液中的酵素；血液中的各種有機化合物；血液中的無機化合物；細胞；表皮；骨等。有時會將該「成為生物樣本所含之測定對象之成分」稱為「測定目標成分」。
本說明書中，「保存穩定性優異」意指：「將本發明一態樣相關之組成物，提供給後述之實施例所記載之穩定性評價試驗時，於60℃保管1個月時，於該保管之前後所獲得的吸光度之變動在±20％以內」。可謂該變動愈小保存穩定性愈優異，該變動在±15％以內為較佳，在±10％以內為更佳，在±5％以內為進而更佳。
＜海藻糖＞
本發明一態樣相關之組成物，係相對於組成物之總重量，含有海藻糖0.2重量％以上且90重量％以下。藉由組成物中的海藻糖的含有比例為上述之範圍，可充分抑制組成物中之反應成分的劣化，可充分獲得改善組成物之保存穩定性的效果。
作為海藻糖，係存在有α,α-海藻糖、α,β-海藻糖(新海藻糖)，及β,β-海藻糖(異海藻糖)之3種類的鍵結異構物(linkage isomer)。α,α-海藻糖有時僅稱為海藻糖。本說明書中「海藻糖」之用語意指包含該等3種類之鍵結異構物。本發明一態樣相關之組成物所含有之海藻糖可使用工業上所販售之一般海藻糖，例如α,α-海藻糖。
(海藻糖之較佳含有比例)
從改善本發明一態樣相關之組成物的保存穩定性的觀點來看，係相對於組成物100重量％，海藻糖以含有1.0重量％以上為較佳，以含有2.0重量％以上為進而較佳。又，從海藻糖的溶解性的觀點來看，係相對於組成物100重量％，海藻糖以含有90重量％以下為更佳，以含有80重量％以下為進而更佳。
＜水分＞
本發明一態樣相關之組成物，係相對於組成物之總重量，含有水分1重量％以上且30重量％以下；水分之重量為海藻糖之重量的5倍以下。組成物中之水分之含有比例為上述之範圍之情形時，本發明一態樣相關之組成物可成為能適用於載片試藥式之乾式化學技術之固體狀的形態。又，水分之重量相對於海藻糖之重量為上述之範圍之情形時，於不妨礙海藻糖所發揮之組成物的保存穩定性提高效果的範圍，可使本發明一態樣相關之組成物中含有水分。
本發明一態樣相關之組成物中之水分的含有比例，係藉由調節以下乾燥條件，而可調節至上述之範圍；該乾燥條件係使含有本發明一態樣相關之組成物之成分之溶液乾燥而製造固體狀之形態的組成物時的乾燥條件。例如，藉由使含有本發明一態樣相關之組成物之成分的溶液自然乾燥，可將組成物中水分的含有比例調節至上述之範圍。
此處，本說明書中，該「水分」意指：包含存在於組成物中之結合水及自由水兩者。於使含有本發明一態樣相關之組成物之成分的溶液乾燥所獲得之固體狀之形態的組成物中之水分的含有比例較1重量％更多之情形時，可謂組成物中殘留有結合水。本發明一態樣相關之組成物中之水分的含有比例，可藉由後述實施例所記載之測定紅外線(IR)光譜之方法來測定。
(水分之較佳含有比例)
從乾燥物之操作性的觀點來看，組成物中之水分之含有比例，係相對於組成物100重量％，以比1重量％更多為較佳，3重量％以上為更佳。又，從保存穩定性的觀點來看，組成物中的水分之含有比例，係相對於組成物100重量％，以30重量％以下為較佳，10重量％以下為更佳。
又，從保存穩定性的觀點來看，水分之重量，較佳為組成物中所含之海藻糖之重量的5倍以下。
＜反應成分＞
本發明一態樣相關之組成物所含之反應成分，係會與生物樣本所含之測定目標成分進行反應之成分，為將生物樣本中之特定的成分選擇性地設為反應基質，而使某種化學反應進行之成分。具有以下之性質：即便複數之成分混合存在於生物樣本之中，仍會使特定之成分選擇性地反應之性質。作為反應成分，具體而言可舉出：酵素、觸媒、抗體等。
作為反應成分，列舉臨床檢查用試藥中一般所使用之例子如表1。
[表1]
| 本發明一態樣相關之組成物所含之反應成分 | 生物樣本中之特定之成分 | |
| 名稱 | 臨床檢查中所測定之檢查項目的簡稱 | |
| DNA聚合酶 | 基因檢查等 | DNA |
| 丙胺酸 | ALT | 丙胺酸轉胺酶 |
| 天門冬胺酸 | AST | 天門冬胺酸轉胺酶 |
| β-羥丁酸脫氫酶 | AST | β-酮化合物 |
| 尿素酶 | BUN | 尿素 |
| 肌酸酐激酶 | CREA | 肌酸酐 |
| 肌酸激酶 | CK | 肌酸 |
| 麩胺酸化合物 | GGT | γ-麩胺醯轉移脢 |
| 嘌呤核苷磷酸化酶 | IP | 無機磷 |
| 醯基輔酶A合成酶 | NEFA | 遊離脂肪酸 |
| 醯基輔酶A氧化酶 | NEFA | 醯基輔酶A |
| 膽固醇氧化酶 | TC | 膽固醇 |
| 磷酸化合物 | ALP | 鹼性磷酸酶 |
| 乳酸脱水素酵素 | LDH | 乳酸 |
| 脂蛋白脂酶 | TG | 三酸甘油酯 |
| 甘油激酶 | TG | 甘油 |
| 甘油-3-磷酸氧化酶 | TG | 甘油-3-磷酸酸 |
| 膽固醇酯酶 | HDL | 膽固醇 |
| 尿酸酶 | UA | 尿酸 |
| 抗CRP抗體 | CRP | C反應性蛋白質 |
| 黃遞酶 | 廣泛使用的酵素 | 醯胺化合物 |
| 過氧化酶 | 廣泛使用的酵素 | 過酸化氫 |
| 黃嘌呤氧化酶 | 廣泛使用的酵素 | 黃嘌呤 |
本發明一態樣相關之組成物所含之反應成分的種類並無特別限定，只要因應測定目標成分適當決定即可。
本發明一態樣相關之組成物的反應成分可含有：酵素、以及為任意成分之基質及色素。其理由於以下說明。
(酵素)
酵素為蛋白質，其高次結構(high order structure)之維持對於酵素之活性維持而言是重要的。高次結構係藉由於水中之疏水性所致之穩定之構成胺基酸(constituent amino acid)之凝聚結構、構成胺基酸彼此之氫鍵等所維持。於將酵素以乾燥狀態進行了保存之情形時，由於進行乾燥時酵素周圍之水會被剝奪，故維持該等結構之重要因素會被剝奪，而發生結構之重組(變性)，結果使得該活性降低。於是，使酵素成為乾燥狀態時，若水所持有之氫鍵、代替提供所謂親水性環境之功能的非揮發性之化合物存在於蛋白質的周圍或內部，則如上述般之結構之重組便會難以發生，亦可抑制酵素之活性的降低。如上所述，本發明一態樣相關之組成物係含有海藻糖，由於海藻糖可作為穩定成分來發揮功能，故藉由本發明一態樣相關之組成物，於將酵素以乾燥狀態進行了保存之情形時，可抑制酵素之活性的降低。
作為反應成分所含之酵素，例如可列舉有：葡萄糖氧化酶(GOD)、葡萄醣脫氫酶(GDH)、葡萄糖-6-磷酸去氫酶(G6P)、黃遞酶(DI)、肌酸酐醯胺水合酶(CNH)、肌酸酶(creatine amidinohydrolase)(CRH)、肌胺酸氧化酶(sarcosine oxidase)(SAO)，及過氧化酶(POD)、尿酸酶(UAO)、尿素酶(URH)、丙酮酸氧化酶(PYO)、己醣激酶(HK)等。酵素之種類只要因應測定目標成分的種類來適當決定即可。
作為一例，於測定目標成分為葡萄糖(GLU)之情形，作為本發明一態樣相關之組成物所含之反應成分的酵素，較佳為包含選自由GOD、GDH及G6P所組成之群之至少1種的葡萄糖特異性酵素，更佳為包含GDH。此處，該「葡萄糖特異性酵素」意指，將GLU作為特異性反應基質之酵素。酵素較佳為進而包含黃遞酶(DI)。
又例如，測定目標成分為肌酸酐(CREA)之情形，作為反應成分之酵素，較佳為包含肌酸酐醯胺水合酶(CNH)、肌酸酶(CRH)、肌胺酸氧化酶(SAO)，及過氧化酶(POD)。
本發明一態樣相關之組成物，從反應靈敏度的觀點來看，較佳為以具有0.001U/mg以上之比活性(specific activity)之方式來含有酵素，更佳為以具有0.01U/mg以上之比活性之方式來含有酵素。又，本發明一態樣相關之組成物中之酵素的含有比例即便多也沒有問題，但從經濟性之觀點來看，較佳為以具有1,000U/mg以下之比活性之方式來含有酵素，更佳為以具有100U/mg以下之比活性之方式來含有酵素。
(基質)
作為基質，可使用習知的基質，例如可列舉有：氧化態菸鹼醯胺菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)、三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、黃素腺嘌呤二核苷酸二鈉n水合物(flavin adenine dinucleotide disodium n-hydrate)(FAD)、菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化態(NADP)、Thionicotinamide-Adenine Dinucleotide(Thio-NAD+)等。
本發明一態樣相關之組成物中之基質的含有比例，從反應靈敏度的觀點來看，依測定對象進行適當設定即可，但相對於組成物100重量％，較佳為0.1重量％以上，更佳為以1重量％以上。又，從保存穩定性的觀點來看，係相對於組成物100重量％，較佳為90重量％以下，更佳為80重量％以下。
(色素)
作為色素，可使用習知之色素，例如可列舉有：四唑鹽、無色染料(leuco dye)、汀得試藥(Trinder's reagent)、pH指示劑、螯合顯色試劑(chelate color former)、酵素反應的指示物質(GluCANA)等。於該等中，作為色素，可較佳地使用無色染料或四唑鹽。
四唑鹽可使用習知之物質，例如可列舉有：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺醯基)-2H-四唑鎓/單鈉鹽(WST-8)；2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺醯基)-2H-四唑鎓/單鈉鹽(WST-1)；2-(4-碘苯基)-3-(2,4-二硝基苯基)-5-(2,4-二次磺醯基)-2H-四唑鎓/單鈉鹽(WST-3)；2-苯并噻唑-3-(4-羧基-2-甲氧基苯基)-5-[4-(2-磺乙基胺甲醯基)苯基]-2H-四唑鎓(WST-4)；2,2’-二苯并噻唑基-5,5’-雙[4-二(2-磺乙基)胺甲醯基苯基]-3,3’-(3,3’-二甲氧基-4,4’-伸聯苯基)二四唑鎓/二鈉鹽(WST-5)；2-(4-硝基苯基)-5-苯基-3-[4-(4-磺醯基偶氮)-2-磺醯基]-2H-四唑鎓/單鈉鹽(WST-9)；3-(4,5-二甲基-噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓/溴化物(MTT)；3,3’-[3,3’-二甲氧基-(1,1’-聯苯基)-4,4’-二基]-雙[2-(4-硝基苯基)-5-苯基-2H-四唑鎓/氯化物(NITRO-TB)等。
作為無色染料，可使用習知之物質，例如可列舉有：三苯甲烷衍生物、酚噻𠯤衍生物、二苯胺衍生物等。更具體而言，可列舉有：4,4’-亞苄基雙(N,N-二甲基苯胺)等之三苯甲烷衍生物；10-(羧基甲胺基羰基)-3,7-雙(二甲胺基)酚噻𠯤鹽(DA-67)、10-(甲胺基羰基)-3,7-雙(二甲胺基)酚噻𠯤、10-(N-甲基胺甲醯基)-3-二甲胺基-7-羥基-10H-酚噻𠯤等之酚噻𠯤衍生物；4,4’-雙(二甲胺基)二苯胺、N-(羧基甲胺基羰基)-4,4’-雙(二甲胺基)二苯胺鹽(DA-64)等之二苯胺衍生物；1-(乙胺基硫羰基)-2-(3,5-二甲氧基-4-羥苯基)-4,5-雙(4-二乙胺基苯基)咪唑等。此處，鹽並無特別限定，然而，例如可列舉有：鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽等。
四唑鹽係於DI之共存下藉由電子載體所還原，生成著色染料之三苯基甲脂染料。電子載體可使用：能將四唑鹽進行還原，使三苯基甲脂染料生成之習知物質，例如可列舉有：還原態菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)、還原態菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)等。此處，如下式(1)所示，NADH係在NAD的存在下，藉由使GDH作用於GLU所生成。
(化學式1)
因此，測定目標成分為GLU之情形時，從靈敏度的觀點來看，作為色素，可較佳地使用四唑鹽。
又，無色染料係藉由過氧化酶與過酸化水素(H
2O
2)之作用所氧化，生成著色染料之亞甲藍(MB)。H
2O
2係在測定目標成分之肌酸酐與本發明一態樣相關之組成物中之反應成分的酵素在反應的過程所生成。因此，測定目標成分為CREA之情形時，從靈敏度之觀點來看，作為色素，可較佳地使用無色染料。
本發明一態樣相關之組成物中之色素的含有比例，必須依測定對象物質來適當調整，係相對於組成物100重量％，較佳為0.01重量％以上，更佳為0.1重量％以上。又，從穩定性、色素本身顯色、變色前之色素的著色對測定值之影響的觀點來看，係相對於組成物100重量％，較佳為50重量％以下，較佳為30重量％以下。
＜其他成分＞
本發明一態樣相關之組成物，因應需求，於不妨礙本發明效果之範圍下，亦可含有上述之成分以外的成分。本發明一態樣相關之組成物，係較佳進而例如含有選自由緩衝鹽及添加劑所組成之群之至少1種。
(緩衝鹽)
緩衝鹽可使用具有緩衝反應系統之pH之作用的習知物質，例如可列舉有：4-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-乙磺酸(HEPES)；2-𠰌啉乙磺酸(MES)、磷酸緩衝生理食鹽水(PBS)、N-[Tris(hydroxymethyl)methyl]glycine(Tricine)、N,N-Bis(2-hydroxyethyl)glycine(Bicine)等通稱Good Buffer者。緩衝鹽可適當地配合pH來進行選擇。
本發明一態樣相關之組成物中之緩衝鹽的含有比例並無特別限定，從緩衝能的觀點來看，係相對於組成物100重量％，較佳為0.01重量％以上，更佳為0.1重量％以上。又，本發明一態樣相關之組成物中之緩衝鹽的含有比例之上限並無特別限定。
(添加劑)
添加劑可列舉有：海藻糖以外之穩定成分、賦形劑、防腐劑、界面活性劑、具有界面活性能的合成聚合物等。
作為海藻糖以外的穩定成分，可使用：選自由含有2～4個的單醣所構成之醣類、糖醇、胺基酸、以及含有胺基酸及羧酸之鹽所組成之群之一個或複數個化合物。例示能較佳地使用之化合物如下。
作為含有2～4個的單醣所構成之醣類，可列舉有：蔗糖(sucrose)、乳酮糖、乳糖、麥芽糖、纖維雙醣、麴二醣、黑麯黴醣(nigerose)、異麥芽糖、槐糖、海帶二糖、龍膽二糖、松二醣、麥芽酮糖(maltulose)、巴拉金糖、龍膽二酮糖(gentiobiulose)、甘露二醣(mannobiose)、蜜二糖、蜜二酮糖(melibiulose)、異乳糖(neolactose)、半乳蔗糖(galactosucrose)、海葱二糖、新橙皮糖(neohesperidose)、芸香糖、芸香酮糖(rutinulose)、蠶豆糖、木二糖(xylobiose)、櫻草糖等之雙醣類；又，黑麯黴三糖(nigerotriose)、麥芽三糖、蜜三糖、麥芽三酮糖(maltotriulose)、棉子糖、蔗果三糖等之三醣類；又，蔗果四糖(nystose)、黑麯黴四糖(nigerotetraose)、水蘇糖之四醣類。於該等中，就穩定化之效果、取得之容易性等的方面而言，可較佳使用的是：蔗糖、乳糖、麥芽糖、巴拉金糖、麥芽三糖、棉子糖。就其穩定化效果的方面而言，可進而較佳使用的是：蔗糖、麥芽糖。
作為可較佳地使用之糖醇，可列舉：甘油、赤藻糖醇、蘇糖醇(threitol)、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨醇、乳糖醇(lactitol)、甘露醇、麥芽糖醇等。
於本發明一態樣相關之組成物中，作為穩定成分所使用之胺基酸並無特別限制，但作為其中可較佳地使用之胺基酸，可列舉有：精胺酸、組胺酸、離胺酸等之鹼性胺基酸。
又，胺基酸之無機鹽亦可較佳地使用。舉例有：天門冬胺酸鈉、天門冬胺酸鉀、麩胺酸鈉、麩胺酸鉀等酸性胺基酸的無機鹽。
作為含有胺基酸及羧酸之鹽，可無特別限制地使用，但作為較佳之組合，由於可防止揮發引起的羧酸的散失，使穩定成分之效果持久，故可列舉有：含有鹼性胺基酸及非揮發性之羧酸之鹽。進而具體地說明如下。
作為鹼性胺基酸，可列舉有：精胺酸、組胺酸、離胺酸等。
作為羧酸，可列舉有：於分子內具有1個羧基之醋酸、乳酸、丁酸、辛酸等；又，於分子內具有2個羧基之草酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、酞酸、異酞酸、對酞酸、反丁烯二酸、蘋果酸、酒石酸等之二羧酸類；又，檸檬酸、異檸檬酸、酸草醯琥珀酸等之三羧酸類。該等中，若使用二羧酸類、三羧酸類，則於胺基酸之鹽形成時，可防止羧酸之揮發引起的鹽之分解，因此，可更佳地使用。若要列舉被較佳地使用之羧酸，考量作為其穩定成分之效果及取得之難易度等，則較佳為蘋果酸、酒石酸、檸檬酸。
該等海藻糖以外的穩定成分可單獨使用一種，亦可組合兩種以上。
本發明一態樣相關之組成物中之海藻糖以外的穩定成分的含有比例雖並無特別限定，但從穩定性的效果之觀點來看，係相對於組成物100重量％，較佳為0.1重量％以上，更佳為1重量％以上。又，從保存穩定性的效果的觀點來看，係相對於組成物100重量％，較佳為90重量％以下，更佳為80重量％以下。
賦形劑較佳地係使用不會妨礙作為目的之反應，而與該穩定成分進行了混合時，即便於高溫時變形亦少之物質。換言之，於本發明一態樣相關之組成物中作為賦形劑所含有之物質如下述。即，多醣類；環狀的糖類；白蛋白等之蛋白質葡萄糖等。穩定成分本身亦能作為賦形劑來發揮功能。
賦形劑係含有至少6個以上的單醣所構成，於將該單醣之個數設為n(n為整數)時，係含有含3×n個以上的羥基的多醣類(稱為本發明之多醣類)，及選自由具有胺基酸骨架之聚合物所組成之群之至少一種。
可作為賦形劑使用之多醣類若含有一定數量的羥基，則可使用任意者。此是由於能提高對水的溶解度。作為此種多醣類，例如可列舉有：纖維素、幾丁質、澱粉、肝醣、洋菜糖、鹿角菜膠、類糊精、糊精(k、3×k)等之直線狀的多醣類；又，可列舉有：α-環糊精及其甲基化體或羥丙基化體等的衍生物、β-環糊精及其甲基化體或羥丙基化體的衍生物、γ-環糊精及其甲基化體或羥丙基化體等的衍生物等之環狀多醣類的環糊精類。
其中，作為多醣類係含有至少6個以上的單醣所構成，該單醣之個數設為n(n為整數)時，較佳為含3×n個以上之羥基的多醣類。
可作為用作賦形劑使用之多醣類，若要列舉較佳具體例，則列舉有：澱粉、肝醣、類糊精、糊精等之直線狀的多醣類；α-環糊精及其甲基化體或羥丙基化體等的衍生物、β-環糊精及其甲基化體或羥丙基化體的衍生物、γ-環糊精及其甲基化體或羥丙基化體等的衍生物等之環狀多醣類的之環糊精類。若要列舉被更佳地使用之例，則因為容易對水溶解，故類糊精、環糊精類會被進而更佳地使用。
可用作賦形劑而具有胺基酸骨架的聚合物，係單一的胺基酸呈直線狀進行了複數結合者。即，若要列舉具體的例子，則列舉有：L-離胺酸結合而成之聚離胺酸(polylysine)、精胺酸結合而成之聚-L-精胺酸及其鹽酸鹽等。
此種賦形劑可單獨使用一種，亦可組合兩種以上。又，藉由使賦形劑與氯化鈉、氯化鉀等之無機鹽進行組合，可使酵素的穩定性提高。
本發明一態樣相關之組成物中的賦形劑的含有比例並無特別限定，從賦形劑的效果的觀點來看，係相對於組成物100重量％，較佳為0.01重量％以上，更佳為0.1重量％以上。又，從賦形劑的溶解性的觀點來看，係相對於組成物100重量％，較佳為90重量％以下，更佳為80重量％以下。
作為可較佳地用作界面活性劑之物質，於對反應所必要之物質或反應不會造成影響之物質的範圍下，列舉有：陰離子界面活性劑、陽離子界面活性劑、兩性界面活性劑、非離子性界面活性劑等。非離子性界面活性劑若能與該穩定成分混合，則能無特別限制地使用。若要列舉一般可取得之物質的例子則如下述。即，列舉：聚氧乙烯月桂醚醣之聚氧乙烯脂肪酸醚類；山梨糖醇酐單月桂酸酯(sorbitan monolaurate)、山梨糖醇酐單油酸酯等之山梨糖醇酐脂肪酸酯類；3-[(3-Cholamidopropyl)dimethylammonio]propanesulfonate(CHAPS)；Triton-X；SDS等。界面活性劑有妨害酵素反應等之情形，故一般而言是以其添加量比多醣類等更少之方式來加以使用。
界面活性劑可單獨使用1種，亦可組合2種以上。本發明一態樣相關之組成物中之界面活性劑的含有比例並無特別限定，從獲得界面活性劑的效果的觀點來看，係相對於組成物100重量％，較佳為0.01重量％以上，更佳為0.05重量％以上。又，考慮到對酵素反應之影響，則係相對於組成物100重量％，較佳為10重量％以下，更佳為5重量％以下。
作為可較佳地用作防腐劑之物質，於對反應所必要之物質或反應不造成影響之物質之範圍下，列舉有疊氮化鈉、ProClin等。
防腐劑可單獨使用一種，亦可組合兩種以上。本發明一態樣相關之組成物中的防腐劑的含有比例並無特別限定，從獲得防腐劑的效果的觀點來看，係相對於組成物100重量％，較佳為0.01重量％以上，更佳為0.05重量％以上。又，考慮到防腐劑本身為高濃度且會具有毒性，則係相對於組成物100重量％，較佳為1重量％以下，更佳為0.1重量％以下。
(酵素、基質及色素之組合的例子)
本發明一態樣相關之組成物所含之酵素、以及為任意成分之基質及色素之組合，只要因應測定目標成分的種類及欲使用之反應樣式來適當決定即可。
對於測定目標成分為GLU之情形舉例進行說明。本發明實施形態1相關之組成物，係含有GOD及POD作為酵素；含有無色染料及汀得試藥作為色素。本發明實施形態1相關之組成物不含基質。為了構成GLU試藥，能較佳地使用本發明實施形態1相關之組成物；該GLU試藥係利用習知之比色法來測定血清樣本中的GLU。
本發明實施形態2相關之組成物，係含有GDH及DI作為反應成分，含有NAD作為基質，含有WST-4作為色素。為了構成利用了乾式化學技術之GLU試藥，能較佳地使用本發明實施形態2相關之組成物；該GLU試藥係利用習知之比色法來測定血清樣本中的GLU。
本發明實施形態3相關之組成物，係含有G6P及HK作為反應成分，含有ATP及NAD作為基質。本發明實施形態3相關之組成物，由於只要測定NADH的波長即可，故不含色素。為了構成利用了乾式化學技術之GLU試藥，能較佳地使用本發明實施形態3相關之組成物；該GLU試藥係利用習知之比色法來測定血清樣本中的GLU。
其次，對於測定目標成分為CREA之情形舉例進行説明。本發明實施形態4相關之組成物，係含有CNH、CRH、SAO及POD作為反應成分，含有DA-67作為色素。為了構成利用了乾式化學技術之CREA試藥，可較佳地使用本發明實施形態4相關之組成物；該CREA試藥係利用習知的比色法來測定血清樣本中的CREA。
＜組成物的形態及性質＞
本發明一態樣相關之組成物較佳為固體狀且為玻璃狀態。此處，該「玻璃狀態」意指：被保存於沸點以上且玻璃轉移溫度(Tg)以下之狀態。本發明一態樣相關之組成物，由於含有玻璃轉移溫度高之海藻糖，故於室溫(15℃～40℃)會成為玻璃狀態。
酵素、基質及色素，一般而言，係於室溫具有不穩定的性質，但本發明一態樣相關之組成物為固體狀且為玻璃狀態，故能保管於室溫以上。更具體而言，本發明一態樣相關之組成物的保存溫度可設為1℃～60℃，更佳為設為1℃～40℃。本發明一態樣相關之組成物亦可保存於一般的乾燥試藥的保存溫度，即2℃～8℃。
＜組成物之用途＞
本發明一態樣相關之組成物，藉由因應目的而適當地選擇反應成分、以及為任意成分之基質及色素的種類，可使用於利用了乾式化學技術之各種乾燥試藥用途。本發明一態樣相關之組成物，例如可製成：GLU試藥用組成物、CREA試藥用組成物、AST試藥用組成物、ALT試藥用組成物、BUN試藥用組成物等。
又，本發明一態樣相關之組成物，係殘留有結合水且同時使反應成分之保存穩定性提高，故可應用於載片試藥式之乾式化學技術。故而，本發明一態樣相關之組成物可製成載片試藥用組成物。
又，本發明一態樣相關之組成物為固體狀且為玻璃狀態，故可於室溫保管。因此，本發明一態樣相關之組成物可製成室溫保存用乾燥試藥用組成物。
＜組成物的製造方法＞
對本發明一態樣相關之組成物的製造方法之一例進行說明。本發明一態樣相關之組成物可藉由包含以下之步驟(i)及(ii)的製造方法來製造：
(i)將本發明一態樣相關之組成物的各成分混合於相同溶劑中，製備均勻之溶液的步驟；
(ii)使於該步驟(i)所獲得之溶液乾燥之步驟。
藉由此種製造方法，可將反應成分與海藻糖充分進行混合。其結果為：可設定海藻糖存在於反應成分之分子的周圍或內部之狀態。如上所述，由於海藻糖可代替所謂的「水持有之，氫鍵、親水性環境之提供」的功能，故因為海藻糖存在於反應成分之周圍或內部，使得反應成分之結構的重組變得難以發生，而能抑制反應成分之活性的降低。
關於各步驟，於以下說明。
(步驟(i))
含有反應成分之本發明一態樣相關之組成物的主成分為一般被使用於水溶液之組成。因此，上述溶劑一般為水。於步驟(i)中之本發明一態樣相關之組成物之成分的混合方法並無特別限制，可使用已知的方法。例如可列舉有：渦旋混合法(Vortex mixing)、超音波分散法等。
(步驟(ii))
將於該步驟(i)所獲得之溶液進行乾燥之方法並無特別限制，可使用已知之方法。例如可列舉有：自然乾燥、熱風乾燥、噴霧熱風乾燥、冷凍乾燥。作為一例，反應成分含有酵素之情形時，較佳地使用冷凍乾燥、自然乾燥來作為將於該步驟(i)所獲得之溶液進行乾燥之方法。又，作為另一例，由於將本發明一態樣相關之組成物應用於載片試藥式之乾式化學技術之情形時，由於在乾燥物殘留有結合水較佳，故較佳地使用自然乾燥來作為將於該步驟(i)所獲得之溶液進行乾燥之方法。
使本發明一態樣相關之組成物自然乾燥之方法並無特別限制，可使用已知之方法。例如可列舉有：將本發明一態樣相關之組成物，於室溫(15℃~40℃)，與乾燥保護劑一同加入乾燥器，於低濕度環境下使其乾燥一晚之方法。此處，該「低濕度環境」意指於室溫中且相對濕度30％RH以下之環境。
作為乾燥保護劑，可列舉有：將欲使其乾燥之對象物進行乾燥，並以保護之目的而被使用之習知的物質。作為此種物質，例如可舉出有：氯化鈣、合成沸石(分子篩)等。此處，乾燥保護劑所發揮之「保護」意指：從吸濕之方面保護乾燥物。因此，作為乾燥保護劑，以可吸附水分至低濕度域(10％RH付近)為止之種類的乾燥劑為較佳。
[2.乾燥試藥]
本發明一態樣相關之乾燥試藥係具備：本發明一態樣相關之組成物；乾燥保護劑，其將該組成物進行乾燥並保護；及包材，其將該組成物及該乾燥保護劑進行包裝。藉此，便能提供一種含有特定量之水分且同時保存穩定性優異之乾燥試藥。
(組成物)
關於本發明一態樣相關之組成物之構成，如已進行之說明，故此處不再重複說明。於本發明一態樣相關之乾燥試藥之中，本發明一態樣相關之組成物係以乾燥之狀態而具備在支持體上。作為支持體，例如可列舉有：聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、聚對苯二甲酸乙二酯(PET)、苯乙烯-丙烯腈樹脂(ABS樹脂)等之具有透光性的材料等。
(乾燥保護劑)
關於乾燥保護劑，如該「組成物的製造方法」之項目所說明，故此處不再重複說明。
(包材)
作為包材之材質，例如可列舉有：鋁蒸鍍樹脂膜、包裝用膜狀乾燥材等。
包材之形狀及尺寸，可設為：能將本發明一態樣相關之組成物及乾燥保護劑進行包裝之形狀及尺寸。
從吸濕防止的觀點來看，較佳為將本發明一態樣相關之組成物及乾燥保護劑利用包材進行密封包裝。例如，將鋁袋(aluminum pouch)之口進行熱壓接合，來進行熱封之方法，藉此，可將本發明一態樣相關之組成物及乾燥保護劑利用包材進行密封包裝。
從溫度變動的觀點來看，於將本發明一態樣相關之組成物及乾燥保護劑包裝好之狀態的包材之內部氣體的壓力，較佳為大致為大氣壓。此處，本說明書中，「大致為大氣壓」意指：1,000hPa～1,100hPa之範圍的壓力，較佳為1,010hPa～1,020hPa之範圍的壓力。
從吸濕防止的觀點來看，於將本發明一態樣相關之組成物及乾燥保護劑包裝好之狀態之包材的內部，較佳係在20℃時之相對濕度為30％RH以下，且40℃時之該氣體中的水分含量為30％RH以下。
20℃時之相對濕度，係更佳為30％RH以下，進而更佳為10％RH以下。20℃時之相對濕度，從吸濕防止的觀點來看，係愈低愈佳，其下限並無特別限定，從乾燥保護劑之性能的觀點來看，可為1.0％RH以上。
40℃時包材之內部氣體中的水分含量，係更佳為30％RH以下，進而更佳為10％RH以下。40℃時包材之內部氣體中的水分含量，從防止吸濕的觀點來看，係愈低愈佳，其下限雖並無特別限定，但從乾燥保護劑之性能的觀點來看，可為1.0％RH以上。
包材內部的相對濕度及氣體中之水分含量意指：將溫濕度記錄器一同進行內包，利用記錄內部濕度的方法而測得之值。
本發明一態樣相關之乾燥試藥有以下優點：於需要時藉由於血液樣本進行溶解，可即時地進行定性測定、定量測定。於以下詳細進行說明。
於臨床檢查之領域中，存在一種被稱為生物化學檢查之一系列的檢查(測定)。生物化學檢查中，會進行血液等之體液所含之無機物、低分子有機化合物、蛋白質、酵素等之定量。
該等檢查多為：於水溶液中將檢查試藥與血液等(血清、血漿、脊髓液)進行混合，使檢查試藥之成分與血液等之成分進行反應，來測定顯色反應等引起之吸光度變化。
作為檢查試藥之成分，多是進行酵素使用。例如，測定血清中的葡萄糖之試藥，係將由以下的反應所生成之NADPH的量，利用NADPH特有的吸收波長，即340nm之吸光度變化來進行定量。
＜己醣激酶所引起之酵素反應＞
葡萄糖 + ATP→ 葡萄糖-6-磷酸 + ADP
(反應於Mg離子共存下進行)
＜葡萄糖-6-磷酸脱水素酵素引起之酵素反應＞
葡萄糖-6-磷酸 + ADP → D-葡萄糖酸內酯-6-磷酸 + NADPH + H
+利用此反應，可構成測定血清樣本中之葡萄糖的生物樣本測定用乾燥試藥。將本發明一態樣相關之組成物，以含有被使用於該反應之ATP、己醣激酶、pH緩衝劑、Mg鹽之必要量的方式來進行製備，將該組成物以乾燥狀態加入至測定單元中，藉此，可構成本發明一態樣相關之乾燥試藥。
本發明一態樣相關之組成物，係藉由含有特定量之海藻糖，而使保存穩定性優異。因此，具備此種本發明一態樣相關之組成物之乾燥試藥，係長期之保存穩定性優異，而能於室溫以上保管，必要時藉由於血液樣本進行溶解，可即時地進行定性測定、定量測定。
必須於冷藏或冷凍下保存之以往的生物樣本測定用乾燥試藥，係於即將進行測定時，先加溫至該乾燥試藥所含之酵素等的反應最適溫度37℃，再提供予測定。因此，以往的生物樣本測定用乾燥試藥，至開始測定需要數分鐘到數十分鐘之時間，而被期望其縮短化。又，以往的生物樣本測定用乾燥試藥於加溫至37℃時，會於該乾燥試藥發生破裂，而自容器脫落，其結果，會發生變得無法進行所需的測定之異常。
相對於此，本發明一態樣相關之乾燥試藥由於能於室溫以上保管，故無需將乾燥試藥進行加溫之步驟。因此，本發明一態樣相關之乾燥試藥，可將從保存場所取出再供測定為止的時間大幅縮短，且難以發生如破裂等之變得無法進行測定之異常。因此，本發明一態樣相關之乾燥試藥相較於以往之生物樣本測定用乾燥試藥，會提高使用性。
本發明一態樣相關之乾燥試藥之用途並無特別限定，例如可使用於臨床檢查用途、生物化學領域等之研究用途。
[3.分析方法]
使用了本發明一態樣相關之乾燥試藥之生物樣本的分析方法亦被包含於本發明之範疇。藉由使用本發明一態樣相關之乾燥試藥來分析生物樣本，可將從保存場所取出再供測定為止的時間大幅縮短，且具有難以發生如破裂等之變得無法進行測定之異常的優點。
[4.保存組成物的方法]
保存本發明一態樣相關之組成物的方法亦被包含於本發明之範疇。即，本發明一態樣相關之保存組成物的方法為以下之方法：
一種保存該組成物的方法，其係藉由以下來保存該組成物的方法：使用組成物，該組成物含有與成為生物樣本所含之測定對象之目標成分進行反應之反應成分；海藻糖；及水分；相對於該組成物之總重量，係含有該海藻糖0.2重量％以上且90重量％以下，及該水分1重量％以上且30重量％以下；將該水分之重量設為該海藻糖之重量的5倍以下。
又，以下為保存本發明另一態樣相關之組成物的方法：
一種作為乾燥試藥保存該組成物的方法，其中，該乾燥試藥具備：本發明一態樣相關之組成物；乾燥保護劑，其將該組成物進行乾燥並保護；及包材，其將該組成物及該乾燥保護劑進行包裝。
於保存本發明一態樣相關之組成物的方法中，較佳為使用該組成物為固體狀且為玻璃狀態之組成物。
[總結]
本發明態樣1相關之組成物，其含有：反應成分，其與成為生物樣本所含之測定對象之目標成分進行反應；海藻糖；及水分；相對於組成物之總重量，係含有該海藻糖0.2重量％以上且90重量％以下，及該水分1重量％以上且30重量％以下；該水分之重量為該海藻糖之重量的5倍以下。
本發明態樣2相關之組成物，於上述態樣1中，較佳為固體狀且為玻璃狀態。
本發明態樣3相關之組成物，於上述態樣1或2中，較佳為該水分的含有比例為3重量％以上且10重量％。
本發明態樣4相關之組成物，於上述態樣1～3任一者中，較佳為含有該海藻糖1.0重量％以上且80重量％以下。
本發明態樣5相關之組成物，於上述態樣1～4之任一者中，該反應成分亦可含有酵素。
本發明態樣6相關之組成物，於上述態樣1～5任一者中，亦可進而含有選自由基質、色素、緩衝鹽及添加劑所組成之群之至少1種。
本發明態樣7相關之組成物，於上述態樣6中，該色素亦可為無色染料或四唑鹽。
本發明態樣8相關之乾燥試藥係具備：上述態樣1～7中任一種的組成物；乾燥保護劑，其將該組成物進行乾燥並保護；及包材，其將該組成物及該乾燥保護劑進行包裝。
本發明態樣9相關之乾燥試藥，於上述態樣8中，該包材之內部氣體的壓力大致為大氣壓；該包材之內部，較佳為在20℃時之相對濕度為30％RH以下，且40℃時之該氣體中的水分含量為30％RH以下。
本發明態樣10相關之保存組成物的方法，係藉由以下來保存該組成物的方法：使用組成物，該組成物含有與成為生物樣本所含之測定對象之目標成分進行反應之反應成分；海藻糖；及水分；相對於該組成物之總重量，係含有該海藻糖0.2重量％以上且90重量％以下，及該水分1重量％以上且30重量％以下；將該水分之重量設為該海藻糖之重量的5倍以下。
本發明態樣11相關之保存組成物的方法，於上述態樣10中，較佳為使用該組成物為固體狀且為玻璃狀態之組成物。
本發明態樣12相關之保存組成物的方法，其係作為乾燥試藥保存該組成物之方法；該乾燥試藥具備：上述態樣1～7中任一種的組成物；乾燥保護劑，其將該組成物進行乾燥並保護；及包材，其將該組成物及該乾燥保護劑進行包裝。
本發明並不限定於上述之各實施形態，於請求項所示之範圍可為各種變更，關於將實施形態所分別揭露之技術手段適當組合而得之實施形態亦包含於本發明之技術範圍。
以下，利用實施例具體地說明本發明。本發明並不限定於實施例。
＜1.使用了IR之水分含量之確認＞
[實驗操作]
(1)使用氯化鈣乾燥劑，將IR(PerkinElmer Japan製，型號Spectrum100A)之測定部(1次反射 衰減全反射(ATR)法：鑽石結晶)周圍的相對濕度調整至10％RH以下。
(2)將含有1重量％海藻糖及0.5重量％CHAPS之測定對象樣本0.5μL，滴下至IR之測定部，使其乾燥。
(3)測定經時之IR光譜，將水分含量進行了定量。此時的測定條件設為：測定範圍500～4000cm
-1、解析度4cm
-1、累積次數4次。
從所獲得之1640cm
-1之峰的面積來計算出殘留水分含量。於殘留水分含量之計算，會事先使用了由已知水分含量的標準樣本所作成之水分含量、1640cm
-1之峰的面積的檢量線。
[結果]
於經過24時間後，殘留水分含量達到穩定(plateau)，可知殘留約3.0重量％左右。
＜2.玻璃轉移溫度之測定＞
(試驗試藥之原料)
・海藻糖(α,α-海藻糖；FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation製)
・甘露醇(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation製)
・CHAPS(同仁化學研究所股份有限公司製)
[實驗操作]
(1)以示於表2之摻合比例，分別製備了實施例及比較例的試驗試藥。
(2)使其於乾燥器內乾燥一晚。
(3)於以下的條件進行了微差掃描熱量測定(DSC)。
使用A1樣品盤。樣品量：1～10mg。
升溫速度：10℃/min、溫度範圍：30℃～120℃。
[表2]
| 實施例1 | 實施例2 | 比較例1 | 比較例2 | |
| 海藻糖 | 1wt% | 1wt% | - | - |
| 甘露醇 | - | - | 1wt% | 1wt% |
| CHAPS | - | 0.5wt% | - | 0.5wt% |
| 水分比例 | 3.0% | 3.0% | 1%以下 | 1% |
[結果]
實施例之試驗試藥的玻璃轉移溫度分別為以下。
實施例1：60℃、實施例2：50℃
自該等之結果，顯示出含有海藻糖之試驗試藥的玻璃轉移溫度為室溫(40℃)以上，該等之試驗試藥於室溫為玻璃狀態。
相對於此，比較例1及2之試驗試藥的玻璃轉移溫度分別未達30℃，認為玻璃轉移溫度是在室溫以下。
＜3.GLU試藥之保存穩定性評價＞
(R1試藥之原料)
・GDH(東洋紡股份有限公司製)
・DI(東洋紡股份有限公司製)
・pH7．0 HEPES緩衝劑(同仁化學研究所股份有限公司製)
・海藻糖(α,α-海藻糖；FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation製)
・甘露醇(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation製)
(R2試藥之原料)
・β-NAD(Oriental Yeast Co., Ltd.製)
・WST-4(同仁化學研究所股份有限公司製)
・pH7．0 HEPES(同仁化學研究所股份有限公司製)
・海藻糖(α,α-海藻糖；FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation製)
・甘露醇(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation製)
(測定樣本)
使用了以下的測定樣本。
・空白樣本(150mM PBS緩衝劑)
・低濃度調整檢體(GLU：約80mg/dL)
・高濃度調整檢體(GLU：約350mg/dL)
[實驗操作]
(1)製備了利用以下的反應測定血清樣本中的GLU之GLU試藥。
(化學式2)
更具體而言，以示於表3及表4之摻合比例，分別製備R1試藥及R2試藥。
(2)於well plate(AS ONE CORPORATION.製，型號1-6776-01)上，將R1試藥及R2試藥分別各滴下100μL。
(3)將該(2)之試藥容器與氯化鈣乾燥劑一同放入乾燥器，使其於低濕度環境下(相對濕度10％RH)乾燥一晩。
(4)將該(3)之試藥容器與氯化鈣乾燥劑一同放入鋁袋內，進行密封，製作成乾燥試藥。
(5)將該(4)之乾燥試藥於60℃保管1個月。
(6)將保管後之乾燥試藥，使用100μL之超純水(MilliQ(註冊商標)水)，使R1試藥及R2試藥分別再溶解。
(7)將於該(6)進行了調整的100μL之R1試藥及100μL之R2試藥、以及4μL之各測定樣本進行了混合。
(8)使用分光光度計(TECAN製、Infinite PRO)，於反應終點測得630nm時之吸光度。
Criteria：吸光度之變動為10％以內。
[表3]
| R1試藥 | 實施例3 最終濃度 | 比較例3 最終濃度 |
| GDH | 10U/mL | 10U/mL |
| DI | 10U/mL | 10U/mL |
| pH7.0 HEPES | 100 mM | 100 mM |
| 海藻糖 | 1wt% | - |
| 甘露醇 | - | 1wt% |
[表4]
| R2試藥 | 實施例3 最終濃度 | 比較例3 最終濃度 |
| β-NAD | 2 mM | 2 mM |
| WST-4 | 2 mM | 2 mM |
| pH7.0 HEPES | 100 mM | 100 mM |
| 海藻糖 | 1wt% | - |
| 甘露醇 | - | 1wt% |
[結果]
將結果示於表5。
[表5]
| 60℃、1個月 保管結果 | 實施例3 | 比較例3 | |
| 空白樣本 | 評價結果 | 無劣化 | 有劣化 |
| 吸光度 | 0.08⇒0.10 (變動率：25.0％) | 0.02⇒0.50 (變動率：2,400％) | |
| 低濃度調整檢體 | 評價結果 | 無劣化 | 有劣化 |
| 吸光度 | 0.41⇒0.43 (變動率：4.9％) | 0.36⇒0.60 (變動率：66.7％) | |
| 高濃度調整檢體 | 評價結果 | 無劣化 | 有劣化 |
| 吸光度 | 1.75⇒1.67 (變動率：4.6％) | 1.77⇒0.74 (變動率：58.2％) |
關於表5中的吸光度，箭頭左側之數值為乾燥後、進行60℃保管前測定時的吸光度，箭頭右側之數值表示使用了於60℃保管1個月後之試驗試藥時的吸光度。
關於保存穩定性，於吸光度的變動率為±20％以下之情形時，評價為無試藥之劣化；於該變動率超過±20％之情形時，評價為有試藥之劣化。
藉由實施例3與比較例3之比較，含有海藻糖之實施例3的試藥組成物，相較於含有甘露醇之比較例3的試藥組成物，能提高GLU試藥之穩定性。從此結果顯示出：具備含有海藻糖之實施例3的試藥組成物之GLU試藥，係含有特定量之水分且同時保存穩定性優異。再者，實施例3之空白樣本之吸光度的變動率雖為25.0％，但以濃度換算則約為5mg/dL之增加，於測定結果並無巨大影響故而判斷為無劣化。
＜4.CREA試藥的保存穩定性評價＞
(R1試藥之原料)
・CNH(東洋紡股份有限公司製)
・CRH(東洋紡股份有限公司製)
・SAO(東洋紡股份有限公司製)
・POD(東洋紡股份有限公司製)
・pH7.0 HEPES緩衝劑(同仁化學研究所股份有限公司製)
・海藻糖(α,α-海藻糖；FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation製)
・甘露醇(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation製)
(R2試藥之原料)
・DA-67(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation製)
・pH7.0 HEPES(同仁化學研究所股份有限公司製)
・海藻糖(α,α-海藻糖；FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation製)
・甘露醇(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation製)
(測定樣本)
使用了以下的測定樣本。
・空白樣本(150mM PBS緩衝劑)
・低濃度調整檢體(CREA：約1.0mg/dL)
・高濃度調整檢體(CREA：約6.5mg/dL)
[實驗操作]
(1)製備利用以下反應而測定血清樣本中之CREA的CREA試藥。
(化學式3)
更具體而言，以示於表6及表7之摻合比例，分別製備R1試藥及R2試藥。
(2)於well plate(AS ONE CORPORATION.製，型號1-6776-01)上，將R1試藥及R2試藥分別各滴下100μL。
(3)將該(2)之試藥容器與氯化鈣乾燥劑一同放入乾燥器，使其於低濕度環境下(相對濕度10％RH)乾燥一晩。
(4)將該(3)之試藥容器與氯化鈣乾燥劑一同放入鋁袋內，進行密封，製作成乾燥試藥。
(5)將該(4)之乾燥試藥於60℃保管1個月。
(6)將保管後之乾燥試藥，使用100μL之超純水(MilliQ(註冊商標)水)，使R1試藥及R2試藥分別再溶解。
(7)將於該(6)進行了調整的100μL之R1試藥及100μL之R2試藥、以及4μL之各測定樣本進行了混合。
(8)使用分光光度計(TECAN製、Infinite PRO)，於反應終點測得630nm時之吸光度。
Criteria：吸光度之變動為10％以內。
[表6]
| R1試藥 | 實施例4 最終濃度 | 比較例4 最終濃度 |
| CNH | 5U/mL | 5U/mL |
| CRH | 5U/mL | 5U/mL |
| SAO | 5U/mL | 5U/mL |
| POD | 5U/mL | 5U/mL |
| pH7.0 HEPES | 100 mM | 100 mM |
| 海藻糖 | 1wt% | - |
| 甘露醇 | - | 1wt% |
[表7]
| R2試藥 | 實施例4 最終濃度 | 比較例4 最終濃度 |
| DA-67 | 0.1 mM | 0.1 mM |
| pH7.0 HEPES | 100 mM | 100 mM |
| 海藻糖 | 1wt% | - |
| 甘露醇 | - | 1wt% |
[結果]
將結果表示於表8。
[表8]
| 60℃、1個月 保管結果 | 實施例4 | 比較例4 | |
| 空白樣本 | 評價結果 | 無劣化 | 有劣化 |
| 吸光度 | 0.01⇒0.01 (變動率：0％) | 0.02⇒0.15 (變動率：650.0％) | |
| 低濃度調整檢體 | 評價結果 | 無劣化 | 有劣化 |
| 吸光度 | 0.09⇒0.09 (變動率：0％) | 0.06⇒0.21 (變動率：250.0％) | |
| 高濃度調整檢體 | 評價結果 | 無劣化 | 有劣化 |
| 吸光度 | 0.23⇒0.20 (變動率：13.0％) | 0.22⇒0.38 (變動率：72.7％) |
關於表8中的吸光度，箭頭左側之數值為乾燥後、進行60℃保管前測定時的吸光度，箭頭右側之數值表示使用了於60℃保管1個月後之試驗試藥時的吸光度。
關於保存穩定性，於吸光度的變動率為±20％以下之情形時，評價為無試藥之劣化；於變動率超過±20％之情形時，評價為有試藥之劣化。
藉由實施例4與比較例4之比較，含有海藻糖之實施例4的試藥組成物，係相較於含有甘露醇之比較例4的試藥組成物，提高了CREA試藥的穩定性。從此結果顯示出：具備含有海藻糖之實施例4的試藥組成物之CREA試藥，係含有特定量之水分且同時保存穩定性優異。
[產業利用性]
本發明可用於使用了乾式化學技術之檢查試藥。
Claims (12)
- 一種組成物，其含有：反應成分，其與成為生物樣本所含之測定對象之目標成分進行反應； 海藻糖；及 水分； 相對於組成物之總重量，係含有該海藻糖0.2重量％以上且90重量％以下，及該水分1重量％以上且30重量％以下； 該水分之重量為該海藻糖之重量的5倍以下。
- 如請求項1之組成物，其為固體狀，且為玻璃狀態。
- 如請求項1或2之組成物，其中，該水分的含有比例為3重量％以上且10重量％以下。
- 如請求項1或2之組成物，其係含有該海藻糖1.0重量％以上且80重量％以下。
- 如請求項1或2之組成物，其中，該反應成分含有酵素。
- 如請求項1或2之組成物，其進而含有選自由基質、色素、緩衝鹽及添加劑所組成之群之至少1種。
- 如請求項6之組成物，其中，該色素為無色染料(leuco dye)或四唑鹽。
- 一種乾燥試藥，其具備：請求項1或2之組成物； 乾燥保護劑，其將該組成物進行乾燥並保護；及 包材，其將該組成物及該乾燥保護劑進行包裝。
- 如請求項8之乾燥試藥，其中，該包材之內部氣體的壓力大致為大氣壓； 該包材之內部，在20℃時之相對濕度為30％RH以下，且40℃時之該氣體中的水分含量為30％RH以下。
- 一種保存組成物的方法，其係藉由以下來保存該組成物：使用組成物，該組成物含有與成為生物樣本所含之測定對象之目標成分進行反應之反應成分； 海藻糖；及 水分； 相對於該組成物之總重量，係含有該海藻糖0.2重量％以上且90重量％以下，及該水分1重量％以上且30重量％以下； 將該水分之重量設為該海藻糖之重量的5倍以下。
- 如請求項10之保存組成物的方法，其特徵在於：使用該組成物為固體狀且為玻璃狀態之組成物。
- 一種保存組成物的方法，其係作為乾燥試藥保存該組成物；，該乾燥試藥具備： 請求項1或2之組成物； 乾燥保護劑，其將該組成物進行乾燥並保護；及 包材，其將該組成物及該乾燥保護劑進行包裝。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2024-054032 | 2024-03-28 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TW202538052A true TW202538052A (zh) | 2025-10-01 |
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