TW202521577A

TW202521577A - 抗ｏｘ４０ｌ抗體以及其用途

Info

Publication number: TW202521577A
Application number: TW113129042A
Authority: TW
Inventors: 冉昊; 李莉; 何付凡; 曹蕾; 張悅
Original assignee: 大陸商信達生物製藥（蘇州）有限公司
Priority date: 2023-08-04
Filing date: 2024-08-02
Publication date: 2025-06-01
Also published as: WO2025031290A1

Abstract

本發明涉及特異性結合OX40L的新型抗體和抗體片段以及含有該抗體或抗體片段的組成物。此外，本發明涉及編碼該抗體或其抗體片段的核酸及包含其的宿主細胞，以及相關用途。此外，本發明涉及這些抗體和抗體片段的治療和診斷用途。

Description

抗OX40L抗體以及其用途

T細胞共刺激分子OX40及其同源配體OX40L作為T細胞介導的疾病的治療靶點引起了廣泛的研究興趣。

OX40是一種1型跨膜糖蛋白，由約275個胺基酸組成，具有三個完整的富含半胱胺酸結構域(CRD)和一個部分C末端CRD。OX40的表觀分子量為50kDa。OX40以及其他TNFRSF成員(例如4-1BB、CD27、CD30和CD40)是在不同階段發揮作用以調節和控制免疫反應的T細胞共刺激分子。與其他組成型T細胞共刺激受體(如CD28和CD27)不同，OX40不在幼稚T細胞上表達。OX40由抗原(Ag)識別後的TCR接合後的信號暫態誘導，在活化的T細胞(包括活化的CD4+和CD8+T細胞，以及中性粒細胞、自然殺傷細胞(NK)和自然殺傷T細胞(NKT))中48-72h高峰。唯一的例外是OX40在小鼠FOXP3+Treg細胞中是組成型。OX40表達的動力學涉及許多因素，包括細胞因子環境、抗原的持久性、炎症環境和其他共刺激途徑的影響。OX40缺陷型T細胞通常可能在TCR招募後2-3天增殖並分化為效應T細胞，但它們在12-13天後顯示出顯著的存活率下降。也就是說，OX40信號可能不會影響T細胞的初始啟動階段，但可能在維持T細胞效應階段的晚期增殖和存活方面發揮重要作用。

OX40的配體(OX40L，也稱為CD252、CD134L或gp34)，也是TNFR超家族的成員。OX40L是一種II型糖蛋白，具有23個胺基酸的胞質尾部和一個133個胺基酸的胞外結構域。鼠OX40L可以刺激人和小鼠T細胞；然而，人類OX40L只能刺激人類T細胞。OX40L主要在活化的抗原呈遞細胞(APC)例如樹突狀細胞(DC)、活化的B細胞和巨噬細胞上表達。可被誘導表達OX40L的細胞類型要廣泛得多。除了APC，OX40L還在造血細胞例如活化的NK細胞、肥大細胞或回應性CD4+T細胞和非造血細胞，如內皮細胞或平滑肌細胞上表達。(Yu Fu等人，The significance of OX40 and OX40L to T-cell biology and immune disease，Immunological Reviews 2009，Vol.229：173-191)。OX40L藉由和OX40相互作用並誘導受體的三聚化，從而啟動下游的NfKB信號通路，促進記憶性T細胞的形成、炎症因子的分泌並抑制調節性T細胞的產生，起到促進細胞免疫反應的作用。

自身免疫性疾病的典型特徵是由於免疫系統未能維持對自身抗原的自身耐受性而產生針對自身抗原的反應性自身抗體。由於對發病機制知之甚少，一些眾所周知的自身免疫性疾病的發病率很高。這些包括實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)、系統性紅斑狼瘡(SLE)和類風濕性關節炎 (RA)、結腸炎、自身免疫性實驗性葡萄膜炎(AEU)、1型糖尿病和多發性硬化症(MS)。

由於T細胞在控制OX40-OX40L與T細胞相互作用的免疫反應和共刺激作用中的關鍵作用，靶向OX40-OX40L相互作用可能會改善自身抗原特異性T細胞反應。因此，已經進行了實驗以驗證藉由阻斷OX40或OX40L靶向OX40-OX40L相互作用是否對自身免疫性疾病具有治療益處，包括EAE、SLE、RA、結腸炎、AEU、1型糖尿病、MS移植物抗-宿主病(GVHD)和炎症性腸病(IBD)。研究表明OX40在自身免疫位點上調並與疾病嚴重程度相關。因此，抑制該信號通路對多種免疫相關疾病有潛在的治療作用。

由於存在大量的未被滿足的臨床治療的需求，開發靶向OX40L的藥物十分必要。雖然，現有技術已經開發了一些針對OX40L的單株抗體，但是，這些抗體親和力較低，生物學活性和體內藥效都有待進一步提高。

因此，還需要開發新的針對OX40L的抗體，其與OX40L的結合親和力更強，生物學活性更高，且體內藥效更好。

發明概述

本發明提供了一種新的識別OX40配體(OX40L)高親和力抗體，其選擇性阻斷OX40L-OX40信號通路。

因此，本發明涉及一種特異性結合OX40L，例如人OX40L的抗體或片段，例如抗原結合片段。

本發明的抗體或其抗原結合片段，在蛋白水準和細胞水平均能有效阻斷OX40L與其受體OX40的相互作用，能有效抑制T細胞的啟動、增殖和/或分化。

例如，在移植物抗宿主的小鼠模型中(GvHD)，施用本發明抗體或其抗原結合片段的小鼠能夠保持體重增長且無臨床症狀，和/或顯著降低T細胞的活化或炎症因子的產生。

本發明的抗體或其抗原結合片段，藉由對Fc區進行突變，例如進行S228P突變，能夠有效減少抗體在體內發生鏈交換的幾率，提高其穩定性。

因此，本發明涉及以下具體的方面。

在一些方面，本發明涉及一種抗OX40L抗體或其抗原結合片段，該抗體包含：

(i)如SEQ ID NO：4所示的VH中所含的三個互補決定區域HCDR1、HCDR2和HCDR3，和如SEQ ID NO：8所示的VL中所含的三個互補決定區域LCDR1、LCDR2和LCDR3；或

(ii)如SEQ ID NO：14所示的VH中所含的三個互補決定區域HCDR1、HCDR2和HCDR3，和如SEQ ID NO：18所示的VL中所含的三個互補決定區域LCDR1、LCDR2和LCDR3；

例如，其中該HCDR1根據Abm方案確定的，HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3是根據Kabat方案確定的。

在一些方面，本發明涉及一種抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其包含第一重鏈互補決定區(HCDR1)、第二重鏈互補決定區(HCDR2)、第三重鏈互補決定區(HCDR3)以及第一輕鏈互補決定區(LCDR1)、第二輕鏈互補決定區(LCDR2)和第三輕鏈互補決定區(LCDR3)，其中，

(i)該HCDR1、HCDR2、HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3分別包含SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列或分別由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列組成；或

(ii)該HCDR1、HCDR2、HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3分別包含SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列或分別由SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列組成。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(VH)，其中該重鏈可變區包含與選自SEQ ID NO：4或14所示的胺基酸序列具有至少90%同一性的胺基酸序列，或由該序列組成或包含選自SEQ ID NO：4或14所示的胺基酸序列，或由該序列組成。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變區(VL)，其中該輕鏈可變區包含與選自SEQ ID NO：8 或18所示的胺基酸序列具有至少90%同一性的胺基酸序列，或由該序列組成或包含選自SEQ ID NO：8或18所示的胺基酸序列，或由該序列組成。

在一些實施方案中，本發明涉及抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中

(i)該重鏈可變區包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列或與其具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列與其具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；

(ii)該重鏈可變區包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列或與其具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：18所示的胺基酸序列與其具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中

(i)該重鏈可變區包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；或

(ii)該重鏈可變區包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：18所示的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段包含Fc區。在一些具體的實施方案中，該Fc區來自人的IgGFc，例如，來自人IgG1的Fc、來自人IgG2的Fc、來自人IgG3的Fc或來自人IgG4的Fc。在一些具體的實施方案中，該Fc區包含增強Fc區穩定性或減少抗體體內鏈交換的突變。在一些具體的實施方案中，該突變為S228P突變。在一些具體的實施方案中，其中該Fc區

(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO：27或28或由其組成；

(ii)包含與胺基酸序列SEQ ID NO：28具有至少90%同一性，例如95%、96%、97%、99%或更高的同一性的胺基酸序列；或者

(iii)包含與胺基酸序列SEQ ID NO：27具有至少90%同一性，例如95%、96%、97%、99%或更高的同一性的胺基酸序列，且包含S228P突變。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段包含重鏈恆定區，該重鏈恆定區來自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的恆定區，較佳地，該重鏈恆定區

(i)包含選自SEQ ID NO：21或29的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；

(ii)包含與SEQ ID NO：29的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列；或者

(iii)包含與SEQ ID NO：21的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列，且具有S228P缺失突變。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段包含輕鏈恆定區，該輕鏈恆定區為lambda或Kappa輕鏈恆定區，較佳地，該輕鏈恆定區

(i)包含與SEQ ID NO：22的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；或

(ii)包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段包含重鏈，其中該重鏈

(i)包含與選自SEQ ID NO：9或19的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；或

(ii)包含選自SEQ ID NO：9或19的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段包含輕鏈，其中該輕鏈

(i)包含與選自SEQ ID NO：10或20的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；或

(ii)包含選自SEQ ID NO：10或20的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。

在一些實施方案中，本發明涉及抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈和輕鏈，其中

(i)該重鏈包含與SEQ ID NO：9的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；且該輕鏈包含與SEQ ID NO：10的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；

(ii)該重鏈包含與SEQ ID NO：19的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；且該輕鏈包含與SEQ ID NO：20的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段包含重鏈和輕鏈，其中

(i)該重鏈包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列或由其組成的，該輕鏈包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列或由其組成；

(ii)該重鏈包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列或由其組成的，該輕鏈包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列或由其組成。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體是單株抗體。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體是人源化的抗體或嵌合抗體。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體的抗原結合片段是選自以下的抗體片段：Fab、Fab’、Fab’-SH、Fv、單鏈抗體(例如scFv)、(Fab’)2、單結構域抗體例如VHH、dAb(domainantibody)、雙價抗體或線性抗體。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段具有一種或多種以下性質：

a)以高親和力結合OX40L(例如人OX40L)；

b)在蛋白水準和細胞水平均能有效阻斷OX40L與其受體OX40的相互作用；

c)抑制OX40/OX40L信號通路；

d)抑制T細胞的啟動、增殖和/或分化；

e)降低T細胞的活化和/或炎症因子的產生；

f)治療移植物抗宿主病。

在一些方面，本發明涉及一種分離的核酸，其編碼本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段。

在一些方面，本發明涉及一種包含本發明的核酸的載體，較佳地該載體是表達載體。

在一些方面，本發明涉及一種包含本發明的核酸或載體的宿主細胞，較佳地，該宿主細胞是原核的或真核的，更佳的選自酵母細胞、哺乳動物細胞(例如293細胞或CHO細胞，例如CHO-K細胞或HEK293細胞)或適用於製備抗體或其抗原結合片段的其它細胞。

在一些方面，本發明涉及一種製備抗OX40L抗體或其抗原結合片段的方法，該方法包括

a)在適於表達編碼本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段的核酸的條件下培養本發明的宿主細胞，

b)視需要地分離該抗體或其抗原結合片段，

c)視需要地該方法還包括從該宿主細胞回收該抗OX40L抗體或其抗原結合片段，視需要地，該抗體被純化，例如被ProteinA純化。

在一些方面，本發明涉及一種免疫綴合物，其包含本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段和其它物質，例如毒素、小分子藥物、細胞毒性劑、細胞凋亡劑、螯合劑、免疫調節劑，例如抗炎劑或免疫抑制劑。

在一些方面，本發明涉及一種醫藥組成物，其包含本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段或免疫綴合物，以及視需要地藥用輔料。

在一些方面，本發明涉及一種藥物組合產品，其包含本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段或免疫綴合物，以及一種或多種其它治療劑，例如該治療劑選自細胞因子、其它抗體、小分子藥物或免疫調節劑(例如免疫抑制劑)。

在一些方面，本發明涉及一種預防或治療個體中涉及OX40L/OX40介導的途徑的不適當啟動相關疾病或病症的方法，該方法包括向該受試者施用有效量的本發明的結合OX40L的抗體或其抗原結合片段、或免疫綴合物、或醫藥組成物、或藥物組合產品。在一些實施方案中，在該受試者中，相比健康個體，具有OX40L/OX40介導的信號通路的異常啟動。在一些實施方案中，該疾病或病症選自自身免疫類疾病或同種異體移植，例如，自身免疫病類疾病包括但不限於過敏性皮炎、哮喘、系統性紅斑狼瘡、肖葛籣綜合症、免疫性血小板減少性紫癜、多發性硬化、狼瘡性腎炎、肌萎縮性脊髓側索硬化症、類風濕關節炎、非類風濕性關節炎、接觸性皮炎、高IgE綜合症、炎症腸病、重症肌無力、格蕾夫斯氏病、溶血性貧血、牛皮癬、特應性皮炎、變應性哮喘或特發性炎症疾病。在一些實施方案中，該方法還包括施用一種或多種其它療法例如治療方式和/或其它治療劑，例如該治療劑選自細胞因子、其它抗體、小分子藥物或免疫調節劑(例如免疫抑制劑)。

圖1顯示了抗OX40L抗體的親和力、對於OX40-OX40L的阻斷活性以及對過表達OX40的Jurkat-NFκB螢光素酶活性的影響；

圖2顯示了抗OX40L抗體對於T細胞啟動的影響；

圖3顯示了DC誘導的Th2分化過程中，抗OX40L抗體處理後IL5和IL13分泌的變化；

圖4顯示了GvHD小鼠模型中小鼠體重的變化以及生存曲線；

圖5顯示了GvHD小鼠模型中第14天時小鼠血中CD4陽性T細胞的比例。

發明詳述

I.定義

在下文詳細描述本發明前，應理解本發明不限於本文中描述的特定方法學、方案和試劑，因為這些可以變化。還應理解本文中使用的術語僅為了描述具體實施方案，而並不意圖限制本發明的範圍，其僅會由所附申請專利範圍限制。除非另外定義，本文中使用的所有技術和科學術語與本發明所屬領域中具有通常知識者通常的理解具有相同的含義。

為了解釋本說明書，將使用以下定義，並且只要適當，以單數形式使用的術語也可以包括複數，並且反之亦然。要理解，本文所用的術語僅是為了描述具體的實施方案，並且不意欲是限制性的。

術語“約”在與數位數值聯合使用時意為涵蓋具有比指定數位數值小5%的下限和比指定數字數值大5%的上限的範圍內的數字數值。

如本文所用，術語“和/或”意指可選項中的任一項或可選項的兩項或多項或全部。

如本文所用，術語“包含”或“包括”意指包括所述的要素、整數或步驟，但是不排除任意其他要素、整數或步驟。在本文中，當使用術語“包含”或“包括”時，除非另有指明，否則也涵蓋由所述及的要素、整數或步驟組合的情形。例如，當提及“包含”某個具體序列的抗體可變區時，也旨在涵蓋由該具體序列組成的抗體可變區。

“分離的”抗體或分子是這樣的抗體或分子，其已經與其天然環境的組分分離。在一些實施方案中，將抗體或分子純化至超過95%或99%純度，如藉由例如電泳(例如，SDS-PAGE，等電聚焦(IEF)，毛細管電泳)或層析(例如，離子交換或反相HPLC)確定的。

如本文所用，“OX40L”是指任何天然OX40L多肽(例如人OX40L多肽)或其變體。術語“OX40L”涵蓋“全長”未處理OX40L多肽以及由細胞內的處理產生的任何形式的OX40L多肽。該術語還涵蓋OX40L的天然存在的變體，例如由剪切變體和等位元基因變體編碼的那些。本文所述的OX40L多肽可從多種來源，諸如從人組織或從另一來源例如食蟹猴分離，或藉由重組或合成方法製備。在本發明的一個實施方案中，人OX40L蛋白如(CD252,Uniport：P23510)中所示。在一個實施方案中，人OX40L基因如(Uniport：P29279)所示。在本發明的一個實施方案中，食蟹猴OX40L蛋白如(uniport：A0A1D5QQH7)中所示。

術語“全抗體”或“全長抗體”在本文中可互換使用，是指具有天然免疫球蛋白分子結構的抗體分子。在常規四鏈IgG抗體的情況下，全長抗體包含由二硫鍵相互連接的兩條重鏈(H)和兩條輕鏈(L)。在僅具有重鏈而缺乏輕鏈的重鏈抗體情況下，全長抗體包含由二硫鍵相互連接的兩條重鏈(H)。對於常規四鏈IgG抗體，全長抗體重鏈通常由重鏈可變區(本文中縮寫為VH)和重鏈恆定區組成，其中重鏈恆定區至少包含3個結構域CH1、CH2和CH3。全長抗體輕鏈由輕鏈可變區(本文中縮寫為VL)和輕鏈恆定區組成，其中輕鏈恆定區由一個結構域CL組成。每個重鏈可變區VH和每個輕鏈可變區都由三個CDR和4個FR組成，從胺基端到羧基端以如下順序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。術語“抗體片段”包括完整抗體的一部分。在較佳的實施方案中，抗體片段為抗原結合片段。

術語抗體的“抗原結合片段”是與全長抗體不同的分子，其包含全長抗體的一部分，但其能結合全長抗體的抗原或與全長抗體(即與抗原結合片段所來源的全長抗體)競爭結合抗原。可以藉由重組DNA技術、或藉由酶或化學切割完整的抗體製備抗原結合片段。抗原結合片段包括但不限於Fv、Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、dAb(domain antibody)、線性抗體、單鏈抗體(例如scFv)；單結構域抗體例如VHH、雙價抗體或其片段、或駱駝科抗體、雙體抗體(diabody)、單域抗體(sdAb)、奈米抗體。例如，藉由木瓜蛋白酶消化全長抗體能夠獲得Fab片段。此外，藉由胃蛋白酶在鉸鏈區的二硫鍵下面消化完全抗體產生F(ab')2，其為Fab’的二聚體，是二價的抗體片段。F(ab')2可以在中性條件下藉由破壞鉸鏈區中的二硫鍵而被還原，由此將F(ab')2二聚體轉化為Fab'單體。Fab'單體基本上是具有鉸鏈區的Fab片段。Fv片段由抗體單臂的VL和VH結構域組成。Fv片段的兩個結構域VL和VH可以由獨立的基因編碼，但是也可以使用重組方法，使用合成性連接肽連接這兩個結構域以使其作為單條蛋白鏈產生，並且在該單條蛋白鏈中VL區和VH區配對以形成單鏈Fv(scFv)。

術語“單鏈抗體(scAb)”在本文中以最寬泛的含義使用，並具體覆蓋最初作為單個連續多肽鏈產生的具有單特異性或多特異性(例如雙特異性)的抗體。此類單鏈抗體包括但不限於，具有兩個相連接的VL區和VH區。在一個實施方案中，單鏈抗體是scFv。

“雙體抗體”是藉由基因融合構建的二價小型抗體，例如其是由兩個多肽鏈組成的二聚體。雙體抗體的每一多肽鏈的VL和VH域藉由接頭結合，從而編碼在同一多肽鏈中的VL和VH形成具有不同的單鏈可變區片段的二聚體。雙體抗體一般具有兩個抗原結合位點。

“互補決定區”或“CDR區”或“CDR”是抗體可變結構域中在序列上高變並且形成在結構上確定的環(“超變環”)和/或含有抗原接觸殘基(“抗原接觸點”)的區域。CDR主要負責與抗原表位結合。重鏈和輕鏈的CDR通常被稱作CDR1、CDR2和CDR3，從N-端開始順序編號。位於抗體重鏈可變結構域內的CDR被稱作HCDR1、HCDR2和HCDR3，而位於抗體輕鏈可變結構域內的CDR被稱作LCDR1、LCDR2和LCDR3。在一個給定的輕鏈可變區或重鏈可變區胺基酸序列中，各CDR的精確胺基酸序列邊界可以使用許多公知的抗體CDR指派方案的任一種或其組合確定，該指派方案包括例如：基於抗體的三維結構和CDR環的拓撲學的Chothia(Chothia等人.(1989)Nature 342：877-883，Al-Lazikani等人，“Standard conformations for the canonical structures of immunoglobulins”,Journal of Molecular Biology,273,927-948(1997))，基於抗體序列可變性的Kabat(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第4版，U.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987)),AbM(University of Bath)，Contact(University College London)，國際ImMunoGeneTics database(IMGT)(http：//imgt.cines.fr或 http：//imgt.cines.org)，以及基於利用大量晶體結構的近鄰傳播聚類(affinity propagation clustering)的North CDR定義。

以下為採用kabat、AbM、Chothia、Contact和IMGT方案定義的CDR的區域範圍的示例性方案。

除非另有說明，否則在本發明中，術語“CDR”或“CDR序列”涵蓋以上述任一種方式確定的CDR序列。CDR也可以基於與參考CDR序列(例如本發明示例性CDR之任一)具有相同的Kabat編號位置而確定。

除非另有說明，否則在本發明中，當提及抗體可變區中的殘基位置(包括重鏈可變區殘基和輕鏈可變區殘基)時，是指根據Kabat編號系統(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))的編號位置。

在一些實施方案中，本發明中抗體的重鏈可變區的CDR1是按照AbM方案確定的，CDR2和CDR3是按照Kabat方案確定的。在一些實施方案中，本發明中抗體的輕鏈可變區的CDR是按照Kabat方案確定的。

與參照抗體“結合相同或重疊表位的抗體”是指這樣的抗體，其在競爭測定中阻斷50%、60%、70%、80%、90%或95%以上的該參照抗體與其抗原的結合，反言之，參照抗體在競爭測定中阻斷50%、60%、70%、80%、90%或95%以上的該抗體與其抗原的結合。

與參照抗體競爭結合其抗原的抗體是指這樣的抗體，其在競爭測定中阻斷50%、60%、70%、80%、90%或95%以上的該參照抗體與其抗原的結合。反言之，參照抗體在競爭測定中阻斷50%、60%、70%、80%、90%或95%以上的該抗體與其抗原的結合。眾多類型的競爭性結合測定可用於確定一種抗體是否與另一種競爭，這些測定例如：固相直接或間接放射免疫測定(RIA)、固相直接或間接酶免疫測定(EIA)、夾心競爭測定。

抑制(例如競爭性抑制)參照抗體與其抗原的結合的抗體是指這樣的抗體，其抑制50%、60%、70%、80%、90%或95%以上的該參照抗體與其抗原的結合。反言之，參照抗體抑制50%、60%、70%、80%、90%或95%以上的該抗體與其抗原的結合。抗體與其抗原的結合可以親和力(例如平衡解離常數)衡量。測定親和力的方法是本領域已知的。

與參照抗體顯示相同或相似的結合親和力和/或特異性的抗體是指這樣的抗體，其能夠具有參照抗體的至少50%、60%、70%、80%、90%或95%以上的結合親和力和/或特異性。這可以藉由本領域已知的任何測定結合親和力和/或特異性的方法進行測定。

術語“嵌合抗體”是這樣的抗體分子，其中(a)將恆定區或其部分改變、替換或交換，從而抗原結合位點與不同的或改變的類別、效應子功能和/或物種的恆定區或賦予嵌合抗體新性能的完全不同的分子(例如，酶、毒素、激素、生長因子、藥物)等連接；或(b)將可變區或其部分用具有不同或改變的抗原特異性的可變區改變、替換或交換。例如，小鼠抗體可以藉由將其恆定區更換為來自人免疫球蛋白的恆定區進行修飾。由於更換為人類恆定區，該嵌合抗體可以保留其在識別抗原方面的特異性，同時如與原始小鼠抗體相比，具有在人類中降低的免疫原性。

“人源化抗體”是一種保留非人類抗體(例如小鼠單株抗體)的抗原特異性反應性，同時例如在作為治療藥對人施用時免疫原性較低的抗體。這可以例如藉由保留非人類抗原結合位點並將抗體的剩餘部分替換成它們的人類相應部分(即，將恆定區以及可變區中不參與結合的部分替換為人類抗體的相應部分)來實現。

術語“Fc結構域”或“Fc區”在本文中用來定義免疫球蛋白重鏈的含有至少一部分恆定區的C端區域。該術語包括天然序列Fc區和變體Fc區。天然的免疫球蛋白“Fc結構域”包含兩個或三個恆定結構域，即CH2結構域、CH3結構域和可選的CH4結構域。例如，在天然抗體中，免疫球蛋白Fc結構域包含源自IgG、IgA和IgD類抗體的兩條重鏈的第二和第三恆定結構域(CH2結構域和CH3結構域)；或者包含源自IgM和IgE類抗體的兩條重鏈的第二、第三和第四恆定結構域(CH2結構域、CH3結構域和CH4結構域)。除非本文中另外說明，否則Fc區或重鏈恆定區中的胺基酸殘基編號根據如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interes，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991中所述的EU編號體系(也稱作EU索引)進行編號。

如本文所述的“保守改變”包括對多肽序列的置換、缺失或添加，但不實質性改變多肽序列的期望功能活性。在一些實施方案中，保守改變為保守置換。保守置換是指一個胺基酸經相同類別內的另一胺基酸置換，例如一個酸性胺基酸經另一酸性胺基酸置換，一個鹼性胺基酸經另一鹼性胺基酸置換，或一個中性胺基酸經另一中性胺基酸置換。例如，保守置換常常導致某個胺基酸置換為化學上相似的胺基酸。提供功能上相似胺基酸的保守置換表是本領域熟知的。以下列出了8組含有互為保守替換的胺基酸：1)丙胺酸(A)、甘胺酸(G)；2)天冬胺酸(D)、谷胺酸(E)；3)天冬醯胺(N)、穀胺醯胺(Q)；4)精胺酸(R)、賴胺酸(K)；5)異亮胺酸(I)、亮胺酸(L)、甲硫胺酸(M)、纈胺酸(V)；6)苯丙胺酸(F)、酪胺酸(Y)、色胺酸(W)；7)絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)；和8)半胱胺酸(C)、甲硫胺酸(M)。在一些實施方案中，術語“保守改變”在應用於抗體分子胺基酸序列時用於指不顯著影響或改變含有胺基酸序列的本發明抗體分子的目的抗原結合特徵的胺基酸修飾。例如保守改變變體相對於親本抗體保持對目的抗原至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或更高，例如100-110%或更高的結合親和力。

術語“載體”當在本文中使用時是指能夠增殖與其相連的另一個核酸的核酸分子。該術語包括作為自我複製核酸結構的載體以及結合到已經引入其的宿主細胞的基因組中的載體。一些載體能夠指導與其可操作相連的核酸的表達。這樣的載體在本文中被稱為“表達載體”。

“免疫綴合物”是與一個或多個其它物質(包括但不限於標記)綴合的抗體。

本文所述的術語“治療劑”涵蓋在預防或治療與OX40/OX40L介導的途徑的不適當啟動相關疾病中有效的任何物質，包括細胞因子、其它抗體、小分子藥物或免疫調節劑(例如免疫抑制劑)。

術語“小分子藥物”是指低分子量的能夠調節生物過程的有機化合物。“小分子”被定義為分子量小於10kD、通常小於2kD和較佳小於1kD的分子。小分子包括但不限於無機分子、有機分子、含無機組分的有機分子、含放射性原子的分子、合成分子、肽模擬物和抗體模擬物。作為治療劑，小分子可以比大分子更能透過細胞、對降解更不易感和更不易於引發免疫應答。

本文使用的術語“免疫調節劑”指抑制或調節免疫應答的天然或合成活性劑或者藥物。免疫應答可以是體液應答或細胞應答。免疫調節劑包含免疫抑制劑。

本文使用的“免疫抑制劑”、“免疫抑制藥物”或“免疫抑制物”是在免疫抑制治療中用於抑制或阻止免疫系統活性的治療劑。

術語“有效量”指本發明的抗體或片段或綴合物或組成物或組合的這樣的量或劑量，其以單一或多次劑量施用患者後，在需要治療或預防的患者中產生預期效果。

“治療有效量”指以需要的劑量並持續需要的時間段，有效實現所需治療結果的量。治療有效量也是這樣的一個量，其中抗體或抗體片段或其綴合物或組成物或組合的任何有毒或有害作用不及治療有益作用。相對於未治療的物件，“治療有效量”較佳地抑制可度量參數(例如T細胞活化)至少約20%、更佳地至少約40%、甚至更佳地至少約50%、60%或70%。在一些實施方案中如本文所使用的術語“治療有效量”意圖限定在治療方案中治療狀況(例如自身免疫、過敏、發炎、GVHD或抗移植、藥物或排斥反應)或降低或消除免疫應答必需的治療的量。

“預防有效量”指以需要的劑量並持續需要的時間段，有效實現所需預防結果的量。通常，由於預防性劑量在物件中在疾病較早階段之前或在疾病較早階段使用，故預防有效量將小於治療有效量。在一些實施方案中如本文所使用的術語“預防有效量”是意圖限定治療方案中預防狀況或疾病的進展和症狀(例如自身免疫，過敏，發炎，GVHD或抗移植、藥物或排斥反應)必需的預防的量，

術語“宿主細胞”、“宿主細胞系”和“宿主細胞培養物”可交換地使用且是指其中引入外源核酸的細胞，包括這種細胞的後代。宿主細胞包括“轉化體”和“轉化的細胞”，其包括初級轉化的細胞和來源於其的後代，而不考慮傳代的數目。後代在核酸內容上可能與親本細胞不完全相同，而是可以包含突變。本文中包括在最初轉化的細胞中篩選或選擇的具有相同功能或生物學活性的突變體後代。

本文所使用的術語“標記”是指被直接或間接綴合或融合至試劑(諸如多核苷酸探針或抗體)並且促進其所綴合或融合的試劑的檢測的化合物或組成物。標記本身可以是可檢測的(例如，放射性同位素標記或螢光標記)或在酶促標記的情況下可以催化可檢測的受質化合物或組成物的化學改變。術語旨在涵蓋藉由將可檢測物質偶聯(即，物理連接)至探針或抗體來直接標記探針或抗體以及藉由與直接標記的另一種試劑反應來間接標記探針或抗體。

本文所用的術語“個體”“物件”或“受試者”可互換使用，包括哺乳動物。哺乳動物包括但不限於，家養動物(例如，牛，羊，貓，狗和馬)，靈長類動物(例如，人和非人靈長類動物如猴)，兔，以及齧齒類動物(例如，小鼠和大鼠)。在一些實施方案中，個體或受試者是人。

本文所用的術語“受試者/患者/個體樣品”指從患者或受試者得到的細胞或流體的集合。組織或細胞樣品的來源可以是實體組織，像來自新鮮的、冷凍的和/或保存的器官或組織樣品或活檢樣品或穿刺樣品；血液或任何血液組分；體液，諸如腦脊液、羊膜液(羊水)、腹膜液(腹水)、或間隙液；來自受試者的妊娠或發育任何時間的細胞。組織樣品可能包含在自然界中天然不與組織混雜的化合物，諸如防腐劑、抗凝劑、緩衝劑、固定劑、營養物、抗生素、等等。

“編碼抗OX40L抗體或其片段的核酸”是指一個或多個核酸分子，其編碼抗體重鏈或輕鏈(或其片段，例如重鏈可變區或輕鏈可變區)，包括在單一載體或分開的載體中的這樣的核酸分子，以及存在於宿主細胞中的一個或多個位置處的這樣的核酸分子。

胺基酸序列的“同一性百分數(%)”是指將候選序列與本說明書中所示的具體胺基酸序列進行比對並且如有必要的話為達到最大序列同一性百分數而引入空位後，並且不考慮任何保守置換作為序列同一性的一部分時，候選序列中與本說明書中所示的具體胺基酸序列的胺基酸殘基相同的胺基酸殘基百分數。在一些實施方案中，本發明考慮本發明抗體分子的變體，該變體相對於在本文中具體揭露的抗體分子及其序列而言具有相當程度的同一性，例如同一性為至少80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%或更高。該變體可以包含保守性改變。

術語“藥用輔料”指與活性物質一起施用的稀釋劑、佐劑(例如弗氏佐劑(完全和不完全的))、賦形劑、載體或穩定劑等。

術語“醫藥組成物”指這樣的組成物，其以允許包含在其中的活性成分的生物學活性有效的形式存在，並且不包含對施用該組成物的受試者具有不可接受的毒性的另外的成分。

如本文所用的，術語“藥物組合或組合產品”是指非固定組合產品或固定組合產品，包括但不限於藥盒/試劑盒、醫藥組成物。術語“非固定組合”意指活性成分(例如，(i)本發明的抗體、以及(ii)其它治療劑)以分開的實體被同時、無特定時間限制或以相同或不同的時間間隔、依次地施用於患者，其中這類施用在患者體內提供預防或治療有效水準的兩種或更多種活性劑。術語“固定組合”意指兩種或更多種活性劑以單個實體的形式被同時施用於患者。較佳對兩種或更多種活性劑的劑量和/或時間間隔進行選擇，從而使各部分的聯合使用能夠在治療疾病或病症時產生大於單獨使用任何一種成分所能達到的效果。各成分可以各自呈單獨的製劑形式，其製劑形式可以相同也可以不同。

術語“組合療法”是指施用兩種或更多種治療劑或治療方式(例如放射療法或手術)以治療本文所述疾病。這種施用包括以基本上同時的方式共同施用這些治療劑，例如以具有固定比例的活性成分的單一膠囊。或者，這種施用包括對於各個活性成分在多種或在分開的容器(例如片劑、膠囊、粉末和液體)中的共同施用。粉末和/或液體可以在施用前重構或稀釋至所需劑量。此外，這種施用還包括以大致相同的時間或在不同的時間以順序的方式使用每種類型的治療劑。在任一情況下，治療方案將提供藥物組合在治療本文所述的病症或病狀中的有益作用。

用於本文時，“治療”指減緩、中斷、阻滯、緩解、停止、降低、或逆轉疾病的症狀、併發症、或生化指徵的發作、緩解症狀或阻止或抑制疾病、病狀或病症的進一步發展。

用於本文時，“預防”包括對疾病或病症或特定疾病或病症的症狀的發生或發展的抑制。

II 抗體

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段在蛋白水準和細胞水準能有效阻斷OX40L與其受體OX40的相互作用例如結合，和/或阻斷OX40信號啟動。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體其抗原結合片段能有效抑制T細胞的啟動、增殖和/或分化，例如抑制T細胞對於炎症因子如白介素如IL5和/或IL3的分泌水準，或抑制Th2炎症反應。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體其抗原結合片段能夠維持移植物抗宿主病個體的體重(或保持其體重增長)，令其無臨床症狀，降低T細胞的活化，和/或抑制其炎症因子(例如干擾素如IFNγ或白介素如IL-6)的產生。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段包含3個來自重鏈可變區的互補決定區(HCDR)，HCDR1、HCDR2和HCDR3。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段包含3個來自輕鏈可變區的互補決定區(LCDR)，LCDR1、LCDR2和LCDR3。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段包含3個來自重鏈可變區的互補決定區(HCDR)和3個來自輕鏈可變區的互補決定區(LCDR)。

在一些方面中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(VH)。在一些方面中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變區(VH)。在一些方面中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區(VH)。在一些實施方案中，該重鏈可變區包含3個來自重鏈可變區的互補決定區(CDR)，HCDR1、 HCDR2和HCDR3。在一些實施方案中，該輕鏈可變區包含3個來自輕鏈可變區的互補決定區(CDR)，LCDR1、LCDR2和LCDR3。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段還包含抗體重鏈恆定區。在一些實施方案中，本發明抗OX40L抗體或其抗原結合片段還包含抗體輕鏈恆定區。在一些實施方案中，本發明抗OX40L抗體或其抗原結合片段還包含重鏈恆定區和輕鏈恆定區。

在一些實施方案中，本發明重鏈可變區：

(i)包含與選自SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：14的胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；或者

(ii)包含選自SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：14的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；或者

(iii)包含與選自SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：14的胺基酸序列相比具有1個或多個(較佳不超過10個，更佳不超過5、4、3、2、1個)的胺基酸改變(較佳胺基酸置換，更佳胺基酸保守置換)的胺基酸序列由該胺基酸序列組成，較佳地，該胺基酸改變不發生在CDR區中。

在一些實施方案中，本發明的輕鏈可變區

(i)包含與選自SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：18的胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；或者

(ii)包含選自SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：18的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；或者

(iii)包含與選自SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：18的胺基酸序列相比具有1個或多個(較佳不超過10個，更佳不超過5、4、3、2、1個)的胺基酸改變(較佳胺基酸置換，更佳胺基酸保守置換)的胺基酸序列由該胺基酸序列組成，較佳地，該胺基酸改變不發生在CDR區中。

在一些實施方案中，本發明的3個來自重鏈可變區的互補決定區(HCDR)，HCDR1、HCDR2和HCDR3選自

(i)如SEQ ID NO：4或14所示的VH中所含的三個互補決定區域HCDR1、HCDR2和HCDR3；

(ii)相對於(i)中任一項的序列，在該三個HCDR區上共包含至少一個且不超過5、4、3、2或1個胺基酸改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的序列，

例如其中該HCDR可以根據任何確定CDR的方案來確定，例如分別根據Kabat、AbM、Chothia、Contact或IMGT方案或其組合確定；

例如，該HCDR1根據AbM方案確定的，且該HCDR2和HCDR3分別是根據Kabat方案確定的。

在一些實施方案中，本發明的3個來自輕鏈可變區的互補決定區(LCDR)，LCDR1、LCDR2和LCDR3選自

(i)如SEQ ID NO：8或18所示的VL中所含的三個互補決定區域LCDR1、LCDR2和LCDR3，或

(ii)相對於(i)中任一項的序列，在該三個LCDR區上共包含至少一個且不超過5、4、3、2或1個胺基酸改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的序列，

例如其中該LCDR可以根據任何確定CDR的方案來確定，例如分別根據Kabat、AbM、Chothia、Contact或IMGT方案或其組合確定；

例如，該LCDR1、2和3分別是根據Kabat方案確定。

在一些實施方案中，HCDR1包含SEQ ID NO：1或11的胺基酸序列，或由該胺基酸序列組成，或者HCDR1包含與SEQ ID NO：1或11的胺基酸序列相比具有一個、兩個或三個改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的胺基酸序列。

在一些實施方案中，HCDR2包含SEQ ID NO：2或12的胺基酸序列，或由該胺基酸序列組成，或者HCDR2包含與SEQ ID NO：2或12的胺基酸序列相比具有一個、兩個或三個改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的胺基酸序列。

在一些實施方案中，HCDR3包含SEQ ID NO：3或13的胺基酸序列，或由該胺基酸序列組成，或者HCDR3包含與SEQ ID NO：3或15的胺基酸序列相比具有一個、兩個或三個改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的胺基酸序列。

在一些實施方案中，LCDR1包含SEQ ID NO：5或15的胺基酸序列，或由該胺基酸序列組成，或者LCDR1包含與SEQ ID NO：5或15的胺基酸序列相比具有一個、兩個或三個改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的胺基酸序列。

在一些實施方案中，LCDR2包含SEQ ID NO：6或16的胺基酸序列，或由該胺基酸序列組成，或者LCDR2包含與SEQ ID NO：6 或16的胺基酸序列相比具有一個、兩個或三個改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的胺基酸序列。

在一些實施方案中，LCDR3包含SEQ ID NO：7或17的胺基酸序列，或由該胺基酸序列組成，或者LCDR3包含與SEQ ID NO：7或17的胺基酸序列相比具有一個、兩個或三個改變(較佳胺基酸置換，較佳保守置換)的胺基酸序列。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段還包含抗體重鏈。在一些實施方案中，本發明抗OX40L抗體或其抗原結合片段還包含抗體輕鏈。在一些實施方案中，本發明抗OX40L抗體或其抗原結合片段還包含重鏈和輕鏈。在一些實施方案中，本發明的抗體重鏈包含重鏈可變區和重鏈恆定區，或由重鏈可變區和重鏈恆定區組成。在一些實施方案中，本發明的抗體輕鏈包含輕鏈可變區和輕鏈恆定區，或由輕鏈可變區和輕鏈恆定區組成。在一些實施方案中，本發明的抗體包含兩條重鏈和兩條輕鏈，或由兩條重鏈和兩條輕鏈組成。

在一些實施方案中，本發明的抗體重鏈恆定區為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重鏈恆定區，較佳的IgG4的重鏈恆定區。在一些實施方案中，本發明的抗體輕鏈恆定區為lambda或Kappa輕鏈恆定區，較佳的Kappa輕鏈恆定區。

在一些實施方案中，本發明的抗體的重鏈恆定區包含Fc區或突變的Fc區。

在一些實施方案中，Fc區為來自人的IgG Fc，例如，來自人IgG1的Fc、來自人IgG2的Fc、來自人IgG3的Fc或來自人IgG4的Fc。在一個實施方案中，Fc區來自人IgG4。在一個實施方案中，Fc區包含胺基酸序列SEQ ID NO：28或與其具有至少90%同一性，例如95%、96%、97%、99%或更高的同一性的胺基酸序列或由其組成。

在一個實施方案中，在Fc區的效應子功能(例如Fc區的補體啟動功能)的特性上修飾Fc區。在一個實施方案中，該效應子功能相對於野生同種型Fc區已經被降低或消除。在一個實施方案中，藉由選自以下的方法來降低或消除效應子功能：使用天然具有降低或消除的效應子功能的Fc同種型、和Fc區修飾。Fc區還可以包含改變對一種或多種Fc受體的結合親和力的修飾。

在一個實施方案中，該Fc受體是Fcγ受體，特別地是人Fcγ受體。在一些實施方案中，該Fc區包含降低與Fcγ受體結合的突變。該Fc區還包含改善抗體穩定性的突變，例如消除IgG的異質性的突變。在一些實施方案中，該突變能夠有助於減少抗體在體內發生鏈交換的幾率。在一些是實施方案中，該突變為將第228位的絲胺酸突變位脯胺酸。因此在一個較佳的實施方案中，本發明的Fc區具有S228P(EU編號)突變。在一些實施方案中，本發明的抗體或其片段的Fc區為包含S228P突變的IgG4 Fc區。

因此，在一個較佳的實施方案中，本發明的Fc區包含SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列，或包含與SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列具有至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%的同一性的胺基酸序列且具有S228P突變。

在一些較佳的實施方案中，本發明的抗體重鏈恆定區

(i)包含與選自SEQ ID NO：21或29的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；

(ii)包含選自SEQ ID NO：21或29的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；或者

(iii)包含與選自SEQ ID NO：21或29的胺基酸序列相比具有1個或多個(較佳不超過20個或10個，更佳不超過5、4、3、2、1個)的胺基酸改變(較佳胺基酸置換，更佳胺基酸保守置換)的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。

在一些較佳的實施方案中，本發明的抗體重鏈恆定區包含與SEQ ID NO：21的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列，且具有S228P突變。在一些較佳的實施方案中，本發明的抗體重鏈恆定區包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。

在一些實施方案中，本發明的抗體輕鏈恆定區

(i)包含與SEQ ID NO：22的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；

(ii)包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；或者

(iii)包含與SEQ ID NO：22的胺基酸序列相比具有1個或多個(較佳不超過20個或10個，更佳不超過5、4、3、2、1個)的胺基酸改變(較佳胺基酸置換，更佳胺基酸保守置換)的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。

在一些具體的實施方案中，本發明的抗OX40L抗體包含第一重鏈互補決定區(HCDR1)、第二重鏈互補決定區(HCDR2)、第三重鏈互補決定區(HCDR3)以及第一輕鏈互補決定區(LCDR1)、第二輕鏈互補決定區(LCDR2)和第三輕鏈互補決定區(LCDR3)，其中，

(ii)其中HCDR1、HCDR2、HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3分別包含SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列或分別由SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列組成。

在一些實施方案中，本發明的VH包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，以及該VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，該HCDR1、HCDR2、HCDR3分別包含SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列或分別由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列組成，該LCDR1、LCDR2和LCDR3分別包含SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列或分別由SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列組成。

在一些實施方案中，本發明的VH包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，以及該VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，該HCDR1、HCDR2、HCDR3分別包含SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列或分別由SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列組成，該LCDR1、LCDR2和LCDR3分別包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列或分別由SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列組成。

在一些實施方案中，本發明的抗體或其抗原結合片段，其包含：

(i)包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列或與其具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成的VH，和/或包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列與其具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成的VL；

(ii)包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列或與其具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成的VH，和/或包含SEQ ID NO：18所示的胺基酸序列與其具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成的VL。

在一些實施方案中，本發明的抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中

(i)重鏈可變區包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列或由其組成，且輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列或由其組成；或者

(ii)重鏈可變區包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列或由其組成，且輕鏈可變區包含SEQ ID NO：18所示的胺基酸序列或由其組成。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段還包含抗體重鏈。在一些實施方案中，本發明抗OX40L抗體或其抗原結合片段還包含抗體輕鏈。在一些實施方案中，本發明抗OX40L抗體或其抗原結合片段還包含重鏈和輕鏈。

在一些實施方案中，該重鏈包含

(i)包含與選自SEQ ID NO：9或19的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；

(ii)包含選自SEQ ID NO：9或19的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；或者

(iii)包含與選自SEQ ID NO：9或19的胺基酸序列相比具有1個或、多個(較佳不超過20個或10個，更佳不超過5、4、3、2、1個)的胺基酸改變(較佳胺基酸置換，更佳胺基酸保守置換)的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。

在一些實施方案中，該輕鏈包含

(i)包含與選自SEQ ID NO：10或20的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；

(ii)包含選自SEQ ID NO：10或20的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；或者

(iii)包含與選自SEQ ID NO：10或20的胺基酸序列相比具有1個或多個(較佳不超過20個或10個，更佳不超過5、4、3、2、1個)的胺基酸改變(較佳胺基酸置換，更佳胺基酸保守置換)的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。

在一些實施方案中，本發明的抗體或其抗原結合片段包含重鏈和輕鏈，其中

(i)該重鏈包含與SEQ ID NO：9的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；和/或該輕鏈包含與SEQ ID NO：10的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；

(ii)該重鏈包含與SEQ ID NO：19的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；和/或該輕鏈包含與SEQ ID NO：20的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。

(i)該重鏈包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列或由其組成的，且該輕鏈包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列或由其組成；或者

(ii)該重鏈包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列或由其組成的，且該輕鏈包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列或由其組成。

在本發明的一個實施方案中，本文所述的胺基酸改變包括胺基酸的置換、插入或缺失。較佳的，本文所述的胺基酸改變為胺基酸置換，較佳地保守置換。

在較佳的實施方案中，本發明所述的胺基酸改變發生在CDR外的區域(例如在FR中)。更佳地，本發明所述的胺基酸改變發生在重鏈可變區外和/或輕鏈可變區外的區域。

在某些實施方案中，本文中所提供的抗體經改變以增加或降低抗體經糖基化的程度。對抗體的糖基化位點的添加或缺失可藉由改變胺基酸序列以便產生或移除一或多個糖基化位點而方便地實現。當抗體包含Fc區時，可以改變附著於其的糖類。在一些應用中，除去不想要的糖基化位點的修飾可以是有用的，例如除去岩藻糖基序以提高抗體依賴性細胞毒性(ADCC)功能。在其它應用中，可以進行半乳糖苷化修飾以修飾補體依賴性細胞毒性(CDC)。

在某些實施方案中，可能需要產生經半胱胺酸工程改造的抗體，例如“硫代MAb”，其中抗體的一或多個殘基經半胱胺酸殘基置換。

在某些實施方案中，本文中所提供的抗體可進一步經修飾為含有本領域中已知且輕易獲得的其他非蛋白質部分。適合抗體衍生作用的部分包括，但不限於，水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性實例包括，但不限於，聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二烷、聚-1,3,6-三烷、乙烯/馬來酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)、及葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚環氧丙烷/氧化乙烯共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇、及其混合物。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體或其抗原結合片段具有以下一個或多個特性：

(i)顯示與本發明抗體對OX40L相同或相似的結合親和力和/或特異性；

(ii)抑制(例如，競爭性抑制)本發明抗體與OX40L的結合；

(iii)與本發明抗體結合相同或重疊的表位；

(iv)與本發明抗體競爭結合OX40L；

(v)具有本發明抗體的一個或多個生物學特性。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體是IgG1形式的抗體或IgG2形式的抗體或IgG3形式的抗體或IgG4形式的抗體，較佳的，為IgG4形式的抗體。

在一些實施方案中，抗OX40L抗體是單株抗體。

在一些實施方案中，抗OX40L抗體是人源化的。

在一些實施方案中，抗OX40L抗體是嵌合抗體。

在一個實施方案中，本發明的抗OX40L抗體還涵蓋其抗體片段(例如抗原結合片段)，較佳地選自以下的抗體片段：Fab、Fab’、Fab’-SH、Fv、單鏈抗體(例如scFv)、(Fab’)2、單結構域抗體例如VHH、dAb(domain antibody)、雙價抗體或線性抗體。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體還涵蓋特異性結合OX40L的多特異性抗體，例如雙特異性抗體。

在一些實施方案中，本發明的抗OX40L抗體是全長抗體。

III.本發明的核酸以及包含其的宿主細胞

在一方面，本發明提供編碼本發明的抗體或其抗原結合片段的任一條鏈或任何單體或結構域的核酸。可以採用本領域熟知的方法，產生編碼各條鏈的多核苷酸序列。例如，當從適宜的表達載體表達時，由該核酸編碼的多肽能夠顯示人OX40L抗原結合能力。例如，在一些實施方案中，該編碼重鏈和/或輕鏈的可變區的核酸在讀框中與編碼重鏈和/或輕鏈的恆定區的核酸可操作連接，從而當從適宜的表達載體表達時，產生編碼該抗體重鏈和/或的核酸。

在一方面，本發明提供了編碼本文所述任何抗OX40L抗體或其片段的核酸。該核酸可以包含編碼抗體的輕鏈可變區和/或重鏈可變區的胺基酸序列的核酸，或包含編碼抗體的輕鏈和/或重鏈的胺基酸序列的核酸。

例如，本發明的核酸包含編碼選自SEQ ID NO：4、8-10、14和18-20中任一項所示胺基酸序列的核酸，或編碼與選自SEQ ID NO：4、8-10、14和18-20中任一項所示的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的同一性的胺基酸序列的核酸。如本領域具有通常知識者明瞭的，因為密碼子簡併性，每一個抗體或多肽胺基酸序列可以由多種核酸序列編碼。編碼本發明分子的核酸序列可以採用本領域熟知的方法，例如藉由從頭固相DNA合成，或藉由PCR擴增而產生為了便於生產和純化，可以在抗體的重鏈和/或輕鏈的N端融合分泌性信號肽，和/或利於純化的標籤肽

本發明也提供包含本發明核酸的載體。在一個實施方案中，載體是表達載體，例如真核表達載體。載體包括但不限於病毒、質粒、黏粒、λ噬菌體或酵母人工染色體(YAC)。在較佳的實施方案中，本發明的表達載體是pcDNA載體，例如pcDNA3.1表達載體。

在一個實施方案中，提供包含該載體的宿主細胞。本發明也提供包含該核酸或該載體的宿主細胞。適用於複製並支持本發明抗體表達的宿主細胞是本領域中公知的。可以用特定的表達載體轉染或轉導這類細胞，並且可以生長大量的含載體細胞以用於接種大規模發酵罐，從而獲得充足量的抗體用於臨床應用。用於選殖或表達編碼抗體的載體的適當宿主細胞包括本文描述的原核或真核細胞。例如，抗體可在細菌中產生，特別當不需要糖基化和Fc效應子功能時。在表達後，抗體可以從可溶級分中的細菌細胞糊狀物分離，並且可以進一步純化。

在一個實施方案中，宿主細胞是真核的。在另一個實施方案中，宿主細胞選自酵母細胞、哺乳動物細胞(例如CHO細胞(例如CHO-S或CHO-K)或293細胞(例如293F或HEK293細胞))或適用於製備抗體或其片段的其它細胞。在一個實施方案中，宿主細胞是原核的，例如是細菌，例如大腸桿菌。

例如，真核微生物諸如絲狀真菌或酵母是關於編碼抗體的載體的合適選殖或表達宿主。例如，糖基化途徑已經進行“人源化”的真菌和酵母菌株導致產生具有部分或完全人糖基化模式的抗體。適於表達糖基化抗體的宿主細胞也衍生自多細胞生物體(無脊椎動物和脊椎動物)。也可以將脊椎動物細胞用作宿主。例如，可以使用被改造以適合於懸浮生長的哺乳動物細胞系。有用的哺乳動物宿主細胞系的其它實例是用SV40轉化的猴腎CV1系(COS-7)；人胚腎系(HEK293、293F或293T細胞)等。其它有用的哺乳動物宿主細胞系包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包括DHFR-CHO細胞、CHO-S細胞、ExpiCHO等；以及骨髓瘤細胞系如Y0，NS0和Sp2/0。本領域已知適合產生抗體的哺乳動物宿主細胞系。

IV.本發明的抗體分子的生產和純化

在一個實施方案中，本發明提供製備本發明抗體分子或其片段(較佳的抗原結合片段)的方法，其中該方法包括在適於表達編碼本發明抗體分子或其片段(較佳的抗原結合片段)的核酸的條件下培養該宿主細胞，以及視需要地分離該抗體或其片段(例如抗原結合片段)。在某個實施方案中，該方法還包括從宿主細胞回收本發明抗體分子或其片段(例如抗原結合片段)。

可以將編碼本發明抗體的多肽鏈的多核苷酸插入一個或多個載體中以便進一步在宿主細胞中株和/或表達。可以使用所屬技術領域具有通常知識者熟知的方法來構建表達載體。一旦已經製備了用於表達的包含本發明的一種或多種核酸分子的表達載體，則可以將表達載體轉染或引入適宜的宿主細胞中。多種技術可以用來實現這個目的，例如，原生質體融合、磷酸鈣沉澱、電穿孔、逆轉錄病毒的轉導、病毒轉染、基因槍、基於脂質體的轉染或其他常規技。

如本文所述製備的抗體分子可以藉由已知的現有技術如高效液相色譜、離子交換層析、凝膠電泳、親和層析、大小排阻層析等純化。用來純化特定蛋白質的實際條件還取決於淨電荷、疏水性、親水性等因素，並且這些對本領域具有通常知識者是顯而易見的。可以藉由多種熟知分析方法中的任一種方法確定本發明的抗體分子的純度，該熟知分析方法包括尺寸排阻層析、凝膠電泳、高效液相色譜等。

V.測定法

可以藉由本領域中已知的多種測定法對本文中提供的抗OX40L抗體鑑定，篩選，或表徵其物理/化學特性和/或生物學活性。

本發明還提供了用於鑑定具有生物學活性的抗OX40L抗體的測定法。生物學活性可以包括例如結合OX40L(例如結合人OX40L)，對OX40/OX40L信號通路的抑制、對OX40與OX40L的結合的阻斷、對T細胞啟動、增殖和/或分化(例如向Th2分化)的抑制、對炎症因子產生的抑制以及對免疫系統疾病(例如移植物抗宿主病)的治療作用等。還提供在體內和/或在體外具有此類生物學活性的抗體。

對於上述生物學活性的測定，可以具體參見實施例中給出的示例性的測定方法。

可以理解的是，能夠使用本發明的免疫綴合物替換或補充抗OX40L抗體來進行任何上述測定法。

可以理解的是，能夠使用抗OX40L抗體和別的治療劑的組合來進行任何上述測定法。

VI.免疫綴合物

在一些實施方案中，本發明提供了免疫綴合物，其包含本文中提供的任何抗OX40L抗體和其它物質，例如適合與OX40L抗體形成免疫綴合物的活性劑或標記。在一些實施方案中，該適合與OX40L抗體形成免疫綴合物的活性劑可以是，例如毒素、小分子藥物、細胞毒性劑、細胞凋亡劑、螯合劑、免疫調節劑，例如抗炎劑或免疫抑制劑。

在一些實施方案中，該免疫綴合物是抗體藥物偶聯物(ADC)。

VII.醫藥組成物和藥物製劑

在一些實施方案中，本發明提供包含本文所述的任何抗OX40L抗體或其片段(較佳地其抗原結合片段)或其免疫綴合物的組成物，較佳地組成物為醫藥組成物。在一個實施方案中，該組成物還包含藥用輔料。在一個實施方案中，組成物，例如，醫藥組成物，包含本發明的抗OX40L抗體或其片段或其免疫綴合物，以及一種或多種其它治療劑的組合。

本發明還包括包含抗OX40L抗體或其免疫綴合物的組成物(包括醫藥組成物或藥物製劑)，或包含編碼抗OX40L抗體的多核苷酸的組成物(包括醫藥組成物或藥物製劑)。在某些實施方案中，組成物包含一種或多種結合OX40L的抗體或其片段，或一種或多種編碼一種或多種抗OX40L的抗體或其片段的多核苷酸。這些組成物還可以包含合適的藥用輔料，如本領域中已知的藥用載體、藥用賦形劑，包括緩衝劑。

如本文所用，“藥用載體”包括生理上相容的任何和全部溶劑、分散介質、等滲劑和吸收延遲劑等。

對於藥用輔料的使用及其用途，亦參見“Handbook of Pharmaceutical Excipients”，第八版，R.C.Rowe,P.J.Seskey和S.C.Owen,Pharmaceutical Press,London,Chicago。

本發明的組成物可以處於多種形式。這些形式例如包括液體、半固體和固體劑型，如液態溶液劑(例如，可注射用溶液劑和可輸注溶液劑)、散劑或混懸劑、脂質體劑和栓劑。較佳的形式取決於預期的施用模式和治療用途。

可以藉由將具有所需純度的本發明的抗體與一種或多種視需要的藥用輔料混合來製備包含本文所述的抗體的藥物製劑，較佳地以凍乾製劑或水溶液的形式。

本發明的醫藥組成物或製劑還可以包含超過一種活性成分，該活性成分是被治療的特定適應證所需的，較佳具有不會不利地彼此影響的互補活性的那些活性成分。例如，理想的是還提供其它治療劑，例如細胞因子、小分子藥物、免疫調節劑(例如免疫抑制劑或抗炎劑)或其他抗體等。該活性成分以對於目的用途有效的量合適地組合存在。

可製備持續釋放製劑。持續釋放製劑的合適實例包括含有抗體的固體疏水聚合物的半滲透基質，該基質呈成形物品，例如薄膜或微囊形式。

VIII.藥物組合和藥盒

在一些實施方案中，本發明還提供了藥物組合或藥物組合產品，其包含本發明的抗OX40L抗體或其片段(較佳的抗原結合片段)，或其免疫綴合物，以及一種或多種其它治療劑(細胞因子、小分子藥物、免疫調節劑(例如免疫抑制劑或抗炎劑)或其他抗體等)。

本發明的另一個目的是提供一種成套藥盒，其包含本發明的藥物組合，較佳地該藥盒為藥物劑量單元形式。由此可以依據給藥方案或藥物施用間隔提供劑量單元。

在一個實施方案中，本發明的成套藥盒在同一包裝內包含：

- 含有包含抗OX40L抗體或其片段的醫藥組成物的第一容器；

- 含有包含其它治療劑的醫藥組成物的第二容器。

IX.用途和方法

在一些實施方案中，本發明的抗體作為單藥或聯合用藥預防或治療個體中涉及OX40L/OX40介導的途徑的異常啟動相關疾病或病症的方法。

在一些實施方案中，本發明的抗體能夠藉由阻斷OX40L-OX40信號進而抑制T細胞啟動反應以降低相關免疫反應，降低與自身免疫反應過激相關的疾病或症狀。

在一些實施方案中，該疾病或病症的患者中，相比健康個體，具有OX40L/OX40所介導的免疫系統過激。在一些實施方案中，該疾病或病症的患者中的細胞(例如抗原呈遞細胞)上具有增加的OX40L的表達和/或在患者中的細胞(例如T細胞，如啟動的T細胞)上具有增加的OX40的表達，例如相比健康個體的相應細胞。

在一些實施方案中，該疾病或病症選自自身免疫類疾病或移植物抗宿主病。在一些是實施方案中，自身免疫病類疾病包括但不限於過敏性皮炎、哮喘、系統性紅斑狼瘡、肖葛籣綜合症、免疫性血小板減少性紫癜、多發性硬化、狼瘡性腎炎、肌萎縮性脊髓側索硬化症、類風濕關節炎、非類風濕性關節炎、接觸性皮炎、高IgE綜合症、炎症腸病、重症肌無力、格蕾夫斯氏病、溶血性貧血、牛皮癬、特應性皮炎(例如中重度特應性皮炎)、變應性哮喘或特發性炎症疾病(CN106459196B)。

在一些實施方案中，本發明的抗體或抗體片段或免疫綴合物或組成物或產品會延遲病症和/或與病症相關的症狀的發作。

在一些實施方案中，本發明提供本發明的抗OX40L抗體或其片段或包含其的免疫綴合物或組成物在生產或製備藥物中的用途，該藥物用於本文所述的用途，例如用於預防或治療本文提及的相關疾病或病症。

在一些實施方案中，本文所述的預防或治療方法還包括向該受試者或個體組合施用本文揭露的抗體分子或醫藥組成物或免疫綴合物，以及一種或多種其它療法，例如治療方式和/或其它治療劑。在一些實施方案中，抗OX40L抗體或其片段(以及包含其的免疫綴合物、組成物、醫藥組成物、製劑等)還能與一種或多種其它療法例如治療方式和/或其它治療劑組合施用，用於本文所述的用途，例如用於預防和/或治療本文提及的相關疾病或病症。

在一些實施方案中，該治療劑選自細胞因子、小分子藥物、免疫調節劑(例如免疫抑制劑或抗炎劑)或其他抗體等。

在一些實施方案中，本文中描述的抗體可以與其他抗體組合，用於分別施用，例如，分別作為單獨的抗體分別施用，或連接時(例如作為雙特異性或多特異性抗體分子)施用。

此類組合療法涵蓋組合施用(例如兩種或更多種治療劑包含在同一配製劑或分開的配製劑中)，和分開施用，在該情況中，可以在施用別的治療劑和/或療法之前，同時，和/或之後發生本發明的抗體的施用。

本發明的抗體或其片段(以及包含其的免疫綴合物、組成物、醫藥組成物、製劑、組合產品等)可以藉由任何合適的方法給藥，包括腸胃外給藥，並且，如果局部治療需要，病灶內給藥。腸胃外注射或輸注包括肌內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下注射或輸注。

X.用於診斷和檢測的方法和組成物

在一個方面，本發明還涉及對本發明抗體或其抗原結合片段的用於診斷和檢測的方法和包含其的用於診斷和檢測的組成物。

在某些實施方案中，本文中提供的任何抗OX40L抗體或其片段(較佳的抗原結合片段)可以用於檢測OX40L在生物樣品中的存在。

術語“檢測”用於本文中時，包括定量或定性檢測，示例性的檢測方法可以涉及免疫組織化學、免疫細胞化學、流式細胞術(例如，FACS)、抗體分子複合的磁珠、ELISA測定法、PCR-技術(例如，RT-PCR)。在某些實施方案中，生物樣品是血、血清或生物來源的其他液體樣品。在某些實施方案中，生物樣品包含細胞或組織。

在一個實施方案中，提供用於診斷或檢測方法的抗OX40L抗體或其片段。

在另一個方面中，提供檢測OX40L在生物樣品中的存在的方法。在某些實施方案中，該方法包含檢測OX40L蛋白在生物樣品中的存在。在某些實施方案中，OX40L是人OX40L。在某些實施方案中，該方法包括將生物樣品與如本文所述的抗OX40L抗體或其片段在允許抗OX40L抗體或其片段與OX40L結合的條件下接觸，並檢測在抗OX40L抗體或其片段和OX40L之間是否形成複合物。複合物的形成表示存在OX40L。該方法可以是體外或體內方法。在一個實施方案中，抗OX40L抗體或其片段被用於選擇適合利用抗OX40L抗體或其片段的治療的受試者，例如其中OX40L是用於選擇該受試者的生物標記物。

在一些實施方案中，提供標記的抗OX40L抗體或其片段。標記包括但不限於，被直接檢測的標記或部分(如螢光標記、發色團標記、電子緻密標記、化學發光標記和放射性標記)，以及被間接檢測的部分，如酶或配體，例如，藉由酶促反應或分子相互作用。

在本文中提供的一些實施方案中，樣品是在用抗OX40L抗體或其片段治療之前獲得的。在一些實施方案中，樣品是在用其他療法之前獲得的。在一些實施方案中，樣品是在用其他療法治療過程中，或者用其他療法治療後獲得的。

在一些實施方案中，在治療之前，例如，在起始治療之前或在治療間隔後的某次治療之前檢測OX40L。

在一些實施方案中，提供了一種治療本發明疾病的方法，該方法包括：對受試者(例如，樣品)(例如，受試者樣品)檢驗OX40L的存在，因而確定OX40L值，將OX40L值與對照值比較，並且如果OX40L值大於對照值，則向受試者施用治療有效量的視需要與一種或多種其他療法組合的抗OX40L抗體或其片段(例如，本文所述的抗OX40L抗體或其片段)，因而治療該疾病。

本發明的這些以及其它方面和實施方案在圖式(圖式簡述緊隨其後)和以下的發明詳述中得到描述並且示例於以下實施例中。上文以及整個本申請中所論述的任何或所有特徵可以在本發明的各種實施方案中組合。以下實施例進一步說明本發明，然而，應理解實施例以說明而非限定的方式來描述，並且本領域具有通常知識者可以進行多種修改。

實施例

設備：Thermo Fisher MULTISKAN-FC(實施例1-3)

設備：螢光定量酶標儀SPARK(實施例1)

設備：BD FACSymphony A3 Flow Cytometer(實施例4)

試劑及原材料：

實施例1：抗OX40L抗體分子抑制OX40與OX40L的結合

採用融合瘤技術，以人GS-CHO細胞高表達humanOX40L的細胞系或者human OX40L融合蛋白(Human OX40 Ligand/TNFSF4 Protein,His Tag(active trimer)(MALS verified))，Acro)免疫小鼠，犧牲小鼠取脾臟並消化為單細胞懸液，將脾細胞與具有增殖能力的骨髓瘤細胞雜交，在選擇培養基的作用下，得到能夠表達陽性抗體的融合瘤細胞。再藉由體外流式細胞術和ELISA方法篩選，得到能夠結合OX40L以及阻斷OX40-OX40L相互作用的鼠源抗體。

CHO-OX40L細胞製備

將Human OX40L(SEQ ID NO：30)的編碼核酸序列構建在pXC17.4質粒中，使用PvuI(NEB)進行酶切，獲得線性載體。取用生長狀態良好的GS-CHO細胞進行電轉，體系中包含40ug載體和1×10^7細胞，電轉結束夠將細胞轉移至無GlutaMax的GS-CHO新鮮培養液中。待GS-CHO正常生長後，向培養體系中加入L-蛋胺酸亞碸亞胺，對細胞進行篩選。等待細胞活率恢復到95%以上，進行流式分選細胞，獲得GS-CHO-OX40L(CHO-OX40L)。

免疫

以人GS-CHO細胞高表達humanOX40L的細胞系(CHO-OX40L)或者human OX40L融合蛋白(Human OX40 Ligand/TNFSF4 Protein,His Tag(active trimer)(MALS verified))，Acro)免疫Balb/c小鼠(購自北京維通利華實驗動物技術有限公司)，每兩週免疫一次，免疫三次。

細胞融合

當血清效價滿足要求後，摘取小鼠的脾製備B淋巴細胞懸液，與SP2/0骨髓瘤細胞(ATCC)以1：2~1：1的比例混合後進行電融合。將融合後的細胞從電極皿中轉移入50ml離心管中，用含HAT的培養基稀釋細胞至1~2×10⁴個細胞/ml，96孔板中每孔加入100μl細胞懸液。融合後第7天更換篩選培養基，培養第10天(或更久，根據細胞生長狀態)後進行流式細胞術(FACS)檢測，篩選陽性株。

融合瘤細胞陽性株篩選(FACS)

藉由流式細胞儀(FACS)篩選出特異性表達抗OX40L抗體的融合瘤細胞。將待檢測細胞(GS-CHO humanOX40L)計數，並稀釋至1×10⁶個細胞/ml，向U型底96孔板中加入100μl/孔。500g離心5min，去除細胞培養基。將融合瘤96孔板培養上清加入U型板並重新懸浮細胞，每孔加100μl，冰上靜置30min。500g離心5min去除上清，PBS洗細胞1遍。500g 5min去除PBS，每孔加入100μl抗鼠Fab(Jackson Immunoresearch，Cat#115-545-006)的FITC標記的二抗(1：500稀釋於PBS中)，陽性對照抗體加入100μl抗人Fc的PE(Biolegend，Cat#409304)標記的二抗。冰上避光孵育30min。500g 5min去除上清，PBS洗細胞1遍。用50μl 1×PBS重新懸浮細胞，FACS上機檢測。

融合瘤細胞阻斷OX40/OX40L功能篩選

將上述融合瘤細胞陽性株挑選出來，進一步檢測其在阻斷OX40和OX40L結合中的活性。根據阻斷結果，選擇陽性株亞選殖。

陽性融合瘤細胞亞選殖

準備一塊96孔板，每孔加入200μl培養基，該培養基是在篩選培養基的基礎上將HAT更換成HT(Gibco,Cat#11067-030)，其餘配方相同。將上述融合篩選出的陽性孔的細胞製成細胞懸液，分別取100ul加入到第一排的每個孔中混勻，然後將第1排細胞懸液取100μl加入第2排，充分混勻後取100μl加入下一排；重複上述步驟，靜置96孔板30min，顯微鏡下觀察計數。取100個細胞對應的體積加入20ml培養基，並混勻鋪板，每孔200μl。一週後顯微鏡下觀察，判斷並標記出單株孔。待每孔細胞匯合度達到50%以上時，同上述FACS篩選方法以及阻斷實驗進行檢測，挑出目標陽性孔體外篩選，並採用生物膜薄層干涉測定技術(ForteBio)測定所獲得的融合瘤細胞上清與抗原的親和力。

融合瘤測序

將篩選得到的陽性株進行融合瘤測序，以得到抗體可變區序列。

RNA抽提：運用RNA抽提試劑盒(Macherey-Nagel，Cat#740984.250)提取融合瘤細胞RNA。取新鮮培養的細胞約5×10⁶個，300g離心5min，去除上清，沉澱中加入500μl LBP緩衝液，混勻至澄清。加入到DNA去除管中，11000rpm離心1min，收集流穿液。流穿液中加入100ul LBS，混勻。將澄清的溶液加入到RNA收集管中，11000rpm離心1min去除液體，加入200μl WB1，11000rpm離心1min去除液體。向RNA收集管加入600ul WB2，11000rpm離心1min去除液體。向RNA收集管加入250ul WB2，11000rpm離心2min，棄去液體，後將RNA收集管空轉1min，離心徹底去除液體。將RNA column打開蓋子並移至新的1.5mL EP管中，揮發乙醇2min，加入50ul DEPC treated ddH₂O，靜置2min後11,000g離心1min，收集沖提液。測定RNA濃度。

反轉錄PCR：利用PrimeScript^TM RT reagent Kit(Takara)反轉錄獲得cDNA，反應體系如下：5×PrimeScript Buffer 4ul，1×PrimeScript RT Enzyme Mix 1ul，Oligo dT Primer(50μM)1ul，Total RNA 8ul，ddH₂O 6ul。反應程式如下：37℃ 15min，85℃ 5s，4℃ hold。得到RT-PCR產物cDNA。

PCR擴增VH/VL序列：取兩份cDNA分別對重鏈和輕鏈可變區進行擴增。反應體系如下：ExTag(ExTaq Hot Start Version，Takara)0.5ul，10×ExTaq buffer 3ul，dNTP 4ul，Forward primer 2ul，Reverse primer 2ul，template(cDNA)1ul，ddH₂O 17.5ul。反應程式如下：步驟1：94℃ 5min；步驟2：94℃ 30s；步驟3：55℃ 30s；步驟4：72℃ 40s；步驟5：72℃ 10min。其中步驟2至步驟4迴圈30次。將PCR產物採用Mighty TA-cloning Kit試劑盒(Takara)，連接至T載體上。

轉化細胞：-80℃取出TOP10感受態(天根生化科技(北京)有限公司)，冰上融化，取上述獲得的連接產物5μl加入到融化的TOP10感受態中，混勻後冰上孵育30min。42℃熱激90s後迅速冰上冷卻2min，向EP管中補加900μl LB培養基(生工生物工程(上海)股份有限公司)，37℃，220rpm搖床培養1h。3000g離心2min，吸除800μl上清，用剩餘的培養基將菌體重新懸浮並塗布在胺苄青黴素抗性的平板上。於37℃培養過夜，挑株測序，將測序結果利用MEGA7軟體進行分析比對。

構建嵌合抗體

利用分子生物學技術，獲得上述融合瘤細胞產生的抗OX40L抗體的重鏈和輕鏈序列，分別將其輕重鏈可變區基因片段藉由同源重組酶連接到pcDNA3.1載體中，其中恆定區選擇IgG4亞型(重鏈恆定區：包含S228P突變，SEQ ID NO：21；輕鏈恆定區：SEQ ID NO：22)，獲得輕鏈和重鏈抗體的表達質粒。然後將同一抗體的輕鏈質粒與重鏈質粒按1：1的莫耳比混合，經聚乙烯亞胺(PEI)(Polysciences，Cat#23966)轉染293F細胞，培養5-7天後，細胞活力低於60%時，收集細胞培養上清並用Protein A親和管柱純化出單株抗體，獲得人鼠嵌合抗體。

嵌合抗體篩選：採用流式細胞術和螢光素酶報告基因法體外實驗篩選，得到同時具有結合OX40L和阻斷OX40-OX40L相互作用的抗OX40L抗體。

抗體人源化

根據常規方法，將上述實施例得到的嵌合抗體進行人源化。人源化後抗體的CDR序列、輕鏈可變區和重鏈可變區序列，輕鏈和重鏈的胺基酸序列參序列表。

人源化抗體的表達和純化

根據所需轉染體積傳代HEK293細胞(Invitrogen)，轉染前一天將細胞密度調整至1.5×10⁶個細胞/ml。轉染當天細胞密度約為3×10⁶個細胞/ml。取終體積1/10(v/v)的Opti-MEM培養基(Gibco貨號：31985-070)作為轉染緩衝液，分別加入含有人源化抗體的重鏈和輕鏈的表達質粒pcDNA3.1載體(其包含編碼HZ18和HZ22抗體重鏈和輕鏈的核酸)，混勻，用0.22μm的濾頭過濾備用。加合適的聚乙烯亞胺(PEI)(Polysciences， 23966)到上一步的質粒中(質粒與PEI的品質比例為1：3)，混勻後室溫孵育10min，獲得DNA/PEI混合物。將DNA/PEI混合物輕柔倒入HEK293細胞並混勻，在37℃，8% CO₂的條件下培養24h後，補加終濃度為2mM的VPA(Sigma，貨號：P4543-100G)，及2%(v/v)的Feed溶液(1g/L Phytone Peptone+1g/L Difco Select Phytone)，繼續培養6天。

在細胞培養後，細胞培養液以13000rpm離心20min，收集上清，根據製造商的說明書，用預裝管柱Hitrap Mabselect Sure(GE,11-0034-95)純化上清液，並測定濃度。取100μg純化後蛋白，調整濃度至1mg/mL，使用凝膠過濾色譜管柱SW3000(TOSOH貨號：18675)測定蛋白質純度，結果表明獲得了高純度的嵌合抗體。

人源化抗體親和力測定

採用ForteBio測定法測定人源化抗體結合抗原(人和食蟹猴OX40L)的親和力，以平衡解離常數(KD)表示。結果如表1所示。

在本申請中，本發明的發明人篩選到了與OX40L有更高親和力的抗體，並進行人源化改造最終得到了2個人源化抗體HZ18和HZ22，在本實施例中測試其在分子水準及細胞水準對OX40L的阻斷作用。同時，在CHO-OX40L過表達細胞和Jurkat-OX40-NFκB-Luc reporter細胞共培養體系中，本發明抗OX40L抗體的加入阻斷了CHO細胞表面OX40L和 Jurkat-OX40-NFκB-Luc reporter表面OX40的結合，從而抑制了Jurkat細胞下游NFκB的啟動和螢光素酶產生，降低體系的螢光信號。

ELISA檢測抗體阻斷OX40/OX40L蛋白水準結合

實驗步驟：使用Citrate-buffered saline稀釋OX40L重組蛋白至濃度1μg/ml，每孔100μl加入96孔酶標板中，4℃孵育過夜。第二天取出包被好的酶標板，使用PBST buffer(1×PBS，0.05% Tween)洗滌三次，拍乾，向96孔酶標板中加入封閉液(1×PBS，0.05% Tween，1% BSA)室溫孵育2h。使用PBST buffer洗滌三次，拍乾。使用封閉液稀釋OX40-Avi至1μg/ml，同時使用封閉液稀釋待檢測抗體。向96孔酶標板中分別加入50μl稀釋後的OX40-Avi和50μl稀釋後的待檢測抗體，室溫孵育2h。使用PBST buffer洗滌三次，拍乾。使用封閉液稀釋Streptavidin-HRP(1：3000)，以每孔100μl加入到96孔酶標板中，室溫避光孵育1h。使用PBST buffer洗滌三次，拍乾。向96孔酶標板中加入100μl TMB顯色液進行顯色，並使用終止液終止顯色。在酶標儀中讀取OD450吸光值。

報告基因系統檢測抗體阻斷OX40信號啟動

實驗步驟：準備生長狀態良好的OX40L過表達細胞(CHO-OX40L)和過表達OX40的報告細胞(Jurkat-OX40-NFκB-Luc)。對細胞進行計數，使用1640完全培養液將CHO-OX40L調整至5.5×10^4/ml，將Jurkat-OX40-NFκB-Luc稀釋至2.2×10^6/ml，同時使用1640完全培養液稀釋抗體。向96孔白底板中加入45μl CHO-OX40L和45μl Jurkat-OX40-NFκB-Luc細胞，同時加入10μl抗體。將96孔白底板放入37℃細胞培養箱中孵育6h。孵育完成後，每孔加入100μl Bio-Glo Reagent，室溫避光反應10min，放置於多功能酶標儀上讀取螢光值。圖1所示為實驗結果。其中，抗體KY1005(US10654935B2)。

實施例2：抗OX40L抗體對原代T細胞啟動的抑制

在CHO-OX40L過表達細胞和原代T細胞的共培養體系中，檢測抗OX40L抗體對T細胞啟動的影響，藉由測量培養體系中IL-2的分泌水準來反映抑制效果。

實驗步驟如下：稀釋OKT3至1μg/ml，每孔100μl加入96孔U底板中，4℃包被過夜。第二天，去除96孔U底板中的液體，使用1×PBS洗滌96孔U底板三次，拍乾。使用Pan-T細胞分離試劑盒(Miltenyi Biotec)，按照說明書的操作分離PBMC中的Pan T細胞，使用1640完全培養液(RPMI medium 1640+5%FBS)調整細胞密度至1×10⁶/ml，並加入anti-human CD28。使用1640完全培養液稀釋CHO-OX40L細胞至0.8×105/ml，使用1640完全培養液稀釋待檢測抗體。向拍乾的96孔U底板中加入100μl Pan T細胞，50μl CHO-OX40L和50μl待測抗體。將96孔U底板放置於37℃細胞培養箱中孵育3天。三天後取出96孔U底板，500×g離心10min，吸取培養上清。使用IL-2 ELISA(Human IL-2 DuoSet ELISA，R&D)檢測上清中IL-2的含量，用以表示T細胞的啟動情況。

圖2所示為實驗結果。藉由圖2可以看出OX40L的阻斷性抗體能夠顯著抑制T細胞在體外的啟動水準。

實施例3：抗OX40L抗體對DCs誘導的T細胞向Th2分化的影響

已有的研究表明，胸腺基質淋巴生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)可誘導樹突狀細胞上OX40L的表達，進而在抗原遞呈過程中促進T細胞向Th2分化，分泌Th2細胞相關的因子IL-4、IL-5和IL-13。

本實驗中，用重組hTSLP(Sino Biological)刺激分離得到的原代DC細胞，隨後將DC與分離得到的naïve CD4 T細胞進行共培養6天，再加入anti-CD3/anti-CD28抗體對T細胞進行進一步啟動。在整個培養體系中加入抗OX40L的抗體或isotype-control，藉由檢測IL-5和IL-13的分泌水準評估抗體的抑制效果。

實驗步驟：

使用EasySep Human Myeloid DC Enrichment Kit(Stemcell)試劑盒分離mDC：

取出PBMC，快速化凍，使用1×PBS洗滌兩遍；使用MACS Buffer重新懸浮PBMC至5×107個/ml；向體系中加入FcR blocker 15μl/ml，Myeloid DC Enrichment Cocktail Component A 50μl/ml，DC Enrichment Cocktail Component B 50μl/ml，混勻室溫避光孵育30min；取出分離的磁珠，振盪混勻後加入至體系中，100μl/ml混勻，室溫避光孵育10min；將體系的體積添加MACS Buffer至2.5ml，轉移到流式管中；將流式管放置於磁力架上，室溫等待5min；將液體吸取到一個新的流式管中，將新的流式管繼續放置在磁場中，室溫等待5min；吸取液體至15ml管，500×g，10min離心；使用X-VIVO 15重新懸浮mDC，500×g，10min離心。使用X-VIVO 15(Lonza)重新懸浮mDC，調整細胞密度至1×10^6個/ml。在mDC懸液中加入重組hTSLP，終濃度20ng/ml，將細胞種到超低吸附96孔U底板中，每孔200μl。將超低吸附96孔U底板中的mDC細胞放置在37℃中培養2天。

將mDC細胞從培養箱中取出，500×g，10min離心；去除上清，使用新鮮X-VIVO 15培液重新懸浮細胞，500×g，10min離心；繼續使用新鮮X-VIVO 15培液重新懸浮細胞，500×g，10min離心，去除上清；使用X-VIVO 15調整mDC濃度至160000個/ml。

使用EasySep Human Naive CD4+T Cell Isolation Kit(Stemcell)試劑盒分離naive CD4+T細胞：取出PBMC，快速化凍，使用1×PBS洗滌兩遍；使用MACS Buffer重新懸浮PBMC至5×107個/ml；加入Biotinylated Anti-CD45RO Antibody 50μl/ml，Isolation Cocktail 50μl/ml，混勻，室溫放置5min；取出分離的磁珠，振盪混勻後加入至體系中，50μl/ml混勻，室溫放置5min；將體系的體積添加MACS Buffer至2.5ml，轉移到流式管中；將流式管放置於磁力架上，室溫等待5min；將液體吸取到一個新的流式管中，將新的流式管繼續放置在磁場中，室溫等待5min；吸取液體至15ml管，500×g，10min離心；使用X-VIVO 15重新懸浮T細胞，500×g，10min離心。使用X-VIVO 15重新懸浮naive CD4+T細胞，調整細胞密度至400000個/ml。

在超低吸附96孔U底板中加入稀釋好的50μl mDC，100μl naive CD4+T細胞和50μl抗體，將超低吸附96孔U底板置於37℃，5% CO₂細胞培養箱中孵育4天。共孵育體系培養4天後，取出超低吸附96孔U底板，500×g，10min離心，吸取140μl上清棄掉；同上稀釋4×抗體，向超低吸附96孔U底板加入120μl新鮮X-VIVO 15培液和40μl 4×抗體。吹勻超低吸附96孔U底板中的細胞；將超低吸附96孔U底板置於37℃，5% CO₂細胞培養箱中繼續孵育3天。取出超低吸附96孔U底板，500×g，10min離心，吸取150μl上清棄掉；使用X-VIVO 15稀釋Anti-Human CD28至3.33μg/ml(1.67×)，向前一天包被了OKT3的U底板中，每孔加入120μl。同上一樣稀釋4×待測抗體，向前一天包被的U底板中，每孔加入40μl抗體。將超低吸附96孔U底板中離心到底部的細胞吹勻，全部轉移到前一天包被的96孔U底板中；放入37℃培養箱中培養1天。從培養箱中取出96孔U底板，500×g，10min離心，吸取140μl上清至新V底板中放置於-80℃，待進行ELISA實驗應用Human IL-5 DuoSet ELISA和Human IL-13 ELISA BASIC kit(HRP)檢測細胞因子。

圖3為實驗結果。藉由圖3可以看出OX40L的阻斷性抗體能夠顯著抑制Th2炎症反應。

實施例4：抗OX40L抗體在移植物抗宿主(GvHD)小鼠模型中的作用

第一部分：GvHD動物實驗過程及疾病評分

NOG小鼠靜脈注射PBMC(1*10^7/隻)，建立GVHD模型。立即進行隨機分組，分為4組，每組9隻。每週給藥一次，共四次，分別為D0、D7、D14、D21。每週2次記錄小鼠體重，觀察小鼠生存情況，製作體重變化圖及生存曲線圖，如圖4。D14進行採血用於流式檢測。本實驗中，HZ22能有效減少小鼠GVHD造成的體重下降，並顯著降低小鼠死亡率；HZ18能顯著降低小鼠死亡率。

PBMC信息

廠家：AllCellS貨號：FPB005F-C批號：3024702

小鼠信息

品系：NOG性別：雌性來源：維通利華實驗動物技術有限公司合格證編號：110011211111216336

抗體信息

第二部分：流式檢測相關的marker

在本實驗中，在建模第14天的時候，取血，藉由流式的方式，分析小鼠血中的CD4 T細胞的數目。並且檢測CD4 T細胞中Granzyme B陽性細胞的比例。同時藉由ELISA的方式檢測血清中IFN-γ和IL-6的量。如圖5所示，藉由圖5可以看出，使用OX40L的阻斷性抗體能夠抑制GvHD小鼠外周血的中的IFNγ和IL-6的分泌，同時也抑制了T細胞的活化。

序列總結：

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Claims

一種抗OX40L抗體或其抗原結合片段，該抗體包含：

(i)如SEQ ID NO：4所示的VH中所含的三個互補決定區域HCDR1、HCDR2和HCDR3，和如SEQ ID NO：8所示的VL中所含的三個互補決定區域LCDR1、LCDR2和LCDR3；或

(ii)如SEQ ID NO：14所示的VH中所含的三個互補決定區域HCDR1、HCDR2和HCDR3，和如SEQ ID NO：18所示的VL中所含的三個互補決定區域LCDR1、LCDR2和LCDR3。
一種抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其包含第一重鏈互補決定區(HCDR1)、第二重鏈互補決定區(HCDR2)、第三重鏈互補決定區(HCDR3)以及第一輕鏈互補決定區(LCDR1)、第二輕鏈互補決定區(LCDR2)和第三輕鏈互補決定區(LCDR3)，其中，

(i)該HCDR1、HCDR2、HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3分別包含SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列或分別由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列組成；或

(ii)該HCDR1、HCDR2、HCDR3以及LCDR1、LCDR2和LCDR3分別包含SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列或分別由SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列組成。
如請求項1或2所述的抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區(VH)，其中該重鏈可變區包含與選自SEQ ID NO：4或14所示的胺基酸序列具有至少90%同一性的胺基酸序列，或由該序列組成或包含選自SEQ ID NO：4或14所示的胺基酸序列，或由該序列組成；或者其包含輕鏈可變區(VL)，其中該輕鏈可變區包含與選自SEQ ID NO：8或18所示的胺基酸序列具有至少90%同一性的胺基酸序列，或由該序列組成或包含選自SEQ ID NO：8或18所示的胺基酸序列，或由該序列組成。
一種抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中

(i)該重鏈可變區包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列或與其具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列與其具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；

(ii)該重鏈可變區包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；

(iii)該重鏈可變區包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列或與其具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：18所示的胺基酸序列與其具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；或

(iv)該重鏈可變區包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：18所示的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
如請求項1或2所述的抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中

(i)該重鏈可變區包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；或

(ii)該重鏈可變區包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：18所示的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
如請求項1至5中任一項所述的抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其包含Fc區。
如請求項6所述的抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其中該Fc區是來自人的IgG的Fc，例如，來自人IgG1的Fc、來自人IgG2的Fc、來自人IgG3的Fc或來自人IgG4的Fc。
如請求項7所述的抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其中該Fc區包含增強Fc區穩定性或減少抗體體內鏈交換的突變。
如請求項8所述的抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其中該突變為S228P突變。
如請求項6至9中任一項所述的抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其中該Fc區

(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO：27或28或由其組成；

(ii)包含與胺基酸序列SEQ ID NO：28具有至少90%同一性，例如95%、96%、97%、99%或更高的同一性的胺基酸序列；或者

(iii)包含與胺基酸序列SEQ ID NO：27具有至少90%同一性，例如95%、96%、97%、99%或更高的同一性的胺基酸序列，且包含S228P突變。
如請求項1至10中任一項所述的抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈恆定區，該重鏈恆定區來自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的恆定區，較佳地，該重鏈恆定區

(i)包含選自SEQ ID NO：21或29的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；

(ii)包含與SEQ ID NO：29的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列；或者

(iii)包含與SEQ ID NO：21的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列，且具有S228P缺失突變。
如請求項1至11中任一項所述的抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其包含輕鏈恆定區，該輕鏈恆定區為lambda或Kappa輕鏈恆定區，較佳地，該輕鏈恆定區

(i)包含與SEQ ID NO：22的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；或

(ii)包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
如請求項1至12中任一項所述的抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈，其中該重鏈

(i)包含與選自SEQ ID NO：9或19的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；或

(ii)包含選自SEQ ID NO：9或19的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；或者

其包含輕鏈，其中該輕鏈

(i)包含與選自SEQ ID NO：10或20的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；或

(ii)包含選自SEQ ID NO：10或20的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
一種抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈和輕鏈，其中

(i)該重鏈包含與SEQ ID NO：9的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；且該輕鏈包含與SEQ ID NO：10的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；

(ii)該重鏈包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列或由其組成的，該輕鏈包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列或由其組成；

(iii)該重鏈包含與SEQ ID NO：19的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；且該輕鏈包含與SEQ ID NO：20的胺基酸序列具有至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成；或

(iv)該重鏈包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列或由其組成的，該輕鏈包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列或由其組成。
如請求項1至14中任一項所述的抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈和輕鏈，其中

(i)該重鏈包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列或由其組成的，該輕鏈包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列或由其組成；

(ii)該重鏈包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列或由其組成的，該輕鏈包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列或由其組成。
如請求項1至15中任一項所述的抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其中該抗體是單株抗體。
如請求項1至16中任一項所述的抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其中該抗體是人源化的抗體或嵌合抗體。
如請求項1至17中任一項所述的抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其中該抗原結合片段是選自以下的抗體片段：Fab、Fab’、Fab’-SH、Fv、單鏈抗體(例如scFv)、(Fab’)₂、單結構域抗體例如VHH、dAb(domainantibody)、雙價抗體或線性抗體。
如請求項1至18中任一項所述的抗OX40L抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段具有一種或多種以下性質：

a)以高親和力結合OX40L(例如人OX40L)；

b)在蛋白水準和細胞水平均能有效阻斷OX40L與其受體OX40的相互作用；

c)抑制OX40/OX40L信號通路；

d)抑制T細胞的啟動、增殖和/或分化；

e)降低T細胞的活化和/或炎症因子的產生；

f)治療移植物抗宿主病。
一種分離的核酸，其編碼如請求項1至19中任一項所述的抗OX40L抗體或其抗原結合片段。
一種包含如請求項20所述的核酸的載體，較佳地該載體是表達載體。
一種包含如請求項20所述的核酸或如請求項21所述的載體的宿主細胞，較佳地，該宿主細胞是原核的或真核的，更佳的選自酵母細胞、哺乳動物細胞(例如293細胞或CHO細胞，例如CHO-K細胞或HEK293細胞)或適用於製備抗體或其抗原結合片段的其它細胞。
一種製備抗OX40L抗體或其抗原結合片段的方法，該方法包括

a)在適於表達編碼如請求項1至19中任一項所述的抗OX40L抗體或其抗原結合片段的核酸的條件下培養如請求項22所述的宿主細胞，

b)視需要地分離該抗體或其抗原結合片段，

c)視需要地該方法還包括從該宿主細胞回收該抗OX40L抗體或其抗原結合片段，視需要地，該抗體被純化，例如被ProteinA純化。
一種免疫綴合物，其包含如請求項1至19中任一項所述的抗OX40L的抗體或其抗原結合片段和其它物質，例如毒素、小分子藥物、細胞毒性劑、細胞凋亡劑、螯合劑、免疫調節劑，例如抗炎劑或免疫抑制劑。
一種醫藥組成物，其包含如請求項1至19中任一項所述的抗OX40L抗體或其抗原結合片段或如請求項24所述的免疫綴合物，以及視需要地藥用輔料。
一種藥物組合產品，其包含如請求項1至19中任一項所述的抗OX40L抗體或其抗原結合片段或如請求項24所述的免疫綴合物，以及一種或多種其它治療劑，例如該治療劑選自細胞因子、其它抗體、小分子藥物或免疫調節劑(例如免疫抑制劑)。
一種預防或治療個體中涉及OX40L/OX40介導的途徑的不適當啟動相關疾病或病症的方法，該方法包括向該受試者施用有效量的如請求項1至19中任一項所述的抗OX40L抗體或其抗原結合片段、或如請求項24所述的免疫綴合物、或如請求項25所述的醫藥組成物、或如請求項26所述的藥物組合產品。
如請求項27所述的方法，其中該受試者中，相比健康個體，具有OX40L/OX40介導的信號通路的異常啟動。
如請求項27或28所述的方法，其中該疾病或病症選自自身免疫類疾病或同種異體移植，例如，自身免疫病類疾病包括但不限於過敏性皮炎、哮喘、系統性紅斑狼瘡、肖葛籣綜合症、免疫性血小板減少性紫癜、多發性硬化、狼瘡性腎炎、肌萎縮性脊髓側索硬化症、類風濕關節炎、非類風濕性關節炎、接觸性皮炎、高IgE綜合症、炎症腸病、重症肌無力、格蕾夫斯氏病、溶血性貧血、牛皮癬、特應性皮炎、變應性哮喘或特發性炎症疾病。
如請求項27至29中任一項所述的方法，其中該方法還包括施用一種或多種其它療法例如治療方式和/或其它治療劑，例如該治療劑選自細胞因子、其它抗體、小分子藥物或免疫調節劑(例如免疫抑制劑)。