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TW202527984A - 5t4抗體藥物結合物及其使用之方法 - Google Patents

5t4抗體藥物結合物及其使用之方法

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Publication number
TW202527984A
TW202527984A TW113143900A TW113143900A TW202527984A TW 202527984 A TW202527984 A TW 202527984A TW 113143900 A TW113143900 A TW 113143900A TW 113143900 A TW113143900 A TW 113143900A TW 202527984 A TW202527984 A TW 202527984A
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TW
Taiwan
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seq
amino acid
acid sequence
cancer
adc
Prior art date
Application number
TW113143900A
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English (en)
Inventor
艾咪 彼得森
Original Assignee
美商艾克塞里克斯公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
Application filed by 美商艾克塞里克斯公司 filed Critical 美商艾克塞里克斯公司
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Abstract

本發明提供用5T4 ADC，視情況與諸如帕博利珠單抗(pembrolizumab)之PD-L1/PD-1抑制劑組合，治療癌症之方法。所治療之癌症包括乳癌、子宮內膜癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)及結腸直腸癌。

Description

5T4抗體藥物結合物及其使用之方法
本揭露大體上係關於5T4抗體藥物結合物及其用於治療癌症之方法。
5T4，亦稱為Wnt活化抑制因子1或WAIF1，係含有八個富含白胺酸之重複序列的N-糖基化跨膜72 kDa醣蛋白。5T4通常被稱為癌胚抗原，因為其在胎兒滋養層(其首次被發現的地方)中表現，或被稱為滋養層醣蛋白(TPBG)。5T4存在於各種腫瘤中。儘管其受限表現似乎使5T4有可能成為癌症療法中之目標，但靶向5T4之抗體、ADC及疫苗尚未實現成功的治療。
此項技術中仍需要可靶向5T4之ADC，以治療、預防或緩解5T4介導之疾病、病症或病況，諸如涉及表現5T4之腫瘤細胞的疾病、病症或病況。
提供一種治療個體之癌症的方法。該方法包含向個體投與ADC。癌症為乳癌、子宮內膜癌(EC)、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌中之任一或多者。在一些實施例中，癌症為三陰性乳癌(TNBC)。在一些實施例中，癌症為激素受體陽性乳癌(HR+ BC)。在一些實施例中，癌症為胰管腺癌(PDAC)。在一些實施例中，癌症為非小細胞肺癌(NSCLC)。在一些實施例中，癌症為頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC)。在一些實施例中，癌症為子宮內膜癌(EC)。
在一些實施例中，ADC由 式 ( I ' )表示： (I ' )， 其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且其中Ab包含：(1)包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)中所示之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，及(2)包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)中所示之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)；其中Ab進一步包含一或多個 fGly '，其中 fGly '為與 式 ( I ' )之非Ab部分連接的甲醯基甘胺酸胺基酸殘基；其中MMAE為單甲基奧瑞他汀E (monomethyl auristatin E)且由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示 式 ( I ' )中之連接點；且其中n為整數。在其他實施例中，n為選自1至10中之任一者的整數。在其他實施例中，n為2。
在一些實施例中，ADC由 式 ( I )表示： (I)， 其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且其中Ab包含：(1)包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)中所示之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，及(2)包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)中所示之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)；其中Ab進一步包含一或多個 fGly '，其中MMAE為單甲基奧瑞他汀E且由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示 式 ( I )中之連接點，且其中 fGly '為與 式 ( I )之非Ab部分連接的甲醯基甘胺酸胺基酸殘基。
在一些實施例中，ADC包含藉由連接子( L - 1)與單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合之抗體(Ab)： ( L-1)， 其中波浪線指示與Ab之連接點且##指示與MMAE之連接點；其中MMAE由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示與( L - 1)之連接點；其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且其中Ab包含：(1)包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)中所示之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，及(2)包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)中所示之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)；且其中Ab進一步包含一或多個 fGly '且其中 fGly '為與連接子( L - 1)連接之甲醯基甘胺酸胺基酸殘基。在其他實施例中，一個Ab與一至十個MMAE結合，且各MMAE藉由一個連接子( L - 1)與Ab結合。在其他實施例中，一個Ab與兩個MMAE結合，且各MMAE藉由一個連接子( L - 1)與Ab結合。
在一些實施例中，ADC係藉由將抗體(Ab)與包含結合前連接子 ( L - 1a ' )及單甲基奧瑞他汀E (MMAE)之連接子-藥物結合而產生： ( L-1a ')， 其中##指示與MMAE之連接點；其中MMAE由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示與( L - 1a ')之連接點；其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且其中Ab包含：(1)包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)中所示之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，及(2)包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)中所示之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)；且其中Ab進一步包含一或多個 fGly '且其中 fGly '為在Ab與連接子-藥物結合後與連接子( L - 1a ')連接之甲醯基甘胺酸胺基酸殘基。在其他實施例中，一個Ab與一至十個連接子-藥物結合。在其他實施例中，一個Ab與兩個連接子-藥物結合。
在本文所揭示之實施例中之任一者中，例如在由 式 ( I ' )或 式 ( I )表示之ADC或包含 ( L - 1 )之ADC或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC中，Ab包含一至十個 fGly '。在其他實施例中，Ab包含兩個 fGly '。
在本文所揭示之實施例中之任一者中，例如在由 式 ( I ' )或 式 ( I )表示之ADC或包含 ( L - 1 )之ADC或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC中，Ab包含X 1( fGly ')X 2Z 2X 3Z 3(SEQ ID NO: 67)之模體，其中：Z 2為脯胺酸(P)或丙胺酸(A)殘基；Z 3為鹼性胺基酸殘基或脂族胺基酸殘基；X 1存在或不存在，且當存在時，為任何胺基酸殘基，其限制條件為當SEQ ID NO: 67之序列位於抗體Ab之N端時，X 1存在；且X 2及X 3獨立地為任何胺基酸殘基。在一些實施例中，鹼性胺基酸殘基係選自由精胺酸(R)、離胺酸(K)及組胺酸(H)組成之群。另外或替代地，脂族胺基酸殘基係選自由以下組成之群：丙胺酸(A)、甘胺酸(G)、白胺酸(L)、纈胺酸(V)、異白胺酸(I)及脯胺酸(P)。在一些實施例中，SEQ ID NO: 67之模體係選自由以下組成之群：L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)、M( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 45)、V( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 46)、L( fGly ')SPSR (SEQ ID NO: 47)、L( fGly ')APSR (SEQ ID NO: 48)、L( fGly ')VPSR (SEQ ID NO: 49)、L( fGly ')GPSR (SEQ ID NO: 50)、I( fGly ')TPAR (SEQ ID NO: 51)、L( fGly ')TPSK (SEQ ID NO: 52)、M( fGly ')TPSK (SEQ ID NO: 53)、V( fGly ')TPSK (SEQ ID NO: 54)、L( fGly ')SPSK (SEQ ID NO: 55)、L( fGly ')APSK (SEQ ID NO: 56)、L( fGly ')VPSK (SEQ ID NO: 57)、L( fGly ')GPSK (SEQ ID NO: 58)、L( fGly ')TPSA (SEQ ID NO: 59)、I( fGly ')TPAA (SEQ ID NO: 60)、M( fGly ')TPSA (SEQ ID NO: 61)、V( fGly ')TPSA (SEQ ID NO: 62)、L( fGly ')SPSA (SEQ ID NO: 63)、L( fGly ')APSA (SEQ ID NO: 64)、L( fGly ')VPSA (SEQ ID NO: 65)及L( fGly ')GPSA (SEQ ID NO: 66)。
在本文所揭示之實施例中之任一者中，例如在由 式 ( I ' )或 式 ( I )表示之ADC或包含 ( L - 1 )之ADC或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC中，Ab包含兩條重鏈及兩條輕鏈，且其中該等重鏈中之各者包含SEQ ID NO: 67之模體。在本文所揭示之實施例中之任一者中，例如在由 式 ( I ' )或 式 ( I )表示之ADC或包含 ( L - 1 )之ADC或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC中，Ab包含L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)之胺基酸序列。在其他實施例中，Ab包含兩條重鏈及兩條輕鏈，且其中該等重鏈中之各者包含L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)之模體。在一些實施例中，模體之 fGly '位於重鏈中對應於SEQ ID NO: 2之第453個胺基酸殘基的位置處。
在本文所揭示之實施例中之任一者中，例如在由 式 ( I ' )或 式 ( I )表示之ADC或包含 ( L - 1 )之ADC或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC中，Ab為本文所揭示之5T4抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，Ab包含：包含選自由SEQ ID NO: 13、19、24、25及30組成之群之胺基酸序列的HCDR1；包含選自由SEQ ID NO: 14、20、26、31及36組成之群之胺基酸序列的HCDR2；包含選自由SEQ ID NO: 15、21、27及32組成之群之胺基酸序列的HCDR3；包含選自由SEQ ID NO: 16、22、28及33組成之群之胺基酸序列的LCDR1；包含選自由SEQ ID NO: 17、23及34組成之群之胺基酸序列的LCDR2；及包含選自由SEQ ID NO: 18、29及35組成之群之胺基酸序列的LCDR3。
在一些實施例中，HCDR1包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。在一些實施例中，HCDR1包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。在一些實施例中，HCDR1包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。在一些實施例中，HCDR1包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列。在一些實施例中，HCDR1包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列。在一些實施例中，HCDR1包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
在一些實施例中，Ab包含：包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的VH及包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的VL。在其他實施例中，Ab包含：包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈。
在一些實施例中，本文所揭示之投與ADC的方法與向個體投與用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的手段(諸如PD-L1/PD-1抑制劑)組合。此類用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的手段的一個實例為帕博利珠單抗。在一些實施例中，本文所揭示之方法進一步包含向個體投與用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的手段。在一些實施例中，ADC與用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的手段同時投與。在一些實施例中，ADC在用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的手段之後投與。在一些實施例中，ADC在用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的手段之前投與。
在一些實施例中，本文所揭示之投與ADC的方法與向個體投與PD-L1/PD-1抑制劑組合。在一些實施例中，本文所揭示之方法進一步包含向個體投與PD-L1/PD-1抑制劑。在一些實施例中，ADC與PD-L1/PD-1抑制劑同時投與。在一些實施例中，ADC在PD-L1/PD-1抑制劑之後投與。在一些實施例中，ADC在PD-L1/PD-1抑制劑之前投與。另外或替代地，在一些實施例中，PD-L1/PD-1抑制劑為包含帕博利珠單抗之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3的抗體或其抗原結合片段。在其他實施例中，PD-L1/PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。在其他實施例中，PD-L1/PD-1抑制劑以約200 mg之劑量向個體投與。另外或替代地，在一些實施例中，PD-L1/PD-1抑制劑係靜脈內投與。另外或替代地，在一些實施例中，PD-L1/PD-1抑制劑每3週投與一次(q3w)。
在本文所揭示之實施例中之任一者中，例如在由 式 ( I ' )或 式 ( I )表示之ADC或包含 ( L - 1 )之ADC或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC中，ADC係靜脈內投與。另外或替代地，在一些實施例中，ADC每3週投與一次(q3w)。
在一些實施例中，其中個體為人類。
相關申請案之交叉引用本申請案主張2023年11月15日申請之美國臨時專利申請案第63/599,497號及2023年12月11日申請之美國臨時專利申請案第63/608,755號的權益，該等臨時專利申請案各自的揭露內容以全文引用之方式併入本文中。
序列表本申請案含有已以XML檔案格式與本申請案一起提交的電子序列表，該序列表之全部內容以全文引用之方式併入本文中。與本申請案一起提交的序列表XML檔案的名稱為「14529-168-228_SEQ_LISTING.xml」，創建於2024年11月12日，且大小為146,919位元組。
在一個態樣中，本文提供一種用於治療個體之癌症的方法，該方法包含以治療有效劑量向該個體投與ADC，其中該ADC由 式 ( I ' ) 或式 ( I )表示。
在一些實施例中，ADC由 式 ( I ' )表示： (I ' )， 其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且其中Ab包含：(1)包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)中所示之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，及(2)包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)中所示之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)；其中Ab進一步包含一或多個 fGly '，其中 fGly '為與 式 ( I ' )之非Ab部分連接的甲醯基甘胺酸胺基酸殘基；其中MMAE為單甲基奧瑞他汀E且由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示 式 ( I ' )中之連接點；且其中n為整數。在其他實施例中，n為選自1至10中之任一者的整數。在其他實施例中，n為2。
在一些實施例中，ADC由 式 ( I )表示且包含藉由連接子( L - 1)與單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合之Ab： (I)， 其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且包含命名為 mAbA15之抗體的重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)、重鏈互補決定區3 (HCDR3)、輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)，其中Ab進一步包含兩個模體，其各自為L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)，其中 fGly '為與包含( L - 1)之連接子-藥物連接的胺基酸殘基，且其中 mAbA15包含： a)包含以下胺基酸序列之重鏈： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYIHWVRQAPGKGLEWVAYITSTGSYTEYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDRSTRYSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSL ( fGly ')TPSRGS (SEQ ID NO: 2)；及 b)包含以下胺基酸序列之輕鏈： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYATPVTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 3)； 其中 L-1為： ( L-1)， 其中波浪線指示與Ab之連接點，且##指示與MMAE之連接點；且 其中MMAE由 式 ( III )表示： ( III)，其中*指示與( L - 1)之連接點。
在一些實施例中，ADC由 式 ( I )表示： 其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且其中Ab包含：(1)包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)中所示之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，及(2)包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)中所示之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)；其中Ab進一步包含一或多個 fGly '，其中MMAE為單甲基奧瑞他汀E且由 式 ( III )表示。
在某些實施例中，癌症為乳癌、子宮內膜癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌或膀胱癌中之任一或多者。在某些實施例中，癌症為胰臟腺癌(PDAC，在本文中亦稱為胰管腺癌)。在某些實施例中，癌症為肺腺癌或鱗狀細胞肺癌。在某些實施例中，癌症為非小細胞肺癌(NSCLC)。在某些實施例中，癌症為頭頸癌。在某些實施例中，癌症為頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC)。在某些實施例中，癌症為腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌。
在某些實施例中，ADC以約0.1 mg/kg至約10.0 mg/kg之劑量向個體投與。在某些實施例中，ADC以約0.3 mg/kg至約6.0 mg/kg或約0.3 mg/kg至約2.0 mg/kg之劑量向個體投與。在某些實施例中，ADC以約0.3 mg/kg、約0.6 mg/kg、約1.0 mg/kg、約1.5 mg/kg或約2.0 mg/kg之劑量向個體投與。
在某些實施例中，Ab包含兩條重鏈(HC)及兩條輕鏈(LC)，且其中HC中之各者包含一個L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)之模體。
在某些實施例中，ADC在治療週期之第一天向個體投與，持續一或多個治療週期。在某些實施例中，各治療週期為3週±3天。在某些實施例中，ADC每三週向個體投與一次(q3w)。在某些實施例中，ADC係向個體靜脈內投與。
在某些實施例中，該方法包含向個體投與PD-L1/PD-1抑制劑。在某些實施例中，PD-L1/PD-1抑制劑每三週向個體投與一次(q3w)。在某些實施例中，PD-L1/PD-1抑制劑係向個體靜脈內投與。在某些實施例中，PD-L1/PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。在某些實施例中，PD-L1/PD-1抑制劑以約200 mg之劑量向個體投與。
在某些實施例中，個體為人類。
在另一態樣中，本文提供一種治療在投與ADC時經歷不良事件之個體之癌症持續兩個或更多個治療週期的方法，該方法包含： (i)在第一治療週期中以約0.1 mg/kg至約10.0 mg/kg之劑量向該個體投與該ADC； (ii)在該個體在第一治療週期之後及第二治療週期之前具有不良事件時，延遲向該個體進一步投與該ADC；以及 (iii)在第二治療週期中恢復該ADC之投與， 其中該ADC由 式 ( I )表示且包含藉由連接子( L - 1)與單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合之Ab： (I) 其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且包含命名為 mAbA15之抗體的重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)、重鏈互補決定區3 (HCDR3)、輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)，其中Ab進一步包含兩個模體，其各自為L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)，其中 fGly '為與包含( L - 1)之連接子-藥物連接的胺基酸殘基，且其中 mAbA15包含： a)包含以下胺基酸序列之重鏈： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYIHWVRQAPGKGLEWVAYITSTGSYTEYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDRSTRYSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSL ( fGly ')TPSRGS (SEQ ID NO: 2)；及 b)包含以下胺基酸序列之輕鏈： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYATPVTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 3)； 其中( L-1)為： ( L-1)，其中波浪線指示與Ab之連接點，且##指示與MMAE之連接點；且 其中MMAE由 式 ( III )表示： ( III)，其中*指示與( L - 1)之連接點。
在某些實施例中，一旦不良事件得到緩解或恢復，則在步驟(iii)中恢復投與。在某些實施例中，第二治療週期之投與劑量為第一治療週期之劑量。在某些實施例中，第二治療週期之投與劑量低於第一治療週期之劑量。
在另一態樣中，本文提供一種治療在投與ADC時經歷不良事件之個體之癌症持續兩個或更多個治療週期的方法，該方法包含： i)在第一治療週期中以約0.1 mg/kg至約10.0 mg/kg之第一劑量向該個體投與該ADC； ii)在第二治療週期中，在該個體具有不良事件時，以低於該第一劑量之第二劑量向該個體投與該ADC， 其中該ADC由 式 ( I )表示且包含藉由連接子( L-1)與單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合之Ab： (I) 其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且包含命名為 mAbA15之抗體的重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)、重鏈互補決定區3 (HCDR3)、輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)，其中Ab進一步包含兩個模體，其各自為L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)，其中 fGly '為與包含( L - 1)之連接子-藥物連接的胺基酸殘基，且其中 mAbA15包含： a)包含以下胺基酸序列之重鏈： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYIHWVRQAPGKGLEWVAYITSTGSYTEYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDRSTRYSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSL ( fGly ')TPSRGS (SEQ ID NO: 2)；及 b)包含以下胺基酸序列之輕鏈： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYATPVTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 3)； 其中( L-1)為： ( L-1)，其中波浪線指示與Ab之連接點，且##指示與MMAE之連接點；且 其中MMAE由 式 ( III )表示： ( III)，其中*指示與( L - 1)之連接點。
在某些實施例中，一旦不良事件得到緩解或恢復，則在步驟(ii)中以第二劑量向個體投與。在某些實施例中，不良事件係選自由以下組成之群：3級血小板減少症伴臨床顯著出血、4級血小板減少症、3級或更高級別的嗜中性球減少症伴經量測至少38.3℃之發熱、3級或更高級別的嗜中性球減少症伴至少38℃持續發熱至少一小時、4級嗜中性球減少症持續超過7天、4級貧血、在沒有膽道堵塞或其他肝臟異常解釋(諸如病毒性肝炎、酒精性或自體免疫性肝炎、吉伯特氏症候群(Gilbert Syndrome)或用其他肝毒性藥物治療)的情況下丙胺酸轉胺酶或天冬胺酸轉胺酶水平超過正常值上限的3倍且總膽紅素水平超過正常值上限的2倍、及5級不良事件。 7.1 定義
除非另外定義，否則本文所用之所有技術及科學術語均具有熟習本揭露技術者通常理解之含義。除非另外規定，否則如本文所用，以下術語具有下文賦予其之含義。
在一些實施例中，化學結構與相應的化學名稱一起揭示。在有衝突的情況下，化學結構決定含義，而非名稱。
除非明確陳述或自上下文顯而易見，否則如本文所用，術語「或」應理解為包括性的。除非另有明確陳述或自上下文顯而易見，否則如本文所用，術語「一(a)」、「一(an)」及「該(the)」應理解為單數或複數。
術語「約」及「大約」意謂在給定值或範圍之20%以內、15%以內、10%以內、9%以內、8%以內、7%以內、6%以內、5%以內、4%以內、3%以內、2%以內、1%以內或更小的變化。
在一些實施例中，組分名稱中之術語「第一」、「第二」、「第三」、「第四」及類似術語用於區分及鑑別在其名稱中共用某些標識之多於一種組分。舉例而言，「第一抗體」及「第二抗體」用於區分兩種抗體。
應瞭解，每當在本文中用術語「包含」描述實施例時，亦提供用術語「由……組成」及/或「基本上由……組成」描述之其他類似實施例。亦應理解，每當在本文中用片語「基本上由……組成」描述實施例時，亦提供用術語「由……組成」描述之其他類似實施例。
在諸如「在A與B之間」或「在A-B之間」之片語中使用的術語「在……之間」係指包括A及B兩者之範圍或其任何子範圍。
如本文所用，A至B之範圍包括A及B兩者或其任何數字或子範圍。
在本文諸如「A及/或B」之片語中使用的術語「及/或」意欲包括A及B；A或B；A (單獨)；及B (單獨)。同樣，在諸如「A、B及/或C」之片語中使用的術語「及/或」意欲涵蓋以下實施例中之各者：A、B及C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A及C；A及B；B及C；A (單獨)；B (單獨)；及C (單獨)。
術語「視情況選用」或「視情況」意謂隨後描述的情況可能發生或可能不發生，因此本說明書包括該情況發生的實例及該情況不發生的實例。
術語「患者」及「個體」可互換使用且係指人類及非人類個體，尤其哺乳動物個體。在一個實施例中，患者或個體為人類。
本文所揭示之5T4 ADC的劑量以每公斤個體重量之ADC毫克(mg/kg)為單位提供。然而，亦可規定劑量以每平方公尺體表面積之ADC毫克(mg/m 2)為單位。熟習此項技術者將能夠使用人類之K m比率(對於60 kg人類為1.62 m 2或37 kg/m 2)容易地將以mg/kg為單位的劑量轉換為以mg/m 2為單位的劑量。亦即，以mg/kg為單位的劑量可藉由乘以37 kg/m 2轉換為以mg/m 2為單位的劑量。在人類個體中，約0.3 mg/kg之劑量等於約11 mg/m 2之劑量。5 mg/kg ADC之劑量等於人類中185 mg/m 2之劑量。
如本文所用，術語「治療(treating)」或「治療(treatment)」意謂治療諸如哺乳動物(特別是人類)之個體之疾病或醫學病況或對該疾病或醫學病況之治療，其包括：(a)預防個體出現該疾病或醫學病況，諸如預防性治療；(b)改善個體之該疾病或醫學病況，諸如消除該疾病或醫學病況或引起該疾病或醫學病況之消退；(c)抑制個體之該疾病或醫學病況，例如藉由減緩或遏制個體之該疾病或醫學病況的發展；或(d)減輕個體之該疾病或醫學病況的症狀。在一些實施例中，術語「治療(treating)」或「治療(treatment)」不包括預防性治療。在一些實施例中，術語「治療(treating)」或「治療(treatment)」在其關於治療癌症或癌症治療時可包括逆轉腫瘤進展(例如減小腫瘤尺寸)、減緩腫瘤進展或停止腫瘤進展。在一個實施例中，腫瘤進展係藉由針對臨床試驗選擇之反應評估標準來確定。
在本文之任何實施例中，術語「腫瘤」係指任何贅生性細胞生長或增殖(無論惡性或良性)，且係指所有癌前及癌性細胞及組織。
術語「癌症」及「癌性」係指或描述哺乳動物之通常以不受調控之細胞生長為特徵的生理病況。可根據本文所揭示之方法治療的癌症包括但不限於乳癌(例如三陰性乳癌(TNBC)或激素受體陽性乳癌(HR+ BC))、子宮內膜癌、頭頸癌(例如頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC))、胰臟癌(例如胰臟腺癌(PDAC，在本文中亦稱為胰管腺癌))、肺癌(例如非小細胞肺癌(NSCLC))、前列腺癌、子宮頸癌或膀胱癌。在某些實施例中，癌症為肺腺癌或鱗狀細胞肺癌。在某些實施例中，NSCLC之特徵在於選自由以下組成之群的突變：EGFR敏化突變、ALK重排、ROS1重排、BRAF V600E突變、MET外顯子14跳躍突變及RET重排。在某些實施例中，癌症為腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌。在一些實施例中，癌症為泌尿生殖系統癌症。在一些實施例中，癌症為胃腸癌。在一些實施例中，癌症為婦科癌症。另外或替代地，癌症係先前無法治療的。另外或替代地，癌症係復發性的。另外或替代地，癌症係轉移性的。另外或替代地，癌症係晚期的，例如局部晚期的。另外或替代地，癌症係不可手術治療的。
如本文所用，「EGFR敏化突變」包括外顯子19缺失及外顯子21點突變。外顯子19缺失使EGFR之無活性形式不穩定，使其保持活性構形。此等缺失佔所有EGFR突變之約45%。最常見的框移缺失為delE756-A750，隨後為delL747_P753insS及delL747_A750insP。外顯子21點突變將EGFR鎖定在組成型活性構形且佔EGFR突變之40%。最常見的外顯子21突變為L858R。
如本文所用，「ALK重排」或「alk陽性」包括ALK基因與另一基因之任何重排，其產生融合基因。最常見的ALK重排為EML4基因及ALK (未分化淋巴瘤激酶)基因之重排，其產生融合致癌基因EML4-ALK。
如本文所用，「ROS1重排」係指ROS1基因與另一基因之一部分的融合。
如本文所用，「BRAF V600E突變」係指BRAF基因在胺基酸600處自纈胺酸突變為麩胺酸。
如本文所用，「MET外顯子14跳躍突變」係指剪接位點突變之存在，其導致MET基因之外顯子14的轉錄喪失。
如本文所用，「RET重排」係指RET基因與另一基因之一部分的融合。
如本文所用，術語「治療有效量」係指足以降低及/或改善給定疾病、病症或病況及/或與其相關之症狀的嚴重程度及/或持續時間的本文所描述之抗體或ADC的量。藥劑(包括治療劑)之治療有效量可為(i)減少或改善給定疾病、病症或病況之進展或進程，(ii)減少或改善給定疾病、病症或病況之復發、發展或發作，及/或(iii)改善或增強另一種療法(例如除投與本文所描述之抗體或ADC之外的療法)的治療效果所必需的量。本揭露之物質/分子/藥劑(例如5T4抗體或ADC)之「治療有效量」可基於許多因素而變化，諸如個體之疾病狀態、年齡、性別及體重，以及物質/分子/藥劑在個體中引發所需反應的能力。治療有效量涵蓋治療有益效果超過物質/分子/藥劑之任何毒性或有害效果的量。在一些實施例中，術語「治療有效量」係指有效「治療」個體或哺乳動物之疾病、病症或病況的抗體或其他藥劑(例如或藥物)的量。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受」意謂經聯邦或州政府之管理機構批准，或在美國藥典、歐洲藥典或其他公認藥典中列出用於動物，更特別是用於人類。
「賦形劑」包括在所採用之劑量及濃度下對暴露於其的細胞或哺乳動物無毒的載劑、賦形劑、防腐劑或穩定劑，且可包括例如以影響穩定性、增大調配物體積或賦予最終劑型中之活性成分治療增強(例如促進吸收、降低黏度、增強溶解度)。「賦形劑」可為天然或合成的有機或無機成分，其與活性成分組合以方便使用活性成分，例如向個體投與活性成分。賦形劑之實例包括緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，諸如抗壞血酸；低分子量(例如小於約十個胺基酸殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、精胺酸或離胺酸；單糖、雙糖及其他碳水化合物，諸如葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖醇，諸如甘露糖醇或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；及/或非離子型界面活性劑，諸如TWEEN™、聚乙二醇(PEG)及PLURONICS™。術語「賦形劑」亦可指與治療劑一起投與的稀釋劑、佐劑(例如弗氏佐劑(完全或不完全))、賦形劑或媒劑。此類賦形劑可為無菌液體，諸如水及油，諸如石油、動物、植物或合成來源之油，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油及其類似物。當靜脈內投與組合物(例如醫藥組合物)時，水為例示性賦形劑。鹽水溶液以及右旋糖及甘油水溶液亦可用作液體賦形劑，特別是用於可注射溶液。適合的賦形劑(例如醫藥賦形劑)包括澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、大米、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、甘油單硬脂酸酯、滑石、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇及其類似物。在任何實施例中，組合物亦可含有少量潤濕劑或乳化劑，或pH緩衝劑。組合物可呈溶液、懸浮液、乳液、錠劑、丸劑、膠囊、散劑、持續釋放調配物及其類似物之形式。口服組合物(諸如調配物)可包括標準賦形劑，諸如醫藥級甘露糖醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂及其類似物。適合的賦形劑之實例描述於Remington: The Science and Practice of Pharmacy (2020) (Elsevier Science, Amsterdam, Netherlands)中，包括醫藥化合物，可含有有效量或治療有效量之5T4 ADC，例如呈分離或純化的形式，以及適合量之賦形劑以提供用於向個體適當投與的形式。調配物應適合投與模式。
除非另外指明，否則術語「5T4」係指來自任何脊椎動物來源，包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類、食蟹獼猴(cyno))、犬及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠)之多肽(「多肽」及「蛋白質」在本文中可互換使用)或任何原生5T4。5T4，亦稱為「5T4癌胚滋養層醣蛋白」或「Wnt活化抑制因子1」或「5T4癌滋養層醣蛋白」或「5T4癌胚抗原」或「WAIF1」或「M6P1」或「5T4-AG」或「5T4AG」或「TPBG」，為由TPBG基因編碼之醣蛋白。術語5T4涵蓋「全長」5T4，以及由細胞中之加工產生的任何形式的5T4或其任何片段。在一些實施例中，5T4包含信號序列。在一些實施例中，5T4不包括信號序列。在一些實施例中，術語5T4係指全長5T4之片段，其包含5T4胞外域。術語5T4亦涵蓋5T4的天然存在之變異體，諸如SNP變異體、剪接變異體及對偶基因變異體。下文提供人類5T4之全長胺基酸序列(例示性信號序列=斜體文字；例示性胞外域=加下劃線的文字)： 。
下文提供食蟹獼猴(cyno) 5T4之全長胺基酸序列(例示性信號序列=斜體文字；例示性胞外域=加下劃線的文字)： 。
下文提供小鼠5T4之全長胺基酸序列(例示性信號序列=斜體文字；例示性胞外域=加下劃線的文字)： 。
術語「恆定區」及「恆定域」在本文中可互換使用，為此項技術中眾所周知的抗體術語，且係指抗體部分，例如輕鏈及/或重鏈之羧基端部分，其不直接參與抗體與抗原之結合，但其可表現出各種效應功能，諸如與Fc受體之相互作用。該術語包括相對於免疫球蛋白可變區具有通常更保守的胺基酸序列的免疫球蛋白分子的部分。
術語「抗體」、「免疫球蛋白」或「Ig」在本文中可互換使用，且以最廣泛的含義使用，具體涵蓋例如多株抗體、單株抗體(包括促效劑、拮抗劑、中和抗體、全長單株抗體)、具有多抗原決定基或單抗原決定基特異性的抗體組合物、重組產生的抗體、單域抗體、單特異性抗體、多特異性抗體(包括雙特異性抗體)、合成抗體、嵌合抗體、人源化抗體或具有全長重鏈及/或輕鏈的抗體的人類形式。抗體亦包括單抗體域以及保留5T4結合特徵之抗體片段(及/或包含抗體片段之多肽) (在本文中亦稱為抗原結合片段)。抗體片段之非限制性實例包括抗體的抗原結合區及/或效應區，例如Fab、Fab'、F(ab') 2、Fv、scFv、(scFv) 2、單鏈抗體分子、雙可變域抗體、單可變域抗體、線性抗體、V區、由抗體片段形成的多特異性抗體、F(ab) 2、Fd、Fc、雙功能抗體、二-雙功能抗體、二硫鍵連接的Fv (dsFv)、單域抗體(例如奈米抗體)或其他片段(例如由非共價偶合之重鏈及輕鏈之可變區組成的片段)。一般而言，可變(V)區可為免疫球蛋白重鏈(VH)及/或輕鏈(VL)可變區的任何適合的排列。舉例而言，抗體亦包括包含兩個重鏈分子及兩個輕鏈分子之四聚體抗體、抗體輕鏈單體及抗體重鏈單體。因此，舉例而言，V區可為二聚體且含有結合5T4的VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚體。在任何實施例中，VH區與VL區可直接或透過連接子共價偶合以形成單鏈Fv (scFv)。為了便於參考，scFv蛋白在本文中被稱為包括在類別「抗體片段」中。抗體片段之另一種形式為包含抗體之一或多個互補決定區(CDR)的肽。CDR (亦稱為「最小識別單元」或「高變區」)可藉由構築編碼一或多個所關注CDR之聚核苷酸來獲得。此類聚核苷酸係例如藉由使用聚合酶連鎖反應以使用產抗體細胞之mRNA作為模板合成可變區來製備(參見例如Larrick等人, Methods: A Companion to Methods in Enzymology, 2:106 (1991)；Courtenay-Luck, 「Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies」, Monoclonal Antibodies Production, Engineering and Clinical Application, Ritter等人(編), 第166頁, Cambridge University Press (1995)；及Ward等人, 「Genetic Manipulation and Expression of Antibodies」, Monoclonal Antibodies: Principles and Applications, Birch等人(編), 第137頁, Wiley-Liss, Inc. (1995))。抗體片段可併入例如單域抗體、最大抗體、微型抗體、胞內抗體、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、新抗原受體之可變區(v-NAR)及雙-單鏈Fv區中(參見例如Hollinger及Hudson, Nature Biotechnology, 23(9):1126-1136, 2005)。在一些實施例中，包含VH及/或VL之抗體含有輕鏈及/或重鏈恆定區，諸如一或多個恆定區，包括一或多個IgG1、IgG2、IgG3及/或IgG4恆定區。在一些實施例中，抗體可包括上述任一者之抗原決定基結合片段。本文所描述之抗體可屬於免疫球蛋白分子之任何類別(例如IgG、IgE、IgM、IgD及IgA)或任何子類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)。
術語「可變區」及「可變域」可互換地用於指抗體之輕鏈及重鏈的一部分，該部分通常位於輕鏈及重鏈之胺基端，在重鏈中具有約120至130個胺基酸的長度，在輕鏈中具有約100至110個胺基酸的長度，且用於各抗體對其抗原之結合及特異性。重鏈可變區在本文中稱為「VH」。輕鏈可變區在本文中稱為「VL」。術語「可變」係指可變區的某些區段在抗體之間在序列上廣泛不同的事實。V區介導抗原結合且限定特定抗體對其抗原的特異性。然而，可變性並非均勻分佈在可變區的110個胺基酸跨度上。相反，V區由約15-30個胺基酸的稱為構架區(FR)的較少可變(例如相對不變)的區段組成，該等構架區由稱為「高變區」或可替代地稱為「互補決定區」的具有較大變異性(例如極端可變性)的較短區分開。重鏈及輕鏈之可變區各自包含四個構架(FR1、FR2、FR3及FR4)，其主要採用β片層組態，由三個高變區連接，該等高變區形成連接β片層結構的環，且在一些情況下形成β片層結構的一部分。各鏈中之高變區藉由構架鄰近地保持在一起，且與來自另一條鏈之高變區一起促成抗體之抗原結合位點的形成(參見例如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, (1991))。恆定區不直接參與抗體與抗原的結合，但表現出各種效應功能，諸如抗體參與抗體依賴性細胞毒性(ADCC)及補體依賴性細胞毒性(CDC)。不同抗體之間可變區的序列差異很大。序列的可變性集中於CDR中，而可變區中較少可變的部分稱為構架區(FR)。輕鏈及重鏈之CDR主要負責抗體與抗原的相互作用。在特定實施例中，可變區為人類可變區。
當關於抗體使用時，術語「重鏈」係指約50-70 kDa的多肽鏈，其中胺基端部分包括約120至130個或更多個胺基酸的可變區，且羧基端部分包括一或多個恆定區。「重鏈」可指基於恆定區之胺基酸序列的任何不同類型，例如alpha (α)、delta (δ)、epsilon (ε)、gamma (γ)及mu (μ)，其分別產生IgA、IgD、IgE、IgG及IgM類別的抗體，包括IgG的子類別，例如IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。
如本文所用，當關於抗體使用時，術語「輕鏈」可指約25 kDa的多肽鏈，其中胺基端部分包括約100至約110個或更多個胺基酸的可變區，且羧基端部分包括恆定區。輕鏈的大致長度為211至217個胺基酸。基於恆定區之胺基酸序列，存在兩種不同的類型，例如kappa (κ)或lambda (λ)。輕鏈胺基酸序列為此項技術中所熟知的。
在兩個或更多個核酸或多肽的上下文中，術語「一致」或「一致性」百分比係指當比較及比對(必要時，引入空位)以獲得最大對應性時，不考慮任何保守胺基酸取代作為序列一致性的一部分，兩個或更多個序列或子序列相同或具有指定百分比的相同核苷酸或胺基酸殘基。一致性百分比可使用序列比較軟體或演算法或藉由目視檢查來量測。可用於獲得胺基酸或核苷酸序列比對的各種演算法及軟體為此項技術中眾所周知的。此等演算法及軟體包括但不限於鹼基局部比對搜尋工具(BLAST)、ALIGN、MegAlign、BestFit、GCG Wisconsin套裝程式及其變體。在一些實施例中，兩個核酸或多肽實質上一致，意謂當比較及比對以獲得最大對應性時，其具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%或至少90%，且在一些實施例中，具有至少95%、96%、97%、98%或99%的核苷酸或胺基酸殘基一致性，如使用序列比較演算法或藉由目視檢查所量測。在一些實施例中，一致性存在於胺基酸序列的長度為至少約10個殘基、至少約20個殘基、至少約40-60個殘基、至少約60-80個殘基或其間的任何整數值的區域上。在一些實施例中，一致性存在於比60-80個殘基更長的區域上，諸如至少約80-100個殘基，且在一些實施例中，序列在所比較之序列(諸如目標蛋白或抗體之編碼區)的全長上實質上一致。在一些實施例中，一致性存在於核苷酸序列的長度為至少約10個鹼基、至少約20個鹼基、至少約40-60個鹼基、至少約60-80個鹼基或其間的任何整數值的區域上。在一些實施例中，一致性存在於比60-80個鹼基更長的區域上，諸如至少約80-1000個鹼基或更多，且在一些實施例中，序列在所比較之序列(諸如編碼所關注蛋白質之核苷酸序列)的全長上實質上一致。
「保守胺基酸取代」為其中一個胺基酸殘基經具有類似化學特徵之側鏈的另一個胺基酸殘基置換的胺基酸取代。此項技術中已大體上定義具有類似側鏈之胺基酸殘基家族，包括鹼性側鏈(例如離胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(例如天冬胺酸、麩胺酸)、不帶電荷的極性側鏈(例如甘胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸)、非極性側鏈(例如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸)、β分支側鏈(例如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及芳族側鏈(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)。舉例而言，用苯丙胺酸取代酪胺酸為保守取代。通常，本揭露之多肽、可溶性蛋白質及/或抗體之序列中的保守取代不消除含有該胺基酸序列之多肽、可溶性蛋白質或抗體與目標結合位點之結合。鑑別不消除結合的胺基酸保守取代的方法為此項技術中眾所周知的。
術語「多肽」係指任何長度之胺基酸聚合物。聚合物可為直鏈或分支鏈的，其可包含經修飾之胺基酸，且其可包括非胺基酸(例如經非胺基酸取代)。該等術語亦涵蓋天然或藉由干預修飾之胺基酸聚合物；例如，二硫鍵形成、糖基化、脂質化、乙醯化、磷酸化或任何其他操作或修飾，諸如與諸如標記組分或藥物(例如毒素)之部分(直接或間接)連接或結合。該定義內亦包括例如含有胺基酸之一或多種類似物(包括例如非天然胺基酸)以及此項技術中已知之其他修飾的多肽。應瞭解，由於本揭露之多肽可基於抗體或免疫球蛋白超家族之其他成員，因此在一些實施例中，多肽可以單鏈或單鏈二聚體形式存在。
如本文所用，第一肽中對應於第二肽中之第二胺基酸殘基的第一胺基酸殘基係指第一肽與第二肽之間的序列比對中與第二胺基酸殘基比對的第一胺基酸殘基。比對方法可供熟習此項技術者使用，諸如本文所揭示之BLAST及/或Clustal Omega。
如本文所用，「抗原」為含有抗體可結合之抗原決定基的部分或分子。因此，抗原可被抗體結合。在一些實施例中，本文所描述之抗體結合的抗原為5T4 (例如人類5T4)或其片段，諸如包含5T4之一或多個區的片段。
如本文所用，「抗原決定基」為此項技術中之術語，且係指抗體可結合之抗原的局部區域。抗原決定基可為線性抗原決定基或構形、非線性或不連續抗原決定基。在多肽抗原的情況下，例如，抗原決定基可為多肽之連續胺基酸(「線性」表位)，或者抗原決定基可包含來自多肽之兩個或更多個非連續區的胺基酸(「構形」、「非線性」或「不連續」抗原決定基)，例如人類5T4。熟習此項技術者應瞭解，一般而言，線性抗原決定基可或可不依賴於二級、三級或四級結構。例如，在一些實施例中，抗體與一組胺基酸結合，而不管該組胺基酸是否摺疊成天然三維蛋白質結構。在其他實施例中，抗體需要構成抗原決定基之胺基酸殘基展現特定構形(例如彎曲、扭轉、轉動或摺疊)以識別及結合抗原決定基。
抗體與參考抗體結合「抗原決定基」、「基本上相同的抗原決定基」或「相同的抗原決定基」。用於確定兩種抗體是否結合三維空間中之相同、重疊或相鄰抗原決定基的最廣泛使用及快速的方法為競爭分析，其可以多種不同的形式組態，例如使用經標記之抗原或經標記之抗體。在一些分析中，抗原固定於96孔盤上，或在細胞表面上表現，且使用放射性、螢光或酶標記量測未標記之抗體阻斷經標記之抗體結合的能力。
本文中之術語「Fc區」用於定義免疫球蛋白重鏈之C端區，包括例如原生序列Fc區、重組Fc區及變異Fc區。儘管免疫球蛋白重鏈之Fc區的邊界可能變化，但人類IgG重鏈Fc區通常定義為自(EU編號系統之)位置Cys226處的胺基酸殘基或(EU編號系統之)位置Pro230處的胺基酸殘基延伸至其羧基端。Fc區之C端離胺酸(EU編號系統之殘基447)可例如在抗體的產生或純化期間或藉由重組工程改造編碼抗體重鏈之核酸來移除。下文提供例示性Fc區序列(CH2域=粗體文字；CH3域=加下劃線的文字)： 。
「功能性Fc區」具有原生序列Fc區之「效應功能」。例示性「效應功能」包括C1q結合；補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體；BCR)之下調及其類似者。此類效應功能通常需要Fc區與結合區或結合域(例如抗體可變區或域)組合且可使用所揭示之各種分析來評估。
「原生序列Fc區」包含與自然界中所發現之Fc區的胺基酸序列一致的胺基酸序列，且未經人工操縱、修飾及/或改變(例如分離、純化、選擇，包括其他序列(諸如可變區序列)或與其組合)。原生序列人類Fc區包括原生序列人類IgG1 Fc區(非A及A異型)；原生序列人類IgG2 Fc區；原生序列人類IgG3 Fc區；及原生序列人類IgG4 Fc區；以及其天然存在之變異體。
「變異Fc區」包含由於至少一個胺基酸修飾(例如取代、添加或缺失)，較佳一或多個胺基酸取代，而與原生序列Fc區之胺基酸序列不同的胺基酸序列。在一些實施例中，與原生序列Fc區相比或與親本多肽之Fc區相比，變異Fc區在原生序列Fc區中或在親本多肽之Fc區中具有至少一個胺基酸取代，例如約一至約十個胺基酸取代，且較佳約一至約五個胺基酸取代。本文所描述之變異Fc區可與原生序列Fc區及/或親本多肽之Fc區具有至少約80%同源性，或與其具有至少約90%同源性，例如與其具有至少約95%同源性。本文所描述之變異Fc區在本文中可具有效應功能的喪失(例如緘默Fc)。下文提供例示性變異Fc區(「緘默Fc」)序列(CH2域=粗體文字，其中胺基酸變化加下劃線；CH3域=加下劃線的文字)： 。
術語「抗原結合片段」、「抗原結合域」、「抗原結合區」及類似術語係指抗體的一部分，該部分包含與抗原相互作用且賦予結合片段或區域其對抗原的特異性及親和力的胺基酸殘基(例如CDR)。如本文所用，「抗原結合片段」包括「抗體片段」，其包含抗體之一部分，該部分包括一或多個CDR，諸如抗體之抗原結合區或可變區。
本文所描述之抗體包括但不限於合成抗體、單株抗體、重組產生之抗體、多特異性抗體(例如包括雙特異性抗體)、人類抗體、人源化抗體、嵌合抗體、胞內抗體、單鏈Fv (scFv) (例如包括單特異性、雙特異性及其類似者)、駱駝化抗體、Fab片段、F(ab')片段、二硫鍵連接的Fv (sdFv)、抗個體基因型(抗Id)抗體及上述任一者之抗原決定基結合片段。
在一些實施例中，本文所描述之抗體包括免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性部分，諸如含有一或多個結合5T4之抗原結合位點的分子。
如本文所描述之5T4抗體可為免疫球蛋白分子之任何類型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY)、任何類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1或IgA2)或任何子類別(例如IgG2a或IgG2b)。在一些實施例中，如本文所描述之5T4抗體為IgG抗體(例如人類IgG)或其類別(例如人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)或子類別。在一些實施例中，5T4抗體為IgG1抗體。另外或替代地，5T4抗體為κ抗體。
在一些實施例中，5T4抗體為包含兩個重(H)鏈/輕(L)鏈對的4鏈抗體單元，其中H鏈的胺基酸序列一致且L鏈的胺基酸序列一致。在一些實施例中，H鏈及/或L鏈包含恆定區，例如人類恆定區。在一些實施例中，5T4抗體之L鏈恆定區為κ或λ輕鏈恆定區，例如人類κ或λ輕鏈恆定區。在一些實施例中，5T4抗體之L鏈恆定區為κ輕鏈恆定區，例如人類κ輕鏈恆定區。另外或替代地，在一些實施例中，5T4抗體之H鏈恆定區包含γ重鏈恆定區，例如人類γ重鏈恆定區。在一些實施例中，5T4抗體包含IgG恆定區，例如人類IgG恆定區(例如IgG1、IgG2、IgG3及/或IgG4恆定區)。在一些實施例中，5T4抗體包含IgG1恆定區。在一些實施例中，5T4抗體包含IgG1重鏈恆定區及κ輕鏈恆定區。
如本文所用，「5T4抗體」及「結合5T4之抗體」可互換使用，且係指優先結合5T4之抗體。抗體或其片段可優先結合5T4，諸如人類5T4，此意謂該抗體或其片段以比其與不相關對照蛋白質結合更大的親和力結合5T4，諸如人類5T4。舉例而言，該抗體或其片段可特異性識別且結合5T4或其一部分。「特異性結合」意謂5T4抗體或其片段以比對不相關對照蛋白質(例如雞卵白溶菌酶)之親和力大至少5、10、15、20、25、50、100、250、500、1000或10,000倍的親和力結合5T4。在一些實施例中，5T4抗體或其片段可實質上唯一地結合5T4 (例如，能夠將5T4與其他已知多肽區分開，例如藉助於結合親和力的可量測差異)。在一些實施例中，5T4抗體可與除人類5T4序列之外的5T4序列(例如食蟹獼猴5T4序列)反應。
當在本文中使用時，術語「高變區」、「HVR」、「HV」、「互補決定區」及「CDR」係指抗體可變區中序列高變及/或形成結構上限定之環的區域。一般而言，抗體包含六個高變區：VH中之三個(H1或VH CDR1或HCDR1、H2或VH CDR2或HCDR2、以及H3或VH CDR3或HCDR3)，以及VL中之三個(L1或VL CDR1或LCDR1、L2或VL CDR2或LCDR2、以及L3或VL CDR3或LCDR3)。數種高變區描述在使用中且涵蓋在本文中。Kabat CDR係基於序列可變性且最常用(參見例如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991))。Chothia實際上係指結構環之位置(參見例如Chothia及Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))。在使用Kabat編號規約進行編號時，Chothia CDR-H1環之末端在H32與H34之間變化，此視環之長度而定(此係因為Kabat編號方案將插入置於H35A及H35B；若既不存在35A，亦不存在35B，則環末端位於32；若僅存在35A，則環末端位於33；若35A與35B均存在，則環末端位於34)。AbM高變區代表Kabat CDR與Chothia結構環之間的折衷，且由Oxford Molecular之AbM抗體模型化軟體使用(參見例如Martin, Antibody Engineering, 第2卷, 第3章, Springer Verlag)。「contact」高變區係基於對可用複雜晶體結構之分析。來自此等高變區或CDR中之各者的殘基標示於下文中。
已開發且廣泛採用通用編號系統，ImMunoGeneTics (IMGT ®)資訊系統(Lefranc等人, Dev. Comp. Immunol. 27(1):55-77 (2003))。IMGT ®為專用於人類及其他脊椎動物之免疫球蛋白(IG)、T細胞受體(TR)及主要組織相容複合體(MHC)的整合式資訊系統。在本文中，根據胺基酸序列及輕鏈或重鏈內的位置來提及CDR。由於免疫球蛋白可變區結構內CDR的「位置」在物種之間係保守的且存在於稱為環的結構中，因此藉由使用比對結構特徵之可變區序列的編號系統，容易鑑別CDR及構架殘基。此資訊可用於將來自一個物種之免疫球蛋白的CDR殘基移植及置換至通常來自人類抗體之受體構架中。Honegger及Plückthun, J . Mol . Biol. 309: 657-670 (2001)已開發出另一種編號系統(AHon)。編號系統(包括例如Kabat編號及IMGT®獨特編號系統)之間的對應性已為熟習此項技術者所熟知(參見例如Kabat，見上文；Chothia及Lesk，見上文；Martin，見上文；Lefranc等人，見上文)且亦說明於下文中。此項技術中已知或本文所描述之各種系統代表描繪CDR之不同方式，且當其用於限定相同抗體時，其通常視為等效的。本文中所展示之例示性系統組合Kabat與Chothia。
例示性 IMGT ® Kabat AbM Chothia Contact
V HCDR1 26-35 27-38 31-35 26-35 26-32 30-35
V HCDR2 50-65 56-65 50-65 50-58 53-55 47-58
V HCDR3 95-102 105-117 95-102 95-102 96-101 93-101
V LCDR1 24-34 27-38 24-34 24-34 26-32 30-36
V LCDR2 50-56 56-65 50-56 50-56 50-52 46-55
V LCDR3 89-97 105-117 89-97 89-97 91-96 89-96
高變區可包含如下「延伸的高變區」：VL中之24-36或24-34 (L1)、46-56或50-56 (L2)及89-97或89-96 (L3)，以及VH中之26-35或26-35A (H1)、50-65或49-65 (H2)及93-102、94-102或95-102 (H3)。如本文所用，術語「高變區」、「HVR」、「HV」、「互補決定區」及「CDR」可互換使用。
如本文所用，「化學治療劑」係指作為細胞毒性藥物的藥物，其可在癌症治療中破壞或抑制惡性細胞的生長及分裂。
如本文所用，「PD-L1抑制劑」、「PD-1抑制劑」、「PD-1/PD-L1抑制劑」及「PD-L1/PD-1抑制劑」可互換使用，且係指阻斷存在於細胞表面上的PD-1及PD-L1免疫檢查點蛋白之活性的一組檢查點抑制劑抗癌藥物。PD-L1/PD-1抑制劑之非限制性實例包括納武單抗(nivolumab)、帕博利珠單抗(pembrolizumab)、阿特珠單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)、度伐魯單抗(durvalumab)、西米普利單抗(cemiplimab)、多塔利單抗(dostarlimab)及瑞弗利單抗(retifanlimab)。參見例如US8354509B2，其以全文引用的方式併入本文中。
帕博利珠單抗為對PD-1細胞表面膜受體具有特異性之人源化單株免疫球蛋白G4 (IgG4) κ抗體，其已證明產生增加的抗腫瘤免疫反應及癌症患者存活改善的能力。在一些實施例中，帕博利珠單抗包含兩條重鏈及兩條輕鏈或由兩條重鏈及兩條輕鏈組成。在其他實施例中，帕博利珠單抗之重鏈中之各者包含如下所示之胺基酸序列或由如下所示之胺基酸序列組成： QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQGLEWMGGINPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 9)。在其他實施例中，帕博利珠單抗之輕鏈中之各者包含如下所示之胺基酸序列或由如下所示之胺基酸序列組成： EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 10)。在一些實施例中，帕博利珠單抗描述於以下中之任一或多者中：KEGG條目：D10574，CAS：1374853-91-4，或PubChem：254741536，PubChem 377483934，及DrugBank登錄號：DB09037，其各自以全文引用的方式併入本文中。
如本文所用，術語「血細胞減少症」意謂血細胞數量不足及/或給定類型血細胞數量不足。血細胞減少症包括貧血、白血球減少症、嗜中性球減少症、血小板減少症及全血細胞減少症。
如本文所用，術語「嗜中性球減少症」意謂循環嗜中性球數量不足，例如絕對嗜中性球計數(ANC)小於1,500個細胞/微升(2級或更高)。如本文所用，以下嗜中性球減少症等級為：0級：ANC≥2,000個細胞/微升；1級：ANC≥1,500個細胞/微升至＜2,000個細胞/微升；2級：ANC≥1,000個細胞/微升至＜1,500個細胞/微升；3級：ANC≥500個細胞/微升至＜1,000個細胞/微升；4級：ANC＜500個細胞/微升。參見例如Common Terminology Criteria for Adverse Events (CTCAE), 版本5.0, 2017年11月, National Institutes of Health, National Cancer Institute，其以全文引用的方式併入本文中。熟習此項技術者應理解，0級嗜中性球減少症表示不存在嗜中性球減少症，亦即，其中不存在循環嗜中性球的數量不足。
如本文所用，術語「血小板減少症」意謂循環血小板數量不足，例如血小板計數小於100,000個細胞/微升。如本文所用，以下血小板減少症等級為：0級：血小板計數≥150,000個細胞/微升；1級：血小板計數≥75,000個細胞/微升至＜150,000個細胞/微升；2級：血小板計數≥50,000個細胞/微升至＜75,000個細胞/微升；3級：血小板計數≥25,000個細胞/微升至＜50,000個細胞/微升；4級：血小板計數＜25,000個細胞/微升。參見例如Common Terminology Criteria for Adverse Events (CTCAE), 版本5.0, 2017年11月, National Institutes of Health, National Cancer Institute。1級血小板減少症亦可分類為1A級：血小板計數≥100,000個細胞/微升至＜150,000個細胞/微升；以及1B級：血小板計數≥75,000個細胞/微升至＜100,000個細胞/微升。熟習此項技術者應理解，0級血小板減少症表示不存在血小板減少症，亦即，其中不存在循環血小板的數量不足。
如本文所用，術語「絕對嗜中性球計數(ANC)」意謂白血球計數中嗜中性球之總數。熟習此項技術者應知曉如何計算ANC。舉例而言，ANC可如下計算：ANC = WBC (個細胞/微升) × [(PMN + 條帶)百分比÷ 100]；其中「WBC」為白血球計數，「PMN」為嗜中性球百分比，且「條帶」為幼年嗜中性球。
參考以下實施方式及說明性實例可更充分地理解本揭露，該等實施方式及說明性實例意欲例示非限制性實施例。 7.2    5T4 抗體
本文所描述之5T4 ADC包含藥物及與其結合之5T4抗體。在一些實施例中，5T4抗體係指一種抗體，其特異性結合5T4，諸如5T4蛋白、5T4多肽、5T4多肽片段、5T4肽或5T4抗原決定基。在一些實施例中，5T4抗體為結合5T4之人類或人源化抗體(例如包含人類恆定區)。在一些實施例中，5T4抗體可結合在哺乳動物(例如人類)細胞(包括表現5T4之腫瘤細胞)表面上表現的5T4。在一些實施例中，5T4抗體結合在細胞(諸如腫瘤細胞)上表現的5T4胞外抗原決定基(例如胞外5T4抗原決定基)。在一些實施例中，5T4為人類5T4。人類5T4之例示性胺基酸序列描述於本文中。
在一些實施例中，5T4抗體與參考5T4抗體競爭結合5T4，該參考5T4抗體包含本文所描述之抗體中之任一者的VH區、VL區、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及/或LCDR3，諸如 表 1中所描述之VH區、VL區、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及/或LCDR3的胺基酸序列。因此，在一些實施例中，5T4抗體與參考5T4抗體競爭結合5T4，該參考5T4抗體包含命名為 mAbA15之抗體的一個、兩個及/或三個VH CDR及/或一個、兩個及/或三個VL CDR。在一些實施例中，5T4 ADC包含與5T4抗體(直接或間接)結合的藥物，該5T4抗體與參考5T4抗體競爭結合5T4，該參考5T4抗體包含來自命名為 mAbA15之抗體的一個、兩個及/或三個VH CDR及一個、兩個及/或三個VL CDR。在一些實施例中，5T4抗體與參考5T4抗體競爭結合5T4，該參考5T4抗體包含命名為 mAbA15之抗體的VH區及VL區。在一些實施例中，5T4抗體與參考5T4抗體競爭結合5T4，該參考5T4抗體包含：包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的VH區及包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的VL區。
在一些實施例中，5T4抗體包含本文所描述之抗體中之任一者的VH區、VL區、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及/或LCDR3，諸如 表 1中所描述之VH區、VL區、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及/或LCDR3的胺基酸序列。因此，在一些實施例中，5T4抗體包含來自命名為 mAbA15之抗體的一個、兩個及/或三個重鏈CDR及/或一個、兩個及/或三個輕鏈CDR。在一些實施例中，5T4抗體包含來自命名為 mAbA15之抗體的一個、兩個及/或三個重鏈CDR及一個、兩個及/或三個輕鏈CDR。
在一些實施例中，5T4抗體包含VH區，其包含本文諸如 表 1中所描述之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3中之一或多者(諸如一者、兩者或三者)；及/或VL區，其包含本文諸如 表 1中所描述之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3中之一或多者(諸如一者、兩者或三者)。
命名為 mAbA15之抗體包含：包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的VH及包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的VL。在其他實施例中，命名為 mAbA15之抗體包含：包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈。 表 1 ： 抗體 mAbA15
例示性 IMGT ® Kabat Chothia Contact AbM
VH CDR序列 HCDR1 GFTFSSYYIH (SEQ ID NO: 13) GFTFSSYY (SEQ ID NO: 19) SYYIH (SEQ ID NO: 24) GFTFSSY (SEQ ID NO: 25) SSYYIH (SEQ ID NO: 30) GFTFSSYYIH (SEQ ID NO: 13)
HCDR2 YITSTGSYTEYADSVKG (SEQ ID NO: 14) ITSTGSYT (SEQ ID NO: 20) YITSTGSYTEYADSVKG (SEQ ID NO: 14) STGS (SEQ ID NO: 26) WVAYITSTGSYTE (SEQ ID NO: 31) YITSTGSYTE (SEQ ID NO: 36)
HCDR3 YDRSTRYSGLDY (SEQ ID NO: 15) ARYDRSTRYSGLDY (SEQ ID NO: 21) YDRSTRYSGLDY (SEQ ID NO: 15) DRSTRYSGLD (SEQ ID NO: 27) ARYDRSTRYSGLD (SEQ ID NO: 32) YDRSTRYSGLDY (SEQ ID NO: 15)
VL CDR序列 LCDR1 RASQSVSSAVA (SEQ ID NO: 16) QSVSSA (SEQ ID NO: 22) RASQSVSSAVA (SEQ ID NO: 16) SQSVSSA (SEQ ID NO: 28) SSAVAWY (SEQ ID NO: 33) RASQSVSSAVA (SEQ ID NO: 16)
LCDR2 SASSLYS (SEQ ID NO: 17) SAS (SEQ ID NO: 23) SASSLYS (SEQ ID NO: 17) SAS (SEQ ID NO: 23) LLIYSASSLY (SEQ ID NO: 34) SASSLYS (SEQ ID NO: 17)
LCDR3 QQAYATPVT (SEQ ID NO: 18) QQAYATPVT (SEQ ID NO: 18) QQAYATPVT (SEQ ID NO: 18) AYATPV (SEQ ID NO: 29) QQAYATPV (SEQ ID NO: 35) QQAYATPVT (SEQ ID NO: 18)
VH胺基酸序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYIHWVRQAPGKGLEWVAYITSTGSYTEYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDRSTRYSGLDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 11)
VL胺基酸序列： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYATPVTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 12)
在一些實施例中，5T4抗體包含VH區。在一些實施例中，5T4抗體包含VL區。在一些實施例中，5T4抗體具有(i) VH區；及(ii) VL區之組合。
在一些實施例中，5T4抗體包含重鏈，其具有(i)本文諸如 表 1中所描述之VH，及(ii)一或多個重鏈恆定區(例如CH1、鉸鏈、CH2及CH3)之組合。例示性IgG重鏈可包含本文所描述之任何VH胺基酸序列及以下CH1、鉸鏈、CH2及CH3胺基酸序列： 。 另一例示性IgG重鏈可包含本文所描述之任何VH胺基酸序列及以下CH1、鉸鏈、CH2及CH3胺基酸序列： 。
在一些實施例中，5T4抗體包含具有以下組合的輕鏈：(i)本文諸如 表 1中所描述之VL區；及(ii)輕鏈恆定區(CL)。例示性輕鏈(例如用於與IgG重鏈配對)可包含本文所描述之任何VL胺基酸序列及以下CL胺基酸序列： 。
在一些實施例中，5T4抗體包含(a)重鏈，其具有(i)本文諸如 表 1中所描述之VH及(ii)一或多個重鏈恆定區(例如CH1、鉸鏈、CH2及CH3)之組合；及(b)輕鏈，其具有(i)本文諸如 表 1中所描述之VL及(ii) IgG形式之輕鏈恆定區(CL)之組合。
在一些實施例中，結合5T4之抗體包含具有以下胺基酸序列之重鏈： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYIHWVRQAPGKGLEWVAYITSTGSYTEYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDRSTRYSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSLCTPSRGS (SEQ ID NO: 40)，及具有以下胺基酸序列之輕鏈：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYATPVTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 3)。
在一些實施例中，結合5T4之抗體包含重鏈，該重鏈已經修飾以包括甲醯基甘胺酸殘基且因此具有以下胺基酸序列： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYIHWVRQAPGKGLEWVAYITSTGSYTEYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDRSTRYSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSL( fGly)TPSRGS (SEQ ID NO: 41)，其中 f ( Gly )為甲醯基甘胺酸殘基。在其他實施例中，結合5T4之抗體進一步包含具有以下胺基酸序列之輕鏈：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYATPVTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 3)。
在一些實施例中，5T4 ADC包含具有以下胺基酸序列之重鏈：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYIHWVRQAPGKGLEWVAYITSTGSYTEYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDRSTRYSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSL ( fGly ')TPSRGS (SEQ ID NO: 2)，其中( fGly ')為與本文所揭示之連接子-藥物結合的胺基酸(甲醯基甘胺酸) (諸如藉由使其側鏈經連接子-藥物置換)。在其他實施例中，結合5T4之抗體進一步包含具有以下胺基酸序列之輕鏈：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYATPVTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 3)。
如本文所描述，為了產生結合物，含有 fGly殘基之多肽可藉由 fGly與連接至藥物或活性劑之連接子的反應性部分(例如本文所描述之肼基-吲哚基或肼基-吡咯并-吡啶基偶合部分)的反應而結合至藥物或活性劑，以產生含 fGly '之硫酸酯酶模體。如本文所用，術語 fGly '係指透過本文所描述之連接子與藥物或活性劑偶合之硫酸酯酶模體的胺基酸殘基。
在一些實施例中，5T4 ADC包含具有以下胺基酸序列之重鏈：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYIHWVRQAPGKGLEWVAYITSTGSYTEYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDRSTRYSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSL nTPSRGS (SEQ ID NO: 42)，其中 n為與本文所揭示之連接子-藥物結合的胺基酸(甲醯基甘胺酸) (諸如藉由使其側鏈經連接子-藥物置換)。在一些實施例中，胺基酸 n係指 fGly '。在其他實施例中，結合5T4之抗體進一步包含具有以下胺基酸序列之輕鏈：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKA PKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYATPVTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 3)。
在一些實施例中，5T4抗體包含一或多個CDR (例如一個、兩個、三個、四個、五個或六個CDR)，例如 表 1中所描述之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及/或LCDR3。
在一些實施例中，5T4抗體包含一或多個CDR (例如一個、兩個或三個VH CDR)，例如 表 1中所描述之HCDR1、HCDR2、HCDR3。在一些實施例中，5T4抗體包含一或多個CDR (例如一個、兩個或三個VL CDR)，例如 表 1中所描述之LCDR1、LCDR2及/或LCDR3。在一些實施例中，5T4抗體包含一或多個CDR (例如一個、兩個或三個VH CDR)，例如 表 1中所描述之HCDR1、HCDR2、HCDR3，及一或多個CDR (例如一個、兩個或三個VL CDR)，例如 表 1中所描述之LCDR1、LCDR2及/或LCDR3。
在一些實施例中，5T4抗體包含重鏈可變區(VH)，其包含：(1)包含以下中之任一者之胺基酸序列的HCDR1：(i) SEQ ID NO: 13，(ii) SEQ ID NO: 19，(iii) SEQ ID NO: 24，(iv) SEQ ID NO: 25，及(v) SEQ ID NO: 30；(2)包含以下中之任一者之胺基酸序列的HCDR2：(i) SEQ ID NO: 14，(ii) SEQ ID NO: 20，(iii) SEQ ID NO: 26，(iv) SEQ ID NO: 31，及(v) SEQ ID NO: 36；及(3)包含以下中之任一者之胺基酸序列的HCDR3：(i) SEQ ID NO: 15，(ii) SEQ ID NO: 21，(iii) SEQ ID NO: 27，及(iv) SEQ ID NO: 32；及/或VL區，其包含：(1)包含以下中之任一者之胺基酸序列的VCDR1：(i) SEQ ID NO: 16，(ii) SEQ ID NO: 22，(iii) SEQ ID NO: 28，及(iv) SEQ ID NO: 33；(2)包含以下中之任一者之胺基酸序列的LCDR2：(i) SEQ ID NO: 17，(ii) SEQ ID NO: 23，及(iii) SEQ ID NO: 34；及(3)包含以下中之任一者之胺基酸序列的LCDR3：(i) SEQ ID NO: 18，(ii) SEQ ID NO: 29，及(iii) SEQ ID NO: 35。
在一些實施例中，5T4抗體包含VH區，其包含：(1)包含以下中之任一者之胺基酸序列的HCDR1：(i) SEQ ID NO: 13，(ii) SEQ ID NO: 19，(iii) SEQ ID NO: 24，(iv) SEQ ID NO: 25，及(v) SEQ ID NO: 30；(2)包含以下中之任一者之胺基酸序列的HCDR2：(i) SEQ ID NO: 14，(ii) SEQ ID NO: 20，(iii) SEQ ID NO: 26，(iv) SEQ ID NO: 31，及(v) SEQ ID NO: 36；及(3)包含以下中之任一者之胺基酸序列的HCDR3：(i) SEQ ID NO: 15，(ii) SEQ ID NO: 21，(iii) SEQ ID NO: 27，及(iv) SEQ ID NO: 32。
在一些實施例中，5T4抗體包含VL區，其包含：(1)包含以下中之任一者之胺基酸序列的LCDR1：(i) SEQ ID NO: 16，(ii) SEQ ID NO: 22，(iii) SEQ ID NO: 28，及(iv) SEQ ID NO: 33；(2)包含以下中之任一者之胺基酸序列的LCDR2：(i) SEQ ID NO: 17，(ii) SEQ ID NO: 23，及(iii) SEQ ID NO: 34；及(3)包含以下中之任一者之胺基酸序列的LCDR3：(i) SEQ ID NO: 18，(ii) SEQ ID NO: 29，及(iii) SEQ ID NO: 35。
在一些實施例中，5T4 ADC包含結合5T4之抗體，其中該抗體包含來自命名為 mAbA15之抗體的所有三個重鏈CDR及/或所有三個輕鏈CDR，命名為 mAbA15之抗體包含SEQ ID NO: 11之VH胺基酸序列及SEQ ID NO: 12之VL胺基酸序列。在一些實施例中，5T4 ADC包含5T4抗體，其中該5T4抗體包含來自命名為 mAbA15之抗體的所有三個重鏈CDR及/或所有三個輕鏈CDR。
在一些實施例中，5T4 ADC包含結合5T4之抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含本文諸如 表 1中所描述之HCDR1、HCDR2及HCDR3胺基酸序列；及/或(b) VL區，其包含本文諸如 表 1中所描述之LCDR1、LCDR2及LCDR3胺基酸序列。在一些實施例中，5T4 ADC包含結合5T4之抗體，其中該抗體包含：VH區，其包含本文諸如 表 1中所描述之HCDR1、HCDR2及HCDR3胺基酸序列。在一些實施例中，5T4 ADC包含結合5T4之抗體，其中該抗體包含VL區，其包含本文諸如 表 1中所描述之LCDR1、LCDR2及LCDR3胺基酸序列。
在一些實施例中，5T4 ADC包含結合5T4之抗體，其中該抗體包含本文所描述之VH區及/或VL區，且其中該VH及/或VL包含人類構架序列。在一些實施例中，VH區及/或VL區包含構架1 (FR1)、構架2 (FR2)、構架3 (FR3)及/或框架4 (FR4)序列，諸如人類FR1、人類FR2、人類FR3及/或人類FR4。
在一些實施例中，5T4抗體之CDR可藉由Kabat系統確定(Kabat等人, (1971) Ann. NY Acad. Sci. 190:382-391及Kabat等人, (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第五版, U.S. Department of Health and Human Services, NIH出版號91-3242)。
在一些實施例中，5T4抗體之CDR可藉由Chothia系統確定，其在本文中將被稱為「Chothia CDR」(參見例如Chothia及Lesk, 1987, J. Mol. Biol., 196:901-917；Al-Lazikani等人, 1997, J. Mol. Biol., 273:927-948；Chothia等人, 1992, J. Mol. Biol., 227:799-817；Tramontano A.等人, 1990, J. Mol. Biol. 215(1):175-82；及美國專利第7,709,226號)。
在一些實施例中，5T4抗體之CDR可藉由ImMunoGeneTics (IMGT ®)系統確定，例如Lefranc, M.-P., 1999, The Immunologist, 7:132-136及Lefranc, M.-P.等人, 1999, Nucleic Acids Res., 27:209-212中所描述(「IMGT ®CDR」)。
在一些實施例中，5T4抗體之CDR可藉由AbM系統確定，其在本文中將被稱為「AbM CDR」，例如MacCallum等人, 1996, J. Mol. Biol., 262:732-745中所描述。亦參見例如Martin, A., 「Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains」, Antibody Engineering, Kontermann及Dübel編, 第31章, 第422-439頁, Springer-Verlag, Berlin (2001)。
在一些實施例中，5T4抗體之CDR可藉由Contact系統確定，其在本文中將被稱為「Contact CDR」(參見例如MacCallum RM等人, 1996, J Mol Biol 5: 732-745)。Contact CDR係基於對可用複雜晶體結構之分析。
在一些實施例中，沿著5T4抗體之VH (例如CDR1、CDR2或CDR3)及/或VL (例如CDR1、CDR2或CDR3)區的一或多個(例如一個、兩個、三個) CDR的位置可變化一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸位置，其限制條件為維持(例如實質上維持例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)與5T4 (例如人類5T4)的結合。舉例而言，在一些實施例中，定義 表 1之CDR的位置可藉由相對於當前CDR位置將CDR之N端及/或C端邊界移位一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸而變化，其限制條件為維持(例如實質上維持例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)與5T4 (例如人類5T4)的結合。另外或替代地，在一些實施例中，沿著本文所描述之5T4抗體(例如人類5T4抗體)之VH (例如CDR1、CDR2或CDR3)及/或VL (例如CDR1、CDR2或CDR3)區的一或多個(例如一個、兩個、三個) CDR的長度可變化(例如更短或更長)一個、兩個、三個、四個、五個或更多個胺基酸，其限制條件為維持(例如實質上維持例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)與5T4 (例如人類5T4)的結合。舉例而言，在一些實施例中，VH及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3可比SEQ ID NO: 13-36所描述之CDR中之一或多者短一個、兩個、三個、四個、五個或更多個胺基酸，其限制條件為維持(例如實質上維持例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)與5T4 (例如人類5T4)的結合。在其他實施例中，VH及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3可比SEQ ID NO: 13-36所描述之CDR中之一或多者長一個、兩個、三個、四個、五個或更多個胺基酸，其限制條件為維持(例如實質上維持例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)與5T4 (例如人類5T4)的結合。另外或替代地，在一些實施例中，與SEQ ID NO: 13-36所描述之CDR中之一或多者相比，VH及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3之胺基端可延伸一個、兩個、三個、四個、五個或更多個胺基酸，其限制條件為維持(例如實質上維持例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)與5T4 (例如人類5T4)的結合。另外或替代地，在一些實施例中，與SEQ ID NO: 13-36所描述之CDR中之一或多者相比，VH及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3之羧基端可延伸一個、兩個、三個、四個、五個或更多個胺基酸，其限制條件為維持(例如實質上維持例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)與5T4 (例如人類5T4)的結合。另外或替代地，在一些實施例中，與SEQ ID NO: 13-36所描述之CDR中之一或多者相比，VH及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3之胺基端可縮短一個、兩個、三個、四個、五個或更多個胺基酸，其限制條件為維持(例如實質上維持例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)與5T4 (例如人類5T4)的結合。在一些實施例中，與SEQ ID NO: 13-36所描述之CDR中之一或多者相比，VH及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3之羧基端可縮短一個、兩個、三個、四個、五個或更多個胺基酸，其限制條件為維持(例如實質上維持例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)與5T4 (例如人類5T4)的結合。可使用此項技術中已知的任何方法來確定是否維持與5T4 (例如人類5T4)的結合，諸如WO2023220620及WO2023220626中所揭示之彼等方法，該等專利各自以全文引用的方式併入本文中。 7.3 抗體藥物結合物及結合方法
在一些實施例中，抗體可在與連接子-藥物結合之前經修飾。抗體之修飾可產生經修飾之抗體，其含有一或多個適於與連接子-藥物結合之反應性基團。
在一些實施例中，抗體可在一或多個胺基酸殘基處經修飾以提供一或多個適於與連接子-藥物結合之反應性基團。舉例而言，引入多肽中的羰基可選擇性地與α-親核體(諸如攜有胺氧基及醯肼的化合物)反應。具有增強的動力學、位點選擇性及結合物穩定性的對蛋白質上之羰基官能基具有選擇性的化學物質可產生改良的生物結合物。
在一些實施例中，抗體可經修飾以包括反應性醛基(例如反應性醛)。反應性醛可包括在「醛標籤」或「ald-標籤」中，該標籤意指衍生自硫酸酯酶模體之胺基酸序列，其已藉由甲醯基甘胺酸生成酶(FGE)的作用轉化為含有2-甲醯基甘胺酸殘基(在本文中稱為「 fGly」)。由FGE生成的 fGly殘基在文獻中亦稱為「甲醯基甘胺酸」。換言之，術語「醛標籤」在本文中用於指包含「經轉化」之硫酸酯酶模體(例如其中半胱胺酸或絲胺酸殘基已藉由FGE的作用轉化成 fGly的硫酸酯酶模體，例如L( fGly)TPSR (SEQ ID NO: 43))的胺基酸序列。經轉化之硫酸酯酶模體可衍生自包含「未轉化」之硫酸酯酶模體(例如其中半胱胺酸或絲胺酸殘基尚未藉由FGE轉化成 fGly，但能夠被轉化的硫酸酯酶模體，例如具有序列：L(C/S)TPSR (SEQ ID NO: 44)的未轉化之硫酸酯酶模體)的胺基酸序列。在甲醯基甘胺酸生成酶(FGE)對硫酸酯酶模體之作用的上下文中使用的「轉化」係指硫酸酯酶模體中之半胱胺酸或絲胺酸殘基生物化學修飾成甲醯基甘胺酸( fGly)殘基(例如Cys修飾成 fGly，或Ser修飾成 fGly)。如本文所用，帶醛標籤之抗體係指其中半胱胺酸或絲胺酸殘基已經修飾以形成甲醯基甘胺酸殘基的抗體。醛標籤及其在定點蛋白質修飾中之用途的額外態樣描述於U.S. 7,985,783、U.S. 8,729,232、WO2008036350及WO2009120611中，其揭露內容各自以引用的方式併入本文中。因此，與本文所揭示之連接子或連接子-藥物結合的 fGly殘基在本文中稱為 fGly '。
多肽轉化為包括 fGly可藉由基於細胞之方法(活體內)或無細胞方法(活體外)實現。類似地，修飾多肽以產生適合於結合的多肽(例如修飾以產生含有適合於結合的反應性基團的多肽)可藉由基於細胞之方法(活體內)或無細胞方法(活體外)實現。
抗體之胺基酸序列可經修飾以包括硫酸酯酶模體，其含有能夠在活體內(例如在細胞中轉譯含醛標籤之蛋白質時)或活體外(例如藉由在無細胞系統中使含醛標籤之蛋白質與FGE接觸)藉由FGE的作用轉化(氧化)成 fGly殘基的絲胺酸或半胱胺酸殘基。此類硫酸酯酶模體在本文中亦可稱為FGE修飾位點。用於產生5T4 ADC之5T4抗體包括至少Ig恆定區，例如Ig重鏈恆定區(例如至少CH1域；至少CH1及CH2域；CH1、CH2及CH3域；或CH1、CH2、CH3及CH4域)或Ig輕鏈恆定區。
硫酸酯酶模體可引入抗體中之任何適宜位點中。如本文中所指出，在一些實施例中，目標多肽之原生胺基酸序列的修飾程度降至最低，以使插入、缺失、取代(置換)及/或添加(例如添加至N端或C端)之胺基酸殘基數目降至最低。使目標抗體之胺基酸序列的修飾程度降至最低可使此類修飾對抗體功能及/或結構可具有的影響降至最低。
在一些實施例中，帶醛標籤之抗體包含帶醛標籤之Ig重鏈恆定區(例如至少CH1域；至少CH1及CH2域；CH1、CH2及CH3域；或CH1、CH2、CH3及CH4域)。帶醛標籤之Ig重鏈恆定區可包括IgA、IgM、IgD、IgE、IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同型重鏈或其任何異型變異體之重鏈恆定區序列，例如人類重鏈恆定區序列或小鼠重鏈恆定區序列、雜合體重鏈恆定區、合成重鏈恆定區或共有重鏈恆定區序列及其類似序列，該等序列經修飾以包括至少一個硫酸酯酶模體，該硫酸酯酶模體可藉由FGE修飾以產生經 fGly修飾之Ig多肽。參見例如WO2012097333及WO2018169953，其各自以全文引用的方式併入本文中。Ig重鏈之異型變異體為此項技術中已知的。參見例如Jefferis及Lefranc (2009) MAbs1:4。
在一些實施例中，帶醛標籤之抗體包含帶醛標籤之Ig輕鏈恆定區。帶醛標籤之Ig輕鏈恆定區可包括κ輕鏈、λ輕鏈之恆定區序列，例如κ或λ輕鏈恆定區、雜合體輕鏈恆定區、合成輕鏈恆定區或共有輕鏈恆定區序列及其類似序列，該等序列經修飾以包括至少一個硫酸酯酶模體，該硫酸酯酶模體可藉由FGE修飾以產生經 fGly修飾之抗體。參見例如WO2012097333及WO2017189432，其各自以全文引用的方式併入本文中。
或者，經分離、未修飾之多肽可在缺乏適合酶的宿主細胞中重組產生之後或藉由合成產生來分離。隨後可使經分離之多肽與適合酶在提供多肽之所需修飾以包括 fGly的條件下接觸。可藉由此項技術中已知的方法(例如使用加熱、調節pH、離液劑(例如尿素及其類似物)、有機溶劑(例如烴類：辛烷、苯、氯仿)及其類似物)使多肽展開且使變性蛋白質與適合酶接觸。經修飾之多肽隨後可在適合條件下再摺疊。
在一些實施例中，含有 fGly殘基的經修飾之抗體可藉由 fGly與連接子-藥物上之偶合部分(諸如本文所描述之肼基-吡咯并偶合部分)的反應而與連接子-藥物結合。舉例而言，可自產生源(例如重組宿主細胞產生、合成產生)分離含 fGly之抗體，且在適於提供藥物或其他部分與5T4抗體之結合的條件下與含反應性搭配物之藥物或其他部分(例如可偵測標記)接觸。舉例而言，含反應性搭配物之藥物或其他部分可包括結合部分(例如本文所描述之肼基-吡咯并偶合部分)。含肼基-吡咯并之藥物可與抗體反應以產生本文所描述之5T4 ADC。參見例如WO2014078566及WO2015081282，其各自以全文引用的方式併入本文中。
用於使抗體與嗒𠯤-吡咯并偶合部分偶合的通用流程如下所示。
肼基-吡咯并偶合部分，其在本文中可互換地稱為氮雜-肼基-異-皮克特-施彭格勒(aza-hydrazino- iso-Pictet-Spengler，azaHIPS)偶合部分，在與甲醯基-甘胺酸結合後形成嗒𠯤-吡咯并偶合部分，諸如以上所示。5T4抗體可包括2-甲醯基甘胺酸殘基( fGly)，其與azaHIPS偶合部分反應，從而將兩者結合在一起。為了產生5T4 ADC，藥物可在azaHIPS部分的任何位置(例如R 16、Y 1、Y 2、Y 3或Q 4)直接或間接(例如透過連接子部分)與azaHIPS部分偶合。R 2及R 3可各自獨立地為任何所需取代基，諸如但不限於氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、烷氧基、經取代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、羧基、羧基酯、醯基、醯氧基、醯基胺基、胺基醯基、烷基醯胺、經取代之烷基醯胺、磺醯基、硫代烷氧基、經取代之硫代烷氧基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷基、經取代之環烷基、雜環基或經取代之雜環基。
醛標籤之最小硫酸酯酶模體之長度通常為5或6個胺基酸殘基，長度通常不超過6個胺基酸殘基。Ig多肽中提供的硫酸酯酶模體為至少5或6個胺基酸殘基，且長度可為例如5至16、6至16、5至15、6至15、5至14、6至14、5至13、6至13、5至12、6至12、5至11、6至11、5至10、6至10、5至9、6至9、5至8或6至8個胺基酸殘基，以便限定長度小於16、15、14、13、12、11、10、9、8、7或6個胺基酸殘基的硫酸酯酶模體。
在某些實施例中，所關注之5T4抗體包括相對於原生胺基酸序列插入、缺失、取代(置換)一或多個胺基酸殘基，諸如2個或更多個、或3個或更多個、或4個或更多個、或5個或更多個、或6個或更多個、或7個或更多個、或8個或更多個、或9個或更多個、或10個或更多個、或11個或更多個、或12個或更多個、或13個或更多個、或14個或更多個、或15個或更多個、或16個或更多個、或17個或更多個、或18個或更多個、或19個或更多個、或20個或更多個胺基酸殘基以提供5T4抗體中硫酸酯酶模體之序列的彼等抗體。在某些實施例中，5T4抗體包括相對於5T4抗體之原生胺基酸序列(諸如SEQ ID NO: 3之輕鏈及/或包含SEQ ID NO: 11之VH及Fc區的重鏈)的胺基酸序列的少於20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3或2個胺基酸殘基的修飾(插入、添加、缺失及/或取代/置換)。當5T4抗體之原生胺基酸序列含有所需硫酸酯酶模體之一或多個殘基時，可減少殘基修飾之總數，例如藉由側接原生胺基酸殘基之胺基酸殘基的定點修飾(插入、添加、缺失、取代/置換)以提供所需硫酸酯酶模體的序列。在某些實施例中，使目標抗體之原生胺基酸序列的修飾程度降至最低，以便使插入、缺失、取代(置換)或添加(例如添加至N端或C端)之胺基酸殘基的數目降至最低。使目標抗體之胺基酸序列的修飾程度降至最低可使此類修飾對抗體功能及/或結構可具有的影響降至最低。
應注意，儘管備受關注之醛標籤為包含至少最小硫酸酯酶模體(亦稱為「共有硫酸酯酶模體」)之醛標籤，但將容易瞭解，本揭露考慮且涵蓋更長的醛標籤且其可用於本揭露之組合物及方法中。因此，醛標籤可包含5或6個殘基的最小硫酸酯酶模體或可更長，且包含可在模體之N端及/或C端側藉由額外胺基酸殘基側接的最小硫酸酯酶模體。考慮例如5或6個胺基酸殘基之醛標籤，以及超過5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多個胺基酸殘基之更長胺基酸序列。
醛標籤可存在於Ig重鏈之C端處或附近；例如醛標籤可存在於原生野生型Ig重鏈C端之1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸內。醛標籤可存在於Ig重鏈之CH1域內。醛標籤可存在於Ig重鏈之CH2域內。醛標籤可存在於Ig重鏈之CH3域內。醛標籤可存在於Ig輕鏈恆定區中，例如κ輕鏈恆定區或λ輕鏈恆定區中。
在一些實施例中，本文所揭示之5T4抗體包含硫酸酯酶模體。
在某些實施例中，所用硫酸酯酶模體可由以下描述： X 1Z 1X 2Z 2X 3Z 3(SEQ ID NO: 68) 其中： Z 1為半胱胺酸或絲胺酸(其亦可由(C/S)表示)； Z 2為脯胺酸或丙胺酸殘基(其亦可由(P/A)表示)； Z 3為鹼性胺基酸(例如精胺酸(R)，且可為離胺酸(K)或組胺酸(H)，例如離胺酸)，或脂族胺基酸(丙胺酸(A)、甘胺酸(G)、白胺酸(L)、纈胺酸(V)、異白胺酸(I)或脯胺酸(P)，例如A、G、L、V或I； X 1存在或不存在，且當存在時，可為任何胺基酸，例如脂族胺基酸、含硫胺基酸或極性、不帶電荷的胺基酸(例如除芳族胺基酸或帶電荷的胺基酸之外)，例如L、M、V、S或T，例如L、M、S或V，其限制條件為當硫酸酯酶模體位於目標5T4抗體之N端時，X 1存在；以及 X 2及X 3可獨立地為任何胺基酸，但通常為脂族胺基酸、極性、不帶電荷的胺基酸或含硫胺基酸(例如除芳族胺基酸或帶電荷的胺基酸之外)，例如S、T、A、V、G或C，例如S、T、A、V或G。
抗體重鏈及/或輕鏈之胺基酸序列可經修飾以提供X 1Z 1X 2Z 2X 3Z 3(SEQ ID NO: 68)之至少5個胺基酸的序列 其中： Z 1為半胱胺酸或絲胺酸； Z 2為脯胺酸或丙胺酸殘基； Z 3為脂族胺基酸或鹼性胺基酸； X 1存在或不存在，且當存在時，為任何胺基酸，其限制條件為當異源硫酸酯酶模體位於5T4抗體之N端時，X 1存在； X 2及X 3各自獨立地為任何胺基酸。
硫酸酯酶模體通常經選擇以便能夠藉由所選FGE (例如存在於表現帶醛標籤之抗體之宿主細胞中的FGE，或在無細胞活體外方法中待與帶醛標籤之抗體接觸的FGE)轉化。
舉例而言，當FGE為真核FGE (例如哺乳動物FGE，包括人類FGE)時，硫酸酯酶模體可為： X 1CX 2PX 3Z 3(SEQ ID NO: 69) 其中： X 1可存在或不存在，且當存在時，可為任何胺基酸，例如脂族胺基酸、含硫胺基酸或極性、不帶電荷的胺基酸(例如除芳族胺基酸或帶電荷的胺基酸之外)，例如L、M、S或V，其限制條件為當硫酸酯酶模體位於目標5T4抗體之N端時，X 1存在； X 2及X 3可獨立地為任何胺基酸，例如脂族胺基酸、含硫胺基酸或極性、不帶電荷的胺基酸(例如除芳族胺基酸或帶電荷的胺基酸之外)，例如S、T、A、V、G或C，例如S、T、A、V或G；以及 Z 3為鹼性胺基酸(例如精胺酸(R)，且可為離胺酸(K)或組胺酸(H)，例如離胺酸)，或脂族胺基酸(丙胺酸(A)、甘胺酸(G)、白胺酸(L)、纈胺酸(V)、異白胺酸(I)或脯胺酸(P)，例如A、G、L、V或I。
硫酸酯酶模體之特定實例包括LCTPSR (SEQ ID NO: 70)、MCTPSR (SEQ ID NO: 71)、VCTPSR (SEQ ID NO: 72)、LCSPSR (SEQ ID NO: 73)、LCAPSR (SEQ ID NO: 74)、LCVPSR (SEQ ID NO: 75)、LCGPSR (SEQ ID NO: 76)、ICTPAR (SEQ ID NO: 77)、LCTPSK (SEQ ID NO: 78)、MCTPSK (SEQ ID NO: 79)、VCTPSK (SEQ ID NO: 80)、LCSPSK (SEQ ID NO: 81)、LCAPSK (SEQ ID NO: 82)、LCVPSK (SEQ ID NO: 83)、LCGPSK (SEQ ID NO: 84)、LCTPSA (SEQ ID NO: 85)、ICTPAA (SEQ ID NO: 86)、MCTPSA (SEQ ID NO: 87)、VCTPSA (SEQ ID NO: 88)、LCSPSA (SEQ ID NO: 89)、LCAPSA (SEQ ID NO: 90)、LCVPSA (SEQ ID NO: 91)及LCGPSA (SEQ ID NO: 92)。
在一些實施例中，在與本文所揭示之連接子或連接子-藥物結合之前，本文所揭示之5T4抗體包含含 fGly之硫酸酯酶模體。
在FGE對抗體重鏈及/或輕鏈的作用後，硫酸酯酶模體中之絲胺酸或半胱胺酸被修飾成 fGly。因此，含 fGly之硫酸酯酶模體可為： X 1( fGly)X 2Z 2X 3Z 3(SEQ ID NO: 93) 其中： fGly為甲醯基甘胺酸殘基； Z 2為脯胺酸或丙胺酸殘基(其亦可由(P/A)表示)； Z 3為鹼性胺基酸(例如精胺酸(R)，且可為離胺酸(K)或組胺酸(H)，通常為離胺酸)，或脂族胺基酸(丙胺酸(A)、甘胺酸(G)、白胺酸(L)、纈胺酸(V)、異白胺酸(I)或脯胺酸(P)，例如A、G、L、V或I； X 1可存在或不存在，且當存在時，可為任何胺基酸，例如脂族胺基酸、含硫胺基酸或極性、不帶電荷的胺基酸(例如除芳族胺基酸或帶電荷的胺基酸之外)，例如L、M、V、S或T，例如L、M或V，其限制條件為當硫酸酯酶模體位於目標5T4抗體之N端時，X 1存在；以及 X 2及X 3可獨立地為任何胺基酸，例如脂族胺基酸、含硫胺基酸或極性、不帶電荷的胺基酸(例如除芳族胺基酸或帶電荷的胺基酸之外)，例如S、T、A、V、G或C，例如S、T、A、V或G。
含 fGly之硫酸酯酶模體的特定實例包括L( fGly)TPSR (SEQ ID NO: 94)、M( fGly)TPSR (SEQ ID NO: 95)、V( fGly)TPSR (SEQ ID NO: 96)、L( fGly)SPSR (SEQ ID NO: 97)、L( fGly)APSR (SEQ ID NO: 98)、L( fGly)VPSR (SEQ ID NO: 99)、L( fGly)GPSR (SEQ ID NO: 100)、I( fGly)TPAR (SEQ ID NO: 101)、L( fGly)TPSK (SEQ ID NO: 102)、M( fGly)TPSK (SEQ ID NO: 103)、V( fGly)TPSK (SEQ ID NO: 104)、L( fGly)SPSK (SEQ ID NO: 105)、L( fGly)APSK (SEQ ID NO: 106)、L( fGly)VPSK (SEQ ID NO: 107)、L( fGly)GPSK (SEQ ID NO: 108)、L( fGly)TPSA (SEQ ID NO: 109)、I( fGly)TPAA (SEQ ID NO: 110)、M( fGly)TPSA (SEQ ID NO: 111)、V( fGly)TPSA (SEQ ID NO: 112)、L( fGly)SPSA (SEQ ID NO: 113)、L( fGly)APSA (SEQ ID NO: 114)、L( fGly)VPSA (SEQ ID NO: 115)及L( fGly)GPSA (SEQ ID NO: 116)。
在一些實施例中，本文所揭示之5T4抗體包含含 fGly'之硫酸酯酶模體。在一些實施例中，本文所揭示之5T4抗體包含至少一個含 fGly'之硫酸酯酶模體。
如上文所描述，為了產生結合物，含有 fGly殘基之5T4抗體可藉由 fGly與連接至藥物或活性劑之連接子的反應性部分(例如上文所描述之肼基-吲哚基或肼基-吡咯并-吡啶基結合部分)的反應而結合至藥物或活性劑，以產生含 fGly '之硫酸酯酶模體。如本文所用，術語 fGly'係指透過本文所描述之連接子(例如分支連接子)與藥物或活性劑偶合之硫酸酯酶模體的胺基酸殘基。因此，含 fGly'之硫酸酯酶模體可為： X 1( fGly')X 2Z 2X 3Z 3(SEQ ID NO: 67) 其中： fGly'為透過本文所描述之連接子(例如分支連接子)與藥物或活性劑偶合之胺基酸殘基； Z 2為脯胺酸或丙胺酸殘基(其亦可由(P/A)表示)； Z 3為鹼性胺基酸(例如精胺酸(R)，且可為離胺酸(K)或組胺酸(H)，通常為離胺酸)，或脂族胺基酸(丙胺酸(A)、甘胺酸(G)、白胺酸(L)、纈胺酸(V)、異白胺酸(I)或脯胺酸(P)，例如A、G、L、V或I； X 1可存在或不存在，且當存在時，可為任何胺基酸，例如脂族胺基酸、含硫胺基酸或極性、不帶電荷的胺基酸(例如除芳族胺基酸或帶電荷的胺基酸之外)，例如L、M、V、S或T，例如L、M或V，其限制條件為當硫酸酯酶模體位於目標5T4抗體之N端時，X 1存在；以及 X 2及X 3可獨立地為任何胺基酸，例如脂族胺基酸、含硫胺基酸或極性、不帶電荷的胺基酸(例如除芳族胺基酸或帶電荷的胺基酸之外)，例如S、T、A、V、G或C，例如S、T、A、V或G。
含 fGly'之硫酸酯酶模體的特定實例包括L( fGly')TPSR (SEQ ID NO: 1)、M( fGly')TPSR (SEQ ID NO: 45)、V( fGly')TPSR (SEQ ID NO: 46)、L( fGly')SPSR (SEQ ID NO: 47)、L( fGly')APSR (SEQ ID NO: 48)、L( fGly')VPSR (SEQ ID NO: 49)、L( fGly')GPSR (SEQ ID NO: 50)、I( fGly')TPAR (SEQ ID NO: 51)、L( fGly')TPSK (SEQ ID NO: 52)、M( fGly')TPSK (SEQ ID NO: 53)、V( fGly')TPSK (SEQ ID NO: 54)、L( fGly')SPSK (SEQ ID NO: 55)、L( fGly')APSK (SEQ ID NO: 56)、L( fGly')VPSK (SEQ ID NO: 57)、L( fGly')GPSK (SEQ ID NO: 58)、L( fGly')TPSA (SEQ ID NO: 59)、I( fGly')TPAA (SEQ ID NO: 60)、M( fGly')TPSA (SEQ ID NO: 61)、V( fGly')TPSA (SEQ ID NO: 62)、L( fGly')SPSA (SEQ ID NO: 63)、L( fGly')APSA (SEQ ID NO: 64)、L( fGly')VPSA (SEQ ID NO: 65)及L( fGly')GPSA (SEQ ID NO: 66)。
如上文所指出，抗體之胺基酸序列經修飾以包括硫酸酯酶模體，其含有能夠在活體內(例如在細胞中轉譯含醛標籤之蛋白質時)或活體外(例如藉由在無細胞系統中使含醛標籤之蛋白質與FGE接觸)藉由FGE的作用轉化(氧化)成 fGly殘基的絲胺酸或半胱胺酸殘基。用於產生本揭露結合物之抗體包括至少Ig恆定區，例如Ig重鏈恆定區(例如至少CH1域；至少CH1及CH2域；CH1、CH2及CH3域；或CH1、CH2、CH3及CH4域)或Ig輕鏈恆定區。此類Ig抗體在本文中稱為「目標Ig多肽」或「目標抗體」。
抗體中引入硫酸酯酶模體之位點可為任何適宜位點。如上文所指出，在一些情況下，使目標多肽之原生胺基酸序列的修飾程度降至最低，以便使插入、缺失、取代(替換)及/或添加(例如添加至N端或C端)之胺基酸殘基的數目降至最低。使目標抗體之胺基酸序列的修飾程度降至最低可使此類修飾對抗體功能及/或結構可具有的影響降至最低。
抗體重鏈恆定區可包括任何重鏈同型之Ig恆定區、非天然存在之Ig重鏈恆定區(包括共有Ig重鏈恆定區)。Ig恆定區胺基酸序列可經修飾以包括醛標籤，其中醛標籤存在於Ig恆定區之溶劑可及環區中或鄰近Ig恆定區之溶劑可及環區。Ig恆定區胺基酸序列可藉由插入及/或取代1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16個胺基酸或多於16個胺基酸而經修飾，以提供上文所描述之硫酸酯酶模體的胺基酸序列。
在一些情況下，帶醛標籤之抗體包含帶醛標籤之Ig重鏈恆定區(例如至少CH1域；至少CH1及CH2域；CH1、CH2及CH3域；或CH1、CH2、CH3及CH4域)。帶醛標籤之Ig重鏈恆定區可包括IgA、IgM、IgD、IgE、IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同型重鏈或其任何異型變異體之重鏈恆定區序列，例如人類重鏈恆定區序列或小鼠重鏈恆定區序列、雜合體重鏈恆定區、合成重鏈恆定區或共有重鏈恆定區序列等，該等序列經修飾以包括至少一個硫酸酯酶模體，該硫酸酯酶模體可藉由FGE修飾以產生經 fGly修飾之Ig多肽。Ig重鏈之異型變異體為此項技術中已知的。參見例如Jefferis及Lefranc (2009) MAbs1:4。
在一些情況下，帶醛標籤之抗體包含帶醛標籤之Ig輕鏈恆定區。帶醛標籤之Ig輕鏈恆定區可包括κ輕鏈、λ輕鏈之恆定區序列，例如人類κ或λ輕鏈恆定區、雜合體輕鏈恆定區、合成輕鏈恆定區或共有輕鏈恆定區序列等，該等序列經修飾以包括至少一個硫酸酯酶模體，該硫酸酯酶模體可藉由FGE修飾以產生經 fGly修飾之抗體。例示性恆定區包括人類γ1及γ3區。除硫酸酯酶模體之外，恆定區可具有野生型胺基酸序列，或其可具有與野生型胺基酸序列至少70%一致(例如至少80%、至少90%或至少95%一致)的胺基酸序列。
在一些實施例中，硫酸酯酶模體位於Ig多肽重鏈之C端之外的位置或除Ig多肽重鏈之C端之外的位置。如上文所指出，經分離之帶醛標籤之抗體可包含經修飾以包括上文所描述之硫酸酯酶模體的重鏈恆定區胺基酸序列，其中該硫酸酯酶模體位於抗體重鏈恆定區之表面可及環區中或與其相鄰。
硫酸酯酶模體可提供於Ig重鏈之此類修飾位點之此等胺基酸序列中之一或多者內或與其相鄰。舉例而言，Ig重鏈多肽胺基酸序列可在此等胺基酸序列中之一或多者處經修飾(例如其中修飾包括一或多個胺基酸殘基插入、缺失及/或取代)，以提供與此等修飾位點相鄰及在其N端及/或與其相鄰及在其C端的硫酸酯酶模體。替代地或另外，Ig重鏈多肽胺基酸序列可在此等胺基酸序列中之一或多者處經修飾(例如其中修飾包括一或多個胺基酸殘基插入、缺失及/或取代)，以在Ig重鏈修飾位點之任何兩個殘基之間提供硫酸酯酶模體。在一些實施例中，Ig重鏈多肽胺基酸序列可經修飾以包括兩個模體，該兩個模體可彼此相鄰，或可由一個、兩個、三個、四個或更多個(例如約1至約25個、約25至約50個、或約50至約100個或更多個)胺基酸分隔開。替代地或另外，在原生胺基酸序列提供硫酸酯酶模體序列之一或多個胺基酸殘基的情況下，Ig重鏈多肽胺基酸序列之修飾位點的選定胺基酸殘基可經修飾(例如其中修飾包括一或多個胺基酸殘基插入、缺失及/或取代)，以便在修飾位點處提供硫酸酯酶模體。
本揭露之抗體-藥物結合物中所用之抗體可具有多種抗原結合特異性中之任一者，包括但不限於例如癌細胞上存在之抗原；自體免疫細胞上存在之抗原；病原微生物上存在之抗原；感染病毒之細胞(例如感染人類免疫缺乏病毒之細胞)上存在之抗原；病變細胞上存在之抗原；及其類似者。舉例而言，抗體結合物可結合抗原，其中抗原存在於細胞表面上。本揭露之抗體結合物可以適合的結合親和力結合抗原，例如5×10 - 6M至10 - 7M、10 - 7M至5×10 - 7M、5×10 - 7M至10 - 8M、10 - 8M至5×10 - 8M、5×10 - 8M至10 - 9M，或大於10 - 9M之結合親和力。
作為非限制性實例，主題抗體結合物可結合癌細胞上存在之抗原(例如腫瘤特異性抗原；癌細胞上過度表現之抗原；等)，且所結合部分可為藥物，諸如細胞毒性化合物(例如細胞毒性小分子、細胞毒性合成肽等)。舉例而言，主題抗體結合物可對癌細胞上之抗原具有特異性，其中所結合部分為藥物，諸如細胞毒性化合物(例如細胞毒性小分子、細胞毒性合成肽等)。
含有 fGly殘基的經修飾之5T4抗體可與包含氮雜-肼基-異-皮克特-施彭格勒(azaHIPS)偶合部分之連接子-藥物結合，例如在連接子( L - 1)中，如下文 流程 1中所示： 流程 1其中W為式( L - 2)： ， 其中#表示與azaHIPS部分之結合點且##指示與MMAE之連接點；且 其中MMAE由 式 ( III )表示： ( III)，其中*指示與( L - 2)之連接點。
更具體地，5T4抗體上之一或多個 fGly修飾可與包含下文所示之結合前連接子( L - 1a)的連接子-藥物上之azaHIPS部分反應，以產生包含一或多個經結合之連接子-藥物的5T4抗體，該一或多個經結合之連接子-藥物包含連接子( L - 1)： ( L-1a)， 其中##指示與MMAE之連接點；且 其中MMAE由 式 ( III )表示： ( III)，其中*指示與( L - 1a)之連接點。
更具體地，5T4抗體上之一或多個 fGly修飾可與包含下文所示之結合前連接子( L - 1a ')的連接子-藥物上之azaHIPS部分反應，以產生包含一或多個經結合之連接子-藥物的5T4抗體，該一或多個經結合之連接子-藥物包含連接子( L - 1)： ( L-1a ')， 其中##指示與MMAE之連接點；且 其中MMAE由 式 ( III )表示： ( III)，其中*指示與( L - 1a ')之連接點。
在一些實施例中，( L - 1a ')係指(2 S,3 S,4 S,5 R,6 S)-6-(5-((5 S,8 S,11 S,12 R)-11-(( S)-二級丁基)-12-(2-(( S)-2-((1 R,2 R)-3-(((1 S,2 R)-1-羥基-1-苯基丙-2-基)胺基)-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基丙基)吡咯啶-1-基)-2-側氧基乙基)-5,8-二異丙基-4,10-二甲基-3,6,9-三側氧基-2,13-二氧雜-4,7,10-三氮雜十四烷基)-2-((2 S,5 S,18 R)-22-(2-((1,2-二甲基肼基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-5-異丙基-2-甲基-4,7,17,20-四側氧基-18-(磺基甲基)-10,13-二氧雜-3,6,16,19-四氮雜二十二烷醯胺)苯氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-甲酸。在一些實施例中，( L - 1a ')之化學摘要服務社(CAS)登記號為2773415-17-9。
在一個實施例中，重鏈恆定區及輕鏈恆定區中之一或兩者中的一或多個胺基酸與包含( L - 1)之連接子的連接子-藥物結合： ( L-1)， 其中 表示與Ab之結合點且##指示與MMAE之連接點；且 其中MMAE由 式 ( III )表示： ( III)，其中*指示與( L - 1)之連接點。在一個實施例中，包含結合前連接子 ( L - 1a ' )或( L - 1a)之連接子-藥物為 式 ( II )之連接子-藥物： ( II)，其中波浪線指示與Ab之連接點且MMAE由 式 ( III )表示： ( III)，其中*指示 式 ( II )中之連接點。
在一個實施例中，重鏈恆定區及輕鏈恆定區中之一或兩者中的一或多個胺基酸與包含( L - 1)之連接子的連接子-藥物結合。在一個實施例中，兩個重鏈恆定區中之一個胺基酸與包含( L - 1)之連接子的連接子-藥物結合。包含此類5T4 ADC之組合物可表現出藥物與抗體比率(「DAR」)為約1至約2。換言之，各5T4抗體與一或兩個連接子-藥物結合。確定DAR之方法為技術人員所熟知的且包括使用逆相層析或HPLC-MS之方法，例如WO2023220620中所揭示之彼等方法，該專利其以全文引用的方式併入本文中。
在一個實施例中，本文提供例如國際專利公開案第WO 2023/220620 A2號(國際專利申請案第PCT/US2023/066811號)中所揭示之5T4 ADC，該專利以全文引用的方式併入本文中。在一個實施例中，5T4 ADC係由 式 ( I )表示，其包含藉由包含連接子(L-1)之連接子-藥物與單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合之Ab： (I) 其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段。在一個實施例中，5T4 ADC包含5T4抗體或其抗原結合片段，其包含 表 1中所描述之VH區、VL區、重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)、重鏈互補決定區3 (HCDR3)、輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及/或輕鏈互補決定區3 (LCDR3)。在一個實施例中，5T4 ADC包含5T4抗體或其抗原結合片段，其包含：包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的VH區及包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的VL區。在一個實施例中，5T4抗體包含具有以下胺基酸序列之輕鏈： 。
在一個實施例中，包含連接子( L - 1)之連接子-藥物與5T4抗體中之各重鏈恆定區結合(例如，5T4抗體與兩個連接子-藥物結合)。在一個實施例中，包含連接子( L - 1)之連接子-藥物與5T4抗體中之各重鏈結合(例如，5T4抗體與兩個連接子-藥物結合)。在一個實施例中，包含連接子( L - 1)之連接子-藥物與5T4抗體中之各重鏈恆定區中的CH3區結合。在一個實施例中，包含連接子( L - 1)之連接子-藥物與5T4抗體中之各重鏈中的CH3區結合。在另一實施例中，包含連接子( L - 1)之連接子-藥物與抗5T4含醛抗體之各重鏈之C453處的甲醯基甘胺酸中之醛結合(甲醯基甘胺酸胺基酸殘基對應於SEQ ID NO: 40中C之第453個胺基酸殘基，在本文中亦稱為「C453」)。在一個實施例中，包含連接子( L - 1)之連接子-藥物與對應於SEQ ID NO: 41)中fGly之第453個胺基酸殘基的甲醯基甘胺酸中之醛結合。在一個實施例中，包含連接子( L - 1)之連接子-藥物與對應於SEQ ID NO: 2)中fGly'之第453個胺基酸殘基的甲醯基甘胺酸中之醛結合。在此類實施例中，各5T4 ADC包含兩個MMAE藥物。包含此類ADC之組合物將表現出DAR為2。在一些實施例中，5T4 ADC包含5T4抗體，其包含具有以下胺基酸序列之輕鏈： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYATPVTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 3)及具有以下胺基酸序列之重鏈： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYIHWVRQAPGKGLEWVAYITSTGSYTEYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDRSTRYSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSL nTPSRGS (SEQ ID NO: 42)，其中 n為其側鏈經包含連接子( L - 1)之連接子-藥物置換的胺基酸： ( L-1)， 其中 表示與Ab之結合點且##指示與MMAE之連接點；且 其中MMAE由 式 ( III )表示： ( III)，其中*指示與( L - 1)之連接點。在一些實施例中，SEQ ID NO: 42中之胺基酸 n係指本文所描述之 fGly '。
在一個實施例中，5T4 ADC係藉由將結合前連接子( L - 1a ')與抗5T4含醛抗體之各重鏈的甲醯基甘胺酸(諸如在C453)處之醛結合而產生，其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段。在一個實施例中，5T4 ADC包含5T4抗體或其抗原結合片段，其包含 表 1中所描述之VH區、VL區、重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)、重鏈互補決定區3 (HCDR3)、輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及/或輕鏈互補決定區3 (LCDR3)。在一個實施例中，5T4 ADC包含本文所揭示之5T4抗體或其抗原結合片段。在一個實施例中，5T4 ADC包含5T4抗體或其抗原結合片段，其包含：包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的VH區及包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的VL區。在一個實施例中，5T4抗體包含具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，5T4 ADC包含5T4抗體，其包含：包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈及具有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的重鏈。
在其他實施例中，5T4 ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC)之抗體包含兩條重鏈(HC)及兩條輕鏈(LC)，且其中HC中之各者包含一個L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)之模體。因此，各5T4 ADC包含兩個MMAE藥物，且包含此類ADC之組合物表現出DAR為約1至約2，諸如2。
在一些實施例中，5T4 ADC包含結合5T4之抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含以下中之任一者之胺基酸序列的HCDR1：(i) SEQ ID NO: 13，(ii) SEQ ID NO: 19，(iii) SEQ ID NO: 24，(iv) SEQ ID NO: 25，及(v) SEQ ID NO: 30；(2)包含以下中之任一者之胺基酸序列的HCDR2：(i) SEQ ID NO: 14，(ii) SEQ ID NO: 20，(iii) SEQ ID NO: 26，(iv) SEQ ID NO: 31，及(v) SEQ ID NO: 36；及(3)包含以下中之任一者之胺基酸序列的HCDR3：(i) SEQ ID NO: 15，(ii) SEQ ID NO: 21，(iii) SEQ ID NO: 27，及(iv) SEQ ID NO: 32；及/或VL區，其包含：(1)包含以下中之任一者之胺基酸序列的LCDR1：(i) SEQ ID NO: 16，(ii) SEQ ID NO: 22，(iii) SEQ ID NO: 28，及(iv) SEQ ID NO: 33；(2)包含以下中之任一者之胺基酸序列的LCDR2：(i) SEQ ID NO: 17，(ii) SEQ ID NO: 23，及(iii) SEQ ID NO: 34；及(3)包含以下中之任一者之胺基酸序列的LCDR3：(i) SEQ ID NO: 18，(ii) SEQ ID NO: 29，及(iii) SEQ ID NO: 35。
在一些實施例中，5T4 ADC包含結合5T4之抗體，其中該抗體包含VH區，其包含：(1)包含以下中之任一者之胺基酸序列的HCDR1：(i) SEQ ID NO: 13，(ii) SEQ ID NO: 19，(iii) SEQ ID NO: 24，(iv) SEQ ID NO: 25，及(v) SEQ ID NO: 30；(2)包含以下中之任一者之胺基酸序列的HCDR2：(i) SEQ ID NO: 14，(ii) SEQ ID NO: 20，(iii) SEQ ID NO: 26，(iv) SEQ ID NO: 31，及(v) SEQ ID NO: 36；及(3)包含以下中之任一者之胺基酸序列的HCDR3：(i) SEQ ID NO: 15，(ii) SEQ ID NO: 21，(iii) SEQ ID NO: 27，及(iv) SEQ ID NO: 32。
在一些實施例中，5T4 ADC包含結合5T4之抗體，其中該抗體包含VL區，其包含：(1)包含以下中之任一者之胺基酸序列的LCDR1：(i) SEQ ID NO: 16，(ii) SEQ ID NO: 22，(iii) SEQ ID NO: 28，及(iv) SEQ ID NO: 33；(2)包含以下中之任一者之胺基酸序列的LCDR2：(i) SEQ ID NO: 17，(ii) SEQ ID NO: 23，及(iii) SEQ ID NO: 34；及(3)包含以下中之任一者之胺基酸序列的LCDR3：(i) SEQ ID NO: 18，(ii) SEQ ID NO: 29，及(iii) SEQ ID NO: 35。
在一些實施例中，5T4 ADC包含結合5T4之抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的HCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的HCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的HCDR3；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的VL CDR1；(2)包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的LCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的LCDR3。
在一些實施例中，5T4 ADC包含結合5T4之抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列的HCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列的HCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的HCDR3；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的LCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的LCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的LCDR3。
在一些實施例中，5T4 ADC包含結合5T4之抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的HCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的HCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的HCDR3；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的LCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的LCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的LCDR3。
在一些實施例中，5T4 ADC包含結合5T4之抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列的HCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列的HCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列的HCDR3；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列的LCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的LCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列的LCDR3。
在一些實施例中，5T4 ADC包含結合5T4之抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列的HCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列的HCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列的HCDR3；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列的LCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列的LCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列的LCDR3。
在一些實施例中，5T4 ADC包含結合5T4之抗體，其中該抗體包含：(a) VH區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的HCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列的HCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的HCDR3；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的LCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的LCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的LCDR3。
在一些實施例中，5T4 ADC可包含5T4抗體，該抗體包含一或多個(例如一個、兩個、三個、四個或更多個)保守序列修飾。關於作為5T4抗體(諸如人類5T4抗體)之多肽，保守序列修飾包括保守胺基酸取代，其中胺基酸殘基經具有相似側鏈之胺基酸殘基置換。此項技術中已定義具有相似側鏈之胺基酸殘基家族。本文揭示了此等家族。因此，在一些實施例中，5T4抗體中預測的非必需胺基酸殘基可經來自相同側鏈家族的另一個胺基酸殘基置換。鑑別不消除抗原結合之胺基酸保守取代及其編碼核苷酸的方法為此項技術中眾所周知的(參見例如Brummell等人, Biochem. 32:1180-1187 (1993)；Kobayashi等人, Protein Eng. 12(10):879-884 (1999)；及Burks等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:412-417 (1997))。在一些實施例中，本文所描述之保守序列修飾將5T4抗體(例如人類5T4抗體)之胺基酸序列修飾50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%。在一些實施例中，胺基酸序列修飾係指對CDR (諸如 表 1中所描述之CDR)的至多一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸取代。因此，舉例而言，各此類CDR可含有至多五個保守胺基酸取代，例如至多(不超過)四個保守胺基酸取代，例如至多(不超過)三個保守胺基酸取代，例如至多(不超過)兩個保守胺基酸取代，或不超過一個保守胺基酸取代。在一些實施例中，5T4 ADC包含5T4抗體，該抗體含有與 mAbA15之CDR (參見例如 表 1)具有至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的一或多個(例如一個、兩個、三個、四個、五個或六個) CDR。在一些實施例中，5T4 ADC包含5T4抗體，該抗體含有包含與 mAbA15之CDR (參見例如 表 1)一致的CDR的VH及VL。在一些實施例中，胺基酸序列修飾不包括特異性決定殘基(SDR)內的任何修飾。在一些實施例中，胺基酸序列修飾不包括CDR (諸如CDR1、CDR2、CDR3或其任何組合)內的任何修飾。在其他實施例中，胺基酸序列修飾位於構架區或恆定區中。
在一些實施例中，5T4 ADC中之抗體包含VH，其包含與SEQ ID NO: 11具有至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列；及VL，其包含與SEQ ID NO: 12具有至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列，且抗體與5T4 (例如人類5T4)之結合得以維持(例如，實質上維持例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)。在其他實施例中，5T4 ADC中之抗體包含與 mAbA15之CDR (參見例如 表 1)一致的CDR。
在一些實施例中，5T4 ADC中之抗體包含：包含與SEQ ID NO: 2具有至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列的重鏈及包含與SEQ ID NO: 3具有至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的胺基酸序列的輕鏈，且抗體與5T4 (例如人類5T4)之結合得以維持(例如，實質上維持例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少95%)。在其他實施例中，5T4 ADC中之抗體包含與 mAbA15之CDR (參見例如 表 1)一致的CDR。在其他實施例中，重鏈中L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)之模體得以維持。
在一些實施例中，5T4 ADC可由 式 ( I )或 式 ( I ' )表示，或包含 ( L - 1 )，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生，其中Ab為本文所揭示之結合5T4之抗體。在一些實施例中，抗體包含VH，其包含與本文諸如 表 1中所描述之CDR一致或實質上一致的一或多個(諸如一個、兩個或三個) CDR。另外或替代地，在一些實施例中，抗體包含VL，其包含與本文諸如 表 1中所描述之CDR一致或實質上一致的一或多個(諸如一個、兩個或三個) CDR。
在一些實施例中，5T4 ADC可由 式 ( I )或 式 ( I ' )表示，或包含 ( L - 1 )，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生，其中Ab為本文所揭示之結合5T4之抗體。在一些實施例中，抗體包含與本文諸如 表 1中所描述之VH一致或實質上一致的VH。另外或替代地，在一些實施例中，抗體包含與本文諸如 表 1中所描述之VL一致或實質上一致的VL。
在一些實施例中，5T4 ADC可由 式 ( I )或 式 ( I ' )表示，或包含 ( L - 1 )，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生，其中Ab為結合5T4之抗體。在一些實施例中，抗體包含：包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的VH及包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的VL。
在一些實施例中，5T4 ADC可由 式 ( I )或 式 ( I ' )表示，或包含 ( L - 1 )，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生，其中Ab為結合5T4之抗體且包含(a) VH區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 13、19、24、25及30中任一者之胺基酸序列的HCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 14、20、26、31及36中任一者之胺基酸序列的HCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 15、21、27及32中任一者之胺基酸序列的HCDR3；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 16、22、28及33中任一者之胺基酸序列的LCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 17、23及34中任一者之胺基酸序列的LCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 18、29及35中任一者之胺基酸序列的LCDR3。
在一些實施例中，5T4 ADC可由 式 ( I )或 式 ( I ' )表示，或包含 ( L - 1 )，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生，其中Ab為結合5T4之抗體。在一些實施例中，Ab包含：(a) VH區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的HCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的HCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的HCDR3；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的VL CDR1；(2)包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的LCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的LCDR3。在一些實施例中，Ab包含：(a) VH區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列的HCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列的HCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的HCDR3；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的LCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的LCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的LCDR3。在一些實施例中，Ab包含：(a) VH區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的HCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的HCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的HCDR3；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的LCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的LCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的LCDR3。在一些實施例中，Ab包含：(a) VH區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列的HCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列的HCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列的HCDR3；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列的LCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的LCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列的LCDR3。在一些實施例中，Ab包含：(a) VH區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列的HCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列的HCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列的HCDR3；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列的LCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列的LCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列的LCDR3。在一些實施例中，Ab包含：(a) VH區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的HCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列的HCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的HCDR3；及(b) VL區，其包含：(1)包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的LCDR1；(2)包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的LCDR2；及(3)包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的LCDR3。
在一些實施例中，5T4 ADC可由 式 ( I )或 式 ( I ' )表示，或包含 ( L - 1 )，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生，其中Ab為結合5T4之抗體。在一些實施例中，抗體進一步包含SEQ ID NO: 11及12中之任一者中所示之構架1 (FR1)、構架2 (FR2)、構架3 (FR3)及/或構架4 (FR4)序列。
在一些實施例中，5T4 ADC可由 式 ( I )或 式 ( I ' )表示，或包含 ( L - 1 )，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生，其中Ab為結合5T4之抗體。在一些實施例中，Ab為 mAbA15。在一些實施例中，Ab包含：包含SEQ ID NO: 2中所示之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 3中所示之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，Ab包含：包含SEQ ID NO: 42中所示之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 3中所示之胺基酸序列的輕鏈。
在一個實施例中，5T4 ADC包含藉由連接子( L - 1)與單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合之Ab，且由下 式 ( I )表示： (I) 其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且包含命名為 mAbA15之抗體的重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)、重鏈互補決定區3 (HCDR3)、輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)，其中Ab進一步包含兩個模體，其各自為L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)，其中 fGly '為與包含連接子( L - 1)之連接子-藥物連接的胺基酸殘基，且其中 mAbA15包含： a)包含以下胺基酸序列之重鏈： ；及 b)包含以下胺基酸序列之輕鏈： 。
在一個實施例中，5T4 ADC由下 式 ( I )表示： (I)，其中Ab為5T4抗體，其包含： a)包含以下胺基酸序列之重鏈： ；及 b)包含以下胺基酸序列之輕鏈： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYATPVTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 3)。在一些實施例中，連接子( L - 1)為： ( L-1)，其中波浪線指示在( fGly ')處與Ab之連接點，且##指示與MMAE之連接點；且 其中MMAE由 式 ( III )表示： ( III)，其中*指示與( L - 1)之連接點。在一個實施例中， 式 ( II )之連接子-有效負載在( fGly ')處與Ab結合： ( II)，其中波浪線指示與Ab之連接點且MMAE由 式 ( III )表示： ( III)，其中*指示 式 ( II )中之連接點。此ADC在本文中亦稱為「 5T4 - ADC - 1」。
在一些實施例中，本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)，每個抗體組分攜帶兩個MMAE藥物分子，使得藥物與抗體比率(DAR)為2:1。
在藥理學相關物種食蟹獼猴中，在13週符合良好實驗室規範(GLP)之毒理學、毒理動力學及安全性藥理學研究中評估本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC。在一些實施例中，本文所揭示之5T4 ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)，每個抗體組分攜帶兩個MMAE有效負載分子，使得藥物與抗體比率(DAR)為2:1。不希望受理論所束縛，咸信在機制上，本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)，與腫瘤細胞表面上表現之5T4結合且隨後被腫瘤細胞內化。隨後自抗體酶促裂解連接子-有效負載釋放MMAE細胞毒素。游離MMAE在腫瘤細胞內起作用以阻斷微管蛋白細胞分裂的聚合，但亦自初始腫瘤細胞釋放至細胞外空間中以進入周圍細胞，包括腫瘤細胞，以抑制彼等周圍細胞中的細胞分裂(通常稱為旁觀者效應)。此旁觀者效應有效殺死表現5T4之腫瘤細胞及存在於表現5T4之細胞旁邊的5T4陰性腫瘤細胞。
已證明靶向PD-1 (T細胞抑制性檢查點蛋白)之抗體增強針對腫瘤細胞之免疫反應，且係多種癌症之標準護理的一部分。帕博利珠單抗為對PD-1/PD-L1細胞表面膜受體具有特異性之人源化單株免疫球蛋白G4 (IgG4) κ抗體，其已證明產生增加的抗腫瘤免疫反應及癌症患者存活改善的能力。帕博利珠單抗已在美國及歐洲經批准用於多種癌症類型(Keytruda美國處方資訊[USPI]及歐洲藥品管理局[EMA]產品特徵摘要[SmPC])。如實例中所說明，將PD-L1抑制劑或PD-1抑制劑(諸如帕博利珠單抗)與本文所揭示之ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1))組合增強了ADC之抗癌作用，此可能在患有晚期腫瘤之患者中或對於其他可用療法無效及/或耐受性不良之彼等患者特別有用。因此，在一個態樣中，本揭露亦提供使用本文所揭示之ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1))與PD-L1/PD-1抑制劑(諸如帕博利珠單抗)之組合來治療癌症之方法。
在一些實施例中，本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)，以醫藥組合物之形式提供，用於向個體投與。此類醫藥組合物包含治療有效量之ADC及一或多種醫藥學上可接受之賦形劑。
因此，本文提供一種醫藥組合物，其包含本文所揭示之5T4 ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)及一或多種醫藥學上可接受之賦形劑。
適合的醫藥學上可接受之賦形劑之實例包括適於向人類或獸醫學個體投與的固體或液體填充劑、稀釋劑、其他賦形劑或囊封物質(例如，生理學上可接受的及/或藥理學上可接受的)。醫藥學上可接受之賦形劑可與一或多種活性組分(例如雜合分子)共混，且當醫藥組合物中存在多於一種醫藥學上可接受之賦形劑時，可以實質上不損害所需醫藥功效的方式彼此共混。醫藥學上可接受之材料通常能夠向個體投與而不會產生明顯的不良生理效應，諸如噁心、眩暈、皮疹或胃部不適。例如，期望包含醫藥學上可接受之賦形劑的組合物在出於治療目的向人類個體投與時不具有免疫原性。
在一些實施例中，包含本文所揭示之ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1))的醫藥組合物另外含有適合的緩衝劑，包括例如呈鹽形式之乙酸、呈鹽形式之檸檬酸、呈鹽形式之硼酸及呈鹽形式之磷酸。在一些實施例中，包含ADC之醫藥組合物亦視情況含有適合的防腐劑，諸如苯紮氯銨、氯丁醇、對羥基苯甲酸酯及硫柳汞。在一些實施例中，包含ADC之醫藥組合物以單位劑型提供，且可藉由任何適合的方法製備，其中許多為藥劑學技術中眾所周知的。
在一些實施例中，適合於非經腸投與的包含本文所揭示之ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1))的醫藥組合物呈ADC之無菌水性製劑形式，其較佳與接受者之血液等張。在一些實施例中，使用適合的分散劑或潤濕劑及懸浮劑，使用已知方法調配此水性製劑。在一些實施例中，無菌可注射製劑亦為在無毒的非經腸可接受之稀釋劑或溶劑中之無菌可注射溶液或懸浮液，例如呈1,3-丁二醇中之溶液。適合的媒劑及溶劑之非限制性實例包括水、林格氏溶液及等張氯化鈉溶液。在一些實施例中，採用無菌不揮發性油作為溶劑或懸浮介質。出於此目的，可採用任何溫和的不揮發性油，諸如合成的單甘油酯或二甘油酯。此外，脂肪酸(諸如油酸)可用於製備本文所揭示之ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1))的可注射調配物。
在一些實施例中，本文所揭示之ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1))的醫藥組合物適當地封裝於例如小瓶、小袋、安瓿及/或任何類似及適當的容器中。在一個實施例中，包含本文所揭示之ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1))的醫藥組合物以濃縮物形式提供，其可在使用之前進一步稀釋。在一個實施例中，包含本文所揭示之ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1))的醫藥組合物以諸如凍乾物形式提供，其可在使用之前復原。在一個實施例中，包含本文所揭示之ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1))的醫藥組合物以意欲使用之濃度提供。在一些實施例中，包含本文所揭示之ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1))的醫藥組合物以單位劑型提供於滅菌容器中，例如作為套組之一部分，各容器具有所需量及濃度的ADC。 7.4 方法、投與及給藥
在一個態樣中，本文提供一種用於治療個體之癌症的方法，該方法包含向該個體投與ADC。
在一些實施例中，癌症為乳癌、子宮內膜癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌中之任一或多者。
在一些實施例中，ADC由 式 ( I ' )表示： (I')， 其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且其中Ab包含： (1) 包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)中所示之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，及 (2) 包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)中所示之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)。
在一些實施例中，Ab進一步包含一或多個 fGly '，其中 fGly '為與 式 ( I ' )之非Ab部分連接的甲醯基甘胺酸胺基酸殘基。
在一些實施例中，其中MMAE為單甲基奧瑞他汀E且由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示 式 ( I ' )中之連接點。
在一些實施例中，n為整數。在其他實施例中，n為選自1至10中之任一者的整數。在其他實施例中，n為2。在其他實施例中，n為1。
在一些實施例中，投與包含多種DAR物種之ADC群體。在其他實施例中，該群體包含由 式 ( I ' )表示之第一ADC，其中其n為1，及由 式 ( I ' )表示之第二ADC，其中其n為2。
在一些實施例中，向個體投與包含由 式 ( I ' )表示之第一ADC及醫藥學上可接受之賦形劑的醫藥組合物。在其他實施例中，醫藥組合物包含由 式 ( I ' )表示之第二ADC，其中第一ADC中之第一n不同於第二ADC之第二n。在其他實施例中，第一n為2。另外或替代地，第二n為1。在一些實施例中，此類醫藥組合物表現出藥物與抗體比率(「DAR」)為約1至約2。在其他實施例中，醫藥組合物表現出DAR為1.8。
在一些實施例中， 式 ( I ' )中之Ab包含至少一個 fGly '。在一些實施例中， 式 ( I ' )中之Ab進一步包含一或多個(諸如一至十個) fGly。在其他實施例中， 式 ( I ' )中之Ab進一步包含一或多個(諸如一至十個) SEQ ID NO: 93之模體。
在另一態樣中，ADC由 式 ( I )表示： (I)， 其中 式 ( III )中之*指示 式 ( I )中之連接點，且其中 fGly '為與 式 ( I )之非Ab部分連接的甲醯基甘胺酸胺基酸殘基。
在一些實施例中，ADC包含藉由連接子( L - 1)與單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合之抗體(Ab)： ( L-1)， 其中波浪線指示與Ab之連接點，且##指示與MMAE之連接點。
在一些實施例中，MMAE由式(III)表示： ( III)， 其中*指示與( L - 1)之連接點。 其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且其中Ab包含： (1) 包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)中所示之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，及 (2) 包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)中所示之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)；且 其中Ab進一步包含一或多個 fGly '且其中 fGly '為與連接子( L - 1)連接之甲醯基甘胺酸胺基酸殘基。
在一些實施例中，一個Ab與一至十個MMAE結合，且其中各MMAE藉由一個連接子( L - 1)與Ab結合。
在一些實施例中，一個Ab與兩個MMAE結合，且其中各MMAE藉由一個連接子( L - 1)與Ab結合。
在另一態樣中，提供一種用於治療個體之癌症的方法，該方法包含向該個體投與ADC， 其中該癌症為乳癌、子宮內膜癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌中之任一或多者， 其中該ADC係藉由將抗體(Ab)與包含結合前連接子 ( L - 1a ' )及單甲基奧瑞他汀E (MMAE)之連接子-藥物結合而產生： ( L-1a ')， 其中##指示與MMAE之連接點； 其中MMAE由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示與( L - 1a ')之連接點； 其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且其中Ab包含： (1) 包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)中所示之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，及 (2) 包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)中所示之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)；且 其中Ab進一步包含一或多個 fGly '，且其中 fGly '為在Ab與連接子-藥物結合之後與連接子( L - 1a ')連接之甲醯基甘胺酸胺基酸殘基。在一些實施例中，Ab在與連接子-藥物結合之前包含：包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，一個Ab與一至十個連接子-藥物結合。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，一個Ab與兩個連接子-藥物結合。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，Ab包含一至十個 fGly '。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，Ab包含兩個 fGly '。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，Ab包含X 1( fGly ')X 2Z 2X 3Z 3(SEQ ID NO: 67)之模體， 其中： Z 2為脯胺酸(P)或丙胺酸(A)殘基； Z 3為視情況選自由以下組成之群的鹼性胺基酸殘基：精胺酸(R)、離胺酸(K)及組胺酸(H)，或視情況選自由以下組成之群的脂族胺基酸殘基：丙胺酸(A)、甘胺酸(G)、白胺酸(L)、纈胺酸(V)、異白胺酸(I)及脯胺酸(P)； X 1存在或不存在，且當存在時，為任何胺基酸殘基，其限制條件為當SEQ ID NO: 67之序列位於抗體Ab之N端時，X 1存在；且 X 2及X 3獨立地為任何胺基酸殘基， 視情況其中， SEQ ID NO: 67之模體係選自由以下組成之群：L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)、M( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 45)、V( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 46)、L( fGly ')SPSR (SEQ ID NO: 47)、L( fGly ')APSR (SEQ ID NO: 48)、L( fGly ')VPSR (SEQ ID NO: 49)、L( fGly ')GPSR (SEQ ID NO: 50)、I( fGly ')TPAR (SEQ ID NO: 51)、L( fGly ')TPSK (SEQ ID NO: 52)、M( fGly ')TPSK (SEQ ID NO: 53)、V( fGly ')TPSK (SEQ ID NO: 54)、L( fGly ')SPSK (SEQ ID NO: 55)、L( fGly ')APSK (SEQ ID NO: 56)、L( fGly ')VPSK (SEQ ID NO: 57)、L( fGly ')GPSK (SEQ ID NO: 58)、L( fGly ')TPSA (SEQ ID NO: 59)、I( fGly ')TPAA (SEQ ID NO: 60)、M( fGly ')TPSA (SEQ ID NO: 61)、V( fGly ')TPSA (SEQ ID NO: 62)、L( fGly ')SPSA (SEQ ID NO: 63)、L( fGly ')APSA (SEQ ID NO: 64)、L( fGly ')VPSA (SEQ ID NO: 65)及L( fGly ')GPSA (SEQ ID NO: 66)。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，Ab包含兩條重鏈及兩條輕鏈，且其中重鏈中之各者包含SEQ ID NO: 67之模體。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，Ab包含L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)之胺基酸序列。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，Ab包含兩條重鏈及兩條輕鏈，且其中重鏈中之各者包含L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)之模體。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，模體之 fGly '位於重鏈中對應於SEQ ID NO: 2之第453個胺基酸殘基(在本文中亦稱為C453)之位置處。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中， (1) HCDR1包含選自由SEQ ID NO: 13、19、24、25及30組成之群的胺基酸序列， (2) HCDR2包含選自由SEQ ID NO: 14、20、26、31及36組成之群的胺基酸序列， (3) HCDR3包含選自由SEQ ID NO: 15、21、27及32組成之群的胺基酸序列， (4) LCDR1包含選自由SEQ ID NO: 16、22、28及33組成之群的胺基酸序列， (5) LCDR2包含選自由SEQ ID NO: 17、23及34組成之群的胺基酸序列，且 (6) LCDR3包含選自由SEQ ID NO: 18、29及35組成之群的胺基酸序列。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中， (i) HCDR1包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；或 (ii) HCDR1包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；或 (iii) HCDR1包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；或 (iv) HCDR1包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列；或 (v) HCDR1包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列；或 (vi) HCDR1包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，Ab包含：包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的VH及包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的VL。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，Ab包含：包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈。因此，Ab在與連接子或連接子-藥物結合之前包含：包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，癌症為三陰性乳癌(TNBC)或激素受體陽性乳癌(HR+ BC)。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，癌症為胰管腺癌(PDAC)。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，癌症為非小細胞肺癌(NSCLC)。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，癌症為頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC)。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，該方法進一步包含向個體投與用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的手段。用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的例示性手段包括本文所揭示之PD-L1/PD-1抑制劑，諸如帕博利珠單抗。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，ADC與用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的手段同時、在其之後或之前投與。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，該方法進一步包含向個體投與PD-L1/PD-1抑制劑。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，ADC與PD-L1/PD-1抑制劑同時、在其之後或之前投與。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，PD-L1/PD-1抑制劑為包含帕博利珠單抗之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3的抗體或其抗原結合片段。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，PD-L1/PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，PD-L1/PD-1抑制劑以約200 mg之劑量向個體投與。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，PD-L1/PD-1抑制劑係靜脈內投與。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，PD-L1/PD-1抑制劑每3週投與一次(q3w)。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，ADC係靜脈內投與。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，ADC每3週投與一次(q3w)。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，個體為人類。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，ADC亦指其立體異構物、溶劑合物或鹽。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，向個體投與包含所描述之ADC及醫藥學上可接受之賦形劑的醫藥組合物。在其他實施例中，醫藥組合物包含多種DAR物種之ADC。在一些實施例中，醫藥組合物之平均DAR為約1至約2。在其他實施例中，醫藥組合物之平均DAR為1.8。在一些實施例中，醫藥組合物表現出DAR為約1至約2。在其他實施例中，醫藥組合物表現出DAR為1.8。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，向個體投與包含所描述之第一ADC及醫藥學上可接受之賦形劑的醫藥組合物。在一些實施例中，醫藥組合物包含本文所揭示之第二ADC，其中兩種ADC在與各Ab直接或間接結合之藥物(諸如MMAE)的數目上不同。在其他實施例中，兩個藥物(諸如MMAE)與第一ADC中之Ab直接或間接結合，且一個藥物(諸如MMAE)與第二ADC中之Ab直接或間接結合。在一些實施例中，此類醫藥組合物表現出藥物與抗體比率(「DAR」)為約1至約2。在其他實施例中，醫藥組合物表現出DAR為1.8。在其他實施例中，各5T4抗體與一或兩個連接子-藥物結合。
在本文所揭示之實施例及態樣中之任一者中，向個體投與ADC群體。在其他實施例中，此類ADC群體表現出藥物與抗體比率(「DAR」)為約1至約2。在其他實施例中，ADC群體表現出DAR為1.8。在其他實施例中，各5T4抗體與一或兩個連接子-藥物結合。
在一些實施例中，本文所揭示之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)由以下圖示表示。在其他實施例中，下圖中之波浪線將Ab (在上圖中繪示為形成Y形之四個條)與連接子-藥物(在兩個圖中繪示為實心星形)分開。
本揭露提供治療個體之癌症的方法，其包含投與治療有效劑量之本文所揭示之5T4 ADC，諸如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (例如 5T4 - ADC - 1)。
在一個實施例中，5T4 ADC由下 式 ( I )表示： (I) 其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段。在一個實施例中，5T4 ADC包含5T4抗體或其抗原結合片段，其中5T4抗體或其抗原結合片段包含 表 1中所描述之VH區、VL區、重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)、重鏈互補決定區3 (HCDR3)、輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及/或輕鏈互補決定區3 (LCDR3)。在一個實施例中，Ab為本文所揭示之5T4抗體。在一個實施例中，5T4 ADC包含5T4抗體，其包含：包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的VH區及包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的VL區。在一個實施例中，5T4抗體包含具有以下胺基酸序列之輕鏈： 。
在一個實施例中，包含連接子( L - 1)之連接子-藥物與5T4抗體中之各重鏈恆定區結合(例如，5T4抗體與兩個連接子-藥物結合)。在一個實施例中，包含連接子( L - 1)之連接子-藥物與5T4抗體中之各重鏈結合(例如，5T4抗體與兩個連接子-藥物結合)。在一個實施例中，包含連接子( L - 1)之連接子-藥物與5T4抗體中之各重鏈恆定區中的CH3區結合。在一個實施例中，包含連接子( L - 1)之連接子-藥物與5T4抗體中之各重鏈中的CH3區結合。在另一實施例中，包含連接子( L - 1)之連接子-藥物與抗5T4含醛抗體之各重鏈之C453處的甲醯基甘胺酸中之醛結合。在此類實施例中，各5T4 ADC包含兩個MMAE藥物。包含此類ADC之組合物將表現出DAR為2。在一些實施例中，5T4 ADC包含5T4抗體，其包含具有以下胺基酸序列之輕鏈： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYATPVTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 3)，及具有以下胺基酸序列之重鏈： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYIHWVRQAPGKGLEWVAYITSTGSYTEYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDRSTRYSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSL nTPSRGS (SEQ ID NO: 42)，其中 n為與包含連接子( L - 1)之連接子-藥物結合的胺基酸(例如使其側鏈經該連接子-藥物置換)： ( L-1)， 其中 表示與Ab之結合點且##指示與MMAE之連接點；且 其中MMAE由 式 ( III )表示： ( III)，其中*指示與( L - 1)之連接點。在一些實施例中，SEQ ID NO: 42中之胺基酸 n係指本文所描述之 fGly '。在一些實施例中， n為其側鏈經 式 ( II )置換之胺基酸： ( II)，其中波浪線指示與Ab之連接點且MMAE由 式 ( III )表示： ( III)，其中*指示 式 ( II )中之連接點。
在一個實施例中，ADC由 式 ( I )表示： (I). 其中Ab為5T4抗體，其包含： a)具有以下胺基酸序列之重鏈： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYIHWVRQAPGKGLEWVAYITSTGSYTEYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDRSTRYSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSL nTPSRGS (SEQ ID NO: 42)，其中 n為與本文所描述之包含連接子( L - 1)之連接子-藥物連接的胺基酸： ( L-1) 其中波浪線指示在( fGly ')處與Ab之連接點，且##指示與MMAE之連接點；且 其中MMAE由 式 ( III )表示： ( III)，其中*指示與連接子( L - 1)之連接點；及 b)具有以下胺基酸序列之輕鏈： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYATPVTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 3)。在一些實施例中，SEQ ID NO: 42中之胺基酸 n係指本文所描述之 fGly '。
在一些實施例中，治療有效劑量之PD-L1抑制劑與本文所揭示之ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1))組合向個體投與。在一個實施例中，PD-L1抑制劑為帕博利珠單抗。在一個實施例中，治療有效劑量之本文所揭示之ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1))以本文部分7.3中所描述之醫藥組合物形式向個體投與。
在一個實施例中，癌症為選自由以下組成之群的癌症：乳癌、子宮內膜癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌或膀胱癌。在一個實施例中，癌症為TNBC。在一個實施例中，癌症為HR+ BC。在一個實施例中，癌症為PDAC。在某些實施例中，癌症為肺腺癌或鱗狀細胞肺癌。在一個實施例中，癌症為NSCLC。在一些實施例中，癌症為頭頸癌。在一個實施例中，癌症為HNSCC。在一個實施例中，NSCLC之特徵在於選自由以下組成之群的突變：EGFR敏化突變、ALK重排、ROS1重排、BRAF V600E突變、MET外顯子14跳躍突變及RET重排。在某些實施例中，癌症為腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌。在一些實施例中，癌症為泌尿生殖系統癌症。在一些實施例中，癌症為胃腸癌。在一些實施例中，癌症為婦科癌症。另外或替代地，癌症係先前無法治療的。另外或替代地，癌症係復發性的。另外或替代地，癌症係轉移性的。另外或替代地，癌症係晚期的，例如局部晚期的。另外或替代地，癌症係不可手術治療的。
下文考慮且描述了用於治療個體之癌症的許多治療有效的投與及給藥方案。
在一個態樣中，提供一種用於治療個體之癌症的方法，其包含以約0.1 mg/kg至約10.0 mg/kg之劑量向該個體投與本文(例如根據部分7.3中之任何實施例)所揭示之ADC。在一個實施例中，ADC由 式 ( I )表示且包含藉由本文所揭示之連接子( L - 1)與單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合之Ab： (I)。
在其他實施例中，Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且包含命名為 mAbA15之抗體的重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)、重鏈互補決定區3 (HCDR3)、輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)。在一些實施例中，Ab進一步包含兩個模體，其各自為L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)。在其他實施例中， fGly '為與本文所揭示之包含連接子( L - 1)之連接子-藥物連接的胺基酸殘基。在一些實施例中， mAbA15包含：a)包含以下胺基酸序列之重鏈： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYIHWVRQAPGKGLEWVAYITSTGSYTEYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDRSTRYSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSL ( fGly ')TPSRGS (SEQ ID NO: 2)；及b)包含以下胺基酸序列之輕鏈： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYATPVTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 3)。在一些實施例中，ADC為 5T4 - ADC - 1。在一些實施例中，癌症為乳癌、子宮內膜癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌或膀胱癌中之任一或多者。在某些實施例中，癌症為胰臟腺癌(PDAC，在本文中亦稱為胰管腺癌)。在某些實施例中，癌症為肺腺癌或鱗狀細胞肺癌。在某些實施例中，癌症為非小細胞肺癌(NSCLC)。在一些實施例中，癌症為頭頸癌。在某些實施例中，癌症為頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC)。在某些實施例中，癌症為腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌。在一些實施例中，癌症為泌尿生殖系統癌症。在一些實施例中，癌症為胃腸癌。在一些實施例中，癌症為婦科癌症。另外或替代地，癌症係先前無法治療的。另外或替代地，癌症係復發性的。另外或替代地，癌症係轉移性的。另外或替代地，癌症係晚期的，例如局部晚期的。另外或替代地，癌症係不可手術治療的。
本文亦提供一種用於治療個體之癌症的方法，其包含向該個體投與本文所揭示之5T4 ADC。在一些實施例中，癌症為乳癌、子宮內膜癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌或膀胱癌中之任一或多者。在某些實施例中，癌症為胰臟腺癌(PDAC，在本文中亦稱為胰管腺癌)。在某些實施例中，癌症為肺腺癌或鱗狀細胞肺癌。在某些實施例中，癌症為非小細胞肺癌(NSCLC)。在一些實施例中，癌症為頭頸癌。在某些實施例中，癌症為頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC)。在某些實施例中，癌症為腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌。在一些實施例中，癌症為泌尿生殖系統癌症。在一些實施例中，癌症為胃腸癌。在一些實施例中，癌症為婦科癌症。另外或替代地，癌症係先前無法治療的。另外或替代地，癌症係復發性的。另外或替代地，癌症係轉移性的。另外或替代地，癌症係晚期的，例如局部晚期的。另外或替代地，癌症係不可手術治療的。
在一些實施例中，ADC由 式 ( I )表示且包含藉由連接子( L - 1)與單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合之Ab： (I) 在其他實施例中，Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且包含命名為 mAbA15之抗體的重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)、重鏈互補決定區3 (HCDR3)、輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)。在一些實施例中，Ab進一步包含兩個模體，其各自為L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)。在其他實施例中， fGly '為與包含( L - 1)之連接子-藥物連接的胺基酸殘基。在一些實施例中， mAbA15包含：a)包含以下胺基酸序列之重鏈：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYIHWVRQAPGKGLEWVAYITSTGSYTEYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDRSTRYSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSL ( fGly ')TPSRGS (SEQ ID NO: 2)；及b)包含以下胺基酸序列之輕鏈： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYATPVTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 3)。另外或替代地， fGly '連接至 式 ( II )之連接子-藥物： ( II)，其中波浪線指示與Ab之連接點且MMAE由 式 ( III )表示： ( III)，其中*指示 式 ( II )中之連接點。在一些實施例中，ADC為 5T4 - ADC - 1。在其他實施例中，ADC以約0.1 mg/kg至約10.0 mg/kg之劑量向個體投與。
在一些實施例中，Ab包含兩條重鏈(HC)及兩條輕鏈(LC)，且HC中之各者包含一個L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)之模體。在一些實施例中，Ab為 mAbA15。
在一些實施例中，ADC在治療週期之第一天向個體投與，持續一或多個治療週期。在其他實施例中，各治療週期為3週±3天。
在一些實施例中，ADC每三週向個體投與一次(q3w)。
在一些實施例中，ADC係向個體靜脈內投與。
在一些實施例中，本文所揭示之方法進一步包含向個體投與PD-L1/PD-1抑制劑。另外或替代地，向個體投與PD-L1/PD-1抑制劑。在一些實施例中，ADC與PD-L1/PD-1抑制劑同時投與。在一些實施例中，ADC在PD-L1/PD-1抑制劑之後投與。在一些實施例中，ADC在PD-L1/PD-1抑制劑之前投與。在一些實施例中，ADC與PD-L1/PD-1抑制劑在同一天投與。在一些實施例中，ADC及PD-L1/PD-1抑制劑之投與間隔至少約30分鐘或間隔至少約1小時。在一些實施例中，在治療週期之第一天向個體投與PD-L1/PD-1抑制劑，持續一或多個治療週期。在其他實施例中，各治療週期為3週±3天。在一些實施例中，PD-L1/PD-1抑制劑每三週向個體投與一次(q3w)。在一些實施例中，PD-L1/PD-1抑制劑係向個體靜脈內投與。在一些實施例中，PD-L1/PD-1抑制劑為包含帕博利珠單抗之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3的抗體或其抗原結合片段。在其他實施例中，PD-L1/PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。在一些實施例中，PD-L1/PD-1抑制劑以約200 mg之劑量向個體投與。
在一些實施例中，本文所揭示之ADC以約0.1 mg/kg至約10.0 mg/kg之劑量向個體投與。在一些實施例中，ADC以約0.1 mg/kg至約9.5 mg/kg、約0.1 mg/kg至約9.0 mg/kg、約0.1 mg/kg至約8.5 mg/kg、約0.1 mg/kg至約8.0 mg/kg、約0.1 mg/kg至約7.5 mg/kg、約0.1 mg/kg至約7.0 mg/kg、約0.1 mg/kg至約6.5 mg/kg、約0.1 mg/kg至約6.0 mg/kg、約0.1 mg/kg至約5.5 mg/kg、約0.1 mg/kg至約5.0 mg/kg、約0.1 mg/kg至約4.5 mg/kg、約0.1 mg/kg至約4.0 mg/kg、約0.1 mg/kg至約3.5 mg/kg、約0.1 mg/kg至約3.0 mg/kg、約0.1 mg/kg至約2.5 mg/kg、約0.1 mg/kg至約2.0 mg/kg、約0.1 mg/kg至約1.5 mg/kg、約0.1 mg/kg至約1.0 mg/kg、約0.1 mg/kg至約0.5 mg/kg、或約0.1 mg/kg至約0.3 mg/kg之劑量向個體投與。在一些實施例中，ADC以約0.3 mg/kg至約9.5 mg/kg、約0.3 mg/kg至約9.0 mg/kg、約0.3 mg/kg至約8.5 mg/kg、約0.3 mg/kg至約8.0 mg/kg、約0.3 mg/kg至約7.5 mg/kg、約0.3 mg/kg至約7.0 mg/kg、約0.3 mg/kg至約6.5 mg/kg、約0.3 mg/kg至約6.0 mg/kg、約0.3 mg/kg至約5.5 mg/kg、約0.3 mg/kg至約5.0 mg/kg、約0.3 mg/kg至約4.5 mg/kg、約0.3 mg/kg至約4.0 mg/kg、約0.3 mg/kg至約3.5 mg/kg、約0.3 mg/kg至約3.0 mg/kg、約0.3 mg/kg至約2.5 mg/kg、約0.3 mg/kg至約2.0 mg/kg、約0.3 mg/kg至約1.5 mg/kg、約0.3 mg/kg至約1.0 mg/kg、或約0.3 mg/kg至約0.5 mg/kg之劑量向個體投與。在一些實施例中，ADC以約0.5 mg/kg至約9.5 mg/kg、約0.5 mg/kg至約9.0 mg/kg、約0.5 mg/kg至約8.5 mg/kg、約0.5 mg/kg至約8.0 mg/kg、約0.5 mg/kg至約7.5 mg/kg、約0.5 mg/kg至約7.0 mg/kg、約0.5 mg/kg至約6.5 mg/kg、約0.5 mg/kg至約6.0 mg/kg、約0.5 mg/kg至約5.5 mg/kg、約0.5 mg/kg至約5.0 mg/kg、約0.5 mg/kg至約4.5 mg/kg、約0.5 mg/kg至約4.0 mg/kg、約0.5 mg/kg至約3.5 mg/kg、約0.5 mg/kg至約3.0 mg/kg、約0.5 mg/kg至約2.5 mg/kg、約0.5 mg/kg至約2.0 mg/kg、約0.5 mg/kg至約1.5 mg/kg、或約0.5 mg/kg至約1.0 mg/kg之劑量向個體投與。在一些實施例中，ADC以約1.0 mg/kg至約9.5 mg/kg、約1.0 mg/kg至約9.0 mg/kg、約1.0 mg/kg至約8.5 mg/kg、約1.0 mg/kg至約8.0 mg/kg、約1.0 mg/kg至約7.5 mg/kg、約1.0 mg/kg至約7.0 mg/kg、約1.0 mg/kg至約6.5 mg/kg、約1.0 mg/kg至約6.0 mg/kg、約1.0 mg/kg至約5.5 mg/kg、約1.0 mg/kg至約5.0 mg/kg、約1.0 mg/kg至約4.5 mg/kg、約1.0 mg/kg至約4.0 mg/kg、約1.0 mg/kg至約3.5 mg/kg、約1.0 mg/kg至約3.0 mg/kg、約1.0 mg/kg至約2.5 mg/kg、約1.0 mg/kg至約2.0 mg/kg、或約1.0 mg/kg至約1.5 mg/kg之劑量向個體投與。在一些實施例中，ADC以約1.5 mg/kg至約9.5 mg/kg、約1.5 mg/kg至約9.0 mg/kg、約1.5 mg/kg至約8.5 mg/kg、約1.5 mg/kg至約8.0 mg/kg、約1.5 mg/kg至約7.5 mg/kg、約1.5 mg/kg至約7.0 mg/kg、約1.5 mg/kg至約6.5 mg/kg、約1.5 mg/kg至約6.0 mg/kg、約1.5 mg/kg至約5.5 mg/kg、約1.5 mg/kg至約5.0 mg/kg、約1.5 mg/kg至約4.5 mg/kg、約1.5 mg/kg至約4.0 mg/kg、約1.5 mg/kg至約3.5 mg/kg、約1.5 mg/kg至約3.0 mg/kg、約1.5 mg/kg至約2.5 mg/kg、或約1.5 mg/kg至約2.0 mg/kg之劑量向個體投與。在一些實施例中，ADC以約2.0 mg/kg至約9.5 mg/kg、約2.0 mg/kg至約9.0 mg/kg、約2.0 mg/kg至約8.5 mg/kg、約2.0 mg/kg至約8.0 mg/kg、約2.0 mg/kg至約7.5 mg/kg、約2.0 mg/kg至約7.0 mg/kg、約2.0 mg/kg至約6.5 mg/kg、約2.0 mg/kg至約6.0 mg/kg、約2.0 mg/kg至約5.5 mg/kg、約2.0 mg/kg至約5.0 mg/kg、約2.0 mg/kg至約4.5 mg/kg、約2.0 mg/kg至約4.0 mg/kg、約2.0 mg/kg至約3.5 mg/kg、約2.0 mg/kg至約3.0 mg/kg、或約2.0 mg/kg至約2.5 mg/kg之劑量向個體投與。在一些實施例中，ADC以約2.5 mg/kg至約9.5 mg/kg、約2.5 mg/kg至約9.0 mg/kg、約2.5 mg/kg至約8.5 mg/kg、約2.5 mg/kg至約8.0 mg/kg、約2.5 mg/kg至約7.5 mg/kg、約2.5 mg/kg至約7.0 mg/kg、約2.5 mg/kg至約6.5 mg/kg、約2.5 mg/kg至約6.0 mg/kg、約2.5 mg/kg至約5.5 mg/kg、約2.5 mg/kg至約5.0 mg/kg、約2.5 mg/kg至約4.5 mg/kg、約2.5 mg/kg至約4.0 mg/kg、約2.5 mg/kg至約3.5 mg/kg、或約2.5 mg/kg至約3.0 mg/kg之劑量向個體投與。在一些實施例中，ADC以約3.0 mg/kg至約9.5 mg/kg、約3.0 mg/kg至約9.0 mg/kg、約3.0 mg/kg至約8.5 mg/kg、約3.0 mg/kg至約8.0 mg/kg、約3.0 mg/kg至約7.5 mg/kg、約3.0 mg/kg至約7.0 mg/kg、約3.0 mg/kg至約6.5 mg/kg、約3.0 mg/kg至約6.0 mg/kg、約3.0 mg/kg至約5.5 mg/kg、約3.0 mg/kg至約5.0 mg/kg、約3.0 mg/kg至約4.5 mg/kg、約3.0 mg/kg至約4.0 mg/kg、或約3.0 mg/kg至約3.5 mg/kg之劑量向個體投與。在一些實施例中，ADC以約3.5 mg/kg至約9.5 mg/kg、約3.5 mg/kg至約9.0 mg/kg、約3.5 mg/kg至約8.5 mg/kg、約3.5 mg/kg至約8.0 mg/kg、約3.5 mg/kg至約7.5 mg/kg、約3.5 mg/kg至約7.0 mg/kg、約3.5 mg/kg至約6.5 mg/kg、約3.5 mg/kg至約6.0 mg/kg、約3.5 mg/kg至約5.5 mg/kg、約3.5 mg/kg至約5.0 mg/kg、約3.5 mg/kg至約4.5 mg/kg、或約3.5 mg/kg至約4.0 mg/kg之劑量向個體投與。在一些實施例中，ADC以約4.0 mg/kg至約9.5 mg/kg、約4.0 mg/kg至約9.0 mg/kg、約4.0 mg/kg至約8.5 mg/kg、約4.0 mg/kg至約8.0 mg/kg、約4.0 mg/kg至約7.5 mg/kg、約4.0 mg/kg至約7.0 mg/kg、約4.0 mg/kg至約6.5 mg/kg、約4.0 mg/kg至約6.0 mg/kg、約4.0 mg/kg至約5.5 mg/kg、約4.0 mg/kg至約5.0 mg/kg、或約4.0 mg/kg至約4.5 mg/kg之劑量向個體投與。在一些實施例中，ADC以約4.5 mg/kg至約9.5 mg/kg、約4.5 mg/kg至約9.0 mg/kg、約4.5 mg/kg至約8.5 mg/kg、約4.5 mg/kg至約8.0 mg/kg、約4.5 mg/kg至約7.5 mg/kg、約4.5 mg/kg至約7.0 mg/kg、約4.5 mg/kg至約6.5 mg/kg、約4.5 mg/kg至約6.0 mg/kg、約4.5 mg/kg至約5.5 mg/kg、或約4.5 mg/kg至約5.0 mg/kg之劑量向個體投與。在一些實施例中，ADC以約5.0 mg/kg至約9.5 mg/kg、約5.0 mg/kg至約9.0 mg/kg、約5.0 mg/kg至約8.5 mg/kg、約5.0 mg/kg至約8.0 mg/kg、約5.0 mg/kg至約7.5 mg/kg、約5.0 mg/kg至約7.0 mg/kg、約5.0 mg/kg至約6.5 mg/kg、約5.0 mg/kg至約6.0 mg/kg、約5.0 mg/kg至約5.5 mg/kg之劑量向個體投與。在一些實施例中，ADC以約5.5 mg/kg至約9.5 mg/kg、約5.5 mg/kg至約9.0 mg/kg、約5.5 mg/kg至約8.5 mg/kg、約5.5 mg/kg至約8.0 mg/kg、約5.5 mg/kg至約7.5 mg/kg、約5.5 mg/kg至約7.0 mg/kg、約5.5 mg/kg至約6.5 mg/kg、或約5.5 mg/kg至約6.0 mg/kg之劑量向個體投與。在一些實施例中，ADC以約6.0 mg/kg至約9.5 mg/kg、約6.0 mg/kg至約9.0 mg/kg、約6.0 mg/kg至約8.5 mg/kg、約6.0 mg/kg至約8.0 mg/kg、約6.0 mg/kg至約7.5 mg/kg、約6.0 mg/kg至約7.0 mg/kg、或約6.0 mg/kg至約6.5 mg/kg之劑量向個體投與。
在一些實施例中，本文所揭示之ADC以約0.3 mg/kg至約6.0 mg/kg之劑量向個體投與。
在一些實施例中，本文所揭示之ADC以約0.3 mg/kg至約2.0 mg/kg之劑量向個體投與。
在一些實施例中，本文所揭示之ADC以約0.3 mg/kg、約0.6 mg/kg、約1.0 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2.0 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3.0 mg/kg、約3.5 mg/kg、約4.0 mg/kg、約4.5 mg/kg、約5.0 mg/kg、約5.5 mg/kg、約6.0 mg/kg、約6.5 mg/kg、約7.0 mg/kg、約7.5 mg/kg、約8.0 mg/kg、約8.5 mg/kg、約9.0 mg/kg、約9.5 mg/kg、約10.0 mg/kg之劑量向個體投與。
熟習此項技術者應理解，本文亦包括等效劑量，諸如本文所揭示之轉化為每體表面積之ADC量的劑量。此類轉化之方法可見於例如Nair AB, Jacob S. J Basic Clin Pharm. 2016 Mar;7(2):27-31，其以全文引用的方式併入本文中。
在一些實施例中，癌症為三陰性乳癌(TNBC)或激素受體陽性乳癌(HR+ BC)。
在一些實施例中，癌症為胰臟腺癌(PDAC，在本文中亦稱為胰管腺癌)。
在一些實施例中，癌症為前列腺癌。
在一些實施例中，癌症為子宮頸癌。
在一些實施例中，癌症為膀胱癌。
在一些實施例中，癌症為結腸直腸癌。
在一些實施例中，癌症為非小細胞肺癌(NSCLC)。在一些實施例中，個體具有一或多種選自由以下組成之群的突變：EGFR敏化突變、ALK重排、ROS1重排、BRAF V600E突變、MET外顯子14跳躍突變及RET重排。在一些實施例中，個體之癌症具有一或多種選自由以下組成之群的突變：EGFR敏化突變、ALK重排、ROS1重排、BRAF V600E突變、MET外顯子14跳躍突變及RET重排。在某些實施例中，癌症為肺腺癌或鱗狀細胞肺癌。
在一些實施例中，癌症為頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC)。
在一些實施例中，向個體投與本文所揭示之ADC約四至約二十四個月。在一些實施例中，向個體投與ADC約四至約十八個月。在一些實施例中，向個體投與ADC約四至約十二個月。在一些實施例中，向個體投與ADC約四至約六個月。
在一些實施例中，個體為人類。 7.4.1 單一療法
在一個實施例中，本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)作為單一藥劑(例如不與任何其他化學治療劑組合)以治療有效劑量向個體投與以治療癌症。在一個實施例中，當週期性投與持續一定時長(「治療時長」)及/或一定數目之治療週期時，本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)以治療有效劑量週期性地向個體投與(例如每個治療週期一次)。
在一個實施例中，用於治療個體之癌症的方法包含以約0.3 mg/kg至約5.0 mg/kg之劑量向個體投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)，持續一或多個治療週期。在一個實施例中，在各治療週期之第一天向個體投與各劑量之本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。另外或替代地，各治療週期僅含有一次投與。在一個實施例中，向個體靜脈內投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。在一個實施例中，各治療週期為3週±3天。另外或替代地，個體經歷1個或2個或3個或更多個治療週期，且在各治療週期之第一天接受一次投與。在一個實施例中，間隔至少19天向個體投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。在一個實施例中，治療個體之癌症的方法包含以約0.3 mg/kg至約3.5 mg/kg ADC之劑量向個體投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。在一個實施例中，治療個體之癌症的方法包含以約1 mg/kg至約3.5 mg/kg ADC之劑量向個體投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。在一個實施例中，治療個體之癌症的方法包含以約0.3 mg/kg至約2.0 mg/kg ADC之劑量向個體投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。在一個實施例中，治療個體之癌症的方法包含以約0.3 mg/kg ADC之劑量向個體投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。在一個實施例中，治療個體之癌症的方法包含以約0.6 mg/kg ADC之劑量向個體投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。在一個實施例中，治療個體之癌症的方法包含以約1 mg/kg ADC之劑量向個體投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。在一個實施例中，治療個體之癌症的方法包含以約1.5 mg/kg ADC之劑量向個體投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。在一個實施例中，治療個體之癌症的方法包含以約2 mg/kg ADC之劑量向個體投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。熟習此項技術者應理解，本文亦包括等效劑量，諸如本文所揭示之轉化為每體表面積之ADC量的劑量。此類轉化之方法可見於例如Nair AB, Jacob S. J Basic Clin Pharm. 2016 Mar;7(2):27-31，其以全文引用的方式併入本文中。在一個實施例中，向個體投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC的治療時長為約四至約二十四個月。在一個實施例中，治療時長為約四至約十八個月。在一個實施例中，治療時長為約四至約十二個月。在一個實施例中，治療時長為約四至約六個月。
在一個實施例中，藉由本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)治療之癌症為選自由以下組成之群的癌症：乳癌、子宮內膜癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌或膀胱癌。在一個實施例中，癌症為TNBC。在一個實施例中，癌症為HR+ BC。在一個實施例中，癌症為PDAC。在某些實施例中，癌症為肺腺癌或鱗狀細胞肺癌。在一個實施例中，癌症為NSCLC。在一些實施例中，癌症為頭頸癌。在一個實施例中，癌症為HNSCC。在一個實施例中，NSCLC之特徵在於選自由以下組成之群的突變：EGFR敏化突變、ALK重排、ROS1重排、BRAF V600E突變、MET外顯子14跳躍突變及RET重排。在某些實施例中，癌症為腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌。在一些實施例中，癌症為泌尿生殖系統癌症。在一些實施例中，癌症為胃腸癌。在一些實施例中，癌症為婦科癌症。另外或替代地，癌症係先前無法治療的。另外或替代地，癌症係復發性的。另外或替代地，癌症係轉移性的。另外或替代地，癌症係晚期的，例如局部晚期的。另外或替代地，癌症係不可手術治療的。 7.4.2 組合療法
在一個實施例中，本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)以治療有效劑量與治療有效劑量之第二化學治療劑組合向個體投與以治療癌症。在一個實施例中，第二化學治療劑為PD-1/PD-L1抑制劑。在一個實施例中，PD-1/PD-L1抑制劑為帕博利珠單抗。在一個實施例中，當週期性投與持續一定時長(「治療時長」)及/或一定數目之治療週期時，本文所揭示之ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1))及第二治療劑(例如PD-1/PD-L1抑制劑或帕博利珠單抗)以治療有效劑量週期性地向個體投與(例如每個治療週期一次)。在一個實施例中，將200 mg帕博利珠單抗與治療有效量之本文所揭示之ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1))組合向個體投與。
在一個實施例中，用於治療個體之癌症的方法包含以約0.3 mg/kg至約5.0 mg/kg之劑量向個體投與本文所揭示之ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1))及PD-1/PD-L1抑制劑(諸如200 mg帕博利珠單抗)，持續一或多個治療週期。在一個實施例中，在各治療週期之第一天向個體投與各劑量之ADC。在一個實施例中，PD-1/PD-L1抑制劑(例如200 mg帕博利珠單抗)與ADC在各治療週期之同一天向個體投與。在一個實施例中，向個體靜脈內投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。在一個實施例中，向個體靜脈內投與帕博利珠單抗。在一個實施例中，各治療週期為3週±3天。在一個實施例中，間隔至少19天向個體投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。在一個實施例中，以約0.3 mg/kg至約3.5 mg/kg之劑量向個體投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。在一個實施例中，以約1 mg/kg至約3.5 mg/kg之劑量向個體投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。在一個實施例中，以約0.3 mg/kg至約2.0 mg/kg之劑量向個體投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。在一個實施例中，治療個體之癌症的方法包含以約0.3 mg/kg ADC之劑量向個體投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。在一個實施例中，治療個體之癌症的方法包含以約0.6 mg/kg ADC之劑量向個體投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。在一個實施例中，治療個體之癌症的方法包含以約1 mg/kg ADC之劑量向個體投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。在一個實施例中，治療個體之癌症的方法包含以約1.5 mg/kg ADC之劑量向個體投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。在一個實施例中，治療個體之癌症的方法包含以約2 mg/kg ADC之劑量向個體投與本文所揭示之ADC，例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)。熟習此項技術者應理解，本文亦包括等效劑量，諸如本文所揭示之轉化為每體表面積之ADC量的劑量。此類轉化之方法可見於例如Nair AB, Jacob S. J Basic Clin Pharm. 2016 Mar;7(2):27-31，其以全文引用的方式併入本文中。在一個實施例中，向個體投與ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)之治療時長為約四至約二十四個月。在一個實施例中，治療時長為約四至約十八個月。在一個實施例中，治療時長為約四至約十二個月。在一個實施例中，治療時長為約六個月。
在一個實施例中，藉由本文所揭示之ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1))與帕博利珠單抗之組合治療之癌症為選自由以下組成之群的癌症：乳癌、子宮內膜癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌或膀胱癌。在一個實施例中，癌症為TNBC。在一個實施例中，癌症為HR+ BC。在一個實施例中，癌症為PDAC。在某些實施例中，癌症為肺腺癌或鱗狀細胞肺癌。在一個實施例中，癌症為NSCLC。在一些實施例中，癌症為頭頸癌。在一個實施例中，癌症為HNSCC。在一個實施例中，NSCLC之特徵在於選自由以下組成之群的突變：EGFR敏化突變、ALK重排、ROS1重排、BRAF V600E突變、MET外顯子14跳躍突變及RET重排。在某些實施例中，藉由本文所揭示之ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1))與帕博利珠單抗之組合治療之癌症為選自由腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌組成之群的癌症。在一些實施例中，癌症為泌尿生殖系統癌症。在一些實施例中，癌症為胃腸癌。在一些實施例中，癌症為婦科癌症。另外或替代地，癌症係先前無法治療的。另外或替代地，癌症係復發性的。另外或替代地，癌症係轉移性的。另外或替代地，癌症係晚期的，例如局部晚期的。另外或替代地，癌症係不可手術治療的。 7.4.3 不良事件
在任何實施例中，已根據本文所揭示(例如章節7.4.1至7.4.2中之任一者所揭示)之任何給藥方案投與本文所揭示之ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1))及/或帕博利珠單抗的個體可進行不良事件(AE)之監測。個體可能由於ADC及/或帕博利珠單抗而經歷一或多種治療相關AE。因此，可謹慎調整ADC之劑量及/或中斷ADC及/或帕博利珠單抗之投與，直至個體自不良事件恢復。
AE被表徵為以下五個等級中之一者——1級為輕度AE；2級為中度AE；3級為重度AE；4級為危及生命或失能AE；且5級為與AE相關之死亡。AE之分級係基於CTCAE版本6.0中提供之指南。可能促使劑量調整及/或中斷投與的不良事件之非限制性實例包括3級血小板減少症伴臨床顯著出血、4級血小板減少症、3級或更高級別的嗜中性球減少症伴經量測至少38.3℃之發熱、3級或更高級別的嗜中性球減少症伴至少38℃持續發熱至少一小時、4級嗜中性球減少症持續超過7天、4級貧血、在沒有膽道堵塞或其他肝臟異常解釋(諸如病毒性肝炎、酒精性或自體免疫性肝炎、吉伯特氏症候群或用其他肝毒性藥物治療)的情況下丙胺酸轉胺酶或天冬胺酸轉胺酶水平超過正常值上限的3倍且總膽紅素水平超過正常值上限的2倍、及任何5級不良事件。
在一個實施例中，根據本文所揭示(例如章節7.4.1至7.4.2中之任一者所揭示)之任何給藥方案，將本文所揭示之ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1))以治療有效劑量視情況與帕博利珠單抗組合向個體投與一或多個治療週期以治療癌症，且個體經歷AE。隨後中斷向個體投與ADC，直至個體自AE中恢復，此時恢復ADC之投與。在一些實施例中，當向個體投與ADC與帕博利珠單抗之組合時，僅中斷ADC之投與，直至個體自AE中恢復，此時恢復ADC之投與。
在一個實施例中，根據本文所揭示(例如章節7.4.1至7.4.2中之任一者所揭示)之任何給藥方案，將本文所揭示之ADC (例如 式 ( I )或 式 ( I ' )之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1))以治療有效劑量視情況與帕博利珠單抗組合向個體投與一或多個治療週期以治療癌症，且個體經歷AE。隨後在一或多個後續治療週期中減少ADC之劑量，直至個體自AE中恢復，此時恢復以AE之前投與的劑量投與ADC。在一些實施例中，當向個體投與ADC與帕博利珠單抗之組合時，減少ADC之劑量，直至個體自AE中恢復，此時恢復以AE之前投與的劑量投與ADC。
可藉由量測來評估AE之恢復，諸如藉由量測個體之體溫、丙胺酸轉胺酶或天冬胺酸轉胺酶水平、總膽紅素水平及/或血細胞計數(例如絕對嗜中性球計數(ANC)及/或血小板計數)。舉例而言，當個體之ANC達到某一臨限值(例如≥1,500個細胞/微升、≥1,000個細胞/微升或≥500個細胞/微升)及/或個體之血小板計數達到某一臨限值(例如≥100,000個細胞/微升、≥75,000個細胞/微升、≥50,000個細胞/微升或≥25,000個細胞/微升)長達14天時，可認為個體已自AE中恢復。
在一個態樣中，提供一種治療在投與ADC時經歷不良事件之個體之癌症持續兩個或更多個治療週期的方法。該方法包含：(i)在第一治療週期中以約0.1 mg/kg至約10.0 mg/kg之劑量向個體投與ADC；(ii)在個體在第一治療週期之後及第二治療週期之前具有不良事件時，延遲向個體進一步投與ADC；及(iii)在第二治療週期中恢復ADC之投與。在一些實施例中，ADC係如本文所揭示，例如由 式 ( I )或 式 ( I ' )表示之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC。另外或替代地，ADC包含藉由連接子( L - 1)與單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合之Ab。 (I) 在一些實施例中，Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且包含命名為 mAbA15之抗體的重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)、重鏈互補決定區3 (HCDR3)、輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)。在一些實施例中，Ab進一步包含兩個模體，其各自為L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)，其中 fGly '為與包含連接子( L - 1)之連接子-藥物連接的胺基酸殘基。在一些實施例中， mAbA15包含：a)包含以下胺基酸序列之重鏈：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYIHWVRQAPGKGLEWVAYITSTGSYTEYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDRSTRYSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSL ( fGly ')TPSRGS (SEQ ID NO: 2)；及b)包含以下胺基酸序列之輕鏈：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYATPVTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 3)。在一些實施例中，Ab為 mAbA15。另外或替代地， fGly '為與 式 ( II )之連接子-藥物連接的胺基酸殘基： ( II)，其中波浪線指示與Ab之連接點且MMAE由 式 ( III )表示： ( III)，其中*指示 式 ( II )中之連接點。在一些實施例中，ADC為 5T4 - ADC - 1。在一些實施例中，一旦不良事件得到緩解或恢復，則在步驟(iii)中恢復投與。在一些實施例中，第二治療週期之投與劑量為第一治療週期之劑量。在一些實施例中，第二治療週期之投與劑量低於第一治療週期之劑量。
在一個態樣中，提供一種治療在投與ADC時經歷不良事件之個體之癌症持續兩個或更多個治療週期的方法。該方法包含：i)在第一治療週期中以約0.1 mg/kg至約10.0 mg/kg之第一劑量向個體投與ADC；ii)在第二治療週期中，在個體具有不良事件時，以低於第一劑量之第二劑量向個體投與ADC。在一些實施例中，ADC係如本文所揭示，例如由 式 ( I )或 式 ( I ' )表示之ADC，或包含 ( L - 1 )之ADC，或藉由結合 ( L - 1a ' )產生之ADC。在一些實施例中，ADC包含藉由連接子( L - 1) (亦繪示為 ( L - 1 ' ))與單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合之Ab。 (L-I ' )在一些實施例中，Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且包含命名為 mAbA15之抗體的重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)、重鏈互補決定區3 (HCDR3)、輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)。在一些實施例中，Ab進一步包含兩個模體，其各自為L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)，其中 fGly '為與包含連接子( L - 1)之連接子-藥物連接的胺基酸殘基。在一些實施例中， mAbA15包含：a)包含以下胺基酸序列之重鏈：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYIHWVRQAPGKGLEWVAYITSTGSYTEYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARYDRSTRYSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGSL ( fGly ')TPSRGS (SEQ ID NO: 2)；及b)包含以下胺基酸序列之輕鏈：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYATPVTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 3)。在一些實施例中，Ab為 mAbA15。另外或替代地， fGly '為與 式 ( II )之連接子-藥物連接的胺基酸殘基： ( II)，其中波浪線指示與Ab之連接點且MMAE由 式 ( III )表示： ( III)，其中*指示 式 ( II )中之連接點。在一些實施例中，ADC為 5T4 - ADC - 1。在一些實施例中，一旦不良事件得到緩解或恢復，則在步驟(ii)中以第二劑量向個體投與。在一些實施例中，每3週一次(q3w)向個體投與ADC。
在一些實施例中，不良事件係選自由以下組成之群：3級血小板減少症伴臨床顯著出血、4級血小板減少症、3級或更高級別的嗜中性球減少症伴經量測至少38.3℃之發熱、3級或更高級別的嗜中性球減少症伴至少38℃持續發熱至少一小時、4級嗜中性球減少症持續超過7天、4級貧血、在沒有膽道堵塞或其他肝臟異常解釋(諸如病毒性肝炎、酒精性或自體免疫性肝炎、吉伯特氏症候群或用其他肝毒性藥物治療)的情況下丙胺酸轉胺酶或天冬胺酸轉胺酶水平超過正常值上限的3倍且總膽紅素水平超過正常值上限的2倍、及5級不良事件。
在一些實施例中，Ab包含兩條重鏈(HC)及兩條輕鏈(LC)，且其中HC中之各者包含一個L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)之模體。在一些實施例中，Ab為 mAbA15。
在一些實施例中，在各治療週期之第一天向個體投與ADC。在其他實施例中，各治療週期為3週±3天。
在一些實施例中，ADC係向個體靜脈內投與。
在一些實施例中，該方法進一步包含向個體投與PD-L1/PD-1抑制劑。在一些實施例中，向個體投與PD-L1/PD-1抑制劑。在一些實施例中，ADC與PD-L1/PD-1抑制劑同時投與。在一些實施例中，ADC在PD-L1/PD-1抑制劑之後投與。在一些實施例中，ADC在PD-L1/PD-1抑制劑之前投與。在一些實施例中，ADC與PD-L1/PD-1抑制劑在同一天投與。在一些實施例中，ADC及PD-L1/PD-1抑制劑之投與間隔至少約30分鐘或間隔至少約1小時。在一些實施例中，在各治療週期之第一天向個體投與PD-L1/PD-1抑制劑。在一些實施例中，PD-L1/PD-1抑制劑每三週向個體投與一次(q3w)。在一些實施例中，PD-L1/PD-1抑制劑係向個體靜脈內投與。在一些實施例中，PD-L1/PD-1抑制劑為包含帕博利珠單抗之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3的抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，PD-L1/PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。在一些實施例中，PD-L1/PD-1抑制劑以約200 mg之劑量向個體投與。
在一些實施例中，ADC係在第一治療週期中以約0.3 mg/kg至約6.0 mg/kg之劑量向個體投與。在一些實施例中，ADC係在第一治療週期中以約0.3 mg/kg至約2.0 mg/kg之劑量向個體投與。在一些實施例中，ADC係在第一治療週期中以約0.3 mg/kg、約0.6 mg/kg、約1.0 mg/kg、約1.5 mg/kg或約2.0 mg/kg之劑量向個體投與。
在一些實施例中，癌症為乳癌、子宮內膜癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌或膀胱癌。在一些實施例中，癌症為三陰性乳癌(TNBC)或激素受體陽性乳癌(HR+ BC)。在一些實施例中，癌症為胰臟腺癌(PDAC，在本文中亦稱為胰管腺癌)。在某些實施例中，癌症為肺腺癌或鱗狀細胞肺癌。在一些實施例中，癌症為非小細胞肺癌(NSCLC)。在其他實施例中，個體具有一或多種選自由以下組成之群的突變：EGFR敏化突變、ALK重排、ROS1重排、BRAF V600E突變、MET外顯子14跳躍突變及RET重排。在一些實施例中，個體之癌症具有一或多種選自由以下組成之群的突變：EGFR敏化突變、ALK重排、ROS1重排、BRAF V600E突變、MET外顯子14跳躍突變及RET重排。在一些實施例中，癌症為頭頸癌。在一些實施例中，癌症為頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC)。在某些實施例中，癌症為腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌。在一些實施例中，癌症為泌尿生殖系統癌症。在一些實施例中，癌症為胃腸癌。在一些實施例中，癌症為婦科癌症。另外或替代地，癌症係先前無法治療的。另外或替代地，癌症係復發性的。另外或替代地，癌症係轉移性的。另外或替代地，癌症係晚期的，例如局部晚期的。另外或替代地，癌症係不可手術治療的。
在一些實施例中，向個體投與ADC約四至約二十四個月。在一些實施例中，向個體投與ADC約四至約十八個月。在一些實施例中，向個體投與ADC約四至約十二個月。在一些實施例中，向個體投與ADC約四至約六個月。
在一些實施例中，個體為人類。 8. 實施例
1.      一種用於治療個體之癌症的方法，該方法包含向該個體投與ADC，其中該癌症為乳癌、子宮內膜癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌中之任一或多者； 其中該ADC由 式 ( I ' )表示： (I ' )， 其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且其中該Ab包含：(1)包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)中所示之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，及(2)包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)中所示之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)； 其中該Ab進一步包含一或多個 fGly '，其中 fGly '為與 式 ( I ' )之非Ab部分連接的甲醯基甘胺酸胺基酸殘基； 其中MMAE為單甲基奧瑞他汀E且由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示 式 ( I ' )中之連接點；且 其中n為整數。
2.      如實施例1之方法，其中n為選自1至10中之任一者的整數。
3.      如實施例1或2之方法，其中n為2且其中該ADC由 式 ( I )表示： (I)， 其中 式 ( III )中之*指示 式 ( I )中之連接點，且其中 fGly '為與 式 ( I )之非Ab部分連接的甲醯基甘胺酸胺基酸殘基。
4.      一種用於治療個體之癌症的方法，該方法包含向該個體投與ADC，其中該癌症為乳癌、子宮內膜癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌中之任一或多者，其中該ADC由 式 ( I )表示： (I)其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且包含命名為 mAbA15之抗體的重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)、重鏈互補決定區3 (HCDR3)、輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)，其中該Ab進一步包含兩個模體，其各自為L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)，其中 fGly '為與由 式 ( I )表示之ADC之非Ab部分連接的胺基酸殘基，且其中 mAbA15包含： a)包含以下胺基酸序列之重鏈： ；及 b)包含以下胺基酸序列之輕鏈： ；且 其中MMAE為單甲基奧瑞他汀E且由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示 式 ( I )中之連接點。
5.      一種用於治療個體之癌症的方法，該方法包含向該個體投與ADC， 其中該癌症為乳癌、子宮內膜癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌中之任一或多者； 其中該ADC包含藉由連接子( L - 1)與單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合之抗體(Ab)： ( L-1)， 其中波浪線指示與該Ab之連接點，且##指示與該MMAE之連接點； 其中該MMAE由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示與( L - 1)之連接點； 其中該Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且其中該Ab包含：(1)包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)中所示之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，及(2)包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)中所示之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)；且 其中該Ab進一步包含一或多個 fGly '且其中 fGly '為與連接子( L - 1)連接之甲醯基甘胺酸胺基酸殘基。
6.      如實施例5之方法，其中一個Ab與一至十個MMAE結合，且其中各MMAE藉由一個連接子( L - 1)與Ab結合。
7.      如實施例5或6之方法，其中一個Ab與兩個MMAE結合，且其中各MMAE藉由一個連接子( L - 1)與Ab結合。
8.      一種用於治療個體之癌症的方法，該方法包含向該個體投與ADC，其中該癌症為乳癌、子宮內膜癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌中之任一或多者，其中該ADC包含藉由連接子( L - 1)與單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合之抗體(Ab)： ( L-1)， 其中波浪線指示與該Ab之連接點，且##指示與該MMAE之連接點； 其中該MMAE由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示與( L - 1)之連接點；且 其中該Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且包含命名為 mAbA15之抗體的重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)、重鏈互補決定區3 (HCDR3)、輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)，其中該Ab進一步包含兩個模體，其各自為L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)，其中 fGly '為與連接子( L - 1)連接之胺基酸殘基，且其中 mAbA15包含：包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈。
9.      一種用於治療個體之癌症的方法，該方法包含向該個體投與ADC， 其中該癌症為乳癌、子宮內膜癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌中之任一或多者， 其中該ADC係藉由將抗體(Ab)與包含結合前連接子 ( L - 1a ' )及單甲基奧瑞他汀E (MMAE)之連接子-藥物結合而產生： ( L-1a ')， 其中##指示與該MMAE之連接點； 其中該MMAE由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示與( L - 1a ')之連接點； 其中該Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且其中該Ab包含：(1)包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)中所示之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，及(2)包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)中所示之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)；且 其中該Ab進一步包含一或多個 fGly '，且其中 fGly '為在該Ab與該連接子-藥物結合之後與連接子( L - 1a ')連接之甲醯基甘胺酸胺基酸殘基。
10.     如實施例9之方法，其中一個Ab與一至十個連接子-藥物結合。
11.     如實施例9或10之方法，其中一個Ab與兩個連接子-藥物結合。
12.     一種用於治療個體之癌症的方法，該方法包含向該個體投與ADC，其中該癌症為乳癌、子宮內膜癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌中之任一或多者，其中該ADC係藉由將抗體(Ab)與包含結合前連接子 ( L - 1a ' )及單甲基奧瑞他汀E (MMAE)之連接子-藥物結合而產生： ( L-1a ')，其中##指示與該MMAE之連接點； 其中該MMAE由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示與( L - 1a ')之連接點；且 其中該Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且包含命名為 mAbA15之抗體的重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)、重鏈互補決定區3 (HCDR3)、輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)，其中該Ab進一步包含兩個模體，其各自為L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)，其中 fGly '為在結合後與( L - 1a ')連接之胺基酸殘基，且其中 mAbA15包含：包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈。
13.     如實施例1至12中任一項之方法，其中該ADC以約0.1 mg/kg至約10.0 mg/kg之劑量向該個體投與。
14.     一種用於治療個體之癌症的方法，該方法包含以約0.1 mg/kg至約10.0 mg/kg之劑量向該個體投與ADC，其中該ADC由 式 ( I ' )表示： (I ' )， 其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且其中該Ab包含：(1)包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)中所示之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，及(2)包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)中所示之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)； 其中該Ab進一步包含一或多個 fGly '，其中 fGly '為與 式 ( I ' )之非Ab部分連接的甲醯基甘胺酸胺基酸殘基； 其中MMAE為單甲基奧瑞他汀E且由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示 式 ( I ' )中之連接點；且 其中n為整數。
15.     如實施例14之方法，其中n為選自1至10中之任一者的整數。
16.     如實施例14或15之方法，其中n為2且其中該ADC由 式 ( I )表示： (I)， 其中 式 ( III )中之*指示 式 ( I )中之連接點，且其中 fGly '為與 式 ( I )之非Ab部分連接的甲醯基甘胺酸胺基酸殘基。
17.     一種用於治療個體之癌症的方法，該方法包含以約0.1 mg/kg至約10.0 mg/kg之劑量向該個體投與ADC，其中該ADC由 式 ( I )表示： (I)， 其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且包含命名為 mAbA15之抗體的重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)、重鏈互補決定區3 (HCDR3)、輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)，其中該Ab進一步包含兩個模體，其各自為L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)，其中 fGly '為與由 式 ( I )表示之ADC之非Ab部分連接的胺基酸殘基，且其中 mAbA15包含： a)包含以下胺基酸序列之重鏈： ；及 b)包含以下胺基酸序列之輕鏈： ；且 其中MMAE為單甲基奧瑞他汀E且由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示 式 ( I )中之連接點。
18.     一種用於治療個體之癌症的方法，該方法包含以約0.1 mg/kg至約10.0 mg/kg之劑量向該個體投與ADC，其中該ADC包含藉由連接子( L - 1)與單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合之抗體(Ab)： ( L-1)， 其中波浪線指示與該Ab之連接點，且##指示與該MMAE之連接點； 其中該MMAE由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示與( L - 1)之連接點； 其中該Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且其中該Ab包含：(1)包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)中所示之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，及(2)包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)中所示之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)；且 其中該Ab進一步包含一或多個 fGly '且其中 fGly '為與連接子( L - 1)連接之甲醯基甘胺酸胺基酸殘基。
19.     如實施例18之方法，其中一個Ab與一至十個MMAE結合，且其中各MMAE藉由一個連接子( L - 1)與Ab結合。
20.     如實施例18或19之方法，其中一個Ab與兩個MMAE結合，且其中各MMAE藉由一個連接子( L - 1)與Ab結合。
21.     一種用於治療個體之癌症的方法，該方法包含以約0.1 mg/kg至約10.0 mg/kg之劑量向該個體投與ADC，其中該ADC包含藉由連接子( L - 1)與單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合之抗體(Ab)： ( L-1)， 其中波浪線指示與該Ab之連接點，且##指示與該MMAE之連接點； 其中該MMAE由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示與( L - 1)之連接點；且 其中該Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且包含命名為 mAbA15之抗體的重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)、重鏈互補決定區3 (HCDR3)、輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)，其中該Ab進一步包含兩個模體，其各自為L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)，其中 fGly '為與連接子( L - 1)連接之胺基酸殘基，且其中 mAbA15包含：包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈。
22.     一種用於治療個體之癌症的方法，該方法包含以約0.1 mg/kg至約10.0 mg/kg之劑量向該個體投與ADC，其中該ADC係藉由將抗體(Ab)與包含結合前連接子 ( L - 1a ' )及單甲基奧瑞他汀E (MMAE)之連接子-藥物結合而產生： ( L-1a ')， 其中##指示與該MMAE之連接點； 其中該MMAE由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示與( L - 1a ')之連接點； 其中該Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且其中該Ab包含：(1)包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)中所示之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，及(2)包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)中所示之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)；且 其中該Ab進一步包含一或多個 fGly '，且其中 fGly '為在該Ab與該連接子-藥物結合之後與連接子( L - 1a ')連接之甲醯基甘胺酸胺基酸殘基。
23.     如實施例22之方法，其中一個Ab與一至十個連接子-藥物結合。
24.     如實施例22或23之方法，其中一個Ab與兩個連接子-藥物結合。
25.     一種用於治療個體之癌症的方法，該方法包含以約0.1 mg/kg至約10.0 mg/kg之劑量向該個體投與ADC，其中該ADC係藉由將抗體(Ab)與包含結合前連接子 ( L - 1a ' )及單甲基奧瑞他汀E (MMAE)之連接子-藥物結合而產生： ( L-1a ')， 其中##指示與該MMAE之連接點； 其中該MMAE由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示與( L - 1a ')之連接點；且 其中該Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且包含命名為 mAbA15之抗體的重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)、重鏈互補決定區3 (HCDR3)、輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)，其中該Ab進一步包含兩個模體，其各自為L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)，其中 fGly '為在該Ab與該連接子-藥物結合後與( L - 1a ')連接之胺基酸殘基，且其中 mAbA15包含：包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈。
26.     一種治療在投與ADC時或之後經歷不良事件之個體之癌症持續兩個或更多個治療週期的方法，該方法包含： (i)在第一治療週期中以約0.1 mg/kg至約10.0 mg/kg之劑量向該個體投與該ADC； (ii)在該個體在該第一治療週期之後及第二治療週期之前具有不良事件時，延遲向該個體進一步投與該ADC；以及 (iii)在該第二治療週期中恢復該ADC之投與， 其中該ADC由 式 ( I )表示： (I)， 其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且包含命名為 mAbA15之抗體的重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)、重鏈互補決定區3 (HCDR3)、輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)，其中該Ab進一步包含兩個模體，其各自為L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)，其中 fGly '為與由 式 ( I )表示之ADC之非Ab部分連接的胺基酸殘基，且其中 mAbA15包含： a)包含以下胺基酸序列之重鏈： ；及 b)包含以下胺基酸序列之輕鏈： ；且 其中MMAE為單甲基奧瑞他汀E且由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示 式 ( I )中之連接點。
27.     如實施例26之方法，其中一旦該不良事件得到緩解或恢復，則在步驟(iii)中恢復該投與。
28.     如實施例26或27之方法，其中該第二治療週期之投與劑量為該第一治療週期之劑量。
29.     如實施例26或27之方法，其中該第二治療週期之投與劑量低於該第一治療週期之劑量。
30.     一種治療在投與ADC時或之後經歷不良事件之個體之癌症持續兩個或更多個治療週期的方法，該方法包含： i)在第一治療週期中以約0.1 mg/kg至約10.0 mg/kg之第一劑量向該個體投與該ADC； ii)在第二治療週期中，在該個體具有不良事件時，以低於該第一劑量之第二劑量向該個體投與該ADC， 其中該ADC由 式 ( I )表示： (I)， 其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且包含命名為 mAbA15之抗體的重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)、重鏈互補決定區3 (HCDR3)、輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)，其中該Ab進一步包含兩個模體，其各自為L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)，其中 fGly '為與由 式 ( I )表示之ADC之非Ab部分連接的胺基酸殘基，且其中 mAbA15包含： a)包含以下胺基酸序列之重鏈： ；及 b)包含以下胺基酸序列之輕鏈： ；且 其中MMAE為單甲基奧瑞他汀E且由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示 式 ( I )中之連接點。
31.     如實施例30之方法，其中一旦該不良事件得到緩解或恢復，則在步驟(ii)中以該第二劑量向該個體投與。
32.     如實施例26至31中任一項之方法，其中該不良事件係選自由以下組成之群：3級血小板減少症伴臨床顯著出血、4級血小板減少症、3級或更高級別的嗜中性球減少症伴經量測至少38.3℃之發熱、3級或更高級別的嗜中性球減少症伴至少38℃持續發熱至少一小時、4級嗜中性球減少症持續超過7天、4級貧血、在沒有膽道堵塞或其他肝臟異常解釋(諸如病毒性肝炎、酒精性或自體免疫性肝炎、吉伯特氏症候群或用其他肝毒性藥物治療)的情況下丙胺酸轉胺酶或天冬胺酸轉胺酶水平超過正常值上限的3倍且總膽紅素水平超過正常值上限的2倍、及5級不良事件。
33.     如實施例26至32中任一項之方法，其中該ADC包含藉由連接子( L - 1)與該MMAE結合之該Ab： ( L-1)， 其中波浪線指示與該Ab之連接點，且##指示與該MMAE之連接點。
34.     如實施例14至33中任一項之方法，其中該癌症為乳癌、子宮內膜癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌或膀胱癌、腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌中之任一或多者。
35.     如實施例1、2、5、6、9、10、13至15、18、19、22、23及35中任一項之方法，其中該Ab包含一至十個 fGly '。
36.     如實施例1至35中任一項之方法，其中該Ab包含兩個 fGly '。
37.     如實施例1至36中任一項之方法，其中該Ab包含X 1( fGly ')X 2Z 2X 3Z 3(SEQ ID NO: 67)之模體， 其中： Z 2為脯胺酸(P)或丙胺酸(A)殘基； Z 3為視情況選自由以下組成之群的鹼性胺基酸殘基：精胺酸(R)、離胺酸(K)及組胺酸(H)，或視情況選自由以下組成之群的脂族胺基酸殘基：丙胺酸(A)、甘胺酸(G)、白胺酸(L)、纈胺酸(V)、異白胺酸(I)及脯胺酸(P)； X 1存在或不存在，且當存在時，為任何胺基酸殘基，其限制條件為當SEQ ID NO: 67之序列位於該抗體Ab之N端時，X 1存在；且 X 2及X 3獨立地為任何胺基酸殘基， 視情況其中， SEQ ID NO: 67之模體係選自由以下組成之群：L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)、M( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 45)、V( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 46)、L( fGly ')SPSR (SEQ ID NO: 47)、L( fGly ')APSR (SEQ ID NO: 48)、L( fGly ')VPSR (SEQ ID NO: 49)、L( fGly ')GPSR (SEQ ID NO: 50)、I( fGly ')TPAR (SEQ ID NO: 51)、L( fGly ')TPSK (SEQ ID NO: 52)、M( fGly ')TPSK (SEQ ID NO: 53)、V( fGly ')TPSK (SEQ ID NO: 54)、L( fGly ')SPSK (SEQ ID NO: 55)、L( fGly ')APSK (SEQ ID NO: 56)、L( fGly ')VPSK (SEQ ID NO: 57)、L( fGly ')GPSK (SEQ ID NO: 58)、L( fGly ')TPSA (SEQ ID NO: 59)、I( fGly ')TPAA (SEQ ID NO: 60)、M( fGly ')TPSA (SEQ ID NO: 61)、V( fGly ')TPSA (SEQ ID NO: 62)、L( fGly ')SPSA (SEQ ID NO: 63)、L( fGly ')APSA (SEQ ID NO: 64)、L( fGly ')VPSA (SEQ ID NO: 65)及L( fGly ')GPSA (SEQ ID NO: 66)。
38.     如實施例37之方法，其中該Ab包含兩條重鏈及兩條輕鏈，且其中該等重鏈中之各者包含SEQ ID NO: 67之模體。
39.     如實施例1至38中任一項之方法，其中該Ab包含L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)之胺基酸序列。
40.     如實施例1至39中任一項之方法，其中該Ab包含兩條重鏈(HC)及兩條輕鏈(LC)，且其中該等HC中之各者包含一個L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)之模體。
41.     如實施例38或40之方法，其中該模體之 fGly '位於該重鏈中對應於SEQ ID NO: 2之第453個胺基酸殘基( fGly ' )的位置處。
42.     如實施例1至41中任一項之方法，其中 (1) HCDR1包含選自由SEQ ID NO: 13、19、24、25及30組成之群的胺基酸序列， (2) HCDR2包含選自由SEQ ID NO: 14、20、26、31及36組成之群的胺基酸序列， (3) HCDR3包含選自由SEQ ID NO: 15、21、27及32組成之群的胺基酸序列， (4) LCDR1包含選自由SEQ ID NO: 16、22、28及33組成之群的胺基酸序列， (5) LCDR2包含選自由SEQ ID NO: 17、23及34組成之群的胺基酸序列，且 (6) LCDR3包含選自由SEQ ID NO: 18、29及35組成之群的胺基酸序列。
43.     如實施例1至42中任一項之方法，其中： (i) HCDR1包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；或 (ii) HCDR1包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；或 (iii) HCDR1包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；或 (iv) HCDR1包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列；或 (v) HCDR1包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列；或 (vi)  HCDR1包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
44.     如實施例1至43中任一項之方法，其中該Ab包含：包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的VH及包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的VL。
45.     如實施例1至44中任一項之方法，其中該Ab包含：包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈。
46.     如實施例1至45中任一項之方法，其中該Ab為 mAbA15。
47.     如實施例1至46中任一項之方法，其中該ADC係在治療週期之第一天向該個體投與，持續一或多個治療週期。
48.     如實施例47之方法，其中各治療週期為3週±3天。
49.     如實施例1至48中任一項之方法，其中該ADC每三週向該個體投與一次(q3w)。
50.     如實施例1至49中任一項之方法，其中該ADC係向該個體靜脈內投與。
51.     如實施例1至50之方法，其進一步包含向該個體投與用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的手段。
52.     如實施例1至51之方法，其中向該個體投與用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的手段。
53.     如實施例51或52之方法，其中該ADC與該用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的手段同時投與。
54.     如實施例51或52之方法，其中該ADC係在該用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的手段之後投與。
55.     如實施例51或52之方法，其中該ADC係在該用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的手段之前投與。
56.     如實施例54或55之方法，其中該ADC與該用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的手段在同一天投與。
57.     如實施例56之方法，其中該ADC及該用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的手段之投與間隔至少約30分鐘或間隔至少約1小時。
58.     如實施例51至57中任一項之方法，其中該用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的手段在治療週期之第一天向該個體投與，持續一或多個治療週期。
59.     如實施例58之方法，其中各治療週期為3週±3天。
60.     如實施例51至59中任一項之方法，其中該用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的手段每三週向該個體投與一次(q3w)。
61.     如實施例51至60中任一項之方法，其中該用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的手段係向該個體靜脈內投與。
62.     如實施例1至50中任一項之方法，其進一步包含向該個體投與PD-L1/PD-1抑制劑。
63.     如實施例1至50中任一項之方法，其中向該個體投與PD-L1/PD-1抑制劑。
64.     如實施例62或63之方法，其中該ADC與該PD-L1/PD-1抑制劑同時投與。
65.     如實施例62或63之方法，其中該ADC係在該PD-L1/PD-1抑制劑之後投與。
66.     如實施例62或63之方法，其中該ADC係在該PD-L1/PD-1抑制劑之前投與。
67.     如實施例65或66之方法，其中該ADC與該PD-L1/PD-1抑制劑在同一天投與。
68.     如實施例67之方法，其中該ADC及該PD-L1/PD-1抑制劑之投與間隔至少約30分鐘或間隔至少約1小時。
69.     如實施例62至68中任一項之方法，其中該PD-L1/PD-1抑制劑在治療週期之第一天向該個體投與，持續一或多個治療週期。
70.     如實施例69之方法，其中各治療週期為3週±3天。
71.     如實施例62至70中任一項之方法，其中該PD-L1/PD-1抑制劑每三週向該個體投與一次(q3w)。
72.     如實施例62至71中任一項之方法，其中該PD-L1/PD-1抑制劑係向該個體靜脈內投與。
73.     如實施例62至72中任一項之方法，其中該PD-L1/PD-1抑制劑為包含帕博利珠單抗之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3的抗體或其抗原結合片段。
74.     如實施例73之方法，其中該PD-L1/PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。
75.     如實施例73或74之方法，其中該PD-L1/PD-1抑制劑以約200 mg之劑量向該個體投與。
76.     如實施例1至75中任一項之方法，其中該ADC以約0.3 mg/kg至約6.0 mg/kg之劑量向該個體投與。
77.     如實施例1至76中任一項之方法，其中該ADC以約0.3 mg/kg至約2.0 mg/kg之劑量向該個體投與。
78.     如實施例1至77中任一項之方法，其中該ADC以約0.3 mg/kg、約0.6 mg/kg、約1.0 mg/kg、約1.5 mg/kg或約2.0 mg/kg之劑量向該個體投與。
79.     如實施例1至78中任一項之方法，其中該癌症為三陰性乳癌(TNBC)或激素受體陽性乳癌(HR+ BC)。
80.     如實施例1至78中任一項之方法，其中該癌症為胰管腺癌(PDAC)。
81.     如實施例1至78中任一項之方法，其中該癌症為非小細胞肺癌(NSCLC)。
82.     如實施例81之方法，其中該個體具有一或多種選自由以下組成之群的突變：EGFR敏化突變、ALK重排、ROS1重排、BRAF V600E突變、MET外顯子14跳躍突變及RET重排。
83.     如實施例1至78中任一項之方法，其中該癌症為頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC)。
84.     如實施例1至83中任一項之方法，其中該ADC向該個體投與約四至約二十四個月。
85.     如實施例1至84中任一項之方法，其中該ADC向該個體投與約四至約十八個月。
86.     如實施例1至85中任一項之方法，其中該ADC向該個體投與約四至約十二個月。
87.     如實施例1至86中任一項之方法，其中該ADC向該個體投與約四至約六個月。
88.     如實施例1至87中任一項之方法，其中該ADC亦指其立體異構物、溶劑合物或鹽。
89.     如實施例1至88中任一項之方法，其中向該個體投與包含該ADC及醫藥學上可接受之賦形劑的醫藥組合物。
90. 如實施例89之方法，該醫藥組合物包含多種DAR物種之該ADC。
91.     如實施例90之方法，其中該醫藥組合物表現出藥物與抗體比率(DAR)為約2。
92.     如實施例90或91之方法，其中該醫藥組合物表現出DAR為1.8。
93.     如任何前述實施例之方法，其中該個體為人類。 9. 實例 實例 1 ：式 ( I ) 之 5T4 ADC 的 合成
1.1 連接子 - 有效負載的合成
化合物 ( IIa )之連接子-藥物預結合物(例如準備與5T4抗體結合之 式 ( II )的形式)的合成展示於 圖 1中。
化合物 I - 1及2,3,4,5,6-五氟苯酚商購自Shanghai Medicilon且按原樣使用。單甲基奧瑞他汀E (MMAE)係購自BroadPharm (San Diego, CA, USA)。所有其他試劑均獲自商業來源且未經純化即使用。
將化合物 I - 1(1.33 g，1.67 mmol)與2,3,4,5,6-五氟苯酚(1.23 g，6.68 mmol)合併於6.5 mL無水DMF中。此混合物在室溫下用1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺(「EDCI-HCl」，0.64 g，3.34 mmol)一次性處理且攪拌20小時，直至藉由HPLC分析證實化合物 I- 1完全耗盡。將反應混合物裝載於C18管柱(BIOTAGE ®，連同樣品共計60 g)上且用0-80%梯度(10個管柱體積)的ACN/水+0.05% TFA溶離。合併純溶離份，在旋轉蒸發器上濃縮直至輕微渾濁且凍乾，得到呈棕褐色粉末狀之中間物 I - 2(1.40 g，1.46 mmol，87%產率)，將其在氮氣下在-20℃儲存直至進一步使用。棕褐色粉末之LRMS (ESI)分析顯示在 m / z961.2 [M+H] +處之峰，如C 44H 45F 5N 6O 11S所預期。
在20 mL玻璃小瓶中，在室溫下合併MMAE (720 mg，1.0 mmol)、5 mL無水DMF及0.35 mL DIPEA (2.0 mmol)。將所得混合物攪拌且用呈固體狀之化合物 I - 3(1014 mg，1.0 mmol)分幾小份處理，隨後在室溫下一次性添加HOAt (136 mg，1.0 mmol)。攪拌反應混合物6小時，直至藉由HPLC分析證實反應完成。將反應混合物倒入30 mL水中。所得白色沉澱物藉由旋轉分離且收集，用5 mL水洗滌且在高真空下短暫乾燥，得到1.87 g呈黃色固體狀之中間物 I - 4，其未經純化即根據以下揭露內容進一步反應。
將中間物 I - 4(1.87 g)於15 mL THF中之溶液在冰浴中冷卻至0℃，且用1 M氫氧化鋰水溶液(3 mL)緩慢處理。反應混合物在0℃下攪拌3小時，接著升溫至環境溫度，用3 mL的1 M氫氧化鋰水溶液處理且用3 mL甲醇稀釋。在室溫下攪拌所得混合物3小時，直至藉由HPLC分析證實水解完成。接著藉由添加1 M HCl水溶液以使反應混合物達到pH 7來淬滅反應。隨後將反應混合物減壓濃縮且用10 mL甲基三級丁基醚(「MTBE」)洗滌。藉由逆相層析(C18管柱，0-40%乙腈-水 + 0.05% TFA)純化水層。合併純產物溶離份，減壓濃縮且凍乾，得到呈白色粉末狀之中間物 I- 5(735 mg，0.60 mmol，經兩個步驟60%產率)。白色粉末之LRMS (ESI)分析顯示在 m / z1229.7 [M+H] +處之峰，如C 61H 96N 8O 18所預期。
在室溫下，將DIPEA (0.21 mL，1.2 mmol)及中間物 I - 2(575 mg，0.60 mmol)於2 mL DMA中之溶液添加至中間物 I - 5(735 mg，0.60 mmol)於3 mL無水DMA中之攪拌溶液中。隨後添加1-羥基-7-氮雜苯并三唑(「HOAt」，84 mg，0.60 mmol)。將所得混合物攪拌30分鐘，直到藉由HPLC證實偶合完成。接著在室溫下用1.2 mL哌啶處理反應混合物。15分鐘後，藉由逆相層析(C18管柱，0-40%梯度的乙腈-水)純化反應混合物。合併純溶離份，在減壓及室溫下濃縮且凍乾，得到呈白色蓬鬆粉末狀之 式 ( IIa )(808 mg，0.45 mmol，75%產率)。白色粉末之LRMS (ESI)分析顯示在1783.9 [M+H] +處之峰，如C 84H 130N 14O 26S m / z所預期。
1.2 5T4 抗體的 合成
將編碼ADC中5T4抗體之重鏈及輕鏈的基因分別選殖至哺乳動物表現載體中，用於在哺乳動物細胞中作為全長IgG表現。使用蛋白質A樹脂自培養上清液中純化IgG抗體。帶標籤之5T4抗體係根據此項技術中已知的方法製備，諸如以下文獻中所描述之方法：Rabuka D.等人, 「Site-specific chemical protein conjugation using genetically encoded aldehyde tags,」 Nat Protoc., 2012; 7(6):1052-1067及美國專利第7,985,783 B2號，該等文獻各自以全文引用的方式併入本文中。簡言之，將含有異源硫酸酯酶模體之5T4抗體與甲醯基甘胺酸生成酶接觸，以將模體中之半胱胺酸轉化為具有醛部分之甲醯基甘胺酸，以生成「帶醛標籤之抗體」。
1.3 結合
藉由使連接子-藥物及帶醛標籤之抗體在37℃下在含有0.85% DMA之20 mM檸檬酸鈉pH 5.5、50 mM氯化鈉中反應72小時，將上文章節1.1中所描述之帶醛標籤之5T4抗體(15 mg/mL)與合成的連接子-藥物預結合物 IIa(8莫耳當量藥物:抗體)結合。結合後，使用具有30 kDa TFF卡匣(Sigma-Aldrich，目錄號P3C030C00)之115V Labscale切向流過濾(TFF)系統(Millipore，目錄號XX42LSS11)藉由透濾移除殘餘的游離藥物，且在20 mM檸檬酸鈉pH 5.5、50 mM NaCl中交換12個透濾體積(600 mL)。或者，亦可使用多輪稀釋至20 mM檸檬酸鈉pH 5.5、50 mM氯化鈉中且使用AMICON® 0.5 mL 30 kD分子量截留(MWCO)離心過濾器(Millipore Sigma，目錄號#UFC5030BK)或ZEBA®去鹽管柱(Fisher Scientific，目錄號PI87766)濃縮來移除殘留的游離藥物。 實例 2 ： 實例 1 之 ADC 作為單一藥劑及組合療法在患有局部晚期或轉移性實體腫瘤之個體中的劑量遞增及擴展研究
2.1 劑量遞增階段
患有晚期實體腫瘤之個體用遞增劑量的 實例 1之ADC ( 5T4 - ADC - 1)以單一藥劑(單一藥劑劑量遞增群組)或與200 mg帕博利珠單抗組合(組合劑量遞增群組)之形式治療。ADC之起始劑量為0.3mg/kg體重，每三週一次(q3w)靜脈內投與。對於體重＞120 kg之個體，基於120 kg體重計算最大總劑量。在「組合劑量遞增群組」中，帕博利珠單抗亦與ADC同時靜脈內投與。
使用貝葉斯最優區間(Bayesian optimal interval；BOIN)設計確定遞增劑量。投與起始劑量後的3週時期包含DLT評估期。遞增劑量最初基於改良的斐波那契數列(modified Fibonacci progression) (相對於先前劑量增加100%、67%、50%且隨後33%)，但基於來自當前及先前群組之安全性及PK結果的評估，可在群組之間建立較小的遞增劑量。
在本研究中，最大耐受劑量(MTD)之目標毒性率為ϕ= 0.25，最大樣本量為45。根據BOIN設計登記的個體總數，如 圖 2所示，取決於確定MTD及/或推薦劑量(RD)所需的劑量水平的數目。對多達5名個體的登記群組進行治療及觀察。若個體經歷劑量限制性毒性(DLT)或完成DLT評估期而不經歷DLT，則認為可對其進行評估以做出劑量遞增/遞減決策。
沒有經歷DLT且由於安全性以外的原因沒有完成DLT評估期的個體不視為可評估的。鑒於在劑量水平下可評估個體中的DLT率，BOIN設計使用以下規則，其經最佳化以使不正確劑量分配的機率降至最低以指導劑量遞增/遞減。
根據 圖 2： • 若在當前劑量下觀測到的DLT率≤0.197，則將劑量遞增至下一個更高的劑量水平； • 若在當前劑量下觀測到的DLT率＞0.298，則將劑量遞減至下一個更低的劑量水平； • 否則，繼續當前劑量。
為了控制超劑量，若Pr (𝑝 𝑗＞ 0.25 |資料) ＞ 0.95且至少3名可評估個體已以劑量水平𝑗治療，則自進一步檢查中排除劑量𝑗及更高水平，其中𝑝 𝑗為劑量水平𝑗的真實DLT率。此後驗機率係基於β-二項式模型𝑦 𝑗∣𝑝 𝑗 二項式(𝑝 𝑗)與𝑝𝑗 均勻(0, 1)來評估，其中𝑦 𝑗為在劑量水平𝑗經歷DLT之個體的數目。當排除最低劑量時，出於安全性停止試驗。選擇機率截止值0.95以與當目標DLT率≤1/6時，3名個體中有2名經歷DLT的劑量被排除的慣例一致。上述劑量遞增/遞減及排除規則可等效地呈現於 表 2中，其用於進行試驗。 表 2 ：用於 BOIN 設計之劑量遞增及遞減規則
以當前劑量治療之可評估個體的數目 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
遞增，若DLT之數目≤ NA NA 0 0 0 1 1 1 1 1 2 2
遞減，若DLT之數目≥ 1 1 1 2 2 2 3 3 3 3 4 4
排除，若DLT之數目≥ NA NA 3 3 3 4 4 4 5 5 6 6
以當前劑量治療之可評估個體的數目 13 14 15 - - - - - - - - -
遞增，若DLT之數目≤ 2 2 2 - - - - - - - - -
遞減，若DLT之數目≥ 4 5 5 - - - - - - - - -
排除，若DLT之數目≥ 6 7 7 - - - - - - - - -
當已在登記演算法中指示為下一步驟的劑量水平中觀測到12名可評估個體或者已在方案的階段中治療及觀測到總共45名可評估個體時，以先到者為準，劑量遞增階段的累積結束。亦可同時以低於安全劑量的任何劑量水平添加另外的個體。
在研究期間，包括在劑量遞增階段及擴展階段中，採用以下停止規則： • 在一個群組內(在非隨機化群組中)或在一個治療組內(在隨機化群組中)發生兩個或更多個5級治療相關AE； • 一個群組內超過30%的個體由於治療相關AE而停止研究治療； • 一個群組內超過70%的個體經歷≥3級治療相關AE。 MTD 確定：
MTD之確定係基於Liu及Yuan, 2015, 「Bayesian Optimal Interval Designs for Phase I Clinical Trials,」 Journal of the Royal Statistical Society, 64(3):507-523中規定的保序回歸。此計算由Shiny應用軟體「BOIN」實施(Zhou等人, 2020, 「BOIN Suite: A Software Platform to Design and Implement Novel Early-Phase Clinical Trials,」 JCO Clin Cancer Inform., 5:91-10，可在http://www.trialdesign.org獲得)。具體地，選擇為MTD的劑量係最接近目標毒性率之毒性率的最大保序估計值。當存在並列情況時，若保序估計值低於目標毒性率，則選擇較高的劑量水平。若保序估計值大於或等於目標毒性率，則選擇較低的劑量水平。
BOIN設計(Liu及Yuan 2015；Yuan等人2016)用於鑑別 實例 1之ADC的MTD。在此研究中，MTD之目標毒性率為ϕ= 0.25。基於至多7個劑量水平，單一藥劑ADC的最大樣本量為45，且基於至多4個劑量水平，與帕博利珠單抗組合的最大樣本量為30。根據BOIN設計登記的個體總數取決於確定MTD及/或RD所需的劑量水平的數目。 RD 確定：
獨立於MTD確定，且在審查所有可用的安全性、PK及初步臨床活性資料後，群組審查委員會為ADC選擇一個RD水平，在該水平下治療相應的擴展群組個體。ADC之RD係MTD或群組審查委員會自行決定的較低劑量水平。 劑量遞增的幅度：
僅當在當前劑量水平下評估了根據BOIN設計登記的至少3名個體且如上文所論述未達到中止登記的原因時，才進行劑量遞增至下一個更高的劑量水平。當選擇新的更高劑量水平進行評估時，劑量遞增係基於改良的斐波那契數列，但群組審查委員會可基於來自當前及先前群組之安全性及PK結果的評估決定在群組之間建立較小的遞增(例如，下一群組的劑量可小於斐波那契序列推薦的劑量)。 個體內劑量遞增：
在確定MTD之前，群組審查委員會可允許個體之個體內劑量遞增至安全的ADC劑量水平(亦即，已對至少3名個體完成DLT評估)。允許劑量遞增之個體確實有助於在較高劑量下進行DLT評估。 中間劑量水平群組：
可在先前開放的劑量水平之間插入中間劑量水平群組，且在群組審查委員會的請求下基於新出現的安全性及PK資料進行評估。每個額外的中間劑量可將總樣本量擴展到至多6名個體(可探索最多2個中間劑量)。來自中間劑量水平之資料包括在最終回歸模型中以確定MTD。 方案重新評估：
若群組審查委員會不能選擇可接受之RD用於在群組擴展階段進一步評估方案(例如，為了安全性而提前終止，毒性資料不足)，則可在新的劑量遞增階段評估替代治療方案。在此等情況下，來自第一劑量遞增評估之資料用於告知劑量水平及/或治療方案選擇，但登記及遞增/遞減決定遵循BOIN設計，而與先前評估無關。 治療延長期：
在完成21天DLT評估期後，個體有機會在長達24個月的治療延長期內繼續接受研究治療，包括組合治療劑(若適用)，其限制條件為不滿足任何中斷標準。若個體獲得由研究者確定的明確臨床益處且經試驗委託者同意，則個體可繼續接受ADC超過24個月。若研究者認為個體仍自研究治療中獲得臨床益處且繼續研究治療的潛在益處超過潛在風險，則可在第一次出現放射照相進展後繼續治療。在出現放射照相進展後，進行臨床判斷以決定是否繼續進行治療。在出現放射照相進展時具有臨床上顯著的症狀惡化的個體可能不適合進一步治療。若有後續進展的證據，則個體必須中斷治療。
在第一DLT評估期(第22+天)後，個體可繼續接受治療長達24個月或更長時間，直至滿足由研究者評估的放射照相PD或任何其他治療中斷標準。
劑量限制性毒性(DLT)定義為在DLT評估期間發生的任何以下治療引發的不良事件： • 任何在群組審查委員會看來具有潛在的臨床意義，使得進一步的劑量遞增將使個體暴露於不可接受的風險之治療引發的AE，其限制條件為該AE不能合理地歸因於個體之潛在疾病、其他醫學病況或伴隨藥物； • 非血液學毒性：任何≥3級治療引發的AE (例外情況在下文描述)； • 血液學毒性：任何以下治療引發的AE： o 3級血小板減少症伴臨床顯著出血； o 4級血小板減少症； o 任何持續時間的≥3級嗜中性球減少症伴發熱(單次體溫≥38.3℃[101℉]或持續體溫≥38.0℃[100℉]持續≥1小時)； o 持續時間＞7天的4級嗜中性球減少症；及 o 4級貧血； • 在沒有膽道堵塞證據(亦即，鹼性磷酸酶[ALP]顯著升高)或其他肝臟異常解釋(例如病毒性肝炎、酒精性或自體免疫性肝炎、吉伯特氏症候群、其他肝毒性藥物)的情況下，丙胺酸轉胺酶(ALT)或天冬胺酸轉胺酶(AST)＞3×正常值上限(ULN)且總膽紅素＞2×ULN (Hy定律)； • 需要減少ADC第二次輸注的劑量或停用ADC的任何治療引發的AE；以及 • 不能明確歸因於潛在疾病或外部原因的5級AE。
不視為DLT之AE之實例： • 3級疲勞或厭食，持續＜7天；≥3級噁心、嘔吐、腹瀉或脫水，在使用最大/最佳醫學療法後持續≤72小時；≥3級皮疹，持續≤5天； • 超出正常範圍且不具有任何臨床相關性之單個實驗室值。在超出範圍值後1週內，必須在未進行用於糾正異常之直接干預(例如用於電解質異常之電解質補充物)的情況下，在重複測試時記錄到正常值或基線級別水平；及 • 腫瘤發作相關AE (亦即，局部疼痛、腫瘤部位的刺激)。
對於經歷DLT之個體，停止ADC之投與，直至毒性消退至基線或≤1級嚴重程度。由研究者自行決定且經試驗委託者同意，允許在21天內恢復之個體以比產生DLT之劑量低一個劑量水平的最大劑量恢復ADC。若耐受降低的劑量而沒有DLT或其他不可接受的毒性，則個體有資格以降低的劑量進行治療延長期。
圖 3中展示了描繪用於單一藥劑劑量遞增群組(頂部)及組合劑量遞增群組(底部)的遞增劑量之BOIN設計的方案。
2.2 群組擴展階段
在劑量遞增階段確定 實例 1之ADC的推薦劑量後，在單一藥劑群組擴展階段中，在多個腫瘤特異性擴展群組中評估ADC作為單一藥劑(單一藥劑群組擴展階段)或與帕博利珠單抗組合(組合療法群組擴展階段)的安全性及功效。腫瘤特異性群組包括患有HR+乳癌(HR+ BC)、非小細胞肺癌(NSCLC)、頭頸癌(HNSCC)、胰臟癌(PDAC)、子宮內膜癌(EC)或三陰性乳癌(TNBC)之個體。在一些實施例中，腫瘤特異性群組進一步包括患有前列腺癌、子宮頸癌、膀胱癌之個體。另外或替代地，腫瘤特異性群組進一步包括患有腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌之個體。Simon 2階段設計用於HNSCC、PDAC、TNBC及EC群組。 單一藥劑群組擴展階段
將兩個劑量水平(RD及低於RD之劑量[RD-low])之ADC向所選擇的單一藥劑腫瘤群組中之個體q3w IV投與，以更全面地理解暴露-安全性及暴露-反應關係。此有助於確定ADC在此等適應症中之最佳劑量及其是否可推廣至其他實體腫瘤。對RD或RD-low群組之登記係隨機的。 組合療法群組擴展階段
對所選擇的單一藥劑腫瘤群組中之個體 ， 實例 1之ADC以推薦劑量IV q3w投與，且帕博利珠單抗以200 mg之劑量q3w投與，以更全面地理解暴露-安全性及暴露-反應關係。此有助於確定ADC在此等適應症中之最佳劑量及其是否可推廣至其他實體腫瘤。對RD或RD-low群組之登記係隨機的。
對於NSCLC及HR+ BC擴展群組，評估兩個劑量水平以有助於確定ADC在此等適應症中之最佳劑量及其是否可推廣至其他實體腫瘤。使用1:1隨機化比率，針對各腫瘤類型隨機分配之約50名個體，從而將個體分配至RD或RD-low水平。
對於HNSCC、PDAC、EC及TNBC，使用兩階段設計以RD評估各擴展群組(參見 表 3)。 表 3 ：以 RD 評估之擴展群組的兩階段設計
群組 a 腫瘤類型 「無效」藥物之最大反應率 ( p 0 ) 目標反應率 ( p1 ) 個體總數 I 階段中之 個體數目 繼續至 II 階段所需的最小反應數 群組「成功」所需的最小總反應 若「無效」則在 I 階段 後停止研究的機率 單側 α 統計功效
群組D HNSCC 15% 35% 40 12 2 10 44% 0.061 91%
群組E PDAC 4% 15% 40 19 1 4 46% 0.071 85%
群組F EC 12% 30% 38 10 1 8 28% 0.074 90%
群組G TNBC 12% 30% 38 10 1 8 28% 0.074 90%
縮寫：EC，子宮內膜癌；HNSCC，頭頸部鱗狀細胞癌；PDAC，胰臟腺癌；RD，推薦劑量；TNBC，三陰性乳癌
2.3 個體
在患有晚期實體腫瘤之個體中評估ADC作為單一藥劑的此1期研究中登記的個體數目為約301 (劑量遞增群組中約45名個體及擴展群組中約256名個體(RD劑量水平))。另外，在用ADC與帕博利珠單抗組合治療的劑量遞增群組中登記至多30名個體。用ADC與帕博利珠單抗組合治療的擴展群組中之個體數目可與用ADC作為單一藥劑治療的劑量遞增群組之個體數目不同或相當。個體登記展示於 表 4中。 表 4 ：個體登記
劑量遞增階段
群組 a 腫瘤類型 ADC 劑量 BOIN 設計 n =
群組A1 實體腫瘤 劑量mg/kg IV q3w b 3至12
群組A2 實體腫瘤 TBD mg/kg IV q3w c 各3至12
總計 ~45 d
群組擴展階段：隨機化群組
群組 腫瘤類型 ADC 劑量 每個治療組的樣本量 n =
群組B NSCLC B1組：RD (TBD) B2組：RD-low (TBD) ~25 ~25
群組C HR+乳癌 C1組：RD (TBD) C2組：RD-low (TBD) ~25 ~25
群組擴展階段：單組群組
群組 腫瘤類型 ADC 劑量 兩階段設計 n =
群組D HNSCC TBD mg/kg IV q3w e 40 (12 + 28)
群組E PDAC TBD mg/kg IV q3w e 40 (19 + 21)
群組F EC TBD mg/kg IV q3w e 38 (10 + 28)
群組G TNBC TBD mg/kg IV q3w e 38 (10 + 28)
總計 ~256
縮寫：BOIN，貝葉斯最佳區間；d，登記個體之劑量水平；EC，子宮內膜癌；HNSCC，頭頸部鱗狀細胞癌；HR+ BC，激素受體陽性乳癌；IV，靜脈內；NSCLC，非小細胞肺癌；PDAC，胰臟腺癌；RD，推薦劑量；TNBC，三陰性乳癌；n，A多達7個群組；q3w，每3週；TBD，待確定。 a在劑量遞增階段以單一ADC劑量水平治療之所有個體被定義為群組(例如，群組A1包括以ADC起始劑量治療之所有個體)。 bADC之起始劑量水平。 cADC遞增之先前劑量的100%的最大劑量增量。 d除了此等45名個體之外，若探索額外的中間劑量，則可擴大總樣本量。若群組審查委員會得出在此劑量水平下應獲得額外的安全性資料的結論，則亦可在評估的任何劑量水平下添加額外的個體(在該劑量水平下至多總共12名)。 e以ADC的推薦劑量。
為了有資格進行研究，個體必須滿足以下所有納入標準而不滿足任何排除標準： 納入標準 2) 個體-疾病特徵： • 細胞學或組織學及放射學證實的不能手術、局部晚期、轉移性或復發性實體腫瘤： 劑量遞增階段群組 A ( 實體腫瘤 ) ：• 個體患有組織學證實的不可切除或轉移性實體腫瘤，且標準治癒性措施不存在或不再有效，且沒有已知的延長存活的療法。 • 注意：結腸直腸腺癌(CRC)、透明細胞腎細胞癌(ccRCC)、肝細胞癌(HCC)腫瘤類型由於預期缺乏有效負載的益處而被排除在劑量遞增階段之外。 群組擴展階段 ( 群組 B - G ) ：• 個體已經接受標準的延長壽命的療法，除非該等療法不存在，或者可用的療法係不可耐受的或不再有效的，如下文所描述： 群組 B ( 非小細胞肺癌 ) ：• 根據主要研究者的意見，患有IV期NSCLC之個體在其最後一次全身抗癌療法期間或之後需要全身療法。 • 沒有可操作突變之個體必須接受基於鉑之化學療法及PD-(L)1抑制劑，針對局部晚期或轉移性疾病同時或依序投與。若沒有資格接受ICI療法之個體已接受含鉑雙重化療，則該等個體係有資格的。 • 具有可操作突變(例如，EGFR敏化突變、ALK重排、ROS1重排、BRAF V600E突變、MET外顯子14跳躍突變、RET重排)之個體必須已接受針對該特定遺傳改變的至少一種靶向療法，除非該療法不可用，或者個體沒有資格接受該療法。 • 個體必須已接受不超過3線先前的用於局部晚期或轉移性疾病的全身抗癌療法(例如，化學療法、免疫療法、作為單一藥劑或組合給予的分子靶向療法)。 群組 C ( 激素受體陽性乳癌 ) ：• 患有激素受體陽性(ER+及/或PR+)及HER-2陰性或低的乳癌，且在針對不能手術的局部晚期或轉移性疾病的最後一次全身抗癌療法期間或之後根據研究者的意見需要全身療法的個體。 • 注意：雌激素受體及孕酮受體陽性定義為經由IHC分析≥1%的細胞表現激素受體。 • HER-2陰性藉由當地實驗室評估定義為以下任一種：原位雜交(ISH)非擴增(HER-2與CEP17之比率＜2.0或單探針平均HER-2基因複本數＜4個信號/細胞)，或IHC 0或IHC 1+。 • 注意：HER-2低定義為IHC評分為1+或2+且ISH測試為陰性。若多於一個測試結果可用且其不全部滿足納入標準定義，則與試驗委託者討論以確定個體的資格。 • 由於手術或自然絕經或促性腺激素釋放激素(GnRH)促效劑(例如戈舍瑞林)的卵巢抑制，個體必須具有絕經後狀態。 • 對於不能手術的局部晚期或轉移性乳癌，個體必須依序或同時接受至少一種先前的內分泌抗癌療法及一種先前的CDK 4/6抑制劑療法。 • 個體必須尚未接受超過3線的用於局部晚期或轉移性疾病的先前全身抗癌療法(例如CDK4/6抑制劑、細胞毒性療法、包括ADC之靶向療法)。 • 注意：對內分泌抗癌療法的先前線的數目沒有限制。實例包括選擇性雌激素受體降解劑(SERD)、選擇性雌激素受體調節劑(SERM)以及類固醇及非類固醇芳香酶抑制劑(SAI、NSAI)。 群組 D ( 頭頸癌 ) ：• 患有頭頸癌(鱗狀細胞組織學)且在最後一次全身抗癌療法期間或之後根據主要研究者的意見需要全身療法的個體。允許的原發性腫瘤位置為口腔、口咽、下咽及聲門喉。注意：排除具有鼻咽原發性腫瘤部位的個體。 • 對於不能手術的局部晚期、復發性或轉移性疾病，個體必須已接受先前的含鉑化學療法(包括化學放射)。若當地視為標準護理且若有資格，則個體必須亦已接受ICI療法。 • 對於不能手術的局部晚期復發性或轉移性疾病環境，個體必須已接受不超過3線的先前全身抗癌療法(例如化學療法、免疫療法、作為單一藥劑或組合給予的靶向療法)。 群組 E ( 胰臟癌 )• 患有胰臟癌(腺癌組織學)且在最後一次全身抗癌療法期間或之後根據主要研究者的意見需要全身療法的個體。 • 個體必須已接受用吉西他濱與白蛋白結合型紫杉醇(nab-paclitaxel)或FOLFIRINOX組合的先前治療，或者已證明不適合標準療法。 • 對於不可手術的局部晚期、復發性或轉移性疾病，已接受至少1線且不超過2線先前全身抗癌療法的個體。 群組 F ( 子宮內膜癌 ) ：• i. 患有組織學證實的、晚期、復發性或轉移性子宮內膜癌且在最後一次全身抗癌療法期間或之後根據主要研究者的意見需要全身療法的個體。 • ii. 個體必須在輔助、局部晚期或轉移性疾病環境中已接受含鉑化學療法。 • iii. 對於不能手術的局部晚期復發性或轉移性疾病環境，個體必須已接受不超過3線的先前全身抗癌療法(例如化學療法、免疫療法、作為單一藥劑或組合給予的靶向療法)。 群組 G ( 三陰性乳癌 ) ：• 患有三陰性(雌激素受體陰性[ER-]/孕酮受體陰性[PR-]及HER-2-)乳癌且在最後一次針對不能手術的局部晚期或轉移性疾病的全身抗癌療法期間或之後根據主要研究者的意見需要全身療法的個體。 • 雌激素受體及孕酮受體陰性定義為經由IHC分析＜1%的細胞表現激素受體。 •  HER-2陰性藉由當地實驗室評估定義為以下任一種：ISH未擴增(HER-2與CEP17之比率＜2.0或單探針平均HER-2基因複本數＜4個信號/細胞)，或IHC 0或IHC 1+。 • 注意：HER-2低定義為IHC評分為1+或2+且FISH測試為陰性。若多於一個測試結果可用且其不全部滿足納入標準定義，則與試驗委託者討論以確定個體的資格)。 • 個體必須已接受至少1線先前全身化學療法(基於蒽環黴素、烷基化劑或紫杉烷之化學療法)，但不超過3線先前全身抗癌療法用於局部晚期或轉移性疾病(例如細胞毒性療法、包括ADC之靶向療法、免疫療法)。 3) 僅群組擴展階段：由研究者確定的根據RECIST 1.1的可量測疾病。 4) 在同意前不超過2年收集可用的存檔腫瘤組織。若存檔腫瘤組織不可用，則可在第一劑量之前至少7天收集新鮮的腫瘤活檢體(若可安全地獲得)。對腫瘤組織樣品的具體要求在實驗室手冊中提供。 5) 自AE恢復至基線或≤1級嚴重程度(不良事件通用術語標準第5版[CTCAE v5])，除非AE係臨床上不顯著的(例如禿髮)或穩定的。 6) 在同意當天年齡為18歲或更大。 7) 美國東岸癌症臨床研究合作組織(ECOG)體能狀態為0-1。 8) 適當的器官及骨髓功能，基於在研究治療的第一劑量之前10天內滿足所有以下實驗室標準： a. 在篩選實驗室樣品收集之前2週內無顆粒球群落刺激因子(G-CSF)支援的情況下，絕對嗜中性球計數(ANC)≥1500/mm 3(≥1.5 GI/L)。 b. 在篩選實驗室樣品收集之前2週內無輸血的情況下，血小板≥100,000/mm 3(≥ 100 GI/L)]。 c. 在篩選實驗室樣品收集之前2週內無輸血的情況下，血紅蛋白≥ 9 g/dL (≥ 9 g/L)]。 d. 在無抗凝血療法的情況下，凝血酶原時間(PT)或活化部分凝血活酶時間(aPTT)≤1.2×ULN或國際標準化比率(INR)≤1.5 (若服用穩定的口服香豆素類抗凝血劑，則INR≤3)。 e. ALT及AST≤3×ULN或≤5，伴有有記錄的肝轉移。 f. 總膽紅素≤1.5×ULN (對於患有吉爾伯氏病或非結合性高膽紅素血症的個體，≤3×ULN)。 g. 血清肌酐≤1.5×ULN或使用Cockcroft-Gault方程式計算的肌酐清除率≥45 mL/min (≥0.75 mL/s)]。 h. 尿蛋白與肌酐之比率(UPCR)≤1 mg/mg (≤113.2 mg/mmol)]肌酐。 9) 能夠理解及遵守方案要求，且必須簽署知情同意文件。 10) 性活躍的可育個體及其伴侶必須同意高效避孕方法，當在研究過程中及最後一劑研究治療後的以下持續時間(以較晚者為準)一致且正確地使用時，該等避孕方法單獨或組合導致每年小於1%的失敗率： • 對於具有生育潛力的女性，在最後一劑ADC後9個月，或對於男性，在最後一劑ADC後4個月。 • 對於有生育潛力的女性，在最後一劑帕博利珠單抗後186天，或對於男性，在最後一劑後96天 • 注意：需要額外的避孕方法，諸如障壁方法(例如避孕套)。 • 注意：此外，男性必須同意不捐獻精子，且女性必須同意不捐獻卵子(卵子、卵母細胞)用於在此等相同時期內的生殖目的。 • 注意：無精子症男性可免除避孕要求。持續不具有異性性活動的具有生育潛力的女性亦免除避孕要求，且仍必須進行妊娠測試。 11) 具有生育潛力的女性個體在篩選時不得懷孕。除非滿足以下標準之一，否則女性個體被視為具有生育潛力：永久性絕育(子宮切除術、雙側輸卵管切除術或雙側卵巢切除術)或有記錄的絕經後狀態(定義為45歲以上的女性在沒有其他生物或生理原因的情況下閉經12個月。此外，55歲以下的女性必須具有＞40 mIU/mL的血清促卵泡激素(FSH)水平以確認絕經)。 排除標準 1) 單一藥劑及組合劑量遞增階段：不太可能對抗有絲分裂化學療法有反應的腫瘤類型，包括：結腸直腸腺癌、肝細胞癌、透明細胞腎細胞癌。 2) 先前用任何靶向5T4之抗體藥物結合物或基於澳瑞他汀衍生物之抗體藥物結合物治療。 3) 在研究治療的第一劑量之前21天(亞硝基脲或絲裂黴素在42天內)內接受任何化學療法或抗癌抗體(例如抗VEGF mAb、抗體藥物結合物或PD-1/PD-L1 mAb)。 4) 在研究治療的第一劑量之前2週內接受任何類型的小分子激酶抑制劑(包括研究性激酶抑制劑)。 5) 在研究治療的第一劑量之前，在最後一次劑量的2週內或5個半衰期內(以較短者為準)接受任何抗癌激素療法。注意：允許伴隨使用促黃體激素釋放激素(LHRH)促效劑或拮抗劑。 6) 在研究治療的第一劑量之前2週內進行放射療法。患有來自先前放射療法之臨床相關持續併發症的個體不符合條件。 7) 已知的腦轉移或顱硬膜外疾病，除非用放射療法及/或手術(包括放射手術)充分治療，且在研究治療的第一劑量之前穩定至少4週。符合條件的個體必須在研究治療的第一劑量時在神經學上無症狀且沒有皮質類固醇治療。 8) (僅對於帕博利珠單抗組合)在研究治療的第一劑量之前2週內診斷為免疫缺乏症或正在接受全身類固醇療法或任何其他形式的免疫抑制療法。允許吸入、局部或耳用皮質類固醇及鹽皮質激素。 9) 個體患有不受控制的、顯著的間期或近期疾病，包括但不限於以下病況： a. 急性眼部感染、結膜或角膜的急性或慢性潰瘍性/瘢痕性病況，包括但不限於來自自體免疫性疾病之眼部病症(例如黏膜類天疱瘡、休格連氏症候群(Sjogren's syndrome))、嚴重的結膜/角膜瘢痕形成(例如放射性角膜病變)、嚴重的乾眼病(Schirmer測試讀數≤5 mm)、角膜移植史、單眼性； b. 周圍神經病變(感覺及/或運動) CTCAE等級≥2； c. 紐約心臟協會3級或4級充血性心臟衰竭、不穩定型心絞痛、嚴重心律不整(例如心室撲動、心室纖維性顫動、尖端扭轉型室性心動過速)； d. 在第一劑量之前6個月內的中風(包括短暫性腦缺血發作[TIA])、心肌梗塞或其他缺血事件； e. 在第一劑量之前3個月內的血栓栓塞事件(例如DVT或PE)。個體必須已接受抗凝血療法且在第一劑量時無症狀； f. 特發性肺纖維化、機化性肺炎、藥物誘導之肺炎或特發性肺炎的病史； g. 中度至重度肝損傷(Child-Pugh B或C)； h. 需要全身療法之活動性感染； i. 未治療之已知人類免疫缺乏病毒(HIV)或後天免疫缺乏症候群(AIDS)相關疾病。HIV陽性但具有不可偵測之病毒負荷且已接受抗反轉錄病毒療法至少30天的個體符合條件。注意：若當地法規要求，則在篩選時進行HIV測試； j. 急性或慢性B型或C型肝炎感染；或 k. 需要腹膜透析或血液透析。 10) B型肝炎表面抗原(HBsAg)測試呈陽性。 11) C型肝炎病毒(HCV)抗體測試呈陽性。 • 注意：患有經治療之C型肝炎但HCV抗體測試呈陽性，隨後HCV RNA測試呈陰性且沒有正在進行的抗HCV療法的個體符合條件。 • 注意：HCV RNA測試僅對HCV抗體測試呈陽性的個體進行。 12) 在第一劑量之前4週內臨床上顯著的血尿、嘔吐或咯血或其他顯著出血(例如肺出血)史。 13) 活動性自體免疫疾病或過去5年內需要免疫抑制療法的自體免疫疾病史。需要間歇使用支氣管擴張劑的患有哮喘的個體不排除在研究參與之外。其他例外情況需要試驗委託者批准。 14) 無代償性/症狀性甲狀腺功能低下。 15) 實體器官或同種異體幹細胞移植史。 16) 在研究治療的第一劑量之前4週內進行大手術(例如胃腸[GI]手術、腦轉移瘤的移除或生檢)。在第一劑量之前7天內進行小手術(例如簡單切除、拔牙)。大手術的完全傷口癒合必須在第一劑量之前發生。患有來自先前手術之臨床相關持續併發症的個體不符合條件。 17) 在研究治療的第一劑量之前4週內，藉由Fridericia公式計算的經校正QT間期(QTcF) ＞ 480 ms每次心電圖(ECG)。 • 注意：若單次ECG顯示QTcF的絕對值＞ 480 ms，則必須在初次ECG之後30分鐘內以約3分鐘的間隔再進行2次ECG，且QTcF的3次連續結果的平均值必須≤480 ms才能使個體符合條件。 18) 可能干擾遵守方案要求或給予知情同意書的能力的精神疾病史。 19) 懷孕或哺乳期的女性。 20) 先前鑑別的對研究治療調配物之組分的過敏或超敏反應。 21) 在研究治療的第一劑量之前2年內診斷出另一種惡性腫瘤，淺表皮膚癌或認為治癒且未用全身療法治療的局部低級腫瘤除外。
將 實例 1之ADC提供在填充有3.4 mL以15 mg/mL (51 mg/小瓶)調配之藥品的10 mL小瓶中。各小瓶之可抽出體積≥3.0 mL (≥45 mg)。藥品以冷凍液體形式提供，且小瓶在使用前必須儲存在≤-65℃。 目標及指標
表 5概述研究之主要目標及用於達成及評估彼等目標的指標。 表 5 ：目標及指標
目標 指標
劑量遞增階段 ( 單一藥劑群組 )
主要
• 確定MTD及/或RD，用於在患有晚期惡性腫瘤之個體中進一步評估ADC之IV投與 • DLT之發生率及嚴重程度
次要
• 評估ADC之安全性及耐受性 • AE、SAE、導致中斷之AE及死亡之發生率
• 表徵ADC之PK • 評估指定時間點時血漿或血清中ADC (與有效負載結合之抗體)、總抗體(未結合及經結合之抗體)及游離有效負載的PK
• 評估ADC之免疫原性 • ADA對ADC反應的發生率
探索性
• 評估ADC之抗腫瘤活性，由每個INV按照RECIST 1.1之ORR、DOR及PFS所量測 • 每個INV按照RECIST 1.1之ORR • 每個INV按照RECIST 1.1之DOR • 每個INV按照RECIST 1.1之PFS
• 評估PK與探索性PD生物標記、初步功效及安全性結果之間的關係 • 與ADC濃度相關之血漿蛋白生物標記(諸如但不限於HMGB1、CDH2、SFRP1、PLAUR)相對於基線的變化。 • 腫瘤中之變化(例如5T4之IHC、增殖標記[例如Ki67]之IHC、有絲分裂標記[例如磷酸化組蛋白H3]之IHC、對腫瘤、基質及界面之空間轉錄體學分析) • 選擇的腫瘤(例如IHC及/或遺傳學及基因體學)及血液生物標記(例如可溶性蛋白、ctDNA)與臨床指標的相關性
劑量遞增階段 ( 組合療法群組 )
主要
• 確定MTD及/或RD以進一步評估在患有晚期惡性腫瘤之個體中IV投與ADC與帕博利珠單抗之組合 • DLT之發生率及嚴重程度
次要
• 評估ADC與帕博利珠單抗組合之安全性及耐受性 • AE、SAE、imAE、導致中斷之AE及死亡之發生率
• 表徵ADC與帕博利珠單抗組合之PK • 評估指定時間點時血漿或血清中ADC (與有效負載結合之抗體)、總抗體(未結合及經結合之抗體)及游離有效負載的PK
• 表徵ADC在與帕博利珠單抗組合投與時之免疫原性 • ADA對ADC反應的發生率
探索性
• 評估ADC與帕博利珠單抗組合之抗腫瘤活性，由每個INV按照RECIST 1.1之ORR、DOR及PFS所量測 • 每個INV按照RECIST 1.1之ORR • 每個INV按照RECIST 1.1之DOR • 每個INV按照RECIST 1.1之PFS
• 評估PK與探索性PD生物標記、初步功效及安全性結果之間的關係 • 與ADC濃度相關之血漿蛋白生物標記(諸如但不限於HMGB1、CDH2、SFRP1、PLAUR)相對於基線的變化。 • 腫瘤中之變化(例如5T4之IHC、增殖標記[例如Ki67]之IHC、有絲分裂標記[例如磷酸化組蛋白H3]之IHC、對腫瘤、基質及界面之空間轉錄體學分析) • 選擇的腫瘤(例如IHC及/或遺傳學及基因體學)及血液生物標記(例如可溶性蛋白、ctDNA)與臨床指標的相關性
群組擴展階段 ( 單一藥劑及組合療法群組
主要
• 藉由每個INV按照RECIST 1.1估計ORR來評估ADC之初步功效 • 每個INV按照RECIST 1.1之ORR
次要
• 評估ADC之安全性及耐受性 • AE、SAE、導致中斷之AE、死亡之發生率
• 評估ADC之抗腫瘤活性，由每個INV按照RECIST 1.1針對選定群組之ORR、DOR、OS及PFS所量測 • 評估ADC之抗腫瘤活性，藉由按照RECIST 1.1之DOR及PFS所量測 • 藉由INV之ORR • 選定群組之ORR • OS
• 表徵ADC單一療法之PK及ADC在與帕博利珠單抗組合投與時之PK • 評估指定時間點時血漿或血清中ADC (與有效負載結合之抗體)、總抗體(未結合及經結合之抗體)及游離有效負載的PK
• 表徵ADC之免疫原性 •  ADA對ADC反應的發生率
探索性
• 評估ADC對腫瘤及血液生物標記之效應以及腫瘤標記與臨床指標之相關性 • 血漿蛋白生物標記(諸如但不限於HMGB1、CDH2、SFRP1、PLAUR)或治療後腫瘤組織(例如5T4之IHC、Ki67及磷酸化組蛋白H3之IHC、對腫瘤及基質中不同區室之空間轉錄體學分析)相對於基線的變化，與ADC濃度相關。 選擇的腫瘤生物標記(例如IHC及/或遺傳學及基因體學)及血液生物標記(例如可溶性蛋白、ctDNA、CTC)與臨床指標的相關性
所用縮寫：ADA，抗藥物抗體；AE，不良事件；ctDNA，循環腫瘤DNA；DLT，劑量限制性毒性；DOR，反應持續時間；IHC，免疫組織化學；INV，研究者；IV，靜脈內；MTD，最大耐受劑量；ORR，客觀反應率；PD，藥效學；PFS，無進展存活期；PK，藥物動力學；RD，推薦劑量；SAE，嚴重不良事件
腫瘤評估
藉由對比增強電腦斷層攝影術(CT)及/或磁共振成像(MRI)評估腫瘤狀態，且根據RECIST 1.1 (Eisenhauer等人2009)評估治療反應。患有原發性腦腫瘤(諸如神經膠母細胞瘤)之個體不需要RECIST 1.1評估。在篩選時使用的相同成像儀器用於研究治療的第一劑量後的各後續腫瘤評估。
放射照相評估包括以下：
胸部 / 腹部 / 骨盆 ( CAP ) 成像：在篩選時及在研究開始後每6週對所有個體進行CAP之CT或CT胸部及MRI腹部/骨盆。在研究完成42週後，每9週進行此等評估。
腦成像：
在患有腦轉移之個體中，在篩選時對劑量遞增階段中具有腦轉移史或臨床症狀的所有個體及群組擴展階段中的所有個體進行腦MRI (或CT)。在研究治療開始後，在患有腦轉移之個體中或若臨床上有指示，每6週進行評估。在研究完成42週後，每9週(±7天)進行此等評估。
在患有原發性腦腫瘤(諸如神經膠母細胞瘤)之個體中，在篩選時及在研究治療開始後每6週(±5天)在所有患有原發性腦腫瘤之個體中進行腦的對比增強MRI。神經腫瘤學中之反應評估標準(RANO)用於評估治療反應(Huang及Wen, 2016, 「Response Assessment in Neuro-Oncology Criteria and Clinical Endpoints,」 Magn Reason Imaging Clin N Am, 24(4):705-718)。在研究完成42週後，每9週(±7天)進行此等評估。
骨成像：用於骨轉移之鎝骨掃描或正電子發射斷層攝影術(PET)成像(例如18F-NaF)並非研究強制評估之一部分，但可根據標準臨床實踐用於指導針對具有疑似或已知骨轉移之個體的根據RECIST 1.1的確證CT/MRI成像。
根據研究者之放射照相腫瘤評估可用於治療決策。在局部確定的放射照相進展時及/或若個體不再感覺到臨床上有益，則可中斷研究治療。放射照相腫瘤評估根據方案定義之時程繼續，無論研究治療是否減少、暫停、延遲或中斷，直至放射照相進展或研究治療中斷之較晚者。 評估
接受ADC治療之個體的劑量遞增階段及群組擴展階段的所需評估的時程呈現於下 表 6及 表 7中。
以下為治療期間的程序及評估的原則： • 第1週期第1天定義為第一次IV研究治療日期。ADC輸注以「週期」投與，每3週±3天(除非由於AE而延遲)且總是間隔至少19天且劑量之間不超過42天。週期的開始為IV研究治療輸注當天。 • 在治療期間，在各治療週期之前(72小時內)需要研究問診以評估安全性及實驗室研究，且若臨床上指示，亦即在治療延遲期間，至少每3週或更頻繁地繼續。 • 在IV研究藥物投與後第15天(±1天)的前2個週期期間需要問診以監測AE、生命徵象及某些安全性實驗室。 • 放射照相腫瘤評估與自隨機化日期起固定的相應治療週期一起進行。時間點不會由於研究治療的延遲、暫停或中斷而被修改。 • 在任何時間允許進行額外的臨床及安全性評估的不定期問診。 • 根據 表 6及 表 7進行PK、免疫原性、PD及生物標記評估。 表 6 ：劑量遞增階段之評估時程
評估 治療前 21 天 DLT 評估期 治療期 b 治療後 c
篩選 a 第 1 週期 第 2 週期 第 3 週期及以後 安全性 FU ( 在決定中斷研究治療後 ) 延長 FU
第 1 天 第 2 天 第 4 天 d 第 8 天 ( ± 1 天 ) 第 15 天 ( ± 1 天 ) 第 21 天 ( ± 1 天 ) 第 1 天 第 2 天 第 8 天 ( ± 1 天 ) 第 1 天 EOT 30 天隨訪 (+14 天 ) 60 天隨訪 (+14 天 ) 100 天 e 隨訪 (+14 天 ) (Q12 W ± 14 天 )
知情同意書 e X
人口統計資料、醫療及癌症病史 ≤ 28天
安全性 f
身體檢查+體重 g ≤ 28天 (+身高) X X X X X X X X X X X
ECOG PS ≤ 28天 X X X X X X X
生命徵象 h ≤ 28天 X X X X X X X X X X
心臟超音波檢查 ≤ 10天
12導程ECG i ≤ 10天 X X X X X X X X
伴隨藥物 記錄自研究治療的第一劑量前21天至決定中斷研究治療之日後30天服用的伴隨藥物。
不良事件 記錄自知情同意書至30天隨訪之新的或惡化的AE。AE資訊在研究問診時收集，且亦可在任何時間經電話或藉由自發的個體報告收集。在研究治療的第一劑量之日，記錄給藥前及給藥後的AE。跟蹤在30天隨訪後正在進行的某些AE及所有SAE，直至研究者解決或確定事件係穩定的或不可逆的。
眼科評估 k ≤ 28天 X
神經及眼部症狀評估 ≤ 28天 X
血液學 ≤ 10天 X l X X X X X X X X X X X
血清化學 ≤ 10天 X l X X X X X X X
尿分析 ≤ 10天 X l X X X X X X X X X X
尿化學，包括UPCR ≤ 10天 X l X X X X X X a X X X X
甲狀腺功能測試(TSH、fT3、fT4) ≤ 10天 X l X X k X X X X
HBV及HCV；HIV (若當地法規要求) ≤ 10天
INR及aPTT ≤ 10天 X X X X n X X X X
血清或尿液妊娠測試 1 ≤ 7天 (血清) X X X X X X X
FSH m ≤ 10天 X
研究治療
ADC IV 輸注 ADC之劑量每3週(+3天)且間隔至少19天投與。 在ADC IV輸注後，在診所監測個體至少60分鐘(對於第一次輸注)，且若耐受(沒有IRR)，則至少30分鐘用於後續輸注。眼部AE之預防與如本文所描述之輸注相關地投與。
帕博利珠單抗輸注 帕博利珠單抗之劑量每3週(+3天)且間隔至少19天投與。 在帕博利珠單抗IV輸注後，在診所監測個體至少60分鐘(對於第一次輸注)，且若耐受(沒有IRR)，則至少30分鐘用於後續輸注。imAE之預防與如本文所描述之輸注相關地投與。
藥物動力學、藥效學及生物標記評估
所有PK、PD及生物標記分析在表8中之評估時程中所指示的時間點收集。
腫瘤評估
CT/MRI n 胸部、腹部、骨盆 ( CAP ) ≤ 28天 在研究的前42週內每6週(±7天)。在研究完成42週(第42週問診)後，每9週(±7天)進行此等評估。
MRI/CT o 腦 ≤ 28天 在研究的前42週內，每6週(±7天)進行研究治療的第一劑量後的評估。在研究完成42週(第42週問診)後，每9週(±7天)進行此等評估。
鎝骨掃描 p 骨 ≤ 28天 在前48週內每12週(±7天)及其後每24週(±14天)或根據臨床指示進行評估。
縮寫：aPTT，活化的部分凝血活酶；CAP，胸部、腹部、骨盆；CT，電腦斷層攝影術；DLT，劑量限制性毒性；ECG，心電圖；ECOG，美國東岸癌症臨床研究合作組織；HBV，B型肝炎病毒；HCV，C型肝炎病毒；HIV，人類免疫缺乏病毒；INR，國際標準化比值；IV，靜脈內；MRI，磁共振成像；OS，總存活期；PD，藥效學；PK，藥物動力學；TSH，促甲狀腺激素；UPCR，尿蛋白-肌酐比率 腳註注意：基線定義為在接受研究藥物之前的最近評估。 a篩選：在研究治療的第一劑量之前審查篩選評估的結果，以確認個體滿足資格標準。 b治療期：若長達24個月沒有疾病進展的臨床跡象且試驗委託者同意，則個體可在治療延長期期間在不存在劑量限制性毒性(DLT)的情況下(或若DLT已消退)繼續投與研究治療。若個體獲得由研究者確定且由試驗委託者同意的明確臨床益處，則個體可繼續接受ADC超過24個月。 c治療期後：決定中斷研究治療的日期定義為決定永久中斷研究治療的日期或研究治療的最後一次劑量的日期之較晚者。 d對PK樣品進行第4天評估。進一步的細節可在表8中獲得。 e知情同意書：在進行任何研究特定程序之前必須提供知情同意書；然而，若現場的IRB/EC政策允許，則在知情同意之前作為常規護理的一部分進行的評估可用作篩選評估。 f安全性評估：安全性評估可在各週期的第1天之前至多72小時進行。 g 身體檢查：在研究治療的第一劑量之前的第1天及隨後的臨床上指示的安全性評估時進行症狀指導的身體檢查。在各輸注之前確定實際體重(始終在有或沒有鞋的情況下量測)以確定ADC的劑量。 h生命徵象：生命徵象由5分鐘的坐位或仰臥位血壓、脈搏率、呼吸率及體溫組成。在給藥前(例如，儘可能在投與研究治療之前60分鐘內)量測生命徵象。在計劃在同一時間點進行多次評估的研究問診時，首先量測ECG，接著量測生命徵象，且隨後儘可能採集血液(開始PK取樣)。 i12導程ECG：在第1天，在投與研究治療之前及給藥後1小時(±30分鐘)進行12導程ECG。給藥後ECG時間點相對於研究治療輸注結束。若在前1天內進行，則在劑量2當天在給藥前不需要ECG。隨後，若在研究藥物投與當天進行，則在研究治療投與之前在指定時間點進行12導程ECG。若臨床上指示，則進行額外ECG。在由於QT延長而重新開始ADC治療的情況下，每週重複ECG持續2週，隨後每2週重複ECG持續1個月，隨後根據方案定義的時間點重複ECG。 j第1天評估：此評估旨在確認篩選後及第一劑量之前對治療的適合性。若此評估在第一劑量之前10天(對於具有生育潛力之女性的妊娠測試為7天)內的篩選期間進行，則此評估不需要在第1天進行，除非個體的臨床狀態已改變(例如指示臨床惡化的新症狀的發作)。若在第1天在給藥前進行評估，則在投與任何治療之前，研究者必須可獲得結果且對其進行審查。 k眼科檢查由眼科醫生(或若眼科醫生不可用，則由驗光師)進行：(1)在第一劑量之前21天內的篩選期(基線)期間；(2)在前一次ADC劑量後至少1週及各下一次ADC劑量前2週內治療時隨訪；(3)眼部症狀迅速惡化。基線眼科檢查包括眼科病史、當前眼鏡處方記錄(若適用)、最佳矯正視力、Schirmer測試、裂隙燈、眼壓量測。治療時隨訪眼科檢查包括最佳矯正視力及裂隙燈。根據臨床指示進行額外的治療時眼科檢查。定期(例如每月)跟蹤在60天隨訪(60天FU)時具有持續角膜不良事件的個體，直至眼科醫生(或若眼科醫生不可用，則驗光師)解決或認為臨床穩定。 l血清或尿液妊娠測試：在給藥第1天之前重複血清妊娠測試(對於具有生育潛力的女性)，除非在第1天之前7天內在篩選期間進行妊娠評估。進行額外的妊娠測試(血清或尿液)用於基線後妊娠評估。 mFSH：用於55歲以下的女性以確定絕經狀態。 n在整個研究中使用相同的成像儀器。在給定時間點按照RECIST 1.1之PR或CR必須藉由在首次滿足反應標準後≥4週的重複評估來確認。此可在下一個安排的評估時完成。 o僅在具有記錄的局部治療的腦轉移的個體中或若由新的腦轉移的臨床跡象指示，才需要腦成像。為了滿足研究的資格要求，腦轉移必須在第一劑量之前已治療且穩定至少4週。 p用於骨轉移之鎝骨掃描或正電子發射斷層攝影術(PET)成像(例如18F-NaF)並非研究強制評估之一部分，但可根據標準臨床實踐用於指導根據RECIST 1.1的確證CT/MRI成像，且亦可用於評估前列腺癌患者的進展(參見群組I納入標準)。藉由CT/MRI證實的骨病變必須報告為非目標病變或新病變。
表 7 ：群組擴展階段之評估時程
評估 治療前 治療期 - 群組擴展階段 b 治療後 c
篩選 a 第 1 週期 第 2 週期 第 3 週期及以後 EOT 30 天隨訪 (+14 天 ) 60 天隨訪 (+14 天 ) 延長 FU (Q12 W ± 14 天 )
第 1 天 第 2 天 第 4 天 d 第 8 天 ( ± 1 天 ) 第 15 天 ( ± 1 天 ) 第 21 天 ( ± 1 天 ) 第 1 天 第 2 天 第 8 天 ( ± 1 天 ) 第 1 天
知情同意書 e X
人口統計資料、醫療及癌症病史 ≤ 28天
安全性 f
身體檢查+體重 g ≤ 28天 (+身高) X X X X X X X X X X
ECOG PS ≤ 28天 X X X X X X
生命徵象 h ≤ 28天 X X X X X X X X X
心臟超音波檢查 ≤ 10天
12導程ECG i ≤ 10天 X X X X X X X
伴隨藥物 記錄自研究治療的第一劑量前21天至決定中斷研究治療之日後30天服用的伴隨藥物。
不良事件 記錄自知情同意書至30天隨訪之新的或惡化的AE。AE資訊在研究問診時收集，且亦可在任何時間經電話或藉由自發的個體報告收集。在研究治療的第一劑量之日，記錄給藥前及給藥後的AE。跟蹤在30天隨訪後正在進行的某些AE及所有SAE，直至研究者解決或確定事件係穩定的或不可逆的。
眼科評估 k ≤ 28天 X
神經及眼部症狀評估 ≤ 28天 X
血液學 ≤ 10天 X j X X X X X X X X X X
血清化學 ≤ 10天 X j X X X X X X X
尿分析 ≤ 10天 X j X X X X X X X X X
尿化學，包括UPCR ≤ 10天 X j X X X X X X d X X X
甲狀腺功能測試(TSH、fT3、fT4) ≤ 10天 X j X X n X X X
HBV及HCV；HIV (若當地法規要求) ≤ 10天
INR及aPTT ≤ 10天 X X X X n X X X
血清或尿液妊娠測試 1 ≤ 7天 (血清) X X X X X X
FSH m ≤ 10天 X
研究治療
ADC IV 輸注 ADC之劑量每3週(+3天)且間隔至少19天投與。 在ADC IV輸注後，在診所監測個體至少60分鐘(對於第一次輸注)，且若耐受(沒有IRR)，則至少30分鐘用於後續輸注。眼部AE之預防與如本文所描述之輸注相關地投與。
藥物動力學、藥效學及生物標記評估
所有PK、PD及生物標記分析在表9中之評估時程中所指示的時間點收集。
腫瘤評估
CT/MRI n 胸部、腹部、骨盆 (CAP) ≤ 28天 在研究的前42週內每6週(±7天)。在研究完成42週(第42週問診)後，每9週(±7天)進行此等評估。
MRI/CT o 腦 ≤ 28天 在研究的前42週內，每6週(±7天)進行研究治療的第一劑量後的評估。在研究完成42週(第42週問診)後，每9週(±7天)進行此等評估。
鎝骨掃描 p 骨 ≤ 28天 在前48週內每12週(±7天)及其後每24週(±14天)或根據臨床指示進行評估。
縮寫及腳註與表6中相同。
如 表 8及 表 9所示，自所有治療群組中之個體獲得用於PK評估之血液樣品及腫瘤樣品且加以分析： 表 8 ：劑量遞增群組之樣品收集的時刻表
藥物動力學 免疫原性 生物標記
血液 血液 ( 血漿生物標記 ) 血液 (CTC) 腫瘤組織 ( 存檔 ) 腫瘤組織 ( 新鮮生檢 )
治療期前
篩選 (≤ 14天) Xa
治療期ADC每3週以靜脈內輸注形式投與。PK樣品在給藥前約30分鐘、給藥後±5分鐘至2小時內以及在給藥後較晚時間點±15分鐘內採集。
21 天 DLT 評估期
第 1 天 (C1D1) 給藥前 X (All) X (All) X X
給藥後：15 min X (All)
第 2 天 (C1D2) C1D1給藥後24 h X (All) X
第 4 天 (C1D4) 給藥後72 h X (All) X X
第 8 天 (C1D8) 給藥後168 h X (All) X X
第 15 天 (C1D15) C2D1給藥後336 h X (All)
第 22 天 (C2D1) 給藥前 X (All) X (All) X Xb
給藥後：15 min X (All)
治療延長期
第 23 天 (C2D2) C2D1給藥後24 h X (All)
第 25 天 (C2D4) C2D1給藥後72 h X (All)
第 29 天 (C2D8) C2D1給藥後168 h X (All)
第 36 天 (C2D15) C2D1給藥後336 h X (All)
C3D1 及以後 給藥前 X (All) X (All) X
給藥後：15 min X (All)
給藥後：7 +/-2天 X (All)
進展時 X
治療期後
30 天 FU X X (All)
60 天 FU X X (All)
100 天 FU X X (All)
All =所有個體 a收集可用的存檔腫瘤組織(在同意前約2年獲得)。若存檔腫瘤組織不可用，若同意且若可安全地獲得，則可在第1天問診之前至少7天(且至多60天)進行新鮮腫瘤生檢。 b可在第22天問診(±5天)時收集視情況選用之腫瘤樣品。
表 9 ：群組擴展階段之樣品集合的時刻表
藥物動力學 免疫原性 生物標記
血液 血液 ( 血漿生物標記 ) 血液 ( 生殖系 DNA ) 血液 (ctDNA) 腫瘤組織 ( 存檔 ) 腫瘤組織 ( 新鮮生檢 )
治療期前
篩選 (≤ 14天) Xa
治療期ADC每3週以靜脈內輸注形式投與。PK樣品在給藥前約30分鐘、給藥後±5分鐘至2小時內以及在給藥後較晚時間點±15分鐘內採集。
21 天 DLT 評估期
第 1 天 (C1D1) 給藥前 X (All) X (All) X X X
給藥後：15 min X (All)
第 2 天 (C1D2) C1D1給藥後24 h X (All)
第 4 天 (C1D4) 給藥後72 h X (All)
第 8 天 (C1D8) 給藥後168 h X (All)
第 15 天 (C1D15) C2D1給藥後336 h X (All)
第 22 天 (C2D1) 給藥前 X (All) X (All) X
給藥後：15 min X (All)
治療延長期
第 23 天 (C2D2) C2D1給藥後24 h X (All)
第 25 天 (C2D4) C2D1給藥後72 h X (All)
第 29 天 (C2D8) C2D1給藥後168 h X (All)
第 36 天 (C2D15) C2D1給藥後336 h X (All)
C3D1 及以後 給藥前 X (All) X (All) X
給藥後：15 min X (All)
給藥後：7 +/-2天 X (All)
進展時 X
治療期後
30 天 FU X X (All)
FU 2 X X (All)
All =所有個體 a收集可用的存檔腫瘤組織(在同意前約2年獲得)。若存檔腫瘤組織不可用，若同意且若可安全地獲得，則可在第1天問診之前至少7天(且至多60天)進行新鮮腫瘤生檢。 b可在第22天問診(±5天)時收集視情況選用之腫瘤樣品。
探索性生物標記分析，包括但不限於： • 基因體學(例如，突變改變、表觀遺傳修飾、複本數)； • 表現(例如，TPBG、β III微管蛋白、藥物外排轉運蛋白)； • 藥效學分析(例如，CDH2、SFRP1、PLAUR)； • 反應生物標記(例如，腫瘤組織中之可溶性HMGB1、細胞介素、細胞週期停滯及細胞凋亡標記)； • ctDNA；以及 • CTC。 實例 3 ： 靶向腫瘤相關抗原 5T4 之 用於治療實體腫瘤之 5T4 - ADC - 1 的 臨床前表徵
3.1 概述
在細胞來源之異種移植(CDX)乳癌細胞株(MCF-7、MDA-MD-468)及患者來源之異種移植(PDX)腫瘤模型(頭頸部鱗狀細胞癌[HNSCC]、非小細胞肺癌[NSCLC]及乳癌)中評估 5T4 - ADC - 1的活體外及活體內功效。另外，在MC38-h5T4同基因型結腸癌異種移植模型中評估 5T4 - ADC - 1+ 抗PD-1抗體之活體內組合功效。
結果顯示， 5T4 - ADC - 1在MCF7及MDA-MB-468乳癌細胞株中表現出具有亞奈莫耳效力的活體外細胞毒性作用，且與異種移植及PDX模型中之經媒劑處理之動物相比，在5-10 mg/kg 5T4 - ADC - 1的劑量範圍內表現出活體內腫瘤生長抑制(80-99%)。在表現MC38-h5T4之同基因型結腸癌異種移植模型中， 5T4 - ADC - 1+ 抗PD-1與單獨投與的任一藥劑相比顯示出改善的功效。
因此， 5T4 - ADC - 1係一種新穎的抗5T4 ADC，其表現出有效的抗腫瘤活性，抑制活體外癌細胞生長及各種活體內模型中之腫瘤生長。此等發現支持 5T4 - ADC - 1在人類臨床研究中的評估。
3.2 材料及方法
RP-HPLC分析：使用配備有XBridge Shield RP 18, 4.6 × 150 mm, 3.5 µm (Waters)之Agilent 1260 HPLC系統分析所有樣品( 5T4 - ADC - 1及MMAE有效負載[購自MedChemExpress，目錄號CAS: 474645-27-7])。操作條件設定如下：在50℃，流動速率為1.0 mL/min，其中移動相A (MPA)包含0.1%三氟乙酸的水溶液，且移動相B (MPB)含有0.1%三氟乙酸的乙腈溶液。使用450 nm的參考波長在280 nm處監測吸光度。對於各分析，將20 μL體積的樣品注入系統中。溶離曲線包括自1%至30% MPB的30分鐘線性梯度，隨後用99% MPB洗滌5分鐘，最後在1% MPB下再平衡2分鐘。
細胞株：MCF-7及MDA-MB-468細胞(表現5T4之人類乳癌細胞株)來自美國典型培養物保藏中心(ATCC)或美國國家癌症研究院(NCI)，且使用形態學、短串聯重複序列分析或基於聚合酶連鎖反應之方法來鑑別。細胞按照建議維持在5% CO 2、37℃下且在培養中不超過18次繼代。
活體外細胞毒性：為了評估 5T4 - ADC - 1之活體外細胞毒性，將八種濃度(3 pm至50 nM)應用於表現5T4抗原之乳癌細胞株(MDA-MB-468及MCF7)。120小時後使用CellTiter-Glo®發光分析(Promega，目錄號G7573)量測細胞存活率，其中藉由比較經處理之細胞相對於未處理之對照細胞的發光來計算存活率百分比(亦即，存活率% = 100-[lum 平均未處理-lum 實驗]/lum 平均未處理× 100)。
5T4 - ADC - 1之活體內功效(抗腫瘤活性) -細胞來源之異種移植(CDX)模型：在AAALAC (實驗室動物護理評估及認證協會)認可的設施，根據各別機構動物護理及使用委員會批准的方案進行活體內研究。在乳癌之兩種鼠類異種移植模型中評估 5T4 - ADC - 1之活體內功效：MCF7 (雌性無胸腺裸小鼠；每個處理組n=10；Charles River Discovery Services)及MDA-MB-468 (雌性嚴重複合型免疫缺乏疾病[SCID]米色小鼠；每個處理組n=8；Charles River Discovery services)。對於兩種模型，小鼠經由皮下側腹注射接種MCF-7或MDA-MB-468細胞，且一旦腫瘤達到100-150 mm 3之尺寸，就將該等小鼠隨機分配至處理組。隨機分組後，小鼠接受靜脈內(IV)劑量(MCF-7模型在第1天一次劑量或兩次劑量[第1天一次及第7天一次]；MDA-MB-468模型在第1天及第4天一次劑量])。兩項MCF-7研究之劑量水平如下： 5T4 - ADC - 1(單次劑量方案中為0.5、2.5或5 mg/kg，或兩次劑量QW [每週一次]×2方案中兩次劑量中之各者為0.25、1.25或2.5 mg/kg)。對於MDA-MB-468模型，動物在第1天及第4天接受5 mg/kg劑量)。在所有研究中，包括陰性對照(與所評估之最高 5T4 - ADC - 1劑量匹配的同型匹配的ADC)、陽性對照(與所評估之最高 5T4 - ADC - 1劑量匹配的靶向5T4之馬佛多坦ADC)或媒劑(PBS或20 mM檸檬酸鈉/50 mM氯化鈉)。對於MDA-MB-468研究，亦包括來自 5T4 - ADC - 1之mAb作為處理組(5 mg/kg)。在整個研究中每兩週量測體重及腫瘤尺寸，且當腫瘤尺寸超過特定臨限值(對於MDA-MD-468為700 mm 3；對於MCF-7為1000 mm 3)或體重減輕＞20%時，對動物實施安樂死。對於MDA-MD-468在第84天且對於MCF-7在第26/28天評估腫瘤生長抑制百分比(TGI%) (分別為一次或兩次劑量模型)。
5T4 - ADC - 1 - 5T4 - ADC - 1與抗PD-1劑組合之活體內功效(抗腫瘤活性)：為了評估 5T4 - ADC - 1與抗計劃性細胞死亡蛋白1 (抗PD-1)檢查點抑制劑組合之功效，雌性C57BL/6小鼠經由皮下側腹注射接種MC38-h5T4細胞(同基因型結腸癌模型)，且一旦腫瘤達到87 mm 2之尺寸，就將該等小鼠隨機分配至處理組(每組n=10；Crown Bioscience)。隨機分組後，小鼠接受 5T4 - ADC - 1媒劑 + 抗PD-1媒劑、 5T4 - ADC - 15 mg/kg (單次劑量) + 抗PD-1媒劑、 5T4 - ADC - 1媒劑 + 抗PD-1 0.5 mg/kg (每週兩次，持續2週)、 5T4 - ADC - 1媒劑 + 抗PD-1 0.75 mg/kg (每週兩次，持續2週)、 5T4 - ADC - 15 mg/kg (單次劑量) + 抗PD-1 0.75 mg/kg (每週兩次，持續2週)或 5T4 - ADC - 15 mg/kg (單次劑量) + 抗PD-1 0.5 mg/kg (每週兩次，持續2週)。每週兩次(在兩個維度上)量測腫瘤體積，且當腫瘤尺寸達到2,000 mm 3、體重減輕＞20%或動物達到第55天(根據隨機分組)時，對動物實施安樂死。在第18天評估TGI%。
5T4 - ADC - 1之活體內功效(抗腫瘤活性) - 患者來源之異種移植(PDX)模型：基於5T4表現之H評分(藉由免疫組織化學方法確定)在100與200之間來選擇PDX模型(Crown Bioscience；HNSCC、NSCLC及乳癌)。向雌性NOD [非肥胖糖尿病]/SCID或Balb/c小鼠(n=10/組/研究)投與10 mg/kg 5T4 - ADC - 1或媒劑的單次IV劑量。處理後監測腫瘤體積至少28天。當腫瘤尺寸達到＞3,000 mm 3、體重減輕＞20%或動物達到預定的研究結束時，對動物實施安樂死。對於處理組及媒劑組，在最終的各別研究日評估TGI%。
統計分析：對於活體外細胞毒性分析，存活率計算為實驗孔中相對於未處理之對照孔的發光(lum)百分比。未處理孔之平均發光視為100%存活率。具體地，用於計算單個實驗孔之存活率百分比的公式如下：存活率% = 100-(lum 平均未處理-lum 實驗)/lum 平均未處理× 100。使用GraphPad PRISM以圖形方式顯示資料。為了計算絕對IC 50，使用藉由非線性回歸模型及四參數劑量反應擬合的劑量-反應曲線分析歸一化資料。
對於MCF-7及MDA-MB-468 CDX活體內異種移植功效研究，使用GraphPad PRISM軟體進行統計分析。PDX及CDX組合功效研究的統計分析在R語言及統計計算與圖形環境中進行。根據活體內功效資料的正態性，採用ANOVA或Kruskal Wallis檢驗進行比較，在存在三組或更多組的情況下進行適當的事後檢驗。
對於PDX研究，使用Mann Whitney t檢驗或Welch t檢驗進行成對比較。
對於MCF-7、MDA-MB-468及PDX研究，TGI%定義為(1-Ti/Ci)×100，其中Ti及Ci分別為處理組及對照組的平均腫瘤體積(在給定日)。對於MC38-h5T4模型中的組合CDX研究，TGI%定義為1-(Vt/V0)/(Ct-C0)*100，其中V為在時間t或0時經處理之腫瘤體積，且C為對照[媒劑]體積)。對數秩(Mantel-Cox)檢驗用於存活分析。在所有情況下，p值＜0.05視為統計顯著的。
3.3 結果
使用上文所描述之RP-HPLC測試包含本文所用之 5T4 - ADC - 1的組合物且表現出DAR為1.8。
活體外細胞毒性：在MDA-MD-468及MCF-7乳癌細胞株中之活體外細胞毒性研究表明， 5T4 - ADC - 1具有強力細胞毒活性，對於MDA-MB-468及MCF-7細胞株，IC 50值分別為0.896 nM (95% CI：0.53-1.5)及0.185 nM (95% CI：0.10-0.33)，且最大抑制值分別為90.2%及77.8% ( 圖 4A 及圖 4B)。靶向5T4之馬佛多坦ADC的效力比 5T4 - ADC - 1低4-7倍，在MDA-MD-468及MCF-7細胞中之IC 50值分別為6.4 nM (95% CI：4.7-8.8)及0.78 nM (95% CI：未定義) ( 圖 4A 及圖 4B)。相比之下，同型匹配的對照ADC (例如，與相同連接子有效負載結合之非5T4結合IgG1抗體)對腫瘤細胞存活率幾乎沒有影響，證實5T4結合為細胞毒性所需的。
活體內功效：在MCF-7乳癌異種移植模型中，以單次劑量IV投與0.5、2.5或5 mg/kg 5T4 - ADC - 1或以多次劑量QWx2時程IV投與0.25、1.25或2.5 mg/kg 5T4 - ADC - 1在前20天內引起劑量相關之腫瘤消退且抑制腫瘤生長直至研究結束(58天； 圖 5A 及圖 5B)。在單次劑量研究中( 表 10， 圖 5C)，相對於媒劑之TGI%值隨劑量增加(對於0.5、2.5及5 mg/kg 5T4 - ADC - 1，分別為11%、50% [ P＜0.05]及93% [ P＜0.0001])，完全反應(CR，定義為連續三天腫瘤體積＜13.5 mm 3：分別為0/10、2/10及7/10)之數目亦如此。經媒劑處理之動物的中值存活時間為29.5天，相比之下用0.5 mg/kg、2.5 mg/kg及5 mg/kg 5T4 - ADC - 1處理之動物的中值存活時間分別為29、47及＞58天(研究的最後一天)。在多劑量研究中觀測到相同的趨勢( 表 11， 圖 5D)，其中對於0.25、1.25及2.5 mg/kg 5T4 - ADC - 1的QWx2劑量，TGI%值分別為21%、50% ( P＜0.001)及91% ( P＜0.001)且CR分別為0/10、1/10及3/10。媒劑組中的中值存活時間為28天，相比之下0.25 mg/kg、1.25 mg/kg及2.5 mg/kg 5T4 - ADC - 1組的中值存活時間分別為29.5、38.5及＞58天(研究的最後一天)。此外，單次劑量及多次劑量MCF-7研究均顯示，靶向5T4之馬佛多坦ADC導致比所測試之最高 5T4 - ADC - 1劑量更低的TGI%及更少的CR ( 表 11)。同型匹配的ADC對照在任一異種移植研究中亦未顯示抗腫瘤活性(TGI%分別為4.9%及18%，在任一研究中均無CR)。 表 10.  IV 投與 5T4 - ADC - 1 及對照後之腫瘤生長抑制、反應率及存活率 ( MCF7 異種移植模型中之單次劑量 )
組別 CR 相對於媒劑之TGI% (第26天) 相對於媒劑之 P值 a 中值存活期 ( 天 ) 對數秩檢驗 (Mantel-Cox) 相對於媒劑之 P 值
媒劑 0 -- -- 29.5 --
同型ADC，5 mg/kg 0 4.9 NS 31 NS
靶向5T4之馬佛多坦-ADC，5 mg/kg 1 80 ＜0.001 ＞58 ＜0.001
5T4-ADC-1，0.5 mg/kg 0 11 NS 29 NS
5T4-ADC-1，2.5 mg/kg 2 50 ＜0.05 47 ＜0.05
5T4-ADC-1，5 mg/kg 7 93 ＜0.0001 ＞58 ＜0.0001
a按需要使用單因子ANOVA與Dunnett事後檢驗確定TGI%相對於媒劑之統計差異。 ANOVA，方差分析；CR，完全反應(定義為連續三次量測之腫瘤體積＜13.5 mm 3；IV，靜脈內；NS，= P＞0.05；TGI%，腫瘤生長抑制百分比(定義為[1-Ti/Ci] × 100，其中Ti及Ci分別為處理組及對照組在給定日之平均腫瘤體積)。 表 11.  IV 投與 5T4 - ADC - 1 及對照後之腫瘤生長抑制、反應率及存活率 ( MCF7 異種移植模型中之 QWx2 給藥 )
組別 CR 相對於媒劑之TGI% (第28天) 相對於媒劑之 P值 a 中值存活期 (天) 對數秩檢驗 (Mantel-Cox) P 值( 相對於媒劑)
媒劑 0 -- -- 28 --
同型ADC，2.5 mg/kg 0 18 NS 29.5 NS
靶向5T4之馬佛多坦-ADC，2.5 mg/kg 0 57 ＜0.001 42 ＜0.001
5T4-ADC-1，0.25 mg/kg 0 21 NS 29.5 NS
5T4-ADC-1，1.25 mg/kg 1 50 ＜0.001 38.5 ＜0.05
5T4-ADC-1，2.55 mg/kg 3 91 ＜0.001 ＞58 ＜0.0001
a按需要使用單因子ANOVA與Dunnett事後檢驗確定TGI%相對於媒劑之統計差異。 ANOVA，方差分析；CR，完全反應(定義為連續三次量測之腫瘤體積＜13.5 mm 3；IV，靜脈內；NS，= P＞0.05；TGI%，腫瘤生長抑制百分比(定義為[1-Ti/Ci] × 100，其中Ti及Ci分別為處理組及對照組在給定日之平均腫瘤體積)。
在MDA-MD-468乳癌模型中，IV投與5 mg/kg 5T4 - ADC - 1使得在20天內腫瘤幾乎完全消退且給藥後抑制腫瘤生長長達100天( 圖 5E)。此外，相對於媒劑之TGI%值為93% ( P＜0.0001)且10隻動物中有8隻觀測到CR ( 表 12)。相比之下，靶向5T4之馬佛多坦ADC沒有表現出持久的腫瘤控制(亦即，在最後一次劑量後約14天腫瘤再生長明顯)，具有較低TGI% (46%； P＜0.01)及2/10 CR ( 表 12 ， 圖 5E)。同型匹配的ADC (5 mg/kg)及親本mAb (5 mg/kg)均未顯示出任何抗腫瘤活性(TGI%分別為5.8%及4.9%；任一組中均無CR； 表 12)。 表 12. IV 投與 5T4 - ADC - 1 及對照後之腫瘤生長抑制及反應率 ( MDA - MB - 468 異種移植模型 )
組別 CR 相對於媒劑之TGI% (第84天) 相對於媒劑之 P值
媒劑 0 -- --
同型ADC，5 mg/kg 0 5.8 NS
靶向5T4之馬佛多坦-ADC，5 mg/kg 2 46 ＜0.01
5T4-ADC-1，5 mg/kg 8 93 ＜0.0001
5T4-ADC-1中之親本抗體，5 mg/kg 0 4.9 NS
a按需要使用單因子ANOVA與Dunnett事後檢驗確定TGI%相對於媒劑之統計差異。 ANOVA，方差分析；CR，完全反應(定義為連續三次量測之腫瘤體積＜13.5 mm 3；IV，靜脈內；NS，= P＞0.05；TGI%，腫瘤生長抑制百分比(定義為[1-Ti/Ci] × 100，其中Ti及Ci分別為處理組及對照組在給定日之平均腫瘤體積)。
5T4 - ADC - 1與抗PD-1劑組合：在鼠類h5T4同基因型結腸癌模型中，截至第18天，與對照相比，5 mg/kg 5T4 - ADC - 1之單次劑量顯著抑制腫瘤生長(TGI：71%； P＜0.001； 圖 6A 及圖 6B ； 表 13)。此外，10隻動物中有4隻觀測到CR (定義為連續3天腫瘤體積為0 mm 3)。在 5T4 - ADC - 1+ 抗PD-1組中， 5T4 - ADC - 1介導之腫瘤生長抑制進一步增強， 5T4 - ADC - 1+ 0.75 mg/kg抗PD-1及 5T4 - ADC - 1+ 5 mg/kg抗PD-1之TGI值分別為97%及96% (相對於對照均 P＜0.001)，CR率分別為9/10及5/10； 圖 6A 及圖 6B ； 表 13)。用單獨的抗PD-1劑(0.75 mg/kg或0.5 mg/kg劑量)未觀測到此增強的腫瘤抑制，TGI分別為55%及57%，CR率分別為0/10及0/10。 5T4 - ADC - 1+ 抗PD-1處理組亦顯示最長的中值存活期( 5T4 - ADC - 1+ 0.75 mg/kg抗PD-1及 5T4 - ADC - 1+ 0.5 mg/kg抗PD-1分別＞55天)，其他活性處理組(媒劑 + 0.5 mg/kg抗PD-1；媒劑 + 0.75 mg/kg抗PD-1)具有31-39天之中值存活期。對照組之中值存活期為22天。 表 13.  IV 投與 5T4 - ADC - 1 及對照後之腫瘤生長抑制、反應率及存活率 ( h5T4 - MC38 模型 )
組別 劑量水平(mg/kg) CR 相對於媒劑之TGI% ( 第18 天) 相對於媒劑之 P 值 a 中值存活期 ( 天) 對數秩檢驗 (Mantel-Cox) P 值( 相對於媒劑)
媒劑(PBS) 媒劑( 5T4-ADC-1) - 0 -- -- -- --
-
媒劑(PBS) 5T4-ADC-1 - 4 71 ＜0.001 22 ＜0.001
5
抗PD-1 媒劑( 5T4-ADC-1) 0.75 0 55 NS 39 ＜0.001
-
抗PD-1 媒劑( 5T4-ADC-1) 0.5 0 57 NS 30.5 ＜0.001
-
抗PD-1 5T4-ADC-1 0.75 9 97 ＜0.001 ＞55 ＜0.001
5
抗PD-1 5T4-ADC-1 0.5 5 96 ＜0.001 ＞55 ＜0.001
5
a使用Kruskal Wallis ANOVA與Conover事後檢驗確定TGI%相對於媒劑之統計差異。 ANOVA，方差分析；CR，完全反應(定義為連續三次量測之腫瘤體積為0 mm 3；IV，靜脈內；NS，= P＞0.05；TGI%，腫瘤生長抑制百分比，定義為指定日之(1-(Vt/V0) / (Ct-C0)) × 100，其中V為在時間t或0時經處理之腫瘤體積，且C為對照(媒劑)體積)。
PDX模型：10 mg/kg 5T4 - ADC - 1之單次IV劑量使得表現5T4之PDX模型中多種適應症的腫瘤顯著減少( 圖 7A - 7C)，HNSCC、NSCLC及乳癌之TGI%值分別為100%、97%及81%。經 5T4 - ADC - 1處理之動物在給藥後約10天開始顯示腫瘤抑制及消退，且持續至給藥後至少30天，HNSCC、NSCLC及乳癌PDX模型之CR分別為8/10、0/10及7/10動物。
3.4 論述
新穎抗5T4 ADC，即 5T4 - ADC - 1及其親本mAb的臨床前表徵顯示，兩者均對重組人類及食蟹獼猴5T4的膜遠端具有高結合親和力，其中 5T4 - ADC - 1作為具有高度位點特異性DAR之串聯裂解的含MMAE之ADC顯示出有效的目標介導之活性。
與單獨投與的任一化合物相比， 5T4 - ADC - 1與抗PD-1劑之組合在鼠類同基因型結腸癌模型中增強了腫瘤抑制，平均腫瘤體積與對照相比減小了約30倍，以及TGI%值＞95%且在高達90%的測試動物中CR。此等有前景的發現突出了 5T4 - ADC - 1作為組合搭配物在表現5T4之癌症中的潛力。
總之， 5T4 - ADC - 1表現出有效的抗腫瘤活性，抑制活體外癌細胞生長及各種活體內鼠類異種移植模型及PDX模型中的腫瘤生長。此等功效資料表明， 5T4 - ADC - 1在一系列實體腫瘤類型中具有有前景的治療潛力，且支持 5T4 - ADC - 1作為單一療法或與免疫療法諸如抗PD-1劑組合在臨床研究中的評估。 實例 4 ：藉由 IHC 對 患者組織之 5T4 表現分析
進行免疫組織化學(IHC)研究以評估選擇的癌症類型中患者腫瘤組織樣品的5T4表現且鑑別用於臨床工作的目標癌症。
簡言之，測試樣品係獲自US Biomax。隨後按照製造商說明書且使用以下套組及試劑進行IHC：初級抗體：Abcam，目錄號Ab134162，殖株號EPR5529，濃度：0.168 mg/mL，稀釋度1:600；二級抗體偵測套組：Bond Polymer Refine，Leica，目錄號DS9800；Bond™抗原決定基修復溶液1，1L(Bond ER1) (Leica，目錄號AR9961)；Bond™抗原決定基修復溶液2，1L(Bond ER2) (Leica，目錄號AR9640)；Bond™脫蠟溶液，1L (Leica，目錄號AR9222)；Bond™洗滌溶液10×濃縮物(Leica，目錄號AR9590)；IHC級無水酒精(Leica，目錄號3803686)；SignalStain抗體稀釋劑(即用型) (CST，目錄號8112)；無動物阻斷溶液(5×) (CST，目錄號15019)；Bond RX自動IHC&ISH系統(Leica，目錄號Bond RX)；及NanoZoomer數位載片系統(Hamamatsu，目錄號NDP2.0-HT)。抗原修復進行20分鐘(使用抗原決定基修復溶液1 (檸檬酸鹽緩衝液pH 6.0)或抗原決定基修復溶液2 (EDTA緩衝液，pH 9.0))，同時遵循 表 14中詳述的IHC程序。 表 14. IHC 程序 .
步驟 試劑 時間 ( 分鐘 ) 溫度 ( ℃ ) 步驟 試劑 時間 ( 分鐘 ) 溫度 ( ℃ )
1 脫蠟溶液 0.5 72 23 阻斷試劑 20 RT
2 脫蠟溶液 0 72 24 初級Ab 60 RT
3 脫蠟溶液 0 RT 25 Bond洗滌緩衝液 0 RT
4 酒精 0 RT 26 Bond洗滌緩衝液 2 RT
5 酒精 0 RT 27 Bond洗滌緩衝液 2 RT
6 酒精 0 RT 28 Bond洗滌緩衝液 2 RT
7 Bond洗滌緩衝液 0 RT 29 Polymer 20 RT
8 Bond洗滌緩衝液 0 RT 30 Bond洗滌緩衝液 0 RT
9 Bond洗滌緩衝液 0 RT 31 Bond洗滌緩衝液 2 RT
10 Bond ER1/ER2 0 RT 32 Bond洗滌緩衝液 2 RT
11 Bond ER1/ER2 0 RT 33 Bond洗滌緩衝液 2 RT
12 Bond ER1/ER2 20 100 34 去離子水 0 RT
13 Bond ER1/ER2 0 RT 35 DAB Refine 0 RT
14 Bond洗滌緩衝液 0 RT 36 DAB Refine 5 RT
15 Bond洗滌緩衝液 0 RT 37 去離子水 0 RT
16 Bond洗滌緩衝液 0 RT 38 去離子水 0 RT
17 Bond洗滌緩衝液 0 RT 39 去離子水 0 RT
18 Bond洗滌緩衝液 3 RT 40 蘇木精 10 RT
19 過氧化物阻斷劑 10 RT 41 去離子水 0 RT
20 Bond洗滌緩衝液 0 RT 42 Bond洗滌緩衝液 0 RT
21 Bond洗滌緩衝液 0 RT 43 去離子水 0 RT
22 Bond洗滌緩衝液 0 RT
RT：室溫 時間=0意謂用溶液快速沖洗載片。
使用NanoZoomer-HT 2.0 Image系統使用40×放大率掃描所有染色的切片。生成整個切片影像的高解析度影像，且藉由HALO TM影像分析平台進一步分析。
對腫瘤區域進行評分且排除壞死。陽性染色的強度在四個水平評分：0 (陰性)、1+ (弱染色)、2+ (中等染色)、3+ (強染色)。評估不同強度水平下腫瘤區域的百分比，且如下計算H評分：H評分= (0處之%) ×0 + (1處之%) ×1 + (2處之%)×2 + (3處之%)×3 (H評分範圍在0至300之間)。
結果顯示在廣泛的癌症類型中觀測到5T4表現。雖然在腫瘤及基質細胞中均可觀測到5T4染色，但在腫瘤細胞中通常觀測到更顯著的染色。參見例如 圖 8A 及圖 8B以及 表 15。
結果亦顯示，在測試的癌症類型中，乳癌、肺癌、間皮癌、子宮頸癌及頭頸癌顯示出更高的5T4表現。前列腺癌、腎癌、卵巢癌、結腸癌及胃癌顯示出相對較低的5T4表現。參見例如 圖 8A 及圖 8B。 表 15. IHC 結果
癌症類型 評估的腫瘤核心總數 5T4 陽性腫瘤核心 5T4 陽性率 (%) H 評分中值 H 評分平均值
乳癌 315 314 99.7 128.0 124.9
肺癌 338 336 99.4 139.9 135.3
胰臟癌 278 272 97.8 90.9 96.5
膀胱癌 190 186 97.9 110.1 105.9
頭頸癌 130 130 100.0 124.9 122.0
前列腺癌 103 86 83.5 7.5 31.5
子宮內膜癌 97 97 100.0 134.2 121.0
間皮瘤 86 86 100.0 116.6 132.0
子宮頸癌 281 280 99.6 93.4 93.6
腎癌 391 376 96.2 46.0 42.2
卵巢癌 384 321 83.6 43.7 54.9
結腸癌 376 316 84.0 27.7 48.8
胃癌 178 163 91.6 57.5 64.1
* * * * *
在整個本申請案中，已引用各種公開案、專利、專利申請案及其他文獻。此等公開案、專利、專利申請案及其他文獻之揭露內容特此以全文引用之方式併入本申請案中以用於所有目的，包括為了更充分地描述與本文所揭露之主題有關的目前先進技術。雖然已參考上文所提供之實例描述所揭露之主題，但應理解，可在不脫離所揭露之主題之精神的情況下進行各種修改。在審閱本說明書後，許多變化形式對於熟習此項技術者將變得顯而易見。
圖 1提供了根據 實例 1之用於合成本文所揭示之ADC (諸如 5T4 - ADC - 1)的方法。
圖 2描繪了BOIN設計之示意圖。
圖 3描繪了描繪用於實例中所描述之劑量遞增階段之BOIN設計的流程。
圖 4A - 4B展示了 5T4 - ADC - 1在MCF-7 ( 圖 4A)及MDA-MB-468 ( 圖 4B)乳癌細胞株中之活體外細胞毒性活性，如 實例 3中進一步說明。在用於活體內異種移植研究之兩種腫瘤細胞株中均觀測到 5T4- ADC - 1介導之活體外細胞毒性。在兩種細胞株中，與陽性對照(靶向5T4之馬福多汀(mafodotin) ADC)相比， 5T4 - ADC - 1表現出改良的效力及相似的最大抑制。
圖 5A - 5E展示了在MCF-7 ( 圖 5A - 5D)及MDA-MB-468 ( 圖 5E)鼠類乳癌異種移植模型中IV投與 5T4 - ADC - 1後的活體內腫瘤生長抑制及存活曲線，如 實例 3中進一步說明。進行 5T4 - ADC - 1之單次劑量( 圖 5A)或每週一次持續兩週(QWx2)給藥( 圖 5B)的劑量反應研究。繪製單次劑量( 圖 5C)及QWx2劑量( 圖 5D)研究之存活曲線。在任一給藥方案後，與媒劑相比， 5T4 - ADC - 1引起劑量相關之腫瘤體積抑制及更長的存活期(右移曲線)。如 圖 5E中所示， 5T4 - ADC - 1在給藥後20天開始產生最大且持久的抑制。本研究未生成存活曲線，因為媒劑中僅2/8隻動物達到預定的存活結果。SEM，平均值之標準誤差。
圖 6A - 6B展示了 5T4 - ADC - 1及抗PD-1檢查點抑制劑在小鼠同基因型MC38-h5T4模型中之組合功效，如 實例 3中進一步說明。與單獨投與的任一種藥劑相比， 5T4 - ADC - 1及抗PD-1試劑之組合增強了抗腫瘤活性且改善了存活率。BIW，每週兩次； i . v .，靜脈內；PD-1，計劃性細胞死亡蛋白1；SEM，平均值之標準誤差。
圖 7A - 7C展示了在HNSCC ( 圖 7A)、NSCLC ( 圖 7B)及乳癌(非TNBC) ( 圖 7C)之鼠類PDX模型中單次劑量IV投與 5T4 - ADC - 1(10 mg/kg)後的活體內腫瘤生長抑制，如 實例 3中進一步說明。IV，靜脈內；NSCLC，非小細胞肺癌；SEM，平均值之標準誤差；HNSCC，頭頸部鱗狀細胞癌；TGI，腫瘤生長抑制。
圖 8A - 8B繪製了患者腫瘤組織樣本之5T4表現( 圖 8A，H評分； 圖 8B，5T4陽性腫瘤細胞之百分比)，如 實例 4中進一步說明。
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Claims (36)

  1. 一種用於治療個體之癌症的方法，該方法包含向該個體投與ADC， 其中該癌症為乳癌、子宮內膜癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌中之任一或多者； 其中該ADC由 式 ( I ' )表示： (I')， 其中Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且其中該Ab包含： (1)包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)中所示之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，及 (2)包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)中所示之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)； 其中該Ab進一步包含一或多個 fGly '，其中 fGly '為與 式 ( I ' )之非Ab部分連接的甲醯基甘胺酸胺基酸殘基； 其中MMAE為單甲基奧瑞他汀E且由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示 式 ( I ' )中之連接點；且 其中n為整數。
  2. 如請求項1之方法，其中n為選自1至10中之任一者的整數。
  3. 如請求項1或2之方法，其中n為2且其中該ADC由 式 ( I )表示： (I)， 其中 式 ( III )中之*指示 式 ( I )中之連接點，且其中 fGly '為與 式 ( I )之非Ab部分連接的甲醯基甘胺酸胺基酸殘基。
  4. 一種用於治療個體之癌症的方法，該方法包含向該個體投與ADC， 其中該癌症為乳癌、子宮內膜癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌中之任一或多者； 其中該ADC包含藉由連接子( L - 1)與單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合之抗體(Ab)： ( L-1)， 其中波浪線指示與該Ab之連接點，且##指示與該MMAE之連接點； 其中該MMAE由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示與( L - 1)之連接點； 其中該Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且其中該Ab包含： (1)包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)中所示之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，及 (2)包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)中所示之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)；且 其中該Ab進一步包含一或多個 fGly '且其中 fGly '為與連接子( L - 1)連接之甲醯基甘胺酸胺基酸殘基。
  5. 如請求項4之方法，其中一個Ab與一至十個MMAE結合，且其中各MMAE藉由一個連接子( L - 1)與Ab結合。
  6. 如請求項4或5之方法，其中一個Ab與兩個MMAE結合，且其中各MMAE藉由一個連接子( L - 1)與Ab結合。
  7. 一種用於治療個體之癌症的方法，該方法包含向該個體投與ADC， 其中該癌症為乳癌、子宮內膜癌、頭頸癌、胰臟癌、肺癌、前列腺癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎細胞癌(RCC)、肝細胞癌(HCC)或結腸直腸癌中之任一或多者， 其中該ADC係藉由將抗體(Ab)與包含結合前連接子 ( L - 1a ' )及單甲基奧瑞他汀E (MMAE)之連接子-藥物結合而產生： ( L-1a ')， 其中##指示與該MMAE之連接點； 其中該MMAE由 式 ( III )表示： ( III)， 其中*指示與( L - 1a ')之連接點； 其中該Ab為5T4抗體或其抗原結合片段，且其中該Ab包含： (1)包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的重鏈可變區(VH)中所示之重鏈互補決定區1 (HCDR1)、重鏈互補決定區2 (HCDR2)及重鏈互補決定區3 (HCDR3)，及 (2)包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)中所示之輕鏈互補決定區1 (LCDR1)、輕鏈互補決定區2 (LCDR2)及輕鏈互補決定區3 (LCDR3)；且 其中該Ab進一步包含一或多個 fGly '，且其中 fGly '為在該Ab與該連接子-藥物結合之後與連接子( L - 1a ')連接之甲醯基甘胺酸胺基酸殘基。
  8. 如請求項7之方法，其中一個Ab與一至十個連接子-藥物結合。
  9. 如請求項7或8之方法，其中一個Ab與兩個連接子-藥物結合。
  10. 如請求項1、2、4、5、7及8中任一項之方法，其中該Ab包含一至十個 fGly '。
  11. 如請求項1至10中任一項之方法，其中該Ab包含兩個 fGly '。
  12. 如請求項1至11中任一項之方法，其中該Ab包含X 1( fGly ')X 2Z 2X 3Z 3(SEQ ID NO: 67)之模體， 其中： Z 2為脯胺酸(P)或丙胺酸(A)殘基； Z 3為視情況選自由以下組成之群的鹼性胺基酸殘基：精胺酸(R)、離胺酸(K)及組胺酸(H)，或視情況選自由以下組成之群的脂族胺基酸殘基：丙胺酸(A)、甘胺酸(G)、白胺酸(L)、纈胺酸(V)、異白胺酸(I)及脯胺酸(P)； X 1存在或不存在，且當存在時，為任何胺基酸殘基，其限制條件為當SEQ ID NO: 67之序列位於該抗體Ab之N端時，X 1存在；且 X 2及X 3獨立地為任何胺基酸殘基， 視情況其中， SEQ ID NO: 67之模體係選自由以下組成之群：L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)、M( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 45)、V( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 46)、L( fGly ')SPSR (SEQ ID NO: 47)、L( fGly ')APSR (SEQ ID NO: 48)、L( fGly ')VPSR (SEQ ID NO: 49)、L( fGly ')GPSR (SEQ ID NO: 50)、I( fGly ')TPAR (SEQ ID NO: 51)、L( fGly ')TPSK (SEQ ID NO: 52)、M( fGly ')TPSK (SEQ ID NO: 53)、V( fGly ')TPSK (SEQ ID NO: 54)、L( fGly ')SPSK (SEQ ID NO: 55)、L( fGly ')APSK (SEQ ID NO: 56)、L( fGly ')VPSK (SEQ ID NO: 57)、L( fGly ')GPSK (SEQ ID NO: 58)、L( fGly ')TPSA (SEQ ID NO: 59)、I( fGly ')TPAA (SEQ ID NO: 60)、M( fGly ')TPSA (SEQ ID NO: 61)、V( fGly ')TPSA (SEQ ID NO: 62)、L( fGly ')SPSA (SEQ ID NO: 63)、L( fGly ')APSA (SEQ ID NO: 64)、L( fGly ')VPSA (SEQ ID NO: 65)及L( fGly ')GPSA (SEQ ID NO: 66)。
  13. 如請求項12之方法，其中該Ab包含兩條重鏈及兩條輕鏈，且其中該等重鏈中之各者包含SEQ ID NO: 67之模體。
  14. 如請求項1至13中任一項之方法，其中該Ab包含L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)之胺基酸序列。
  15. 如請求項1至14中任一項之方法，其中該Ab包含兩條重鏈及兩條輕鏈，且其中該等重鏈中之各者包含L( fGly ')TPSR (SEQ ID NO: 1)之模體。
  16. 如請求項13或15之方法，其中該模體之 fGly '位於該重鏈中對應於SEQ ID NO: 2之第453個胺基酸殘基的位置處。
  17. 如請求項1至16中任一項之方法，其中 (1) HCDR1包含選自由SEQ ID NO: 13、19、24、25及30組成之群的胺基酸序列， (2) HCDR2包含選自由SEQ ID NO: 14、20、26、31及36組成之群的胺基酸序列， (3) HCDR3包含選自由SEQ ID NO: 15、21、27及32組成之群的胺基酸序列， (4) LCDR1包含選自由SEQ ID NO: 16、22、28及33組成之群的胺基酸序列， (5) LCDR2包含選自由SEQ ID NO: 17、23及34組成之群的胺基酸序列，且 (6) LCDR3包含選自由SEQ ID NO: 18、29及35組成之群的胺基酸序列。
  18. 如請求項1至17中任一項之方法，其中： (i) HCDR1包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；或 (ii) HCDR1包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；或 (iii) HCDR1包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；或 (iv) HCDR1包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 26之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 29之胺基酸序列；或 (v) HCDR1包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列；或 (vi) HCDR1包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列，LCDR1包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，且LCDR3包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
  19. 如請求項1至18中任一項之方法，其中該Ab包含：包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的VH及包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的VL。
  20. 如請求項1至19中任一項之方法，其中該Ab包含：包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈。
  21. 如請求項1至20中任一項之方法，其中該癌症為三陰性乳癌(TNBC)或激素受體陽性乳癌(HR+ BC)。
  22. 如請求項1至20中任一項之方法，其中該癌症為胰管腺癌(PDAC)。
  23. 如請求項1至20中任一項之方法，其中該癌症為非小細胞肺癌(NSCLC)。
  24. 如請求項1至20中任一項之方法，其中該癌症為頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC)。
  25. 如請求項1至24中任一項之方法，其進一步包含向該個體投與用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的手段。
  26. 如請求項25之方法，其中該ADC與該用於抑制PD-1與PD-L1之間的相互作用的手段同時、在其之後或在其之前投與。
  27. 如請求項1至24中任一項之方法，其進一步包含向該個體投與PD-L1/PD-1抑制劑。
  28. 如請求項27之方法，其中該ADC與該PD-L1/PD-1抑制劑同時、在其之後或在其之前投與。
  29. 如請求項27或28之方法，其中該PD-L1/PD-1抑制劑為包含帕博利珠單抗之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3的抗體或其抗原結合片段。
  30. 如請求項27至29中任一項之方法，其中該PD-L1/PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。
  31. 如請求項29或30之方法，其中該PD-L1/PD-1抑制劑以約200 mg之劑量向該個體投與。
  32. 如請求項27至31中任一項之方法，其中該PD-L1/PD-1抑制劑係靜脈內投與。
  33. 如請求項27至32中任一項之方法，其中該PD-L1/PD-1抑制劑每3週投與一次(q3w)。
  34. 如請求項1至33中任一項之方法，其中該ADC係靜脈內投與。
  35. 如請求項1至34中任一項之方法，其中該ADC每3週投與一次(q3w)。
  36. 如請求項1至35中任一項之方法，其中該個體為人類。
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