TW202517630A

TW202517630A - 新穎苯并咪唑吡啶衍生物

Info

Publication number: TW202517630A
Application number: TW113126698A
Authority: TW
Inventors: 盧卡斯克雷斯
Original assignee: 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司
Priority date: 2023-07-19
Filing date: 2024-07-17
Publication date: 2025-05-01
Also published as: AR133277A1; WO2025017043A1

Abstract

本發明涉及一種式 (Ia) 化合物，其中 R ¹及 R ²係如說明書中及申請專利範圍中所定義。該式 (Ia) 化合物可用為藥物。

Description

新穎苯并咪唑吡啶衍生物

本發明涉及可用於在哺乳動物中治療及/或預防的有機化合物，且特定而言涉及調節 SIK 活性的代謝產物的前驅藥。本發明進一步涉及其製造、含有其的醫藥組成物以及其作為治療活性物質的用途。

鹽誘導型激酶 (SIK) 屬於 AMP 活化蛋白激酶 (AMPK) 的一個次家族，稱為 AMPK 相關激酶。其包含三個成員，分別命名為 SIK1、SIK2 和 SIK3，表現廣泛。它們的主要生物學作用為藉由控制兩類關鍵轉錄調節因子之磷酸化及亞細胞定位來修飾基因表現：CRTC (cAMP 調節之轉錄輔活化物) 及 IIa 類 HDAC (組蛋白去乙醯酶)。事實上，在基底狀態下，CRTC 及 HDAC 兩者皆被 SIK 激酶磷酸化，並透過與它們的細胞質伴護蛋白 14-3-3 之交互作用而隔離在細胞質中。回應於通常增加 cAMP 之細胞內含量的細胞外線索，SIK 激酶之活性受到抑制，CRTC 及 HDAC 不再被磷酸化，並因此從 14-3-3 中釋放。因此，它們可轉位至細胞核中並調節基因表現 (綜述於：Wein 等人, Trends Endocrinol Metab.2018 年 10 月;29(10):723-735)。

在巨噬細胞中，SIK 激酶之抑制導致 1) CRTC3 穿梭到細胞核並增加 IL-10 之轉錄；及 2) HDAC4/5 轉位至細胞核，並隨後使 NF-κB 去乙醯基化，導致促炎性細胞激素轉錄減少 (Clark 等人, Proc Natl Acad Sci U S A. 2012 年 10 月 16 日;109(42):16986-91)。

巨噬細胞對於維持組織穩態、媒介發炎及促進發炎消退至關重要。為實現該功能多樣性，巨噬細胞能夠回應於環境線索以不同的方式「極化」。沿其一系列活化狀態的兩種極端表型為「M1」或「促性炎巨噬細胞」及「M2」或「促消退巨噬細胞」。

令人驚訝的是，細胞內 SIK 激酶之抑制覆蓋這些細胞外巨噬細胞極化訊息，並將它們推向促消退表型。這伴隨 IL-10 之增加 (藉由干擾 SIK-CRTC3 途徑) 以及 TNF-α、IL-12 及 IL-6 之伴隨減少 (藉由干擾 SIK-HDAC4/5 及 NF-κB 途徑)。當 SIK 抑制時，高含量之 IL-10 和低含量之促炎性細胞激素將促進發炎之消退。對 SIK 通路的探索最初已在巨噬細胞 (Clark 等人，Proc Natl Acad Sci U S A. 2012 年 10 月 16 日;109(42):16986-91) 及樹突狀細胞 (Sundberg 等人，Proc Natl Acad Sci U S A. 2014 年 8 月 26 日;111(34):12468-73) 中進行描述，且 pan-SIK 抑制劑之治療潛力已在小鼠 LPS (脂多醣) 挑戰模型 (Sundberg 等人，ACS Chem Biol.2016 年 8 月 19 日;11(8):2105-11) 及在結腸炎模型 (Fu 等人, Inflamm Bowel Dis.2021 年 10 月 20 日;27(11):1821-1831) 中得到證實。此後，SIK 已被證明是若干免疫細胞 (包括肥大細胞) 之功能的重要參與者 (Darling 等人, J Biol Chem.2021 年 1 月至 6 月;296:100428)。重要的是，SIK1 在巨噬細胞中的表現不佳，並且本發明之一個實施例為 SIK2/3 抑制劑保留 SIK1，從而限制潛在的 SIK1 相關毒性。

SIK 抑制劑在以下疾病中具有高治療潛力：1) 特徵在於促炎性巨噬細胞流入組織中並影響組織穩態及癒合，或 2) 其中抗 TNF 療法有益 (部分或全部) 或 IL10 含量不足。具有炎性巨噬細胞特徵的疾病為例如類風濕關節炎、青少年期的類風濕關節炎、NASH、原發性硬化性膽管炎、巨細胞血管炎、發炎性腸病 (「IBD」)、動脈粥樣硬化、第 2 型糖尿病及腎絲球腎炎。

與 IL-10 及 TNF-α 具有經證實之聯繫的疾病為 IBD。降低 IL-10 功能的基因改變 (諸如 IL-10 或其受體中之 SNP) 與人類 IBD 風險增加相關聯。此外，抗 TNF 療法是成功的，但僅有一部分 IBD 患者有反應性，並且隨著時間的推移，該有限的反應性大部分消失。SIK 抑制劑之所述雙重作用 (增加 IL-10 及降低 TNF-α) 使它們特別適用於 IBD 之治療。

所有三種 SIK 激酶同功型在人體組織中廣泛表現，其中在皮膚及脂肪組織中觀察到的 SIK1、在脂肪組織中觀察到的 SIK2 以及在睾丸及大腦中觀察到的 SIK3 之表現最高。與它們在巨噬細胞中的作用類似，該等細胞中的 SIK 回應於細胞外訊息而使 CRTC 及 II 類 HDCA 磷酸化，其接著改變若干細胞因子之表現。

除其生理作用以外，報告已將 SIK 表現之失調與幾種疾病聯繫起來。例如，SIK2 已被描述為原發性硬化性膽管炎 (一種通常與 IBD 相關聯的纖維化疾病) 的風險位點。此外，SIK2 及 SIK3 表現在卵巢癌和前列腺癌中較高，並且與不良存活率相關 (Miranda 等人，Cancer Cell.2016 年 8 月 8 日;30(2):273-289；Bon 等人，Mol Cancer Res.2015 年 4 月;13(4):620-635)。

時至今日，許多由先天免疫系統失調所致之疾病缺乏有效的療法，並且對新療法存在高度未滿足的醫療需求。本發明涉及一種新穎化合物，其為高活性 SIK 抑制劑，用於治療發炎、過敏及自體免疫疾病。因此，除發炎、過敏及自體免疫疾病以外，SIK 抑制劑亦可與癌症、代謝性疾病、骨密度失調疾病、色素沉著相關疾病或美容、纖維化疾病及憂鬱症具有潛在的相關性。

本發明涉及一種式 (Ia) 化合物，其在活體內代謝成式 (I) 的活性代謝物。當與代謝物相比時，本發明的前驅藥呈現出改善的物理化學性質，諸如例如滲透性，此隨後亦提供了增強的口服生物利用度並且可以進一步提供有利的藥物動力學。

本發明特定而言涉及一種式 (Ia) 化合物 (Ia) 其中 R ₁及 R ₂中之一者為前驅藥部分，或其中 R ₁及 R ₂中之一者與其所接附的氧或氮一起形成前驅藥部分；且 R ₁及 R ₂中之另一者為氫；或其醫藥上可接受之鹽。

在本說明書中，術語「烷基」在單獨或組合時表示具有 1 至 8 個碳原子的直鏈或支鏈烷基，特別是具有 1 至 6 個碳原子的直鏈或支鏈烷基，且更特別是具有 1 至 4 個碳原子的直鏈或支鏈烷基。直鏈及支鏈 C1-C8 烷基基團的實例包括但不限於甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、三級丁基、異構戊基、異構己基、異構庚基及異構辛基，特定而言包括甲基、乙基、丙基、丁基及戊基。烷基之特定實例為甲基、乙基、丙基、異丙基及三級丁基。甲基、異丙基及三級丁基為式 (I) 或 (Ia) 化合物中「烷基」的更特定的實例。

術語「烷氧基」或「烷基氧基」在單獨或組合時表示其中術語「烷基」具有先前給定之含義的下式基團：烷基 -O-，諸如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、二級丁氧基及三級丁氧基。「烷氧基」的特定實例為甲氧基、異丙氧基及三級丁氧基。

術語「氧基」在單獨或組合時表示 -O- 基團。

術語「羰基」在單獨或組合時表示 -C(O)- 基團。

術語「胺基」在單獨或組合時表示一級胺基 (-NH ₂)、二級胺基 (-NH-) 或三級胺基 (-N-)。

術語「烷基胺基」為與 -NH- 基團連接的烷基基團，諸如例如甲基胺基，其中該胺基進一步與相關化合物連接。術語「二烷基胺基」表示連接至 -N- 原子的兩個烷基基團，諸如例如二甲基胺基，其中胺基進一步連接至相關化合物。

術語「烷基羰基」為連接至 -C(O)- 基團的烷基基團，其中羰基進一步連接至相關化合物。特定的「烷基羰基」為例如甲基羰基 (亦稱為乙醯基)、乙基羰基、異丙基羰基及三級丁基羰基。

術語「烷氧基羰基」為連接至 -C(O)- 基團的烷氧基基團，其中羰基進一步連接至相關化合物。特定的「烷氧基羰基」為例如甲氧基羰基、異丙氧基羰基及三級丁氧基羰基。

術語「胺基羰基」單獨或組合表示與「羰基」基團連接的「胺基」基團，其中羰基進一步與相關化合物連接。

術語「烷基胺基羰基」單獨或組合表示與「羰基」基團連接的「烷基胺基」基團，其中羰基進一步與相關化合物連接。「烷基胺基羰基」的特定實例為例如甲基胺基羰基。

術語「二烷基胺基羰基」單獨或組合表示與「羰基」基團連接的「二烷基胺基」基團，其中羰基進一步與相關化合物連接。「二烷基胺基羰基」的特定實例為例如二甲基胺基羰基。

術語「烷基羰基氧基烷基」單獨或組合表示與「氧基」基團連接的「烷基羰基」基團，其中「氧基」基團進一步經由「烷基」基團與相關化合物連接。特定的「烷基羰基氧基烷基」為例如甲基羰基氧基甲基。

術語「胺基烷基羰基」單獨或組合表示與「烷基羰基」基團連接的「胺基」基團，其中「烷基羰基」基團進一步與相關化合物連接。「胺基烷基羰基」的特定實例為例如甲基胺基羰基。

術語「烷氧基羰基氧基烷基」單獨或組合表示與「氧基」基團連接的「烷氧基羰基」基團，其中「氧基」基團進一步經由烷基基團與相關化合物連接。特定的「烷氧基羰基氧基烷基」為例如甲氧基羰基氧基甲基。

術語「烷氧基羰基(烷基胺基)烷基」單獨或組合表示與「烷基胺基」基團連接的「烷氧基羰基」基團，其中「烷基胺基」基團進一步經由「烷基」基團與相關化合物連接。「烷氧基羰基(烷基胺基)烷基」的特定實例為例如甲氧基羰基(甲基胺基)甲基及甲氧基羰基(甲基胺基)乙基。

術語「雜芳基」在單獨或組合時表示具有 5 至 12 個環原子的芳族單環或雙環系統，其包含各自獨立地選自 N、O 及 S 的 1、2、3 或 4 個雜原子，且其餘之環原子為碳。環系統可經由選自 C、N、S 及 O 的原子接附至剩餘化合物，特定而言經由 N 原子接附至剩餘化合物 (「N-雜芳基」)。環系統可以係部分或完全芳香族的。雜芳基的實例包括但不限於吡唑基、吡唑-1-基、吡唑-3-基、吡唑-4-基、吡啶基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、嗒𠯤基、嗒𠯤-3-基、嗒𠯤-4-基、吡𠯤基、吡𠯤-2-基、異㗁唑基、異㗁唑-3-基、異㗁唑-4-基、㗁唑基、2-㗁唑-5-基、2-側氧-3-咪唑-1-基、嘧啶基、嘧啶-5-基、苯并三唑基、1H-苯并三唑-4-基、呋喃基 (furanyl)、呋喃基 (furyl)、2-呋喃基、3-呋喃基、[6-側氧-1H-嗒𠯤-5-基], 三唑基、三唑-1-基、三唑-2-基、三唑-3-基、三唑-4-基、吡啶-2-酮、2-側氧-4-吡啶基、嘧啶-2-基、嘧啶-5-基、(1,3,4-㗁二唑-2-基)、(1,3,4-噻二唑-2-基)、(1,2,4-三𠯤-3-基)、2-側氧-嘧啶-4-基、(1-甲基-2-側氧-3-吡啶基)、5-甲基-6-側氧-4H-吡咯并[3,4-c]吡唑-2-基、(2,3-二氫嗒𠯤并[4,5-b][1,4]㗁𠯤-8-基) 及 1,3-二氧雜環戊烯-2-酮。「雜芳基」的特定實例為例如1,3-二氧雜環戊烯-2-酮。

術語「雜芳基烷基」單獨或組合表示經由烷基基團與相關化合物連接的「雜芳基」基團。「雜芳基烷基」的特定實例為例如 1,3-二氧雜環戊烯-2-酮-4-甲基及4-甲基-1,3-二氧雜環戊烯-2-酮-5-甲基

術語「磷酸二氫烷基」單獨或組合表示經由「烷基」基團與相關化合物連接的磷酸二氫基團。

術語「醫藥上可接受之鹽」表示不為生物或以其他方式非所欲之鹽。醫藥上可接受之鹽包括酸加成鹽及鹼添加鹽。術語「醫藥上可接受之酸加成鹽」表示與無機酸諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸形成的彼等醫藥上可接受之鹽，及與選自脂肪族、脂環族、芳族、雜環、羧酸及磺酸類有機酸之有機酸形成的彼等醫藥上可接受之鹽，該等有機酸諸如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、天冬胺酸、抗壞血酸、麩胺酸、鄰胺基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、苦杏仁酸、撲酸、苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、及柳酸。術語「醫藥上可接受之鹼添加鹽」表示與有機鹼或無機鹼形成之彼等醫藥上可接受之鹽。可接受之無機鹼的實例包括鈉鹽、鉀鹽、銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋅鹽、銅鹽、錳鹽及鋁鹽。源自醫藥上可接受之有機無毒性鹼的鹽包括一級胺、二級胺及三級胺的鹽，經取代之胺 (包括天然存在的經取代之胺)、環胺及鹼性離子交換樹脂，例如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙胺基乙醇、三甲胺、二環己胺、離胺酸、精胺酸、組胺酸、咖啡因、普魯卡因、海巴明 (hydrabamine)、膽鹼、甜菜鹼、乙二胺、葡萄糖胺、甲基還原葡糖胺 (methylglucamine)、可可鹼、嘌呤類、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶及多胺樹脂類。

術語「前驅藥 (prodrug)」表示一種化合物的形式或衍生物，其在活體內代謝（例如，藉由個體在投予後透過個體的生物體液或酶）為該化合物的藥理活性形式，以產生所需的藥理作用。人體內的不同部位允許將前驅藥代謝成藥物活性形式，諸如例如肝臟、腸道及血漿。前驅藥描述於例如 Richard B. Silverman 撰寫的「The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action」，Academic Press, San Diego, 2004，第 8 章 Prodrugs and Drug Delivery Systems，第 497-558 頁。

術語「前驅藥部分 (prodrug moiety)」表示一種化學部分，其可在活體內代謝（例如，藉由個體在投予後透過生物體液或酶）以得到該化合物的藥理活性形式，以產生所需的藥理作用。如本文所述的式 (I) 化合物為式 (Ia) 化合物的活性代謝物，其中前驅藥部分在活體內代謝成活性形式。「前驅藥部分」的實例為例如二烷基胺基羰基、烷基胺基羰基、胺基羰基、烷基羰基、烷氧基羰基、烷基羰基氧基烷基、胺基烷基羰基、烷氧基羰基氧基烷基、烷氧基羰基(烷基胺基)烷基、雜芳基烷基、磷酸二氫甲基及 -PO ₃H ₂。特別地，以下基團為可以代謝成羥基部分的適當前驅藥部分的實例：碳酸酯、酯、胺基甲酸酯、磷酸酯及膦醯氧基甲基醚。

術語「本發明的化合物」及「本發明之化合物」指代適用的式 (I) 及 / 或式 (Ia) 化合物及其立體異構物、互變異構物溶劑化物、及其鹽 (例如，醫藥上可接受之鹽)。

互變異構形式，亦即與適用的式 (I) 或 (Ia) 化合物互變的結構異構體，特別是在溶液中與適用的式 (I) 或 (Ia) 化合物互變的結構異構體，在一些情況下可以存在並且應理解為被包括在本發明中。

若起始物質或適用的式 (I) 及 / 或 (Ia) 化合物中之一者含有在一或多個反應步驟之反應條件下不穩定或具反應性的一或多個官能基，則可在應用此項技術中熟知之方法的關鍵步驟之前引入適當之保護基團 (如例如在 T. W. Greene 及 P. G. M. Wuts 撰寫的「Protective Groups in Organic Chemistry」，第 3 版, 1999, Wiley, New York 中所描述)。可使用文獻中所描述之標準方法在合成後期移除此等保護基團。保護基團的實例為三級丁氧基羰基 (Boc)、9-茀基甲基胺甲酸酯 (Fmoc)、2-三甲基矽基乙基胺甲酸酯 (Teoc)、羰基苯甲氧基 (Cbz) 和對甲氧基芐氧基羰基 (Moz)。

適用的式 (I) 及 / 或 (Ia) 化合物可含有數個非對稱中心，且可以光學純的鏡像異構物、鏡像異構物的混合物 (諸如例如外消旋物)、非鏡像異構物的混合物、非鏡像異構外消旋物或非鏡像異構外消旋物的混合物的形式存在。

「非對稱碳原子」一詞意指具有四個不同取代基的碳原子。依據 Cahn-Ingold-Prelog 序列法則，非對稱碳原子可為「R」或「S」組態。

此外，在適用的情況下，本發明包括式 (I) 及 / 或 (Ia) 化合物的所有光學異構物，亦即非鏡像異構物、非鏡像異構混合物、外消旋混合物、所有其對應的鏡像異構物及/或互變異構物及其等溶劑化物。

如果需要，可分離本發明的化合物的外消旋混合物，從而分離出個別的鏡像異構物。可藉由本領域已知的方法進行分離，例如將化合物的外消旋混合物與鏡像異構性純的化合物偶合以形成非鏡像異構混合物，然後藉由標準方法，例如分化結晶作用或層析法分離個別的非鏡像異構物。

在提供光學上純的鏡像異構物的實施例中，光學上純的鏡像異構物意指化合物包含＞ 90 重量% 的所需異構物，特定而言＞ 95 重量% 的所需異構物，或更特定而言＞ 99 重量% 的所需異構物，該重量百分比基於化合物的異構物的總重量。手性純的或手性富集的化合物可藉由手性選擇性合成或藉由鏡像異構物分離來製備。鏡像異構物分離可在最終產物上或在適當之中間體上進行。

本文描繪之結構亦旨在包括區別僅在於存在一個或多個同位素濃化原子之化合物。此類同位素的特定實例為 ²H、 ³H、 ¹³C、 ¹⁴C 及 ¹⁸F。例如，其中一或多個氫原子被氘或氚替代或者一或多個碳原子被富含 ¹³C 或 ¹⁴C 的碳替代的結構皆在本發明的範圍內。

因此，本發明亦涉及：

一種前驅藥，其在活體內代謝成式 (I) 化合物 (I) 或其醫藥上可接受之鹽；

一種根據本發明的化合物，其中 R ₁及 R ₂中之一者為二烷基胺基羰基、烷基胺基羰基、胺基羰基、烷基羰基、烷氧基羰基、烷基羰基氧基烷基、胺基烷基羰基、烷氧基羰基氧基烷基、烷氧基羰基(烷基胺基)烷基、雜芳基烷基、磷酸二氫烷基或 -PO ₃H ₂；並且另一者為氫；或其醫藥上可接受之鹽；

一種根據本發明的化合物，其中 R ₁及 R ₂中之一者為二烷基胺基羰基、烷基羰基或烷氧基羰基，且另一者為氫；

一種根據本發明的化合物，其中 R ₁為二甲基胺基羰基、甲基羰基、異丙基羰基、異丙氧基羰基、三級丁氧基羰基或甲氧基羰基；且其中 R ₂為氫；以及

一種根據本發明的化合物，其中 R ₁為氫；且其中 R ₂為二甲基胺基羰基、甲基羰基、三級丁基羰基或甲氧基羰基。

本發明亦進一步涉及一種根據本發明的化合物，其選自 1-[1-[6-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-5-[(1 S)-1-羥基乙基]-2-吡啶基]苯并咪唑-5-基]-3,3-二甲基-1-(6-甲基嗒𠯤-3-基)脲； [(1 S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基] N, N-二甲基胺基甲酸酯； N-[1-[6-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-5-[(1 S)-1-羥基乙基]-2-吡啶基]苯并咪唑-5-基]- N-(6-甲基嗒𠯤-3-基)乙醯胺； N-[1-[6-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-5-[(1 S)-1-羥基乙基]-2-吡啶基]苯并咪唑-5-基]-2,2-二甲基- N-(6-甲基嗒𠯤-3-基)丙醯胺； 2-甲基丙酸[(1 S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基]酯； [(1 S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基]異丙基碳酸酯； [(1 S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基]碳酸三級丁酯； [(1 S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基]甲基碳酸酯；以及 [(1 S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基]乙酸酯；或其醫藥上可接受之鹽。

本發明亦進一步涉及一種根據本發明的化合物，其選自 [(1 S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基]甲基碳酸酯； [(1 S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基]異丙基碳酸酯； [(1 S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基]乙酸酯；以及 2-甲基丙酸[(1 S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基]酯；或其醫藥上可接受之鹽。 一般合成方案

適用的式 (I) 及 / 或 (Ia) 化合物的合成可以例如根據下面一般方案 1 至 4 中描述的非詳盡程序或根據本領域技術人員已知的方法來完成。在一些情況下，可改變反應步驟的順序，並且不同方案的各個步驟可按照本文所揭示之不同方式進行組合。方案 1

在方案 1 中，R ₁如本文所述；式 (Ia-1) 化合物為根據式 (Ia) 的化合物，其中 R ₂為氫；X 為適當的離去基團；鹼基可以為例如 DMAP。方案 2

在方案 2 中，R ₁如本文所述；式 (Ia-1) 化合物為根據式 (Ia) 的化合物，其中 R ₂為氫；X 為適當的離去基團。方案 3

在方案 3 中，R ₂如本文所述；式 (Ia-2) 化合物為根據式 (Ia) 的化合物，其中 R ₁為氫；PG 為適當的保護基團，特別是甲矽烷基醚保護基團；X 為適當的離去基團，特別是氯；步驟 1 中的鹼可以為例如咪唑；步驟 2 中的鹼可以為例如 4-二甲基胺基吡啶。方案 4

在方案4中，R ₁如本文所述；式 (Ia-3) 化合物為根據式 (Ia) 的化合物，其中 R ₂為氫；R’ 為適合的烷基基團；溶劑可以為例如二氯甲烷或四氫呋喃且反應可以例如在環境溫度或升高的溫度 (例如 50℃) 下進行。

因此，本發明亦涉及一種製備根據本發明之化合物之方法，其包含以下步驟中之一者：

一種用於製備根據本發明的化合物的方法，其包含以下步驟中之至少一者： (a) 使式 (I) 化合物與式 R ₁-X 或 R ₂-X 之化合物，在適當的溶劑及適當的鹼存在下反應； (b) 使式 (A2) 化合物 (A2) 與適當的去保護試劑且在適當的溶劑存在下反應； (c) 使式 (A3) 化合物 (A3) 與式 (A4) 化合物 (A4) 在適當的鹼及適當的溶劑存在下反應；其中 X 為適當的離去基團；其中 PG 為適當的保護基團；且其中 R ₁及 R ₂如本文所述。

在以上方法的步驟 (a) 中，X 優先為鹵素，特別是氯；溶劑優先為 THF 或 DCM；並且該鹼優先為 4-二甲胺基吡啶或 NaH；

在以上方法的步驟 (b) 中，PG 優先為適當的甲矽烷基醚部分；PG 優先為 TBAF；並且該溶劑優先為 THF；並且

在以上方法的步驟 (c) 中，該鹼優先為 K ₂CO ₃；並且該溶劑優先為 DMSO。

本發明還特別涉及：

一種如本文所述之式 (Ia) 化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用為治療活性物質；

一種醫藥組成物，其包含如本文所述之式 (Ia) 化合物或其醫藥上可接受之鹽，以及治療惰性載劑；

一種如本文所述之式 (Ia) 化合物或其醫藥上可接受之鹽的用途，其用於治療或預防類風濕關節炎、青少年期的類風濕關節炎、非酒精性脂肪性肝炎 (NASH)、原發性硬化性膽管炎、巨細胞血管炎、發炎性腸病 (IBD)、動脈粥樣硬化、第 2 型糖尿病或腎絲球腎炎，特別是發炎性腸病 (IBD)；

一種如本文所述之式 (Ia) 化合物或其醫藥上可接受之鹽的用途，其用於製備用於治療或預防類風濕關節炎、青少年期的類風濕關節炎、非酒精性脂肪性肝炎 (NASH)、原發性硬化性膽管炎、巨細胞血管炎、發炎性腸病 (IBD)、動脈粥樣硬化、第 2 型糖尿病或腎絲球腎炎，特別是發炎性腸病 (IBD) 之藥物；

一種如本文所述之式 (Ia) 化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療或預防類風濕關節炎、青少年期的類風濕關節炎、非酒精性脂肪性肝炎 (NASH)、原發性硬化性膽管炎、巨細胞血管炎、發炎性腸病 (IBD)、動脈粥樣硬化、第 2 型糖尿病或腎絲球腎炎，特別是發炎性腸病 (IBD)；以及

一種治療或預防類風濕關節炎、青少年期的類風濕關節炎、非酒精性脂肪性肝炎 (NASH)、原發性硬化性膽管炎、巨細胞血管炎、發炎性腸病 (IBD)、動脈粥樣硬化、第 2 型糖尿病或腎絲球腎炎之方法，該方法包含向有需要之患者投予有效量的如本文所述的式 (Ia) 化合物或其醫藥上可接受之鹽。 醫藥組成物

本發明之另一實施例提供包含本發明之化合物以及治療惰性載劑、稀釋劑或賦形劑的醫藥組成物或藥物，以及使用本發明之化合物製備此類組成物及藥物的方法。在一個實例中，式 (Ia) 化合物可藉由在適當 pH 於環境溫度且以所期望之純度與生理學上可接受之載劑 (亦即，在所採用之劑量及濃度對接受者無毒的載劑) 混合來調配成生藥 (galenical) 投予形式。調配物之 pH 主要取決於化合物之特定用途及濃度，但在任何情況下較佳範圍皆為約 3 至約 8。在一個實例中，根據本發明的化合物係在乙酸酯緩衝劑 (pH 5) 中調配。在另一實施例中，根據本發明的化合物係無菌的。化合物可例如以固體或非晶形組成物、作為凍乾調配物或作為水溶液儲存。

組成物係以與良好醫學實踐一致的方式進行調配、給藥及投予。在這種情況下，考慮的因素包括待治療的具體障礙、待治療的具體哺乳動物、個別患者的臨床病症、障礙的原因、遞送藥物的部位、投予方法、投予日程及醫療從業者已知的其他因素。

本發明的化合物可藉由任何適當的方式投予，該等方式包括口服、局部 (包括口腔及舌下)、直腸、陰道、透皮、腸胃外、皮下、腹膜內、肺內、皮內、鞘內、硬膜外及鼻內，並且如果需要的話，用於局部治療、病灶內投予。腸胃道外輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投予。

本發明之化合物可以任何方便的投予形式投予，例如錠劑、粉末、膠囊、溶液、分散液、懸浮劑、糖漿、噴霧劑、栓劑、凝膠、乳劑、貼劑等。該等組成物可含有醫藥製劑中之習用成分，例如稀釋劑、載劑、pH 調節劑、甜味劑、填充劑及其他活性劑。

典型調配物藉由將本發明之化合物與載劑或賦形劑混合來製備。適當的載劑及賦形劑為本領域技術人員眾所周知的，並且詳細描述於例如，Ansel, Howard C., 等人, Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems.Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2004; Gennaro, Alfonso R., 等人Remington: The Science and Practice of Pharmacy.Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2000；及 Rowe, Raymond C. Handbook of Pharmaceutical Excipients.Chicago, Pharmaceutical Press, 2005 中。調配物亦可包括一種或多種緩沖劑、穩定劑、界面活性劑、潤濕劑、潤滑劑、乳化劑、懸浮劑、防腐劑、抗氧化劑、滲透劑、滑動劑、加工助劑、著色劑、甜味劑、香化劑、調味劑、稀釋劑及其他已知添加劑，以提供藥 (亦即，本發明之化合物或其醫藥組成物) 之良好呈現或輔助製造藥品 (亦即，藥物)。

現在將藉由下列無限制性特徵的實例來說明本發明。實例

縮寫 AcCl = 乙醯氯；ACN = 乙腈；CAS = 化學文摘服務；CDI = 1,1'-羰基二咪唑；DCM = 二氯甲烷；DIPEA = N,N-二異丙基乙胺；DMAP = 4-二甲胺基吡啶；ESI = 電噴霧電離；EtOAc = 乙酸乙酯；EtOH=乙醇；FA = 甲酸；HPLC = 高效液相層析法； ⁱPrOH = 異丙醇；LC-MS = 液相層析-MS；MeOH = 甲醇； MS = 質譜；NPLC = 正相液相層析法；NMR = 核磁共振；R _f= 保留因子；RT = 室溫；SFC = 超臨界流體層析法；TBAF = 四正丁基氟化銨；TBSCl = 三級丁基二甲基氯矽烷；THF = 四氫呋喃；TLC = 薄層層析法。式 (I) 化合物 5- 甲基 -1-[6-[5-[(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 胺基 ] 苯并咪唑 -1- 基 ]-3-[(1S)-1- 羥基乙基 ]-2- 吡啶基 ] 吡唑 -3- 甲腈 中間體 1 ： N-(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )-1H- 苯并咪唑 -5- 胺

將 5-胺基苯并咪唑 (8.0 g, 60.1 mmol, 1.0 當量) 及 3-氯-6-甲基嗒𠯤 (7.34 g, 57.08 mmol, 0.950 當量) 於 ⁱ PrOH (120 mL) 中之混合物於 120℃ 攪拌 72 小時。在真空中濃縮深棕色懸浮液，並將殘餘物於 MeOH (60 mL) 中研製。將固體藉由過濾收集並將其於 DCM (40 mL) 中研製。將產物藉由過濾收集，用 DCM 洗滌並乾燥。獲得棕色固體狀標題化合物 (10 g，產率 71.3%)。LC-MS：m/z = 226.0 [M+H] ⁺，ESI pos。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d6): δ = 9.60 (br s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.52 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.44 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 5.04 - 4.15 (m, 1H), 2.49 (s, 3H)。步驟 1 ： 1-(3- 乙醯基 -6- 氯 -2- 吡啶基 )-5- 甲基 - 吡唑 -3- 甲腈 ( 中間體 2)

將 1-(6-氯-2-氟-3-吡啶基)乙酮 (CAS# 1260663-13-5, 5 g, 28.81 mmol, 1 當量)、5-甲基-1H-吡唑-3-甲腈 (2.93 g, 27.37 mmol, 0.950 當量) 及 DIPEA (14.3 mL, 86.42 mmol, 3 當量) 於 DMSO (50 mL) 中之溶液於 80℃ 攪拌 4 小時。將反應混合物冷卻至室溫，倒入 H ₂O (250 mL) 中並用 EtOAc (3 × 150 mL) 萃取。將合併之有機層用鹽水 (3 × 300mL) 洗滌並在真空中濃縮。將殘餘物藉由急速層析 (矽膠，含有 0% 至 35% EtOAc 的石油醚) 純化。獲得黃色油狀標題化合物 (5.3 g，產率 70.6%)。LC-MS：m/z = 261.1 [M+H] ⁺，ESI pos。步驟 2 ： 1-[3- 乙醯基 -6-[5-[(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 胺基 ] 苯并咪唑 -1- 基 ]-2- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -3- 甲腈及 1-[3- 乙醯基 -6-[6-[(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 胺基 ] 苯并咪唑 -1- 基 ]-2- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -3- 甲腈

將 1-(3-乙醯基-6-氯-2-吡啶基)-5-甲基-吡唑-3-甲腈 (5.3 g，20.33 mmol，1 當量)、N-(6-甲基嗒𠯤-3-基)-1H-苯并咪唑-5-胺 (中間體 1) (4.58 g，20.33 mmol，1 當量) 及 K ₂CO ₃(5.62 g，40.66 mmol，2 當量) 於 DMSO (50 mL) 中之混合物於 50℃ 攪拌 12 小時。將混合物冷卻至室溫並倒入 H ₂O (500 mL) 中。沉澱出固體。將其用 EtOAc (3 × 400 mL) 萃取。濃縮合併的有機層。將殘餘物藉由製備型 HPLC 純化：管柱 Phenomenex Luna C18 (250mm × 70 mm × 15µm)。流速 140 mL/min。梯度：含有 20% 至 50% CH ₃CN 的 (含 0.225% 甲酸 v/v 的 H ₂O) (35 分鐘)，然後使用 100% CH ₃CN (1 分鐘)。獲得兩種標題化合物之混合物。該混合物藉由下製備型 NPLC 純化：柱 Welch Ultimate XB-SiOH (250mm x 70mm x 10um)。流速 140 mL/min。梯度：含有 20% 至 60% EtOH 的己烷 (20 分鐘)，然後使用 100% EtOH (3 分鐘)，以得到淺棕色固體狀 1-[3-乙醯基-6-[6-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-2-吡啶基]-5-甲基-吡唑-3-甲腈 (1.1 g，產率 12%) 及淺棕色固體狀 1-[3-乙醯基-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-2-吡啶基]-5-甲基-吡唑-3-甲腈 (600 mg，產率 6.6%)。位置異構物 1：LC-MS：m/z = 450.1 [M+H] ⁺, ESI +。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ = 9.31 (s, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.98 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.55 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.27 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 7.46 (dd, J= 2.0, 8.7 Hz, 1H), 7.30 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 7.09 - 7.04 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.50 (br s, 3H), 2.19 (s, 3H)。位置異構物 2：LC-MS：m/z = 450.1 [M+H] ⁺, ESI +。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ = 9.30 (s, 1H), 9.11 (s, 1H), 8.54 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.47 (d, J= 1.7 Hz, 1H), 8.30 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 8.14 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 7.53 (dd, J= 1.9, 8.9 Hz, 1H), 7.34 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 7.14 (s, 1H), 7.10 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.48 (br s, 3H), 2.20 (s, 3H)。步驟 3 ： 1-[3-(1- 羥基乙基 )-6-[5-[(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 胺基 ] 苯并咪唑 -1- 基 ]-2- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -3- 甲腈

於 0℃ 向 1-[3-乙醯基-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-2-吡啶基]-5-甲基-吡唑-3-甲腈 (600 mg, 1.33 mmol, 1 當量) 於 MeOH (10 mL) 與 THF (10 mL) 之混合物中之溶液中添加 NaBH ₄(151 mg, 3.99 mmol, 2.99 當量)。於 0℃ 繼續攪拌 1 小時。將 DMF (5 mL) 添加至混合物中，將其於 20℃ 攪拌 2 小時。將混合物再次冷卻至 0℃ 並添加 NaBH ₄(76 mg, 2 mmol, 1.5 當量)。移除冷卻浴，並於室溫繼續攪拌 2 小時。將反應混合物藉由緩慢添加 H ₂O (50 mL) 來淬滅，然後用 DCM (2 × 50 mL) 萃取。將合併之有機萃取物在真空下濃縮。將殘餘物藉由以下製備型 HPLC 純化：柱 Waters Xbridge (150mm x 25mm x 5µm)。流速 60 mL/min。梯度：含有 19% 至 49% CH ₃CN 的 (含 10 mM NH ₄HCO ₃的 H ₂O) (11 分鐘)，然後使用 100% CH ₃CN (2 分鐘) 純化。獲得白色凍乾固體狀標題化合物 (400 mg，產率 65%)。LC-MS：m/z = 452.2 [M+H] ⁺，ESI pos。步驟 4 ： 5- 甲基 -1-[6-[5-[(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 胺基 ] 苯并咪唑 -1- 基 ]-3-[(1S)-1- 羥基乙基 ]-2- 吡啶基 ] 吡唑 -3- 甲腈

將 1-[3-(1-羥基乙基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-2-吡啶基]-5-甲基-吡唑-3-甲腈 (如實例 64 之步驟 3 中所獲得) (400 mg，0.89 mmol，1 當量) 藉由手性 SFC (Daicel Chiralpak AY-H (250mm × 30mm × 10µm)。流速：70 mL/min，60% (含 0.1% NH ₄OH 的異丙醇) 純化。獲得白色固體狀標題化合物 (157.5 mg，產率 39.4%)。LC-MS：m/z = 452.2 [M+H] ⁺, ESI +。 ¹H NMR (400 MHz, CD ₃OD): δ = 8.89 (s, 1H), 8.50 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 8.22 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 8.13 (dd, J= 8.7, 15.2 Hz, 2H), 7.60 (dd, J= 2.1, 8.9 Hz, 1H), 7.35 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 7.12 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 0.6 Hz, 1H), 4.78 - 4.74 (m, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 1.41 (d, J= 6.5 Hz, 3H)。

立體源碳之絕對組態之分配係藉由 Mosher 酯分析來進行：將 3.6 mg (8.0 µmol) 醇溶解於 CDCl ₃及 2.9 µl 吡啶 (36.3 µmol, 7 當量) 中，然後添加 ( R)-Mosher 氯化物 (( R)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯基乙醯氯, 7.6 µl, 40.2 umol, 5.0 當量)，以形成對應的 (S )-Mosher 酯。藉由疊加與其鏡像異構物之 ¹H-NMR 譜 (COSY) 的比較顯示 C2-甲基基團之高磁場位移，因此指示醇之 ( S)-組態。實例 1 [(1 S)-1-[2-(3- 氰基 -5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 )-6-[5-[(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 胺基 ] 苯并咪唑 -1- 基 ]-3- 吡啶基 ] 乙基 ] 甲基碳酸酯 步驟 1 ：咪唑 -1- 羧酸 [(1S)-1-[2-(3- 氰基 -5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 )-6-[5-[(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 胺基 ] 苯并咪唑 -1- 基 ]-3- 吡啶基 ] 乙基 ] 酯

在 7 小時內每隔 30 分鐘向 1-[3-[(1 S)-1-羥基乙基]-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-2-吡啶基]-5-甲基-吡唑-3-甲腈 (5.10 g，11.3 mmol，1.00 當量) 在二氯甲烷 (200 mL) 和四氫呋喃 (400 mL) 中的懸浮液中分 7 份添加 CDI (14.1 g，87.0 mmol，7.70 當量)，與此同時在 45℃ 下攪拌。將反應混合物冷卻並用於以下步驟。步驟 2 ： [(1S)-1-[2-(3- 氰基 -5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 )-6-[5-[(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 胺基 ] 苯并咪唑 -1- 基 ]-3- 吡啶基 ] 乙基 ] 甲基碳酸酯

向在步驟 1 中所獲得的反應混合物中添加 MeOH (95.3 g，120 mL，2.97 mol，263 當量)，並將混合物在室溫下攪拌 30 分鐘。添加 4-二甲基胺基吡啶 (207 mg，1.69 mmol，0.15 當量)，並將混合物在室溫下攪拌 30 分鐘。添加 4-二甲基胺基吡啶 (1.38 g，11.29 mmol，1.00 當量)，並將反應混合物在室溫下攪拌 30 分鐘。將反應混合物加熱至 50℃ 並攪拌 15 分鐘。將反應混合物濃縮並將殘餘物溶解在 MeOH (50 mL) 中並在 50℃ 攪拌 10 分鐘。將反應混合物減壓濃縮，並將殘餘物倒入 500ml 水中，並將混合物在室溫下攪拌 10 分鐘。將混合物用 EtOAc (3 × 100 mL) 萃取，並將合併的有機層用水 (3 × 50 mL) 及鹽水 (50 mL) 洗滌，經 Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮。將粗品透過 SiO ₂層析法 (ISCO：120 g 的從 0% 至 5% 的 MeOH 的 CH ₂Cl ₂溶液) 純化。將產物從 CH ₂Cl ₂/ EtOAC (1:1) 中重結晶，並將固體過濾並乾燥以得到呈白色固體的[(1 S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基]甲基碳酸酯 (5.18 g，10.2 mmol，2 步中的產率 90%)。LC-MS：m/z = 510.2 [M+H] ⁺, ESI +。 ¹H NMR (600 MHz, CDCl ₃) δ ppm 8.61 (s, 1 H), 8.28 (d, J= 8.5 Hz, 1 H), 8.03 (d, J= 8.8 Hz, 1 H), 7.80 (dd, J= 5.0, 3.4 Hz, 2 H), 7.40 - 7.44 (m, 1 H), 7.14 - 7.20 (m, 1 H), 7.09 (d, J= 9.1 Hz, 1 H), 7.00 (br s, 1 H), 6.72 (q, J= 0.8 Hz, 1 H), 5.49 (q, J= 6.6 Hz, 1 H), 3.72 (s, 3 H), 2.63 (s, 3 H), 2.51 (d, J= 0.9 Hz, 3 H), 1.78 (d, J= 6.6 Hz, 3 H)。99.8% ee（手性 SFC，Daicel Chiralpak AY，150x4.6mm，5µm，共溶劑：MeOH + 0.1% 二乙胺，6 分鐘梯度：20% 至 40%，烘箱溫度：40℃，BPR 2000 PSI) 實例 2 [(1 S)-1-[2-(3- 氰基 -5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 )-6-[5-[(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 胺基 ] 苯并咪唑 -1- 基 ]-3- 吡啶基 ] 乙基 ] 異丙基碳酸酯

根據實施例 1 的步驟 1 及步驟 2 中所述的程序，使用 1-[3-[(1 S)-1-羥基乙基]-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-2-吡啶基]-5-甲基-吡唑-3-甲腈 (150 mg，0.332 mmol)，獲得了呈白色固體的標題化合物[(1 S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基]異丙基碳酸酯 (127 mg，0.236 mmol，2 步中的產率 71%)。LC-MS：m/z = 538.3 [M+H] ⁺, ESI +。 ¹H NMR (600 MHz, CDCl ₃) δ ppm 8.59 (s, 1 H), 8.27 (d, J= 8.3 Hz, 1 H), 8.01 (d, J= 8.8 Hz, 1 H), 7.77 - 7.80 (m, 1 H), 7.75 - 7.83 (m, 1 H), 7.40 (dd, J= 8.8, 2.1 Hz, 1 H), 7.12 - 7.16 (m, 1 H), 7.07 (d, J= 9.1 Hz, 1 H), 7.02 (br s, 1 H), 6.69 (d, J= 0.9 Hz, 1 H), 5.45 (q, J= 6.6 Hz, 1 H), 4.74 (quin, J= 6.2 Hz, 1 H), 2.60 (s, 3 H), 2.48 (d, J= 0.8 Hz, 3 H), 1.74 (d, J= 6.6 Hz, 3 H), 1.17 - 1.32 (m, 6 H)。實例 3 [(1 S)-1-[2-(3- 氰基 -5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 )-6-[5-[(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 胺基 ] 苯并咪唑 -1- 基 ]-3- 吡啶基 ] 乙基 ] 碳酸三級丁酯

向 1-[3-[(1 S)-1-羥基乙基]-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-2-吡啶基]-5-甲基-吡唑-3-甲腈 (150 mg，0.332 mmol，1.00 當量) 在四氫呋喃 (3.3 mL) 中的溶液中添加 (Boc) ₂O (83 mg，89 µL，382 umol，1.15 當量) 及 4-二甲基胺基吡啶 (8 mg，66 umol，0.20 當量)。將反應混合物在室溫下攪拌 10 分鐘。將反應混合物用水 (20 mL) 稀釋，並用 EtOAc (2 × 40 mL) 萃取。合併的有機層用鹽水 (20 mL) 洗滌、以 Na ₂SO ₄乾燥、過濾並濃縮。將殘餘物藉由急速層析 (SiO ₂，0% 至6% 的 MeOH 的 DCM 溶液)純化，以得到呈白色固體的 N-[1-[6-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-5-[(1 S)-1-羥基乙基]-2-吡啶基]苯并咪唑-5-基]-N-(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基甲酸三級丁酯 (157 mg，0.286 mmol，86%)。LC-MS：m/z = 552.3 [M+H] ⁺, ESI +。 ¹H NMR (600 MHz, CDCl ₃) δ ppm 8.59 (s, 1 H), 8.28 (d, J= 8.4 Hz, 1 H), 8.00 (d, J= 8.8 Hz, 1 H), 7.78 (dd, J= 5.3, 3.1 Hz, 2 H), 7.37 - 7.42 (m, 1 H), 7.13 (d, J= 9.1 Hz, 1 H), 7.06 - 7.09 (m, 1 H), 7.04 (s, 1 H), 6.69 (d, J= 0.9 Hz, 1 H), 5.38 - 5.46 (m, 1H), 2.60 (s, 3 H), 2.46 (d, J= 0.8 Hz, 3 H), 1.71 (d, J= 6.6 Hz, 3 H), 1.40 (s, 9 H)。實例 4 [(1 S)-1-[2-(3- 氰基 -5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 )-6-[5-[(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 胺基 ] 苯并咪唑 -1- 基 ]-3- 吡啶基 ] 乙基 ] 乙酸酯 步驟 1 ： 1-[6- 氯 -3-[(1S)-1- 羥基乙基 ]-2- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -3- 甲腈

向 1-(3-乙醯基-6-氯-2-吡啶基)-5-甲基-吡唑-3-甲腈 (化合物 I，中間體 2) (2.34 g，8.98 mmol，1.00 當量) 在甲醇 (72 mL) 中的溶液中添加 NaBH ₄(374 mg，9.87 mmol，1.10 當量)，並將反應混合物在室溫下攪拌 1 小時。將反應混合物倒入水 (100 mL) 中，並用 EtOAc (3 × 75 mL) 萃取。將合併之有機層用鹽水 (50 mL) 洗滌、經 Na ₂SO ₄乾燥，過濾濃縮。將粗產物 (2.46 g，9.365 mmol) 藉由手性 SFC (Daicel Chiralpak AY-H (250mm x 30mm x10µm)。流速：70 mL / min，60% (0.1% NH ₄OH 的異丙醇溶液)) 以得到呈白色固體的 1-[6-氯-3-[(1 S)-1-羥基乙基]-2-吡啶基]-5-甲基-吡唑-3-甲腈 (1.10 g，4.198 mmol，45% 產率)。LC-MS：m/z = 307.1 [M+HCOO] ^-, ESI -。步驟 2 ： [(1S)-1-[6- 氯 -2-(3- 氰基 -5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 )-3- 吡啶基 ] 乙基 ] 酯

向 1-[6-氯-3-[(1 S)-1-羥基乙基]-2-吡啶基]-5-甲基-吡唑-3-甲腈 (125 mg，0.476 mmol，1.00 當量) 在無水 DCM (3 mL) 中的攪拌溶液中添加 Et ₃N (72 mg，100 µL，0.714 mmol，1.50 當量)，然後在 2 小時內滴加 AcCl (406 µL，5.71 mmol，12.00 當量)。攪拌反應混合物另外 15 分鐘。將反應混合物用水 (20 mL) 稀釋，並用 EtOAc (2 × 30 mL) 萃取。合併的有機層用鹽水 (20 mL) 洗滌、以 Na ₂SO ₄乾燥、過濾並濃縮。將殘餘物藉由急速層析 (SiO ₂，0% 至 20% 的 EtOAc 的庚烷溶液) 純化以得到呈無色油狀物的 [(1S)-1-[6-氯-2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-3-吡啶基]乙基]酯 (147 mg，0.471 mmol，99%)。LC-MS：m/z = 305.2 [M+H] ⁺，ESI pos。步驟 3 ： [(1S)-1-[2-(3- 氰基 -5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 )-6-[5-[(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 胺基 ] 苯并咪唑 -1- 基 ]-3- 吡啶基 ] 乙基 ] 乙酸酯

在氬氣下將[(1 S)-1-[6-氯-2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-3-吡啶基]乙基]酯 (147 mg，0.482 mmol，1.00 當量)、1H-苯并咪唑-5-基-(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺 (化合物 I，中間體 1) (130 mg，0.579 mmol，1.20 當量)、磷酸三鉀 (307 mg，1.45 mmol，3.00 當量)和 tBuXPhosPdG3 (19 mg，0.024 mmol，0.05 當量；CAS 號 1447963-75-8))放入燒瓶中。添加三級戊醇 (2.41 mL)並將反應混合物在 80℃ 攪拌 1.5 小時。將反應混合物冷卻至室溫並濃縮。將殘餘物藉由急速層析 (SiO ₂，0% 至 8% 的 MeOH 的 DCM 溶液) 純化以得到呈淺黃色固體的 [(1 S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[6-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基]酯 (36 mg，14%)。LC-MS：m/z = 494.2 [M+H] ⁺, ESI +。 ¹H NMR (600 MHz, CDCl ₃) δ ppm 8.57 (s, 1 H), 8.20 (d, J= 8.4 Hz, 1 H), 7.99 (d, J= 8.3 Hz, 1 H), 7.75 - 7.78 (m, 1 H), 7.67 - 7.86 (m, 1 H), 7.38 (dd, J= 8.7, 2.1 Hz, 1 H), 7.12 - 7.22 (m, 2 H), 7.03 - 7.09 (m, 1 H), 6.68 (d, J= 0.8 Hz, 1 H), 5.47 (d, J= 6.6 Hz, 1 H), 2.60 (s, 3 H), 2.47 (d, J= 0.8 Hz, 3 H), 2.39 - 2.43 (m, 1 H), 1.95 - 1.97 (m, 1 H), 1.70 (d, J= 6.6 Hz, 3 H)。實例 5 2- 甲基丙酸 [(1 S)-1-[2-(3- 氰基 -5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 )-6-[5-[(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 胺基 ] 苯并咪唑 -1- 基 ]-3- 吡啶基 ] 乙基 ] 酯

向 4-二甲基胺基吡啶（65 mg，532 umol，4.00 當量）和2-甲基丙醯氯（28 mg，28 µL，266 µmol，2.00 當量）在無水 DCM (2 mL) 中的溶液中添加 1-[3-[(1 S)-1-羥基乙基]-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-2-吡啶基]-5-甲基-吡唑-3-甲腈 (化合物 I) (60 mg，133 µmol，1.00 當量)。將反應混合物在室溫下攪拌 15 分鐘。添加 MeOH (2 mL) 並將混合物在室溫下攪拌 30 分鐘。將反應混合物濃縮，並將殘餘物藉由急速層析 (SiO ₂，0% 至 8% 的 MeOH 的 DCM 溶液) 純化以得到呈白色固體的 2-甲基丙酸 [(1 S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基]酯 (58 mg，112 µmol，84%)。LC-MS：m/z = 522.3 [M+H] ⁺, ESI +。 ¹H NMR (600 MHz, CDCl ₃) δ ppm 8.57 (s, 1 H), 8.17 (d, J= 8.2 Hz, 1 H), 8.00 (dd, J= 8.8, 0.6 Hz, 1 H), 7.70 - 7.83 (m, 2H), 7.39 (dd, J= 8.7, 2.0 Hz, 1 H), 7.11 - 7.19 (m, 1 H), 7.04 - 7.09 (m, 1 H), 7.02 (br s, 1 H), 6.68 (d, J= 0.8 Hz, 1 H), 5.45 (q, J= 6.6 Hz, 1 H), 2.60 (s, 3 H), 2.49 - 2.54 (m, 1 H), 2.48 (d, J= 0.8 Hz, 3 H), 1.71 (d, J= 6.6 Hz, 3 H), 1.12 (dd, J= 9.6, 7.0 Hz, 6 H)。實例 6 [(1 S)-1-[2-(3- 氰基 -5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 )-6-[5-[(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 胺基 ] 苯并咪唑 -1- 基 ]-3- 吡啶基 ] 乙基 ]N,N- 二甲基胺基甲酸酯

向 1-[3-[(1 S)-1-羥基乙基]-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-2-吡啶基]-5-甲基-吡唑-3-甲腈 (化合物 I) (100 mg，221 µmol，1.00 當量) 在無水 THF (1 mL) 中的溶液中添加 NaH (12 mg，244 µmol，1.10 當量) 及二甲基胺基甲醯氯 (22 µL，244 µmol，1.10 當量)。將反應混合物在室溫下攪拌 30 分鐘。添加甲醇 (1 mL) 並將混合物在室溫下攪拌 30 分鐘。蒸發掉揮發性物質，並將殘餘物藉由反相急速層析 (0% 至 50% 的 ACN 水溶液) 純化以得到呈黃色粉末的 [(1S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基]N,N-二甲基胺基甲酸酯 (75 mg，144 µmol，65% 產率)。LC-MS：m/z = 523.3 [M+H]+, ESI +。 ¹H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.63 (br s, 1 H), 9.06 (s, 1 H), 8.43 (d, J= 8.6 Hz, 1 H), 8.37 (d, J= 2.0 Hz, 1 H), 8.27 (d, J= 8.5 Hz, 1 H), 8.08 (d, J= 9.0 Hz, 1 H), 7.52 (d, J= 9.2 Hz, 1 H), 7.49 (dd, J= 8.9, 2.2 Hz, 1 H), 7.31 (d, J= 9.1 Hz, 1 H), 7.11 (d, J= 0.8 Hz, 1 H), 5.27 (q, J= 6.6 Hz, 1 H), 2.88 (s, 3 H), 2.72 (s, 3 H), 2.52 (s, 3 H), 2.38 (d, J= 0.8 Hz, 3 H), 1.57 (d, J= 6.6 Hz, 3 H)。實例 7 1-[1-[6-(3- 氰基 -5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 )-5-[(1S)-1- 羥基乙基 ]-2- 吡啶基 ] 苯并咪唑 -5- 基 ]-3,3- 二甲基 -1-(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 脲步驟 1 ： 1-[3-[(1S)-1-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 甲矽烷基 ] 氧乙基 ]-6-[5-[(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 胺基 ] 苯并咪唑 -1- 基 ]-2- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -3- 甲腈

將 1-[3-[(1 S)-1-羥基乙基]-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-2-吡啶基]-5-甲基-吡唑-3-甲腈 (化合物 I) (150 mg，332 µmol，1.00 當量)懸浮於 DCM (1.5 mL)中。添加咪唑 (68 mg，997 µmol，3.00 當量)，然後添加TBSCl (110 mg，731 µmol，2.20 當量)，並將反應混合物在 50℃ 攪拌 2 小時。將反應混合物冷卻至室溫，用水 (20 mL) 稀釋，並用 DCM (2 × 20 mL) 萃取。合併的有機層用鹽水 (20 mL) 洗滌、以 Na ₂SO ₄乾燥、過濾並濃縮。將粗產物藉由急速層析 (SiO ₂，0% 至 10% MeOH 的 DCM 溶液) 純化以得到呈淺黃色固體的 1-[3-[(1 S)-1-[三級丁基(二甲基)甲矽烷基]氧乙基]-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-2-吡啶基]-5-甲基-吡唑-3-甲腈 (175 mg，310 µmol，產率 93%)。LC-MS：m/z = 566.5 [M+H]+，ESI pos。步驟 2 ： 1-[1-[5-[(1S)-1-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 甲矽烷基 ] 氧乙基 ]-6-(3- 氰基 -5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 )-2- 吡啶基 ] 苯并咪唑 -5- 基 ]-3,3- 二甲基 -1-(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 脲

將 1-[3-[(1 S)-1-[三級丁基(二甲基)甲矽烷基]氧乙基]-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-2-吡啶基]-5-甲基-吡唑-3-甲腈 (80 mg，141 µmol，1.00 當量) 溶解在 DMF (800 µL) 中。添加 NaH (7.5 mg，156 µmol，1.10 當量)，並將反應混合物在室溫下攪拌 15 分鐘。添加二甲基胺基甲醯氯 (17 mg，14 µL，156 µmol，1.10 當量)，並將反應混合物在室溫下攪拌 2 小時。添加二甲基胺基甲醯氯 (17 mg，14 µL，156 µmol，1.10 當量)，並將反應混合物在室溫下攪拌 2 小時。將反應混合物藉由添加飽和水性 NH ₄Cl (4 mL) 淬滅，並用 EtOAc (3 × 20 mL) 萃取。合併的有機層用鹽水 (20 mL) 洗滌、以 Na ₂SO ₄乾燥、過濾並濃縮。將殘餘物藉由急速層析 (SiO ₂；0% 至 10% MeOH 的 DCM 溶液) 純化以得到呈淺黃色油狀物的 1-[1-[5-[(1 S)-1-[三級丁基(二甲基)甲矽烷基]氧乙基]-6-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-2-吡啶基]苯并咪唑-5-基]-3,3-二甲基-1-(6-甲基嗒𠯤-3-基)脲 (70 mg，71%產率，110 µmol，)。LC-MS：m/z = 637.4 [M+H]+，ESI pos。步驟 3 ： 1-[1-[6-(3- 氰基 -5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 )-5-[(1S)-1- 羥基乙基 ]-2- 吡啶基 ] 苯并咪唑 -5- 基 ]-3,3- 二甲基 -1-(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 脲

將 1-[1-[5-[(1 S)-1-[三級丁基(二甲基)甲矽烷基]氧乙基]-6-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-2-吡啶基]苯并咪唑-5-基]-3,3-二甲基-1-(6-甲基嗒𠯤-3-基)脲 (70 mg，56 µmol，1.00 當量) 溶解於 THF (0.5 mL) 中。添加 1M TBAF 在 THF (1M) 中的溶液 (168 µL，168 µmol，3.00 當量)，並將反應混合物在室溫下攪拌1小時。添加水 (0.5 mL)，並將反應混合物在室溫下攪拌 30 分鐘。將反應混合物濃縮，並將殘餘物藉由反相急速層析 (0% 至 50% ACN的水溶液) 純化以得到呈白色固體的 1-[1-[6-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-5-[(1 S)-1-羥基乙基]-2-吡啶基]苯并咪唑-5-基]-3,3-二甲基-1-(6-甲基嗒𠯤-3-基)脲 (10 mg，19 µmol，35% 產率)。LC-MS：m/z = 523.4 [M+H] ⁺, ESI +。 ¹H NMR (600 MHz, CDCl ₃) δ ppm 8.57 (s, 1 H), 8.36 (d, J= 8.4 Hz, 1 H), 7.96 (d, J= 8.8 Hz, 1 H), 7.71 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.66 (d, J= 1.9 Hz, 1 H), 7.20 - 7.25 (m, 1 H), 7.20 (s, 1 H), 7.05 - 7.10 (m, 1 H), 6.66 - 6.71 (m, 1 H), 4.81 - 4.88 (m, 1 H), 3.46 - 3.76 (m, 1 H), 2.91 - 2.96 (m, 6 H), 2.93 (s, 6 H), 2.63 (s, 3 H), 2.45 (s, 3 H), 1.46 - 1.51 (m, 3 H)。實例 8 N-[1-[6-(3- 氰基 -5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 )-5-[(1 S)-1- 羥基乙基 ]-2- 吡啶基 ] 苯并咪唑 -5- 基 ]-N-(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 乙醯胺 步驟 1 ： N-[1-[5-[(1S)-1-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 甲矽烷基 ] 氧乙基 ]-6-(3- 氰基 -5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 )-2- 吡啶基 ] 苯并咪唑 -5- 基 ]-N-(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 乙醯胺

向 4-二甲基胺基吡啶 (26 mg，0.21 mmol，4.0 當量) 及乙醯氯 (5 µL mL，0.06 mmol，1.2 當量) 在無水 DCM (3 mL) 中的溶液中添加 1-[3-[(1 S)-1-[三級丁基(二甲基)甲矽烷基]氧乙基]-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-2-吡啶基]-5-甲基-吡唑-3-甲腈 (實施例 7 中的步驟 1) (30 mg，0.05 mmol，1.0 當量)，然後將反應混合物在 25℃ 攪拌 1 小時。將反應混合物濃縮，並將殘餘物藉由製備型 TLC (EtOAc / MeOH 9:1，R _f= 0.45) 純化以得到呈灰白色固體的 N-[1-[5-[(1 S)-1-[三級丁基(二甲基)甲矽烷基]氧乙基]-6-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-2-吡啶基]苯并咪唑-5-基]-N-(6-甲基嗒𠯤-3-基)乙醯胺 (10 mg，0.02 mmol，31% 產率)。LC-MS：m/z = 608.1 [M+H] ⁺，ESI pos。步驟 2 ： N-[1-[6-(3- 氰基 -5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 )-5-[(1S)-1- 羥基乙基 ]-2- 吡啶基 ] 苯并咪唑 -5- 基 ]-N-(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 乙醯胺

在室溫下向 N-[1-[5-[(1 S)-1-[三級丁基(二甲基)甲矽烷基]氧乙基]-6-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-2-吡啶基]苯并咪唑-5-基]-N-(6-甲基嗒𠯤-3-基)乙醯胺 (10 mg，0.02 mmol，1.00 當量) 在 THF (2 mL) 中的溶液中添加 TBAF (1M 的 THF 溶液) (0.05 mL，0.05 mmol，3.00 當量)。將所得溶液在室溫下攪拌 2 小時。然後將反應混合物在 EtOAc (10 mL) 與水 (20 mL) 之間分配，並將水相用 EtOAc (2 × 10 mL) 萃取。合併的有機層用鹽水 (10 mL) 洗滌、以 Na ₂SO ₄乾燥、過濾並濃縮。將殘餘物藉由製備型 TLC (DCM/MeOH 10:1，R _abb= 0.45，UV) 純化，然後藉由製備型 HPLC (Phenomenex Luna C18 150 mm x 25mm x 10 µm，5% 至 10% 水 + 0.225% FA 的 ACN 溶液)，25 mL/min) 純化以得到呈灰白色固體的 N-[1-[6-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-5-[(1 S)-1-羥基乙基]-2-吡啶基]苯并咪唑-5-基]-N-(6-甲基嗒𠯤-3-基)乙醯胺 (4.5 mg，0.01 mmol，55% 產率)。LC-MS：m/z = 494.1 [M+H] ⁺, ESI +。 ¹H NMR (400 MHz, METHANOL-d4) δ = 9.05 (s, 1H), 8.55 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 8.29 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.19 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.95 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 7.87 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 7.69 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 7.49 (dd, J= 2.0, 8.8 Hz, 1H), 6.88 (d, J= 0.6 Hz, 1H), 4.80 (s, 1H), 2.68 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 1.43 (d, J= 6.5 Hz, 3H)。實例 9 N-[1-[6-(3- 氰基 -5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 )-5-[(1 S)-1- 羥基乙基 ]-2- 吡啶基 ] 苯并咪唑 -5- 基 ]-2,2- 二甲基 -N-(6- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 丙醯胺

向 4-二甲基胺基吡啶 (54 mg，443 µmol，4.00 當量) 及新戊醯氯 (16 µL，133 µmol，1.20 當量)在無水 DCM (6 mL) 中的溶液中添加 1-[3-[(1 S)-1-羥基乙基]-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-2-吡啶基]-5-甲基-吡唑-3-甲腈 (化合物 I) (50 mg，111 µmol，1.00 當量)。將反應在室溫下攪拌 5 分鐘。添加 MeOH (6 mL) 並將反應混合物在室溫下攪拌 30 分鐘。將反應混合物濃縮，並將殘餘物藉由急速層析 (SiO ₂，0% 至 8% MeOH 的 DCM 溶液)純化以得到呈白色固體的 N-[1-[6-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-5-[(1 S)-1-羥基乙基]-2-吡啶基]苯并咪唑-5-基]-2,2-二甲基-N-(6-甲基嗒𠯤-3-基)丙醯胺 (50 mg，93 µmol，84% 產率)。LC-MS：m/z = 536.4 [M+H] ⁺, ESI +。 ¹H NMR (600 MHz, CDCl ₃) δ ppm 8.86 - 9.04 (m, 1 H), 8.42 - 8.56 (m, 1 H), 8.01 - 8.18 (m, 1 H), 7.73 - 7.92 (m, 3 H), 7.39 - 7.69 (m, 2 H), 6.65 - 6.78 (m, 1 H), 4.94 (br d, J= 6.4 Hz, 1 H), 2.81 (br s, 3 H), 2.48 (s, 3 H), 1.54 (d, J= 6.3 Hz, 3 H), 1.19 (s, 8 H)。實例 10 磷酸化測定 SIK1-3

在 SIK2 (或為 SIK1 或 SIK3) 及 ATP 存在下，將 CHK 肽 (具有 C 端精胺酸醯胺修飾的 KKKVSRSGLYRSPSMPENLNRPR) 在四個可行的絲胺酸中之一者上磷酸化。在測定條件下僅觀察到一處磷酸化。將 60 nl 於 DMSO 中之各化合物稀釋系列 (12 個濃度點；稀釋係數為 3，通常為 30 µM 至 170 pM) 藉由聲學分配轉移至測定盤中，並在添加 5 µl SIK1 (5 nM) 或 5 µl SIK2 (0.5 nM) 或 7 µl SIK3 (1.5 nM) 在測定緩衝劑 (12.5 mM HEPES (pH 7.0)，10 mM 乙酸鎂，0.005% BSA) 中的溶液後預孵育 (環境溫度) 30 分鐘。添加 10 µM CHK-肽溶液及 5 µl 的 100 µM ATP (用於 SIK1 及 SIK2) 或 3 µl (用於 SIK3) 在測定緩衝劑中的溶液，並於環境溫度孵育 45 分鐘。添加 40 µl 的 0.125% 甲酸水溶液以猝滅反應。利用 RapidFire (RF) 質譜法生成資料，如下所述。將藉由 MRM (多反應監測；API5000 或 6500+) 或 EIC (提取離子電流；QToF) 測量的針對磷酸化及非磷酸化形式的多電荷種類 (3 至 5 次充電) 相加，且計算比率 (總磷酸化物種總和/所有物種總和) 以用於資料評估。藉由 Genedata 軟體基於非抑制對照 DMSO 及商用 SIK 抑制劑 (1µM YKL-05-099 (CAS 號 1936529-65-5)) 進行歸一化。測定結果以半數最大抑制濃度 (IC50) 表示，並總結在下表 1 中。 RapidFire 設置：

藉由真空抽吸樣品 (最大 600ms)，並用 0.1% 甲酸水溶液以 1.5ml/min 於 3000ms 內上樣至 C4 管匣 (Agilent；#G9203A)。然後，將樣品用 90% 乙腈；10% 水；0.007% TFA；0.093 甲酸以 1.25ml/min 於 4000ms 內轉移至 API5000 (API6500+) 或 QToF 質譜儀。將管匣用 0.1% 甲酸水溶液額外再調節 500ms。 MS 設置 Sciex API5000/API6500+：

所有 MS 分析皆於 MRM 模式下使用以下 MS 設置：電噴霧：正；離子噴霧電壓：4000V；溫度：550℃；碰撞氣體：5；氣簾：15；氣體 1：40；氣體 2：42；EP：10。DP = 去簇潛力；CE = 碰撞能量；CXP = 細胞退出電位。

名稱	Q1 (m/z)	Q3 (m/z)	時間 (ms)	DP (V)	CE (V)	CXP (V)
CHK(4+)	676.0	84.2	50	46	99	18
CHK(5+)	541.0	84.2	50	51	71	36
pCHK(4+)	696.0	84.2	50	66	105	18
pCHK(5+)	557.0	84.2	50	51	53	4

MS 設置 Agilent QToF 6545

所有 MS 分析皆於 MS 模式下使用以下 MS 設置：雙 AJS 電噴霧：正；VCap：3000V；乾燥氣體及鞘氣：340℃，於 8l/min；霧化器：60psig；噴嘴電壓：2000V；碎裂電壓：130V；截取錐：35V；Oct1 RF Vpp：700V；在 5 幅譜圖/秒下的參考質量數

名稱	EIC (m/z)	寬度
CHK(3+)	900.8345	50ppm
CHK(4+)	675.8789	50ppm
CHK(5+)	540.9048	50ppm
pCHK(3+)	927.4961	50ppm
pCHK(4+)	695.8747	50ppm

實例 11 人類全血測定， α LISA

將人類全血 (從 Roche Basel 醫療中心訂購，在肝素-鋰抗阻塞劑存在下) 轉移至 384 孔測定盤 (Phenoplate-Perkin Elmer) 中，並與 SIK 抑制劑一起預孵育 1 小時。抑制劑化合物 (在 DMSO 中連續稀釋) 在測定盤中以 16 個濃度 (範圍從 10 µM 到最終 0.3 nM) 在兩名不同的健康捐血者身上進行測試，連續稀釋因子為 2。測定板中之最終 DMSO 濃度為 0.1%。隨後，以 100ng/mL LPS 刺激細胞 3 小時。在盤離心 (1300 rpm，5 分鐘) 後收集血漿並轉移至 αLISA 盤。藉由依照由 Perkin Elmer 提供的用於珠粒及抗體稀釋和添加的 SOP 測量細胞激素 IL-10 及 TNFα。

將 αLisa 盤在 FSX pherastar 上在 680 nM 光激發及 615 nm 發射光下讀取。基於非抑制對照 DMSO 孔和陽性對照孔中的已知 SIK 抑制劑（稱為 ‘417；10µM 最終濃度；化合物從 WO2019105886 中已知），藉由 Genedata 軟體對每個個別的盤執行標準化。測定的結果以半最大抑制濃度(針對 TNF 的 IC50) 及半最大活性濃度 (針對 IL-10 的 EC50) 表示。 ‘417 的結構：

以下進一步解釋 αLISA 的原理：藉由 αLISA 測量細胞上清液中的 IL-10 及 TNFα 濃度，此允許以靈敏、定量及可再現的方式進行測量。此測定基於細胞激素與針對鏈黴親和素包被的供體珠粒的生物素化抗分析物抗體 (IL-10 或 TNFα) 的結合，而另一種抗分析物抗體與 αLISA 受體珠粒綴合。在存在分析物的情況下，珠粒變得非常接近，並且 680nm 光波長對供體珠粒的激發觸發單線態氧分子的釋放，從而誘導向受體珠粒的級聯能量轉移，從而導致發射 615nM 的光。用於 hWBA 的材料及試劑：

盤：	用途	盤品牌及類型
AP 384 孔	檢定盤	Perkin Elmer 細胞載劑黑色透明底 / 酚醛板
源盤 (SP)	複合盤	NASP 以及 Weidmann, 384 \|MTP, 40121-101 及 23490-101
光學盤	α LISA	Perkin Elmer

試劑 (品牌)	品牌/供應商	貨號/批次	濃度
全血 (肝素鋰)	羅氏醫療服務公司 (Roche medical service)	Na	NA
RPMI 培養基 1640 + Glutamax	GIBCO	61870-010	100%
LPS (1mg/mL) (其對於使用此種 LPS 來源至關重要，因為品質可差異很大)	西格瑪奧德裡奇公司 (SIGMA)	#L5418-2ML，來自 1mg/mL 的大腸桿菌(E.coli)原液	1 mg/mL
α LISA IL10 試劑盒 (5000 個測定點) - AL218 F	Perkin Elmer	AL218F
TNFα (人類) αLISA 檢測試劑盒，5,000 個測定點 AL208F	Perkin Elmer	AL208F

實施例 10 及實施例 11 中所述的測定的結果表明本發明的前驅藥本身僅具有降低的 SIK 抑制活性 (參見實施例 10 中所述的酶資料)，但是它們在代謝加工後提供了有效的前驅藥 (參見如實施例 11 中所述的 TNFα 活性)，其可歸因於 hWBA 中代謝物的活性。實施例 10 及實施例 11 中所述的測定的結果總結於下表 1 中。表 1 ：抑制 SIK1 、 SIK2 、 SIK3 及 TNFα hWBA EC50 的 IC50 值：

實例	SIK1 RF IC50 (µM)	SIK2 RF IC50 (µM)	SIK3 RF IC50 (µM)	TNFα hWBA IC50 (µM)
化合物 (I) (= 代謝物)	0.026	0.0002	0.0002	0.01342
1	0.803	0.0269	0.0057	0.030
2	＞30.000	0.5452	0.5201	0.098
3	5.334	0.0939	0.0782	3.353
4	1.279	0.1797	0.0229	0.194
5	＞30.000	1.4156	0.5264	0.111
6	12.899	0.3946	0.0233	9.665
7	3.011	0.1381	0.1163	1.857
8	1.961	0.0291	0.0254	1.852
9	0.503	0.0057	0.0054	0.185

實例 12 作為單向 P-gp 篩選之一部分所獲得的 P _app( 被動通透性測量 ) 實驗說明

一般測定使用經轉染之過表現人類或小鼠 P-gp 的 LLC-PK1 細胞 (豬腎上皮細胞)，在 96 孔半透濾膜盤上培養，其中它們形成具有緊密連接的極化單層，並用作頂端與基底外側腔室之間的屏障。

P-gp 在該單層之面向頂端的膜中表現。

藉由分別添加細胞不可滲透的標記物螢光黃及參考 P-gp 受質依度沙班 (edoxaban) 來確認細胞單層之緊密性及 P-gp 之功能活性。

該測定在 Tecan 液體處理機器人上完全自動化完成。 資料分析及解釋

對於受質測試，該測定藉由在不存在及存在特異性 P-gp 抑制劑唑喹達 (zosuquidar) 的情況下向細胞單層之頂端 (亦即，供體區室) 側給藥並測量於 37℃ 孵育 3 小時期間化合物向基底外側 (亦即，接收) 區室的移動來確定測試化合物的單向通透性 (Papp A＞B 方程式 1)。P-gp 的效果係藉由表示頂端流出比 (AP-ER，方程式 2) 來測量。平均通透性 (P _app) 係在不存在 P-gp 的情況下經由唑喹達條件確定。然後使用 AP-ER 及平均 P _app對化合物特性流出度及通透性進行分類 (表 2)。

方程式 1.P _app、A、C0 及 dQ/dt 分別表示表觀通透性 (P _app)、過濾表面積 (A)、初始濃度 (C ₀)、及每個時間段的運輸量 (dQ/dt)。P _app係基於單個時間點來計算。

方程式 2.頂端流出比 (AP-ER) 之計算。Papp,inh (A＞B) 係在存在抑制劑的情況下頂端至基底外側方向的通透性，且 Papp (A＞B) 係在不存在抑制劑的情況下頂端至基底外側方向的通透性值。結果

與代謝物相比，本發明的化合物表現出增大的 P _app，與此同時保留總體藥物樣性質。總體而言，增大的通透性表明當與代謝物相比時，前驅藥的口服生物利用度有所改善。表 2 – P _app 通透性

實例	P _app 通透性 (nm/ 秒 )
化合物 (I) (= 代謝物)	30
1	110
2	93
4	120
5	99
6	150

實例 A

含有以下成分的薄膜包衣錠劑可以常規方式製造：

成分	每片劑
核心：
式 (Ia) 化合物或其醫藥上可接受之鹽	10.0 mg	200.0 mg
微晶纖維素	23.5 mg	43.5 mg
含水乳糖	60.0 mg	70.0 mg
聚乙烯吡咯烷酮 K30	12.5 mg	15.0 mg
羧甲基澱粉鈉	12.5 mg	17.0 mg
硬脂酸鎂	1.5 mg	4.5 mg
(核心重量)	120.0 mg	350.0 mg
薄膜塗層：
羥丙基甲基纖維素	3.5 mg	7.0 mg
聚乙二醇 6000	0.8 mg	1.6 mg
滑石	1.3 mg	2.6 mg
氧化鐵 (黃)	0.8 mg	1.6 mg
二氧化鈦	0.8 mg	1.6 mg

將活性成分過篩並與微晶纖維素混合，然後將混合物與聚乙烯吡咯啶酮的水溶液一起製粒。然後將顆粒與羧甲基澱粉鈉和硬脂酸鎂混合，並分別壓製成 120 或 350 mg 的核心。以上述膜包衣的水溶液/懸浮液對該核心進行上漆。實例 B

含有以下成分的膠囊可以常規方式製造：

成分	每個膠囊
式 (Ia) 化合物或其醫藥上可接受之鹽	25.0 mg
乳糖	150.0 mg
玉米澱粉	20.0 mg
滑石	5.0 mg

將組分過篩並混合及充填入大小為 2 的膠囊中。實例 C

注射溶液可具有以下組成：

式 (Ia) 化合物或其醫藥上可接受之鹽	3.0 mg
聚乙二醇 400	150.0 mg
乙酸	q.s. ad pH 5.0
注射溶液用水	ad 1.0 ml

將活性成分溶於聚乙二醇 400 和注射用水 (部分) 的混合物中。藉由乙酸將 pH 調整至 5.0。藉由添加剩餘量的水將體積調整至 1.0 ml。過濾溶液，使用適當的增量充填至小瓶中並滅菌。

Claims

一種根據式 (Ia) 之化合物， (Ia) 其中 R ₁及 R ₂中之一者為前驅藥部分 (prodrug moiety)，或其中 R ₁及 R ₂中之一者與其所接附的氧或氮一起形成前驅藥部分；且 R ₁及 R ₂中之另一者為氫；或其醫藥上可接受之鹽。
如請求項 1 之化合物，其中 R ₁及 R ₂中之一者為二烷基胺基羰基、烷基胺基羰基、胺基羰基、烷基羰基、烷氧基羰基、烷基羰基氧基烷基、胺基烷基羰基、烷氧基羰基氧基烷基、烷氧基羰基(烷基胺基)烷基、雜芳基烷基、磷酸二氫烷基或 –PO ₃H ₂；且另一者為氫；或其醫藥上可接受之鹽。
如請求項 1 或 2 之化合物，其中 R ₁及 R ₂中之一者為二烷基胺基羰基、烷基羰基或烷氧基羰基，且另一者為氫。
如請求項 1 至 3 中任一項之化合物，其中 R ₁為二甲基胺基羰基、甲基羰基、異丙基羰基、異丙氧基羰基、三級丁氧基羰基或甲氧基羰基；且其中 R ₂為氫。
如請求項 1 至 3 中任一項之化合物，其中 R ₁為氫；且其中 R ₂為二甲基胺基羰基、甲基羰基、三級丁基羰基或甲氧基羰基。
如請求項 1 至 5 中任一項之化合物，其係選自 1-[1-[6-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-5-[(1S)-1-羥基乙基]-2-吡啶基]苯并咪唑-5-基]-3,3-二甲基-1-(6-甲基嗒𠯤-3-基)脲； [(1S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基]N,N-二甲基胺基甲酸酯； N-[1-[6-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-5-[(1S)-1-羥基乙基]-2-吡啶基]苯并咪唑-5-基]-N-(6-甲基嗒𠯤-3-基)乙醯胺； N-[1-[6-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-5-[(1S)-1-羥基乙基]-2-吡啶基]苯并咪唑-5-基]-2,2-二甲基-N-(6-甲基嗒𠯤-3-基)丙醯胺； 2-甲基丙酸[(1S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基]酯； [(1S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基]異丙基碳酸酯； [(1S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基]碳酸三級丁酯； [(1S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基]甲基碳酸酯；以及 [(1S)-1-[2-(3-氰基-5-甲基-吡唑-1-基)-6-[5-[(6-甲基嗒𠯤-3-基)胺基]苯并咪唑-1-基]-3-吡啶基]乙基]乙酸酯；或其醫藥上可接受之鹽。
一種製備如請求項 1 至 6 中任一項之化合物之方法，其包含下列步驟中之至少一者： (a) 使式 (I) 化合物與式 R ₁-X 或 R ₂-X 之化合物，在適當的溶劑及適當的鹼存在下反應； (b) 使式 (A2) 化合物 (A2) 與適當的去保護試劑且在適當的溶劑存在下反應； (c) 使式 (A3) 化合物 (A3) 與式 (A4) 化合物 (A4) 在適當的鹼及適當的溶劑存在下反應；其中 X 為適當的離去基團；其中 PG 為適當的保護基團；且其中 R ₁及 R ₂係如前述請求項中任一項所述。
如請求項 1 至 6 中任一項之化合物，其根據如請求項 7 之方法製造。
如請求項 1 至 6 中任一項之化合物，其用為治療活性物質。
一種醫藥組成物，其包含如請求項 1 至 6 中任一項之化合物，以及治療惰性載劑。
一種如請求項 1 至 6 中任一項之化合物的用途，其用於治療或預防類風濕關節炎、青少年期的類風濕關節炎、非酒精性脂肪性肝炎 (NASH)、原發性硬化性膽管炎、巨細胞血管炎、發炎性腸病 (IBD)、動脈粥樣硬化、第 2 型糖尿病或腎絲球腎炎。
一種如請求項 1 至 6 中任一項之化合物用於製備藥物的用途，該藥物用於治療或預防類風濕關節炎、青少年期的類風濕關節炎、非酒精性脂肪性肝炎 (NASH)、原發性硬化性膽管炎、巨細胞血管炎、發炎性腸病 (IBD)、動脈粥樣硬化、第 2 型糖尿病或腎絲球腎炎。
如請求項 1 至 6 中任一項之化合物，其使用於治療或預防類風濕關節炎、青少年期的類風濕關節炎、非酒精性脂肪性肝炎 (NASH)、原發性硬化性膽管炎、巨細胞血管炎、發炎性腸病 (IBD)、動脈粥樣硬化、第 2 型糖尿病或腎絲球腎炎。
一種治療或預防類風濕關節炎、青少年期的類風濕關節炎、非酒精性脂肪性肝炎 (NASH)、原發性硬化性膽管炎、巨細胞血管炎、發炎性腸病 (IBD)、動脈粥樣硬化、第 2 型糖尿病或腎絲球腎炎之方法，該方法包含向有需要之患者投予有效量之如請求項 1 至 6 中任一項之化合物。
如前文所述之本發明。