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TW202506733A - 淋巴毒素β受體促效劑結合蛋白 - Google Patents

淋巴毒素β受體促效劑結合蛋白 Download PDF

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TW202506733A
TW202506733A TW113121515A TW113121515A TW202506733A TW 202506733 A TW202506733 A TW 202506733A TW 113121515 A TW113121515 A TW 113121515A TW 113121515 A TW113121515 A TW 113121515A TW 202506733 A TW202506733 A TW 202506733A
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Abstract

本揭露描述了與淋巴毒素β受體（LTβR）相互作用並使其激動的LTβR結合蛋白，以及製備和使用這樣的LTβR結合蛋白之方法。還描述了治療患有實性瘤的受試者之方法，其涉及投與藥學上有效量的LTβR結合蛋白。

Description

淋巴毒素β受體促效劑結合蛋白
本發明之領域關於與淋巴毒素β受體（「LTβR」或「LTBR」）結合蛋白相關的組成物和方法。
癌症免疫療法藉由誘導或增強患者的有效抗腫瘤免疫反應來增強癌症患者的存活率。免疫檢查點抑制係免疫療法的一種形式，其已經改變了許多腫瘤的治療前景。該療法藉由阻斷介導腫瘤免疫逃避的免疫檢查點蛋白（例如細胞毒性T淋巴細胞抗原4（CTLA-4）、計畫性細胞死亡蛋白1（PD-1）和計畫性細胞死亡配體1（PD-L1））的免疫抑制訊息起作用。阻斷這種免疫抑制傳訊可恢復和/或增強身體的自然抗腫瘤反應，以促進腫瘤根除。雖然這種形式的免疫療法在許多患者中產生了持久的反應，但它未能在許多其他患者中產生治療反應。特別地，患有「冷腫瘤」，即以缺乏浸潤性T細胞和存在其他免疫抑制細胞為特徵的腫瘤之患者通常對免疫檢查點抑制劑療法具有耐藥性。因此，本領域需要如下抗癌療法：其可以誘導T細胞浸潤到腫瘤微環境中，以使這樣的冷腫瘤發炎並克服這種耐藥性，從而使腫瘤適合免疫療法。
本揭露之第一方面涉及促效劑淋巴毒素β受體（LTβR）結合蛋白。本揭露之促效劑LTβR結合蛋白結合包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基169-211的人LTβR富含半胱胺酸結構域4（CRD4）的一或多個胺基酸殘基，並且 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合或 (b) 不抑制LTα1β2與LTβR結合。
本揭露之另一方面涉及雙特異性促效劑LTβR結合蛋白。該雙特異性結合蛋白包含LTβR結合結構域，其中該LTβR結合結構域結合包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基169-211的人LTβR CRD4的一或多個胺基酸殘基；和腫瘤相關抗原結合結構域。這種雙特異性結合蛋白激動LTβR活性，並且 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合或 (b) 不抑制LTα1β2與LTβR結合。
本揭露之其他方面涉及編碼本揭露之促效劑LTβR結合蛋白和雙特異性LTβR結合蛋白的多核苷酸；包含該等多核苷酸的載體；以及包含該等載體的宿主細胞。
本揭露之額外的方面涉及藥物組成物，該等藥物組成物包含本文所述之促效劑LTβR結合蛋白、雙特異性促效劑LTβR結合蛋白或編碼其的多核苷酸或載體。
本揭露之另一方面涉及治療受試者癌症之方法，該等方法涉及向患有癌症的受試者投與促效劑LTβR結合蛋白。該等方法中使用的促效劑LTβR結合蛋白結合包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基169-211的人LTβR富含半胱胺酸結構域4（CRD4）的一或多個胺基酸殘基，並且 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合或 (b) 不抑制LTα1β2與LTβR結合。
本揭露之另一方面涉及治療受試者癌症之方法，該等方法涉及向患有癌症的受試者投與雙特異性促效劑LTβR結合蛋白。該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白包含LTβR結合結構域和腫瘤相關抗原結合結構域。該LTβR結合結構域結合包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基169-211的人LTβR富含半胱胺酸結構域（CRD4）的一或多個胺基酸殘基。雙特異性LTβR結合蛋白進一步包含腫瘤相關抗原結合結構域。雙特異性LTβR結合蛋白激動LTβR活性，並且 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合或 (b) 不抑制LT1α2β與LTβR結合。
LTβR激動作用作為抗腫瘤療法之潛在效用早在20多年前就被提出（參見例如，Browning等人, 「Signaling through the Lymphotoxin β Receptor Induces the Death of Some Adenocarcinoma Tumor Lines[通過淋巴毒素β受體的傳訊誘導一些腺癌腫瘤系的死亡],」 J. Exp. Med.[實驗醫學雜誌] 183:867 (1996)）。儘管如此，只有一種LTβR抗體進入了I期臨床試驗，並且該試驗提前結束。LTβR在全身多種細胞上普遍表現，並在淋巴器官和多種免疫細胞群的形成和維持中起著關鍵作用。因此，為了使LTβR抗體具有治療有效性和安全性，它必須選擇性地激活腫瘤微環境中的LTβR傳訊，而不會破壞腫瘤微環境外的正常LTβR傳訊。雖然可以使用提供交聯特異性LTβR激活的雙特異性模式來實現將激動作用靶向腫瘤環境；但如果設計不當，交聯依賴性促效劑將在以靶標非依賴性方式結合LTβR時充當拮抗劑。鑒於LTβR在維持免疫功能中的重要性，對其活性進行拮抗造成嚴重的安全問題。
本文揭露的促效劑LTβR結合蛋白藉由以交聯靶標依賴性方式發揮促效劑活性而不拮抗正常LTβR傳訊活性來克服這個問題。這藉由特異性選擇和工程化LTβR結合蛋白來實現，當與LTβR的富含半胱胺酸的結構域4（CRD4）結合時，該LTβR結合蛋白以交聯特異性方式激動LTβR，而不阻斷內源性LTβR配體（即LIGHT或LTα1β2）結合和傳訊活性。
根據35 U.S.C. §119(e)特此要求2023年6月12日提交的美國臨時申請案號63/472,565之權益，並且將其揭露內容藉由引用特此併入本文。
本揭露關於結合和激動淋巴毒素β受體（LTβR）的蛋白分子。本揭露提供了促效劑LTβR結合蛋白，其結合包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基169-211的人LTβR富含半胱胺酸結構域4（CRD4）的一或多個胺基酸殘基，並且 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合或 (b) 不抑制LTα1β2與LTβR結合。本揭露還提供了雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其包含與人LTβR CRD4的一或多個胺基酸殘基結合並且 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合或 (b) 不抑制LT1α2β與LTβR結合的LTβR結合結構域，以及腫瘤相關抗原結合結構域。
本揭露進一步關於治療人受試者癌症之方法。該等方法包括向患有癌症的受試者投與促效劑LTβR結合蛋白，例如如本文所描述的促效劑LTβR抗體或雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，以誘導或增強受試者的抗腫瘤免疫反應。如本文所證明的，腫瘤微環境中的LTβR激動作用誘導高內皮微靜脈形成，以增強免疫細胞浸潤到腫瘤微環境中。這種LTβR介導的抗腫瘤免疫反應足以減少腫瘤生長。
本揭露進一步提供了與結合人LTβR的促效劑LTβR結合蛋白相關的組成物、套組（kit）和方法。還提供了包含編碼本文揭露的促效劑LTβR結合蛋白的全部或一部分之多核苷酸序列的核酸分子。本揭露進一步提供了包含這樣的核酸的載體和質體，以及包含這樣的核酸和/或載體和質體的細胞或細胞系。所提供的方法進一步包括，例如，製備、鑒定和分離促效劑LTβR結合蛋白之方法，以及用於向人受試者投與本揭露之促效劑LTβR結合蛋白之方法。
應理解，如所聲明的前述一般描述以及以下的詳細描述均僅為示例性和說明性的，而不限制所揭露的發明。
除非本文另外定義，否則結合本揭露使用的科技術語應當具有熟悉該項技術者通常所理解的含義。通常，結合本文所描述的細胞及組織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學以及蛋白質及核酸化學及雜交而使用的命名法及其技術係本領域中所熟知且通常使用的那些命名法及技術。除非另外指示，否則本揭露之方法和技術通常根據本領域熟知且如貫穿本說明書所引用和討論的各種通用和更特別參考文獻中所述之常規方法來進行。參見例如Sambrook等人 ,Molecular Cloning: A Laboratory Manual [分子選殖：實驗室手冊], 第2版, Cold Spring Harbor Laboratory Press [冷泉港實驗室出版社], 冷泉港, 紐約(1989) 和Ausubel等人, Current Protocols in Molecular Biology [分子生物學現代方法], Greene Publishing Associates [格林出版聯合公司] (1992)，以及Harlow和Lane Antibodies: A Laboratory Manual [抗體：實驗室手冊] Cold Spring Harbor Laboratory Press [冷泉港實驗室出版社], 冷泉港, 紐約(1990)，該等所有都藉由引用併入本文。酶促反應及純化技術係根據製造商之說明書、如本領域中通常所實現或如本文所描述來進行。結合本文中所描述的分析化學、合成有機化學以及醫學及藥物化學而使用的術語及其實驗程式和技術係本領域中眾所周知且通常使用的那些術語以及實驗程式和技術。
在本揭露中，除非另有明確說明，否則單數術語的使用包括複數，並且複數術語應包括單數。除非上下文另外明確指示，否則如本文所用，單數形式「一個」、「一種」和「該」包括單數和複數個指示物。
在本揭露中，術語「包括（including）」、以及其他形式如「包括（includes）」和「包括（included）」之使用不是限制性的。同樣，除非另外特別說明，否則術語如「元件」或「組分」涵蓋包含一個單位的元件和組分以及包含超過一個亞單位的元件和組分兩者。而且，術語「部分（portion）」的使用可包括一部分（moiety）或整個部分（moiety）。
藉由端點表述的數值範圍包括歸入到各自範圍內的所有數值和分數，以及所述端點。
如本文所用，術語「約」在指可測量值例如參數、數量、持續時間等時，意在涵蓋指定值± 10%或更小，較佳的是 ± 1%-5%或更小的變化，只要這樣的變化適合在所揭露的實施方式中執行。應理解，修飾詞「約」所指的值本身也是特別地，而且較佳的是揭露的。
使用標準的一或三字母縮寫表示多核苷酸和多肽序列。除非另有說明，否則多肽序列的胺基末端位於左側，其羧基末端位於右側。單鏈核酸序列以及雙鏈核酸序列的頂鏈的5'末端位於左側，其3'末端位於右側。多肽的特定部分可藉由胺基酸殘基數（如胺基酸1至50）或該位點的實際殘基（如天冬醯胺至脯胺酸）來指定。特定的多肽或多核苷酸序列也可以藉由解釋其與參考序列的差異來描述。
除非另有說明，否則以下術語應理解為具有以下含義：
「序列同一性」係指兩個或更多個胺基酸（多肽或蛋白質）序列或兩個或更多個核酸（多核苷酸）序列之間的關係，如藉由比較序列確定的。兩個序列之間的同一性較佳的是藉由評估它們在如本文所鑒定的序列的整個長度上的同一性來定義。
在比較兩個或更多個核苷酸或胺基酸序列的同一性時，第一序列和第二序列之間的序列同一性百分比可以使用熟悉該項技術者已知的方法計算，例如，藉由將第一序列中與第二序列中相應位置的殘基相同的殘基數除以第一序列中殘基的總數乘以100%或藉由使用已知的電腦演算法進行序列比對，例如NCBI Blast，例如BLASTN和BLASTP（Altschul, S. F.等人, J. Mol. Biol.[分子生物學雜誌] 215:403-410 (1990)）、GCG套裝程式（Devereux, J.,等人, Nucleic Acids Research[核酸研究] 12 (1): 387 (1984)）、BestFit、FASTA和EMBOSS Needle（Madeira, F.,等人, Nucleic Acids Research[核酸研究] 47(W1): W636-W641 (2019)）。
「結合親和力」通常係指分子（例如，如本文所描述的LTβR結合蛋白）的單個結合位點與其結合配偶體（例如，人LTβR）之間的非共價相互作用的總和的強度。除非另有說明，否則如本文所用，「結合親和力」係指內在結合親和力，其反映了結合對成員（例如，LTβR結合蛋白和LTβR）之間的1 : 1相互作用。分子X對其配偶體Y的親和力通常可以表示為解離常數（KD）。親和力可以用本領域已知的多種方式測量和/或表示，包括但不限於平衡解離常數（K D）和平衡締合常數（K A）。K D係根據k off/k on的商計算的，而K A係根據k on/k off的商計算的。K on係指例如抗體與抗原的締合速率常數，而K off係指例如抗體從抗原中的解離。結合親和力可以使用如本文所描述的和本領域已知的多種技術來確定，例如但不限於平衡方法，例如酶聯免疫吸附測定（ELISA）、KinExA（參見，例如，Rathanaswami等人 Analytical Biochemistry[分析生物化學], 373:52-60 (2008)，特此藉由引用將其全部併入）和放射免疫測定（RIA）；表面電漿共振測定；或其他基於動力學的測定（例如，BIACORE ®分析或Octet®分析（forteBIO））。親和力也可以使用其他方法確定，例如間接結合測定、競爭性結合測定、螢光共振能量轉移（FRET）、凝膠電泳和層析（例如凝膠過濾）。該等方法和其他方法可以對一或多種待檢查的組分使用標記和/或使用多種檢測方法，包括但不限於發色標記、螢光標記、發光標記或者同位素標記。結合親和力和動力學的詳細描述可見於Paul, W. E.編輯，Fundamental Immunology [基礎免疫學], 第4版, Lippincott-Raven [Lippincott-Raven出版社], 費城 (1999)，其集中於抗體-免疫原相互作用。
如本文所用，術語「結合蛋白」係指本領域已知的多種形式的結合蛋白中的任一種。在示例性方面，本揭露之結合蛋白包括 (i) 全長免疫球蛋白分子，即抗體，(ii) 抗體的表位結合片段，以及 (iii) 抗體衍生物，例如多特異性抗體。
如本文所用，術語「抗體」係指具有常規免疫球蛋白形式、包含重鏈及輕鏈且包含可變區及恒定區的蛋白質。例如，抗體可為IgG，其係兩對相同多肽鏈的「Y形」結構，每對具有一條「輕」鏈（典型地具有約25 kDa的分子量）和一條「重」鏈（典型地具有約50-70 kDa的分子量）。抗體具有可變區和恒定區。在IgG形式中，可變區通常是約100-110個或更多個胺基酸，包含三個互補決定區（CDR），並且主要負責抗原識別。
本領域已經描述了抗體CDR的一般結構和特性。簡言之，在抗體支架中，CDR嵌埋於重鏈及輕鏈可變區中的框架內，在這裡其構成主要負責抗原結合及識別的區域。可變區典型地包含至少三個重鏈CDR或輕鏈CDR（Kabat等人, 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest [有免疫學意義的蛋白質序列], Public Health Service [公共衛生署] N.I.H., Bethesda [貝塞斯達], Md. [馬里蘭州]；還參見Chothia和Lesk, 1987, J. Mol. Biol.[分子生物學雜誌] 196:901-917；Chothia等人, 1989, Nature [自然] 342: 877-883），位於框架區內（由Kabat等人, 1991指定框架區1-4、FR1、FR2、FR3、和FR4；還參見Chothia和Lesk, 1987, 同上）。
抗體可以包含本領域已知的任何恒定區。人輕鏈分類為κ輕鏈及λ輕鏈。重鏈分類為μ、δ、γ、α或ε，並且將抗體的同種型分別定義為IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在本發明中，抗體為IgG同種型。IgG具有若干個亞類，包括但不限於IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。輕鏈恒定區可為例如κ型或λ型輕鏈恒定區，例如人κ型或λ型輕鏈恒定區。
抗體的「表位結合片段」涵蓋全長抗體的任何多肽片段、區域、部分或結構域，其表現出與全長抗體相同或基本相似的結合特性，並且可以例如藉由蛋白酶切割完整親本抗體來獲得。
「抗體衍生物」係含有至少一個抗體表位結合結構域的蛋白質或多肽，通常使用重組技術或經由親本抗體或其部分的化學修飾形成。抗體衍生物包含與一或多種親本抗體或其相關部分的胺基酸序列基本相似的胺基酸序列。本揭露之示例性抗體衍生物包括多特異性結合蛋白，例如雙特異性結合蛋白。
如本文所用，術語「表位」係指抗體結合的蛋白質的位點或部分。表位可以由形成構象空間單元的連續胺基酸殘基或不連續胺基酸殘基中的一個或兩個組成。對於不連續表位，來自抗原線性序列不同部分的胺基酸通過蛋白質分子的折疊在3維空間中非常接近。LTβR結合蛋白結合的表位可以藉由如本文所描述的氫/氘交換與質譜偶合來確定。
如本文所用，術語「互補位」係指結合蛋白，例如抗體，與蛋白靶標的表位結合的部分。互補位本質上可為線性的或可為不連續的，由抗體的非連續胺基酸殘基之間的空間關係形成，而不是由一系列線性胺基酸形成。如本文所提及的，「輕鏈互補位胺基酸殘基」、「重鏈互補位胺基酸殘基」或「互補位介面殘基」係指參與同蛋白質靶標結合相互作用的抗體輕鏈和/或重鏈殘基。互補位可以包含單個重鏈CDR，例如重鏈CDR3的胺基酸殘基，或來自重鏈CDR（HCDR1、CDR2、HCDR3）和輕鏈CDR（LCDR1、LCDR2和LCDR3）的胺基酸殘基的組合。如本文所證明的，互補位不需要CDR的所有胺基酸殘基，並且不需要來自所有六個CDR的胺基酸殘基。 LTβR 結合蛋白
本文的揭露涵蓋促效劑淋巴毒素β受體（LTβR）結合蛋白。LTβR（也稱為腫瘤壞死因子（TNF）受體超家族成員3和腫瘤壞死因子受體III型（TNFR-III））是TNF家族成員，在大多數細胞類型（包括成纖維細胞、上皮細胞、單核細胞、樹突狀細胞和髓系細胞）上表現。LTβR不被T或B淋巴細胞表現。LTβR係兩種TNF家族細胞介素配體的受體。該等LTβR配體中的第一個配體係淋巴毒素α和淋巴毒素β亞基的異源三聚體，稱為LTα1β2。LTβR的第二個配體係LIGHT（腫瘤壞死因子配體超家族成員14（TNFSF14））的同源三聚體。LTα1β2和LIGHT與LTβR的結合激活主要涉及NFκB途徑的訊息傳遞途徑。LTβR傳訊參與發育過程中的淋巴結（LN）器官發生和成年後淋巴器官和多種免疫細胞（包括嗜中性球、自然殺手（NK）細胞和恒定自然殺手T（iNKT）細胞）的維持。LTβR在非淋巴器官中稱為三級淋巴結構（TLS）的LN樣細胞簇的形成、以及T細胞跨內皮遷移的關鍵基因的誘導中也發揮著關鍵作用，這兩者均為促進有效抗腫瘤反應的關鍵。
人LTβR係61 kDa跨膜蛋白，其具有SEQ ID NO: 1（同種型1）或SEQ ID NO: 2（同種型2）的胺基酸序列，如下所示。如本文所描述的LTβR結合蛋白與人LTβR結合。在一個實施方式中，本揭露之LTβR結合蛋白與人LTβR的胞外結構域內的一或多個表位（包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基31-227）結合，所述胞外結構域包含四個富含半胱胺酸的結構域（即CRD1-CRD4）。 人LTβR同種型1（UniProtKB No. P36941-1） MLLPWATSAPGLAWGPLVLGLFGLLAASQPQAVPPYASENQTCRDQEKEYYEPQHRICCS RCPPGTYVSAKCSRIRDTVCATCAENSYNEHWNYLTICQLCRPCDPVMGLEEIAPCTSKR KTQCRCQPGMFCAAWALECTHCELLSDCPPGTEAELKDEVGKGNNHCVPCKAGHFQNTSS PSARCQPHTRCENQGLVEAAPGTAQSDTTCKNPLEPLPPEMSGTMLMLAVLLPLAFFLLL ATVFSCIWKSHPSLCRKLGSLLKRRPQGEGPNPVAGSWEPPKAHPYFPDLVQPLLPISGD VSPVSTGLPAAPVLEAGVPQQQSPLDLTREPQLEPGEQSQVAHGTNGIHVTGGSMTITGN IYIYNGPVLGGPPGPGDLPATPEPPYPIPEEGDPGPPGLSTPHQEDGKAWHLAETEHCGA TPSNRGPRNQFITHD (SEQ ID NO: 1) 人LTβR同種型2（UniProtKB No. P36941-2） MEATGISLASQLKVPPYASENQTCRDQEKEYYEPQHRICCSRCPPGTYVSAKCSRIRDTV CATCAENSYNEHWNYLTICQLCRPCDPVMGLEEIAPCTSKRKTQCRCQPGMFCAAWALEC THCELLSDCPPGTEAELKDEVGKGNNHCVPCKAGHFQNTSSPSARCQPHTRCENQGLVEA APGTAQSDTTCKNPLEPLPPEMSGTMLMLAVLLPLAFFLLLATVFSCIWKSHPSLCRKLG SLLKRRPQGEGPNPVAGSWEPPKAHPYFPDLVQPLLPISGDVSPVSTGLPAAPVLEAGVP QQQSPLDLTREPQLEPGEQSQVAHGTNGIHVTGGSMTITGNIYIYNGPVLGGPPGPGDLP ATPEPPYPIPEEGDPGPPGLSTPHQEDGKAWHLAETEHCGATPSNRGPRNQFITHD (SEQ ID NO: 2)
在一個實施方式中，本文所描述的LTβR結合蛋白也結合食蟹猴（cyno）LTβR。cyno LTβR之胺基酸序列如下提供（SEQ ID NO: 3）。在一個實施方式中，本文所描述的LTβR結合蛋白不結合鼠LTβR。在一個實施方式中，本文所描述的LTβR結合蛋白結合人LTβR和食蟹猴LTβR，但不結合鼠LTβR。 Macaca fascicularis （食蟹猴） UniProtKB No. A0A2K5VGQ6 （ SEQ ID NO:3 ）MRLPWATSAPGLAWGPLVLGLFGLLAASQPQVVRKGPVPPYGSENQTCRDQEKEYYEPRH RICCSRCPPGTYVSAKCSRSRDTVCATCAENSYNEHWNYLTICQLCRPCDPVMGLEEIAP CTSKRKTQCRCQPGMFCAAWALECTHCELLSDCPPGTEAELKDEVGKGNNHCVPCKAGHF QNTSSPSARCQPHTRCEDQGLVEAAPGTAQSDTTCRNPSESLPPEMSGTMLMLAILLPLA FFLLLATIFACIWKSHPSLCRKLGSLLKRHPQGEGPNPVAAGRDPPKANPQYPDLVEPLL PISGDVSPVSTGLPTALVSEEGVPQQQSPLDLTTEPQLEPGEQNQVAHGTNGIHVTGGSM TITGNIYIYNGPVLGGPPGPGDLPATPDPPYPIPEEGDPGPPGLSTPHQEDGKAWHLAET EHCGATPSNRGPRSQFITYD
根據本揭露，LTβR結合蛋白為促效劑LTβR結合蛋白，例如，促效劑LTβR抗體、抗體的促效劑LTβR表位結合片段、或促效劑LTβR抗體衍生物（例如，促效劑LTβR雙特異性結合蛋白）。如本文所用，「促效劑LTβR結合蛋白」係一種LTβR結合分子，其藉由與受體結合直接誘導LTβR介導的傳訊，或經由與受體結合並例如藉由使用交聯抗體在細胞表面誘導其更高級的簇集間接誘導LTβR介導的傳訊。本揭露之LTβR結合蛋白與LTβR的結合誘導NFκB傳訊、與T細胞跨內皮遷移相關的基因表現和/或TLS簇形成。用於測量本揭露結合蛋白對LTβR激活和/或LTβR傳訊誘導之測定係本領域已知的並在本文中描述。
在一個實施方式中，藉由測定與促效劑LTβR結合蛋白孵育後表現LTβR的細胞釋放的白血球介素-8（IL8）來測量LTβR激動作用，如本文實例7所述。與不存在相比，在存在本揭露之LTβR結合蛋白的情況下，細胞IL8釋放水平的增加表明LTβR結合蛋白作為促效劑LTβR結合蛋白。在另一個實施方式中，藉由測定內皮細胞之反式激活來測量LTβR激動作用。LTβR介導的內皮細胞反式激活可以藉由測定以下來測量：黏附分子（例如血管細胞黏附蛋白1（VCAM1；也稱為CD106）和/或細胞內黏附分子1（ICAM；也稱為CD54））的內皮細胞表現，和/或炎性趨化因子例如CCL5、CCL2和CXCL10的表現或分泌。與不存在促效劑LTβR結合蛋白相比，在存在其的情況下，內皮細胞VCAM或ICAM表現增加表明LTβR結合蛋白作為促效劑LTβR結合蛋白。類似地，與不存在LTβR結合蛋白相比，在存在其的情況下，CCL5、CCL2和/或CXCL10的內皮細胞表現或分泌增加表明LTβR結合蛋白作為促效劑LTβR結合蛋白。
在一個實施方式中，相對於在不存在促效劑LTβR結合蛋白情況下的LTβR傳訊活性，本文所描述的LTβR結合蛋白的促效劑活性誘導LTβR傳訊活性增加至少10%，如藉由例如IL8釋放或內皮細胞反式激活測量的。在一個實施方式中，相對於在不存在促效劑LTβR結合蛋白的情況下的LTβR傳訊水平，本文所描述的LTβR結合蛋白使LTβR傳訊活性增加至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%。在一個實施方式中，相對於在不存在促效劑LTβR結合蛋白的情況下的LTβR傳訊水平，本文所描述的LTβR結合蛋白使LTβR傳訊活性增加至少100%。
在一個實施方式中，本文所描述的LTβR結合蛋白的促效劑活性使用如上文所述之一或多個體外功能終點來測量，並且該活性表示為半最大有效濃度（EC 50）。在一個實施方式中，本文所描述的LTβR結合蛋白的EC 50在約1 pM至約500 pM、約1 pM至約250 pM、約1 pM至約200 pM、約1 pM至約150 pM、約1 pM至約125 pM、約1 pM至約100 pM、約1 pM至約90 pM、約1 pM至約80 pM、約1 pM至70 pM、約1 pM至約60 pM、約1 pM至約50 pM、約1 pM至約40 pM、約1 pM至約30 pM、約1 pM至200 pM、約10 pM至約200 pM、約20 pM至約200 pM、約30 pM至約200 pM、約40 pM至約200 pM、約50 pM至約200 pM、約60 pM至約200 pM內。在一個實施方式中，如本文所描述的促效劑LTβR結合蛋白介導的IL-8釋放的EC 50為約10 pM至約200 pM、約20 pM至約150 pM、或約30 pM至約140 pM。
在一個實施方式中，如本文所描述的LTβR結合蛋白結合並激動人LTβR，同時允許內源性LTβR配體與受體結合並產生活性。如上所述，LTβR結合至少兩種不同的內源性配體，即LIGHT和LTα1β2。當本揭露之LTβR結合蛋白與LTβR的其相應表位結合時，LIGHT或LTα1β2中的至少一種也可以與LTβR結合以激活內源性配體介導的傳訊活性。因此，在一個實施方式中，本文所描述的LTβR結合蛋白的結合不抑制、阻止或排除LTα1β2與LTβR的結合。在一個實施方式中，本文所描述的LTβR結合蛋白的結合不抑制、阻止或排除LIGHT與LTβR的結合。在一個較佳的實施方式中，本文所描述的LTβR結合蛋白的結合不抑制、阻止或排除LIGHT與LTβR的結合或LTα1β2與LTβR的結合。
促效劑LTβR結合蛋白的這種功能特徵，本文稱為「非配體阻斷活性」，係本揭露之促效劑LTβR結合蛋白的有益特徵，因為它在將結合蛋白投與給例如患者時使安全性最大化。此外，本文所描述的LTβR結合蛋白優先以交聯依賴性方式激動LTβR，即結合分子必須與LTβR和另一種蛋白（例如，Fc受體或靶向蛋白）結合以誘導LTβR激活。從安全角度來看，這兩個特性提供了優越的分子。如果結合分子以非交聯依賴性方式結合LTβR，例如，它僅與LTβR結合，則其結合不會激動受體。此外，由於LTβR結合蛋白以不阻斷內源性配體結合的方式結合LTβR，因此其結合也將不會無意中拮抗或阻斷內源性配體介導的活性。
在一個實施方式中，如本文所描述的促效劑LTβR結合蛋白的非配體阻斷活性之特徵在於其結合對LIGHT和LTα1β2與LTβR結合的抑制百分比。在一個實施方式中，本揭露之結合蛋白與LTβR結合對LIGHT與LTβR結合（≤ 20%抑制）或LTα1β2與LTβR結合（≤ 20%抑制）的抑制或阻斷可忽略不計，如藉由下文所描述的基於細胞的受體-配體測定測量的（另參見實例8）。例如，如本文所描述的結合蛋白與LTβR結合抑制LIGHT與LTβR結合的 ≤ 20%、LTα1β2與LTβR結合的 ≤ 20%、或LIGHT和LTα1β2與LTβR結合的 ≤ 20%，如藉由本文所描述的基於細胞的受體-配體測定測量的。在一個實施方式中，如本文所描述的LTβR結合蛋白抑制LIGHT與LTβR結合或LTα1β2與LTβR結合的 ＜ 20%、＜ 15%、＜ 10%、＜ 9%、＜ 8%、＜ 7%、＜ 6%、＜ 5%、＜ 4%、＜ 3%、＜ 2%或 ＜ 1%。在一個實施方式中，如本文所描述的結合蛋白與LTβR結合抑制LIGHT與LTβR結合的 ＜ 15%或抑制LTα1β2與LTβR結合的 ＜ 15%，如藉由本文所描述且實例8.2中示例的基於細胞的受體配體測定測量的。在一個實施方式中，如本文所描述的結合蛋白與LTβR結合抑制LIGHT與LTβR結合的 ＜ 15%且抑制LTα1β2與LTβR結合的 ＜ 15%，如藉由本文所描述且實例8.2中示例的基於細胞的受體配體測定測量的。在一個實施方式中，本文所描述的結合蛋白與LTβR結合抑制LIGHT與LTβR結合的 ＜ 10%或抑制LTα1β2與LTβR結合的 ＜ 10%，如藉由本文所描述的基於細胞的受體配體測定測量的。在一個實施方式中，本文所描述的結合蛋白與LTβR結合抑制LIGHT與LTβR結合的 ＜ 10%且抑制LTα1β2與LTβR結合的 ＜ 10%，如藉由本文所描述的基於細胞的受體配體測定法測量的。在一個實施方式中，本文所描述的結合蛋白與LTβR結合抑制LIGHT與LTβR結合的 ＜ 5%或抑制LTα1β2與LTβR結合的 ＜ 5%，如藉由本文所描述的基於細胞的受體配體測定測量的。在一個實施方式中，本文所描述的結合蛋白與LTβR結合抑制LIGHT與LTβR結合的 ＜ 5%且抑制LTα1β2與LTβR結合的 ＜ 5%，如藉由本文所描述的基於細胞的受體配體測定法測量的。較佳的是，本文所描述的結合蛋白與LTβR結合抑制LIGHT與LTβR結合的0%或抑制LTα1β2與LTβR結合的0%，如藉由本文所描述的基於細胞的受體配體測定測量的。更較佳的是，本文所描述的結合蛋白與LTβR結合抑制LIGHT與LTβR結合的0%且抑制LTα1β2與LTβR結合的0%，如藉由本文所描述的基於細胞的受體配體測定測量的。不抑制LIGHT與LTβR結合且不抑制LTα1β2與LTβR結合（即，表現出對LIGHT與LTβR結合0%抑制且對LTα1β2與LTβR結合0%抑制）的本文所描述的示例性LTβR結合蛋白包括但不限於與LTβR的CRD4結構域結合的促效劑LTβR結合蛋白。
可替代地，如本文所描述的促效劑LTβR結合蛋白的非配體阻斷活性之特徵在於，在結合促效劑LTβR結合蛋白存在下發生的內源性LTβR配體結合的百分比。在一個實施方式中，如本文所描述的結合蛋白與LTβR結合允許發生至少80%的內源性LTβR配體（即LIGHT或LTα1β2）結合，如藉由本文所描述的基於細胞的受體-配體測定測量的（參見實例8.2）。在一個實施方式中，如本文所描述的結合蛋白與LTβR結合允許發生至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的LIGHT與LTβR結合或LTα1β2與LTβR結合。在一個實施方式中，如本文所描述的結合蛋白與LTβR結合允許發生至少90%的LIGHT與LTβR結合或允許發生至少90%的LTα1β2配體與LTβR結合，如藉由本文所描述且實例8中示例的基於細胞的受體-配體測定測量的。在一個實施方式中，如本文所描述的結合蛋白與LTβR結合允許發生至少90%的LIGHT與LTβR結合且允許發生至少90%的LTα1β2配體與LTβR結合，如藉由本文所描述且實例8中示例的基於細胞的受體-配體測定測量的。在一個實施方式中，如本文所描述的結合蛋白與LTβR結合允許發生至少95%的LIGHT與LTβR結合或允許發生至少95%的LTα1β2配體與LTβR結合，如藉由本文所描述且實例8中示例的基於細胞的受體-配體測定測量的。在一個實施方式中，如本文所描述的結合蛋白與LTβR結合允許發生至少95%的LIGHT與LTβR結合且允許發生至少95%的LTα1β2配體與LTβR結合，如藉由本文所描述且實例8中示例的基於細胞的受體-配體測定測量的。較佳的是，如本文所描述的結合蛋白與LTβR結合允許發生100%的LIGHT與LTβR結合或允許發生100%的LTα1β2配體與LTβR結合，如藉由實例8中所描述的基於細胞的基於受體-配體的測定測量的。更較佳的是，如本文所描述的結合蛋白與LTβR結合允許發生100%的LIGHT與LTβR結合且允許發生100%的LTα1β2配體與LTβR結合，如藉由實例8中所描述的基於細胞的基於受體-配體的測定測量的。允許LIGHT與LTβR結合的100%和LTα1β2與LTβR結合的100%的本文所描述的示例性促效劑LTβR結合蛋白係與LTβR的CRD4結構域結合的促效劑LTβR結合蛋白。
本文所描述的促效劑LTβR結合蛋白的非配體阻斷活性使用基於細胞的受體-配體結合測定進行測量和定量。該測定測量在本揭露之促效劑LTβR結合蛋白存在下對LIGHT和/或LTα1β2與LTβR結合的抑制百分比（參見實例8）。這種基於細胞的受體-配體結合測定涉及將表現LTβR的細胞與含有促效劑LTβR結合蛋白的細胞培養基在4°C下孵育1小時，以使促效劑LTβR結合蛋白結合細胞上表現的LTβR。合適的表現LTβR的細胞包括任何自然表現LTβR的細胞類型，例如內皮細胞、巨噬細胞、自然殺手細胞等，以及被工程化以表現LTβR的細胞，例如用LTβR表現載體轉染的細胞系（例如CHO細胞、HEK 293細胞、黑色素瘤細胞等）。細胞培養基中促效劑LTβR結合蛋白的濃度為有效地使表現LTβR的細胞表現的所有LTβR的結合飽和的濃度。例如，細胞培養基中促效劑LTβR結合蛋白的濃度為濃度5-30 nM，以使表現LTβR的細胞表現的所有LTβR的結合飽和。該測定進一步涉及在與促效劑LTβR結合蛋白孵育後，在配體與LTβR有效結合的條件下，將表現LTβR的細胞與可檢測的LIGHT配體、可檢測的LTα1β2配體或兩者（即可檢測的LIGHT和LTα1β2配體）相互作用。藉由將LIGHT和LTα1β2配體直接偶合到可檢測的標記（例如螢光標記或標籤）使其係可檢測的。使用合適的手段（例如，螢光激活的細胞分選），在促效劑LTβR結合蛋白存在下，對可檢測的LIGHT和/或LTα1β2配體與表現LTβR的細胞的結合進行檢測。配體結合抑制的定量評估係藉由將在存在促效劑LTβR結合蛋白下LIGHT和/或LTα1β與LTβR的結合水平與在不存在促效劑LTβR結合蛋白下LIGHT和/或LTα1β與LTβR的相應結合水平進行比較來確定的。最低限度抑制（≤ 20%抑制）或不抑制（0%抑制）LIGHT或LTα1β2配體與LTβR結合的促效劑LTβR結合蛋白被鑒定為適用於本文所描述之方法。在流式細胞儀上經由FAC，在存在或不存在LTβR結合蛋白的情況下，對可檢測的LIGHT和/或LTα1β2配體與表現LTβR的細胞的結合進行檢測。
本文所描述的示例性促效劑LTβR結合蛋白表現出所期望的功能特性（例如，cyno和人LTβR結合和非配體阻斷活性），部分原因是LTβR的表位與促效劑LTβR結合蛋白結合。在一個實施方式中，本文所揭露的LTβR結合蛋白與包含胞外結構域的富含半胱胺酸結構域（CRD）的一或多個片段的LTβR的表位結合，即CRD1、CRD2、CRD3或CRD4的一或多個殘基。人LTβR胞外結構域如下SEQ ID NO: 4所示。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白與包含LTβR的CRD1殘基的表位結合。LTβR的CRD1包含SEQ ID NO: 4的殘基12-51，其對應於SEQ ID NO: 1之全長LTβR的殘基42-81。在一個實施方式中，本揭露之LTβR結合蛋白與包含LTβR CRD2的殘基的表位結合。LTβR CRD2包含SEQ ID NO: 4的殘基52-94，其對應於SEQ ID NO: 1之全長LTβR的殘基82-124。在一個實施方式中，本揭露之LTβR結合蛋白與包含LTβR CRD3的殘基的表位結合。LTβR CRD3包含SEQ ID NO: 4的殘基95-138，其對應於SEQ ID NO: 1之全長LTβR的殘基125-168。在一個實施方式中，本揭露之LTβR結合蛋白與包含LTβR CRD4的殘基的表位結合。LTβR CRD4包含SEQ ID NO: 4的殘基139-181，其對應於SEQ ID NO: 1之全長LTβR胺基酸序列的殘基168-211。 QAVPPYASENQTCRDQEKEYYEPQHRICCSRCPPGTYVSAKCSRIRDTVCATCAENSYNEHWNYLTICQLCRPCDPVMGLEEIAPCTSKRKTQCRCQPGMFCAAWALECTHCELLSDCPPGTEAELKDEVGKGNNHCVPCKAGHFQNTSSPSARCQPHTRCENQGLVEAAPGTAQSDTTCKNPLEPLPPEMSGTMLM (SEQ ID NO: 4)
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白與包含人LTβR的胞外CRD2和CRD3的殘基的表位結合。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白與包含SEQ ID NO: 4之位置56-64處的一或多個殘基的CRD2內的表位結合，並與包含SEQ ID NO: 4之位置81-101處的一或多個殘基的跨越CRD2和CRD3的表位結合，如藉由氫/氘交換（HDX）質譜（MS）確定的。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白與CRD2和CRD3的上述區域結合，而不與CRD2和CRD3之外的LTβR區域結合。換句話說，在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白與LTβR中由CRD2和CRD3內的一或多個殘基組成的區域結合。LTβR結合蛋白與LTβR的已鑒定區域的結合激動受體傳訊，同時允許內源性LTβR配體結合。結合該表位的促效劑LTβR結合蛋白也結合cyno LTβR。具有該等特性之示例性促效劑LTβR結合蛋白在本文中被鑒定為LIBC219058（19324）和LIBC218990（19320）。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白與包含人LTβR的胞外CRD1的殘基的表位結合。在一個實施方式中，本文所描述的促效劑LTβR結合蛋白與包含SEQ ID NO: 4之位置3-9、20-29和/或38-47處的一或多個殘基的CRD1內的表位結合，如藉由HDX MS確定的。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白與CRD1的上述區域結合，而不與CRD1之外的LTβR區域結合。換句話說，在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白與LTβR中由CRD1內的殘基組成的區域結合。LTβR結合蛋白與LTβR的該表位的結合激動受體傳訊，同時允許內源性LIGHT配體與LTβR結合，並最低限度地抑制LTα1β2配體結合（≤ 20%）。結合該表位的促效劑LTβR結合蛋白也結合cyno LTβR。具有該等特性的示例性促效劑LTβR結合蛋白在本文中被鑒定為LIBC218994（19321）。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白與包含人LTβR的胞外CRD1的殘基的表位結合。在一個實施方式中，本文所描述的促效劑LTβR結合蛋白與包含SEQ ID NO: 4之位置1-19處的一或多個殘基的CRD1內的表位結合，如藉由HDX MS確定的。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白與CRD1的上述區域結合，而不與CRD1之外的LTβR區域結合。換句話說，在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白與LTβR中由CRD1內的殘基組成的區域結合。LTβR結合蛋白與LTβR的該表位的結合激動受體傳訊，並且不抑制內源性LIGHT與LTβR結合，以及不抑制內源性LTα1β2與LTβR結合。結合該表位的促效劑LTβR結合蛋白也結合cyno LTβR。具有該等特性的示例性促效劑LTβR結合蛋白在本文中被鑒定為LIBC219051（19323）。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白與包含人LTβR的胞外CRD4的殘基的表位結合。在一個實施方式中，本文所描述的促效劑LTβR結合蛋白與包含LTβR的胞外結構域（SEQ ID NO: 4）（SEQ ID NO: 1的殘基197-209）的位置168-179處的一或多個殘基的CRD4內的表位結合，如藉由HDX MS確定的。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白與CRD4的上述區域結合，而不與CRD4之外的LTβR區域結合。換句話說，在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白與LTβR中由CRD4內的殘基組成的區域結合。促效劑LTβR結合蛋白與LTβR的該表位的結合激動受體傳訊，並且不抑制內源性LIGHT與LTβR結合，以及不抑制內源性LTα1β2與LTβR結合。結合該表位的促效劑LTβR結合蛋白也結合cyno LTβR。具有該等特性的示例性促效劑LTβR結合蛋白在本文中被鑒定為LIBC219081（19325）和LIBC218979（19319）。
與本文揭露的示例性促效劑LTβR結合蛋白具有相同或重疊表位的LTβR結合蛋白將相互競爭結合LTβR。因此，在一個實施方式中，本揭露之示例性促效劑LTβR結合蛋白與LIBC219081（19325）和/或LIBC218979（19319）競爭結合CRD4。「競爭」或「與……競爭」意指LTβR結合蛋白競爭靶標上的相同表位或結合位點。這樣的競爭可以藉由其中參考促效劑LTβR結合蛋白（例如促效劑LTβR結合蛋白LIBC219081（19325）和LIBC218979（19319））阻止或抑制測試LTβR結合蛋白的特異性結合的測定來確定。本文在實例9.2中描述了示例性競爭性結合測定，其可用於鑒定本揭露所涵蓋的競爭性結合LTβR的CRD4的促效劑LTβR結合蛋白。通常，當競爭性LTβR結合蛋白過量存在時，其將抑制參考促效劑LTβR結合蛋白與共同表位的結合至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、或至少75%。在一些情況下，參考促效劑LTβR結合蛋白與LTβR的結合被抑制至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或更多。本文描述了本揭露之示例性促效劑LTβR結合蛋白，其與本文鑒定為LIBC219081（19325）和LIBC218979（19319）的結合蛋白競爭結合LTβR的CRD4結構域（參見表2-4和6-8）。
本揭露之促效劑LTβR結合蛋白係結合並激動LTβR的蛋白質，而不阻斷或抑制一種或兩種內源性LTβR配體結合LTβR。本文所描述的LTβR結合蛋白包含一或多個胺基酸結合結構域，該等胺基酸結合結構域單獨或組合結合LTβR區域並激活受體的傳訊活性。視需要，該促效劑LTβR結合蛋白進一步包含支架或框架部分，其允許一或多個結合結構域採用促進一或多個結合結構域和LTβR之間結合相互作用的構象。示例性LTβR結合蛋白包括但不限於LTβR抗體（即免疫球蛋白）、LTβR抗體的表位結合片段、和LTβR抗體衍生物，本文更詳細地描述了其中的每一種。
本文揭露的促效劑LTβR結合蛋白與LTβR的胞外結構域內的其相應表位結合。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白比替代表位更頻繁、更快速、以更長持續時間和/或更大親和力或親合力結合LTβR的胞外結構域的CRD4內的表位殘基（即SEQ ID NO: 4（ECD）的殘基139-181；SEQ ID NO: 1（全長LTβR）的殘基169-211）。在一個實施方式中，本文所描述的促效劑LTβR結合蛋白與LTβR的胞外CRD4結構域的任何2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個胺基酸殘基結合，特別是SEQ ID NO: 4的168-179的一或多個殘基或SEQ ID NO: 4的168-178的一或多個殘基。
根據本揭露，促效劑LTβR結合蛋白以緊密結合親和力結合LTβR，如由10 -7M或更小的平衡解離常數（K D）值確定的。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白（例如，LTβR抗體、表位結合片段或抗體衍生物）以小於10 -7M、小於10 -8M、小於10 -9M、小於10 -10M、或小於10 -11M、小於10 -12M或小於10 -13M的平衡解離常數或K D（k off/k on）（值越低指示結合親和力越緊密）結合人LTβR。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白（例如，抗體、表位結合片段和抗體衍生物）結合人LTβR，其平衡解離常數或K D（k off/k on）在約10 -7M和約10 -11M之間、約10 -7M和約10 -10M之間、約10 -7M和約10 -9M之間、約10 -7M和約10 -8M之間、約10 -8M和約10 -9M之間、約10 -9M和約10 -10M之間、約10 -10M和約10 -11M之間、約10 -11M和約10 -12M之間、約10 -12M和約10 -13M之間。在任何實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白特異性結合人LTβR，其K D在約10 -8M和約10 -11M之間或在約10 -9M和約10 -10M之間。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白（例如，抗體、表位結合片段和抗體衍生物）特異性結合人LTβR，其平衡解離常數或K D（k off/k on）在約0.01 mM和約10 nM之間、約0.01 nM和約9 nM之間、約0.01 nM和約8 nM之間、約0.01 nM和約7 nM之間、約0.01 nM和約6 nM之間、約0.01 nM和約5 nM之間、約0.01 nM和約4 nM之間、約0.01 nM和約3 nM之間、約0.01 nM和約2 nM之間、約0.01 nM和約1 nM之間、約0.1 nM和約10 nM之間、約0.1 nM和約9 nM之間、約0.1 nM和約8 nM之間、約0.1 nM和約7 nM之間、約0.1 nM和約6 nM之間、約0.1 nM和約5 nM之間、約0.1 nM和約4 nM之間、約0.1 nM和約3 nM之間、約0.1 nM和約2 nM之間、約0.1 nM和約1 nM之間、或約0.01 nM和約0.1 nM之間。
與人LTβR結合的本揭露之促效劑LTβR結合蛋白也以相同或相似的親和力與食蟹猴（cyno）LTβR結合。cyno LTβR的胺基酸序列在本文中提供為SEQ ID NO: 3。在示例性方面，本文所描述的促效劑LTβR結合蛋白與食蟹猴LTβR結合，其K D在約10 -7M和約10 -8M之間、約10 -8M和約10 -9M之間、約10 -9M和約10 -10M之間、約10 -10M和約10 -11M之間、約10 -11M和約10 -12M之間。在任何實施方式中，本揭露之LTβR結合蛋白 特異性結合cyno LTβR，其K D在約10 -8M和約10 -10M之間。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白（例如，抗體、表位結合片段和抗體衍生物）與食蟹猴（cyno）LTβR結合，其平衡解離常數或K D（k off/k on）在約0.1 nM和約30 nM之間、約0.1 nM和約20 nM之間、約0.1 nM和約10 nM之間、約0.1 nM和約9 nM之間、約0.1 nM和約8 nM之間、約0.1 nM和約7 nM之間、約0.1 nM和約6 nM之間、約0.1 nM和約5 nM之間、約0.1 nM和約4 nM之間、約0.1 nM和約3 nM之間、約0.1 nM和約2 nM之間、或約0.1 nM和約1 nM之間。
本揭露之促效劑LTβR結合蛋白以高親和力與人LTβR和cyno LTβR結合。例如，該促效劑LTβR結合蛋白對人LTβR的K D係在促效劑LTβR結合蛋白對cyno LTβR的K D的約100倍、約50倍、約25倍、約10倍、約5倍或約2倍或更少以內。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白對人LTβR的K D係促效劑LTβR結合蛋白對cyno LTβR的K D的約10倍或更少。
如本文揭露的促效劑LTβR結合蛋白與LTβR胞外結構域結合，其親和力的K D對應於比其與非特異性抗原（例如，TNFR-I或TNFR-II等）結合的親和力低至少10倍，例如低至少100倍，例如低至少1,000倍，例如低至少10,000倍，例如低至少100,000倍。親和力降低的量取決於結合蛋白對LTβR的K D，因此當該促效劑LTβR結合蛋白的K D非常低（即結合蛋白具有高度特異性）時，對LTβR的親和力低於對非特異性抗原的親和力的量可能為至少10,000倍。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白為LTβR抗體、LTβR抗體的表位結合片段（例如，結合LTβR的Fab、Fab′、F(ab′) 2）或LTβR抗體衍生物（例如，LTβR scFv、微抗體、雙特異抗體或多特異性結合蛋白），如本文所描述的。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白係如本文所定義的抗體。術語「抗體」還包括在重鏈和/或輕鏈的N端和/或C端包含1、2、3、4或5個胺基酸殘基插入或缺失的抗體，其保留與包含不包含該等胺基酸殘基取代、插入或缺失的兩個重鏈和兩個輕鏈的抗體相同或相似的結合和/或功能。
本文所描述的抗體和其他結合分子（即抗體的表位結合片段和抗體衍生物）的重鏈和輕鏈可變區（分別為V H和V L）負責LTβR識別和結合，而重鏈和輕鏈恒定區介導免疫球蛋白與宿主組織或因子的結合，包括免疫系統的多種細胞（例如，效應細胞）和經典補體系統的第一組分（Clq）。在輕鏈和重鏈中，可變區（V）和恒定區（C）由約12個或更多個胺基酸的「J」區連接，重鏈還包括約10個以上胺基酸的「D」區（一般參見Fundamental Immunology [基礎免疫學] 第7章（Paul, W., 編輯, 第2版 Raven Press, 紐約 (1989)，特此藉由引用將其全部併入）。每個輕鏈/重鏈對的可變區形成抗體結合位點，使得完整的免疫球蛋白具有兩個結合位點。
如本文所描述的LTβR抗體和其他LTβR結合蛋白的V H和V L區進一步細分為高變區，稱為「互補決定區」或「CDR」，其散佈在更保守序列的區域內，該區域稱為「框架區」（FR）。重鏈和輕鏈的一或多個可變區CDR內的一或多個殘基形成與抗原（例如LTβR）相互作用的結合結構域。下文更詳細地描述了本揭露之LTβR抗體和結合蛋白的示例性V H和V L結構域序列以及V H和V LCDR序列。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白係LTβR抗體的表位結合片段。如本文所用，術語「片段」、「區域」、「部分」和「結構域」通常旨在係同義詞，除非它們的使用上下文另有說明。例如，可以藉由完整親本抗體的蛋白酶切割來獲得表現出LTβR結合能力的抗體片段（例如，Fab和(Fab′) 2片段）。可替代地，LTβR抗體的表位結合片段係胺基酸序列，其包含這樣的親本抗體的一部分胺基酸序列。本揭露所涵蓋的示例性LTβR結合片段包括但不限於 (i) Fab'或Fab片段，其係包含如上所述之VL、VH、CL和CH1結構域的單價片段；(ii) F(ab') 2片段，其係包含藉由鉸鏈區的二硫鍵連接的兩個Fab片段的二價片段；(iii) 基本上由VH和CH1結構域組成的Fd片段；(iv) 基本上由VL和VH結構域組成的Fv片段；(v) 單個結構域抗體或dAb片段（Ward等人 「Binding Activities Of A Repertoire Of Single Immunoglobulin Variable Domains Secreted From Escherichia coli [大腸桿菌分泌的單個免疫球蛋白可變結構域的庫的結合活性],」 Nature[自然] 341 :544-546 (1989)，特此藉由引用將其全部併入），其基本上由VH或VL結構域（或VH或VL的表位結合部分）組成，也被稱為結構域抗體或奈米抗體（Holt等人 「Domain Antibodies: Proteins For Therapy [結構域抗體：治療用蛋白質],」 Trends Biotechnol.[生物技術趨勢] 21(11):484-490 (2003)；Revets等人 「Nanobodies As Novel Agents For Cancer Therapy [奈米抗體作為癌症治療的新型藥物],」 Expert Opin. Biol. Ther.[生物治療專家觀點] 5(1):111-124 (2005)，特此藉由引用將其全部併入）；和 (vi) 分離的互補決定區（CDR）。
本揭露之促效劑LTβR表位結合片段可以包含如本文揭露的LTβR抗體之1、2、3、4、5或全部6個CDR結構域。在一個實施方式中，LTβR抗體的表位結合片段包含，基本上由，或由親本LTβR抗體的30至100個胺基酸殘基、或50至150個胺基酸殘基、或70至200個胺基酸殘基組成。在一個實施方式中，LTβR抗體的表位結合片段的長度為LTβR抗體長度的至少40%、50%、60%、70%、80%、90%或95%。在一個實施方式中，本揭露之LTβR表位結合片段引發與該片段來源的LTβR抗體相同或相似的活性。在一個實施方式中，如本文所描述的促效劑LTβR表位結合片段和LTβR抗體引發可檢測的LTβR結合活性並誘導LTβR傳訊，如本文揭露的。
LTβR抗體的表位結合片段可以使用熟悉該項技術者已知的常規技術獲得。例如，促效劑LTβR F(ab') 2片段可以藉由用胃蛋白酶處理促效劑LTβR抗體而產生。可以處理所得LTβR F(ab') 2片段以還原二硫鍵以產生LTβR Fab'片段。促效劑LTβR Fab片段可以藉由用木瓜酶處理促效劑LTβR抗體來獲得，LTβR Fab'片段可以藉由胃蛋白酶消化促效劑LTβR抗體來獲得。促效劑LTβR Fab'片段可以藉由用還原劑如二硫蘇糖醇處理促效劑LTβR F(ab') 2片段來獲得。LTβR結合片段也可以藉由在重組細胞中表現編碼這樣的片段的核酸而產生（參見例如，Evans等人 「Rapid Expression Of An Anti-Human C5 Chimeric Fab Utilizing A Vector That Replicates In COS And 293 Cells [利用在COS和293細胞中複製的載體快速表現抗人C5嵌合Fab],」 J. Immunol. Meth.[免疫學方法雜誌] 184:123-38 (1995)，特此藉由引用將其全部併入）。例如，編碼LTβR F(ab') 2片段一部分的嵌合基因可以包括編碼重鏈的CH1結構域和鉸鏈區的DNA序列，然後係翻譯終止密碼子以產生這種截短的抗體片段分子。可以以與抗體相同的方式容易地篩選能夠與LTβR的所需表位結合的合適片段的效用。本揭露之LTβR抗體及其表位結合片段係「分離的」，以便存在於不同於其產生或將天然存在的物理環境中。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白為抗體衍生物。促效劑LTβR抗體衍生物包括含有促效劑LTβR抗體的至少一個表位結合結構域的蛋白質或多肽，其通常使用重組技術形成。促效劑LTβR抗體衍生物也可以或可替代地通過親本LTβR抗體或其部分的化學修飾而獲得。促效劑LTβR抗體衍生物包含與該親本抗體或親本抗體的相關部分的胺基酸序列基本相似的胺基酸序列，例如與該親本LTβR抗體或其相關部分相差小於30%、小於20%、小於10%或小於5%，或與該親本分子或其相關部分相差10個胺基酸殘基，或相差少於10、9、8、7、6、5、4、3或2個胺基酸殘基。
本揭露之示例性促效劑LTβR抗體衍生物係單鏈Fv（scFv）。促效劑LTβR scFv由Fv片段的兩個結構域，即V L區和V H區形成的，該等結構域可能由單獨的基因編碼。使用重組方法，藉由柔性連接基（通常為約10、12、15個或更多個胺基酸殘基）連接這樣的基因序列或其編碼cDNA，使它們能夠製成單個蛋白質鏈，其中V L和V H區結合形成單價表位結合蛋白（參見例如，Bird等人 「Single-Chain Antigen-Binding Proteins [單鏈抗原結合蛋白],」 Science[科學] 242:423-426 (1988)；和Huston等人 「Protein Engineering Of Antibody Binding Sites: Recovery Of Specific Activity In An Anti-Digoxin Single-Chain Fv Analogue Produced In Escherichia coli[抗體結合位點的蛋白質工程：在大腸桿菌中產生的抗地高辛單鏈Fv類似物中比活性的恢復],」 Proc. Natl. Acad. Sci.(U.S.A.)[美國國家科學院院刊] 85:5879-5883 (1988)，特此藉由引用將其全部併入）。
本揭露之另一種示例性促效劑LTβR抗體衍生物係雙特異性scFv。雙特異性LTβR scFv可以藉由使用柔性連接基形成，該柔性連接基使不同單個多肽鏈的V L和V H區（每個具有不同的表位結合特異性）聯繫在一起。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR抗體衍生物係二價或雙價單鏈可變片段，藉由將兩個scFv串聯連接在一起來工程化（即串聯scFv）或使它們二聚化形成雙特異抗體（Holliger等人 「『Diabodies[雙特異抗體]』: Small Bivalent And Bispecific Antibody Fragments [小的雙價和雙特異性抗體片段],」 Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.)[美國國家科學院院刊] 90(14), 6444-8 (1993)；特此藉由引用將其全部併入）。根據本實施方式，雙價串聯scFv或雙特異抗體中的每個scFv可為相同的，即識別相同的LTβR靶表位，或者可為不同的，即識別和結合不同的靶表位。在又另一個實施方式中，該促效劑LTβR抗體衍生物係三抗體，即三價單鏈可變片段，藉由以串聯或三聚體形式將三個scFv連接在一起以形成三抗體來工程化。根據本實施方式，三抗體中的每個scFv可為相同的，即識別相同的靶表位，或者可為不同的，即識別和結合不同的靶表位。在另一個實施方式中，該促效劑LTβR抗體衍生物係四個單鏈可變片段的四抗體，其中每個scFv識別相同或不同的靶表位。在另一個實施方式中，該促效劑LTβR抗體衍生物係「線性抗體」，其係包含一對串聯Fd片段（VH-CH1-VH-CH1）的抗體，其與互補的輕鏈多肽一起形成一對抗原結合區（參見Zapata等人 Protein Eng.[蛋白質工程] 8(10): 1057-1062 (1995)，特此藉由引用將其全部併入）。在另一個實施方式中，該促效劑LTβR抗體衍生物係微抗體，包含與CH3區偶合的單鏈Fv區（即scFv-CH3）。在另一個實施方式中，該促效劑LTβR抗體衍生物係修飾的結構域抗體，例如，修飾的單個VL或VH結構域或藉由肽連接基連接的兩個或更多個VH結構域（參見例如，Ward等人, Nature[自然], 341:544-546 (1989)，特此藉由引用將其全部併入）；大抗體，即與Fc區融合的兩個scFv（參見例如，Fredericks等人, Protein Engineering, Design & Selection [蛋白質工程化、設計和選擇], 17:95-106 (2004)和Powers等人, J. Immunol. Methods [免疫學方法雜誌], 251:123-135 (2001)，特此藉由引用將其全部併入）；或肽體（附接到Fc區的一或多個肽，參見Feige的PCT申請公開案號WO 00/024782，特此藉由引用將其全部併入）。在另一個實施方式中，該促效劑LTβR抗體衍生物係免疫球蛋白融合蛋白，其包含與鉸鏈區多肽和一或多個免疫球蛋白恒定區偶合的促效劑LTβR結合結構域（即，包含一或多個重鏈和/或輕鏈CDR的多肽，如本文所描述的）（參見例如，美國專利申請公開案號20030133939，特此藉由引用將其全部併入）。示例性免疫球蛋白融合蛋白形式包括但不限於IgG-scFv、IgG-Fab、2scFv-IgG、4scFv-IgG、VH-IgG、IgG-VH和Fab-scFv-Fc。
本揭露之另一種示例性促效劑LTβR抗體衍生物係多特異性結合抗體，例如雙特異性或三特異性結合蛋白。本揭露之多特異性促效劑LTβR結合蛋白包含結合LTβR並與一或多個額外結合結構域偶合的第一結合結構域，其中每個額外結合結構域結合非LTβR的靶部分。本揭露之示例性促效劑LTβR多特異性結合蛋白係雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其包含LTβR結合結構域和腫瘤相關抗原結合結構域。雙特異性促效劑LTβR結合蛋白之示例性LTβR結合結構域包括來自本文揭露的任一種LTβR抗體的結合結構域。在一個實施方式中，雙特異性促效劑LTβR結合蛋白包含LTβR結合結構域，該LTβR結合結構域結合包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基169-211的人LTβR富含半胱胺酸的結構域4（CRD4）的一或多個胺基酸殘基。該雙特異性促效劑結合蛋白不抑制LIGHT與LTβR結合，而且不抑制LT1α2β與LTβR結合。
根據本揭露，促效劑LTβR結合蛋白為人促效劑LTβR結合蛋白。人促效劑LTβR結合蛋白包含可變區和恒定區或結構域，其基本上對應於本領域已知的人種系免疫球蛋白序列，包括例如Kabat等人 (1991) 所描述的那些。本文揭露的人促效劑LTβR結合蛋白可以包括非人種系免疫球蛋白序列編碼的胺基酸殘基（例如，藉由體外隨機或位點特異性誘變或藉由體內體細胞突變引入的突變），例如在CDR中，特別是CDR3。本揭露之人促效劑LTβR結合蛋白可以具有至少一個、兩個、三個、四個、五個或更多個被非人種系免疫球蛋白序列編碼的胺基酸殘基替換的位置。本文所用的人促效劑結合蛋白的定義還考慮了完全人抗體，其包括非人工和/或非基因改變的人抗體序列，因為該等可以藉由使用本領域已知的技術或系統（例如，噬菌體展示技術或轉基因小鼠技術，包括但不限於XenoMouse ®，其是能夠產生人抗體的轉基因小鼠）衍生。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白為IgG同種型。同種型的選擇通常將由所期望的效應物功能來指導，例如抗體依賴性細胞毒性（ADCC）誘導。示例性IgG同種型係IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白為IgG1同種型。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白為IgG2同種型。
根據本揭露之所有方面，本文揭露的示例性促效劑LTβR結合蛋白之結合結構域包含一或多個VH和VL CDR，其可以使用本領域已知的任一種標準方法來描述，包括但不限於Kabat編號方案（Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest [免疫學感興趣的蛋白質序列], 第5版, U.S. Dept. of Health and Human Services [美國衛生與公眾服務部], NIH (1991)）、Chothia編號方案（Chothia等人, J. Mol. Biol.[分子生物學雜誌] 196: 901-917 (1987)和Al-Lazikani等人, J. Mol. Biol.[分子生物學雜誌] 273: 927-948 (1997)，特此藉由引用將其全部併入）、Abhinandan編號方案（Abhinandan等人, Mol. Immunol.[分子免疫學] 45: 3832-3839 (2008)，特此藉由引用將其全部併入）、免疫遺傳學（IMGT）數據庫編號方案（Giudicelli等人, Nucl. Acids Res.[核酸研究] 34: D781-784 (2006)和Lefranc等人, Dev. Comp. Immunol.[發育和比較免疫學] 27: 55-77 (2003)，特此藉由引用將其全部併入）、Aho編號方案（Honegger等人, J. Mol. Biol.[分子生物學雜誌] 309: 657-670 (2001)，特此藉由引用將其全部併入）和Contact編號方案（MacCallum等人, J. Mol. Biol.[分子生物學雜誌] 262 732-745 (1996)，特此藉由引用將其全部併入）。根據每個系統，包含CDR的VH和VL區的殘基在下表1中提供。 [ 表 1] . 根據已知編號方案的 VH 和 VL CDR 殘基
環 Kabat AbM Chothia Contact IMGT
L1 L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36 L27-L32
L2 L50-L56 L50-L56 L50-L52 L46-L55 L50-L51
L3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96 L89-L97
H1 H31-H35B （Kabat編號） H26-H35B H26-H32..34 H30-H35B H26-H35B
H1 H31-H35 （Chothia編號） H26-H35 H26-H32 H30-H35 H26-H33
H2 H50-H65 H50-H58 H52-H56 H47-H58 H51-H56
H3 H95-H102 H95-H102 H96-H101 H93-H101 H93-H102
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含表4、8和12中提供的重鏈可變區序列中之任一個的HCDR1、HCDR2和HCDR3，以及表4、8和12中也提供的相應輕鏈可變區的LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中CDR由Kabat編號方案定義。在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含表4、8和12中提供的重鏈可變區序列中之任一個的HCDR1、HCDR2和HCDR3，以及表4、8和12中也提供的相應輕鏈可變區的LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中CDR由Chothia編號方案定義。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含表4、8和12中提供的重鏈可變區序列中之任一個的HCDR1、HCDR2和HCDR3，以及表4、8和12中提供的相應輕鏈可變區的LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中CDR由AbM編號方案定義。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含表4、8和12中提供的重鏈可變區序列中之任一個的HCDR1、HCDR2和HCDR3，以及表4、8和12中也提供的相應輕鏈可變區的LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中CDR由IMGT編號方案定義。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含表4、8和12中提供的重鏈可變區序列中之任一個的HCDR1、HCDR2和HCDR3，以及表4、8和12中也提供的相應輕鏈可變區的LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中CDR由Contact編號方案定義。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白為抗體。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白為雙特異性抗體。 結合 CRD4 的 LT β R 促效劑結合蛋白
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白與包含LTβR的CRD4殘基的表位結合。LTβR的CRD4跨越SEQ ID NO: 4（LTβR ECD）的殘基139-181，其對應於SEQ ID NO: 1（全長LTβR）的殘基169-211。在一個實施方式中，本文所描述的促效劑LTβR結合蛋白與包含LTβR的胞外結構域（SEQ ID NO: 4）（SEQ ID NO: 1的殘基197-209）的位置168-179處的一或多個CRD4殘基的表位結合，如藉由HDX MS確定的。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白與包含LTβR CRD4殘基的表位結合，並且還與CRD4外的一或多個殘基結合。例如，在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白與包含LTβR的CRD4殘基和相鄰CRD3殘基的表位結合。LTβR的CRD3包含SEQ ID NO: 4的殘基95-138，其對應於SEQ ID NO: 1之全長LTβR的殘基125-168。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白與LTβR的CRD4內的LTβR表位結合，而不與如本文定義的CRD4外的LTβR區域結合。換句話說，在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白與由LTβR的CRD4內的殘基組成的表位結合。
促效劑LTβR結合蛋白與LTβR的CRD4結合激動受體傳訊，並且不抑制內源性LTβR配體（即LIGHT或LTα1β2）與受體結合。在一些實施方式中，具有該等特性的促效劑LTβR結合蛋白係抗體。本文揭露了具有該等功能特徵的示例性促效劑LTβR抗體（參見表2-4和6-8）。在一些實施方式中，具有該等特性的促效劑LTβR結合蛋白係雙特異性結合蛋白。具有該等功能特徵的示例性促效劑LTβR雙特異性結合蛋白包含來自本文揭露的示例性促效劑LTβR抗體的LTβR結合結構域。
根據本揭露，具有該等功能特性的促效劑LTβR結合蛋白，即結合LTβR的CRD4殘基且不阻斷LIGHT與LTβR結合或LTα1β2與LTβR結合的結合蛋白，藉由其共用的重鏈可變區（V H）CDR結構定義。該等促效劑LTβR結合蛋白可以藉由其共用的輕鏈可變區（V L）CDR結構進一步定義。這種共用的CDR結構，表現為共有的V HCDR和V LCDR序列，來源於本文揭露的示例性促效劑LTβR結合蛋白的VH和VL結構域的比對（表4），其 (i) 具有上述功能特徵，以及 (ii) 包含分別與LTβR結合蛋白LIBC219081和LIBC 218979的V H和V L胺基酸序列具有至少90%序列同一性的V H和V L胺基酸序列。
因此，在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白，其 (i) 結合LTβR CRD4的殘基和 (ii) 不阻斷LIGHT與LTβR結合，並且不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含由以下定義的共用V HCDR結構：HCDR1胺基酸序列：X 1YX 3MX 5（SEQ ID NO: 5），其中X 1為S或N；X 3為G、D或A；並且X 5為H或Y；HCDR2胺基酸序列：X 1IX 3YDX 6X 7X 8X 9Y X 11X 12DSVKG（SEQ ID NO: 6），其中X 1為A或V；X 3為W或R；X 6為E或G；X 7為S、R或T；X 8為N或K；X 9為K、R或Q；X 11為H或Y；並且X 12為A或E；以及HCDR3胺基酸序列：X 1RX 3X 4X 5X 6X 7X 8X 9YYGX 13X 14V（SEQ ID NO: 7），其中X 1為D或E；X 3為V、G或I；X 4為V、P或A；X 5為A、Y或G；X 6為R、A、G或H；X 7為P或G；X 8為G、N、D、Y、A或H；X 9為Y、T或F；X 13為L或M；並且X 14為D或A。在一些實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白係抗體。在一些實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白係雙特異性結合蛋白。
示例性促效劑LTβR結合蛋白（例如，抗體或雙特異性結合蛋白）的重鏈CDR序列在下表2中提供，其結合LTβR的CRD4，不阻斷LIGHT或LTα1β2結合或活性，並且包含SEQ ID NO: 5的HCDR1、SEQ ID NO: 6的HCDR2和SEQ ID NO: 7的HCDR3。 [表2]：LTβR CRD4結合物的重鏈CDR序列，其與LIBC219081和LIBC218979的Fv結構域具有90%序列同一性
LIBC 編號 HCDR1 HCDR2 HCDR3
SEQ ID SEQ ID SEQ ID
共有的 X 1YX 3MX 5X 1為S、N； X 3為G、A、D X 5為H、Y 5 X 1IX 3YDX 6X 7X 8X 9Y X 11X 12DSVKG X 1為A、V X 3為W、R X 6為E、G X 7為S、R、T X 8為N、K X 9為K、R、Q X 11為H、Y X 12為A、E 6 X 1RX 3X 4X 5X 6X 7X 8X 9YYGX 13X 14V X 1為D、E X 3為V、I、G X 4為V、A、P X 5為A、G、Y X 6為R、A、H、G X 7為P、G X 8為G、N、D、Y、A、H X 9為Y、F、T X 13為L、M X 14為D、A 7
219081 (19325) SYAMH 8 VIWYDGSNQYYADSVKG 9 DRVAAHPAYYYGLDV 10
218979 (19319) SYGMH 11 VIWYDGSNKYYADSVKG 12 ERIAAAPYYYYGMDV 13
1318341 SYAMH 14 VIWYDGTNKYYADSVKG 15 DRVAARPDYYYGMDV 16
1318409 SYAMH 17 VIWYDGSNKYYADSVKG 18 DRVVARPDYYYGMDV 19
1318412 SYAMH 20 VIWYDGRKRYYADSVKG 21 DRIAARPNYYYGLDV 22
1318738 SYDMH 23 VIRYDGSNKYYEDSVKG 24 ERGPYGGNTYYGMDV 25
1319003 SYGMH 26 VIWYDGRKRYYADSVKG 27 DRIAARPNYYYGLDV 28
1319078 SYAMH 29 VIWYDGSNKYYADSVKG 30 DRVAARPNYYYGMAV 31
1319182 SYAMH 32 VIWYDGSNKYYADSVKG 33 DRVVARPDYYYGMDV 34
1319275 SYAMH 35 VIWYDGSNKYYEDSVKG 36 DRVAARPNFYYGMDV 37
1319390 SYAMH 38 VIWYDGSNKYYEDSVKG 39 DRVAARPNFYYGMDV 40
1319499 NYGMY 41 VIWYDESNKYYADSVKG 42 DRIAGRPGYYYGMDV 43
1319908 SYAMH 44 VIWYDGRKRYYADSVKG 45 DRIAARPNYYYGLDV 46
1318496 SYAMH 47 AIWYDGSNKYHADSVKG 48 DRIAARPNYYYGMDV 49
1320038 SYAMH 50 AIWYDGSNKYHADSVKG 51 DRIAARPNYYYGMDV 52
1308929 SYAMH 53 VIWYDGSNKYYADSVKG 54 DRVAARPHYYYGLDV 55
1309633 SYAMH 56 VIWYDGSNKYYADSVKG 57 DRVAARPHYYYGLDV 58
1309682 SYAMH 59 VIWYDGSNKYYADSVKG 60 DRVAARPHYYYGLDV 61
在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白，其 (i) 結合LTβR CRD4的殘基和 (ii) 不阻斷LIGHT與LTβR結合，並且不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含由以下定義的共用V LCDR結構：LCDR1胺基酸序列：SGDX 4LPX 7X 8YX 10Y（SEQ ID NO: 62），其中X 4為A或T；X 7為E、K、Q、D或N；X 8為Q或H；並且X 10為A或T；LCDR2胺基酸序列：KDNERPS（SEQ ID NO: 63）；以及LCDR3胺基酸序列：QSX 3DX 5SX 7X 8YX 10X 11（SEQ ID NO: 64），其中X 3為A或T；X 5為S、G或N；X 7為G或A；X 8為T、S或A；X 10為V或M；並且X 11為I或V。
下表3中提供了示例性促效劑LTβR結合蛋白的輕鏈CDR序列，其結合LTβR的CRD4，不阻斷LIGHT或LTα1β2結合或活性，並且包含SEQ ID NO: 62的LCDR1、SEQ ID NO: 63的LCDR2和SEQ ID NO: 64的LCDR3。 [ 表 3] ：示例性LTβR CRD4結合物的輕鏈CDR，其與LIBC219081和LIBC218979的Fv結構域具有90%序列同一性
LIBC 編號 LCDR1 LCDR2 LCDR3
SEQ ID SEQ ID SEQ ID
共有的 SGDX 4LPX 7X 8YX 10Y X 4為A、T X 7為E、K、Q、D、N X 8為Q、H X 10為A、T 62 KDNERPS 63 QSX 3DX 5SX 7X 8YX 10X 11X 3為A、T X 5為S、G、N X 7為G、A X 8為T、S、A X 10為V、M X 11為I、V 64
219081 (19325) SGDALPNHYAY 65 KDNERPS 66 QSADSSGSYVI 67
218979 (19319) SGDALPKHYAY 68 KDNERPS 69 QSADNTGSYMV 70
1318341 SGDALPDHYTY 71 KDNERPS 72 QSADSSGAYVI 73
1318409 SGDALPQHYTY 74 KDNERPS 75 QSADGSGTYVV 76
1318412 SGDTLPEHYTY 77 KDNERPS 78 QSADSSGAYVV 79
1318738 SGDALPKHYAY 80 KDNERPS 81 QSTDSSATYVV 82
1319003 SGDTLPDHYTY 83 KDNERPS 84 QSADSSGAYVV 85
1319078 SGDTLPNHYTY 86 KDNERPS 87 QSADSSGTYVL 88
1319182 SGDTLPQHYTY 89 KDNERPS 90 QSADSSGSYVV 91
1319275 SGDALPKHYAY 92 KDNERPS 93 QSADSSGTYVV 94
1319390 SGDALPKHYAY 95 KDNERPS 96 QSADSSGTYVV 97
1319499 SGDALPKQYAY 98 KDNERPS 99 QSADSSGAYVV 100
1319908 SGDTLPEHYTY 101 KDNERPS 102 QSADSSGAYVV 103
1318496 SGDTLPNHYTY 104 KDNERPS 105 QSADSSGSYVV 106
1320038 SGDTLPNHYTY 107 KDNERPS 108 QSADSSGSYVV 109
1308929 SGDALPNHYAY 110 KDNERPS 111 QSADSSGSYVV 112
1309633 SGDALPNQYAY 113 KDNERPS 114 QSADSSGSYVV 115
1309682 SGDALPNQYAY 116 KDNERPS 117 QSADSSGSYVV 118
在一個實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白，其結合人LTβR CRD4的殘基和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包括那些具有分別與LTβR結合蛋白LIBC219081的VH和VL胺基酸序列（分別為SEQ ID NO: 121和122）具有至少80%序列同一性的VH和VL胺基酸序列的結合蛋白。在一個實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白，其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包括那些具有分別與LTβR結合蛋白LIBC218979的VH和VL胺基酸序列（分別為SEQ ID NO: 123和124）具有至少80%序列同一性的VH和VL胺基酸序列的結合蛋白。在一個實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白，其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包括那些具有分別與LTβR結合蛋白LIBC219081（分別為SEQ ID NO: 121和122）和LIBC218979（分別為SEQ ID NO: 123和124）的VH和VL胺基酸序列具有至少80%序列同一性的VH和VL胺基酸序列的結合蛋白。
在一個實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白（例如抗體或雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合或 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包括那些具有分別與LTβR結合蛋白LIBC219081的VH和VL胺基酸序列（分別為SEQ ID NO: 121和122）具有至少85%序列同一性的VH和VL胺基酸序列的結合蛋白。在一個實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白，其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包括那些具有分別與LTβR結合蛋白LIBC218979的VH和VL胺基酸序列（分別為SEQ ID NO: 123和124）具有至少85%序列同一性的VH和VL胺基酸序列的結合蛋白。在一個實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白，其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包括那些具有分別與LTβR結合蛋白LIBC219081（分別為SEQ ID NO: 121和122）和LIBC218979（分別為SEQ ID NO: 123和124）的VH和VL胺基酸序列具有至少85%序列同一性的VH和VL胺基酸序列的結合蛋白。
在一個實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白（例如抗體或雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包括那些具有分別與LTβR結合蛋白LIBC219081和LIBC218979的VH和VL胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VH和VL胺基酸序列的結合蛋白。因此，在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 121之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 123之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 121之胺基酸序列和SEQ ID NO: 123之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列。與SEQ ID NO: 121和SEQ ID NO: 123之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的示例性VH胺基酸序列提供在下表4中。
在一個實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白（例如抗體或雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包括那些包含與SEQ ID NO: 121之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列的結合蛋白。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 123之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 121之胺基酸序列和SEQ ID NO: 123之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列。與SEQ ID NO: 121和SEQ ID NO: 123之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的示例性VH胺基酸序列提供在下表4中。
在一個實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白（例如抗體或雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包括那些包含與SEQ ID NO: 122之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列的結合蛋白。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 124之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 122之胺基酸序列和SEQ ID NO: 124之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列。與SEQ ID NO: 122和SEQ ID NO: 124之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的示例性VL胺基酸序列提供在下表4中。
在一個實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白（例如抗體或雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含與SEQ ID NO: 121之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 122之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 121之胺基酸序列具有至少95%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 122之胺基酸序列具有至少95%序列同一性的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 121之胺基酸序列具有至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 122之胺基酸序列具有至少98%序列同一性的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白（例如抗體或雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含與SEQ ID NO: 123之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 124之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 123之胺基酸序列具有至少95%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 124之胺基酸序列具有至少95%序列同一性的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 123之胺基酸序列具有至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 124之胺基酸序列具有至少98%序列同一性的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白（例如抗體或雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含與SEQ ID NO: 121之胺基酸序列和SEQ ID NO: 123之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 122之胺基酸序列和SEQ ID NO: 124之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 121之胺基酸序列和SEQ ID NO: 123之胺基酸序列具有至少95%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 122之胺基酸序列和SEQ ID NO: 124之胺基酸序列具有至少95%序列同一性的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 121之胺基酸序列和SEQ ID NO: 123之胺基酸序列具有至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 122之胺基酸序列和SEQ ID NO: 124之胺基酸序列具有至少98%序列同一性的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白（例如抗體或雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含與SEQ ID NO: 121或SEQ ID NO: 123的VH胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列並且包含如下HCDR1胺基酸序列：X 1YX 3MX 5（SEQ ID NO: 5），其中X 1為S或N；X 3為G、D或A；並且X 5為H或Y；HCDR2胺基酸序列：X 1IX 3YDX 6X 7X 8X 9Y X 11X 12DSVKG（SEQ ID NO: 6），其中X 1為A或V；X 3為W或R；X 6為E或G；X 7為S、R或T；X 8為N或K；X 9為K、R或Q；X 11為H或Y；並且X 12為A或E；以及HCDR3胺基酸序列：X 1RX 3X 4X 5X 6X 7X 8X 9YYGX 13X 14V（SEQ ID NO: 7），其中X 1為D或E；X 3為V、G或I；X 4為V、P或A；X 5為A、Y或G；X 6為R、A、G或H；X 7為P或G；X 8為G、N、D、Y、A或H；X 9為Y、T或F；X 13為L或M；並且X 14為D或A。與SEQ ID NO: 121或SEQ ID NO: 123之胺基酸序列的VH具有90%序列同一性和包含SEQ ID NO: 5、6和7的HCDR序列的促效劑LTβR結合蛋白的示例性VH胺基酸序列提供在下表4中。
該等促效劑LTβR結合蛋白進一步可以包含與SEQ ID NO: 122或SEQ ID NO: 124的VL胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列並且包含以下LCDR1胺基酸序列：SGDX 4LPX 7X 8YX 10Y（SEQ ID NO: 62），其中X 4為A或T；X 7為E、K、Q、D或N；X 8為Q或H；並且X 10為A或T；LCDR2胺基酸序列：KDNERPS（SEQ ID NO: 63）；以及LCDR3胺基酸序列：QSX 3DX 5SX 7X 8YX 10X 11（SEQ ID NO: 64），其中X 3為A或T；X 5為S、G或N；X 7為G或A；X 8為T、S或A；X 10為V或M；並且X 11為I或V。與SEQ ID NO: 122或SEQ ID NO: 124之胺基酸序列的VL具有90%序列同一性和包含SEQ ID NO: 62、63和64的LCDR序列的促效劑LTβR結合蛋白的示例性VL胺基酸序列提供在下表4中。
在一個實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白（例如抗體或雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含以下VH胺基酸序列：QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSX 31YX 33MX 35WVRQAPGKGLEWVAX 50IX 52YDX 55X 56X 57X 58YX 60X 61DSVKGRFTISRDNSKNTLSLQMNSLRAEDTAVYYCARX 99RX 101X 102X 103X 104X 105X 106X 107YYGX 111X 112VWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 119)，其中X 31為S或N；X 33為G或A；X 35為H或Y；X 50為A或V；X 52為W或R；X 55為E或G；X 56為S、R或T；X 57為N或K；X 58為K、R或Q；X 60為H或Y；X 61為A或E；X 99為D或E；X 101為V、G或I；X 102為V、P或A；X 103為A、Y或G；X 104為R、A、G或H；X 106為G、N、D、Y、A或H；X 107為Y、T或F；X 111為L或M；並且X 112為D或A。
在一個實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白（例如抗體或雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含以下VL胺基酸序列：SYELTQPPSVSVSPRQTARITCSGDX 26LPX 29X 30YX 32YWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSX 90DX 92SX 94X 95YX 97X 98FGGGTKLTVLG (SEQ ID NO: 120)，其中X 26為A或T；X 29為E、K、Q、D或N；X 30為Q或H；X 32為A或T；X 90為A或T；X 92為S、G或N；X 94為G或A；X 95為T、S或A；X 97為V或M；並且X 98為I或V。
在一個實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白（例如抗體或雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含VH，其中該VH包含SEQ ID NO: 119之胺基酸序列，並且與SEQ ID NO: 121的VH胺基酸序列和/或SEQ ID NO: 123的VH胺基酸序列共用至少90%序列同一性。該促效劑LTβR結合蛋白進一步包含VL，其中該VL包含SEQ ID NO: 120之胺基酸序列，並且與SEQ ID NO: 122的VL胺基酸序列和/或SEQ ID NO: 124的VL胺基酸序列共用至少90%序列同一性。
在一個實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白（例如抗體或雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含VH，其中該VH包含SEQ ID NO: 119之胺基酸序列，並且與SEQ ID NO: 121的VH胺基酸序列和/或SEQ ID NO: 123的VH胺基酸序列共用至少95%序列同一性。該促效劑LTβR結合蛋白進一步包含VL，其中該VL包含SEQ ID NO: 120之胺基酸序列，並且與SEQ ID NO: 122的VL胺基酸序列和/或SEQ ID NO: 124的VL胺基酸序列共用至少95%序列同一性。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白，其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含可變輕鏈（VL）結構域、可變重鏈（VH）結構域或VL和VH結構域的組合。表4中提供了與LIBC219081和LIBC218979的VH和VL胺基酸序列共用90%序列同一性的示例性促效劑LTβR結合蛋白的VH和VL胺基酸序列。在一些實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白的VH結構域包含表4中提供的VH胺基酸序列中的任一個，或與表4中列出的VH胺基酸序列中的任一個至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或至少95%相同的胺基酸序列。在一些實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白的VL結構域包含下表4中提供的VL胺基酸序列中的任一個，或與表4中列出的VL胺基酸序列中的任一個至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%相同的胺基酸序列。 [ 表 4] ：共用 90% 序列同一性的 LTβR CRD4 結合蛋白的 VH 和 VL 序列
LIBC 編號 結構域 序列 SEQ ID
共有的 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSX 31YX 33MX 35WVRQAPGKGLEWVAX 50IX 52YDX 55X 56X 57X 58YX 60X 61DSVKGRFTISRDNSKNTLSLQMNSLRAEDTAVYYCARX 99RX 101X 102X 103X 104X 105X 106X 107YYGX 111X 112VWGQGTTVTVSS 119
V L SYELTQPPSVSVSPRQTARITCSGDX 26LPX 29X 30YX 32Y     WYQQKPGQAPVLVIYKDX 51ERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSX 90DX 92SX 94X 95YX 97X 98FGGGTKLTVLG 120
219081 19325 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNQYYADSVKGRFIISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRVAAHPAYYYGLDVWGQGTTVTVSS 121
V L SYELTQPPSVSLSPGQTARITCSGDALPNHYAYWYQQKPGQAPVLVIFKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGSYVIFGGGTKLTVLG 122
218979 19319 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLSLQMNSLRAEDTAVYYCARERIAAAPYYYYGMDVWGQGTTVTVSS 123
V L SYELTQPPSVSVSPRQTARITCSGDALPKHYAYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADNTGSYMVFGGGTKLTVLG 124
1308929 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLDWVGVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRVAARPHYYYGLDVWGQGTTVTVSS 125
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPNHYAYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGSYVVFGGGTKLTVLG 126
1318341 V H LVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGTNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNTLRADDTAVYFCAKDRVAARPDYYYGMDVWGQGTTVTVSS 127
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARIACSGDALPDHYTYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGAYVIFGGGTKLTVLG 128
1318409 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKDTLHLQMNSLRAEDMAVYFCAKDRVVARPDYYYGMDVWGQGTTVTVSS 129
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPQHYTYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTIRGVQAEDEADYYCQSADGSGTYVVFGGGTKLTVLG 130
1318412 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGRKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRIAARPNYYYGLDVWGQGTTVTVSS 131
V L SYELIQPPSVSVSPGQTARITCSGDTLPEHYTYWYQQRPGQAPILVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTIRGVQAEDEADYYCQSADSSGAYVVFGGGTKLTVLG 132
1318738 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQAPGKGLEWVAVIRYDGSNKYYEDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRVEDTAVYYCARERGPYGGNTYYGMDVWGQGTTVTVSS 133
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPKHYAYWYQQKPGQAPVMVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSTDSSATYVVFGGGTKLTVLR 134
1319003 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGRKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRIAARPNYYYGLDVWGQGTTVTVSS 135
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDTLPDHYTYWYQQRPGQAPILVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTIRGVQAEDEADYYCQSADSSGAYVVFGGGTKLTVLR 136
1319078 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRVAARPNYYYGMAVWGQGTTVTVSS 137
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDTLPNHYTYWYQQKPGQAPVMVIYKDNERPSGIPERFSGFSSGTTVTLTITGVQAEDEADYYCQSADSSGTYVLFGGGTKLTVLG 138
1319182 V H QVHLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKDTLHLQMNSLRAEDMAVYFCAKDRVVARPDYYYGMDVWGQGTTVTVSS 139
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDTLPQHYTYWYQQNPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISRVQAEDEADYYCQSADSSGSYVVFGGGTKLTVLG 140
1319275 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYEDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRVAARPNFYYGMDVWGQGTTVTVSS 141
V L SYELTQPPSVSLSPGHSARITCSGDALPKHYAYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGTYVVFGGGTKLTVLG 142
1319390 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYEDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRVAARPNFYYGMDVWGQGTTVTVSS 143
V L SYELTQPPSVSLSPGHSARITCSGDALPKHYAYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGTYVVFGGGTKLTVLG 144
1319499 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSNYGMYWVRQAPGKGLEWVAVIWYDESNKYYADSVKGRFTISRDYSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRIAGRPGYYYGMDVWGQGTTVTVSS 145
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARISCSGDALPKQYAYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGAYVVFGGGTKLTVLG 146
1319908 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGRKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRIAARPNYYYGLDVWGQGTTVTVSS 147
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDTLPEHYTYWYQQRPGQAPILVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTIRGVQAEDEADYYCQSADSSGAYVVFGGGTKLTVLG 148
1318496 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAAIWYDGSNKYHADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRIAARPNYYYGMDVWGQGTTVTVSS 149
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDTLPNHYTYWYQQEPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTIRGVQAEDEADYYCQSADSSGSYVVFGGGTKLTVLG 150
1320038 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAAIWYDGSNKYHADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRIAARPNYYYGMDVWGQGTTVTVSS 151
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDTLPNHYTYWYQQEPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTIRGVQAEDEADYYCQSADSSGSYVVFGGGTKLTVLG 152
1308929 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLDWVGVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRVAARPHYYYGLDVWGQGTTVTVSS 153
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPNHYAYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGSYVVFGGGTKLTVLG 154
1309633 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRVAARPHYYYGLDVWGQGTTVTVSS 155
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPNQYAYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGSYVVFGGGTKLTVLG 156
1309682 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRVAARPHYYYGLDVWGQGTTVTVSS 157
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPNQYAYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGSYVVFGGGTKLTVLG 158
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白）結合人LTβR CRD4，包括對應於SEQ ID NO: 1的殘基198-209（SEQ ID NO: 4的殘基168-179）的一或多個殘基，並且 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合和 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合。該促效劑LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 8的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 9的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 10的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白的VH包含SEQ ID NO: 5的HCDR1序列，SEQ ID NO: 6的HCDR2序列和SEQ ID NO: 7的HCDR3序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白的VH包含SEQ ID NO: 8的HCDR1序列，SEQ ID NO: 9的HCDR2序列和SEQ ID NO: 10的HCDR3序列。
根據前述實施方式，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 65的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 66的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 67的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 62的LCDR1序列，SEQ ID NO: 63的LCDR2和SEQ ID NO: 64的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 65的LCDR1序列，SEQ ID NO: 66的LCDR2和SEQ ID NO: 67的LCDR3序列。包含該實施方式的VH和VL的示例性LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 219081（BR# 19325；41B2）的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白）結合人LTβR CRD4，包括對應於SEQ ID NO: 1的殘基197-209（即SEQ ID NO: 4的殘基167-179）的一或多個殘基，並且 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合和 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合。該LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 11的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 12的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 13的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該LTβR結合蛋白的VH包含SEQ ID NO: 5的HCDR1序列，SEQ ID NO: 6的HCDR2序列和SEQ ID NO: 7的HCDR3序列。在一個實施方式中，該LTβR結合蛋白的VH包含SEQ ID NO: 11的HCDR1序列，SEQ ID NO: 12的HCDR2序列和SEQ ID NO: 13的HCDR3序列。
根據前述實施方式，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 68的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 69的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 70的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 62的LCDR1序列，SEQ ID NO: 63的LCDR2和SEQ ID NO: 64的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 68的LCDR1序列，SEQ ID NO: 69的LCDR2和SEQ ID NO: 70的LCDR3序列。包含該實施方式的VH和VL的示例性LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 218979（BR#19319；23E9）的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含選自以下的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列的組合：(i) 分別為SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 71、SEQ ID NO: 72和SEQ ID NO: 73，(ii) 分別為SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 75和SEQ ID NO: 76；(iii) 分別為SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 77、SEQ ID NO: 78和SEQ ID NO: 79；(iv) 分別為SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 81和SEQ ID NO: 82；(v) 分別為SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 83、SEQ ID NO: 84和SEQ ID NO: 85；(vi) 分別為SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 87和SEQ ID NO: 88；(vii) 分別為SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 89、SEQ ID NO: 90和SEQ ID NO: 91；(viii) 分別為SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 93和SEQ ID NO: 94；(vix) 分別為SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 95、SEQ ID NO: 96和SEQ ID NO: 97；(x) 分別為SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 99和SEQ ID NO: 100；(xi) 分別為SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 101、SEQ ID NO: 102和SEQ ID NO: 103；(xii) 分別為SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 105和SEQ ID NO: 106；(xiii) 分別為SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 107、SEQ ID NO: 108和SEQ ID NO: 109；(xiv) 分別為SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 111和SEQ ID NO: 112；(xv) 分別為SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 113、SEQ ID NO: 114和SEQ ID NO: 115；以及 (xvi) 分別為SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 117和SEQ ID NO: 118。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含選自以下的VH胺基酸序列和VL胺基酸序列：SEQ ID NO: 119的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 120的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 121的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 122的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 123的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 124的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 125的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 126的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 127的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 128的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 129的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 130的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 131的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 132的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 133的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 134的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 135的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 136的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 137的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 138的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 139的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 140的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 141的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 142的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 143的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 144的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 145的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 146的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 147的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 148的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 149的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 150的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 151的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 152的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 153的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 154的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 155的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 156的VL胺基酸序列；以及SEQ ID NO: 157的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 158的VL胺基酸序列。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含如上所述之VH區和/或VL區，並且進一步包含與VH區偶合的一或多個重鏈恒定區和/或與VL區偶合的輕鏈恒定區。例如，在一個實施方式中，該LTβR結合蛋白係Fab，其包含VH和與VL偶合的第一重鏈恒定結構域（CH1）以及輕鏈恒定區（CL）。在另一個實施方式中，該LTβR結合蛋白係F(ab’)2，其包含藉由鉸鏈區偶合的完全抗體的兩個LTβR結合區，其中每個結合區包含VH-CH1和VL-CL。在另一個實施方式中，該LTβR結合蛋白係包含完全輕鏈（VL-CL）和完全重鏈（VH-CH1-CH2-CH3）的抗體。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含人IgG1重鏈。在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含人IgG2重鏈。在一個實施方式中，該人IgG重鏈被修飾以防止或減少與Fcγ受體的相互作用。在一個實施方式中，該人IgG係穩定效應物無功能（SEFL）IgG（Liu等人, J Biol. Chem.[生物化學雜誌] 292(5):1876-1883，特此藉由引用將其全部併入）。下表5提供了本揭露之LTβR結合蛋白之示例性輕鏈恒定區和重鏈恒定區的胺基酸序列。 [ 表 5] ：示例性 LC 和 HC 恒定結構域區
描述 SEQ ID NO: 胺基酸序列
λLC恒定區 299 QPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKS HRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
κLC恒定區 300 TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEK HKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
IgG1 SEFL2 (CH1-Fc) 301 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
本文表9中提供了本揭露之LTβR抗體之示例性胺基酸序列，該抗體結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白）與LTβR結合物LIBC219081和LIBC218979競爭結合人LTβR CRD4，以及 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合。
根據本揭露，具有該等功能特性的促效劑LTβR結合蛋白，即與LTβR結合物LIBC219081和LIBC218979競爭結合LTβR的CRD4，並且不阻斷LIGHT或LTα1β2與LTβR結合，由其結構相似的VH和VL結構域定義。這種共用的可變區結構，表現為共有的VH和VL CDR序列以及共有的VH和VL序列，來源於本文揭露的示例性促效劑LTβR結合蛋白的比對（參見表6、7和8），其 (i) 具有該等功能特徵以及 (ii) 包含在其各自的整個長度上共用至少90%序列同一性的VH和VL胺基酸序列，即在FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4上從N端到C端。
因此，在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含由以下定義的共用VH CDR結構：HCDR1胺基酸序列：GX 2YMH（SEQ ID NO: 159），其中X 2為Y或F；HCDR2胺基酸序列：WINPNX 6GGTNYAQKFQG（SEQ ID NO: 160），其中X 6為S、N或R；以及HCDR3胺基酸序列：X 1X 2X 3X 4GX 6X 7X 8YYGMDV（SEQ ID NO: 161），其中X 1為D或A；X 2為R或D；X 3為N、S或A；X 4為G或S；X 6為V或W；X 7為Y或不存在；X 8為Y或不存在。下表6中提供了示例性促效劑LTβR結合蛋白的重鏈CDR序列，其結合LTβR CRD4，不阻斷LIGHT與LTβR結合，不阻斷LTα1β2與LTβR結合，並且包含SEQ ID NO: 159的HCDR1、SEQ ID NO: 160的HCDR2和SEQ ID NO: 161的HCDR3。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含分別為SEQ ID NO: 159-161的HCDR 1-3，進一步包含由以下定義的共用VL CDR結構：LCDR1胺基酸序列TGTX4SDVGSYNLVS（SEQ ID NO: 278），其中X 4為T、N或S；LCDR2胺基酸序列EVX 3X 4RPS（SEQ ID NO: 279），其中X 3為T或S且X 4為K或V；以及LCDR3胺基酸序列CSYX 4X 5SX 7TX 9V（SEQ ID NO: 280），其中X 4為A或V；X 5為D或E；X 7為S或K；X 9為L或W。下表7中提供了示例性促效劑LTβR結合蛋白的輕鏈CDR序列，其結合LTβR CRD4，不阻斷LIGHT與LTβR結合，不阻斷LTα1β2與LTβR結合，並且包含SEQ ID NO: 278的LCDR1、SEQ ID NO: 279的LCDR2和SEQ ID NO: 280的LCDR3。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含分別為SEQ ID NO: 159-161的HCDR 1-3，進一步包含由以下定義的共用VL CDR結構：LCDR1胺基酸序列SGDX 4LPX 7X 8YX 10Y（SEQ ID NO: 308），其中X 4為A或T；X 7為Q、E、N、R或K；X 8為H或Q；X 10為V、T或A；LCDR2胺基酸序列KDX 3X 4RPS（SEQ ID NO: 309），其中X 3為N或S；X 4為D或E；以及LCDR3胺基酸序列QSADX 5SGX 8X 9VV（SEQ ID NO: 310），其中X 5為I、N或S；X 8為S、A、I或T；並且X 9為F或Y。下表7中提供了示例性促效劑LTβR結合蛋白的輕鏈CDR序列，其結合LTβR CRD4，不阻斷LIGHT與LTβR結合，不阻斷LTα1β2與LTβR結合，並且包含SEQ ID NO: 308的LCDR1、SEQ ID NO: 309的LCDR2和SEQ ID NO: 310的LCDR3。 [ 表 6] .結合人LTβR CRD4且不阻斷LIGHT或LTα1β2與LTβR結合的促效劑LTβR結合蛋白的重鏈CDR序列
LIBC 編號 HCDR1 HCDR2 HCDR3
SEQ ID SEQ ID SEQ ID
共有的 VH進化枝1 GX 2YMH X 2為Y或F 159 WINPNX 6GGTNYAQKFQG X 6為S、N或R 160 X 1X 2X 3X 4GX 6X 7X 8YYGMDV X 1為D、A X 2為R、D X 3為N、S、A X 4為G、S X 6為V、W X 7為Y、不存在 X 8為Y、不存在 161
1303255 GYYMH 162 WINPNNGGTNYAQKFQG 163 ADNSGWYYYYGMDV 164
1303574 GYYMH 165 WINPNNGGTNYAQKFQG 166 ADNSGWYYYYGMDV 167
1303613 GYYMH 168 WINPNNGGTNYAQKFQG 169 ADNSGWYYYYGMDV 170
1303507 GYYMH 171 WINPNNGGTNYAQKFQG 172 ADNSGWYYYYGMDV 173
1303716 GYYMH 174 WINPNNGGTNYAQKFQG 175 ADNSGWYYYYGMDV 176
1308640 GYYMH 177 WINPNNGGTNYAQKFQG 178 ADSSGWYYYYGMDV 179
1308591 GFYMH 180 WINPNNGGTNYAQKFQG 181 ADSSGWYYYYGMDV 182
1303446 GYYMH 183 WINPNNGGTNYAQKFQG 184 ADNSGWYYYYGMDV 185
1306164 GYYMH 186 WINPNSGGTNYAQKFQG 187 DRAGGVYYGMDV 188
1306253 GYYMH 189 WINPNRGGTNYAQKFQG 190 DRAGGVYYGMDV 191
1306424 GYYMH 192 WINPNRGGTNYAQKFQG 193 DRAGGVYYGMDV 194
共有的 VH進化枝4 X 1YGMH X 1為A或S 195 X 1IWYDGNNKYYX 12DSVKG X 1為L或V X 12為E或A 196 DRITX 5VRGVTNYGMDV X 5為M、R 197
1306053 AYGMH 197 LIWYDGNNKYYADSVKG 198 DRITRVRGVTNYGMDV 199
1306153 AYGMH 200 LIWYDGNNKYYADSVKG 201 DRITRVRGVTNYGMDV 202
1306251 AYGMH 203 LIWYDGNNKYYADSVKG 204 DRITRVRGVTNYGMDV 205
1306674 AYGMH 206 LIWYDGNNKYYADSVKG 207 DRITRVRGVTNYGMDV 208
1307329 AYGMH 209 LIWYDGNNKYYADSVKG 210 DRITRVRGVTNYGMDV 211
1306622 AYGMH 212 LIWYDGNNKYYADSVKG 213 DRITRVRGVTNYGMDV 214
1306800 AYGMH 215 LIWYDGNNKYYADSVKG 216 DRITRVRGVTNYGMDV 217
1306965 AYGMH 218 LIWYDGNNKYYADSVKG 219 DRITRVRGVTNYGMDV 220
1306294 SYGMH 221 VIWYDGNNKYYEDSVKG 222 DRITMVRGVTNYGMDV 223
共有的VH進化枝7 SX 2AMH X 2為Y或F 224 VIWYX 5X 6X 7NX 9FYADSVKG X 5為D、A、N X 6為R、E X 7為N、S X 9為K、N 225 GDX 3X 4YX 6YX 8YGX 11DX 13X 3為W、R X 4為N、D X 6為S、H、Y X 8為Y、Q、K X 11為M、V X 13為L、V 226
1307739 SYAMH 227 VIWYDRNNKFYADSVKG 228 GDRDYHYQYGMDV 229
1310489 SYAMH 230 VIWYDRNNKFYADSVKG 231 GDRDYHYQYGMDV 232
1308006 SYAMH 233 VIWYNRNNNFYADSVKG 234 GDRDYYYYYGMDV 235
1308236 SYAMH 236 VIWYNRNNNFYADSVKG 237 GDRDYYYYYGMDV 238
1308563 SYAMH 239 VIWYNRNNNFYADSVKG 240 GDRDYYYYYGMDV 241
1308943 SYAMH 242 VIWYNRNNNFYADSVKG 243 GDRDYYYYYGMDV 244
1318301 SFAMH 245 VIWYAESNKFYADSVKG 246 GDWNYSYKYGVDL 247
1319279 SFAMH 257 VIWYAESNKFYADSVKG 258 GDWNYSYKYGVDL 259
1318394 SYGMH 248 VIWYDRSNKYYADSVKG 249 GISGYRYGTDMDV 250
1318693 SYGMH 251 VIWYDRSNKYYADSVKG 252 GISGYRYGTDMDV 253
1318991 SYGMH 254 VIWYDRSNKYYADSVKG 255 GISGYRYGTDMDV 256
1318188 SDGYFWS 266 FIYFTGITYYNPSLQS 267 VIPGEDAFDI 268
1318198 SDGYFWS 275 FIYFTGITYYNPSLQS 276 VIPGEDAFDI 277
1318253 GFYMH 260 WLNPNTGGTSYVQKFQG 261 GTGTTAFDF 262
1318209 SYVMN 263 GISGSDGSTYYADSVKG 264 EEDWNYGFDY 265
1319569 SYDIN 269 WMNPNTGNTGYPQKFQG 270 GGLTMKVVGAGWFDP 271
1307105 SYGMD 272 VISYDGNYKYYADSVKG 273 DDYSTLDY 274
[ 表 7] .結合人LTβR CRD4且不阻斷LIGHT或LTα1β2與LTβR結合的促效劑LTβR結合蛋白的輕鏈CDR序列
LIBC 編號 LCDR1 LCDR2 LCDR3
SEQ ID SEQ ID SEQ ID
共有的VL進化枝1 TGTX 4SDVGSYNLVS X 4為T、N、S 278 EVX 3X 4RPS X 3為S、T X 4為K、V 279 CSYX 4X 5SX 7TX 9V X 4為A、V X 5為D、E X 7為S、K X 9為L、W 280
1303255 TGTTSDVGSYNLVS 281 EVSKRPS 282 CSYAESSTLV 283
1303574 TGTTSDVGSYNLVS 284 EVSKRPS 285 CSYAESSTLV 286
1303613 TGTTSDVGSYNLVS 287 EVSKRPS 288 CSYAESSTLV 289
1303507 TGTTSDVGSYNLVS 290 EVSKRPS 291 CSYAESSTLV 292
1303716 TGTTSDVGSYNLVS 293 EVSKRPS 294 CSYAESSTLV 295
1308640 TGTSSDVGSYNLVS 296 EVSKRPS 297 CSYADSSTLV 298
1318394 TGTSSDVGSYNLVS 380 EVTVRPS 381 CSYVDSKTWV 382
1318693 TGTSSDVGSYNLVS 383 EVTVRPS 384 CSYVDSKTWV 385
1318991 TGTSSDVGSYNLVS 386 EVTVRPS 387 CSYVDSKTWV 388
1318198 TGTNSDVGSYNLVS 398 EVTVRPS 399 CSYVDSKTWV 400
1308591 TGTSSDVGSYNLVS 302 EVSKRPS 303 CSYAD RST LV 304
1303446 TGT TSDVGSYNLVS 305 EVSKRPS 306 CSYA ESST LV 307
共有的VL進化枝4 SGDX 4LPX 7X 8YX 10Y X 4為A、T X 7為Q、E、N、R、K X 8為H、Q X 10為V、T、A 308 KDX 3X 4RPS X 3為N、S X 4為D、E 309 QSADX 5SGX 8X 9VV X 5為I、N、S， X 8為S、A、I、T X 9為F、Y 310
1306164 SGDALPKQYAY 311 KDSERPS 312 QSADNSGTFVV 313
1306253 SGDALPKQYAY 314 KDSERPS 315 QSADSSGTYVV 316
1306424 SGDALPKQYAY 317 KDSERPS 318 QSADSSGTYVV 319
1306053 SGDTLPKQYVY 320 KDNERPS 321 QSADNSGIYVV 322
1306153 SGDTLPKHYAY 323 KDNERPS 324 QSADNSGIYVV 325
1306251 SGDTLPKHYAY 326 KDNERPS 327 QSADNSGIYVV 328
1306674 SGDTLPKHYAY 329 KDNERPS 330 QSADNSGIYVV 331
1307329 SGDTLPKHYAY 332 KDNERPS 333 QSADNSGIYVV 334
1306622 SGDALPRHYAY 335 KDNERPS 336 QSADSSGIYVV 337
1306800 SGDALPKHYAY 338 KDNERPS 339 QSADNSGIYVV 340
1306965 SGDALPNHYAY 341 KDNERPS 342 QSADSSGIYVV 343
1306294 SGDALPKHYTY 344 KDNDRPS 345 QSADISGIYVV 346
1318253 SGDALPQHYTY 347 KDNERPS 348 QSADSSGSYVV 349
1318209 SGDTLPEHYTY 350 KDNERPS 351 QSADSSGAYVV 352
1318188 SGDALPQHYTY 353 KDNERPS 354 QSADISGTYVV 355
共有的VL進化枝2 TGX 3X 4SDVGSYNLVS X 3為S、T X 4為N、S、I 356 EVX 3KRPS X 3為T、N、S 357 CSYAX 5X 6X 7TYV X 5為D、G X 6為T、S X 7為R、S、K， 358
1307739 TGTSSDVGSYNLVS 359 EVSKRPS 360 CSYADSSTYV 361
1310489 TGTSSDVGSYNLVS 362 EVSKRPS 363 CSYAGSSTYV 364
1308006 TGTISDVGSYNLVS 365 EVNKRPS 366 CSYADTKTYV 367
1308236 TGTISDVGSYNLVS 368 EVSKRPS 369 CSYADTKTYV 370
1308563 TGTISDVGSYNLVS 371 EVSKRPS 372 CSYADTKTYV 373
1308943 TGTISDVGSYNLVS 374 EVSKRPS 375 CSYADTKTYV 376
1318301 TGSNSDVGSYNLVS 377 EVTKRPS 378 CSYADSRTYV 379
1319279 TGSNSDVGSYNLVS 389 EVNKRPS 390 CSYADSRTYV 391
1319569 SGDKLGDKYAF 392 QDKKRPS 393 QAWDISTGV 394
1307105 TGTSRDVGGYNYVS 395 EVSNRPS 396 SSYISGNSHV 397
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含由以下定義的共用VH CDR結構：HCDR1胺基酸序列：X 1YGMH（SEQ ID NO: 195），其中X 1為A或S；HCDR2胺基酸序列：X 1IWYDGNNKYYX 12DSVKG（SEQ ID NO: 196），其中X 1為L或V，並且X 12為E或A；以及HCDR3胺基酸序列：DRITX 5VRGVTNYGMDV（SEQ ID NO: 197），其中X 5為M或R。上表6中提供了示例性促效劑LTβR結合蛋白的重鏈CDR序列，其結合人LTβR CRD4，不阻斷LIGHT與LTβR結合，不阻斷LTa1ß2與LTβR結合，並且包含SEQ ID NO: 195的HCDR1、SEQ ID NO: 196的HCDR2和SEQ ID NO: 197的HCDR3。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含分別為SEQ ID NO: 195-197的HCDR 1-3，進一步包含由以下定義的共用VL CDR結構：LCDR1胺基酸序列SGDX 4LPX 7X 8YX 10Y（SEQ ID NO: 308），其中X 4為A或T；X 7為Q、E、N、R或K；X 8為H或Q；並且X 10為V、T或A；LCDR2胺基酸序列KDX 3X 4RPS（SEQ ID NO: 309），其中X 3為N或S且X 4為D或E；以及LCDR3胺基酸序列QSADX 5SGX 8X 9VV（SEQ ID NO: 310），其中X 5為I、N或S；X 8為S、A、I或T；X 9為F或Y。上表7中提供了示例性促效劑LTβR結合蛋白的輕鏈可變區CDR序列，其結合人LTβR CRD4，不阻斷LIGHT與LTβR結合，不阻斷LTα1β2與LTβR結合，並且包含SEQ ID NO: 308的LCDR1、SEQ ID NO: 309的LCDR2和SEQ ID NO: 310的LCDR3。
在另一個實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含由以下定義的共用VH CDR結構：HCDR1胺基酸序列：SX 2AMH（SEQ ID NO: 224），其中X 2為Y或F；HCDR2胺基酸序列：VIWYX 5X 6X 7NX 9FYADSVKG（SEQ ID NO: 225），其中X 5為D、A或N；X 6為R或E；X 7為N或S；X 9為K或N；HCDR3胺基酸序列：GDX 3X 4YX 6YX 8YGX 11DX 13（SEQ ID NO: 226），其中X 3為W或R；X 4為N或D；X 6為S、H或Y；X 8為Y、Q或K；X 11為M或V；X 13為L或V。上表6中提供了示例性促效劑LTβR結合蛋白的重鏈CDR序列，其結合人LTβR CRD4，不阻斷LIGHT與LTβR結合，不阻斷LTα1β2與LTβR結合，並且包含SEQ ID NO: 224的HCDR1、SEQ ID NO: 225的HCDR2和SEQ ID NO: 226的HCDR3。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含分別為SEQ ID NO: 224-226的HCDR 1-3，進一步包含由以下定義的共用VL CDR結構：LCDR1胺基酸序列TGX 3X 4SDVGSYNLVS（SEQ ID NO: 356），其中X 3為S或T；X 4為N、S或I；LCDR2胺基酸序列：EVX 3KRPS（SEQ ID NO: 357），其中X 3為T、N或S；以及LCDR3胺基酸序列：CSYAX 5X 6X 7TYV（SEQ ID NO: 358），其中X 5為D或G；X 6為T或S；X 7為R、S或K。上表7中提供了示例性促效劑LTβR結合蛋白的輕鏈可變區CDR序列，其結合人LTβR CRD4，不阻斷LIGHT與LTβR結合，不阻斷LTα1β2與LTβR結合，並且包含SEQ ID NO: 356的LCDR1、SEQ ID NO: 357的LCDR2和SEQ ID NO: 358的LCDR3。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含可變輕鏈（VL）結構域、可變重鏈（VH）結構域或VL和VH結構域的組合。在任何實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白的VH結構域包含下表8中提供的VH胺基酸序列中的任一個，或與表8中列出的VH胺基酸序列中的任一個至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或至少95%相同的胺基酸序列。在任何實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白的VL結構域包含下表8中提供的VL胺基酸序列中的任一個，或與表8中列出的VL胺基酸序列中的任一個至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%相同的胺基酸序列。
本揭露之示例性促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含選自以下的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列的組合：(i) 分別為SEQ ID NO: 159、SEQ ID NO: 160、SEQ ID NO: 161、SEQ ID NO: 278、SEQ ID NO: 279和SEQ ID NO: 280；(ii) 分別為SEQ ID NO: 162、SEQ ID NO: 163、SEQ ID NO: 164、SEQ ID NO: 281、SEQ ID NO: 282和SEQ ID NO: 283；(iii) 分別為SEQ ID NO: 165、SEQ ID NO: 166、SEQ ID NO: 167、SEQ ID NO: 284、SEQ ID NO: 285和SEQ ID NO: 286；(iv) 分別為SEQ ID NO: 168、SEQ ID NO: 169、SEQ ID NO: 170、SEQ ID NO: 287、SEQ ID NO: 288和SEQ ID NO: 289；(v) 分別為SEQ ID NO: 171、SEQ ID NO: 172、SEQ ID NO: 173、SEQ ID NO: 290、SEQ ID NO: 291和SEQ ID NO: 292；(vi) 分別為SEQ ID NO: 174、SEQ ID NO: 175、SEQ ID NO: 176、SEQ ID NO: 293、SEQ ID NO: 294和SEQ ID NO: 295；(vii) 分別為SEQ ID NO: 177、SEQ ID NO: 178、SEQ ID NO: 179、SEQ ID NO: 296、SEQ ID NO: 297和SEQ ID NO: 298；(viii) 分別為SEQ ID NO: 180、SEQ ID NO: 181、SEQ ID NO: 182、SEQ ID NO: 302、SEQ ID NO: 303和SEQ ID NO: 304；(ix) 分別為SEQ ID NO: 183、SEQ ID NO: 184、SEQ ID NO: 185、SEQ ID NO: 305、SEQ ID NO: 306和SEQ ID NO: 307。
在一個實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包括那些包含分別為SEQ ID NO: 159-161的HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列以及分別為SEQ ID NO: 278-280的LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列的結合蛋白。該等促效劑LTβR結合蛋白進一步包含選自以下的VH和VL胺基酸序列：與SEQ ID NO: 401的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 402的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 403的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 404的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 405的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 406的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 407的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 408的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 409的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 410的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 411的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 412的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 413的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 414的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 415的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 416的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列。下表8中提供了本文所述之VH和VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之示例性促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含選自以下的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列的組合：(i) 分別為SEQ ID NO: 159、SEQ ID NO: 160、SEQ ID NO: 161、SEQ ID NO: 308、SEQ ID NO: 309和SEQ ID NO: 310；(ii) 分別為SEQ ID NO: 189、SEQ ID NO: 190、SEQ ID NO: 191、SEQ ID NO: 314、SEQ ID NO: 315和SEQ ID NO: 316；(iii) 分別為SEQ ID NO: 186、SEQ ID NO: 187、SEQ ID NO: 188、SEQ ID NO: 311、SEQ ID NO: 312和SEQ ID NO: 313；(iv) 分別為SEQ ID NO: 192、SEQ ID NO: 193、SEQ ID NO: 194、SEQ ID NO: 317、SEQ ID NO: 318和SEQ ID NO: 319。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包括那些包含分別為SEQ ID NO: 159-161的HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列以及分別為SEQ ID NO: 308-310的LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列的結合蛋白。該等促效劑LTβR結合蛋白進一步包含選自以下的VH和VL胺基酸序列：與SEQ ID NO: 417的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 418的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 419的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 420的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；以及與SEQ ID NO: 421的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 422的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列。下表8中提供了本文所述之VH和VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之示例性促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含選自以下的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列的組合：(i) SEQ ID NO: 195、SEQ ID NO: 196、SEQ ID NO: 197、SEQ ID NO: 308、SEQ ID NO: 309和SEQ ID NO: 310；(ii) SEQ ID NO: 197、SEQ ID NO: 198、SEQ ID NO: 199、SEQ ID NO: 320、SEQ ID NO: 321和SEQ ID NO: 322；(iii) 分別為SEQ ID NO: 200、SEQ ID NO: 201、SEQ ID NO: 202、SEQ ID NO: 323、SEQ ID NO: 324和SEQ ID NO: 325；(iv) 分別為SEQ ID NO: 203、SEQ ID NO: 204、SEQ ID NO: 205、SEQ ID NO: 326、SEQ ID NO: 327和SEQ ID NO: 328；(v) 分別為SEQ ID NO: 206、SEQ ID NO: 207、SEQ ID NO: 208、SEQ ID NO: 329、SEQ ID NO: 330和SEQ ID NO: 331；(vi) 分別為SEQ ID NO: 209、SEQ ID NO: 210、SEQ ID NO: 211、SEQ ID NO: 332、SEQ ID NO: 333和SEQ ID NO: 334；(vii) 分別為SEQ ID NO: 212、SEQ ID NO: 213、SEQ ID NO: 214、SEQ ID NO: 335、SEQ ID NO: 336和SEQ ID NO: 337；(viii) 分別為SEQ ID NO: 215、SEQ ID NO: 216、SEQ ID NO: 217、SEQ ID NO: 338、SEQ ID NO: 339和SEQ ID NO: 340；(ix) 分別為SEQ ID NO: 218、SEQ ID NO: 219、SEQ ID NO: 220、SEQ ID NO: 341、SEQ ID NO: 342和SEQ ID NO: 343；(x) 分別為SEQ ID NO: 221、SEQ ID NO: 222、SEQ ID NO: 223、SEQ ID NO: 343、SEQ ID NO: 344和SEQ ID NO: 345。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含分別為SEQ ID NO: 195-197的HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列以及分別為SEQ ID NO: 308-310的LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列。該等促效劑LTβR結合蛋白進一步包含選自以下的VH和VL胺基酸序列：與SEQ ID NO: 423的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 424的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 425的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 426的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 427的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 428的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 429的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 430的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 431的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 432的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 433的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 434的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 435的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 436的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 437的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 438的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 439的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 440的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列。下表8中提供了本文所述之VH和VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之示例性促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含選自以下的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列的組合：(i) 分別為SEQ ID NO: 224、SEQ ID NO: 225、SEQ ID NO: 226、SEQ ID NO: 356、SEQ ID NO: 357和SEQ ID NO: 358；(ii) 分別為SEQ ID NO: 227、SEQ ID NO: 228、SEQ ID NO: 229、SEQ ID NO: 359、SEQ ID NO: 360和SEQ ID NO: 361；(iii) 分別為SEQ ID NO: 230、SEQ ID NO: 231、SEQ ID NO: 232、SEQ ID NO: 362、SEQ ID NO: 363和SEQ ID NO: 364；(iv) 分別為SEQ ID NO: 233、SEQ ID NO: 234、SEQ ID NO: 235、SEQ ID NO: 365、SEQ ID NO: 366和SEQ ID NO: 367；(v) 分別為SEQ ID NO: 236、SEQ ID NO: 237、SEQ ID NO: 238、SEQ ID NO: 368、SEQ ID NO: 369和SEQ ID NO: 370；(vi) 分別為SEQ ID NO: 239、SEQ ID NO: 240、SEQ ID NO: 241、SEQ ID NO: 371、SEQ ID NO: 372和SEQ ID NO: 373；(vii) 分別為SEQ ID NO: 242、SEQ ID NO: 243、SEQ ID NO: 244、SEQ ID NO: 374、SEQ ID NO: 375和SEQ ID NO: 376；(viii) 分別為SEQ ID NO: 245、SEQ ID NO: 246、SEQ ID NO: 247、SEQ ID NO: 377、SEQ ID NO: 378和SEQ ID NO: 379；(ix) 分別為SEQ ID NO: 248、SEQ ID NO: 249、SEQ ID NO: 250、SEQ ID NO: 380、SEQ ID NO: 381和SEQ ID NO: 382；(x) 分別為SEQ ID NO: 251、SEQ ID NO: 252、SEQ ID NO: 253、SEQ ID NO: 383、SEQ ID NO: 384和SEQ ID NO: 385；(xi) 分別為SEQ ID NO: 254、SEQ ID NO: 255、SEQ ID NO: 256、SEQ ID NO: 386、SEQ ID NO: 387和SEQ ID NO: 388；(xii) 分別為SEQ ID NO: 180、SEQ ID NO: 181、SEQ ID NO: 182、SEQ ID NO: 302、SEQ ID NO: 303和SEQ ID NO: 304；；(xiii) 分別為SEQ ID NO: 183、SEQ ID NO: 184、SEQ ID NO: 185、SEQ ID NO: 305、SEQ ID NO: 306和SEQ ID NO: 307；(xiv) 分別為SEQ ID NO: 257、SEQ ID NO: 258、SEQ ID NO: 259、SEQ ID NO: 389、SEQ ID NO: 390和SEQ ID NO: 391。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含分別為SEQ ID NO: 224-226的HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列以及分別為SEQ ID NO: 356-358的LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列。該等促效劑LTβR結合蛋白進一步包含選自以下的VH和VL胺基酸序列：與SEQ ID NO: 441的VH胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 442的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 443的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 444的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 445的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 446的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 447的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 448的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 449的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 450的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 451的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 452的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 453的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 454的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 455的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 456的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 457的VH胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 458的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 459的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 460的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列；與SEQ ID NO: 461的VH胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 462的VL胺基酸序列具有至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的VL胺基酸序列。下表8中提供了本文所述之VH和VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之示例性促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含選自以下的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列的組合：(i) 分別為SEQ ID NO: 257、SEQ ID NO: 258、SEQ ID NO: 259、SEQ ID NO: 389、SEQ ID NO: 390和SEQ ID NO: 391（1319279）；(ii) 分別為SEQ ID NO: 260、SEQ ID NO: 261、SEQ ID NO: 262、SEQ ID NO: 347、SEQ ID NO: 348和SEQ ID NO: 349（1318253）；(iii) 分別為SEQ ID NO: 263、SEQ ID NO: 264、SEQ ID NO: 265、SEQ ID NO: 350、SEQ ID NO: 351和SEQ ID NO: 352（1318209）；(iv) 分別為SEQ ID NO: 266、SEQ ID NO: 267、SEQ ID NO: 268、SEQ ID NO: 353、SEQ ID NO: 354和SEQ ID NO: 355（1318188）；(v) 分別為SEQ ID NO: 269、SEQ ID NO: 270、SEQ ID NO: 271、SEQ ID NO: 392、SEQ ID NO: 393和SEQ ID NO: 394（1319569）；(vi) 分別為SEQ ID NO: 272、SEQ ID NO: 273、SEQ ID NO: 274、SEQ ID NO: 395、SEQ ID NO: 396和SEQ ID NO: 397（1317105）；(vii) 分別為SEQ ID NO: 275、SEQ ID NO: 276、SEQ ID NO: 277、SEQ ID NO: 398、SEQ ID NO: 399和SEQ ID NO: 400（1318198）；
在另一個實施方式中，本揭露之LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含選自以下的VH胺基酸序列和VL胺基酸序列：SEQ ID NO: 401的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 402的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 403的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 404的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 405的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 406的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 407的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 408的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 409的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 410的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 411的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 412的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 413的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 414的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 415的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 416的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 417的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 418的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 419的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 420的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 421的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 422的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 423的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 424的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 425的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 426的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 427的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 428的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 429的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 430的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 431的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 432的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 433的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 434的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 435的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 436的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 437的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 438的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 439的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 440的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 441的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 442的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 443的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 444的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 445的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 446的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 447的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 448的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 449的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 450的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 451的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 452的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 453的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 454的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 455的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 456的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 457的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 458的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 459的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 460的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 461的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 462的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 463的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 464的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 465的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 466的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 467的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 468的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 469的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 470的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 471的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 472的VL胺基酸序列；以及SEQ ID NO: 473的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 474的VL胺基酸序列。下表8中提供了本文所述之VH和VL胺基酸序列。 [ 表 8] ：與LTβR結合物LIBC219081和LIBC218979競爭結合LTβR的CRD4並且不阻斷LIGHT或LTα1β2結合的LTβR結合蛋白的VH和VL胺基酸序列
LIBC 編號 結構域 序列 SEQ ID
1303255 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNNGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAKADNSGWYYYYGMDVWGQGTTVTVSS 401
V L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTTSDVGSYNLVSWYQQHPGKVPKFMIYEVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYHCCSYAESSTLVFGGGTKLTVLG 402
1303574 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNNGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAKADNSGWYYYYGMDVWGQGTTVTVSS 403
V L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTTSDVGSYNLVSWYQQHPGKVPKFMIYEVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTIFGLQAEDEADYHCCSYAESSTLVFGGGTKLTVLG 404
1303613 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNNGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAKADNSGWYYYYGMDVWGQGTTVTVSS 405
V L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTTSDVGSYNLVSWYQQHPGKVPKFMIYEVSKRPSGVYNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYHCCSYAESSTLVFGGGTKLTVLG 406
1303507 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNNGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAKADNSGWYYYYGMDVWGQGTTVTVSS 407
V L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTTSDVGSYNLVSWYQQHPGKVPKFMIYEVSKRPSGVFNRFSGSKSGNTASLTIFGLQAEDEADYHCCSYAESSTLVFGGGTKLTVLG 408
1303716 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNNGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAKADNSGWYYYYGMDVWGQGTTVTVSS 409
V L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTTSDVGSYNLVSWYQQHPGKVPKFMIYEVSKRPSGVFNRFSGSKSGNTASLTIFGLQAEDEADYHCCSYAESSTLVFGGGTKLTVLG 410
1308640 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNNGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAKADSSGWYYYYGMDVWGQGTTVTVSS 411
V L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGSYNLVSWYQQHPGKVPKFMIYEVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYHCCSYADSSTLVFGGGTKLTVLG 412
1308591 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGFYMHWVRQAPGQGLKWMGWINPNNGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAKADSSGWYYYYGMDVWGQGTTVTVSS 413
V L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGSYNLVSWYQQHPGKVPKFMIYEVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCCSYADRSTLVFGGGTKLTVLG 414
1303446 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNNGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAKADNSGWYYYYGMDVWGQGTTVTVSS 415
V L QSALTQPASVFGSPGQSITISCTGTTSDVGSYNLVSWYQQHPGKVPKFMIYEVSKRPSGVYNRFSGSKSGNTASLTIFGLQAEDEADYHCCSYAESSTLVFGGGTKLTVLG 416
1306164 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVFYCAKDRAGGVYYGMDVWGQGTTVTVSS 417
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPKQYAYWYQKKPGQAPVRVIYKDSERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADNSGTFVVFGGGTKLTVLG 418
1306253 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCRASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNRGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLISDDTAVYYCAKDRAGGVYYGMDVWGQGTTVTVSS 419
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPKQYAYWYQQKPDQAPVMVISKDSERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDESDYYCQSADSSGTYVVFGGGTKLTVLG 420
1306424 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCRASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNRGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLISDDTAVYYCAKDRAGGVYYGMDVWGQGTTVTVSS 421
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPKQYAYWYQQKPDQAPVMVISKDSERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDESDYYCQSADSSGTYVVFGGGTKLTVLG 422
1306053 V H QEHLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSAYGMHWVRQAPGKGLEWVALIWYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARDRITRVRGVTNYGMDVWGQGTTVTVSS 423
V L SYELTQPPSMSVSPGQTARITCSGDTLPKQYVYWYRQKPGQAPVLVIYKDNERPSGILERFSGSSSGATVTLTISGVQAEDEADYFCQSADNSGIYVVFGGGTKLTVLG 424
1306153 V H QEHLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSAYGMHWVRQAPGKGLEWVALIWYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARDRITRVRGVTNYGMDVWGQGTTVTVSS 425
V L SYELTQPPSMSVSPGQTARITCSGDTLPKHYAYWYRQKAGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGATVTLTISGVQAEDEADYFCQSADNSGIYVVFGGGTKLTVLG 426
1306251 V H QEHLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSAYGMHWVRQAPGKGLEWVALIWYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARDRITRVRGVTNYGMDVWGQGTTVTVSS 427
V L SYELTQPPSMSVSPGQTARITCSGDTLPKHYAYWYRQKAGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGATVTLTISGVQAEDEADYFCQSADNSGIYVVFGGGTKLTVLG 428
1306674 V H QEHLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSAYGMHWVRQAPGKGLEWVALIWYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARDRITRVRGVTNYGMDVWGQGTTVTVSS 429
V L SYELTQPPSMSVSPGQTARITCSGDTLPKHYAYWYRQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGATVTLTISGVQAEDEADYFCQSADNSGIYVVFGGGTKLTVLG 430
1307329 V H QEHLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSAYGMHWVRQAPGKGLEWVALIWYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARDRITRVRGVTNYGMDVWGQGTTVTVSS 431
V L SYELTQPPSMSVSPGQTARITCSGDTLPKHYAYWYRQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGATVTLTISGVQAEDEADYFCQSADNSGIYVVFGGGTKLTVLG 432
1306622 V H QVQLVESGGGVVQFGRSLRLSCAASGFTFSAYGMHWVRQAPGKGLEWVALIWYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRITRVRGVTNYGMDVWGQGTTVTVSS 433
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPRHYAYWYRQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGATVTLTISGVQAEDEADYFCQSADSSGIYVVFGGGTKLTVLG 434
1306800 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSAYGMHWVRQAPGKGLEWVALIWYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRITRVRGVTNYGMDVWGQGTTVTVSS 435
V L SYELTQPPSMSVSPGQTARITCSGDALPKHYAYWYRQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGATVTLTISGVQAEDEADYFCQSADNSGIYVVFGGGTKLTVLG 436
1306965 V H QVQVVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSAYGMHWVRQAPGKGLEWVALIWYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARDRITRVRGVTNYGMDVWGQGTTVTVSS 437
V L SYELTQPPSVSLSPGQTARITCSGDALPNHYAYWYRQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGATVTLTITGVQAEDEADYFCQSADSSGIYVVFGGGTKLTVLG 438
1306294 V H QEQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGNNKYYEDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRITMVRGVTNYGMDVWGQGTTVTVSS 439
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPKHYTYWYQQKPGQAPLLVIYKDNDRPSGIPERFSGSSSGTTVTLTIRGVQAEDEADYYCQSADISGIYVVFGGGTKLTVLG 440
1307739 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDRNNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGDRDYHYQYGMDVWGQGTTVTVSS 441
V L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPQLMIYEVSKRPSGVSNRFSVSKSGNTASLTISGLRAEDEADYYCCSYADSSTYVFGTGTKVTVLG 442
1310489 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDRNNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGDRDYHYQYGMDVWGQGTTVTVSS 443
V L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPQLMIYEVSKRPSGVSSRFSVSKSGNTASLTISGLRAEDEADYYCCSYAGSSTYVFGSGTKVTVLG 444
1308006 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYNRNNNFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGDRDYYYYYGMDVWGQGTTVTVSS 445
V L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTISDVGSYNLVSWYQQHPGKAPQLMIYEVNKRPSGVSNRFSVSKSGNTASLTISGLRAEDEADYYCCSYADTKTYVFGTGTKVTVLG 446
1308236 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYNRNNNFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGDRDYYYYYGMDVWGQGTTVTVSS 447
V L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTISDVGSYNLVSWYQQHPGKAPQLMIYEVSKRPSGVSNRFSVSKSGNTASLTISGLRAEDEADYYCCSYADTKTYVFGTGTKVTVLG 448
1308563 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYNRNNNFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDAAVYYCARGDRDYYYYYGMDVWGQGTTVTVSS 449
V L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTISDVGSYNLVSWYQQHPGKAPQLMIYEVSKRPSGVSNRFSVSKSGNTASLTISGLRAEDEADYYCCSYADTKTYVFGTGTKVTVLG 450
1308943 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYNRNNNFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDAAVYYCARGDRDYYYYYGMDVWGQGTTVTVSS 451
V L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTISDVGSYNLVSWYQQHPGKAPQLMIYEVSKRPSGVSNRFSVSKSGNTASLTISGLRAEDEADYYCCSYADTKTYVFGTGTKVTVLG 452
1318301 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSFAMHWVRQAPGKGLDWVAVIWYAESNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGDWNYSYKYGVDLWGQGTTVTVSS 453
V L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGSNSDVGSYNLVSWYQQDPGKAPKLMIYEVTKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCCSYADSRTYVFGTGTKVTVLG 454
1318394 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWMTVIWYDRSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGISGYRYGTDMDVWGQGTTVTVSS 455
V L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKFMIYEVTVRPSGVSNRFSGSKSGNTAYLTISGLQAEDEADYYCCSYVDSKTWVFGGGTKLTVLG 456
1318693 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWMTVIWYDRSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGISGYRYGTDMDVWGQGTTVTVSS 457
V L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKFMIYEVTVRPSGVSNRFSGSKSGNTAYLTISGLQAEDEADYYCCSYVDSKTWVFGGGTKLTVLG 458
1318991 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWMTVIWYDRSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGISGYRYGTDMDVWGQGTTVTVSS 459
V L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKFMIYEVTVRPSGVSNRFSGSKSGNTAYLTISGLQAEDEADYYCCSYVDSKTWVFGGGTKLTVLG 460
1319279 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSFAMHWVRQAPGKGLDWVAVIWYAESNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGDWNYSYKYGVDLWGQGTTVTVSS 461
V L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGSNSDVGSYNLVSWYQQDPGKAPKLMIYEVNKRPSGVYNCFFGSKSGNTASLTICGLQGEEEGDYY*CSYADSRTYVFGSGTKVTVLG 462
1318253 V H QMQLVQSGTEVKKPGASVKVSCEASGYAFTGFYMHWVRQAPGQGLEWMGWLNPNTGGTSYVQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCASGTGTTAFDFWGQGTMVTVSS 463
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPQHYTYWYQQKPGRAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGSYVVFGGGTKLTVLG 464
1318209 V H EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYVMNWVRQAPGKGLEWVSGISGSDGSTYYADSVKGRFTISSDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKEEDWNYGFDYWGQGTLVTVSS 465
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDTLPEHYTYWYQQRPGQAPILVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTIRGVQAEDEADYYCQSADSSGAYVVFGGGTKLTVLG 466
1318188 V H QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSDGYFWSWIRQHPGKGLEWIGFIYFTGITYYNPSLQSRVTISVDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYYCARVIPGEDAFDIWGQGTMVTVSS 467
V L SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPQHYTYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADISGTYVVFGGGTKLTVLG 468
1319569 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDINWVRQATGQGLEWMGWMNPNTGNTGYPQKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGLTMKVVGAGWFDPWGQGTLVTVSS 469
V L SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYAFWYQQKPGQSPLLVIYQDKKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDISTGVFGGGTKLTVLG 470
1307105 V H QVQVVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRSYGMDWVRQAPGKGLEWVAVISYDGNYKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDYSTLDYWGQGTLVTVSS 471
V L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSRDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYISGNSHVFGTGTKVTVPG 472
1318198 V H QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSDGYFWSWIRQHPGKGLEWIGFIYFTGITYYNPSLQSRVTISVDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYYCARVIPGEDAFDIWGQGTMVTVSS 473
V L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTNSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKFMIYEVTVRPSGVSNRFSGSKSGNTAYLTISGLQAEDEADYYCCSYVDSKTWVFGGGTKLTVLG 474
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白），其結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合，包含如上所述之VH區和/或VL區，並且進一步包含與VH區偶合的一或多個重鏈恒定區和/或與VL區偶合的輕鏈恒定區。例如，在一個實施方式中，該LTβR結合蛋白係Fab，其包含VH和與VL偶合的第一重鏈恒定結構域（CH1）以及輕鏈恒定區（CL）。在另一個實施方式中，該LTβR結合蛋白係F(ab’)2，其包含藉由鉸鏈區偶合的完全抗體的兩個LTβR結合區，其中每個結合區包含VH-CH1和VL-CL。在另一個實施方式中，該LTβR結合蛋白係包含完全輕鏈（VL-CL）和完全重鏈（VH-CH1-CH2-CH3）的抗體。下表9中提供了本揭露之LTβR抗體之示例性胺基酸序列，該抗體結合人LTβR CRD4和 (a) 不阻斷LIGHT與LTβR結合並且 (b) 不阻斷LTα1β2與LTβR結合。 [ 表 9] . LT β R CRD4 結合抗體的抗體 HC 和 LC 序列
LIBC 編號 描述 序列 SEQ ID
219081 19325 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNQYYADSVKGRFIISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRVAAHPAYYYGLDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 747
LC SYELTQPPSVSLSPGQTARITCSGDALPNHYAYWYQQKPGQAPVLVIFKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGSYVIFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 748
218979 19319 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLSLQMNSLRAEDTAVYYCARERIAAAPYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 749
LC SYELTQPPSVSVSPRQTARITCSGDALPKHYAYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADNTGSYMVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 750
1308929 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLDWVGVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRVAARPHYYYGLDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 751
LC SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPNHYAYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGSYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 752
1318341 HC LVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGTNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNTLRADDTAVYFCAKDRVAARPDYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 753
LC SYELTQPPSVSVSPGQTARIACSGDALPDHYTYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGAYVIFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 754
1318409 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKDTLHLQMNSLRAEDMAVYFCAKDRVVARPDYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 755
LC SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPQHYTYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTIRGVQAEDEADYYCQSADGSGTYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 756
1318412 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGRKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRIAARPNYYYGLDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 757
LC SYELIQPPSVSVSPGQTARITCSGDTLPEHYTYWYQQRPGQAPILVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTIRGVQAEDEADYYCQSADSSGAYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 758
1318738 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQAPGKGLEWVAVIRYDGSNKYYEDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRVEDTAVYYCARERGPYGGNTYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 759
LC SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPKHYAYWYQQKPGQAPVMVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSTDSSATYVVFGGGTKLTVLRQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 760
1319003 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGRKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRIAARPNYYYGLDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 761
LC SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDTLPDHYTYWYQQRPGQAPILVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTIRGVQAEDEADYYCQSADSSGAYVVFGGGTKLTVLRQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 762
1319078 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRVAARPNYYYGMAVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 763
LC SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDTLPNHYTYWYQQKPGQAPVMVIYKDNERPSGIPERFSGFSSGTTVTLTITGVQAEDEADYYCQSADSSGTYVLFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 764
1319182 HC QVHLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKDTLHLQMNSLRAEDMAVYFCAKDRVVARPDYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 765
LC SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDTLPQHYTYWYQQNPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISRVQAEDEADYYCQSADSSGSYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 766
1319275 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYEDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRVAARPNFYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 767
LC SYELTQPPSVSLSPGHSARITCSGDALPKHYAYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGTYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 768
1319390 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYEDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRVAARPNFYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 769
LC SYELTQPPSVSLSPGHSARITCSGDALPKHYAYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGTYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 770
1319499 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSNYGMYWVRQAPGKGLEWVAVIWYDESNKYYADSVKGRFTISRDYSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRIAGRPGYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 771
LC SYELTQPPSVSVSPGQTARISCSGDALPKQYAYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGAYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 772
1319908 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGRKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRIAARPNYYYGLDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 773
LC SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDTLPEHYTYWYQQRPGQAPILVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTIRGVQAEDEADYYCQSADSSGAYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 774
1318496 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAAIWYDGSNKYHADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRIAARPNYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 775
LC SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDTLPNHYTYWYQQEPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTIRGVQAEDEADYYCQSADSSGSYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 776
1320038 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAAIWYDGSNKYHADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRIAARPNYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 777
LC SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDTLPNHYTYWYQQEPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTIRGVQAEDEADYYCQSADSSGSYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 778
1308929 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLDWVGVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRVAARPHYYYGLDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 779
LC SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPNHYAYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGSYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 780
1309633 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRVAARPHYYYGLDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 781
LC SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPNQYAYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGSYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 782
1303255 HC QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNNGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAKADNSGWYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 783
LC QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTTSDVGSYNLVSWYQQHPGKVPKFMIYEVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYHCCSYAESSTLVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 784
1303574 HC QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNNGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAKADNSGWYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 785
LC QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTTSDVGSYNLVSWYQQHPGKVPKFMIYEVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTIFGLQAEDEADYHCCSYAESSTLVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 786
1303613 HC QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNNGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAKADNSGWYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 787
LC QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTTSDVGSYNLVSWYQQHPGKVPKFMIYEVSKRPSGVYNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYHCCSYAESSTLVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 788
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LC SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPKQYAYWYQKKPGQAPVRVIYKDSERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADNSGTFVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 800
1306253 HC QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCRASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNRGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLISDDTAVYYCAKDRAGGVYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 801
LC SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPKQYAYWYQQKPDQAPVMVISKDSERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDESDYYCQSADSSGTYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 802
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LC SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPKQYAYWYQQKPDQAPVMVISKDSERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDESDYYCQSADSSGTYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 804
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LC SYELTQPPSMSVSPGQTARITCSGDTLPKQYVYWYRQKPGQAPVLVIYKDNERPSGILERFSGSSSGATVTLTISGVQAEDEADYFCQSADNSGIYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 806
1306153 HC QEHLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSAYGMHWVRQAPGKGLEWVALIWYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARDRITRVRGVTNYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 807
LC SYELTQPPSMSVSPGQTARITCSGDTLPKHYAYWYRQKAGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGATVTLTISGVQAEDEADYFCQSADNSGIYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 808
1306251 HC QEHLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSAYGMHWVRQAPGKGLEWVALIWYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARDRITRVRGVTNYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 809
LC SYELTQPPSMSVSPGQTARITCSGDTLPKHYAYWYRQKAGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGATVTLTISGVQAEDEADYFCQSADNSGIYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 810
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LC SYELTQPPSMSVSPGQTARITCSGDTLPKHYAYWYRQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGATVTLTISGVQAEDEADYFCQSADNSGIYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 812
1307329 HC QEHLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSAYGMHWVRQAPGKGLEWVALIWYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCARDRITRVRGVTNYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 813
LC SYELTQPPSMSVSPGQTARITCSGDTLPKHYAYWYRQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGATVTLTISGVQAEDEADYFCQSADNSGIYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 814
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LC SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPRHYAYWYRQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGATVTLTISGVQAEDEADYFCQSADSSGIYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 816
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LC SYELTQPPSMSVSPGQTARITCSGDALPKHYAYWYRQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGATVTLTISGVQAEDEADYFCQSADNSGIYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 818
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1306294 HC QEQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGNNKYYEDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRITMVRGVTNYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 821
LC SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPKHYTYWYQQKPGQAPLLVIYKDNDRPSGIPERFSGSSSGTTVTLTIRGVQAEDEADYYCQSADISGIYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 822
1307739 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDRNNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGDRDYHYQYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 823
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1310489 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDRNNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGDRDYHYQYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 825
LC QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPQLMIYEVSKRPSGVSSRFSVSKSGNTASLTISGLRAEDEADYYCCSYAGSSTYVFGSGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 826
1308006 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYNRNNNFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGDRDYYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 827
LC QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTISDVGSYNLVSWYQQHPGKAPQLMIYEVNKRPSGVSNRFSVSKSGNTASLTISGLRAEDEADYYCCSYADTKTYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 828
1308236 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYNRNNNFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGDRDYYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 829
LC QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTISDVGSYNLVSWYQQHPGKAPQLMIYEVSKRPSGVSNRFSVSKSGNTASLTISGLRAEDEADYYCCSYADTKTYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 830
1308563 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYNRNNNFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDAAVYYCARGDRDYYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 831
LC QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTISDVGSYNLVSWYQQHPGKAPQLMIYEVSKRPSGVSNRFSVSKSGNTASLTISGLRAEDEADYYCCSYADTKTYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 832
1308943 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYNRNNNFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDAAVYYCARGDRDYYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 833
LC QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTISDVGSYNLVSWYQQHPGKAPQLMIYEVSKRPSGVSNRFSVSKSGNTASLTISGLRAEDEADYYCCSYADTKTYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 834
1318301 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSFAMHWVRQAPGKGLDWVAVIWYAESNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGDWNYSYKYGVDLWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 835
LC QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGSNSDVGSYNLVSWYQQDPGKAPKLMIYEVTKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCCSYADSRTYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 836
1318394 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWMTVIWYDRSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGISGYRYGTDMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 837
LC QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKFMIYEVTVRPSGVSNRFSGSKSGNTAYLTISGLQAEDEADYYCCSYVDSKTWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 838
1318693 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWMTVIWYDRSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGISGYRYGTDMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 839
LC QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKFMIYEVTVRPSGVSNRFSGSKSGNTAYLTISGLQAEDEADYYCCSYVDSKTWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 840
1318991 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWMTVIWYDRSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGISGYRYGTDMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 841
LC QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKFMIYEVTVRPSGVSNRFSGSKSGNTAYLTISGLQAEDEADYYCCSYVDSKTWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 842
1319279 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSFAMHWVRQAPGKGLDWVAVIWYAESNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGDWNYSYKYGVDLWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 843
LC QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGSNSDVGSYNLVSWYQQDPGKAPKLMIYEVNKRPSGVYNCFFGSKSGNTASLTICGLQGEEEGDYY*CSYADSRTYVFGSGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 844
1318253 HC QMQLVQSGTEVKKPGASVKVSCEASGYAFTGFYMHWVRQAPGQGLEWMGWLNPNTGGTSYVQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCASGTGTTAFDFWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 845
LC SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPQHYTYWYQQKPGRAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGSYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 846
1318209 HC EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYVMNWVRQAPGKGLEWVSGISGSDGSTYYADSVKGRFTISSDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKEEDWNYGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 847
LC SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDTLPEHYTYWYQQRPGQAPILVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTIRGVQAEDEADYYCQSADSSGAYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 848
1318188 HC QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSDGYFWSWIRQHPGKGLEWIGFIYFTGITYYNPSLQSRVTISVDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYYCARVIPGEDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 849
LC SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPQHYTYWYQQKPGQAPVLVIYKDNERPSGIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADISGTYVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 850
1319569 HC QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDINWVRQATGQGLEWMGWMNPNTGNTGYPQKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGLTMKVVGAGWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 851
LC SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYAFWYQQKPGQSPLLVIYQDKKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDISTGVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 852
1307105 HC QVQVVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRSYGMDWVRQAPGKGLEWVAVISYDGNYKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDYSTLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 853
LC QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSRDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYISGNSHVFGTGTKVTVPGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 854
1318198 HC QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSDGYFWSWIRQHPGKGLEWIGFIYFTGITYYNPSLQSRVTISVDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYYCARVIPGEDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 855
LC QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTNSDVGSYNLVSWYQQHPGKAPKFMIYEVTVRPSGVSNRFSGSKSGNTAYLTISGLQAEDEADYYCCSYVDSKTWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 856
結合 CRD1 、 CRD2 和 / 或 CRD3 的 LTβR 促效劑結合蛋白
根據本揭露之所有方面，如本文所描述的促效劑LTβR結合蛋白包含結合並激動LTβR活性的一或多個結合結構域。在一個實施方式中，該結合結構域包含重鏈可變區（VH）或其片段，其中該VH包含結合LTβR的一或多個互補決定區（即HCDR1、HCDR2和/或HCDR3）或其部分。在一個實施方式中，該VH包含SEQ ID NO: 475-498、740-742或其修飾序列中任一個的HCDR1胺基酸序列，其中與SEQ ID NO: 475-498和740-742中的任一個相比，所述修飾序列含有1、2或3個胺基酸殘基修飾。在一個實施方式中，該VH包含SEQ ID NO: 499-528、743或其修飾序列中任一個的HCDR2胺基酸序列，其中與SEQ ID NO: 499-528和743中的任一個相比，所述修飾序列含有1、2或3個胺基酸殘基修飾。在一個實施方式中，該VH包含SEQ ID NO: 529-558、744-746或其修飾序列中任一個的HCDR3胺基酸序列，其中與SEQ ID NO: 529-558和744-746中的任一個相比，所述修飾序列含有1、2或3個胺基酸殘基修飾。下表10中提供了本文所描述的示例性促效劑LTβR結合蛋白的重鏈CDR序列。
如本文實例中所描述的，本文揭露的幾種LTβR抗體的互補位作圖研究表明，在某些情況下，特定LTβR抗體與LTβR的結合不涉及或需要抗體的所有三個重鏈CDR區和/或不涉及一或多個重鏈CDR的所有殘基。顯示不參與LTβR抗體結合相互作用的重鏈CDR在下表10中用星號表示。藉由互補位作圖或突變分析鑒定的顯示不參與或不需要LTβR抗體結合相互作用的重鏈CDR區的殘基被鑒定為可變殘基（X）。表10序列內的X殘基的同一性在本文實例12的表18-25中提供。 [ 表 10] . LT β R 結合蛋白的重鏈 CDR 序列
LIBC 編號 Well ID HCDR1 HCDR2 HCDR3
SEQ ID SEQ ID SEQ ID
218990 (19320) 30H1 GDYMY* 475 WINPX 5SGGTNX 11-X 17 499 EGSSGWSAEYX 11X 12X 13 529
WINPX 5SGGTNX 11-X 17 500 EGSSGWSAEYX 11X 12X 13 530
WINPNSGGTNYAKKFQG 501 EGSSGWSAEYFQH 531
218994 (19321) 31A3 SYX 8X 9X 10 476 IIWYX 5X 6SDX 9-X 17 502 GDSEDFYYYDX 11X 12X 13 532
SYX 8X 9X 10 477 IIWYX 5X 6SDX 9-X 17 503 GDSEDFYYYDX 11X 12X 13 533
SYGMH 478 IIWYDGSDEYYADSVKG 504 GDSEDFYYYDFDV 534
219058 (19324) 36G2 TSGMN 479 SVSSSGSYX 9-X 17 505 AX 2YNWHFDASX 11X 12 535
SVSSSGSYX 9-X 17 506 AX 2YNWHFDASX 11X 12 536
SVSSSGSYIYYADSVKG 507 ARYNWHFDASDI 537
219037 (19322) 34D1 SGGYFWS 480 YSHYSGTTYYNPSLKS 508 VPDGEDYFDY 538
219098 (19327) 44B1 SYAMS 481 TISGSGGSTYYADSVKG 509 VRDNWNYX 8X 9MDV 539
VRDNWNYX 8X 9MDV 540
VRDNWNYDGMDV 541
219098.001 SYAMS 482 TISGSGGSTYYADSVKG 510 VRDNWNYDGMDV 542
219097 (19326) 43D9 DAWX 9X 10 740 RIKTKTDGGTTDYAAPVKG* 743 DYGDYX 6X 7 744
DAWX 9X 10 741 DYGDYX 6X 7 745
DAWMS 742 DYGDYEY 746
219051 (19323) 35F5 GYYLH 483 WINPNIGVTDX 11AQKFQD 511 RGYNDDYDFDY 543
WINPNIGVTDX 11AQKFQD 512
WINPNIGVTDSAQKFQD 513
218989-1 29G8 TSGMGVG 484 LIYWNGGKLYSPSLKN 514 SGYYDNSGYYWDGMDV 544
218967 17F5 SYFWT 485 YIYYSGSTNYNPSLKS 515 VETIMAFDAFDI 545
218981 25C9 SGGYFWS 486 YTHYIGSTYYNPSLKS 516 VDTAMVDAFDI 546
218995 31C9 SRNWWG 487 YIHYIGNTYYNPSLKS 517 ETGSDGDDTFDI 547
218996 31B10 NYDMH 488 TIWYDGSNKYYADSVKG 518 LSTVTTGDYYGMDV 548
218998 32A2 SGGYFWG 489 YIHYIGSPYYNPSLKS 519 DCSSVNCQDAFDI 549
219083 41H7 SDGYFWS 490 FIYYSGTTYYNPSLKS 520 VCGGDCYDAFDI 550
219092 43C1 NSIWWG 491 YIHYSGNTYYNPSLKS 521 NFGDVDAFDI 551
219023 33G6 SNSAAWN 492 RTYCRSKCYSDYALSVKS 522 AVADHYSYALDV 552
219023.001 SNSAAWN 493 RTYYRSKWYSDYALSVKS 523 AVADHYSYALDV 553
219095 43G5 NYAMN 494 VISDSGGSSNYADSVKG 524 DRSIAGYYGMDV 554
219102 44G11 SYYWS 495 YIYYGGSTNYNPSLKS 525 SYSSAWYGSAY 555
218973 21A5 SYGIH 496 VIWYDGSKKYYADSVKG 526 DPSHYYGSGSYNYFYGMDV 556
219044 34F10 DNYMS 497 VIYSGGNTYYGDSVKG 527 PFFDY 557
218997 31E12 SGGYYWS 498 YIYYSGSTYYNPSLMG 528 RGPVAGGFDY 558
* 本文所描述的 HDX 互補位作圖實驗表明 CDR 不參與結合 LT β R
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含輕鏈可變區（VL），其中VL包含單獨或與VH CDR一起結合LTβR的一或多個互補決定區（即LCDR1、LCDR2和/或LCDR3）或其部分。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 559-589或其修飾序列中任一個的LCDR1胺基酸序列，其中與SEQ ID NO: 559-589中的任一個相比，所述修飾序列含有1、2或3個胺基酸殘基修飾。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 590-618或其修飾序列中任一個的LCDR2胺基酸序列，其中與SEQ ID NO: 590-618中的任一個相比，所述修飾序列含有1、2或3個胺基酸殘基修飾。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 619-643或其修飾序列中任一個的LCDR3胺基酸序列，其中與SEQ ID NO: 619-643中的任一個相比，所述修飾序列含有1、2或3個胺基酸殘基修飾。下表11中提供了本文所述之示例性促效劑LTβR結合蛋白的輕鏈CDR序列。
如本文實例中所描述的，本文揭露的幾種LTβR抗體的互補位作圖研究表明，在某些情況下，特定LTβR抗體與LTβR的結合不涉及或需要抗體的所有三個輕鏈CDR區和/或不涉及一或多個輕鏈CDR的所有殘基。顯示不參與LTβR抗體結合相互作用的輕鏈CDR在下表11中用星號表示。藉由互補位作圖或突變分析鑒定的顯示不參與LTβR抗體結合相互作用或其不需要的輕鏈CDR區的殘基被鑒定為可變殘基（X）。表11序列內的X殘基的同一性在本文實例12的表18-25中提供。 [ 表 11] . LT β R 結合蛋白的輕鏈 CDR 序列
LIBC 編號 Well ID LCDR1 LCDR2 LCDR3
SEQ ID SEQ ID SEQ ID
218990 (19320) 30H1 X 1X 2X 3X 4SVSSSFX 11X 12 559 GASRRAT* 590 QQYGTSPLS 619
X 1X 2X 3X 4SVSSSFX 11X 12 560
RASQSVSSSFLA 561
218994 (19321) 31A3 SGSSSNIGKNX 11X 12X 13 562 DNNX 4X 5PS 591 X 1X 2X 3DHSLSASX 11X 12 620
SGSSSNIGKNX 11X 12X 13 563 DNNX 4X 5PS 592 X 1X 2X 3DHSLSASX 11X 12 621
SGSSSNIGKNYVS 564 DNNKRPS 593 GTWDHSLSASYV 622
219058 (19324) 36G2 RASQSISSDLN* 565 AASSLX 6X 7 594 QQSYNTPLT* 623
AASSLX 6X 7 595
AASSLHS 596
219097 (19326) 43D9 RTSQSISRYLN 566 GASSLX 6X 7 597 HQSYSTPPT* 624
GASSLX 6X 7 598
GASSLQS 599
219037 (19322) 34D1 RASQTISSYLN 567 DASSLQS 600 QQSFSAPIT 625
219098 (19327) 44B1 RX 2SQSLLYSSGYIDLD 568 LGSNRAS 601 MQTIQTPLT 626
RX 2SQSLLYSSGYIDLD 569
RCSQSLLYSSGYIDLD 570
219098.001 RSSQSLLYSSGYIDLD 571 LGSNRAS 602 MQTIQTPLT 627
219051 (19323) 35F5 KSRQSLLHRX 10X 11KTYLY 572 EVSNRFS 603 MQSIQLPLI 628
KSRQSLLHRX 10X 11KTYLY 573
KSRQSLLHRDGKTYLY 574
218989 29G8 RASQSLISDYLV 575 GASSRPT 604 QQYDTSLN 629
218967 17F5 RASQSVGSSYLA 576 GASSRAT 605 QQYDTSPIT 630
218981 25C9 RASQNIDSSYLA 577 DTSSRAT 606 QQYGGSPIT 631
218995 31C9 RASQSIGSSYLA 578 GASGRAT 607 QQCYSSPIT 632
218996 31B10 SGSRSNIGNNYVS 579 DNSKRPS 608 GTWDSSLSAVV 633
218998 32A2 WSSQSIDSTYLA 580 GASTRAT 609 QQYSSSPIT 634
219083 41H7 RASQNISNTYLA 581 GASSRAT 610 QQYFSSPIT 635
219092 43C1 RASQSISSSYLA 582 GASSRAT 611 QQYYLSPLT 636
219023 33G6 RASQTIRTYLN 583 AASSLQS 612 QQSYSSPIT 637
219023.001 RASQTIRTYLN 584 AASSLQS 613 QQSYSSPIT 638
219095 43G5 RASQSISSDLN 585 AASSLHS 614 QQSYNTPLT 639
219102 44G11 QASQDISNYLI 586 DASNLET 615 QQYDHLPIT 640
218973 21A5 SGSSSNIGNTYVS 587 DNNERPS 616 GTWDNSLTAVV 641
219044 34F10 RASQTVWSNYLA 588 GASRRVI 617 QQYGSSSIT 642
218997 31E12 RASQNVYNNYLA 589 GTSSRAT 618 QQYGSSLLCS 643
* 本文所描述的HDX 互補位作圖實驗表明CDR 不參與結合LT βR
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白結合人LTβR的CRD2和CRD3，包括對應於SEQ ID NO: 4的殘基56-64和81-101（對應於SEQ ID NO: 1的殘基86-94和111-131）的一或多個殘基，並允許如本文所定義的內源性LTβR配體結合活性。該促效劑LTβR結合蛋白包含可變重鏈結構域（VH），其包含與SEQ ID NO: 501的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 531的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。視需要，該VH進一步包含與SEQ ID NO: 475的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列。在一個實施方式中，該LTβR結合蛋白的VH包含SEQ ID NO: 499的HCDR2序列和SEQ ID NO: 529的HCDR3序列；或如SEQ ID NO: 500的HCDR2序列和SEQ ID NO: 530的HCDR3序列進一步定義的。在一個實施方式中，該LTβR結合蛋白的VH包含SEQ ID NO: 501的HCDR2序列和SEQ ID NO: 531的HCDR3序列。視需要，該示例性促效劑LTβR結合蛋白的VH進一步包含SEQ ID NO: 475的HCDR1。
根據前述實施方式，該促效劑LTβR結合蛋白視需要進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 561的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，以及與SEQ ID NO: 619的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。視需要，該VL進一步包含與SEQ ID NO: 590的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 559的LCDR1序列和SEQ ID NO: 619的LCDR3序列；或如SEQ ID NO: 560的LCDR1序列和SEQ ID NO: 619的LCDR3序列進一步定義的；或如SEQ ID NO: 560的LCDR1序列和SEQ ID NO: 619的LCDR3序列進一步定義的。視需要，該VL進一步包含SEQ ID NO: 590的LCDR2。包含該實施方式的VH和VL之示例性促效劑LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 218990（19320；30H1）的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白係結合LTβR的CRD1的結合蛋白，包括對應於SEQ ID NO: 4的殘基3-9、20-29和38-47（對應於SEQ ID NO: 1的殘基33-39、50-59和68-77）的一或多個殘基。在一個實施方式中，該LTβR結合蛋白不阻斷或抑制內源性LIGHT與LTβR結合發生，以及至少或約80%的內源性LTα1β2與LTβR結合發生。該LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 478的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 504的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 534的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該LTβR結合蛋白的VH包含SEQ ID NO: 476的HCDR1序列，SEQ ID NO: 502的HCDR2序列和SEQ ID NO: 532的HCDR3序列；或如SEQ ID NO: 477的HCDR1序列、SEQ ID NO: 503的HCDR2序列和SEQ ID NO: 533的HCDR3序列進一步定義的；或如SEQ ID NO: 478的HCDR1序列、SEQ ID NO: 504的HCDR2序列和SEQ ID NO: 534的HCDR3序列進一步定義的。
根據前述實施方式，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白視需要進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 564的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 593的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 622的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO:562的LCDR1序列、SEQ ID NO: 591的LCDR2和SEQ ID NO: 620的LCDR3序列；或如SEQ ID NO: 563的LCDR1序列、SEQ ID NO: 592的LCDR2和SEQ ID NO: 621的LCDR3序列進一步定義的；或如SEQ ID NO: 564的LCDR1序列、SEQ ID NO: 593的LCDR2和SEQ ID NO: 622的LCDR3序列進一步定義的。包含該實施方式的VH和VL之示例性促效劑LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 218994（19321；31A3）的LTβR抗體
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白結合人LTβR的CRD2和CRD3，包括對應於SEQ ID NO: 4的殘基56-64和81-101（對應於SEQ ID NO: 1的殘基86-94和111-131）的一或多個殘基。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白在＜ 8 nM的濃度下不阻斷內源性LIGHT或LTα1β2與LTβR結合，如本文所描述的基於細胞的受體-配體測定所測量的（參見例如，實例8.2）。該LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 479的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 507的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 537的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該LTβR結合蛋白的VH包含SEQ ID NO: 479的HCDR1序列，SEQ ID NO: 505的HCDR2序列和SEQ ID NO: 535的HCDR3序列；或如SEQ ID NO: 479的HCDR1序列、SEQ ID NO: 506的HCDR2序列和SEQ ID NO: 536的HCDR3序列進一步定義的；或如SEQ ID NO: 479的HCDR1序列、SEQ ID NO: 507的HCDR2序列和SEQ ID NO: 537的HCDR3序列進一步定義的。
根據前述實施方式，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白視需要進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 596的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列。視需要，該VL包含與SEQ ID NO: 565的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，以及視需要包含與SEQ ID NO: 623的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 594的LCDR2，或如SEQ ID NO: 595的LCDR2進一步定義的，或如SEQ ID NO: 596的LCDR2進一步定義的。視需要，該VL包含SEQ ID NO: 565的LCDR1序列，SEQ ID NO: 596的LCDR2和SEQ ID NO: 623的LCDR3序列。包含該實施方式的VH和VL之示例性促效劑LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 219058（19324；36G2）的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白係結合LTβR且不阻斷或抑制LIGHT與LTβR結合發生的結合蛋白。該促效劑LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 480的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 508的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 538的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該VH包含SEQ ID NO: 408的HCDR1序列，SEQ ID NO: 508的HCDR2和SEQ ID NO: 538的HCDR3序列。
根據前述實施方式，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白視需要進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 567的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 600的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 625的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 567的LCDR1序列，SEQ ID NO: 600的LCDR2和SEQ ID NO: 625的LCDR3序列。包含該實施方式的VH和VL之示例性促效劑LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 219037（19322；34D1）的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白係結合LTβR且不阻斷或抑制如本文定義的LIGHT與LTβR結合的結合蛋白。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白不阻斷或抑制LIGHT與LTβR結合。該LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 4812的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 509的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 539的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該VH包含SEQ ID NO: 481的HCDR1序列、SEQ ID NO: 509的HCDR2和SEQ ID NO: 539的HCDR3序列，或如SEQ ID NO: 481的HCDR1序列、SEQ ID NO: 509的HCDR2和SEQ ID NO: 540的HCDR3序列進一步定義的；或如SEQ ID NO: 481的HCDR1序列、SEQ ID NO: 509的HCDR2和SEQ ID NO: 541的HCDR3序列進一步定義的。
根據前述實施方式，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白視需要進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 570的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 601的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 626的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO:568的LCDR1序列、SEQ ID NO: 601的LCDR2和SEQ ID NO: 626的LCDR3序列；或如SEQ ID NO: 569的LCDR1序列、SEQ ID NO: 601的LCDR2和SEQ ID NO: 626的LCDR3序列進一步定義的；或如SEQ ID NO: 570的LCDR1序列、SEQ ID NO: 601的LCDR2和SEQ ID NO: 626的LCDR3序列進一步定義的；或如SEQ ID NO: 571的LCDR1序列、SEQ ID NO: 602的LCDR2和SEQ ID NO: 627的LCDR3序列進一步定義的。包含該實施方式的VH和VL之示例性促效劑LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 219098（19327；44B1）的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或促效劑LTβR雙特異性結合蛋白）結合人LTβR CRD1，包括對應於SEQ ID NO: 4的殘基1-19（對應於SEQ ID NO: 1的殘基31-49）的一或多個殘基。該促效劑LTβR結合蛋白不阻斷LIGHT與LTβR結合並且不阻斷LTα1β2與LTβR結合。該促效劑LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 483的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 513的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 543的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該VH包含SEQ ID NO:483的HCDR1序列、SEQ ID NO: 511的HCDR2和SEQ ID NO: 543的HCDR3序列；或如SEQ ID NO: 483的HCDR1序列、SEQ ID NO: 512的HCDR2和SEQ ID NO: 543的HCDR3序列進一步定義的；或如SEQ ID NO: 483的HCDR1序列、SEQ ID NO: 513的HCDR2和SEQ ID NO: 543的HCDR3序列進一步定義的。
根據前述實施方式，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白視需要進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 574的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 603的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 628的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO:57217的LCDR1序列、SEQ ID NO: 603的LCDR2和SEQ ID NO: 628的LCDR3序列；或如SEQ ID NO: 573的LCDR1序列、SEQ ID NO: 603的LCDR2和SEQ ID NO: 628的LCDR3序列進一步定義的；或如SEQ ID NO: 574的LCDR1序列、SEQ ID NO: 603的LCDR2和SEQ ID NO: 628的LCDR3序列進一步定義的。包含該實施方式的VH和VL之示例性促效劑LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 219051（19323；35F5）的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，本揭露之LTβR結合蛋白係結合LTβR CRD1和CRD2的基於抗體的分子，包括對應於SEQ ID NO: 4的殘基38-42和56-70的一或多個殘基。該基於LTβR抗體的分子包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 742的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，以及與SEQ ID NO: 746的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。視需要，該LTβR結合蛋白的VH進一步包含與SEQ ID NO: 743的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列。在任何實施方式中，該LTβR結合蛋白的VH包含SEQ ID NO: 740的HCDR1序列和SEQ ID NO: 744的HCDR3序列；或如SEQ ID NO: 741的HCDR1序列和SEQ ID NO: 745的HCDR3序列進一步定義的；或如SEQ ID NO: 742的HCDR1序列和SEQ ID NO: 746的HCDR3序列進一步定義的。視需要，該示例性LTβR結合蛋白的VH進一步包含SEQ ID NO: 743的HCDR2。
根據前述實施方式，本揭露之該基於LTβR抗體的分子視需要進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 566的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 599的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列。視需要，該VL進一步包含與SEQ ID NO: 624的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在任何實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 566的LCDR1序列和SEQ ID NO: 597的LCDR2；或如SEQ ID NO: 566的LCDR1序列和SEQ ID NO: 598的LCDR2進一步定義的；或如SEQ ID NO: 566的LCDR1序列和SEQ ID NO: 599的LCDR2進一步定義的。視需要，該VL進一步包含SEQ ID NO: 624的LCDR3。包含該實施方式的VH和VL之示例性基於LTβR抗體的分子包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 219097（19326；43D9）的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 484的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 514的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 544的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該VH包含SEQ ID NO: 484的HCDR1序列，SEQ ID NO: 514的HCDR2和SEQ ID NO: 544的HCDR3序列。該促效劑LTβR結合蛋白進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 575的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 604的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 629的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 575的LCDR1序列，SEQ ID NO: 604的LCDR2和SEQ ID NO: 629的LCDR3序列。包含該實施方式的VH和VL之示例性促效劑LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 218989的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 485的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 515的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 545的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該VH包含SEQ ID NO: 485的HCDR1序列，SEQ ID NO: 515的HCDR2和SEQ ID NO: 545的HCDR3序列。本揭露之促效劑LTβR結合蛋白進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 576的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 605的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 630的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 576的LCDR1序列，SEQ ID NO: 605的LCDR2和SEQ ID NO: 630的LCDR3序列。包含該實施方式的VH和VL之示例性促效劑LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 218967的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 486的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 516的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 546的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該VH包含SEQ ID NO: 486的HCDR1序列，SEQ ID NO: 516的HCDR2和SEQ ID NO: 546的HCDR3序列。本揭露之促效劑LTβR結合蛋白視需要進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 577的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 606的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 631的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 577的LCDR1序列，SEQ ID NO: 6068的LCDR2和SEQ ID NO: 631的LCDR3序列。包含該實施方式的VH和VL之示例性促效劑LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 218981的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 487的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 517的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 547的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該VH包含SEQ ID NO: 487的HCDR1序列，SEQ ID NO: 517的HCDR2和SEQ ID NO: 547的HCDR3序列。本揭露之促效劑LTβR結合蛋白進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 578的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 607的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 632的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 578的LCDR1序列，SEQ ID NO: 607的LCDR2和SEQ ID NO: 632的LCDR3序列。包含該實施方式的VH和VL之示例性促效劑LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 218995的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 488的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 518的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 548的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該VH包含SEQ ID NO: 488的HCDR1序列，SEQ ID NO: 518的HCDR2和SEQ ID NO: 548的HCDR3序列。本揭露之促效劑LTβR結合蛋白視需要進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 579的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 608的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 633的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 579的LCDR1序列，SEQ ID NO: 608的LCDR2和SEQ ID NO: 633的LCDR3序列。包含該實施方式的VH和VL之示例性促效劑LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 218996的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 489的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 519的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 549的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該VH包含SEQ ID NO: 489的HCDR1序列，SEQ ID NO: 519的HCDR2和SEQ ID NO: 549的HCDR3序列。本揭露之促效劑LTβR結合蛋白視需要進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 580的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 609的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 634的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 580的LCDR1序列，SEQ ID NO: 609的LCDR2和SEQ ID NO: 634的LCDR3序列。包含該實施方式的VH和VL之示例性促效劑LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 218998的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 490的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 520的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 550的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該VH包含SEQ ID NO: 490的HCDR1序列，SEQ ID NO: 520的HCDR2和SEQ ID NO: 550的HCDR3序列。本揭露之促效劑LTβR結合蛋白視需要進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 581的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 610的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 635的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 581的LCDR1序列，SEQ ID NO: 610的LCDR2和SEQ ID NO: 635的LCDR3序列。包含該實施方式的VH和VL之示例性促效劑LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 219083的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 491的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 521的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 551的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該VH包含SEQ ID NO: 491的HCDR1序列，SEQ ID NO: 521的HCDR2和SEQ ID NO: 551的HCDR3序列。本揭露之促效劑LTβR結合蛋白視需要進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 582的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 611的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 636的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 582的LCDR1序列，SEQ ID NO: 611的LCDR2和SEQ ID NO: 636的LCDR3序列。包含該實施方式的VH和VL之示例性促效劑LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 219092的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白係結合LTβR並允許內源性LTβR配體結合活性的結合蛋白，如本文所定義的。該LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 492的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 522的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 552的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該VH包含SEQ ID NO: 492的HCDR1序列，SEQ ID NO: 522的HCDR2和SEQ ID NO: 552的HCDR3序列。在一個實施方式中，SEQ ID NO: 522的HCDR2被修飾以取代SEQ ID NO: 522中的位置4和8處的半胱胺酸殘基。在一個實施方式中，該LTβR結合蛋白的HCDR2包含SEQ ID NO: 523的HCDR2。本揭露之促效劑LTβR結合蛋白視需要進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 583的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 612的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 637的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 583的LCDR1序列，SEQ ID NO: 612的LCDR2和SEQ ID NO: 637的LCDR3序列。包含該實施方式的VH和VL之示例性促效劑LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 219023的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 494的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 524的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 554的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該VH包含SEQ ID NO: 494的HCDR1序列，SEQ ID NO: 524的HCDR2和SEQ ID NO: 554的HCDR3序列。本揭露之促效劑LTβR結合蛋白視需要進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 585的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 614的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 639的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 585的LCDR1序列，SEQ ID NO: 614的LCDR2和SEQ ID NO: 639的LCDR3序列。包含該實施方式的VH和VL之示例性促效劑LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 219095的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 495的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 525的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 555的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該VH包含SEQ ID NO: 495的HCDR1序列，SEQ ID NO: 525的HCDR2和SEQ ID NO: 555的HCDR3序列。本揭露之促效劑LTβR結合蛋白視需要進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 586的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 615的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 640的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 586的LCDR1序列，SEQ ID NO: 615的LCDR2和SEQ ID NO: 640的LCDR3序列。包含該實施方式的VH和VL之示例性促效劑LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 219102的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 496的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 526的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 556的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該VH包含SEQ ID NO: 496的HCDR1序列，SEQ ID NO: 526的HCDR2和SEQ ID NO: 556的HCDR3序列。本揭露之促效劑LTβR結合蛋白視需要進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 587的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 616的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 641的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 587的LCDR1序列，SEQ ID NO: 616的LCDR2和SEQ ID NO: 641的LCDR3序列。包含該實施方式的VH和VL之示例性促效劑LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 218973的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 497的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 527的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 557的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該VH包含SEQ ID NO: 497的HCDR1序列，SEQ ID NO: 527的HCDR2和SEQ ID NO: 557的HCDR3序列。本揭露之促效劑LTβR結合蛋白視需要進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 588的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 617的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 642的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 588的LCDR1序列，SEQ ID NO: 617的LCDR2和SEQ ID NO: 642的LCDR3序列。包含該實施方式的VH和VL之示例性促效劑LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 219044的LTβR抗體。
在另一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含VH，其中該VH包含與SEQ ID NO: 498的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR1序列，與SEQ ID NO: 528的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 558的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的HCDR3序列。在一個實施方式中，該VH包含SEQ ID NO: 498的HCDR1序列，SEQ ID NO: 528的HCDR2和SEQ ID NO: 558的HCDR3序列。本揭露之促效劑LTβR結合蛋白視需要進一步包含VL，其中該VL包含與SEQ ID NO: 589的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR1序列，與SEQ ID NO: 618的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR2序列，以及與SEQ ID NO: 643的序列共用至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的LCDR3序列。在一個實施方式中，該VL包含SEQ ID NO: 589的LCDR1序列，SEQ ID NO: 618的LCDR2和SEQ ID NO: 643的LCDR3序列。包含該實施方式的VH和VL之示例性促效劑LTβR結合蛋白包括但不限於本文鑒定為LIBC No. 218997的LTβR抗體。
對本文揭露的LTβR結合蛋白的重鏈CDR序列和/或輕鏈CDR序列的合適的胺基酸修飾包括，例如，保守取代或功能等效的胺基酸殘基取代，該等取代導致變體CDR序列具有與上文描述的CDR序列的那些相似或增強的結合特徵。本揭露涵蓋的是含有1、2、3、4、5或更多個胺基酸取代（取決於CDR的長度）的表2、3、6、7、9和10的CDR，該等取代維持或增強抗體的LTβR結合。所得修飾的CDR在序列上與表2、3、6、7、9和10中提供的CDR係至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%相似。
對本文揭露的重鏈和輕鏈CDR序列的合適的胺基酸修飾包括，例如，保守取代或功能等效的胺基酸殘基取代，該等取代導致變體CDR序列具有與本文揭露的CDR序列的那些相似或增強的結合特徵。保守取代係發生在與其側鏈相關的胺基酸家族中的取代。基因編碼的胺基酸可分為四個家族：(1) 酸性（天冬胺酸、麩胺酸）；(2) 鹼性（離胺酸、精胺酸、組胺酸）；(3) 非極性（丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、蛋胺酸、色胺酸）；以及 (4) 不帶電荷的極性（甘胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、半胱胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸）。苯丙胺酸、色胺酸和酪胺酸有時被共同分類為芳香族胺基酸。可替代地，胺基酸庫可以分組為 (1) 酸性（天冬胺酸、麩胺酸）；(2) 鹼性（離胺酸、精胺酸組胺酸），(3) 脂肪族（甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、絲胺酸、蘇胺酸），其中絲胺酸和蘇胺酸視需要地單獨分組為脂肪族羥基；(4) 芳香族（苯丙胺酸、酪胺酸、色胺酸）；(5) 醯胺（天冬醯胺、麩醯胺酸）；以及 (6) 含硫（半胱胺酸和蛋胺酸）（Stryer (編輯), Biochemistry[生物化學], 第2版, WH Freeman and Co., 1981，特此藉由引用將其全部併入）。也可以對本文揭露的重鏈CDR序列和輕鏈CDR序列進行非保守取代。非保守取代涉及用來自不同類別胺基酸的一或多個胺基酸殘基取代CDR的一或多個胺基酸殘基，以改善或增強CDR的結合特性。本文揭露的重鏈可變區CDR和/或輕鏈可變區CDR的胺基酸序列可進一步包含維持或增強LTβR結合的一或多個內部中性胺基酸插入或缺失。
如本文所描述的結合LTβR的LTβR結合蛋白可以包含可變輕鏈（VL）、可變重鏈（VH）或VL鏈和VH鏈的組合。在一個實施方式中，該LTβR結合蛋白的VH鏈包含下表12中提供的VH胺基酸序列中的任一個，或與表12中列出的VH胺基酸序列中的任一個至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或至少95%相同的胺基酸序列。在一個實施方式中，該LTβR結合蛋白的VL鏈包含下表12中提供的VL胺基酸序列中的任一個，或與表12中列出的VL胺基酸序列中的任一個至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%相同的胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白結合並激動人LTβR（SEQ ID NO: 1），同時允許內源性LTβR配體結合和活性（即LIGHT或LTα1β2結合），如本文所描述的，並且包含與表12中所列的VH結構域胺基酸序列中的任一個具有至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的重鏈可變結構域。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白結合並激動人LTβR（SEQ ID NO: 1），同時允許內源性LTβR配體結合和活性（即LIGHT或LTα1β2結合），如本文所描述的，並且包含與表12中所列的VL結構域胺基酸序列中的任一個具有至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的輕鏈可變結構域。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白結合並激動人LTβR（SEQ ID NO: 1），同時允許內源性LTβR配體結合和活性（即LIGHT或LTα1β2結合），如本文所描述的，並且包含與表12中所列的VH結構域胺基酸序列中的任一個具有至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的重鏈可變結構域，以及與表12中所列的相應VL結構域胺基酸序列具有至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的輕鏈可變結構域。 [ 表 12] . LT β R 結合蛋白 VH 和 VL 胺基酸序列
LIBC 編號 Well ID 結構域 序列 SEQ ID
218990 30H1 19320 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGDYMYWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAKKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAREGSSGWSAEYFQHWGQGTLVTVFS 644
V L EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSFLAWYQQKLGQAPRLLMYGASRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGTSPLSFGGGTKVEIKR 645
218994 31A3/ 19321 V H QVQLVESGGAVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSDEYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSVRDEDTALYYCVRGDSEDFYYYDFDVWGQGTTVTVSS 646
V L QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGKNYVSWYQHLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDHSLSASYVFGTGTKVTVLG 647
219058 36G2/ 19324 V H EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSTSGMNWVRQAPGKGLEWVSSVSSSGSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGARYNWHFDASDIWGQGTVVTVSS 648
V L DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSDLNWYQQKPGKAPNLLIYAASSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLLPEDFATYYCQQSYNTPLTFGGGTKVEIKR 649
219097 43D9/19326 V H EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFNDAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKTKTDGGTTDYAAPVKGRITISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTDYGDYEYWGQGTLVTVSS 650
V L DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQSYSTPPTFGQGTKVEIKR 651
219037 34D1/ 19322 V H QVQLQESGPGRVKPSQTLSLTCTVSGGSINSGGYFWSWIRQHPGKVLEWIGYSHYSGTTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQLSLKLNSVNAADTAVYYCARVPDGEDYFDYWGQGALVTVSS 652
V L DLQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFETYYCQQSFSAPITFGQGTRLEIKR 653
219098 44B1/ 19327 V H EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLNLQMNSLRAEDTAVYYCAKVRDNWNYDGMDVWGQGTTVTVSS 654
V L DIVMTQSPLSLPVTLGESASISCRCSQSLLYSSGYIDLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQTIQTPLTFGGGTKVEIKR 655
219098.001 V H EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLNLQMNSLRAEDTAVYYCAKVRDNWNYDGMDVWGQGTTVTVSS 656
V L DIVMTQSPLSLPVTLGESASISCRSSQSLLYSSGYIDLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQTIQTPLTFGGGTKVEIKR 657
219051 35F5/19323 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYLHWVRQAPGQGLEWMGWINPNIGVTDSAQKFQDRVTMTRDTSISTAYMELSRLISDDTAVYYCTVRGYNDDYDFDYWGQGTLVTVSS 658
V L DVVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSRQSLLHRDGKTYLYWYLQKPGQPPQLLIYEVSNRFSGVPNRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQSIQLPLIFGGGTRVDIKR 659
218989 29G8 V H QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFTGFSLSTSGMGVGWIRQPPGKALEWLALIYWNGGKLYSPSLKNRLTITKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAHSGYYDNSGYYWDGMDVWGQGTTVTVSP 660
V L EIVLTQSPVTLSLSPGERATLSCRASQSLISDYLVWYQQKPGQAPRLLIYGASSRPTGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDTSLNFGGGTKVEIKR 661
218967 17F5 V H QVQLQESGPGVVKPSETLSLTCTVSGGSISSYFWTWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTFSVDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYYCARVETIMAFDAFDIWGQGTMVTVSS 662
V L EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYFCQQYDTSPITFGQGTRLEIKR 663
218981 25C9 V H QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYFWSWIRQHPGKGLEWIGYTHYIGSTYYNPSLKSRVAFSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVDTAMVDAFDIWGQGTMVTVSS 664
V L EIMLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQNIDSSYLAWYQQTPGQAPRLLIYDTSSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFSVYYCQQYGGSPITFGQGTRLDIKR 665
218995 31C9 V H QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSISSRNWWGWIRQPPGKGLEWIGYIHYIGNTYYNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARETGSDGDDTFDIWGQGTMVTVSS 666
V L EIVLTQSPVTLSLSPGERATLSCRASQSIGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASGRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFALYYCQQCYSSPITFGHGTRLDIKR 667
218996 31B10 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYDMHWVRQAPGKGLEWVTTIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCPTLSTVTTGDYYGMDVWGQGTAVTVSS 668
V L QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSRSNIGNNYVSWYQQLPGTVPKLLIYDNSKRPSGIPDRFSGSKSGTSVTLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAVVFGGGTKLTVLS 669
218998 32A2 V H QVQLQESGPGQVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYFWGWIRQHPGKGLEWIGYIHYIGSPYYNPSLKSRTTISVDTSKNQFSLKLSSVIAADTAVYYCARDCSSVNCQDAFDIWGQGTMVTVSS 670
V L EIVLTQSPGTLSLSPGERASLSCWSSQSIDSTYLAWYHQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLSISRLEPEDFAVYYCQQYSSSPITFGQGTRLEIKR 671
219083 41H7 V H QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIRSDGYFWSWIRQHPGKGLEWLGFIYYSGTTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLTSVTVADTAVYYCARVCGGDCYDAFDIWGQGTMVTVSS 672
V L DIVLTQSPGTLSLSPGEGATLSCRASQNISNTYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYDCQQYFSSPITFGGGTRVEIKR 673
219092 43C1 V H QVQVQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSISNSIWWGWIRQPPGKGLEWIGYIHYSGNTYYNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLNSVTAVDTAVYYCARNFGDVDAFDIWGQGTMVTVSS 674
V L EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLNISRLEPEDFVVYYCQQYYLSPLTFGGGTKVEIKR 675
219023 33G6 V H QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVFSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYCRSKCYSDYALSVKSRATINPDTSENQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARAVADHYSYALDVWGQGTTVNVSS 676
V L DIQMNQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTIRTYLNWYQQKPGKAPKVLIYAASSLQSGVPSRFSGTGSGTDFTLTITSLQPEDFATYSCQQSYSSPITFGGGTKVEIKR 677
219023.001 V H QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVFSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYSDYALSVKSRATINPDTSENQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARAVADHYSYALDVWGQGTTVTVSS 678
V L DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTIRTYLNWYQQKPGKAPKVLIYAASSLQSGVPSRFSGTGSGTDFTLTITSLQPEDFATYSCQQSYSSPITFGGGTKVEIKR 679
219095 43G5 V H EVQLLESGGNLVQPGGSLRLSCVVSGFTFNNYAMNWVRQAPGKGLEWVSVISDSGGSSNYADSVKGRFTISRDNSKKTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRSIAGYYGMDVWGQGTTVTVSS 680
V L DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSDLNWYQQKPGKAPNLLIYAASSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLLPEDFATYYCQQSYNTPLTFGGGTKVEIKR 681
219102 44G11 V H QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRLPPGKGLEWIGYIYYGGSTNYNPSLKSRVSMSVDTSKNQFSLKLSYVTAADTAVYYCARSYSSAWYGSAYWGQGTLVIVSS 682
V L DIQMTQSPSSLSASLGDRVTITCQASQDISNYLIWYQLKPGKAPKVLIYDASNLETGVPSRFSGNGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYDHLPITFGQGTRLDIKR 683
219102.001 V H QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRLPPGKGLEWIGYIYYGGSTNYNPSLKSRVSMSVDTSKNQFSLKLSYVTAADTAVYYCARSYSSAWYGSAYWGQGTLVIVSS 684
V L DIQMTQSPSSLSASLGDRVTITCQASQDISNYLIWYQLKPGKAPKVLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYDHLPITFGQGTRLDIKR 685
218973 21A5 V H QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKKYYADSVKGRFTISRDNSKSTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPSHYYGSGSYNYFYGMDVWGQGTTVTVSS 686
V L QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNTYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNERPSGIPDRFSGSKSDTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDNSLTAVVFGGGTKLTVLG 687
219044 34F10 V H EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSDNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGNTYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCTGPFFDYWGPGTLVTVSS 688
V L EIVLTQFPGTLSLSPGEGGTLSCRASQTVWSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASRRVIGIPDRFSGSGSGTDFNLTISSLEPGDFAVYYCQQYGSSSITFGQGTRLEIKR 689
218997 31E12 V H QVQVQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTYYNPSLMGRVTISVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARRGPVAGGFDYWGQGTLVTVSS 690
V L EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQNVYNNYLAWYQQKPRQAPRLLIYGTSSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSLLCSFGQGTKLEIKR 691
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白結合並激動人和cyno LTβR。該促效劑LTβR結合蛋白在表位結合人LTβR的CRD2和CRD3，該表位包含SEQ ID NO: 4之位置56-64和81-101（對應於SEQ ID NO: 1的殘基86-94和111-131）處的一或多個殘基或由其組成。該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 644的VH結構域胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的重鏈可變結構域和與SEQ ID NO: 645的VL結構域胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的輕鏈可變結構域。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 644至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 645至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 644的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 645的VL胺基酸序列（30H1/19320）。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白結合並激動人和cyno LTβR。該促效劑LTβR結合蛋白在表位結合人LTβR的CRD1，該表位包含SEQ ID NO: 4之位置3-9、12-29和38-47（對應於SEQ ID NO: 1的殘基33-39、50-59和68-77）處的一或多個殘基或由其組成。該促效劑LTβR結合蛋白允許發生100%的LIGHT與LTβR結合和/或至少或約80%的LTα1β2與LTβR結合，並且包含與SEQ ID NO: 646的VH結構域胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的重鏈可變結構域。該LTβR結合蛋白進一步包含與SEQ ID NO: 647的VL結構域胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的輕鏈可變結構域。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 646至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 647至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 646的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 647的VL胺基酸序列（19321）。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白結合並激動人和cyno LTβR。該促效劑LTβR結合蛋白在表位結合人LTβR的CRD2和CRD3，該表位包含SEQ ID NO: 4之位置56-64和81-101（對應於SEQ ID NO: 1的殘基86-94和111-131）處的一或多個殘基或由其組成。該促效劑LTβR結合蛋白在基於細胞的受體-配體測定中在＜ 8 nM濃度下不抑制LIGHT和LTα1β2與LTβR結合，如本文所描述的。該LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 648的VH結構域胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的重鏈可變結構域和與SEQ ID NO: 649的VL結構域胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的輕鏈可變結構域。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 648至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 649至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 648的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 649的VL胺基酸序列（19324）。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白結合並激動人和cyno LTβR。該LTβR結合蛋白在表位結合人LTβR的CRD1和CRD2，該表位包含SEQ ID NO: 4之位置38-42、56-65和65-70處的一或多個殘基或由其組成。該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 650的VH結構域胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的重鏈可變結構域和與SEQ ID NO: 651的VL結構域胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的輕鏈可變結構域。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 650至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 651至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 650的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 651的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白結合並激動人和cyno LTβR，並且不抑制內源性LIGHT與LTβR結合。該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 652的VH結構域胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的重鏈可變結構域和與SEQ ID NO: 653的VL結構域胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的輕鏈可變結構域。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 652至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 653至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 652的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 653的VL胺基酸序列（19322）。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白結合並激動人和cyno LTβR，並且不抑制內源性LIGHT與LTβR結合。該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 654至少80%、至少85%或至少90%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 655或SEQ ID NO: 657至少80%、至少85%或至少90%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 654至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 657至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 654的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 657的VL胺基酸序列（19327）。
在一個實施方式中，本揭露之LTβR結合蛋白結合並激動人和cyno LTβR，以及不抑制LTα1β2與LTβR結合且不抑制LIGHT與LTβR結合。該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 658的VH結構域胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的重鏈可變結構域和與SEQ ID NO: 659的VL結構域胺基酸序列具有至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的輕鏈可變結構域。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 658至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 659至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 658的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 659的VL胺基酸序列（35F5/19323）。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白結合並激動人和cyno LTβR，並包含與SEQ ID NO: 660至少80%、至少85%或至少90%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 661至少80%、至少85%或至少90%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 660至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 661至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 660的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 661的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白結合並激動人和cyno LTβR，並包含與SEQ ID NO: 662至少80%、至少85%或至少90%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 663至少80%、至少85%或至少90%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 662至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 663至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 662的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 663的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白係促效劑結合蛋白，其結合LTβR，並包含與SEQ ID NO: 664至少80%、至少85%或至少90%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 665至少80%、至少85%或至少90%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 664至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 665至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 664的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 665的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白係促效劑結合蛋白，其結合LTβR，並包含與SEQ ID NO: 666至少80%、至少85%或至少90%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 667至少80%、至少85%或至少90%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 666至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 667至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 666的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 667的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白係促效劑結合蛋白，其結合LTβR，並包含與SEQ ID NO: 668至少80%、至少85%或至少90%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 669至少80%、至少85%或至少90%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 668至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 669至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 668的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 669的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白係促效劑結合蛋白，其結合LTβR，並包含與SEQ ID NO: 670至少80%、至少85%或至少90%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 671至少80%、至少85%或至少90%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 670至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 671至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 670的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 671的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白係促效劑結合蛋白，其結合LTβR，並包含與SEQ ID NO: 672至少80%、至少85%或至少90%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 673至少80%、至少85%或至少90%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 672至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 673至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 672的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 673的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白係促效劑結合蛋白，其結合LTβR，並包含與SEQ ID NO: 674至少80%、至少85%或至少90%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 675至少80%、至少85%或至少90%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 674至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 675至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 674的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 675的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白係促效劑結合蛋白，其結合LTβR，並包含與SEQ ID NO: 676至少80%、至少85%或至少90%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 677至少80%、至少85%或至少90%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 676至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 677至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 676的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 677的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白係促效劑結合蛋白，其結合LTβR，並包含與SEQ ID NO: 678至少80%、至少85%或至少90%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 679至少80%、至少85%或至少90%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 678至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 679至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 678的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 679的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白係促效劑結合蛋白，其結合LTβR，並包含與SEQ ID NO: 680至少80%、至少85%或至少90%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 681至少80%、至少85%或至少90%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 680至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 681至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 680的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 681的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白係促效劑結合蛋白，其結合LTβR，並包含與SEQ ID NO: 682至少80%、至少85%或至少90%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 683或SEQ ID NO: 685至少80%、至少85%或至少90%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 682至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 683或SEQ ID NO: 685至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 682的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 683或SEQ ID NO: 685的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白係促效劑結合蛋白，其結合LTβR，並包含與SEQ ID NO: 686至少80%、至少85%或至少90%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 687至少80%、至少85%或至少90%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 686至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 687至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 686的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 687的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白係促效劑結合蛋白，其結合LTβR，並包含與SEQ ID NO: 688至少80%、至少85%或至少90%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 689至少80%、至少85%或至少90%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 688至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 689至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 688的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 689的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白係促效劑結合蛋白，其結合LTβR，並包含與SEQ ID NO: 690至少80%、至少85%或至少90%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 691至少80%、至少85%或至少90%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含與SEQ ID NO: 690至少95%相同的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 691至少95%相同的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白包含SEQ ID NO: 690的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 691的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白包含如上所描述的VH區和/或VL區，並且進一步包含與VH區偶合的一或多個重鏈恒定區和/或與VL區偶合的輕鏈恒定區。例如，在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白係Fab，其包含VH和與VL偶合的第一重鏈恒定結構域（CH1）以及輕鏈恒定區（CL）。在另一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白係F(ab’)2，其包含藉由鉸鏈區偶合的完全抗體的兩個LTβR結合區，其中每個結合區包含VH-CH1和VL-CL。本文表13中提供了本揭露之示例性促效劑LTβR抗體的完全重鏈和輕鏈胺基酸序列。 [ 表 13] . LT β R 抗體的全長胺基酸序列
LIBC 編號 Well ID 鏈 序列 SEQ ID
218990 30H1 19320 HC QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGDYMYWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAKKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAREGSSGWSAEYFQHWGQGTLVTVFSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 692
LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSFLAWYQQKLGQAPRLLMYGASRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGTSPLSFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 693
218994 31A3/ 19321 HC QVQLVESGGAVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGSDEYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSVRDEDTALYYCVRGDSEDFYYYDFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 694
LC QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGKNYVSWYQHLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDHSLSASYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 695
219058 36G2/ 19324 HC EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSTSGMNWVRQAPGKGLEWVSSVSSSGSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGARYNWHFDASDIWGQGTVVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 696
LC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSDLNWYQQKPGKAPNLLIYAASSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLLPEDFATYYCQQSYNTPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 697
219097 43D9/19326/ HC EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFNDAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKTKTDGGTTDYAAPVKGRITISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTDYGDYEYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 698
LC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQSYSTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 699
219037 34D1/ 19322 HC QVQLQESGPGRVKPSQTLSLTCTVSGGSINSGGYFWSWIRQHPGKVLEWIGYSHYSGTTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQLSLKLNSVNAADTAVYYCARVPDGEDYFDYWGQGALVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 700
LC DLQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFETYYCQQSFSAPITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 701
219098 44B1/ 19327 HC EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLNLQMNSLRAEDTAVYYCAKVRDNWNYDGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 702
LC DIVMTQSPLSLPVTLGESASISCRCSQSLLYSSGYIDLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQTIQTPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 703
219098.001 HC EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLNLQMNSLRAEDTAVYYCAKVRDNWNYDGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 704
LC DIVMTQSPLSLPVTLGESASISCRSSQSLLYSSGYIDLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQTIQTPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 705
219051 35F5/19323 HC QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYLHWVRQAPGQGLEWMGWINPNIGVTDSAQKFQDRVTMTRDTSISTAYMELSRLISDDTAVYYCTVRGYNDDYDFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 706
LC DVVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSRQSLLHRDGKTYLYWYLQKPGQPPQLLIYEVSNRFSGVPNRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQSIQLPLIFGGGTRVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 707
218989 29G8 HC QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFTGFSLSTSGMGVGWIRQPPGKALEWLALIYWNGGKLYSPSLKNRLTITKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAHSGYYDNSGYYWDGMDVWGQGTTVTVSPASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 708
LC EIVLTQSPVTLSLSPGERATLSCRASQSLISDYLVWYQQKPGQAPRLLIYGASSRPTGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDTSLNFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 709
218967 17F5 HC QVQLQESGPGVVKPSETLSLTCTVSGGSISSYFWTWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTFSVDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYYCARVETIMAFDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 710
LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYFCQQYDTSPITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 711
218981 25C9 HC QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYFWSWIRQHPGKGLEWIGYTHYIGSTYYNPSLKSRVAFSVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVDTAMVDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 712
LC EIMLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQNIDSSYLAWYQQTPGQAPRLLIYDTSSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFSVYYCQQYGGSPITFGQGTRLDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 713
218995 31C9 HC QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSISSRNWWGWIRQPPGKGLEWIGYIHYIGNTYYNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCARETGSDGDDTFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 714
LC EIVLTQSPVTLSLSPGERATLSCRASQSIGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASGRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFALYYCQQCYSSPITFGHGTRLDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 715
218996 31B10 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYDMHWVRQAPGKGLEWVTTIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCPTLSTVTTGDYYGMDVWGQGTAVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 716
LC QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSRSNIGNNYVSWYQQLPGTVPKLLIYDNSKRPSGIPDRFSGSKSGTSVTLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAVVFGGGTKLTVLSQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 717
218998 32A2 HC QVQLQESGPGQVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYFWGWIRQHPGKGLEWIGYIHYIGSPYYNPSLKSRTTISVDTSKNQFSLKLSSVIAADTAVYYCARDCSSVNCQDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 718
LC EIVLTQSPGTLSLSPGERASLSCWSSQSIDSTYLAWYHQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLSISRLEPEDFAVYYCQQYSSSPITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 719
219083 41H7 HC QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIRSDGYFWSWIRQHPGKGLEWLGFIYYSGTTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLTSVTVADTAVYYCARVCGGDCYDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 720
LC DIVLTQSPGTLSLSPGEGATLSCRASQNISNTYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYDCQQYFSSPITFGGGTRVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 721
219092 43C1 HC QVQVQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGYSISNSIWWGWIRQPPGKGLEWIGYIHYSGNTYYNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLNSVTAVDTAVYYCARNFGDVDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 722
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219102 44G11 HC QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRLPPGKGLEWIGYIYYGGSTNYNPSLKSRVSMSVDTSKNQFSLKLSYVTAADTAVYYCARSYSSAWYGSAYWGQGTLVIVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 730
LC DIQMTQSPSSLSASLGDRVTITCQASQDISNYLIWYQLKPGKAPKVLIYDASNLETGVPSRFSGNGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYDHLPITFGQGTRLDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 731
219102.001 HC QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRLPPGKGLEWIGYIYYGGSTNYNPSLKSRVSMSVDTSKNQFSLKLSYVTAADTAVYYCARSYSSAWYGSAYWGQGTLVIVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 732
LC DIQMTQSPSSLSASLGDRVTITCQASQDISNYLIWYQLKPGKAPKVLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYDHLPITFGQGTRLDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 733
218973 21A5 HC QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKKYYADSVKGRFTISRDNSKSTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDPSHYYGSGSYNYFYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 734
LC QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNTYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNERPSGIPDRFSGSKSDTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDNSLTAVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS 735
219044 34F10 HC EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTVSDNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGNTYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCTGPFFDYWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 736
LC EIVLTQFPGTLSLSPGEGGTLSCRASQTVWSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASRRVIGIPDRFSGSGSGTDFNLTISSLEPGDFAVYYCQQYGSSSITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 737
218997 31E12 HC QVQVQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTYYNPSLMGRVTISVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARRGPVAGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 738
LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQNVYNNYLAWYQQKPRQAPRLLIYGTSSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSLLCSFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 739
多特異性 LT β R 結合分子
在本揭露之另一方面，該促效劑LTβR結合蛋白為多特異性促效劑LTβR結合蛋白。根據本揭露之此方面，該多特異性促效劑LTβR結合蛋白包含與人LTβR（SEQ ID NO: 1）結合的第一結合結構域和與非LTβR蛋白靶標（即LTβR以外的蛋白質）結合的第二結合結構域，其中該多特異性結合蛋白激動LTβR活性並且 (a) 不抑制LIGHT與LTßR結合，以及 (b) 不抑制LT1α2β與LTβR結合。如本文所描述的示例性LTβR多特異性結合蛋白的第二結合結構域與非LTβR蛋白靶標結合。在一個實施方式中，該LTβR多特異性結合蛋白的第二結合結構域與腫瘤微環境（TME）的腫瘤細胞或其他細胞優先表現的蛋白或抗原結合。
在一個實施方式中，該多特異性促效劑LTβR結合蛋白對於由該第一和第二結合結構域多特異性結合蛋白結合的每個蛋白靶標係單價的。在一個實施方式中，該多特異性促效劑LTβR結合蛋白對於LTβR配體結合結構域係單價的，而對於非LTβR結合結構域係二價的。
在一個實施方式中，本揭露之多特異性促效劑LTβR結合蛋白進一步包含一或多個額外的結合結構域。在一個實施方式中，本文所描述的多特異性促效劑LTβR結合蛋白包含第三結合結構域，其中該第三結合結構域結合與該第一或第二結合結構域相同的蛋白靶標，以形成對於由雙特異性結合蛋白結合的蛋白靶標之一為二價的雙特異性結合蛋白。在另一個實施方式中，該第三結合結構域結合與該第一和第二結合結構域不同的蛋白靶標，從而形成單價三特異性結合蛋白。在一個實施方式中，該多特異性促效劑LTβR結合蛋白可以進一步包含第四結合結構域，其中該第四結合結構域結合與該第一、第二或第三結合結構域相同的蛋白靶標。
根據本揭露之此方面，該多特異性促效劑LTβR結合蛋白可以採用本領域已知的任何多特異性結合蛋白形式。例如，在一個實施方式中，該多特異性促效劑LTβR結合蛋白係促效劑LTβR雙特異性結合蛋白或三特異性促效劑LTβR結合蛋白。在一個實施方式中，該多特異性促效劑LTβR結合結構域的第一、第二和/或第三結合結構域係Fab。可替代地，該多特異性促效劑LTβR結合結構域的第一、第二和/或第三結合結構域係scFv。在一個實施方式中，該第一結合結構域是Fab，該第二結合結構域係scFv，並且視需要存在的第三結合結構域係Fab或scFv。在一個實施方式中，該第二結合結構域係Fab，該第一結合結構域係scFv，並且視需要存在的第三結合結構域係Fab或scFv。在一個實施方式中，該第一和第二結合結構域係Fab，並且視需要存在的第三結合結構域係Fab或scFv。在一個實施方式中，該第一和第二結合結構域係scFv，並且視需要存在的第三結合結構域係Fab或scFv。
在本揭露之一個實施方式中，該多特異性促效劑LTβR結合蛋白係雙特異性促效劑LTβR結合蛋白。如本文所指的「雙特異性結合蛋白」係同時與兩種不同抗原結合的結合蛋白。本揭露之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白涵蓋了本領域已知的任何雙特異性分子形式（參見例如，Spiess等人, Mol. Immunol.[分子免疫學] 67(2): 95-106 (2015)，特此藉由引用將其全部併入）。該等分子形式包括保留具有兩個Fab臂和一個Fc區的傳統單株抗體結構的IgG樣形式、含有附加的額外抗原結合部分的IgG形式、雙特異性結合蛋白片段、雙特異性融合蛋白及其組合。
在一個實施方式中，該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的第一和/或第二結合結構域係Fab。可替代地，該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的第一和/或第二結合結構域係scFv。在一個實施方式中，該第一結合結構域係Fab，並且該第二結合結構域係scFv。在一個實施方式中，該第二結合結構域係Fab，並且該第一結合結構域係scFv。在一個實施方式中，該第一和第二結合結構域均為Fab。在一個實施方式中，該第一和第二結合結構域均為scFv。
在一個實施方式中，本揭露之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白係全長雙特異性IgG或包含IgG樣結構。在一個實施方式中，該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白係對於由雙特異性結合蛋白結合的每個靶蛋白係單價的異源IgG。包含經工程化以增強異二聚體形成的Fc結構域的示例性異源IgG雙特異性形式在本領域中係熟知的，並且係本揭露之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的合適形式。該等異源IgG形式包括但不限於旋鈕入孔形式（參見例如，Ridgway等人, 「‘Knobs-into-holes’ engineering of antibody CH3 domains for heavy chain heterodimerization[用於重鏈異二聚化的抗體CH3結構域的‘旋鈕入孔’工程化],」 Protein Eng.[蛋白工程] 9:617-621 (1996)和Atwell等人, 「Stable heterodimers from remodeling the domain interface of a homodimer using a phage display library[使用噬菌體展示文庫 重塑同源二聚體結構域介面的穩定異二聚體],」 J. Mol. Biol.[分子生物學雜誌] 270:26-35 (1997)，特此藉由引用將其全部併入）、DuoBody形式（參見例如，Labrijn等人, 「Efficient generation of stable bispecific IgG1 by controlled Fab-arm exchange[藉由受控的Fab-arm交換有效產生穩定的雙特異性IgG1],」 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.[美國國家科學院院刊], 110: 5145-5150 (2013)，特此藉由引用將其全部併入）；Azymetric形式（參見例如，Von Kreudenstein等人, 「Improving biophysical properties of a bispecific antibody scaffold to aid developability: quality by molecular design[提高雙特異性抗體支架的生物物理特性以説明可開發性：分子設計的品質],」 mAbs[單株抗體] 5:646-654 (2013)，特此藉由引用將其全部併入）；帶電的Fc對（參見例如，Gunasekaran等人, 「Enhancing antibody Fc heterodimer formation through electrostatic steering effects: applications to bispecific molecules and monovalent IgG[藉由靜電轉向效應增強抗體Fc異二聚體的形成：對雙特異性分子和單價IgG的應用],」 J. Biol. Chem.[生物化學雜誌], 285: 19637-46 (2010)和Strop等人, 「Generating bispecific human IgG1 and IgG2 antibodies from any antibody pair[從任何抗體對生成雙特異性人IgG1和IgG2抗體],」 J. Mol. Biol.[分子生物學雜誌], 420:204-219 (2012)，特此藉由引用將其全部併入）；mAb-Fv（參見例如，Close等人, 「A novel bispecific antibody format enables simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of distinct target antigens[一種新型雙特異性抗體形式能夠使不同靶抗原同時二價和單價共接合],」 mAbs[單株抗體] 3: 546-557 (2011)，特此藉由引用將其全部併入）；鏈交換工程化結構域（SEED）C(H)3異二聚體形式（參見例如，Davis等人, 「SEEDbodies: fusion proteins based on strand-exchange engineered domain (SEED) CH3 heterodimers in an Fc analogue platform for asymmetric binders or immunofusions and bispecific antibodies[SEED體：基於Fc類似物平臺中鏈交換工程化結構域（SEED）CH3異二聚體的融合蛋白，用於不對稱結合物或免疫融合物和雙特異性抗體],」 Protein Eng. Des.Sel.[ 蛋白質工程設計與選擇 ]23:195-202 (2010)，特此藉由引用將其全部併入）；和蛋白A差別親和力（參見例如，Davis等人的美國專利案號8,586,713，特此藉由引用將其全部併入）。
在一個實施方式中，本揭露之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白係包含一或多個結合蛋白片段的構建體。本揭露之合適的LTβR雙特異性結合蛋白片段構建體包括但不限於包含經由肽連接基連接的兩個單可變（VHH）結構域的奈米抗體（Els Conrath等人, 「Camel single-domain antibodies as modular building units in bispecific and bivalent antibody constructs[駱駝單結構域抗體作為雙特異性和二價抗體構建體中的模組化構建單元],」 J. Biol. Chem.[生物化學雜誌] 276:7346-50 (2001)，特此藉由引用將其全部併入），以及包含兩個偶合在一起的scFv片段的雙特異抗體（Holliger等人, 「‘Diabodies’: small bivalent and bispecific antibody fragments[‘雙特異抗體’：小的二價和雙特異性抗體片段],」 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.[美國國家科學院院刊], 90: 6444-6448 (1993)，特此藉由引用將其全部併入）。合適的雙特異抗體LTβR雙特異性構建體包括但不限於單鏈雙特異抗體（參見例如，Alt等人, 「Novel tetravalent and bispecific IgG-like antibody molecules combining single-chain diabodies with the immunoglobulin gamma1 Fc or CH3 region[將單鏈雙特異抗體與免疫球蛋白γ1 Fc或CH3區結合的新型四價和雙特異性IgG樣抗體分子],」 FEBS Lett.[歐洲生物化學會聯合會快報] 454: 90-94 (1999)，特此藉由引用將其全部併入）、雙親和力重新靶向雙特異抗體（DART）（參見例如，Johnson等人, 「Effector cell recruitment with novel Fv-based dual-affinity re-targeting protein leads to potent tumor cytolysis and in vivo B-cell depletion[用新型基於Fv的雙親和力重新靶向蛋白募集效應細胞導致有效的腫瘤細胞溶解和體內B細胞耗竭],」 J. Mol. Biol.[分子生物學雜誌] 399: 436-449 (2010)，特此藉由引用將其全部併入）、串聯雙特異抗體和包含連接在單多肽鏈中的兩對VL和VH結構域的四價串聯雙特異抗體（TandAb）（參見例如，Arndt等人, 「A bispecific diabody that mediates natural killer cell cytotoxicity against xenotransplanted human Hodgkin's tumors[介導自然殺手細胞對異種移植的人霍奇金腫瘤的細胞毒性的雙特異性雙特異抗體],」 Blood[血液] 94: 2562-2568 (1999)，特此藉由引用將其全部併入）。合適的LTβR雙特異性構建體還包括與Fc部分偶合（例如，微抗體、雙特異抗體-CH3、sc雙特異抗體-CH3、scFv-CH3、微抗體）或與一或多個其他部分融合以延長半衰期（例如，與血清白蛋白或白蛋白結合蛋白融合）的scFv片段或雙特異抗體。
在一個實施方式中，本揭露之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白係工程化為雙特異性的單特異性IgG抗體（例如，含有雙特異性抗體的第一或第二結合結構域），通過將包含例如VHH、scFv、2scFv、Fv、Fab或抗體模擬物結合結構域的額外結合結構域（例如，分別為該第二或第一結合結構域）與抗體的一或多個輕鏈或重鏈的胺基或羧基末端偶合。示例性工程化雙特異性結合蛋白包括但不限於雙可變結構域(DVD)-IgG、IgG(H)-scFv、ScFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)IgG、IgG((L,H)-Fv、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig（參見例如，Spiess等人, 「Alternative molecular formats and therapeutic applications for bispecific antibodies[雙特異性抗體的替代分子形式和治療應用],」 Mol. Immunol.[分子免疫學] 67(2): 95-106 (2015)，特此藉由引用將其全部併入）。
在一個實施方式中，本揭露之多特異性促效劑LTβR結合蛋白係雙特異性促效劑LTβR結合蛋白。該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白包含 (i) LTβR結合結構域，其中該LTβR結合結構域結合包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基169-211的人LTβR CRD4的一或多個胺基酸殘基，和 (ii) 腫瘤相關抗原結合結構域。該雙特異性LTβR結合蛋白激動LTβR活性，並且 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合和 (b) 不抑制LT1α2β與LTβR結合。
上文描述了結合人LTβR的CRD4的示例性LTβR結合結構域，即HCDR和LCDR，以及VH和VL結構域，包括但不限於LIBC219081和LIBC218979的結合結構域以及表2-4和6-8中提供的LTβR結合蛋白的結合結構域。特別地，如本文所描述的雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的合適的第一結合結構域可包含重鏈可變結構域（VH）或其片段，其包含表2或表6的單行中所列的HCDR1、HCDR2和/或HCDR3中的一或多個或其部分。在一個實施方式中，該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的第一結合結構域包含表2或表6的單行中所列的HCDR1、HCDR2和HCDR3的全部三個或其部分。在一個實施方式中，該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的第一結合結構域包含輕鏈可變結構域（VL）或其片段，其包含表3或表7的單行中所列的LCDR1、LCDR2和/或LCDR3中的一或多個或其部分。在一個實施方式中，該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的第一結合結構域包含表3或表7的單行中所列的LCDR1、LCDR2和LCDR3的全部三個或其部分。在一個實施方式中，如本文所描述的雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的第一結合結構域包含VH或其片段，其包含表2或表6的單行中所列的HCDR1、HCDR2和/或HCDR3中的一或多個或其部分，以及VL或其片段，其包含表3或表7的單行中所列的相應結合分子的LCDR1、LCDR2和/或LCDR3中的一或多個或其部分。在一個實施方式中，如本文所描述的雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的第一結合結構域包含VH或其片段，其包含表2或表6的單行中所列的HCDR1、HCDR2和HCDR3的全部三個或其部分，以及VL或其片段，其包含表3或表7的單行中所列的相應結合分子的LCDR1、LCDR2和LCDR3的全部三個或其部分。該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合，而且 (b) 不抑制LT1α2β與LTβR結合。
在一個實施方式中，結合人LTβR的CRD4的雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的第一結合結構域包含重鏈可變結構域（VH）、輕鏈可變結構域（VL）或VH和VL結構域的組合。在一個實施方式中，該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的第一結合結構域的VH結構域包含表4或表8中提供的VH胺基酸序列中的任一個，或與表4或表8中列出的VH胺基酸序列中的任一個至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%相同的胺基酸序列。在一個實施方式中，該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的第一結合結構域的VL結構域包含表4或表8中提供的VL胺基酸序列中的任一個，或與表4或表8中列出的VL胺基酸序列中的任一個至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%相同的胺基酸序列。該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合，而且 (b) 不抑制LT1α2β與LTβR結合。
在一個實施方式中，結合人LTβR的CRD4的雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的第一結合結構域包含與表4或表8中列出的VH結構域胺基酸序列中的任一個具有至少85%、至少90%、至少95%或100%序列同一性的重鏈可變結構域，和與表4或表8中列出的相應VL結構域胺基酸序列具有至少85%、至少90%、至少95%或100%序列同一性的輕鏈可變結構域。該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合，而且 (b) 不抑制LT1α2β與LTβR結合。
在一個實施方式中，結合人LTβR的CRD4的雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的LTβR結合結構域包含VH，其包含HCDR1胺基酸序列：X 1YX 3MX 5（SEQ ID NO: 5），其中X 1為S或N；X 3為G、D或A；並且X 5為H或Y；HCDR2胺基酸序列：X 1IX 3YDX 6X 7X 8X 9Y X 11X 12DSVKG（SEQ ID NO: 6），其中X 1為A或V；X 3為W或R；X 6為E或G；X 7為S、R或T；X 8為N或K；X 9為K、R或Q；X 11為H或Y；並且X 12為A或E；以及HCDR3胺基酸序列：X 1RX 3X 4X 5X 6X 7X 8X 9YYGX 13X 14V（SEQ ID NO: 7），其中X 1為D或E；X 3為V、G或I；X 4為V、P或A；X 5為A、Y或G；X 6為R、A、G或H；X 7為P或G；X 8為G、N、D、Y、A或H；X 9為Y、T或F；X 13為L或M；並且X 14為D或A。該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合，而且 (b) 不抑制LT1α2β與LTβR結合。
在一個實施方式中，結合人LTβR的CRD4的雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的LTβR結合結構域進一步包含VL，其包含LCDR1胺基酸序列：SGDX 4LPX 7X 8YX 10Y（SEQ ID NO: 62），其中X 4為A或T；X 7為E、K、Q、D或N；X 8為Q或H；並且X 10為A或T；LCDR2胺基酸序列：KDNERPS（SEQ ID NO: 63）；以及LCDR3胺基酸序列：QSX 3DX 5SX 7X 8YX 10X 11（SEQ ID NO: 64），其中X 3為A或T；X 5為S、G或N；X 7為G或A；X 8為T、S或A；X 10為V或M；並且X 11為I或V。該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合，而且 (b) 不抑制LT1α2β與LTβR結合。
在一個實施方式中，結合人LTβR的CRD4的雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的LTβR結合結構域包含與SEQ ID NO: 121之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列。在一個實施方式中，LTβR結合結構域包含與SEQ ID NO: 123之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列。在一個實施方式中，LTβR結合結構域包含與SEQ ID NO: 121之胺基酸序列和SEQ ID NO: 123之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列。與SEQ ID NO: 121和SEQ ID NO: 123之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的示例性VH胺基酸序列提供在上表4中。該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合，而且 (b) 不抑制LT1α2β與LTβR結合。
在一個實施方式中，該結合人LTβR的CRD4的雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的LTβR結合結構域包含與SEQ ID NO: 122之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該LTβR結合結構域包含與SEQ ID NO: 124之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該LTβR結合結構域包含與SEQ ID NO: 122之胺基酸序列和SEQ ID NO: 124之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列。與SEQ ID NO: 122和SEQ ID NO: 124之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的示例性VL胺基酸序列提供在上表4中。該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合，而且 (b) 不抑制LT1α2β與LTβR結合。
在一個實施方式中，該結合人LTβR的CRD4的雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的LTβR結合結構域包含與SEQ ID NO: 121之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 122之胺基酸序列具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，該LTβR結合結構域包含與SEQ ID NO: 121之胺基酸序列具有至少95%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 122之胺基酸序列具有至少95%序列同一性的VL胺基酸序列。在一個實施方式中，LTβR結合結構域包含與SEQ ID NO: 121之胺基酸序列具有至少98%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 122之胺基酸序列具有至少98%序列同一性的VL胺基酸序列。該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合，而且 (b) 不抑制LT1α2β與LTβR結合。
在一個實施方式中，該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的LTβR結合結構域包含與SEQ ID NO: 123具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列，以及SEQ ID NO: 5（X 1YX 3MX 5）的HCDR1胺基酸序列，SEQ ID NO: 6（X 1IX 3YDX 6X 7X 8X 9YX 11X 12DSVKG）的HCDR2胺基酸序列，以及SEQ ID NO: 7（X 1RX 3X 4X 5X 6X 7X 8X 9YYGX 13X 14V）的HCDR3胺基酸序列。在一個實施方式中，該LTβR結合結構域進一步包含與SEQ ID NO: 124具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列，以及SEQ ID NO: 62（SGDX 4LPX 7X 8YX 10Y）的LCDR1胺基酸序列，SEQ ID NO: 63（KDX 3ERPS）的LCDR2胺基酸序列，以及SEQ ID NO: 64（QSX 3DX 5SX 7X 8YX 10X 11）的LCDR3胺基酸序列。該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合，而且 (b) 不抑制LT1α2β與LTβR結合。
在一個實施方式中，該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的LTβR結合結構域包含VH，其包含分別為SEQ ID NO: 11-13的HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列，以及VL，其包含分別為SEQ ID NO: 68-70的LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列。在一個實施方式中，該LTβR結合結構域包含VH，其包含分別為SEQ ID NO: 8-10的HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列，以及VL，其包含分別為SEQ ID NO: 65-67的LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列。該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合，而且 (b) 不抑制LT1α2β與LTβR結合。
在一個實施方式中，該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的LTβR結合結構域與示例性LTβR結合物LIBC219081和LIBC218979競爭結合LTβR。在一個實施方式中，該第一結合結構域包含選自以下的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列：(i) SEQ ID NO: 159、SEQ ID NO: 160、SEQ ID NO: 161、SEQ ID NO: 278、SEQ ID NO: 279和SEQ ID NO: 280；(ii) SEQ ID NO: 159、SEQ ID NO: 160、SEQ ID NO: 161、SEQ ID NO: 299、SEQ ID NO: 300和SEQ ID NO: 301；(iii) SEQ ID NO: 159、SEQ ID NO: 160、SEQ ID NO: 161、SEQ ID NO: 308、SEQ ID NO: 309和SEQ ID NO: 310；(iv) SEQ ID NO: 195、SEQ ID NO: 196、SEQ ID NO: 197、SEQ ID NO: 308、SEQ ID NO: 309和SEQ ID NO: 310；(v) SEQ ID NO: 224、SEQ ID NO: 225、SEQ ID NO: 226、SEQ ID NO: 356、SEQ ID NO: 357和SEQ ID NO: 358。包含具有上述重鏈和輕鏈CDR的第一結合結構域的雙特異性促效劑LTβR結合蛋白不抑制LIGHT與LTβR結合，而且不抑制LT1α2β與LTβR結合。
在一個實施方式中，該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的LTβR結合結構域結合人LTβR CRD1，並包含與SEQ ID NO: 646的VH結構域胺基酸序列具有至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的重鏈可變結構域和與SEQ ID NO: 647的VL結構域胺基酸序列具有至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的輕鏈可變結構域。該雙特異性LTβR結合蛋白不抑制內源性LIGHT與LTβR結合，並允許發生80%的內源性LTα1β2與LTβR結合。
在一個實施方式中，該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的LTβR結合結構域結合人LTβR，並包含與SEQ ID NO: 652的VH結構域胺基酸序列具有至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的重鏈可變結構域和與SEQ ID NO: 653的VL結構域胺基酸序列具有至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的輕鏈可變結構域。該雙特異性LTβR結合蛋白不抑制內源性LIGHT與LTβR結合。
在一個實施方式中，該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的LTβR結合結構域結合人LTβR，並包含與SEQ ID NO: 654的VH結構域胺基酸序列具有至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的重鏈可變結構域和與SEQ ID NO: 655的VL結構域胺基酸序列具有至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的輕鏈可變結構域。該雙特異性LTβR結合蛋白不抑制內源性LIGHT與LTβR結合。
在一個實施方式中，該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的LTβR結合結構域結合人LTβR CRD1，並包含與SEQ ID NO: 658的VH結構域胺基酸序列具有至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的重鏈可變結構域和與SEQ ID NO: 659的VL結構域胺基酸序列具有至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的輕鏈可變結構域。該雙特異性LTβR結合蛋白不抑制內源性LIGHT與LTβR結合，而且不抑制LTα1β2與LTβR結合。
在一個實施方式中，該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的LTβR結合結構域結合人LTβR CRD2和CRD3，並包含與SEQ ID NO: 648的VH結構域胺基酸序列具有至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的重鏈可變結構域和與SEQ ID NO: 649的VL結構域胺基酸序列具有至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的輕鏈可變結構域。該LTβR結合蛋白在基於細胞的受體-配體測定中在＜ 8 nM濃度下不抑制LIGHT和LTα1β2與LTβR結合，如本文所描述的。
在一個實施方式中，該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的LTβR結合結構域結合人LTβR CRD2和CRD3，並包含與SEQ ID NO: 644的VH結構域胺基酸序列具有至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的重鏈可變結構域和與SEQ ID NO: 645的VL結構域胺基酸序列具有至少85%、至少90%或至少95%序列同一性的輕鏈可變結構域。
在一個實施方式中，該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的腫瘤相關結合結構域與腫瘤相關抗原（TAA）結合。在一個實施方式中，該TAA係實性瘤TAA。合適的TAA係本領域已知的，並包括但不限於甲型胎兒蛋白（AFP）、CD44v6、碳酸酐酶IX（CAIX）、癌胚抗原（CEA）、CD133、肝細胞生長因子受體（c-MET）、密連蛋白18.2（CLDN18.2）、密連蛋白6（CLDN6）、含富白胺酸重複序列的蛋白15（LRRC15）、表皮生長因子受體（EGFR）、III型變體表皮生長因子受體（EGFRvIII）、促紅血球生成素產生肝細胞癌A2（EphA2）、上皮細胞黏附分子（EpCAM）、胎兒乙醯膽鹼受體、葉酸受體α（FRα）、神經節苷脂GD2（GD2）、蛋白多糖-3（GPC3）、鳥苷酸環化酶C（GUCY2C）、人表皮生長因子受體1（HER1）、人表皮生長因子受體2（ERBB2/HER2）、細胞間黏附分子1（ICAM-1）、白血球介素13受體α2（IL13Rα2）、白血球介素11受體α（IL11Rα）、Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物（KRAS）、KRAS G12D、L1細胞黏附分子（L1CAM）、MAGE、MET、黏蛋白1（MUC1）、黏蛋白16（MUC16）、黏蛋白17（MUC17）、自然殺手組2成員D（NKG2D）、NYESO-1、前列腺幹細胞抗原（PSCA）、腎母細胞瘤1（WT-1）、半乳糖凝集素9（Gal9）、計畫性細胞死亡1配體1（PD-L1）、滋養層糖蛋白（5T4癌胚抗原）、葉酸受體α（FOLR1）和腫瘤相關鈣訊息傳遞子2（TROP2）。
能夠結合該等TAA的結合蛋白在實例中進行了描述，並且在本領域中係已知的。任何該等已知的結合蛋白或從其衍生的TAA結合結構域可以方便地用作本文所描述的雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的TAA結合結構域。例如，且不限於，該TAA結合結構域可包含本文實例7中描述的CLDN6結合結構域、CLDN18.2結合結構域、LRRC15結合結構域或MUC17結合結構域。其他合適的TAA結合結構域包括但不限於抗甲型胎兒蛋白（AFP）抗體或其結合結構域（參見例如，Hansen等人的美國專利案號8,268,312，特此藉由引用將其全部併入）；抗CD44v6抗體或其結合結構域（參見例如，Adolf等人的美國專利案號6,972,324，特此藉由引用將其全部併入）；抗碳酸酐酶IX（CAIX）抗體或其結合結構域（參見例如，Renner的WO 2011139375和Lenferink的美國專利案號10,487,153，特此藉由引用將其全部併入）；抗癌胚抗原（CEA）抗體或其結合結構域（參見例如，Mossner等人的美國專利申請公開案號20160075795，特此藉由引用將其全部併入）；抗CD133抗體或其結合結構域（參見例如，Vallera的美國專利案號11,098,109和Pfister等人的美國專利申請公開案號20200354468，特此藉由引用將其全部併入）；抗肝細胞生長因子受體（c-MET）抗體或其結合結構域（參見例如，Harms等人的美國專利案號9,458,245，和Neijssen等人的美國專利案號9,068,011，特此藉由引用將其全部併入）；抗密連蛋白18.2抗體或其結合結構域（參見例如，Dahlhoff等人的美國專利申請公開案號20200055932，和Hu等人的美國專利案號10,421,817，特此藉由引用將其全部併入）；抗密連蛋白6抗體或其結合結構域（參見例如，Chambers等人的美國專利案號11,248,046，特此藉由引用將其全部併入）；抗表皮生長因子受體（EGFR）抗體或其結合結構域（參見例如，Chiu等人的美國專利案號9,695,242，和van de Winkel等人的美國專利案號9,458,236，特此藉由引用將其全部併入）；抗III型變體表皮生長因子受體（EGFRvIII）抗體或其結合結構域（參見例如，Kirschner等人的美國專利案號10,738,124，和Ellwanger等人的美國專利案號10,273,309，特此藉由引用將其全部併入）；抗促紅血球生成素產生肝細胞癌A2（EphA2）抗體或其結合結構域（參見例如，Bouchard等人的美國專利案號9,676,864，和Zhou和Marks的美國專利案號10,406,225，特此藉由引用將其全部併入）；抗上皮細胞黏附分子（EpCAM）抗體或其結合結構域（參見例如，Gunnarsson等人的美國專利案號8,637,017，和Harvey等人的美國專利案號9,790,274，特此藉由引用將其全部併入）；抗胎兒乙醯膽鹼受體抗體或其結合結構域（參見例如，Martinez-Martinez的WO 2013011030，特此藉由引用將其全部併入）；抗葉酸受體α（FRα）結合結構域（參見例如，O’Shannessy的美國專利案號8,475,795，特此藉由引用將其全部併入）；抗神經節苷脂GD2（GD2）抗體或其結合結構域（參見例如，Scholz等人的美國專利申請公開案號20210189000，和Leusen等人的美國專利申請公開案號20210179732，特此藉由引用將其全部併入）；抗蛋白多糖-3（GPC3）抗體或其結合結構域（參見例如，Terrett等人的美國專利案號9,217,033，特此藉由引用將其全部併入）；抗鳥苷酸環化酶C（GUCY2C）抗體或其結合結構域（參見例如，Chang等人的美國專利申請公開案號20200010566，特此藉由引用將其全部併入）；抗人表皮生長因子受體1（HER1）抗體或其結合結構域（參見例如，Bossenmaier等人的美國專利申請公開案號20180100022，特此藉由引用將其全部併入）；抗人表皮生長因子受體2（ERBB2/HER2）抗體或其結合結構域（參見例如，Goeij等人的美國專利案號11,046,771，和Alper的美國專利案號8,722,362，特此藉由引用將其全部併入）；抗細胞間黏附分子1（ICAM-1）抗體或其結合結構域（參見例如，Hansson等人的美國專利申請公開案號20160280788，和Abulrob等人的美國專利案號8,623,369，特此藉由引用將其全部併入）；抗白血球介素13受體α2（IL13Rα2）抗體或其結合結構域（參見例如，Balyasnikova等人的美國專利申請公開案號20200181227，特此藉由引用將其全部併入）；抗白血球介素11受體α（IL11Rα）抗體或其結合結構域（參見例如，Edwards等人的美國專利案號9,340,618，特此藉由引用將其全部併入）；抗Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物（KRAS）抗體或其結合結構域（參見例如，Zhou等人的美國專利案號11,174,314，特此藉由引用將其全部併入）；抗L1細胞黏附分子（L1CAM）抗體或其結合結構域（參見例如，Hong等人的美國專利申請公開案號20220033494，特此藉由引用將其全部併入）；抗MAGE抗體或其結合結構域（參見例如，Bergeron等人的美國專利案號8,987,423，和Esslinger等人的美國專利申請公開案號20140093514，特此藉由引用將其全部併入）；抗肝細胞生長因子受體（HGF受體/MET）抗體或其結合結構域（參見例如，Burgess等人的美國專利案號8,609,090，和Goetsch等人的美國專利案號8,545,839，特此藉由引用將其全部併入）；抗黏蛋白1（MUC1）抗體或其結合結構域（參見例如，Denardo等人的美國專利案號7,183,388，和Yonezawa的美國專利案號8,951,526，特此藉由引用將其全部併入）；抗黏蛋白16（MUC16）抗體或其結合結構域（參見例如，Haber等人的美國專利案號10,941,208，特此藉由引用將其全部併入）；抗黏蛋白17（MUC17）抗體或其結合結構域（參見例如，Raum等人的美國專利申請公開案號20210130465，特此藉由引用將其全部併入）；抗自然殺手組2成員D（NKG2D）抗體或其結合結構域（參見例如，Urso等人的美國專利案號10,526,409，特此藉由引用將其全部併入）；抗癌/睪丸抗原1（CT6.1）抗體或其結合結構域（參見例如，美國專利申請公開案號20190382504，特此藉由引用將其全部併入）；抗前列腺幹細胞抗原（PSCA）抗體或其結合結構域（參見例如，Gudas等人的美國專利案號8,013,128，特此藉由引用將其全部併入）；抗腎母細胞瘤1（WT-1）抗體或其結合結構域（參見例如，Benz等人的美國專利案號11,192,957，特此藉由引用將其全部併入）；抗半乳糖凝集素9（Gal9）抗體或其結合結構域（參見例如，Koide等人的美國專利案號10,344,091，特此藉由引用將其全部併入）；抗計畫性細胞死亡1配體1（PD-L1）抗體或其結合結構域（參見例如，Freeman等人的美國專利案號9,988,452，特此藉由引用將其全部併入）；抗滋養層糖蛋白（5T4癌胚抗原）抗體或其結合結構域（參見例如，Boghaert等人的美國專利案號8,044,178，特此藉由引用將其全部併入）；抗葉酸受體α（FOLR1）抗體或其結合結構域（參見例如，Ando等人的美國專利案號9,207,238，特此藉由引用將其全部併入）；和抗腫瘤相關鈣訊息傳遞子2（滋養層細胞表面抗原2；TROP2）抗體或其結合結構域（參見例如，Tang等人的美國專利案號11,192,954，特此藉由引用將其全部併入）。
在另一個實施方式中，該雙特異性LTβR結合蛋白的腫瘤相關抗原結合結構域與腫瘤微環境（TME）的基質相關抗原（SAA）結合。合適的SAA包括但不限於纖連蛋白（FN1）、基質金屬蛋白酶-2（MMP2）、血小板衍生的生長因子受體-β（PDGFRβ）、dickkopf相關蛋白3（DKK3）、血小板衍生的生長因子亞基B（PDGFB）、NUAK家族SNF1樣激酶1（NUAK1）、成纖維細胞生長因子（FGF1）、PDZ和LIM結構域蛋白4（PDLIM4）、gremlin 1（Grem1）和骨膜蛋白（POSTN）。
能夠結合該等SAA的結合蛋白在本領域中已經係已知的，並且可以容易地用作本文所描述的LTβR雙特異性結合蛋白的第二結合結構域。例如，且不限於，該第二結合結構域可包含抗纖連蛋白抗體或其結合結構域（參見例如，Kato等人的美國專利申請公開案號20100248262，特此藉由引用將其全部併入）、抗基質金屬蛋白酶-2抗體或其結合結構域（參見例如，Devy的美國專利案號8,013,125，特此藉由引用將其全部併入）、抗血小板衍生的生長因子受體-β（PDGFRβ）抗體或其結合結構域（參見例如，Zhu等人的美國專利案號7,740,850，特此藉由引用將其全部併入）、抗dickkopf相關蛋白3抗體或其結合結構域（參見例如，Hwang等人的美國專利申請公開案號20210340232，特此藉由引用將其全部併入）、抗血小板衍生的生長因子亞基B抗體或其結合結構域（參見例如，Arch等人的美國專利案號9,428,577，特此藉由引用將其全部併入）、抗NUAK家族SNF1樣激酶1（NUAK1）抗體或其結合結構域、抗成纖維細胞生長因子抗體或其結合結構域（參見例如，Ashkenazi等人的美國專利案號8,410,250，和Weng等人的美國專利案號8,481,168，特此藉由引用將其全部併入）、抗PDZ和LIM結構域蛋白4（PDLIM4）抗體或其結合結構域、抗gremlin 1抗體或其結合結構域（參見例如，Chalothorn等人的美國專利申請公開案號20180057580，和Dedi等人的美國專利申請公開案號20210163586，特此藉由引用將其全部併入）、以及抗骨膜蛋白抗體或其結合結構域（參見例如，Taniyama等人的美國專利案號8,372,957，特此藉由引用將其全部併入）。
在一個實施方式中，本揭露之多特異性LTβR結合蛋白係對於LTβR結合係單價的雙特異性LTβR結合蛋白。對於本文所描述的LTβR結合結構域，已經發現包含該等呈單價形式（但不是二價形式）的LTβR結合結構域的雙特異性分子表現出交聯依賴性LTβR激動作用。換句話說，包含單價LTβR結合結構域的雙特異性分子需要第一和第二結合結構域的結合以誘導LTβR受體聚集並實現LTβR激動作用。這種對LTβR具有單價的雙特異性構建體特別有利於將LTβR激動作用靶向特定組織，例如腫瘤微環境，因為活性取決於第一和第二結合結構域的結合。此外，本文揭露的LTβR結合物係基於它們與LTβR在不會抑制內源性LTβR配體結合和傳訊的區域（例如CRD4）的結合進行專門篩選和選擇的。本文揭露 的LTβR結合蛋白的該等特性共同確保了，如果LTβR雙特異性結合蛋白在靶向腫瘤微環境之外結合LTβR，(i) 在不存在第二結合結構域與其靶標結合的情況下，結合不會誘導脫靶LTβR傳訊，以及 (ii) 這樣的結合不會阻斷脫靶組織中的內源性LTβR配體（即，LIGHT和LTα1β2）傳訊。該等設計特性提供了相對於先前描述的LTβR結合蛋白具有優異的安全性和功效性質的LTβR結合蛋白。 衍生物、變體和模擬物
在一個實施方式中，本文所描述的LTβR結合蛋白在重鏈恒定區中包含一或多個胺基酸修飾，其提高半衰期/穩定性或使抗體更適用於表現/可製造性。在一個實施方式中，該LTβR結合蛋白被設計為防止或減少與Fc受體的相互作用。在示例性情況中，該結合蛋白係包含缺乏與Fcγ受體相互作用能力的恒定區的穩定效應物無功能（SEFL）結合蛋白。胺基酸突變和製備SEFL抗體之方法在本領域中係已知的，參見例如，Liu等人, J. Biol. Chem[生物化學雜誌]. 292: 1876-1883 (2016)；和Jacobsen等人, J. Biol. Chem[生物化學雜誌]. 292: 1865-1875 (2017)，特此藉由引用將其全部併入。在示例性方面，本文所描述的LTβR結合蛋白被修飾為包含以下突變中的一或多個，根據EU系統進行編號：L242C、A287C、R292C、N297G、V302C、L306C和/或K334C。在示例性方面，本文所描述的LTβR結合蛋白包含N297G取代以形成SEFL結合蛋白。在示例性方面，本文所描述的LTβR結合蛋白包含A287C、N297G和L306C取代以形成SEFL結合蛋白。在其他示例性方面，該LTβR結合蛋白包含R292C、N297G和V302C取代以形成基於SEFL2-2抗體的分子。
在一個實施方式中，如本文所描述的促效劑LTβR結合蛋白可以包含其他半衰期延長（HLE）修飾。在一個實施方式中，該HLE修飾發生在重鏈恒定區中，並包含以下胺基酸取代中的一或多個，根據EU系統編號：M252Y、S254T和T256E。在示例性情況中，該LTβR結合蛋白包含M252Y、S254T和T256E取代中的一個或兩個。在示例性情況中，本揭露之LTβR結合蛋白包含M252Y、S254T和T256E中的全部三個。在一個實施方式中，該HLE修飾發生在重鏈恒定區中，並包含以下取代中的一或多個，根據EU系統編號：L309D、Q311H和N434S。在示例性情況中，本揭露之LTβR結合蛋白包含L309D、Q311H和N434S取代中的一個、兩個或全部三個。在示例性情況中，該LTβR結合蛋白包含L309D、Q311H和N434S取代中的全部三個。在一個實施方式中，本文揭露的LTβR結合蛋白包含SEFL或SEFL2-2修飾與本文所描述的任何HLE修飾的組合。
在某些實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白的變體包括糖基化變體，其中糖基化位點的數量和/或類型與親本多肽的胺基酸序列相比已經改變。在某些實施方式中，變體包含比天然蛋白質更多或更少數目的N連接的糖基化位點。可替代地，消除此序列的取代將移除已存在的N連接的碳水化合物鏈。還提供了N連接的碳水化合物鏈的重排，其中消除一或多個N連接的糖基化位點（典型地天然存在的那些）並且創造一或多個新的N連接的位點。額外的結合蛋白變體包括半胱胺酸變體，其中與親本胺基酸序列相比，一或多個半胱胺酸殘基缺失或被取代為另一種胺基酸（例如絲胺酸）。當抗體必須重新折疊成生物學上活性構象時，如在分離不溶性包涵體之後，半胱胺酸變體可能有用。半胱胺酸變體一般具有少於天然蛋白質的半胱胺酸殘基，且典型地具有偶數個以使由未配對的半胱胺酸引起的相互作用最小。
在一個實施方式中，本文揭露的促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體和雙特異性促效劑LTβR結合蛋白）包括翻譯後修飾的變體。例如，在一個實施方式中，包含重鏈的促效劑LTβR結合蛋白的C末端離胺酸殘基已缺失。
其他期望的胺基酸取代（無論是保守的還是非保守的）和缺失可以由熟悉該項技術者在需要這樣的取代或缺失時來確定。在某些實施方式中，胺基酸取代可用於例如鑒定與功能相關的結合蛋白的重要殘基、增加或降低抗體對本文所描述的感興趣靶標的親和力、降低對蛋白水解的易感性、降低對氧化的易感性、改變形成蛋白複合物的結合親和力，和/或賦予或修飾此類多肽的其他物理化學或功能性質。根據某些實施方式，可在天然存在的序列中（在某些實施方式中，在形成分子間接觸的一或多個結構域外的多肽部分中）進行單個或多個胺基酸取代（在某些實施方式中為保守胺基酸取代）。在某些實施方式中，保守胺基酸取代通常可能不會實質性地改變親本序列的結構特徵（例如，替換胺基酸不應傾向於破壞親本序列中發生的螺旋或破壞表徵親本序列的其他類型的二級結構）。領域公認的多肽二級和三級結構之實例描述於Proteins, Structures and Molecular Principles [蛋白質、結構和分子原理] (Creighton編輯, W. H. Freeman and Company [W.H.弗裡曼公司], 紐約 (1984))；Introduction to Protein Structure [蛋白質結構簡介] (C.Branden及J.Tooze編, Garland Publishing [加蘭出版社], 紐約, 紐約州。(1991))；以及Thornton等人 Nature [自然] 354:105 (1991)，將該等文獻各自藉由引用併入本文。 編碼 LT β R 結合蛋白的核酸分子
本揭露進一步提供了包含編碼本揭露之促效劑LTβR結合蛋白的核苷酸序列的核酸分子。本文所用的「核酸分子」涵蓋多核苷酸和寡核苷酸，通常係指DNA或RNA的聚合物，或其修飾形式，其可為單鏈或雙鏈，從天然來源合成或獲得（例如，分離和/或純化），其可以含有天然、非天然或改變的核苷酸，並且其可以含有天然的、非天然或改變的核苷酸間鍵，例如磷酸醯胺鍵或硫代磷酸鍵，而不是在未修飾的寡核苷酸的核苷酸之間發現的磷酸二酯。核酸分子可以包含編碼本揭露之任何促效劑LTβR結合蛋白的任何核苷酸序列。在一些實施方式中，核酸不包含任何插入、缺失、倒位和/或取代。在其他實施方式中，核酸包含一或多個插入、缺失、倒位和/或取代。
在一些方面，本揭露之核酸分子係重組的。如本文所用，術語「重組」係指藉由使用實驗室方法連接天然或合成核酸片段以形成自然界中未發現的核酸分子而在活細胞外構建的分子。
在一些方面，本揭露之核酸分子係使用本領域已知的程式基於化學合成和/或酶連接反應構建的。參見例如，Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual [分子選殖：實驗室手冊].第3版, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor [冷泉港實驗室出版社], NY 2001；和Ausubel等人, Current Protocols in Molecular Biology [分子生物學現代方法], Greene Publishing Associates [格林出版公司] 和John Wiley & Sons [約翰·威利父子公司], NY [紐約州], 1994。例如，核酸分子可以使用天然存在的核苷酸或多種修飾的核苷酸進行化學合成，該等核苷酸旨在提高分子的生物穩定性或增加雜交時形成的雙鏈體的物理穩定性（例如，硫代磷酸衍生物和吖啶取代的核苷酸）。可用於生成核酸的修飾核苷酸之實例包括但不限於5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯碘尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黃嘌呤、黃嘌呤、4-乙醯胞嘧啶、5-(羧基羥甲基)尿嘧啶、5-羧甲基胺基甲基-2-硫尿苷、5-羧甲基胺基甲基尿嘧啶、二氫尿嘧啶、β-D-半乳糖基Q核苷（queosine）、肌苷、N 6-異戊烯基腺嘌呤、1-甲基鳥嘌呤、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鳥嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鳥嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N-取代的腺嘌呤、7-甲基鳥嘌呤、5-甲基胺甲基尿嘧啶、5-甲氧基胺基甲基-2-硫尿嘧啶、β-D-甘露糖基Q核苷（queosine）、5'-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N 6-異戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧乙酸（v）、wybutoxosine、假尿嘧啶、Q核苷（queosine）、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧乙酸甲酯、3-(3-胺基-3-N-2-羧丙基)尿嘧啶和2,6-二胺基嘌呤。
在一個實施方式中，該核酸分子包含一或多個多核苷酸，其編碼促效劑LTβR結合蛋白之全部或部分，例如如本文揭露的結合蛋白的一條或兩條鏈。多核苷酸可為適合所期望用途或功能的任何長度，並且可以可操作地偶合到一或多個額外序列（例如調節序列）和/或是較大核酸分子（例如載體）的一部分。如果調節序列影響多核苷酸序列的表現（例如，表現的水平、時間或位置），則多核苷酸「可操作地偶合」或「可操作地連接」至調節序列。多核苷酸分子可為單鏈或雙鏈，並且可以包含RNA和/或DNA核苷酸以及其人工變體（例如，肽核酸）。
在一個實施方式中，本揭露之多核苷酸編碼上文揭露的促效劑LTβR結合蛋白，並包含編碼上文所描述的CDR中的任一個、任兩個、任三個、任四個、任五個或任六個的序列，包括表2、6和10中提供的重鏈CDR和表3、7和11中提供的輕鏈CDR。
在一個實施方式中，本揭露之多核苷酸分子包含編碼與LTβR的CRD4結合的LTβR結合蛋白的VH結構域和VL結構域的核苷酸序列。因此，在一個實施方式中，該多核苷酸分子包含選自以下的編碼VH和VL結構域的核苷酸序列：SEQ ID NO: 119的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 120的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 121的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 122的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 123的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 124的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 125的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 126的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 127的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 128的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 129的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 130的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 131的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 132的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 133的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 134的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 135的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 136的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 137的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 138的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 139的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 140的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 141的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 142的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 143的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 144的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 145的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 146的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 147的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 148的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 149的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 150的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 151的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 152的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 153的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 154的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 155的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 156的VL胺基酸序列；以及SEQ ID NO: 157的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 158的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之多核苷酸分子包含編碼促效劑LTβR結合蛋白的VH結構域和VL結構域的核苷酸序列，該促效劑LTβR結合蛋白與LIBC219081和LIBC218979示例性LTβR結合物競爭結合LTβR的CRD4。因此，在一個實施方式中，該多核苷酸分子包含選自以下的編碼VH和VL結構域的核苷酸序列：SEQ ID NO: 401的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 402的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 403的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 404的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 405的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 406的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 407的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 408的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 409的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 410的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 411的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 412的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 413的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 414的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 415的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 416的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 417的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 418的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 419的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 420的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 421的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 422的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 423的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 424的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 425的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 426的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 427的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 428的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 429的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 430的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 431的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 432的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 433的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 434的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 435的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 436的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 437的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 438的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 439的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 440的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 441的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 442的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 443的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 444的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 445的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 446的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 447的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 448的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 449的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 450的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 451的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 452的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 453的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 454的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 455的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 456的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 457的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 458的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 459的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 460的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 461的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 462的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 463的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 464的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 465的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 466的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 467的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 468的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 469的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 470的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 471的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 472的VL胺基酸序列；以及SEQ ID NO: 473的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 474的VL胺基酸序列。
在一個實施方式中，本揭露之多核苷酸分子包含編碼結合人LTβR的促效劑LTβR結合蛋白的VH結構域和VL結構域的核苷酸序列。因此，在一個實施方式中，該多核苷酸包含選自以下的編碼VH和VL結構域的核苷酸序列：SEQ ID NO: 644的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 645的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 646的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 647的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 648的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 649的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 650的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 651的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 652的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 653的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 654的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 655的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 656的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 657的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 658的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 659的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 660的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 661的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 662的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 663的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 664的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 665的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 666的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 667的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 668的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 669的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 670的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 671的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 672的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 673的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 674的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 675的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 676的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 677的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 678的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 679的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 680的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 681的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 682的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 683的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 684的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 685的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 686的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 687的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 688的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 689的VL胺基酸序列；SEQ ID NO: 690的VH胺基酸序列和SEQ ID NO: 691的VL胺基酸序列。下表14中提供了編碼本文揭露的促效劑LTβR結合蛋白的VH和VL結構域的示例性核酸序列。 [ 表 14] . LT β R 結合蛋白的核酸序列
LIBC. 編號 鏈 序列 SEQ ID
218990 HC CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCGGCGACTATATGTACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTAACAGTGGTGGCACAAACTATGCAAAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAAGGGAGCAGTGGCTGGTCCGCCGAATACTTCCAGCACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTTTTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCAGCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAATAG 857
LC GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTNTCNTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTTCTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACTTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATGTATGGTGCATCCCGCAGGGCCACAGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTACCTCACCTCTCTCTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 858
218994 HC CAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGCCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATATGGTATGATGGAAGTGATGAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGTTGTATCTGCAAATGAACAGTGTGAGAGACGAGGACACGGCTCTGTATTACTGTGTGAGAGGGGACAGTGAGGACTTCTACTACTACGATTTCGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCAGCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAATAG 859
LC CAGTCTGTGTTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAAGAATTATGTTTCCTGGTACCAACACCTCCCAGGCACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAATAAGCGACCCTCAGGAATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACTGCGGAACATGGGATCACAGCCTGAGTGCTAGTTATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATCAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAAACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAG 860
219058 HC GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTACCTCTGGCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCGTTAGTAGTAGTGGTAGTTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTCTATTACTGTGCTGGAGCTCGGTATAACTGGCACTTTGATGCTTCTGATATCTGGGGCCAAGGGACAGTGGTCACCGTCTCTTCAGCCAGCACCAAGGGGCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCATCATGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGCAAATAG 861
LC GACATCCAGATGACCCAGTCTCCGTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCGATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAACCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCACAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTCCTACCTGAGGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAATACCCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 862
219081 HC CCGATTCATCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTATATTACTGTGCGCGAGATCGGGTAGCAGCTCATCCGGCCTACTACTACGGTCTGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCAGCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAATAG 863
LC TCCTATGAGCTGACACAGCCACCCTCGGTGTCATTGTCCCCAGGACAGACGGCCAGGATCACCTGCTCTGGAGATGCATTGCCAAACCATTATGCTTATTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTACTGGTGATATTTAAAGACAATGAGAGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAGTTCAGGGACAACAGTCACGTTGACCATCAGTGGAGTCCAGGCAGAAGACGAGGCTGACTATTACTGTCAATCAGCAGACAGCAGTGGTTCTTATGTGATTTTCGGCGGAGGGACCAAACTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATCAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAAACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAG 864
219097 HC GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTAAAGCCTGGGGGGTCCCTTAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAATGACGCCTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTGGCCGTATTAAAACCAAAACTGATGGTGGGACAACAGACTACGCTGCACCCGTGAAAGGCAGAATCACCATCTCAAGAGATGATTCAAAAAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAAACCGAGGACACAGCCGTGTATTACTGTACCACCGACTACGGTGACTACGAGTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCAGCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAATAG 865
LC GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGACAAGTCAGAGCATTAGTAGATATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTATGGTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTATTGTCATCAGAGTTACAGTACCCCTCCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 866
218979 HC CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTCTCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGAGCGTATAGCAGCAGCCCCTTACTACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCAGCACCAAGGGGCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCATCATGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGCAAATAG 867
LC TCCTATGAACTGACACAGCCACCCTCGGTGTCGGTGTCCCCAAGACAGACGGCCAGGATCACCTGCTCTGGAGATGCATTGCCAAAGCATTATGCTTATTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTGATATATAAAGACAATGAGAGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAGCTCAGGGACAACTGTCACGTTGACCATCAGTGGAGTCCAGGCAGAAGACGAGGCTGACTATTACTGTCAATCAGCAGACAACACTGGTTCTTATATGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATCAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAAACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAG 868
219037 HC CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACGGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAACAGTGGTGGTTACTTCTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAAGGTCCTGGAGTGGATTGGGTACAGCCATTACAGTGGTACCACCTACTACAATCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTAACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGCTCTCCCTGAAGCTGAACTCTGTGAATGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTGCCTGATGGGGAAGACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAGCCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCAGCACCAAGGGGCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCATCATGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGCAAATAG 869
LC GACCTCCAGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGACCATTAGTAGTTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCGGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTATGATGCCTCAAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGAAACTTACTACTGTCAACAGAGTTTCAGTGCCCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAAATTAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 870
219098 HC GAGGTGCAGTTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTTCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGAATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAGTTAGGGATAACTGGAACTACGACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCAGCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAATAG 871
LC GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCTTGGAGAGTCGGCCTCCATCTCCTGTAGGTGTAGTCAGAGCCTCCTGTATAGTAGTGGATACATCGATTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGGCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTATTTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGGGTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAAACTATACAAACTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 872
219098.001 HC GAGGTGCAGTTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTTCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGAATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAGTTAGGGATAACTGGAACTACGACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCAGCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAATAG 873
LC GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCTTGGAGAGTCGGCCTCCATCTCCTGTAGGAGCAGTCAGAGCCTCCTGTATAGTAGTGGATACATCGATTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGGCAGTCTCCACAGCTCCTGATCTATTTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGGGTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAAACTATACAAACTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 874
219051 HC CAGGTGCAACTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCTTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCGGCTACTATCTACACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTAATATTGGTGTCACAGACTGTGCACAGAAGTTTCAGGACAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGTACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGGCTGATATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTACGGTACGTGGATATAATGATGATTACGACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCAGCACCAAGGGGCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCATCATGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGCAAATAG 875
LC GATGTTGTGATGACCCAGACTCCACTCTCTCTGTCCGTCACCCCTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAAGTCTCGTCAGAGCCTCCTGCATAGAGATGGAAAGACCTATTTGTATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGCCAGCCTCCACAACTCCTGATCTATGAAGTTTCCAACCGGTTCTCTGGAGTGCCAAATAGATTCAGTGGCAGCGGGTCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCCGGGTGGAGGCTGAAGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAAAGTATACAGCTTCCGCTCATTTTCGGCGGAGGGACCAGGGTTGACATCAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 876
218989 HC CAGATCACCTTGAAGGAGTCTGGTCCTACGCTGGTGAAACCCACACAGACCCTCACGCTGACCTGCACCTTCACTGGGTTTTCACTCAGCACTAGTGGAATGGGTGTGGGCTGGATCCGTCAGCCCCCAGGAAAGGCCCTGGAGTGGCTTGCACTCATTTATTGGAATGGTGGTAAGCTCTACAGCCCATCTCTGAAGAACAGGCTCACCATCACCAAGGACACCTCCAAAAACCAGGTGGTCCTTACAATGACCAACATGGACCCTGTGGACACAGCCACATATTACTGTGCACACAGTGGATACTATGATAATAGTGGCTATTACTGGGACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCCCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCAGCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAATAG 877
LC GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGTCACCCTGTCTTTGTCGCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTCTTATCAGCGACTACTTAGTCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGCCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAATATGATACCTCCCTCAATTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 878
218967 HC CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGAGTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTTACTTCTGGACCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAATGGATTGGCTATATCTATTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACGTTTTCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGTTGAATTCTGTGACCGCTGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTGGAAACAATTATGGCCTTTGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCAGCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAATAG 879
LC GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTGGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCTAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTTCTGTCAGCAGTATGATACCTCACCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 880
218981 HC CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTGGTGGTTACTTCTGGAGCTGGATCCGTCAGCACCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGGTACACCCATTACATTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTGCCTTTTCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGTTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGTGGATACAGCTATGGTGGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCAGCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAATAG 881
LC GAAATTATGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAATATTGACAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGACACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATACATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTTCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTGGCTCACCTATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGACATTAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 882
218995 HC CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCAGTAGTCGTAACTGGTGGGGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATCGGGTACATCCATTATATTGGGAACACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATGTCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGTGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAGACTGGTAGCGATGGTGATGATACTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCAGCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAATAG 883
LC GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGTCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATTGGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCGGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCACTGTATTACTGTCAGCAGTGTTATAGCTCACCGATCACCTTCGGCCACGGGACACGACTGGACATTAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 884
218996 HC CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGTCTCTGTCTCTGGTGGCTCCATCAACAGTGGTAATTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGAAAGGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCCATTACAGTGGGAACACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGGACTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGGTGGCTACGGAATACTACTACTACGGTGTGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCAGCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAATAG 885
LC CAGTCTGTGTTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTACCAGCAGTTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAATAAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACTGCGGAACATGGGATCGCAGCCTGAGTGCTGTGATATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATCAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAAACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAG 886
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219092 HC CAGGTGCAGGTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGACACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCAGCAATAGTATCTGGTGGGGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTACATCCATTATAGTGGGAACACCTACTATAATCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATGTCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAACTCTGTGACCGCCGTGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAAATTTCGGTGACGTTGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCAGCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAATAG 891
LC GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTATTAGCAGCAGCTATTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAACATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGTTGTGTATTACTGTCAGCAGTATTATCTCTCACCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 892
219023 HC CAAGTGCAGCTGCAACAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGTGACAGTGTCTTTAGCAACAGTGCTGCTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCCTCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATATTGTAGGTCCAAGTGTTATAGTGATTATGCATTATCTGTGAAAAGTCGAGCAACCATCAACCCAGACACATCCGAGAACCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGCAGTGGCTGACCACTACTCCTACGCTTTGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCAATGTCTCCTCAGCCAGCACCAAGGGGCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCATCATGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGCAAATAG 893
LC GACATCCAGATGAACCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGACCATTAGAACTTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGGTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCTTCAAGGTTCAGTGGCACTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCACCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTCCTGTCAACAGAGTTACAGTTCACCGATCACTTTCGGCGGGGGGACCAAGGTCGAGATCAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 894
219023.001 HC CAAGTGCAGCTGCAACAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGTGACAGTGTCTTTAGCAACAGTGCTGCTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCCTCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATATTACAGGTCCAAGTGGTATAGTGATTATGCATTATCTGTGAAAAGTCGAGCAACCATCAACCCAGACACATCCGAGAACCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGCAGTGGCTGACCACTACTCCTACGCTTTGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCAGCACCAAGGGGCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCATCATGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGCAAATAG 895
LC GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGACCATTAGAACTTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGGTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCTTCAAGGTTCAGTGGCACTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCACCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTCCTGTCAACAGAGTTACAGTTCACCGATCACTTTCGGCGGGGGGACCAAGGTCGAGATCAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 896
219095 HC GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAAACTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGTAGTCTCTGGATTCACCTTTAACAACTATGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGTTATTAGTGATAGTGGTGGTAGCTCAAACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAAAACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAGATCGGAGTATAGCCGGCTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCAGCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAATAG 897
LC GACATCCAGATGACCCAGTCTCCGTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCGATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAACCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCACAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTCCTACCTGAGGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAATACCCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 898
219102 HC CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTTACTACTGGAGCTGGATCCGGCTGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTATATCTATTATGGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGGGTCTCCATGTCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTATGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATCGTATAGCAGCGCCTGGTACGGCTCTGCATACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCATCGTCTCCTCGGCCAGCACCAAGGGGCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCATCATGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGCAAATAG 899
LC GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTTTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAGCAACTATTTAATTTGGTATCAGCTGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGGTCCTGATCTACGATGCATCCAATTTGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAATGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCtGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAACAGTATGATCATCTCCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGACATTAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 900
219102.001 HC CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTTACTACTGGAGCTGGATCCGGCTGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTATATCTATTATGGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGGGTCTCCATGTCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTATGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATCGTATAGCAGCGCCTGGTACGGCTCTGCATACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCATCGTCTCCTCGGCCAGCACCAAGGGGCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCATCATGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGCAAATAG 901
LC GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTTTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAGCAACTATTTAATTTGGTATCAGCTGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGGTCCTGATCTACGATGCATCCAATTTGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAGCGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCtGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAACAGTATGATCATCTCCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGACATTAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 902
218973 HC CAGGTGCAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATACACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAAGTAAAAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAGCACGCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGATCCCTCCCATTACTATGGTTCGGGGAGTTATAACTACTTCTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCAGCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAATAG 903
LC CAGTCTGTGTTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATACTTATGTATCCTGGTACCAGCAACTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAATGAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGACACGTCAGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACTGCGGAACCTGGGATAACAGCCTGACTGCTGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATCAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAAACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAG 904
219044 HC GAGGTGCAGTTGGTGGAGTCTGGAGGAGGCTTGATCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGGTTCACCGTCAGTGACAACTACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGGTCTCAGTTATTTATAGCGGTGGTAACACATACTACGGAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTCTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTTCTGTACTGGCCCCTTCTTTGACTACTGGGGCCCGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCAGCACCAAGGGGCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCATCATGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGCAAATAG 905
LC GAAATTGTGTTGACGCAGTTTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCGGGGGAAGGAGGCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGACTGTTTGGAGCAACTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGGAGGGTCATTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCAATCTCACCATCAGCAGCCTGGAGCCTGGAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGTTCATCGATTACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 906
218997 HC CAGGTGCAGGTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTGGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCTATTACAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCATGGGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTTTCCCTGAGGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTATTGTGCGAGAAGGGGGCCAGTGGCTGGTGGATTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCAGCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAATAG 907
LC GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAATGTTTACAACAACTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTCGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTACATCCAGTAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAACAGTATGGTAGCTCACTTCTGTGCAGTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGAACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG 908
可以藉由突變將變化引入本文揭露的核酸分子中，從而導致其編碼的多肽（例如，LTβR結合蛋白）的胺基酸序列發生變化。可使用本領域中已知的任何技術來引入突變。在一個實施方式中，使用例如定點誘變方案來改變一或多個特定胺基酸殘基。在另一個實施方式中，使用例如隨機誘變方案使一或多個隨機選擇的殘基改變。無論是如何製備的，可以表現並篩選出突變多肽的所需特性。
可以將突變引入本文揭露的核酸分子中，而不顯著改變其編碼的多肽的生物活性。例如，可進行核苷酸取代，從而在非必需胺基酸殘基處進行胺基酸取代。在一個實施方式中，本揭露之促效劑LTβR結合蛋白之一的本文提供的核苷酸序列發生突變，使得其編碼的胺基酸序列包含如本文所示的本揭露之LTβR結合蛋白的輕鏈和/或重鏈的胺基酸殘基的一或多個缺失或取代。在另一個實施方式中，該誘變插入與本文所示的本揭露之促效劑LTβR結合蛋白的輕鏈和/或重鏈的一或多個胺基酸殘基相鄰的胺基酸。可替代地，可以將一或多個突變引入本文揭露的核酸分子中，其選擇性地改變其編碼的促效劑LTβR結合蛋白的生物活性。
編碼本揭露之抗體的相應胺基酸序列的本揭露之促效劑LTβR結合蛋白的核苷酸序列可以例如藉由隨機誘變或定點誘變來改變，以產生與未突變的多核苷酸相比包含一或多個特定核苷酸取代、缺失或插入的改變的多核苷酸。用於進行這樣的改變的技術的實例描述於以下中：Walder等人, Gene[基因] 42:133 (1986)；Bauer等人 Gene[基因] 37:73 (1985)；Smith等人, 1981, Genetic Engineering: Principles and Methods[基因工程：原理與方法], Plenum Press；以及美國專利案號4,518,584和4,737,462。例如，該等和其他方法可用於製備具有所期望的特性（例如，與未衍生的抗體相比，對所期望靶標的親和力、親合力或特異性增加，體內或體外活性或穩定性增加，或體內副作用減少）的LTβR結合蛋白的衍生物。
在另一個實施方式中，本揭露提供了包含編碼本文揭露的促效劑LTβR結合蛋白的多核苷酸的載體。載體係用於將另一個核酸引入細胞的核酸分子。載體之實例包括但不限於質體、病毒載體、非附加型哺乳動物載體和表現載體，例如重組表現載體。
包含本揭露之多核苷酸的載體可以使用以下中描述的標準重組DNA技術來製備：例如，Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual[分子選殖：實驗室手冊]. 第3版, 冷泉港出版社, 紐約冷泉港 (2001)；以及Ausubel等人, Current Protocols in Molecular Biology[分子生物學的當前方案], Greene Publishing Associates和John Wiley & Sons, NY (1994)，特此藉由引用將其全部併入。呈圓形或線性的表現載體的構建體可經製備以含有在原核或真核宿主細胞中發揮功能的複製系統。複製系統可來源於例如CoIEl、2 μ質體、λ、SV40、牛乳頭瘤病毒等。
在一個實施方式中，該表現載體係圓形質體（參見例如，Muthumani等人, 「Optimized and Enhanced DNA Plasmid Vector Based In vivo Construction of a Neutralizing anti-HIV-1 Envelope Glycoprotein Fab[中和抗HIV-1包膜糖蛋白Fab的基於優化和增強DNA質體載體的體內構建],」 Hum. Vaccin. Immunother[人類疫苗和免疫療法]. 9: 2253-2262 (2013)，特此藉由引用將其全部併入）。質體可以藉由整合到細胞基因組中來轉化靶細胞或存在於染色體外（例如，具有複製起點的自主複製質體）。示例性質體載體包括但不限於pCEP4、pREP4、pVAX、pcDNA3.0、provax或能夠表現由重組核酸序列構建體編碼的重鏈多肽和/或輕鏈多肽的任何其他表現載體。
在另一個實施方式中，該表現載體係線性表現盒（「LEC」）。LEC能夠經由電穿孔有效地遞送到受試者，以表現由重組核酸序列構建體編碼的重鏈多肽和/或輕鏈多肽。LEC可為任何沒有磷酸骨架的線性DNA。在一個實施方式中，該LEC不含有任何抗生素抗性基因和/或磷酸骨架。在另一個實施方式中，該LEC不含有與所需基因表現無關的其他核酸序列。
LEC可以衍生自任何能夠線性化的質體。質體可能能夠表現由重組核酸序列構建體編碼的重鏈多肽和/或輕鏈多肽。示例性質體包括但不限於pNP（Puerto Rico/34）、pM2（New Caledonia/99）、WLV009、pVAX、pcDNA3.0或provax，或任何其他能夠表現由重組核酸序列構建體編碼的重鏈多肽和/或輕鏈多肽的表現載體。
在另一個實施方式中，該表現載體係病毒載體。能夠表現全長抗體或其結合部分的合適病毒載體包括，例如，腺相關病毒（AAV）載體（參見例如，Lewis等人, 「Generation of Neutralizing Activity against Human Immunodeficiency Virus Type I in Serum by Antibody Gene Transfer[藉由抗體基因轉移在血清中產生對人類免疫缺乏病毒I型的中和活性],」 J. Virol.[病毒學雜誌] 76:8769-775 (2002)；Fang等人, 「An Antibody Delivery System for Regulated Expression of Therapeutic Levels of Monoclonal Antibodies In vivo[一種用於調節治療水平單株抗體體內表現的抗體遞送系統],」 Mol. Ther.[分子療法]15(6): 1153-9 (2007)；Buning等人, 「Recent Developments in Adeno-associated Virus Vector Technology[腺相關病毒載體技術的最新發展],」 J. Gene Med.[基因醫學雜誌] 10:717-733 (2008)）、慢病毒載體（參見例如，Joseph等人, 「Inhibition of In vivo HIV Infection in Humanized Mice by Gene Therapy of Human Hematopoietic Stem Cells with a Lentiviral Vector Encoding a Broadly Neutralizing anti-HIV Antibody[藉由用編碼廣泛中和抗HIV抗體的慢病毒載體對人類造血幹細胞進行基因治療來抑制人源化小鼠體內HIV感染],」 J. Virol.[病毒學雜誌], 84: 6645-53 (2010)；以及Luo等人, 「Engineering Human Hematopoietic Stem/Progenitor Cells to Produce a Broadly Neutralizing anti-HIV Antibody after In vivo Maturation to Human B Lymphocytes[工程化人類造血幹細胞/先驅細胞以在體內成熟為人B淋巴細胞後產生廣泛中和的抗HIV抗體],」 Blood[血液] 113: 1422-1431 (2009)）、反轉錄病毒載體、複製缺陷型腺病毒載體和無腸腺病毒載體（參見例如，美國專利案號5,872,005）。用於生成和分離適合用作載體的腺相關病毒（AAV）的方法係本領域已知的（參見例如，Grieger和Samulski, 「Adeno-associated Virus as a Gene Therapy Vector: Vector Development, Production and Clinical Applications[腺相關病毒作為基因治療載體：載體開發，生產和臨床應用],」 Adv.Biochem. EnginBiotechnol.[生物化學工程/生物技術的進展]99: 119-145 (2005)；Buning等人, 「Recent Developments in Adeno-associated Virus Vector Technology[腺相關病毒載體技術的最新發展],」 J. Gene Med.[基因醫學雜誌] 10:717-733 (2008)）。
編碼如本文所描述的促效劑LTβR結合蛋白的表現載體構建體可包括編碼重鏈多肽、重鏈可變區或其片段的多核苷酸。重鏈多肽可以包括可變重鏈（VH）區和/或至少一個恒定重鏈（CH）區。至少一個恒定重鏈區可以包括恒定重鏈區1（CH1）、恒定重鏈區2（CH2）、和恒定重鏈區3（CH3）和/或鉸鏈區。在一些實施方式中，該重鏈多肽可以包括VH區和CH1區。在其他實施方式中，該重鏈多肽可以包括VH區、CH1區、鉸鏈區、CH2區和CH3區。表現構建體還可以包括編碼輕鏈多肽、輕鏈可變區或其片段的多核苷酸序列。輕鏈多肽可以包括可變輕鏈（VL）區和/或恒定輕鏈（CL）區。
在一些方面，載體包含一或多個調節序列。「調節序列」係影響與其可操作地連接的核酸的表現（例如，表現的水平、時間或位置）的核酸。示例性調節序列包括轉錄和翻譯起始和終止密碼子，其對於載體要引入的宿主類型（例如，細菌、真菌、植物或動物）係特定的，視情況而定，並考慮載體係基於DNA還是基於RNA。基於待用於表現的宿主細胞而選擇合適的調節序列，並且可操作地連接至要表現的核酸序列。調節序列包括在許多類型的宿主細胞中直接組成型表現核苷酸序列的那些（例如，SV40早期基因強化子、Rous肉瘤病毒啟動子和巨細胞病毒啟動子），僅在某些宿主細胞中直接表現核苷酸序列的那些（例如，組織特異性調節序列），以及響應於特定治療或條件而指導核苷酸序列誘導表現的那些（例如，哺乳動物細胞中的金屬硫蛋白啟動子以及原核和真核系統中的tet反應和/或鏈黴素反應啟動子（參見例如，Voss等人, Trends Biochem. Sci.[生化科學趨勢] 11:287 (1986), Maniatis等人, Science[科學] 236:1237 (1987)））。熟悉該項技術者將理解，表現載體的設計可以取決於諸如待轉化的宿主細胞的選擇、所期望的蛋白表現水平等因素。可以將本揭露之表現載體引入宿主細胞中，從而產生由如本文所描述的核酸編碼的蛋白或肽。
表現構建體可以進一步編碼蛋白酶切割位點。蛋白酶切割位點可以被蛋白酶或肽酶識別。蛋白酶可為內肽酶或內切蛋白酶，例如但不限於弗林蛋白酶、彈性蛋白酶、HtrA、鈣蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶。在其他實施方式中，蛋白酶可為絲胺酸蛋白酶、蘇胺酸蛋白酶、半胱胺酸蛋白酶、天冬胺酸蛋白酶、金屬蛋白酶、麩胺酸蛋白酶或任何切割內部肽鍵的蛋白酶（即，不切割N末端或C末端肽鍵）。蛋白酶切割位點可以包括一或多個促進或提高切割效率的胺基酸序列。
表現構建體可以進一步編碼連接模體列。該連接模體列可以編碼在空間上分離和/或連接表現構建體的一或多個組分（編碼抗體的重鏈和輕鏈組分）的胺基酸序列。
在一個實施方式中，第一表現載體構建體編碼包括VH和CH1的重鏈多肽，第二表現載體構建體編碼包括VL和CL的輕鏈多肽。替代排列包括編碼包括VH、CH1、鉸鏈區、CH2和CH3的重鏈多肽的第一載體和編碼包括VL和CL的輕鏈多肽的第二載體。
在另一個實施方式中，該表現載體構建體編碼包括VH和CH1的重鏈多肽，以及包括VL和CL的輕鏈多肽，並且連接模體列位於編碼重鏈多肽的核酸序列和編碼輕鏈多肽的核酸序列之間。
在替代實施方式中，該表現載體構建體編碼包括VH和CH1的重鏈多肽，以及包括VL和CL的輕鏈多肽，並且編碼蛋白酶切割位點的核酸序列位於編碼重鏈多肽的核酸序列和編碼輕鏈多肽的核酸序列之間。
在另一個實施方式中，該表現載體構建體編碼包括VH、CH1、鉸鏈區、CH2和CH3的重鏈多肽，以及包括VL和CL的輕鏈多肽，並且連接模體列位於編碼重鏈多肽的核酸序列和編碼輕鏈多肽的核酸序列之間。
在又另一個實施方式中，該表現載體構建體編碼包括VH、CH1、鉸鏈區、CH2和CH3的重鏈多肽，以及包括VL和CL的輕鏈多肽，並且編碼蛋白酶切割位點的異源核酸序列位於編碼重鏈多肽的核酸序列和編碼輕鏈多肽的核酸序列之間。
載體可包括一或多種標記基因，其允許選擇轉化或轉染的宿主。標記基因包括殺生物劑抗性（例如針對抗生素、重金屬等的抗性）、營養缺陷型宿主中提供原營養的補充等。適用於本揭露之表現載體的標記基因包括例如新黴素/G418抗性基因、潮黴素抗性基因（hygromycin resistance gene）、組胺醇抗性基因、四環素抗性基因和安比西林抗性基因（ampicillin resistance gene）。
載體可以包含可操作地連接到編碼促效劑LTβR結合蛋白的核苷酸序列的天然或標準啟動子。啟動子（例如強啟動子、弱啟動子、誘導型啟動子、組織特異性啟動子和發育特異性啟動子）的選擇在技術者之普通技術範圍內。類似地，核苷酸序列與啟動子組合還在技術者之技術範圍內。啟動子可為非病毒啟動子或病毒啟動子，例如巨細胞病毒（CMV）啟動子、SV40啟動子、RSV啟動子和在鼠科幹細胞病毒的長末端重複序列中發現的啟動子。
在另一個實施方式中，本揭露提供了已將本揭露之重組表現載體引入其中的宿主細胞。宿主細胞係用於表現核酸的細胞，例如，編碼如本文所描述的LTβR結合蛋白的多核苷酸。合適的宿主細胞包括原核細胞和真核細胞，如下文更詳細描述的。宿主細胞不僅指含有感興趣核酸分子的特定細胞，還指這種細胞的後代或潛在後代。因為由於例如突變或環境影響，在後代中可能發生某些修飾，因此這樣的後代實際上可能與親本細胞不同，但仍包含在本文使用的「宿主細胞」範圍內。
原核生物宿主細胞包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物體，例如大腸桿菌或桿菌。在示例性方面，該細胞係真核細胞，包括但不限於酵母細胞、絲狀真菌細胞、原生動物細胞、藻類細胞、昆蟲細胞或哺乳動物細胞。本領域中描述了這樣的宿主細胞。參見例如，Frenzel,等人, Front Immunol[免疫學前沿] 4: 217 (2013)。在示例性方面中，該等真核細胞為哺乳動物細胞。在示例性方面中，該等真核細胞為非人類哺乳動物細胞。在一些方面，該等細胞係中國倉鼠卵巢（CHO）細胞及其衍生物（例如，CHO-K1、CHO pro-3、CS9）、小鼠骨髓瘤細胞（例如，NS0、GS-NS0、Sp2/0），工程化為缺乏二氫葉酸還原酶（DHFR）活性的細胞（例如，DUKX-X11、DG44）、人胚胎腎293（HEK293）細胞或其衍生物（例如，HEK293T、HEK293-EBNA）、綠色非洲猴腎細胞（例如，COS細胞、VERO細胞）、人子宮頸癌細胞（例如HeLa）、人骨肉瘤上皮細胞U2-OS、腺癌人肺泡基底上皮細胞A549、人纖維肉瘤細胞HT1080、小鼠腦腫瘤細胞CAD、胚胎癌細胞P19、小鼠胚胎成纖維細胞NIH 3T3、小鼠成纖維細胞L929、小鼠神經母細胞瘤細胞N2a、人乳癌細胞MCF-7、視網膜母細胞瘤細胞Y79、人視網膜母細胞瘤細胞SO-Rb50、人肝癌細胞Hep G2、小鼠B骨髓瘤細胞J558L或幼倉鼠腎（BHK）細胞（Gaillet等人 2007；Khan, Adv Pharm Bull [高級藥物通報] 3(2): 257-263 (2013)）。在一個特定實施方式中，該宿主細胞係CS9（CHO細胞系）。
可經由常規轉化或轉染技術將載體DNA引入原核或真核細胞中。為了穩定轉染哺乳動物細胞，已知取決於所使用的表現載體及轉染技術，僅一小部分細胞可將外來DNA整合至其基因組中。為了鑒定和選擇該等整合體，通常將編碼選擇性標誌物（例如針對抗生素抗性）的基因與目的基因一起引入宿主細胞中。另外的選擇性標誌物包括賦予藥物（如G418、潮黴素和胺甲喋呤）抗性的那些。除其他方法以外，可藉由藥物選擇（例如已併入選擇性標記基因的細胞將倖存，而其他細胞則死亡）來鑒別經所引入的核酸穩定轉染的細胞。
轉化的細胞可以在促進LTβR結合蛋白表現的條件下培養，並且藉由常規蛋白純化程式回收結合蛋白。 LT β R 結合蛋白的生產方法
本文揭露的LTβR結合蛋白可以藉由本領域已知的、合成結合蛋白和/或蛋白的任何方法，特別是藉由化學合成或較佳的是，藉由重組表現技術進行生產。從頭合成多肽的合適方法在以下中描述，例如，Chan等人, Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis[Fmoc固相肽合成], Oxford University Press[牛津大學出版社], 英國牛津, 2005；以及Peptide and Protein Drug Analysis[肽和蛋白質藥物分析], Reid, R.編輯, Marcel Dekker, Inc., 2000。
重組表現技術涉及構建含有編碼如本文所描述的促效劑LTβR結合蛋白的多核苷酸的表現載體。一旦獲得了編碼促效劑LTβR結合蛋白的多核苷酸，就可以藉由重組DNA技術生產用於生產促效劑LTβR結合蛋白的載體。構建含有促效劑LTβR結合蛋白編碼序列和適當的轉錄和翻譯控制訊號的表現載體。該等方法包括例如體外重組DNA技術、合成技術、以及體內基因重組。
藉由常規技術將表現載體轉移到宿主細胞，然後藉由常規技術培養轉染的細胞以產生本揭露之促效劑LTβR結合蛋白。在本揭露之一個實施方式中，可以將編碼抗體的重鏈和輕鏈的載體在宿主細胞中共表現，以表現整個免疫球蛋白分子。
多種宿主表現載體系統可用於表現本揭露之促效劑LTβR結合蛋白。這樣的宿主表現系統代表了可以產生感興趣的編碼序列並隨後純化的媒介物，也代表了當用適當的核苷酸編碼序列轉化或轉染時，可以原位表現本揭露之結合蛋白的細胞。細菌細胞（如大腸桿菌）和真核細胞常用於表現重組抗體分子，尤其是用於表現整個重組抗體分子。例如，哺乳動物細胞如中國倉鼠卵巢細胞（CHO），與載體（如來自人類巨細胞病毒的主要中間早期基因啟動子元件）相結合，係抗體的有效表現系統（Foecking等人, Gene[基因] 45:101 (1986)；Cockett等人, Nat. Biotech.[自然生物技術] 8:2 (1990)）。
此外，還可以選擇調節插入序列的表現或以所期望方式修飾和加工基因產物的宿主細胞株。蛋白產物之這樣的修飾（例如，糖基化）和加工（例如，切割）對於結合蛋白的功能可能是重要的。不同宿主細胞對於蛋白和基因產物的翻譯後加工和修飾具有特徵和特定機制。可選擇適當細胞系或宿主系統以確保所表現的外源蛋白的正確修飾和加工。為此，可以使用具有用於初級轉錄物的適當加工、基因產物的糖基化和磷酸化的細胞機器的真核宿主細胞。這樣的哺乳動物宿主細胞包括但不限於CHO細胞、COS細胞、293細胞、3T3細胞、NS0細胞、VERO細胞、BHK細胞或骨髓瘤細胞。
對於重組蛋白（如本揭露之LTβR結合蛋白）的長期、高產量生產，穩定表現係較佳的。例如，可以對穩定表現LTβR抗體分子的細胞系進行工程化。代替使用含有病毒複製起點的表現載體，宿主細胞可以使用由適當表現控制元件（例如啟動子、強化子、序列、轉錄終止子、聚腺苷酸化位點等）和選擇性標誌物來控制的DNA來轉化。在引入外源DNA後，可以允許工程化的細胞在富集的培養基中生長1-2天，並且然後切換至選擇性培養基。重組質體中的選擇性標誌物賦予對選擇的抗性，並且允許細胞穩定地將質體整合到其染色體中並生長以形成病灶，進而其可以進行選殖並擴展成細胞系。該方法可有利地用於工程化表現LTβR結合蛋白的細胞系。這樣的工程化的細胞系可以特別地用於篩選和評估與抗體分子直接或間接相互作用的化合物。
可以使用許多選擇系統，包括但不限於單純皰疹病毒胸苷激酶（參見例如，Wigler等人, Cell[細胞] 11:223 (1977)）、次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉移酶（參見例如，Szybalska和Szybalski, Proc. Natl. Acad. Sci. USA[美國國家科學院院刊] 48:202 (1992)）和腺嘌呤磷酸核糖基轉移酶（參見例如，Lowy等人, Cell[細胞] 22:817 (1980)）基因可分別用於tk、hgprt或aprt細胞。另外，可以將抗代謝藥抗性作為選擇以下基因的依據：dhfr，其賦予對胺甲喋呤的抗性（參見例如，Wigler等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA[美國國家科學院院刊] 77:357 (1980)；O'Hare等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA[美國國家科學院院刊] 78:1527 (1981)）；gpt，其賦予對黴酚酸的抗性（參見例如，Mulligan和Berg, Proc. Natl. Acad. Sci. USA[美國國家科學院院刊] 78:2072 (1981)）；neo，其賦予對胺基糖苷G-418的抗性（參見例如，Wu和Wu, Biotherapy[生物療法] 3:87-95 (1991)）；以及hygro，其賦予對潮黴素的抗性（參見例如，Santerre等人, Gene[基因] 30:147 (1984)）。可以將本領域公知的重組DNA技術的方法常規地應用於選擇所希望的重組選殖，並且此類方法描述於例如，Ausubel等人 (編輯), Current Protocols in Molecular Biology [分子生物學現代方法], John Wiley & Sons [約翰•威利父子公司], 紐約 (1993)；Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual [基因轉移和表現：實驗室手冊], Stockton Press [米斯托克頓出版社], 紐約 (1990)；以及第12和13章, Dracopoli等人 (編輯), Current Protocols in Human Genetics [當代人類遺傳學實驗手冊], John Wiley & Sons [約翰•威利父子公司], 紐約 (1994)；Colberre-Garapin等人, J. Mol. Biol.[分子生物學雜誌] 150:1 (1981)。
宿主細胞可以用本揭露之兩種表現載體進行共轉染，例如，第一載體編碼如本文所描述的促效劑LTβR結合蛋白重鏈或其可變結構域，第二載體編碼如本文所描述的LTβR結合蛋白輕鏈或其可變結構域。這兩種載體可含有相同的選擇性標誌物，這使得重鏈和輕鏈多肽能相等表現。可替代地，可以使用編碼並能夠表現例如重鏈和輕鏈多肽的單個載體。在這種情況下，輕鏈應置於重鏈之前，以避免過量的無毒重鏈（參見例如，Proudfoot, Nature[自然] 322:52 (1986)；Kohler, Proc. Natl. Acad. Sci. USA[美國國家科學院院刊] 77:2197 (1980)）。重鏈和輕鏈的編碼序列可以包含cDNA或基因組DNA。
LTβR單鏈結合蛋白可以經由胺基酸橋（短肽連接基）藉由連接重鏈和輕鏈可變結構域（Fv區）片段形成，從而產生單個多肽鏈。這樣的單鏈Fv（scFv）已藉由在編碼兩個可變結構域多肽（V L和V H）的DNA之間融合編碼肽連接基的DNA來製備。，所得多肽可以自身折疊以形成抗原結合單體，或者它們可以形成多聚體（例如，二聚體、三聚體或四聚體），這取決於兩個可變結構域之間的柔性連接基的長度（參見例如，Kortt等人, Prot. Eng.[蛋白質工程] 10:423 (1997)；Kortt等人, Biomol. Eng.[生物分子工程] 18:95-108 (2001)）。藉由組合包含不同V L和V H的多肽，可以形成與不同表位結合的多聚體scFv（Kriangkum等人, Biomol. Eng.[生物分子工程] 18:31-40 (2001)）。為生產單鏈結合蛋白而開發的技術包括以下中描述的那些：美國專利案號4,946,778；Bird等人, Science[科學] 242:423 (1988)；Huston等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA[美國國家科學院院刊] 85:5879 (1988)；Ward等人, Nature[自然] 334:544 (1989)；de Graaf等人, Methods Mol Biol.[分子生物學方法] 178:379-87 (2002)。
在一個實施方式中，如本文所描述的能夠結合LTβR和TAA或SAA的雙特異性LTβR結合蛋白可以使用本領域已知的方法生產，例如參見，Yan等人的美國專利申請公開案號20200071425，或Kannan等人的美國專利案號8,592,562。在一個實施方式中，如本文所描述的雙特異性促效劑LTβR結合蛋白係使用以下中描述的方法生產：Wu等人的美國專利申請公開案號20100233173；Allan等人的美國專利申請公開案號20100105873；或Wu等人的美國專利申請公開案號20090155275。在一些實施方式中，如本文所描述的能夠結合LTβR和TAA或SAA的雙特異性促效劑LTβR結合蛋白使用以下中描述的方法生產：Thompson等人的美國專利申請公開案號20090175867和Thompson等人的美國專利申請公開案號20110033483。
本文所描述的雙特異性促效劑LTβR結合蛋白可以可替代地藉由直接回收例如在大腸桿菌中重組表現的Fab′片段產生，並且可以以化學偶合以形成雙特異性抗體（參見例如，Carter等人, Applications for Escherichia coli-Derived Humanized Fab’ Fragments: Efficient Construction of Bispecific Antibodies[大腸桿菌衍生的人源化Fab'片段的應用：雙特異性抗體的高效構建]. 於: Rosenberg, M., Moore, G.P. (編輯) The Pharmacology of Monoclonal Antibodies[單株抗體的藥理學]. Handbook of Experimental Pharmacology[實驗藥理學手冊], v. 113. 施普林格，柏林，海德堡）。
一旦藉由本文所描述的任何方法生產促效劑LTβR結合蛋白，就使用標準免疫球蛋白純化方法進行純化。合適的純化方法包括但不限於層析法（例如，離子交換、親和力，特別是藉由蛋白A後對特定抗原的親和力，以及大小排阻層析法）、離心或差分溶解度。此外，本揭露之結合蛋白可以融合到本文所描述的或本領域已知的異源多肽序列，以促進純化。 藥物組成物
本文提供了包含呈多肽、核酸、載體、宿主細胞或其組合的形式的促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或雙特異性促效劑LTβR結合蛋白）的組成物。在一個實施方式中，本揭露之藥物組成物包含呈分離和/或純化的形式的促效劑LTβR結合蛋白或編碼其的多核苷酸。在一個實施方式中，該組成物包含本揭露之兩種或更多種不同的結合蛋白（例如，不同結構）和/或多核苷酸的組合。
本揭露之藥物組成物包含增強促效劑LTβR結合蛋白或編碼其的多核苷酸的化學物理特性的藥劑，例如，經由在特定溫度（例如，室溫）下穩定、增加保質期、減少降解（例如，氧化蛋白酶介導的降解）、增加促效劑LTβR結合蛋白的半衰期等。
在本揭露之示例性方面中，該組成物另外包含藥學上可接受的載劑、稀釋劑或賦形劑。在一些實施方式中，將如本文揭露的LTβR結合蛋白或編碼其的多核苷酸（以下稱為「活性劑」）配製成包含活性劑以及藥學上可接受的載劑、稀釋劑或賦形劑的藥物組成物。就此而言，本揭露進一步提供了包含活性劑的藥物組成物，該藥物組成物旨在投與至受試者，例如哺乳動物。
在一些實施方式中，該活性劑以適合於投與至患者的純度水平存在於藥物組成物中。在一些實施方式中，該活性劑具有至少約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%的純度水平，和藥學上可接受的稀釋劑、載劑或賦形劑。在一些實施方式中，該等組成物含有約0.001至約30.0 mg/ml的濃度的活性劑。
在示例性方面中，該等藥物組成物包含藥學上可接受的載劑。如本文所用，術語「藥學上可接受的載劑」包括任一標準藥物載劑，例如磷酸鹽緩衝鹽水溶液、水、乳液（例如油/水或水/油乳液）和各種類型潤濕劑。該術語還涵蓋經美國聯邦政府的管理機構批准或在美國藥典中列出的用於包括人類的動物的任一試劑。
該藥物組成物可以包含任何藥學上可接受的成分，包括例如酸化劑、添加劑、吸附劑、氣溶膠推進劑、空氣置換劑、鹼化劑、抗結塊劑、抗凝劑、抗微生物防腐劑、抗氧化劑、防腐劑、基質、黏合劑、緩衝劑、螯合劑、包衣劑、著色劑、乾燥劑、洗滌劑、稀釋劑、消毒劑、崩解劑、分散劑、溶解增強劑、染料、潤膚劑、乳化劑、乳化穩定劑、填充劑、成膜劑、增味劑、調味劑、流動促進劑、膠凝劑、造粒劑、保濕劑、潤滑劑、黏膜黏附劑、軟膏基質、軟膏、含油載體、有機基質、錠劑基質、色素、增塑劑、拋光劑、防腐劑、螯合劑、增溶劑、溶劑、穩定劑、栓劑基質、界面活性劑（surface active agent）、界面活性劑（surfactant）、懸浮劑、增稠劑、張力劑、毒性劑、增黏劑、水吸收劑、水混溶性共溶劑、水軟化劑或潤濕劑（例如參見，the Handbook of Pharmaceutical Excipients[藥用賦形劑手冊], 第三版, A. H. Kibbe (Pharmaceutical出版社, 英國倫敦, 2000)；Remington’s Pharmaceutical Sciences[雷明頓製藥科學], 第十六版, E. W. Martin (Mack Publishing Co., 賓夕法尼亞州伊斯頓, 1980)）。
在示例性方面中，該藥物組成物包含在所採用的劑量和濃度下對接受者無毒的配製物材料。在一個實施方式中，藥物組成物包含活性劑和一或多種藥學上可接受的鹽、多元醇、界面活性劑、滲透平衡劑、張力劑、抗氧化劑、抗生素、抗真菌劑、填充劑；凍乾保護劑；消泡劑；螯合劑；防腐劑；色料；鎮痛劑；或另外的藥劑。在示例性方面，除了上文提到的賦形劑中的一或多種之外，該藥物組成物視需要包含一或多種多元醇和/或一或多種界面活性劑。
在某些實施方式中，該藥物組成物可含有用於改變、維持或保持例如組成物的pH值、滲透性、黏性、透明度、顏色、等滲性、氣味、無菌性、穩定性、分解或釋放速率、表面吸收或滲透的配製物材料。在這樣的實施方式中，合適的配製物材料包括但不限於胺基酸（例如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、精胺酸或離胺酸）；抗微生物劑；抗氧化劑（如抗壞血酸、亞硫酸鈉或亞硫酸氫鈉）；緩衝劑（如硼酸鹽、碳酸氫鹽、Tris-HCl、檸檬酸鹽、磷酸鹽或其他有機酸）；疏鬆劑（如甘露糖醇或甘胺酸）；螯合劑（如乙二胺四乙酸（EDTA））；複合劑（如咖啡因、聚乙烯吡咯啶酮、β-環糊精或羥丙基-β-環糊精）；填充劑；單糖；二糖；和其他碳水化合物（諸如葡萄糖、甘露糖或糊精）；蛋白質（諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白）；著色劑、調味劑和稀釋劑；乳化劑；親水聚合物（如聚乙烯吡咯啶酮）；低分子量多肽；成鹽抗衡離子（如鈉）；防腐劑（諸如殺藻胺、苯甲酸、水楊酸、硫柳汞、苯乙醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、氯己定（chlorhexidine）、山梨酸或過氧化氫）；溶劑（如甘油、丙二醇或聚乙二醇）；糖醇（如甘露糖醇或山梨糖醇）；懸浮劑；界面活性劑或潤濕劑（例如pluronics、PEG、脫水山梨醇酯、聚山梨醇酯例如聚山梨醇酯20、triton、胺丁三醇、卵磷脂、膽固醇、泰洛沙泊）；穩定性增強劑；張力增強劑（如鹼金屬鹵化物、較佳的是氯化鈉或氯化鉀，甘露糖醇，山梨糖醇）；遞送媒介物；稀釋劑；賦形劑和/或藥用輔助劑。參見REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES [雷明頓藥物科學], 第18版,（A. R. Genrmo編）, 1990, Mack Publishing Company [麥克出版公司]。
藥物組成物可經配製以實現生理學上相容的pH值。在一些實施方式中，藥物組成物的pH值可例如在約4或約5與約8.0之間或約4.5與約7.5之間或約5.0至約7.5。 治療方法
本揭露之另一方面涉及治療有需要的受試者之方法，其中該方法包括向有需要的受試者投與有效量的如本文所描述的促效劑LTβR結合蛋白，例如促效劑LTβR抗體或雙特異性促效劑LTβR結合蛋白或包含其的藥物組成物。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白係與人LTβR的CRD4結合的蛋白，並且 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合，以及 (b) 不抑制LT1α2β與LTβR結合。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白係促效劑LTβR抗體。在一個實施方式中，該促效劑LTβR結合蛋白係雙特異性LTβR結合蛋白，其包含 (i) LTβR結合結構域，其中該LTβR結合結構域結合包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基169-211的人LTβR CRD4的一或多個胺基酸殘基；和 (ii) 腫瘤相關抗原結合結構域。該雙特異性LTβR結合蛋白激動LTβR活性，並且 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合和 (b) 不抑制LT1α2β與LTβR結合。在一個實施方式中，這種雙特異性促效劑LTβR結合蛋白對於LTβR結合係單價的。
在一個實施方式中，有需要的受試者係患有癌症的受試者。在一個實施方式中，該受試者患有實性瘤。不受限於特定理論，在腫瘤微環境中激動LTβR活性增強了T細胞對腫瘤微環境的浸潤並誘導三級淋巴結構（TLS）的形成。LTβR的這種活性增強和/或提供了腫瘤微環境中的抗腫瘤T細胞活性。因此，在一個實施方式中，投與促效劑LTβR結合蛋白或包含其的藥物組成物適合於在患有腫瘤的受試者中誘導和/或增強抗腫瘤免疫反應。如本文所用，術語「受試者」係指包括人的哺乳動物，並且可與術語「患者」互換使用。
因此，本文提供了增強受試者腫瘤微環境中T細胞數量和活性、增強受試者腫瘤微環境中T細胞存活和效應物功能、以及增強受試者腫瘤微環境中對靶細胞（例如，癌細胞）的細胞毒性之方法。在示例性實施方式中，該等方法包括向受試者投與有效量的本揭露之藥物組成物。在示例性方面中，T細胞活性或免疫反應係針對癌細胞或癌症組織或腫瘤細胞或腫瘤。在示例性方面中，免疫反應為體液免疫反應。在示例性方面中，免疫反應為先天性免疫反應。在示例性方面中，增強的免疫反應為T細胞介導的免疫反應。
如本文所用，術語「增強」及其衍生詞不需要或推斷出100%或完全增強或增加。更確切些，存在本領域中普通技術者認為具有潛在益處或治療作用的不同程度的增強。就此而言，本揭露之藥物組成物可以增強例如T細胞活性或免疫反應到任何量或水平，超過在沒有用如本文所描述的LTβR結合蛋白治療的情況下存在的T細胞活性或免疫反應的量或水平。在示例性實施方式中，藉由本揭露之方法提供的抗腫瘤免疫的增強係抗腫瘤免疫增強至少或約10%、增強至少或約20%、增強至少或約30%、增強至少或約40%、增強至少或約50%、增強至少或約60%、增強至少或約70%、增強至少或約80%、增強至少或約90%、增強至少或約95%、增強至少或約98%。
測量T細胞活性和免疫反應的方法為本領域中已知。T細胞活性可以藉由例如細胞毒性測定法來測量，例如Fu等人, PLoS ONE[公共科學圖書館綜合] 5(7): e11867 (2010)中描述的那些。適用於測量響應的其他T細胞活性測定在Bercovici等人, Clin Diagn Lab Immunol.[臨床診斷實驗室免疫學] 7(6): 859-864 (2000)中進行了描述。測量免疫反應的合適方法包括例如Macatangay等人, Clin Vaccine Immunol[臨床和疫苗免疫學] 17(9): 1452-1459 (2010)和Clay等人, Clin Cancer Res.[臨床癌症研究]7(5):1127-35 (2001)中描述的那些。
需要用如本文所描述的促效劑LTβR結合蛋白治療的受試者包括但不限於患有癌症的受試者，特別是患有實性瘤的受試者。在示例性實施方式中，該方法包括向受試者投與促效劑LTβR結合蛋白或包含促效劑LTβR結合蛋白的藥物組成物，其量可有效治療受試者中的癌症或實性瘤。藉由本文揭露的方法和促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或雙特異性促效劑LTβR結合蛋白）可治療的癌症可為任何癌症，例如由異常和不受控制的細胞分裂引起的任何惡性生長或腫瘤，其可以藉由淋巴系統或血流擴散到身體的其他部位。在一個實施方式中，該癌症或實性瘤係「冷」腫瘤，即被抑制抗腫瘤免疫反應的細胞包圍的腫瘤。
在一個實施方式中，要用如本文所描述的促效劑LTβR結合蛋白治療的受試者患有選自間皮瘤、胰臟腫瘤、卵巢腫瘤、肺腫瘤、食管腫瘤、胃腫瘤、肝腫瘤、結直腸腫瘤、宮頸腫瘤、子宮內膜腫瘤、乳房腫瘤、腎腫瘤、膀胱腫瘤、睪丸腫瘤、前列腺腫瘤、腦腫瘤、骨腫瘤和頭頸部腫瘤的腫瘤。在一個實施方式中，該癌症選自齒槽橫紋肌肉瘤、肛門癌、肛管癌或肛腸癌、眼癌、肝內膽管癌、關節癌、頸部癌、膽囊癌或胸膜癌、鼻癌、鼻腔癌或中耳癌、口腔癌、外陰癌、大腸癌、食道癌、子宮頸癌、胃腸道類癌、下嚥癌、腎癌、喉癌、肝癌、肺癌（例如，非小細胞肺癌（NSCLC））、惡性間皮瘤、黑色素瘤、鼻咽癌、卵巢癌、胰臟癌、腹膜癌、網膜癌和腸系膜癌、咽癌、前列腺癌、直腸癌、腎癌（例如，腎細胞癌（RCC））、小腸癌、軟組織癌、胃癌、睪丸癌、甲狀腺癌、輸尿管癌和膀胱癌。在示例性實施方式中，該受試者患有實性瘤，並且將促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或雙特異性促效劑LTβR結合蛋白）以有效治療受試者腫瘤的量投與至受試者。
術語「治療」涵蓋減輕病症的至少一種症狀或其他實施方式、或降低疾病嚴重程度等。根據本揭露之促效劑LTβR結合蛋白，特別是結合人LTβR的CRD4並且不阻斷內源性LTβR配體結合的促效劑LTβR抗體或雙特異性結合蛋白，不需要完全治癒，或根除疾病的每種症狀或表現，即可構成可行的治療劑。正如在相關領域中所認識到的，治療劑可以降低特定疾病狀態的嚴重程度，但不需要消除疾病的每種表現才能被視為有用的治療劑。僅僅降低疾病的影響（例如藉由減少其症狀的次數或降低其症狀的嚴重度，或藉由增加另一治療的有效性，或藉由產生另一有益作用）或降低疾病在受試者中發生或惡化的可能性即為足夠。本揭露之一個實施方式涉及一種方法，該方法包括向患者投與一定量的促效劑LTβR結合蛋白一段時間，該促效劑LTβR結合蛋白投與的量和時間足以誘導與反映特定病症嚴重程度的指標的基線相比的持續改善。在一個實施方式中，該方法包括向患者投與一定量的如本文揭露的促效劑LTβR結合蛋白一段時間，該促效劑LTβR結合蛋白投與的量和時間足以藉由增加腫瘤微環境中的免疫細胞浸潤和/或免疫細胞抗腫瘤活性將冷腫瘤轉化為熱腫瘤。在一個實施方式中，該方法進一步涉及將促效劑LTβR結合蛋白與一或多種免疫調節劑（例如PD(L)1-軸抑制劑）組合投與，以進一步刺激免疫細胞浸潤到腫瘤微環境中。
術語「預防」涵蓋預防病症的至少一種症狀或其他實施方式等。併入了如本文揭露的結合LTβR的CRD4並且不阻斷內源性LTβR配體結合活性的促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或雙特異性促效劑LTβR結合蛋白）的預防性投與的治療不需要完全有效地預防病況的發作以構成可行的預防劑。僅僅降低疾病在受試者中發生或惡化的可能性即為足夠。在一個實施方式中，如本文所描述的促效劑LTβR結合蛋白的預防性投與藉由增強免疫細胞浸潤到腫瘤微環境中有效地防止腫瘤轉變為冷腫瘤。在一個實施方式中，如本文所描述的促效劑LTβR結合蛋白的預防性投與藉由在腫瘤微環境中增強免疫細胞浸潤和增強抗腫瘤免疫反應來有效地預防腫瘤生長。
如在相關領域中所理解的，將包含如本文揭露的促效劑LTβR結合蛋白的藥物組成物以適合於適應症和組成物的方式投與給受試者。在一個實施方式中，包含結合LTβR的CRD4並且不抑制內源性LTβR配體結合的促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或雙特異性促效劑LTβR結合蛋白）的藥物組成物藉由任何合適的技術投與，包括但不限於胃腸外、靜脈內、肌內、病變內、腹膜內或皮下途徑、藉由推注或連續輸注。藉由吸入遞送包括，例如經鼻或經口吸入、使用霧化器、以氣溶膠形式吸入的促效劑LTβR結合蛋白等。其他替代品包括口服製劑，包括丸劑、糖漿或錠劑。
有利地，促效劑LTβR結合蛋白可以以組成物的形式投與，該組成物包含一或多種額外組分，例如生理上可接受的載劑、賦形劑或稀釋劑。視需要，該組成物另外包含一或多種生理活性劑。在各種特定實施方式中，除了一或多種促效劑LTβR結合蛋白外，該組成物還包含一種、兩種、三種、四種、五種或六種生理活性劑。
提供了用於由執業醫師使用的套組，該等套組包括一或多種促效劑LTβR結合蛋白和用於治療本文所討論的任何病況的標記或其他說明書。在一個實施方式中，該等套組包括一或多種促效劑LTβR結合蛋白的無菌製劑，其可為如本文揭露的組成物的形式，並且可以在一或多個小瓶中。
投與的劑量和頻率可根據諸如投與途徑、所採用的特定促效劑LTβR結合蛋白、待治療的疾病的性質和嚴重程度、病況是急性還是慢性、以及受試者的體型和一般狀況等因素而變化。適當的劑量可以藉由相關領域中（例如，在可能涉及劑量遞增研究的臨床試驗中）已知的程式來確定。
如本文揭露的結合LTβR的CRD4並且不抑制內源性LTβR配體結合活性的促效劑LTβR結合蛋白可以例如一次或多次投與，例如在一段時間內以規則的間隔投與。在特定實施方式中，LTβR結合蛋白在至少每月一次或更長時間內投與，例如，持續一個月、兩個月或三個月或甚至無限期。對於治療慢性病，長期治療通常是最有效的。然而，對於治療急性病，較短時間投與（例如，一到六週）可能就足夠了。一般來說，投與促效劑LTβR結合蛋白，直到患者對所選一或多種指標表現出醫學相關的改善程度（相對於基線）。
如本文揭露的結合LTβR的CRD4和/或不抑制內源性LTβR配體結合活性的促效劑LTβR結合蛋白可較佳的是與免疫調節治療劑的投與結合投與。在一個實施方式中，該免疫調節治療劑係檢查點抑制劑。合適的檢查點抑制劑係本領域已知的，包括例如且不限於PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑、CTLA-4抑制劑、TIM-3抑制劑、LAG-3抑制劑、NKG2A抑制劑、CD73抑制劑和TIGIT抑制劑以及其任何組合。下文更詳細地描述了合適的組合療法。 組合療法
本揭露之方法和組成物的特定實施方式涉及使用至少一種促效劑LTβR結合蛋白和一或多種可用於治療或預防癌症的其他治療劑。在一個實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白單獨投與或與可用於治療患有實性瘤的受試者的其他藥劑組合投與。這樣的藥劑之實例包括蛋白質和非蛋白質藥物。當共投與多種治療劑時，如相關技術中所認識到的，可以相應地調整劑量。「共投與」和組合療法不限於同時投與，還包括在涉及向患者投與至少一種其他治療劑的治療過程中至少投與一次促效劑LTβR結合蛋白的治療方案。在某些實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白在投與至少一種其他治療劑之前投與。在某些實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白與投與至少一種其他治療劑同時投與。在某些實施方式中，促效劑LTβR結合蛋白在投與至少一種其他治療劑之後投與。
在一個實施方式中，該至少一種其他治療劑係免疫調節治療劑，特別是檢查點抑制劑或T細胞接合治療劑。合適的檢查點抑制劑係本領域已知的，包括例如且不限於PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑、CTLA-4抑制劑、TIM-3抑制劑、LAG-3抑制劑、NKG2A抑制劑、CD73抑制劑和TIGIT抑制劑以及其任何組合。
在一個實施方式中，如本文揭露的結合LTβR的CRD4且不抑制內源性LTβR配體結合活性的促效劑LTβR結合蛋白（例如，促效劑LTβR抗體或雙特異性促效劑LTβR結合蛋白）與PD-1抑制劑（例如抗PD-1抗體）組合投與。合適的抗PD-1抗體之實例包括但不限於納武單抗（Opdivo ®/KEGG D10316）、派姆單抗（Keytruda ®/KEGG D10574）、西米普利單抗（Libtayo ®/KEGG D11108）、多塔利單抗（TSR-042/KEGG D11366）、斯巴達珠單抗（KEGG D11605）和匹地利珠單抗（CT-011；KEGG D10390）。
在一個實施方式中，如本文揭露的結合LTβR的CRD4且不抑制內源性LTβR配體結合活性的促效劑LTβR結合蛋白與PD-L1抑制劑（例如抗PD-L1抗體）組合投與。合適的抗PD-L1抗體之實例包括但不限於阿替利珠單抗（Tecentriq ®；KEGG D10773）、阿維魯單抗（Bavencio ®；KEGG D10817）和德瓦魯單抗（Imfinzi ®；KEGG D10808）。
在一個實施方式中，如本文揭露的結合LTβR的CRD4且不抑制內源性LTβR配體結合活性的促效劑LTβR結合蛋白與CTLA-4抑制劑組合投與。合適的CTLA-4抑制劑係單株抗體伊匹單抗（Yervoy；KEGG D04603）。
在一個實施方式中，如本文揭露的結合LTβR的CRD4且不抑制內源性LTβR配體結合活性的促效劑LTβR結合蛋白與TIM-3抑制劑（例如抗TIM-3抗體）組合投與。合適的抗TIM-3抗體之實例包括但不限於沙巴托利單抗（MBG453；諾華公司（Novartis））；LY3321367（禮來公司（Eli Lilly））和TSR-022（Tesaro）。
在一個實施方式中，如本文揭露的結合LTβR的CRD4和/或不抑制內源性LTβR配體結合活性的促效劑LTβR結合蛋白與LAG-3抑制劑（例如抗LAG-3抗體）組合投與。適用於與本文所描述的LTβR結合蛋白組合使用的示例性抗LAG-3抗體包括但不限於瑞拉利單抗（KEGG D11350）。
在一個實施方式中，如本文揭露的結合LTβR的CRD4且不抑制內源性LTβR配體結合活性的促效劑LTβR結合蛋白與NKG2-A/NKG2-B II型整合膜蛋白（NKG2A）抑制劑（例如抗NKG2A抗體）組合投與。適用於與本文所描述的LTβR結合蛋白組合使用的示例性抗NKG2A抗體包括但不限於BMS-986315（Bristol Myers Squibb ®）。
在一個實施方式中，如本文揭露的結合LTβR的CRD4且不抑制內源性LTβR配體結合活性的促效劑LTβR結合蛋白與CD73抑制劑組合投與。與本文所描述的LTβR結合蛋白組合使用的合適的CD73抑制劑包括但不限於小分子CD73抑制劑OP-5244（Du等人, J. Med. Chem.[藥物化學雜誌] 63:10433-10459 (2020)，特此藉由引用將其全部併入）和LY-3475070（禮來公司（Eli Lilly））。
在一個實施方式中，如本文揭露的結合LTβR的CRD4且不抑制內源性LTβR配體結合活性的促效劑LTβR結合蛋白與TIGIT抑制劑（例如抗TIGIT抗體）組合投與。合適的抗TIGIT抗體之實例包括但不限於BMS-986207（百時美施貴寶公司（Bristol-Myers Squibb））；Tiragolumab（羅氏公司（Roche））、MK-7684（默克公司（Merck））和COM902（Compugen公司）。
在已經描述了本揭露以後，藉由說明而非限制的方式提供以下實施方式和實例。 實施方式
本揭露提供了以下非限制性實施方式。
本揭露之實施方式1涉及一種促效劑淋巴毒素β受體（LTβR）結合蛋白，其中所述結合蛋白結合包含人LTβR富含半胱胺酸結構域4（CRD4）的一或多個殘基的表位，其中人LTβR CRD4包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基169-211，並且其中所述結合蛋白 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合或 (b) 不抑制LTα1β2與LTβR結合。
實施方式2係如實施方式1所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中所述結合蛋白 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合且 (b) 不抑制LTα1β2與LTβR結合。
實施方式3係如實施方式1或2所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中所述結合蛋白結合包含SEQ ID NO: 1的殘基197-209的LTβR CRD4的一或多個殘基。
實施方式4係如實施方式1-3所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中在該促效劑LTβR結合蛋白存在下對LIGHT和/或LTα1β2與LTβR結合的抑制在基於細胞的受體-配體結合測定中測量，所述測定包括以下步驟：將表現LTβR的細胞與含有該促效劑LTβR結合蛋白的培養基孵育1小時；在所述孵育後，使該等表現LTβR的細胞與可檢測的LIGHT配體、可檢測的LTα1β2配體或其組合接觸，以允許該等可檢測的配體與LTβR結合；在所述接觸後，在該LTβR結合蛋白存在下，檢測與表現LTβR的細胞結合的可檢測的LIGHT和/或LTα1β2配體；以及        基於所述檢測將該促效劑LTβR結合蛋白鑒定為不抑制LIGHT或LTα1β2與LTβR結合。
實施方式5係如實施方式1-4中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中所述結合蛋白包含：與SEQ ID NO: 121或SEQ ID NO: 123具有至少90%序列同一性的重鏈可變結構域（VH）胺基酸序列和與SEQ ID NO: 122或SEQ ID NO: 124具有至少90%序列同一性的輕鏈可變結構域（VL）胺基酸序列。
實施方式6係如實施方式1-4中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中所述結合蛋白包含：與SEQ ID NO: 121和SEQ ID NO: 123具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 122和SEQ ID NO: 124具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列。
實施方式7係如實施方式1-4中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中所述結合蛋白包含：與SEQ ID NO: 121和SEQ ID NO: 123具有至少95%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 122和SEQ ID NO: 124具有至少95%序列同一性的VL胺基酸序列。
實施方式8係如實施方式1-7中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中所述結合蛋白包含：VH，其包含HCDR1胺基酸序列X 1YX 3MX 5（SEQ ID NO: 5），其中X 1為S或N；X 3為G、D或A；並且X 5為H或Y；HCDR2胺基酸序列X 1IX 3YDX 6X 7X 8X 9Y X 11X 12DSVKG（SEQ ID NO: 6），其中X 1為A或V；X 3為W或R；X 6為E或G；X 7為S、R或T；X 8為N或K；X 9為K、R或Q；X 11為H或Y；並且X 12為A或E；以及HCDR3胺基酸序列X 1RX 3X 4X 5X 6X 7X 8X 9YYGX 13X 14V（SEQ ID NO: 7），其中X 1為D或E；X 3為V、G或I；X 4為V、P或A；X 5為A、Y或G；X 6為R、A、G或H；X 7為P或G；X 8為G、N、D、Y、A或H；X 9為Y、T或F；X 13為L或M；並且X 14為D或A；VL，其包含LCDR1胺基酸序列SGDX 4LPX 7X 8YX 10Y（SEQ ID NO: 62），其中X 4為A或T；X 7為E、K、Q、D或N；X 8為Q或H；並且X 10為A或T；LCDR2胺基酸序列KDNERPS（SEQ ID NO: 63）；以及LCDR3胺基酸序列QSX 3DX 5SX 7X 8YX 10X 11（SEQ ID NO: 64），其中X 3為A或T；X 5為S、G或N；X 7為G或A；X 8為T、S或A；X 10為V或M；並且X 11為I或V。
實施方式9係如實施方式1-8中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中所述結合蛋白包含：與SEQ ID NO: 121具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列、以及SEQ ID NO: 5的HCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 6的HCDR2胺基酸序列和SEQ ID NO: 7的HCDR3胺基酸序列；以及與SEQ ID NO: 122具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列、以及SEQ ID NO: 62的LCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 63的LCDR2胺基酸序列和SEQ ID NO: 64的LCDR3胺基酸序列。
實施方式10係如實施方式1-9中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中所述結合蛋白包含：VH，其包含分別為SEQ ID NO: 11-13的HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列，以及VL，其包含分別為SEQ ID NO: 68-70的LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列；或VH，其包含分別為SEQ ID NO: 8-10的HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列，以及VL，其包含分別為SEQ ID NO: 65-67的LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列。
實施方式11係如實施方式1-10中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中該結合蛋白係抗體。
實施方式12係如實施方式1-10中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中該結合蛋白係雙特異性結合蛋白。
實施方式13涉及雙特異性淋巴毒素β受體（LTβR）結合蛋白，所述結合蛋白包含：LTβR結合結構域，其中該LTβR結合結構域結合包含人LTβR富含半胱胺酸結構域4（CRD4）的一或多個殘基的表位，其中所述LTβR CRD4包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基169-211；和腫瘤相關抗原結合結構域，其中該雙特異性結合蛋白激動LTβR活性，並且 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合或 (b) 不抑制LT1α2β與LTβR結合。
實施方式14係如實施方式13所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中所述結合蛋白 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合且 (b) 不抑制LTα1β2與LTβR結合。
實施方式15係如實施方式13所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該表位包含SEQ ID NO: 1之位置197-209處的LTβR CRD4的一或多個殘基。
實施方式16係如實施方式13-15中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中在該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白存在下對LIGHT和/或LTα1β2與LTβR結合的抑制在基於細胞的受體-配體結合測定中測量，所述測定包括以下步驟：將表現LTβR的細胞與含有該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的培養基孵育1小時；在所述孵育後，使該等表現LTβR的細胞與可檢測的LIGHT配體、可檢測的LTα1β2配體或其組合接觸，以允許該等可檢測的配體與LTβR結合；在所述接觸後，在該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白存在下，檢測與表現LTβR的細胞結合的可檢測的LIGHT和/或LTα1β2配體；以及基於所述檢測將該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白鑒定為不抑制LIGHT或LTα1β2與LTβR結合。
實施方式17係如實施方式13-15中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該LTβR結合結構域包含：與SEQ ID NO: 121或SEQ ID NO: 123具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列，和與SEQ ID NO: 122或SEQ ID NO: 124具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列。
實施方式18係如實施方式13所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該LTβR結合結構域包含：與SEQ ID NO: 121和SEQ ID NO: 123具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 122和SEQ ID NO: 124具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列。
實施方式19係如實施方式13所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該LTβR結合結構域包含：與SEQ ID NO: 121和SEQ ID NO: 123具有至少95%序列同一性的VH胺基酸序列和與SEQ ID NO: 122和SEQ ID NO: 124具有至少95%序列同一性的VL胺基酸序列。
實施方式20係如實施方式13-19中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該LTβR結合結構域包含：VH，其包含HCDR1胺基酸序列X 1YX 3MX 5（SEQ ID NO: 5），其中X 1為S或N；X 3為G、D或A；並且X 5為H或Y；HCDR2胺基酸序列X 1IX 3YDX 6X 7X 8X 9Y X 11X 12DSVKG（SEQ ID NO: 6），其中X 1為A或V；X 3為W或R；X 6為E或G；X 7為S、R或T；X 8為N或K；X 9為K、R或Q；X 11為H或Y；並且X 12為A或E；以及HCDR3胺基酸序列X 1RX 3X 4X 5X 6X 7X 8X 9YYGX 13X 14V（SEQ ID NO: 7），其中X 1為D或E；X 3為V、G或I；X 4為V、P或A；X 5為A、Y或G；X 6為R、A、G或H；X 7為P或G；X 8為G、N、D、Y、A或H；X 9為Y、T或F；X 13為L或M；並且X 14為D或A；VL，其包含LCDR1胺基酸序列SGDX 4LPX 7X 8YX 10Y（SEQ ID NO: 62），其中X 4為A或T；X 7為E、K、Q、D或N；X 8為Q或H；並且X 10為A或T；LCDR2胺基酸序列KDNERPS（SEQ ID NO: 63）；以及LCDR3胺基酸序列QSX 3DX 5SX 7X 8YX 10X 11（SEQ ID NO: 64），其中X 3為A或T；X 5為S、G或N；X 7為G或A；X 8為T、S或A；X 10為V或M；並且X 11為I或V。
實施方式21係如實施方式13-20中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中所述結合蛋白包含：與SEQ ID NO: 121具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列、以及SEQ ID NO: 5的HCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 6的HCDR2胺基酸序列和SEQ ID NO: 7的HCDR3胺基酸序列；以及與SEQ ID NO: 122具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列、以及SEQ ID NO: 62的LCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 63的LCDR2胺基酸序列和SEQ ID NO: 64的LCDR3胺基酸序列。
實施方式22係如實施方式13所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該VH包含分別為SEQ ID NO: 11-13的HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列，以及該VL包含分別為SEQ ID NO: 68-70的LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列；或該VH包含分別為SEQ ID NO: 8-10的HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列，以及該VL包含分別為SEQ ID NO: 65-67的LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列。
實施方式23係如實施方式13-22中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該雙特異性結合蛋白僅包含一個LTβR結合結構域。
實施方式24係如實施方式13-22中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該LTβR結合結構域係Fab。
實施方式25係如實施方式13-24中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中結合蛋白包含一個腫瘤相關抗原結合結構域。
實施方式26係如實施方式25所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該腫瘤相關抗原結合結構域係Fab。
實施方式27係如實施方式13-24中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中結合蛋白包含兩個腫瘤相關抗原結合結構域。
實施方式28係如實施方式13-22中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該LTβR結合結構域係Fab，並且該腫瘤相關抗原結合結構域係Fab。
實施方式29係如實施方式13-28中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該LTβR結合結構域和該腫瘤相關抗原結合結構域各自偶合到Fc部分。
實施方式30係如實施方式29所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該Fc部分不與Fcγ受體結合。
實施方式31涉及編碼如實施方式1-12中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白的多核苷酸。
實施方式32係包含如實施方式31所述之多核苷酸的載體。
實施方式33係包含如實施方式31所述之多核苷酸或如實施方式32所述之載體的宿主細胞。
實施方式34係編碼如實施方式13-30中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的一或多種多核苷酸。
實施方式35係包含如實施方式34所述之一或多種多核苷酸的載體。
實施方式36係包含如實施方式34所述之一或多種多核苷酸或如實施方式35所述之載體的宿主細胞。
實施方式37係一種藥物組成物，其包含：如實施方式1-12中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，如實施方式13-30中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，如實施方式31或34所述之一或多種多核苷酸，或如實施方式32或35所述之載體，以及藥學上可接受的載劑。
實施方式38係如實施方式1-12中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，用作藥物。
實施方式39係如實施方式1-12中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，用於治療癌症。
實施方式40係如實施方式1-12中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，用於製備用於治療癌症的藥物。
實施方式41係如實施方式13-30中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，用作藥物。
實施方式42係如實施方式13-30中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，用於治療癌症。
實施方式43係如實施方式13-30中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，用於製備用於治療癌症的藥物。
實施方式44涉及一種治療受試者癌症之方法，所述方法包括：向患有癌症的受試者投與促效劑淋巴毒素β受體（LTβR）結合蛋白，其中所述結合蛋白結合包含人LTβR富含半胱胺酸結構域4（CRD4）的一或多個殘基的表位，其中人LTβR CRD4包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基169-211，並且其中所述結合蛋白 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合或 (b) 不抑制LTα1β2與LTβR結合。
實施方式45係一種治療受試者癌症之方法，所述方法包括：向患有癌症的受試者投與雙特異性淋巴毒素β受體（LTβR）結合蛋白，其中所述結合蛋白包含：LTβR結合結構域，其中該LTβR結合結構域結合包含人LTβR富含半胱胺酸結構域4（CRD4）的一或多個胺基酸殘基的表位，其中人LTβR CRD4包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基169-211；和腫瘤相關抗原結合結構域，其中該雙特異性結合蛋白激動LTβR活性，並且 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合或 (b) 不抑制LT1α2β與LTβR結合。
實施方式46係如實施方式44或實施方式45所述之方法，進一步包括：與所述促效劑LTβR結合蛋白或雙特異性LTβR結合蛋白結合投與免疫調節治療劑。
實施方式47係如實施方式41或42所述之方法，其中該受試者患有選自由以下組成之群組的實性瘤：間皮瘤、胰臟腫瘤、卵巢腫瘤、肺腫瘤、食管腫瘤、胃腫瘤、肝腫瘤、結直腸腫瘤、宮頸腫瘤、子宮內膜腫瘤、乳房腫瘤、腎腫瘤、膀胱腫瘤、睪丸腫瘤、前列腺腫瘤、腦腫瘤、骨腫瘤和頭頸部腫瘤。 實例
給出以下實例僅用於說明本發明，而不以任何方式限制其範圍。 實例 1 ：靶向腫瘤相關抗原（ TAA ）的 LT β R 激動作用在體內腫瘤模型中表現出治療功效
1.1 靶向 EpCAM 的 LT β R 激動作用在鼠 B16F10 黑色素瘤模型中誘導 HEV 形成並增加淋巴細胞浸潤。在研究第0天，將huEpCAM-B16F10腫瘤細胞皮下植入雌性野生型C57BL/6動物的右側腹部。在第10天將腫瘤分為不同的治療組（n=10/組），平均腫瘤體積為約100 mm 3。每三天一次給動物靜脈給藥30 mg/kg的對照同種型mIgG1（美商安進公司（Amgen），PL-11445-3）或增加劑量（0.3、3和30 mg/kg）的huEpCAM-muLTβR（5G11）雙特異性促效劑LTβR工具抗體（美商安進公司，7622-1）。在第20天收穫腫瘤。將一半的腫瘤解離進行流動式細胞分析術分析，並且另一半用福馬林固定進行組織學分析。如圖1所示，浸潤到腫瘤環境中的CD3 +T細胞的總數（圖1A）在3 mg/kg劑量下增加，並且浸潤到腫瘤環境中的CD19 +B細胞的總數（圖1B）以劑量依賴性方式增加。使用流動式細胞分析術評估T和B細胞浸潤。如圖2所示，huEpCAM-LTβR治療誘導了腫瘤環境中高內皮小靜脈（HEV）的形成（下圖）。在同種型對照治療的腫瘤組織中未觀察到HEV的存在（圖2，上圖）。使用抗PNAd（Meca79）mAb藉由免疫組織化學染色來評估HEV的存在。
1.2 靶向 LRRC15 的 LT β R 激動作用在 KPC M5 腫瘤模型中誘導淋巴細胞浸潤並抑制腫瘤生長。在研究的第0天，將KPC M5胰臟腫瘤細胞皮下植入雌性野生型C57BL/6小鼠的右側腹部。使腫瘤生長10天，達到大約100 mm 3，然後隨機分為相應組（n = 5/組）。每週兩次向動物以3 mpk給藥三劑小鼠工具LRRC15 x LTβR雙特異性抗體（BsAb）（36017-1和28786-1/64506-1）或同種型對照mIgG1 N297G（PL-57469）。在最後一劑LRRC15 x LTβR BsAb（第20天）後三天收穫腫瘤和血清。收集皮膚附著在外周的腫瘤。去除附著的皮膚，並且解離腫瘤以進行流動式細胞分析術分析。如圖3所示，與同種型對照相比，觀察到LRRC15 x LTβR雙特異性抗體治療後，T細胞浸潤（CD3 +細胞）到腫瘤中的增加。
在另一項研究中，在第0天將KPC M5胰臟腫瘤細胞（100k/小鼠）皮下植入雌性野生型C57BL/6小鼠的右側腹部。使腫瘤生長10天，直到平均腫瘤體積達到100 mm 3。將動物隨機分組以接受LRRC15 x LTβR BsAb（36017-1）或同種型對照治療（n = 10/組）。對動物進行腹膜內給藥，每週兩次，共9劑（或直到該等動物退出），使用3 mg/kg的對照同種型mIgG1（11445-3），每週兩次，共9劑，使用3 mg/kg的LRRC15 x LTβR BsAb，或每三天一次，共3劑，使用100 μg/小鼠的抗PD1抗體（7358-1）。每週兩次測量腫瘤並稱量體重，直到腫瘤達到大於或等於2000 mm 3或動物達到中位存活極限的兩倍。如圖4所示，與同種型（●）相比，PD-1抗體治療（■）沒有顯著抑制腫瘤生長，僅產生4.64%的腫瘤生長抑制（TGI）。與同種型相比，用LRRC15 x LTβR BsAb單一療法（▼）治療的腫瘤確實產生了20.76%的統計學顯著TGI。LRRC15 x LTβR BsAb和PD-1抗體組合確實導致了32.37%的更大TGI，但兩個治療組之間沒有統計學顯著性。 實例 2 ：人 LT β R 結合蛋白的產生
藉由免疫XenoMouse®轉基因小鼠產生針對人LTβR的完全人抗體。XenoMouse®及其用於產生人抗體的效用在以下中公開：美國專利案號6,114,598；6,162,963；6,833,268；7,049,426；7,064,244和Green等人, Nature Genetics[自然遺傳學] 7:13-21 (1994)；Mendez等人, Nature Genetics[自然遺傳學] 15:146-156 (1997)；Green和Jakobovitis, J. Ex. Med[實驗醫學雜誌], 188:483-495 (1998)；Kellerman和Green, Current Opinion in Biotechnology[生物技術的當前觀點] 13, 593-597 (2002)，特此藉由引用將其全部併入。多種免疫原和免疫途徑用於產生抗人LTβR免疫反應。使用GeneGun（BioRad）方案在6-8週內對產生人免疫球蛋白G（IgG）2或IgG 4抗體的轉基因XenoMouse ®進行12-16次皮內免疫，該方案遞送包有編碼人LTβR的質體DNA和分子佐劑的金微粒。可替代地，用暫態轉染人或cyno LTβR表現載體的CHO-S細胞對動物進行皮下免疫。對於可溶性蛋白免疫，對小鼠皮下注射人LTβR重組蛋白，每次增強5 μg蛋白質，每週兩次，持續6-8週。在第4週將Cyno LTβR抗原引入小鼠，並與人LTβR抗原以交替的時間表進行注射。為了選擇產生對LTβR特異的抗體的動物，測試了來自免疫小鼠的血清與暫態轉染的HEK 293細胞上表現的人和cyno LTβR的結合，並藉由螢光激活細胞分選（FACS）進行分析。應用相對於背景的倍數GeoMean變化來選擇對人和cyno LTβR具有最高天然效價的響應小鼠。所選的小鼠在組織收穫前4天接受最後的增強，隨後進行B細胞富集。收穫和免疫原的詳細資訊列於表15中。 [ 表 15] . XenoMouse® 免疫和抗體收穫總結
收穫組 免疫原 佐劑 菌株 收穫
收穫2.3 編碼hu LTβR的質體DNA + 編碼cyno LTβR的質體DNA CpG + mGM-CSF G4K 10隻小鼠
G4KL 5隻小鼠
收穫3.4 暫態表現hu LTβR的CHO-S + 暫態表現cyno LTβR的CHO-S Alum + CpG G2K 2隻小鼠
G2KL 8隻小鼠
收穫4.4 暫態表現hu LTβR的CHO-S + 暫態表現cyno LTβR的CHO-S Alum + CpG G4K 4隻小鼠
G4KL 6隻小鼠
收穫5.2 重組人LTβR Fc嵌合體 + 重組Cyno LTβR Fc嵌合體 Alum + CpG G2K 4隻小鼠
G2KL 4隻小鼠
實例 3 ：單株抗體融合瘤產生的製備。
鑒別展現合適血清效價的動物且自脾和/或引流淋巴結獲得淋巴細胞。藉由在合適的培養基（例如，RPMI 1640培養基；加利福尼亞州卡爾斯巴德的英傑公司（Invitrogen, Carlsbad, CA））中研磨，將彙集的淋巴細胞（來自每次收穫）從淋巴組織中解離。使用標準方法選擇和/或擴增B細胞，並使用本領域已知的技術與合適的融合配偶體融合。 實例 4 ：用於 LT β R 結合物鑒定的融合瘤池的第一輪篩選
4.1 從融合瘤池中產生選殖抗 LT β R 融合瘤。將來自收穫1至6的XenoMouse ®融合瘤培養物解凍，並在DMEM選擇培養基中生長3-4天。在FACS富集分選前一天將培養基改為BDQY融合瘤培養基。將細胞在10 mL無菌FACS緩衝液中洗滌，然後與生物素標記的重組人LTβR（R&D系統公司（R&D Systems），目錄號：7538LR）以2-5 µg/mL濃度在1 mL反應體積中在4°C下孵育30分鐘。對於收穫5和6融合瘤培養物，在該步驟中還添加100 µg/mL多選殖人IgG（傑克遜免疫研究公司（Jackson ImmunoResearch），目錄號：009-000-003）以阻斷抗Fc結合物。在10 mL FACS緩衝液中洗滌一次後，將1 mL抗體混合物添加到細胞中，該抗體混合物含有各5 µg/mL的Alexa Fluor 488軛合的山羊抗人IgG Fc Fab（傑克遜免疫研究公司，目錄號：109-547-008）和Alexa Fluor 647軛合的鏈黴親和素（傑克遜免疫研究公司，目錄號：016-600-084）。然後將細胞在4°C下孵育30分鐘。孵育後，將細胞在10 mL FACS緩衝液中洗滌，重懸於2 mL含有5 µL 7-AAD（BD Pharmingen公司，目錄號：559925）的BDQY融合瘤培養基中，然後通過40微米細胞過濾器以去除任何團塊。藉由對Alexa Fluor 488和Alexa Fluor 647螢光訊號雙陽性的活細胞群體進行門控，在BD FACSAria®上對細胞進行批量分選。在第一輪富集分選以使目標群體從＜ 1%到＞ 20%之後，將靶細胞單細胞分選到含有BDQY融合瘤培養基的384孔微量滴定板上，並培養長達2週，然後收集上清液進行篩選。
4.2 LT β R 特異性結合抗體的初始選擇。藉由按照製造商制定的方案使用表現載體、Opti-MEM®培養基（Gibco™，目錄號31985088）和293Fectin™試劑（英傑公司，目錄號12347019）轉染，在宿主人胚胎腎293細胞上表現人LTβR（pTT5.2:VK1O2O12::huLTβR(31-435) C-173003（DNA-38098））。轉染後二十四小時，每15 µL體積FACS緩衝液（磷酸鹽緩衝鹽水（1X）0.0067M（PO4）（賽提瓦公司（Cytiva）目錄號：SH30256.02）、2%胎牛血清（海選殖公司（Hyclone）目錄號：SH30396.03）和30 µg/mL的Hoechst核染劑（Hoechst 33342溶液（20 mM），賽默飛世爾公司（ThermoFisher）目錄號：62249））重懸13000個轉染細胞。將細胞與15 µL融合瘤上清液在室溫下在Corning® 384孔平底透明黑聚苯乙烯TC處理的微孔板中孵育1小時。使用AquaMax 4000平板洗滌機（分子儀器公司（Molecular Devices））用50 µL PBS洗滌細胞兩次。在室溫下以5 µg/mL最終濃度添加到Alexa Fluor 488軛合的AffiniPure山羊抗人IgG（Jackson 109-545-098），持續20分鐘。用50 µL PBS洗滌細胞兩次以去除未結合的檢測試劑，並添加額外的30 µL FACS緩衝液以用微孔板軌道板振盪器（Big Bear Automation Model HT-91000）重懸細胞。在CellInsight CX7高含量篩選（HCS）平臺上使用Acquire only and Cell Health Profiling Bio-Apps HCS Studio 2.0軟體讀取平板。表16列出了每次收穫的結合物數量。 [ 表 16] . 每次收穫的 LT β R 結合物
收穫編號 總共陽性 #
2.3 364個天然結合物
3.4 679個天然結合物
4.4 651個天然結合物
5.2 350個天然結合物
4.3 LT β R 單點和效力功能測定在測定第1天，將人黑色素瘤A375細胞（ATCC，CRL-1619）以10,000個細胞/孔（50 µL）接種在384孔測定板中生長培養基（DMEM，10% FBS，4 mM L-麩醯胺酸，1.5 g/L碳酸氫鈉，4.5 g/L葡萄糖）中。將板在37°C/5% CO2下孵育過夜。在測定第2天，從384孔測定板中取出40 µL/孔的培養上清液。在測定培養基（含有2% FBS的生長培養基）中以最終濃度0.5 µg/mL製備蛋白G（西格瑪公司（Sigma），目錄號P4689）。抗LTβR mAb（R&D系統公司，選殖71315和選殖31G4D8）分別以最終濃度為1 µg/mL和5 µg/mL製備，以1 : 3向下滴定共8個點。對於單點篩選，添加最終濃度為1 µg/mL的含有抗huLTβR抗體的耗盡上清液（ESN）。在添加或不添加蛋白G作為交聯劑的情況下，將測試樣本轉移到384孔測定板中的所期望的孔中。384孔測定板中的最終總體積為50 µL/孔。將測定板在37°C/5% CO2下孵育過夜。在測定第3天，藉由機器人將16 µL上清液從384孔測定板轉移到384孔低體積板。根據製造商之說明，藉由檢測套組（浠思公司（Cisbio），目錄號62IL8PEC）測量趨化因子IL-8釋放，並藉由微孔板讀取器在665 nm和615 nm處讀取。相對IL-8釋放表示為在665 nm/615 nm處獲得的訊號的比率。在沒有蛋白G交聯的情況下表現出低活性，但在蛋白G交聯的情況下表現出高活性的抗體被用於效力測試。
對於功能效力篩選，先將ESN歸一化至10 μg/mL，然後在測定培養基中進一步稀釋至最終濃度1 μg/mL，以1 : 3向下滴定共8個點。抗LTβR抗體的插值EC50、轉運EC50（當訊號=4時）和最大活性（當ENS以1 µg/mL使用時）藉由Genedata Screener（Smart fit公司）的四參數邏輯擬合模型確定。LTβR抗體的功能效力分析、Transit EC 50和最大活性（在665 nm/615 nm獲得的訊號比率）的結果提供於圖5的表A中。
4.4 LTβR 特異性結合抗體的選擇性和交叉反應性食蟹猴主要LTβR（pTT5.2:VK1O2O12::cyLTβR (31-253) C173083（DNA-38100））、食蟹猴次要LTβR（pTT5.2:VK1O2O12::cyLTβR_minor (31-434) C173082（DNA-38099））、鼠LTβR（pTT5.2:VK1O2O12::muLTβR_native(31-415) - DNA-37605）、腫瘤壞死受體超家族1（pTT5:huTNFRp55  (huTNFRSF1) C-159747 - DNA-22292）和腫瘤壞死受體超家族2（pTT5:huTNFRp75-FL (TNFRSF2)  C-159746 - DNA-22291）分別藉由按照製造商制定的方案使用表現載體、Opti-MEM®培養基（Gibco™，目錄號31985088）和293Fectin™試劑（英傑公司，目錄號12347019）轉染在宿主HEK 293細胞上表現。藉由在每個轉染細胞上孵育抗體1小時，然後進行兩個洗滌步驟以去除一抗，來篩選融合瘤上清液中是否存在結合cyno主要LTβR、cyno次要LTβR，Mu LTβR、TNRFSF1和TNRFSF2的單株抗體。然後將細胞與軛合於Alexa647（傑克遜免疫化學（Jackson Immunochemical）109-605-098）的山羊抗人Fc抗體一起孵育15分鐘，並洗滌兩次以去除未結合的檢測試劑。使用Intellicyt公司Accuri iQue™平臺藉由FACS檢測結合。使用Intellicyt公司ForeCyt®企業客戶版軟體進行數據分析。包括使用空pTT5表現載體轉染的HEK 293細胞（模擬轉染），數據呈現為模擬轉染細胞的GeoMean倍數。如圖5的表A所示，LTβR抗體均未表現出與TNRFSF1或TNRFSF2的結合。
4.5 相對表位分組 / 分析。將生物素醯化的重組可溶性人LTβR蛋白Fc嵌合體（R&D系統公司7538-LR-100）以2 µg/mL濃度與鏈黴親和素包被的、經獨特條碼編碼的LumAvidin Beads®（LumAvidin Microspheres，路明克斯公司（Luminex Corp.），美國德克薩斯州奧斯丁）在室溫下在黑暗中偶合30分鐘，並洗滌兩次。將5 µg/mL濃度的參考抗體融合瘤上清液樣本與抗原包被的珠粒在室溫下在黑暗中孵育1小時，並洗滌三次。將珠粒重懸於含有免疫測定穩定劑溶液（Stabilguard™，舒爾默迪克斯公司（SurModics））的FACS緩衝液中。將抗原包被的參考抗體結合珠粒合併，然後將該等珠粒分到含有歸一化的（2 µg/ml）測試抗體（融合瘤上清液）樣本（或陰性對照）的單個樣本孔中，在室溫下在黑暗中孵育1小時，並洗滌兩次。然後將樣本與Mo抗HuG2、G3、G4（PL-46339，由已停產的卡爾生物化學公司（Calbiochem）HP6030抗體序列製成）在室溫下在黑暗中孵育1小時，並洗滌兩次。將樣本與軛合於Alexa488（傑克遜免疫化學115-545-071）的山羊抗小鼠Fc抗體在室溫下在黑暗中孵育15分鐘，並洗滌兩次以去除未結合的檢測試劑，並重懸於FACS緩衝液中。使用Intellicyt公司iQue™ Screener平臺對樣本進行分析。為了確定各個測試抗體的抗體競爭/結合譜，從每個競爭/結合反應（即整個參考抗體組）的參考抗體加測試抗體訊號中減去僅參考抗體結合訊號。單個抗體結合譜被定義為每個競爭/結合反應的淨結合值的集合。然後藉由計算每個測試抗體譜之間的決定係數來評估單個譜之間的相似程度。然後將顯示彼此高度相似（R 2＞ 0.8）的測試抗體分組到共同的分組譜中。使用這種方法，將LTβR結合抗體細分為6個獨特的分組譜（A、B、C、D、E和F）。表現出獨特的分組譜（如上文所描述的）但與另一個譜共用相對高度相似（R 2= 0.7-0.8）的抗體被歸類為該譜的子組（即A.1、A.2等）。LTβR抗體的相對表位分組結果如圖5的表A所示。
4.6 使用基於單點 FACS 珠粒的受體 - 配體測定鑒定 LT β R 受體 - 配體非阻斷抗體。藉由按照製造商制定的方案使用Alexa Fluor 647 Microscale蛋白質標記套組（賽默飛世爾科技公司（Thermo Fisher Scientific），目錄號A30009）軛合人LIGHT（R&D系統公司，目錄號664-LI/CF）和人LTα1β2（R&D系統公司，目錄號8884-LY/CF）來製備人LIGHT-Alexa 647和人LTα1β2-Alexa 647。經由基於FACS的受體-配體測定，測定含有人LTβR結合抗體的融合瘤上清液阻斷人LIGHT和人LTα1β2與人LTβR-His結合的能力。如果LTβR抗體阻止人LIGHT-Alexa 647或人LTα1β2-Alexa 647與人LTβR-His結合，則流動式細胞分析術幾何平均值（GeoMean）訊號相對於在不存在LTβR抗體的情況下獲得的GeoMean訊號降低，從而由於競爭而導致配體結合的高百分比抑制值。圖5的表A顯示了選定的融合瘤上清液樣本的受體-配體相互作用阻斷能力，並反映了在指示的融合瘤上清液存在下，人LIGHT或人LTα1β2與人LTβR-His結合的抑制百分比。
簡言之，在室溫下，將生物素醯化的人LTβR-His在FACS緩衝液[1 x 磷酸鹽緩衝鹽水（賽提瓦公司，目錄號SH30256.02）+ 2%胎牛血清（海選殖公司目錄號SH30396.03）]中的鏈黴親和素（SA）包被的珠粒（Spherotech公司，目錄號SVP-60-5）上捕獲30分鐘。然後將珠粒在FACS緩衝液中藉由在3500 RPM下離心2分鐘洗滌兩次。將包被的珠粒重懸於免疫測定穩定溶液（StabilGuard TM舒爾默迪克斯公司，目錄號SG01）中。將人LTβR特異性單株抗體（15 µL，10 µg/mL）與15 µL包被的珠粒混合，使LTβR抗體的最終濃度為5 µg/mL，並使用96孔V底聚苯乙烯FACS板（康寧公司，目錄號3897）在室溫下孵育1小時。然後將30 µL人LIGHT-Alexa 647或人LTα1β2-Alexa 647以9 µg/mL添加到FACS緩衝液中，並在室溫下在黑暗中孵育30分鐘。人LIGHT-Alexa 647或人LTα1β2-Alexa 647的最終濃度為4.5 µg/mL。將FACS板加入140 uL FACS緩衝液，然後在FACS緩衝液中藉由以3500 RPM離心2分鐘洗滌一次。根據製造商之建議，將樣本重懸在30 µL FACS緩衝液中，並在帶有Intellicyt公司自動進樣器的iQue流式細胞儀上讀取；在Intellicyt公司ForeCyt®企業客戶6.2版（R3）上進行數據分析。
將人LIGHT-Alexa 647或人LTα1β2-Alexa 647的量藉由流動式細胞分析術分析由GeoMean螢光訊號定量，並將該訊號轉換為受體-配體（R-L）相互作用的抑制百分比。在LTβR抗體存在下配體結合訊號的損失計算為R-L結合的抑制百分比。藉由對12個重複的配體-Alexa 647訊號的GeoMean訊號取平均值來確定人LIGHT-Alexa 647或人LTα1β2-Alexa 647的最大GeoMean訊號，該等重複與結合了生物素醯化的人LTβR-His的不相關耗盡上清液（ESN）一起孵育。人LIGHT-Alexa 647或人LTα1β2-Alexa 647的最小GeoMean訊號係從與結合了不相關的生物素醯化的人TREM1-His的不相關的人IgG2對照一起孵育的配體-Alexa 647訊號的GeoMean訊號確定的。使用以下等式計算人LTβR抗體或同種型對照抗體對生物素醯化的人LTβR-His：配體（人LIGHT或人LTα1β2）的抑制百分比： 抑制百分比（%）= 1-（實驗GeoMean-最小GeoMean）/（最大GeoMean-最小GeoMean） 對於一些LTβR抗體，當實驗GeoMean訊號高於最大GeoMean訊號時，獲得了負抑制百分比值，這可能是由於LTβR抗體與生物素醯化的人LTβR-His結合的確認性變化，從而可能導致更高的配體-Alexa 647 GeoMean訊號（即，允許更高水平的內源性配體結合）。使用不相關的ESN不會看到任何潛在的確認性變化，因為不相關的抗體不會與生物素醯化的人LTβR-His結合。
由於使用不相關的樣本代替ESN來確定測定的最小訊號，發現該測定中的背景訊號對於LIGHT高達約20%，以及對於LTα1β2高達約15%。從該最小值中減去ESN樣本以確定淨測定訊號，從而計算抑制%。由於背景水平高，因此經由該測定表現出約20%抑制的LTβR抗體經由該基於細胞的測定被認為是非阻斷物。開發實例8中描述的基於細胞的測定，以確定LTβR抗體的非阻斷活性。
4.7 親和力差距分析。親和力係在通用電氣醫療公司（GE Healthcare）的BIAcore ®3000上測量的。實驗在25°C下進行。運行緩衝液為補充有0.5% BSA的HBS-P（10 mM HEPES，pH 7.4，150 mM NaCl，0.05%界面活性劑P-20；賽提瓦公司目錄號BR100827），並且動力學以高流速（100 µl/min）進行。使用pH 1.7的10 mM甘胺酸進行再生。將小鼠抗人抗體在10 nM乙酸鈉（pH 5）中稀釋至0.065 mg/mL，並使用胺偶合試劑（賽提瓦公司目錄號BR100050）共價偶合至CM5感測器晶片（賽提瓦公司目錄號29104988）的樣本和參考流動池（Fc1）。將未純化的抗LTβR mAb在HBS-P中稀釋至1 µg/ml，並在流動池2、3或4上捕獲，以獲得100 RU - 200 RU的捕獲水平。Fc1用作參考。將靶標（人或cyno LTβR）作為分析物以150 nM、50 nM、16.7 nM、5.6 nM和1.85 nM進樣，其50 nM 濃度運行兩次以測量再現性。解離時間為10分鐘，以允許篩選大抗體組。數據係雙重背景參考，因為從數據中減去了參考Fc和0 nM分析物濃度。在BIAcore ®評估軟體中使用1 : 1朗格繆爾傳質結合模型來分析數據。人和cyno主要的結果顯示在圖5的表B中。
4.8 LT β R 促效劑抗體的分子拯救和定序。使用Qiagen RNeasy微型套組或Invitrogen mRNA catcher plus套組，從含有產生促效劑LTβR抗體的融合瘤細胞的孔中純化出RNA（總RNA或mRNA）。經純化的RNA用於使用經由逆轉錄的cDNA合成、接著聚合酶鏈反應（RT-PCR）來擴增抗體重鏈和輕鏈可變區（V）基因。使用Qiagen單步逆轉錄酶PCR套組（凱傑公司（Qiagen））獲得完全人抗體γ重鏈。此方法用於自RNA模板產生第一鏈cDNA，接著使用多重PCR擴增γ重鏈的可變區。將5' γ鏈特異性引物與抗體重鏈的訊息序列退火，而3'引物與γ恒定結構域的區域退火。使用Qiagen單步逆轉錄酶PCR套組（凱傑公司）獲得完全人κ和λ輕鏈。該方法用於自RNA模板產生第一鏈cDNA，接著使用多重PCR擴增輕鏈的可變區。將5’輕鏈特異性引物與抗體輕鏈的訊息序列退火，而3’引物與輕鏈的恒定區退火。
使用核酸外切酶I和鹼性磷酸酶以酶法純化擴增的cDNA並對純化的PCR產物直接定序。通過生物資訊學方法，自對應核酸序列推導出胺基酸序列。各融合瘤樣本完成兩次另外的獨立的RT-PCR擴增和定序循環，以證實觀察到的任何突變並非PCR的結果。接著分析衍生的胺基酸序列，以確定抗體的種系序列起源，且鑒別與種系序列的偏差。 實例 5 ： LT β R 抗體工程化
藉由將VH結構域與CH1-CH2-CH3序列融合並將VL結構域與到CL或CK序列融合，將選定的抗LTβR抗體轉化為IgG1亞型的標準抗體形式。該抗體同種型的CH2結構域藉由引入N297G突變被工程化以降低效應子功能，並藉由工程化的二硫鍵（R292C，V302C）以提高熱穩定性；該抗體同種型被命名為SEFL2.2。
對抗LTβR抗體進行另外工程化，以去除通過計算預測或經驗確定會影響分子表現、純化、均一性、熱穩定性、膠體穩定性、長期儲存穩定性、體內藥物動力學和/或免疫性的「熱點」或殘基。可變重鏈（VH）和可變輕鏈（VL）結構域中該等熱點的各種胺基酸突變係基於保守性、共變異性、化學相似性、結構建模的預測以及來自其他抗體工程活動的先驗知識設計的。設計的工程化的抗體包括單一突變和突變組合兩者。表17（下文）提供了引入LTβR抗體亞群的單個和組合突變以及工程化抗體的結合親和力（KD）的總結。所鑒定的取代的位置相對於源自以下的參考序列：Honegger和Pluckthun, 「Yet Another Numbering Scheme for Immunoglobulin Variable Domains: An Automatic Modeling and Analysis Tool[免疫球蛋白可變結構域的又另一種編號方案：自動建模和分析工具],」 J. Mol. Biol.[分子生物學雜誌] 309: 657-670 (2001)，特此藉由引用將其全部併入。 [ 表 17] . LT β R 抗體熱點工程化
BioReg ID Fab 描述 親本 KD （ nM ）
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實例 6 ： LT β R 促效劑抗體的表位和互補位作圖   
6.1 氫 / 氘交換（ HDX ）質譜（ MS ）。使用HDX MS進行選擇促效劑LTβR抗體的表位和互補位作圖。HDX MS測量蛋白質骨架醯胺氫的氘交換率。HDX MS實驗使用Twin HTS PAL HDX系統（LEAP技術公司（LEAP Technologies），北卡羅來納州卡勃羅）進行，該系統被配置為在胃蛋白酶柱上進行線上消化，並與Orbitrap質譜儀（Elite，賽默飛世爾科技公司，加利福尼亞州聖約瑟）介面，如前文所描述（參見例如，Chalmers等人, Anal. Chem.[分析化學] 78: 1005-1014 (2006)和Zhang等人, Structure[結構] 18: 1332-1341 (2010)，特此藉由引用將其全部併入）或Twin HTS PAL HDX系統，該系統被配置為進行溶液內消化，並與Orbitrap Eclipse質譜儀（賽默飛世爾科技公司，加利福尼亞州聖約瑟）介面，其方式類似於先前所述（Zhang等人, Anal. Chem.[分析化學] 84(11):4942-4949 (2012)，特此藉由引用將其全部併入）。
6.1.1 使用具有柱上消化的 Twin HTS PAL HDX 系統（「系統 1 」）進行 HDX MS 實驗：用於LTβR抗體（LIBC218990、LIBC218944、LIBC219058、LIBC219081和LIBC219097）的表位/互補位作圖的HDX反應分別在三個條件下進行：分別是僅LTβR胞外結構域（ECD）抗原、LTβR ECD/抗體結構域複合物和僅抗體Fab。考慮到LTβR和評估的抗體具有k D在低nM範圍內的高結合親和力，並且結合比為2 : 1，藉由分別以約20 µM和約10 µM的最終濃度預孵育LTβR與抗體，可以容易地形成LTβR/抗體複合物。H/D交換反應藉由在25°C下如所指示的用10 mM乙酸鹽的D2O（pD 5.2）將蛋白質樣本5倍稀釋預定時間（10 s、1 min、10 min、1 h、4 h和12 h）來激活。藉由與冰冷的200 mM磷酸鈉、4 M鹽酸胍、0.5 M三(2-羧乙基)膦（TCEP）在pH 2.4下1 : 1混合來淬滅交換反應。將淬滅的蛋白質混合物以200 μL/min的流速通過定制填充的2 mm×2 cm胃蛋白酶（世爾科技公司（Fisher Scientific），賓夕法尼亞州匹茲堡）柱（安捷倫技術公司（Agilent Technologies），加利福尼亞州聖克拉拉）。在2 mm×1 cm C18捕獲柱（沃特斯公司（Waters Corporation），麻塞諸塞州米爾福德）上捕獲消化的肽，並以0.2 mL/min的流速脫鹽3分鐘。然後藉由使用2.1 mm × 5 cm C18柱（1.9 μm Hypersil Gold；賽默飛世爾科技公司，麻塞諸塞州沃爾瑟姆），9.5分鐘線性梯度的5%-40%乙腈的0.1%甲酸溶液，以0.2 mL/min的流速來分離肽。蛋白質消化和肽分離在保持在1°C下的熱室中進行，以減少反向交換。對於m/z 400的離子，以60,000的品質分辨能力獲得LC-MS數據。每個實驗都一式兩份進行，以提供對變化的估計。
串聯質譜（MS/MS）實驗在與如上文描述的相同的條件下進行。在數據依賴性模式下獲取產物離子光譜，並選擇10個最豐富的離子進行產物離子分析。所有數據均使用軟體MassAnalyzer（Zhang等人, Anal. Chem.[分析化學] 84: 4942-4949 (2012)，特此藉由引用將其全部併入）處理，用於肽鑒定和氘水平計算。分析了大約500個肽，所有mAb2多肽鏈的序列覆蓋率為至少97%。將所有HDX-MS數據歸一化為100%氘濃度，並用Prism v 6.02（圖形軟體公司（GraphPad Software），加利福尼亞州拉荷亞）以對數標度繪製針對標記時間的氘摻入百分比。
6.1.2 使用具有溶液內消化的 Twin HTS PAL HDX 系統（「系統 2 」）進行 HDX MS 實驗：對於互補位作圖，藉由將抗體Fab結構域與過量（1.5倍）的LTβR胞外結構域（ECD）抗原孵育形成LTβR/抗體複合物，並與游離抗體Fab結構域並行分析。藉由將每個樣本在D 2O中的100 mM磷酸鹽緩衝液中稀釋10倍來開始氘標記。在一定長度的標記時間（6次標記時間，從15 s到2 h，每次至少一式兩份）後，藉由在1°C下在含有0.625 M三(2-羧乙基)膦（TCEP）和約5.8 M尿素的淬滅/變性緩衝液（pH 2.7）中稀釋4倍來淬滅標記。然後將胃蛋白酶添加到淬滅的溶液中，然後在1°C下注入樣本環路中，並在環路線上切換用於梯度洗脫之前進行6 min消化延遲。在1°C下在1 mm×5 cm C18柱（Waters CSH，1.7 µM）上，用9.5分鐘線性梯度的5%-40%乙腈的在0.035%三氟乙酸（TFA）、0.1%甲酸溶液，以0.2 mL/min的流速來分離肽。三種肽，包括緩激肽、血管收縮素和白胺酸腦啡肽，用作內標來校正反向交換。
對於表位作圖，藉由將LTβR ECD抗原與過量（1.5倍）的每種抗體Fab一起孵育形成LTβR/抗體複合物，並與游離抗原並行分析。H/D交換標記和消化以與如上文所描述的相同的方式進行，不同之處在於使用1 : 1胃蛋白酶/XIII型蛋白酶混合物進行消化，並且在注入樣本回路之前，在約7°C下進行消化6 min，這是因為使用標準條件難以用胃蛋白酶消化LTβR ECD。
所有MS數據均為在賽默飛世爾科技公司Orbitrap Eclipse高解析度質譜儀上收集的，該質譜儀具有電灑游離介面。在120k解析度設置下收集MS數據。對於每個互補位或表位實驗，還從兩個未標記的樣本（游離和複合物）中的每一個中收集三次注射的數據依賴性MS/MS，用於肽鑒定。
所有數據均在軟體MassAnalyzer上處理，用於肽鑒定、氘水平計算、使用內標的反向交換校正和全氘化對照（Zhang等人, Anal. Chem.[分析化學] 84(11):4942-4949 (2012)，特此藉由引用將其全部併入）。
6.2 表位作圖結果。表位作圖實驗的結果提供在圖4-8中。來源於單獨LTβR和與抗體複合的LTβR的肽之氘交換圖的比較鑒定了被檢測抗體結合的表位區域，其中被抗體結合的LTβR區域受到保護免於氘交換。應注意的是，肽的N-末端殘基不具有用於測量的醯胺氫，並且在報告表位區域時被排除在外。如圖6和8中所示，LTβR抗體LIBC218990-1（19320）和LIBC219058（19324）與LTβR的CRD2內的殘基結合，如由LTβR ECD（SEQ ID NO: 4）的胺基酸殘基56-64和81-101組成的複合肽中存在的氘的減少所示。因此，LIBC218990-1的表位和LIBC219058的表位包含SYNEHWNY（SEQ ID NO: 4的殘基57-64）的胺基酸序列內的一或多個殘基和EIAPCTSKRKTQCRCQPGMF（SEQ ID NO: 4的殘基82-101）的胺基酸序列內的一或多個殘基。LTβR : LTβR-抗體複合物的其他區域沒有受到保護免於氘交換（數據未顯示）。
LTβR抗體LIBC218994（19321）結合CRD1內的殘基，特別是LTβR ECD（SEQ ID NO: 4）的殘基4-9、21-29和39-47內的一或多個殘基（參見圖7）。因此，LIBC218944的表位包含PPYASE（SEQ ID NO: 4的殘基4-9）、YEPQHRICC（SEQ ID NO: 4的殘基21-29）和SAKCSRIRD（SEQ ID NO: 4的殘基39-47）的胺基酸序列內的一或多個殘基。LTβR : LTβR-抗體複合物的其他區域沒有受到保護免於氘交換（數據未顯示）。
LTβR抗體LIBC219081（19325）結合CRD4內的殘基，特別是LTβR ECD（SEQ ID NO: 4）的位置168-179處的殘基片段內的殘基（參見圖9）。因此，LIBC219081的表位包含EAAPGTAQSDTT（SEQ ID NO: 4的殘基168-179）的胺基酸序列內的一或多個殘基。LTβR : LTβR-抗體複合物的其他區域沒有受到保護免於氘交換（數據未顯示）。
LTβR抗體LIBC219097（19326）結合跨越CRD1和CRD2的LTβR區域，該區域包含LTβR ECD（SEQ ID NO: 4）的39-42和57-70區域中的殘基（參見圖10）。包含殘基38-42和殘基37-47的肽之氘攝取曲線的比較顯示了，殘基38-42的較短肽具有相對大的保護而免於氘交換，而較長肽37-47具有相對小的保護。這表明保護主要發生在重疊的較短肽中，因此將表位區域縮小到LTβR ECD的殘基39-42。因此，LIBC219097的表位包含SAKC（SEQ ID NO: 4的殘基39-42）和SYNEHWNYLTICQL（SEQ ID NO: 4的殘基57-70）的胺基酸序列內的一或多個殘基。LTβR : LTβR-抗體複合物的其他區域沒有受到保護免於氘交換（數據未顯示）。
LTβR抗體LIBC218979（19319）與LTβR ECD（SEQ ID NO: 4）的CRD4內的LTβR殘基結合。LIBC218979與LTβR ECD結合後，LTβR肽167-177和167-181中的氘攝取減少，但肽154-166和178-193中沒有，這表明保護區在殘基168-178內（圖11）。LTβR : LTβR-抗體複合物的其他區域沒有受到保護免於氘交換（數據未顯示）。因此，表位包含EAAPGTAQSDT（SEQ ID NO: 4的殘基168-179）的胺基酸序列內的一或多個殘基。
LTβR抗體LIBC219051（19323）與包括CRD1在內的LTβR ECD的N末端區域結合。LIBC219051與LTβR ECD結合後，LTβR肽1-9、1-20和10-20中的氘攝取減少，但肽19-28中沒有，這表明保護區在殘基1-19內（圖12）。LTβR : LTβR-抗體複合物的其他區域沒有受到保護免於氘交換（數據未顯示）。因此，表位包含QAVPPYASENQTCRDQEKE（SEQ ID NO: 4的殘基1-19）的胺基酸序列內的一或多個殘基。應注意的是，Q1已轉換為pyro-E，其含有可測量的醯胺氫。數據還表明，結合與殘基N10上的糖基化狀態無關。   
6.3 互補位作圖結果。互補位作圖實驗的結果提供在圖13-19中。與表位作圖類似，來源於未結合和LTβR結合抗體的重鏈和輕鏈可變結構域肽中氘攝取的比較用於鑒定所檢測抗體的互補位區域。與未結合抗體相比，結合抗體的肽區域內氘攝取的減少表明所檢測肽的至少一些區域參與結合相互作用。如上文所述，所檢測肽的N末端殘基不具有用於測量的醯胺氫，因此在報告互補位區域時被排除在外。因為這種方法檢測微抗體衍生肽（而不是單個殘基）中的氘交換，所以互補位的解析不在殘基水平上。然而，該方法可以可靠地鑒定不參與結合相互作用的殘基片段。
圖13顯示了來源於未結合和結合的LTβR抗體LIBC218990（19320）的肽之一系列氘攝取圖。受到保護免於氘交換的結合抗體（即抗體-LTβR複合物）的肽在圖底部的相應重鏈和輕鏈可變序列中進行鑒定（參見加框殘基）。每個可變區序列內的CDR位置加下劃線。由SEQ ID NO: 644的殘基27-34組成的重鏈肽的氘攝取圖顯示沒有免於氘攝取。該重鏈肽跨越HCDR1殘基31-35，表明LIBC218990的HCDR1不參與同LTβR的結合相互作用。類似地，SEQ ID NO: 645的殘基50-70的複合輕鏈肽中的氘攝取也顯示沒有免於氘攝取。該輕鏈肽跨越LCDR2殘基51-57，表明LIBC218990的LCDR2也不參與該抗體與LTβR的結合相互作用。
LIBC218990的HCDR2包含SEQ ID NO: 644的殘基50-66。然而，只有該HCDR2區域的前半部分內的殘基參與結合相互作用（即，殘基51-59），如在SEQ ID NO: 644的殘基50-59的複合重鏈肽中觀察到的受到保護免於氘交換和在殘基60-66的複合重鏈肽中觀察不到的缺乏保護所示（圖13）。類似地，雖然LIBC218990的LCDR1跨越VL殘基24-35（SEQ ID NO: 645），但基於與該區域重疊的肽之氘攝取，僅SEQ ID NO: 645的殘基29-33似乎參與LCDR1與LTβR的相互作用（圖13）。在LIBC218990的HCDR3和LCDR3區域中檢測的肽包括各自CDR區域的一端或兩端的框架區。雖然該等框架殘基已被包括在加框區域中，但它們參與結合相互作用不能使用這種方法來解決。
類似於LIBC218990，LIBC219058（19324）（圖15）和LIBC219097（19326）（圖17）的互補位定位顯示了，並非該等抗體的所有六個CDR都參與了該等各自抗體與LTβR之間的結合相互作用。特別地，對於LIBC219058（圖15），由SEQ ID NO: 649的殘基23-33組成的VL的複合肽沒有受到保護免於氘交換，這表明LCDR1不參與同LTβR的相互作用。同樣，由SEQ ID NO: 649的殘基87-116和107-116組成的VL的複合肽也顯示出沒有受到保護免於氘交換，這表明LCDR3不參與抗體與LTβR的結合。對於LIBC219097（圖17），由SEQ ID NO: 650的殘基47-61和62-75組成的VH的複合肽沒有受到保護免於氘交換，這表明HCDR2不參與抗體與LTβR的相互作用（圖17A）。類似地，由SEQ ID NO: 651的殘基87-112組成的複合VL肽沒有受到保護免於氘交換，這表明LIBC219097的LCDR3不參與同LTβR的結合（圖17B）。
圖14和16顯示了來源於未結合和結合的LTβR抗體LIBC218994（19321）（圖14A-14B）和LTβR抗體LIBC219081（19325）（圖16A-16B）的肽之氘攝取圖。受到保護免於氘交換的結合抗體（即抗體-LTβR複合物）的肽在每個圖底部的相應重鏈和輕鏈可變序列中進行鑒定（參見加框殘基）。每個可變區序列內的CDR位置加下劃線。與LIBC218990、LIBC219058和LIBC219097相比，LIBC218994和LIBC219081抗體的互補位作圖顯示，三個VH和VL CDR中的每一個內的殘基都參與了與LTβR的結合相互作用。在一些情況下，當多個肽覆蓋CDR區域時，還鑒定了不參與結合相互作用的特定CDR中的殘基。參見例如SEQ ID NO: 646的VH肽48-57和58-68的圖（圖14A），其顯示HCDR2的殘基49-57而非58-66參與LIBC218994與LTβR的結合相互作用。還參見SEQ ID NO: 121的VH肽49-59和60-68的圖（圖16A），其顯示HCDR2的殘基50-59而非60-66參與LIBC219081與LTβR的結合相互作用。
圖18A-18B顯示了來源於未結合和結合的LTβR抗體LIBC218979（19319）的肽之氘攝取圖。受到保護免於氘交換的結合抗體（即抗體-LTβR複合物）的肽在每個圖底部的相應重鏈（圖18A）和輕鏈（圖18B）可變序列中進行鑒定（參見加框殘基）。每個可變區序列內的CDR位置加下劃線。氘攝取圖的分析表明，LIBC218979的三個VH和VL CDR中的每一個內的殘基都參與了與LTβR的結合相互作用。
圖19A-19B顯示了來源於未結合和結合的LTβR抗體LIBC219051（19323）的肽之氘攝取圖。受到保護免於氘交換的結合抗體（即抗體-LTβR複合物）的肽在每個圖底部的相應重鏈（圖19A）和輕鏈（圖19B）可變序列中進行鑒定（參見加框殘基）。每個可變區序列內的CDR位置加下劃線。氘攝取圖的分析表明，LIBC219051的三個VH和VL CDR中的每一個內的殘基都參與了與LTβR的結合相互作用。
基於互補位定位和熱點工程化，對LTβR結合相互作用重要的LTβR抗體LBC218990、LIBC218994、LIBC219058、LIBC219081、LIBC219097、LIBC218979、LIBC219098和LIBC219051的CDR殘基總結在下表16-22中。未被鑒定為參與或對LTβR結合相互作用至關重要的抗體的CDR殘基（在表16-22的CDR序列中被鑒定為「X」）可以被任何胺基酸殘基、保守胺基酸取代或熱點補救的胺基酸殘基取代，如下表18-25中的每一個所鑒定的。
表 18.LT β R 抗體 LIBC218990 （ 19320/30H1 ）的關鍵 CDR 殘基的總結
HCDR1 ID HCDR2 ID HCDR3 ID
GDYMY * 基於 HDX 分析不是互補位的一部分 475 WINPX 5SGGTNX 11-X 17X 5和X 11-X 17獨立地選自任何胺基酸殘基 499 EGSSGWSAEYX 11X 12X 13X 11-X 13獨立地選自任何胺基酸殘基 529
WINPX 5SGGTNX 11-X 17X 5為N、G、D、E、T、S、R、K、Q、H，較佳的是N或Q X 11為Y、H、M、I、L、F、W X 12為A、G、S、T、V X 13為K、D、E、N、Q、R、V，較佳的是K、V或Q X 14為K、D、E、N、Q、R X 15為F、M、V、I、L、W、Y X 16為Q、D、E、N、H、M、S、R、K X 17為G、A、S、N X 5和X 13各自係如上表17中針對該抗體所定義的熱點殘基（即N61和K72）。 500 EGSSGWSAEYX 11X 12X 13X 11為F、M、V、I、L、W、Y X 12為Q、D、E、N、H、M、S、R、K X 13為H、D、E、N、M、R、Q 530
WINPNSGGTNYAKKFQG 501 EGSSGWSAEYFQH 531
LCDR1 ID LCDR2 ID LCDR3 ID
X 1X 2X 3X 4SVSSSFX 11X 12X 1-X 4和X 11-X 12獨立地選自任何胺基酸殘基 559 GASRRAT * 基於 HDX 分析不是互補位的一部分 590 QQYGTSPLS 619
X 1X 2X 3X 4SVSSSFX 11X 12X 1為R、E、N、H、Q、K X 2為A、G、S、T、V X 3為S、G、D、E、N、Q、A、T X 4為Q、D、E、N、H、M、S、R、K X 11為L、M、V、I、Y、F X 12為A、G、S、T、V 560
RASQSVSSSFLA 561
[ 表 19] . LT β R 抗體 LIBC218994 （ 19321/31A3 ）的關鍵 CDR 殘基的總結
HCDR1 ID HCDR2 ID HCDR3 ID
SYX 3X 4X 5X 3、X 4和X 5獨立地選自任何胺基酸殘基 476 IIWYX 5X 6SDX 9-X 17X 5、X 6和X 9-X 17獨立地選自任何胺基酸殘基 502 GDSEDFYYYDX 11X 12X 13X 11-X 13獨立地選自任何胺基酸殘基 532
SYX 3X 4X 5X 3為G、A、S、N X 4為M、H、Q、Y、F、L、I、V X 5為H、D、E、N、M、R、Q 477 IIWYX 5X 6SDX 9-X 17X 5為D、S、K、Q、H、N或E，較佳的是D或E X 6為G、S、N或A，較佳的是G或A X 9為E、P、D、S、R、K、Q、H、N X 10為Y、H、M、I、L、F、W X 11為Y、H、M、I、L、F、W X 12為A、G、S、T、V X 13為D、S、K、Q、H、N、E、T，較佳的是D、E或T X 14為S、G、D、E、N、Q、A、T、L，較佳的是S或L X 15為V、T、A、M、F、L、I X 16為K、D、E、N、Q、R X 17為G、A、S、N X 5、X 6、X 13和X 14各自係如上表17中針對該抗體所定義的熱點殘基（即D61、G65、D72和S73）。 503 GDSEDFYYYDX 11X 12X 13X 11為F、M、V、I、L、W、Y X 12為D、S、K、Q、H、N、E X 13為V、T、A、M、F、L、I 533
SYGMH 478 IIWYDGSDEYYADSVKG 504 GDSEDFYYYDFDV 534
LCDR1 ID LCDR2 ID LCDR3 ID
SGSSSNIGKNX 11X 12X 13X 11-X 13各自獨立地選自任何胺基酸殘基 562 DNNX 4X 5PS X 4和X 5為任何胺基酸 591 X 1X 2X 3DHSLSASX 11X 12X 1-X 3、X 11和X 12各自獨立地選自任何胺基酸殘基 620
SGSSSNIGKNX 11X 12X 13X 11為Y、H、M、I、L、F、W X 12為V、T、A、M、F、L、I X 13為S、G、D、E、N、Q、A、T 563 DNNX 4X 5PS X 4為K、D、E、N、Q、R、I、L，較佳的是K、I或L X 5為R、E、N、H、Q、K、V、L、I，較佳的是R、V、L或I X 4和X 5各自係如上表17中針對該抗體所定義的熱點殘基（即K69和R70）。 592 X 1X 2X 3DHSLSASX 11X 12X 1為G、A、S、N X 2為T、N、S、V、A X 3為W、F、Y、Q、I，較佳的是W、Q或I X 11為Y、H、M、I、L、F、W X 12為V、T、A、M、F、L、I X 3係如上表17中針對該抗體所定義的熱點殘基（即W109）。 621
SGSSSNIGKNYVS 564 DNNKRPS 593 GTWDHSLSASYV 622
[ 表 20] . LT β R 抗體 LIBC219058 （ 19324/36G2 ）的關鍵 CDR 殘基的總結
HCDR1 ID HCDR2 ID HCDR3 ID
TSGMN 479 SVSSSGSYX 9-X 17X 9-X 17中每一個獨立地選自任何胺基酸殘基 505 AX 2YNWHFDASX 11X 12 535
SVSSSGSYX 9-X 17X 9為I、M、V、Y、F、L X 10為Y、H、M、I、L、F、W X 11為Y、H、M、I、L、F、W X 12為A、G、S、T、V X 13為D、S、K、Q、H、N、E X 14為S、G、D、E、N、Q、A、T X 15為V、T、A、M、F、L、I X 16為K、D、E、N、Q、R X 17為G、A、S、N 506 AX 2YNWHFDASX 11X 12X 2為R、E、N、H、Q、K或I，較佳的是R或I X 11為D、S、K、Q、H、N、E X 12為I、M、V、Y、F、L X 2係如上表17中針對該抗體所定義的熱點殘基（即R110）。 536
SVSSSGSYIYYADSVKG 507 ARYNWHFDASDI 537
LCDR1 ID LCDR2 ID LCDR3 ID
RASQSISSDLN * 基於 HDX 分析不是互補位的一部分 565 AASSLX 6X 7X 6和X 7各自為任何胺基酸殘基 594 QQSYNTPLT * 基於 HDX 分析不是互補位的一部分 623
AASSLX 6X 7X 6為H、D、E、N、M、R、Q X 7為S、G、D、E、N、Q、A、T 595
AASSLHS 596
[ 表 21]. LT β R 抗體 LIBC219081 （ 19325/41B2 ）的關鍵 CDR 殘基的總結
HCDR1 ID HCDR2 ID HCDR3 ID
SYAX 4X 5X 4和X 5各自為任何胺基酸殘基 927 VIWYDGSNQYX 11-X 17X 11-X 17中每一個獨立地選自任何胺基酸殘基 930 DRVAAHPAYYX 11-X 15X 11-X 15中每一個獨立地選自任何胺基酸殘基 933
SYA X 4X 5X 1為M、H、Q、Y、F、L、I、V X 2為H、D、E、N、M、R、Q 928 VIWYDGSNQYX 11-X 17X 11為Y、H、M、I、L、F、W X 12為A、G、S、T、V X 13為D、S、K、Q、H、N、E X 14為S、G、D、E、N、Q、A、T X 15為V、T、A、M、F、L、I X 16為K、D、E、N、Q、R X 17為G、A、S、N 931 DRVAAHPAYYX 11-X 15X 11為Y、H、M、I、L、F、W X 12為G、A、S、N X 13為L、M、V、I、Y、F X 14為D、S、K、Q、H、N、E X 15為V、T、A、M、F、L、I 934
SYAMH 8 VIWYDGSNQYYADSVKG 9 DRVAAHPAYYYGLDV 10
LCDR1 ID LCDR2 ID LCDR3 ID
X 1X 2DALPX 7X 8YAY X 1、X 2、X 7、X 8各自獨立地為任何胺基酸殘基 934 KDNERPS 66 QSADX 5SGSYVI X 5為任何胺基酸殘基 936
X 1X 2DALPX 7X 8YAY X 1為S、G、D、E、N、Q、A、T X 2為G、A、S、N X 7為N、G、D、T、S、R、K、H、E、Q，較佳的是N、E或Q X 8為H、D、E、N、M、R、Q，較佳的是H或Q X 7和X 8各自係如上表17中針對該抗體所定義的熱點殘基（即N33和H39）。 935 QSADX 5SGSYVI X 5為S、G、D、E、N、Q、A、T、I，較佳的是S、A或I X 5係如上表17中針對該抗體所定義的熱點殘基（即S111）。 937
SGDALPNHYAY 65 QSADSSGSYVI 67
[ 表 22] . LT β R 抗體 LIBC219097 （ 19326/43D9 ）的關鍵 CDR 殘基的總結
HCDR1 ID HCDR2 ID HCDR3 ID
DAWX 9X 10X 9和X 10為任何胺基酸殘基 740 RIKTKTDGGTTDYAAPVKG * 不是互補位的一部分 743 DYGDYX 6X 7X 6和X 7為任何胺基酸殘基 744
DAWX 9X 10X 9為M、H、Q、Y、F、L、I、V X 10為S、G、D、E、N、Q、A、T 741 DYGDYX 6X 7X 6為E、P、D、S、R、K、Q、H、N X 7為Y、H、M、I、L、F、W 745
DAWMS 742 DYGDYEY 746
LCDR1 ID LCDR2 ID LCDR3 ID
RTSQSISRYLN 566 GASSLX 6X 7X 6和X 7為任何胺基酸殘基 597 HQSYSTPPT * 基於 HDX 分析不是互補位的一部分 624
GASSLX 6X 7X 6為Q、D、E、N、H、M、S、R、K X 7為S、G、D、E、N、Q、A、T 598
GASSLQS 599
[ 表 23] . LT β R 抗體 LIBC218979 （ 19319/23E9 ）的關鍵 CDR 殘基的總結
HCDR1 ID HCDR2 ID HCDR3 ID
SYGMH 11 VIWYX 5X 6SNKYYAX 13SVKG X 5、X 6和X 13各自為任何胺基酸殘基 938 ERIAAAPYYYYGMDV 13
VIWY X 5X 6SNKYYAX 13SVKG X 5為D、S、K、Q、H、N、E、L，較佳的是D、E或L X 6為G、S、N或A，較佳的是G或A X 13為D、S、K、Q、H、N、E、V或Q，較佳的是D、Q或V X 5、X 6和X 13各自係如上表17中針對該抗體所定義的熱點殘基（即D61、G65和D72）。 939
VIWYDGSNKYYADSVKG 12
LCDR1 ID LCDR2 ID LCDR3 ID
SGDALPKHYAY 68 KDNERPS 69 QSADX 5TGSYX 10V X 5和X 10為任何胺基酸殘基 940
QSADX 5TGSYX 10V X 5為N、G、D、E、T、S、R、K、Q、H、I、L，較佳的是N或I X 10為M、H、Q、Y、F、L、I、V，較佳的是M或V X 5和X 10係如上表17中針對該抗體所定義的熱點殘基（即N111和M137）。 941
QSADNTGSYMV 70
[ 表 24] . LT β R 抗體 LIBC219098 （ 19327/44B1 ）的關鍵 CDR 殘基的總結
HCDR1 ID HCDR2 ID HCDR3 ID
SYAMS 481 TISGSGGSTYYADSVKG 509 VRDNWNYX 8X 9MDV X 8和X 9為任何胺基酸殘基 539
VRDNWNYX 8X 9MDV X 8為D、S、K、Q、H、N、E，較佳的是D或E X 9為G、A、S、N、V，較佳的是G或V X 8和X 9各自係如上表17中針對該抗體所定義的熱點殘基（即D134和G135）。 540
VRDNWNYDGMDV 541
LCDR1 ID LCDR2 ID LCDR3 ID
RX 2SQSLLYSSGYIDLD X 2為任何胺基酸殘基 568 LGSNRAS 601 MQTIQTPLT 627
RX 2SQSLLYSSGYIDLD X 2為C或S X 2係如上表17中針對該抗體所定義的熱點殘基（即C25）。 569
RCSQSLLYSSGYIDLD 570
RSSQSLLYSSGYIDLD 571
[ 表 25] . LT β R 抗體 LIBC219051 （ 19323/35F5 ）的關鍵 CDR 殘基的總結
HCDR1 ID HCDR2 ID HCDR3 ID
GYYLH 483 WINPNIGVTDX 11AQKFQD X 11為任何胺基酸殘基 511 RGYNDDYDFDY 543
WINPNIGVTDX 11AQKFQD X 11為C、S或Y 512
WINPNIGVTDSAQKFQD 513
LCDR1 ID LCDR2 ID LCDR3 ID
KSRQSLLHRX 10X 11KTYLY X 10為任何胺基酸殘基 X 11為任何胺基酸殘基 572 EVSNRFS 603 MQSIQLPLI 628
KSRQSLLHRX 10X 11KTYLY X 10為D、E或V X 11為G或A 573
KSRQSLLHRDGKTYLY 574
實例 7 ：雙特異性分子生產和功能測試
靶向腫瘤抗原相關（TAA）或基質抗原相關（SAA）的促效劑LTβR結合蛋白能夠結合 (i) 人LTβR（huLTβR）和人Claudin 18.2（CLDN18.2），(ii) huLTβR和人Claudin 6（CLDN6），(iii) huLTβR和人MUC17，或 (iv) huLTβR和LRRC15，以AmAb形式（即Fab x scFv）或異源IgG形式產生。該等結合蛋白係使用本文所描述的LTβR抗體（即LTβR抗體36G2（19324）、31A3（19321）、23E9（19319）和41B2（19325））的可變區結合結構域和下表26中提供的相應SAA或TAA的可變區產生的。CLDN18.2、CLDN6、MUC17和LRRC15可變區的胺基酸序列提供在下表27中。
在體外共培養測定中，評估了以AmAb或異源IgG形式產生的促效劑LTβR雙特異性結合蛋白組（見表26）的交聯依賴性LTβR傳訊活性。在該測定中，與穩定表現相關SAA或TAA的CHO或Saos-2細胞共培養的表現LTβR之人黑色素瘤細胞的趨化因子IL-8釋放表明測試抗體的交聯依賴性LTβR傳訊活性。 [ 表 26] . 親本和雙特異性抗體
ID 描述
PUR149194-4 LTΒR(36G2) IgG1 SEFL2
PUR149195-4 LTΒR(31A3) IgG1 SEFL2
PUR149197-4 huClaudin-6(57103 (VH:C51G,VL:C141Q)_IgG1_SEFL2
PUR149198-4 huClaudin-6(57104 (VH:C51G,VL:C141Q))_IgG1_SEFL2
PUR149199-4 huCLDN18.2(32698 (VH:G9R_S57A_V103E,VL:N39K_F103V))_IgG1_SEFL2
PUR149200-4 huCLDN18.2(32698)_IgG1_SEFL2
PUR149202-4 huMUC17(57105 (VH:C51G,VL:C141G_Q149R))_IgG1_SEFL2
PUR149203-4 huMUC17(57107 (VH:C51G,VL:C141G_Q149R))_IgG1_SEFL2
PUR149204-4 huLTΒR(31A3)_Fab x huClaudin-6(57103)_scFv_AmAb_CC
PUR149205-4 huLTΒR(31A3)_Fab x huClaudin-6(57104)_scFv_AmAb_CC
PUR149206-4 huLTΒR(31A3)_Fab x huCLDN18.2(32698)_scFv_AmAb_no_CC
PUR149210-4 huLTΒR(31A3)_Fab x huMUC17(57105)_scFv_AmAb_CC
PUR149211-4 huLTΒR(31A3)_Fab x huMUC17(57107)_scFv_AmAb_CC
PUR149212-5 huLTΒR(36G2)_Fab x huClaudin-6(57103)_scFv_AmAb_CC
PUR149213-4 huLTΒR(36G2)_Fab x huClaudin-6(57104)_scFv_AmAb_CC
PUR149214-4 huLTΒR(36G2)_Fab x huCLDN18.2(32698)scFv_AmAb_no_CC
PUR149215-4 huLTΒR(36G2)_Fab x huCLDN18.2(32698)scFv_AmAb_no_CC
PUR149218-4 huLTΒR(36G2)_Fab x huMUC17(57105))_scFv_AmAb_CC
PUR149219-4 huLTΒR(36G2)_Fab x huMUC17(57107)_scFv_AmAb_CC
44245 huLTΒR(41B2) x LRRC15(25851) AmAb CC
45147 huLTΒR_19325 x huLRRC15_36779(VH:C98S) Hetero IgG1z SEFL2
52208 huLRRC15_36789(VL:C137S)_huLTΒR_19319_Hetero IgG1z SEFL2
[ 表 27] . SAA 和 TAA 結合物的胺基酸序列
結合物名稱 VH SEQ ID NO: VL SEQ ID NO:
huClaudin-6 (57103) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYVHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGATNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVRDALIVEAPATRDYYYYGMDVWGQGTTVTVSS 909 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRSTYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDASPITFGQGTRLEIKR 910
huClaudin-6 (57104) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYVHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGATNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVRDRLIVEAPATRDYYYYGMDVWGQGTTVTVSS 911 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRSTYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDASPITFGQGTRLEIKR 912
huMUC17(57105) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNHGMHWVRQAPGKGLEWVAGIWSEGSNKYYADAVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARATYTTGWSYFDYWGQGTLVTVSS 913 SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQKSGQSPVLVIYQDAKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAFHQSTWVFGGGTQLTVLR 914
huMUC17(57107) QLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGDIDASGSTKYNPSLKSRVTISLDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYFCARKKYSTVWSYFDYWGQGTLVTVSS 915 SYELTQPPSVSVPPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLIIYQDRKRPSGVPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWGSSTAVFGGGTKLTVLR 916
huCLDN18.2 (32698) EVQLLESRGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAEYYCAKGDWKYGYYGMDVWGKGTTVTVSS 917 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYKYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRLEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIKR 918
huCLDN18.2 (32698) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCAKGDWKYGYYGMDVWGKGTTVTVSS 919 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRLEAEDVGFYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIKR 920
huLRRC15 (25851) EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYIHWMRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFLGRVTMTRDTSISTAYLELRRLRSDDTAVYYCARERRYNSGGFDYWGQGTLVTVSS 921 DIVMTQSPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLLHSNGKNYLDWYLQKPGQSPQLLIFLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQAQQTPFTFGPGTKVEIKR 922
huLRRC15 (36779) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGNTLTEVSMHWVRQAPGKGLEWMGGFDPEDGETIYAQKFQGRITMTEDTSTDTAYMELNSLRCEDTAVYFCATLYSSGWNYYYGVDVWGQGTAVTVSS 923 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYGASIFQIGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQHYSYPWTFGQGTRVEIKR 924
huLRRC15 (36789) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNEYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRAEDTAVYYCARDGAVAYYYYYGLDVWGQGTTVTVSS 925 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHRNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGLYYCMQGLQTMCSFGQGTKLEIKR 926
在該測定的第1天，收穫、計數表現LTβR的人黑色素瘤A375細胞（ATCC，CRL-1619），並將該等細胞以10,000個細胞/孔（50 µL）在生長培養基（DMEM，10% FBS，4 mM L-麩醯胺酸，1.5 g/L碳酸氫鈉，4.5 g/L葡萄糖）中接種於384孔測定板（科斯塔公司（Costar），目錄號3701）。將板在37°C/5% CO 2下孵育過夜。在測定的第2天，在測定培養基（DMEM、2% FBS、4 mM L-麩醯胺酸、1.5 g/L碳酸氫鈉、4.5 g/L葡萄糖）中從10 nM 1 : 3向下滴定測試分子11個點。以40 μL從384孔測定板的每個孔中去除培養上清液。然後將滴定的測試分子轉移到預先接種有表現LTβR的A375細胞的384孔測定板，並在室溫下孵育30分鐘。收穫並計數穩定表現靶標的倉鼠卵巢細胞（CHO）或人骨肉瘤Saos-2細胞，將該等細胞重懸在測定培養基中，並按照板佈局轉移到測定板上。然後將測定板在37°C/5% CO 2下孵育過夜。基於測定開發數據，LTβR與表現CLDN6、CLDN18.2、MUC17、LRRC15的細胞或相應的非表現細胞的比率設置為1 : 1。各種表現靶標的細胞為測試分子提供交聯，相應的非表現靶標的細胞用於確定測試分子的交聯獨立性。在測定第3天，按照製造商之說明，藉由檢測套組（浠思公司，目錄號62IL8PEC）測量測定孔上清液中趨化因子IL-8釋放，並由EnVision（珀金埃爾默公司（PerkinElmer））在665 nm和615 nm下讀取。相對IL-8釋放由比率 = 訊號665 nm/訊號615 nm表示。
為了分析，藉由Genedata Screener（Smart fit公司）的四參數邏輯擬合模型確定測試分子的插值EC 50、轉運EC 50和最大活性。插值EC 50係基於每種結合蛋白的劑量曲線中的回折點，轉運EC50係Y軸上特定點的值，對於大多數分子來說，該值為約EC 50。EC 90係使用插值EC 50和希爾斜率以以下公式計算的：EC 90= (90/100-90) √ 希爾斜率EC 50。
雙特異性抗體的最大活性係藉由將每種分子的最高訊號除以相應中性對照的平均訊號來計算的。下表28提供了個體抗體效力的總結，如圖20-23所示。
LTβR x CLDN6 BsAb的大部分最大活性在中性對照的2.98至4.12倍之間（圖20）。含有huLTβR 31A3的分子具有最佳EC 50值，為約75 pM。具有huLTβR 36G2的分子的EC 50值範圍為90.65至183.10 pM。所有分子均表現出交聯依賴性活性。
LTβR x CLDN18.2 BsAb的大部分最大活性在中性對照的4.14至4.32倍之間（圖21）。所有LTβR x CLDN18.2分子具有相似的EC 50值，並表現出交聯依賴性活性。
LTβR x MUC17 BsAb的大部分最大活性在中性對照的2.70至3.26倍之間（圖22）。所有LTβR x MUC17 BsAb分子具有相似的EC 50值，並表現出交聯依賴性活性。
LTβR x LRRC15 BsAb的大部分最大活性在中性對照的4.46至5.37倍之間（圖23）。LTβR x LRRC15 BsAb分子的EC 50值範圍為46.42至108.12。所有LTβR x LRRC15 BsAb分子均表現出交聯依賴性活性。 [ 表 28] ： LT β R 雙特異性分子效力總結
CHO CLDN 6 + 細胞 CHO K1 (CLDN6 -)
LTβR x CLDN6 BsAb ID 最大活性 EC50 [pM] EC90 [pM] 暫態 EC50 （ pM ） Y=2.2 最大活性
PUR149204-4 3.43 74.42 266.45 1575.87 1.06
PUR149205-4 3.70 75.10 340.54 822.36 1.03
PUR149212-5 2.98 90.65 208.03 1514.50 1.07
PUR149213-4 4.12 183.10 3441.46 847.30 1.29
CHO CLDN 18.2 + 細胞 CHO K1 (CLDN18.2 -)
LTβR x CLDN18.2 BsAb ID 最大活性 EC50 [pM] EC90 [pM] 暫態 EC50 （ pM ） Y=2.2 最大活性
PUR149206-4 4.26 50.16 124.96 58.81 1.04
PUR149214-4 4.32 69.98 268.62 81.15 1.14
PUR149215-4 4.14 49.13 196.95 57.65 1.05
CHO MUC17 + 細胞 CHO K1 (MUC17 -)
LTβR x MUC17 BsAb ID 最大活性 EC50 [pM] EC90 [pM] 暫態 EC （ pM ） Y=2.5 最大活性
PUR149211-4 3.26 46.64 295.19 39.99 0.97
PUR149218-4 2.70 43.53 232.93 64.61 1.05
PUR149219-4 3.09 31.61 211.59 30.21 0.97
Saos-2 LRRC15 + 細胞 Saos-2 (LRRC15 -)
LTβR x LRRC15 BsAb ID 最大活性 EC50 [pM] EC90 [pM] 暫態 EC （ pM ） Y=8 最大活性
44245 5.08 80.82 276.94 76.54 1.02
45147 5.37 46.42 708.17 36.98 0.92
52208 4.46 108.12 560.27 120.53 0.94
實例 8 ：使用基於細胞的測定確認 LT β R 受體 - 配體非阻斷活性。
藉由按照製造商制定的方案使用Alexa Fluor 647 Microscale蛋白質標記套組（賽默飛世爾科技公司，目錄號A30009）軛合人LIGHT（R&D系統公司，目錄號664-LI/CF）和人LTα1β2（R&D系統公司，目錄號8884-LY/CF）來製備人LIGHT-Alexa 647和人LTα1β2-Alexa 647。經由基於FACS的受體-配體測定，測定人LTβR結合抗體或包含LTβR結合抗體的雙特異性抗體不阻斷人LIGHT和人LTa1b2與HEK 293T細胞上暫態表現的人LTβR結合的能力。將樣本與人IgG共染色，以另外評估配體的非阻斷是否係由於LTβR抗體與HEK293T細胞上暫態表現的人LTβR不結合。如果LTβR抗體不阻止人LIGHT-Alexa 647或人LTα1β2-Alexa 647與HEK 293T細胞上暫態表現的人LTβR結合，則流動式細胞分析術幾何平均值（GeoMean）訊號相對於在不存在LTβR抗體的情況下獲得的GeoMean訊號降低，從而由於非競爭而導致配體結合的低百分比抑制值。
簡言之，藉由按照製造商制定的方案使用表現huLTβR cDNA[pTT5.2:VK1O2O12::huLTβR(31-435) C173003 (DNA-38098)]的表現載體以及Opti-MEM®減少血清培養基（吉布柯公司（Gibco），目錄號：31985-088）和293FectinTM試劑（吉布柯公司 REF:12347-019，P/N 53020LT）轉染，在宿主人胚胎腎293細胞上表現人LTβR。將7.5 uL人LTβR特異性單株抗體在劑量滴定曲線中滴定，並在4°C下與7.5 uL轉染的hu LTβR細胞在FACS緩衝液[1XPBS+2%胎牛血清（西格瑪奧德里奇公司（Sigma-Aldrich），目錄號F2442-500 mL）]中使用96孔FACS板（康寧公司（Corning）目錄號3702）孵育1小時。然後，在FACS緩衝液中以1.112 µg/mL添加15 µL人LIGHT-Alexa 647或人LTα1β2-Alexa 647，以及5 ug/mL Alexa Fluor 488軛合的AffiniPure山羊抗人IgG（傑克遜免疫研究公司，目錄號：109-545-098），並在室溫下在黑暗中孵育20分鐘。人LIGHT-Alexa 647或人LTα1β2-Alexa 647的最終濃度為0.556 µg/mL，Alexa 488山羊抗人IgG的最終濃度係2.5 ug/mL。將FACS板加入170 uL FACS緩衝液，然後在FACS緩衝液中藉由以2500 RPM離心2分鐘洗滌一次。根據製造商之建議，將樣本重懸在45 µL FACS緩衝液中，並在帶有Intellicyt公司自動進樣器的iQue流式細胞儀上讀取；在Intellicyt公司ForeCyt®企業客戶6.2版（R3）上進行數據分析。
將人LIGHT-Alexa 647或人LTα1β2-Alexa 647的量藉由流動式細胞分析術分析由GeoMean螢光訊號定量，並將該訊號轉換為受體-配體（R-L）相互作用的抑制百分比。在LTβR抗體存在下配體結合訊號的損失計算為R-L結合的抑制百分比。藉由對4個重複的配體-Alexa 647訊號的GeoMean訊號取平均值來確定人LIGHT-Alexa 647或人LTα1β2-Alexa 647的最大GeoMean訊號，該等重複與HEK 293T細胞上暫態表現的人LTβR一起孵育。人LIGHT-Alexa 647或人LTα1β2-Alexa 647的最小GeoMean訊號係由與用模擬載體轉染的HEK 293T細胞一起孵育的配體-Alexa 647訊號的GeoMean訊號確定的。使用以下等式計算人LTβR抗體或同種型對照抗體對人LTβR-His：配體（人LIGHT或人LTα1β2）的抑制百分比： 抑制百分比（%）= 1-（實驗GeoMean-最小GeoMean）/（最大GeoMean-最小GeoMean）
對於一些LTβR抗體，當實驗GeoMean訊號高於最大GeoMean訊號時，獲得了負抑制百分比值，這可能是由於LTβR抗體與HEK 293T細胞上暫態表現的人LTβR結合的確認性變化，從而可能導致更高的配體-Alexa 647 GeoMean訊號（即，與不存在LTβR抗體相比，在其存在下允許更高水平的內源性配體結合）。
使用Alexa 488山羊抗人IgG染劑評估與HEK293T細胞上暫態表現的與人LTβR結合的LTβR抗體的量，並使用相對於不相關上清液的GeoMean特異性倍數的計算，藉由流動式細胞分析術分析的GeoMean螢光訊號進行定量。大於2.0的GeoMean計算值用作LTβR抗體與HEK293T細胞上暫態表現的人LTβR結合的臨界值。
圖24A和24B係繪製隨著所指示的促效劑LTβR結合蛋白濃度的增加，LIGHT（圖24A）和LTα1β2（圖24B）與HEK293T細胞上暫態表現的LTβR的結合受到抑制的圖。人IgG1同種型和市售大鼠抗人LTβR抗體（Carlos-1；英傑公司；目錄號MA125845）分別作為陰性和陽性對照。下表29中提供了測試促效劑LTβR結合蛋白的配體阻斷活性的總結。圖24C顯示了所指示結合分子的濃度依賴性LTβR結合。 [ 表 29] . 選擇促效劑 LT β R 結合蛋白的 LT β R 配體阻斷活性的總結
LTβR 結合物 ID 形式 LTα1β2 LIGHT
19323 (35F5) 單株抗體 在任何測試濃度下均無阻斷活性 在任何測試濃度下均無阻斷活性
19324 (36G2) 單株抗體 僅在＞ 8 nM濃度下觀察到阻斷活性（在＜ 8 nM濃度下為非阻斷物） 僅在＞ 8 nM濃度下觀察到阻斷活性（在＜ 8 nM濃度下為非阻斷物）
19321 (31A3) 單株抗體 在＞ 0.3 nM下，表現出LTα1β2結合的低水平（20%）抑制 在任何測試濃度下均無阻斷活性
19322 (34D1) 單株抗體 在所有測試濃度下阻斷LTα1β2-LTβR結合 在任何測試濃度下均無LIGHT阻斷活性。
19327 (44B1) 單株抗體 在高濃度下阻斷LTα1β2-LTβR 在任何測試濃度下均無LIGHT阻斷活性
19326 (56577) 雙特異性結合蛋白 濃度依賴性LTα1β2-LTβR阻斷 濃度依賴性LIGHT-LTβR阻斷
19325 (56575) 雙特異性結合蛋白 在任何測試濃度下均無LTα1β2阻斷活性。 在任何測試濃度下均無LIGHT阻斷活性。
19319 (52208) 雙特異性結合蛋白 在任何測試濃度下均無LTα1β2阻斷活性。 在任何測試濃度下均無LIGHT阻斷活性。
還評估了雙特異性LTβR結合蛋白的LTβR配體阻斷活性。圖25A和26A係顯示所指示的LTβR-LRRC15雙特異性結合物抑制LTα1β2與細胞表現的LTβR結合的圖，圖25B和26B顯示了相同的LTβR-LRRC15雙特異性結合物抑制LIGHT與細胞表現的LTβR結合。上表29中提供了所測試的LTβR雙特異性結合蛋白的配體阻斷活性的總結。圖25C和26C顯示了所指示的雙特異性結合蛋白的濃度依賴性LTβR結合。
該數據顯示，結合CRD4的LTβR抗體19325（LIBC219081）和19319（LIBC218979）在以抗體和雙特異性結合蛋白形式測試的所有濃度下均不抑制LTα1β2或LIGHT與LTβR結合。 實例 9 ：重新篩選融合瘤池以鑒定額外的 LT β R CRD4 結合非配體阻斷抗體
9.1 從融合瘤池中產生選殖抗 LT β R 融合瘤。將來自收穫1至6的XenoMouse®融合瘤培養物解凍，並在DMEM選擇培養基中生長3-4天。在FACS富集分選前一天將培養基改為BDQY融合瘤培養基。在10 mL無菌FACS緩衝液中洗滌細胞，然後在4°C下，在2 mL反應體積中與3 µg/mL濃度的生物素標記的重組人LTβR（R&D系統公司，目錄號：7538LR）和20 μg/mL濃度的人LTα1β2-Alexa 647（R&D系統公司，目錄號8884-LY/CF）一起孵育30分鐘。對於所有融合瘤培養物，在此步驟中還添加了100 µg/mL多選殖人IgG（傑克遜免疫研究公司，目錄號：009-000-003）以阻斷抗Fc結合物。在10 mL FACS緩衝液中洗滌一次後，將1 mL抗體混合物添加到細胞中，該抗體混合物含有各5 µg/mL Alexa Fluor 488軛合的山羊抗人IgG Fc Fab（傑克遜免疫研究公司，目錄號：109-547-008）和BV421軛合的鏈黴親和素（BD生物科學公司（BD biosciences），目錄號：563259）。然後將細胞在4°C下孵育30分鐘。孵育後，將細胞在10 mL FACS緩衝液中洗滌，重懸於2 mL含有5 µL 7-AAD（BD Pharmingen公司，目錄號：559925）的BDQY融合瘤培養基中，然後通過40微米細胞過濾器以去除任何團塊。藉由對活細胞群體進行門控在BD FACSAria上對細胞進行批量分選，然後對雙陽性Alexa Fluor 488 IgG和BV421 LTβR螢光訊號進行分選，最後對Alexa Fluor 647 LTα1β2和BV421 LTβR螢光訊號進行分選。在第一輪富集分選以使目標群體從＜ 1%到＞ 20%之後，將靶細胞單細胞分選到含有BDQY融合瘤培養基的384孔微量滴定板上，並培養長達2週，然後收集上清液進行篩選。
9.2 相對表位分組 / 分析。將生物素醯化山羊抗人IgG Fc捕獲抗體（傑克遜免疫研究公司，目錄號：109-065-098）以2 µg/mL濃度與鏈黴親和素包被的、經獨特條碼編碼LumAvidin Beads®（LumAvidin Microspheres，路明克斯公司，美國德克薩斯州奧斯丁）在室溫下在黑暗中偶合30分鐘，並洗滌兩次。將4 µg/mL濃度的參考抗體融合瘤上清液樣本與山羊抗人IgG Fc包被的珠粒在室溫下在黑暗中孵育30分鐘，並洗滌三次。將His-標記的人LTβR抗原（VK1O2O12::huLTβR(31-227)::8xHis，46449-2）以60 nM製備，並與5 ug/mL Chrompure人IgG全分子（傑克遜免疫研究公司，目錄號：009-000-003）結合，在室溫下在黑暗中與包被的珠粒孵育30分鐘，並洗滌兩次。將珠粒重懸於含有Stabilguard®（舒爾默迪克斯公司（SurModics）SG01）的FACS緩衝液中。
將含有歸一化（4 ug/mL）測試抗體（融合瘤上清液）的樣本孔與Zenon™抗人Fab（Zenon™ Alexa Fluor™ 488人IgG標記套組，賽默飛世爾科技公司，目錄號：Z25402）以0.06 ug標記/孔在室溫下在黑暗中孵育15分鐘。然後將Chrompure人IgG全分子（傑克遜免疫研究公司，目錄號：009-000-003）以7.2 ug塊/孔添加到Zenon™標記的樣本孔中，並在室溫下在黑暗中孵育15分鐘。
將抗原包被的參考抗體結合珠粒合併，然後將該等珠粒分到含有Zenon™標記的測試抗體（融合瘤上清液）樣本（或陰性對照）的單個樣本孔中，在室溫下在黑暗中孵育30分鐘，並洗滌兩次。測試抗體（融合瘤上清液）的最終濃度為1 ug/mL。將樣本洗滌兩次以去除未結合的檢測試劑，並重懸於FACS緩衝液中。使用Intellicyt公司iQue™ Screener平臺對樣本進行分析。為了確定各個測試抗體的抗體競爭/結合譜，從每個競爭/結合反應（即整個參考抗體組）的參考抗體加測試抗體訊號中減去僅參考抗體結合訊號。單個抗體結合譜被定義為每個競爭/結合反應的淨結合值的集合。然後藉由計算每個測試抗體譜之間的決定係數來評估單個譜之間的相似程度。然後將彼此顯示高度相似性（R2 ＞ 0.7）的測試抗體分組到共同的分組譜中。使用這種方法，將LTβR結合抗體細分為7個獨特的分組譜（A、B、C、D、F、G和H）。已鑒定出與本文鑒定為19325（41B2）和19319（23E9）的LTβR抗體具有共同分組譜的候選抗體，該等抗體藉由HDX-MS分析（見實例6.2）與LTβR的CRD4結合，並在圖27的表中提供。使用內部表位定位測定確認該等候選抗體結合LTβR的CRD4。
9.3 使用基於細胞的測定確認在重新篩選中鑒定出的 LT β R 抗體的非配體阻斷活性。經由實例8中描述的基於FACS的受體-配體測定，測定含有人LTβR結合抗體（5 µg/mL）的融合瘤上清液不阻斷人LIGHT和人LTα1β2與HEK 293T細胞上暫態表現的人LTβR結合的能力。一式兩份測試每種含有人LTβR結合抗體的融合瘤上清液的配體阻斷活性。圖27的表中提供了與和LTβR的CRD4結合的、本文鑒定為19325（41B2）和19319（23E9）的LTβR抗體具有表位分組譜的每種LTβR結合抗體的抑制百分比。如上文所描述的，當實驗GeoMean訊號高於最大GeoMean訊號時，獲得了負抑制百分比值，這可能是由於LTβR抗體與HEK 293T細胞上暫態表現的人LTβR結合的確認性變化，從而可能導致更高的配體-Alexa 647 GeoMean訊號（即，與不存在LTβR抗體相比，在其存在下允許更高水平的內源性配體結合）。
9.4 使用 Carterra 測定確認在重新篩選中鑒定的 LT β R 抗體的非配體阻斷活性。為了進一步確認LTβR抗體的非配體阻斷活性，經由基於Carterra的受體-配體測定，測定含有LTβR結合抗體的融合瘤上清液阻斷人LIGHT（R&D系統公司，目錄號664-LI/CF）和人LTα1β2（R&D系統公司，目錄號8884-LY/CF）與人LTβR-His結合的能力。如果LTβR抗體阻止人LIGHT或人LTα1β2與人LTβR-His結合，則將受體暴露於抗體後注射配體的響應（RU）不會相對於存在單獨LTβR受體時達到的RU增加，從而防止由於競爭而形成三組分夾層複合物。圖27的表顯示了藉由此Caterra方法測量的選定融合瘤上清液樣本的受體-配體相互作用阻斷能力。
簡言之，在25°C下在Carterra ®LSA上，在預載入生物素醯化抗huFc VHH（Chromotek公司，目錄號：shurbGB-1）的HBSTE緩衝液[10 mM HEPES，pH7.4，150 mM NaCl，0.05% tween-20和1 mM EDTA；自製]的鏈黴親和素（SA）晶片（SAHC30M，Carterra零件號4294）上捕獲人LTβR結合抗體組。將抗體歸一化並稀釋至2 µg/mL，並藉由96通道打印頭在晶片的斑點上列印15 min。然後使用單個流通池以300 nM向晶片注射人LTβR-His，結合時間為5 min，以使受體結合達到飽和，解離時間為1 min，這是軟體使解離最小化所允許的最小值。隨後立即以150 nM注射人LIGHT或人LTα1β2配體，結合5 min，解離1 min。在重新列印用於其他配體測定的抗體之前，使用10 mM甘胺酸，pH 1.5（Carterra零件號3639）進行再生。
使用Kinetics軟體（Carterra公司）藉由RU定量LTβR抗體載入、人LTβR-His受體結合和人LIGHT或人LTα1β2配體夾層。夾層水平計算為配體RU與受體RU的比率。用在相同實驗設置中測量的不相關人IgG1對照確定最低夾層水平。對於一些LTβR抗體，夾層水平值較低，可能是由於抗體濃度低、注射體積變化效應、對LTβR的弱結合物或LTβR解離速度快。由於無法確定該等抗體係非阻斷物還是阻斷物，因此，在結果表中被標記為「NA」。
9.5 親和力差距分析。在25°C下在Carterra LSA上，在HBSTE運行緩衝液[10 mM HEPES，pH7.4，150 mM NaCl，0.05% tween-20和1 mM EDTA]中測量親和力。使用10 mM甘胺酸（pH 1.5）（Carterra零件號3639）進行再生。將含有LTβR結合抗體的融合瘤上清液歸一化並稀釋至0.3 µg/mL，並使用96通道打印頭將該等上清液在預先裝載有生物素醯化抗huFc VHH（Chromotek公司，目錄號：shurbGB-1）的鏈黴親和素（SA）晶片（SAHC30M，Carterra零件號4294）的斑點上列印10 min。緩衝液孔和不相關人IgG1樣本用作陰性對照。將靶標、人或cyno LTβR作為分析物以243 nM、81 nM、27 nM、9 nM、3 nM和1 nM注射。結合時間為5 min，解離時間為30分鐘。數據係雙背景參考，因為從數據中減去了晶片上的參考斑點和0 nM分析物濃度。使用1 : 1朗格繆爾傳質結合模型在Kinetics軟體（Carterra公司）中分析數據。人和cyno親和力差距的結果顯示在圖27的表中。
本文引用的每個參考文獻針對它所教導的全部內容和出於所有目的均特此藉由引用將其全部併入。
本揭露之範圍不受本文所述之特定實施方式的限制，該等實施方式旨在作為本揭露之各個實施方式的單個說明，並且揭露了功能上等效的方法和組分。實際上，除了本文中顯示和描述的那些之外，根據前述描述和附圖，本發明之各種修改對於熟悉該項技術者將變得顯而易見。這類改變旨在落入所附申請專利範圍之範圍內。
無
[ 圖 1A-1B]顯示了靶向腫瘤相關抗原（TAA）的LTβR激動作用增加表現人EpCAM的B16F10黑色素瘤腫瘤模型中的淋巴細胞浸潤。如圖1A的圖表所示，相對於投與同種型對照抗體，在3 mg/kg劑量的人EpCAM x 鼠LTβR雙特異性抗體的情況下，浸潤腫瘤組織的T細胞（CD3 +T細胞）的總數增加。如圖1B的圖表所示，相對於投與同種型對照抗體，浸潤腫瘤組織的B細胞（CD19 +B細胞）的總數隨著huEpCAM x muLTβR BsAb的劑量（0.3、3和30 mg/kg）的增加而增加。
[ 圖 2]顯示了在表現人EpCAM的B16F10黑色素瘤腫瘤模型中，靶向腫瘤相關抗原（TAA）的LTβR激動作用誘導HEV形成。圖2顯示了同種型對照治療（上圖像）和3 mg/kg的huEpCAM-muLTβR雙特異性抗體治療（下圖像）後，腫瘤組織中HEV形成的免疫組織化學分析，如本文實例1所描述的。
[ 圖 3]顯示了靶向腫瘤相關抗原（TAA）的LTβR激動作用在人KPC胰臟腫瘤模型中增加T細胞浸潤。圖3的圖表顯示了在向攜帶KPC M5腫瘤的小鼠投與兩種不同工具huLRRC15 x muLTβR BsAb後，每克腫瘤組織的T細胞計數增加。在用流動式細胞分析術評估腫瘤之前，每週投與兩次huLRRC15 x muLTβR BsAb，共3劑。Dunnett多重比較檢驗的單因子變異數分析（One-way ANOVA）顯示了相對於同種型沒有顯著差異，但治療確實顯示出T細胞浸潤的上升趨勢。圖表中表示了平均值和SEM。
[ 圖 4]顯示了靶向腫瘤相關抗原（TAA）的LTβR激動作用在人KPC胰臟腫瘤模型中抑制腫瘤生長。圖4的圖表顯示了用PD-1抗體、huLRRC15 x muLTβR BsAb或該等抗體的組合治療的KPC M5胰臟腫瘤模型的平均腫瘤體積。huLRRC15 x muLTβR BsAb單一療法（▼）比PD-1單一療法（■）產生的效果更大。huLRRC15 x muLTβR BsAb和PD-1 Ab組合確實顯示出更大的TGI，但兩個治療組之間的差異沒有統計學顯著性。Tukey多重比較檢驗的雙因子變異數分析（Two-way ANOVA）表明，huLRRC15 x muLTbR BsAb和huLRRC15 x muLTbR BsAb + PD-1 Ab抗體相對於同種型的顯著性（p ＜ 0.0001）。N = 10，圖表中表示了平均值和SEM。
[ 圖 5]包含表A和表B，總結了在第一輪融合瘤篩選中鑒定的LTβR抗體的表徵數據。表A包含功能效力值（EC 50）和結合數據，即LTβR抗體與TNRFSF1和TNRFSF2、小鼠LTβR和食蟹猴LTβR結合。數據呈現為模擬轉染細胞的GeoMean倍數。表A還顯示了在指示LTβR抗體存在下，使用基於單點FACS珠粒的受體-配體測定評估的人LIGHT或人LTα1β2配體與人LTβR結合的抑制百分比，如實例4.6中所述。表B顯示了LTβR抗體與人和食蟹猴LTβR的結合親和力測量值（ka、kd和KD）。
[ 圖 6]鑒定了參與同LTβR抗體，LIBC No. 218990（Bio. Reg. No. 19320 / Well ID 30H1）之結合相互作用的LTβR胞外結構域（ECD）（SEQ ID NO: 4）的區域，如藉由氫-氘交換（HDX）質譜（MS）確定的（參見實例6.1.1）。顯示了對應於單獨或與抗體複合的LTβR胞外結構域（ECD）的殘基56-64和81-101的肽之氘攝取圖表。相對於非複合肽，複合物衍生肽中免於氘交換表明，LTβR ECD的該等區域內的一或多個殘基，即殘基57-64和82-101參與結合相互作用（注意，肽的N端殘基沒有用於測量的醯胺氫，因此在報告表位區域時被排除在外）。
[ 圖 7]鑒定了參與同LTβR抗體，LIBC No. 218944（Bio. Reg No. 19321 / Well ID 31A3）之結合相互作用的LTβR ECD（SEQ ID NO: 4）的區域，如藉由HDX MS確定的（參見實例6.1.1）。顯示了對應於單獨或與抗體複合的LTβR ECD的殘基3-9、20-29和38-47的肽之氘攝取圖表。相對於非複合肽，複合物衍生肽中免於氘交換表明，LTβR ECD的該等區域內的一或多個殘基，即殘基4-9、21-29和39-47參與結合相互作用（注意，肽的N端殘基沒有用於測量的醯胺氫，因此在報告表位區域時被排除在外）。
[ 圖 8]鑒定了參與同LTβR抗體，LIBC No. 219058（Bio. Reg. No. 19324 / Well ID 36G2）之結合相互作用的LTβR ECD（SEQ ID NO: 4）的區域，如藉由HDX MS確定的（參見實例6.1.1）。顯示了對應於單獨或與抗體複合的LTβR ECD的殘基56-64和81-101的肽之氘攝取圖表。相對於非複合肽，複合物衍生肽中免於氘交換表明，LTβR ECD的該等區域內的一或多個殘基，即殘基57-64和82-101參與結合相互作用（注意，肽的N端殘基沒有用於測量的醯胺氫，因此在報告表位區域時被排除在外）。
[ 圖 9]鑒定了參與同LTβR抗體，LIBC No. 219081（Bio Reg. No. 19325 / Well ID 41B2）之結合相互作用的LTβR ECD（SEQ ID NO: 4）的區域，如藉由HDX MS確定的（參見實例6.1.1）。顯示了對應於單獨或與抗體複合的LTβR ECD的殘基167-179的肽之氘攝取圖表。相對於非複合肽，複合物衍生肽中免於氘交換表明，LTβR ECD的該等區域內的一或多個殘基，即殘基168-179參與結合相互作用（注意，肽的N端殘基沒有用於測量的醯胺氫，因此在報告表位區域時被排除在外）。
[ 圖 10]鑒定了參與同LTβR抗體，LIBC No. 219097（Bio. Reg. No. 19326 / Well ID 43D9）之結合相互作用的LTβR ECD（SEQ ID NO: 4）的區域，如藉由HDX MS確定的（參見實例6.1.1）。顯示了對應於單獨或與抗體複合的LTβR ECD的殘基38-42、37-47、56-64和65-70的肽之氘攝取圖表。相對於非複合肽，複合物衍生肽中免於氘交換表明，LTβR ECD的該等區域內的一或多個殘基，即殘基39-42和57-70參與結合相互作用（注意，肽的N端殘基沒有用於測量的醯胺氫，因此在報告表位區域時被排除在外）。
[ 圖 11]鑒定了參與同LTβR抗體，LIBC No. 218979（Bio. Reg. No. 19319 / Well ID 23E9）之結合相互作用的LTβR ECD（SEQ ID NO: 4）的區域，如藉由HDX MS確定的（參見實例6.1.2）。顯示了對應於單獨或與抗體複合的LTβR ECD的殘基154-166、167-177、167-181和178-193的肽之氘攝取圖表。相對於非複合肽，複合物衍生肽中免於氘交換表明，LTβR ECD的該等區域內的一或多個殘基，即殘基168-178參與結合相互作用（注意，肽的N端殘基沒有用於測量的醯胺氫，因此在報告表位區域時被排除在外）。
[ 圖 12]鑒定了參與同LTβR抗體，LIBC No. 219051（Bio. Reg. No. 19323 / Well ID 35F5）之結合相互作用的LTβR ECD（SEQ ID NO: 4）的區域，如藉由HDX MS確定的（參見實例6.1.2）。顯示了對應於單獨或與抗體複合的LTβR ECD的殘基1-9、1-20（未糖基化和糖基化）、10-20和19-28的肽之氘攝取圖表。相對於非複合肽，複合物衍生肽中免於氘交換表明，LTβR ECD的區域1-19內的一或多個殘基參與結合相互作用（注意，Q1已轉化為pyro-Q，其含有可測量的醯胺氫）。
[ 圖 13]鑒定了參與同LTβR結合相互作用的LIBC No. 218990（19320/30H1）的可變重（VH）和可變輕（VL）結構域區域。顯示了單獨或與LTβR結合的VH和VL結構域肽之氘攝取圖表。相對於非複合肽，複合肽中免於氘交換表明，抗體的該等區域內的一或多個CDR殘基參與結合相互作用。將包括該等一或多個殘基的區域在所示的VH和VL序列中加框，並且將每個可變結構域的三個CDR區域加下劃線。
[ 圖 14A-14B]鑒定了參與同LTβR結合相互作用的LIBC No. 218944（19321/31A3）的可變重（VH）和可變輕（VL）結構域區域。顯示了單獨或與LTβR結合的VH（圖14A）和VL（圖14B）結構域肽之氘攝取圖表。相對於非複合肽，複合肽中免於氘交換表明，抗體的該等區域內的一或多個CDR殘基參與結合相互作用。將包括該等一或多個殘基的區域在所示的VH（圖14A）和VL（圖14B）序列中加框，並且將每個可變結構域的三個CDR區域加下劃線。
[ 圖 15]鑒定了參與同LTβR結合相互作用的LIBC No. 219058（19324/36G2）的可變重（VH）和可變輕（VL）結構域區域。顯示了單獨或與LTβR結合的VH和VL結構域肽之氘攝取圖表。相對於非複合肽，複合肽中免於氘交換表明，抗體的該等區域內的一或多個CDR殘基參與結合相互作用。將包括該等一或多個殘基的區域在所示的VH和VL序列中加框，並且將每個可變結構域的三個CDR區域加下劃線。
[ 圖 16A-16B]鑒定了參與同LTβR結合相互作用的LIBC No. 219081（19325/41B2）的可變重（VH）和可變輕（VL）結構域區域。顯示了單獨或與LTβR結合的VH（圖16A）和VL（圖16B）結構域肽之氘攝取圖表。相對於非複合肽，複合肽中免於氘交換表明，抗體的該等區域內的一或多個CDR殘基參與結合相互作用。將包括該等一或多個殘基的區域在所示的VH（圖16A）和VL（圖16B）序列中加框，並且將每個可變結構域的三個CDR區域加下劃線。
[ 圖 17A-17B]鑒定了參與同LTβR結合相互作用的LIBC No. 219097（19326/43D9）的可變重（VH）和可變輕（VL）結構域區域。顯示了單獨或與LTβR結合的VH（圖17A）和VL（圖17B）結構域肽之氘攝取圖表。相對於非複合肽，複合肽中免於氘交換表明，抗體的該等區域內的一或多個CDR殘基參與結合相互作用。將包括該等一或多個殘基的區域在所示的VH（圖17A）和VL（圖17B）序列中加框，並且將每個可變結構域的三個CDR區域加下劃線。
[ 圖 18A-18B]鑒定了參與同LTβR結合相互作用的LIBC No. 218979（Bio. Reg. No. 19319 / Well ID 23E9）的可變重（VH）和可變輕（VL）結構域區域。顯示了單獨或與LTβR結合的VH（圖18A）和VL（圖18B）結構域肽之氘攝取圖表。相對於非複合肽，複合肽中免於氘交換表明，抗體的該等區域內的一或多個CDR殘基參與結合相互作用。將包括該等一或多個殘基的區域在所示的VH（圖18A）和VL（圖18B）序列中加框，並且將每個可變結構域的三個CDR區域加下劃線。
[ 圖 19A-19B]鑒定了參與同LTβR結合相互作用的LIBC No. 219051（Bio. Reg. No. 19323 / Well ID 35F5）的可變重（VH）和可變輕（VL）結構域區域。顯示了單獨或與LTβR結合的VH（圖19A）和VL（圖19B）結構域肽之氘攝取圖表。相對於非複合肽，複合肽中免於氘交換表明，抗體的該等區域內的一或多個CDR殘基參與結合相互作用。將包括該等一或多個殘基的區域在所示的VH（圖19A）和VL（圖19B）序列中加框，並且將每個可變結構域的三個CDR區域加下劃線。
[ 圖 20]係顯示huLTβR x huCLDN6雙特異性抗體（PUR149204-4、PUR149205-4、PUR149212-5和PUR149213-4）之效力的圖表。在所指示的huLTβR x huCLDN6雙特異性抗體濃度增加的情況下，藉由與表現CLDN6的倉鼠卵巢細胞（CHO）共培養的表現LTβR之人黑色素瘤細胞釋放的IL-8來測量效力。y軸的「訊號」表示藉由665 nm處訊號與615 nm處訊號的比率計算的相對IL-8釋放。
[ 圖 21]係顯示huLTβR x huCLDN18.2雙特異性抗體（PUR149206-4、PUR149214-4和PUR149215-4）之效力的圖表。在所指示的huLTβR x huCLDN18.2雙特異性抗體濃度增加的情況下，藉由與表現CLDN18.2的CHO細胞共培養的表現LTβR之人黑色素瘤細胞釋放的IL-8來測量效力。y軸的「訊號」表示藉由665 nm處訊號與615 nm處訊號的比率計算的相對IL-8釋放。
[ 圖 22]係顯示huLTβR x huMUC17雙特異性抗體（PUR149211-4、PUR149218-4和PUR149219-4）之效力的圖表。在所指示的huLTβR x  huMUC17雙特異性抗體濃度增加的情況下，藉由與表現MUC17的CHO細胞共培養的表現LTβR之人黑色素瘤細胞釋放的IL-8來測量效力。y軸的「訊號」表示藉由665 nm處訊號與615 nm處訊號的比率計算的相對IL-8釋放。
[ 圖 23]係顯示huLTβR x huLRRC15雙特異性抗體（44245-5、45147-3和52208-3）之效力的圖表。在huLTβR x huLRRC15雙特異性抗體濃度增加的情況下，藉由與表現LRRC15的Saos-2細胞共培養的表現LTβR之人黑色素瘤細胞釋放的IL-8來測量效力。y軸的「訊號」表示藉由665 nm處訊號與615 nm處訊號的比率計算的相對IL-8釋放。
[ 圖 24A-24C]係顯示在本文所描述的各種LTβR抗體濃度增加的情況下，LIGHT（圖24A）和LTα1β2（圖24B）抑制作用的圖表。圖24C係顯示抗LTβR抗體與由HEK293細胞表現的LTβR結合的圖表，以證實非配體阻斷活性不是由於測試抗體的非受體結合所致。
[ 圖 25A-25C]係顯示在如本文所描述的各種LTβR-LRRC15雙特異性抗體濃度增加的情況下，LIGHT（圖25A）和LTα1β2（圖25B）抑制作用的圖表。圖25C係顯示LTβR-LRRC15雙特異性抗體與HEK293細胞表現的LTβR結合的圖表，以證實非配體阻斷活性不是由於測試雙特異性抗體的非受體結合所致。
[ 圖 26A-26C]係顯示在如本文所描述的所指定LTβR-LRRC15雙特異性抗體（52208）濃度增加的情況下，LTα1β2（圖26A）和LIGHT（圖26B）抑制作用的圖表。圖26C係顯示LTβR-LRRC15雙特異性抗體與HEK293細胞表現的LTβR結合的圖表，以證實非配體阻斷活性不是由於測試雙特異性抗體的非受體結合所致。
[ 圖 27]提供了總結在重新篩選XenoMouse ®融合瘤池中鑒定的額外促效劑結合LTβR CRD4的非配體阻斷抗體的表格。使用實例9.3中描述的基於細胞的測定和實例9.4中描述的Caterra測定評估抗體的非配體阻斷活性。
無
TW202506733A_113121515_SEQL.xml

Claims (47)

  1. 一種促效劑淋巴毒素β受體（LTβR）結合蛋白，其中所述結合蛋白結合包含人LTβR富含半胱胺酸結構域4（CRD4）的一或多個殘基的表位，其中人LTβR CRD4包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基169-211，並且其中所述結合蛋白 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合或 (b) 不抑制LTα1β2與LTβR結合。
  2. 如請求項1所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中所述結合蛋白 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合且 (b) 不抑制LTα1β2與LTβR結合。
  3. 如請求項1所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中該表位包含SEQ ID NO: 1之位置197-209處的LTβR CRD4的一或多個殘基。
  4. 如請求項1-3中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中在該促效劑LTβR結合蛋白存在下對LIGHT和/或LTα1β2與LTβR結合的抑制在基於細胞的受體-配體結合測定中進行測量，所述測定包括以下步驟： 將表現LTβR的細胞與含有該促效劑LTβR結合蛋白的培養基孵育1小時； 在所述孵育後，使該等表現LTβR的細胞與可檢測的LIGHT配體、可檢測的LTα1β2配體或其組合接觸，以允許該等可檢測的配體與LTβR結合； 在所述接觸後，在該LTβR結合蛋白存在下，檢測與表現LTβR的細胞結合的可檢測的LIGHT和/或LTα1β2配體；以及 基於所述檢測將該促效劑LTβR結合蛋白鑒定為不抑制LIGHT或LTα1β2與LTβR結合。
  5. 如請求項1-3中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中所述結合蛋白包含： 與SEQ ID NO: 121或SEQ ID NO: 123具有至少90%序列同一性的重鏈可變結構域（VH）胺基酸序列，和 與SEQ ID NO: 122或SEQ ID NO: 124具有至少90%序列同一性的輕鏈可變結構域（VL）胺基酸序列。
  6. 如請求項1-3中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中所述結合蛋白包含： 與SEQ ID NO: 121和SEQ ID NO: 123具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列，和 與SEQ ID NO: 122和SEQ ID NO: 124具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列。
  7. 如請求項1-3中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中所述結合蛋白包含： 與SEQ ID NO: 121和SEQ ID NO: 123具有至少95%序列同一性的VH胺基酸序列，和 與SEQ ID NO: 122和SEQ ID NO: 124具有至少95%序列同一性的VL胺基酸序列。
  8. 如請求項1-7中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中所述結合蛋白包含： VH，其包含HCDR1胺基酸序列X 1YX 3MX 5（SEQ ID NO: 5），其中X 1為S或N；X 3為G、D或A；並且X 5為H或Y；HCDR2胺基酸序列X 1IX 3YDX 6X 7X 8X 9Y X 11X 12DSVKG（SEQ ID NO: 6），其中X 1為A或V；X 3為W或R；X 6為E或G；X 7為S、R或T；X 8為N或K；X 9為K、R或Q；X 11為H或Y；並且X 12為A或E；以及HCDR3胺基酸序列X 1RX 3X 4X 5X 6X 7X 8X 9YYGX 13X 14V（SEQ ID NO: 7），其中X 1為D或E；X 3為V、G或I；X 4為V、P或A；X 5為A、Y或G；X 6為R、A、G或H；X 7為P或G；X 8為G、N、D、Y、A或H；X 9為Y、T或F；X 13為L或M；並且X 14為D或A； VL，其包含LCDR1胺基酸序列SGDX 4LPX 7X 8YX 10Y（SEQ ID NO: 62），其中X 4為A或T；X 7為E、K、Q、D或N；X 8為Q或H；並且X 10為A或T；LCDR2胺基酸序列KDNERPS（SEQ ID NO: 63）；以及LCDR3胺基酸序列QSX 3DX 5SX 7X 8YX 10X 11（SEQ ID NO: 64），其中X 3為A或T；X 5為S、G或N；X 7為G或A；X 8為T、S或A；X 10為V或M；並且X 11為I或V。
  9. 如請求項1-8中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中所述結合蛋白包含： 與SEQ ID NO: 121具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列、以及SEQ ID NO: 5的HCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 6的HCDR2胺基酸序列和SEQ ID NO: 7的HCDR3胺基酸序列；以及 與SEQ ID NO: 122具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列、以及SEQ ID NO: 62的LCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 63的LCDR2胺基酸序列和SEQ ID NO: 64的LCDR3胺基酸序列。
  10. 如請求項1-9中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中所述結合蛋白包含： VH，其包含分別為SEQ ID NO: 11-13的HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列，以及VL，其包含分別為SEQ ID NO: 68-70的LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列；或 VH，其包含分別為SEQ ID NO: 8-10的HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列，以及VL，其包含分別為SEQ ID NO: 65-67的LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列。
  11. 如請求項1-10中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中該結合蛋白係抗體。
  12. 如請求項1-10中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，其中該結合蛋白係雙特異性結合蛋白。
  13. 一種雙特異性淋巴毒素β受體（LTβR）結合蛋白，所述結合蛋白包含： LTβR結合結構域，其中該LTβR結合結構域結合包含人LTβR富含半胱胺酸結構域4（CRD4）的一或多個殘基的表位，其中所述LTβR CRD4包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基169-211；以及 腫瘤相關抗原結合結構域， 其中該雙特異性結合蛋白激動LTβR活性，並且 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合或 (b) 不抑制LT1α2β與LTβR結合。
  14. 如請求項13所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中所述結合蛋白 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合且 (b) 不抑制LTα1β2與LTβR結合。
  15. 如請求項13所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該表位包含SEQ ID NO: 1之位置197-209處的LTβR CRD4的一或多個殘基。
  16. 如請求項13-15中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中在該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白存在下對LIGHT和/或LTα1β2與LTβR結合的抑制在基於細胞的受體-配體結合測定中進行測量，所述測定包括以下步驟： 將表現LTβR的細胞與含有該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白的培養基孵育1小時； 在所述孵育後，使該等表現LTβR的細胞與可檢測的LIGHT配體、可檢測的LTα1β2配體或其組合接觸，以允許該等可檢測的配體與LTβR結合； 在所述接觸後，在該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白存在下，檢測與表現LTβR的細胞結合的可檢測的LIGHT和/或LTα1β2配體；以及 基於所述檢測將該雙特異性促效劑LTβR結合蛋白鑒定為不抑制LIGHT或LTα1β2與LTβR結合。
  17. 如請求項13所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該LTβR結合結構域包含： 與SEQ ID NO: 121或SEQ ID NO: 123具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列，和 與SEQ ID NO: 122或SEQ ID NO: 124具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列。
  18. 如請求項13所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該LTβR結合結構域包含： 與SEQ ID NO: 121和SEQ ID NO: 123具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列，和 與SEQ ID NO: 122和SEQ ID NO: 124具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列。
  19. 如請求項13所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該LTβR結合結構域包含： 與SEQ ID NO: 121和SEQ ID NO: 123具有至少95%序列同一性的VH胺基酸序列，和 與SEQ ID NO: 122和SEQ ID NO: 124具有至少95%序列同一性的VL胺基酸序列。
  20. 如請求項13-19中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該LTβR結合結構域包含： VH，其包含HCDR1胺基酸序列X 1YX 3MX 5（SEQ ID NO: 5），其中X 1為S或N；X 3為G、D或A；並且X 5為H或Y；HCDR2胺基酸序列X 1IX 3YDX 6X 7X 8X 9Y X 11X 12DSVKG（SEQ ID NO: 6），其中X 1為A或V；X 3為W或R；X 6為E或G；X 7為S、R或T；X 8為N或K；X 9為K、R或Q；X 11為H或Y；並且X 12為A或E；以及HCDR3胺基酸序列X 1RX 3X 4X 5X 6X 7X 8X 9YYGX 13X 14V（SEQ ID NO: 7），其中X 1為D或E；X 3為V、G或I；X 4為V、P或A；X 5為A、Y或G；X 6為R、A、G或H；X 7為P或G；X 8為G、N、D、Y、A或H；X 9為Y、T或F；X 13為L或M；並且X 14為D或A； VL，其包含LCDR1胺基酸序列SGDX 4LPX 7X 8YX 10Y（SEQ ID NO: 62），其中X 4為A或T；X 7為E、K、Q、D或N；X 8為Q或H；並且X 10為A或T；LCDR2胺基酸序列KDNERPS（SEQ ID NO: 63）；以及LCDR3胺基酸序列QSX 3DX 5SX 7X 8YX 10X 11（SEQ ID NO: 64），其中X 3為A或T；X 5為S、G或N；X 7為G或A；X 8為T、S或A；X 10為V或M；並且X 11為I或V。
  21. 如請求項13-20中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中所述結合蛋白包含： 與SEQ ID NO: 121具有至少90%序列同一性的VH胺基酸序列、以及SEQ ID NO: 5的HCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 6的HCDR2胺基酸序列和SEQ ID NO: 7的HCDR3胺基酸序列；以及 與SEQ ID NO: 122具有至少90%序列同一性的VL胺基酸序列、以及SEQ ID NO: 62的LCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 63的LCDR2胺基酸序列和SEQ ID NO: 64的LCDR3胺基酸序列。
  22. 如請求項13所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中 該VH包含分別為SEQ ID NO: 11-13的HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列，以及該VL包含分別為SEQ ID NO: 68-70的LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列；或 該VH包含分別為SEQ ID NO: 8-10的HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列，以及該VL包含分別為SEQ ID NO: 65-67的LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列。
  23. 如請求項13-22中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該雙特異性結合蛋白僅包含一個LTβR結合結構域。
  24. 如請求項13-22中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該LTβR結合結構域係Fab。
  25. 如請求項13-24中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該結合蛋白包含一個腫瘤相關抗原結合結構域。
  26. 如請求項25所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該腫瘤相關抗原結合結構域係Fab。
  27. 如請求項13-24中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該結合蛋白包含兩個腫瘤相關抗原結合結構域。
  28. 如請求項13-22中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該LTβR結合結構域係Fab，並且該腫瘤相關抗原結合結構域係Fab。
  29. 如請求項13-28中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該LTβR結合結構域和該腫瘤相關抗原結合結構域各自偶合到Fc部分。
  30. 如請求項29所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，其中該Fc部分不與Fc-γ受體結合。
  31. 一種多核苷酸，該多核苷酸編碼如請求項1-12中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白。
  32. 一種載體，該載體包含如請求項31所述之多核苷酸。
  33. 一種宿主細胞，該宿主細胞包含如請求項31所述之多核苷酸或如請求項32所述之載體。
  34. 一或多種多核苷酸，該一或多種多核苷酸編碼如請求項13-30中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白。
  35. 一種載體，該載體包含如請求項34所述之一或多種多核苷酸。
  36. 一種宿主細胞，該宿主細胞包含如請求項34所述之一或多種多核苷酸或如請求項35所述之載體。
  37. 一種藥物組成物，該藥物組成物包含： 如請求項1-12中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，如請求項13-30中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，如請求項31或34所述之一或多種多核苷酸，或如請求項32或35所述之載體，以及 藥學上可接受的載劑。
  38. 如請求項1-12中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，用作藥物。
  39. 如請求項1-12中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，用於治療癌症。
  40. 如請求項1-12中任一項所述之促效劑LTβR結合蛋白，用於製備用於治療癌症的藥物。
  41. 如請求項13-30中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，用作藥物。
  42. 如請求項13-30中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，用於治療癌症。
  43. 如請求項13-30中任一項所述之雙特異性促效劑LTβR結合蛋白，用於製造用於治療癌症的藥物。
  44. 一種治療受試者癌症之方法，所述方法包括： 向患有癌症的受試者投與促效劑淋巴毒素β受體（LTβR）結合蛋白，其中所述結合蛋白結合包含人LTβR富含半胱胺酸結構域4（CRD4）的一或多個殘基的表位，其中人LTβR CRD4包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基169-211，並且其中所述結合蛋白 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合或 (b) 不抑制LTα1β2與LTβR結合。
  45. 一種治療受試者癌症之方法，所述方法包括： 向患有癌症的受試者投與雙特異性淋巴毒素β受體（LTβR）結合蛋白，其中所述結合蛋白包含： LTβR結合結構域，其中該LTβR結合結構域結合包含人LTβR富含半胱胺酸結構域4（CRD4）的一或多個胺基酸殘基的表位，其中人LTβR CRD4包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基169-211；以及 腫瘤相關抗原結合結構域， 其中該雙特異性結合蛋白激動LTβR活性，並且 (a) 不抑制LIGHT與LTβR結合或 (b) 不抑制LT1α2β與LTβR結合。
  46. 如請求項44或請求項45所述之方法，所述方法進一步包括： 與所述促效劑LTβR結合蛋白或雙特異性LTβR結合蛋白結合投與免疫調節治療劑。
  47. 如請求項41或42所述之方法，其中該受試者患有選自由以下組成之群組的實性瘤：間皮瘤、胰臟腫瘤、卵巢腫瘤、肺腫瘤、食管腫瘤、胃腫瘤、肝腫瘤、結直腸腫瘤、宮頸腫瘤、子宮內膜腫瘤、乳房腫瘤、腎腫瘤、膀胱腫瘤、睪丸腫瘤、前列腺腫瘤、腦腫瘤、骨腫瘤和頭頸部腫瘤。
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