TW202440126A - 利用ｍｔａ協作的ｐｒｍｔ５抑制劑和ｍａｔ２ａ抑制劑之癌症治療 - Google Patents

Abstract

本文描述了治療患者之癌症的方法，該等方法包括向該患者投與治療有效量之PRMT5抑制劑（化合物A）和治療有效量之MAT2A（化合物B）之組合療法。

Description

利用MTA協作的PRMT5抑制劑和MAT2A抑制劑之癌症治療

基因表現之表觀遺傳調控係蛋白質產生和細胞分化的重要生物學決定因素，並在許多人類疾病中起到重要的病原性作用。表觀遺傳調控涉及遺傳物質的可遺傳修飾，而不改變其核苷酸序列。典型地，藉由對DNA和蛋白質（例如，組蛋白）進行選擇性的且可逆的修飾（例如，甲基化）來介導表觀遺傳調控，該修飾控制染色質的轉錄活性態與非活性態之間的構象轉變。該等共價修飾可以藉由酶如甲基轉移酶（例如，PRMT5）來控制，其中，許多酶與可能引起人類疾病的特定遺傳改變相關。PRMT5在疾病（例如增生性障礙、代謝障礙和血液障礙）中起作用。

腫瘤抑制基因的純合性缺失係癌症的關鍵驅動因子，通常導致位於緊鄰腫瘤抑制因子的基因組中乘客基因（passenger gene）之附帶丟失。該等乘客基因的缺失可以產生腫瘤細胞特有的治療上易處理的漏洞。染色體9p21基因座（攜帶熟知的腫瘤抑制因子CDKN2A（細胞週期蛋白依賴性激酶抑制劑2A））的純合性缺失發生在所有腫瘤的15%中，並通常包括乘客基因MTAP（甲基硫腺苷磷酸化酶，一種在甲硫胺酸和腺嘌呤補救途徑中的關鍵酶）。MTAP的缺失導致其底物甲基硫腺苷（MTA）的累積。MTA與S-腺苷甲硫胺酸（SAM）（II型甲基轉移酶PRMT5的底物甲基供體）共用緊密的結構相似性。由MTAP的丟失驅動的升高的MTA水平選擇性地與SAM競爭與PRMT5的結合，這使甲基轉移酶處於亞對偶基因狀態，易受到進一步的PRMT5抑制。在大型腫瘤細胞系組中進行的多重基因組規模shRNA退出篩選（drop out screen）已經鑒定出MTAP丟失與細胞系對PRMT5的依賴性之間的強相關性，進一步突出了這種代謝漏洞的強度。然而，PRMT5係一種已知的細胞必需基因，並且條件性PRMT5敲除和siRNA敲低研究表明，重大負擔（例如，全血細胞減少症、不育症、骨骼肌損失、心臟肥大等）可能與在正常組織中抑制PRMT5相關。因此，需要新策略來利用這種代謝漏洞，並優先靶向MTAP無效腫瘤中的PRMT5，同時不妨礙正常組織（MTAP WT）中的PRMT5。用MTA協作的小分子抑制劑靶向PRMT5可以優先靶向在MTAP無效腫瘤細胞中富集的PRMT5的MTA結合態，同時提供了超過正常細胞（其中MTAP完整且MTA水平低）的改善的治療指數。

甲硫胺酸腺苷轉移酶2A（MAT2A）係利用甲硫胺酸（Met）和三磷酸腺苷（ATP）產生s-腺苷甲硫胺酸（SAM）的酶。SAM係細胞中用於使包括DNA、RNA和蛋白質在內的若干底物甲基化的主要甲基供體。一種將SAM用作甲基供體的甲基化酶係PRMT5。儘管SAM係PRMT5活性所必需的，但PRMT5會被MTA競爭性抑制。由於MTA係甲硫胺酸補救途徑的一部分，細胞MTA水平在MTAP啟動的過程中保持較低水平。

MTAP在9號染色體上的基因座中，該基因座通常在患有來自若干起源組織（包括中樞神經系統、胰腺、食道、膀胱和肺）的癌症的患者的細胞中缺失。MTAP的丟失導致MTA的累積，使得與表現MTAP的細胞相比，缺失MTAP的細胞更依賴於SAM產生並且因此更依賴於MAT2A活性。在跨越大約400種癌細胞系的shRNA細胞系篩選中，MAT2A敲低導致缺失MTAP的細胞比MTAP WT細胞具有更大百分比的活力損失（McDonald等人, 2017 Cell [細胞] 170, 577-592）。此外，MAT2A蛋白的誘導型敲低降低了體內腫瘤生長（Maqon等人, 2016 Cell Reports [細胞報告] 15(3), 574-587）。該等結果表明MAT2A抑制劑可以提供用於癌症患者（包括患有缺失MTAP的腫瘤的癌症患者）的新療法。

本揭露提供了治療有需要的患者之癌症的方法，該等方法包括向該患者投與治療有效量之化合物A或其藥學上可接受的鹽和治療有效量之化合物B或其藥學上可接受的鹽之組合療法。在各種情況下，患者患有缺失MTAP的癌症。在一些情況下，癌症係實性瘤。本揭露還提供了一種組合產品，該組合產品包含治療有效量之化合物A或其藥學上可接受的鹽和治療有效量之化合物B或其藥學上可接受的鹽。該組合產品可用於治療包括實性瘤在內的多種癌症。

本揭露提供了治療有需要的患者之癌症的方法，該等方法包括向該患者投與治療有效量之化合物A或其藥學上可接受的鹽和治療有效量之化合物B或其藥學上可接受的鹽之組合療法。預期投與的「患者」或「受試者」包括但不限於人類（即，任何年齡組的男性或女性，例如，兒科受試者（例如，嬰兒、兒童、青少年）或成人受試者（例如，青年成人、中年成人或老年人））和/或非人類動物，例如，哺乳動物如靈長類動物（例如，食蟹猴、恒河猴）、牛、豬、馬、綿羊、山羊、齧齒動物、貓和/或狗。在某些實施方式中，受試者係人類。在某些實施方式中，受試者係非人類動物。術語「患者」和「受試者」在本文中可互換使用。

本揭露還提供了一種組合產品，該組合產品包含治療量的化合物A或其藥學上可接受的鹽和治療有效量之化合物B或其藥學上可接受的鹽。該組合產品可用於治療包括實性瘤在內的多種癌症。術語「組合產品」意指其中組合中的每種治療劑被單獨配製成其自身的藥物組成物，並且該等藥物組成物中的每一種在同一醫學治療（例如，癌症的同一醫學治療）中投與。在一些實施方式中，藥物組成物中的每一種可以具有相同或不同的載體、稀釋劑或賦形劑。本文還提供了治療有效量之化合物A或其藥學上可接受的鹽和治療有效量之化合物B或其藥學上可接受的鹽在治療癌症中之用途。本文提供了治療有效量之化合物A或其藥學上可接受的鹽和治療有效量之化合物B或其藥學上可接受的鹽在製備用於治療癌症的藥物中之用途。

化合物A係PRTM5抑制劑，其化學名稱為(S)-(4-胺基-1,3-二氫呋喃并[3,4-c][1,7]㖠啶-8-基)(3-(4-(三氟甲基)苯基)𠰌啉代)甲酮並且具有以下結構：化合物A： 。

化合物A可以使用如在例如PCT/US 22/75648和PCT/US 21/63540中描述的方法進行合成。

在本文揭露的方法中，化合物A可以作為藥學上可接受的鹽投與。藥學上可接受的鹽包括衍生自適合的無機酸和有機酸以及無機鹼和有機鹼的那些鹽。藥學上可接受的鹽包括與無機酸（諸如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、磷酸、偏磷酸、硝酸和硫酸）以及與有機酸（諸如酒石酸、乙酸、三氟乙酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸、富馬酸、苯甲酸、甲酸、丙酸、乙醇酸、葡糖酸、馬來酸、琥珀酸、樟腦磺酸、異硫磺酸、黏酸、龍膽酸、異菸鹼酸、葡糖二酸、葡糖醛酸、糠酸、麩胺酸、抗壞血酸、鄰胺基苯甲酸、水楊酸、苯乙酸、苦杏仁酸、亞甲基雙羥萘酸（撲酸）、甲磺酸、乙磺酸、泛酸、硬脂酸、亞硫酸、海藻酸、半乳糖醛酸以及芳基磺酸（例如苯磺酸和對甲苯磺酸））形成的酸加成鹽；與鹼金屬和鹼土金屬以及有機鹼（諸如N,N-二苄基乙二胺、氯普魯卡因、膽鹼、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺（N-甲基葡萄胺糖）、離胺酸以及普魯卡因）形成鹼加成鹽；以及內部形成的鹽。合適的鹽包括在P. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (編輯), Handbook of Pharmaceutical Salts Properties, Selection and Use [藥用鹽手冊：特性、選擇和使用]; 2002中描述的那些鹽。在各種實施方式中，化合物A或其鹽經口服投與。

化合物A之「治療有效量」意指有效治療或預防正在被治療的患者的已有症狀的發展或減輕已有症狀的量。尤其根據本文所提供的詳細揭露，有效量的確定完全在熟悉該項技術者之能力範圍內。通常，「治療有效劑量」係指導致實現所需效果的本文描述的化合物A的量。例如，與對照相比，本文描述的治療有效量之化合物A將MTAP活性降低至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%或至少90%。

化合物B係MAT2A抑制劑，其化學名稱為4-胺基-1-(2-氯苯基)-7-(三氟甲基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮並且具有以下結構： 化合物B。 化合物B和製造化合物B之方法揭露於PCT/US 19/65260（WO 2020/123395）中。

在本文揭露的方法中，化合物B可以作為藥學上可接受的鹽投與。藥學上可接受的鹽包括衍生自適合的無機酸和有機酸以及無機鹼和有機鹼的那些鹽。藥學上可接受的鹽包括與無機酸（諸如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、磷酸、偏磷酸、硝酸和硫酸）以及與有機酸（諸如酒石酸、乙酸、三氟乙酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸、富馬酸、苯甲酸、甲酸、丙酸、乙醇酸、葡糖酸、馬來酸、琥珀酸、樟腦磺酸、異硫磺酸、黏酸、龍膽酸、異菸鹼酸、葡糖二酸、葡糖醛酸、糠酸、麩胺酸、抗壞血酸、鄰胺基苯甲酸、水楊酸、苯乙酸、苦杏仁酸、亞甲基雙羥萘酸（撲酸）、甲磺酸、乙磺酸、泛酸、硬脂酸、亞硫酸、海藻酸、半乳糖醛酸以及芳基磺酸（例如苯磺酸和對甲苯磺酸））形成的酸加成鹽；與鹼金屬和鹼土金屬以及有機鹼（諸如N,N-二苄基乙二胺、氯普魯卡因、膽鹼、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺（N-甲基葡萄胺糖）、離胺酸以及普魯卡因）形成鹼加成鹽；以及內部形成的鹽。合適的鹽包括在P. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (編輯), Handbook of Pharmaceutical Salts Properties, Selection and Use [藥用鹽手冊：特性、選擇和使用]; 2002中描述的那些鹽。在各種實施方式中，化合物B或其鹽經口服投與。

化合物B之「治療有效量」意指有效治療或預防正在被治療的患者的已有症狀的發展或減輕已有症狀的量。尤其根據本文所提供的詳細揭露，有效量的確定完全在熟悉該項技術者之能力範圍內。通常，「治療有效劑量」係指導致實現所需效果的本文描述的化合物B的量。例如，與對照相比，本文描述的治療有效量之化合物A將MAT2A活性降低至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%或至少90%。 癌症

在一些實施方式中，癌症係MTAP缺陷型和/或MTA積累型癌症。「MTAP缺陷型相關」或「MTAP缺陷」或「MTAP缺陷型」疾病（例如，增殖性疾病，如癌症）或「與MTAP缺陷相關的」疾病（例如增殖性疾病，如癌症）或「以MTAP缺陷為特徵」的疾病（例如，增殖性疾病，如癌症）等係指其中大量細胞為MTAP缺陷型細胞的疾病（例如，增殖性疾病，如癌症）。例如，在MTAP缺陷型相關疾病中，一或多種疾病細胞可具有顯著降低的MTAP的翻譯後修飾、產生、表現、水平、穩定性和/或活性。MTAP缺陷型相關疾病之實例包括但不限於癌症，包括但不限於：膠質母細胞瘤、惡性外周神經鞘瘤（MPNST）、食道癌（例如，食道鱗狀細胞癌或食道腺癌）、膀胱癌（例如，膀胱尿道上皮癌）、胰臟癌（例如，胰腺腺癌）、間皮瘤、黑色素瘤、非小細胞肺癌（NSCLC，例如，肺鱗狀癌或肺腺癌）、星形細胞瘤、未分化的多形性肉瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、白血病、頭頸癌、胃腺癌、黏液纖維肉瘤、膽管癌、腦癌、胃癌、腎癌、乳癌、子宮內膜癌、尿路癌、肝癌、軟組織癌、胸膜癌和大腸癌或肉瘤。在患有MTAP缺陷型相關疾病的患者中，一些疾病細胞（例如，癌細胞）可能是MTAP缺陷型細胞，而其他疾病細胞不是。類似地，一些疾病細胞可能是MTA積累型細胞，而其他疾病細胞不是。因此，本揭露涵蓋涉及該等組織或任何其他組織的疾病的治療方法，其中MTAP缺陷型和/或MTA積累型細胞的增殖可藉由投與化合物A來抑制。一些MTAP缺陷型癌細胞也缺乏CDKN2A；CDKN2A基因或其產物的翻譯後修飾、產生、表現、水平、穩定性和/或活性在該等細胞中降低。MTAP和CDKN2A的基因在染色體9p21上非常接近；MTAP位於CDKN2A的大約100 kb端粒處。許多癌細胞類型含有CDKN2A/MTAP丟失（兩種基因都丟失）。因此，在一些實施方式中，MTAP缺陷型細胞也缺乏CDKN2A。

在一些實施方式中，癌症係諸如以下的癌症：急性髓系白血病、青少年癌症、兒童腎上腺皮質癌、AIDS相關癌症（例如，淋巴瘤和卡波西肉瘤）、肛門癌、闌尾癌、星形細胞瘤、非典型畸胎樣瘤、基底細胞癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、腦幹細胞膠質瘤、腦瘤、乳癌、支氣管腫瘤、柏基特淋巴瘤、類癌瘤、非典型畸胎樣瘤、胚胎瘤、生殖細胞腫瘤、原發性淋巴瘤、子宮頸癌、兒童癌症、脊索瘤、心臟腫瘤、慢性淋巴細胞白血病（CLL）、慢性髓性白血病（CML）、慢性骨髓增生性障礙、大腸癌、結直腸癌、顱咽管瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、肝外導管原位癌（DCIS）、胚胎瘤、CNS癌症、子宮內膜癌、室管膜瘤、食道癌、鼻腔神經膠質瘤、尤文肉瘤、顱外生殖細胞腫瘤、性腺外生殖細胞腫瘤、眼癌、骨纖維組織細胞瘤、膽囊癌、胃癌、胃腸類癌瘤、胃腸道間質瘤（GIST）、生殖細胞腫瘤、妊娠滋養細胞瘤、毛細胞白血病、頭頸癌、心臟癌症、肝癌、何杰金氏淋巴瘤、下咽癌、眼內黑色素瘤、胰島細胞瘤、胰腺神經內分泌腫瘤、腎癌、喉癌、嘴唇和口腔癌、肝癌、小葉原位癌（LCIS）、肺癌、淋巴瘤、轉移性伴隱匿性原發性鱗狀頸癌、中線癌、口癌、多發性內分泌瘤綜合症、多發性骨髓瘤/漿細胞腫瘤、蕈樣真菌病、骨髓發育不良症候群、骨髓化生不良/骨髓增生腫瘤、多發性骨髓瘤、梅克爾細胞癌、惡性間皮瘤、骨惡性纖維組織細胞瘤和骨肉瘤、鼻腔和副鼻竇癌、鼻咽癌、神經母細胞瘤、非何杰金氏淋巴瘤、非小細胞肺癌（NSCLC）、口腔癌（oral cancer）、嘴唇和口腔癌、口咽癌、卵巢癌、胰臟癌、乳頭瘤病、副神經節瘤、副鼻竇和鼻腔癌、甲狀旁腺癌、陰莖癌、咽癌、胸膜肺母細胞瘤、原發性中樞神經系統（CNS）淋巴瘤、前列腺癌、直腸癌、移行細胞癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、涎腺癌、皮膚癌、胃（stomach/gastric）癌、小細胞肺癌、小腸癌、軟組織肉瘤、T細胞淋巴瘤、睪丸癌、咽喉癌、胸腺瘤和胸腺癌、甲狀腺癌、腎盂和輸尿管移行細胞癌、滋養細胞瘤、兒童罕見癌症、尿道癌、子宮肉瘤、陰道癌、外陰癌或病毒誘發的癌症。在一些情況下，癌症係胰臟癌；食道癌；黑色素瘤；肺癌；苗勒氏混合癌；卵巢癌；或膽囊癌。

在一些實施方式中，癌症係膠質母細胞瘤、惡性外周神經鞘瘤（MPNST）、食道癌（例如，食道鱗狀細胞癌或食道腺癌）、膀胱癌（例如，膀胱尿道上皮癌）、胰臟癌（例如，胰腺腺癌）、間皮瘤、黑色素瘤、非小細胞肺癌（NSCLC，例如，肺鱗狀癌或肺腺癌）、星形細胞瘤、未分化的多形性肉瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、白血病、頭頸癌、胃腺癌、黏液纖維肉瘤、膽管癌、腦癌、胃癌、腎癌、乳癌、子宮內膜癌、尿路癌、肝癌、軟組織癌、胸膜癌和大腸癌或肉瘤。

在一些實施方式中，癌症係白血病、膠質瘤、黑色素瘤、胰臟癌、非小細胞肺癌（NSCLC）、膀胱癌、星形細胞瘤、骨肉瘤、頭頸癌、黏液樣軟骨肉瘤、卵巢癌、子宮內膜癌、乳癌、軟組織肉瘤、非何杰金氏淋巴瘤或間皮瘤。在各種實施方式中，癌症係膀胱癌、黑色素瘤、腦癌、肺癌、胰臟癌、乳癌、食道癌、頭頸癌、腎癌、大腸癌、彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）、急性淋巴球白血病（ALL）或被被套細胞淋巴瘤（MCL）。在一些實施方式中，癌症係胃癌。在一些實施方式中，癌症係大腸癌。在一些實施方式中，癌症係肝癌。在一些實施方式中，癌症係多形性膠質母細胞瘤（GBM）。在一些實施方式中，癌症係膀胱癌。在各種實施方式中，癌症係食道癌。在一些實施方式中，癌症係乳癌。在一些實施方式中，癌症係NSCLC。在一些實施方式中，癌症係MCL。在一些實施方式中，癌症係DLBCL。在各種實施方式中，癌症係ALL。

在一些實施方式中，癌症係實性瘤。

在一些實施方式中，癌症係肺癌或胰臟癌。 監測治療功效

給定的癌症治療方法之功效可以由熟練的臨床醫生確定。然而，在用如本文所述之藥劑治療後，如果例如腫瘤的任何一種或所有體征或症狀發生有益改變、或其他臨床可接受的症狀得到改善或甚至減輕了例如至少10%，則認為治療是如本文所用的術語「有效治療」。功效還可以藉由住院或需要醫療干預而評估的個體未惡化（例如，疾病進展停止）來衡量。衡量該等指標的方法係熟悉該項技術者已知的和/或本文描述的。

本揭露之實施方式指描述並不旨在是窮盡性的或旨在將本揭露局限於所揭露的精確形式。雖然為了說明之目的，本文描述了本揭露之特定實施方式和實例，但是如相關領域的技術者將認識到的，在本揭露之範圍內可以進行各種等效修改。本文所提供的揭露的教導可以適當地應用於其他程序或方法。本文所述之各種實施方式可以組合以提供另外的實施方式。如果需要，可以修改本揭露之方面，以採用上述參考文獻和申請的組成、功能和概念來提供本揭露之另外的實施方式。根據此詳細描述，可以對本揭露進行該等和其他改變。

前述實施方式中之任一種的特定要素可以組合或替換為其他實施方式中的要素。此外，雖然在該等實施方式的上下文中描述了與本揭露之某些實施方式相關的優點，但其他實施方式也可以表現出這樣的優點，並且並非所有實施方式都必須表現出這樣的優點才能屬於本揭露之範圍。

標識的所有專利和其他出版物藉由引用明確併入本文，以描述和揭露（例如在這樣的出版物中描述的）可能與本發明結合使用的方法，除了任何定義、主題免責聲明或否認，並且除非併入的材料與本文中明確揭露的內容不一致，在這種情況下，以本揭露中的語言為準。僅提供該等出版物在本申請的提交日期之前的揭露。在這方面，任何內容都不應解釋為承認發明人由於先前發明或出於任何其他理由而無權提前進行這樣的揭露。關於日期的所有陳述或者關於該等文件之內容的陳述均基於申請人可獲得之資訊，並不構成對該等文件的日期或內容的正確性的任何承認。 實例 實例 1- 肺癌細胞系中化合物 A 和化合物 B 的組合

肺癌細胞系（LU99和H838）用化合物A和化合物B的組合處理6天。對化合物A進行1.9倍系列稀釋，並且對化合物B進行1.9倍系列稀釋，以產生8 x 10的劑量矩陣，包括僅DMSO對照在內。細胞活力藉由CellTiter-Glo發光測定測量。原始發光值通過以下等式轉換為受影響的分數（Fa）：

使用CalcuSyn軟體進行協同作用分析，以基於所用藥物濃度和相應的Fa值確定組合指數（CI）得分。結果在下表1-表2中示出。*CI值（Calcusyn）：強協同作用：0.1-0.3；協同作用：0.3-0.7；中等協同作用：0.7-0.85；輕度協同作用：0.85-0.9；近加和：0.9-1.1。表1和表2代表所進行的2項研究中的1項。N = 2個技術重複。 [ 表 1] . 代表性化合物 A 和化合物 B 濃度以及 LU99 細胞中相應的組合 Fa 和 CI 得分。

LU99 組合指數（ CI ）確定
固定劑量	可變劑量	組合	計算的
化合物 A （ μM ）	化合物 B （ μM ）	Fa	CI 值 *
0.040	1	0.662	0.241
0.040	0.526	0.661	0.182
0.040	0.277	0.636	0.181
0.040	0.146	0.599	0.203
0.040	0.077	0.631	0.149
0.040	0.040	0.615	0.156
0.040	0.021	0.606	0.159

[ 表 2] . 代表性化合物 A 和化合物 B 濃度以及 H838 細胞中相應的組合 Fa 和 CI 得分。

H838 組合指數（ CI ）確定
固定劑量	可變劑量	組合	計算的
化合物 A （ μM ）	化合物 B （ μM ）	Fa	CI 值 *
0.146	0.2	0.952	0.245
0.146	0.105	0.932	0.327
0.146	0.055	0.917	0.362
0.146	0.029	0.916	0.328
0.146	0.015	0.905	0.351
0.146	0.008	0.872	0.467
0.146	0.004	0.863	0.485

實例 2- 肺癌細胞系和胰臟細胞系中的化合物 A 和化合物 B 。

NSCLC癌細胞系CALU1用化合物A和化合物B的組合處理6天。測試的化合物A的最高濃度係10 µM，總計九個1.9倍稀釋和僅DMSO對照。測試的化合物B的最高濃度係10 µM，總計五個2倍稀釋和僅DMSO對照。細胞活力藉由CellTiter-Glo發光測定測量。原始發光值通過以下等式轉換為POC：POC = 100 * (處理/媒介物)。圖1代表所進行的2項研究中的1項。N = 2個技術重複。對平均值和標準差進行繪圖。

胰臟癌細胞系BxPC3用化合物A和化合物B的組合處理6天。測試的化合物A的最高濃度係2 µM，總計九個1.9倍稀釋和僅DMSO對照。測試的化合物B的最高濃度係10 µM，總計五個2倍稀釋和僅DMSO對照。細胞活力藉由CellTiter-Glo發光測定測量。原始發光值通過以下等式轉換為POC：POC = 100 * (處理/媒介物)。圖2代表所進行的3項研究中的1項。N = 2個技術重複。對平均值和標準差進行繪圖。

在對兩種單一藥劑都表現出敏感性的癌細胞系模型中觀察到協同作用，如實例1中示出的。在對化合物B作為單一藥劑時不敏感的模型中，不能評估協同作用，並且沒有觀察到劑量依賴性組合作用。然而，使用該組合時活力降低更多，這表明該組合在該等模型中可能具有加和益處（如實例2中示出的）。 實例 3- 化合物 A 和化合物 B 在胰臟癌動物模型中顯示出協同作用。

將BxPC-3細胞（5 x 10 ⁶）重懸在具有1 : 1基質膠（Matrigel）的100 µL無血清培養基中，並且皮下注射到CB.17 SCID小鼠的右脅腹。基於第18天的腫瘤體積對動物進行分選。每天一次給動物口服媒介物（DI水中的0.1% Tween® 80、2% HPMC，pH 2）、30 mg/kg的化合物A或10 mg/kg的化合物B。用數顯卡尺每週兩次測量腫瘤體積。繪製的數據代表每組的組平均值 ± SEM。N = 每組10個。結果顯示在BxPC-3胰臟癌異種移植物中化合物A和化合物B的組合對比單獨的任一單一藥劑產生顯著的抗腫瘤活性（參見圖3）。 實例 4- 化合物 A 與化合物 B 組合對雌性無胸腺裸鼠中 H838 NSCLC 異種移植物模型中腫瘤生長的作用

在第7天，雌性無胸腺裸鼠被分選到平均腫瘤體積為185 mm ³的六個組（n = 10）中，並且開始給藥。媒介物1（DI水中的0.1% Tween® 80、2% HPMC，pH 2）、媒介物2（0.5%甲基纖維素（400 cp）、0.5% Tween 80，不調整pH）以及測試藥劑每天一次口服（PO）投與，如下：組1接受媒介物1和媒介物2。組2接受10 mg/kg化合物A和媒介物2；組3接受30 mg/kg化合物A和媒介物2；組4接受3 mg/kg化合物B和媒介物1；組5接受10 mg/kg化合物A和3 mg/kg化合物B；組6接受30 mg/kg化合物A和3 mg/kg化合物B。用數顯卡尺每週兩次監測腫瘤體積。數據代表每組的組平均值± SEM，n = 10。組1至組4的處理和腫瘤測量在第25天停止。組5和組6的處理在第39天停止。結果顯示在H838 NSCLC異種移植物中化合物A和化合物B的組合對比單獨的任一單一藥劑產生顯著的抗腫瘤活性（參見圖4A）。

重複進行實驗，並且結果再次顯示在H838 NSCLC異種移植物中化合物A和化合物B的組合對比單獨的任一單一藥劑產生顯著的抗腫瘤活性（參見圖4B）。 實例 5- 肺癌細胞系中化合物 A 和化合物 B 的組合

肺癌細胞系（H838）用化合物A和化合物B的組合處理6天。對化合物A進行1.9倍系列稀釋，並且對化合物B進行1.9倍系列稀釋，以產生8 x 10的劑量矩陣，包括僅DMSO對照在內。細胞活力藉由CellTiter-Glo發光測定測量。原始發光值通過以下等式轉換為受影響的分數（Fa）：

使用CalcuSyn軟體進行協同作用分析，以基於所用藥物濃度和相應的Fa值確定組合指數（CI）得分。結果在下表3中示出。*CI值（Calcusyn）：C ＜ 1表明協同作用；C = 1表明加和作用；C ＞ 1表明拮抗作用。

[表3].代表性化合物A和化合物B濃度以及H838細胞中相應的組合CI得分。

		化合物B （µM）
1.01	0.54	0.35	0.25	0.28	0.46	0.68	1.17	1.66	0.200
1.03	0.65	0.47	0.33	0.37	0.52	0.65	0.97	1.01	0.105
1.30	0.78	0.48	0.36	0.36	0.57	0.73	0.88	1.15	0.055
1.24	0.70	0.43	0.33	0.37	0.48	0.55	0.80	0.78	0.029
1.19	0.75	0.45	0.35	0.41	0.49	0.68	0.98	0.62	0.p15
1.23	0.79	0.54	0.47	0.49	0.70	0.82	1.20	1.21	0.008
1.21	0.87	0.56	0.49	0.67	0.98	1.51	1.56	2.86	0.004
化合物A （µM）	1	0.526	0.277	0.146	0.077	0.040	0.021	0.011	0.006

實例 6- 化合物 A 和化合物 B 在肺癌動物模型中顯示出協同作用。

將H838細胞（5 x 10 ⁶）重懸在具有1 : 1基質膠（Matrigel）的100 µL無血清培養基中，並且皮下注射到CB.17 SCID小鼠的右脅腹。基於第18天的腫瘤體積對動物進行分選。每天一次給動物口服媒介物（DI水中的0.1% Tween® 80、2% HPMC，pH 2）、10 mg/kg或30 mg/kg的化合物A、3 mg/kg的化合物B、或者化合物A和化合物B的組合，總計33次給藥。用數顯卡尺每週兩次測量腫瘤體積。繪製的數據代表每組的組平均值 ± SEM。N = 每組10個。結果顯示在H838肺癌異種移植物中化合物A和化合物B的組合對比單獨的任一單一藥劑產生顯著的抗腫瘤活性（參見圖5）。

無

[圖1]係示出化合物A和化合物B的組合在NSCLC細胞系（CALU1）中的作用之劑量反應曲線。

[圖2]係示出化合物A和化合物B的組合在胰臟癌細胞系（BxPC3）中的作用之劑量反應曲線。

[圖3]係示出在BxPC-3胰臟癌異種移植物中化合物A和化合物B的組合對比單獨的任一單一藥劑產生顯著的抗腫瘤活性之圖。

[圖4A和4B]係示出在H838 NSCLC異種移植物中化合物A和化合物B的組合對比單獨的任一單一藥劑產生顯著的抗腫瘤活性之圖。

[圖5]係示出在H838 NSCLC異種移植物中化合物A和化合物B的組合對比單獨的任一單一藥劑產生顯著的抗腫瘤活性之圖。

無

Claims (19)

1. 一種治療有需要的患者之癌症的方法，該等方法包括向該患者投與治療有效量之化合物A或其藥學上可接受的鹽和治療有效量之化合物B或其藥學上可接受的鹽之組合療法。
2. 如請求項1所述之方法，其中該癌症係缺失MTAP的癌症。
3. 如請求項1或2所述之方法，其中該癌症係實性瘤。
4. 如請求項1-3中任一項所述之方法，其中該癌症係肺癌。
5. 如請求項1-3中任一項所述之方法，其中該癌症係胰臟癌。
6. 如請求項1-5中任一項所述之方法，其中化合物A或其鹽經口服投與。
7. 如請求項1-6中任一項所述之方法，其中化合物A或其鹽每天投與一次。
8. 如請求項1-7中任一項所述之方法，其中化合物B或其鹽經口服投與。
9. 如請求項1-8中任一項所述之方法，其中化合物A和化合物B同時投與。
10. 如請求項1-8中任一項所述之方法，其中化合物A和化合物B依次投與。
11. 如請求項1-10中任一項所述之方法，其中化合物A或其鹽的該治療有效量少於作為單一療法的化合物A或其鹽的量。
12. 如請求項1-11中任一項所述之方法，其中化合物B或其鹽的該治療有效量少於作為單一療法的化合物B或其鹽的量。
13. 如請求項1-12中任一項所述之方法，其中與化合物A單一療法相比，該組合療法表現出協同作用。
14. 如請求項1-13中任一項所述之方法，其中與化合物B單一療法相比，該組合療法表現出協同作用。
15. 一種組合產品，該組合產品包含治療有效量之化合物A或其藥學上可接受的鹽和治療有效量之化合物B或其藥學上可接受的鹽。
16. 治療有效量之化合物A或其藥學上可接受的鹽和治療有效量之化合物B或其藥學上可接受的鹽在治療癌症中之用途。
17. 治療有效量之化合物A或其藥學上可接受的鹽和治療有效量之化合物B或其藥學上可接受的鹽在製備用於治療癌症的藥物中之用途。
18. 如請求項16或17所述之用途，其中該治療有效量之化合物A或其藥學上可接受的鹽和治療有效量之化合物B或其藥學上可接受的鹽同時投與。
19. 如請求項17或18所述之用途，其中該治療有效量之化合物A或其藥學上可接受的鹽和治療有效量之化合物B或其藥學上可接受的鹽依次投與。