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TW202438516A - TAU及β類澱粉肽免疫原組合物及相關方法 - Google Patents

TAU及β類澱粉肽免疫原組合物及相關方法 Download PDF

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TW202438516A
TW202438516A TW113101930A TW113101930A TW202438516A TW 202438516 A TW202438516 A TW 202438516A TW 113101930 A TW113101930 A TW 113101930A TW 113101930 A TW113101930 A TW 113101930A TW 202438516 A TW202438516 A TW 202438516A
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賈斯汀 博伊德
珍 科斯梅 多達特
西里爾 維維安 吉內斯特
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美商瓦辛尼帝股份有限公司
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Abstract

本揭示係關於靶向Tau蛋白部分的經改良之肽免疫原構築體，用於治療及/或預防tau蛋白病變。本揭示亦關於靶向β類澱粉蛋白部分的經改良之肽免疫原構築體，用於治療及/或預防tau蛋白病變。本揭示亦關於含有該等肽免疫原構築體之組合物及套組，尤其包含多種肽免疫原構築體之組合的組合物及套組。本文亦提供製造及使用該等肽免疫原構築體之方法，及由該等肽免疫原構築體產生之抗體。在一些態樣中，本揭示係關於包含基於Tau蛋白部分的肽免疫原構築體及基於β類澱粉蛋白部分的肽免疫原構築體的組合物，以及此等肽免疫原構築體及組合物在治療方法中之用途。

Description

TAU及β類澱粉肽免疫原組合物及相關方法
本揭示係關於基於Tau蛋白部分的肽免疫原構築體及組合物以及其調配物，用於預防及治療tau蛋白病變。本揭示亦關於基於β類澱粉蛋白部分的肽免疫原構築體及組合物以及其調配物，用於預防及治療tau蛋白病變。本揭示進一步關於包含基於Tau蛋白部分的肽免疫原構築體及基於β類澱粉蛋白部分的肽免疫原構築體的組合物，以及此等組合物在治療方法中之用途。
Tau蛋白在中樞神經系統之神經元中含量豐富且在穩定微管方面發揮作用。諸如阿茲海默氏病(Alzheimer's disease；AD)之神經系統之病變及癡呆與Tau蛋白相關，該等Tau蛋白已變得有缺陷且不再正常穩定微管。稱為tau蛋白病變之其他神經退化性疾病之特徵為有大量絲狀Tau。此等疾病包括僅纏結型癡呆(tangle-only dementia)、慢性創傷性腦病(CTE)、嗜銀粒病、進行性核上麻痺、皮質基底核退化症、球狀神經膠質tau蛋白病變及匹克病(Pick's disease)。
β類澱粉(Aβ)肽為在患有阿茲海默氏病者之腦部中發現的類澱粉斑塊之主要組分，且此等肽之寡聚物對神經細胞具有毒性。
需要研發用於治療罹患諸如阿茲海默氏病及tau蛋白病變之疾病的患者的針對Tau及β類澱粉之療法。
本揭示係關於靶向Tau蛋白部分的個別肽免疫原構築體，用於治療及/或預防tau蛋白病變。本揭示亦關於靶向β類澱粉蛋白部分的個別肽免疫原構築體，用於治療及/或預防tau蛋白病變。本揭示亦關於含有該等肽免疫原構築體中之一者、兩者或更多者的組合物、製造及使用該等肽免疫原構築體之方法以及由該等肽免疫原構築體產生之抗體。本揭示進一步關於包含一個、兩個或更多個Tau肽免疫原構築體之組合的組合物；包含一個、兩個或更多個Tau肽免疫原構築體及一或多個β類澱粉(Aβ)肽免疫原構築體之組合的組合物；以及使用此等組合物及組合預防及治療tau蛋白病變(例如阿茲海默氏病)及本文所述之其他tau蛋白病變的方法。
所揭示之肽免疫原構築體含有約15個或更多個胺基酸。Tau肽免疫原構築體含有來自人類Tau蛋白之最長同功異型物(GenBank：AGF19246.1)之部分的B細胞抗原決定基，其具有 表 6中所示之胺基酸序列SEQ ID NO: 60。β類澱粉(Aβ)肽免疫原構築體含有來自Aβ 1-42(SEQ ID NO: 68)，例如Aβ 1-14(SEQ ID NO: 69)的B細胞抗原決定基(參見 表 3及SEQ ID NO: 70及71；亦參見WO 2014/143087中所述之Aβ肽，其內容以引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，肽免疫原構築體及/或B細胞抗原決定基含有化學修飾及/或非天然胺基酸，依本文所述。B細胞抗原決定基可例如經由視情況選用之異源間隔子連接於來源於病原體蛋白之異源T輔助細胞(Th)抗原決定基。所揭示之肽免疫原構築體刺激產生針對B細胞抗原決定基之高度特異性抗體。所揭示之肽免疫原構築體可用作患有tau蛋白病變(例如阿茲海默氏病；亦參見本文所列舉之其他tau蛋白病變)之患者的免疫療法。
Tau肽免疫原構築體之B細胞抗原決定基部分具有來自全長Tau蛋白之胺基酸序列(SEQ ID NO:60)。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體具有來自依本文所述之Tau蛋白的任何B細胞抗原決定基序列。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體具有來自未經修飾之Tau蛋白的B細胞抗原決定基序列。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體具有來自經修飾之Tau蛋白，例如依本文所述之Tau蛋白(例如，藉由對一或多個胺基酸進行取代或化學修飾)的B細胞抗原決定基序列。所考慮之修飾包括(但不限於)用半胱胺酸取代一或多個胺基酸以形成二硫鍵、一或多個胺基酸之乙醯化或N-甲基化，依本文所述。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基具有表1中所示之序列中之任一者。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基具有表7-表10中所示之序列中之任一者(特定言之，表7-表10中之任一者中所提供的免疫原性Tau B細胞抗原決定基)。在一些實施例中，B細胞抗原決定基具有含有依 表 1中所示之SEQ ID NO: 1-8、17-30或63-67中之任一者或 表 7- 表 10中所示之序列中之任一者或其組合，例如SEQ ID NO: 2及7的序列。在一些實施例中，B細胞抗原決定基具有含有依 表 1中所示之SEQ ID NO: 72-76中之任一者的序列。
Aβ肽免疫原構築體之B細胞抗原決定基部分可具有來自全長Aβ 1-42之胺基酸序列(SEQ ID NO: 68)。在一些實施例中，Aβ肽免疫原構築體具有來自依本文所述之Aβ蛋白的任何B細胞抗原決定基序列。在一些實施例中，Aβ肽免疫原構築體具有來自未經修飾之Aβ蛋白的B細胞抗原決定基序列。在一些實施例中，Aβ肽免疫原構築體具有來自經修飾之Aβ蛋白，例如依本文所述之Aβ蛋白(例如，藉由對一或多個胺基酸進行取代或化學修飾)的B細胞抗原決定基序列。所考慮之修飾包括(但不限於)用半胱胺酸取代一或多個胺基酸以形成二硫鍵、一或多個胺基酸之乙醯化或N-甲基化，依本文所述。在一些實施例中，Aβ B細胞抗原決定基具有表3中所示之序列中之任一者。在一些實施例中，Aβ B細胞抗原決定基具有WO2014/143087及/或US 9,102,752 B2中所揭示之序列中之任一者，該等案中之各者之全文，且具體言之，Aβ B細胞抗原決定基之揭示內容(尤其WO2014/143087及/或US 9,102,752 B2中所提供之免疫原性Aβ B細胞抗原決定基)以引用之方式併入本文中。在一些實施例中，B細胞抗原決定基之序列包含Aβ 1-14(SEQ ID NO: 69)或WO 2014/143087中所述之任何其他Aβ肽序列。在一些實施例中，β類澱粉B細胞抗原決定基具有SEQ ID NO: 69或SEQ ID NO: 82。
本揭示之肽免疫原構築體可含有依 表 5中所示之來源於病原性蛋白之異源Th抗原決定基胺基酸序列(例如ID NO: 31至59中之任一者)。在某些實施例中，異源Th抗原決定基來源於天然病原體，諸如白喉毒素(Diphtheria Toxin) (SEQ ID NO: 35)、鐮狀瘧原蟲(Plasmodium Falciparum) (SEQ ID NO: 36)、霍亂毒素(Cholera Toxin) (SEQ ID NO: 38)。在其他實施例中，異源Th抗原決定基為呈單一序列或組合序列形式(例如SEQ ID NO: 32、39或41-45中之任一者)之理想化人工Th抗原決定基，其來源於麻疹病毒(Measles Virus)融合蛋白(MVF 1至5)或B型肝炎表面抗原(HBsAg 1至3)。在一些實施例中，Th抗原決定基為SEQ ID NO: 44。在一些實施例中，Th抗原決定基為SEQ ID NO: 42。在一些實施例中，Th抗原決定基為SEQ ID NO: 45。在一些實施例中，Th抗原決定基為SEQ ID NO: 97。在本文所述之肽免疫原構築體中之任一者中，所提供之Th抗原決定基可經SEQ ID NO: 42、44、45或97中之任一者，例如SEQ ID NO: 44之Th抗原決定基取代。
在一些實施例中，肽免疫原構築體含有共價連接於異源T輔助細胞(Th)抗原決定基的來自Tau或Aβ之B細胞抗原決定基。在一些實施例中，肽免疫原構築體含有經由視情況選用之異源間隔子連接於異源T輔助細胞(Th)抗原決定基的來自Tau或Aβ之B細胞抗原決定基。在一些實施例中，肽免疫原構築體含有直接共價連接於異源T輔助細胞(Th)抗原決定基的來自Tau或Aβ之B細胞抗原決定基。
在某些實施例中，Tau肽免疫原構築體含有具有來自Tau之胺基酸序列(例如SEQ ID NO: 1-8、17-30或63-67或202中之任一者)的B細胞抗原位，其經由視情況選用之異源間隔子連接於來源於病原性蛋白之異源Th抗原決定基(例如SEQ ID NO: 31-59及97中之任一者)。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體含有具有胺基酸序列SEQ ID NO: 2之B細胞抗原位。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體含有具有胺基酸序列SEQ ID NO: 7之B細胞抗原位。在一些實施例中，視情況選用之異源間隔子為能夠將兩個胺基酸及/或肽連接在一起之分子或化學結構。在某些實施例中，間隔子為天然存在之胺基酸、非天然存在之胺基酸或其組合。在具體實施例中，Tau肽免疫原構築體具有 表 2中所示的SEQ ID NO: 9-16中之任一者(例如SEQ ID NO: 10或15)的胺基酸序列(或Tau肽與Th肽之位置顛倒的構築體)。
在某些實施例中，Tau肽免疫原構築體含有具有來自Tau之胺基酸序列(例如SEQ ID NO: 72-76或96中之任一者)的B細胞抗原位，其經由視情況選用之異源間隔子連接於來源於病原性蛋白之異源Th抗原決定基(例如SEQ ID NO: 31-59及97中之任一者)。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體含有具有胺基酸序列SEQ ID NO: 72之B細胞抗原位。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體含有具有胺基酸序列SEQ ID NO: 73之B細胞抗原位。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體含有具有胺基酸序列SEQ ID NO: 74之B細胞抗原位。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體含有具有胺基酸序列SEQ ID NO: 75之B細胞抗原位。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體含有具有胺基酸序列SEQ ID NO: 76之B細胞抗原位。在一些實施例中，視情況選用之異源間隔子為能夠將兩個胺基酸及/或肽連接在一起之分子或化學結構。在某些實施例中，間隔子為天然存在之胺基酸、非天然存在之胺基酸或其組合。在具體實施例中，Tau肽免疫原構築體具有 表 2中所示的SEQ ID NO:77-81中之任一者的胺基酸序列(或Tau肽與Th肽之位置顛倒的構築體)。
在某些實施例中，Aβ肽免疫原構築體含有具有來自Aβ 1-42之胺基酸序列(SEQ ID NO: 68)的B細胞抗原位，其經由視情況選用之異源間隔子連接於來源於病原性蛋白之異源Th抗原決定基(例如SEQ ID NO: 31-59及97中之任一者)。在一些實施例中，視情況選用之異源間隔子為能夠將兩個胺基酸及/或肽連接在一起之分子或化學結構。在某些實施例中，間隔子為天然存在之胺基酸、非天然存在之胺基酸或其組合。在具體實施例中，Aβ肽免疫原構築體具有 表 4中所示的SEQ ID NO:70或71中之一者的胺基酸序列(或Aβ肽與Th肽之位置顛倒的構築體)。
在某些實施例中，Aβ肽免疫原構築體含有具有依 表 3中所示之SEQ ID NO: 68、69、82-88中之一者之胺基酸序列的B細胞抗原位，其經由視情況選用之異源間隔子連接於來源於病原性蛋白之異源Th抗原決定基(例如SEQ ID NO: 31-59及97中之任一者)。在一些實施例中，Aβ肽免疫原構築體含有具有胺基酸序列SEQ ID NO: 69之B細胞抗原位。在一些實施例中，Aβ肽免疫原構築體含有具有胺基酸序列SEQ ID NO: 82之B細胞抗原位。在一些實施例中，視情況選用之異源間隔子為能夠將兩個胺基酸及/或肽連接在一起之分子或化學結構。在某些實施例中，間隔子為天然存在之胺基酸、非天然存在之胺基酸或其組合。在具體實施例中，Aβ肽免疫原構築體具有表4中所示的SEQ ID NO:70或89的胺基酸序列(或Aβ肽與Th肽之位置顛倒的構築體)。
本揭示亦關於含有Tau肽免疫原構築體之組合物。在一些實施例中，所揭示之組合物含有多於一個Tau肽免疫原構築體以覆蓋多個來自Tau之B抗原決定基(例如2、3、4或更多個Tau肽免疫原構築體)。在某些實施例中，組合物含有Tau肽免疫原構築體(例如SEQ ID NO: 9-16中之兩者或更多者的任何組合，或SEQ ID NO: 9-16及77-81中之兩者或更多者的任何組合)與多於一個來源於病原性蛋白之異源Th抗原決定基的混合物以覆蓋患者之廣泛遺傳背景。與僅含有單一Th肽免疫原構築體之組合物相比，含有肽免疫原構築體之混合物的組合物在用於治療tau蛋白病變的免疫接種後可產生較高百分比的起反應者比率。在一些實施例中，靶向Tau之肽免疫原構築體靶向Tau之不同區域(例如，一個肽免疫原構築體靶向Tau之N端區，而第二肽免疫原構築體則靶向重複域；例如分別為SEQ ID NO: 10及15)。在一些實施例中，經一或多個Tau肽免疫原構築體靶向的Tau之N端區在SEQ ID NO: 60之胺基酸1-44內。在一些實施例中，經一或多個Tau肽免疫原構築體靶向的Tau之N端區在SEQ ID NO: 60之胺基酸13-22內。在一些實施例中，經一或多個Tau肽免疫原構築體靶向的區域在SEQ ID NO: 60之胺基酸244-372內。在一些實施例中，經一或多個Tau肽免疫原構築體靶向的區域為在SEQ ID NO: 60之胺基酸244-372內重複(例如重複2次、3次或4次)之胺基酸區域。在一些實施例中，經一或多個Tau肽免疫原構築體靶向的區域為Tau之1R、2R、3R及/或4R重複區域內的胺基酸區域，該等重複區域係此項技術中已知的或本文所述。在一些實施例中，一或多個肽免疫原構築體靶向SEQ ID NO: 60之胺基酸1-44或13-22內的Tau之區域，且一或多個肽免疫原構築體靶向SEQ ID NO: 60之胺基酸244-372內的Tau之區域(或依本文所述之在SEQ ID NO: 60之胺基酸244-372內重複之胺基酸區域)。
在一些實施例中，包含一或多個Tau肽免疫原構築體之組合物亦包括一或多個Aβ肽免疫原構築體(例如，包含SEQ ID NO: 70之肽免疫原構築體、包含SEQ ID NO: 71之肽免疫原構築體或SEQ ID NO: 70及71之組合)。在一些實施例中，包含一或多個Tau肽免疫原構築體之組合物亦包括一或多個Aβ肽免疫原構築體(例如，包含SEQ ID NO: 70之肽免疫原構築體、包含SEQ ID NO: 89之肽免疫原構築體或SEQ ID NO: 70及89之組合)。
本揭示亦關於用於治療及/或預防tau蛋白病變之醫藥組合物。在一些實施例中，醫藥組合物含有以穩定的免疫刺激性複合物形式存在的所揭示之肽免疫原構築體中之一者、兩者或更多者，該免疫刺激性複合物藉由使CpG寡聚物(例如CpG1、CpG2或CpG3)與含有肽免疫原複合物之組合物混合而經由靜電締合形成。此類穩定的免疫刺激性複合物能夠進一步增強肽免疫原構築體之免疫原性。在一些實施例中，醫藥組合物含有佐劑，諸如礦物鹽，包括明礬凝膠(ALHYDROGEL)、磷酸鋁(ADJUPHOS)或油包水乳液(包括MONTANIDE ISA 51或720)。
本揭示亦關於針對所揭示之Tau肽免疫原構築體的抗體。詳言之，當向個體投與時，本揭示之Tau肽免疫原構築體能夠刺激產生與Tau胺基酸序列(例如SEQ ID NO: 1-8、17-30或63-67中之任一者或多者)有交叉反應性的高度特異性抗體。由肽免疫原構築體產生的高度特異性抗體與重組含Tau蛋白有交叉反應性。所揭示之抗體以高特異性結合於Tau，而不太針對用於增強免疫原性之異源Th抗原決定基(若存在)，此與用於此類肽抗原性增強之習知蛋白質或其他生物載劑形成鮮明對比。
本揭示亦關於針對所揭示之β類澱粉肽免疫原構築體的抗體。詳言之，當向個體投與時，本揭示之β類澱粉肽免疫原構築體能夠刺激產生與β類澱粉胺基酸序列(例如SEQ ID NO: 68、69或83-88中之任一者或多者)有交叉反應性的高度特異性抗體。由肽免疫原構築體產生的高度特異性抗體與重組含β類澱粉蛋白有交叉反應性。所揭示之抗體以高特異性結合於β類澱粉，而不太針對用於增強免疫原性之異源Th抗原決定基(若存在)，此與用於此類肽抗原性增強之習知蛋白質或其他生物載劑形成鮮明對比。
本揭示亦包括使用所揭示之肽免疫原構築體及/或針對肽免疫原構築體之抗體治療及/或預防tau蛋白病變的方法。在一些實施例中，用於治療及/或預防tau蛋白病變之方法包括向個體(例如哺乳動物)投與含有一個、兩個或更多個所揭示之肽免疫原構築體的組合物。在某些實施例中，方法中所用之組合物含有所揭示之肽免疫原構築體中之任一者或多者，其以與帶負電寡核苷酸，諸如CpG寡聚物經由靜電締合形成的穩定的免疫刺激性複合物形式存在，該等複合物視情況進一步補充有呈佐劑形式之礦物鹽或油，用於向患有tau蛋白病變之患者投與。所揭示之方法亦包括向處於tau蛋白病變風險下或患有其之主體投與肽免疫原構築體之給藥方案、劑型及途徑。在一些實施例中，個體或患者為人類。
在一些態樣中，本揭示提供一種組合物或套組，其含有包含第一Tau B細胞抗原決定基之第一Tau肽免疫原構築體，該第一Tau B細胞抗原決定基包含來自SEQ ID NO: 60之全長Tau蛋白的約6至約40個胺基酸殘基或由其組成；及 (i)包含第二Tau B細胞抗原決定基之第二Tau肽免疫原構築體，該第二Tau B細胞抗原決定基包含來自SEQ ID NO: 60之全長Tau蛋白的約6至約40個胺基酸殘基或由其組成，其中該第二B細胞抗原決定基與該第一B細胞抗原決定基不同，及/或 (ii)包含β類澱粉B細胞抗原決定基之β類澱粉(Aβ)肽免疫原構築體，該β類澱粉B細胞抗原決定基包含來自SEQ ID NO: 68之全長β類澱粉蛋白的約6至約42個胺基酸殘基或由其組成。
在前述或相關態樣之一些實施例中，本文所揭示之組合物或套組包含第二Tau肽免疫原構築體。在前述或相關態樣之一些實施例中，本文所揭示之組合物或套組包含β類澱粉肽免疫原構築體。在前述或相關態樣之一些實施例中，本文所揭示之組合物或套組包含第二Tau肽免疫原構築體及β類澱粉肽免疫原構築體。
在前述或相關態樣之一些實施例中，第一Tau B細胞抗原決定基包含來自SEQ ID NO: 60之N端胺基酸1至44的約6至40個胺基酸殘基或由其組成，且第二Tau B細胞抗原決定基包含來自SEQ ID NO: 60之重複域胺基酸244至372的約6至40個胺基酸殘基或由其組成。在前述或相關態樣之一些實施例中，該β類澱粉B細胞抗原決定基包含來自SEQ ID NO: 68之胺基酸1-16的至少6個胺基酸殘基。在前述或相關態樣之一些實施例中，β類澱粉B細胞抗原決定基包含來自SEQ ID NO: 68之胺基酸1-16的至少8個胺基酸殘基。
在前述或相關態樣之一些實施例中，第一Tau B細胞抗原決定基、第二Tau B細胞抗原決定基及β類澱粉B細胞抗原決定基之長度各自或獨立地為約8至40個胺基酸。在前述或相關態樣之一些實施例中，第一Tau B細胞抗原決定基、第二Tau B細胞抗原決定基及β類澱粉B細胞抗原決定基之長度各自或獨立地為約8至15個胺基酸。在前述或相關態樣之一些實施例中，第一Tau B細胞抗原決定基、第二Tau B細胞抗原決定基及β類澱粉B細胞抗原決定基之長度各自或獨立地為約10至14個胺基酸。
在前述或相關態樣之一些實施例中，第一Tau B細胞抗原決定基及第二Tau B細胞抗原決定基(若存在)獨立地選自SEQ ID NO: 1-8、17-30、63-67、72-76、96及202。在一些實施例中，第一Tau B細胞抗原決定基及第二Tau B細胞抗原決定基(若存在)獨立地選自SEQ ID NO: 2、4、7、72-76及202。在前述或相關態樣之一些實施例中，第一Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 2或由其組成。在前述或相關態樣之一些實施例中，第一Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 7或由其組成。在前述或相關態樣之一些實施例中，第一Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 202或由其組成。在前述或相關態樣之一些實施例中，第一Tau B細胞抗原決定基係選自SEQ ID No: 1或SEQ ID NO:2，且第二Tau B細胞抗原決定基係選自SEQ ID NO: 7及72-76。在前述或相關態樣之一些實施例中，第一Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 2或由其組成，且第二Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 7或由其組成。在前述或相關態樣之一些實施例中，β類澱粉B細胞抗原決定基係選自SEQ ID NO: 69及82-88。在前述或相關態樣之一些實施例中，β類澱粉B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 69或SEQ ID NO: 82或由其組成。
在前述或相關態樣之一些實施例中，第一Tau肽免疫原構築體包含第一異源T輔助(Th)抗原決定基，第二Tau肽免疫原構築體(若存在)包含第二異源Th抗原決定基，且β類澱粉肽免疫原構築體(若存在)包含第三異源Th抗原決定基。在一些實施例中，第一異源Th抗原決定基、第二異源Th抗原決定基及第三異源Th抗原決定基各自獨立地選自SEQ ID NO: 31-59及97。在一些實施例中，第一異源Th抗原決定基、第二異源Th抗原決定基及第三異源Th抗原決定基各自獨立地選自SEQ ID NO: 42、44、45及97。在一些實施例中，第一異源Th抗原決定基、第二異源Th抗原決定基及第三異源Th抗原決定基各具有SEQ ID NO: 44。
在前述或相關態樣之一些實施例中，第一異源Th抗原決定基與第一Tau B細胞抗原決定基、第二異源Th抗原決定基與第二Tau B細胞抗原決定基及第三異源Th抗原決定基與β類澱粉B細胞抗原決定基各自直接或經由異源間隔子共價連接。在一些實施例中，本文所揭示之組合物或套組包含異源間隔子連接第一異源Th抗原決定基與第一Tau B細胞抗原決定基、第二異源Th抗原決定基與第二Tau B細胞抗原決定基，及/或第三異源Th抗原決定基與β類澱粉B細胞抗原決定基。在一些實施例中，異源間隔子包含一或多個胺基酸。在一些實施例中，一或多個胺基酸為Lys-、Gly-、Lys-Lys-Lys-、(α, ε-N)Lys、Lys-Lys-Lys-ε-Lys (SEQ ID NO: 95)，或ε-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 62)。在一些實施例中，一或多個胺基酸為Lys-Lys-Lys-ε-Lys (SEQ ID NO: 95)或ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 62)。
在前述或相關態樣之一些實施例中，第一Tau肽免疫原構築體及第二Tau肽免疫原構築體(若存在)由下式表示： (Th) m-(A) n-(Tau片段)-X 或 (Tau片段)-(A) n-(Th) m-X 其中 Th為異源T輔助抗原決定基； A為異源間隔子； (Tau片段)為具有來自SEQ ID NO: 60之全長Tau蛋白的6至約40個胺基酸殘基(視情況約10至40個胺基酸殘基)的B細胞抗原決定基； X為胺基酸之α-COOH或α-CONH 2； m為1至約4；及 n為0至約10。
在前述或相關態樣之一些實施例中，β類澱粉肽免疫原構築體由下式表示： (Th) m-(A) n-(Aβ片段)-X 或 (Aβ片段)-(A) n-(Th) m-X 其中 Th為異源T輔助抗原決定基； A為異源間隔子； (Aβ片段)為具有來自SEQ ID NO: 68之全長Aβ蛋白的6至約42個胺基酸殘基(視情況約10至42個胺基酸殘基)的B細胞抗原決定基； X為胺基酸之α-COOH或α-CONH 2； m為1至約4；及 n為0至約10。
在前述或相關態樣之一些實施例中，第一Tau肽免疫原構築體包含第一異源Th抗原決定基共價連接於第一Tau B細胞抗原決定基之羧基端，第二Tau肽免疫原構築體包含第二異源Th抗原決定基共價連接於第二Tau B細胞抗原決定基之胺基端，及/或β類澱粉肽免疫原構築體包含第三異源Th抗原決定基共價連接於β類澱粉B細胞抗原決定基之羧基端。
在前述或相關態樣之一些實施例中，第一Tau肽免疫原構築體及第二Tau肽免疫原構築體係選自SEQ ID NO: 9-16及77-81，或肽細胞抗原決定基與Th抗原決定基之位置顛倒的構築體。在前述或相關態樣之一些實施例中，第一Tau肽免疫原構築體包含SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 15之胺基酸序列或由其組成。在前述或相關態樣之一些實施例中，第一Tau肽免疫原構築體包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列或由其組成，且第二Tau肽免疫原構築體包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列或由其組成。在前述或相關態樣之一些實施例中，第一Tau肽免疫原構築體及/或第二Tau肽免疫原構築體係選自SEQ ID NO:77-81，視情況其中該第一Tau肽免疫原構築體具有SEQ ID NO: 10之胺基酸序列且該第二Tau肽免疫原構築體係選自SEQ ID NO:77-81。在前述或相關態樣之一些實施例中，β類澱粉肽免疫原構築體係選自SEQ ID NO: 70、71及89，或其中B細胞抗原決定基與Th抗原決定基之位置顛倒的構築體。在一些實施例中，β類澱粉肽免疫原構築體包含SEQ ID NO: 70或由其組成。在一些實施例中，β類澱粉肽免疫原構築體包含SEQ ID NO: 89或由其組成。
在一些態樣中，本揭示提供一種Tau肽免疫原構築體，其含有包含選自SEQ ID NO: 72-76之胺基酸序列的B細胞抗原決定基。在前述或相關態樣之一些實施例中，本文所揭示之Tau肽免疫原構築體由下式表示： (Th) m-(A) n-(B細胞抗原決定基)-X 或 (B細胞抗原決定基)-(A) n-(Th) m-X 其中 Th為異源T輔助抗原決定基； A為異源間隔子； (B細胞抗原決定基)包含選自SEQ ID NO: 72-76之胺基酸序列、基本上由其組成，或由其組成； X為胺基酸之α-COOH或α-CONH 2； m為1至約4；及 n為0至約10。
在一些實施例中，本文所揭示之Tau肽免疫原構築體包含選自SEQ ID NO:77-81之胺基酸序列。
在一些態樣中，本揭示提供一種β類澱粉肽免疫原構築體，其含有包含胺基酸序列SEQ ID NO: 82、基本上由其組成或由其組成的B細胞抗原決定基。在前述或相關態樣之一些實施例中，本文所揭示之β類澱粉肽免疫原構築體由下式表示： (Th) m-(A) n-(B細胞抗原決定基)-X 或 (B細胞抗原決定基)-(A) n-(Th) m-X 其中 Th為異源T輔助抗原決定基； A為異源間隔子； (B細胞抗原決定基)包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列、基本上由其組成，或由其組成； X為胺基酸之α-COOH或α-CONH 2； m為1至約4；及 n為0至約10。
在一些實施例中，本文所揭示之β類澱粉肽免疫原構築體包含胺基酸序列SEQ ID NO: 89、基本上由其組成，或由其組成。
在一些態樣中，本揭示提供一種組合物或套組，其包含本文所揭示之Tau肽免疫原構築體。
在一些態樣中，本揭示提供一種組合物或套組，其包含本文所揭示之β類澱粉肽免疫原構築體。
在前述或相關態樣之一些實施例中，本文所揭示之組合物或套組為單一組合物，其包含第一Tau肽免疫原構築體，及以下中之至少一者：第二Tau肽免疫原構築體及β類澱粉肽免疫原構築體。
在前述或相關態樣之一些實施例中，本文所揭示之組合物或套組為如下套組，其包含第一Tau肽免疫原構築體，及以下中之至少一者：第二Tau肽免疫原構築體及β類澱粉肽免疫原構築體。在一些實施例中，在投與個體之前，使套組之各組分混合形成單一組合物，其包含第一Tau肽免疫原構築體，及以下中之至少一者：第二Tau肽免疫原構築體及β類澱粉肽免疫原構築體。在一些實施例中，套組之各組分用於形成包含第一Tau肽免疫原構築體之第一組合物，及包含以下中之至少一者的第二組合物：第二Tau肽免疫原構築體及β類澱粉肽免疫原構築體。
在一些態樣中，本揭示提供一種醫藥組合物，其包含本文所揭示之組合物，及醫藥學上可接受之遞送媒劑及/或佐劑。在前述或相關態樣之一些實施例中，第一Tau肽免疫原構築體、第二Tau肽免疫原構築體及/或β類澱粉肽免疫原構築體與CpG寡脫氧核苷酸(ODN)混合形成穩定的免疫刺激性複合物。在一些實施例中，本文所揭示之醫藥組合物包含3或4個Tau肽免疫原構築體。在一些實施例中，本文所揭示之醫藥組合物包含多於一個β類澱粉肽免疫原構築體。
在一些態樣中，本揭示提供一種分離之抗體或其抗原決定基結合片段，其特異性結合於Tau肽免疫原構築體或β類澱粉肽免疫原構築體之B細胞抗原決定基，該抗體或其抗原決定基結合片段係由向哺乳動物投與一或多種本文所揭示之組合物或本文所揭示之肽免疫原構築體獲得。在前述或相關態樣之一些實施例中，本文所揭示之分離之抗體或其抗原決定基結合片段結合於Tau肽免疫原構築體或β類澱粉肽免疫原構築體。
在一些態樣中，本揭示提供一種組合物，其包含本文所揭示之分離之抗體或其抗原決定基結合片段。
在一些態樣中，本揭示提供一種對個體之tau蛋白病變預防、抑制、降低其嚴重程度、延遲或治療之方法，該方法包含向該個體投與Tau肽免疫原構築體、β類澱粉肽免疫原構築體、一或多種本文所揭示之組合物。在前述或相關態樣之一些實施例中，該方法包含投與組合物，其中第一Tau肽免疫原構築體以及第二Tau肽免疫原構築體及β類澱粉肽免疫原構築體中之至少一者包含在單一組合物中。
在一些態樣中，本揭示提供一種對個體之tau蛋白病變預防、抑制、降低其嚴重程度、延遲或治療之方法，該方法包含向該個體投與：包含第一Tau B細胞抗原決定基之第一Tau肽免疫原構築體，該第一Tau B細胞抗原決定基包含來自SEQ ID NO: 60之全長Tau蛋白的約6至約40個(例如6至40個、8至40個或8至15個)胺基酸殘基或由其組成；及 (i)包含第二Tau B細胞抗原決定基之第二Tau肽免疫原構築體，該第二Tau B細胞抗原決定基包含來自SEQ ID NO: 60之全長Tau蛋白的約6至約40個(例如6至40個、8至40個或8至15個)胺基酸殘基或由其組成，其中該第二B細胞抗原決定基與該第一B細胞抗原決定基不同，及/或 (ii)包含β類澱粉B細胞抗原決定基之β類澱粉(Aβ)肽免疫原構築體，該β類澱粉B細胞抗原決定基包含來自SEQ ID NO: 68之全長β類澱粉蛋白的約6至約42個(例如6至40個、8至40個或8至15個)胺基酸殘基或由其組成；及 其中該第一Tau肽免疫原構築體及該第二Tau肽免疫原構築體及/或該β類澱粉肽免疫原構築體包含在分開投與的各別組合物中。
在前述或相關態樣之一些實施例中，該tau蛋白病變係選自阿茲海默氏病、路易體病(Lewy body disease)、17號染色體相關額顳葉型癡呆、帕金森氏症(parkinsonism linked to chromosome 17；FTDP-17)、進行性核上麻痺、皮質基底核退化症、匹克病、進行性皮質下神經膠瘤病、僅纏結型癡呆、瀰漫性神經纖維纏結伴鈣化、嗜銀粒癡呆、肌肉萎縮性側索硬化帕金森氏症-癡呆綜合症、拳擊手型癡呆、唐氏症候群(Down syndrome)、格-施-謝三氏病(Gerstmann-Straussler-Scheinker disease)、哈-施二氏病(Hallerworden-Spatz disease)、包涵體肌炎、庫賈氏病(Creutzfeld-Jakob disease)、多系統萎縮、尼-匹二氏病(Niemann-Pick disease) C型、普里昂(prion)蛋白類澱粉腦血管病變、亞急性硬化性泛腦炎、肌強直性營養不良、非關島型運動神經元病伴神經纖維纏結(non-guanamian motor neuron disease with neurofibrillary tangles)、腦炎後型帕金森氏症，及慢性創傷性腦病。在一些實施例中，tau蛋白病變為阿茲海默氏病。在一些實施例中，個體為哺乳動物。在一些實施例中，個體為人類。
相關申請案之交叉引用 本申請案主張於2023年1月26日申請之美國臨時專利申請案第63/481,744號及2023年3月21日申請之美國專利申請案第63/453,677號之權益，該等申請案各自以全文引用之方式併入本文中。
序列表之引用 本申請案以電子方式申請且包括呈ST.26(XML)格式之電子提交序列表，名為「VXH-11025_SL.XML」，創建於2024年1月16日，且位元組大小為206,048。呈ST.26 (XML)格式之序列表係本說明書之一部分且以全文引用之方式併入本文中。
本揭示係關於靶向Tau蛋白部分的個別肽免疫原構築體，用於治療及/或預防阿茲海默氏病及tau蛋白病變。本揭示亦關於含有Tau肽免疫原構築體之組合物、製造及使用該等肽免疫原構築體之方法以及由該等肽免疫原構築體產生之抗體。本揭示進一步關於包含多於一個(例如2、3或4個) Tau肽免疫原構築體(例如SEQ ID NO: 9-16中之一或多者例如10及15；或SEQ ID NO:77-81中之一或多者；呈任何組合；亦參見下文)的組合物，以及使用此類組合物或組合預防及/或治療阿茲海默氏病及tau蛋白病變之方法。本揭示進一步提供包含一或多個(例如1、2、3或4個) Tau肽免疫原構築體及一或多個(例如1、2、3或4個) Aβ肽免疫原構築體(例如SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 71、SEQ ID NO:89或其任何組合，諸如SEQ ID NO: 70及SEQ ID NO: 71，或SEQ ID NO: 70及SEQ ID NO: 89)的組合物，以及使用此類組合物或組合預防及/或治療阿茲海默氏病及tau蛋白病變之方法。在一些實施例中，SEQ ID NO: 10與SEQ ID NO: 70及71組合。在一些實施例中，SEQ ID NO: 11與SEQ ID NO: 70及71組合。在一些實施例中，SEQ ID NO: 12與SEQ ID NO: 70及71組合。在一些實施例中，SEQ ID NO: 13與SEQ ID NO: 70及71組合。在一些實施例中，SEQ ID NO: 14與SEQ ID NO: 70及71組合。在一些實施例中，SEQ ID NO: 15與SEQ ID NO: 70及71組合。在一些實施例中，SEQ ID NO: 16與SEQ ID NO: 70及71組合。在一些實施例中，將SEQ ID NO: 9、10、11、12、13、14、15或16中之任一者之另外不同序列添加至上文所列之組合(諸如本文所述之任何另外Tau肽免疫原構築體序列)。在一些實施例中，僅SEQ ID NO: 70或僅SEQ ID NO: 71包括於上文所列之組合中。在一些實施例中，SEQ ID NO: 10與SEQ ID NO: 70及/或89組合。在一些實施例中，SEQ ID NO: 11與SEQ ID NO: 70及/或89組合。在一些實施例中，SEQ ID NO: 12與SEQ ID NO: 70及/或89組合。在一些實施例中，SEQ ID NO: 13與SEQ ID NO: 70及/或89組合。在一些實施例中，SEQ ID NO: 14與SEQ ID NO: 70及/或89組合。在一些實施例中，SEQ ID NO: 15與SEQ ID NO: 70及/或89組合。在一些實施例中，SEQ ID NO: 16與SEQ ID NO: 70及/或89組合。在一些實施例中，SEQ ID NO: 77與SEQ ID NO: 70及/或89組合。在一些實施例中，SEQ ID NO: 78與SEQ ID NO: 70及/或89組合。在一些實施例中，SEQ ID NO: 79與SEQ ID NO: 70及/或89組合。在一些實施例中，SEQ ID NO: 80與SEQ ID NO: 70及/或89組合。在一些實施例中，SEQ ID NO: 81與SEQ ID NO: 70及/或89組合。在一些實施例中，將另外不同的Tau肽免疫原構築體序列添加至上文所列之組合中之任一者(諸如本文所述之任何另外Tau肽免疫原構築體序列)。在一些實施例中，僅SEQ ID NO: 70或僅SEQ ID NO: 89包括於上文所列之組合中之任一者中。
所揭示之肽免疫原構築體含有約15個或更多個胺基酸。在一些實施例中，所揭示之肽免疫原構築體含有約80個或更少、約75個或更少、約70個或更少、約60個或更少、約50個或更少、約40個或更少或約35個或更少胺基酸。
在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體含有來自人類Tau蛋白之最長同功異型物(GenBank：AGF19246.1)之部分的B細胞抗原決定基，其具有 表 6中所示之胺基酸序列。在一些實施例中，β類澱粉肽免疫原構築體含有來自Aβ之一部分的B細胞抗原決定基(參見例如， 表 3)。B細胞抗原決定基可各自經由視情況選用之異源間隔子連接於來源於病原體蛋白之異源T輔助細胞(Th)抗原決定基。所揭示之肽免疫原構築體刺激產生針對Tau或Aβ之高特異性抗體。所揭示之肽免疫原構築體可用作患有阿茲海默氏病及/或tau蛋白病變之患者的免疫療法。
Tau肽免疫原構築體之B細胞抗原決定基部分可具有來自全長Tau蛋白的胺基酸序列( 表 6)。在一些實施例中，B細胞抗原決定基具有含有 表 1中所列之目標序列(例如SEQ ID NO: 1至8、202)中之任一者的序列。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基具有 表 7- 表 10中之任一者中所提供的序列。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基具有表7-表10中之任一者中所提供的任何免疫原性序列(能夠引發抗Tau抗體之序列)。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基具有以下之序列：p5543a、p5546a、p5547a、p5555a、p5557a、p5558a、p5559a、p5564a、p5565a、p5566a、p5569a、p5695a、p5696或p5535a，其分別為SEQ ID NO: 17-30；或以下之序列：p5556a、p5456a、p4579a、p5541a或p4062a，其分別為SEQ ID NO: 63-67，亦示於 表 1中。
Aβ肽免疫原構築體之B細胞抗原決定基部分可具有來自Aβ 1-42，例如Aβ 1-14(參見 表 3；亦參見WO 2014/143087中之另外Aβ肽)之胺基酸序列。在一些實施例中，Aβ肽免疫原構築體之B細胞抗原決定基部分具有表3中所示之任一胺基酸序列。在一些實施例中，Aβ肽免疫原構築體之B細胞抗原決定基部分具有WO 2014/143087及/或US 9,102,752 B2中之任一Aβ肽胺基酸序列，該等文獻中之各者以全文引用之方式併入本文中。WO 2014/143087及/或US 9,102,752 B2中之β類澱粉B細胞抗原決定基及包含該等B細胞抗原決定基之β類澱粉肽免疫原構築體的揭示內容以引用之方式特定併入本文中。在一些實施例中，Aβ B細胞抗原決定基具有WO 2014/143087及/或US 9,102,752 B2中所提供之任何Aβ B細胞抗原決定基序列。在一些實施例中，Aβ B細胞抗原決定基具有WO 2014/143087及/或9,102,752 B2中所提供之任何免疫原性Aβ B細胞抗原決定基序列(能夠引發抗Aβ抗體之序列)。
本揭示之Tau及Aβ肽免疫原構築體可含有來源於病原性蛋白之異源Th抗原決定基胺基酸序列(例如SEQ ID NO: 31至59及97中之任一者)，依 表 5中所示。在某些實施例中，異源Th抗原決定基來源於天然病原體，諸如白喉毒素(SEQ ID NO: 35)、鐮狀瘧原蟲(SEQ ID NO: 36)、霍亂毒素(SEQ ID NO: 38)。在其他實施例中，異源Th抗原決定基為呈單一序列或組合序列形式(例如SEQ ID NO: 32、39或41-45中之任一者)之理想化人工Th抗原決定基，其來源於麻疹病毒融合蛋白(MVF 1至5)或B型肝炎表面抗原(HBsAg 1至3)。在一些實施例中，異源Th抗原決定基具有選自SEQ ID NO: 42、44、45及97之胺基酸序列。在一些實施例中，異源Th抗原決定基具有胺基酸序列SEQ ID NO: 44。
在一些實施例中，肽免疫原構築體含有經由視情況選用之異源間隔子連接於異源T輔助細胞(Th)抗原決定基的來自Tau或Aβ之B細胞抗原決定基。在某些實施例中，肽免疫原構築體含有具有來自Tau之胺基酸序列(參見 表 1(例如SEQ ID NO: 1-8中之任一者)及 表 7- 表 10(例如SEQ ID NO: 17-30或63-67中之任一者))或來自Aβ之胺基酸序列(例如SEQ ID NO: 68或69)的B細胞抗原位，其經由視情況選用之異源間隔子連接於來源於病原性蛋白之異源Th抗原決定基(例如SEQ ID NO: 31至59中之任一者)。在一些實施例中，視情況選用之異源間隔子為能夠將兩個胺基酸及/或肽連接在一起之分子或化學結構。在某些實施例中，間隔子為天然存在之胺基酸、非天然存在之胺基酸或其組合。在具體實施例中，Tau肽免疫原構築體具有 表 2中所示之胺基酸序列(例如SEQ ID NO: 9-16中之任一者的序列，或Tau肽與Th抗原決定基之位置顛倒的構築體)。在具體實施例中，Tau肽免疫原構築體具有SEQ ID NO: 77-81中之任一者的胺基酸序列，或其中Tau肽與Th抗原決定基之位置顛倒的構築體。在具體實施例中，Aβ肽免疫原構築體具有 表 4中所示之胺基酸序列(例如，SEQ ID NO: 70、71或89之序列，或Aβ肽與Th抗原決定基之位置顛倒的構築體)。
本揭示亦關於含有Tau肽免疫原構築體之組合物。在一些實施例中，所揭示之組合物含有多於一個Tau肽免疫原構築體以覆蓋多個來自Tau之B抗原決定基。在某些實施例中，組合物含有Tau肽免疫原構築體與多於一個來源於病原性蛋白之異源Th抗原決定基的混合物以覆蓋患者之廣泛遺傳背景。與僅含有單一肽免疫原構築體之組合物相比，含有肽免疫原構築體之混合物的組合物在用於治療阿茲海默氏病及/或tau蛋白病變的免疫接種後可產生較高百分比的起反應者比率。本揭示亦關於含有一或多個Tau肽免疫原構築體(例如依本文所述)及一或多個Aβ肽免疫原構築體(例如依本文所述)的組合物。
本揭示亦關於用於治療及/或預防阿茲海默氏病及/或tau蛋白病變之醫藥組合物。在一些實施例中，醫藥組合物含有以穩定的免疫刺激性複合物形式存在的所揭示之肽免疫原構築體或其組合(例如Tau肽免疫原構築體之混合物或Tau肽免疫原構築體及Aβ肽免疫原構築體之混合物)，該免疫刺激性複合物藉由使CpG寡聚物與含有肽免疫原複合物之組合物混合而經由靜電締合形成。此類穩定的免疫刺激性複合物能夠進一步增強肽免疫原構築體之免疫原性。在一些實施例中，醫藥組合物含有佐劑，諸如礦物鹽，包括明礬凝膠(ALHYDROGEL)、磷酸鋁(ADJUPHOS)或油包水乳液(包括MONTANIDE ISA 51或720)。當組合使用時，本文中所述之肽免疫原構築體可包含在單一組合物中，或可包含在各別組合物中。
本揭示亦關於針對所揭示之Tau肽免疫原構築體及/或所揭示之β類澱粉肽免疫原構築體的抗體。詳言之，當向個體投與時，本揭示之肽免疫原構築體能夠刺激產生與目標胺基酸序列有交叉反應性的高度特異性抗體。舉例而言，由肽免疫原構築體產生的高度特異性抗體與重組含Tau蛋白有交叉反應性。所揭示之抗體以高特異性結合於Tau，而不太針對用於增強免疫原性之異源Th抗原決定基(若存在)，此與用於此類肽抗原性增強之習知蛋白質或其他生物載劑形成鮮明對比。
本揭示亦包括使用所揭示之肽免疫原構築體(包括例如上文及本文其他處所述之組合)及/或針對該等肽免疫原構築體之抗體治療及/或預防阿茲海默氏病及/或tau蛋白病變的方法。在一些實施例中，用於治療及/或預防阿茲海默氏病及/或tau蛋白病變之方法包括向主體投與含有所揭示之肽免疫原構築體之組合物。在某些實施例中，方法中所用之組合物含有一或多個所揭示之肽免疫原構築體，其以與帶負電寡核苷酸，諸如CpG寡聚物經由靜電締合形成的穩定的免疫刺激性複合物形式存在，該等複合物視情況進一步補充有呈佐劑形式之礦物鹽或油，用於向患有阿茲海默氏病及/或tau蛋白病變之患者投與。所揭示之方法亦包括向處於阿茲海默氏病及/或tau蛋白病變風險下或患有其之主體投與肽免疫原構築體之給藥方案、劑型及途徑。
本文中所用之章節標題僅出於組織目的而不應理解為限制所描述之主題。本申請案中所引用之所有參考文獻或參考文獻之部分均以全文引用之方式明確併入本文中以達成任何目的。
除非另外解釋，否則本文中所用之所有技術及科學術語均具有與本發明所屬領域中之一般熟習此項技術者通常所理解相同的含義。除非上下文另外明確指示，否則單數術語「一(a/an)」及「該」包括多個指示物。類似地，除非上下文另外明確指示，否則字語「或」意欲包括「及」。因此，「包含A或B」意謂包括A，或B，或A及B。應進一步理解，針對多肽給出的所有胺基酸大小及所有分子量或分子質量值均為近似的，且提供用於描述。儘管類似於或等效於本文所述之方法及材料之彼等方法及材料可用於實踐或測試所揭示之方法，但下文描述適合之方法及材料。本文提及之所有公開案、專利申請案、專利及其他參考案均以全文引用之方式併入本文中。在有衝突之情況下，將以本說明書，包括術語之解釋為準。另外，材料、方法及實例僅為說明性的，且不意欲為限制性的。
術語依本文所用，術語「 約」係指陳述值之+/-10%的範圍。在一些實施例中，範圍為陳述值之+/- 5%、+/- 3%、+/- 2%、+/- 1%、+/- 0.5%或+/- 0.1%。
依本文所用，術語「 肽免疫原」係指共價連接於含有B細胞抗原決定基之肽的包含異源T輔助細胞抗原決定基的肽。共價連接可經由共價肽鍵、硫酯或異源間隔子。在一些實施例中，異源間隔子為或包含胺基酸序列。
依本文所用，關於肽免疫原或Th抗原決定基之術語「 人工」係指非天然存在的胺基酸序列。
依本文所用，關於TH抗原決定基之術語「 混雜」係指在物種中及在單一物種之個體中具有反應性的Th抗原決定基。
依本文所用，術語「 預防」個體之疾病或病狀係指在疾病或病狀發作之前向個體投與藥劑(例如本文所述之肽免疫原構築體)，其中在疾病或病狀發作之前向統計樣本投與藥劑，相對於未治療對照樣本，減少治療樣本之疾病或病狀之出現，或相對於未治療對照樣本，延遲疾病或病狀之一或多種症狀的發作或降低其出現率或嚴重度。
依本文所用，術語「 治療」個體之疾病或病狀係指向患有或疑似患有疾病或病狀之個體(亦即，在疾病或病狀發作之後)投與藥劑(例如本文所述之肽免疫原構築體)，使得疾病或病狀之至少一種症狀減少或防止惡化。
肽免疫原構築體本揭示提供肽免疫原構築體，其含有具有來自Tau或β類澱粉(Aβ)之胺基酸序列的B細胞抗原決定基，該B細胞抗原決定基直接或經由視情況選用之異源間隔子共價連接於異源T輔助細胞(Th)抗原決定基。
在一些實施例中，本文所述之肽免疫原構築體係如本文所述經修飾，例如藉由胺基酸之乙醯化、胺基酸之N-甲基化、出於二硫鍵形成目的用半胱胺酸取代一或兩個胺基酸及/或使用N端焦麩胺酸。可接受之修飾為本文所述之任何修飾(參見例如， 表 2及 表 4)。在一些實施例中，本文中考慮之修飾保護肽免疫原構築體免受蛋白酶降解。
依本文所用，片語「Tau肽免疫原構築體」係指含有以下之肽：(a)具有來自最長Tau同功異型物之全長序列(SEQ ID NO:60)的約6個或更多個胺基酸殘基的B細胞抗原決定基(例如約6-40、8-40、9-30、10-25、8-20、9-18、8-15、10-15、8-14或10-14；或約8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40個胺基酸)；(b)異源Th抗原決定基；及(c)視情況選用之異源間隔子。
在某些實施例中，Tau肽免疫原構築體可由下式表示： (Th) m-(A) n-(Tau片段)-X 或 (Tau片段)-(A) n-(Th) m-X 其中 Th為異源T輔助抗原決定基； A為異源間隔子； (Tau片段)為具有來自SEQ ID NO: 60之6至約40個胺基酸殘基的B細胞抗原決定基(例如約6-40、8-40、9-30、10-25、8-20、9-18、8-15、10-15、8-14或10-14；或約8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40個胺基酸)； X為胺基酸之α-COOH或α-CONH 2； m為1至約4；及 n為0至約10。
在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體係選自SEQ ID NO: 9-16及77-81中之任一者，或使用其兩者、三者或更多者之任何組合(參見 表 2)。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體係選自SEQ ID NO: 9-16中之任一者，或使用其兩者、三者或更多者之任何組合(參見 表 2)。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體係選自SEQ ID NO: 77-81中之任一者，或使用其兩者、三者或更多者之任何組合(參見 表 2)。
在一些實施例中，使用多於一個(例如2、3、4或更多個) Tau肽免疫原構築體(例如在本文所述之組合物、套組及方法中)以引發靶向來自Tau之多個B抗原決定基(例如分別為2、3、4或更多個抗原決定基)的抗體。在一些實施例中，多於一個Tau肽免疫原構築體包含來自Tau之不同區域的B細胞抗原決定基(例如針對一個肽免疫原構築體之Tau之N端區及針對第二肽免疫原構築體之重複域；例如分別為SEQ ID NO: 10及15)。在一些實施例中，Tau之N端區在SEQ ID NO: 60之胺基酸1-44(例如胺基酸13-22)內。在一些實施例中，Tau之重複域在SEQ ID NO: 60之胺基酸244-372內。在一些實施例中，包含SEQ ID NO: 60之胺基酸1-44 (例如胺基酸13-22)內的B細胞抗原決定基之Tau肽免疫原構築體與包含SEQ ID NO: 60之胺基酸244-372內的B細胞抗原決定基之另一Tau肽免疫原構築體一起使用(例如在相同組合物中、相同套組中或共投與)。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體中之一者包含來自SEQ ID NO: 60之Tau之N端區(具有來自胺基酸1至44，例如胺基酸13至22內的序列)的B細胞抗原決定基。在一些實施例中，另一Tau肽免疫原構築體包含來自在SEQ ID NO: 60之胺基酸244-372內重複(例如，重複2次、3次或4次)的胺基酸區域的B細胞抗原決定基。在一些實施例中，重複的胺基酸區域為Tau之1R、2R、3R及/或4R重複區域內的胺基酸區域，該等重複區域係此項技術中已知的或本文所述。在一些實施例中，一個Tau肽免疫原構築體包含來自N端區之B細胞抗原決定基，且一個Tau肽免疫原構築體包含來自除N端區以外之區域的B細胞抗原決定基(例如其中該等構築體中之一或兩者引發抗體結合於表 6中所提供的Tau之6種同功異型物中的4者、5者或各者)。在一些實施例中，一個Tau肽免疫原構築體包含來自Tau上重複域之B細胞抗原決定基，且一個Tau肽免疫原構築體包含來自除Tau之重複域以外的區域的B細胞抗原決定基(例如其中該等構築體中之一或兩者引發抗體結合於 表 6中所提供的Tau之6種同功異型物中的4者、5者或各者)。
在一些實施例中，選自SEQ ID NO: 9及10中之任一者的至少一個Tau肽免疫原構築體與選自SEQ ID NO: 15及77-81中之任一者的至少一個Tau肽免疫原構築體一起使用(例如在相同組合物中、相同套組中或共投與)。
在一些實施例中，選自SEQ ID NO: 9-16中之任一者的至少一個Tau肽免疫原構築體與選自SEQ ID NO: 77-81中之任一者的至少一個Tau肽免疫原構築體一起使用(例如在相同組合物中、相同套組中或共投與)。
在一些實施例中，至少一個SEQ ID NO: 10之Tau肽免疫原構築體與選自本文所提供之任何其他者的至少一個Tau肽免疫原構築體一起使用(例如在相同組合物中、相同套組中或共投與)。
在一些實施例中，選自SEQ ID NO: 15及77-81中之任一者的至少一個Tau肽免疫原構築體與選自本文所提供之任何其他者的至少一個Tau肽免疫原構築體一起使用(例如在相同組合物中、相同套組中或共投與)。
在一些實施例中，至少一個SEQ ID NO: 10之Tau肽免疫原構築體與選自SEQ ID NO: 15及77-81中之任一者的至少一個Tau肽免疫原構築體一起使用(例如在相同組合物中、相同套組中或共投與)。
在一些實施例中，組合物或套組包含SEQ ID NO: 10或由其組成之至少一個Tau肽免疫原構築體以及包含SEQ ID NO: 15或由其組成之至少一個Tau肽免疫原構築體(或包含經修飾之胺基酸或化學基團的其經修飾形式)。可接受之修飾為本文所述之任何修飾(諸如在SEQ ID NO:77-81中)。在一些實施例中，組合物或套組包含SEQ ID NO: 10之Tau肽免疫原構築體及SEQ ID NO: 15之Tau肽免疫原構築體。在一些實施例中，組合物或套組包含SEQ ID NO: 10之Tau肽免疫原構築體，及SEQ ID NO: 77-81中之任一者的至少一個Tau肽免疫原構築體。
在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體包含SEQ ID NO:9、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體包含SEQ ID NO:10、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體包含SEQ ID NO:11、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體包含SEQ ID NO:12、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體包含SEQ ID NO:13、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體包含SEQ ID NO:14、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體包含SEQ ID NO:15、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體包含SEQ ID NO:16、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體包含SEQ ID NO:77、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體包含SEQ ID NO:78、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體包含SEQ ID NO:79、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體包含SEQ ID NO:80、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體包含SEQ ID NO:81、基本上由其組成，或由其組成。
依本文所用，片語「β類澱粉或Aβ肽免疫原構築體」係指含有以下之肽：(a)具有來自SEQ ID NO: 68之β類澱粉蛋白之全長序列的約6個或更多個胺基酸殘基的B細胞抗原決定基(例如約6-40、8-40、9-30、10-25、8-20、9-18、8-15、10-15、8-14或10-14；或約8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40個胺基酸)；(b)異源Th抗原決定基；及(c)視情況選用之異源間隔子。
在某些實施例中，Aβ肽免疫原構築體可由下式表示： (Th) m-(A) n-(Aβ片段)-X 或 (Aβ片段)-(A) n-(Th) m-X 其中 Th為異源T輔助抗原決定基； A為異源間隔子； (Aβ片段)為具有來自SEQ ID NO: 68之6至約40個胺基酸殘基的B細胞抗原決定基(例如約6-40、8-40、9-30、10-25、8-20、9-18、8-15、10-15、8-14或10-14；或約8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40個胺基酸)； X為胺基酸之α-COOH或α-CONH 2； m為1至約4；及 n為0至約10。
在一些實施例中，Aβ肽免疫原構築體係選自SEQ ID NO:70及SEQ ID NO: 71或使用其組合(參見 表 4)。在一些實施例中，Aβ肽免疫原構築體係選自SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 71及SEQ ID NO: 89，或使用其兩者或三者之任何組合(參見 表 4)。
對於可與本文所述之Tau肽免疫原構築體組合使用的另外Aβ肽及Aβ肽免疫原性構築體，亦參見WO 2014/143087。屬於WO 2014/143087中所揭示之式的肽免疫原構築體亦可使用且包括於本揭示中。在一些實施例中，Aβ肽免疫原構築體可由WO 2014/143087及/或US 9,102,752 B2中呈現之Aβ肽免疫原構築體中之任一者表示，其相對於該等式的揭示內容以引用之方式特定併入本文中。
在一些實施例中，Aβ肽免疫原構築體包含SEQ ID NO:70或其包含經修飾之胺基酸或化學基團的經修飾形式、基本上由其組成，或由其組成。可接受之修飾為本文所述之任何修飾(諸如SEQ ID NO: 89中)。在一些實施例中，Aβ肽免疫原構築體包含SEQ ID NO:70、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Aβ肽免疫原構築體包含SEQ ID NO:71、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Aβ肽免疫原構築體包含SEQ ID NO:89、基本上由其組成，或由其組成。
在一些實施例中，本文所述之肽免疫原構築體之C端經醯胺化。
在一些實施例中，將一或多個(例如1、2或3個) Tau肽免疫原構築體與一或多個(例如1、2或3個) β類澱粉肽免疫原構築體之組合用於本文所述之組合物、套組及方法中。在一些實施例中，將一個Tau肽免疫原構築體與一個β類澱粉肽免疫原構築體之組合用於本文所述之組合物、套組及方法中。在一些實施例中，組合物或套組包含至少一個Tau肽免疫原構築體，其例如包含SEQ ID NO: 10或由其組成，及/或包含SEQ ID NO: 15或由其組成(或包含經修飾之胺基酸或化學基團的其經修飾形式，例如SEQ ID NO:77-81中之任一者)；以及至少一個β類澱粉肽免疫原構築體，其例如具有包含SEQ ID NO:70或由其組成之胺基酸序列(或包含經修飾之胺基酸或化學基團的其經修飾形式，例如SEQ ID NO:89)。可接受之修飾為本文所述之任何修飾(諸如SEQ ID NO:77-81及89中)。在一些實施例中，組合物或套組包含至少一個SEQ ID NO: 10及/或SEQ ID NO: 15之Tau肽免疫原構築體，以及至少一個SEQ ID NO: 70之β類澱粉肽免疫原構築體。
在本文所述之構築體及組合中之任一者中，異源間隔子及異源Th抗原決定基可經本文所述之另一異源間隔子及/或異源Th抗原決定基取代。舉例而言而非限制性地，異源間隔子可為SEQ ID NO: 62及95中之任一者。同樣，舉例而言而非限制性地，異源Th抗原決定基可為SEQ ID NO: 42、44、45及97中之任一者。
下文描述所揭示之肽免疫原構築體之各種組分。
a. Tau 及 Aβ 片段在一些實施例中，所揭示之肽免疫原構築體含有約6個或更多個胺基酸之B細胞抗原決定基。在一些實施例中，所揭示之肽免疫原構築體含有約8或更多個胺基酸之B細胞抗原決定基。在一些實施例中，本文所提供之Tau或β類澱粉B細胞抗原決定基為約6至40個胺基酸。在一些實施例中，本文所提供之Tau或β類澱粉B細胞抗原決定基之長度為約8-40、9-30、10-25、8-20、9-18、8-15、10-15、8-14或10-14個胺基酸，或約8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40個胺基酸，或此等值之間的任何數目的胺基酸。
在一些實施例中，本文所述之B細胞抗原決定基如本文所述經修飾，例如藉由胺基酸之乙醯化、胺基酸之N-甲基化、出於二硫鍵形成之目的用半胱胺酸取代一或兩個胺基酸及/或使用N端焦麩胺酸。可接受之修飾為本文所述之任何修飾(參見例如，表1及表3)。
Tau肽免疫原構築體含有來自人類Tau蛋白之最長同功異型物(GenBank：AGF19246.1)之部分的B細胞抗原決定基，其具有 表 6中所示之胺基酸序列SEQ ID NO: 60。B細胞抗原決定基可經由視情況選用之異源間隔子連接於來源於病原體蛋白之異源T輔助細胞(Th)抗原決定基。所揭示之肽免疫原構築體刺激產生針對Tau之高特異性抗體。所揭示之肽免疫原構築體可用作患有阿茲海默氏病及/或tau蛋白病變之患者的免疫療法。
Tau肽免疫原構築體之B細胞抗原決定基部分具有來自全長Tau蛋白之胺基酸序列(SEQ ID NO:60)。
在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基具有 表 1中所示之序列(SEQ ID NO: 1-8中之任一者)或 表 7- 表 10中所示之序列(例如SEQ ID NO: 17-30或63-67中之任一者)。
在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體之Tau肽(或Tau B細胞抗原決定基)包含 表 1及 表 7- 表 10中之任一者的肽或由其組成。
在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 1、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 2、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO:3、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 4、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 5、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 6、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 7、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 8、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 17、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 18、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 19、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 20、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 21、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 22、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO:23、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 24、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 25、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 26、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 27、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 28、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 29、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 30、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 63、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 64、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 65、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 66、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 67、基本上由其組成，或由其組成。
在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體之Tau肽(B細胞抗原決定基)包含 表 1及 表 7- 表 10中之任一者的肽或由其組成，其中該肽包括SEQ ID NO: 60之Tau蛋白的1、2、3、4或5個另外胺基酸在 表 1或 表 7- 表 10之肽之N端上。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體之Tau肽(B細胞抗原決定基)包含 表 1及 表 7- 表 10中之任一者的肽或由其組成，其中該肽包括SEQ ID NO: 60之Tau蛋白的1、2、3、4或5個另外胺基酸在 表 1或 表 7- 表 10之肽之C端上。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體之Tau肽(B細胞抗原決定基)包含 表 1及 表 7- 表 10中之任一者的肽或由其組成，其中該肽包括SEQ ID NO: 60之Tau蛋白的1、2、3、4或5個另外胺基酸在 表 1或 表 7- 表 10之肽之N端及/或C端上。後者肽中之另外胺基酸應理解為SEQ ID NO: 60之Tau蛋白之胺基酸與 表 1及 表 7- 表 10之肽序列鄰接。
在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基具有SEQ ID NO: 72-76中之任一者的序列。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 72、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 73、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 74、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 75、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 76、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 77、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 96、基本上由其組成，或由其組成。
在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體之Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 72-76或96中之任一者的肽或由其組成，其中該B細胞抗原決定基包括SEQ ID NO: 60之Tau蛋白的1、2、3、4或5個另外胺基酸在肽之N端上。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體之Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 72-76或96中之任一者的肽或由其組成，其中該B細胞抗原決定基包括SEQ ID NO: 60之Tau蛋白的1、2、3、4或5個另外胺基酸在肽之C端上。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體之Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 72-76或96中之任一者的肽或由其組成，其中該B細胞抗原決定基包括SEQ ID NO: 60之Tau蛋白的1、2、3、4或5個另外胺基酸在肽之N端及/或C端上。另外胺基酸應理解為分別與SEQ ID NO: 72-76及96中之任一者之肽序列鄰接的SEQ ID NO: 60之Tau蛋白之胺基酸。
在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體之Tau肽(B細胞抗原決定基)包含來自SEQ ID NO: 60之約8至約40個胺基酸殘基或由其組成(例如約8-40、9-30、10-25、8-20、9-18或10-15；或約8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40個胺基酸)。在一些實施例中，肽免疫原構築體之Tau肽具有表1及表7-表10中之任一者，例如SEQ ID NO: 1-8、17-30或63-67中之任一者，其中視情況地，肽具有上述另外胺基酸中之一或多者。在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體之Tau肽(B細胞抗原決定基)具有SEQ ID NO: 72-76中之任一者，其中視情況地，肽具有上述另外胺基酸中之一或多者。
β類澱粉肽免疫原構築體之B細胞抗原決定基部分具有來自全長β類澱粉蛋白之胺基酸序列(SEQ ID NO:68)。
在一些實施例中，β類澱粉肽免疫原構築體之β類澱粉肽(或β類澱粉B細胞抗原決定基)包含 表 3中之任一者之肽或由其組成。
在一些實施例中，β類澱粉B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 69、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，β類澱粉B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 82、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，β類澱粉B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO:83、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，β類澱粉B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 84、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，β類澱粉B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 85、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，β類澱粉B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 86、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，β類澱粉B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 87、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，β類澱粉B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 88、基本上由其組成，或由其組成。在一些實施例中，β類澱粉B細胞抗原決定基包含WO 2014/143087或US 9,102,752 B2中所述之β類澱粉肽或B細胞抗原決定基之序列中之任一者、基本上由其組成，或由其組成。
在一些實施例中，β類澱粉肽免疫原構築體之B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 69及82-88中之任一者之肽或由其組成，其中該B細胞抗原決定基包括SEQ ID NO: 68之β類澱粉蛋白的1、2、3、4或5個另外胺基酸在肽之N端上。在一些實施例中，β類澱粉肽免疫原構築體之B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 69及82-88中之任一者之肽或由其組成，其中該B細胞抗原決定基包括SEQ ID NO: 68之β類澱粉蛋白的1、2、3、4或5個另外胺基酸在肽之C端上。在一些實施例中，β類澱粉肽免疫原構築體之B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 69及82-88中之任一者之肽或由其組成，其中該B細胞抗原決定基包括SEQ ID NO: 68之β類澱粉蛋白的1、2、3、4或5個另外胺基酸在肽之N端及/或C端上。另外胺基酸應理解為分別與SEQ ID NO: 69及82-88中之任一者之肽序列鄰接的SEQ ID NO: 68之類澱粉蛋白之胺基酸。
如上文所指出，在一些實施例中，Aβ肽免疫原構築體係選自SEQ ID NO: 70及SEQ ID NO: 71或使用其組合(參見 表 4)。對於可與本文所述之Tau肽免疫原構築體組合使用的另外Aβ肽及Aβ肽免疫原性構築體，亦參見WO 2014/143087。屬於WO 2014/143087之式的肽免疫原構築體亦可使用且包括於本揭示中。
在一些實施例中，本文所述之肽免疫原性構築體之C端經醯胺化。
經修飾之 B 細胞抗原決定基及肽免疫原構築體 在一些實施例中，本文提供經修飾之Tau及Aβ B細胞抗原決定基。本文提供之經特定修飾之B細胞抗原決定基示於 表 1及 表 3中。
在一些實施例中，本文提供經修飾之Tau及Aβ肽免疫原構築體。本文提供之經特定修飾之肽免疫原構築體示於 表 2及 表 4中。
在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含一或多個N-甲基化胺基酸。N-甲基化胺基酸經單甲基化且藉由胺基酸之N-甲基化胺與後一胺基酸之羧酸之間的醯胺鍵連接於後一胺基酸。一個、兩個或更多個胺基酸可經N-甲基化。在一些實施例中，N-甲基化胺基酸為異白胺酸及/或離胺酸。在一些實施例中，B細胞抗原決定基中之一個異白胺酸經N-甲基化。在一些實施例中，B細胞抗原決定基中之一個離胺酸經N-甲基化。在一些實施例中，B細胞抗原決定基中之一個異白胺酸及一個離胺酸經N-甲基化。在一些實施例中，N-甲基化胺基酸出現在B細胞抗原決定基(諸如Tau B細胞抗原決定基)之N端。N-甲基化胺基酸存在於SEQ ID NO: 73-75之Tau B細胞抗原決定基中。N-甲基化胺基酸類似物之實例顯示如下：
在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含一或多個乙醯化胺基酸。在一些實施例中，異白胺酸(例如B細胞抗原決定基之一個異白胺酸)經乙醯化。在一些實施例中，乙醯化胺基酸在B細胞抗原決定基(諸如Tau B細胞抗原決定基)之N端。乙醯化胺基酸存在於SEQ ID No: 72之Tau B細胞抗原決定基中。在一些實施例中，Th抗原決定基包含一或多個乙醯化胺基酸。在一些實施例中，乙醯化胺基酸位於Th抗原決定基之N端。在一些實施例中，異白胺酸(例如Th抗原決定基之異白胺酸)經乙醯化。本文所考慮之乙醯化胺基酸之實例顯示如下(詳言之，N-乙醯化異白胺酸)：
在一些實施例中，代替乙醯化胺基酸，Tau B細胞抗原決定基、Th抗原決定基或肽免疫原構築體包含保護N端免受蛋白酶降解影響之另一修飾。在一些實施例中，該另一修飾為此項技術中已知之任何修飾(其可保護N端免受蛋白酶降解影響)。
在一些實施例中，Tau B細胞抗原決定基包含一或兩個胺基酸取代，其中非半胱胺酸胺基酸經半胱胺酸置換，使得所得B細胞抗原決定基包含可形成二硫鍵的兩個半胱胺酸(藉由半胱胺酸二硫鍵引起環化)。此類經取代之胺基酸存在於SEQ ID No: 76之Tau B細胞抗原決定基中。
在一些實施例中，β類澱粉B細胞抗原決定基包含焦麩胺酸。在一些實施例中，β類澱粉B細胞抗原決定基在B細胞抗原決定基之N端包含焦麩胺酸。該修飾存在於SEQ ID No: 82之β類澱粉B細胞抗原決定基中。焦麩胺酸為一種麩胺酸衍生物，其中側鏈經歷脫水，在側鏈酸基與α胺基之間產生醯胺鍵，如下文所示： 。
本文所述之特異性B細胞抗原決定基修飾(諸如在SEQ ID NO: 72-76及82中)係基於Tau及β類澱粉肽序列之預測結構及/或憑經驗確定之胰蛋白酶消化產物。
在一些實施例中，本文所述之修飾改良肽之蛋白酶穩定性或賦予肽蛋白酶穩定性。
b. 異源 T 輔助細胞抗原決定基 (Th 抗原決定基 )本揭示提供肽免疫原構築體，其含有來自Tau或Aβ之B細胞抗原決定基，該B細胞抗原決定基直接或經由視情況選用之異源間隔子共價連接於異源T輔助細胞(Th)抗原決定基。
肽免疫原構築體中之異源Th抗原決定基增強Tau或Aβ片段之免疫原性，其有助於經由合理設計產生針對最佳化目標B細胞抗原決定基(例如Tau片段)的特異性高效價抗體。
依本文所用，術語「異源」係指胺基酸序列來源於不為Tau或Aβ之野生型序列之部分或不與其同源的胺基酸序列。因此，在Tau之情況下，異源Th抗原決定基為來源於非Tau中天然發現之胺基酸序列的Th抗原決定基(亦即Th抗原決定基不為Tau自體的)。由於Th抗原決定基與Tau異源，因此當異源Th抗原決定基共價連接於Tau片段時，Tau之天然胺基酸序列不在N端或C端方向上延伸。同樣，在Aβ之情況下，異源Th抗原決定基為來源於非Aβ中天然發現之胺基酸序列的Th抗原決定基(亦即Th抗原決定基不為Aβ自體的)。由於Th抗原決定基與Aβ異源，因此當異源Th抗原決定基共價連接於Aβ片段時，Aβ之天然胺基酸序列不在N端或C端方向上延伸。
本揭示之異源Th抗原決定基可為任何不具有Tau(或Aβ)中天然發現之胺基酸序列的Th抗原決定基。Th抗原決定基可具有來源於任何物種(例如人類、豬、牛、狗、大鼠、小鼠、天竺鼠等)之胺基酸序列。Th抗原決定基亦可具有與多個物種之MHC II類分子的混雜結合模體。在某些實施例中，Th抗原決定基包含多個混雜的MHC II類結合模體以實現T輔助細胞之最大活化，從而引起免疫反應之啟動及調節。Th抗原決定基就其自身而言較佳為免疫靜默的，亦即由肽免疫原構築體產生之抗體中極少(若存在)將針對Th抗原決定基，因此允許針對Tau或Aβ片段之靶向B細胞抗原決定基的非常集中之免疫反應。
本揭示之Th抗原決定基包括(但不限於)來源於外來病原體之胺基酸序列，依 表 5中所例示(SEQ ID NO: 31至59或SEQ ID NO: 97中之任一者)。此外，Th抗原決定基包括理想化人工Th抗原決定基及組合理想化人工Th抗原決定基(例如SEQ ID NO: 32及39-45中之任一者)。呈現為組合序列之異源Th抗原決定基肽(例如SEQ ID NO: 40-43中之任一者)含有基於該特定肽之同源物之可變殘基在肽框內之特定位置處展現之胺基酸殘基之混合物。組合肽之組合體在一種方法中可藉由在合成過程中在指定位置添加指定受保護胺基酸之混合物，而非一種特定胺基酸來合成。此類組合異源Th抗原決定基肽的組合體可允許廣泛覆蓋具有不同遺傳背景之動物的Th抗原決定基。異源Th抗原決定基肽之代表性組合序列包括SEQ ID NO: 40-43，其示於 表 5中。本發明之Th抗原決定基肽向來自遺傳多樣性群體之動物及患者提供廣泛反應性及免疫原性。
在一些實施例中，在 表 5中所示的包含N末端離胺酸(諸如N端處之「KKK」胺基酸序列)之Th抗原決定基中，可移除N端離胺酸以用於本文所述之肽免疫原構築體(例如用於包含含有一或多個離胺酸之間隔子的肽免疫原構築體)。在一些實施例中，在 表 5中所示的在N端處包含「KKK」胺基酸序列之Th抗原決定基中，可移除「KKK」胺基酸序列以用於本文所述之肽免疫原構築體(例如用於包含含有「KKK」胺基酸序列之間隔子的肽免疫原構築體)。參見例如SEQ ID NO: 71之肽免疫原構築體，其中肽免疫原構築體中之UBITh®2 Th抗原決定基之序列缺乏三個N端離胺酸。
在一些實施例中，異源Th抗原決定基包含或具有胺基酸序列SEQ ID NO: 44。在一些實施例中，異源Th抗原決定基包含或具有胺基酸序列SEQ ID NO: 42。在一些實施例中，異源Th抗原決定基包含或具有胺基酸序列SEQ ID NO: 45。在一些實施例中，異源Th抗原決定基包含或具有胺基酸序列SEQ ID NO: 97。
包含Th抗原決定基之肽免疫原構築體係或可在單一固相肽合成中與含B細胞抗原決定基片段串聯同時產生。Th抗原決定基亦包括Th抗原決定基之免疫類似物。免疫Th類似物包括免疫增強類似物、交叉反應類似物及足以增強或刺激對含B細胞抗原決定基之片段之免疫反應的此等Th抗原決定基中之任一者之區段。
Th抗原決定基肽之功能性免疫類似物亦有效且作為本發明之一部分包括在內。功能性免疫Th類似物可包括Th抗原決定基中一至約五個胺基酸殘基之保守取代、添加、缺失及插入，其基本上不改變Th抗原決定基之Th刺激功能。保守取代、添加及插入可用天然或非天然胺基酸實現。 表 5鑑別Th抗原決定基肽之功能類似物的另一變化形式。詳言之，MvF1及MvF2 Th之SEQ ID NO: 32及39為MvF4及MvF5之SEQ ID NO:42及44之功能類似物，因為其在胺基酸框架方面差異在於各自在N端及C端缺失(SEQ ID NO: 32及39)或包括(SEQ ID NO: 42及44)兩個胺基酸。此等兩個系列之類似序列之間的差異將不影響此等序列內所含之Th抗原決定基的功能。因此，功能性免疫Th類似物包括來源於麻疹病毒融合蛋白MvF1-4 Th (例如SEQ ID NO: 32、39、40、42及44中之任一者)及來自肝炎表面蛋白HBsAg 1-3 Th (例如SEQ ID NO: 41、43及45中之任一者)之Th抗原決定基的若干形式。在一些實施例中，使用序列SEQ ID NO: 44。在一些實施例中，使用序列SEQ ID NO:42。
肽免疫原構築體中之Th抗原決定基可在含B細胞抗原決定基之肽之N端或C端共價連接。在一些實施例中，Th抗原決定基共價連接於含B細胞抗原決定基之肽之N端。在其他實施例中，Th抗原決定基共價連接於含B細胞抗原決定基之肽之C端。在某些實施例中，多於一個Th抗原決定基共價連接於含B細胞抗原決定基之片段。當多於一個Th抗原決定基連接於含B細胞抗原決定基之片段時，各Th抗原決定基可具有相同胺基酸序列或不同胺基酸序列。此外，當多於一個Th抗原決定基連接於含B細胞抗原決定基之片段時，Th抗原決定基可以任何次序排列。舉例而言，Th抗原決定基可連續連接於含B細胞抗原決定基之片段的N端或連續連接於含B細胞抗原決定基之片段的C端，或Th抗原決定基可共價連接於含B細胞抗原決定基之片段的N端，同時單獨的Th抗原決定基共價連接於含B細胞抗原決定基之片段的C端。關於含B細胞抗原決定基之片段的Th抗原決定基之排列沒有限制。對於 表 2 及表 4中所描繪之免疫原構築體，應理解本揭示包括對應免疫原性構築體，其中含B細胞抗原決定基之肽及Th抗原決定基之位置與 表 2 及表 4中所闡述之取向為顛倒的。
在一些實施例中，Th抗原決定基直接共價連接於含B細胞抗原決定基之片段。在其他實施例中，Th抗原決定基經由下文進一步詳細描述之異源間隔子共價連接於含B細胞抗原決定基之片段。
c. 異源間隔子所揭示之含B細胞抗原決定基之肽免疫原構築體視情況含有將來自含B細胞抗原決定基之肽之B細胞抗原決定基與異源T輔助細胞(Th)抗原決定基共價連接的異源間隔子。
依上文所論述，術語「異源」係指胺基酸序列來源於不為Tau或Aβ之野生型序列之部分或不與其同源的胺基酸序列。因此，當異源間隔子共價連接於來自Tau或Aβ之B細胞抗原決定基時，Tau或Aβ之天然胺基酸序列不在N端或C端方向上延伸，因為間隔子與Tau或Aβ序列異源。
間隔子為能夠將兩個胺基酸及/或肽連接在一起之任何分子或化學結構。視應用而定，間隔子之長度或極性可不同。間隔子連接可經由醯胺鍵或羧基鍵連接，但其他官能基亦可能。間隔子可包括化合物、天然存在之胺基酸或非天然存在之胺基酸。
間隔子可向Tau或β類澱粉肽免疫原構築體提供結構特徵。在結構上，間隔子提供Th抗原決定基與Tau或β類澱粉片段之B細胞抗原決定基之物理分隔。藉由間隔子進行之物理分隔可破壞藉由將Th抗原決定基連接至B細胞抗原決定基而產生之任何人工二級結構。另外，間隔子物理分隔抗原決定基可消除Th細胞及/或B細胞反應之間的干擾。此外，間隔子可經設計以產生或修飾肽免疫原構築體之二級結構。舉例而言，間隔子可經設計以充當可撓性鉸鏈以增強Th抗原決定基與B細胞抗原決定基之分隔。可撓性鉸鏈間隔子亦可准許所存在之肽免疫原與適當Th細胞及B細胞之間的更有效相互作用，以增強對Th抗原決定基及B細胞抗原決定基之免疫反應。編碼可撓性鉸鏈之序列之實例見於免疫球蛋白重鏈鉸鏈區中，其通常富含脯胺酸。可用作間隔子之一個尤其適用之可撓性鉸鏈由序列Pro-Pro-Xaa-Pro-Xaa-Pro (SEQ ID NO: 61)提供，其中Xaa為任何胺基酸，且較佳為天冬胺酸。
間隔子亦可向肽免疫原構築體提供功能特徵。舉例而言，間隔子可經設計以改變肽免疫原構築體之總體電荷，其可影響肽免疫原構築體之溶解度。另外，改變肽免疫原構築體之總體電荷可影響肽免疫原構築體與其他化合物及試劑締合之能力。依下文進一步詳細論述，肽免疫原構築體可與具有帶大量電荷之寡核苷酸，諸如CpG寡聚物經由靜電締合形成穩定的免疫刺激性複合物。肽免疫原構築體之總體電荷對於形成此等穩定的免疫刺激性複合物而言為重要的。
在一些實施例中，異源間隔子包含以下胺基酸中之一者或由其組成：Lys-、Gly-、Lys-Lys-Lys-、(α, ε-N)Lys、Lys-Lys-Lys-εLys、ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys及Pro-Pro-Xaa-Pro-Xaa-Pro，其中Xaa為任何胺基酸或為天冬胺酸。在一些實施例中，間隔子包含胺基酸Lys-Lys-Lys、ε-Lys-Lys-Lys-Lys或Lys-Lys-Lys-ε-Lys或由其組成。在一些實施例中，間隔子之序列包含ε-Lys-Lys-Lys-Lys或Lys-Lys-Lys-ε-Lys或由其組成。在一些實施例中，異源間隔子為Lys-Lys-Lys-εLys。在一些實施例中，異源間隔子為εLys-Lys-Lys-Lys。
依此項技術中所理解，對於包括ε-Lys作為間隔子或在間隔子內之構築體，第一肽序列之C端結合於離胺酸之ε胺基以形成第一醯胺鍵，且第二肽序列之N端結合於離胺酸之羧基以形成第二醯胺鍵。
Lys- ε-Lys (K-εK)鍵之結構顯示如下： 。
可用作間隔子之化合物包括(但不限於) (2-胺基乙氧基)乙酸(AEA)、5-胺基戊酸(AVA)、6-胺基己酸(Ahx)、8-胺基-3,6-二氧雜辛酸(AEEA、mini-PEG1)、12-胺基-4,7,10-三氧雜十二烷酸(mini-PEG2)、15-胺基4,7,10,13-四氧雜十五烷酸(mini-PEG3)、三氧雜十三烷-丁二醯胺酸(Ttds)、12-胺基-十二烷酸、Fmoc-5-胺基-3-氧雜戊酸(O1Pen)及其類似者。
天然存在之胺基酸包括丙胺酸、精胺酸、天冬醯胺、天冬胺酸、半胱胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、脯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、色胺酸、酪胺酸及纈胺酸。
非天然存在之胺基酸包括(但不限於) ε-N離胺酸、β-丙胺酸、鳥胺酸、正白胺酸、正纈胺酸、羥脯胺酸、甲狀腺素、γ-胺基丁酸、高絲胺酸、瓜胺酸、胺基苯甲酸、6-胺基己酸(6-aminocaproic acid)(Aca；6-胺基己酸(6-Aminohexanoic acid))、羥脯胺酸、巰基丙酸(MPA)、3-硝基-酪胺酸、焦麩胺酸及其類似者。
肽免疫原構築體中之間隔子可在Th抗原決定基及含B細胞抗原決定基之肽之N端或C端共價連接。在一些實施例中，間隔子共價連接於Th抗原決定基之C端及含B細胞抗原決定基之肽之N端。在其他實施例中，間隔子共價連接於含B細胞抗原決定基之肽之C端及Th抗原決定基之N端。在某些實施例中，可使用多於一個間隔子，例如當在肽免疫原構築體中存在多於一個Th抗原決定基時。當使用多於一個間隔子時，各間隔子可彼此相同或不同。另外，當在肽免疫原構築體中存在多於一個Th抗原決定基時，Th抗原決定基可用間隔子分隔，該間隔子可與用於將Th抗原決定基與B細胞抗原決定基分隔的間隔子相同或不同。關於Th抗原決定基或含B細胞抗原決定基之片段的間隔子之排列沒有限制。
在某些實施例中，異源間隔子為天然存在之胺基酸或非天然存在之胺基酸。在其他實施例中，間隔子含有多於一個天然存在或非天然存在之胺基酸。在一些實施例中，間隔子包含至少3個或至少4個胺基酸(例如離胺酸)。在一些實施例中，間隔子包含小於7、6或5個胺基酸。在具體實施例中，間隔子為Lys-、Gly-、Lys-Lys-Lys-、(α, ε-N)Lys或ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 62)。
d. Tau 及 A β 肽免疫原構築體及組合之具體實施例Tau肽免疫原構築體可由下式表示： (Th) m-(A) n-(Tau片段)-X 或 (Tau片段)-(A) n-(Th) m-X 其中 Th為異源T輔助抗原決定基； A為異源間隔子； (Tau片段)為具有來自SEQ ID NO: 60之全長Tau蛋白的6至約40或約8至約40個胺基酸殘基的B細胞抗原決定基(例如6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40個胺基酸，或此等值之間的任何長度範圍)； X為胺基酸之α-COOH或α-CONH 2； m為1至約4；及 n為0至約10。
在某些實施例中，Tau肽免疫原構築體中之異源Th抗原決定基具有選自 表 5中所闡述之胺基酸序列中之任一者的胺基酸序列。在某些實施例中，Tau肽免疫原構築體含有多於一個Th抗原決定基。在某些實施例中，Tau肽免疫原構築體含有多於一個Th抗原決定基，例如SEQ ID NO: 44之Th抗原決定基。
在某些實施例中，視情況選用之異源間隔子係選自以下中之任一者：Lys-、Gly-、Lys-Lys-Lys-、(α, ε-N)Lys、ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 62)或Lys-Lys-Lys-ε-Lys (SEQ ID NO:95)，及其組合。在具體實施例中，異源間隔子為ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 62)。在具體實施例中，異源間隔子為Lys-Lys-Lys-ε-Lys (SEQ ID NO:95)。
在某些實施例中，Tau片段具有來自SEQ ID NO: 60之全長Tau蛋白的約8至約40個(例如10-30、10-25、12-20或12-15個)胺基酸殘基。在一些實施例中，Tau片段具有來自SEQ ID NO: 60之全長Tau蛋白的約8-20、8-15、10-15或10-14個胺基酸殘基。在特定實施例中，Tau片段具有 表 1中所示之胺基酸序列(例如SEQ ID NO: 1-8中之一者)或 表 7- 表 10中之一者所示之胺基酸序列(例如SEQ ID NO: 17-30或63-67中之一者)。在其他具體實施例中，Tau片段具有 表 1中所示之SEQ ID NO: 72-76中之任一者的胺基酸序列。
在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體係選自：
a. MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDKKK-eK-ISITEIKGVIVHRIETILF-NH2； SEQ ID NO: 9
b. DHAGTYGLGDKKK-eK-ISITEIKGVIVHRIETILF-NH2； SEQ ID NO: 10
c. ISITEIKGVIVHRIETILF-eK-KKKNITHVPGGGNKK-NH2； SEQ ID NO: 11
d. ISITEIKGVIVHRIETILF-eK-KKKKDNIKHVPGGGSVQIVYK-NH2； SEQ ID NO: 12
e. ISITEIKGVIVHRIETILF-eK-KKKTKIATPRGAAPP-NH2； SEQ ID NO: 13
f. ISITEIKGVIVHRIETILF-eK-KKKVVRTPPKSPSSAKSRL-NH2； SEQ ID NO: 14
g. ISITEIKGVIVHRIETILF-eK-KKKIKHVPGGGSVQIVYK-NH2； 及 SEQ ID NO: 15
h. ISITEIKGVIVHRIETILF-eK-KKKVSGDTSPRHLSNVSST-NH2 SEQ ID NO: 16
在一些實施例中，SEQ ID NO: 9-16中之任一者的T細胞抗原決定基經SEQ ID NO: 31-59中之任一者的T細胞抗原決定基置換。在一些實施例中，SEQ ID NO: 9-16中之任一者之B細胞抗原決定基及T細胞抗原決定基之位置在分子內為顛倒的(亦即，若B細胞抗原決定基在原始分子之N端，則其置於顛倒分子中之分子C端，等)。
在一些實施例中，Tau肽免疫原構築體係選自SEQ ID NO: 77-81中之任一者。在一些實施例中，SEQ ID NO: 77-81中之任一者的T細胞抗原決定基經SEQ ID NO: 31-59中之任一者的T細胞抗原決定基置換。在一些實施例中，SEQ ID NO: 77-81中之任一者之B細胞抗原決定基及T細胞抗原決定基之位置在分子內為顛倒的(亦即，若B細胞抗原決定基在原始分子之N端，則其置於顛倒分子中之分子C端，等)。
Aβ肽免疫原構築體可由下式表示： (Th) m-(A) n-(Aβ片段)-X 或 (Aβ片段)-(A) n-(Th) m-X 其中 Th為異源T輔助抗原決定基； A為異源間隔子； (Aβ片段)為具有來自SEQ ID NO: 68之全長Aβ蛋白的6至約40或約8至約40個胺基酸殘基的B細胞抗原決定基(例如6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40個胺基酸，或此等值之間的任何長度範圍)； X為胺基酸之α-COOH或α-CONH 2； m為1至約4；及 n為0至約10。
在某些實施例中，Aβ肽免疫原構築體中之異源Th抗原決定基具有選自表5中所闡述之胺基酸序列中之任一者的胺基酸序列。在某些實施例中，Aβ肽免疫原構築體含有多於一個Th抗原決定基。在某些實施例中，Aβ肽免疫原構築體含有多於一個Th抗原決定基，例如SEQ ID NO: 44之Th抗原決定基。
在某些實施例中，視情況選用之異源間隔子係選自以下中之任一者：Lys-、Gly-、Lys-Lys-Lys-、(α, ε-N)Lys、ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 62)或Lys-Lys-Lys-ε-Lys (SEQ ID NO:95)，及其組合。在具體實施例中，異源間隔子為ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 62)。在具體實施例中，異源間隔子為Lys-Lys-Lys-ε-Lys (SEQ ID NO:95)。
在某些實施例中，Aβ片段具有來自SEQ ID NO: 60之全長Tau蛋白的約8至約40個(例如10-30、10-25、12-20或12-15個)胺基酸殘基。在一些實施例中，Aβ片段具有來自SEQ ID NO: 68之全長Aβ蛋白的約8-20、8-15、10-15或10-14個胺基酸殘基。在具體實施例中，Aβ片段具有 表 3中所示的胺基酸序列(例如SEQ ID NO: 68或69中之一者)。在其他具體實施例中，Aβ片段具有表3中所示之SEQ ID NO: 83-88中之任一者的胺基酸序列。
在一些實施例中，Aβ肽免疫原構築體係選自SEQ ID NO: 70、71及89。
在一些實施例中，SEQ ID NO: 70、71及89中之任一者的T細胞抗原決定基經SEQ ID NO: 31-59中之任一者的T細胞抗原決定基置換。在一些實施例中，SEQ ID NO: 70、71及89中之任一者之B細胞抗原決定基及T細胞抗原決定基之位置在分子內為顛倒的(亦即，若B細胞抗原決定基在原始分子之N端，則其置於顛倒分子中之分子C端，等)。
在一些實施例中，本文提供本文所述之任何兩個、三個或更多個Tau肽免疫原構築體之組合。
在一些實施例中，本文提供本文所述之任何一個、兩個或更多個Tau肽免疫原構築體與本文所述之任一或多個Aβ肽免疫原構築體之組合。在一些實施例中，組合係以單一組合物形式調配，依本文所述。在一些實施例中，該等兩個或更多個肽免疫原構築體存在於同一套組中，依本文所述。
e. 變異體、同源物及功能類似物亦可使用以上免疫原性肽之變異體及類似物，其誘導針對Tau或Aβ蛋白之較佳抗原決定基的抗體及/或與其有交叉反應性。包括對偶基因變異體、物種變異體及誘導變異體之類似物通常在一個、兩個或若干位置不同於天然存在之肽，通常由於保守取代造成。類似物通常展現出與天然肽之至少80或90%序列一致性。一些類似物亦包括非天然胺基酸或N端或C端胺基酸在一個、兩個或若干位置之修飾。
作為功能類似物之變異體可在胺基酸位置具有保守取代；總體電荷變化；與另一部分共價連接；或胺基酸添加、插入或缺失；及/或其任何組合。
保守取代為一個胺基酸殘基經具有類似化學特性之另一胺基酸殘基取代之情況。舉例而言，非極性(疏水性)胺基酸包括丙胺酸、白胺酸、異白胺酸、纈胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、色胺酸及甲硫胺酸；極性中性胺基酸包括甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、半胱胺酸、酪胺酸、天冬醯胺及麩醯胺酸；帶正電(鹼性)胺基酸包括精胺酸、離胺酸及組胺酸；且帶負電(酸性)胺基酸包括天冬胺酸及麩胺酸。
在一特定實施例中，功能類似物與原始胺基酸序列具有至少50%一致性。在另一實施例中，功能類似物與原始胺基酸序列具有至少80%一致性。在又另一實施例中，功能類似物與原始胺基酸序列具有至少85%一致性。在再一實施例中，功能類似物與原始胺基酸序列具有至少90%一致性。
變異體亦包括磷酸化殘基之變化形式。舉例而言，變異體可包括經磷酸化之肽內的不同殘基。變異免疫原性Tau或Aβ肽亦可包括假磷酸化肽。假磷酸化肽藉由用諸如麩胺酸及天冬胺酸之酸性胺基酸殘基取代Tau或Aβ肽之磷酸化絲胺酸、蘇胺酸及酪胺酸殘基中之一或多者來產生。
Tau 肽免疫原構築體靶向之 Tau 同功異型物及組合Tau表現於六種同功異型物中，反映相同基因之替代性剪接。此等同功異型物包含N端(0N、1N及2N形式)及重複域(3R及4R形式)內之剪接變異體，產生組合0N3R、1N3R、2N3R、0N4R、1N4R及2N4R。(參見例如，Wu等人, 2022, Frontiers in Aging Science 14: Article 945875, doi: 10.3389/fnagi.2022.945875)。當靶向Tau時，需要考慮重要考量因素，因為特異性Tau同功異型物在各種tau病變中以不同方式富集。理想地，有效Tau靶向療法將對所有Tau同功異型物有效。4R 靶向Tau之療法可有效針對AD及其他伴隨4R富集之tau蛋白病變。然而，靶向Tau之4R但非3R同功異型物的療法可能在其中存在3R Tau之匹克病的治療中無效。
在一些實施例中，本文所提供之Tau肽免疫原構築體引發能夠結合選自以下之Tau之同功異型物中之至少兩者、三者、四者、五者或各者的抗體：0N3R、1N3R、2N3R、0N4R、1N4R及2N4R。此類Tau同功異型物之胺基酸序列示於 表 6中(特定言之，2N4R同功異型物具有SEQ ID NO: 60，0N3R同功異型物具有SEQ ID NO: 90，1N3R同功異型物具有SEQ ID NO: 91；2N3R同功異型物具有SEQ ID NO: 92，0N4R同功異型物具有SEQ ID NO: 93，且1N4R同功異型物具有SEQ ID NO: 94)。在一些實施例中，本文所提供之Tau肽免疫原構築體引發能夠結合SEQ ID NO: 60及90-94之Tau之同功異型物中之各者的抗體。在一些實施例中，本文所提供之包含來自Tau之N端區(胺基酸1-44內)之B細胞抗原決定基的Tau肽免疫原構築體引發與選自以下之至少兩個、三個、四個、五個或各Tau之同功異型物結合的抗體：0N3R、1N3R、2N3R、0N4R、1N4R及2N4R。在一些實施例中，本文所提供的包含來自Tau之N端區(胺基酸1-44內)之B細胞抗原決定基的Tau肽免疫原構築體引發與SEQ ID NO: 60及90-94中之至少兩者、三者、四者、五者或各者結合的抗體。在一些實施例中，本文所提供之包含來自Tau之N端區(胺基酸1-44內)之B細胞抗原決定基的Tau肽免疫原構築體引發與SEQ ID NO: 60及90-94中之各者結合的抗體。在一些實施例中，本文所提供之包含來自Tau之重複域(胺基酸244-372內)之B細胞抗原決定基的Tau肽免疫原構築體引發與選自以下之至少兩個、三個、四個、五個或各Tau之同功異型物結合的抗體：0N3R、1N3R、2N3R、0N4R、1N4R及2N4R。在一些實施例中，本文所提供之包含來自Tau之重複域(胺基酸244-372內)之B細胞抗原決定基的Tau肽免疫原構築體引發與SEQ ID NO: 60及90-94中之至少兩者、三者、四者、五者或各者結合的抗體。在一些實施例中，本文所提供之包含來自Tau之重複域(胺基酸244-372內)之B細胞抗原決定基的Tau肽免疫原構築體引發與SEQ ID NO: 60及90-94中之各者結合的抗體。在一些實施例中，本文所提供之包含來自Tau之重複域(胺基酸244-372內)之B細胞抗原決定基的Tau肽免疫原構築體引發可結合於包含4R之Tau同功異型物中的兩個抗原決定基及包含3R之Tau同功異型物中的1個抗原決定基的抗體。
在一些實施例中，包含SEQ ID NO: 10、基本上由其組成或由其組成之Tau肽免疫原構築體引發結合於SEQ ID NO: 60及90-94中之各者的抗體。在一些實施例中，包含SEQ ID NO: 15、基本上由其組成或由其組成之Tau肽免疫原構築體引發結合於SEQ ID NO: 60及90-94中之各者的抗體。在一些實施例中，包含SEQ ID NO: 15、基本上由其組成或由其組成之Tau肽免疫原構築體引發可結合於包含4R之Tau同功異型物中的一個抗原決定基的抗體。在一些實施例中，包含SEQ ID NO: 15、基本上由其組成或由其組成之Tau肽免疫原構築體引發可結合於包含3R之Tau同功異型物中的一個抗原決定基的抗體。在一些實施例中，包含SEQ ID NO: 15、基本上由其組成或由其組成之Tau肽免疫原構築體引發可結合於Tau之P301S突變體形式的抗體。在一些實施例中，包含SEQ ID NO: 15、基本上由其組成或由其組成之Tau肽免疫原構築體引發可結合於Tau之P301L突變體形式的抗體。在一些實施例中，含有包含SEQ ID NO: 15、基本上由其組成或由其組成之Tau肽免疫原構築體及包含SEQ ID NO: 10、基本上由其組成或由其組成之Tau肽免疫原構築體的組合物或組合引發可結合於包含4R之Tau同功異型物中的一個抗原決定基的抗體。在一些實施例中，含有包含SEQ ID NO: 15、基本上由其組成或由其組成之Tau肽免疫原構築體及包含SEQ ID NO: 10、基本上由其組成或由其組成之Tau肽免疫原構築體的組合物或組合引發可結合於包含3R之Tau同功異型物中的一個抗原決定基的抗體。在一些實施例中，含有包含SEQ ID NO: 15、基本上由其組成或由其組成之Tau肽免疫原構築體及包含SEQ ID NO: 10、基本上由其組成或由其組成之Tau肽免疫原構築體的組合物或組合引發可結合於Tau之P301S突變體形式的抗體。在一些實施例中，含有包含SEQ ID NO: 15、基本上由其組成或由其組成之Tau肽免疫原構築體及包含SEQ ID NO: 10、基本上由其組成或由其組成之Tau肽免疫原構築體的組合物或組合引發可結合於Tau之P301L突變體形式的抗體。
組合物本揭示亦提供包含所揭示之Tau肽免疫原構築體中之一者、兩者或更多者及/或所揭示之Tau肽免疫原構築體中之一或多者與一或多個Aβ肽免疫原構築體組合的組合物。
a. 肽組合物含有視情況與一或多個Aβ肽免疫原構築體組合的一個、兩個或更多個所揭示之Tau肽免疫原構築體的組合物可呈液體或固體形式。液體組合物可包括水、緩衝劑、溶劑、鹽及/或不會改變肽免疫原構築體之結構或功能特性的任何其他可接受試劑。肽組合物可含有所揭示之肽免疫原構築體中之一或多者。
b. 醫藥組合物本揭示亦關於含有所揭示之肽免疫原構築體之醫藥組合物。
醫藥組合物可含有醫藥學上可接受之遞送系統中之載劑及/或其他添加劑。因此，醫藥組合物可含有醫藥學上有效量之一或多個肽免疫原構築體以及醫藥學上可接受之載劑、佐劑及/或其他賦形劑，諸如稀釋劑、添加劑、穩定劑、防腐劑、增溶劑、緩衝劑及其類似者。
醫藥組合物可含有一或多種用於加速、延長或增強對肽免疫原構築體之免疫反應而本身不具有任何特異性抗原作用的佐劑。醫藥組合物中所用之佐劑可包括油、鋁鹽、病毒體、磷酸鋁(例如ADJU-PHOS®)、氫氧化鋁(例如ALHYDROGEL®)、liposyn、皂素、角鯊烯、L121、Emulsigen®、單磷醯基脂質A (MPL)、QS21、ISA 35、ISA 206、ISA50V、ISA51、ISA 720，以及其他佐劑及乳化劑。
在一些實施例中，本文所述之醫藥組合物包含佐劑，該佐劑為鋁佐劑。在一些實施例中，佐劑為鋁鹽。在一些實施例中，鋁鹽為磷酸鋁(ADJU-PHOS®)或AlPO 4。在一些實施例中，鋁鹽為氫氧化鋁(ALHYDROGEL®)或Al(OH) 3。在一些實施例中，肽免疫原吸附至鋁凝膠。在一些實施例中，肽免疫原用鋁佐劑沉澱。
在一些實施例中，醫藥組合物為礦物鹽懸浮液。在一些實施例中，醫藥組合物為凝膠。在一些實施例中，醫藥組合物為聚合凝膠。在一些實施例中，醫藥組合物為濕凝膠懸浮液。
在一些實施例中，醫藥組合物含有MONTANIDE™ ISA 51 (一種包含植物油及二縮甘露醇油酸酯之油佐劑組合物，用於產生油包水乳液)、Tween® 80 (亦稱為：聚山梨醇酯80或聚環氧乙烷(20)去水山梨醇單油酸酯)、CpG寡核苷酸及/或其任何組合。在其他實施例中，醫藥組合物為具有Emulsigen或Emulsigen D作為佐劑之水包油包水(亦即w/o/w)乳液。
在一些實施例中，本文所述之醫藥組合物包含肽免疫原及CpG寡核苷酸。在一些實施例中，醫藥組合物包含CpG1、CpG2及/或CpG3。在一些實施例中，醫藥組合物包含CpG1寡核苷酸。在一些實施例中，醫藥組合物包含CpG2寡核苷酸。在一些實施例中，醫藥組合物包含CpG3寡核苷酸。在一些實施例中，CpG寡核苷酸充當肽免疫原穩定劑。在一些實施例中，肽免疫原及CpG寡核苷酸呈微粒形式。在一些實施例中，肽免疫原及CpG寡核苷酸調配為懸浮液。在一些實施例中，CpG寡核苷酸係依WO 03/068169中所述，其以全文，且特定言之，與CpG寡核苷酸有關時以引用之方式併入本文中。在一些實施例中，CPG包含以下之序列或由其組成：CpG1 (tcgtcgtttt gtcgttttgt cgttttgtcg tt)、CpG2 (tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt)或CpG3 (tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt)。在一些實施例中，CpG寡核苷酸(例如CpG1、CpG2或CpG3)為硫代磷酸酯寡核苷酸。在一些實施例中，CpG1包含序列5' TCgTCgTTTTgTCgTTTTgTCgTTTTgTCgTT 3'，其經完全硫代磷酸化。CpG寡核苷酸之非限制性實例提供於 表 11中。
醫藥組合物可調配為立即釋放或持續釋放調配物。另外，醫藥組合物可經調配用於經由免疫原捕獲及與微粒共投與來誘導全身性或局部黏膜免疫。此類遞送系統容易由一般熟習此項技術者確定。
醫藥組合物可製備為呈液體溶液或懸浮液形式之可注射劑。含有肽免疫原構築體之液體媒劑亦可在注射之前製備。醫藥組合物可藉由任何適合之施用方式，例如皮內(i.d.)、靜脈內(i.v.)、腹膜內(i.p.)、肌肉內(i.m.)、鼻內、經口、皮下等，且在任何適合之遞送裝置中投與。在某些實施例中，醫藥組合物經調配用於靜脈內、皮下、皮內或肌肉內投與。亦可製備適用於其他投與模式之醫藥組合物，包括經口及鼻內應用。
醫藥組合物亦可以適合的單位劑型調配。在一些實施例中，醫藥組合物含有每公斤體重約0.5 μg至約1 mg肽免疫原構築體。醫藥組合物之有效劑量視許多不同因素而變化，包括投與方式、目標部位、患者之生理狀態、患者係人類抑或動物、所投與之其他藥物及治療係預防性抑或治療性的。通常，患者為人類，但亦可治療非人類哺乳動物，包括轉殖基因哺乳動物。當以多次劑量遞送時，醫藥組合物可適宜地按單位劑型分成適量。依治療技術中熟知，所投與劑量將視個體之年齡、體重及一般健康狀況而定。
在一些實施例中，醫藥組合物含有多於一個肽免疫原構築體。含有多於一個肽免疫原構築體之混合物的醫藥組合物實現構築體之免疫功效協同增強。含有多於一個肽免疫原構築體之醫藥組合物可由於廣泛MHC II類覆蓋度而在較大遺傳群體中更有效，因此提供對肽免疫原構築體之改良的免疫反應。
在一些實施例中，醫藥組合物含有 表 2中所示之Tau肽免疫原構築體，或其同源物、類似物及/或組合。在一些實施例中，醫藥組合物含有Tau肽免疫原構築體，其包括來自 表 1及 表 7- 表 10中之一者的Tau肽。在一些實施例中，醫藥組合物含有至少兩個(例如2或3個)具有 表 1中所示的B細胞抗原決定基之Tau肽免疫原構築體。在一些實施例中，醫藥組合物含有至少兩個(例如2或3個) 表 2中所示之Tau肽免疫原構築體。在一些實施例中，靶向Tau之肽免疫原構築體靶向Tau之不同區域(例如，一個肽免疫原構築體靶向Tau之N端區，而第二肽免疫原構築體則靶向重複域；例如分別為SEQ ID NO: 10及15)。
在一些實施例中，醫藥組合物含有 表 4中所示之β類澱粉肽免疫原構築體，或其同源物、類似物及/或組合。在一些實施例中，醫藥組合物含有包括 表 3中所示的β類澱粉肽之β類澱粉肽免疫原構築體。
在一些實施例中，醫藥組合物含有Tau肽免疫原構築體(或其同源物、類似物及/或組合)及β類澱粉肽免疫原構築體(或其同源物、類似物及/或組合)。在一些實施例中，醫藥組合物含有至少一個(或例如2或3個)具有 表 1中所示之B細胞抗原決定基之Tau肽免疫原構築體，及至少一個(或例如2或3個)具有 表 3中所示之B細胞抗原決定基之β類澱粉肽免疫原構築體。在一些實施例中，醫藥組合物含有至少一個(或例如2或3個) 表 2中所示之Tau肽免疫原構築體，及至少一個(或例如2或3個) 表 4中所示之β類澱粉肽免疫原構築體。含有肽免疫原構築體之醫藥組合物可用於在投與後在主體中引發免疫反應及產生抗體。
c. 免疫刺激性複合物本揭示亦關於含有一或多種呈與CpG寡核苷酸之免疫刺激性複合物形式之肽免疫原構築體的醫藥組合物。該等免疫刺激性複合物經特定調適以充當佐劑及肽免疫原穩定劑。免疫刺激性複合物呈微粒形式，其可將肽免疫原有效地呈遞給免疫系統之細胞以產生免疫反應。免疫刺激性複合物可調配為用於非經腸投與之懸浮液。免疫刺激性複合物亦可以w/o乳液形式調配為與礦物鹽組合或與原位膠凝聚合物組合之懸浮液，以用於在非經腸投與後將肽免疫原有效遞送至主體之免疫系統的細胞。
穩定的免疫刺激性複合物可藉由使肽免疫原構築體與陰離子分子、寡核苷酸、聚核苷酸或其組合複合而經由靜電締合形成。穩定的免疫刺激性合物可以免疫原遞送系統形式併入醫藥組合物中。
在某些實施例中，肽免疫原構築體經設計以含有在5.0至8.0範圍內之pH下帶正電的陽離子部分。肽免疫原構築體或構築體混合物之陽離子部分上的淨電荷係藉由為各離胺酸(K)、精胺酸(R)或組胺酸(H)指配+1電荷、對於各天冬胺酸(D)或麩胺酸(E)指配-1電荷且對於序列內之其他胺基酸指配0電荷來計算。對肽免疫原構築體之陽離子部分內之電荷求和且以淨平均電荷表示。適合肽免疫原具有淨平均正電荷為+1之陽離子部分。較佳地，肽免疫原具有大於+2之範圍內之淨正電荷。在一些實施例中，肽免疫原構築體之陽離子部分為異源間隔子。在某些實施例中，當間隔子序列為(α, ε-N)Lys、ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 62)時，肽免疫原構築體之陽離子部分之電荷為+4。
依本文所述，「陰離子分子」係指在5.0-8.0範圍內之pH下帶負電荷之任何分子。在某些實施例中，陰離子分子為寡聚物或聚合物。寡聚物或聚合物上之淨負電荷係藉由為寡聚物中之各磷酸二酯或硫代磷酸酯基指配-1電荷來計算。適合的陰離子寡核苷酸為具有8至64個核苷酸鹼基之單股DNA分子，其中CpG模體之重複序列數目在1至10範圍內。較佳地，CpG免疫刺激性單股DNA分子含有18-48個核苷酸鹼基，其中CpG模體之重複序列數目在3至8範圍內。
更佳地，陰離子寡核苷酸係由式：5' X 1CGX 23'表示；其中C及G未甲基化；且X 1係選自A(腺嘌呤)、G(鳥嘌呤)及T(胸腺嘧啶)；且X 2為C(胞嘧啶)或T(胸腺嘧啶)。或者，陰離子寡核苷酸由式：5' (X 3) 2CG(X 4) 23'表示；其中C及G未甲基化；且X 3係選自A、T或G；且X 4為C或T。
所得免疫刺激性複合物呈尺寸通常在1-50微米範圍內之粒子形式且隨多種因素而變化，包括相互作用物種之相對電荷化學計量及分子量。微粒狀免疫刺激性複合物具有提供輔助及上調活體內特異性免疫反應的優勢。另外，穩定的免疫刺激性複合物適用於藉由各種方法製備醫藥組合物，包括油包水乳液、礦物鹽懸浮液及聚合凝膠。
抗體本文亦提供特異性結合於所揭示之肽免疫原之B細胞抗原決定基的分離之抗體或其抗原決定基結合片段。在一些實施例中，此類抗體為IgG抗體。在一些實施例中，此類抗體為IgG1抗體。
用於療法之抗體可使用此項技術中之標準方法產生且包括例如單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如雙特異性及三特異性抗體)及抗體片段，其限制條件為維持所需抗原結合活性及特異性。抗體片段包括例如Fv、單鏈Fv (scFv)、Fab、Fab'、雙scFv、單域抗體(sdAb)及(Fab') 2(包括化學連接之(Fab') 2)。抗體亦包括例如嵌合抗體、人源化抗體及各種物種(諸如小鼠、人類、食蟹獼猴等)之抗體。
在某些實施例中，本文提供製造特異性結合於所揭示之肽免疫原之B細胞抗原決定基的抗體或其抗原決定基結合片段的方法。在一些實施例中，此類方法包含向個體(例如哺乳動物，諸如小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類)投與(例如非經腸，例如肌肉內)肽免疫原。在一些實施例中，此類方法進一步包含在足以產生抗體之時間段之後(例如投與後約第1週至約第16週，或投與後約第6週、第9週及/或第12週)回收及分離所產生之抗體。
在某些實施例中，本揭示提供由Tau肽免疫原構築體中之任一者引發的抗體。
所揭示之Tau肽免疫原構築體(包含Tau片段、異源Th抗原決定基及視情況選用之異源間隔子)能夠在向個體投與時引發免疫反應且產生抗Tau抗體。Tau肽免疫原構築體之設計可中斷對自體Tau之耐受性且引發識別構形、非線性抗原決定基之特異性抗體的產生。
由Tau肽免疫原構築體產生的抗體以單體、二聚體、三聚體及寡聚物形式識別Tau且結合於Tau。
Tau肽免疫原構築體所引發的抗體出人意料地可防止Tau聚集(抗聚集活性)且可使預先形成之Tau聚集體解離(解聚集活性)。
來自經本發明之Tau肽免疫原構築體免疫接種之動物的所得免疫反應證實構築體產生與呈單體、二聚體、三聚體及寡聚物形式之Tau具反應性的強效定點抗體的能力。
在某些實施例中，本揭示提供由β類澱粉肽免疫原構築體中之任一者引發的抗體。所揭示之β類澱粉肽免疫原構築體(包含β類澱粉片段、異源Th抗原決定基及視情況選用之異源間隔子)能夠在向個體投與時引發免疫反應且產生抗β類澱粉抗體。
套組在某些實施例中，本文亦提供套組，其包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：一個、兩個、三個或更多個本文所述之肽免疫原構築體(例如包括兩個或更多個Tau肽免疫原構築體，或Tau肽免疫原構築體及β類澱粉免疫原構築體)、視情況選用之一或多種本文所述之佐劑(例如一或多種本文所述之鋁鹽)、視情況選用之本文所述之CpG寡核苷酸及視情況選用之一或多種賦形劑。在一些實施例中，此類套組包含單一容器，其包含呈一種調配物之兩個、三個或更多個本文所述之肽免疫原構築體(包括兩個或更多個Tau肽免疫原構築體，或Tau肽免疫原構築體及β類澱粉免疫原構築體)。在一些實施例中，此類套組在分開的容器中包含此等組分。在一些實施例中，套組進一步包含使用說明書，諸如關於使用所提供之組分製造肽免疫原組合物之說明書。在一些實施例中，套組進一步包含用於向個體投與肽免疫原組合物之遞送媒劑(例如注射器)。
方法本揭示亦關於製造及使用肽免疫原構築體、組合物及醫藥組合物的方法。
a. 用於製造肽免疫原構築體之方法本揭示之肽免疫原構築體可藉由一般熟習此項技術者熟知之化學合成方法製得(參見例如，Fields等人, Synthetic Peptides: A User's Guide中之第3章, Grant編, W. H. Freeman & Co., New York, NY, 1992, 第77頁)。肽免疫原構築體可使用自動化Merrifield固相合成技術，使用側鏈經保護的胺基酸，用經t-Boc或F-moc化學作用保護的α-NH 2在例如Applied Biosystems肽合成器型號430A或431上來合成。製備包含針對Th抗原決定基之組合文庫肽之肽免疫原構築體可藉由提供替代性胺基酸之混合物以便在指定可變位置偶聯來實現。
在所需肽免疫原構築體得到完全組裝之後，可根據標準程序處理樹脂以使肽自樹脂裂解且可脫除胺基酸側鏈上之官能基。游離肽可藉由HPLC純化且進行生物化學表徵，例如藉由胺基酸分析或藉由定序。肽之純化及表徵方法為一般熟習此項技術者所熟知。由此化學方法產生之肽的品質可得到控制及限定，且因此肽免疫原構築體之可再現性、免疫原性及產量可得到保證。
已發現與小分子藥物保留特異性藥物活性所允許之結構變化性的範圍相比，或與生物衍生之藥物共產生之大分子中發現的所需活性及不合需要之毒性相比，保留所欲免疫活性所允許之結構變化性的範圍要寬鬆得多。因此，有意設計或由合成方法之不可避免的誤差而產生的肽類似物，均為缺失序列副產物之混合物，其層析及免疫特性與所欲肽類似，通常與所需肽之純化製備物一樣有效。設計的類似物及非預期的類似物混合物均為有效的，只要研發出嚴格的QC程序以監測製造製程及產物評估製程兩者，以便保證採用此等肽之最終產物的可再現性及功效即可。
肽免疫原構築體亦可使用重組DNA技術製造，包括核酸分子、載體及/或宿主細胞。因而，編碼肽免疫原構築體及其免疫功能類似物的核酸分子亦作為本發明之一部分由本揭示涵蓋。同樣，包含核酸分子之載體，包括表現載體以及含有載體之宿主細胞亦作為本發明之一部分由本揭示涵蓋。
各種例示性實施例亦涵蓋產生肽免疫原構築體及其免疫功能類似物之方法。舉例而言，方法可包括在表現肽及/或類似物之此類條件下培育含有表現載體之宿主細胞的步驟，該表現載體含有編碼肽免疫原構築體及/或其免疫功能類似物之核酸分子。較長的合成肽免疫原可藉由熟知重組DNA技術合成。此類技術在熟知標準手冊中提供有詳細方案。為了構築編碼本發明之肽的基因，對胺基酸序列進行反向轉譯以獲得編碼胺基酸序列之核酸序列，較佳具有對於要在其中表現該基因的生物體而言最佳的密碼子。接著，通常藉由合成編碼肽及任何調節元件(必要時)之寡核苷酸來製備合成基因。將合成基因插入適合的選殖載體中且轉染至宿主細胞中。肽隨後在適合於所選表現系統及宿主之適合條件下表現。對肽進行純化且藉由標準方法表徵。
b. 製造免疫刺激性複合物之方法各種例示性實施例亦涵蓋產生包含肽免疫原構築體及CpG寡脫氧核苷酸(ODN)分子之免疫刺激性複合物的方法。穩定的免疫刺激性複合物(ISC)來源於肽免疫原構築體之陽離子部分及聚陰離子CpG ODN分子。自組裝系統藉由靜電中和電荷驅動。肽免疫原構築體之陽離子部分與陰離子寡聚物之莫耳電荷比率的化學計量確定締合程度。肽免疫原構築體及CpG ODN之非共價靜電締合為完全可再現過程。肽/CpG ODN免疫刺激性複合物聚集體促成向免疫系統之「專業」抗原呈遞細胞(APC)呈遞，因此進一步增強複合物之免疫原性。此等複合物易於在製造期間針對品質控制進行表徵。肽/CpG ISC活體內具有良好耐受性。包含CpG ODN及源自含B細胞抗原決定基之片段的肽免疫原構築體之微粒系統經設計以利用與CpG ODN使用相關之廣義B細胞有絲分裂原性，同時促進平衡的Th-1/Th-2型反應。
所揭示之醫藥組合物中之CpG ODN在藉由相對電荷之靜電中和介導的過程中與免疫原100%結合，引起形成微米尺寸之微粒。與習知使用之CpG佐劑相比，微粒形式實現顯著減少CpG劑量，減少不良先天性免疫反應之可能性，且促進包括抗原呈遞細胞(APC)在內的替代性免疫原處理路徑。因此，此類調配物在概念上為新穎的且藉由促進由替代機制刺激免疫反應而提供潛在優點。
c. 製造醫藥組合物之方法各種例示性實施例亦涵蓋含有本文所述之肽免疫原構築體之醫藥組合物。在某些實施例中，醫藥組合物採用油包水乳液或礦物鹽懸浮液。
為了使醫藥組合物被大量群體使用且防止Tau或類澱粉聚集亦為投藥之目標之一部分，安全性成為另一重要考量因素。儘管在人類中將油包水乳液用於臨床試驗中之許多調配物，但明礬因其安全性而仍為供用於調配物中之主要佐劑。因此，在臨床應用之製劑中常使用明礬或其礦物鹽磷酸鋁(ADJUPHOS)作為佐劑。
可使用之其他佐劑及免疫刺激劑包括3-O-去醯化單磷醯基脂質A (MPL)或3-DMP、聚合或單體胺基酸，諸如聚麩胺酸或聚離胺酸。該等佐劑可與或不與其他特異性免疫刺激劑一起使用，該等免疫刺激劑諸如為胞壁醯肽(例如N-乙醯基胞壁醯基-L-蘇胺醯基-D-異麩醯胺酸(thr-MDP)、N-乙醯基-去甲胞壁醯基-L-丙胺醯基-D-異麩醯胺酸(nor-MDP)、N-乙醯基胞壁醯基-L-丙胺醯基-D-異麩醯胺醯基-L-丙胺酸-2-(1'-2'二軟脂醯基-sn-甘油基-3-羥基磷醯基氧基)-乙胺(MTP-PE)、N-乙醯基葡萄糖胺基-N-乙醯基胞壁醯基-L-Al-D-isoglu-L-Ala-二軟脂醯氧基丙醯胺(DTP-DPP)(Theramide™)或其他細菌細胞壁組分。水包油乳化液包括MF59 (參見Van Nest等人之WO 90/14837，其以全文引用之方式併入本文中)，其含有5%角鯊烯、0.5% Tween 80及0.5% Span 85 (視情況含有不同量之MTP-PE)，使用微流化床調配成次微米級粒子；SAF，其含有10%角鯊烯、0.4% Tween 80、5%普洛尼克嵌段聚合物(pluronic blocked polymer) L121及thr-MDP，微流化成次微米級乳液或渦旋產生較大粒度乳液；及Ribi™佐劑系統(RAS) (Ribi ImmunoChem, Hamilton, Mont.)，其含有2% 角鯊烯、0.2% Tween 80及一或多種選自以下之細菌細胞壁組分：單磷醯基脂質A (MPL)、海藻糖二黴菌酸酯(TDM)及細胞壁骨骼(CWS)，較佳MPL+CWS (Detox™)。其他佐劑包括弗氏完全佐劑(Complete Freund's Adjuvant；CFA)、弗氏不完全佐劑(IFA)及細胞介素，諸如介白素(IL-1、IL-2及IL-12)、顆粒球巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)以及腫瘤壞死因子(TNF)。
佐劑之選擇取決於含有佐劑之免疫原性調配物之穩定性、投與途徑、給藥時程、佐劑對經疫苗接種之物種之功效，且對於人類而言，醫藥學上可接受之佐劑係已獲相關監管機構批准或可批准用於人類投藥的佐劑。舉例而言，單獨的明礬、MPL或弗氏不完全佐劑(Chang等人, Advanced Drug Delivery Reviews 32:173-186 (1998)，其以全文引用之方式併入本文中)或視情況其所有組合適用於人類投藥。
組合物可包括醫藥學上可接受之無毒載劑或稀釋劑，其定義為常用於調配用於動物或人類投藥之醫藥組合物的媒劑。選擇稀釋劑以免影響組合之生物活性。此類稀釋劑之實例為蒸餾水、生理磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)、右旋糖溶液及漢克氏溶液(Hank's solution)。另外，醫藥組合物或調配物亦可包括其他載劑、佐劑或無毒、非治療性、非免疫原性穩定劑及其類似者。
醫藥組合物亦可包括大的緩慢代謝大分子，諸如蛋白質、多醣(如殼聚醣)、聚乳酸、聚乙醇酸及共聚物(例如乳膠官能化瓊脂糖凝膠、瓊脂糖、纖維素及其類似者)、聚合胺基酸、胺基酸共聚物及脂質聚集體(例如小油滴或脂質體)。另外，此等載劑可充當免疫刺激劑(亦即，佐劑)。
本發明之醫藥組合物可進一步包括適合遞送媒劑。適合遞送媒劑包括(但不限於)病毒、細菌、生物可降解微球體、微米粒子、奈米粒子、脂質體、膠原蛋白微球粒及脂質卷。
d. 使用醫藥組合物之方法本揭示亦包括使用含有Tau肽免疫原構築體之醫藥組合物的方法，及使用含有一或多個Tau肽免疫原構築體及/或一或多個Aβ肽免疫原構築體之醫藥組合物的方法。
在一些實施例中，該等方法採用一或多種包括一或多個Tau肽免疫原構築體之組合物及一或多種包含一或多個Aβ肽免疫原構築體之各別組合物。在一些實施例中，一或多個Tau肽免疫原構築體及一或多個Aβ肽免疫原構築體在單一組合物中。
在一些實施例中，該等方法採用包括兩個或更多個Tau肽免疫原構築體之一種、兩種或更多種組合物。在一些實施例中，兩個或更多個Tau肽免疫原構築體在各別組合物中。在一些實施例中，兩個或更多個Tau肽免疫原構築體在單一組合物中。
在某些實施例中，含有肽免疫原構築體之醫藥組合物可用於： (a)    抑制主體之Tau聚集； (b)    誘導主體之預先形成的Tau聚集體之解聚； (c)    減少宿主之外源Tau聚集體所觸發之神經退化； (d)    減少Tau過度表現細胞中之神經退化； (e)    降低主體中之血清Tau水平； (f)    降低主體腦部中之寡聚Tau水平； (g)    減少神經病變且恢復主體之運動活動；及類似情況； (h)    減少類澱粉斑塊形成。
在一些實施例中，向個體(例如哺乳動物)投與本文所述之Tau肽免疫原構築體或任何組合組合物減少、抑制或預防個體之腦中的Tau之聚集(例如病理性聚集)。
在一些實施例中，向個體(例如哺乳動物)投與本文所述之Tau肽免疫原構築體或任何組合組合物減少、抑制或預防個體之腦中的神經纖維纏結之形成。
在一些實施例中，向個體(例如哺乳動物)投與本文所述之Tau肽免疫原構築體或任何組合組合物降低個體之腦中的寡聚Tau之水平。
在一些實施例中，向個體(例如哺乳動物)投與本文所述之Tau肽免疫原構築體或任何組合組合物降低個體之腦中的Tau原纖維(fibrils)之水平。在一些實施例中，Tau原纖維包含p301S突變。在一些實施例中，Tau原纖維包含p301L突變。在一些實施例中，向個體(例如哺乳動物)投與本文所述之Tau肽免疫原構築體或任何組合組合物降低個體之腦中攜帶p301S或p301L突變之Tau (例如原纖維Tau)之水平。
在一些實施例中，向個體(例如哺乳動物)投與本文所述之Tau肽免疫原構築體或任何組合組合物降低個體之血清或腦中的單體Tau水平。
在一些實施例中，向個體(例如哺乳動物)投與本文所述之β類澱粉肽免疫原構築體或任何組合組合物減少、抑制或預防個體之腦中包含β類澱粉肽之類澱粉聚集體的積聚。
在一些實施例中，向個體(例如哺乳動物)投與本文所述之β類澱粉肽免疫原構築體減少、抑制或預防個體之腦中的類澱粉斑塊形成。
在一些實施例中，向個體(例如哺乳動物)投與本文所述之β類澱粉肽免疫原構築體或任何組合組合物降低個體之腦中的寡聚β類澱粉之水平。
在一些實施例中，向個體(例如哺乳動物)投與本文所述之β類澱粉肽免疫原構築體或任何組合組合物降低個體之腦中的β類澱粉原纖維之水平。
該等方法包含投與有需要之個體包含藥理學上有效量之一或多種肽免疫原構築體之醫藥組合物。
在一些實施例中，本文所述之方法係用於治療及/或預防tau蛋白病變。
依本文所用，「tau蛋白病變」涵蓋涉及微管蛋白Tau在腦內病理性聚集的任何神經退化性疾病。因此，除家族性及偶發性阿茲海默氏病以外，可使用本發明方法治療之其他tau蛋白病變亦包括(但不限於) 17號染色體相關額顳葉型癡呆、帕金森氏症(FTDP-17)、進行性核上麻痺、皮質基底核退化症、匹克病、進行性皮質下神經膠瘤病、僅纏結型癡呆、瀰漫性神經纖維纏結伴鈣化、嗜銀粒癡呆、肌肉萎縮性側索硬化帕金森氏症-癡呆綜合症、拳擊手型癡呆、唐氏症候群、格-施-謝三氏病、哈-施二氏病、包涵體肌炎、庫賈氏病、多系統萎縮、尼-匹二氏病C型、普里昂蛋白類澱粉腦血管病變、亞急性硬化性泛腦炎、肌強直性營養不良、非關島型運動神經元病伴神經纖維纏結、腦炎後型帕金森氏症，及慢性創傷性腦病。該等方法可進一步用於預防及治療路易體病。
在一些實施例中，本文所述之方法係用於治療及/或預防阿茲海默氏病型癡呆。
在一些實施例中，本文所述之方法係用於治療及/或預防阿茲海默氏病。
在一些實施例中，本文所述之方法係用於例如在阿茲海默氏病臨床發病之前抑制錯誤摺疊或病理性Tau形成或降低其水平。
在一些實施例中，本文所述之方法係用於例如在阿茲海默氏病臨床發病之前抑制類澱粉斑塊形成或降低其水平。
本揭示之另一態樣係關於一種促進Tau及/或Aβ聚集體自個體腦部清除的方法。此方法涉及在有效促進Tau或Aβ聚集體自個體腦部清除的條件下，向個體投與本文所述之任一或多個免疫原性Tau或Aβ肽免疫原構築體，例如參見 表 2 及表 4，或識別此類肽中之一者之抗原決定基的一或多種抗體。在一些實施例中，此等方法包括投與一或多個Tau肽免疫原構築體及一或多個Aβ肽免疫原構築體，例如依本文所述。
Tau聚集體之清除包括清除神經纖維纏結及/或神經纖維纏結之病理性Tau前驅體。神經纖維纏結往往與神經退化性疾病相關，包括例如偶發性及家族性阿茲海默氏病、肌肉萎縮性側索硬化、嗜銀粒癡呆、拳擊手型癡呆、慢性創傷性腦病、瀰漫性神經纖維纏結伴鈣化、唐氏症候群、格-施-謝三氏病、哈-施二氏病、17號染色體相關遺傳性額顳葉型癡呆、帕金森氏症(FTDP-17)、包涵體肌炎、庫賈氏病、多發性系統萎縮症、尼-匹二氏病C型、匹克病、普里昂蛋白類澱粉腦血管病變、偶發性皮質基底核退化症、進行性核上麻痺、亞急性硬化性泛腦炎、肌強直性營養不良、運動神經元病伴神經纖維纏結、僅纏結型癡呆，及進行性皮質下神經膠瘤病。
本揭示之另一態樣係關於一種減緩個體之Tau或Aβ病變相關行為表現型之進展的方法。此方法涉及在有效減緩個體之Tau或Aβ病變相關行為表現型的條件下，向個體投與本文所述之任一或多個免疫原性Tau或Aβ肽免疫原構築體，例如參見 表 2 及表 4，或識別此類肽中之一者之免疫原性抗原決定基的一或多種抗體。此方法亦可涉及投與一或多個Tau肽免疫原構築體及一或多個Aβ肽免疫原構築體，例如依本文所述。
依本文所用，Tau病變或Aβ病變相關行為表現型包括(但不限於)認知損傷、早期人格改變及抑制障礙、淡漠、意志缺失、緘默症、失用症、持續症、刻板動作/行為、口部過度活動(hyperorality)、無組織化、無法計劃或組織連續任務、自私/冷漠、反社會特質、缺乏同理心、遲疑不決、具有頻繁語誤但相對保守的理解的語法性失語、理解受損和字詞尋找缺陷、緩慢進行性步態不穩、反步症(retropulsion)、僵化、頻繁跌倒、非左旋多巴反應性軸向剛度(non-levodopa responsive axial rigidity)、核上性凝視麻痺、方波急跳、緩慢垂直掃視、假延髓性麻痺、肢體失用、肌張力障礙、皮質感覺喪失以及震顫。
根據本揭示之方法，在一個實施例中，向有需要之個體投與免疫原性Tau肽、免疫原性Tau肽之組合或一或多個Tau肽免疫原構築體與一或多個Aβ免疫原構築體之組合。在一些實施例中，個體(例如人類)患有本文所述或根據本文所提供之方法治療之疾病、病狀或病變(例如已診斷患有此類疾病、病狀或病變)。在一些實施例中，個體(例如人類)處於本文所述之疾病、病狀或病變之風險下。
蛋白質之適合免疫原性肽片段含有一或多個模擬相應蛋白質之病理性形式的抗原決定基。例示性免疫原性Tau抗原決定基在一或多個胺基酸處磷酸化，該一或多個胺基酸在Tau之病理性形式中磷酸化，但在Tau之正常或非病理性形式中未磷酸化。
在一些實施例中，投與免疫原性Tau或Aβ肽誘導個體對免疫原性Tau或Aβ肽及Tau或Aβ之病理性形式的活性免疫反應，從而促進相關Tau或Aβ聚集體之清除，減緩Tau或Aβ病變相關行為之進展且治療潛在疾病。根據本發明之此態樣，免疫反應涉及形成針對免疫原性Tau或Aβ肽的有益體液(抗體介導)及/或細胞(由抗原特異性T細胞或其分泌產物介導)反應。
體液免疫反應之存在可藉由測試來自個體之生物樣本(例如血液、血漿、血清、尿液、唾液、糞便、CSF或淋巴液)的針對免疫原性Tau或Aβ肽之抗體的存在來確定及監測。用於偵測生物樣本中之抗體之方法為此項技術中所熟知，例如ELISA、點漬墨法、SDS-PAGE凝膠或ELISPOT。細胞介導之免疫反應的存在可藉由此項技術中容易知曉之增殖分析(CD4+ T細胞)或細胞毒性T淋巴細胞(CTL)分析確定。
在本文所述之方法中之任一者之一些實施例中，投與為非經腸投與。在一些實施例中，投與為靜脈內(IV)、皮下(SC)、肌肉內(IM)、皮內(ID)或腹膜內(IP)投與。在一些實施例中，投與為肌肉內投與。在其他實施例中，投與為鼻內投與。
可用於本文所述之方法中之任一者中的Tau肽免疫原構築體中的本發明之經分離之免疫原性Tau肽包括以下 表 1及 表 7- 表 10之胺基酸序列中之任一者。
可用於本文中所述之方法中之任一者中的β類澱粉肽免疫原構築體中的經分離之免疫原性Aβ肽包括 表 3之胺基酸序列中之任一者，及WO 2014/143087及/或US 9,102,752 B2中所述之任一者(包括其式內之肽)。
具體編號實施例 1本揭示之具體實施例闡述於以下加編號之段落中。 1.     一種Tau肽免疫原構築體，其由下式表示： (Th) m-(A) n-(Tau片段)-X 或 (Tau片段)-(A) n-(Th) m-X 其中 Th為異源T輔助抗原決定基； A為異源間隔子； (Tau片段)為具有來自SEQ ID NO: 60之全長Tau蛋白的約10至約40個胺基酸殘基的B細胞抗原決定基； X為胺基酸之α-COOH或α-CONH 2； m為1至約4；及 n為0至約10。 2.     如段落1之Tau肽免疫原構築體，其中Tau片段係選自SEQ ID NO: 1-8、17-30及63-67。 3.     如段落1或2中任一者之Tau肽免疫原構築體，其中Th抗原決定基為SEQ ID NO: 31-59。 4.     如段落1之Tau肽免疫原構築體，其中肽免疫原構築體係選自SEQ ID NO: 9-16或Tau肽與Th肽之位置顛倒的構築體。 5.     一種Tau肽免疫原構築體，其包含： 包含來自SEQ ID NO: 60之全長Tau蛋白序列的約8至約40個胺基酸殘基(例如約8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40個胺基酸)的B細胞抗原決定基； 包含選自SEQ ID NO: 31-59之胺基酸序列的T輔助抗原決定基；及 視情況選用之異源間隔子，其選自胺基酸，即Lys-、Gly-、Lys-Lys-Lys-、(α, ε-N)Lys及ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 62)， 其中B細胞抗原決定基直接或經由視情況選用之異源間隔子共價連接於T輔助抗原決定基。 6.     如段落5之Tau肽免疫原構築體，其中B細胞抗原決定基係選自SEQ ID NO: 1-8、17-30及63-67。 7.     如段落5或6之Tau肽免疫原構築體，其中T輔助抗原決定基係選自SEQ ID NO: 31-59。 8.     如段落5至7中任一者之Tau肽免疫原構築體，其中視情況選用之異源間隔子為(α, ε-N)Lys或ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 62)。 9.     如段落5至8中任一者之Tau肽免疫原構築體，其中T輔助抗原決定基共價連接於B細胞抗原決定基之胺基端。 10.   如段落5至9中任一者之Tau肽免疫原構築體，其中T輔助抗原決定基經由視情況選用之異源間隔子共價連接於B細胞抗原決定基之胺基端。 11.   一種組合物，其包含如段落1至10中任一者之Tau肽免疫原構築體。 12.   一種醫藥組合物，其包含： a. 如段落1至10中任一者之Tau肽免疫原構築體；及 b.醫藥學上可接受之遞送媒劑及/或佐劑。 13.   如段落12之醫藥組合物，其中 a.     Tau肽免疫原構築體係選自SEQ ID NO: 9-16，或相較於SEQ ID NO: 9-16中之一者，B細胞抗原決定基及T細胞抗原決定基之位置為顛倒的Tau肽免疫原構築體；及 b.      Tau肽免疫原構築體與CpG寡脫氧核苷酸(ODN)混合以形成穩定的免疫刺激性複合物。 14.   如段落11至13中任一者之組合物，其中組合物或醫藥組合物包含多於一個該等Tau肽免疫原構築體。 15.   如段落11至14中任一者之組合物，其中組合物或醫藥組合物包含2個、3個或4個該等Tau肽免疫原構築體。 16.   如段落11至15中任一者之組合物，其中組合物或醫藥組合物包含SEQ ID NO: 9-16、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 10及SEQ ID NO: 15中之一或多者或其任何組合，或其中組合物或醫藥組合物包含靶向Tau之第一區(例如N端區)的第一肽免疫原構築體及靶向Tau之第二區(例如重複序列)的第二肽免疫原構築體，視情況其中此等肽免疫原構築體分別包含SEQ ID NO: 2及/或10以及7及/或15。 17.   一種分離之抗體或其抗原決定基結合片段，其特異性結合於如段落1至10中任一者之Tau肽免疫原構築體之B細胞抗原決定基。 18.   如段落17之分離之抗體或其抗原決定基結合片段，其結合於Tau肽免疫原構築體。 19.   一種組合物，其包含如段落17或18之經離抗體或其抗原決定基結合片段。 20.   一種Tau肽免疫原構築體，其選自：
a. MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDKKK-eK-ISITEIKGVIVHRIETILF-NH2； SEQ ID NO: 9
b. DHAGTYGLGDKKK-eK-ISITEIKGVIVHRIETILF-NH2； SEQ ID NO: 10
c. ISITEIKGVIVHRIETILF-eK-KKKNITHVPGGGNKK-NH2； SEQ ID NO: 11
d. ISITEIKGVIVHRIETILF-eK-KKKKDNIKHVPGGGSVQIVYK-NH2； SEQ ID NO: 12
e. ISITEIKGVIVHRIETILF-eK-KKKTKIATPRGAAPP-NH2； SEQ ID NO: 13
f. ISITEIKGVIVHRIETILF-eK-KKKVVRTPPKSPSSAKSRL-NH2； SEQ ID NO: 14
g. ISITEIKGVIVHRIETILF-eK-KKKIKHVPGGGSVQIVYK-NH2； 及 SEQ ID NO: 15
h. ISITEIKGVIVHRIETILF-eK-KKKVSGDTSPRHLSNVSST-NH2 SEQ ID NO: 16
21.   一種組合物，其包含如段落20中之Tau肽免疫原構築體。 22.   一種醫藥組合物，其包含： a. 如段落20中之Tau肽免疫原構築體；及 b.醫藥學上可接受之遞送媒劑及/或佐劑。 23.   如段落22之醫藥組合物，其中Tau肽免疫原構築體與CpG寡脫氧核苷酸(ODN)混合以形成穩定的免疫刺激性複合物。 24.   如段落21至23中任一者之組合物，其中組合物或醫藥組合物包含多於一個該等Tau肽免疫原構築體。 25.   如段落21至24中任一者之組合物，其中組合物或醫藥組合物包含2個、3個或4個該等Tau肽免疫原構築體。 26.   如任一先前段落之組合物，其中組合物或醫藥組合物進一步包含一或多個β類澱粉(Aβ)肽免疫原構築體。 27.   如段落26之組合物，其中組合物包含SEQ ID NO: 70之Aβ肽免疫原構築體、SEQ ID NO: 71之Aβ肽免疫原構築體或SEQ ID NO: 70之Aβ肽免疫原構築體及SEQ ID NO:71之Aβ肽免疫原構築體。 28.   如任一先前段落之組合物，其中組合物包含以下中之任一者或多者：SEQ ID NO: 9-16、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 10及SEQ ID NO: 15或其任何組合，例如，SEQ ID NO: 10與SEQ ID NO:70及71之組合、SEQ ID NO: 11與SEQ ID NO:70及71之組合、SEQ ID NO: 12與SEQ ID NO:70及71之組合、SEQ ID NO: 13與SEQ ID NO:70及71之組合、SEQ ID NO: 14與SEQ ID NO:70及71之組合、SEQ ID NO: 15與SEQ ID NO:70及71之組合、SEQ ID NO: 16與SEQ ID NO:70及71之組合，或上文所列之包括SEQ ID NO: 70但不包括SEQ ID NO: 71或包括SEQ ID NO: 71但不包括SEQ ID NO: 70之組合，或其中組合物或醫藥組合物包含靶向Tau之第一區(例如N端區)的第一肽免疫原構築體及靶向Tau之第二區(例如重複序列)的第二肽免疫原構築體，視情況其中此等肽免疫原構築體分別包含SEQ ID NO: 2及/或10以及7及/或15。 29.   如段落26至28中任一者之組合物，其中組合物包含WO 2014/143087之Aβ肽免疫原性構築體。 30.   一種對個體之tau蛋白病變預防、抑制、降低其嚴重程度、延遲或治療之方法，該方法包含向個體投與如前述段落中任一者之tau肽免疫原構築體或組合物。 31.   如段落30之方法，其中該tau蛋白病變係選自阿茲海默氏病、路易體病、17號染色體相關額顳葉型癡呆、帕金森氏症(FTDP-17)、進行性核上麻痺、皮質基底核退化症、匹克病、進行性皮質下神經膠瘤病、僅纏結型癡呆、瀰漫性神經纖維纏結伴鈣化、嗜銀粒癡呆、肌肉萎縮性側索硬化帕金森氏症-癡呆綜合症、拳擊手型癡呆、唐氏症候群、格-施-謝三氏病、哈-施二氏病、包涵體肌炎、庫賈氏病、多系統萎縮、尼-匹二氏病C型、普里昂蛋白類澱粉腦血管病變、亞急性硬化性泛腦炎、肌強直性營養不良、非關島型運動神經元病伴神經纖維纏結、腦炎後型帕金森氏症，及慢性創傷性腦病。 32.   如段落30或31之方法，其中tau蛋白病變為阿茲海默氏病。 33.   如段落30至32中任一者之方法，其中該方法包含投與一或多個Tau肽免疫原構築體，視情況與一或多個β類澱粉肽免疫原構築體組合。 34.   如段落33之方法，其中一或多個Tau肽免疫原構築體及/或一或多個β類澱粉肽免疫原構築體包含於單一組合物中。 35.   如段落33之方法，其中一或多個Tau肽免疫原構築體及/或一或多個β類澱粉肽免疫原構築體包含於分開投與的各別組合物中。 36.   如段落30至35中任一者之方法，其包含投與如前述段落中任一者之肽免疫原構築體、組合物或其組合中之一或多者。
具體編號實施例 2本揭示之另外具體實施例闡述於以下加編號之段落中。 1.     一種Tau肽免疫原構築體，其由下式表示： (Th) m-(A) n-(Tau片段)-X 或 (Tau片段)-(A) n-(Th) m-X 其中 Th為異源T輔助抗原決定基； A為異源間隔子； (Tau片段)為具有來自SEQ ID NO: 60之全長Tau蛋白的約10至約40個胺基酸殘基的B細胞抗原決定基； X為胺基酸之α-COOH或α-CONH 2； m為1至約4；及 n為0至約10。 2.     如段落1之Tau肽免疫原構築體，其中Tau片段係選自SEQ ID NO: 1-8、17-30及63-67。 3.     如段落1或2中任一者之Tau肽免疫原構築體，其中Th抗原決定基係選自SEQ ID NO: 31-59。 4.     如段落1之Tau肽免疫原構築體，其中肽免疫原構築體係選自SEQ ID NO: 9-16或Tau肽與Th肽之位置顛倒的構築體。 5.     一種Tau肽免疫原構築體，其包含： 包含來自SEQ ID NO: 60之全長Tau蛋白序列的約8至約40個胺基酸殘基(例如約8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40個胺基酸)的B細胞抗原決定基； 包含選自由SEQ ID NO: 31-59組成之群的胺基酸序列的T輔助抗原決定基；及 視情況選用之異源間隔子，其選自胺基酸，即Lys-、Gly-、Lys-Lys-Lys-、(α, ε-N)Lys及ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 62)， 其中B細胞抗原決定基直接或經由視情況選用之異源間隔子共價連接於T輔助抗原決定基。 6.     如段落5之Tau肽免疫原構築體，其中B細胞抗原決定基係選自SEQ ID NO: 1-8、17-30及63-67。 7.     如段落5或6之Tau肽免疫原構築體，其中T輔助抗原決定基係選自SEQ ID NO: 31-59。 8.     如段落5至7中任一者之Tau肽免疫原構築體，其中視情況選用之異源間隔子為(α, ε-N)Lys或ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 62)。 9.     如段落5至8中任一者之Tau肽免疫原構築體，其中T輔助抗原決定基共價連接於B細胞抗原決定基之胺基端。 10.   如段落5至9中任一者之Tau肽免疫原構築體，其中T輔助抗原決定基經由視情況選用之異源間隔子共價連接於B細胞抗原決定基之胺基端。 11.   一種組合物，其包含如段落1至10中任一者之Tau肽免疫原構築體。 12.   一種醫藥組合物，其包含： a.     如段落1至10中任一者之Tau肽免疫原構築體；及 b.     醫藥學上可接受之遞送媒劑及/或佐劑。 13.   如段落12之醫藥組合物，其中 a.     Tau肽免疫原構築體係選自SEQ ID NO: 9-16，或相較於SEQ ID NO: 9-16中之一者，B細胞抗原決定基及T細胞抗原決定基之位置為顛倒的Tau肽免疫原構築體；及 b.     Tau肽免疫原構築體與CpG寡脫氧核苷酸(ODN)混合以形成穩定的免疫刺激性複合物。 14.   如段落11至13中任一者之組合物，其中組合物或醫藥組合物包含多於一個該等Tau肽免疫原構築體。 15.   如段落11至14中任一者之組合物，其中組合物或醫藥組合物包含2個、3個或4個該等Tau肽免疫原構築體。 16.   如段落11至15中任一者之組合物，其中組合物或醫藥組合物包含SEQ ID NO: 9-16、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 10及SEQ ID NO: 15中之一或多者或其任何組合，或其中組合物或醫藥組合物包含靶向Tau之第一區(例如N端區)的第一肽免疫原構築體及靶向Tau之第二區(例如重複序列)的第二肽免疫原構築體，視情況其中此等肽免疫原構築體分別包含SEQ ID NO: 2及/或10以及7及/或15。 17.   一種分離之抗體或其抗原決定基結合片段，其特異性結合於如段落1至10中任一者之Tau肽免疫原構築體之B細胞抗原決定基。 18.   如段落17之分離之抗體或其抗原決定基結合片段，其結合於Tau肽免疫原構築體。 19.   一種組合物，其包含如段落17或18之經離抗體或其抗原決定基結合片段。 20.   一種Tau肽免疫原構築體，其選自：
a.  MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDKKK-eK-ISITEIKGVIVHRIETILF-NH2； SEQ ID NO: 9
b.  DHAGTYGLGDKKK-eK-ISITEIKGVIVHRIETILF-NH2； SEQ ID NO: 10
c.  ISITEIKGVIVHRIETILF-eK-KKKNITHVPGGGNKK-NH2； SEQ ID NO: 11
d.  ISITEIKGVIVHRIETILF-eK-KKKKDNIKHVPGGGSVQIVYK-NH2； SEQ ID NO: 12
e.  ISITEIKGVIVHRIETILF-eK-KKKTKIATPRGAAPP-NH2； SEQ ID NO: 13
f.  ISITEIKGVIVHRIETILF-eK-KKKVVRTPPKSPSSAKSRL-NH2； SEQ ID NO: 14
g.  ISITEIKGVIVHRIETILF-eK-KKKIKHVPGGGSVQIVYK-NH2； 及 SEQ ID NO: 15
h.  ISITEIKGVIVHRIETILF-eK-KKKVSGDTSPRHLSNVSST-NH2 SEQ ID NO: 16
21.   一種組合物，其包含如段落20中之Tau肽免疫原構築體。 22.   一種醫藥組合物，其包含： a.     如段落20中之Tau肽免疫原構築體；及 b.     醫藥學上可接受之遞送媒劑及/或佐劑。 23.   如段落22之醫藥組合物，其中Tau肽免疫原構築體與CpG寡脫氧核苷酸(ODN)混合以形成穩定的免疫刺激性複合物。 24.   如段落21至23中任一者之組合物，其中組合物或醫藥組合物包含多於一個該等Tau肽免疫原構築體。 25.   如段落21至24中任一者之組合物，其中組合物或醫藥組合物包含2個、3個或4個該等Tau肽免疫原構築體。 26.   如任一先前段落之組合物，其中組合物或醫藥組合物進一步包含一或多個β類澱粉(Aβ)肽免疫原構築體。 27.   如段落26之組合物，其中組合物包含SEQ ID NO: 70之Aβ肽免疫原構築體、SEQ ID NO: 71之Aβ肽免疫原構築體或SEQ ID NO: 70之Aβ肽免疫原構築體及SEQ ID NO:71之Aβ肽免疫原構築體。 28.   如任一先前段落之組合物，其中組合物包含以下中之任一者或多者：SEQ ID NO: 9-16、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 10及SEQ ID NO: 15，或其任何組合，例如，SEQ ID NO: 10與SEQ ID NO:70及71之組合、SEQ ID NO: 11與SEQ ID NO:70及71之組合、SEQ ID NO: 12與SEQ ID NO:70及71之組合、SEQ ID NO: 13與SEQ ID NO:70及71之組合、SEQ ID NO: 14與SEQ ID NO:70及71之組合、SEQ ID NO: 15與SEQ ID NO:70及71之組合、SEQ ID NO: 16與SEQ ID NO:70及71之組合，或上文所列之包括SEQ ID NO: 70但不包括SEQ ID NO: 71或包括SEQ ID NO: 71但不包括SEQ ID NO: 70之組合，或其中組合物或醫藥組合物包含靶向Tau之第一區(例如N端區)的第一肽免疫原構築體及靶向Tau之第二區(例如重複序列)的第二肽免疫原構築體，視情況其中此等肽免疫原構築體分別包含SEQ ID NO: 2及/或10以及7及/或15。 29.   如段落26至28中任一者之組合物，其中組合物包含WO 2014/143087之Aβ肽免疫原性構築體。 30.   一種對個體之tau蛋白病變預防、抑制、降低其嚴重程度、延遲或治療之方法，該方法包含向個體投與如前述段落中任一者之tau肽免疫原構築體或組合物。 31.   如段落30之方法，其中該tau蛋白病變係選自阿茲海默氏病、路易體病、17號染色體相關額顳葉型癡呆、帕金森氏症(FTDP-17)、進行性核上麻痺、皮質基底核退化症、匹克病、進行性皮質下神經膠瘤病、僅纏結型癡呆、瀰漫性神經纖維纏結伴鈣化、嗜銀粒癡呆、肌肉萎縮性側索硬化帕金森氏症-癡呆綜合症、拳擊手型癡呆、唐氏症候群、格-施-謝三氏病、哈-施二氏病、包涵體肌炎、庫賈氏病、多系統萎縮、尼-匹二氏病C型、普里昂蛋白類澱粉腦血管病變、亞急性硬化性泛腦炎、肌強直性營養不良、非關島型運動神經元病伴神經纖維纏結、腦炎後型帕金森氏症，及慢性創傷性腦病。 32.   如段落30或31之方法，其中tau蛋白病變為阿茲海默氏病。 33.   如段落30至32中任一者之方法，其中該方法包含投與一或多個Tau肽免疫原構築體，視情況與一或多個β類澱粉肽免疫原構築體組合。 34.   如段落33之方法，其中一或多個Tau肽免疫原構築體及/或一或多個β類澱粉肽免疫原構築體包含於單一組合物中。 35.   如段落33之方法，其中一或多個Tau肽免疫原構築體及/或一或多個β類澱粉肽免疫原構築體包含於分開投與的各別組合物中。 36.   如段落30至35中任一者之方法，其包含投與如前述段落中任一者之肽免疫原構築體、組合物或其組合中之一或多者。
實例 1腦中錯誤摺疊之Tau之積聚與阿茲海默氏病(AD)中之臨床衰退相關，但其表現比認知症狀早數十年(Congdon及Sigurdsson, Nat. Rev. Neurol, 2018)。在AD臨床發作之前靶向病理性Tau可幫助預防疾病及/或進展。在此描述一種用於預防及治療阿茲海默氏病的基於疫苗之免疫治療方法。Tau疫苗之臨床前表徵結果呈現於下 表 A中。圖式中提及之肽可基於 表 2之第1行中之字母碼交叉參考。
表A ：Tau 候選物之免疫原性
前導物 UbTh1 CpG1 抗原 Mono PFF
A 10 107 396 504 17,400
B 10 221 1,490 3,512 2,060
C 10 199 2,827 5,732 745
D 17 18 10,086 574 601
E 10 15 5,216 554 498
F 10 39 97 2,782 4,050
G 10 59 4,003 3,299 4,556
使用來自經疫苗接種之雄性哈脫萊(Hartley)天竺鼠之末端抽血血清(15週)，經由針對T輔助肽、CpG、Tau前導物特異性肽、全長單體Tau(Mono)及Tau預先形成的原纖維(PFF)探測的12點稀釋曲線ELISA得到Ec50值。
基於疫苗之平台示於 圖 1中，且包括B細胞抗原決定基、連接子及Th肽載體。B細胞將識別B細胞抗原決定基且產生針對肽之抗體，該肽模擬生物目標(例如Tau)。連接子化學連接B細胞抗原決定基與Th肽，從而使B細胞抗原決定基向免疫系統之呈遞最佳化。Th肽載體活化T輔助細胞，提醒B細胞開始產生針對B細胞抗原決定基之抗體，同時避免發炎及脫靶活性。標註有功能域及靶向肽的Tau之一級結構示於 圖 1底部。此圖中所指示之肽免疫原構築體的結構亦示於表2中(且藉由字母碼參考)。
依本文所述測試之肽免疫原構築體以100 μg/mL + 300 μg/0.25 mL肽調配於Adju-Phos CpG1中。相隔3給予天竺鼠5次肌肉內射注，在15 wpi收集末端抽血。針對T輔助肽、佐劑組分及Tau之抗體藉由ELISA在連續稀釋液中定量。另外，藉由西方墨點法、點漬墨法及生物層干涉術(BLI)針對重組及源自腦部之Tau製備物表徵抗體結合。在HEK293及B103細胞中經由Tau FRET聚集及pHrodo吸收分析進行活體外功能之評定。
抗體結合表徵之結果示於 圖 2A及 圖 2B中。疫苗誘導之抗體針對三種形式之重組Tau (單體、寡聚及PFF)及來自死後腦組織(Br)之十二烷基肌胺酸鈉(sarkosyl)提取物的結合效能經由點漬墨法表徵( 圖 2A)。針對不同形式之Tau觀測到不同結合概況。BLI結果顯示以在nM範圍內之Kd進行的與各Tau形式之抗體結合，其中三個前導物誘導之抗體之解離速率比貝瑞奈單抗慢( 圖 2B)。呈現Bep及前導物A誘導之抗體對PFF的代表性結合曲線。
使用Tau生物感測器株之聚集分析之結果示於 圖 3A及 圖 3B中。Tau生物感測器株(Frost等人, J. Biol. Chem., 2009; 284(19):12845-12852)用於評定相較於抗Tau mAb，即西瑞奈單抗及貝瑞奈單抗，疫苗誘導之抗體對Tau聚集之功能抑制。分析條件包括添加脂染胺( 圖 3A)及無脂染胺( 圖 3B)。僅無脂染胺之條件引起Ab抑制聚集。
Tau吸收分析之結果示於 圖 4A及 圖 4B中。使B103細胞暴露於加pHrodo標籤之Tau製備物6小時。在吸收後，pHrodo-Tau發螢光，其能夠使用IncuCyte活細胞成像儀定量。前導物A、B、C及F誘導之抗體以劑量反應性方式抑制單體Tau吸收( 圖 4A)。所有前導物誘導之抗體均引起PFF吸收之劑量依賴性降低( 圖 4B)。前導物誘導之抗體之效能各不相同；然而，與單體Tau吸收相比，所有抗體均展現出對PFF之較強抑制。
藉由所測試之Tau肽免疫原構築體誘導的抗體顯示出針對不同形式之Tau的不同結合概況。針對Th1肽或CpG1未觀測到顯著免疫原性。功能分析說明，此類抗體防止Tau凝集(依Tau吸收之抑制所示)。
實例 2在活性及結合分析中測試使用p5555kb及p5187kb產生之抗Tau IgG抗體的組合。 圖 5A顯示根據用p5555kb、p5187kb或p5555kb及p5187kb兩者疫苗接種之大鼠的B103細胞中的Tau吸收分析之結果，該等細胞用pHrodo-PFF Tau及抗Tau抗體處理。在圖5A、圖5B及圖5C中，在p5555kb+p5187kb之情況下，將由指定疫苗產生的抗體在分析中混合在一起。資料顯示當使用來自用p5555kb及p5187kb IgG疫苗接種之大鼠的抗Tau IgG抗體時，Tau吸收減少。 圖 5B為圖5A中之資料之另一呈現，顯示Tau攝吸收之抑制百分比。
為檢查根據p5555kb及p5187kb之抗體是否可共同結合同一目標，使用生物層干涉術(BLI)。簡言之，BLI允許藉由量測由塗佈有目標蛋白或肽之生物感測器反射之光的干擾來定量結合。隨著結合出現，干擾增加。若兩個抗體可一起結合，則預測在引入抗體之後，在不同抗體與同一目標結合之後，干擾增加。若抗體無法共同結合同一目標，則在第一抗體結合之後干擾將不會隨第二抗體變化。 圖 5C顯示根據p5555kb及p5187kb之IgG的生物層干涉術分析之結果。資料顯示，在Tau結合根據p5187kb之IgG之後，根據p5555kb之IgG繼續結合PFF Tau。圖5D顯示藉由投與p5555kb及p5187kB產生之抗Tau IgG同型，顯示IgG1及IgG2b同型之富集。此等結果支持組合疫苗針對Tau之可行性。
在WT及P301L (突變Tau)小鼠中進行疫苗接種研究。 圖 6A顯示用p5555kb疫苗接種之P301L小鼠產生針對單體及PFF Tau之穩定效價。 圖 6B顯示用p5555kb進行接種疫苗減少P301L小鼠中之Tau積聚。 圖 6C顯示來自用p5555kb疫苗接種之P301L小鼠之腦部的溶胞物在Tau生物感測器株中展現出聚集誘導減弱之跡象。此等結果顯示，WT及P301L小鼠均顯示對p5555kb疫苗接種具有陽性反應。
實例 3藉由在一種調配物中組合p5555kb及p5187kb Tau肽免疫原構築體來設計組合Tau疫苗，即VXX-301。圖式中提及VXX-301係指來源於經VXX-301疫苗接種之動物之抗體。 圖 7A 至圖 7B顯示用p5555kb、p5187kb或組合疫苗VXX-301進行疫苗接種之大鼠產生針對單體或原纖維PFF Tau之穩定抗體效價。對於疫苗接種，每0.25 mL劑量使用0.3 mg/ml肽免疫原，伴隨0.1 mg CpG，肌肉內投與。 圖 7C 至圖 7E顯示用p5555kb (Grp1； 圖 7C)、p5187kb (Grp2； 圖 7D)及VXX-301 (Grp3； 圖 7E)對大鼠進行疫苗接種之後的隨時間變化之抗單體Tau IgG效價曲線。 圖 8顯示在用p5555kb、p5187kb或VXX-301疫苗接種之後的抗Tau抗體之IgG同型，其顯示IgG1及IgG2b在疫苗接種之後富集(且顯示IgG2a及IgG2c之效價較低)。
對來自用p5555kb、p5187kb或VXX-301疫苗接種之大鼠的抗Tau抗體進行西方墨點分析，以評估與Tau之不同重組製備物的結合。針對結合所探測之Tau之重組製備物包括2N4R全長Tau、2N3R、WT預先形成的原纖維(PFF)及P301S突變體Tau。P301L K18製備物為含有4個重複域之Tau之C端片段。 圖 9顯示p5555kb衍生之抗體可結合於Tau製備物2N4R、2N3R、WT預先形成的原纖維(PFF)及P301S (但不為K18)，而p5187kb及VXX-301衍生之抗體可結合於所有形式之Tau，包括P301L K18製備物(參見圖9中之白色箭頭)。
來自經疫苗接種之大鼠之抗Tau抗體抑制Tau聚集。 圖 10A顯示來自用VXX-301疫苗接種之大鼠之腦部的溶胞物在Tau生物感測器株中展現出Tau凝集抑制增強之跡象。 圖 10B顯示當與貝瑞奈單抗相比時，來自經p5555kb、p5187kb及VXX-301疫苗接種之大鼠的抗體可同等地抑制Tau聚集。 圖 11A 至圖 11B顯示Tau吸收分析之結果，其顯示來自經疫苗接種之大鼠的抗Tau抗體抑制Tau吸收。資料顯示，用pHrodo-PFF Tau處理之B103細胞展現出顯著Tau再吸收，且貝瑞奈單抗(Bep)、西瑞奈單抗(Sem)或來自經p5555kb、p5187kb或VXX-301疫苗接種之大鼠的抗體可同等地抑制Tau再吸收。此等結果支持組合疫苗VXX-301在抑制Tau再吸收及聚集方面之功效。
為評估針對Tau相關病變及死亡之活體內保護，將雌性P301L Tau突變小鼠用鹽水對照物、p5555kb、p6187kb或VXX-301進行疫苗接種，總共注射6次，且監測210天。用p5555kb、p6187kb或VXX-301疫苗進行疫苗接種在較大百分比之小鼠中延遲共濟失調發生( 圖 12A)且延長存活期( 圖 12B)。用p5555kb、p6187kb或VXX-301進行疫苗接種亦在P301L小鼠中產生針對單體( 圖 12C)及原纖維PFF ( 圖 12D) Tau之高效價抗體。
實例 4用p5555kb、p5187kb或VXX-301產生之抗Tau抗體的抗原決定基特異性藉由ELISA進行抗原決定基定位來確定。將ELISA分析盤用2 mg/mL之 表 B中之各目標肽塗佈，經由生物素連接子固定於盤中的1×TBS中，且在2℃至8℃下培育隔夜。目標肽「N端Tau (1-22)」及「p5555kb靶向序列」與產生p5555kb誘導之抗體中所用的抗原決定基類似。目標肽「p5187kb靶向序列」、「P301S p5187kb」、「P301L p5187kb」及「3R Tau p5187kb」與產生p5187kb誘導之抗體中所用的抗原決定基類似。將塗佈盤在28℃下在500 rpm震盪下封閉於PBS SuperBlock TM緩衝液(SBB；Thermo Fisher)中2小時。經p5555kb、p5187kb或VXX-301疫苗接種之動物的血清樣本在含有2% BSA之1X PBS中以半對數反覆形式自20之初始因子連續稀釋成12點系列，接著一式兩份排列於分析盤中且在28℃下培育1小時。在SBB中以1:10,000稀釋度使用結合HRP之抗大鼠IgG進行效價偵測。在28℃下培育之後，將3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB) Ultra ELISA受質施加至各盤，且在20分鐘之後藉由添加2 N H 2SO 4酸停止反應。在反應停止10分鐘內，在SpectraMax iD5盤讀取器(Molecular Devices)上量測450 nm下之吸光度。將非線性四參數(4-PL)曲線擬合應用於各稀釋系列以計算EC 50效價(SoftMax Pro, 版本7.1或GraphPad Prism，版本9.2)。
表B ： 抗原決定基定位之EC 50 效價
目標肽 目標肽之描述 p5555kb p5187kb VXX-301
NH2-MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGD N端Tau (1-22) 177035 27.92 31675
Ac-DHAGTYGLGD p5555kb靶向序列 4539 69.06 3525
IKHVPGGGSVQIVYK p5187kb靶向序列 118.5 58060 27355
IKHV SGGGSVQIVYK P301S p5187kb 182.1 14660 12323
IKHV LGGGSVQIVYK P301L p5187kb 193.9 14989 8956
LKHQPGGGKVQIINK 3R Tau p5187kb 47.46 6297 4727
使用來自經疫苗接種之雄性哈脫萊天竺鼠之末端抽血血清(15週)，經由針對目標肽探測的12點稀釋曲線ELISA得到Ec50值。
依 表 B中所示，p5555kb誘導之抗Tau抗體對類似於p5555kb B細胞抗原決定基之目標肽顯示出穩定EC 50效價及結合效能，而p5187kb誘導之抗Tau抗體對類似於p5187kb B細胞抗原決定基之目標肽顯示出穩定EC 50效價及結合效能。VXX-301產生之抗體對於所有所用目標肽均顯示出高EC 50效價及結合效能。此等結果證實p5555kb誘導及p5187kb誘導之抗體結合不同目標抗原決定基，以及組合疫苗VXX-301針對Tau之功效。
實例 5藉由在一種疫苗調配物中組合Aβ靶向肽疫苗及Tau靶向肽疫苗來設計組合疫苗。在天竺鼠、大鼠及小鼠中評估疫苗之免疫原性。疫苗衍生之抗體藉由西方墨點法、點漬墨法及免疫組織化學表徵。聚焦於Aβ及Tau腦部病變，藉由腦部勻漿中之免疫組織化學及各種免疫分析在表現人類Aβ及Tau之雙重轉殖基因小鼠(P301L)中評定疫苗功效。
圖 13A及 圖 13B顯示針對Tau及Aβ之Aβ-Tau組合疫苗抗體效價。使用三個不同Tau肽免疫原構築體(p5555kb、p5404kb及p5137kb)與Aβ肽免疫原構築體(p3102kb)組合。p3102kb為表4中所示之SEQ ID NO: 70之構築體。 圖 13A 至圖 13B中之結果顯示組合疫苗誘導穩定免疫原性，對寡聚Aβ及一系列Tau形式(單體、寡聚及原纖維)具有高效價。 表 表 1Tau B細胞抗原決定基之胺基酸序列
序列 Tau序列區 肽編碼 SEQ ID NO
MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGD 1-22 1
DHAGTYGLGD 13-22 2
NITHVPGGGNKK 359-370 3
DNIKHVPGGGSVQIVYK 295-311 4
TKIATPRGAAPP 149-160 5
VVRTPPKSPSSAKSRL 228-243 6
IKHVPGGGSVQIVYK 297-311 7
KHVPGGGSV 298-306 202
VSGDTSPRHLSNVSST 399-414 8
AcIKHVPGGGSVQIVYK 297-311 72
I (NMe)KHVPGGGSVQIVYK 297-311 73
(NMe)IKHVPGGGSVQIVYK 297-311 74
(NMe)I(NMe)KHVPGGGSVQIVYK 297-311 75
IKH CPG CGSVQIVYK* 297-311 76
LKHQPGGGKVQIVYK 96
MAEPRQEFEV p5543a 17
PRQEFEVMED p5546a 18
RQEFEVMEDH p5547a 19
DHAGTYGLGD p5555a 20
AGTYGLGDRK p5557a 21
GTYGLGDRKD p5558a 22
TYGLGDRKDQ p5559a 23
DRKDQGGYTM p5564a 24
RKDQGGYTMH p5565a 25
KDQGGYTMHQ p5566a 26
GGYTMHQDQE P5569a 27
KIATPRGAAP p5695a 28
IATPRGAAPP p5696a 29
VSGDTSPRHL p5535a 30
HAGTYGLGDR p5556a 63
MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKE p5456a 64
ADGKTKIATPRGAAPP p4579a 65
PRHLSNVSST p5541a 66
RENAKAKTDHGAEIVYKSPVVSGDTSPRHL p4062a 67
Ac代表乙醯化。在表1中呈現之B細胞抗原決定基中之任一者之一些實施例中，可移除乙醯化(若存在)。在表1中呈現之B細胞抗原決定基中之任一者之一些實施例中，乙醯化(若存在)可經保護N端免受蛋白酶降解影響之另一修飾置換。在其他實施例中，若不存在，可在N端添加乙醯化。 N-Me表示N-甲基化(單甲基化胺基酸，藉由醯胺鍵連接於後一胺基酸)。 *此肽藉由半胱胺酸二硫鍵環化(參見呈粗體之半胱胺酸)。 表 2Tau肽免疫原構築體之胺基酸序列
名稱 序列 目標序列區 SEQ ID NO
p5459kb MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGD-KKK-εK-ISITEIKGVIVHRIETILF-NH2 1-22 9
A p5555kb DHAGTYGLGD-KKK- εK-ISITEIKGVIVHRIETILF-NH2 13-22 10
B p5404kb ISITEIKGVIVHRIETILF- εK-KKK- NITHVPGGGNKK-NH2 359-370 11
C p5137kb ISITEIKGVIVHRIETILF- εK-KKKK- DNIKHVPGGGSVQIVYK-NH2 295-311 12
D p5505kb ISITEIKGVIVHRIETILF- εK-KKK- TKIATPRGAAPP-NH2 149-160 13
E p4598kb ISITEIKGVIVHRIETILF- εK-KKK- VVRTPPKSPSSAKSRL-NH2 228-243 14
F p5187kb ISITEIKGVIVHRIETILF- εK-KKK- IKHVPGGGSVQIVYK-NH2 297-311 15
G p5506kb ISITEIKGVIVHRIETILF- εK-KKK- VSGDTSPRHLSNVSST-NH2 399-414 16
H Ac-p5187kb Ac-IKHVPGGGSVQIVYK- KKKεK- ISITEIKGVIVHRIETILF 297-311 77
I NMe-K-p5187kb Ac-ISITEIKGVIVHRIETILF- εKKKK- I- (NMe)KHVPGGGSVQIVYK 297-311 78
J nMe-I-p5187kb Ac-ISITEIKGVIVHRIETILF- εKKKK- ( NMe)I KHVPGGGSVQIVYK 297-311 79
K NMe-IK-p5187kb Ac-ISITEIKGVIVHRIETILF- εKKKK- ( NMe)I(NMe)K HVPGGGSVQIVYK 297-311 80
L Cys-Cys-p5187kb Ac-IKH CPG CGSVQIVYK -KKKεK-ISITEIKGVIVHRIETILF 297-311 81
目標肽序列加有下劃線。 Ac代表乙醯化。在表2中呈現之肽免疫原構築體中之任一者之一些實施例中，可移除乙醯化(若存在)。在表2中呈現之肽免疫原構築體中之任一者之一些實施例中，乙醯化(若存在)可經保護N端免受蛋白酶降解影響之另一修飾置換。在其他實施例中，若不存在，可在N端添加乙醯化。 N-Me表示N-甲基化(單甲基化胺基酸，藉由醯胺鍵連接於後一胺基酸)。 表 3Aβ分子及B細胞抗原決定基之胺基酸序列
SEQ ID NO 序列
Aβ 1-42 68 DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA
Aβ 1-14 69 DAEFRHDSGYEVHH
pyroE-Aβ 82 pEFRHDSGYEVHH
Aβ 1-10 83 DAEFRHDSGY
Aβ 1-12 84 DAEFRHDSGYEV
Aβ 1-28 85 DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNK
Aβ 5-14 86 RHDSGYEVHH
Aβ 6-15 87 HDSGYEVHHQ
Aβ 7-16 88 DSGYEVHHQK
pE為焦麩胺酸。 表 4Aβ肽免疫原構築體之胺基酸序列
SEQ ID NO 序列
p3102kb 70 DAEFRHDSGYEVHH-KKKεK -ISITEIKGVIVHRIETILF
71 DAEFRHDSGYEVHH-KKKεK -IITITRIITIITTID
pyroE- Aβ (焦麩醯胺酸Aβ) 89 pEFRHDSGYEVHH-KKKεK-ISITEIKGVIVHRIETILF
目標肽序列加有下劃線。 pE為焦麩胺酸。 表 5病原體蛋白衍生之Th抗原決定基(包括理想化人工Th抗原決定基)之胺基酸序列在Tau肽免疫原構築體之設計中的使用
描述 序列* SEQ ID NO
破傷風梭菌(Clostridium tetani) 1 Th KKQYIKANSKFIGITEL 31
MvF1 Th LSEIKGVIVHRLEGV 32
百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis) Th GAYARCPNGTRALTVAELRGNAEL 33
破傷風梭菌2 Th WVRDIIDDFTNESSQKT 34
白喉Th DSETADNLEKTVAALSILPGHGC 35
鐮狀瘧原蟲Th DHEKKHAKMEKASSVFNVVNS 36
曼森氏裂體吸蟲(Schistosoma mansoni) Th KWFKTNAPNGVDEKHRH 37
霍亂毒素Th ALNIWDRFDVFCTLGATTGYLKGNS 38
MvF2 Th ISEIKGVIVHKIEGI 39
KKKMvF3 Th KKKISISEIKGVIVHKIEGILF       T  RT   TR  T 40
HBsAg1 Th KKKLFLLTKLLTLPQSLD RRRIKII RII I L IR    VRVV  VV V I V    F FF  FF F V F 41
MvF4 Th (UBITh®3) ISISEIKGVIVHKIETILF    T  RT   TR 42
HBsAg2 Th KKKIITITRIITIPQSLD    FFLL   L  ITTI 43
MvF5 Th (UBITh®1) ISITEIKGVIVHRIETILF 44
HBsAg3 Th (UBITh®2) KKKIITITRIITIITTID 45
流感MP1_1 Th FVFTLTVPSER 46
流感MP1_2 Th SGPLKAEIAQRLEDV 47
流感NSP1 Th DRLRRDQKS 48
EBV BHRF1 Th AGLTLSLLVICSYLFISRG 49
破傷風梭菌TT1 Th QYIKANSKFIGITEL 50
EBV EBNA-1 Th PGPLRESIVCYFMVFLQTHI 51
破傷風梭菌TT2 Th FNNFTVSFWLRVPKVSASHLE 52
破傷風梭菌TT3 Th KFIIKRYTPNNEIDSF 53
破傷風梭菌TT4 Th VSIDKFRIFCKALNPK 54
EBV CP Th VPGLYSPCRAFFNKEELL 55
HCMV IE1 Th DKREMWMACIKELH 56
EBV GP340 Th TGHGARTSTEPTTDY 57
EBV BPLF1 Th KELKRQYEKKLRQ 58
EBV EBNA-2 Th TVFYNIPPMPL 59
MvF4 Th  (UBITh®3) ISISEIKGVIVHKIETILF 97
*對於在N端處包含「KKK」之Th抗原決定基，可移除「KKK」以供用於本文所述之肽免疫原中，詳言之，含有包含「KKK」序列之間隔子的彼等肽免疫原。 表 6Tau蛋白序列
描述 序列及 SEQ ID NO
Tau蛋白序列，具有4R及2N之全長(441 aa)同功異型物(GenBank：AGF19246.1) MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTP 70 TAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDK 140 KAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRS 210 RTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINK 280 KLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRV 350 QSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGAEIVYKSPVVSGDTSPRHLSNVSSTGSIDMV 420 DSPQLATLADEVSASLAKQGL (SEQ ID NO. 60)
Tau同功異型物0N3R MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGAEIVYKSPVVSGDTSPRHLSNVSSTGSIDMVDSPQLATLADEVSASLAKQGL (S EQ ID NO. 90)
Tau同功異型物1N3R MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGAEIVYKSPVVSGDTSPRHLSNVSSTGSIDMVDSPQLATLADEVSASLAKQGL (SEQ ID NO. 91)
Tau同功異型物2N3R MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGAEIVYKSPVVSGDTSPRHLSNVSSTGSIDMVDSPQLATLADEVSASLAKQGL (SEQ ID NO. 92)
Tau同功異型物0N4R MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGAEIVYKSPVVSGDTSPRHLSNVSSTGSIDMVDSPQLATLADEVSASLAKQGL (S EQ ID NO. 93)
Tau同功異型物1N4R MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGAEIVYKSPVVSGDTSPRHLSNVSSTGSIDMVDSPQLATLADEVSASLAKQGL (SEQ ID NO. 94)
表 7經由精密的抗原決定基定位定位Tau 275-311內之免疫原性區域 (按出現之次序，表7分別揭示SEQ ID NO 98-105、4、7、106-113) p4604kb 之 Tau (275-311) B 抗原決定基定位
275                                                                           311 超免疫血清 PTAU-15-01GP grp 10 (4603kb, UBITh1-εk-kkk-(V275-K311, P301 → S301), 6w
VQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYK Abs (450nm)
p5116kb: KLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYK (281-311) 3.782
p5117kb: DLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYK (283-311) 3.802
p5118kb: SNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYK (285-311) 3.788
p5119kb: VQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYK (287-311) 3.836
p5120kb: SKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYK (289-311) 3.826
p5121kb: CGSKDNIKHVPGGGSVQIVYK (291-311) 3.781
p5122kb: SKDNIKHVPGGGSVQIVYK (293-311) 3.837
p5123kb: DNIKHVPGGGSVQIVYK (295-311) 3.732
p5124kb: IKHVPGGGSVQIVYK (297-311) 3.477
p5125kb: HVPGGGSVQIVYK (299-311) 0.221
p5126kb: PGGGSVQIVYK (301-311) 0.099
p5127kb: VQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGS (275-305) 0.148
p5128kb: VQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVP (275-301) 0.281
p5129kb: VQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNI (275-297) 0.303
p5130kb: VQIINKKLDLSNVQSKCGS (275-293) 0.320
p5131kb: VQIINKKLDLSNVQS (275-289) 0.091
p5132kb: VQIINKKLDLS (275-285) 0.095
4604a (V275-K311) (275-311) 3.994
超免疫血清來自 ： PTAU-15-01GP 之收集組10 (4603kb, UBITh1-εk-kkk-(V275-K311, P301 → S301), 6wpi 。 陽性肽 ：4604a (V275-K311) 用於定位肽之超免疫血清 ，1/10000 稀釋度 用於陽性肽之超免疫血清 ，1/10000 稀釋度 表 8 -經由精密的抗原決定基定位定位Tau 1-45內之免疫原性區域 (按出現之次序，表8分別揭示64、17、114-115、18、19、116-122、2、63、21-23、123-126、24-26、127、128、27、129-137及64)
Tau N端1-45 10 mer抗原決定基定位 Tau-18-05GP 研究之抗 血清
MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKE 1                                           45 區域 肽編碼 1. p5456kb ： Tau (M1-E45)-KKK εK-UBITh1, grp 6, 15wpi 2. p5457kb ： Tau (M1-D40)- KKK-εK-UBITh1, grp 7, 15wpi 3. p5458kb ： Tau (M1-D34)- KKK-εK-UBITh1, grp 8, 15wpi 4. p5459kb ： Tau (M1-D22)- KKK-εK-UBITh1, grp 9, 15wpi
Abs450 (1:100稀釋度之血清樣本)
MAEPRQEFEV 1 ‒ 10 p5543a 1.149 0.476 3.027 2.826
AEPRQEFEVM 2 ‒ 11 p5544a 0.210 0.084 0.666 0.224
EPRQEFEVME 3 ‒ 12 p5545a 0.191 0.170 0.345 0.288
PRQEFEVMED 4 ‒ 13 p5546a 2.254 2.554 2.352 3.349
RQEFEVMEDH 5 ‒ 14 p5547a 1.669 1.889 1.253 2.111
QEFEVMEDHA 6 ‒ 15 p5548a 0.704 0.676 0.601 0.912
EFEVMEDHAG 7 ‒ 16 p5549a 0.161 0.145 0.209 0.237
FEVMEDHAGT 8 ‒ 17 p5550a 0.076 0.082 0.088 0.118
EVMEDHAGTY 9 ‒ 18 p5551a 0.078 0.097 0.166 0.088
VMEDHAGTYG 10 ‒ 19 p5552a 0.093 0.095 0.486 0.114
MEDHAGTYGL 11 ‒ 20 p5553a 0.154 0.107 0.334 0.386
EDHAGTYGLG 12 ‒ 21 p5554a 0.080 0.068 0.098 0.069
DHAGTYGLGD 13 ‒ 22 p5555a 1.449 0.309 3.322 1.765
HAGTYGLGDR 14 ‒ 23 p5556a 0.853 0.737 0.525 2.395
AGTYGLGDRK 15 ‒ 24 p5557a 0.490 1.630 0.891 3.537
GTYGLGDRKD 16 ‒ 25 p5558a 2.178 3.334 2.255 3.946
TYGLGDRKDQ 17 ‒ 26 p5559a 3.011 3.017 2.064 3.658
YGLGDRKDQG 18 ‒ 27 p5560a 0.371 0.286 0.204 0.456
GLGDRKDQGG 19 ‒ 28 p5561a 0.091 0.064 0.093 0.088
LGDRKDQGGY 20 ‒ 29 p5562a 0.078 0.092 0.072 0.153
GDRKDQGGYT 21 ‒ 30 p5563a 0.221 0.493 0.533 0.527
DRKDQGGYTM 22 ‒ 31 p5564a 0.768 1.872 2.140 0.511
RKDQGGYTMH 23 ‒ 32 p5565a 0.931 1.712 2.262 0.318
KDQGGYTMHQ 24 ‒ 33 p5566a 0.961 0.911 1.183 0.386
DQGGYTMHQD 25 ‒ 34 p5567a 0.140 0.127 0.094 0.093
QGGYTMHQDQ 26 ‒ 35 p5568a 0.398 0.194 0.924 0.413
GGYTMHQDQE 27 ‒ 36 p5569a 0.272 0.268 1.011 0.650
GYTMHQDQEG 28 ‒ 37 p5570a 0.275 0.098 0.614 0.688
YTMHQDQEGD 29 ‒ 38 p5571a 0.101 0.128 0.114 0.213
TMHQDQEGDT 30 ‒ 39 p5572a 0.072 0.065 0.068 0.078
MHQDQEGDTD 31 ‒ 40 p5573a 0.064 0.061 0.068 0.063
HQDQEGDTDA 32 ‒ 41 p5574a 0.062 0.052 0.055 0.053
QDQEGDTDAG 33 ‒ 42 p5575a 0.065 0.059 0.057 0.061
DQEGDTDAGL 34 ‒ 43 p5576a 0.080 0.066 0.062 0.061
QEGDTDAGLK 35 ‒ 44 p5577a 0.091 0.061 0.067 0.075
EGDTDAGLKE 36 ‒ 45 p5578a 0.079 0.079 0.088 0.077
MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKE 1-45 p5456a 4.000 4.000 4.000 4.000
陽性對照肽：p5456a, Tau' a' 肽(M1-E45) 在陽性對照肽上以1/10000 稀釋度測試超免疫血清。 表 9 -經由精密的抗原決定基定位定位Tau 145-160內之免疫原性區域 (按出現之次序，表9分別揭示SEQ ID NO 138-152、28、29、153-162及65)
用於在約 145-160 區域抗原決定基定位之 Tau 10 mer 肽 抗血清
GSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATR 136                                                                      170 區域 肽編碼 1.  p4579kb ： UBITh1-εk-kkk- (A145-P160), Tau- 15-02GP 之 Grp 1, 9w 2. p4579kb ： UBITh1-εk-kkk (A145-P160), Tau- 19-01GP 之 Grp 1, 9w 3. p5200kb ： UBITh3-(A145-P160), Tau-18- 04GP V2 之 grp 2 , 6w 4. p5505kb, UBITh1-εK-KKK (T149-P160), Tau-19-02GP 之 grp 4, 3w
Abs450 (1:100稀釋度之血清樣本)
GSDDKKAKGA 136-145 p5681a 0.080 0.067 0.072 0.066
 SDDKKAKGAD 137-146 p5682a 0.071 0.061 0.075 0.065
  DDKKAKGADG 138-147 p5683a 0.081 0.078 0.071 0.061
   DKKAKGADGK 139-148 p5684a 0.073 0.058 0.066 0.067
    KKAKGADGKT 140-149 p5685a 0.075 0.058 0.062 0.064
     KAKGADGKTK 141-150 p5686a 0.076 0.063 0.071 0.067
      AKGADGKTKI 142-151 p5687a 0.068 0.060 0.071 0.067
       KGADGKTKIA 143-152 p5688a 0.072 0.060 0.069 0.075
        GADGKTKIAT 144-153 p5689a 0.086 0.067 0.071 0.068
         ADGKTKIATP 145-154 p5690a 0.788 0.073 0.076 0.066
          DGKTKIATPR 146-155 p5691a 0.092 0.066 0.074 0.064
           GKTKIATPRG 147-156 p5692a 0.181 0.082 0.085 0.076
            KTKIATPRGA 148-157 p5693a 0.113 0.098 0.082 0.082
             TKIATPRGAA 149-158 p5694a 0.107 0.054 0.060 0.060
              KIATPRGAAP 150-159 p5695a 3.729 3.435 3.802 0.125
               IATPRGAAPP 151-160 p5696a 3.918 3.915 3.974 2.721
                ATPRGAAPPG 152-161 p5697a 0.430 0.246 0.173 0.259
                 TPRGAAPPGQ 153-162 p5698a 0.077 0.049 0.063 0.051
                  PRGAAPPGQK 154-163 p5699a 0.081 0.050 0.059 0.066
                   RGAAPPGQKG 155-164 p5700a 0.071 0.045 0.055 0.057
                    GAAPPGQKGQ 156-165 p5701a 0.086 0.054 0.057 0.063
                     AAPPGQKGQA 157-166 p5702a 0.076 0.058 0.065 0.064
                      APPGQKGQAN 158-167 p5703a 0.087 0.060 0.065 0.070
                       PPGQKGQANA 159-168 p5704a 0.071 0.053 0.055 0.057
                        PGQKGQANAT 160-169 p5705a 0.101 0.075 0.074 0.067
                         GQKGQANATR 161-170 p5706a 0.090 0.070 0.074 0.066
ADGKTKIATPRGAAPP 145-160 p4579a 3.686 3.254 3.854 0.977
陽性對照肽：p4579a, Tau' a' 肽(A145-P160) 在陽性對照肽上以1/10000 稀釋度測試超免疫血清。 表 10 -經由精密的抗原決定基定位定位Tau 379-408內之免疫原性區域 (按出現之次序，表10分別揭示SEQ ID NO 163-191、30、192-196、66、197及198) 用於在379-408區域內抗原決定基定位之Tau 10 mer肽
IETHKLTFRENAKAKTDHGAEIVYKSPVVSGDTSPRHLSNVSSTG 371                                                                                                          415 IAPP 區 肽編碼 1. p4602kb ： UBITh1-εk- kkk-(R379-L408),Tau-15- 02GP, grp 8, 9wpi 2. p4602kb ： UBITh1-εk- kkk-(R379-L408), Tau- 19-01GP, grp 2, 9wpi.
Abs450 ( 平均值 , n=2) ，在 1/100 稀釋度下
IETHKLTFRE 371 - 380 p5507a 0.088 0.083
ETHKLTFREN 372 - 381 p5508a 0.104 0.066
THKLTFRENA 373 - 382 p5509a 0.096 0.059
HKLTFRENAK 374 - 383 p5510a 0.096 0.067
KLTFRENAKA 375 - 384 p5511a 0.089 0.063
LTFRENAKAK 376 - 385 p5512a 0.084 0.066
TFRENAKAKT 377 - 386 p5513a 0.094 0.057
FRENAKAKTD 378 - 387 p5514a 0.083 0.062
RENAKAKTDH 379 - 388 p5515a 0.089 0.061
ENAKAKTDHG 380 - 389 p5516a 0.097 0.065
NAKAKTDHGA 381 - 390 p5517a 0.130 0.104
AKAKTDHGAE 382 - 391 p5518a 0.135 0.080
KAKTDHGAEI 383 - 392 p5519a 0.638 0.210
AKTDHGAEIV 384 - 393 p5520a 0.109 0.070
KTDHGAEIVY 385 - 394 p5521a 0.286 0.201
TDHGAEIVYK 386 - 395 p5522a 0.305 0.251
DHGAEIVYKS 387 - 396 p5523a 0.119 0.104
HGAEIVYKSP 388 - 397 p5524a 0.157 0.151
GAEIVYKSPV 389 - 398 p5525a 0.183 0.147
AEIVYKSPVV 390 - 399 p5526a 0.159 0.152
EIVYKSPVVS 391 - 400 p5527a 0.106 0.082
IVYKSPVVSG 392 - 401 p5528a 0.120 0.077
VYKSPVVSGD 393 - 402 p5529a 0.107 0.070
YKSPVVSGDT 394 - 403 p5530a 0.111 0.072
KSPVVSGDTS 395 - 404 p5531a 0.100 0.061
SPVVSGDTSP 396 - 405 p5532a 0.100 0.069
PVVSGDTSPR 397 - 406 p5533a 0.106 0.171
VVSGDTSPRH 398 - 407 p5534a 0.113 0.076
VSGDTSPRHL 399 - 408 p5535a 4.000 4.000
SGDTSPRHLS 400 - 409 p5536a 0.186 0.529
GDTSPRHLSN 401 - 410 p5537a 0.123 0.170
DTSPRHLSNV 402 - 411 p5538a 0.105 0.085
TSPRHLSNVS 403 - 412 p5539a 0.108 0.086
SPRHLSNVSS 404 - 413 p5540a 0.106 0.083
PRHLSNVSST 405 - 414 p5541a 3.970 3.720
RHLSNVSSTG 406 - 415 p5542a 0.527 0.548
RENAKAKTDHGAEIVYKSPVVSGDTSPRHL 379-408 p4062a 4.000 4.000
陽性對照肽：p4062a (379-408) 。 以1/10000 稀釋度測試樣本。 表 11 ：例示性 CpG 寡核苷酸
描述 序列/ 組成* SEQ ID NO
CpG1 5' TCg TCg TTT TgT CgT TTT gTC gTT TTg TCg TT 3' 199
CpG2 磷酸TCg TCg TTT TgT CgT TTT gTC gTT 3' 200
CpG3 5' TCg TCg TTT TgT CgT TTT gTC gTT 3' 201
*以大寫字母示出之核苷酸表示硫代磷酸酯鍵，且以小寫字母示出之核苷酸表示磷酸二酯鍵。
圖 1為顯示連接於目標特異性B細胞抗原決定基之Th肽載體(頂部)，及標註了功能域及靶向肽的tau一級結構(底部)的示意圖。 圖 2A 及圖 2B為顯示抗體結合表徵結果的點漬墨法、一組圖及表格。 圖 3A 及圖 3B為顯示使用Tau生物感測器株之聚集分析之結果的一組圖。 圖 4A 及圖 4B為顯示Tau吸收分析之結果的一組圖。 圖 5A 及圖 5B為顯示Tau吸收分析之結果的圖。 圖 5C為顯示來自p5555kb之IgG、來自p5187kb之IgG及來自p5555kb及p5187kb之混合IgG的生物層干涉術分析的圖。 圖 5D顯示抗tau IgG同型EC50效價。 圖 6A 至圖 6C為顯示用p5555kb對WT及P301L小鼠進行疫苗接種之結果的圖及照相影像。 圖 6A中之箭頭指示注射。 圖 7A 至圖 7E為顯示用p5555kb、p5187kb或VXX-301免疫接種之大鼠中之IgG效價的圖。VXX-301係指呈一種調配物形式之p5555kb與p5187kb之組合疫苗。 圖 7A 至圖 7B顯示在用p5555kb、p5187kb或VXX-301進行疫苗接種之後，針對單體Tau ( 圖 7A)或原纖維Tau ( 圖 7B)之IgG效價。 圖 7C 至圖 7E顯示在用p5555kb ( 圖 7C)、p5187kb ( 圖 7D)或VXX-301 ( 圖 7E)進行疫苗接種之後，針對單體Tau之IgG效價隨時間之曲線。 圖 8為顯示根據p5555kb、p5187kb或VXX-301的IgG之生物層干涉術分析之圖。疫苗接種之後，IgG1及IgG2b富集，且IgG2a及IgG2c之效價較低。 圖 9為顯示來自用p5555kb、p5187kb或VXX-301疫苗接種之大鼠的抗Tau抗體之西方墨點分析結果的圖。針對結合探測Tau之不同重組製備物，包括全長製備物2N4R、2N3R、WT預先形成原纖維(PFF)、P301S及P301L K18 (含有4個重複域之Tau的C端片段)。白色箭頭指示p5187kb及VXX-301衍生之抗體可結合於所有Tau製備物。 圖 10A 至圖 10B為顯示抗Tau mAb，亦即貝瑞奈單抗(Bepranemab)或來自用p5555kb、p5187kb或VXX-301疫苗接種之大鼠的抗Tau抗體抑制Tau聚集的圖。 圖 11A 至圖 11B為顯示使用抗Tau mAb，亦即西瑞奈單抗(Semorinemab；Sem)、貝瑞奈單抗(Bep)或來自用p5555kb、p5187kb或VXX-301疫苗接種之大鼠的抗Tau抗體的b103細胞中pHrodo-PFF Tau吸收分析之結果的圖。 圖 12A 至圖 12D為顯示針對Tau相關病變及死亡之保護，及用鹽水對照物、p5555kb、p6187kb或VXX-301進行疫苗接種之雌性P301L小鼠中之抗體效價之圖。圖12A至圖12B顯示觀測到的共濟失調發生( 圖 12A)及P301L小鼠存活( 圖 12B)之卡普蘭梅耶曲線(Kaplan Meier curve)。 圖 12C 至圖 12D顯示針對單體Tau ( 圖 12C)或原纖維Tau ( 圖 12D)之末端抗Tau抗體效價。 圖 12A 至圖 12B中之箭頭指示注射。 圖 13A 及圖 13B為顯示Aβ (p3102kb)及Tau (p5555kb、p5404kb或p5137kb)組合疫苗對單體Tau、原纖維Tau、原纖維P301S Tau或不結合至Th肽之對照B細胞抗原決定基肽(a-肽)的免疫原性之圖。
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Claims (59)

  1. 一種組合物或套組，其含有包含第一Tau B細胞抗原決定基之第一Tau肽免疫原構築體，該第一Tau B細胞抗原決定基包含來自SEQ ID NO: 60之全長Tau蛋白的約6至約40個胺基酸殘基或由其組成；及 (i)    包含第二Tau B細胞抗原決定基之第二Tau肽免疫原構築體，該第二Tau B細胞抗原決定基包含來自SEQ ID NO: 60之全長Tau蛋白的約6至約40個胺基酸殘基或由其組成，其中該第二B細胞抗原決定基與該第一B細胞抗原決定基不同，及/或 (ii)   包含β類澱粉B細胞抗原決定基之β類澱粉(Aβ)肽免疫原構築體，該β類澱粉B細胞抗原決定基包含來自SEQ ID NO: 68之全長β類澱粉蛋白的約6至約42個胺基酸殘基或由其組成。
  2. 如請求項1之組合物或套組，其包含該第二Tau肽免疫原構築體。
  3. 如請求項1之組合物或套組，其包含該β類澱粉肽免疫原構築體。
  4. 如請求項1之組合物或套組，其包含該第二Tau肽免疫原構築體及該β類澱粉肽免疫原構築體。
  5. 如請求項1、2或4之組合物或套組，其中該第一Tau B細胞抗原決定基包含來自SEQ ID NO: 60之N端胺基酸1至44的約6至40個胺基酸殘基或由其組成，且該第二Tau B細胞抗原決定基包含來自SEQ ID NO: 60之重複域胺基酸244至372的約6至40個胺基酸殘基或由其組成。
  6. 如請求項1、3、4或5之組合物或套組，其中該β類澱粉B細胞抗原決定基包含來自SEQ ID NO: 68之胺基酸1-16的至少6個胺基酸殘基。
  7. 如請求項1至6中任一項之組合物或套組，其中該第一Tau B細胞抗原決定基、該第二Tau B細胞抗原決定基及該β類澱粉B細胞抗原決定基之長度各自為約8至15個胺基酸，或10至14個胺基酸。
  8. 如請求項1至6中任一項之組合物或套組，其中該第一Tau B細胞抗原決定基及該第二Tau B細胞抗原決定基(若存在)獨立地選自SEQ ID NO: 1-8、17-30、63-67、72-76及96。
  9. 如請求項8之組合物或套組，其中該第一Tau B細胞抗原決定基及該第二Tau B細胞抗原決定基(若存在)獨立地選自SEQ ID NO: 2、4、7及72-76。
  10. 如請求項1至6中任一項之組合物或套組，其中該第一Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 2或由其組成。
  11. 如請求項1至6中任一項之組合物或套組，其中該第一Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 7或由其組成。
  12. 如請求項1至6中任一項之組合物或套組，其中該第一Tau B細胞抗原決定基係選自SEQ ID No: 1或SEQ ID NO:2，且該第二Tau B細胞抗原決定基係選自SEQ ID NO: 7及72-76。
  13. 如請求項1至6中任一項之組合物或套組，其中該第一Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 2或由其組成，且該第二Tau B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 7或由其組成。
  14. 如請求項1至13中任一項之組合物或套組，其中該β類澱粉B細胞抗原決定基係選自SEQ ID NO: 69及82-88。
  15. 如請求項1至13中任一項之組合物或套組，其中該β類澱粉B細胞抗原決定基包含SEQ ID NO: 69或SEQ ID NO: 82或由其組成。
  16. 如請求項1至15中任一項之組合物或套組，其中該第一Tau肽免疫原構築體包含第一異源T輔助(Th)抗原決定基，該第二Tau肽免疫原構築體(若存在)包含第二異源Th抗原決定基，且該β類澱粉肽免疫原構築體(若存在)包含第三異源Th抗原決定基。
  17. 如請求項16之組合物或套組，其中該第一異源Th抗原決定基、該第二異源Th抗原決定基及該第三異源Th抗原決定基各自獨立地選自SEQ ID NO: 31-59及97。
  18. 如請求項16之組合物或套組，其中該第一異源Th抗原決定基、該第二異源Th抗原決定基及該第三異源Th抗原決定基各自獨立地選自SEQ ID NO: 42、44、45及97。
  19. 如請求項16之組合物或套組，其中該第一異源Th抗原決定基、該第二異源Th抗原決定基及該第三異源Th抗原決定基各具有SEQ ID NO: 44。
  20. 如請求項1至19中任一項之組合物或套組，其中該第一異源Th抗原決定基與該第一Tau B細胞抗原決定基、該第二異源Th抗原決定基與該第二Tau B細胞抗原決定基，及該第三異源Th抗原決定基與該β類澱粉B細胞抗原決定基各自直接或經由異源間隔子共價連接。
  21. 如請求項20之組合物或套組，其包含異源間隔子連接該第一異源Th抗原決定基與該第一Tau B細胞抗原決定基、該第二異源Th抗原決定基與該第二Tau B細胞抗原決定基，及/或該第三異源Th抗原決定基與β類澱粉B細胞抗原決定基。
  22. 如請求項21之組合物或套組，其中該異源間隔子包含一或多個胺基酸。
  23. 如請求項22之組合物或套組，其中該一或多個胺基酸為Lys-、Gly-、Lys-Lys-Lys-、(α, ε-N)Lys、Lys-Lys-Lys-ε-Lys (SEQ ID NO: 95)，或ε-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 62)。
  24. 如請求項22之組合物或套組，其中該一或多個胺基酸為Lys-Lys-Lys-ε-Lys (SEQ ID NO: 95)或ε-N-Lys-Lys-Lys-Lys (SEQ ID NO: 62)。
  25. 如請求項1至24中任一項之組合物或套組，其中該第一Tau肽免疫原構築體及(若存在)第二Tau肽免疫原構築體由下式表示： (Th) m-(A) n-(Tau片段)-X 或 (Tau片段)-(A) n-(Th) m-X 其中 Th為異源T輔助抗原決定基； A為異源間隔子； (Tau片段)為具有來自SEQ ID NO: 60之全長Tau蛋白的約6至約40個胺基酸殘基的B細胞抗原決定基；視情況該B細胞抗原決定基具有來自SEQ ID NO: 60之全長Tau蛋白的約10至約40個胺基酸殘基； X為胺基酸之α-COOH或α-CONH 2； m為1至約4；及 n為0至約10。
  26. 如請求項1至25中任一項之組合物或套組，其中該β類澱粉肽免疫原構築體由下式表示： (Th) m-(A) n-(Aβ片段)-X 或 (Aβ片段)-(A) n-(Th) m-X 其中 Th為異源T輔助抗原決定基； A為異源間隔子； (Aβ片段)為具有來自SEQ ID NO: 68之全長Aβ蛋白的約6至約42個胺基酸殘基的B細胞抗原決定基；視情況該B細胞抗原決定基具有來自SEQ ID NO: 68之全長Aβ蛋白的約10至約42個胺基酸殘基； X為胺基酸之α-COOH或α-CONH 2； m為1至約4；及 n為0至約10。
  27. 如請求項1至26中任一項之組合物或套組，其中該第一Tau肽免疫原構築體包含該第一異源Th抗原決定基共價連接於該第一Tau B細胞抗原決定基之羧基端，該第二Tau肽免疫原構築體包含該第二異源Th抗原決定基共價連接於該第二Tau B細胞抗原決定基之胺基端，及/或該β類澱粉肽免疫原構築體包含該第三異源Th抗原決定基共價連接於該β類澱粉B細胞抗原決定基之羧基端。
  28. 如請求項1至27中任一項之組合物或套組，其中該第一Tau肽免疫原構築體及該第二Tau肽免疫原構築體係選自SEQ ID NO: 9-16及77-81，或該肽細胞抗原決定基與該Th抗原決定基之位置顛倒的構築體。
  29. 如請求項1至28中任一項之組合物或套組，其中該第一Tau肽免疫原構築體包含SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 15之胺基酸序列或由其組成。
  30. 如請求項1至29中任一項之組合物或套組，其中該第一Tau肽免疫原構築體包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列或由其組成，且該第二Tau肽免疫原構築體包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列或由其組成。
  31. 如請求項1至28中任一項之組合物或套組，其中該第一Tau肽免疫原構築體及/或該第二Tau肽免疫原構築體係選自SEQ ID NO:77-81，視情況其中該第一Tau肽免疫原構築體具有SEQ ID NO: 10之胺基酸序列且該第二Tau肽免疫原構築體係選自SEQ ID NO:77-81。
  32. 如請求項1至31中任一項之組合物或套組，其中該β類澱粉肽免疫原構築體係選自SEQ ID NO: 70、71及89，或其中該B細胞抗原決定基與該Th抗原決定基之位置顛倒的構築體。
  33. 如請求項32之組合物或套組，其中該β類澱粉肽免疫原構築體包含SEQ ID NO: 70或由其組成。
  34. 如請求項32之組合物或套組，其中該β類澱粉肽免疫原構築體包含SEQ ID NO: 89或由其組成。
  35. 一種Tau肽免疫原構築體，其含有包含選自SEQ ID NO: 72-76之胺基酸序列的B細胞抗原決定基。
  36. 如請求項35之Tau肽免疫原構築體，其由下式表示： (Th) m-(A) n-(B細胞抗原決定基)-X 或 (B細胞抗原決定基)-(A) n-(Th) m-X 其中 Th為異源T輔助抗原決定基； A為異源間隔子； (B細胞抗原決定基)包含選自SEQ ID NO: 72-76之胺基酸序列、基本上由其組成，或由其組成； X為胺基酸之α-COOH或α-CONH 2； m為1至約4；及 n為0至約10。
  37. 如請求項35之Tau肽免疫原構築體，其包含選自SEQ ID NO:77-81之胺基酸序列。
  38. 一種β類澱粉肽免疫原構築體，其含有包含胺基酸序列SEQ ID NO: 82、基本上由其組成或由其組成的B細胞抗原決定基。
  39. 如請求項38之β類澱粉肽免疫原構築體，其由下式表示： (Th) m-(A) n-(B細胞抗原決定基)-X 或 (B細胞抗原決定基)-(A) n-(Th) m-X 其中 Th為異源T輔助抗原決定基； A為異源間隔子； (B細胞抗原決定基)包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列、基本上由其組成，或由其組成； X為胺基酸之α-COOH或α-CONH 2； m為1至約4；及 n為0至約10。
  40. 如請求項38之β類澱粉肽免疫原構築體，其包含SEQ ID NO: 89之胺基酸序列、基本上由其組成，或由其組成。
  41. 一種組合物或套組，其包含如請求項35至37中任一項之Tau肽免疫原構築體。
  42. 一種組合物或套組，其包含如請求項38至40中任一項之β類澱粉肽免疫原構築體。
  43. 如請求項1至34、41及42中任一項之組合物或套組，其為單一組合物，該組合物包含該第一Tau肽免疫原構築體，及以下中之至少一者：該第二Tau肽免疫原構築體及該β類澱粉肽免疫原構築體。
  44. 如請求項1至34、41及42中任一項之組合物或套組，其為套組，該套組包含該第一Tau肽免疫原構築體，及以下中之至少一者：該第二Tau肽免疫原構築體及該β類澱粉肽免疫原構築體。
  45. 如請求項44之組合物或套組，其中在投與個體之前，使該套組之各組分混合形成單一組合物，其包含該第一Tau肽免疫原構築體，及以下中之至少一者：該第二Tau肽免疫原構築體及該β類澱粉肽免疫原構築體。
  46. 如請求項44之組合物或套組，其中該套組之各組分用於形成包含該第一Tau肽免疫原構築體之第一組合物，及包含以下中之至少一者的第二組合物：該第二Tau肽免疫原構築體及該β類澱粉肽免疫原構築體。
  47. 一種醫藥組合物，其包含如請求項43、45或46中任一項之組合物，及醫藥學上可接受之遞送媒劑及/或佐劑。
  48. 如請求項47之醫藥組合物，其中該第一Tau肽免疫原構築體、該第二Tau肽免疫原構築體及/或該β類澱粉肽免疫原構築體與CpG寡脫氧核苷酸(ODN)混合形成穩定的免疫刺激性複合物。
  49. 如請求項47或48之醫藥組合物，其包含3或4個Tau肽免疫原構築體。
  50. 如請求項47、48或49之醫藥組合物，其包含多於一個β類澱粉肽免疫原構築體。
  51. 一種分離之抗體或其抗原決定基結合片段，其特異性結合於該Tau肽免疫原構築體或該β類澱粉肽免疫原構築體之B細胞抗原決定基，該抗體或其抗原決定基結合片段係由向哺乳動物投與如請求項43、45及46至50中任一項之組合物或如請求項35至40中任一項之肽免疫原構築體獲得。
  52. 如請求項51之分離之抗體或其抗原決定基結合片段，其結合於該Tau肽免疫原構築體或該β類澱粉肽免疫原構築體。
  53. 一種組合物，其包含如請求項51或52之分離之抗體或其抗原決定基結合片段。
  54. 一種對個體之tau蛋白病變預防、抑制、降低其嚴重程度、延遲或治療之方法，該方法包含向該個體投與如前述請求項中任一項之Tau肽免疫原構築體、β類澱粉肽免疫原構築體，組合物。
  55. 如請求項54之方法，其包含投與該組合物，其中該第一Tau肽免疫原構築體，以及該第二Tau肽免疫原構築體及該β類澱粉肽免疫原構築體中之至少一者包含在單一組合物中。
  56. 一種對個體之tau蛋白病變預防、抑制、降低其嚴重程度、延遲或治療之方法，該方法包含向該個體投與：包含第一Tau B細胞抗原決定基之第一Tau肽免疫原構築體，該第一Tau B細胞抗原決定基包含來自SEQ ID NO: 60之全長Tau蛋白的約6至約40個胺基酸殘基或由其組成；及 (i)    包含第二Tau B細胞抗原決定基之第二Tau肽免疫原構築體，該第二Tau B細胞抗原決定基包含來自SEQ ID NO: 60之全長Tau蛋白的約6至約40個胺基酸殘基或由其組成，其中該第二B細胞抗原決定基與該第一B細胞抗原決定基不同，及/或 (ii)   包含β類澱粉B細胞抗原決定基之β類澱粉(Aβ)肽免疫原構築體，該β類澱粉B細胞抗原決定基包含來自SEQ ID NO: 68之全長β類澱粉蛋白的約6至約42個胺基酸殘基或由其組成；及 其中該第一Tau肽免疫原構築體及該第二Tau肽免疫原構築體及/或該β類澱粉肽免疫原構築體包含在分開投與的各別組合物中。
  57. 如請求項54至56中任一項之方法，其中該tau蛋白病變係選自阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)、路易體病(Lewy body disease)、17號染色體相關額顳葉型癡呆、帕金森氏症(frontotemporal dementia, parkinsonism linked to chromosome 17；FTDP-17)、進行性核上麻痺、皮質基底核退化症、匹克病(Pick’s disease)、進行性皮質下神經膠瘤病、僅纏結型癡呆、瀰漫性神經纖維纏結伴鈣化、嗜銀粒癡呆、肌肉萎縮性側索硬化帕金森氏症-癡呆綜合症、拳擊手型癡呆、唐氏症候群(Down syndrome)、格-施-謝三氏病(Gerstmann-Straussler-Scheinker disease)、哈-施二氏病(Hallerworden-Spatz disease)、包涵體肌炎、庫賈氏病(Creutzfeld-Jakob disease)、多系統萎縮、尼-匹二氏病(Niemann-Pick disease) C型、普里昂(prion)蛋白類澱粉腦血管病變、亞急性硬化性泛腦炎、肌強直性營養不良、非關島型運動神經元病伴神經纖維纏結(non-guanamian motor neuron disease with neurofibrillary tangles)、腦炎後型帕金森氏症，及慢性創傷性腦病。
  58. 如請求項54至57中任一項之方法，其中該tau蛋白病變為阿茲海默氏病。
  59. 如請求項54至58中任一項之方法，其中該個體為人類。
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