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TW202434311A - 自穩定連接子軛合物 - Google Patents

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TW202434311A
TW202434311A TW113105114A TW113105114A TW202434311A TW 202434311 A TW202434311 A TW 202434311A TW 113105114 A TW113105114 A TW 113105114A TW 113105114 A TW113105114 A TW 113105114A TW 202434311 A TW202434311 A TW 202434311A
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mmol
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TW113105114A
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蔡長昇
蔡玫烜
衛小東
羅煒
吳麗明
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英屬開曼群島商百濟神州有限公司
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Abstract

本揭露內容提供了包含自穩定連接子裝配體組分的抗體藥物軛合物平臺，以及包含平臺來源的連接子-有效載荷和抗體或其抗原結合片段的抗體藥物軛合物。在一些實施方式中，抗體藥物軛合物具有下式： ， 或其藥學上可接受的鹽、互變異構物、溶劑化物或立體異構物，其中變量（例如，BA、RG、R 1a、R 1b、r、RS、R 2a、R 2b、s、R 4、R 3a、R 3b、t、RE、A、a’、W、w’、Y、y’、PA、x）的值如本文所述。

Description

自穩定連接器共軛物
相關申請的交叉引用
本申請要求於2023年2月9日提交的國際申請案號PCT/CN2023/075152的優先權，將該國際申請的揭露內容藉由援引以其全文特此併入。
本文提供了抗體藥物軛合物平臺和包含該等平臺和抗體或其抗原結合片段的抗體藥物軛合物（ADC），以及該等ADC平臺和ADC之用途。
隨著在臨床上許多ADC的進步，抗體-藥物軛合物（ADC）領域已經取得顯著進步。ADC的連接子組分係開發在良好耐受劑量下高活性的優化治療劑的一個重要特徵。因與硫醇基團反應高度特異性和在溫和條件下快速的硫醇加成動力學，親電子順丁烯二醯亞胺官能基已被證明在ADC製備中係有用的。
如由多名生物軛合物領域的研究者已經注意到的，親電子順丁烯二醯亞胺官能基與抗體的游離硫醇之間反應的硫代取代產物經歷緩慢消除，從而逆轉該反應。
當在純化製備ADC中發生該可逆反應時，反應很大程度上不可檢測，因為通過消除過程再生的順丁烯二醯亞胺和硫醇簡單地再反應，從而重整完整的軛合物。然而，當其他硫醇存在時，淨效應可為順丁烯二醯亞胺從ADC的抗體轉移到任何其他可用硫醇。該過程已經記錄發生在血漿中，其中ADC的順丁烯二醯亞胺轉移到血清白蛋白的半胱胺酸34（Alley等人，Bioconjugate Chem. [生物軛合物化學] 2008, 19, 759-765）。在過量半胱胺酸或麩胱甘肽存在下孵育ADC時也已報導該過程（Jununtula等人，Nature Biotech [自然生物技術], 2012）。本揭露內容尤其關於不經歷該轉移反應的生物軛合物。
本文提供了抗體藥物軛合物平臺和抗體藥物軛合物（ADC）。還提供了該等ADC平臺用於製備ADC之用途。
在一些實施方式中，本文提供了具有式 (I) 之ADC化合物： (I) 或其藥學上可接受的鹽、互變異構物、溶劑化物或立體異構物，其中變量（例如，BA、RG、RS、RE、PA、R 1a、R 1b、R 2a、R 2b、R 3a、R 3b、R 4、A、W、Y、r、s、t、a’、w’、y’、x）的值如本文所述。
在一些實施方式中，該平臺係具有式 (II) 之連接子-有效載荷化合物： (II) 或其藥學上可接受的鹽、互變異構物、溶劑化物或立體異構物，其中變量（例如，RG、RS、RE、PA、R 1a、R 1b、R 2a、R 2b、R 3a、R 3b、R 4、A、W、Y、r、s、t、a’、w’、y’）的值如本文所述。
在一些實施方式中，該平臺係具有式 (III) 之連接子化合物： (III) 或其藥學上可接受的鹽、互變異構物、溶劑化物或立體異構物，其中變量（例如，RG、RS、RE、R 1a、R 1b、R 2a、R 2b、R 3a、R 3b、R 4、A、r、s、t、a’）的值如本文所述。
另外的目的和優點將部分闡述在以下描述中，並且部分將從該描述中理解出或者可以藉由實踐習得。該等目的和優點將藉由所附申請專利範圍中特別指出的要素和組合來實現並達成。
應當理解，前面的總體描述和下面的詳細描述均僅是示例性和說明性的，並不限制請求項。
併入並構成本說明書的一部分的附圖說明實施方式並且與該描述一起用於解釋本文所述之原理。
本文提供了抗體藥物軛合物（ADC）和用於製得ADC的共價連接子和連接子-有效載荷（平臺）。ADC諸如藉由提供包含ADC的組成物可用於治療疾病或病症，諸如癌症。本發明揭露的ADC比已知ADC更穩定。
已知一些ADC（諸如使用鏈間半胱胺酸與基於順丁烯二醯亞胺的連接子-有效載荷的軛合的那些）在生理條件下由於逆順丁烯二醯亞胺反應而經歷去軛合。採用自水解順丁烯二醯亞胺的ADC已顯示出改善的穩定性和藥理學特性。在一個實例中，軛合子-抗體軛合物3-3（參見下表3）在pH 9.0下在一至三天內經歷順丁烯二醯亞胺水解。然而，在此類苛刻條件下，一些抗體上可能發生翻譯後修飾（例如，氧化）和去胺化，這可能導致物理特性（諸如疏水性、電荷以及二級和/或三級結構）的變化，並且可能降低解折疊的熱力學或動力學障礙。此類變化可能使ADC易於發生聚集和其他化學修飾，從而可能改變ADC的結合親和力、半衰期和功效。
本發明揭露的軛合子-抗體軛合物可以在溫和條件（例如，pH 7.0）下容易地經歷順丁烯二醯亞胺水解。本發明揭露的軛合子不僅在常規條件（例如，pH 6.5-7.0）下與抗體軛合，而且在軛合條件下也可以發生順丁烯二醯亞胺水解。不需要將緩衝液交換到鹼性緩衝液中進行水解。添加淬滅試劑可以足以停止軛合反應。在藉由經由還原LCMS監測完成順丁烯二醯亞胺水解後，可以將本發明揭露的軛合物緩衝液交換到配製緩衝液中。 6.1.     定義
在本揭露內容中，除非另有指明，否則以下術語具有以下含義。除非另有定義，否則本文所用的所有技術術語和科學術語具有與本揭露內容所屬領域的普通技術者通常所理解的含義相同的含義。在本文提供的術語存在多個定義的情況下，除非另有說明，否則以該等定義為準。
術語「抗體」以廣義用於本文，並且特別涵蓋完整的單株抗體、多株抗體、單特異抗體、多特異抗體（例如，雙特異抗體），以及表現出期望生物活性的抗體片段。完整抗體主要具有兩個區：可變區和恒定區。可變區結合靶抗原並且與該靶抗原相互作用。可變區包含識別並結合特定抗原上的特定結合位點的互補決定區（CDR）。恒定區可以藉由免疫系統識別並與該免疫系統相互作用（參見例如Janeway等人，2001, Immuno. Biology [免疫生物學]，第5版，Garland Publishing [加蘭出版社]，紐約）。抗體可以屬於任何類型（例如，IgG、IgE、IgM、IgD和IgA）、種類（例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2）或亞類。抗體可以來源於任何合適的物種。在一些實施方式中，抗體係人或鼠類來源的。抗體可為例如人的、人源化的或嵌合的。
如本文所用，術語「單株抗體」係指獲得自基本上均質的抗體群體的抗體，即除了可以少量存在的可能天然存在的突變外，構成該群體的單獨抗體係相同的。單株抗體係高度特異性的，針對單一抗原性位點。修飾詞「單株」不應解釋為需要藉由任何特定方法產生抗體。
「完整抗體」係這樣的抗體，該抗體包含抗原結合可變區以及輕鏈恒定結構域（CL）和重鏈恒定結構域CH1、CH2、CH3和CH4（根據抗體種類而定）。恒定結構域可為天然序列恒定結構域（例如，人天然序列恒定結構域）或其胺基酸序列變體。 「抗體片段」包含完整抗體的一部分，包括其抗原結合或可變區。抗體片段之實例包括Fab、Fab’、F(ab’) 2和Fv片段、雙抗體、三抗體、四抗體、線性抗體、單鏈抗體分子、scFv、scFv-Fc、由一或多種抗體片段形成的多特異性抗體片段、由Fab表現文庫產生的一或多種片段、或免疫特異性結合靶抗原（例如，癌細胞抗原、病毒抗原或微生物抗原）的以上任一種的表位結合片段。
「抗原」係抗體特異性結合的實體。
術語「特異性結合（specific binding）」和「特異性結合（specifically binds）」意指抗體或抗體衍生物將以高度選擇性方式與其相應的靶抗原結合，而不與眾多其他抗原結合。典型地，抗體或抗體衍生物以至少約1 × 10 -7M、10 -8M、10 -9M、10 -10M、10 -11M或10 -12M的親和力結合，並且與預定抗原的結合親和力比其與非預定抗原或密切相關抗原的非特異性抗原（例如，BSA、酪蛋白）的結合親和力大至少兩倍。
術語「抑制（inhibit）」或「......的抑制（inhibition of）」意指降低可檢測的量，或完全阻止。
術語「治療有效量」係指有效治療哺乳動物的疾病或病症的藥物之量。在癌症的情況下，藥物的治療有效量可以減少癌細胞的數量；減小腫瘤大小；抑制（即，在一定程度上減緩或停止）癌細胞浸潤至周邊器官中；抑制（即在一定程度上減緩或停止）腫瘤轉移；在一定程度上抑制腫瘤生長；和/或在一定程度上緩解與癌症相關聯的一或多種症狀。如果藥物可以達到抑制生長和/或殺傷現有癌細胞的程度，則該藥物可為細胞抑制性的和/或細胞毒性的。對於癌症療法，功效可以例如藉由評估疾病進展時間（TTP）和/或確定響應率（RR）來測量。
術語「基本的（substantial）」或「基本上（substantially）」係指群體、混合物或樣本中的多數，即＞ 50%，諸如群體的超過50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。
術語「細胞內切割的」和「細胞內切割」係指細胞內配體藥物軛合物（例如，抗體藥物軛合物（ADC））的代謝過程或反應，由此打斷藥物部分（D）與配體單元（例如，抗體（BA或Ab））之間的共價附接，例如連接子，從而在細胞內產生游離藥物或與抗體解離的軛合物的另外的代謝物。因此藥物-連接子-配體軛合物的切割部分係細胞內代謝物。
術語「細胞毒性活性」係指藥物-連接子-配體軛合物化合物或藥物-連接子-配體軛合物的細胞內代謝物的細胞殺傷、細胞抑制或抗增殖作用。細胞毒性活性可以表示為IC50值，該值係半數細胞存活時每單位體積的濃度（莫耳濃度或質量濃度）。
如本文所用，術語「細胞毒性劑」係指抑制細胞功能和/或導致細胞破壞的物質。該術語旨在包括放射性同位素（例如，211At、131I、125I、90Y、186Re、188Re、153Sm、212Bi、32P、60C和Lu的放射性同位素）、化學治療劑和毒素，諸如細菌、真菌、植物或動物來源的小分子毒素或酶活性毒素，包括它們的合成類似物和衍生物。
術語「癌症」和「癌性」係指或描述哺乳動物中典型地以不受調節的細胞生長為特徵的生理病狀或病症。「腫瘤」包含一或多個癌細胞。癌症之實例包括但不限於癌、淋巴瘤、胚細胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴惡性腫瘤。此類癌症的更特定實例包括鱗狀細胞癌（例如，鱗狀上皮細胞癌）；肺癌，包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌（「NSCLC」）、肺腺癌和肺鱗狀癌；腹膜癌；肝細胞癌；胃或胃部癌，包括胃腸道癌；胰臟癌；神經膠質母細胞瘤；子宮頸癌；卵巢癌；肝癌（liver cancer）；膀胱癌；肝細胞瘤；乳癌；結腸癌；直腸癌；結直腸癌；子宮內膜或子宮癌；唾液腺癌；腎臟或腎癌；前列腺癌；外陰癌；甲狀腺癌；肝癌（hepatic carcinoma）；肛癌；陰莖癌；以及頭頸部癌。
本文中的「自體免疫性疾病」係由個體自身組織或蛋白產生且針對它們的疾病或病症。
「患者」之實例包括但不限於哺乳動物諸如人、大鼠、小鼠、豚鼠、猴、豬、山羊、牛、馬、狗或貓以及鳥或家禽。在一些實施方式中，患者係人。
除非上下文另外指明，否則術語「治療（treat）」或「治療（treatment）」係指治療性治療和用於防止復發的預防性措施，其中目的係抑制或減緩（減輕）不期望的生理學變化或病症，諸如癌症的發展或擴散。出於本揭露內容之目的，有益或所期望的臨床結果包括但不限於症狀緩解、疾病程度減輕、疾病狀態穩定化（即，未惡化）、疾病進展延遲或減緩、疾病狀態改善或緩和以及減輕（無論是部分的還是全部的），無論是可檢測的還是不可檢測的。「治療」還可以意指與不接受治療情況下的預期存活期相比，存活期延長。需要治療的那些包括已患有病狀或病症的那些以及易於患上病狀或病症的那些。
在癌症的上下文中，術語「治療」包括以下中的任一項或全部：抑制腫瘤細胞、癌細胞或腫瘤的生長；抑制腫瘤細胞或癌細胞的複製；減輕總體腫瘤負擔或減少癌細胞數量；以及改善與疾病相關聯的一或多種症狀。
在自體免疫性疾病的上下文中，術語「治療」包括以下中的任一項或全部：抑制與自體免疫性疾病狀態相關聯的細胞（包括但不限於產生自體免疫性抗體的細胞）的複製；減輕自體免疫-抗體負擔；以及改善自體免疫性疾病的一或多種症狀。
如本文以及在說明書和所附申請專利範圍中所用，不定冠詞「一個/種（a和an）」以及定冠詞「該（the）」包括複數以及單數指代物，除非上下文另有明確指示。
如本文所用且除非另有說明，否則術語「約」和「大約」，當關於組成物的成分的量或重量百分比使用時，意指由熟悉該項技術者所知的量或重量百分比，以提供與從指定量或重量百分比獲得的藥理學效應等效的藥理學效應。在某些實施方式中，術語「約」和「大約」，當在此上下文中使用時，考慮係在指定量或重量百分比的30%以內、20%以內、15%以內、10%以內、或5%以內的量或重量百分比。
如本文所用且除非另有說明，否則術語「約」和「大約」，當關於提供用來表徵特定固體形式的數值或值範圍使用時，例如關於特定溫度或溫度範圍，諸如例如描述熔化、脫水、去溶劑化或玻璃化轉變溫度；質量變化，諸如例如作為溫度或濕度的函數的質量變化；溶劑或水含量，例如以質量或百分比表示；或峰位置，諸如例如在藉由例如IR或拉曼光譜（Raman spectroscopy）或XRPD的分析中；指示該值或值的範圍可以在熟悉該項技術者認為合理的程度上偏離，同時仍然描述固體形式。用於表徵晶體形式和非晶形固體的技術包括但不限於熱重分析（TGA）、微差掃描熱量法（DSC）、X射線粉末繞射法（XRPD）、單晶X射線繞射法、振動光譜（例如紅外（IR）和拉曼光譜）、固態和溶液核磁共振（NMR）光譜、光學顯微鏡、高溫熱台光學顯微鏡、掃描電子顯微鏡（SEM）、電子晶體學和定量分析、粒度分析（PSA）、表面積分析、溶解度研究和溶出度研究。在某些實施方式中，術語「約」和「大約」，當在此上下文中使用時，指示數值或值的範圍可以在所述值或值的範圍的30%、20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1.5%、1%、0.5%或0.25%以內變化。例如，在一些實施方式中，XRPD峰位置的值可以變化最多± 0.2º 2θ，同時仍描述特定的XRPD峰。
「烷基」基團係飽和、部分飽和或不飽和直鏈或支鏈非環狀烴，該非環狀烴具有1至10個碳原子，典型地1至8個碳原子，或在一些實施方式中1至6個、1至4個或2至6個碳原子。代表性烷基基團包括-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基和正己基；飽和支鏈烷基包括-異丙基、-二級丁基、-異丁基、-三級丁基、-異戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。不飽和烷基基團之實例包括但不限於乙烯基、烯丙基、CH=CH(CH 3)、-CH=C(CH 3) 2、-C(CH 3)=CH 2、-C(CH 3)=CH(CH 3)、C(CH 2CH 3)=CH 2、C≡CH、-C≡C(CH 3)、-C≡C(CH 2CH 3)、-CH 2C≡CH、-CH 2C≡C(CH 3)和CH 2C≡C(CH 2CH 3)等。烷基基團可為取代或未取代的。在某些實施方式中，當本文所述之烷基基團被稱為「取代的」時，它們可以被如在本文揭露的化合物和實施方式中發現的任何一或多個取代基以及以下項取代：鹵素（氯、碘、溴或氟）；羥基；烷氧基；烷氧基烷基；胺基；烷基胺基；羧基；硝基；氰基；硫醇；硫醚；亞胺；醯亞胺；脒；胍；烯胺；胺基羰基；醯胺基；膦酸基；膦；硫代羰基；磺醯基；碸；磺醯胺；酮；醛；酯；脲；胺基甲酸酯；肟；羥胺；烷氧基胺；芳烷氧基胺；N-氧化物；肼；醯肼；腙；疊氮化物；異氰酸酯；異硫氰酸酯；氰酸酯；硫氰酸酯；B(OH) 2；或O(烷基)胺基羰基。
「烯基」基團係具有2至10個碳原子，典型地2至8個碳原子，並且包括至少一個碳-碳雙鍵的直鏈或支鏈非環烴。代表性直鏈和支鏈(C 2-C 8)烯基包括-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-異丁烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2,3-二甲基-2-丁烯基、-1-己烯基、2-己烯基、-3-己烯基、-1-庚烯基、-2-庚烯基、-3-庚烯基、-1-辛烯基、-2-辛烯基、3-辛烯基等。烯基基團的雙鍵可以不共軛或與另一個不飽和基團共軛。烯基基團可為未取代的或取代的。
「環烷基」基團係3至10個碳原子的飽和或部分飽和環狀烷基基團，該環狀烷基基團具有可以視需要被1至3個烷基基團取代的單個環狀環或者多個縮合環或橋接環。在一些實施方式中，環烷基基團具有3至8個環成員，而在其他實施方式中，環碳原子的數量在3至5、3至6或3至7的範圍內。舉例來說，此類環烷基基團包括單環結構（諸如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、1-甲基環丙基、2-甲基環戊基、2-甲基環辛基等）或者多環或橋接環結構（諸如金剛烷基等）。不飽和環烷基基團之實例包括環己烯基、環戊烯基、環己二烯基、丁二烯基、戊二烯基和己二烯基等。環烷基基團可為取代或未取代的。舉例來說，此類取代的環烷基基團包括環己酮等。
「芳基」基團係6至14個碳原子的芳族碳環基團，該芳族碳環基團具有單個環（例如，苯基）或多個縮合環（例如，萘基或蒽基）。在一些實施方式中，芳基基團含有6至14個碳原子，並且在其他實施方式中在基團的環部分中含有6至12或甚至6至10個碳原子。特定芳基包括苯基、聯苯基、萘基等。芳基基團可為取代或未取代的。短語「芳基基團」還包括含有稠合環的基團，諸如稠合芳族-脂肪族環系（例如，二氫茚基、四氫萘基等）。
「雜芳基」基團係在雜芳族環系中具有一至四個雜原子作為環原子的芳基環系統，其中其餘的原子係碳原子。在一些實施方式中，雜芳基基團含有5至6個環原子，並且在其他實施方式中在基團的環部分中含有6至9個或6至10個原子。合適的雜原子包括氧、硫和氮。在某些實施方式中，雜芳基環系係單環的或雙環的。非限制性實例包括但不限於諸如以下的基團：吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、㗁唑基、異㗁唑基、噻唑基、吡咯基、吡啶基、嗒𠯤基、嘧啶基、吡𠯤基、苯硫基、苯并苯硫基、呋喃基、苯并呋喃基（例如，異苯并呋喃-1,3-二亞胺）、吲哚基、氮雜吲哚基（例如，吡咯并吡啶基或1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基）、吲唑基、苯并咪唑基（例如，1H-苯并[d]咪唑基）、咪唑并吡啶基（例如，氮雜苯并咪唑基、3H-咪唑并[4,5-b]吡啶基或1H-咪唑并[4,5-b]吡啶基）、吡唑并吡啶基、三唑并吡啶基、苯并三唑基、苯并㗁唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、異㗁唑并吡啶基、噻萘基、嘌呤基、黃嘌呤基、腺嘌呤基、鳥嘌呤基、喹啉基、異喹啉基、四氫喹啉基、喹㗁啉基和喹唑啉基基團。
「雜環基」係芳族（也稱為雜芳基）或非芳族環烷基，其中一至四個環碳原子獨立地被來自由O、S和N組成之群組的雜原子替代。在一些實施方式中，雜環基基團包含3至10個環成員，而其他此類基團具有3至5個、3至6個或3至8個環成員。雜環基也可以與任何環原子處（即，雜環的任何碳原子或雜原子處）的其他基團鍵合。雜環基基團可為取代或未取代的。雜環基基團涵蓋不飽和、部分飽和和飽和環系，諸如例如咪唑基、咪唑啉基和咪唑啶基基團。術語「雜環基」包括稠合環種類，包括包含稠合芳族和非芳族基團的那些種類，諸如例如苯并三唑基、2,3-二氫苯并[l,4]二㗁英基和苯并[l,3]二氧雜環戊烯基。該術語還包括含有雜原子的橋接多環環系，諸如但不限於奎寧環基。雜環基基團的代表性實例包括但不限於吖丙啶基、氮雜環丁烷基、吡咯啶基、咪唑啶基、吡唑啶基、四氫噻唑基、四氫苯硫基、四氫呋喃基、二氧雜環戊烯基、呋喃基、苯硫基、吡咯基、吡咯啉基、咪唑基、咪唑啉基、吡唑基、吡唑啉基、三唑基、四唑基、㗁唑基、異㗁唑基、噻唑基、噻唑啉基、異噻唑基、噻二唑基、㗁二唑基、哌啶基、哌𠯤基、𠰌啉基、硫代𠰌啉基、四氫哌喃基（例如，四氫-2H-哌喃基）、四氫噻喃基、氧硫雜環己烷、二氧基、二噻烷基、哌喃基、吡啶基、嘧啶基、嗒𠯤基、吡𠯤基、三𠯤基、二氫吡啶基、二氫二噻英基（dihydrodithiinyl）、二氫二亞硫醯基（dihydrodithionyl）、高哌𠯤基、奎寧環基、吲哚基、二氫吲哚基、異吲哚基、氮雜吲哚基（吡咯并吡啶基）、吲唑基、吲𠯤基、苯并三唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并苯硫基、苯并噻唑基、苯并㗁二唑基、苯并㗁𠯤基、苯并二噻英基（benzodithiinyl）、苯并㗁噻吩基（benzoxathiinyl）、苯并噻𠯤基、苯并㗁唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[l,3]二氧雜環戊烯基、吡唑并吡啶基、咪唑并吡啶基（氮雜苯并咪唑基；例如，1H-咪唑并[4,5-b]吡啶基或1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮基）、三唑并吡啶基、異㗁唑并吡啶基、嘌呤基、黃嘌呤基、腺嘌呤基、鳥嘌呤基、喹啉基、異喹啉基、喹𠯤基、喹㗁啉基、喹唑啉基、㖕啉基、酞𠯤基、㖠啶基、喋啶基、噻萘基、二氫苯并噻𠯤基、二氫苯并呋喃基、二氫吲哚基、二氫苯并二㗁英基、四氫吲哚基、四氫吲唑基、四氫苯并咪唑基、四氫苯并三唑基、四氫吡咯并吡啶基、四氫吡唑并吡啶基、四氫咪唑并吡啶基、四氫三唑并吡啶基和四氫喹啉基基團。代表性取代的雜環基基團可以被各種取代基（諸如下文列出的那些）單取代，或取代多於一次（諸如但不限於吡啶基或𠰌啉基基團，該等基團係2次、3次、4次、5次或6次取代的），或雙取代。
「環烷基烷基」基團係具有式-烷基-環烷基的基團，其中烷基和環烷基係以上所定義的。取代的環烷基烷基基團可以在該基團的烷基、環烷基或烷基和環烷基部分兩者處被取代。代表性環烷基烷基基團包括但不限於環戊基甲基、環戊基乙基、環己基甲基、環己基乙基和環己基丙基。代表性取代的環烷基烷基基團可為單取代的或取代多於一次的。
「芳烷基」基團係具有式-烷基-芳基的基團，其中烷基和芳基係以上所定義的。取代的芳烷基基團可以在該基團的烷基、芳基或烷基和芳基部分兩者處被取代。代表性芳烷基基團包括但不限於苄基和苯乙基基團以及稠合的(環烷基芳基)烷基基團，諸如4-乙基-二氫茚基。
「雜環基烷基」基團係具有式-烷基-雜環基的基團，其中烷基和雜環基係以上所定義的。取代的雜環基烷基基團可以在該基團的烷基、雜環基或烷基和雜環基部分兩者處被取代。代表性雜環基烷基基團包括但不限於4-乙基-𠰌啉基、4-丙基𠰌啉基、呋喃-2-基甲基、呋喃-3-基甲基、吡啶-3-基甲基、(四氫-2H-哌喃-4-基)甲基、(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基、四氫呋喃-2-基甲基、四氫呋喃-2-基乙基和吲哚-2-基丙基。
「鹵素」係氯、碘、溴或氟。
「羥基烷基」基團係被一或多個羥基基團取代的上述烷基基團。
「烷氧基」基團係O(烷基)，其中烷基係以上所定義的。
「烷氧基烷基」基團係(烷基)O(烷基)，其中烷基係以上所定義的。
如本文所用，「炔基」係指含有至少兩個碳原子和一或多個碳-碳三鍵的單價烴基部分。炔基視需要被取代，並且可為直鏈、支鏈或環狀的。炔基包括但不限於具有以下的那些基團：具有2-20個碳原子，即C 2-20炔基；具有2-12個碳原子，即C 2-12炔基；具有2-8個碳原子，即C 2-8炔基；具有2-6個碳原子，即C 2-6炔基；以及具有2-4個碳原子，即C 2-4炔基。炔基部分之實例包括但不限於乙炔基、丙炔基和丁炔基。
如本文所用，「鹵代烷基」係指如上所定義的烷基，其中該烷基包括至少一個選自鹵素（例如氟（F）、氯（Cl）、溴（Br）或碘（I））的取代基。鹵代烷基之實例包括但不限於-CF 3、-CH 2CF 3、-CCl 2F和-CCl 3。
如本文所用，「鹵代烷氧基」係指如上所定義的烷氧基，其中該烷氧基包括至少一個選自鹵素（例如，F、Cl、Br或I）的取代基。
如本文所用，「芳基烷基」係指作為烷基化合物的基團的單價部分，其中烷基化合物被芳族取代基取代，即芳族化合物包括與烷基基團的單鍵，並且其中該基團位於烷基基團上。芳基烷基基團經由烷基基團與所示的化學結構鍵合。芳基烷基可以由例如B-CH 2-、B-CH 2-CH 2-、B-CH 2-CH 2-CH 2-、B-CH 2-CH 2-CH 2-CH 2-、B-CH(CH 3)-CH 2-CH 2-、B-CH 2-CH(CH 3)-CH 2-的結構表示，其中B係芳族部分，例如苯基。芳基烷基視需要被取代，即芳基基團和/或烷基基團可以如本文所揭露那樣被取代。芳基烷基之實例包括但不限於苄基。
如本文所用，「烷基芳基」係指作為芳基化合物的基團的單價部分，其中芳基化合物被烷基取代基取代，即芳基化合物包括與烷基基團的單鍵，並且其中該基團位於芳基基團上。烷基芳基經由芳基基團與所示的化學結構鍵合。烷基芳基可以由例如-B-CH 3、-B-CH 2-CH 3、-B-CH 2-CH 2-CH 3、-B-CH 2-CH 2-CH 2-CH 3、-B-CH(CH 3)-CH 2-CH 3、-B-CH 2-CH(CH 3)-CH 3的結構表示，其中B係芳族部分，例如苯基。烷基芳基視需要被取代，即芳基基團和/或烷基基團可以如本文所揭露那樣被取代。烷基芳基之實例包括但不限於甲苯醯基。
如本文所用，「芳氧基」係指作為芳族化合物的基團的單價部分，其中環原子係碳原子，並且其中環被氧基團取代，即芳族化合物包括與氧原子的單鍵並且其中該基團位於氧原子上，例如對於苯氧基為C 6H 5-O-。芳氧基取代基通過該氧原子與它們取代的化合物鍵合。芳氧基視需要被取代。芳氧基包括但不限於具有以下的那些基團：6至20個環碳原子，即C 6-20芳氧基；6至15個環碳原子，即C 6-15芳氧基；以及6至10個環碳原子，即C 6-10芳氧基。芳氧基部分之實例包括但不限於苯氧基、萘氧基和蒽氧基。
「胺基」基團係具有式NH 2的基團。
「羥胺」基團係具有式N(R #)OH或NHOH的基團，其中R #係如本文所定義的取代或未取代的烷基、環烷基、環烷基烷基、芳基、芳烷基、雜環基或雜環基烷基基團。
「烷氧基胺」基團係具有式-N(R #)O-烷基或-NHO-烷基的基團，其中R #如上所定義。
「芳烷氧基胺」基團係具有式N(R #)O-芳基或NHO芳基的基團，其中R #如上所定義。
「烷基胺」基團係具有式NH烷基或N(烷基) 2的基團，其中每個烷基獨立地如上所定義。
「胺基羰基」基團係具有式-C(=O)N(R #) 2、-C(=O)NH(R #)或C(=O)NH 2的基團，其中每個R #如上所定義。
「醯胺基」基團係具有式NHC(=O)(R #)或N(烷基)C(=O)(R #)的基團，其中每個烷基和R #獨立地如上所定義。
「O(烷基)胺基羰基」基團係具有式-O(烷基)C(=O)N(R #) 2、-O(烷基)C(=O)NH(R #)或-O(烷基)C(=O)NH 2的基團，其中每個R #獨立地如上所定義。
「N-氧化物」基團係具有式-N +-O -的基團。
「羧基」基團係具有式C(=O)OH的基團。
「酮」基團係具有式C(=O)(R #)的基團，其中R #如上所定義。
「醛」基團係具有式-CH(=O)的基團。
「酯」基團係具有式C(=O)O(R #)或OC(=O)(R #)的基團，其中R #如上所定義。
「脲」基團係具有式-N(烷基)C(=O)N(R #) 2、-N(烷基)C(=O)NH(R #)、-N(烷基)C(=O)NH 2、-NHC(=O)N(R #) 2、-NHC(=O)NH(R #)或NHC(=O)NH 2 #的基團，其中每個烷基和R #獨立地如上文所定義。
「亞胺」基團係具有式-N=C(R #) 2或-C(R #)=N(R #)的基團，其中每個R #獨立地如上所定義。
「醯亞胺」基團係具有式-C(=O)N(R#)C(=O)(R #)或N((C=O)(R #)) 2的基團，其中每個R #獨立地如上所定義。
「胺基甲酸酯」基團係具有式-OC(=O)N(R #) 2、-OC(=O)NH(R #)、-N(R #)C(=O)O(R #)或-NHC(=O)O(R #)的基團，其中每個R #獨立地如上所定義。
「脒」基團係具有式-C(=N(R #))N(R #) 2、-C(=N(R #))NH(R #)、-C(=N(R #))NH 2、-C(=NH)N(R #) 2、-C(=NH)NH(R #)、-C(=NH)NH 2、-N=C(R #)N(R #) 2、-N=C(R #)NH(R #)、-N=C(R #)NH 2、-N(R #)C(R #)=N(R #)、-NHC(R #)=N(R #)、-N(R #)C(R #)=NH或-NHC(R #)=NH的基團，其中每個R #獨立地如上所定義。
「胍」基團係具有式-N(R #)C(=N(R #))N(R #) 2、-NHC(=N(R #))N(R #) 2、-N(R #)C(=NH)N(R #) 2、-N(R #)C(=N(R #))NH(R #)、-N(R #)C(=N(R #))NH 2、-NHC(=NH)N(R #) 2、-NHC(=N(R #))NH(R #)、-NHC(=N(R #))NH 2、-NHC(=NH)NH(R #)、-NHC(=NH)NH 2、-N=C(N(R #) 2) 2、-N=C(NH(R #)) 2或-N=C(NH 2) 2的基團，其中每個R #獨立地如上所定義。
「烯胺」基團係具有式-N(R #)C(R #)=C(R #) 2、-NHC(R #)=C(R #) 2、-C(N(R #) 2)=C(R #) 2、-C(NH(R #))=C(R #) 2、-C(NH 2)=C(R #) 2、-C(R #)=C(R #)(N(R #) 2)、C(R #)=C(R #)(NH(R #))或-C(R #)=C(R #)(NH 2)的基團，其中每個R #獨立地如上所定義。
「肟」基團係具有式-C(=NO(R #))(R #)、-C(=NOH)(R #)、-CH(=NO(R #))或-CH(=NOH)的基團，其中每個R #獨立地如上所定義。
「醯肼」基團係具有式-C(=O)N(R #)N(R #) 2、-C(=O)NHN(R #) 2、-C(=O)N(R #)NH(R #)、-C(=O)N(R #)NH 2、-C(=O)NHNH(R #) 2或-C(=O)NHNH 2的基團，其中每個R #獨立地如上所定義。
「肼」基團係具有式-N(R #)N(R #) 2、-NHN(R #) 2、-N(R #)NH(R #)、-N(R #)NH 2、-NHNH(R #) 2或-NHNH 2的基團，其中每個R #獨立地如上所定義。
「腙」基團係具有式-C(=N-N(R #) 2)(R #) 2、-C(=NNH(R #))(R #) 2、-C(=N-NH 2)(R #) 2、-N(R #)(N=C(R #) 2)或-NH(N=C(R #) 2)的基團，其中每個R #獨立地如上所定義。
「疊氮化物」基團係具有式-N 3的基團。
「異氰酸酯」基團係具有式N=C=O的基團。
「異硫氰酸酯」基團係具有式N=C=S的基團。
「氰酸酯」基團係具有式OCN的基團。
「硫氰酸酯」基團係具有式SCN的基團。
「硫醚」基團係具有式-S(R #)的基團，其中R #如上所定義。
「硫代羰基」基團係具有式-C(=S)(R #)的基團，其中R #如上所定義。
「亞磺醯基」基團係具有式-S(=O)(R #)的基團，其中R #如上所定義。
「碸」基團係具有式-S(=O) 2(R #)的基團，其中R #如上所定義。
「磺醯基胺基」基團係具有式-NHSO 2(R #)或-N(烷基)SO 2(R #)的基團，其中每個烷基和R #係以上所定義的。
「磺醯胺」基團係具有式-S(=O) 2N(R #) 2、-S(=O) 2NH(R #)或-S(=O) 2NH 2的基團，其中每個R #獨立地如上所定義。
「膦酸酯」基團係具有式-P(=O)(O(R #)) 2、-P(=O)(OH) 2、-OP(=O)(O(R #))(R #)或-OP(=O)(OH)(R #)的基團，其中每個R #獨立地如上所定義。
「膦」基團係具有式-P(R #) 2的基團，其中每個R #獨立地如上所定義。
當本文所述之基團（除烷基基團外）被稱為「取代的」時，它們可以被任何適當的一或多個取代基取代。取代基的說明性實例係在本文揭露的化合物和實施方式中發現的那些，以及鹵素（氯、碘、溴或氟）；烷基；羥基；烷氧基；烷氧基烷基；胺基；烷基胺基；羧基；硝基；氰基；硫醇；硫醚；亞胺；醯亞胺；脒；胍；烯胺；胺基羰基；醯胺基；膦酸酯；膦；硫代羰基；亞磺醯基；碸；磺醯胺；酮；醛；酯；脲；胺基甲酸酯；肟；羥胺；烷氧基胺；芳烷氧基胺；N-氧化物；肼；醯肼；腙；疊氮化物；異氰酸酯；異硫氰酸酯；氰酸酯；硫氰酸酯；氧（═O）；B(OH) 2，O(烷基)胺基羰基；環烷基，其可為單環的或者稠合或非稠合多環的（例如，環丙基、環丁基、環戊基或環己基）；或雜環基，其可為單環的或者稠合或非稠合多環的（例如，吡咯啶基、哌啶基、哌𠯤基、𠰌啉基或噻𠯤基）；單環或者稠合或非稠合多環芳基或雜芳基（例如，苯基、萘基、吡咯基、吲哚基、呋喃基、苯硫基、咪唑基、㗁唑基、異㗁唑基、噻唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、吡啶基、喹啉基、異喹啉基、吖啶基、吡𠯤基、嗒𠯤基、嘧啶基、苯并咪唑基、苯并苯硫基或苯并呋喃基）；芳基氧基；芳烷基氧基；雜環基氧基；以及雜環基烷氧基。
如本文所用，術語「藥學上可接受的鹽」係指由藥學上可接受的無毒酸或鹼（包括無機酸或鹼以及有機酸或鹼）製備的鹽。
如本文所用並且除非另有指明，術語「溶劑化物」意指進一步包括藉由非共價分子間力結合的化學計量或非化學計量量的溶劑的化合物或其鹽。在一個實施方式中，溶劑化物係水合物。
如本文所用並且除非另有指明，否則術語「水合物」意指進一步包括藉由非共價分子間力結合的化學計量或非化學計量量的水的化合物或其鹽。
如本文所用並且除非另有指明，否則術語「前驅藥」意指可以在生物條件（體外或體內）下水解、氧化或以其他方式反應以提供活性化合物的化合物衍生物。前驅藥之實例包括但不限於化合物的衍生物和代謝物，其包括可生物水解的部分，諸如可生物水解的醯胺、可生物水解的酯、可生物水解的胺基甲酸酯、可生物水解的碳酸酯、可生物水解的醯脲和可生物水解的磷酸酯類似物。在某些實施方式中，具有羧基官能基的化合物的前驅藥係羧酸的低級烷基酯。可以藉由酯化分子上存在的任何羧酸部分形成羧酸酯。典型地可以使用眾所周知的方法來製備前驅藥，諸如 Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery [ 伯格藥物化學和藥物發現 ]第6版（Donald J. Abraham編輯，2001, Wiley [威立出版社]）以及 Design and Application of Prodrugs [ 前驅藥的設計和應用 ]（H. Bundgaard編輯，1985, Harwood Academic Publishers Gmfh [哈伍德學術出版公司]）中描述的那些方法。
如本文所用且除非另有指明，術語「立體異構物」或「立體異構物純的」意指化合物的一種立體異構物，其基本不含該化合物的其他立體異構物。例如，具有一個手性中心的立體異構純化合物將基本上不含該化合物的相反鏡像異構物。具有兩個手性中心的立體異構純化合物將基本上不含該化合物的其他非鏡像異構物。典型的立體異構純化合物包含按重量計大於約80%的該化合物的一種立體異構物和按重量計小於約20%的該化合物的其他立體異構物，按重量計大於約90%的該化合物的一種立體異構物和按重量計小於約10%的該化合物的其他立體異構物，按重量計大於約95%的該化合物的一種立體異構物和按重量計小於約5%的該化合物的其他立體異構物，或按重量計大於約97%的該化合物的一種立體異構物和按重量計小於約3%的該化合物的其他立體異構物。該等化合物可以有手性中心，並且可以以外消旋物、單獨的鏡像異構物或非鏡像異構物、以及其混合物的形式存在。所有該等異構形式（包括其混合物）都包括在本文揭露的實施方式中。該等化合物的立體異構純形式的用途以及該等形式的混合物的用途都涵蓋在本文揭露的實施方式中。例如，包含特定化合物的等量或不等量鏡像異構物的混合物可以用於本文揭露的方法和組成物中。可以使用標準技術（諸如手性柱或手性拆分劑）來不對稱地合成或拆分該等異構物。參見例如Jacques, J.等人， Enantiomers, Racemates and Resolutions[鏡像異構物、外消旋物及拆分]（WileyInterscience, New York [紐約威利國際科學出版社], 1981）；Wilen, S. H.等人， Tetrahedron[四面體] 33:2725 (1977)；Eliel, E. L., Stereochemistry of Carbon Compounds[碳化合物的立體化學]（McGrawHill, NY [紐約州麥格勞希爾出版社], 1962）；以及Wilen, S. H., Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions[拆分劑和光學解析度表] 第268頁 (E.L. Eliel編輯，Univ. of Notre Dame Press [聖母大學出版社]，聖母大學，印第安那州，1972)。
還應注意的是，化合物可以包括E和Z異構物或其混合物，以及順式和反式異構物或其混合物。在某些實施方式中，化合物被分離為順式或反式異構物。在其他實施方式中，化合物係順式和反式異構物的混合物。
「互變異構物」係指化合物的彼此平衡的異構形式。該等異構形式的濃度將取決於該化合物所處的環境，並且可以根據例如該化合物是固體還是在有機溶液或水溶液中而不同。例如，在水溶液中，吡唑可以表現出以下異構形式，它們被稱為彼此的互變異構物： 。
如熟悉該項技術者容易理解的，各種各樣的官能基和其他結構可以表現出互變異構並且化合物的所有互變異構物都在本揭露內容的範圍內。
還應注意的是，化合物可以在一或多個原子處含有非天然比例的原子同位素。例如，化合物可以用放射性同位素進行放射性標記，諸如例如用氚（ 3H）、碘-125（ 125I）、硫-35（ 35S）或碳-14（ 14C）標記，或者可為同位素富集的，諸如富集氘（ 2H）、碳-13（ 13C）或氮-15（ 15N）。如本文所用，「同位素體」係同位素富集的化合物。術語「同位素富集的」係指具有不同於原子的天然同位素組成的同位素組成的原子。「同位素富集的」也可為指如下化合物，該化合物含有具有不同於原子的天然同位素組成的同位素組成的至少一個原子。術語「同位素組成」係指給定原子的每種同位素的量。放射性標記的和同位素富集的化合物可用作治療劑（例如，癌症和炎症治療劑）、研究試劑（例如，結合測定試劑）和診斷劑（例如，體內顯像劑）。本文所述之化合物的所有同位素變化（無論是否具有放射性）都應涵蓋在本文所提供的實施方式的範圍內。在一些實施方式中，提供了化合物的同位素體，例如，該等同位素體係氘、碳-13或氮-15富集的化合物。
應注意的是，如果在所描繪的結構與該結構的名稱之間存在差異，則所描繪的結構將被給予更大的權重。
如本文所用，術語「殘基」係指化合物內在化學反應後保留的化學部分。例如，術語「胺基酸殘基」或「N-烷基胺基酸殘基」係指胺基酸或N-烷基胺基酸與合適的偶合配偶體的醯胺偶合或肽偶合的產物；其中例如水分子在胺基酸或N-烷基胺基酸的醯胺或肽偶合後被排出，產生具有摻入其中的胺基酸殘基或N-烷基胺基酸殘基的產物。
如本文所用，「糖」或「糖基團」或「糖殘基」係指可以包含3-碳（三糖）單元、4-碳（四糖）單元、5-碳（戊糖）單元、6-碳（己糖）單元、7-碳（庚糖）單元或其組合的碳水化合物部分，並且可為單糖、二糖、三糖、四糖、五糖、寡糖或任何其他多糖。在一些情況下，「糖」或「糖基團」或「糖殘基」包括呋喃糖（例如，呋喃核糖、呋喃果糖）或哌喃糖（例如，哌喃葡萄糖、哌喃半乳糖）或其組合。在一些情況下，「糖」或「糖基團」或「糖殘基」包括醛糖或酮糖或其組合。單糖的非限制性實例包括核糖、去氧核糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖和果糖。二糖的非限制性實例包括蔗糖、麥芽糖、乳糖、乳果糖和海藻糖。其他「糖」或「糖基團」或「糖殘基」包括多糖和/或寡糖，包括但不限於直鏈澱粉、支鏈澱粉、糖原、菊粉和纖維素。在一些情況下，「糖」或「糖基團」或「糖殘基」係胺基糖。在一些情況下，「糖」或「糖基團」或「糖殘基」係經由其胺基基團與分子的其餘部分連接以與分子的其餘部分形成醯胺鍵（即，葡糖醯胺）的葡糖胺殘基（1-胺基-1-去氧-D-葡萄糖醇）。
某些基團、部分、取代基和原子用例如與一或多個鍵相交的彎曲線描繪，以指示通過其鍵合該等基團、部分、取代基、原子的原子。例如，被丙基基團取代的苯基基團被描繪為： 具有以下結構： 。
除非另有規定，否則顯示通過兩個原子之間的鍵與非環狀基團鍵合的取代基的說明旨在表明該取代基可以根據本文闡述的技術或本揭露內容所屬領域中已知的技術與該取代基鍵所穿過的鍵的任一原子鍵合。因此，例如， 涵蓋 和 。
如本文所用，「結合劑」係指能夠特異性結合給定結合配偶體（例如，抗原）的任何分子，例如抗體。
如本文所用，術語「胺基酸」係指含有胺基（-NH 2）和羧基（-COOH）官能基以及側鏈（R基團）的有機化合物，該側鏈對每個胺基酸係特異性的。胺基酸可為蛋白源性的或非蛋白源性的。「蛋白源性」係指該胺基酸係在蛋白質中發現的二十種天然存在的胺基酸之一。蛋白源性胺基酸包括丙胺酸、精胺酸、天冬醯胺、天冬胺酸、半胱胺酸、麩醯胺酸、麩胺酸、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、脯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、色胺酸、酪胺酸和纈胺酸。「非蛋白源性」係指該胺基酸不是在蛋白質中天然發現的，或者不是藉由細胞機器直接產生的（例如，係翻譯後修飾的產物）。非蛋白源性胺基酸的非限制性實例包括γ-胺基丁酸（GABA）、牛磺酸（2-胺基乙磺酸）、茶胺酸（L-γ-穀胺醯乙基醯胺）、羥脯胺酸、β-丙胺酸、鳥胺酸和瓜胺酸。
如本文所用，各種語法形式的「肽」以其最廣泛的含義定義，以指代兩個或更多個亞基胺基酸、胺基酸類似物或其他肽模擬物的化合物。亞基可以藉由肽鍵或其他鍵（例如，酯、醚等）連接。如本文所用，術語「胺基酸」係指天然和/或非天然的、蛋白源性或非蛋白源性的、或合成的胺基酸，包括甘胺酸以及D和L旋光異構物兩者，以及胺基酸類似物和肽模擬物。如果肽鏈較短，例如兩個、三個或更多個胺基酸，則通常將其稱為寡肽。如果肽鏈較長，則典型地將肽稱為多肽或蛋白質。該定義涵蓋全長蛋白質、其類似物、突變體和片段。該術語還包括多肽的表現後修飾，例如糖基化、乙醯化、磷酸化等。此外，由於分子中存在可電離的胺基和羧基，特定的肽可以作為酸性或鹼性鹽或以中性形式獲得。肽可以直接從來源生物體獲得，或者可以以重組或合成方式產生。
抗體的胺基酸序列可以使用任何已知的編號方案，包括由以下文獻描述的那些編號方案進行編號：Kabat等人（「Kabat」編號方案）；Al-Lazikani等人，1997, J. Mol. Biol. [分子生物學雜誌], 273:927-948（「Chothia」編號方案）；MacCallum等人，1996, J. Mol. Biol. [分子生物學雜誌] 262:732-745（「Contact」編號方案）；Lefranc等人，Dev. Comp. Immunol. [發育與比較免疫學], 2003, 27:55-77（「IMGT」編號方案）；以及Honegge和Pluckthun, J. Mol. Biol. [分子生物學雜誌], 2001, 309:657-70（「AHo」編號方案）。除非另有說明，否則本文中使用的編號方案為Kabat編號方案。然而，編號方案的選擇並不旨在暗示在不存在序列差異的地方存在序列差異，並且熟悉該項技術者可以藉由檢查一或多種抗體的胺基酸序列容易地確認序列位置。除非另有說明，當提及抗體重鏈恒定區中的殘基時，通常使用「EU編號方案」（例如，如Kabat等人，同上中報告的）。
如本文所用，術語「抗HER2抗體」係指選擇性結合HER2受體的抗體，例如曲妥珠單抗（trastuzumab）（赫賽汀（Herceptin））。在一個實施方式中，曲妥珠單抗可以如US 6407213和US 5821337中所述那樣製得和使用，將該等專利的整個揭露內容藉由援引併入本文。
如本文所用，術語「抗HER3抗體」係指選擇性結合HER3受體的抗體，例如帕瑞妥單抗（patritumab）。在一個實施方式中，帕瑞妥單抗可以如US 7705130中所述那樣製得和使用，將該專利的整個揭露內容藉由援引併入本文。
如本文所用，術語「抗PTK7抗體」係指選擇性結合PTK7受體的抗體，例如考非妥珠單抗（cofetuzumab）。在一個實施方式中，考非妥珠單抗可以如US 9777070中所述那樣製得和使用，將該專利的整個揭露內容藉由援引併入本文。
如本文所用，術語「ifinatamab」係指選擇性結合B7H3受體的抗體。在一個實施方式中，ifinatamab可以如US 10117952或WO 2022102695中所述那樣製得和使用，將該等專利的整個揭露內容藉由援引併入本文。
如本文所用，術語「細胞殺傷活性」係指降低或減弱所測試的細胞系的細胞活力的活性。
在下面的請求項和前面的描述中，除非上下文由於表現語言或必要的含義而另有要求，否則詞語「包含（comprise）」或變形如「包含（comprises）」或「包含（comprising）」以包括的意義使用，即指定所述特徵的存在，但不排除在各種實施方式中存在或添加另外的特徵。 6.2.     軛合物
在實施方式中，軛合物或其藥學上可接受的鹽、互變異構物、溶劑化物或立體異構物包括蛋白質，該蛋白質與至少一種有效載荷或有效載荷殘基（在本文中也稱為藥物單元）連接，並且經由共價連接子與至少一個親水性部分連接。共價連接子與蛋白質、有效載荷殘基和親水性部分中的每一種直接或間接鍵合。在一些實施方式中，蛋白質係結合劑，諸如抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方式中，蛋白質與共價連接子，諸如本文闡述的連接子直接鍵合。在此類情況下，結合劑與共價連接子相距一個鍵位。共價連接子也可以與有效載荷殘基直接鍵合，使得共價連接子與有效載荷殘基相距一個鍵位。有效載荷可為本文闡述的任何有效載荷。在一些實施方式中，共價連接子也與親水性部分直接鍵合，使得共價連接子與親水性部分相距一個鍵位。親水性部分可為本文闡述的任何親水性部分（HG）。
在一些實施方式中，結合劑與共價連接子間接鍵合，使得結合劑與共價連接子相距多於一個鍵位。在此類情況下，結合劑通過另一個部分與共價連接子鍵合。例如，結合劑可以與順丁烯二醯亞胺基團鍵合，該順丁烯二醯亞胺基團與鍵合至共價連接子的聚乙二醇基團鍵合。
在一些實例中，共價連接子也與有效載荷殘基間接鍵合，使得共價連接子與有效載荷殘基相距多於一個鍵位。共價連接子通過另一個部分與有效載荷鍵合。例如，共價連接子可以與二肽，諸如但不限於Val-Ala或Val-Cit鍵合，該二肽可以與可以鍵合至有效載荷殘基的PAB鍵合。
在一些實施方式中，共價連接子與親水性部分間接鍵合，使得共價連接子與親水性部分相距多於一個鍵位。共價連接子通過另一個部分與親水性部分鍵合。 6.2.1.  方面1
本文提供了ADC，例如用於在療法，諸如癌症療法中使用。
一個實施方式係具有式 (I) 之ADC化合物： (I) 或其藥學上可接受的鹽、互變異構物、溶劑化物或立體異構物， BA係選自人源化、嵌合或人抗體或其抗原結合片段的結合劑； RG係反應性基團殘基； RS係開環穩定基團； RE係開環強化子； R 1a和R 1b中的每一個獨立地是H；取代或未取代的C 1-4烷基；取代或未取代的C 3-5環烷基；或者R 1a和R 1b連同它們所附接的原子一起形成取代或未取代的C 3-5環烷基； R 2a和R 2b中的每一個獨立地是H；取代或未取代的C 1-4烷基；取代或未取代的C 3-5環烷基；或者R 2a和R 2b連同它們所附接的原子一起形成取代或未取代的C 3-5環烷基； R 3a和R 3b中的每一個獨立地是H；取代或未取代的C 1-4烷基；取代或未取代的C 3-5環烷基；或者R 3a和R 3b連同它們所附接的原子一起形成取代或未取代的C 3-5環烷基； R 4係H；取代或未取代的C 1-4烷基；或者取代或未取代的C 3-5環烷基； r、s和t中的每一個獨立地是0、1或2； A係延伸子（Stretcher）單元殘基； 下標a’係0或1； W係可切割單元； 下標w’係0或1； Y係間隔子單元； 下標y’係0或1； PA係有效載荷殘基；並且 下標x係1至15。
在一個實施方式中，下標x係1至12。在一個實施方式中，下標x係1至10。在一個實施方式中，下標x係2至10。在一個實施方式中，下標x係3至10。在一個實施方式中，下標x係4至10。在一個實施方式中，下標x係4至9。在一個實施方式中，下標x係4至8。
在一些實施方式中，R 1a、R 1b、R 2a、R 2b、R 3a、R 3b和R 4中的每一個獨立地是H。
在一些實施方式中，RS係-NR 5aR 5b，其中R 5a和R 5b中的每一個獨立地是H或者取代或未取代的C 1-4烷基。
在一些實施方式中，RS係胺基(-NH 2)基團或-N(CH 3) 2。
在一些實施方式中，RS係胺基基團。
在一些實施方式中，RE係鍵、-O-、-OC(=O)-、-OC(=O)NR 6-、-NHC(=O)NR 6-、-OS(=O) 2NR 6-、-NHS(=O) 2NR 6-或-OC(=O)NHS(=O) 2NR 6-；並且R 6係H或者取代或未取代的C 1-4烷基。
在一些實施方式中，R 6係H、甲基、乙基或異丙基。
在一些實施方式中，RE係-OC(=O)NR 6-。
在一些實施方式中，RE係-OC(=O)NH-。
在一些實施方式中，RG係 、 、 或 。
在一些實施方式中，RG係 、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-或 。
在一些實施方式中，r係0。
在一些實施方式中，s係1。
在一些實施方式中，t係1或2。
在一些實施方式中，r係0，s係1，並且t係1或2。
在一些實施方式中，A係鍵、-(CH 2) n-C(═O)-、-CH 2-C(═O)-NH-(CH 2) n-C(═O)-、-(CH 2CH 2O) n-CH 2CH 2-C(═O)-、-CH[-(CH 2) n-COOH]-C(═O)-、-CH 2-C(═O)-NH-(CH 2) n-C(═O)-NH-(CH 2) n-C(═O)-或-C(═O)-(CH 2) n-C(═O)-，其中每個n獨立地表示1、2、3、4或5的整數。
在一些實施方式中，W w’係下式之一：
式 (Ia) 或 式 (Ib)，
並且HG係親水性部分或氫。
在一些實施方式中，HG係糖、磷酸酯、硫酸酯、磷酸二酯或膦酸酯。
在一些實施方式中，HG係糖，並且糖係β-D-半乳糖、N-乙醯基-P-D-半乳胺糖、N-乙醯基-a-D-半乳胺糖、N-乙醯基-P-D-葡糖胺、β-D-葡糖醛酸、a-L-艾杜糖醛酸、a-D-半乳糖、a-D-葡萄糖、β-D-葡萄糖、a-D-甘露糖、β-D-甘露糖、a-L-岩藻糖、β-D-木糖、神經胺酸、其硫酸鹽、磷酸鹽、羧基、胺基或O-乙醯基修飾。在一些實施方式中，HG選自β-D-半乳糖和β-D-葡糖醛酸。
在一些實施方式中，HG係 、 或 。
在一些實施方式中，Y y’係PAB單元。
在一些實施方式中，延伸子單元（-A-）存在並且延伸共價連接子的框架以在自穩定連接子裝配體與藥物單元（有效載荷或有效載荷殘基）之間提供更多的距離。除結合劑（BA）、延伸子單元（A）、可切割單元（W）、間隔子單元（Y）和有效載荷殘基（PA）之外，自穩定連接子裝配體可以包括具有式 (I) 之組分。在實施方式中，自穩定連接子包括反應性基團殘基（RG）、開環穩定基團（RS）、開環強化子（RE），以及連接RG、RS和/或RE的碳原子和R基團。延伸子單元可以將自穩定連接子裝配體連接到可切割單元（當可切割單元存在時）；可以將自穩定連接子裝配體連接到間隔子單元（當可切割單元不存在並且間隔子單元存在時）；或者可以將自穩定連接子裝配體連接到藥物單元（當可切割單元和間隔子單元兩者不存在時）。延伸子單元可以附接至多於一個可切割單元、間隔子單元和/或藥物單元。自穩定連接子裝配體、可切割單元、間隔子單元和藥物單元可以分別是本文所述之任何自穩定連接子裝配體、可切割單元、間隔子單元和藥物單元。
延伸子單元可以改變藥物-連接子的物理化學特性，這取決於延伸子單元的組分。在一些實施方式中，延伸子單元可以增加藥物-連接子的溶解性，並且可以包括一或多種溶解性增強基團，諸如離子基團或水溶性聚合物。水溶性聚合物可以在室溫下溶於水，並且可以包括聚(乙)二醇基團和其他聚合物，諸如聚乙烯亞胺。
延伸子單元可以包含一或多個延伸子基團。延伸子基團之實例包括例如-NH-C 1-10伸烷基-、-NH-C 1-10伸烷基-NH-C(O)-C 1-10伸烷基-、-NH-C 1-10伸烷基-C(O)-NH-C 1-10伸烷基-、-NH-(CH 2CH 2O) u-、-NH-(CH 2CH 2O) u-CH 2-、-NH-(CH 2CH 2NH) u-(CH 2) u-NH-(CH 2CH 2NH) u-(CH 2) u-NH-C(O)-(CH 2) u-NH-(C 3-C 8亞碳環基（carbocyclo）)-、-NH-(伸芳基)-和-NH-(C 3-C 8亞雜環基（heterocyclo）-)-，其中每個u獨立地是1-10。
在一些實施方式中，可切割單元（-W w’-）存在並且可以將自穩定連接子裝配體連接到間隔子單元（當間隔子單元存在時）或者將自穩定連接子裝配體連接到藥物單元（當間隔子單元不存在時）。自穩定連接子裝配體與間隔子單元或藥物單元的連接可以直接從自穩定連接子裝配體（當延伸子單元不存在時）起或經由延伸子單元（當延伸子單元存在時）。
在一些實施方式中，可切割單元在一端直接軛合至自穩定連接子裝配體並且在另一端直接軛合至藥物單元。在一些實施方式中，可切割單元在一端直接軛合至自延伸子單元並且在另一端直接軛合至藥物單元。在另外的實施方式中，可切割單元在一端直接軛合至自延伸子單元並且在另一端直接軛合至間隔子單元。在仍另外的實施方式中，可切割單元在一端直接軛合至自穩定連接子裝配體並且在另一端直接軛合至間隔子單元。在實施方式中，延伸子單元和/或間隔子單元可以不存在。
可切割單元可以與藥物單元（PA）或間隔子單元形成可切割鍵。用於形成可切割鍵的反應性基團可以包括例如巰基基團以形成二硫鍵；醛、酮或肼基團以形成腙鍵；羧基或胺基基團以形成肽鍵；以及羧基或羥基基團以形成酯鍵。
可切割單元可以包括通過二硫化物交換可切割的含二硫化物連接子、在酸性pH下酸不穩定性連接子或藉由酶（諸如水解酶、肽酶、酯酶或葡糖醛酸酶）可切割的連接子。可切割單元可以包括一或多個切割位點。
在一些實施方式中，可切割單元包括一或多個，諸如1至12個胺基酸。可切割單元可以包括例如單肽、二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或十二肽單元。
每個胺基酸可為天然或非天然的胺基酸，和/或該等胺基酸的D-或L-異構物，條件係可切割鍵係可用的。在一些實施方式中，可切割單元僅包括天然胺基酸。每個胺基酸可為蛋白源性的或非蛋白源性的胺基酸。
在一些實施方式中，每個胺基酸獨立地選自以下群組，該群組由以下組成：丙胺酸、精胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺、組胺酸、甘胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、苯丙胺酸、離胺酸、白胺酸、絲胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、異白胺酸、脯胺酸、色胺酸、纈胺酸、半胱胺酸、甲硫胺酸、硒代半胱胺酸、鳥胺酸、青黴胺、β-丙胺酸、胺基烷酸、胺基炔酸、胺基烷二酸、胺基苯甲酸、胺基-亞雜環基-鏈烷酸、雜環-羧酸、瓜胺酸、抑胃酶胺酸、二胺基鏈烷酸及其衍生物。在一些實施方式中，每個胺基酸獨立地選自以下群組，該群組由以下組成：丙胺酸、精胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺、組胺酸、甘胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、苯丙胺酸、離胺酸、白胺酸、絲胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、異白胺酸、脯胺酸、色胺酸、纈胺酸、半胱胺酸、甲硫胺酸和硒代半胱胺酸。在一些實施方式中，每個胺基酸獨立地選自以下群組，該群組由以下組成：丙胺酸、精胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺、組胺酸、甘胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、苯丙胺酸、離胺酸、白胺酸、絲胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、異白胺酸、脯胺酸、色胺酸和纈胺酸。
在一些實施方式中，每個胺基酸獨立地選自以下天然胺基酸的L異構物：丙胺酸、精胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺、組胺酸、甘胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、苯丙胺酸、離胺酸、白胺酸、絲胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、異白胺酸、色胺酸和纈胺酸。在一些實施方式中，每個胺基酸係以下天然胺基酸的D異構物：丙胺酸、精胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺、組胺酸、甘胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、苯丙胺酸、離胺酸、白胺酸、絲胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、異白胺酸、色胺酸和纈胺酸。
在實施方式中，可切割單元係二肽-Val-Cit-、-Phe-Lys-或-Val-Ala。
在一些實施方式中，可切割單元包括一個或兩個末端胺基酸，並且通過末端胺基酸中存在的功能單元（例如，其羧酸或胺基末端）連接到藥物單元和/或間隔子單元。
在一些實施方式中，可切割單元與藥物單元之間的鍵可以藉由一或多種酶（包括腫瘤相關蛋白酶）進行酶促切割以釋放出藥物單元（-PA），該藥物單元在釋放後可以在體內質子化，以提供藥物（PA）。
可以設計有用的可切割單元以優化其針對特定酶（諸如腫瘤相關蛋白酶）的酶促切割的選擇性。在一個實施方式中，可切割單元與藥物單元或間隔子單元之間的連接係藉由組織蛋白酶B、C和/或D，或胞漿素蛋白酶催化切割的連接。
在一些實施方式中，間隔子單元（-Y y’-）存在並且延伸共價連接子的框架。間隔子單元可以將可切割單元連接到藥物單元或者將延伸子單元連接到藥物單元或者將自穩定連接子裝配體連接到藥物單元。間隔子單元可以包括一或多個自切除或非自切除基團。在一些實施方式中，間隔子單元包括一或多個自切除基團。在此上下文中，術語「自切除基團」係指能夠將兩個間隔的化學部分共價連接在一起形成通常穩定的三重分子的雙官能化學部分。自切除基團在其與第一部分的鍵被切割時將自發地與第二化學部分分離。在其他實施方式中，間隔子單元不是自切除的。在此類實施方式中，間隔子單元的部分或全部保持附接至藥物單元。
在一些實施方式中，-Y y’-係自切除基團並且經由自切除基團的亞甲基碳原子連接到可切割單元，並且經由碳酸酯、胺基甲酸酯或醚基團直接連接到藥物單元。
在一些實施方式中，-Y y’-係對胺基苄醇（PAB）單元（例如，-NH-(C 6H 4)-CH 2-O-C(=O)-）。PAB單元的亞苯基部分視需要被-C 1-C 8烷基、-O-(C 1-C 8烷基)、-鹵素、-硝基或-氰基取代。
在另一個實施方式中，-Y y’-係碳酸酯基團。
自切除基團的其他實例包括但不限於在電學上與PAB單元類似的芳族化合物，諸如2-胺基咪唑-5-甲醇衍生物（參見例如Hay等人，1999 , Bioorg. Med. Chem. Lett.[生物有機與藥物化學快報] 9:2237）和鄰或對胺基苄基縮醛。合適的間隔子單元包括在醯胺鍵水解後經歷環化的那些，諸如取代和未取代的4-胺基丁酸醯胺（參見例如Rodrigues等人，1995 , Chemistry Biology[化學生物學] 2:223）、適當取代的雙環[2.2.1]和雙環[2.2.2]環系（參見例如Storm等人，1972 , J. Amer. Chem. Soc.[美國化學學會雜誌] 94:5815）和2-胺基苯基丙酸醯胺（參見例如Amsberry等人，1990 , J. Org. Chem.[有機化學雜誌] 55:5867）。在甘胺酸的α位取代的含胺基藥物的消除（參見例如Kingsbury等人，1984 , J. Med. Chem.[醫藥化學雜誌] 27:1447）亦為合適自切除基團之實例。
其他合適的間隔子單元揭露於美國公開案號2005-0238649中，將該專利的揭露內容藉由援引併入本文。
用於與本發明揭露的連接子、平臺和ADC一起使用的合適的延伸子單元、可切割單元和間隔子單元描述於WO 2004/010957、WO 2007/038658、WO 2005/112919、美國專利案號6,214,345、7,659,241、7,498,298、7,968,687和8,163,888以及美國公開案號2009-0111756、2009-0018086和2009-0274713中，將該等專利中的每一篇以其全文並出於所有目的併入本文。 結合劑
本文提供了結合劑（BA），例如用於在本文所述之ADC中使用。
具有式 (I) 之化合物可以包括本文所述之任何BA。
在一些實施方式中，BA係抗體或其抗原結合片段，例如人源化、嵌合或人抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段特異性結合人B7H3。在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段係ifinatamab。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段特異性結合PTK7。在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段係考非妥珠單抗。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段特異性結合HER3。在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段係帕瑞妥單抗。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段特異性結合HER2。在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段係曲妥珠單抗。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段係單株抗體、嵌合抗體、人源化抗體、人工程化抗體、單鏈抗體（scFv）、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段具有抗體依賴性細胞毒性（ADCC）或補體依賴性細胞毒性（CDC）。
在一些實施方式中，Fc結構域係具有降低的效應子功能的IgG1。 有效載荷
本文提供了有效載荷（PA），例如用於在本文所述之平臺和/或ADC中使用。
具有式 (I) 之化合物可以包括本文所述之任何PA。
在一些實施方式中，每個PA獨立地是細胞毒性劑。
在一些實施方式中，每個PA獨立地選自以下群組，該群組由以下組成：DXd、7-乙基-10-羥基-喜樹鹼（SN-38）和單甲基澳瑞司他汀E（MMAE）。
在一些實施方式中，每個PA獨立地是具有式 (VI) 之化合物： (VI)， 並且R 9和R 10中的每一個獨立地是氫、鹵素或者取代或未取代的C 1-4烷基。
在一些實施方式中，每個PA獨立地是 、 、 、 或 。
在一些實施方式中，ADC具有下式： 、 、 、 、 、 、 或 ， 其中變量（例如，BA、PA、A、W、Y、a’、w’、y’、x）的值如上所述。
在一些實施方式中，ADC具有下式： 、 、 、 、 、 、 或 ， 其中變量（例如，BA、PA、A、W、Y、a’、w’、y’、x）的值如上所述。 6.2.2.  方面2
在一些實施方式中，ADC化合物由下式之一或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物和/或立體異構物表示：
編號 結構
ADC4-7o′ 、
ADC4-8o′ 、
ADC4-9o′ 、
ADC4-10o′ 、
ADC4-11o′ 、
ADC4-12o′ 、
ADC4-13o′ 、
ADC4-14o′ 或
ADC4-16o′ ，
其中BA係人源化、嵌合或人抗體或其抗原結合片段，下標x係1至15，並且PA如以上在方面1中所述的。BA的替代性值如本文例如關於方面1闡述的。變量下標x的替代性值如本文例如關於具有式 (I) 之化合物闡述的。
在一些實施方式中，ADC化合物由下式之一或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物和/或立體異構物表示：
編號 結構
ADC4-7o′ 、
ADC4-8o′ 、
ADC4-9o′ 、
ADC4-10o′ 、
ADC4-11o′ 、
ADC4-12o′ 、
ADC4-13o′ 、
ADC4-14o′ 、
ADC4-16o′ 、
ADC4-7′ 、
ADC4-8′ 、
ADC4-9′ 、
ADC4-10′ 、
ADC4-11′ 、
ADC4-12′ 、
ADC4-13′ 、
ADC4-14′ ，或
ADC4-16′ ，
其中BA係人源化、嵌合或人抗體或其抗原結合片段，下標x係1至15，並且PA如以上在方面1中所述的。BA的替代性值如本文例如關於方面1闡述的。變量下標x的替代性值如本文例如關於具有式 (I) 之化合物闡述的。 6.2.3.  方面3
在一些實施方式中，ADC化合物由下式之一或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物和/或立體異構物表示： 、 、 、 、 、 、 、 或 ， 其中Ab係人源化、嵌合或人抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方式中，Ab係ifinatamab。
在一些實施方式中，ADC化合物由下式之一或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物和/或立體異構物表示：
編號 結構
ADC4-7o 、
ADC4-8o 、
ADC4-9o 、
ADC4-10o 、
ADC4-11o 、
ADC4-12o 、
ADC4-13o 、
ADC4-14o 或
ADC4-16o ，
其中Ab係人源化、嵌合或人抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方式中，Ab係ifinatamab。
在一些實施方式中，ADC化合物由下式之一或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物和/或立體異構物表示： 、 、 、 、 、 、 、 或 ， 其中Ab係人源化、嵌合或人抗體或其抗原結合片段，並且x係1至15。
在一些實施方式中，Ab係ifinatamab。
在一些實施方式中，ADC化合物由下式之一或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物和/或立體異構物表示：
編號 結構
ADC4-7 、
ADC4-8 、
ADC4-9 、
ADC4-10 、
ADC4-11 、
ADC4-12 、
ADC4-13 、
ADC4-14 或
ADC4-16 。
其中Ab係人源化、嵌合或人抗體或其抗原結合片段，並且x係1至15。
在一些實施方式中，Ab係ifinatamab。 6.2.4.  方面4
本文還提供了平臺，例如用於在製備ADC，諸如本文所述之ADC中使用。
在一些實施方式中，平臺係具有式 (II) 之連接子-有效載荷化合物： (II) 或其藥學上可接受的鹽、互變異構物、溶劑化物或立體異構物， RG係反應性基團； RS係開環穩定基團； RE係開環強化子； R 1a和R 1b中的每一個獨立地是H；取代或未取代的C 1-4烷基；取代或未取代的C 3-5環烷基；或者R 1a和R 1b連同它們所附接的原子一起形成取代或未取代的C 3-5環烷基； R 2a和R 2b中的每一個獨立地是H；取代或未取代的C 1-4烷基；取代或未取代的C 3-5環烷基；或者R 2a和R 2b連同它們所附接的原子一起形成取代或未取代的C 3-5環烷基； R 3a和R 3b中的每一個獨立地是H；取代或未取代的C 1-4烷基；取代或未取代的C 3-5環烷基；或者R 3a和R 3b連同它們所附接的原子一起形成取代或未取代的C 3-5環烷基； R 4係H；取代或未取代的C 1-4烷基；或者取代或未取代的C 3-5環烷基； r、s和t中的每一個獨立地是0、1或2； A係延伸子單元殘基； 下標a’係0或1； W係可切割單元； 下標w’係0或1； Y係間隔子單元； 下標y’係0或1；並且 PA係有效載荷殘基。
在一些實施方式中，RG係 或 。
在一些實施方式中，RG係 或 。
在一些實施方式中，R 1a、R 1b、R 2a、R 2b、R 3a、R 3b和R 4中的每一個獨立地是H。
在一些實施方式中，RS係胺基基團或-NR 5aR 5b，其中R 5a和R 5b中的每一個獨立地是H或者取代或未取代的C 1-4烷基。
在一些實施方式中，RS係胺基基團或-N(CH 3) 2。
在一些實施方式中，RS係胺基基團。
在一些實施方式中，RE係鍵、-O-、-OC(=O)-、-OC(=O)NR 6-、-NHC(=O)NR 6-、-OS(=O) 2NR 6-、-NHS(=O) 2NR 6-或-OC(=O)NHS(=O) 2NR 6-；並且R 6係H或者取代或未取代的C 1-4烷基。
在一些實施方式中，R 6係H、甲基、乙基或異丙基。
在一些實施方式中，RE係-OC(=O)NR 6-。
在一些實施方式中，RE係-OC(=O)NH-。
在一些實施方式中，r係0。
在一些實施方式中，s係1。
在一些實施方式中，t係1或2。
在一些實施方式中，A係鍵、-(CH 2) n-C(═O)-、-CH 2-C(═O)-NH-(CH 2) n-C(═O)-、-(CH 2CH 2O)n-CH 2CH 2-C(═O)-、-CH[-(CH 2) n-COOH]-C(═O)-、-CH 2-C(═O)-NH-(CH 2) n-C(═O)-NH-(CH 2) n-C(═O)-或-C(═O)-(CH 2) n-C(═O)-，其中每個n獨立地表示1、2、3、4或5的整數。
在一些實施方式中，W w’係下式之一：
式 (Ia) 或 式 (Ib)，
並且HG係親水性部分或氫。
在一些實施方式中，HG係糖、磷酸酯、硫酸酯、磷酸二酯或膦酸酯。
在一些實施方式中，糖係β-D-半乳糖、N-乙醯基-P-D-半乳胺糖、N-乙醯基-a-D-半乳胺糖、N-乙醯基-P-D-葡糖胺、β-D-葡糖醛酸、a-L-艾杜糖醛酸、a-D-半乳糖、a-D-葡萄糖、β-D-葡萄糖、a-D-甘露糖、β-D-甘露糖、a-L-岩藻糖、β-D-木糖、神經胺酸、其硫酸鹽、磷酸鹽、羧基、胺基或O-乙醯基修飾。在一些實施方式中，HG選自β-D-半乳糖和β-D-葡糖醛酸。
在一些實施方式中，HG係 、 或 。
在一些實施方式中，Y y’係PAB單元。
在一些實施方式中，化合物具有下式： 、 、 、 、 、 、 或 ， 其中變量（例如，BA、PA、A、W、Y、a’、w’、y’、x）的值如上所述。 6.2.5.  方面5
在一些實施方式中，連接子-有效載荷化合物由下式之一或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物和/或立體異構物表示：
編號 結構
LP 4-7 、
LP 4-8 、
LP 4-9 、
LP 4-10 、
LP 4-11 、
LP 4-12 、
LP 4-13 、
LP 4-14 或
LP 4-16 ，
其中PA如以上關於方面1所述之。
在一些實施方式中，連接子-有效載荷化合物係以下中的任一者或其藥學上可接受的鹽和/或溶劑化物： 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
在一些實施方式中，連接子-有效載荷化合物係以下中的任一者或其藥學上可接受的鹽和/或溶劑化物：
編號 結構
2-7 、
2-8 、
2-9 、
2-10 、
2-11 、
2-12 、
2-13 、
2-14 、
2-15 或
2-16 。
6.2.6.  方面6
本文還提供了共價連接子，例如用於在本文所述之平臺和/或ADC中使用。
在（例如，用於在平臺中使用的連接子的）一些實施方式中，連接子係具有式 (III) 之化合物： (III) 或其藥學上可接受的鹽、互變異構物、溶劑化物或立體異構物， RG係反應性基團； RS係開環穩定基團； RE係開環強化子； R 1a和R 1b中的每一個獨立地是H；取代或未取代的C 1-4烷基；取代或未取代的C 3-5環烷基；或者R 1a和R 1b連同它們所附接的原子一起形成取代或未取代的C 3-5環烷基； R 2a和R 2b中的每一個獨立地是H；取代或未取代的C 1-4烷基；取代或未取代的C 3-5環烷基；或者R 2a和R 2b連同它們所附接的原子一起形成取代或未取代的C 3-5環烷基； R 3a和R 3b中的每一個獨立地是H；取代或未取代的C 1-4烷基；取代或未取代的C 3-5環烷基；或者R 3a和R 3b連同它們所附接的原子一起形成取代或未取代的C 3-5環烷基； R 4係H；取代或未取代的C 1-4烷基；或者取代或未取代的C 3-5環烷基； r、s和t中的每一個獨立地是0、1或2； A係延伸子單元；並且 下標a’係0或1。
在一些實施方式中，RG係 或 。
在一些實施方式中，R 1a、R 1b、R 2a、R 2b、R 3a、R 3b和R 4中的每一個獨立地是H。
在一些實施方式中，RS係胺基基團或-NR 5aR 5b，其中R 5a和R 5b中的每一個獨立地是H或者取代或未取代的C 1-4烷基。
在一些實施方式中，RS係胺基基團或-N(CH 3) 2。
在一些實施方式中，RS係胺基基團。
在一些實施方式中，RE係鍵、-O-、-OC(=O)-、-OC(=O)NR 6-、-NHC(=O)NR 6-、-OS(=O) 2NR 6-、-NHS(=O) 2NR 6-或-OC(=O)NHS(=O) 2NR 6-；並且R 6係H或者取代或未取代的C 1-4烷基。
在一些實施方式中，R 6係H、甲基、乙基或異丙基。
在一些實施方式中，RE係-OC(=O)NR 6-。
在一些實施方式中，RE係-OC(=O)NH-。
在一些實施方式中，r係0。
在一些實施方式中，s係1。
在一些實施方式中，t係1或2。
在一些實施方式中，A係鍵、-(CH 2) n-C(═O)R 7、-CH 2-C(═O)-NH-(CH 2) n-C(═O)R 7、-(CH 2CH 2O)n-CH 2CH 2-C(═O)R 7、-CH[-(CH 2) n-COOH]-C(═O)R 7、-CH 2-C(═O)-NH-(CH 2) n-C(═O)-NH-(CH 2) n-C(═O)R 7或-C(═O)-(CH 2) n-C(═O)R 7，其中每個n獨立地表示1、2、3、4或5的整數；R 7係OH或NR 8aR 8b；並且R 8a和R 8b中的每一個獨立地是H；取代或未取代的C 1-4烷基；取代或未取代的C 3-5環烷基；或者R 8a和R 8b連同它們所附接的原子一起形成取代或未取代的C 3-5環烷基。
在一些實施方式中，R 7係OH、NH 2、NHCH 3或N(CH 3) 2。 6.2.7.  方面7
在一些實施方式中，連接子化合物係以下中的任一者或其藥學上可接受的鹽和/或溶劑化物：
編號 結構
1-2 、
1-4 、
1-5 、
1-6 、
1-7 、
1-8 、
1-9 、
1-10 、
1-11 、
1-12 、
1-13 或
1-14 。
6.3.     製得軛合物的方法或過程
本文提供了藉由以下方式製備軛合物製方法：使結合劑（BA）與連接子-有效載荷化合物在適合於在結合劑與連接子-有效載荷化合物之間形成鍵的條件下接觸。反應條件可以係本領域已知的任何合適的反應條件。結合劑可為抗體，並且鍵可以形成抗體-藥物軛合物。
此類反應之實例提供在以下實例中。
在一些實施方式中，製得軛合物製方法包括在偶合條件下將化合物用結合劑處理或使化合物與結合劑接觸。化合物可以包括與至少一種有效載荷鍵合的反應性連接子。該化合物可為本文揭露的任何連接子或平臺化合物。 6.4.     藥物組成物
本文還提供了包含本文闡述的ADC的組成物，包括藥物組成物。在一些實施方式中，組成物（例如，藥物組成物）進一步包含藥學上可接受的賦形劑。
可以藉由將具有期望的純度的抗體藥物軛合物與一或多種視需要的藥學上可接受的載劑混合以凍乾配製物或水性溶液的形式製備根據本揭露內容的藥物組成物（Remington’s Pharmaceutical Sciences[雷明頓氏藥物科學] 第16版，Osol, A.編輯 (1980)）。藥學上可接受的載劑在所採用的劑量和濃度下一般對接受者無毒，並且包括但不限於：緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫胺酸；防腐劑（諸如十八烷基二甲基苄基氯化銨；氯化六甲雙銨；殺藻銨；氯化本索寧；苯酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；和間甲酚）；低分子量（少於約10個殘基）的多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽反離子，諸如鈉；金屬錯合物（例如，Zn-蛋白錯合物）；和/或非離子型界面活性劑，諸如聚乙二醇（PEG）。本文的示例性藥學上可接受的載劑進一步包括間質藥物分散劑，諸如可溶性中性活性透明質酸酶糖蛋白（sHASEGP），例如人可溶性PH-20透明質酸酶糖蛋白，諸如rHuPH20（HYLENEX®，百特國際有限公司（Baxter International, Inc.））。某些示例性sHASEGP和使用方法（包括rHuPH20）描述於美國專利案號US 7,871,607和2006/0104968中。在一方面，將sHASEGP與一或多種另外的糖胺聚糖酶諸如軟骨素酶組合。
示例性凍乾配製物描述於美國專利案號6,267,958中。水性配製物包括美國專利案號6,171,586和WO 2006/044908中描述的那些，後者中描述的配製物包含組胺酸-乙酸鹽緩衝劑。
可以製備持續釋放製劑。持續釋放製劑的合適實例包括含有抗體藥物軛合物的固體疏水性聚合物的半透性基質，該等基質呈成形製品的形式，例如膜或微膠囊。
用於體內投與的配製物通常是無菌的。無菌性可以例如通過無菌過濾膜過濾而容易地實現。 6.5.     使用方法
在一些實施方式中，本文闡述了一種在有需要的受試者（例如，患者）中治療疾病或病症（例如，癌症）之方法，該方法包括向患者投與有效量的本文揭露的ADC。
本文揭露的抗體藥物軛合物可以藉由任何合適的手段投與，包括腸胃外、肺內和鼻內以及（如果期望用於局部治療）病灶內投與。腸胃外輸注包括肌內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投與。給藥可以藉由任何合適的途徑，例如藉由注射，諸如靜脈內或皮下注射，這部分取決於投與是短暫的還是長期的。本文考慮了多種給藥方案，包括但不限於單次投與或在不同時間點的多次投與、推注投與和脈衝輸注。
本揭露內容的抗體藥物軛合物可以以符合良好醫學實踐的方式配製、給藥和投與。關於這點要考慮的因素包括治療的特定障礙、治療的特定哺乳動物、個體患者的臨床病症、障礙的起因、藥劑的遞送位點、投與方法、投與方案、和醫療從業者已知的其他因素。 7. 實例
以下實例旨在示例性的，並且不應當視為以任何方式限制。除非另有說明，否則下文所述實例中的實驗方法為常規方法。除非另有說明，否則試劑和材料係可商購獲得的。採用的所有溶劑和化學品係分析級或化學純度。使用前將溶劑再蒸餾。無水溶劑根據標準方法或參考方法製備。用於柱層析法的矽膠（100-200目）和用於薄層層析法（TLC）的矽膠（GF254）係可從中國的青島海洋化工有限公司（Tsingdao Haiyang Chemical Co., Ltd.）或煙臺化工有限公司（Yantai Chemical Co., Ltd.）商購獲得的；除非另有說明，否則這兩者均用石油醚（60°C-90°C）/乙酸乙酯（v/v）洗脫，並且用碘或者磷鉬酸在乙醇中之溶液目測觀察。除非另有說明，否則所有萃取溶劑均經無水Na 2SO 4乾燥。以TMS（四甲基矽烷）為內標，在Bruck-400、Varian 400MR核磁共振波譜儀上記錄 1H NMR譜。耦合常數以赫茲計給出。峰報告為單峰（s）、雙重峰（d）、三重峰（t）、四重峰（q）、五重峰（p）、六重峰（h）、七重峰（hept）、多重峰（m）或其組合；br代表寬峰。藉由使用配備有在214 nm和254 nm處檢測的二極體陣列檢測器（DAD）和離子阱（ESI源）的Agilent1100,1200高效液相層析-離子阱質譜儀（LC-MSD Trap）記錄LC/MS數據。除試劑以外的所有化合物名稱均藉由ChemDraw ®18.0生成。
為了簡明起見，本文使用某些縮寫。一個實例係表示胺基酸的單字母縮寫。胺基酸及其對應的三字母和單字母縮寫如下：
丙胺酸 Ala （A）
精胺酸 Arg （R）
天冬醯胺 Asn （N）
天冬胺酸 Asp （D）
半胱胺酸 Cys （C）
麩胺酸 Glu （E）
麩醯胺酸 Gln （Q）
甘胺酸 Gly （G）
組胺酸 His （H）
異白胺酸 Ile (I)
白胺酸 Leu （L）
離胺酸 Lys （K）
甲硫胺酸 Met （M）
苯丙胺酸 Phe （F）
脯胺酸 Pro （P）
絲胺酸 Ser （S）
蘇胺酸 Thr （T）
色胺酸 Trp （W）
酪胺酸 Tyr （Y）
纈胺酸 Val （V）
在以下實例中，使用以下縮寫：
TEA 三乙胺
THF 四氫呋喃
MeOH 甲醇
HOBt 1-羥基苯并三唑
DIPEA N,N-二異丙基乙胺
DMF N,N-二甲基甲醯胺
NH 4Cl 氯化銨
LiOH 氫氧化鋰
HCl 鹽酸
TFA 三氟乙酸
K 2CO 3 碳酸鉀
Na 2SO 4 硫酸鈉
EtOAc 乙酸乙酯
製備型HPLC 製備型高效液相層析法
Cu(OAc) 2 無水乙酸銅
Pb(OAc) 4 四乙酸鉛
TSTU 2-琥珀醯亞胺基-1,1,3,3-四甲基脲四氟
Et 2N 二乙胺
r.t. 室溫
MS 質譜分析法
ESI 電灑電離
FA 甲酸
MTBE 甲基三級丁基醚
HPLC 高效液相層析法
FCC 快速柱層析法
DMSO 二甲基亞碸
DSC N,N'-二琥珀醯亞胺基碳酸酯
AcOH 乙酸
Tol 甲苯
DMA 二甲基乙醯胺
DCM 二氯甲烷
TBAB 溴化四丁基銨
HATU 偶氮苯并三氮唑四甲基脲六氟磷酸酯
UPLC 分析方法
方法A：流動相A：0.1% FA的水溶液，B：MeCN；梯度：10%B維持0.2 min，10% - 95%B維持5.8 min，95%B維持0.5 min；流速：0.6 mL/min；柱：ACQUITY UPLC® BEH C18 1.7 µm。
方法B：流動相A：0.1% FA的水溶液，B：MeCN；梯度：10%B維持0.5 min，10% - 90%B維持2.5 min，90%B維持0.2 min；流速：0.6 mL/min；柱：ACQUITY UPLC® BEH C18 1.7 µm。 方法C：流動相A：0.1% FA的水溶液，B：MeCN；梯度：10%B維持0.2 min，10% - 90%B維持1.3 min，90%B維持0.3 min；流速：0.6 mL/min；柱：ACQUITY UPLC® BEH C18 1.7 µm。
可商購獲得的化合物 1-1和 1-3購自MedChemExpress公司。 實例 1-2
步驟1：(S,Z)-4-((2-((三級丁氧羰基)胺基)-1-羧乙基)胺基)-4-側氧基丁-2-烯酸（ 1-2c）
製備 1-2a（445.0 mg，2.18 mmol）和 1-2b（213.7 mg，2.18 mmol）在冰乙酸（10 mL）中之混合物。將混合物在r.t.下攪拌2.5 h。將DCM/己烷（1 : 1，30 mL）添加至反應混合物，然後沈澱出白色固體，將其過濾，並且將固體與Tol共蒸發兩次以去除AcOH，得到呈白色固體的 1-2c（530 mg，約80.4%產率）。
MS (ESI) m/z: 301.2 [M-H]。
步驟2：(S)-3-((三級丁氧羰基)胺基)-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙酸（ 1-2d）
向 1-2c（530 mg，1.75 mmol）在Tol（18 mL）和DMA（1 mL）中之懸浮液中添加TEA（532.3 mg，5.26 mmol）和4Å分子篩，並且然後將混合物加熱至120°C並且在該溫度下攪拌4 h。將混合物真空濃縮以去除Tol，然後藉由製備型HPLC（FA）純化。將級分凍乾，得到呈白色粉末的 1-2d（201 mg，40.3%產率）。
MS (ESI) m/z: 304.3 [M+Na] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.09 (s, 2H), 6.99 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.60 (dd, J = 10.8, 4.0 Hz, 1H), 3.59-3.53 (m, 1H), 3.46-3.38 (m, 1H), 1.32 (s, 9H)。
步驟3：(S)-7-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基-4,8-二側氧基-3,12,15,18,21-五氧雜-5,9-二氮雜二十四烷-24-酸 （ 1-2f）
向 1-2d（25 mg，0.09 mmol）在DMF（1 mL）中之溶液中添加TSTU（26.5 mg，0.09 mmol）和DIPEA（45.5 mg，0.35 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌10 min。將 1-2d轉化為活性酯。添加 1-2e。將混合物在r.t.下攪拌1 h。將反應混合物藉由製備型HPLC（FA 0.1%）純化，並且將級分凍乾，得到呈白色粉末的 1-2f（22 mg，46.5%產率）。
MS (ESI) m/z: 554.5 [M+Na] +。
步驟4：(S)-1-胺基-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-3-側氧基-7,10,13,16-四氧雜-4-氮雜十九烷-19-酸TFA鹽（ 1-2）
將 1-2f（22.0 mg，0.04 mmol）在DCM/TFA（1 : 1，2 mL）中之混合物在r.t.下攪拌1 h。將混合物真空濃縮，得到粗製產物，並且然後溶解在水中進行凍乾。獲得呈黃色泡沫狀固體的 1-2（17.5 mg，TFA鹽）。
MS (ESI) m/z: 432.4 [M+H] +。 實例 1-4
步驟1：(S)-(2-胺基-3-羥丙基)胺基甲酸三級丁基酯（ 1-4b）
向 1-4a（2.0 g，6.17 mmol）（合成參考文獻： Journal of Medicinal Chemistry[藥物化學雜誌] , 1998 ，第 41 卷， # 15 ，第 2786 - 2805頁）在MeOH（10 mL）中之混合物中添加濕Pd/C（106 mg）。將黑色懸浮液用H 2氣球吹掃3次，然後在r.t.下在H 2氣球下攪拌1 h。將混合物用注射器頭過濾並用MeOH/H 2O（5 : 1，10 mL）洗滌。將合併的有機層真空濃縮，得到呈無色油狀物的 1-4b （1.3 g，粗製物）。
MS (ESI) m/z: 191.2 [M+H] +。
步驟2：(S,Z)-4-((1-((三級丁氧羰基)胺基)-3-羥基丙-2-基)胺基)-4-側氧基丁-2-烯酸（ 1-4d）
在r.t.下向 1-4b（934 mg，4.91 mmol）在DCM（15 mL）中之溶液中逐滴添加在DCM（20 mL）中之 1-4c（481.43 mg，4.91 mmol）。將混合物真空濃縮，得到殘餘物。將其溶解在ACN中並藉由製備型HPLC（FA 0.1%）純化。將級分真空濃縮，得到呈無色油狀物的 1-4d（1010 mg，71.4%產率）。
MS (ESI) m/z: 311.3 [M+Na] +。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 7.98 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.36 (s, 2H), 5.22 (t, J= 6.3 Hz, 1H), 3.99 (m, 1H), 3.81 (dd, J= 12.2, 2.8 Hz, 1H), 3.64 (dd, J= 12.2, 3.2 Hz, 1H), 3.45 – 3.24 (m, 3H), 1.45 (s, 9H)。
步驟3：(S)-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-3-羥丙基)胺基甲酸三級丁基酯（ 1-4e）
向 1-4d（1010.0 mg，3.50 mmol）在Tol（40 mL）中之溶液中添加4Å分子篩（300 mg）和TEA（1063.5 mg，10.51 mmol）。將懸浮液用N 2氣球吹掃三次並加熱至120°C持續過夜。將混合物過濾並用EtOAc（50 mL）洗滌，用1 N KHSO 4（30 mL* 2）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾並且藉由使用（石油醚/EtOAc = 0%-65%）作為流動相的FCC純化，並且將級分真空濃縮，得到呈灰白色固體的 1-4e（470 mg，49%產率）。
MS (ESI) m/z: 293.2 [M+Na] +。
1H NMR (400 MHz, cdcl 3) δ 6.71 (s, 2H), 4.93 (m, 1H), 4.28 (td, J= 9.6, 4.8 Hz, 1H), 3.90 (d, J= 5.2 Hz, 2H), 3.66 (dt, J= 14.8, 7.6 Hz, 1H), 3.46 – 3.39 (m, 1H), 1.40 (s, 9H)。
步驟4：(S)-7-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基-4,10-二側氧基-3,9,14,17,20,23-六氧雜-5,11-二氮雜二十六烷-26-酸（ 1-4g）
向 1-4e（110 mg，0.41 mmol）在DMF（3 mL）中之溶液中添加DSC（114.7 mg，0.45 mmol）和DIPEA（57.9 mg，0.45 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌2 h，並且混合物變成棕色混合物。添加 1-4f（140.4 mg，0.53 mmol）並在r.t.下攪拌30 min。將混合物藉由製備型HPLC（FA）純化，並且將級分凍乾，得到呈白色固體的 1-4g（64 mg，28%產率）。
MS (ESI) m/z: 584.5 [M+Na] +。
步驟5：(S)-1-胺基-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-5-側氧基-4,9,12,15,18-五氧雜-6-氮雜二十一烷-21-酸（TFA鹽）（ 1-4）
將 1-4g（32 mg，0.057 mmol）在TFA/DCM（1 : 1，1 mL）中之溶液在r.t.下攪拌10 min。將混合物真空濃縮並溶解在水/ACN（2 mL）中，並且凍乾，得到呈淡黃色油狀物的 1-4（25.2 mg）。
MS (ESI) m/z: 462.4 [M+H] +。 實例 1-5
步驟1：(S)-7-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2,2-二甲基-4,10-二側氧基-3,9-二氧雜-5,11-二氮雜十四烷-14-酸三級丁基酯（ 1-5b）
向 1-4e（107 mg，0.40 mmol）在DMF（3 mL）中之溶液中添加DSC（121.7 mg，0.48 mmol）和DIPEA（76.8 mg，0.59 mmol）。將混合物在RT下攪拌2 h，並且變成棕色混合物。添加 1-5a（93.5 mg，0.52 mmol）並在r.t.下攪拌30 min。將該混合物藉由製備型HPLC（FA 0.1%）純化，並且將級分凍乾，得到呈白色固體的 1-5b（69 mg，40%產率）。
MS (ESI) m/z: 464.4 [M+Na] +。
步驟2：(S)-3-(((3-胺基-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙氧基)羰基)胺基)丙酸HCl鹽 （ 1-5c）
將 1-5b（69 mg，0.16 mmol）在4 M HCl/EtOAc（3 mL）中之溶液在冰浴中攪拌1 h。將混合物真空濃縮，得到呈灰白色固體的 1-5c（55 mg，粗製物）。
MS (ESI) m/z: 286.2 [M+H] +。
步驟3：(S)-3-(((3-(二甲基胺基)-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙氧基)羰基)胺基)丙酸（ 1-5）
向 1-5c（55 mg，0.19 mmol）在DCM中之懸浮液中添加在水中之30%甲醛（5.8 g，200當量）。將混合物在r.t.下攪拌10 min，然後添加NaBH(OAc) 3（102.1 mg，0.48 mmol），並在r.t.下攪拌1 h。使用N 2氣泡去除DCM，並且將剩餘物藉由製備型HPLC（FA）純化，得到呈淡黃色油狀物的 1-5（13.4 mg，22%產率）。
MS (ESI) m/z: 314.3 [M+H] +。 實例 1-6
步驟1：(S)-3-(2-(((苄氧基)羰基)胺基)-3-((三級丁氧羰基)胺基)丙氧基)丙酸乙基酯（ 1-6b）
在冰浴中向 1-4a（9.3 g，28.7）、TBAB（924.2 mg，2.87 mmol）和 1-6a（26.0 g，143.4 mmol）在DCM（100 mL）中之混合物中逐滴添加50% wt NaOH水溶液（40 mL）。使混合物升溫至r.t.並在r.t.下攪拌過夜。將混合物在冰浴中用1 N KHSO 4酸化至pH = 3，並用DCM（100 mL * 3）萃取。將合併的有機層用鹽水（50 mL * 2）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，並真空濃縮，得到呈黃色油狀物的 1-6b（12 g，粗製物）。
MS (ESI) m/z: 447.4 [M+Na] +。
步驟2：(S)-3-(2-(((苄氧基)羰基)胺基)-3-((三級丁氧羰基)胺基)丙氧基)丙酸（ 1-6c）
向 1-6b（12 g，粗製物）在MeOH（50 mL）中之溶液中添加2N LiOH（10 mL）。將混合物在r.t.下攪拌4 h。將混合物在冰浴中用1 N KHSO4酸化至pH = 3，並用EA（100 mL * 3）萃取。將合併的有機層用鹽水（100 mL）洗滌，經Na 2SO 4乾燥並過濾，並且將濾液真空濃縮，得到殘餘物。將其藉由FCC（EA/PE = 40%-100%作為流動相）純化，得到呈無色透明油狀物的 1-6c（2.7 g粗製物）。
MS (ESI) m/z: 419.3 [M+Na] +。
步驟3：(S)-3-(3-((三級丁氧羰基)胺基)-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙氧基)丙酸（ 1-6d）
向 1-6c（2 g，粗製物）在MeOH（30 mL）中之溶液中添加濕Pd/C（200 mg），然後將混合物在r.t.下攪拌30 min。將黑色懸浮液通過注射器頭過濾，用H 2O洗滌，然後真空濃縮，得到殘餘物，然後溶解在水（30 mL）中，並且用EA（50 mL *3）萃取。將水相真空濃縮，得到呈無色透明油狀物的 1-6d（930 mg）。
MS (ESI) m/z: 263.4 [M+H] +。
步驟4：(S)-3-(3-((三級丁氧羰基)胺基)-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙氧基)丙酸（ 1-6f）
在冰浴中向 1-6d （930 mg，粗製物）在飽和NaHCO 3（10 mL）中之混合物中添加 1-6e（827.3 mg，5.9 mmol），並攪拌20 min，然後升溫至r.t.，持續1 h。將混合物在冰浴中用1 N KHSO 4酸化至pH = 3，並用EA（20 mL *3）萃取，並且將合併的有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾，並且將濾液真空濃縮，得到殘餘物。將其藉由製備型HPLC（FA）純化，得到呈白色固體的 1-6f（189 mg）。
MS (ESI) m/z: 365.3 [M+H] +。
步驟5：(S)-3-(3-((三級丁氧羰基)胺基)-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙氧基)丙酸HCl鹽（ 1-6）
將 1-6f（26 mg，0.08 mmol）在4 N HCl/EtOAc（1 mL）中之溶液在r.t.下攪拌1 h。將懸浮液過濾並用EtOAc洗滌，得到呈白色固體的 1-6（12.1 mg）。
MS (ESI) m/z: 243.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, dmso) δ 12.25 (s, 1H), 8.16 (s, 3H), 7.12 (s, 1H), 4.47 – 4.37 (m, 1H), 3.69 (d, J= 10.8 Hz, 2H), 3.66 – 3.57 (m, 2H), 3.34 (m, 1H), 3.15 (d, J= 11.6 Hz, 1H), 2.45 (t, J= 6.4 Hz, 2H)。 實例 1-7
步驟1：(S)-3-(3-(((苄氧基)羰基)胺基)-2-((三級丁氧羰基)胺基)丙氧基)丙酸乙基酯（ 1-7b）
向 1-7a（5.0 g，15.41 mmol）（購自無錫）、TBAB（496.9 mg，1.54 mmol）和 1-6a（14.0 g，77.07 mmol）在DCM（50 mL）中之混合物中逐滴添加50% wt NaOH水溶液（7.2 g，77.07 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌過夜。將混合物用DCM（100 mL）稀釋，並用DCM（50 mL * 2）萃取。將合併的有機層用鹽水（50 mL * 2）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，並真空濃縮，得到殘餘物。將其藉由矽膠柱層析法（PE/EA = 0%-30%）純化，並且將級分真空濃縮，得到呈無色透明油狀物的 1-7b（3.06 g，約46.8%純度）。
MS (ESI) m/z: 447.4 [M+Na] +。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ7.32 (m, 5H), 5.35 (s, 1H), 5.18-5.04 (m, 2H), 4.19 -4.09 (dq, J= 6.8, 1.6 Hz 2H), 3.82 (m, 1H), 3.69 (m, 2H), 3.56 (dd, J= 9.2, 3.6 Hz, 1H), 3.47 (dd, J= 9.6, 5.2 Hz, 1H), 3.45-3.37 (m, 1H), 3.36-3.25 (m, 1H), 2.55 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.24 (t, J= 7.2 Hz, 3H)。
步驟2：(S)-3-(3-(((苄氧基)羰基)胺基)-2-((三級丁氧羰基)胺基)丙氧基)丙酸（ 1-7c）
向 1-7b（3.06 g，7.21 mmol）在MeOH（30 mL）中之溶液中添加4 N NaOH（2.7 mL，10.8 mmol），並且然後在r.t.下攪拌12 h。將混合物用水（30 mL）稀釋並在冰浴中用1 N KHSO 4酸化至pH = 3，並用EtOAc（50 mL * 4）萃取。將合併的有機層用鹽水（50 mL * 3）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，並且將濾液真空濃縮，得到呈無色透明油狀物的 1-7c（2.8 g，98%產率）。
MS (ESI) m/z: 419.3 [M+Na] +。
步驟3：(S)-3-(3-胺基-2-((三級丁氧羰基)胺基)丙氧基)丙酸（ 1-7d）
向 1-7c（2.8 g，7.1 mmol）在MeOH（30 mL）中之溶液中添加濕Pd/C（250 mg），並且然後在r.t.下攪拌30 min。將黑色懸浮液通過注射器頭過濾，用H 2O洗滌，並且然後真空濃縮，得到呈白色固體的 1-7d（1.85 g）。
MS (ESI) m/z: 263.2 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, d 2o) δ 4.1~3.9 (m, 1H), 3.73 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 3.64 (dd, J= 10.4, 4.4 Hz, 1H), 3.57 (dd, J= 10.4, 5.2 Hz, 1H), 3.22 (dd, J= 13.2, 4.4 Hz, 1H), 3.08 (dd, J= 13.2, 8.0 Hz, 1H), 2.45 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H)。
步驟4：(S)-3-(2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙氧基)丙酸（ 1-7e）
向 1-7d（500 mg，1.91 mmol）在1 N NaHCO 3（10 mL）中之溶液中添加 1-6e（397.7 mg，2.86 mmol）。將混合物在0°C下攪拌30 min，然後緩慢升溫至r.t.，持續2 h。將混合物在冰浴中用1 N KHSO 4酸化至pH = 3，並用EtOAc（20 mL * 2）萃取。將合併的有機層用鹽水（20 mL）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，並且將濾液真空濃縮，得到呈白色固體的 1-7e （560 g，85.8%產率）。
MS (ESI) m/z: 365.3 [M+Na] +。
1H NMR (400 MHz, cdcl 3) δ 6.69 (s, 2H), 5.06 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 4.08~3.97 (m, 1H), 3.82~3.68 (m, 3H), 3.59 (dd, J= 14.0, 3.6 Hz, 2H), 3.51 (dd, J= 9.6, 4.4 Hz, 1H), 2.64 (t, J= 6.2 Hz, 1H), 1.38 (s, 9H)。
步驟5：(S)-(1-(3-(二甲基胺基)-3-側氧基丙氧基)-3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙-2-基)胺基甲酸三級丁基酯（ 1-7f）
向 1-7e（50 mg，0.15 mmol）在DMF（2 mL）中之溶液中添加HATU（55.5 mg，0.15 mmol）、DIPEA（56.6 mg，0.44 mmol）和二甲基胺鹽酸鹽（11.9 mg，0.15 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌30 min。將混合物用EtOAc（20 mL）稀釋，用鹽水（15 mL * 3）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，並且將濾液真空濃縮，得到殘餘物。將其藉由FCC（MeOH/DCM = 0%-5%作為流動相）純化，得到呈黃色油狀物的 1-7f（35 mg，64.9%產率）。
MS (ESI) m/z: 392.4 [M+Na] +。
步驟6：(S)-3-(2-胺基-3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙氧基)-N,N-二甲基丙醯胺TFA鹽（ 1-7）
將 1-7f（35 mg，0.095 mmol）在DCM/TFA（1 : 1，2 mL）中之溶液在r.t.下攪拌10 min。將混合物真空濃縮，得到殘餘物，然後將其溶解在水（20 mL）中，並用EtOAc（20 mL * 3）萃取。將水相凍乾，得到呈棕色油狀物的1-7（38.5 mg）。
MS (ESI) m/z: 392.4 [M+Na] +。
1H NMR (400 MHz, dmso) δ 8.05 (s, 3H), 7.09 (s, 2H), 3.73 – 3.55 (m, 6H), 3.53 – 3.42 (m, 1H), 2.97 (s, 3H), 2.83 (s, 3H), 2.58 (t, J = 6.4 Hz, 2H)。 實例 1-8
步驟1：( S)-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)-3-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)丙基)胺基甲酸三級丁基酯（ 1-8a）
在r.t.下向 1-4e（81 mg，0.3 mmol）和雙(4-硝基苯基)碳酸酯（100.2 mg，0.33 mmol）在DMF（2.3 mL）中之溶液中添加DIPEA（81.6 ml，0.45 mmol）。添加後，將混合物在r.t.下攪拌過夜。將混合物用EtOAc稀釋並且將有機層用飽和NH 4Cl水溶液、H 2O和鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾，並且將濾液真空濃縮，得到殘餘物。將粗製產物用MTBE研磨並過濾，得到呈白色固體的目標產物 1-8a（91 mg，70%產率）。
MS (ESI) m/z: 458.4 [M+Na] +。
步驟2：(2-(二甲基胺基)-2-側氧基乙基)(甲基)胺基甲酸(9 H-茀-9-基)甲基酯（ 1-8c）
向 1-8b（1.0 g，3.2 mmol）在DMF（15 mL）中之溶液中添加HATU（1.34 g，3.53 mmol）、DIPEA（1.24 g，9.63 mmol）和二甲基胺鹽酸鹽（314 mg，3.85 mmol）。將反應物在r.t.下攪拌30 min。將混合物用EtOAc（100 mL）稀釋，用鹽水（15 mL x 3）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，並且將濾液真空濃縮，得到殘餘物。將其FCC（MeOH/DCM = 0%-5%作為流動相），得到呈黃色油狀物的 1-8c（1.75 g，＞ 100%產率）（含有1-羥基-7-氮雜苯并三唑（HOAt））。
MS (ESI) m/z: 339.3 [M+H] +。
步驟3： N, N-二甲基-2-(甲基胺基)乙醯胺（ 1-8d）
向 1-8c（100.0 mg，0.30 mmol）在DMF（3 mL）中之溶液中添加Et 2NH（252 mg，3.0 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌20 min。將反應混合物真空濃縮並與甲苯共蒸發兩次，得到呈棕色固體的 1-8d，將其直接用於下一步驟中。
步驟4：(2-(二甲基胺基)-2-側氧基乙基)(甲基)胺基甲酸( S)-3-((三級丁氧羰基)胺基)-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)丙基酯（ 1-8f）
在r.t.下向 1-8e（50.0 mg，0.115 mmol）在DMF（1 mL）中之溶液中添加粗製固體 1-8d和DIPEA（44.5 mg 0.345 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌30 min。將反應混合物用DMF稀釋並用0.1 NHCl酸化。將混合物藉由製備型HPLC（FA）純化，並且將級分凍乾，得到呈淡黃色固體的 1-8f（17.2 mg，36.3%產率）。
MS (ESI) m/z: 435.4 [M+Na] +。
步驟5：(2-(二甲基胺基)-2-側氧基乙基)(甲基)胺基甲酸(S)-3-胺基-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙基酯（ 1-8）
將 1-8f（7.7 mg，0.021 mmol）在TFA/DCM（1 : 1，0.6 mL）中之溶液在r.t.下攪拌60 min。將混合物真空濃縮並溶解在水/ACN（1 : 1，2 mL）中，並且凍乾，得到呈白色固體的 1-8（7.8 mg，約100%產率）。
MS (ESI) m/z: 313.3 [M+H] +。 實例 1-9
步驟1：(3-(二甲基胺基)-3-側氧基丙基)胺基甲酸苄基酯（ 1-9b）
向 1-9a（1.116 g，5 mmol）在DMF（25 mL）中之溶液中添加HATU（2.09 g，5.5 mmol）、DIPEA（1.94 g，15 mmol）和二甲基胺鹽酸鹽（489 mg，6 mmol）。將反應物在r.t.下攪拌30 min。將混合物用EtOAc（100 mL）稀釋，用鹽水（15 mL x 3）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，並且將濾液真空濃縮，得到殘餘物。將其藉由FCC（MeOH/DCM = 0%-5%作為流動相）純化，得到呈黃色油狀物的 1-9b（0.987 g，79%產率）。
MS (ESI) m/z: 251.2 [M+H] +。
步驟2：3-胺基- N, N-二甲基丙醯胺（ 1-9c）
在r.t.下向 1-9b（500 mg，2.0 mmol）在MeOH（5 mL）中之懸浮液中添加Pd/C（50 mg，10% wt/wt）。將氣氛替代為H 2，並且將混合物在r.t.下攪拌2 h。將混合物通過矽藻土墊過濾，並且將濾液真空濃縮，得到呈無色油狀物的粗製產物 1-9c（233 mg，約100%產率），將其直接用於下一步驟。
MS (ESI) m/z: 117.0 [M+H] +。
步驟3：3-(異丙基胺基)- N, N-二甲基丙醯胺（ 1-9d）
在r.t.下向 1-9c（233 mg，2.0 mmol）和丙酮（232.3 mg，4.0 mmol）在MeOH（9 mL）中之溶液中添加NaBH 3CN（510.8 mg，8.0 mmol）。將反應物在r.t.下攪拌18 h。將混合物真空濃縮，並且將殘餘物重新溶解在DCM（20 mL）中並用飽和NaHCO 3（10 mL）、H 2O（10 mL）、鹽水（10 mL）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，並且將濾液真空濃縮，得到呈淡綠色油狀物的粗製目標產物 1-9d （164 mg，52%產率）。
MS (ESI) m/z: 159.1 [M+H] +。
步驟4：(3-(二甲基胺基)-3-側氧基丙基)(異丙基)胺基甲酸( S)-3-((三級丁氧羰基)胺基)-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)丙基酯（ 1-9e）
在r.t.下向 1-8e（30.0 mg，0.115 mmol）在DMF（1 mL）中之溶液中添加粗製油狀物 1-9d（33 mg，0.21 mmol）和DIPEA（27 mg，0.21 mmol）。將反應物在r.t.下攪拌30 min。將反應混合物用DMF稀釋並用0.1 NHCl酸化。將混合物藉由製備型HPLC（FA）純化，並且將級分凍乾，得到呈白色固體的 1-9e（22.5 mg，58.8%產率）。
MS (ESI) m/z: 477.4 [M+Na] +。
步驟5：(3-(二甲基胺基)-3-側氧基丙基)(異丙基)胺基甲酸(S)-3-胺基-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙基酯三氟乙酸鹽（ 1-9）
將 1-9e（22.5 mg，0.0495 mmol）在TFA/DCM（1 : 1，1.2 mL）中之溶液在r.t.下攪拌60 min。將混合物真空濃縮並溶解在水/ACN（1 : 1，2 mL）中，並且凍乾，得到呈白色固體的 1-9（23.2 mg，約100%產率）。
MS (ESI) m/z: 355.3 [M+H] +。 實例 1-10
步驟1：(3-側氧基丙烷-1,2-二基)(S)-二胺基甲酸苄基三級丁基酯（ 1-10a）
將(COCl) 2（3.9 g，30.83 mmol）在DCM（50 mL）中之溶液冷卻至-70°C，逐滴添加DMSO（3.6 g，46.24 mmol），然後在-70°C下攪拌30 min。將 1-4a（5.0 g，15.41 mmol）溶解在DMSO（10 mL）中並通過注射器添加，然後在-70°C下攪拌30 min。逐滴添加TEA（7.8 g，77.1 mmol），並且然後緩慢升溫至r.t.。將混合物倒入水（100 mL）中並用EtOAc（50 mL * 2）萃取。將合併的有機層用鹽水（100 mL*2）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，並且將濾液真空濃縮，得到殘餘物。將其藉由FCC（EA/PE = 1%-50%作為流動相）純化，並且將級分真空濃縮，得到呈黃色油狀物的 1-10a（4.86 g，97.8%產率）。
1H NMR (400 MHz, cdcl3) δ 9.64 (s, 1H), 7.39 – 7.30 (m, 5H), 5.93 (s, 1H), 4.86 (s, 1H), 4.35-4.22(m, 1H), 3.77 – 3.64 (m, 1H), 3.56 (dt, J = 14.8, 4.8 Hz, 1H), 1.40 (s, 9H)。
步驟2：(R)-6-(((苄氧基)羰基)胺基)-7-((三級丁氧羰基)胺基)庚-4-烯酸乙基酯（ 1-10c）
在0°C下向 1-10b（6.5 g，14.3 mmol）在Tol（30 mL）中之懸浮液中逐滴添加t-BuOK（在THF中之1 M溶液，14.5 mL，14.5 mmol）。混合物在30 min內變成深色。在-70°C下逐滴添加在Tol（20 mL）中之 1-10a（2.0 g，6.2 mmol），然後緩慢升溫至r.t.。將混合物藉由添加飽和NH 4Cl（50 mL）淬滅。在分離後，將Tol相用鹽水（30 mL * 2）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，並且將濾液真空濃縮，得到殘餘物。藉由FCC（EA/PE = 0%-30%-50%）進行純化得到呈白色固體的 1-10c（808 mg，30.8%產率）。
MS (ESI) m/z: 443.4 [M+Na]+。
1H NMR (400 MHz, cdcl3) δ 7.40 – 7.27 (m, 5H), 5.72~5.60 (m, 0.2 H), 5.60 – 5.46 (m, 0.8H), 5.40 (dd, J = 16.0 Hz, 6.4 Hz, 0.2H), 5.34~5.20 (m, 1.8 H), 4.95~4.70 (m, 1 H), 5.16~5.01 (m, 2H) , 4.60~4.40 (m, 1 H),4.12 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.39 – 3.08 (m, 2H), 2.6~2.2 (m, 4H), 1.42 (s, 9H), 1.24 (t, J = 7.2 Hz, 1H)。
步驟3：(R)-6-(((苄氧基)羰基)胺基)-7-((三級丁氧羰基)胺基)庚-4-烯酸（ 1-10d）
向 1-10c（808.0 mg，1.92 mmol）在MeOH（10 mL）中之溶液中添加4 N NaOH（1.92 mL，7.69 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌3.5 h。將混合物用水（20 mL）稀釋，用飽和KHSO 4酸化至pH = 3，並用EtOAc（30 mL * 3）萃取。將合併的有機層用鹽水（50 mL）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，並且將濾液真空濃縮，得到呈白色固體的 1-10d（781 mg）。
MS (ESI) m/z: 415.4 [M+Na] +。
步驟4：(R)-6-胺基-7-((三級丁氧羰基)胺基)庚酸（ 1-10e）
向 1-10d（781.0 mg，1.99 mmol）在MeOH（8 mL）中之溶液中添加濕Pd/C（67 mg），然後在r.t.下攪拌24 h。將黑色懸浮液通過注射器頭過濾，用MeOH/H 2O（5 : 1，30 mL）洗滌，然後真空濃縮，得到呈白色固體的 1-10e（510 mg，98.5%產率）。
MS (ESI) m/z: 261.3 [M+H] +。
步驟5：(R)-7-((三級丁氧羰基)胺基)-6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)庚酸（ 1-10f）
在0°C下向 1-10e（510 mg，1.96 mmol）在1 N NaHCO 3（10 mL）中之混合物中添加 1-6e（455.8 mg，2.94 mmol），然後在0°C下攪拌30 min並且使其升溫至r.t.，持續3 h。將反應物用飽和KHSO 4酸化至pH = 3，並用EtOAc（30 mL * 3）萃取。將合併的有機層用鹽水（50 mL）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，並且將濾液濃縮，得到殘餘物。將其藉由FCC（MeOH/DCM = 0%-5%）純化。將級分真空濃縮，得到呈淡黃色油狀物的 1-10f（590 mg，85%產率）。
MS (ESI) m/z: 363.3 [M+Na] +。
步驟6：(R)-(7-(二甲基胺基)-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-7-側氧基庚基)胺基甲酸三級丁基酯（ 1-10g）
向 1-10f（53 mg，0.16 mmol）在DMF（2 mL）中之溶液中添加HATU（71.6 mg，0.19 mmol）、DIPEA（44.3 mg，0.34 mmol）和二甲基胺鹽酸鹽（14.0 mg，0.17 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌30 min。將混合物用EtOAc（20 mL）稀釋，用鹽水（15 mL * 3）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，並且將濾液真空濃縮，得到殘餘物。將其藉由FCC（MeOH/DCM = 0%-5%作為流動相）純化，得到呈黃色油狀物的 1-10g（53 mg，92.1%產率）。
MS (ESI) m/z: 390.4 [M+Na] +。
步驟7：(R)-7-胺基-6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N,N-二甲基庚醯胺TFA鹽（ 1-10）
將 1-10g（30 mg，0.08 mmol）在DCM/TFA（1 : 1，2 mL）中之溶液在r.t.下攪拌10 min。將混合物真空濃縮，得到殘餘物，然後將其溶解在水（20 mL）中並用EtOAc（20 mL * 3）萃取。將水相凍乾，得到呈棕色油狀物的 1-10（33 mg）。
MS (ESI) m/z: 268.3 [M+H] +。 實例 1-11
步驟1：(S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-4-((三級丁氧羰基)胺基)丁酸甲基酯（ 1-11b）
將 1-11a（4.00 g，9.08 mmol）和K 2CO 3（1.38 g，9.99 mmol）添加至DMF（10 mL），之後在0°C下逐滴添加CH 3I（2.58 g，18.16 mmol）。將所得混合物在0°C下攪拌20 min並且使其升溫至25°C並在25°C下進一步攪拌30 min。完全反應後，將反應混合物用EA（50 mL）稀釋並用鹽水（25 mL*3）和H 2O（25 mL*2）洗滌。將有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到呈淺黃色固體的 1-11b（4.08 g，定量）。
MS (ESI) m/z: 477.4 [M+Na] +。
步驟2：(4-羥基丁烷-1,3-二基)(S)-二胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲基三級丁基酯（ 1-11c）
將 1-11b（1.00 g，2.20 mmol）溶解在THF（55 mL）和EtOH（55 mL）中，之後在0°C下連續添加NaBH 4（499 mg，13.20 mmol）和LiCl（616 mg，14.52 mmol）。將所得混合物在25°C下攪拌1.5 h。完全反應後，添加飽和NH 4Cl水溶液（10 mL）以淬滅反應。將反應混合物用H 2O（50 mL）稀釋，並用EA（35 mL*3）萃取。將合併的有機層用鹽水（30 mL*2）和水（30 mL*2）洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾，並減壓濃縮，得到呈白色固體的 1-11c（938 mg，定量）。將產物不經純化直接用於下一步驟。
MS (ESI) m/z: 449.4 [M+Na] +。
1H NMR (400 MHz, d 6-DMSO) δ7.86 (d, J=7.2 Hz, 2H), 7.70-7.67 (m, 2H), 7.39 (t, J=7.2 Hz, 2H), 7.32-7.29 (m, 2H), 7.07-7.05 (m, 1H), 6.67 (t, J=5.2 Hz, 1H), 6.51 (s, 1H), 4.62 (br s, 1 H), 4.29-4.17 (m, 3H), 3.41-3.38 (m, 1H), 3.25-3.24 (m, 1H), 2.98-2.95 (m, 1H), 2.86-2.83 (m, 1H), 1.33 (s, 9H)。
步驟3：(4-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)丁烷-1,3-二基)(S)-二胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲基三級丁基酯（ 1-11d）
將 1-11c（850 mg，1.87 mmol）和雙(4-硝基苯基)碳酸酯（1.14 g，3.74 mmol）溶解在DMF（5 mL）中，之後添加DIPEA（363 mg，2.81 mmol）。將所得混合物在25°C下攪拌1.5 h。完全反應後，將反應混合物用EA（100 mL）稀釋並用鹽水（35 mL*2）和水（35 mL*2）洗滌。將有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾並減壓濃縮，得到呈白色固體的 1-11d（890 mg，80.4%產率）。
MS (ESI) m/z: 614.4 [M+Na] +。
步驟4：(4-(((3-(二甲基胺基)-3-側氧基丙基)胺基甲醯基)氧基)丁烷-1,3-二基)(S)-二胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲基三級丁基酯（ 1-11f）
將 1-11d（360 mg，0.61 mmol）和 1-11e（141 mg，1.22 mmol）溶解在DMF（5 mL）中，之後添加DIPEA（157 mg，1.22 mmol）。將所得混合物在25°C下攪拌2.5 h。完全反應後，將反應混合物濃縮並藉由快速柱層析法（DCM/MeOH）純化，得到呈淡黃色固體的 1-11f（260 mg，75.1%產率）。
MS (ESI) m/z: 592.5 [M+Na] +。
步驟5：(S)-(3-胺基-4-(((3-(二甲基胺基)-3-側氧基丙基)胺基甲醯基)側氧基)丁基)胺基甲酸三級丁基酯（ 1-11g）
將 1-11f（260 mg，0.46 mmol）溶解在DMF（3 mL）中，之後添加Et 2NH（334 mg，4.57 mmol）。將所得混合物在25°C下攪拌15 min。完全反應後，將反應混合物減壓濃縮，得到呈淺棕色漿料的 1-11g（158 mg，定量），將其直接用於下一步驟。
MS (ESI) m/z: 347.4 [M+H] +。
步驟6：(3-(二甲基胺基)-3-側氧基丙基)胺基甲酸(S)-4-((三級丁氧羰基)胺基)-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁基酯（ 1-11i）
將 1-11g（64 mg，0.18 mmol）和 1-11h（43 mg，0.28 mmol）溶解在ACN（2 mL）和NaHCO 3水溶液（1 M，4 mL）的混合溶液中。首先將混合物在0°C下攪拌30 min並且在25°C下進一步攪拌40 min。完全反應後，將反應混合物用KHSO 4水溶液（2 M）調整至pH約4，用EA（60 mL）稀釋並用鹽水（30 mL）和H 2O（30 mL*2）洗滌。將有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾並濃縮，得到作為粗製產物的黃色油狀物，將其藉由快速柱層析法（DCM/MeOH）純化，得到呈白色固體的 1-11i（60 mg，76.2%產率）。
MS (ESI) m/z: 449.5 [M+Na] +。
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ6.79 (s, 2H), 6.56-6.54 (m, 1H), 4.34-4.31 (m, 2H), 4.23-4.16 (m, 1H), 3.31-3.30 (m, 2H), 3.01-2.99 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.55-2.52 (m, 2H), 2.17-2.08 (m, 1H), 1.86-1.77 (m, 1H), 1.41 (s, 9H)。
步驟7：(3-(二甲基胺基)-3-側氧基丙基)胺基甲酸(S)-4-胺基-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁基酯（ 1-11）
將 1-11i（55 mg，0.13 mmol）溶解在DCM（3 mL）中，之後添加TFA（1 mL）。將所得混合物在25°C下攪拌20 min。完全反應後，將反應混合物減壓濃縮，得到呈澄清油狀物的 1-11（TFA鹽，54 mg，定量）。
MS (ESI) m/z: 327.3 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, d 6-DMSO) δ7.78 (s, 3H), 7.05 (s, 2H), 4.28-4.13 (m, 3H), 3.12 (dd, J 1=12.8 Hz, J 1=6.8 Hz, 2H), 2.91 (s, 3H), 2.79-2.73 (m, 5H), 2.39 (t, J=7.2 Hz, 2H), 2.12-2.07 (m, 1H), 1.96-1.90 (m, 1H)。 實例 1-12
步驟1：3-胺基丙酸甲基酯（ 1-12b）
將SOCl 2（13.4 g，112.2 mmol）逐滴添加至化合物 1-12a（5 g，56.1 mmol）在MeOH（100 mL）中之懸浮液。將混合物在70°C下攪拌16 h。將混合物濃縮，得到粗製化合物。將粗製化合物藉由快速柱層析法（用DCM/MeOH = 0% - 20%洗脫）進一步純化。獲得呈灰白色固體的化合物 1-12b（3.2 g，55.3%）。
MS (ESI) m/z: 130.1 [M+Na] +。
步驟2：3-異氰酸基丙酸甲基酯（ 1-12c）
將在CH 2Cl 2（5 mL）和飽和NaHCO 3（水）溶液（5 mL）中之化合物 1-12b（500 mg，4.85 mmol）脫氣，並且將燒瓶冷卻在冰水浴中。在0°C下在惰性氣氛下一次性添加三光氣（1.44 g，4.85 mmol）。將反應物經2.5 h在0°C下攪拌至r.t.。將反應物用水（100 mL）稀釋並倒入分液漏斗中。將各層分離，並且將水層用CH 2Cl 2萃取。將合併的有機萃取物用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，並減壓濃縮，獲得呈黃色液體的粗製化合物 1-12c（426 mg，68.1%產率），將其不經純化直接用於下一反應。
步驟3：(3-(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)丙烷-1,2-二基)(S)-二胺基甲酸苄基三級丁基酯（ 1-12e）
將三苯基膦（2.91 g，11.1 mmol）和鄰苯二甲醯亞胺（1.63 g，11.1 mmol）添加至含有無水THF（30 mL）的燒瓶。添加化合物 1-12d（3 g，9.25 mmol），並且將燒瓶冷卻至0°C。逐滴添加偶氮二甲酸二異丙酯DIAD（2.24 mg，11.1 mmol），並且將反應在0°C下攪拌30分鐘並在室溫下攪拌過夜。將混合物減壓濃縮，並且將殘餘物藉由快速柱層析法（用PE/EA = 0%-70%洗脫）純化，得到呈白色固體的化合物 1-12e（3.6 g，85.9%）。
MS (ESI) m/z: 476.4 [M+Na] +。
步驟4：(3-胺基丙烷-1,2-二基)(R)-二胺基甲酸苄基三級丁基酯（ 1-12f）
將化合物 1-12e（1.3 g，2.87 mmol）溶解在甲醇（30 mL）中，並且添加一水合肼（359 mg，5.73 mmol）。然後將反應混合物回流2 h並且冷卻至室溫。將形成的沈澱過濾，並且使用甲醇洗滌濾液。將濾液減壓濃縮，並且將剩餘固體藉由快速柱層析法（用DCM/MeOH = 0%-20%洗脫）純化，得到呈無色油狀物的化合物 1-12f（640 mg，69.0%產率）。
MS (ESI) m/z: 324.3 [M+H] +。
步驟5：(R)-7-(((苄氧基)羰基)胺基)-2,2-二甲基-4,10-二側氧基-3-氧雜-5,9,11-三氮雜十四烷-14-酸甲基酯（ 1-12g）
在0°C下向化合物 1-12f（500 mg，1.55 mmol）在THF（10 ml）中之溶液中添加 1-12c（399 mg，3.09 mmol）和Et 3N（312.9 mg，3.09 mmol），並且將混合物在r.t.下持續4 h。將混合物用EA（100 mL）稀釋並藉由鹽水（50 mL * 2）洗滌。將有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾並濃縮，並且將殘餘物藉由快速柱層析法（用PE/EA = 0%-40%洗脫）純化，得到呈白色固體的化合物 1-12g（335 mg，47.9%產率）。
MS (ESI) m/z: 453.5 [M+H] +。
步驟6：(R)-7-(((苄氧基)羰基)胺基)-2,2-二甲基-4,10-二側氧基-3-氧雜-5,9,11-三氮雜十四烷-14-酸（ 1-12h）
向化合物 1-12g（335 mg，0.74 mmol）在MeOH-H 2O（6 mL， v : v=3 : 1）中之溶液中添加LiOH（35.5 mg，1.48 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌16 h。將混合物濃縮以去除MeOH並用H 2O（5 mL）稀釋。將混合物的pH藉由HOAc調整至5並藉由EA（50 mL*3）萃取。將有機層合併並乾燥，並且濃縮，得到呈白色固體的化合物 1-12h（289 mg，88.9%產率）。
MS (ESI) m/z: 439.4 [M+H] +。
步驟7：(3-(3-(3-(二甲基胺基)-3-側氧基丙基)脲基)丙烷-1,2-二基)(R)-二胺基甲酸苄基三級丁基酯（ 1-12i）
向化合物 1-12h（180 mg，0.41 mmol）在DCM（6 mL）中之溶液中添加Me 2NH.HCl（67.0 mg，0.82 mmol）、1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)脲（EDCI）（102.3 mg，0.534 mmol）和HOBt（72.1 mg，0.534 mmol）和Et 3N（83.08 mg，0.82 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌16 h。將混合物用EA（100 mL）稀釋，用1 N HCl（50 mL*3）、飽和NaHCO 3（50 mL*3）和鹽水（50 mL*3）洗滌。將有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾並濃縮，得到呈白色固體的粗製產物 1-12i（131 mg，68.6%產率）。
MS (ESI) m/z: 466.5 [M+H] +。
步驟8：(R)-(2-胺基-3-(3-(3-(二甲基胺基)-3-側氧基丙基)脲基)丙基)胺基甲酸三級丁基酯（ 1-12j）
向化合物 1-12i（131 mg，0.28 mmol）在MeOH（4 mL）中之溶液中添加Pd/C（10%，26 mg）。將混合物在r.t.下在H 2下攪拌4 h。將混合物過濾並濃縮，得到呈無色油狀物的粗製產物 1-12j（93 mg，粗製物）。
MS (ESI) m/z: 332.4 [M+H] +。
步驟9：(R)-(3-(3-(3-(二甲基胺基)-3-側氧基丙基)脲基)-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙基)胺基甲酸三級丁基酯（ 1-12l）
在0°C下向化合物 1-12j（93 mg，0.281 mmol）在NaHCO 3（1 N，5 mL）和THF（5 mL）中之溶液中添加 1-12k（132 mg，0.842 mmol）。將混合物在0°C下攪拌30 min，然後升溫至室溫並攪拌1 h。將混合物藉由製備型HPLC（方法：柱：XBridge製備型C18 OBD 5 um 19*250 mm；流動相：A-水（0.1% TFA）：B-乙腈；流速：20 mL/min）純化。獲得呈白色固體的化合物 1-12l（32 mg，27.7%產率）。
MS (ESI) m/z: 412.4 [M+H] +。
步驟10：乙酸(S)-3-(3-(3-胺基-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙基)脲基)-N,N-二甲基丙醯胺酯（ 1-12）
向化合物 1-12l（30 mg，0.073 mmol）在DCM（10 mL）中之溶液中添加TFA（1 mL）。將混合物在室溫下攪拌1 h。將混合物濃縮，得到呈白色固體的粗製化合物 1-12（19 mg，83.7%產率）。
MS (ESI) m/z: 312.4 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, DMSO): δ7.90 (br s, 3H), 7.04 (s, 2H), 6.32-6.29 (m, 1H), 5.89 (br s, 1H), 4.20-4.17 (m, 1H), 3.37-3.23 (m, 4 H), 3.15-3.12 (m, 3H), 3.09 (s, 3H), 2.73 (s, 3H), 2.36-2.33 (m, 2H)。 實例 1-13 (3-(二甲基胺基)-3-側氧基丙基)胺基甲酸4-胺基-3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁基酯（ 1-13）
根據實例 1-11的合成程序合成 1-13（TFA鹽，178 mg，定量）。
MS (ESI) m/z: 327.4 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, d 6-DMSO): δ8.01 (br s, 3H), 7.04 (s, 2H), 6.83 (t, J=6.0 Hz, 1H), 4.28-4.23 (m, 1H), 3.87 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.34-3.29 (m, 1H), 3.17-3.12 (m, 3H), 2.94 (s, 3H), 2.81 (s, 3H), 2.43 (t, J=7.2 Hz, 2H), 2.13-2.06 (m, 1H), 1.98-1.93 (m, 1H)。 實例 1-14
(R)-3-(4-((三級丁氧羰基)胺基)-3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁氧基)丙酸 1-14e
根據實例 1-7的合成程序合成呈白色固體的 1-13e（110 mg）。
MS (ESI) m/z: 379.3 [M+Na] +。
1H NMR (400 MHz, cdcl3) δ 6.68 (s, 2H), 4.87 (s, 1H), 4.42-4.26 (m, 1H), 3.70-3.56 (m, 3H), 3.50 3.52-3.47 (m, 1H), 3.43-3.36 (m, 1H), 3.31 (dt, J=14.0, 4.4 Hz, 1H), 2.56 (t, J=6.0 Hz, 1H), 3.32-2.12 (m, 1H), 1.97-1.92 (m, 1H), 1.40 (s, 9H)。
(R)-3-(4-胺基-3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁氧基)-N,N-二甲基丙醯胺（TFA鹽）（ 1-14）
根據實例 1-7的合成程序合成呈棕色油狀物的 1-14（9.6 mg）。
MS (ESI) m/z: 384.4 [M+H] +。
根據專利案號US 10,973,924B2和專利申請公開案號US 2020/345863A1中報導的方法合成參考化合物 2-1和 2-3。 實例 2-2   
步驟1：((6S,15S)-1-((2R,3S,4R,5S)-5-(2-胺基-2-側氧基乙基)-3,4二羥基四氫呋喃-2-基)-15-苄基-24-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-3,7,10,13,16,19,24-七側氧基-22-氧雜-2,8,11,14,17,20-六氮雜二十四烷-6-基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲基酯（ 2-2c）
根據實例 1-2的步驟3合成化合物 2-2c（20 mg，36.8%產率）。
MS (ESI) m/z: 1386.9 [M+Na] +。
步驟2：(S)-2-胺基-N5-(((2R,3S,4R,5S)-5-(2-胺基-2-側氧基乙基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基)-N1-((S)-10-苄基-1-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-1,6,9,12,15-五側氧基-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六烷-16-基)戊二醯胺（ 2-2d）
根據實例 1-11的步驟5合成化合物 2-2c（20 mg，36.8%產率）。（17 mg，定量）。
MS (ESI) m/z: 1142.8 [M+H] +。
步驟3：(S)-N5-(((2R,3S,4R,5S)-5-(2-胺基-2-側氧基乙基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基)-N1-((S)-10-苄基-1-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-1,6,9,12,15-五側氧基-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六烷-16-基)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙醯胺基)丙醯胺基)戊二醯胺（ 2-2）
向 1-3（5 mg，0.021 mmol）和HATU（8 mg，0.021 mmol）在DMF（1 mL）中之混合物中添加DIPEA（5 mg，0.035 mmol）。將混合物在r.t.下反應10 min。添加 2-2d（20 mg，0.018 mmol），並且將混合物在此溫度下進一步再攪拌15 min。將混合物過濾，並且將濾液使用製備型HPLC（方法：柱：XBridge製備型C18 OBD 5 um 19*250 mm；流動相：A-水（0.1%甲酸）：B-乙腈；流速：20 mL/min）純化，得到 2-2（4 mg，16.9%產率）。
MS (ESI) m/z: 1372.8 [M+Na] +。 實例 2-4
步驟1：三乙酸(2 R,3 R,4 S,5 S,6 S)-2-(( S)-2-(( S)-2-((((9 H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(((2-(苄氧基)-2-側氧基乙氧基)甲基)胺基)-3-側氧基丙氧基)-6-(甲氧基羰基)四氫-2 H-哌喃-3,4,5-三基酯（ 2-4c）
將 2-4a（150 mg，0.25 mmol，購自MedChemExpress公司）、 2-4b（148 mg，0.37 mmol，可商購獲得的）和4Å MS（800 mg）在無水DCE（5 mL）中之混合物在r.t.下攪拌30 min。在氮氣氣氛下添加AgOTf（83 mg，0.32 mmol）並在r.t.下攪拌14 h。將反應溶液用EtOAc（10 mL）稀釋，通過矽藻土過濾，並用EtOAc（5 mL * 3）洗滌。將有機相用飽和NaHCO 3（20 mL）洗滌，濃縮並藉由快速柱層析法（洗脫劑：石油醚/EtOAc = 70/30至0/100，然後DCM/MeOH = 100/0至95/5）純化，得到呈淺黃色固體的 2-4c（28 mg，12.2%產率）。
MS (ESI) m/z: 942.5 [M+Na] +。
步驟2：(5 S,8 S)-1-(9 H-茀-9-基)-5-異丙基-3,6,9-三側氧基-8-((((2 R,3 R,4 S,5 S,6 S)-3,4,5-三乙氧基-6-(甲氧基羰基)四氫-2 H-哌喃-2-基)氧基)甲基)-2,12-二氧雜-4,7,10-三氮雜十四烷-14-酸（ 2-4d）
在氮氣氣氛下向 2-4c（114 mg，0.12 mmol）和10% Pd/C（26 mg，0.012 mmol）的混合物中添加MeOH（3 mL）。將反應溶液在r.t.下在H 2氣氛下攪拌1 h。將溶液過濾並真空濃縮，得到呈白色固體的 2-4d（103 mg，12.4%產率）。
MS (ESI) m/z: 852.5 [M+Na] +。
步驟3：三乙酸(2 R,3 R,4 S,5 S,6 S)-2-(( S)-2-(( S)-2-((((9 H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(((2-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1 H,12 H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2-側氧基乙氧基)甲基)胺基)-3-側氧基丙氧基)-6-(甲氧基羰基)四氫-2 H-哌喃-3,4,5-三基酯（ 2-4e）
向 2-4d（103 mg，0.12 mmol）、依喜替康（exatecan）甲磺酸鹽（64 mg，0.12 mmol）和HATU（47 mg，0.12 mmol）在無水DMF（2 mL）中之溶液中添加DIPEA（61 μL，0.36 mmol）。將溶液在r.t.下攪拌1 h並添加至H 2O（20 mL）中，並且用DCM/MeOH（10 : 1，11 mL * 3）萃取。將有機相濃縮並藉由快速柱層析法（洗脫劑：DCM/MeOH = 100/0至95/5）純化，得到呈淺棕色固體的 2-4e（97 mg，64.0%產率）。
MS (ESI) m/z: 1269.5 [M+Na] +。
步驟4：(2 S,3 S,4 S,5 R,6 R)-6-(( S)-2-(( S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-3-(((2-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1 H,12 H-苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2- b]喹啉-1-基)胺基)-2-側氧基乙氧基)甲基)胺基)-3-側氧基丙氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2 H-哌喃-2-甲酸（ 2-4f）
向 2-4e（30 mg，0.024 mmol）在MeOH/H 2O（0.5/0.5 mL）中之溶液中添加TEA（167 μL，1.2 mmol）。將溶液在r.t.下攪拌9 h。完全反應後，將混合物藉由製備型HPLC（FA）（方法：柱：XBridge製備型C18 OBD 5 um 19*250 mm；流動相：A-水（0.1%甲酸）：B-乙腈；流速：20 mL/min）純化。將級分凍乾，得到呈淡黃色固體的 2-4f（15 mg，70.6%產率）。
MS (ESI) m/z: 885.5 [M+H] +。
步驟5：(2 S,3 S,4 S,5 R,6 R)-6-(( S)-2-(( S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)乙醯胺基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(((2-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1 H,12 H-苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2- b]喹啉-1-基)胺基)-2-側氧基乙氧基)甲基)胺基)-3-側氧基丙氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2 H-哌喃-2-甲酸（ 2-4）
向 1-3（8.3 mg，0.038 mmol）和HATU（11 mg，0.029 mmol）在無水DMF（0.3 mL）中之溶液中添加DIPEA（5 μL，0.029 mmol）。將所得混合物在r.t.下攪拌15 min並逐滴添加至 2-4f（17 mg，0.019 mmol）在無水DMF（0.7 mL）中之溶液中。將所得混合物在r.t.下進一步攪拌15 min。添加HOAc以將pH調整至5。將溶液藉由製備型HPLC（FA）（方法：柱：XBridge製備型C18 OBD 5 um 19*250 mm；流動相：A-水（0.1%甲酸）：B-乙腈；流速：20 mL/min）純化。將級分凍乾，得到呈米色固體的 2-4（13 mg，63.5%產率）。
MS (ESI) m/z: 1093.5 [M+H] +。 實例 2-5
步驟1：三乙酸(2 R,3 R,4 S,5 S,6 S)-2-(( S)-2-((((9 H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-(苄氧基)-3-側氧基丙氧基)-6-(甲氧基羰基)四氫-2 H-哌喃-3,4,5-三基酯（ 2-5b）
向 2-5a（834 mg，2 mmol）、 2-4b（950 mg，2.4 mmol）和4Å MS（3000 mg）的混合物中添加無水DCM（30 mL），在r.t.下攪拌30 min。在氮氣氣氛下添加AgOTf（617 mg，2.4 mmol），在r.t.下攪拌16 h。將反應溶液用EtOAc（30 mL）稀釋，通過矽藻土過濾，用EtOAc（20 mL * 3）洗滌。將有機相用飽和NaHCO 3（20 mL）洗滌，濃縮並藉由快速柱層析法（洗脫劑：石油醚/EtOAc = 70/30至0/100）純化，得到呈淺黃色固體的 2-5b（470 mg，32.1%產率）。
MS (ESI) m/z: 756.3 [M+Na] +。
步驟2：三乙酸(2 R,3 R,4 S,5 S,6 S)-2-(( S)-2-胺基-3-(苄氧基)-3-側氧基丙氧基)-6-(甲氧基羰基)四氫-2 H-哌喃-3,4,5-三基酯（ 2-5c）
向 2-5b（470 mg，0.64 mmol）在DMF（5 mL）中之溶液中添加Et 2N（1420 µL，1011 mg，12.8 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌0.5 h。反應完成後，將混合物真空濃縮，得到呈黃色固體的 2-5c（327 mg，粗製物）。
MS (ESI) m/z: 512.4 [M+H] +。
步驟3：三乙酸(2 R,3 R,4 S,5 S,6 S)-2-(( S)-2-(( S)-2-((((9 H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(苄氧基)-3-側氧基丙氧基)-6-(甲氧基羰基)四氫-2 H-哌喃-3,4,5-三基酯（ 2-5e）
向 2-5d（327 mg）在DMF（5 mL）中之溶液中添加HATU（291 mg，0.76 mmol）和DIPEA（223 µL，165 mg，1.27 mmol）。將所得黃色溶液在r.t.下攪拌5 min，然後添加 2-5c（239 mg，0.70 mmol）。將混合物在r.t.下進一步攪拌60 min。反應完成後，將溶劑蒸發並且將殘餘物藉由快速柱層析法（洗脫劑：石油醚/EtOAc = 70/30至0/100）和製備型HPLC（FA）（方法：柱：XBridge製備型C18 OBD 5 um 19*250 mm；流動相：A-水（0.1%甲酸）：B-乙腈；流速：20 mL/min）純化。將級分凍乾，得到呈白色固體的 2-5e（300 mg，56.2%產率）。
MS (ESI) m/z: 833.4 [M+H] +。
步驟4：N-((((9 H-茀-9-基)甲氧基)羰基)-L-纈胺醯基)-O-((2 R,3 R,4 S,5 S,6 S)-3,4,5-三乙氧基-6-(甲氧基羰基)四氫-2 H-哌喃-2-基)-L-絲胺酸（ 2-5f）
向 2-5e（300 mg，0.36 mmol）在MeOH（10 mL）和THF（8 mL）中之溶液中添加濕Pd/C（30 mg），然後用H 2氣球吹掃3次並在r.t.下攪拌2 h。反應完成後，將混合物通過注射器過濾器頭過濾，並且將濾液真空濃縮，得到呈白色固體的 2-5f（265 mg，粗製物）。
MS (ESI) m/z: 765.3 [M+Na] +。
步驟5：三乙酸(2 R,3 R,4 S,5 S,6 S)-2-(( S)-2-(( S)-2-((((9 H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-((2-(((2-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1 H,12 H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2-側氧基乙氧基)甲基)胺基)-2-側氧基乙基)胺基)-3-側氧基丙氧基)-6-(甲氧基羰基)四氫-2 H-哌喃-3,4,5-三基酯（ 2-5h）
向 2-5f（265 mg）在DMF（5 mL）中之溶液中添加HATU（120 mg，0.42 mmol）和DIPEA（124 µL，92 mg，0.71 mmol）。將所得黃色溶液在r.t.下攪拌5 min，然後添加 2-5g（227 mg，0.39 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌60 min。反應完成後，將溶劑蒸發，並且將殘餘物藉由快速柱層析法（洗脫劑：DCM/MeOH = 95/5至90/10）純化，得到呈棕色固體的 2-5h（280 mg，59.6%產率）。
MS (ESI) m/z: 1326.4 [M+Na] +。
步驟6：三乙酸(2 R,3 R,4 S,5 S,6 S)-2-(( S)-2-(( S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-3-((2-(((2-(((1S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1 H,12 H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2-側氧基乙氧基)甲基)胺基)-2-側氧基乙基)胺基)-3-側氧基丙氧基)-6-(甲氧基羰基)四氫-2 H-哌喃-3,4,5-三基酯（ 2-5i）
向 2-5h（280 mg，0.21 mmol）在DMF（5 mL）中之溶液中添加Et 2N（478 µL，340 mg，4.29 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌0.5 h。反應完成後，將混合物真空濃縮，得到呈白色固體的 2-5i（220 mg，粗製物）。
MS (ESI) m/z: 1082.4 [M+H] +。
步驟7：(2 S,3 S,4 S,5 R,6 R)-6-(( S)-2-(( S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-3-((2-(((2-(((1S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1 H,12 H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2-側氧基乙氧基)甲基)胺基)-2-側氧基乙基)胺基)-3-側氧基丙氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-甲酸（ 2-5j）
向 2-5i（220 mg）在MeOH/H 2O（5/5 mL）中之溶液中添加Na 2CO 3（151 mg，1.42 mmol），並且將混合物在r.t.下攪拌9 h。將溶液藉由製備型HPLC（FA）（方法：柱：XBridge製備型C18 OBD 5 um 19*250 mm；流動相：A-水（0.1%甲酸）：B-乙腈；流速：20 mL/min）純化。將級分凍乾，得到呈白色固體的 2-5j（45 mg，23.8%產率）。
MS (ESI) m/z: 942.3 [M+H] +。
步驟8：(2 S,3 S,4 S,5 R,6 R)-6-(( S)-2-(( S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)乙醯胺基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-((2-(((2-(((1 R,9 R)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1 H,12 H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2-側氧基乙氧基)甲基)胺基)-2-側氧基乙基)胺基)-3-側氧基丙氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2 H-哌喃-2-甲酸（ 2-5）
向 1-3（5.76 mg，0.026 mmol）和HATU（9.576 mg，0.025 mmol）在無水DMF（1 mL）中之溶液中添加DIPEA（7.3 μL，5.4 mg，0.042 mmol），並且將混合物在r.t.下攪拌15 min。將溶液逐滴添加至 2-5j（20 mg，0.021 mmol）在無水DMF（1 mL）中之溶液中，並在r.t.下攪拌15 min。將溶液藉由製備型HPLC（FA）（方法：柱：XBridge製備型C18 OBD 5 um 19*250 mm；流動相：A-水（0.1%甲酸）：B-乙腈；流速：20 mL/min）純化。將級分凍乾，得到呈白色固體的 2-5（7.4 mg，31.0%產率）。
MS (ESI) m/z: 1172.4 [M+Na] +。 實例 2-6
步驟1：((10S,21S)-10-苄基-21-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-1-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-1,6,9,12,15,18-六側氧基-3,19-二氧雜-5,8,11,14,17-五氮雜二十二烷-22-基)胺基甲酸三級丁基酯（ 2-6b）
向 1-4e（205.7 mg，0.76 mmol）在DMF（3 mL）中之混合物中添加DSC（195.0 mg，0.76 mmol）和DIPEA（118.1 mg，0.91 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌2 h。添加 2-6a（500.7 mg，0.57 mmol，購自MedChemExpress公司）並且然後在r.t.下攪拌10 min。將混合物過濾，並且將濾液藉由製備型HPLC（FA）純化，得到呈暗黃色固體的 2-6（230 mg）。
MS (ESI) m/z: 1160.8 [M+Na] +。
步驟2：((S)-10-苄基-1-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-1,6,9,12,15-五側氧基-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六烷-16-基)胺基甲酸(S)-3-胺基-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙基酯（ 2-6）
向 2-6b（30.0 mg，0.026 mmol）在DCM（2 mL）中之混合物中添加ZnBr 2（237.7 mg，1.06 mmol），並且將混合物加熱至45°C，持續16 h。將混合物真空濃縮以去除DCM，然後溶解在DMSO/H 2O中並藉由製備型HPLC（FA）純化。將級分凍乾，得到呈白色固體的 2-6（12.6 mg，45%產率）。
MS (ESI) m/z: 1037.8 [M+H] +。 實例 2-7
步驟1：N-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)-L-纈胺醯基)-O-((2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三乙醯氧基-6-(甲氧基羰基)四氫-2H-哌喃-2-基)-L-絲胺酸（ 2-7a）
向 2-5b（4.1 g，4.92 mmol）在MeOH（50 mL）、THF（100 mL）和DCM（20 mL）中之混合物中添加濕Pd/C（400 mg，10%純度）。將黑色懸浮液用H 2氣球吹掃三次，並且然後在r.t.下攪拌1 h。將黑色懸浮液通過矽藻土墊過濾，並用MeOH（200 mL）洗滌。將合併的有機層真空濃縮，得到呈灰白色固體的 2-7a（3650 mg，99.8%產率）。
MS (ESI) m/z: 743.6 [M+H] +。
步驟2：三乙酸(2R,3R,4S,5S,6S)-2-((S)-2-((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-((2-(苄氧基)-2-側氧基乙基)胺基)-3-側氧基丙氧基)-6-(甲氧基羰基)四氫-2H-哌喃-3,4,5-三基酯（ 2-7c）
向 2-7a（3.65 g，4.92 mmol）和 2-7c（1.66 g，4.92 mmol）在DMF（50 mL）中之溶液中添加HATU（1.87 g，4.92 mmol）和DIPEA（1.59 g，12.29 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌30 min。完全反應後，將混合物藉由FCC（MeOH/DCM = 0%-10%）純化，將級分真空濃縮，得到呈灰白色泡沫狀固體的 2-7c（3.8 g，86.9%產率）。
MS (ESI) m/z: 890.7 [M+H] +。
步驟3：N-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)-L-纈胺醯基)-O-((2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三乙醯氧基-6-(甲氧基羰基)四氫-2H-哌喃-2-基)-L-絲胺醯甘胺酸（ 2-7d）
向 2-7c（3.8 g，4.27 mmol）在MeOH（150 mL）和DCM（50 mL）中之混合物中添加濕Pd/C（400 mg，10%純度）。將黑色懸浮液用H 2氣球吹掃三次，並且然後在r.t.下攪拌40 min。將黑色懸浮液通過矽藻土墊過濾，並用MeOH（150 mL）洗滌。將合併的有機層真空濃縮，得到呈灰白色固體的 2-7d（3.3 g，96.6%產率）。
MS (ESI) m/z: 800.7 [M+H] +。
步驟4：三乙酸(2R,3R,4S,5S,6S)-2-((S)-2-((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-((乙醯氧基甲基)胺基)-3-側氧基丙氧基)-6-(甲氧基羰基)四氫-2H-哌喃-3,4,5-三基酯（ 2-7e）
向 2-7d（3.3 g，4.13 mmol）在DMF（30 mL）中之溶液中添加Pb(OAc) 4（2.74 g，6.19 mmol）、Cu(OAc) 2（74.9 mg，0.41 mmol）和HOAc（247.8 mg，4.13 mmol）。將所得黑色混合物用N 2氣球吹掃三次，並且然後在65°C下攪拌40 min；混合物變成深藍色。將混合物用EtOAc（300 mL）稀釋，用鹽水（100 mL * 3）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾並真空濃縮，得到殘餘物。將其藉由FCC（MeOH/DCM = 0%-10%）純化，並且將級分真空濃縮，得到呈淡黃色固體的 2-7e（2.8 g，83.4%產率）。
MS (ESI) m/z: 836.6 [M+Na] +。
步驟5：(2S,3S,4S,5R,6R)-6-((2S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-3-(((3-((9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)丙氧基)甲基)胺基)-3-側氧基丙氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-甲酸（ 2-7g）
將 2-7e（301 mg，0.37 mmol）、 2-7f（177 mg，0.37 mmol）和4Å分子篩（500 mg）在無水THF（10 mL）中之白色懸浮液混合物在r.t.下攪拌10 min。添加Sc(OTf) 3（218 mg，0.44 mmol）並且將所得黃色懸浮液在r.t.下攪拌4 h。將黃色懸浮液混合物通過矽藻土墊過濾並用EA洗滌。將合併的有機層用飽和NaHCO 3（30 mL）和鹽水（30 mL）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，並且將濾液真空濃縮，得到殘餘物。將其藉由矽膠柱（MeOH/DCM = 0%-5%）純化。將級分真空濃縮，得到呈白色泡沫的 2-7g（353 mg，77.5%產率）。
MS (ESI) m/z: 1254.8 [M+Na] +。
步驟6：(2S,3S,4S,5R,6R)-6-((2S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-3-(((3-((9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)丙氧基)甲基)胺基)-3-側氧基丙氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-甲酸（ 2-7h）
根據實例 2-5的步驟6合成呈白色固體的 2-7h（65 mg，54.3%產率）。
MS (ESI) m/z: 870.7 [M+H] +。
步驟7：(2S,3S,4S,5R,6R)-6-(((7S,12S,15S)-7-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-15-(((3-((9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)丙氧基)甲基)胺基甲醯基)-12-異丙基-2,2-二甲基-4,10,13-三側氧基-3,9-二氧雜-5,11,14-三氮雜十六烷-16-基)氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-甲酸（ 2-7i）
根據實例 2-6的步驟1合成呈白色固體的 2-7i（18 mg，40.1%產率）。
MS (ESI) m/z: 1166.9 [M+H] +。
步驟8：(2S,3S,4S,5R,6R)-6-((2S)-2-((S)-2-((((S)-3-胺基-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(((3-((9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)丙氧基)甲基)胺基)-3-側氧基丙氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-甲酸（ 2-7）
根據實例 2-6的步驟2合成呈澄清漿料的 2-7（4.7 mg，50.1%產率）。
MS (ESI) m/z: 1066.8 [M+H] +。 實例 2-8
步驟1：乙酸(5S,8S)-1-(9H-茀-9-基)-5-異丙基-8-甲基-3,6,9-三側氧基-2-氧雜-4,7,10-三氮雜十一烷-11-基酯（ 2-8b ）
向 2-8a（5.0 g，10.70 mmol）在DMF（100 mL）中之混合物中添加Cu(OAc) 2（738.2 mg，4.06 mmol）、Pb(OAc) 4（5.41 g，12.2 mmol）和冰乙酸（1.4 mL，1.5 g，24.3 mmol）。將所得深藍色混合物用N 2氣球吹掃三次，然後加熱至70°C持續1 h，並且變成綠色混合物。將混合物用EtOAc（1000 mL）稀釋，用鹽水（300 mL * 3）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，並且將濾液真空濃縮，得到粗製產物。將其用MTBE/PE（10/1，500 mL）研磨並過濾，之後高真空乾燥濾餅，得到呈淡黃色固體的 2-8b （4.4 g，85.4%產率）。
MS (ESI) m/z: 504.5 [M+Na] +。
1H NMR (400 MHz, dmso) δ 8.89 (t, J= 6.8 Hz, 1H), 8.10 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.89 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 7.75 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 7.43 (dd, J= 14.4, 7.6 Hz, 3H), 7.35-1.30(m, 2H), 5.13-5.05 (m, 2H), 4.35 – 4.19 (m, 4H), 3.88 (dd, J= 8.8, 7.2 Hz, 1H), 1.98 (s, 2H), 1.26 – 1.17 (m, 4H), 0.86 (dd, J= 9.8, 6.8 Hz, 6H)。
步驟2：(5S,8S)-1-(9H-茀-9-基)-5-異丙基-8,14,14-三甲基-3,6,9-三側氧基-2,12-二氧雜-4,7,10-三氮雜十五烷-15-酸苄基酯（ 2-8d）
將 2-8b（300 mg，0.623 mmol）、 2-8c（259.6 mg，1.246 mmol）和4Å分子篩在無水THF（10 mL）中之白色懸浮液混合物在r.t.下攪拌10 min。添加Sc(OTf) 3（368.0 mg，0.748 mmol）並且將所得黃色懸浮液在r.t.下攪拌4 h。將黃色懸浮液混合物通過矽藻土墊過濾並用EtOAc（30 mL）洗滌。將合併的有機層用飽和NaHCO 3（30 mL）和鹽水（30 mL）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，並且將濾液真空濃縮，得到殘餘物。將其藉由矽膠柱（MeOH/DCM = 0%-5%）純化。將級分真空濃縮，得到呈白色固體的 2-8d（274 mg，69.8%產率）。
MS (ESI) m/z: 652.6 [M+Na] +。
步驟3：3-(((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)甲氧基)-2,2-二甲基丙酸苄基酯（ 2-8e）
向 2-8d（274.0 mg，0.44 mmol）在DMF（5 mL）中之溶液中添加Et 2N（477.3 mg，5.53 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌20 min。將反應混合物真空濃縮並與Tol共蒸發兩次，得到呈棕色油狀物的 2-8e（275.3 mg，粗製物）。
MS (ESI) m/z: 430.4 [M+Na] +。
步驟4：(5S,8S,11S)-5-(3-((((2S,3R,4S,5R)-5-(2-胺基-2-側氧基乙基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基)胺基)-3-側氧基丙基)-1-(9H-茀-9-基)-8-異丙基-11,17,17-三甲基-3,6,9,12-四側氧基-2,15-二氧雜-4,7,10,13-四氮雜十八烷-18-酸苄基酯（ 2-8f）
向 2-8e（275.3 mg，粗製物）和 2-2b（282.3 mg，0.52 mmol）在DMF（5 mL）中之溶液中添加HATU（198.2 mg，0.52 mmol）和DIPEA（168.4 mg，1.30 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌10 min。將混合物通過反相（C18，60 g，30%-70%）純化，並且將級分冷凍乾燥，得到呈棕色固體的 2-8f（370 mg，91.5%產率）。
MS (ESI) m/z: 953.8 [M+Na] +。
步驟5：(5S,8S,11S)-5-(3-((((2S,3R,4S,5R)-5-(2-胺基-2-側氧基乙基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基)胺基)-3-側氧基丙基)-1-(9H-茀-9-基)-8-異丙基-11,17,17-三甲基-3,6,9,12-四側氧基-2,15-二氧雜-4,7,10,13-四氮雜十八烷-18-酸（ 2-8g）
向 2-8f （370 mg，0.388 mmol）在DMF/MeOH（1 : 1，15 mL）中之混合物中添加Pd/C（35 mg）。將黑色懸浮液用H 2氣球吹掃三次，然後在r.t.下在H 2氣球下攪拌6 h。將反應混合物通過矽藻土墊過濾，並用DMF（15 mL）和MeOH（50 mL）洗滌。將合併的有機層真空濃縮並與Tol共蒸發三次，得到呈淺棕色固體的 2-8g （350 mg，粗製物）。
MS (ESI) m/z: 863.7 [M+Na] +。
步驟6：((6S,9S,12S)-1-((2S,3R,4S,5R)-5-(2-胺基-2-側氧基乙基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)-19-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-9-異丙基-12,18,18-三甲基-3,7,10,13,19-五側氧基-16-氧雜-2,8,11,14-四氮雜十九烷-6-基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲基酯（ 2-8h）
根據實例 2-4的步驟3合成呈淡黃色固體的 2-8h（276.1 mg，65%產率）。
MS (ESI) m/z: 1282.1 [M+Na] +。
步驟7：(S)-2-胺基-N5-(((2S,3R,4S,5R)-5-(2-胺基-2-側氧基乙基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基)-N1-((S)-1-(((S)-1-(((3-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2,2-二甲基-3-側氧基丙氧基)甲基)胺基)-1-側氧基丙烷-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁烷-2-基)戊二醯胺（ 2-8i）
向 2-8h（276.1 mg，0.22 mmol）在DMF（5 mL）中之溶液中添加Et 2N（240.6 mg，3.29 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌20 min。將反應混合物真空濃縮並與Tol共蒸發兩次，得到呈棕色固體的 2-8i（278.3 mg，粗製物）。
MS (ESI) m/z: 1036.9 [M+H] +。
步驟8：((8S,11S,14S)-14-(3-((((2R,3S,4R,5S)-5-(2-胺基-2-側氧基乙基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基)胺基)-3-側氧基丙基)-1-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-11-異丙基-2,2,8-三甲基-1,7,10,13,16-五側氧基-4-氧雜-6,9,12,15-四氮雜十八烷-18-基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲基酯（ 2-8k）
向 2-8i（49.9 mg，0.048 mmol）和 2-8j（15.0 mg，0.048 mmol）在DMF（3 mL）中之溶液中添加HATU（18.3 mg，0.048 mmol）和DIPEA（18.7 mg，0.145 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌10 min。將混合物藉由製備型HPLC（FA 0.1%）純化，並且將級分冷凍乾燥，得到呈白色固體的 2-8k（42 mg，65.6%純度）。
MS (ESI) m/z: 1352.0 [M+Na] +。
步驟9：(S)-N5-(((2R,3S,4R,5S)-5-(2-胺基-2-側氧基乙基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基)-2-(3-胺基丙醯胺基)-N1-((S)-1-(((S)-1-(((3-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2,2-二甲基-3-側氧基丙氧基)甲基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)戊二醯胺（ 2-8l）
向 2-8k（42 mg，0.032 mmol）在DMF（5 mL）中之溶液中添加Et 2N（34.7 mg，0.474 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌20 min。將反應混合物真空濃縮並與Tol共蒸發兩次，得到呈棕色固體的 2-8l（43 mg，粗製物）。
MS (ESI) m/z: 1107.9 [M+H] +。
步驟10：((2S,7S,10S,13S)-7-(3-((((2R,3S,4R,5S)-5-(2-胺基-2-側氧基乙基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基)胺基)-3-側氧基丙基)-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-20-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-10-異丙基-13,19,19-三甲基-5,8,11,14,20-五側氧基-4,17-二氧雜-6,9,12,15-四氮雜二十烷基)胺基甲酸三級丁基酯（ 2-8m）
向 1-4e（120 mg，0.444 mmol）在DMF（3 mL）中之溶液中添加雙(4-硝基苯基)碳酸酯（148.7 mg，0.489 mmol）和DIPEA（94.7 mg，0.733 mmol）。將所得淺黃色混合物在r.t.下攪拌2 h。將其藉由製備型HPLC（FA）純化，並且將級分真空濃縮，得到呈白色固體的活性碳酸酯（81.6 mg，42.2%產率）。向在DMF（3 mL）中之活性碳酸酯（13.8 mg，0.032 mmol）和 2-8l （42.5 mg，粗製物）中添加DIPEA（8.2 mg，0.063 mmol）。將所得淺黃色混合物在r.t.下攪拌1 h。將反應混合物藉由製備型HPLC（FA 0.1%）純化，並且將級分凍乾，得到呈淡黃色固體的 2-8m（28.1 mg，0.02 mmol）。
MS (ESI) m/z: 1427.1 [M+Na] +。
步驟11：((6S,9S,12S)-1-((2R,3S,4R,5S)-5-(2-胺基-2-側氧基乙基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)-19-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-9-異丙基-12,18,18-三甲基-3,7,10,13,19-五側氧基-16-氧雜-2,8,11,14-四氮雜十九烷-6-基)胺基甲酸(S)-3-胺基-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙基酯（ 2-8）
向 2-8m（28.1 mg，0.02 mmol）在DCM（3 mL）中之懸浮液中添加ZnBr2（179.7 mg，0.798 mmol），然後在45°C下攪拌4 h。將混合物真空濃縮並溶解在DMSO中，然後藉由製備型HPLC（0.1% FA）純化。將級分凍乾，得到呈淡黃色固體的 2-8（15.7 mg，60.4%產率）。
MS (ESI) m/z: 1304.1 [M+H] +。 實例 2-9
((17S,20S,23S)-17-(3-((((2R,3S,4R,5S)-5-(2-胺基-2-側氧基乙基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基)胺基)-3-側氧基丙基)-30-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-20-異丙基-23,29,29-三甲基-15,18,21,24,30-五側氧基-3,6,9,12,27-五氧雜-16,19,22,25-四氮雜三十烷基)胺基甲酸(S)-3-((三級丁氧羰基)胺基)-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙基酯（ 2-9）
根據實例 2-8的合成程序合成呈淡黃色固體的 2-9（14.4 mg，61.5%產率）。
MS (ESI) m/z: 1480.2 [M+H] +。 實例 2-10
步驟1：三乙酸(2R,3R,4S,5S,6S)-2-((S)-2-((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(((3-(苄氧基)-2,2-二甲基-3-側氧基丙氧基)甲基)胺基)-3-側氧基丙氧基)-6-(甲氧基羰基)四氫-2H-哌喃-3,4,5-三基酯（ 2-10a）
將 2-7e（300 mg，0.37 mmol）、 2-8c（154 mg，0.74 mmol）和4Å分子篩（500 mg）在無水THF（10 mL）中之白色懸浮液混合物在r.t.下攪拌10 min。添加Sc(OTf) 3（217.9 mg，0.44 mmol）並且將所得黃色懸浮液在r.t.下攪拌4 h。將黃色懸浮液混合物通過矽藻土墊過濾並用EA洗滌。將合併的有機層用飽和NaHCO 3（30 mL）和鹽水（30 mL）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，並且將濾液真空濃縮，得到殘餘物。將其藉由矽膠柱（MeOH/DCM = 0%-5%）純化。將級分真空濃縮，得到呈白色泡沫固體的 2-10a（275 mg，77.5%產率）。
MS (ESI) m/z: 984.8 [M+Na] +。
步驟2：(5S,8S)-1-(9H-茀-9-基)-5-異丙基-14,14-二甲基-3,6,9-三側氧基-8-((((2R,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-三乙醯氧基-6-(甲氧基羰基)四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)甲基)-2,12-二氧雜-4,7,10-三氮雜十五烷-15-酸（ 2-10b）
向 2-10a（275 mg，0.29 mmol）在MeOH（10 mL）中之溶液中添加濕Pd/C（55 mg，10%純度）。將黑色懸浮液用H 2氣球吹掃三次，然後在r.t.下攪拌2 h。將混合物通過注射器頭過濾並用MeOH（15 mL）洗滌，並且真空濃縮，得到呈白色泡沫固體的 2-10b（230 mg，粗製物）。
MS (ESI) m/z: 894.6 [M+Na] +。
步驟3：三乙酸(2R,3R,4S,5S,6S)-2-((S)-2-((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(((3-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2,2-二甲基-3-側氧基丙氧基)甲基)胺基)-3-側氧基丙氧基)-6-(甲氧基羰基)四氫-2H-哌喃-3,4,5-三基酯（ 2-10c）
向 2-10b（230 mg，粗製物）、依喜替康甲磺酸鹽（139.9 mg，0.26 mmol）和HATU（100.3 mg，0.26 mol）在DMF（5 mL）中之混合物中添加DIPEA（102.3 mg，0.79 mmol）。將所得棕色混合物在r.t.下攪拌1 h。將混合物用EtOAc（20 mL）稀釋，用鹽水（20 mL * 3）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾並真空濃縮，得到殘餘物。將其藉由FCC（MeOH/DCM = 0%-3%）純化，並真空濃縮，得到呈灰白色泡沫固體的 2-10c（325 mg，95.6%產率）。
MS (ESI) m/z: 1289.9 [M+H] +。
步驟4：(2S,3S,4S,5R,6R)-6-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-3-(((3-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2,2-二甲基-3-側氧基丙氧基)甲基)胺基)-3-側氧基丙氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-甲酸（ 2-10d）
向 2-10c（325 mg，0.25 mmol）在DMF（5 mL）中之溶液中添加Et 2N（523.2 mg，5.06 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌20 min。LCMS顯示反應完成後，將混合物真空濃縮，得到粗製產物。將其溶解在MeOH（6 mL）中，並且添加K 2CO 3（174.7 mg，1.26 mmol）並在r.t.下攪拌10 min。然後將H 2O（2 mL）添加至混合物並在r.t.下攪拌30 min。將混合物在0°C下用飽和KHSO 4酸化至pH = 3，過濾並藉由製備型HPLC（0.1% FA）純化。將級分凍乾，得到呈淡黃色固體的 2-10d（140 mg，59.7%產率）。
MS (ESI) m/z: 927.4 [M+H] +。
1H NMR (400 MHz, d 6-DMSO) δ9.56 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.07 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.77 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 5.54 (dd, J= 13.2, 7.2 Hz, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.18 (dd, J= 41.6, 18.8 Hz, 2H), 5.09-5.02 (m, 1H), 4.96 (s, 1H), 4.62 (dd, J= 10.0, 6.8 Hz, 1H), 4.56-4.44 (m, 2H), 4.19 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 3.82 (dd, J= 10.8, 6.8 Hz, 1H), 3.61 (dd, J= 11.6, 6.4 Hz, 2H), 3.17-3.05 (m, 4H), 2.94 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.11 (dt, J= 21.3, 7.6 Hz, 2H), 2.03-1.93 (m, 2H), 1.92-1.78 (m, 3H), 1.12 (d, J= 8.0 Hz, 6H), 0.87 (dd, J= 13.0, 6.6 Hz, 9H)。
步驟5：(2S,3S,4S,5R,6R)-6-(((6S,13S,16S)-6-((2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)甲基)-16-(((3-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2,2-二甲基-3-側氧基丙氧基)甲基)胺基甲醯基)-13-異丙基-2,2-二甲基-4,11,14-三側氧基-3,8-二氧雜-5,12,15-三氮雜十七烷-17-基)氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-甲酸（ 2-10e）
向 1-7e（6.7 mg，0.02 mmol）在DMF（2 mL）中之溶液中添加HATU（8.6 mg，0.02 mmol）和DIPEA（5.2 mg，0.04 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌10 min。添加 2-10d（15 mg，0.02 mmol）並在r.t.下攪拌30 min。將混合物藉由製備型HPLC（FA）純化，得到呈灰白色固體的 2-10e（9.1 mg，44.4%產率）。
MS (ESI) m/z: 1252.1 [M+H] +。
步驟6：(2S,3S,4S,5R,6R)-6-((S)-2-((S)-2-(3-((S)-2-胺基-3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(((3-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2,2-二甲基-3-側氧基丙氧基)甲基)胺基)-3-側氧基丙氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-甲酸（ 2-10）
向 2-10e（9.1 mg，0.007 mmol）在DCM（1.5 mL）中之懸浮液中添加ZnBr 2（32.4 mg，0.14 mmol），然後在45°C下攪拌8 h。將混合物真空濃縮並溶解在DMSO中，然後藉由製備型HPLC（0.1% FA）純化。將級分凍乾，得到呈白色固體的 2-10（7.1 mg，85.7%產率）。
MS (ESI) m/z: 1151.9 [M+H] +。 實例 2-11
步驟1：3-(異丙基胺基)丙酸三級丁基酯（ 2-11b）
在r.t.下向 2-11a（908 mg，5.0 mmol）和丙酮（580 mg，10.0 mmol）在MeOH-H 2O（1 : 1，20 mL）中之溶液中添加NaBH 3CN（1.28 g，20.0 mmol）。將反應物在r.t.下攪拌18 h。將混合物真空濃縮，並且將殘餘物重新溶解在DCM（20 mL）中並用飽和NaHCO 3（10 mL）、H 2O（10 mL）、鹽水（10 mL）洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，並且將濾液真空濃縮，得到呈無色油狀物的粗製目標產物 1-11b （1.21 g），將其直接用於下一步驟。
MS (ESI) m/z: 188.2 [M+H] +。
步驟2：3-(異丙基胺基)丙酸（ 2-11c）
將 2-11b（600 mg，2.5 mmol）在TFA/DCM（5 : 2，7 mL）中之溶液在r.t.下攪拌過夜。將混合物真空濃縮，並且將殘餘物重新溶解在水中。將水層用EtOAc洗滌並凍乾，得到呈白色固體的 2-11c（444.4 mg，77.9%產率）。
MS (ESI) m/z: 132.1 [M+H] +。
步驟3：( S)-7-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)-11-異丙基-2,2-二甲基-4,10-二側氧基-3,9-二氧雜-5,11-二氮雜十四烷-14-酸（ 2-11d）
在r.t.下向 2-11c（12.3 mg，0.094 mmol）和 1-8e（20 mg，0.046 mmol）在DMF（1 mL）中之溶液中添加DIPEA（30 mg，0.23 mmol）和HOBt（2 mg，0.014 mmol）。將反應物在r.t.下攪拌16 min。將反應混合物用DMF稀釋並用0.1 NHCl酸化。將混合物藉由製備型HPLC（FA）純化，將級分凍乾，得到呈淡黃色固體的 2-11d（6.8 mg，34.6%產率）。
MS (ESI) m/z: 450.48 [M+Na] +。
步驟4：(2 S,3 S,4 S,5 R,6 R)-6-(((7 S,16 S,19 S)-7-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)-19-(((3-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1 H,12 H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2,2-二甲基-3-側氧基丙氧基)甲基)胺基甲醯基)-11,16-二異丙基-2,2-二甲基-4,10,14,17-四側氧基-3,9-二氧雜-5,11,15,18-四氮雜二十烷-20-基)氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2 H-哌喃-2-甲酸（ 2-11e）
向 2-11d（6.8 mg，0.0159 mmol）在DMF（0.5 mL）中之溶液中添加HATU（6.0 mg，0.0159 mmol）、DIPEA（4.7 mg，0.0363 mmol）和 2-10d（13.4 mg，0.0145 mmol）。將反應物在r.t.下攪拌30 min。將混合物用DMF（1.5 mL）稀釋並用AcOH酸化。將其藉由製備型HPLC（FA）純化。將級分凍乾，得到呈白色固體的 2-11e（5.1 mg，26.4%產率）。
MS (ESI) m/z: 1358.9 [M+Na] +。
步驟5：(2 S,3 S,4 S,5 R,6 R)-6-(((2 S,5 S,14 S)-15-胺基-14-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-基)-2-(((3-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1 H,12 H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2,2-二甲基-3-側氧基丙氧基)甲基)胺基甲醯基)-5,10-二異丙基-4,7,11-三側氧基-12-氧雜-3,6,10-三氮雜十五烷基)氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2 H-哌喃-2-甲酸（ 2-11）
向 2-11e（5.1 mg，0.007 mmol）在DCM（1.5 mL）中之懸浮液中添加ZnBr 2（32.4 mg，0.14 mmol），然後在45°C下攪拌21 h。將混合物真空濃縮並溶解在0.1%/ACN（80 : 20，1 mL）中，然後藉由製備型HPLC（0.1% TFA）純化。將級分凍乾，得到呈白色固體的 2-11（2.2 mg，46.6%產率）。
MS (ESI) m/z: 1236.8 [M+H] +。 實例 2-12
(2S,3S,4S,5R,6R)-6-((S)-2-((S)-2-((R)-7-胺基-6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)庚醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(((3-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2,2-二甲基-3-側氧基丙氧基)甲基)胺基)-3-側氧基丙氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-甲酸（ 2-12）
根據實例 2-10的合成程序合成呈白色固體的 2-12（5.8 mg，45%產率）。
MS (ESI) m/z: 1149.9 [M+H] +。 實例 2-13
步驟1：(2 S,3 S,4 S,5 R,6 R)-6-(((8 S,11 S)-11-(((3-(((1 S,9 S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1 H,12 H-苯并[ de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2,2-二甲基-3-側氧基丙氧基)甲基)胺基甲醯基)-1-(9 H-茀-9-基)-8-異丙基-4-甲基-3,6,9-三側氧基-2-氧雜-4,7,10-三氮雜十二烷-12-基)氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2 H-哌喃-2-甲酸（ 2-13b）
向 2-13a（11.1 mg，0.0356 mmol）在DMF（1 mL）中之溶液中添加HATU（13.5 mg，0.0356 mmol）、DIPEA（10.5 mg，0.081 mmol）和 2-10d（30 mg，0.0323 mmol）。將反應物在r.t.下攪拌30 min。將混合物用DMF（1.5 mL）稀釋並用AcOH酸化。將其藉由製備型HPLC（FA）純化。將級分凍乾，得到呈淡黃色固體的 2-13b（14.6 mg，36.9%產率）。
MS (ESI) m/z: 1221.0 [M+H] +。
步驟2：(2S,3S,4S,5R,6R)-6-((S)-3-(((3-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2,2-二甲基-3-側氧基丙氧基)甲基)胺基)-2-((S)-3-甲基-2-(2-(甲基胺基)乙醯胺基)丁醯胺基)-3-側氧基丙氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-甲酸（ 2-13c）
向 2-13b（14.6 mg，0.012 mmol）在DMF（0.3 mL）中之溶液中添加Et 2NH（8.8 mg，0.12 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌20 min。將反應混合物真空濃縮並與甲苯共蒸發兩次，得到呈棕色固體的 2-13c，將其直接用於下一步驟中。
步驟3：(2S,3S,4S,5R,6R)-6-(((7S,15S,18S)-7-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-18-(((3-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2,2-二甲基-3-側氧基丙氧基)甲基)胺基甲醯基)-15-異丙基-2,2,11-三甲基-4,10,13,16-四側氧基-3,9-二氧雜-5,11,14,17-四氮雜十九烷-19-基)氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-甲酸（ 2-13d）
向 2-4e（3.6 mg，0.0132 mmol）在DMF（0.2 mL）中之混合物中添加DSC（3.5 mg，0.0136 mmol）和DIPEA（2.3 mg，0.018 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌3 h。然後添加粗製固體 2-13c，並且在r.t.下再攪拌30 min。將混合物用DMF（1.5 mL）稀釋並用AcOH酸化。將其藉由製備型HPLC（FA）純化，得到呈淡黃色固體的 2-13d（5.4 mg，34.8%產率）。
MS (ESI) m/z: 1294.9 [M+H] +。
步驟4：(2S,3S,4S,5R,6R)-6-(((2S,5S,13S)-14-胺基-13-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2-(((3-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3’,4’:6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2,2-二甲基-3-側氧基丙氧基)甲基)胺基甲醯基)-5-異丙基-9-甲基-4,7,10-三側氧基-11-氧雜-3,6,9-三氮雜十四烷基)氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-甲酸（ 2-13）
向 2-13d（5.4 mg，0.0042 mmol）在DCM（0.5 mL）中之懸浮液中添加ZnBr 2（24 mg，0.11 mmol），然後在45°C下攪拌24 h。將混合物真空濃縮並溶解在0.1%/ACN（80 : 20，1 mL）中，然後藉由製備型HPLC（0.1% TFA）純化。將級分凍乾，得到呈白色固體的 2-13（1.3 mg，26%產率）。
MS (ESI) m/z: 1194.9 [M+H] +。 實例 2-14   
(R)-3-(((4-胺基-3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁氧基)羰基)胺基)丙酸（ 2-14a）
根據實例 1-13的合成程序合成 2-14a（280 mg，89.6%產率）。
MS (ESI) m/z: 422.3 [M+Na] +。
1H NMR (400 MHz, d 6-DMSO) δ12.48 (br s, 1H), 7.03-6.99 (m, 2H), 6.94 (s, 2H), 4.08-4.03 (m, 3H), 3.86-3.83 (m, 2H), 3.17-3.11 (m, 2H), 2.35 (t, J=7.2 Hz, 2H), 2.14-2.09 (m, 1H), 1.91-1.84 (m, 1H), 1.32 (s, 9H)。
(2S,3S,4S,5R,6R)-6-(((2S,5S,15R)-16-胺基-15-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-2-(((3-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2,2-二甲基-3-側氧基丙氧基)甲基)胺基甲醯基)-5-異丙基-4,7,11-三側氧基-12-氧雜-3,6,10-三氮雜十六烷基)氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-甲酸（ 2-14）
根據實例 2-12的合成程序合成 2-14（13 mg，64.0%產率）。
MS (ESI) m/z: 1208.9 [M+H] +。 實例 2-15   
步驟1：((8S,11S,14S,21S)-14-(3-((((2R,3S,4R,5S)-5-(2-胺基-2-側氧基乙基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基)胺基)-3-側氧基丙基)-21-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-1-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-11-異丙基-2,2,8-三甲基-1,7,10,13,16-五側氧基-4,19-二氧雜-6,9,12,15-四氮雜二十二烷-22-基)胺基甲酸三級丁基酯（ 2-15a）
向 1-6f（45 mg，0.13 mmol）在DMF（3 mL）中之溶液中添加HATU（55.0 mg，0.15 mmol）和DIPEA（34.1 mg，0.26 mmol）。將混合物在r.t.下攪拌10 min。將 2-8i（147 mg，粗製物）添加至混合物並在r.t.下攪拌5 min。將混合物藉由製備型HPLC（FA 0.1%）純化，得到呈淡黃色固體的 2-8r（93 mg，52%產率）。
MS (ESI) m/z: 1384.1 [M+Na] +。
步驟2：(S)-2-(3-((S)-3-胺基-2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙氧基)丙醯胺基)-N5-(((2R,3S,4R,5S)-5-(2-胺基-2-側氧基乙基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基)-N1-((S)-1-(((S)-1-(((3-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2,2-二甲基-3-側氧基丙氧基)甲基)胺基)-1-側氧基丙-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)戊二醯胺（ 2-15）
向 2-8r（52 mg，0.038 mmol）在DCM（4 mL）中之懸浮液中添加ZnBr 2（258.2 mg，1.147 mmol），然後在45°C下攪拌8 h。將混合物真空濃縮並溶解在DMSO中，然後藉由製備型HPLC（0.1% FA）純化。將級分凍乾，得到呈淡黃色固體的 2-15 （29.2 mg）。
MS (ESI) m/z: 1261.0 [M+H] +。 實例 2-16   
(2S,3S,4S,5R,6R)-6-((S)-2-((S)-2-(3-((R)-4-胺基-3-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丁氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(((3-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羥基-4-甲基-10,13-二側氧基-2,3,9,10,13,15-六氫-1H,12H-苯并[de]哌喃并[3',4':6,7]吲哚𠯤并[1,2-b]喹啉-1-基)胺基)-2,2-二甲基-3-側氧基丙氧基)甲基)胺基)-3-側氧基丙氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-哌喃-2-甲酸（ 2-16）
根據實例 2-10的合成程序合成呈白色固體的 2-16（13.4 mg，79.1%產率）。
MS (ESI) m/z: 1165.7 [M+H] +。
實例1-2和1-4至1-14的化合物以及參考化合物1-1和1-3示出在下表1中。實例2-2和2-4至2-16的化合物以及參考化合物2-1和2-3示出在下表2中。
[表1]：軛合子
化合物編號 軛合子結構
1-1
1-2
1-3
1-4
1-5
1-6
1-7
1-8
1-9
1-10
1-11
1-12
1-13
1-14
[表2]：軛合子-連接子-有效載荷
化合物編號 軛合子 - 連接子 - 有效載荷結構
2-1
2-2
2-3
2-4
2-5
2-6
2-7
2-8
2-9
2-10
2-11
2-12
2-13
2-14
2-15
2-16
軛合子 - 抗體軛合物和抗體藥物軛合物製備和表徵
DAR8 抗體藥物軛合物 / 軛合子 - 抗體軛合物製備。將軛合緩衝液中的抗體（濃度為0.5-25 mg/mL，PBS緩衝液pH 6.0-8.5）在還原溫度（0°C-40°C）下孵育10 min。將8-15當量TECP溶液（PBS緩衝液中的5 mM儲備液）添加至反應混合物，並且使還原反應在還原溫度下進行1-8小時。在將還原混合物冷卻至0°C-25°C後，逐步添加有機溶劑（例如，DMSO、DMF、DMA、PG、乙腈，0-25% v/v）和軛合子-連接子-有效載荷（參見表2）或軛合子（參見表1）儲備液（10-25當量，有機溶劑中的10 mM儲備液）。將軛合溶液在0°C-25°C下放置1-3 h，並且用N-乙醯基半胱胺酸（1 mM儲備液）淬滅反應。將溶液緩衝液交換（旋轉脫鹽柱、超濾和透析）到儲存緩衝液（例如，pH 5.5-6.5組胺酸乙酸鹽緩衝液，具有視需要的添加劑諸如蔗糖，海藻糖，吐溫20、60、80）中。
在軛合步驟後，將ADC（或軛合子-抗體軛合物）緩衝液交換到開環緩衝液（pH 6.5-9.0，PBS，硼酸鹽或tris緩衝液）中，並且將溶液在22°C或37°C下放置1-48 h。經由還原LCMS監測順丁烯二醯亞胺開環過程。一旦軛合的順丁烯二醯亞胺水解完成，就經由透析將所得ADC緩衝交換到鹼性tris pH 8.0-8.5緩衝液或酸性組胺酸-乙酸鹽pH 5.0-6.5緩衝液中。
根據前述方法製備的軛合子-抗體軛合物和ADC分別示出於表3和4中。開環時間在下表3中示出。
用於監測和確定順丁烯二醯亞胺水解的 LCMS 方法。在以下測量條件下進行LC-MS分析： LC-MS系統：Vanquish Flex UHPLC和Orbitrap Exploris 240質譜儀 柱：MAbPac™ RP，2.1*50 mm，4 μm，1,500 Å，Thermo Scientific™ 柱溫：80°C 流動相A：0.1%甲酸（FA）水溶液 流動相B：含有0.1%甲酸（FA）的乙腈溶液 梯度程序1：25 %B-25 %B（0 min-2 min）、25 %B-50 %B（2 min-18 min）、50 %B-90 %B（18 min-18.1 min）、90 %B-90 %B（18.1 min-20 min）、90 %B-25 %B（20 min-20.1 min）、25 %B-25 %B（20.1 min-25 min） 梯度程序2 進樣量：2 μg MS參數：在HMR模式中在R = 15k的設置下獲得完整和變性MS數據，並且在Thermo Scientific™ BioPharma Finder™ 4.0軟體中使用ReSpect™演算法和滑動視窗積分進行去卷積。
ADC 表徵。使用以下分析方法表徵ADC。藉由LCMS方法或HIC方法確定ADC的藥物與抗體比率（DAR）。製得的ADC的SEC純度全部＞ 95%純度。
LCMS 方法：在以下測量條件下進行LC-MS分析： LC-MS系統：Vanquish Flex UHPLC和Orbitrap Exploris 240質譜儀 柱：MAbPac™ RP，2.1*50 mm，4 μm，1,500 Å，Thermo Scientific™ 柱溫：80°C 流動相A：0.1%甲酸（FA）水溶液 流動相B：含有0.1%甲酸（FA）的乙腈溶液 梯度程序：25 %B-25 %B（0 min-2 min）、25 %B-50 %B（2 min-18 min）、50 %B-90 %B（18 min-18.1 min）、90 %B-90 %B（18.1 min-20 min）、90 %B-25 %B（20 min-20.1 min）、25 %B-25 %B（20.1 min-25 min） 進樣量：1 μg MS參數：在HMR模式中在R = 15k的設置下獲得完整和變性MS數據，並且在Thermo Scientific™ BioPharma Finder™ 4.0軟體中使用ReSpect™演算法和滑動視窗積分進行去卷積。
HIC 方法：在以下測量條件下進行HPLC分析： 方法1 HPLC系統：沃特世公司（Waters）ACQUITY ARC HPLC系統 檢測器：測量波長： 280 nm 柱：東曹生命科學公司（Tosoh Bioscience）4.6 μm ID × 3.5 cm，2.5 μm丁基-無孔樹脂柱 柱溫：25°C 流動相A：1.5 M硫酸銨、50 mM磷酸鹽緩衝液，pH 7.0 流動相B：50 mM磷酸鹽緩衝液、25%（V/V）異丙醇，pH 7.0 梯度程序：0%B-0%B（0 min-2 min）、0%B-100%B（2 min-15 min）、100%B-100%B（15 min-16 min）、100%B-0%B（16 min-17 min）、0%B-0%B（17 min-20 min） 進樣量：20 μg 方法2 HPLC系統：沃特世公司ACQUITY ARC HPLC系統 檢測器：測量波長：280 nm 柱：MABPac HIC-10，5 μm，4.6 × 10 mm（熱電公司（Thermo）） 柱溫：25°C 流動相A：1.5 M硫酸銨、50 mM磷酸鈉，pH 7.0 流動相B：50 mM磷酸鈉，pH 7.0 梯度程序：20 % B- 20 % B（0 min-1 min）、0 % B-0 % B（1 min-35 min）、20 % B-20 % B（35 min-40 min） 流速：0.5 mL/min 樣本製備：將樣本用初始流動相稀釋至0.5 mg/mL。
用於確定 ADC 純度的 SEC 方法：在以下測量條件下進行HPLC分析： HPLC系統：沃特世公司H-Class UPLC系統 檢測器：測量波長：280nm 柱：ACQUITY UPLC BEH200 SEC 1.7um 4.6 x 150mm，沃特世公司 柱溫：室溫 流動相A：200 mM磷酸鹽緩衝液，250 mM氯化鉀，15%異丙醇，pH 7.0 梯度程序：在10 min等度洗脫下，流速為0.3 mL/min 進樣量：20 μg
ADC 疏水性評價：具有較高疏水性的ADC將顯現為具有稍晚的來自HIC（疏水性相互作用柱）層析法的滯留時間。使用DAR8峰作為參考的結果呈現於表4中。
藉由用於監測環水解的上述LCMS方法測量的開環時間的結果作為RO T 1/2（即50%順丁烯二醯亞胺環打開的時間（以小時計））呈現於表3中。
[表3]： 軛合子-抗體軛合物
軛合子 - 抗體軛合物編號 抗體 軛合子結構 MS DAR RO T 1/2 （ h ）
3-1 赫賽汀 8.02 NA
3-3 赫賽汀 8.12 36.0
3-4 赫賽汀 7.98 1.6
3-5 赫賽汀 NA NA
3-6 赫賽汀 8.00 1.9
3-7 赫賽汀 8.00 1.7
3-8 赫賽汀 7.80 1.6
3-9 赫賽汀 7.96 0.8
3-10 赫賽汀 8.00 2.0
3-11 赫賽汀 8.00 14.0
3-12 赫賽汀 8.00 1.6
3-13 赫賽汀 8.00 1.7
3-14 赫賽汀 8.00 2.0
[表4]：ADC
ADC 編號 抗體 ADC 結構 DAR8 物質HIC 滯留時間（min ）（方法1 ）
ADC4-B Ifinatamab 10.860
ADC4-4o Ifinatamab 9.676
ADC4-5o Ifinatamab 9.764
ADC4-6o 赫賽汀 NA
ADC4-7o Ifinatamab 9.637
ADC4-8o Ifinatamab 10.444
ADC4-9o Ifinatamab 10.883
ADC4-10o Ifinatamab 9.898
ADC4-11o Ifinatamab 9.948
ADC4-12o Ifinatamab 9.801
ADC4-13o Ifinatamab 9.877
ADC4-14o Ifinatamab 9.977
ADC4-16o Ifinatamab 9.795
抗體資訊
Ifinatamab MABX-9001a（抗B7H3抗體）
輕鏈序列
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSRLIYMHWYQQKPGQAPRPLIYATSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQWNSNPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC（SEQ ID NO: 1）
重鏈序列
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTNYVMHWVRQAPGQGLEWMGYINPYNDDVKYNEKFKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARWGYYGSPLYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK（SEQ ID NO: 2） 軛合子 - 抗體軛合物水解動力學
軛合子-抗體軛合物順丁烯二醯亞胺水解（開環）動力學呈現於圖1A-1L、表3（對於pH 7.0反應條件，水解T 1/2）和表5中。表5中的數據藉由上述LCMS方法生成並且包括在抗體軛合後在超過95%的軛合子中順丁烯二醯亞胺環打開的時間（以小時計）（「RO完成時間（＞ 95%）（h）」）。軛合子-抗體軛合物3-1的結果表明在24小時後，約0%的順丁烯二醯亞胺環係打開的；軛合子-抗體軛合物3-3的結果表明在24小時後，約28%的順丁烯二醯亞胺環係打開的。 [表5]：軛合子-抗體軛合物時程動力學
軛合子-抗體軛合物編號 pH 時間點（h） MS DAR RO（%） RO完成時間（＞ 95%）（h）
LC HC 總計
3-1 7 1 8.02 0 0 0 24 h 約0%
3 8.02 0 0.17 0.13
5 8.02 0 0.2 0.15
7 8.02 0 0 0
24 8 0 0.27 0.21
3-3 7 1 8.04 0 0 0 24 h 約28%
3 8.04 0.89 0.8 0.82
5 8.08 2.52 3.82 3.5
7 8.08 3.8 6.1 5.53
24 8.12 13.49 32.76 27.94
3-4 7 1 7.96 23.19 51.56 44.47 7
3 7.98 75.33 88.19 84.98
5 7.98 87.91 90.01 89.49
7 7.98 95.37 99.07 98.15
24 7.98 99.66 99.08 99.23
3-6 7 1 8 15.27 39.88 33.73 24
3 8 53.78 81.63 74.67
5 8 73.23 93.34 88.31
7 8 79.56 96.47 92.24
24 8 93.88 99.41 98.03
3-7 7 1 8.52 28.33 40.83 37.71 ＞ 24
3 8 60.08 79.61 74.73
5 8 77.85 88.54 85.87
7 8 86.34 87.98 87.57
24 8 92.99 90.8 91.35
3-8 7 1 7.74 44.94 / / 5
3 7.88 80.15 96.11 92.12
5 7.78 92.96 99.49 97.85
7 7.8 94.42 99.47 98.21
24 7.8 95.48 99.55 98.53
3-9 7 1 7.94 40.06 66.09 59.58 5
3 7.94 79.93 99.84 94.86
5 7.96 89.36 99.07 96.64
7 7.96 93.56 100 98.39
24 7.96 99.17 100 99.79
3-10 7 1 8 21.63 42.51 37.29 7
3 8 49.46 76.09 69.43
5 8 64.05 91.86 84.91
7 8 83.47 98.26 94.56
24 8 100 99.52 99.64
3-11 7 1 8 1.97 3.41 3.05 96
3 8 6.37 12.32 10.83
5 8 10.15 31.72 26.33
7 8 14.6 33.03 28.42
24 8 68.64 84.46 80.51
96 8 89.26 96.94 95.02
3-12 7 1 8 27.31 45.46 40.92 7
3 8 74.84 89.82 86.08
5 8 78.30 95.33 91.07
7 8 88.53 99.07 96.44
24 8 95.87 99.64 98.70
3-13 7 1 8 21.50 43.63 38.10 7
3 8 64.20 92.96 85.77
5 8 74.30 100.00 93.58
7 8 93.68 99.68 98.18
24 8 94.99 100.00 98.75
3-14 7 1 8 17.39 46.79 39.44 24
3 8 32.97 67.87 59.15
5 8 77.46 85.71 83.65
7 8 72.00 95.45 89.59
24 8 95.83 99.69 98.73
數據證明本發明揭露的軛合子-抗體軛合物（例如，3-4至3-14）在溫和條件（例如，pH 7.0）下容易地經歷順丁烯二醯亞胺水解。本發明揭露的軛合子不僅在常規條件（例如，pH 6.5-7.0）下與抗體軛合，而且在軛合條件下也可以發生順丁烯二醯亞胺水解。不需要將緩衝液交換到鹼性緩衝液中進行水解，這可以有助於降低ADC製造成本。添加淬滅試劑可以足以停止軛合反應。在藉由經由還原LCMS監測完成順丁烯二醯亞胺水解後，可以將本發明揭露的軛合物緩衝液交換到配製緩衝液中。 自水解軛合子 - 抗體軛合物的穩定性
在上述軛合和水解步驟（參見「 DAR8 抗體藥物軛合物 / 軛合子 - 抗體軛合物製備」）後，將軛合子-抗體軛合物在配製緩衝液（pH 5.5 20 mM組胺酸緩衝液）或麩胱甘肽（GSH）緩衝液（pH 7.4或8.0）中孵育，並且將溶液在22°C或37°C下放置1-168 h。經由還原LCMS監測水解狀態。結果呈現於表6、表7和圖2A-23B中。
具有GSH的穩定性
C ADC（mM） GSH（mM） pH 時間（h） 溫度（°C）
0.001-0.03 10 7.4/8.0 ≥ 18 22/37
[表6]：在具有和不具有GSH的pH 7.4和8.0緩衝液中的軛合子-抗體穩定性
軛合子-抗體軛合物編號 孵育時間（h） pH 溫度（°C） MS DAR
3-3 20 7.4 22 8.06
37 7.98
8.0 22 8.02
3-4 20 7.4 22 8.00
37 8.00
8.0 22 8.00
3-5 21 7.4 22 8.00
37 8.00
8.0 22 8.00
3-6 20 7.4 22 8.00
37 8.00
8.0 22 8.00
3-7 20 7.4 22 8.00
37 8.00
8.0 22 8.00
3-8 20 7.4 22 7.92
37 7.92
8.0 22 7.88
3-9 20 7.4 22 8.00
37 8.00
8.0 22 8.00
3-10 20 7.4 22 8.00
37 8.00
8.0 22 8.00
3-11 20 7.4 22 8.00
37 8.00
8.0 22 8.00
3-12 24 7.4 22 8.00
37 8.00
8.0 22 8.00
3-13 24 7.4 22 7.90
37 7.90
8.0 22 7.90
3-14 24 7.4 22 7.98
37 8.00
8.0 22 8.00
結果證明，當在具有或不具有GSH的緩衝液中孵育18小時時，對於所有軛合子-抗體軛合物的DAR保持在約8.0。
[表7]：在配製緩衝液（pH 5.5 20 mM組胺酸緩衝液）中的軛合子-抗體穩定性
軛合子-抗體軛合物編號 孵育時間（h） pH 溫度（°C） MS DAR-T = 0 h MS DAR-T = 168 h 在T = 168 h時順丁烯二醯亞胺開環率（%）
3-3 168 5.5 22 7.92 7.92 96.40
3-4 168 5.5 22 8.00 8.00 98.86
3-6 168 5.5 22 8.00 8.00 97.04
3-7 168 5.5 22 8.00 8.00 97.99
3-8 168 5.5 22 7.76 7.80 95.50
3-9 240 5.5 22 8.00 8.00 98.51
3-10 168 5.5 22 8.00 8.00 98.38
3-11 168 5.5 22 8.02 8.00 96.99
3-12 168 5.5 22 8.02 8.02 97.83
3-13 168 5.5 22 7.84 7.88 98.33
3-14 168 5.5 22 8.00 8.00 97.15
表7中呈現的結果證明，所揭露的軛合子-抗體軛合物在酸性配製緩衝液中168小時後維持其＞ 96%的水解形式。 ADC ：軛合後的順丁烯二醯亞胺水解
在順丁烯二醯亞胺水解後，ADC 4-4和4-5（參見表4）在緩衝液交換至配製緩衝液中的過程期間容易黏附至Slide-A-Lyzer ™透析套組（kit）或超濾Amicon®膜，這導致低回收率（＜ 40%）。在不局限於任何機理或作用方式的情況下，懷疑順丁烯二醯亞胺水解產生額外的8個負電荷，並且可能已導致ADC的物理特性的變化，使得它們在純化柱和超濾Amicon®膜上變得有黏性。ADC 4-7至4-16在純化期間具有＞ 80%回收，並且未觀察到在Slide-A-Lyzer™透析套組或超濾Amicon®膜上的黏附行為。
ADC在GSH溶液或配製緩衝液中的穩定性評估結果分別呈現於表8和表9以及圖24A-37B中。
[表8]：在具有和不具有GSH的pH 7.4和8.0緩衝液中的ADC穩定性
ADC C GSH（mM） 時間（h） pH 溫度（°C） MS DAR
ADC 4-6 10 18 7.4 22 8.06
37 8.08
8.0 22 8.06
ADC 4-10 10 18 7.4 22 8.04
37 8.02
8.0 22 8.04
ADC 4-11 10 18 7.4 22 8.34
37 8.48
8.0 22 8.34
ADC 4-12 10 18 7.4 22 8.18
37 8.32
8.0 22 8.20
ADC 4-13 10 72 7.4 22 7.94
37 7.96
8.0 22 7.94
ADC 4-14 10 72 7.4 22 8.14
37 8.16
8.0 22 8.12
ADC 4-16 10 96 7.4 22 8.14
37 8.20
8.0 22 8.14
結果證明，在GSH溶液（pH 7.4或8.0，持續18小時）中孵育後，對於ADC 4-6、4-10至4-14和4-16未觀察到去軛合事件。
[表9]：在配製緩衝液（20 mM組胺酸緩衝液）中的ADC穩定性
ADC 時間（h） pH 溫度（°C） MS DAR-T = 0 h MS DAR-T = 168 h 在T = 168 h時順丁烯二醯亞胺開環率（%）
ADC 4-6 93 5.5 22 8.02 8.14 98.88
ADC 4-10 168 5.5 22 8.02 8.08 95.21
ADC 4-11 168 5.5 22 8.12 8.18 99.93
ADC 4-12 168 5.5 22 8.06 8.10 99.81
ADC 4-13 168 5.5 22 8.00 8.02 99.94
ADC 4-14 168 5.5 22 8.06 8.08 99.96
ADC 4-16 168 5.5 22 8.06 8.04 99.92
結果證明，在配製緩衝液中儲存一週後，對於ADC 4-6、4-10至4-14和4-16未觀察到去軛合事件。 細胞系
NCI-H1650 （ ATCC ， CRL-5883 ） 。NCI-H1650係在1987年從患有3期支氣管肺泡癌的27歲男性吸煙者的肺組織中分離的表現出上皮形態的細胞系，並且NCI-H1650購自ATCC。用於NCI-H1650的基礎培養基係ATCC配製的RPMI-1640培養基（ATCC 30-2001）。為了製備完全生長培養基，將最終濃度為10%的胎牛血清（吉畢科公司（Gibco），10099-141C）添加至基礎培養基。使細胞系在濕潤的5% CO 2氣氛中在37°C下生長，並且用MycoAlert ™PLUS黴漿菌檢測套組（龍沙公司（Lonza），LT07-710）定期測試黴漿菌的存在。
Capan-1 （ ATCC ， HTB-79 ）。Capan-1係從患有胰臟腺癌的40歲白人男性的胰臟中分離的表現出上皮形態的細胞系，並且Capan-1購自ATCC。用於Capan-1的基礎培養基係ATCC配製的伊斯科夫（Iscove's）改良杜氏培養基（目錄號30-2005）。為了製備完全生長培養基，將最終濃度為20%的胎牛血清（吉畢科公司，10099-141C）添加至基礎培養基。使細胞系在濕潤的5% CO 2氣氛中在37°C下生長，並且用MycoAlert ™PLUS黴漿菌檢測套組（龍沙公司，LT07-710）定期測試黴漿菌的存在。
MDA-MB-453 （ SIBS ）。MDA-MB-453來源於一名48歲女性轉移性乳癌患者的滲出液，該轉移性乳癌累及結節、腦以及胸膜腔和心包腔兩者，並且MDA-MB-453購自SIBS。用於MDA-MB-453的基礎培養基係RPMI 1640培養基，HEPES（吉畢科公司，22400105）。為了製備完全生長培養基，將最終濃度為10%的胎牛血清（吉畢科公司，10099-141C）添加至基礎培養基。使細胞系在濕潤的5% CO 2氣氛中在37°C下生長，並且用MycoAlert ™PLUS黴漿菌檢測套組（龍沙公司，LT07-710）定期測試黴漿菌的存在。 [表10]：B7H3表現水平
細胞系 分子編號（QSC套組）
NCI-H1650 505998
Capan-1 63062
MDA-MB-453 0
在 NCI-H1650 、 Capan-1 和 MDA-MB-453 癌細胞系中的 ADC 直接殺傷
在NCI-1650、Capan-1和MDA-MB-453癌系中評估ADC直接殺傷。將細胞接種（NCI-1650或MDA-MB-453（2E3/孔）或Capan-1（4E3/孔））至3D 96孔板（康寧公司：4520）中（80 µl/孔），並且在37°C、5% CO 2下孵育過夜。添加含有不同濃度的ADC（40 µl/孔）的新鮮生長培養基，並且在37°C、5% CO 2下孵育6天。藉由3D試劑（普洛麥格公司（Promega），G9683）檢測細胞活力，100 µl/孔。將3D板在室溫下孵育30分鐘以穩定發光信號。然後用微板讀取器分析板。
將數據匯總於表11-12和圖38-43中。 [表11]：對B7H3高和低表現細胞系的ADC直接殺傷效力
ADC NCI-H1650 （高）， 3D Capan-1 （ 低 ）， 3D
Emax （ % ） EC50 （ nM ） Emax （ % ） EC50 （ nM ）
ADC4-B 75.3 3.9 84.9 0.5
ADC4-8 79.5 2.9 66.6 1.0
ADC4-9 81.4 2.8 78.8 0.8
ADC4-10 80.0 1.7 68.4 0.6
[表12]：對B7H3高和低表現細胞系的ADC直接殺傷效力
ADC NCI-H1650 （高）， 3D Capan-1 （ 低 ）， 3D
Emax （ % ） EC50 （ nM ） Emax （ % ） EC50 （ nM ）
ADC4-B 66.5 4.5 74.3 1.1
ADC4-11 85.6 2.1 62.4 1.0
ADC4-12 83.2 2.3 61.9 0.7
ADC4-13 79.3 1.6 58.5 0.5
ADC4-14 81.6 1.3 61.3 0.4
ADC4-16 76.4 1.5 62.2 0.6
ADC體內功效研究
將3 × 10 6個H1650細胞/200 μL PBS/基質膠皮下植入雌性BALB/c裸小鼠的右側腹。在孵育後，使用卡尺每週兩次在兩個尺寸上確定腫瘤體積並且將其使用下式表示（以mm 3計）：V = 0.5(a × b 2)，其中a和b分別是腫瘤的長直徑和短直徑。當腫瘤的平均體積達到大約200 mm 3大小時，將小鼠隨機分為6組，每組8隻動物，並且用媒介物ADC4-B、ADC4-10、ADC4-12、ADC4-14或ADC4-16以1或3 mg/kg QW*2進行靜脈內治療。將部分消退（PR）定義為在三次連續測量中腫瘤體積小於第一天給藥的起始腫瘤體積的50%，完全消退（CR）定義為在三次連續測量中腫瘤體積小於14 mm 3。數據表示為平均腫瘤體積 ± 平均值的標準差（SEM）。使用以下公式計算腫瘤生長抑制（TGI）： 治療t = 在時間t經治療的腫瘤體積 治療t 0= 在時間0經治療的腫瘤體積 安慰劑t = 在時間t安慰劑腫瘤體積 安慰劑t 0= 在時間0安慰劑腫瘤體積
結果呈現於圖44和45中。具有開環（RO）軛合子的測試ADC（即，ADC4-10、ADC 4-12、ADC 4-14和ADC 4-16）在人肺癌模型中表現出強效的抗癌活性，並且活性優於非RO軛合子ADC（即，ACD4-B）（圖44）。RO軛合子ADC以劑量依賴性方式表現出抗腫瘤活性（圖45）。 ADC 血漿穩定性
ADC與血漿的孵育：將ADC稀釋到小鼠或人血漿中以產生100 μg/mL的ADC在血漿中的最終溶液。將樣本在37°C下孵育。在五個時間點（0、4、24、72或168 h）獲取等分試樣（100 μL）。將樣本在-80°C下冷凍直至分析。
血漿有效載荷濃度在以下測量條件下進行測定： 儀器：LC-MS/MS（Triple Quad 6500 plus） 監測器：MRM 柱：先進材料技術公司（Advanced Materials Technology），HALO AQ-C18 2.7µm 90Å，50*2.1 mm 柱溫：40 °C 流動相A：H 2O-0.1%FA 流動相B：ACN-0.1%FA 用於DXd和Topo1i類似物的梯度程序：2%B-2%B（0 min-0.2 min）、2%B-98%B（0.2 min-1.2 min）、98%B-98%B（1.2 min-2.0 min）、98%B-2%B（2.0 min-2.01 min）、2%B-2%B（2.01 min-4.0 min） 進樣量：10 μL（DXd或Topo1i類似物）
結果呈現於圖46和47中。具有順丁烯二醯亞胺水解的RO軛合子的ADC在小鼠血漿（圖46）和在人血漿（圖47）中顯示出低的有效載荷釋放率。 在小鼠 PK 研究中
在向H1650荷瘤小鼠或非荷瘤小鼠靜脈內投與一劑量的ADC後，在0.0833、2、24、72、120和168 h後收集血液樣本，之後離心（4°C，3000 × g，7 min）以分離血漿。藉由內部開發的Meso Scale Discovery（MSD）配體結合方法測量ADC的濃度。簡而言之，將帶His標籤的B7H3細胞外結構域融合蛋白用作捕獲試劑，並且將生物素標記的抗有效載荷Ab用作ADC的檢測試劑。使用與上述相同的方法測量有效載荷的血漿濃度。
結果呈現於圖48中。具有順丁烯二醯亞胺水解的RO軛合子的ADC在H1650功效模型中顯示出良好ADC PK和低有效載荷暴露。
雖然出於清楚理解的目的，已經藉由說明以及實例的方式相當詳細地呈現了前述揭露內容，但熟悉該項技術者將清楚的係，可以實施某些微小改變和修改。因此，描述和實例不應解釋為限制性的。
應當理解，即使本文提到了任何出版物，但這種提及並不構成承認出版物形成任何國家的本領域公知常識的一部分。
本文引用的所有非專利出版物、專利、專利申請和公開的專利申請的揭露內容藉由援引以其全文特此併入本文。
無
[圖1A-1L] 描繪了軛合子（conjugator）-抗體軛合物順丁烯二醯亞胺水解（開環）動力學曲線。 [圖2A-2D] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-3在具有和不具有GSH的pH 7.4和8.0緩衝液中的穩定性數據。 [圖3A-3D] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-4在具有和不具有GSH的pH 7.4和8.0緩衝液中的穩定性數據。 [圖4A-4D] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-6在具有和不具有GSH的pH 7.4和8.0緩衝液中的穩定性數據。 [圖5A-5D] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-7在具有和不具有GSH的pH 7.4和8.0緩衝液中的穩定性數據。 [圖6A-6D] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-8在具有和不具有GSH的pH 7.4和8.0緩衝液中的穩定性數據。 [圖7A-7D] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-9在具有和不具有GSH的pH 7.4和8.0緩衝液中的穩定性數據。 [圖8A-8D] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-10在具有和不具有GSH的pH 7.4和8.0緩衝液中的穩定性數據。 [圖9A-9D] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-11在具有和不具有GSH的pH 7.4和8.0緩衝液中的穩定性數據。 [圖10A-10D] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-12在具有和不具有GSH的pH 7.4和8.0緩衝液中的穩定性數據。 [圖11A-11D] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-13在具有和不具有GSH的pH 7.4和8.0緩衝液中的穩定性數據。 [圖12A-12D] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-14在具有和不具有GSH的pH 7.4和8.0緩衝液中的穩定性數據。 [圖13A-13B] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-3在pH 5.5組胺酸緩衝液中持續168 h的穩定性數據。 [圖14A-14B] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-4在pH 5.5組胺酸緩衝液中持續168 h的穩定性數據。 [圖15A-15B] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-6在pH 5.5組胺酸緩衝液中持續168 h的穩定性數據。 [圖16A-16B] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-7在pH 5.5組胺酸緩衝液中持續168 h的穩定性數據。 [圖17A-17D] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-8在pH 5.5組胺酸緩衝液中持續168 h的穩定性數據。 [圖18A-18B] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-9在pH 5.5組胺酸緩衝液中持續168 h的穩定性數據。 [圖19A-19B] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-10在pH 5.5組胺酸緩衝液中持續168 h的穩定性數據。 [圖20A-20B] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-11在pH 5.5組胺酸緩衝液中持續168 h的穩定性數據。 [圖21A-21B] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-12在pH 5.5組胺酸緩衝液中持續168 h的穩定性數據。 [圖22A-22B] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-13在pH 5.5組胺酸緩衝液中持續168 h的穩定性數據。 [圖23A-23B] 描繪了軛合子-抗體軛合物3-14在pH 5.5組胺酸緩衝液中持續168 h的穩定性數據。 [圖24A-24D] 描繪了ADC 4-6在pH 7.4或8.0 GSH緩衝液中的穩定性數據。 [圖25A-25D] 描繪了ADC 4-10在pH 7.4或8.0 GSH緩衝液中的穩定性數據。 [圖26A-26D] 描繪了ADC 4-11在pH 7.4或8.0 GSH緩衝液中的穩定性數據。 [圖27A-27D] 描繪了ADC 4-12在pH 7.4或8.0 GSH緩衝液中的穩定性數據。 [圖28A-28D] 描繪了ADC 4-13在pH 7.4或8.0 GSH緩衝液中的穩定性數據。 [圖29A-29D] 描繪了ADC 4-14在pH 7.4或8.0 GSH緩衝液中的穩定性數據。 [圖30A-30D] 描繪了ADC 4-16在pH 7.4或8.0 GSH緩衝液中的穩定性數據。 [圖31A-31D] 描繪了ADC 4-6在配製緩衝液中的穩定性數據。 [圖32A-32D] 描繪了ADC 4-10在配製緩衝液中的穩定性數據。 [圖33A-33B] 描繪了ADC 4-11在配製緩衝液中的穩定性數據。 [圖34A-34B] 描繪了ADC 4-12在配製緩衝液中的穩定性數據。 [圖35A-35B] 描繪了ADC 4-13在配製緩衝液中的穩定性數據。 [圖36A-36B] 描繪了ADC 4-14在配製緩衝液中的穩定性數據。 [圖37A-37B] 描繪了ADC 4-16在配製緩衝液中的穩定性數據。 [圖38] 描繪了對B7H3高表現細胞系（H1650）的ADC直接殺傷活性。 [圖39] 描繪了對B7H3低表現細胞系（Capan-1）的ADC直接殺傷活性。 [圖40] 描繪了對B7H3（-）表現細胞系（MB-453）的ADC直接殺傷活性。 [圖41] 描繪了對B7H3高表現細胞系（H1650）的ADC直接殺傷活性。 [圖42] 描繪了對B7H3低表現細胞系（Capan-1）的ADC直接殺傷活性。 [圖43] 描繪了對B7H3（-）表現細胞系（MB-453）的ADC直接殺傷活性。 [圖44] 係示出了在肺癌的H1650模型中的ADC抗腫瘤活性之線圖。 [圖45] 係示出了在肺癌的H1650模型中的劑量依賴性ADC抗腫瘤活性之線圖。 [圖46] 係示出了在小鼠血漿中從ADC的有效載荷釋放率之線圖。 [圖47] 係示出了在人血漿中從ADC的有效載荷釋放率之線圖。 [圖48] 係示出了ADC的PK概況之線圖。
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Claims (69)

  1. 一種具有式 (I) 之化合物： (I) 或其藥學上可接受的鹽、互變異構物、溶劑化物或立體異構物，其中： BA係選自人源化、嵌合或人抗體或其抗原結合片段的結合劑； RG係反應性基團殘基； RS係開環穩定基團； RE係開環強化子； R 1a和R 1b中的每一個獨立地是H；取代或未取代的C 1-4烷基；取代或未取代的C 3-5環烷基；或者R 1a和R 1b連同它們所附接的原子一起形成取代或未取代的C 3-5環烷基； R 2a和R 2b中的每一個獨立地是H；取代或未取代的C 1-4烷基；取代或未取代的C 3-5環烷基；或者R 2a和R 2b連同它們所附接的原子一起形成取代或未取代的C 3-5環烷基； R 3a和R 3b中的每一個獨立地是H；取代或未取代的C 1-4烷基；取代或未取代的C 3-5環烷基；或者R 3a和R 3b連同它們所附接的原子一起形成取代或未取代的C 3-5環烷基； R 4係H；取代或未取代的C 1-4烷基；或者取代或未取代的C 3-5環烷基； r、s和t中的每一個獨立地是0、1或2； A係延伸子單元殘基； 下標a’係0或1； W係可切割單元； 下標w’係0或1； Y係間隔子單元； 下標y’係0或1； PA係有效載荷殘基；並且 下標x係1至15。
  2. 如請求項1所述之化合物，其中R 1a、R 1b、R 2a、R 2b、R 3a、R 3b和R 4中的每一個獨立地是H。
  3. 如請求項1或請求項2所述之化合物， 其中RS係胺基基團或-NR 5aR 5b，並且 其中R 5a和R 5b中的每一個獨立地是H或者取代或未取代的C 1-4烷基。
  4. 如請求項3所述之化合物，其中RS係胺基基團或-N(CH 3) 2。
  5. 如請求項4所述之化合物，其中RS係胺基基團。
  6. 如請求項1-5中任一項所述之化合物，其中RE係鍵、-O-、-OC(=O)-、-OC(=O)NR 6-、-NHC(=O)NR 6-、-OS(=O) 2NR 6-、-NHS(=O) 2NR 6-或-OC(=O)NHS(=O) 2NR 6-；並且R 6係H或者取代或未取代的C 1-4烷基。
  7. 如請求項6所述之化合物，其中R 6係H、甲基、乙基或異丙基。
  8. 如請求項7所述之化合物，其中RE係-OC(=O)NR 6-。
  9. 如請求項8所述之化合物，其中RE係-OC(=O)NH-。
  10. 如請求項1-9中任一項所述之化合物，其中RG係 、 、 或 。
  11. 如請求項1-9中任一項所述之化合物，其中RG係 、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-或 。
  12. 如請求項1-11中任一項所述之化合物，其中r係0。
  13. 如請求項1-11中任一項所述之化合物，其中s係1。
  14. 如請求項1-11中任一項所述之化合物，其中t係1或2。
  15. 如請求項1-14中任一項所述之化合物，其中A係-(CH 2) n-C(═O)-、-CH 2-C(═O)-NH-(CH 2) n-C(═O)-、-(CH 2CH 2O)n-CH 2CH 2-C(═O)-、-CH[-(CH 2) n-COOH]-C(═O)-、-CH 2-C(═O)-NH-(CH 2) n-C(═O)-NH-(CH 2) n-C(═O)-或-C(═O)-(CH 2) n-C(═O)-，其中每個n獨立地表示1、2、3、4或5的整數。
  16. 如請求項1-15中任一項所述之化合物，其中W w’係下式之一： 或 ，並且 其中HG係親水性部分或氫。
  17. 如請求項16所述之化合物，其中HG係糖、磷酸酯、硫酸酯、磷酸二酯或膦酸酯。
  18. 如請求項17所述之化合物，其中HG係糖並且該糖係β-D-半乳糖、N-乙醯基-P-D-半乳胺糖、N-乙醯基-a-D-半乳胺糖、N-乙醯基-P-D-葡糖胺、β-D-葡糖醛酸、a-L-艾杜糖醛酸、a-D-半乳糖、a-D-葡萄糖、β-D-葡萄糖、a-D-甘露糖、β-D-甘露糖、a-L-岩藻糖、β-D-木糖、神經胺酸、其硫酸鹽、磷酸鹽、羧基、胺基或O-乙醯基修飾。
  19. 如請求項16所述之化合物，其中HG係 、 或 。
  20. 如請求項1-19中任一項所述之化合物，其中Y y’係對胺基苄醇（PAB）單元。
  21. 如請求項1所述之化合物，其中該化合物係下式之一： 、 、 、 、 、 、 或 。
  22. 如請求項1所述之化合物，其中該化合物係下式之一： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
  23. 如請求項1-22中任一項所述之化合物，其中BA係ifinatamab、考非妥珠單抗、帕瑞妥單抗或曲妥珠單抗，或者ifinatamab、考非妥珠單抗、帕瑞妥單抗或曲妥珠單抗的抗原結合片段。
  24. 如請求項1-22中任一項所述之化合物，其中BA係結合選自HER2、HER3、PTK7或B7H3的受體中的一或多種的人源化、嵌合或人抗體或其抗原結合片段。
  25. 如請求項1所述之化合物，其中該化合物係 、 、 、 、 、 、 、 或 ， 其中Ab係ifinatamab。
  26. 如請求項1所述之化合物，其中該化合物係 、 、 、 、 、 、 、 或 ， 其中Ab係ifinatamab。
  27. 一種藥物組成物，該藥物組成物包含如請求項1-26中任一項所述之化合物或其藥學上可接受的鹽、互變異構物、溶劑化物或立體異構物，以及藥學上可接受的賦形劑。
  28. 一種具有式 (II) 之化合物： (II) 或藥學上可接受的鹽、互變異構物、溶劑化物或立體異構物，其中： RG係反應性基團； RS係開環穩定基團； RE係開環強化子； R 1a和R 1b中的每一個獨立地是H；取代或未取代的C 1-4烷基；取代或未取代的C 3-5環烷基；或者R 1a和R 1b連同它們所附接的原子一起形成取代或未取代的C 3-5環烷基； R 2a和R 2b中的每一個獨立地是H；取代或未取代的C 1-4烷基；取代或未取代的C 3-5環烷基；或者R 2a和R 2b連同它們所附接的原子一起形成取代或未取代的C 3-5環烷基； R 3a和R 3b中的每一個獨立地是H；取代或未取代的C 1-4烷基；取代或未取代的C 3-5環烷基；或者R 3a和R 3b連同它們所附接的原子一起形成取代或未取代的C 3-5環烷基； R 4係H、取代或未取代的C 1-4烷基；或者取代或未取代的C 3-5環烷基； r、s和t中的每一個獨立地是0、1或2； A係延伸子單元殘基； 下標a’係0或1； W係可切割單元； 下標w’係0或1； Y係間隔子單元； 下標y’係0或1；並且 PA係有效載荷殘基。
  29. 如請求項28所述之化合物，其中R 1a、R 1b、R 2a、R 2b、R 3a、R 3b和R 4中的每一個獨立地是H。
  30. 如請求項28或29所述之化合物， 其中RS係胺基基團或-NR 5aR 5b，並且 其中R 5a和R 5b中的每一個獨立地是H或者取代或未取代的C 1-4烷基。
  31. 如請求項30所述之化合物，其中RS係胺基基團或-N(CH 3) 2。
  32. 如請求項31所述之化合物，其中RS係胺基基團。
  33. 如請求項28-32中任一項所述之化合物，其中RE係鍵、-O-、-OC(=O)-、-OC(=O)NR 6-、-NHC(=O)NR 6-、-OS(=O) 2NR 6-、-NHS(=O) 2NR 6-或-OC(=O)NHS(=O) 2NR 6-；並且R 6係H或者取代或未取代的C 1-4烷基。
  34. 如請求項33所述之化合物，其中R 6係H、甲基、乙基或異丙基。
  35. 如請求項34所述之化合物，其中RE係-OC(=O)NR 6-。
  36. 如請求項35所述之化合物，其中RE係-OC(=O)NH-。
  37. 如請求項28-36中任一項所述之化合物，其中RG係 或 。
  38. 如請求項28-37中任一項所述之化合物，其中r係0。
  39. 如請求項28-38中任一項所述之化合物，其中s係1。
  40. 如請求項28-39中任一項所述之化合物，其中t係1或2。
  41. 如請求項28-40中任一項所述之化合物，其中A係-(CH 2) n-C(═O)、-CH 2-C(═O)-NH-(CH 2) n-C(═O)、-(CH 2CH 2O) n-CH 2CH 2-C(═O)、-CH[-(CH 2) n-COOH]-C(═O)、-CH 2-C(═O)-NH-(CH 2) n-C(═O)-NH-(CH 2) n-C(═O)或-C(═O)-(CH 2) n-C(═O)，並且其中每個n獨立地表示1、2、3、4或5的整數。
  42. 如請求項28-41中任一項所述之化合物，其中W w’係下式之一： 或 ， 並且其中HG係親水性部分或氫。
  43. 如請求項42所述之化合物，其中HG係糖、磷酸酯、硫酸酯、磷酸二酯或膦酸酯。
  44. 如請求項43所述之化合物，其中HG係糖並且該糖係β-D-半乳糖、N-乙醯基-P-D-半乳胺糖、N-乙醯基-a-D-半乳胺糖、N-乙醯基-P-D-葡糖胺、β-D-葡糖醛酸、a-L-艾杜糖醛酸、a-D-半乳糖、a-D-葡萄糖、β-D-葡萄糖、a-D-甘露糖、β-D-甘露糖、a-L-岩藻糖、β-D-木糖、神經胺酸、其硫酸鹽、磷酸鹽、羧基、胺基或O-乙醯基修飾。
  45. 如請求項42所述之化合物，其中HG係 、 或 。
  46. 如請求項28-45中任一項所述之化合物，其中Y y’係PAB單元。
  47. 如請求項28所述之化合物，其中該化合物係下式之一： 、 、 、 、 、 、 或 。
  48. 如請求項28-47中任一項所述之化合物，其中該化合物係下式之一： 、 、 、 、 、 、 、 或 。
  49. 如請求項28-48中任一項所述之化合物，其中該化合物係 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
  50. 如請求項1-26和28-48中任一項所述之化合物，其中每個PA獨立地是細胞毒性劑。
  51. 如請求項50所述之化合物，其中PA獨立地選自以下群組，該群組由以下組成：DXd、7-乙基-10-羥基-喜樹鹼（SN-38）和單甲基澳瑞司他汀E（MMAE）。
  52. 如請求項50所述之化合物，其中PA獨立地表示具有式 (VI) 之化合物： (VI)， 其中R 9和R 10中的每一個獨立地是氫、鹵素或者取代或未取代的C 1-4烷基。
  53. 如請求項50所述之化合物，其中PA獨立地表示 、 、 、 或 。
  54. 一種具有式 (III) 之化合物： (III) 或其藥學上可接受的鹽、互變異構物、溶劑化物或立體異構物， 其中： RG係反應性基團； RS係開環穩定基團； RE係開環強化子； R 1a和R 1b中的每一個獨立地是H；取代或未取代的C 1-4烷基；取代或未取代的C 3-5環烷基；或者R 1a和R 1b連同它們所附接的原子一起形成取代或未取代的C 3-5環烷基； R 2a和R 2b中的每一個獨立地是H；取代或未取代的C 1-4烷基；取代或未取代的C 3-5環烷基；或者R 2a和R 2b連同它們所附接的原子一起形成取代或未取代的C 3-5環烷基； R 3a和R 3b中的每一個獨立地是H；取代或未取代的C 1-4烷基；取代或未取代的C 3-5環烷基；或者R 3a和R 3b連同它們所附接的原子一起形成取代或未取代的C 3-5環烷基； R 4係H；取代或未取代的C 1-4烷基；或者取代或未取代的C 3-5環烷基； r、s和t中的每一個獨立地是0、1或2； A係延伸子單元；並且 下標a’係0或1。
  55. 如請求項54所述之化合物，其中RG係 或 。
  56. 如任一請求項54或55所述之化合物，其中R 1a、R 1b、R 2a、R 2b、R 3a、R 3b和R 4中的每一個獨立地是H。
  57. 如請求項54-56中任一項所述之化合物，其中RS係胺基基團或-NR 5aR 5b，並且其中R 5a和R 5b中的每一個獨立地是H或者取代或未取代的C 1-4烷基。
  58. 如請求項57所述之化合物，其中RS係胺基基團或-N(CH 3) 2。
  59. 如請求項58所述之化合物，其中RS係胺基基團。
  60. 如請求項54-59中任一項所述之化合物，其中RE係鍵、-O-、-OC(=O)-、-OC(=O)NR 6-、-NHC(=O)NR 6-、-OS(=O) 2NR 6-、-NHS(=O) 2NR 6-或-OC(=O)NHS(=O) 2NR 6-；並且R 6係H或者取代或未取代的C 1-4烷基。
  61. 如請求項60所述之化合物，其中R 6係H、甲基、乙基或異丙基。
  62. 如請求項61所述之化合物，其中RE係-OC(=O)NR 6-。
  63. 如請求項62所述之化合物，其中RE係-OC(=O)NH-。
  64. 如請求項54-63中任一項所述之化合物，其中r係0。
  65. 如請求項54-64中任一項所述之化合物，其中s係1。
  66. 如請求項54-65中任一項所述之化合物，其中t係1或2。
  67. 如請求項54-66中任一項所述之化合物，其中 A係鍵、-(CH 2) n-C(═O)R 7、-CH 2-C(═O)-NH-(CH 2) n-C(═O)R 7、-(CH 2CH 2O) n-CH 2CH 2-C(═O)R 7、-CH[-(CH 2) n-COOH]-C(═O)R 7、-CH 2-C(═O)-NH-(CH 2) n-C(═O)-NH-(CH 2) n-C(═O)R 7或-C(═O)-(CH 2) n-C(═O)R 7， 每個n獨立地表示1、2、3、4或5的整數； R 7係OH或NR 8aR 8b；並且 R 8a和R 8b中的每一個獨立地是H；取代或未取代的C 1-4烷基；取代或未取代的C 3-5環烷基；或者R 8a和R 8b連同它們所附接的原子一起形成取代或未取代的C 3-5環烷基。
  68. 如請求項67所述之化合物，其中R 7係OH、NH 2、NHCH 3或N(CH 3) 2。
  69. 如請求項54所述之化合物，其中該化合物係 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
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