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TW202426644A - Ｆｎ３域－ｓｉｒｎａ結合物及其用途 - Google Patents

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TW202426644A
TW202426644A TW112139858A TW112139858A TW202426644A TW 202426644 A TW202426644 A TW 202426644A TW 112139858 A TW112139858 A TW 112139858A TW 112139858 A TW112139858 A TW 112139858A TW 202426644 A TW202426644 A TW 202426644A
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TW
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seq
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group
acid sequence
nucleic acid
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TW112139858A
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史瓦普尼爾 庫卡尼
湯瑪士 禪葛亞
蘇庫瑪爾 薩卡姆里
賈桂琳 李
史提芬 Ｇ 納德勒
米拉 拉馬努金
卡琳 Ｔ 歐尼爾
斯戴芬 安德森
Original Assignee
美商亞羅生物治療公司
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Abstract

本發明係關於組合物，諸如siRNA分子及與其結合之FN3域，以及製造及使用該等分子之方法。

Description

FN3域-SIRNA結合物及其用途
本發明實施例係關於可與纖維結合蛋白III型域(FN3)結合之siRNA分子以及製造及使用該等分子之方法。
治療性核酸包括例如小干擾RNA (siRNA)、微小RNA (miRNA)、反義寡核苷酸、核酶、質體、免疫刺激核酸、反義股、拮抗mir、抗mir、微小RNA模擬物、超級mir、U1接附子及適體。就siRNA或miRNA而言，此等核酸可經由一種稱為RNA干擾(RNAi)之過程來下調特定蛋白質之細胞內含量。RNAi之治療應用極其廣泛，因為siRNA及miRNA構築體可用針對任何目標蛋白之轉錄本的任何核苷酸序列合成。迄今為止，siRNA構築體已在活體外及活體內模型中顯示出特異性下調目標蛋白之能力。另外，siRNA構築體目前正在臨床研究中進行評估，且已獲准用於多種疾病。
然而，siRNA構築體目前面臨兩個問題：第一，其對血漿中之核酸酶消化的易感性，及第二，其作為游離siRNA或miRNA全身投與時，進入細胞內區室從而與RISC (RNA誘導型靜默複合體)結合的能力有限。某些遞送系統，諸如由陽離子脂質與其他脂質組分(諸如膽固醇及PEG脂質)、碳水化合物(諸如GalNAc三聚體)形成之脂質奈米粒子，已被用於促進細胞對寡核苷酸之吸收。然而，此等遞送系統尚未被證明成功地將siRNA高效且有效地遞送至其在肝臟以外之組織中的預定目標。
CD40及其配位體CD40L (或CD154)為免疫細胞(包括B細胞、T細胞及樹突狀細胞)表現之跨膜蛋白。CD40用以藉由刺激T細胞以及B細胞之活化及成熟來增強免疫反應。在自體免疫疾病中，CD40在免疫系統活化中之作用亦包括產生自體免疫抗體。舉例而言，研究已顯示CD40在類風濕性關節炎、自體免疫甲狀腺疾病、I型糖尿病、神經發炎性疾病(諸如多發性硬化症)、牛皮癬、發炎性腸病、全身性紅斑狼瘡及狼瘡性腎炎中發揮作用(參見例如Zheng等人, Arthritis Res. & Therapy, 2010, 12:R13；Peters等人, Semin Immunol., 2009, 21(5):293-300；及Ripoll等人, PLoS One, 2013, 8(6):e65068)。
需要用於將治療性核酸，諸如小干擾RNA (siRNA)遞送至預定細胞目標，以下調罹患自體免疫疾病之個體中的CD40之產生及表現的組合物及方法。此外，需要一種具有最佳化臨床使用特性、可特異性結合CD71之FN3域，及將此類分子用於能夠經由受體介導之CD71內化而進入細胞內的新穎治療劑之方法。本發明實施例滿足此等需求以及其他需求。
本文提供包含siRNA分子之組合物，該等分子包含有義股及反義股，諸如本文所提供之彼等分子。在一些實施例中，siRNA分子靶向CD40基因。在一些實施例中，siRNA進一步包含共價連接至siRNA之有義股或反義股的連接子。在一些實施例中，連接子連接至有義股或反義股之5'端或3'端。在一些實施例中，siRNA分子進一步包含有義股或反義股上之乙烯基膦酸酯修飾。在一些實施例中，乙烯基膦酸酯修飾位於有義股或反義股之5'端或3'端。在一些實施例中，有義股包含選自由以下組成之群的核酸序列：SEQ ID NO: 1890、1893、1941、1942、1944、46-178、312-331、1850、1851、1891、1892、1894-1928、1932-1940、1943、1945-1959、2298、2302、2304、352-356、673-805、939-958、2070、2071、2110-2148、2152-2179、2300、2306及2308。在一些實施例中，反義股包含選自由以下組成之群的核酸序列：SEQ ID NO: 2290、2293、2051、2052、2054、179-311、332-351、1960、1961、2000-2038、2042-2050、2053、2055-2069、2291、2292、2294-2297、2299、2303、2305、356-359、806-938、959-978、2180、2181、2220-2258、2262-2289、2301、2307及2309。在一些實施例中，siRNA分子包含表3A、表3B、表4A、表4B、表5A或表5B中所示之成對siRNA。
在一些實施例中，組合物進一步包含與siRNA分子結合之一或多個FN3域。在一些實施例中，該一或多個FN3域包含結合CD71之FN3域。在一些實施例中，FN3域包含與選自SEQ ID NO: 570、672、1848、1773、1849、1767、360-569、571-644、663-67、1395-1772、1774-1766及1768-1847中之任一者之序列至少87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%一致或完全一致的胺基酸序列。
在一些實施例中，一或多個FN3域包含至少兩個由肽連接子連接之FN3域。在一些實施例中，連接子包含選自由SEQ ID NO: 645-661組成之群的胺基酸序列。
本文亦提供具有下式之組合物： (X 1) n-(X 2) q-(X 3) y-L-X 4； C-(X 1) n-(X 2) q-L-X 4-(X 3) y； (X 1) n-(X 2) q-L-X 4-(X 3) y-C； C-(X 1) n-(X 2) q-L-X 4-L-(X 3) y； 或(X 1) n-(X 2) q-L-X 4-L-(X 3) y-C， 其中：X 1為第一FN3域；X 2為第二FN3域；X 3為第三FN3域或半衰期延長分子；L為連接子；且X 4為核酸分子，諸如靶向CD40之siRNA，諸如本文所提供之核酸分子。C為聚合物，諸如PEG、白蛋白結合蛋白或與血清蛋白結合之脂族鏈，其中n、q及y各自獨立地為0或1。在一些實施例中，X 1、X 2及X 3與相同或不同的目標蛋白結合。
本文亦提供具有式A 1-B 1之組合物，其中A 1具有式(C) n-(L 1) t-X s且B 1具有式X AS-(L 2) q-(F 1) y，或A 1具有式(F 1) n-(L 1) t-X s且B 1具有式X AS-(L 2) q-(C) y，其中： C為聚合物，諸如PEG、白蛋白結合蛋白或與血清蛋白結合之脂族鏈； L 1及L 2各自獨立地為連接子； X S為雙股siRNA分子之5'至3'寡核苷酸有義股； X AS為雙股siRNA分子之3'至5'寡核苷酸反義股； F 1為包含至少一個FN3域之多肽； 其中n、t、q及y各自獨立地為0或1； 其中X S及X AS形成雙股寡核苷酸分子，以形成靶向CD40之組合物/複合物。
在一些實施例中，本文提供一種治療有需要之個體之免疫疾病的方法，該方法包含向該個體投與組合物，諸如本文所提供之任何組合物。在一些實施例中，本文提供一種降低細胞(諸如免疫細胞)中目標基因之mRNA表現的方法，該方法包含使該免疫細胞與本文所提供之任何組合物的組合物接觸。在一些實施例中，本文提供一種將siRNA分子遞送至個體之細胞(諸如免疫細胞)的方法，該方法包含向該個體投與包含本文所提供之任何組合物的醫藥組合物。在一些實施例中，本文提供一種將靶向CD40之siRNA分子遞送至個體之表現CD71之免疫細胞的方法，該方法包含向該個體投與包含本文所提供之任何組合物的醫藥組合物，其中該siRNA分子下調該表現CD71之免疫細胞中CD40之mRNA表現。
本文進一步提供一種減少一或多種血清細胞介素之方法，該方法包含向一或多種表現CD71之免疫細胞投與靶向CD40之siRNA分子。在一些實施例中，一或多種血清細胞介素包含IFN-γ、IL-6、TNF-α、IL-12、IP-10、RANTES或其任何組合。在一些實施例中，一或多種表現CD71之免疫細胞包含B細胞、T細胞或其組合。
本文進一步提供一種選擇性減少表現CD71之免疫細胞群體的方法，該方法包含向表現CD71之免疫細胞群體投與靶向CD40之siRNA分子。在一些實施例中，表現CD71之免疫細胞群體包含B細胞、T細胞或其組合。
如本說明書及隨附申請專利範圍中所用，單數形式「一(a)」、「一(an)」及「該」包括複數個指代物，除非上下文另外明確規定。因此，例如，提及「細胞」包括兩個或更多個細胞之組合，及其類似者。
「纖維結合蛋白III型域」或「FN3域」係指在包括纖維結合蛋白、肌腱蛋白、細胞內細胞骨架蛋白、細胞介素受體及原核酶之蛋白質中頻繁出現的多肽序列(Bork及Doolittle, Proc Nat Acad Sci USA 89:8990-8994, 1992；Meinke等人, J Bacteriol 175:1910-1918, 1993；Watanabe等人, J Biol Chem 265:15659-15665, 1990)。例示性FN3域為存在於人類肌腱蛋白C中之15個不同FN3域、存在於人類纖維結合蛋白(FN)中之15個不同FN3域及例如美國專利第8,278,419號中所描述之非天然合成FN3域。個別FN3域藉由域編號及蛋白質名稱來指代，例如肌腱蛋白之第3個FN3域(TN3)或纖維結合蛋白之第10個FN3域(FN10)。如通篇所用，「辛替恩(Centyrin)」亦指FN3域。此外，如本文所描述之FN3域並非抗體，因為其不具有可變重鏈(V H)及/或輕鏈(V L)之結構。
「自體免疫疾病」係指個體之免疫反應針對個體自身成分之疾病狀況及狀態，從而導致不期望且常常使人衰弱的病況。如本文所用，「自體免疫疾病」意欲進一步包括自體免疫病況、症候群及其類似物。自體免疫疾病包括但不限於阿狄森氏病(Addison's disease)、過敏、過敏性鼻炎、僵直性脊椎炎、哮喘、動脈粥樣硬化、耳部自體免疫疾病、眼部自體免疫疾病、自體免疫萎縮性胃炎、自體免疫肝炎、自體免疫溶血性貧血、自體免疫腮腺炎、自體免疫葡萄膜炎、乳糜瀉、原發性膽汁性肝硬化、良性淋巴細胞性血管炎、COPD、結腸炎、冠心病、克羅恩氏病(Crohn's disease)、糖尿病(I型)、抑鬱症、糖尿病(包括1型及/或2型糖尿病)、附睪炎、絲球體腎炎、古巴斯德氏症候群(Goodpasture's syndrome)、格雷夫氏病(Graves' disease)、格-巴二氏症候群(Guillain-Barre syndrome)、橋本氏病(Hashimoto's disease)、溶血性貧血、特發性血小板減少性紫癜、發炎性腸病(IBD)、對重組藥品(例如血友病之因子VII)之免疫反應、幼年特發性關節炎、全身性紅斑狼瘡、狼瘡性腎炎、男性不育症、混合結締組織病、多發性硬化症、重症肌無力、腫瘤、骨關節炎、疼痛、原發性黏液水腫、天疱瘡、惡性貧血、多發性肌炎、牛皮癬、牛皮癬性關節炎、反應性關節炎、風濕熱、類風濕性關節炎、類肉瘤病、硬皮病、休格連氏症候群(Sjogren's syndrome)、脊椎關節病、交感性眼炎、T細胞淋巴瘤、T細胞急性淋巴母細胞白血病、睪丸血管中心性T細胞淋巴瘤、甲狀腺炎、移植排斥反應、潰瘍性結腸炎、自體免疫葡萄膜炎及血管炎。自體免疫疾病包括但不限於受影響組織為主要目標且在一些情況下為次要目標之病況。此類病況包括但不限於AIDS、異位性過敏、支氣管哮喘、濕疹、麻風、精神分裂症、遺傳性抑鬱症、組織及器官移植、慢性疲勞症候群、阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)、帕金森氏病(Parkinson's disease)、心肌梗塞、中風、自閉症、癲癇症、亞瑟氏現象(Arthus' phenomenon)、全身性過敏反應以及酒精及藥物成癮。
「捕捉劑」係指與特定類型之細胞結合且能夠使該細胞與其他細胞分離的物質。例示性捕捉劑為磁性珠粒、鐵磁流體、囊封試劑、結合特定細胞類型之分子及其類似物。
「樣本」係指自個體分離之類似體液、細胞或組織之集合，以及個體體內存在之體液、細胞或組織。例示性樣本為組織活檢體、細針抽吸物、手術切除之組織、器官培養物、細胞培養物及生物體液，諸如血液、血清及漿液、血漿、淋巴液、尿液、唾液、囊液、淚滴、糞便、痰液、分泌組織及器官之黏膜分泌物、陰道分泌物、腹水、胸膜液、心包液、腹膜液、腹腔液及其他體腔之液體、藉由支氣管灌洗收集之液體、滑液、與個體或生物源接觸之液體溶液，例如細胞及器官培養基，包括細胞或器官條件培養基及灌洗液及其類似物。
「取代」、「經取代」、「突變」或「經突變」係指改變、缺失或插入多肽或聚核苷酸序列中之一或多個胺基酸或核苷酸以產生該序列之變異體。
「變異體」係指藉由一或多個修飾(例如取代、插入或缺失)而與參考多肽或參考聚核苷酸不同的多肽或聚核苷酸。
「特異性結合(Specifically binds)」或「特異性結合(specific binding)」係指FN3域與其目標(諸如CD71)結合之能力，其解離常數(K D)為約1×10 -6M或更小，例如約1×10 -7M或更小、約1×10 -8M或更小、約1×10 -9M或更小、約1×10 -10M或更小、約1×10 -11M或更小、約1×10 -12M或更小或約1×10 -13M或更小。或者，「特異性結合」係指在標準溶液ELISA分析中，FN3域與其目標(例如CD71)結合之能力比陰性對照高至少5倍。特異性結合亦可使用如本文所描述之蛋白質體陣列來證明。在一些實施例中，陰性對照為不結合CD71之FN3域。在一些實施例中，特異性結合CD71之FN3域可與其他相關抗原具有交叉反應性，例如與來自其他物種諸如食蟹獼猴( Macaca Fascicularis，cynomolgus monkey，cyno)或黑猩猩( Pan troglodytes，chimpanzee)之相同預定抗原(同源物)具有交叉反應性。
「庫」係指變異體之集合。庫可由多肽或聚核苷酸變異體構成。
「穩定性」係指分子在生理條件下維持摺疊狀態，使其保留至少一種正常功能活性，例如與預定抗原諸如CD71結合之能力。
「CD71」係指具有SEQ ID NO: 3或4之胺基酸序列的人類CD71蛋白。在一些實施例中，SEQ ID NO: 3為全長人類CD71蛋白。在一些實施例中，SEQ ID NO: 4為人類CD71之胞外域。
「Tencon」係指具有以下共同序列之合成纖維結合蛋白III型(FN3)域： 且描述於美國專利公開案第2010/0216708號中。
「免疫細胞」係指免疫系統中分類為淋巴細胞(T細胞、B細胞及NK細胞)、嗜中性球或單核球/巨噬細胞之細胞。免疫細胞亦包括樹突狀細胞。「樹突狀細胞」係指在適應性免疫系統中發揮重要作用的一類抗原呈遞細胞(APC)。樹突狀細胞之主要功能為向T淋巴細胞呈遞抗原，且分泌可進一步直接或間接地調節免疫反應之細胞介素。樹突狀細胞具有在非活性或靜息的初始T淋巴細胞中誘導初級免疫反應的能力。
「載體」係指能夠在生物系統內複製或可在此類系統之間移動之聚核苷酸。載體聚核苷酸通常含有元件，諸如複製起點、聚腺苷酸化信號或選擇標記物，用以促進此等聚核苷酸在生物系統中之重複或維持。此類生物系統之實例可包括細胞、病毒、動物、植物及利用能夠複製載體之生物組分的重構生物系統。構成載體之聚核苷酸可為DNA或RNA分子或其雜合體。
「表現載體」係指可用於生物系統或重構生物系統中以引導由表現載體中存在之聚核苷酸序列編碼之多肽的轉譯的載體。
「聚核苷酸」係指包含由糖-磷酸主鏈或其他等效共價化學方法共價連接之核苷酸鏈的合成分子。cDNA為聚核苷酸之典型實例。
「多肽」或「蛋白質」係指包含至少兩個藉由肽鍵連接形成多肽之胺基酸殘基的分子。少於約50個胺基酸之小多肽可稱為「肽」。
「價」係指分子中存在指定數目之抗原特異性結合位點。因此，術語「單價」、「二價」、「四價」及「六價」分別係指分子中存在一個、兩個、四個及六個抗原特異性結合位點。
「個體」包括任何人類或非人類動物。「非人類動物」包括所有脊椎動物，例如哺乳動物及非哺乳動物，諸如非人類靈長類動物、羊、狗、貓、馬、牛、雞、兩棲動物、爬行動物等。除非另有說明，否則術語「患者」或「個體」可互換使用。
「經分離」係指分子(諸如合成聚核苷酸或多肽，諸如FN3域)之同質群體，該等分子已與產生該等分子之系統(諸如重組細胞)中的其他組分實質上分離及/或純化，以及已經歷至少一個純化或分離步驟之蛋白質。「經分離之FN3域」係指實質上不含其他細胞材料及/或化學物質之FN3域，且涵蓋分離至更高純度，諸如80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%純度之FN3域。
「遷移」當用於指代細胞的移動時，意謂細胞自一個位置移動至另一個位置。舉例而言，細胞(例如白血球或免疫細胞)自血管移動至組織可稱為自血管遷移至組織。遷移亦可包括「趨邊」過程，其係指細胞自血管內部向血管壁移動。遷移亦可包括細胞黏附至血管壁，以及跨血管壁遷移進入組織。
組合物 在一些實施例中，提供一種組合物，其包含連接至寡核苷酸分子之多肽，諸如包含FN3域之多肽。寡核苷酸分子可為例如siRNA分子。在一些實施例中，FN3域為本文所提供之結合CD71之FN3域。在一些實施例中，寡核苷酸為與CD40 RNA (諸如本文所提供之mRNA)結合的CD40 siRNA。在一些實施例中，組合物進一步包含本文所提供之聚合物。
在一些實施例中，siRNA分子為能夠抑制目標基因表現之雙股RNAi (dsRNA)劑。dsRNA劑包含有義股(隨從股)及反義股(引導股)。在一些實施例中，dsRNA劑之各股的長度可在12-40個核苷酸範圍內。舉例而言，各股的長度可為14-40個核苷酸、17-37個核苷酸、25-37個核苷酸、27-30個核苷酸、17-23個核苷酸、17-21個核苷酸、17-19個核苷酸、19-25個核苷酸、19-23個核苷酸、19-21個核苷酸、21-25個核苷酸或21-23個核苷酸。
在一些實施例中，有義股及反義股通常形成雙螺旋dsRNA。dsRNA劑之雙螺旋區的長度可為12-40個核苷酸對。舉例而言，雙螺旋區的長度可為14-40個核苷酸對、17-30個核苷酸對、25-35個核苷酸、27-35個核苷酸對、17-23個核苷酸對、17-21個核苷酸對、17-19個核苷酸對、19-25個核苷酸對、19-23個核苷酸對、19-21個核苷酸對、21-25個核苷酸對或21-23個核苷酸對。在另一個實例中，雙螺旋區的長度係選自12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40個核苷酸對。
在一些實施例中，dsRNA在一股之3'端或5'端或兩端包含dsRNA劑之一或多個懸垂物區及/或封端基團。懸垂物的長度可為1-10個核苷酸、1-6個核苷酸，例如2-6個核苷酸、1-5個核苷酸、2-5個核苷酸、1-4個核苷酸、2-4個核苷酸、1-3個核苷酸、2-3個核苷酸或1-2個核苷酸。懸垂物可為一股比另一股長的結果，或相同長度之兩股交錯的結果。懸垂物可與目標mRNA形成錯配，或其可與所靶向之基因序列互補，或其可為另一序列。第一股及第二股亦可接合，例如藉由額外鹼基接合以形成髮夾，或藉由其他非鹼基連接子接合。
在一些實施例中，dsRNA劑之懸垂物區中的核苷酸可各自獨立地為經修飾或未經修飾之核苷酸，包括但不限於2'-糖修飾，諸如2-F、2'-O-甲基、2'-O-(2-甲氧基乙基)、2'-O-(2-甲氧基乙基)、2'-O-(2-甲氧基乙基)及其任何組合。舉例而言，TT (UU)可為任一股上任一端之懸垂物序列。懸垂物可與目標mRNA形成錯配，或其可與所靶向之基因序列互補，或其可為另一序列。
dsRNA劑之有義股、反義股或兩股的5'-或3'-懸垂物可經磷酸化。在一些實施例中，懸垂物區含有兩個核苷酸，在兩個核苷酸之間具有硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯或甲磺醯胺基磷酸酯，其中兩個核苷酸可相同或不同。在一個實施例中，懸垂物存在於有義股、反義股或兩股之3'端。在一個實施例中，此3'-懸垂物存在於反義股中。在一個實施例中，此3'-懸垂物存在於有義股中。
dsRNA劑可僅包含單個懸垂物，其可加強dsRNA之干擾活性而不影響其整體穩定性。舉例而言，單股懸垂物位於有義股之3'-末端或者反義股之3'-末端。dsRNA亦可具有鈍端，位於反義股之5'端(或有義股之3'端)，或反之亦然。一般而言，dsRNA之反義股在3'端具有核苷酸懸垂物，而5'端為鈍端。儘管不受理論束縛，但反義股5'端之不對稱鈍端及反義股之3'端懸垂物有利於引導股負載至RNA誘導型靜默複合體(RISC)中。舉例而言，單個懸垂物的長度包含至少兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個核苷酸。
在一些實施例中，dsRNA劑亦可在dsRNA雙螺旋體之兩端具有兩個鈍端。
在一些實施例中，dsRNA劑之有義股及反義股中的每個核苷酸均可經修飾。各核苷酸可用相同或不同的修飾來修飾，其可包括非連接磷酸氧中之一或兩者及/或連接磷酸氧中之一或多者的一或多種改變；核糖成分的改變，例如核糖上之2羥基的改變；用「去磷酸」連接子批量置換磷酸部分；天然存在之鹼基的修飾或置換；及核糖-磷酸主鏈的置換或修飾。
在一些實施例中，3'或5'懸垂物中之全部或一些鹼基可經修飾，例如用本文所描述之修飾來修飾。修飾可包括例如使用在核糖之2'位置用此項技術中已知的修飾進行的修飾，例如使用經2'-去氧-2'-氟(2'-F)或2'-O-甲基(2'-OMe)修飾之去氧核糖核苷酸代替核鹼基之核糖，及磷酸基團之修飾，例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯或甲磺醯胺基磷酸酯修飾。懸垂物無需與目標序列同源。
在一些實施例中，有義股及反義股之各殘基獨立地經LNA、HNA、CeNA、2'-甲氧基乙基、2'-O-甲基、2'-O-烯丙基、2'-C-烯丙基、2'-去氧或2'-氟修飾。該等股可含有不止一種修飾。在一個實施例中，有義股及反義股之各殘基獨立地經2'-O-甲基或2'-氟修飾。
在一些實施例中，有義股及反義股上通常存在至少兩種不同修飾。彼等兩種修飾可為2'-去氧、2'-O-甲基或2'-氟修飾、非環狀核苷酸或其他修飾。
在一個實施例中，有義股及反義股各自包含選自2'-氟、2'-O-甲基或2'-去氧之兩種以不同方式修飾之核苷酸。
dsRNA劑可進一步包含至少一個硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯、甲磺醯胺基磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸間鍵聯。硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯、甲磺醯胺基磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸間鍵聯修飾可發生在有義股或反義股或兩者之股中任何位置之任何核苷酸上。舉例而言，核苷酸間鍵聯修飾可發生在有義股及/或反義股之每個核苷酸上；各核苷酸間鍵聯修飾可以交替模式發生在有義股或反義股上；或有義股或反義股以交替模式包含兩個核苷酸間鍵聯修飾。有義股上之核苷酸間鍵聯修飾的交替模式可與反義股相同或不同，且有義股上之核苷酸間鍵聯修飾的交替模式可相對於反義股上之核苷酸間鍵聯修飾的交替模式具有移位。
在一些實施例中，dsRNA劑包含懸垂物區中之硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯、甲磺醯胺基磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸間鍵聯修飾。舉例而言，懸垂物區包含兩個核苷酸，在兩個核苷酸之間具有硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯、甲磺醯胺基磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸間鍵聯。亦可進行核苷酸間鍵聯修飾以將懸垂核苷酸與雙螺旋區內之末端配對核苷酸連接。舉例而言，至少2個、3個、4個或所有懸垂核苷酸可經由硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯、甲磺醯胺基磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸間鍵聯連接，且視情況，可能存在額外硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯、甲磺醯胺基磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸間鍵聯，將懸垂核苷酸與緊鄰懸垂核苷酸之配對核苷酸連接。舉例而言，在末端三個核苷酸之間可能存在至少兩個硫代磷酸酯核苷酸間鍵聯，其中三個核苷酸中之兩個為懸垂核苷酸，且第三個為緊鄰懸垂核苷酸之配對核苷酸。在一些實施例中，此等末端三個核苷酸可位於反義股之3'端。
在一些實施例中，dsRNA組合物藉由經修飾之鹼基或核苷類似物連接，如美國專利第7,427,672號中所描述，該專利以引用的方式併入本文中。在一些實施例中，經修飾之鹼基或核苷類似物在本文所描述之式中稱為連接子或L。
在一些實施例中，經修飾之鹼基或核苷類似物具有如化學式I中所示之結構及其鹽： (化學式I) 其中鹼基表示視情況具有取代基之芳族雜環基或芳族烴環基，R 1及R 2相同或不同，且各自表示氫原子、核酸合成用羥基之保護基、烷基、烯基、環烷基、芳基、芳烷基、醯基、磺醯基、矽烷基、磷酸基、受保護基保護用於核酸合成之磷酸基或--P(R 4)R 5，其中R 4及R 5相同或不同，且各自表示羥基、受保護基保護用於核酸合成之羥基、巰基、受保護基保護用於核酸合成之巰基、胺基、具有1至5個碳原子之烷氧基、具有1至5個碳原子之烷硫基、具有1至6個碳原子之氰基烷氧基或經具有1至5個碳原子之烷基取代之胺基，且X表示OMe或F。
在一些實施例中，經修飾之鹼基或核苷類似物具有如化學式I中所示之結構及其鹽，其中R 1為氫原子、脂族醯基、芳族醯基、脂族或芳族磺醯基、經一至三個芳基取代之甲基、經一至三個具有經低碳烷基、低碳烷氧基、鹵素或氰基取代之芳基環的芳基取代之甲基、或矽烷基。
在一些實施例中，經修飾之鹼基或核苷類似物具有如化學式I中所示之結構及其鹽，其中R 1為氫原子、乙醯基、苯甲醯基、甲磺醯基、對甲苯磺醯基、苯甲基、對甲氧基苯甲基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基、單甲氧基三苯甲基或三級丁基二苯基矽烷基。
在一些實施例中，經修飾之鹼基或核苷類似物具有如化學式I中所示之結構及其鹽，其中R 2為氫原子、脂族醯基、芳族醯基、脂族或芳族磺醯基、經一至三個芳基取代之甲基、經一至三個具有經低碳烷基、低碳烷氧基、鹵素或氰基取代之芳基環的芳基取代之甲基、矽烷基、胺基亞磷酸酯基、膦醯基、磷酸基或受保護基保護用於核酸合成之磷酸基。
在一些實施例中，經修飾之鹼基或核苷類似物具有如化學式I中所示之結構及其鹽，其中R 2為氫原子、乙醯基、苯甲醯基、甲磺醯基、對甲苯磺醯基、苯甲基、對甲氧基苯甲基、三級丁基二苯基矽烷基、--P(OC 2H 4CN)(N(i-Pr) 2)、--P(OCH 3)(N(i-Pr) 2)、膦醯基、或2-氯苯基磷酸基或4-氯苯基磷酸基。
在一些實施例中，經修飾之鹼基或核苷類似物具有如化學式I中所示之結構及其鹽，其中鹼基為嘌呤-9-基、2-側氧基嘧啶-1-基、或具有選自以下α基團之取代基的嘌呤-9-基或2-側氧基嘧啶-1-基：羥基、受保護基保護用於核酸合成之羥基、具有1至5個碳原子之烷氧基、巰基、受保護基保護用於核酸合成之巰基、具有1至5個碳原子之烷硫基、胺基、受保護基保護用於核酸合成之胺基、經具有1至5個碳原子之烷基取代之胺基、具有1至5個碳原子之烷基及鹵素原子。
在一些實施例中，經修飾之鹼基或核苷類似物具有如化學式I中所示之結構及其鹽，其中鹼基為6-胺基嘌呤-9-基(亦即腺嘌呤基)、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的6-胺基嘌呤-9-基、2,6-二胺基嘌呤-9-基、2-胺基-6-氯嘌呤-9-基、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-胺基-6-氯嘌呤-9-基、2-胺基-6-氟嘌呤-9-基、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-胺基-6-氟嘌呤-9-基、2-胺基-6-溴嘌呤-9-基、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-胺基-6-溴嘌呤-9-基、2-胺基-6-羥基嘌呤-9-基(亦即鳥嘌呤基)、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-胺基-6-羥基嘌呤-9-基、6-胺基-2-甲氧基嘌呤-9-基、6-胺基-2-氯嘌呤-9-基、6-胺基-2-氟嘌呤-9-基、2,6-二甲氧基嘌呤-9-基、2,6-二氯嘌呤-9-基、6-巰基嘌呤-9-基、2-側氧基-4-胺基-1,2-二氫嘧啶-1-基(亦即胞嘧啶基)、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-側氧基-4-胺基-1,2-二氫嘧啶-1-基、2-側氧基-4-胺基-5-氟-1,2-二氫嘧啶-1-基、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-側氧基-4-胺基-5-氟-1,2-二氫嘧啶-1-基、4-胺基-2-側氧基-5-氯-1,2-二氫嘧啶-1-基、2-側氧基-4-甲氧基-1,2-二氫嘧啶-1-基、2-側氧基-4-巰基-1,2-二氫嘧啶-1-基、2-側氧基-4-羥基-1,2-二氫嘧啶-1-基(亦即尿嘧啶基)、2-側氧基-4-羥基-5-甲基-1,2-二氫嘧啶-1-基(亦即胸腺嘧啶基)、4-胺基-5-甲基-2-側氧基-1,2-二氫嘧啶-1-基(亦即5-甲基胞嘧啶基)或具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的4-胺基-5-甲基-2-側氧基-1,2-二氫嘧啶-1-基。
在一些實施例中，經修飾之鹼基或核苷類似物具有如化學式IB中所示之結構及其鹽： (化學式IB) 其中鹼基表示視情況具有取代基之芳族雜環基或芳族烴環基，R 1及R 2相同或不同，且各自表示氫原子、核酸合成用羥基之保護基、烷基、烯基、環烷基、芳基、芳烷基、醯基、磺醯基、矽烷基、磷酸基、受保護基保護用於核酸合成之磷酸基或--P(R 4)R 5，其中R 4及R 5相同或不同，且各自表示羥基、受保護基保護用於核酸合成之羥基、巰基、受保護基保護用於核酸合成之巰基、胺基、具有1至5個碳原子之烷氧基、具有1至5個碳原子之烷硫基、具有1至6個碳原子之氰基烷氧基或經具有1至5個碳原子之烷基取代之胺基，R 3表示氫原子、烷基、烯基、環烷基、芳基、芳烷基、醯基、磺醯基或功能分子單元取代基，且m表示0至2之整數，且n表示0至3之整數。在一些實施例中，m及n均為0。
在一些實施例中，經修飾之鹼基或核苷類似物具有如化學式IB中所示之結構及其鹽，其中R 1為氫原子、脂族醯基、芳族醯基、脂族或芳族磺醯基、經一至三個芳基取代之甲基、經一至三個具有經低碳烷基、低碳烷氧基、鹵素或氰基取代之芳基環的芳基取代之甲基、或矽烷基。
在一些實施例中，經修飾之鹼基或核苷類似物具有如化學式IB中所示之結構及其鹽，其中R 1為氫原子、乙醯基、苯甲醯基、甲磺醯基、對甲苯磺醯基、苯甲基、對甲氧基苯甲基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基、單甲氧基三苯甲基或三級丁基二苯基矽烷基。
在一些實施例中，經修飾之鹼基或核苷類似物具有如化學式IB中所示之結構及其鹽，其中R 2為氫原子、脂族醯基、芳族醯基、脂族或芳族磺醯基、經一至三個芳基取代之甲基、經一至三個具有經低碳烷基、低碳烷氧基、鹵素或氰基取代之芳基環的芳基取代之甲基、矽烷基、胺基亞磷酸酯基、膦醯基、磷酸基或受保護基保護用於核酸合成之磷酸基。
在一些實施例中，經修飾之鹼基或核苷類似物具有如化學式IB中所示之結構及其鹽，其中R 2為氫原子、乙醯基、苯甲醯基、甲磺醯基、對甲苯磺醯基、苯甲基、對甲氧基苯甲基、三級丁基二苯基矽烷基、--P(OC 2H 4CN)(N(i-Pr) 2)、--P(OCH 3)(N(i-Pr) 2)、膦醯基、或2-氯苯基磷酸基或4-氯苯基磷酸基。
在一些實施例中，經修飾之鹼基或核苷類似物具有如化學式IB中所示之結構及其鹽，其中R 3為氫原子、苯氧基乙醯基、具有1至5個碳原子之烷基、具有1至5個碳原子之烯基、具有6至14個碳原子之芳基、經一至三個芳基取代之甲基、低碳脂族或芳族磺醯基(諸如甲磺醯基或對甲苯磺醯基)、具有1至5個碳原子之脂族醯基(諸如乙醯基)或芳族醯基(諸如苯甲醯基)。
在一些實施例中，經修飾之鹼基或核苷類似物具有如化學式IB中所示之結構及其鹽，其中作為R 3之功能分子單元取代基為螢光或化學發光標記分子、核酸切口活性官能基、或細胞內或細胞核轉移信號肽。
在一些實施例中，經修飾之鹼基或核苷類似物具有如化學式IB中所示之結構及其鹽，其中鹼基為嘌呤-9-基、2-側氧基嘧啶-1-基、或具有選自以下α基團之取代基的嘌呤-9-基或2-側氧基嘧啶-1-基：羥基、受保護基保護用於核酸合成之羥基、具有1至5個碳原子之烷氧基、巰基、受保護基保護用於核酸合成之巰基、具有1至5個碳原子之烷硫基、胺基、受保護基保護用於核酸合成之胺基、經具有1至5個碳原子之烷基取代之胺基、具有1至5個碳原子之烷基及鹵素原子。
在一些實施例中，經修飾之鹼基或核苷類似物具有如化學式IB中所示之結構及其鹽，其中鹼基為6-胺基嘌呤-9-基(亦即腺嘌呤基)、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的6-胺基嘌呤-9-基、2,6-二胺基嘌呤-9-基、2-胺基-6-氯嘌呤-9-基、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-胺基-6-氯嘌呤-9-基、2-胺基-6-氟嘌呤-9-基、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-胺基-6-氟嘌呤-9-基、2-胺基-6-溴嘌呤-9-基、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-胺基-6-溴嘌呤-9-基、2-胺基-6-羥基嘌呤-9-基(亦即鳥嘌呤基)、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-胺基-6-羥基嘌呤-9-基、6-胺基-2-甲氧基嘌呤-9-基、6-胺基-2-氯嘌呤-9-基、6-胺基-2-氟嘌呤-9-基、2,6-二甲氧基嘌呤-9-基、2,6-二氯嘌呤-9-基、6-巰基嘌呤-9-基、2-側氧基-4-胺基-1,2-二氫嘧啶-1-基(亦即胞嘧啶基)、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-側氧基-4-胺基-1,2-二氫嘧啶-1-基、2-側氧基-4-胺基-5-氟-1,2-二氫嘧啶-1-基、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-側氧基-4-胺基-5-氟-1,2-二氫嘧啶-1-基、4-胺基-2-側氧基-5-氯-1,2-二氫嘧啶-1-基、2-側氧基-4-甲氧基-1,2-二氫嘧啶-1-基、2-側氧基-4-巰基-1,2-二氫嘧啶-1-基、2-側氧基-4-羥基-1,2-二氫嘧啶-1-基(亦即尿嘧啶基)、2-側氧基-4-羥基-5-甲基-1,2-二氫嘧啶-1-基(亦即胸腺嘧啶基)、4-胺基-5-甲基-2-側氧基-1,2-二氫嘧啶-1-基(亦即5-甲基胞嘧啶基)或具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的4-胺基-5-甲基-2-側氧基-1,2-二氫嘧啶-1-基。
在一些實施例中，經修飾之鹼基或核苷類似物具有如化學式IB中所示之結構及其鹽，其中m為0，且n為1。
在一些實施例中，經修飾之鹼基或核苷類似物為DNA寡核苷酸或RNA寡核苷酸類似物，其含有一或多種類型之具有如化學式II中所示之結構的核苷類似物之單元結構中之一者或兩者或多於兩者，或其藥理學上可接受之鹽，其限制條件為寡核苷酸類似物中各別核苷之間的連接形式可除與天然核酸中相同的磷酸二酯鍵[--OP(O 2 -)O--]以外含有一或兩個或更多個硫代磷酸酯鍵[--OP(O)(S -)O--]、二硫代磷酸酯鍵[--O 2PS 2--]、膦酸酯鍵[--PO(OH) 2--]、胺基磷酸酯鍵[--O=P(OH) 2--]或甲磺醯胺基磷酸酯鍵[--OP(O)(N)(SO 2)(CH 3)O--]，且若含有一或多種類型之此等結構中之兩者或更多者，則此等結構之間的鹼基可相同或不同： (化學式II) 其中鹼基表示視情況具有取代基之芳族雜環基或芳族烴環基，且X表示OMe或F。
在一些實施例中，寡核苷酸類似物或其藥理學上可接受之鹽具有如化學式II中所示之結構，其中鹼基為嘌呤-9-基、2-側氧基嘧啶-1-基、或具有選自以下α基團之取代基的嘌呤-9-基或2-側氧基嘧啶-1-基：羥基、受保護基保護用於核酸合成之羥基、具有1至5個碳原子之烷氧基、巰基、受保護基保護用於核酸合成之巰基、具有1至5個碳原子之烷硫基、胺基、受保護基保護用於核酸合成之胺基、經具有1至5個碳原子之烷基取代之胺基、具有1至5個碳原子之烷基及鹵素原子。
在一些實施例中，寡核苷酸類似物或其藥理學上可接受之鹽具有如化學式II中所示之結構，其中鹼基為6-胺基嘌呤-9-基(亦即腺嘌呤基)、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的6-胺基嘌呤-9-基、2,6-二胺基嘌呤-9-基、2-胺基-6-氯嘌呤-9-基、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-胺基-6-氯嘌呤-9-基、2-胺基-6-氟嘌呤-9-基、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-胺基-6-氟嘌呤-9-基、2-胺基-6-溴嘌呤-9-基、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-胺基-6-溴嘌呤-9-基、2-胺基-6-羥基嘌呤-9-基(亦即鳥嘌呤基)、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-胺基-6-羥基嘌呤-9-基、6-胺基-2-甲氧基嘌呤-9-基、6-胺基-2-氯嘌呤-9-基、6-胺基-2-氟嘌呤-9-基、2,6-二甲氧基嘌呤-9-基、2,6-二氯嘌呤-9-基、6-巰基嘌呤-9-基、2-側氧基-4-胺基-1,2-二氫嘧啶-1-基(亦即胞嘧啶基)、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-側氧基-4-胺基-1,2-二氫嘧啶-1-基、2-側氧基-4-胺基-5-氟-1,2-二氫嘧啶-1-基、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-側氧基-4-胺基-5-氟-1,2-二氫嘧啶-1-基、4-胺基-2-側氧基-5-氯-1,2-二氫嘧啶-1-基、2-側氧基-4-甲氧基-1,2-二氫嘧啶-1-基、2-側氧基-4-巰基-1,2-二氫嘧啶-1-基、2-側氧基-4-羥基-1,2-二氫嘧啶-1-基(亦即尿嘧啶基)、2-側氧基-4-羥基-5-甲基-1,2-二氫嘧啶-1-基(亦即胸腺嘧啶基)、4-胺基-5-甲基-2-側氧基-1,2-二氫嘧啶-1-基(亦即5-甲基胞嘧啶基)或具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的4-胺基-5-甲基-2-側氧基-1,2-二氫嘧啶-1-基。
在一些實施例中，經修飾之鹼基或核苷類似物為DNA寡核苷酸或RNA寡核苷酸類似物，其含有一或多種類型之具有如化學式IIB中所示之結構的核苷類似物之單元結構中之一者或兩者或多於兩者，或其藥理學上可接受之鹽，其限制條件為寡核苷酸類似物中各別核苷之間的連接形式可除與天然核酸中相同的磷酸二酯鍵[--OP(O 2 -)O--]以外含有一或兩個或更多個硫代磷酸酯鍵[--OP(O)(S -)O--]、二硫代磷酸酯鍵[--O 2PS 2--]、膦酸酯鍵[--PO(OH) 2--]、胺基磷酸酯鍵[--O=P(OH) 2--]或甲磺醯胺基磷酸酯鍵[--OP(O)(N)(SO 2)(CH 3)O--]，且若含有一或多種類型之此等結構中之兩者或更多者，則此等結構之間的鹼基可相同或不同： (化學式IIB) 其中鹼基表示視情況具有取代基之芳族雜環基或芳族烴環基，R 3表示氫原子、烷基、烯基、環烷基、芳基、芳烷基、醯基、磺醯基、矽烷基或功能分子單元取代基，且m表示0至2之整數，且n表示0至3之整數。在一些實施例中，m及n均為0。
在一些實施例中，寡核苷酸類似物或其藥理學上可接受之鹽具有如化學式IIB中所示之結構，其中R 1為氫原子、脂族醯基、芳族醯基、脂族或芳族磺醯基、經一至三個芳基取代之甲基、經一至三個具有經低碳烷基、低碳烷氧基、鹵素或氰基取代之芳基環的芳基取代之甲基、或矽烷基。
在一些實施例中，寡核苷酸類似物或其藥理學上可接受之鹽具有如化學式IIB中所示之結構，其中R 1為氫原子、乙醯基、苯甲醯基、甲磺醯基、對甲苯磺醯基、苯甲基、對甲氧基苯甲基、三苯甲基、二甲氧基三苯甲基、單甲氧基三苯甲基或三級丁基二苯基矽烷基。
在一些實施例中，寡核苷酸類似物或其藥理學上可接受之鹽具有如化學式IIB中所示之結構，其中R 2為氫原子、脂族醯基、芳族醯基、脂族或芳族磺醯基、經一至三個芳基取代之甲基、經一至三個具有經低碳烷基、低碳烷氧基、鹵素或氰基取代之芳基環的芳基取代之甲基、矽烷基、胺基亞磷酸酯基、膦醯基、磷酸基或受保護基保護用於核酸合成之磷酸基。
在一些實施例中，寡核苷酸類似物或其藥理學上可接受之鹽具有如化學式IIB中所示之結構，其中R 2為氫原子、乙醯基、苯甲醯基、苯甲基、對甲氧基苯甲基、甲磺醯基、對甲苯磺醯基、三級丁基二苯基矽烷基、--P(OC 2H 4CN)(N(i-Pr) 2)、--P(OCH 3)(N(i-Pr) 2)、膦醯基、或2-氯苯基磷酸基或4-氯苯基磷酸基。
在一些實施例中，寡核苷酸類似物或其藥理學上可接受之鹽具有如化學式IIB中所示之結構，其中R 3為氫原子、苯氧基乙醯基、具有1至5個碳原子之烷基、具有1至5個碳原子之烯基、具有6至14個碳原子之芳基、經一至三個芳基取代之甲基、低碳脂族或芳族磺醯基(諸如甲磺醯基或對甲苯磺醯基)、具有1至5個碳原子之脂族醯基(諸如乙醯基)或芳族醯基(諸如苯甲醯基)。
在一些實施例中，寡核苷酸類似物或其藥理學上可接受之鹽具有如化學式IIB中所示之結構，其中作為R 3之功能分子單元取代基為螢光或化學發光標記分子、核酸切口活性官能基、或細胞內或細胞核轉移信號肽。
在一些實施例中，寡核苷酸類似物或其藥理學上可接受之鹽具有如化學式IIB中所示之結構，其中鹼基為嘌呤-9-基、2-側氧基嘧啶-1-基、或具有選自以下α基團之取代基的嘌呤-9-基或2-側氧基嘧啶-1-基：羥基、受保護基保護用於核酸合成之羥基、具有1至5個碳原子之烷氧基、巰基、受保護基保護用於核酸合成之巰基、具有1至5個碳原子之烷硫基、胺基、受保護基保護用於核酸合成之胺基、經具有1至5個碳原子之烷基取代之胺基、具有1至5個碳原子之烷基及鹵素原子。
在一些實施例中，寡核苷酸類似物或其藥理學上可接受之鹽具有如化學式IIB中所示之結構，其中鹼基為6-胺基嘌呤-9-基(亦即腺嘌呤基)、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的6-胺基嘌呤-9-基、2,6-二胺基嘌呤-9-基、2-胺基-6-氯嘌呤-9-基、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-胺基-6-氯嘌呤-9-基、2-胺基-6-氟嘌呤-9-基、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-胺基-6-氟嘌呤-9-基、2-胺基-6-溴嘌呤-9-基、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-胺基-6-溴嘌呤-9-基、2-胺基-6-羥基嘌呤-9-基(亦即鳥嘌呤基)、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-胺基-6-羥基嘌呤-9-基、6-胺基-2-甲氧基嘌呤-9-基、6-胺基-2-氯嘌呤-9-基、6-胺基-2-氟嘌呤-9-基、2,6-二甲氧基嘌呤-9-基、2,6-二氯嘌呤-9-基、6-巰基嘌呤-9-基、2-側氧基-4-胺基-1,2-二氫嘧啶-1-基(亦即胞嘧啶基)、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-側氧基-4-胺基-1,2-二氫嘧啶-1-基、2-側氧基-4-胺基-5-氟-1,2-二氫嘧啶-1-基、具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的2-側氧基-4-胺基-5-氟-1,2-二氫嘧啶-1-基、4-胺基-2-側氧基-5-氯-1,2-二氫嘧啶-1-基、2-側氧基-4-甲氧基-1,2-二氫嘧啶-1-基、2-側氧基-4-巰基-1,2-二氫嘧啶-1-基、2-側氧基-4-羥基-1,2-二氫嘧啶-1-基(亦即尿嘧啶基)、2-側氧基-4-羥基-5-甲基-1,2-二氫嘧啶-1-基(亦即胸腺嘧啶基)、4-胺基-5-甲基-2-側氧基-1,2-二氫嘧啶-1-基(亦即5-甲基胞嘧啶基)或具有受保護基保護用於核酸合成之胺基的4-胺基-5-甲基-2-側氧基-1,2-二氫嘧啶-1-基。
在一些實施例中，寡核苷酸類似物或其藥理學上可接受之鹽具有如化學式IIB中所示之結構，其中m為0，且n為1。
在一些實施例中，dsRNA劑包含與目標之錯配、在雙螺旋體內之錯配或其組合。錯配可發生在懸垂物區或雙螺旋區中。鹼基對可基於其促進解離或解鏈之傾向排序(例如，基於特定配對之締合或解離的自由能，最簡單的方法為在單個對之基礎上檢查配對，但亦可使用下一個鄰近或類似分析)。在促進解離方面：A:U優於G:C；G:U優於G:C；且I:C優於G:C (I=肌苷)。錯配，例如非典型配對或除典型配對以外之配對(如本文別處所描述)優於典型(A:T、A:U、G:C)配對；且包括通用鹼基之配對優於典型配對。
在一些實施例中，dsRNA劑可在有義股或反義股之5'端包含含磷基團。5'端含磷基團可為5'端磷酸(5'-P)、5'端硫代磷酸酯(5'-PS)、5'端二硫代磷酸酯(5'-PS 2)、5'端乙烯基膦酸酯(5'-VP)、5'端甲基膦酸酯(MePhos)、5'端甲磺醯胺基磷酸酯(5'MsPA)或5'-去氧-5'-C-丙二醯基。當5'端含磷基團為5'端乙烯基膦酸酯(5'-VP)時，5'-VP可為5'-E-VP異構物，諸如反式乙烯基磷酸酯或順式乙烯基磷酸酯，或其混合物。此等修飾之代表性結構可見於例如美國專利第10,233,448號中，該專利特此以全文引用之方式併入。
在一些實施例中，核苷酸類似物或合成核苷酸鹼基包含在核糖部分之2'羥基處具有修飾的核酸。在一些情況下，修飾包括H、OR、R、鹵基、SH、SR、NH2、NHR、NR2或CN，其中R為烷基部分。例示性烷基部分包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、三級丁基、C 1-C 10鏈長的直鏈及分支鏈。在一些情況下，烷基部分進一步包含修飾。在一些情況下，修飾包含偶氮基、酮基、醛基、羧基、硝基、亞硝基、腈基、雜環基(例如咪唑基、肼基或羥基胺基)、異氰酸酯基或氰酸酯基、或含硫基團(例如亞碸、碸、硫化物及二硫化物)。在一些情況下，烷基部分進一步包含額外雜原子，諸如O、S、N、Se，且此等雜原子中之各者可進一步經如上文所描述之烷基取代。在一些情況下，雜環基之碳經氮、氧或硫取代。在一些情況下，雜環取代包括但不限於N-嗎啉基、咪唑及N-吡咯啶基。
在一些情況下，2'羥基處之修飾為2'-O-甲基修飾或2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)修飾。腺苷分子之2'-O-甲基修飾及尿苷之2'O-甲氧基乙基修飾的例示性化學結構繪示如下。
2'-O-甲基-腺苷 2'-O-甲氧基乙基尿苷
在一些情況下，2'羥基處之修飾為2'-O-胺基丙基修飾，其中包含丙基連接子之延伸胺基將胺基與2'氧結合。在一些情況下，此修飾藉由每個糖引入來自胺基之一個正電荷來中和寡核苷酸分子之磷酸衍生之總體負電荷，從而由於其兩性離子特性而改良細胞吸收特性。2'-O-胺基丙基核苷胺基亞磷酸酯之例示性化學結構繪示如下。 2'-O-胺基丙基核苷胺基亞磷酸酯
在一些情況下，2'羥基處之修飾為鎖定或橋聯核糖修飾(例如鎖核酸或LNA)，其中2'碳處鍵結之氧分子藉由亞甲基連接至4'碳，從而形成2'-C,4'-C-氧基-亞甲基連接之雙環核糖核苷酸單體。LNA之化學結構的例示性圖示繪示如下。左側顯示之圖示突出顯示LNA單體之化學連接性。右側顯示之圖示突出顯示LNA單體之呋喃醣環的鎖定3'-內(3E)構形。
在一些情況下，2'羥基處之修飾包含伸乙基核酸(ENA)，諸如2'-4'-伸乙基橋聯核酸，其將糖構形鎖定為C3'-內糖褶皺構形。ENA為橋聯核酸類修飾核酸之一部分，該類核酸亦包含LNA。ENA及橋聯核酸之例示性化學結構繪示如下。
在一些實施例中，2'羥基處之額外修飾包括2'-去氧、2'-去氧-2'-氟、2'-O-胺基丙基(2'-O-AP)、2'-O-二甲基胺基乙基(2'-O- DMAOE)、2'-O-二甲基胺基丙基(2'-O-DMAP)、2'-O-二甲基胺基乙氧基乙基(2'-O-DMAEOE)或2'-O-N-甲基乙醯胺基(2'-O-NMA)。
在一些實施例中，核苷酸類似物包含經修飾之鹼基，諸如但不限於5-丙炔基尿苷、5-丙炔基胞苷、6-甲基腺嘌呤、6-甲基鳥嘌呤、N,N,-二甲基腺嘌呤、2-丙基腺嘌呤、2丙基鳥嘌呤、2-胺基腺嘌呤、1-甲基肌苷、3-甲基尿苷、5-甲基胞苷、5-甲基尿苷及在5位處具有修飾之其他核苷酸、5-(2-胺基)丙基尿苷、5-鹵胞苷、5-鹵尿苷、4-乙醯基胞苷、1-甲基腺苷、2-甲基腺苷、3-甲基胞苷、6-甲基尿苷、2-甲基鳥苷、7-甲基鳥苷、2,2-二甲基鳥苷、5-甲基胺乙基尿苷、5-甲氧基尿苷、去氮核苷酸(諸如7-去氮-腺苷)、6-偶氮基尿苷、6-偶氮基胞苷、6-偶氮基胸苷、5-甲基-2-硫代尿苷、其他硫基鹼基(諸如2-硫代尿苷及4-硫代尿苷及2-硫代胞苷)、二氫尿苷、假尿苷、Q核苷、古嘌苷、萘基及經取代之萘基、任何O-烷基化嘌呤及嘧啶及N-烷基化嘌呤及嘧啶(諸如N6-甲基腺苷)、5-甲基羰基甲基尿苷、尿苷5-氧基乙酸、吡啶-4-酮、吡啶-2-酮、苯基及經修飾之苯基(諸如胺基苯酚或2,4,6-三甲氧基苯)、充當G形夾核苷酸之經修飾之胞嘧啶、8-經取代之腺嘌呤及鳥嘌呤、5-經取代之尿嘧啶及胸嘧啶、氮雜嘧啶、羧基羥基烷基核苷酸、羧基烷基胺基烷基核苷酸及烷基羰基烷基化核苷酸。經修飾之核苷酸亦包括關於糖部分經修飾之彼等核苷酸以及具有非核糖基之糖或其類似物之核苷酸。舉例而言，在一些情況下，糖部分為或基於甘露糖、阿拉伯糖、葡萄哌喃糖、半乳哌喃糖、4'-硫基核糖及其他糖、雜環或碳環。術語核苷酸亦包括此項技術中稱為通用鹼基之核苷酸。舉例而言，通用鹼基包括但不限於3-硝基吡咯、5-硝基吲哚或水粉蕈素(nebularine)。
在一些實施例中，核苷酸類似物進一步包含N-嗎啉基、肽核酸(PNA)、甲基膦酸酯核苷酸、硫醇膦酸酯核苷酸、2'-氟N3-P5'-胺基磷酸酯、1',5'-無水己糖醇核酸(HNA)或其組合。N-嗎啉基或二胺基磷酸酯N-嗎啉基寡聚物(PMO)包含合成分子，其結構藉由偏離正常糖及磷酸結構來模擬天然核酸結構。在一些情況下，五員核糖環經含有四個碳、一個氮及一個氧之六員N-嗎啉基環取代。在一些情況下，核糖單體藉由二胺基磷酸酯基團而非磷酸基團連接。在此類情況下，主鏈改變移除所有正電荷及負電荷，使得N-嗎啉基中性分子能夠在無諸如帶電寡核苷酸所使用之細胞遞送劑的輔助下穿過細胞膜。
在一些實施例中，肽核酸(PNA)不含有糖環或磷酸酯鍵聯，且鹼基由寡甘胺酸樣分子連接且適當間隔，因此消除主鏈電荷。
在一些實施例中，一或多種修飾視情況發生在核苷酸間鍵聯處。在一些情況下，經修飾之核苷酸間鍵聯包括但不限於硫代磷酸酯、甲磺醯胺基磷酸酯、二硫代磷酸酯、甲基膦酸酯、5'-伸烷基膦酸酯、5'-甲基膦酸酯、3'-伸烷基膦酸酯、三氟化硼、具有3'-5'鍵聯或2'-5'鍵聯之硼代磷酸酯及硒代磷酸酯、磷酸三酯、硫羰基烷基磷酸三酯、氫膦酸酯鍵聯、烷基膦酸酯、烷基硫代膦酸酯、芳基硫代膦酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、亞膦酸酯、胺基磷酸酯、3'-烷基胺基磷酸酯、胺基烷基胺基磷酸酯、硫代胺基磷酸酯、哌𠯤磷酸酯、苯胺硫代磷酸酯、苯胺磷酸酯、酮、碸、磺醯胺、碳酸酯、胺基甲酸酯、亞甲基伸肼基化物、亞甲基二甲基伸肼基化物、甲縮醛、硫代甲縮醛、肟、亞甲基亞胺基化物、亞甲基甲基亞胺基化物、硫代醯胺、具有核乙醯基之鍵聯、胺乙基甘胺酸、矽烷基或矽氧烷鍵聯、具有或不具有雜原子之例如1至10個碳的飽和或不飽和及/或經取代及/或含有雜原子之烷基或環烷基鍵聯、具有N-嗎啉基結構之鍵聯、醯胺、聚醯胺(其中鹼基直接地或間接地連接至主鏈之氮雜氮)及其組合。硫代磷酸酯反義寡核苷酸(PS ASO)為包含硫代磷酸酯鍵聯之反義寡核苷酸。甲磺醯胺基磷酸酯反義寡核苷酸(MsPA ASO)為包含甲磺醯胺基磷酸酯鍵聯之反義寡核苷酸。
在一些情況下，修飾為甲基或硫醇修飾，諸如甲基膦酸酯、甲磺醯胺基磷酸酯或硫醇膦酸酯修飾。在一些情況下，經修飾之核苷酸包括但不限於2'-氟N3-P5'-胺基磷酸酯。
在一些情況下，經修飾之核苷酸包括但不限於己糖醇核酸(或1',5'-無水己糖醇核酸(HNA))。
在一些實施例中，一或多種修飾進一步視情況包括核糖部分、磷酸酯主鏈及核苷之修飾，或3'末端或5'末端處之核苷酸類似物之修飾。舉例而言，3'末端視情況包括3'陽離子基團，或藉由用3'-3'鍵聯使3'末端處之核苷反轉。在另一替代方案中，3'末端視情況與胺基烷基結合，例如3' C5-胺基烷基dT。在額外替代方案中，3'末端視情況與無鹼基位點結合，例如與無嘌呤核酸或無嘧啶核酸位點結合。在一些情況下，5'末端與胺基烷基結合，例如5'-O-烷基胺基取代基。在一些情況下，5'末端與無鹼基位點結合，例如與無嘌呤核酸或無嘧啶核酸位點結合。
在一些實施例中，寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物中之一或多者。在一些情況下，寡核苷酸分子包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、20、25個或更多個本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，合成核苷酸類似物包括2'-O-甲基、2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)、2'-O-胺基丙基、2'-去氧、2'-去氧-2'-氟、2'-O-胺基丙基(2'-O-AP)、2'-O-二甲基胺基乙基(2'-O-DMAOE)、2'-O-二甲基胺基丙基(2'-O-DMAP)、2'-O-二甲基胺基乙氧基乙基(2'-O-DMAEOE)或2'-O-N-甲基乙醯胺基(2'-O-NMA)修飾之LNA、ENA、PNA、HNA、N-嗎啉基、甲基膦酸酯核苷酸、硫醇膦酸酯核苷酸、2'-氟N3-P5'-胺基磷酸酯或其組合。在一些情況下，寡核苷酸分子包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、20、25個或更多個選自以下之合成核苷酸類似物：2'-O-甲基、2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)、2'-O-胺基丙基、2'-去氧、2'-去氧-2'-氟、2'-O-胺基丙基(2'-O-AP)、2'-O-二甲基胺基乙基(2'-O-DMAOE)、2'-O-二甲基胺基丙基(2'-O-DMAP)、2'-O-二甲基胺基乙氧基乙基(2'-O-DMAEOE)或2'-O-N-甲基乙醯胺基(2'-O-NMA)修飾之LNA、ENA、PNA、HNA、N-嗎啉基、甲基膦酸酯核苷酸、硫醇膦酸酯核苷酸、2'-氟N3-P5'-胺基磷酸酯或其組合。在一些情況下，寡核苷酸分子包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、20、25個或更多個2'-O-甲基修飾之核苷酸。在一些情況下，寡核苷酸分子包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、20、25個或更多個2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)修飾之核苷酸。在一些情況下，寡核苷酸分子包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、20、25個或更多個硫醇膦酸酯核苷酸。
在一些情況下，寡核苷酸分子包含以下中之至少一者：約5%至約100%修飾、約10%至約100%修飾、約20%至約100%修飾、約30%至約100%修飾、約40%至約100%修飾、約50%至約100%修飾、約60%至約100%修飾、約70%至約100%修飾、約80%至約100%修飾及約90%至約100%修飾。在一些情況下，寡核苷酸分子包含100%修飾。
在一些情況下，寡核苷酸分子包含以下中之至少一者：約10%至約90%修飾、約20%至約90%修飾、約30%至約90%修飾、約40%至約90%修飾、約50%至約90%修飾、約60%至約90%修飾、約70%至約90%修飾及約80%至約100%修飾。
在一些情況下，寡核苷酸分子包含以下中之至少一者：約10%至約80%修飾、約20%至約80%修飾、約30%至約80%修飾、約40%至約80%修飾、約50%至約80%修飾、約60%至約80%修飾及約70%至約80%修飾。
在一些情況下，寡核苷酸分子包含以下中之至少一者：約10%至約70%修飾、約20%至約70%修飾、約30%至約70%修飾、約40%至約70%修飾、約50%至約70%修飾及約60%至約70%修飾。
在一些情況下，寡核苷酸分子包含以下中之至少一者：約10%至約60%修飾、約20%至約60%修飾、約30%至約60%修飾、約40%至約60%修飾及約50%至約60%修飾。
在一些情況下，寡核苷酸分子包含以下中之至少一者：約10%至約50%修飾、約20%至約50%修飾、約30%至約50%修飾及約40%至約50%修飾。
在一些情況下，寡核苷酸分子包含以下中之至少一者：約10%至約40%修飾、約20%至約40%修飾及約30%至約40%修飾。
在一些情況下，寡核苷酸分子包含以下中之至少一者：約10%至約30%修飾及約20%至約30%修飾。
在一些情況下，寡核苷酸分子包含約10%至約20%修飾。
在一些情況下，寡核苷酸分子包含約15%至約90%、約20%至約80%、約30%至約70%或約40%至約60%修飾。
在其他情況下，寡核苷酸分子包含至少約15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%修飾。
在一些實施例中，寡核苷酸分子包含至少約1、約2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17、約18、約19、約20、約21、約22、約23、約24、約25、約26、約27、約28、約29、約30、約31、約32、約33、約34、約35、約36、約37、約38、約39或約40個修飾。
在一些情況下，寡核苷酸分子包含至少約1、約2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17、約18、約19、約20、約21、約22、約23、約24、約25、約26、約27、約28、約29、約30、約31、約32、約33、約34、約35、約36、約37、約38、約39或約40個經修飾之核苷酸。
在一些情況下，約5%至約100%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約5%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約10%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約15%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約20%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約25%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約30%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約35%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約40%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約45%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約50%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約55%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約60%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約65%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約70%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約75%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約80%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約85%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約90%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約95%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約96%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約97%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約98%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約99%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些情況下，約100%之寡核苷酸分子包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，合成核苷酸類似物包括2'-O-甲基、2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)、2'-O-胺基丙基、2'-去氧、2'-去氧-2'-氟、2'-O-胺基丙基(2'-O-AP)、2'-O-二甲基胺基乙基(2'-O-DMAOE)、2'-O-二甲基胺基丙基(2'-O-DMAP)、2'-O-二甲基胺基乙氧基乙基(2'-O-DMAEOE)或2'-O-N-甲基乙醯胺基(2'-O-NMA)修飾之LNA、ENA、PNA、HNA、N-嗎啉基、甲基膦酸酯核苷酸、硫醇膦酸酯核苷酸、2'-氟N3-P5'-胺基磷酸酯或其組合。
在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約1至約25個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約1個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約2個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約3個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約4個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約5個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約6個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約7個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約8個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約9個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約10個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約11個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約12個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約13個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約14個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約15個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約16個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約17個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約18個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約19個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約20個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約21個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約22個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約23個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約24個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約25個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約26個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約27個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約28個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約29個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約30個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約31個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約32個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約33個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約34個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約35個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約36個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約37個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約38個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約39個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含約40個修飾，其中修飾包含本文所描述之合成核苷酸類似物。
在一些實施例中，寡核苷酸分子由兩個獨立的聚核苷酸組裝而成，其中一個聚核苷酸包含寡核苷酸分子之有義股且第二個聚核苷酸包含寡核苷酸分子之反義股。在其他實施例中，有義股經由連接子分子連接至反義股，該連接子分子在一些情況下為聚核苷酸連接子或非核苷酸連接子。
在一些實施例中，寡核苷酸分子包含有義股及反義股，其中有義股中之嘧啶核苷酸包含2'-O-甲基嘧啶核苷酸，且有義股中之嘌呤核苷酸包含2'-去氧嘌呤核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含有義股及反義股，其中有義股中存在之嘧啶核苷酸包含2'-去氧-2'-氟嘧啶核苷酸，且其中有義股中存在之嘌呤核苷酸包含2'-去氧嘌呤核苷酸。
在一些實施例中，寡核苷酸分子包含有義股及反義股，其中嘧啶核苷酸在存在於該反義股中時為2'-去氧-2'-氟嘧啶核苷酸，且嘌呤核苷酸在存在於該反義股中時為2'-O-甲基嘌呤核苷酸。
在一些實施例中，寡核苷酸分子包含有義股及反義股，其中嘧啶核苷酸在存在於該反義股中時為2'-去氧-2'-氟嘧啶核苷酸，且其中嘌呤核苷酸在存在於該反義股中時包含2'-去氧-嘌呤核苷酸。
在一些實施例中，寡核苷酸分子包含有義股及反義股，且有義股及反義股中之至少一者具有複數個(例如，兩個或更多個、三個或更多個、四個或更多個、五個或更多個、六個或更多個、七個或更多個、八個或更多個等) 2'-O-甲基或2'-去氧-2'-氟修飾之核苷酸。在一些實施例中，複數個2'-O-甲基或2'-去氧-2'-氟修飾之核苷酸中之至少兩個、三個、四個、五個、六個或七個為連續核苷酸。在一些實施例中，連續的2'-O-甲基或2'-去氧-2'-氟修飾之核苷酸位於有義股及/或反義股之5'端。在一些實施例中，連續的2'-O-甲基或2'-去氧-2'-氟修飾之核苷酸位於有義股及/或反義股之3'端。在一些實施例中，寡核苷酸分子之有義股在其5'端及/或3'端或兩者處包括至少四個、至少五個、至少六個連續的2'-O-甲基修飾之核苷酸。視情況，在此類實施例中，寡核苷酸分子之有義股在聚核苷酸5'端之至少四個、至少五個、至少六個連續的2'-O-甲基修飾之核苷酸的3'端處，或在聚核苷酸3'端之至少四個、至少五個、至少六個連續的2'-O-甲基修飾之核苷酸的5'端處包括至少一個、至少兩個、至少三個、至少四個2'-去氧-2'-氟修飾之核苷酸。亦視情況，此類至少兩個、至少三個、至少四個2'-去氧-2'-氟修飾之核苷酸為連續核苷酸。
在一些實施例中，寡核苷酸分子包含有義股及反義股，且有義股及反義股中之至少一者具有位於有義股及/或反義股之5'端的2'-O-甲基修飾之核苷酸。在一些實施例中，有義股及反義股中之至少一者具有位於有義股及/或反義股之3'端的2'-O-甲基修飾之核苷酸。在一些實施例中，位於有義股及/或反義股之5'端的2'-O-甲基修飾之核苷酸為嘌呤核苷酸。在一些實施例中，位於有義股及/或反義股之5'端的2'-O-甲基修飾之核苷酸為嘧啶核苷酸。
在一些實施例中，寡核苷酸分子包含有義股及反義股，且有義股及反義股中之一者具有位於5'端之至少兩個連續的2'-去氧-2'-氟修飾之核苷酸，而另一股具有位於5'端之至少兩個連續的2'-O-甲基修飾之核苷酸。在一些實施例中，當該股具有位於5'端之至少兩個連續的2'-去氧-2'-氟修飾之核苷酸時，該股在至少兩個連續的2'-去氧-2'-氟修飾之核苷酸的3'端亦包括至少兩個、至少三個連續的2'-O-甲基修飾之核苷酸。在一些實施例中，有義股及反義股中之一者在其5'端及/或3'端具有至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個、至少六個或至少七個連續的2'-O-甲基修飾之核苷酸，該等核苷酸連接至2'-去氧-2'-氟修飾之核苷酸。在一些實施例中，有義股及反義股中之一者具有至少四個、至少五個核苷酸，其具有交替的2'-O-甲基修飾之核苷酸及2'-去氧-2'-氟修飾之核苷酸。
在一些實施例中，寡核苷酸分子，諸如siRNA，具有如式III所示之式：
有義股(SS)
反義股(AS)，
其中由N表示之各核苷酸獨立地為A、U、C或G或經修飾之核苷酸鹼基，諸如本文所提供之彼等者。有義股及反義股之N 1核苷酸代表各自股之5'端。為了清楚起見，雖然式III在有義股及反義股中均使用N 1、N 2、N 3等，但核苷酸鹼基不需要相同且不意欲相同。式III所示之siRNA與目標序列互補。
舉例而言，在一些實施例中，有義股包含N 1及N 2處之具有硫代磷酸酯(PS)修飾之主鏈的2'O-甲基修飾之核苷酸；N 3、N 7、N 8、N 9、N 12及N 17處之2'-氟修飾之核苷酸；及N 4、N 5、N 6、N 10、N 11、N 13、N 14、N 15、N 16、N 18及N 19處之2'O-甲基修飾之核苷酸。
在一些實施例中，反義股包含連接至N 1之乙烯基膦酸酯部分；N 2處之具有硫代磷酸酯(PS)修飾之主鏈的2'氟修飾之核苷酸；N 3、N 4、N 5、N 6、N 7、N 8、N 9、N 10、N 11、N 12、N 13、N 15、N 16、N 17、N 18及N 19處之2'O-甲基修飾之核苷酸；N 14處之2'氟修飾之核苷酸；及N 20及N 21處之具有硫代磷酸酯(PS)修飾之主鏈的2'O-甲基修飾之核苷酸。
在一些實施例中，寡核苷酸分子包含有義股及反義股，其中有義股包括有義股之5'端、3'端、或5'端及3'端處之末端帽部分。在其他實施例中，末端帽部分為反向去氧無鹼基部分。
在一些實施例中，寡核苷酸分子包含有義股及反義股，其中反義股包含反義股之3'端處之甘油基修飾。
在一些實施例中，寡核苷酸分子包含有義股及反義股，其中有義股包含一或多個，例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個或更多個硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯或甲磺醯胺基磷酸酯核苷酸間鍵聯，及/或一或多個(例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個) 2'-去氧、2'-O-甲基、2'-去氧-2'-氟，及/或約一或多個(例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個)通用鹼基修飾之核苷酸，及視情況存在之有義股之3'端、5'端、或3'端及5'端處之末端帽分子；且其中反義股包含約1至約10個或更多個，具體地約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個或更多個硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯或甲磺醯胺基磷酸酯核苷酸間鍵聯，及/或一或多個(例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個) 2'-去氧、2'-O-甲基、2'-去氧-2'-氟，及/或一或多個(例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個)通用鹼基修飾之核苷酸，及視情況存在之反義股之3'端、5'端、或3'端及5'端處之末端帽分子。在其他實施例中，有義股及/或反義股之一或多個，例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個嘧啶核苷酸經2'-去氧、2'-O-甲基及/或2'-去氧-2'-氟核苷酸化學修飾，具有或不具有一或多個，例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯或甲磺醯胺基磷酸酯核苷酸間鍵聯及/或存在於相同或不同股中之3'端、5'端、或3'端及5'端處之末端帽分子。
在一些實施例中，寡核苷酸分子包含有義股及反義股，其中有義股包含約1至約25個，例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個或更多個硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯或甲磺醯胺基磷酸酯核苷酸間鍵聯，及/或一或多個(例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個) 2'-去氧、2'-O-甲基、2'-去氧-2'-氟，及/或一或多個(例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個)通用鹼基修飾之核苷酸，及視情況存在之有義股之3'端、5'端、或3'端及5'端處之末端帽分子；且其中反義股包含約1至約25個或更多個，例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個或更多個硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯或甲磺醯胺基磷酸酯核苷酸間鍵聯，及/或一或多個(例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個) 2'-去氧、2'-O-甲基、2'-去氧-2'-氟，及/或一或多個(例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個)通用鹼基修飾之核苷酸，及視情況存在之反義股之3'端、5'端、或3'端及5'端處之末端帽分子。在其他實施例中，有義股及/或反義股之一或多個，例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個嘧啶核苷酸經2'-去氧、2'-O-甲基及/或2'-去氧-2'-氟核苷酸化學修飾，具有或不具有約1至約25個或更多個，例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個或更多個硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯或甲磺醯胺基磷酸酯核苷酸間鍵聯及/或存在於相同或不同股中之3'端、5'端、或3'端及5'端處之末端帽分子。
在一些實施例中，寡核苷酸分子包含有義股及反義股，其中反義股包含一或多個，例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個或更多個硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯或甲磺醯胺基磷酸酯核苷酸間鍵聯，及/或有義股及/或反義股之3'端、5'端、或3'端及5'端處之約一或多個(例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個) 2'-去氧、2'-O-甲基、2'-去氧-2'-氟，及/或一或多個(例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個)通用鹼基修飾之核苷酸，及視情況存在之有義股之3'端、5'端、或3'端及5'端處之末端帽分子。在一些實施例中，反義股包含約1至約10個或更多個，具體地約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯或甲磺醯胺基磷酸酯核苷酸間鍵聯，及/或一或多個(例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個) 2'-去氧、2'-O-甲基、2'-去氧-2'-氟，及/或一或多個(例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個)通用鹼基修飾之核苷酸，及視情況存在之反義股之3'端、5'端、或3'端及5'端處之末端帽分子。在其他實施例中，有義股及/或反義股之一或多個，例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個或更多個嘧啶核苷酸經2'-去氧、2'-O-甲基及/或2'-去氧-2'-氟核苷酸化學修飾，具有或不具有一或多個，例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯或甲磺醯胺基磷酸酯核苷酸間鍵聯及/或存在於相同或不同股中之3'端、5'端、或3'端及5'端處之末端帽分子。
在一些實施例中，寡核苷酸分子包含有義股及反義股，其中反義股包含約1至約25個或更多個，例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個或更多個硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯或甲磺醯胺基磷酸酯核苷酸間鍵聯，及/或一或多個(例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個) 2'-去氧、2'-O-甲基、2'-去氧-2'-氟，及/或一或多個(例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個)通用鹼基經修飾之核苷酸，及視情況存在之有義股之3'端、5'端、或3'端及5'端處之末端帽分子；且反義股包含約1至約25個或更多個，例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個或更多個硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯或甲磺醯胺基磷酸酯核苷酸間鍵聯，及/或一或多個(例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個) 2'-去氧、2'-O-甲基、2'-去氧-2'-氟，及/或一或多個(例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個)通用鹼基修飾之核苷酸，及視情況存在之反義股之3'端、5'端、或3'端及5'端處之末端帽分子。在其他實施例中，有義股及/或反義股之一或多個，例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個嘧啶核苷酸經2'-去氧、2'-O-甲基及/或2'-去氧-2'-氟核苷酸化學修飾，具有或不具有約1至約5個，例如約1、2、3、4、5個或更多個硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯或甲磺醯胺基磷酸酯核苷酸間鍵聯及/或存在於相同或不同股中之3'端、5'端、或3'端及5'端處之末端帽分子。
在一些實施例中，本文所描述之寡核苷酸分子為經化學修飾之短干擾核酸分子，其在寡核苷酸分子之各股中具有約1至約25個，例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個或更多個硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯或甲磺醯胺基磷酸酯核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，寡核苷酸分子包含有義股及反義股，且反義股包含反義股之3'端處之磷酸主鏈修飾。替代地及/或另外，寡核苷酸分子包含有義股及反義股，且有義股包含反義股之5'端處之磷酸主鏈修飾。在一些情況下，磷酸主鏈修飾為硫代磷酸酯。在一些情況下，磷酸主鏈修飾為二硫代磷酸酯。在一些情況下，磷酸主鏈修飾為膦酸酯。在一些情況下，磷酸主鏈修飾為胺基磷酸酯。在一些情況下，磷酸主鏈修飾為甲磺醯胺基磷酸酯。在一些實施例中，有義股或反義股具有經由兩個硫代磷酸酯主鏈偶合之三個連續核苷。在一些實施例中，有義股或反義股具有經由兩個二硫代磷酸酯主鏈偶合之三個連續核苷。在一些實施例中，有義股或反義股具有經由兩個膦酸酯主鏈偶合之三個連續核苷。在一些實施例中，有義股或反義股具有經由兩個胺基磷酸酯主鏈偶合之三個連續核苷。在一些實施例中，有義股或反義股具有經由兩個甲磺醯胺基磷酸酯主鏈偶合之三個連續核苷。
在另一實施例中，本文所描述之寡核苷酸分子包含2'-5'核苷酸間鍵聯。在一些情況下，2'-5'核苷酸間鍵聯位於一或兩個序列股之3'端、5'端、或3'端及5'端。在其他情況下，2'-5'核苷酸間鍵聯存在於一或兩個序列股內之各個其他位置，例如寡核苷酸分子之一股或兩股中約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個包括嘧啶核苷酸之每一核苷酸間鍵聯的位置包含2'-5'核苷酸間鍵聯，或寡核苷酸分子之一股或兩股中約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個包括嘌呤核苷酸之每一核苷酸間鍵聯的位置包含2'-5'核苷酸間鍵聯。
在一些實施例中，寡核苷酸分子為在細胞或重構活體外系統中介導RNAi活性之單股分子，其中該寡核苷酸分子包含與目標核酸序列具有互補性之單股聚核苷酸，且其中該寡核苷酸分子中存在之一或多個嘧啶核苷酸為2'-去氧-2'-氟嘧啶核苷酸(例如，其中所有嘧啶核苷酸均為2'-去氧-2'-氟嘧啶核苷酸，或者複數個嘧啶核苷酸為2'-去氧-2'-氟嘧啶核苷酸)，且其中該寡核苷酸分子中存在之任何嘌呤核苷酸為2'-去氧嘌呤核苷酸(例如，其中所有嘌呤核苷酸均為2'-去氧嘌呤核苷酸，或者複數個嘌呤核苷酸為2'-去氧嘌呤核苷酸)，及末端帽修飾，其視情況存在於反義序列之3'端、5'端、或3'端及5'端，該寡核苷酸分子視情況進一步包含該寡核苷酸分子之3'端處之約1至約4個(例如約1、2、3或4個)末端2'-去氧核苷酸，其中末端核苷酸進一步包含一或多個(例如1、2、3或4個)硫代磷酸酯或甲磺醯胺基磷酸酯核苷酸間鍵聯，且其中該寡核苷酸分子視情況進一步包含末端磷酸基團，諸如5'末端磷酸基團。
在一些情況下，當與天然聚核酸分子及核酸內切酶相比時，本文所描述之合成核苷酸類似物中之一或多者對諸如核糖核酸酶(例如RNase H)、去氧核糖核酸酶(例如DNase)或核酸外切酶(例如5'-3'核酸外切酶及3'-5'核酸外切酶)之核酸酶具有抗性。在一些情況下，合成核苷酸類似物，包含2'-O-甲基、2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)、2'-O-胺基丙基、2'-去氧、2'-去氧-2'-氟、2'-O-胺基丙基(2'-O-AP)、2'-O-二甲基胺基乙基(2'-O-DMAOE)、2'-O-二甲基胺基丙基(2'-O-DMAP)、2'-O-二甲基胺基乙氧基乙基(2'-O-DMAEOE)或2'-O-N-甲基乙醯胺基(2'-O-NMA)修飾之LNA、ENA、PNA、HNA、N-嗎啉基、甲基膦酸酯核苷酸、硫醇膦酸酯核苷酸、2'-氟N3-P5'-胺基磷酸酯或其組合，對諸如核糖核酸酶(例如RNase H)、去氧核糖核酸酶(例如DNase)或核酸外切酶(例如5'-3'核酸外切酶及3'-5'核酸外切酶)之核酸酶具有抗性。在一些情況下，2'-O-甲基修飾之寡核苷酸分子具有核酸酶抗性(例如RNase H、DNase、5'-3'核酸外切酶或3'-5'核酸外切酶抗性)。在一些情況下，2'O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)修飾之寡核苷酸分子具有核酸酶抗性(例如RNase H、DNase、5'-3'核酸外切酶或3'-5'核酸外切酶抗性)。在一些情況下，2'-O-胺基丙基修飾之寡核苷酸分子具有核酸酶抗性(例如RNase H、DNase、5'-3'核酸外切酶或3'-5'核酸外切酶抗性)。在一些情況下，2'-去氧修飾之寡核苷酸分子具有核酸酶抗性(例如RNase H、DNase、5'-3'核酸外切酶或3'-5'核酸外切酶抗性)。在一些情況下，2'-去氧-2'-氟修飾之寡核苷酸分子具有核酸酶抗性(例如RNase H、DNase、5'-3'核酸外切酶或3'-5'核酸外切酶抗性)。在一些情況下，2'-O-胺基丙基(2'-O-AP)修飾之寡核苷酸分子具有核酸酶抗性(例如RNase H、DNase、5'-3'核酸外切酶或3'-5'核酸外切酶抗性)。在一些情況下，2'-O-二甲基胺基乙基(2'-O-DMAOE)修飾之寡核苷酸分子具有核酸酶抗性(例如RNase H、DNase、5'-3'核酸外切酶或3'-5'核酸外切酶抗性)。在一些情況下，2'-O-二甲基胺基丙基(2'-O-DMAP)修飾之寡核苷酸分子具有核酸酶抗性(例如RNase H、DNase、5'-3'核酸外切酶或3'-5'核酸外切酶抗性)。在一些情況下，2'-O-二甲基胺基乙氧基乙基(2'-O-DMAEOE)修飾之寡核苷酸分子具有核酸酶抗性(例如RNase H、DNase、5'-3'核酸外切酶或3'-5'核酸外切酶抗性)。在一些情況下，2'-O-N-甲基乙醯胺基(2'-O-NMA)修飾之寡核苷酸分子具有核酸酶抗性(例如RNase H、DNase、5'-3'核酸外切酶或3'-5'核酸外切酶抗性)。在一些情況下，LNA修飾之寡核苷酸分子具有核酸酶抗性(例如RNase H、DNase、5'-3'核酸外切酶或3'-5'核酸外切酶抗性)。在一些情況下，ENA修飾之寡核苷酸分子具有核酸酶抗性(例如RNase H、DNase、5'-3'核酸外切酶或3'-5'核酸外切酶抗性)。在一些情況下，HNA修飾之寡核苷酸分子具有核酸酶抗性(例如RNase H、DNase、5'-3'核酸外切酶或3'-5'核酸外切酶抗性)。在一些情況下，N-嗎啉基具有核酸酶抗性(例如RNase H、DNase、5'-3'核酸外切酶或3'-5'核酸外切酶抗性)。在一些情況下，PNA修飾之寡核苷酸分子對核酸酶具有抗性(例如RNase H、DNase、5'-3'核酸外切酶或3'-5'核酸外切酶抗性)。在一些情況下，甲基膦酸酯修飾之寡核苷酸分子具有核酸酶抗性(例如RNase H、DNase、5'-3'核酸外切酶或3'-5'核酸外切酶抗性)。在一些情況下，硫醇膦酸酯修飾之寡核苷酸分子具有核酸酶抗性(例如RNase H、DNase、5'-3'核酸外切酶或3'-5'核酸外切酶抗性)。在一些情況下，包含2'-氟N3-P5'-胺基磷酸酯之寡核苷酸分子具有核酸酶抗性(例如RNase H、DNase、5'-3'核酸外切酶或3'-5'核酸外切酶抗性)。在一些情況下，本文所描述之5'結合物抑制5'-3'核酸外切裂解。在一些情況下，本文所描述之3'結合物抑制3'-5'核酸外切裂解。
在一些實施例中，相對於等效的天然聚核酸分子，一或多種本文所描述之合成核苷酸類似物對其mRNA目標具有增加的結合親和力。相對於等效的天然聚核酸分子，一或多種合成核苷酸類似物，包含2'-O-甲基、2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)、2'-O-胺基丙基、2'-去氧、2'-去氧-2'-氟、2'-O-胺基丙基(2'-O -AP)、2'-O-二甲基胺基乙基(2'-O-DMAOE)、2'-O-二甲基胺基丙基(2'-O-DMAP)、2'-O-二甲基胺基乙氧基乙基(2'-O-DMAEOE)或2'-O-N-甲基乙醯胺基(2'-O-NMA)修飾之LNA、ENA、PNA、HNA、N-嗎啉基、甲基膦酸酯核苷酸、硫醇膦酸酯核苷酸或2'-氟N3-P5'-胺基磷酸酯，對其mRNA目標具有增加的結合親和力。在一些情況下，相對於等效的天然聚核酸分子，2'-O-甲基修飾之寡核苷酸分子對其mRNA目標具有增加的結合親和力。在一些情況下，相對於等效的天然聚核酸分子，2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)修飾之寡核苷酸分子對其mRNA目標具有增加的結合親和力。在一些情況下，相對於等效的天然聚核酸分子，2'-O-胺基丙基修飾之寡核苷酸分子對mRNA目標具有增加的結合親和力。在一些情況下，相對於等效的天然聚核酸分子，2'-去氧修飾之寡核苷酸分子對其mRNA目標具有增加的結合親和力。在一些情況下，相對於等效的天然聚核酸分子，2'-去氧-2'-氟修飾之寡核苷酸分子對其mRNA目標具有增加的結合親和力。在一些情況下，相對於等效的天然聚核酸分子，2'-O-胺基丙基(2'-O-AP)修飾之寡核苷酸分子對其mRNA目標具有增加的結合親和力。在一些情況下，相對於等效的天然聚核酸分子，2'-O-二甲基胺基乙基(2'-O-DMAOE)修飾之寡核苷酸分子對其mRNA目標具有增加的結合親和力。在一些情況下，相對於等效的天然聚核酸分子，2'-O-二甲基胺基丙基(2'-O-DMAP)修飾之寡核苷酸分子對其mRNA目標具有增加的結合親和力。在一些情況下，相對於等效的天然聚核酸分子，2'-O-二甲基胺基乙氧基乙基(2'-O-DMAEOE)修飾之寡核苷酸分子對其mRNA目標具有增加的結合親和力。在一些情況下，相對於等效的天然聚核酸分子，2'-O-N-甲基乙醯胺基(2'-O-NMA)修飾之寡核苷酸分子對其mRNA目標具有增加的結合親和力。在一些情況下，相對於等效的天然聚核酸分子，LNA修飾之寡核苷酸分子對其mRNA目標具有增加的結合親和力。在一些情況下，相對於等效的天然聚核酸分子，ENA修飾之寡核苷酸分子對其mRNA目標具有增加的結合親和力。在一些情況下，相對於等效的天然聚核酸分子，PNA修飾之寡核苷酸分子對其mRNA目標具有增加的結合親和力。在一些情況下，相對於等效的天然聚核酸分子，HNA修飾之寡核苷酸分子對其mRNA目標具有增加的結合親和力。在一些情況下，相對於等效的天然聚核酸分子，N-嗎啉基修飾之寡核苷酸分子對其mRNA目標具有增加的結合親和力。在一些情況下，相對於等效的天然聚核酸分子，甲基膦酸酯核苷酸修飾之寡核苷酸分子對其mRNA目標具有增加的結合親和力。在一些情況下，相對於等效的天然聚核酸分子，硫醇膦酸酯核苷酸修飾之寡核苷酸分子對其mRNA目標具有增加的結合親和力。在一些情況下，相對於等效的天然聚核酸分子，包含2'-氟N3-P5'-胺基磷酸酯之寡核苷酸分子對mRNA目標具有增加的結合親和力。在一些情況下，增加的親和力係以較低的Kd、較高的熔融溫度(Tm)或其組合來說明。
在一些實施例中，本文所描述之寡核苷酸分子為對掌性純(或立體純)聚核酸分子，或包含單一鏡像異構物之聚核酸分子。在一些情況下，寡核苷酸分子包含L-核苷酸。在一些情況下，寡核苷酸分子包含D-核苷酸。在一些情況下，寡核苷酸分子組合物包含少於30%、25%、20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%或更少的其鏡像異構物。在一些情況下，寡核苷酸分子組合物包含少於30%、25%、20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%或更少的外消旋混合物。
在一些實施例中，本文所描述之寡核苷酸分子經進一步修飾以包括適體結合部分。在一些情況下，適體結合部分為DNA適體結合部分。在一些情況下，適體結合部分為Alphamer，其包含識別特定細胞表面目標之適體部分及呈現特定抗原決定基以連接至循環抗體之部分。
在其他實施例中，本文所描述之寡核苷酸分子經修飾以增加其穩定性。在一些實施例中，寡核苷酸分子為RNA (例如siRNA)。在一些情況下，寡核苷酸分子藉由上述修飾中之一或多者進行修飾以增加其穩定性。在一些情況下，寡核苷酸分子在2'羥基位置處經修飾，諸如藉由2'-O-甲基、2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)、2'-O-胺基丙基、2'-去氧、2'-去氧-2'-氟、2'-O-胺基丙基(2'-O-AP)、2'-O-二甲基胺基乙基(2'-O-DMAOE)、2'-O-二甲基胺基丙基(2'-O-DMAP)、2'-O-二甲基胺基乙氧基乙基(2'-O-DMAEOE)或2'-O-N-甲基乙醯胺基(2'-O-NMA)修飾或藉由鎖定或橋聯核糖構形(例如LNA或ENA)。在一些情況下，寡核苷酸分子經2'-O-甲基及/或2'-O-甲氧基乙基核糖修飾。在一些情況下，寡核苷酸分子亦包括N-嗎啉基、PNA、HNA、甲基膦酸酯核苷酸、硫醇膦酸酯核苷酸及/或2'-氟N3-P5'-胺基磷酸酯以增加其穩定性。在一些情況下，寡核苷酸分子為對掌性純(或立體純)寡核苷酸分子。在一些情況下，對掌性純(或立體純)寡核苷酸分子經修飾以增加其穩定性。對RNA進行適合的修飾以增加遞送穩定性對於熟習此項技術者而言為顯而易見的。
在一些實施例中，寡核苷酸分子包含2'修飾。在一些實施例中，寡核苷酸分子自有義股5'端起之位置3、7、8、9、12及17處的核苷酸未用2'O-甲基修飾進行修飾。在一些實施例中，寡核苷酸分子自有義股5'端起之位置3、7、8、9、12及17處的核苷酸用2'氟修飾進行修飾。在一些實施例中，寡核苷酸分子自反義股5'端起之位置2及14處的核苷酸未用2'O-甲基修飾進行修飾。在一些實施例中，寡核苷酸分子自反義股5'端起之位置2及14處的核苷酸用2'氟修飾進行修飾。在一些實施例中，核苷酸中之任一者可進一步包含5'-硫代磷酸酯基修飾。在一些實施例中，寡核苷酸分子自有義股5'端起之位置1及2處的核苷酸用5'-硫代磷酸酯基修飾進行修飾。在一些實施例中，寡核苷酸分子自反義股5'端起之位置1、2、20及21處的核苷酸用5'-硫代磷酸酯基修飾進行修飾。在一些實施例中，寡核苷酸分子之有義股或反義股的5'端可進一步包含乙烯基膦酸酯修飾。在一些實施例中，寡核苷酸分子自反義股5'端起之位置1處的核苷酸用乙烯基膦酸酯修飾進行修飾。
在一些情況下，寡核苷酸分子為包含自互補有義區及反義區之雙股聚核苷酸分子，其中反義區包含與目標核酸分子之核苷酸序列或其一部分互補的核苷酸序列，且有義區具有與目標核酸序列或其一部分對應的核苷酸序列。在一些情況下，寡核苷酸分子由兩個獨立的聚核苷酸組裝而成，其中一股為有義股且另一股為反義股，其中反義股及有義股為自互補的(例如，各股包含與另一股之核苷酸序列互補的核苷酸序列；諸如其中反義股及有義股形成雙螺旋體或雙股結構，例如其中雙股區為約19、20、21、22、23個或更多個鹼基對)；反義股包含與目標核酸分子之核苷酸序列或其一部分互補的核苷酸序列，且有義股包含與目標核酸序列或其一部分對應的核苷酸序列。或者，寡核苷酸分子由單個寡核苷酸組裝而成，其中寡核苷酸分子之自互補有義區及反義區藉由基於核酸或基於非核酸之連接子連接。
在一些情況下，寡核苷酸分子為具有雙螺旋體、不對稱雙螺旋體、髮夾或不對稱髮夾二級結構、具有自互補有義區及反義區之聚核苷酸，其中反義區包含與獨立的目標核酸分子之核酸序列或其一部分互補的核酸序列，且有義區包含與目標核酸序列或其一部分對應的核酸序列。在其他情況下，寡核苷酸分子為具有兩個或更多個環結構及包含自互補有義區及反義區之莖的環狀單股聚核苷酸，其中反義區包含與目標核酸分子之核酸序列或其一部分互補的核酸序列，且有義區包含與目標核酸序列或其一部分對應的核酸序列，且其中環狀聚核苷酸經活體內或活體外加工以產生能夠介導RNAi之活性寡核苷酸分子。在額外情況下，寡核苷酸分子亦包含單股聚核苷酸，其包含與目標核酸分子之核酸序列或其一部分互補的核酸序列(例如，其中此類寡核苷酸分子不需要在寡核苷酸分子內存在與目標核酸序列或其一部分對應的核酸序列)，其中單股聚核苷酸進一步包含末端磷酸基團，諸如5'-磷酸或5',3'-二磷酸。
在一些情況下，不對稱髮夾為線性寡核苷酸分子，其包含反義區、包含核苷酸或非核苷酸之環部分、及有義區，有義區包含比反義區少的核苷酸，達到有義區具有足夠的互補核苷酸與反義區鹼基配對且形成具有環之雙螺旋體的程度。舉例而言，不對稱髮夾寡核苷酸分子包含長度足以介導細胞或活體外系統中之RNAi (例如約19至約22個核苷酸)的反義區、包含約4至約8個核苷酸之環區、及具有約3至約18個與反義區互補之核苷酸的有義區。在一些情況下，不對稱髮夾寡核苷酸分子亦包含經化學修飾之5'末端磷酸基團。在額外情況下，不對稱髮夾寡核苷酸分子之環部分包含核苷酸、非核苷酸、連接子分子或結合物分子。
在一些實施例中，不對稱雙螺旋體為具有兩個獨立股的包含有義區及反義區之寡核苷酸分子，其中有義區包含比反義區少的核苷酸，達到有義區具有足夠的互補核苷酸與反義區鹼基配對且形成雙螺旋體的程度。舉例而言，不對稱雙螺旋體寡核苷酸分子包含長度足以介導細胞或活體外系統中之RNAi (例如約19至約22個核苷酸)的反義區及具有約3至約19個與反義區互補之核苷酸的有義區。
在一些情況下，通用鹼基係指與天然DNA/RNA鹼基中之各者形成鹼基對的核苷酸鹼基類似物，彼此之間幾乎沒有區別。通用鹼基之非限制性實例包括此項技術中已知的C-苯基、C-萘基及其他芳族衍生物、肌苷、唑甲醯胺及硝基唑衍生物，諸如3-硝基吡咯、4-硝基吲哚、5-硝基吲哚及6-硝基吲哚。
在一些實施例中，dsRNA劑經5'磷酸化或在5'末端包括磷醯基類似物。5'-磷酸修飾包括與RISC介導之基因靜默相容的彼等修飾。適合的修飾包括：5'-單磷酸(HO 2(O)P--O-5')；5'-二磷酸((HO) 2(O)P--O--P(HO)(O)--O-5')；5'-三磷酸((HO) 2(O)P--O--(HO)(O)P--O--P(HO)(O)--O-5')；5'-鳥苷帽(7-甲基化或非甲基化) (7m-G-O-5'-(HO)(O)P--O--(HO)(O)P--O--P(HO)(O)--O-5')；5'-腺苷帽(Appp)及任何經修飾或未經修飾之核苷酸帽結構(N--O-5'-(HO)(O)P--O--(HO)(O)P--O--P(HO)(O)--O-5')；5'-單硫代磷酸酯(硫代磷酸酯；(HO) 2(S)P--O-5')；5'-單二硫代磷酸酯(二硫代磷酸酯；(HO)(HS)(S)P--O-5')、5'-硫代磷酸酯((HO)2(O)P--S-5')；二硫代磷酸酯[--O 2PS 2--]；膦酸酯[--PO(OH) 2--]；胺基磷酸酯[--O=P(OH) 2--]；甲磺醯胺基磷酸酯(CH 3)(SO 2)(N)P(O) 2--O-5')；經氧/硫置換之單磷酸酯、二磷酸酯及三磷酸酯之任何額外組合(例如5'-α-硫代三磷酸酯、5'-γ-硫代三磷酸酯等)、5'-胺基磷酸酯((HO) 2(O)P—NH-5'、(HO)(NH 2)(O)P—O-5')、5'-烷基膦酸酯(R=烷基=甲基、乙基、異丙基、丙基等，例如RP(OH)(O)--O-5'-，5'-烯基膦酸酯(亦即乙烯基、經取代之乙烯基)，(OH) 2(O)P-5'-CH2-)、5'-烷基醚膦酸酯(R=烷基醚=甲氧基甲基(MeOCH2-)、乙氧基甲基等，例如RP(OH)(O)--O-5'-)。在一些實施例中，修飾可置於dsRNA劑之反義股中。
其他修飾及修飾模式可見於例如美國專利第10,233,448號中，其特此以引用之方式併入。其他修飾及修飾模式可見於例如Anderson等人, Nucleic Acids Research 2021, 49 (16), 9026-9041中，其特此以引用之方式併入。其他修飾及修飾模式可見於例如PCT公開案第WO2021/030778號中，其特此以引用之方式併入。其他修飾及修飾模式可見於例如PCT公開案第WO2021/030763號中，其特此以引用之方式併入。
在一些實施例中，寡核苷酸分子之序列與CD40之目標序列至少40%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或99.5%互補。在一些實施例中，CD40之目標序列為CD40中約10-50個鹼基對長度、約15-50個鹼基對長度、15-40個鹼基對長度、15-30個鹼基對長度或15-25個鹼基對長度序列之核酸序列，其中目標序列之第一個核苷酸開始於CD40 mRNA轉錄本之編碼區或5'或3'-非轉譯區(UTR)中的任何核苷酸。舉例而言，目標序列之第一個核苷酸可經選擇以使其開始於CD40 mRNA之編碼或非編碼區(5'或3'-非轉譯區)的核酸位置(nal，自CD40 mRNA全長之5'端開始編號，例如5'端第一個核苷酸為nal 1) 1、nal 2、nal 3、nal 4、nal 5、nal 6、nal 7、nal 8、nal 9、nal 10、nal 11、nal 12、nal 13、nal 14、nal 15、nal 15、nal 16、nal 17或任何其他核酸位置。在一些實施例中，目標序列之第一個核苷酸可經選擇以使其開始於nal 10- nal 15、nal 10- nal 20、nal 50- nal 60、nal 55- nal 65、nal 75- nal 85、nal 95- nal 105、nal 135- nal 145、nal 155- nal 165、nal 225- nal 235、nal 265- nal 275、nal 275- nal 245、nal 245- nal 255、nal 285- nal 335、nal 335- nal 345、nal 385- nal 395、nal 515- nal 525、nal 665- nal 675、nal 675- nal 685、nal 695- nal 705、nal 705- nal 715、nal 875- nal 885、nal 885- nal 895、nal 895- nal 905、nal 1035- nal 1045、nal 1045- nal 1055、nal 1125- nal 1135、nal 1135- nal 1145、nal 1145- nal 1155、nal 1155- nal 1165、nal 1125- nal 1135、nal 1155- nal 1165、nal 1225- nal 1235、nal 1235- nal 1245、nal 1275- nal 1245、nal 1245- nal 1255、nal 1265- nal 1275、nal 1125- nal 1135、nal 1155- nal 1165、nal 1225- nal 1235、nal 1235- nal 1245、nal 1275- nal 1245、nal 1245- nal 1255、nal 1265- nal 1275、nal 1275- nal 1285、nal 1335- nal 1345、nal 1345- nal 1355、nal 1525- nal 1535、nal 1535- nal 1545、nal 1605- nal 1615、nal 1615-c.1625、nal 1625- nal 1635、nal 1635-1735、nal 1735-1835、nal 1835-1935、nal. 1836-1856、nal 1935-2000、nal 2000 -2100、nal 2100 -2200、nal 2200 -2260、nal 2260 -2400、nal 2400 -2500、nal 2500 -2600、nal 2600 -2700、nal 2700 -2800、nal 2800 -2500、nal 2500 -2600、nal 2600 -2700、nal 2700 -2800、nal 2800 -2860等之內或之間的位置。在一些實施例中，CD40 mRNA之序列以NCBI參考序列形式提供：NM_001250.6智人CD40分子(CD40)，轉錄本變異體1，mRNA： 。
在一些實施例中，dsRNA劑之反義股與目標RNA 100%互補以與其雜交且經由RNA干擾抑制其表現。目標RNA可為細胞中表現之任何RNA。在另一實施例中，細胞為腫瘤細胞、肝臟細胞、肌肉細胞、免疫細胞、心臟細胞或中樞神經系統細胞。在另一實施例中，dsRNA劑之反義股與目標RNA至少99%、至少98%、至少97%、至少96%、95%、至少90%、至少85%、至少80%、至少75%、至少70%、至少65%、至少60%、至少55%或至少50%互補。在一些實施例中，目標RNA為CD40 RNA。在一些實施例中，siRNA分子為降低CD40之mRNA表現的siRNA。在一些實施例中，siRNA分子為在本文所描述之分析中以不超過200 nm之濃度降低CD40之mRNA表現且降低其他RNA之表現不超過50%的siRNA，如本文所描述。
在一些實施例中，siRNA連接至蛋白質，諸如FN3域。siRNA可連接至多個FN3域，該等域與相同的目標蛋白或不同的目標蛋白結合。在一些實施例中，連接子連接至有義股，用於促進有義股與FN3域之連接。
在一些實施例中，本文提供具有式(X1) n-(X2) q-(X3) y-L-X4之組合物，其中X1為第一FN3域，X2為第二FN3域，X3為第三FN3域或半衰期延長分子，L為連接子，且X4為核酸分子，諸如但不限於siRNA分子，其中n、q及y各自獨立地為0或1。在一些實施例中，X1、X2及X3與不同的目標蛋白結合。在一些實施例中，y為0。在一些實施例中，n為1，q為0，且y為0。在一些實施例中，n為1，q為1，且y為0。在一些實施例中，n為1，q為1，且y為1。在一些實施例中，與無X3之分子相比，X3增加分子整體之半衰期。在一些實施例中，半衰期延長部分為與白蛋白結合之FN3域。此類FN3域之實例包括但不限於美國專利申請公開案第2017/0348397號及美國專利第9,156,887號中所描述之彼等者，該等文獻特此以全文引用之方式併入。FN3域可併入其他次單元，例如經由共價相互作用。在一些實施例中，FN3域進一步包含半衰期延長部分。例示性半衰期延長部分為白蛋白、白蛋白變異體、白蛋白結合蛋白及/或域、與血清蛋白結合之脂族鏈、運鐵蛋白及其片段及類似物以及Fc區。人類Fc區之胺基酸序列為眾所周知的，且包括IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA及IgE Fc區。在一些實施例中，FN3域可併入第二FN3域，其與延長整個分子之半衰期的分子結合，諸如但不限於本文所描述之半衰期延長部分中之任一者。在一些實施例中，第二FN3域與白蛋白、白蛋白變異體、白蛋白結合蛋白及/或域及其片段及類似物結合。
在一些實施例中，本文提供具有式(X1)-(X2)-L-(X4)之組合物，其中X1為第一FN3域，X2為第二FN3域，L為連接子，且X4為核酸分子。在一些實施例中，X4為siRNA分子。在一些實施例中，X1為結合CD71之FN3域。在一些實施例中，X2為結合CD71之FN3域。在一些實施例中，X1及X2不與同一目標蛋白結合。在一些實施例中，X1及X2與同一目標蛋白結合，但在蛋白質上之不同結合位點處。在一些實施例中，X1及X2與相同目標蛋白結合。在一些實施例中，X1及X2為結合CD71之FN3域。在一些實施例中，組合物不包含(例如不含)與ASGPR結合之化合物或蛋白質。
在一些實施例中，本文提供具有式C-(X1) n-(X2) q[L-X4]-(X3) y之組合物，其中X1為第一FN3域；X2為第二FN3域；X3為第三FN3域或半衰期延長分子；L為連接子；X4為寡核苷酸分子；且C為聚合物，其中n、q及y各自獨立地為0或1。
在一些實施例中，本文提供具有式(X1) n-(X2) q[L-X4]-(X3) y-C之組合物，其中X1為第一FN3域；X2為第二FN3域；X3為第三FN3域或半衰期延長分子；L為連接子；X4為寡核苷酸分子；且C為聚合物，其中n、q及y各自獨立地為0或1。
在一些實施例中，本文提供具有式C-(X1) n-(X2) q[L-X4]L-(X3) y之組合物，其中X1為第一FN3域；X2為第二FN3域；X3為第三FN3域或半衰期延長分子；L為連接子；X4為寡核苷酸分子；且C為聚合物，其中n、q及y各自獨立地為0或1。
在一些實施例中，本文提供具有式(X1) n-(X2) q[L-X4]L-(X3) y-C之組合物，其中X1為第一FN3域；X2為第二FN3域；X3為第三FN3域或半衰期延長分子；L為連接子；X4為寡核苷酸分子；且C為聚合物，其中n、q及y各自獨立地為0或1。
在一些實施例中，提供具有式A 1-B 1之組合物或複合物，其中A 1具有式C-L 1-X s且B 1具有式X AS-L 2-F 1，其中： C為聚合物，諸如PEG； L 1及L 2各自獨立地為連接子； X S為雙股siRNA分子之5'至3'寡核苷酸有義股； X AS為雙股siRNA分子之3'至5'寡核苷酸反義股； F 1為包含至少一個FN3域之多肽； 其中X S及X AS形成雙股寡核苷酸分子，以形成組合物/複合物。
在一些實施例中，提供具有式A 1-B 1之組合物或複合物，其中A 1具有式X s且B 1具有式X AS-L 2-F 1。
在一些實施例中，提供具有式A 1-B 1之組合物或複合物，其中A 1具有式C-L 1-X s且B 1具有式X AS。
在一些實施例中，有義股為本文所提供之有義股。在一些實施例中，反義股為本文所提供之反義股。在一些實施例中，有義股及反義股形成靶向CD40之雙股siRNA分子。在一些實施例中，雙股寡核苷酸之長度為約21-23個核苷酸鹼基對。在某些實施例中，C為視情況選用的。
在一些實施例中，提供具有式A 1-B 1之組合物或複合物，其中A 1具有式F 1-L 1-X s且B 1具有式X AS-L 2-C，其中： F 1為包含至少一個FN3域之多肽； L 1及L 2各自獨立地為連接子； C為聚合物，諸如PEG； X S為雙股siRNA分子之5'至3'寡核苷酸有義股； X AS為雙股siRNA分子之3'至5'寡核苷酸反義股； 其中X S及X AS形成雙股寡核苷酸分子，以形成組合物/複合物。在某些實施例中，C為視情況選用的。
在一些實施例中，提供具有式A 1-B 1之組合物或複合物，其中A 1具有式X s且B 1具有式X AS-L 2-C。
在一些實施例中，提供具有式A 1-B 1之組合物或複合物，其中A 1具有式F 1-L 1-X s且B 1具有式X AS。
在一些實施例中，A 1及B 1經由氫鍵結彼此相互作用。在一些實施例中，A 1及B 1經由沃森-克里克鹼基配對(Watson-Crick base pairing)彼此相互作用。
在一些實施例中，組合物描述了聚合物(聚合物部分C，或僅C)。在一些實施例中，C可為延長分子半衰期之分子。在一些實施例中，聚合物為天然或合成聚合物，由分支鏈或未分支鏈單體之長鏈及/或單體之二維或三維交聯網組成。在一些情況下，聚合物包括多醣、木質素、橡膠或聚環氧烷(例如聚乙二醇)。在一些情況下，至少一種聚合物包括但不限於α-,ω-二羥基聚乙二醇、可生物降解的內酯基聚合物，例如聚丙烯酸、聚乳酸(PLA)、聚(乙醇酸) (PGA)、聚丙烯、聚苯乙烯、聚烯烴、聚醯胺、聚氰基丙烯酸酯、聚醯亞胺、聚對苯二甲酸伸乙酯(PET、PETG)、聚對苯二甲酸伸乙酯(PETE)、聚丁二醇(PTG)或聚胺酯以及其混合物。如本文所用，混合物係指在同一化合物中使用不同的聚合物以及指代嵌段共聚物。在一些情況下，嵌段共聚物為聚合物之至少一個部分由另一聚合物之單體建構之聚合物。在一些情況下，聚合物包含聚環氧烷。在一些情況下，聚合物包含PEG。在一些情況下，聚合物包含聚乙亞胺(PEI)或羥乙基澱粉(HES)。
在一些實施例中，C為PEG部分。在一些實施例中，PEG部分結合在寡核苷酸分子之5'末端，而結合部分結合在寡核苷酸分子之3'末端。在一些實施例中，PEG部分結合在寡核苷酸分子之3'末端，而結合部分結合在寡核苷酸分子之5'末端。在一些實施例中，PEG部分結合至寡核苷酸分子之內部位點。在一些實施例中，PEG部分、結合部分或其組合結合至寡核苷酸分子之內部位點。在一些實施例中，結合為直接結合。在一些實施例中，結合係經由自然連接。
在一些實施例中，聚環氧烷(例如PEG)為多分散或單分散化合物。在一些實施例中，多分散材料包含不同分子量材料之分散分佈，藉由平均重量(重量平均)尺寸及分散度表徵。在一些實施例中，單分散PEG包含一種尺寸之分子。在一些實施例中，C為多分散或單分散聚環氧烷(例如PEG)，且所示分子量表示聚環氧烷(例如PEG)分子之平均分子量。
在一些實施例中，聚環氧烷(例如PEG)之分子量為約200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1450、1500、1600、1700、1800、1900、2000、2100、2200、2300、2400、2500、2600、2700、2800、2900、3000、3250、3350、3500、3750、4000、4250、4500、4600、4750、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、10,000、12,000、20,000、35,000、40,000、50,000、60,000或100,000 Da。
在一些實施例中，C為聚環氧烷(例如PEG)且其分子量為約200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1450、1500、1600、1700、1800、1900、2000、2100、2200、2300、2400、2500、2600、2700、2800、2900、3000、3250、3350、3500、3750、4000、4250、4500、4600、4750、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、10,000、12,000、20,000、35,000、40,000、50,000、60,000或100,000 Da。在一些實施例中，C為PEG且其分子量為約200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1450、1500、1600、1700、1800、1900、2000、2100、2200、2300、2400、2500、2600、2700、2800、2900、3000、3250、3350、3500、3750、4000、4250、4500、4600、4750、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、10,000、12,000、20,000、35,000、40,000、50,000、60,000或100,000 Da。在一些實施例中，C之分子量為約200 Da。在一些實施例中，C之分子量為約300 Da。在一些實施例中，C之分子量為約400 Da。在一些實施例中，C之分子量為約500 Da。在一些實施例中，C之分子量為約600 Da。在一些實施例中，C之分子量為約700 Da。在一些實施例中，C之分子量為約800 Da。在一些實施例中，C之分子量為約900 Da。在一些實施例中，C之分子量為約1000 Da。在一些實施例中，C之分子量為約1100 Da。在一些實施例中，C之分子量為約1200 Da。在一些實施例中，C之分子量為約1300 Da。在一些實施例中，C之分子量為約1400 Da。在一些實施例中，C之分子量為約1450 Da。在一些實施例中，C之分子量為約1500 Da。在一些實施例中，C之分子量為約1600 Da。在一些實施例中，C之分子量為約1700 Da。在一些實施例中，C之分子量為約1800 Da。在一些實施例中，C之分子量為約1900 Da。在一些實施例中，C之分子量為約2000 Da。在一些實施例中，C之分子量為約2100 Da。在一些實施例中，C之分子量為約2200 Da。在一些實施例中，C之分子量為約2300 Da。在一些實施例中，C之分子量為約2400 Da。在一些實施例中，C之分子量為約2500 Da。在一些實施例中，C之分子量為約2600 Da。在一些實施例中，C之分子量為約2700 Da。在一些實施例中，C之分子量為約2800 Da。在一些實施例中，C之分子量為約2900 Da。在一些實施例中，C之分子量為約3000 Da。在一些實施例中，C之分子量為約3250 Da。在一些實施例中，C之分子量為約3350 Da。在一些實施例中，C之分子量為約3500 Da。在一些實施例中，C之分子量為約3750 Da。在一些實施例中，C之分子量為約4000 Da。在一些實施例中，C之分子量為約4250 Da。在一些實施例中，C之分子量為約4500 Da。在一些實施例中，C之分子量為約4600 Da。在一些實施例中，C之分子量為約4750 Da。在一些實施例中，C之分子量為約5000 Da。在一些實施例中，C之分子量為約5500 Da。在一些實施例中，C之分子量為約6000 Da。在一些實施例中，C之分子量為約6500 Da。在一些實施例中，C之分子量為約7000 Da。在一些實施例中，C之分子量為約7500 Da。在一些實施例中，C之分子量為約8000 Da。在一些實施例中，C之分子量為約10,000 Da。在一些實施例中，C之分子量為約12,000 Da。在一些實施例中，C之分子量為約20,000 Da。在一些實施例中，C之分子量為約35,000 Da。在一些實施例中，C之分子量為約40,000 Da。在一些實施例中，C之分子量為約50,000 Da。在一些實施例中，C之分子量為約60,000 Da。在一些實施例中，C之分子量為約100,000 Da。
在一些實施例中，聚環氧烷(例如PEG)為離散PEG，其中離散PEG為包含多於一個重複環氧乙烷單元之聚合PEG。在一些實施例中，離散PEG (dPEG)包含2至60、2至50或2至48個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22、24、26、28、30、35、40、42、48、50個或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約2個或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約3個或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約4或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約5或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約6或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約7或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約8或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約9或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約10或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約11或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約12或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約13或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約14或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約15或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約16或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約17或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約18或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約19或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約20或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約22或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約24或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約26或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約28或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約30或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約35或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約40或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約42或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約48或更多個重複環氧乙烷單元。在一些實施例中，dPEG包含約50或更多個重複環氧乙烷單元。在一些情況下，dPEG係由純(例如約95%、98%、99%或99.5%)起始材料以逐步方式合成為單分子量化合物。在一些情況下，dPEG具有特定分子量，而非平均分子量。在一些情況下，本文所描述之dPEG為來自Quanta Biodesign, LMD之dPEG。
在一些實施例中，C為白蛋白結合域。在一些實施例中，白蛋白結合域特異性結合血清白蛋白，例如人類血清白蛋白(HSA)，以延長該域或與白蛋白結合域相關或連接之另一種治療劑的半衰期。在一些實施例中，人類血清白蛋白結合域包含連接至分子N末端之起始子甲硫胺酸(Met)。在一些實施例中，人類血清白蛋白結合域包含連接至該域之C末端或N末端的半胱胺酸(Cys)。添加N末端Met及/或C末端Cys可促進表現及/或與另一分子結合，該分子可為另一半衰期延長分子，諸如PEG、Fc區及其類似物。
在一些實施例中，白蛋白結合域包含表1中所提供之SEQ ID NO: 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23之胺基酸序列。在一些實施例中，白蛋白結合域(蛋白質)經分離。在一些實施例中，白蛋白結合域包含與SEQ ID NO: 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23之胺基酸序列至少或85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在一些實施例中，白蛋白結合域包含與SEQ ID NO: 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23之胺基酸序列至少或85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列，其限制條件為該蛋白質具有與SEQ ID NO: 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23之位置10對應的取代。在一些實施例中，取代為A10V。在一些實施例中，取代為A10G、A10L、A10I、A10T或A10S。在一些實施例中，位置10處之取代為任何天然存在之胺基酸。在一些實施例中，經分離之白蛋白結合域包含當與SEQ ID NO: 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23之胺基酸序列相比時具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14個取代之胺基酸序列。在一些實施例中，取代位於與SEQ ID NO: 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23之位置10對應的位置處。在一些實施例中，所提供之FN3域在與SEQ ID NO: 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23之殘基位置6、11、22、25、26、52、53、61、88或位置6、8、10、11、14、15、16、20、30、34、38、40、41、45、47、48、53、54、59、60、62、64、70、88、89、90、91或93對應的至少一個殘基位置或在C末端包含半胱胺酸殘基。儘管該等位置以系列形式列出，但亦可個別地選擇各位置。在一些實施例中，半胱胺酸位於與位置6、53或88對應的位置處。在一些實施例中，白蛋白結合域之額外實例可見於美國專利第10,925,932號，其特此以全文引用之方式併入。 表1：白蛋白結合域序列
SEQ ID NO: 序列
5 MLPAPKNLVASRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYWEPGIGGEAIWLRVPGSERSYDLTGLKPGTEYKVWIHGVKGGASSPPLIARFTT
6 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYWEPGIGGEAIWLRVPGSERSYDLTGLKPGTEYKVWIHGVKGGASSPPLIARFTT
7 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFAIAYWEPGIGGEAIWLRVPGSERSYDLTGLKPGTEYKVWIHGVKGGASSPPLIARFTT
8 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNISYWEPGIGGEAIWLRVPGSERSYDLTGLKPGTEYKVWIHGVKGGASSPPLIARFTT
9 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYAEPGIGGEAIWLRVPGSRSYDLTGLKPGTEYKVWIHGVKGGASSPPLIARFTT
10 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYWEAGIGGEAIWLRVPGSERSYDLTGLKPGTEYKVWIHGVKGGASSPPLIARFTT
11 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYWEPAIGGEAIWLRVPGSERSYDLTGLKPGTEYKVWIHGVKGGASSPPLIARFTT
12 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYWEPGAGGEAIWLRVPGSERSYDLTGLKPGTEYKVWIHGVKGGASSPPLIARFTT
13 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYWEPGIAGEAIWLRVPGSERSYDLTGLKPGTEYKVWIHGVKGGASSPPLIARFTT
14 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYWEPGIGGEAIALRVPGSERSYDLTGLKPGTEYKVWIHGVKGGASSPPLIARFTT
15 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYWEPGIGGEAIWLAVPGSERSYDLTGLKPGTEYKVWIHGVKGGASSPPLIARFTT
16 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYWEPGIGGEAIWLRVPGSERSYDLTGLKPGTEYAVWIHGVKGGASSPPLIARFTT
17 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYWEPGIGGEAIWLRVPGSERSYDLTGLKPGTEYKVAIHGVKGGASSPPLIARFTT
18 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYWEPGIGGEAIWLRVPGSERSYDLTGLKPGTEYKVWIAGVKGGASSPPLIARFTT
19 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYWEPGIGGEAIWLRVPGSERSYDLTGLKPGTEYKVWIHGVKGGSSSPPLIARFTT
20 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYWEPGIGGEAIWLRVPGSERSYDLTGLKPGTEYKVWIHGVKGGAASPPLIARFTT
21 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYWEPGIGGEAIWLRVPGSERSYDLTGLKPGTEYKVWIHGVKGGASSAPLIARFTT
22 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYWEPGIGGEAIWLRVPGSERSYDLTGLKPGTEYKVWIHGVKGGASSPPLAARFTT
23 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFNIAYWEPGIGGEAIWLRVPGSERSYDLTGLKPGTEYKVWIHGVKGGASSPPLIAAFTT
在一些實施例中，C亦可為Endoporter、INF-7、TAT、聚精胺酸、聚離胺酸或兩性肽。此等部分可用於代替本文提供之其他半衰期延長部分或作為其補充。在一些實施例中，C可為將複合物遞送至細胞、內體或ER中之分子；該等分子係選自表2中列舉之彼等肽。 表2
SEQ ID NO: 名稱 序列
24 TAT RKKRRQRRR
25 滲透素 RQIKIWFQNRRMKWKK
26 轉運素 GWTLNSAGYLLGKINKALAALAKKIL
27 MAP KLALKLALKALKAALKLA
28 Pep-1 KETWWETWWTEWSQPKKKRKV
29 KDEL KDEL
30 GALA WEAALAEALAELAEHLAEALAEALEALAA
31 HA2 GDIMGEWGNEIFGAIAGFLGC
32 Aurine 1.2 GLFDIIKKIAESF
33 MPG GALFLGWLGAAGSTMGAPKSKRKV
34 TP-10 AGYLLGKINLKALAALAKKIL
35 EB-1 LIRLWSHLIHIWFQNRRLKWKKK
36 HA2-滲透素 GLFGAIAGFIENGWEGMIDGRQIKIWFQNRRMKWKK
37 內體溶解 FFKKLAHALHLLALLALHLAHALKKA
38 內體溶解 LFEAIEGFIENGWGMIDGWYG
39 內體溶解 LFEAIEGFIENGWEGMIDGWYGRKKRRQRRR
40 內體溶解 IGAVLKVLTTGLPALISWIKRKRQQ
41 ER靶向 MKLAVTLTLVTLALSSSSASA
42 ER靶向 RLIEDICLPRWGCLWEDDKDEL
43 ER靶向 MIRTLLLSTLVAGALSK
44 ER靶向 ILSSLTVTQLLRRLHQWIK
45 ER靶向 MIRTLLLSTLVAGALSKDEL
在一些實施例中，L 1為可用於將聚合物C連接至有義股X S或將F 1之多肽連接至有義股X S的任何連接子。在一些實施例中，L 1具有下式： 其中X S、X AS及F 1如上文所定義。
在一些實施例中，n = 0-20。在一些實施例中，R及R1獨立地為甲基。在一些實施例中，R及R1獨立地存在或兩者均不存在。在一些實施例中，X及Y獨立地為S。在一些實施例中，X及Y獨立地存在或不存在。在一些實施例中，肽為酶可裂解肽，諸如但不限於Val-Cit、Val-Ala等。
在一些實施例中，L 2為可用於將F1之多肽連接至反義股X AS或將聚合物C連接至反義股X AS的任何連接子。
在一些實施例中，L 2具有以下複合物中之式： 其中X AS及F 1如上文所定義。
在一些實施例中，n = 0-20。在一些實施例中，R及R1獨立地為甲基。在一些實施例中，R及R1獨立地存在或兩者均不存在。在一些實施例中，X及Y獨立地為S。在一些實施例中，X及Y獨立地存在或不存在。在一些實施例中，肽為酶可裂解肽，諸如但不限於Val-Cit、Val-Ala等。
在一些實施例中，連接子經由F1上存在之半胱胺酸殘基共價連接至F1，此可如下所示： 其中X S為雙股siRNA分子之5'至3'寡核苷酸有義股；X AS為雙股siRNA分子之3'至5'寡核苷酸反義股；且F 1為包含至少一個FN3域之多肽，其中X S及X AS形成雙股siRNA分子。
在一些實施例中，A 1-B 1具有下式： 其中C為聚合物，諸如PEG、Endoporter、INF-7、TAT、聚精胺酸、聚離胺酸、兩性肽或如本文所提供；且F 1為包含至少一個FN3域之多肽。有義股及反義股由「N」符號表示，其中由N表示之各核苷酸獨立地為A、U、C或G或經修飾之核鹼基，諸如本文所提供之彼等者。有義股及反義股之N 1核苷酸代表各自股之5'端。為了清楚起見，雖然式III在有義股及反義股中均使用N 1、N 2、N 3等，但核苷酸鹼基不需要相同且不意欲相同。式III所示之siRNA與目標序列互補。舉例而言，在一些實施例中，有義股包含N 1及N 2處之具有硫代磷酸酯(PS)修飾之主鏈的2'O-甲基修飾之核苷酸；N 3、N 7、N 8、N 9、N 12及N 17處之2'-氟修飾之核苷酸；及N 4、N 5、N 6、N 10、N 11、N 13、N 14、N 15、N 16、N 18及N 19處之2'O-甲基修飾之核苷酸。
在一些實施例中，反義股包含連接至N 1之乙烯基膦酸酯部分；N 2處之具有硫代磷酸酯(PS)修飾之主鏈的2'氟修飾之核苷酸；N 3、N 4、N 5、N 6、N 7、N 8、N 9、N 10、N 11、N 12、N 13、N 15、N 16、N 17、N 18及N 19處之2'O-甲基修飾之核苷酸；N 14處之2'氟修飾之核苷酸；及N 20及N 21處之具有硫代磷酸酯(PS)修飾之主鏈的2'O-甲基修飾之核苷酸。
在一些實施例中，提供具有下式之化合物： 。
在一些實施例中，提供具有下式之化合物： ， 其中F 1為包含至少一個FN3域之多肽且與連接子結合。上文所示之連接子為非限制性實例，且可使用其他類型之連接子。
在一些實施例中，F 1包含具有式(X 1) n-(X 2) q-(X 3) y之多肽，其中X 1為第一FN3域；X 2為第二FN3域；X 3為第三FN3域或半衰期延長分子；其中n、q及y各自獨立地為0或1，其限制條件為n、q及y中之至少一者為1。在一些實施例中，n、q及y各自為1。在一些實施例中，n及q為1且y為0。在一些實施例中，n及y為1且q為0。
在一些實施例中，X 1為結合CD71之FN3域，諸如本文所提供者。在一些實施例中，X 2為結合CD71之FN3域。在一些實施例中，X1及X 2為不同的結合CD71之FN3域。在一些實施例中，結合域為相同的。在一些實施例中，X 3為與人類血清白蛋白結合之FN3域。在一些實施例中，X 3為無效應功能之Fc域，其延長蛋白質之半衰期。在一些實施例中，X 1為第一結合CD71之FN3域，X 2為第二結合CD71之FN3域，且X 3為結合白蛋白之FN3域。此類多肽之實例提供於本文及下文中。在一些實施例中，本文提供具有式C-(X 1) n-(X 2) q-(X 3) y-L-X 4之組合物，其中C為聚合物，諸如PEG、Endoporter、INF-7、TAT、聚精胺酸、聚離胺酸、兩性肽或表2中提供之肽；X 1為第一FN3域；X 2為第二FN3域；X 3為第三FN3域或半衰期延長分子；L為連接子；且X 4為核酸分子，其中n、q及y各自獨立地為0或1。
在一些實施例中，本文提供具有式(X1) n-(X2) q-(X3) y-L-X4-C之組合物，其中X1為第一FN3域；X2為第二FN3域；X3為第三FN3域或半衰期延長分子；L為連接子；X4為核酸分子；且C為聚合物，其中n、q及y各自獨立地為0或1。
在一些實施例中，本文提供具有式X4-L-(X1) n-(X2) q-(X3) y之組合物，其中X1為第一FN3域；X2為第二FN3域；X3為第三FN3域或半衰期延長分子；L為連接子；且X4為核酸分子，其中n、q及y各自獨立地為0或1。
在一些實施例中，本文提供具有式C-X4-L-(X1) n-(X2) q-(X3) y之組合物，其中C為聚合物；X1為第一FN3域；X2為第二FN3域；X3為第三FN3域或半衰期延長分子；L為連接子；且X4為核酸分子，其中n、q及y各自獨立地為0或1。
在一些實施例中，本文提供具有式X4-L-(X1) n-(X2) q-(X3) y-C之組合物，其中X1為第一FN3域；X2為第二FN3域；X3為第三FN3域或半衰期延長分子；L為連接子；X4為核酸分子；且C為聚合物，其中n、q及y各自獨立地為0或1。
在一些實施例中，結合CD40之siRNA分子包含可遵循以下序列之成對序列：有義股(5'-3') nsnsnnnnNfNfNfnnnnnnnnsnsa或(5'-3') nsnsnnnnNfNfNfnnnnnnnnna；及反義股(5'-3') UfsNfsnnnNfnnnnnnnNfnNfnnnsusu，其中(n)為2'-O-Me (甲基)，(Nf)為2'-F (氟)，(s)為硫代磷酸酯主鏈修飾。有義股及反義股中之各核苷酸可在核糖及核鹼基位置處獨立地或組合地經修飾。
在一些實施例中，siRNA分子包含來自表3A、表3B、表4A或表4B之成對序列。在一些實施例中，表5A及表5B描繪成對序列之非限制性實例，其中有義股包含連接子分子。在一些實施例中，本文所提供之任何siRNA分子可包含如本文所揭示之連接子分子。
在一些實施例中，siRNA分子包含有包含SEQ ID NO: 1890之核酸序列的有義股及包含SEQ ID NO: 2290之核酸序列的反義股。在一些實施例中，siRNA分子包含有義股之3'端處的連接子。在一些實施例中，連接子為C 6-NH 2-丙基-Mal。在一些實施例中，siRNA分子包含如表5B中所示之成對序列H11。
在一些實施例中，siRNA分子包含有包含SEQ ID NO: 1893之核酸序列的有義股及包含SEQ ID NO: 2293之核酸序列的反義股。在一些實施例中，siRNA分子包含有義股之3'端處的連接子。在一些實施例中，連接子為C 6-NH 2-丙基-Mal。在一些實施例中，siRNA分子包含如表5B中所示之成對序列K11。
在一些實施例中，siRNA分子包含有包含SEQ ID NO: 1941之核酸序列的有義股及包含SEQ ID NO: 2051之核酸序列的反義股。在一些實施例中，siRNA分子包含有義股之5'端處的連接子。在一些實施例中，連接子為C 6-NH 2-丙基-Mal。在一些實施例中，siRNA分子包含如表5B中所示之成對序列O10。
在一些實施例中，siRNA分子包含有包含SEQ ID NO: 1942之核酸序列的有義股及包含SEQ ID NO: 2052之核酸序列的反義股。在一些實施例中，siRNA分子包含有義股之5'端處的連接子。在一些實施例中，連接子為C 6-NH 2-丙基-Mal。在一些實施例中，siRNA分子包含如表5B中所示之成對序列P10。
在一些實施例中，siRNA分子包含有包含SEQ ID NO: 1944之核酸序列的有義股及包含SEQ ID NO: 2054之核酸序列的反義股。在一些實施例中，siRNA分子包含有義股之5'端處的連接子。在一些實施例中，連接子為C 6-NH 2-丙基-Mal。在一些實施例中，siRNA分子包含如表5B中所示之成對序列R10。 表3A：siRNA有義序列及反義序列(經修飾)
成對 siRNA SEQ ID NO: 有義股 5' -3' SEQ ID NO: 反義股 5' -3'
A1 46 [mA*][mG*][fA][mA][mC][mC][fA][fC][fC][mC][mA][fC][mU][mG][mC][mA][fU][mG][mA][idT] 179 [fU*][fC*][mA][mU][mG][mC][mA][mG][mU][mG][mG][mG][mU][fG][mG][mU][mU][mC][mU][*mU][*mU]
B1 47 [mA*][mG*][fA][mA][mA][mA][fA][fC][fA][mG][mU][fA][mC][mC][mU][mA][fA][mU][mA][idT] 180 [fU*][fA*][mU][mU][mA][mG][mG][mU][mA][mC][mU][mG][mU][fU][mU][mU][mU][mC][mU][*mU][*mU]
C1 48 [mG*][mA*][fA][mA][mC][mU][fG][fG][fU][mG][mA][fG][mU][mG][mA][mC][fU][mG][mA][idT] 181 [fU*][fC*][mA][mG][mU][mC][mA][mC][mU][mC][mA][mC][mC][fA][mG][mU][mU][mU][mC][*mU][*mU]
D1 49 [mA*][mA*][fA][mC][mU][mG][fG][fU][fG][mA][mG][fU][mG][mA][mC][mU][fG][mC][mA][idT] 182 [fU*][fG*][mC][mA][mG][mU][mC][mA][mC][mU][mC][mA][mC][fC][mA][mG][mU][mU][mU][*mU][*mU]
E1 50 [mA*][mG*][fU][mU][mC][mA][fC][fU][fG][mA][mA][fA][mC][mG][mG][mA][fA][mU][mA][idT] 183 [fU*][fA*][mU][mU][mC][mC][mG][mU][mU][mU][mC][mA][mG][fU][mG][mA][mA][mC][mU][*mU][*mU]
F1 51 [mG*][mG*][fA][mA][mU][mG][fC][fC][fU][mU][mC][fC][mU][mU][mG][mC][fG][mG][mA][idT] 184 [fU*][fC*][mC][mG][mC][mA][mA][mG][mG][mA][mA][mG][mG][fC][mA][mU][mU][mC][mC][*mU][*mU]
G1 52 [mU*][mG*][fC][mC][mU][mU][fC][fC][fU][mU][mG][fC][mG][mG][mU][mG][fA][mA][mA][idT] 185 [fU*][fU*][mU][mC][mA][mC][mC][mG][mC][mA][mA][mG][mG][fA][mA][mG][mG][mC][mA][*mU][*mU]
H1 53 [mG*][mC*][fC][mU][mU][mC][fC][fU][fU][mG][mC][fG][mG][mU][mG][mA][fA][mA][mA][idT] 186 [fU*][fU*][mU][mU][mC][mA][mC][mC][mG][mC][mA][mA][mG][fG][mA][mA][mG][mG][mC][*mU][*mU]
I1 54 [mC*][mC*][fU][mU][mC][mC][fU][fU][fG][mC][mG][fG][mU][mG][mA][mA][fA][mG][mA][idT] 187 [fU*][fC*][mU][mU][mU][mC][mA][mC][mC][mG][mC][mA][mA][fG][mG][mA][mA][mG][mG][*mU][*mU]
J1 55 [mC*][mU*][fU][mC][mC][mU][fU][fG][fC][mG][mG][fU][mG][mA][mA][mA][fG][mC][mA][idT] 188 [fU*][fG*][mC][mU][mU][mU][mC][mA][mC][mC][mG][mC][mA][fA][mG][mG][mA][mA][mG][*mU][*mU]
K1 56 [mU*][mU*][fC][mC][mU][mU][fG][fC][fG][mG][mU][fG][mA][mA][mA][mG][fC][mG][mA][idT] 189 [fU*][fC*][mG][mC][mU][mU][mU][mC][mA][mC][mC][mG][mC][fA][mA][mG][mG][mA][mA][*mU][*mU]
L1 57 [mU*][mC*][fC][mU][mU][mG][fC][fG][fG][mU][mG][fA][mA][mA][mG][mC][fG][mA][mA][idT] 190 [fU*][fU*][mC][mG][mC][mU][mU][mU][mC][mA][mC][mC][mG][fC][mA][mA][mG][mG][mA][*mU][*mU]
M1 58 [mC*][mC*][fU][mU][mG][mC][fG][fG][fU][mG][mA][fA][mA][mG][mC][mG][fA][mA][mA][idT] 191 [fU*][fU*][mU][mC][mG][mC][mU][mU][mU][mC][mA][mC][mC][fG][mC][mA][mA][mG][mG][*mU][*mU]
N1 59 [mC*][mU*][fU][mG][mC][mG][fG][fU][fG][mA][mA][fA][mG][mC][mG][mA][fA][mU][mA][idT] 192 [fU*][fA*][mU][mU][mC][mG][mC][mU][mU][mU][mC][mA][mC][fC][mG][mC][mA][mA][mG][*mU][*mU]
O1 60 [mU*][mU*][fG][mC][mG][mG][fU][fG][fA][mA][mA][fG][mC][mG][mA][mA][fU][mU][mA][idT] 193 [fU*][fA*][mA][mU][mU][mC][mG][mC][mU][mU][mU][mC][mA][fC][mC][mG][mC][mA][mA][*mU][*mU]
P1 61 [mU*][mG*][fC][mG][mG][mU][fG][fA][fA][mA][mG][fC][mG][mA][mA][mU][fU][mC][mA][idT] 194 [fU*][fG*][mA][mA][mU][mU][mC][mG][mC][mU][mU][mU][mC][fA][mC][mC][mG][mC][mA][*mU][*mU]
Q1 62 [mC*][mG*][fG][mU][mG][mA][fA][fA][fG][mC][mG][fA][mA][mU][mU][mC][fC][mU][mA][idT] 195 [fU*][fA*][mG][mG][mA][mA][mU][mU][mC][mG][mC][mU][mU][fU][mC][mA][mC][mC][mG][*mU][*mU]
R1 63 [mG*][mG*][fU][mG][mA][mA][fA][fG][fC][mG][mA][fA][mU][mU][mC][mC][fU][mA][mA][idT] 196 [fU*][fU*][mA][mG][mG][mA][mA][mU][mU][mC][mG][mC][mU][fU][mU][mC][mA][mC][mC][*mU][*mU]
S1 64 [mU*][mG*][fA][mA][mA][mG][fC][fG][fA][mA][mU][fU][mC][mC][mU][mA][fG][mA][mA][idT] 197 [fU*][fU*][mC][mU][mA][mG][mG][mA][mA][mU][mU][mC][mG][fC][mU][mU][mU][mC][mA][*mU][*mU]
T1 65 [mG*][mA*][fA][mA][mG][mC][fG][fA][fA][mU][mU][fC][mC][mU][mA][mG][fA][mC][mA][idT] 198 [fU*][fG*][mU][mC][mU][mA][mG][mG][mA][mA][mU][mU][mC][fG][mC][mU][mU][mU][mC][*mU][*mU]
U1 66 [mA*][mA*][fA][mG][mC][mG][fA][fA][fU][mU][mC][fC][mU][mA][mG][mA][fC][mA][mA][idT] 199 [fU*][fU*][mG][mU][mC][mU][mA][mG][mG][mA][mA][mU][mU][fC][mG][mC][mU][mU][mU][*mU][*mU]
V1 67 [mA*][mA*][fG][mC][mG][mA][fA][fU][fU][mC][mC][fU][mA][mG][mA][mC][fA][mC][mA][idT] 200 [fU*][fG*][mU][mG][mU][mC][mU][mA][mG][mG][mA][mA][mU][fU][mC][mG][mC][mU][mU][*mU][*mU]
W1 68 [mA*][mG*][fC][mG][mA][mA][fU][fU][fC][mC][mU][fA][mG][mA][mC][mA][fC][mC][mA][idT] 201 [fU*][fG*][mG][mU][mG][mU][mC][mU][mA][mG][mG][mA][mA][fU][mU][mC][mG][mC][mU][*mU][*mU]
X1 69 [mC*][mU*][fA][mG][mA][mC][fA][fC][fC][mU][mG][fG][mA][mA][mC][mA][fG][mA][mA][idT] 202 [fU*][fU*][mC][mU][mG][mU][mU][mC][mC][mA][mG][mG][mU][fG][mU][mC][mU][mA][mG][*mU][*mU]
Y1 70 [mC*][mA*][fG][mC][mA][mC][fA][fA][fA][mU][mA][fC][mU][mG][mC][mG][fA][mC][mA][idT] 203 [fU*][fG*][mU][mC][mG][mC][mA][mG][mU][mA][mU][mU][mU][fG][mU][mG][mC][mU][mG][*mU][*mU]
Z1 71 [mA*][mG*][fC][mA][mC][mA][fA][fA][fU][mA][mC][fU][mG][mC][mG][mA][fC][mC][mA][idT] 204 [fU*][fG*][mG][mU][mC][mG][mC][mA][mG][mU][mA][mU][mU][fU][mG][mU][mG][mC][mU][*mU][*mU]
A2 72 [mG*][mC*][fA][mC][mA][mA][fA][fU][fA][mC][mU][fG][mC][mG][mA][mC][fC][mC][mA][idT] 205 [fU*][fG*][mG][mG][mU][mC][mG][mC][mA][mG][mU][mA][mU][fU][mU][mG][mU][mG][mC][*mU][*mU]
B2 73 [mU*][mA*][fC][mU][mG][mC][fG][fA][fC][mC][mC][fC][mA][mA][mC][mC][fU][mA][mA][idT] 206 [fU*][fU*][mA][mG][mG][mU][mU][mG][mG][mG][mG][mU][mC][fG][mC][mA][mG][mU][mA][*mU][*mU]
C2 74 [mA*][mC*][fU][mG][mC][mG][fA][fC][fC][mC][mC][fA][mA][mC][mC][mU][fA][mG][mA][idT] 207 [fU*][fC*][mU][mA][mG][mG][mU][mU][mG][mG][mG][mG][mU][fC][mG][mC][mA][mG][mU][*mU][*mU]
D2 75 [mC*][mU*][fG][mC][mG][mA][fC][fC][fC][mC][mA][fA][mC][mC][mU][mA][fG][mG][mA][idT] 208 [fU*][fC*][mC][mU][mA][mG][mG][mU][mU][mG][mG][mG][mG][fU][mC][mG][mC][mA][mG][*mU][*mU]
E2 76 [mG*][mA*][fC][mC][mC][mC][fA][fA][fC][mC][mU][fA][mG][mG][mG][mC][fU][mU][mA][idT] 209 [fU*][fA*][mA][mG][mC][mC][mC][mU][mA][mG][mG][mU][mU][fG][mG][mG][mG][mU][mC][*mU][*mU]
F2 77 [mA*][mC*][fC][mC][mC][mA][fA][fC][fC][mU][mA][fG][mG][mG][mC][mU][fU][mC][mA][idT] 210 [fU*][fG*][mA][mA][mG][mC][mC][mC][mU][mA][mG][mG][mU][fU][mG][mG][mG][mG][mU][*mU][*mU]
G2 78 [mC*][mC*][fC][mC][mA][mA][fC][fC][fU][mA][mG][fG][mG][mC][mU][mU][fC][mG][mA][idT] 211 [fU*][fC*][mG][mA][mA][mG][mC][mC][mC][mU][mA][mG][mG][fU][mU][mG][mG][mG][mG][*mU][*mU]
H2 79 [mC*][mC*][fU][mA][mG][mG][fG][fC][fU][mU][mC][fG][mG][mG][mU][mC][fC][mA][mA][idT] 212 [fU*][fU*][mG][mG][mA][mC][mC][mC][mG][mA][mA][mG][mC][fC][mC][mU][mA][mG][mG][*mU][*mU]
I2 80 [mU*][mC*][fG][mG][mG][mU][fC][fC][fA][mG][mC][fA][mG][mA][mA][mG][fG][mG][mA][idT] 213 [fU*][fC*][mC][mC][mU][mU][mC][mU][mG][mC][mU][mG][mG][fA][mC][mC][mC][mG][mA][*mU][*mU]
J2 81 [mG*][mA*][fA][mG][mG][mC][fU][fG][fG][mC][mA][fC][mU][mG][mU][mA][fC][mG][mA][idT] 214 [fU*][fC*][mG][mU][mA][mC][mA][mG][mU][mG][mC][mC][mA][fG][mC][mC][mU][mU][mC][*mU][*mU]
K2 82 [mG*][mG*][fC][mA][mC][mU][fG][fU][fA][mC][mG][fA][mG][mU][mG][mA][fG][mG][mA][idT] 215 [fU*][fC*][mC][mU][mC][mA][mC][mU][mC][mG][mU][mA][mC][fA][mG][mU][mG][mC][mC][*mU][*mU]
L2 83 [mG*][mU*][fA][mC][mG][mA][fG][fU][fG][mA][mG][fG][mC][mC][mU][mG][fU][mG][mA][idT] 216 [fU*][fC*][mA][mC][mA][mG][mG][mC][mC][mU][mC][mA][mC][fU][mC][mG][mU][mA][mC][*mU][*mU]
M2 84 [mU*][mG*][fU][mC][mC][mU][fG][fC][fA][mC][mC][fG][mC][mU][mC][mA][fU][mG][mA][idT] 217 [fU*][fC*][mA][mU][mG][mA][mG][mC][mG][mG][mU][mG][mC][fA][mG][mG][mA][mC][mA][*mU][*mU]
N2 85 [mU*][mG*][fC][mA][mC][mC][fG][fC][fU][mC][mA][fU][mG][mC][mU][mC][fG][mC][mA][idT] 218 [fU*][fG*][mC][mG][mA][mG][mC][mA][mU][mG][mA][mG][mC][fG][mG][mU][mG][mC][mA][*mU][*mU]
O2 86 [mG*][mC*][fA][mC][mC][mG][fC][fU][fC][mA][mU][fG][mC][mU][mC][mG][fC][mC][mA][idT] 219 [fU*][fG*][mG][mC][mG][mA][mG][mC][mA][mU][mG][mA][mG][fC][mG][mG][mU][mG][mC][*mU][*mU]
P2 87 [mC*][mC*][fG][mC][mU][mC][fA][fU][fG][mC][mU][fC][mG][mC][mC][mC][fG][mG][mA][idT] 220 [fU*][fC*][mC][mG][mG][mG][mC][mG][mA][mG][mC][mA][mU][fG][mA][mG][mC][mG][mG][*mU][*mU]
Q2 88 [mC*][mC*][fC][mG][mG][mC][fU][fU][fU][mG][mG][fG][mG][mU][mC][mA][fA][mG][mA][idT] 221 [fU*][fC*][mU][mU][mG][mA][mC][mC][mC][mC][mA][mA][mA][fG][mC][mC][mG][mG][mG][*mU][*mU]
R2 89 [mC*][mU*][fG][mA][mU][mA][fC][fC][fA][mU][mC][fU][mG][mC][mG][mA][fG][mC][mA][idT] 222 [fU*][fG*][mC][mU][mC][mG][mC][mA][mG][mA][mU][mG][mG][fU][mA][mU][mC][mA][mG][*mU][*mU]
S2 90 [mU*][mG*][fA][mU][mA][mC][fC][fA][fU][mC][mU][fG][mC][mG][mA][mG][fC][mC][mA][idT] 223 [fU*][fG*][mG][mC][mU][mC][mG][mC][mA][mG][mA][mU][mG][fG][mU][mA][mU][mC][mA][*mU][*mU]
T2 91 [mC*][mU*][fG][mC][mC][mC][fA][fG][fU][mC][mG][fG][mC][mU][mU][mC][fU][mU][mA][idT] 224 [fU*][fA*][mA][mG][mA][mA][mG][mC][mC][mG][mA][mC][mU][fG][mG][mG][mC][mA][mG][*mU][*mU]
U2 92 [mG*][mU*][fG][mU][mC][mA][fU][fC][fU][mG][mC][fU][mU][mU][mC][mG][fA][mA][mA][idT] 225 [fU*][fU*][mU][mC][mG][mA][mA][mA][mG][mC][mA][mG][mA][fU][mG][mA][mC][mA][mC][*mU][*mU]
V2 93 [mU*][mG*][fU][mC][mA][mU][fC][fU][fG][mC][mU][fU][mU][mC][mG][mA][fA][mA][mA][idT] 226 [fU*][fU*][mU][mU][mC][mG][mA][mA][mA][mG][mC][mA][mG][fA][mU][mG][mA][mC][mA][*mU][*mU]
W2 94 [mU*][mC*][fA][mU][mC][mU][fG][fC][fU][mU][mU][fC][mG][mA][mA][mA][fA][mA][mA][idT] 227 [fU*][fU*][mU][mU][mU][mU][mC][mG][mA][mA][mA][mG][mC][fA][mG][mA][mU][mG][mA][*mU][*mU]
X2 95 [mU*][mU*][fC][mG][mA][mA][fA][fA][fA][mU][mG][fU][mC][mA][mC][mC][fC][mU][mA][idT] 228 [fU*][fA*][mG][mG][mG][mU][mG][mA][mC][mA][mU][mU][mU][fU][mU][mC][mG][mA][mA][*mU][*mU]
Y2 96 [mU*][mC*][fG][mA][mA][mA][fA][fA][fU][mG][mU][fC][mA][mC][mC][mC][fU][mU][mA][idT] 229 [fU*][fA*][mA][mG][mG][mG][mU][mG][mA][mC][mA][mU][mU][fU][mU][mU][mC][mG][mA][*mU][*mU]
Z2 97 [mA*][mA*][fA][mA][mU][mG][fU][fC][fA][mC][mC][fC][mU][mU][mG][mG][fA][mC][mA][idT] 230 [fU*][fG*][mU][mC][mC][mA][mA][mG][mG][mG][mU][mG][mA][fC][mA][mU][mU][mU][mU][*mU][*mU]
A3 98 [mU*][mG*][fA][mU][mC][mC][fC][fC][fA][mU][mC][fA][mU][mC][mU][mU][fC][mG][mA][idT] 231 [fU*][fC*][mG][mA][mA][mG][mA][mU][mG][mA][mU][mG][mG][fG][mG][mA][mU][mC][mA][*mU][*mU]
B3 99 [mC*][mC*][fC][mC][mA][mU][fC][fA][fU][mC][mU][fU][mC][mG][mG][mG][fA][mU][mA][idT] 232 [fU*][fA*][mU][mC][mC][mC][mG][mA][mA][mG][mA][mU][mG][fA][mU][mG][mG][mG][mG][*mU][*mU]
C3 100 [mA*][mU*][fC][mU][mU][mC][fG][fG][fG][mA][mU][fC][mC][mU][mG][mU][fU][mU][mA][idT] 233 [fU*][fA*][mA][mA][mC][mA][mG][mG][mA][mU][mC][mC][mC][fG][mA][mA][mG][mA][mU][*mU][*mU]
D3 101 [mA*][mA*][fG][mA][mA][mG][fC][fC][fA][mA][mC][fC][mA][mA][mU][mA][fA][mG][mA][idT] 234 [fU*][fC*][mU][mU][mA][mU][mU][mG][mG][mU][mU][mG][mG][fC][mU][mU][mC][mU][mU][*mU][*mU]
E3 102 [mA*][mA*][fG][mC][mC][mA][fA][fC][fC][mA][mA][fU][mA][mA][mG][mG][fC][mC][mA][idT] 235 [fU*][fG*][mG][mC][mC][mU][mU][mA][mU][mU][mG][mG][mU][fU][mG][mG][mC][mU][mU][*mU][*mU]
F3 103 [mA*][mG*][fA][mU][mC][mA][fA][fU][fU][mU][mU][fC][mC][mC][mG][mA][fC][mG][mA][idT] 236 [fU*][fC*][mG][mU][mC][mG][mG][mG][mA][mA][mA][mA][mU][fU][mG][mA][mU][mC][mU][*mU][*mU]
G3 104 [mG*][mA*][fU][mC][mA][mA][fU][fU][fU][mU][mC][fC][mC][mG][mA][mC][fG][mA][mA][idT] 237 [fU*][fU*][mC][mG][mU][mC][mG][mG][mG][mA][mA][mA][mA][fU][mU][mG][mA][mU][mC][*mU][*mU]
H3 105 [mA*][mU*][fC][mA][mA][mU][fU][fU][fU][mC][mC][fC][mG][mA][mC][mG][fA][mU][mA][idT] 238 [fU*][fA*][mU][mC][mG][mU][mC][mG][mG][mG][mA][mA][mA][fA][mU][mU][mG][mA][mU][*mU][*mU]
I3 106 [mU*][mC*][fA][mA][mU][mU][fU][fU][fC][mC][mC][fG][mA][mC][mG][mA][fU][mC][mA][idT] 239 [fU*][fG*][mA][mU][mC][mG][mU][mC][mG][mG][mG][mA][mA][fA][mA][mU][mU][mG][mA][*mU][*mU]
J3 107 [mC*][mG*][fA][mC][mG][mA][fU][fC][fU][mU][mC][fC][mU][mG][mG][mC][fU][mC][mA][idT] 240 [fU*][fG*][mA][mG][mC][mC][mA][mG][mG][mA][mA][mG][mA][fU][mC][mG][mU][mC][mG][*mU][*mU]
K3 108 [mA*][mC*][fG][mA][mU][mC][fU][fU][fC][mC][mU][fG][mG][mC][mU][mC][fC][mA][mA][idT] 241 [fU*][fU*][mG][mG][mA][mG][mC][mC][mA][mG][mG][mA][mA][fG][mA][mU][mC][mG][mU][*mU][*mU]
L3 109 [mG*][mA*][fU][mC][mU][mU][fC][fC][fU][mG][mG][fC][mU][mC][mC][mA][fA][mC][mA][idT] 242 [fU*][fG*][mU][mU][mG][mG][mA][mG][mC][mC][mA][mG][mG][fA][mA][mG][mA][mU][mC][*mU][*mU]
M3 110 [mU*][mG*][fC][mA][mG][mG][fA][fG][fA][mC][mU][fU][mU][mA][mC][mA][fU][mG][mA][idT] 243 [fU*][fC*][mA][mU][mG][mU][mA][mA][mA][mG][mU][mC][mU][fC][mC][mU][mG][mC][mA][*mU][*mU]
N3 111 [mC*][mA*][fG][mG][mA][mG][fA][fC][fU][mU][mU][fA][mC][mA][mU][mG][fG][mA][mA][idT] 244 [fU*][fU*][mC][mC][mA][mU][mG][mU][mA][mA][mA][mG][mU][fC][mU][mC][mC][mU][mG][*mU][*mU]
O3 112 [mG*][mG*][fA][mG][mA][mC][fU][fU][fU][mA][mC][fA][mU][mG][mG][mA][fU][mG][mA][idT] 245 [fU*][fC*][mA][mU][mC][mC][mA][mU][mG][mU][mA][mA][mA][fG][mU][mC][mU][mC][mC][*mU][*mU]
P3 113 [mA*][mG*][fG][mA][mU][mG][fG][fC][fA][mA][mA][fG][mA][mG][mA][mG][fU][mC][mA][idT] 246 [fU*][fG*][mA][mC][mU][mC][mU][mC][mU][mU][mU][mG][mC][fC][mA][mU][mC][mC][mU][*mU][*mU]
Q3 114 [mG*][mG*][fA][mU][mG][mG][fC][fA][fA][mA][mG][fA][mG][mA][mG][mU][fC][mG][mA][idT] 247 [fU*][fC*][mG][mA][mC][mU][mC][mU][mC][mU][mU][mU][mG][fC][mC][mA][mU][mC][mC][*mU][*mU]
R3 115 [mU*][mG*][fG][mC][mA][mA][fA][fG][fA][mG][mA][fG][mU][mC][mG][mC][fA][mU][mA][idT] 248 [fU*][fA*][mU][mG][mC][mG][mA][mC][mU][mC][mU][mC][mU][fU][mU][mG][mC][mC][mA][*mU][*mU]
S3 116 [mG*][mG*][fC][mA][mA][mA][fG][fA][fG][mA][mG][fU][mC][mG][mC][mA][fU][mC][mA][idT] 249 [fU*][fG*][mA][mU][mG][mC][mG][mA][mC][mU][mC][mU][mC][fU][mU][mU][mG][mC][mC][*mU][*mU]
T3 117 [mG*][mC*][fA][mA][mA][mG][fA][fG][fA][mG][mU][fC][mG][mC][mA][mU][fC][mU][mA][idT] 250 [fU*][fA*][mG][mA][mU][mG][mC][mG][mA][mC][mU][mC][mU][fC][mU][mU][mU][mG][mC][*mU][*mU]
U3 118 [mA*][mA*][fA][mG][mA][mG][fA][fG][fU][mC][mG][fC][mA][mU][mC][mU][fC][mA][mA][idT] 251 [fU*][fU*][mG][mA][mG][mA][mU][mG][mC][mG][mA][mC][mU][fC][mU][mC][mU][mU][mU][*mU][*mU]
V3 119 [mA*][mA*][fG][mA][mG][mA][fG][fU][fC][mG][mC][fA][mU][mC][mU][mC][fA][mG][mA][idT] 252 [fU*][fC*][mU][mG][mA][mG][mA][mU][mG][mC][mG][mA][mC][fU][mC][mU][mC][mU][mU][*mU][*mU]
W3 120 [mA*][mG*][fA][mG][mA][mG][fU][fC][fG][mC][mA][fU][mC][mU][mC][mA][fG][mU][mA][idT] 253 [fU*][fA*][mC][mU][mG][mA][mG][mA][mU][mG][mC][mG][mA][fC][mU][mC][mU][mC][mU][*mU][*mU]
X3 121 [mG*][mA*][fG][mA][mG][mU][fC][fG][fC][mA][mU][fC][mU][mC][mA][mG][fU][mG][mA][idT] 254 [fU*][fC*][mA][mC][mU][mG][mA][mG][mA][mU][mG][mC][mG][fA][mC][mU][mC][mU][mC][*mU][*mU]
Y3 122 [mA*][mG*][fA][mG][mU][mC][fG][fC][fA][mU][mC][fU][mC][mA][mG][mU][fG][mC][mA][idT] 255 [fU*][fG*][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][mA][mU][mG][mC][fG][mA][mC][mU][mC][mU][*mU][*mU]
Z3 123 [mG*][mA*][fG][mU][mC][mG][fC][fA][fU][mC][mU][fC][mA][mG][mU][mG][fC][mA][mA][idT] 256 [fU*][fU*][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][mA][mU][mG][fC][mG][mA][mC][mU][mC][*mU][*mU]
A4 124 [mG*][mU*][fC][mG][mC][mA][fU][fC][fU][mC][mA][fG][mU][mG][mC][mA][fG][mG][mA][idT] 257 [fU*][fC*][mC][mU][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][mA][fU][mG][mC][mG][mA][mC][*mU][*mU]
B4 125 [mC*][mU*][fG][mC][mU][mG][fU][fG][fG][mC][mG][fU][mG][mA][mG][mG][fG][mU][mA][idT] 258 [fU*][fA*][mC][mC][mC][mU][mC][mA][mC][mG][mC][mC][mA][fC][mA][mG][mC][mA][mG][*mU][*mU]
C4 126 [mG*][mG*][fC][mA][mC][mU][fG][fA][fC][mU][mG][fG][mG][mC][mA][mU][fA][mG][mA][idT] 259 [fU*][fC*][mU][mA][mU][mG][mC][mC][mC][mA][mG][mU][mC][fA][mG][mU][mG][mC][mC][*mU][*mU]
D4 127 [mG*][mG*][fG][mC][mA][mU][fA][fG][fC][mU][mC][fC][mC][mC][mG][mC][fU][mU][mA][idT] 260 [fU*][fA*][mA][mG][mC][mG][mG][mG][mG][mA][mG][mC][mU][fA][mU][mG][mC][mC][mC][*mU][*mU]
E4 128 [mA*][mG*][fA][mA][mC][mC][fU][fC][fU][mC][mA][fC][mU][mU][mC][mA][fC][mC][mA][idT] 261 [fU*][fG*][mG][mU][mG][mA][mA][mG][mU][mG][mA][mG][mA][fG][mG][mU][mU][mC][mU][*mU][*mU]
F4 129 [mG*][mA*][fA][mC][mC][mU][fC][fU][fC][mA][mC][fU][mU][mC][mA][mC][fC][mC][mA][idT] 262 [fU*][fG*][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mG][mU][mG][mA][mG][fA][mG][mG][mU][mU][mC][*mU][*mU]
G4 130 [mA*][mG*][fU][mC][mU][mC][fC][fC][fA][mA][mC][fU][mU][mG][mU][mA][fU][mU][mA][idT] 263 [fU*][fA*][mA][mU][mA][mC][mA][mA][mG][mU][mU][mG][mG][fG][mA][mG][mA][mC][mU][*mU][*mU]
H4 131 [mG*][mG*][fU][mU][mU][mA][fG][fU][fA][mA][mU][fA][mU][mC][mC][mA][fC][mC][mA][idT] 264 [fU*][fG*][mG][mU][mG][mG][mA][mU][mA][mU][mU][mA][mC][fU][mA][mA][mA][mC][mC][*mU][*mU]
I4 132 [mG*][mU*][fU][mU][mA][mG][fU][fA][fA][mU][mA][fU][mC][mC][mA][mC][fC][mA][mA][idT] 265 [fU*][fU*][mG][mG][mU][mG][mG][mA][mU][mA][mU][mU][mA][fC][mU][mA][mA][mA][mC][*mU][*mU]
J4 133 [mU*][mU*][fU][mA][mG][mU][fA][fA][fU][mA][mU][fC][mC][mA][mC][mC][fA][mG][mA][idT] 266 [fU*][fC*][mU][mG][mG][mU][mG][mG][mA][mU][mA][mU][mU][fA][mC][mU][mA][mA][mA][*mU][*mU]
K4 134 [mG*][mU*][fA][mA][mU][mA][fU][fC][fC][mA][mC][fC][mA][mG][mA][mC][fC][mU][mA][idT] 267 [fU*][fA*][mG][mG][mU][mC][mU][mG][mG][mU][mG][mG][mA][fU][mA][mU][mU][mA][mC][*mU][*mU]
L4 135 [mU*][mA*][fA][mU][mA][mU][fC][fC][fA][mC][mC][fA][mG][mA][mC][mC][fU][mU][mA][idT] 268 [fU*][fA*][mA][mG][mG][mU][mC][mU][mG][mG][mU][mG][mG][fA][mU][mA][mU][mU][mA][*mU][*mU]
M4 136 [mC*][mA*][fU][mG][mG][mU][fG][fG][fC][mU][mU][fC][mC][mC][mU][mG][fC][mG][mA][idT] 269 [fU*][fC*][mG][mC][mA][mG][mG][mG][mA][mA][mG][mC][mC][fA][mC][mC][mA][mU][mG][*mU][*mU]
N4 137 [mU*][mG*][fC][mG][mC][mC][fC][fA][fG][mG][mA][fA][mG][mC][mC][mA][fU][mA][mA][idT] 270 [fU*][fU*][mA][mU][mG][mG][mC][mU][mU][mC][mC][mU][mG][fG][mG][mC][mG][mC][mA][*mU][*mU]
O4 138 [mC*][mG*][fC][mC][mC][mA][fG][fG][fA][mA][mG][fC][mC][mA][mU][mA][fU][mA][mA][idT] 271 [fU*][fU*][mA][mU][mA][mU][mG][mG][mC][mU][mU][mC][mC][fU][mG][mG][mG][mC][mG][*mU][*mU]
P4 139 [mA*][mG*][fC][mC][mA][mU][fA][fU][fA][mC][mA][fC][mA][mG][mA][mU][fG][mC][mA][idT] 272 [fU*][fG*][mC][mA][mU][mC][mU][mG][mU][mG][mU][mA][mU][fA][mU][mG][mG][mC][mU][*mU][*mU]
Q4 140 [mG*][mC*][fC][mA][mU][mA][fU][fA][fC][mA][mC][fA][mG][mA][mU][mG][fC][mC][mA][idT] 273 [fU*][fG*][mG][mC][mA][mU][mC][mU][mG][mU][mG][mU][mA][fU][mA][mU][mG][mG][mC][*mU][*mU]
R4 141 [mU*][mU*][fG][mU][mU][mU][fG][fU][fG][mA][mU][fA][mG][mU][mG][mA][fA][mC][mA][idT] 274 [fU*][fG*][mU][mU][mC][mA][mC][mU][mA][mU][mC][mA][mC][fA][mA][mA][mC][mA][mA][*mU][*mU]
S4 142 [mG*][mG*][fA][mA][mG][mC][fU][fG][fC][mU][mU][fA][mA][mC][mU][mG][fU][mC][mA][idT] 275 [fU*][fG*][mA][mC][mA][mG][mU][mU][mA][mA][mG][mC][mA][fG][mC][mU][mU][mC][mC][*mU][*mU]
T4 143 [mG*][mC*][fU][mG][mC][mU][fU][fA][fA][mC][mU][fG][mU][mC][mC][mA][fU][mC][mA][idT] 276 [fU*][fG*][mA][mU][mG][mG][mA][mC][mA][mG][mU][mU][mA][fA][mG][mC][mA][mG][mC][*mU][*mU]
U4 144 [mA*][mG*][fC][mA][mG][mG][fA][fG][fA][mC][mU][fG][mG][mC][mU][mA][fA][mA][mA][idT] 277 [fU*][fU*][mU][mU][mA][mG][mC][mC][mA][mG][mU][mC][mU][fC][mC][mU][mG][mC][mU][*mU][*mU]
V4 145 [mG*][mC*][fA][mG][mG][mA][fG][fA][fC][mU][mG][fG][mC][mU][mA][mA][fA][mU][mA][idT] 278 [fU*][fA*][mU][mU][mU][mA][mG][mC][mC][mA][mG][mU][mC][fU][mC][mC][mU][mG][mC][*mU][*mU]
W4 146 [mC*][mA*][fG][mG][mA][mG][fA][fC][fU][mG][mG][fC][mU][mA][mA][mA][fU][mA][mA][idT] 279 [fU*][fU*][mA][mU][mU][mU][mA][mG][mC][mC][mA][mG][mU][fC][mU][mC][mC][mU][mG][*mU][*mU]
X4 147 [mA*][mU*][fA][mC][mA][mA][fC][fA][fG][mA][mA][fU][mC][mU][mC][mA][fA][mA][mA][idT] 280 [fU*][fU*][mU][mU][mG][mA][mG][mA][mU][mU][mC][mU][mG][fU][mU][mG][mU][mA][mU][*mU][*mU]
Y4 148 [mC*][mA*][fG][mA][mA][mA][fA][fC][fC][mC][mA][fC][mA][mG][mC][mU][fC][mG][mA][idT] 281 [fU*][fC*][mG][mA][mG][mC][mU][mG][mU][mG][mG][mG][mU][fU][mU][mU][mC][mU][mG][*mU][*mU]
Z4 149 [mA*][mC*][fC][mC][mA][mC][fA][fG][fC][mU][mC][fG][mA][mA][mG][mA][fG][mU][mA][idT] 282 [fU*][fA*][mC][mU][mC][mU][mU][mC][mG][mA][mG][mC][mU][fG][mU][mG][mG][mG][mU][*mU][*mU]
A5 150 [mG*][mC*][fU][mC][mG][mA][fA][fG][fA][mG][mU][fG][mG][mU][mG][mA][fC][mG][mA][idT] 283 [fU*][fC*][mG][mU][mC][mA][mC][mC][mA][mC][mU][mC][mU][fU][mC][mG][mA][mG][mC][*mU][*mU]
B5 151 [mU*][mC*][fG][mA][mA][mG][fA][fG][fU][mG][mG][fU][mG][mA][mC][mG][fU][mC][mA][idT] 284 [fU*][fG*][mA][mC][mG][mU][mC][mA][mC][mC][mA][mC][mU][fC][mU][mU][mC][mG][mA][*mU][*mU]
C5 152 [mG*][mA*][fA][mG][mA][mG][fU][fG][fG][mU][mG][fA][mC][mG][mU][mC][fU][mG][mA][idT] 285 [fU*][fC*][mA][mG][mA][mC][mG][mU][mC][mA][mC][mC][mA][fC][mU][mC][mU][mU][mC][*mU][*mU]
D5 153 [mG*][mG*][fU][mU][mG][mG][fU][fU][fA][mA][mA][fG][mG][mG][mA][mG][fA][mU][mA][idT] 286 [fU*][fA*][mU][mC][mU][mC][mC][mC][mU][mU][mU][mA][mA][fC][mC][mA][mA][mC][mC][*mU][*mU]
E5 154 [mU*][mU*][fG][mG][mC][mU][fU][fU][fC][mC][mC][fA][mU][mA][mA][mU][fG][mC][mA][idT] 287 [fU*][fG*][mC][mA][mU][mU][mA][mU][mG][mG][mG][mA][mA][fA][mG][mC][mC][mA][mA][*mU][*mU]
F5 155 [mC*][mC*][fC][mU][mG][mC][fC][fC][fA][mG][mU][fC][mG][mG][mC][mU][fU][mC][mA][idT] 288 [fU*][fG*][mA][mA][mG][mC][mC][mG][mA][mC][mU][mG][mG][fG][mC][mA][mG][mG][mG][*mU][*mU]
G5 156 [mC*][mC*][fU][mG][mC][mC][fC][fA][fG][mU][mC][fG][mG][mC][mU][mU][fC][mU][mA][idT] 289 [fU*][fA*][mG][mA][mA][mG][mC][mC][mG][mA][mC][mU][mG][fG][mG][mC][mA][mG][mG][*mU][*mU]
H5 157 [mU*][mG*][fC][mC][mC][mA][fG][fU][fC][mG][mG][fC][mU][mU][mC][mU][fU][mC][mA][idT] 290 [fU*][fG*][mA][mA][mG][mA][mA][mG][mC][mC][mG][mA][mC][fU][mG][mG][mG][mC][mA][*mU][*mU]
I5 158 [mG*][mC*][fC][mC][mA][mG][fU][fC][fG][mG][mC][fU][mU][mC][mU][mU][fC][mU][mA][idT] 291 [fU*][fA*][mG][mA][mA][mG][mA][mA][mG][mC][mC][mG][mA][fC][mU][mG][mG][mG][mC][*mU][*mU]
J5 159 [mC*][mC*][fA][mG][mU][mC][fG][fG][fC][mU][mU][fC][mU][mU][mC][mU][fC][mC][mA][idT] 292 [fU*][fG*][mG][mA][mG][mA][mA][mG][mA][mA][mG][mC][mC][fG][mA][mC][mU][mG][mG][*mU][*mU]
K5 160 [mC*][mA*][fG][mU][mC][mG][fG][fC][fU][mU][mC][fU][mU][mC][mU][mC][fC][mA][mA][idT] 293 [fU*][fU*][mG][mG][mA][mG][mA][mA][mG][mA][mA][mG][mC][fC][mG][mA][mC][mU][mG][*mU][*mU]
L5 161 [mA*][mG*][fU][mC][mG][mG][fC][fU][fU][mC][mU][fU][mC][mU][mC][mC][fA][mA][mA][idT] 294 [fU*][fU*][mU][mG][mG][mA][mG][mA][mA][mG][mA][mA][mG][fC][mC][mG][mA][mC][mU][*mU][*mU]
M5 162 [mG*][mC*][fU][mG][mC][mU][fC][fC][fA][mG][mU][fG][mC][mA][mG][mG][fA][mG][mA][idT] 295 [fU*][fC*][mU][mC][mC][mU][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mG][fA][mG][mC][mA][mG][mC][*mU][*mU]
N5 163 [mC*][mU*][fG][mC][mU][mC][fC][fA][fG][mU][mG][fC][mA][mG][mG][mA][fG][mA][mA][idT] 296 [fU*][fU*][mC][mU][mC][mC][mU][mG][mC][mA][mC][mU][mG][fG][mA][mG][mC][mA][mG][*mU][*mU]
O5 164 [mA*][mG*][fU][mC][mG][mC][fA][fU][fC][mU][mC][fA][mG][mU][mG][mC][fA][mG][mA][idT] 297 [fU*][fC*][mU][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][mA][mU][fG][mC][mG][mA][mC][mU][*mU][*mU]
P5 165 [mU*][mC*][fG][mC][mA][mU][fC][fU][fC][mA][mG][fU][mG][mC][mA][mG][fG][mA][mA][idT] 298 [fU*][fU*][mC][mC][mU][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][fA][mU][mG][mC][mG][mA][*mU][*mU]
Q5 166 [mC*][mC*][fC][mA][mG][mU][fC][fG][fG][mC][mU][fU][mC][mU][mU][mC][fU][mC][mA][idT] 299 [fU*][fG*][mA][mG][mA][mA][mG][mA][mA][mG][mC][mC][mG][fA][mC][mU][mG][mG][mG][*mU][*mU]
R5 167 [mC*][mC*][fC][mU][mG][mC][fC][fC][fA][mG][mU][fC][mG][mG][mC][mU][fU][mC][mA][mU][*mU][*idT] 300 [fU*][fG*][mA][mA][mG][mC][mC][mG][mA][mC][mU][mG][mG][fG][mC][mA][mG][mG][mG][*mU][*mU]
S5 168 [mC*][mC*][fU][mG][mC][mC][fC][fA][fG][mU][mC][fG][mG][mC][mU][mU][fC][mU][mA][mU][*mU][*idT] 301 [fU*][fA*][mG][mA][mA][mG][mC][mC][mG][mA][mC][mU][mG][fG][mG][mC][mA][mG][mG][*mU][*mU]
T5 169 [mU*][mG*][fC][mC][mC][mA][fG][fU][fC][mG][mG][fC][mU][mU][mC][mU][fU][mC][mA][mU][*mU][*idT] 302 [fU*][fG*][mA][mA][mG][mA][mA][mG][mC][mC][mG][mA][mC][fU][mG][mG][mG][mC][mA][*mU][*mU]
U5 170 [mG*][mC*][fC][mC][mA][mG][fU][fC][fG][mG][mC][fU][mU][mC][mU][mU][fC][mU][mA][mU][*mU][*idT] 303 [fU*][fA*][mG][mA][mA][mG][mA][mA][mG][mC][mC][mG][mA][fC][mU][mG][mG][mG][mC][*mU][*mU]
V5 171 [mC*][mC*][fC][mA][mG][mU][fC][fG][fG][mC][mU][fU][mC][mU][mU][mC][fU][mC][mA][mU][*mU][*idT] 304 [fU*][fG*][mA][mG][mA][mA][mG][mA][mA][mG][mC][mC][mG][fA][mC][mU][mG][mG][mG][*mU][*mU]
W5 172 [mC*][mC*][fA][mG][mU][mC][fG][fG][fC][mU][mU][fC][mU][mU][mC][mU][fC][mC][mA][mU][*mU][*idT] 305 [fU*][fG*][mG][mA][mG][mA][mA][mG][mA][mA][mG][mC][mC][fG][mA][mC][mU][mG][mG][*mU][*mU]
X5 173 [mC*][mA*][fG][mU][mC][mG][fG][fC][fU][mU][mC][fU][mU][mC][mU][mC][fC][mA][mA][mU][*mU][*idT] 306 [fU*][fU*][mG][mG][mA][mG][mA][mA][mG][mA][mA][mG][mC][fC][mG][mA][mC][mU][mG][*mU][*mU]
Y5 174 [mG*][mC*][fU][mG][mC][mU][fC][fC][fA][mG][mU][fG][mC][mA][mG][mG][fA][mG][mA][mU][*mU][*idT] 307 [fU*][fC*][mU][mC][mC][mU][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mG][fA][mG][mC][mA][mG][mC][*mU][*mU]
Z5 175 [mC*][mU*][fG][mC][mU][mC][fC][fA][fG][mU][mG][fC][mA][mG][mG][mA][fG][mA][mA][mU][*mU][*idT] 308 [fU*][fU*][mC][mU][mC][mC][mU][mG][mC][mA][mC][mU][mG][fG][mA][mG][mC][mA][mG][*mU][*mU]
A6 176 [mA*][mG*][fU][mC][mG][mC][fA][fU][fC][mU][mC][fA][mG][mU][mG][mC][fA][mG][mA][mU][*mU][*idT] 309 [fU*][fC*][mU][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][mA][mU][fG][mC][mG][mA][mC][mU][*mU][*mU]
B6 177 [mU*][mC*][fG][mC][mA][mU][fC][fU][fC][mA][mG][fU][mG][mC][mA][mG][fG][mA][mA][mU][*mU][*idT] 310 [fU*][fU*][mC][mC][mU][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][fA][mU][mG][mC][mG][mA][*mU][*mU]
C6 178 [mA*][mG*][fU][mC][mG][mG][fC][fU][fU][mC][mU][fU][mC][mU][mC][mC][fA][mA][mA][mU][*mU][*idT] 311 [mU*][fU*][mU][mG][mG][mA][mG][mA][mA][mG][mA][mA][mG][fC][mC][mG][mA][mC][mU][*mU][*mU]
縮寫 鍵：n/N= 任何核苷酸 mN= 2'-O-甲基取代 fN= 2'-F取代 idT = 反向Dt vinmN或vinmU = 2'-O甲基乙烯基膦酸酯尿苷 * = 硫代磷酸酯 括號指示個別鹼基。
表3B：siRNA有義序列及反義序列(未經修飾)
SEQ ID NO: 有義股 5' -3' SEQ ID NO: 反義股 5' -3'
673 AGAACCACCCACUGCAUGA 806 UCAUGCAGUGGGUGGUUCUUU
674 AGAAAAACAGUACCUAAUA 807 UAUUAGGUACUGUUUUUCUUU
675 GAAACUGGUGAGUGACUGA 808 UCAGUCACUCACCAGUUUCUU
676 AAACUGGUGAGUGACUGCA 809 UGCAGUCACUCACCAGUUUUU
677 AGUUCACUGAAACGGAAUA 810 UAUUCCGUUUCAGUGAACUUU
678 GGAAUGCCUUCCUUGCGGA 811 UCCGCAAGGAAGGCAUUCCUU
679 UGCCUUCCUUGCGGUGAAA 812 UUUCACCGCAAGGAAGGCAUU
680 GCCUUCCUUGCGGUGAAAA 813 UUUUCACCGCAAGGAAGGCUU
681 CCUUCCUUGCGGUGAAAGA 814 UCUUUCACCGCAAGGAAGGUU
682 CUUCCUUGCGGUGAAAGCA 815 UGCUUUCACCGCAAGGAAGUU
683 UUCCUUGCGGUGAAAGCGA 816 UCGCUUUCACCGCAAGGAAUU
684 UCCUUGCGGUGAAAGCGAA 817 UUCGCUUUCACCGCAAGGAUU
685 CCUUGCGGUGAAAGCGAAA 818 UUUCGCUUUCACCGCAAGGUU
686 CUUGCGGUGAAAGCGAAUA 819 UAUUCGCUUUCACCGCAAGUU
687 UUGCGGUGAAAGCGAAUUA 820 UAAUUCGCUUUCACCGCAAUU
688 UGCGGUGAAAGCGAAUUCA 821 UGAAUUCGCUUUCACCGCAUU
689 CGGUGAAAGCGAAUUCCUA 822 UAGGAAUUCGCUUUCACCGUU
690 GGUGAAAGCGAAUUCCUAA 823 UUAGGAAUUCGCUUUCACCUU
691 UGAAAGCGAAUUCCUAGAA 824 UUCUAGGAAUUCGCUUUCAUU
692 GAAAGCGAAUUCCUAGACA 825 UGUCUAGGAAUUCGCUUUCUU
693 AAAGCGAAUUCCUAGACAA 826 UUGUCUAGGAAUUCGCUUUUU
694 AAGCGAAUUCCUAGACACA 827 UGUGUCUAGGAAUUCGCUUUU
695 AGCGAAUUCCUAGACACCA 828 UGGUGUCUAGGAAUUCGCUUU
696 CUAGACACCUGGAACAGAA 829 UUCUGUUCCAGGUGUCUAGUU
697 CAGCACAAAUACUGCGACA 830 UGUCGCAGUAUUUGUGCUGUU
698 AGCACAAAUACUGCGACCA 831 UGGUCGCAGUAUUUGUGCUUU
699 GCACAAAUACUGCGACCCA 832 UGGGUCGCAGUAUUUGUGCUU
700 UACUGCGACCCCAACCUAA 833 UUAGGUUGGGGUCGCAGUAUU
701 ACUGCGACCCCAACCUAGA 834 UCUAGGUUGGGGUCGCAGUUU
702 CUGCGACCCCAACCUAGGA 835 UCCUAGGUUGGGGUCGCAGUU
703 GACCCCAACCUAGGGCUUA 836 UAAGCCCUAGGUUGGGGUCUU
704 ACCCCAACCUAGGGCUUCA 837 UGAAGCCCUAGGUUGGGGUUU
705 CCCCAACCUAGGGCUUCGA 838 UCGAAGCCCUAGGUUGGGGUU
706 CCUAGGGCUUCGGGUCCAA 839 UUGGACCCGAAGCCCUAGGUU
707 UCGGGUCCAGCAGAAGGGA 840 UCCCUUCUGCUGGACCCGAUU
708 GAAGGCUGGCACUGUACGA 841 UCGUACAGUGCCAGCCUUCUU
709 GGCACUGUACGAGUGAGGA 842 UCCUCACUCGUACAGUGCCUU
710 GUACGAGUGAGGCCUGUGA 843 UCACAGGCCUCACUCGUACUU
711 UGUCCUGCACCGCUCAUGA 844 UCAUGAGCGGUGCAGGACAUU
712 UGCACCGCUCAUGCUCGCA 845 UGCGAGCAUGAGCGGUGCAUU
713 GCACCGCUCAUGCUCGCCA 846 UGGCGAGCAUGAGCGGUGCUU
714 CCGCUCAUGCUCGCCCGGA 847 UCCGGGCGAGCAUGAGCGGUU
715 CCCGGCUUUGGGGUCAAGA 848 UCUUGACCCCAAAGCCGGGUU
716 CUGAUACCAUCUGCGAGCA 849 UGCUCGCAGAUGGUAUCAGUU
717 UGAUACCAUCUGCGAGCCA 850 UGGCUCGCAGAUGGUAUCAUU
718 CUGCCCAGUCGGCUUCUUA 851 UAAGAAGCCGACUGGGCAGUU
719 GUGUCAUCUGCUUUCGAAA 852 UUUCGAAAGCAGAUGACACUU
720 UGUCAUCUGCUUUCGAAAA 853 UUUUCGAAAGCAGAUGACAUU
721 UCAUCUGCUUUCGAAAAAA 854 UUUUUUCGAAAGCAGAUGAUU
722 UUCGAAAAAUGUCACCCUA 855 UAGGGUGACAUUUUUCGAAUU
723 UCGAAAAAUGUCACCCUUA 856 UAAGGGUGACAUUUUUCGAUU
724 AAAAUGUCACCCUUGGACA 857 UGUCCAAGGGUGACAUUUUUU
725 UGAUCCCCAUCAUCUUCGA 858 UCGAAGAUGAUGGGGAUCAUU
726 CCCCAUCAUCUUCGGGAUA 859 UAUCCCGAAGAUGAUGGGGUU
727 AUCUUCGGGAUCCUGUUUA 860 UAAACAGGAUCCCGAAGAUUU
728 AAGAAGCCAACCAAUAAGA 861 UCUUAUUGGUUGGCUUCUUUU
729 AAGCCAACCAAUAAGGCCA 862 UGGCCUUAUUGGUUGGCUUUU
730 AGAUCAAUUUUCCCGACGA 863 UCGUCGGGAAAAUUGAUCUUU
731 GAUCAAUUUUCCCGACGAA 864 UUCGUCGGGAAAAUUGAUCUU
732 AUCAAUUUUCCCGACGAUA 865 UAUCGUCGGGAAAAUUGAUUU
733 UCAAUUUUCCCGACGAUCA 866 UGAUCGUCGGGAAAAUUGAUU
734 CGACGAUCUUCCUGGCUCA 867 UGAGCCAGGAAGAUCGUCGUU
735 ACGAUCUUCCUGGCUCCAA 868 UUGGAGCCAGGAAGAUCGUUU
736 GAUCUUCCUGGCUCCAACA 869 UGUUGGAGCCAGGAAGAUCUU
737 UGCAGGAGACUUUACAUGA 870 UCAUGUAAAGUCUCCUGCAUU
738 CAGGAGACUUUACAUGGAA 871 UUCCAUGUAAAGUCUCCUGUU
739 GGAGACUUUACAUGGAUGA 872 UCAUCCAUGUAAAGUCUCCUU
740 AGGAUGGCAAAGAGAGUCA 873 UGACUCUCUUUGCCAUCCUUU
741 GGAUGGCAAAGAGAGUCGA 874 UCGACUCUCUUUGCCAUCCUU
742 UGGCAAAGAGAGUCGCAUA 875 UAUGCGACUCUCUUUGCCAUU
743 GGCAAAGAGAGUCGCAUCA 876 UGAUGCGACUCUCUUUGCCUU
744 GCAAAGAGAGUCGCAUCUA 877 UAGAUGCGACUCUCUUUGCUU
745 AAAGAGAGUCGCAUCUCAA 878 UUGAGAUGCGACUCUCUUUUU
746 AAGAGAGUCGCAUCUCAGA 879 UCUGAGAUGCGACUCUCUUUU
747 AGAGAGUCGCAUCUCAGUA 880 UACUGAGAUGCGACUCUCUUU
748 GAGAGUCGCAUCUCAGUGA 881 UCACUGAGAUGCGACUCUCUU
749 AGAGUCGCAUCUCAGUGCA 882 UGCACUGAGAUGCGACUCUUU
750 GAGUCGCAUCUCAGUGCAA 883 UUGCACUGAGAUGCGACUCUU
751 GUCGCAUCUCAGUGCAGGA 884 UCCUGCACUGAGAUGCGACUU
752 CUGCUGUGGCGUGAGGGUA 885 UACCCUCACGCCACAGCAGUU
753 GGCACUGACUGGGCAUAGA 886 UCUAUGCCCAGUCAGUGCCUU
754 GGGCAUAGCUCCCCGCUUA 887 UAAGCGGGGAGCUAUGCCCUU
755 AGAACCUCUCACUUCACCA 888 UGGUGAAGUGAGAGGUUCUUU
756 GAACCUCUCACUUCACCCA 889 UGGGUGAAGUGAGAGGUUCUU
757 AGUCUCCCAACUUGUAUUA 890 UAAUACAAGUUGGGAGACUUU
758 GGUUUAGUAAUAUCCACCA 891 UGGUGGAUAUUACUAAACCUU
759 GUUUAGUAAUAUCCACCAA 892 UUGGUGGAUAUUACUAAACUU
760 UUUAGUAAUAUCCACCAGA 893 UCUGGUGGAUAUUACUAAAUU
761 GUAAUAUCCACCAGACCUA 894 UAGGUCUGGUGGAUAUUACUU
762 UAAUAUCCACCAGACCUUA 895 UAAGGUCUGGUGGAUAUUAUU
763 CAUGGUGGCUUCCCUGCGA 896 UCGCAGGGAAGCCACCAUGUU
764 UGCGCCCAGGAAGCCAUAA 897 UUAUGGCUUCCUGGGCGCAUU
765 CGCCCAGGAAGCCAUAUAA 898 UUAUAUGGCUUCCUGGGCGUU
766 AGCCAUAUACACAGAUGCA 899 UGCAUCUGUGUAUAUGGCUUU
767 GCCAUAUACACAGAUGCCA 900 UGGCAUCUGUGUAUAUGGCUU
768 UUGUUUGUGAUAGUGAACA 901 UGUUCACUAUCACAAACAAUU
769 GGAAGCUGCUUAACUGUCA 902 UGACAGUUAAGCAGCUUCCUU
770 GCUGCUUAACUGUCCAUCA 903 UGAUGGACAGUUAAGCAGCUU
771 AGCAGGAGACUGGCUAAAA 904 UUUUAGCCAGUCUCCUGCUUU
772 GCAGGAGACUGGCUAAAUA 905 UAUUUAGCCAGUCUCCUGCUU
773 CAGGAGACUGGCUAAAUAA 906 UUAUUUAGCCAGUCUCCUGUU
774 AUACAACAGAAUCUCAAAA 907 UUUUGAGAUUCUGUUGUAUUU
775 CAGAAAACCCACAGCUCGA 908 UCGAGCUGUGGGUUUUCUGUU
776 ACCCACAGCUCGAAGAGUA 909 UACUCUUCGAGCUGUGGGUUU
777 GCUCGAAGAGUGGUGACGA 910 UCGUCACCACUCUUCGAGCUU
778 UCGAAGAGUGGUGACGUCA 911 UGACGUCACCACUCUUCGAUU
779 GAAGAGUGGUGACGUCUGA 912 UCAGACGUCACCACUCUUCUU
780 GGUUGGUUAAAGGGAGAUA 913 UAUCUCCCUUUAACCAACCUU
781 UUGGCUUUCCCAUAAUGCA 914 UGCAUUAUGGGAAAGCCAAUU
782 CCCUGCCCAGUCGGCUUCA 915 UGAAGCCGACUGGGCAGGGUU
783 CCUGCCCAGUCGGCUUCUA 916 UAGAAGCCGACUGGGCAGGUU
784 UGCCCAGUCGGCUUCUUCA 917 UGAAGAAGCCGACUGGGCAUU
785 GCCCAGUCGGCUUCUUCUA 918 UAGAAGAAGCCGACUGGGCUU
786 CCAGUCGGCUUCUUCUCCA 919 UGGAGAAGAAGCCGACUGGUU
787 CAGUCGGCUUCUUCUCCAA 920 UUGGAGAAGAAGCCGACUGUU
788 AGUCGGCUUCUUCUCCAAA 921 UUUGGAGAAGAAGCCGACUUU
789 GCUGCUCCAGUGCAGGAGA 922 UCUCCUGCACUGGAGCAGCUU
790 CUGCUCCAGUGCAGGAGAA 923 UUCUCCUGCACUGGAGCAGUU
791 AGUCGCAUCUCAGUGCAGA 924 UCUGCACUGAGAUGCGACUUU
792 UCGCAUCUCAGUGCAGGAA 925 UUCCUGCACUGAGAUGCGAUU
793 CCCAGUCGGCUUCUUCUCA 926 UGAGAAGAAGCCGACUGGGUU
794 CCCUGCCCAGUCGGCUUCAUU 927 UGAAGCCGACUGGGCAGGGUU
795 CCUGCCCAGUCGGCUUCUAUU 928 UAGAAGCCGACUGGGCAGGUU
796 UGCCCAGUCGGCUUCUUCAUU 929 UGAAGAAGCCGACUGGGCAUU
797 GCCCAGUCGGCUUCUUCUAUU 930 UAGAAGAAGCCGACUGGGCUU
798 CCCAGUCGGCUUCUUCUCAUU 931 UGAGAAGAAGCCGACUGGGUU
799 CCAGUCGGCUUCUUCUCCAUU 932 UGGAGAAGAAGCCGACUGGUU
800 CAGUCGGCUUCUUCUCCAAUU 933 UUGGAGAAGAAGCCGACUGUU
801 GCUGCUCCAGUGCAGGAGAUU 934 UCUCCUGCACUGGAGCAGCUU
802 CUGCUCCAGUGCAGGAGAAUU 935 UUCUCCUGCACUGGAGCAGUU
803 AGUCGCAUCUCAGUGCAGAUU 936 UCUGCACUGAGAUGCGACUUU
804 UCGCAUCUCAGUGCAGGAAUU 937 UUCCUGCACUGAGAUGCGAUU
805 AGUCGGCUUCUUCUCCAAAUU 938 UUUGGAGAAGAAGCCGACUUU
表4A：siRNA有義序列及反義序列(經修飾)
成對 siRNA SEQ ID NO: 有義股 5' -3' SEQ ID NO: 反義股 5' -3'
D6 312 [mG*][mA*][fG][mU][mC][mG][fC][fA][fU][mC][mU][fC][mA][mG][mU][mG][fC][mA][mA] 332 [vinmU*][fU*][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][mA][mU][mG][fC][mG][mA][mC][mU][mC][*mU][*mU]
E6 313 [mG*][mU*][fC][mG][mC][mA][fU][fC][fU][mC][mA][fG][mU][mG][mC][mA][fG][mG][mA] 333 [vinmU*][fC*][mC][mU][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][mA][fU][mG][mC][mG][mA][mC][*mU][*mU]
F6 314 [mA*][mG*][fA][mA][mC][mC][fU][fC][fU][mC][mA][fC][mU][mU][mC][mA][fC][mC][mA] 334 [vinmU*][fG*][mG][mU][mG][mA][mA][mG][mU][mG][mA][mG][mA][fG][mG][mU][mU][mC][mU][*mU][*mU]
G6 315 [mG*][mA*][fA][mC][mC][mU][fC][fU][fC][mA][mC][fU][mU][mC][mA][mC][fC][mC][mA] 335 [vinmU*][fG*][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mG][mU][mG][mA][mG][fA][mG][mG][mU][mU][mC][*mU][*mU]
H6 316 [mA*][mG*][fU][mC][mU][mC][fC][fC][fA][mA][mC][fU][mU][mG][mU][mA][fU][mU][mA] 336 [vinmU*][fA*][mA][mU][mA][mC][mA][mA][mG][mU][mU][mG][mG][fG][mA][mG][mA][mC][mU][*mU][*mU]
I6 317 [mG*][mG*][fA][mA][mG][mC][fU][fG][fC][mU][mU][fA][mA][mC][mU][mG][fU][mC][mA] 337 [vinmU*][fG*][mA][mC][mA][mG][mU][mU][mA][mA][mG][mC][mA][fG][mC][mU][mU][mC][mC][*mU][*mU]
J6 318 [mG*][mC*][fA][mG][mG][mA][fG][fA][fC][mU][mG][fG][mC][mU][mA][mA][fA][mU][mA] 338 [vinmU*][fA*][mU][mU][mU][mA][mG][mC][mC][mA][mG][mU][mC][fU][mC][mC][mU][mG][mC][*mU][*mU]
K6 319 [mU*][mU*][fA][mU][mC][mC][fU][fU][fU][mG][mG][fU][mU][mU][mC][mU][fU][mG][mA] 339 [vinmU*][fC*][mA][mA][mG][mA][mA][mA][mC][mC][mA][mA][mA][fG][mG][mA][mU][mA][mA][*mU][*mU]
L6 320 [mG*][mU*][fG][mU][mG][mU][fU][fA][fC][mG][mU][fG][mC][mA][mG][mU][fG][mA][mA][mU][mU] 340 [vinmU*][fU*][mC][mA][mC][mU][mG][mC][mA][mC][mG][mU][mA][fA][mC][mA][mC][mA][mC][*mU][*mG]
M6 321 [mU*][mG*][fU][mU][mC][mC][fA][fC][fU][mG][mG][fG][mC][mU][mG][mA][fG][mA][mA] 341 [vinmU*][fU*][mC][mU][mC][mA][mG][mC][mC][mC][mA][mG][mU][fG][mG][mA][mA][mC][mA][*mU][*mU]
N6 322 [mG*][mC*][fG][mA][mA][mU][fU][fC][fC][mU][mA][fG][mA][mC][mA][mC][fC][mU][mA][mU][mU] 342 [vinmU*][fA*][mG][mG][mU][mG][mU][mC][mU][mC][mG][mG][mA][fA][mU][mU][mC][mG][mC][*mU][*mU]
O6 323 [mG*][mU*][fG][mU][mG][mU][fU][fA][fC][mG][mU][fG][mC][mA][mG][mU][fG][mA][mC][mU][mA] 343 [vinmU*][fA*][mG][mU][mC][mA][mC][mU][mG][mC][mA][mC][mG][fU][mA][mA][mC][mA][mC][mA][mC][*mU][*mG]
P6 324 [mA*][mC*][fU][mA][mC][mA][fA][fG][fA][mC][mU][fC][mG][mU][mG][mA][fC][mC][mA][mU][mU] 344 [vinmU*][fG*][mG][mU][mC][mA][mC][mG][mA][mG][mU][mC][mU][fU][mG][mU][mA][mG][mU][*mU][*mU]
Q6 325 [fG*][mU*][fG][mU][fG][mU][fU][mA][fC][mG][fU][mG][fC][mA][fG][mU][fG][mA][fA][mU][mU] 345 [vinmU*][fU*][mC][fA][mC][fU][mG][fC][mA][fC][mG][fU][mA][fA][mC][fA][mC][fA][mC][*mU][*mG]
R6 326 [fG*][mC*][fG][mA][fA][mU][fU][mC][fC][mU][fA][mG][fA][mC][fA][mC][fC][mU][fA][mU][mU] 346 [vinmU*][fA*][mG][fG][mU][fG][mU][fC][mU][fC][mG][fG][mA][fA][mU][fU][mC][fG][mC][*mU][*mU]
S6 327 [fG*][mU*][fG][mU][fG][mU][fU][mA][fC][mG][fU][mG][fC][mA][fG][mU][fG][mA][fC][mU][mA] 347 [vinmU*][fA*][mG][fU][mC][fA][mC][fU][mG][fC][mA][fC][mG][fU][mA][fA][mC][fA][mC][fA][mC][*fU][*mG]
T6 328 [mU*][mC*][fC][mU][mU][mG][fC][fG][fG][mU][mG][fA][mA][mA][mG][mC][fG][mA][mA] 348 [vinmU*][fU*][mC][mG][mC][mU][mU][mU][mC][mA][mC][mC][mG][fC][mA][mA][mG][mG][mA][*mU][*mU]
U6 329 [mG*][mU*][fA][mA][mU][mA][fU][fC][fC][mA][mC][fC][mA][mG][mA][mC][fC][mU][mA] 349 [vinmU*][fA*][mG][mG][mU][mC][mU][mG][mG][mU][mG][mG][mA][fU][mA][mU][mU][mA][mC][*mU][*mU]
V6 330 [mU*][mU*][fG][mU][mU][mU][fG][fU][fG][mA][mU][fA][mG][mU][mG][mA][fA][mC][mA] 350 [vinmU*][fG*][mU][mU][mC][mA][mC][mU][mA][mU][mC][mA][mC][fA][mA][mA][mC][mA][mA][*mU][*mU]
W6 331 [mG*][mC*][fU][mG][mC][mU][fU][fA][fA][mC][mU][fG][mU][mC][mC][mA][fU][mC][mA] 351 [vinmU*][fG*][mA][mU][mG][mG][mA][mC][mA][mG][mU][mU][mA][fA][mG][mC][mA][mG][mC][*mU][*mU]
B7 1850 [mA*][mG*][fC][mA][mG][mG][fA][fG][fA][mC][mU][fG][mG][mC][mU][mA][fA][mA][mA] 1960 [vinmU*][fU*][mU][mU][mA][mG][mC][mC][mA][mG][mU][mC][mU][fC][mC][mU][mG][mC][mU][*mU][*mU]
C7 1851 [mC*][mA*][fG][mG][mA][mG][fA][fC][fU][mG][mG][fC][mU][mA][mA][mA][fU][mA][mA] 1961 [vinmU*][fU*][mA][mU][mU][mU][mA][mG][mC][mC][mA][mG][mU][fC][mU][mC][mC][mU][mG][*mU][*mU]
P8 1890 [mA*][mG*][fA][mA][mA][mC][fA][fG][fU][mU][mC][fA][mC][mC][mU][mU][fG][mA][mA] 2000 [vin][mU][*fU][*mC][mA][mA][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mC][mU][fG][mU][mU][mU][mC][mU][*mU][*mU]
Q8 1891 [mG*][mA*][fA][mA][mC][mA][fG][fU][fU][mC][mA][fC][mC][mU][mU][mG][fA][mA][mA] 2001 [vin][mU][*fU][*mU][mC][mA][mA][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mC][fU][mG][mU][mU][mU][mC][*mU][*mU]
R8 1892 [mA*][mA*][fC][mC][mU][mC][fU][fC][fA][mC][mU][fU][mC][mA][mC][mC][fC][mU][mA] 2002 [vin][mU][*fA][*mG][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mG][mU][mG][mA][fG][mA][mG][mG][mU][mU][*mU][*mU]
S8 1893 [mA*][mC*][fC][mU][mC][mU][fC][fA][fC][mU][mU][fC][mA][mC][mC][mC][fU][mG][mA] 2003 [vin][mU][*fC][*mA][mG][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mG][mU][mG][fA][mG][mA][mG][mG][mU][*mU][*mU]
T8 1894 [mC*][mC*][fU][mC][mU][mC][fA][fC][fU][mU][mC][fA][mC][mC][mC][mU][fG][mG][mA] 2004 [vin][mU][*fC][*mC][mA][mG][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mG][mU][fG][mA][mG][mA][mG][mG][*mU][*mU]
U8 1895 [mC*][mU*][fC][mU][mC][mA][fC][fU][fU][mC][mA][fC][mC][mC][mU][mG][fG][mA][mA] 2005 [vin][mU][*fU][*mC][mC][mA][mG][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mG][fU][mG][mA][mG][mA][mG][*mU][*mU]
V8 1896 [mU*][mC*][fU][mC][mA][mC][fU][fU][fC][mA][mC][fC][mC][mU][mG][mG][fA][mG][mA] 2006 [vin][mU][*fC][*mU][mC][mC][mA][mG][mG][mG][mU][mG][mA][mA][fG][mU][mG][mA][mG][mA][*mU][*mU]
W8 1897 [mC*][mU*][fC][mA][mC][mU][fU][fC][fA][mC][mC][fC][mU][mG][mG][mA][fG][mC][mA] 2007 [vin][mU][*fG][*mC][mU][mC][mC][mA][mG][mG][mG][mU][mG][mA][fA][mG][mU][mG][mA][mG][*mU][*mU]
X8 1898 [mU*][mC*][fA][mC][mU][mU][fC][fA][fC][mC][mC][fU][mG][mG][mA][mG][fC][mC][mA] 2008 [vinmU*][fG*][mG][mC][mU][mC][mC][mA][mG][mG][mG][mU][mG][fA][mA][mG][mU][mG][mA][*mU][*mU]
Y8 1899 [mC*][mA*][fC][mU][mU][mC][fA][fC][fC][mC][mU][fG][mG][mA][mG][mC][fC][mC][mA] 2009 [vinmU*][fG*][mG][mG][mC][mU][mC][mC][mA][mG][mG][mG][mU][fG][mA][mA][mG][mU][mG][*mU][*mU]
Z8 1900 [mA*][mC*][fU][mU][mC][mA][fC][fC][fC][mU][mG][fG][mA][mG][mC][mC][fC][mA][mA] 2010 [vinmU*][fU*][mG][mG][mG][mC][mU][mC][mC][mA][mG][mG][mG][fU][mG][mA][mA][mG][mU][*mU][*mU]
A9 1901 [mC*][mU*][fU][mC][mA][mC][fC][fC][fU][mG][mG][fA][mG][mC][mC][mC][fA][mU][mA] 2011 [vinmU*][fA*][mU][mG][mG][mG][mC][mU][mC][mC][mA][mG][mG][fG][mU][mG][mA][mA][mG][*mU][*mU]
B9 1902 [mU*][mU*][fC][mA][mC][mC][fC][fU][fG][mG][mA][fG][mC][mC][mC][mA][fU][mC][mA] 2012 [vinmU*][fG*][mA][mU][mG][mG][mG][mC][mU][mC][mC][mA][mG][fG][mG][mU][mG][mA][mA][*mU][*mU]
C9 1903 [mU*][mC*][fA][mC][mC][mC][fU][fG][fG][mA][mG][fC][mC][mC][mA][mU][fC][mC][mA] 2013 [vinmU*][fG*][mG][mA][mU][mG][mG][mG][mC][mU][mC][mC][mA][fG][mG][mG][mU][mG][mA][*mU][*mU]
D9 1904 [mC*][mA*][fC][mC][mC][mU][fG][fG][fA][mG][mC][fC][mC][mA][mU][mC][fC][mA][mA] 2014 [vinmU*][fU*][mG][mG][mA][mU][mG][mG][mG][mC][mU][mC][mC][fA][mG][mG][mG][mU][mG][*mU][*mU]
E9 1905 [mA*][mC*][fC][mC][mU][mG][fG][fA][fG][mC][mC][fC][mA][mU][mC][mC][fA][mG][mA] 2015 [vinmU*][fC*][mU][mG][mG][mA][mU][mG][mG][mG][mC][mU][mC][fC][mA][mG][mG][mG][mU][*mU][*mU]
F9 1906 [mC*][mC*][fC][mU][mG][mG][fA][fG][fC][mC][mC][fA][mU][mC][mC][mA][fG][mU][mA] 2016 [vinmU*][fA*][mC][mU][mG][mG][mA][mU][mG][mG][mG][mC][mU][fC][mC][mA][mG][mG][mG][*mU][*mU]
G9 1907 [mC*][mC*][fU][mG][mG][mA][fG][fC][fC][mC][mA][fU][mC][mC][mA][mG][fU][mC][mA] 2017 [vinmU*][fG*][mA][mC][mU][mG][mG][mA][mU][mG][mG][mG][mC][fU][mC][mC][mA][mG][mG][*mU][*mU]
H9 1908 [mC*][mU*][fG][mG][mA][mG][fC][fC][fC][mA][mU][fC][mC][mA][mG][mU][fC][mU][mA] 2018 [vinmU*][fA*][mG][mA][mC][mU][mG][mG][mA][mU][mG][mG][mG][fC][mU][mC][mC][mA][mG][*mU][*mU]
I9 1909 [mC*][mU*][fG][mC][mU][mU][fA][fA][fC][mU][mG][fU][mC][mC][mA][mU][fC][mA][mA] 2019 [vinmU*][fU*][mG][mA][mU][mG][mG][mA][mC][mA][mG][mU][mU][fA][mA][mG][mC][mA][mG][*mU][*mU]
J9 1910 [mU*][mG*][fC][mU][mU][mA][fA][fC][fU][mG][mU][fC][mC][mA][mU][mC][fA][mG][mA] 2020 [vinmU*][fC*][mU][mG][mA][mU][mG][mG][mA][mC][mA][mG][mU][fU][mA][mA][mG][mC][mA][*mU][*mU]
K9 1911 [mG*][mC*][fU][mU][mA][mA][fC][fU][fG][mU][mC][fC][mA][mU][mC][mA][fG][mC][mA] 2021 [vinmU*][fG*][mC][mU][mG][mA][mU][mG][mG][mA][mC][mA][mG][fU][mU][mA][mA][mG][mC][*mU][*mU]
L9 1912 [mC*][mU*][fU][mA][mA][mC][fU][fG][fU][mC][mC][fA][mU][mC][mA][mG][fC][mA][mA] 2022 [vinmU*][fU][mG][mC][mU][mG][mA][mU][mG][mG][mA][mC][mA][fG][mU][mU][mA][mA][mG][*mU][*mU]
M9 1913 [mU*][mU*][fA][mA][mC][mU][fG][fU][fC][mC][mA][fU][mC][mA][mG][mC][fA][mG][mA] 2023 [vinmU*][fC*][mU][mG][mC][mU][mG][mA][mU][mG][mG][mA][mC][fA][mG][mU][mU][mA][mA][*mU][*mU]
N9 1914 [mA*][mA*][fC][mU][mG][mU][fC][fC][fA][mU][mC][fA][mG][mC][mA][mG][fG][mA][mA] 2024 [vinmU*][fU*][mC][mC][mU][mG][mC][mU][mG][mA][mU][mG][mG][fA][mC][mA][mG][mU][mU][*mU][*mU]
O9 1915 [mA*][mC*][fU][mG][mU][mC][fC][fA][fU][mC][mA][fG][mC][mA][mG][mG][fA][mG][mA] 2025 [vinmU*][fC*][mU][mC][mC][mU][mG][mC][mU][mG][mA][mU][mG][fG][mA][mC][mA][mG][mU][*mU][*mU]
P9 1916 [mC*][mU*][fG][mU][mC][mC][fA][fU][fC][mA][mG][fC][mA][mG][mG][mA][fG][mA][mA] 2026 [vinmU*][fU*][mC][mU][mC][mC][mU][mG][mC][mU][mG][mA][mU][fG][mG][mA][mC][mA][mG][*mU][*mU]
Q9 1917 [mG*][mU*][fC][mC][mA][mU][fC][fA][fG][mC][mA][fG][mG][mA][mG][mA][fC][mU][mA] 2027 [vinmU*][fA][mG][mU][mC][mU][mC][mC][mU][mG][mC][mU][mG][fA][mU][mG][mG][mA][mC][*mU][*mU]
R9 1918 [mU*][mC*][fC][mA][mU][mC][fA][fG][fC][mA][mG][fG][mA][mG][mA][mC][fU][mG][mA] 2028 [vinmU*][fC*][mA][mG][mU][mC][mU][mC][mC][mU][mG][mC][mU][fG][mA][mU][mG][mG][mA][*mU][*mU]
S9 1919 [mA*][mU*][fC][mA][mG][mC][fA][fG][fG][mA][mG][fA][mC][mU][mG][mG][fC][mU][mA] 2029 [vinmU*][fA*][mG][mC][mC][mA][mG][mU][mC][mU][mC][mC][mU][fG][mC][mU][mG][mA][mU][*mU][*mU]
T9 1920 [mU*][mC*][fA][mG][mC][mA][fG][fG][fA][mG][mA][fC][mU][mG][mG][mC][fU][mA][mA] 2030 [vinmU*][fU*][mA][mG][mC][mC][mA][mG][mU][mC][mU][mC][mC][fU][mG][mC][mU][mG][mA][*mU][*mU]
U9 1921 [mG*][mG*][fA][mG][mA][mC][fU][fG][fG][mC][mU][fA][mA][mA][mU][mA][fA][mA][mA] 2031 [vinmU*][fU*][mU][mU][mA][mU][mU][mU][mA][mG][mC][mC][mA][fG][mU][mC][mU][mC][mC][*mU][*mU]
V9 1922 [mG*][mA*][fC][mU][mG][mG][fC][fU][fA][mA][mA][fU][mA][mA][mA][mA][fU][mU][mA] 2032 [vinmU*][fA*][mA][mU][mU][mU][mU][mA][mU][mU][mU][mA][mG][fC][mC][mA][mG][mU][mC][*mU][*mU]
W9 1923 [mC*][mU*][fG][mG][mC][mU][fA][fA][fA][mU][mA][fA][mA][mA][mU][mU][fA][mG][mA] 2033 [vinmU*][fC*][mU][mA][mA][mU][mU][mU][mU][mA][mU][mU][mU][fA][mG][mC][mC][mA][mG][*mU][*mU]
X9 1924 [mU*][mG*][fG][mC][mU][mA][fA][fA][fU][mA][mA][fA][mA][mU][mU][mA][fG][mA][mA] 2034 [vinmU*][fU*][mC][mU][mA][mA][mU][mU][mU][mU][mA][mU][mU][fU][mA][mG][mC][mC][mA][*mU][*mU]
Y9 1925 [mG*][mG*][fC][mU][mA][mA][fA][fU][fA][mA][mA][fA][mU][mU][mA][mG][fA][mA][mA] 2035 [vinmU*][fU*][mU][mC][mU][mA][mA][mU][mU][mU][mU][mA][mU][fU][mU][mA][mG][mC][mC][*mU][*mU]
Z9 1926 [mG*][mC*][fU][mA][mA][mA][fU][fA][fA][mA][mA][fU][mU][mA][mG][mA][fA][mU][mA] 2036 [vinmU*][fA*][mU][mU][mC][mU][mA][mA][mU][mU][mU][mU][mA][fU][mU][mU][mA][mG][mC][*mU][*mU]
A10 1927 [mA*][mA*][fA][mU][mA][mA][fA][fA][fU][mU][mA][fG][mA][mA][mU][mA][fU][mA][mA] 2037 [vinmU*][fU*][mA][mU][mA][mU][mU][mC][mU][mA][mA][mU][mU][fU][mU][mA][mU][mU][mU][*mU][*mU]
B10 1928 [mA*][mU*][fA][mA][mA][mA][fU][fU][fA][mG][mA][fA][mU][mA][mU][mA][fU][mU][mA] 2038 [vinmU*][fA*][mA][mU][mA][mU][mA][mU][mU][mC][mU][mA][mA][fU][mU][mU][mU][mA][mU][*mU][*mU]
F10 1932 [mG*][mA*][fG][mU][mC][mG][fC][fA][fU][mC][mU][fC][mA][mG][mU][mG][fC][mA][mA] 2042 [vinmU*][fU*][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][mA][mU][mG][fC][mG][mA][mC][mU][mC][*mU][*mU]
G10 1933 [mG*][mU*][fC][mG][mC][mA][fU][fC][fU][mC][mA][fG][mU][mG][mC][mA][fG][mG][mA] 2043 [vinmU*][fC*][mC][mU][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][mA][fU][mG][mC][mG][mA][mC][*mU][*mU]
H10 1934 [mA*][mG*][fA][mA][mC][mC][fU][fC][fU][mC][mA][fC][mU][mU][mC][mA][fC][mC][mA] 2044 [vinmU*][fG*][mG][mU][mG][mA][mA][mG][mU][mG][mA][mG][mA][fG][mG][mU][mU][mC][mU][*mU][*mU]
I10 1935 [mG*][mC*][fA][mG][mG][mA][fG][fA][fC][mU][mG][fG][mC][mU][mA][mA][fA][mU][mA] 2045 [vinmU*][fA*][mU][mU][mU][mA][mG][mC][mC][mA][mG][mU][mC][fU][mC][mC][mU][mG][mC][*mU][*mU]
J10 1936 [mA*][mA*][fC][mA][mG][mU][fA][fC][fC][mU][mA][fA][mU][mA][mA][mA][fC][mA][mA] 2046 [vinmU*][fU*][mG][mU][mU][mU][mA][mU][mU][mA][mG][mG][mU][fA][mC][mU][mG][mU][mU][*mU][*mU]
K10 1937 [fG*][mU*][fC][mG][fC][mA][fU][mC][fU][mC][fA][mG][fU][mG][fC][mA][fG][mG][fA] 2047 [vinmU*][fC*][mC][fU][mG][fC][mA][fC][mU][fG][mA][fG][mA][fU][mG][fC][mG][fA][mC][*mU][*mU]
L10 1938 [fG*][mU*][fC][mG][fC][mA][fU][fC][fU][mC][fA][mG][mU][mG][fC][mA][fG][mG][mA] 2048 [vinmU*][fC*][mC][fU][mG][fC][fA][fC][mU][fG][mA][mG][mA][fU][mG][fC][mG][fA][mC][*fU][*mU]
M10 1939 [mG][mA][fA][mC][mC][mU][fC][fU][fC][mA][mC][fU][mU][mC][mA][mC][fC][*mC][*mA] 2049 [vinmU*][fG*][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mG][mU][mG][mA][mG][fA][mG][mG][mU][mU][mC][*mU][*mU]
N10 1940 [mG][mC][fA][mG][mG][mA][fG][fA][fC][mU][mG][fG][mC][mU][mA][mA][fA][*mU][*mA] 2050 [vinmU*][fA*][mU][mU][mU][mA][mG][mC][mC][mA][mG][mU][mC][fU][mC][mC][mU][mG][mC][*mU][*mU]
O10 1941 [mA][mG][fA][mA][mA][mC][fA][fG][fU][mU][mC][fA][mC][mC][mU][mU][fG][*mA][*mA] 2051 [vinmU*][fU*][mC][mA][mA][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mC][mU][fG][mU][mU][mU][mC][mU][*mU][*mU]
P10 1942 [mG][mA][fA][mA][mC][mA][fG][fU][fU][mC][mA][fC][mC][mU][mU][mG][fA][*mA][*mA] 2052 [vinmU*][fU*][mU][mC][mA][mA][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mC][fU][mG][mU][mU][mU][mC][*mU][*mU]
Q10 1943 [mG][mA][fA][mA][mC][mA][fG][fU][fU][mC][mA][fC][mC][mU][mU][mG][fA][*mA][*mA] 2053 [vinmU*][fU*][mU][mC][mA][mA][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mC][fU][mG][mU][mU][mU][mC][*mU][*mU]
R10 1944 [mA][mC][fC][mU][mC][mU][fC][fA][fC][mU][mU][fC][mA][mC][mC][mC][fU][*mG][*mA] 2054 [vinmU*][fC*][mA][mG][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mG][mU][mG][fA][mG][mA][mG][mG][mU][*mU][*mU]
S10 1945 [mA][mC][fU][mU][mC][mA][fC][fC][fC][mU][mG][fG][mA][mG][mC][mC][fC][*mA][*mA] 2055 [vinmU*][fU*][mG][mG][mG][mC][mU][mC][mC][mA][mG][mG][mG][fU][mG][mA][mA][mG][mU][*mU][*mU]
T10 1946 [mG*][mA*][fA][mA][mC][mA][fG][fU][fU][mC][mA][fC][mC][mU][mU][mG][fA][mA][mA] 2056 [vinmU*][fU*][mU][mC][mA][mA][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mC][fU][mG][mU][mU][mU][mC][*mU][*mU]
U10 1947 [mG][mU][fC][mG][mC][mA][fU][fC][fU][mC][mA][fG][mU][mG][mC][mA][fG][*mG][*mA] 2057 [vinmU*][fC*][mC][mU][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][mA][fU][mG][mC][mG][mA][mC][*mU][*mU]
V10 1948 [mG][mU][fC][mG][mC][mA][fU][fC][fU][mC][mA][fG][mU][mG][mC][mA][fG][*mG][*mA] 2058 [vinmU*][fC*][mC][mU][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][mA][fU][mG][mC][mG][mA][mC][*mU][*mU]
W10 1949 [mG][mU][fC][mG][mC][mA][fU][fC][fU][mC][mA][fG][mU][mG][mC][mA][fG][*mG][*mA] 2059 [vinmU*][fC*][mC][mU][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][mA][fU][mG][mC][mG][mA][mC][*mU][*mU]
X10 1950 [mG][mU][fC][mG][mC][mA][fU][fC][fU][mC][mA][fG][mU][mG][mC][mA][fG][*mG][*mA] 2060 [vinmU*][fC*][mC][mU][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][mA][fU][mG][mC][mG][mA][mC][*mU][*mU]
Y10 1951 [mG][mU][fC][mG][mC][mA][fU][fC][fU][mC][mA][fG][mU][mG][mC][mA][fG][*mG][*mA] 2061 [vinmU*][fC*][mC][mU][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][mA][fU][mG][mC][mG][mA][mC][*mU][*mU]
Z10 1952 [mG][mU][fC][mG][mC][mA][fU][fC][fU][mC][mA][fG][mU][mG][mC][mA][fG][*mG][*mA] 2062 [vinmU*][fC*][mC][mU][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][mA][fU][mG][mC][mG][mA][mC][*mU][*mU]
A11 1953 [*][Mg][Mu][Fc][Mg][Mc][Ma][Fu][Fc][Fu][Mc][Ma][Fg][Mu][Mg][Mc][Ma][Fg][*mG][*mA] 2063 [vinmU*][fC*][mC][mU][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][mA][fU][mG][mC][mG][mA][mC][*mU][*mU]
B11 1954 [mG][mA][fA][mA][mC][mA][fG][fU][fU][mC][mA][fC][mC][mU][mU][mG][fA][*mA][*mA] 2064 [vinmU*][fU*][mU][mC][mA][mA][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mC][fU][mG][mU][mU][mU][mC][*mU][*mU]
C11 1955 [mG][mA][fA][mA][mC][mA][fG][fU][fU][mC][mA][fC][mC][mU][mU][mG][fA][*mA][*mA] 2065 [vinmU*][fU*][mU][mC][mA][mA][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mC][fU][mG][mU][mU][mU][mC][*mU][*mU]
D11 1956 [mG][mA][fA][mA][mC][mA][fG][fU][fU][mC][mA][fC][mC][mU][mU][mG][fA][*mA][*mA] 2066 [vinmU*][fU*][mU][mC][mA][mA][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mC][fU][mG][mU][mU][mU][mC][*mU][*mU]
E11 1957 [mG][mA][fA][mA][mC][mA][fG][fU][fU][mC][mA][fC][mC][mU][mU][mG][fA][*mA][*mA] 2067 [vinmU*][fU*][mU][mC][mA][mA][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mC][fU][mG][mU][mU][mU][mC][*mU][*mU]
F11 1958 [mG][mA][fA][mA][mC][mA][fG][fU][fU][mC][mA][fC][mC][mU][mU][mG][fA][*mA][*mA] 2068 [vinmU*][fU*][mU][mC][mA][mA][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mC][fU][mG][mU][mU][mU][mC][*mU][*mU]
G11 1959 [$][mG][mU][fC][mG][mC][mA][fU][fC][fU][mC][mA][fG][mU][mG][mC][mA][fG][*mG][*mA] 2069 [vinmU*][fC*][mC][mU][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][mA][fU][mG][mC][mG][mA][mC][*mU][*mU]
H11 1890 [mA*][mG*][fA][mA][mA][mC][fA][fG][fU][mU][mC][fA][mC][mC][mU][mU][fG][mA][mA] 2290 [vinmU*][fU*][mC][mA][mA][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mC][mU][fG][mU][mU][mU][mC][mU][*mU][*mU]
I11 1891 [mG*][mA*][fA][mA][mC][mA][fG][fU][fU][mC][mA][fC][mC][mU][mU][mG][fA][mA][mA] 2291 [vinmU*][fU*][mU][mC][mA][mA][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mC][fU][mG][mU][mU][mU][mC][*mU][*mU]
J11 1892 [mA*][mA*][fC][mC][mU][mC][fU][fC][fA][mC][mU][fU][mC][mA][mC][mC][fC][mU][mA] 2292 [vinmU*][fA*][mG][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mG][mU][mG][mA][fG][mA][mG][mG][mU][mU][*mU][*mU]
K11 1893 [mA*][mC*][fC][mU][mC][mU][fC][fA][fC][mU][mU][fC][mA][mC][mC][mC][fU][mG][mA] 2293 [vinmU*][fC*][mA][mG][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mG][mU][mG][fA][mG][mA][mG][mG][mU][*mU][*mU]
L11 1894 [mC*][mC*][fU][mC][mU][mC][fA][fC][fU][mU][mC][fA][mC][mC][mC][mU][fG][mG][mA] 2294 [vinmU*][fC*][mC][mA][mG][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mG][mU][fG][mA][mG][mA][mG][mG][*mU][*mU]
M11 1895 [mC*][mU*][fC][mU][mC][mA][fC][fU][fU][mC][mA][fC][mC][mC][mU][mG][fG][mA][mA] 2295 [vinmU*][fU*][mC][mC][mA][mG][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mG][fU][mG][mA][mG][mA][mG][*mU][*mU]
N11 1896 [mU*][mC*][fU][mC][mA][mC][fU][fU][fC][mA][mC][fC][mC][mU][mG][mG][fA][mG][mA] 2296 [vinmU*][fC*][mU][mC][mC][mA][mG][mG][mG][mU][mG][mA][mA][fG][mU][mG][mA][mG][mA][*mU][*mU]
O11 1897 [mC*][mU*][fC][mA][mC][mU][fU][fC][fA][mC][mC][fC][mU][mG][mG][mA][fG][mC][mA] 2297 [vinmU*][fG*][mC][mU][mC][mC][mA][mG][mG][mG][mU][mG][mA][fA][mG][mU][mG][mA][mG][*mU][*mU]
P11 2298 [mA*][mG*][fG][mA][mG][mA][fC][fU][fG][mG][mC][fU][mA][mA][mA][mU][fA][mA][mA] 2299 [vinmU*][fU*][mU][mA][mU][mU][mU][mA][mG][mC][mC][mA][mG][fU][mC][mU][mC][mC][mU][*mU][*mU]
Q11 2302 [fG*][mU*][fC][mG][fC][mA][fU][fC][fU][mC][fA][mG][mU][mG][fC][mA][fG][mG][mA] 2303 [vinmU*][fC*][mC][fU][mG][fC][fA][fC][mU][fG][mA][mG][mA][fU][mG][fC][mG][fA][mC][*fU][*mU]
R11 2304 [fG*][mU*][fC][mG][fC][mA][fU][mC][fU][mC][fA][mG][fU][mG][fC][mA][fG][mG][fA] 2305 [vinmU*][fC*][mC][fU][mG][fC][mA][fC][mU][fG][mA][fG][mA][fU][mG][fC][mG][fA][mC][*mU][*mU]
縮寫 鍵 ：n/N= 任何核苷酸 mN= 2'-O-甲基取代 fN= 2'-F取代 idT = 反向Dt vinmN或vinmU = 2'-O甲基乙烯基膦酸酯尿苷 * = 硫代磷酸酯 Nr = 具有2'-OH核糖之核苷酸A、C、G、U [PO] = 磷酸基團(PO 4) [$] = PO 4-C 6-NH 2-棕櫚酸酯 括號指示個別鹼基。
表4B：siRNA有義序列及反義序列(未經修飾)
SEQ ID NO: 有義股 5' -3' SEQ ID NO: 反義股 5' -3'
939 GAGUCGCAUCUCAGUGCAA 959 UUGCACUGAGAUGCGACUCUU
940 GUCGCAUCUCAGUGCAGGA 960 UCCUGCACUGAGAUGCGACUU
941 AGAACCUCUCACUUCACCA 961 UGGUGAAGUGAGAGGUUCUUU
942 GAACCUCUCACUUCACCCA 962 UGGGUGAAGUGAGAGGUUCUU
943 AGUCUCCCAACUUGUAUUA 963 UAAUACAAGUUGGGAGACUUU
944 GGAAGCUGCUUAACUGUCA 964 UGACAGUUAAGCAGCUUCCUU
945 GCAGGAGACUGGCUAAAUA 965 UAUUUAGCCAGUCUCCUGCUU
946 UUAUCCUUUGGUUUCUUGA 966 UCAAGAAACCAAAGGAUAAUU
947 GUGUGUUACGUGCAGUGAAUU 967 UUCACUGCACGUAACACACUG
948 UGUUCCACUGGGCUGAGAA 968 UUCUCAGCCCAGUGGAACAUU
949 GCGAAUUCCUAGACACCUAUU 969 UAGGUGUCUCGGAAUUCGCUU
950 GUGUGUUACGUGCAGUGACUA 970 UAGUCACUGCACGUAACACACUG
951 ACUACAAGACUCGUGACCAUU 971 UGGUCACGAGUCUUGUAGUUU
952 GUGUGUUACGUGCAGUGAAUU 972 UUCACUGCACGUAACACACUG
953 GCGAAUUCCUAGACACCUAUU 973 UAGGUGUCUCGGAAUUCGCUU
954 GUGUGUUACGUGCAGUGACUA 974 UAGUCACUGCACGUAACACACUG
955 UCCUUGCGGUGAAAGCGAA 975 UUCGCUUUCACCGCAAGGAUU
956 GUAAUAUCCACCAGACCUA 976 UAGGUCUGGUGGAUAUUACUU
957 UUGUUUGUGAUAGUGAACA 977 UGUUCACUAUCACAAACAAUU
958 GCUGCUUAACUGUCCAUCA 978 UGAUGGACAGUUAAGCAGCUU
2070 AGCAGGAGACUGGCUAAAA 2180 UUUUAGCCAGUCUCCUGCUUU
2071 CAGGAGACUGGCUAAAUAA 2181 UUAUUUAGCCAGUCUCCUGUU
2110 AGAAACAGUUCACCUUGAA 2220 UUCAAGGUGAACUGUUUCUUU
2111 GAAACAGUUCACCUUGAAA 2221 UUUCAAGGUGAACUGUUUCUU
2112 AACCUCUCACUUCACCCUA 2222 UAGGGUGAAGUGAGAGGUUUU
2113 ACCUCUCACUUCACCCUGA 2223 UCAGGGUGAAGUGAGAGGUUU
2114 CCUCUCACUUCACCCUGGA 2224 UCCAGGGUGAAGUGAGAGGUU
2115 CUCUCACUUCACCCUGGAA 2225 UUCCAGGGUGAAGUGAGAGUU
2116 UCUCACUUCACCCUGGAGA 2226 UCUCCAGGGUGAAGUGAGAUU
2117 CUCACUUCACCCUGGAGCA 2227 UGCUCCAGGGUGAAGUGAGUU
2118 UCACUUCACCCUGGAGCCA 2228 UGGCUCCAGGGUGAAGUGAUU
2119 CACUUCACCCUGGAGCCCA 2229 UGGGCUCCAGGGUGAAGUGUU
2120 ACUUCACCCUGGAGCCCAA 2230 UUGGGCUCCAGGGUGAAGUUU
2121 CUUCACCCUGGAGCCCAUA 2231 UAUGGGCUCCAGGGUGAAGUU
2122 UUCACCCUGGAGCCCAUCA 2232 UGAUGGGCUCCAGGGUGAAUU
2123 UCACCCUGGAGCCCAUCCA 2233 UGGAUGGGCUCCAGGGUGAUU
2124 CACCCUGGAGCCCAUCCAA 2234 UUGGAUGGGCUCCAGGGUGUU
2125 ACCCUGGAGCCCAUCCAGA 2235 UCUGGAUGGGCUCCAGGGUUU
2126 CCCUGGAGCCCAUCCAGUA 2236 UACUGGAUGGGCUCCAGGGUU
2127 CCUGGAGCCCAUCCAGUCA 2237 UGACUGGAUGGGCUCCAGGUU
2128 CUGGAGCCCAUCCAGUCUA 2238 UAGACUGGAUGGGCUCCAGUU
2129 CUGCUUAACUGUCCAUCAA 2239 UUGAUGGACAGUUAAGCAGUU
2130 UGCUUAACUGUCCAUCAGA 2240 UCUGAUGGACAGUUAAGCAUU
2131 GCUUAACUGUCCAUCAGCA 2241 UGCUGAUGGACAGUUAAGCUU
2132 CUUAACUGUCCAUCAGCAA 2242 UUGCUGAUGGACAGUUAAGUU
2133 UUAACUGUCCAUCAGCAGA 2243 UCUGCUGAUGGACAGUUAAUU
2134 AACUGUCCAUCAGCAGGAA 2244 UUCCUGCUGAUGGACAGUUUU
2135 ACUGUCCAUCAGCAGGAGA 2245 UCUCCUGCUGAUGGACAGUUU
2136 CUGUCCAUCAGCAGGAGAA 2246 UUCUCCUGCUGAUGGACAGUU
2137 GUCCAUCAGCAGGAGACUA 2247 UAGUCUCCUGCUGAUGGACUU
2138 UCCAUCAGCAGGAGACUGA 2248 UCAGUCUCCUGCUGAUGGAUU
2139 AUCAGCAGGAGACUGGCUA 2249 UAGCCAGUCUCCUGCUGAUUU
2140 UCAGCAGGAGACUGGCUAA 2250 UUAGCCAGUCUCCUGCUGAUU
2141 GGAGACUGGCUAAAUAAAA 2251 UUUUAUUUAGCCAGUCUCCUU
2142 GACUGGCUAAAUAAAAUUA 2252 UAAUUUUAUUUAGCCAGUCUU
2143 CUGGCUAAAUAAAAUUAGA 2253 UCUAAUUUUAUUUAGCCAGUU
2144 UGGCUAAAUAAAAUUAGAA 2254 UUCUAAUUUUAUUUAGCCAUU
2145 GGCUAAAUAAAAUUAGAAA 2255 UUUCUAAUUUUAUUUAGCCUU
2146 GCUAAAUAAAAUUAGAAUA 2256 UAUUCUAAUUUUAUUUAGCUU
2147 AAAUAAAAUUAGAAUAUAA 2257 UUAUAUUCUAAUUUUAUUUUU
2148 AUAAAAUUAGAAUAUAUUA 2258 UAAUAUAUUCUAAUUUUAUUU
2152 GAGUCGCAUCUCAGUGCAA 2262 UUGCACUGAGAUGCGACUCUU
2153 GUCGCAUCUCAGUGCAGGA 2263 UCCUGCACUGAGAUGCGACUU
2154 AGAACCUCUCACUUCACCA 2264 UGGUGAAGUGAGAGGUUCUUU
2155 GCAGGAGACUGGCUAAAUA 2265 UAUUUAGCCAGUCUCCUGCUU
2156 AACAGUACCUAAUAAACAA 2266 UUGUUUAUUAGGUACUGUUUU
2157 GUCGCAUCUCAGUGCAGGA 2267 UCCUGCACUGAGAUGCGACUU
2158 GUCGCAUCUCAGUGCAGGA 2268 UCCUGCACUGAGAUGCGACUU
2159 GAACCUCUCACUUCACCCA 2269 UGGGUGAAGUGAGAGGUUCUU
2160 GCAGGAGACUGGCUAAAUA 2270 UAUUUAGCCAGUCUCCUGCUU
2161 AGAAACAGUUCACCUUGAA 2271 UUCAAGGUGAACUGUUUCUUU
2162 GAAACAGUUCACCUUGAAA 2272 UUUCAAGGUGAACUGUUUCUU
2163 GAAACAGUUCACCUUGAAA 2273 UUUCAAGGUGAACUGUUUCUU
2164 ACCUCUCACUUCACCCUGA 2274 UCAGGGUGAAGUGAGAGGUUU
2165 ACUUCACCCUGGAGCCCAA 2275 UUGGGCUCCAGGGUGAAGUUU
2166 GAAACAGUUCACCUUGAAA 2276 UUUCAAGGUGAACUGUUUCUU
2167 GUCGCAUCUCAGUGCAGGA 2277 UCCUGCACUGAGAUGCGACUU
2168 GUCGCAUCUCAGUGCAGGA 2278 UCCUGCACUGAGAUGCGACUU
2169 GUCGCAUCUCAGUGCAGGA 2279 UCCUGCACUGAGAUGCGACUU
2170 GUCGCAUCUCAGUGCAGGA 2280 UCCUGCACUGAGAUGCGACUU
2171 GUCGCAUCUCAGUGCAGGA 2281 UCCUGCACUGAGAUGCGACUU
2172 GUCGCAUCUCAGUGCAGGA 2282 UCCUGCACUGAGAUGCGACUU
2173 GUCGCAUCUCAGUGCAGGA 2283 UCCUGCACUGAGAUGCGACUU
2174 GAAACAGUUCACCUUGAAA 2284 UUUCAAGGUGAACUGUUUCUU
2175 GAAACAGUUCACCUUGAAA 2285 UUUCAAGGUGAACUGUUUCUU
2176 GAAACAGUUCACCUUGAAA 2286 UUUCAAGGUGAACUGUUUCUU
2177 GAAACAGUUCACCUUGAAA 2287 UUUCAAGGUGAACUGUUUCUU
2178 GAAACAGUUCACCUUGAAA 2288 UUUCAAGGUGAACUGUUUCUU
2179 GUCGCAUCUCAGUGCAGGA 2289 UCCUGCACUGAGAUGCGACUU
2110 AGAAACAGUUCACCUUGAA 2220 UUCAAGGUGAACUGUUUCUUU
2111 GAAACAGUUCACCUUGAAA 2221 UUUCAAGGUGAACUGUUUCUU
2112 AACCUCUCACUUCACCCUA 2222 UAGGGUGAAGUGAGAGGUUUU
2113 ACCUCUCACUUCACCCUGA 2223 UCAGGGUGAAGUGAGAGGUUU
2114 CCUCUCACUUCACCCUGGA 2224 UCCAGGGUGAAGUGAGAGGUU
2115 CUCUCACUUCACCCUGGAA 2225 UUCCAGGGUGAAGUGAGAGUU
2116 UCUCACUUCACCCUGGAGA 2226 UCUCCAGGGUGAAGUGAGAUU
2117 CUCACUUCACCCUGGAGCA 2227 UGCUCCAGGGUGAAGUGAGUU
2300 AGGAGACUGGCUAAAUAAA 2301 UUUAUUUAGCCAGUCUCCUUU
2306 GUCGCAUCUCAGUGCAGGA 2307 UCCUGCACUGAGAUGCGACUU
2308 GUCGCAUCUCAGUGCAGGA 2309 UCCUGCACUGAGAUGCGACUU
表5A：具有連接子之成對siRNA
成對 siRNA SEQ ID NO: 有義股 5' -3' SEQ ID NO: 反義股 5' -3'
X6 312 [mG*][mA*][fG][mU][mC][mG][fC][fA][fU][mC][mU][fC][mA][mG][mU][mG][fC][mA][mA] 332 [vinmU*][fU*][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][mA][mU][mG][fC][mG][mA][mC][mU][mC][*mU][*mU]
Y6 313 [mG*][mU*][fC][mG][mC][mA][fU][fC][fU][mC][mA][fG][mU][mG][mC][mA][fG][mG][mA] 333 [vinmU*][fC*][mC][mU][mG][mC][mA][mC][mU][mG][mA][mG][mA][fU][mG][mC][mG][mA][mC][*mU][*mU]
Z6 314 [mA*][mG*][fA][mA][mC][mC][fU][fC][fU][mC][mA][fC][mU][mU][mC][mA][fC][mC][mA] 334 [vinmU*][fG*][mG][mU][mG][mA][mA][mG][mU][mG][mA][mG][mA][fG][mG][mU][mU][mC][mU][*mU][*mU]
A7 318 [mG*][mC*][fA][mG][mG][mA][fG][fA][fC][mU][mG][fG][mC][mU][mA][mA][fA][mU][mA] 338 [vinmU*][fA*][mU][mU][mU][mA][mG][mC][mC][mA][mG][mU][mC][fU][mC][mC][mU][mG][mC][*mU][*mU]
其中表5A中之有義股包含以下3'連接子：
縮寫 鍵 ：n/N= 任何核苷酸 mN= 2'-O-甲基取代 fN= 2'-F取代 idT = 反向Dt vinmN或vinmU = 2'-O甲基乙烯基膦酸酯尿苷 X = O或S * = 硫代磷酸酯 括號指示個別鹼基。
表5B：具有連接子之成對siRNA
成對 siRNA SEQ ID NO: 有義股 5' -3' SEQ ID NO: 反義股 5' -3' 連接子位置
H11 1890 [mA*][mG*][fA][mA][mA][mC][fA][fG][fU][mU][mC][fA][mC][mC][mU][mU][fG][mA][mA] 2290 [vinmU*][fU*][mC][mA][mA][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mC][mU][fG][mU][mU][mU][mC][mU][*mU][*mU] 有義股之3'端
K11 1893 [mA*][mC*][fC][mU][mC][mU][fC][fA][fC][mU][mU][fC][mA][mC][mC][mC][fU][mG][mA] 2293 [vinmU*][fC*][mA][mG][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mG][mU][mG][fA][mG][mA][mG][mG][mU][*mU][*mU] 有義股之3'端
O10 1941 [mA][mG][fA][mA][mA][mC][fA][fG][fU][mU][mC][fA][mC][mC][mU][mU][fG][*mA][*mA] 2051 [vinmU*][fU*][mC][mA][mA][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mC][mU][fG][mU][mU][mU][mC][mU][*mU][*mU] 有義股之5'端
P10 1942 [mG][mA][fA][mA][mC][mA][fG][fU][fU][mC][mA][fC][mC][mU][mU][mG][fA][*mA][*mA] 2052 [vinmU*][fU*][mU][mC][mA][mA][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mC][fU][mG][mU][mU][mU][mC][*mU][*mU] 有義股之5'端
R10 1944 [mA][mC][fC][mU][mC][mU][fC][fA][fC][mU][mU][fC][mA][mC][mC][mC][fU][*mG][*mA] 2054 [vinmU*][fC*][mA][mG][mG][mG][mU][mG][mA][mA][mG][mU][mG][fA][mG][mA][mG][mG][mU][*mU][*mU] 有義股之5'端
其中表5B中之有義股包含以下連接子： C6-NH2-丙基-Mal
縮寫 鍵 ：n/N= 任何核苷酸 mN= 2'-O-甲基取代 fN= 2'-F取代 idT = 反向Dt vinmN或vinmU = 2'-O甲基乙烯基膦酸酯尿苷 X = O或S * = 硫代磷酸酯 括號指示個別鹼基。
在一些實施例中，上述聚核苷酸包括彼等不包括2'-O甲基乙烯基膦酸酯尿苷作為siRNA反義股上之5'核苷酸的聚核苷酸。
在一些實施例中，聚核苷酸如本文所提供。在一些實施例中，聚核苷酸包含構成雙螺旋體之部分的第一股及第二股。在一些實施例中，聚核苷酸包含有義股及反義股。在一些實施例中，聚核苷酸包含表3A、表3B、表4A、表4B、表5A或表5B中所示之序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含表3A、表4A或表5A中所示之序列，但無鹼基修飾。在一些實施例中，聚核苷酸包含本文所提供之成對siRNA。在一些實施例中，成對siRNA不與FN3域結合。
在一些實施例中，本文所描述之寡核苷酸分子係使用此項技術中已知的程序使用化學合成及/或酶促連接反應來構築。舉例而言，寡核苷酸分子係使用天然存在之核苷酸或經設計以增加分子之生物穩定性或增加寡核苷酸分子與目標核酸之間形成的雙螺旋體之物理穩定性的經各種修飾之核苷酸來化學合成。或者，寡核苷酸分子係使用表現載體以生物方式產生，寡核苷酸分子已以反義方向(亦即，自插入的寡核苷酸分子轉錄之RNA將與相關目標聚核酸分子呈反義方向)次選殖至表現載體中。
在一些實施例中，寡核苷酸分子係經由串聯合成方法合成，其中兩股合成為由可裂解連接子分隔的單個連續寡核苷酸片段或股，該可裂解連接子隨後經裂解以提供獨立片段或股，該等片段或股雜交且允許純化雙螺旋體。
在一些情況下，寡核苷酸分子亦由兩個不同的核酸股或片段組裝而成，其中一個片段包括該分子之有義區且第二個片段包括該分子之反義區。
在一些情況下，雖然寡核苷酸分子核苷酸間鍵聯用硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、胺基磷酸酯或甲磺醯胺基磷酸酯進行化學修飾，但鍵聯改良穩定性。過度修飾有時會導致毒性或活性降低。因此，當設計核酸分子時，此等核苷酸間鍵聯之量在一些情況下降至最低。在此類情況下，降低此等鍵聯之濃度會降低此等分子之毒性、增加功效且提高特異性。
如本文所描述，在一些實施例中，本文所揭示之任何核酸分子可經修飾以在dsRNA之有義股的5'端包括連接子。在一些實施例中，本文所揭示之任何核酸分子可經修飾以在dsRNA之反義股的5'端包括乙烯基膦酸酯或經修飾之乙烯基膦酸酯。在一些實施例中，本文所揭示之任何核酸分子可經修飾以在dsRNA之有義股的3'端包括連接子。在一些實施例中，本文所揭示之任何核酸分子可經修飾以在dsRNA之反義股的3'端包括乙烯基膦酸酯。連接子可用於將dsRNA連接至FN3域。連接子可共價連接至例如FN3域上之半胱胺酸殘基，該半胱胺酸殘基為天然存在的或已如本文及例如美國專利第10,196,446號所描述經取代，該專利特此以全文引用之方式併入。
在一些實施例中，如上文提供之表3A及表4A中所示之A1-W6及B7-G11的成對siRNA在有義股之3'端包含連接子。在一些實施例中，如上文提供之表3A及表4A中所示之A1-W6及B7-G11的成對siRNA在有義股之5'端包含乙烯基膦酸酯。
連接子(L)之結構的非限制性實例繪示於下表6A及表6B中。 表6A：例示性連接子(L)結構
連接子結構 連接子名稱
Mal-C 2H 4C(O)(NH)-(CH 2) 6或C 6-NH 2-丙基-Mal
Mal-(PEG) 12(NH)(CH 2) 6
Mal-NH-(CH 2) 6或 胺基己基連接子-(CH 2) 6-
Val-Cit-PABA
表6B：例示性連接子(L)結構
亦可使用其他連接子，諸如藉由點擊化學、醯胺偶合、還原胺化、肟及酶促偶合(諸如轉麩醯胺酸酶及分選結合)形成之連接子。此處提供之連接子本質上為例示性的，且亦可使用藉由其他此類方法製得之其他連接子。舉例而言，經由磷酸基團連接之連接子可為硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯。
當連接至siRNA時，結構L-(X4)可由下式中之一者表示：
儘管本文說明某些siRNA序列具有某些經修飾之核鹼基，但本文亦提供無此類修飾之序列。亦即，序列可包含本文提供之表中所示之序列而無任何修飾。在一些實施例中，未經修飾之siRNA序列仍可在dsRNA之有義股的5'端包含連接子。在一些實施例中，核酸分子可經修飾以在dsRNA之反義股的5'端包括乙烯基膦酸酯。在一些實施例中，核酸分子可經修飾以在dsRNA之有義股的3'端包括連接子。在一些實施例中，核酸分子可經修飾以在dsRNA之反義股的3'端包括乙烯基膦酸酯。連接子可如本文所提供。
在一些實施例中，提供包含結合CD71之多肽的FN3蛋白。在一些實施例中，多肽包含結合CD71之FN3域。在一些實施例中，提供包含SEQ ID NO: 360-644、663-672或1395-1849之胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，結合CD71之多肽包含SEQ ID NO: 360-644、663-672或1395-1849之序列。多肽可結合之CD71蛋白之序列可為例如SEQ ID No: 3或4。在一些實施例中，結合CD71之FN3域特異性結合CD71。
在一些實施例中，結合CD71之FN3域係基於SEQ ID NO: 1之Tencon序列或SEQ ID NO: 2之Tencon 27序列(LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFLIQYQESEKVGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVKGGHRSNPLSAIFTT)，視情況在殘基位置11、14、17、37、46、73或86處具有取代(殘基編號對應於SEQ ID NO: 2)。
在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 360-644、663-672或1395-1849之胺基酸序列。
在一些實施例中，提供包含有包含SEQ ID NO: 360之胺基酸序列之多肽的蛋白質。SEQ ID NO: 360為基於SEQ ID NO: 361、SEQ ID NO: 362、SEQ ID NO: 363及SEQ ID NO: 364之序列的共同序列。SEQ ID NO: 360之序列為： MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFX 1IX 2YX 3EX 4X 5X 6X 7GEAIX 8LX 9VPGSERSYDLTGLKPGTEYX 10VX 11IX 12X 13VKGGX 14X 15SX 16PLX 17AX 18FTT， 其中X 8、X 9、X 17及X 18各自獨立地為除甲硫胺酸或脯胺酸以外之任何胺基酸，及 X 1係選自D、F、Y或H， X 2係選自Y、G、A或V， X 3係選自I、T、L、A或H， X 4係選自S、Y或P， X 5係選自Y、G、Q或R， X 6係選自G或P， X 7係選自A、Y、P、D或S， X 10係選自W、N、S或E， X 11係選自L、Y或G， X 12係選自D、Q、H或V， X 13係選自G或S， X 14係選自R、G、F、L或D， X 15係選自W、S、P或L，及 X 16係選自T、V、M或S。
在一些實施例中： X 1係選自D、F、Y或H， X 2係選自G、A或V， X 3係選自T、L、A或H， X 4係選自Y或P， X 5係選自G、Q或R， X 6係選自G或P， X 7係選自Y、P、D或S， X 10係選自W、N、S或E， X 11係選自L、Y或G， X 12係選自Q、H或V， X 13係選自G或S， X 14係選自G、F、L或D， X 15係選自S、P或L，及 X 16係選自V、M或S。
在一些實施例中，X 1、X 2、X 3、X 4、X 5、X 6、X 7、X 10、X 11、X 12、X 13、X 14、X 15及X 16如SEQ ID NO: 361之序列中所示。在一些實施例中，X 1、X 2、X 3、X 4、X 5、X 6、X 7、X 10、X 11、X 12、X 13、X 14、X 15及X 16如SEQ ID NO: 362之序列中所示。在一些實施例中，X 1、X 2、X 3、X 4、X 5、X 6、X 7、X 10、X 11、X 12、X 13、X 14、X 15及X 16如SEQ ID NO: 363之序列中所示。在一些實施例中，X 1、X 2、X 3、X 4、X 5、X 6、X 7、X 10、X 11、X 12、X 13、X 14、X 15及X 16如SEQ ID NO: 364之序列中所示。
在一些實施例中，X 8、X 9、X 17及X 18獨立地為丙胺酸、精胺酸、天冬醯胺、天冬胺酸、半胱胺酸、麩醯胺酸、麩胺酸、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、苯丙胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、色胺酸、酪胺酸或纈胺酸。在一些實施例中，X 8、X 9、X 17及X 18獨立地不為丙胺酸、精胺酸、天冬醯胺、天冬胺酸、半胱胺酸、麩醯胺酸、麩胺酸、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、苯丙胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、色胺酸、酪胺酸或纈胺酸。在一些實施例中，X 8、X 9、X 17及X 18獨立地為丙胺酸。在一些實施例中，X 8、X 9、X 17及X 18獨立地為精胺酸。在一些實施例中，X 8、X 9、X 17及X 18獨立地為天冬醯胺。在一些實施例中，X 8、X 9、X 17及X 18獨立地為天冬胺酸。在一些實施例中，X 8、X 9、X 17及X 18獨立地為半胱胺酸。在一些實施例中，X 8、X 9、X 17及X 18獨立地為麩醯胺酸。在一些實施例中，X 8、X 9、X 17及X 18獨立地為麩胺酸。在一些實施例中，X 8、X 9、X 17及X 18獨立地為甘胺酸。在一些實施例中，X 8、X 9、X 17及X 18獨立地為組胺酸。在一些實施例中，X 8、X 9、X 17及X 18獨立地為異白胺酸。在一些實施例中，X 8、X 9、X 17及X 18獨立地為白胺酸。在一些實施例中，X 8、X 9、X 17及X 18獨立地為離胺酸。在一些實施例中，X 8、X 9、X 17及X 18獨立地為苯丙胺酸。在一些實施例中，X 8、X 9、X 17及X 18獨立地為絲胺酸。在一些實施例中，X 8、X 9、X 17及X 18獨立地為蘇胺酸。在一些實施例中，X 8、X 9、X 17及X 18獨立地為色胺酸。在一些實施例中，X 8、X 9、X 17及X 18獨立地為酪胺酸。在一些實施例中，X 8、X 9、X 17及X 18獨立地為纈胺酸。
在一些實施例中，序列如SEQ ID NO: 361之序列中所示，不同之處在於與X 8、X 9、X 17及X 18之位置對應的位置可為上述任何其他胺基酸殘基，除了在一些實施例中，X 8不為V，X 9不為T，X 17不為S，且X 18不為I。
在一些實施例中，序列如SEQ ID NO: 362之序列中所示，不同之處在於與X 8、X 9、X 17及X 18之位置對應的位置可為上述任何其他胺基酸殘基，除了在一些實施例中，X 8不為V，X 9不為T，X 17不為S，且X 18不為I。
在一些實施例中，序列如SEQ ID NO: 363之序列中所示，不同之處在於與X 8、X 9、X 17及X 18之位置對應的位置可為上述任何其他胺基酸殘基，除了在一些實施例中，X 8不為V，X 9不為T，X 17不為S，且X 18不為I。
在一些實施例中，序列如SEQ ID NO: 364之序列中所示，不同之處在於與X 8、X 9、X 17及X 18之位置對應的位置可為上述任何其他胺基酸殘基，除了在一些實施例中，X 8不為V，X 9不為T，X 17不為S，且X 18不為I。
在一些實施例中，蛋白質包含有包含與SEQ ID NO: 360之序列至少62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列的多肽。在一些實施例中，蛋白質與SEQ ID NO: 360之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致。在一些實施例中，蛋白質與SEQ ID NO: 360之序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致。在一些實施例中，蛋白質與SEQ ID NO: 360之序列至少95%、96%、97%、98%或99%一致。
SEQ ID NO: 361-364之序列列於下表7中。 表7：結合CD71之FN3域序列
SEQ ID NO: 序列
361 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFYIAYAEPRPDGEAI VL TVPGSERSYDLTGLKPGTEYSVLIHGVKGGLLSSPL SA IFTT
362 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFFIGYLEPQPPGEAI VL TVPGSERSYDLTGLKPGTEYNVTIQGVKGGFPSMPL SA IFTT
363 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFHIVYHEPRPSGEAI VL TVPGSERSYDLTGLKPGTEYEVGIVSVKGGDLSVPL SA IFTT
364 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFDIGYTEYGGYGEAI VL TVPGSERSYDLTGLKPGTEYWVLIQGVKGGGSSVPL SA IFTT
可使用可經由NCBI網站獲得之BlastP使用預設參數對兩個序列進行比對來確定一致性百分比。
如本文所提供，在一些實施例中，結合CD71之FN3域結合人類成熟CD71或人類成熟CD71胞外域。在一些實施例中，人類成熟CD71為SEQ ID NO: 3，且人類成熟CD71胞外結合域為SEQ ID NO: 4，其各自提供於下表8中。 表8：CD71序列
SEQ ID NO: 序列
3 MMDQARSAFSNLFGGEPLSYTRFSLARQVDGDNSHVEMKLAVDEEENADNNTKANVTKPKRCSGSICYGTIAVIVFFLIGFMIGYLGYCKGVEPKTECERLAGTESPVREEPGEDFPAARRLYWDDLKRKLSEKLDSTDFTGTIKLLNENSYVPREAGSQKDENLALYVENQFREFKLSKVWRDQHFVKIQVKDSAQNSVIIVDKNGRLVYLVENPGGYVAYSKAATVTGKLVHANFGTKKDFEDLYTPVNGSIVIVRAGKITFAEKVANAESLNAIGVLIYMDQTKFPIVNAELSFFGHAHLGTGDPYTPGFPSFNHTQFPPSRSSGLPNIPVQTISRAAAEKLFGNMEGDCPSDWKTDSTCRMVTSESKNVKLTVSNVLKEIKILNIFGVIKGFVEPDHYVVVGAQRDAWGPGAAKSGVGTALLLKLAQMFSDMVLKDGFQPSRSIIFASWSAGDFGSVGATEWLEGYLSSLHLKAFTYINLDKAVLGTSNFKVSASPLLYTLIEKTMQNVKHPVTGQFLYQDSNWASKVEKLTLDNAAFPFLAYSGIPAVSFCFCEDTDYPYLGTTMDTYKELIERIPELNKVARAAAEVAGQFVIKLTHDVELNLDYERYNSQLLSFVRDLNQYRADIKEMGLSLQWLYSARGDFFRATSRLTTDFGNAEKTDRFVMKKLNDRVMRVEYHFLSPYVSPKESPFRHVFWGSGSHTLPALLENLKLRKQNNGAFNETLFRNQLALATWTIQGAANALSGDVWDIDNEF
4 CKGVEPKTECERLAGTESPVREEPGEDFPAARRLYWDDLKRKLSEKLDSTDFTGTIKLLNENSYVPREAGSQKDENLALYVENQFREFKLSKVWRDQHFVKIQVKDSAQNSVIIVDKNGRLVYLVENPGGYVAYSKAATVTGKLVHANFGTKKDFEDLYTPVNGSIVIVRAGKITFAEKVANAESLNAIGVLIYMDQTKFPIVNAELSFFGHAHLGTGDPYTPGFPSFNHTQFPPSRSSGLPNIPVQTISRAAAEKLFGNMEGDCPSDWKTDSTCRMVTSESKNVKLTVSNVLKEIKILNIFGVIKGFVEPDHYVVVGAQRDAWGPGAAKSGVGTALLLKLAQMFSDMVLKDGFQPSRSIIFASWSAGDFGSVGATEWLEGYLSSLHLKAFTYINLDKAVLGTSNFKVSASPLLYTLIEKTMQNVKHPVTGQFLYQDSNWASKVEKLTLDNAAFPFLAYSGIPAVSFCFCEDTDYPYLGTTMDTYKELIERIPELNKVARAAAEVAGQFVIKLTHDVELNLDYERYNSQLLSFVRDLNQYRADIKEMGLSLQWLYSARGDFFRATSRLTTDFGNAEKTDRFVMKKLNDRVMRVEYHFLSPYVSPKESPFRHVFWGSGSHTLPALLENLKLRKQNNGAFNETLFRNQLALATWTIQGAANALSGDVWDIDNEF
如本文所提供，FN3域可結合CD71蛋白。即使未明確陳述，亦提供亦可特異性結合CD71蛋白之域。因此，例如，結合CD71之FN3域亦涵蓋特異性結合CD71之FN3域蛋白。此等分子可用於例如治療及診斷應用以及成像。在一些實施例中，提供編碼本文所揭示之FN3域之聚核苷酸或其互補核酸、載體、宿主細胞以及製造及使用其之方法。在一些實施例中，提供結合或特異性結合CD71之經分離之FN3域。
在一些實施例中，藉由熟習此項技術者所實踐之表面電漿子共振或Kinexa方法所測定，FN3域可以小於約1×10 -7M，例如小於約1×10 -8M、小於約1×10 -9M、小於約1×10 -10M、小於約1×10 -11M、小於約1×10 -12M或小於約1×10 -13M之解離常數(K D)結合CD71。若在不同條件(例如容積滲透濃度、pH)下量測，則所量測之特定FN3域-抗原相互作用的親和力可能會有所不同。因此，親和力及其他抗原結合參數(例如K D、K on、K off)之量測係用蛋白質骨架及抗原之標準化溶液及標準化緩衝液(諸如本文所描述之緩衝液)進行。
在一些實施例中，在標準溶液ELISA分析中，FN3域可結合CD71，其比陰性對照獲得之信號高至少5倍。
在一些實施例中，結合或特異性結合CD71之FN3域包含連接至分子之N末端的起始子甲硫胺酸(Met)。在一些實施例中，結合或特異性結合CD71之FN3域包含連接至FN3域之C末端的半胱胺酸(Cys)。添加N末端Met及/或C末端Cys可促進表現及/或結合，以延長半衰期且提供分子之其他功能。
FN3域亦可含有半胱胺酸取代，諸如美國專利第10,196,446號中所描述之彼等者，該專利特此以全文引用之方式併入。簡言之，在一些實施例中，本文所提供之多肽可在選自由以下組成之群的位置處包含至少一個半胱胺酸取代：基於SEQ ID NO: 1或美國專利第10,196,446號之SEQ ID NO: 1之FN3域的殘基6、8、10、11、14、15、16、20、30、34、38、40、41、45、47、48、53、54、59、60、62、64、70、88、89、90、91及93 LPAPKNLVVSEVTEDSLRLSWTAPDAAFDSFLIQYQESEKVGEAINLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYTVSIYGVKGGHRSNPLSAEFTT (SEQ ID NO: 2311)， 該專利特此以全文引用之方式併入，及相關FN3域中之等效位置。
在一些實施例中，取代位於殘基6處。在一些實施例中，取代位於殘基8處。在一些實施例中，取代位於殘基10處。在一些實施例中，取代位於殘基11處。在一些實施例中，取代位於殘基14處。在一些實施例中，取代位於殘基15處。在一些實施例中，取代位於殘基16處。在一些實施例中，取代位於殘基20處。在一些實施例中，取代位於殘基30處。在一些實施例中，取代位於殘基34處。在一些實施例中，取代位於殘基38處。在一些實施例中，取代位於殘基40處。在一些實施例中，取代位於殘基41處。在一些實施例中，取代位於殘基45處。在一些實施例中，取代位於殘基47處。在一些實施例中，取代位於殘基48處。在一些實施例中，取代位於殘基53處。在一些實施例中，取代位於殘基54處。在一些實施例中，取代位於殘基59處。在一些實施例中，取代位於殘基60處。在一些實施例中，取代位於殘基62處。在一些實施例中，取代位於殘基64處。在一些實施例中，取代位於殘基70處。在一些實施例中，取代位於殘基88處。在一些實施例中，取代位於殘基89處。在一些實施例中，取代位於殘基90處。在一些實施例中，取代位於殘基91處。在一些實施例中，取代位於殘基93處。
域或蛋白質中某一位置處之半胱胺酸取代包含用半胱胺酸殘基置換現有的胺基酸殘基。在一些實施例中，代替取代，將半胱胺酸插入與上文所列之位置相鄰的序列中。半胱胺酸修飾之其他實例可見於例如美國專利申請公開案第2017/0362301號中，其特此以全文引用之方式併入。序列之比對可在例如NCBI網站使用BlastP使用預設參數來進行。
在一些實施例中，半胱胺酸殘基插入域或蛋白質中之任何位置。
在一些實施例中，結合CD71之FN3域被內化至細胞中。在一些實施例中，FN3域之內化可促進可偵測標記或治療劑遞送至細胞中。在一些實施例中，FN3域之內化可促進細胞毒性劑遞送至細胞中。細胞毒性劑可充當治療劑。在一些實施例中，FN3域之內化可促進本文所揭示之任何可偵測標記、治療劑及/或細胞毒性劑遞送至細胞中。在一些實施例中，FN3域之內化可促進寡核苷酸遞送至細胞中。在一些實施例中，細胞為腫瘤細胞。在一些實施例中，細胞為肝臟細胞。在一些實施例中，細胞為肌肉細胞。在一些實施例中，細胞為免疫細胞。在一些實施例中，細胞為中樞神經系統細胞。在一些實施例中，細胞為心臟細胞。在一些實施例中，治療劑為本文所提供之siRNA分子。與可偵測標記結合之結合CD71之FN3域可用於活體內或活體外評估CD71在諸如腫瘤組織之樣本上的表現。與可偵測標記結合之結合CD71之FN3域可用於活體內或活體外評估CD71在樣本血液、免疫細胞或肌肉細胞上的表現。
在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 360-644、663-672或1395-1849之胺基酸序列。
在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 365之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 366之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 367之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 368之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 369之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 370之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 371之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 372之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 373之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 374之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 375之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 376之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 377之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 378之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 379之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 380之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 381之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 382之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 383之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 384之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 385之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 386之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 387之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 388之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 389之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 390之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 391之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 392之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 393之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 394之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 395之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 396之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 397之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 398之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 399之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 400之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 401之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 402之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 403之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 404之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 405之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 406之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 407之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 408之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 409之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 410之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 411之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 412之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 413之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 414之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 415之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 416之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 417之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 418之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 419之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 420之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 421之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 422之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 423之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 424之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 425之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 426之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 427之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 428之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 429之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 430之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 431之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 432之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 433之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 434之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 435之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 436之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 437之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 438之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 439之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 440之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 441之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 442之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 443之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 444之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 445之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 446之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 447之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 448之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 449之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 450之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 451之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 452之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 453之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 454之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 455之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 456之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 457之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 458之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 459之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 460之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 461之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 462之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 463之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 464之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 465之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 466之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 467之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 468之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 469之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 470之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 471之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 472之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 473之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 474之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 475之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 476之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 477之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 478之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 479之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 480之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 481之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 482之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 483之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 484之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 485之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 486之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 487之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 488之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 489之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 490之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 491之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 492之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 493之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 494之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 495之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 496之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 497之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 498之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 499之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 500之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 501之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 502之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 503之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 504之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 505之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 506之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 507之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 508之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 509之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 510之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 511之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 512之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 513之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 514之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 515之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 516之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 517之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 518之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 519之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 520之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 521之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 522之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 523之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 524之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 525之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 526之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 527之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 528之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 529之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 530之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 531之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 532之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 533之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 534之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 535之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 536之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 537之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 538之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 539之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 540之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 541之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 542之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 543之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 544之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 545之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 546之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 547之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 548之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 549之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 550之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 551之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 552之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 553之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 554之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 555之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 556之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 557之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 558之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 559之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 560之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 561之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 562之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 563之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 564之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 565之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 566之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 567之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 568之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 569之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 570之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 571之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 572之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 573之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 574之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 575之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 576之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 577之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 578之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 579之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 580之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 581之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 582之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 583之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 584之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 585之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 586之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 587之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 588之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 589之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 590之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 591之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 592之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 593之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 594之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 595之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 596之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 597之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 598之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 599之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 600之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 601之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 602之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 603之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 604之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 605之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 606之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 607之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 608之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 609之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 610之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 611之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 612之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 613之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 614之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 615之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 616之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 617之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 618之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 619之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 620之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 621之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 622之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 623之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 624之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 625之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 626之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 627之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 628之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 629之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 630之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 631之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 632之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 633之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 634之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 635之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 636之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 637之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 638之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 639之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 640之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 641之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 642之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 643之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 644之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 663之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 664之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 665之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 666之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 667之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 668之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 669之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 670之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 671之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 672之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1395之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1396之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1397之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1398之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1399之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1400之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1401之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1402之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1403之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1404之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1405之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1406之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1407之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1408之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1409之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1410之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1411之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1412之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1413之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1414之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1415之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1416之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1417之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1418之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1419之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1420之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1421之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1422之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1423之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1424之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1425之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1426之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1427之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1428之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1429之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1430之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1431之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1432之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1433之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1434之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1435之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1436之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1437之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1438之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1439之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1440之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1441之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1442之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1443之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1444之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1445之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1446之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1447之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1448之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1449之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1450之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1451之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1452之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1453之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1454之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1455之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1456之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1457之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1458之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1459之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1460之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1461之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1462之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1463之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1464之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1465之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1466之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1467之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1468之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1469之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1470之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1471之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1472之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1473之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1474之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1475之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1476之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1477之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1478之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1479之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1480之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1481之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1482之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1483之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1484之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1485之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1486之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1487之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1488之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1489之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1490之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1491之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1492之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1493之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1494之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1495之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1496之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1497之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1498之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1499之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1500之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1501之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1502之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1503之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1504之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1505之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1506之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1507之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1508之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1509之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1510之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1511之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1512之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1513之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1514之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1515之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1516之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1517之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1518之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1519之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1520之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1521之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1522之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1523之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1524之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1525之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1526之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1527之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1528之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1529之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1530之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1531之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1532之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1533之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1534之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1535之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1536之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1537之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1538之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1539之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1540之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1541之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1542之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1543之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1544之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1545之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 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1567之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1568之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1569之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1570之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1571之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1572之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1573之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1574之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1575之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1576之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1577之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1578之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1579之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1580之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1581之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1582之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1583之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1584之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1585之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1586之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1587之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1588之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1589之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1590之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1591之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1592之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1593之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1594之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1595之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1596之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1597之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1598之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1599之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1600之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1601之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1602之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1603之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1604之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1605之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1606之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1607之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1608之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1609之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1610之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1611之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1612之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1613之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1614之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1615之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1616之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1617之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1618之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1619之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1620之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1621之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1622之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1623之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1624之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1625之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1626之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1627之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1628之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1629之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1630之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1631之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1632之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1633之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1634之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1635之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1636之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1637之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1638之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1639之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1640之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1641之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1642之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1643之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1644之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1645之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1646之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1647之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1648之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1649之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1650之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1651之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1652之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1653之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1654之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1655之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1656之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1657之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1658之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1659之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1660之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1661之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1662之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1663之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1664之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1665之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1666之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1667之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1668之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1669之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1670之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1671之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1672之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1673之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1674之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1675之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1676之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1677之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1678之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1679之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1680之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1681之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1682之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1683之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1684之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1685之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1686之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1687之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1688之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1689之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1690之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1691之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1692之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1693之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1694之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1695之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1696之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1697之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1698之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1699之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1700之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1701之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1702之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1703之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1704之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1705之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1706之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1707之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1708之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1709之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1710之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1711之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1712之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1713之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1714之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1715之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1716之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1717之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1718之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1719之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1720之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1721之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1722之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1723之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1724之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1725之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1726之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1727之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1728之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1729之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1730之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1731之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1732之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1733之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1734之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1735之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1736之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1737之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1738之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1739之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1740之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1741之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1742之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1743之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1744之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1745之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1746之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1747之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1748之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1749之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1750之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1751之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1752之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1753之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1754之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1755之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1756之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1757之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1758之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1759之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1760之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1761之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1762之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1763之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1764之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1765之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1766之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1767之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1768之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1769之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1770之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1771之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1772之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1773之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1774之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1775之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1776之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1777之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1778之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1779之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1780之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1781之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1782之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1783之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1784之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1785之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1786之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1787之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1788之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1789之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1790之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1791之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1792之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1793之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1794之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1795之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1796之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1797之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1798之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1799之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1800之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1801之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1802之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1803之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1804之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1805之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1806之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1807之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1808之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1809之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1810之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1811之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1812之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1813之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1814之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1815之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1816之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1817之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1818之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1819之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1820之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1821之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1822之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1823之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1824之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1825之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1826之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1827之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1828之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1829之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1830之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1831之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1832之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1833之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1834之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1835之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1836之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1837之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1838之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1839之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1840之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1841之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1842之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1843之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1844之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1845之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1846之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1847之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1848之胺基酸序列。在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 1849之胺基酸序列。
在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含連接至分子之N末端的起始子甲硫胺酸(Met)。
在一些實施例中，經分離之結合CD71之FN3域包含與SEQ ID NO: 365-644、663-672或1395-1849之胺基酸序列中之一者62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。可使用可經由NCBI網站獲得之BlastP使用預設參數對兩個序列進行比對來確定一致性百分比。結合CD71之FN3域之序列可見於例如表9中。此等序列示出有N末端甲硫胺酸。亦可在無N末端甲硫胺酸之情況下利用該域之序列。僅為了避免複製幾乎一致的序列，不提供此類序列之表，但熟習此項技術者可立即設想出本文提供之無N末端甲硫胺酸之序列，且本發明應理解及解釋為包括此類序列。 表9：結合CD71之FN3域序列
SEQ ID NO: 序列
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1793 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFFIGYLEPQPPGEAIILWVPGSERSYDLTGLKPGTEYNVTIQGVKGGFPSIPLIAVFTT
1794 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFFIGYLEPQPPGEAISLYVPGSERSYDLTGLKPGTEYNVTIQGVKGGFPSSPLFADFTT
1795 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFFIGYLEPQPPGEAIDLLVPGSERSYDLTGLKPGTEYNVTIQGVKGGFPSMPLSAIFTT
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1800 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTALDAAFDSFFIGYLEPQPPGEAIHLFVPGSERSYDLTGLKPGTEYNVTIQGVKGGFPSEPLIANFTT
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1826 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFEIGYFEYSYYGEAIVLTVPGSERSYDLTGLKPGTEYRVYIGGVKGGGWSRPLSAIFTT
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1833 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFFIGYLEPQPPGEAIDLYVPGSERSYDLTGLKPGTEYNVTIQGVKGGFPSHPLVAVFTT
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1849 MLPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFFIGYLEPQPPGEAIHLYVPGSCRSYDLTGLKPGTEYNVTIQGVKGGFPSVPLIAKFTT
不受任何特定理論束縛，在一些實施例中，連接至核酸分子之FN3域可用於將治療劑靶向遞送至表現一或多個FN3域之結合搭配物的細胞，且在其中引導核酸分子之細胞內積聚。此可使siRNA分子與細胞機構適當地相互作用，以抑制目標基因之表現，提高功效，且在一些實施例中，亦可避免相同siRNA分子之非靶向投與可能產生的毒性。
本文所描述之與特定目標蛋白結合之FN3域可以單體、二聚體或多聚體形式產生，例如作為增加效價且因此增加目標分子結合之親合力的手段，或產生同時結合兩個或更多個不同目標分子之雙特異性或多特異性骨架。二聚體及多聚體可藉由連接單特異性、雙特異性或多特異性蛋白質骨架來產生，例如藉由包括胺基酸連接子，例如含有聚甘胺酸、甘胺酸及絲胺酸、或丙胺酸及脯胺酸之連接子。
因此，如本文所提供，連接至siRNA分子之不同FN3域亦可與另一結合不同目標之FN3域結合或連接。連接子可為可撓性連接子。連接子可為短肽序列，諸如本文所描述之彼等者。舉例而言，連接子可為G/S或G/A連接子及其類似物。如本文所提供，連接子可為例如表10中所示之連接子。 表10：例示性肽連接子序列
SEQ ID NO 序列
645 (GS) 2
646 (GGGS) 2
647 (GGGGS) 1-5
648 (GGGGS) 5
649 (GGGGA) 1-5
650 (AP) 1-20
651 (AP) 2-20
652 (AP) 2
653 (AP) 5
654 (AP) 10
655 (AP) 20
656 A(EAAAK) 5AAA
657 (EAAAK) 1-5
658 EAAAKEAAAKEAAAKEAAAK
659 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
660 APAPAPAPAP
661 EAAAK
在一些實施例中，包含由連接子連接之兩個FN3域的FN3域具有SEQ ID NO: 645之胺基酸序列。在一些實施例中，包含由連接子連接之兩個FN3域的FN3域具有SEQ ID NO: 646之胺基酸序列。在一些實施例中，包含由連接子連接之兩個FN3域的FN3域具有SEQ ID NO: 647之胺基酸序列。在一些實施例中，包含由連接子連接之兩個FN3域的FN3域具有SEQ ID NO: 648之胺基酸序列。在一些實施例中，包含由連接子連接之兩個FN3域的FN3域具有SEQ ID NO: 649之胺基酸序列。在一些實施例中，包含由連接子連接之兩個FN3域的FN3域具有SEQ ID NO: 650之胺基酸序列。在一些實施例中，包含由連接子連接之兩個FN3域的FN3域具有SEQ ID NO: 651之胺基酸序列。在一些實施例中，包含由連接子連接之兩個FN3域的FN3域具有SEQ ID NO: 652之胺基酸序列。在一些實施例中，包含由連接子連接之兩個FN3域的FN3域具有SEQ ID NO: 653之胺基酸序列。在一些實施例中，包含由連接子連接之兩個FN3域的FN3域具有SEQ ID NO: 654之胺基酸序列。在一些實施例中，包含由連接子連接之兩個FN3域的FN3域具有SEQ ID NO: 655之胺基酸序列。在一些實施例中，包含由連接子連接之兩個FN3域的FN3域具有SEQ ID NO: 656之胺基酸序列。在一些實施例中，包含由連接子連接之兩個FN3域的FN3域具有SEQ ID NO: 657之胺基酸序列。在一些實施例中，包含由連接子連接之兩個FN3域的FN3域具有SEQ ID NO: 658之胺基酸序列。在一些實施例中，包含由連接子連接之兩個FN3域的FN3域具有SEQ ID NO: 659之胺基酸序列。在一些實施例中，包含由連接子連接之兩個FN3域的FN3域具有SEQ ID NO: 660之胺基酸序列。在一些實施例中，包含由連接子連接之兩個FN3域的FN3域具有SEQ ID NO: 661之胺基酸序列。在一些實施例中，包含由連接子連接之兩個FN3域的FN3域具有SEQ ID No: 645-661中之一者的胺基酸序列。
二聚體及多聚體可在N至C方向上彼此連接。使用天然存在的以及合成的肽連接子將多肽連接成新穎的連接融合多肽在文獻中為眾所周知的(Hallewell等人 , J Biol Chem264, 5260-5268, 1989；Alfthan等人 , Protein Eng.8, 725-731, 1995；Robinson及Sauer, Biochemistry35, 109-116, 1996；美國專利第5,856,456號)。此段落中所描述之連接子亦可用於連接本文及上文所提供之式中提供的域。
半衰期延長部分 在一些實施例中，FN3域亦可例如經由共價相互作用併入其他次單元。在一些實施例中，FN3域進一步包含半衰期延長部分。例示性半衰期延長部分為白蛋白、白蛋白變異體、白蛋白結合蛋白及/或域、與血清蛋白結合之一或多條脂族鏈、運鐵蛋白及其片段及類似物以及Fc區。人類Fc區之胺基酸序列為眾所周知的，且包括IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA及IgE Fc區。在一些實施例中，FN3域與白蛋白、白蛋白變異體、白蛋白結合蛋白及/或域及其片段及類似物結合，從而延長整個分子之半衰期。
在一些實施例中，白蛋白結合域包含SEQ ID NO: 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23之胺基酸序列。在一些實施例中，白蛋白結合域(蛋白質)經分離。在一些實施例中，白蛋白結合域包含與SEQ ID NO: 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23之胺基酸序列至少或85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在一些實施例中，白蛋白結合域包含與SEQ ID NO: 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23之胺基酸序列至少或85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列，其限制條件為該蛋白質具有與SEQ ID NO: 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23之位置10對應的取代。在一些實施例中，取代為A10V。在一些實施例中，取代為A10G、A10L、A10I、A10T或A10S。在一些實施例中，位置10處之取代為任何天然存在之胺基酸。在一些實施例中，經分離之白蛋白結合域包含當與SEQ ID NO: 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23之胺基酸序列相比時具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14個取代之胺基酸序列。在一些實施例中，取代位於與SEQ ID NO: 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23之位置10對應的位置處。在一些實施例中，所提供之FN3域在與SEQ ID NO: 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23之殘基位置6、11、22、25、26、52、53、61、88或位置6、8、10、11、14、15、16、20、30、34、38、40、41、45、47、48、53、54、59、60、62、64、70、88、89或90對應的至少一個殘基位置或在C末端包含半胱胺酸殘基。儘管該等位置以系列形式列出，但亦可個別地選擇各位置。在一些實施例中，半胱胺酸位於與位置6、53或88對應的位置處。在一些實施例中，白蛋白結合域之額外實例可見於美國專利第10,925,932號，其特此以引用之方式併入。
抗體恆定區之全部或一部分可連接至FN3域以賦予抗體樣特性，尤其與Fc區相關之彼等特性，諸如Fc效應功能，諸如C1q結合、補體依賴性細胞毒性(CDC)、Fc受體結合、抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)、吞噬作用、下調細胞表面受體(例如B細胞受體；BCR)，且可藉由修飾負責此等活性之Fc中的殘基而進一步修飾(關於綜述；參見Strohl, Curr Opin Biotechnol.20, 685-691, 2009)。
可在FN3域中併入額外部分，諸如聚乙二醇(PEG)分子，諸如PEG5000或PEG20,000；不同鏈長之脂肪酸及脂肪酸酯，例如月桂酸酯、肉豆蔻酸酯、硬脂酸酯、花生酸酯、山崳酸酯、油酸酯、花生四烯酸酯、辛二酸、十四烷二酸、十八烷二酸、二十二烷二酸及其類似物；聚離胺酸；辛烷；碳水化合物(葡聚糖、纖維素、寡糖或多糖)，以獲得期望的特性。此等部分可與蛋白質骨架編碼序列直接融合，且可藉由標準選殖及表現技術產生。或者，可使用眾所周知的化學偶合方法將該等部分連接至本文所揭示之重組產生的分子。
PEG部分可添加至FN3域，其係例如藉由將半胱胺酸殘基併入分子之C末端，或將半胱胺酸工程改造至遠離分子之結合面的殘基位置，且使用眾所周知的方法將PEG基團連接至半胱胺酸。
可藉由數種眾所周知的分析來比較併入額外部分之FN3域的功能。舉例而言，因併入Fc域及/或Fc域變異體而改變的特性可在Fc受體結合分析中使用受體(諸如FcγRI、FcγRII、FcγRIII或FcRn受體)之可溶性形式，或使用眾所周知的基於細胞之分析法量測，例如ADCC或CDC，或在活體內模型中評估本文所揭示之分子的藥物動力學特性來分析。
本文所提供之組合物可藉由製備FN3蛋白及核酸分子且將其連接在一起來製備。將蛋白質與核酸分子連接之技術為已知的，且可使用任何方法。舉例而言，在一些實施例中，核酸分子經連接子(諸如本文所提供之連接子)修飾，且隨後將蛋白質與包含連接子之核酸分子混合以形成組合物。舉例而言，在一些實施例中，使用硫醇-順丁烯二醯亞胺化學方法，經由半胱胺酸將FN3域與siRNA結合。在一些實施例中，含有半胱胺酸之FN3域可在列磷酸鹽緩衝鹽水(或任何其他適當的緩衝液)中用還原劑(例如參(2-羧乙基)膦(TCEP))還原以產生游離硫醇。隨後，在一些實施例中，將含有游離硫醇之FN3域與順丁烯二醯亞胺連接之經修飾之siRNA雙螺旋體混合，且在形成連接複合物之條件下培育。在一些實施例中，混合物在室溫(RT)下培育0-5小時或約1、2、3、4或5小時。反應可例如用N-乙基順丁烯二醯亞胺淬滅。在一些實施例中，結合物可使用親和層析及離子交換進行純化。亦可使用其他方法且此僅為一個非限制性實施例。
製造FN3蛋白之方法為已知的，且可使用任何方法來產生該等蛋白。實例提供於以引用的方式併入本文中之參考文獻中。
在一些實施例中，特異性結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 365-644或663-672之胺基酸序列，其中組胺酸標籤已附接至多肽之N末端或C末端以便於純化。在一些實施例中，組胺酸標籤(His標籤)包含六個組胺酸殘基(SEQ ID NO: 662)。在其他實施例中，His標籤藉由至少一個甘胺酸殘基或約2至約4個甘胺酸殘基連接至FN3域。因此，在純化FN3域且自多肽裂解His標籤之後，一或多個甘胺酸可留在N末端或C末端。在一些實施例中，若自N末端移除His標籤，則所有甘胺酸均會被移除。在一些實施例中，若自C末端移除His標籤，則保留一或多個甘胺酸。
在一些實施例中，特異性結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 365-644或663-672之胺基酸序列，其中N末端甲硫胺酸在FN3域純化後被保留。在一些實施例中，特異性結合CD71之FN3域包含SEQ ID NO: 365-644或663-672之胺基酸序列，其中N末端甲硫胺酸在FN3域純化後未被保留。
舉例而言，如本文所描述，在一些實施例中，無甲硫胺酸之SEQ ID NO: 570之胺基酸序列如下： LPAPKNLVVSRVTEDSARLSWTAPDAAFDSFYIAYAEPRPDGEAILLQVPGSCRSYDLTGLKPGTEYSVLIHGVKGGLLSSPLTAIFTT (SEQ ID NO: 2310)
如本文所提供，FN3域可連接至siRNA分子。儘管某些FN3域示出有甲硫胺酸，但應理解，FN3域可在無N末端甲硫胺酸之情況下連接至siRNA。此外，熟習此項技術者應瞭解，在不存在N末端甲硫胺酸之情況下，本文提供之半胱胺酸殘基位置的編號將移至低一位殘基。
舉例而言，FN3域之胺基酸序列可為諸如本文所提供之胺基酸序列，包括但不限於與SEQ ID NO: 570或SEQ ID NO: 2310之胺基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%一致或一致的胺基酸序列，可連接至本文所提供之成對siRNA。在一些實施例中，成對siRNA包含有義股及反義股。在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO: 2110之核苷酸序列或其經修飾形式，且反義股包含SEQ ID NO: 2220之核苷酸序列或其經修飾形式。在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO: 2113之核苷酸序列或其經修飾形式，且反義股包含SEQ ID NO: 2223之核苷酸序列或其經修飾形式。在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO: 2111之核苷酸序列或其經修飾形式，且反義股包含SEQ ID NO: 2221之核苷酸序列或其經修飾形式。在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO: 1890之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO: 2290之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO: 1893之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO: 2293之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO: 1941之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO: 2051之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO: 1942之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO: 2052之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO: 1944之核苷酸序列且反義股包含SEQ ID NO: 2054之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股及反義股對(成對siRNA)如本文所提供。
套組 在一些實施例中，提供一種套組，其包含本文所描述之組合物。套組可用於治療用途及用作診斷套組。在一些實施例中，套組包含與核酸分子結合之FN3域。
結合物之用途 本文提供之組合物可用於診斷、監測、調節、治療、緩解人類疾病或細胞、組織、器官、體液或一般宿主之特定病變、幫助預防其發病或減輕其症狀。
在一些實施例中，FN3域可促進遞送至活化的淋巴細胞、樹突狀細胞或其他免疫細胞，以治療免疫疾病。因此，在一些實施例中，結合CD71之FN3域係針對免疫細胞。在一些實施例中，結合CD71之FN3域係針對B細胞。在一些實施例中，結合CD71之FN3域係針對T細胞。在一些實施例中，結合CD71之FN3域係針對樹突狀細胞。在一些實施例中，結合CD71之FN3域係針對單核球。在一些實施例中，結合CD71之FN3域對免疫細胞不具有抗增殖作用。舉例而言，在一些實施例中，結合CD71之FN3域對B細胞、T細胞、樹突狀細胞、單核球或其任何組合不具有抗增殖作用。
在一些實施例中，提供治療有需要之個體之自體免疫疾病的方法。在一些實施例中，該等方法包含向個體投與結合CD71之多肽或醫藥組合物。在一些實施例中，多肽為結合CD71之FN3域。在一些實施例中，多肽包含諸如SEQ ID NO: 361-644或663-672之胺基酸序列，或與治療劑連接或結合之本文所提供之多肽。在一些實施例中，一種治療個體之自體免疫疾病的方法，該方法包含向該個體投與結合CD71之FN3域，且該FN3域與治療劑(例如細胞毒性劑；寡核苷酸，諸如siRNA、ASO及其類似物；結合另一目標之FN3域；及其類似物)結合。
在一些實施例中，自體免疫疾病係選自由以下組成之群：類風濕性關節炎、橋本氏自體免疫甲狀腺炎(Hashimoto's autoimmune thyroiditis)、乳糜瀉、1型糖尿病、白斑病、風濕熱、惡性貧血/萎縮性胃炎、斑禿、免疫性血小板減少性紫癜、牛皮癬、發炎性腸病、全身性紅斑狼瘡、天疱瘡、休格連氏症候群(Sjogren's syndrome)、肌炎、狼瘡性腎炎、神經發炎性疾病(諸如多發性硬化症)或預防實體器官移植排斥反應。
在一些實施例中，提供降低細胞中目標基因之表現的方法。在一些實施例中，該等方法包含將本文所提供之組合物或醫藥組合物遞送至細胞。在一些實施例中，細胞為離體的。在一些實施例中，細胞為活體內的。在一些實施例中，目標基因為CD40。然而，目標基因可為任何目標基因，因為本文提供之證據表明，siRNA分子可在與FN3域結合時有效地遞送。在一些實施例中，靶向CD40之siRNA連接至FN3域。在一些實施例中，FN3多肽(域)為結合CD71者。在一些實施例中，FN3多肽如本文所提供或如PCT申請案第PCT/US20/55509號、美國申請案第17/070,337號、PCT申請案第PCT/US20/55470號或美國申請案第17/070,020號所提供，其各自特此以全文引用之方式併入。在一些實施例中，siRNA不與FN3域結合。在一些實施例中，降低目標基因之表現的方法使得目標基因之表現降低約99%、90-99%、50-90%或10-50%。
在一些實施例中，提供一種降低CD40表現之方法。在一些實施例中，降低的表現為CD40 mRNA之表現(量)。在一些實施例中，降低CD40表現之方法使得CD40表現降低約99%、90-99%、50-90%或10-50%。在一些實施例中，降低的表現為CD40蛋白之表現(量)。在一些實施例中，降低的蛋白質為CD40蛋白。在一些實施例中，CD40蛋白之降低發生在免疫細胞中。在一些實施例中，CD40蛋白之降低發生在B細胞中。在一些實施例中，CD40蛋白之降低發生在T細胞中。在一些實施例中，CD40蛋白之降低發生在樹突狀細胞中。在一些實施例中，該方法包含將本文所提供之靶向CD40之siRNA分子遞送至細胞。在一些實施例中，siRNA與FN3域結合。在一些實施例中，FN3域為結合CD71之FN3域。在一些實施例中，FN3域如本文所提供。在一些實施例中，FN3域為兩個結合CD71之FN3域的二聚體。在一些實施例中，FN3域為相同的。在一些實施例中，兩個FN3域為不同的，亦即結合CD71之不同區或胺基酸殘基，亦即不同抗原決定基。在一些實施例中，該方法包含向個體(患者)投與靶向CD40之siRNA分子，諸如本文所提供之彼等者。在一些實施例中，向個體投與之靶向CD40之siRNA分子與FN3域結合或連接。在一些實施例中，FN3域為結合CD71之FN3域。在一些實施例中，FN3域如本文所提供。在一些實施例中，FN3域為兩個結合CD71之FN3域的二聚體。在一些實施例中，FN3域為相同的。在一些實施例中，兩個FN3域為不同的，亦即結合CD71之不同區或胺基酸殘基，亦即不同抗原決定基。在一些實施例中，CD71結合域為本文所提供之多肽。
在一些實施例中，提供將siRNA分子遞送至個體之細胞的方法。在一些實施例中，該等方法包含向個體投與包含本文所提供之組合物的醫藥組合物。在一些實施例中，細胞為CD71陽性細胞。關於蛋白質之術語「陽性細胞」係指表現該蛋白質之細胞。在一些實施例中，蛋白質在細胞表面上表現。在一些實施例中，細胞為腫瘤細胞、肝臟細胞、免疫細胞、心臟細胞、肌肉細胞、CNS細胞或血腦障壁內之細胞。在一些實施例中，細胞為免疫細胞。在一些實施例中，細胞為B細胞。在一些實施例中，細胞為T細胞。在一些實施例中，細胞為樹突狀細胞。在一些實施例中，siRNA分子下調細胞中目標基因之表現。在一些實施例中，目標基因為CD40。
在一些實施例中，提供減少個體之一或多種血清細胞介素之方法。在一些實施例中，該方法包含投與siRNA分子。在一些實施例中，siRNA分子下調細胞中目標基因之表現。在一些實施例中，目標基因為CD40。在一些實施例中，一或多種細胞為CD71陽性細胞。在一些實施例中，一或多種細胞為免疫細胞。在一些實施例中，細胞為B細胞。在一些實施例中，細胞為樹突狀細胞。在一些實施例中，細胞為T細胞。在一些實施例中，一或多種血清細胞介素包含IFN-γ、IL-6、TNF-α、IL-12、IP-10及/或RANTES或其任何組合。在一些實施例中，一或多種血清細胞介素包含IFN-γ。在一些實施例中，一或多種血清細胞介素包含IL-6。在一些實施例中，一或多種血清細胞介素包含TNF-α。在一些實施例中，一或多種血清細胞介素包含IL-12。在一些實施例中，一或多種血清細胞介素包含IP-10。在一些實施例中，一或多種血清細胞介素包含RANTES。
在一些實施例中，提供減少或抑制細胞遷移之方法。在一些實施例中，該等方法包含使細胞與siRNA分子接觸。在一些實施例中，siRNA分子下調細胞中目標基因之表現。在一些實施例中，目標基因為CD40。在一些實施例中，細胞為CD71陽性細胞。在一些實施例中，細胞為免疫細胞。在一些實施例中，細胞為B細胞。在一些實施例中，細胞為樹突狀細胞。在一些實施例中，該等方法包含減少或抑制細胞自血液遷移至組織。在一些實施例中，該等方法包含減少或抑制細胞自血液遷移至淋巴器官組織。在一些實施例中，該等方法包含選擇性地減少或抑制B細胞及/或樹突狀細胞之遷移，而不減少或抑制T細胞之遷移。
在一些實施例中，提供抑制趨邊之方法。在一些實施例中，該等方法包含使細胞與siRNA分子接觸。在一些實施例中，siRNA分子下調細胞中目標基因之表現。在一些實施例中，目標基因為CD40。在一些實施例中，細胞為CD71陽性細胞。在一些實施例中，細胞為免疫細胞。在一些實施例中，細胞為B細胞。在一些實施例中，細胞為樹突狀細胞。在一些實施例中，該等方法包含減少或抑制細胞自血管內部向血管壁之趨邊。在一些實施例中，該等方法包含選擇性地減少或抑制B細胞及/或樹突狀細胞之趨邊，而不減少或抑制T細胞之趨邊。
在一些實施例中，本文提供之組合物或醫藥組合物可單獨或與其他治療劑組合投與，亦即同時或依序投與。
「治療(treat)」或「治療(treatment)」係指治療性治療及防治性措施，其中目標為預防或減緩(減輕)不期望的生理變化或病症，諸如癌症之發展或擴散。在一些實施例中，有益或期望的臨床結果包括但不限於症狀緩解、疾病範圍縮小、疾病狀態穩定(亦即不惡化)、疾病進展延遲或減緩、疾病狀態改善或減輕以及緩解(無論是部分緩解或完全緩解)，無論可偵測或不可偵測。「治療」亦可意謂與不接受治療之預期存活期相比延長存活期。需要治療之彼等者包括已患有病況或病症之彼等者，以及易患病況或病症之彼等者或欲預防病況或病症之彼等者。
「治療有效量」係指在必需劑量及時間段有效達成所期望之治療結果的量。本文提供之組合物的治療有效量可根據諸如個體之疾病狀態、年齡、性別及體重之因素而不同。有效量之例示性指標為患者健康狀況改善、腫瘤尺寸減小或縮小、腫瘤生長停滯或減緩、及/或不存在癌細胞向體內其他部位之轉移。
投與/醫藥組合物 在一些實施例中，提供包含本文提供之組合物及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。對於治療用途，組合物可製備為在醫藥學上可接受之載劑中含有有效量之域或分子作為活性成分的醫藥組合物。「載劑」係指與活性化合物一起投與之稀釋劑、佐劑、賦形劑或媒劑。此類媒劑可為液體，諸如水及油，包括石油、動物、植物或合成來源之油，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油及其類似物。舉例而言，可使用0.4%生理鹽水及0.3%甘胺酸。此等溶液為無菌的且一般不含顆粒物質。其可藉由習知、眾所周知的滅菌技術(例如過濾)進行滅菌。組合物可視需要含有醫藥學上可接受之輔助物質以接近生理條件，諸如pH調節劑及緩衝劑、穩定劑、增稠劑、潤滑劑及著色劑等。本文所揭示之分子在此類醫藥調配物中之濃度可廣泛變化，亦即按重量計自小於約0.5%、通常至少約1%至高達15%或20%，且將主要基於所需劑量、流體體積、黏度等，根據所選特定投與模式進行選擇。適合的媒劑及調配物，包括其他人類蛋白質，例如人類血清白蛋白，描述於例如Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第21版, Troy, D.B.編, Lipincott Williams and Wilkins, Philadelphia, PA 2006, 第5部分, Pharmaceutical Manufacturing, 第691-1092頁(尤其參見第958-989頁)中。
本文所揭示之組合物用於治療用途之投與模式可為將藥劑遞送至宿主的任何適合的途徑，諸如非經腸投與，例如皮內、肌肉內、腹膜內、靜脈內或皮下、經肺；經黏膜(經口、鼻內、陰道內、經直腸)，使用錠劑、膠囊、溶液、散劑、凝膠、粒子形式之調配物；及包含於注射器、植入裝置、滲透泵、藥筒、微型泵中之調配物；或此項技術中眾所周知的熟習此項技術者瞭解的其他方式。特定部位投與可藉由例如關節內、支氣管內、腹內、囊內、軟骨內、腔內、體腔內、小腦內、腦室內、結腸內、子宮頸管內、胃內、肝內、心內、骨內、骨盆內、心包內、腹膜內、胸膜內、前列腺內、肺內、直腸內、腎內、視網膜內、脊椎內、滑膜內、胸腔內、子宮內、血管內、膀胱內、病灶內、經陰道、經直腸、頰內、舌下、鼻內或經皮遞送來達成。
醫藥組合物可以包含容器之套組形式供應，該容器包含本文所描述之醫藥組合物。醫藥組合物可例如以單次或多次劑量之可注射溶液形式提供，或以在注射前復原之無菌粉末形式提供。或者，此類套組可包括乾粉分散器、液體氣溶膠產生器或霧化器，用於投與醫藥組合物。此類套組可進一步包含關於醫藥組合物之適應症及用法的書面資訊。
列舉的實施例 本文提供之實施例亦包括但不限於以下： 1. 一種組合物，其包含靶向CD40基因之siRNA分子，該分子包含有義股及反義股，諸如本文所提供之彼等分子。 2. 如實施例1之組合物，其中該siRNA分子不含有任何經修飾之核鹼基。 3. 如實施例1或2之組合物，其中該siRNA分子進一步包含共價連接至該有義股或該反義股之連接子。 4. 如實施例3之組合物，其中該連接子連接至該有義股或該反義股之5'端或3'端。 5. 如實施例1至4中任一項之組合物，其中該siRNA分子進一步包含該有義股或該反義股上之乙烯基膦酸酯修飾。 6. 如實施例5之組合物，其中該乙烯基膦酸酯修飾連接至該有義股或該反義股之5'端或3'端。 7. 如實施例1至6中任一項之組合物，其中該有義股包含選自SEQ ID NO: 46-178、312-331、352-356、673-805及939-958中之任一者的核酸序列。 8. 如實施例1至7中任一項之組合物，其中該反義股包含選自SEQ ID NO: 179-311、332-351、356-359、806-938及959-978中之任一者的核酸序列。 9. 如前述實施例中任一項之組合物，其中該siRNA分子包含A1、B1、C1、D1、E1、F1、G1、H1、I1、J1、K1、L1、M1、N1、O1、P1、Q1、R1、S1、T1、U1、V1、W1、X1、Y1、Z1、A2、B2、C2、D2、E2、F2、G2、H2、I2、J2、K2、L2、M2、N2、O2、P2、Q2、R2、S2、T2、U2、V2、W2、X2、Y2、Z2、A3、B3、C3、D3、E3、F3、G3、H3、I3、J3、K3、L3、M3、N3、O3、P3、Q3、R3、S3、T3、U3、V3、W3、X3、Y3、Z3、A4、B4、C4、D4、E4、F4、G4、H4、I4、J4、K4、L4、M4、N4、O4、P4、Q4、R4、S4、T4、U4、V4、W4、X4、Y4、Z4、A5、B5、C5、D5、E5、F5、G5、H5、I5、J5、K5、L5、M5、N5、O5、P5、Q5、R5、S5、T5、U5、V5、W5、X5、Y5、Z5、A6、B6、C6、D6、E6、F6、G6、H6、I6、J6、K6、L6、M6、N6、O6、P6、Q6、R6、S6、T6、U6、V6、W6、B7、C7、P8、Q8、R8、S8、T8、U8、V8、W8、X8、Y8、Z8、A9、B9、C9、D9、E9、F9、G9、H9、I9、J9、K9、L9、M9、N9、O9、P9、Q9、R9、S9、T9、U9、V9、W9、X9、Y9、Z9、A10、B10、F10、G10、H10、I10、J10、K10、L10、M10、N10、O10、P10、Q10、R10、S10、T10、U10、V10、W10、X10、Y10、Z10、A11、B11、C11、D11、E11、F11、G11、H11、I11、J11、K11、L11、M11、N11、O11、P11、Q11、R11或表3A、表3B、表4A、表4B、表5A或表5B中所示之成對siRNA。 10.    如實施例1至6中任一項之組合物，其中該有義股基本上由19或20個核苷酸組成。 11.    如實施例1至6中任一項之組合物，其中該反義股基本上由21個核苷酸組成。 12.    如前述實施例中任一項之組合物，其中該組合物包含表3A、表3B、表4A、表4B、表5A或表5B中所提供之成對siRNA，其具有本文所提供之連接子及/或乙烯基膦酸酯修飾。 13.    如前述實施例中任一項之組合物，其中該siRNA分子具有如式III所示之式：
有義股(SS)
反義股(AS)，
其中由N表示之各核苷酸獨立地為A、U、C或G或經修飾之核苷酸鹼基，諸如本文所提供之彼等者。 14.    如實施例13之組合物，其中該有義股包含N 1及N 2處之具有硫代磷酸酯(PS)修飾之主鏈的2'O-甲基修飾之核苷酸；N 3、N 7、N 8、N 9、N 12及N 17處之2'-氟修飾之核苷酸；及N 4、N 5、N 6、N 10、N 11、N 13、N 14、N 15、N 16、N 18及N 19處之2'O-甲基修飾之核苷酸。 15.    如實施例13之組合物，其中該反義股包含N 1處連接之具有硫代磷酸酯(PS)修飾之主鏈的乙烯基膦酸酯部分；N 2處之具有PS修飾之主鏈的2'氟修飾之核苷酸；N 3、N 4、N 5、N 6、N 7、N 8、N 9、N 10、N 11、N 12、N 13、N 15、N 16、N 17、N 18及N 19處之2'O-甲基修飾之核苷酸；N 14處之2'氟修飾之核苷酸；及N 20及N 21處之具有PS修飾之主鏈的2'O-甲基修飾之核苷酸。 16.    如實施例13之組合物，其中該反義股包含連接至N 1之乙烯基膦酸酯部分。 17.    如實施例13至16中任一項之組合物，其中該siRNA分子與連接子結合，如下式所示： ，或 。 18.    如前述實施例中任一項之組合物，其中該siRNA分子具有如式III所示之式： 其中F 1為包含至少一個FN3域之多肽。 19.    如實施例18之組合物，其中F 1包含具有式(X 1) n-(X 2) q-(X 3) y之多肽，其中X 1為第一FN3域；X 2為第二FN3域；X 3為第三FN3域或半衰期延長分子；其中n、q及y各自獨立地為0或1，其限制條件為n、q及y中之至少一者為1。 20.    一種組合物，其包含一或多個FN3域與siRNA分子結合，該分子包含有義股及反義股且靶向CD40，諸如本文所提供之彼等分子。 21.    如實施例20之組合物，其中該siRNA分子不含有任何經修飾之核鹼基。 22.    如實施例20或21之組合物，其中該siRNA分子進一步包含連接子。 23.    如實施例22之組合物，其中該連接子共價連接至該有義股或該反義股。 24.    如實施例22或23之組合物，其中該連接子連接至該有義股或該反義股之5'端或3'端。 25.    如實施例20至24中任一項之組合物，其中該siRNA分子進一步包含該有義股或該反義股上之乙烯基膦酸酯修飾。 26.    如實施例25之組合物，其中該乙烯基膦酸酯修飾連接至該有義股或該反義股之5'端或3'端。 27.    如實施例20至26中任一項之組合物，其中該有義股包含選自SEQ ID NO: 46-178、312-331、352-356、673-805及939-958中之任一者的核酸序列。 28.    如實施例20至26中任一項之組合物，其中該反義股包含選自SEQ ID NO: 179-311、332-351、356-359、806-938及959-978中之任一者的核酸序列。 29.    如實施例20至26中任一項之組合物，其中該siRNA分子包含A1、B1、C1、D1、E1、F1、G1、H1、I1、J1、K1、L1、M1、N1、O1、P1、Q1、R1、S1、T1、U1、V1、W1、X1、Y1、Z1、A2、B2、C2、D2、E2、F2、G2、H2、I2、J2、K2、L2、M2、N2、O2、P2、Q2、R2、S2、T2、U2、V2、W2、X2、Y2、Z2、A3、B3、C3、D3、E3、F3、G3、H3、I3、J3、K3、L3、M3、N3、O3、P3、Q3、R3、S3、T3、U3、V3、W3、X3、Y3、Z3、A4、B4、C4、D4、E4、F4、G4、H4、I4、J4、K4、L4、M4、N4、O4、P4、Q4、R4、S4、T4、U4、V4、W4、X4、Y4、Z4、A5、B5、C5、D5、E5、F5、G5、H5、I5、J5、K5、L5、M5、N5、O5、P5、Q5、R5、S5、T5、U5、V5、W5、X5、Y5、Z5、A6、B6、C6、D6、E6、F6、G6、H6、I6、J6、K6、L6、M6、N6、O6、P6、Q6、R6、S6、T6、U6、V6、W6、B7、C7、P8、Q8、R8、S8、T8、U8、V8、W8、X8、Y8、Z8、A9、B9、C9、D9、E9、F9、G9、H9、I9、J9、K9、L9、M9、N9、O9、P9、Q9、R9、S9、T9、U9、V9、W9、X9、Y9、Z9、A10、B10、F10、G10、H10、I10、J10、K10、L10、M10、N10、O10、P10、Q10、R10、S10、T10、U10、V10、W10、X10、Y10、Z10、A11、B11、C11、D11、E11、F11、G11、H11、I11、J11、K11、L11、M11、N11、O11、P11、Q11、R11或表3A、表3B、表4A、表4B、表5A或表5B中所示之成對siRNA。 30.    如實施例20至26中任一項之組合物，其中該siRNA分子包含表3A、表3B、表4A、表4B、表5A或表5B中所提供之成對siRNA，其具有如本文所闡述之連接子及/或乙烯基膦酸酯修飾。 31.    如實施例20至30中任一項之組合物，其中該一或多個FN3域包含經由FN3域中之半胱胺酸與該siRNA分子結合之FN3域。 32.    如實施例31之組合物，其中該半胱胺酸位於如本文所描述之位置處。 33.    如實施例31或32之組合物，其中該FN3域中之該半胱胺酸位於與基於SEQ ID NO: 2311之FN3域之殘基6、8、10、11、14、15、16、20、30、34、38、40、41、45、47、48、53、54、59、60、62、64、70、88、89、90、91或93對應的位置處。 34.    如實施例33之組合物，其中該半胱胺酸位於與殘基6、53或88對應的位置處。 35.    如實施例20至34中任一項之組合物，其中該一或多個FN3域包含結合CD71之FN3域。 36.    如實施例20至35中任一項之組合物，其中該一或多個FN3域包含有包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849中之任一者之序列至少87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致或一致的胺基酸序列的FN3域。 37.    如實施例36之組合物，其中該FN3域包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少87%一致的胺基酸序列。 38.    如實施例36之組合物，其中該FN3域包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少88%一致的胺基酸序列。 39.    如實施例36之組合物，其中該FN3域包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少89%一致的胺基酸序列。 40.    如實施例36之組合物，其中該FN3域包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少90%一致的胺基酸序列。 41.    如實施例36之組合物，其中該FN3域包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少91%一致的胺基酸序列。 42.    如實施例36之組合物，其中該FN3域包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少92%一致的胺基酸序列。 43.    如實施例36之組合物，其中該FN3域包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少93%一致的胺基酸序列。 44.    如實施例36之組合物，其中該FN3域包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少93%一致的胺基酸序列。 45.    如實施例36之組合物，其中該FN3域包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少94%一致的胺基酸序列。 46.    如實施例36之組合物，其中該FN3域包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少94%一致的胺基酸序列。 47.    如實施例36之組合物，其中該FN3域包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少95%一致的胺基酸序列。 48.    如實施例36之組合物，其中該FN3域包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少96%一致的胺基酸序列。 49.    如實施例36之組合物，其中該FN3域包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少97%一致的胺基酸序列。 50.    如實施例36之組合物，其中該FN3域包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少98%一致的胺基酸序列。 51.    如實施例36之組合物，其中該FN3域包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少99%一致的胺基酸序列。 52.    如實施例36之組合物，其中該FN3域包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列一致的胺基酸序列。 53.    如實施例20至52中任一項之組合物，其中該一或多個FN3域包含至少兩個由肽連接子連接之FN3域。 54.    如實施例53之組合物，其中該肽連接子包含選自SEQ ID NO: 645-661中之任一者的胺基酸序列。 55.    如實施例53或54之組合物，其中該一或多個FN3域包含第一FN3域及第二FN3域。 56.    如實施例55之組合物，其中該第一FN3域包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849中之任一者之序列至少87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致或一致的胺基酸序列。 57.    如實施例55或66之組合物，其中該第一FN3域結合CD71。 58.    如實施例55至57中任一項之組合物，其中該第二FN3域結合與該第一FN3域不同的目標。 59.    如實施例58之組合物，其中該第二FN3域結合白蛋白且包含選自SEQ ID NO: 5-23中之任一者的胺基酸序列或其結合片段。 60.    如實施例55至57中任一項之組合物，其中該第二FN3域結合與該第一FN3域相同的目標。 61.    如實施例20至60中任一項之組合物，其進一步包含第三FN3域。 62.    如實施例61之組合物，其中該第三FN3域結合CD71或白蛋白。 63.    如實施例62之組合物，其中結合CD71之FN3域具有本文所提供之胺基酸序列，包括但不限於SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849中之任一者或其結合片段。 64.    如實施例63之組合物，其中該結合CD71之FN3域具有本文所提供之半胱胺酸取代。 65.    如實施例62之組合物，其中結合白蛋白之FN3具有本文所提供之胺基酸序列，包括但不限於SEQ ID NO: 5-23中之任一者或其結合片段。 66.    如實施例65之組合物，其中該結合CD71之FN3域具有本文所提供之半胱胺酸取代。 67.    一種組合物，其具有下式： (X 1) n-(X 2) q-(X 3) y-L-X 4； C-(X 1) n-(X 2) q-L-X 4-(X 3) y； (X 1) n-(X 2) q-L-X 4-(X 3) y-C； C-(X 1) n-(X 2) q-L-X 4-L-(X 3) y； 或(X 1) n-(X 2) q-L-X 4-L-(X 3) y-C， 其中： X 1為第一FN3域； X 2為第二FN3域； X 3為第三FN3域或半衰期延長分子； L為連接子； X 4為核酸分子，諸如靶向CD40之siRNA，諸如本文所提供之彼等者； C為聚合物，諸如PEG、白蛋白結合蛋白或與血清蛋白結合之脂族鏈；及/或 n、q及y各自獨立地為0或1。 68.    如實施例67之組合物，其中X 1、X 2及X 3與相同或不同的目標蛋白結合。 69.    如實施例67或68之組合物，其中y為0。 70.    如實施例67或68之組合物，其中n為1，q為0，且y為0。 71.    如實施例67或68之組合物，其中n為1，q為1，且y為0。 72.    如實施例67或68之組合物，其中n為1，q為1，且y為1。 73.    如實施例67至72中任一項之組合物，其中與無X 3之分子相比，X 3增加分子整體之半衰期。 74.    如實施例67至73中任一項之組合物，其中X 3為結合白蛋白之第三FN3域。 75.    如實施例67至74中任一項之組合物，其中該連接子為本文所提供之連接子。 76.    如實施例67至75中任一項之組合物，其中該等FN3域由肽連接子連接。 77.    如實施例76之組合物，其中該肽連接子包含選自SEQ ID NO: 645-661中之任一者及其組合的胺基酸序列。 78.    如實施例67至77中任一項之組合物，其中該第一、第二及/或第三FN3域包含本文所提供之胺基酸序列。 79.    如實施例67至78中任一項之組合物，其中X 4為靶向CD40之siRNA分子。 80.    如實施例79之組合物，其中該siRNA分子為本文所提供之siRNA分子。 81.    如實施例79或80之組合物，其中該siRNA分子降低CD40之mRNA表現。 82.    如實施例79至81中任一項之組合物，其中該siRNA分子特異性降低CD40之mRNA表現。 83.    如實施例79至82中任一項之組合物，其中該siRNA分子降低CD40之mRNA表現且不顯著降低其他mRNA之表現。 84.    如實施例79至83中任一項之組合物，其中該siRNA分子在本文所描述之分析中以不超過200 nm之濃度降低CD40之mRNA表現且降低其他mRNA之表現不超過50%，如本文所描述。 85.    如實施例79至84中任一項之組合物，其中該siRNA分子降低CD40之mRNA表現且降低CD40蛋白之濃度。 86.    如實施例85之組合物，其中該siRNA分子降低細胞中CD40蛋白之濃度。 87.    如實施例86之組合物，其中該細胞為免疫細胞。 88.    如實施例87之組合物，其中該免疫細胞為B細胞、T細胞或樹突狀細胞。 89.    如實施例88之組合物，其中該免疫細胞為B細胞。 90.    如實施例88之組合物，其中該免疫細胞為T細胞。 91.    如實施例88之組合物，其中該免疫細胞為樹突狀細胞。 92.    如實施例79至91中任一項之組合物，其中該siRNA分子包含下式中所提供之成對siRNA： 。 93.    如實施例92之組合物，其中反義股包含N 1處之乙烯基膦酸酯修飾。 94.    如實施例92之組合物，其中順丁烯二醯亞胺經水解以形成以下化合物之混合物，或各化合物中之一或兩者，或僅以下化合物中之一者： 。 95.    如實施例67至94中任一項之組合物，其中該siRNA分子包含本文所提供之成對siRNA或表3A、表3B、表4A、表4B、表5A或表5B中所提供之成對siRNA。 96.    一種具有式A 1-B 1之組合物，其中A 1具有式(C) n-(L 1) t-X s且B 1具有式X AS-(L 2) q-(F 1) y， 其中： C為聚合物，諸如PEG、白蛋白結合蛋白或與血清蛋白結合之脂族鏈； L 1及L 2各自獨立地為連接子； X S為雙股siRNA分子之5'至3'寡核苷酸有義股； X AS為雙股siRNA分子之3'至5'寡核苷酸反義股； F 1為包含至少一個FN3域之多肽； n、t、q及y各自獨立地為0或1；及/或 X S及X AS形成雙股寡核苷酸分子，以形成靶向CD40之組合物/複合物。 97.    一種具有式A 1-B 1之組合物，其中A 1具有式(F 1) n-(L 1) t-X s且B 1具有式X AS-(L 2) q-(C) y，其中： C為聚合物，諸如PEG、白蛋白結合蛋白或與血清蛋白結合之脂族鏈； L 1及L 2各自獨立地為連接子； X S為雙股siRNA分子之5'至3'寡核苷酸有義股； X AS為雙股siRNA分子之3'至5'寡核苷酸反義股； F 1為包含至少一個FN3域之多肽； n、t、q及y各自獨立地為0或1；及/或 X S及X AS形成雙股寡核苷酸分子，以形成靶向CD40之組合物/複合物。 98.    如實施例96或97之組合物，其中L 1具有下式： 。 99.    如實施例96或97之組合物，其中L 2具有下式： 。 100.  如實施例96或97之組合物，其中A 1-B 1具有下式： 。 101.  如實施例96或97之組合物，其中A 1-B 1具有下式： 。 102.  如實施例96或97之組合物，其中F 1包含具有式(X 1) n-(X 2) q-(X 3) y之多肽，其中X 1為第一FN3域；X 2為第二FN3域；X 3為第三FN3域或半衰期延長分子；其中n、q及y各自獨立地為0或1，其限制條件為n、q及y中之至少一者為1。 103.  如實施例96或97之組合物，其中X 1為結合CD71之FN3域。 104.  如實施例96或97之組合物，其中X 2為結合CD71之FN3域。 105.  如實施例96或97之組合物，其中X 3為結合人類血清白蛋白之FN3域。 106.  如實施例96或97之組合物，其中X 3為無效應功能之Fc域，其延長蛋白質之半衰期。 107.  如實施例96至106中任一項之組合物，其中X S包含選自SEQ ID NO: 46-178、312-331、352-356、673-805及939-958中之任一者的核酸序列。 108.  如實施例96至106中任一項之組合物，其中X AS包含選自SEQ ID NO: 179-311、332-351、356-359、806-938及959-978中之任一者的核酸序列。 109.  如實施例96至106中任一項之組合物，其中X S及X AS形成選自以下中之任一者的成對siRNA：A1、B1、C1、D1、E1、F1、G1、H1、I1、J1、K1、L1、M1、N1、O1、P1、Q1、R1、S1、T1、U1、V1、W1、X1、Y1、Z1、A2、B2、C2、D2、E2、F2、G2、H2、I2、J2、K2、L2、M2、N2、O2、P2、Q2、R2、S2、T2、U2、V2、W2、X2、Y2、Z2、A3、B3、C3、D3、E3、F3、G3、H3、I3、J3、K3、L3、M3、N3、O3、P3、Q3、R3、S3、T3、U3、V3、W3、X3、Y3、Z3、A4、B4、C4、D4、E4、F4、G4、H4、I4、J4、K4、L4、M4、N4、O4、P4、Q4、R4、S4、T4、U4、V4、W4、X4、Y4、Z4、A5、B5、C5、D5、E5、F5、G5、H5、I5、J5、K5、L5、M5、N5、O5、P5、Q5、R5、S5、T5、U5、V5、W5、X5、Y5、Z5、A6、B6、C6、D6、E6、F6、G6、H6、I6、J6、K6、L6、M6、N6、O6、P6、Q6、R6、S6、T6、U6、V6、W6、B7、C7、P8、Q8、R8、S8、T8、U8、V8、W8、X8、Y8、Z8、A9、B9、C9、D9、E9、F9、G9、H9、I9、J9、K9、L9、M9、N9、O9、P9、Q9、R9、S9、T9、U9、V9、W9、X9、Y9、Z9、A10、B10、F10、G10、H10、I10、J10、K10、L10、M10、N10、O10、P10、Q10、R10、S10、T10、U10、V10、W10、X10、Y10、Z10、A11、B11、C11、D11、E11、F11、G11、H11、I11、J11、K11、L11、M11、N11、O11、P11、Q11、R11或如表3A、表3B、表4A、表4B、表5A或表5B中所示。 110.  如實施例96至106中任一項之組合物，其中F 1包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849中之任一者之序列至少87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致或一致的胺基酸序列。 111.  如實施例110之組合物，其中F 1包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849中之任一者之序列至少87%一致的胺基酸序列。 112.  如實施例110之組合物，其中F 1包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849中之任一者之序列至少88%一致的胺基酸序列。 113.  如實施例110之組合物，其中F 1包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少89%一致的胺基酸序列。 114.  如實施例110之組合物，其中F 1包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少90%一致的胺基酸序列。 115.  如實施例110之組合物，其中F 1包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少91%一致的胺基酸序列。 116.  如實施例110之組合物，其中F 1包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少92%一致的胺基酸序列。 117.  如實施例110之組合物，其中F 1包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少93%一致的胺基酸序列。 118.  如實施例110之組合物，其中F 1包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少93%一致的胺基酸序列。 119.  如實施例110之組合物，其中F 1包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少94%一致的胺基酸序列。 120.  如實施例110之組合物，其中F 1包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少94%一致的胺基酸序列。 121.  如實施例110之組合物，其中F 1包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少95%一致的胺基酸序列。 122.  如實施例110之組合物，其中F 1包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少96%一致的胺基酸序列。 123.  如實施例110之組合物，其中F 1包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少97%一致的胺基酸序列。 124.  如實施例110之組合物，其中F 1包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少98%一致的胺基酸序列。 125.  如實施例110之組合物，其中F 1包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列至少99%一致的胺基酸序列。 126.  如實施例110之組合物，其中F 1包含與選自SEQ ID NO: 360-644、663-672及1395-1849之序列一致的胺基酸序列。 127.  如實施例96至106中任一項之組合物，其中F 1包含結合白蛋白之多肽。 128.  一種醫藥組合物，其包含如實施例1至127中任一項之組合物。 129.  一種套組，其包含如實施例1至127中任一項之組合物。 130.  一種治療有需要之個體之免疫疾病的方法，該方法包含向該個體投與如實施例1至127中任一項之組合物或本文所提供之任何組合物。 131.  一種如本文所提供或如實施例1至127中任一項之組合物的用途，其用於製備供治療免疫疾病，諸如本文所提供之自體免疫疾病用之醫藥組合物或藥物。 132.  一種如本文所提供或如實施例1至127中任一項之組合物的用途，其用於治療免疫疾病。 133.  如實施例132之用途，其中該免疫疾病為類風濕性關節炎、橋本氏自體免疫甲狀腺炎、乳糜瀉、1型糖尿病、白斑病、風濕熱、惡性貧血/萎縮性胃炎、斑禿、免疫性血小板減少性紫癜、牛皮癬、發炎性腸病、全身性紅斑狼瘡、天疱瘡、休格連氏症候群、發炎性肌炎、狼瘡性腎炎、尋常天疱瘡、多發性硬化症或預防實體器官移植排斥反應。 134.  一種降低諸如免疫細胞之細胞中目標基因之表現的方法，該方法包含使該免疫細胞與如實施例1至127中任一項之組合物或如本文所提供之組合物接觸。 135.  如實施例134之方法，其中該目標基因為CD40。 136.  一種將siRNA分子遞送至個體之細胞諸如免疫細胞的方法，該方法包含向該個體投與包含如實施例1至127中任一項之組合物的醫藥組合物。 137.  如實施例136之方法，其中該細胞為CD71陽性細胞。 138.  如實施例136或137之方法，其中該細胞為免疫細胞。 139.  如實施例138之方法，其中該免疫細胞為B細胞、T細胞或樹突狀細胞。 140.  如實施例139之方法，其中該免疫細胞為B細胞。 141.  如實施例139之方法，其中該免疫細胞為T細胞。 142.  如實施例139之方法，其中該免疫細胞為樹突狀細胞。 143.  如實施例136至142中任一項之方法，其中該siRNA分子下調該細胞中目標基因之表現。 144.  如實施例143之方法，其中該目標基因之表現的下調引起約99%、90-99%、50-90%或10-50%之降低。 145.  如實施例136至144中任一項之方法，其中該目標基因為CD40。 146.  一種將靶向CD40之siRNA分子遞送至個體之CD71陽性免疫細胞的方法，該方法包含向該個體投與包含如實施例1至127中任一項之組合物的醫藥組合物，其中該siRNA分子下調該CD71陽性免疫細胞中CD40之表現。 147.  一種減少CD71陽性免疫細胞群體中之一或多種細胞介素的方法，該方法包含使該CD71陽性免疫細胞群體與如實施例1至127中任一項之組合物接觸。 148.  一種減少個體之一或多種細胞介素的方法，該方法包含向該個體投與如實施例1至127中任一項之組合物。 149.  一種減少有需要之個體之一或多種細胞介素的方法，該方法包含向該有需要之個體投與如實施例1至127中任一項之組合物。 150.  如實施例147之方法，其中該一或多種細胞介素係選自IFN-γ、IL-6、TNF-α、IL-12、IP-10及/或RANTES或其任何組合。 151.  如實施例147或148之方法，其中該一或多種CD71陽性免疫細胞包含B細胞、T細胞、樹突狀細胞或其組合。 152.  一種減少或抑制細胞群體自血液遷移至組織的方法，該方法包含使靶向CD40之siRNA分子，諸如本文所描述之彼等分子與該細胞群體接觸。 153.  如實施例152之方法，其中該細胞群體包含表現CD40之細胞。 154.  如實施例152或153之方法，其中該細胞群體包含樹突狀細胞、B細胞或其組合。 155.  如實施例152至154中任一項之方法，其中該組織為淋巴器官組織。
實例 以下實例說明本文所揭示之實施例。僅出於說明之目的提供此等實例且該等實施例決不應解釋為限於此等實例，而是應解釋為涵蓋由於本文所提供之教示而變為證據之任何及所有變化形式。熟習此項技術者將容易地認識到可經改變或修改以產生基本上相似之結果的多種非關鍵性參數。
實例1：CD40 siRNA序列鑑別及表徵. siRNA 電腦模擬篩選 ：進行電腦模擬siRNA篩選以鑑別與人類CD40 mRNA互補之siRNA。描繪篩選期間之步驟及評定特性的流程圖展示於圖1中。所有可能的19聚體反義序列均由原始人類CD40 mRNA同功異型物序列(NM_001250.6)產生，且評定各19聚體與其他相關人類CD40同功異型物之互補性。在小鼠、大鼠及食蟹獼猴之總轉錄本中進一步評定電腦模擬交叉反應性。評定來自各模型生物體之註釋良好的轉錄本子集以確定交叉反應性(表17)。藉由使用BOWTIE將兩股定位至人類RefSeq版本204總轉錄本且鑑別位置2-18處之核苷酸分別具有14、15、16及17個核苷酸比對的位置來評定脫靶效應。 表 17
物種 考慮活性之轉錄本
人類 NM_001250.6
NM_001302753.2
NM_001322421.2
NM_001362758.2
NM_152854.4
NM_001322422.2
XM_017028135.1
XM_017028136.1
XM_005260619.3
ENST00000372285.8
ENST00000372276.7
ENST00000620709.4
小鼠 NM_011611.2
NM_170704.2
NM_170703.2
NM_170702.2
XM_006499155.5
XM_006499154.4
ENSMUST00000017799.11
ENSMUST00000073707.8
食蟹獼猴 XM_005569217.2
XM_005569218.2
XM_005569221.2
XM_005569219.2
XM_005569220.2
ENSMFAT00000070425.1
ENSMFAT00000070436.1
大鼠 NM_134360.1
XM_006235511.2
XM_008762464.1
XM_008762463.2
XM_008762465.1
ENSRNOT00000055148.4
根據NCBI dbSNP Build 2.0 153評定人類siRNA目標位點之常見人類多形現象(MAF ＞ 1%)。捨棄靶向常見對偶基因之序列。接下來，評定所有相關模型生物體中siRNA脫靶基因之有義股及反義股。不與任何常見人類遺傳多形現象重疊之siRNA分子視為用於合成之候選物。基於人類脫靶預測對此等候選物進行優先篩選。選擇彼等含有相對較低數目之與總轉錄本之脫靶比對的序列用於合成。隨後用5' U (連同相應的3'有義A)置換反義位置1，且將3' UU工程改造至反義股中。
寡核苷酸合成 ：寡核苷酸之合成係在Mermade® 12合成儀上使用標準胺基亞磷酸酯化學方法，在500Å受控微孔玻璃(CPG)上以0.1 M濃度的胺基磷酸酯之乙腈溶液進行。含碘之THF/吡啶/水(0.02 M)用作氧化劑，0.6 M ETT (5-乙基硫代四唑)用作活化劑。 N,N-二甲基- N'-(3-硫酮基-3H-1,2,4-二噻唑-5-基)甲脒(DDTT)之0.09 M吡啶溶液用作硫化試劑，以引入硫代磷酸酯(PS)鍵。3% (v/v)二氯乙酸之二氯甲烷溶液用作解封閉溶液。所有不含順丁烯二醯亞胺之單股均藉由離子交換層析純化，其中使用20 mM磷酸鹽pH 8.5作為緩衝液A且使用20 mM磷酸鹽pH 8.5及1 M溴化鈉作為緩衝液B。純化後，彙集寡核苷酸溶離份，濃縮且去鹽。隨後將去鹽樣品凍乾且儲存在-20℃下。
反義股脫除保護基 ：合成後，用乙腈(ACN)洗滌支撐物且在管柱中真空乾燥，轉移至可緊密密封之1 mL螺帽中且與5%二乙胺於氨水中之溶液一起在65℃下震盪5小時。藉由液相層析-質譜法(LC-MS)檢查粗寡核苷酸之裂解及脫除保護基，且隨後藉由IEX-HPLC純化。
含順丁烯二醯亞胺之寡核苷酸的合成、脫除保護基及黏接 ：使用3'胺基修飾之CPG固體支撐物或5'胺基修飾之胺基亞磷酸酯製得含順丁烯二醯亞胺之寡核苷酸。將支撐物轉移至可緊密密封之1 mL小瓶中，且與50/50 v/v 40%甲胺水溶液及氨水(AMA)一起在室溫下培育2小時或在65℃下培育10分鐘以裂解及脫除保護基。單股藉由離子交換層析純化，且在添加順丁烯二醯亞胺之前在與反義股相同的條件下去鹽。
製得含大約20 mg/mL胺修飾之有義股的0.05 M磷酸鹽緩衝液pH 7.1，向其中添加溶解於ACN中之10當量順丁烯二醯亞胺N-羥基丁二醯亞胺(NHS)酯。將NHS酯溶液添加至寡核苷酸水溶液中且在室溫下震盪3小時。現在使用20 mM乙酸三乙銨與含80%乙腈之緩衝液B作為移動相，藉由逆相層析純化順丁烯二醯亞胺結合之寡核苷酸。
純化後，彙集寡核苷酸溶離份，濃縮且去鹽。為了避免順丁烯二醯亞胺水解，使用等莫耳量之各去鹽單股經由冷凍乾燥進行有義股及反義股之雙螺旋化。
FN3-siRNA 結合及純化 ：FN3域-siRNA結合物係藉由將半胱胺酸修飾之結合CD71之FN3域與含有順丁烯二醯亞胺之siRNA經由半胱胺酸特異性化學方法結合來製備。對於FN3-順丁烯二醯亞胺結合，在室溫下用10 mM參(2-羧乙基)膦(TCEP)還原50-200 µM含半胱胺酸之結合CD71之FN3域的PBS溶液(30分鐘)，得到游離硫醇。為了移除TCEP，用飽和硫酸銨溶液沉澱FN3蛋白，且隨後與預先即刻溶解於水中之順丁烯二醯亞胺修飾之siRNA雙螺旋體以約1.5:1 FN3:siRNA之莫耳比混合。在室溫或37℃下培育1小時後，用 N-乙基順丁烯二醯亞胺(反應混合物中NEM之最終濃度為1 mM)淬滅反應。
為了避免經由逆邁克爾反應(retro-Michael reaction)損失有效負載，進行順丁烯二醯亞胺環水解。將來自結合物之彙集溶離份透析至25 mM TRIS pH 8.9緩衝液中。在此緩衝液中，將反應物置於37℃之培育箱震盪器中72小時。藉由LC-MS監測反應的完成。
分兩步純化FN3域-siRNA結合物：使用IMAC層析(HisTrap HP)移除未反應之siRNA連接子，且使用陰離子交換層析-Capto-DEAE移除未反應之FN3蛋白。FN3域-siRNA結合物藉由PAGE、分析型尺寸排阻層析及LC/MS進行表徵。結合物之濃度係使用Nanodrop基於結合物溶液在260處之吸光度來計算。
活體外篩選 1 ：使用單一濃度進行活體外篩選來選擇第一組命中物。在Neon轉染系統(Life Technologies)中使用Neon 10 µl尖端對Raji細胞進行電穿孔，設置為1300 V脈衝電壓、30 ms脈衝寬度及1個脈衝數。使用單一濃度20 nM之siRNA進行電穿孔。電穿孔後，將細胞接種於RPMI-1640 + 10%熱滅活認證之FBS + 1% glutamax中。細胞在溶解之前在37℃下培育24小時。使用Cells to Ct進行qPCR。PGK1用作內源對照且RQ值相對於「僅水之電穿孔」對照正規化。所用siRNA有義股之SEQ ID NO、相對CD40表現及KD %展示於表11、12及13中。 表11
SEQ ID NO 相對 CD40 表現 KD %
僅細胞 1.149254212 -15%
水 1.003990555 0%
46 0.909680702 9%
47 0.743403529 26%
48 0.703704739 30%
49 0.947740379 5%
50 0.864740935 14%
51 0.62619472 37%
52 0.768353208 23%
53 0.987012714 1%
54 0.869341663 13%
55 0.841853463 16%
56 0.817380579 18%
57 0.552310134 45%
58 1.082485112 -8%
59 1.042719552 -4%
60 0.899848414 10%
61 0.880316424 12%
62 0.664870191 34%
63 0.729761005 27%
64 0.902885713 10%
65 0.729691208 27%
66 0.590870903 41%
67 0.798724017 20%
68 0.774238883 23%
69 0.743035586 26%
70 0.983048203 2%
71 0.993623025 1%
72 0.875978927 12%
73 1.135949571 -14%
74 1.053504041 -5%
75 1.008676715 -1%
76 0.948329523 5%
77 1.091930907 -9%
78 1.034526434 -3%
79 0.924380748 8%
80 1.121298524 -12%
81 0.984561964 2%
82 0.978611164 2%
83 0.881130218 12%
84 1.320259339 -32%
85 0.928711683 7%
86 0.990115269 1%
87 1.024379909 -2%
表12
SEQ ID NO 相對 CD40 表現 KD %
僅細胞 1.343776 -34%
水 1 0%
101 0.831747016 17%
102 0.81733404 18%
103 0.563286873 44%
104 0.680236801 32%
105 0.748766708 25%
106 1.210384159 -21%
107 0.626908315 37%
108 0.824963716 18%
109 0.586207223 41%
110 0.538112572 46%
111 0.498946757 50%
112 0.704325487 30%
113 0.812404254 19%
114 0.514618913 49%
115 0.531157496 47%
116 1.121295754 -12%
117 1.045805998 -5%
118 0.617456337 38%
119 0.988976941 1%
120 0.937158154 6%
121 0.625369433 37%
122 0.661367656 34%
123 0.443969715 56%
124 0.558153316 44%
125 0.745917202 25%
126 0.71088051 29%
127 0.776290399 22%
128 0.350835076 65%
129 0.396576832 60%
130 0.394009796 61%
131 0.565565057 43%
132 0.666630372 33%
133 0.860769602 14%
134 0.457934389 54%
135 0.801985609 20%
136 1.089838975 -9%
137 1.068546521 -7%
138 0.751258525 25%
139 0.714892672 29%
140 0.543018731 46%
141 0.470724331 53%
142 0.437388094 56%
143 0.49984402 50%
144 0.474237371 53%
145 0.331310913 67%
146 0.504627385 50%
147 0.814147169 19%
148 0.872137532 13%
149 0.927470102 7%
150 0.767530331 23%
151 0.702624434 30%
152 0.865857788 13%
153 0.972791933 3%
154 0.947240401 5%
表13
SEQ ID NO 相對 CD40 表現 KD %
僅細胞 1.122351745 -12%
水 1 0%
88 0.950617657 5%
89 1.071355823 -7%
90 1.21709319 -22%
91 1.08442193 -8%
92 0.965247485 3%
93 0.883124196 12%
94 0.697111663 30%
95 0.686988025 31%
96 0.929588911 7%
97 0.516791125 48%
98 0.843864392 16%
99 0.953386611 5%
100 1.065865765 -7%
155 1.035884581 -4%
156 1.229445655 -23%
157 0.619988851 38%
158 0.781808906 22%
159 0.952489595 5%
160 0.631758163 37%
161 0.715872508 28%
162 0.796020481 20%
163 1.180848838 -18%
164 0.966813286 3%
165 1.292063155 -29%
166 0.883030797 12%
167 0.859540302 14%
168 0.870443073 13%
169 0.625400025 37%
170 0.54956429 45%
171 0.84474175 16%
172 0.906642904 9%
173 0.620974058 38%
174 0.961299584 4%
175 1.076118437 -8%
176 0.860515866 14%
177 1.049361244 -5%
178 0.64558077 35%
活體外篩選 2 ：在Neon轉染系統(Life Technologies)中用Neon 10 µl尖端對Raji或A20細胞進行電穿孔，設置為1300 V脈衝電壓、30 ms脈衝寬度及1個脈動數用於Raji或1680 V脈衝電壓、20 ms脈衝寬度及1個脈衝用於A20。針對電穿孔進行siRNA之滴定(自300 nM開始進行2倍稀釋)。電穿孔後，將細胞接種於RPMI-1640 + 10%熱滅活認證之FBS + 1% glutamax中。細胞在溶解之前在37℃下培育24小時。使用Cells to Ct進行qPCR。對於Raji，PGK1、HPRT1及UBE2D2用作內源對照，且RQ值相對於「水之電穿孔」對照正規化。對於A20，B2M、HPRT1及PGK1用作內源對照，且RQ值相對於「僅水之電穿孔」對照正規化。所用siRNA有義股之SEQ ID NO、300 nM下之KD %及EC50值展示於表14及表15 (Raji細胞)以及表16及表17 (A20細胞)中。與表15及表17中所示之序列對應的滴定曲線分別展示於圖2A及圖2B中。 表14
SEQ ID NO 300 nM 下之 KD % EC50
57 70% 14.5
123 64% 7.12
124 56% 19.69
128 45% 4.988
129 76% 9.914
130 69% 10.97
134 72% 24.68
141 57% 31.56
142 62% 20.76
143 61% 12.13
145 70% 3.95
表15
SEQ ID NO 300 nM 下之KD % EC50
328 65% 8.194
332 61% 9.342
333 59% 11.48
314 78% 6.852
315 73% 20.39
316 61% 4.03
329 61% 10.29
330 57% 4.835
317 67% 9.59
331 46% 3.077
318 67% 3.91
表16
SEQ ID NO 300 nM 下之KD % EC50
123 83% 6.267
124 67% 5.248
表17
SEQ ID NO 300 nM 下之KD % EC50
332 87% 3.557
333 73% 13.45
實例2：藉由投與結合CD71之FN3域-CD40 siRNA組合物降低CD40表現(預示性). 將本文所提供之結合CD71之FN3域與本文所提供之CD40 siRNA結合，且進行分析以確定與免疫細胞之優良結合、siRNA吸收及目標細胞中CD40表現之降低。將選擇的組合物調配為本文所提供之醫藥組合物，且向患有自體免疫疾病之動物模型投與。靶向免疫細胞中之CD40表現降低，且自體免疫疾病得到治療。
實例3：siRNA及結合物之活體外測試. 在 SKBR3 及 Cal27 細胞中使用轉染試劑之單次劑量及劑量反應曲線 ：使用一般熟習此項技術者已知的方法，用轉染試劑反向轉染SKBR3或Cal27細胞，每孔20,000個細胞。簡言之，將表18中所示之siRNA及轉染試劑分別在減血清培養基中稀釋，隨後以1:1比率組合。將轉染試劑及siRNA之混合物用移液管移入96孔平底盤中，且用再懸浮於含有RPMI 1640及10%胎牛血清之無抗生素培養基中之細胞加滿。將細胞在37℃下培育24小時，且隨後溶解細胞以在SKBR3細胞中進行定量聚合酶鏈反應(qPCR)分析。使用大量溶解試劑溶解細胞且分離RNA進行量測。PGK1用作內源基因對照。相對定量(RQ)值相對於「僅用轉染試劑轉染」對照正規化。亦量測SKBR3細胞組之減弱(KD)。測定SKBR3及Cal27細胞組之EC50及Emax。表18展示在SKBR3細胞中測試之各siRNA所示的相對CD40 mRNA表現、10 nM下之KD %、EC50 (pM)及Emax (%)以及在Cal27細胞中測試之各siRNA的EC50 (pM)及Emax (%)。在用表18中所列之siRNA處理後，活體外SKBR3細胞之相對CD40 mRNA表現降低約77%至約84%。與處理Cal27細胞後相比，處理SKBR3細胞後之效力及最大反應降低。 表18
siRNA ID 有義股 SEQ ID NO 反義股 SEQ ID NO 相對 CD40 mRNA 表現 (SKBR3) 10 nM 下之 KD % (SKBR3) EC50 (pM) (SKBR3) Emax (%) (SKBR3) EC50 (pM) (Cal27) Emax (%) (Cal27)
ABXO-1049 1890 2290 0.222 78 18.0 72.0 43.2 80
ABXO-1050 1891 2291 0.166 83 6.0 74.0 23.8 83
ABXO-1052 1893 2293 0.189 81 21.0 73.0 39.5 86
ABXO-1059 1900 2010 0.202 80 36.0 79.0 64 86
ABXO-537 315 335 0.163 84 19.0 75.0 114 85
在 A20 及 C2C12 細胞中使用電穿孔之單次劑量及劑量反應曲線 ：在1680 V脈衝電壓、20 ms脈衝寬度及1個脈衝下，用10 µL尖端對A20細胞進行電穿孔，每孔50,000個細胞。將表19中之siRNA稀釋於水中進行電穿孔；水僅用作對照。電穿孔後，將細胞接種於含有RPMI 1640及10%胎牛血清之無抗生素培養基中。細胞在溶解之前在37℃下培育24小時。使用大量溶解試劑溶解細胞且分離RNA進行量測。B2M用作內源基因對照。RQ值相對於對照正規化。
用轉染試劑反向轉染C2C12細胞，每孔20,000個細胞。簡言之，將siRNA及轉染試劑分別在減血清培養基中稀釋，隨後以1:1比率組合成混合物。將混合物用移液管移入96孔平底盤中，且用再懸浮於含有RPMI 1640及10%胎牛血清之無抗生素培養基中之細胞加滿。細胞在溶解之前在37℃下培育24小時。使用Cells to Ct進行qPCR。B2M用作內源基因對照。RQ值相對於「僅用轉染試劑轉染」對照正規化。表19中展示在A20細胞中測試之各結合物的相對CD40 mRNA表現、5 nM下之KD %、EC50 (pM)及Emax (%)；亦展示在C2C12細胞中測試之各siRNA的EC50 (pM)及Emax (%)。在投與下文亦即表19中所列之一些siRNA後，活體外A20細胞中之相對CD40 mRNA表現降低。舉例而言，在投與siRNA ABXO-1036後，活體外A20細胞中之相對CD40 mRNA表現降低約27.8%。 表19
siRNA ID 相對 CD40 mRNA 表現 (A20) 5 nM 下之 KD % (A20) EC50 (nM) (A20) Emax (%) (A20) EC50 (pM) (C2C12) Emax (%) (C2C12)
ABXO-1022 0.764 24 6.1 83 62 94
ABXO-1025 0.825 18 13 79 73 90
ABXO-1036 0.722 28 0.63 73 15 94
ABXO-1002 0.786 21 92.5 74 N/A N/A
ABXO-1003 0.827 17 161.3 70 N/A N/A
ABXO-1004 1.183 0 N/A N/A N/A N/A
ABXO-1005 0.885 12 N/A N/A N/A N/A
ABXO-1006 1.037 0 N/A N/A N/A N/A
ABXO-1007 1.095 0 N/A N/A N/A N/A
ABXO-1009 1.165 0 N/A N/A N/A N/A
ABXO-1010 0.88 12 N/A N/A N/A N/A
ABXO-1011 1.191 0 N/A N/A N/A N/A
ABXO-1012 1.12 0 N/A N/A N/A N/A
ABXO-1013 1.038 0 N/A N/A N/A N/A
ABXO-1014 1.06 0 N/A N/A N/A N/A
ABXO-1015 1.23 0 N/A N/A N/A N/A
ABXO-1016 1.07 0 N/A N/A N/A N/A
ABXO-1017 1.08 0 N/A N/A N/A N/A
ABXO-1018 0.919 8 N/A N/A N/A N/A
ABXO-1019 1.11 0 N/A N/A N/A N/A
ABXO-1028 0.947 5 N/A N/A N/A N/A
ABXO-1029 0.89 11 N/A N/A N/A N/A
ABXO-1030 1.14 0 N/A N/A N/A N/A
ABXO-1031 0.98 2 N/A N/A N/A N/A
ABXO-1032 1.19 0 N/A N/A N/A N/A
在樹突狀細胞 (DC) 及 SKBR3 細胞中測試結合物 ：樹突狀細胞(每孔500,000個細胞)及SKBR3細胞(每孔50,000個細胞)在37℃下用稀釋的結合物及活化劑處理四天，隨後細胞溶解進行qPCR。培養基由RPMI + 10%胎牛血清 + 1%青黴素及鏈黴素構成。對於樹突狀細胞，在細胞溶解後提取RNA。對於SKBR3細胞，使用大量溶解試劑溶解細胞且分離RNA進行量測。對於SKBR3細胞，PGK1用作內源對照，且對於樹突狀細胞，PGK1及UBE2D2用作內源對照。相對定量(RQ)值相對於「僅活化細胞」對照正規化。表20展示在樹突狀細胞及SKBR3細胞中測試之ABXC-83及ABXC-225結合物的EC50 (以nM為單位)及Emax (%)，證明結合物與活化對照相比之效力及功效。 表20
結合物 ID 辛替恩 SEQ ID NO siRNA 有義股 SEQ ID NO siRNA 反義股 SEQ ID NO 細胞類型 EC50 (nM) Emax (%)
ABXC-83 570 354 358 樹突狀細胞 129 65
ABXC-83 570 354 358 樹突狀細胞 14.9 49
ABXC-83 570 354 358 樹突狀細胞 130 49
ABXC-225 1849 354 358 樹突狀細胞 4.7 60
ABXC-225 1849 354 358 樹突狀細胞 1.4 65
ABXC-83 570 354 358 SKBR3 4.7 65
實例4：在捐贈的人類樹突狀細胞中活體外投與結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物. 用包含CD71 FN3-CD40 siRNA結合物ABXC-79 (SEQ ID NO: 1848、354、358)之例示性組合物進行處理，減少了活化且暴露於CD40配位體之人類樹突狀細胞中CD40 mRNA之表現且減少IL-12之產生。樹突狀細胞(每孔500,000個細胞)用1 µM之結合物及活化劑處理四天，隨後在37℃下用另一活化劑處理一天，接著收集上清液以進行電致化學發光(ECL)免疫分析及用於qPCR之細胞溶解。對於ECL，使用多重分析套組來定量上清液中之細胞介素。所用細胞培養基由RPMI + 10%胎牛血清 + 1%青黴素及鏈黴素構成。對於qPCR，在細胞溶解後提取RNA，且使用PGK1及UBE2D2作為qPCR中之內源對照。相對定量(RQ)值相對於「僅活化細胞」對照進行正規化。
如圖3A中所示，處理後，相對CD40 mRNA表現在來自供體1之細胞中降低超過80%，且在來自供體2之細胞中降低約60%。如圖3B中所示，IL-12之產生(以pg/mL為單位量測)在來自供體1之細胞中降低約80%，且在來自供體2之細胞中降低約40%。此等結果證明CD71 FN3-CD40 siRNA結合物在人類樹突狀細胞中之功能活性。
實例5：在嚙齒類動物模型中活體內投與結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物的小鼠替代物. 將在不同實驗條件下之雄性CD-1小鼠(各組n = 5)在第-1天進行處理、在第0天進行處理，且在第1天終止處理，之後對血清細胞介素含量進行定量。存在三個處理組，其中兩個亦在第0天活化。第1組藉由投與CD71 FN3-CD40 siRNA結合物之兩種小鼠替代物進行處理，且在終止處理前活化。第2組藉由投與緩衝鹽水(「HBS」)進行處理，且在終止處理前活化。第3組(「初始」)未進行處理且未在終止處理前活化。此外，另外兩個對照組用不具有針對CD40之特異性之siRNA或對CD40無活性之加帽siRNA處理。在活體內，投與小鼠替代結合物減少了血清細胞介素且防止樹突狀細胞及B細胞之趨邊現象。在投與小鼠替代結合物後，IFN-γ、IL-6、TNF-α、IL-12、IP-10及RANTES之血清含量(以pg/mL為單位量測)降低。
CD40表現之降低程度係藉由投與抗CD40促效劑抗體，隨後經由流動式細胞量測分析量測樹突狀細胞、B細胞及T細胞之量來確定。在投與抗CD40促效劑後，所有經處理之對照組均顯示樹突狀細胞及B細胞之數目減少。相比之下，實驗組之樹突狀細胞及B細胞沒有表現出相同程度的減少，此表明例示性結合物具有降低彼等細胞類型中之CD40表現之能力。CD40陰性T細胞在任何組中均不受影響，此證明例示性結合物之特異性。因此，此等結果證明，例示性結合物可抑制樹突狀細胞及B細胞中之CD40表現，此在不受任何特定理論束縛的情況下表明攜帶CD40之樹突狀細胞及B細胞的遷移被阻止或減少。
此等出人意料的結果及本文提供之實施例證明，利用靶向細胞表面蛋白(諸如CD71)之FN3域，靶向CD40之siRNA分子可成功地靶向免疫細胞之子集，且此類構築體可選擇性地降低樹突狀細胞及B細胞中之CD40表現，且因此抑制此類細胞之遷移及趨邊，而不影響CD40陰性T細胞。因此，此等組合物可用於治療由樹突狀細胞及B細胞以及/或CD40表現及活性介導之疾病，諸如自體免疫疾病。
實例6：在人類樹突狀細胞中活體外投與結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物會降低CD40 mRNA表現及CD40蛋白表現. 用結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA的例示性結合物ABXC-285 (SEQ ID NO: 570、1941、2051)、ABXC-286 (SEQ ID NO: 570、1942、2052)及ABXC-287 (SEQ ID NO: 570、1944、2054)進行處理，降低了捐贈的人類樹突狀細胞中CD40 mRNA之表現且降低CD40蛋白之表現。
樹突狀細胞(每孔500,000個細胞)在培養時用1 µM之結合物及活化劑處理四天。所用細胞培養基由RPMI、10%胎牛血清及1%青黴素及鏈黴素構成。在第四天，在細胞溶解後提取RNA，且經由qPCR定量CD40 mRNA表現。PGK1及UBE2D2用作內源對照。相對定量(RQ)值相對於「僅活化」對照細胞進行正規化。來自相同供體之樹突狀細胞(每孔500,000個細胞)用結合物及活化劑進行與上文所描述相同的四天處理，且隨後在處理後保持培養6-13天。在處理後6、8、11及13天經由流動式細胞測量術染色來量測CD40蛋白表現。相對表現值相對於「僅活化」對照細胞進行正規化。
在用結合物處理後，兩個供體之相對CD40 mRNA表現降低超過70%。如圖4及下表21中所示，相對CD40 mRNA表現在來自供體3之細胞中降低超過90%，且在來自供體4之細胞中降低超過70%。 表21：CD40 mRNA減弱
結合物 ID 辛替恩 SEQ ID NO siRNA 有義股 SEQ ID NO siRNA 反義股 SEQ ID NO 供體 3 樹突狀細胞 供體 4 樹突狀細胞
EC50 (nM) 1 µM 下之減弱 % EC50 (nM) 1 µM 下之減弱 %
ABXC-285 570 1941 2051 ＜ 10 ＞ 90 ＜ 10 ＞ 70
ABXC-286 570 1942 2052 ＜ 10 ＞ 90 ＜ 10 ＞ 75
在用結合物處理後一週內，兩個供體之樹突狀細胞中的相對CD40蛋白表面表現降低超過50%。如圖5中所示，到處理後第6天，來自供體3之樹突狀細胞顯示相對CD40蛋白表現降低約40%。到第13天，來自供體3之細胞中的相對CD40蛋白表現降低超過70%。到處理後第8天，來自供體4之樹突狀細胞顯示相對CD40蛋白表現降低約50%。到第11天，來自供體4之細胞中的相對CD40蛋白表現降低超過60%。
此等結果證明結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物在活體外人類樹突狀細胞中的功能活性。
實例7：在人類樹突狀細胞中活體外投與結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物會減少細胞介素產生. 當活化時，表現CD40之樹突狀細胞產生且釋放細胞介素。用結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA的例示性結合物ABXC-326 (SEQ ID NO: 570、1890、2290)及ABXC-328 (SEQ ID NO: 570、1893、2293)進行處理，減少了活體外活化且暴露於CD40配位體之人類樹突狀細胞的細胞介素產生。
樹突狀細胞(每孔500,000個細胞)用1 µM之結合物及活化劑處理七天，隨後暴露於CD40配位體一天。所用細胞培養基由RPMI、10%胎牛血清及1%青黴素及鏈黴素構成。收集上清液且使用多重分析套組經由電致化學發光(ECL)免疫分析來定量細胞介素之量(以pg/mL為單位)。
在結合物處理後，兩個供體之樹突狀細胞之細胞介素產生減少。如圖6中所示，來自供體5及供體6之樹突狀細胞中的IL-12產生減少超過90%。TNF-α產生在來自供體5之細胞中減少超過70%，且在來自供體6之細胞中減少超過90%。來自供體5及供體6之細胞中的IL-6產生減少超過30%。
此等結果證明結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物在活體外人類樹突狀細胞中的功能活性。
實例8：在小鼠中活體內投與結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物的小鼠替代物會降低血清細胞介素含量. 用結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物的小鼠替代物進行處理會降低小鼠活體內與樹突狀細胞介導之免疫反應相關的細胞介素的血清含量。
六個組，各組由五隻雄性CD1小鼠組成，在終止處理前三天(第0天、第1天、第2天)的過程中暴露於不同的條件。兩組用包含結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA的結合物的兩種不同的小鼠替代物(「小鼠替代物1」及「小鼠替代物2」)處理。一組用CD71辛替恩及不靶向CD40之siRNA的結合物處理(「陰性對照」)。一組僅用未與任何siRNA結合之CD71辛替恩處理(「僅辛替恩」)。一組僅用hepes緩衝鹽水處理(「媒劑」)。最後一組在整個實驗過程中未接受處理(「初始」)。
在第0天，向除初始組以外的所有組投與抗CD40促效劑單株抗體，以活體內活化表現CD40之細胞。投與抗CD40促效劑後兩小時，除初始組以外的所有組接受媒劑或藥物處理。在第1天，除初始組以外的所有組再次接受除抗CD40促效劑以外的媒劑或藥物處理，之後量測所有組之血清細胞介素含量(以pg/mL為單位)。由於與樹突狀細胞介導之免疫反應相關，因此量測以下細胞介素：IFN-γ、IL-6、TNF-α、IL-12p40、IP-10及RANTES。在第2天，所有個體均被終止處理。
如圖7中所示，初始組中的小鼠既未活化亦未處理，顯示極少量的任何所量測之細胞介素。相比之下，用抗CD40促效劑抗體活化且用媒劑、僅辛替恩或陰性對照結合物處理之小鼠均顯示所有量測的細胞介素含量相對於初始組升高，與吾人對具有活化的表現CD40之樹突狀細胞的小鼠的預期一致(不受任何特定理論束縛)。然而，用CD71-CD40結合物之小鼠替代物處理的小鼠經歷IFN-γ及IL-6之幾乎完全減弱，與初始組中的含量相當。替代物處理之小鼠亦顯示TNF-α、IL-12p40、IP-10及RANTES之含量極低，與初始組相當或在統計學上沒有差異。此等小鼠替代物將與預期在人類細胞中觀測到的結果相關。
此等出人意料的結果及本文提供之實施例證明，利用靶向細胞表面蛋白(諸如CD71)之FN3域，靶向CD40之siRNA分子可成功地靶向免疫細胞之子集，且此類構築體可選擇性地減少與免疫反應相關之細胞介素的產生。因此，此等組合物可用於治療由樹突狀細胞及B細胞以及/或CD40表現及活性介導之疾病，諸如自體免疫疾病。
實例9：活體內投與結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物的小鼠替代物會降低CNS自體免疫疾病及炎症之嚙齒類動物模型中的血清細胞介素含量. 實驗性自體免疫腦脊髓炎(EAE)疾病為中樞神經系統(CNS)中之自體免疫性及發炎性疾病的小鼠模型，諸如但不限於多發性硬化症及肌肉萎縮性側索硬化。此實驗展示用結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物的小鼠替代物處理誘導性EAE小鼠的結果。
四個組，各組由五隻雌性C57BL/6小鼠組成，在終止前及臨床症狀開始顯現前12天的過程中暴露於不同的條件。一組用本文所描述之例示性CD71-CD40結合物的小鼠替代物處理，一組用抗CD40配位體純系處理(「陽性對照」)，且一組用hepes緩衝鹽水處理(「媒劑」)。最後一組由既未處理亦未誘導至患病狀態的健康小鼠組成(「初始」)。
在第0天，除初始組以外的所有組均用藥物或媒劑處理。在第1天，藉由投與含MOG 35-55之完全弗氏佐劑(complete Freund's adjuvant)來誘導處理組患有EAE，且在第1天、第4天及第7天接受額外劑量之藥物或媒劑。為了定量EAE模型中之細胞介素含量，收集血清且經由電致化學發光(ECL)免疫分析進行分析以定量IP-10、IL-12p70、IL-6、TNF-α、IFN-γ及RANTES。為了定量EAE模型中之免疫細胞頻率，收集脊髓組織及引流淋巴結(dLN)組織，用以下抗體進行流動式細胞測量術染色：TCR-B、CD4、CD8、CD19、CD11c、CD45、CD86、CD69、CD40、CXCR3及CCR6。
如圖8中所示，僅用媒劑處理之EAE小鼠顯示所有量測的細胞介素的最高血清含量。與用媒劑處理之EAE小鼠相比，用小鼠替代物處理之EAE小鼠顯示所有量測的細胞介素的血清含量相對較低。相比之下，用陽性對照處理之EAE小鼠顯示IP-10、IL-6、TNF-α、RANTES之血清含量與用小鼠替代物處理之EAE小鼠相當，但顯示IL-12p70及IFN-γ之減弱。此等結果表明，用CD71-CD40結合物之小鼠替代物處理會抑制EAE模型之血清中的細胞介素誘導。
如圖9中所示，所有EAE小鼠顯示與脊髓組織相比，dLN組織中B細胞之比例相對較高。然而，此差異在用小鼠替代物處理之EAE小鼠中最為明顯。與用媒劑或陽性對照處理之EAE小鼠相比，用小鼠替代物處理之EAE小鼠在dLN組織中顯示最高的B細胞百分比，而在脊髓組織中顯示最低的B細胞百分比。如圖10中所示，與用媒劑處理之EAE小鼠相比，用小鼠替代物處理之EAE小鼠顯示樹突狀細胞、CD8 T細胞及CD4 T細胞的比例相對較低。此外，如圖11中所示，與用媒劑或陽性對照處理之EAE小鼠相比，用小鼠替代物處理之EAE小鼠顯示脊髓組織中淋巴細胞、單核球及巨噬細胞之比例相對較低。此等結果表明，用CD71-CD40結合物之小鼠替代物處理會抑制B細胞、樹突狀細胞及T細胞浸潤至脊髓中。此等小鼠替代物將與預期在其他哺乳動物(諸如人類)中觀測的結果相關。
此等出人意料的結果及本文提供之實施例證明，利用靶向細胞表面蛋白(諸如CD71)之FN3域，靶向CD40之siRNA分子可成功地靶向免疫細胞之子集，且此類構築體可選擇性地減少自體免疫疾病動物模型中細胞介素的產生且抑制免疫細胞浸潤至中樞神經系統中。因此，此等組合物可用於治療由樹突狀細胞及B細胞以及/或CD40表現及活性介導之疾病，諸如中樞神經系統之自體免疫疾病，包括但不限於本文提供之彼等疾病，例如多發性硬化症。
實例10：在SKBR3細胞中活體外投與靶向CD40之siRNA分子會以有限的脫靶相互作用下調CD40表現. 此實驗展示活體外向細胞投與靶向CD40之siRNA且因此量測CD40表現的結果。兩個處理組之SKBR3細胞用兩種例示性靶向CD40之siRNA ABXO-1049 (SEQ ID NO: 1890、2290)及ABXO-1052 (SEQ ID NO: 1893、2293)以及濃度為10 nM之脂染胺轉染24小時，對照組之SKBR3細胞僅用脂染胺處理，每組6個複本。選擇10 nM之濃度係因為其遠遠超過兩種siRNA實現eMax之濃度。mRNA為選自細胞之polyA+，且進行非股2×150bp配對末端定序至平均深度＞2000萬個讀段。
使用FastQC確認RNA-seq庫之品質。使用Kallisto將庫與GrCH38.p13人類總轉錄本進行偽比對。讀段偽比對率平均達到88.6%，表明資料品質良好。隨後使用DESeq2比較各處理組中之細胞與對照組中之細胞來評定差異性表現。任何非蛋白質編碼基因及在75%或更大的比較庫中表現少於10個讀段的基因均自下游分析中濾除。使用DESeq2 log2(倍數變化) (LFC)臨界參數計算差異性表現信號之顯著性，應用0.585 LFC基線進行統計測試。使用AshR估算LFC收縮率。
CD40 mRNA表現實質上且顯著減弱。兩個處理組中之各者的CD40表現下調至對照組之32%及22%。CD40為兩個處理組中差異性表現之所有基因中下調幅度最大的蛋白質編碼基因。
使用BLAST及Bowtie比對器進行潛在脫靶效應之電腦模擬預測。例示性siRNA之有義序列及反義序列與由GRCh38總轉錄本建構之內部資料庫進行比對。在此等比對器鑑別之所有預測的潛在脫靶效應中，各siRNA中僅鑑別出一種顯著下調的脫靶效應。
在此等定序資料中，第一處理組顯示總共可偵測到八個顯著脫靶效應，且第二處理組顯示總共可偵測到兩個顯著脫靶效應。就兩種siRNA而言，此等脫靶信號均可歸因於反義序列。
總之，此等資料證明例示性靶向CD40之成對siRNACD40具有高特異性，且具有有限的脫靶相互作用。
實例11：在人類樹突狀細胞中活體外投與結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物會降低CD40蛋白表現. 如下表22中所詳述，用結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA的例示性結合物進行處理會減弱捐贈的人類樹突狀細胞中CD40蛋白之表現。
樹突狀細胞(每孔500,000個細胞)在培養時用1 µM之結合物及活化劑處理11天。所用細胞培養基由RPMI、10%胎牛血清及1%青黴素及鏈黴素構成。在第11天，使用CD40抗體純系經由流動式細胞測量術量測CD40蛋白表現。相對蛋白質表現值相對於「僅活化」對照細胞正規化。
如下表22中所示，相對於活化的對照細胞中之CD40蛋白表現，在投與CD71-CD40結合物後，來自三個不同人類供體之樹突狀細胞中的CD40蛋白之表現減弱50-82%。 表22：CD40蛋白減弱
結合物 ID 辛替恩 SEQ ID NO siRNA 有義股 SEQ ID NO siRNA 反義股 SEQ ID NO 樹突狀細胞供體 CD40 蛋白減弱 %
ABXC-285 570 1941 2051 供體3 73%
ABXC-286 570 1942 2052 供體3 73%
ABXC-287 570 1944 2054 供體3 82%
ABXC-285 570 1941 2051 供體4 57%
ABXC-286 570 1942 2052 供體4 59%
ABXC-287 570 1944 2054 供體4 71%
ABXC-326 570 1890 2290 供體5 48%
ABXC-328 570 1893 2293 供體5 50%
ABXC-326 570 1890 2290 供體6 51%
ABXC-328 570 1893 2293 供體6 66%
此等結果證明結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物在活體外來自多個供體之人類樹突狀細胞中的功能活性。
通用方法分子生物學中之標準方法描述於Sambrook, Fritsch及Maniatis (1982 & 1989 第2版, 2001 第3版) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY；Sambrook及Russell (2001) Molecular Cloning, 第 3 版 ,Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY；Wu (1993) Recombinant DNA, 第217卷, Academic Press, San Diego, CA)中。標準方法亦出現在Ausbel等人, (2001) Current Protocols in Molecular Biology, 第 1-4 卷, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY中，其描述細菌細胞中之選殖及DNA突變誘發(第1卷)、哺乳動物細胞及酵母中之選殖(第2卷)、糖結合物及蛋白質表現(第3卷)及生物資訊學(第4卷)。
描述了蛋白質純化方法，包括免疫沉澱、層析、電泳、離心及結晶(Coligan等人, (2000) Current Protocols in Protein Science, 第 1 卷, John Wiley and Sons, Inc., New York)。描述了化學分析、化學修飾、轉譯後修飾、融合蛋白之產生、蛋白質之糖基化(參見例如Coligan等人, (2000) Current Protocols in Protein Science, 第 2 卷, John Wiley and Sons, Inc., New York；Ausubel等人, (2001) Current Protocols in Molecular Biology, 第 3 卷, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, 第16.0.5-16.22.17頁；Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis, MO; 第45-89頁；Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory, Piscataway, N.J., 第384-391頁)。描述了多株及單株抗體之產生、純化及片段化(Coligan等人, (2001) Current Protcols in Immunology, 第 1 卷, John Wiley and Sons, Inc., New York；Harlow及Lane (1999) Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY；Harlow及Lane, 見上文)。可獲得用於表徵配位體/受體相互作用之標準技術(參見例如Coligan等人, (2001) Current Protocols in Immunology, 第 4 卷, John Wiley, Inc., New York)。
本文中所引用之所有參考文獻均以引用的方式併入，引用程度如同各個別出版物、資料庫條目(例如Genbank序列或GeneID條目)、專利申請案或專利特定且單獨地指示以引用的方式併入一般。申請人遵循37 C.F.R. §1.57(b)(1)，此以引用的方式併入之表述旨在關於每一個別出版物、資料庫條目(例如Genbank序列或GeneID條目)、專利申請案或專利，其中各者均依照37 C.F.R. §1.57(b)(2)明確鑑別，即使此類引用沒有緊接著以引用方式併入之專用表述。在本說明書內包括以引用的方式併入之專用表述(若存在)不會以任何方式弱化此以引用的方式併入之一般表述。在本文中引用參考文獻不旨在承認該參考文獻為相關先前技術，亦不構成對此等出版物或文獻之內容或日期的任何承認。
本發明實施例之範疇不受本文所描述之特定實施例限制。實際上，根據前述描述，除本文所描述之修改以外，實施例之各種修改對於熟習此項技術者而言將變得顯而易見。此類修改意欲屬於隨附申請專利範圍之範疇內。
前述書面說明書被認為足以使熟習此項技術者能夠實踐實施例。除本文所示及描述之修改以外，實施例之各種修改對於熟習此項技術者而言將根據前述說明書變得顯而易見，且屬於隨附申請專利範圍之範疇內。
圖1描繪用於CD40 siRNA之電腦模擬篩選之步驟及評定特性的流程圖。 圖2描繪Raji細胞(圖2，圖A)及A20細胞(圖2，圖B)中例示性CD40 siRNA的滴定曲線。 圖3A描繪在用或不用例示性結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物處理的情況下，已活化且暴露於CD40配位體之捐贈的人類樹突狀細胞的活體外相對CD40 mRNA表現。 圖3B描繪活化或未活化、暴露於CD40配位體或未暴露於CD40配位體、及用例示性結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物處理或未處理之捐贈的人類樹突狀細胞的活體外IL-12產生。 圖4描繪活化且用遞增濃度之例示性結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物處理之捐贈的人類樹突狀細胞的活體外相對CD40 mRNA表現。經處理之細胞的CD40 mRNA表現相對於經活化、未處理之樹突狀細胞的mRNA表現正規化。隨著結合物之濃度(以nM為單位)增加，所有供體之相對CD40 mRNA表現降低。 圖5描繪活化且用例示性結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物處理、或活化且未處理(「僅活化」)之捐贈的人類樹突狀細胞隨時間推移的活體外相對CD40蛋白表現。經處理之細胞的CD40蛋白表現相對於經活化、未處理之樹突狀細胞的蛋白表現正規化。 圖6描繪活化且用例示性結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物處理之捐贈的樹突狀細胞、活化且用陰性對照處理之樹突狀細胞、及活化且未處理之樹突狀細胞的活體外細胞介素產生。 圖7描繪活化且用例示性結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物處理之小鼠、活化且用陰性對照處理之小鼠、活化且僅用結合CD71之FN3域處理之小鼠、活化且用媒劑處理之小鼠、及既未活化亦未處理之初始小鼠的活體內血清細胞介素含量。 圖8描繪用EAE (一種動物疾病模式)誘導、活化且用例示性結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物處理之小鼠的活體內血清細胞介素含量。進一步描繪活化且用陰性對照處理之EAE小鼠、活化且僅用結合CD71之FN3域處理之EAE小鼠、活化且用媒劑處理之EAE小鼠、及既未活化亦未處理之健康初始小鼠。 圖9描繪自用EAE (一種動物疾病模式)誘導、活化且用例示性結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物處理之小鼠收集的引流淋巴結組織及脊髓組織中B細胞的活體內頻率。進一步描繪活化且用陽性對照處理之EAE小鼠、活化且用媒劑處理之EAE小鼠、及既未活化亦未處理之健康初始小鼠。 圖10描繪自用EAE (一種動物疾病模式)誘導、活化且用例示性結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物處理之小鼠收集的脊髓組織中樹突狀細胞、CD8 T細胞及CD4 T細胞的活體內頻率。進一步描繪活化且用陽性對照處理之EAE小鼠及活化且用媒劑處理之EAE小鼠。 圖11描繪自用EAE (一種動物疾病模式)誘導、活化且用例示性結合CD71之FN3域及靶向CD40之siRNA結合物處理之小鼠收集的脊髓組織中淋巴細胞、單核球及巨噬細胞的活體內頻率。進一步描繪活化且用陽性對照處理之EAE小鼠及活化且用媒劑處理之EAE小鼠。

Claims (41)

  1. 一種組合物，其包含靶向CD40基因之siRNA分子，該分子包含有義股及反義股，其中： 該有義股包含SEQ ID NO: 2110之核酸序列或其經修飾形式，且該反義股包含SEQ ID NO: 2220之核酸序列或其經修飾形式； 該有義股包含SEQ ID NO: 2113之核酸序列或其經修飾形式，且該反義股包含SEQ ID NO: 2223之核酸序列或其經修飾形式； 該有義股包含SEQ ID NO: 2111之核酸序列或其經修飾形式，且該反義股包含SEQ ID NO: 2221之核酸序列或其經修飾形式； 該有義股包含SEQ ID NO: 1890之核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 2290之核酸序列； 該有義股包含SEQ ID NO: 1893之核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 2293之核酸序列； 該有義股包含SEQ ID NO: 1941之核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 2051之核酸序列； 該有義股包含SEQ ID NO: 1942之核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 2052之核酸序列； 該有義股包含SEQ ID NO: 1944之核酸序列，且該反義股包含SEQ ID NO: 2054之核酸序列； 或本文所提供之有義股及反義股對(成對siRNA)。
  2. 如請求項1之組合物，其中該siRNA分子進一步包含共價連接至該有義股或該反義股之連接子。
  3. 如請求項2之組合物，其中該連接子連接至該有義股或該反義股之5'端或3'端。
  4. 如請求項1之組合物，其中該siRNA分子進一步包含該有義股或該反義股上之乙烯基膦酸酯修飾。
  5. 如請求項4之組合物，其中該乙烯基膦酸酯修飾連接至該有義股或該反義股之5'端或3'端。
  6. 如請求項1之組合物，其中該有義股包含選自SEQ ID NO: 1890、1893、1941、1942、1944、46-178、312-331、1850、1851、1891、1892、1894-1928、1932-1940、1943、1945-1959、2298、2302、2304、352-356、673-805、939-958、2070、2071、2110-2148、2152-2179、2300、2306及2308中之任一者的核酸序列其或經修飾形式。
  7. 如請求項1之組合物，其中該反義股包含選自SEQ ID NO: 2290、2293、2051、2052、2054、179-311、332-351、1960、1961、2000-2038、2042-2050、2053、2055-2069、2291、2292、2294-2297、2299、2303、2305、356-359、806-938、959-978、2180、2181、2220-2258、2262-2289、2301、2307及2309中之任一者的核酸序列或其經修飾形式。
  8. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該siRNA分子包含A1、B1、C1、D1、E1、F1、G1、H1、I1、J1、K1、L1、M1、N1、O1、P1、Q1、R1、S1、T1、U1、V1、W1、X1、Y1、Z1、A2、B2、C2、D2、E2、F2、G2、H2、I2、J2、K2、L2、M2、N2、O2、P2、Q2、R2、S2、T2、U2、V2、W2、X2、Y2、Z2、A3、B3、C3、D3、E3、F3、G3、H3、I3、J3、K3、L3、M3、N3、O3、P3、Q3、R3、S3、T3、U3、V3、W3、X3、Y3、Z3、A4、B4、C4、D4、E4、F4、G4、H4、I4、J4、K4、L4、M4、N4、O4、P4、Q4、R4、S4、T4、U4、V4、W4、X4、Y4、Z4、A5、B5、C5、D5、E5、F5、G5、H5、I5、J5、K5、L5、M5、N5、O5、P5、Q5、R5、S5、T5、U5、V5、W5、X5、Y5、Z5、A6、B6、C6、D6、E6、F6、G6、H6、I6、J6、K6、L6、M6、N6、O6、P6、Q6、R6、S6、T6、U6、V6、W6、B7、C7、P8、Q8、R8、S8、T8、U8、V8、W8、X8、Y8、Z8、A9、B9、C9、D9、E9、F9、G9、H9、I9、J9、K9、L9、M9、N9、O9、P9、Q9、R9、S9、T9、U9、V9、W9、X9、Y9、Z9、A10、B10、F10、G10、H10、I10、J10、K10、L10、M10、N10、O10、P10、Q10、R10、S10、T10、U10、V10、W10、X10、Y10、Z10、A11、B11、C11、D11、E11、F11、G11、H11、I11、J11、K11、L11、M11、N11、O11、P11、Q11、R11或表3A、表3B、表4A、表4B、表5A或表5B中所示之成對siRNA(有義股及反義股)。
  9. 如請求項8之組合物，其中該組合物包含表3A、表3B、表4A、表4B、表5A或表5B中所示之成對siRNA，其具有本文所提供之連接子及/或乙烯基膦酸酯修飾。
  10. 如請求項1之組合物，其中該siRNA分子具有式III所示之式： 有義股(SS) 反義股(AS) (III)，
    其中以N代表各核苷酸，其係如SEQ ID NO: 2110及SEQ ID NO: 2220、SEQ ID NO: 2113及SEQ ID NO: 2223、SEQ ID NO: 2111及SEQ ID NO: 2221、或本文所提供之有義股及反義股對(成對siRNA)所示，或包含諸如本文所提供之彼等經修飾之核苷酸鹼基。
  11. 如請求項10之組合物，其中該有義股包含N 1及N 2處之具有硫代磷酸酯(PS)修飾之主鏈的2'O-甲基修飾之核苷酸；N 3、N 7、N 8、N 9、N 12及N 17處之2'-氟修飾之核苷酸；及N 4、N 5、N 6、N 10、N 11、N 13、N 14、N 15、N 16、N 18及N 19處之2'O-甲基修飾之核苷酸。
  12. 如請求項10或11之組合物，其中該反義股包含N 1處連接之具有硫代磷酸酯(PS)修飾之主鏈的乙烯基膦酸酯部分；N 2處之具有PS修飾之主鏈的2'氟修飾之核苷酸；N 3、N 4、N 5、N 6、N 7、N 8、N 9、N 10、N 11、N 12、N 13、N 15、N 16、N 17、N 18及N 19處之2'O-甲基修飾之核苷酸；N 14處之2'氟修飾之核苷酸；及N 20及N 21處之具有PS修飾之主鏈的2'O-甲基修飾之核苷酸。
  13. 如請求項10之組合物，其中該反義股包含連接至N 1之乙烯基膦酸酯部分。
  14. 如請求項10之組合物，其中該siRNA分子與連接子結合，如下式所示： ，或 。
  15. 如請求項1之組合物，其中該siRNA分子具有如下式所示之式： 其中F 1為包含至少一個FN3域之多肽。
  16. 如請求項1之組合物，其進一步包含與該siRNA分子結合之一或多個FN3域。
  17. 如請求項16之組合物，其中該一或多個FN3域包含經由FN3域中之半胱胺酸與該siRNA分子結合之FN3域。
  18. 如請求項16或17之組合物，其中該一或多個FN3域包含結合CD71之FN3域。
  19. 如請求項18之組合物，其中該結合CD71之FN3域包含與選自SEQ ID NO: 570、672、1848、1773、1849、1767、360-569、571-644、663-67、1395-1772、1774-1766、1768-1847及2310中之任一者之序列至少87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%一致或係一致的胺基酸序列。
  20. 如請求項18之組合物，其中該FN3域包含與SEQ ID NO: 570、SEQ ID NO: 2310或SEQ ID NO: 672之胺基酸序列至少95%一致的胺基酸序列。
  21. 如請求項18之組合物，其中該FN3域包含有包含SEQ ID NO: 570或SEQ ID NO: 2310之胺基酸序列的胺基酸序列。
  22. 如請求項18之組合物，其中該FN3域包含與SEQ ID NO: 570之胺基酸序列至少95%一致的胺基酸序列，其限制條件為位置54處之殘基為半胱胺酸，或與SEQ ID NO: 2310之胺基酸序列至少95%一致的胺基酸序列，其限制條件為位置53處之殘基為半胱胺酸。
  23. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至22中任一項之組合物。
  24. 一種套組，其包含如請求項1至22中任一項之組合物。
  25. 一種治療有需要之個體之免疫疾病的方法，該方法包含向該個體投與如請求項1至22中任一項之組合物。
  26. 如請求項25之方法，其中該免疫疾病為類風濕性關節炎、橋本氏自體免疫甲狀腺炎(Hashimoto's autoimmune thyroiditis)、乳糜瀉、1型糖尿病、白斑病、風濕熱、惡性貧血/萎縮性胃炎、斑禿、免疫性血小板減少性紫癜、牛皮癬、發炎性腸病、全身性紅斑狼瘡、天疱瘡、休格連氏症候群(Sjogren's syndrome)、發炎性肌炎、狼瘡性腎炎、尋常天疱瘡、多發性硬化症或預防實體器官移植排斥反應。
  27. 一種如請求項1至22中任一項之組合物的用途，其用於製備供治療免疫疾病，諸如自體免疫疾病用之醫藥組合物或藥物。
  28. 如請求項27之用途，其中該免疫疾病為類風濕性關節炎、橋本氏自體免疫甲狀腺炎、乳糜瀉、1型糖尿病、白斑病、風濕熱、惡性貧血/萎縮性胃炎、斑禿、免疫性血小板減少性紫癜、牛皮癬、發炎性腸病、全身性紅斑狼瘡、天疱瘡、休格連氏症候群、發炎性肌炎、狼瘡性腎炎、尋常天疱瘡、多發性硬化症或預防實體器官移植排斥反應。
  29. 一種如請求項1至22中任一項之組合物的用途，其用於治療免疫疾病，諸如自體免疫疾病。
  30. 如請求項29之用途，其中該免疫疾病為類風濕性關節炎、橋本氏自體免疫甲狀腺炎、乳糜瀉、1型糖尿病、白斑病、風濕熱、惡性貧血/萎縮性胃炎、斑禿、免疫性血小板減少性紫癜、牛皮癬、發炎性腸病、全身性紅斑狼瘡、天疱瘡、休格連氏症候群、發炎性肌炎、狼瘡性腎炎、尋常天疱瘡、多發性硬化症或預防實體器官移植排斥反應。
  31. 一種降低細胞中CD40之表現的方法，該方法包含使該細胞與如請求項1至22中任一項之組合物接觸。
  32. 一種將siRNA分子遞送至個體之免疫細胞的方法，該方法包含向該個體投與包含如請求項1至22中任一項之組合物的醫藥組合物，或該組合物包含靶向免疫特異性細胞基因目標之siRNA。
  33. 如請求項32之方法，其中該免疫細胞為B細胞、T細胞或樹突狀細胞。
  34. 如請求項32或33之方法，其中該目標基因為CD40。
  35. 一種將靶向CD40之siRNA分子遞送至個體之CD71陽性免疫細胞的方法，該方法包含向該個體投與包含如請求項1至22中任一項之組合物的醫藥組合物，其中該siRNA分子下調該CD71陽性免疫細胞中CD40之表現。
  36. 一種減少個體之一或多種細胞介素的方法，該方法包含向該個體投與如請求項1至22中任一項之組合物。
  37. 如請求項36之方法，其中該一或多種細胞介素係選自IFN-γ、IL-6、TNF-α、IL-12、IP-10、RANTES及其任何組合。
  38. 一種減少或抑制免疫細胞群體自血液遷移至組織的方法，該方法包含使包含靶向CD40之siRNA分子的組合物與該細胞群體接觸。
  39. 如請求項38之方法，其中該組合物為如請求項1至22中任一項之組合物。
  40. 如請求項38之方法，其中該免疫細胞群體包含表現CD40之(CD40 +)細胞。
  41. 如請求項38至40中任一項之方法，其中該免疫細胞群體包含樹突狀細胞、B細胞或其組合。
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