TW202415388A - 噴霧冷凍乾燥方法於包覆ｍＲＮＡ的脂質奈米顆粒調製劑的冷凍乾燥之用途 - Google Patents
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Abstract
本發明關於包括包覆mRNA的脂質奈米顆粒之液體醫藥調製劑的冷凍乾燥。
根據本發明，使用噴霧冷凍乾燥方法以達成該冷凍乾燥。
本發明特別關注於mRNA疫苗調製劑的冷凍乾燥。
Description
本發明關於包括包覆傳訊RNA的脂質奈米顆粒之液體醫藥調製劑的冷凍乾燥。
在醫藥領域中，越來越多有前景的基因療法及疫苗係基於RNA及DNA聚合物。與實施此等基於RNA或DNA之基因療法或疫苗相關聯的關鍵問題為投遞。裸露之RNA或DNA分子在生物體液中迅速降解，在全身性投予後不積聚在組織中，且即使到達目標組織亦不可穿透目標細胞。再者，免疫系統係經設計以識別及破壞含有遺傳資訊之載體。
因此，已提出投予包覆在脂質奈米顆粒(LNP)中的RNA或DNA分子，使得RNA或DNA分子可投遞至目標細胞而不降解。
在RNA疫苗、特別為傳訊RNA (mRNA)疫苗的例子中，LNP有助於RNA投遞至細胞且由此促進免疫反應。LNP的形成及RNA的包覆對疫苗的功效至關重要，且將RNA及脂質材料帶到一起的製造操作必須在能夠包覆的適當條件下進行。
在流行病爆發的背景下，許多挑戰係與能使全球最多的人迅速取得此等疫苗的疫苗供應鏈相關聯。
第一個主要挑戰係與疫苗所需之儲存溫度有關，諸如mRNA疫苗，其需要較冷(≤-20℃)的儲存。冷凍乾燥技術可緩解與儲存溫度相關聯的供應鏈挑戰，因為經冷凍乾燥之產品通常只需要2至8℃之儲存溫度。
需要適合於冷凍乾燥mRNA疫苗之冷凍乾燥技術以保存產品屬性及特別達成LNP的長期穩定性，且因此應在此方面仔細考慮可行的冷凍乾燥技術之性能。
習知的小瓶冷凍乾燥(VFD)為生物製品乾燥的黃金標準技術，已證明其適合於冷凍乾燥mRNA疫苗。關於此點，可參考例如下列的出版物：
- Hiromi Muramatsu, Kieu Lam, Csaba Bajusz, Dorottya Laczkó, Katalin Karikó, Petra Schreiner, Alan Martin, Peter Lutwyche, James Heyes, Norbert Pardi, Lyophilization provides long-term stability for a lipid nanoparticle-formulated, nucleoside-modified mRNA vaccine, Molecular Therapy, 30(5),2022,1941-1951；
Liangxia Ai, Yafei Li, Li Zhou, Hao Zhang, Wenrong Yao, Jinyu Han, Junmiao Wu, Ruiyue Wang, Weijie Wang, Pan Xu, Zhouwang Li, Chengliang Wei, Haobo Chen, Jianqun Liang, Ming Guo, Zhixiang Huang, Xin Wang, Zhen Zhang, Wenjie Xiang, Bin Lv, Peiqi Peng, Shangfeng Zhang, Xuhao Ji, Zhangyi Li, Huiyi Luo, Jianping Chen, Ke Lan, Yong Hu, Lyophilized mRNA-lipid nanoparticle vaccines with long-term stability and high antigenicity against SARS-CoV-2, bioRxiv, Preprint, 2022；
- Emily A. Voigt, Alana Gerhardt, Derek Hanson, Peter Battisti, Sierra Reed, Jasneet Singh, Raodoh Mohamath, Madeleine F. Jennewein, Julie Bakken, Samuel Beaver, Christopher Press, Patrick Soon-Shiong, Christopher J. Paddon, Christopher B. Fox, Corey Casper, A self-amplifying RNA vaccine against COVID-19 with long-term room-temperature stability, bioRxiv, Preprint, 2022。
然而，頃發現習知的VFD方法顯著地增加製造時間。更特定言之，VFD方法可取決於調製劑而通常具有至多3至7天的數天週期時間。
因此，對加速製造之替代的冷凍乾燥技術有需求，以增加拯救患者生命之生物藥品的可用性，諸如上文提及之mRNA疫苗。
根據本發明之第一態樣，噴霧冷凍乾燥方法係用於包括包覆mRNA的脂質奈米顆粒之液體醫藥調製劑的冷凍乾燥。
本發明人發現本發明容許此等調製劑的冷凍乾燥週期時間自數天大幅地縮短至2小時或更短。
本發明不限於包覆單一mRNA構築體的脂質奈米顆粒，並亦適用於包覆一種以上的mRNA構築體、特別為不同的一級結構之mRNA的脂質奈米顆粒。
噴霧冷凍乾燥(SFD)為有潛力每年供應數十億劑疫苗的技術，例如在流行病爆發期間，因為其容許比習知的小瓶冷凍乾燥(VFD)更快且更有效地製造散裝的經冷凍乾燥之生物製品。本發明人亦已發現SFD適合於保存產品的質量屬性且達成LNP的穩定性。
根據本發明之較佳的實施態樣，噴霧冷凍乾燥方法包含下列的連續步驟：
- 將液體醫藥調製劑在具有溫控壁的塔中噴霧冷凍，藉助於冷卻劑控制的溫度維持在介於-100與-190℃之間，以便獲得經冷凍之丸粒；
- 將經冷凍之丸粒轉移至真空乾燥室中；及
- 將經冷凍之丸粒在真空乾燥室內在不高於1000微巴之壓力下乾燥，丸粒係在真空乾燥室內在受控的溫度下加熱。
根據本發明之另一態樣，其提供包括包覆mRNA的脂質奈米顆粒之液體醫藥調製劑的冷凍乾燥之方法，該方法包含下列的連續步驟：
- 將液體醫藥調製劑在具有溫控壁的塔中噴霧冷凍，藉助於冷卻劑控制的溫度維持在介於-100與-190℃之間，以便獲得經冷凍之丸粒；
- 將經冷凍之丸粒轉移至真空乾燥室中；及
- 將經冷凍之丸粒在真空乾燥室內在不高於1000微巴之壓力下乾燥，丸粒係在真空乾燥室內在受控的溫度下加熱。
根據本發明之較佳的實施態樣，該方法可包含下列步驟中之一或多者：
- 經冷凍之丸粒在真空乾燥室內藉由與真空乾燥室內具備的溫控表面直接接觸來加熱；
-溫控表面可由真空乾燥室內的轉桶內表面形成；
-另一選擇地，溫控表面可由真空乾燥室內的一靜態架或一組靜態架的表面形成；
-在真空乾燥室內的溫控表面之溫度係在-70℃至+60℃、較佳在-45℃至+50℃之範圍內變化。
根據本發明之另一較佳的實施態樣，該方法可包含下列步驟中之一或多者：
- 將經冷凍之丸粒在真空乾燥室內以非接觸式加熱來加熱；
-將經冷凍之丸粒在真空乾燥室內以電磁輻射、特別為紅外線輻射或射頻(特別為微波)輻射來加熱。
根據本發明之視需要的特徵，該方法可包含在乾燥經冷凍之丸粒前的預乾燥步驟，該預乾燥步驟包括將丸粒加熱至高於冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)、但低於冰融化溫度之退火溫度。
醫藥調製劑較佳為疫苗調製劑。
在本發明進一步的態樣中，其提供以根據本發明之方法所獲得的經冷凍乾燥之醫藥產品。
在本發明進一步的態樣中，其提供重構液體醫藥調製劑之方法，其中將稀釋劑添加至以根據本發明之方法所獲得的經冷凍乾燥之醫藥產品中，以獲得具有mRNA濃度少於或等於冷凍乾燥前的調製劑之mRNA濃度的調製劑。
本發明之詳細說明下列的定義用於本發明說明及申請專利範圍中：
- 術語「冷凍濃縮物」係指由於冷凍醫藥調製劑而形成的相。在冷凍期間，大部分的溶劑(通常為水)自溶液或分散相分離以形成冰。當冷凍隨著溫度的降低而繼續進行時，未冷凍相(含有溶解之溶質或分散相)逐漸濃縮且被稱為「冷凍濃縮物」。參考文獻：(i) Tang X, Pikal MJ 2004. Design of Freeze-Drying Processes for Pharmaceuticals: Practical Advice. Pharm Res 21(2):191-200；(ii) Bhatnagar B, Tchessalov S., Lewis L, and Johnson R, Freeze-drying of Biologics. In: Encyclopedia of Pharmaceutical Science and Technology, 4th edition, Publisher Taylor & Francis, 2013:1673-1722。
- 用於特定的醫藥調製劑之術語「冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度」(Tg’)表示在冷凍期間出現最大冷凍濃度之溫度(B. Bhatnagar, S. Tchessalov, L. Lewis, and R. Johnson, Freeze Drying of Biologics. In Encyclopedia of Pharmaceutical Science and Technology, 4th Ed. Taylor and Francis: New York, 1673-1722, 2013)。可能要注意在低於Tg’下形成以高黏度及低流動性為特徵的剛性玻璃。當乾燥步驟期間超過Tg’溫度時，經冷凍濃縮之溶質的黏滯流動引起餅狀物塌陷，導致由冷凍創造的微觀結構喪失。
- 術語「丸粒」係指傾向圓形的顆粒。
本發明關於噴霧冷凍乾燥(SFD)方法。此等SFD方法可用於包括包覆mRNA的LNP之液體醫藥調製劑(特別為mRNA疫苗調製劑)的冷凍乾燥。
噴霧冷凍乾燥(SFD)為一項尖端技術，其可轉變溶液(活性醫藥成分、賦形劑及其作為醫藥調製劑之組合)成為自由流動的散裝乾燥丸粒，具有通常比習知的小瓶冷凍乾燥(VFD)更短的週期持續時間。本發明之SFD方法包含兩個主要步驟：(i)將溶液向下噴霧至冷氣體環境中以形成經冷凍之次毫米液滴或丸粒，及(ii)在轉桶或其他真空乾燥系統中進行基於溫控表面與經冷凍之液滴接觸的靜態或動態真空乾燥。術語液滴及丸粒在本文可互換使用。
根據本發明，SFD方法較佳地包含下列的連續步驟：
- 將液體醫藥調製劑在具有溫控壁的塔中噴霧冷凍，藉助於冷卻劑控制的溫度維持在介於-100與-190℃之間，以便獲得經冷凍之丸粒；
- 將經冷凍之丸粒轉移至真空乾燥室中；及
- 將經冷凍之丸粒在真空乾燥室內在不高於1000微巴之壓力下乾燥，丸粒係在真空乾燥室內在受控的溫度下加熱。
將經冷凍之丸粒在真空乾燥室內藉由與真空乾燥室內具備的溫控表面直接接觸來加熱。
在真空乾燥室內的溫控表面之溫度較佳地在-70℃至+60℃、較佳在-45℃至+50℃之範圍內變化。
SFD方法視需要地包含在乾燥步驟前的預乾燥步驟，該預乾燥步驟包括將經冷凍之丸粒加熱至高於冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)、但低於冰融化溫度之退火溫度。
本發明人發現在本發明之方法中包括退火步驟可具有下列有利的效應：
藉由增加冰晶的尺寸以縮短乾燥持續時間，且因此影響含有LNP的經乾燥之丸粒(糖和緩衝基質)的比表面積及孔隙率；及/或
在噴霧冷凍乾燥及重構後維持LNP之Z平均值及多分散性指數(PDI)，觀察到彼等與冷凍乾燥前的LNP之Z平均值及PDI值相似。
若需要更短的乾燥時間且必須控制LNP之膠體性質，則包括退火步驟可能特別有利。
根據本發明之方法的退火溫度較佳地比冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)高2℃及比冰融化溫度低1℃。
根據本發明之方法的退火溫度較佳地比冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)高5℃及比冰融化溫度低2℃。
根據本發明之方法的退火溫度較佳地比冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)高10℃及比冰融化溫度低3℃。
根據本發明之方法的退火溫度較佳地比冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)高20℃及比冰融化溫度低3℃。
根據本發明之方法的退火溫度較佳地比冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)高30℃及比冰融化溫度低3℃。
冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)特別以微差掃瞄熱量法測量。
冷凍濃縮物之冰融化溫度特別以微差掃瞄熱量法測量。
乾燥步驟較佳地可在轉桶中執行，其中溫控表面係由真空乾燥室內的轉桶內表面所形成。與執行乾燥步驟的其他方法相比，發現使用此轉桶提供更高的生產量。
另一選擇地，乾燥步驟可在一靜態架或一組靜態架上執行，其中溫控表面係由真空乾燥室內的該靜態架的表面所形成。
作為藉由與控溫表面直接接觸以加熱經冷凍之丸粒的替代法，可將丸粒在真空乾燥室內以非接觸式加熱來加熱、較佳地藉助於電磁輻射、特別為紅外線或射頻(例如微波)輻射。可使用任何其他方式傳遞用於非破壞性產品脫水之能量。
適合用於可以本發明之方法冷凍乾燥的調製劑中之脂質於下文說明。
LNP之脂質組分可包括例如陽離子脂質、磷脂(諸如不飽和脂質，例如DOPE或DSPC)、結構性脂質(例如聚乙二醇(PEG)脂質或膽固醇)或其任何組合。脂質組分之元素可由特定部分提供。
在一些實施態樣中，LNP之脂質組分包括陽離子脂質、磷脂、PEG脂質及結構性脂質。在特定的實施態樣中，脂質奈米顆粒之脂質組分包括約30 mol%至約60 mol%之陽離子脂質、約0 mol%至約30 mol%之磷脂、約18.5 mol%至約48.5 mol%之結構性脂質、及約0 mol%至約10 mol%之PEG脂質，其先決條件為總mol%不超過100%。在一些實施態樣中，脂質奈米顆粒之脂質組分包括約35 mol%至約55 mol%之陽離子脂質化合物、約5 mol%至約25 mol%之磷脂、約30 mol%至約40 mol%之結構性脂質、及約0 mol%至約10 mol%之PEG脂質。在特別的實施態樣中，脂質組分包括約50 mol%之該陽離子脂質、約10 mol%之磷脂、約38.5 mol%之結構性脂質、及約1.5 mol%之PEG脂質。在另一特別的實施態樣中，脂質組分包括約40 mol%之該陽離子脂質、約20 mol%之磷脂、約38.5 mol%之結構性脂質、及約1.5 mol%之PEG脂質。在一些實施態樣中，磷脂可為DOPE或DSPC。在其他的實施態樣中，PEG脂質可為PEG-DMG及/或結構性脂質可為膽固醇。
在LNP中之治療劑及/或預防劑的量可取決於脂質奈米顆粒的尺寸、組成、所欲標靶及/或應用，以及治療劑及/或預防劑的性質而定。例如，可用於LNP中之RNA的量可取決於RNA的尺寸、序列及其他特徵而定。亦可改變LNP中之治療劑及/或預防劑及其他元素(例如脂質)的相對量。在一些實施態樣中，在LNP中之脂質組分對治療劑及/或預防劑之wt/wt比可為約5：1至約60：1，諸如5：1、6：1、7：1、8：1、9：1、10：1、11：1、12：1、13：1、14：1、15：1、16：1、17：1、18：1、19：1、20：1、25：1、30：1、35：1、40：1、45：1、50：1、及60：1。例如，脂質組分對治療劑及/或預防劑之wt/wt比可為約10：1至約40：1。在特定的實施態樣中，wt/wt比為約20：1。在LNP中之治療劑及/或預防劑的量可例如使用吸收光譜法(例如紫外線-可見光光譜法)測量。
在一些實施態樣中，可離子化脂質為式(IL-l)化合物：
、或其N氧化物、或鹽或異構物，其中：
Ri係選自由下列所組成之群組：C5-30烷基、C5-20烯基、-R*YR”、-YR”和-R”M’R’；R2和R3獨立地選自由下列所組成之群組：H、C1-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3與彼等附接的原子一起形成雜環或碳環；R4係選自由下列所組成之群組：氫、C3-6碳環、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-CHQR、-CQ(R)2和未經取代之C1-6烷基，其中Q係選自碳環、雜環、-OR、
-0(CH
2)nN(R)2、-C(0)0R、-0C(0)R、-CX3、-CX2H、
-CXH2、-CN、-N(R)2、-C(0)N(R)2、-N(R)C(0)R、
-N(R)S(0)
2R、-N(R)C(0)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、
-N(R)Re、N(R)S(0)
2R
8、-0(CH
2)nOR、
-N(R)C(=NR9)N(R)
2、-N(R)C(=CHR9)N(R)
2、
-0C(0)N(R)
2J-N(R)C(0)0R、-N(0R)C(0)R、-N(0R)S(0)
2R、-N(0R)C(0)0R、-N(0R)C(0)N(R)
2、-N(OR)C(S)N(R)2、
-N(OR)C(=NR9)N(R)
2、-N(OR)C(=CHR9)N(R)
2、
-C(=NR9)N(R)
2、-C(=NR9)R、-C(0)N(R)0R和
-C(R)N(R)2C(0)0R，且各n獨立地選自1、2、3、4和5；各R5獨立地選自由下列所組成之群組：C1-3烷基、C2-3烯基和H；各Re獨立地選自由下列所組成之群組：C1-3烷基、C2-3烯基和H；M和M’獨立地選自-C(0)0-、-OC(O)-、 -0C(0)-M”-C(0)0-、-C(0)N(R’)-、-N(R’)C(0)-、-C(O)-、 -C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(0)(0R’)0-、 -S(0)
2-、-S-S-、芳基和雜芳基，其中M”為鍵、C1-13烷基或C2-13烯基；R7係選自由下列所組成之群組：C1-3烷基、C2-3烯基和H；Re係選自由下列所組成之群組：C3-6碳環和雜環；R9係選自由下列所組成之群組：H、CN、NO2、Ci-6烷基、-OR、-S(0)
2R、-S(0)
2N(R)
2、C
2-6烯基、C3-6碳環和雜環；各R獨立地選自由下列所組成之群組：C1-3烷基、C
2-3烯基和H；各R’獨立地選自由下列所組成之群組：C1-is烷基、C
2-is烯基、-R*YR”、-YR”和H；各R”獨立地選自由下列所組成之群組：C3-15烷基和C3-15烯基；各R*獨立地選自由下列所組成之群組：Ci-i
2烷基和C
2-i2烯基；各Y獨立為C3-6碳環；各X獨立地選自由下列所組成之群組：F、Cl、Br和I；及m係選自5、6、7、8、9、10、11、12和13；且其中當R
4為-(CH
2)
nQ、 -(CH
2)nCHQR、-CHQR或-CQ(R)
2時，則(i)當n為1、2、3、4或5時，Q不為-N(R)
2，或(ii)當n為1或2時，Q不為5、6或7員雜環烷基。
脂質奈米顆粒組成物之脂質組分可包括一或多種包含聚合物之分子，諸如經聚乙二醇(PEG)改質之脂質。此等種類可另外稱為聚乙二醇化脂質。PEG脂質為經聚乙二醇改質之脂質。PEG脂質可選自包括下列的非限制性群組：經PEG改質之磷脂醯乙醇胺、經PEG改質之磷脂酸、經PEG改質之腦醯胺、經PEG改質之二烷基胺、經PEG改質之二醯基甘油、經PEG改質之二烷基甘油及其混合物。在一些實施態樣中，PEG脂質可為PEG-c-DOMG、PEG-DMG、PEG-DLPE、PEG-DMPE、PEG-DPPC或PEG-DSPE脂質。如本文所使用之術語「PEG脂質」係指經聚乙二醇(PEG)改質之脂質。PEG脂質的非限制性實例包括經PEG改質之磷脂醯乙醇胺和磷脂酸、PEG-腦醯胺共軛體(例如PEG-CerCl4或PEG-CerC20)、經PEG改質之二烷基胺及經PEG改質之l,2-二醯基氧丙-3-胺。此等脂質亦稱為聚乙二醇化脂質。在一些實施態樣中，PEG脂質可為PEG-c-DOMG、PEG-DMG、PEG-DLPE、PEG-DMPE、PEG-DPPC或PEG-DSPE脂質。在一些實施態樣中，經PEG改質之脂質為PEG DMG之改質形式。在一些實施態樣中，經PEG改質之脂質為具有式(IV)之PEG脂質：
其中R
8和R
9各自獨立為含有10至30個碳原子的直鏈或支鏈、飽和或不飽和烷基鏈，其中烷基鏈視需要地經一個或多個酯鍵中斷；且w具有30至60之平均值範圍。
下列說明本發明之實施例對應於特異性mRNA疫苗調製劑的冷凍乾燥，該調製劑在此特定的例子中為Flu modRNA (華盛頓株(Washington strain))藥物產品(DP)。流感modRNA免疫原性組成物係由一或多種編碼源自季節性人類流感病毒株之全長HA醣蛋白的經核苷修飾之mRNA所組成。特異性構築體(HA modRNA)為免疫原性組成物中唯一的活性成分。除了編碼抗原的經密碼子最佳化之序列以外，RNA亦含有出於調介高的RNA穩定性及轉譯效率而最佳化之常見的結構元件(5’端帽、5’UTR、3’-UTR、poly(A)尾)。RNA不含有任何尿苷；以經修飾之N1-甲基假尿苷代替尿苷用於RNA合成。用於生產含有端帽1結構之RNA的5’端帽類似物(m
2 7,3’
-OMeGppp(m
12’
-O)ApG)顯示於下。
上述結構對應於Trilink之CleanCap AG (3’OMe)-m
2 7,3’-OGppp(m
12’-O)ApG。
脂質奈米顆粒係根據美國專利9737619 (PCT公開號WO2015/199952)和美國專利10166298 (PCT公開號WO 2017/075531)及PCT公開號WO2020/146805中所述之通用程序製備及測試。
在實施例中，mRNA疫苗調製劑包括包覆mRNA之LNP，其分散在適合於冷凍乾燥之基質中。
實施例及圖形僅以說明為目的而提供且不應被解釋成限制本發明之範圍。
設計短期(6個月)研究以評鑑使用SFD及習知的VFD的經冷凍乾燥之調製劑的穩定性：圖9至16。亦評估作為冷凍保護劑和凍乾保護劑之蔗糖濃度(300 mM對600 mM蔗糖基質)及冷凍後退火對產品屬性的效應。
特別及除了較短的乾燥時間的優點以外，驚訝地發現來自mRNA調製劑之SFD丸粒的產品屬性亦展示出下列的有利性質：
-極佳的乾丸粒流動性容許填充任何類型的容器(小瓶、泡殼、雙室藥筒/注射器、大瓶等)；
-可在冷凍乾燥後定義及進行之給藥及填充靈活性。
A. 噴霧冷凍在具有溫控壁的噴霧塔頂部，諸如圖1所示，將溫度等於或高於冷藏溫度(2℃至8℃之範圍)的液體調製劑通過製粒噴嘴泵送，經由層流式噴射破碎產生單分散之液滴。在塔內部之冷卻氣體(LN2或LN2與氣態N2之混合物)係藉助於環形冷卻套維持在目標溫度(在-100℃至-190℃之範圍內)。利用0.2至0.5 mm之範圍內的噴嘴孔產生具有0.4 mm至1.0 mm直徑的丸粒或液滴。對應的製粒頻率範圍為500至6500 Hz，具有介於5與50 g/min之間的質量流速。利用≤0.3 m
3/h之偏轉噴射氣體流速以分散液滴及改進噴霧冷凍效率。在冷凍塔的底部收集經噴霧冷凍之丸粒或液滴用於後續乾燥或儲存。圖2提供當前實驗室規模的噴霧冷凍方法的實例(Sebastião IB, Bhatnagar B, Tchessalov S. A Kinetic Model for Spray-Freezing of Pharmaceuticals, Journal of Pharmaceutical Sciences 110 (2021) 2047-2062)。
在圖2中，T
gas,1和T
gas,2表示在冷凍塔內部之冷卻氣體變化。在此實施例中，將750 mL之液體調製劑以23.5 mL/min之流速及每秒4000滴的標稱製粒頻率噴霧。高黏性溶液(例如＞5 cP)可在更高的溫度下噴霧，導致改進的泵送及噴霧性能而無需顯著增加的冷凍塔尺寸(Sebastião IB, Bhatnagar B, Tchessalov S, Ohtake S, Plitzko M, Luy B, Alexeenko A, Bulk Dynamic Spray Freeze-Drying Part 2: Model-Based Parametric Study for Spray-Freezing Process Characterization, Journal of Pharmaceutical Sciences 108 (2019), 2075-2085)。
經噴霧冷凍乾燥之丸粒為次毫米級(例如200至1000微米)，且在本發明之背景下，彼等含有脂質奈米顆粒(較佳地具有20至150 nm之範圍內的Z平均值)。
B.1 旋轉真空乾燥在旋轉真空乾燥器的例子中，乾燥製程係藉由將轉桶壁預冷卻至低於-45℃之溫度或調製劑的冷凍濃縮物之各自玻璃轉移溫度來啟動。一旦達成此目標條件，將經噴霧冷凍之丸粒轉移至轉桶中，轉桶接著開始以介於0至5 RPM之間的速度旋轉。此時，可根據需要在或大於基質之玻璃轉移溫度下執行經冷凍之丸粒的退火。
若預期噴霧冷凍乾燥對LNP Z平均值和PDI沒有影響及/或若丸粒變得更易碎，導致在加工期間產生灰塵且降低產率，則可考慮省略在本發明之背景下的退火步驟。
在退火期間，將經冷凍之溶液加熱至高於冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)、但低於共晶熔化、二次熔化或冰熔化溫度之溫度。已顯示以退火增加冰晶尺寸及昇華速率，且降低在冷凍乾燥期間的乾燥速率之瓶間不均勻性(Bhatnagar B, Tchessalov S., Lewis L, and Johnson R, Freeze-drying of Biologics. In: Encyclopedia of Pharmaceutical Science and Technology, 4th edition, Publisher Taylor & Francis, 2013: 1673-1722；Searles JA, Carpenter JF, Randolph TW. Annealing to optimize the Primary Drying Rate, reduce Freezing-induced Drying Rate Heterogeneity, and determine Tg’ in Pharmaceutical Lyophilization. Journal of Pharmaceutical Sciences 90 (2001) 872-887；Tang X, Pikal MJ 2004. Design of Freeze-Drying Processes for Pharmaceuticals: Practical Advice. Pharm Res 21(2): 191-200)。
下一步是降低圍繞轉桶的乾燥室中之壓力至不高於1000微巴(750毫托)、較佳在不高於500微巴(375毫托)之壓力下。初次乾燥接著以一系列逐步或連續改變的各種乾燥參數執行，該等參數包括室壓力、轉桶壁溫度、轉桶速度和紅外線(IR)加熱器的功率。保持初次乾燥參數的最終目標值，直到以皮冉尼壓力計及電容真空計(CM)壓力讀數的收斂性指示昇華結束。在二次乾燥期間，將部分經乾燥之液滴或丸粒中的殘留水經由增加轉桶溫度及(或) IR功率之脫附來移除。
初次和二次乾燥參數可在介於0至1000微巴(0至750毫托)、-70℃至+60℃、0至10 RPM及0至25000 W之間變化。
該等範圍較佳地分別為0至500微巴(0至375毫托)、-45℃至+50℃、0至5 RPM及0至15000 W。
在二次乾燥完成後，其亦以皮冉尼壓力計及CM收斂性指示，將散裝丸粒(比表面積≥2 m
2/g)在乾燥氛圍下卸載至收集容器中以儲存或後續填充至目標容器中。
圖3提供當前實驗室規模的轉桶中之乾燥製程的實例。
將經冷凍之丸粒在此裝載至具有低於-55℃之表面溫度(T2)的預冷轉桶中。轉桶溫度係藉助於內建的環形冷卻套及冷卻劑流體(T1)的相應入口溫度來控制，該冷卻劑流體在此例子中為矽油。附著至轉桶壁的溫度感測器指示散裝產品(亦即丸粒)的溫度(T3)。在裝載及調理經冷凍之丸粒後，將室密封且啟動真空。在本發明之實施例中，在整個乾燥製程期間保持50微巴(37.5毫托)之壓力，如CM讀數(P2)所示。以皮冉尼壓力計(P1)及CM值的收斂性指示初次及二次乾燥完成。在整個製程中利用不同的紅外輻射器功率(W1)及轉桶速度(S1)設定點以符合目標產品溫度史及總乾燥時間。
B.2 經冷凍之丸粒的替代乾燥作為替代的乾燥製程，可將經噴霧冷凍之丸粒轉移至任何利用溫控表面的真空乾燥系統中，例如習知的架式冷凍乾燥機或一組串接架(取自IMA-Group. LYNFINITY: Continuous aseptic spray-freeze-drying. 2020)。各自的初次和二次乾燥參數的範圍可在介於0至1000微巴(0至750毫托)之室壓力、-70℃與+60℃之溫控表面之間變化。該等範圍較佳地分別為0至500微巴(0至375毫托)及-45℃至+50℃。初次和二次乾燥的終點可以任何已知的方式鑑定，包括但不限於皮冉尼-CM收斂性、壓力上升法、可調式二極體雷射吸收光譜法(TDLAS)、質譜儀、IR和近IR檢測器。
圖4和5分別提供在習知的冷凍乾燥機中進行的有及未退火之架式乾燥製程的實例。
在該等圖中，T1表示用於乾燥經噴霧冷凍之丸粒的控溫表面(在此例子中為冷凍乾燥機的架子)之溫度設定點。各自的產品溫度係以T2表示。在裝載及調理經冷凍之丸粒後，將室密封且啟動真空。在此實施例中，在整個乾燥製程期間保持40微巴(30毫托)之壓力，如CM讀數(P2)所示。以皮冉尼壓力計(P1)及CM值的收斂性指示初次及二次乾燥完成。
經噴霧冷凍之丸粒的乾燥時間可藉由降低散裝產品的床厚度來縮短。如圖6所例證，一層經冷凍之丸粒的乾燥可在少於2小時內完成。
C. 產物品質的分析評鑑脂質奈米顆粒(LNP)係以各種方法特徵化。例如，利用顯微術(例如透射電子顯微術或掃描電子顯微術)檢查LNP的尺寸及形態。表1總結用於特徵化經冷凍乾燥之LNP的分析技術。
表 1：用於特徵化經冷凍乾燥之LNP的分析方法的實例
可使用動態光散射或電位測定法(例如電位滴定)測量ζ電位。照慣例利用動態光散射(DLS)測定顆粒尺寸。亦可使用諸如Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments Ltd, Malvern, Worcestershire, UK)之儀器測量LNP的多種特徵，諸如顆粒尺寸、多分散性指數(PDI)和ζ電位。
根據本發明使用DLS所測量的乾燥後的LNP之Z平均值較佳在20至180 nm之範圍內、更佳在30至150 nm之範圍內、且最佳在40至120 nm之範圍內。
根據本發明使用DLS所測量的乾燥後的LNP之PDI較佳在0.01至0.5之範圍內、更佳在0.05至0.4之範圍內、且最佳在0.1至0.3之範圍內。
治療劑及/或預防劑的包覆效率說明相對於所提供的初始量，在製備後包覆LNP或以其他方式與LNP締合之治療劑及/或預防劑的量。希望有高的包覆效率(例如接近100%)。
根據本發明，在乾燥後的包覆效率較佳為大於70%、更佳為大於80%、且最佳為大於90%。
包覆效率可例如藉由比較在以一或多種有機溶劑或清潔劑破碎脂質奈米顆粒前及後在含有脂質奈米顆粒的介質中之治療劑及/或預防劑的量來測量。使用Tecan螢光讀板儀(Tecan Group Ltd, Männedorf, Switzerland)所測量的螢光用於測定溶液中之游離治療劑/預防劑(例如RNA)的量。
本揭示之LNP、LNP懸浮液、經冷凍乾燥之LNP組成物或LNP調製劑的化學性質可以各種方法特徵化。在一些實施態樣中，電泳法(例如毛細管電泳法)或層析術(例如逆液相層析術)可用於檢查mRNA完整性。片段分析儀(FA)系統為多重毛細管凝膠電泳法(CGE)儀器，其可執行mRNA (及其他RNA)之高通量分離及定量。mRNA之完整性百分比係使用FA自動化CGE系統(Agilent Technologies Inc, Agilent, California, USA)測定。
RNA較佳地在乾燥後具有至少50%、較佳地至少60%、更佳地至少70%、更佳地至少80%、最佳地至少90%之完整性。
設計本發明之研究以評鑑以SFD及VFD技術冷凍乾燥之Flu mRNA (華盛頓株) DP的穩定性。亦評估作為冷凍保護劑和凍乾保護劑之蔗糖濃度(300 mM對600 mM蔗糖基質)及退火對產品屬性的效應。評鑑適合於本發明之背景下使用的兩種基於LNP的調製劑(F1和F2，表2)且說明於表2中。
表 2：在VFD及SFD前的調製劑組成物及每一小瓶的乾樣品重量(來自VFD的餅狀物及來自SFD的丸粒)。
經乾燥之樣品(圖8，所示的代表性圖像)入選在2至8℃(在本文為簡潔起見，以5℃表示)及25℃下的穩定性研究，以評鑑儲存條件對殘留水分含量、平均奈米顆粒尺寸、PDI、mRNA包覆、濃度、完整性及試管內表現(IVE)的影響。由於在25℃下儲存的小瓶取得的數量有限，所以此研究組僅產生1個月的數據，除非另有其他陳述。在各個時間點，將樣品使用USP 0.9% w/v之鹽水或無菌注射用水(sWFI)重構至0.1 mg/mL之mRNA的冷凍乾燥前(prelyo)濃度。
在下文提及且呈現在圖上的標繪圖中，含有mRNA的調製劑1和2分別簡稱為300 mM和600 mM蔗糖調製劑。同樣地，退火及未退火的經冷凍乾燥之樣品以「退火」及「未退火」列出。
C.1 殘留水分含量在VFD及SFD樣品中的殘留水分含量係以庫倫卡爾費雪滴定儀(Photovolt Aquatest™ 2010卡爾費雪庫倫水分滴定儀，Photovolt Instruments, St. Louis Park, MN)測定。圖9顯示在5℃下儲存6個月(6M)的SFD樣品之水分含量變化。VFD數據僅在初始時間點(t0)產生。該等數據示意退火及未退火的本發明之SFD樣品具有相似的水分攝取率。
在低於或等於冷藏儲存(「冷藏儲存」經定義為2℃至8℃之溫度範圍)之溫度下儲存後約2週至約1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、9個月、1年、或2年，經乾燥之組成物較佳地具有以本發明之方法達成的低於4%、更佳為低於2%、且最佳為低於1%之殘留水含量。
C.2 LNP 之膠體穩定性在經冷凍乾燥之VFD及SFD樣品中的LNP之膠體穩定性係經由DLS檢定法測定。圖10和11分別顯示調製劑1和2之平均奈米顆粒尺寸(Z平均值)及PDI的變化。
未退火及退火之VFD調製劑與包括退火之SFD調製劑的膠體穩定性相當且亦相似。在退火不存在下，SFD調製劑展現出較大的LNP尺寸及PDI (圖10和11)。
在經乾燥之組成物在低於或等於冷藏儲存(2℃至8℃之範圍)之溫度下儲存後約2週至約1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、9個月、1年、或2年，以本發明之方法達成的乾燥後的LNP之Z平均值較佳在20至180 nm之範圍內、更佳在30至150 nm之範圍內、且最佳在40至120 nm之範圍內。
當根據本發明之方法包括退火步驟時，較佳地獲得該等LNP尺寸。
在經乾燥之組成物在低於或等於冷藏儲存(2℃至8℃之範圍)之溫度下儲存後約2週至約1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、9個月、1年、或2年，以本發明之方法達成的乾燥後的LNP之PDI較佳在0.01至0.5之範圍內、更佳在0.05至0.4之範圍內、且最佳在0.1至0.3之範圍內。
當根據本發明之方法包括退火步驟時，較佳地獲得該等PDI值。
C.3 mRNA 之包覆及濃度在經冷凍乾燥之VFD及SFD樣品中的mRNA之包覆%及濃度係經由RiboGreen®檢定法測定。圖12和13分別提供調製劑1和2之該兩種屬性的變化。VFD及SFD調製劑之包覆%及mRNA濃度在兩種溫度(亦即分別為5℃和25℃)下的儲存期間沒有改變。
在經乾燥之組成物在低於或等於冷藏儲存(2℃至8℃之範圍)之溫度下儲存後約2週至約1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、9個月、1年、或2年，以本發明之方法達成的乾燥後的包覆效率較佳為大於70%、更佳為大於80%、且最佳為大於90%。
在經乾燥之組成物在低於或等於冷藏儲存(2℃至8℃之範圍)之溫度下儲存後約2週至約1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、9個月、1年、或2年，以本發明之方法達成的乾燥後的mRNA濃度較佳為約2 mg/mL、較佳為至少約0.5 mg/mL、更佳為至少約0.1 mg/mL、最佳為至少約0.001 mg/mL。
C.4 mRNA 完整性在經冷凍乾燥之VFD及SFD樣品中的mRNA完整性係經由片段分析(FA)檢定法測定。圖14和15分別表示調製劑1和2之mRNA完整性百分比的變化。在VFD及SFD調製劑中的RNA完整性%在5℃下的儲存期間沒有改變。在VFD及SFD調製劑中觀察到在25℃下的儲存期間降低的RNA完整性%。
在經乾燥之組成物在低於或等於冷藏儲存(2℃至8℃之範圍)之溫度下儲存後約2週至約1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、9個月、1年、或2年，RNA較佳地具有以本發明之方法達成的乾燥後約50%、較佳為至少約60%、更佳為至少約70%、更佳為至少約80%、最佳為至少約90%。
C.5 試管內表現在經冷凍乾燥之VFD及SFD樣品中的mRNA之試管內表現(IVE)係經由基於細胞之檢定法以螢光活化之細胞分選儀(FACS)測定。圖16分別顯示調製劑1和2隨時間的IVE表現%輪廓。表現%在VFD及SFD調製劑在5℃下的儲存期間未降低。
在經乾燥之組成物在低於或等於冷藏儲存(2℃至8℃之範圍)之溫度下儲存後約2週至約1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、9個月、1年、或2年，以本發明之方法達成的%IVE較佳為至少30%、較佳為至少約40%、更佳為至少約50%、更佳為至少約60%、更佳為至少約70%、且最佳為至少約80%。
C.6 作為冷凍保護劑和凍乾保護劑之蔗糖濃度的效應在本發明之調製劑及方法中所使用之較佳的蔗糖濃度係在5至60%之範圍內、更佳在5至25%之範圍內、且最佳在10至20%之範圍內。
在上述實驗的結論中，已顯示SFD方法適合於冷凍乾燥包括包覆mRNA的脂質奈米顆粒之液體醫藥調製劑。在該等實驗中所產生之數據特別地示意經受SFD的mRNA調製劑之產品屬性與以習知的VFD所獲得之產品屬性相當。而且，數據示意包含同時提供特定的有利效應(參考B.1)之退火步驟不對所評估之產品屬性有負面的影響。
因此，所述之SFD方法可有利地用於達成生產經乾燥之醫藥產品或產品中間物的冷凍乾燥。
| 產品屬性 | 分析程序 |
| 殘留水分 | 卡爾費雪(Karl Fischer)庫倫滴定及NIR |
| 熱行為 (融化溫度、玻璃轉移溫度) | 微差掃瞄熱量法 |
| 相行為 (結晶/非晶形相) | X射線繞射 |
| LNP尺寸及多分散性 | 動態光散射 |
| RNA包覆及含量 | 螢光檢定法 |
| RNA完整性 | 毛細管凝膠電泳法 |
| LNP形態 | 電子顯微術 |
| 試管內表現 | 基於細胞之流動式細胞測量術 |
| 脂質含量 | HPLC-CAD |
| 比表面積 | BET氣體吸附-脫附 |
| 調製劑 | Flu mRNA，mg/mL | 基質組成 | 餅狀物 重量 (VFD) | 丸粒重量(SFD) |
| F1 | 0.1 | 300 mM (10.3% w/v)蔗糖、 10 mM Tris，pH 7.4 | 32 mg | 32 mg |
| F2 | 0.1 | 600 mM (20.5% w/v)蔗糖、 10 mM Tris，pH 7.4 | 63 mg | 63 mg |
本發明現以參考下文所列出的圖式進一步說明下列實施例，其中：
- [圖1]為本發明之方法中所使用之噴霧塔的示意圖；
- [圖2]表示在噴霧塔內部之冷卻氣體的變化；
- [圖3]繪示關於以轉桶乾燥的實施例所產生之數據；
- [圖4]繪示關於退火的經噴霧冷凍之丸粒的架式乾燥的實施例所產生之數據；
- [圖5]繪示關於未退火的經冷凍之丸粒的架式乾燥的實施例所產生之數據；
- [圖6]繪示關於未退火的單層經冷凍之丸粒的架式乾燥的實施例所產生之數據；
- [圖7]顯示在圖6中所提及的實施例之乾燥期間的單層經冷凍之丸粒的圖像；
- [圖8]顯示經小瓶冷凍乾燥之餅狀物及經噴霧冷凍乾燥之丸粒的圖像；
- [圖9]表示在經冷凍乾燥之調製劑1和2 (300 mM和600 mM蔗糖)中之水分含量的變化，樣品係儲存在5℃下(具有僅在初始時間點t0所產生之VFD數據)；
- [圖10]表示經冷凍乾燥之調製劑1(300 mM蔗糖)在5℃(左圖)和25℃(右圖)下儲存後的LNP之膠體穩定性的變化；
- [圖11]表示經冷凍乾燥之調製劑2(600 mM蔗糖)在5℃(左圖)和25℃(右圖)下儲存後的LNP之膠體穩定性的變化；
- [圖12]表示經冷凍乾燥之調製劑1(300 mM蔗糖)在5℃(左圖)和25℃(右圖)下儲存後的mRNA之包覆%及濃度的變化；
- [圖13]表示經冷凍乾燥之調製劑2(600 mM蔗糖)在5℃(左圖)和25℃(右圖)下儲存後的mRNA之包覆%及濃度的變化；
- [圖14]表示經冷凍乾燥之調製劑1(300 mM蔗糖)在5℃(左圖)和25℃(右圖)下儲存後的mRNA完整性的變化；
- [圖15]表示經冷凍乾燥之調製劑2(600 mM蔗糖)在5℃(左圖)和25℃(右圖)下儲存後的mRNA完整性的變化；及
- [圖16]繪示經冷凍乾燥之調製劑1和2 (300 mM和600 mM蔗糖)在5℃下儲存後的試管內表現(IVE)。
Claims (39)
- 一種噴霧冷凍乾燥方法於包括包覆mRNA的脂質奈米顆粒之液體醫藥調製劑的冷凍乾燥之用途。
- 如請求項1之用途，其中該噴霧冷凍乾燥方法包含下列的連續步驟： - 將該液體醫藥調製劑在具有溫控壁的塔中噴霧冷凍，藉助於冷卻劑控制的該溫度維持在介於-100與-190℃之間的溫度下，以便獲得經冷凍之丸粒； - 將該等經冷凍之丸粒轉移至真空乾燥室中；及 - 將該等經冷凍之丸粒在該真空乾燥室內在不高於1000微巴之壓力下乾燥，該等丸粒係在該真空乾燥室內在受控的溫度下加熱。
- 如請求項2之用途，其中該等經冷凍之丸粒係在該真空乾燥室內藉由與該真空乾燥室內具備的溫控表面直接接觸來加熱。
- 如請求項3之用途，其中該溫控表面係由該真空乾燥室內的轉桶內表面所形成。
- 如請求項4之用途，其中該轉桶的旋轉速度係介於0與10 RPM之間、較佳為介於0與5 RPM之間。
- 如請求項3之用途，其中該溫控表面係由該真空乾燥室內的一靜態架或一組靜態架的表面所形成。
- 如請求項3至6中任一項之用途，其中在該真空乾燥室內的該溫控表面之溫度係在-70℃至+60℃、較佳在-45℃至+50℃之範圍內變化。
- 如請求項3至7中任一項之用途，其中在該真空乾燥室內之壓力係介於0至1000微巴(0至750毫托)之間、較佳係介於0至500微巴(0至375毫托)之間變化。
- 如請求項2之用途，其中該等經冷凍之丸粒係在該真空乾燥室內以非接觸式加熱來加熱。
- 如請求項9之用途，其中該等經冷凍之丸粒係在該真空乾燥室內以電磁輻射、特別為紅外線輻射或射頻、特別為微波輻射來加熱。
- 如請求項2至10中任一項之用途，其中該噴霧冷凍乾燥方法包含在乾燥該等經冷凍之丸粒前的預乾燥步驟，該預乾燥步驟包括將該等丸粒加熱至高於冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)、但低於冰融化溫度之退火溫度。
- 如請求項11之用途，其中該退火溫度比該冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)高2℃及比該冰融化溫度低1℃、較佳為比該冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)高5℃及比該冰融化溫度低2℃、更佳為比該冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)高10℃及比該冰融化溫度低3℃、更佳為比該冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)高20℃及比該冰融化溫度低3℃、且又更佳為比該冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)高30℃及比該冰融化溫度低3℃。
- 如請求項1至12中任一項之用途，其中該醫藥調製劑為疫苗調製劑。
- 一種包括包覆mRNA的脂質奈米顆粒之液體醫藥調製劑之冷凍乾燥之方法，其包含下列的連續步驟： - 將該液體醫藥調製劑在具有溫控壁的塔中噴霧冷凍，藉助於冷卻劑控制的該溫度維持在介於-100與-190℃之間的溫度下，以便獲得經冷凍之丸粒； - 將該等經冷凍之丸粒轉移至真空乾燥室中；及 - 將該等經冷凍之丸粒在真空乾燥室內在不高於1000微巴之壓力下乾燥，該等丸粒係在該真空乾燥室內在受控的溫度下加熱。
- 如請求項14之方法，其中該等經冷凍之丸粒係在該真空乾燥室內藉由與該真空乾燥室內具備的溫控表面直接接觸來加熱。
- 如請求項15之方法，其中該溫控表面係由該真空乾燥室內的轉桶內表面所形成。
- 如請求項16之方法，其中該轉桶的旋轉速度係介於0與10 RPM之間、較佳為介於0與5 RPM之間。
- 如請求項15之方法，其中該溫控表面係由該真空乾燥室內的一靜態架或一組靜態架的表面所形成。
- 如請求項15至18中任一項之方法，其中在該真空乾燥室內的該溫控表面之溫度係在-70℃至+60℃、較佳在-45℃至+50℃之範圍內變化。
- 如請求項15至19中任一項之方法，其中在該真空乾燥室內之壓力係介於0至1000微巴(0至750毫托)之間、較佳係介於0至500微巴(0至375毫托)之間變化。
- 如請求項14之方法，其中該等經冷凍之丸粒係在該真空乾燥室內以非接觸式加熱來加熱。
- 如請求項21之方法，其中該等經冷凍之丸粒係在該真空乾燥室內以電磁輻射、特別為紅外線輻射或射頻、特別為微波輻射來加熱。
- 如請求項14至22中任一項之方法，其包含在乾燥步驟前的預加熱步驟，該預加熱步驟包括將該等經冷凍之丸粒加熱至高於冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)、但低於冰融化溫度之退火溫度。
- 如請求項23之方法，其中該退火溫度比該冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)高2℃及比該冰融化溫度低1℃、較佳為比該冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)高5℃及比該冰融化溫度低2℃、更佳為比該冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)高10℃及比該冰融化溫度低3℃、更佳為比該冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)高20℃及比該冰融化溫度低3℃、且又更佳為比該冷凍濃縮物之玻璃轉移溫度(Tg’)高30℃及比該冰融化溫度低3℃。
- 如請求項14至24中任一項之方法，其中該醫藥調製劑為疫苗調製劑。
- 一種以如請求項14至25中任一項之方法所獲得的經冷凍乾燥之醫藥產物。
- 如請求項26之產物，其中該LNP之Z平均值係在20至180 nm之範圍內、更佳在30至150 nm之範圍內、且最佳在40至120 nm之範圍內。
- 如請求項26或27之產物，其中該LNP之PDI係在0.01至0.5之範圍內、更佳在0.05至0.4之範圍內、且最佳在0.1至0.3之範圍內。
- 如請求項26至28中任一項之產物，其中該包覆效率為大於70%、更佳為大於80%、且最佳為大於90%。
- 如請求項26至29中任一項之產物，其中該mRNA具有至少50%、較佳為至少60%、更佳為至少70%、更佳為至少80%、最佳為至少90%之完整性。
- 如請求項26至30中任一項之產物，其中在低於或等於冷藏儲存之溫度下儲存後約2週至約1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、9個月、1年、或2年，該殘留水含量為低於4%、更佳為低於2%、且最佳為低於1%。
- 如請求項26至31中任一項之產物，其中在低於或等於冷藏儲存之溫度下儲存後約2週至約1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、9個月、1年、或2年，該LNP之Z平均值係在20至180 nm之範圍內、更佳在30至150 nm之範圍內、且最佳在40至120 nm之範圍內。
- 如請求項26至32中任一項之產物，其中在低於或等於冷藏儲存之溫度下儲存後約2週至約1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、9個月、1年、或2年，該LNP之PDI係在0.01至0.5之範圍內、更佳在0.05至0.4之範圍內、且最佳在0.1至0.3之範圍內。
- 如請求項26至33中任一項之產物，其中在低於或等於冷藏儲存之溫度下儲存後約2週至約1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、9個月、1年、或2年，該包覆效率為大於70%、更佳為大於80%、且最佳為大於90%。
- 如請求項26至34中任一項之產物，其中在低於或等於冷藏儲存之溫度下儲存後約2週至約1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、9個月、1年、或2年，該mRNA濃度為約2 mg/mL、較佳為至少約0.5 mg/mL、更佳為至少約0.1 mg/mL、最佳為至少約0.001 mg/mL。
- 如請求項26至35中任一項之產物，其中在低於或等於冷藏儲存之溫度下儲存後約2週至約1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、9個月、1年、或2年，該mRNA具有約50%、較佳為至少約60%、更佳為至少約70%、更佳為至少約80%、最佳為至少約90%之完整性。
- 如請求項26至36中任一項之產物，其中在低於或等於冷藏儲存之溫度下儲存後約2週至約1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、9個月、1年、或2年，該mRNA具有至少30%、較佳為至少約40%、更佳為至少約50%、更佳為至少約60%、更佳為至少約70%、且最佳為至少約80%之試管內表現。
- 如請求項26至37中任一項之產物，其中該蔗糖濃度係在5至60%之範圍內、更佳在5至25%之範圍內、且最佳在10至20%之範圍內。
- 一種液體醫藥調製劑之重構方法，其中將稀釋劑添加至如請求項27至38中任一項之經冷凍乾燥之醫藥產物中，以獲得具有mRNA濃度少於或等於冷凍乾燥前的該調製劑之mRNA濃度的調製劑。
Applications Claiming Priority (4)
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