TW202408545A - 整合的壓力反應抑制劑及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本發明提供包含蛋白質及/或構築體之組合物，該等構築體包含編碼整合的壓力反應(ISR)抑制蛋白質及/或其特徵部分之編碼序列。例示性構築體包括AAV構築體。亦提供使用所揭示之構築體用於治療及/或預防長期記憶形成能力減弱及/或改善長期記憶形成能力之方法。

Description

整合的壓力反應抑制劑及其使用方法

本發明至少係關於老化生物學、神經學、遺傳學、醫學及老人學領域。

為了維持細胞健康，蛋白質需要以適當量合成，以高保真度摺疊且組裝，恰當地定位且降解。當多種壓力感測器分子觸發胞內信號傳導網路時，專門的機制會對此等基本過程中之故障做出反應以維持或重建蛋白質穩態(蛋白恆定)。一種此類網路為整合的壓力反應(integrated stress response；ISR)，其係一種藉由對基因表現進行再程式化來幫助恢復細胞平衡之中樞及進化上保守的信號傳導路徑。ISR之中樞調節中心位於真核起始因子2 /真核起始因子2B (eIF2/eIF2B)複合物中，其控制eIF2•GTP•甲硫胺醯基-起始tRNA三元複合物(TC)之形成，此為啟動新的蛋白質合成之前提條件(參見例如Hinnebusch等人, 2016；其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。異三聚體轉譯起始因子eIF2之α次單元中單個絲胺酸之磷酸化抑制功能性TC之組裝，從而阻斷eIF2之鳥嘌呤核苷酸交換因子(稱為eIF2B)之作用(參見例如Bogorad等人, 2017；Kenner等人, 2019；Kashiwagi等人, 2019；Adomavicius等人, 2019；及Gordiyenko等人, 2019；其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。

藉由四種集中於eIF2之磷酸化的專用激酶(蛋白激酶R樣內質網激酶(Protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase；PERK)、eIF-2-α激酶(GCN2)、RNA活化之蛋白激酶(PKR)及原血紅素調節之eIF2α激酶(HRI))感測不同病況，包括蛋白恆定缺陷、營養缺乏、病毒感染及氧化壓力。eIF2之磷酸化(eIF2-P)使得蛋白質合成普遍減少。矛盾的是，eIF2-P亦觸發攜帶短抑制性上游開讀框(ORF)之特定mRNA (包括關鍵轉錄因子，諸如ATF4)在其5'非轉譯區(5' UTR)中之轉譯(參見例如 圖 1)。藉由降低一般轉譯及上調驅動新轉錄程式之少數蛋白質之合成，ISR旨在藉由對基因表現進行再程式化來維持穩態。然而，若壓力不能緩解，則ISR觸發細胞凋亡以消除受損細胞。

ISR及與疾病病況相關之系統的某些態樣已綜述於Mauro Costa-Mattioli & Peter Walter, 2020中(參見例如Mauro Costa-Mattioli及Peter Walter, The integrated stress response: From mechanism to disease. Science2020年4月24日; 368(6489): eaat5313，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。ISR之天然活化、過度活化及/或異常活化已涉及各種疾病病況，包括認知病症、神經退化、癌症、糖尿病、肌肉損失(例如惡病質)及代謝病症。

在超過15年前，發現ISR為長期記憶形成之中樞調節因子。簡言之，ISR之基因或藥理學抑制(例如eIF2-P減少)增強長期記憶，而ISR之活化(例如eIF2-P增加)減弱長期記憶(參見例如Costa-Mattioli等人, 2007；Costa-Mattioli等人, 2005及Zhu等人, 2011；其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。全世界之研究者已再現、建立且大大擴展了ISR為中樞記憶開關之概念(參見例如Batista等人, 2015；Ma等人, 2013；Sharma等人, 2018；Segev等人, 2015；Stern等人, 2013；Moreno等人, 2012；Kim等人, 2013；Wong等人, 2019；及Costa-Mattioli & Walter, 2020中所綜述；其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。最值得注意的是，發現了一種ISR抑制劑(ISRIB)，其與在基因上降低ISR之作用類似：即其增強長期記憶形成(參見例如Kenner等人, 2019；及Sidrauski等人, 2013；其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。

ISR在由蛋白質錯誤摺疊及聚集問題、粒線體功能障礙及/或氧化壓力引起之各種大腦病症中活化。舉例而言，ISR之活化為與以下相關之記憶缺陷所暗含的主要致病機制：唐氏症(Down Syndrome) (參見例如Zhu等人, 2019)、阿茲海默氏病(Alzheimer's disease；AD) (參見例如Ma等人, 2013；Segev等人, 2015；Tible等人, 2019；Hwang等人, 2017；及Lourenco等人, 2013；其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)、創傷性腦損傷(TBI) (參見例如Chou等人, 2017；及Sen等人, 2017；其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)及老化(參見例如Sharma等人, 2018，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。因此，ISR正成為逆轉因蛋白質穩態破壞而引起之各種記憶病症中的認知功能障礙之有前景的途徑。

最後，藉由對活化ISR且與人類之智能障礙相關的突變進行鑑別來突出顯示ISR在認知功能障礙中之重要性(參見例如Abdulkarim等人, 2015；Kernohan等人, 2015；Borck等人, 2012；Skopkova等人, 2017；Gregory等人, 2019；Moortgat等人, 2015；及Costa-Mattioli等人, 2020；其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。此等罕見突變中之一些映射至CReP (由PPP1R15B編碼)之PP1結合部位且破壞CReP•PP1磷酸酶複合物之穩定性，由此增加eIF2-P (參見例如Abdulkarim等人, 2015；及Kernohan等人, 2015；其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。編碼eIF2γ之基因中之其他突變減少TC形成，且因此誘導ISR，類似地會引起患有精神不全、癲癇症、低性腺功能症、小頭畸形及肥胖(mental deficiency, epilepsy, hypogenitalism, microcephaly, and obesity；MEHMO)症候群(一種X性聯ID症候群)之患者的認知功能障礙(參見例如Borck等人, 2012；Skopkova等人, 2017；Gregory等人, 2019；及Moortgat等人, 2016；其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。因此，ISR之活化與人類之認知功能障礙相關。

本文中所描述之研究至少提供用於減輕ISR相關認知功能障礙之新的組合物及方法。

除其他之外，本發明提供以下認識：可經由調節(例如抑制) ISR來治療與整合的壓力反應(ISR)活化(例如天然活化、過度活化及/或異常活化)相關之疾病或病況。在某些實施例中，ISR之調節包含使用構築體、粒子、多肽、聚核苷酸及/或包含該等構築體、粒子、蛋白質及/或編碼該等蛋白質之核苷酸的組合物，其中蛋白質包含PP1結合域及eIF2結合域。在一些實施例中，本文揭示一種非天然聚核苷酸構築體，其包含編碼整合的壓力反應(ISR)之一或多種抑制劑的聚核苷酸序列，其中一或多種抑制劑包含蛋白質磷酸酶-1 (PP1)結合域及真核起始因子2 (eIF2)結合域，其中非天然聚核苷酸構築體包含：A)異源啟動子，其可操作地連接至編碼ISR之一或多種抑制劑的聚核苷酸序列，其中異源啟動子並非半乳糖誘導型啟動子；及/或B)包含異源啟動子之重組病毒載體，該異源啟動子可操作地連接至編碼ISR之一或多種抑制劑的聚核苷酸序列，其中異源啟動子並非半乳糖誘導型啟動子。

在一些實施例中，本文揭示一種非天然聚核苷酸構築體，其包含編碼ISR之一或多種抑制劑的聚核苷酸序列，其中一或多種抑制劑包含PP1結合域及eIF2結合域，其中聚核苷酸構築體進一步包含連接PP1結合域與eIF2結合域之肽連接序列，其中肽連接序列包含在由DP71L蛋白質(例如根據SEQ ID NO: 18)之E12位置表示之胺基酸位置處的麩胺酸，其中聚核苷酸構築體進一步包含：A)異源啟動子，其可操作地連接至編碼ISR網路之一或多種抑制劑的聚核苷酸序列；及/或B)包含異源啟動子之重組病毒載體，該異源啟動子可操作地連接至編碼ISR網路之一或多種抑制劑的聚核苷酸序列。

在一些實施例中，ISR抑制劑與PP1α及/或PP1γ及/或eIF2之結合親和力高於具有類似一級胺基酸序列長度之其他ISR抑制劑。在一些實施例中，ISR抑制劑與PP1α及/或PP1γ及/或eIF2之結合親和力高於ΔCREP蛋白。在一些實施例中，使用免疫沈澱分析法評估結合親和力。在一些實施例中，使用對來自轉殖基因人類細胞(例如HEK293T細胞)之溶解產物進行的免疫沈澱分析法來評估結合親和力。在一些實施例中，轉殖基因人類細胞(例如HEK293T細胞)經構築體轉染，該構築體穩定及/或短暫地表現所關注之蛋白質(例如ISR抑制劑)及可偵測標記物(例如標籤，例如螢光標記物，例如GFP (例如由SEQ ID NO: 37編碼))。在一些實施例中，使用靶向可偵測標記物及/或所關注之蛋白質的抗體來分析結合親和力，且使用任何適合方法(諸如(但不限於) ELISA分析法、西方墨點(Western blot)分析法、免疫沈澱質譜分析法等)來(例如定性及/或定量地)偵測結合親和力。在一些實施例中，以本文圖6中所描述來評估結合親和力。

在一些實施例中，本文中所描述之構築體編碼抑制劑，該抑制劑包含可操作以募集蛋白質及/或蛋白質複合物之PP1結合域，該蛋白質及/或蛋白質複合物包含絲胺酸/蘇胺酸-蛋白質磷酸酶PP1-α催化次單元(PPP1CA，亦稱為PP1α)、絲胺酸/蘇胺酸-蛋白質磷酸酶PP1-β催化次單元(PPP1CB，亦稱為PP1β)及/或絲胺酸/蘇胺酸-蛋白質磷酸酶PP1-γ催化次單元(PPP1CC，亦稱為PP1γ)。在一些實施例中，本文中所描述之構築體編碼抑制劑，該抑制劑包含可操作以募集蛋白質及/或蛋白複合物之eIF2結合域，該蛋白質及/或蛋白複合物包含eIF2α、eIF2β及/或eIF2γ次單元。在一些實施例中，PP1結合域包含RVxF PP1結合模體及/或KGILK PP1結合模體。在一些實施例中，PP1結合域包含KVRF、KVTF、RVRF、WVTF、IVRF及/或HVRF PP1結合模體。在一些實施例中，eIF2結合域包含RxGx-WxxxAxDRxRFxxRI eIF2結合模體。

在一些實施例中，本文中所描述之構築體編碼抑制劑，該抑制劑包含eIF2α磷酸化之組成性抑制因子(CReP)蛋白或其特徵部分。在一些實施例中，CReP蛋白包含與SEQ ID NO: 6至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，CreP蛋白或其特徵部分進一步包含連接PP1結合域與eIF2結合域之肽連接序列。在一些實施例中，肽連接序列衍生自非洲豬熱病毒(African swine fever virus) DP71L蛋白質。在一些實施例中，肽連接序列與SEQ ID NO: 21至少或恰好73%、82%、91%或100%一致。在一些實施例中，CReP蛋白為嵌合蛋白且包含與SEQ ID NO: 4至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，CReP蛋白為嵌合蛋白且包含根據SEQ ID NO: 4之胺基酸序列。

在一些實施例中，本文中所描述之構築體編碼抑制劑，該抑制劑包含蛋白質磷酸酶1調節次單元15A (GADD34)蛋白或其特徵部分。在一些實施例中，本文中所描述之構築體編碼抑制劑，該抑制劑包含單純疱疹病毒(Herpes simplex virus) γ34.5蛋白或其特徵部分。在一些實施例中，本文中所描述之構築體編碼抑制劑，該抑制劑包含金絲雀痘病毒(Canarypox virus) CNPV231蛋白或其特徵部分。在一些實施例中，本文中所描述之構築體編碼抑制劑，該抑制劑包含袋鼠疱疹病毒(Macropoid herpes virus) ICP34.5蛋白或其特徵部分。在一些實施例中，本文中所描述之構築體編碼抑制劑，該抑制劑包含桑燈蛾昆蟲痘病毒(Amsacta moorei entomopoxvirus)「L」AmEPV193蛋白或其特徵部分。

在一些實施例中，本文中所描述之構築體編碼抑制劑，該抑制劑包含非洲豬瘟病毒DP71L蛋白或其特徵部分。在一些實施例中，抑制劑包含與SEQ ID NO: 18至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，抑制劑包含根據SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。在一些實施例中，抑制劑係由聚核苷酸編碼，該聚核苷酸包含與SEQ ID NO: 19至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之編碼序列。在一些實施例中，抑制劑係由聚核苷酸編碼，該聚核苷酸包含根據SEQ ID NO: 19之編碼序列。在一些實施例中，抑制劑包含DP71L蛋白，該DP71L蛋白不包含V6E突變及/或E12T突變(例如相對於SEQ ID NO: 18)。

在一些實施例中，本文中所描述之構築體編碼抑制劑，該抑制劑在PP1結合域與eIF2結合域之間包含肽連接子。在一些實施例中，抑制劑包含衍生自DP71L蛋白之肽連接子。在一些實施例中，肽連接子包含在DP71L蛋白(SEQ ID NO: 18) E12位置處之麩胺酸。在一些實施例中，肽連接子包含編碼其之胺基酸序列或聚核苷酸序列，其與SEQ ID NO: 20或21至少或恰好73%、82%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。

在一些實施例中，本文中所描述之構築體包含多於一種ISR抑制劑，其選自由以下組成之蛋白質之群：CReP、GADD34、γ34.5、CNPV231、ICP34.5、AmEPV193及DP71L，及/或其特徵部分。

在一些實施例中，本文中所描述之構築體包含為CAG啟動子之異源啟動子。在一些實施例中，CAG啟動子包含與SEQ ID NO: 25或26至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之聚核苷酸序列。在一些實施例中，CAG啟動子包含根據SEQ ID NO: 25或26之聚核苷酸序列。在一些實施例中，本文中所描述之構築體包含ISR抑制劑，該ISR抑制劑不包含麩胺基硫S-轉移酶(GST)及/或不與其融合。

在一些實施例中，本文中所描述之構築體包含於逆轉錄病毒衣殼中。在一些實施例中，本文描述一種AAV粒子，其包含本文中所揭示之構築體中之任一者，其中構築體包含於腺相關病毒(AAV)衣殼中。在一些實施例中，AAV粒子具有AAV-DJ/8、AAV9、AAV Php.B及/或AAV Php.eB血清型及/或假型中之任一者。在一些實施例中，AAV粒子能夠逆行感染。在一些實施例中，AAV粒子包含核苷酸構築體，該核苷酸構築體包含與SEQ ID NO: 22至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之聚核苷酸序列。在一些實施例中，AAV粒子包含根據SEQ ID NO: 22之聚核苷酸序列。在一些實施例中，AAV衣殼為AAV-DJ/8、AAV9、AAV Php.B及/或AAV Php.eB衣殼。

本文亦揭示多肽。在一些實施例中，多肽包含與SEQ ID NO: 4至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，多肽包含根據SEQ ID NO: 4之胺基酸序列。

本文亦揭示藥理學上可接受之組合物，其包含本文中所描述之非天然構築體、多肽及/或AAV粒子。本文亦揭示包含本文中所揭示之非天然構築體、多肽、AAV粒子及/或組合物之細胞。

本文亦揭示延遲個體(例如哺乳動物個體，例如人類個體)中之認知功能障礙之發作、治療該認知功能障礙、減緩該認知功能障礙之進展、降低該認知功能障礙之風險及/或預防該認知功能障礙的方法，其包含向個體(例如哺乳動物個體，例如人類個體)投與本文中所揭示之非天然構築體、多肽、AAV粒子或組合物。在一些實施例中，向中樞神經系統進行投與。在一些實施例中，向周邊神經系統進行投與。在一些實施例中，向腦脊髓液(CSF)進行投與。在一些實施例中，向海馬體進行投與。在一些實施例中，向海馬體之CA1、CA2及/或CA3區域進行投與。在一些實施例中，投與改善個體中之突觸可塑性。在一些實施例中，投與改善個體中之長期記憶形成。在一些實施例中，投與抑制及/或抵消個體中之蛋白激酶R樣內質網激酶(PERK)、eIF-2-α激酶(GCN2)、RNA活化之蛋白激酶(PKR)及/或原血紅素調節之eIF2α激酶(HRI)中之一或多者的作用。在一些實施例中，投與將磷酸化酶定位至eIF2蛋白。在一些實施例中，個體已被診斷患有與認知損傷或功能障礙相關之疾病及/或病症。在一些實施例中，個體患有神經發育性病症。在一些實施例中，個體患有神經退化性病症。在一些實施例中，個體患有及/或預期發生唐氏症、阿茲海默氏病、創傷性腦損傷、腦白質消失(vanishing white matter；VWM)症、額顳葉型失智症及/或衰老相關認知減退。

本文亦揭示延遲人類個體中與ISR之活化、過度活化及/或異常活化相關之疾病的發作、治療該疾病、減緩該疾病之進展、降低該疾病之風險及/或預防該疾病的方法，其包含投與本文中所描述之非天然構築體、多肽、AAV粒子或組合物。在一些實施例中，疾病為認知病症、神經退化、癌症、糖尿病及/或代謝病症。在一些實施例中，個體年齡小於10歲。在一些實施例中，個體年齡大於30歲。在一些實施例中，個體年齡大於50歲。在一些實施例中，個體年齡大於70歲。在一些實施例中，個體為哺乳動物。在一些實施例中，個體為人類。

本文亦揭示延遲人類個體中之認知功能障礙之發作、治療該認知功能障礙、延緩該認知功能障礙之進展、降低該認知功能障礙之風險及/或預防該認知功能障礙的方法，其包含向人類個體投與：A)編碼ISR之抑制劑的聚核苷酸，該ISR之抑制劑包含根據SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；B)編碼ISR之抑制劑的聚核苷酸，該ISR之抑制劑包含根據SEQ ID NO: 4之胺基酸序列；C)編碼ISR之抑制劑的聚核苷酸，該ISR之抑制劑包含與根據SEQ ID NO: 18之胺基酸序列至少或恰好85%、90%、95%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列，其中抑制劑包含蛋白質磷酸酶-1 (PP1)結合域及真核起始因子2 (eIF2)結合域；或D)編碼ISR之抑制劑的聚核苷酸，該ISR之抑制劑包含與根據SEQ ID NO: 4之胺基酸序列至少或恰好85%、90%、95%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列，其中抑制劑包含蛋白質磷酸酶-1 (PP1)結合域及真核起始因子2 (eIF2)結合域。在一些實施例中，聚核苷酸包含與SEQ ID NO: 22至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之聚核苷酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼肽連接序列之序列，該肽連接序列與SEQ ID NO: 21至少或恰好73%、82%、91%或100%一致。在一些實施例中，聚核苷酸包含編碼CReP嵌合蛋白之序列，該CReP嵌合蛋白包含與SEQ ID NO: 4至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，聚核苷酸可操作地連接至異源啟動子。在一些實施例中，異源啟動子並非半乳糖誘導型啟動子。在一些實施例中，疾病與人類個體中之ISR之活化、過度活化及/或異常活化相關。

本文亦揭示包含 Ppp1r15b基因中之突變的轉殖基因小鼠。在一些實施例中，突變為R658C突變。在一些實施例中，使用核酸內切酶產生突變。在一些實施例中，核酸內切酶為Cas9。在一些實施例中，產生包含使 Ppp1r15b基因與包含SEQ ID NO: 38之引導RNA接觸。

本發明之某些實施例係經由以下態樣表徵。

態樣1為一種非天然聚核苷酸構築體，其包含編碼整合的壓力反應(ISR)之一或多種抑制劑的聚核苷酸序列，其中一或多種抑制劑包含蛋白質磷酸酶-1 (PP1)結合域及真核起始因子2 (eIF2)結合域，其中非天然聚核苷酸構築體包含：A)異源啟動子，其可操作地連接至編碼ISR之一或多種抑制劑的聚核苷酸序列，其中異源啟動子並非半乳糖誘導型啟動子；及/或B)包含異源啟動子之重組病毒載體，該異源啟動子可操作地連接至編碼ISR之一或多種抑制劑的聚核苷酸序列，其中異源啟動子並非半乳糖誘導型啟動子。

態樣2為如態樣1之構築體，其進一步包含連接PP1結合域與eIF2結合域之肽連接序列。

態樣3為如態樣1或2之構築體，其中肽連接序列與SEQ ID NO: 21至少或恰好73%、82%、91%或100%一致。

態樣4為如態樣1至3中任一項之構築體，其中連接序列在根據SEQ ID NO: 18之DP71L蛋白E12位置處包含麩胺酸。

態樣5為如態樣1至4中任一項之構築體，其中抑制劑包含與SEQ ID NO: 4至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。

態樣6為如態樣1至5中任一項之構築體，其中抑制劑包含根據SEQ ID NO: 4之胺基酸序列。

態樣7為如態樣1至4中任一項之構築體，其中抑制劑包含與SEQ ID NO: 18至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。

態樣8為如態樣1至5中任一項之構築體，其中抑制劑包含根據SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。

態樣9為如態樣1至8中任一項之構築體，其中異源啟動子為CAG啟動子。

態樣10為如態樣1至9中任一項之構築體，其中非天然構築體包含於逆轉錄病毒衣殼中。

態樣11為一種AAV粒子，其包含如態樣1至10中任一項之構築體，該構築體包含於腺相關病毒(AAV)衣殼中。

態樣12為如態樣11之AAV粒子，其中AAV粒子具有AAV-DJ/8、AAV9、AAV Php.B及/或AAV Php.eB血清型及/或假型中之任一者。

態樣13為如態樣11或12之AAV粒子，其中AAV粒子能夠逆行感染。

態樣14為一種AAV粒子，其包含核苷酸構築體，該核苷酸構築體包含與SEQ ID NO: 22至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之聚核苷酸序列。

態樣15為如態樣14之AAV粒子，其包含根據SEQ ID NO: 22之聚核苷酸序列。

態樣16為如態樣14或15之AAV粒子，其中AAV衣殼為AAV-DJ/8、AAV9、AAV Php.B及/或AAV Php.eB衣殼。

態樣17為一種多肽，其包含與SEQ ID NO: 4至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。

態樣18為如態樣17之多肽，其包含根據SEQ ID NO: 4之胺基酸序列。

態樣19為一種藥理學上可接受之組合物，其包含如態樣1至18中任一項之非天然構築體、多肽或AAV粒子。

態樣20為一種人類細胞，其包含如態樣1至19中任一項之非天然構築體、多肽、AAV粒子或組合物。

態樣21為一種延遲人類個體中之認知功能障礙之發作、治療該認知功能障礙、減緩該認知功能障礙之進展、降低該認知功能障礙之風險及/或預防該認知功能障礙的方法，其包含向人類個體投與如態樣1至20中任一項之非天然構築體、多肽、AAV粒子或組合物。

態樣22為如態樣21之方法，其中向中樞神經系統進行投與。

態樣23為如態樣21之方法，其中向周邊神經系統進行投與。

態樣24為如態樣21之方法，其中向腦脊髓液(CSF)進行投與。

態樣25為如態樣21或22之方法，其中向海馬體進行投與。

態樣26為如態樣25之方法，其中向海馬體之CA1、CA2及/或CA3區域進行投與。

態樣27為如態樣21至26中任一項之方法，其中人類個體已被診斷患有與認知損傷或功能障礙相關之疾病及/或病症。

態樣28為如態樣21至27中任一項之方法，其中個體患有神經發育性病症。

態樣29為如態樣21至27中任一項之方法，其中個體患有神經退化性病症。

態樣30為如態樣21至29中任一項之方法，其中個體患有及/或預期發生唐氏症、阿茲海默氏病、創傷性腦損傷、腦白質消失(VWM)症、額顳葉型失智症及/或衰老相關認知減退。

態樣31為一種延遲人類個體中與ISR之活化、過度活化及/或異常活化相關之疾病的發作、治療該疾病、減緩該疾病之進展、降低該疾病之風險及/或預防該疾病的方法，其包含向人類個體投與如態樣1至20中任一項之非天然構築體、多肽、AAV粒子或組合物。

態樣32為如態樣31之方法，其中疾病為認知病症、神經退化、癌症、糖尿病及/或代謝病症。

態樣33為一種延遲人類個體中之認知功能障礙之發作、治療該認知功能障礙、減緩該認知功能障礙之進展、降低該認知功能障礙之風險及/或預防該認知功能障礙的方法，其包含向人類個體投與：a)編碼ISR之抑制劑的聚核苷酸，該ISR之抑制劑包含根據SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；b)編碼ISR之抑制劑的聚核苷酸，該ISR之抑制劑包含根據SEQ ID NO: 4之胺基酸序列；C)編碼ISR之抑制劑的聚核苷酸，該ISR之抑制劑包含與根據SEQ ID NO: 18之胺基酸序列至少或恰好85%、90%、95%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列，其中抑制劑包含蛋白質磷酸酶-1 (PP1)結合域及真核起始因子2 (eIF2)結合域；或d)編碼ISR之抑制劑的聚核苷酸，該ISR之抑制劑包含與根據SEQ ID NO: 4之胺基酸序列至少或恰好85%、90%、95%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列，其中抑制劑包含蛋白質磷酸酶-1 (PP1)結合域及真核起始因子2 (eIF2)結合域。

態樣34為如態樣33之方法，其中聚核苷酸包含編碼抑制劑胺基酸序列之序列，該抑制劑胺基酸序列與SEQ ID NO: 18至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。

態樣35為如態樣33之方法，其中聚核苷酸包含編碼抑制劑胺基酸序列之序列，該抑制劑胺基酸序列與SEQ ID NO: 4至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。

態樣36為如態樣33至35中任一項之方法，其中聚核苷酸包含編碼肽連接序列之序列，該肽連接序列與SEQ ID NO: 21至少或恰好73%、82%、91%或100%一致。

態樣37為如態樣33至36中任一項之方法，其中聚核苷酸可操作地連接至異源啟動子。

態樣38為如態樣37之方法，其中異源啟動子並非半乳糖誘導型啟動子。

態樣39為如態樣33至38中任一項之方法，其中疾病與人類個體中之ISR之活化、過度活化及/或異常活化相關。

態樣40為一種轉殖基因小鼠，其包含 Ppp1r15b基因中之突變。

態樣41為如態樣40之轉殖基因小鼠，其中突變為R658C突變。

態樣42為如態樣40或41之轉殖基因小鼠，其中使用核酸內切酶產生突變。

態樣43為如態樣42之轉殖基因小鼠，其中核酸內切酶為Cas9。

態樣44為如態樣43之轉殖基因小鼠，其中產生包含使 Ppp1r15b基因與包含SEQ ID NO: 38之引導RNA接觸。

相關申請案之交互參照

本申請案主張2022年7月8日申請之美國臨時專利申請案第63/359,672號之優先權，該申請案以全文引用之方式併入本文中。 序列表

本申請案含有序列表，該序列表已以ST26格式提交且以全文引用之方式併入本文中。該ST26複本創建於2023年6月13日，命名為BAYM_P0373WO_Sequence_Listing.xml且大小為441,028位元組。 關於聯邦政府獎助研究或開發之聲明

本發明在政府支持下在由美國國家衛生研究院(National Institutes of Health)授予之R01 NS076708-10下進行。政府享有本發明中之某些權利。

本文中所描述之研究至少提供用於抑制ISR，包括減輕ISR相關病症之新的組合物及方法。ISR及與疾病相關之系統的某些態樣已綜述於Mauro Costa-Mattioli及Peter Walter 2020中(參見例如Mauro Costa-Mattioli及Peter Walter, The integrated stress response: From mechanism to disease. Science2020年4月24日; 368(6489): eaat5313，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。在某些實施例中，本文中所描述之構築體、粒子、多肽、聚核苷酸及/或組合物可用於抑制ISR之方法中。在某些實施例中，本文中所描述之構築體、粒子、多肽、聚核苷酸及/或組合物可用於治療與ISR之天然活化、過度活化及/或異常活化相關之疾病的方法中。在一些實施例中，此類疾病可包括(但不限於)認知病症、神經退化、癌症、糖尿病、肌肉損失(例如惡病質)及/或代謝病症。

可基於本文中所描述之方法來使用一或多種組合物(例如，包括組合物中所包含之組分，諸如構築體(例如聚核苷酸構築體，諸如RNA及/或DNA構築體)、粒子、多肽等)之用途。本申請案通篇論述其他實施例。關於本發明之一個態樣所論述之任何實施例同樣適用於本發明之其他態樣，且反之亦然。實例部分中之實施例應理解為適用於本文中所描述之技術之所有態樣的實施例。

在本申請案通篇中，術語「約」用於指示，值包括用於量測或定量方法之固有誤差變化。

當與術語「包含」結合使用時，字組「一(a)」或「一(an)」之使用可意謂「一個」，但其亦與「一或多個」、「至少一個」及「一個或多於一個」之含義相符。

片語「及/或」意謂「及」或「或」。舉例而言，A、B及/或C包括：單獨的A、單獨的B、單獨的C、A與B之組合、A與C之組合、B與C之組合或A、B及C之組合。換言之，「及/或」作為包含性的或操作。

字組「包含(comprising)」(及包含(comprising)之任何形式，諸如「包含(comprise)」及「包含(comprises)」)、「具有(having)」(及具有(having)之任何形式，諸如「具有(have)」及「具有(has)」)、「包括(including)」(及包括(including)之任何形式，諸如「包括(includes)」及「包括(include)」)或「含有(containing)」(及含有(containing)之任何形式，諸如「含有(contains)」及「含有(contain)」)為包含性或開放的且不排除額外未列出之要素或方法步驟。

組合物及方法在使用時可「包含」本說明書通篇所揭示之成分或步驟中之任一者、「基本上由其組成」或「由其組成」。「基本上由」所揭示之成分或步驟中之任一者「組成」的組合物及方法將申請專利範圍之範疇限制於不實質影響所主張發明之基本及新穎特徵的指定材料或步驟。

術語「有效」，如該術語在說明書及/或申請專利範圍中所使用，意謂足以實現所需、預期或預定之結果。

術語「個體(individual)」、「個體(subject)」及「患者(patient)」可互換地使用且可指人類或非人類。

當用於申請專利範圍及/或本說明書中時，術語「抑制」或「降低」或「預防」或「避免」或此等術語之任何變化形式包括達成所需結果之任何可量測之降低或完全抑制。

如本文中所使用，「蛋白質」或「多肽」係指包含至少五個胺基酸殘基之分子。如本文中所使用，術語「野生型」係指在生物體中天然存在之分子之內源性版本。在一些實施例中，使用蛋白質或多肽之野生型版本，然而在本發明之許多實施例中，使用經修飾及/或非天然之蛋白質或多肽來調節(例如抑制) ISR。上文所描述之術語可互換地使用。「經修飾之蛋白質」或「經修飾之多肽」或「變異體」係指化學結構，尤其胺基酸序列相對於野生型蛋白質或多肽改變之蛋白質或多肽。在一些實施例中，經修飾/變異體蛋白質或多肽具有至少一種經修飾之活性或功能(認識到蛋白質或多肽可具有多種活性或功能)。尤其經考慮，經修飾/變異體蛋白質或多肽可相對於一種活性或功能改變，但在其他方面保留野生型活性或功能，諸如免疫原性。「非天然」存在之多肽及/或構築體(例如聚核苷酸構築體)係指經工程改造之多肽及/或構築體，其已藉由人工產生且在自然界中並未發現。非天然多肽及/或構築體亦應理解為包含非天然胺基酸及/或非天然核苷酸。蛋白質可直接自其天然之生物體中分離，藉由重組DNA/外源性表現方法產生，或藉由固相肽合成(SPPS)或其他活體外方法產生。在一些實施例中，蛋白質係由RNA構築體產生。在一些實施例中，編碼蛋白質之RNA構築體(例如線性及/或環狀構築體)可以合成方式及/或藉由活體外方法產生。在特定實施例中，存在經分離之核酸區段及併入編碼多肽之核酸序列的重組載體。術語「重組」可與多肽或特異性多肽之名稱結合使用，且此通常係指由已經活體外操作或為此類分子之複製產物之核酸分子產生的多肽。

在治療性、診斷性或生理學目的或作用之情形下的任何方法亦可描述於「用途」申請專利範圍語言中，諸如本文中所論述之任何化合物、組合物或藥劑用於達成或實施所描述之治療性、診斷性或生理學目的或作用「之用途」。

尤其經考慮，關於本發明之一個實施例所論述之任何限制可適用於本發明之任何其他實施例。此外，本發明之任何組合物可用於本發明之任何方法中，且本發明之任何方法可用於產生或利用本發明之任何組合物。關於本發明之一個態樣所論述之任何實施例同樣適用於本發明之其他態樣，且反之亦然。舉例而言，本文中所描述之方法中之任何步驟可適用於任何其他方法。此外，本文中所描述之任何方法可排除任何步驟或步驟之組合。實例中所闡述之實施例之態樣亦為可在不同實例中之其他處或本申請案中之其他處(諸如在發明內容、實施方式、申請專利範圍及圖式簡單說明中)所論述之實施例的上下文中實施的實施例。

本發明之其他目標、特徵及優勢將自以下實施方式而變得顯而易知。然而，應理解，由於對於熟習此項技術者而言，本發明之精神及範疇內之各種變化及修改將自此實施方式變得顯而易見，因而實施方式及特定實例在指示本發明之特定實施例時僅作為說明提供。 I. 與整合的壓力反應 ( ISR ) 活化相關之病況 A. 認知病症

在一些實施例中，本文中所描述之技術(例如組合物及/或方法)適用於延遲人類個體中與ISR之活化、過度活化及/或異常活化相關之疾病的發作、治療該疾病、減緩該疾病之進展、降低該疾病之風險及/或預防該疾病。在一些實施例中，疾病為與認知減退相關之疾病，且本文中所提供之技術適用於延遲認知減退及/或其他與疾病病況相關之症狀的發作、治療認知減退及/或其他與疾病病況相關之症狀、減緩認知減退及/或其他與疾病病況相關之症狀的進展、降低認知減退及/或其他與疾病病況相關之症狀的風險，及/或預防認知減退及/或其他與疾病病況相關之症狀。經本文中所描述，在某些實施例中，認知減退與整合的壓力反應(ISR)系統之活化相關及/或由整合的壓力反應(ISR)系統之活化引起。在某些實施例中，本文中所描述之技術適用於至少部分地逆轉認知功能之缺陷(例如，認知功能受損，諸如(但不限於)長期記憶(LTM)形成受損，及/或保留)。在某些實施例中，本文中所描述之技術適用於降低LTM形成能力損失之風險。在某些實施例中，本文中所描述之技術適用於治療LTM形成能力之損失。在某些實施例中，本文中所描述之技術適用於改善LTM形成能力。在某些實施例中，本文中所揭示之組合物及/或方法改善長期增效(LTP)及/或突觸可塑性。在某些實施例中，本文中所揭示之組合物及/或方法改善長效LTP。在某些實施例中，本文中所揭示之組合物及/或方法改善晚期LTP。在某些實施例中，本文中所描述之技術適用於在ISR過度活化之條件下，例如在傳統ISR抑制性組合物(例如小分子，諸如激酶抑制劑及/或ISRIB)不足以達成治療性疾病病況改善及/或預防之條件下提供ISR抑制。

可使用熟習此項技術者熟知之方法(例如篩選測試及/或問卷)來評估認知功能，包括(但不限於)例如注意力、方向、語言、記憶、視覺空間能力、社會互動、功能狀態之評估及/或行為評估。

在某些實施例中，本文中所描述之技術適用於預防與ISR活化相關之各種神經系統病症(例如神經退化性病症、神經發育性病症等)、治療該等神經系統病症及/或降低該等神經系統病症之風險。在某些實施例中，本文中所描述之技術適用於改善腦功能(例如腦認知功能)，包括(但不限於)與ISR活化相關或不相關之LTM形成及/或保留。

在一些實施例中，認知病症為神經病症，且部分特徵為神經退化及/或異常神經發育(例如神經發育性病症)。在某些實施例中，神經病症可為(但不限於)唐氏症(DS)、夏柯-馬里-杜斯氏病(Charcot-Marie-Tooth disease)、重度抑鬱症(MDD)、精神分裂症、阿茲海默氏病、亨丁頓氏病(Huntington disease)、帕金森氏病(Parkinson's disease)、肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(Amyotrophic lateral sclerosis；ALS)、多發性硬化症(MS)、普里昂病(Prion disease)、創傷性腦損傷、腦白質消失(VWM)症、額顳葉型失智症及/或老化(例如年齡相關認知減退)。在某些實施例中，本文中所提供之技術適用於延遲與認知病症相關之認知功能障礙之發作、治療該認知功能障礙、減緩該認知功能障礙之進展、降低該認知功能障礙之風險及/或預防該認知功能障礙。在某些實施例中，本文中所提供之技術適用於延遲神經病症之發作、治療該神經病症、減緩該神經病症之進展、降低該神經病症之風險及/或預防該神經病症。

唐氏症(DS)為智能障礙(ID)之最常見遺傳形式且在10 000名活新生兒中約有10名患該病(參見例如Khoshnood等人, 2011)。患有DS之個體自早期兒童期便顯示學習及記憶、語言及執行功能缺陷，此係由存在第21號染色體(Hsa21)之額外複本所引起。DS患者展現樹突狀分支及脊柱密度之年齡依賴性降低，其可能與神經元中肌動蛋白細胞骨架之重組受損有關(Marin-Padilla 1976；Takashima等人1981)。另外，DS患者顯示早期發作之阿茲海默樣神經退化(綜述於例如Lott及Dierssen 2010中)。ISR在DS症狀呈現及認知能力中之作用論述於Zhu等人, 2019中，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中。在某些實施例中，本文中所描述之構築體及/或組合物適用於預防、治療及/或緩解與唐氏症相關之症狀。

阿茲海默氏病在生物學上由存在含β澱粉樣蛋白之斑塊及含tau之神經纖維纏結定義。阿茲海默氏病為一種遺傳及偶發性神經退化性疾病，其在其原型呈現中引起健忘性認知障礙且在其不太常見變異體中引起非健忘性認知障礙。阿茲海默氏病為在中年及晚年罹患認知障礙之常見原因，但其臨床影響會因其他神經退化性病況及腦血管病況改變。阿茲海默氏病生物學可被視為一種腦部病症，其由高度相關之胞內體/溶酶體清除路徑中突觸穩態喪失及功能障礙之複雜互相作用引起，其中Aβ及tau之前驅物、聚集物種及轉譯後修飾產物發揮重要作用。已知突觸穩態喪失會促進ISR。阿茲海默氏病中ISR之某些態樣描述於Tible等人, 2019；Hwang等人, 2017；及Lourenco等人, 2013中；其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中。在某些實施例中，本文中所描述之構築體及/或組合物適用於預防、治療及/或緩解與阿茲海默氏病相關之症狀。

腦白質消失(VWM)症(亦稱為伴有中樞神經系統髓鞘形成不良之兒童共濟失調(childhood ataxia with central nervous system hypomyelination；CACH))為一種由EIF2B1、EIF2B2、EIF2B3、EIF2B4及/或EIF2B5基因中之一或多者中之突變引起的罕見遺傳性神經病況。患有VWM病之兒童具有一或多個缺陷蛋白，該等蛋白質阻止身體產生足夠髓鞘，一種使神經纖維絕緣、保護其免於損傷之白色脂肪物質。由髓鞘覆蓋之神經纖維稱為「白質」。在沒有髓鞘之情況下，整個身體中之神經會惡化並消失。諸如肌肉僵硬及身體協調較差之症狀通常在2歲與6歲之間開始出現。若孩子發燒、感染或頭部損傷，則疾病可能會惡化。在某些病況中，可能出現VWM之成人發作形式，且通常伴隨有行為異常、重度頭痛及/或認知減退。ISR在VWM病中之某些作用描述於Abbink等人, 2019中(參見例如Abbink等人, Vanishing white matter: deregulated integrated stress response as therapy target. Ann Clin Transl Neurol. 2019年8月; 6(8): 1407-1422；其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。在某些實施例中，本文中所描述之構築體及/或組合物適用於預防、治療及/或緩解與VWM病相關之症狀。

額顳葉型失智症為影響大腦之額葉及顳葉之一系列病症。在某些情況下，個性、情緒、行為、記憶形成及言語均由大腦之此等部分控制，且隨著相關細胞失去其功能而喪失。額顳葉型失智症之症狀視大腦受影響之區域而定，但大部分症狀可歸類為行為或語言改變。在一些實施例中，行為症狀可包括不當行動、冷漠、缺乏興趣及/或熱情、缺乏抑制或約束、忽視個人衛生及/或照護，及/或強迫行為。在一些實施例中，語言症狀可包括難以說話及/或理解言語、難以使用適當語言、喪失閱讀及/或書寫技能，及/或難以進行社交互動。在某些情況下，患有額顳葉型失智症之個體可產生稱為匹克體(pick body)之異常蛋白質結構。額顳葉型失智症之最常見遺傳原因為C9orf72基因之重複擴增。與額顳葉型失智症相關之蛋白質積聚經由蛋白激酶PERK活化ISR反應。ISR在額顳葉型失智症中之某些作用描述於Radford等人, 2015中(參見例如Radford等人, PERK inhibition prevents tau-mediated neurodegeneration in a mouse model of frontotemporal dementia. Acta Neuropathol130, 633-642 (2015)；及Costa-Mattioli & Walter, 2020；其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。在某些實施例中，本文中所描述之構築體及/或組合物適用於預防、治療及/或緩解與額顳葉型失智症相關之症狀。

健康老化需要協調彙聚於蛋白質穩態網路上之大量壓力信號傳導路徑。ISR活性隨年齡增長而增加，表明與老化過程存在潛在聯繫。儘管在ISR活化期間發生之蛋白質生物合成減少與壽命延長相關，但近期資料顯示，壽命受到ISR限制，因為ISR抑制延長線蟲之存活期且增強老年小鼠之認知功能。在某些實施例中，ISR受到調節，同時亦調節老化過程。ISR在老化中之某些作用描述於Derisbourg等人, 2021中(參見例如Derisbourg等人, Perspective: Modulating the integrated stress response to slow aging and ameliorate age-related pathology. Nat Aging. 2021年9月; 1(9):760-768；其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。在某些實施例中，本文中所描述之構築體及/或組合物適用於預防、治療及/或緩解與衰老相關之症狀。在某些實施例中，本文中所描述之構築體及/或組合物適用於預防、治療及/或緩解與衰老相關認知減退相關之症狀。 B. 其他病症及疾病

在一些實施例中，本文中所描述之構築體、粒子、多肽、聚核苷酸及/或組合物可用於預防人類個體中與ISR活化(例如正常活化、高度活化及/或異常活化)相關之疾病或病症、治療該疾病或病症、降低該疾病或病症之進展，及/或降低該疾病或病症之風險的方法中。在一些實施例中，本文中所描述之構築體、粒子、多肽、聚核苷酸及/或組合物可用於治療疾病或病症中，其中疾病或病症為神經退化性疾病、發炎疾病、自體免疫疾病、代謝症候群、癌症、血管疾病、纖維變性疾病、病毒感染、肌骨胳疾病(諸如肌病)、眼部疾病或遺傳病症。

在一些實施例中，疾病或病症為神經退化性疾病。在一些實施例中，神經退化性疾病為腦白質消失症、伴有CNS髓鞘形成不良之兒童共濟失調、智能障礙症候群、阿茲海默氏病、普里昂病、庫賈氏病(Creutzfeldt-Jakob disease)、帕金森氏病、肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)、佩利措伊斯-梅茨巴赫病(Pelizaeus-Merzbacher disease)、認知損傷、創傷性腦損傷、手術後認知功能障礙(PCD)、神經-耳科症候群、聽覺損失、亨丁頓氏症、中風、慢性創傷性腦病、脊髓損傷、失智症、額顳葉型失智症(FTD)、抑鬱症或社會行為障礙。在一些實施例中，認知損傷係藉由老化、輻射、敗血症、癲癇、心臟病發作、心臟手術、肝臟衰竭、肝性腦病、麻醉、腦損傷、大腦手術、缺血、化學療法、癌症治療、危重病、腦震盪、肌肉纖維疼痛或抑鬱症觸發。在一些實施例中，神經退化性疾病為阿茲海默氏病。在一些實施例中，神經退化性疾病為衰老相關認知損傷。在一些實施例中，神經退化性疾病為創傷性腦損傷。

在一些實施例中，本文中所描述之構築體、粒子、多肽、聚核苷酸及/或組合物可用於治療阿茲海默氏病之方法中。在一些實施例中，神經退化及/或認知損傷減少。

在一些實施例中，疾病或病症為發炎疾病。在一些實施例中，發炎疾病為關節炎、牛皮癬性關節炎、牛皮癬、幼年特發性關節炎、氣喘、過敏性氣喘、支氣管性氣喘、結核病、慢性呼吸道病症、囊腫性纖維化、腎小球腎炎、膜性腎病、類肉瘤病、血管炎、魚鱗癬、移植排斥反應、間質性膀胱炎、異位性皮膚炎或發炎性腸道疾病。在一些實施例中，發炎性腸道疾病為克羅恩氏病(Crohn'disease)、潰瘍性結腸炎或乳糜瀉。

在一些實施例中，疾病或病症為自體免疫疾病。在一些實施例中，自體免疫性疾病為全身性紅斑性狼瘡症、1型糖尿病、多發性硬化症或類風濕性關節炎。

在一些實施例中，疾病或病症為代謝症候群。在一些實施例中，代謝症候群為急性胰臟炎、慢性胰臟炎、酒精性肝脂肪變性、肥胖、葡萄糖失耐、胰島素抗性、高血糖症、脂肪肝、血脂異常、高脂質血症、類半胱胺酸血症或2型糖尿病。在一些實施例中，代謝症候群為酒精性肝脂肪變性、肥胖、葡萄糖失耐、胰島素抗性、高血糖症、脂肪肝、血脂異常、高脂質血症、類半胱胺酸血症或2型糖尿病。

在一些實施例中，疾病或病症為癌症。在一些實施例中，癌症為胰臟癌、乳癌、腎臟癌、膀胱癌、前列腺癌、睪丸癌、尿道上皮癌、子宮內膜癌、卵巢癌、宮頸癌、腎癌、食道癌、胃腸基質瘤(GIST)、多發性骨髓瘤、分泌細胞癌、甲狀腺癌、胃腸道癌、慢性骨髓白血病、肝細胞癌、結腸癌、黑色素瘤、惡性神經膠質瘤、神經膠質母細胞瘤、多形性膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、小腦發育不良性神經節細胞瘤、尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、橫紋肌肉瘤、室管膜瘤、神經管母細胞瘤、管腺癌、腺鱗癌、腎母細胞瘤、腺泡細胞癌、神經母細胞瘤或肺癌。在一些實施例中，分泌細胞癌症為非何傑金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、慢性淋巴球性白血病、意義不明單株免疫球蛋白增高症(monoclonal gammopathy of undetermined significance；MGUS)、漿細胞瘤、淋巴漿細胞淋巴瘤或急性淋巴母細胞白血病。

在一些實施例中，疾病或病症為肌肉骨胳疾病(諸如肌病)。在一些實施例中，肌肉骨胳疾病為肌病、肌肉失養症(muscular dystrophy)、肌萎縮(muscular atrophy)、肌肉耗損(muscular wasting)，或肌肉減少症。在一些實施例中，肌肉失養症為杜顯氏肌肉失養症(Duchenne muscular dystrophy；DMD)、貝克氏病(Becker's disease)、肌強直性營養不良、X性聯擴張性心肌病變、脊髓性肌萎縮(spinal muscular atrophy；SMA)，或施密德型幹骺端軟骨發育不全(metaphyseal chondrodysplasia, Schmid type；MCDS)。在一些實施例中，肌病為骨胳肌肉萎縮。在一些實施例中，肌肉骨胳疾病(諸如骨胳肌肉萎縮)係由老化、慢性疾病、中風、營養不良、臥床休息(bedrest)、矯形外科損傷、骨折、惡病質、饑餓、心臟衰竭、阻塞性肺疾病、腎衰竭、後天免疫缺乏症候群(AIDS)、敗血症、免疫病症、癌症、ALS、燒傷、去神經、糖尿病、肌肉廢用(muscle disuse)、肢體不動、機械卸載、肌炎，或營養不良觸發。

在一些實施例中，本文中所描述之構築體、粒子、多肽、聚核苷酸及/或組合物可用於治療肌肉骨胳疾病之方法中。在一些實施例中，骨胳肌肉質量、品質及/或強度增加。在一些實施例中，肌肉蛋白質之合成增加。在一些實施例中，抑制骨胳肌肉纖維萎縮。

在一些實施例中，疾病或病症為血管疾病。在一些實施例中，血管疾病為動脈粥樣硬化、腹部主動脈瘤、頸動脈疾病、深層靜脈栓塞、柏格氏疾病(Buerger's disease)、慢性靜脈高血壓、血管鈣化、毛細管擴張或淋巴水腫。

在一些實施例中，疾病或病症為眼病。在一些實施例中，眼病為青光眼、年齡相關黃斑變性、發炎性視網膜疾病、視網膜血管疾病、糖尿病性視網膜病變、眼色素層炎(uveitis)、紅斑(rosacea)、修格蘭氏症候群(Sjogren's syndrome)，或增殖性視網膜病變中之新血管生成。

在一些實施例中，本文提供一種調節ISR路徑之方法。咸信本文中所描述之構築體、粒子、多肽、聚核苷酸及/或組合物有效調節ISR路徑。在一些實施例中，調節ISR路徑之方法包含藉由向細胞投與或遞送本文中所描述之構築體及/或化合物來調節細胞中之ISR路徑。在一些實施例中，調節ISR路徑之方法包含藉由向個體投與本文中所描述之構築體及/或化合物來調節個體中之ISR路徑。在一些實施例中，ISR路徑之調節可藉由此項技術中已知之方法，諸如西方墨點法、免疫組織化學或報導基因細胞株分析法(reporter cell line assay)來確定。 II. 蛋白質、多肽及聚核苷酸

在某些實施例中，本文提供構築體(例如聚核苷酸構築體，例如線性及/或環狀聚核苷酸構築體，例如DNA及/或RNA構築體)、多肽及/或組合物，及/或使用其之方法，其由整合的壓力反應(ISR)之抑制劑或其特徵部分組成、基本上由該抑制劑或其特徵部分組成及/或包含該抑制劑或其特徵部分，及/或編碼該抑制劑或其特徵部分。在某些實施例中，蛋白質或多肽(野生型或經修飾)之大小可包含(但不限於) 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600、625、650、675、700、725、750、775、800、825、850、875、900、925、950、975、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1750、2000、2250、2500個胺基酸殘基或更多，及其中任何可導出之範圍，或本文中所描述或參考之對應胺基序列之衍生物。經考慮，可藉由截短使多肽突變，使其短於其對應野生型形式，此外，其可能藉由融合或結合具有特定功能(例如用於靶向或定位，用於增強免疫原性，用於純化目的等)之異源蛋白質或多肽序列而改變。如本文中所使用，術語「域」係指蛋白質或多肽之任何獨特功能或結構單元，且通常係指具有熟習此項技術者可識別之結構或功能的胺基酸序列(例如PP1結合域、eIF2結合域、肽連接子等)。

本發明之多肽、蛋白質或編碼此類多肽或蛋白質之聚核苷酸可包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50個(或其中任何可導出之範圍)或更多個變異體胺基酸或核酸取代，或與SEQ ID NO: 1至447之至少、恰好或至多3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、300、400、500、550、1000個或更多個連續胺基酸或核酸(或其中任何可導出之範圍)至少或恰好60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100% (或其中任何可導出之範圍)類似、一致或同源。

在一些實施例中，蛋白質、多肽或核酸可包含SEQ ID NO: 1至447之1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、433、434、435、436、437、438、439、440、441、442、443、444、445、446、447、448、449、450、451、452、453、454、455、456、457、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469、470、471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、493、494、495、496、497、498、499、500、501、502、503、504、505、506、507、508、509、510、511、512、513、514、515、516、517、518、519、520、521、522、523、524、525、526、527、528、529、530、531、532、533、534、535、536、537、538、539、540、541、542、543、544、545、546、547、548、549、550、551、552、553、554、555、556、557、558、559、560、561、562、563、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、575、576、577、578、579、580、581、582、583、584、585、586、587、588、589、590、591、592、593、594、595、596、597、598、599、600、601、602、603、604、605、606、607、608、609、610、611、612、613、614、615、616、617、618、619、620、621、622、623、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、635、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、646、647、648、649、650、651、652、653、654、655、656、657、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、669、670、671、672、673、674、675、676、677、678、679、680、681、682、683、684、685、686、687、688、689、690、691、692、693、694、695、696、697、698、699、700、701、702、703、704、705、706、707、708、709、710、711、712、713、714、715、716、717、718、719、720、721、722、723、724、725、726、727、728、729、730、731、732、733、734、735、736、737、738、739、740、741、742、743、744、745、746、747、748、749、750、751、752、753、754、755、756、757、758、759、760、761、762、763、764、765、766、767、768、769、770、771、772、773、774、775、776、777、778、779、780、781、782、783、784、785、786、787、788、789、790、791、792、793、794、795、796、797、798、799、800、801、802、803、804、805、806、807、808、809、810、811、812、813、814、815、816、817、818、819、820、821、822、823、824、825、826、827、828、829、830、831、832、833、834、835、836、837、838、839、840、841、842、843、844、845、846、847、848、849、850、851、852、853、854、855、856、857、858、859、860、861、862、863、864、865、866、867、868、869、870、871、872、873、874、875、876、877、878、879、880、881、882、883、884、885、886、887、888、889、890、891、892、893、894、895、896、897、898、899、900、901、902、903、904、905、906、907、908、909、910、911、912、913、914、915、916、917、918、919、920、921、922、923、924、925、926、927、928、929、930、931、932、933、934、935、936、937、938、939、940、941、942、943、944、945、946、947、948、949、950、951、952、953、954、955、956、957、958、959、960、961、962、963、964、965、966、967、968、969、970、971、972、973、974、975、976、977、978、979、980、981、982、983、984、985、986、987、988、989、990、991、992、993、994、995、996、997、998、999或1000個(或其中任何可導出之範圍)或更多個連續胺基酸或核酸。

在一些實施例中，多肽、蛋白質或核酸可由以下組成、基本上由以下組成或包含以下：SEQ ID NO: 1至447之至少、至多或恰好1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、433、434、435、436、437、438、439、440、441、442、443、444、445、446、447、448、449、450、451、452、453、454、455、456、457、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469、470、471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、493、494、495、496、497、498、499、500、501、502、503、504、505、506、507、508、509、510、511、512、513、514、515、516、517、518、519、520、521、522、523、524、525、526、527、528、529、530、531、532、533、534、535、536、537、538、539、540、541、542、543、544、545、546、547、548、549、550、551、552、553、554、555、556、557、558、559、560、561、562、563、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、575、576、577、578、579、580、581、582、583、584、585、586、587、588、589、590、591、592、593、594、595、596、597、598、599、600、601、602、603、604、605、606、607、608、609、610、611、612、613、614、615、616、617、618、619、620、621、622、623、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、635、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、646、647、648、649、650、651、652、653、654、655、656、657、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、669、670、671、672、673、674、675、676、677、678、679、680、681、682、683、684、685、686、687、688、689、690、691、692、693、694、695、696、697、698、699、700、701、702、703、704、705、706、707、708、709、710、711、712、713、714、715、716、717、718、719、720、721、722、723、724、725、726、727、728、729、730、731、732、733、734、735、736、737、738、739、740、741、742、743、744、745、746、747、748、749、750、751、752、753、754、755、756、757、758、759、760、761、762、763、764、765、766、767、768、769、770、771、772、773、774、775、776、777、778、779、780、781、782、783、784、785、786、787、788、789、790、791、792、793、794、795、796、797、798、799、800、801、802、803、804、805、806、807、808、809、810、811、812、813、814、815、816、817、818、819、820、821、822、823、824、825、826、827、828、829、830、831、832、833、834、835、836、837、838、839、840、841、842、843、844、845、846、847、848、849、850、851、852、853、854、855、856、857、858、859、860、861、862、863、864、865、866、867、868、869、870、871、872、873、874、875、876、877、878、879、880、881、882、883、884、885、886、887、888、889、890、891、892、893、894、895、896、897、898、899、900、901、902、903、904、905、906、907、908、909、910、911、912、913、914、915、916、917、918、919、920、921、922、923、924、925、926、927、928、929、930、931、932、933、934、935、936、937、938、939、940、941、942、943、944、945、946、947、948、949、950、951、952、953、954、955、956、957、958、959、960、961、962、963、964、965、966、967、968、969、970、971、972、973、974、975、976、977、978、979、980、981、982、983、984、985、986、987、988、989、990、991、992、993、994、995、996、997、998、999或1000個(或其中任何可導出之範圍)連續胺基酸或核酸，其與SEQ ID NO: 1至447中之一者至少、至多或恰好60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100% (或其中任何可導出之範圍)類似、一致或同源。

在一些態樣中，存在核酸分子或多肽，其起始於SEQ ID NO: 1至447中之任一者的位置1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、433、434、435、436、437、438、439、440、441、442、443、444、445、446、447、448、449、450、451、452、453、454、455、456、457、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469、470、471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、493、494、495、496、497、498、499、500、501、502、503、504、505、506、507、508、509、510、511、512、513、514、515、516、517、518、519、520、521、522、523、524、525、526、527、528、529、530、531、532、533、534、535、536、537、538、539、540、541、542、543、544、545、546、547、548、549、550、551、552、553、554、555、556、557、558、559、560、561、562、563、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、575、576、577、578、579、580、581、582、583、584、585、586、587、588、589、590、591、592、593、594、595、596、597、598、599、600、601、602、603、604、605、606、607、608、609、610、611、612、613、614、615、616、617、618、619、620、621、622、623、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、635、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、646、647、648、649、650、651、652、653、654、655、656、657、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、669、670、671、672、673、674、675、676、677、678、679、680、681、682、683、684、685、686、687、688、689、690、691、692、693、694、695、696、697、698、699、700、701、702、703、704、705、706、707、708、709、710、711、712、713、714、715、716、717、718、719、720、721、722、723、724、725、726、727、728、729、730、731、732、733、734、735、736、737、738、739、740、741、742、743、744、745、746、747、748、749、750、751、752、753、754、755、756、757、758、759、760、761、762、763、764、765、766、767、768、769、770、771、772、773、774、775、776、777、778、779、780、781、782、783、784、785、786、787、788、789、790、791、792、793、794、795、796、797、798、799、800、801、802、803、804、805、806、807、808、809、810、811、812、813、814、815、816、817、818、819、820、821、822、823、824、825、826、827、828、829、830、831、832、833、834、835、836、837、838、839、840、841、842、843、844、845、846、847、848、849、850、851、852、853、854、855、856、857、858、859、860、861、862、863、864、865、866、867、868、869、870、871、872、873、874、875、876、877、878、879、880、881、882、883、884、885、886、887、888、889、890、891、892、893、894、895、896、897、898、899、900、901、902、903、904、905、906、907、908、909、910、911、912、913、914、915、916、917、918、919、920、921、922、923、924、925、926、927、928、929、930、931、932、933、934、935、936、937、938、939、940、941、942、943、944、945、946、947、948、949、950、951、952、953、954、955、956、957、958、959、960、961、962、963、964、965、966、967、968、969、970、971、972、973、974、975、976、977、978、979、980、981、982、983、984、985、986、987、988、989、990、991、992、993、994、995、996、997、998、999或1000處且包含SEQ ID NO: 1至447中之任一者的至少、至多或恰好2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、433、434、435、436、437、438、439、440、441、442、443、444、445、446、447、448、449、450、451、452、453、454、455、456、457、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469、470、471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、493、494、495、496、497、498、499、500、501、502、503、504、505、506、507、508、509、510、511、512、513、514、515、516、517、518、519、520、521、522、523、524、525、526、527、528、529、530、531、532、533、534、535、536、537、538、539、540、541、542、543、544、545、546、547、548、549、550、551、552、553、554、555、556、557、558、559、560、561、562、563、564、565、566、567、568、569、570、571、572、573、574、575、576、577、578、579、580、581、582、583、584、585、586、587、588、589、590、591、592、593、594、595、596、597、598、599、600、601、602、603、604、605、606、607、608、609、610、611、612、613、614、615、616、617、618、619、620、621、622、623、624、625、626、627、628、629、630、631、632、633、634、635、636、637、638、639、640、641、642、643、644、645、646、647、648、649、650、651、652、653、654、655、656、657、658、659、660、661、662、663、664、665、666、667、668、669、670、671、672、673、674、675、676、677、678、679、680、681、682、683、684、685、686、687、688、689、690、691、692、693、694、695、696、697、698、699、700、701、702、703、704、705、706、707、708、709、710、711、712、713、714、715、716、717、718、719、720、721、722、723、724、725、726、727、728、729、730、731、732、733、734、735、736、737、738、739、740、741、742、743、744、745、746、747、748、749、750、751、752、753、754、755、756、757、758、759、760、761、762、763、764、765、766、767、768、769、770、771、772、773、774、775、776、777、778、779、780、781、782、783、784、785、786、787、788、789、790、791、792、793、794、795、796、797、798、799、800、801、802、803、804、805、806、807、808、809、810、811、812、813、814、815、816、817、818、819、820、821、822、823、824、825、826、827、828、829、830、831、832、833、834、835、836、837、838、839、840、841、842、843、844、845、846、847、848、849、850、851、852、853、854、855、856、857、858、859、860、861、862、863、864、865、866、867、868、869、870、871、872、873、874、875、876、877、878、879、880、881、882、883、884、885、886、887、888、889、890、891、892、893、894、895、896、897、898、899、900、901、902、903、904、905、906、907、908、909、910、911、912、913、914、915、916、917、918、919、920、921、922、923、924、925、926、927、928、929、930、931、932、933、934、935、936、937、938、939、940、941、942、943、944、945、946、947、948、949、950、951、952、953、954、955、956、957、958、959、960、961、962、963、964、965、966、967、968、969、970、971、972、973、974、975、976、977、978、979、980、981、982、983、984、985、986、987、988、989、990、991、992、993、994、995、996、997、998、999或1000個(或其中任何可導出之範圍)連續胺基酸或核酸。

各種基因之核苷酸以及蛋白質、多肽及肽序列先前已揭示且可見於經認可之電腦化資料庫中。兩種常用資料庫為美國國家生物技術資訊中心(the National Center for Biotechnology Information)之Genbank及GenPept資料庫(在全球資訊網(World Wide Web)上之ncbi.nlm.nih.gov/處)及通用蛋白質資源(The Universal Protein Resource，UniProt；在全球資訊網上之uniprot.org處)。可使用本文中揭示或一般熟習此項技術者已知之技術來擴增及/或表現此等基因之編碼區。

在一些實施例中，根據本發明之ISR抑制劑係由經 表 1中所描述之胺基酸序列組成、基本上由該胺基酸序列組成或包含該胺基酸序列。在一些實施例中，如 表 1中所指示之短劃線(-)係定量的且代表任何胺基酸。在一些實施例中，ISR之抑制劑係由胺基酸序列組成、基本上由胺基酸序列組成或包含胺基酸序列，或由聚核苷酸序列編碼，該胺基酸序列或聚核苷酸序列與SEQ ID NO: 39至447具有至少或恰好約75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100% (或其中任何可導出之範圍)之一致性。 表 1 - 包含 PP1 結合域及 eIF2 結合域之蛋白質變異體

名稱	屬	門	序列	SEQ ID NO
tr|R7U6B5|R7U6B5_CAPTE	特利塔小頭蟲( Capitella teleta)	環節動物門(Annelida)	---------------------------LCQA--YAEARKGEWEMFARDRSRFASRVQSLEKIISPILSEEHRQHIR--	39
tr|T1EY96|T1EY96_HELRO	羅布斯塔澤蛭( Helobdella robusta)	環節動物門	---DQPAKKNKKKVRFSDTVDCQIIDEGD----EKECRKGHWELFALDRARFRKRINEAEPVLAWLFYPNHRIKM---	40
tr|F4WRG9|F4WRG9_ACREC	棘頂切葉蟻( Acromyrmex echinatior)	節肢動物門(Arthropoda)	------RNKQTKKVSFDPTPVVHV------A--YRAARRGPWEEIARDNERFRGRIKSIAIVLDPILKSKH-------	41
tr|Q17PS4|Q17PS4_AEDAE	埃及伊蚊( Aedes aegypti)	節肢動物門	----PDSGFEEKKVQFNLKPEVHVMRTWDFA--YRQARKGEWEIAARDRERFKNRIHETGKVLSTVFDKNLRDKVY--	42
tr|A0A1S4EV95|A0A1S4EV95_AEDAE	埃及伊蚊	節肢動物門	----------EKKVQFNLKPEVH------FA--YRQARKGEWEIAARDRERFKNRIHETGKVLSTVFDKN--------	43
tr|A0A023EUJ6|A0A023EUJ6_AEDAL	白紋伊蚊( Aedes albopictus)	節肢動物門	----PDSGFEEKKVQFNLNPEVHVIRAWDFA--YRQARKGEWEMAARDRERFKKRIQETENVLSSVFDKKLRDKVY--	44
tr|A0A1W4X3S0|A0A1W4X3S0_AGRPL	光蠟瘦吉丁蟲( Agrilus planipennis)	節肢動物門	-------ITNRKKVSFASDCKVHHMVKWSYA--YQAARKGPWEECARDRERFMLRIRNLEPELSKVFDPKLRKRIY--	45
tr|A0A1E1XCI9|A0A1E1XCI9_9ACAR	光輪花蜱( Amblyomma aureolatum)	節肢動物門	------DVGKPPRAAKVNFPLL--VQVHS-A--DDLERKGPWEQIAVDRRRFQSRIASVESVLAPVLCPDHRQNVY--	46
tr|A0A023FNM1|A0A023FNM1_9ACAR	卡延花蜱( Amblyomma cajennense)	節肢動物門	---------------KVNFPGL--VQVHS-A--DDLERKGPWEQIALDRRRFQSRIASVECVLAPVLSAEHRQNVYQ-	47
tr|A0A023G0U4|A0A023G0U4_9ACAR	微小花蜱( Amblyomma parvum)	節肢動物門	------------RAAKVNFPLL--VQVHS-A--DDFERKGPWEQIAVDRRRFQSRIASVESVLAPVLTAEHRQNVY--	48
tr|A0A1E1XQC2|A0A1E1XQC2_9ACAR	雕刻花蜱( Amblyomma sculptum)	節肢動物門	------DVGKPPRAAKVNFPLL--VQVHS-A--DDLERKGPWEQIALDRRRFQSRIASVECVLAPVLSAEHRQNVY--	49
tr|A0A023GBB1|A0A023GBB1_9ACAR	特里斯特花蜱( Amblyomma triste)	節肢動物門	------DVGKPPRAAKVNFPLL--VQVHC-A--DDLERKGPWEQIAVDRRRFQSRIDSVERVLAPVLSPDHRRNVY--	50
tr|A0A182ILC7|A0A182ILC7_9DIPT	黑小按蚊( Anopheles atroparvus)	節肢動物門	-------GFEEKKVRFNMKPVVHVMRAWDFA--YRQARKGDWEMAARDRERFRKRIDDLEPVLGPALQSNVRDKIY--	51
tr|A0A2M3ZGE9|A0A2M3ZGE9_9DIPT	巴西按蚊( Anopheles braziliensis)	節肢動物門	--------FEERKVRFNTKPVVH-----DFA--YRQARKGEWEMAARDRERFRKHIADLEPVLGPALQPALRERIYQ-	52
tr|A0A2M3Z3Q5|A0A2M3Z3Q5_9DIPT	巴西按蚊	節肢動物門	-------GFEERKVRFNTKPVVHVMRAWDFA--YRQARKGEWEMAARDRERFRKHIADLEPVLGPALQPALRERIY--	53
tr|A0A182JQ15|A0A182JQ15_9DIPT	克里斯蒂按蚊( Anopheles christyi)	節肢動物門	-------GFEEKKVRFNAKPVVHVMRAWDFA--YRQARKGDWEMAARDRERFRKRIADLEPVLGPALQPRIRDKVY--	54
tr|A0A182MSM9|A0A182MSM9_9DIPT	庫態按蚊( Anopheles culicifacies)	節肢動物門	-------GFDEKKVRFNTKPVVHVMRVWDFA--YRQARKGDWETTARDSERFRKRIADLEPVLGPALQPALRDKIY--	55
tr|W5JKI8|W5JKI8_ANODA	達氏按蚊( Anopheles darlingi)	節肢動物門	----------ERKVRFNTKPVVHV-----FA--YRQARKGEWEMAARDRERFRKHVADLEPVLGPALQPALRERIYQ-	56
tr|A0A182NV32|A0A182NV32_9DIPT	大劣按蚊( Anopheles dirus)	節肢動物門	----------ERKVRFNLKPVVHV-----FA--YRQARKGDWEMAARDRERFRKRVADLEPVLGPALQSTLRDKIYT-	57
tr|A0A182P0K5|A0A182P0K5_9DIPT	表皮按蚊( Anopheles epiroticus)	節肢動物門	-------GFEEKKVRFNSKPVVHVMRAWDFA--YRQARKGDWETAARDRERFRKRIADLEPVLGAVLQPTLRDKIY--	58
tr|A0A182QYU0|A0A182QYU0_9DIPT	法氏按蚊( Anopheles farauti)	節肢動物門	-------GYEEKKVRFNMKPVVHVMRAWDFA--YRQARKGDWEMAARDRERFRKRVADLEPVLGPALQSTLRDKIY--	59
tr|A0A182RQF9|A0A182RQF9_ANOFN	不吉按蚊( Anopheles funestus)	節肢動物門	-------GFEEKKVRFNLKPVVHVMRAWDFA--YRQARKGDWEMAARDSERFRKRITELEPVLGPALQSALRDKIY--	60
tr|Q7Q951|Q7Q951_ANOGA	剛比亞按蚊( Anopheles gambiae)	節肢動物門	-------GFEEKKVRFNSKPVVHVMRAWDFA--YRQARKGEWEMAARDRERFRKRIAELEPLLGPALQPALRDKVY--	61
tr|A0A2M4BJU3|A0A2M4BJU3_9DIPT	馬拉霍拉按蚊( Anopheles marajoara)	節肢動物門	----------ERKVRFNTKPVVHV------A--YRQARKGEWEMAARDRERFRKHIADLEPVLGPALQP---------	62
tr|A0A182WMK0|A0A182WMK0_9DIPT	微小按蚊( Anopheles minimus)	節肢動物門	-------GFDEKKVRFNSKPVVHIMRVWNFA--YRQARKGDWETTARDNERFQKRIAELEPVLTPALQPALRDKIY--	63
tr|A0A182WS40|A0A182WS40_ANOQN	四環按蚊( Anopheles quadriannulatus)	節肢動物門	--------FEEKKVRFNSKPVVH-----DFA--YRQARKGEWEMAARDRERFRKRIAELEPLLGPALQPALRDKVYS-	64
tr|A0A084VUD6|A0A084VUD6_ANOSI	中華按蚊( Anopheles sinensis)	節肢動物門	-------DYRSYNVRFCQKPVIHVMRAWDFA--YRQARKGEWEMAARDRERFRKRIDDLEPVLGPALQPSVRDKIY--	65
tr|A0A182YBW0|A0A182YBW0_ANOST	斯氏按蚊( Anopheles stephensi)	節肢動物門	----------EKKVRFNMQPVVHV-----FA--YRQARKGDWEMAARDRERFRKRVADLEPVLGPALQSTLRDKIYA-	66
tr|A0A2A3E3P4|A0A2A3E3P4_APICC	中華蜜蜂( Apis cerana cerana)	節肢動物門	--------SPVQKVKFN------IMVQWDYA--YRAARKGPWEEMARDRERFRGRINCIERVLNPILTTQHR------	67
tr|A0A088APR2|A0A088APR2_APIME	意大利蜜蜂( Apis mellifera)	節肢動物門	-----RPLSPVQKVKFNLNPEIHIMVQWDYA--YRAARKGPWEEMARDRERFRGRINCIERVLNPILTTQHRTYIW--	68
tr|A0A158NR84|A0A158NR84_ATTCE	巨首芭切葉蟻( Atta cephalotes)	節肢動物門	-------NTQTKKVSFDPTPVVH------YA--YRAARRGPWEEIARDNERFRGRIKSIAIVLDPILKSKH-------	69
tr|A0A195BFA1|A0A195BFA1_9HYME	哥倫比亞芭切葉蟻( Atta colombica)	節肢動物門	----------TKKVSFDPTPVVHVM-----A--YRAARRGPWEEIARDNERFRGRIKSIAIVLDPILKSKHRSQVWQ-	70
tr|A0A034WW97|A0A034WW97_BACDO	東方果實蠅( Bactrocera dorsalis)	節肢動物門	-----KPPESSKRVRFNLNPEIHVMYAWSYA--YRSARKGHWESLARDRDRFRKRIENTSKFINPILTPEHRS-----	71
tr|A0A0K8V9E4|A0A0K8V9E4_BACLA	辣椒果實蠅( Bactrocera latifrons)	節肢動物門	---------SSKRVRFNLNPEIHVMYAWNFA--YRSARKGHWESLARDRDRFRKRIESTSKYINPILTPEHRS-----	72
tr|A0A0K8W450|A0A0K8W450_BACLA	辣椒果實蠅	節肢動物門	---------SSKRVRFNLNPEIH------FA--YRSARKGHWESLARDRDRFRKRIESTSKYINPILTP---------	73
tr|A0A2P8Z491|A0A2P8Z491_BLAGE	德國小蠊( Blattella germanica)	節肢動物門	---------IPVKIGFSDEVEVHVMDKWVKE--YHEARIGIWMQLALDHARFQKRIKDLEPVLAPVLTQEHRD-----	74
tr|H9JNN9|H9JNN9_BOMMO	家蠶( Bombyx mori)	節肢動物門	------KDRPVKRVTFSDEPKVHVMRVWAFA--ARQARAGHWERYALDRERFKRRIADVEMAVSWVLKPQHRSRV---	75
tr|E2A0E2|E2A0E2_CAMFO	佛羅里達弓背蟻( Camponotus floridanus)	節肢動物門	-------TTQTKKVSFAQTPIIHIMVTWNYA--YRAARKGQWEEMARDNERFKGRINSIAAVLDPILTR---------	76
tr|W8BX39|W8BX39_CERCA	地中海果實蠅( Ceratitis capitata)	節肢動物門	-----SPIHKVKKVRFNLNPVVHTMYAWSFA--YKSARKGQWENFARDRDRFRRRIENTSKYLNPILTPEHRS-----	77
tr|A0A1B6DLP0|A0A1B6DLP0_9HEMI	亞利桑那鉤沫蟬( Clastoptera arizonana)	節肢動物門	--------KINKKVTFAAEVKVHRMVVWDYA--YRMARTGPWEVYARDSARFMNRIGQIATVLNPILNSNHRQK----	78
tr|U5EQS2|U5EQS2_9DIPT	附肢蠓( Corethrella appendiculata)	節肢動物門	--QQPDSGFEDKKVRFQLKPDVHVLRAWDFA--YRQARKGPWEEAARDRCRFSERIKRSSIILTPILNENHRDKIYS-	79
tr|A0A2J7QRK2|A0A2J7QRK2_9NEOP	乾木白蟻( Cryptotermes secundus)	節肢動物門	--------KKPVKVHFACLMTVHPMVKWNHA--YHEARCGPWEQMARDRVRFMARIKQMEPVLAAVFSAEHRQCVWS-	80
tr|A0A1B6FV58|A0A1B6FV58_9HEMI	田蟬( Cuerna arida)	節肢動物門	-------NPGAKKVRFAEGAQIHPMVTWDFA--YRSARKGPWETLALDSQRFKCRVARTEKILAPVLDPEHRAAVY--	81
tr|A0A1B6FVF2|A0A1B6FVF2_9HEMI	田蟬	節肢動物門	-------NPGAKKVRFAEGAQIH-----DFA--YRSARKGPWETLALDSQRFKCRVARTEKILAPVLDPEHRAAVYR-	82
tr|B0WSX4|B0WSX4_CULQU	致倦庫蚊( Culex quinquefasciatus)	節肢動物門	--------YPTLTVRFNFKTQVHVMRVWDYA--YRQARKSEWEIAARDRAWFKRRIENTEPVLGPIFDRDLRERVY--	83
tr|A0A1Q3F8E7|A0A1Q3F8E7_CULTA	環跗庫蚊( Culex tarsalis)	節肢動物門	------------TVRFNFKTQVHVMRVWDYA--YRQARSGSWQLAARDRAWFKRRIEKTEPILGPIFDRELRERVY--	84
tr|A0A151IG91|A0A151IG91_9HYME	真菌蟻( Cyphomyrmex costatus)	節肢動物門	-------TTQTKKVSFDPTPVVHVMVTWNYA--YRAARRGPWEEIARDNERFKGRIKSIAIVLDPILKSKHRSQVW--	85
tr|A0A212FG81|A0A212FG81_DANPL	黑脈金斑蝶( Danaus plexippus plexippus)	節肢動物門	-------RQPKKRVRFSSQPKVHVMRVWAFA--ARQARAGHWERHALDRERFKRRIADVEMAISWVLKPQHRSRI---	86
tr|A0A164LUI8|A0A164LUI8_9CRUS	大型蚤( Daphnia magna)	節肢動物門	-----RKKTPLKKVHFPQLIRV------RHA--HRAARRGDWERFARDADRFRERIDSTAAILTPILD----------	87
tr|A0A0P5GPX7|A0A0P5GPX7_9CRUS	大型蚤	節肢動物門	-----RKKTPLKKVHFPPLIRV------THA--HRAARRGDWERFARDADRFRERIDSTAAILTPILD----------	88
tr|A0A0P5MHL2|A0A0P5MHL2_9CRUS	大型蚤	節肢動物門	------KKTPLKKVHFPPDIRVRPMLTWTHA--HRAARRGDWERFARDADRFRERIDSTAAILTPILDPLHRDRIR--	89
tr|A0A0N8C389|A0A0N8C389_9CRUS	大型蚤	節肢動物門	---------PLKKVHFPPDHRV------THA--HRAARRGDWERFARDADRFRERIDSTAAILTPILDPLHRDRIRQ-	90
tr|E9FSW1|E9FSW1_DAPPU	蚤狀溞( Daphnia pulex)	節肢動物門	--------SRSKQVHFPVDTRIRPMLTWTHA--HRAARKGDWERFARDADRFRERIDSTAAILAPILDPSHRDRM---	91
tr|U4TY70|U4TY70_DENPD	中歐山松大小蠹( Dendroctonus ponderosae)	節肢動物門	-------VTPRK-VTFAPDCTVHRMIKWSFA--YEAARKGHWETYARDRCRFKDRILRVERNIKLVLDPKHRAKIYS-	92
tr|N6TSQ7|N6TSQ7_DENPD	中歐山松大小蠹	節肢動物門	-------VTPRK-VTFANLCTVH------YA--YEAARKGHWETYARDRCRFKDRILRVERNIKLVLDPK--------	93
tr|B3MCP4|B3MCP4_DROAN	嗜鳳梨果蠅( Drosophila ananassae)	節肢動物門	--------SAAKKVRFNLKPEVHVMHVWDFA--YRTARKSEWQLIARDRDRFEKRINRVAPILNPILSPNHRDSV---	94
tr|A0A0M3QVM0|A0A0M3QVM0_DROBS	巴氏果蠅( Drosophila busckii)	節肢動物門	--------PLQKKVRFNLKPEVHKMHTWDFA--YRAARKGMWQEVARDRERFKQRINRLEPILNIICSANHREKV---	95
tr|B3NQ42|B3NQ42_DROER	直菇果蠅( Drosophila erecta)	節肢動物門	-------SIPVKKVRFNIKPEVH------YA--YRAARKSEWQVMARDRDRFQQRIRRISPILNAVLTSV--------	96
tr|A0A1W4ULZ2|A0A1W4ULZ2_DROFC	嗜榕果蠅( Drosophila ficusphila)	節肢動物門	--------TTAKKVRFNMKPEVHVMLAWDYA--YRAARKSEWQVMARDRARFQQRIKRISPILNAVLTPIHRESV---	97
tr|B4J663|B4J663_DROGR	格里姆氏果蠅( Drosophila grimshawi)	節肢動物門	--------ELRKKVHFNLSPEVHVMHAWNFA--YRAARKGGWQQFARDRDRFSQRIKRVAPIIDIVLSPSHRDRV---	98
tr|B4KLY0|B4KLY0_DROMO	莫哈韋氏果蠅( Drosophila mojavensis)	節肢動物門	--------EHRKRVRFDLKPKVHVMHTWDYA--YRAARKGGWQQIALDRERFQQRINRIAPTLNIILTSNHRDKI---	99
tr|B4GCG6|B4GCG6_DROPE	佩斯氏果蠅( Drosophila persimilis)	節肢動物門	--------TTNKKVRFNLKPEVHVMLAWDFA--YRAARKSEWQVMARDRFRFQQRIHRVAPILNPILTPNHREQV---	100
tr|Q290B9|Q290B9_DROPS	擬暗果蠅( Drosophila pseudoobscura pseudoobscura)	節肢動物門	----------NKKVRFNLKPEVH-----DFA--YRAARKSEWQVMARDRFRFQQRIHRVAPILNPILTPNHREQVYK-	101
tr|B4QBG0|B4QBG0_DROSI	擬果蠅( Drosophila simulans)	節肢動物門	-------SAPVKKVRFNMKPEVH------YA--YRAARKSEWQVMARDRDRFQQRIRRISPILNAVLTPV--------	102
tr|B4LP12|B4LP12_DROVI	維爾氏果蠅( Drosophila virilis)	節肢動物門	--------EVQKRVRFNLKPKVHVMHAWDFA--YRAARKGDWQEVARDRDRFQQRINRIAPILNNVLSSNHREKV---	103
tr|B4MRL4|B4MRL4_DROWI	威爾氏果蠅( Drosophila willistoni)	節肢動物門	--------KSPKKVRFNLVPDVHVMRTWNFA--YRAARKGDWQVYSRDRDRFQQRINRVAPILSTVLSSNHREKV---	104
tr|B4PAB9|B4PAB9_DROYA	雅庫氏果蠅( Drosophila yakuba)	節肢動物門	--------TPVKKVRFNMKPEVHVMLAWDYA--YRAARKSEWQVMARDRDRFQQRIRRISPILNAVLTPVHRERV---	105
tr|A0A154PEC5|A0A154PEC5_9HYME	大翅杜隧蜂( Dufourea novaeangliae)	節肢動物門	--------PPTQKVKFNLNPTVHIMVQWDYA--YRAARKGPWEEMARDRERFKGRINCIERVLNPILTTQHRTHMWQ-	106
tr|A0A0C9RD89|A0A0C9RD89_9HYME	阿里山潛蠅繭蜂( Fopius arisanus)	節肢動物門	------PPESSKRVRFNLNPEIH------YA--YRSARKGHWESLARDRDRFRKRIENTSKFINPILTP---------	107
tr|A0A0C9R4Y5|A0A0C9R4Y5_9HYME	阿里山潛蠅繭蜂	節肢動物門	-----EEDTTEQKVRFNLEPTIHTMIQWNYA--YRAARRGPWEEMARDRERFRVRINCIGRVLEPILTAKHRECIW--	108
tr|A0A1A9X5T0|A0A1A9X5T0_9MUSC	短鬚舌蠅( Glossina brevipalpis)	節肢動物門	------SSDKPKKVRFDTKPVVHVMHTWNYA--YRAARKSEWGILINNRAHFKSRIQRVANELNPILSIEHRQKIY--	109
tr|A0A1B0GC50|A0A1B0GC50_GLOMM	刺舌蠅( Glossina morsitans morsitans)	節肢動物門	----------PKKVRFDTKPIVHVM-----A--YRAARKSEWQIILQDRAHFKSRIQRVANELNPILSIEHRQKIYE-	110
tr|A0A1A9ZZH5|A0A1A9ZZH5_GLOPL	淡足舌蠅( Glossina pallidipes)	節肢動物門	------SSEKPKKVRFDTKPIVHVMHAWDYA--YRAARKSEWQIILQDRAHFKSRIQRVANELNPILSIEHRQKIY--	111
tr|A0A1B6MLH5|A0A1B6MLH5_9HEMI	雕葉蟬( Graphocephala atropunctata)	節肢動物門	-------NPRTKKVRFAKGTQIHRMVTWDFA--YRSARKGPWETLALDSQRFKSRVAGTEEILAPILDPQHRAAVY--	112
tr|A0A0L7QQH5|A0A0L7QQH5_9HYME	東南藍莓蜂( Habropoda laboriosa)	節肢動物門	-----ESVPPVQKVKFNLNPVVHVMMHWDYA--YRAARKGPWEEMARDRERFRGRINCIERVLNPILTTQHRTHIW--	113
tr|E2BRL2|E2BRL2_HARSA	印度跳蟻( Harpegnathos saltator)	節肢動物門	---------------------VHIMVQWDYA--YRAARKGPWEEMARDRERFKRRINCIAAVLDPILASQHRAHVW--	114
tr|A0A2W1BIE7|A0A2W1BIE7_HELAM	番茄夜蛾( Helicoverpa armigera)	節肢動物門	----------PKRVQFS--PKVH---VLAFA--ARQARAGHWERYALDRDRFKRRIADVEVAVSWVLRPQHRSRIM--	115
tr|A0A2A4JAH5|A0A2A4JAH5_HELVI	美洲菸葉蛾( Heliothis virescens)	節肢動物門	------KGLPPKRVQFSSAPKVHVLRVWAFA--ARQARAGHWERYALDRDRFKRRIADVEVAVSWVLRPQHRSRIM--	116
tr|A0A1B6IL55|A0A1B6IL55_9HEMI	斜紋夜蛾( Homalodisca liturata)	節肢動物門	----------TKKVRFAEGAQIH-----DFA--YRSARKGPWETLALDSERFKCRVARTEKILAPVLDPEHRATVY--	117
tr|A0A131XW59|A0A131XW59_IXORI	羊硬蜱( Ixodes ricinus)	節肢動物門	------DEQAQHRISKVNFGTF--LEVYD-A--DDVDRRGPWEQMAIDRKRFQVRVVSTEAVLAPVFSAEHRQRTF--	118
tr|B7P0Y0|B7P0Y0_IXOSC	肩突硬蜱( Ixodes scapularis)	節肢動物門	------DEQAQHRISKVNFGTF--MQVHD-A--DDVDRRGPWEQMAIDRKRFQTRVASTEAVLAPVFSAEHRQRTF--	119
tr|A0A0L0BQF9|A0A0L0BQF9_LUCCU	銅綠蠅( Lucilia cuprina)	節肢動物門	---------KKKKVRFNTKPTVHVMHTWNYA--YRAARKGEWEMYARDRERFKLRIQRAASTLNPILEREHRQK----	120
tr|A0A1B0CCY5|A0A1B0CCY5_LUTLO	長鬚羅蛉( Lutzomyia longipalpis)	節肢動物門	------SGFEERKVRFNLKPEVHVIRAWEFA--YRQARKGNWDQVARDRDRFEKRILSLGRVLSPILEQNHREKVY--	121
tr|A0A0K8SEF5|A0A0K8SEF5_LYGHE	豆莢草盲蝽( Lygus hesperus)	節肢動物門	MPLVKGNGYETGVDPIVKIVGGFVGSKSQAGSSNHRGREFSLWDVIFDKIIESMEQPKQAARKWGDVGGRKVPRIEGFAMIGMRKLSVNDSGCFRPKWSSAPQEYGESECRNQFPELGHGQDCDIGKSRTTDDTPETRVNDFVVKSTQDCFTPDRTDCSSNSSDSTELTSPSEQPFELTPPPSVETCGTLHHPHDQSPVREVCPAEPTEKHPQVVRSSSSFQVPCQRLLSESEDDSIPSDVLSSSVESHIDTFPPHKRVQRSISECSADSDDSFIVFESTEDEPVIFDESDDDDDGSTDEDLDEIDNCVLIPHNCDFSAPQQYLSRLEEANLKWNKTYGSVPTKSKSNKKCASKKVKFAEGKDLAKVKRLVAWDFAHRAARVGPWEMYYRDSQRFKSRISSLSSVISPVLAQSHRKKIYTQRFQT	122
tr|A0A146LKA2|A0A146LKA2_LYGHE	豆莢草盲蝽	節肢動物門	----SNKKCASKKVKFA------RLVAWDFA--HRAARVGPWEMYYRDSQRFKSRISSLSSVISPVLA--HRKKIYT-	123
tr|A0A146L9L8|A0A146L9L8_LYGHE	豆莢草盲蝽	節肢動物門	--------CASKKVKFAEGAKVKRLVAWDFA--HRAARVGPWEMYYRDSQRFKSRISSLSSVISPVLAQSHRKKIYT-	124
tr|A0A0A9Z6A2|A0A0A9Z6A2_LYGHE	豆莢草盲蝽	節肢動物門	----------SKKVKFAEGKDL-----WDFA--HRAARVGPWEMYYRDSQRFKSRISSLSSVISPVLAQSHRKKIY--	125
tr|A0A0M9A061|A0A0M9A061_9HYME	四帶無刺蜂( Melipona quadrifasciata)	節肢動物門	-----KLVAPIREVKFNLNPVVHLMVQWDYA--YRAARKGPWEEMARDRERFRGRINCIERVLNPILTVQHRIHIW--	126
tr|A0A1I8MZQ9|A0A1I8MZQ9_MUSDO	家蠅( Musca domestica)	節肢動物門	-------CDKKKKVRFNTKPVVHVMHTWNYA--YRAARKGNWEMYARDRERFKMRIDRTAHVLNRILEPEHRQKIY--	127
tr|T1PDC8|T1PDC8_MUSDO	家蠅	節肢動物門	----------KKKVRFNTKPVVH------YA--YRAARKGNWEMYARDRERFKMRIDRTAHVLNRILE----------	128
tr|K7JKC1|K7JKC1_NASVI	麗蠅蛹集金小蜂( Nasonia vitripennis)	節肢動物門	-------NGNKKCVRFKEEPTIHLMYTWRFA--HHQVRRGKWEEAARDRERFRRRIVQTNEIIMPVLLKK--------	129
tr|K7JVD2|K7JVD2_NASVI	麗蠅蛹集金小蜂	節肢動物門	----QQQNGKEKCVRFKEEPTIHF------A--HHQARCGKWEEAARDRERFRRRIVQTNEIIMPVLLKKLK------	130
tr|K7JQS0|K7JQS0_NASVI	麗蠅蛹集金小蜂	節肢動物門	------QNGKEKCVRFKEEPTIHLMYTWRFA--HHQARCGKWEEAARDRERFRRRIVQTNEIIMPVLLKK--------	131
tr|K7JET5|K7JET5_NASVI	麗蠅蛹集金小蜂	節肢動物門	----------EKCVRFKEEPTIHLM-----A--HHQARCGKWEEAARDRERFRRRIVQTNEIIMPVLLK---------	132
tr|K7JZ07|K7JZ07_NASVI	麗蠅蛹集金小蜂	節肢動物門	----------KKRVHFQEKPTDHLMCGWTYA--HKNARCGEWEQVARDQERFKLRIERMGKIMVPTLL----------	133
tr|K7JSI1|K7JSI1_NASVI	麗蠅蛹集金小蜂	節肢動物門	---DNNSSKQNKNLRFSDKVLIHNMCTWTFA--YQSARRGEWMQAACDRERFRMRIERTGVIINPVLLK---------	134
tr|K7JHK7|K7JHK7_NASVI	麗蠅蛹集金小蜂	節肢動物門	-----VHSIQPTKVKFDLNPTVHRMIKWNFA--YRAARPGPWEQIARDRERFNSRIKCIGRVLNPVLAKDHRDLVY--	135
tr|A0A2R7W1J6|A0A2R7W1J6_ONCFA	洲脊胸長椿( Oncopeltus fasciatus)	節肢動物門	-----------KMVKWKELVKIHPLVVWDFA--SRAARIGPWEKYRVDRDRFRNRIQNASSTLNPILDPAYRLKVF--	136
tr|A0A026W8Q1|A0A026W8Q1_OOCBI	畢氏卵角蟻( Ooceraea biroi)	節肢動物門	-----EELMEARKVKFNPTPIVHVMIKWNYA--YRAARKGPWEEMARDNERFRGRINSIAAVLNPILTNQHRLQIW--	137
tr|A0A1D2MWJ5|A0A1D2MWJ5_ORCCI	跳蟲( Orchesella cincta)	節肢動物門	------KKRKSKKVSFDEENLVSVIEFEDDA--SRRARETYWEVFARDRARFQDRIFRTGDILEPILLGAHRTKVF--	138
tr|A0A1D2MYI7|A0A1D2MYI7_ORCCI	跳蟲	節肢動物門	------KEKKIKSVRFKEENEVIEFED-DIE--SKNNRKLYWESVAADRFRFKDRIERLQEILSPVLNSSHRNVVY--	139
tr|A0A293L4Z5|A0A293L4Z5_ORNER	遊盪鈍緣蜱( Ornithodoros erraticus)	節肢動物門	----------DSKVHFPADDIL--VAVRT-A--DDIDRKGTWEQAANDRLRFQCRIDNAEKILSPVLSIEHRQKVL--	140
tr|A0A1Z5KVX7|A0A1Z5KVX7_ORNMO	非洲毛白鈍緣蜱( Ornithodoros moubata)	節肢動物門	----------DAKVHFPTDDIL--VDVQK-A--DDIDRKGPWEQAANDRLRFQCRIANTEKILSPVLSAEHRQKVL--	141
tr|A0A224XUG3|A0A224XUG3_9HEMI	條紋錐蝽( Panstrongylus lignarius)	節肢動物門	----------PKKVSFANLVQ-----VWDFA--LRAARKGPWEMLALDRSRFKTKIQQLSNIISPILEENHRKQIFH-	142
tr|A0A0N0PEA1|A0A0N0PEA1_PAPMA	金鳳蝶( Papilio machaon)	節肢動物門	----------RKTVRFS--PKVH---VWAFA--ARQARAGHWERHALDRERFKRRIADVEMAVSWVLKPQHRARVM--	143
tr|A0A194PSV8|A0A194PSV8_PAPXU	柑橘鳳蝶( Papilio xuthus)	節肢動物門	-------KQPCKTVRFSPNPKVHVMRVWAFA--ARQARAGHWERHALDRERFKRRIADVEMAVSWVLKPQHRARV---	144
tr|S4P6Q9|S4P6Q9_9NEOP	斑點木蝶( Pararge aegeria)	節肢動物門	-------KLPPKKVTFSTQPKVHVMRVWAFA--ARQARAGHWERHARDRERFKRRIADVEMAISWVFKRQHRTRV---	145
tr|A0A2L2Z1T4|A0A2L2Z1T4_PARTP	溫室擬肥腹蛛( Parasteatoda tepidariorum)	節肢動物門	-----DKPRDPVKVTFAPLVTVHCFQ----K--PLEENQPSYDTSALDRIRFQNRIEELSRLLTPILTLEHRTNI---	146
tr|A0A1E1W419|A0A1E1W419_PECGO	紅鈴蟲( Pectinophora gossypiella)	節肢動物門	-------GQPPKRVSFSEKPKVHVMRVWTFA--ARQARAGHWERHALDRERFKRRIADVDMAVSWVLKPQHRSRV---	147
tr|A0A1B0DBA5|A0A1B0DBA5_PHLPP	巴浦白蛉( Phlebotomus papatasi)	節肢動物門	---------ETREVRFNLKPEVHVIRAWDFA--YRTARKGHWEQVARDRERFGKRILSLGHVLSPILEKSHREK----	148
tr|A0A1Y1MCV4|A0A1Y1MCV4_PHOPY	螢火蟲( Photinus pyralis)	節肢動物門	------DEVPAKKVRFASECEVHPMIQWSYA--YQKARKGPWEQFALDRMRFRNRVANVQPILDRILEPSHRSKIY--	149
tr|A0A1Y1M8V8|A0A1Y1M8V8_PHOPY	螢火蟲	節肢動物門	----------AKKVRFASEEEVHPM-----A--YQKARKGPWEQFALDRMRFRNRVANVQPILDRILEPSHRSKIYK-	150
tr|A0A131YLQ0|A0A131YLQ0_RHIAP	附尾扇頭蜱( Rhipicephalus appendiculatus)	節肢動物門	---------------KVSFPQL--VEVHN-A--DDMERKGPWEQIAVDRRRFQSRIASVESVLAPVLSREHRQKVYQ-	151
tr|A0A224YPI8|A0A224YPI8_9ACAR	贊比西扇頭蜱( Rhipicephalus zambeziensis)	節肢動物門	------DVSGAPRSAKVSFPVL--VEVHS-A--DDMERKGPWEQIAVDRRRFQSRIASVESVLAPVLSHEHRQKVY--	152
tr|T1HNP2|T1HNP2_RHOPR	長紅獵蝽( Rhodnius prolixus)	節肢動物門	--SDLTSPTSPKKVSFANGVQIRKMVVWDFA--LRAARKGPWEMIALDRSRFKTKIQQLSNIISPILEQKHRRRIF--	153
tr|E9IRX6|E9IRX6_SOLIN	紅火蟻( Solenopsis invicta)	節肢動物門	------LTAQTKKVKFNLQPVVHVMIAWDYA--YRAARKGHWEQFARDNERFRGRINSISIVLDPILKNQHRSQVWQ-	154
tr|A0A2H1VH82|A0A2H1VH82_SPOFR	草地貪夜蛾( Spodoptera frugiperda)	節肢動物門	-------------VHFSE--KVH---VWSFA--ARQARAGHWERFALDRDRFKRRIADVDMAVSWVLKPQHRSRVM--	155
tr|A0A2H1VER0|A0A2H1VER0_SPOFR	草地貪夜蛾	節肢動物門	-------------VHFSEQPKVHVMRVWSFA--ARQARAGHWERYALDRDRFKRRIADVDMAVSWVLKPQHRSRV---	156
tr|A0A087UMN6|A0A087UMN6_9ARAC	隆頭蛛( Stegodyphus mimosarum)	節肢動物門	-----DTPKLPSKVSFAPEADLVQIVPVEYC-----ERKGEWEMYASERLRFKRKIDDLEKVLSPCFSSSHRAKVF--	157
tr|A0A1I8NP93|A0A1I8NP93_STOCA	廄螫蠅( Stomoxys calcitrans)	節肢動物門	-------CDKKKKVRFNTKPEVHVMHAWNYA--YRAARKGHWEMYARDRERFKMRINRVANILNPILEPEHRLKVY--	158
tr|T1JNK2|T1JNK2_STRMM	海蜈蚣( Strigamia maritima)	節肢動物門	------SCSEKKKVHFASLVEVHSLAIED----DEDSRKGPWEEYARDRERFTKKIEDLDTIISPVLSATHRAKIY--	159
tr|A0A0K8TR91|A0A0K8TR91_TABBR	多聲虻( Tabanus bromius)	節肢動物門	--------KKEKKVRFNLKPDIHVMHSWDFA--YRAARKGPWEVIARDRCRFKQRIEKLGEIIGPILSDNHRKK----	160
tr|A0A151IU56|A0A151IU56_9HYME	科氏糙切葉蟻( Trachymyrmex cornetzi)	節肢動物門	---------QTKKVSFDPTPVVHV------A--YRAARRGPWEEIARDNERFRGRIKSIAIVLDPILKSKH-------	161
tr|A0A195FJL5|A0A195FJL5_9HYME	北方糙切葉蟻( Trachymyrmex septentrionalis)	節肢動物門	-------NTQSKKVSFDPTPVVHVMVTWNYA--YRAARRGPWEEIARDNERFKKRIKSIAIVLDPILKSKHRSQIW--	162
tr|A0A151X539|A0A151X539_9HYME	澤氏糙切葉蟻( Trachymyrmex zeteki)	節肢動物門	-------NTQIKKVSFDPTPVVHVMVTWNYA--YRAARRGPWEELARDNERFRGRIKSIAIVLDPILKSKHRSRVW--	163
tr|A0A170YYB9|A0A170YYB9_TRIIF	騷擾錐蝽( Triatoma infestans)	節肢動物門	-----TSPKSPKKVSFANLVQVRTMVVWDFA--LRAARKGPWEMLALDRSRFKTKIQQLSNIISPILEQNHRKQIF--	164
tr|D2A5U3|D2A5U3_TRICA	赤擬穀盜( Tribolium castaneum)	節肢動物門	-------LVPDKKVRFASECEVHPMIMWSFA--YQAARKGPWEEYARDRDRFNKRVRNTEAIIGHVFSDEHRSKIY--	165
tr|D7GYC2|D7GYC2_TRICA	赤擬穀盜	節肢動物門	----------LKQVRFNEDVTLYVLNV-------NEDRKGYW---VRDRMWFQKRIRDVEMILKPFLEL---------	166
tr|A0A232F6X1|A0A232F6X1_9HYME	薩克氏金小蜂( Trichomalopsis sarcophagae)	節肢動物門	----------PTKVKFDLNPTVHRM-----A--YRAARPGPWEQIARDRERFNSRIKCIGRVLNPVLAKEHRDLVYN-	167
tr|A0A0A1XII6|A0A0A1XII6_ZEUCU	瓜實蠅( Zeugodacus cucurbitae)	節肢動物門	---------NCKRVRF--NPEVH----WSYA--YKSARKGHWESLARDRDRFRKRIENTSKYINPILTPEHRS-----	168
tr|A0A1Q3DL60|A0A1Q3DL60_9VIRU	雪蟹桿菌病毒( Chionoecetes opilio bacilliform virus)	逆轉錄酶病毒門(Artverviricota)	-------GTNTQRITFGGVTATHHIIAWSFA--YQEARRGHWEQLARDRTRLRNRVTRVYNI----------------	169
tr|A0A1S3IHP0|A0A1S3IHP0_LINUN	鏟形海豆芽( Lingula unguis)	腕足動物門(Brachiopoda)	------SDTTPKRVHFPDEETVYEIM--QMD--ENECRKGPWEAYAVDRCRFQKRIAEVNDAIGYCFDPQHRQHIL--	170
tr|A0A091MPX3|A0A091MPX3_9PASS	刺鷯( Acanthisitta chloris)	脊索動物門(Chordata)	--------PKRKKVTFLEQVTEYYIS-------SEEDRKGPWEEMARDSCRFQKRIQETEEAIGYCFTTEHRQRVF--	171
tr|D2H8S4|D2H8S4_AILME	大熊貓( Ailuropoda melanoleuca)	脊索動物門	-----RAHTKRKKVTFLEEVTEYYIS-------DDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEVAIGYCLTREHRERMF--	172
tr|D2H7Y3|D2H7Y3_AILME	大熊貓	脊索動物門	WHPDPETPLKPRKVRFSEKVSVHLLVVWAGP--AQAARRGPWEQLARDRSRFARRIAQAQELLGPCLTPAARARAWA-	173
tr|A0A151NK26|A0A151NK26_ALLMI	美國短吻鱷( Alligator mississippiensis)	脊索動物門	---------AAKKVHFCPVVTVH-----DFA--SRTARCGPWEELARDRCRFRQRIEQAEVVLGPCLEPGHRAKAW--	174
tr|A0A151MAW2|A0A151MAW2_ALLMI	美國短吻鱷	脊索動物門	--------TKKKKVTFLDEVTEYYVS-------GEEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEDAIGHTSHSC--------	175
tr|A0A1U7RBG9|A0A1U7RBG9_ALLSI	揚子江鱷( Alligator sinensis)	脊索動物門	---DQEGNRAAKKVRFCPVVTVHPLIVWDFA--SRAARCGPWEELARDRCRFRQRIEQAEVVLGPCLEPGHRAKAW--	176
tr|A0A1U7S3B9|A0A1U7S3B9_ALLSI	揚子江鱷	脊索動物門	-----HTHTKKKKVTFLDEVTEYYVS-------SEEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEDAIGYCLTVEHRQKI---	177
tr|A0A0Q3TCT0|A0A0Q3TCT0_AMAAE	青綠頂亞馬遜鸚鵡( Amazona aestiva)	脊索動物門	-------PLTNWGGTFLDKVTEYYVS-------SEEDRKGPWEEIARDGCRFQKRIQETEEAIGYCFTADHRQRVF--	178
tr|R0L938|R0L938_ANAPL	綠頭鴨( Anas platyrhynchos)	脊索動物門	--------TTRKKVTFLEKVTEYYVS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEEAIGYCFTTEHRQRVL--	179
tr|A0A0E9TVB7|A0A0E9TVB7_ANGAN	歐洲鰻鱺( Anguilla anguilla)	脊索動物門	--------------------------------------------MARDRDRFRRRVQTASDIISPFLLANHRARVWE-	180
tr|G1KGT3|G1KGT3_ANOCA	安樂蜥( Anolis carolinensis)	脊索動物門	---------TKKKVTFLEEVVEYYIS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFLKRIQETENAIGYCLTMEHRQQIF--	181
tr|A0A2K5CYS5|A0A2K5CYS5_AOTNA	小夜猴( Aotus nancymaae)	脊索動物門	----------ARKVHFSEKVTVHL------P--AHAARRGPWEQFARDRSRFARRIAQAQELLSPCLTP---------	182
tr|A0A091NH62|A0A091NH62_APAVI	斑尾非洲咬鵑( Apaloderma vittatum)	脊索動物門	--------TKRKKVTFLEKVTEYYIS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEEAIGYCFSTEHRQRVF--	183
tr|A0A087QPR2|A0A087QPR2_APTFO	帝企鵝( Aptenodytes forsteri)	脊索動物門	---EKCRSTKRKKVTFLEKVT-YYIS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEEAIGYCFTTE--------	184
tr|W5JYE7|W5JYE7_ASTMX	墨西哥脂鯉( Astyanax mexicanus)	脊索動物門	---------LVKKVKFSPVVQVHKMRAWSFA--FQASRKGPWEEHARDRDRFQRRIMKTEQAIGYCFSLSHRQSLQH-	185
tr|W5KS24|W5KS24_ASTMX	墨西哥脂鯉	脊索動物門	-------CVRLKKVTFVEEVEEFYAS-------SDEDRHGPWEEFARDRCRFQRRVQDVEETISYCLAPTFRLVIF--	186
tr|W5K4R1|W5K4R1_ASTMX	墨西哥脂鯉	脊索動物門	---------GTKKVRFSEEVKVHNLVAWSFA--SREARDGSWMQLARDRERFKRRVERTEEVLSPCLTSQHRARVW--	187
tr|A0A2I4BUP4|A0A2I4BUP4_9TELE	林奈氏澳鱂( Austrofundulus limnaeus)	脊索動物門	---------VQKKVQFSPVVQVHVMRTWPFA--RQATRKGHWEEMARDRDRFRRRIEETEQAVGRCLTPAHRQKMWA-	188
tr|A0A2I4C690|A0A2I4C690_9TELE	林奈氏澳鱂	脊索動物門	-------CKNLKKVRFCDQVDEFFASCG--E--EEEDRRGPWEELARDRCRFQRRCEEVEQSIGFCLQPQHRHRVL--	189
tr|A0A087V878|A0A087V878_BALRE	灰冠鶴普通亞種( Balearica regulorum gibbericeps)	脊索動物門	----------RKKVTFLEKVTEYYVS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEEAIGYCFTAEHRQRVFN-	190
tr|A0A2P4T271|A0A2P4T271_BAMTH	灰胸竹雞( Bambusicola thoracicus)	脊索動物門	-------HLTVCRVTFLEKVTEYYVS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEEAIDDIDWLD--LRIFFI	191
tr|L8IKH8|L8IKH8_9CETA	野犛牛( Bos mutus)	脊索動物門	RHQDLEPLLKTRKVRFSEKVSIHPLVVWAGP--AQAARRGPWEQFARDRSRFARRIAQQADATPPFPK----------	192
tr|E1BKX2|E1BKX2_BOVIN	歐洲牛( Bos taurus)	脊索動物門	-SGETHTHIRRKKVTFLEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEEAIGYCLTFEHREKMFN-	193
tr|G3X6A2|G3X6A2_BOVIN	歐洲牛	脊索動物門	RHQDLERLLKTRKVRFSEKVSIHPLVVWAGP--AQAARRGPWEQFARDRSRFARRIAQVQEELGPYLTPAARARAWA-	194
sp|Q2KI51|PR15A_BOVIN	歐洲牛	脊索動物門	-----------RKVRFSEKVSIHPLVV-------QAARRGPWEQFARDRSRFARRIAQVQEELGPYLTPAARARA---	195
tr|A0A226NIW5|A0A226NIW5_CALSU	鱗斑鶉( Callipepla squamata)	脊索動物門	----------VCRVTFLEKVTEYYVS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEEAIGYCFTPEHRQRVLN-	196
tr|A0A091IAC0|A0A091IAC0_CALAN	安氏蜂鳥( Calypte anna)	脊索動物門	----------RKKVTFLEKVTEYYIS-------GEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEEAIGYCFTTEHRQKVFN-	197
tr|T0M6R5|T0M6R5_CAMFR	野雙峰駝( Camelus ferus)	脊索動物門	---------KVQLVTFLEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEDAIGD-------------	198
tr|S9XM19|S9XM19_CAMFR	野雙峰駝	脊索動物門	----------ETPVRFSEKVSVHLLAVWAGP--ARAARRGPWEQFARDRSRFARRVARAQEELGPYLTPDARARAWA-	199
tr|E2RII3|E2RII3_CANLF	家犬( Canis lupus familiaris)	脊索動物門	------ARIKRKKVTFLEEVTEYYIS-------EDEDRRGPWEQFARDACRFQKRIQETEDAIGYCLTFEHRERMF--	200
tr|J9P332|J9P332_CANLF	家犬	脊索動物門	RHPDPETPLTARKVRFSEKVSVHLLAVWAGP--AQAARRGPWEQLARDRSRFARRIAQAQEQLGPCLTPAARARAWA-	201
tr|A0A091M8U5|A0A091M8U5_CARIC	紅腿叫鶴( Cariama cristata)	脊索動物門	----------QKKVTFLEKVTEYYIS-------SEEDRKGPWEEIARDGCRFQKRIQETEEAIGYCFTTEHRQRVFN-	202
tr|H0V6Q0|H0V6Q0_CAVPO	豚鼠( Cavia porcellus)	脊索動物門	-----HTSIKRKKVTFVEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDACRFRKRIQETEDAIGYCLTFEYRERIF--	203
tr|A0A286XWE4|A0A286XWE4_CAVPO	豚鼠	脊索動物門	----------RKKVTFVEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDACRFRKRIQETEDAIGYCLTFEYRERIFN-	204
tr|A0A2K5QP44|A0A2K5QP44_CEBCA	巴拿馬白面卷尾猴( Cebus capucinus imitator)	脊索動物門	RDLDPETPLKARKVHFSEKVTVHLLAVWAGP--AHAARQGPWEQLARDRSRFARRIAQAQELLSPCLTPAARARAWA-	205
tr|A0A2K5LT72|A0A2K5LT72_CERAT	白頂白眉猴( Cercocebus atys)	脊索動物門	----------RRKVTFLEEVTE-YIS-------GDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEDAIGYCLTF---------	206
tr|A0A212CRD6|A0A212CRD6_CEREH	歐洲馬鹿( Cervus elaphus hippelaphus)	脊索動物門	----------RKKVTFLEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDGCSFQKRIQETEEAIGYCLTFEHREKMFN-	207
tr|A0A093BFU8|A0A093BFU8_CHAPE	煙囪雨燕( Chaetura pelagica)	脊索動物門	--------HKRKKVTFLEKVTEYYIS-------GEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEEAIGYCFTPEHRQRVF--	208
tr|A0A0A0AQW6|A0A0A0AQW6_CHAVO	雙領鴴( Charadrius vociferus)	脊索動物門	----KCRSTKRKKVTFLEKV-EYYIS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEEAIGHCFTAE--------	209
tr|M7BFJ5|M7BFJ5_CHEMY	綠海龜( Chelonia mydas)	脊索動物門	-----HTSTKRKKVTFLEEVTEYYVS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEDAIGYCLTIEHRQRI---	210
tr|A0A0D9S311|A0A0D9S311_CHLSB	西非綠猴( Chlorocebus sabaeus)	脊索動物門	----------ARKVHFSEKVTVHFPA--------QAARQGPWEQLARDRSRFARRIAQAQEELSPCLTP---------	211
tr|A0A1W2WF74|A0A1W2WF74_CIOIN	玻璃海鞘( Ciona intestinalis)	脊索動物門	--------KAPSKVRFMDKVVVHPMVAWSYA--YREARKGRWDSAARDRHRFGDRVRCVGDAISWCFNTSHRGKIYA-	212
tr|H2XQL9|H2XQL9_CIOIN	玻璃海鞘	脊索動物門	-----------SKVRFMDKVVVHPM-----A--YREARKGRWDSAARDRHRFGDRVRCVGDAISWCFNTSHRGKIY--	213
tr|A0A226PWT9|A0A226PWT9_COLVI	山齒鶉( Colinus virginianus)	脊索動物門	-------HLTVCRVTFLEKVTEYYVS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEEAIGYCFTTEHRQRVL--	214
tr|A0A2I0M025|A0A2I0M025_COLLI	野鴿( Columba livia)	脊索動物門	----KCGSTKRKKVTFLEKVTE-YIS-------GEEDRKGPWEELARDGCRFQRRIQETEEAIGYCFTAE--------	215
tr|A0A091EF33|A0A091EF33_CORBR	短嘴鴉( Corvus brachyrhynchos)	脊索動物門	----------RKKVTFLEKVTEYYIS-------SEEDRKGPWEEMARDGCRFQKRIQETEEAIGYCLTTEHRQRVFH-	216
tr|G3HQB0|G3HQB0_CRIGR	灰倉鼠( Cricetulus griseus)	脊索動物門	-SGETCTHNKRKKVTFLEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEDAIGYCLTFEHRERMFN-	217
tr|G3HZX4|G3HZX4_CRIGR	灰倉鼠	脊索動物門	-----------RKVHFSENVTVHFLAV-------QAARPGPWEQLARDRSRFARRIAQAEEKLGPYLTPAFRARAW--	218
sp|Q60465|PR15A_CRILO	長尾倉鼠( Cricetulus longicaudatus)	脊索動物門	QDQDPETPLRARKVHFSENVTVHFLAVWAGP--AQAARRGPWEQLARDRSRFARRIAQAEEKLGPYLTPAFRARAWA-	219
tr|A4IG88|A4IG88_DANRE	斑馬魚( Danio rerio)	脊索動物門	---------RLKKVKFSPVVQVHKMRAWSFA--LQASRKGPWEELARDRDRFRKRIIDTEKAIGYCFSLSHREKVWA-	220
tr|F1QPN1|F1QPN1_DANRE	斑馬魚	脊索動物門	---------KLKKVKFSPVVQVHKMRAWSFA--LQASRKGPWEELARDRDRFRKRIGDTEKAIGYCFSLSNREKMRA-	221
tr|A0A2R8Q2M1|A0A2R8Q2M1_DANRE	斑馬魚	脊索動物門	----------LKKVKFSPVVQVH-----SFA--LQASRKGPWEELARDRDRFRKRIGDTEKAIGYCFSLSNREKMR--	222
tr|A3KNJ7|A3KNJ7_DANRE	斑馬魚	脊索動物門	---------SGKKVCFSERVCVRPLLVWSYA--SRSARDGSWLQMARDRERFRRRVQTLEPVLKPCLMPEHRARVW--	223
tr|A0A2Y9PE36|A0A2Y9PE36_DELLE	白鯨( Delphinapterus leucas)	脊索動物門	-----------RKVRFSEKVSVHLLAV-------QAARRGPWEQFARDRSRFARRIAQAQEELGPYLTPAARARA---	224
tr|K9IMI7|K9IMI7_DESRO	吸血蝠( Desmodus rotundus)	脊索動物門	------THTKKKKVTFLEEVTEYYVS-------GDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEDAIGYCLTFEHRERMF--	225
tr|K9IKB2|K9IKB2_DESRO	吸血蝠	脊索動物門	---------PSCEVTFLEEVTEYYVS-------GDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEDAIGYCLTFEHRERMF--	226
tr|K9IM54|K9IM54_DESRO	吸血蝠	脊索動物門	QHLDPETPQKTTKVRFSEKVSIHYLVVWAGP--AQAARQGPWEQFARDRSRFARRIAQVEEVLGPCFTLAARARAWA-	227
tr|A0A1S3F936|A0A1S3F936_DIPOR	奧氏更格盧鼠( Dipodomys ordii)	脊索動物門	-SGDRHTHLKRKKVTFLEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEVAIGYCLTFEHRERMFN-	228
tr|A0A1S3G2W4|A0A1S3G2W4_DIPOR	奧氏更格盧鼠	脊索動物門	QEPNDEIPLNTRKVRFSEKVTVHFLVVWAGA--AQAARQGPWEQFARDRSRFARRIARAQEELGPCLTPTWRARAWA-	229
tr|A0A093GY39|A0A093GY39_DRYPU	絨啄木鳥( Dryobates pubescens)	脊索動物門	--------TKRKKVTFQEQVTEYYIS-------SEEDRKGPWEELARDSCRFQKRIQETEEAIGHCLTPQHRHRVW--	230
tr|A0A2Y9JYL5|A0A2Y9JYL5_ENHLU	阿拉斯加海獺( Enhydra lutris kenyoni)	脊索動物門	------TRIKRKKVTFLEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETENVIGYCLTFEHRERMF--	231
tr|A0A2Y9L316|A0A2Y9L316_ENHLU	阿拉斯加海獺	脊索動物門	-----------RKVRFSENVSVHLLAV-------QAARRGPWEQLARDRSRFARRIAQAQEQLGPCLTPAARARA---	232
tr|K7Z365|K7Z365_EPIAW	青石斑魚( Epinephelus awoara)	脊索動物門	---------SQKRVRFSPLVQVHVMRTWQFA--RQASRKGHWEEMARDRDRFRRRVQETEQAIGHCFTQQHRER----	233
tr|F6PQN6|F6PQN6_HORSE	家馬( Equus caballus)	脊索動物門	RDLEPETPLKARKVCFSEKVTIHFLVVWAGP--AQAARRGPWEQLARDRSRFAHRIARAQEELGPCLTPAARARAWA-	234
tr|A0A1S2ZR15|A0A1S2ZR15_ERIEU	西歐刺蝟( Erinaceus europaeus)	脊索動物門	------VHTKRKKVTFLEEITEYYIS-------DDEDRKGPWEEFARDACRFQKRIQETEDAIGYCLTFEHRERMF--	235
tr|A0A1S3AJH2|A0A1S3AJH2_ERIEU	西歐刺蝟	脊索動物門	QLPDPGTPPQGRKVRFSEEVSVHILAVWAGP--AQAARRGPWEQMARDRSRFARRIAQAQEELGPCLTPEARARAWA-	236
tr|A0A2F0B7Y3|A0A2F0B7Y3_ESCRO	灰鯨( Eschrichtius robustus)	脊索動物門	------THIQRKKVCFFLLTCLIICIA-----------------------------SDVVKDISMTFLEA--------	237
tr|A0A2F0AY78|A0A2F0AY78_ESCRO	灰鯨	脊索動物門	RHRDPEPPLKTRKVRFSEKVSVHLLAVWAGP--AQAARRGPWEQFARDRSRFARRIAQAQEELGPYLTPAARARAWA-	238
tr|A0A093JBH0|A0A093JBH0_EURHL	日鳽( Eurypyga helias)	脊索動物門	--------SKRKKVTFLEKVTEYYVS-------SEEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEEAIGHCFTAEHRQRVF--	239
tr|M3WUP7|M3WUP7_FELCA	家貓( Felis catus)	脊索動物門	-SGQRHTRIKRKKVTFLEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEDAIGYCLTVEHRERMFN-	240
tr|M3XBR1|M3XBR1_FELCA	家貓	脊索動物門	RHPDPEPPVKARKVRFSEKVSVHLLAVWAGP--ARAARRGPWEQLARDRSRFARRIAQAQEQLGPCLTPAARARAWA-	241
tr|U3JCE0|U3JCE0_FICAL	白領姬鶲( Ficedula albicollis)	脊索動物門	-----TANSKRKKVTFLEEVTEYLIS-------SEEDRRGPWEELARDGCRFQRRIQETEEAIGYCLRPEHRLRV---	242
tr|A0A091CPQ2|A0A091CPQ2_FUKDA	達馬拉蘭鼴鼠( Fukomys damarensis)	脊索動物門	----------RKKVTFLEEVTEYYVS-------GDEDRKGPWEEFARDACRFRKRIQETEDAIGHCLTFEHRERMFN-	243
tr|A0A147AAX9|A0A147AAX9_FUNHE	底鱂( Fundulus heteroclitus)	脊索動物門	---------RQKKVRFSPLVHVHVMRTWPFA--RQASRKGHWEELARDRDRFRRRIADTERAVGRCLSRPHRERMRA-	244
tr|A0A147AUZ6|A0A147AUZ6_FUNHE	底鱂	脊索動物門	--------KLPKKVRFCDDVEEFFASGG--E--EEEDRRGPWEELARDRCRFLRRCQEVEQSIGFCLQPQHRRQVF--	245
tr|F1NUR5|F1NUR5_CHICK	原雞( Gallus gallus)	脊索動物門	-------RLTVCRVTFLEKVTEYYVS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEEAIGYCFTTE---RVFHR	246
tr|G3NU49|G3NU49_GASAC	三刺魚( Gasterosteus aculeatus)	脊索動物門	---------TRKKVHFSPEVQVHVMRTWPFA--RQASRKGHWEEMARDRDRFRRRVWEAEQTIGRCLSPDHRDGMRA-	247
tr|G5BMM3|G5BMM3_HETGA	裸鼴鼠( Heterocephalus glaber)	脊索動物門	-----HTPIKGKKVTFLEEVTEYYVS-------GDEDRKGPWEEFARDACRFRKRIQETEDAIGYCLTFEHRERMF--	248
tr|A0A0P6JG56|A0A0P6JG56_HETGA	裸鼴鼠	脊索動物門	----------GKKVTFLEEVTE-YVS-------GDEDRKGPWEEFARDACRFRKRIQETEDAIGYCLTF---------	249
sp|O75807|PR15A_HUMAN	智人( Homo sapiens)	脊索動物門	HDPDPETPLKARKVRFSEKVTVHFLAVWAGP--AQAARQGPWEQLARDRSRFARRITQAQEELSPCLTPAARARAWA-	250
tr|C1JC98|C1JC98_HYPNO	鱅魚( Hypophthalmichthys nobilis)	脊索動物門	------------QVCFSDKVTVHPLVVWSFA--SRAARDGCWLQMARDRERFRRRVENIENVIKPCLTPEHRASVW--	251
tr|A0A1A7YZB7|A0A1A7YZB7_9TELE	紋狀鱂( Iconisemion striatum)	脊索動物門	---------TQKKVQFSPLVQVHVMRTWPFA--RQASRKGHWEELARDRDRFRRRVLDTERAVGHCFTQPHRERMRA-	252
tr|A0A2D0QSY1|A0A2D0QSY1_ICTPU	斑點叉尾鮰( Ictalurus punctatus)	脊索動物門	---------TVKRVKFSPVVQIHKMRAWSFA--LQACRKGPWEEHARDRDRFQRRILETEQAIGYCFMRSHRDKFFI-	253
tr|A0A2D0PHH9|A0A2D0PHH9_ICTPU	斑點叉尾鮰	脊索動物門	-------VVRLKKVTFIEEVEEFYAS-------SDEERHGPWEEYARDRCRFQRRVQEVEESISYCLSPSFRLNIF--	254
tr|A0A2D0RC33|A0A2D0RC33_ICTPU	斑點叉尾鮰	脊索動物門	-----STKERATKVRFSEEVTIHYIE-WDAA--NQAARDGSWMEMARDRDRFKRRVEQIGEIISPCLTAQHRAK----	255
tr|I3NCX6|I3NCX6_ICTTR	十三條紋地松鼠( Ictidomys tridecemlineatus)	脊索動物門	-----HMHIKRKKVTFLEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEDAIGYCLTFEHRERMF--	256
tr|A0A0F8AW99|A0A0F8AW99_LARCR	大黃魚( Larimichthys crocea)	脊索動物門	---------TQKKVRFSPLVQVHVMRTWPFA--RRASRKGHWEEMVRDRDRFRRRIQETEQAICHCFTQEHRERIRA-	257
tr|A0A0F8AW45|A0A0F8AW45_LARCR	大黃魚	脊索動物門	-------CSTTKKVRFCDDVEEFFASGG--E--EDEDRHGPWEELARDRCRFLRRCQEVEQSIAFCLQPQHRRKVY--	258
tr|M3XK44|M3XK44_LATCH	拉蒂邁魚( Latimeria chalumnae)	脊索動物門	------RDVTPKKVLFLDEVTEYYLS-------DEEDRKGPWEAFARDRCRFKKRIQEIEEAVAYCLAPEHRRKV---	259
tr|W5M566|W5M566_LEPOC	眼斑雀鱔( Lepisosteus oculatus)	脊索動物門	---------TEKKVSFSPVVQVHVMHAWSFA--LRAARRGPWEEMARDRARFRRRIEETEKAIGHCLSTAHREKILA-	260
tr|W5NND4|W5NND4_LEPOC	眼斑雀鱔	脊索動物門	------------QVRFSDTVVVRPLVVWAFA--SRAARSGCWQEMARDRDRFQRRVQQTSVAIEPCLQPEHRARVW--	261
tr|A0A2U3XJE9|A0A2U3XJE9_LEPWE	韋德爾氏海豹( Leptonychotes weddellii)	脊索動物門	-SGERHAHIKRKKVTFLEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEDAIGYCLTFEHRERMFN-	262
tr|A0A2U3YVJ2|A0A2U3YVJ2_LEPWE	韋德爾氏海豹	脊索動物門	-----------RKVHFSEKVSVHLLAV-------QAARRGPWEQLARDRSRFAWRIAQAQEQLGPCLTPAARARA---	263
tr|A0A091PQ00|A0A091PQ00_LEPDC	鵑鴗( Leptosomus discolor)	脊索動物門	--------TKQKKVTFLEEVTEYYVS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEEAIGYCFTTEHRQRVF--	264
tr|A0A2I0THG7|A0A2I0THG7_LIMLA	斑尾塍鷸( Limosa lapponica baueri)	脊索動物門	------------RVTFLEKVTE-YIS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEEAIGYCFTRE--------	265
tr|A0A218UHA0|A0A218UHA0_9PASE	十姊妹雀鳥( Lonchura striata domestica)	脊索動物門	-----TASSKRKKVTFHEEVTEYYIS-------SEEDRKGPWEEMARDGCRFQKRIQETEEAIGYCLSPEHRLRV---	266
tr|G3UEH1|G3UEH1_LOXAF	非洲草原象( Loxodonta africana)	脊索動物門	QNPDLGIPLKATKVHFSEKVSVHYLAV-------------PWEQLARDRSRFARRIAGVQEELEPCLTPAARARAWA-	267
tr|G3UNC1|G3UNC1_LOXAF	非洲草原象	脊索動物門	---------KATKVHFSEKVSVHYLA--------------PWEQLARDRSRFARRIAGVQEELEPCLTPAARARAW--	268
tr|A0A2K5VWQ4|A0A2K5VWQ4_MACFA	長尾獼猴( Macaca fascicularis)	脊索動物門	---------KARKVHFSEKVTVHF------P--AQAARQGPWEQLARDRSRFARRIALAQEELSPCLTP---------	269
tr|A0A1D5R262|A0A1D5R262_MACMU	恆河獼猴( Macaca mulatta)	脊索動物門	RDLDPEIPLKARKVHFSEKVTVHFLAVWAGP--AQAARQGPWEQLARDRSRFARRIALAQEELSPCLTPAARARAWA-	270
tr|A0A093PIN3|A0A093PIN3_9PASS	金領嬌鶲( Manacus vitellinus)	脊索動物門	--------SKRKKVTFLEKVTEYYIS-------SEEDRKGPWEEMARDGCRFQKRIQETEEAIGYCFTSEHRQRVF--	271
tr|A0A2K5YBX8|A0A2K5YBX8_MANLE	鬼狒( Mandrillus leucophaeus)	脊索動物門	-----QTHVKRRKVTFLEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEDAIGYCLTFEHRERMF--	272
tr|A0A091QM69|A0A091QM69_MERNU	紅蜂虎( Merops nubicus)	脊索動物門	---ERCRRTKRKKVTFLEKVT-YYIS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEEAIGHCFTTE--------	273
tr|A0A1U8CJL6|A0A1U8CJL6_MESAU	金倉鼠( Mesocricetus auratus)	脊索動物門	QDQDPDTPPRARKVRFSEKVAVHFLAVWAGP--AQAARRGPWEQLARDRSRFARRIAQAEEKLGPCLTPAFRARAWA-	274
tr|U3FZ67|U3FZ67_MICFL	珊瑚蛇( Micrurus fulvius)	脊索動物門	-----EKCKKKKKVTFLEEVTEYYVS-------IEEDRKGPWEELARDGCRFHKRIQETEDAIGYCLTVEHRQRI---	275
tr|A0A2H6MW52|A0A2H6MW52_MICLE	卡氏南美珊瑚蛇( Micrurus lemniscatus carvalhoi)	脊索動物門	----REKCKKKKKVTFLEEVTE-YVS-------IEEDRKGPWEELARDGCRFHKRIQETEDAIGYCLTVE--------	276
tr|A0A2D4HKZ6|A0A2D4HKZ6_MICLE	南美珊瑚蛇( Micrurus lemniscatus lemniscatus)	脊索動物門	--------QVKKKVRFSPVVTVH-----DYA--SRAARRGPWEEMARDRCRFHRRITQMAAILEPCFAEDHRDKVWK-	277
tr|A0A2D4IKG3|A0A2D4IKG3_MICLE	南美珊瑚蛇	脊索動物門	---------KKKKVTFLEEVTE-YVS-------IEEDRKGPWEELARDGCRFHKRIQETEDAIGYCLTVE--------	278
tr|A0A2D4Q362|A0A2D4Q362_MICSU	蘇里南珊瑚蛇( Micrurus surinamensis)	脊索動物門	----------KMKVRFSPVVTVHSLVVWDYA--SRAARRGPWEEMARDRCRFHRRITQMAAILEPCFAEDHRDKVW--	279
tr|A0A2D4NWJ1|A0A2D4NWJ1_MICSU	蘇里南珊瑚蛇	脊索動物門	-----EKCKKKKKVTFLEEVTY-YVS-------IEEDRKGPWEELARDGCRFHKRIQETEDAIGYCLTVE--------	280
tr|F7BX77|F7BX77_MONDO	負鼠( Monodelphis domestica)	脊索動物門	-----HTATRRKKVTFLEEVTEYYIS-------SDEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEDAIGYCLTFEHRQKIF--	281
sp|Q8BFW3|PR15B_MOUSE	小家鼠( Mus musculus)	脊索動物門	----------RKKVTFLEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEVAIGYCLAFEHREKMFN-	282
tr|A0A1B0GRX4|A0A1B0GRX4_MOUSE	小家鼠	脊索動物門	---------GPRDSSKSSE----------GP--AQAARRGPWEQFARDRSRFARRIAQAEEKLGPYLTPDSRARAWA-	283
sp|P17564|PR15A_MOUSE	小家鼠	脊索動物門	----------ARKVHFAEKVTVHFPA--------QAARRGPWEQFARDRSRFARRIAQAEEKLGPYLTP---------	284
tr|B2RRL7|B2RRL7_MOUSE	小家鼠	脊索動物門	-----------RKVHFAEKVTVHFLAV-------QAARRGPWEQFARDRSRFARRIAQAEEKLGPYLTPDSRARA---	285
tr|G9KI60|G9KI60_MUSPF	雪貂( Mustela putorius furo)	脊索動物門	------KRIKKKKVTFLEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDAFRFQKRIRETENAIGYCLTFEHRERMF--	286
tr|M3YJU7|M3YJU7_MUSPF	雪貂	脊索動物門	----------KKKVTFLEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDAFRFQKRIRETENAIGYCLTFEHRERMFN-	287
tr|S7Q597|S7Q597_MYOBR	布氏鼠耳蝠( Myotis brandtii)	脊索動物門	QHPDPETPEKARKVHFSEKVSIHFLIVWAGP--AQAARRGPWEQFARDRSRFARRIAQAEEKLGPCLTPAARARAWA-	288
tr|L5LGR6|L5LGR6_MYODS	大衛鼠耳蝠( Myotis davidii)	脊索動物門	-----------RKVHFSEKVSIHFLIV-------QAARRGPWEQFARDRSRFARRIAQAEEKLGPCLTPAARARA---	289
tr|G1P3R3|G1P3R3_MYOLU	避光鼠耳蝠( Myotis lucifugus)	脊索動物門	----------ARKVHFSEKVSIHFPA--------QAARRGPWEQFARDRSRFARRIAQAEEKLGPCLTP---------	290
tr|A0A1A6G2E1|A0A1A6G2E1_NEOLE	沙漠林鼠( Neotoma lepida)	脊索動物門	RDQDPETPLRARKVHFSEKVTVHFLAVWAGP--AQAARRGPWEQVARDRSRFARRIAQAEEELGPYLTPAFRARAWA-	291
tr|A0A091V327|A0A091V327_NIPNI	朱鹮( Nipponia nippon)	脊索動物門	----------VCRVTFLEKVTEYYIS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEEAIGYCFTTEHRQRVFN-	292
tr|A0A2I3GRM3|A0A2I3GRM3_NOMLE	白頰長臂猿( Nomascus leucogenys)	脊索動物門	-----------RQVHFSEKVTVHFLAV-------QAARQGPWEQLARDRSRFARRIAQAQEELSPCLTPAARARA---	293
tr|A0A1A8D4T8|A0A1A8D4T8_9TELE	卡迪氏假鰓鱂( Nothobranchius kadleci)	脊索動物門	-----KASSTQKKVHFSPLVQVH-----PFA--RQASRKGHWEELARDRDRFRRRVLDTERAIGNCFTQSHREKMR--	294
tr|A0A1A8GYN8|A0A1A8GYN8_9TELE	科氏假鰓鱂( Nothobranchius korthausae)	脊索動物門	-----KARSTQKKVQFSPRVQVH------FA--RQASRKGHWEELARDRDRFRRRVLDTERAIGNCFTQ---------	295
tr|A0A1A8G5F4|A0A1A8G5F4_9TELE	科氏假鰓鱂	脊索動物門	----------SKKVQFCDDVEEFFAS-------EEEDRRGPWEELARDRCRFLRRCEEVEKNISYCLQPQHRRQVL--	296
tr|A0A1A8HUB8|A0A1A8HUB8_NOTKU	庫恩氏假鰓鱂( Nothobranchius kuhntae)	脊索動物門	---------TQKKVQFSPLVQVHVMRTWPFA--RQASRKGHWEELARDRDRFRRRVLDTERAIGNCFTQSHREKMRA-	297
tr|A0A1A8MZ04|A0A1A8MZ04_9TELE	皮氏假鰓鱂( Nothobranchius pienaari)	脊索動物門	----------QKKVHFSPLVQVH------VA--RQASRKGHWEELARDRDRFRRRVLDTERAIGNCFTQS--------	298
tr|A0A1A8RGY5|A0A1A8RGY5_9TELE	拉氏假鰓鱂( Nothobranchius rachovii)	脊索動物門	-----KASSTRKKVHFSPLVQVH------FA--RQASRKGHWEELARDRDRFRRRVLDTERAIGNCFTQ---------	299
tr|A0A1A8RDN9|A0A1A8RDN9_9TELE	拉氏假鰓鱂	脊索動物門	-------GRCSKKVRFCDDVEEFFASCG--E--EEEDRRGPWEELARDRCRFLRRCEEVEKNISYCLQPHHRRQVL--	300
tr|A0A2U3ZVT9|A0A2U3ZVT9_ODORO	太平洋海象( Odobenus rosmarus divergens)	脊索動物門	----------ARKVHFSEKVSVHL------P--AQAARRGPWEQLARDRSRFARRIAQAQEQLGPCLTP---------	301
tr|A0A060VZ96|A0A060VZ96_ONCMY	虹鱒( Oncorhynchus mykiss)	脊索動物門	----------LKKVRFSPLVQVH-----PFA--RQMSRKGPWEELARDRDRFRKRIQETEQAIGYCFSQSHRDTIR--	302
tr|A0A060WIS8|A0A060WIS8_ONCMY	虹鱒	脊索動物門	---------PLKKVRFSPLVQVHVMRTWPFA--RHVSRKGPWEELARDRGRFRRRIQEAEQTIDYCFSQSHREKIWA-	303
tr|A0A060XUB5|A0A060XUB5_ONCMY	虹鱒	脊索動物門	-------CVTVKKVCFCDTVEEFYAS----E--DDEDRCGPWEELARDRARFLRRVQDVEDGIGYVLSTTFRVAVY--	304
tr|V8P8I2|V8P8I2_OPHHA	眼鏡王蛇( Ophiophagus hannah)	脊索動物門	----------KKKVRFSPVVTVH-----SLA--SRAARRGPWEEMARDRFRFHRRITQMAAILEPCFTEDHRDKVWK-	305
tr|F7FB61|F7FB61_ORNAN	鴨嘴獸( Ornithorhynchus anatinus)	脊索動物門	-----QVHTRRKKVTFLEEVTEYYIS-------SDEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEDAIG--------------	306
tr|K7EHP9|K7EHP9_ORNAN	鴨嘴獸	脊索動物門	-----ERSMAGRKVQFSSQVSVHLMAVWAGP--ARAARRGPWEQLARDRSRFSRRIAQAERELAPCLSPAARAAAWA-	307
tr|G1TKF7|G1TKF7_RABIT	家兔( Oryctolagus cuniculus)	脊索動物門	------AHSKRKKVTFLEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEDAIGYCLTLEHRQRVF--	308
tr|G1TEF9|G1TEF9_RABIT	家兔	脊索動物門	RGPDPETPL-ARKVRFSDKVTVHLLAVWAGP--AQAARKGPWEQFARDRSRFARRIARAQEELGPCLSPAARARAWA-	309
tr|H2L6W6|H2L6W6_ORYLA	青鱂魚( Oryzias latipes)	脊索動物門	----------SKQVRFSPQVQVHVMRTWPFA--RQASRKGLWEEMARDRDRFRRRIVETEQAIGYCFSPPHRQK----	310
tr|H2M4Z9|H2M4Z9_ORYLA	青鱂魚	脊索動物門	--------RSSKKVRFCDTVEEFFASCE-EE--GEEDRQGPWEQMARDRCRFLRRCQEVEQQIAYCLQPQHRLRVY--	311
tr|H0WWF1|H0WWF1_OTOGA	小耳大嬰猴( Otolemur garnettii)	脊索動物門	WDPDPETPLRGRKVRFSEKVTVHLLAVWAGP--AQAARRGPWEQFARDRSRFQRRITQAQEELGPCLTPAARARAWT-	312
tr|W5NWY5|W5NWY5_SHEEP	綿羊( Ovis aries)	脊索動物門	------THIRRKKVTFLEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEEAIGYCLTFEHREKMF--	313
tr|W5PS00|W5PS00_SHEEP	綿羊	脊索動物門	RHLDLEPLPKTRKVRFSEKVSVHPLVVWAGP--AQAARRGPWEQFARD--RFPRRTARAQGELGPSLTPAARARAWA-	314
tr|A0A2R8ZMT3|A0A2R8ZMT3_PANPA	倭黑猩猩( Pan paniscus)	脊索動物門	---------KARKVHFSEKVTVHFLAA-------QAARQGPWEQLARDRSRFARRIAQAQEELNPCLTPAARARAW--	315
tr|A0A1V4KX71|A0A1V4KX71_PATFA	斑尾鴿( Patagioenas fasciata monilis)	脊索動物門	-----CRSTKRKKVTFLEKVTEYYIS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQRRIQETEEAIGYCFTAEHRQRV---	316
tr|K7FEU8|K7FEU8_PELSI	中華鱉( Pelodiscus sinensis)	脊索動物門	-----HAKTKRKKVTFLEEVTEYYIS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEDAIGYCLTIEHRQTI---	317
tr|A0A091TM09|A0A091TM09_PHALP	白尾鸏( Phaethon lepturus)	脊索動物門	----KRRSTKRKKVTFLEKV-EYYIS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEEAIGYCFTTE--------	318
tr|A0A2Y9F179|A0A2Y9F179_PHYCD	抹香鯨( Physeter catodon)	脊索動物門	---------NTRKVRFSEKVSVHLPA--------QAARRGPWEQFARDRSRFARRIAQAQEELGPYLTP---------	319
tr|A0A094KNW3|A0A094KNW3_9AVES	鳳頭 ( Podiceps cristatus)	脊索動物門	----------RKKVTFLDKVTEYYIS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEEAIGYCFTREHRQRVFN-	320
tr|A0A096MBK4|A0A096MBK4_POEFO	秀美花鱂( Poecilia formosa)	脊索動物門	---------RQKKVQFSPLVQVHVMRTWPFA--RQASRKGHWEELARDRDRFRRRIADTEQAVGYCLTQPHREKMRA-	321
tr|A0A096M760|A0A096M760_POEFO	秀美花鱂	脊索動物門	-------NRSTKKVRFCDEVEEFFASC------SEEDRRGPWEELARDRCRFRRRCQEVEHSIGFCLAPAHRWRVY--	322
tr|A0A0S7MCR7|A0A0S7MCR7_9TELE	多育若花鱂( Poeciliopsis prolifica)	脊索動物門	---------RQKKVQFSPLVQVHVMRTWPFA--RQASRKGHWEELARD--------------------PPWP------	323
tr|A0A2J8U7R8|A0A2J8U7R8_PONAB	蘇門答臘猩猩( Pongo abelii)	脊索動物門	HDPDPETPLKARKVHFSEKVTVHFLAVWAGP--AQAARQGPWEQLARDRSRFARRIARAQKELSPCLTPAARARAWA-	324
tr|H2NZI7|H2NZI7_PONAB	蘇門答臘猩猩	脊索動物門	-----------RKVHFSEKVTVHFLAV-------QAARQGPWEQLARDRSRFARRIARAQKELSPCLTPAARARA---	325
tr|A0A2K6G4D3|A0A2K6G4D3_PROCO	克氏冕狐猴( Propithecus coquereli)	脊索動物門	QDPDPETPLKARKVRFSEKVTVHFLYVWAGP--AQAARRGPWEQLARDRSRFARRIAQAQEELGPCLTPAARARAWA-	326
tr|A0A093CBD4|A0A093CBD4_9AVES	黃喉沙雞( Pterocles gutturalis)	脊索動物門	----------RKKVTFLEKVTEYYIS-------SEEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEEAIGYCFTPEHRQRVFN-	327
tr|L5L4K0|L5L4K0_PTEAL	中央狐蝠( Pteropus alecto)	脊索動物門	TFSESDGQSSDRWVRFSEKVSIHLLAVWAGP--AQAARRGPWEQFARDRSRFARRIAQAQEVLGPCLTPAARARAWA-	328
tr|B5DF35|B5DF35_RAT	褐家鼠( Rattus norvegicus)	脊索動物門	--------RASDQVTFLEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEVAIGYCLTFEHRERVF--	329
tr|D3ZP67|D3ZP67_RAT	褐家鼠	脊索動物門	-----YTHIKRKKVTFLEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEVAIGYCLTFEHRERVF--	330
tr|A0A0G2JSW4|A0A0G2JSW4_RAT	褐家鼠	脊索動物門	RNQDPEIPLKGRKVHFSEKVTVHFLAVWAGP--AQAARRGPWEQFARDRSRFARRIAQAEEQLGPYLTPAFRARAWT-	331
tr|A0A2K6MMD3|A0A2K6MMD3_RHIBE	滇金絲猴( Rhinopithecus bieti)	脊索動物門	-SGGRHTHVKRKKVTFLEEVTEYYIS-------DDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEDAIGYCLTFEHRERMFN-	332
tr|A0A2K6UW65|A0A2K6UW65_SAIBB	亞馬遜松鼠猴( Saimiri boliviensis boliviensis)	脊索動物門	----------ARKVHFSEKVTVHL------P--AHAARQGPWEQLARDRSRFARRIAQTQELLSPCLTP---------	333
tr|A0A2K6UWC3|A0A2K6UWC3_SAIBB	亞馬遜松鼠猴	脊索動物門	---------KARKVHFSEKVTVHL------P--AHAARQGPWEQLARDRSRFARRIAQTQELLSPCLTP---------	334
tr|A0A1S3KNK9|A0A1S3KNK9_SALSA	大西洋鮭( Salmo salar)	脊索動物門	---------PLKKVRFSPLVQVHVMHTWPFA--RQMSRKGPWEELARDRDRFRKRIQETEQAIGYCFSQSHRDTIRA-	335
tr|A0A1S3KPD5|A0A1S3KPD5_SALSA	大西洋鮭	脊索動物門	-----KFNHPLKKVRFSPLVQVH-----PFA--RQMSRKGPWEELARDRDRFRKRIQETEQAIGYCFSQSHRDTIR--	336
tr|A0A1S3PDA1|A0A1S3PDA1_SALSA	大西洋鮭	脊索動物門	---------PLKKVRFSLLVQVHVMRTWPFA--RQVSRKGPWEELARDRGRFRRRIQEAEQTIGYFFSQSHREKIWA-	337
tr|A0A1S3P6L6|A0A1S3P6L6_SALSA	大西洋鮭	脊索動物門	-------CVTVKKVGFRDEVDEFYAS----E--DDEDRRGPWEELARDRCRFLRRVQEVEESIGYVFSSTFRLTVC--	338
tr|A0A1S3L8J1|A0A1S3L8J1_SALSA	大西洋鮭	脊索動物門	--------VTVKRVCFCDTVEEFYAS--------DEDRSGPWEELARDRARFLRRVQDVEDGIGYVLSTTFR------	339
tr|G3VPS2|G3VPS2_SARHA	袋獾( Sarcophilus harrisii)	脊索動物門	---------KEGEVRFSSTVGLRLLVVWAGP--ARAARRGPWEQLARDRDRFARRIAQAEALLGPCLSPATRTRAWA-	340
tr|A0A1W5AQX9|A0A1W5AQX9_9TELE	亞洲龍魚( Scleropages formosus)	脊索動物門	----------LPKVRFSPVVEVH------VA--LQASRRGPWEEMARDRDRFKRRIAETEQAIGYCLLPS--------	341
tr|A0A1W5ARN7|A0A1W5ARN7_9TELE	亞洲龍魚	脊索動物門	---------ILPKVRFSPVVEVHVMRSWSFA--LQASRRGPWEEMARDRDRFKRRIAETEQAIGYCLLPSHREKILA-	342
tr|A0A0P7UI69|A0A0P7UI69_9TELE	亞洲龍魚	脊索動物門	----------LPKVRFSPVVEVH-----SFA--LQATRRGPWEEMARDRDRFKRRIAETEQAIGYCLLPSHREKIL--	343
tr|A0A0P7USJ6|A0A0P7USJ6_9TELE	亞洲龍魚	脊索動物門	-------CAKLKKVRFVEEVEEFYAS-------SDEDRRGPWEEFARDRCRFLRRVQETEEVISYCLAPTFRLLIF--	344
tr|A0A1W5AE17|A0A1W5AE17_9TELE	亞洲龍魚	脊索動物門	---------KLKKVRFVEEVEEFYA--------SDEDRRGPWEEFARDRCRFLRRVQETEEVISYCLAPTFRLL----	345
tr|A0A1W4YP86|A0A1W4YP86_9TELE	亞洲龍魚	脊索動物門	----------SRKVRFSNVVKVPP-----FA--SRAARDGCWQEMARDRARFKRRVDAVSEIISPCLLPEHRAMVWE-	346
tr|A0A0P7VNB0|A0A0P7VNB0_9TELE	亞洲龍魚	脊索動物門	------AVVSSRKVRFSNVVKVHPLVTWSFA--SRAARDGSWQEMARDRARFKRRVDAVSEIISPCLLPEHRAMVWE-	347
tr|A0A1W4YP94|A0A1W4YP94_9TELE	亞洲龍魚	脊索動物門	------MMVSSRKVRFSNVVKVHPLVTWSFA--SRAARDGSWQEIARDRARFKRRVDAVNEIISPCLLPEHRAMVWE-	348
tr|A0A1W5ANM8|A0A1W5ANM8_9TELE	亞洲龍魚	脊索動物門	-------KQGVKKVRFSDAVKVHPMVVWQFA--SRVARDGSWLEMARDRERFRRRVRAASDVISPCLLPQHRARVWR-	349
tr|A0A1W5APZ6|A0A1W5APZ6_9TELE	亞洲龍魚	脊索動物門	-RTRQNQKQGVKKVRFSDAVKVH------FA--SRVARDGSWLEMARDRERFRRRVRAASDVISPCLLPQH-------	350
tr|A0A2U9BVW2|A0A2U9BVW2_SCOMX	大菱鮃( Scophthalmus maximus)	脊索動物門	---------AQKKVRFSPVVQVHVMRTWPFA--RQASRKGHWEVMARDRDRFQRRIRETEPTIRHVLEQSHREKIQA-	351
tr|A0A2U9BEM8|A0A2U9BEM8_SCOMX	大菱鮃	脊索動物門	------RCGSTKKVRFCDHVEEFFASCGEEE--EEEDRRGPWEELARDRSRFLRRCLEVEQSIAYCLQPQHRSLVY--	352
tr|A0A093HKD2|A0A093HKD2_STRCA	非洲鴕鳥南非亞種( Struthio camelus australis)	脊索動物門	----------RKKVTFLEKVTEYYIS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEDAIGYCLTTEHRQKVFN-	353
tr|I3LIA2|I3LIA2_PIG	野豬( Sus scrofa)	脊索動物門	------THTQRKKVTFLEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEDAIGYCLTFEHRERIF--	354
tr|F1RIN9|F1RIN9_PIG	野豬	脊索動物門	RHQDPEPPRKTRKVRFSEKVSVHLLAVWAGP--AQAARRGPWEQFARDRSRFARRIAQAEEVLGPYLTPAARARAWA-	355
tr|A0A2I7ZPD2|A0A2I7ZPD2_TACFU	黃顙魚( Tachysurus fulvidraco)	脊索動物門	-NPDQSTKESAKKVRFSEEVTIHTLEAWGFA--SQAARDGSWMEMARDRDRFKKRVEKAVELISPCLTAQHRARV---	356
tr|H1A4D9|H1A4D9_TAEGU	斑胸草雀( Taeniopygia guttata)	脊索動物門	---EKTASSKRKKVTFHEEVT-YYIS-------SEEDRKGPWEEMARDGCRFQKRIQETEEAIAYCLSPE--------	357
tr|H2RNL4|H2RNL4_TAKRU	虎河魨( Takifugu rubripes)	脊索動物門	--------RTIKKVRFCEHVDEVVI-GA--E--EEEDRRGPWEELARDRCRFLRRCQEVEQSIAYCLQPQHRRAVY--	358
tr|A0A1U7U7Z2|A0A1U7U7Z2_TARSY	菲律賓眼鏡猴( Tarsius syrichta)	脊索動物門	-----HALIKRKKVTFLEEITEYYIS-------DDEDRKGPWEEFARDACRFQKRIQETEDAIGYCLTFEHRERVF--	359
tr|A0A1U7SRC3|A0A1U7SRC3_TARSY	菲律賓眼鏡猴	脊索動物門	RDPDPETPLKPRKVCFSEKVTVHFLAVWAGP--AQANRRGPWEQLARDRSRFARRIAQAQEVLGPCLTPAARARAWA-	360
tr|A0A093BVK0|A0A093BVK0_TAUER	紅冠蕉鵑( Tauraco erythrolophus)	脊索動物門	----------RKKVTFLEKVTEYYIS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEEAIGYCFTTEHRQRVFD-	361
tr|Q4T9W6|Q4T9W6_TETNG	綠河豚( Tetraodon nigroviridis)	脊索動物門	---------GNSRVRFSPVVHVHVMRSWTFA--RQASRKGNWEEMARDRDRFQRRIREAEAQLGPCLSPAHRRKQDR-	362
tr|A0A099ZQY2|A0A099ZQY2_TINGU	白喉 ( Tinamus guttatus)	脊索動物門	--------SKRKKVTFLEKVTEYYIS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEDAIGYCLTIEHRQKVF--	363
tr|A0A2Y9DVH9|A0A2Y9DVH9_TRIMA	西印度海牛( Trichechus manatus latirostris)	脊索動物門	RDLDPGTPLKATKVRFSEKVSVHYLAVWAGP--ARAARRGPWEQLARDRNRFARRIACVQEELNPCLTPAARARAWA-	364
tr|L9JAZ8|L9JAZ8_TUPCH	北樹鼩( Tupaia chinensis)	脊索動物門	----------RKKVTFLEEVTEYYIS-------DDEDRKGPWEEFARDACRFQKRIQETEDAIGYCLTFEHREKMFN-	365
tr|L9J9G4|L9J9G4_TUPCH	北樹鼩	脊索動物門	WDPDPETPLKARKVRFSEKVTVHFLTVWAGP--AQAARRGPWEEFARDRSRFARRIAQAQEELGPYLTPAARARAWT-	366
tr|A0A2U3V9Z3|A0A2U3V9Z3_TURTR	寬吻海豚( Tursiops truncatus)	脊索動物門	-SGARHTHIQRKKVTFLEEVTEYYIS-------GDEDRKGPWEEFARDGCRFQKRIQETEDAIGYCLTFEHREKMFN-	367
tr|A0A093EKS1|A0A093EKS1_TYTAL	倉鴞( Tyto alba)	脊索動物門	-SGEKCRSTKRKKVTFLEKVTEYYIS-------SEEDRKGPWEELARDGCRFQKRIQETEEAIGYCFTTEHRQRVFN-	368
tr|A0A1L8FH50|A0A1L8FH50_XENLA	非洲爪蟾( Xenopus laevis)	脊索動物門	----------IKRVRFSPTVKVHHMVAWSYA--YRTARKGPWEEYARDRCRFQRRIAETEAAIGFCLDPQHREKIRA-	369
tr|A0A1L8FH48|A0A1L8FH48_XENLA	非洲爪蟾	脊索動物門	----------IKKVHFSPTVKVHHMVVWSYA--YRMARKGPWEEYARDRCRFQRRIAETDGVIRNFLEPQHREKIWT-	370
tr|Q5U232|Q5U232_XENLA	非洲爪蟾	脊索動物門	----------IKRVHFSPTVKVHHMVVWSYA--YRMARKGPWEEYARDRCRFQRRIAEAEGVIRNFLQPQHREKIWT-	371
tr|Q5U4R3|Q5U4R3_XENLA	非洲爪蟾	脊索動物門	-----------KKVHFSPTVKVHHM-----A--YRMARKGPWEEYARDRCRFQRRIAETDGVIRNFLEPQHREKIW--	372
tr|A0A1L8FNH1|A0A1L8FNH1_XENLA	非洲爪蟾	脊索動物門	----------IKHVRFSSSVTVHHMVVWSYA--HRMARRGSWEEYARDRCRFQKRIAETEAAIGLCMEPQHREKIWA-	373
tr|F7DWG0|F7DWG0_XENTR	熱帶爪蟾( Xenopus tropicalis)	脊索動物門	----------IKHVRFSPSVTVHHIVVWSYA--HRMARRGIWEEYARDRCRFQRRIAETEAAIGFCMEPPHRKKIWA-	374
tr|M4AD25|M4AD25_XIPMA	花斑劍尾魚( Xiphophorus maculatus)	脊索動物門	----------QKKVQFSPLVQVH-----PFA--RQASRKGHWEELARDRDRFRRRIADTERAVGYCLSQPHREKMR--	375
tr|A7RH49|A7RH49_NEMVE	星狀海葵( Nematostella vectensis)	刺胞動物門(Cnidaria)	------AGTGTKKVKFCEEDDVHVMYTWDFA--YRAARRSEWCQCATDREHFKLRINQTEQLLKPVLLD---------	376
tr|A0A2B4SRF3|A0A2B4SRF3_STYPI	萼柱珊瑚( Stylophora pistillata)	刺胞動物門	------GNKKKKRVCFKPDTVIHPMIVWSFA--YKQARKGTWEMEALDRLRFQKRIRDLDEILTPVLLA---------	377
tr|A0A2V2PBT9|A0A2V2PBT9_ENTFC	屎腸球菌( Enterococcus faecium)	厚壁菌門(Firmicutes)	------QNIQQKKVRFSDEVTVCPLVDWPQA--SSDARDGSWMAMARDRDRFSRRVED--------------------	378
tr|A0A0B7BHB3|A0A0B7BHB3_9EUPU	普通蛞蝓( Arion vulgaris)	軟體動物門(Mollusca)	-----------IKVHFASEPTVH------IV--GTEERGGI-SHYALDRERFERRILESEQIISPVLDADHRAKILE-	379
tr|A0A2C9KDJ8|A0A2C9KDJ8_BIOGL	光滑雙臍螺( Biomphalaria glabrata)	軟體動物門	----------LIKVRFAAEPEVY------LV--GTEDRCGTWQHYALDRERFGRRIQEISNIVSPILEQKHRAKIC--	380
tr|V4A4E2|V4A4E2_LOTGI	貓頭鷹帽貝( Lottia gigantea)	軟體動物門	------KSKTQKKVRFEEGTTVYQMVAWSFA--YRASRKGPWEQYARDRERFQRKIRDLEEVLSQILIDSHRSKIF--	381
tr|A0A210Q4Q9|A0A210Q4Q9_MIZYE	蝦夷盤扇貝( Mizuhopecten yessoensis)	軟體動物門	-------KKSKSKVTFAEGDTVYDL--------DDEDRKSHWEECVRDRERFQRRITEVGEIMKPVLSMERRDRIY--	382
tr|A0A210Q4Q8|A0A210Q4Q8_MIZYE	蝦夷盤扇貝	軟體動物門	-----QREKSKSKVTFAQLCTVYDL--------DDEDRKSHWEECVRDRERFQRRITEVGEIMKPVLSMER-------	383
tr|A0A0L8HX49|A0A0L8HX49_OCTBM	加州雙斑章魚( Octopus bimaculoides)	軟體動物門	------VHHKTSKVRFAADETKHFMLVWSFA--YQAARKGEWVQIHIDSERFRCRIENTEQVLKPILDPSHRLKILA-	384
sp|P0C754|DP71L_ASFK5	非洲豬瘟病毒(分離株Pig/Kenya/KEN-50/1950)	NA	----------------------------E-A--DDIDRKGPWEQAAVDRLRFQRRITDTEEILSTVFL----------	385
tr|A9JM96|A9JM96_ASFPP	非洲豬瘟病毒(分離株Pig/Portugal/OURT88/ 1988)	NA	------------DTKHVRFAAA--VEVWE-A--DDIERKGPWEQVAVDRFRFQRRIASVEELLSTVLLRQKKLLEQQ-	386
sp|P0C755|DP71L_ASFM2	非洲豬瘟病毒(分離株Tick/Malawi/Lil 20-1/1983)	NA	---------------------------------DDIDRKGPWEQAAVDRLRFQRRIADTEKILSAVLL----------	387
sp|P0C756|DP71L_ASFP4	非洲豬瘟病毒(分離株Tick/South Africa/Pretoriuskop Pr4/1996)	NA	-MGGRRRKKRTNDVKHVRFAAA--VEVWE-A--DDIERKGPWEQAAVDRFRFQRRIASVEELLSAVLLRQKKLLEQQ-	388
sp|P0C753|DP71L_ASFWA	非洲豬瘟病毒(分離株Warthog/Namibia/Wart80/1980)	NA	------------DVKHVRFAAA--VEVWE-A--DDIERKGPWEQAAVDRFRFQRRIASVEELLSAVLLR---------	389
tr|Q8B591|Q8B591_GVCF	雲杉卷葉蛾顆粒體病毒(Choristoneura fumiferana granulovirus)	NA	---------DKKIVTFIENSKILVMRVWLFA--ARQSRVGHWQNYAIDRERFKTRIARVAKKISWIFESRHRIKIN--	390
tr|A0A0K0WS63|A0A0K0WS63_9BBAC	分月扇舟蛾顆粒體病毒B (Clostera anastomosis granulovirus B)	NA	---------CRRRVTFSDKNQIFIMWVWLYA--ANKARSIYWEKCAADRVRFQKRIKEVGTKIEWVLSDSHRSSMY--	391
tr|A0A097DAN4|A0A097DAN4_9BBAC	木薯天蛾顆粒體病毒(Erinnyis ello granulovirus)	NA	---------KNKRVSFNPNTRTYIMWVWLYA--AKKARSNYWEQCAVDRARFHRRIKEVGLKISWVLSNEHRSKI---	392
tr|A0A288WJ04|A0A288WJ04_9BBAC	木薯天蛾顆粒體病毒	NA	---------KNKRVSFNPNTRTY-----LYA--AKKARSNYWEQCAVDRARFQRRIKEVGLKISWVLSNEHRSKI---	393
tr|B0YLU8|B0YLU8_GHVS	舌蠅肥大唾腺炎病毒(Glossina hytrovirus) (分離株Glossina pallidipes/Ethiopia/ Seibersdorf/-)	NA	------KAENNKKVRFDPAPPVHKIIAWDFA--YRAARKGEWEIIVRDRARFKTRITRTENKIKHILDPEYRNKIY--	394
tr|A0A2G9P657|A0A2G9P657_LITCT	美洲牛蛙(Lithobates catesbeiana)	NA	----------VKKVRFSSNVTVHRMVTWSYA--YRMSRKGPWEEYARDHCRFQKRIAEAEAAIGFCLQPDHREKIWA-	395
tr|E0VSW1|E0VSW1_PEDHC	體虱亞種	NA	---DDVKSKSSKKVKFNNNVKVNKIIAWDHA--YRNARLGPWEQMARDRVRFHERISRLSDVISPILGDKHRRKI---	396
tr|A0A2S1KM50|A0A2S1KM50_ASF	非洲豬瘟病毒	核胞病毒門(Nucleocytoviricota)	-------------AKHVRFAAA--VEVWE-A--DDIERKGPWEQVAVDRFRFQRRIASVEELLSAVLLRQ--------	397
tr|A0A2S1KM30|A0A2S1KM30_ASF	非洲豬瘟病毒	核胞病毒門	-------------AKHVHFATA--VEVWE-A--DDIERKGPWEQVAVDRFRFQRRIASVEELLTAVLLRQ--------	398
tr|Q76SC7|Q76SC7_ASF	非洲豬瘟病毒	核胞病毒門	------------DTKHVRFAAA--VEVWE-A--DDIERKGPWEQVAVDRFRFQRRIASVEELLSTVLLR---------	399
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tr|P90496|P90496_ASF	非洲豬瘟病毒	核胞病毒門	------------DAKHVRFAAA--VEVWE-A--DDIERKGPWEQVAVDRFRFQRRIASVEELLSAMLLR---------	401
tr|A0A1C6ZY93|A0A1C6ZY93_ASF	非洲豬瘟病毒	核胞病毒門	--------KRTNDTKHVRFAAA--VEVWE-A--DDIERKGPWEQVAVDRFRFQRRIASVEELLSTVLLRQ--------	402
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tr|A0A0C5AZK7|A0A0C5AZK7_ASF	非洲豬瘟病毒	核胞病毒門	----------------------------E-A--DDIDRKGPWEQAAADRLRFQRRIANAEEILSVALL----------	405
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tr|A0A2S1KM46|A0A2S1KM46_ASF	非洲豬瘟病毒	核胞病毒門	----------------VHFAIL--VDLRE-A--DDIDRKGPWEQAAVDRLRFQRRITDTEEILSAVFLRKK-------	409
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tr|Q9EML3|Q9EML3_AMEPV	桑燈蛾昆蟲痘病毒	核胞病毒門	------KHKPSKKVRFSSEPKLHIMYVWLYA--AKQTRKLYWDKFAIDRHRFKRRINDIDISISWVLTPHHRHKIM--	412
tr|W8QF34|W8QF34_9VIRU	微小按蚊虹彩病毒(Anopheles minimus irodovirus)	核胞病毒門	---------PRQKIRFSQKIIII------FV--DKEDRRGPWEMLARDRDRFHHRIQNINNEIGWIFSPTHRTKI---	413
tr|Q6VZB6|Q6VZB6_CNPV	金絲雀痘病毒(Canarypox virus)	核胞病毒門	------------VVTFSETIIEYHVP--------YEDRKGPWEEIARDRYRFEKRIKETAEIIEFCLSENHRRNI---	414
tr|W8W1F7|W8W1F7_9VIRU	無脊椎動物虹彩病毒22	核胞病毒門	----------KHKVTFAPKPIIIFI--------EIEDRKGPWETYALDRYRFNCRIKDVESKIGWCLGSNHRKNILI-	415
tr|W8W278|W8W278_9VIRU	無脊椎動物虹彩病毒30	核胞病毒門	-------KNSKHKVTFASKPIIIFI--------EIEDRKGPWETYALDRYRFHRRIKDVESKIGWCLGSNHRKNIF--	416
tr|S6DF93|S6DF93_9VIRU	無脊椎動物虹彩病毒22	核胞病毒門	-------IKCKHKVTFAPKPIIIFI--------EIEDRKGPWETYALDRYRFNCRIKDVESKIGWCLGSDHRKNIL--	417
tr|W8W243|W8W243_9VIRU	無脊椎動物虹彩病毒25	核胞病毒門	--------KCFRKVTFALRPMII------IIE-DDEDRKGPWEILAVDRDRFNRRILNVESQIGWCFGEKHRENIF--	418
tr|A0A1V0QGI8|A0A1V0QGI8_CNPV	剪水鸌痘病毒(Shearwaterpox virus)	核胞病毒門	---------KKSVVTFSETIIEYHVP--------YEDRKGPWEEIARDRYRFEKRIKETAEMIEFCLSENHRRNI---	419
tr|A0A1V0S876|A0A1V0S876_CNPV	剪水鸌痘病毒	核胞病毒門	---------SSITVKFNEKVTVYYVP--------YEDRKGPWEEFARDRYRFKKRINETGEIIERCLTESHRQ-----	420
tr|A0A2N9QUY5|A0A2N9QUY5_9VIRU	粉紋夜蛾囊泡病毒6b (Trichoplusia ni ascovirus 6b)	核胞病毒門	---------LLKRVKFSDQPHIHIMWVWSFA--ARQARVGEWDRYAINRDRFRRRIAEVDSAVSWILNPVHRSKIM--	421
tr|G0T5C9|G0T5C9_IRV9	維塞納虹彩病毒(Wiseana iridescent virus)	核胞病毒門	-----------RKVKFTLMPTII------IIEDDDEDRKGPWEIFAVDRDRFNRRILNVESQIGWCFQPKHRENIF--	422
tr|K9MHD6|K9MHD6_9ALPH	黑猩猩疱疹病毒菌株105640	衣殼病毒門(Peploviricota)	---------PPRKVCFSPRVRVRHLVAWETA--ARLARRGTWARERADRDRFRRRVAAAEAVIGPCLEPEARARAR--	423
tr|A0A060Q1X2|A0A060Q1X2_9ALPH	果蝠α疱疹病毒1型	衣殼病毒門	-----DSPASTARVRFSPSVR--ILVTWQVA--ARQARRGSWAHHQADRARFRRRVAEAEAALGPILCAEARERARA-	424
tr|G8H8Q0|G8H8Q0_HHV1	人類疱疹病毒1型	衣殼病毒門	-----AXXXXPGGVRFSPHVR--HLVVWAXX--XXXXXXXSWARERADRARFGRRVAEAEAVIGPCLGPEARARALA-	425
tr|A0A0F7GW96|A0A0F7GW96_HHV1	人類疱疹病毒1型	衣殼病毒門	-----ATPATPARVRFSPHVR--HLVVWASA--ARLXXXXXXXXXXADRARFRRRVAEAEAVTRPSLGPEARARALA-	426
tr|A0A0F7GU37|A0A0F7GU37_HHV1	人類疱疹病毒1型	衣殼病毒門	-----XTPATPARVRFSPHVR--HLVVWASA--ARXXXRGSWARERADRARVPRRGAEAEAVIGPCPGPEARARALA-	427
tr|A0A193GT91|A0A193GT91_HHV1	人類疱疹病毒1型	衣殼病毒門	-----ATPATPATPATPXXXXXXXXXXXXXX--XXXXXRGSWARERADRARFRRRVAEAEAVIGPCLGPEARARALA-	428
tr|A0A0F7GVQ8|A0A0F7GVQ8_HHV1	人類疱疹病毒1型	衣殼病毒門	-----------ARVRFSPHVR--------SA--ARLARRGSWARKRADRARFRRRVAEAEAVIGPGLGPEARARAL--	429
tr|A0A0F7GTV6|A0A0F7GTV6_HHV1	人類疱疹病毒1型	衣殼病毒門	-----XTPATPARVRFSPHVR--HLVVWASA--ARLARRGSWARGRADRAPCRRRGAEAEAVIGPCLGPEARARALA-	430
tr|A0A0F7GUX7|A0A0F7GUX7_HHV1	人類疱疹病毒1型	衣殼病毒門	-----ATPATPARVASPRPAR--HLVVWASA--ARLARRGSWARERADRARFRRRVAEAEAVIGPCLGPEARARALA-	431
tr|A0A2U9AA93|A0A2U9AA93_HHV1	人類疱疹病毒1型	衣殼病毒門	-----------ARVRFSPHVRVRH------A--ARLARRGSWARERADRARFRRRVAEAEAVIGPCLGPE--------	432
tr|A0A0F7GS11|A0A0F7GS11_HHV1	人類疱疹病毒1型	衣殼病毒門	----------PARVRFSPLVV------WPPP--ARLARRGSWARERADRARFRRRVAEAEAVIGPCLGP---------	433
tr|D3YPC3|D3YPC3_HHV1	人類疱疹病毒1型	衣殼病毒門	-----------ARVRFSPHVRVRHL-----A--ARLARRGSWARERADRARFRRRVAEAEAVIGPCLGPEARARAL--	434
tr|A0A1C3J794|A0A1C3J794_HHV1	人類疱疹病毒1型	衣殼病毒門	-----------ARVRFSPHVV------WASA--ARLARRGSWARERADRARFRRRVAEAEAVIGPCLGP---------	435
tr|A0A0X8EA43|A0A0X8EA43_HHV1	人類疱疹病毒1型	衣殼病毒門	---GPATPATPARVRFSPHVRVRHLVVWASA--ARLARRGSWARERADRARFRRRVAEAEAVIGPCLGPEARARALA-	436
tr|H9E905|H9E905_HHV1	人類疱疹病毒1型	衣殼病毒門	------------RVRFSPHVR------WASA--ARLARRGSWARERADRARFRRRVAEAEAVIGPCLGPE--------	437
tr|A0A181ZG78|A0A181ZG78_HHV11	人類疱疹病毒1型(菌株17)	衣殼病毒門	-----KPPKTPARVRFSPHVR--HLVVWASA--ARLARRGSWARERADRARFRRRVAEAEAVIGPCLGPQARARALA-	438
sp|P37319|ICP34_HHV1N	人類疱疹病毒1型(菌株MGH-10)	衣殼病毒門	----------PARVRFSPLVV------WASA--ARLARRGSWARERADRARFRRRVAEAEAVIGPCLGP---------	439
tr|G9I220|G9I220_HHV2	人類疱疹病毒2型	衣殼病毒門	----------RGKVCFSP--LVA----WETA--ARLARRGSWARERADRDRFRRRVAAAEAVIGPCLEP---------	440
tr|A0A290Y4M3|A0A290Y4M3_HHV2	人類疱疹病毒2型	衣殼病毒門	-----------GKVCFSP--RVQ------TA--ARLARRGSWARERADRDRFRRRVAAAEAVIGPCLEPEARARAR--	441
sp|P28283|ICP34_HHV2H	人類疱疹病毒2型(菌株HG52)	衣殼病毒門	-----AADAPRGKVCFSP--RVQHLVAWETA--ARLARRGSWARERADRDRFRRRVAAAEAVIGPCLEPEARARARA-	442
tr|A0A0Y0A6B1|A0A0Y0A6B1_9ALPH	袋鼠α疱疹病毒1型	衣殼病毒門	-----------SIVRFATTVRVHPLVVWNTA--ARLARRGSWEHHLADRMRFDRRVRELEVLLGPSLQPHIRA-----	443
tr|Q91CH8|Q91CH8_9ALPH	袋鼠α疱疹病毒1型	衣殼病毒門	------------IVRFATTVRVHPL-----A--ARLARRGSWEPPLADRMRFDRRVRELEVLLGPSLQPHIRACV---	444
tr|E2IUH1|E2IUH1_SHV1	猿猴疱疹病毒1型(菌株MV-5-4-PSL)	衣殼病毒門	--PDIDPRGKHRVVRFSDTVRVHRLVVWESA--ARQARRGTWLQDSADRARFQRRITEAEATIGSCLTLEARAKAWA-	445
tr|B3SBK1|B3SBK1_TRIAD	黏絲盤蟲(Trichoplax adhaerens)	扁盤動物門(Placozoa)	---DSSSPSRPTRVHFKPGKEVHLMVTWNFA--YRAARKATWCQYRIDHIRFLNRIKKVEEAIRYVFQPQHREKML--	446
tr|A0A1X7U8I0|A0A1X7U8I0_AMPQE	昆士蘭大堡礁海綿(Amphimedon queenslandica)	海綿動物門(Porifera)	------QPSSCKRVQFKPEPQVHHMVTWRYA--YRTARKGHWEQLGLDRDRFQKRIETIGKAIGPCLLK---------	447

eIF2α 磷酸化之組成性抑制因子 ( CReP )

在一些實施例中，根據本發明之ISR抑制劑係由以下組成、基本上由以下組成或包含以下：eIF2α磷酸化之組成性抑制因子(CReP)蛋白(亦稱為蛋白質磷酸酶1調節次單元15B；PPP1R15B)。在一些實施例中，根據本發明之ISR抑制劑係由CReP與DP71L之嵌合體組成、基本上由CReP與DP71L之嵌合體組成或包含CReP與DP71L之嵌合體。在一些實施例中，CReP與DP71L之嵌合體包含衍生自CReP之PP1及/或eIF2結合域，及衍生自DP71L之互連肽連接序列。在一些實施例中，ISR抑制劑係由胺基酸序列組成、基本上由胺基酸序列組成或包含胺基酸序列，或由聚核苷酸序列編碼，該胺基酸序列或聚核苷酸序列與SEQ ID NO: 1至6具有至少或恰好約75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100% (或其中任何可導出之範圍)之一致性。 SEQ ID NO: 1 - CReP 胺基酸序列 SEQ ID NO: 2 - CReP 聚核苷酸序列 SEQ ID NO: 3 - 例示性嵌合 CReP 聚核苷酸序列 SEQ ID NO: 4 - 例示性嵌合 CReP 蛋白胺基酸序列 SEQ ID NO: 5 - 例示性 Δ CReP 蛋白聚核苷酸編碼序列 SEQ ID NO: 6 - 例示性 Δ CReP 蛋白胺基酸序列 蛋白質磷酸酶 1 調節次單元 15A ( GADD34 )

在一些實施例中，根據本發明之ISR抑制劑係由蛋白質磷酸酶1調節次單位15A (GADD34)蛋白組成、基本上由蛋白質磷酸酶1調節次單位15A (GADD34)蛋白組成或包含蛋白質磷酸酶1調節次單位15A (GADD34)蛋白。在一些實施例中，ISR抑制劑係由胺基酸序列組成、基本上由胺基酸序列組成或包含胺基酸序列，或由聚核苷酸序列編碼，該胺基酸序列或聚核苷酸序列與SEQ ID NO: 7至8具有至少或恰好約75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100% (或其中任何可導出之範圍)之一致性。 SEQ ID NO: 7 - GADD34 胺基酸序列 SEQ ID NO: 8 - GADD34 聚核苷酸序列 單純疱疹病毒衍生之蛋白質 γ34 . 5

在一些實施例中，根據本發明之ISR抑制劑係由單純疱疹病毒衍生之γ34.5蛋白組成、基本上由單純疱疹病毒衍生之γ34.5蛋白組成或包含單純疱疹病毒衍生之γ34.5蛋白。在一些實施例中，ISR抑制劑係由胺基酸序列組成、基本上由胺基酸序列組成或包含胺基酸序列，或由聚核苷酸序列編碼，該胺基酸序列或聚核苷酸序列與SEQ ID NO: 9至10具有至少或恰好約75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100% (或其中任何可導出之範圍)之一致性。 SEQ ID NO: 9 - γ 34.5 胺基酸序列 SEQ ID NO: 10 - γ34.5 聚核苷酸序列 金絲雀痘病毒衍生之蛋白質 CNPV231

在一些實施例中，根據本發明之ISR抑制劑係由以下組成、基本上由以下組成或包含以下：金絲雀痘病毒衍生之CNPV231蛋白(MyD116樣蛋白；寄存編號Q6VZB6)。在一些實施例中，ISR抑制劑係由胺基酸序列組成、基本上由胺基酸序列組成或包含胺基酸序列，或由聚核苷酸序列編碼，該胺基酸序列或聚核苷酸序列與SEQ ID NO: 11至12具有至少或恰好約75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100% (或其中任何可導出之範圍)之一致性。 SEQ ID NO: 11 - CNPV231 胺基酸序列 SEQ ID NO: 12 - CNPV231 聚核苷酸序列 袋鼠疱疹病毒衍生之蛋白質 ICP34 . 5

在一些實施例中，根據本發明之ISR抑制劑係由袋鼠疱疹病毒衍生之ICP34.5蛋白組成、基本上由袋鼠疱疹病毒衍生之ICP34.5蛋白組成或包含袋鼠疱疹病毒衍生之ICP34.5蛋白。在一些實施例中，ISR抑制劑係由胺基酸序列組成、基本上由胺基酸序列組成或包含胺基酸序列，或由聚核苷酸序列編碼，該胺基酸序列或聚核苷酸序列與SEQ ID NO: 13至14具有至少或恰好約75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100% (或其中任何可導出之範圍)之一致性。 SEQ ID NO: 13 - ICP34.5 胺基酸序列 SEQ ID NO: 14 - ICP34.5 聚核苷酸序列 桑燈蛾昆蟲痘病毒「 L 」衍生之蛋白質 AmEPV193

在一些實施例中，根據本發明之ISR抑制劑係由以下組成、基本上由以下組成或包含以下：桑燈蛾昆蟲痘病毒「L」衍生之AmEPV193蛋白(寄存編號Q9EML3)。在一些實施例中，ISR抑制劑係由胺基酸序列組成、基本上由胺基酸序列組成或包含胺基酸序列，或由聚核苷酸序列編碼，該胺基酸序列或聚核苷酸序列與SEQ ID NO: 15至16具有至少或恰好約75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100% (或其中任何可導出之範圍)之一致性。 SEQ ID NO: 15 - AmEPV193 胺基酸序列 SEQ ID NO: 16 - AmEPV193 聚核苷酸序列 非洲豬瘟病毒衍生之蛋白質 DP71L

在一些實施例中，根據本發明之ISR抑制劑係由非洲豬瘟病毒衍生之DP71L蛋白組成、基本上由非洲豬瘟病毒衍生之DP71L蛋白組成或包含非洲豬瘟病毒衍生之DP71L蛋白。在一些實施例中，DP71L蛋白為長形式蛋白質，而替代地，在一些實施例中，DP71L蛋白為短形式蛋白質。一般而言，如本文中所使用，DP71L係參考短形式蛋白質(例如，如由SEQ ID NO: 18表示)，然而，在一些實施例中，可使用略微較長或較短之蛋白質同功型(例如，相對於SEQ ID NO: 18，額外包含，或缺失1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個胺基酸之蛋白質同功型)。在一些實施例中，根據本發明之ISR抑制劑為嵌合蛋白(例如，包含衍生自兩種或更多種蛋白質之域的合成蛋白)，該嵌合蛋白包含安置於PP1結合域與eIF2結合域之間的衍生自DP71L之肽連接序列。在一些實施例中，衍生自DP71L之肽連接序列包含8、9、10、11或12個胺基酸。在一些實施例中，衍生自DP71L之肽連接序列增強ISR抑制劑結合至PP1之能力。在一些實施例中，衍生自DP71L之肽連接序列包含一或多個麩胺酸，其可影響PP1結合域之蛋白質間或蛋白質內結合動力學。在一些實施例中，一或多個麩胺酸為DP71L蛋白之麩胺酸E12 (例如在序列「MDVKHVRFAAAV EVWEADDI」(SEQ ID NO: 17)中帶下劃線之麩胺酸，其為SEQ ID NO: 18中發現之E12麩胺酸(例如，當不包括N端甲硫胺酸時的第12個胺基酸，或當包括N端甲硫胺酸時的第13個胺基酸))。在一些實施例中，衍生自DP71L之連接序列係由以下組成、基本上由以下組成或包含以下：與SEQ ID NO: 20至21具有至少或恰好約55%、64%、73%、82%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100% (或其中任何可導出之範圍)一致性之聚核苷酸序列及/或胺基酸序列。在一些實施例中，ISR抑制劑係由胺基酸序列組成、基本上由胺基酸序列組成或包含胺基酸序列，或由聚核苷酸序列編碼，該胺基酸序列或聚核苷酸序列與SEQ ID NO: 18至19具有至少或恰好約75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100% (或其中任何可導出之範圍)之一致性。 SEQ ID NO: 18 - DP71L 胺基酸序列 SEQ ID NO: 19 - DP71L 聚核苷酸序列 SEQ ID NO: 20 -DP71L 衍生之肽連接子聚核苷酸編碼序列 SEQ ID NO: 21 -DP71L 衍生之肽連接子胺基酸序列

在一些實施例中，蛋白質之胺基酸次單元經修飾以產生等效或甚至改良之第二代變異體多肽或肽。. 舉例而言，在與結構(諸如受質分子上之抗體或結合部位的抗原結合區)之相互作用結合力顯著損失或未顯著損失之情況下，某些胺基酸可經蛋白質或多肽序列中之其他胺基酸取代。由於蛋白質之相互作用能力及性質定義蛋白質之功能活性，因而可在蛋白質序列中且在其對應DNA編碼序列中進行某些胺基酸取代，且仍然產生具有類似或所需特性之蛋白質。因此，經本發明人考慮，可在不顯著損失蛋白質生物效用或活性之情況下，在編碼蛋白質之基因的DNA序列中進行各種改變。

術語「在功能上等效之密碼子」在本文中用於指代編碼相同胺基酸之密碼子，諸如精胺酸之六個不同密碼子。亦考慮「中性取代」或「中性突變」，其係指編碼生物學上等效之胺基酸的一或多個密碼子之變化。

本發明之胺基酸序列變異體可為取代型、插入型或缺失型變異體。與野生型相比，本發明之多肽中之變化可影響蛋白質或多肽之1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50個或更多個非連續或連續胺基酸。變異體可包含胺基酸序列，該胺基酸序列與本文中所提供或參考之任何序列至少或恰好約50%、60%、70%、80%或90% (包括其間之所有值及範圍)一致。變異體可包括2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個或更多個取代胺基酸。

亦將理解，胺基酸及核酸序列可分別包括其他殘基，諸如其他N端或C端胺基酸，或5'或3'序列，且仍與本文中所揭示之序列中之一者中所闡述基本上一致，只要序列符合上文所闡述之準則即可，包括保持與蛋白質表現有關之生物學蛋白質活性。末端序列之添加尤其適用於可能例如包括各種非編碼序列之核酸序列，該等非編碼序列側接編碼區之5'或3'部分中之任一者。

缺失變異體通常缺乏天然或野生型蛋白質之一或多個殘基。可缺失個別殘基或可缺失多個連續胺基酸。可將終止密碼子引入(藉由取代或插入)至編碼核酸序列中以產生經截短之蛋白質。

插入型突變體通常涉及在多肽中之非封端點處添加胺基酸殘基。此可包括插入一或多個胺基酸殘基。亦可產生末端添加物且可包括融合蛋白，該等融合蛋白為本文中描述或參考之一或多種肽或多肽的多聚體或串聯體。

取代型變異體通常含有在蛋白質或多肽內之一或多個部位處一個胺基酸更換成另一胺基酸，且可經設計以在損失或不損失其他功能或特性之情況下調節多肽之一或多種特性。取代可為保守性的，亦即一個胺基酸由具有類似化學特性之胺基酸置換。「保守性胺基酸取代」可涉及一種胺基酸類別之成員由相同類別之另一成員更換。保守性取代在此項技術中為熟知的且包括例如以下變化：丙胺酸變成絲胺酸；精胺酸變成離胺酸；天冬醯胺變成麩醯胺酸或組胺酸；天冬胺酸變成麩胺酸；半胱胺酸變成絲胺酸；麩醯胺酸變成天冬醯胺；麩胺酸變成天冬胺酸；甘胺酸變成脯胺酸；組胺酸變成天冬醯胺或麩醯胺酸；異白胺酸變成白胺酸或纈胺酸；白胺酸變成纈胺酸或異白胺酸；離胺酸變成精胺酸；甲硫胺酸變成白胺酸或異白胺酸；苯丙胺酸變成酪胺酸、白胺酸或甲硫胺酸；絲胺酸變成蘇胺酸；蘇胺酸變成絲胺酸；色胺酸變成酪胺酸；酪胺酸變成色胺酸或苯丙胺酸；及纈胺酸變成異白胺酸或白胺酸。保守性胺基酸取代可涵蓋非天然存在之胺基酸殘基，其通常藉由化學肽合成而非藉由生物系統中之合成來併入。此等胺基酸殘基包括肽模擬物或胺基酸部分之其他逆轉或反轉形式。

或者，取代可為「非保守性的」，從而影響多肽之功能或活性。非保守性變化通常涉及用化學上相異之胺基酸殘基取代胺基酸殘基，諸如用極性或帶電胺基酸取代非極性或不帶電胺基酸，且反之亦然。非保守性取代可能涉及將胺基酸類別中之一者的成員更換成來自另一類別之成員。 III. 載體

除其他之外，本發明提供，在一些實施例中，經本文中所描述之ISR抑制劑係由聚核苷酸，諸如包含聚核苷酸(例如聚核苷酸構築體)之載體編碼。包含根據本發明之聚核苷酸構築體之載體包括此項技術中已知的所有載體，包括併入聚核苷酸之黏質體、質體(例如裸的或含於脂質體中)及病毒構築體(例如慢病毒、逆轉錄病毒、腺病毒及腺相關病毒構築體)，該聚核苷酸包含ISR基因之抑制劑或其特徵部分(例如，如本文中所使用，「其特徵部分」係指執行所需功能(例如其包含抑制ISR之能力)所必需之該蛋白質之部分，例如該部分包含功能性PP1結合域及eIF2結合域)。熟習此項技術者將能夠選擇適合之構築體以及細胞來製造本文中所描述之聚核苷酸中之任一者。在一些實施例中，構築體為質體(亦即，可在細胞內部自主複製之環狀DNA分子)。在一些實施例中，構築體可為黏質體(例如，pWE或sCos系列)。

在一些實施例中，構築體為病毒構築體。在一些實施例中，病毒構築體為慢病毒、逆轉錄病毒、腺病毒或腺相關病毒構築體。在一些實施例中，構築體為腺相關病毒(AAV)構築體(參見例如Asokan等人, Mol. Ther. 20: 699-7080, 2012，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，病毒構築體為腺病毒構築體。在一些實施例中，病毒構築體亦可基於或衍生自α病毒。α病毒包括(但不限於)辛德比(Sindbis) (及VEEV)病毒、奧拉病毒(Aura virus)、巴班基病毒(Babanki virus)、巴馬森林病毒(Barmah Forest virus)、比巴魯病毒(Bebaru virus)、卡巴斯歐病毒(Cabassou virus)、屈公病毒(Chikungunya virus)、東部馬腦炎病毒(Eastern equine encephalitis virus)、沼澤地病毒(Everglades virus)、摩根堡病毒(Fort Morgan virus)、蓋塔病毒(Getah virus)、高原J病毒(Highlands J virus)、克孜拉加奇病毒(Kyzylagach virus)、馬雅羅病毒(Mayaro virus)、Me Tri病毒(Me Tri virus)、米德爾堡病毒(Middelburg virus)、莫索達斯佩德拉斯病毒(Mosso das Pedras virus)、穆坎布病毒(Mucambo virus)、恩杜穆病毒(Ndumu virus)、奧尼永-尼永病毒(O'nyong-nyong virus)、皮春納病毒(Pixuna virus)、尼格羅河病毒(Rio Negro virus)、羅斯河病毒(Ross River virus)、鮭魚胰臟疾病病毒(Salmon pancreas disease virus)、勝利基森林病毒(Semliki Forest virus)、南象海豹病毒(Southern elephant seal virus)、圖那特病毒(Tonate virus)、特羅卡拉病毒(Trocara virus)、烏納病毒(Una virus)、委內瑞拉馬腦炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus)、西部馬腦炎病毒(Western equine encephalitis virus)及瓦塔羅阿病毒(Whataroa virus)。通常，此類病毒之基因體編碼可在宿主細胞之細胞質中轉譯之非結構蛋白(例如複製子)及結構蛋白(例如衣殼及包膜)。羅斯河病毒、辛德比病毒、勝利基森林病毒(SFV)及委內瑞拉馬腦炎病毒(VEEV)已全部用於開發用於編碼序列遞送之病毒構築體。假型化病毒可藉由將α病毒包膜醣蛋白與逆轉錄病毒衣殼組合來形成。α病毒構築體之實例可見於美國公開案第20150050243號、第20090305344號及第20060177819號中；構築體及其製造方法出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中。

在一些實施例中，本文中所提供之構築體可具有不同尺寸。在一些實施例中，構築體為質體且可包括全長多至約1 kb、多至約2 kb、多至約3 kb、多至約4 kb、多至約5 kb、多至約6 kb、多至約7 kb、多至約8 kb、多至約9 kb、多至約10 kb、多至約11 kb、多至約12 kb、多至約13 kb、多至約14 kb，或多至約15 kb。在一些實施例中，構築體為質體且可具有全長在約1 kb至約2 kb、約1 kb至約3 kb、約1 kb至約4 kb、約1 kb至約5 kb、約1 kb至約6 kb、約1 kb至約7 kb、約1 kb至約8 kb、約1 kb至約9 kb、約1 kb至約10 kb、約1 kb至約11 kb、約1 kb至約12 kb、約1 kb至約13 kb、約1 kb至約14 kb，或約1 kb至約15 kb範圍內。

在一些實施例中，構築體為病毒構築體且可具有多至10 kb之總核苷酸數目。在一些實施例中，病毒構築體可具有總核苷酸數目在約1 kb至約2 kb、1 kb至約3 kb、約1 kb至約4 kb、約1 kb至約5 kb、約1 kb至約6 kb、約1 kb至約7 kb、約1 kb至約8 kb、約1 kb至約9 kb、約1 kb至約10 kb、約2 kb至約3 kb、約2 kb至約4 kb、約2 kb至約5 kb、約2 kb至約6 kb、約2 kb至約7 kb、約2 kb至約8 kb、約2 kb至約9 kb、約2 kb至約10 kb、約3 kb至約4 kb、約3 kb至約5 kb、約3 kb至約6 kb、約3 kb至約7 kb、約3 kb至約8 kb、約3 kb至約9 kb、約3 kb至約10 kb、約4 kb至約5 kb、約4 kb至約6 kb、約4 kb至約7 kb、約4 kb至約8 kb、約4 kb至約9 kb、約4 kb至約10 kb、約5 kb至約6 kb、約5 kb至約7 kb、約5 kb至約8 kb、約5 kb至約9 kb、約5 kb至約10 kb、約6 kb至約7 kb、約6 kb至約8 kb、約6 kb至約9 kb、約6 kb至約10 kb、約7 kb至約8 kb、約7 kb至約9 kb、約7 kb至約10 kb、約8 kb至約9 kb、約8 kb至約10 kb，或約9 kb至約10 kb範圍內。

在一些實施例中，構築體為慢病毒構築體且可具有多至8 kb之總核苷酸數目。在一些實例中，慢病毒構築體可具有總核苷酸數目約1 kb至約2 kb、約1 kb至約3 kb、約1 kb至約4 kb、約1 kb至約5 kb、約1 kb至約6 kb、約1 kb至約7 kb、約1 kb至約8 kb、約2 kb至約3 kb、約2 kb至約4 kb、約2 kb至約5 kb、約2 kb至約6 kb、約2 kb至約7 kb、約2 kb至約8 kb、約3 kb至約4 kb、約3 kb至約5 kb、約3 kb至約6 kb、約3 kb至約7 kb、約3 kb至約8 kb、約4 kb至約5 kb、約4 kb至約6 kb、約4 kb至約7 kb、約4 kb至約8 kb、約5 kb至約6 kb、約5 kb至約7 kb、約5 kb至約8 kb、約6 kb至約8 kb、約6 kb至約7 kb，或約7 kb至約8 kb。

在一些實施例中，構築體為腺病毒構築體且可具有至多8 kb之總核苷酸數目。在一些實例中，腺病毒構築體可具有在約1 kb至約2 kb、約1 kb至約3 kb、約1 kb至約4 kb、約1 kb至約5 kb、約1 kb至約6 kb、約1 kb至約7 kb、約1 kb至約8 kb、約2 kb至約3 kb、約2 kb至約4 kb、約2 kb至約5 kb、約2 kb至約6 kb、約2 kb至約7 kb、約2 kb至約8 kb、約3 kb至約4 kb、約3 kb至約5 kb、約3 kb至約6 kb、約3 kb至約7 kb、約3 kb至約8 kb、約4 kb至約5 kb、約4 kb至約6 kb、約4 kb至約7 kb、約4 kb至約8 kb、約5 kb至約6 kb、約5 kb至約7 kb、約5 kb至約8 kb、約6 kb至約7 kb、約6 kb至約8 kb，或約7 kb至約8 kb範圍內之總核苷酸數目。

本文中所描述之構築體中之任一者可進一步包括控制序列，例如選自以下之群的控制序列：轉錄起始序列、轉錄終止序列、啟動子序列、強化子序列、RNA剪接序列、聚腺苷酸化(聚(A))序列、Kozak共有序列，及/或可容納轉錄前或轉錄後調節及/或控制元件之其他非轉譯區。在一些實施例中，啟動子可為天然啟動子、組成型啟動子、誘導型啟動子及/或組織特異性啟動子。本文描述控制序列之非限制性實例。 A. AAV 粒子

除其他之外，本發明提供AAV粒子，其包含編碼ISR抑制劑之聚核苷酸構築體，及AAV衣殼。在一些實施例中，AAV粒子可描述為具有血清型，其為對構築體菌株及衣殼菌株之描述。舉例而言，在一些實施例中，AAV粒子可描述為AAV2，其中粒子具有AAV2衣殼及包含特徵性AAV2反向末端重複序列(Inverted Terminal Repeat；ITR)之構築體。在一些實施例中，AAV粒子可描述為假型，其中衣殼及構築體衍生自不同AAV菌株，例如AAV2/9將指AAV粒子，其包含利用AAV2 ITR之構築體及AAV9衣殼。假型化AAV載體之其他實例包括(但不限於) AAV2/1、AAV2/2、AAV2/3、AAV2/4、AAV2/5、AAV2/6、AAV2/7、AAV2/8及AAV2/9。

在一些實施例中，根據本發明適合使用之AAV粒子可包含或衍生自任何天然或重組AAV血清型。在一些實施例中，根據本發明之AAV係選自天然血清型，諸如AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11及AAV12；或假型、嵌合體及其變異體。

如本文中所使用，當提及AAV載體或「嵌合AAV載體」時，術語「嵌合體」係指AAV載體，其包含含有來自至少兩種不同AAV血清型之VP1、VP2及VP3蛋白的衣殼；或替代地，其包含VP1、VP2及VP3蛋白，其至少一者包含來自另一AAV血清型之至少一部分。嵌合AAV載體之實例包括(但不限於) AAV-DJ、AAV-DJ/8、AAV2G9、AAV2i8、AAV2i8G9、AAV8G9及AAV9i1。

在一些實施例中，根據本發明之AAV血清型及/或假型係選自包含以下或由以下組成之群：AAV1、AAV2、AAV3、AAV 4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV106.1/hu.37、AAV114.3/hu.40、AAV127.2/hu.41、AAV127.5/hu.42、AAV128.1/hu.43、AAV128.3/hu.44、AAV130.4/hu.48、AAV145.1/hu.53、AAV145.5/hu.54、AAV145.6/hu.55、AAV16.12/hu.11、AAV16.3、AAV16.8/hu.10、AAV161.10/hu.60、AAV161.6/hu.61、AAV1-7/rh.48、AAV1-8/rh.49、AAV2i8、AAV2i8G9、AAV2-15/rh.62、AAV223.1、AAV223.2、AAV223.4、AAV223.5、AAV223.6、AAV223.7、AAV2-3/rh.61、AAV24.1、AAV2-4/rh.50、AAV2-5/rh.51、AAV2.5T、AAV27.3、AAV29.3/bb.1、AAV29.5/bb.2、AAV2G9、AAV3B、AAV3.1/hu.6、AAV3.1/hu.9、AAV3-11/rh.53、AAV3-3、AAV33.12/hu.17、AAV33.4/hu.15、AAV33.8/hu.16、AAV3-9/rh.52、AAV3a、AAV3b、AAV4-19/rh.55、AAV42.12、AAV42-10、AAV42-11、AAV42-12、AAV42-13、AAV42-15、AAV42-1b、AAV42-2、AAV42-3a、AAV42-3b、AAV42-4、AAV42-5a、AAV42-5b、AAV42-6b、AAV42-8、AAV42-aa、AAV43-1、AAV43-12、AAV43-20、AAV43-21、AAV43-23、AAV43-25、AAV43-5、AAV4-4、AAV44.1、AAV44.2、AAV44.5、AAV46.2/hu.28、AAV46.6/hu.29、AAV4-8/rh.64、AAV4-9/rh.54、AAV52.1/hu.20、AAV52/hu.19、AAV5-22/rh.58、AAV5-3/rh.57、AAV54.1/hu.21、AAV54.2/hu.22、AAV54.4R/hu.27、AAV54.5/hu.23、AAV54.7/hu.24、AAV58.2/hu.25、AAV6.1、AAV6.1.2、AAV6.2、AAV7m8、AAV7.2、AAV7.3/hu.7、AAV-8b、AAV8G9、AAV-8h、AAV9i1、AAV9.11、AAV9.13、AAV9.16、AAV9.24、AAV9.45、AAV9.47、AAV9.61、AAV9.68、AAV9.84、AAV9.9、AAVcy.2、AAVcy.3、AAVcy.4、AAVcy.5、AAVcy.5R1、AAVcy.5R2、AAVcy.5R3、AAVcy.5R4、AAVcy.6、AAVhu.1、AAVhu.2、AAVhu.3、AAVhu.4、AAVhu.5、AAVhu.6、AAVhu.7、AAVhu.8、AAVhu.9、AAVhu.10、AAVhu.11、AAVhu.12、AAVhu.13、AAVhu.14/9、AAVhu.15、AAVhu.16、AAVhu.17、AAVhu.18、AAVhu.19、AAVhu.20、AAVhu.21、AAVhu.22、AAVhu.23.2、AAVhu.24、AAVhu.25、AVhu.27、AAVhu.28、AAVhu.29、AAVhu.29R、AAVhu.31、AAVhu.32、AAVhu.34、AAVhu.35、AAVhu.37、AAVhu.39、AAVhu.40、AAVhu.41、AAVhu.42、AAVhu.43、AAVhu.44、AAVhu.44R1、AAVhu.44R2、AAVhu.44R3、AAVhu.45、AAVhu.46、AAVhu.47、AAVhu.48、AAVhu.48R1、AAVhu.48R2、AAVhu.48R3、AAVhu.49、AAVhu.51、AAVhu.52、AAVhu.53、AAVhu.54、AAVhu.55、AAVhu.56、AAVhu.57、AAVhu.58、AAVhu.60、AAVhu.61、AAVhu.63、AAVhu.64、AAVhu.66、AAVhu.67、AAVpi.1、AAVpi.2、AAVpi.3、AAVrh.2、AAVrh.2R、AAVrh.8、AAVrh.8R、AAVrh8R R533A突變體、AAVrh8R A586R突變體、AAVrh.10、AAVrh.12、AAVrh.13、AAVrh. 13R、AAVrh.14、AAVrh.17、AAVrh.18、AAVrh.19、AAVrh.20、AAVrh.21、AAVrh.22、AAVrh.23、AAVrh.24、AAVrh.25、AAVrh.31、AAVrh.32、AAVrh.33、AAVrh.34、AAVrh.35、AAVrh.36、AAVrh.37、AAVrh.37R2、AAVrh.38、AAVrh.39、AAVrh.40、AAVrh.43、AAVrh.44、AAVrh.45、AAVrh.46、AAVrh.47、AAVrh.48、AAVrh.48.1、AAVrh.48.1.2、AAVrh.48.2、AAVrh.49、AAVrh.50、AAVrh.51、AAVrh.52、AAVrh.53、AAVrh.54、AAVrh.55、AAVrh.56、AAVrh.57、AAVrh.58、AAVrh.59、AAVrh.60、AAVrh.61、AAVrh.62、AAVrh.64、AAVrh.64R1、AAVrh.64R2、AAVrh.65、AAVrh.67、AAVrh.68、AAVrh.69、AAVrh.70、AAVrh.72、AAVrh.73、AAVrh.74、AAV-PHP.B、AAVPHP.A、AAV-G2B-26、AAV-G2B-13、AAV-TH1 .1-32、AAVTH1.1-35、AAV-PHP.B2、AAV-PHP.B3、AAV-PHP.N/PHP.B-DGT、AAV-PHP.B-EST、AAV-PHP.B-GGT、AAV-PHP.BATP、AAV-PHP.B-ATT-T、AAV-PHP.B-DGT-T、AAV-PHP.B-GGT-T、AAV-PHP.B-SGS、AAV-PHP.B-AQP、AAV-PHP.B-QQP、AAV-PHP.B-SNP(3)、AAV-PHP.B-SNP、AAV-PHP.B-QGT、AAV-PHP.B-NQT、AAV-PHP.B-EGS、AAV-PHP.BSGN、AAV-PHP.B-EGT、AAV-PHP.B-DST、AAV-PHP.BDST、AAV-PHP.B-STP、AAV-PHP.B-PQP、AAV-PHP.BSQP、AAV-PHP.B-Q1P、AAV-PHP.B-TMP、AAV-PHP.BTTP、AAV-PHP.S/G2A12、AAV-G2A15/G2A3、AAV-G2B4、AAV-G2B5、PHP.S、AAAV、AAV A3.3、AAV A3.4、AAV A3.5、AAV A3.7、AAV CBr-7.3、AAV CBr-7.1、AAV CBr-7.10、AAV CBr-7.2、AAV CBr-7.4、AAV CBr-7.5、AAV CBr-7.7、AAV CBr-7.8、AAV CBr-B7.3、AAV CBr-B7.4、AAV CBr-E1、AAV CBr-E2、AAV CBr-E3、AAV CBr-E4、AAV CBr-E5、AAV CBr-e5、AAV CBr-E6、AAV CBr-E7、AAV CBr-E8、AAV CHt-1、AAV CHt-2、AAV CHt-3、AAV CHt-6.1、AAV CHt-6.10、AAV CHt-6.5、AAV CHt-6.6、AAV CHt-6.7、AAV CHt-6.8、AAV CHt-P1、AAV CHt-P2、AAV CHt-P5、AAV CHt-P6、AAV CHt-P8、AAV CHt-P9、AAV CKd-N4、AAV CKd-1、AAV CKd-10、AAV CKd-2、AAV CKd-3、AAV CKd-4、AAV CKd-6、AAV CKd-7、AAV CKd-8、AAV CKd-B1、AAV CKd-B2、AAV CKd-B3、AAV CKdB4、AAV CKd-B5、AAV CKd-B6、AAV CKd-B7、AAV CKd-B8、AAV CKd-H1、AAV CKd-H2、AAV CKd-H3、AAV CKd-H4、AAV CKd-H5、AAV CKd-H6、AAV CKd-N3、AAV CKd-N9、AAV CLg-F1、AAV CLg-F2、AAV CLg-F3、AAV CLg-F4、AAV CLg-F5、AAV CLg-F6、AAV CLg-F7、AAV CLg-F8、AAV CLv-M9、AAV CLv-R6、AAV CLv-1、AAV CLv1-1、AAV CLv1-10、AAV CLv1-2、AAV CLv-12、AAV CLv1-3、AAV CLv-13、AAV CLv1-4、AAV CLv1-7、AAV CLv1-8、AAV CLv1-9、AAV CLv-2、AAV CLv-3、AAV CLv-4、AAV CLv-6、AAV CLv-8、AAV CLv-D1、AAV CLv-D2、AAV CLv-D3、AAV CLv-D4、AAV CLv-D5、AAV CLv-D6、AAV CLv-D7、AAV CLv-D8、AAV CLv-E1、AAV CLv-K1、AAV CLv-K3、AAV CLv-K6、AAV CLv-L4、AAV CLv-L5、AAV CLv-L6、AAV CLv-M1、AAV CLv-M11、AAV CLv-M2、AAV CLv-M5、AAV CLv-M6、AAV CLvM7、AAV CLv-M8、AAV CLv-R1、AAV CLv-R2、AAV CLv-R3、AAV CLv-R4、AAV CLv-R5、AAV CLv-R7、AAV CLv-R8、AAV CLv-R9、AAV CSp-8.10、AAV CSp-1、AAV CSp-10、AAV CSp-11、AAV CSp-2、AAV CSp-3、AAV CSp-4、AAV CSp-6、AAV CSp-7、AAV CSp-8、AAV CSp-8.2、AAV CSp-8.4、AAV CSp-8.5、AAV CSp-8.6、AAV CSp-8.7、AAV CSp-8.8、AAV CSp-8.9、AAV CSp-9、AAVLK08、AAV-LK15、AAV改組100-1、AAV改組100-2、AAV改組100-3、AAV改組100-7、AAV改組10-2、AAV改組10-6、AAV改組10-8、AAV SM 100-10、AAV SM 100-3、AAV SM 10-1、AAV SM 10-2、AAV SM 10-8、AAV.VR-355、AAV-b、AAVC1、AAVC2、AAVC5、AAVCh.5、AAVCh.5R1、AAV-DJ、AAV-DJ8、AAVF1/HSC1、AAVF11/HSC11、AAVF12/HSC12、AAVF13/HSC13、AAVF14/HSC14、AVF15/HSC15、AAVF16/HSC16、AAVF17/HSC17、AAVF2/HSC2、AAVF3、AAVF3/HSC3、AAVF4/HSC4、AAVF5、AAVF5/HSC5、AAVF6/HSC6、AAVF7/HSC7、AAVF8/HSC8、AAVF9/HSC9、AAV-h、AAVH-1/hu.1、AAVH2、AAVH-5/hu.3、AAVH6、AAVhE1.1、AAVhEr1.14、AAVhEr1.16、AAVhEr1.18、AAVhER1.23、AAVhEr1.35、AAVhEr1.36、AAVhEr1.5、AAVhEr1.7、AAVhEr1.8、AAVhEr2.16、AAVhEr2.29、AAVhEr2.30、AAVhEr2.31、AAVhEr2.36、AAVhEr2.4、AAVhEr3.1、AAVLG-10/rh.40、AAVLG-4/rh.38、AAVLG-9/hu.39、AAVLG-9/hu.39、AAV-LK01、AAV-LK02、AAV-LK03、AAV-LK03、AAV-LK04、AAV-LK05、AAV-LK06、AAVLK07、AAV-LK09、AAV-LK10、AAV-LK11、AAV-LK12、AAV-LK13、AAV-LK14、AAV-LK16、AAV-LK17、AAVLK18、AAV-LK19、AAVN721-8/rh.43、AAV-PAEC、AAVPAEC12、AAV-PAEC11、AAV-PAEC2、AAV-PAEC4、AAVPAEC6、AAV-PAEC7、AAV-PAECS、Anc80、Anc80L65、Anc81、Anc82、Anc83、Anc84、Anc94、Anc110、Anc113、Anc126、Anc127、BAAV、BNP61 AAV、BNP62 AAV、BNP63 AAV、牛AAV、山羊AAV、日本AAV10血清型、UPENN AAV10、VOY101及VOY201。

在某些實施例中，AAV血清型及/或假型為AAV-DJ/8、AAV9、AAV Php.B及/或AAV Php.eB。在某些實施例中，AAV血清型及/或假型包含AAV-DJ/8。在某些實施例中，AAV血清型及/或假型包含AAV9。在某些實施例中，AAV血清型及/或假型包含AAV Php.B。在某些實施例中，AAV血清型及/或假型包含AAV Php.eB。

在一些實施例中，AAV為AAV變異體，其已例如藉由一或多種殼蛋白中之一或若干個胺基酸殘基之取代、缺失或添加而經基因修飾。此類變異體之實例包括(但不限於)具有Y444F、Y500F、Y730F及/或S662V突變中之一或多者的AAV2；具有Y705F、Y731F及/或T492V突變中之一或多者的AAV3；及具有S663V及/或T492V突變中之一或多者的AAV6。

在一些實施例中，AAV衣殼經修飾以包含至少一種表面結合醣或其衍生物。如本文中所使用，當提及至少一種醣時，術語「表面結合」意謂該至少一種醣結合於AAV載體之外表面且暴露於AAV載體之外表面。醣之適合實例包括(但不限於)單醣、寡醣、多醣及其衍生物。 1. AAV 構築體

在一些實施例中，本發明提供聚核苷酸載體(例如聚核苷酸構築體)，其包含編碼ISR抑制劑或其特徵部分(例如包含PP1結合域及eIF2α結合域)之聚核苷酸序列。在本文中所描述之一些實施例中，包括ISR抑制劑之聚核苷酸載體為聚核苷酸構築體，且可包含於AAV衣殼中以產生AAV粒子(例如，AAV粒子包含AAV衣殼中所包含之AAV構築體)。

在一些實施例中，聚核苷酸構築體包含一或多種組分，其衍生自天然存在之AAV基因體構築體或由天然存在之AAV基因體構築體修飾。在一些實施例中，衍生自AAV構築體之序列為AAV1構築體、AAV2構築體、AAV3構築體、AAV4構築體、AAV5構築體、AAV6構築體、AAV7構築體、AAV8構築體、AAV DJ/8構築體、AAV9構築體、AAV2.7m8構築體、AAV8BP2構築體、AAV293構築體、AAVPhp.B構築體或AAVPhp.eB構築體(參見例如Chan等人, 2017)。本文中可使用之其他例示性AAV構築體為此項技術中已知的。(參見例如Kanaan等人, Mol. Ther. Nucleic Acids 8: 184-197, 2017；Li等人, Mol. Ther. 16(7): 1252-1260, 2008；Adachi等人, Nat. Commun. 5: 3075, 2014；Isgrig等人, Nat. Commun. 10(1): 427, 2019；及Gao等人, J. Virol. 78(12): 6381-6388, 2004；其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。

在一些實施例中，AAV衍生之序列(例如包含於聚核苷酸構築體中之序列)通常包括順式作用5'及3' ITR序列(參見例如B. J. Carter, 「Handbook of Parvoviruses」中所編, P. Tijsser, CRC Press,第155 168頁, 1990，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。典型AAV2衍生之ITR序列之長度為約145個核苷酸。在一些實施例中，將至少或恰好80%之典型ITR序列(例如至少或恰好85%、至少或恰好90%、至少或恰好95%、或至少或恰好100%等)併入本文中所提供之構築體中。修飾此等ITR序列之能力在此項技術之技能內。(參見例如諸如Sambrook等人, 「Molecular Cloning. A Laboratory Manual」,第2版, Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1989；及K. Fisher等人, J Virol. 70:520 532, 1996之正文，其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，本文中所描述之編碼序列及/或構築體中之任一者係由5'及3' AAV ITR序列側接。AAV ITR序列可自任何已知AAV，包括目前所鑑別之AAV類型獲得。

在一些實施例中，根據本發明且以此項技術已知之模式描述之聚核苷酸構築體(參見例如Asokan等人, Mal. Ther. 20: 699- 7080, 2012，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)通常包含編碼序列或其部分、至少一個序列及/或控制序列，及視情況選用之5'及3' AAV反向末端重複序列(ITR)。在一些實施例中，所提供之構築體可封裝於衣殼中以產生AAV粒子。可將AAV粒子遞送至所選擇之靶細胞。在一些實施例中，所提供之構築體包含其他視情況選用之編碼序列，其為核酸序列(例如抑制性核酸序列)、與編碼所關注之多肽、蛋白質、功能性RNA分子(例如miRNA、miRNA抑制劑)或其他基因產物的構築體序列異源。在一些實施例中，核酸編碼序列以准許在標靶組織之細胞中進行編碼序列轉錄、轉譯及/或表現之方式可操作地連接至組分及/或控制組分。

在一些實施例中，未經修飾之AAV內源性基因體包括兩個開讀框，「cap」及「rep」，其由ITR側接。在一些實施例中，重組AAV構築體類似地包含一或多個由ITR序列側接之開讀框(例如，包含ISR抑制劑編碼序列之編碼序列)。在一些實施例中，AAV構築體亦包含習知控制元件，其以允許其在經聚核苷酸構築體轉染或經本發明產生之病毒粒子感染的細胞中進行轉錄、轉譯及/或表現的方式可操作地連接至編碼序列。在一些實施例中，AAV構築體視情況包含啟動子、強化子、非轉譯區(例如5' UTR、3' UTR)、Kozak序列、內部核糖體進入部位(internal ribosomal entry site；IRES)、剪接部位(例如受體部位、供體部位)、聚腺苷酸化部位，或其任何組合。

在一些實施例中，構築體為AAV構築體。在一些實施例中，AAV構築體可包括至少500 bp、至少1 kb、至少1.5 kb、至少2 kb、至少2.5 kb、至少3 kb、至少3.5 kb、至少4 kb或至少4.5 kb。在一些實施例中，AAV構築體可包括至多7.5 kb、至多7 kb、至多6.5 kb、至多6 kb、至多5.5 kb、至多5 kb、至多4.5 kb、至多4 kb、至多3.5 kb、至多3 kb或至多2.5 kb。在一些實施例中，AAV構築體可包括約1 kb至約2 kb、約1 kb至約3 kb、約1 kb至約4 kb、約1 kb至約5 kb、約2 kb至約3 kb、約2 kb至約4 kb、約2 kb至約5 kb、約3 kb至約4 kb、約3 kb至約5 kb，或約4 kb至約5 kb。

本文中所描述之構築體中之任一者可進一步包括調節及/或控制序列，例如選自以下之群的控制序列：轉錄起始序列、轉錄終止序列、啟動子序列、強化子序列、RNA剪接序列、聚腺苷酸化(聚(A))序列、Kozak共有序列，及/或其任何組合。在一些實施例中，啟動子可為天然啟動子、組成型啟動子、誘導型啟動子及/或組織特異性啟動子。本文描述控制序列之非限制性實例且其他為此項技術中已知的。 SEQ ID NO: 22 - 例示性 AAV 構築體聚核苷酸序列 2.      AAV衣殼

在一些實施例中，本發明提供封裝至AAV衣殼中之一或多種聚核苷酸構築體。在一些實施例中，AAV衣殼係來自或衍生自AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAVrh8、AAVrhl0、AAVrh39、AAVrh43或AAV祖血清型之AAV衣殼，或其一或多種雜合體。在一些實施例中，AAV衣殼係來自AAV祖血清型。在一些實施例中，AAV衣殼為祖(Anc) AAV衣殼。Anc衣殼係由構築體序列形成，該構築體序列使用演化機率及演化模型化構建以確定可能之祖序列。因此，已知Anc衣殼/構築體序列在自然界中不存在。在一些實施例中，AAV衣殼係自AAV9衣殼工程改造及/或衍生。在一些實施例中，AAV衣殼為AAV PHP.eB衣殼。在一些實施例中，AAV衣殼為AAV PHP.B衣殼(參見例如Diptaman Chatterjee等人, Gene Therapy29, 2290-387 (2022))。

如本文所提供，在一些實施例中，AAV衣殼及AAV構築體(例如包含AAV ITR)之任何組合均可用於本發明之重組AAV粒子中。舉例而言，野生型或變異體AAV2 ITR及AAV DJ/8、AAV9、AAV PHP.B及/或AAV PHP.eB衣殼，或變異體AAV2 ITR及AAV6衣殼等。在本發明之一些實施例中，AAV粒子完全由AAV2及/或AAV9組分構成(例如衣殼及ITR為AAV2及/或AAV9血清型)。在一些實施例中，AAV粒子為AAV2/6、AAV2/8或AAV2/9粒子(例如具有AAV2 ITR之AAV構築體的AAV6、AAV8或AAV9衣殼)。 3.      例示性AAV構築體組分 a. 反向末端重複序列 ( ITR )

構築體之AAV衍生之序列通常包含順式作用5'及3' ITR (參見例如B. J. Carter, 「Handbook of Parvoviruses」中所編, P. Tijsser, CRC Press,第155 168頁(1990)，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。通常，ITR能夠形成髮夾。形成髮夾之能力可促成ITR自我引發之能力，從而允許第二DNA股之引子酶非依賴性合成。ITR亦可有助於AAV粒子中之AAV構築體的有效衣殼化。

本發明之AAV粒子可包含AAV構築體，該AAV構築體包含編碼序列(例如編碼ISR之抑制劑)及側接有5'及3' AAV ITR序列之相關元件。在一些實施例中，ITR為或包含約130個核酸。在一些實施例中，ITR為或包含約145個核酸。在一些實施例中，使用所有或實質上所有編碼ITR之序列。在一些實施例中，AAV ITR序列可自任何已知AAV，包括目前所鑑別之哺乳動物AAV類型獲得。在一些實施例中，ITR為AAV2 ITR。在一些實施例中，ITR為AAV9 ITR。

本發明之聚核苷酸構築體之非限制性實例為包含轉殖基因之「順式作用」構築體，其中該轉殖基因序列及任何相關調節元件係由5'或「左側」及3'或「右側」AAV ITR序列側接。5'及左側名稱係指ITR序列相對於整個構築體之位置，其在有義方向上自左向右讀出。舉例而言，在一些實施例中，當以線性方式在有義定向上描繪構築體時，5'或左側ITR為最接近給定構築體之啟動子(例如與聚腺苷酸化序列相對)的ITR。同時，3'及右側名稱係指ITR序列相對於整個構築體之位置，其在有義方向上自左向右讀出。舉例而言，在一些實施例中，當以線性方式在有義定向上描繪構築體時，3'或右側ITR為最接近給定構築體之聚腺苷酸化序列(例如與啟動子序列相對)的ITR。一般而言，如本文中所提供之ITR根據有義股以5'至3'之次序描繪。因此，熟習此項技術者應瞭解，當自有義方向轉換至反義方向時，5'或「左側」定向ITR亦可描繪為3'或「右側」ITR 。此外，將給定有義ITR序列(例如5'/左側AAV ITR)轉型成反義序列(例如3'/右側ITR序列)完全在熟習此項技術者之能力範圍內。一般熟習此項技術者應瞭解如何修飾給定ITR序列以用作5'/左側或3'/右側ITR或其反義版本。

在一些實施例中，ITR(例如5' ITR)可具有根據SEQ ID NO: 23之序列。在一些實施例中，ITR(例如3' ITR)可具有根據SEQ ID NO: 24之序列。在一些實施例中，ITR包括如此項技術中已知的一或多種修飾，例如截短、缺失、取代或插入。在一些實施例中，ITR包含少於145個核苷酸，例如120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135或141個核苷酸。舉例而言，在一些實施例中，ITR包含110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143 144或145個核苷酸。

在一些實施例中，5' ITR序列與由SEQ ID NO: 23表示之5' ITR序列至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。在一些實施例中，3' ITR序列與由SEQ ID NO: 24表示之3' ITR序列至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。 SEQ ID NO: 23 - 例示性 5' AAV ITR 聚核苷酸序列 SEQ ID NO: 24 - 例示性 3' AAV ITR 聚核苷酸序列 b. 啟動子

在一些實施例中，構築體(例如AAV構築體)包含啟動子。術語「啟動子」係指由酶/蛋白質識別之DNA序列，其可促進及/或啟動可操作地連接之基因(例如編碼ISR之抑制劑)之轉錄。舉例而言，啟動子通常係指例如與RNA聚合酶及/或任何相關因子結合且可自其啟動轉錄之聚核苷酸序列。因此，在一些實施例中，構築體(例如AAV構築體)包含啟動子，其可操作地連接至本文中所描述之非限制性例示性啟動子中之一者。

在一些實施例中，啟動子為誘導型啟動子、組成型啟動子、哺乳動物細胞啟動子、病毒啟動子、嵌合啟動子、經工程改造之啟動子、組織特異性啟動子或此項技術中已知之任何其他類型的啟動子。在一些實施例中，啟動子為RNA聚合酶II啟動子，諸如哺乳動物RNA聚合酶II啟動子。在一些實施例中，啟動子為RNA聚合酶III啟動子，包括(但不限於) HI啟動子、人類U6啟動子、小鼠U6啟動子或豬U6啟動子。啟動子一般將為能夠促進神經細胞中之轉錄的啟動子。

此項技術中已知各種啟動子，其在一些實施例中可用於本文中。在一些實施例中，本文中可使用之啟動子之非限制性實例包括：人類EFlα、人類巨細胞病毒(CMV) (美國專利案第5,168,062號，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)、人類泛蛋白C (UBC)、小鼠磷酸甘油酸激酶1、多瘤腺病毒、猿猴病毒40 (SV40)、β-血球蛋白、β-肌動蛋白、α-胎蛋白、γ-血球蛋白、β-干擾素、γ-麩胺醯基轉移酶、小鼠乳房腫瘤病毒(MMTV)、勞斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus)、大鼠胰島素、甘油醛-3-磷酸鹽去氫酶、金屬硫蛋白II (MT II)、澱粉酵素、組織蛋白酶、MI蕈毒鹼受體、逆轉錄病毒LTR (例如人類T細胞白血病病毒HTLV)、AAV ITR、介白素-2、膠原蛋白酶、血小板衍生生長因子、腺病毒5 E2、基質溶素、鼠類MX基因、葡萄糖調節之蛋白質(GRP78及GRP94)、α-2-巨球蛋白、波形蛋白(vimentin)、I類MHC基因H-2K b、HSP70、增殖蛋白、腫瘤壞死因子、促甲狀腺激素a基因、免疫球蛋白輕鏈、T細胞受體、HLA DQa及DQ、介白素-2受體、II類MHC、II類MHC HLA-DRa、肌肉肌酸激酶、前白蛋白(甲狀腺素運載蛋白)、彈性蛋白酶I、白蛋白基因、c-fos、c-HA-ras、神經細胞黏附分子(NCAM)、H2B (TH2B)組蛋白、大鼠生長激素、人類血清澱粉樣蛋白(SAA)、肌鈣蛋白I (TN I)、杜顯氏肌肉萎縮症、人類免疫不全病毒及長臂猿白血病病毒(Gibbon Ape Leukemia Virus；GAL V)啟動子。啟動子之其他實例為此項技術中已知的。參見例如Lodish, Molecular Cell Biology, Freeman and Company, New York 2007，其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中。在一些實施例中，啟動子為CMV即刻早期啟動子。在一些實施例中，啟動子為CAG啟動子及/或CAG/CBA啟動子。

術語「組成型」啟動子係指當與編碼蛋白質(例如ISR之抑制劑)之核酸可操作地連接時，使得RNA在大部分或所有生理條件下自細胞中之核酸轉錄的聚核苷酸及/或寡核苷酸序列。組成型啟動子之實例包括(但不限於)逆轉錄病毒勞斯肉瘤病毒(RSV) LTR啟動子、巨細胞病毒(CMV)啟動子(參見例如Boshart等人, Cell41:521-530, 1985，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)、SV 40啟動子、二氫葉酸還原酶啟動子、β-肌動蛋白啟動子、磷酸甘油激酶(PGK)啟動子及EFl-α啟動子(Invitrogen)。

誘導型啟動子允許基因表現之調節且可藉由以下調節：以外源性方式提供之化合物；環境因素，諸如溫度；或特定生理狀態(例如急性期，細胞之特定分化狀態)之存在，或僅存在於複製細胞中。誘導型啟動子及可誘導型系統可購自各種商業來源，包括(但不限於) Invitrogen、Clontech及Ariad。誘導型啟動子之其他實例為此項技術中已知的。由以外源性方式提供之化合物調節之誘導型啟動子的實例包括鋅-可誘導型綿羊金屬硫蛋白(MT)啟動子、地塞米松(dexamethasone；Dex)可誘導型小鼠乳房腫瘤病毒(MMTV)啟動子、T7聚合酶啟動子系統(參見例如WO 98/10088，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)；蛻皮激素(ecdysone)昆蟲啟動子(參見例如No等人, Proc. Natl. Acad Sci. U.S.A93:3346-3351, 1996，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)、四環素-可抑制系統(參見例如Gossen等人, Proc. Natl. Acad Sci. U.S.A89:5547-5551, 1992，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)、四環素-可誘導型系統(參見例如Gossen等人, Science268: 1766-1769, 1995，亦參見Harvey等人, Curr. Opin. Chem. Biol.2:512-518, 1998，其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)、RU486-可誘導型系統(參見例如Wang等人, Nat. Biotech. 15:239- 243, 1997及 Wang等人, Gene Ther. 4:432-441, 1997，其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)，及雷帕黴素(rapamycin)-可誘導型系統(參見例如Magari等人, J Clin. Invest.100:2865-2872, 1997，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。

術語「組織特異性」啟動子係指僅在某些特定細胞類型及/或組織中具有活性之啟動子(例如，特定基因之轉錄僅在表現轉錄調節及/或控制蛋白之細胞內發生，該等蛋白質結合至組織特異性啟動子)。在一些實施例中，調節及/或控制序列賦予組織特異性基因表現能力。在一些情況下，組織特異性調節及/或控制序列結合以組織特異性方式誘導轉錄之組織特異性轉錄因子。在一些實施例中，組織特異性啟動子為神經元特異性啟動子。在一些實施例中，組織特異性啟動子為神經膠細胞特異性啟動子。在一些實施例中，組織特異性啟動子為海馬細胞特異性啟動子。 SEQ ID NO: 25 - 例示性 CAG 啟動子聚核苷酸序列 SEQ ID NO: 26 - 例示性 CAG 啟動子 / 強化子聚核苷酸序列 c. 強化子

在一些實施例中，構築體可包括強化子序列。如本文中所使用之術語「強化子」係指聚核苷酸及/或寡核苷酸序列，其可增加編碼所關注蛋白質(例如ISR之抑制劑)之核酸的轉錄水平，及/或在轉錄之後增加或改變轉錄物之轉譯效率。在一些實施例中，強化子序列(一般長度為50至1500 bp)通常藉由為轉錄相關蛋白(例如轉錄因子)提供額外結合部位，及/或穩定或修飾轉錄後調節機構來提高轉錄水平。在一些實施例中，強化子序列見於內含子序列內。在一些實施例中，強化子序列見於3'及/或5' UTR中。在一些實施例中，在編碼序列下游發現強化子區域，該編碼序列包含轉殖基因且接近聚腺苷酸化序列。不同於啟動子序列，強化子序列可在距轉錄起始部位大得多的距離(例如與啟動子相比)處起作用。強化子之非限制性實例包括土拔鼠肝炎病毒轉錄後調節元件(woodchuck hepatitis virus post-transcriptional regulatory element；WPRE)、RSV強化子、CMV強化子及/或SV40強化子。 SEQ ID NO: 27 - 例示性 WPRE 聚核苷酸序列 d. 側接之非轉譯區 ， 5' UTR 及 3' UTR

在一些實施例中，本文中所描述之構築體中之任一者可包括非轉譯區(UTR)，諸如5' UTR或3' UTR。基因之UTR可經轉錄但不轉譯。5' UTR在轉錄起始部位開始且持續至起始密碼子，但不包括起始密碼子。3' UTR緊接在終止密碼子之後開始且持續直至轉錄終止信號。UTR之調節及/或控制特徵可併入至經本文所描述之構築體、粒子、聚核苷酸、組合物、套組或方法中之任一者中，以增強或以其他方式調節ISR之抑制劑的表現。

天然5' UTR包括在轉譯啟動中發揮作用之序列。在一些實施例中，5' UTR可包含序列，如Kozak序列，其通常已知參與核糖體啟動許多基因之轉譯的過程。Kozak序列具有共有序列CCR(A/G)CCAUGG，其中R為起始密碼子(AUG)上游之三個鹼基之嘌呤(A或G)，且起始密碼子之後為另一個「G」。在一些實施例中，5' UTR亦形成參與延長因子結合之二級結構。在一些實施例中，5' UTR包括於本文中所描述之構築體中之任一者中。5' UTR之非限制性實例，包括來自以下基因之5' UTR：白蛋白、血清澱粉樣蛋白A、脂蛋白元A/B/E、運鐵蛋白、α胎蛋白、紅血球生成素及因子VIII，可用於增強核酸分子(諸如mRNA)之表現。

已知3' UTR具有嵌入其中之腺苷及尿苷(呈RNA形式)或胸苷(呈DNA形式)之延伸段。此等富含AU之標記在具有高轉化率之基因中尤其普遍。基於其序列特徵及功能特性，富含AU之元件(ARE)可分成三個類別(參見例如Chen等人, Mol. Cell. Biol.15:5777-5788, 1995；Chen等人, Mol. Cell Biol.15:2010-2018, 1995，其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)：I類ARE在富含U之區域內含有AUUUA模體之若干個分散複本。舉例而言，c-Myc及MyoD mRNA含有I類ARE。II類ARE具有兩個或更多個重疊UUAUUUA(U/A) (U/A)九聚體。GM-CSF及TNF-α mRNA為含有II類ARE之實例。III類ARE之定義不太明確。此等富含U之區域不含AUUUA模體，c-Jun及成肌素mRNA為此類別之兩個充分研究之實例。

已知結合至ARE之大部分蛋白質使信使去穩定化，而ELAV家族之成員，最值得注意的是HuR，已有記載可增加mRNA之穩定性。HuR與所有三種類別之ARE結合。將HuR特異性結合部位工程改造至核酸分子之3' UTR中會引起HuR結合，且因此引起活體內訊息穩定。

在一些實施例中，3' UTR ARE之引入、移除或修飾可用於調節編碼ISR蛋白質抑制劑之mRNA的穩定性。在其他實施例中，可移除ARE或使其突變以增加胞內穩定性且因此增加ISR蛋白之抑制劑之轉譯及產生。

在一些實施例中，非ARE序列可併入至5'或3' UTR中。在一些實施例中，內含子或內含子序列之部分可併入至本文中所提供之構築體、粒子、聚核苷酸、組合物、套組及方法中之任一者中的聚核苷酸之側接區域中。併入內含子序列可增加蛋白產量以及mRNA含量。 e. 內部核糖體進入部位 ( IRES )

在一些實施例中，編碼ISR蛋白質之抑制劑的構築體可包括內部核糖體進入部位(IRES)。IIRES形成複雜之二級結構，該二級結構允許轉譯啟動在mRNA緊鄰IRES所在位置下游之任何位置發生(參見例如Pelletier及Sonenberg, Mol . Cell . Biol .8(3): 1103-1112, 1988，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。熟習此項技術者已知有若干種IRES序列，包括來自例如口蹄病病毒(foot and mouth disease virus；FMDV)、腦心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus；EMCV)、人類鼻病毒(human rhinovirus；HRV)、蟋蟀麻痺病毒(cricket paralysis virus)、人類免疫不全病毒(human immunodeficiency virus；HIV)、A型肝炎病毒(hepatitis A virus；HA V)、C型肝炎病毒(hepatitis C virus；HCV)及脊髓灰白質炎病毒(poliovirus；PV)之序列(參見例如Alberts, Molecular Biology of the Cell, Garland Science, 2002；及Hellen等人, Genes Dev.15(13):1593-612, 2001，其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。

在一些實施例中，併入至編碼ISR蛋白質之抑制劑的構築體中之IRES序列為口蹄疫病毒(FMDV) 2A序列。口蹄疫病毒2A序列為一種小肽(長度大約18個胺基酸)，其據展示介導多蛋白(polyprotein)之裂解(參見例如Ryan, MD等人, EMBO4:928-933, 1994；Mattion等人, J Virology70:8124-8127, 1996；Furler等人, Gene Therapy8:864-873, 2001；及Halpin等人, Plant Journal4:453-459, 1999，其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。2A序列之裂解活性先前已在包括質體及基因療法構築體(例如AAV及逆轉錄病毒)之人工系統中得到證實(參見例如Ryan等人, EMBO4:928-933, 1994；Mattion等人, J Virology70:8124-8127, 1996；Furler等人, Gene Therapy8:864-873, 2001；及Halpin等人, Plant Journal4:453-459, 1999；de Felipe等人, Gene Therapy6: 198-208, 1999；de Felipe等人, Human Gene TherapyII: 1921-1931, 2000；及Klump等人, Gene Therapy8:811-817, 2001，其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。

在一些實施例中，IRES可用於AAV構築體中。在一些實施例中，編碼ISR蛋白質之抑制劑的構築體可包括聚核苷酸內部核糖體進入部位(IRES)。在一些實施例中，IRES可為包含多於一個構築體之組合物的部分。在一些實施例中，IRES係用於自單個基因轉錄物產生多於一個多肽。 f. 剪接部位

在一些實施例中，本文中所提供之構築體中之任一者可包括剪接供體及/或剪接受體序列，其在轉錄期間發生之RNA加工期間起作用。在一些實施例中，剪接部位參與反式剪接(trans-splicing)。 g. 聚腺苷酸化序列

在一些實施例中，本文中所提供之構築體可包括聚腺苷酸化(聚(A))信號序列。大部分初生真核mRNA在其3'端具有在複雜過程期間添加之聚(A)尾(poly (A) tail)，該複雜過程包括初級轉錄物之裂解及由聚(A)信號序列驅動之偶合聚腺苷酸化反應(參見例如Proudfoot等人, Cell108:501-512, 2002，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。聚(A)尾賦予mRNA穩定性及可轉移性(參見例如 Molecular Biology of the Cell,第三版B. Alberts等人, Garland Publishing, 1994，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，聚(A)信號序列位於編碼序列之3'。

如本文中所使用，「聚腺苷酸化」係指聚腺苷部分或其經修飾之變異體與信使RNA分子之共價鍵聯。在真核生物體中，大部分信使RNA (mRNA)分子在3'端經聚腺苷酸化。3'聚(A)尾為長的腺嘌呤核苷酸序列(例如50、60、70、100、200、500、1000、2000、3000、4000或5000)，其經由酶(聚腺苷酸化聚合酶)之作用添加至前驅體mRNA中。在一些實施例中，將聚(A)尾添加至含有特定序列(例如聚(A)信號)之轉錄物上。聚(A)尾及相關蛋白質有助於保護mRNA免於核酸外切酶降解。聚腺苷酸化在轉錄終止、mRNA自細胞核之輸出，及轉譯中亦發揮作用。聚腺苷酸化在DNA轉錄成RNA之後立即在細胞核中發生，但亦可稍後在細胞質中發生。在轉錄終止後，mRNA鏈經由與RNA聚合酶相關之核酸內切酶複合物之作用進行裂解。裂解部位之特徵通常為在裂解部位附近存在鹼基序列AAUAAA。在mRNA已裂解後，將腺苷殘基添加至裂解部位之游離3'端。

如本文中所使用，「聚(A)信號序列」或「聚腺苷酸化信號序列」為觸發mRNA之核酸內切酶裂解且將一連串腺苷添加至裂解mRNA之3'端的序列。

存在若干種可在一些實施例中使用之聚(A)信號序列，包括衍生自以下之序列：牛生長激素(bGH) (Woychik等人, Proc. Natl. Acad Sci. U.S.A.81(13):3944-3948, 1984；美國專利第5,122,458號，其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)、小鼠-β-血球蛋白、小鼠-α-血球蛋白(Orkin等人, EMBOJ 4(2):453-456, 1985；Thein等人, Blood71(2):313-319, 1988，其各自出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)、人類膠原蛋白、多瘤病毒(Batt等人, Mol. Cell Biol.15(9):4783-4790, 1995，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)、單純疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV TK)、IgG重鏈基因聚腺苷酸化信號(US 2006/0040354，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)、人類生長激素(hGH) (Szymanski等人, Mol Therapy15(7):1340-1347, 2007，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)，及/或由諸如SV40晚期及早期聚(A)部位之SV40聚(A)部位組成之群(參見例如Schek等人, Mol Cell Biol.12(12):5386-5393, 1992，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。

在一些實施例中，聚(A)信號序列可為AATAAA。AATAAA序列可經與AATAAA同源且能夠發出聚腺苷酸化信號之其他六核苷酸序列取代，該等六核苷酸序列包括ATTAAA、AGTAAA、CATAAA、TATAAA、GATAAA、ACTAAA、AATATA、AAGAAA、AATAAT、AAAAAA、AATGAA、AATCAA、AACAAA、AATCAA、AATAAC、AATAGA、AATTAA或AATAAG (參見例如WO 06/12414，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，聚(A)信號序列可為合成聚腺苷酸化部位(參見例如基於Levitt等人, Genes Dev.3(7):1019-1025, 1989之Promega之pCl-neo表現構築體，該文獻出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。 SEQ ID NO: 28 - 例示性 SV40 聚 A 信號聚核苷酸序列 h. 其他序列

在一些實施例中，本發明之構築體可包含2A元件或序列。在一些實施例中，本發明之構築體可包括一或多個選殖部位。在一些此類實施例中，在製造以用於向個體投與之前，可能不會完全移除選殖部位。在一些實施例中，選殖部位可具有功能性作用，包括作為連接序列或作為Kozak部位之部分。如熟習此項技術者將瞭解，選殖部位可在一級序列中顯著變化，同時保持其所需功能。

在一些實施例中，2A元件為T2A、P2A、E2A及/或F2A元件。在一些實施例中，2A序列可包含視情況選用之5'連接序列，諸如(但不限於) GSG (例如甘胺酸、絲胺酸、甘胺酸)。 SEQ ID NO: 29 - 例示性 T2A 胺基酸序列 SEQ ID NO: 30 - 例示性 P2A 胺基酸序列 SEQ ID NO: 31 - 例示性 E2A 胺基酸序列 SEQ ID NO: 32 - 例示性 F2A 胺基酸序列 SEQ ID NO: 33 - 例示性 P2A 寡核苷酸序列 SEQ ID NO: 34 - 例示性轉錄連接子寡核苷酸序列 SEQ ID NO: 35 - 例示性轉錄連接子寡核苷酸序列 i. 去穩定域

在一些實施例中，本文中所提供之構築體中之任一者可視情況包括序列，該序列編碼用於蛋白質表現之時間及/或空間控制的去穩定域(「去穩定序列」)。去穩定序列之非限制性實例包括編碼FK506序列、二氫葉酸還原酶(DHFR)序列或其他示例性去穩定序列之序列。

在缺乏穩定配位體之情況下，可操作地連接至去穩定序列之蛋白質序列係由泛蛋白化降解。相比之下，在存在穩定配位體之情況下，蛋白質降解得到抑制，由此允許可操作地連接至去穩定序列之蛋白質序列被主動表現。作為蛋白質表現穩定化之陽性對照，蛋白質表現可藉由包括以下之習知方法來偵測：酶分析法、放射線攝影分析法、比色分析法、螢光分析法或其他光譜分析法、螢光活化細胞分選(fluorescent activating cell sorting；FACS)分析法及/或免疫分析法(例如酶素連結免疫吸附分析法(enzyme linked immunosorbent assay；ELISA)、放射免疫分析法(RIA)及免疫組織化學)。

去穩定序列之其他實例為此項技術中已知的。在一些實施例中，去穩定序列為FK506結合蛋白(FKBP12)及雷帕黴素結合蛋白序列，且穩定配位體為Shield-I (Shld1) (參見例如Banaszynski等人(2012) Cell126(5):995-1004，其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，去穩定序列為DHFR序列，且穩定配位體為曲美普林(trimethoprim；TMP) (參見例如Iwamoto等人, (2010) Chem Biol17:981-988，其出於本文中所描述之目的其以引用之方式併入本文中)。 j. 報導子序列或元件

在一些實施例中，本文中所提供之構築體可視情況包括編碼報導子多肽及/或蛋白質之序列(「報導子序列」)。報導子序列之非限制性實例包括編碼以下之DNA序列：β-內醯胺酶、β半乳糖苷酶(LacZ)、鹼性磷酸酶、胸苷激酶、綠色螢光蛋白(GFP)、紅色螢光蛋白、mCherry螢光蛋白、黃色螢光蛋白、氯胺苯醇乙醯基轉移酶(CAT)及螢光素酶。報導子序列之其他實例為此項技術中已知的。當報導子序列與驅動其表現之控制元件締合時，報導子序列可提供藉由包括以下之習知方法偵測之信號：酶分析法、放射線攝影分析法、比色分析法、螢光分析法或其他光譜分析法、螢光活化細胞分選(FACS)分析法及/或免疫分析法(例如酶素連結免疫吸附分析法(ELISA)、放射免疫分析法(RIA)及免疫組織化學)。

在一些實施例中，報導子序列為Lacz基因，且藉由針對β-半乳糖苷酶活性之分析法來偵測細胞中攜帶Lacz基因之構築體的存在。在一些實施例中，報導子序列為螢光蛋白(例如綠色螢光蛋白(GFP))或螢光素酶。在其中報導子序列為螢光蛋白或螢光素酶之實施例中，可藉由螢光成像技術(例如螢光顯微鏡檢查術(fluorescent microscopy)或FACS)或光度計(例如分光光度計或IVIS成像儀器)中之光產生來量測細胞中攜帶螢光蛋白或螢光素酶之構築體的存在。在一些實施例中，報導子序列可用於驗證本文中所描述之構築體中之任一者的組織特異性靶向能力及/或組織特異性啟動子調節及/或控制活性。提供例示性GFP標籤序列作為SEQ ID NO: 37。

在一些實施例中，報導子序列為FLAG標籤(例如3xFLAG標籤)，且藉由蛋白結合或偵測分析法(例如西方墨點法、免疫組織化學、放射免疫分析法(RIA)、質譜法)來偵測細胞中攜帶FLAG標籤之構築體的存在。提供例示性3xFLAG標籤序列作為SEQ ID NO: 36。 SEQ ID NO: 36 - 例示性 3xFLAG 標籤聚核苷酸序列 SEQ ID NO: 37 - 例示性 GFP 聚核苷酸序列 IV. 構築體及 / 或組合物之投與

在一些實施例中，本文中所描述之構築體、粒子、多肽、聚核苷酸及/或組合物可包含於具有一或多種額外治療劑之調配物中。

在一些實施例中，本文中所描述之構築體、粒子、多肽、聚核苷酸及/或組合物可包含於調配物中，其中調配物包含醫藥學上可接受之賦形劑。

在一些實施例中，向有需要之個體投與本文中所描述之構築體、粒子、多肽、聚核苷酸及/或組合物。在一些實施例中，個體可患有以下疾病、可經診斷患有以下疾病或可對發展以下疾病敏感：唐氏症(DS)、夏柯-馬里-杜斯氏病、重度抑鬱症(MDD)、精神分裂症、阿茲海默氏病、亨丁頓氏病、帕金森氏病、肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)、多發性硬化症(MS)、普里昂病、創傷性腦損傷、腦白質消失(VWM)症、額顳葉型失智症及/或老化(例如年齡相關認知減退)。

在一些實施例中，個體為哺乳動物。在一些實施例中，個體為家畜。在一些實施例中，個體為農場動物。在一些實施例中，個體為動物園動物。在一些實施例中，個體為狗或貓。在一些實施例中，個體為母牛、馬、綿羊或山羊。在一些實施例中，個體可為(但不限於)狗、貓、雪貂、兔、母牛、鴨、豬、山羊、雞、馬、駱馬、駱駝、鴕鳥、鹿、火雞、鴿子、綿羊、鵝、公牛及/或馴鹿。在一些實施例中，個體為人類。在一些實施例中，個體之年齡等於、小於或超過1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100歲。

在一些實施例中，根據本發明之本文中所描述之構築體、粒子、多肽、聚核苷酸及/或組合物可藉由脊柱內及/或腦內投藥進行投與。在一些實施例中，脊柱內投藥包含鞘內及硬膜外投藥或由鞘內及硬膜外投藥組成。

在一些實施例中，腦內投與本文中所描述之構築體、粒子、多肽、聚核苷酸及/或組合物。在一些實施例中，腦內投藥在選自包含以下或由以下組成之群的部位處進行：海馬體及/或海馬形成(諸如，例如海馬角(cornu ammonis) (例如CA1、CA2及/或CA3)、下托複合體(subicular complex)、內嗅皮質及/或齒狀回)、紋狀體(諸如，例如殼核(putamen)、尾核(caudate nucleus)、依核(nucleus accumbens)、嗅結節(olfactory tubercle)、外部蒼白球及/或內部蒼白球)、丘腦、下丘腦、上丘腦、丘腦底部、薄壁組織、大腦、髓質、小腦深核(諸如，例如黑質(substantia nigra)、齒狀核、栓狀核、球狀核及/或頂核(fastigii nucleus))、腦脊髓液(CSF)、腦膜、硬腦膜、蜘網膜、軟腦膜、蛛膜下池(subarachnoid cisterns) (諸如，例如大池(cisterna magna)、腦橋池(pontine cistern)、腳間池(interpeduncular cistern)、交叉池(chiasmatic cistern)、大腦外側窩池(cistern of lateral cerebral fossa)、上池(superior cistern)及/或丘腦終板池(cistern of lamina terminalis))、蜘蛛膜下腔、皮質、隔膜、腦橋及小腦。

在一些實施例中，本文中所描述之構築體、粒子、多肽、聚核苷酸及/或組合物經海馬內(例如海馬體，例如CA1、CA2及/或CA3中)、紋狀體內(例如紋狀體中，諸如殼核、尾核、依核、嗅結節、外部蒼白球及/或內部蒼白球中)、丘腦內(例如丘腦中)及/或腦池內(例如蛛膜下池中，諸如大池、腦橋池、腳間池、交叉池、大腦外側窩池、上池及/或丘腦終板池中)投與。

在一些實施例中，本文中所描述之構築體、粒子、多肽、聚核苷酸及/或組合物經腦室內、海馬內、實質內、紋狀體內、丘腦內、腦池內及/或鞘內投與。

在一些實施例中，包含本文中所描述之構築體、粒子、多肽、聚核苷酸及/或組合物的治療方案可包含投與治療劑之組合，諸如第一療法及第二療法。療法可以此項技術中已知的任何適合之方式投與。舉例而言，第一及第二療法可依序(在不同時間)或並行(同時)地投與。在一些實施例中，第一及第二療法係以單獨組合物投與。在一些實施例中，第一及第二療法在相同組合物中。

在一些實施例中，包含本文中所描述之構築體、粒子、多肽、聚核苷酸及/或組合物的治療方案包含投與多於一種組合物，諸如2種組合物、3種組合物、4種組合物或多於4種組合物。可使用藥劑之各種組合。在一些實施例中，本發明之治療劑可藉由相同投藥途徑或藉由不同投藥途徑進行投與。在一些實施例中，本文中所描述之構築體、粒子、多肽、聚核苷酸及/或組合物及/或額外治療劑經靜脈內、肌內、皮下、局部、經口、經皮、腹膜內、眶內、藉由植入、藉由吸入、鞘內、腦室內或鼻內投與。在一些實施例中，本文中所描述之構築體、粒子、多肽、聚核苷酸及/或組合物及/或額外治療劑經靜脈內、肌內、皮下、局部、經口、經皮、腹膜內、眶內、藉由植入、藉由吸入、鞘內、腦室內或鼻內投與。在一些實施例中，可基於所治療之疾病類型、疾病之嚴重程度及病程、個體之臨床病況、個體之臨床病史及對治療之反應，以及主治醫師之判斷來判定適合之劑量。

在一些實施例中，治療可包括各種「單位劑量」。將單位劑量定義為含有預定量之治療性組合物。所投與之量，以及特定途徑及調配物屬於熟習臨床技術者之判定技能範圍內。單位劑量無需以單次注射形式投與，但可包含設定時段內的連續輸注。在一些實施例中，單位劑量包含可單次投與之劑量。

在一些實施例中，根據治療數目及單位劑量兩者，所投與之量視所需治療作用而定。應理解，有效劑量係指實現特定作用所需之量。在某些實施例之實踐中，經考慮，在0.10 mg/kg至200 mg/kg範圍內之劑量可實現此等藥劑之保護性能力。在某些實施例中，經考慮，劑量可包含含有濃度為每毫升約10 ⁸至約10 ¹⁴個病毒基因體之AAV粒子的組合物。此外，此類劑量可在一天內，及/或在數天、數週或數月內多次投與。

在某些實施例中，治療性組合物之確切量亦視從業者之判斷而定且為各個體所特有的。影響劑量之因素包括患者之生理及臨床狀態、投藥途徑、預期治療目標(症狀之緩解對比治癒)，以及特定治療性物質或個體可能正經歷之其他療法的效能、穩定性及毒性。

亦應理解，攝取為物種及器官/組織依賴性的。可適用之轉換因子以及關於攝取及濃度量測結果作出之生理學假設為熟知的，且將准許熟習此項技術者將一種濃度量測結果轉換成另一種且進行關於本文中所描述之劑量、功效及結果的合理比較並得出結論。

在某些情況下，將需要投與組合物多次，例如投與2、3、4、5、6或更多次。可以1、2、3、4、5、6、7、8至5、6、7、8、9、10、11、12週或超過12週之間隔(包括其間所有範圍)進行投藥。

片語「醫藥學上可接受」或「藥理學上可接受」係指當向動物或人類投與時不產生有害、過敏或其他不良反應之分子實體及組合物。如本文中所使用，「醫藥學上可接受之載劑」包括任何及所有溶劑、分散液介質、包衣、抗微生物劑及抗真菌劑、等張劑及吸收延遲劑及其類似物。此類介質及藥劑用於醫藥活性物質之用途在此項技術中為熟知的。除非任何習知介質或藥劑與活性成分不相容，否則涵蓋其於免疫原性及治療性組合物中之用途。補充活性成分，諸如其他抗感染劑及疫苗亦可併入組合物中。

活性化合物可調配用於非經腸投與，例如調配用於經由靜脈內、肌內、皮下或腹膜內途徑進行之注射。通常，此類組合物可以液體溶液或懸浮液形式製備；亦可製備適用於在注射之前添加液體後製備溶液或懸浮液之固體形式；且製劑亦可乳化。

適合於可注射用途之醫藥形式包括無菌水溶液或分散液；調配物，包括例如水性丙二醇；及用於無菌可注射溶液或分散液之即時製備的無菌粉末。在所有情況下，形式必須為無菌的且必須為流體以達到其可易於注射之程度。其在製造及儲存條件下亦應為穩定的，且應經保存以使其免受諸如細菌及真菌之微生物的污染作用。

在一些實施例中，當組合物為蛋白質時，蛋白質組合物可調配成中性或鹽形式。醫藥學上可接受之鹽包括酸加成鹽(由蛋白質之游離胺基形成)且其由無機酸(諸如鹽酸或磷酸)或有機酸(諸如乙酸、草酸、酒石酸、杏仁酸及其類似酸)形成。用游離羧基形成之鹽亦可衍生自無機鹼，諸如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣或氫氧化鐵；及有機鹼，諸如異丙胺、三甲胺、組胺酸、普魯卡因(procaine)及其類似鹼。

在一些實施例中，醫藥組合物可包括含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇及液體聚乙二醇及其類似物)、其適合之混合物及植物油的溶劑或分散液介質。舉例而言，可藉由使用諸如卵磷脂之包衣、在分散液之情況下藉由維持所需粒徑及藉由使用界面活性劑來維持適當流動性。微生物活動之預防可藉由各種抗細菌劑及抗真菌劑(例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞及其類似物)來實現。在許多情況下，將較佳包括等張劑，例如糖或氯化鈉。可注射組合物之延長吸收可藉由在組合物中使用延遲吸收劑例如單硬脂酸鋁及明膠來實現。

在一些實施例中，無菌可注射溶液係藉由如下來製備：將所需量之活性化合物視需要與上文列舉之各種其他成分一起併入適當溶劑中，隨後進行過濾滅菌或等效程序。通常，藉由將各種滅菌活性成分併入無菌媒劑中來製備分散液，該無菌媒劑含有基本分散液介質及來自上文所列舉之成分之其他所需成分。在用於製備無菌可注射溶液之無菌粉末的情況下，較佳之製備方法為真空乾燥及冷凍乾燥技術，其產生活性成分加來自其先前無菌過濾溶液之任何其他所需成分的粉末。

在一些實施例中，在調配後，本文中所描述之組合物可以與劑型相容之方式且以在治療或預防上有效之此類量進行投與。在一些實施例中，調配物係以各種劑型，諸如上文所描述之可注射溶液之類型進行投與。 A. 醫藥組合物

在某些態樣中，用於方法中之構築體、粒子、多肽、聚核苷酸及/或組合物或藥劑適當包含於醫藥學上可接受之載劑中，該等方法諸如延遲個體(例如人類個體)中之認知功能障礙之發作、治療該認知功能障礙、減緩該認知功能障礙之進展、降低該認知功能障礙之風險及/或預防該認知功能障礙的方法。載體為無毒、生物相容的且經選擇以免不利地影響藥劑之生物活性。在本發明之一些態樣中，藥劑可調配成用於局部遞送(亦即達到身體特定位置，諸如腦組織或其他組織)或全身遞送之製劑，該等製劑呈固體、半固體、凝膠、液體或氣體形式，諸如錠劑、膠囊、粉末、顆粒、軟膏、溶液、儲存劑、吸入劑及允許經口、非經腸或手術投與之注射劑。本發明之某些態樣亦涵蓋藉由塗覆醫療裝置及其類似物進行之組合物局部投與。

在一些實施例中，適用於經由可注射、輸注或沖洗進行之非經腸遞送及局部遞送的載劑包括蒸餾水、磷酸鹽緩衝生理鹽水、正常或乳酸化之林格氏溶液(Ringer's solutions)、右旋糖溶液、漢氏溶液(Hank's solution)或丙二醇。另外，無菌、非揮發性油可用作溶劑或懸浮液介質。出於此目的，可使用任何生物相容性油，包括合成之單甘油酯或二甘油酯。另外，諸如油酸之脂肪酸可用於製備可注射劑。載劑及藥劑可複合成液體、懸浮液、可聚合或不可聚合凝膠、糊狀物或油膏。

在某些實施例中，載劑亦可包含維持(亦即延長、延遲或調節)藥劑之遞送，或增強治療劑之遞送、攝取、穩定性或藥物動力學的遞送媒劑。作為非限制性實例，此類遞送媒劑可包括微粒、微球、奈米球或奈米粒子，其包含蛋白質、脂質體、碳水化合物、合成有機化合物、無機化合物、聚合或共聚合水凝膠及聚合微胞。

在某些態樣中，向患者或個體投與之組合物的實際給藥量可藉由物理及生理因素，諸如體重、病況嚴重程度、正治療之疾病類型、先前或並行之治療性介入、患者之特發病及投藥途徑來測定。負責投藥之從業者將在任何情況下確定組合物中之活性成分的濃度及適用於單獨個體之劑量。

在一些實施例中，可在水中適當地與界面活性劑(諸如羥丙基纖維素)混合來製備醫藥組合物之溶液。亦可在甘油、液體聚乙二醇、其混合物中及在油中製備分散液。在普通之儲存及使用條件下，此等製劑含有防腐劑以防止微生物生長。

在某些態樣中，醫藥組合物宜以呈液體溶液或懸浮液之可注射組合物形式進行投與；亦可在注射之前製備適合之固體形式或於液體中之溶液或懸浮液。此等製劑亦可乳化。用於此類目的之典型組合物包含醫藥學上可接受之載劑。舉例而言，組合物可含有每毫升磷酸鹽緩衝鹽水10 mg或更少、25 mg、50 mg或至多約100 mg之人類血清白蛋白。其他醫藥學上可接受之載劑包括水溶液、無毒賦形劑，包括鹽、防腐劑、緩衝液及其類似物。

在一些實施例中，非水性溶劑之非限制性實例為丙二醇、聚乙二醇、植物油及可注射有機酯，諸如乙基油酸酯。在一些實施例中，水性載劑之非限制性實例包括水、醇/水溶液、鹽水溶液、非經腸媒劑(諸如氯化鈉、林格氏右旋糖等)。在一些實施例中，靜脈內媒劑包括流體及營養補充劑。防腐劑包括抗微生物劑、抗真菌劑、抗氧化劑、螯合劑及惰性氣體。根據熟知參數來調節醫藥組合物中各種組分之pH及確切濃度。

在某些實施例中，包含本文中所描述之構築體的調配物及/或共投與調配物可適用於經口投與。在一些實施例中，口服調配物包括典型之賦形劑，諸如醫藥級甘露糖醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂及其類似物。組合物呈溶液、懸浮液、錠劑、丸劑、膠囊、持續釋放型調配物或粉末形式。

基於預期目標來確定醫藥組合物之有效量。術語「單位劑量」或「劑量」係指適用於個體之物理離散單位，各單位含有經計算以產生與其投與(亦即適當途徑及治療方案)相關之上文所論述之所需反應的醫藥組合物之預定量。根據治療數目及單位劑量兩者，所投與之量視所需之保護或效果而定。

醫藥組合物之精確量亦視從業者之判斷而定且為各個體所特有的。影響劑量之因素包括患者之物理及臨床狀態、投藥途徑、預期治療目標(例如症狀之緩解相對於治癒)以及特定治療性物質之效能、穩定性及毒性。 實例

包括以下實例以展示本發明之較佳實施例。熟習此項技術者應瞭解，以下實例中所揭示之技術代表本發明人所發現的在本發明之實踐中發揮良好作用之技術，且因此可視為構成用於其實踐之較佳模式。然而，根據本發明，熟習此項技術者應瞭解，在不背離本發明之精神及範疇的情況下可對所揭示之特定實施例作出許多改變且仍獲得相同或類似結果。 材料及方法 -

除非另外指出，否則本文中所描述之實驗及程序如下進行。 Ppp1r15b ^R658C 小鼠之產生

用特異性gRNA (例如AGTGGTGATGAGGATCGCAA AGG(SEQ ID NO: 38)；PAM序列帶下劃線且並非必需包含於gRNA序列內，(Synthego))、Cas9 mRNA (Sigma)及含有R658C突變之供體DNA顯微注射小鼠iPSC。供體DNA長度為500 bp且除所關注之點突變以外，引入緘默突變以防止突變體編輯回WT。供體亦含有側接突變區域之大約250 bp以促進同源重組。將經編輯之細胞植入至替代之雌性中且藉由基因座之定序對幼鼠進行基因分型。此等步驟在貝勒醫學院(Baylor College of Medicine；BCM)之核心設施中進行。培育攜帶所需突變之幼鼠且進行表現型測試。 基於細胞之分析法

對於壓力實驗，產生由慢病毒轉導所產生之穩定細胞且使用標準轉導程序用嘌呤黴素進行選擇。接著，用1 μM寡黴素、100 nM毒胡蘿蔔素處理細胞，或用1 μg聚(IC)使用脂染胺2000轉染三小時，隨後收穫細胞。在藉由SDS-PAGE及西方墨點法(western blotting)對指定蛋白質進行分析之前，製備及標準化溶解產物。 免疫沈澱

使用標準程序，用等效量之表現指定GFP標記基因及DP71L/ΔCREP嵌合體的DNA質體轉染細胞。轉染後16小時，洗滌細胞且收穫於溶解緩衝液中。對總蛋白質進行定量且在免疫沈澱反應中使用等效量之蛋白質。使用磁性GFP捕獲樹脂(Proteintech Group)在4℃下滾動隔夜來捕獲複合物。使用磁體自粗溶解產物分離複合物且用冰冷溶解緩衝液洗滌三次。用1X Laemmli緩衝液自樹脂溶離複合物，且藉由SDS-PAGE及西方墨點法進行分析。 腺相關病毒 ( AAV )

藉由將所指示之序列選殖於AAV2質體主鏈中來產生腺相關病毒。接著純化DNA且將其遞送至核心設施以產生用親神經性DJ/8進行血清分型之AAV。用可商購套組(Cell Biolabs)純化AAV且藉由基於qPCR之分析法進行定量。通常，將每ml 0.5至1 µl之約10 ¹²個病毒基因體注射至小鼠之CA1及CA3區域(海馬角子場1及3)兩者中之各海馬體中。在行為實驗開始之前，使AAV表現轉殖基因至少14天。隨後，剝離小鼠大腦，且製備樣品以進行SDS-PAGE及西方墨點法。 行為測試

如吾人先前所公開(參見例如Zhu等人, 2019)進行特定程序。簡言之，連續三天處理小鼠5分鐘以將其馴化成實驗者。隨後，將小鼠置放於制約腔室中以使其每兩天適應20分鐘。接著對小鼠進行厭惡之足部電擊訓練。以0.7 mA投與兩次訓練電擊，每次間隔90秒，其中在訓練電擊之間及之後記錄僵硬。最後，在訓練後的24小時，將小鼠置放於相同腔室中5分鐘且使用Freezeview軟體記錄僵硬所花費之時間的百分比。以吾人先前所描述(參見例如Zhu等人, 2019)且用僅略微之改良進行物體辨別。簡言之，處理小鼠5天(每天5至10分鐘)，且接著使其在昏暗環境光下適應黑色塑膠玻璃矩形腔室(31×24 cm，高度27 cm)10分鐘，持續5天。將兩個相同物體呈現給小鼠探索5分鐘，其後使小鼠返回至飼養籠。在二十四小時後，將一個物體置換為一個新穎物體且將小鼠再次置放於腔室中5分鐘。新穎物體具有相同高度及體積，但具有不同形狀及外觀。對物體之探索定義為在物體半徑2 cm內嗅探物體(鼻子接觸或頭指向物體)。坐或站在物體上不評分為探索。自安置於訓練腔室上方之攝影機記錄行為。將鑑別指數(DI)計算為DI = (新穎物體探索時間-熟悉物體探索時間/總探索時間) ×100。為控制氣味提示，用乙醇充分清潔開放空間場地及物體，乾燥且在小鼠之間通風。 電生理學

以先前所描述(參見例如Zhu等人, 2019)進行電生理學記錄。自CA1水平海馬截片(320 μm厚)進行現場記錄，該截片用振動切片機(Leica VT 1000S、Leica Microsystems、Buffalo Grove, IL)，在4℃下自於人造腦脊髓液溶液(ACSF；95% O2及5% CO2) (2至3毫升/分鐘)中之成年小鼠(3至6個月大)大腦中切割，該人造腦脊髓液溶液以mM計含有：124 NaCl、2.0 KCl、1.3 MgSO4、2.5 CaCl2、1.2 KH2PO4、25 NaHCO3及10葡萄糖。在記錄之前，將截片在介面腔室中培育至少60分鐘，且在28至29℃以2至3毫升/分鐘之流動速率用人造腦脊髓液(ACSF)連續灌注。將記錄電極置放於放線層(stratum radiatum)中。用ACSF填充之微量吸管記錄現場興奮性突觸後電位(field excitatory postsynaptic potential；fEPSP)，且該等電位由置放於CA1放線層中之雙極性刺激電極引發以激發Schaffer側支纖維及連合纖維。調節0.1-ms脈衝之強度以引起最大反應之30%至35%。在0.033 Hz下建立穩定之反應基線至少30分鐘。藉由應用四次高頻刺激訓練(100 Hz，1 s) (分別間隔5分鐘)來誘導強直性LTP。使用MultiClamp 700B放大器(Molecular Devices, Union City, CA)，在浸沒腔室(2至3毫升/分鐘)中在31至32℃下使用習知箝膜(patch-clamp)技術進行全細胞記錄。在立式顯微鏡(Axioskope FS2, Carl Zeiss, Oberkochen, Germany)之載物台上藉由紅外微分干涉對比視訊顯微圖目視鑑別CA1神經元。膜片吸量管(電阻2至5 MW)填充有(以mM計)：140 CsCl、10 HEPES、10 Na2-磷酸肌酸、0.2 BAPTA、2 Mg3-ATP、0.2 Na3-GTP；使用Wescor 5500蒸氣壓滲透計(Wescor, Logan, UT)將pH調節至7.2且將滲透壓調節至295至300 mOsm。在存在NBQX (5 μM，2,3-二羥基-6-硝基-7-胺磺醯基-苯并[f]喹喏啉二鈉鹽)、AP5 (25 μM，DL-2-胺基-5-膦基戊酸)及TTX (1 μM，河豚毒素(tetrodotoxin))之情況下，記錄在-60 mV下之微型抑制性突觸後電流。為了記錄興奮性電流，CsCl經130 mM K-葡萄糖酸鹽及10 mM KCl置換。在存在100 μM苦毒素(picrotoxin)之情況下，記錄在-70 mV下之興奮性突觸後電流(excitatory postsynaptic current；EPSC)。所有藥物均獲自Tocris (Ellisville, MO)。 多核糖體分析及 RNA 分離

以先前所描述(參見例如Hinnebusch等人, 2016)進行多核糖體分析，隨後進行RNA定序。簡言之，以先前所描述(參見例如Zhu等人, 2019；及Tible等人, 2019)，製備新鮮12 ml之10%至50%蔗糖密度梯度[10 mM HEPESKOH (pH 7.6)、5 mM MgCl2、150 mM KCl、200 U/ml RNasin RNA酶抑制劑(Promega, Madison, WI)]。在使用前，使梯度在4℃下保持至少2小時。將小鼠腦組織在切割溶液[1X HBSS、2.5 mM HEPES-KOH (pH 7.6)、35 mM葡萄糖、4 mM NaHCO3、100 μg/ml環己醯亞胺(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)]中剝離，且在含有100 μg/ml環己醯亞胺之冰冷PBS中在4℃下藉由以3000 rpm進行離心10分鐘來洗滌。接著，將組織溶解於多核糖體溶解緩衝液[10 mM HEPES-KOH (pH 7.4)、5 mM MgCl2、150 mM KCl、0.5 mM DTT、100 U/ml RNasin RNA酶抑制劑(Promega, Madison, WI)、100 μg/ml環己醯亞胺及不含EDTA之蛋白酶抑制劑(Roche Indianapolis, IN)]中且在4℃下以2000 × g離心10分鐘。接著將上清液轉移至補充有0.5% NP-40之預冷淬試管中，且保持在冰上10分鐘。在4℃下以14,000 rpm離心樣品10分鐘。將上清液分層於蔗糖梯度上或保留用於總RNA分離。在SW-40Ti轉子中以35,000 rpm在4℃下離心梯度2小時，且接著藉由用Brandel試管刺穿器刺穿試管，使70%蔗糖穿過試管底部且使用ISCO UA-6 UV偵測器監測自管溶離之材料的吸光度來分析。在整個過程中收集溶離份且根據製造商說明書(Life Technologies, Carlsbad, CA)用TRIzol萃取RNA。在各組之三個生物複本中進行實驗。 轉譯之表面感測 ( SUnSET )

以先前所描述(參見例如Zhu等人, 2019)，使用SUnSET (一種監測蛋白質合成之非放射性標記方法)來量測蛋白質合成。簡言之，以吾人先前所描述(參見例如Zhu等人, 2019)，用McIlwain組織切片機(Mickle, UK)切割海馬截片(300 μm)且在室溫下於含氧(95% O2，5% CO2) ACSF中培育1小時，隨後在處理之前在32℃下於含氧(95% O2，5% CO2) ACSF中培育1小時。將嘌呤黴素(10 μg/μl，溶解於含氧ACSF中)以浴液形式塗覆至截片20分鐘，隨後用未經處理之含氧ACSF洗滌。接著將截片在乾冰上速凍且儲存於-80℃下直至使用。將經冷凍之截片溶解於均質化緩衝液(以mM計：40 Tris HCl，pH 8.0、150 NaCl、25 b-甘油磷酸鹽、50 NaF、2 Na3VO3、1X蛋白酶抑制劑混合物、10%甘油、1% Triton X-100)中。以先前所描述(參見例如Zhu等人, 2019)，藉由西方墨點法使用針對嘌呤黴素之12D10抗體(目錄號MABE343，1:5000, EMD Millipore Corp, Darmstadt, Germany)來偵測嘌呤黴素併入。使用ImageJ及由司徒頓t檢定(Student's t-test)評估之統計顯著性對所得條帶之密度進行定量。 實例 1 - Ppp1r15b ^R658C 小鼠之生 成 及表徵 Ppp1r15b ^R658C 小鼠展現異常轉譯控制及活性 ISR 。

產生新的小鼠模型( Ppp1r15b ^R658C小鼠)，其在 PPP1R15B中攜帶選擇性突變(R658C)，該突變已藉由全外顯子體定序鑑別為與人類中之智能障礙相關(參見例如Abdulkarim等人, 2015；Kernohan等人, 2015；及Mohammad等人, 2016)。簡言之，使用靶向PPP1R15B區域之引導RNA，用CRISPR生成小鼠，該區域與編碼R658C突變之鹼基位置非常接近。簡言之，將含有R658C突變之供體DNA、Cas9 mRNA及引導RNA共注射至胚胎中，該胚胎隨後植入至替代小鼠中。鑑別具有所需基因座之同型組合靶向的四隻幼鼠( 圖 2A)。培育小鼠且獲得突變體及同窩對照。與在攜帶同型組合突變之個體中觀測到之小頭畸形一致(參見例如Abdulkarim等人, 2015；及Kernohan等人, 2015)，亦發現Ppp1r15bR658C小鼠展現略微較小大腦( 圖 2B)。在人類中，R658C突變抑制CReP•PP1磷酸酶複合物之活性，引起eIF2-P含量增加(參見例如Abdulkarim等人, 2015；及Kernohan等人, 2015)。與人類資料一致，發現CReP含量未改變( 圖 2C)，但發現 Ppp1r15b ^R658C小鼠之大腦( 圖 2D)及初代纖維母細胞( 圖 2E)中之eIF2-P含量增加。因此， Ppp1r15b ^R658C小鼠中之ISR受到選擇性干擾。

由於ISR之活化抑制一般轉譯(參見例如Costa-Mattioli等人, 2009)，因此接著研究蔗糖梯度中之多核糖體沈積是否降低 Ppp1r15b ^R658C小鼠中之總蛋白質合成速率，如最近所描述(參見例如Zhu等人, 2019)。在此技術中，給定mRNA在蔗糖梯度中之位置係藉由相關核糖體之數目確定。未充分轉譯或未轉譯之mRNA積聚在頂部附近，而轉譯活性mRNA與多個核糖體(多核糖體)相關且沈積至梯度底部( 圖 2F)。結果顯示， Ppp1r15b ^R658C小鼠大腦中之一般轉譯受到抑制，如藉由多核糖體之減少及單核糖體之相應增加所指示( 圖 2G 至圖 2H)，其與增加之eIF2-P含量一致(參見例如Costa-Mattioli等人, 2007；及Harding等人, 2000)。此外，當本發明人藉由評估初生多肽鏈中之嘌呤黴素併入而在活體內量測蛋白質合成時(參見例如Zhu等人, 2019；及Di Prisco等人, 2014)，發現在來自 Ppp1r15b ^R658C小鼠之纖維母細胞中，嘌呤黴素併入減少( 圖 2I 至圖 2J)。因此，當ISR在 Ppp1r15b ^R658C小鼠之大腦中活化時，蛋白質合成速率降低。 Ppp1r15bR658C 小鼠之長期記憶受損。

本發明人及其他人已證實ISR之活化損害長期記憶(參見例如Costa-Mattioli等人, 2007；Batista等人, 2016；Jiang等人, 2015；Jian等人, 2014；及Shrestha等人, 2020)。鑒於 Ppp1r15b ^R658C小鼠選擇性地活化ISR，本發明人接著測定此等小鼠是否具有長期記憶損傷。為此目的，檢查海馬體依賴性情境恐懼記憶，其中情境(制約刺激；CS)與足部電擊(非制約刺激；US)配對。在訓練之後的二十四小時，使小鼠暴露於CS且將恐懼反應(「僵硬行為」)量測為其長期記憶之強度指數( 圖 3A)。資料顯示，在訓練之前，僵硬在 Ppp1r15b ^R658C小鼠及未經處理之對照同窩小鼠中類似，但在訓練之後的24小時， Ppp1r15b ^R658C小鼠展現僵硬顯著減少，指示其長期記憶受損( 圖 3B)。

另外，亦評估長期物體辨識記憶，其亦視海馬體而定(參見例如Vann等人, 2011)。在長期物體辨識記憶任務中，動物需要在熟悉與新穎物體之間進行區分。已知野生型(WT)小鼠優先探索新穎物體。在訓練期間，將兩個相同物體置放於盒中且允許小鼠探索物體( 圖 3C)。資料顯示， Ppp1r15b ^R658C及WT同窩小鼠在訓練期間平均花費等量時間研究物體( 圖 3D)。然而，當24小時後置換新物體時， Ppp1r15b ^R658C小鼠展現物體辨別力降低，指示其長期物體辨識記憶存在缺陷( 圖 3E)。因此， Ppp1r15b ^R658C小鼠之長期記憶受損。 Ppp1r15b ^R658C 小鼠之長期增效受損。

本發明人量測 Ppp1r15b ^R658C小鼠中之長期增效(LTP)，一種記憶形成之細胞模型(參見例如Neves等人, 2008)。在海馬截片中，四次100 Hz刺激訓練誘導視新蛋白質合成而定之持久L-LTP (參見例如Costa-Mattioli等人, 2009；Kandel等人, 2001；及Kelleher等人, 2004)。鑒於本發明人及其他人已證實ISR雙向調節L-LTP：亦即，ISR之活化損害L-LTP，而ISR之抑制促進L-LTP (參見例如Costa-Mattioli等人, 2007；Zhu等人, 2011；Jiang等人, 2010；及Huang等人, 2016)，且即時結果顯示 Ppp1r15b ^R658C小鼠中之ISR受到選擇性活化，本發明人想知道此等小鼠中之L-LTP是否受損。實際上，與現場一致，四次100 Hz之訓練在WT截片中誘導持續之L-LTP ( 圖 3F)。然而，相同刺激方案未能在 Ppp1r15b ^R658C截片中如此進行( 圖 3F)。值得注意的是，如藉由現場興奮性電位之輸入-輸出標繪圖(作為突觸前纖維群峰(presynaptic fiber volley)與雙脈衝易化(paired pulse facilitation)之函式)所測定，基礎突觸傳導在WT及 Ppp1r15b ^R658C截片中類似(資料未示出)。因此， Ppp1r15b ^R658C小鼠之長期增效受損。 實例 2 - 整合的壓力反應 ( ISR ) 之抑制 抑制 ISR 之病毒策略。

由於eIF2-P磷酸酶之調節可證明為一種調節ISR活性之有效機制，因此本發明人利用病毒所使用之策略來抑制ISR。鑒於eIF2-P增加(亦即，ISR活化)損害細胞及病毒蛋白合成兩者，許多病毒已演化出使ISR不活化之機制(參見例如Garcia等人, 2007)。實際上，例如哺乳動物同源物GADD34及CReP，來自單純疱疹病毒之γ34.5蛋白、來自非洲豬瘟病毒之DP71L蛋白、金絲雀痘病毒(CNPV)之CNPV231蛋白、來自袋鼠疱疹病毒(MaHV)之ICP34.5蛋白，及來自桑燈蛾昆蟲痘病毒「L」(AmEPV)之AmEPV193蛋白，咸信其全部均募集PP1以使eIF2去磷酸化(參見例如Rojas等人, 2015) ( 圖 4A)。在酵母中，此等蛋白質藉由減少eIF2-P來抑制ISR(參見例如Rojas等人, 2015)。然而，A)本發明人已知，酵母基因體並不天然地編碼可抑制ISR之eIF2-磷酸酶輔因子直系同源物(例如GADD34或CreP樣蛋白)，且B)酵母中將PP1募集至eIF2之機制與人類細胞中之募集機制不同(參見例如Rojas等人, Protein phosphatase PP1/GLC7 interaction domain in yeast eIF2γ bypasses targeting subunit requirement for eIF2α dephosphorylation. PNAS, 2014, 111(14) E1344-E1353；其出於本文中所描述之目的以引用之方式併入本文中)。迄今為止，不清楚此等蛋白質是否將以類似方式在人類細胞中起作用。此外，迄今為止，不清楚病毒蛋白(例如DP71L)是否可抑制ISR，由此減少、治療、預防及/或逆轉與ISR活化相關之認知功能障礙及/或其他疾病及病症。

在本文中，本發明人首先關注DP71L，因為其為含有PP1結合域及eIF2結合域兩者之家族的最小蛋白質(62個胺基酸) ( 圖 4A)。本發明人首先檢查DP71L是否能夠抑制人類細胞中由寡黴素(oligo)誘導之ISR活化，已知該寡黴素活化ISR激酶HRI。如所預期，在經GFP轉染之HEK293細胞中，經eIF2-P增加所測定，寡黴素誘導ISR。相比之下，DP71L-GFP之表現完全阻止寡黴素誘導之ISR活化( 圖 4B)。類似地，DP71L-GFP分別抑制聚(I:C)及毒胡蘿蔔素(thap) (兩種熟知之ISR激酶PKR及PERK之活化劑)誘導之ISR活化。因此，DP71L為人類細胞中ISR之強效泛抑制劑( 圖 4C 至圖 4D)，且可用於抑制人類細胞中之ISR活化而不考慮活化之ISR分支如何。 DP71L 功能之分子表徵。

為闡明DP71L對ISR抑制之效能的潛在機制，本發明人首先比較DP71L與截短型CReP相比之作用，該截短型CReP與DP71L具有相同長度且含有PP1及eIF2結合模體(ΔCREP， 圖 5A；例如SEQ ID NO: 6)。在毒胡蘿蔔素誘導ISR後，本發明人發現，當與ΔCREP-GFP相比時，DP71L-GFP為ISR之更強效抑制劑( 圖 5B)。DP71L為使磷酸酶PP1與標靶eIF2橋接之骨架蛋白，因此使得磷酸酶對其標靶具有特異性。基於此，本發明人假設，DP71L增強之ISR抑制特性可歸因於與PP1、eIF2或兩種蛋白質之結合增加。為測試此假設，本發明人逐個比較ΔCREP-GFP或DP71L-GFP與內源性PP1及eIF2之結合。儘管ΔCREP-GFP及DP71L-GFP兩者與eIF2之結合類似，但據顯示DP71L-GFP與PP1之結合強於ΔCREP-GFP ( 圖 5C)，表明DP71L可相對於其他類似尺寸之PP1及eIF2結合蛋白呈現增加之PP1結合。

為鑑別區分DP71L-GFP與ΔCREP-GFP之蛋白質區域，本發明人產生包含CREP及DP71L之各種部分的不同嵌合蛋白( 圖 6A)。首先，DP71L之中端及C端部分調換為ΔCREP-GFP [C8僅含有ΔCREP之N端(PP1結合)模體]。如上文所指出，觀測到與ΔCREP-GFP相比，全長DP71L-GFP與PP1之結合更強( 圖 6B)。有趣的是，C8顯示與PP1之強結合，其類似於全長DP71L。隨後，將含有PP1結合域及連接子區域(例如PP1結合域與eIF2結合域之間的區域)兩者的ΔCREP-GFP之N端融合至DP71L之C端(例如eIF2結合域)。與DP71L相比，此構築體，C20，呈現降低之PP1結合( 圖 6B)。最後，將包括PP1結合模體及連接子區域之DP71L之N端添加至ΔCREP-GFP產生D20，且此殖株在與ΔCREP-GFP相比時呈現與PP1之改良結合( 圖 6B)。因此，資料指示PP1結合域與eIF2結合域之間的連接子區域可定量地促成DP71L或ΔCREP-GFP與PP1之結合效率。為進一步測試此觀測結果，本發明人僅調換DP71L與ΔCREP-GFP之連接子區域( 圖 6C)。根據較早觀測結果，當與ΔCREP-GFP相比時，含有DP71之連接子(例如「DP71-連接子」)的ΔCREP-GFP更強地結合至PP1。相比之下，當與WT DP71L相比時，將ΔCREP-GFP之連接子(例如「ΔCREP-連接子」)添加至DP71L使得嵌合蛋白與PP1之結合減少( 圖 6D)。此等結果令人驚訝且出乎意料，因為先前尚未知曉，連接子區域可能有助於與PP1之結合。

DP71L之連接子含有12個胺基酸，而ΔCREP之連接子含有13個胺基酸。兩種蛋白質結構連同PP1以及eIF2α之N端域(NTD)的α摺疊預測( 圖 7A 至圖 7B)顯示，DP71L含有經預測與PP1形成新氫鍵之麩胺酸(ΔCREP中為酪胺酸)。鑒於已知氫鍵使蛋白質-蛋白質相互作用/結構及分子識別穩定，本發明人假設，DP71L上之麩胺酸之突變將破壞PP1結合。與此假設一致，使麩胺酸(E12)突變且用酪胺酸置換麩胺酸顯著地降低DP71L與PP1之結合( 圖 7C)。最後，計算分析揭示，在動物界(例如包括針對該等動物之病毒)中存在＞ 440種不同大小之含有PP1及eIF2結合域兩者之蛋白質(例如其子集在本文 表 1中呈現)。值得注意的是，DP71L似乎為經鑑別之最短蛋白質，且為此清單中僅有的在此位置中含有麩胺酸之蛋白質。 實例 3 - 逆轉與 ISR 相關之認知缺陷 DP71L ： 一種逆轉唐氏症及阿茲海默氏病之小鼠模型中之認知缺陷的新基因療法方法。

調低ISR正成為逆轉各種記憶病症中之認知功能障礙的有前景途徑。一些ISR激酶之小分子抑制劑之發展(參見例如Halliday等人, 2015；Nakamura等人, 2018；Axten等人, 2012；Rosen等人, 2009；Huang等人, 1990；Bryk等人, 2011；Robert等人, 2009；Yefidoff-Freedman等人, 2017；及Hong等人, 2016)為理解此等激酶及其相關標靶之細胞功能提供寶貴工具。然而令人遺憾的是，此等小分子抑制劑之治療前景很大程度上仍未實現，且由於其相對缺乏特異性(參見例如Rojas-Rivera等人, 2017)及顯著毒性作用，諸如與使用PERK抑制劑相關之胰臟毒性(參見例如Yu等人, 2015)而受到妨礙。迄今為止，ISRIB為最佳表徵之ISR抑制劑。生物化學、基因及結構結果顯示，ISRIB直接結合至eIF2B且藉由促進其組裝而增強其活性(參見例如Sidrauski等人, 2013；Sidrauski等人, 2015；Tsai等人, 2018；及Zyryanova等人, 2018)。然而，ISRIB阻斷僅中等活化程度之ISR (參見例如Rabouw等人, 2019)。亦即，當ISR強烈活化時，ISRIB無法抑制ISR (參見例如Halliday等人, 2015；及Rabouw等人, 2019)。另外，ISRIB溶解性非常差，此顯著妨礙其經由血腦障壁滲透至大腦之能力且因此妨礙其作為藥物之發展。因此，非常需要新的、更具特異性及/或更強效之ISR抑制劑。鑒於此需要，本發明人已開發新的且高效的且基於療法之方法，其使ISR緘默及/或抑制ISR。腺相關病毒(AAV)為用於靶向治療各種疾病之基因遞送的主要平台。藉由最佳化AAV之衣殼，近期發展已對AAV介導之基因療法之臨床前及臨床成功做出實質性貢獻。然而，基於AAV之療法的一個主要限制為相關之相對較小封裝容量，例如其限於約4.7 kb。

由於DP71L之小尺寸及其強效ISR抑制能力，本發明人判定，DP71L蛋白及/或包含編碼其之聚核苷酸序列的構築體將為改善認知及/或減輕及/或預防活化ISR之其他疾病之症狀的理想基因治療方法。為此目的，本發明人將DP71L-GFP選殖至基於AAV之構築體中，形成AAV粒子，且將AAV遞送至海馬體(小鼠之長期記憶形成所需之大腦結構)中( 圖 8A)。表現DP71L-GFP之AAV的立體定向注射引起小鼠海馬體中之可偵測蛋白質表現( 圖 8A)。本發明人及其他人先前已證實，ISR之抑制挽救與唐氏症(DS) (參見例如Zhu等人, 2019)及阿茲海默氏病(AD) (參見例如Ma等人, 2013；Segev等人, 2015；Tible等人, 2019；Hwang等人, 2017；及Lourenco等人, 2013)相關之記憶缺陷。因此，本發明人測試注射DP71L AAV是否挽救此等認知功能障礙模型中之長期記憶。

DS仍為智能障礙之最常見遺傳形式。Ts65Dn小鼠為DS之充分表徵之小鼠模型，其再現DS患者之記憶缺陷特徵且展現長期記憶缺陷(參見例如Zhu等人, 2019)。令人驚奇地是，將DP71L-GFP (而非單獨GFP)注射至Ts65Dn小鼠之海馬體中足以完全逆轉此模型中之長期記憶缺陷( 圖 8B)。接著，本發明人檢驗DP71L是否亦恢復Ts65Dn小鼠海馬體中之突觸連接強度的缺陷。為此目的，本發明人量測海馬L-LTP，一種用於記憶形成之細胞模型。在海馬截片中，四次100 Hz之訓練誘導持久之L-LTP。據先前所展示，由於ISR之活化，來自Ts65Dn小鼠之截片中之L-LTP受損(參見例如Zhu等人, 2019)。根據此觀測結果，本發明人發現，當與注射GFP之對照動物相比時，DP71L-GFP AAV注射挽救DS小鼠中發現之L-LTP缺陷( 圖 8C)。此等資料顯示，DP71L AAV療法逆轉認知減退以及與唐氏症相關之突觸功能的潛在持久缺陷。

阿茲海默氏病為最常見形式之失智症。雖然在2020年，有580萬美國人患有阿茲海默氏病，但預計到2060年，此數目增加三倍，達到1400萬人。目前，可減輕及/或治癒與阿茲海默氏病(AD)相關之記憶衰退的有效治療並不存在。APP/PS1為雙重轉殖基因小鼠，其表現嵌合小鼠/人類澱粉樣前驅蛋白(Mo/HuAPP695swe)及突變體人類早老素1 (PS1-dE9)，兩者均針對CNS神經元。兩種突變均與早發型阿茲海默氏病相關。此「人類化」APP/PS1模型已用於研究與AD相關之病變。如先前所報導，本發明人發現，APP/PS1小鼠展現相當顯著之長期記憶及L-LTP缺陷( 圖 8D)。明顯地，DP71L AAV療法逆轉APP/PS1小鼠中發現之長期記憶及L-LTP缺陷兩者( 圖 8E)。

總之，本發明人已鑑別出一種新的且強效之基因療法(例如包含ISR抑制劑，例如包含DP71L)，該療法改善廣泛範圍之活化ISR的認知病症之病況中的長期記憶形成。 *  *  *

本文中所揭示及主張之所有方法可根據本發明在不進行不當實驗之情況下進行及執行。雖然已根據較佳實施例描述本發明之組合物及方法，但熟習此項技術者應清楚，可在不背離本發明之概念、精神及範疇的情況下將變化應用於本文中所描述之方法及方法之步驟或步驟之順序中。更特定言之，將顯而易知的是，在化學及生理學兩者上相關之某些藥劑可經本文中所描述之藥劑取代，同時將達成相同或類似結果。對熟習此項技術者顯而易見的所有此類類似替代物及修改均視為在如隨附申請專利範圍所定義之本發明之精神、範疇及概念內。 參考文獻

以下參考文獻，在其對本文中所闡述之內容提供例示性程序或其他細節補充的範圍內，特定地以引用之方式併入本文中。 1    Hinnebusch, A. G., Ivanov, I. P. & Sonenberg, N. Translational control by 5'-untranslated regions of eukaryotic mRNAs. Science352, 1413-1416, doi:10.1126/science.aad9868 (2016). 2     Bogorad, A. M., Lin, K. Y. & Marintchev, A. Novel mechanisms of eIF2B action and regulation by eIF2alpha phosphorylation. Nucleic Acids Res45, 11962-11979, doi:10.1093/nar/gkx845 (2017). 3    Kenner, L. R. et al.,eIF2B-catalyzed nucleotide exchange and phosphoregulation by the integrated stress response. Science364, 491-495, doi:10.1126/science.aaw2922 (2019). 4    Kashiwagi, K. et al.,Structural basis for eIF2B inhibition in integrated stress response. Science 364, 495-499, doi:10.1126/science.aaw4104 (2019). 5     Adomavicius, T. et al.,The structural basis of translational control by eIF2 phosphorylation. Nat Commun10, 2136, doi:10.1038/s41467-019-10167-3 (2019). 6     Gordiyenko, Y., Llacer, J. L. & Ramakrishnan, V. Structural basis for the inhibition of translation through eIF2alpha phosphorylation. Nat Commun10, 2640, doi:10.1038/s41467-019-10606-1 (2019). 7     Costa-Mattioli, M. et al.,eIF2alpha phosphorylation bidirectionally regulates the switch from short- to long-term synaptic plasticity and memory. Cell129, 195-206, doi:10.1016/j.cell.2007.01.050 (2007). 8     Costa-Mattioli, M. et al.,Translational control of hippocampal synaptic plasticity and memory by the eIF2alpha kinase GCN2. Nature436, 1166-1173, doi:10.1038/nature03897 (2005). 9     Zhu, P. J. et al.,Suppression of PKR promotes network excitability and enhanced cognition by interferon-gamma-mediated disinhibition. Cell147, 1384-1396, doi:10.1016/j.cell.2011.11.029 (2011). 10   Batista, G., Johnson, J. L., Dominguez, E., Costa-Mattioli, M., & Pena, J. L. Translational control of auditory imprinting and structural plasticity by eIF2alpha. Elife 5, doi:10.7554/eLife.17197 (2016). 11   Ma, T. et al.,Suppression of eIF2alpha kinases alleviates Alzheimer's disease-related plasticity and memory deficits. Nat Neurosci 16, 1299-1305, doi:10.1038/nn.3486 (2013). 12   Sharma, V. et al. Local Inhibition of PERK Enhances Memory and Reverses Age-Related Deterioration of Cognitive and Neuronal Properties. J Neurosci38, 648-658, doi:10.1523/JNEUROSCI.0628-17.2017 (2018). 13   Segev, Y. et al., PKR Inhibition Rescues Memory Deficit and ATF4 Overexpression in ApoE epsilon4 Human Replacement Mice. J Neurosci35, 12986-12993, doi:10.1523/JNEUROSCI.5241-14.2015 (2015). 14   Stern, E., Chinnakkaruppan, A., David, O., Sonenberg, N. & Rosenblum, K. Blocking the eIF2alpha kinase (PKR) enhances positive and negative forms of cortex-dependent taste memory. J Neurosci33, 2517-2525, doi:10.1523/JNEUROSCI.2322-12.2013 (2013). 15   Moreno, J. A. et al.,Sustained translational repression by eIF2alpha-P mediates prion neurodegeneration. Nature485, 507-511, doi:10.1038/nature11058 (2012). 16   Kim, H. J. et al.,Therapeutic modulation of eIF2alpha phosphorylation rescues TDP-43 toxicity in amyotrophic lateral sclerosis disease models. Nat Genet46, 152-160, doi:10.1038/ng.2853 (2014). 17   Wong, Y. L. et al.,eIF2B activator prevents neurological defects caused by a chronic integrated stress response. Elife8, doi:10.7554/eLife.42940 (2019). 18   Sidrauski, C. et al.,Pharmacological brake-release of mRNA translation enhances cognitive memory. Elife2, e00498, doi:10.7554/eLife.00498 (2013). 19   Zhu, P. J. et al.,Activation of the ISR mediates the behavioral and neurophysiological abnormalities in Down syndrome. Science366, 843-849, doi:10.1126/science.aaw5185 (2019). 20   Tible, M. et al.,PKR knockout in the 5xFAD model of Alzheimer's disease reveals beneficial effects on spatial memory and brain lesions. Aging Cell18, e12887, doi:10.1111/acel.12887 (2019). 21   Hwang, K. D., Bak, M. S., Kim, S. J., Rhee, S. & Lee, Y. S. Restoring synaptic plasticity and memory in mouse models of Alzheimer's disease by PKR inhibition. Mol Brain10, 57, doi:10.1186/s13041-017-0338-3 (2017). 22   Lourenco, M. V. et al.,TNF-alpha mediates PKR-dependent memory impairment and brain IRS-1 inhibition induced by Alzheimer's beta-amyloid oligomers in mice and monkeys. Cell Metab18, 831-843, doi:10.1016/j.cmet.2013.11.002 (2013). 23   Chou, A. et al.,Inhibition of the integrated stress response reverses cognitive deficits after traumatic brain injury. Proc Natl Acad Sci U S A114, E6420-E6426, doi:10.1073/pnas.1707661114 (2017). 24   Sen, T., Gupta, R., Kaiser, H. & Sen, N. Activation of PERK Elicits Memory Impairment through Inactivation of CREB and Downregulation of PSD95 After Traumatic Brain Injury. J Neurosci37, 5900-5911, doi:10.1523/JNEUROSCI.2343-16.2017 (2017). 25   Abdulkarim, B. et al.,A Missense Mutation in PPP1R15B Causes a Syndrome Including Diabetes, Short Stature, and Microcephaly. Diabetes64, 3951-3962, doi:10.2337/db15-0477 (2015). 26   Kernohan, K. D. et al.,Homozygous mutation in the eukaryotic translation initiation factor 2alpha phosphatase gene, PPP1R15B, is associated with severe microcephaly, short stature and intellectual disability. Hum Mol Genet24, 6293-6300, doi:10.1093/hmg/ddv337 (2015). 27   Borck, G. et al.,eIF2gamma mutation that disrupts eIF2 complex integrity links intellectual disability to impaired translation initiation. Mol Cell48, 641-646, doi:10.1016/j.molcel.2012.09.005 (2012). 28   Skopkova, M. et al.,EIF2S3 Mutations Associated with Severe X-Linked Intellectual Disability Syndrome MEHMO. Hum Mutat38, 409-425, doi:10.1002/humu.23170 (2017). 29   Gregory, L. C. et al.,Impaired EIF2S3 function associated with a novel phenotype of X-linked hypopituitarism with glucose dysregulation. EBioMedicine42, 470-480, doi:10.1016/j.ebiom.2019.03.013 (2019). 30   Moortgat, S. et al.,Two novel EIF2S3 mutations associated with syndromic intellectual disability with severe microcephaly, growth retardation, and epilepsy. Am J Med Genet A170, 2927-2933, doi:10.1002/ajmg.a.37792 (2016). 31   Costa-Mattioli, M. & Walter, P. The integrated stress response: From mechanism to disease. Science368, doi:10.1126/science.aat5314 (2020). 32   Mohammad, S. et al.,Infantile Cirrhosis, Growth Impairment, and Neurodevelopmental Anomalies Associated with Deficiency of PPP1R15B. J Pediatr179, 144-149 e142, doi:10.1016/j.jpeds.2016.08.043 (2016). 33   Costa-Mattioli, M., Sonenberg, N. & Richter, J. D. in Translational Control in Health and Disease. Vol. 90 (ed J. W. Hershey) 293-311 (Elsevier, 2009). 34   Harding, H. P. et al.,Regulated translation initiation controls stress-induced gene expression in mammalian cells. Mol Cell6, 1099-1108 (2000). 35   Di Prisco, G. V. et al.,Translational control of mGluR-dependent long-term depression and object-place learning by eIF2alpha. Nat Neurosci 17, 1073-1082, doi:10.1038/nn.3754 (2014). 36   Jiang, Z. et al.,eIF2alpha Phosphorylation-dependent translation in CA1 pyramidal cells impairs hippocampal memory consolidation without affecting general translation. J Neurosci30, 2582-2594, doi:30/7/2582 [pii]10.1523/JNEUROSCI.3971-09.2010 (2010). 37   Jian, M. et al.,eIF2alpha dephosphorylation in basolateral amygdala mediates reconsolidation of drug memory. J Neurosci34, 10010-10021, doi:10.1523/JNEUROSCI.0934-14.2014 (2014). 38   Shrestha, P. et al.,Cell-type-specific drug-inducible protein synthesis inhibition demonstrates that memory consolidation requires rapid neuronal translation. Nat Neurosci23, 281-292, doi:10.1038/s41593-019-0568-z (2020). 39   Vann, S. D. & Albasser, M. M. Hippocampus and neocortex: recognition and spatial memory. Curr Opin Neurobiol21, 440-445, doi:10.1016/j.conb.2011.02.002 (2011). 40   Neves, G., Cooke, S. F. & Bliss, T. V. Synaptic plasticity, memory and the hippocampus: a neural network approach to causality. Nat Rev Neurosci9, 65-75, doi:nrn2303 [pii]10.1038/nrn2303 (2008). 41   Costa-Mattioli, M., Sossin, W. S., Klann, E. & Sonenberg, N. Translational Control of Long-Lasting Synaptic Plasticity and Memory. Neuron61, 10-26 (2009). 42   Kandel, E. R. The molecular biology of memory storage: a dialogue between genes and synapses. Science294, 1030-1038 (2001). 43   Kelleher, R. J., 3rd, Govindarajan, A. & Tonegawa, S. Translational regulatory mechanisms in persistent forms of synaptic plasticity. Neuron44, 59-73 (2004). 44   Huang, W. et al.,Translational control by eIF2alpha phosphorylation regulates vulnerability to the synaptic and behavioral effects of cocaine. Elife5, doi:10.7554/eLife.12052 (2016). 45   Garcia, M. A. Meurs, E. F. & Esteban, M. The dsRNA protein kinase PKR: virus and cell control. Biochimie89, 799-811, doi:10.1016/j.biochi.2007.03.001 (2007). 46   Rojas, M., Vasconcelos, G., & Dever, T. E. An eIF2alpha-binding motif in protein phosphatase 1 subunit GADD34 and its viral orthologs is required to promote dephosphorylation of eIF2alpha. Proc Natl Acad SciU S A 112, E3466-3475, doi:10.1073/pnas.1501557112 (2015). 47   Halliday, M., et al.,Partial restoration of protein synthesis rates by the small molecule ISRIB prevents neurodegeneration without pancreatic toxicity. Cell Death Dis6, e1672 (2015). 48   Nakamura, A. et al.,Inhibition of GCN2 sensitizes ASNS-low cancer cells to asparaginase by disrupting the amino acid response. Proc Natl Acad Sci U S A115, E7776-E7785 (2018). 49   Axten, J. M. et al.,Discovery of 7-methyl-5-(1-{[3-(trifluoromethyl)phenyl]acetyl}-2,3-dihydro-1H-indol-5-yl)-7H-p yrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-amine (GSK2606414), a potent and selective first-in-class inhibitor of protein kinase R (PKR)-like endoplasmic reticulum kinase (PERK). J Med Chem55, 7193-7207 (2012). 50   Rosen, M. D. et al.,Discovery of the first known small-molecule inhibitors of heme-regulated eukaryotic initiation factor 2alpha (HRI) kinase. Bioorg Med Chem Lett19, 6548-6551 (2009). 51   Huang, J. T., & Schneider, R. J., Adenovirus inhibition of cellular protein synthesis is prevented by the drug 2-aminopurine. Proc Natl Acad Sci U S A87, 7115-7119 (1990). 52   Bryk, R. et al.,Identification of new inhibitors of protein kinase R guided by statistical modeling. Bioorg Med Chem Lett21, 4108-4114 (2011). 53   Robert, F. et al.,Blocking UV-induced eIF2alpha phosphorylation with small molecule inhibitors of GCN2. Chem Biol Drug Des74, 57-67 (2009). 54   Yefidoff-Freedman, R. et al.,Development of 1-((1,4-trans)-4-Aryloxycyclohexyl)-3-arylurea Activators of Heme-Regulated Inhibitor as Selective Activators of the Eukaryotic Initiation Factor 2 Alpha (eIF2alpha) Phosphorylation Arm of the Integrated Endoplasmic Reticulum Stress Response. J Med Chem60, 5392-5406 (2017). 55   Hong, M. N., Nam, K. Y., Kim, K. K., Kim, S. Y., Kim, I., The small molecule '1-(4-biphenylylcarbonyl)-4-(5-bromo-2-methoxybenzyl) piperazine oxalate' and its derivatives regulate global protein synthesis by inactivating eukaryotic translation initiation factor 2-alpha. Cell Stress Chaperones21, 485-497 (2016). 56   Rojas-Rivera, D . et al.,When PERK inhibitors turn out to be new potent RIPK1 inhibitors: critical issues on the specificity and use of GSK2606414 and GSK2656157. Cell Death Differ24, 1100-1110 (2017). 57   Yu, Q. et al.,Type I interferons mediate pancreatic toxicities of PERK inhibition. Proc Natl Acad Sci U S A112, 15420-15425 (2015). 58   Sidrauski, C. et al.,Pharmacological dimerization and activation of the exchange factor eIF2B antagonizes the integrated stress response. Elife4, e07314 (2015). 59   Tsai, J. C. et al.,Structure of the nucleotide exchange factor eIF2B reveals mechanism of memory enhancing molecule. Science359, (2018). 60   Zyryanova, A. F . et al.,Binding of ISRIB reveals a regulatory site in the nucleotide exchange factor eIF2B. Science359, 1533-1536 (2018). 61   Rabouw H. H. et al.,Small molecule ISRIB suppresses the integrated stress response within a defined window of activation. Proc Natl Acad Sci U S A116, 2097-2102 (2019). 62   Chan K. Y., Jang M. J., Yoo B. B., Greenbaum A., Ravi N., Wu W. L., Sanchez-Guardado L., Lois C., Mazmanian S. K., Deverman B. E., Gradinaru V., Engineered AAVs for efficient noninvasive gene delivery to the central and peripheral nervous systems. Nat Neurosci.2017 Aug;20(8):1172-1179. doi: 10.1038/nn.4593. Epub 2017 Jun 26. 10.1038/nn.4593.

以下圖式形成本說明書之部分且包括在內以進一步展示本發明之某些態樣。參考此等圖式中之一或多者，結合本文中呈現之特定實施例之詳細描述，可更好地理解本發明。

圖 1 ，(先前技術) ISR之分子佈線。ISR激酶回應於不同細胞壓力而使eIF2磷酸化。eIF2之磷酸化引起細胞中eIF2B活性之抑制，由此減少三元複合物(eIF2•GTP•甲硫胺醯基-起始tRNA)含量，其藉由eIF2B在eIF2上之GDP/GTP交換來控制。三元複合物之濃度決定一般蛋白質合成(綠色)及特定mRNA (諸如ATF4)轉譯(紅色)之轉譯狀態。兩種磷酸酶複合物回應於ISR活化而拮抗ISR、組成性機制中之PP1•CReP及回饋機制中之PP1•GADD34。

圖 2A 至圖 2J，在 Ppp1r15b ^R658C小鼠中活化ISR且轉譯減少。 ( 2A )指示 Ppp1r15b ^R658C小鼠中之突變的桑格定序(Sanger sequencing)。 ( 2B )WT及 Ppp1r15b ^R658C小鼠中之大腦尺寸。 (2C 至 2D)來自WT及 Ppp1r15b ^R658C小鼠之海馬提取物中的CReP含量 (2C)及eIF2-P含量 (2D)之代表性西方墨點及定量。 ( 2E )來自WT及 Ppp1r15b ^R658C之初代纖維母細胞中的eIF2-P含量之代表性西方墨點法及定量。 ( 2F )多核糖體分析沈積之示意圖。在超速離心之後，基於尺寸分離40S、60S及80S以及多核糖體。 ( 2G 至 2H )WT及 Ppp1r15b ^R658C小鼠之海馬體中之多核糖體概況 ( 2G )及定量 ( 2H )。 ( 2I 至 2J )使用抗嘌呤黴素(puromycin)抗體將嘌呤黴素併入至初生肽中。資料為平均值± s.e.m。*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01。

圖 3A 至圖 3F ， Ppp1r15b ^R658C小鼠中之長期恐懼及物體辨別記憶受損。 (3A)恐懼制約之示意圖。 (3B)在WT及 Ppp1r15b ^R658C小鼠中，在制約之前(未經訓練)的2分鐘週期期間且接著在訓練之後24小時的5分鐘週期期間評估僵硬行為(freezing behavior)。 (3C)物體辨別任務之示意圖。 (3D)在訓練期間之物體探索時間。 (3E)將新穎物體鑑別指數(DI)計算為DI = (新穎物體探索時間-熟悉物體探索時間/總探索時間) ×100 (參見例如經Zhu等人, 2019中所描述)。 (3F)在WT及 Ppp1r15b ^R658C小鼠中，藉由4次100 Hz下之訓練引發晚期長期增效(Late Long-Term Potentiation；L-LTP) (在220分鐘時，p ＜ 0.01)。資料為平均值± s.e.m。*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01。

圖 4A 至圖 4D ，DP71L為ISR之強效泛抑制劑。 (4A)CReP及病毒磷酸酶中保存之PP1結合模體及eIF2結合模體。 (4B 至 4D)DP71L-GFP阻止不同壓力(分別為寡黴素、聚(I:C)及毒胡蘿蔔素(thapsigargin) (每組n=4))誘導ISR。

圖 5A 至圖 5C ，DP71L強結合至PP1以使ISR之活化減弱。 (5A)DP71L及ΔCREP之示意圖。蛋白域參與eIF2α磷酸酶輔因子與PP1及eIF2之相互作用。 (5B)西方墨點揭示經GRP、GFP-DP71L或GFP-ΔCREP轉染之細胞中的ISR之活化。 (5C)經GFP標記之DP71L或CREP與內源性PP1或eIF2α之間的活體內相互作用。來自GFP-DP71L或GFP-ΔCREP之免疫沈澱物中的PP1γ、PP1α及eIF2之含量。

圖 6A 至圖 6D ，在PP1結合域與eIF2α結合域之間的互聯(亦稱為「連接子」或「肽連接子」)區域為必需的且足以使DP71L結合至PP1。 (6A)參與PP1及eIF2結合之不同嵌合蛋白及蛋白域的示意圖(例如分別為DP71L、ΔCREP及連接子突變體蛋白(分別為C8、C20及D20))。 (6B)人類HEK293T細胞經不同GFP-構築體轉染且隨後經抗GFP抗體免疫沈澱。展示來自經GFP標記之不同嵌合蛋白之免疫沈澱物中的PP1γ及PP1α之含量。 (6C)分別為DP71L、ΔCREP及連接子嵌合體蛋白「DP71L-連接子」及「ΔCREP-連接子」之示意圖。 (6D)HEK293T細胞經不同GFP-構築體轉染且隨後所關注之蛋白質經抗GFP抗體免疫沈澱。結果顯示經GFP標記之嵌合蛋白與來自經GFP標記之DP71L、ΔCREP及經連接子調換之嵌合蛋白(分別為DP71L-連接子及ΔCREP-連接子)之免疫沈澱物中的內源性PP1γ及PP1α之間的活體內相互作用水平。

圖 7A 至圖 7C ，DP71L之連接子中的氫鍵結麩胺酸之突變損害PP1結合。 (7A)DP71L與eIF2及PP1之複合物的α摺疊預測。 (7B)展示PP1 (青色)以及DP71L (洋紅色)及CreP (黃色)之類似區域的放大α摺疊預測。參與氫鍵結之麩胺酸在ΔCREP中之類似蘇胺酸旁邊突出顯示。 (7C)用DP71L之麩胺酸突變體(E12T)及對照色胺酸突變體(W14Y)進行之IP實驗。

圖 8A 至圖 8E ，注射DP71L挽救唐氏症及阿茲海默氏病之小鼠模型中之長期記憶缺陷。 (8A)展示DP71L-GFP在小鼠大腦中之表現的代表性圖像。 (8B)注射有DP71L-GFP或GFP之Ts65Dn小鼠(唐氏症模型)中之僵硬行為。在制約之前(未經訓練)的2分鐘週期期間且接著在訓練之後24小時的5分鐘週期期間評估僵硬行為。 (8C)注射有DP71L-GFP或GFP之Ts65Dn小鼠中之長期增效(LTP)。藉由4次100 Hz下之訓練引發LTP (在220分鐘時，p ＜ 0.01；每組n=8至10)。 (8D)注射有DP71L-GFP或GFP之APP/PS1小鼠(阿茲海默氏病之「人類化」模型)中之僵硬行為。在制約之前(未經訓練)的2分鐘週期期間且接著在訓練之後24小時的5分鐘週期期間評估僵硬行為。 (8E)注射有DP71L-GFP或GFP之APP/PS1小鼠中之長期增效(LTP)。藉由4次100 Hz下之訓練引發LTP (在220分鐘時，p ＜ 0.001；每組n=10)。資料為平均值± s.e.m。*P ＜ 0.05，***P ＜ 0.001。

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Claims (44)

1. 一種非天然聚核苷酸構築體，其包含編碼整合的壓力反應(integrated stress response；ISR)之一或多種抑制劑的聚核苷酸序列，其中該一或多種抑制劑包含蛋白質磷酸酶-1 (PP1)結合域及真核起始因子2 (eIF2)結合域，其中該非天然聚核苷酸構築體包含：A)異源啟動子，其可操作地連接至編碼該ISR之一或多種抑制劑的該聚核苷酸序列，其中該異源啟動子並非半乳糖誘導型啟動子；及/或B)包含異源啟動子之重組病毒載體，該異源啟動子可操作地連接至編碼該ISR之一或多種抑制劑的聚核苷酸序列，其中該異源啟動子並非半乳糖誘導型啟動子。
2. 如請求項1之構築體，其進一步包含連接該PP1結合域與eIF2結合域之肽連接序列。
3. 如請求項1或2之構築體，其中該肽連接序列與SEQ ID NO: 21至少或恰好73%、82%、91%或100%一致。
4. 如請求項1至3中任一項之構築體，其中該連接序列包含麩胺酸在根據SEQ ID NO: 18之DP71L蛋白質E12位置。
5. 如請求項1至4中任一項之構築體，其中該抑制劑包含與SEQ ID NO: 4至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。
6. 如請求項1至5中任一項之構築體，其中該抑制劑包含根據SEQ ID NO: 4之胺基酸序列。
7. 如請求項1至4中任一項之構築體，其中該抑制劑包含與SEQ ID NO: 18至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。
8. 如請求項1至5中任一項之構築體，其中該抑制劑包含根據SEQ ID NO: 18之胺基酸序列。
9. 如請求項1至8中任一項之構築體，其中該異源啟動子為CAG啟動子。
10. 如請求項1至9中任一項之構築體，其中該非天然構築體包含於逆轉錄病毒衣殼中。
11. 一種AAV粒子，其包含如請求項1至10中任一項之構築體，該構築體包含於腺相關病毒(adeno associated virus；AAV)衣殼中。
12. 如請求項11之AAV粒子，其中該AAV粒子為AAV-DJ/8、AAV9、AAV Php.B及/或AAV Php.eB血清型及/或假型中之任一者。
13. 如請求項11或12之AAV粒子，其中該AAV粒子能夠逆行感染。
14. 一種AAV粒子，其包含核苷酸構築體，該核苷酸構築體包含與SEQ ID NO: 22至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之聚核苷酸序列。
15. 如請求項14之AAV粒子，其包含根據SEQ ID NO: 22之聚核苷酸序列。
16. 如請求項14或15之AAV粒子，其中該AAV衣殼為AAV-DJ/8、AAV9、AAV Php.B及/或AAV Php.eB衣殼。
17. 一種多肽，其包含與SEQ ID NO: 4至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列。
18. 如請求項17之多肽，其包含根據SEQ ID NO: 4之胺基酸序列。
19. 一種藥理學上可接受之組合物，其包含如請求項1至18中任一項之非天然構築體、多肽或AAV粒子。
20. 一種人類細胞，其包含如請求項1至19中任一項之非天然構築體、多肽、AAV粒子或組合物。
21. 一種於人類個體中延遲認知功能障礙之發作、治療認知功能障礙、減緩認知功能障礙之進展、降低認知功能障礙之風險及/或預防認知功能障礙的方法，其包含向該人類個體投與如請求項1至20中任一項之非天然構築體、多肽、AAV粒子或組合物。
22. 如請求項21之方法，其中向中樞神經系統投與。
23. 如請求項21之方法，其中向周邊神經系統投與。
24. 如請求項21之方法，其中向腦脊髓液(CSF)投與。
25. 如請求項21或22之方法，其中向海馬體投與。
26. 如請求項25之方法，其中向該海馬體之CA1、CA2及/或CA3區域投與。
27. 如請求項21至26中任一項之方法，其中該人類個體已被診斷患有與認知損傷或功能障礙相關之疾病及/或病症。
28. 如請求項21至27中任一項之方法，其中該個體患有神經發育性病症。
29. 如請求項21至27中任一項之方法，其中該個體患有神經退化性病症。
30. 如請求項21至29中任一項之方法，其中該個體患有及/或預期發生唐氏症(Down Syndrome)、阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)、創傷性腦損傷、腦白質消失(vanishing white matter；VWM)症、額顳葉型失智症，及/或衰老相關認知減退。
31. 一種於人類個體中使與ISR之活化、過度活化及/或異常活化相關之疾病的發作延遲、治療該疾病、減緩該疾病之進展、降低該疾病之風險及/或預防該疾病的方法，其包含向該人類個體投與如請求項1至20中任一項之非天然構築體、多肽、AAV粒子或組合物。
32. 如請求項31之方法，其中該疾病為認知病症、神經退化、癌症、糖尿病及/或代謝病症。
33. 一種於人類個體中延遲認知功能障礙之發作、治療認知功能障礙、減緩認知功能障礙之進展、降低認知功能障礙之風險及/或預防認知功能障礙的方法，其包含向該人類個體投與： A) 編碼ISR之抑制劑的聚核苷酸，該抑制劑包含根據SEQ ID NO: 18之胺基酸序列； B) 編碼該ISR之抑制劑的聚核苷酸，該抑制劑包含根據SEQ ID NO: 4之胺基酸序列； C) 編碼該ISR之抑制劑的聚核苷酸，該抑制劑包含與根據SEQ ID NO: 18之該胺基酸序列至少或恰好85%、90%、95%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列，其中該抑制劑包含蛋白質磷酸酶-1 (PP1)結合域及真核起始因子2 (eIF2)結合域；或 D) 編碼該ISR之抑制劑的聚核苷酸，該抑制劑包含與根據SEQ ID NO: 4之該胺基酸序列至少或恰好85%、90%、95%、97%、98%、99%或100%一致之胺基酸序列，其中該抑制劑包含蛋白質磷酸酶-1 (PP1)結合域及真核起始因子2 (eIF2)結合域。
34. 如請求項33之方法，其中該聚核苷酸包含編碼抑制劑胺基酸序列之序列，該抑制劑胺基酸序列與SEQ ID NO: 18至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。
35. 如請求項33之方法，其中該聚核苷酸包含編碼抑制劑胺基酸序列之序列，該抑制劑胺基酸序列與SEQ ID NO: 4至少或恰好85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。
36. 如請求項33至35中任一項之方法，其中該聚核苷酸包含編碼肽連接序列之序列，該肽連接序列與SEQ ID NO: 21至少或恰好73%、82%、91%或100%一致。
37. 如請求項33至36中任一項之方法，其中該聚核苷酸可操作地連接至異源啟動子。
38. 如請求項37之方法，其中該異源啟動子並非半乳糖誘導型啟動子。
39. 如請求項33至38中任一項之方法，其中該疾病與人類個體中之該ISR之活化、過度活化及/或異常活化相關。
40. 一種轉殖基因小鼠，其包含 Ppp1r15b基因中之突變。
41. 如請求項40之轉殖基因小鼠，其中該突變為R658C突變。
42. 如請求項40或41之轉殖基因小鼠，其中該突變係使用核酸內切酶產生。
43. 如請求項42之轉殖基因小鼠，其中該核酸內切酶為Cas9。
44. 如請求項43之轉殖基因小鼠，其中該產生包含使該 Ppp1r15b基因與包含SEQ ID NO: 38之引導RNA接觸。