TW202323810A

TW202323810A - 預填充式注射器製劑的調製方法

Info

Publication number: TW202323810A
Application number: TW111137979A
Authority: TW
Inventors: 新井健悟; 平山和德; 江上貴一; 福田正和
Original assignee: 日商中外製藥股份有限公司
Priority date: 2021-10-08
Filing date: 2022-10-06
Publication date: 2023-06-16
Also published as: JP2025072514A; WO2023058723A1; MX2024004117A; AR127269A1; KR20240082388A; WO2023058705A1; AU2022361184A1; JPWO2023058723A1; EP4413998A1; TW202333781A; IL311956A; CA3233924A1; US20240404622A1

Abstract

本發明的目的在於在包含蛋白質的溶液填充於容器中的注射用製劑中，降低能夠由目視檢出的粒子的形成。根據本發明，提供判斷粒子的形成風險高的蛋白質的方法。

Description

預填充式注射器製劑的調製方法

本發明是有關於在溶液中含有蛋白質作為有效成分、並填充於容器的醫藥製劑。

近年來，各種抗體製劑被開發並投入實際使用，多數的抗體製劑被使用於作為靜脈注射用製劑。另一方面，由於醫療現場的需要，對於開發將含抗體製劑作為能夠自我注射的皮下注射用製劑的需求越來越高。特別是從便利性而言，對開發封裝在預填充式注射器的溶液製劑的需求很高。

設計皮下注射用的含抗體製劑時，每一次的抗體投予量為大量(約80~200mg)，另一方面，在皮下注射時，一般而言由於注射液量受到限制，因此投予液中的抗體必須高濃度化。

近年來，作為自我注射用的預填充式注射器製劑，在醫療現場開始使用具備下述的預填充式注射器：內部填充有藥劑的筒狀的注射器本體、安裝在前述注射器本體的先端的注射針、可拆卸地包覆安裝的注射針之注射器針帽(cap)、及插入於前述注射器本體内能夠在該注射器本體的軸芯方向滑動的柱塞(plunger)。

使用預填充式注射器時，取下注射器針帽、將針插入投予部位後，藉由柱塞桿使柱塞向前方移動，而排出、投予藥液。一般而言，為了確保主柱塞的滑動性，在預填充式注射器的內壁及柱塞，有進行塗佈潤滑劑之矽油(silicone oil)等之事項。

在含抗體製劑中，有在水溶液中形成粒子之問題。形成的粒子是比所謂的二聚體、三聚體之多聚物更大的凝集體，已知有一般難以用目視觀測的1.5μm至小於50μm的粒徑的微粒子之亞可視粒子(sub-visible particle、SVP)、以標準照度(約2,000-3,000 lx)能夠經由目視檢出的可視粒子(visible particle:VP、比100μm更大)。再者，經由醫藥製劑中的可視粒子的目視的檢出率根據實施者彼此之間差異很大，有報導記載，在藥典規定的標準照度(約2,000-3,000lx)中、100μm的粒徑的粒子的檢出感度為約40%、150μm的粒徑的粒子的檢出感度為約70%程度、200μm的粒徑的粒子的檢出感度幾乎為100%(非專利文獻1)。再者，藉由提高觀察醫藥製劑的照度、增長觀察時間等，實際上也能夠以目視檢出最小約40μm之更小粒徑的粒子。本說明書中，特別將這種40μm~100μm的粒子稱為僅在高照度能夠由目視檢出的粒子。又、具有40μm以上的粒徑的粒子是在高照度能夠由目視檢出的粒子，稱為能夠由目視檢出的粒子。

一般而言，抗體具有吸附在氣液界面、固液界面之所謂的界面而凝集的性質。這種界面的存在有造成上述的能夠由目視檢出的粒子的形成的可能性。有報告指出對於填充有抗體溶液的注射器施加機械應力，起因於界面的存在之微粒子顯著地增加(非專利文獻2)。填充於注射器的抗體溶液，因存在有氣泡而形成氣液界面、因與柱塞及注射器筒(barrel)接觸而形成固液界面。再者、預填充式注射器的柱塞及筒塗佈有矽酮(silicone)的情況時，抗體溶液與固相表面的矽酮接觸，形成新的固液界面。又，有報告指出吸附於固液界面、已凝集的蛋白質藉由預填充式注射器中的空氣的移動，剝落於溶液中，以可視粒子的方式顯現(非專利文獻3)。

做為降低在各種界面受到的應力(stress)的方法，能夠列舉減少預填充式注射器内的氣泡的量。藉由減少氣泡的量，能夠減少在預填充式注射器中移動的空氣的量，其結果，認為能夠抑制吸附於氣液界面、固液界面、凝集體的脫落等。

至今，雖然有報告關於包含特定的抗體的預填充式注射器，藉由降低溶液中的氣泡的量，能夠減低不包含界面活性劑的溶液中之以肉眼不可見的粒子、可視粒子等的量的報導，但是皆為特定分子的結果且是以極不穩定的條件進行評價的結果(專利文獻1、2)。

蛋白質的構成要素之胺基酸殘基因側鏈所包含的官能基的不同而各殘基的物性也相異。作為側鏈的物性的特徴，從是否具有在側鏈具有帶電荷的官能基、及側鏈究竟有多疏水的方面，可大致分為兩類。

發明所屬技術領域具有通常知識者已知使用計算化學軟體、輸入胺基酸序列資訊，則能夠在電腦中建構該蛋白質的立體結構模型。胺基酸殘基的物性之中，關於電荷、使用被稱為分子力場的參數能夠計算原子層級的部分電荷。被使用作為計算化學軟體的分子操作環境(Molecular Operating Environment，MOE；Chemical Computing Group Inc.(CCG))採用被稱為Amber10:EHT的分子力場，關於構成蛋白質的胺基酸的各原子的部分電荷，經由從1995年發表以來持續地改良的Amber力場(非專利文獻4)的版本ff10而分配。作為胺基酸殘基的疏水度的指標，與實驗上能夠測定的水辛醇分配係數logP相關的疏水度指標在1990年代確立，MOE則是採用Crippen等人開發的指標 (非專利文獻5)。

在1990年代提案以如同上述的個別的胺基酸殘基的電荷、疏水度的指標為基準，檢出在蛋白質的立體結構上、有電荷、疏水的胺基酸殘基一定以上的局部(區塊)的方法(非專利文獻6)，分別作為電荷區塊、疏水性區塊，能夠以前述的計算化學軟體MOE檢出，2018年有報告指出與藥物開發實驗數據有某種程度的相關性(非專利文獻7)。

再者，作為計算化學軟體MOE對於製劑開發的應用例子，有報告以MOE計算的抗體的疏水性區塊的面積與可視粒子的發生率具有某種程度的相關性(非專利文獻8)。 [先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]日本特開2015-042638號公報 [專利文獻2]國際公開第2017/184880號 [非專利文獻]

[非專利文獻1]James A. Melchore, AAPS PharmSciTech; 2011; 12(1): 215-221. [非專利文獻2]Torisu et al., J. Pharm. Sci. 106 (2017) 2966-2978. [非專利文獻3]Gerhardt et al., J. Pharm. Sci. 103 (2014) 1601-1612. [非專利文獻4]Cornell et al., J. Am. Chem. Soc. 1995, 117, 5179-5197. [非專利文獻5]Wildman et al., J. Chem. Inf. Comput. Sci. 1999, 39, 868-873. [非專利文獻6]Jones et al., J. Mol. Biol. 1997 272, 133-143. [非專利文獻7]Jetha et al., MABS 2018, 10, 6, 890-900. [非專利文獻8]Grapentin et al., J. Pharm. Sci. 109 (2020) 2393-2404.

[發明所欲解決的問題]

關於基於立體結構模型的計算結果之疏水性區塊以外的參數、及在預填充式注射器製劑所包含的溶液中形成的能夠由目視檢出的粒子的發生風險的相關性仍為未知。再者，謀求用於抑制粒子發生之更佳的方法。

本發明者者們發現，特別是關於對於在分子中施加了許多改變而增加了疏水性、電荷的偏向的生物醫藥品，即使在適當量的界面活性劑添加後、也難以完全抑制能夠由目視檢出的粒子的形成。 [用於解決問題之技術方法]

在此，本發明者們發現，關於由疏水性區塊的面積及電荷區塊的面積所計算出的數值為特定值以上的抗體，藉由降低氣泡容量，能夠大幅地抑制即使界面活性劑添加後也無法完全抑制的預填充式注射器製劑中的能夠由目視檢出的粒子的形成。本說明書包含下述的發明的揭示。

[1-1]一種判斷蛋白質的方法，其為在溶液中含有蛋白質作為有效成分之醫藥製劑中，判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質之方法，包含下列步驟：經由同源模擬法(Homology modeling)或抗體建模(Antibody Modelling)，由蛋白質的胺基酸序列製作蛋白質的立體結構模型，獲得的模型的表面中，將疏水性殘基聚集成團簇狀的部分、及帶電荷殘基聚集成團簇狀的部分分別界定為疏水性區塊及電荷區塊，計算各別的面積，計算以面積的大小排序、前5位為止的疏水性區塊的面積的和(X(Å ²))，及電荷區塊總面積(Y(Å ²))，及將X+Y×1.5為1700以上的蛋白質判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質，其中粒子具有40μm以上的粒徑。

[1-2] 如[1-1]所記載的方法，電荷為正電荷。 [1-3] 如[1-1]所記載的方法，電荷為負電荷。 [1-4] 如[1-1]~[1-3]中任一項所記載的方法，將X+Y×1.5為2000以上的蛋白質判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質。

[1-5] 如[1-1]~[1-4]中任一項所記載的方法，同源模擬法或抗體建模中、使用Amber10: EHT作為分子力場。 [1-6] 如[1-1]~[1-5]中任一項所記載的方法，粒子具有比100μm更高的粒徑。

[1-7] 如[1-1]~[1-6]中任一項所記載的方法，溶液為水溶液。 [1-8] 如[1-1]~[1-7]中任一項所記載的方法，蛋白質為單株抗體、融合蛋白質、荷爾蒙、細胞激素(cytokine)、酵素、疫苗。

[1-9] 如[1-1]~[1-8]中任一項所記載的方法，蛋白質為單株抗體。 [1-10] 如[1-9]所記載的方法，單株抗體為單特異性抗體、或雙特異性抗體的任一者。

[1-11] 如[1-9]所記載的方法，單株抗體為IgG1、IgG2及IgG4的任一者。 [1-12] 如[1-1]~[1-11]中任一項所記載的方法，經由抗體建模進行製作蛋白質的立體結構模型。

[1-13] 如[1-1]~[1-12]中任一項所記載的方法，使用分子操作環境(Molecular Operating Environment，MOE)軟體進行同源模擬法或抗體建模。

[2-1]一種判斷蛋白質的方法，其為在溶液中含有蛋白質作為有效成分之醫藥製劑中，判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質之方法，包含下述步驟：經由同源模擬法或抗體建模，由蛋白質的胺基酸序列製作蛋白質的立體結構模型，將對應於所獲得的模型的表面的帶電荷殘基的團簇的部分界定作為電荷區塊，計算電荷區塊總面積(Y(Å ²))，及將Y為600以上的蛋白質判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質，其中粒子具有40μm以上的粒徑。

[2-2] 如[2-1]所記載的方法，電荷為正電荷。 [2-3] 如[2-1]所記載的方法，電荷為負電荷。 [2-4] 如[2-1]~[2-3]中任一項所記載的方法，將Y為700以上的蛋白質判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質。

[2-5] 如[2-1]~[2-4]中任一項所記載的方法，同源模擬法或抗體建模中，使用Amber10: EHT作為分子力場。 [2-6] 如[2-1]~[2-5]中任一項所記載的方法，粒子具有比100μm更高的粒徑。

[2-7] 如[2-1]~[2-6]中任一項所記載的方法，溶液為水溶液。 [2-8] 如[2-1]~[2-7]中任一項所記載的方法，蛋白質為單株抗體、融合蛋白質、荷爾蒙、細胞激素、酵素、疫苗。

[2-9] 如[2-1]~[2-8]中任一項所記載的方法，蛋白質為單株抗體。 [2-10] 如[2-9]所記載的方法，單株抗體為單特異性抗體、或雙特異性抗體的任一者。

[2-11] 如[2-9]所記載的方法，單株抗體為IgG1、IgG2及IgG4的任一者。 [2-12] 如[2-1]~[2-11]中任一項所記載的方法，製作蛋白質的立體結構模型是經由抗體建模而進行。

[2-13] 如[2-1]~[2-12]中任一項所記載的方法，同源模擬法或抗體建模式使用分子操作環境 (MOE)軟體而進行。

[3-1]一種降低溶液中的粒子發生的方法，其為在將含有蛋白質作為有效成分的溶液填充於容器的注射用製劑中、降低溶液中的粒子發生的方法，包含容器内的氣泡的容量為40μL以下，容器為注射器或卡式瓶(cartridge)，蛋白質為經由如[1-1]~[1-13]及[2-1]~[2-13]中任一項所記載的方法判斷為在溶液中形成粒子風險高的蛋白質。

[3-2] 如[3-1]所記載的方法，包含容器内的氣泡的容量為10μL以下。 [3-3] 如[3-1]或[3-2]所記載的方法，容器為注射器。

[3-4] 如[3-3]所記載的方法，經由真空活塞配置法或機械的活塞配置法封蓋注射器。 [3-5] 如[3-1]~[3-4]中任一項所記載的方法，粒子具有100μm以上的粒徑。

[3-6] 如[3-1]~[3-5]中任一項所記載的方法，溶液為水溶液。 [3-7] 如[3-1]~[3-6]中任一項所記載的方法，蛋白質為單株抗體、融合蛋白質、荷爾蒙、細胞激素、酵素、疫苗。

[3-8] 如[3-1]~[3-7]中任一項所記載的方法，蛋白質為單株抗體。 [3-9] 如[3-8]所記載的方法，單株抗體為單特異性抗體、或雙特異性抗體的任一者。

[3-10] 如[3-8]所記載的方法，單株抗體為IgG1、IgG2及IgG4的任一者。 [3-11] 如[3-8]所記載的方法，單株抗體選擇自具有序列編號3及4的H鏈及序列編號5的L鏈的抗體、或具有序列編號6的H鏈及序列編號7的L鏈的抗體。 [3-12] 如[3-8]所記載的方法，單株抗體為具有序列編號8的H鏈與序列編號9的L鏈的組合及序列編號11的H鏈與序列編號10的L鏈的組合之抗體。

[4-1]一種製備將含有蛋白質作為有效成分的溶液填充於容器之注射用製劑的方法，包含以獲得的注射用製劑中、容器内的氣泡的容量為40μL以下的方式，將溶液填充至容器内，容器為注射器或卡式瓶，蛋白質為經由如[1-1]~[1-13]及[2-1]~[2-13]中任一項所記載的方法判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質。

[4-2] 如[4-1]所記載的方法，包含以獲得的注射用製劑中、容器内的氣泡的容量為10μL以下的方式，將溶液填充至容器内。 [4-3] 如[4-1]或[4-2]所記載的方法，容器為注射器。

[4-4] 如[4-3]所記載的方法，在對容器内的溶液填充、經由真空活塞配置法或機械的活塞配置法封蓋容器。 [4-5] 如[4-1]~[4-4]中任一項所記載的方法，粒子具有100μm以上的粒徑。

[4-6] 如[4-1]~[4-5]中任一項所記載的方法，溶液為水溶液。 [4-7] 如[4-1]~[4-6]中任一項所記載的方法，蛋白質為單株抗體。

[4-8] 如[4-7]所記載的方法，單株抗體為單特異性抗體、或雙特異性抗體的任一者。 [4-9] 如[4-7]所記載的方法，單株抗體為IgG1、IgG2及IgG4的任一者。

[4-10] 如[4-7]所記載的方法，單株抗體選擇自具有序列編號3及4的H鏈與序列編號5的L鏈之抗體、或具有序列編號6的H鏈與序列編號7的L鏈的抗體。 [4-11] 如[4-7]所記載的方法，單株抗體為具有序列編號8的H鏈與序列編號9的L鏈的組合，及序列編號11的H鏈與序列編號10的L鏈的組合的抗體。

[5-1] 一種注射用製劑，其為含有蛋白質作為有效成分的溶液填充於容器的注射用製劑，蛋白質為經由如[1-1]~[1-13]及[2-1]~[2-13]中任一項所記載的方法判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質，容器為注射器或卡式瓶，容器内的氣泡的容量為40μL以下。

[5-2] 如[5-1]所記載的注射用製劑，容器内的氣泡的容量為10μL以下。 [5-3] 如[5-1]或[5-2]所記載的注射用製劑，容器為注射器。

[5-4] 如[5-1]~[5-3]中任一項所記載的注射用製劑，溶液中的蛋白質的濃度為0.1mg/mL以上。 [5-5] 如[5-1]~[5-4]中任一項所記載的注射用製劑，溶液中的蛋白質的濃度為0.1~300mg/mL的範圍。

[5-6] 如[5-1]~[5-5]中任一項所記載的注射用製劑，溶液中的蛋白質的濃度為1~200mg/mL的範圍。 [5-7] 如[5-1]~[5-6]中任一項所記載的注射用製劑，1 mL注射器内所包含的溶液為0.1~1.2mL的範圍、或2.25mL注射器内所包含的溶液為0.1~2.5mL的範圍。

[5-8] 如[5-1]~[5-7]中任一項所記載的注射用製劑，1mL注射器内所包含的溶液為0.2~1.1mL的範圍、或2.25mL注射器内所包含的溶液為0.3~2.3mL的範圍。

[5-9] 如[5-1]~[5-8]中任一項所記載的注射用製劑，含有蛋白質作為有效成分的溶液填充於容器之注射用製劑，包含內部含有醫藥製劑的注射器或卡式瓶以及活塞(stopper)，注射器或卡式瓶為玻璃或環烯烴系的樹脂製。

[5-10] 如[5-9]所記載的注射用製劑，環烯烴系的樹脂為環烯烴聚合物(COP)或環烯烴共聚物(COC)。 [5-11] 如[5-1]~[5-10]中任一項所記載的注射用製劑，粒子具有100μm以上的粒徑。

[5-12] 如[5-1]~[5-11]中任一項所記載的方法，溶液為水溶液。 [5-13] 如[5-1]~[5-12]中任一項所記載的注射用製劑，蛋白質為單株抗體。

[5-14] 如[5-13]所記載的注射用製劑，單株抗體為單特異性抗體、或雙特異性抗體的任一者。 [5-15] 如[5-13]所記載的注射用製劑，單株抗體為IgG1、IgG2及IgG4的任一者。

[5-16] 如[5-13]所記載的注射用製劑，單株抗體選擇自具有序列編號3及4的H鏈與序列編號5的L鏈的抗體、或具有序列編號6的H鏈與序列編號7的L鏈的抗體。

[5-17] 如[5-1]~[5-16]中任一項所記載的注射用製劑，溶液包含糖、糖醇、緩衝劑、防腐劑、載劑、抗氧化劑、螯合劑、天然聚合物、合成聚合物、凝固保護劑、界面活性劑、增量劑、安定化劑或此等的組合、包含1種或複數的藥學上許可的賦形劑。

[5-18] 如[5-17]所記載的注射用製劑，界面活性劑為聚山梨醇酯、泊洛沙姆188(Poloxamer 188)、月桂基硫酸鈉、多元醇、聚(乙二醇)、甘油、丙二醇或聚(乙烯醇)。

[5-19] 如[5-17]或[5-18]所記載的注射用製劑，界面活性劑為聚山梨醇酯或者泊洛沙姆188。 [5-20] 如[5-17]~[5-19]中任一項所記載的注射用製劑，溶液中的界面活性劑的濃度為0.01mg/mL以上。

[5-21] 如[5-17]~[5-20]中任一項所記載的注射用製劑，溶液中的界面活性劑的濃度為0.01~5mg/mL的範圍。 [5-22] 如[5-17]~[5-21]中任一項所記載的注射用製劑，溶液中的界面活性劑的濃度為0.25~0.75mg/mL的範圍。

[5-23] 如[5-1]~[5-22]中任一項所記載的注射用製劑，溶液的pH為4.5~7.5的範圍。 [5-24] 如[5-1]~[5-23]中任一項所記載的注射用製劑，溶液的pH為5.0~7.0的範圍。

[5-25] 如[5-1]~[5-24]中任一項所記載的注射用製劑，溶液的pH為5.5~6.5的範圍。 [5-26] 如[5-1]~[5-25]中任一項所記載的注射用製劑，相較於注射用製劑内的氣泡的容量為120μL的條件的情況時，在25℃保管中、經施加落下應力的注射用製劑的3個月保管後之平均粒子數減少。

[5-27] 如[5-1]~[5-25]中任一項所記載的注射用製劑，相較於注射用製劑内的氣泡的容量為120μL的條件的情況時，含有0.01mg/mL的界面活性劑的注射用製劑之在5℃保管1天後的平均粒子數減少。 [5-28] 如[5-13]、[5-14]、或[5-17]~[5-26]中任一項所記載的注射用製劑，單株抗體為具有序列編號8的H鏈與序列編號9的L鏈的組合及序列編號11的H鏈與序列編號10的L鏈的組合的抗體。

[6-1]一種判斷蛋白質的系統，其為在溶液中含有蛋白質作為有效成分之醫藥製劑中、判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的系統，包含下述步驟：經由同源模擬法或抗體建模，由蛋白質的胺基酸序列製作蛋白質的立體結構模型，將獲得的模型的表面中、疏水性殘基聚集成團簇狀的部分、及帶電荷殘基聚集成團簇狀的部分分別界定為疏水性區塊及電荷區塊，計算各自的面積，計算由面積的大小排序的前5位為止的疏水性區塊的面積的和(X(Å ²))、及電荷區塊總面積(Y(Å ²))，及將X+Y×1.5為1700以上的蛋白質判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質，其中粒子具有40μm以上的粒徑。

[6-2] 如[6-1]所記載的系統，電荷為正電荷。 [6-3] 如[6-1]所記載的系統，電荷為負電荷。 [6-4] 如[6-1]~[6-3]中任一項所記載的系統，將X+Y×1.5為2000以上的蛋白質判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質。

[6-5] 如[6-1]~[6-4]中任一項所記載的系統，在同源模擬法或抗體建模中、使用Amber10: EHT作為分子力場。 [6-6] 如[6-1]~[6-5]中任一項所記載的系統，粒子具有比100μm更高的粒徑。

[6-7] 如[6-1]~[6-6]中任一項所記載的系統，溶液為水溶液。 [6-8] 如[6-1]~[6-7]中任一項所記載的系統，蛋白質為單株抗體、融合蛋白質、荷爾蒙、細胞激素、酵素、疫苗。

[6-9] 如[6-1]~[6-8]中任一項所記載的系統，蛋白質為單株抗體。 [6-10] 如[6-9]所記載的系統，單株抗體為單特異性抗體、或雙特異性抗體的任一者。

[6-11] 如[6-9]所記載的系統，單株抗體為IgG1、IgG2及IgG4的任一者。 [6-12] 如[6-1]~[6-11]中任一項所記載的系統，經由抗體建模進行製作蛋白質的立體結構模型。

[6-13]一種使電腦運作如[6-1]~[6-12]任一項所記載的系統中各步驟的程式。 [6-14]一種記憶如[6-13]所記載的程式的記憶媒體。

[6-15]一種裝置，安裝有如[6-13]所記載的程式，在溶液中含有蛋白質作為有效成分之醫藥製劑中，判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質。

[7-1]一種判斷蛋白質的系統，其為在溶液中含有蛋白質作為有效成分之醫藥製劑中，判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的系統，包含下述步驟：經由同源模擬法或抗體建模，由蛋白質的胺基酸序列製作蛋白質的立體結構模型，界定對應於所獲得的模型的表面的帶電荷殘基的團簇的部分作為電荷區塊，計算電荷區塊總面積(Y(Å ²))，及將Y為600以上的蛋白質判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質，其中粒子具有40μm以上的粒徑。

[7-2] 如[7-1]所記載的系統，電荷為正電荷。 [7-3] 如[7-1]所記載的系統，電荷為負電荷。 [7-4] 如[7-1]~[7-3]中任一項所記載的系統，將Y為700以上的蛋白質判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質。

[7-5] 如[7-1]~[7-4]中任一項所記載的系統，在同源模擬法或抗體建模中、使用Amber10: EHT作為分子力場。 [7-6] 如[7-1]~[7-5]中任一項所記載的系統，粒子具有比100μm更高的粒徑。

[7-7] 如[7-1]~[7-6]中任一項所記載的系統，溶液為水溶液。 [7-8] 如[7-1]~[7-7]中任一項所記載的系統，蛋白質為單株抗體、融合蛋白質、荷爾蒙、細胞激素、酵素、疫苗。

[7-9] 如[7-1]~[7-8]中任一項所記載的系統，蛋白質為單株抗體。 [7-10] 如[7-9]所記載的系統，單株抗體為單特異性抗體、或雙特異性抗體的任一者。

[7-11] 如[7-9]所記載的系統，單株抗體為IgG1、IgG2及IgG4的任一者。 [7-12] 如[7-1]~[7-11]中任一項所記載的系統，經由抗體建模進行製作蛋白質的立體結構模型。

[7-13]一種使電腦運作如[7-1]~[7-12]任一項所記載的系統中的各步驟的程式。 [7-14]一種記憶如[7-13]所記載的程式的記憶媒體。

[7-15]一種裝置，安裝有如[7-13]所記載的程式，在溶液中含有蛋白質作為有效成分之醫藥製劑中，判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質。 [發明效果]

根據本發明的一個面向，能夠判斷在預填充式注射器製劑的溶液中、能夠由目視檢出的粒子的形成風險高的蛋白質。根據本發明的另一面向，能夠提供最大程度地抑制能夠由目視檢出的粒子的形成的預填充式注射器製劑。

(1)形成能夠由目視檢出的粒子的風險的判斷本說明書中，能夠由目視檢出的粒子是指，以高照度能夠由目視檢出的粒子，具有40μm以上的粒徑。其中，將以由藥典規定的標準照度(約2,000-3,000lx)能夠由目視檢出的粒子稱為「可視粒子」或「不溶性可視性粒子」。可視粒子一般具有比100μm大的粒徑 (非專利文獻1)。尺寸比可視粒子小，以藥典規定的標準照度(約2,000-3,000lx)為肉眼不可見，但是提高照度、延長觀察時間則能夠由目視檢出的粒子為「僅在高照度能夠由目視檢出的粒子」，具有40μm~100μm的粒徑。可視粒子可經由下述確認：照明下、在標準照度(約2,000-3,000lx)，在黑色背景或白色背景前將容器緩慢地旋轉或翻轉5秒以上，以肉眼進行目視檢查。僅在高照度能夠由目視檢出的粒子可經由下述確認：照明下、在高照度(6,000lx以上)，在黑色背景前將容器緩慢地旋轉或翻轉30秒以上，以肉眼進行目視檢查。在高照度的檢查也能夠確認可視粒子。由溶液中的蛋白質分子以外產生的粒子，不管尺寸、不考慮為作為「能夠由目視檢出的粒子」。能夠由目視檢出的粒子是起因於蛋白質分子的事項，可經由顯微拉曼光譜測定而確認。溶液中作為蛋白質而包含的僅有醫藥有效成分(API)，能夠由目視檢出的粒子是由API產生之物。能夠由目視檢出的粒子的粒徑、數量能夠以遮光粒子計數法、顯微鏡粒子計數法、流動窗(flow sight)粒子影像解析法、目視檢查、分離粒子後顯微紅外光譜(infrared spectroscopy；IR)測定、顯微拉曼光譜測定而能夠進行測定，較佳為經由目視檢查與顯微紅外光譜或顯微拉曼光譜測定的組合進行測定。

本說明書中，醫藥製劑的溶液中「形成粒子的風險高」是指，溶液中的蛋白質分子容易凝集、形成能夠由目視檢出的粒子。形成粒子的風險高的蛋白質的例子，能夠列舉即使在適當量的界面活性劑添加後、也形成能夠由目視檢出的粒子的蛋白質。

本說明書中，「氣泡」是指容器内的液體與容器的壁面之間或液體内的氣體的空間。此等為藉由肉眼或光學顯微鏡檢查而能夠看見的大小之物。「容器内」是指例如附針頭預填充式注射器的情況時，包含以剛性針罩(RNS)及活塞封蓋的空間全體，具體而言是指針內部、及筒內部的空間。容器處於垂直時、不及於容器的徑全體，並非液體的全部但一部分與容器的蓋部(例如、活塞)的底面接觸。在一態樣中，氣泡為球形。在一態樣中，氣泡並非球形。在此種的一態樣中，氣泡為卵形。

在本發明的一個面向中，氣泡的容量可為120μL以下、110μL以下、100μL以下、90μL以下、80μL以下、70μL以下、60μL以下、50μL以下、40μL以下、30μL以下、20μL以下、10μL以下。在本發明的一個態樣中，氣泡的容量是以將容器所包含的全部氣泡進行一體化時的氣泡的容量進行測定。氣泡的容量能夠經由、「於已經含有溶液的吸量管(pipette)等的帶有適當的刻度的容器、從針尖依照氣體、溶液的順序排出而實際測量氣泡的容量」、「取得影像、從氣泡部分的面積計算氣泡的容量」、「基於已知的筒内徑資訊、由氣泡部分的高度計算氣泡的容量」等的方法而測定。

在本發明的一個面向中，為了判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質，使用「同源模擬法」。「同源模擬法」是指，關於具有特定的序列的蛋白質，基於與具有已知的三維結構的一以上的蛋白質之間的序列類似性，推定三維結構的方法。對於特定的胺基酸序列的同源模擬法，通常包含下述步驟。1)識別蛋白質資料庫(Protein Data Bank)中的已知結構的同系物(homologue)、2)將對象的序列對應模板結構進行配置、3)基於此比對(alignment)建構模型、4)進行模型的評價及精密化 (Xiang, Curr Protein Pept Sci. 2006 June; 7(3):217-227)。作為搭載同源模擬法功能、進行三維結構推定的軟體，能夠列舉分子操作環境 (Molecular Operating Enviroment，MOE；Chemical Computing Group Inc.(CCG)(加拿大)、Web Antibody Modelling (WAM； http://antibody.bath.ac.uk)、 Rosetta (https://www.rosettacommons.org/software)、 Prime (Schrodinger)、MODELLER (Eswar、 et al.、Comparative Protein Structure Modeling With MODELLER. Current Protocols in Bioinformatics, John Wiley & Sons, Inc., Supplement 15, 5.6.1-5.6.30, 200.)、 SEGMOD/ENCAD (Levitt M. J Mol Biol 1992; 226:507-533)、 SWISS-MODEL (Schwede T、 Kopp J、 Guex N、Peitsch M C. Nucleic Acids Research 2003; 31 :3381-3385.)、 3D-JIGSAW (Bates et al., Proteins: Structure, Function and Genetics, Suppl 2001; 5:39-46)、 NEST (Xiang, Curr Protein Pept Sci. 2006 June; 7(3): 217-227)、及BUILDER (Koehl and Delarue, Curr Opin Struct Biol 1996; 6(2): 222-226)等，但不限定於此。作為較佳軟體能夠列舉MOE。

在本發明的一個面向中，「抗體建模」是指、單株抗體特化的推定三維結構推定功能及資料庫。抗體建模中，能夠基於片段的結構組裝全體的結構。例如，能夠將抗體Fab片段追加至Fc片段的結晶結構，將Fab片段追加至以推定的蛋白質結構所形成的Fc片段結晶結構。例如，能夠利用搭載於MOE的功能而實施。

在本發明的一個面向中，「區塊(patch)」是指蛋白質或抗體的三維結構中、顯現特定的物理化學的特性的殘基團簇(cluster)的表面區域。作為區塊，能夠列舉疏水性區塊及電荷區塊。疏水性區塊是疏水性殘基聚集成團簇狀的部分的表面區域。疏水性殘基聚集成團簇狀的部分也可以包含疏水性殘基以外的殘基。電荷區塊是帶電荷殘基聚集成團簇狀的部分的表面區域。帶電荷殘基聚集成團簇狀的部分也可以包含不帶電荷殘基。

在本發明的一個面向中，能夠以MOE的蛋白質特性(Protein properties)功能，計算關於蛋白質的區塊面積之特徴量，關於特定的蛋白質表面的區塊的面積，將以疏水性區塊的面積由大至小排序的前5位為止的疏水性區塊的面積的和設為X(Å ²)、電荷區塊總面積作為Y(Å ²)時，基於X+Y×1.5判斷蛋白質的粒子形成風險。在一個態樣中，將X+Y×1.5的值為1700以上的蛋白質判斷為粒子形成風險高的蛋白質。在另一態樣中，將X+Y×1.5的值為2000以上、2500以上、3000以上、3500以上、或4000以上的蛋白質判斷為粒子形成風險高的蛋白質。

在本發明的一個面向中，能夠以MOE的蛋白質特性功能，計算關於蛋白質的區塊面積的特徴量，關於特定的蛋白質表面的區塊的面積，基於電荷區塊總面積Y(Å ²)判斷蛋白質的粒子形成風險。在一個態樣中，將Y的值為600以上的蛋白質判斷為粒子形成風險高的蛋白質。在另一態樣中，將Y的值為700以上、800以上、900以上、1000以上、1500以上、2000以上、2500以上、3000以上、或4000以上的蛋白質判斷為粒子形成風險高的蛋白質。

在此，經由疏水性區塊的面積的排序是指，將在蛋白質表面認為的疏水性區塊以面積的順序排列的清單，各疏水性區塊意味著在蛋白質表面由獨立存在的且具有一定大小的疏水性殘基團簇所形成的疏水性區塊。排序的前5位為止的疏水性區塊的面積(Å ²)之和計算作為X。在此、前5位為止的疏水性區塊的面積的和是指，由大至小前5位為止的疏水性區塊的面積的總計值。但是、分子中疏水性區塊為4個以下的情況時，是指實際存在的全部的疏水性區塊的面積的總計值。

電荷區塊總面積意味著存在於蛋白質表面的帶正電或帶負電的電荷區塊全部的面積(Å ²)的和。在本發明的一個面向中，「分子力場」是將分子中存在的各原子接受到怎樣的力作為函數而進行參數化。基於分子力場之分子力學計算、分子動力學計算，是將表示原子間的作用力、原子間的鍵結的參數(結合距離、結合角等)作為變數，根據原子的種類、鍵結樣式而決定位勢函數(potential function)，以數值表示。基於分子力場之分子力學計算、分子動力學計算，是將表示原子間的作用力、原子間的鍵結的參數(結合距離、結合角等)作為變數，根據原子的種類、鍵結樣式而決定位勢函數(potential function)，以數值表示。

在本發明的一個面向中，能夠使用的分子力場無特殊限制，能夠依照目的適當選擇，能夠列舉例如、Amber系的分子力場、CHARMm系的分子力場、OPLS系的分子力場等。作為Amber系的分子力場，能夠列舉例如、Amber10/14:EHT、Amber ff99SB-ILDN、Amber 12SB等。作為CHARMm系的分子力場，能夠列舉例如、CHARMm36等。此等之中，使用MOE的情況時以Amber10:EHT為佳。

(2)粒子形成的降低在本發明的一個面向中，「降低粒子的形成」是指，在以預定的條件、形成能夠由目視檢出的粒子的醫藥製劑的溶液中，藉由調整氣泡的容量，使其不形成能夠由目視檢出的粒子、或減少形成的粒子數。降低能夠由目視檢出的粒子的形成之事項，能夠經由計數氣泡的容量調整前後的粒子數而確認。粒子的尺寸、數目能夠經由遮光粒子計數法、顯微鏡粒子計數法、流動窗(flow sight)粒子影像解析法、目視檢查、分離粒子後以顯微紅外光譜(infrared spectroscopy；IR)測定、顯微拉曼光譜測定而測定，較佳為組合目視檢查與顯微紅外光譜或顯微拉曼光譜測定而測定。

(3)醫藥製劑在本發明的一個面向中，醫藥製劑為含有蛋白質作為有效成分之溶液。醫藥製劑可為注射用製劑。

在本發明的一個面向中，注射用製劑是指填充於用於經由注射而投予的注射用容器，溶液中含有蛋白質作為有效成分之醫藥製劑。在本發明的一個面向中，「獲得的注射用製劑」是指，經調整氣泡容量後的作為最終製品而獲得的注射用製劑。

在本發明的一個面向中，醫藥製劑以容器内的溶液不凝固的方式保存於-30℃~25℃、較佳為溶液的凝固點起至25℃、更佳為1℃~10℃、更佳為2℃~8℃、進而更佳為5℃。保存進行1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、11小時、12小時、13小時、14小時、15小時、16小時、17小時、18小時、19小時、20小時、21小時、22小時、23小時、24小時、25小時、26小時、27小時、28小時、29小時、30小時、31小時、32小時、33小時、34小時、35小時、36小時、48小時、60小時、72小時、84小時、96小時。保存進行至少24小時、至少2天、至少3天、至少4天、至少10天、至少20天、至少30天、至少40天、至少50天、至少60天、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月。

在本發明的一個面向中，在溶液製劑中使用的蛋白質包含抗體、融合蛋白質、酵素、荷爾蒙、細胞激素、疫苗，但不限定於此。更具體而言，包含單株抗體、顆粒狀群落刺激因子(G-CSF)、顆粒狀巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)、紅血球生成素(EPO)、干擾素、IL-1、IL-6等的介白素、組織血纖維蛋白溶酶原(plasminogen)活性化因子(TPA)、血小板生成素(thrombopoietin)、尿激脢(urokinase)、血清白蛋白、第VIII凝血因子、瘦素(leptin)、幹細胞生長因子(SCF)等。

在本發明的一個面向中，醫藥製劑所使用的蛋白質是具有與哺乳動物、特別是人類的生理活性蛋白質實質上相同的生物學活性之物，包含源自天然之物、及經由基因重組法所獲得之物。經由基因重組法所獲得之蛋白質包含與天然蛋白質的胺基酸序列相同之物，或者使該胺基酸序列的1或複數缺失、取代、加成之物，具有前述生物學的活性之物。

在本發明的一個面向中，溶液中的蛋白質的濃度為0.1mg/mL以上、亦可為0.1~300mg/mL的範圍、1~200mg/mL的範圍。在本發明的一個面向中，使用的抗體只要能與所期望的抗原結合則無特殊限制，可為多株抗體亦可為單株抗體，從安定地生產均質的抗體的觀點而言，以單株抗體為佳。又、在本發明的一個面向中，使用的抗體可為單特異性抗體、亦可為雙特異性抗體、或分子内具有3個以上的抗原辨識部位的具有多重特異性的抗體。

在本發明的一個面向中，作為使用的單株抗體，不僅是源自人類、小鼠、大鼠、倉鼠、兔、綿羊、駱駝、猴等的動物的單株抗體，也包含嵌合(Chimeric)抗體、人源化(Humanized)抗體、雙特異性抗體等人為地改變的基因重組型抗體。進而，也包含進行用於以血中滯留性、體内動態的改善為目的之抗體分子的物性的改變(具體而言，等電點(pI)改變、Fc受體的親和性改變等)的將抗體的恆定區等人為地改變的基因重組型抗體。

又、在本發明的一個面向中，使用的抗體的免疫球蛋白類型(class)未特別限制，可為IgG1、IgG2、IgG3、IgG4等的IgG、IgA、IgD、IgE、IgM等任一類型，較佳為IgG、特別佳為IgG1、IgG2及IgG4。

在本發明的又一個面向中，使用的抗體不僅是具有恆定區與可變區的抗體(全長抗體)，也包含Fv、Fab、F(ab) ₂等的抗體片段、使抗體的可變區以胜肽連接子等的連接子結合的1或2會場的一條鏈Fv(scFv、sc(Fv) ₂)、scFv二聚物等的雙特異性抗體等的低分子化抗體等，較佳為全長抗體。

在本發明的一個面向中，能夠經由週知的方法製作使用的抗體。產生單株抗體的融合瘤(hybridoma)，基本上能夠使用週知技術，以下述的方式製作。亦即，能夠經由下述而製作：使用所期望的抗原、表現所期望的抗原的細胞作為致敏抗原，將此等遵從通常的免疫方法進行免疫，使獲得的免疫細胞藉由通常的細胞融合法與周知的親細胞融合，經由通常的篩選法，篩選單株抗體產生細胞(融合瘤)。融合瘤的製作能夠依據例如，Milstein等人的方法(Kohler. G. and Milstein, C., Methods Enzymol. (1981) 73: 3-46)等而進行。抗原的免疫原性低的情況時，可使其與白蛋白等的具有免疫原性的巨大分子結合，進行免疫即可。

又、能夠使用從融合瘤選殖(cloning)抗體基因，組裝入適當的載體，將其導入宿主的使用基因重組技術而產生的基因重組型抗體(例如、參照Carl, A. K. Borrebaeck, James, W. Larrick, THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES, Published in the United Kingdom by MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990)。具體而言，由融合瘤mRNA使用反轉錄酶合成抗體的可變區(V區域)的cDNA。獲得編碼目標的抗體的V區域的DNA，將其與編碼所望的抗體恆定區(C區域)的DNA連結，將此等組裝入表現載體。或、亦可將編碼抗體的V區域的DNA組裝入包含抗體C區域的DNA的表現載體。表現控制區域，將例如、增強子(enhancer)、啟動子(promoter)的調控以能夠表現的方式組裝入表現載體。接者，藉由此表現載體將宿主細胞進行轉形(transformation)，能夠使其表現抗體。

本發明的一個面向中，能夠使用以降低對於人類的異種抗原性等為目的之人為地改變的基因重組型抗體，例如、嵌合抗體、人源化抗體等。此等改變抗體能夠使用已知的方法製造。嵌合抗體能夠經由下述獲得：由人類以外的哺乳動物，例如、小鼠抗體的重鏈、輕鏈的可變區與人類抗體的重鏈、輕鏈的恆定區所形成的抗體，將編碼小鼠抗體的可變區的DNA與編碼人類抗體的恆定區的DNA連結，將此等組裝入表現載體、導入宿主使其生產。

人源化抗體，亦稱為重構型(reshaped)人類抗體，是將人類以外的哺乳動物，例如小鼠抗體的互補決定區(CDR；complementarity determining region)移植至人類抗體的互補決定區之物，其一般性的基因重組方法亦為已知。具體而言，以將小鼠抗體的CDR與人類抗體的框架區(framework region；FR)連結的方式所設計的DNA序列，由在末端具部分有重疊部分的方式製作的數個寡核苷酸，經由PCR法合成。所獲得的DNA與編碼人類抗體恆定區的DNA連結，之後，組裝至表現載體，藉由將其導入宿主使其產生而獲得(參照歐洲專利申請公開號第239400號，WO 96/02576)。經由CDR而連結的人類抗體的FR，選擇互補決定區形成良好的抗原結合部位之物。依照需求，亦可以重構型人類抗體的互補決定區形成適當的抗原結合部位的方式，取代抗體可變區的框架區的胺基酸(Sato, K.et al., Cancer Res. (1993) 53, 851-856)。

作為用於改善抗體的活性、物性、藥物動態、安全性等的取代抗體的胺基酸的技術，已知例如下述的技術，在本發明的一個面向中，使用的抗體包含施加此種胺基酸的取代(也包含缺失、加成)的抗體。

在IgG抗體的可變區施加胺基酸取代的技術，以人源化(Tsurushita N, Hinton PR、 Kumar S. , Design of humanized antibodies: from anti-Tac to Zenapax., Methods. 2005 May;36(1):69-83.)為始，已有報告經由用於增強結合活性的互補決定區(CDR)的胺基酸取代之親和性突變(affinity maturation) (Rajpal A, Beyaz N, Haber L, Cappuccilli G, Yee H, Bhatt RR, Takeuchi T, Lerner RA, Crea R. , A general method for greatly improving the affinity of antibodies by using combinatorial libraries., Proc Natl Acad Sci U S A. 2005 Jun 14;102(24):8466-71.)、經由框架區(FR)的胺基酸取代而提升物理化學的安定性(Ewert S, Honegger A, Pluckthun A. , Stability improvement of antibodies for extracellular and intracellular applications: CDR grafting to stable frameworks and structure-based framework engineering. , Methods. 2004 Oct;34(2):184-99. Review)。又、作為施加IgG抗體的Fc區域的胺基酸取代的技術，已知有增強抗體依賴性細胞傷害活性(ADCC)活性、補體依賴性細胞傷害活性(CDC)活性的技術 (Kim SJ, Park Y, Hong HJ., Antibody engineering for the development of therapeutic antibodies., Mol Cells. 2005 Aug 31;20(1):17-29. Review.)。進而，不僅是此種的增強效應(effector)功能，也有報告提升抗體的血中半衰期的Fc的胺基酸取代技術 (Hinton PR, Xiong JM, Johlfs MG, Tang MT, Keller S, Tsurushita N., An engineered human IgG1 antibody with longer serum half-life.、 J Immunol. 2006 Jan 1;176(1):346-56.,Ghetie V, Popov S, Borvak J, Radu C, Matesoi D, Medesan C, Ober RJ, Ward ES., Increasing the serum persistence of an IgG fragment by random mutagenesis., Nat Biotechnol. 1997 Jul;15(7):637-40.)。進而以抗體的物性改善為目的之恆定區的種種胺基酸取代技術也已知(WO 09/41613)。

又、也已知人類抗體的取得方法。例如，將淋巴球於體外(in vitro)以所期望的抗原或表現所期望的抗原的細胞致敏，將致敏淋巴球，與人類骨髓瘤細胞，例如U266融合，能夠獲得對於抗原具有結合活性的所期望的人類抗體(參照日本專利特公第平1-59878號公報)。再者，亦可對具有人類抗體基因全部的組合庫(repertory)的基因轉殖動物以抗原進行免疫，取得所期望的人類抗體(參照WO 93/12227、WO 92/03918、WO 94/02602、WO 94/25585、WO 96/34096、WO 96/33735)。進而，使用人類抗體庫，經由重複篩選(panning)取得人類抗體的技術也已知。例如，可將人類抗體的可變區作為單鏈抗體(scFv)、經由噬菌體表現法表現於噬菌體表面，選擇結合至抗原的噬菌體。只要分析所選擇之噬菌體的基因，可決定編碼結合至抗原的人類抗體的可變區的DNA序列。明白結合至抗原的scFv的DNA序列的話，可製作包含該序列的適當的表現載體，能夠取得人類抗體。此等方法已為周知，可參照WO 92/01047、WO 92/20791、WO 93/06213、WO 93/11236、WO 93/19172、WO 95/01438、WO 95/15388。在本發明的一個面向中，使用的抗體包含此種人類抗體。

一旦分離抗體基因，導入適當的宿主製作抗體的情況時，能夠使用適當的宿主及表現載體的組合。使用真核細胞作為宿主的情況時，能夠使用動物細胞、植物細胞、真菌細胞。做為動物細胞，已知(1)哺乳類細胞，例如、CHO、COS、骨髓瘤、BHK (倉鼠胎腎，baby hamster kidney)、HeLa、Vero，(2)兩生類細胞，例如、非洲爪蟾卵母細胞，或者(3)昆蟲細胞，例如、sf9、sf21、Tn5等。作為植物細胞，已知菸草(Nicotiana)屬，例如源自菸草(Nicotiana tabacum)的細胞，亦可將此為癒創組織(callus)培養。做為真菌細胞，已知酵母，例如、酵母菌(Saccharomyces)屬，例如釀酒酵母(Saccharomyces serevisiae)、絲狀菌，例如，麴黴菌(Aspergillus)屬，例如黑黴菌(Aspergillus niger)等。使用原核細胞的情況時，有使用細菌細胞的生產系統。作為細菌細胞，已知大腸菌(E.coli)、枯草桿菌。於此等細胞，經由轉形將目標的抗體基因導入，藉由將經轉形的細胞於體外培養能夠獲得抗體。

進而，醫藥製劑中使用的抗體包含抗體修飾物。例如，也能夠使用與聚乙二醇(PEG)、細胞傷害性藥劑等的各種分子結合的抗體 (Farmaco. 1999 Aug 30;54(8): 497-516.、Cancer J. 2008 May-Jun;14(3):154-69)。此種抗體修飾物能夠經由於抗體施加化學性的修飾而獲得。此等方法在此技術領域已經確立。

本發明的一個面向中，本揭示中的抗體亦可為嵌合抗體。嵌合抗體，例如記載於US Patent No. 4,816,567、Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)。嵌合抗體亦可包含非人類可變區(例如，源自如猴的非人類靈長類、或小鼠、大鼠、倉鼠、或者兔等的可變區)及人類的恆定區。

本發明的一個面向中，本揭示中的抗體可為人源化抗體。典型地非人類抗體為維持親本的非人類抗體的特異性與親和性，為了減少在人類的免疫原性而進行人源化。典型地、人源化抗體包含一個以上的可變區，其中HVR存在著例如源自非人類抗體的CDR(或其一部分)、與源自人類抗體序列的FR(或其一部分)。任選地、人源化抗體能夠包含人類恆定區的至少一部分。在一實施態樣中，人源化抗體内的FR的胺基酸殘基，例如為了維持或改善抗體的特異性、親和性，亦可以與對應於非人類抗體(例如源自HVR殘基的抗體)的胺基酸殘基進行取代。

人源化抗體及其製作方法，例如下述整理的總論(Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008))、更例如下述記載的：Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989); US Patent Nos. 5, 821,337, 7,527,791, 6,982,321, and 7,087,409; Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005) (描述特異性決定區接枝( specificity determining region(SDR) grafting); Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) (描述「表面重整(resurfacing)」); Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) (描述「FR改組(FR shuffling)」)；及Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) and Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (描述「達到FR改組之『指引選擇(guided selection)』」)。

本發明的一個面向中，能夠使用於人源化的人類框架(framework)，例如，亦可包含使用「最佳擬合(best-fit)」法(Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993))選擇的框架、源自重鏈或輕鏈的可變區之特定的次群的人類抗體的共通序列的框架(Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992) and Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993))、源自FR庫的篩選的框架區(Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) 及 Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618(1996))。

本發明的一個面向中，本揭示中的抗體可為人類抗體。人類抗體能夠以各式各樣的技術製作。人類抗體概述於例如van Dijk 及 van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-374 (2001) 、 Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)。人類抗體為對抗原有回應之完全人類抗體，或是經由對於已經以生產伴隨著人類可變區的方式進行改變之基因轉殖動物投予免疫原而製造。此種動物，典型地含有全部或一部分的人類免疫球蛋白基因座，是將人類免疫球蛋白基因座的全部或一部分替換至內因性的免疫球蛋白基因座，或者，以染色體外或隨機地包含於該動物的染色體内的狀態存在。此種基因轉殖小鼠中，內因性的免疫球蛋白基因座通常被失活。從基因轉殖動物獲得人類抗體之方法之整理，參照Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)。再者，例如參照，記載XENOMOUSE(商標)技術的US Patent No. 6,075,181、6,150,584號；記載HUMAB(註冊商標)技術的US Patent No. 5,770,429；記載K-M MOUSE(註冊商標)技術的US Patent No. 7,041,870；以及記載VELOCIMOUSE(註冊商標)技術的US2007/0061900。從經由此種動物而產生的完全抗體的人類可變區，亦可例如、經由與相異的人類恆定區組合等，進一步進行修飾。

本發明的另一個面向，人類抗體亦可基於融合瘤的方法進行製作。用於產生人類單株抗體的人類骨髓瘤細胞及小鼠‐人類異質骨髓瘤(hetero myeloma)細胞株記載如下(例如、Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984)；Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp.51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)；及Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991))。經由人類B細胞融合瘤技術而產生人類抗體記載於Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)。作為其他方法，能夠列舉例如US Patent No. 7,189,826(記載從融合瘤細胞株製造單株人類IgM抗體)、及Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006)(記載人類-人類融合瘤)。人類融合瘤技術(三元(trioma)技術)記載於Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 及Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)。

本發明的另一個面向中，人類抗體也能夠經由分離選擇自源自人類的噬菌體呈現庫的Fv選殖株可變域序列而產生。此種可變區序列能夠接著與所期望的人類恆定區組合。從抗體庫選擇人類抗體的方法參照下述。

本發明的一個面向中，本揭示中的抗體也可經由篩選具有所期望的1個或複數的活性的抗體之組合分子庫(combinatorial library)而分離。例如，噬菌體呈現庫的製作方法、篩選關於具有所期望的結合特性的抗體之分子庫的方法等為該技術領域已知。此種方法總論於Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001) ，進而例如記載於McCafferty et al., Nature 348:552-554；Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991)； Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992)； Marks and Bradbury, Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003)； Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004)； Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004)； Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34):12467-12472 (2004)；Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)。

本發明的一個面向中的特定的噬菌體呈現法，可於VH及VL的組合庫(repertory)經由聚合酶連鎖反應(polymerase chain reaction: PCR)分別選殖，並隨機地在噬菌體庫中再結合，該噬菌體庫可依照Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994) 所記載地、篩選抗原結合噬菌體。噬菌體呈現例如scFv、Fab之抗體片段。來自經免疫化的供給源之分子庫能夠不需要建構融合瘤而能夠提供對於免疫原高親和性的抗體。在其他實施態樣，如Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)所記載地，不需進行免疫化，選殖初始組合庫(naïve repertory) (例如、來自人類)，能夠提供廣泛地非自我或對於自我抗原單一來源的抗體。在又一實施態樣中，初始分子庫(naïve library)以如Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)記載的方式，從幹細胞選殖再重排之前的V-基因區段(segment)，編碼超可變區CDR3且經由使用包含用於在體外達到重構型的隨機序列的PCR引子而能夠合成地製作。記載人類抗體噬菌體庫的專利文獻，能夠列舉例如US Patent No. 5,750,373、US2005/0079574、US2005/0119455、US2005/0266000、US2007/0117126、US2007/0160598、US2007/0237764、US2007/0292936、US2009/0002360。

從人類抗體庫分離的抗體或抗體片段，在本說明書視為人類抗體或人類抗體片段。本發明的一個面向中，本揭示的抗體為多重特異性抗體(例如、雙特異性抗體)。多重特異性抗體為對於至少2個的相異部位具有結合特異性的抗體(例如單株抗體)。在一實施態樣中，結合特異性的一個是針對抗原，另一個是針對上述以外的抗原。在另一實施態樣中，雙特異性抗體亦可結合於抗原的相異的2個的抗原決定位(epitope)。雙特異性抗體亦可使用於用於使細胞傷害劑局部化於表現抗原的細胞。雙特異性抗體可製備為全長抗體或抗體片段。

作為製作多重特異性抗體的方法，並非用於限定，能夠列舉，將具有相異的特異性的2個免疫球蛋白的重鏈-輕鏈配對的重組共同表現(例如Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)、WO93/08829、及Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991))、及knob-in-hole技術(例如US Patent No. 5,731,168)。多重特異性抗體也可以經由下述而製作：操作用以製作Fc異二聚體分子的靜電轉向效應(electrostatic steering effects) (例如WO2009/089004A1)；使2個以上的抗體或抗體片段交聯 (例如US Patent No. 4,676,980及Brennan et al., Science, 229: 81(1985))；使用白胺酸拉鏈(leucine zipper)製作具有2個特異性的抗體(例如Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992))；使用「雙功能抗體(DIABODY)」技術製作雙特異性抗體片段(例如Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993))；使用scFv二聚體(例如Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994))；製備三重特異性抗體(例如Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991))。並且，亦可為包含「章魚抗體(octopus antibody)」之具有3個以上功能性抗原結合部位的方式的經製作的抗體(例如US2006/0025576)。

本發明的一個面向中，本揭示中的抗體或其抗體片段包含結合於抗原及其他相異的抗原之1個抗原結合部位，「雙效Fab(dual acting Fab)」或「DAF」(例如US2008/0069820)。

本發明的一個面向中，本揭示中的抗體的胺基酸序列的改變體(突變體)能夠藉由將適當的修飾導入編碼抗體的分子之核酸、或合成胜肽而製備。此種修飾能夠適當組合一或複數個對胺基酸序列中的、任意的胺基酸(殘基)的任意的缺失、插入、取代而進行。只要最終建構物具有所期望的特徴(例如、抗原結合性)，能夠利用缺失、插入、取代的任意的組合。

本發明的一個面向中，進行一或複數的胺基酸取代提供抗體改變體(突變體)的情況時，取代的變異的導入的目的部位能夠包含HVR及FR。作為醫藥製劑中使用的抗體，能夠列舉抗組織因子抗體、抗IL-6受體抗體、抗IL-6抗體、抗磷脂肌醇蛋白聚糖-3(Glypican-3)抗體、抗CD3抗體、抗CD20抗體、抗GPIIb/IIIa抗體、抗TNF抗體、抗CD25抗體、抗EGFR抗體、抗Her2/neu抗體、抗RSV抗體、抗CD33抗體、抗CD52抗體、抗IgE抗體、抗CD11a抗體、抗VEGF抗體、抗VLA4抗體、抗HM1.24抗原抗體、抗副甲狀腺荷爾蒙關聯胜肽抗體(抗PTHrP抗體)、抗神經節苷脂(ganglioside)GM3抗體、抗TPO受體致效劑抗體、凝血第VIII因子代替抗體、抗IL31受體抗體、抗HLA抗體、抗AXL抗體、抗CXCR4抗體、抗NR10抗體、因子IX與因子X的雙特異性抗體等，但不限定於此。

作為醫藥製劑中使用的較佳重構型人源化抗體，能夠列舉人源化抗介白素6(IL-6)受體抗體(托珠單抗(tocilizumab)、hPM-1或者MRA、參照WO92/19759)、人源化抗HM1.24抗原單株抗體(參照WO98/14580)、人源化抗副甲狀腺荷爾蒙關聯胜肽抗體(抗PTHrP抗體)( 參照WO98/13388)、人源化抗組織因子抗體(參照WO99/51743)、抗磷脂肌醇蛋白聚糖-3人源化IgG1κ抗體(codrituzumab、GC33、參照WO2006/006693)、抗NR10人源化抗體(參照WO2009/072604)、因子IX與因子X的雙特異性人源化抗體(參照ACE910、WO2012/067176)等。

在本發明的一個面向中，醫藥製劑能夠依照需要，與適當的藥學上許可的載劑、媒體等混和而調製，作為溶液製劑。溶液製劑的溶媒為水或藥學上許可的有機溶媒。作為此種有機溶媒，能夠列舉例如、丙二醇(1,2-丙二醇)、聚乙二醇300、聚乙二醇400、乙醇、甘油、醋酸等。作為適當的藥學上許可的載劑、媒體，例如、滅菌水、生理食鹽水、安定化劑、抗氧化劑(抗壞血酸等)、緩衝劑(磷酸、檸檬酸、組胺酸、其他的有機酸等)、防腐劑、界面活性劑(PEG、Tween等)、螯合劑(EDTA等)、結合劑等。又，亦可含有其他的低分子量的多肽，血清白蛋白，明膠、免疫球蛋白等的蛋白質，甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、甲硫胺酸、精胺酸及離胺酸等的胺基酸，多醣及單醣等醣類、碳水化合物，甘露醇、山梨醇等的糖醇。設定為注射用的溶液的情況時，亦可併用例如包含生理食鹽水、葡萄糖、其他的補助藥的等張液，能夠列舉例如、D-山梨醇、D-甘露糖、D-甘露醇、氯化鈉，適當的助溶劑，例如醇類(乙醇等)、聚醇(丙二醇、PEG等)、非離子性界面活性劑(聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20、泊洛沙姆188、HCO-50)等。

在本發明的一個面向中，溶液製劑中使用的緩衝劑使用用於維持溶液的pH的物質而調配。在本發明的一個面向中，含高濃度抗體溶液製劑中、溶液的pH較佳為4.5~7.5、更佳為5.0~7.0、進而較佳為5.5~6.5。在本發明的一個面向中，能夠使用的緩衝劑為能夠調整至此範圍的pH、且為醫藥上許可之物。此種緩衝劑為溶液製劑的領域的具有通常知識者所週知，能夠使用例如、磷酸鹽(鈉或鉀)、碳酸氫鈉等的無機鹽；檸檬酸鹽(鈉或鉀)、醋酸鈉、琥珀酸鈉等的有機酸鹽；或磷酸、碳酸、檸檬酸、琥珀酸、蘋果酸、葡萄糖酸等的酸類。進而亦可使用Tris類及MES、MOPS、HEPES般的良好緩衝劑(Good buffers)、組胺酸(例如組胺酸鹽酸鹽)、甘胺酸等。

緩衝劑的濃度一般為1~500mmol/L、較佳為5~100mmol/L、更佳為10~20mmol/L。使用組胺酸緩衝劑的情況時，緩衝劑較佳為含有5~25mmol/L的組胺酸、更佳為含有10~20mmol/L的組胺酸。

在本發明的一個面向中，含高濃度抗體溶液製劑藉由添加對於有效成分之抗體適當的安定化劑，使其安定化為佳。在本發明的一個面向中，「安定的」含高濃度抗體溶液製劑是指在冷藏溫度(2~8℃)至少12個月、較佳為2年、更較佳為3年；或在室溫(22~28℃)至少3個月、較佳為6個月、更較佳為1年，沒有觀察到顯著地變化。例如，在5℃保存2年後的二聚體的量及分解物的量的總計為5.0%以下、較佳為2%以下、更佳為1.5%以下，或者在25℃保存6個月後的二聚體的量及分解物的量的總計為5.0%以下、較佳為2%以下、更佳為1.5%以下。

在本發明的一個面向中，作為界面活性劑，典型的例子能夠列舉非離子性界面活性劑，例如山梨糖醇酐單辛酸酯、山梨糖醇酐單月桂酸酯、山梨糖醇酐單棕櫚酸酯等的山梨糖醇酐脂肪酸酯；單辛酸甘油酯、單肉豆蔻酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯等的脂肪酸甘油酯；單硬脂酸癸甘油酯、二硬脂酸癸甘油酯、單亞麻油酸癸甘油酯等的聚脂肪酸甘油酯；聚氧乙烯山梨糖醇酐單月桂酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐單硬脂酸脂、聚氧乙烯山梨糖醇酐單棕櫚酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐三油酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐三硬脂酸脂等的聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯；聚氧乙烯山梨醇四硬脂酸脂、聚氧乙烯山梨醇四油酸酯等的聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯；聚氧乙烯單硬脂酸甘油酯等的聚氧乙烯脂肪酸甘油酯；聚乙二醇二硬脂酸脂等的聚乙二醇脂肪酸酯；聚氧乙烯月桂醚等的聚氧乙烯烷基醚；聚氧乙烯聚氧丙烯乙二醇醚、聚氧乙烯聚氧丙烯丙醚、聚氧乙烯聚氧丙烯十六醚等的聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚；聚氧乙烯壬基苯基醚等的聚氧乙烯烷基苯基醚；聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯硬化蓖麻油(聚氧乙烯氫化蓖麻油)等的聚氧乙烯硬化蓖麻油；聚氧乙烯山梨醇蜂蠟等的聚氧乙烯蜂蠟衍生物；聚氧乙烯羊毛脂等的聚氧乙烯羊毛脂衍生物；聚氧乙烯硬脂酸醯胺等的聚氧乙烯脂肪酸醯胺等的具有HLB6~18之物；陰離子性界面活性劑，例如十六基硫酸鈉、月桂基硫酸鈉、油基(oleyl)硫酸鈉等的具有碳原子數10~18的烷基之烷基硫酸鹽；聚氧乙烯月桂基硫酸鈉等的、氧乙烯的平均加成莫耳數為2~4之烷基的碳原子數為10~18之聚氧乙烯烷基醚硫酸鹽；磺琥珀酸鈉月桂酯等的、烷基的碳原子數為8~18之磺琥珀酸鹽烷基酯；天然系的界面活性劑，例如卵磷脂、磷甘油酯；神經鞘磷脂(sphingomyelin)等的鞘磷脂(sphingophospholipid)；碳原子數12~18的脂肪酸之蔗糖脂肪酸酯等。在本發明的一個面向中，製劑能夠組合此種界面活性劑的1種或2種以上而添加。

較佳的界面活性劑為聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯及聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚，特佳為聚山梨醇酯20、21、40、60、65、80、81、85以及Pluronic (註冊商標)型界面活性劑，最佳為聚山梨醇酯20、80及Pluronic F-6 (泊洛沙姆188)。

在本發明的一個面向中，添加於抗體製劑的界面活性劑的添加量，一般為0.0001~10%(mg/mL)、較佳為0.001~5%、更佳為0.005~3%。

再者，本發明的製劑依照需要能夠適當地添加凝固保護劑、懸濁劑、助溶劑、張力劑、防腐劑、吸附抑制劑、稀釋劑、賦形劑、pH調整劑、止痛劑、含硫還原劑、抗氧化劑等。

作為凝固保護劑，能夠列舉例如、海藻糖、蔗糖、山梨醇(sorbitol)等的糖類。作為助溶劑，能夠列舉例如、聚氧乙烯硬化蓖麻油、聚山梨醇酯80(Polysorbate 80)、菸鹼醯胺、聚氧乙烯山梨糖醇酐單月桂酸酯、聚乙烯二醇(macrogol)、蓖麻油脂肪酸乙酯等。

作為張力劑，能夠列舉例如、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣等。作為防腐劑，能夠列舉例如、對羥苯甲酸甲酯、對羥苯甲酸乙酯、山梨酸、酚、甲酚、氯甲酚等。

作為吸附抑制劑，能夠列舉例如、人類血清白蛋白、卵磷脂、聚葡萄糖、環氧乙烷・環氧丙烷共聚物、羥丙基織維素、甲基織維素、聚氧乙烯硬化蓖麻油、聚乙二醇等。

作為含硫還原劑，能夠列舉例如，N-乙醯半胱胺酸、N-乙醯升半胱胺酸、硫辛酸、二乙醇硫醚、硫乙醇胺、硫甘油、硫山梨醇、硫乙醇酸及其鹽、硫代硫酸鈉、麩胱甘肽、碳原子數1~7的硫烷酸(thioalkanoic acids)等的具有硫氫基(sulfhydryl)之物等。

作為抗氧化劑，能夠列舉例如、異抗壞血酸、二丁基羥基甲苯、丁羥甲氧苯、α-生育酚、醋酸生育酚、L-抗壞血酸及其鹽、L-抗壞血酸棕櫚酸酯、L-抗壞血酸硬脂酸酯、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、五倍子酸三戊酯、五倍子酸丙酯，或者如乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、焦磷酸鈉、偏磷酸鈉等的螯合劑。

在本發明的一個面向中，醫藥製劑是自體免疫疾病、免疫疾病、感染症、炎症性疾病、神經系疾病、以及包含癌的腫瘤疾病及贅生物(neoplasm)疾病的治療用。在特定的實施形態，醫藥的用途包含鬱血性心衰竭(CHF)、缺血引起的嚴重心律失常、高膽固醇血症、血管炎、酒糟、痤瘡、濕疹、心肌炎及心肌其他狀態、川崎病(Kawasaki's disease)、全身性紅斑性狼瘡、糖尿病、椎關節病、滑液膜纖維母細胞、以及骨髄間質；骨量減少；柏哲德氏病(Paget’s disease)、骨巨細胞瘤；乳癌；廢用性骨減少；營養失調、齒周疾病、高雪氏症(Gaucher disease)、林格漢氏(Langerhans)細胞組織球增生症、脊髄損傷、急性化膿性關節炎、軟骨症、庫欣氏(Cushing)症候群、單骨性纖維性骨發育不良、多骨性纖維性骨發育不良、歯骨膜再構築、及骨折；類肉瘤病(sarcoidosis)；黑色素瘤、前列腺癌、胰臟癌、溶骨性骨癌、乳癌、肺癌、胃癌、腎癌、及直腸癌；骨轉移、骨痛管理、及體液性惡性高鈣血症、僵直性脊椎炎、以及其他的脊椎關節症；移植排斥反應、病毒感染症、血液贅生物、及類贅生物的狀態、例如何杰金氏淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)；包含非何杰金氏淋巴瘤(布凱特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、小淋巴球性淋巴瘤/慢性淋巴性白血病、蕈狀肉芽腫、套細胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma)、濾泡性淋巴瘤、瀰漫性大細胞型B細胞淋巴瘤、邊緣層淋巴瘤、毛細胞白血病、及淋巴漿細胞性白血病)、B細胞急性淋巴性白血病(B-cell acute lymphoblastic leukemia )/淋巴瘤及T細胞急性淋巴性白血病/淋巴瘤、包含淋巴球前驅細胞的腫瘤、胸腺瘤、末梢T細胞白血病、成人T細胞白血病/T細胞淋巴瘤、及大顆粒淋巴球性白血病、成熟T細胞及成熟NK細胞的腫瘤、林格漢氏細胞組織球增多症、伴隨著成熟AML、不具分化的AML、包含急性前骨髄球性白血病、急性骨髄球單球性白血病、及急性單球性白血病的急性骨髄性白血病、包含骨髄發育不全症候群、以及慢性骨髄性白血病的慢性骨髄增殖性疾病等的骨髄贅生物、中樞神經系的腫瘤、例如腦腫瘤(神經膠質瘤、神經母細胞瘤 (neuroblastoma)、星狀細胞瘤、髄胚細胞瘤、腦室管膜瘤、及視網膜胚細胞瘤)、實性瘤(鼻咽腔癌、基底細胞癌、胰臟癌、膽管癌、卡波西氏肉瘤(Kaposi’s sarcoma)、睪丸癌、子宮癌、陰道癌、或者子宮頸癌、卵巢癌、原發性肝癌、或子宮内膜癌、以及血管系統的腫瘤(血管肉瘤及血管外皮細胞瘤)、骨質疏鬆症、肝炎、HIV、AIDS、脊椎關節炎、關節風濕、炎症性腸疾病(IBD)、敗血症及敗血症性休克、克隆氏症(Crohn disease )、乾癬、厚皮病、移植物抗宿主病(GVHD)、同種異體移植物(allograft)排斥、多發性骨髓瘤(MM)、骨髄增生不良症候群(MDS)、及急性骨髄性白血病(AML)等的血液惡性疾病、與腫瘤相關的炎症、末梢神經損傷、或髓鞘脫失病的治療用。在特定的實施形態中，醫藥的用途為尋常性乾癬、胰臓炎、潰瘍性大腸炎、非何杰金氏淋巴瘤、乳癌、結腸直腸癌、中皮瘤、軟組織肉瘤、幼年特發性關節炎、黄斑部病變、呼吸道融合病毒、克隆氏症、關節風濕、乾癬性關節炎、卡所門氏病(Castleman's disease)、僵直性脊椎炎、骨質疏鬆症、治療誘發的骨量減少、骨轉移、多發性骨髄瘤、阿茲海默症、青光眼、薛格連氏病(Sjoegren's disease)、史迪爾氏病(Still disease)、多發性硬化症、高免疫球蛋白血症、貧血、腎隔增生性腎炎、及氣喘的治療用。

在本發明的一個面向中，抗體具有的特異的結合性的抗原可為穿膜分子(例如、受體)或生長因子等的配體(ligand)。作為例示的抗原，分子、能夠列舉例如腎活素(renin)；包含人類生長荷爾蒙及牛生長荷爾蒙的生長荷爾蒙；生長荷爾蒙釋放因子；副甲狀腺素；甲狀腺刺激素；脂蛋白；α-1-抗胰蛋白(trypsin)；胰島素A鏈；胰島素B鏈；前胰島素；濾泡刺激素；抑鈣素；促黄體素；升糖素；因子VIIIC、因子IX、組織因子(TF)及溫韋伯氏凝血因子(von Willebrand factor)等的凝血因子；蛋白質C等的抗凝血因子；心房性鈉利尿因子；肺界面活性劑；尿激脢或人類尿或組織型血纖維蛋白溶酶原活化因子(t-PA)等的血纖維蛋白溶酶原活化因子；鈴蟾素(bombesin)；凝血酶；造血性生長因子；腫瘤壞死因子-α及-β；腦啡胜肽酶(enkephalinase)；RANTES(regulated on activation normally T-cell expressed and secreted)；人類巨噬細胞炎症性蛋白質(MIP-1-α)；人類血清白蛋白等的血清白蛋白；慕氏管抑制物質(Mullerian-inhibiting substance)；鬆弛素A鏈；鬆弛素B鏈；前鬆弛素；小鼠性腺刺激荷爾蒙相關胜肽；β內醯胺脢等的微生物蛋白質；DNAse；IgE；CTLA-4等的細胞傷害性T-淋巴球相關抗原(CTLA)；抑制素(inhibin)；活化素(activin)；血管内皮細胞生長因子(VEGF)；荷爾蒙或生長因子的受體；蛋白質A或D；風濕因子；神經營養因子、例如骨源性神經營養因子(BDNF)、神經營養因子-3、-4、-5、或-6(NT-3、NT-4、NT-5、或NT-6)、或神經生長因子、例如NGF-b；血小板衍生生長因子(PDGF)；aFGF及bFGF等的纖維母細胞生長因子；上皮生長因子(EGF)；TGF-α及包含TGF-b1、TGF-b2、TGF-b3、TGF-b4、或TGF-b5的TGF-β等的轉化生長因子(TGF)；TNF-α或TNF-β等的腫瘤壞死因子(TNF)；類胰島素生長因子-I及-II(IGF-I及IGF-II)；des(1-3)-IGF-I(腦IGF-I)、類胰島素生長因子結合蛋白質；CD3、CD4、CD8、CD19、CD20、CD22及CD40等的CD蛋白質；紅血球生成素；骨誘導因子；抗毒素(antitoxin)；骨成形蛋白質(BMP)；干擾素-α、-β及-γ等的干擾素；例如、M-CSF、GM-CSF、G-CSF等的群落刺激因子(CSF)；例如、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9及IL-10等的介白素(IL)；超氧化物歧化酶(superoxide dismutase)；T細胞受體；表面膜蛋白；衰退加速因子(decay‐accelerating factor)；例如、AIDS外套膜(envelope)的一部等的病毒抗原；運輸蛋白；回歸受體(homing receptor)；位址素(addressin)；調節蛋白；CD11a、CD11b、CD11c、CD18、ICAM、VLA-4及VCAM等的整合素(integrin)；HER2、HER3或HER4受體等的腫瘤相關抗原；以及上述列舉的多肽的任何片段。

在本發明的一個面向中，作為所包含的抗體的例示性的分子標的，能夠列舉CD蛋白質、例如CD3、CD4、CD8、CD19、CD20、CD22、CD34及CD40；EGF受體、HER2、HER3或HER4受體等的ErbB受體家族的成員；B細胞表面抗原、例如CD20或BR3；包含DR5的腫瘤壞死受體超家族的成員；前列腺幹細胞抗原(PSCA)；LFA-1、Mac1、p150.95、VLA-4、ICAM-1、VCAM、α4/β7整合素、及包含α或β次單元(subunit)的任何的αv/β3整合素(例如、抗CD11a、抗CD18或抗CD11b抗體)等的細胞接著分子；生長因子、例如VEGF及其受體；組織因子(TF)；腫瘤壞死因子(TNF)、例如TNF-α或TNF-β、α干擾素(α-IFN)；IL-8等的介白素；IgE；血液型抗原；flk2/flk3受體；肥胖(OB)受體；mp1受體；CTLA-4；蛋白質C等。

(4)容器在本發明的一個面向中，作為填充醫藥製劑的容器，能夠列舉注射器及卡式瓶。

在本發明的一個面向中，「預填充式注射器」是指，在作為容器的注射器中、填充液體組成物之注射器。在一態樣中，預填充式注射器是將用於投予至患者的醫藥組成物填充於注射器内。在此，注射器為注射器密封物(closure)，例如、經由非用於限定之活塞而蓋蓋。在一態樣中，組成物在製造用填充施設中填充至注射器内。在一態樣中，注射器在組成物填充至注射器内之前進行滅菌。在一態樣中，預填充式注射器在對患者投予組成物前，具有1天、或至少7天、或至少14天、或至少1個月、或至少6個月、或至少1年、或至少2年的保存期間。在一態樣中，預填充式注射器暴露於儲藏及/或輸送的條件。

在本發明的一個態樣中，預填充式注射器暴露於機械應力。作為機械應力，能夠列舉落下應力、振動應力、及旋轉應力，但不限定於此。在本發明的一個態樣中，預填充式注射器受到1次、2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次、10次、11次、12次、13次、14次、15次、16次、17次、18次、19次、20次、21次、22次、23次、24次、25次、25次以上、30次以上、或40次以上的落下應力。落下時施加於預填充式注射器的應力，除了落下次數以外，根據高度、方向等而變化。落下高度，例如記載於American Society for Testing and Materials(ASTM) D4169的38.1cm，但不限定於此。又，以施加再現性良好的同程度的落下應力為目的，也有以使預填充式注射器的方向在落下途中不會變化的方式，進行適當的包裝的情況。包裝例如、「放入托盤、將托盤堆疊」、「如圖2所示，在已編號的紙箱，將堆疊的托盤以預填充式注射器的針尖朝向面2的方式包裝於紙箱」等，但不限定於此。較佳為關於落下的高度、方向，以邊改變使落下時成為下方的面為面1、面2、面3、面4的順序、邊使其從高度38.1 cm落下。將此作為1組，一次的落下應力實施2組的落下。

預填充式注射器如圖3所示，具備用於投予藥劑的注射器。再者，預填充式注射器具備插入於注射器的活塞。並且，預填充式注射器具備連接於注射器的注射針。預填充式注射器具備將注射針蓋住的針帽。藥劑為液狀的藥劑，例如蛋白質製劑。

注射器具備具有先端部及基端部的形成為筒狀的筒。又、注射器為略筒狀。筒為在內部儲存藥劑的零件。本實施形態的筒除了先端部及基端部之外，具備連接先端部與基端部的筒狀部(參照圖3)。又，筒具有在筒狀部的筒軸方向、從另一端的外周全周朝向外面(筒狀部的徑的外面的方向)延伸的凸緣(flange)部。

筒為以例如透明，且能耐受投予藥劑時施加的內壓的材質形成。具體而言，筒的材質為包含降莰烯等的環狀烯烴為重複單元之樹脂。更具體的說明，筒的材質為由環狀烯烴的單獨聚合物之COP(環烯烴聚合物)、環狀烯烴與乙烯等的共聚物之COC(環烯烴共聚物)等的透明樹脂。又，筒亦可為PP(聚丙烯)、玻璃等。

再者，筒的内表面(例如、筒狀部的内表面)，為了抑制對於筒的内表面的活塞(piston)的滑動抵抗，亦可塗佈矽油作為潤滑劑。

在本發明的一個面向中，矽油為聚二甲基矽氧烷。一些例示的聚二甲基矽氧烷，例如包含但不限於黏度為350厘司(centistoke)的Dow Corning(註冊商標) 360 Medical Fluid、黏度為1000厘司的Dow Corning(註冊商標) 360 Medical Fluid、黏度為12,500厘司的Dow Corning(註冊商標) 360 Medical Fluid、及Dow Corning(註冊商標) MDX4-4159 fluid ，包含但不限於Dow Corning(註冊商標) 360 Medical Fluid。

在本發明的一個面向中，注射器的容量的尺寸(規格)未特別限定。具體而言，容量為0.5mL~5.0mL，較佳為1mL般的容量的小尺寸的注射器的情況時、在本發明的一個面向中，具有顯著地有利功效。再者，1mL規格的注射器内所包含的溶液的容量為0.1~1.2mL的範圍、較佳為0.2~1.1mL的範圍。2.5mL規格的注射器内所包含的溶液的容量為0.1~2.5mL的範圍，較佳為0.3~2.3mL的範圍。又，醫藥製劑包含水溶液的情況時，1mL規格的注射器内所包含的水溶液的容量為0.1~1.2mL的範圍，較佳為0.2~1.1mL的範圍。2.5mL規格的注射器内所包含的水溶液的容量為0.1~2.5mL的範圍，較佳為0.3~2.3mL的範圍。

在本發明的一個面向中，卡式瓶容量的尺寸(規格)未特別限定。具體而言，容量可為0.5mL~20.0mL，例如可為1.0mL、1.5mL、1.8mL、2.0mL、2.2mL、3.0mL、5.0mL、10.0mL、15.0mL、20.0mL，但不限於此種容量。

在本發明的一個面向中，使用的卡式瓶為塑膠製或玻璃製的標準注射卡式瓶。玻璃製的注射卡式瓶的規格及公差規定於國際標準的ISO13926-1。關於活塞及密封(針帽、盤(disk))，記載於標準的國際標準的ISO13926-2及3。完成填充準備的注射器或預填充式注射器的規格及公差規定於國際標準的ISO11040-4。在一個態樣中，所使用的卡式瓶為滿足上述國際標準的1個以上的塑膠製或玻璃製的注射卡式瓶。本發明的另一個面向，所使用的卡式瓶為不匹配ISO等的國際標準的塑膠製或玻璃製的注射卡式瓶。

(5)系統在本發明的一個面向中，提供在溶液中含有蛋白質作為有效成分之醫藥製劑中、判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的系統。該系統包含：經由同源模擬法或抗體建模，由蛋白質的胺基酸序列製作蛋白質的立體結構模型的步驟，從獲得的模型的表面中、將疏水性殘基聚集成團簇狀的部分、及帶電荷殘基聚集成團簇狀的部分分別界定為疏水性區塊及電荷區塊，計算各自的面積的步驟，計算依照面積的大小排序前5位為止的疏水性區塊的面積的和(X(Å ²))、及電荷區塊總面積(Y(Å ²))的步驟，及將X+Y×1.5為1700以上的蛋白質判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的步驟。

在本發明的一個面向中，前述系統是用於實施判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的方法之系統，能夠經由將以下所記載的程式安裝於用以判斷的裝置、電腦等而實施。

在本發明的一個面向中，程式是使電腦運作在前述系統中的各步驟的程式，即使判斷在溶液中含有蛋白質作為有效成分之醫藥製劑中、在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的裝置是通用裝置，藉由安裝於該通用裝置，能夠使用作為前述判斷裝置的電腦程式。再者，在本發明的一個面向中，電腦程式並非必須一定要安裝於前述判斷裝置，例如、也能夠將其記憶於記錄媒體(recording medium)而提供。在此，「記錄媒體」是指一種媒體，能夠承載本身不佔據空間的程式，例如包含磁片(flexible disk)、硬碟、CD-R、CD-RW、MO(磁光碟)、DVD-R、DVD-RW、快閃記憶體等。再者，電腦程式也能夠從儲存該電腦程式的電腦，經由通信線路傳送到其他的電腦或裝置。在本發明的一個面向中，電腦程式包含儲存於此種電腦中的電腦程式、及傳送中的電腦程式。

(基於疏水性區塊及電荷區塊、判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的裝置用的程式) 在本發明的一個面向中，本發明是有關於一種記憶於裝置中或記錄媒體而運用的程式，該裝置或記錄媒體為在溶液中含有蛋白質作為有效成分之醫藥製劑中，基於疏水性區塊及電荷區塊，判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的裝置或記錄媒體。

該程式在前述裝置或電腦中施行下列步驟：經由同源模擬法或抗體建模、由蛋白質的胺基酸序列製作蛋白質的立體結構模型之步驟，從獲得的模型的表面中、將疏水性殘基聚集成團簇狀的部分、及帶電荷殘基聚集成團簇狀的部分分別界定為疏水性區塊及電荷區塊，計算各自的面積之步驟，計算依照面積的大小排序前5位為止的疏水性區塊的面積的和(X(Å ²))、及電荷區塊總面積(Y(Å ²))的步驟，及將X+Y×1.5為1700以上的蛋白質判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質之步驟。

圖7的判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的裝置(10)的結構圖中，上述的製作模型的步驟是基於輸入於輸入部(11)的胺基酸序列、藉由模型製作部(12)而施行。界定疏水性區塊及電荷區塊，計算各自的面積，計算依照面積的大小排序前5位為止的疏水性區塊的面積的和(X(Å ²))、及電荷區塊總面積(Y(Å ²))的步驟是在計算部(13)實施。將X+Y×1.5為1700以上的蛋白質判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的步驟是在判斷部(14)實施。判斷結果經由輸出部(15)輸出。此等的各步驟以例如、CPU讀取儲存於HDD内的電腦程式而施行。

此電腦程式為單獨不佔有空間，也可為儲存於資訊記錄媒體而流通。在此、「資訊記錄媒體」是指，例如磁片、硬碟、CD-ROM、CD-R、CD-RW、MO(磁光碟)、MD、DVD-R、DVD-RW、快閃記憶體、IC卡等。將此等資訊記錄媒體連接於前述裝置的數據輸入輸出部，能夠將電腦程式安裝於前述裝置内的HDD等的記憶體。又、也能夠從儲存此電腦程式的別的電腦、藉由通信線路將該電腦程式傳送至前述裝置，安裝於其內部的HDD等的記憶體。

圖5顯示施行判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的裝置用的電腦程式時的前述裝置進行的處理流程。前述裝置的CPU讀取儲存於相同裝置的HDD等的記憶體内的前述裝置用的電腦程式，經由同源模擬法或抗體建模、由蛋白質的胺基酸序列製作蛋白質的立體結構模型。接著，上述CPU讀取上述電腦程式，從製作的模型將疏水性殘基聚集成團簇狀的部分、及帶電荷殘基聚集成團簇狀的部分分別界定為疏水性區塊及電荷區塊，計算各自的面積，計算依照面積的大小排序前5位為止的疏水性區塊的面積的和(X(Å ²))、及電荷區塊總面積(Y(Å ²))。接著，CPU讀取上述電腦程式，將X+Y×1.5為1700以上的蛋白質判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質。

(基於電荷區塊判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的裝置用的程式) 在本發明的一個面向中，本發明是關於一種記憶於裝置中或記錄媒體中而運用的程式，該裝置或記錄媒體為在溶液中含有蛋白質作為有效成分之醫藥製劑中，基於電荷區塊、判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的裝置或記錄媒體。

該程式在前述裝置或電腦中施行下述步驟：經由同源模擬法或抗體建模、由蛋白質的胺基酸序列製作蛋白質的立體結構模型的步驟，從獲得的模型的表面中、將帶電荷殘基聚集成團簇狀的部分界定為電荷區塊，計算電荷區塊總面積(Y(Å ²))的步驟，及將Y為600以上的蛋白質判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的步驟。

上述的製作模型的步驟，是藉由模型製作部而施行。界定電荷區塊計算電荷區塊總面積(Y(Å ²))的步驟，在計算部實施。將Y為600以上的蛋白質判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的步驟，在判斷部實施。此等的各步驟，例如、CPU讀取儲存於HDD内的電腦程式而施行。

此電腦程式可為單獨無法佔據空間之物，也可以是儲存於資訊記錄媒體而流通之物。在此、「資訊記錄媒體」是指例如、磁片、硬碟、CD-ROM、CD-R、CD-RW、MO(磁光碟)、MD、DVD-R、DVD-RW、快閃記憶體、IC卡等。此等資訊記錄媒體能夠連接於判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的裝置的數據輸入輸出部，將電腦程式安裝於前述裝置内的HDD等的記憶體。再者，也能夠從儲存此電腦程式的別的電腦、藉由通信線路傳送該電腦程式至前述，安裝於其內部的HDD等的記憶體。

圖6顯示施行判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的裝置用的電腦程式時的前述裝置的進行處理流程。前述裝置的CPU讀取儲存於同裝置的HDD等的記憶體内的前述裝置用的電腦程式，經由同源模擬法或抗體建模、由蛋白質的胺基酸序列製作蛋白質的立體結構模型。接著，上述CPU讀取上述電腦程式，從製作的模型將帶電荷殘基聚集成團簇狀的部分界定為電荷區塊，計算電荷區塊總面積(Y(Å ²))。接著，將Y為600以上的蛋白質判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質。 [實施例]

實施例1 能夠由目視檢出的粒子的計數關於mAb1(H鏈/序列編號:1、L鏈/序列編號:2；托珠單抗)、mAb2(H鏈/序列編號3及4:共通L鏈:序列編號5)、mAb3(H鏈/序列編號:6、L鏈/序列編號:7)及mAb4(具有第VIII凝血因子(FVIII)輔因子功能替代活性的人源化雙特異性抗體)、mAb5(抗潛在型肌肉生長抑制素(myostatin)全能(sweeping)人源化抗體)、mAb6(H鏈/序列編號8及L鏈/序列編號9的組合、及H鏈/序列編號11及L鏈/序列編號10的組合；抗HLA-DQ2.5人源化雙特異性抗體)的6種類的抗體，調配含抗體溶液(mAb1-6:50 mg/mL、緩衝劑:20 mmol/L組胺酸、安定化劑:150 mmol/L精胺酸及162 mmol/L天冬胺酸、界面活性劑:0.01 mg/mL 泊洛沙姆188、pH 6.0)，以0.22μm過濾器過濾之後，填充1.0 mL的溶液於經放射線(25 kGy)滅菌的27G附針COP製注射器(1 mL規格)内，以活塞封蓋(capping)。對於經填充、封蓋的樣本，實施封蓋後立刻能夠由目視檢出的粒子評價1，排除判斷為注射器内含有能夠由目視檢出的粒子的樣本。每個抗體提供10支的樣本進行試驗，但是由於mAb-6相較於其它的抗體不安定度高，填充後立刻的能夠由目視檢出的粒子的發生頻率極高，提供各3支進行試驗。基於以下述的氣泡容量測定、設定方法所製作的檢量線，調整注射器的活塞位置，準備氣泡容量為120μL及10μL的樣本。針對各氣泡容量的樣本，實施在5℃保管1天後、能夠由目視檢出的粒子評價2。

[能夠由目視檢出的粒子評價1] 清潔樣本的注射器容器的外表面，在白色光源的正下方約10000 lx的亮度的位置，在黑色的背景前緩慢地旋轉或翻轉注射器，實施以肉眼約30秒的目視檢查，調查填充於注射器的溶液中有無能夠由目視檢出的粒子。

[氣泡容量測定、設定方法] 將填充1.0 mL的含抗體溶液、以活塞封蓋的含抗體溶液注射器樣本之27G附針COP製注射器(1 mL規格)，以針朝上的方向、使氣泡上升至針的基部為止，從針尖押出空氣，以從凸緣至活塞為止的距離成為11 mm的方式、調整活塞的位置。將注射器所包含的溶液及全部的空氣注入内徑0.5 mm的管(tube)。藉由測定管内的空氣層的長度，計算注射器的氣泡容量。將此測定重複4次的結果，從凸緣至活塞為止的距離為11 mm的情況時，平均氣泡容量為120μL。接著製作3支儘可能地從注射器的針尖將空氣排除的樣本，測定從凸緣至活塞為止的距離。從凸緣至活塞為止的平均距離為15.1 mm。又、其實際的氣泡容量為3μL。從此等的測定結果，製作從凸緣至活塞為止的距離與氣泡容量的檢量線，基於從凸緣至活塞為止的距離設定氣泡容量。設定的氣泡容量的條件如下述表1所示。

[表1]

[能夠由目視檢出的粒子評價2] 清潔樣本的注射器容器的外表面，在白色光源的正下方約8000 lx的亮度的位置，在黑色的背景前緩慢地旋轉或翻轉注射器，藉由實施約30秒的目視檢查，調查填充於注射器的溶液中有無能夠由目視檢出的粒子。確認到能夠由目視檢出的粒子的存在的樣本，在白色光源的正下方約8000 lx的亮度的位置，在黑色的背景前緩慢地旋轉或翻轉，以肉眼計數注射器内的能夠由目視檢出的粒子數。

[評價結果] 將樣本在5℃保管1天後的注射器内之能夠由目視檢出的粒子評價2的結果，顯示於下述表2。

[表2]

實施例2 形成粒子的風險高的條件的決定 1.抗體的3維結構模型的製作在分子操作環境(Molecular Operating Environment，MOE)、2019.01(Chemical Computing Group ULC)的抗體模型(Antibody modeling)功能中，輸入6種類的抗體(mAb1-6)的胺基酸序列，使每個互補決定區(CDR)與各自的模板配對(matching)，將其組合以IgG全長的範圍製作各抗體的3維結構模型。作為計算條件，關於單特異性抗體使用Chains: VL、VH選項(option)，關於一部分的雙特異性抗體使用Chains: bispecific選項，關於Model type，使用Ig Immunoglobulin。任一者的抗體，框架區及互補決定區的模板結構使用被評價為最適合抗體模型功能的結晶結構資訊。應用0.1 kcal/mol/Å ²作為關於結構的能量最小化的收束的梯度值的閾值(Gradient limit)。其他的參數使用規定值。關於力場，使用MOE 2019.01的標準之Amber10: EHT。

刪除儘管mAb2、mAb3的各抗體序列中不包含而由MOE自動補充的殘基，針對刪除的周邊殘基實施能量最小化。關於mAb1，不特別實施殘基刪除。

2.抗體的3維結構模型的物性計算輸入在1.製作的6種類的抗體(mAb1-6)的3維結構模型，以MOE 2019.01的蛋白質特性(Protein properties)功能，計算綜合的各抗體的特徴量。除了將Target pH變更為6以外，其他的參數使用既定值。輸出的特徴量保存作為MDB檔案。

關於各抗體，計算的特徴量中的關於區塊的4種類的特徴量，具體而言，將全部的疏水性區塊之中面積順序前5個的面積的總計值(Patch_hyd_5)、全部的疏水性區塊的面積的總計值(Patch_hyd)、全部的電荷區塊之中面積順序前5個的面積的總計值(Patch_ion_5)、全部的電荷區塊的面積的總計值(Patch_ion)從MDB檔案中取出，檢討與實驗值之間的相關性。此時，也檢討關於2種類的特徴量的組合與實驗值之間的相關性。相關性的檢討使用將各特徴量作為一個變數、實施例1表2所示的氣泡容量120μL的樣本的每一注射器之能夠由目視檢出的粒子數的平均作為一個變數的情況時的皮爾森積差相關係數(Pearson product-moment correlation coefficient)及斯皮曼的等級相關係數(Spearman’s rank correlation coefficient)。表示任一特徴量及面積的單位為Å ²。

以上的利用MOE的全部的計算中，關於分子力場，使用MOE 2019.01的標準之Amber10: EHT。將6種類的抗體(mAb1-6)的Patch_hyd_5、Patch_hyd、Patch_ion_5、Patch_ion、其組合值(單位全部為Å ²)、及實施例1表2所示之氣泡容量120μL的樣本的每一注射器能夠由目視檢出的粒子數的平均之間的皮爾森的積差相關係數、斯皮曼的等級相關係數顯示於表3。

其結果，發現Patch_ion的值與氣泡容量120μL的樣本的每一注射器的能夠由目視檢出的粒子數的平均的相關性高(積差相關係數: 0.91)。進而，發現「Patch_hyd_5」與「(Patch_ion*1.5)」的和與氣泡容量120μL的樣本的每一注射器的能夠由目視檢出的粒子數的平均的相關性最高 (積差相關係數: 0.92)。

[表3]

實施例1表2所示的氣泡容量120μL的樣本的每一注射器的能夠由目視檢出的粒子數的平均與「Patch_hyd_5+(Patch_ion*1.5)」的關聯性顯示於下述的表4。藉由比較在實施例1所獲得的氣泡容量120μL及10μL的能夠由目視檢出的粒子數，顯示能夠由目視檢出的粒子數的平均的減少的程度(能夠由目視檢出的粒子的降低率)。

[表4]

實施例3 mAb2的能夠由目視檢出的粒子的形成確認試驗將含mAb2溶液(mAb2:150 mg/mL、緩衝劑:20 mmol/L組胺酸、安定化劑:150 mmol/L精胺酸及約162 mmol/L天冬胺酸、界面活性劑:0.5 mg/mL 泊洛沙姆188、pH 6.0)以0.22μm過濾器過濾之後，填充1.0 mL的溶液於經放射線(25 kGy)滅菌的27G附針COP製注射器(1 mL規格)内，以活塞封蓋。針對填充、封蓋的樣本，實施封蓋後立刻能夠由目視檢出的粒子評價1，排除判斷為注射器内包含能夠由目視檢出的粒子的樣本。基於實施例1所獲得的檢量線，調整注射器的活塞位置，調整為表5所示的目標的氣泡容量。對於各氣泡容量的樣本，在5℃保管約7個月後變更為在25℃保管後，在25℃保管6週。在25℃的保管期間中、施加3次下述說明的機械應力，經過6週後、實施能夠由目視檢出的粒子評價2。對於確認到能夠由目視檢出的粒子的存在的樣本，使用拉曼影像顯微鏡(Raman Imaging Microscope，DXR2xi)，藉由拉曼光譜的測定實施能夠由目視檢出的粒子的鑑別，確認粒子是源自mAb2。

[能夠由目視檢出的粒子評價1] 除了白色光源的正下方亮度為約8000 lx以外，以與實施例1的能夠由目視檢出的粒子評價1同樣地進行，調查填充於注射器的溶液中有無能夠由目視檢出的粒子。

[表5]

[機械應力] 參照ASTM D4169，將下述的落下試驗及振動試驗以落下試驗、振動試驗、落下試驗的順序組合施加應力。

[落下試驗] 將預填充式注射器置入托盤，將托盤堆疊總計3枚。托盤從上至下為空托盤、樣本托盤、空托盤的順序堆疊。如圖2所示進行紙箱的編號。堆疊的托盤以預填充式注射器的針尖朝向面2的方式包裝於紙箱中。對於包裝於紙箱的樣本，以落下時成為下側的面為面1、面2、面3、面4的順序變更，使其從高度38.1 cm落下。將此做為1組，一次的落下試驗實施2組的落下。

[振動試驗] 將注射器樣本置入托盤之後，將托盤以紙箱包裝，以注射器的筒平行於地面的方式配置紙箱。強度分別為Truck Low 40 min、Truck Middle 15 min、Truck High 5 min、Air level I 120 min，對紙箱施加振動應力。

[能夠由目視檢出的粒子評價2] 除了白色光源的正下方亮度為約6000 lx以外，以與實施例1的能夠由目視檢出的粒子評價1同樣地進行，調查填充於注射器的溶液中有無能夠由目視檢出的粒子。

[能夠由目視檢出的粒子的鑑別方法] 對於機械應力付加後的在能夠由目視檢出的粒子評價2中，確認到能夠由目視檢出的粒子的存在的全部樣本，將溶液的全部以孔徑3 μm的鎳過濾器進行吸濾。取得過濾器上所捕捉到的粒子中、尺寸最大的異物的拉曼光譜，確認到實施鑑別的粒子源自於mAb2。

[評價結果] 施加機械應力後的能夠由目視檢出的粒子的鑑別結果顯示於下述表6。如同下述，即使是含有適量的界面活性劑的狀態，在通常的氣泡容量的氣泡容量120μL，在複數的樣本確認到蛋白質性的能夠由目視檢出的粒子。明白藉由將此氣泡容量設定為69μL以下，能夠降低即使添加界面活性劑也無法抑制的蛋白質性的能夠由目視檢出的粒子的數目之事項。

經鑑別的蛋白質性的能夠由目視檢出的粒子的尺寸的直方圖顯示於圖4。蛋白質性的能夠由目視檢出的粒子的尺寸範圍為46.0~279μm。

[表6]

實施例4 mAb3的可視粒子形成確認試驗將含mAb3溶液(mAb3:120 mg/mL、緩衝劑:20 mmol/L組胺酸、安定化劑:150 mmol/L精胺酸及約162 mmol/L天冬胺酸、界面活性劑:0.5 mg/mL 泊洛沙姆188、pH 6.0)以0.22μm過濾器過濾之後，填充1.0 mL於經放射線(25 kGy)滅菌的27G附針COP製注射器(1 mL規格)内，以活塞封蓋。針對填充、封蓋的樣本，封蓋後立刻實施可視粒子評價1，排除判斷為注射器内包含可視粒子的樣本。基於實施例1所獲得的檢量線，藉由調整注射器的活塞位置，調整為表7所示的目標的氣泡容量。對於各氣泡容量的樣本，試驗開始時施加機械應力後在40℃保管60天後，以與本實施例的可視粒子評價1同樣地條件實施可視粒子評價2。

[可視粒子評價1] 以與實施例1的能夠由目視檢出的粒子評價1同樣地方法，將亮度設為3000-3750 lx，在黑色背景前11秒以上、白色背景前5秒以上，使注射器緩慢地旋轉或翻轉並觀察，調查填充於注射器的溶液中有無可視粒子。

[表7]

[機械應力] 參照ASTM D4169，以下述的條件施加振動應力。之後，以下述的條件施加200次旋轉應力。

[振動應力] 將注射器樣本置入固定容器，以注射器的筒垂直於地面的方式配置固定容器。以Truck Low 40 min、Truck Middle 15 min、Truck High 5 min、Air level II 120 min的強度對固定容器施加振動應力。

[旋轉應力] 將注射器樣本置入固定容器，以注射器的筒垂直於地面的方式進行配置。以注射器内的空氣充分地移動的速度手動旋轉。

[評價結果] 在40℃保管60天後的可視粒子評價2的結果，顯示於下述表8。與實施例3表6相同，即使是含有適量的界面活性劑的狀態，在氣泡容量120μL、在複數的樣本確認到可視粒子。明白藉由將此氣泡容量設定為42μL以下，能夠降低即使添加界面活性劑也無法抑制的可視粒子的數目之事項。

[表8]

實施例5 mAb3的能夠由目視檢出的粒子形成確認試驗將含mAb3溶液(mAb3:120 mg/mL、緩衝劑:20 mmol/L組胺酸、安定化劑:150 mmol/L精胺酸及162 mmol/L天冬胺酸、界面活性劑:0.5 mg/mL 泊洛沙姆188、pH 6.0)以0.22μm過濾器過濾之後，填充2.0 mL的溶液於經放射線(25 kGy)滅菌的27G附針COP製注射器(2.25 mL規格)内，以活塞封蓋。對於填充、封蓋的樣本，封蓋後立刻實施能夠由目視檢出的粒子評價1，排除判斷為注射器内包含能夠由目視檢出的粒子的樣本。基於以下述的氣泡容量測定、設定方法所製作的檢量線，藉由調整注射器的活塞位置，調整為表9所示的目標的氣泡容量。對於各氣泡容量的樣本，在25℃保管約3個月後，實施能夠由目視檢出的粒子評價2。保管中，在保管開始時、保管開始2週後、及保管開始3週後的總計3次，施加機械應力。

[能夠由目視檢出的粒子評價1] 除了在白色光源的正下方亮度約8000 lx以外，以與實施例1的能夠由目視檢出的粒子評價1同樣地進行，調查填充於注射器的溶液中有無能夠由目視檢出的粒子。

[氣泡容量測定、設定方法] 將填充有2.0 mL的含抗體溶液以活塞封蓋的含抗體溶液注射器樣本的27G附針COP製注射器(2.25 mL規格)、以朝向針朝上的方向，使氣泡上升至針的基部為止從針尖押出空氣，製作儘可能地排除的樣本。從凸緣至活塞為止的距離為14.2 mm。

對於儘可能地排除空氣的樣本，使用別的注射器從樣本的橡皮栓側將針刺入，注入120μL的空氣。從凸緣至活塞為止的距離為12 mm。

從以上的測定結果，製作從凸緣至活塞為止的距離與氣泡容量的檢量線，以從凸緣至活塞為止的距離設定氣泡容量。設定的氣泡容量的條件如下述表9所示。

[表9]

[機械應力] 參照ASTM D4169，在保管開始時、將下述的落下試驗及振動試驗以落下試驗、振動試驗、落下試驗的順序組合施加應力。在保管開始2週後、及保管開始3週後的2次，只有落下試驗的應力以落下試驗重複2組進行施加。落下試驗及振動試驗以與實施例3同樣地方法進行。

[能夠由目視檢出的粒子評價2] 除了白色光源的正下方亮度約6000 lx以外，以與實施例1的能夠由目視檢出的粒子評價1同樣地進行，調查填充於注射器的溶液中有無能夠由目視檢出的粒子。

[評價結果] 在25℃保管約3個月後的能夠由目視檢出的粒子的評價結果顯示於下述表8。與實施例3表6相同，即使含有適量的界面活性劑的狀態，於氣泡容量120μL、在複數的樣本確認到能夠由目視檢出的粒子。

明白藉由將此氣泡容量設定為10μL以下，能夠降地即使添加界面活性劑也無法抑制的能夠由目視檢出的粒子的數目之事項。

[表10]

10:蛋白質的裝置 11:輸入部 12:模型製作部 13:計算部 14:判斷部 15:輸出部

[圖1]圖1為注射器中的氣泡為(a)120μL、(b)40μL、(c)10μL時的影像。 [圖2]圖2為落下試驗所使用的紙箱的示意圖。 [圖3]圖3為注射器的結構的一個例子。 [圖4]圖4為在實施例3中界定的蛋白質性的能夠由目視檢出的粒子的尺寸的直方圖。 [圖5]圖5為顯示施行基於疏水性區塊及電荷區塊、判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的裝置用的程式時的處理流程。 [圖6]圖6為顯示施行基於電荷區塊、判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的裝置用的程式時的處理流程。 [圖7]圖7顯示判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的裝置的示意結構圖。

TW202323810A_111137979_SEQL.xml

Claims

一種判斷蛋白質的方法，其為在溶液中含有蛋白質作為有效成分之醫藥製劑中，判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的方法，包含下述步驟：經由同源模擬法或抗體建模，由蛋白質的胺基酸序列製作蛋白質的立體結構模型，將對應於所獲得的模型的表面的疏水性殘基的團簇及帶電荷殘基的團簇的部分、分別界定為疏水性區塊及電荷區塊，計算各自的面積，計算依照面積的大小排序前5位為止的疏水性區塊的面積的和(X(Å ²))、及電荷區塊總面積(Y(Å ²))，及將X+Y×1.5為1700以上的蛋白質判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質，其中粒子具有40μm以上的粒徑。
如請求項1所述的方法，其中，將X+Y×1.5為2000以上的蛋白質判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質。
一種判斷蛋白質的方法，其為在溶液中含有蛋白質作為有效成分之醫藥製劑中，判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的方法，包含下述步驟：經由同源模擬法或抗體建模，由蛋白質的胺基酸序列製作蛋白質的立體結構模型，將對應於所獲得的模型的表面的帶電荷殘基的團簇的部分界定為電荷區塊，計算電荷區塊總面積(Y(Å ²))，及將Y為600以上的蛋白質判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質，其中粒子具有40μm以上的粒徑。
如請求項1~3中任一項所述的方法，其中，溶液為水溶液。
如請求項1~4中任一項所述的方法，其中，蛋白質為單株抗體。
如請求項5所述的方法，其中，單株抗體為單特異性抗體、或雙特異性抗體的任一者。
如請求項1~6中任一項所述的方法，其中，同源模擬法或抗體建模使用分子操作環境(MOE)軟體。
一種降低溶液中的粒子發生的方法，其為將含有蛋白質作為有效成分的溶液填充於容器的注射用製劑中、降低溶液中的粒子發生的方法，包含將容器内的氣泡的容量設為40μL以下，容器為注射器或卡式瓶，蛋白質為經由如請求項1~7中任一項所述的方法判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質。
如請求項8所述的方法，更包含容器内的氣泡的容量為10μL以下。
一種製備含有蛋白質作為有效成分溶液填充於容器的注射用製劑的方法，包含以獲得的注射用製劑中、容器内的氣泡的容量為40μL以下的方式將溶液填充至容器内，容器為注射器或卡式瓶，蛋白質為經由如請求項1~7中任一項所述的方法判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質。
如請求項9所述的方法，更包含以獲得的注射用製劑的容器内的氣泡的容量為10μL以下的方式，將溶液填充至容器内。
如請求項10或11所述的方法，其中，溶液為水溶液。
一種注射用製劑，其為含有蛋白質作為有效成分的溶液填充於容器的注射用製劑，其中蛋白質為經由如請求項1~6中任一項所述的方法判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質，容器為注射器或卡式瓶，容器内的氣泡的容量為40μL以下。
如請求項13所述的注射用製劑，其中，容器内的氣泡的容量為10μL以下。
如請求項13或14所述的注射用製劑，其中，溶液為水溶液。
一種判斷蛋白質的系統，其為在溶液中含有蛋白質作為有效成分之醫藥製劑中、判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的系統，包含下述步驟：經由同源模擬法或抗體建模，由蛋白質的胺基酸序列製作蛋白質的立體結構模型，從獲得的模型的表面中，將疏水性殘基聚集成團簇狀的部分、及帶電荷殘基聚集成團簇狀的部分分別界定為疏水性區塊及電荷區塊，計算各自的面積，計算依照面積的大小排序前5位為止的疏水性區塊的面積的和(X(Å ²))、及電荷區塊總面積(Y(Å ²))，及將X+Y×1.5為1700以上的蛋白質判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質，其中粒子具有40μm以上的粒徑。
一種判斷蛋白質的系統，其為在溶液中含有蛋白質作為有效成分之醫藥製劑中、判斷在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質的系統，包含下述步驟：經由同源模擬法或抗體建模，由蛋白質的胺基酸序列製作蛋白質的立體結構模型，將對應於所獲得的模型的表面的帶電荷殘基的團簇的部分界定為電荷區塊，計算電荷區塊總面積(Y(Å ²))，及將Y為600以上的蛋白質判斷為在溶液中形成粒子的風險高的蛋白質，其中粒子具有40μm以上的粒徑。