TW202323284A

TW202323284A - 免疫靜默Ｆｃ變體

Info

Publication number: TW202323284A
Application number: TW111141765A
Authority: TW
Inventors: 卡提克維斯瓦納坦
Original assignee: 美商威特拉公司
Priority date: 2021-11-02
Filing date: 2022-11-02
Publication date: 2023-06-16
Also published as: WO2023081160A1; AU2022380477A1; US20230416372A1; IL312475A; KR20240102981A; CA3236564A1; CN119462907A; US20230365694A1; JP2024540728A; EP4426728A1; MX2024005337A; CN118556075A

Abstract

本發明中提供具有顯著降低ADCC、ADCP及CDC功能之Fc變體。如本文所述，本發明部分係基於辨識出可消除與所有FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa、FcγRIIIb和C1q之結合的突變物的新穎組合。

Description

免疫靜默Fc變體

免疫反應是身體保護自身對抗入侵的外來物質，進而引起感染或疾病的機制。此機制基於所製造或投與宿主的抗體經由其可變區與抗原結合的能力。一旦該抗原與該抗體結合，該抗原就會被靶向破壞，此通常由抗體的恆定區或Fc結構域部分地介導。

例如，抗體Fc結構域的活性之一為結合至可幫助裂解標靶抗原(例如細胞病原體)的補體蛋白。Fc區之另一活性係結合至免疫細胞表面上之Fc受器(FcR)，或稱為效應子細胞，其具有觸發其他免疫作用之能力。這些免疫作用包括，例如免疫活化劑的釋放、抗體製造的調節、胞吞作用、吞噬作用及細胞殺傷。在一些臨床應用中，這些反應對於抗體的療效至關重要，而在其他案例中則會引起不希望的副作用。效應子介導的副作用之一實例為釋放會引起急性發燒反應的發炎性細胞激素。另一實例為帶有抗原的細胞的長期缺失。

抗體之效應子功能可藉由使用不具有Fc區之抗體片段（例如，諸如Fab、Fab′2或單鏈抗體(sFv)）來避免，然而，此等片段具有降低之半衰期、僅一個抗原結合位點而非兩個(例如，在Fab抗體片段及單鏈抗體(sFv)之例子中)，且更難純化。

本發明提供具有顯著降低的ADCC、ADCP和CDC功能的Fc變體。如本文所述，本發明部分係基於辨識出可消除與所有FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa、FcγRIIIb和C1q之結合的突變物的新穎組合。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含位置235及265處之胺基酸取代，其中該位置265處之胺基酸經Gly取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一些實施例中，Fc變體進一步包含在位置234、237、329、330或331處之一或多個胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體進一步包含在位置234處之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體進一步包含在位置234及237處之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體進一步包含在位置234、330及331處之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體進一步包含在位置234、237、330及331處之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體進一步包含在位置237處之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體進一步包含在位置330及331處之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體進一步包含在位置329處之胺基酸取代。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含位置234及265處之胺基酸取代，其中該位置234處之胺基酸經Val取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一些實施例中，Fc變體進一步包含在位置235及237處之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體進一步包含在位置235、237、330及331處之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體進一步包含在位置235處之胺基酸取代。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG4 Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含在位置F234、L235及D265處之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含234V、L235E及D265G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一些實施例中，Fc變體為IgG4 Fc區。在一些實施例中，Fc變體包含S228P、F234V、L235E及D265G之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體為IgG4 Fc區且包含S228P、F234V、L235E及D265G之胺基酸取代。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含234F、L235E及D265G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一些實施例中，Fc變體為IgG1 Fc區。在一些實施例中，Fc變體包含L234F、L235E及D265G之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體為IgG1 Fc區且包含L234F、L235E及D265G之胺基酸取代。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含234F、L235E、G237A及D265G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一些實施例中，Fc變體為IgG1 Fc區。在一些實施例中，Fc變體包含L234F、L235E、G237A及D265G之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體為IgG1 Fc區且包含L234F、L235E、G237A及D265G之胺基酸取代。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含234V、L235E、G237A及D265G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一些實施例中，Fc變體為IgG1 Fc區。在一些實施例中，Fc變體包含L234V、L235E、G237A及D265G之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體為IgG1 Fc區且包含L234V、L235E、G237A及D265G之胺基酸取代。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含234F、L235E、D265D、A330S及P331S之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一些實施例中，Fc變體為IgG1 Fc區。在一些實施例中，Fc變體包含L234F、L235E、D265D、A330S及P331S之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體為IgG1 Fc區且包含L234F、L235E、D265D、A330S及P331S之胺基酸取代。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含234V、L235A、G237A及D265G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一些實施例中，Fc變體為IgG1 Fc區。在一些實施例中，Fc變體包含L234V、L235A、G237A及D265G之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體為IgG1 Fc區且包含234F、L234V、L235A、G237A及D265G之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體為IgG4 Fc區。在一些實施例中，Fc變體包含S228P、L234V、L235A、G237A及D265G之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體為IgG4 Fc區且包含S228P、L234V、L235A、G237A及D265G之胺基酸取代。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含234V、L235A、G237A、D265G、A330S及P331S之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一些實施例中，Fc變體為IgG1 Fc區。在一些實施例中，Fc變體包含L234V、L235A、G237A、D265G、A330S及P331S之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體為IgG1 Fc區且包含L234V、L235A、G237A、D265G、A330S及P331S之胺基酸取代。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含L235E及D265G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一些實施例中，Fc變體為IgG4 Fc區。在一些實施例中，Fc變體包含S228P、L235E及D265G之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體為IgG4 Fc區且包含S228P、L235E及D265G之胺基酸取代。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含L235E、G237A及D265G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一些實施例中，Fc變體為IgG4 Fc區。在一些實施例中，Fc變體包含S228P、L235E、G237A及D265G之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體為IgG4 Fc區且包含S228P、L235E、G237A及D265G之胺基酸取代。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含L235E、G237A及P329G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一些實施例中，Fc變體為IgG4 Fc區。在一些實施例中，Fc變體包含S228P、L235E、G237A及P329G之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體為IgG4 Fc區且包含S228P、L235E、G237A及P329G之胺基酸取代。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含L235E、G237A及L328R之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一些實施例中，Fc變體為IgG4 Fc區。在一些實施例中，Fc變體包含S228P、L235E、G237A及L328R之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體為IgG4 Fc區且包含S228P、L235E、G237A及L328R之胺基酸取代。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含D265G、A330S及P331S之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一些實施例中，Fc變體為IgG2 Fc區。在一些實施例中，Fc變體包含D265G、A330S及P331S之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體為IgG2 Fc區且包含D265G、A330S及P331S之胺基酸取代。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含235E、D265G、A330S及P331S之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一些實施例中，Fc變體為IgG2 Fc區。在一些實施例中，Fc變體包含A235E、D265G、A330S及P331S之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體為IgG2 Fc區且包含A235E、D265G、A330S及P331S之胺基酸取代。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含235E、D265G、及P329G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一些實施例中，Fc變體為IgG2 Fc區。在一些實施例中，Fc變體包含A235E、D265G及P329G之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體為IgG2 Fc區且包含A235E、D265G及P329G之胺基酸取代。

在一態樣中，本發明提供編碼包含本發明Fc變體的經分離多肽之核酸。

在一態樣中，本發明提供一種細胞，其包含編碼包含本發明Fc變體的經分離多肽之核酸。

在一態樣中，本發明提供一種治療疾病或病症之方法，該方法包含向有需要的個體投與治療有效量之包含Fc變體之經分離多肽。在一些實施例中，該疾病或病症為ANCA-相關血管炎。在一些實施例中，該疾病或病症為C3腎小球病變(C3G)。在一些實施例中，該疾病或病症為自體免疫疾病。在一些實施例中，該疾病或病症為濕性老年性黃斑部病變(wAMD)。在一些實施例中，該疾病或病症為被動型海曼腎炎(NHP)。在一些實施例中，該疾病或病症為膠原蛋白-抗體誘導之關節炎(CAIA)。

抗體之Fc區係控制抗體的細胞毒性活性並可能影響抗體之血清半衰期。然而，在治療性內容中，抗體之細胞毒性效應子功能通常不理想，並可藉由活化宿主免疫防禦引起安全性疑慮及不希望的副作用。當額外活化有害時，便需要Fc-改造以使IgG Fc結構域靜默，使其無法結合至Fc-γ受器。

本發明描述新類別的Fc變體，其在使IgG Fc結構域靜默方面特別有效。值得注意的是，本發明之Fc突變組合為新穎的，並可降低與Fc-γ受器及C1q之結合，而有效降低不希望的ADCC、ADCP及CDC效應子功能。 Fc 區及其效應子功能

抗體之Fc區會與許多Fc受器及配位體相互作用，賦予一系列重要的功能能力，稱為效應子功能。對於IgG而言，該Fc區包含Ig結構域Cγ2和Cγ3，且N端鉸鏈引導至Cγ2。IgG類的一個重要Fc受器家族為Fc γ受器(FcγR)。此等受器介導抗體與免疫系統的細胞臂之間的通訊(Raghavan等人, 1996, Annu Rev Cell Dev Biol 12:181-220；Ravetch等人, 2001, Annu Rev Immunol 19:275-290)。在人類中，此蛋白家族包括FcγRI (CD64)，包括同種型FcγRIa、FcγRIb、和FcγRIc；FcγRII (CD32)，包括同種型FcγRIIa (包括異型H131和R131)、FcγRIIb (包括FcγRIIb-1和FcγRIIb-2)、和FcγRIIc；以及FcγRIII (CD16)，包括同種型FcγRIIIa (包括異型V158和F158)和FcγRIIIb (包括異型FcγRIIIb-NA1和FcγRIIIb-NA2) (Jefferis等人, 2002, Immunol Lett 82:57-65, 以引用方式併入)。此等受器通常具有介導與Fc結合之細胞外結構域、跨膜區、及可能介導細胞內某些信號事件的細胞內結構域。這些受器在多種免疫細胞中表現，包括單核球、巨噬細胞、嗜中性球、樹突細胞、嗜酸性粒細胞、肥大細胞、血小板、B細胞、大顆粒淋巴球、蘭格罕細胞(Langerhans' cell)、自然殺手細胞(NK)和γδ T細胞。Fc/FcγR複合物的形成將這些效應子細胞召集到結合抗原的位點，通常會導致細胞內的信號事件和重要的後續免疫反應，例如發炎介質的釋放、B細胞活化、內吞作用、吞噬作用和細胞毒性攻擊。介導細胞毒性及吞噬效應子功能之能力為抗體破壞靶向細胞之潛在機制。細胞介導的反應，其中表現FcγR的非特異性細胞毒性細胞會辨識標靶細胞上結合的抗體，並隨後導致該標靶細胞裂解，稱為抗體依賴性細胞-介導的細胞毒性(ADCC) (Raghavan等人., 1996, Annu Rev Cell Dev Biol 12:181-220; Ghetie等人, 2000, Annu Rev Immunol 18:739-766; Ravetch等人, 2001, Annu Rev Immunol 19:275-290，以引用方式併入)。細胞介導反應，其中表現FcγR的非特異性細胞毒殺細胞會辨識標靶細胞上結合的抗體，隨後引發針對標靶細胞的吞噬作用，稱為抗體依賴性細胞-介導的吞噬作用(ADCP)。人類FcγR的細胞外結構域的許多結構已經解出，包括FcγRIIa(pdb登錄號1H9V)(Sondermann等人, 2001, J Mol Biol 309:737-749) (pdb登錄號1 FCG) (Maxwell等人, 1999, Nat Struct Biol 6:437-442)、FcγRIIb (pdb登錄號2FCB) (Sondermann等人, 1999, Embo J 18:1095-1103)；以及FcγRIIIb (pdb登錄號1E4J) (Sondermann等人, 2000, Nature 406:267-273，以引用方式併入)。所有FcγR都結合至Fc上的相同區域，即在Cγ2結構域的N端和其前接的鉸鏈。此相互作用已在結構上得到良好鑑定(Sondermann等人, 2001, J Mol Biol 309:737-749，以引用方式併入)，與人類FcγRIIIb之胞外結構域結合的人類Fc的數種結構已被解出(pdb登錄號1E4K)(Sondermann等人, 2000, Nature 406:267-273) (pdb登錄號1IIS and 1IIX) (Radaev等人, 2001, J Biol Chem 276:16469-16477，以引用方式併入)，以及具有人類IgE Fd/FcεRIa複合物的結構亦已被解出(pdb登錄號1F6A) (Garman等人, 2000, Nature 406:259-266，以引用方式併入)。

Fc上的一個重疊但獨立的位點係作為補體蛋白C1q的界面。與Fc/FcγR結合而介導ADCC的方式相同，Fc/C1q之結合會介導補體依賴性細胞毒性(CDC)。C1q與絲胺酸蛋白酶C1r和C1s形成複合物，以形成C1複合物。C1q可結合六個抗體，儘管結合至兩個IgG足以活化補體級聯。類似於Fc與FcγR的相互作用，不同的IgG亞群對C1q具有不同的親和力，其中IgG1和IgG3通常比IgG2和IgG4可實質上更好地結合至FcγR。

Fc上介於Cγ2和Cγ3結構域之間的一個位點會介導與新生兒受器FcRn的相互作用，其結合將內吞體中的內吞抗體循環回血流中(Raghavan等人, 1996, Annu Rev Cell Dev Biol 12:181-220; Ghetie等人, 2000, Annu Rev Immunol 18:739-766，以引用方式併入)。此過程，再加上全長分子的大尺寸會導致腎臟過濾的阻礙，導致有利的抗體血清半衰期範圍為一到三週。Fc與FcRn的結合在抗體傳送中也扮演關鍵角色。Fc上FcRn之結合位點亦為細菌蛋白A及G結合之位點。這些蛋白質的緊密結合通常被作為在蛋白質純化過程中藉由使用蛋白A或蛋白G親和層析法來純化抗體的一種方法。因此，此區在Fc上的保真度對於抗體的臨床特性及其純化而言都很重要。大鼠Fc/FcRn複合物的可用結構(Martin等人, 2001, Mol Cell 7:867-877，以引用方式併入)，以及Fc與蛋白A和G的複合物之可用結構(Deisenhofer, 1981, Biochemistry 20:2361-2370; Sauer-Eriksson等人, 1995, Structure 3:265-278; Tashiro等人, 1995, Curr Opin Struct Biol 5:471-481，以引用方式併入)，提供對Fc與這些蛋白質相互作用的深入了解。

本發明相關於可用於多種情況的最佳化Fc變體。如上文所概述，當前抗體療法具有多種問題。本發明提供一種改善抗體之治療功效的有希望方法，藉由消除其介導之細胞毒性效應子功能(諸如ADCC、ADCP及CDC)的能力而達成。 本發明之 Fc 變體

本發明之Fc變體可發現用於多種Fc多肽中。包含本發明之Fc變體的Fc多肽在本文中稱為「本發明之Fc多肽」。本發明之Fc多肽包括在較大多肽(諸如抗體或Fc融合物)之內容中包含本發明之Fc變體的多肽。亦即，本發明之Fc多肽包括了包含有本發明之Fc變體的抗體及Fc融合物。如本文所使用之「本發明之抗體」係指包含本發明之Fc變體的抗體。如本文所使用之「本發明之Fc融合物」係指包含本發明之Fc變體的Fc融合物。本發明之Fc多肽亦包括除該Fc區外，包含極少或無額外多肽序列之多肽，稱為經分離Fc。本發明之Fc多肽亦包括該Fc區的片段。如下所述，本發明之前述Fc多肽中之任一者可融合至一或多個融合配對物或共軛配對物，以提供所需的功能特性。

本文所述的親本Fc多肽可來自廣泛的來源，並可實質上由來自任何生物體的一或多個Fc基因編碼，包括但不限於：人類、囓齒動物包括但不限於小鼠和大鼠、兔形動物如兔子和野兔、駱駝科動物如駱駝、美洲駝和單峰駱駝、以及非人類靈長類動物包括但不限於原猴亞目、闊鼻小目猴(新世界猴)、猴科(舊世界猴)和類人猿科動物，包括長臂猿、小長臂猿和類人猿，其中最佳為人類。本發明之親本Fc多肽可實質上由屬於任一抗體分類之免疫球蛋白基因編碼，包括但不限於：屬於IgG之序列（包括人類亞群IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)、IgA(包括人類亞群IgA1及IgA2)、IgD、IgE、IgG或IgM抗體類。本發明之親本Fc多肽包含屬於人類IgG類抗體之序列。舉例而言，該親本Fc多肽可為親本抗體，例如人類IgG1抗體、人類IgA抗體或小鼠IgG2a或IgG2b抗體。該親本抗體可為非人類、嵌合性、人類化或完全人類，如下詳述。該親本Fc多肽可以某種方式修飾或改造，例如親本抗體可為親和力成熟、或可具有經改造的醣類形式，全部更完整地描述如下。替代地，該親本Fc多肽可為Fc融合物，例如Fc融合物，其中該融合配對物靶向一細胞表面受器。替代地，該親本Fc多肽可為經分離之Fc區，其在Fc區之外包含很少或無其他多肽序列。該親本Fc多肽可為天然存在的Fc區，或可為Fc多肽之現有經改造變體。重要的是，該親本Fc多肽包含一Fc區，其之後可突變以生成Fc變體。

本發明之Fc變體可發現用於廣範圍産品中。於一實施例中，本發明之Fc變體為治療用、診斷用或研究試劑，較佳為治療用。或者，本發明之Fc變體可用於農業或工業用途。本發明之抗體可用於單株或多株抗體組成物中。本發明之Fc變體可為促效劑、拮抗劑、中和劑、抑制劑或刺激劑。在一較佳實施例中，本發明之Fc變體用於殺死帶有標靶抗原之標靶細胞，例如癌細胞。在另一實施例中，本發明之Fc變體用於阻斷、拮抗或協同該標靶抗原。在另一較佳實施例中，本發明之Fc變體用於阻斷、拮抗或協同該標靶抗原，並殺死帶有該標靶抗原之標靶細胞。 最佳化特性

本發明提供針對許多治療相關特性最佳化的Fc變體。Fc變體包含相對於親本Fc多肽之一或多個胺基酸修飾，其中所述胺基酸修飾提供一或多個最佳化特性。本發明之Fc變體在在胺基酸序列中因為至少一個胺基酸修飾而與其親本Fc多肽不同。因此，與親本多肽相較，本發明之Fc變體具有至少一個胺基酸修飾。替代地，與親本多肽相較，本發明之Fc變體可具有大於一個胺基酸修飾，例如自約一至五十個胺基酸修飾、自約一至十個胺基酸修飾、或自約一至約五個胺基酸修飾。因此，該Fc變體的序列和親本Fc多肽的序列呈實質上同源性。例如，本文中之變體Fc變體序列將與親本Fc變體序列具有約80%同源性，較佳地至少約90%同源性，且最佳地至少約95%同源性。

本發明之Fc變體可針對各種性質進行最佳化。經改造或預測顯示一或多個最佳化特性之Fc變體在本文中稱為「最佳化Fc變體」。可最佳化之特性包括但不限於提高或降低對FcγR之親和力。在一些實施例中，本發明的Fc變體經最佳化，以降低或消除對人類FcγR的親和力，包括但不限於：FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa和FcγRIIIb。這些實施例預期提供在人類中具有增強的治療特性的Fc多肽，例如降低的效應子功能和降低的毒性。在其他實施例中，本發明之Fc變體提供對一或多種FcγR之親和力增強，但對一或多種其他FcγR之親和力降低。舉例而言，本發明之Fc變體可具有增強的與FcγRIIIa之結合，但降低的與FcγRIIb之結合。或者，本發明之Fc變體可具有增進的與FcγRIIa和FcγRI之結合，但降低的與FcγRIIb之結合。在又一實施例中，本發明之Fc變體可具有增進的與FcγRIIb之結合，但降低的與一或多種活化的FcγR之結合。

在一些實施例中，Fc變體已降低或消除對FcγRI的親和力。在一些實施例中，Fc變體已降低或消除對FcγRIIa的親和力。在一些實施例中，Fc變體已降低或消除對FcγRIIb的親和力。在一些實施例中，Fc變體已降低或消除對FcγRIIc的親和力。在一些實施例中，Fc變體已降低或消除對FcγRIIIa的親和力。在一些實施例中，Fc變體已降低或消除對FcγRIIIb的親和力。在一些實施例中，Fc變體已降低或消除對C1q的親和力。在一些實施例中，Fc變體已增強對FcRn的親和力。在一些實施例中，Fc變體維持對FcRn的親和力。在一些實施例中，Fc變體已降低或消除對FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa、FcγRIIIb和C1q的親和力。在一些實施例中，Fc變體已降低或消除對FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa、FcγRIIIb和C1q的親和力，並維持對FcRn之結合。

本發明之Fc變體亦可經最佳化，以用於增強非醣基化形式之功能及/或溶液性質。在一較佳實施例中，本發明的非醣基化Fc變體以比親本Fc變體的非醣基化形式更低的親和力，與Fc配位體結合。該Fc配位體包括但不限於：FcγRs、C1q、FcRn、及蛋白A和G，且可來自任何來源，包括但不限於：人類、小鼠、大鼠、兔子或猴，較佳為人類。在另一較佳實施例中，該Fc變體經最佳化，以比親本Fc變體之非醣基化形式更穩定及/或更易溶解。 經改造之 Fc 突變

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG1 Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含L234F/L235E/D265G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG1 Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含L234F/L235E/G237A/D265G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG1 Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含L234V/L235E/G237A/D265G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG1 Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含L234F/L235E/D265G/A330S/P331S之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG1 Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含L234V/L235A/G237A/D265G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG1 Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含L234V/L235A/G237A/D265G/A330S/P331S之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG1 Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含D265G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG4 Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含L235E/D265G/S228P之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG4 Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含F234V/L235E/D265G/S228P之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG4 Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含F234V/L235A/G237A/D265G/S228P之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG4 Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含L235E/G237A/D265G/S228P之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG4 Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含L235E/G237A/P329G/S228P之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG4 Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含L235E/G237A/L328R/S228P之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG2 Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含D265G/A330S/P331S之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG2 Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含A235E/D265G/A330S/P331S之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG2 Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含A235E/D265G/P329G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。

在一態樣中，本發明提供一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含235E、D265G、及P329G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。在一些實施例中，Fc變體為IgG2 Fc區。在一些實施例中，Fc變體包含A235E、D265G及P329G之胺基酸取代。在一些實施例中，Fc變體為IgG2 Fc區且包含A235E、D265G及P329G之胺基酸取代。具有 Fc 變體之抗體的設計

本發明之Fc變體可為抗體，在本文中稱為「本發明之抗體」。本發明之抗體可包含實質上由屬於任一抗體分類之免疫球蛋白基因編碼的免疫球蛋白序列，包括但不限於：IgG(包括人類亞群IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)、IgA(包括人類亞群IgA1和IgA2)、IgD、IgE、IgG和IgM類抗體。最佳本發明之抗體包含屬於人類IgG類抗體之序列。本發明之抗體可為非人類、嵌合性、人類化或完全人類。如熟習此項技術者將瞭解的，此等不同類型之抗體反映人類中之「人類化」程度或免疫原性的潛在程度。關於這些概念的描述，請參見Clark等人, 2000、及引用的參考文獻(Clark, 2000, Immunol Today 21:397-402，以引用方式併入)。嵌合抗體包含非人類抗體的可變區，例如小鼠或大鼠來源的VH和VL結構域，其可操作地連接至人類抗體的恆定區。該非人類可變區可衍生自如上所述的任何生物體，較佳為哺乳動物，最佳為囓齒動物或靈長類動物。在一實施例中，本發明抗體包含猴可變結構域，例如描述於Newman等人, 1992, Biotechnology 10:1455-1460、美國專利號5,658,570、及美國專利號5,750,105，以引用方式併入。在一較佳實施例中，該可變區衍生自非人類來源，但其免疫原性已使用蛋白質工程降低。在一較佳實施例中，本發明之抗體係人類化(Tsurushita & Vasquez, 2004, Humanization of Monoclonal Antibodies, Molecular Biology of B Cells, 533-545, Elsevier Science (USA)，以引用的方式併入本文中)。如本文中所用，「人類化」抗體意謂一種抗體，其包含一個人類框架區(FR)、和一或多個來自非人類(通常為小鼠或大鼠)抗體的互補決定區(CDR)。提供該CDR之非人類抗體稱為「供應體」，而提供框架之人類免疫球蛋白稱為「接受體」。人類化主要依賴於將供應體CDR嫁接植至接受體(人類)之VL及VH框架(Winter 美國專利號5,225,539，以引用的方式併入本文中)。這種策略稱為「CDR嫁接」。通常需要將選定的接受體框架殘基「回復突變」為相應的供應體殘基，以重新獲得在初始嫁接構建體中喪失的親和力(美國專利號5,530,101；美國專利號5,585,089；美國專利號5,693,761；美國專利號5,693,762；美國專利號6,180,370；美國專利號5,859,205；美國專利號5,821,337；美國專利號6,054,297；美國專利號6,407,213，以引用的方式併入本文中)。用於人類化的許多其他方法是本領域已知的(Tsurushita & Vasquez, 2004, Humanization of Monoclonal Antibodies, Molecular Biology of B Cells, 533-545, Elsevier Science (USA)，以引用的方式併入本文中)，以及任何此類方法皆可在本發明中用於修飾Fc變體，以降低免疫原性。最佳地，該人類化抗體亦將包含免疫球蛋白恆定區的至少一部分，通常是人類免疫球蛋白的恆定區，因此通常將包含人類Fc區。

在一些實施例中，包含一Fc變體之抗體為單特異性抗體。在一些實施例中，包含一Fc變體之抗體為多特異性抗體。在一些實施例中，包含一Fc變體之抗體為雙特異性抗體。在一些實施例中，包含Fc變體的抗體為多互補位抗體，例如包含複數個免疫球蛋白可變區序列，其中複數個第一免疫球蛋白可變區序列對第一表位具有結合特異性，且複數個第二免疫球蛋白可變區序列對第二表位具有結合特異性。在一實施例中，第一及第二抗原決定基位於同一抗原上，例如同一蛋白質(或多聚體蛋白質之次單元)上。雙特異性或雙互補位抗體對不超過兩種抗原或抗原決定基具有特異性。雙特異性或雙互補位抗體分子之通常以對第一抗原決定基具有結合特異性之第一免疫球蛋白可變區序列及對第二抗原決定基具有結合特異性之第二免疫球蛋白可變區序列為特徵。在一實施例中，雙特異性或雙互補位抗體分子包含對第一抗原決定基具有結合特異性之半抗體或其片段及對第二抗原決定基具有結合特異性之半抗體或其片段。在一實施例中，第一及第二抗原決定基位於同一抗原上，例如同一蛋白質(或多聚體蛋白質之次單元)上。在一些實施例中，本發明中提供之雙互補位抗體包含Fab-Fc及單鏈可變片段(scFv)，其中Fc經由連接子連接至scFv。

在一些實施例中，雙互補位抗體為具有兩個臂單鏈Fab-Fc設計之雙特異性抗體，其包含CH3域中之「杵-臼(knobs-in-hole)」(KiH)突變，以組裝兩個半抗體(共同Fc雜二聚體及獨特VH-CH及VL-CL域)。在一些實施例中，KiH突變包含一個CH3域中之T366Y突變，可用於產生杵，而另一CH3域中之Y407T突變可用於產生臼。在一些實施例中，一個CH3域中之F405A突變可用於產生杵，而另一CH3域中之T394W突變可用於產生臼。在一些實施例中，一個CH3域中之T366W突變可用於產生杵而另一CH3域中之Y407A突變可用於產生臼。在一些實施例中，雙互補位scFv-Fc分子可使用杵-臼技術(例如，包括臼突變：Y349C、T366S、L368A、Y407V；杵突變：S354C、T366W)產生。

在一些實施例中，雙互補位抗體包含表 2中所描述之抗體格式。表 2. 雙互補位抗體之格式

(位點II) Fab-IgG-scFv (位點I)

(位點II) Fab-IgG-連接子-VL(位點I)-連接子-VH (位點I)

(位點II) Fab-IgG-連接子-VH(位點I)-連接子-VL (位點I)

(位點I) Fab-IgG-scFv (位點II)

在一實施例中，雙互補位抗體分子包含兩個重鏈可變區及兩個輕鏈可變區。在一實施例中，抗C5aR1抗體分子包含Fab、F(ab')2、Fv、Fd或單鏈Fv片段(scFv)。

在一些實施例中，本申請案中所使用之Fc域包含或衍生於IgG、IgM、IgE、Fc部分。除上文所描述之KiH突變以外，Fc域包含S228P突變。在一些實施例中，S228P增強抗體之均質性。在一些實施例中，Fc域包含或衍生於IgG Fc域。在一些實施例中，IgG Fc域為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc域。在一些實施例中，Fc域衍生於或包含IgG4 Fc域。在一些實施例中，Fc域衍生於或包含具有S228P突變之IgG4 Fc域。在一些實施例中，Fc域衍生於或包含IgG1 Fc域。在一些實施例中，Fc域衍生於或包含具有S228P突變之IgG1 Fc域。

在一些例示性實施例中，單特異性抗體及雙互補位抗體可經修飾或突變以增強抗體之熱穩定性。可藉由測定聚集起始溫度來評估抗體之熱穩定性。增加抗體穩定性之方式中之一者為如藉由差示掃描熱量測定(DSC)所量測使熱轉化中點(Tm)升高。一般而言，蛋白質Tm與其穩定性相關且與其在溶液中對展開及變性之易感性及視蛋白質展開趨勢而定之降解過程呈負相關。許多研究已發現在藉由DSC量測為熱穩定性之調配物之物理穩定性的等級與藉由其他方法量測之物理穩定性之間存在相關性(Maa等人, (1996) Int. J. Pharm. 140: 155-68；Remmele等人, (1997) Pharm. Res. 15: 200-8；Gupta等人, (2003) AAPS PharmSci. 5E8: 2003；Bedu-Addo等人, (2004) Pharm. Res. 21: 1353-61；Zhang等人, (2004) J. Pharm. Sci. 93: 3076-89)。調配物研究表明，Fab Tm牽涉對應mAb之長期物理穩定性。

在一些例示性實施例中，策略性引入二硫鍵可使單體蛋白質及多次單元蛋白質穩定，在增強抗體之熱穩定性方面起作用。

在一些例示性實施例中，策略性引入與芳族胺基酸(AA)，如色胺酸(TRP)、酪胺酸(TYR)、苯丙胺酸(PHE)及組胺酸(HIS)之π堆疊相互作用在增強抗體之熱穩定性方面起作用。

在一些實施例中，策略性引入出現在具有相反正或負全電子電荷之胺基酸側鏈之間的鹽橋，亦即(在中性pH下) Glu或Asp vs. Arg或Lys，增強了蛋白質，尤其是抗體之穩定性。

在一些例示性實施例中，單特異性抗體或雙互補位抗體包含一或多種增強熱穩定性之修飾。在一些實施例中，增強熱穩定性之修飾為半胱胺酸殘基之引入。

在一些實施例中，例示性雙互補位抗體之Tm大於65

C。在一些實施例中，例示性雙互補位抗體之Tm大於60

C，例示性雙互補位抗體之Tm大於55

C。在一些實施例中，例示性雙互補位抗體之Tm大於50

C。

在一些實施例中，肽連接子用於將scFv或單鏈抗體連接至Fab之Fc域。適合連接子之若干實例包括單個甘胺酸(G)殘基；二甘胺酸肽(GG)；三肽(GGG)；具有四個甘胺酸殘基之肽(GGGG)；具有五個甘胺酸殘基之肽(GGGGG – SEQ ID NO: 1)；具有六個甘胺酸殘基之肽(GGGGGG – SEQ ID NO: 2)；具有七個甘胺酸殘基之肽(GGGGGGG)；具有八個甘胺酸殘基之肽(GGGGGGGG – SEQ ID NO: 4)。可使用之胺基酸殘基之其他組合，諸如GGGGS – SEQ ID NO: 5、肽GGGGSGGGGS – SEQ ID NO: 6、肽GGGGSGGGGSGGGGS – SEQ ID NO: 7、肽GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS – SEQ ID NO: 8、肽GGSGSSGSGG – SEQ ID NO: 9、QRIEG – SEQ ID NO: 10、及肽GQPKAAP – SEQ ID NO: 11。其他適合的連接子包括單個Ser及Val殘基；二肽RTQP、SS、TK、SL、TKGPS – SEQ ID NO: 12、TVAAP – SEQ ID NO: 13、QPKAA – SEQ ID NO: 14。以上所列之實例不意欲以任何方式限制本發明之範疇，且已展示包含選自由以下組成之群的隨機選擇之胺基酸的連接子適用於結合蛋白：纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、離胺酸、精胺酸、組胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、甘胺酸及脯胺酸。關於連接子序列之額外描述，參見例如WO2012135345。

連接子中胺基酸殘基之一致性及序列可視在連接子中實現所需的次級結構元件之類型而變化。舉例而言，甘胺酸、絲胺酸及丙胺酸最佳用於具有最大可撓性之連接子。若需要更具剛性及延伸之連接子，則甘胺酸、脯胺酸、蘇胺酸及絲胺酸之某些組合為適用的。視所需特性而定，視需要，可將任何胺基酸殘基視為與其他胺基酸殘基組合之連接子，以構築更大的肽連接子。標靶

實質上任何抗原可由本發明之Fc變體靶向，包括但不限於屬於以下標靶列表之蛋白質、次單元、結構域、模體、及/或表位：17-IA、4-1 BB、4Dc、6-酮-PGF1a、8-異-PGF2a、8-氧-dG、A1腺苷受器、A33、ACE、ACE-2、活化素、活化素A、活化素AB、活化素B、活化素C、活化素RIA、活化素RIA ALK-2、活化素RIB ALK-4、活化素RIIA、活化素RIIB、ADAM、ADAM10、ADAM12、ADAM15、ADAM17/TACE、ADAM8、ADAM9、ADAMTS、ADAMTS4、ADAMTS5、Addressins、aFGF、ALCAM、ALK、ALK-1、ALK-7、α-1-抗胰蛋白酶、α-V/β-1拮抗劑、ANG、Ang、APAF-1、APE、APJ、APP、APRIL、AR、ARC、ART、青蒿琥酯(Artemin)、抗-Id、ASPARTIC、心房利鈉因子、av/b3整合素、Axl、b2M、B7-1、B7-2、B7-H、B-淋巴細胞刺激劑(BlyS)、BACE、BACE-1、Bad、BAFF、BAFF-R、Bag-1、BAK、Bax、BCA-1、BCAM、Bcl、BCMA、BDNF、b-ECGF、bFGF、BID、Bik、BIM、BLC、BL-CAM、BLK、BMP、BMP-2 BMP-2a、BMP-3成骨素、BMP-4 BMP-2b、BMP-5、BMP-6 Vgr-1、BMP-7 (0P-1)、BMP-8 (BMP-8a、OP-2)、BMPR、BMPR-IA (ALK-3)、BMPR-IB (ALK-6)、BRK-2、RPK-1、BMPR-II (BRK-3)、BMPs、b-NGF、BOK、鈴蟾肽(Bombesin)、骨源性神經營養因子、BPDE、BPDE-DNA、BTC、補體因子3 (C3)、C3a、C3b、C4、C5、C5a、C5a受器1 (C5aR1) C10、CA125、CAD-8、降鈣素、cAMP、癌胚抗原(CEA)、癌相關抗原、組織蛋白酶A、組織蛋白酶B、組織蛋白酶C/DPPI、組織蛋白酶D、組織蛋白酶E、組織蛋白酶H、組織蛋白酶L、組織蛋白酶O、組織蛋白酶S、組織蛋白酶V、組織蛋白酶X/Z/P、CBL、CCI、CCK2、CCL、CCL1、CCL11、CCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL2、CCL20、CCL21、CCL22、CCL23、CCL24、CCL25、CCL26、CCL27、CCL28、CCL3、CCL4、CCL5、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9/10、CCR、CCR1、CCR10、CCR10、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CD1、CD2、CD3、CD3E、CD4、CD5、CD6、CD7、CD8、CD10、CD11a、CD11b、CD11c、CD13、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD27L、CD28、CD29、CD30、CD30L、CD32、CD33 (p67蛋白)、CD34、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、CD46、CD49a、CD52、CD54、CD55、CD56、CD61、CD64、CD66e、CD74、CD80 (B7-1)、CD89、CD95、CD123、CD137、CD138、CD140a、CD146、CD147、CD148、CD152、CD164、CEACAM5、CFTR、cGMP、CINC、肉毒桿菌(Clostridium botulinum)毒素、產氣莢膜桿菌(Clostridium perfringens)毒素、CKb8-1、CLC、CMV、CMV UL、CNTF、CNTN-1、COX、C-Ret、CRG-2、CT-1、CTACK、CTGF、CTLA-4、CX3CL1、CX3CR1、CXCL、CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CXCL15、CXCL16、CXCR、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR6、細胞角蛋白腫瘤相關抗原、DAN、DCC、DcR3、DC-SIGN、衰減加速因子、des(1-3)-IGF-1 (腦IGF-1)、Dhh、毛地黃(digoxin)、DNAM-1、DNA酶(Dnase)、Dpp、DPPIV/CD26、Dtk、ECAD、EDA、EDA-A1、EDA-A2、EDAR、EGF、EGFR (ErbB-1)、EMA、EMMPRIN、ENA、內皮素受器、腦啡胜肽酶(Enkephalinase)、eNOS、Eot、伊紅趨素1 (eotaxin1)、EpCAM、腎上腺素B2/EphB4、EPO、ERCC、E-選擇素、ET-1、凝血因子IIa、凝血因子VII、凝血因子VIIIc、凝血因子IX、纖維母細胞活化蛋白(FAP)、Fas、FcR1、FEN-1、鐵蛋白、FGF、FGF-19、FGF-2、FGF3、FGF-8、FGFR、FGFR-3、纖維蛋白、FL、FLIP、Flt-3、Flt-4、促濾泡素、Fractalkine、FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9、FZD10、G250、Gas 6、GCP-2、GCSF、GD2、GD3、GDF、GDF-1、GDF-3 (Vgr-2)、GDF-5 (BMP-14、CDMP-1)、GDF-6 (BMP-13、CDMP-2)、GDF-7 (BMP-12、CDMP-3)、GDF-8 (肌肉生長抑制素)、GDF-9、GDF-15 (MIC-1)、GDNF、GDNF、GFAP、GFRa-1、GFR-α1、GFR-α2、GFR-α3、GITR、升糖素、Glut 4、醣蛋白IIb/IIIa (GPIlb/111a)、GM-CSF、gp130、gp72、GRO、生長激素釋放因子、不全抗原(NP-cap或NIP-cap)、HB-EGF、HCC、HCMV gB包膜醣蛋白、HCMV) gH包膜醣蛋白、HCMV UL、造血生長因子(HGF)、Hep B gp120、肝素酶、Her2、Her2/neu (ErbB-2)、Her3 (ErbB-3)、Her4 (ErbB-4)、單純皰疹病毒(HSV) gB醣蛋白、HSV gD醣蛋白、HGFA、高分子量黑色素瘤相關抗原(HMW-MAA)、HIV gp120、HIV IIIB gp120 V3環、HLA、HLA-DR、HM1.24、HMFG PEM、HRG、Hrk、人類心肌肌球蛋白、人類巨細胞病毒(HCMV)、人類生長激素 (HGH)、HVEM、I-309、IAP、ICAM、ICAM-1、ICAM-3、ICE、ICOS、IFNg、Ig、IgA受器、IgE、IGF、IGF結合蛋白、IGF-1R、IGFBP、IGF-I、IGF-II、IL、IL-1、IL-1R、IL-2、IL-2R、IL-4、IL-4R、IL-5、IL-5R、IL-6、IL-6R、IL-8、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-18、IL-18R、IL-23、干擾素 (INF)-α、INF-β、INF-γ、抑制素、iNOS、胰島素A-鏈、胰島素B-鏈、類胰島素生長因子1、整合素α2、整合素α3、整合素α4、整合素α4/β1、整合素α4/β7、整合素α5 (αV)、整合素α5/β1、整合素α5/β3、整合素α6、整合素β1、整合素β2、干擾素γ、IP-10、I-TAC、JE、激肽釋放素2、激肽釋放素5、激肽釋放素6、激肽釋放素11、激肽釋放素12、激肽釋放素14、激肽釋放素15、激肽釋放素L1、激肽釋放素L2、激肽釋放素L3、激肽釋放素L4、KC、KDR、角質形成細胞生長因子(KGF)、層黏連蛋白5、LAMP、LAP、LAP (TGF-1)、潛伏TGF-1、潛伏TGF-1 bpi、LBP、LDGF、LECT2、Lefty、Lewis-Y抗原、Lewis-Y相關抗原、LFA-1、LFA-3、Lfo、LIF、LIGHT、脂蛋白、LIX、LKN、Lptn、L-選擇素、LT-a、LT-b、LTB4、LTBP-1、肺表面張力素、促黃體激素、淋巴毒素β受體、Mac-1、MAdCAM、MAG、MAP2、MARC、MCAM、MCAM、MCK-2、MCP、M-CSF、MDC、Mer、金屬蛋白酶、MGDF受器、MGMT、MHC (HLA-DR)、MIF、MIG、MIP、MIP-1-alpha、MK、MMAC1、MMP、MMP-1、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-2、MMP-24、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MPIF、Mpo、MSK、MSP、黏蛋白(Mud)、MUC18、穆勒氏管抑制物質、Mug、MuSK、NAIP、NAP、NCAD、N-鈣黏素、NCA 90、NCAM、NCAM、腦啡肽酶(Neprilysin)、神經營養因子-3、-4、或-6、Neurturin、神經生長因子(NGF)、NGFR、NGF-β、nNOS、NO、NOS、Npn、NRG-3、NT、NTN、OB、OGG1、OPG、OPN、OSM、OX40L、OX40R、p150、p95、PADPr、副甲狀腺素、PARC、PARP、PBR、PBSF、PCAD、P-Cadherin、PCNA、PDGF、PDGF、PDK-1、PECAM、PEM、PF4、PGE、PGF、PGI2、PGJ2、PIN、PLA2、胎盤鹼性磷酸酶(PLAP)、PIGF、PLP、PP14、胰島素原、鬆弛素原、蛋白C、PS、PSA、PSCA、前列腺特異性膜抗原(PSMA)、PTEN、PTHrp、Ptk、PTN、R51、RANK、RANKL、RANTES、RANTES、鬆弛素A-鏈、鬆弛素B-鏈、腎素、呼吸道融合病毒(RSV) F、RSV Fgp、Ret、類風濕因子、RLIP76、RPA2、RSK、S100、SCF/KL、SDF-1、SERINE、血清白蛋白、sFRP-3、Shh、SIGIRR、SK-1、SLAM、SLPI、SMAC、SMDF、SMOH、SOD、SPARC、Stat、STEAP、STEAP-II、TACE、TACI、TAG-72 (腫瘤相關醣蛋白-72)、TARC、TCA-3、T-細胞受器(如T-細胞受器α/β)、TdT、TECK、TEM1、TEM5、TEM7、TEM8、TERT、睪丸PLAP-樣鹼性磷酸酶、TfR、TGF、TGF-α、TGF-β、TGF-β Pan特異性、TGF-β R1 (ALK-5)、TGF-βRII、TGF-β RIIb、TGF-βRIII、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β4、TGF-β5、凝血酶、胸腺Ck-1、促甲狀腺激素、Tie、TIMP、TIQ、組織因子、TMEFF2、Tmpo、TMPRSS2、TNF、TNF-α、TNF-αβ、TNF-β2、TNFα、TNF-R1、TNF-RII、TNFRSF10A (TRAIL R1Apo-2、DR4)、TNFRSF10B (TRAIL R2DR5、KILLER、TRICK-2A、TRICK-B)、TNFRSF10C (TRAIL R3DcRl、LIT、TRID)、TNFRSF10D (TRAIL R4 DcR2、TRUNDD)、TNFRSF11A (RANK ODF R、TRANCE R)、TNFRSF11B (OPG OCIF、TR1)、TNFRSF12 (TWEAK R FN14)、TNFRSF13B (TACI)、TNFRSF13C (BAFF R)、TNFRSF14 (HVEM ATAR、HveA、LIGHT R、TR2)、TNFRSF16 (NGFR p75NTR)、TNFRSF17 (BCMA)、TNFRSF18 (GITR AITR)、TNFRSF19 (TROY TAJ、TRADE)、TNFRSF19L (RELT)、TNFRSF1A (TNF R1CD120a、p55-60)、TNFRSF1B (TNF RIICD120b、p75-80)、TNFRSF26 (TNFRH3)、TNFRSF3 (LTbR TNF RIII、TNFC R)、TNFRSF4 (OX40 ACT35、TXGP1R)、TNFRSF5 (CD40 p50)、TNFRSF6 (Fas Apo-1、APT1、CD95)、TNFRSF6B (DcR3M68、TR6)、TNFRSF7 (CD27)、TNFRSF8 (CD30)、TNFRSF9 (4-1BB CD137、ILA)、TNFRSF21 (DR6)、TNFRSF22 (DcTRAIL R2TNFRH2)、TNFRST23 (DcTRAIL R1TNFRH1)、TNFRSF25 (DR3 Apo-3、LARD、TR-3、TRAMP、WSL-1)、TNFSF10 (TRAIL Apo-2配位體、TL2)、TNFSF11 (TRANCE/RANK配位體ODF、OPG配位體)、TNFSF12 (TWEAK Apo-3配位體、DR3配位體)、TNFSF13 (APRIL TALL2)、TNFSF13B (BAFF BLYS、TALL1、THANK、TNFSF20)、TNFSF14 (LIGHT HVEM配位體、LTg)、TNFSF15 (TL1A/VEGI)、TNFSF18 (GITR配位體AITR配位體、TL6)、TNFSF1A (TNF-a Conectin、DIF、TNFSF2)、TNFSF1B (TNF-b LTa、TNFSF1)、TNFSF3 (LTb TNFC、p33)、TNFSF4 (OX40配位體gp34、TXGP1)、TNFSF5 (CD40配位體CD154、gp39、HIGM1、IMD3、TRAP)、TNFSF6 (Fas配位體Apo-1配位體、APT1配位體)、TNFSF7 (CD27配位體CD70)、TNFSF8 (CD30配位體CD153)、TNFSF9 (4-1BB配位體CD137配位體)、TP-1、t-PA、Tpo、TRAIL、TRAIL R、TRAIL-R1、TRAIL-R2、TRANCE、運鐵蛋白受器、TRF、Trk、TROP-2、TSG、TSLP、腫瘤相關抗原CA 125、腫瘤相關抗原表現Lewis Y相關醣類、TWEAK、TXB2、Ung、uPAR、uPAR-1、尿激酶、VCAM、VCAM-1、VECAD、VE-鈣黏素(VE-Cadherin)、VE-鈣黏素-2、VEFGR-1 (flt-1)、VEGF、VEGFR、VEGFR-3 (flt-4)、VEGI、VIM、病毒抗原、VLA、VLA-1、VLA-4、VNR整合素、類血友病因子(von Willebrands factor)、WIF-1、WNT1、WNT2、WNT2B/13、WNT3、WNT3A、WNT4、WNT5A、WNT5B、WNT6、WNT7A、WNT7B、WNT8A、WNT8B、WNT9A、WNT9A、WNT9B、WNT10A、WNT10B、WNT11、WNT16、XCL1、XCL2、XCR1、XCR1、XEDAR、XIAP、XPD、以及激素和生長因子的受器。

在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合補體因子。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合SARS-CoV-2。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合類澱粉蛋白β原纖維。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合LAG-3。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合CD3。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合VEGF。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合Ang-2。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合PD-1。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合EGFR。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合IFNAR1。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合CD19。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合IL-17A。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合IL-17B。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合IL-13。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合類血管生成素3。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合神經生長因子。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合伊波拉病毒。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合HER2。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合GD2。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合BCMA。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合IL-6R。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合TROP-2。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合IGF-1R。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合CD38。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合黏連蛋白-4 (Nectin-4)。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合P-選擇素。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合CD79b。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合硬化蛋白。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合IFNγ。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合CCR4。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合CGRP受器。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合補體因子之受器。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合C5a受器1。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合C5a。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合C3。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合C3a。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合C3b。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合C3受器。在一些實施例中，包含Fc變體之抗體係特異性結合C10。載體

本文進一步提供一載體，其包含編碼包含Fc變體之經分離多肽的核苷酸序列，如本文所述。

在一實施例中，載體包含本文所描述之核酸。例如，該載體可包含第一和第二核酸，其分別編碼選自本文揭示之一或多個抗體分子之抗體分子的重鏈和輕鏈可變區。

在某些實施例中，該載體包含編碼Fc可變區的核苷酸序列，或與其實質上同源的序列(例如，與其至少約85%、90%、95%、99%或更多相同的序列，及/或具有一或多個取代，例如保守性取代)。

載體包括但不限於病毒、質體、黏質體、λ噬菌體或酵母人工染色體(YAC)。可採用多種載體系統。舉例而言，一類載體利用來源於動物病毒，諸如牛乳頭狀瘤病毒(bovine papilloma virus)、多瘤病毒(polyoma virus)、腺病毒、牛痘病毒、桿狀病毒(aculovirus)、反轉錄病毒(勞斯肉瘤病毒(Rous Sarcoma Virus)、MMTV或MOMLV)或SV40病毒之DNA元件。另一類載體利用來源於RNA病毒，諸如勝利基森林病毒(Semliki Forest virus)、東部馬腦炎病毒(Eastern Equine Encephalitis virus)及黃病毒(Flaviviruses)之RNA元件。

另外，可藉由引入一或多種允許選擇轉染宿主細胞之標記物來選擇將DNA穩定整合至其染色體中的細胞。標記物可以提供例如營養缺陷型宿主之原始營養型、殺生物劑抗性(例如，抗生素)或對重金屬(諸如銅)之抗性等。可選標記物基因可直接連接至待表現之DNA序列或藉由共轉化引入相同細胞中。mRNA之最佳合成亦可能需要其他元件。此等元件可包括剪接訊號以及轉錄啟動子、強化子及終止訊號。

一旦製備用於表現的含有構築體之表現載體或DNA序列，可將表現載體轉染或引入適當宿主細胞中。可採用多種技術來實現此，諸如原生質體融合、磷酸鈣沈澱、電致孔、反轉錄病毒轉導、病毒轉染、基因槍、基於脂質之轉染或其他習知技術。在原生質體融合之情況下，使細胞在培養基中生長且針對適當活性進行篩選。

培養所得轉染細胞且回收所產生抗體分子之方法及條件為熟習此項技術者已知的，且可基於本發明描述，視所採用之特定表現載體及哺乳動物宿主細胞而定進行改變或最佳化。 治療用途

包含本發明之Fc變體(例如抗體)的經分離多肽可用於治療各種疾病，包括但不限於：黑色素瘤、wAMD、DME、食道鱗狀細胞癌、第1型糖尿病、非小細胞肺癌、氣喘、CNS、子宮頸癌、冷凝集素病、系統性紅斑狼瘡、乾癬、異位性皮膚炎、子宮內膜癌、膀胱癌、伊波拉病毒感染、HER2+乳癌、多發性骨髓瘤、乳癌、甲狀腺型眼病、鐮狀細胞病、HIV感染、胃癌、炭疽感染、骨質流失、克隆氏症(Crohn disease)、ANCA-相關性血管炎、狼瘡、類風濕性關節炎、發炎性腸病、C3腎小球病(C3G)、C3腎小球腎炎(C3GN)、緻密物沉積病(DDD)、化膿性汗腺炎(HS)、非典型溶血性尿毒症症候群、狼瘡性腎炎、IgA腎病、重症肌無力、黃斑部病變、阿茲海默症、肌萎縮側索硬化症、亨廷頓舞蹈病(Huntington’s Disease)、神經病變疼痛、COVID-19感染、過敏性氣喘、慢性阻塞性肺病、大皰性類天皰瘡、壞疽性膿皮病、乾癬、陣發性睡眠性血紅蛋白尿伴血管外溶血、急性腎損傷(AKI)、慢性腎病(CKD)、地圖狀萎縮(GA)、自體免疫性溶血性貧血(AIHA)，以及年齡相關性黃斑部病變(AMD)。

在一些實施例中，本發明提供一種治療疾病或病症之方法，該方法包含向有需要的個體投與治療有效量之包含Fc變體之經分離多肽。在一些實施例中，該疾病或病症為ANCA-相關血管炎。在一些實施例中，該疾病或病症為C3腎小球病變(C3G)。

在一些實施例中，本發明之Fc變體可改造成特異性結合至一抗原之抗體。在一些實施例中，本發明之Fc變體可改造成表 3中所列之抗體。表 3. 市售治療性抗體

名稱	標靶	特異性	同種型
莫羅單抗-CD3 (Muromonab-CD3)	CD3	單特異性	mIgG2a
埃法利單抗(Efalizumab)	CD11a	單特異性	hIgG1
托西莫單抗-I131 (Tositumomab-I131)	CD20	單特異性	mIgG2a
奈巴庫單抗(Nebacumab)	內毒素	單特異性	hIgM
依決洛單抗(Edrecolomab)	EpCAM	單特異性	mIgG2a
卡妥索單抗(Catumaxomab)	EPCAM, CD3	雙特異性	mIgG2a/k和rIgG2b/λ雜合
達克利珠單抗(Daclizumab)	CD25	單特異性	hIgG1
阿比西單抗(Abciximab)	GPIIb/IIIa	單特異性	hIgG1 Fab
利妥昔單抗(Rituximab)	CD20	單特異性	hIgG1
巴希力單抗(Basiliximab)	IL-2R	單特異性	hIgG1
帕利珠單抗(Palivizumab)	RSV	單特異性	hIgG1
英夫利昔單抗(Infliximab)	TNF	單特異性	hIgG1
曲妥珠單抗(Trastuzumab)	HER2	單特異性	hIgG1
阿達木單抗(Adalimumab)	TNF	單特異性	hIgG1
依比圖姆單抗(Ibritumomab tiuxetan)	CD20	單特異性	mIgG1
奧馬珠單抗(Omalizumab）	IgE	單特異性	hIgG1
賽妥昔單抗(Cetuximab)	EGFR	單特異性	hIgG1
貝伐單抗(Bevacizumab)	VEGF	單特異性	hIgG1
納塔利珠單抗(Natalizumab)	a4整合素	單特異性	hIgG4
帕尼替木單抗(Panitumumab)	EGFR	單特異性	hIgG2
蘭尼單抗(Ranibizumab)	VEGF	單特異性	hIgG1 Fab
尤利珠單抗(Eculizumab）	C5	單特異性	hIgG2(CH1-鉸鏈)/hIgG4(CH2-CH3)
培塞利珠單抗-pegol (Certolizumab pegol)	TNF	單特異性	hFab
優特克單抗(Ustekinumab)	IL-12/23	單特異性	hIgG1
卡納金單抗(Canakinumab)	IL-1β	單特異性	hIgG1
戈利木單抗(Golimumab)	TNF	單特異性	hIgG1
奧伐圖姆單抗(Ofatumumab）	CD20	單特異性	hIgG1
托珠單抗(Tocilizumab)	IL-6R	單特異性	hIgG1
地舒單抗(Denosumab)	RANK-L	單特異性	hIgG2
貝利木單抗(Belimumab)	BLyS	單特異性	hIgG1
伊匹利姆單抗(Ipilimumab)	CTLA-4	單特異性	hIgG1
布妥昔單抗-維多汀偶聯物(Brentuximab vedotin)	CD30	單特異性	hIgG1
帕妥珠單抗(Pertuzumab)	HER2	單特異性	hIgG1
阿多-曲妥珠單抗-美坦新(Ado-trastuzumab emtansine)	HER2	單特異性	hIgG1
瑞莎巴卡單抗(Raxibacumab)	炭疽桿菌-PA複合物(B. anthrasis PA)	單特異性	hIgG1
阿托珠單抗(Obinutuzumab)	CD20	單特異性	hIgG1
錫拉昔單抗(Siltuximab)	IL-6	單特異性	hIgG1
雷莫蘆單抗(Ramucirumab)	VEGFR2	單特異性	hIgG1
維多珠單抗(Vedolizumab)	α4β7整合素	單特異性	hIgG1
尼羅單抗(Nivolumab)	PD1	單特異性	hIgG4
帕博利珠單抗(Pembrolizumab)	PD1	單特異性	hIgG4
百利妥單抗(Blinatumomab)	CD19, CD3	雙特異性	串聯scFv
阿倫單抗(Alemtuzumab)	CD52	單特異性	hIgG1
依凡洛單抗(Evolocumab)	PCSK9	單特異性	hIgG2
伊達盧珠單抗(Idarucizumab)	達比加特蘭(Dabigatran)	單特異性	hIgG1 Fab
奈希圖姆單抗(Necitumumab)	EGFR	單特異性	hIgG1
丁努妥昔單抗(Dinutuximab)	GD2	單特異性	hIgG1
斯庫其努單抗(Secukinumab)	IL-17a	單特異性	hIgG1
美普立珠單抗(Mepolizumab)	IL-5	單特異性	hIgG1
阿利羅單抗(Alirocumab)	PCSK9	單特異性	hIgG1
達雷特單抗(Daratumumab)	CD38	單特異性	hIgG1
埃羅妥珠單抗(Elotuzumab)	SLAMF7	單特異性	hIgG1
伊沙單抗(Ixekizumab)	IL-17a	單特異性	hIgG4
瑞思單抗(Reslizumab)	IL-5	單特異性	hIgG4
奧拉單抗(Olaratumab)	PDGFRα	單特異性	hIgG1
貝斯洛單抗(Bezlotoxumab)	困難梭狀桿菌(Clostridium difficile)腸毒素B	單特異性	hIgG1
阿替利珠單抗(Atezolizumab)	PD-L1	單特異性	hIgG1
奧他沙星單抗(Obiltoxaximab)	炭疽桿菌-PA複合物(B. anthrasis PA)	單特異性	hIgG1
布羅達單抗(Brodalumab)	IL-17R	單特異性	hIgG2
杜匹魯單抗(Dupilumab)	IL-4R α	單特異性	hIgG4
伊珠單抗-奧佐米星(Inotuzumab ozogamicin)	CD22	單特異性	hIgG4
古思爾單抗(Guselkumab)	IL-23 p19	單特異性	hIgG1
薩利木單抗(Sarilumab)	IL-6R	單特異性	hIgG1
阿維魯單抗(Avelumab)	PD-L1	單特異性	hIgG1
艾米西單抗(Emicizumab)	凝血因子Ixa、X	雙特異性	hIgG4
奧瑞珠單抗(Ocrelizumab)	CD20	單特異性	hIgG1
本瑞珠單抗(Benralizumab)	IL-5R α	單特異性	hIgG1
德瓦單抗(Durvalumab)	PD-L1	單特異性	hIgG1
吉妥珠單抗-奧佐米星(Gemtuzumab ozogamicin)	CD33	單特異性	hIgG4
依瑞單抗(erenumab-aooe)	CGRP受器	單特異性	hIgG2
加卡因單抗(galcanezumab-gnlm)	CGRP	單特異性	hIgG4
布魯蘇單抗(burosumab-twza)	FGF23	單特異性	hIgG1
拉納德單抗(lanadelumab-flyo)	血漿激肽釋放酶	單特異性	hIgG1
莫加珠單抗(mogamulizumab-kpkc)	CCR4	單特異性	hIgG1
替拉珠單抗(Tildrakizumab-asmn)	IL-23 p19	單特異性	hIgG1
弗雷曼珠單抗(fremanelizumab-vfrm)	CGRP	單特異性	hIgG2Δa
拉武珠單抗(ravulizumab-cwvz)	C5	單特異性	hIgG2(CH1-鉸鏈)/hIgG4(CH2-CH3)
賽米普利單抗(cemiplimab-rwlc)	PD-1	單特異性	hIgG4
伊巴珠單抗(ibalizumab-uiyk)	CD4	單特異性	hIgG4
依馬帕單抗(emapalumab-lzsg)	IFNg	單特異性	hIgG1
莫西莫單抗(moxetumomab pasudotox-tdfk)	CD22	單特異性	mIgG1 dsFv與PE38外毒素融合
卡拉西單抗(caplacizumab-yhdp)	類血友病因子	單特異性	雙價奈米體
瑞生珠單抗(Risankizumab-rzaa)	IL-23 p19	單特異性	hIgG1
波拉珠單抗(polatuzumab vedotin-piiq)	CD79b	單特異性	hIgG1
羅摩蘇單抗(romosolizumab-aqqg)	硬化蛋白	單特異性	hIgG2
溴魯西單抗(Brolucizumab-dbell)	VEGF-A	單特異性	hscFv
克立珠單抗(crizanlizumab-tmca)	CD62 (亦稱P-選擇素)	單特異性	hIgG2
恩福單抗(enfortumab vedotin-ejfv)	Nectin-4	單特異性	hIgG1
[fam-]德喜曲妥珠單抗(fam-trastuzumab deruxtecan-nxki)	HER2	單特異性	hIgG1
替普圖單抗(teprotumab-trbw)	IGF-1R	單特異性	hIgG1
依替尼珠單抗(eptizumab-jjmr)	CGRP	單特異性	hIgG1
伊沙妥昔單抗(isatuximab-irfc)	CD38	單特異性	hIgG1
沙妥珠單抗(sacitituzumab govitecan-hziy)	TROP-2	單特異性	hIgG1
依奈利珠單抗(inebilizumab-cdon)	CD19	單特異性	hIgG1
他伐西他單抗(tafasitamab-cxix)	CD19	單特異性	hIgG1/2雜合
貝蘭他單抗(belantamab mafodotin-blmf)	B細胞成熟抗原	單特異性	hIgG1
賽妥珠單抗(stralizumab-mwge)	IL-6R	單特異性	hIgG2
阿托替維單抗(Atoltivimab)、馬夫替維單抗(maftivimab)和地西維單抗(desivimab-ebgn)	伊波拉病毒	單特異性	hIgG1
那西他單抗(Naxitamab-gqgk)	GD2	單特異性	hIgG1
馬格妥昔單抗(Margetuximab-cmkb)	HER2	單特異性	hIgG1
安舒維單抗(Ansuvimab-zykl)	伊波拉病毒醣蛋白	單特異性	hIgG1
伊維那卡單抗(Evinacumab)	類血管生成素3	單特異性	hIgG4
隆卡斯妥昔單抗(Loncastuximab tesirine)	CD19	單特異性	hIgG1/k
多斯利單抗(Dostarlimab)	PD-1	單特異性	hIgG4
阿米凡他單抗(Amivantamab)	EGFR, cMET	雙特異性	hIgG1
阿杜卡單抗(Aducanumab)	類澱粉蛋白β	單特異性	hIgG1
泰尼珠單抗(Tanezumab)	神經生長因子	單特異性	hIgG2Δa
川隆單抗(Tralokinumab)	IL-13	單特異性	hIgG4
替普珠單抗(Teplizumab)	CD3	單特異性	hIgG1
納索普利布(Narsoplimab)	MASP-2	單特異性	hIgG4
雷蒂芬利布(Retifanlimab)	PD-1	單特異性	hIgG4
奧普珠單抗(Oportuzumab Monatox)	EpCAM	單特異性	hscFv與PE38外毒素融合
阿尼鲁單抗(Anifrolumab, anifrolumab-fnia)	IFNAR1	單特異性	hIgG1
依諾利姆(Inolimomb)	CD25	單特異性	mIgG1
貝姆卡單抗(Bimekizumab)	IL-17A及IL-17F (重疊結合位點）	單特異性	hIgG1
斯廷利單抗(Sutimlimab)	C1s	單特異性	hIgG4
烏比妥單抗(Ublituximab)	CD20	單特異性	hIgG1
替索單抗(Tisotumab vedotin, tisotumab vedotin-tftv)	組織因子	單特異性	hIgG1
托里帕單抗(Toripalimab)	PD-1	單特異性	hIgG4
辛蒂利單抗(Sintilimab)	PD-1	單特異性	hIgG4
替則培單抗(Tezepelumab)	甲狀腺基質淋巴生成素	單特異性	hIgG2
歐布特單抗(Omburtamab)	B7-H3 (CD276)	單特異性	hIgG1
潘普利單抗(Penpulimab)	PD-1	單特異性	hIgG1
法西單抗(Faricimab)	VEGF-A, Ang-2	雙特異性	hIgG1
替班塔福(Tebentafusp)	gp100, CD3	雙特異性	與TCR融合之hscFV
替雷利珠單抗(Tislelizumab)	PD-1	單特異性	hIgG4
瑞特利單抗(Relatlimab)	LAG-3	單特異性	hIgG4
利卡單抗(Lecanemab)	類澱粉蛋白β原纖維	單特異性	hIgG1
卡西瑞單抗+伊德维單抗(Casirivimab + imdevimab)	SARS-CoV-2	單特異性	hIgG1
瑞達維單抗(Regdanvimab)	SARS-CoV-2	單特異性	hIgG1
尼莫珠單抗(Nimotuzumab)	EGFR	單特異性	hIgG1
伊妥珠單抗(Itolizumab)	CD6	單特異性	hIgG1
Rmab	狂犬病病毒G醣蛋白	單特異性	hIgG1
索特維單抗(Sotrovimab)	SARS-CoV-2	單特異性
瑞達維單抗(Regdanvimab)	SARS-CoV-2	單特異性

實例

本發明之其他特徵、目標及優點在以下實例中顯而易見。然而，應理解，實例雖然指示本發明之實施例，但僅以說明而非限制之方式給出。本發明之範疇內的各種改變及修改對於熟習此項技術者而言將自實例變得顯而易見。實例 1. 產生新穎之 Fc 突變

Fc-γ受器會辨識並結合IgG抗體之Fc區。此結合藉由觸發效應子功能來調節免疫反應。在一些疾病適應症中，治療性抗體與Fc-γ受器相互作用並增強天然Fc-γ受器活化可能是有益的，但對於其他適應症卻可能是有害的。當額外活化有害時，便需要Fc-改造以使IgG Fc結構域靜默，使其無法結合至Fc-γ受器。在此實例中，經改造的新穎Fc變體，其對於使IgG Fc結構域靜默尤其有效。值得注意的是，本發明之Fc突變的組合為新穎的，且對於消除與Fc-γ受器及C1q之親和力是有效的。本發明之Fc變體示於表 1中。表 1. 新穎之 Fc 變體

Fc	突變	亞型
VFc07	L234F/L235E/D265G	IgG1
VFc08	L234F/L235E/G237A/D265G	IgG1
VFc09	L234V/L235E/G237A/D265G	IgG1
VFc10	L234F/L235E/D265G/A330S/P331S	IgG1
VFc11	L234V/L235A/G237A/D265G	IgG1
VFc12	L234V/L235A/G237A/D265G/A330S/P331S	IgG1
VFc13	D265G	IgG1
VFc16	L235E/D265G	IgG4-S228P
VFc17	F234V/L235E/D265G	IgG4-S228P
VFc18	F234V/L235A/G237A/D265G	IgG4-S228P
VFc19	L235E/G237A/D265G	IgG4-S228P
VFc20	L235E/G237A/P329G	IgG4-S228P
VFc21	L235E/G237A/L328R	IgG4-S228P
VFc22	D265G/A330S/P331S	IgG2
VFc23	A235E/D265G/A330S/P331S	IgG2
VFc24	A235E/D265G/P329G	IgG2

實例 2. Fc 變體顯示顯著降低與 Fcγ 受器及 C1q 之結合

本實例確認表 1中所示之新穎Fc變體成功消除與Fc- γ受器及C1q之結合。將Fc變體改造成抗體「Ab1」及「Ab2」，其各自包含不同的可變域且靶向不同抗原。 測定與 Fc-γ 受器及 C1q 之結合之方法

本流程描述可用於決定Fc-靜默抗體與Fc-γ受器或C1q結合程度的方法，使用Octet Red 384系統或ELISA之生物膜干涉測量法(BLI)。使用HIS1K生物感測器之NiNTA來評估與FcγRI、FcγRIIa H167、FcγRIIb、FcγRIIIa V176和FcγRIIIb之結合。在此兩種流程中，首先將Fc-γ受器加載到生物感測器上，然後用酪蛋白或BSA阻斷該生物感測器，以防止抗體與生物感測器上任何未結合的配位體發生非特異性結合。接下來，將生物感測器引入抗體中，之後回到阻斷緩衝液中進行短暫的解離階段。得到的結合感測圖用於定性評估每一測量相互作用的強度，而最大平衡結合反應作為定量讀數，其中最大平衡結合反應與結合親和力成正比。根據此項技術中的已知方法，以類似方式量測與C1q之結合。結果

如圖 1A-C所示，與其對應的野生型IgG同種型相較，所有Fc變體皆會導致與FcγRI、FcγRIIa和FcγRIIb的結合顯著降低。值得注意的是，對於Ab1和Ab2二者而言，vFc07-vFc12和vFc16-vFc24中任一者的Fc區都不與FcγRI、FcγRIIa和FcγRIIb結合。亦值得注意的是，單突變D265G能夠顯著降低與FcγRI、FcγRIIa和FcγRIIb之結合(比較圖 1A-C中的vFc13 vs IgG1 WT)。此外，與其對應的野生型IgG同種型相較( 圖 1D)，無論可變區(Ab1或Ab2)如何，所有Fc變體都導致與C1q的結合顯著降低。實例 3. 進一步驗證兩種 Fc 變體 降低與 Fcγ 受器及 C1q 之結合

此實例驗證本發明之Fc變體成功消除與Fc-γ受器及C1q之結合。在此特定實例中，實驗中使用2個Fc變體：vFc10及vFc17。vFc10包含IgG1同種型中的L234F/L235E/D265G/A330S/P331S突變，且vFc17包含IgG4-S228P同種型中的F234V/L235E/D265G突變。(S228P突變係藉由穩定IgG分子核心鉸鏈中的二硫化物來減少Fab-臂交換）這兩種Fc變體之每一者皆改造成抗體「Ab1」。藉由實例2中描述的方法測試經改造抗體與FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa、FcγRIIIb和C1q的結合。

抗體的主要缺點是其嚴苛的製造要求(Garber, 2001, Nat Biotechnol 19:184-185; Dove, 2002, Nat Biotechnol 20:777-779，以引用方式併入)。因此，經改造之抗體不受限於表現及純化產率是很重要的。野生型IgG1、野生型IgG4、vFc10或vFc17 Fc區改造成抗體Ab1，係根據此項技術中已知之方法於培養基中表現，並測量其表現產率。如圖 2A所示，具有vFc10或vFc17 Fc變體的兩種抗體均產生高產率，其產率明顯高於野生型IgG1抗體，且與野生型IgG4抗體相當或更高。正如本領域普通技術人員所理解的，蛋白A會與免疫球蛋白的Fc部分相互作用。因此進行Octet實驗，以確認Fc變體中引入的突變不會改變與蛋白A結合之特性。圖 2B顯示Fc變體展示與野生型IgG1或IgG4相似的結合，說明該等突變不會改變與蛋白A結合之特性。

如圖 3A所示，當與該抗體配對時，vFc10和vFc17都將與FcγRI之結合消除到接近基線水平。類似地，vFc10和vFc17二者都將與FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa和FcγRIIIb的結合消除到接近基線水平( 圖 3B-3C)。IgG4具有短鉸鏈及低Fab臂可撓性，其部分地屏蔽其與C1q之結合。圖 3D顯示與Ab1配對時，vFc10和vFc17均未引入與C1q之結合。

整體而言，本實例中的數據顯示，當與抗體的可變區配對時，所測試的兩個Fc變體皆顯示與所有FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa、FcγRIIIb和C1q的結合被消除。實例 4. Fc 變體展示顯著降低的 ADCC 、 ADCP 和 CDC 之誘導

IgG亞群抗體為雙功能分子，具有序列可變並負責與抗原結合的F(ab)結構域，以及序列恆定並負責介導一範圍之抗體效應子功能的Fc結構域。這些功能主要是通過與補體成分C1q或與主要在白血球表面表現的FcγR家族相互作用而觸發。Fc γ受器(FcγR)觸發細胞-介導的細胞毒性效應子功能，例如抗體依賴性細胞毒性(ADCC)、吞噬作用(ADCP)和補體-依賴性細胞毒性(CDC)。

抗體依賴性細胞毒性(ADCC)是IgG的Fc-依賴性效應子功能，對於抗病毒免疫性和抗腫瘤治療很重要。NK細胞介導的ADCC主要通過IgG-Fc-受器(FcγR)IIIa觸發。吞噬細胞，包括單核球、巨噬細胞、嗜中性球、嗜酸性球及樹突狀細胞(DC)，會表現FcγRI、FcγRII和FcαRI，全部都可介導免疫複合物攝入。ADCP藉由將免疫複合物運輸到溶酶體進行降解和抗原加工，以呈遞在細胞表面的主要組織相容性複合物(MHC)分子上，因而導致免疫複合物從受感染的宿主中清除。有趣的是，一些病毒利用這種機制，逃避溶酶體降解來感染吞噬細胞(在下文「抗體-依賴性增強感染」中描述)。

此實例顯示本發明的Fc變體能夠消除與FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa、FcγRIIIb和C1q的結合，具有降低的ADCC、ADCP和CDC功能。

在此特定實例中，實驗中使用2個Fc變體：vFc10及vFc17。vFc10包含IgG1同種型中的L234F/L235E/D265G/A330S/P331S突變，且vFc17包含IgG4-S228P同種型中的F234V/L235E/D265G突變。這兩種Fc變體之每一者皆改造成抗體「Ab1」。根據抗體濃度測量ADCC、ADCP和CDC誘導之量。

圖 4A顯示與野生型IgG1抗體相較，VFc10和VFc17維持低ADCC。同樣地，與野生型IgG1抗體相較，VFc10及VFc17維持低ADCP及CDC ( 圖 4B及圖 4C)。

整體而言，本實例中的數據顯示本發明的Fc變體消除與所有FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa、FcγRIIIb和C1q的結合，並有效地降低ADCC、ADCP和CDC功能。 等效方案及範疇

熟習此項技術者將認識到或能夠僅使用常規實驗來確定本文中所描述之本發明之特定實施例之許多等效物。本發明之範疇並不意欲限於以上描述，而是如以下申請專利範圍中所闡述。

圖 1A-D為一系列說明以實例2中描述的測定法測得之經各種Fc變體改造的Ab1和Ab2分別與FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb和C1q之結合的示例圖。

圖 2A為說明經野生型IgG1、野生型IgG4、vFc10、及vFc17改造之Ab1的表現水平之示例性長條圖及表格。圖 2B為說明經野生型IgG1、野生型IgG4、vFc17改造之Ab1與蛋白質A之結合特性之之示例圖及表格。

圖 3A為說明經野生型IgG1、野生型IgG4、vFc10或vFc17改造的Ab1與FcγRI之結合的示例圖，其說明與野生型IgG1和IgG4相較下，本發明的Fc變體顯著降低Fc與FcγRI的結合。圖 3B為說明經野生型IgG1、野生型IgG4、vFc10或vFc17改造的Ab1與FcγRIIa和FcγRIIb之結合的示例圖，其說明與野生型IgG1和IgG4相較下，本發明的Fc變體顯著降低Fc與FcγRIIa和FcγRIIb的結合。圖 3C為說明經野生型IgG1、野生型IgG4、vFc10或vFc17改造的Ab1與FcγRIIIa和FcγRIIIb的結合之示例圖。圖 3D為說明經野生型IgG1、野生型IgG4、vFc10或vFc17改造的Ab1與C1q的結合之示例圖。

圖 4A為說明經野生型IgG1、野生型IgG4、vFc10或vFc17改造的Ab1誘導ADCC之倍數的示例圖。圖 4B為說明經野生型IgG1、野生型IgG4、vFc10或vFc17改造的Ab1誘導ADCP之倍數的示例圖。圖 4C為說明經野生型IgG1、野生型IgG4、vFc10或vFc17改造的Ab1誘導CDC之倍數的示例圖。定義

抗體：如本文中所用，術語「抗體」係指免疫球蛋白分子及免疫球蛋白(Ig)分子之免疫活性部分，亦即含有結合抗原抗原(與抗原免疫反應)之抗原結合位點的分子。「結合」或「與...免疫反應」意謂抗體與所需之一或多個抗原決定子反應。抗體包括抗體片段。抗體亦包括但不限於多株、單株、嵌合dAb (域抗體)、單鏈、Fab、Fab’、F(ab’)2片段、scFv及Fab表現庫。抗體可為完整抗體、或免疫球蛋白、或抗體片段。

Fc 域：如本文所用，術語「Fc區」係指含有恆定區之至少一部分的免疫球蛋白重鏈之C端區。術語包括天然序列Fc區及變體Fc區。在一個實施例中，人類IgG重鏈Fc區自Cys226或自Pro230延伸至重鏈之羧基端。然而，Fc區之C端離胺酸(Lys447)可存在或可不存在。除非本文另外說明，否則Fc區或恆定區中胺基酸殘基之編號係根據EU編號系統，亦稱為EU指引，如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991中所描述。

Fab 臂交換：術語「Fab臂交換」係指IgG4抗體可交換『半分子』的現象，亦即在本文中稱為Fab臂交換的活動。尤其在雙特異性或雙互補位分子中，此產生具有未知特異性且因此潛在地降低之治療功效的官能性單價抗體。可將突變引入Fc域中以抑制Fab臂交換。眾所周知，S228P突變可防止IgG4 FAE在活體外及活體內達至不可偵測的含量。

人源化抗體：術語「人源化抗體」包括作為特異性免疫球蛋白鏈、嵌合免疫球蛋白或其片段之非人類(例如，鼠類)抗體，其含有最少量的非人類(例如，鼠類)序列。通常，人源化抗體為人類免疫球蛋白，其中來自互補決定區(CDR)之殘基經來自具有所需特異性、親和力及能力之非人類物種(例如，小鼠、大鼠、兔、倉鼠)之CDR之殘基置換(Jones等人, Nature321:522-525, 1986；Riechmann等人, Nature332:323-327, 1988；Verhoeyen等人, Science239:1534-1536, 1988)。

單株抗體：術語「單株抗體」係指自實質上均質抗體群體獲得的抗體，亦即包含該群體之個別抗體除可以少量存在之可能天然產生突變以外為一致的。單株抗體針對單一抗原位點具高度特異性。修飾語「單株」指示抗體之特徵為自實質上均質抗體群體獲得，且不應理解為需要藉由任何特定方法來產生該抗體。

多特異性抗體：如本文所用，術語「多特異性抗體」係指能夠特異性結合於相同或不同目標上之兩個或更多個不同抗原決定基的結合分子、抗體或其抗原結合片段。

雙互補位抗體：如本文所用，術語「雙互補位抗體」係指能夠結合相同目標抗原分子上之2個不同非重疊抗原決定基的多特異性抗體。

K _i 或 K _d ：如本文所用，術語「 K _d 」如本文所用係指如此項技術中已知之特定抗體-抗原相互作用之解離常數，且對於本發明之組合物將應用為靶向部分與其同源配位體之結合親和力的參數。

IC50：如本文所用，術語「IC50」係指抑制配位體促效劑之最大生物反應之一半所需的濃度，且一般藉由競爭結合分析來測定。

EC50：如本文所用，術語「EC50」係指半最大有效濃度。術語EC50係指在指定暴露時間之後在基線與最大值之間誘導一半反應的藥物、抗體或毒素之濃度。更簡言之，可將EC50定義為獲得50%所需作用所需之濃度。

連接子：如本文所用，術語「連接子」係指連接兩個分子且通常用以將兩個分子置於較佳組態中之分子或分子群(諸如單體或聚合物)。許多策略可用於將分子共價連接在一起。此等策略包括但不限於蛋白質或蛋白域之N端與C端之間的多肽連接、經由二硫鍵連接及經由化學交聯試劑連接。在此實施例之一個態樣中，連接子為藉由重組技術或肽合成產生之肽鍵。連接子可含有提供可撓性之胺基酸殘基。因此，連接子肽可主要包括以下胺基酸殘基：Gly、Ser、Ala或Thr。連接子肽應具有足以以使得兩個分子相對於彼此呈現正確構形之方式連接兩個分子的長度，使得其保留所需活性。用於此目的之適合長度包括至少一個且不超過30個胺基酸殘基。在一個實施例中，連接子之長度為約1至30個胺基酸。在另一實施例中，連接子之長度為約1至15個胺基酸。另外，經選擇以包括於連接子肽中之胺基酸殘基應展現不明顯干擾多肽之活性的特性。

scFv：如本文所用，術語「scFv」係指免疫球蛋白之重鏈(VH)及輕鏈(VL)之可變區之融合蛋白，其與10至約25個胺基酸之短連接子肽連接。

Fab：如本文所用，術語「Fab」係指包含完整抗體之一部分的抗體片段，包含其抗原結合區或可變區。

活體外：如本文所用，術語「 活體外」係指在人工環境中，例如在試管或反應容器中、在細胞培養物中等，而非在多細胞生物體內發生的事件。

活體內：如本文所用，術語「 活體內」係指事件發生在諸如人類及非人類動物之多細胞生物體內。在基於細胞之系統的情形下，該術語可用於指在活細胞內(與例如活體外系統相反)發生的事件。

個體：如本文所用，術語「個體」係指人類或任何非人類動物(例如，小鼠、大鼠、兔、狗、貓、牛、豬、綿羊、馬或靈長類動物)。人類包括出生前及出生後的形式。在許多實施例中，個體為人類。個體可以是患者，此係指前往醫療服務提供者為診斷或治療疾病的人類。術語「個體」在本文中可與「個人」或「患者」互換使用。個體可罹患或易患疾病或病症，但可能顯示或可能不顯示該疾病或病症之症狀。

功能障礙：如本文所用，術語「功能障礙」係指異常功能。分子(例如，蛋白質)之功能障礙可由與此分子相關的活性之增加或降低引起。分子之功能障礙可由與分子本身或與分子直接或間接相互作用或調節分子之其他分子相關的缺陷引起。

衍生物：如本文所用，術語「衍生物」在與抗體或C5aR1抗體結合使用時係指具有保留原始分子之至少一些功能及/或特性的原始分子之一些序列的一部分。

一致性：如本文所用，術語「一致性」係指如此項技術中已知的兩種或更多種多肽分子或兩種或更多種核酸分子之序列之間的關係，其比較此等分子之序列。藉由進行確定關係。在此項技術中，「一致性」亦意謂核酸分子或多肽之間的序列相關性程度，且在一些情況下超過一種核苷酸序列或超過一種。其可藉由胺基酸序列串之間的匹配來測定。「一致性」意謂在由特定數學模型或電腦程式（亦即，「演算法」)解決之間隙比對(若存在)與兩個或更多個序列之較小序列之間。量測一致性匹配百分比。

相似性或 類似：如本文所用，在此項技術中關於相關概念，但與「一致性」、「相似性」相反使用之術語「相似性」係指一致性及保守性取代匹配兩者。指示相關性，包括如果兩個多肽序列有，例如20個胺基酸中有10個相同的胺基酸，其餘都是非保守性取代，則一致性百分比和相似性百分比都是50%。在同一實例中，若存在5個或更多個保守性取代，則一致性百分比仍為50%，但相似性百分比為75%。因此，若存在保守性取代，則兩種多肽之間的相似性百分比高於此等兩種多肽之間的一致性百分比。

治療：如本文所用，術語「治療(treat/treatment/treating)」係指用於部分或完全地減輕、改善、緩和、抑制、預防特定疾病、病症及/或病狀之一或多種症狀或特徵、延遲其發作、降低其嚴重性及/或降低其發生率的任何方法。治療可投與至未展現疾病之體徵及/或僅展現疾病之早期體徵的個體以便降低患上與疾病相關之病變的風險。

載體：術語「載體」係指用於人工攜帶外來遺傳物質至外來基因物質可在此處複製或表現之另一細胞的聚核苷酸(通常DNA)。非限制性例示性載體包括質體、病毒載體、黏質體及人工染色體。此類載體可衍生自多種來源，包括細菌及病毒來源。質體之非限制性例示性病毒來源為腺相關病毒。

本發明之各種態樣在以下章節中詳細描述。章節之使用並不意欲限制本發明。各章節可適用於本發明之任何態樣。在本申請案中，除非另有說明，否則「或」之使用意謂「及/或」。如本文所用，單數形式「一」及「該」包括單數及複數個指示物，除非上下文另外明確指示。

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Claims

一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含位置235及265處之胺基酸取代，其中該位置265處之胺基酸經Gly取代，其中該殘基係根據EU指引編號。
如請求項1所述之經分離多肽，其中該Fc變體進一步包含在位置234、237、329、330或331處之一或多個胺基酸取代。
一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含位置234及265處之胺基酸取代，其中該位置234處之胺基酸經Val取代，其中該殘基係根據EU指引編號。
一種包含野生型人類IgG4 Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含在位置F234、L235及D265處之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。
一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含234V、L235E及D265G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。
如請求項5所述之經分離多肽，其中該Fc變體為IgG4 Fc區且包含S228P、F234V、L235E及D265G之胺基酸取代。
一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含234F、L235E及D265G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。
如請求項7所述之經分離多肽，其中該Fc變體為IgG1 Fc區且包含L234F、L235E及D265G之胺基酸取代。
一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含234F、L235E、G237A及D265G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。
如請求項9所述之經分離多肽，其中該Fc變體為IgG1 Fc區且包含L234F、L235E、G237A及D265G之胺基酸取代。
一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含234V、L235E、G237A及D265G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。
如請求項11所述之經分離多肽，其中該Fc變體為IgG1 Fc區且包含L234V、L235E、G237A及D265G之胺基酸取代。
一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含234F、L235E、D265D、A330S及P331S之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。
如請求項13所述之經分離多肽，其中該Fc變體為IgG1 Fc區且包含234F、L235E、D265D、A330S及P331S之胺基酸取代。
一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含234V、L235A、G237A及D265G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。
如請求項15所述之經分離多肽，其中該Fc變體為IgG1 Fc區且包含L234V、L235A、G237A及D265G之胺基酸取代。
如請求項15所述之經分離多肽，其中該Fc變體為IgG4 Fc區且包含S228P、L234V、L235A、G237A及D265G之胺基酸取代。
一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含234V、L235A、G237A、D265G、A330S及P331S之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。
如請求項18所述之經分離多肽，其中該Fc變體為IgG1 Fc區且包含L234V、L235A、G237A、D265G、A330S及P331S之胺基酸取代。
一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含L235E及D265G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。
如請求項20所述之經分離多肽，其中該Fc變體為IgG4 Fc區且包含S228P、L235E及D265G之胺基酸取代。
一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含L235E、G237A及D265G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。
如請求項22所述之經分離多肽，其中該Fc變體為IgG4 Fc區且包含S228P、L235E、G237A及D265G之胺基酸取代。
一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含L235E、G237A及P329G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。
如請求項24所述之經分離多肽，其中該Fc變體為IgG4 Fc區且包含S228P、L235E、G237A及P329G之胺基酸取代。
一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含L235E、G237A及L328R之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。
如請求項26所述之經分離多肽，其中該Fc變體為IgG4 Fc區且包含S228P、L235E、G237A及L328R之胺基酸取代。
一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含D265G、A330S及P331S之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。
如請求項28所述之經分離多肽，其中該Fc變體為IgG2 Fc區且包含D265G、A330S及P331S之胺基酸取代。
一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含235E、D265G、A330S及P331S之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。
如請求項30所述之經分離多肽，其中該Fc變體為IgG2 Fc區且包含A235E、D265G、A330S及P331S之胺基酸取代。
一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含235E、D265G、及P329G之胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。
如請求項32所述之經分離多肽，其中該Fc變體為IgG2 Fc區且包含A235E、D265G及P329G之胺基酸取代。
一種包含野生型人類IgG Fc區的Fc變體之經分離多肽，該Fc變體包含D265G之胺基酸取代及一或多個胺基酸取代，其中該殘基係根據EU指引編號。
如請求項34所述之經分離多肽，其中該一或多個胺基酸取代係位於位置234、235、237、330、331、329、及/或328。
一種編碼前述請求項中任一項所述之經分離多肽的核酸。
一種細胞，其包含如請求項36所述之核酸。
一種製造如請求項1至35中任一項所述之經分離多肽之方法，該方法包含：培養包含編碼該抗體或其抗原結合片段之核酸的宿主細胞，且在允許產生該抗體或其抗原結合片段之條件下培養該細胞。
一種藉由投與治療有效量之如請求項1至35中任一項所述之經分離多肽治療疾病或病症之方法。