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TW202317602A - 嵌合多肽 - Google Patents

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TW202317602A
TW202317602A TW111126544A TW111126544A TW202317602A TW 202317602 A TW202317602 A TW 202317602A TW 111126544 A TW111126544 A TW 111126544A TW 111126544 A TW111126544 A TW 111126544A TW 202317602 A TW202317602 A TW 202317602A
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TW
Taiwan
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fusion protein
intracellular
polypeptide
domain
Prior art date
Application number
TW111126544A
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菲利普 Ｄ 格林伯格
艾許里 Ｍ 特倫
Original Assignee
福瑞德哈金森腫瘤中心
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Abstract

本揭露內容提供具有新穎訊息傳導特性之融合蛋白。所揭露之實施例包括融合蛋白，其包含能夠與TGFβ多肽結合之胞外組分、跨膜組分及包含來自IL-2Rβ或IL-2Rγ蛋白之細胞質域的胞內組分。某些實施例包括自TGFβR跨膜域延伸至IL-2R細胞質域N端的TGFβR胞內突出端或突出端序列。響應於TGFβ，融合蛋白可在宿主細胞中啟動IL-2訊息，促進例如宿主細胞之增殖。提供表現融合蛋白及任擇的抗原結合蛋白諸如TCR或CAR之重組宿主細胞。亦提供編碼融合蛋白之多核苷酸及包含該等多核苷酸之載體。亦提供包含其之組成物及方法。

Description

嵌合多肽
本發明係有關於嵌合多肽。
發明背景
用於治療癌症及其他疾病之過繼細胞療法仍在開發中，且需要新的策略，例如以改善活體內細胞免疫療法，諸如在實體腫瘤之情況下。本發明所揭露之實施例解決此等需求且提供其他相關優勢。
依據本發明之一實施例，係特地提出一種融合蛋白，其包含： (i)   胞外組分，該胞外組分包含轉型生長因子β受體(TGFβR)多肽之胞外域或其能夠與TGFβ多肽結合之部分或變異體； (ii)     胞內組分，該胞內組分包含介白素-2受體(IL-2R)多肽之胞內部分；及 (iii) 跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之胞外組分與(ii)之胞內組分之間， 其中該融合蛋白在由宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之IL-2訊息。
較佳實施例之詳細說明
本揭露內容部分提供能夠與轉型生長因子-β (TGFβ)多肽(或其二聚體)結合且由此促進宿主細胞中之介白素-2 (IL-2)訊息傳導的融合蛋白(在本文中亦稱為「嵌合」融合蛋白或「嵌合體」)。換言之，某些實施例提供將TGFβ輸入轉化為宿主細胞中之IL-2訊息的融合蛋白。
在本揭露內容中，應理解，TGFβR1亦可稱為TGFβRI、TGFbR1或TGFbRI。應理解，TGFβR2亦可稱為TGFβRII、TGFbR2或TGFbRII。應理解，IL-2Rγ亦可稱為IL2-Rg、IL2Rg或IL2Rγ。應理解，IL-2Rβ亦可稱為IL2-Rb、IL2Rb或IL2Rβ。
作為背景，在正常條件下，TGFβ受體(TGFβR)複合物與TGFβ之結合向細胞傳遞抑制性訊息，此與IL-2R複合物與IL-2之結合所啟動的促進性(例如促進分化、增殖、效應功能及營養吸收)訊息傳導相反。簡言之，TGFβ1同二聚體與TGFβR2之結合促進由二個TGFβR1蛋白及二個TGFβR2蛋白構成之異源四聚體受體複合物的組裝，形成對稱的2:2:2配體-受體複合物。配體結合促進TGFβR1之胞內絲胺酸/蘇胺酸激酶活性，使SMAD2/SMAD3蛋白磷酸化，導致其核易位且與轉錄因子結合以調節轉錄反應。TGFβ1訊息傳導導致T細胞之增殖及效應功能降低。IL-2與含有alpha (α)、beta (β)及gamma (γ)鏈之高親和力受體(IL-2R)複合物結合，導致JAK1及JAK3酪胺酸激酶分別募集至IL-2Rβ及IL-2Rγ。在活化後，JAK1/3使IL-2Rβ磷酸化，導致STAT5之募集及其後續磷酸化及活化。磷酸化的STAT5同二聚體易位至細胞核，以驅動參與T細胞分化及效應功能之基因轉錄。IL-2訊息傳導亦引起MAP激酶及mTORC1之活化，以驅動T細胞增殖及營養吸收。總體而言，TGFβ1及IL-2訊息傳導路徑對T細胞發揮相反的作用。
TGFβ1之血漿位準與結腸直腸癌之疾病程度相關，且報導為結腸直腸癌治癒性切除術後肝轉移之預測指標(Tsushima等人, Clin. Cancer Res. 7:1258-1262 (2001))；可溶性TGFβ之治療前位準亦報導為胰臟癌情況之預後指標(Park等人, Cancer Medicine 9:43-51 (2020) doi: 10.1002/cam4.2677))。
本發明所揭露之融合蛋白的某些實施例包含能夠與TGFβ多肽(例如TGFβ1同二聚體)結合之胞外組分、跨膜組分及包含IL-2Rβ或IL-2Rγ之胞內部分的胞內組分。胞外組分可包含TGFβR多肽(例如TGFβR1或TGFβR2)之胞外域的全部或一部分，或可衍生自該胞外域。跨膜組分可包含TGFβR多肽或IL-2R多肽的全部或一部分，或可衍生自TGFβR多肽或IL-2R多肽。
在一些實施例中，胞內組分包含自融合蛋白之TGFβR跨膜域延伸至IL-2Rβ或IL-2Rγ之胞內部分之N端的一至二十個、一至十五個、一至十個、一至五個、二至二十個、二至十五個、二至十個、二至五個、三至二十個、三至十五個、三至十個、三至五個、至多五個、至多十個、至多十五個、至多二十個、或一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個、十八個、十九個或二十個來自TGFβR (源)多肽之胞內域的連續胺基酸，或其包含一個、二個、三個、四個或五個任擇地守恆胺基酸取代之變異體；此等胺基酸較佳來自TGFβR源多肽胞內域之N端部分。換言之，某些實施例包含TGFβR多肽之一部分，其包含TGFβR跨膜域及TGFβR胞內域之N端部分，或包含一個、二個、三個、四個或五個任擇地守恆胺基酸取代之N端部分的變異體。來自對融合蛋白之跨膜組分有貢獻的相同TGFβR源多肽之此類胞內胺基酸或胺基酸序列(亦即融合蛋白胞內組分之N端、近膜胺基酸或胺基酸序列)，或其包含一個、二個、三個、四個或五個任擇地守恆胺基酸取代之變異體)可稱為胞內突出端或胞內突出端序列。
舉例而言，在一些實施例中，融合蛋白之跨膜組分包含TGFβRI跨膜域，且融合蛋白之胞內組分在其N末端包含一至二十個、一至十五個、一至十個、一至五個、二至二十個、二至十五個、二至十個、二至五個、三至二十個、三至十五個、三至十個、三至五個、至多五個、至多十個、至多十五個、至多二十個、或一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個、十八個、十九個或二十個來自TGFβRI胞內域之連續N端胺基酸，或其包含一個、二個、三個、四個或五個任擇地守恆胺基酸取代之變異體；舉例而言，人類TGFβRI胞內域之N端二十個胺基酸以粗體、下劃線字體顯示如下： MEAAVAAPRP RLLLLVLAAA AAAAAALLPG ATALQCFCHL CTKDNFTCVT DGLCFVSVTE TTDKVIHNSM CIAEIDLIPR DRPFVCAPSS KTGSVTTTYC CNQDHCNKIE LPTTVKSSPG LGPVELAAVI AGPVCFVCIS LMLMVYI CHN RTVIHHRVPN EEDPSLD RPF ISEGTTLKDL IYDMTTSGSG SGLPLLVQRT IARTIVLQES IGKGRFGEVW RGKWRGEEVA VKIFSSREER SWFREAEIYQ TVMLRHENIL GFIAADNKDN GTWTQLWLVS DYHEHGSLFD YLNRYTVTVE GMIKLALSTA SGLAHLHMEI VGTQGKPAIA HRDLKSKNIL VKKNGTCCIA DLGLAVRHDS ATDTIDIAPN HRVGTKRYMA PEVLDDSINM KHFESFKRAD IYAMGLVFWE IARRCSIGGI HEDYQLPYYD LVPSDPSVEE MRKVVCEQKL RPNIPNRWQS CEALRVMAKI MRECWYANGA ARLTALRIKK TLSQLSQQEG IKM CHN RTVIHHRVPN EEDPSLDRPF ISEGTTLKDL IYDMTTSGSG SGLPLLVQRT IARTIVLQES IGKGRFGEVW RGKWRGEEVA VKIFSSREER SWFREAEIYQ TVMLRHENIL GFIAADNKDN GTWTQLWLVS DYHEHGSLFD YLNRYTVTVE GMIKLALSTA SGLAHLHMEI VGTQGKPAIA HRDLKSKNIL VKKNGTCCIA DLGLAVRHDS ATDTIDIAPN HRVGTKRYMA PEVLDDSINM KHFESFKRAD IYAMGLVFWE IARRCSIGGI HEDYQLPYYD LVPSDPSVEE MRKVVCEQKL RPNIPNRWQS CEALRVMAKI MRECWYANGA ARLTALRIKK TLSQLSQQEG IKM (SEQ ID NO.:1)
因此，在一些實施例中，融合蛋白包含TGFβRI跨膜域，且自跨膜域延伸至融合蛋白之胞內組分中的為以上以粗體、下劃線字體顯示的前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸，或其包含一個、二個、三個、四個或五個任擇地守恆胺基酸取代之變異體。
作為另一實例，在一些實施例中，融合蛋白之跨膜組分包含TGFβRII跨膜域，且融合蛋白之胞內組分在其N末端包含一至二十個、一至十五個、一至十個、一至五個、二至二十個、二至十五個、二至十個、二至五個、三至二十個、三至十五個、三至十個、三至五個、至多五個、至多十個、至多十五個、至多二十個、或一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個、十八個、十九個或二十個來自TGFβRII胞內域之連續N端胺基酸，或其包含一個、二個、三個、四個或五個任擇地守恆胺基酸取代之變異體；舉例而言，人類TGFβRII胞內域之N端二十個胺基酸以粗體、下劃線字體顯示如下： MGRGLLRGLW PLHIVLWTRI ASTIPPHVQK SVNNDMIVTD NNGAVKFPQL CKFCDVRFST CDNQKSCMSN CSITSICEKP QEVCVAVWRK NDENITLETV CHDPKLPYHD FILEDAASPK CIMKEKKKPG ETFFMCSCSS DECNDNIIFS EEYNTSNPDL LLVIFQVTGI SLLPPLGVAI SVIIIFYCY R VNRQQKLSST WETGKTRKL M EFSEHCAIIL EDDRSDISST CANNINHNTE LLPIELDTLV GKGRFAEVYK AKLKQNTSEQ FETVAVKIFP YEEYASWKTE KDIFSDINLK HENILQFLTA EERKTELGKQ YWLITAFHAK GNLQEYLTRH VISWEDLRKL GSSLARGIAH LHSDHTPCGR PKMPIVHRDL KSSNILVKND LTCCLCDFGL SLRLDPTLSV DDLANSGQVG TARYMAPEVL ESRMNLENVE SFKQTDVYSM ALVLWEMTSR CNAVGEVKDY EPPFGSKVRE HPCVESMKDN VLRDRGRPEI PSFWLNHQGI QMVCETLTEC WDHDPEARLT AQCVAERFSE LEHLDRLSGR SCSEEKIPED GSLNTTK (SEQ ID NO.:2)
因此，在一些實施例中，融合蛋白包含TGFβRII跨膜域，且自跨膜域延伸至融合蛋白之胞內組分中的為以上以粗體、下劃線字體顯示的前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸，或其包含一個、二個、三個、四個或五個任擇地守恆胺基酸取代之變異體。
在一些實施例中，包含此類胞內突出端或突出端序列之融合蛋白相對於在其他方面相同但不包含胞內突出端或突出端序列之參考融合蛋白提供改良的IL-R訊息傳導。在一些實施例中，來自TGFβRI之胞內突出端包含或由序列C-H-N組成。在一些實施例中，來自TGFβRII之胞內突出端包含或由序列R-V-N組成。
所揭露之融合蛋白(例如在如本文所述之複合物中且在宿主細胞中表現)與如本文所揭露之TGFβ (例如TGFβ1)多肽結合將通常的抑制性TGFβ訊息轉化為支持細胞活性(諸如T細胞之增殖及增強效應功能)的有益IL-2訊息。
在某些實施例中，TGFβR1、TGFβR2、IL-2Rγ及/或IL-2Rβ為人類的。
人類TGFβR1同功型包括以下所述之同功型：UniProt KB P36897-1 (「同功型1」)；UniProt KB P36897-2 (「同功型2」)；及UniProt KB P36897-3 (「同功型3」)。來自此等同功型中之任一者的胺基酸序列可存在於所揭露之融合蛋白中；在一些實施例中，同功型1為較佳的。
人類TGFβR2同功型包括以下所述之同功型：UniProt KB P37173-1 (「同功型1」)；及UniProt KB P37173-2 (「同功型2」)。來自此等同功型中之任一者的胺基酸序列可存在於所揭露之融合蛋白中；在一些實施例中，同功型1為較佳的。
人類IL-2Rγ同功型包括以下所述之同功型：UniProt KB P31785-1 (「同功型1」)；及UniProt KB P31785-2 (「同功型2」)。來自此等同功型中之任一者的胺基酸序列可存在於所揭露之融合蛋白中；在一些實施例中，同功型1為較佳的。
人類IL-2Rβ描述於UniProt KB P14784中。
亦考慮來自人類TGFβR1、TGFβR2、IL-2Rγ及/或IL-2Rβ之胺基酸序列的功能性變異體(如本文所述)。
應理解，藉由「能夠與TGFβ多肽結合」，所揭露之融合蛋白包含允許融合蛋白與TGFβ多肽結合之結構；通常，當TGFβ二聚體(諸如TGFβ1同二聚體)與包含二個TGFβR1配體結合部分及二個TGFβR2配體結合部分之蛋白質複合物結合時，就會發生結合。因此，所揭露之融合蛋白至少在蛋白質複合物包含二個TGFβR1配體結合部分及二個TGFβR2配體結合部分的情況下「能夠」與TGFβ多肽結合。換言之，「能夠結合」涵蓋作為TGFβ結合複合物之一部分對結合作出貢獻。通常，TGFβ多肽將包含在二聚體中；結合複合物之融合蛋白與TGFβ多肽二聚體之間的結合相互作用可包含融合蛋白與二聚體之一或二個TGFβ多肽之間的相互作用。在一些實施例中，當融合蛋白存在於此類複合物的範圍之外(例如作為單體)時，融合蛋白與TGFβ多肽(或其二聚體)之間亦可發生結合相互作用。在一些實施例中，融合蛋白在宿主細胞之表面表現且與至少一種本揭露內容之其他融合蛋白締合；例如，包含TGFβRI胞外域之融合蛋白與包含TGFβRII胞外域之融合蛋白締合。在一些實施例中，宿主細胞表現蛋白質複合物，其包含二個分子之包含TGFβRI胞外域之融合蛋白及二個分子之包含TGFβRII胞外域之融合蛋白，且該蛋白質複合物能夠與TGFβ分子或其二聚體結合。
包含來自IL-2Rβ或IL-2Rγ之胞內部分(或其功能性變異體或片段)的單個融合蛋白能夠至少促進IL-2訊息傳導(例如，在融合蛋白與TGFβ多肽結合後參與啟動IL-2訊息傳導)。如上文所論述，在正常條件下，IL-2訊息傳導通常涉及一個IL-2Rγ蛋白及一個IL-2Rβ蛋白(此等與IL-2Rα蛋白形成IL-2結合複合物)。雖然一個在其胞內組分中包含IL-2Rγ序列之融合蛋白及一個在其胞內組分中包含IL-2Rβ序列之融合蛋白可因此一起足以在適當刺激時經由配體結合啟動IL-2訊息傳導，但在一些實施例中，四個融合蛋白(此等共同提供二個TGFβR1配體結合部分及二個TGFβR2配體結合部分)可締合形成TGFβ結合複合物，且四個融合蛋白中之每一者可包含來自IL-2Rγ或IL-2Rβ之胞內組分，該胞內組分限制條件為在複合物中，存在至少一個IL-2Rγ胞內組分(或其功能性變異體或部分)及至少一個IL-2Rβ胞內組分(或其功能性變異體或部分)。
在一些實施例中，二個本發明所揭露之融合蛋白可彼此相同或可彼此不同，且均可由宿主細胞表現。在一些實施例中，二個融合蛋白可在宿主細胞表面締合以促成複合物，該複合物(i)能夠與TGFβ多肽，例如TGFβ1多肽或其同二聚體結合，及(ii)能夠促成宿主細胞中之IL-2訊息。作為非限制性說明，第一融合蛋白可包含來自TGFβR1及TGFβR2中之一者的胞外域，且第二融合蛋白可包含來自TGFβR1及TGFβR2中之另一者的胞外域。第一融合蛋白可包含來自IL-2Rγ及IL-2Rβ中之一者的胞內域，且第二融合蛋白可包含來自IL-2Rγ及IL-2Rβ中之另一者的胞內域。因此，在此說明性實施例中，第一融合蛋白及第二融合蛋白共同包含來自TGFβR1之胞外域、來自TGFβR2之胞外域、來自IL-2Rγ之胞內域及來自IL-2Rβ之胞內域。
在某些實施例中，四個融合蛋白，其中之每一者可與其他者不同，或可與其他者中之一者相同，可在宿主細胞表面締合以形成複合物，該複合物能夠與TGFβ多肽(例如TGFβ1同二聚體)結合且由此在宿主細胞中啟動IL-2訊息。四個融合蛋白中之二者可包含TGFβR1胞外域或其一部分或變異體，且四個融合蛋白中之另外二者可包含TGFβR2胞外域或其一部分或變異體。在一些實施例中，四個融合蛋白中之至少一者且較佳二者包含IL-2Rβ之胞內部分。在某些實施例中，四個融合蛋白中之至少一者且較佳二者包含IL-2Rγ之胞內部分。
在一些實施例中，蛋白質複合物包含第一及第二本發明所揭露之融合蛋白，且TGFβ多肽(或其二聚體)與蛋白質複合物之結合在表現蛋白質複合物之宿主細胞中啟動IL-2訊息。在一些實施例中，第一融合蛋白包含TGFβR1胞外域或其結合TGFβ多肽(或其二聚體)之功能性部分或變異體，且第二融合蛋白包含TGFβR2胞外域或其結合TGFβ多肽(或其二聚體)之功能性部分或變異體。在某些其他實施例中：(i)第一融合蛋白進一步包含IL-2Rβ胞內部分且第二融合蛋白進一步包含IL-2Rγ胞內部分；或(ii)第一融合蛋白進一步包含IL-2Rγ胞內部分且第二融合蛋白進一步包含IL-2Rβ胞內部分。在一些實施例中，融合蛋白之跨膜組分來自融合蛋白之胞外組分所來源的TGFβR蛋白，或融合蛋白之跨膜組分來自融合蛋白之胞內組分所來源的IL-2R蛋白。
融合蛋白之某些非限制性實施例彙總於表A中，且第一及第二融合蛋白之某些非限制性實施例(例如，可由同一多核苷酸分子或載體編碼及/或可由同一宿主細胞表現之對)彙總於表B中。 表 A. 某些非限制性融合蛋白實施例
融合蛋白 E.C. T.C. I.C.
      任擇的胞內突出端 § 胞內部分 ( 例如來自以下之細胞質 / 訊息傳導域 )
「1」 TGFβR1 TGFβR1 TGFβR1 IL-2Rβ
「2」 TGFβR1 IL-2Rβ -- IL-2Rβ
「3」 TGFβR1 TGFβR1 TGFβR1 IL-2Rγ
「4」 TGFβR1 IL-2Rγ -- IL-2Rγ
「5」 TGFβR2 TGFβR2 TGFβR2 IL-2Rβ
「6」 TGFβR2 IL-2Rβ -- IL-2Rβ
「7」 TGFβR2 TGFβR2 TGFβR2 IL-2Rγ
「8」 TGFβR2 IL-2Rγ -- IL-2Rγ
E.C. = 胞外組分；T.C. = 跨膜組分；I.C. = 胞內組分 §一至二十個、一至十五個、一至十個、一至五個、二至二十個、二至十五個、二至十個、二至五個、三至二十個、三至十五個、三至十個、三至五個、至多五個、至多十個、至多十五個、至多二十個、或一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個、十八個、十九個或二十個來自TGFβR蛋白之有助於跨膜組分之連續N端胞內胺基酸，或其包含一個、二個、三個、四個或五個任擇地守恆胺基酸取代之變異體。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含來自人類TGFβRI之胞外域的胞外組分；(ii)包含來自人類TGFβRI之跨膜域的跨膜組分；及(iii)包含來自人類IL-2Rβ之細胞質/訊息傳導域的胞內組分，該胞內組分中任擇地，胞內組分進一步包含安置於人類IL-2Rβ細胞質/訊息傳導域之N端的一至二十個、一至十五個、一至十個、一至五個、二至二十個、二至十五個、二至十個、二至五個、三至二十個、三至十五個、三至十個、三至五個、至多五個、至多十個、至多十五個、至多二十個、或一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個、十八個、十九個或二十個來自TGFβRI之連續N端胺基酸，或其包含一個、二個、三個、四個或五個任擇地守恆胺基酸取代之變異體。在一些實施例中，胞內組分包含安置於人類IL-2Rβ細胞質/訊息傳導域之N端的三個胺基酸C-H-N。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含來自人類TGFβRI之胞外域的胞外組分；(ii)包含來自人類TGFβRI之跨膜域的跨膜組分；及(iii)包含來自人類IL-2Rγ之細胞質/訊息傳導域的胞內組分，該胞內組分中任擇地，胞內組分進一步包含安置於人類IL-2Rγ細胞質/訊息傳導域之N端的一至二十個、一至十五個、一至十個、一至五個、二至二十個、二至十五個、二至十個、二至五個、三至二十個、三至十五個、三至十個、三至五個、至多五個、至多十個、至多十五個、至多二十個、或一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個、十八個、十九個或二十個來自TGFβRI之連續N端胺基酸，或其包含一個、二個、三個、四個或五個任擇地守恆胺基酸取代之變異體。在一些實施例中，胞內組分包含安置於人類IL-2Rγ細胞質/訊息傳導域之N端的三個胺基酸C-H-N。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含來自人類TGFβRI之胞外域的胞外組分；(ii)包含來自人類IL-2Rβ之跨膜域的跨膜組分及(iii)包含來自人類IL-2Rβ之細胞質/訊息傳導域的胞內組分。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含來自人類TGFβRI之胞外域的胞外組分；(ii)包含來自人類IL-2Rγ之跨膜域的跨膜組分；及(iii)包含來自IL-2Rγ之細胞質/訊息傳導域的胞內組分。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含來自人類TGFβRII之胞外域的胞外組分；(ii)包含來自人類TGFβRII之跨膜域的跨膜組分；及(iii)包含來自人類IL-2Rβ之細胞質/訊息傳導域的胞內組分，該胞內組分中任擇地，胞內組分進一步包含安置於人類IL-2Rβ細胞質/訊息傳導域之N端的一至二十個、一至十五個、一至十個、一至五個、二至二十個、二至十五個、二至十個、二至五個、三至二十個、三至十五個、三至十個、三至五個、至多五個、至多十個、至多十五個、至多二十個、或一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個、十八個、十九個或二十個來自TGFβRII之連續N端胺基酸，或其包含一個、二個、三個、四個或五個任擇地守恆胺基酸取代之變異體。在一些實施例中，胞內組分包含安置於人類IL-2Rβ細胞質/訊息傳導域之N端的三個胺基酸R-V-N。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含來自人類TGFβRII之胞外域的胞外組分；(ii)包含來自人類TGFβRII之跨膜域的跨膜組分；及(iii)包含來自人類IL-2Rγ之細胞質/訊息傳導域的胞內組分，該胞內組分中任擇地，胞內組分進一步包含安置於人類IL-2Rγ細胞質/訊息傳導域之N端的一至二十個、一至十五個、一至十個、一至五個、二至二十個、二至十五個、二至十個、二至五個、三至二十個、三至十五個、三至十個、三至五個、至多五個、至多十個、至多十五個、至多二十個、或一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個、十八個、十九個或二十個來自TGFβRII之連續N端胺基酸，或其包含一個、二個、三個、四個或五個任擇地守恆胺基酸取代之變異體。在一些實施例中，胞內組分包含安置於人類IL-2Rγ細胞質/訊息傳導域之N端的三個胺基酸R-V-N。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含來自人類TGFβRII之胞外域的胞外組分；(ii)包含來自人類IL-2Rβ之跨膜域的跨膜組分及(iii)包含來自人類IL-2Rβ之細胞質/訊息傳導域的胞內組分。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含來自人類TGFβRII之胞外域的胞外組分；(ii)包含來自人類IL-2Rγ之跨膜域的跨膜組分；及(iii)包含來自IL-2Rγ之細胞質/訊息傳導域的胞內組分。 表B. 參考表A 之某些非限制性融合蛋白對
第一融合蛋白 第二融合蛋白
「1」 「5」
「1」 「6」
「1」 「7」
「1」 「8」
「2」 「5」
「2」 「6」
「2」 「7」
「2」 「8」
「3」 「5」
「3」 「6」
「3」 「7」
「3」 「8」
「4」 「5」
「4」 「6」
「4」 「7」
「4」 「8」
「5」 「1」
「5」 「2」
「5」 「3」
「5」 「4」
「6」 「1」
「6」 「2」
「6」 「3」
「6」 「4」
「7」 「1」
「7」 「2」
「7」 「3」
「7」 「4」
「8」 「1」
「8」 「2」
「8」 「3」
「8」 「4」
在特定實施例中，提供編碼以下各項之多核苷酸或載體，或提供表現以下各項之宿主細胞：(1)第一融合蛋白，其包含(1a)包含來自(例如人類) TGFβR1之胞外域的胞外組分，(1b)包含來自(例如人類) IL-2Rβ之跨膜域的跨膜組分，及(1c)包含來自(例如人類) IL-2Rβ之細胞質/訊息傳導域的胞內組分；及(2)第二融合蛋白，其包含(2a)包含來自(例如人類) TGFβR2之胞外域的胞外組分，(1b)包含來自(例如人類) IL-2Rγ之跨膜域的跨膜組分，及(1c)包含來自(例如人類) IL-2Rγ之細胞質/訊息傳導域的胞內組分。在一些實施例中，多核苷酸或載體進一步編碼或宿主細胞進一步表現抗原結合蛋白，諸如TCR或CAR。
在其他實施例中，提供編碼以下各項之多核苷酸或載體，或提供表現以下各項之宿主細胞：(1)第一融合蛋白，其包含(1a)包含來自(例如人類) TGFβR2之胞外域的胞外組分，(1b)包含來自(例如人類) TGFβR2之跨膜域的跨膜組分，及(1c)包含來自(例如人類) IL-2Rβ之細胞質/訊息傳導域且任擇地在其N端包含如表A所述之TGFβR2胞內突出端序列、任擇地包含安置於IL-2Rβ細胞質/訊息傳導域N端之序列R-V-N的胞內組分；及(2)第二融合蛋白，其包含(2a)包含來自(例如人類) TGFβR1之胞外域的胞外組分，(1b)包含來自(例如人類) TGFβR1之跨膜域的跨膜組分，及(1c)包含來自(例如人類) IL-2Rγ之細胞質/訊息傳導域且任擇地在其N端包含如表A所述之TGFβR1胞內突出端或突出端序列的胞內組分，進一步任擇地，其中胞內組分包含安置於IL-2Rγ細胞質/訊息傳導域N端之胺基酸C-H-N。在一些實施例中，多核苷酸或載體進一步編碼或宿主細胞進一步表現抗原結合蛋白，諸如TCR或CAR。
亦提供編碼如本文所揭露之一或多種融合蛋白的多核苷酸、包含多核苷酸之載體、宿主細胞組成物及例如可用於治療諸如癌症之疾病或病症的其他試劑。亦提供相關方法及用途。
所揭露之融合蛋白可用於例如細胞免疫療法，諸如由亦表現抗原結合蛋白，諸如TCR、CAR或其類似物之免疫細胞表現。與不表現融合蛋白之參考宿主細胞相比，此類宿主細胞可包含改良的持久性、增殖、效應功能或其任何組合。舉例而言，在一些情形下(例如實體腫瘤)，TGFβ之位準可能很高(例如與健康個體之TGFβ血清位準相比)，且可能對不表現如本文所提供之一或多種融合蛋白的細胞產生抑制作用。表現所揭露之融合蛋白的細胞將原本抑制性的TGFβ訊息轉化為IL-2訊息。
在更詳細地闡述本揭露內容之前，提供將在本文中使用的某些術語的附加定義可能有助於對其的理解。在整個本揭露內容中闡述了更多定義。
在本說明書中，除非另外指明，否則任何濃度範圍、百分比範圍、比率範圍或整數範圍應理解為包括所述範圍內之任何整數值，且在適當時包括其分數(諸如整數之十分之一及百分之一)。此外，除非另外指明，否則本文中所述之與諸如聚合物次單元、大小或厚度之任何物理特徵相關的任何數字範圍應理解為包括所述範圍內之任何整數。如本文所用，除非另外指明，否則術語「約」意謂指定範圍、值或結構之±20%。「約」包括±15%、±10%及±5%。應理解，如本文所用之術語「一(a/an)」係指所列舉組分中之「一或多者」。替代物(例如「或」)之使用應理解為意謂替代物中之一者、二者或任何組合。如本文所用，術語「包括」、「具有」及「包含」同義地使用，該等術語及其變化形式意欲被理解為非限制性的。
「任擇的」或「任擇地」意謂隨後描述之要素、組分、事件或情況可能發生或可能不發生，且該描述包括該要素、組分、事件或情況發生之實例及不發生之實例。
另外，應理解，由本文所述之結構及次單元之各種組合得出的個別構築體或構築體之群係由本申請案揭露，其程度如同各構築體或構築體之群單獨地闡述一般。因此，特定結構或特定次單元之選擇在本揭露內容之範疇內。
術語「基本上由……組成」不等同於「包含」且係指申請專利範圍中指定的材料或步驟，或實質上不影響所主張主題之基本特徵的材料或步驟。舉例而言，當域、區、模組(例如蛋白質域、連接子、訊息肽)或蛋白質(其可具有一或多個域、區或模組)之胺基酸序列包括延伸、缺失、突變或其組合(例如胺基酸在胺基端或羧基端或域之間)，該等胺基酸之組合至多占域、區、模組或蛋白質長度之20% (例如至多15%、10%、8%、6%、5%、4%、3%、2%或1%)且實質上不影響(亦即，不使活性降低50%以上，諸如不超過40%、30%、25%、20%、15%、10%、5%或1%)域、區、模組或蛋白質之活性(例如結合蛋白之目標結合親和力)時，蛋白質域、區或模組或蛋白質「基本上由」特定胺基酸序列「組成」。
如本文所用，術語「胺基酸」係指天然存在及合成的胺基酸，以及以與天然存在之胺基酸類似的方式起作用之胺基酸類似物及胺基酸模擬物。天然存在之胺基酸為由遺傳密碼編碼之胺基酸以及後來經修飾之彼等胺基酸，例如羥脯胺酸、γ-羧基麩胺酸及O-磷酸絲胺酸。胺基酸類似物係指具有與天然存在之胺基酸相同的基本化學結構(亦即與氫、羧基、胺基及R基團鍵結之α碳)的化合物，例如高絲胺酸、正白胺酸、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸甲基鋶。此類類似物具有經修飾之R基團(例如正白胺酸)或經修飾之肽主鏈，但保留與天然存在之胺基酸相同的基本化學結構。胺基酸模擬物係指具有與胺基酸之通用化學結構不同的結構，但以與天然存在之胺基酸類似的方式起作用的化合物。
如本文所用，「突變」係指核酸分子或多肽分子之序列分別與參考或野生型核酸分子或多肽分子相比的變化。突變可導致若干不同類型之序列變化，包括核苷酸或胺基酸之取代、插入或缺失。
「守恆取代」係指不顯著影響或改變特定蛋白質之結合特徵的胺基酸取代。一般而言，守恆取代為經取代之胺基酸殘基經具有類似側鏈之胺基酸殘基置換的取代。守恆取代包括在以下組中之一者中發現的取代：第1組：丙胺酸(Ala或A)、甘胺酸(Gly或G)、絲胺酸(Ser或S)、蘇胺酸(Thr或T)；第2組：天冬胺酸(Asp或D)、麩胺酸(Glu或E)；第3組：天冬醯胺(Asn或N)、麩醯胺酸(Gln或Q)；第4組：精胺酸(Arg或R)、離胺酸(Lys或K)、組胺酸(His或H)；第5組：異白胺酸(Ile或I)、白胺酸(Leu或L)、甲硫胺酸(Met或M)、纈胺酸(Val或V)；及第6組：苯丙胺酸(Phe或F)、酪胺酸(Tyr或Y)、色胺酸(Trp或W)。另外或替代地，胺基酸可根據類似功能、化學結構或組成(例如酸性、鹼性、脂族、芳族或含硫)分組至守恆取代組中。舉例而言，出於取代之目的，脂族分組可包括Gly、Ala、Val、Leu及Ile。其他守恆取代組包括：含硫：Met及半胱胺酸(Cys或C)；酸性：Asp、Glu、Asn及Gln；小脂族、非極性或略微極性殘基：Ala、Ser、Thr、Pro及Gly；極性、帶負電殘基及其醯胺：Asp、Asn、Glu及Gln；極性、帶正電殘基：His、Arg及Lys；大脂族、非極性殘基：Met、Leu、Ile、Val及Cys；及大芳族殘基：Phe、Tyr及Trp。額外資訊可見於例如Creighton (1984) Proteins, W.H. Freeman and Company及Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties (W H Freeman & Co.; 第2版 (1993年12月))。
在某些實施例中，本揭露內容之變異蛋白質、肽、多肽及胺基酸序列可包含相對於參考胺基酸序列之一或多個守恆取代。
如本文所用，「蛋白質」或「多肽」係指胺基酸殘基之聚合物。蛋白質適用於天然存在之胺基酸聚合物，以及適用於其中一或多個胺基酸殘基為相應天然存在之胺基酸的人工化學模擬物的胺基酸聚合物，及非天然存在之胺基酸聚合物。
如本文所用，「融合蛋白」係指在單鏈中具有至少二個不同域及/或模體之蛋白質，其中域或模體不天然地共同存在於蛋白質中(例如，以給定排列、順序或數目，或完全沒有)。在某些實施例中，融合蛋白包含至少二個不同域及/或模體，該等域及/或模體不共同存在於單個天然存在之肽或多肽中。在某些實施例中，融合蛋白包含來自二個或更多個不同多肽之胺基酸序列；例如，融合蛋白可包含來自TGFβR多肽之胺基酸序列或域及來自IL-2R多肽之胺基酸序列或域。編碼融合蛋白之多核苷酸可使用PCR、重組工程改造或其類似者構築，或可合成此類融合蛋白。融合蛋白可進一步含有其他組分，諸如標籤、連接子或轉導標記。在某些實施例中，由宿主細胞(例如T細胞)表現或產生之融合蛋白定位至細胞表面，其中融合蛋白可錨定至細胞膜。
「核酸分子」或「多核苷酸」係指包括共價連接之核苷酸的聚合化合物，其可由天然次單元(例如嘌呤或嘧啶鹼基)或非天然次單元(例如
Figure 111126544-001
啉環)構成。嘌呤鹼基包括腺嘌呤、鳥嘌呤、次黃嘌呤及黃嘌呤，且嘧啶鹼基包括尿嘧啶、胸腺嘧啶及胞嘧啶。核酸分子包括聚核糖核酸(RNA)、聚去氧核糖核酸(DNA)，其包括cDNA、基因體DNA及合成DNA，其中任一者可為單股或雙股的。若為單股的，則核酸分子可為編碼股或非編碼(反義)股。編碼胺基酸序列之核酸分子包括編碼相同胺基酸序列之所有核苷酸序列。一些型式之核苷酸序列亦可包括內含子，以致經由共轉錄或轉錄後機制移除內含子。換言之，由於遺傳密碼之冗餘或簡併或藉由剪接，不同核苷酸序列可編碼相同胺基酸序列。
亦考慮本揭露內容之核酸分子之變異體。變異核酸分子與如本文所述之定義或參考多核苷酸的核酸分子至少70%、75%、80%、85%、90%且較佳95%、96%、97%、98%、99%或99.9%一致，或在0.015M氯化鈉、0.0015M檸檬酸鈉、約65-68℃或0.015M氯化鈉、0.0015M檸檬酸鈉及50%甲醯胺、約42℃之嚴格雜交條件下與多核苷酸雜交。核酸分子變異體保留編碼具有本文所述之功能(諸如特異性結合目標分子)之融合蛋白或其結合域的能力。
「序列一致性百分比」係指二個或更多個序列之間的關係，藉由比較序列來確定。確定序列一致性之較佳方法經設計以在所比較之序列之間產生最佳匹配。舉例而言，出於最佳比較目的來比對序列(例如，可在第一及第二胺基酸或核酸序列中之一者或二者中引入空隙以用於最佳比對)。此外，出於比較目的可忽略非同源序列。除非另外指明，否則本文中提及之序列一致性百分比係在參考序列之長度上計算。確定序列一致性及相似性之方法可見於公開可用的電腦程式中。序列比對及一致性百分比計算可使用BLAST程式(例如BLAST 2.0、BLASTP、BLASTN或BLASTX)來執行。BLAST程式中使用之數學算法可見於Altschul等人, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997。在本揭露內容之上下文內，應理解，在使用序列分析軟體進行分析時，分析結果係基於所參考之程式之「預設值」。「預設值」意謂首次初始化時最初與軟件一起加載的任何一組數值或參數。
術語「經分離」意謂材料自其原始環境(例如若其為天然存在的，則為天然環境)移除。舉例而言，存在於活動物中之天然存在之核酸或多肽為未經分離的，但與天然系統中之一些或所有共存材料分離的相同核酸或多肽為經分離的。此類核酸可為載體之一部分及/或此類核酸或多肽可為組成物(例如細胞溶解物)之一部分，且仍為經分離的，因為此類載體或組成物不為核酸或多肽之天然環境的一部分。在一些實施例中，本揭露內容之組成物可為「經分離的」，意為其與可以、曾經或將要投予該組成物之個體物理分離且不包含於該個體內。任何本發明所揭露之融合蛋白、多核苷酸、載體或宿主細胞可以「經分離」形式提供。
術語「基因」意謂參與產生多肽鏈之DNA區段；其包括編碼區前後的區域(「前導及尾部序列」)以及個別編碼區段(外顯子)之間的介入序列(內含子)。
「功能性變異體」係指與本發明之親代或參考化合物結構相似或實質上結構相似的多肽或多核苷酸，但在某些情況下在組成上略有不同(例如，一個鹼基、原子或功能不同、添加或移除)，使得多肽或經編碼多肽能夠以至少50%之效率，較佳至少55%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.9%或100%之親代多肽之活性位準執行經編碼親代多肽之至少一種功能。換言之，當功能性變異體在選定分析法中與親代或參考多肽相比表現出不超過50%的效能降低時，本揭露內容之多肽或經編碼多肽的功能性變異體具有「相似的結合」、「相似的親和力」或「相似的活性」，諸如量測結合親和力(例如Biacore®或四聚體染色量測締合(K a)或解離(K D)常數)或親合力之分析法；或量測IL-2訊息傳導之分析法(例如：藉由流動式細胞測量術及/或使用對其具有特異性之抗體(例如來自BD Biosciences之BD Phosflow™ Alexa Fluor® 647小鼠抗Stat5 (pY694)，目錄號612599)的西方墨點法量測磷酸化STAT5；量測一或多個基因之表現，該等基因之表現已知由STAT5介導；量測MAP激酶及/或mTORC1之活化)；或量測TGFβ訊息傳導之分析法(例如，藉由流動式細胞測量術及/或使用對其具有特異性之抗體(例如來自R&D Systems之人類磷酸化Smad2 (S465/S467)/Smad3 (S423/S425)抗體，目錄號AB3226；亦參見來自R&D Systems之基於磷酸化Smad3 (S423/S425)/Smad2 (S465/S467)細胞之ELISA，目錄號KCB3226；亦參見來自Cell Signaling Technology ®之磷酸化Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4)兔mAb #8828)之西方墨點法量測磷酸化SMAD2/SMAD3。STAT5介導之轉錄可使用已知的報告基因分析法，諸如pGL3-3xSTAT5- Luc報告基因分析法(Yin等人, J. Biomol Screen 16(4):443-449 (2011); doi: 10.1177/1087057111400190)來詢問。GRB2及SOS之募集可以生物化學的方式進行表徵，例如藉由免疫共沈澱(Wang等人, J Biol. Chem. 275(30):23355-23361 (2000); doi: 10.1074/jbc.M000404200)。
如本文所用，「功能性部分」或「功能性片段」係指僅包含親代或參考多肽或多核苷酸(分別)之域、部分或片段的多肽或多核苷酸，且該多肽或經編碼多肽保留與親代或參考化合物之域、部分或片段相關的至少50%之活性，較佳至少55%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.9%或100%之親代多肽之活性位準，或提供生物益處(例如IL-2訊息傳導)。當功能性部分或片段在選定分析法中與親代或參考多肽相比表現出不超過50%的效能降低(與親代或參考相比，在親和力方面較佳不超過20%或10%或不超過對數差異)時，本揭露內容之多肽或經編碼多肽的「功能性部分」或「功能性片段」具有「相似的結合」或「相似的活性」，諸如用於量測結合親和力或量測效應功能(例如細胞介素釋放)之分析法。
如本文所用，「異源」或「非內源」或「外源」係指非宿主細胞或個體原生的任何基因、蛋白質、化合物、核酸分子或活性，或已改變的宿主細胞或個體原生的任何基因、蛋白質、化合物、核酸分子或活性。異源、非內源或外源包括已經突變或以其他方式改變以使得結構、活性或二者在原生與改變的基因、蛋白質、化合物或核酸分子之間不同的基因、蛋白質、化合物或核酸分子。在某些實施例中，異源、非內源或外源基因、蛋白質或核酸分子(例如受體、配體等)可能對於宿主細胞或個體而言並非內源的，但實際上，編碼此類基因、蛋白質或核酸分子之核酸可藉由結合、轉型、轉染、電穿孔或其類似方式添加至宿主細胞中，其中所添加之核酸分子可整合至宿主細胞基因體中或可以染色體外遺傳物質之形式存在(例如，作為質體或其他自我複製載體)。應瞭解，在包含異源多核苷酸之宿主細胞的情況下，該多核苷酸對宿主細胞之後代為「異源」的，無論該後代本身是否經操縱以例如引入該多核苷酸。
術語「同源」或「同源物」係指發現於或來源於宿主細胞、物種或菌株之基因、蛋白質、化合物、核酸分子或活性。舉例而言，編碼多肽之異源或外源多核苷酸或基因可與原生多核苷酸或基因同源且編碼同源多肽或活性，但多核苷酸或多肽可具有改變的結構、序列、表現位準或其任何組合。非內源多核苷酸或基因以及經編碼多肽或活性可來自同一物種、不同物種或其組合。
如本文所用，術語「內源」或「原生」係指正常存在於宿主細胞或個體中之多核苷酸、基因、蛋白質、化合物、分子或活性。
如本文所用，術語「表現」係指基於核酸分子(諸如基因)之編碼序列產生多肽的過程。該過程可包括轉錄、轉錄後控制、轉錄後修飾、轉譯、轉譯後控制、轉譯後修飾或其任何組合。經表現之核酸分子通常可操作地連接於表現控制序列(例如啟動子)。
術語「可操作地連接」係指二個或更多個核酸分子在單個核酸片段上之締合，使得一者之功能受另一者影響。舉例而言，當啟動子能夠影響編碼序列之表現(亦即編碼序列在啟動子之轉錄控制下)時，啟動子與編碼序列可操作地連接。「非連接」意謂相關遺傳元件彼此不緊密相關且一者之功能不影響另一者。
如本文所用，「表現載體」係指含有核酸分子之DNA構築體，該核酸分子可操作地連接於適合的控制序列，能夠在適合宿主中實現核酸分子之表現。此類控制序列包括實現轉錄之啟動子、控制此類轉錄之任擇的操縱序列、編碼適合的mRNA核糖體結合位點之序列及控制轉錄及轉譯終止之序列。載體可為質體、噬菌體粒子、病毒或僅潛在的基因體插入物。一旦轉型至適合的宿主中，載體可獨立於宿主基因體複製且起作用，或在一些情況下，可整合至基因體本身中。在本說明書中，「質體」、「表現質體」、「病毒」及「載體」通常可互換使用。
在將核酸分子插入細胞中之情形下，術語「引入」意謂「轉染」或「轉型」或「轉導」，且包括指將核酸分子併入真核或原核細胞中，其中核酸分子可併入細胞之基因體(例如染色體、質體、色素體或粒線體DNA)中，轉化成自主複製子或暫時表現(例如經轉染mRNA)。如本文所用，術語「經工程改造」、「重組」或「非天然」係指包括至少一種基因改變或藉由引入外源核酸分子而經修飾之生物體、微生物、細胞、核酸分子或載體，其中此類改變或修飾係藉由基因工程改造(亦即人工干預)引入。基因改變包括例如引入編碼蛋白質、融合蛋白或酶之可表現核酸分子之修飾，或其他核酸分子添加、缺失、取代或細胞遺傳物質之其他功能性破壞。額外修飾包括例如非編碼調節區，其中修飾改變多核苷酸、基因或操縱子之表現。
如本文所述，超過一個異源核酸分子可作為單獨核酸分子、作為多個單獨受控基因、作為多順反子核酸分子、作為編碼融合蛋白之單個核酸分子或其任何組合引入宿主細胞中。當二個或更多個異源核酸分子引入宿主細胞中時，應理解，二個或更多個異源核酸分子可作為單個核酸分子(例如在單個載體上)、在各別載體上、在單個位點或多個位點整合至宿主染色體中或其任何組合引入。所提及之異源核酸分子或蛋白質活性之數目係指編碼核酸分子之數目或蛋白質活性之數目，而非引入宿主細胞中之各別核酸分子之數目。
術語「構築體」係指含有重組核酸分子之任何多核苷酸。構築體可存在於載體(例如細菌載體、病毒載體)中或可整合至基因體中。「載體」為能夠輸送另一核酸分子之核酸分子。載體可為例如質體、黏質體、病毒、RNA載體或線性或環狀DNA或RNA分子，其可包括染色體、非染色體、半合成或合成核酸分子。本揭露內容之載體亦包括轉位子系統(例如Sleeping Beauty，參見例如Geurts等人, Mol. Ther. 8:108, 2003: Mátés等人, Nat. Genet. 41:753, 2009)。例示性載體為能夠自主複製(游離型載體)、能夠將多核苷酸遞送至細胞基因體(例如病毒載體)或能夠表現其所連接之核酸分子(表現載體)的載體。
如本文所用，術語「宿主」係指用異源核酸分子進行基因修飾以產生感興趣之多肽(例如本揭露內容之融合蛋白)的目標細胞(例如T細胞)或微生物。在某些實施例中，宿主細胞可任擇地具有或經修飾以包括其他基因修飾，該等修飾賦予與例如異源蛋白之生物合成有關或無關的所需特性(例如包括可偵測標記；缺失、改變或截短的內源宿主細胞蛋白；表現抗原結合蛋白)。
如本文所用，關於混合物中細胞類型之量，「富集」或「耗乏」係指在由一或多個富集或耗乏過程或步驟產生之細胞混合物中，「富集」類型之數目增加、「耗乏」細胞之數目減少或二者兼有。因此，視經歷富集過程之原始細胞群的來源而定，混合物或組成物可含有30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%或更多(按數目或計數)的「富集」細胞。經歷耗乏過程之細胞可導致混合物或組成物含有50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%或更少(按數目或計數)的「耗乏」細胞。在某些實施例中，混合物中某種細胞類型之量將富集且不同細胞類型之量將耗乏，諸如富集CD4 +細胞同時耗乏CD8 +細胞，或富集CD62L +細胞同時耗乏CD62L -細胞，或其組合。
「T細胞受體」(TCR)係指一種稱為免疫球蛋白超家族成員之多蛋白複合物(各組成蛋白具有可變結合域、恆定域、跨膜區及短胞質尾區；參見例如Janeway等人, Immunobiology: The Immune System in Health and Disease, 第3版, Current Biology Publications, p. 4:33, 1997)，能夠與結合於MHC受體之抗原肽結合。TCR可在細胞表面或以可溶性形式存在，且一般由具有α及β鏈(亦分別稱為TCRα及TCRβ)或γ及δ鏈(亦分別稱為TCRγ及TCRδ)之異二聚體構成。TCR鏈之胞外部分(例如α鏈、β鏈)含有二個免疫球蛋白域，即在N端之可變域(例如α鏈可變域或V α，β鏈可變域或V β；通常基於Kabat編號之胺基酸1至116 (Kabat等人, 「Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, Public Health Service National Institutes of Health, 1991, 第5版)及鄰近細胞膜之恆定域(例如α鏈恆定域或C α，通常基於Kabat之胺基酸117至259，β鏈恆定域或C β，通常基於Kabat之胺基酸117至295)。可變域含有由構架區(FR)分開的互補決定區(CDR)(參見例如Jores等人, Proc. Nat'l Acad. Sci. U.S.A. 87:9138, 1990；Chothia等人, EMBO J. 7:3745, 1988；亦參見Lefranc等人, Dev. Comp. Immunol. 27:55, 2003)。本揭露內容中使用之TCR或TCR結合域之來源可來自各種動物物種，諸如人類、小鼠、大鼠、兔或其他哺乳動物。
「CD3」為六條鏈之多蛋白質複合物(參見Abbas及Lichtman, 2003；Janeway等人, 第172及178頁, 1999)。在哺乳動物中，複合物一般包含一條CD3γ鏈、一條CD3δ鏈、二條CD3ε鏈及CD3ζ鏈之同二聚體。CD3γ、CD3δ及CD3ε鏈為免疫球蛋白超家族的相關細胞表面蛋白，含有單個免疫球蛋白域。CD3γ、CD3δ及CD3ε鏈之跨膜區帶負電，其被認為允許此等鏈與T細胞受體鏈之帶正電區締合。CD3複合蛋白質之細胞內尾區含有基於免疫受體酪胺酸之活化模體或ITAM，其被認為對T細胞響應於抗原結合之訊息傳導很重要。
CD3以及其中的蛋白質次單元、域及序列可來自各種動物物種，包括人類、小鼠、大鼠或其他哺乳動物。
在某些實施例中，TCR存在於T細胞(亦稱為T淋巴球)之表面上且與CD3複合物締合。在某些實施例中，TCR複合物包含TCR或其功能部分；包含二條CD3ζ鏈或其功能性部分或變異體之二聚體；包含CD3δ鏈及CDɛ鏈或其功能性部分或變異體之二聚體；及包含CD3γ鏈及CDɛ鏈或其功能性部分或變異體之二聚體，其中之任一或多者對於T細胞可為內源或異源的。
「主要組織相容性複合體分子」(MHC分子)係指將肽抗原遞送至細胞表面之醣蛋白。MHC I類分子為由跨膜α鏈(具有三個α域)及非共價締合之β2微球蛋白組成的異二聚體。MHC II類分子由二個跨膜醣蛋白α及β構成，二者均跨膜。各鏈具有二個域。MHC I類分子將源於胞質液之肽遞送至細胞表面，在此肽:MHC複合物由CD8 +T細胞識別。MHC II類分子將源於囊泡系統之肽遞送至細胞表面，在此其由CD4 +T細胞識別。MHC分子可來自各種動物物種，包括人類、小鼠、大鼠、貓、狗、山羊、馬或其他哺乳動物。
「CD4」係指一種免疫球蛋白輔受體醣蛋白，其可輔助TCR與抗原:MHC結合且與抗原呈現細胞通信(參見Campbell及Reece, Biology 909 (Benjamin Cummings, 第六版, 2002)；UniProtKB P01730)。CD4存在於免疫細胞之表面上，諸如T輔助細胞、單核球、巨噬細胞及樹突狀細胞，且包括在細胞表面表現之四個免疫球蛋白域(D1至D4)。在抗原識別過程中，CD4與TCR複合物一起募集至MHCII分子之不同區域結合(CD4結合MHCII β2，而TCR複合物結合抗原:MHCII α1/β1)。
如本文所用，術語「CD8輔受體」或「CD8」意謂細胞表面醣蛋白CD8，呈α-α同二聚體或α-β異二聚體形式。CD8輔受體可輔助細胞毒性T細胞(CD8 +)之功能，且經由其細胞質酪胺酸磷酸化途徑進行訊息傳導來發揮作用(Gao及Jakobsen, Immunol. Today 21:630-636, 2000；Cole及Gao, Cell. Mol. Immunol. 1:81-88, 2004)。在人類中，存在五(5)條不同的CD8β鏈(參見UniProtKB標識符P10966)及單條CD8α鏈(參見UniProtKB標識符P01732)。
「嵌合抗原受體」(CAR)係指一種融合蛋白，其經工程改造以含有二個或更多個胺基酸序列(其可為天然存在之胺基酸序列)以非天然存在或宿主細胞中非天然存在之方式連接在一起，該融合蛋白在存在於細胞表面上時可充當抗原特異性受體。本揭露內容之CAR包括胞外部分，其包含抗原結合域(例如，獲自或衍生自免疫球蛋白或免疫球蛋白樣分子，諸如自對癌症抗原具有特異性之抗體或TCR (分別)衍生之scFv或scTCR，或衍生自或獲自NK細胞之殺傷性免疫受體的抗原結合域，經設計之錨蛋白重複蛋白(DARPin)、經工程改造之纖維連接蛋白三型域(亦稱為單功能抗體)諸如Adnectin TM、配體(例如若目標為細胞介素受體，則為細胞介素)、受體胞外域(例如若目標為細胞介素，則為細胞介素受體)或其類似物)與跨膜域及一或多個胞內訊息傳導域(任擇地含有共刺激域)連接(參見例如Sadelain等人 , Cancer Discov., 3(4):388 (2013)；亦參見Harris及Kranz, Trends Pharmacol. Sci., 37(3):220 (2016)；Stone等人 , Cancer Immunol. Immunother., 63(11):1163 (2014))。在某些實施例中，CAR包含抗原特異性TCR結合域(參見例如Walseng等人, Scientific Reports 7:10713, 2017；TCR CAR構築體及其方法特此以全文引用之方式併入)。
在TCR之上下文中，術語「可變區」或「可變域」係指TCR α鏈或β鏈(或γδ TCR之γ鏈及δ鏈)之域，或抗體重鏈或輕鏈中參與抗原結合之域(亦即，含有接觸抗原且導致結合之胺基酸及/或其他結構)。原生TCR之α鏈及β鏈的可變域(分別為Vα及Vβ)通常具有類似結構，各域包含四個一般守恆的構架區(FR)及三個CDR。抗體重鏈(V H)及輕鏈(V L)之可變域通常亦各自包含四個一般守恆的構架區(FR)及三個CDR。在TCR及抗體中，構架區分開CDR且CDR位於構架區之間(亦即，一級結構)。
術語「互補決定區」及「CDR」與「高變區」或「HVR」同義，且係指TCR或抗體可變區內之胺基酸序列，其一般賦予抗原特異性及/或結合親和力且在一級結構中藉由構架序列彼此分開。在一些情況下，構架胺基酸亦可有助於結合，例如亦可接觸抗原或含有抗原的分子。一般而言，各可變區中存在三個CDR (亦即，TCRα鏈及β鏈可變區中之每一者中的三個CDR；抗體重鏈及輕鏈可變區中之每一者中的3個CDR)。在TCR之情況下，CDR3被認為是負責識別經加工抗原之主要CDR。CDR1及CDR2通常主要與MHC相互作用。可變域序列可與編號方案(例如Kabat、EU、國際免疫遺傳學資訊系統(IMGT)及Aho)比對，其可允許註釋等效殘基位置且使用抗原受體編號及受體分類(ANARCI)軟體工具比較不同分子(2016, Bioinformatics 15:298-300)。
如本文所用，「抗原」或「Ag」係指可引發免疫反應之免疫原性分子。此免疫反應可涉及抗體產生、特定免疫勝任細胞(例如T細胞)之活化、細胞介素之分泌或其任何組合。抗原(免疫原性分子)可為例如肽、醣肽、多肽、醣多肽、多核苷酸、多醣、脂質或其類似物。顯而易見的是，抗原可合成、重組產生或來源於生物樣本。可含有一或多個抗原之例示性生物樣本包括組織樣本、腫瘤樣本、細胞、生物流體或其組合。抗原可由經修飾或經基因工程改造以表現抗原之細胞產生。
術語「抗原決定基」或「抗原性抗原決定基」包括由同源結合分子(諸如免疫球蛋白、T細胞受體(TCR)、嵌合抗原受體或其他結合分子、域或蛋白質)識別且特異性結合之任何分子、結構、胺基酸序列或蛋白質決定子。抗原決定基決定子一般含有分子之化學活性表面分組，諸如胺基酸或糖側鏈，且可具有特定三維結構特徵，以及荷質比特徵。
「治療(treat)」或「治療(treatment)」或「改善」係指對個體(例如人類或非人類哺乳動物，諸如靈長類動物、馬、貓、狗、山羊、小鼠或大鼠)之疾病、病症或病況的醫療管理。一般而言，包含表現本揭露內容之融合蛋白的宿主細胞及任擇的佐劑的適當劑量或治療方案以足以引起治療或預防益處的量投予。治療或預防益處包括改善臨床結果；減輕或緩解與疾病相關之症狀；減少症狀發生；改善生活品質；延長無病狀態；減輕疾病程度；穩定疾病狀態；延遲疾病進展；緩解；存活；延長存活期；或其任何組合。在一些實施例中，本揭露內容之細胞免疫療法的益處可進一步包括減少(例如在數目或嚴重程度上)或不存在細胞介素相關毒性，諸如細胞介素釋放症候群。
本揭露內容之組成物(融合蛋白、表現融合蛋白之宿主細胞、多核苷酸、載體或其類似物)的「治療有效量」或「有效量」係指足以產生治療效果之組成物的量，治療效果包括以統計學上顯著之方式改善臨床結果；減輕或緩解與疾病相關之症狀；減少症狀發生；改善生活品質；延長無病狀態；減輕疾病程度；穩定疾病狀態；延遲疾病進展；緩解；存活；延長存活期。在癌症之情況下，益處可包括例如減小腫瘤之大小、面積、體積及/或密度，及/或減少或逆轉腫瘤生長或癌症擴散之速率。
當提及單獨投予之個別活性成分時，治療有效量係指該成分單獨的作用。當提及組合時，治療有效量係指活性成分或組合輔助活性成分與表現活性成分之細胞的組合量，不論連續或同時投予均產生治療效果。組合亦可為表現超過一種活性成分，諸如特異性結合抗原之二種不同的抗原結合蛋白(例如CAR、TCR)或本揭露內容之融合蛋白的細胞。
術語「醫藥學上可接受之賦形劑或載劑」或「生理學上可接受之賦形劑或載劑」係指生物學上相容之媒劑，例如生理鹽水，其在本文中更詳細地描述，適用於向人類或其他非人類哺乳動物個體投予，且一般認為安全或不引起嚴重不良事件。
如本文所用，「統計顯著」係指當使用學生t檢驗計算時p值為0.050或更小，且表明所量測之特定事件或結果不太可能為偶然出現的。
如本文所用，術語「過繼免疫療法(adoptive immune therapy/adoptive immunotherapy)」係指投予天然存在或經基因工程改造之疾病抗原特異性免疫細胞(例如T細胞)。過繼細胞免疫療法可為自體的(免疫細胞來自受體)、同種異體的(免疫細胞來自同一物種之供體)或同基因型的(免疫細胞來自與受體基因相同的供體)。
如本文所用，在二個或更多個核酸或多肽序列之上下文中，術語「最佳比對」係指二個(例如在成對比對中)或更多個(例如在多個序列比對中)序列已與對應性最大的胺基酸殘基或核苷酸比對，例如藉由產生最高或「最佳化」一致性百分比評分的比對所確定。
本揭露內容包括本文所述之任何融合蛋白或其組分或域的變異體，其具有一或多個守恆胺基酸取代。此類守恆取代可在多肽之胺基酸序列中進行，而不會破壞多肽之三維結構或功能。守恆取代可藉由具有相似疏水性、極性及R鏈長度之胺基酸彼此取代來實現。另外或替代地，藉由比較來自不同物種之同源蛋白質的比對序列，可藉由在不改變經編碼蛋白之基本功能的情況下定位已在物種之間突變的胺基酸殘基(例如非守恆殘基)來鑑別守恆取代。此類經守恆取代之變異體可包括與本文所述之融合蛋白或組分序列中之任一者至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約86%、至少約87%、至少約88%、至少約89%、至少約90%、至少約91%、至少約92%、至少約93%、至少約94%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%一致的變異體。在一些實施例中，此類經守恆取代之變異體為功能性變異體。此類功能性變異體可涵蓋具有取代之序列，使得一或多個關鍵活性位點殘基或配體結合殘基之活性守恆。 融合蛋白
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含轉型生長因子β受體(TGFβR)多肽之胞外域或其能夠與TGFβ多肽結合之部分或變異體的胞外組分；(ii)包含介白素-2受體(IL-2R)多肽之胞內部分的胞內組分；及(iii)安置於(i)之胞外組分與(ii)之胞內組分之間的跨膜組分，該跨膜組分中融合蛋白在由宿主細胞表現且與TGFβ多肽結合時，能夠促成宿主細胞中之IL-2訊息。
在某些實施例中，TGFβR多肽包含TGFβR1多肽或TGFβR2多肽。在某些實施例中，IL-2R多肽包含IL-2Rβ多肽、IL-2Rγ多肽或二者。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之胞外域或其能夠與TGFβ多肽結合之部分或變異體的胞外組分；(ii)包含介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之胞內部分的胞內組分；及(iii)安置於(i)之胞外組分與(ii)之胞內組分之間的跨膜組分，該跨膜組分中融合蛋白在由宿主細胞表現且與TGFβ多肽結合時，能夠促成宿主細胞中之IL-2訊息。
在一些實施例中，包含TGFβR1或TGFβR2多肽之胞外域或其功能性片段的胞外組分包含人類或大鼠TGFβR1或TGFβR2多肽(例如uniprot寄存編號P36897、A3QNQ0、P80204、P38438，其條目、序列資訊及蛋白質特徵以全文引用之方式併入本文中)。
在一些實施例中，包含TGFβR1或TGFβR2多肽之胞外域、其功能性片段或其變異體的胞外組分經組態以結合TGFβR1或TGFβR2之天然配體的一或多個殘基，包括但不限於TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、BMP-2、BMP-7或ActA中之至少一者。在一些實施例中，天然配體之一或多個殘基包含鑑別為對TGFβR1或TGFβR2-配體相互作用重要的殘基(參見例如Hart等人 Nat Struct Biol. 2002年3月;9(3):203-8，其以全文引用的方式併入本文中，包括其中的晶體結構及結合相互作用教示內容)。在一些實施例中，胞外組分經組態以接觸TGF-β3、TGF-β2或TGF-β1之殘基R25、K31、W32、H34、K37、Y90、Y91、V92、G93或R94中之至少一者。在一些實施例中，在最佳比對時，胞外組分經組態以接觸相對於TGF-β3、TGF-β2或TGF-β1之殘基R25、K31、W32、H34、K37、Y90、Y91、V92、G93或R94中之至少一者。在一些實施例中，胞外組分包含人類TGF-βR2之殘基L27、F30、D32、S49、I50、T51、S52、I53或E55中之至少一者。在一些實施例中，在最佳比對時，胞外組分包含相對於人類TGF-βR2之殘基L27、F30、D32、S49、I50、T51、S52、I53或E55中之至少一者。
在一些實施例中，包含IL-2Rβ或IL-2Rγ多肽之胞內部分的融合蛋白胞內組分包含SH2訊息傳導域所特有的一或多個殘基、人類及鼠類IL-2Rβ或IL-2Rγ之間守恆的一或多個殘基及/或能夠磷酸化的一或多個殘基(參見例如Nelson等人 Mol Cell Biol. 1996年1月;16(1):309-17，其以全文引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，該一或多個殘基包含人類IL-2Rγ胞內域之P4、R5、I6、P7、T8、L12、D14、L15、V16、Y19、G32、L33、E35或L37。在一些實施例中，在最佳比對時，該一或多個殘基包含相對於SEQ ID NO: 46之P4、R5、I6、P7、T8、L12、D14、L15、V16、Y19、G32、L33、E35或L37。
在一些實施例中，融合蛋白之胞內組分包含、基本上由或由IL-2Rγ之近膜區組成(例如包含細胞質殘基1-37或1-52或5-37或40-52；參見Nelson等人, Mol. Cell Bio. 16(1):309-317 (1996))。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之胞外域或其能夠與TGFβ多肽結合之部分或變異體的胞外組分；(ii)包含介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之胞內部分的胞內組分；及(iii)安置於(i)之胞外組分與(ii)之胞內組分之間的跨膜組分，該跨膜組分中融合蛋白在由宿主細胞表現且與TGFβ多肽結合時，能夠促成宿主細胞中之IL-2訊息。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之胞外域或其能夠與TGFβ多肽結合之部分或變異體的胞外組分；(ii)包含介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之胞內部分的胞內組分；及(iii)安置於(i)之胞外組分與(ii)之胞內組分之間的跨膜組分，該跨膜組分中融合蛋白在由宿主細胞表現且與TGFβ多肽結合時，能夠促成宿主細胞中之IL-2訊息。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之胞外域或其能夠與TGFβ多肽結合之部分或變異體的胞外組分；(ii)包含介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之胞內部分的胞內組分；及(iii)安置於(i)之胞外組分與(ii)之胞內組分之間的跨膜組分，該跨膜組分中融合蛋白在由宿主細胞表現且與TGFβ多肽結合時，能夠促成宿主細胞中之IL-2訊息。
在本發明所揭露之實施例中之任一者中，胞外組分可包含或由來自TGFβR1 (例如SEQ ID NO.:39)或來自TGFβR2 (例如SEQ ID NO.:41)之胞外域組成。
在本發明所揭露之實施例中之任一者中，跨膜組分可包含或由來自IL-2Rβ (SEQ ID NO.:43)之跨膜域組成。
在本發明所揭露之實施例中之任一者中，跨膜組分可包含或由來自IL-2Rγ (SEQ ID NO.:45)之跨膜域組成。
在本發明所揭露之實施例中之任一者中，跨膜組分可包含或由來自TGFβR1 (SEQ ID NO.:40)之跨膜域組成。在一些實施例中，融合蛋白包含來自TGFβR1之跨膜域，及自跨膜域延伸至融合蛋白之胞內組分中的來自TGFβR1之胞內突出端或突出端序列，如表A所述。在一些實施例中，胞內突出端序列包含、基本上由或由C-H-N組成。
在本發明所揭露之實施例中之任一者中，跨膜組分可包含或由來自TGFβR2 (SEQ ID NO.:42)之跨膜域組成。在一些實施例中，融合蛋白包含來自TGFβR2之跨膜域，及自跨膜域延伸至融合蛋白之胞內組分中的來自TGFβR2之胞內突出端或突出端序列，如表A所述。在一些實施例中，胞內突出端序列包含、基本上由或由R-V-N組成。
在本發明所揭露之實施例中之任一者中，胞內組分可包含來自IL-2Rγ (SEQ ID NO.:46)或來自IL-2Rβ (SEQ ID NO.:44)之胞內域。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之胞外域或其能夠與TGFβ多肽結合之部分或變異體的胞外組分；(ii)包含介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之胞內部分的胞內組分，該胞內組分中胞內組分任擇地包含IL-2Rβ胞內域；及(iii)安置於(i)之胞外組分與(ii)之胞內組分之間的跨膜組分，該跨膜組分中跨膜組分任擇地包含IL-2Rβ跨膜域，其中融合蛋白在由宿主細胞表現且與TGFβ多肽結合時，能夠促成宿主細胞中之IL-2訊息。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之胞外域或其能夠與TGFβ多肽結合之部分或變異體的胞外組分；(ii)包含介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之胞內部分的胞內組分，該胞內組分中胞內組分任擇地包含IL-2Rβ胞內域；及(iii)安置於(i)之胞外組分與(ii)之胞內組分之間的跨膜組分，該跨膜組分中跨膜組分任擇地包含IL-2Rβ跨膜域，其中融合蛋白在由宿主細胞表現且與TGFβ多肽結合時，能夠促成宿主細胞中之IL-2訊息。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之胞外域或其能夠與TGFβ多肽結合之部分或變異體的胞外組分；(ii)包含介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之胞內部分的胞內組分，該胞內組分中胞內組分任擇地包含IL-2Rβ跨膜域；及(iii)安置於(i)之胞外組分與(ii)之胞內組分之間的跨膜組分，該跨膜組分中跨膜組分任擇地包含TGFβR1跨膜域(在此情況下，胞內組分可進一步包含TGFβR1胞內突出端或突出端序列)，其中融合蛋白在由宿主細胞表現且與TGFβ多肽結合時，能夠促成宿主細胞中之IL-2訊息。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之胞外域或其能夠與TGFβ多肽結合之部分或變異體的胞外組分；(ii)包含介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之胞內部分的胞內組分，該胞內組分中胞內組分任擇地包含IL-2Rβ跨膜域；及(iii)安置於(i)之胞外組分與(ii)之胞內組分之間的跨膜組分，該跨膜組分中跨膜組分任擇地包含TGFβR2跨膜域(在此情況下，胞內組分可進一步包含TGFβR2胞內突出端或突出端序列)，其中融合蛋白在由宿主細胞表現且與TGFβ多肽結合時，能夠促成宿主細胞中之IL-2訊息。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之胞外域或其能夠與TGFβ多肽結合之部分或變異體的胞外組分；(ii)包含介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之胞內部分的胞內組分，該胞內組分中胞內組分任擇地包含IL-2Rγ胞內域；及(iii)安置於(i)之胞外組分與(ii)之胞內組分之間的跨膜組分，該跨膜組分中跨膜組分任擇地包含IL-2Rγ跨膜域，其中融合蛋白在由宿主細胞表現且與TGFβ多肽結合時，能夠促成宿主細胞中之IL-2訊息。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之胞外域或其能夠與TGFβ多肽結合之部分或變異體的胞外組分；(ii)包含介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之胞內部分的胞內組分，該胞內組分中胞內組分任擇地包含IL-2Rγ胞內域；及(iii)安置於(i)之胞外組分與(ii)之胞內組分之間的跨膜組分，該跨膜組分中跨膜組分任擇地包含IL-2Rγ跨膜域，其中融合蛋白在由宿主細胞表現且與TGFβ多肽結合時，能夠促成宿主細胞中之IL-2訊息。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之胞外域或其能夠與TGFβ多肽結合之部分或變異體的胞外組分；(ii)包含介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之胞內部分的胞內組分，該胞內組分中胞內組分任擇地包含IL-2Rγ胞內域；及(iii)安置於(i)之胞外組分與(ii)之胞內組分之間的跨膜組分，該跨膜組分中跨膜組分任擇地包含TGFβR2跨膜域(在此情況下，胞內組分可進一步包含TGFβR2胞內突出端或突出端序列)，其中融合蛋白在由宿主細胞表現且與TGFβ多肽結合時，能夠促成宿主細胞中之IL-2訊息。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含：(i)包含轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之胞外域或其能夠與TGFβ多肽結合之部分或變異體的胞外組分；(ii)包含介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之胞內部分的胞內組分，該胞內組分中胞內組分任擇地包含IL-2Rγ胞內域；及(iii)安置於(i)之胞外組分與(ii)之胞內組分之間的跨膜組分，該跨膜組分中跨膜組分任擇地包含TGFβR1跨膜域(在此情況下，胞內組分可進一步包含TGFβR1胞內突出端或突出端序列)，其中融合蛋白在由宿主細胞表現且與TGFβ多肽結合時，能夠促成宿主細胞中之IL-2訊息。
在融合蛋白之某些實施例中，(1)(i)胞外組分與SEQ ID NO.:39或41中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成；(ii)跨膜組分與SEQ ID NO.:40；SEQ ID NO.:42；SEQ ID NO.:43；或SEQ ID NO.:45中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成；及(iii)胞內組分與SEQ ID NO.:44或46中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成，且其中任擇地，融合蛋白包含與SEQ ID NOS.:5、6、9、10、13、14、17及18中之任一者中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性或包含或由該胺基酸序列組成的胺基酸序列；及/或(2)其中融合蛋白包含一或多個胺基酸取代、插入及/或缺失以減少或防止融合蛋白與人類TGFβR1或人類TGFβR2形成蛋白質二聚體，其中任擇地，該一或多個胺基酸取代、插入及/或缺失提供：(i) SEQ ID NO.:47之變異體，其中該變異體包含一至十個胺基酸插入或一至十個胺基酸缺失；(ii)添加至SEQ ID NO.:47之N端及/或C端的一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個胺基酸；(iii) SEQ ID NO.:48之變異體，其中該變異體包含一至十個胺基酸插入或一至十個胺基酸缺失；(iv)添加至SEQ ID NO.:48之N端及/或C端的一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個。
在本發明所揭露之實施例中之任一者中，IL-2訊息包含(i)-(vii)中之任一或多者：(i) IL-2R多肽之胞內部分由JAK1或JAK3磷酸化；(ii)以下中之任一或多者在宿主細胞中磷酸化：PI3K；Akt；STAT；STAT5A；STAT5B；MEK；SHC1；MEK1；MEK2；ERK1；ERK2；及STAT3 (例如使用對蛋白質之磷酸化形式具有特異性的抗體)；(iii) STAT5介導之轉錄；(iv) GRB2及SOS之募集；(v) RAS之GTP負載；(vi) Raf-ERK MAPK級聯之活化；(vii) mTORC1及/或HIF1α/HIF1β之活化。
在本發明所揭露之實施例中之任一者中，當融合蛋白由宿主細胞表現(例如在一些實施例中，宿主細胞表現二種如本文所述之融合蛋白且融合蛋白包含在TGFβ結合複合物中)且融合蛋白(或複合物)與TGFβ多肽結合時，宿主細胞執行以下中之一或多者：增殖；生長；效應分子(例如T細胞受體)之表現；醣酵解代謝；蛋白質(例如MYC、SLC7A5或二者)之表現；及膽固醇之生物合成。
在一些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含或由SEQ ID NOs.:5、6、9、10、13、14、17及18中之任一者中所列之胺基酸序列組成。
在某些實施例中，提供一種融合蛋白，其包含或由SEQ ID NOs.:7、11、15及19中之任一者中所列之胺基酸序列組成。 抗原結合蛋白質
在一些實施例中，編碼如本文所提供之融合蛋白的多核苷酸或包含或表現其之宿主細胞進一步編碼或表現抗原結合蛋白。抗原結合蛋白將包含至少一個胞外結合域，且將通常包含跨膜組分及胞內組分。在某些實施例中，胞內組分可包含訊息傳導域、共刺激域或二者。抗原結合蛋白之實例包括TCR、CAR、scTCR及其類似物。
如本文所用，「結合域」(亦稱為「結合區」或「結合部分」)係指具有與目標(例如抗原)特異性及非共價締合、聯合或組合之能力的分子或其部分(例如肽、寡肽、多肽)。結合域包括任何天然存在的、合成的、半合成的或重組產生的生物分子、分子複合物(亦即包含二個或更多個生物分子之複合物)或其他感興趣的目標的結合搭配物。可用於融合蛋白之例示性結合域包括針對與生物分子、分子複合物或其他感興趣的目標(例如DARPins、 10FNIII域)的特異性結合能力選擇的單鏈免疫球蛋白可變區(例如scTCR、scFv、scFab、scTv)、Fab、sdAb諸如奈米抗體/VHH、VNAR、受體胞外域、配體(例如細胞介素、趨化介素)或(其他)合成多肽。在某些實施例中，結合域包含scFv、scTv、scTCR或配體。在某些實施例中，結合域為嵌合的、人類的或人源化的。
在某些實施例中，結合域為或包含scFv，其包含V H域、V L域及肽連接子。在特定實施例中，scFv包含藉由肽連接子接合至V L域之V H域，其可呈V H-連接子-V L方向或V L-連接子-V H方向。
scFv可經工程改造以使得V L域之C末端藉由短肽序列連接至V H域之N末端，或反之亦然(亦即，(N)V L(C)-連接子-(N)V H(C)或(N)V H(C)-連接子-(N)V L(C)。應瞭解，scTCR或scTv或scFab亦可設計成任何N端至C端方向。
如本文所用，「特異性結合」或「對……具有特異性」係指抗原結合蛋白(例如T細胞受體或嵌合抗原受體)或結合域(或包含其之融合蛋白)與目標分子締合或聯合的親和力或K a(亦即，以1/M為單位之特定結合相互作用的平衡締合常數)等於或大於10 5M -1(其等於此締合反應之締合速率[K on]與解離速率[K off]之比率)，同時不與樣品中之任何其他分子或組分顯著締合或聯合。抗原結合蛋白或結合域可分類為「高親和力」結合蛋白或結合域或「低親和力」結合蛋白或結合域。「高親和力」結合蛋白或結合域係指K a為至少10 7M -1、至少10 8M -1、至少10 9M 1、至少10 10M -1、至少10 11M -1、至少10 12M -1或至少10 13M -1之彼等結合蛋白或結合域。「低親和力」結合蛋白或結合域係指K a為至多10 7M -1、至多10 6M -1或至多10 5M -1之彼等結合蛋白或結合域。或者，親和力可定義為特定結合相互作用之平衡解離常數(K D)，單位為M (例如，10 -5M至10 -13M)。
在其他實施例中，抗原結合蛋白可與目標抗原(例如癌症抗原，諸如ROR1、CD19、CD20、CD22、EGFR、EGFRvIII、EGP-2、EGP-40、GD2、GD3、HPV E6、HPV E7、Her2、L1-CAM、Lewis A、Lewis Y、MUC1、MUC16、PSCA、PSMA、CD56、CD23、CD24、CD30、CD33、CD37、CD44v7/8、CD38、CD56、CD123、CA125、c-MET、FcRH5、WT1、葉酸受體α、VEGF-α、VEGFR1、VEGFR2、IL-13Rα2、IL-11Rα、MAGE-A1、MAGE-A3、MAGE-A4、SSX-2、PRAME、HA-1、核心結合因子(CBF)、PSA、ephrin A2、ephrin B2、NKG2D、NY-ESO-1、TAG-72、間皮素、NY-ESO、α-胎兒蛋白、CAR15-3、hCG或β-hcG、5T4、BCMA、FAP、碳酸酐酶9、BRAF (諸如BRAF V600E)、β2M、ETA、酪胺酸酶、KRAS、NRAS、MR1或CEA抗原)特異性結合，任擇地包含在抗原:MHC複合物中。在一些實施例中，抗原結合蛋白或其結合域能夠與自體免疫性抗原，或與感染(例如病毒、細菌、真菌或寄生蟲)相關之抗原，或與神經退化性疾病相關之抗原(例如tau、α-突觸核蛋白、類澱粉蛋白β)特異性結合。
在某些實施例中，抗原結合蛋白之結合域可具有「增強的親和力」，其係指經選擇或經工程改造之受體或結合域與目標抗原之結合比野生型(或親代)結合域更強。舉例而言，增強的親和力可歸因於對目標抗原之K a(平衡締合常數)高於野生型結合域，歸因於對目標抗原之K d(解離常數)小於野生型結合域，歸因於對目標抗原之解離速率(k off)小於野生型結合域，或其組合。
已知多種分析法用於鑑別特異性結合特定目標之結合域以及確定結合域或抗原結合蛋白親和力，諸如西方墨點法、ELISA、分析型超速離心、光譜法、等溫滴定量熱法(ITC)及表面電漿子共振(Biacore®)分析(參見例如Scatchard等人, Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660, 1949；Wilson, Science 295:2103, 2002；Wolff等人, Cancer Res. 53:2560, 1993；及美國專利第5,283,173號、第5,468,614號或等效者)。亦已知表觀親和力或相對親和力之分析法。在某些實例中，對抗原結合蛋白之表觀親和力係藉由評定與各種濃度之四聚體的結合來量測，例如藉由使用經標記四聚體之流動式細胞測量術。在一些實例中，融合蛋白之表觀K D係使用經標記四聚體之2倍稀釋液在一系列濃度下量測，接著藉由非線性回歸確定結合曲線，表觀K D確定為產生半最大結合之配體濃度。
在某些實施例中，除結合域外，抗原結合蛋白之胞外組分包含：(i)免疫球蛋白(例如IgG，諸如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4) CH1域或其功能性變異體或部分；(ii)免疫球蛋白(例如IgG，諸如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4) CH2域或其功能性變異體或部分；(iii)免疫球蛋白(例如IgG，諸如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4) CH3域或其功能性變異體或部分；(iv)免疫球蛋白(例如IgG，諸如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4) CL域或其功能性變異體或部分；(v) CD8胞外域或其功能性變異體或部分；(vi) CD28胞外域或其功能性變異體或部分；(vii) CD4胞外域或其功能性變異體或部分；(viii) IgG (例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)鉸鏈(例如包含或由SEQ ID NO: 71之胺基酸序列組成)或其功能性變異體或部分；(ix) II型C-凝集素域間(柄)區或其功能性變異體或部分；(x)分化簇(CD)分子柄區或其功能性變異體；(xi)連接子，任擇地為甘胺酸-絲胺酸連接子，包含約一至約十個重複的Gly xSer y，其中X及Y各自獨立地為一至十；或(xii) (i)-(xi)之任何組合。一般而言，(i)-(xii)中之一或多者將安置於跨膜域與結合域之間。應瞭解，在抗原結合蛋白之背景下，CH1域、CH2域、CH3域、CL域、CD8胞外域、CD28胞外域、CD4胞外域、II型C-凝集素域間(柄)區、分化簇(CD)分子柄區或IgG鉸鏈(例如連接子，如下文進一步論述)之功能性變異體或其部分具有足夠的長度、形狀及/或可撓性以使結合域遠離表現抗原結合蛋白之宿主細胞的表面，從而使宿主細胞與目標細胞之間能夠適當接觸、目標(例如抗原)結合及宿主細胞活化。在某些實施例中，胞外域包含安置於結合域與跨膜域之間(且任擇地但不一定連接)的連接子。在一些實施例中，連接子包含鉸鏈區或其一部分，任擇地為IgG鉸鏈胺基酸序列。
本揭露內容之抗原結合蛋白的胞外組分及胞內組分藉由跨膜域連接。至少在抗原結合蛋白之情況下，「跨膜域」為可插入或跨越細胞膜之跨膜蛋白的一部分。跨膜域之三維結構在細胞膜中為熱力學穩定的且長度一般介於約15個胺基酸至約30個胺基酸。跨膜域之結構可包含α螺旋、β筒、β摺疊、β螺旋或其任何組合。在某些實施例中，抗原結合蛋白之跨膜域包含或來源於已知的跨膜蛋白(例如CD4跨膜域、CD8跨膜域、CD27跨膜域、CD28跨膜域或其任何組合)，且可為其功能性部分或變異體；亦即保留或實質上保留在細胞膜中熱力學穩定的且一般具有約15個胺基酸至約30個胺基酸之長度的三維結構。
在某些實施例中，抗原結合蛋白之胞外組分進一步包含安置於結合域與跨膜域之間(且任擇地但不一定連接)的連接子。如本文所用，當提及抗原結合蛋白之連接結合域及跨膜域的組分時，「連接子」可為具有約二個胺基酸至約500個胺基酸之胺基酸序列，其可為由連接子連接之二個區、域、模體、片段或模組之間的構形運動提供可撓性及空間。舉例而言，本揭露內容之連接子可使結合域遠離表現抗原結合蛋白之宿主細胞的表面，以使宿主細胞與目標細胞之間能夠適當接觸、目標(例如抗原)結合及宿主細胞活化(Patel等人, Gene Therapy 6: 412-419, 1999)。連接子長度可基於選定的目標分子、選定的結合抗原決定基或抗原結合域大小及親和力變化以使抗原識別達到最大(參見例如Guest等人, J. Immunother. 28:203-11, 2005；PCT公開案第WO 2014/031687號)。例示性連接子包括具有甘胺酸-絲胺酸胺基酸鏈之連接子，該鏈具有一至約十個重複的Gly xSer y，其中x及y各自獨立地為0至10之整數，其限制條件為x及y不皆為0 (例如(Gly 4Ser) 2；(Gly 3Ser) 2；Gly 2Ser；或其組合，諸如(Gly 3Ser) 2Gly 2Ser)。在一些實施例中，胞外域包含甘胺酸-絲胺酸連接子，其不包含在結合域中；例如安置於跨膜域與結合域之間(無論結合域是否亦包含此類連接子)。舉例而言，在某些實施例中，抗原結合蛋白包含胞外域，其包含安置於跨膜域與結合域之間的第一甘胺酸-絲胺酸連接子，且結合域可包含scFv或scTCR或scTv或scFab，其包含第二甘胺酸-絲胺酸連接子，其中第一及第二甘胺酸-絲胺酸連接子可為相同或不同的甘胺酸-絲胺酸連接子且可具有相同或不同的長度。
用於抗原結合蛋白之連接子亦包括免疫球蛋白恆定區(亦即任何同型之CH1、CH2、CH3或CL)及其部分及變異體。在某些實施例中，連接子包含CH3域、CH2域或二者。在某些實施例中，連接子包含CH2域及CH3域。在其他實施例中，CH2域及CH3域各自為相同的同型。在特定實施例中，CH2域及CH3域為IgG4或IgG1同型。在其他實施例中，CH2域及CH3域各自為不同的同型。在特定實施例中，CH2包含N297Q突變。在不希望受理論束縛的情況下，咸信具有N297Q突變之CH2域不結合FcγR (參見例如Sazinsky等人, PNAS 105(51):20167 (2008))。在某些實施例中，連接子包含人類免疫球蛋白恆定區或其一部分。在某些實施例中，連接子包含來自CD4之胞外域或其一部分。在一些實施例中，連接子包含來自CD8之胞外域或其一部分。
在本文所述之任一實施例中，連接子可包含鉸鏈區或其一部分。鉸鏈區為長度及序列可變之可撓性胺基酸聚合物(通常富含脯胺酸及半胱胺酸胺基酸)，且連接免疫球蛋白之較大且較不可撓的區域。舉例而言，鉸鏈區連接抗體之Fc及Fab區且連接TCR之恆定區及跨膜區。在某些實施例中，連接子包含免疫球蛋白恆定區或其一部分及鉸鏈區或其一部分。在某些實施例中，連接子包含如本文所述之甘胺酸-絲胺酸連接子。
在某些實施例中，抗原結合蛋白之胞內組分包含效應子域或其功能性部分或變異體。
至少在抗原結合蛋白之上下文中，「效應子域」為抗原結合蛋白之胞內部分或域，當接受適當訊息時，可直接或間接地促進細胞中之生物或生理反應。在某些實施例中，生物生理反應為或包含免疫反應。在某些實施例中，效應子域來自蛋白質或其部分或蛋白質複合物，當結合時或當蛋白質或其部分或蛋白質複合物直接與目標分子結合且觸發來自效應子域的訊息時接收訊息。
當效應子域含有一或多個訊息傳導域或模體時，諸如胞內基於酪胺酸之活化模體(ITAM)，諸如共刺激分子中發現之彼等者，效應子域可直接促進細胞反應。在不希望受理論束縛的情況下，咸信ITAM對於配體與T細胞受體或包含T細胞效應子域之融合蛋白接合後的T細胞活化很重要。在某些實施例中，胞內組分或其功能性部分包含ITAM。
可包括在本揭露內容之抗原結合蛋白中的例示性效應域包括來自CD3ζ、CD25、CD79A、CD79B、CARD11、DAP10、FcRα、FcRβ、FcRγ、Fyn、HVEM、ICOS、Lck、LAG3、LAT、LRP、NKG2D、NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3、NOTCH4、Wnt、ROR2、Ryk、SLAMF1、Slp76、pTα、TCRα、TCRβ、TRIM、Zap70、PTCH2或其功能性部分或變異體，或其任何組合之效應域。
在某些實施例中，胞內組分進一步包含共刺激域或其功能性部分或變異體，其中共刺激域或其功能性部分或變異體任擇地安置於效應子域與跨膜域之間。
在某些實施例中，抗原結合蛋白之胞內組分包含選自以下之共刺激域或其功能性部分：CD27、CD28、4-1BB (CD137)、OX40 (CD134)、CD2、CD5、ICAM-1 (CD54)、LFA-1 (CD11a/CD18)、ICOS (CD278)、GITR、CD30、CD40、BAFF-R、HVEM、LIGHT、MKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3、與CD83特異性結合之配體，或其功能性變異體，或其任何組合。在某些實施例中，胞內組分包含CD28共刺激域或其功能性部分或變異體(其可任擇地包括原生CD28蛋白之位置186-187處的LL→GG突變(參見Nguyen等人, Blood 102:4320, 2003))、4-1BB共刺激域或其功能性部分或變異體，或二者。
在某些實施例中，抗原結合蛋白之胞內組分包含CD3ζ胞內域或其功能性(例如訊息傳導)部分，或其功能性變異體。在某些實施例中，抗原結合蛋白之胞內組分包含CD27胞內域或其功能性(例如訊息傳導)部分，或其功能性變異體。在某些實施例中，抗原結合融合蛋白之胞內組分包含CD28胞內域或其功能性(例如訊息傳導)部分，或其功能性變異體。在其他實施例中，抗原結合蛋白之胞內組分包含4-1BB胞內域或其功能性(例如訊息傳導)部分，或其功能性變異體。在某些實施例中，抗原結合蛋白之胞內組分包含OX40胞內域或其功能性(例如訊息傳導)部分，或其功能性變異體。在某些實施例中，抗原結合蛋白之胞內組分包含CD2胞內域或其功能性(例如訊息傳導)部分，或其功能性變異體。在某些實施例中，抗原結合蛋白之胞內組分包含CD5胞內域或其功能性(例如訊息傳導)部分，或其功能性變異體。在某些實施例中，抗原結合蛋白之胞內組分包含ICAM-1胞內域或其功能性(例如訊息傳導)部分，或其功能性變異體。在某些實施例中，抗原結合蛋白之胞內組分包含LFA-1胞內域或其功能性(例如訊息傳導)部分，或其功能性變異體。在某些實施例中，抗原結合蛋白之胞內組分包含ICOS胞內域或其功能性(例如訊息傳導)部分，或其功能性變異體。
在某些實施例中，抗原結合蛋白之胞外組分、結合域、連接子、跨膜域、胞內組分、效應子域或其功能性部分或變異體、或共刺激域或其功能性部分或變異體中之一或多者可(或融合蛋白可)進一步包含一或多個接合點胺基酸。「接合點胺基酸」或「接合點胺基酸殘基」係指蛋白質之二個相鄰的域、模體、區、模組或片段之間，諸如在結合域與相鄰連接子之間、在跨膜域與相鄰胞外或胞內域之間、或在連接二個域、模體、區、模組或片段之連接子的一端或二端上(例如在連接子與相鄰結合域之間或在連接子與相鄰鉸鏈之間)的一或多個(例如約2-20個)胺基酸殘基。接合點胺基酸可能由融合蛋白之構築體設計產生(例如，在構築編碼融合蛋白之多核苷酸期間使用限制酶位點或自裂解肽序列產生的胺基酸殘基)。舉例而言，融合蛋白之跨膜域可在胺基末端、羧基末端或二者具有一或多個接合點胺基酸。
蛋白質標籤為獨特的肽序列，其貼附或基因融合至感興趣的蛋白質或作為其一部分，且可由例如異源或非內源的同源結合分子或受質(例如受體、配體、抗體、碳水化合物或金屬基質)或本揭露內容之融合蛋白識別或結合。蛋白質標籤可用於偵測、鑑別、分離、追蹤、純化、富集、靶向或生物或化學修飾感興趣的加標籤蛋白質，特別是當加標籤蛋白質為細胞蛋白質或細胞之異質群體(例如，如周邊血液之生物樣本)的一部分時。在某些實施例中，本揭露內容之融合蛋白或抗原結合蛋白的蛋白質標籤包含Myc標籤、His標籤、Flag標籤、Xpress標籤、Avi標籤、調鈣蛋白標籤、聚麩胺酸標籤、HA標籤、Nus標籤、S標籤、X標籤、SBP標籤、Softag、V5標籤、CBP、GST、MBP、GFP、硫氧還蛋白標籤、Strep標籤(例如Strep-Tag；Strep-Tag II；及其變異體，包括例如Schmidt及Skerra, Nature Protocols, 2:1528-1535 (2007)；美國專利第7,981,632號；及PCT公開案第WO 2015/067768號中所揭露之彼等者、strep標籤肽、含有step標籤肽之多肽及其序列以引用的方式併入本文中)或其任何組合。
在本文所述之任一實施例中，抗原結合蛋白可為或可包含CAR或TCR。製造融合蛋白(包括CAR)之方法描述於例如美國專利第6,410,319號；美國專利第7,446,191號；美國專利公開案第2010/065818號；美國專利第8,822,647號；PCT公開案第WO 2014/031687號；美國專利第7,514,537號；Brentjens等人, 2007, Clin. Cancer Res. 13:5426及Walseng等人, Scientific Reports 7:10713, 2017中，其技術以引用之方式併入本文中。生產經工程改造之TCR的方法描述於例如Bowerman等人 , Mol. Immunol., 46(15):3000 (2009)中，其技術以引用之方式併入本文中。
在某些實施例中，TCR包含單鏈TCR (scTCR)，其包含二個TCR可變域(例如Vα及Vβ域)，但僅包含單個TCR恆定域(例如Cα或Cβ)。在某些實施例中，TCR或嵌合抗原受體之抗原結合片段為嵌合的(例如包含來自多於一個供體或物種之胺基酸殘基或模體)、人源化的(例如包含來自源非人類蛋白質之胺基酸序列中的改變，以降低人類免疫原性之風險)或人類的。
舉例而言，可用於分離及純化重組產生的可溶性融合蛋白及/或抗原結合蛋白之方法可包括自適合的將重組可溶性融合蛋白分泌至培養基中之宿主細胞/載體系統獲得上清液，且隨後使用市售過濾器濃縮培養基。濃縮後，濃縮物可應用於單一適合的純化基質或一系列適合的基質，諸如親和基質或離子交換樹脂。可採用一或多個逆相HPLC步驟進一步純化重組多肽。當自天然環境分離免疫原時，亦可採用此等純化方法。用於大規模生產一或多種本文所述之分離/重組可溶性融合蛋白的方法包括分批細胞培養，其經監測及控制以維持適當的培養條件。可溶性融合蛋白之純化可根據本文所述及此項技術中已知的方法進行，且符合國內及國外監管機構的法律及指導原則。
如本文所述之抗原結合蛋白可根據大量此項技術公認的分析宿主細胞活性之方法中之任一者進行功能表徵。舉例而言，在宿主T細胞之情況下，抗原結合蛋白可藉由測定T細胞結合、活化或誘導以及測定目標(例如抗原)特異性之T細胞反應來進行功能表徵。實例包括測定T細胞增殖、T細胞細胞介素釋放、目標特異性T細胞刺激、MHC限制性T細胞刺激、CTL活性(例如藉由偵測預負載目標細胞之 51Cr或銪釋放)、T細胞表型標記表現之變化及其他T細胞功能量測。進行此等及類似分析法之程序可見於例如Lefkovits ( Immunology Methods Manual: The Comprehensive Sourcebook of Techniques, 1998)。亦參見 Current Protocols in Immunology；Weir, Handbook of Experimental Immunology, Blackwell Scientific, Boston, MA (1986)；Mishell及Shigii (編) Selected Methods in Cellular Immunology, Freeman Publishing, San Francisco, CA (1979)；Green及Reed, Science281:1309 (1998)及其中所引用之參考文獻。其中某些分析法可用於評定本揭露內容之TGFβ結合融合蛋白或包含其之宿主細胞的活性。
細胞介素之位準可根據本文所述及此項技術中實踐之方法來測定，包括例如ELISA、ELISPOT、胞內細胞介素染色及流動式細胞測量術及其組合(例如胞內細胞介素染色及流動式細胞測量術)。由免疫反應之目標特異性誘發或刺激引起的免疫細胞增殖及純系擴增可藉由分離淋巴細胞，諸如周邊血細胞樣本中之循環淋巴細胞或來自淋巴結之細胞；用抗原刺激細胞；及量測細胞介素產生、細胞增殖及/或細胞生存力，諸如藉由併入氚化胸苷或非放射性分析法，諸如MTT分析法及其類似者來測定。本文所述之免疫原對Th1免疫反應與Th2免疫反應之間平衡的影響可例如藉由測定Th1細胞介素，諸如IFN-γ、IL-12、IL-2及TNF-β，以及2型細胞介素，諸如IL-4、IL-5、IL-9、IL-10及IL-13之位準來檢查。 多核苷酸、載體及宿主細胞
在某些態樣中，提供編碼如本文所述之融合蛋白中之任一或多者及任擇的抗原結合蛋白之核酸分子(亦稱為多核苷酸)。編碼本揭露內容之所需融合蛋白的多核苷酸可插入適當載體(例如病毒載體或非病毒質體載體)中，以引入感興趣的宿主細胞(例如免疫細胞，諸如T細胞)中。多核苷酸可進一步編碼如本文所揭露之額外融合蛋白，及/或可進一步編碼抗原結合蛋白，及/或可進一步編碼標記。
在一些實施例中，多核苷酸編碼二個融合蛋白，且編碼包含TGFβRII胞外域或其功能性部分或變異體之融合蛋白之序列安置於編碼包含TGFβRI胞外域或其功能性部分或變異體之融合蛋白之序列的5'，且任擇地安置於由該多核苷酸編碼之任何其他多肽的5'。在不希望受理論束縛的情況下，將編碼TGFβRII衍生之融合蛋白的順反子置於多順反子構築體中之第一(最5')位置可有助於此順反子在構築體中之所有順反子中的表現最高；由於TGFβRII具有更高親和力(與TGFβRI對TGFβ相比)，TGFβRII衍生之融合蛋白的表面表現增加可提供對TGFβ結合之改良的敏感性及/或改良的IL-2R訊息轉導。
例示性標記(例如，用於用如本文所提供之多核苷酸轉導細胞)包括綠色螢光蛋白、人類CD2之胞外域、截短的人類EGFR (huEGFRt，(參見Wang等人, Blood 118:1255, 2011)、截短的人類CD19 (huCD19t)；截短的人類CD34 (huCD34t)；或截短的人類NGFR (huNGFRt)。在某些實施例中，經編碼標記包含EGFRt、CD19t、CD34t或NGFRt。
在本發明所揭露之實施例中之任一者中，編碼(融合或抗原結合)蛋白之多核苷酸可進一步包含編碼標記之多核苷酸及編碼自裂解多肽之多核苷酸，其中編碼自裂解多肽之多核苷酸位於編碼(融合或抗原結合)蛋白之多核苷酸與編碼標記之多核苷酸之間(或編碼不同融合蛋白之多核苷酸之間，或編碼抗原結合蛋白之組分(例如TCR鏈)之多核苷酸之間，或編碼融合蛋白之多核苷酸與編碼抗原結合蛋白或其組分之多核苷酸之間)。舉例而言，當編碼蛋白質之多核苷酸、編碼標記之多核苷酸及自裂解多肽由宿主細胞表現時，(融合或抗原結合)蛋白及標記將作為獨立的分子存在於宿主細胞表面上。在某些實施例中，自裂解多肽包含來自豬捷申病毒-1 (P2A、明脈扁刺蛾病毒(T2A、馬鼻炎A病毒(E2A)、口蹄疫病毒(F2A)、泰勒病毒( Theilovirus)及腦心肌炎病毒)之2A肽。2A肽之例示性核酸及胺基酸序列載於例如Kim等人 ( PLOS One6:e18556, 2011，其2A核酸及胺基酸序列以全文引用之方式併入本文中；亦以引用之方式併入本文中為Hill等人, Nucleic Acids Research 49:20 (2021)以及Lima及Lanza, Virus 13(11):2160 (2021)，特別是其中表1中所述之2A及2A樣肽)。在一些實施例中，多核苷酸編碼N端及/或C端且連接至2A (或2A樣)肽的連接子序列。此類連接子序列之實例為胺基酸序列GSG或胺基酸序列SGSG。
在本發明所揭露之實施例中之任一者中，由本揭露內容之多核苷酸編碼的自裂解多肽包含P2A、T2A、E2A或F2A。在某些實施例中，自裂解多肽與連接子(例如GSG)融合，諸如在自裂解多肽之N端。
在一些實施例中，多核苷酸編碼弗林蛋白酶裂解位點。弗林蛋白酶裂解序列(亦稱為弗林蛋白酶識別位點)可具有最小裂解位點R-X-X-R (SEQ ID NO.:53)。在一些實施例中，弗林蛋白酶裂解序列具有最小裂解位點R-X-K/R-R (SEQ ID NO.:23)。在一些實施例中，弗林蛋白酶裂解序列具有最小裂解位點RAKR (SEQ ID NO.:54)或RARR (SEQ ID NO.:55)。在某些實施例中，編碼弗林蛋白酶裂解位點之多核苷酸安置於編碼自裂解肽(與任擇的連接子)之多核苷酸的上游(5')。在特定實施例中，多核苷酸在5'至3'方向上包含編碼本揭露內容之融合蛋白的多核苷酸、編碼弗林蛋白酶裂解位點之多核苷酸、編碼(任擇的連接子及)自裂解多肽之多核苷酸。在不希望受理論束縛的情況下，此類排列可避免、減少或使融合蛋白C末端(例如IL-2Rγ或IL-2Rγ胞內域C端)之不必要的胺基酸減至最少，且可藉由融合蛋白在宿主細胞中提供改良的IL-2訊息轉導。
在本文所述之任一實施例中，本揭露內容之多核苷酸(例如編碼融合蛋白之多核苷酸或編碼標記之多核苷酸或編碼抗原結合蛋白之多核苷酸)可經密碼子最佳化以在宿主細胞中表現(參見例如Scholten等人, Clin. Immunol. 119:135-145 (2006)。可使用已知的技術及工具進行密碼子最佳化，例如使用GenScript® OptimumGene TM工具或GeneArt TM/GeneOptimizer TM工具。經密碼子最佳化之序列包括經部分密碼子最佳化之序列(亦即一或多個密碼子經最佳化以在宿主細胞中表現)及經完全密碼子最佳化之序列。
在某些實施例中，編碼融合蛋白或抗原結合蛋白之多核苷酸進一步包含編碼前導或訊息序列(亦稱為訊息肽)之多核苷酸。訊息肽使新合成的多肽靶向至其細胞內部或外部之適當位置。訊息肽可在定位或分泌完成期間或完成後自多肽移除。具有訊息肽之多肽在本文中稱為「前蛋白」，而移除訊息肽之多肽在本文中稱為「成熟」蛋白或多肽。訊息肽可位於所編碼之多肽的N末端或C末端。例示性前導胺基酸序列來自GM-CSF。其他前導胺基酸序列包括來自TGFβRI (SEQ ID NO.:21)、TGFβRII (SEQ ID NO.:22)、CD8α、CD8β、鼠類IgG、κ輕鏈或其類似物之彼等胺基酸序列。某些訊息肽及其特徵描述於Owji等人, European Journal of Cell Biology 97(6):422-441 (2018)及Ling等人 Front. Immunol.(2020) doi.org /10.3389/fimmu.2020.604318中；其中的訊息肽以引用的方式併入本文中。
在其他態樣中，提供表現構築體，其中表現構築體包含可操作地連接於表現控制序列(例如啟動子)之本揭露內容之多核苷酸。例示性啟動子序列包括EF1啟動子或MSCV U3啟動子或MNDU3啟動子。在某些實施例中，表現構築體包含於載體中。例示性載體可包含能夠運輸其所連接之另一多核苷酸或能夠在宿主生物體中複製的多核苷酸。載體之一些實例包括質體、病毒載體、黏質體及其他。一些載體可能能夠在引入其之宿主細胞中自主複製(例如具有細菌複製起點之細菌載體及游離型哺乳動物載體)，而其他載體可整合至宿主細胞之基因體中，或在引入宿主細胞中後促進多核苷酸插入物之整合，從而與宿主基因體一起複製(例如慢病毒載體、反轉錄病毒載體)。此外，一些載體能夠指導其可操作地連接之基因的表現(此等載體可稱為「表現載體」)。根據相關實施例，應進一步理解，若向個體共投予一或多種藥劑(例如編碼如本文所述之融合蛋白的多核苷酸)，則各藥劑可存在於獨立的或相同的載體中，且多個載體(各含有不同的藥劑或相同的藥劑)可引入細胞或細胞群中或向個體投予。
在某些實施例中，本揭露內容之多核苷酸可操作地連接於載體之某些元件。舉例而言，可操作地連接實現所連接之編碼序列之表現及加工所需的多核苷酸序列。表現控制序列可包括適當的轉錄起始、終止、啟動子及強化子序列；有效的RNA加工訊息，諸如剪接及聚腺苷酸化訊息；穩定細胞質mRNA之序列；提高轉譯效率之序列(亦即Kozak共同序列)；增強蛋白質穩定性之序列；及可能增強蛋白質分泌之序列。若表現控制序列與感興趣的基因鄰接及表現控制序列以反式作用或以一定距離作用以控制感興趣的基因，則表現控制序列可為可操作地連接的。
在某些實施例中，載體包含質體載體或病毒載體(例如選自慢病毒載體或γ-反轉錄病毒載體之載體)。病毒載體包括反轉錄病毒；腺病毒(例如腺相關病毒)；微小病毒；冠狀病毒；負股RNA病毒，諸如正黏病毒(例如流感病毒)、棒狀病毒(例如狂犬病及水泡性口炎病毒)、副黏病毒(例如麻疹及仙台)；正股RNA病毒，諸如微小RNA病毒及α病毒；及雙股DNA病毒，包括腺病毒、疱疹病毒(例如1型及2型單純疱疹病毒、埃-巴二氏病毒(Epstein-Barr virus)、細胞巨大病毒)及痘病毒(例如牛痘、禽痘及金絲雀痘)。其他病毒包括例如諾沃克病毒(Norwalk virus)、披衣病毒、黃病毒、呼腸孤病毒、乳多泡病毒、嗜肝DNA病毒及肝炎病毒。反轉錄病毒之實例包括禽類白血病性肉瘤、哺乳動物C型病毒、哺乳動物B型病毒、哺乳動物D型病毒、HTLV-BLV群、慢病毒、泡沫病毒(Coffin, J. M., Retroviridae: The viruses and their replication, Fundamental Virology, 第三版, B. N. Fields等人編, Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, 1996)。
「反轉錄病毒」為具有RNA基因體之病毒，該基因體使用反轉錄酶反轉錄為DNA，隨後反轉錄的DNA併入宿主細胞基因體中。「γ反轉錄病毒」係指反轉錄病毒科之一屬。γ反轉錄病毒之實例包括小鼠幹細胞病毒、鼠類白血病病毒、貓白血病病毒、貓肉瘤病毒及禽類網狀內皮細胞增生病毒。
如本文所用，「慢病毒載體」意謂用於基因遞送之基於HIV之慢病毒載體，其可為整合的或非整合的，具有相對較大的封裝能力，且可轉導一系列不同的細胞類型。慢病毒載體通常在將三個(封裝、包膜及轉移)或更多個質體瞬時轉染至生產細胞中之後產生。與HIV一樣，慢病毒載體經由病毒表面醣蛋白與細胞表面上之受體的相互作用而進入目標細胞。在進入後，病毒RNA進行反轉錄，此係由病毒反轉錄酶複合物介導。反轉錄之產物為雙股線性病毒DNA，其為病毒整合至受感染細胞之DNA中的受質。
在某些實施例中，病毒載體可為γ反轉錄病毒，例如莫洛尼鼠類白血病病毒(Moloney murine leukemia virus，MLV)衍生之載體。在其他實施例中，病毒載體可為更複雜的反轉錄病毒衍生之載體，例如慢病毒衍生之載體。HIV-1衍生之載體屬於此類別。其他實例包括衍生自HIV-2、FIV、馬類感染性貧血病毒、SIV及梅迪-威司奈病病毒(Maedi-Visna virus) (綿羊慢病毒)之慢病毒載體。使用反轉錄病毒及慢病毒病毒載體及封裝細胞以用含有CAR轉殖基因之病毒粒子轉導哺乳動物宿主細胞的方法為此項技術中已知的且先前已描述於例如：美國專利8,119,772；Walchli等人, PLoS One 6:327930, 2011；Zhao等人, J. Immunol. 174:4415, 2005；Engels等人, Hum. Gene Ther. 14:1155, 2003；Frecha等人, Mol. Ther. 18:1748, 2010；及Verhoeyen等人, Methods Mol. Biol. 506:97, 2009。反轉錄病毒及慢病毒載體構築體及表現系統亦為可商購的。其他病毒載體亦可用於多核苷酸遞送，包括DNA病毒載體，包括例如基於腺病毒之載體及基於腺相關病毒(AAV)之載體；衍生自單純疱疹病毒(HSV)之載體，包括擴增子載體、複製缺陷型HSV及減毒HSV (Krisky等人, Gene Ther. 5:1517, 1998)。
開發用於基因療法用途之其他載體亦可與本揭露內容之組成物及方法一起使用。此類載體包括衍生自桿狀病毒及α-病毒之載體。(Jolly, D J. 1999. Emerging Viral Vectors. pp 209-40 in Friedmann T. ed. The Development of Human Gene Therapy. New York: Cold Spring Harbor Lab)，或質體載體(諸如睡美人或其他轉位子載體)。
當病毒載體基因體包含多個欲在宿主細胞中作為單獨轉錄物表現之多核苷酸時，病毒載體亦可在二個(或更多個)轉錄物之間包含允許雙順反子或多順反子表現的額外序列。在病毒載體中使用的此類序列之實例包括內部核糖體進入位點(IRES)、弗林蛋白酶裂解位點、病毒2A肽或其任何組合。
用於基因工程改造及生產感興趣的融合蛋白的表現載體的構築可藉由使用此項技術中已知的任何適合的分子生物學工程改造技術來實現。為了獲得高效轉錄及轉譯，各重組表現構築體中之多核苷酸包括至少一個適當的表現控制序列(亦稱為調節序列)，諸如前導序列且尤其可操作地連接於編碼免疫原之核苷酸序列的啟動子。
在某些實施例中，本揭露內容之多核苷酸用於轉染/轉導宿主細胞(例如T細胞)。在某些實施例中，編碼及/或表現如本文所揭露之融合蛋白的宿主細胞可用於過繼轉移療法(例如，靶向癌症抗原或靶向表現標籤肽之過繼轉移細胞)。已描述用所需核酸轉染/轉導T細胞之方法(例如美國專利申請公開案第2004/0087025號)，以及使用具有所需目標特異性之T細胞的過繼轉移程序(例如Schmitt等人, Hum. Gen. 20:1240, 2009；Dossett等人, Mol. Ther. 17:742, 2009；Till等人, Blood 112:2261, 2008；Wang等人, Hum. Gene Ther. 18:712, 2007；Kuball等人, Blood 109:2331, 2007；US 2011/0243972；US 2011/0189141；Leen等人, Ann. Rev. Immunol. 25:243, 2007)，從而考慮基於本文中之教示，包括針對本揭露內容之融合蛋白之教示，使此等方法適應於本發明所揭露之實施例。
在某些實施例中，宿主細胞為造血前驅細胞或人類免疫系統細胞。如本文中所提及，「造血前驅細胞」為可來源於造血幹細胞或胎兒組織且能夠進一步分化為成熟細胞類型(例如免疫系統細胞)的細胞。例示性造血前驅細胞包括具有CD24 LoLin -CD117 +表型之彼等細胞或在胸腺中發現之彼等細胞(稱為祖胸腺細胞)。
如本文所用，「免疫系統細胞」意謂免疫系統之任何細胞，其起源於骨髓中之造血幹細胞，其產生二個主要譜系：骨髓前驅細胞(其產生骨髓細胞，諸如單核球、巨噬細胞、樹突狀細胞、巨核細胞及顆粒球)及淋巴前驅細胞(其產生淋巴細胞，諸如T細胞、B細胞、自然殺手(NK)細胞及NK-T細胞)。例示性免疫系統細胞包括CD4 +T細胞、CD8 +T細胞、CD4 -CD8 -雙陰性T細胞、γδ T細胞、調節性T細胞、幹細胞記憶T細胞、自然殺手細胞(例如NK細胞或NK-T細胞)、B細胞及樹突狀細胞。巨噬細胞及樹突狀細胞可稱為「抗原呈現細胞」或「APC」，其為當與肽複合之APC表面上之主要組織相容性複合體(MHC)受體與T細胞之表面上的TCR相互作用時可活化T細胞的特化細胞。
「T細胞」或「T淋巴球」為一種在胸腺中成熟且產生T細胞受體(TCR)之免疫系統細胞，但應理解，原生TCR之表現經(例如人工)抑制或消除之T細胞仍為T細胞。T細胞可為初始的(未暴露於抗原；與T CM相比，CD62L、CCR7、CD28、CD3、CD127及CD45RA之表現增加且CD45RO之表現減少)、記憶T細胞(T M) (經歷抗原及長期的)及效應細胞(經歷抗原、細胞毒性)。T M可進一步分成中央記憶T細胞(T CM，與初始T細胞相比，CD62L、CCR7、CD28、CD127、CD45RO及CD95之表現增加且CD54RA之表現減少)及效應記憶T細胞(T EM，與初始T細胞或T CM相比，CD62L、CCR7、CD28、CD45RA之表現減少且CD127之表現增加)亞群。
效應T細胞(T E)係指經歷抗原之CD8 +細胞毒性T淋巴細胞，其與T CM相比，CD62L、CCR7、CD28之表現減少且對顆粒酶及穿孔蛋白呈陽性。輔助T細胞(T H)為CD4 +細胞，其藉由釋放細胞介素影響其他免疫細胞之活性。CD4 +T細胞可活化及抑制適應性免疫反應，而彼等二種功能中之哪一者經誘導將取決於其他細胞及訊息之存在。T細胞可使用已知技術收集，且各種亞群或其組合可藉由已知技術富集或耗乏，諸如藉由與抗體之親和力結合、流動式細胞測量術或免疫磁性選擇。其他例示性T細胞包括調節性T細胞，諸如CD4 +CD25 +(Foxp3 +)調節性T細胞及Treg17細胞，以及Tr1、Th3、CD8 +CD28 -及Qa-1限制性T細胞。
「T細胞譜系之細胞」係指顯示T細胞或其前體或前驅細胞之至少一種表型表徵的細胞，該表型特徵將細胞與其他淋巴細胞以及紅血球系或骨髓譜系之細胞區分開來。此類表型特徵可包括表現一或多種T細胞特有的蛋白質(例如CD3 +、CD4 +、CD8 +)，或T細胞特有的生理學、形態學、功能性或免疫學特徵。舉例而言，T細胞譜系之細胞可為定型為T細胞譜系之前驅細胞；CD25 +未成熟及不活化的T細胞；已經歷CD4或CD8譜系定型之細胞；CD4 +CD8 +雙陽性胸腺細胞前驅細胞；單陽性CD4 +或CD8 +；TCRαβ或TCR γδ；或成熟及功能性或活化T細胞。
在某些實施例中，免疫系統細胞為CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、CD4- CD8-雙陰性T細胞、γδ T細胞、自然殺手細胞(例如NK細胞或NK-T細胞)、樹突狀細胞、B細胞或其任何組合。在某些實施例中，免疫系統細胞為CD4+ T細胞。在某些實施例中，T細胞為初始T細胞、中央記憶T細胞、效應記憶T細胞、幹細胞記憶T細胞或其任何組合。
宿主細胞可包括可接受載體或併入核酸或表現蛋白質之任何個別細胞或細胞培養物。該術語亦涵蓋宿主細胞之後代，無論基因上或表型上是否相同或不同。適合的宿主細胞可視載體而定且可包括哺乳動物細胞、動物細胞、人類細胞、猿猴細胞、昆蟲細胞、酵母細胞及細菌細胞。此等細胞可藉由使用病毒載體、經由磷酸鈣沈澱轉型、DEAE-聚葡萄糖、電穿孔、顯微注射或其他方法誘導併入載體或其他材料。參見例如Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual第2版 (Cold Spring Harbor Laboratory, 1989)。
在上述實施例中之任一者中，包含編碼融合蛋白之異源多核苷酸的宿主細胞可為免疫細胞，其經修飾以減少或消除一或多個編碼多肽產物之內源基因的表現，該多肽產物選自TGFβR1基因座、TGFβR2基因座、PD-1基因座、CTLA4基因座、LAT基因座、TIM-3基因座、PD-L1基因座、TIGIT基因座、A2AR基因座、Fas基因座、FasL基因座、B7-H3基因座、B7-H4基因座、IDO基因座、VISTA基因座、SIGLEC7基因座、SIGLEC9基因座、TRAC基因座、TRBC基因座、T細胞受體基因座、MHC (例如HLA)基因座、CBLB基因座、RASA2基因座、UBASH3A基因座、CISH基因座或其任何組合。
在不希望受理論束縛的情況下，某些內源性表現的免疫細胞蛋白可下調經修飾之免疫宿主細胞(例如PD-1、LAG-3、CTLA4、TIGIT、CBLB、RASA2、UBASH3A、CISH、Fas)的免疫活性，或可與本揭露內容之融合蛋白競爭宿主細胞之表現及/或與TGFβ結合及/或可引起不希望的TGFβ訊息傳導(例如TGFβR1及/或TGFβRII)，或可干擾本揭露內容之抗原結合蛋白的結合活性且干擾宿主細胞與表現抗原之目標細胞的結合，或其任何組合。此外，在細胞轉移療法中使用的供體免疫細胞上表現之內源蛋白(例如免疫宿主細胞蛋白，諸如HLA)可能被同種異體受體識別為外來的，此可導致同種異體受體消除或抑制供體免疫細胞。
因此，減少或消除此類內源基因或蛋白之表現或活性可改良宿主細胞在自體或同種異體宿主環境中之活性、耐受性及持久性，且可允許普遍投予細胞(例如向任何接受者，不論HLA類型如何)。在某些實施例中，經修飾之宿主免疫細胞為供體細胞(例如同種異體)或自體細胞。在某些實施例中，本揭露內容之經修飾之免疫宿主細胞包含染色體基因剔除編碼以下之基因中之一或多者：PD-1、LAG-3、CTLA4、TIM3、TIGIT、HLA組分(例如編碼α1巨球蛋白、α2巨球蛋白、α3巨球蛋白、β1微球蛋白或β2微球蛋白之基因)、或TCR組分(例如編碼TCR可變區或TCR恆定區之基因) (參見例如Torikai等人, Nature Sci. Rep. 6:21757 (2016)；Torikai等人, Blood 119(24):5697 (2012)；及Torikai等人, Blood 122(8):1341 (2013)，其中的基因編輯技術、組成物及過繼細胞療法以全文引用之方式併入本文中)、TGFβR1、TGFβR2、LAT、A2AR、Fas、FasL、B7-H3、B7-H4、IDO、VISTA、SIGLEC7、SIGLEC9、TRAC、TRBC、CBLB、RASA2、UBASH3A及/或CISH。如本文所用，術語「染色體基因剔除」係指宿主細胞之基因改變，其阻止宿主細胞產生功能活性內源多肽產物。導致染色體基因剔除之改變可包括例如引入無義突變(包括過早終止密碼子之形成)、錯義突變、基因缺失及股斷裂，以及抑制宿主細胞中之內源基因表現之抑制性核酸分子的異源表現。
在某些實施例中，染色體基因剔除或基因敲入係藉由對宿主細胞之染色體編輯來實現。染色體編輯可使用例如核酸內切酶進行。如本文所用，「核酸內切酶」係指能夠催化裂解多核苷酸鏈內之磷酸二酯鍵的酶。在某些實施例中，核酸內切酶能夠裂解目標基因，從而使目標基因不活化或「基因剔除」。核酸內切酶可為天然存在、重組、經基因修飾或融合的核酸內切酶。由核酸內切酶引起之核酸股斷裂通常經由同源重組或非同源末端連接(NHEJ)之不同機制修復。在同源重組過程中，供體核酸分子可用於供體基因「基因敲入」、目標基因「基因剔除」，且任擇地經由供體基因基因嵌入或目標基因基因剔除事件使目標基因不活化。NHEJ為易錯修復過程，通常導致裂解位點之DNA序列變化，例如取代、缺失或添加至少一個核苷酸。NHEJ可用於「基因剔除」目標基因。核酸內切酶之實例包括鋅指核酸酶、TALE核酸酶、CRISPR-Cas核酸酶、大範圍核酸酶及megaTAL。
如本文所用，「鋅指核酸酶」(ZFN)係指包含與非特異性DNA裂解域(諸如Fokl核酸內切酶)融合之鋅指DNA結合域的融合蛋白。各約30個胺基酸之鋅指模體與DNA之約3個鹼基對結合，且某些殘基處之胺基酸可經改變以改變三聯體序列特異性(參見例如Desjarlais等人, Proc. Natl. Acad. Sci. 90:2256-2260, 1993；Wolfe等人, J. Mol. Biol. 285:1917-1934, 1999)。多個鋅指模體可以串聯方式連接以對所需DNA序列，諸如長度範圍介於約9至約18個鹼基對之區域產生結合特異性。作為背景，ZFN藉由催化基因體中位點特異性DNA雙股斷裂(DSB)之形成來介導基因體編輯，且藉由同源定向修復來促進包含與基因體同源之側接序列的轉殖基因在DSB位點之靶向整合。或者，由ZFN產生之DSB可經由非同源末端連接(NHEJ)修復導致目標基因之基因剔除，非同源末端連接為一種易錯細胞修復途徑，導致裂解位點處之核苷酸插入或缺失。在某些實施例中，基因剔除包含使用ZFN分子進行之插入、缺失、突變或其組合。
如本文所用，「轉錄活化子樣效應物核酸酶」(TALEN)係指包含TALE DNA結合域及DNA裂解域(諸如FokI核酸內切酶)之融合蛋白。「TALE DNA結合域」或「TALE」由一或多個TALE重複域/單元構成，其各自一般具有高度守恆的33-35個胺基酸的序列，其中第12及第13個胺基酸相異。TALE重複域參與TALE與目標DNA序列之結合。相異的胺基酸殘基，稱為重複可變二殘基(RVD)，與特定的核苷酸識別相關。已確定此等TALE之DNA識別的天然(典型)編碼，諸如TALE之位置12及13處之HD (組胺酸-天冬胺酸)序列導致TALE與胞嘧啶(C)結合，NG (天冬醯胺-甘胺酸)與T核苷酸結合，NI (天冬醯胺-異白胺酸)與A結合，NN (天冬醯胺-天冬醯胺)與G或A核苷酸結合，及NG (天冬醯胺-甘胺酸)與T核苷酸結合。非典型RVD亦為已知的(參見例如美國專利公開案第US 2011/0301073號，其中的非典型RVD以全文引用的方式併入本文中)。TALEN可用於指導T細胞基因體中之位點特異性雙股斷裂(DSB)。非同源末端連接(NHEJ)自雙股斷裂之二側連接DNA，其中很少或沒有用於黏合之序列重疊，從而引入剔除基因表現之錯誤。或者，同源定向修復可在DSB位點處引入轉殖基因，其限制條件為轉殖基因中存在同源側接序列。在某些實施例中，基因剔除包含插入、缺失、突變或其組合，且使用TALEN分子進行。
如本文所用，「成簇規律間隔短回文重複序列/Cas」(CRISPR/Cas)核酸酶系統係指採用CRISPR RNA (crRNA)引導之Cas核酸酶經由鹼基配對互補性識別基因體內之目標位點(稱為原型間隔子)，且隨後若短的、守恆的原型間隔子相關模體(PAM)緊隨互補目標序列之3'之後，則裂解DNA的系統。基於Cas核酸酶之序列及結構，CRISPR/Cas系統分類為三種類型(亦即I型、II型及III型)。I型及III型之crRNA引導之監控複合物需要多個Cas次單元。研究最多的II型系統包含至少三個組分：RNA引導之Cas9核酸酶、crRNA及反式作用crRNA (tracrRNA)。tracrRNA包含雙螺旋體形成區。crRNA及tracrRNA形成雙螺旋體，其能夠與Cas9核酸酶相互作用，且經由crRNA上之間隔子與目標DNA上之PAM上游的原型間隔子之間的Watson-Crick鹼基配對，將Cas9/crRNA:tracrRNA複合物引導至目標DNA上之特定位點。Cas9核酸酶在由crRNA間隔子定義之區域內裂解雙股斷裂。藉由NHEJ之修復導致插入及/或缺失，從而破壞靶向基因座之表現。或者，可經由同源定向修復在DSB之位點處引入具有同源側接序列之轉殖基因。crRNA及tracrRNA可經工程改造為單引導RNA (sgRNA或gRNA) (參見例如Jinek等人, Science 337:816-21, 2012)。此外，引導RNA與目標位點互補之區域可經改變或程式化以靶向所需序列(Xie等人, PLOS One 9:e100448, 2014；美國專利申請公開案第US 2014/0068797號、美國專利申請公開案第US 2014/0186843號；美國專利第8,697,359號及PCT公開案第WO 2015/071474號；其中之每一者以引用的方式併入)。在某些實施例中，基因剔除包含插入、缺失、突變或其組合，且使用CRISPR/Cas核酸酶系統進行。
gRNA序列及使用其剔除編碼免疫細胞蛋白之內源基因之方法的實例包括Ren等人, Clin. Cancer Res. 23(9):2255-2266 (2017)中所述之彼等實例，其中之gRNA、CAS9 DNA、載體及基因剔除技術特此以全文引用之方式併入。
可使用替代性Cas核酸酶，包括但不限於Cas 12、Cas 13及Cas 14核酸酶及其變異體。舉例而言，可利用WO 2019/178427中所揭示之Cas核酸酶，其特此以全文引用之方式併入(包括其中所揭露之Cas核酸酶、CRISPR-Cas系統及相關方法)。
如本文所用，「大範圍核酸酶」亦稱為「歸巢核酸內切酶」，係指以大的識別位點(約12至約40個鹼基對之雙股DNA序列)為特徵的去氧核糖核酸內切酶。大範圍核酸酶可基於序列及結構模體分成五個家族：LAGLIDADG、GIY-YIG、HNH、His-Cys盒及PD-(D/E)XK。例示性大範圍核酸酶包括I-SceI、I-CeuI、PI-PspI、PI-Sce、I-SceIV、I-CsmI、I-PanI、I-SceII、I-PpoI、I-SceIII、I-CreI、I-TevI、I-TevII及I-TevIII，其識別序列為已知的(參見例如美國專利第5,420,032號及第6,833,252號；Belfort等人, Nucleic Acids Res. 25:3379-3388, 1997；Dujon等人, Gene 82:115-118, 1989；Perler等人, Nucleic Acids Res. 22:1125-1127, 1994；Jasin, Trends Genet. 12:224-228, 1996；Gimble等人, J. Mol. Biol. 263:163-180, 1996；Argast等人, J. Mol. Biol. 280:345-353, 1998)。
在某些實施例中，天然存在之大範圍核酸酶可用於促進選自PD-1、LAG3、TIM3、CTLA4、TIGIT、HLA編碼基因或TCR組分編碼基因之目標的位點特異性基因體修飾。在其他實施例中，對目標基因具有新穎結合特異性的經工程改造之大範圍核酸酶用於位點特異性基因體修飾(參見例如Porteus等人, Nat. Biotechnol. 23:967-73, 2005；Sussman等人, J. Mol. Biol. 342:31-41, 2004；Epinat等人, Nucleic Acids Res. 31:2952-62, 2003；Chevalier等人, Molec. Cell 10:895-905, 2002；Ashworth等人, Nature 441:656-659, 2006；Paques等人, Curr. Gene Ther. 7:49-66, 2007；美國專利公開案第US 2007/0117128號；第US 2006/0206949號；第US 2006/0153826號；第US 2006/0078552號；及第US 2004/0002092號)。在其他實施例中，使用已經TALEN之模組化DNA結合域修飾之歸巢核酸內切酶產生染色體基因剔除，以製造稱為megaTAL之融合蛋白。MegaTAL不僅可用於剔除一或多個目標基因，且亦在與編碼感興趣的多肽的外源供體模板組合使用時，引入(敲入)異源或外源多核苷酸。
在某些實施例中，染色體基因剔除包含引入宿主細胞(例如免疫細胞)中之抑制性核酸分子，該宿主細胞包含編碼與腫瘤相關抗原特異性結合之抗原特異性受體的異源多核苷酸，其中該抑制性核酸分子編碼目標特異性抑制劑，且其中編碼的目標特異性抑制劑抑制宿主免疫細胞中之內源基因表現(例如PD-1、TIM3、LAG3、CTLA4、TIGIT、HLA組分、TCR組分、TGFβRI、TGFβRII或其任何組合)。
在使用基因剔除程序或藥劑後，可藉由宿主免疫細胞之DNA定序直接確認染色體基因剔除。染色體基因剔除亦可自基因剔除後不存在基因表現(例如不存在由基因編碼之mRNA或多肽產物)來推斷。
前述基因編輯技術中之任一者可用於將本揭露內容之多核苷酸(例如編碼融合蛋白)引入宿主細胞基因體中。在一些實施例中，將異源多核苷酸引入編碼內源TCR組分、HLA組分、PD-1、LAG-3、CTLA4、TIM3或TIGIT之基因座或「安全港」基因座，諸如Rosa26、AAVS1、CCR5或其類似物。
在某些實施例中，本揭露內容之宿主細胞(例如免疫細胞)經工程改造以使得融合蛋白或抗原結合蛋白之表現藉由宿主細胞與抗原之結合來調節(例如控制)，該抗原為與抗原結合蛋白特異性結合之抗原不同的抗原，或對於融合蛋白，不為TGFβ。
舉例而言，宿主細胞可包含(i)編碼經工程改造(亦即合成)的Notch受體的多核苷酸，其包含(a)胞外組分，包含與抗原結合之結合域，該抗原為與抗原結合蛋白所結合之抗原不同的抗原；(b)Notch核心域或其功能性部分或變異體；及(c)胞內組分，包含轉錄因子(亦即，能夠活化或增加，或抑制、阻遏或減少目標核苷酸序列(例如基因)或一組目標核苷酸序列之轉錄的多肽)；及(ii)編碼如本文所揭露之抗原結合蛋白且包含可由轉錄因子識別或結合之表現控制序列的異源多核苷酸，其中經工程改造之Notch受體與抗原之結合導致轉錄因子自經工程改造之Notch受體釋放(例如，藉由蛋白酶驅動之裂解)，其繼而可驅動融合蛋白之轉錄。參見例如Morsut等人, Cell 164:780-791 (2016)及PCT公開申請案第WO 2016/138034A1號，其中的合成Notch構築體以引用的方式併入本文中。簡言之，此類「邏輯閘控」表現系統可用於調節本揭露內容之抗原結合蛋白之表現，使得表現僅在或優先在宿主細胞遇到第一抗原(亦即可由合成Notch受體結合)時發生，該抗原僅由癌細胞表現，或主要由癌細胞表現，或與健康細胞相比在癌細胞上具有較高表現位準。在抗原結合蛋白識別之目標由健康細胞表現之情形下，此類實施例可減少融合蛋白之「中靶脫組織」識別。
在其他態樣中，提供套組，其包含(a)如本文所述之載體或表現構築體及(b)用於將載體或表現構築體轉導至宿主細胞中之試劑。 用途
本揭露內容亦提供用於治療疾病或病況之方法，其中該等方法包含向有需要之個體投予有效量之本揭露內容之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞、組成物或單位劑量。在一些實施例中，疾病或病況表現或以其他方式與目標(例如抗原)相關聯，且該方法包含投予進一步表現抗原結合蛋白之表現融合蛋白的宿主細胞。在一些實施例中。
如本文所用，「過度增殖性病症」係指與正常或未病變的細胞相比過度生長或增殖。例示性過度增殖性病症包括腫瘤、癌症、贅生性組織、癌瘤、肉瘤、惡性細胞、惡性前細胞以及非贅生性或非惡性過度增殖性病症(例如腺瘤、纖維瘤、脂肪瘤、平滑肌瘤、血管瘤、纖維化、再狹窄以及自體免疫疾病，諸如類風濕性關節炎、骨關節炎、牛皮癬、發炎性腸病或其類似疾病)。某些涉及異常或過度生長之疾病，其發生速度比過度增殖性疾病的情況慢，可稱為「增殖性疾病」，且包括某些腫瘤、癌症、贅生性組織、癌瘤、肉瘤、惡性細胞、惡性前細胞以及非贅生性或非惡性病症。
另外，「癌症」可指任何加速增殖的細胞，包括實體腫瘤、腹水腫瘤、血液或淋巴或其他惡性腫瘤；結締組織惡性腫瘤；轉移性疾病；器官或幹細胞移植後的微量殘存疾病；多重耐藥性癌症、原發性或繼發性惡性腫瘤、與惡性腫瘤相關的血管生成或其他形式的癌症。
在某些實施例中，可根據本發明所揭露之方法及用途治療的癌症包含癌瘤、肉瘤、神經膠質瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤或其任何組合。在某些實施例中，癌症包含頭頸癌、黑素瘤、胰臟癌、膽管癌、肝細胞癌、乳癌包括三陰性乳癌(TNBC)、胃癌、非小細胞肺癌、前列腺癌、食道癌、間皮瘤、小細胞肺癌、結腸直腸癌、神經膠質母細胞瘤或其任何組合。
在某些實施例中，癌症包含阿金氏腫瘤(Askin's tumor)、葡萄狀肉瘤、軟骨肉瘤、尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、PNET、惡性血管內皮瘤、惡性神經鞘瘤、骨肉瘤、肺泡狀軟組織肉瘤、血管肉瘤、葉狀囊肉瘤、隆凸性皮膚纖維肉瘤(DFSP)、硬纖維瘤、促結締組織增生性小圓細胞腫瘤、上皮樣肉瘤、骨外軟骨肉瘤、骨外骨肉瘤、纖維肉瘤、胃腸道間質瘤(GIST)、血管外皮瘤、血管內皮瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉瘤、未分化多形性肉瘤、惡性周邊神經鞘腫瘤(MPNST)、神經纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、滑膜肉瘤、未分化多形性肉瘤、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、皮革胃、血管活性腸肽瘤、膽管癌、肝細胞癌、腺樣囊性癌、腎細胞癌、格拉維茨瘤(Grawitz tumor)、室管膜瘤、星形細胞瘤、寡樹突神經膠質瘤、腦幹神經膠質瘤、視神經膠質瘤、混合神經膠質瘤、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)、B細胞淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、免疫母細胞大細胞淋巴瘤、前體B淋巴母細胞淋巴瘤及套細胞淋巴瘤、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症(Waldenström's macroglobulinemia)、CD37+樹突狀細胞淋巴瘤、淋巴漿細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤、黏膜相關(MALT)淋巴組織之結外邊緣區B細胞淋巴瘤、結邊緣區B細胞淋巴瘤、縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤、成人T細胞淋巴瘤、鼻型結外NK/T細胞淋巴瘤、腸病相關T細胞淋巴瘤、肝脾T細胞淋巴瘤、母細胞性NK細胞淋巴瘤、塞紮里症候群(Sezary syndrome)、血管免疫母細胞T細胞淋巴瘤、間變性大細胞淋巴瘤或其任何組合。
在某些實施例中，癌症包含實體腫瘤。在一些實施例中，實體腫瘤為肉瘤或癌瘤。在某些實施例中，實體腫瘤係選自：軟骨肉瘤；纖維肉瘤(纖維母細胞肉瘤)；隆凸性皮膚纖維肉瘤(DFSP)；骨肉瘤；橫紋肌肉瘤；尤文氏肉瘤；胃腸道間質瘤；平滑肌肉瘤；血管肉瘤；卡波西氏肉瘤；脂肪肉瘤；多形性肉瘤；或滑膜肉瘤。
在某些實施例中，實體腫瘤係選自肺癌(例如腺癌、鱗狀細胞癌(表皮樣癌)；鱗狀細胞癌；腺癌；腺鱗癌；未分化癌；大細胞癌；小細胞癌；乳癌(例如乳腺管原位癌(非侵襲性)、小葉原位癌(非侵襲性)、侵襲性乳腺管癌、侵襲性小葉癌、非侵襲性癌)；肝癌(例如肝細胞癌、膽管瘤或膽管癌)；大細胞未分化性癌、細支氣管肺泡癌)；卵巢癌(例如表面上皮-間質腫瘤(腺癌)或卵巢上皮癌(其包括漿液性腫瘤、子宮內膜樣腫瘤及黏液性囊腺癌)、表皮樣(鱗狀細胞癌)、胚胎性癌及絨毛膜癌(生殖細胞腫瘤))；腎癌(例如腎腺癌、腎上腺樣瘤、移行細胞癌(腎盂)、鱗狀細胞癌、貝里尼管癌(Bellini duct carcinoma)、透明細胞腺癌、移行細胞癌、腎盂類癌)；腎上腺癌(例如腎上腺皮質癌)、睪丸癌(例如生殖細胞癌(精原細胞瘤、絨毛膜癌、胚胎癌、畸胎癌)、漿液性癌)；胃癌(例如腺癌)；腸癌(例如十二指腸腺癌)；結腸直腸癌；或皮膚癌(例如基底細胞癌、鱗狀細胞癌)。在某些實施例中，實體腫瘤為卵巢癌、卵巢上皮癌、子宮頸腺癌或小細胞癌、胰臟癌、結腸直腸癌(例如腺癌或鱗狀細胞癌)、肺癌、乳腺管癌或前列腺腺癌。
在本發明所揭露之實施例中之任一者中，宿主細胞為同種異體細胞、同基因型細胞或自體細胞。通常，宿主細胞將進一步表現或編碼抗原結合蛋白。可藉由本發明治療之個體一般為人類及其他靈長類個體，諸如用於獸醫學目的之猴及猿。在前述實施例中之任一者中，個體可為人類個體。個體可為男性或女性且可為任何適合的年齡，包括嬰兒、幼年、青年、成年及老年個體。根據本揭露內容之細胞可以適合於待治療之疾病、病況或病症的方式投予，由醫學領域之技術人員確定。在以上實施例中之任一者中，包含如本文所述之融合蛋白的細胞靜脈內、腹膜內、瘤內投予至骨髓、淋巴結或腦脊髓液中，以便遇到待消融之加標籤細胞。組成物之適當劑量、適合的投予持續時間及頻率將由諸如以下之因素決定：患者之狀況；疾病、病況或病症之尺寸、類型及嚴重程度；加標籤細胞之不希望的類型或位準或活性、活性成分之特定形式；及投予方法。
在以上實施例中之任一者中，本揭露內容之方法包含投予表現本揭露內容之融合蛋白的宿主細胞。通常，宿主細胞將進一步表現或編碼抗原結合蛋白。組成物中細胞之量為至少一個細胞(例如一個經融合蛋白修飾之CD8 +T細胞亞群；一個經融合蛋白修飾之CD4 +T細胞亞群)，或更典型地大於10 2個細胞，例如高達10 6個、高達10 7個、高達10 8個細胞、高達10 9個細胞，或大於10 10個細胞，諸如約10 11個細胞/平方公尺。在某些實施例中，細胞以約10 5至約10 11個細胞/平方公尺之範圍、較佳約10 5或約10 6至約10 9或約10 10個細胞/平方公尺之範圍投予。細胞數目將取決於組成物預期之最終用途以及其中包括的細胞類型。舉例而言，經修飾以含有對特定抗原具有特異性之融合蛋白的細胞將包含含有至少30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或更多此類細胞之細胞群。對於本文提供之用途，細胞之體積一般為一公升或更少、500 ml或更少、250 ml或更少、或100 ml或更少。在實施例中，所需細胞之密度通常大於10 4個細胞/毫升且一般大於10 7個細胞/毫升，一般為10 8個細胞/毫升或更大。細胞可以單次輸注形式或在一定時間範圍內以多次輸注形式投予。臨床上相關數目之免疫細胞可分配至多次輸注中，其累積等於或超過10 5、10 6、10 7、10 8、10 9、10 10或10 11個細胞。
本文亦提供單位劑量，其包含本揭露內容之宿主細胞(例如包含本揭露內容之多核苷酸的經修飾免疫細胞)或宿主細胞組成物。通常，宿主細胞將進一步表現或編碼抗原結合蛋白。在某些實施例中，單位劑量包含(i)包含至少約30% (例如包括30%或更多)、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%或至少約95%經修飾之CD4 +T細胞的組成物與(ii)包含至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%或至少約95%經修飾之CD8 +T細胞的組成物之約1:1比率(例如，諸如1:1比率)之組合，其中單位劑量含有減少量或實質上沒有初始T細胞(亦即，與具有可比數目之PBMC的患者樣本相比，單位劑量中存在之初始T細胞群少於約50%、少於約40%、少於約30%、少於約20%、少於約10%、少於約5%或少於約1%)。
在一些實施例中，單位劑量包含(i)包含至少約50%經修飾之CD4 +T細胞的組成物與(ii)包含至少約50%經修飾之CD8 +T細胞的組成物之約1:1比率之組合，其中單位劑量含有減少量或實質上沒有初始T細胞。在其他實施例中，單位劑量包含(i)包含至少約60%經修飾之CD4 +T細胞的組成物與(ii)包含至少約60%經修飾之CD8 +T細胞的組成物之約1:1比率之組合，其中單位劑量含有減少量或實質上沒有初始T細胞。在其他實施例中，單位劑量包含(i)包含至少約70%經修飾之CD4 +T細胞的組成物與(ii)包含至少約70%經修飾之CD8 +T細胞的組成物之約1:1比率之組合，其中單位劑量含有減少量或實質上沒有初始T細胞。在一些實施例中，單位劑量包含(i)包含至少約80%經修飾之CD4 +T細胞的組成物與(ii)包含至少約80%經修飾之CD8 +T細胞的組成物之約1:1比率之組合，其中單位劑量含有減少量或實質上沒有初始T細胞。在一些實施例中，單位劑量包含(i)包含至少約85%經修飾之CD4 +T細胞的組成物與(ii)包含至少約85%經修飾之CD8 +T細胞的組成物之約1:1比率之組合，其中單位劑量含有減少量或實質上沒有初始T細胞。在一些實施例中，單位劑量包含(i)包含至少約90%經修飾之CD4 +T細胞的組成物與(ii)包含至少約90%經修飾之CD8 +T細胞的組成物之約1:1比率之組合，其中單位劑量含有減少量或實質上沒有初始T細胞。
在本文所述之任一實施例中，單位劑量包含相等或大致相等數目的經工程改造之CD45RA -CD3 +CD8 +及經工程改造之CD45RA -CD3 +CD4 +T M細胞。
亦考慮醫藥組成物，其包含如本文所揭露之融合蛋白或表現或編碼融合蛋白之細胞，及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。適合的賦形劑包括水、生理鹽水、右旋糖、甘油或其類似物及其組合。在實施例中，包含如本文所揭露之融合蛋白或宿主細胞的組成物進一步包含適合的輸注介質。適合的輸注介質可為任何等張介質調配物，通常可利用生理鹽水、Normosol R (Abbott)或Plasma-Lyte A (Baxter)、5%右旋糖水溶液、林格氏乳酸鹽(Ringer's lactate)。輸注介質可補充有人類血清白蛋白或其他人類血清組分。
醫藥組成物可以適合於待治療(或預防)之疾病或病況的方式投予，由醫學領域之技術人員確定。組成物之適當劑量及適合的投予持續時間及頻率將由諸如以下之因素決定：患者之健康狀況、患者之體型(亦即體重、質量或身體面積)、患者病況之類型及嚴重程度、不希望的融合蛋白表現細胞之類型或位準或活性、活性成分之特定形式及投予方法。一般而言，適當的劑量及治療方案以足以提供治療及/或預防益處(諸如本文所述，包括改善的臨床結果，諸如更頻繁的完全或部分緩解，或更長的無病及/或總存活期，或症狀嚴重程度減輕)之量提供組成物。對於預防用途，劑量應足以預防與目標(例如抗原)相關之疾病、延遲其發作或減輕其嚴重程度。根據本文所述之方法投予的免疫原性組成物之預防益處可藉由進行臨床前(包括活體外及活體內動物研究)及臨床研究，且藉由適當的統計學、生物學及臨床方法及技術分析自其獲得之資料來確定，其皆可由熟習此項技術者容易地實踐。
本文考慮之某些治療或預防方法包括投予宿主細胞(其可為自體、同種異體或同基因型的)，其包含穩定地整合至細胞染色體中之如本文所述之所需多核苷酸。舉例而言，此類細胞組成物可使用自體、同種異體或同基因型免疫系統細胞(例如T細胞、抗原呈現細胞、自然殺手細胞)活體外產生，以便將所需的表現融合蛋白之T細胞組成物作為過繼免疫療法投予個體。在某些實施例中，宿主細胞包含造血前驅細胞或人類免疫細胞。在某些實施例中，免疫系統細胞包含CD4 +T細胞、CD8 +T細胞、CD4 -CD8 -雙陰性T細胞、γδ T細胞、自然殺手細胞、樹突狀細胞或其任何組合。在某些實施例中，免疫系統細胞包含初始T細胞、中央記憶T細胞、幹細胞記憶T細胞、效應記憶T細胞或其任何組合。在特定實施例中，細胞包含CD4 +T細胞。在特定實施例中，細胞包含CD8 +T細胞。
如本文所用，組成物之投予係指將其遞送至個體，而不考慮遞送之途徑或模式。投予可連續地或間歇地及非經腸進行。投予可用於治療已確認為患有公認病況、疾病或疾病狀態之個體，或用於治療易患或有風險罹患此類病況、疾病或疾病狀態之個體。與輔助療法共投予可包括以任何順序及任何給藥時程同時及/或依序遞送多種藥劑(例如，表現融合蛋白之重組(亦即經工程改造)宿主細胞與一或多種細胞介素；免疫抑制療法，諸如鈣調神經磷酸酶抑制劑、皮質類固醇、微管抑制劑、低劑量之黴酚酸前藥或其任何組合)。
在某些實施例中，向個體投予多個劑量的如本文所述之重組宿主細胞，其可以約二週至約四週或更長時間的投予間隔投予。在某些實施例中，多個單位劑量以約二週、三週、四週、五週、六週、七週、八週或更多週的投予間隔投予。
在其他實施例中，所治療之個體進一步接受免疫抑制療法，諸如鈣調神經磷酸酶抑制劑、皮質類固醇、微管抑制劑、低劑量之黴酚酸前藥或其任何組合。在其他實施例中，所治療之個體已接受非清髓性或清髓性造血細胞移植，其中治療可在非清髓性造血細胞移植後至少二個月至至少三個月投予。
醫藥組成物(例如宿主細胞、融合蛋白、單位劑量或組成物)之有效量係指以所需劑量及時間段足以達到如本文所述之所需臨床結果或有益治療的量。有效量可以一或多次投予遞送。若投予已知或確認患有疾病或疾病狀態之個體，則術語「治療量」可用於提及治療，而「預防有效量」可用於描述向易患或有風險罹患疾病或疾病狀態(例如復發)之個體投予有效量作為預防過程。
CTL免疫反應之位準可藉由本文所述且此項技術中常規實踐之許多免疫學方法中之任一者來確定。CTL免疫反應之位準可在投予本文所述之由例如T細胞表現之融合蛋白中之任一者之前及之後確定。用於確定CTL活性之細胞毒性分析法可使用此項技術中常規實踐的數種技術及方法中之任一者來進行(參見例如Henkart等人, 「Cytotoxic T-Lymphocytes」 in Fundamental Immunology, Paul (編) (2003 Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA), 第1127-50頁，及其中所引用之參考文獻)。
目標(例如抗原)特異性T細胞反應通常藉由根據本文所述之T細胞功能參數(例如增殖、細胞介素釋放、CTL活性、改變的細胞表面標記表型等)中之任一者比較觀察到的T細胞反應來確定，其可在適當環境中在暴露於同源抗原(例如，當由免疫相容性抗原呈現細胞呈現時，用於引發或活化T細胞之抗原)的T細胞與來自同一來源群體且暴露於結構不同或無關的對照抗原的T細胞之間進行。對同源抗原之反應大於對對照抗原之反應，具有統計顯著性，表明抗原特異性。
可自個體獲得生物樣本，以確定對如本文所述之融合蛋白或細胞之免疫反應的存在及位準。如本文所用，「生物樣本」可為血液樣本(可由其製備血清或血漿)、生檢標本、體液(例如肺灌洗液、腹水、黏膜洗滌液、滑液)、骨髓、淋巴結、組織外植體、器官培養物或來自個體或生物來源之任何其他組織或細胞製劑。亦可在接受任何免疫原性組成物之前自個體獲得生物樣本，該生物樣本可用作建立基線(亦即免疫前)資料之對照。
本文所述之醫藥組成物可提供於單位劑量或多劑量容器，諸如密封安瓿或小瓶中。此類容器可冷凍以保持調配物之穩定性直至。在某些實施例中，單位劑量包含約10 5個細胞/平方公尺至約10 11個細胞/平方公尺之劑量的如本文所述之重組宿主細胞。開發適合的給藥及治療方案以在多種治療方案中使用本文所述之特定組成物，包括例如非經腸或靜脈內投予或調配物。
若主題組成物係非經腸投予，則該組成物亦可包括無菌水性或油性溶液或懸浮液。適合的無毒性非經腸可接受之稀釋劑或溶劑包括水、林格氏溶液、等張鹽溶液、1,3-丁二醇、乙醇、丙二醇或與水混合之聚乙二醇。水性溶液或懸浮液可進一步包含一或多種緩衝劑，諸如乙酸鈉、檸檬酸鈉、硼酸鈉或酒石酸鈉。當然，用於製備任何劑量單位調配物之任何材料應為醫藥學上純的且在所採用之量下實質上無毒。另外，活性化合物可併入持續釋放製劑及調配物中。如本文所用，單位劑型係指適合作為用於待治療之個體之單位劑量的物理離散單位；各單位可含有預定量之重組細胞或活性化合物，其經計算以產生與適當醫藥載劑相關聯的期望效果。
一般而言，適當的劑量及治療方案以足以提供治療或預防益處之量提供活性分子或細胞。此類反應可藉由在所治療之個體中建立與未治療之個體相比改善的臨床結果(例如更頻繁的完全或部分緩解，或更長的無病存活期)來監測。對腫瘤蛋白之預先存在的免疫反應的增加通常與改善的臨床結果相關。此類免疫反應一般可使用標準增殖、細胞毒性或細胞介素分析法來評估，該等分析法在此項技術中為常規的且可使用治療前後自個體獲得之樣本進行。
在其他態樣中，提供套組，其包含(a)宿主細胞、(b)組成物或(c)如本文所述之單位劑量。
根據本揭露內容之方法可進一步包括在組合療法中投予一或多種額外藥劑來治療疾病或病症。舉例而言，在某些實施例中，組合療法包含將融合蛋白(或表現其的經工程改造之宿主細胞)與免疫檢查點抑制劑(同時、同步或依序)投予。在一些實施例中，組合療法包含將本揭露內容之融合蛋白(或表現其的經工程改造之宿主細胞)與刺激性免疫檢查點藥劑之促效劑一起投予。在其他實施例中，組合療法包含將本揭露內容之融合蛋白(或表現其的經工程改造之宿主細胞)與二級療法諸如化學治療劑、放射療法、手術、抗體或其任何組合一起投予。
如本文所用，術語「免疫抑制劑(immune suppression agent/immunosuppression agent)」係指提供抑制訊息以幫助控制或抑制免疫反應的一或多種細胞、蛋白質、分子、化合物或複合物。舉例而言，免疫抑制劑包括彼等部分或完全阻斷免疫刺激；減少、防止或延遲免疫活化；或增加、活化或上調免疫抑制的分子。靶向(例如使用免疫檢查點抑制劑)的例示性免疫抑制劑包括PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG3、CTLA4、B7-H3、B7-H4、CD244/2B4、HVEM、BTLA、CD160、TIM3、GAL9、KIR、PVR1G (CD112R)、PVRL2、腺苷、A2aR、免疫抑制性細胞介素(例如IL-10、IL-4、IL-1RA、IL-35)、IDO、精胺酸酶、VISTA、TIGIT、LAIR1、CEACAM-1、CEACAM-3、CEACAM-5、Treg細胞或其任何組合。
免疫抑制劑抑制劑(亦稱為免疫檢查點抑制劑)可為化合物、抗體、抗體片段或融合多肽(例如Fc融合物，諸如CTLA4-Fc或LAG3-Fc)、反義分子、核糖核酸酶或RNAi分子或低分子量有機分子。在本文所揭露之任何實施例中，方法可包含將本揭露內容之組成物(例如融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或醫藥組成物)與以下免疫抑制組分中之任一者的一或多種抑制劑單獨或以任何組合投予。在某些實施例中，組成物與PD-1抑制劑組合使用，例如PD-1特異性抗體或其結合片段，諸如匹地利珠單抗(pidilizumab)、納武單抗(nivolumab) (Keytruda，原名MDX-1106)、派姆單抗(pembrolizumab) (Opdivo，原名MK-3475)、MEDI0680 (原名AMP-514)、AMP-224、BMS-936558或其任何組合。在其他實施例中，組成物與PD-L1特異性抗體或其結合片段組合使用，諸如BMS-936559、德瓦魯單抗(durvalumab) (MEDI4736)、阿替利珠單抗(atezolizumab) (RG7446)、阿維魯單抗(avelumab) (MSB0010718C)、MPDL3280A或其任何組合。在某些實施例中，組成物與LAG3抑制劑組合使用，諸如LAG525、IMP321、IMP701、9H12、BMS-986016或其任何組合。在某些實施例中，組成物與CTLA4之抑制劑組合使用。在特定實施例中，組成物與CTLA4特異性抗體或其結合片段組合使用，諸如伊匹單抗(ipilimumab)、曲美木單抗(tremelimumab)、CTLA4-Ig融合蛋白(例如阿巴西普(abatacept)、貝拉西普(belatacept))或其任何組合。在某些實施例中，組成物與B7-H3特異性抗體或其結合片段組合使用，諸如依諾妥珠單抗(enoblituzumab) (MGA271)、376.96或二者。B7-H4抗體結合片段可為scFv或其融合蛋白，如例如 Dangaj等人, Cancer Res. 73:4820, 2013中所述，以及美國專利第9,574,000號及PCT專利公開案第WO/201640724A1號及第WO 2013/025779A1號中所述之彼等者。在某些實施例中，組成物與CD244之抑制劑組合使用。在某些實施例中，組成物與BLTA、HVEM、CD160或其任何組合之抑制劑組合使用。抗CD-160抗體描述於例如PCT公開案第WO 2010/084158號中。在某些實施例中，組成物與TIM3之抑制劑組合使用。在某些實施例中，組成物與Gal9之抑制劑組合使用。在某些實施例中，組成物與腺苷訊息傳導之抑制劑組合使用，諸如誘餌腺苷受體。在某些實施例中，組成物與A2aR之抑制劑組合使用。在某些實施例中，組成物與KIR之抑制劑組合使用，諸如利瑞魯單抗(lirilumab) (BMS-986015)。在某些實施例中，組成物與抑制性細胞介素(通常為除TGFβ以外之細胞介素)或Treg發育或活性之抑制劑組合使用。在某些實施例中，組成物與IDO抑制劑組合使用，諸如左旋-1-甲基色胺酸、艾卡哚司他(epacadostat) (INCB024360；Liu等人, Blood 115:3520-30, 2010)、依布硒啉(ebselen) (Terentis等人, Biochem. 49:591-600, 2010)、吲哚莫德(indoximod)、NLG919 (Mautino等人, American Association for Cancer Research 104th Annual Meeting 2013; 2013年4月6-10日)、1-甲基-色胺酸(1-MT)-替拉紮明或其任何組合。在某些實施例中，組成物與精胺酸酶抑制劑組合使用，諸如N(ω)-硝基-L-精胺酸甲酯(L-NAME)、N-ω-羥基-正-l-精胺酸(nor-NOHA)、L-NOHA、2(S)-胺基-6-硼己酸(ABH)、S-(2-硼乙基)-L-半胱胺酸(BEC)或其任何組合。在某些實施例中，本揭露內容之組成物(或表現其的經工程改造之宿主細胞)與VISTA之抑制劑組合使用，諸如CA-170 (Curis, Lexington, Mass.)。在某些實施例中，組成物與TIGIT之抑制劑，諸如COM902 (Compugen, Toronto, Ontario Canada)；CD155之抑制劑，諸如COM701 (Compugen)；或二者組合使用。在某些實施例中，組成物與PVRIG、PVRL2或二者之抑制劑組合使用。抗PVRIG抗體描述於例如PCT公開案第號WO 2016/134333中。抗PVRL2抗體描述於例如PCT公開案第WO 2017/021526號中。在某些實施例中，組成物與LAIR1抑制劑組合使用。在某些實施例中，組成物與CEACAM-1、CEACAM-3、CEACAM-5或其任何組合之抑制劑組合使用。在某些實施例中，組成物與增加刺激性免疫檢查點分子之活性的藥劑(亦即為促效劑)組合使用。舉例而言，本揭露內容之組成物可與以下組合使用：CD137 (4-1BB)促效劑(諸如烏瑞魯單抗(urelumab))、CD134 (OX-40)促效劑(諸如MEDI6469、MEDI6383或MEDI0562)、來那度胺(lenalidomide)、泊馬度胺(pomalidomide)、CD27促效劑(諸如CDX-1127)、CD28促效劑(諸如TGN1412、CD80或CD86)、CD40促效劑(諸如CP-870,893、rhuCD40L或SGN-40)、CD122促效劑(諸如IL-2)、GITR促效劑(諸如PCT專利公開案第WO 2016/054638號中所述之人源化單株抗體)、ICOS (CD278)促效劑(諸如GSK3359609、mAb 88.2、JTX-2011、Icos 145-1、Icos 314-8或其任何組合)。在本文所揭露之任何實施例中，方法可包含單獨或以任何組合投予具有一或多種刺激性免疫檢查點分子之促效劑(包括前述任一者)的組成物。
在某些實施例中，組合療法包含組成物及二級療法，其包含以下中之一或多者：對由非發炎實體腫瘤表現之癌症抗原具有特異性之抗體或其抗原結合片段、放射治療、手術、化學治療劑、細胞介素、RNAi或其任何組合。
在某些實施例中，組合治療方法包含投予組成物且進一步投予放射治療或手術。放射療法為此項技術中熟知的且包括X射線療法，諸如γ-輻射及放射性藥物療法。適合於治療個體之給定癌症或非發炎實體腫瘤之手術及手術技術為一般熟習此項技術者所熟知的。
在某些實施例中，組合療法方法包含投予組成物且進一步投予化學治療劑。化學治療劑包括但不限於染色質功能抑制劑、拓樸異構酶抑制劑、微管抑制藥物、DNA損傷劑、抗代謝物(諸如葉酸拮抗劑、嘧啶類似物、嘌呤類似物及經糖修飾之類似物)、DNA合成抑制劑、DNA交互劑(諸如嵌入劑)及DNA修復抑制劑。說明性化學治療劑包括但不限於以下群組：抗代謝物/抗癌劑，諸如嘧啶類似物(5-氟尿嘧啶、氟尿苷、卡培他濱、吉西他濱及阿糖胞苷)及嘌呤類似物、葉酸拮抗劑及相關抑制劑(巰基嘌呤、硫鳥嘌呤、噴司他丁及2-氯去氧腺苷(克拉屈濱))；抗增殖/抗有絲分裂劑，包括天然產物，諸如長春花生物鹼(長春鹼、長春新鹼及長春瑞賓)，微管破壞劑，諸如紫杉烷(紫杉醇、多西他賽)、長春新鹼、長春鹼、諾考達唑、埃博黴素及溫諾平、表鬼臼毒素(依託泊苷、替尼泊苷)、DNA損傷劑(放線菌素、安吖啶、蒽環黴素、博萊黴素、白消安、喜樹鹼、卡鉑、苯丁酸氮芥、順鉑、環磷醯胺(cyclophosphamide)、環磷醯胺(Cytoxan)、更生黴素、道諾黴素、阿黴素、表柔比星、六甲密胺奧沙利鉑、異環磷醯胺、美法侖、甲基二(氯乙基)胺、絲裂黴素、米托蒽醌、亞硝基脲、普卡黴素、丙卡巴肼、紫杉醇、泰索帝、替莫唑胺、替尼泊苷、三伸乙基硫代磷醯胺及依託泊苷(VP 16))；抗生素，諸如更生黴素(放線菌素D)、道諾黴素、阿黴素(阿德力黴素)、伊達比星、蒽環黴素、米托蒽醌、博來黴素、普卡黴素(光神黴素)及絲裂黴素；酶(L-天冬醯胺酶，其全身性代謝L-天冬醯胺且剝奪沒有能力合成其自身天冬醯胺的細胞)；抗血小板劑；抗增殖/抗有絲分裂烷基化劑，諸如氮芥(甲基二(氯乙基)胺、環磷醯胺及類似物、美法侖、苯丁酸氮芥)、乙烯亞胺及甲基三聚氰胺(六甲蜜胺及噻替派)、磺酸烷基酯-白消安、亞硝基脲(卡莫司汀(BCNU)及類似物、鏈佐星)、三氮雜萘-達卡巴嗪(DTIC)；抗增殖/抗有絲分裂抗代謝物，諸如葉酸類似物(甲胺喋呤)；鉑配位複合物(順鉑、卡鉑)、丙卡巴肼、羥基脲、米托坦、胺魯米特；激素、激素類似物(雌激素、他莫昔芬、戈舍瑞林、比卡魯胺、尼魯胺)及芳香酶抑制劑(來曲唑、阿那曲唑)；抗凝劑(肝素、合成肝素鹽及其他凝血酶抑制劑)；纖維蛋白溶解劑(諸如組織血纖維蛋白溶酶原活化劑、鏈激酶及尿激酶)、阿司匹林、雙嘧達莫、噻氯匹定、克羅匹多、阿昔單抗；抗遷移劑；抗分泌劑(布瑞汀)；免疫抑制劑(環孢素、他克莫司(FK-506)、西羅莫司(雷帕黴素)、硫唑嘌呤、黴酚酸嗎啉乙酯)；抗血管生成化合物(TNP470、金雀異黃酮)及生長因子抑制劑(血管內皮生長因子(VEGF)抑制劑、纖維母細胞生長因子(FGF)抑制劑)；血管收縮素受體阻斷劑；一氧化氮供體；反義寡核苷酸；抗體(曲妥珠單抗、利妥昔單抗)；嵌合抗原受體；細胞週期抑制劑及分化誘導劑(視網酸)；mTOR抑制劑、拓樸異構酶抑制劑(阿黴素(阿德力黴素)、安吖啶、喜樹鹼、道諾黴素、更生黴素、艾尼西德、表柔比星、依託泊苷、伊達比星、伊立替康(CPT-11)及米托蒽醌、拓樸替康、伊立替康)、皮質類固醇(皮質酮、地塞米松、氫皮質酮、甲潑尼龍、普賴松及潑尼龍)；生長因子訊息轉導激酶抑制劑；粒線體功能障礙誘導劑、毒素諸如霍亂毒素、蓖麻毒素、綠膿桿菌外毒素、百日咳博德氏桿菌腺苷酸環化酶毒素或白喉毒素及胱天蛋白酶活化劑；及染色質破環劑。
細胞介素可用於操縱宿主免疫反應朝向抗癌活性。參見例如Floros & Tarhini, Semin. Oncol. 42(4):539-548, 2015。可用於促進免疫抗癌或抗腫瘤反應之細胞介素包括例如IFN-α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-21、IL-24及GM-CSF，單獨或與本揭露內容之融合蛋白或表現其之細胞(或載體或多核苷酸)任意組合。
在某些實施例中，個體正接受、已接受或將接受以下中之一或多者：(i)化學療法；(ii)放射療法；(iii)免疫抑制組分之抑制劑；(iv)刺激性免疫檢查點藥劑之促效劑；(v) RNAi；(vi)細胞介素；(vii)手術；(viii)單株抗體及/或抗體-藥物結合物；或(ix) (i)-(viii)之任何組合，按任何順序。
本文亦提供本發明所揭露之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞、組成物或單位劑量中之任一者的用途，其用於治療個體之疾病或病症，其中該疾病或病況任擇地以抗原(例如由諸如在宿主細胞中表現之抗原結合蛋白之結合域結合) (例如本文所揭露之任何目標)之存在為特徵。
本文亦提供本發明所揭露之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞、組成物或單位劑量中之任一者的用途，其用於製造供治療個體之疾病或病況用的藥物。
本揭露內容亦提供以下非限制性列舉實施例。
實施例1.  一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體(TGFβR)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體(IL-2R)多肽之一胞內部分；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例2.  如實施例1之融合蛋白，其中該TGFβR多肽包含一TGFβR1多肽或一TGFβR2多肽。
實施例3.  如實施例1或2之融合蛋白，其中該IL-2R多肽包含一IL-2Rβ多肽、一IL-2Rγ多肽或二者。
實施例4.  一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之一胞內部分；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例5.  一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之一胞內部分；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例6.  一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之一胞內部分；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例7.  一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之一胞內部分；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例8.  如實施例1至7中任一項之融合蛋白，其中該跨膜組分包含來自IL-2Rβ之一跨膜域。
實施例9.  如實施例1至8中任一項之融合蛋白，其中該跨膜組分包含來自IL-2Rγ之一跨膜域。
實施例10.    如實施例1至9中任一項之融合蛋白，其中該跨膜組分包含來自TGFβR1之一跨膜域。
實施例11. 如實施例1至10中任一項之融合蛋白，其中該跨膜組分包含來自TGFβR2之一跨膜域。
實施例12.    一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rβ胞內域；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一IL-2Rβ跨膜域， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例13.    一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rβ胞內域；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一IL-2Rβ跨膜域， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例14.    一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rβ跨膜域；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一TGFβR1跨膜域， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例15.    一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rβ胞內域；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一TGFβR2跨膜域， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例16.    一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rγ胞內域；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一IL-2Rγ跨膜域， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例17.    一種融合蛋白，其包含：(i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；(ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rγ胞內域；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一IL-2Rγ跨膜域，其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例18.    一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rγ胞內域；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一TGFβR2跨膜域， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例19.    一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rγ胞內域；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一TGFβR1跨膜域， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例20.    如實施例1至19中任一項之融合蛋白，其中：(1) (i)該胞外組分與SEQ ID NO.:39或41中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成；(ii)該跨膜組分與SEQ ID NO.:40；SEQ ID NO.:42；SEQ ID NO.:43；或SEQ ID NO.:45中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成；及(iii)該胞內組分與SEQ ID NO.:44或46中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成，且其中任擇地，該融合蛋白包含與SEQ ID NOS.:5、6、9、10、13、14、17及18中之任一者中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性或包含或由該胺基酸序列組成的胺基酸序列；及/或(2)    其中該融合蛋白包含一或多個胺基酸取代、插入及/或缺失以減少或防止該融合蛋白與一人類TGFβR1或一人類TGFβR2形成一蛋白質二聚體，其中任擇地，該一或多個胺基酸取代、插入及/或缺失提供：(i) SEQ ID NO.:47之一變異體，其中該變異體包含一至十個胺基酸插入或一至十個胺基酸缺失；(ii)添加至SEQ ID NO.:47之N端及/或C端的一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個胺基酸；(iii) SEQ ID NO.:48之一變異體，其中該變異體包含一至十個胺基酸插入或一至十個胺基酸缺失；(iv)添加至SEQ ID NO.:48之N端及/或C端的一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個。
實施例21.    如實施例1至20中任一項之融合蛋白，其中該IL-2訊息包含、引起、提供或促進(i)-(vii)中之任一或多者：(i)該IL-2R多肽之該胞內部分由JAK1或JAK3磷酸化；(ii)以下中之任一或多者在該宿主細胞中磷酸化：PI3K；Akt；STAT；STAT5A；STAT5B；MEK；SHC1；MEK1；MEK2；ERK1；ERK2；及STAT3；(iii) STAT5介導之轉錄；(iv) GRB2及SOS之募集；(v) RAS之GTP負載；(vi) Raf-ERK MAPK級聯之活化；(vii) mTORC1及/或HIF1α/HIF1β之活化。
實施例22.    如實施例1至21中任一項之融合蛋白，其中當該融合蛋白由一宿主細胞表現且該融合蛋白與該TGFβ多肽結合時，該宿主細胞執行以下中之一或多者：增殖；生長；一效應分子(例如一T細胞受體)之表現；醣酵解代謝；蛋白質(例如MYC、SLC7A5或二者)之表現；及膽固醇之生物合成。
實施例23.    一種融合蛋白，其包含或由SEQ ID NOs.:5、6、9、10、13、14、17及18中之任一者中所列之胺基酸序列組成。
實施例24.    一種融合蛋白，其包含或由SEQ ID NOs.:7、11、15及19中之任一者中所列之胺基酸序列組成。
實施例25.    一種多核苷酸，其編碼如實施例1至24中任一項之融合蛋白。
實施例26.    一種多核苷酸，其編碼如實施例1至24中任一項之融合蛋白，其中該經編碼融合蛋白進一步包含在該胞外組分之N端且連接至該胞外組分之一訊息肽。
實施例27.    如實施例26之多核苷酸，其中該訊息肽包含或由SEQ ID NO.:21或22中所列之胺基酸序列組成。
實施例28.    一種多核苷酸，其編碼(1)如實施例1至24中任一項之一第一融合蛋白及(2)如實施例1至24中任一項之一第二融合蛋白。
實施例29.    如實施例28之多核苷酸，其中該第一融合蛋白之一胺基酸序列與該第二融合蛋白之一胺基酸序列不同， 其中，任擇地： (a)  該第一融合蛋白包含一TGFβR1多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，且該第二融合蛋白包含一TGFβR2多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；及/或 (b)  該第一融合蛋白包含一IL-2Rγ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rγ胞內域，且該第二融合蛋白包含一IL-2Rβ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rβ胞內域，或(c)該第一融合蛋白包含一IL-2Rβ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rβ胞內域，且該第二融合蛋白包含一IL-2Rγ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rγ胞內域；及/或 (d)  該第一融合蛋白包含一IL-2Rβ跨膜域、一IL-2Rγ跨膜域、一TGFβR1跨膜域或一TGFβR2跨膜域，且該第二融合蛋白包含一IL-2Rβ跨膜域、一IL-2Rγ跨膜域、一TGFβR1跨膜域或一TGFβR2跨膜域。
實施例30.    如實施例28或29之多核苷酸，其進一步包含安置於編碼該第一融合蛋白之一核苷酸序列與編碼該第二融合蛋白之一核苷酸序列之間的： (i)   編碼一弗林蛋白酶裂解位點之一核苷酸序列； (ii)  編碼一自裂解多肽(例如P2A、T2A、E2A、F2A)之一核苷酸序列；或 (iii) (i)及(ii)二者，其中，任擇地，(i)安置於(ii)之5' (亦即上游)。
實施例31.    如實施例25至30中任一項之多核苷酸，其經密碼子最佳化以在一宿主細胞中表現，其中該宿主細胞任擇地為一人類宿主細胞，進一步任擇地為一人類免疫系統細胞，再進一步任擇地為一人類T細胞(例如一CD4+ T細胞、一CD8+ T細胞、一CD4- CD8-雙陰性T細胞、一γδ T細胞或其任何組合)、一人類NK細胞或一人類NK-T細胞。
實施例32.    如實施例31之多核苷酸，其經密碼子最佳化以在一T細胞(例如一CD4+ T細胞、一CD8+ T細胞、一CD4- CD8-雙陰性T細胞、一γδ T細胞或其任何組合)、一NK細胞或一NK-T細胞中表現，其中該細胞較佳為人類的。
實施例33.    如實施例25至32中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸與SEQ ID NOs.:8、12、16及20中之任一者中所列之胺基酸序列具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成。
實施例34.    如實施例25至33中任一項之多核苷酸，其進一步包含編碼一抗原結合蛋白之一核苷酸序列。
實施例35.    如實施例34之多核苷酸，其中該抗原結合蛋白包含一TCR、一TCR之一抗原結合片段(例如一scTv)、一scTCR、一CAR或其任何組合。
實施例36.    如實施例25至35中任一項之多核苷酸，其進一步包含編碼一轉導標記之一核苷酸序列。
實施例37.    如實施例36之多核苷酸，其中該經編碼轉導標記包含EGFRt、CD19t、CD34t或NGFRt。
實施例38.    如實施例25至37中任一項之多核苷酸，其進一步包含編碼一引導RNA之一核苷酸序列，其中，任擇地，該引導RNA對一TGFβR1基因座、一TGFβR2基因座、一PD-1基因座、一CTLA4基因座、一LAT基因座、一TIM-3基因座、一PD-L1基因座、一TIGIT基因座、一A2AR基因座、一Fas基因座、一FasL基因座、一B7-H3基因座、一B7-H4基因座、一IDO基因座、一VISTA基因座、一SIGLEC7基因座、一SIGLEC9基因座、一TRAC基因座、一TRBC基因座、一T細胞受體基因座、一MHC (例如HLA)基因座、一CBLB基因座、一RASA2基因座、一UBASH3A基因座、一CISH基因座或其任何組合具有特異性。
實施例39.    如實施例25至38中任一項之多核苷酸，其進一步包含編碼一Cas核酸酶之一核苷酸序列，其中，任擇地，該Cas核酸酶包含一Cas9或其一功能性變異體、一Cas12或其一功能性變異體、一Cas13或其一功能性變異體、或一Cas14或其一功能性變異體。
實施例40.    一種載體，其包含如實施例25至39中任一項之多核苷酸，任擇地，其中該多核苷酸可操作地連接於一表現控制序列。
實施例41.    如實施例40之載體，其中該載體能夠將該多核苷酸遞送至一造血前驅細胞或一人類免疫系統細胞。
實施例42.    如實施例41之載體，其中該人類免疫系統細胞包含一CD4+ T細胞、一CD8+ T細胞、一CD4- CD8-雙陰性T細胞、一γδ T細胞、一自然殺手細胞、一自然殺手T細胞、一樹突狀細胞或其任何組合。
實施例43.    如實施例42之載體，其中該T細胞包含一初始T細胞、一中央記憶T細胞、一幹細胞記憶T細胞、一效應記憶T細胞或其任何組合。
實施例44.    如實施例40至43中任一項之載體，其中該載體為一病毒載體。
實施例45.    如實施例44之載體，其中該病毒載體為一慢病毒載體或一γ-反轉錄病毒載體。
實施例46.    一種宿主細胞，其表現如實施例1至24中任一項之融合蛋白。
實施例47.    一種宿主細胞，其包含如實施例25至39中任一項之多核苷酸。
實施例48.    一種宿主細胞，其包含如實施例40至45中任一項之載體。
實施例49.    如實施例46至48中任一項之宿主細胞，其表現或編碼(1)如實施例1至24中任一項之一第一融合蛋白及(2)如實施例1至24中任一項之一第二融合蛋白。
實施例50.    如實施例49之宿主細胞，其中該第一融合蛋白之一胺基酸序列與該第二融合蛋白之一胺基酸序列不同， 其中，任擇地： (a)  該第一融合蛋白包含一TGFβR1多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，且該第二融合蛋白包含一TGFβR2多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；及/或 (b)  該第一融合蛋白包含一IL-2Rγ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rγ胞內域，且該第二融合蛋白包含一IL-2Rβ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rβ胞內域，或(c)該第一融合蛋白包含一IL-2Rβ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rβ胞內域，且該第二融合蛋白包含一IL-2Rγ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rγ胞內域；及/或 (d)  該第一融合蛋白包含一IL-2Rβ跨膜域、一IL-2Rγ跨膜域、一TGFβR1跨膜域或一TGFβR2跨膜域，且該第二融合蛋白包含一IL-2Rβ跨膜域、一IL-2Rγ跨膜域、一TGFβR1跨膜域或一TGFβR2跨膜域。
實施例51.    如實施例49或50之宿主細胞，其中： (i)   該第一融合蛋白包含與SEQ ID NOs.:5、10、13及18中之任一者中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列；及 (ii)  該第二融合蛋白包含與SEQ ID NOs.:6、9、14及17中之任一者中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列。
實施例52.    如實施例51之宿主細胞，其中該第一融合蛋白及該第二融合蛋白包含與以下SEQ ID NOs中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列：(i)分別為5及6；(ii)分別為5及9；(iii)分別為5及14；(iv)分別為5及17；(v)分別為10及6；(vi)分別為10及9；(vii)分別為10及14；(viii)分別為10及17；(ix)分別為13及6；(x)分別為13及9；(xi)分別為13及14；(xii)分別為13及17；(xiii)分別為18及6；(xiv)分別為18及9；(xv)分別為18及14；或(xvi)分別為18及17。
實施例53.    如實施例50至52中任一項之宿主細胞，其中該宿主細胞編碼與SEQ ID NOs.:7、11、15及19中之任一者中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列。
實施例54.    如實施例50至53中任一項之宿主細胞，其中該宿主細胞在其細胞表面表現包含該第一融合蛋白及該第二融合蛋白之一蛋白質複合物，其中該蛋白質複合物能夠與一TGFβ多肽結合，該多肽任擇地包含在一TGFβ二聚體中。
實施例55.    如實施例46至54中任一項之宿主細胞，其中該宿主細胞包含一造血前驅細胞或一人類免疫系統細胞。
實施例56.    如實施例46至55中任一項之宿主細胞，其中該宿主細胞包含一CD4+ T細胞、一CD8+ T細胞、一CD4- CD8-雙陰性T細胞、一γδ T細胞、一自然殺手細胞、一自然殺手T細胞、一樹突狀細胞或其任何組合。
實施例57.    如實施例46至56中任一項之宿主細胞，其中該宿主細胞包含一T細胞。
實施例58.    如實施例57之宿主細胞，其中該T細胞包含一初始T細胞、一中央記憶T細胞、一幹細胞記憶T細胞、一效應記憶T細胞或其任何組合。
實施例59.    如實施例46至58中任一項之宿主細胞，其包含以下之一染色體基因剔除或一突變：一TGFβR1基因座、一TGFβR2基因座、一PD-1基因座、一CTLA4基因座、一LAT基因座、一TIM-3基因座、一PD-L1基因座、一TIGIT基因座、一A2AR基因座、一Fas基因座、一FasL基因座、一B7-H3基因座、一B7-H4基因座、一IDO基因座、一VISTA基因座、一SIGLEC7基因座、一SIGLEC9基因座、一TRAC基因座、一TRBC基因座、一T細胞受體基因座、一MHC (例如HLA)基因座、一CBLB基因座、一RASA2基因座、一UBASH3A基因座、一CISH基因座或其任何組合。
實施例60.    如實施例46至59中任一項之宿主細胞，其中該宿主細胞經修飾(例如，具有一染色體基因剔除突變及/或一染色體誤義突變及/或一染色體剪接接合點突變；編碼一抑制性核酸，諸如一siRNA或一反義寡核苷酸)，以使得一內源性TGFβR1、一內源性TGFβR2或二者之蛋白質表現與該未經修飾之宿主細胞相比減少(包括剔除式表現)。
實施例61.    如實施例46至60中任一項之宿主細胞，其進一步包含編碼一抗原結合蛋白之一多核苷酸。
實施例62.    如實施例46至61中任一項之宿主細胞，其表現一/該抗原結合蛋白。
實施例63.    如實施例61或62之宿主細胞，其中該抗原結合蛋白包含一TCR (任擇地，其中該TCR對該宿主細胞為內源的)、一TCR之一抗原結合片段(例如一scTv)、一scTCR、一CAR或其任何組合。
實施例64.    如實施例61至63中任一項之宿主細胞，其中該抗原結合蛋白結合於：一癌症抗原；一自體免疫抗原；一病毒抗原；一細菌抗原；一真菌抗原；一寄生蟲抗原；或其任何組合。
實施例65.    如實施例64之宿主細胞，其中該癌症包含一實體腫瘤、一惡性血液病或二者。
實施例66.    如實施例64至65中任一項之宿主細胞，其中該抗原係選自一WT1、間皮素、KRAS、ROR1、EGFR、EGFRvIII、EGP-2、EGP-40、GD2、GD3、HPV E6、HPV E7、Her2、L1-CAM、Lewis A、Lewis Y、MUC1、MUC16、PSCA、PSMA、CD19、CD20、CD22、CD56、CD23、CD24、CD30、CD33、CD37、CD44v7/8、CD38、CD56、CD123、CA125、c-MET、FcRH5、葉酸受體α、VEGF-α、VEGFR1、VEGFR2、IL-13Rα2、IL-11Rα、MAGE-A1、PSA、ephrin A2、ephrin B2、NKG2D、NY-ESO-1、TAG-72、NY-ESO、5T4、BCMA、FAP、碳酸酐酶9、BRAF、α-胎兒蛋白、MAGE-A3、MAGE-A4、SSX-2、PRAME、HA-1、β2M、ETA、酪胺酸酶、NRAS或CEA抗原。
實施例67.    如實施例1至24中任一項之融合蛋白，如實施例25至39中任一項之多核苷酸、如實施例40至45中任一項之載體或如實施例46至66中任一項之宿主細胞，其中該TGFβ多肽包含一TGFB1、一TGFB2、一TGFB3或其任何組合，任擇地包含在一TGFβ多肽二聚體中。
實施例68.    如實施例46至67中任一項之宿主細胞，其中當該宿主細胞在一TGFβ存在下時，與當該宿主細胞在該TGFβ不存在下時之磷酸化STAT5位準相比，該宿主細胞包含一增加的磷酸化STAT5位準。
實施例69.    如實施例46至67中任一項之宿主細胞，其中當該宿主細胞在一TGFβ多肽(例如一TGFβ多肽二聚體)存在下時，該宿主細胞包含一IL-2R訊息。
實施例70.    如實施例46至69中任一項之宿主細胞，其中當在一TGFβ多肽(例如一TGFβ多肽二聚體)存在下時，該宿主細胞執行以下中之一或多者：增殖；生長；一效應分子(例如一T細胞受體)之表現；醣酵解代謝；蛋白質(例如MYC、SLC7A5或二者)之表現；及膽固醇之生物合成。
實施例71.    如實施例46至70中任一項之宿主細胞，其中與一參考細胞相比，當該宿主細胞在一TGFβ多肽(例如一TGFβ多肽二聚體)存在下時，該宿主細胞具有一降低的磷酸化SMAD2/SMAD3位準， 其中該參考細胞不編碼或表現該(等)融合蛋白，且任擇地，未經修飾以使得一內源性TGFβR1、一內源性TGFβR2或二者之蛋白質表現與無修飾之該參考細胞相比減少(包括剔除式表現)。
實施例72.    如實施例46至71中任一項之宿主細胞，其中當該宿主細胞在一TGFβ存在下時，與當不編碼或表現該(等)融合蛋白之一參考細胞在該TGFβ存在下時該參考細胞中所包含之磷酸化STAT5位準相比，該宿主細胞包含一增加的磷酸化STAT5位準。
實施例73.    如實施例46至72中任一項之宿主細胞，其中當該宿主細胞在一IL-2存在下時，與當分別不編碼或表現該(等)融合蛋白之一參考細胞在該IL-2存在下時該參考細胞中所包含之磷酸化STAT5位準相比，該宿主細胞包含一增加的磷酸化STAT5位準。
實施例74.    如實施例61至73中任一項之宿主細胞，其中當在一TGFβ多肽(任擇地包含在一TGFβ多肽二聚體中)存在下時，該宿主細胞能夠以與一參考細胞在一IL-2多肽存在下時該參考細胞之殺傷位準大致相同的位準殺傷抗原表現細胞。
實施例75.    一種組成物，其包含：(i)如實施例1至24及67中任一項之融合蛋白；及/或(ii)如實施例25至39及67中任一項之多核苷酸；及/或(iii)如實施例40至45及67中任一項之載體；及/或(iv)如實施例46至74中任一項之宿主細胞，及一醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑。
實施例76.    如實施例75之組成物，其包含(i)包含至少約30% CD4+ T宿主細胞之一組成物與(ii)包含至少約30% CD8+ T宿主細胞之一組成物之約一1:1比率的組合。
實施例77.    一種治療一個體之一疾病或病況的方法，該方法包含向該個體投予一有效量之：(i) 如實施例1至24及67中任一項之融合蛋白；及/或(ii)  如實施例25至39及67中任一項之多核苷酸；及/或(iii)   如實施例40至45及67中任一項之載體；及/或(iv)  如實施例46至74中任一項之宿主細胞；及/或(v)  如實施例75或76之組成物。
實施例78.    如實施例1至24及67中任一項之融合蛋白，及/或如實施例25至39及67中任一項之多核苷酸，及/或如實施例40至45及67中任一項之載體，及/或 如實施例46至74中任一項之宿主細胞，及/或如實施例75或76之組成物，其用於治療一個體之一疾病或病況的一方法中。
實施例79.    如實施例1至24及67中任一項之融合蛋白，及/或如實施例25至39及67中任一項之多核苷酸，及/或如實施例40至45及67中任一項之載體，及/或 如實施例46至74中任一項之宿主細胞，及/或如實施例75或76之組成物，其用於製備供治療一個體之一疾病或病況用之一藥物。
實施例80.    如實施例77之方法或如實施例78或79之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該疾病或病況與一抗原之表現相關或以一抗原之表現為特徵，其中該抗原由該抗原結合蛋白特異性結合。
實施例81.    如實施例77或80之方法，或如實施例78至80中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該疾病或病況包含或為一過度增殖性疾病、一增殖性疾病、一自體免疫疾病、一神經退化性疾病或一感染。
實施例82.    如實施例77、80或81之方法或如實施例78至81中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該疾病或病況為一癌症。
實施例83.    如實施例82之方法或如實施例82之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該癌症包含一癌瘤、一肉瘤、一神經膠質瘤、一淋巴瘤、一白血病、一骨髓瘤或其任何組合。
實施例84.    如實施例82或83之方法，或如實施例82或83之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該癌症包含一頭頸癌、黑素瘤、胰臟癌、膽管癌、肝細胞癌、包括三陰性乳癌(TNBC)在內之乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、前列腺癌、食道癌、間皮瘤、小細胞肺癌、結腸直腸癌、神經膠質母細胞瘤或其任何組合。
實施例85.    如實施例82至84中任一項之方法，或如實施例82至84中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該癌症包含阿金氏腫瘤、葡萄狀肉瘤、軟骨肉瘤、尤文氏肉瘤、PNET、惡性血管內皮瘤、惡性神經鞘瘤、骨肉瘤、肺泡狀軟組織肉瘤、血管肉瘤、葉狀囊肉瘤、隆凸性皮膚纖維肉瘤(DFSP)、硬纖維瘤、促結締組織增生性小圓細胞腫瘤、上皮樣肉瘤、骨外軟骨肉瘤、骨外骨肉瘤、纖維肉瘤、胃腸道間質瘤(GIST)、血管外皮瘤、血管內皮瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉瘤、未分化多形性肉瘤、惡性周邊神經鞘腫瘤(MPNST)、神經纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、滑膜肉瘤、未分化多形性肉瘤、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、皮革胃、血管活性腸肽瘤、膽管癌、肝細胞癌、腺樣囊性癌、腎細胞癌、格拉維茨瘤、室管膜瘤、星形細胞瘤、寡樹突神經膠質瘤、腦幹神經膠質瘤、視神經膠質瘤、一混合神經膠質瘤、霍奇金氏淋巴瘤、一B細胞淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、伯基特氏淋巴瘤、小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、免疫母細胞大細胞淋巴瘤、前體B淋巴母細胞淋巴瘤及套細胞淋巴瘤、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、CD37 +樹突狀細胞淋巴瘤、淋巴漿細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤、黏膜相關(MALT)淋巴組織之結外邊緣區B細胞淋巴瘤、結邊緣區B細胞淋巴瘤、縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤、成人T細胞淋巴瘤、鼻型結外NK/T細胞淋巴瘤、腸病相關T細胞淋巴瘤、肝脾T細胞淋巴瘤、母細胞性NK細胞淋巴瘤、塞紮里症候群、血管免疫母細胞T細胞淋巴瘤、間變性大細胞淋巴瘤或其任何組合。
實施例86.    如實施例82之方法或如實施例82之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該癌症包含一實體腫瘤。
實施例87.    如實施例86之方法或如實施例86之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該實體腫瘤為一肉瘤或一癌瘤。
實施例88.    如實施例87之方法或如實施例87之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該實體腫瘤係選自：軟骨肉瘤；纖維肉瘤(纖維母細胞肉瘤)；隆凸性皮膚纖維肉瘤(DFSP)；骨肉瘤；橫紋肌肉瘤；尤文氏肉瘤；一胃腸道間質瘤；平滑肌肉瘤；血管肉瘤；卡波西氏肉瘤；脂肪肉瘤；多形性肉瘤；或滑膜肉瘤。
實施例89.    如實施例86至88中任一項之方法或如實施例86至88中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該實體腫瘤係選自一肺癌(例如腺癌、鱗狀細胞癌(表皮樣癌)；鱗狀細胞癌；腺癌；腺鱗癌；未分化癌；大細胞癌；小細胞癌；一乳癌(例如乳腺管原位癌(非侵襲性)、小葉原位癌(非侵襲性)、侵襲性乳腺管癌、侵襲性小葉癌、非侵襲性癌)；一肝癌(例如肝細胞癌、膽管瘤或膽管癌)；大細胞未分化性癌、細支氣管肺泡癌)；一卵巢癌(例如表面上皮-間質腫瘤(腺癌)或卵巢上皮癌(其包括漿液性腫瘤、子宮內膜樣腫瘤及黏液性囊腺癌)、表皮樣(鱗狀細胞癌)、胚胎性癌及絨毛膜癌(生殖細胞腫瘤))；一腎癌(例如腎腺癌、腎上腺樣瘤、移行細胞癌(腎盂)、鱗狀細胞癌、貝里尼管癌、透明細胞腺癌、移行細胞癌、腎盂類癌)；一腎上腺癌(例如腎上腺皮質癌)、一睪丸癌(例如生殖細胞癌(精原細胞瘤、絨毛膜癌、胚胎癌、畸胎癌)、漿液性癌)；胃癌(例如腺癌)；一腸癌(例如十二指腸腺癌)；一結腸直腸癌；或一皮膚癌(例如基底細胞癌、鱗狀細胞癌)。
實施例90.    如實施例86至89中任一項之方法，或如實施例86至89中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該實體腫瘤為一卵巢癌、一卵巢上皮癌、一子宮頸腺癌或小細胞癌、一胰臟癌、一結腸直腸癌(例如一腺癌或鱗狀細胞癌)、一肺癌、一乳腺管癌或一前列腺腺癌。
實施例91.    如實施例77及80至90中任一項之方法，或如實施例78至90中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該宿主細胞為一同種異體細胞、一同基因型細胞或一自體細胞。
實施例92.    如實施例77及80至91中任一項之方法，或如實施例78至91中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該方法包含向該個體投予多個劑量之該融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物。
實施例93.    如實施例92之方法或如實施例92之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該等多個劑量以約二週、三週、四週、五週、六週、七週、八週或更多週的投予間隔投予。
實施例94.    如實施例92或93之方法，或如實施例92或93之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該宿主細胞之一劑量包含約10 5個細胞/平方公尺至約10 11個細胞/平方公尺。
實施例95.    如實施例77及80至94中任一項之方法，或如實施例78至94中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該個體正接受、已接受或將接受以下中之一或多者：(i)化學療法；(ii)放射療法；(iii)一免疫抑制組分之一抑制劑；(iv)一刺激性免疫檢查點藥劑之一促效劑；(v) RNAi；(vi)一細胞介素；(vii)一手術；(viii)一單株抗體及/或一抗體-藥物結合物；或(ix) (i)-(viii)之任何組合，按任何順序。
實施例1a. 一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體(TGFβR)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；(ii)一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體(IL-2R)多肽之一胞內部分；及(iii)一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例2a. 如實施例1a之融合蛋白，其中該TGFβR多肽包含一TGFβR1多肽或一TGFβR2多肽。
實施例3a. 如實施例1a或2a之融合蛋白，其中該IL-2R多肽包含一IL-2Rβ多肽、一IL-2Rγ多肽或二者。
實施例4a. 一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；(ii)一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之一胞內部分；及(iii)一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例5a. 一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；(ii)一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之一胞內部分；及 (iii)一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例6a. 一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；(ii)一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之一胞內部分；及 (iii)一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例7a. 一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；(ii)一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之一胞內部分；及 (iii)一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例8a. 如實施例1a至7a中任一項之融合蛋白，其中該跨膜組分包含來自IL-2Rβ之一跨膜域。
實施例9a. 如實施例1a至8a中任一項之融合蛋白，其中該跨膜組分包含來自IL-2Rγ之一跨膜域。
實施例10a.  如實施例1a至9a中任一項之融合蛋白，其中該跨膜組分包含來自TGFβR1之一跨膜域，且其中任擇地，該融合蛋白之該胞內組分進一步包含安置於該IL-2R胞內部分之N端的一至二十個、一至十五個、一至十個、一至五個、二至二十個、二至十五個、二至十個、二至五個、三至二十個、三至十五個、三至十個、三至五個、至多五個、至多十個、至多十五個、至多二十個、或一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個、十八個、十九個或二十個來自TGFβR1胞內域之連續N端胺基酸，或其包含一個、二個、三個、四個或五個任擇地守恆胺基酸取代之一變異體，其中進一步任擇地，該融合蛋白之該胞內組分包含安置於該IL-2R胞內部分之N端的胺基酸C-H-N。
實施例11a.  如實施例1a至10a中任一項之融合蛋白，其中該跨膜組分包含來自TGFβR2之一跨膜域，且其中任擇地，該融合蛋白之該胞內組分進一步包含安置於該IL-2R胞內部分之N端的一至二十個、一至十五個、一至十個、一至五個、二至二十個、二至十五個、二至十個、二至五個、三至二十個、三至十五個、三至十個、三至五個、至多五個、至多十個、至多十五個、至多二十個、或一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個、十八個、十九個或二十個來自TGFβR2胞內域之連續N端胺基酸，或其包含一個、二個、三個、四個或五個任擇地守恆胺基酸取代之一變異體，其中進一步任擇地，該融合蛋白之該胞內組分包含安置於該IL-2R胞內部分之N端的胺基酸R-V-N。
實施例12a.  一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；(ii)一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rβ胞內域；及(iii)一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一IL-2Rβ跨膜域，其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例13a.  一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；(ii)一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rβ胞內域；及(iii)一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一IL-2Rβ跨膜域，其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例14a.  一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；(ii)一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rβ胞內域；及(iii)一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一TGFβR1跨膜域，其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例15a.  一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；(ii)一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rβ胞內域；及(iii)一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一TGFβR2跨膜域，其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例16a.  一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；(ii)一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rγ胞內域；及(iii)一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一IL-2Rγ跨膜域，其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例17a.  一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；(ii)一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rγ胞內域；及 (iii)一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一IL-2Rγ跨膜域，其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例18a.  一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；(ii)一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rγ胞內域；及 (iii)一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一TGFβR2跨膜域，其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例19a.  一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；(ii)一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rγ胞內域；及(iii)一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一TGFβR1跨膜域，其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
實施例20a.  如實施例1a至19a中任一項之融合蛋白，其中：(1) (i)該胞外組分與SEQ ID NO.:39或41中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成；(ii)該跨膜組分與SEQ ID NO.:40；SEQ ID NO.:42；SEQ ID NO.:43；或SEQ ID NO.:45中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成；及(iii)該胞內組分與SEQ ID NO.:44或46中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成，且其中任擇地，該融合蛋白包含與SEQ ID NOS.:5、6、9、10、13、14、17及18中之任一者中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性或包含或由該胺基酸序列組成的胺基酸序列；及/或(2)其中該融合蛋白包含一或多個胺基酸取代、插入及/或缺失以減少或防止該融合蛋白與一人類TGFβR1或一人類TGFβR2形成一蛋白質二聚體，其中任擇地，該一或多個胺基酸取代、插入及/或缺失提供：(i) SEQ ID NO.:47之一變異體，其中該變異體包含一至十個胺基酸插入或一至十個胺基酸缺失；(ii)添加至SEQ ID NO.:47之N端及/或C端的一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個胺基酸；(iii) SEQ ID NO.:48之一變異體，其中該變異體包含一至十個胺基酸插入或一至十個胺基酸缺失；(iv)添加至SEQ ID NO.:48之N端及/或C端的一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個。
實施例21a.  如實施例1a至20a中任一項之融合蛋白，其中該跨膜組分包含來自該TGFβR多肽之一跨膜域且該胞內組分包含自該跨膜域延伸至該IL-2R多肽之該胞內部分的N端的一TGFβR胞內突出端或胞內突出端序列，例如表A所述，其中任擇地：(i)該跨膜組分包含一TGFβR1跨膜域且該胞內組分包含自該TGFβR1跨膜域延伸至該IL-2R多肽之該胞內部分的N端的一TGFβR1胞內突出端或胞內突出端序列，例如表A所述，其任擇地包含、基本上由或由胺基酸序列C-H-N組成；或 (ii)該跨膜組分包含一TGFβR2跨膜域且該胞內組分包含自該TGFβR2跨膜域延伸至該IL-2R多肽之該胞內部分的N端的一TGFβR2胞內突出端或胞內突出端序列，例如表A所述，其任擇地包含、基本上由或由胺基酸序列R-V-N組成。
實施例22a.  如實施例1a至21a中任一項之融合蛋白，其中該跨膜組分及該胞內組分之一部分共同包含SEQ ID NO.:56或SEQ ID NO.:60之胺基酸序列。
實施例23a.  如實施例1a至22a中任一項之融合蛋白，其中該IL-2訊息包含、引起、提供或促進(i)-(vii)中之任一或多者：(i)該IL-2R多肽之該胞內部分由JAK1或JAK3磷酸化；(ii)以下中之任一或多者在該宿主細胞中磷酸化：PI3K；Akt；STAT；STAT5A；STAT5B；MEK；SHC1；MEK1；MEK2；ERK1；ERK2；及STAT3；(iii) STAT5介導之轉錄；(iv) GRB2及SOS之募集；(v) RAS之GTP負載；(vi) Raf-ERK MAPK級聯之活化；(vii) mTORC1及/或HIF1α/HIF1β之活化。
實施例24a.  如實施例1a至23a中任一項之融合蛋白，其中當該融合蛋白由一宿主細胞表現且該融合蛋白與該TGFβ多肽結合時，該宿主細胞執行以下中之一或多者：增殖；生長；一效應分子(例如一T細胞受體)之表現；醣酵解代謝；蛋白質(例如MYC、SLC7A5或二者)之表現；及膽固醇之生物合成。
實施例25a.  一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含來自人類TGFβRI之一胞外域；(ii)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自人類TGFβRI之一跨膜域；及(iii)一胞內組分，該胞內組分包含來自人類IL-2Rβ之一細胞質/訊息傳導域，其中任擇地，該胞內組分進一步包含一人類TGFβR1胞內突出端或胞內突出端序列，例如表A所述，其任擇地包含、基本上由或由胺基酸序列C-H-N組成，安置於該人類IL-2Rβ細胞質/訊息傳導域之N端。
實施例26a.  一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含來自人類TGFβRI之一胞外域；(ii)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自人類TGFβRI之一跨膜域；及(iii)一胞內組分，該胞內組分包含來自人類IL-2Rγ之一細胞質/訊息傳導域，其中任擇地，該胞內組分進一步包含一人類TGFβR1胞內突出端或胞內突出端序列，例如表A所述，其任擇地包含、基本上由或由胺基酸序列C-H-N組成，安置於該人類IL-2Rγ細胞質/訊息傳導域之N端。
實施例27a.  一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含來自人類TGFβRI之一胞外域；(ii)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自人類IL-2Rβ之一跨膜域；及(iii)一胞內組分，該胞內組分包含來自人類IL-2Rβ之一細胞質/訊息傳導域。
實施例28a.  一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含來自人類TGFβRI之一胞外域；(ii)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自人類IL-2Rγ之一跨膜域；及(iii)一胞內組分，該胞內組分包含來自IL-2Rγ之一細胞質/訊息傳導域。
實施例29a.  一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含來自人類TGFβRII之一胞外域；(ii)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自人類TGFβRII之一跨膜域；及(iii)一胞內組分，該胞內組分包含來自人類IL-2Rβ之一細胞質/訊息傳導域，其中任擇地，該胞內組分進一步包含一人類TGFβRII胞內突出端或胞內突出端序列，例如表A所述，其任擇地包含、基本上由或由胺基酸序列R-V-N組成，安置於該IL-2Rβ細胞質/訊息傳導域之N端。
實施例30a.  一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含來自人類TGFβRII之一胞外域；(ii)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自人類TGFβRII之一跨膜域；及(iii)一胞內組分，該胞內組分包含來自人類IL-2Rγ之一細胞質/訊息傳導域，其中任擇地，該胞內組分進一步包含一人類TGFβRII胞內突出端或胞內突出端序列，例如表A所述，其任擇地包含、基本上由或由胺基酸序列R-V-N組成，安置於該IL-2Rγ細胞質/訊息傳導域之N端。
實施例31a.  一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含來自人類TGFβRII之一胞外域；(ii)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自人類IL-2Rβ之一跨膜域；及(iii)一胞內組分，該胞內組分包含來自人類IL-2Rβ之一細胞質/訊息傳導域。
實施例32a.  一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含來自人類TGFβRII之一胞外域；(ii)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自人類IL-2Rγ之一跨膜域；及(iii)一胞內組分，該胞內組分包含來自IL-2Rγ之一細胞質/訊息傳導域。
實施例33a.  一種融合蛋白，其包含或由SEQ ID NOs.:5、6、9、10、13、14、17及18中之任一者中所列之胺基酸序列組成。
實施例34a.  一種融合蛋白，其包含或由SEQ ID NOs.:7、11、15及19中之任一者中所列之胺基酸序列組成。
實施例35a.  一種多核苷酸，其編碼如實施例1a至34a中任一項之融合蛋白。
實施例36a.  一種多核苷酸，其編碼如實施例1a至34a中任一項之融合蛋白，其中該/一經編碼融合蛋白進一步包含在該胞外組分之N端且連接至該胞外組分之一訊息肽。
實施例37a.  如實施例36a之多核苷酸，其中該訊息肽包含或由SEQ ID NO.:21或22中所列之胺基酸序列組成。
實施例38a.  一種多核苷酸，其編碼(1)如實施例1至34a中任一項之一第一融合蛋白及(2)如實施例1至34a中任一項之一第二融合蛋白，任擇地，其中該第一融合蛋白及該第二融合蛋白包含與以下SEQ ID NOs中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列：(i)分別為5及6；(ii)分別為5及9；(iii)分別為5及14；(iv)分別為5及17；(v)分別為10及6；(vi)分別為10及9；(vii)分別為10及14；(viii)分別為10及17；(ix)分別為13及6；(x)分別為13及9；(xi)分別為13及14；(xii)分別為13及17；(xiii)分別為18及6；(xiv)分別為18及9；(xv)分別為18及14；或(xvi)分別為18及17。
實施例39a.  如實施例38a之多核苷酸，其中該第一融合蛋白之一胺基酸序列與該第二融合蛋白之一胺基酸序列不同，其中，任擇地，該第一融合蛋白及該第二融合蛋白係根據表B，及/或：(a)該第一融合蛋白包含一TGFβR1多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，且該第二融合蛋白包含一TGFβR2多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；及/或(b)該第一融合蛋白包含一IL-2Rγ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rγ胞內域，且該第二融合蛋白包含一IL-2Rβ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rβ胞內域，或(c)該第一融合蛋白包含一IL-2Rβ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rβ胞內域，且該第二融合蛋白包含一IL-2Rγ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rγ胞內域；及/或(d)該第一融合蛋白包含一IL-2Rβ跨膜域、一IL-2Rγ跨膜域、一TGFβR1跨膜域或一TGFβR2跨膜域，且該第二融合蛋白包含一IL-2Rβ跨膜域、一IL-2Rγ跨膜域、一TGFβR1跨膜域或一TGFβR2跨膜域。
實施例40a.  如實施例39a之多核苷酸，其中： (i)該第一融合蛋白包含一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，且該第二融合蛋白包含一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；或(ii)該第一融合蛋白包含一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，且該第二融合蛋白包含一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體。
實施例41a.  一種多核苷酸，其編碼：(1)一第一融合蛋白，包含(1a)一胞外組分，該胞外組分包含來自(例如人類) TGFβR1之一胞外域，(1b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自(例如人類) IL-2Rβ之一跨膜域，及(1c)一胞內組分，該胞內組分包含來自(例如人類) IL-2Rβ之一細胞質/訊息傳導域；及(2)一第二融合蛋白，包含(2a)一胞外組分，該胞外組分包含來自(例如人類) TGFβR2之一胞外域，(2b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自(例如人類) IL-2Rγ之一跨膜域，及(2c)一胞內組分，該胞內組分包含來自(例如人類) IL-2Rγ之一細胞質/訊息傳導域， 其中，任擇地，多核苷酸進一步編碼一抗原結合蛋白，諸如一TCR或一CAR。
實施例42a.  一種多核苷酸，其編碼：(1)一第一融合蛋白，包含(1a)一胞外組分，該胞外組分包含來自(例如人類) TGFβR2之一胞外域，(1b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自(例如人類) TGFβR2之一跨膜域，及(1c)一胞內組分，該胞內組分包含來自(例如人類) IL-2Rβ之一細胞質/訊息傳導域；及(2)一第二融合蛋白，包含(2a)一胞外組分，該胞外組分包含來自(例如人類) TGFβR1之一胞外域，(2b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自(例如人類) TGFβR1之一跨膜域，及(2c)一胞內組分，該胞內組分包含來自(例如人類) IL-2Rγ之一細胞質/訊息傳導域，任擇地，其中(i)該胞內組分進一步包含安置於該IL-2Rγ細胞質/訊息傳導域之N端的胺基酸C-H-N，及/或(ii)該多核苷酸進一步編碼一抗原結合蛋白，諸如一TCR或一CAR。
實施例43a.  如實施例38a至42a中任一項之多核苷酸，其進一步包含安置於編碼該第一融合蛋白之一核苷酸序列與編碼該第二融合蛋白之一核苷酸序列之間的：(i)編碼一弗林蛋白酶裂解位點之一核苷酸序列；(ii)編碼一自裂解多肽(例如P2A、T2A、E2A、F2A)之一核苷酸序列；或(iii) (i)及(ii)二者，其中，任擇地，(i)安置於(ii)之5' (亦即上游)。
實施例44a.  如實施例43a之多核苷酸，其在5'至3'方向上包含：編碼該第一融合蛋白之一核苷酸序列；編碼一弗林蛋白酶裂解位點之一核苷酸序列；編碼一自裂解多肽與一任擇的N端連接子(例如G-S-G)之一核苷酸；及編碼該第二融合蛋白之一核苷酸序列。
實施例45a.  如實施例44a之多核苷酸，其中： (i)該第一融合蛋白包含(1a)一胞外組分，該胞外組分包含來自TGFβR1之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，(1b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自IL-2Rβ之一跨膜域，及(1c)一胞內組分，該胞內組分包含來自IL-2Rβ之一胞內域，且該第二融合蛋白包含(2a)一胞外組分，該胞外組分包含來自TGFβR2之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，(2b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自IL-2Rγ之一跨膜域，及(2c)一胞內組分，該胞內組分包含來自IL-2Rγ之一胞內域；(ii)該第一融合蛋白包含(1a)一胞外組分，該胞外組分包含來自TGFβR2之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，(1b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自IL-2Rβ之一跨膜域，及(1c)一胞內組分，該胞內組分包含來自IL-2Rβ之一胞內域，且該第二融合蛋白包含(2a)一胞外組分，該胞外組分包含來自TGFβR1之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，(2b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自IL-2Rγ之一跨膜域，及(2c)一胞內組分，該胞內組分包含來自IL-2Rγ之一胞內域； (iii)該第一融合蛋白包含(1a)一胞外組分，該胞外組分包含來自TGFβR1之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，(1b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自TGFβR1之一跨膜域，及(1c)一胞內組分，該胞內組分包含(1)(c)(1)一任擇的TGFβR1胞內突出端或突出端序列，例如表A所述且任擇地包含、基本上由或由胺基酸C-H-N組成，及(1)(c)(2)來自IL-2Rβ之一胞內域，且該第二融合蛋白包含(2a)一胞外組分，該胞外組分包含來自TGFβR2之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，(2b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自TGFβR2之一跨膜域，及(2c)一胞內組分，該胞內組分包含(2)(c)(1)一任擇的TGFβR2胞內突出端或突出端序列，例如表A所述且任擇地包含、基本上由或由胺基酸R-V-N組成，及(2)(c)(2)來自IL-2Rγ之一胞內域；或 (iv)該第一融合蛋白包含(1a)一胞外組分，該胞外組分包含來自TGFβR2之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，(1b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自TGFβR2之一跨膜域，及(1c)一胞內組分，該胞內組分包含(1)(c)(1)一任擇的TGFβR2胞內突出端或突出端序列，例如表A所述且任擇地包含、基本上由或由胺基酸R-V-N組成，及(1)(c)(2)來自IL-2Rβ之一胞內域，且該第二融合蛋白包含(2a)一胞外組分，該胞外組分包含來自TGFβR1之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，(2b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自TGFβR1之一跨膜域，及(2c)一胞內組分，該胞內組分包含(2)(c)(1)一任擇的TGFβR1胞內突出端或突出端序列，例如表A所述且任擇地包含、基本上由或由胺基酸C-H-N組成，及(2)(c)(2)來自IL-2Rγ之一胞內域。
實施例46a.  如實施例38a至45a中任一項之多核苷酸，其經密碼子最佳化以在一宿主細胞中表現，其中該宿主細胞任擇地為一人類宿主細胞，進一步任擇地為一人類免疫系統細胞，再進一步任擇地為一人類T細胞(例如一CD4+ T細胞、一CD8+ T細胞、一CD4- CD8-雙陰性T細胞、一γδ T細胞或其任何組合)、一人類NK細胞或一人類NK-T細胞。
實施例47a.  如實施例46a之多核苷酸，其經密碼子最佳化以在一T細胞(例如一CD4+ T細胞、一CD8+ T細胞、一CD4- CD8-雙陰性T細胞、一γδ T細胞或其任何組合)、一NK細胞或一NK-T細胞中表現，其中該細胞較佳為人類的。
實施例48a.  如實施例38a至47a中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸與SEQ ID NOs.:8、12、16及20中之任一者中所列之胺基酸序列具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成。
實施例49a.  如實施例38a至48a中任一項之多核苷酸，其進一步包含編碼一抗原結合蛋白之一核苷酸序列。
實施例50a.  如實施例49a之多核苷酸，其中該抗原結合蛋白包含一TCR、一TCR之一抗原結合片段(例如一scTv)、一scTCR、一CAR或其任何組合。
實施例51a.  如實施例50a之多核苷酸，其中該抗原結合蛋白包含一αβ TCR，且其中該多核苷酸在5'至3'方向上包含：(1)編碼該TCRβ鏈之一核苷酸序列；編碼一弗林蛋白酶裂解位點之一核苷酸序列；編碼一自裂解多肽與一任擇的N端連接子(例如G-S-G)之一核苷酸序列；編碼該第一融合蛋白之一核苷酸序列；編碼一弗林蛋白酶裂解位點之一核苷酸序列；編碼一自裂解多肽與一任擇的N端連接子(例如G-S-G)之一核苷酸；編碼該第二融合蛋白之一核苷酸序列；編碼一弗林蛋白酶裂解位點之一核苷酸序列；編碼一自裂解多肽與一任擇的N端連接子(例如G-S-G)之一核苷酸序列；及編碼該TCRα鏈之一核苷酸序列；或(2)編碼該TCRα鏈之一核苷酸序列；編碼一弗林蛋白酶裂解位點之一核苷酸序列；編碼一自裂解多肽與一任擇的N端連接子(例如G-S-G)之一核苷酸序列；編碼該第一融合蛋白之一核苷酸序列；編碼一弗林蛋白酶裂解位點之一核苷酸序列；編碼一自裂解多肽與一任擇的N端連接子(例如G-S-G)之一核苷酸；編碼該第二融合蛋白之一核苷酸序列；編碼一弗林蛋白酶裂解位點之一核苷酸序列；編碼一自裂解多肽與一任擇的N端連接子(例如G-S-G)之一核苷酸序列；及編碼該TCRβ鏈之一核苷酸序列。
實施例52a.  如實施例35a至51a中任一項之多核苷酸，其進一步包含編碼一轉導標記之一核苷酸序列。
實施例53a.  如實施例52a之多核苷酸，其中該經編碼轉導標記包含EGFRt、CD19t、CD34t或NGFRt。
實施例54a.  如實施例35a至53a中任一項之多核苷酸，其進一步包含編碼一引導RNA之一核苷酸序列，其中，任擇地，該引導RNA對一TGFβR1基因座、一TGFβR2基因座、一PD-1基因座、一CTLA4基因座、一LAT基因座、一TIM-3基因座、一PD-L1基因座、一TIGIT基因座、一A2AR基因座、一Fas基因座、一FasL基因座、一B7-H3基因座、一B7-H4基因座、一IDO基因座、一VISTA基因座、一SIGLEC7基因座、一SIGLEC9基因座、一TRAC基因座、一TRBC基因座、一T細胞受體基因座、一MHC (例如HLA)基因座、一CBLB基因座、一RASA2基因座、一UBASH3A基因座、一CISH基因座或其任何組合具有特異性。
實施例55a.  如實施例35a至54a中任一項之多核苷酸，其進一步包含編碼一Cas核酸酶之一核苷酸序列，其中，任擇地，該Cas核酸酶包含一Cas9或其一功能性變異體、一Cas12或其一功能性變異體、一Cas13或其一功能性變異體、或一Cas14或其一功能性變異體。
實施例56a.  一種載體，其包含如實施例35a至55a中任一項之多核苷酸，任擇地，其中該多核苷酸可操作地連接於一表現控制序列。
實施例57a.  如實施例56a之載體，其中該載體能夠將該多核苷酸遞送至一造血前驅細胞或一人類免疫系統細胞。
實施例58a.  如實施例57a之載體，其中該人類免疫系統細胞包含一T細胞，諸如一CD4+ T細胞、一CD8+ T細胞、一CD4- CD8-雙陰性T細胞或一γδ T細胞、一自然殺手細胞、一自然殺手T細胞、一樹突狀細胞或其任何組合。
實施例59a.  如實施例58a之載體，其中該T細胞包含一初始T細胞、一中央記憶T細胞、一幹細胞記憶T細胞、一效應記憶T細胞或其任何組合。
實施例60a.  如實施例56a至59a中任一項之載體，其中該載體為一病毒載體。
實施例61a.  如實施例60a之載體，其中該病毒載體為一慢病毒載體或一γ-反轉錄病毒載體。
實施例62a.  一種宿主細胞，其表現如實施例1a至34a中任一項之融合蛋白。
實施例63a.  一種宿主細胞，其包含如實施例35a至55a中任一項之多核苷酸。
實施例64a.  一種宿主細胞，其包含如實施例56a至61a中任一項之載體。
實施例65a.  如實施例62a至64a中任一項之宿主細胞，其表現或編碼(1)如實施例1a至34a中任一項之一第一融合蛋白及(2)如實施例1a至34a中任一項之一第二融合蛋白。
實施例66a.  如實施例65a之宿主細胞，其中該第一融合蛋白之一胺基酸序列與該第二融合蛋白之一胺基酸序列不同， 其中，任擇地，該第一融合蛋白及該第二融合蛋白係根據表B，及/或： (a)  該第一融合蛋白包含一TGFβR1多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，且該第二融合蛋白包含一TGFβR2多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；及/或 (b)  該第一融合蛋白包含一IL-2Rγ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rγ胞內域，且該第二融合蛋白包含一IL-2Rβ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rβ胞內域，或(c)該第一融合蛋白包含一IL-2Rβ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rβ胞內域，且該第二融合蛋白包含一IL-2Rγ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rγ胞內域；及/或 (d)  該第一融合蛋白包含一IL-2Rβ跨膜域、一IL-2Rγ跨膜域、一TGFβR1跨膜域或一TGFβR2跨膜域，且該第二融合蛋白包含一IL-2Rβ跨膜域、一IL-2Rγ跨膜域、一TGFβR1跨膜域或一TGFβR2跨膜域。
實施例67a.  如實施例66a之宿主細胞，其中： (i)   該第一融合蛋白包含一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，且該第二融合蛋白包含一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；或 (ii)  該第一融合蛋白包含一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，且該第二融合蛋白包含一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體。
實施例68a.  如實施例65a至67a中任一項之宿主細胞，其中：(1)該第一融合蛋白包含(1a)一胞外組分，該胞外組分包含來自(例如人類) TGFβR1之一胞外域，(1b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自(例如人類) IL-2Rβ之一跨膜域，及(1c)一胞內組分，該胞內組分包含來自(例如人類) IL-2Rβ之一細胞質/訊息傳導域；及(2)該第二融合蛋白包含(2a)一胞外組分，該胞外組分包含來自(例如人類) TGFβR2之一胞外域，(2b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自(例如人類) IL-2Rγ之一跨膜域，及(2c)一胞內組分，該胞內組分包含來自(例如人類) IL-2Rγ之一細胞質/訊息傳導域， 其中，任擇地，多核苷酸進一步編碼一抗原結合蛋白，諸如一TCR或一CAR。
實施例69a.  如實施例65a至67a中任一項之宿主細胞，其中：(1)該第一融合蛋白包含(1a)一胞外組分，該胞外組分包含來自(例如人類) TGFβR2之一胞外域，(1b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自(例如人類) TGFβR2之一跨膜域，及(1c)一胞內組分，該胞內組分包含來自(例如人類) IL-2Rβ之一細胞質/訊息傳導域及一任擇的TGFβR2胞內突出端或突出端序列，例如表A所述且任擇地包含、基本上由或由胺基酸R-V-N組成；及(2)該第二融合蛋白包含(2a)一胞外組分，該胞外組分包含來自(例如人類) TGFβR1之一胞外域，(2b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自(例如人類) TGFβR1之一跨膜域，及(2c)一胞內組分，該胞內組分包含來自(例如人類) IL-2Rγ之一細胞質/訊息傳導域，任擇地，其中(i)該胞內組分進一步包含一TGFβR1胞內突出端或突出端序列，例如表A所述且任擇地包含、基本上由或由胺基酸C-H-N組成，安置於該IL-2Rγ細胞質/訊息傳導域之N端，及/或(ii)該多核苷酸進一步編碼一抗原結合蛋白，諸如一TCR或一CAR。
實施例70a.  如實施例65a至69a中任一項之宿主細胞，其中： (i)   該第一融合蛋白包含與SEQ ID NOs.:5、10、13及18中之任一者中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列；及 (ii)  該第二融合蛋白包含與SEQ ID NOs.:6、9、14及17中之任一者中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列。
實施例71a.  如實施例70a之宿主細胞，其中該第一融合蛋白及該第二融合蛋白包含與以下SEQ ID NOs中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列：(i)分別為5及6；(ii)分別為5及9；(iii)分別為5及14；(iv)分別為5及17；(v)分別為10及6；(vi)分別為10及9；(vii)分別為10及14；(viii)分別為10及17；(ix)分別為13及6；(x)分別為13及9；(xi)分別為13及14；(xii)分別為13及17；(xiii)分別為18及6；(xiv)分別為18及9；(xv)分別為18及14；或(xvi)分別為18及17。
實施例72a.  如實施例66a至71a中任一項之宿主細胞，其中該宿主細胞編碼與SEQ ID NOs.:7、11、15及19中之任一者中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成的一胺基酸序列。
實施例73a.  如實施例66a至72a中任一項之宿主細胞，其中該宿主細胞在其細胞表面表現包含該第一融合蛋白及該第二融合蛋白之一蛋白質複合物，其中該蛋白質複合物能夠與一TGFβ多肽結合，該多肽任擇地包含在一TGFβ二聚體中。
實施例74a.  如實施例62a至73a中任一項之宿主細胞，其中該宿主細胞包含一造血前驅細胞或一人類免疫系統細胞。
實施例75a.  如實施例62a至74a中任一項之宿主細胞，其中該宿主細胞包含一T細胞，諸如一CD4+ T細胞、一CD8+ T細胞、一CD4- CD8-雙陰性T細胞或一γδ T細胞、一自然殺手細胞、一自然殺手T細胞、一樹突狀細胞或其任何組合。
實施例76a.  如實施例62a至75a中任一項之宿主細胞，其中該宿主細胞包含一T細胞，其中，任擇地，該T細胞包含一初始T細胞、一中央記憶T細胞、一幹細胞記憶T細胞、一效應記憶T細胞或其任何組合。
實施例77a.  如實施例62a至76a中任一項之宿主細胞，其包含以下之一染色體基因剔除或一突變：一TGFβR1基因座、一TGFβR2基因座、一PD-1基因座、一CTLA4基因座、一LAT基因座、一TIM-3基因座、一PD-L1基因座、一TIGIT基因座、一A2AR基因座、一Fas基因座、一FasL基因座、一B7-H3基因座、一B7-H4基因座、一IDO基因座、一VISTA基因座、一SIGLEC7基因座、一SIGLEC9基因座、一TRAC基因座、一TRBC基因座、一T細胞受體基因座、一MHC (例如HLA)基因座、一CBLB基因座、一RASA2基因座、一UBASH3A基因座、一CISH基因座或其任何組合。
實施例78a.  如實施例62a至77a中任一項之宿主細胞，其中該宿主細胞經修飾(例如，具有一染色體基因剔除突變及/或一染色體誤義突變及/或一染色體剪接接合點突變；編碼一抑制性核酸，諸如一siRNA或一反義寡核苷酸)，以使得一內源性TGFβR1、一內源性TGFβR2或二者之蛋白質表現與該未經修飾之宿主細胞相比減少(包括剔除式表現)。
實施例79a.  如實施例62a至78a中任一項之宿主細胞，其包含編碼一抗原結合蛋白之一多核苷酸。
實施例80a.  如實施例62a至79a中任一項之宿主細胞，其表現一/該抗原結合蛋白。
實施例81a.  如實施例79a或80a之宿主細胞，其中該抗原結合蛋白包含一TCR (任擇地，其中該TCR對該宿主細胞為內源的)、一TCR之一抗原結合片段(例如一scTv)、一scTCR、一CAR或其任何組合。
實施例82a.  如實施例79a至81a中任一項之宿主細胞，其中該抗原結合蛋白結合於：一癌症抗原；一自體免疫抗原；一病毒抗原；一細菌抗原；一真菌抗原；一寄生蟲抗原；或其任何組合。
實施例83a.  如實施例82a之宿主細胞，其中該癌症包含一實體腫瘤、一惡性血液病或二者。
實施例84a.  如實施例82a至83a中任一項之宿主細胞，其中該抗原係選自一WT1、間皮素、KRAS、ROR1、EGFR、EGFRvIII、EGP-2、EGP-40、GD2、GD3、HPV E6、HPV E7、Her2、L1-CAM、Lewis A、Lewis Y、MUC1、MUC16、PSCA、PSMA、CD19、CD20、CD22、CD56、CD23、CD24、CD30、CD33、CD37、CD44v7/8、CD38、CD56、CD123、CA125、c-MET、FcRH5、葉酸受體α、VEGF-α、VEGFR1、VEGFR2、IL-13Rα2、IL-11Rα、MAGE-A1、PSA、ephrin A2、ephrin B2、NKG2D、NY-ESO-1、TAG-72、NY-ESO、5T4、BCMA、FAP、碳酸酐酶9、BRAF、α-胎兒蛋白、MAGE-A3、MAGE-A4、SSX-2、PRAME、HA-1、β2M、ETA、酪胺酸酶、NRAS或CEA抗原，任擇地與一MHC (例如HLA)分子複合。
實施例85a.  如實施例1a至34a中任一項之融合蛋白、如實施例35a至55a中任一項之多核苷酸、如實施例56a至61a中任一項之載體或如實施例62a至84a中任一項之宿主細胞，其中該TGFβ多肽包含一TGFB1、一TGFB2、一TGFB3或其任何組合，任擇地包含在一TGFβ多肽二聚體中。
實施例86a.  如實施例62a至85a中任一項之宿主細胞，其中當該宿主細胞在一TGFβ (例如一TGFβ多肽二聚體)存在下時，與當該宿主細胞在該TGFβ不存在下時之磷酸化STAT5位準相比，該宿主細胞包含一增加的磷酸化STAT5位準。
實施例87a.  如實施例62a至86a中任一項之宿主細胞，其中當該宿主細胞在一TGFβ多肽(例如一TGFβ多肽二聚體)存在下時，該宿主細胞包含一IL-2R訊息。
實施例88a.  如實施例62a至87a中任一項之宿主細胞，其中當在一TGFβ多肽(例如一TGFβ多肽二聚體)存在下時，該宿主細胞執行以下中之一或多者：增殖；生長；一效應分子(例如一T細胞受體)之表現；醣酵解代謝；蛋白質(例如MYC、SLC7A5或二者)之表現；及膽固醇之生物合成。
實施例89a.  如實施例62a至88a中任一項之宿主細胞，其中與一參考細胞相比，當該宿主細胞在一TGFβ多肽(例如一TGFβ多肽二聚體)存在下時，該宿主細胞具有一降低的磷酸化SMAD2/SMAD3位準， 其中該參考細胞不編碼或表現該(等)融合蛋白，且任擇地，未經修飾以使得一內源性TGFβR1、一內源性TGFβR2或二者之蛋白質表現與無修飾之該參考細胞相比減少(包括剔除式表現)。
實施例90a.  如實施例62a至89a中任一項之宿主細胞，其中當該宿主細胞在一TGFβ (例如一TGFβ多肽二聚體)存在下時，與當不編碼或表現該(等)融合蛋白之一參考細胞在該TGFβ存在下時該參考細胞中所包含之磷酸化STAT5位準相比，該宿主細胞包含一增加的磷酸化STAT5位準。
實施例91a.  如實施例62a至90a中任一項之宿主細胞，其中當該宿主細胞在一IL-2存在下時，與當分別不編碼或表現該(等)融合蛋白之一參考細胞在該IL-2存在下時該參考細胞中所包含之磷酸化STAT5位準相比，該宿主細胞包含一增加的磷酸化STAT5位準。
實施例92a.  如實施例62a至91a中任一項之宿主細胞，其中當在一TGFβ多肽(任擇地包含在一TGFβ多肽二聚體中)存在下且任擇地在一IL-2多肽不存在下時，該宿主細胞能夠以與一參考細胞在一IL-2多肽存在下時該參考細胞之殺傷位準大致相同的位準殺傷抗原表現細胞。
實施例93a.  如實施例62a至92a中任一項之宿主細胞，其能夠定位至包含一腫瘤之一宿主個體中的該腫瘤，且與不表現該(等)融合蛋白之一參考宿主細胞相比，任擇地在該腫瘤處/中具有更大的定位。
實施例94a.  一種組成物，其包含：(i)如實施例1a至34a及85a中任一項之融合蛋白；及/或(ii)如實施例35a至55a及85a中任一項之多核苷酸；及/或(iii)如實施例56a至61a及85a中任一項之載體；及/或(iv)如實施例62a至93a中任一項之宿主細胞，及一醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑。
實施例95a.  如實施例94a之組成物，其包含(i)包含至少約30% CD4+ T宿主細胞之一組成物與(ii)包含至少約30% CD8+ T宿主細胞之一組成物之約一1:1比率的組合。
實施例96a.  一種治療一個體之一疾病或病況的方法，該方法包含向該個體投予一有效量之：(i)如實施例1a至34a及85a中任一項之融合蛋白；及/或(ii)如實施例35a至55a及85a中任一項之多核苷酸；及/或(iii)如實施例56a至61a及85a中任一項之載體；及/或(iv)如實施例62a至93a中任一項之宿主細胞；及/或(v)如實施例94a或95a之組成物。
實施例97a.  如實施例1a至34a及85a中任一項之融合蛋白，及/或如實施例35a至55a及85a中任一項之多核苷酸，及/或如實施例56a至61a及85a中任一項之載體，及/或如實施例62a至93a中任一項之宿主細胞，及/或如實施例94a或95a之組成物，其用於治療一個體之一疾病或病況的一方法中。
實施例98a.  如實施例1a至34a及85a中任一項之融合蛋白，及/或如實施例35a至55a及85a中任一項之多核苷酸，及/或如實施例56a至61a及85a中任一項之載體，及/或如實施例62a至93a中任一項之宿主細胞，及/或如實施例94a或95a之組成物，其用於製備供治療一個體之一疾病或病況用之一藥物。
實施例99a.  如實施例96a之方法或如實施例97a或98a之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該疾病或病況與一抗原之表現相關或以一抗原之表現為特徵，其中該抗原由該抗原結合蛋白特異性結合。
實施例100a.   如實施例96a或99a之方法，或如實施例97a至99a中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該疾病或病況包含或為一過度增殖性疾病、一增殖性疾病、一自體免疫疾病、一神經退化性疾病或一感染。
實施例101a.   如實施例96a、99a或100a之方法或如實施例97a至100a中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該疾病或病況為一癌症，諸如一實體腫瘤或一惡性血液病。
實施例102a.   如實施例101a之方法或如實施例101a之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該癌症包含一癌瘤、一肉瘤、一神經膠質瘤、一淋巴瘤、一白血病、一骨髓瘤或其任何組合。
實施例103a.   如實施例101a或102a之方法，或如實施例101a或102a之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該癌症包含一頭頸癌、黑素瘤、胰臟癌、膽管癌、肝細胞癌、包括三陰性乳癌(TNBC)在內之乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、前列腺癌、食道癌、間皮瘤、小細胞肺癌、結腸直腸癌、神經膠質母細胞瘤或其任何組合。
實施例104a.   如實施例101a至103a中任一項之方法，或如實施例101a至103a中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該癌症包含阿金氏腫瘤、葡萄狀肉瘤、軟骨肉瘤、尤文氏肉瘤、PNET、惡性血管內皮瘤、惡性神經鞘瘤、骨肉瘤、肺泡狀軟組織肉瘤、血管肉瘤、葉狀囊肉瘤、隆凸性皮膚纖維肉瘤(DFSP)、硬纖維瘤、促結締組織增生性小圓細胞腫瘤、上皮樣肉瘤、骨外軟骨肉瘤、骨外骨肉瘤、纖維肉瘤、胃腸道間質瘤(GIST)、血管外皮瘤、血管內皮瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉瘤、未分化多形性肉瘤、惡性周邊神經鞘腫瘤(MPNST)、神經纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、滑膜肉瘤、未分化多形性肉瘤、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、皮革胃、血管活性腸肽瘤、膽管癌、肝細胞癌、腺樣囊性癌、腎細胞癌、格拉維茨瘤、室管膜瘤、星形細胞瘤、寡樹突神經膠質瘤、腦幹神經膠質瘤、視神經膠質瘤、一混合神經膠質瘤、霍奇金氏淋巴瘤、一B細胞淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、伯基特氏淋巴瘤、小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、免疫母細胞大細胞淋巴瘤、前體B淋巴母細胞淋巴瘤及套細胞淋巴瘤、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、CD37 +樹突狀細胞淋巴瘤、淋巴漿細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤、黏膜相關(MALT)淋巴組織之結外邊緣區B細胞淋巴瘤、結邊緣區B細胞淋巴瘤、縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤、成人T細胞淋巴瘤、鼻型結外NK/T細胞淋巴瘤、腸病相關T細胞淋巴瘤、肝脾T細胞淋巴瘤、母細胞性NK細胞淋巴瘤、塞紮里症候群、血管免疫母細胞T細胞淋巴瘤、間變性大細胞淋巴瘤或其任何組合。
實施例105a.   如實施例101a之方法或如實施例101a之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該癌症包含一實體腫瘤。
實施例106a.   如實施例105a之方法或如實施例105a之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該實體腫瘤為一肉瘤或一癌瘤。
實施例107a.   如實施例106a之方法或如實施例106a之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該實體腫瘤係選自：軟骨肉瘤；纖維肉瘤(纖維母細胞肉瘤)；隆凸性皮膚纖維肉瘤(DFSP)；骨肉瘤；橫紋肌肉瘤；尤文氏肉瘤；一胃腸道間質瘤；平滑肌肉瘤；血管肉瘤；卡波西氏肉瘤；脂肪肉瘤；多形性肉瘤；或滑膜肉瘤。
實施例108a.   如實施例105a至107a中任一項之方法或如實施例105a至107a中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該實體腫瘤係選自一肺癌(例如腺癌、鱗狀細胞癌(表皮樣癌)；鱗狀細胞癌；腺癌；腺鱗癌；未分化癌；大細胞癌；小細胞癌；一乳癌(例如乳腺管原位癌(非侵襲性)、小葉原位癌(非侵襲性)、侵襲性乳腺管癌、侵襲性小葉癌、非侵襲性癌)；一肝癌(例如肝細胞癌、膽管瘤或膽管癌)；大細胞未分化性癌、細支氣管肺泡癌)；一卵巢癌(例如表面上皮-間質腫瘤(腺癌)或卵巢上皮癌(其包括漿液性腫瘤、子宮內膜樣腫瘤及黏液性囊腺癌)、表皮樣(鱗狀細胞癌)、胚胎性癌及絨毛膜癌(生殖細胞腫瘤))；一腎癌(例如腎腺癌、腎上腺樣瘤、移行細胞癌(腎盂)、鱗狀細胞癌、貝里尼管癌、透明細胞腺癌、移行細胞癌、腎盂類癌)；一腎上腺癌(例如腎上腺皮質癌)、一睪丸癌(例如生殖細胞癌(精原細胞瘤、絨毛膜癌、胚胎癌、畸胎癌)、漿液性癌)；胃癌(例如腺癌)；一腸癌(例如十二指腸腺癌)；一結腸直腸癌；或一皮膚癌(例如基底細胞癌、鱗狀細胞癌)。
實施例109a.   如實施例105a至108a中任一項之方法，或如實施例105a至108a中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該實體腫瘤為一卵巢癌、一卵巢上皮癌、一子宮頸腺癌或小細胞癌、一胰臟癌、一結腸直腸癌(例如一腺癌或鱗狀細胞癌)、一肺癌、一乳腺管癌或一前列腺腺癌。
實施例110a.    如實施例96a及99a至108a中任一項之方法，或如實施例97a至108a中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該宿主細胞為一同種異體細胞、一同基因型細胞或一自體細胞。
實施例111a. 如實施例96a及99a至110a中任一項之方法，或如實施例97a至110a中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該方法包含向該個體投予多個劑量之該融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物。
實施例112a.    如實施例110a之方法或如實施例111a之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該等多個劑量以約二週、三週、四週、五週、六週、七週、八週或更多週的投予間隔投予。
實施例113a.    如實施例111a或112a之方法，或如實施例111a或112a之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該宿主細胞之一劑量包含約10 5個細胞/平方公尺至約10 11個細胞/平方公尺。
實施例114a.    如實施例96a及99a至113a中任一項之方法，或如實施例97a至113a中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該個體正接受、已接受或將接受以下中之一或多者：(i)化學療法；(ii)放射療法；(iii)一免疫抑制組分之一抑制劑；(iv)一刺激性免疫檢查點藥劑之一促效劑；(v) RNAi；(vi)一細胞介素；(vii)一手術；(viii)一單株抗體及/或一抗體-藥物結合物；或(ix) (i)-(viii)之任何組合，按任何順序。
實施例115a.    如實施例96a及99a至114a中任一項之方法，或如實施例97a至114a中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該個體正接受、已接受或將接受：(i) IL-2；(ii) TGFβ；或(iii) (i)及(ii)二者。
實施例116a.    一種方法，其包含將如實施例35a至55a中任一項之多核苷酸或如實施例56a至61a中任一項之載體引入一宿主細胞中，其中，任擇地，該宿主細胞包含一T細胞。
實施例117a.    如實施例116a之方法，其進一步包含將該宿主細胞與TGFβ及任擇的IL-2一起培育。 序列表 ( 序列清單 )
SEQ ID NO. 描述 序列
1 人類TGF-β受體1型，同功型1 (UniProt KB P36897-1)，具有訊息肽 MEAAVAAPRP RLLLLVLAAA AAAAAALLPG ATALQCFCHL CTKDNFTCVT DGLCFVSVTE TTDKVIHNSM CIAEIDLIPR DRPFVCAPSS KTGSVTTTYC CNQDHCNKIE LPTTVKSSPG LGPVELAAVI AGPVCFVCIS LMLMVYICHN RTVIHHRVPN EEDPSLDRPF ISEGTTLKDL IYDMTTSGSG SGLPLLVQRT IARTIVLQES IGKGRFGEVW RGKWRGEEVA VKIFSSREER SWFREAEIYQ TVMLRHENIL GFIAADNKDN GTWTQLWLVS DYHEHGSLFD YLNRYTVTVE GMIKLALSTA SGLAHLHMEI VGTQGKPAIA HRDLKSKNIL VKKNGTCCIA DLGLAVRHDS ATDTIDIAPN HRVGTKRYMA PEVLDDSINM KHFESFKRAD IYAMGLVFWE IARRCSIGGI HEDYQLPYYD LVPSDPSVEE MRKVVCEQKL RPNIPNRWQS CEALRVMAKI MRECWYANGA ARLTALRIKK TLSQLSQQEG IKM
2 人類TGF-β受體2型，同功型1 (UniProt KB P37173-1)，具有訊息肽 MGRGLLRGLW PLHIVLWTRI ASTIPPHVQK SVNNDMIVTD NNGAVKFPQL CKFCDVRFST CDNQKSCMSN CSITSICEKP QEVCVAVWRK NDENITLETV CHDPKLPYHD FILEDAASPK CIMKEKKKPG ETFFMCSCSS DECNDNIIFS EEYNTSNPDL LLVIFQVTGI SLLPPLGVAI SVIIIFYCYR VNRQQKLSST WETGKTRKLM EFSEHCAIIL EDDRSDISST CANNINHNTE LLPIELDTLV GKGRFAEVYK AKLKQNTSEQ FETVAVKIFP YEEYASWKTE KDIFSDINLK HENILQFLTA EERKTELGKQ YWLITAFHAK GNLQEYLTRH VISWEDLRKL GSSLARGIAH LHSDHTPCGR PKMPIVHRDL KSSNILVKND LTCCLCDFGL SLRLDPTLSV DDLANSGQVG TARYMAPEVL ESRMNLENVE SFKQTDVYSM ALVLWEMTSR CNAVGEVKDY EPPFGSKVRE HPCVESMKDN VLRDRGRPEI PSFWLNHQGI QMVCETLTEC WDHDPEARLT AQCVAERFSE LEHLDRLSGR SCSEEKIPED GSLNTTK
3 人類介白素-2受體次單元β (UniProt KB P14784)，具有訊息肽 MAAPALSWRL PLLILLLPLA TSWASAAVNG TSQFTCFYNS RANISCVWSQ DGALQDTSCQ VHAWPDRRRW NQTCELLPVS QASWACNLIL GAPDSQKLTT VDIVTLRVLC REGVRWRVMA IQDFKPFENL RLMAPISLQV VHVETHRCNI SWEISQASHY FERHLEFEAR TLSPGHTWEE APLLTLKQKQ EWICLETLTP DTQYEFQVRV KPLQGEFTTW SPWSQPLAFR TKPAALGKDT IPWLGHLLVG LSGAFGFIIL VYLLINCRNT GPWLKKVLKC NTPDPSKFFS QLSSEHGGDV QKWLSSPFPS SSFSPGGLAP EISPLEVLER DKVTQLLLQQ DKVPEPASLS SNHSLTSCFT NQGYFFFHLP DALEIEACQV YFTYDPYSEE DPDEGVAGAP TGSSPQPLQP LSGEDDAYCT FPSRDDLLLF SPSLLGGPSP PSTAPGGSGA GEERMPPSLQ ERVPRDWDPQ PLGPPTPGVP DLVDFQPPPE LVLREAGEEV PDAGPREGVS FPWSRPPGQG EFRALNARLP LNTDAYLSLQ ELQGQDPTHL V
4 人類介白素-2受體次單元γ，同功型1 (UniProt KB P31785-1)，具有訊息肽 MLKPSLPFTS LLFLQLPLLG VGLNTTILTP NGNEDTTADF FLTTMPTDSL SVSTLPLPEV QCFVFNVEYM NCTWNSSSEP QPTNLTLHYW YKNSDNDKVQ KCSHYLFSEE ITSGCQLQKK EIHLYQTFVV QLQDPREPRR QATQMLKLQN LVIPWAPENL TLHKLSESQL ELNWNNRFLN HCLEHLVQYR TDWDHSWTEQ SVDYRHKFSL PSVDGQKRYT FRVRSRFNPL CGSAQHWSEW SHPIHWGSNT SKENPFLFAL EAVVISVGSM GLIISLLCVY FWLERTMPRI PTLKNLEDLV TEYHGNFSAW SGVSKGLAES LQPDYSERLC LVSEIPPKGG ALGEGPGASP CNQHSPYWAP PCYTLKPET
5 TGFβR2_IL-2Rβ嵌合蛋白(具有IL-2Rβ跨膜域) TIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDIPWLGHLLVGLSGAFGFIILVYLLINCRNTGPWLKKVLKCNTPDPSKFFSQLSSEHGGDVQKWLSSPFPSSSFSPGGLAPEISPLEVLERDKVTQLLLQQDKVPEPASLSSNHSLTSCFTNQGYFFFHLPDALEIEACQVYFTYDPYSEEDPDEGVAGAPTGSSPQPLQPLSGEDDAYCTFPSRDDLLLFSPSLLGGPSPPSTAPGGSGAGEERMPPSLQERVPRDWDPQPLGPPTPGVPDLVDFQPPPELVLREAGEEVPDAGPREGVSFPWSRPPGQGEFRALNARLPLNTDAYLSLQELQGQDPTHLV
6 TGFβR1_IL-2Rγ嵌合蛋白(具有IL-2Rγ跨膜域) LQCFCHLCTKDNFTCVTDGLCFVSVTETTDKVIHNSMCIAEIDLIPRDRPFVCAPSSKTGSVTTTYCCNQDHCNKIELPTTVKSSPGLGPVEPFLFALEAVVISVGSMGLIISLLCVYFWLERTMPRIPTLKNLEDLVTEYHGNFSAWSGVSKGLAESLQPDYSERLCLVSEIPPKGGALGEGPGASPCNQHSPYWAPPCYTLKPET
7 TGFβR2_IL-2Rβ藉由弗林蛋白酶-連接子-P2A裂解序列與TGFβR1_IL-2Rγ連接，具有訊息肽 MGRGLLRGLWPLHIVLWTRIASTIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDIPWLGHLLVGLSGAFGFIILVYLLINCRNTGPWLKKVLKCNTPDPSKFFSQLSSEHGGDVQKWLSSPFPSSSFSPGGLAPEISPLEVLERDKVTQLLLQQDKVPEPASLSSNHSLTSCFTNQGYFFFHLPDALEIEACQVYFTYDPYSEEDPDEGVAGAPTGSSPQPLQPLSGEDDAYCTFPSRDDLLLFSPSLLGGPSPPSTAPGGSGAGEERMPPSLQERVPRDWDPQPLGPPTPGVPDLVDFQPPPELVLREAGEEVPDAGPREGVSFPWSRPPGQGEFRALNARLPLNTDAYLSLQELQGQDPTHLVRAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMEAAVAAPRPRLLLLVLAAAAAAAAALLPGATALQCFCHLCTKDNFTCVTDGLCFVSVTETTDKVIHNSMCIAEIDLIPRDRPFVCAPSSKTGSVTTTYCCNQDHCNKIELPTTVKSSPGLGPVEPFLFALEAVVISVGSMGLIISLLCVYFWLERTMPRIPTLKNLEDLVTEYHGNFSAWSGVSKGLAESLQPDYSERLCLVSEIPPKGGALGEGPGASPCNQHSPYWAPPCYTLKPET
8 編碼[TGFβR2_IL-2Rβ藉由弗林蛋白酶-連接子-P2A裂解序列與TGFβR1_IL-2Rγ連接，具有訊息肽]之多核苷酸 ATGGGTCGGGGGCTGCTCAGGGGCCTGTGGCCGCTGCACATCGTCCTGTGGACGCGTATCGCCAGCACGATCCCACCGCACGTTCAGAAGTCGGTTAATAACGACATGATAGTCACTGACAACAACGGTGCAGTCAAGTTTCCACAACTGTGTAAATTTTGTGATGTGAGATTTTCCACCTGTGACAACCAGAAATCCTGCATGAGCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCACAGGAAGTCTGTGTGGCTGTATGGAGAAAGAATGACGAGAACATAACACTAGAGACAGTTTGCCATGACCCCAAGCTCCCCTACCATGACTTTATTCTGGAAGATGCTGCTTCTCCAAAGTGCATTATGAAGGAGAAGAAAAAGCCTGGTGAGACTTTCTTCATGTGTTCCTGTAGCTCTGATGAGTGCAATGACAACATCATCTTCTCAGAAGAATATAACACCAGCAATCCTGACATTCCGTGGCTCGGCCACCTCCTCGTGGGCCTCAGCGGGGCTTTTGGCTTCATCATCTTAGTGTACTTGCTGATCAACTGCAGGAACACCGGGCCATGGCTGAAGAAGGTCCTGAAGTGTAACACCCCAGACCCCTCGAAGTTCTTTTCCCAGCTGAGCTCAGAGCATGGAGGAGACGTCCAGAAGTGGCTCTCTTCGCCCTTCCCCTCATCGTCCTTCAGCCCTGGCGGCCTGGCACCTGAGATCTCGCCACTAGAAGTGCTGGAGAGGGACAAGGTGACGCAGCTGCTCCTGCAGCAGGACAAGGTGCCTGAGCCCGCATCCTTAAGCAGCAACCACTCGCTGACCAGCTGCTTCACCAACCAGGGTTACTTCTTCTTCCACCTCCCGGATGCCTTGGAGATAGAGGCCTGCCAGGTGTACTTTACTTACGACCCCTACTCAGAGGAAGACCCTGATGAGGGTGTGGCCGGGGCACCCACAGGGTCTTCCCCCCAACCCCTGCAGCCTCTGTCAGGGGAGGACGACGCCTACTGCACCTTCCCCTCCAGGGATGACCTGCTGCTCTTCTCCCCCAGTCTCCTCGGTGGCCCCAGCCCCCCAAGCACTGCCCCTGGGGGCAGTGGGGCCGGTGAAGAGAGGATGCCCCCTTCTTTGCAAGAAAGAGTCCCCAGAGACTGGGACCCCCAGCCCCTGGGGCCTCCCACCCCAGGAGTCCCAGACCTGGTGGATTTTCAGCCACCCCCTGAGCTGGTGCTGCGAGAGGCTGGGGAGGAGGTCCCTGACGCTGGCCCCAGGGAGGGAGTCAGTTTCCCCTGGTCCAGGCCTCCTGGGCAGGGGGAGTTCAGGGCCCTTAATGCTCGCCTGCCCCTGAACACTGATGCCTACTTGTCCCTCCAAGAACTCCAGGGTCAGGACCCAACTCACTTGGTGCGGGCCAAGCGGTCCGGATCCGGAGCCACGAACTTCTCTCTGTTAAAGCAAGCAGGAGACGTGGAAGAAAACCCCGGTCCCATGGAGGCGGCGGTCGCTGCTCCGCGTCCCCGGCTGCTCCTCCTTGTGCTTGCTGCAGCGGCAGCAGCTGCAGCGGCACTTCTCCCGGGGGCGACGGCGTTACAGTGTTTCTGCCACCTCTGTACAAAAGACAATTTTACTTGTGTGACAGATGGGCTCTGCTTTGTCTCTGTCACAGAGACCACCGACAAAGTGATCCACAACAGCATGTGCATCGCGGAGATCGACCTGATTCCTCGGGACCGCCCCTTCGTGTGTGCACCCTCTTCAAAAACTGGGTCTGTGACTACAACATATTGCTGCAATCAGGACCATTGCAATAAAATAGAACTTCCAACTACTGTAAAGTCATCACCTGGCCTTGGTCCTGTGGAACCTTTCCTGTTTGCATTGGAAGCCGTGGTTATCTCTGTTGGCTCCATGGGATTGATTATCAGCCTTCTCTGTGTGTATTTCTGGCTGGAACGGACGATGCCCCGAATTCCCACCCTGAAGAACCTAGAGGATCTTGTTACTGAATACCACGGGAACTTTTCGGCCTGGAGTGGTGTGTCTAAGGGACTGGCTGAGAGTCTGCAGCCAGACTACAGTGAACGACTCTGCCTCGTCAGTGAGATTCCCCCAAAAGGAGGGGCCCTTGGGGAGGGGCCTGGGGCCTCCCCATGCAACCAGCATAGCCCCTACTGGGCCCCCCCATGTTACACCCTAAAGCCTGAAACC
9 TGFβR1_IL-2Rβ嵌合蛋白(具有IL-2Rβ跨膜域) LQCFCHLCTKDNFTCVTDGLCFVSVTETTDKVIHNSMCIAEIDLIPRDRPFVCAPSSKTGSVTTTYCCNQDHCNKIELPTTVKSSPGLGPVEIPWLGHLLVGLSGAFGFIILVYLLINCRNTGPWLKKVLKCNTPDPSKFFSQLSSEHGGDVQKWLSSPFPSSSFSPGGLAPEISPLEVLERDKVTQLLLQQDKVPEPASLSSNHSLTSCFTNQGYFFFHLPDALEIEACQVYFTYDPYSEEDPDEGVAGAPTGSSPQPLQPLSGEDDAYCTFPSRDDLLLFSPSLLGGPSPPSTAPGGSGAGEERMPPSLQERVPRDWDPQPLGPPTPGVPDLVDFQPPPELVLREAGEEVPDAGPREGVSFPWSRPPGQGEFRALNARLPLNTDAYLSLQELQGQDPTHLV
10 TGFβR2_IL-2Rγ嵌合蛋白(具有IL-2Rγ跨膜域) TIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDPFLFALEAVVISVGSMGLIISLLCVYFWLERTMPRIPTLKNLEDLVTEYHGNFSAWSGVSKGLAESLQPDYSERLCLVSEIPPKGGALGEGPGASPCNQHSPYWAPPCYTLKPET
11 TGFβR1_IL-2Rβ藉由弗林蛋白酶-連接子-P2A裂解序列與TGFβR2_IL-2Rγ連接，具有訊息肽 MEAAVAAPRPRLLLLVLAAAAAAAAALLPGATALQCFCHLCTKDNFTCVTDGLCFVSVTETTDKVIHNSMCIAEIDLIPRDRPFVCAPSSKTGSVTTTYCCNQDHCNKIELPTTVKSSPGLGPVEIPWLGHLLVGLSGAFGFIILVYLLINCRNTGPWLKKVLKCNTPDPSKFFSQLSSEHGGDVQKWLSSPFPSSSFSPGGLAPEISPLEVLERDKVTQLLLQQDKVPEPASLSSNHSLTSCFTNQGYFFFHLPDALEIEACQVYFTYDPYSEEDPDEGVAGAPTGSSPQPLQPLSGEDDAYCTFPSRDDLLLFSPSLLGGPSPPSTAPGGSGAGEERMPPSLQERVPRDWDPQPLGPPTPGVPDLVDFQPPPELVLREAGEEVPDAGPREGVSFPWSRPPGQGEFRALNARLPLNTDAYLSLQELQGQDPTHLVRAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMGRGLLRGLWPLHIVLWTRIASTIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDPFLFALEAVVISVGSMGLIISLLCVYFWLERTMPRIPTLKNLEDLVTEYHGNFSAWSGVSKGLAESLQPDYSERLCLVSEIPPKGGALGEGPGASPCNQHSPYWAPPCYTLKPET
12 編碼[TGFβR1_IL-2Rβ藉由弗林蛋白酶-連接子-P2A裂解序列與TGFβR1_IL-2Rγ連接，具有訊息肽]之多核苷酸 atggaggcggcggtcgctgctccgcgtccccggctgctcctccttgtgcttgctgcagcggcagcagctgcagcggcacttctcccgggggcgacggcgttacagtgtttctgccacctctgtacaaaagacaattttacttgtgtgacagatgggctctgctttgtctctgtcacagagaccaccgacaaagtgatccacaacagcatgtgcatcgcggagatcgacctgattcctcgggaccgccccttcgtgtgtgcaccctcttcaaaaactgggtctgtgactacaacatattgctgcaatcaggaccattgcaataaaatagaacttccaactactgtaaagtcatcacctggccttggtcctgtggaaattccgtggctcggccacctcctcgtgggcctcagcggggcttttggcttcatcatcttagtgtacttgctgatcaactgcaggaacaccgggccatggctgaagaaggtcctgaagtgtaacaccccagacccctcgaagttcttttcccagctgagctcagagcatggaggagacgtccagaagtggctctcttcgcccttcccctcatcgtccttcagccctggcggcctggcacctgagatctcgccactagaagtgctggagagggacaaggtgacgcagctgctcctgcagcaggacaaggtgcctgagcccgcatccttaagcagcaaccactcgctgaccagctgcttcaccaaccagggttacttcttcttccacctcccggatgccttggagatagaggcctgccaggtgtactttacttacgacccctactcagaggaagaccctgatgagggtgtggccggggcacccacagggtcttccccccaacccctgcagcctctgtcaggggaggacgacgcctactgcaccttcccctccagggatgacctgctgctcttctcccccagtctcctcggtggccccagccccccaagcactgcccctgggggcagtggggccggtgaagagaggatgcccccttctttgcaagaaagagtccccagagactgggacccccagcccctggggcctcccaccccaggagtcccagacctggtggattttcagccaccccctgagctggtgctgcgagaggctggggaggaggtccctgacgctggccccagggagggagtcagtttcccctggtccaggcctcctgggcagggggagttcagggcccttaatgctcgcctgcccctgaacactgatgcctacttgtccctccaagaactccagggtcaggacccaactcacttggtgcgggccaagcggtccggatccggagccacgaacttctctctgttaaagcaagcaggagacgtggaagaaaaccccggtcccatgggtcgggggctgctcaggggcctgtggccgctgcacatcgtcctgtggacgcgtatcgccagcacgatcccaccgcacgttcagaagtcggttaataacgacatgatagtcactgacaacaacggtgcagtcaagtttccacaactgtgtaaattttgtgatgtgagattttccacctgtgacaaccagaaatcctgcatgagcaactgcagcatcacctccatctgtgagaagccacaggaagtctgtgtggctgtatggagaaagaatgacgagaacataacactagagacagtttgccatgaccccaagctcccctaccatgactttattctggaagatgctgcttctccaaagtgcattatgaaggagaagaaaaagcctggtgagactttcttcatgtgttcctgtagctctgatgagtgcaatgacaacatcatcttctcagaagaatataacaccagcaatcctgaccctttcctgtttgcattggaagccgtggttatctctgttggctccatgggattgattatcagccttctctgtgtgtatttctggctggaacggacgatgccccgaattcccaccctgaagaacctagaggatcttgttactgaataccacgggaacttttcggcctggagtggtgtgtctaagggactggctgagagtctgcagccagactacagtgaacgactctgcctcgtcagtgagattcccccaaaaggaggggcccttggggaggggcctggggcctccccatgcaaccagcatagcccctactgggcccccccatgttacaccctaaagcctgaaacc
13 TGFβR2- TM_IL-2Rβ嵌合蛋白 TIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD LLLVIFQVTGISLLPPLGVAISVIIIFYCYNCRNTGPWLKKVLKCNTPDPSKFFSQLSSEHGGDVQKWLSSPFPSSSFSPGGLAPEISPLEVLERDKVTQLLLQQDKVPEPASLSSNHSLTSCFTNQGYFFFHLPDALEIEACQVYFTYDPYSEEDPDEGVAGAPTGSSPQPLQPLSGEDDAYCTFPSRDDLLLFSPSLLGGPSPPSTAPGGSGAGEERMPPSLQERVPRDWDPQPLGPPTPGVPDLVDFQPPPELVLREAGEEVPDAGPREGVSFPWSRPPGQGEFRALNARLPLNTDAYLSLQELQGQDPTHLV
14 TGFβR1- TM- 具有胞內突出端_IL-2Rγ嵌合蛋白 LQCFCHLCTKDNFTCVTDGLCFVSVTETTDKVIHNSMCIAEIDLIPRDRPFVCAPSSKTGSVTTTYCCNQDHCNKIELPTTVKSSPGLGPVE LAAVIAGPVCFVCISLMLMVYICHNERTMPRIPTLKNLEDLVTEYHGNFSAWSGVSKGLAESLQPDYSERLCLVSEIPPKGGALGEGPGASPCNQHSPYWAPPCYTLKPET
15 TGFβR2- TM_IL-2Rβ藉由弗林蛋白酶-連接子-P2A裂解序列與TGFβR1- TM- 具有胞內突出端_IL-2Rγ連接，具有訊息肽 MGRGLLRGLWPLHIVLWTRIASTIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD LLLVIFQVTGISLLPPLGVAISVIIIFYCYNCRNTGPWLKKVLKCNTPDPSKFFSQLSSEHGGDVQKWLSSPFPSSSFSPGGLAPEISPLEVLERDKVTQLLLQQDKVPEPASLSSNHSLTSCFTNQGYFFFHLPDALEIEACQVYFTYDPYSEEDPDEGVAGAPTGSSPQPLQPLSGEDDAYCTFPSRDDLLLFSPSLLGGPSPPSTAPGGSGAGEERMPPSLQERVPRDWDPQPLGPPTPGVPDLVDFQPPPELVLREAGEEVPDAGPREGVSFPWSRPPGQGEFRALNARLPLNTDAYLSLQELQGQDPTHLVRAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMEAAVAAPRPRLLLLVLAAAAAAAAALLPGATALQCFCHLCTKDNFTCVTDGLCFVSVTETTDKVIHNSMCIAEIDLIPRDRPFVCAPSSKTGSVTTTYCCNQDHCNKIELPTTVKSSPGLGPVE LAAVIAGPVCFVCISLMLMVYICHNERTMPRIPTLKNLEDLVTEYHGNFSAWSGVSKGLAESLQPDYSERLCLVSEIPPKGGALGEGPGASPCNQHSPYWAPPCYTLKPET
16 編碼[TGFβR2-TM_IL-2Rβ藉由弗林蛋白酶-連接子-P2A裂解序列與TGFβR1-TM-具有胞內突出端_IL-2Rγ連接，具有訊息肽]之多核苷酸 ATGGGTCGGGGGCTGCTCAGGGGCCTGTGGCCGCTGCACATCGTCCTGTGGACGCGTATCGCCAGCACGATCCCACCGCACGTTCAGAAGTCGGTTAATAACGACATGATAGTCACTGACAACAACGGTGCAGTCAAGTTTCCACAACTGTGTAAATTTTGTGATGTGAGATTTTCCACCTGTGACAACCAGAAATCCTGCATGAGCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCACAGGAAGTCTGTGTGGCTGTATGGAGAAAGAATGACGAGAACATAACACTAGAGACAGTTTGCCATGACCCCAAGCTCCCCTACCATGACTTTATTCTGGAAGATGCTGCTTCTCCAAAGTGCATTATGAAGGAGAAGAAAAAGCCTGGTGAGACTTTCTTCATGTGTTCCTGTAGCTCTGATGAGTGCAATGACAACATCATCTTCTCAGAAGAATATAACACCAGCAATCCTGACTTGTTGCTAGTCATATTTCAAGTGACAGGCATCAGCCTCCTGCCACCACTGGGAGTTGCCATATCTGTCATCATCATCTTCTACTGCTACAACTGCAGGAACACCGGGCCATGGCTGAAGAAGGTCCTGAAGTGTAACACCCCAGACCCCTCGAAGTTCTTTTCCCAGCTGAGCTCAGAGCATGGAGGAGACGTCCAGAAGTGGCTCTCTTCGCCCTTCCCCTCATCGTCCTTCAGCCCTGGCGGCCTGGCACCTGAGATCTCGCCACTAGAAGTGCTGGAGAGGGACAAGGTGACGCAGCTGCTCCTGCAGCAGGACAAGGTGCCTGAGCCCGCATCCTTAAGCAGCAACCACTCGCTGACCAGCTGCTTCACCAACCAGGGTTACTTCTTCTTCCACCTCCCGGATGCCTTGGAGATAGAGGCCTGCCAGGTGTACTTTACTTACGACCCCTACTCAGAGGAAGACCCTGATGAGGGTGTGGCCGGGGCACCCACAGGGTCTTCCCCCCAACCCCTGCAGCCTCTGTCAGGGGAGGACGACGCCTACTGCACCTTCCCCTCCAGGGATGACCTGCTGCTCTTCTCCCCCAGTCTCCTCGGTGGCCCCAGCCCCCCAAGCACTGCCCCTGGGGGCAGTGGGGCCGGTGAAGAGAGGATGCCCCCTTCTTTGCAAGAAAGAGTCCCCAGAGACTGGGACCCCCAGCCCCTGGGGCCTCCCACCCCAGGAGTCCCAGACCTGGTGGATTTTCAGCCACCCCCTGAGCTGGTGCTGCGAGAGGCTGGGGAGGAGGTCCCTGACGCTGGCCCCAGGGAGGGAGTCAGTTTCCCCTGGTCCAGGCCTCCTGGGCAGGGGGAGTTCAGGGCCCTTAATGCTCGCCTGCCCCTGAACACTGATGCCTACTTGTCCCTCCAAGAACTCCAGGGTCAGGACCCAACTCACTTGGTGCGGGCCAAGCGGTCCGGATCCGGAGCCACGAACTTCTCTCTGTTAAAGCAAGCAGGAGACGTGGAAGAAAACCCCGGTCCCATGGAGGCGGCGGTCGCTGCTCCGCGTCCCCGGCTGCTCCTCCTTGTGCTTGCTGCAGCGGCAGCAGCTGCAGCGGCACTTCTCCCGGGGGCGACGGCGTTACAGTGTTTCTGCCACCTCTGTACAAAAGACAATTTTACTTGTGTGACAGATGGGCTCTGCTTTGTCTCTGTCACAGAGACCACCGACAAAGTGATCCACAACAGCATGTGCATCGCGGAGATCGACCTGATTCCTCGGGACCGCCCCTTCGTGTGTGCACCCTCTTCAAAAACTGGGTCTGTGACTACAACATATTGCTGCAATCAGGACCATTGCAATAAAATAGAACTTCCAACTACTGTAAAGTCATCACCTGGCCTTGGTCCTGTGGAACTGGCAGCTGTCATTGCTGGACCAGTGTGCTTCGTCTGCATCTCACTCATGTTGATGGTCTATATCTGCCACAACGAACGGACGATGCCCCGAATTCCCACCCTGAAGAACCTAGAGGATCTTGTTACTGAATACCACGGGAACTTTTCGGCCTGGAGTGGTGTGTCTAAGGGACTGGCTGAGAGTCTGCAGCCAGACTACAGTGAACGACTCTGCCTCGTCAGTGAGATTCCCCCAAAAGGAGGGGCCCTTGGGGAGGGGCCTGGGGCCTCCCCATGCAACCAGCATAGCCCCTACTGGGCCCCCCCATGTTACACCCTAAAGCCTGAAACC
17 TGFβR1- TM +3aa_IL2Rβ嵌合蛋白 LQCFCHLCTKDNFTCVTDGLCFVSVTETTDKVIHNSMCIAEIDLIPRDRPFVCAPSSKTGSVTTTYCCNQDHCNKIELPTTVKSSPGLGPVE LAAVIAGPVCFVCISLMLMVYICHNNCRNTGPWLKKVLKCNTPDPSKFFSQLSSEHGGDVQKWLSSPFPSSSFSPGGLAPEISPLEVLERDKVTQLLLQQDKVPEPASLSSNHSLTSCFTNQGYFFFHLPDALEIEACQVYFTYDPYSEEDPDEGVAGAPTGSSPQPLQPLSGEDDAYCTFPSRDDLLLFSPSLLGGPSPPSTAPGGSGAGEERMPPSLQERVPRDWDPQPLGPPTPGVPDLVDFQPPPELVLREAGEEVPDAGPREGVSFPWSRPPGQGEFRALNARLPLNTDAYLSLQELQGQDPTHLV
18 TGFβR2- TM- 無胞內突出端_IL2Rγ嵌合蛋白 TIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD LLLVIFQVTGISLLPPLGVAISVIIIFYCYERTMPRIPTLKNLEDLVTEYHGNFSAWSGVSKGLAESLQPDYSERLCLVSEIPPKGGALGEGPGASPCNQHSPYWAPPCYTLKPET
19 TGFβR1- TM- 具有胞內突出端_IL-2Rβ藉由弗林蛋白酶-連接子-P2A裂解序列與TGFβR2- TM_IL-2Rγ連接，具有訊息肽 MEAAVAAPRPRLLLLVLAAAAAAAAALLPGATALQCFCHLCTKDNFTCVTDGLCFVSVTETTDKVIHNSMCIAEIDLIPRDRPFVCAPSSKTGSVTTTYCCNQDHCNKIELPTTVKSSPGLGPVE LAAVIAGPVCFVCISLMLMVYICHNNCRNTGPWLKKVLKCNTPDPSKFFSQLSSEHGGDVQKWLSSPFPSSSFSPGGLAPEISPLEVLERDKVTQLLLQQDKVPEPASLSSNHSLTSCFTNQGYFFFHLPDALEIEACQVYFTYDPYSEEDPDEGVAGAPTGSSPQPLQPLSGEDDAYCTFPSRDDLLLFSPSLLGGPSPPSTAPGGSGAGEERMPPSLQERVPRDWDPQPLGPPTPGVPDLVDFQPPPELVLREAGEEVPDAGPREGVSFPWSRPPGQGEFRALNARLPLNTDAYLSLQELQGQDPTHLVRAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMGRGLLRGLWPLHIVLWTRIASTIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD LLLVIFQVTGISLLPPLGVAISVIIIFYCYERTMPRIPTLKNLEDLVTEYHGNFSAWSGVSKGLAESLQPDYSERLCLVSEIPPKGGALGEGPGASPCNQHSPYWAPPCYTLKPET
20 編碼[TGFβR1-TM-具有胞內突出端_IL-2Rβ藉由弗林蛋白酶-連接子-P2A裂解序列與TGFβR2-TM_IL-2Rγ連接，具有訊息肽]之多核苷酸 ATGGAGGCGGCGGTCGCTGCTCCGCGTCCCCGGCTGCTCCTCCTTGTGCTTGCTGCAGCGGCAGCAGCTGCAGCGGCACTTCTCCCGGGGGCGACGGCGTTACAGTGTTTCTGCCACCTCTGTACAAAAGACAATTTTACTTGTGTGACAGATGGGCTCTGCTTTGTCTCTGTCACAGAGACCACCGACAAAGTGATCCACAACAGCATGTGCATCGCGGAGATCGACCTGATTCCTCGGGACCGCCCCTTCGTGTGTGCACCCTCTTCAAAAACTGGGTCTGTGACTACAACATATTGCTGCAATCAGGACCATTGCAATAAAATAGAACTTCCAACTACTGTAAAGTCATCACCTGGCCTTGGTCCTGTGGAACTGGCAGCTGTCATTGCTGGACCAGTGTGCTTCGTCTGCATCTCACTCATGTTGATGGTCTATATCTGCCACAACAACTGCAGGAACACCGGGCCATGGCTGAAGAAGGTCCTGAAGTGTAACACCCCAGACCCCTCGAAGTTCTTTTCCCAGCTGAGCTCAGAGCATGGAGGAGACGTCCAGAAGTGGCTCTCTTCGCCCTTCCCCTCATCGTCCTTCAGCCCTGGCGGCCTGGCACCTGAGATCTCGCCACTAGAAGTGCTGGAGAGGGACAAGGTGACGCAGCTGCTCCTGCAGCAGGACAAGGTGCCTGAGCCCGCATCCTTAAGCAGCAACCACTCGCTGACCAGCTGCTTCACCAACCAGGGTTACTTCTTCTTCCACCTCCCGGATGCCTTGGAGATAGAGGCCTGCCAGGTGTACTTTACTTACGACCCCTACTCAGAGGAAGACCCTGATGAGGGTGTGGCCGGGGCACCCACAGGGTCTTCCCCCCAACCCCTGCAGCCTCTGTCAGGGGAGGACGACGCCTACTGCACCTTCCCCTCCAGGGATGACCTGCTGCTCTTCTCCCCCAGTCTCCTCGGTGGCCCCAGCCCCCCAAGCACTGCCCCTGGGGGCAGTGGGGCCGGTGAAGAGAGGATGCCCCCTTCTTTGCAAGAAAGAGTCCCCAGAGACTGGGACCCCCAGCCCCTGGGGCCTCCCACCCCAGGAGTCCCAGACCTGGTGGATTTTCAGCCACCCCCTGAGCTGGTGCTGCGAGAGGCTGGGGAGGAGGTCCCTGACGCTGGCCCCAGGGAGGGAGTCAGTTTCCCCTGGTCCAGGCCTCCTGGGCAGGGGGAGTTCAGGGCCCTTAATGCTCGCCTGCCCCTGAACACTGATGCCTACTTGTCCCTCCAAGAACTCCAGGGTCAGGACCCAACTCACTTGGTGCGGGCCAAGCGGTCCGGATCCGGAGCCACGAACTTCTCTCTGTTAAAGCAAGCAGGAGACGTGGAAGAAAACCCCGGTCCCATGGGTCGGGGGCTGCTCAGGGGCCTGTGGCCGCTGCACATCGTCCTGTGGACGCGTATCGCCAGCACGATCCCACCGCACGTTCAGAAGTCGGTTAATAACGACATGATAGTCACTGACAACAACGGTGCAGTCAAGTTTCCACAACTGTGTAAATTTTGTGATGTGAGATTTTCCACCTGTGACAACCAGAAATCCTGCATGAGCAACTGCAGCATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCACAGGAAGTCTGTGTGGCTGTATGGAGAAAGAATGACGAGAACATAACACTAGAGACAGTTTGCCATGACCCCAAGCTCCCCTACCATGACTTTATTCTGGAAGATGCTGCTTCTCCAAAGTGCATTATGAAGGAGAAGAAAAAGCCTGGTGAGACTTTCTTCATGTGTTCCTGTAGCTCTGATGAGTGCAATGACAACATCATCTTCTCAGAAGAATATAACACCAGCAATCCTGACTTGTTGCTAGTCATATTTCAAGTGACAGGCATCAGCCTCCTGCCACCACTGGGAGTTGCCATATCTGTCATCATCATCTTCTACTGCTACGAACGGACGATGCCCCGAATTCCCACCCTGAAGAACCTAGAGGATCTTGTTACTGAATACCACGGGAACTTTTCGGCCTGGAGTGGTGTGTCTAAGGGACTGGCTGAGAGTCTGCAGCCAGACTACAGTGAACGACTCTGCCTCGTCAGTGAGATTCCCCCAAAAGGAGGGGCCCTTGGGGAGGGGCCTGGGGCCTCCCCATGCAACCAGCATAGCCCCTACTGGGCCCCCCCATGTTACACCCTAAAGCCTGAAACC
21 訊息肽，TGFβR1 MEAAVAAPRPRLLLLVLAAAAAAAAALLPGATA
22 訊息肽，TGFβR2 MGRGLLRGLWPLHIVLWTRIAS
23 弗林蛋白酶裂解模體 R-X-K/R-R
24 具有N端GSG連接子之豬捷申病毒-1 2A (P2A)肽 GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP
25 明脈扁刺蛾病毒2A (T2A)肽 LEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPR
26 馬鼻炎A病毒(ERAV) 2A (E2A) QCTNYALLKLAGDVESNPGP
27 具有N端GSG連接子之口蹄疫病毒2A (F2A)肽 GSGVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP
28 弗林蛋白酶裂解模體-絲胺酸-GSG-P2A RAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGP
29 截短的NGFR (tNGFR)，具有訊息肽 MGAGATGRAMDGPRLLLLLLLGVSLGGAKEACPTGLYTHSGECCKACNLGEGVAQPCGANQTVCEPCLDSVTFSDVVSATEPCKPCTECVGLQSMSAPCVEADDAVCRCAYGYYQDETTGRCEACRVCEAGSGLVFSCQDKQNTVCEECPDGTYSDEANHVDPCLPCTVCEDTERQLRECTRWADAECEEIPGRWITRSTPPEGSDSTAPSTQEPEAPPEQDLIASTVAGVVTTVMGSSQPVVTRGTTDNLIPVYCSILAAVVVGLVAYIAFKRWNS
30 截短的EGFR (tEGFR) RKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFM
31 連接子218胺基酸序列 GSTSGSGKPGSGEGSTKG
32 連接子胺基酸序列 GSGKPGSGEG
33 連接子胺基酸序列 GKPGSGEG
34 連接子胺基酸序列 SGKPGSGE
35 連接子胺基酸序列 BPXXXZ，其中各X獨立地為甘胺酸(G)或絲胺酸(S)，B為帶正電胺基酸且Z為甘胺酸(G)或帶負電胺基酸
36 連接子胺基酸序列 (G xS) y，其中x為1-10且y為1-10
37 連接子胺基酸序列 GGGGSGGGGSGGGGS
38 連接子胺基酸序列 GSTSGGGSGGGSGGGGSS
39 人類TGFβR1胞外域 LQCFCHLCTKDNFTCVTDGLCFVSVTETTDKVIHNSMCIAEIDLIPRDRPFVCAPSSKTGSVTTTYCCNQDHCNKIELPTTVKSSPGLGPVE
40 人類TGFβR1跨膜域 LAAVIAGPVCFVCISLMLMVYI
41 人類TGFβR2胞外域 TIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD
42 人類TGFβR2跨膜域 LLLVIFQVTGISLLPPLGVAISVIIIFYCY
43 人類IL-2Rβ跨膜域 IPWLGHLLVGLSGAFGFIILVYLLI
44 人類IL-2Rβ細胞質/訊息傳導域 NCRNTGPWLKKVLKCNTPDPSKFFSQLSSEHGGDVQKWLSSPFPSSSFSPGGLAPEISPLEVLERDKVTQLLLQQDKVPEPASLSSNHSLTSCFTNQGYFFFHLPDALEIEACQVYFTYDPYSEEDPDEGVAGAPTGSSPQPLQPLSGEDDAYCTFPSRDDLLLFSPSLLGGPSPPSTAPGGSGAGEERMPPSLQERVPRDWDPQPLGPPTPGVPDLVDFQPPPELVLREAGEEVPDAGPREGVSFPWSRPPGQGEFRALNARLPLNTDAYLSLQELQGQDPTHLV
45 人類IL-2Rγ跨膜域 PFLFALEAVVISVGSMGLIISLLCVYFWL
46 人類IL-2Rγ細胞質/訊息傳導域 ERTMPRIPTLKNLEDLVTEYHGNFSAWSGVSKGLAESLQPDYSERLCLVSEIPPKGGALGEGPGASPCNQHSPYWAPPCYTLKPET
47 包含TGFβR1部分胞外域及跨膜域胺基酸之序列 SSPGLGPVEL
48 包含TGFβR1部分胞外域及跨膜域胺基酸之序列 IFSEEYNTSNPDLL
49 sgTGFβRI引導RNA CATACAAACGGCCTATCTCG
50 sgTGFβRII引導RNA TCACCCGACTTCTGAACGTG
51 TGFβRI正向基因體引子 AGTGTTTCTGCCACCTCTGT
52 TGFβRI反向基因體引子 TGCCTCTAAACGGAATGAGC
53 弗林蛋白酶裂解模體 RXXR
54 弗林蛋白酶裂解序列 RAKR
55 弗林蛋白酶裂解序列 RARR
56 具有3個胺基酸之胞內突出端(CHN)的TGFβRI跨膜序列 LAAVIAGPVCFVCISLMLMVYICHN
57 sgTGFβRII引導RNA CTAGTCATATTTCAAGTGAC  
58 具有鼠源化TGFbRI-IL2b-弗林蛋白酶-GSG-P2A-TGFbRII-IL2g之Msln特異性TCR，具有訊息肽 MTLKMDSSPGFVAVILLILGRTHGDSVTQTEGPVTVSESESLIINCTYSATSIAYPNLFWYVRYPGEGLQLLLKVITAGQKGSSRGFEATYNKETTSFHLQKASVQESDSAVYYCALGLDYANKMIFGLGTILRVRPHIQNPEPAVYQLKDPRSQDSTLCLFTDFDSQINVPKTMESGTFITDKTVLDMKAMDSKSNGAIAWSNQTSFTCQDIFKETNATYPSSDVPCDATLTEKSFETDMNLNFQNLSVMGLRILLLKVAGFNLLMTLRLWSSRAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMEAAAAAPRRPQLLIVLVAAATLLPGAKALQCFCHLCTKDNFTCETDGLCFVSVTETTDKVIHNSMCIAEIDLIPRDRPFVCAPSSKTGAVTTTYCCNQDHCNKIELPTTGPFSEKQSAGLGPVEILPMSWLRYLLLVLGCFSGFFSCVYILVKCRYLGPWLKTVLKCHIPDPSEFFSQLSSQHGGDLQKWLSSPVPLSFFSPSGPAPEISPLEVLDGDSKAVQLLLLQKDSAPLPSPSGHSQASCFTNQGYFFFHLPNALEIESCQVYFTYDPCVEEEVEEDGSRLPEGSPHPPLLPLAGEQDDYCAFPPRDDLLLFSPSLSTPNTAYGGSRAPEERSPLSLHEGLPSLASRDLMGLQRPLERMPEGDGEGLSANSSGEQASVPEGNLHGQDQDRGQGPILTLNTDAYLSLQELQAQDSVHLIRAKRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMGRGLLRGLWPLHIVLWTRIASTIPPHVPKSDVEMEAQKDASIHLSCNRTIHPLKHFNSDVMASDNGGAVKLPQLCKFCDVRLSTCDNQKSCMSNCSITAICEKPHEVCVAVWRKNDKNITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKRAGETFFMCACNMEECNDYIIFSEEYTTSSPDPSLFALEAVLIPVGTMGLIITLIFVYCWLERMPPIPPIKNLEDLVTEYQGNFSAWSGVSKGLTESLQPDYSERFCHVSEIPPKGGALGEGPGGSPCSLHSPYWPPPCYSLKPEARAKRSGSGQCTNYALLKLAGDVESNPGPMDPRLLCCVIFCLLAATFVDTTVKQNPRYKLARVGKPVNLICSQTMNHDTMYWYQKKPNQAPKLLLFYYDKILNREADTFEKFQSSRPNNSFCSLYIGSAGLEYSAMYLCASSNPQDTQYFGPGTRLLVLEDLRNVTPPKVSLFEPSKAEIANKQKATLVCLARGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQAYKESNYSYCLSSRLRVSATFWHNPRNHFRCQVQFHGLSEEDKWPEGSPKPVTQNISAEAWGRADCGITSASYHQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSGLVLMAMVKKKNS
59 具有鼠源化TGFbRII-IL2b-弗林蛋白酶-GSG-P2A-TGFbRI-IL2g之Msln特異性TCR，具有訊息肽 MTLKMDSSPGFVAVILLILGRTHGDSVTQTEGPVTVSESESLIINCTYSATSIAYPNLFWYVRYPGEGLQLLLKVITAGQKGSSRGFEATYNKETTSFHLQKASVQESDSAVYYCALGLDYANKMIFGLGTILRVRPHIQNPEPAVYQLKDPRSQDSTLCLFTDFDSQINVPKTMESGTFITDKTVLDMKAMDSKSNGAIAWSNQTSFTCQDIFKETNATYPSSDVPCDATLTEKSFETDMNLNFQNLSVMGLRILLLKVAGFNLLMTLRLWSSRAKRSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMGRGLLRGLWPLHIVLWTRIASTIPPHVPKSDVEMEAQKDASIHLSCNRTIHPLKHFNSDVMASDNGGAVKLPQLCKFCDVRLSTCDNQKSCMSNCSITAICEKPHEVCVAVWRKNDKNITLETVCHDPKLTYHGFTLEDAASPKCVMKEKKRAGETFFMCACNMEECNDYIIFSEEYTTSSPDLLLVIIQVTGVSLLPPLGIAIAVIIIFYCYKCRYLGPWLKTVLKCHIPDPSEFFSQLSSQHGGDLQKWLSSPVPLSFFSPSGPAPEISPLEVLDGDSKAVQLLLLQKDSAPLPSPSGHSQASCFTNQGYFFFHLPNALEIESCQVYFTYDPCVEEEVEEDGSRLPEGSPHPPLLPLAGEQDDYCAFPPRDDLLLFSPSLSTPNTAYGGSRAPEERSPLSLHEGLPSLASRDLMGLQRPLERMPEGDGEGLSANSSGEQASVPEGNLHGQDQDRGQGPILTLNTDAYLSLQELQAQDSVHLIRAKRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMEAAAAAPRRPQLLIVLVAAATLLPGAKALQCFCHLCTKDNFTCETDGLCFVSVTETTDKVIHNSMCIAEIDLIPRDRPFVCAPSSKTGAVTTTYCCNQDHCNKIELPTTGPFSEKQSAGLGPVELAAVIAGPVCFVCIALMLMVYIERMPPIPPIKNLEDLVTEYQGNFSAWSGVSKGLTESLQPDYSERFCHVSEIPPKGGALGEGPGGSPCSLHSPYWPPPCYSLKPEARAKRSGSGQCTNYALLKLAGDVESNPGPMDPRLLCCVIFCLLAATFVDTTVKQNPRYKLARVGKPVNLICSQTMNHDTMYWYQKKPNQAPKLLLFYYDKILNREADTFEKFQSSRPNNSFCSLYIGSAGLEYSAMYLCASSNPQDTQYFGPGTRLLVLEDLRNVTPPKVSLFEPSKAEIANKQKATLVCLARGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQAYKESNYSYCLSSRLRVSATFWHNPRNHFRCQVQFHGLSEEDKWPEGSPKPVTQNISAEAWGRADCGITSASYHQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSGLVLMAMVKKKNS
60 具有3個胺基酸之胞內突出端(RVN)的TGFβRII跨膜序列 LLLVIFQVTGISLLPPLGVAISVIIIFYCYRVN
實例 實例1 人類TGFBR/IL-2R 嵌合蛋白之設計及測試
如圖1-20B所示及所述，設計、構築及測試各種嵌合構築體。資料顯示，例如：TGFβR/IL-2R嵌合體重新利用TGFβ1以經由pSTAT5傳遞IL-2訊息；TGFβR/IL-2R嵌合體減少經由pSMAD2/3之內源性TGFβRI/II訊息傳導；在TGFβ1中培養經嵌合體轉導之T細胞選擇(嵌合體編碼)轉殖基因表現；TGFβ1促進表現TGFβR/IL-2R嵌合體之T細胞的細胞分裂；TGFβ1劑量反應曲線顯示由TGFβR/IL-2R嵌合體與間皮素特異性TCR介導之pSTAT5訊息傳導的差異；在TGFβ1中培養經TCR轉導/經嵌合體轉導之人類T細胞選擇間皮素-HLA四聚體表現；間皮素特異性TCR與TGFβR/IL-2R嵌合體共表現支持僅在TGFβ1刺激下之增殖及腫瘤殺傷；表現間皮素特異性TCR及TGFβR/IL-2R嵌合體之T細胞的細胞毒性與僅在習知IL-2刺激下表現TCR之T細胞的細胞毒性相似；藉由10 ng/mL TGFβ1及5 U/mL IL-2之組合治療增強表現間皮素特異性TCR與嵌合體之T細胞的增殖及細胞毒性；及在嵌合蛋白之跨膜組分的胞內側添加TGFβRI之3個胺基酸促進IL-2R訊息傳導。 實例2 實例1 之材料及方法 嵌合構築體的產生
人類TGFbR/IL2R嵌合體DNA由Twist Biosciences合成為基因片段，且使用NEBuilder HiFi DNA組裝套組(New England Biosciences；E2621L)藉由Gibson Assembly選殖至pRRLSIN慢病毒骨架中。多順反子構築體係藉由併入自裂解病毒2A肽產生，在GSG連接子-2A序列之5'具有弗林蛋白酶裂解位點，以便於在5'位置自多肽之C端修剪2A肽片段。添加2A序列，隨後添加截短的人類NGFR，以作為轉導標記選擇構築體。一段20個鹼基對的TGFbRI序列經密碼子最佳化以防止sgRNA黏接，且因此使得內源性而非轉殖基因TGFbRI能夠進行CRISPR-Cas9介導之基因剔除。TGFbRII之轉殖基因序列無需經密碼子最佳化，因為sgRNA在外顯子-內含子接合點處結合內源序列。為此等研究產生的所有構築體均藉由弗雷德哈欽森癌症研究中心(Fred Hutchinson Cancer Research Center)之基因體學核心設施進行的桑格定序(Sanger sequencing)進行序列驗證。 慢病毒封裝及轉導
慢病毒係藉由用慢病毒封裝質體pMDLg、pMDG2、pRSV及含有MSCV U3啟動子及由長末端重複序列側接之感興趣的轉殖基因的轉移質體轉染HEK-293T細胞而產生。TransIT Lenti (Mirus Bio; MIR 6603)轉染試劑以3:1 (μL TransIT:μg DNA)之比率使用，6孔盤中每孔總共2 μg DNA。轉染後24小時更換培養基，以匹配將轉導之細胞的培養基。48小時後，收集慢病毒上清液且經由0.45 μm過濾器過濾，以分離出封裝細胞。對需要轉導之細胞群(亦即活化的人類CD8 +T細胞)進行計數，且以0.5×10 6個細胞/100 μL再懸浮於人類T細胞培養基中，且添加至2 mL經過濾之慢病毒上清液中。各孔補充有2 μL聚凝胺且在2500rpm、30℃下離心90分鐘，以增強T細胞之轉導。離心後，T細胞用IL-2補充至最終濃度為50 U/mL，且使其在37℃培育箱中恢復至少72小時，隨後量測轉導效率。 初級人類 CD8 +T 細胞之分離
人類健康供體周邊血液白血球單采術(Leukopak apheresis)產品係購自STEMCELL Technologies (70500)。淋巴細胞用補充有0.5 mM EDTA之PBS洗滌三次，且在RPMI 1640基礎培養基中洗滌一次。藉由在Turk溶液中稀釋來對總PBMC進行計數。將PBMC在含有2%胎牛血清及1 mM EDTA之PBS中調整至50×10 6個細胞/毫升之濃度。根據製造商的建議，使用EasySep人類CD8 T細胞分離套組(STEMCELL Technologies; 17953)分離CD8 +T細胞。針對所述CD8，藉由流動式細胞測量分析檢查T細胞之純度，且發現其純度＞98%。 初級人類 CD8 +T 細胞之活化
將如上所述分離之人類CD8+ T細胞懸浮於含有以下之人類T細胞培養基中，最終濃度為1×10 6：具有建它黴素(gentamicin)及酚紅之XVIVO-15基礎培養基(Lonza BioWhittaker, BW04-418Q)，補充有5%人類血清(BloodWorks Northwest)、50 μM β-巰基乙醇及10 mM N-乙醯基-L-半胱胺酸(Sigma, A9165-25G)。藉由添加濃度為1個珠粒/細胞之CD3/CD28 DynaBeads (ThermoFisher; 11131D)、250 U/mL人類IL-2 (ProLeukin)、5 ng/mL人類IL-7及5 ng/mL人類IL-15啟動TCR刺激。T細胞在轉導前在活化混合液中培育24小時，且48小時後經由磁分離自T細胞移除DynaBeads。 組織培養及試劑
初級人類CD8 T細胞在以下人類T細胞培養基中培養：具有建它黴素及酚紅之XVIVO-15基礎培養基(Lonza BioWhittaker, BW04-418Q)，補充有5%人類血清(BloodWorks Northwest)、50 μM β-巰基乙醇及10 mM N-乙醯基-L-半胱胺酸(Sigma, A9165-25G)。每48小時用最終濃度為50 U/mL IL-2補充初級人類CD8 T細胞。MDA-MB-468乳腺癌細胞(ATCC, HTB-132)在補充有10%胎牛血清及1%青黴素-鏈黴素(w/v)之達爾伯克氏改良伊格爾培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium)中培養。MDA-MB-468維持在＜80%匯合度，且藉由用0.05%胰蛋白酶-EDTA (Gibco; 25300-054)解離而繼代。在用於實驗之前，確認所有細胞株均為黴漿菌陰性。 流動式細胞測量分析及細胞分選
螢光團結合之人類抗體經由Biolegend購買，包括NGFR (ME20.4; 345112)及TGFbRII (W11755E; 399706)。以下抗體經由BD Biosciences購買：pSMAD2/3 (O72-670; 562586)及pSTAT5 (47; 612599)、CD8 (SK1; 335787)。HLA-A2/WT1四聚體係由弗雷德哈欽森癌症研究中心之免疫監測實驗室生成。根據製造商的建議，使用LIVE/DEAD可固定淺綠色死細胞染色套組(ThermoFisher; L34957)標記細胞。在抗體染色後，將細胞再懸浮於FACS緩衝液(補充有2%胎牛血清(v/v)及0.5 mM EDTA之PBS)中進行流動式細胞測量分析。在BD Biosciences Canto II儀器或BD Biosciences Aria II分選儀上獲取流動式細胞測量術資料以使用FACSDiva軟體進行流動式細胞測量術細胞分選。FlowJo v9軟體(TreeStar, Ashland OR)用於分析所有流動式細胞測量術資料。 藉由磷酸化流動式細胞測量術分析胞內訊息傳導
用嵌合構築體轉導之T細胞在XVIVO-15無血清基礎培養基中洗滌二次且使其血清饑餓隔夜。對T細胞進行計數且以2×10 5個細胞/孔接種於96孔盤中。根據製造商的建議，用LIVE/DEAD Fixable Violet Stain (ThermoFisher; L34955)對細胞進行染色。在FACS緩衝液中對細胞進行NGFR染色，隨後洗滌且再懸浮於補充有指定量TGFb1或IL-2之人類T細胞培養基中，且在37℃下培育整15分鐘。自此，如下文所述進行pSTAT5染色或pSMAD2/3染色。
對於pSTAT5染色，直接添加16%多聚甲醛至最終濃度為3%，且在室溫下培育10分鐘。在1350 rpm下離心4分鐘，丟棄培養基且在FACS緩衝液中洗滌。藉由緩慢添加50微升/孔冰冷的Phosflow Perm Buffer III (BD Biosciences; 558050)使細胞透化且用移液器充分混合。在冰上培育15-20分鐘。在冷的FACS緩衝液中洗滌二次，且隨後在FACS緩衝液中在4℃下對pSTAT5進行染色45分鐘，避光。用FACS緩衝液洗一次且隨後再懸浮於FACS緩衝液中進行流動式細胞測量分析。
對於pSMAD2/3染色，離心細胞，丟棄培養基，且再懸浮於CytoFix/CytoPerm溶液(BD Biosciences; 554714)中且在室溫下培育20分鐘。用1× PermWash緩衝液洗滌，且隨後在1× PermWash緩衝液中在4℃下對pSMAD2/3進行染色45分鐘，避光。用1× PermWash緩衝液洗滌一次且用FACS緩衝液洗滌一次。隨後再懸浮於FACS緩衝液中進行流動式細胞測量分析。 T 細胞增殖分析法
根據製造商的建議，用CellTrace Violet細胞增殖套組(ThermoFisher; C34557)標記經指定構築體轉導之T細胞。標記後，將T細胞再懸浮於含有不同濃度之IL-2或TGFb1 (R&D Systems; 7754-BH)之人類T細胞培養基中。每48小時按指示用IL-2或TGFb1重新刺激T細胞。5天後，將T細胞再懸浮於補充有碘化丙錠(ThermoFisher; P1304MP)之FACS緩衝液中進行活/死辨別，且藉由流動式細胞測量術進行分析。 IncuCyte 腫瘤殺傷分析法
根據製造商推薦的感染方案，使用NucLight Red慢病毒試劑(Essen BioScience, 4625)轉導MDA-MB-468細胞。對NucLight Red陽性群體進行分選且如所述藉由FACS檢查純度。對於MDA-MB-468殺傷實驗，在開始實驗前16小時，將腫瘤懸浮於人類T細胞培養基中，且以5,000個細胞/孔接種於平底96孔盤中，以使細胞黏附隔夜。人類初級CD8+ T細胞經純化、活化且用指定慢病毒構築體轉導，且經由FACS分選至純淨(僅TCR)或藉由在10 ng/mL重組人類TGFb1中培養選擇轉殖基因表現(TCR + 嵌合體構築體、僅嵌合體構築體)。在選擇培養基中7天後，藉由流動式細胞測量術檢查細胞純度，且所有T細胞條件之轉殖基因表現陽性率均＞95% (經由對轉導標記tNGFR之染色來量測)。在即將收集資料之前，對T細胞進行計數，將其再懸浮於溫熱的人類T細胞培養基中，且基於5,000個腫瘤細胞/孔之固定計數以指定效應子:目標細胞比率添加至96孔盤中。腫瘤細胞殺傷資料係在IncuCyte S3自動成像平台(Essen BioScience)上產生，該平台經組態以在各實驗之指定長度內每2小時獲取一次影像。腫瘤細胞殺傷係藉由NucLight Red訊息之損失(每孔之總紅色物體面積相對於第一次掃描時每孔之總紅色物體面積歸一化)來量化。使用GraphPad Prism軟體繪製各時間點之平均值(每一條件n=3個孔)，用誤差條表示標準偏差。 經由 RNP 電穿孔之 CRISPR-Cas9 介導之 TGFbRI/II 基因剔除使用Benchling CRISPR gRNA設計工具設計靶向人類TGFbRI及TGFbRII之引導RNA，序列如下(5'至3')： TGFbRI: CATACAAACGGCCTATCTCG (SEQ ID NO.:49) TGFbRII: TCACCCGACTTCTGAACGTG (SEQ ID NO.:50) 對於其他實驗，使用以下TGFbRII gRNA： CTAGTCATATTTCAAGTGAC (SEQ ID NO.:57) 引導RNA係自IDT訂購(Alt-R CRISPR-Cas9 crRNA)，且與tracrRNA (Dharmacon; U-002005-20)以1:1之莫耳比在37℃下培育30分鐘而複合形成sgRNA。在以2:1 sgRNA:Cas9之莫耳比添加Cas9蛋白(Berkeley MacroLab)之前，添加聚麩胺酸(Sigma; P4761)以促進Cas9 RNP複合物之穩定，每次電穿孔之最終濃度為50 pmol RNP。將RNP在37℃下培育15分鐘，隨後添加至細胞中。如所述活化48小時之人類CD8 +T細胞經由磁體與活化珠粒分離且計數。細胞以100×g離心10分鐘且以1×10 6個細胞/20 μL P3緩衝液(Lonza P3初級細胞96孔套組; V4SP-3096)再懸浮。將預先形成的RNP複合物添加至細胞溶液中，轉移至單個孔中，且經由Lonza 4D Nucleofector使用脈衝代碼EO-115進行電穿孔。在電穿孔後，立即向各孔中添加80 μL預溫熱的人類T細胞培養基，且使細胞在37℃培育箱中恢復15分鐘。隨後將細胞轉移至12孔盤中且使其靜置72小時，隨後藉由流動式細胞測量術(TGFbRII)分析基因剔除效率或收穫及擴增基因體DNA、桑格定序及使用Synthego ICE工具推斷CRISPR編輯(TGFbRI)進行分析(Hsiau等人 bioRxiv 2018 DOI:10.1101/251082)。使用以下引子自基因體模板DNA擴增感興趣的區域： TGFbRI正向：AGTGTTTCTGCCACCTCTGT (SEQ ID NO.:51) TGFbRI反向：TGCCTCTAAACGGAATGAGC (SEQ ID NO.:52) 實例3 鼠類 TGFBR/IL-2R 嵌合蛋白之設計及測試
使用與實例2中所述類似之方法設計及測試鼠類構築體，例如除圖21-26C另有說明外。資料顯示，例如：鼠類TGFβR/IL-2R嵌合體經由pSTAT5將小鼠TGFβ1轉化為IL-2訊息；在TGFβ1中培養鼠類T細胞選擇四聚體表現；產生且表徵表現對間皮素具有特異性之鼠類TCR及本揭露內容之鼠類嵌合蛋白的鼠類治療性T細胞；在經基因工程改造之KrasLSL-G12D/+; Trp53LSL-R172H/+;p48Cre/+ (KPC)小鼠模型中提供TCR與TGFβR/IL-2R嵌合體作為胰管腺癌(PDA)之TCR-T細胞療法；及相對於僅表現TCR之T細胞，含有TGFβR/IL-2R嵌合體之經工程改造之TCR-T細胞優先積聚在胰臟腫瘤中。
可組合上述各種實施例以提供其他實施例。本說明書中所提及的及/或本申請案資料表中所列出的所有美國專利、美國專利申請公開案、美國專利申請案、外國專利、外國專利申請案及非專利出版物均以全文引用之方式併入本文中。必要時，可修改實施例之態樣以採用各種專利、申請案及公開案之概念，從而提供其他實施例。
可鑒於以上詳細描述對實施例進行此等及其他改變。一般而言，在以下申請專利範圍中，所用術語不應解釋為將申請專利範圍限於本說明書及申請專利範圍中所揭示之特定實施例，而應解釋為包括所有可能的實施例以及此類申請專利範圍有權要求的等效物之全部範圍。因此，申請專利範圍不受本揭露內容限制。
無
圖1提供四種表現構築體之示意圖，各編碼本揭露內容之二種TGFβR/IL-2R嵌合融合蛋白。編碼本揭露內容之某些嵌合融合蛋白的雙順反子構築體包括將順反子分開的弗林蛋白酶裂解位點、GSG連接子及P2A自裂解肽序列。其他構築體含有如圖所示之轉殖基因，在第二融合蛋白下游具有額外的弗林蛋白酶裂解位點-GSG-E2A，隨後為截短的人類神經生長因子受體(NGFR)作為轉導標記。
圖 2A-3B顯示表現嵌合融合蛋白且用TGFβ刺激之T細胞經由pSTAT5的IL-2訊息傳導。(2A, 3A)具有CRISPR-Cas9介導之TGFβR1/2缺失之初級人類CD8 T細胞用編碼嵌合融合蛋白之構築體轉導，且用指定量之重組人類TGFβ1或IL-2刺激，隨後固定/透化且用磷酸化特異性STAT5抗體染色。(2B, 3B)具有或不具有TGFβR1/2缺失之初級人類CD8 T細胞用嵌合構築體轉導且用25 ng/mL (2B)或10 ng/mL (3B) TGFβ1刺激，隨後固定/透化，且進行pSTAT5染色。在內源TGFβ受體1及2缺失後，觀察到pSTAT5訊息之適度增加。在圖中： ●            「1b-2g IL2 TM」指示編碼含有TGFβR1胞外域、IL-2Rβ跨膜域及IL-2Rβ胞內域之第一融合物以及含有TGFβR2胞外域、IL-2Rγ跨膜域及IL-2Rγ胞內域之第二融合物的轉殖基因； ●            「2b-1g IL2 TM」指示編碼含有TGFβR2胞外域、IL-2Rβ跨膜域及IL-2Rβ胞內域之第一融合物以及含有TGFβR1胞外域、IL-2Rγ跨膜域及IL-2Rγ胞內域之第二融合物的轉殖基因； ●            「1b-2g TGFbR TM」指示編碼含有TGFβR1胞外域、TGFβR1跨膜域(在構築體中後接胺基酸C-H-N，換言之，來自TGFβR1之3個胺基酸的胞內突出端)及IL-2Rβ胞內域之第一融合物以及含有TGFβR2胞外域、TGFβR2跨膜域及IL-2Rγ胞內域之第二融合物的轉殖基因；及 ●            「2b-1g TGFbR TM」指示編碼含有TGFβR2胞外域、TGFβR2跨膜域及IL-2Rβ胞內域之第一融合物以及含有TGFβR1胞外域、TGFβR1跨膜域(在構築體中後接胺基酸C-H-N)及IL-2Rγ胞內域之第二融合物的轉殖基因。
圖 4A-5B顯示T細胞中經由pSMAD2/3之內源TGFβR1/2訊息傳導。(4A, 5A)初級人類CD8 T細胞(完整TGFβR1/2)用嵌合構築體轉導且用指定量之重組人類TGFβ1或IL-2刺激，隨後固定/透化且用磷酸化特異性SMAD2/SMAD3抗體染色。(4B, 5B)具有或不具有TGFβR1/2缺失之初級人類CD8 T細胞(分別為深灰色及淺灰色條)用嵌合構築體轉導且用25 ng/mL (4B)或10 ng/mL (5B) TGFβ1刺激，隨後固定/透化且進行pSMAD2/3染色。相對於未轉導之對照，用嵌合體轉導之細胞中pSMAD2/3訊息之幅度減小。資料來自使用不同濃度之TGFβ的實驗，如圖所示。
圖 6A 及 6B顯示用嵌合融合轉殖基因轉導且在TGFβ存在下培養之T細胞的生存力及轉殖基因表現。用(6A) TGFβR1-EC_IL-2Rβ-TM_IL-2Rβ-IC/TGFβR2-EC_IL-2Rγ-TM_IL-2Rγ-IC或(6B) TGFβR2-EC_TGFβR2-TM_IL-2Rβ-IC/TGFβR1-EC_TGFβR1-TM (具有C-H-N)_IL-2Rγ-IC (由MSCV U3啟動子驅動之多順反子表現卡匣，嵌合融合物藉由弗林蛋白酶裂解位點及P2A序列彼此分開，第二融合物藉由另一弗林蛋白酶裂解位點及E2A序列與NGFRt分開)轉導之初級人類T細胞在指定量之重組人類TGFβ1或IL-2中培養，且每48小時用指定細胞介素條件再刺激，持續7天。隨時間推移量測表現轉殖基因序列之細胞的生存力及百分比(藉由轉導標記NGFR量測)。添加TGFβ1選擇表現轉殖基因構築體之細胞(相對於IL-2或僅培養基對照)且以足以維持生存力之位準支持IL-2訊息轉導。
圖 7A 及 7B顯示表現嵌合融合物且用TGFβ1 (7A)或IL-2 (7B)刺激之T細胞的細胞分裂。初級人類CD8 T細胞用CellTrace Violet標記，且每48小時用指定濃度之重組人類TGFβ1或IL-2刺激。5天後，藉由將TGFβ1添加至用嵌合體轉導之細胞來增強細胞增殖(藉由經由流動式細胞測量術稀釋CTV訊息量測)，但未轉導之對照則沒有。經由嵌合構築體之TGFβ1介導之訊息傳導促進細胞分裂，其程度與未轉導之對照細胞中之IL-2相似。流動影像之頂部列 = 對照；中間列 = 用編碼TGFβR1-EC_IL-2Rβ-TM_IL-2Rβ-IC / TGFβR2-EC_IL-2Rγ-TM_IL-2Rγ-IC之構築體轉導；底部列 = 用含有TGFβR2-EC_IL-2Rβ-TM_IL-2Rβ-IC / TGFβR1-EC_IL-2Rγ-TM_IL-2Rγ-IC之構築體轉導。
圖 8顯示初級人類T細胞對MDA-MB-468腫瘤細胞株之殺傷，該等T細胞(i)經轉導以表現識別腫瘤細胞株表現之WT-1抗原的外源TCR，且用IL-2刺激，(ii)經轉導以表現TCR以及本揭露內容之嵌合融合物，且用TGFβ1刺激，或(iii)經轉導以表現本揭露內容之嵌合融合物(而非TCR)，且用TGFβ1刺激。表現轉殖基因構築體之初級人類CD8 T細胞用指定細胞介素刺激且與NucLight Red+ MDA-MB-468腫瘤以(左) 3:1、(右上) 1.5:1或(右下) 0.75:1之效應物:目標比共培育。經由IncuCyte S3自動成像系統每2小時獲取影像(9個影像/孔，n=3個孔/條件)。計算每孔剩餘腫瘤之分數(相對於各孔獲取之第一影像歸一化)且作為時間的函數來繪製，其中標準偏差用豎條表示。用嵌合體轉導且在TGFβ1中培養的T細胞群清除腫瘤的程度及動力學與在IL-2中維持的僅TCR對照相似。僅用TGFβR1-EC_IL-2Rβ-TM_IL-2Rβ-IC/TGFβR2-EC_IL-2Rγ-TM_IL-2Rγ-IC (無TCR)轉導且在TGFβ1中培養的T細胞作為陰性對照包括在內。
圖 9顯示未經修飾之初級人類CD8+ T細胞及具有CRISPR-Cas9介導之TGFβR2基因剔除之初級人類CD8+ T細胞在經由Cas9 RNP電穿孔進行基因剔除後72小時的TGFβR2表現。引導RNA序列為：sgTGFβR1：CATACAAACGGCCTATCTCG (SEQ ID NO.:49)；及sgTGFβR2：TCACCCGACTTCTGAACGTG (SEQ ID NO.:50)。用於驗證基因剔除之試劑為：TGFβR1正向基因體引子：AGTGTTTCTGCCACCTCTGT (SEQ ID NO.:51)；TGFβR1反向基因體引子：TGCCTCTAAACGGAATGAGC (SEQ ID NO.:52)；Synthego ICE (CRISPR編輯推斷)分析工具(Hsiau等人 bioRxiv 2018 DOI:10.1101/251082)；及TGFβR2 APC抗體：Biolegend純系W11755E (目錄號399706)。
圖 10概述阿爾瑪藍(Alamar Blue)細胞生存力分析法。
圖 11A-11B顯示阿爾瑪藍細胞生存力分析法之結果，對經轉導以表現指定嵌合融合構築體且用TGFβ (A)或IL-2 (B)刺激之CTLL-2細胞進行測試。
圖 12A-12D顯示TGFβR/IL-2R嵌合融合蛋白重新利用TGFβ1以經由pSTAT5傳遞IL-2訊息。(A)初級人類CD8 T細胞經活化，用嵌合構築體轉導，且用指定量之重組人類TGFβ1或IL-2刺激，隨後固定/透化且用磷酸化特異性(Y694) STAT5抗體染色。含有TGFβRI跨膜域之融合物進一步含有自跨膜序列延伸之三個胺基酸的胞內突出端C-H-N。點代表個別供體，n=2。(B)初級人類CD8 T細胞用Cas9及靶向TGFβRII之sgRNA電穿孔以剔除內源TGFβRII，藉由TGFβRII相對於無CRISPR對照之訊息損失所示。圖例與直方圖之自上而下的順序相對應。(C)具有CRISPR-Cas9介導之TGFβRI/II缺失之初級人類CD8 T細胞如上文所述進行轉導、刺激且藉由流動式細胞測量術進行分析。(D)比較(A)及(C)中具有完整內源TGFβRI/II或CRISPR介導之內源TGFβRI/II缺失(雙基因剔除，DKO)之CD8 T細胞之間的pSTAT5訊息傳導，此處顯示各嵌合構築體及未轉導之對照的10 ng/mL TGFβ1刺激條件。在內源TGFβRI/II缺失後，觀察到pSTAT5訊息適度增加，表明內源受體對嵌合受體訊息轉導之干擾最小。
圖 13A-13B顯示TGFβR/IL-2R嵌合融合蛋白減少經由pSMAD2/3之內源TGFβRI/II訊息傳導。(A)初級人類CD8 T細胞用嵌合構築體轉導且用指定量之重組人類TGFβ1刺激，隨後固定/透化且用磷酸化特異性SMAD2(S465/S467)/SMAD3(S423/S425)抗體染色。含有TGFβRI跨膜域之融合物進一步含有自跨膜序列延伸之三個胺基酸的胞內突出端C-H-N。點代表個別供體，n=3。(B)具有或不具有TGFβRI/II缺失之初級人類CD8 T細胞如上文所述進行轉導、刺激及分析，此處顯示各嵌合構築體及未轉導之對照的10 ng/mL TGFβ1刺激條件。在所有條件下，當內源TGFβRI/II消除時，pSMAD2/3訊息之幅度減小，表明內源TGFβ1訊息傳導正在發生，但在用TGFβR/IL-2R嵌合體轉導之T細胞中程度較低(比較未轉導與嵌合體之WT與DKO之間的差異)。
圖 14顯示二種表現構築體之示意圖，各編碼本揭露內容之二種TGFβR/IL-2R嵌合融合蛋白以及對間皮素抗原肽具有特異性之T細胞受體(TCR)。編碼TCR鏈(β、α)及TGFβR/IL-2R嵌合融合蛋白之序列藉由編碼弗林蛋白酶裂解位點、GSG連接子及2A自裂解肽序列之序列分開。含有TGFβRI跨膜域之融合物進一步含有自跨膜序列延伸之三個胺基酸的胞內突出端C-H-N。
圖 15A-15B顯示TGFβ1劑量反應曲線，顯示由具有間皮素特異性TCR之TGFβR/IL-2R嵌合融合蛋白介導之pSTAT5訊息傳導的差異。含有TGFβRI跨膜域之融合物進一步含有自跨膜序列延伸之三個胺基酸的胞內突出端C-H-N。具有CRISPR介導之TGFβRI/II缺失之初級人類CD8 T細胞經活化，用嵌合構築體轉導，且用指定量之重組人類TGFβ1刺激，隨後固定/透化且用磷酸化特異性(Y694) STAT5抗體染色。顯示二個獨立供體(A、B)之結果。
圖 16A-16B顯示在TGFβ1中培養經嵌合融合蛋白及TCR轉導之T細胞選擇四聚體表現。用(A)間皮素特異性TCR/TGFβRI-IL-2βTM-IL-2β/TGFβRII-IL2γTM-IL2γ或(B)間皮素特異性TCR/TGFβRII-TGFβRII TM-IL-2β/TGFβRI-TGFβRI TM-IL-2γ轉導之初級人類CD8 T細胞在指定量之重組人類TGFβ1或IL-2中培養，且每48小時用細胞介素再刺激，持續7天。含有TGFβRI跨膜域之融合物進一步含有自跨膜序列延伸之三個胺基酸的胞內突出端C-H-N。隨時間推移追蹤表現轉殖基因構築體之T細胞(藉由間皮素肽:MHC四聚體染色量測)，且以總CD8+ T細胞之百分比(左)或以給定條件下四聚體陽性細胞相對於50 U/mL IL-2對照條件之比率計算的倍數富集(右)來圖示。此等資料表明，添加TGFβ1強烈選擇表現轉殖基因構築體之細胞。
圖 17A-17E顯示與TGFβR/IL-2R嵌合受體共表現之間皮素特異性TCR支持單獨使用TGFβ1刺激之增殖及腫瘤殺傷。將僅表現間皮素特異性TCR或如圖14中表現TCR與嵌合融合蛋白之初級人類CD8 T細胞與NucLight Red+ PANC-1腫瘤以(A) 20:1、(B) 10:1或(C) 5:1之效應物:目標比共培育。經由IncuCyte活細胞成像平台每2小時獲取影像(9個影像/孔，n=4個孔/條件)，且每48小時用10 ng/mL人類TGFβ1刺激共培養物，如箭頭所指示。將每孔剩餘腫瘤面積之分數(相對於各個別孔獲取之第一影像歸一化)作為時間的函數來繪製，其中標準偏差用豎條表示。(D)表現TCR與嵌合融合蛋白之T細胞比在TGFβ1中培養之僅TCR之T細胞增殖更多。T細胞倍數擴增係藉由將在最終時間點(t=168hr)自各孔量化之T細胞總數除以獲取之第一影像(t=0)中之T細胞總數來量化，點表示一式多份的孔(n=4)。(E)所有三個T細胞群在與腫瘤細胞共培養之前藉由T細胞群之四聚體染色所量化，在表面上表現相似位準之間皮素特異性TCR。
圖 18A-18D顯示，表現間皮素特異性TCR與TGFβR/IL-2R嵌合融合蛋白之T細胞的細胞毒性與在習知IL-2刺激下之僅TCR之T細胞相似。將僅表現間皮素特異性TCR或如圖14中表現TCR與嵌合融合蛋白之初級人類CD8 T細胞與NucLight Red+ PANC-1腫瘤以(A) 20:1、(B) 10:1或(C) 5:1之效應物:目標比共培育。經由IncuCyte活細胞成像平台每2小時獲取影像(9個影像/孔，n=4個孔/條件)，且每48小時用50 U/mL IL-2刺激共培養物，如箭頭所指示。將每孔剩餘腫瘤面積之分數(相對於各個別孔獲取之第一影像歸一化)作為時間的函數來繪製，其中標準偏差用豎條表示。(D)表現TCR與嵌合融合蛋白之T細胞在IL-2中培養時與僅TCR之T細胞相比沒有增殖優勢。T細胞倍數擴增係藉由將在最終時間點(t=168hr)自各孔影像量化之T細胞總數除以獲取之第一影像(t=0)中之T細胞總數來量化，點表示一式多份的孔(n=4)。
圖 19A-19D顯示，表現間皮素特異性TCR與嵌合融合蛋白之T細胞的增殖及細胞毒性藉由10 ng/mL TGFβ1及5 U/mL IL-2之組合處理得到增強。將僅表現間皮素特異性TCR或如圖14中表現TCR與嵌合融合蛋白之初級人類CD8 T細胞與NucLight Red+ PANC-1腫瘤以(A) 20:1、(B) 10:1或(C) 5:1之效應物:目標比共培育。經由IncuCyte活細胞成像平台每2小時獲取影像(9個影像/孔，n=4個孔/條件)，且每48小時用10 ng/mL TGFβ1及5 U/mL IL-2刺激共培養物，如箭頭所指示。將每孔剩餘腫瘤面積之分數(相對於各個別孔獲取之第一影像歸一化)作為時間的函數來繪製，其中標準偏差用豎條表示。(D)當在TGFβ1及IL-2之組合中培養時，表現TCR與嵌合融合蛋白之T細胞比僅TCR之T細胞增殖更多。T細胞倍數擴增係藉由將在最終時間點(t=168hr)自各孔量化之T細胞總數除以獲取之第一影像(t=0)中之T細胞總數來量化，點表示一式多份的孔(n=4)。
圖 20A-20B顯示，在靠近跨膜域之TGFβRI胞內序列添加3個胺基酸促進IL-2R訊息傳導。(A)初級人類CD8 T細胞經活化，用嵌合構築體轉導，且用指定量之重組人類TGFβ1或IL-2刺激，隨後固定/透化且用磷酸化特異性(Y694) STAT5抗體染色。點代表個別供體，n=2。(B)初級人類CD8 T細胞用嵌合構築體轉導且用指定量之重組人類TGFβ1刺激，隨後固定/透化且用磷酸化特異性SMAD2(S465/S467)/SMAD3(S423/S425)抗體染色。點代表個別供體，n=3。構築體2β-1γ (TGFβR TM)含有TGFβRI靠近跨膜區之3個胺基酸(C-H-N)，而另一構築體(2β-1γ (TGFβR TM-3AA))含有TGFβRI之胞外區及跨膜區的胺基酸，但不含TGFβRI胞內突出端；換言之，移除3個胺基酸的胞內突出端。
圖 21-26C係關於測試嵌合融合蛋白之鼠類型式的實驗。
圖 21顯示二種表現構築體之示意圖，各編碼本揭露內容之TGFβR/IL-2R嵌合融合蛋白的二種鼠類型式以及自 MSLN -/-小鼠分離且對間皮素抗原肽具有特異性的TCR1045(參見Stromnes等人 Cancer Cell 28(5):638-685 (2015)，TCR1045以引用的方式併入本文中)。構築體設計與圖14所示及描述的大體上相似，但含有鼠類TGFβRI跨膜域之融合蛋白不含C-H-N胞內突出端(在小鼠與人類TGFβRI之間守恆)。反轉錄病毒骨架pMP71用於將構築體遞送至T細胞。
圖 22顯示鼠類TGFβR/IL-2R嵌合體經由pSTAT5將小鼠TGFβ1轉化為IL-2訊息。初級小鼠P14脾細胞經活化，用嵌合構築體轉導，且用指定量之重組鼠類TGFβ1或人類IL-2刺激，隨後固定/透化且用磷酸化特異性(Y694) STAT5抗體染色。點代表生物學重複，n=3。顯示的事件在活的Vβ9陽性(Msln 1045 TCR β鏈)細胞上進行閘控。
圖 23A-23B顯示在TGFβ1中培養鼠類T細胞選擇四聚體表現。用(A) Msln1045 TCR/TGFβRI-IL2βTM-IL2β/TGFβRII-IL2γTM-IL2γ或(B) Msln1045 TCR/TGFβRII-TGFβRII TM-IL2β/TGFβRI-TGFβRI TM-IL2γ轉導之鼠類CD8 T細胞在指定量之重組小鼠TGFβ1或人類IL-2中培養，且每48小時用細胞介素再刺激，持續7天。隨時間推移追蹤表現轉殖基因構築體之T細胞(藉由用四聚體及識別Msln1045 TCR β鏈Vβ9之抗體染色量測)且以總CD8+ T細胞之百分比來圖示。此等資料表明，添加TGFβ1強烈選擇表現轉殖基因構築體之細胞。
圖 24A-24C係關於鼠類治療性T細胞的產生及表徵。(A)具有及不具有鼠類TGFβR/IL-2R嵌合體之鼠類Msln 1045 TCR構築體的圖式。多順反子構築體在各蛋白質(TCR或嵌合融合物)編碼序列之間含有弗林蛋白酶裂解位點、GSG連接子及2A自裂解肽序列。(B)用於工程改造治療性鼠類T細胞之實驗工作流程。自轉殖基因P14供體小鼠收穫脾細胞，該等小鼠分別對僅TCR及TCR與嵌合融合蛋白呈Thy1.2同型接合/CD45.1陰性或Thy1.2/Thy1.1異型接合/CD45.1陽性，且用培養盤結合的抗CD3/抗CD28抗體、IL-2及IL-21活化。活化的T細胞用反轉錄病毒轉導，且在7天後，經轉導細胞藉由與用同源Msln肽及IL-2脈衝之經輻照抗原呈現細胞共培養進行擴增。(C)在擴增後一週，藉由流動式細胞測量術，藉由用Msln:HLA四聚體及與Msln 1045 TCR β鏈(Vβ9)結合之抗體進行表面染色，分析經工程改造之供體細胞的治療性TCR的表現，如右側點圖所示。所有圖均在活的Thy1.2陽性細胞上進行閘控。各條件之供體P14脾細胞的基因型由左側點圖顯示，對同源標記Thy1.1及CD45.1進行染色。
圖 25A-25B顯示Msln 1045 TCR與TGFβR/IL-2R嵌合體作為TCR-T細胞療法用於經基因工程改造之KrasLSL-G12D/+; Trp53LSL-R172H/+;p48Cre/+ (KPC)小鼠模型之胰管腺癌(PDA)。(A)用於治療攜帶腫瘤之KPC小鼠的過繼細胞轉移(ACT)工作流程。KPC小鼠經由超音波成像篩選PDA之證據，且隨後納入所示三個治療組中之一者(n=5隻小鼠，2隻/組用於共轉移)。受體小鼠在過繼轉移經工程改造之T細胞以及IL-2及用同源Msln肽脈衝之經輻照抗原呈現細胞(APC)之前，接受環磷醯胺作為預處理療法。對於共轉移組1及2，TCR與嵌合體T細胞以大致1:1的比率轉移。各組每隻小鼠之轉移細胞總數顯示在(B)中。
圖 26A-26C顯示，相對於僅Msln 1045 TCR之T細胞，含有TGFβR/IL-2R嵌合體之經工程改造之T細胞優先積聚在胰臟腫瘤中。(A) KPC小鼠在收穫前一週用指定的經工程改造之T細胞處理。將胰臟腫瘤組織解離成單細胞懸浮液，且藉由流動式細胞測量術分析以量測共轉移之T細胞群的相對比率。(B)基於供體及受體T細胞之遺傳背景，指示對應於自腫瘤收穫之三個T細胞群之同源標記的圖式。(C)共轉移之T細胞群的直接比較顯示，相對於僅表現Msln1045 TCR之T細胞，經工程改造以表現Msln 1045 TCR及TGFβR/IL-2R嵌合融合蛋白之T細胞(頂部，「第1組」；底部，「第2組」)優先積聚在腫瘤中(分別比較Thy1.1陰性/CD45.1陽性細胞與Thy1.1陽性/CD45.1陰性細胞)。所有點圖在活的Thy1.2陽性細胞上進行閘控。各點圖代表一隻小鼠且治療組對應於(A)中所示之組。所有小鼠腫瘤中觀察到的內源T細胞(Thy1.1陰性/CD45.1陰性群體)之豐度可歸因於在解剖胰臟腫瘤組織時包含引流淋巴結，如KPC模型所報導(參見Lee等人, Curr Protoc Pharmacol. 2016;73:14.39.1-14.39.20. 發表於2016年6月1日. doi:10.1002/cpph.2)，其中腫瘤可容易生長至附近的淋巴結中，使得淋巴結與腫瘤難以區分。
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Claims (117)

  1. 一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體(TGFβR)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體(IL-2R)多肽之一胞內部分；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
  2. 如請求項1之融合蛋白，其中該TGFβR多肽包含一TGFβR1多肽或一TGFβR2多肽。
  3. 如請求項1或2之融合蛋白，其中該IL-2R多肽包含一IL-2Rβ多肽、一IL-2Rγ多肽或二者。
  4. 一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之一胞內部分；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
  5. 一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之一胞內部分；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
  6. 一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之一胞內部分；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
  7. 一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之一胞內部分；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
  8. 如請求項1至7中任一項之融合蛋白，其中該跨膜組分包含來自IL-2Rβ之一跨膜域。
  9. 如請求項1至8中任一項之融合蛋白，其中該跨膜組分包含來自IL-2Rγ之一跨膜域。
  10. 如請求項1至9中任一項之融合蛋白，其中該跨膜組分包含來自TGFβR1之一跨膜域，且其中任擇地，該融合蛋白之該胞內組分進一步包含安置於該IL-2R胞內部分之N端的一至二十個、一至十五個、一至十個、一至五個、二至二十個、二至十五個、二至十個、二至五個、三至二十個、三至十五個、三至十個、三至五個、至多五個、至多十個、至多十五個、至多二十個、或一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個、十八個、十九個或二十個來自TGFβR1胞內域之連續N端胺基酸，或其一變異體，該變異體包含一個、二個、三個、四個或五個任擇地守恆胺基酸取代，其中進一步任擇地，該融合蛋白之該胞內組分包含安置於該IL-2R胞內部分之N端的胺基酸C-H-N。
  11. 如請求項1至10中任一項之融合蛋白，其中該跨膜組分包含來自TGFβR2之一跨膜域，且其中任擇地，該融合蛋白之該胞內組分進一步包含安置於該IL-2R胞內部分之N端的一至二十個、一至十五個、一至十個、一至五個、二至二十個、二至十五個、二至十個、二至五個、三至二十個、三至十五個、三至十個、三至五個、至多五個、至多十個、至多十五個、至多二十個、或一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個、十一個、十二個、十三個、十四個、十五個、十六個、十七個、十八個、十九個或二十個來自TGFβR2胞內域之連續N端胺基酸，或其一變異體，該變異體包含一個、二個、三個、四個或五個任擇地守恆胺基酸取代，其中進一步任擇地，該融合蛋白之該胞內組分包含安置於該IL-2R胞內部分之N端的胺基酸R-V-N。
  12. 一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rβ胞內域；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一IL-2Rβ跨膜域， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
  13. 一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rβ胞內域；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一IL-2Rβ跨膜域， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
  14. 一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rβ胞內域；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一TGFβR1跨膜域， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
  15. 一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體β (IL-2Rβ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rβ胞內域；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一TGFβR2跨膜域， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
  16. 一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rγ胞內域；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一IL-2Rγ跨膜域， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
  17. 一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rγ胞內域；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一IL-2Rγ跨膜域， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
  18. 一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rγ胞內域；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一TGFβR2跨膜域， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
  19. 一種融合蛋白，其包含： (i)   一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體； (ii)  一胞內組分，該胞內組分包含一介白素-2受體γ (IL-2Rγ)多肽之一胞內部分，其中該胞內組分任擇地包含一IL-2Rγ胞內域；及 (iii) 一跨膜組分，該跨膜組分安置於(i)之該胞外組分與(ii)之該胞內組分之間，其中該跨膜組分任擇地包含一TGFβR1跨膜域， 其中該融合蛋白在由一宿主細胞表現且與該TGFβ多肽結合時，能夠促成該宿主細胞中之一IL-2訊息。
  20. 如請求項1至19中任一項之融合蛋白，其中： (1)  (i)   該胞外組分與SEQ ID NO.:39或41中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成； (ii) 該跨膜組分與SEQ ID NO.:40、SEQ ID NO.:42、SEQ ID NO.:43或SEQ ID NO.:45中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成；及 (iii)   該胞內組分與SEQ ID NO.:44或46中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由該胺基酸序列組成， 且其中任擇地，該融合蛋白包含一胺基酸序列，其與SEQ ID NOS.:5、6、9、10、13、14、17及18中之任一者中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含或由SEQ ID NOS.:5、6、9、10、13、14、17及18中之任一者中所列之胺基酸序列組成；及/或 (2)  其中該融合蛋白包含一或多個胺基酸取代、插入及/或缺失以減少或防止該融合蛋白與一人類TGFβR1或一人類TGFβR2形成一蛋白質二聚體，其中任擇地，該一或多個胺基酸取代、插入及/或缺失提供： (i)  SEQ ID NO.:47之一變異體，其中該變異體包含一至十個胺基酸插入或一至十個胺基酸缺失； (ii) 被添加至SEQ ID NO.:47之N端及/或C端的一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個胺基酸； (iii)   SEQ ID NO.:48之一變異體，其中該變異體包含一至十個胺基酸插入或一至十個胺基酸缺失； (iv)   被添加至SEQ ID NO.:48之N端及/或C端的一個、二個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或更多個。
  21. 如請求項1至20中任一項之融合蛋白，其中該跨膜組分包含來自該TGFβR多肽之一跨膜域且該胞內組分包含自該跨膜域延伸至該IL-2R多肽之該胞內部分的N端的一TGFβR胞內突出端或胞內突出端序列，例如表A所述者，其中任擇地： (i)   該跨膜組分包含一TGFβR1跨膜域且該胞內組分包含自該TGFβR1跨膜域延伸至該IL-2R多肽之該胞內部分的N端的一TGFβR1胞內突出端或胞內突出端序列，例如表A所述，其任擇地包含胺基酸序列C-H-N、基本上由胺基酸序列C-H-N組成或由胺基酸序列C-H-N組成；或 (ii)  該跨膜組分包含一TGFβR2跨膜域且該胞內組分包含自該TGFβR2跨膜域延伸至該IL-2R多肽之該胞內部分的N端的一TGFβR2胞內突出端或胞內突出端序列，例如表A所述，其任擇地包含胺基酸序列R-V-N、基本上由胺基酸序列R-V-N組成或由胺基酸序列R-V-N組成。
  22. 如請求項1至21中任一項之融合蛋白，其中該跨膜組分及該胞內組分之一部分共同包含SEQ ID NO.:56或SEQ ID NO.:60之胺基酸序列。
  23. 如請求項1至22中任一項之融合蛋白，其中該IL-2訊息包含、引起、提供或促進下列(i)-(vii)中之任一或多者： (i)   該IL-2R多肽之該胞內部分由JAK1或JAK3磷酸化； (ii)  以下中之任一者或多者在該宿主細胞中磷酸化：PI3K、Akt、STAT、STAT5A、STAT5B、MEK、SHC1、MEK1、MEK2、ERK1、ERK2及STAT3； (iii) STAT5介導之轉錄； (iv) GRB2及SOS之募集； (v)  RAS之GTP負載； (vi) Raf-ERK MAPK級聯之活化； (vii)   mTORC1及/或HIF1α/HIF1β之活化。
  24. 如請求項1至23中任一項之融合蛋白，其中當該融合蛋白由一宿主細胞表現且該融合蛋白與該TGFβ多肽結合時，該宿主細胞執行以下中之一或多者：增殖、生長、一效應分子(例如一T細胞受體)之表現、醣酵解代謝、蛋白質(例如MYC、SLC7A5或二者)之表現及膽固醇之生物合成。
  25. 一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含來自人類TGFβRI之一胞外域；(ii)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自人類TGFβRI之一跨膜域；及(iii)一胞內組分，該胞內組分包含來自人類IL-2Rβ之一細胞質/訊息傳導域，其中任擇地，該胞內組分進一步包含一人類TGFβR1胞內突出端或胞內突出端序列，例如表A所述，其任擇地包含胺基酸序列C-H-N、基本上由胺基酸序列C-H-N組成或由胺基酸序列C-H-N組成，安置於該人類IL-2Rβ細胞質/訊息傳導域之N端。
  26. 一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含來自人類TGFβRI之一胞外域；(ii)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自人類TGFβRI之一跨膜域；及(iii)一胞內組分，該胞內組分包含來自人類IL-2Rγ之一細胞質/訊息傳導域，其中任擇地，該胞內組分進一步包含一人類TGFβR1胞內突出端或胞內突出端序列，例如表A所述，其任擇地包含胺基酸序列C-H-N、基本上由胺基酸序列C-H-N組成或由胺基酸序列C-H-N組成，安置於該人類IL-2Rγ細胞質/訊息傳導域之N端。
  27. 一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含來自人類TGFβRI之一胞外域；(ii)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自人類IL-2Rβ之一跨膜域；及(iii)一胞內組分，該胞內組分包含來自人類IL-2Rβ之一細胞質/訊息傳導域。
  28. 一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含來自人類TGFβRI之一胞外域；(ii)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自人類IL-2Rγ之一跨膜域；及(iii)一胞內組分，該胞內組分包含來自IL-2Rγ之一細胞質/訊息傳導域。
  29. 一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含來自人類TGFβRII之一胞外域；(ii)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自人類TGFβRII之一跨膜域；及(iii)一胞內組分，該胞內組分包含來自人類IL-2Rβ之一細胞質/訊息傳導域，其中任擇地，該胞內組分進一步包含一人類TGFβRII胞內突出端或胞內突出端序列，例如表A所述，其任擇地包含胺基酸序列R-V-N、基本上由胺基酸序列R-V-N組成或由胺基酸序列R-V-N組成，安置於該IL-2Rβ細胞質/訊息傳導域之N端。
  30. 一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含來自人類TGFβRII之一胞外域；(ii)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自人類TGFβRII之一跨膜域；及(iii)一胞內組分，該胞內組分包含來自人類IL-2Rγ之一細胞質/訊息傳導域，其中任擇地，該胞內組分進一步包含一人類TGFβRII胞內突出端或胞內突出端序列，例如表A所述，其任擇地包含胺基酸序列R-V-N、基本上由胺基酸序列R-V-N組成或由胺基酸序列R-V-N組成，安置於該IL-2Rγ細胞質/訊息傳導域之N端。
  31. 一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含來自人類TGFβRII之一胞外域；(ii)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自人類IL-2Rβ之一跨膜域；及(iii)一胞內組分，該胞內組分包含來自人類IL-2Rβ之一細胞質/訊息傳導域。
  32. 一種融合蛋白，其包含：(i)一胞外組分，該胞外組分包含來自人類TGFβRII之一胞外域；(ii)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自人類IL-2Rγ之一跨膜域；及(iii)一胞內組分，該胞內組分包含來自IL-2Rγ之一細胞質/訊息傳導域。
  33. 一種融合蛋白，其包含SEQ ID NOs.:5、6、9、10、13、14、17及18中之任一者中所列之胺基酸序列或由SEQ ID NOs.:5、6、9、10、13、14、17及18中之任一者中所列之胺基酸序列組成。
  34. 一種融合蛋白，其包含SEQ ID NOs.:7、11、15及19中之任一者中所列之胺基酸序列或由SEQ ID NOs.:7、11、15及19中之任一者中所列之胺基酸序列組成。
  35. 一種多核苷酸，其編碼如請求項1至34中任一項之融合蛋白。
  36. 一種多核苷酸，其編碼如請求項1至34中任一項之融合蛋白，其中該/一經編碼之融合蛋白進一步包含在該胞外組分之N端且連接至該胞外組分之一訊息肽。
  37. 如請求項36之多核苷酸，其中該訊息肽包含SEQ ID NO.:21或22中所列之胺基酸序列或由SEQ ID NO.:21或22中所列之胺基酸序列組成。
  38. 一種多核苷酸，其編碼(1)如請求項1至34中任一項之一第一融合蛋白及(2)如請求項1至34中任一項之一第二融合蛋白，任擇地，其中該第一融合蛋白及該第二融合蛋白包含與以下SEQ ID NOs中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性之胺基酸序列，或包含以下SEQ ID NOs中所列之胺基酸序列或由以下SEQ ID NOs中所列之胺基酸序列組成的胺基酸序列：(i)分別為5及6；(ii)分別為5及9；(iii)分別為5及14；(iv)分別為5及17；(v)分別為10及6；(vi)分別為10及9；(vii)分別為10及14；(viii)分別為10及17；(ix)分別為13及6；(x)分別為13及9；(xi)分別為13及14；(xii)分別為13及17；(xiii)分別為18及6；(xiv)分別為18及9；(xv)分別為18及14；或(xvi)分別為18及17。
  39. 如請求項38之多核苷酸，其中該第一融合蛋白之胺基酸序列與該第二融合蛋白之胺基酸序列不同， 其中，任擇地，該第一融合蛋白及該第二融合蛋白係根據表B，及/或： (a)  該第一融合蛋白包含一TGFβR1多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，且該第二融合蛋白包含一TGFβR2多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；及/或 (b)  該第一融合蛋白包含一IL-2Rγ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rγ胞內域，且該第二融合蛋白包含一IL-2Rβ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rβ胞內域，或(c)該第一融合蛋白包含一IL-2Rβ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rβ胞內域，且該第二融合蛋白包含一IL-2Rγ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rγ胞內域；及/或 (d)  該第一融合蛋白包含一IL-2Rβ跨膜域、一IL-2Rγ跨膜域、一TGFβR1跨膜域或一TGFβR2跨膜域，且該第二融合蛋白包含一IL-2Rβ跨膜域、一IL-2Rγ跨膜域、一TGFβR1跨膜域或一TGFβR2跨膜域。
  40. 如請求項39之多核苷酸，其中： (i)   該第一融合蛋白包含一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，且該第二融合蛋白包含一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；或 (ii)  該第一融合蛋白包含一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，且該第二融合蛋白包含一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體。
  41. 一種多核苷酸，其編碼：(1)一第一融合蛋白，包含(1a)一胞外組分，該胞外組分包含來自(例如人類) TGFβR1之一胞外域，(1b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自(例如人類) IL-2Rβ之一跨膜域，及(1c)一胞內組分，該胞內組分包含來自(例如人類) IL-2Rβ之一細胞質/訊息傳導域；以及(2)一第二融合蛋白，包含(2a)一胞外組分，該胞外組分包含來自(例如人類) TGFβR2之一胞外域，(2b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自(例如人類) IL-2Rγ之一跨膜域，及(2c)一胞內組分，該胞內組分包含來自(例如人類) IL-2Rγ之一細胞質/訊息傳導域， 其中，任擇地，多核苷酸進一步編碼一抗原結合蛋白，諸如一TCR或一CAR。
  42. 一種多核苷酸，其編碼：(1)一第一融合蛋白，包含(1a)一胞外組分，該胞外組分包含來自(例如人類) TGFβR2之一胞外域，(1b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自(例如人類) TGFβR2之一跨膜域，及(1c)一胞內組分，該胞內組分包含來自(例如人類) IL-2Rβ之一細胞質/訊息傳導域；及(2)一第二融合蛋白，包含(2a)一胞外組分，該胞外組分包含來自(例如人類) TGFβR1之一胞外域，(2b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自(例如人類) TGFβR1之一跨膜域，及(2c)一胞內組分，該胞內組分包含來自(例如人類) IL-2Rγ之一細胞質/訊息傳導域，任擇地，其中(i)該胞內組分進一步包含安置於該IL-2Rγ細胞質/訊息傳導域之N端的胺基酸C-H-N，及/或(ii)該多核苷酸進一步編碼一抗原結合蛋白，諸如一TCR或一CAR。
  43. 如請求項38至42中任一項之多核苷酸，其進一步包含安置於編碼該第一融合蛋白之一核苷酸序列與編碼該第二融合蛋白之一核苷酸序列之間的下述： (i)   編碼一弗林蛋白酶裂解位點之一核苷酸序列； (ii)  編碼一自裂解多肽(例如P2A、T2A、E2A、F2A)之一核苷酸序列；或 (iii) (i)及(ii)二者，其中，任擇地，(i)安置於(ii)之5' (亦即上游)。
  44. 如請求項43之多核苷酸，其在5'至3'方向上包含：編碼該第一融合蛋白之一核苷酸序列；編碼一弗林蛋白酶裂解位點之一核苷酸序列；編碼具一任擇的N端連接子(例如G-S-G)之一自裂解多肽的一核苷酸；及編碼該第二融合蛋白之一核苷酸序列。
  45. 如請求項44之多核苷酸，其中： (i)   該第一融合蛋白包含(1a)一胞外組分，該胞外組分包含來自TGFβR1之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，(1b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自IL-2Rβ之一跨膜域，及(1c)一胞內組分，該胞內組分包含來自IL-2Rβ之一胞內域，且該第二融合蛋白包含(2a)一胞外組分，該胞外組分包含來自TGFβR2之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，(2b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自IL-2Rγ之一跨膜域，及(2c)一胞內組分，該胞內組分包含來自IL-2Rγ之一胞內域； (ii)  該第一融合蛋白包含(1a)一胞外組分，該胞外組分包含來自TGFβR2之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，(1b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自IL-2Rβ之一跨膜域，及(1c)一胞內組分，該胞內組分包含來自IL-2Rβ之一胞內域，且該第二融合蛋白包含(2a)一胞外組分，該胞外組分包含來自TGFβR1之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，(2b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自IL-2Rγ之一跨膜域，及(2c)一胞內組分，該胞內組分包含來自IL-2Rγ之一胞內域； (iii) 該第一融合蛋白包含(1a)一胞外組分，該胞外組分包含來自TGFβR1之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，(1b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自TGFβR1之一跨膜域，及(1c)一胞內組分，該胞內組分包含(1)(c)(1)一任擇的TGFβR1胞內突出端或突出端序列，例如表A所述且任擇地包含胺基酸C-H-N、基本上由胺基酸C-H-N組成或由胺基酸C-H-N組成，及(1)(c)(2)來自IL-2Rβ之一胞內域，且該第二融合蛋白包含(2a)一胞外組分，該胞外組分包含來自TGFβR2之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，(2b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自TGFβR2之一跨膜域，及(2c)一胞內組分，該胞內組分包含(2)(c)(1)一任擇的TGFβR2胞內突出端或突出端序列，例如表A所述且任擇地包含胺基酸R-V-N、基本上由胺基酸R-V-N組成或由胺基酸R-V-N組成，及(2)(c)(2)來自IL-2Rγ之一胞內域；或 (iv)該第一融合蛋白包含(1a)一胞外組分，該胞外組分包含來自TGFβR2之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，(1b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自TGFβR2之一跨膜域，及(1c)一胞內組分，該胞內組分包含(1)(c)(1)一任擇的TGFβR2胞內突出端或突出端序列，例如表A所述且任擇地包含胺基酸R-V-N組成、基本上由胺基酸R-V-N組成或由胺基酸R-V-N組成，及(1)(c)(2)來自IL-2Rβ之一胞內域，且該第二融合蛋白包含(2a)一胞外組分，該胞外組分包含來自TGFβR1之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，(2b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自TGFβR1之一跨膜域，及(2c)一胞內組分，該胞內組分包含(2)(c)(1)一任擇的TGFβR1胞內突出端或突出端序列，例如表A所述且任擇地包含胺基酸C-H-N、基本上由胺基酸C-H-N組成或由胺基酸C-H-N組成，及(2)(c)(2)來自IL-2Rγ之一胞內域。
  46. 如請求項38至45中任一項之多核苷酸，其經密碼子最佳化以在一宿主細胞中表現，其中該宿主細胞任擇地為一人類宿主細胞，進一步任擇地為一人類免疫系統細胞，再進一步任擇地為一人類T細胞(例如一CD4+ T細胞、一CD8+ T細胞、一CD4- CD8-雙陰性T細胞、一γδ T細胞或其等之任何組合)、一人類NK細胞或一人類NK-T細胞。
  47. 如請求項46之多核苷酸，其經密碼子最佳化以在一T細胞(例如一CD4+ T細胞、一CD8+ T細胞、一CD4- CD8-雙陰性T細胞、一γδ T細胞或其等之任何組合)、一NK細胞或一NK-T細胞中表現，其中該細胞較佳為人類的。
  48. 如請求項38至47中任一項之多核苷酸，其中該多核苷酸與SEQ ID NOs.:8、12、16及20中之任一者中所列之胺基酸序列具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含SEQ ID NOs.:8、12、16及20中之任一者中所列之胺基酸序列或由SEQ ID NOs.:8、12、16及20中之任一者中所列之胺基酸序列組成。
  49. 如請求項38至48中任一項之多核苷酸，其進一步包含編碼一抗原結合蛋白之一核苷酸序列。
  50. 如請求項49之多核苷酸，其中該抗原結合蛋白包含一TCR、一TCR之一抗原結合片段(例如一scTv)、一scTCR、一CAR或其等之任何組合。
  51. 如請求項50之多核苷酸，其中該抗原結合蛋白包含一αβ TCR，且其中該多核苷酸在5'至3'方向上包含： (1)  編碼該TCRβ鏈之一核苷酸序列；編碼一弗林蛋白酶裂解位點之一核苷酸序列；編碼具一任擇的N端連接子(例如G-S-G)之一自裂解多肽的一核苷酸序列；編碼該第一融合蛋白之一核苷酸序列；編碼一弗林蛋白酶裂解位點之一核苷酸序列；編碼具一任擇的N端連接子(例如G-S-G)之一自裂解多肽的一核苷酸；編碼該第二融合蛋白之一核苷酸序列；編碼一弗林蛋白酶裂解位點之一核苷酸序列；編碼具一任擇的N端連接子(例如G-S-G)之一自裂解多肽的一核苷酸序列；及編碼該TCRα鏈之一核苷酸序列；或 (2)  編碼該TCRα鏈之一核苷酸序列；編碼一弗林蛋白酶裂解位點之一核苷酸序列；編碼具一任擇的N端連接子(例如G-S-G)之一自裂解多肽的一核苷酸序列；編碼該第一融合蛋白之一核苷酸序列；編碼一弗林蛋白酶裂解位點之一核苷酸序列；編碼具一任擇的N端連接子(例如G-S-G)之一自裂解多肽的一核苷酸；編碼該第二融合蛋白之一核苷酸序列；編碼一弗林蛋白酶裂解位點之一核苷酸序列；編碼具一任擇的N端連接子(例如G-S-G)之一自裂解多肽的一核苷酸序列；及編碼該TCRβ鏈之一核苷酸序列。
  52. 如請求項35至51中任一項之多核苷酸，其進一步包含編碼一轉導標記之一核苷酸序列。
  53. 如請求項52之多核苷酸，其中該經編碼之轉導標記包含EGFRt、CD19t、CD34t或NGFRt。
  54. 如請求項35至53中任一項之多核苷酸，其進一步包含編碼一引導RNA之一核苷酸序列，其中，任擇地，該引導RNA對下述具有特異性：一TGFβR1基因座、一TGFβR2基因座、一PD-1基因座、一CTLA4基因座、一LAT基因座、一TIM-3基因座、一PD-L1基因座、一TIGIT基因座、一A2AR基因座、一Fas基因座、一FasL基因座、一B7-H3基因座、一B7-H4基因座、一IDO基因座、一VISTA基因座、一SIGLEC7基因座、一SIGLEC9基因座、一TRAC基因座、一TRBC基因座、一T細胞受體基因座、一MHC (例如HLA)基因座、一CBLB基因座、一RASA2基因座、一UBASH3A基因座、一CISH基因座或其等之任何組合。
  55. 如請求項35至54中任一項之多核苷酸，其進一步包含編碼一Cas核酸酶之一核苷酸序列，其中，任擇地，該Cas核酸酶包含一Cas9或其一功能性變異體、一Cas12或其一功能性變異體、一Cas13或其一功能性變異體，或者一Cas14或其一功能性變異體。
  56. 一種載體，其包含如請求項35至55中任一項之多核苷酸，任擇地，其中該多核苷酸可操作地連接於一表現控制序列。
  57. 如請求項56之載體，其中該載體能夠將該多核苷酸遞送至一造血前驅細胞或一人類免疫系統細胞。
  58. 如請求項57之載體，其中該人類免疫系統細胞包含一T細胞，諸如一CD4+ T細胞、一CD8+ T細胞、一CD4- CD8-雙陰性T細胞或一γδ T細胞；一自然殺手細胞；一自然殺手T細胞；一樹突狀細胞；或其等之任何組合。
  59. 如請求項58之載體，其中該T細胞包含一初始T細胞、一中央記憶T細胞、一幹細胞記憶T細胞、一效應記憶T細胞或其等之任何組合。
  60. 如請求項56至59中任一項之載體，其中該載體為一病毒載體。
  61. 如請求項60之載體，其中該病毒載體為一慢病毒載體或一γ-反轉錄病毒載體。
  62. 一種宿主細胞，其表現如請求項1至34中任一項之融合蛋白。
  63. 一種宿主細胞，其包含如請求項35至55中任一項之多核苷酸。
  64. 一種宿主細胞，其包含如請求項56至61中任一項之載體。
  65. 如請求項62至64中任一項之宿主細胞，其表現或編碼(1)如請求項1至34中任一項之一第一融合蛋白及(2)如請求項1至34中任一項之一第二融合蛋白。
  66. 如請求項65之宿主細胞，其中該第一融合蛋白之一胺基酸序列與該第二融合蛋白之一胺基酸序列不同， 其中，任擇地，該第一融合蛋白及該第二融合蛋白係根據表B，及/或： (a)  該第一融合蛋白包含一TGFβR1多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，且該第二融合蛋白包含一TGFβR2多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；及/或 (b)  該第一融合蛋白包含一IL-2Rγ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rγ胞內域，且該第二融合蛋白包含一IL-2Rβ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rβ胞內域，或(c)該第一融合蛋白包含一IL-2Rβ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rβ胞內域，且該第二融合蛋白包含一IL-2Rγ多肽之一胞內部分，較佳為一IL-2Rγ胞內域；及/或 (d)  該第一融合蛋白包含一IL-2Rβ跨膜域、一IL-2Rγ跨膜域、一TGFβR1跨膜域或一TGFβR2跨膜域，且該第二融合蛋白包含一IL-2Rβ跨膜域、一IL-2Rγ跨膜域、一TGFβR1跨膜域或一TGFβR2跨膜域。
  67. 如請求項66之宿主細胞，其中： (i)   該第一融合蛋白包含一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，且該第二融合蛋白包含一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體；或 (ii)  該第一融合蛋白包含一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體2 (TGFβR2)多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體，且該第二融合蛋白包含一胞外組分，該胞外組分包含一轉型生長因子β受體1 (TGFβR1)多肽之一胞外域，或其能夠與一TGFβ多肽結合之一部分或變異體。
  68. 如請求項65至67中任一項之宿主細胞，其中：(1)該第一融合蛋白包含(1a)一胞外組分，該胞外組分包含來自(例如人類) TGFβR1之一胞外域，(1b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自(例如人類) IL-2Rβ之一跨膜域，及(1c)一胞內組分，該胞內組分包含來自(例如人類) IL-2Rβ之一細胞質/訊息傳導域；及(2)該第二融合蛋白包含(2a)一胞外組分，該胞外組分包含來自(例如人類) TGFβR2之一胞外域，(2b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自(例如人類) IL-2Rγ之一跨膜域，及(2c)一胞內組分，該胞內組分包含來自(例如人類) IL-2Rγ之一細胞質/訊息傳導域， 其中，任擇地，多核苷酸進一步編碼一抗原結合蛋白，諸如一TCR或一CAR。
  69. 如請求項65至67中任一項之宿主細胞，其中：(1)該第一融合蛋白包含(1a)一胞外組分，該胞外組分包含來自(例如人類) TGFβR2之一胞外域，(1b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自(例如人類) TGFβR2之一跨膜域，及(1c)一胞內組分，該胞內組分包含來自(例如人類) IL-2Rβ之一細胞質/訊息傳導域及一任擇的TGFβR2胞內突出端或突出端序列，例如表A所述且任擇地包含胺基酸R-V-N、基本上由胺基酸R-V-N組成或由胺基酸R-V-N組成；及(2)該第二融合蛋白包含(2a)一胞外組分，該胞外組分包含來自(例如人類) TGFβR1之一胞外域，(2b)一跨膜組分，該跨膜組分包含來自(例如人類) TGFβR1之一跨膜域，及(2c)一胞內組分，該胞內組分包含來自(例如人類) IL-2Rγ之一細胞質/訊息傳導域，任擇地，其中(i)該胞內組分進一步包含一TGFβR1胞內突出端或突出端序列，例如表A所述且任擇地包含胺基酸C-H-N、基本上由胺基酸C-H-N組成或由胺基酸C-H-N組成，安置於該IL-2Rγ細胞質/訊息傳導域之N端，及/或(ii)該多核苷酸進一步編碼一抗原結合蛋白，諸如一TCR或一CAR。
  70. 如請求項65至69中任一項之宿主細胞，其中： (i)   該第一融合蛋白包含一胺基酸序列，其與SEQ ID NOs.:5、10、13及18中之任一者中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含SEQ ID NOs.:5、10、13及18中之任一者中所列之胺基酸序列或由SEQ ID NOs.:5、10、13及18中之任一者中所列之胺基酸序列組成；及 (ii)  該第二融合蛋白包含一胺基酸序列，其與SEQ ID NOs.:6、9、14及17中之任一者中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含SEQ ID NOs.:6、9、14及17中之任一者中所列之胺基酸序列或由SEQ ID NOs.:6、9、14及17中之任一者中所列之胺基酸序列組成。
  71. 如請求項70之宿主細胞，其中該第一融合蛋白及該第二融合蛋白包含與以下SEQ ID NOs中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性之胺基酸序列，或包含以下SEQ ID NOs中所列之胺基酸序列或由以下SEQ ID NOs中所列之胺基酸序列組成的胺基酸序列：(i)分別為5及6；(ii)分別為5及9；(iii)分別為5及14；(iv)分別為5及17；(v)分別為10及6；(vi)分別為10及9；(vii)分別為10及14；(viii)分別為10及17；(ix)分別為13及6；(x)分別為13及9；(xi)分別為13及14；(xii)分別為13及17；(xiii)分別為18及6；(xiv)分別為18及9；(xv)分別為18及14；或(xvi)分別為18及17。
  72. 如請求項66至71中任一項之宿主細胞，其中該宿主細胞編碼一胺基酸序列，其與SEQ ID NOs.:7、11、15及19中之任一者中所列之胺基酸序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性，或包含SEQ ID NOs.:7、11、15及19中之任一者中所列之胺基酸序列或由SEQ ID NOs.:7、11、15及19中之任一者中所列之胺基酸序列組成。
  73. 如請求項66至72中任一項之宿主細胞，其中該宿主細胞在其細胞表面表現包含該第一融合蛋白及該第二融合蛋白之一蛋白質複合物，其中該蛋白質複合物能夠與一TGFβ多肽結合，該多肽任擇地包含在一TGFβ二聚體中。
  74. 如請求項62至73中任一項之宿主細胞，其中該宿主細胞包含一造血前驅細胞或一人類免疫系統細胞。
  75. 如請求項62至74中任一項之宿主細胞，其中該宿主細胞包含一T細胞，諸如一CD4+ T細胞、一CD8+ T細胞、一CD4- CD8-雙陰性T細胞或一γδ T細胞；一自然殺手細胞；一自然殺手T細胞；一樹突狀細胞；或其等之任何組合。
  76. 如請求項62至75中任一項之宿主細胞，其中該宿主細胞包含一T細胞，其中，任擇地，該T細胞包含一初始T細胞、一中央記憶T細胞、一幹細胞記憶T細胞、一效應記憶T細胞或其等之任何組合。
  77. 如請求項62至76中任一項之宿主細胞，其包含以下之一染色體基因剔除或一突變：一TGFβR1基因座、一TGFβR2基因座、一PD-1基因座、一CTLA4基因座、一LAT基因座、一TIM-3基因座、一PD-L1基因座、一TIGIT基因座、一A2AR基因座、一Fas基因座、一FasL基因座、一B7-H3基因座、一B7-H4基因座、一IDO基因座、一VISTA基因座、一SIGLEC7基因座、一SIGLEC9基因座、一TRAC基因座、一TRBC基因座、一T細胞受體基因座、一MHC (例如HLA)基因座、一CBLB基因座、一RASA2基因座、一UBASH3A基因座、一CISH基因座或其等之任何組合。
  78. 如請求項62至77中任一項之宿主細胞，其中該宿主細胞經修飾(例如，具有一染色體基因剔除突變及/或一染色體誤義突變及/或一染色體剪接接合點突變；編碼一抑制性核酸，諸如一siRNA或一反義寡核苷酸)，以具有與未經修飾之宿主細胞相比，一內源性TGFβR1、一內源性TGFβR2或二者之降低的蛋白質表現(包括剔除式表現)。
  79. 如請求項62至78中任一項之宿主細胞，其包含編碼一抗原結合蛋白之一多核苷酸。
  80. 如請求項62至79中任一項之宿主細胞，其表現一/該抗原結合蛋白。
  81. 如請求項79或80之宿主細胞，其中該抗原結合蛋白包含一TCR (任擇地，其中該TCR對該宿主細胞為內源的)、一TCR之一抗原結合片段(例如一scTv)、一scTCR、一CAR或其等之任何組合。
  82. 如請求項79至81中任一項之宿主細胞，其中該抗原結合蛋白結合至：一癌症抗原；一自體免疫抗原；一病毒抗原；一細菌抗原；一真菌抗原；一寄生蟲抗原；或其等之任何組合。
  83. 如請求項82之宿主細胞，其中該癌症包含一實體腫瘤、一惡性血液病或二者。
  84. 如請求項82至83中任一項之宿主細胞，其中該抗原係選自一WT1、間皮素、KRAS、ROR1、EGFR、EGFRvIII、EGP-2、EGP-40、GD2、GD3、HPV E6、HPV E7、Her2、L1-CAM、Lewis A、Lewis Y、MUC1、MUC16、PSCA、PSMA、CD19、CD20、CD22、CD56、CD23、CD24、CD30、CD33、CD37、CD44v7/8、CD38、CD56、CD123、CA125、c-MET、FcRH5、葉酸受體α、VEGF-α、VEGFR1、VEGFR2、IL-13Rα2、IL-11Rα、MAGE-A1、PSA、ephrin A2、ephrin B2、NKG2D、NY-ESO-1、TAG-72、NY-ESO、5T4、BCMA、FAP、碳酸酐酶9、BRAF、α-胎兒蛋白、MAGE-A3、MAGE-A4、SSX-2、PRAME、HA-1、β2M、ETA、酪胺酸酶、NRAS或CEA抗原，任擇地與一MHC (例如HLA)分子複合。
  85. 如請求項1至34中任一項之融合蛋白、如請求項35至55中任一項之多核苷酸、如請求項56至61中任一項之載體或如請求項62至84中任一項之宿主細胞，其中該TGFβ多肽包含一TGFB1、一TGFB2、一TGFB3或其等之任何組合，任擇地包含在一TGFβ多肽二聚體中。
  86. 如請求項62至85中任一項之宿主細胞，其中當該宿主細胞在一TGFβ (例如一TGFβ多肽二聚體)存在下時，與當該宿主細胞在該TGFβ不存在下時之磷酸化STAT5位準相比，該宿主細胞包含一增加的磷酸化STAT5位準。
  87. 如請求項62至86中任一項之宿主細胞，其中當該宿主細胞在一TGFβ多肽(例如一TGFβ多肽二聚體)存在下時，該宿主細胞包含一IL-2R訊息。
  88. 如請求項62至87中任一項之宿主細胞，其中當在一TGFβ多肽(例如一TGFβ多肽二聚體)存在下時，該宿主細胞執行以下中之一或多者：增殖；生長；一效應分子(例如一T細胞受體)之表現；醣酵解代謝；蛋白質(例如MYC、SLC7A5或二者)之表現；及膽固醇之生物合成。
  89. 如請求項62至88中任一項之宿主細胞，其中與一參考細胞相比，當該宿主細胞在一TGFβ多肽(例如一TGFβ多肽二聚體)存在下時，該宿主細胞具有一降低的磷酸化SMAD2/SMAD3位準， 其中該參考細胞不編碼或表現該(等)融合蛋白，且任擇地，未經修飾以具有與無修飾之該參考細胞相比，一內源性TGFβR1、一內源性TGFβR2或二者之降低的蛋白質表現(包括剔除式表現)。
  90. 如請求項62至89中任一項之宿主細胞，其中當該宿主細胞在一TGFβ (例如一TGFβ多肽二聚體)存在下時，與當不編碼或表現該(等)融合蛋白之一參考細胞在該TGFβ存在下時該參考細胞中所包含之磷酸化STAT5位準相比，該宿主細胞包含一增加的磷酸化STAT5位準。
  91. 如請求項62至90中任一項之宿主細胞，其中當該宿主細胞在一IL-2存在下時，與當分別不編碼或表現該(等)融合蛋白之一參考細胞在該IL-2存在下時該參考細胞中所包含之磷酸化STAT5位準相比，該宿主細胞包含一增加的磷酸化STAT5位準。
  92. 如請求項62至91中任一項之宿主細胞，其中當在一TGFβ多肽(任擇地包含在一TGFβ多肽二聚體中)存在下且任擇地在一IL-2多肽不存在下時，該宿主細胞能夠以與一參考細胞在一IL-2多肽存在下時該參考細胞之殺傷位準大致相同的位準來殺傷抗原表現細胞。
  93. 如請求項62至92中任一項之宿主細胞，其能夠在包含一腫瘤之一宿主個體中定位該腫瘤，且與不表現該(等)融合蛋白之一參考宿主細胞相比，任擇地在該腫瘤處/中具有更大的定位。
  94. 一種組成物，其包含： (i)   如請求項1至34及85中任一項之融合蛋白；及/或 (ii)  如請求項35至55及85中任一項之多核苷酸；及/或 (iii) 如請求項56至61及85中任一項之載體；及/或 (iv) 如請求項62至93中任一項之宿主細胞， 及一醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑。
  95. 如請求項94之組成物，其包含：呈約一1:1比率之(i)包含至少約30% CD4+ T宿主細胞之一組成物與(ii)包含至少約30% CD8+ T宿主細胞之一組成物。
  96. 一種治療一個體之一疾病或病況的方法，該方法包含向該個體投予一有效量之： (i)   如請求項1至34及85中任一項之融合蛋白；及/或 (ii)  如請求項35至55及85中任一項之多核苷酸；及/或 (iii) 如請求項56至61及85中任一項之載體；及/或 (iv) 如請求項62至93中任一項之宿主細胞；及/或 (v)  如請求項94或95之組成物。
  97. 如請求項1至34及85中任一項之融合蛋白，及/或如請求項35至55及85中任一項之多核苷酸，及/或如請求項56至61及85中任一項之載體，及/或如請求項62至93中任一項之宿主細胞，及/或如請求項94或95之組成物，其供使用於治療一個體之一疾病或病況的一方法中。
  98. 如請求項1至34及85中任一項之融合蛋白，及/或如請求項35至55及85中任一項之多核苷酸，及/或如請求項56至61及85中任一項之載體，及/或如請求項62至93中任一項之宿主細胞，及/或如請求項94或95之組成物，其供使用於製備供治療一個體之一疾病或病況用之一藥物。
  99. 如請求項96之方法或如請求項97或98之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該疾病或病況與一抗原之表現相關或以一抗原之表現為特徵，其中該抗原由該抗原結合蛋白特異性結合。
  100. 如請求項96或99之方法，或如請求項97至99中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該疾病或病況包含或為一過度增殖性疾病、一增殖性疾病、一自體免疫疾病、一神經退化性疾病或一感染。
  101. 如請求項96、99或100之方法或如請求項97至100中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該疾病或病況為一癌症，諸如一實體腫瘤或一惡性血液病。
  102. 如請求項101之方法或如請求項101之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該癌症包含一癌瘤、一肉瘤、一神經膠質瘤、一淋巴瘤、一白血病、一骨髓瘤或其等之任何組合。
  103. 如請求項101或102之方法，或如請求項101或102之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該癌症包含一頭頸癌、黑素瘤、胰臟癌、膽管癌、肝細胞癌、包括三陰性乳癌(TNBC)之乳癌、胃癌、非小細胞肺癌、前列腺癌、食道癌、間皮瘤、小細胞肺癌、結腸直腸癌、神經膠質母細胞瘤或其等之任何組合。
  104. 如請求項101至103中任一項之方法，或如請求項101至103中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該癌症包含阿金氏腫瘤(Askin's tumor)、葡萄狀肉瘤、軟骨肉瘤、尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、PNET、惡性血管內皮瘤、惡性神經鞘瘤、骨肉瘤、肺泡狀軟組織肉瘤、血管肉瘤、葉狀囊肉瘤、隆凸性皮膚纖維肉瘤(DFSP)、硬纖維瘤、促結締組織增生性小圓細胞腫瘤、上皮樣肉瘤、骨外軟骨肉瘤、骨外骨肉瘤、纖維肉瘤、胃腸道間質瘤(GIST)、血管外皮瘤、血管內皮瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉瘤、未分化多形性肉瘤、惡性周邊神經鞘腫瘤(MPNST)、神經纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、滑膜肉瘤、未分化多形性肉瘤、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、皮革胃、血管活性腸肽瘤、膽管癌、肝細胞癌、腺樣囊性癌、腎細胞癌、格拉維茨瘤(Grawitz tumor)、室管膜瘤、星形細胞瘤、寡樹突神經膠質瘤、腦幹神經膠質瘤、視神經膠質瘤、一混合神經膠質瘤、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)、一B細胞淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、免疫母細胞大細胞淋巴瘤、前體B淋巴母細胞淋巴瘤及套細胞淋巴瘤、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症(Waldenström's macroglobulinemia)、CD37 +樹突狀細胞淋巴瘤、淋巴漿細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤、黏膜相關(MALT)淋巴組織之結外邊緣區B細胞淋巴瘤、結邊緣區B細胞淋巴瘤、縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤、成人T細胞淋巴瘤、鼻型結外NK/T細胞淋巴瘤、腸病相關T細胞淋巴瘤、肝脾T細胞淋巴瘤、母細胞性NK細胞淋巴瘤、塞紮里症候群(Sezary syndrome)、血管免疫母細胞T細胞淋巴瘤、間變性大細胞淋巴瘤或其等之任何組合。
  105. 如請求項101之方法或如請求項101之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該癌症包含一實體腫瘤。
  106. 如請求項105之方法或如請求項105之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該實體腫瘤為一肉瘤或一癌瘤。
  107. 如請求項106之方法或如請求項106之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該實體腫瘤係選自：軟骨肉瘤；纖維肉瘤(纖維母細胞肉瘤)；隆凸性皮膚纖維肉瘤(DFSP)；骨肉瘤；橫紋肌肉瘤；尤文氏肉瘤；一胃腸道間質瘤；平滑肌肉瘤；血管肉瘤；卡波西氏肉瘤；脂肪肉瘤；多形性肉瘤；或滑膜肉瘤。
  108. 如請求項105至107中任一項之方法或如請求項105至107中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該實體腫瘤係選自一肺癌(例如腺癌、鱗狀細胞癌(表皮樣癌)；鱗狀細胞癌；腺癌；腺鱗癌；未分化癌；大細胞癌；小細胞癌；一乳癌(例如乳腺管原位癌(非侵襲性)、小葉原位癌(非侵襲性)、侵襲性乳腺管癌、侵襲性小葉癌、非侵襲性癌)；一肝癌(例如肝細胞癌、膽管瘤或膽管癌)；大細胞未分化性癌、細支氣管肺泡癌)；一卵巢癌[ 例如表面上皮-間質腫瘤(腺癌)或卵巢上皮癌(其包括漿液性腫瘤、子宮內膜樣腫瘤及黏液性囊腺癌)、表皮樣(鱗狀細胞癌)、胚胎性癌及絨毛膜癌(生殖細胞腫瘤)]；一腎癌(例如腎腺癌、腎上腺樣瘤、移行細胞癌(腎盂)、鱗狀細胞癌、貝里尼管癌(Bellini duct carcinoma)、透明細胞腺癌、移行細胞癌、腎盂類癌)；一腎上腺癌(例如腎上腺皮質癌)；一睪丸癌(例如生殖細胞癌(精原細胞瘤、絨毛膜癌、胚胎癌、畸胎癌)、漿液性癌)；胃癌(例如腺癌)；一腸癌(例如十二指腸腺癌)；一結腸直腸癌；或一皮膚癌(例如基底細胞癌、鱗狀細胞癌)。
  109. 如請求項105至108中任一項之方法，或如請求項105至108中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該實體腫瘤為一卵巢癌、一卵巢上皮癌、一子宮頸腺癌或小細胞癌、一胰臟癌、一結腸直腸癌(例如一腺癌或鱗狀細胞癌)、一肺癌、一乳腺管癌或一前列腺腺癌。
  110. 如請求項96及99至109中任一項之方法，或如請求項97至108中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該宿主細胞為一同種異體細胞、一同基因型細胞或一自體細胞。
  111. 如請求項96及99至110中任一項之方法，或如請求項97至109中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該方法包含向該個體投予多個劑量之該融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物。
  112. 如請求項111之方法或如請求項111之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該多個劑量以約二週、三週、四週、五週、六週、七週、八週或更多週的投予間隔來投予。
  113. 如請求項111或112之方法，或如請求項111或112之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該宿主細胞之一劑量包含約10 5個細胞/平方公尺至約10 11個細胞/平方公尺。
  114. 如請求項96及99至113中任一項之方法，或如請求項97至113中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該個體正接受、已接受或將接受以下中之一或多者：(i)化學療法；(ii)放射療法；(iii)一免疫抑制組分之一抑制劑；(iv)一刺激性免疫檢查點藥劑之一促效劑；(v) RNAi；(vi)一細胞介素；(vii)一手術；(viii)一單株抗體及/或一抗體-藥物結合物；或(ix) (i)-(viii)之任何組合，按任何順序。
  115. 如請求項96及99至114中任一項之方法，或如請求項97至114中任一項之供使用之融合蛋白、多核苷酸、載體、宿主細胞或組成物，其中該個體正接受、已接受或將接受：(i) IL-2；(ii) TGFβ；或(iii) (i)及(ii)二者。
  116. 一種方法，其包含將如請求項35至55中任一項之多核苷酸或如請求項56至61中任一項之載體引入一宿主細胞中，其中，任擇地，該宿主細胞包含一T細胞。
  117. 如請求項116之方法，其進一步包含將該宿主細胞與TGFβ及任擇的IL-2一起培育。
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