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TW202146012A - 抑制ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２複製和治療冠狀病毒疾病２０１９之方法 - Google Patents

抑制ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２複製和治療冠狀病毒疾病２０１９之方法 Download PDF

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TW202146012A
TW202146012A TW110107704A TW110107704A TW202146012A TW 202146012 A TW202146012 A TW 202146012A TW 110107704 A TW110107704 A TW 110107704A TW 110107704 A TW110107704 A TW 110107704A TW 202146012 A TW202146012 A TW 202146012A
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班傑明 柏克
艾瑪 霍金
羅伯特 霍夫曼
羅伯特 卡尼亞
強納森 利力斯
馬修 歐布藍拉瑞米
基曼堤娜 潘奇華
布列德里 蘇利文
安卓 席爾
馬汀 堤司賀斯特
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Abstract

本發明關於治療患者的冠狀病毒疾病2019(COVID-19)之方法，其係藉由對其有需要的患者投予治療有效量之特定的SARS-CoV-2抑制劑化合物或含有彼之醫藥組成物。本發明亦關於抑制SARS-CoV-2冠狀病毒的病毒複製活性，其包含令SARS-CoV-2-相關性冠狀病毒蛋白酶與治療有效量的SARS-CoV-2蛋白酶抑制劑(諸如SARS-CoV-2 3CL蛋白酶抑制劑)及包含彼之組成物接觸。

Description

抑制ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２複製和治療冠狀病毒疾病２０１９之方法
本發明關於抑制病毒複製活性之方法，其包含令SARS-CoV-2相關性3C樣(「3CL」)蛋白酶與治療有效量的SARS-CoV-2相關性3C樣蛋白酶抑制劑接觸。本發明亦關於治療患者的冠狀病毒疾病2019(「COVID-19」)之方法，其係藉由對其有需要的患者投予治療有效量的SARS-CoV-2相關性3C樣蛋白酶抑制劑。本發明進一步關於治療患者的COVID-19之方法，該方法包含對其有需要的患者投予醫藥組成物，其包含治療有效量的SARS-CoV-2相關性3C樣蛋白酶抑制劑。
冠狀病毒疾病2019(「COVID-19」)之全球爆發已與2019年12月起源於中國湖北省武漢市之暴露相關聯。在2020年3月上旬，COVID-19之爆發已擴散至全球許多國家，包括美國，已確認超過93,000人被感染且導致超過3,000人死亡。COVID-19之病原體已鑑定為新型冠狀病毒，已將其命名為嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒2 (「SARS-CoV-2」)。SARS-CoV-2之基因組序列已自中國武漢的9位患者獲得的分離物定序，且已發現其屬於乙型冠狀病毒屬(genus Betacoronovirus)之沙貝病毒亞屬(subgenus Sarbecovirus)。Lu, R.等人之The Lancet, January 29, 2020; http://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)。發現SARS-CoV-2之序列與2018年在中國東部舟山(Zhoushan)收集的兩種自蝙蝠衍生之SARS樣冠狀病毒bat-SL-CoVZC45及bat-SL-CoVZXC21具有88%之同源性。亦發現SARS-CoV-2與2002至2003年爆發之嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒(「SARS-CoV」)，SARS之病原體共享約79%之同源性及與2012年起源於中東爆發之中東呼吸道症候群冠狀病毒(「MERS-CoV」)，呼吸道病毒之病原體共享約50%之同源性。基於SARS-CoV-2的103個定序之基因組的最新分析，已提出SARS-CoV-2可分成兩大類型(L型和S型)，以S型為祖型及L型係自S型進化。Lu, J.; Cui, J.等人之On the origin and continuing evolution of SARS-CoV-2; http://doi.org/10.1093/nsr/nwaa036。S型和L型可藉由僅兩個在位置8,782(orf1ab :T8517C，同義)及28,144 (ORF8 : C251T，S84L)上緊密鍵聯之SNP明確地定義。在分析的103個基因組中，約70%屬於L型及約30%屬於S型。尚不清楚自S型的L型進化是否在人類中或通過人畜共通中間體發生，但似乎L型比S型更有攻擊性，且嘗試遏制爆發的人為干預可能在SARS-CoV-2爆發開始後不久使L型和S型之相對豐度改變。所提出之SARS-CoV-2之S和L亞型的發現提高個人可能相繼感染個別的亞型或同時感染兩種亞型的可能性。鑑於此不斷進化的威脅，本技術對有效治療COVID-19及抑制SARS-CoV-2冠狀病毒複製之方法有迫切的需要。 最近的證據清楚地顯示新出現的冠狀病毒SARS-CoV-2，COVID-19之病原體(疾病控制中心，CDC)已獲取人對人傳播的能力，導致病毒的社區擴散。SARS-CoV-2受體結合結構域(「RBD」)之序列(包括其與血管緊縮素2受體，ACE2直接接觸之受體結合基序(RBM))類似於SARS-CoV之RBD及RBM，強力示意SARS-CoV-2使用ACE2作為其受體。Yushun Wan, Y.; Shang, J.; Graham, R.; 2, Baric, R.S.; Li, F.; Receptor recognition by novel coronavirus from Wuhan: An analysis based on decade-long structural studies of SARS; J. Virol. 2020; doi:10.1128/JVI.00127-20。在SARS-CoV-2 RBM中的幾個關鍵殘基(特別為Gln493 )提供與人類ACE2有利的相互作用，與SARS-CoV-2對人類細胞感染的能力一致。在SARS-CoV-2之RBM中的幾個其他關鍵殘基(特別為Asn501 )與結合人類ACE2可相容，但並不理想，示意SARS-CoV-2係使用ACE2結合而以一定的能力進行人對人傳播。 冠狀病毒複製及轉錄功能係以所謂的「複製酶」基因編碼(Ziebuhr, J., Snijder, E.J.和Gorbaleya, A.E.; Virus-encoded proteinases and proteolytic processing in Nidovirales. J. Gen. Virol. 2000, 81, 853-879；及Fehr, A.R.; Perlman, S.; Coronaviruses: An Overview of Their Replication and Pathogenesis Methods Mol Biol. 2015; 1282: 1–23. doi:10.1007/978-1-4939-2438-7_1)，該基因係由兩個重疊的多蛋白質所組成，彼等係經病毒蛋白酶大規模地處理。C近端區域係在11個保守型結構域間接合處以冠狀病毒主體或「3C樣」蛋白酶處理(Ziebuhr, Snijder, Gorbaleya, 2000；及Fehr, Perlman等人，2015)。名稱「3C樣」蛋白酶係源自於冠狀病毒酵素與熟知的微小核醣核酸病毒3C蛋白酶之間特定的相似性。該等相似性包括受質偏好性(substrate preference)、使用半胱胺酸作為催化的活性位點親核劑及其推定之整體多肽折疊的相似性。當與SARS-CoV 3CL蛋白酶(登錄號YP_009725301.1)相比時，已發現SARS-CoV-2 3CL蛋白酶序列(登錄號YP_009725301.1)共享96.08%之同源性，Xu, J.; Zhao, S.; Teng, T.; Abdalla, A.E.; Zhu, W.; Xie, L.; Wang, Y.; Guo, X.; Systematic Comparison of Two Animal-to-Human Transmitted Human Coronaviruses: SARS-CoV-2and SARS-CoV; Viruses 2020, 12, 244; doi:10.3390/v12020244。最近Hilgenfeld與其同事發表SARS-CoV-2冠狀病毒主要蛋白酶(3CL)之高解析X射線結構，Zhang, L.; Lin, D.; Sun, X.; Rox, K.; Hilgenfeld, R.; X-ray Structure of Main Protease of the Novel Coronavirus SARS-CoV-2 Enables Design of a-Ketoamide Inhibitors; bioRxiv preprint doi: https://doi.org/10.1101/2020.02.17.952879。當比較SARS-CoV-2與SARS-CoV之3CL蛋白酶時，結構表明有差異。在SARS-CoV中，但不在SARS-CoV-2 3CL蛋白酶二聚體中，在兩個結構域III之間有極性相互作用，涉及在各原聚體之殘基Thr285 的側鏈羥基之間的2.60-Å氫鍵，且以Ile286 與Thr285 Cγ2 的側鏈之間的疏水性接觸支持。當與SARS-CoV 3CL中的相同殘基相比時，在SARS-CoV-2 3CL中，將蘇胺酸以丙胺酸置換及將異白胺酸以白胺酸置換。在SARS-CoV-2 3CL蛋白酶中觀察到的Thr285Ala置換容許兩個結構域III彼此更靠近一點(在分子A及B中的殘基285之Cα原子之間的距離在SARS-CoV 3CL蛋白酶中為6.77 Å及在SARS-CoV-2 3CL蛋白酶中為5.21 Å，及在兩個結構域III的質量中心之間的距離係自33.4 Å縮小至32.1 Å)。在SARS-CoV-2 3CL之活性位點中，Cys145 及His41 形成催化二分體，當其與埋入的水分子(其為鍵結至His41 之氫)在一起時，可將其視為構成SARS-CoV-2 3CL蛋白酶之催化三分體。鑑於持續的SARS-CoV-2擴散，其已引起當前的全球COVID-19爆發，因此希望具有抑制SARS-CoV-2病毒複製及治療患者的COVID-19之新方法。
實施態樣(En)說明本發明，其中E1為治療患者的COVID-19之方法，該方法包含對其有需要的患者投予治療有效量的選自由下列所組成的群組之化合物：2,6-二氯苯甲酸(3S)-3-({4-甲基-N-[(2R)-四氫呋喃-2-基羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；環丙烷羧酸(3S)-3-({N-[(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環丙基-1-側氧丙-2-基)甲吡啶醯胺；N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環戊基-1-側氧丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((S)-2-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-1-環戊基-2-側氧乙基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3,3-二甲基丁基)-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}戊基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((S)-1-(((S)-4-羥基-3-側氧基-1-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丁-2-基)胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；(2R )-2-環戊基-2-[2-(2,6-二乙基吡啶-4-基)乙基]-5-[(5,7-二甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)甲基]-4-羥基-3H -吡喃-6-酮；(3S ,4aS ,8aS )-N -三級丁基-2-[(2R ,3R )-2-羥基-3-[(3-羥基-2-甲基苯甲醯基)胺基]-4-苯基硫烷基丁基]-3,4,4a ,5,6,7,8,8a -八氫-1H -異喹啉-3-甲醯胺；(E ,4S )-4-[[(2R ,5S )-2-[(4-氟苯基)甲基]-6-甲基-5-[(5-甲基-1,2-㗁唑-3-羰基)胺基]-4-側氧庚醯基]胺基]-5-[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]戊-2-烯酸乙酯；及(R)-3-((2S,3S)-2-羥基-3-{[1-(3-羥基-2-甲基-苯基)-甲醯基]-胺基}-4-苯基-丁醯基)-5,5-二甲基-噻唑啶-4-羧酸烯丙基醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。 E2為E1之方法，其中化合物係經口或經靜脈內投予。E3為E2之方法，其中化合物係經靜脈內投予。E4為E3之方法，其中化合物係經24小時期間內間歇投予或經24小時期間內連續投予。E5為E1至E4中任一者之方法，其中化合物為2,6-二氯苯甲酸(3S)-3-({4-甲基-N-[(2R)-四氫呋喃-2-基羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；或其醫藥上可接受的鹽。E6為E1至E4中任一者之方法，其中化合物為環丙烷羧酸(3S)-3-({N-[(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；或其醫藥上可接受的鹽。E7為E1至E4中任一者之方法，其中化合物為N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環丙基-1-側氧丙-2-基)甲吡啶醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。E8為E1至E4中任一者之方法，其中化合物為N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環戊基-1-側氧丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。E9為E1至E4中任一者之方法，其中化合物為N-((S)-2-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-1-環戊基-2-側氧乙基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。E10為E1至E4中任一者之方法，其中化合物為N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3,3-二甲基丁基)-1H-吲哚-2-甲醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。E11為E1至E4中任一者之方法，其中化合物為N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}戊基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。E12為E1至E4中任一者之方法，其中化合物為N-((S)-1-(((S)-4-羥基-3-側氧基-1-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丁-2-基)胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。E13為E1至E4中任一者之方法，其中化合物為N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。E14為E1至E4中任一者之方法，其中化合物為(2R )-2-環戊基-2-[2-(2,6-二乙基吡啶-4-基)乙基]-5-[(5,7-二甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)甲基]-4-羥基-3H -吡喃-6-酮；或其醫藥上可接受的鹽。E15為E1至E4中任一者之方法，其中化合物為(3S ,4aS ,8aS )-N -三級丁基-2-[(2R ,3R )-2-羥基-3-[(3-羥基-2-甲基苯甲醯基)胺基]-4-苯基硫烷基丁基]-3,4,4a ,5,6,7,8,8a -八氫-1H -異喹啉-3-甲醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。E16為E1至E4中任一者之方法，其中化合物為(E ,4S )-4-[[(2R ,5S )-2-[(4-氟苯基)甲基]-6-甲基-5-[(5-甲基-1,2-㗁唑-3-羰基)胺基]-4-側氧庚醯基]胺基]-5-[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]戊-2-烯酸乙酯；或其醫藥上可接受的鹽。E17為E1至E4中任一者之方法，其中化合物為(R)-3-((2S,3S)-2-羥基-3-{[1-(3-羥基-2-甲基-苯基)-甲醯基]-胺基}-4-苯基-丁醯基)-5,5-二甲基-噻唑啶-4-羧酸烯丙基醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。 E18為抑制或預防SARS-CoV-2病毒複製之方法，其包含令SARS-CoV-2冠狀病毒蛋白酶與治療有效量的選自由下列所組成的群組之化合物接觸：2,6-二氯苯甲酸(3S)-3-({4-甲基-N-[(2R)-四氫呋喃-2-基羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；環丙烷羧酸(3S)-3-({N-[(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環丙基-1-側氧丙-2-基)甲吡啶醯胺；N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環戊基-1-側氧丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((S)-2-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-1-環戊基-2-側氧乙基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3,3-二甲基丁基)-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}戊基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((S)-1-(((S)-4-羥基-3-側氧基-1-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丁-2-基)胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；(2R )-2-環戊基-2-[2-(2,6-二乙基吡啶-4-基)乙基]-5-[(5,7-二甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)甲基]-4-羥基-3H -吡喃-6-酮；(3S ,4aS ,8aS )-N -三級丁基-2-[(2R ,3R )-2-羥基-3-[(3-羥基-2-甲基苯甲醯基)胺基]-4-苯基硫烷基丁基]-3,4,4a ,5,6,7,8,8a -八氫-1H -異喹啉-3-甲醯胺；(E ,4S )-4-[[(2R ,5S )-2-[(4-氟苯基)甲基]-6-甲基-5-[(5-甲基-1,2-㗁唑-3-羰基)胺基]-4-側氧庚醯基]胺基]-5-[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]戊-2-烯酸乙酯；及(R)-3-((2S,3S)-2-羥基-3-{[1-(3-羥基-2-甲基-苯基)-甲醯基]-胺基}-4-苯基-丁醯基)-5,5-二甲基-噻唑啶-4-羧酸烯丙基醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。 E19為抑制或預防SARS-CoV-2病毒複製之方法，其包含令SARS-CoV-2冠狀病毒3CL蛋白酶與治療有效量的選自由下列所組成的群組之化合物接觸：2,6-二氯苯甲酸(3S)-3-({4-甲基-N-[(2R)-四氫呋喃-2-基羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；環丙烷羧酸(3S)-3-({N-[(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環丙基-1-側氧丙-2-基)甲吡啶醯胺；N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環戊基-1-側氧丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((S)-2-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-1-環戊基-2-側氧乙基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3,3-二甲基丁基)-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}戊基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((S)-1-(((S)-4-羥基-3-側氧基-1-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丁-2-基)胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；及N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。 E20為治療患者的COVID-19之方法，該方法包含對其有需要的患者投予醫藥組成物，醫藥組成物包含治療有效量的選自由下列所組成的群組之化合物：2,6-二氯苯甲酸(3S)-3-({4-甲基-N-[(2R)-四氫呋喃-2-基羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；環丙烷羧酸(3S)-3-({N-[(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環丙基-1-側氧丙-2-基)甲吡啶醯胺；N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環戊基-1-側氧丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((S)-2-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-1-環戊基-2-側氧乙基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3,3-二甲基丁基)-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}戊基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((S)-1-(((S)-4-羥基-3-側氧基-1-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丁-2-基)胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；(2R )-2-環戊基-2-[2-(2,6-二乙基吡啶-4-基)乙基]-5-[(5,7-二甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)甲基]-4-羥基-3H -吡喃-6-酮；(3S ,4aS ,8aS )-N -三級丁基-2-[(2R ,3R )-2-羥基-3-[(3-羥基-2-甲基苯甲醯基)胺基]-4-苯基硫烷基丁基]-3,4,4a ,5,6,7,8,8a -八氫-1H -異喹啉-3-甲醯胺；(E ,4S )-4-[[(2R ,5S )-2-[(4-氟苯基)甲基]-6-甲基-5-[(5-甲基-1,2-㗁唑-3-羰基)胺基]-4-側氧庚醯基]胺基]-5-[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]戊-2-烯酸乙酯；及(R)-3-((2S,3S)-2-羥基-3-{[1-(3-羥基-2-甲基-苯基)-甲醯基]-胺基}-4-苯基-丁醯基)-5,5-二甲基-噻唑啶-4-羧酸烯丙基醯胺；或其醫藥上可接受的鹽；及醫藥上可接受的載劑。E21為E20之方法，其中醫藥組成物進一步包含附加的治療劑。E22為E21之方法，其中醫藥組成物進一步包含醫藥上可接受的干擾素、p-醣蛋白抑制劑及CYP3A4抑制劑中至少一者。 E23為選自由下列所組成的群組之化合物：N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環丙基-1-側氧丙-2-基)甲吡啶醯胺；N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環戊基-1-側氧丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；及N-((S)-2-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-1-環戊基-2-側氧乙基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。 E24為E1之方法，其進一步包含對其有需要的患者投予治療有效量的附加治療劑，其係選自瑞德西韋(remdesivir)、阿奇黴素(azithromycin)、氯奎寧(chloroquine)和羥基氯奎寧中一或多者。 E25為E24之方法，其中投予N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽。 E26為E25之方法，其中投予瑞德西韋及阿奇黴素中一或兩者。 E27為治療患者以SARS-CoV-2冠狀病毒3C樣蛋白酶活性媒介之症狀之方法，其係藉由對該患者投予醫藥有效量的如本文所述之SARS-CoV-2蛋白酶抑制劑。 E28為靶向SARS-CoV-2抑制之方法，作為治療由SARS-CoV-2相關性病毒感染所引起的適應症之手段。 E29為鑑定細胞或病毒路徑之方法，該路徑干擾可能用於治療由SARS-CoV-2感染所引起的適應症之成員的功能，該方法係藉由投予如本文所述之SARS-CoV-2蛋白酶抑制劑。 E30為使用如本文所述之SARS-CoV-2蛋白酶抑制劑作為理解其他SARS-CoV-2抑制劑之作用機制的工具之方法。 E31為使用SARS-CoV-2 3C樣蛋白酶抑制劑進行監測基因調升或調降的基因分布實驗之方法，其係以鑑定用於治療由SARS-CoV-2(諸如COVID-19)感染所引起的適應症之抑制劑為目的。 E32為用於治療哺乳動物的COVID-19之醫藥組成物，其含有有效治療COVID-19之SARS-CoV-2 3C樣蛋白酶抑制劑的量及醫藥上可接受的載劑。 E33為治療患者的COVID-19之方法，該方法包含對其有需要的患者經靜脈內投予治療有效量的N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺。 E34為E33之方法，其中將0.2 g/天至4 g/天之N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺投予患者。 E35為E34之方法，其中將0.3 g/天至3 g/天之N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺投予患者。 E36為E33至E35中任一者之方法，其中將N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺經連續靜脈內輸液投予患者。 E37為E36之方法，其中將約0.3 g/天至3 g/天之N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺經連續靜脈內輸液投予患者。 E38為E37之方法，其中將N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺以足夠維持約0.5 μM之Ceff 的量經連續靜脈內輸液投予患者。 E39為E33至E38中任一者之方法，其中將N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺與一或多種附加的治療劑組合投予。 E40為E39之方法，其中附加的治療劑為瑞德西韋及阿奇黴素。 E41為E40之方法，其中瑞德西韋係經連續靜脈內輸液共同投予。 E42為E40之方法，其中阿奇黴素係經連續靜脈內輸液共同投予。 E43為晶形化合物N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺水合物(形式3)，其具有包含三或更多個選自8.6 ± 0.2、11.9 ± 0.2、14.6 ± 0.2、18.7 ± 0.2和19.7 ± 0.2之以2-θ度計的X射線繞射峰的粉末X射線繞射圖案。E44為請求項37之晶形化合物，其中以2-θ度計的粉末X射線繞射峰為14.6 ± 0.2、18.7 ± 0.2和19.7 ± 0.2。E45為請求項37之晶形化合物，其中以2-θ度計的粉末X射線繞射峰為8.6 ± 0.2、14.6 ± 0.2、18.7 ± 0.2和19.7 ± 0.2。E46為請求項37之晶形化合物，其中以2-θ度計的粉末X射線繞射峰為8.6 ± 0.2、11.9 ± 0.2、14.6 ± 0.2、18.7 ± 0.2和19.7 ± 0.2。 E47為治療患者的COVID-19之方法，該方法包含經腸胃外投予水性液體組成物，其包含：a)約0.2mg/mL至約2.0mg/mL之N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽；b)一或多種共溶劑；c)視需要的一或多種界面活性劑；且d)緩衝劑；其中最終組成物具有約1.5至約6之pH，且一或多種共溶劑的總量為至多約30% (v/v)。 E48為E47之方法，其中組成物係以每天約1000mL或更少的體積經靜脈內投予患者，具有約3至約5之pH，且一或多種共溶劑的總量為至多約20% (v/v)。 E49為E48之方法，其中組成物包含：a)約0.2 mg/mL至約1.0 mg/mL之N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽；b)一或多種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：苯甲醇(BA)、二甲基丙烯醯胺(DMA)、二甲亞碸(DMSO)、乙醇、N-甲基吡咯啶酮(NMP)、聚乙二醇和丙二醇(PG)，其中一或多種共溶劑的總量為至多約10% (v/v)；c)一或多種界面活性劑，當存在時，其係選自由下列所組成的群組：聚乙烯基吡咯啶酮(PVP)、泊洛沙姆(poloxamer) 407、泊洛沙姆188、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙氧基化蓖麻油、卵磷脂、聚山梨醇酯80 (PS80)、聚山梨醇酯20 (PS20)和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯；及d)緩衝劑，其係選自由下列所組成的群組：乙酸、檸檬酸、乳酸、磷酸和酒石酸。 E50為E49之方法，其中組成物包含：a)一或兩種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：二甲亞碸(DMSO)、乙醇、PEG300和PEG400；b)一或兩種界面活性劑，當存在時，其係選自由下列所組成的群組：聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯；及c)緩衝劑，其為至多約50 mM檸檬酸。 E51為E50之方法，其中組成物係經連續靜脈內輸液投予患者，且投予患者之組成物體積為每天約250 mL至約500 mL。 E52為治療患者的COVID-19之方法，該方法包含經腸胃外投予水性液體組成物，其包含：a)約0.2 mg/mL至約16 mg/mL之N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽；b)複合劑；c)緩衝劑；d)視需要的一或多種共溶劑；及e)視需要的一或多種界面活性劑；其中最終組成物具有約1.5至約6之pH，且一或多種共溶劑當存在時的總量為總溶液之至多約15% (v/v)。 E53為E52之方法，其中該組成物：a)係以每天約1000 mL或更少的體積經靜脈內投予患者；b)具有約3至約5之pH；且c)具有總溶液之至多約10% (v/v)的一或多種共溶劑當存在時的總量。 E54為E53之方法，其中組成物包含：a)約0.2 mg/mL至約8.0 mg/mL之N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽；b)複合劑，其係選自由下列所組成的群組：α-環糊精、β-環糊精、γ-環糊精、菸鹼醯胺、苯甲酸鈉和柳酸鈉，其中複合劑對N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺之莫耳比為約1.5：1至約25：1；c)緩衝劑，其係選自由下列所組成的群組：乙酸、檸檬酸、乳酸、磷酸和酒石酸；d)一或多種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：苯甲醇(BA)、二甲基丙烯醯胺(DMA)、二甲亞碸(DMSO)、乙醇、N-甲基吡咯啶酮(NMP)、聚乙二醇和丙二醇(PG)，其中一或多種共溶劑當存在時的總量為總溶液之至多約6% (v/v)；及e)視需要的一或多種界面活性劑，其係選自由下列所組成的群組：聚乙烯基吡咯啶酮(PVP)、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙氧基化蓖麻油、卵磷脂、聚山梨醇酯80 (PS80)、聚山梨醇酯20 (PS20)和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯。 E55為E54之方法，其中：a)複合劑為β-環糊精；b)β-環糊精對N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺之莫耳比為約1.5：1至約8：1；且c)緩衝劑為至多50 mM檸檬酸。 E56為E55之方法，其中：a)組成物包含一至兩種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：二甲亞碸(DMSO)、乙醇、PEG300、PEG400和丙二醇(PG)；b)複合劑係選自由下列所組成的群組：羥基丙基-β-環糊精(HP-β-CD)和磺丁基醚-β-環糊精(SBE-β-CD)；且c)界面活性劑，當存在時，係選自聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯。 E57為E56之方法，其中：a)兩種共溶劑為乙醇和二甲亞碸(DMSO)中一者且另一共溶劑係選自由下列所組成的群組：PEG300、PEG400和丙二醇(PG)，其中乙醇或DMSO對PEG 300、PEG400或PG之比為約1：2至約1：4；或兩種共溶劑為乙醇和DMSO，其中乙醇對DMSO之比為約1：2至約1：4；b)羥基丙基-β-環糊精(HP-β-CD)或磺丁基醚-β-環糊精(SBE-β-CD)對N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺之莫耳比為約2：1至約6：1；且c)檸檬酸緩衝劑之濃度為至多約50 mM。 E58為E57之方法，其中組成物係經連續靜脈內輸液投予患者，且投予患者之組成物體積為每天約250 mL至約500 mL。 E59為醫藥組成物，其包含：a)治療有效量的N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽；b)複合劑，其係選自由下列所組成的群組：α-環糊精、β-環糊精、γ-環糊精、菸鹼醯胺、苯甲酸鈉和柳酸鈉，其中複合劑對N-((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺之莫耳比為約1.5：1至約25：1，及c)緩衝劑。 E60為E59之醫藥組成物，其中醫藥組成物為立即使用型或立即稀釋型腸胃外溶液，其：a)視需要地包含一或多種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：苯甲醇(BA)、二甲基丙烯醯胺(DMA)、二甲亞碸(DMSO)、乙醇、N-甲基吡咯啶酮(NMP)、聚乙二醇和丙二醇(PG)；b)另外視需要地包含界面活性劑，其係選自由下列所組成的群組：聚乙烯基吡咯啶酮(PVP)、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙氧基化蓖麻油、卵磷脂、聚山梨醇酯80 (PS80)、聚山梨醇酯20 (PS20)和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯；c)緩衝劑，其係選自由下列所組成的群組：乙酸、檸檬酸、乳酸、磷酸和酒石酸；且d)腸胃外溶液之pH為約3至約5。 E61為E60之醫藥組成物，其包含：a)約0.2 mg/mL至約16 mg/mL之濃度的N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽；b)複合劑，其為羥基丙基-β-環糊精(HP-β-CD)或磺丁基醚-β-環糊精(SBE-β-CD)，其中複合劑對N-((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺之莫耳比為約1.5：1至約8：1；c)一或兩種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：二甲亞碸(DMSO)、乙醇、PEG300、PEG400和丙二醇(PG)，且共溶劑之總濃度為總溶液之至多約15% (v/v)；d)視需要包含的界面活性劑，其係選自由下列所組成的群組：聚山梨醇酯80 (PS80)、聚山梨醇酯20 (PS20)和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯；及e)緩衝劑，其為檸檬酸。 E62為E61之醫藥組成物，其包含：a)約0.2 mg/mL至約8 mg/mL之濃度的N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽；b)複合劑，其為羥基丙基-β-環糊精(HP-β-CD)或磺丁基醚-β-環糊精(SBE-β-CD)，其中複合劑對N-((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺之莫耳比為約2：1至約6：1；及c)一或兩種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：二甲亞碸(DMSO)、乙醇、PEG300、PEG400和丙二醇，且共溶劑之總濃度為總溶液之至多約10% (v/v)。 E63為E62之醫藥組成物，其係藉由包含以下步驟之下列方法製備：a)將N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽溶解在一或多種共溶劑中以提供第一非水性溶液，該共溶劑係選自由下列所組成的群組：二甲亞碸(DMSO)、乙醇、PEG300、PEG400和丙二醇(PG)；b)將羥基丙基-β-環糊精(HP-β-CD)或磺丁基醚-β-環糊精(SBE-β-CD)溶解在含水溶液中以提供第二水性溶液，該含水溶液含有檸檬酸緩衝劑和視需要的界面活性劑；及c)將來自步驟a)的第一非水性溶液與來自步驟b)的第二水性溶液組合以提供該醫藥組成物。 E64為E63之醫藥組成物，其包含約1.1%之乙醇(v/v)、約3.4%之PEG400 (v/v)、約80 mg/mL之SBE-β-環糊精、約6 mg/mL之N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺、至多約50 mM檸檬酸，且其中pH為約4至約5。 E65為E59之醫藥組成物，其中組成物為立即經重構成適合於腸胃外投予之溶液的親液物或粉末。 E66為E65之醫藥組成物，其中組成物a)視需要地包含一或多種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：苯甲醇(BA)、二甲基丙烯醯胺(DMA)、二甲亞碸(DMSO)、乙醇、N-甲基吡咯啶酮(NMP)、聚乙二醇和丙二醇(PG)；b)視需要地包含界面活性劑，其係選自由下列所組成的群組：聚乙烯基吡咯啶酮(PVP)、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙氧基化蓖麻油、卵磷脂、聚山梨醇酯80 (PS80)、聚山梨醇酯20 (PS20)和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯；且c)包含緩衝劑，其係選自由下列所組成的群組：乙酸、檸檬酸、乳酸、磷酸和酒石酸。 E67為E65之醫藥組成物，其為立即經重構成腸胃外溶液的粉末，其中粉末包含N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺水合物(形式3)。 E68為E1及E47至E58中任一者之方法，其中將一或多種附加劑投予患者，其中一或多種附加劑係選自抗病毒劑(諸如瑞德西韋、加利西韋(galidesivir)、法維拉韋(favilavir)/阿維法韋(avifavir)、慕紐拉韋(mulnupiravir)(MK-4482/EIDD 2801)、AT-527、AT-301、BLD-2660、法維匹拉韋(favipiravir)、卡莫司他(camostat)、SLV213恩曲他濱(emtrictabine)/替諾福韋(tenofivir)、克列夫定(clevudine)、達塞曲匹(dalcetrapib)、波普瑞韋(boceprevir)和ABX464)、糖皮質素(諸如地塞米松和氫皮質酮)、恢復期血漿、重組人類血漿(諸如凝溶膠蛋白(gelsolin)(Rhu-p65N))、單株抗體(諸如瑞格丹單抗(regdanvimab)(Regkirova)、拉瓦珠單抗(ravulizumab)(優托米瑞(Ultomiris))、VIR-7831/VIR-7832、BRII-196/BRII-198、COVI-AMG/COVI DROPS (STI-2020)、巴拉尼單抗(bamlanivimab)(LY-CoV555)、馬維利單抗(mavrilimab)、勒隆利單抗(leronlimab)(PRO140)、AZD7442、朗齊魯單抗(lenzilumab)、英利昔單抗(infliximab)、阿達木單抗(adalimumab)、JS 016、STI-1499 (COVIGUARD)、拉那德單抗(lanadelumab)(Takhzyro)、康納金單抗(canakinumab) (Ilaris)、吉斯魯單抗(gimsilumab)和奧替利單抗(otilimab))、抗體雞尾酒(諸如卡西維單抗(casirivimab)/伊迪維單抗(imdevimab)(REGN-Cov2))、重組融合蛋白質(諸如MK-7110 (CD24Fc/SACCOVID))、抗凝血劑(諸如肝素和阿哌沙班(apixaban))、IL-6受體促效劑(諸如托西珠單抗(tocilizumab) (Actemra)和沙瑞盧單抗(sarilumab)(Kevzara))、PIKfyve抑制劑(諸如阿匹莫德(apilimod)二甲磺酸鹽)、RIPK1抑制劑(諸如DNL758)、VIP受體促效劑(諸如PB1046)、SGLT2抑制劑(諸如達格列淨(dapaglifozin))、TYK抑制劑(諸如阿畢替尼(abivertinib))、激酶抑制劑(諸如ATR-002、貝西替尼(bemcentinib)、阿卡拉布魯替尼(acalabrutinib)和洛嗎莫德(losmapimod))、H2阻斷劑(諸如啡莫替定(famotidine))、驅蟲劑(諸如耐克螺(niclosamide))、弗林蛋白酶(furin)抑制劑(諸如重氮胺苯脒(diminazene))。 應理解本發明的治療實施態樣之方法亦可解釋為醫療用途型實施態樣(諸如以下的E1A)或另一選擇為第二醫療用途型實施態樣(諸如以下的E1B)。 E1A為選自由下列所組成的群組之化合物：2,6-二氯苯甲酸(3S)-3-({4-甲基-N-[(2R)-四氫呋喃-2-基羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；環丙烷羧酸(3S)-3-({N-[(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環丙基-1-側氧丙-2-基)甲吡啶醯胺；N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環戊基-1-側氧丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((S)-2-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-1-環戊基-2-側氧乙基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3,3-二甲基丁基)-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}戊基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((S)-1-(((S)-4-羥基-3-側氧基-1-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丁-2-基)胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；(2R )-2-環戊基-2-[2-(2,6-二乙基吡啶-4-基)乙基]-5-[(5,7-二甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)甲基]-4-羥基-3H -吡喃-6-酮；(3S ,4aS ,8aS )-N -三級丁基-2-[(2R ,3R )-2-羥基-3-[(3-羥基-2-甲基苯甲醯基)胺基]-4-苯基硫烷基丁基]-3,4,4a ,5,6,7,8,8a -八氫-1H -異喹啉-3-甲醯胺；(E ,4S )-4-[[(2R ,5S )-2-[(4-氟苯基)甲基]-6-甲基-5-[(5-甲基-1,2-㗁唑-3-羰基)胺基]-4-側氧庚醯基]胺基]-5-[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]戊-2-烯酸乙酯；及(R)-3-((2S,3S)-2-羥基-3-{[1-(3-羥基-2-甲基-苯基)-甲醯基]-胺基}-4-苯基-丁醯基)-5,5-二甲基-噻唑啶-4-羧酸烯丙基醯胺；或其醫藥上可接受的鹽，其係用於治療患者的COVID-19。 E1B為選自由下列所組成的群組之化合物：2,6-二氯苯甲酸(3S)-3-({4-甲基-N-[(2R)-四氫呋喃-2-基羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；環丙烷羧酸(3S)-3-({N-[(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環丙基-1-側氧丙-2-基)甲吡啶醯胺；N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環戊基-1-側氧丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((S)-2-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-1-環戊基-2-側氧乙基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3,3-二甲基丁基)-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}戊基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((S)-1-(((S)-4-羥基-3-側氧基-1-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丁-2-基)胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；(2R )-2-環戊基-2-[2-(2,6-二乙基吡啶-4-基)乙基]-5-[(5,7-二甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)甲基]-4-羥基-3H -吡喃-6-酮；(3S ,4aS ,8aS )-N -三級丁基-2-[(2R ,3R )-2-羥基-3-[(3-羥基-2-甲基苯甲醯基)胺基]-4-苯基硫烷基丁基]-3,4,4a ,5,6,7,8,8a -八氫-1H -異喹啉-3-甲醯胺；(E ,4S )-4-[[(2R ,5S )-2-[(4-氟苯基)甲基]-6-甲基-5-[(5-甲基-1,2-㗁唑-3-羰基)胺基]-4-側氧庚醯基]胺基]-5-[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]戊-2-烯酸乙酯；及(R)-3-((2S,3S)-2-羥基-3-{[1-(3-羥基-2-甲基-苯基)-甲醯基]-胺基}-4-苯基-丁醯基)-5,5-二甲基-噻唑啶-4-羧酸烯丙基醯胺；或其醫藥上可接受的鹽，其係用於製備供治療患者的COVID-19之藥劑。 E2A為根據E1A使用之化合物，其中化合物係經口或經靜脈內投予。E3A為根據E2A使用之化合物，其中化合物係經靜脈內投予。E4A為根據E3A使用之化合物，其中化合物係經24小時期間內間歇投予或經24小時期間內連續投予。E5A為根據E1A至E4A中任一者使用之化合物，其中化合物為2,6-二氯苯甲酸(3S)-3-({4-甲基-N-[(2R)-四氫呋喃-2-基羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；或其醫藥上可接受的鹽。E6A為根據E1A至E4A中任一者使用之化合物，其中化合物為環丙烷羧酸(3S)-3-({N-[(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；或其醫藥上可接受的鹽。E7A為根據E1A至E4A中任一者使用之化合物，其中化合物為N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環丙基-1-側氧丙-2-基)甲吡啶醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。E8A為根據E1A至E4A中任一者使用之化合物，其中化合物為N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環戊基-1-側氧丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。E9A為根據E1A至E4A中任一者使用之化合物，其中化合物為N-((S)-2-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-1-環戊基-2-側氧乙基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。E10A為根據E1A至E4A中任一者使用之化合物，其中化合物為N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3,3-二甲基丁基)-1H-吲哚-2-甲醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。E11A為根據E1A至E4A中任一者使用之化合物，其中化合物為N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}戊基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。E12A為根據E1A至E4A中任一者使用之化合物，其中化合物為N-((S)-1-(((S)-4-羥基-3-側氧基-1-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丁-2-基)胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。E13A為根據E1A至E4A中任一者使用之化合物，其中化合物為N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。E14A為根據E1A至E4A中任一者使用之化合物，其中化合物為(2R )-2-環戊基-2-[2-(2,6-二乙基吡啶-4-基)乙基]-5-[(5,7-二甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)甲基]-4-羥基-3H -吡喃-6-酮；或其醫藥上可接受的鹽。E15A為根據E1A至E4A中任一者使用之化合物，其中化合物為(3S ,4aS ,8aS )-N -三級丁基-2-[(2R ,3R )-2-羥基-3-[(3-羥基-2-甲基苯甲醯基)胺基]-4-苯基硫烷基丁基]-3,4,4a ,5,6,7,8,8a -八氫-1H -異喹啉-3-甲醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。E16A為根據E1A至E4A中任一者使用之化合物，其中化合物為(E ,4S )-4-[[(2R ,5S )-2-[(4-氟苯基)甲基]-6-甲基-5-[(5-甲基-1,2-㗁唑-3-羰基)胺基]-4-側氧庚醯基]胺基]-5-[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]戊-2-烯酸乙酯；或其醫藥上可接受的鹽。E17A為根據E1A至E4A中任一者使用之化合物，其中化合物為(R)-3-((2S,3S)-2-羥基-3-{[1-(3-羥基-2-甲基-苯基)-甲醯基]-胺基}-4-苯基-丁醯基)-5,5-二甲基-噻唑啶-4-羧酸烯丙基醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。 E18A為選自由下列所組成的群組之化合物：2,6-二氯苯甲酸(3S)-3-({4-甲基-N-[(2R)-四氫呋喃-2-基羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；環丙烷羧酸(3S)-3-({N-[(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環丙基-1-側氧丙-2-基)甲吡啶醯胺；N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環戊基-1-側氧丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((S)-2-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-1-環戊基-2-側氧乙基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3,3-二甲基丁基)-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}戊基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((S)-1-(((S)-4-羥基-3-側氧基-1-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丁-2-基)胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；(2R )-2-環戊基-2-[2-(2,6-二乙基吡啶-4-基)乙基]-5-[(5,7-二甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)甲基]-4-羥基-3H -吡喃-6-酮；(3S ,4aS ,8aS )-N -三級丁基-2-[(2R ,3R )-2-羥基-3-[(3-羥基-2-甲基苯甲醯基)胺基]-4-苯基硫烷基丁基]-3,4,4a ,5,6,7,8,8a -八氫-1H -異喹啉-3-甲醯胺；(E ,4S )-4-[[(2R ,5S )-2-[(4-氟苯基)甲基]-6-甲基-5-[(5-甲基-1,2-㗁唑-3-羰基)胺基]-4-側氧庚醯基]胺基]-5-[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]戊-2-烯酸乙酯；及(R)-3-((2S,3S)-2-羥基-3-{[1-(3-羥基-2-甲基-苯基)-甲醯基]-胺基}-4-苯基-丁醯基)-5,5-二甲基-噻唑啶-4-羧酸烯丙基醯胺；或其醫藥上可接受的鹽，其係用於抑制或預防患者的SARS-CoV-2病毒複製。 E19A為選自由下列所組成的群組之化合物：2,6-二氯苯甲酸(3S)-3-({4-甲基-N-[(2R)-四氫呋喃-2-基羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；環丙烷羧酸(3S)-3-({N-[(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環丙基-1-側氧丙-2-基)甲吡啶醯胺；N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環戊基-1-側氧丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((S)-2-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-1-環戊基-2-側氧乙基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3,3-二甲基丁基)-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}戊基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((S)-1-(((S)-4-羥基-3-側氧基-1-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丁-2-基)胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；及N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；或其醫藥上可接受的鹽，其係用於抑制或預防SARS-CoV-2病毒複製。 E20A為醫藥組成物，該醫藥組成物包含治療有效量的選自由下列所組成的群組之化合物：2,6-二氯苯甲酸(3S)-3-({4-甲基-N-[(2R)-四氫呋喃-2-基羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；環丙烷羧酸(3S)-3-({N-[(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯；N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環丙基-1-側氧丙-2-基)甲吡啶醯胺；N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環戊基-1-側氧丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((S)-2-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-1-環戊基-2-側氧乙基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3,3-二甲基丁基)-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}戊基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((S)-1-(((S)-4-羥基-3-側氧基-1-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丁-2-基)胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；(2R )-2-環戊基-2-[2-(2,6-二乙基吡啶-4-基)乙基]-5-[(5,7-二甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)甲基]-4-羥基-3H -吡喃-6-酮；(3S ,4aS ,8aS )-N -三級丁基-2-[(2R ,3R )-2-羥基-3-[(3-羥基-2-甲基苯甲醯基)胺基]-4-苯基硫烷基丁基]-3,4,4a ,5,6,7,8,8a -八氫-1H -異喹啉-3-甲醯胺；(E ,4S )-4-[[(2R ,5S )-2-[(4-氟苯基)甲基]-6-甲基-5-[(5-甲基-1,2-㗁唑-3-羰基)胺基]-4-側氧庚醯基]胺基]-5-[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]戊-2-烯酸乙酯；及(R)-3-((2S,3S)-2-羥基-3-{[1-(3-羥基-2-甲基-苯基)-甲醯基]-胺基}-4-苯基-丁醯基)-5,5-二甲基-噻唑啶-4-羧酸烯丙基醯胺；或其醫藥上可接受的鹽；及醫藥上可接受的載劑，其係用於治療患者的COVID-19。 E21A為根據E20A使用之組成物，其中該醫藥組成物進一步包含附加的治療劑。E22A為根據E20A使用之組成物，其中該醫藥組成物進一步包含醫藥上可接受的干擾素、p-醣蛋白抑制劑及CYP3A4抑制劑中至少一者。 E24A為根據E1A使用之組成物，其進一步包含選自瑞德西韋、阿奇黴素、氯奎寧和羥基氯奎寧中一或多者的附加治療劑，其係用於治療患者的COVID-19。 E25A為根據E24A使用之組成物，其中化合物為N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽。 E26A為根據E25A使用之組成物，其中瑞德西韋及阿奇黴素中一或兩者為附加的治療劑。 E47A為水性液體組成物，其包含：a)約0.2mg/mL至約2.0mg/mL之N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽；b)一或多種共溶劑；c)視需要的一或多種界面活性劑；及d)緩衝劑；其中最終組成物具有約1.5至約6之pH，且一或多種共溶劑的總量為至多約30% (v/v)，其係用於治療患者的COVID-19。 E48A為根據E47A使用之組成物，其中組成物係以每天約1000 mL或更少的體積經靜脈內投予患者，具有約3至約5之pH，且一或多種共溶劑的總量為至多約20% (v/v)。 E49A為根據E48A使用之組成物，其中組成物包含：a)約0.2 mg/mL至約1.0 mg/mL之N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽；b)一或多種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：苯甲醇(BA)、二甲基丙烯醯胺(DMA)、二甲亞碸(DMSO)、乙醇、N-甲基吡咯啶酮(NMP)、聚乙二醇和丙二醇(PG)，其中一或多種共溶劑的總量為至多約10% (v/v)；c)一或多種界面活性劑，當存在時，其係選自由下列所組成的群組：聚乙烯基吡咯啶酮(PVP)、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙氧基化蓖麻油、卵磷脂、聚山梨醇酯80 (PS80)、聚山梨醇酯20 (PS20)和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯；及d)緩衝劑，其係選自由下列所組成的群組：乙酸、檸檬酸、乳酸、磷酸和酒石酸。 E50A為根據E49A使用之組成物，其中組成物包含：a)一或兩種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：二甲亞碸(DMSO)、乙醇、PEG300和PEG400；b)一或兩種界面活性劑，當存在時，其係選自由下列所組成的群組：聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯；及c)緩衝劑，其為至多約50 mM檸檬酸。 E51A為根據E50A使用之組成物，其中組成物係經連續靜脈內輸液投予患者，且投予患者之組成物體積為每天約250 mL至約500 mL。 E52A為水性液體組成物，其包含：a)約0.2mg/mL至約16mg/mL之N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽；b)複合劑；c)緩衝劑；d)視需要的一或多種共溶劑；及e)視需要的一或多種界面活性劑；其中最終組成物具有約1.5至約6之pH，且一或多種共溶劑當存在時的總量為總溶液之至多約15% (v/v)，其係用於治療患者的COVID-19。 E53A為根據E52A使用之組成物，其中組成物：a)係以每天約1000mL或更少的體積經靜脈內投予患者；b)具有約3至約5之pH；且c)具有總溶液之至多約10% (v/v)之的一或多種共溶劑當存在時的總量。 E54A為根據E53A使用之組成物，其中組成物包含：a)約0.2mg/mL至約8.0mg/mL之N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽；b)複合劑，其係選自由下列所組成的群組：α-環糊精、β-環糊精、γ-環糊精、菸鹼醯胺、苯甲酸鈉和柳酸鈉，其中複合劑對N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺之莫耳比為約1.5：1至約25：1；c)緩衝劑，其係選自由下列所組成的群組：乙酸、檸檬酸、乳酸、磷酸和酒石酸；d)一或多種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：苯甲醇(BA)、二甲基丙烯醯胺(DMA)、二甲亞碸(DMSO)、乙醇、N-甲基吡咯啶酮(NMP)、聚乙二醇和丙二醇(PG)，其中一或多種共溶劑當存在時的總量為總溶液之至多約6% (v/v)；及e)視需要的一或多種界面活性劑，其係選自由下列所組成的群組：聚乙烯基吡咯啶酮(PVP)、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙氧基化蓖麻油、卵磷脂、聚山梨醇酯80 (PS80)、聚山梨醇酯20 (PS20)和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯。 E55A為根據E54A使用之組成物，其中：a)複合劑為β-環糊精；b)β-環糊精對N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺之莫耳比為約1.5：1至約8：1；且c)緩衝劑為至多50 mM檸檬酸。 E56A為根據E55A使用之組成物，其中：a)組成物包含一至兩種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：二甲亞碸(DMSO)、乙醇、PEG300、PEG400和丙二醇(PG)；b)複合劑係選自由下列所組成的群組：羥基丙基-β-環糊精(HP-β-CD)和磺丁基醚-β-環糊精(SBE-β-CD)；且c)界面活性劑，當存在時，係選自聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯。 E57A為根據E56A使用之組成物，其中：a)兩種共溶劑為乙醇和二甲亞碸(DMSO)中一者且另一共溶劑係選自由下列所組成的群組：PEG300、PEG400和丙二醇(PG)，其中乙醇或DMSO對PEG 300、PEG400或PG之比為約1：2至約1：4；或兩種共溶劑為乙醇和DMSO，其中乙醇對DMSO之比為約1：2至約1：4；b)羥基丙基-β-環糊精(HP-β-CD)或磺丁基醚-β-環糊精(SBE-β-CD)對N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺之莫耳比為約2：1至約6：1；且c)檸檬酸緩衝劑之濃度為至多約50 mM。 E58A為根據E57A使用之組成物，其中組成物係以連續靜脈內輸液投予患者，且投予患者之組成物體積為每天約250 mL至約500 mL。 E59A為醫藥組成物，其包含：a)治療有效量的N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽；b)複合劑，其係選自由下列所組成的群組：α-環糊精、β-環糊精、γ-環糊精、菸鹼醯胺、苯甲酸鈉和柳酸鈉，其中複合劑對N-((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺之莫耳比為約1.5：1至約25：1；及c)緩衝劑，其係用於治療患者的COVID-19。 E60A為根據E59A使用之組成物，其中醫藥組成物為立即使用型或立即稀釋型腸胃外溶液，其：a)視需要地包含一或多種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：苯甲醇(BA)、二甲基丙烯醯胺(DMA)、二甲亞碸(DMSO)、乙醇、N-甲基吡咯啶酮(NMP)、聚乙二醇和丙二醇(PG)；b)另外視需要地包含界面活性劑，其係選自由下列所組成的群組：聚乙烯基吡咯啶酮(PVP)、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙氧基化蓖麻油、卵磷脂、聚山梨醇酯80 (PS80)、聚山梨醇酯20 (PS20)和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯；c)緩衝劑，其係選自由下列所組成的群組：乙酸、檸檬酸、乳酸、磷酸和酒石酸；且d)腸胃外溶液之pH為約3至約5。 E61A為根據E60A使用之組成物，其包含：a)約0.2 mg/mL至約16mg/mL之濃度的N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽；b)複合劑，其為羥基丙基-β-環糊精(HP-β-CD)或磺丁基醚-β-環糊精(SBE-β-CD)，其中複合劑對N-((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺之莫耳比為約1.5：1至約8：1；c)一或兩種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：二甲亞碸(DMSO)、乙醇、PEG300、PEG400和丙二醇(PG)，且共溶劑之總濃度為總溶液之至多約15%(v/v)；d)視需要地包含界面活性劑，其係選自由下列所組成的群組：聚山梨醇酯80 (PS80)、聚山梨醇酯20 (PS20)和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯；及e)緩衝劑，其為檸檬酸。 E62A為根據E61A使用之組成物，其包含：a)約0.2 mg/mL至約8mg/mL之濃度的N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽；b)複合劑，其為羥基丙基-β-環糊精(HP-β-CD)或磺丁基醚-β-環糊精(SBE-β-CD)，其中複合劑對N-((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺之莫耳比為約2：1至約6：1；及c)一或兩種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：二甲亞碸(DMSO)、乙醇、PEG300、PEG400和丙二醇，且共溶劑之總濃度為至總溶液之多約10% (v/v)。 E63A為根據E62A使用之組成物，其中醫藥組成物係以包含以下步驟的下列方法製備：a)將N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽溶解在一或多種共溶劑中以提供第一非水性溶液，該共溶劑係選自由下列所組成的群組：二甲亞碸(DMSO)、乙醇、PEG300、PEG400和丙二醇(PG)；b)將羥基丙基-β-環糊精(HP-β-CD)或磺丁基醚-β-環糊精(SBE-β-CD)溶解在含水溶液中以提供第二水性溶液，該含水溶液含有緩衝劑和視需要的界面活性劑；且c)將來自步驟a)的第一非水性溶液與來自步驟b)的第二水性溶液組合以提供該醫藥組成物。 E64A為根據E63A使用之組成物，其中醫藥組成物包含約1.1%之乙醇(v/v)、約3.4%之PEG400(v/v)、約80 mg/mL之SBE-β-環糊精、約6mg/mL之N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺、至多50mM檸檬酸，且其中pH為約4至約5。 E65A為根據E59A使用之組成物，其中組成物為立即經重構成適合於腸胃外投予之溶液的親液物或粉末，其係用於治療患者的COVID-19。 E66A為根據E65A使用之組成物，其中組成物a)視需要地包含一或多種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：苯甲醇(BA)、二甲基丙烯醯胺(DMA)、二甲亞碸(DMSO)、乙醇、N-甲基吡咯啶酮(NMP)、聚乙二醇和丙二醇(PG)；b)視需要地包含界面活性劑，其係選自由下列所組成的群組：聚乙烯基吡咯啶酮(PVP)、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙氧基化蓖麻油、卵磷脂、聚山梨醇酯80(PS80)、聚山梨醇酯20 (PS20)和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯；且c)包含緩衝劑，其係選自由下列所組成的群組：乙酸、檸檬酸、乳酸、磷酸和酒石酸。 E67A為根據E65A使用之組成物，其中醫藥組成物為立即經重構成腸胃外溶液的粉末，其中粉末包含N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺水合物(形式3)。 E68A為根據E1A至E26A及E47A至E67A中任一者使用之組成物，其中一或多種選自由下列所組成的群組之附加劑係用於治療患者的COVID-19：瑞德西韋、加利西韋、法維拉韋/阿維法韋、慕紐拉韋(MK-4482/EIDD 2801)、AT-527、AT-301、BLD-2660、法維匹拉韋、卡莫司他、SLV213恩曲他濱/替諾福韋、克列夫定、達塞曲匹、波普瑞韋、ABX464、地塞米松、氫皮質酮、恢復期血漿、凝溶膠蛋白(Rhu-p65N)、瑞格丹單抗(Regkirova)、拉瓦珠單抗(優托米瑞)、VIR-7831/VIR-7832、BRII-196/BRII-198、COVI-AMG/COVI DROPS (STI-2020)、巴拉尼單抗(LY-CoV555)、馬維利單抗、勒隆利單抗(PRO140)、AZD7442、朗齊魯單抗、英利昔單抗、阿達木單抗、JS 016、STI-1499 (COVIGUARD)、拉那德單抗(Takhzyro)、康納金單抗(Ilaris)、吉斯魯單抗、奧替利單抗、卡西維單抗/伊迪維單抗(REGN-Cov2)、MK-7110 (CD24Fc/SACCOVID)、肝素、阿哌沙班、托西珠單抗(Actemra)、沙瑞盧單抗(Kevzara)、阿匹莫德二甲磺酸鹽、DNL758、PB1046、達格列淨、阿畢替尼、ATR-002、貝西替尼、阿卡拉布魯替尼、洛嗎莫德、啡莫替定、耐克螺和重氮胺苯脒。
詳細說明 出於如本文所述及所請求之本發明的目的，下列的術語係定義如下： 如本文所使用的術語「包含(comprising)」及「包括(including)」係以其開放、非限制性意義使用。如本文所使用的術語「治療(treating)」，除非另有其他指示，意指逆轉、減輕、抑制此術語適用之疾患或病症或此疾患或病症的一或多種症狀之進展，或預防此等疾患或病症或此疾患或病症的一或多種症狀。在治療COVID-19之方法中，應理解COVID-19為經SARS-CoV-2病毒感染而於患者中引起的疾病。應理解SARS-CoV-2病毒涵蓋最初發現的病毒株以及出現諸如但不限於下列的病毒株之突變株，諸如B.1.1.7 (UK變異株)、B.1.351 (南非變異株)和P.1 (巴西變異株)。如本文所使用的術語「治療(treatment)」，除非另有其他指示，係指如上文剛定義之「治療(treating)」的治療行為。 如本文所使用的短語「醫藥上可接受的鹽(類)」，除非另有其他指示，包括可存在於本文所述之化合物中的酸性或鹼性基團之鹽類。在本發明之方法中所使用的鹼性本質之化合物能夠與各種無機及有機酸形成各種廣泛的鹽類。可用於製備此等鹼性化合物之醫藥上可接受的酸加成鹽類之酸為那些形成無毒性酸加成鹽類之酸，亦即含有藥理上可接受的陰離子之鹽類，諸如乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、依地酸鈣(calcium edetate)、樟腦酸鹽、碳酸鹽、氯化物、克拉維酸鹽(clavulanate)、檸檬酸鹽、二鹽酸鹽、依地酸鹽、乙二磺酸鹽(edislyate)、依託酸鹽(estolate)、乙磺酸鹽(esylate)、乙基琥珀酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、麩胺酸鹽、乙醇醯基胺基苯胂酸鹽(glycollylarsanilate)、己基間苯二酚鹽、海卓胺(hydrabamine)、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、碘化物、羥乙基磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、苦杏仁酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、黏液酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽(pamoate)(恩波酸鹽(embonate))、棕櫚酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、柳酸鹽、硬脂酸鹽、鹼式乙酸鹽、丁二酸鹽、丹寧酸鹽、酒石酸鹽、8-氯茶鹼鹽(teoclate)、甲苯磺酸鹽、三乙基碘化物(triethiodode)和戊酸鹽。除了以醫藥上可接受的鹽類存在以外，應理解本發明所使用的化合物亦可以共晶體存在。 關於本發明之方法中所使用的化合物，若化合物亦以互變異構物形式存在，則本發明關於所有此等互變異構物及其混合物之用途。 本發明亦包括以經同位素標記之化合物治療COVID-19之方法及抑制SARS-CoV-2之方法，該經同位素標記之化合物係與本文所列舉之化合物相同，但事實在於一或多個原子係經具有與經常於自然中發現的原子質量或質量數不同的原子質量或質量數之原子置換。可併入本發明化合物中之同位素的實例分別包括氫、碳、氮、氧、磷、氟和氯之同位素，諸如2 H、3 H、13 C、14 C、15 N、18 O、17 O、31 P、32 P、35 S、18 F和36 CI。含有前述同位素及/或其他原子之同位素的本發明化合物、其前藥及該化合物或該前藥之醫藥上可接受的鹽類係在本發明之範圍內。特定的經同位素標記之本發明化合物(例如那些併入放射性同位素，諸如3 H和14 C之化合物)可用於藥物及/或受質組織分佈檢定法中。氚化(亦即3 H)及碳-14(亦即14 C)同位素係出於彼等容易製備及可檢測性而特佳。再者，經較重的同位素(諸如氘，亦即2 H)取代可由於更大的代謝穩定性而供給特定的治療優點，例如增加的活體內半生期或減少的劑量需求，且因此在一些情況下可能較佳。在本發明之方法中所使用的經同位素標記之化合物及其前藥通常可藉由以可輕易取得的經同位素標記之試劑取代未經同位素標記之試劑來進行製備本技術中所揭示之化合物的程序而製得。 本發明亦涵蓋使用醫藥組成物之方法及通過投予本發明化合物之前藥治療COVID-19感染之方法。具有游離胺基或羥基之化合物可轉化成前藥。前藥包括其中胺基酸殘基或二或更多種(例如二、三或四種)胺基酸殘基之多肽鏈係通過酯鍵共價連結至本發明之方法中所使用的化合物之羥基的化合物。胺基酸殘基包括但不限於20種天然生成之胺基酸，常以三個字母符號標示，且亦包括4-羥基脯胺酸、羥基離胺酸、鎖鏈素(demosine)、異鎖鏈素、3-甲基組胺酸、正纈胺酸、β-丙胺酸、γ-胺基丁酸、瓜胺酸、高半胱胺酸、高絲胺酸、鳥胺酸和甲硫胺酸碸。亦涵蓋額外類型的前藥。例如，游離羥基可使用包括但不限於下列之基團衍化：半琥珀酸酯、磷酸酯、二甲基胺基乙酸酯和磷醯氧基甲氧基羰基，如Advanced Drug Delivery Reviews 、1996、19、115中所略述。亦包括羥基和胺基之胺甲酸酯前藥，如羥基之碳酸酯前藥、磺酸酯和硫酸酯。亦涵蓋羥基之衍化，如(醯氧基)甲醚和(醯氧基)乙醚，其中醯基可為烷酯，其可視需要地經包括但不限於醚、胺和羧酸官能基之基團取代，或其中醯基為如上述之胺基酸酯。此類型的前藥說明於J. Med. Chem .、1996、29、10中。游離胺亦可衍化為醯胺、磺醯胺或磷醯胺。所有該等前藥部分可併入包括但不限於醚、胺和羧酸官能基之基團。 本發明化合物亦可與其他藥物組合使用。例如，以本發明之SARS-CoV-2冠狀病毒3CL蛋白酶抑制劑及干擾素(諸如干擾素α或聚乙二醇化干擾素，諸如PEG-Intron或Pegasus)給藥受SARS-CoV-2冠狀病毒感染的患者(亦即患有COVID-19的患者)可提供比單獨給藥干擾素、聚乙二醇化干擾素或SARS-CoV-2冠狀病毒抑制劑更大的臨床效應。更大的臨床效應的實例可包括減少更多的COVID-19症狀、更快的症狀緩解時間、減輕的肺部病變、減少在患者中更多的SARS-CoV-2冠狀病毒量(病毒載量)和降低的死亡率。 SARS-CoV-2冠狀病毒感染表現p-醣蛋白之細胞。本發明之某些SARS-CoV-2冠狀病毒3CL蛋白酶抑制劑為p-醣蛋白受質。抑制亦為p-醣蛋白受質的SARS-CoV-2冠狀病毒之化合物可以p-醣蛋白抑制劑給藥。p-醣蛋白抑制劑的實例為維拉帕米(verapamil)、長春花鹼、酮康唑(ketoconazole)、奈非那韋(nelfinavir)、利托那韋(ritonavir)或環孢素。p-醣蛋白抑制劑係藉由抑制本發明之SARS-CoV-2冠狀病毒抑制劑自細胞外排起作用。抑制基於p-醣蛋白之外排防止由於p-醣蛋白外排而降低SARS-CoV-2冠狀病毒抑制劑之細胞內濃度。抑制p-醣蛋白外排導致較高的SARS-CoV-2冠狀病毒抑制劑之細胞內濃度。以本發明之SARS-CoV-2冠狀病毒3CL蛋白酶抑制劑及p-醣蛋白抑制劑給藥受SARS-CoV-2冠狀病毒感染的患者可藉由增加SARS-CoV-2冠狀病毒3CL蛋白酶抑制劑之細胞內濃度而降低達成有效劑量所需的SARS-CoV-2冠狀病毒3CL蛋白酶抑制劑之量。 在可用於增加哺乳動物對本發明化合物之暴露量的藥劑之中，其為可作為細胞色素P450(CYP450)酵素的至少一種同功型之抑制劑的藥劑。可受到有利的抑制之CYP450的同功型包括但不限於CYP1A2、CYP2D6、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4。在本發明之方法中所使用的化合物包括可為CYP3A4受質且以CYP3A4代謝之化合物。以SARS-CoV-2冠狀病毒抑制劑(其為CYP3A4受質，諸如SARS-CoV-2冠狀病毒3CL蛋白酶抑制劑)及CYP3A4抑制劑(諸如利托那韋、奈非那韋或地拉韋啶(delavirdine))給藥受SARS-CoV-2冠狀病毒感染的患者係由CYP3A4降低SARS-Cov-2冠狀病毒抑制劑之代謝。這導致降低的SARS-CoV-2冠狀病毒抑制劑清除率及增加的SARS-Cov-2冠狀病毒抑制劑血漿濃度。降低的清除率及較高的血漿濃度可導致較低的SARS-CoV-2冠狀病毒抑制劑有效劑量。 可與本發明之方法中的SARS-CoV-2抑制劑組合使用之附加治療劑包括下列： PLpro抑制劑：利巴韋林(Ribavirin)、纈更昔洛韋(Valganciclovir)、β -胸腺核苷、阿斯巴甜(Aspartame)、氧烯洛爾(Oxprenolol)、強力黴素(Doxycycline)、醋奮乃靜(Acetophenazine)、碘普胺(Iopromide)、核黃素、瑞普特羅(Reproterol)、2,2′-環胞苷(Cyclocytidine)、氯黴素(Chloramphenicol)、氯苯甘醚胺甲酸酯(Chlorphenesin carbamate)、左羥丙哌嗪(Levodropropizine)、頭孢孟多(Cefamandole)、氟尿苷(Floxuridine)、泰格環黴素(Tigecycline)、培美曲塞(Pemetrexed)、L(+)-抗壞血酸、麩胱甘肽、柑果苷素、腺苷蛋胺酸(Ademetionine)、馬索羅酚(Masoprocol)、異維甲酸(Isotretinoin)、單挫林(Dantrolene)、磺胺塞拉金(Sulfasalazine)抗菌劑、水飛薊素(Silybin)、尼卡第平(Nicardipine)、西地那非(Sildenafil)、桔梗皂苷(Platycodin)、金黃酮、新柑果苷、貝加黃酮(Baicalin)、蘇葛三醇(Sugetriol)-3,9-二乙酸酯、(–)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin gallate)、費坦素(Phaitanthrin) D、2-(3,4-二羥基苯基)-2-[[2-(3,4-二羥基苯基)-3,4-二氫-5,7-二羥基-2H -1-苯并吡喃-3-基]氧基]-3,4-二氫-2H -1-苯并吡喃-3,4,5,7-四醇、2,2-二(3-吲哚基)-3-吲哚酮、丙酸(S )-(1S ,2R ,4aS ,5R ,8aS )-1-甲醯胺基-1,4a-二甲基-6-亞甲基-5-((E )-2-(2-側氧基-2,5-二氫呋喃-3-基)乙烯基)十氫萘-2-基-2-胺基-3-苯酯、白皮杉醇(Piceatannol)、迷迭香酸(Rosmarinic acid)和厚朴酚(Magnolol)。 3CLpro抑制劑：賴甲四環素(Lymecycline)、氯己定(Chlorhexidine)、阿夫若欣(Alfuzosin)、西司他丁(Cilastatin)、啡莫替定、阿米三嗪(Almitrine)、普羅加比(Progabide)、奈帕芬胺(Nepafenac)、卡維地洛(Carvedilol)、安佩那維(Amprenavir)、泰格環黴素、孟魯司特(Montelukast)、胭脂蟲酸、含羞草鹼、黃素、黃體素、頭孢匹胺(Cefpiramide)、非奈西林(Phenethicillin)、坎沙曲(Candoxatril)、尼卡第平、戊酸雌二醇、吡格列酮(Pioglitazone)、考尼伐坦(Conivaptan)、替米沙坦(Telmisartan)、強力黴素、羥四環素、5-((R )-1,2-二噻㖦-3-基)戊酸(1S ,2R ,4aS ,5R ,8aS )-1-甲醯胺基-1,4a-二甲基-6-亞甲基-5-((E )-2-(2-側氧基-2,5-二氫呋喃-3-基)乙烯基)十氫萘-2-酯、貝土洛那(Betulonal)、金黃酮-7-O -β-葡萄糖醛酸苷、穿心蓮內酯苷(Andrographiside)、2-硝基苯甲酸(1S ,2R ,4aS ,5R ,8aS )-1-甲醯胺基-1,4a-二甲基-6-亞甲基-5-((E )-2-(2-側氧基-2,5-二氫呋喃-3-基)乙烯基)十氫萘-2-酯、2β -羥基-3,4-開環(seco)-木栓烷-27-羧酸(friedelolactone-27-oic acid)、丙酸(S )-(1S ,2R ,4aS ,5R ,8aS )-1-甲醯胺基-1,4a-二甲基-6-亞甲基-5-((E )-2-(2-側氧基-2,5-二氫呋喃-3-基)乙烯基)十氫萘-2-基-2-胺基-3-苯酯、異迪克提諾(Isodecortinol)、酵母固醇(Cerevisterol)、柑果苷、新柑果苷、穿心蓮潘林內酯(Andrograpanin)、苯甲酸2-((1R ,5R ,6R ,8aS )-6-羥基-5-(羥基甲基)-5,8a-二甲基-2-亞甲基十氫萘-1-基)乙酯、大波斯菊苷(Cosmosiin)、克雷斯托卡頓(Cleistocaltone) A、2,2-二(3-吲哚基)-3-吲哚酮、拜洛賓(Biorobin)、格尼地辛(Gnidicin)、非雷姆利諾(Phyllaemblinol)、茶黃素3,3′-二-O -沒食子酸酯、迷迭香酸、高盛賽德(Kouitchenside)I、丁香油素(Oleanolic acid)、豆固-5-烯-3-醇、去乙醯基龍膽苦苷(Deacetylcentapicrin)和博全莫(Berchemol)。 RdRp抑制劑：纈更昔洛韋、氯己定、頭孢布烯(Ceftibuten)、酚丙喘寧(Fenoterol)、氟達拉濱(Fludarabine)、艾妥可那唑(Itraconazole)、頭孢呋辛(Cefuroxime)、阿托奎酮(Atovaquone)、鵝去氧膽酸(Chenodeoxycholic acid)、色甘酸(Cromolyn)、泮庫溴銨(Pancuronium bromide)、皮質酮、替勃龍(Tibolone)、新生黴素(Novobiocin)、水飛薊素、伊達比星(Idarubicin)、溴隱亭(Bromocriptine)、地芬諾酯(Diphenoxylate)、苯乙哌啶(Benzylpenicilloyl)G、達比加群酯(Dabigatran etexilate)、畢吐隆那(Betulonal)、格尼地辛、2β ,30β -二羥基-3,4-開環-木栓烷-27-內酯、14-脫氧-11,12-二去氫穿心蓮內酯(didehydroandrographolide)、格尼狄春(Gniditrin)、茶黃素3,3′-二-O -沒食子酸酯、丙酸(R )-((1R ,5aS ,6R ,9aS )-1,5a-二甲基-7-亞甲基-3-側氧基-6-((E )-2-(2-側氧基-2,5-二氫呋喃-3-基)乙烯基)十氫-1H -苯并[c ]氮呯-1-基)甲基2-胺基-3-苯酯、2β -羥基-3,4-開環-木栓烷-27-羧酸、2-(3,4-二羥基苯基)-2-[[2-(3,4-二羥基苯基)-3,4-二氫-5,7-二羥基-2H -1-苯并吡喃-3-基]氧基]-3,4-二氫-2H -1-苯并吡喃-3,4,5,7-四醇、非雷姆利辛(Phyllaemblicin) B、14-羥基香附酮(cyperotundone)、穿心蓮內酯苷、苯甲酸2-((1R ,5R ,6R , 8aS )-6-羥基-5-(羥基甲基)-5,8a-二甲基-2-亞甲基十氫萘-1-基)乙酯、穿心蓮內酯(Andrographolide)、蘇葛三醇-3,9-二乙酸酯、貝加黃酮、5-((R )-1,2-二噻㖦-3-基)戊酸(1S ,2R , 4aS ,5R ,8aS )-1-甲醯胺基-1,4a-二甲基-6-亞甲基-5-((E )-2-(2-側氧基-2,5-二氫呋喃-3-基)乙烯基)十氫萘-2-酯、1,7-二羥基-3-甲氧基氧雜蒽酮、1,2,6-三甲氧基-8-[(6-O -β-D-吡喃木糖基-β-D-吡喃葡萄糖基)氧基]-9H -氧雜蒽-9-酮和1,8-二羥基-6-甲氧基-2-[(6-O -β-D-吡喃木糖基-β-D-吡喃葡萄糖基)氧基]-9H -氧雜蒽-9-酮、8-(β -D-吡喃葡萄糖氧基)-1,3,5-三羥基-9H -氧雜蒽-9-酮。 可在本發明之方法中使用的附加治療劑包括洋芫荽苷(Diosmin)、柑果苷、MK-3207、維奈托克(Venetoclax)、二氫麥角克鹼、勃拉嗪(Bolazine)、R428、地特氯銨(Ditercalinium)、依托泊苷(Etoposide)、替尼泊苷(Teniposide)、UK-432097、伊立替康(Irinotecan)、魯瑪卡托(Lumacaftor)、維帕他韋(Velpatasvir)、伊盧多林(Eluxadoline)、雷迪帕韋(Ledipasvir)、洛匹那韋(Lopinavir)/利托那韋+利巴韋林、阿爾費隆(Alferon)和普賴鬆(prednisone)。 可在本發明之方法中使用的其他附加劑包括下文所示以11r、13a和13b標示之α-酮基醯胺化合物，如Zhang, L.; Lin, D.; Sun, X.; Rox, K.; Hilgenfeld, R.; X-ray Structure of Main Protease of the Novel Coronavirus SARS-CoV-2 Enables Design of α-Ketoamide Inhibitors; bioRxiv preprint doi: https://doi.org/10.1101/2020.02.17.952879中所述。
Figure 02_image001
可在本發明之方法中使用的其他附加劑包括氯奎寧、羥基氯奎寧、阿奇黴素和瑞德西韋。更大的臨床效益的實例可包括減少更多的COVID-19症狀、更快的症狀緩解時間、肺部病理減少、減少在患者中更多的SARS-CoV-2冠狀病毒量(病毒載量)和降低的死亡率。 本發明之另一實施態樣為治療患者的COVID-19之方法，其中投予附加劑且附加劑係選自抗病毒劑(諸如瑞德西韋、加利西韋、法維拉韋/阿維法韋、慕紐拉韋(MK-4482/EIDD 2801)、AT-527、AT-301、BLD-2660、法維匹拉韋、卡莫司他、SLV213恩曲他濱/替諾福韋、克列夫定、達塞曲匹、波普瑞韋和ABX464)、糖皮質素(諸如地塞米松和氫皮質酮)、恢復期血漿、重組人類血漿(諸如凝溶膠蛋白(Rhu-p65N))、單株抗體(諸如瑞格丹單抗(Regkirova)、拉瓦珠單抗(優托米瑞)、VIR-7831/VIR-7832、BRII-196/BRII-198、COVI-AMG/COVI DROPS (STI 2020)、巴拉尼單抗(LY-CoV555)、馬維利單抗、勒隆利單抗(PRO140)、AZD7442、朗齊魯單抗、英利昔單抗、阿達木單抗、JS 016、STI-1499(COVIGUARD)、拉那德單抗(Takhzyro)、康納金單抗(Ilaris)、吉斯魯單抗和奧替利單抗)、抗體雞尾酒(諸如卡西維單抗/伊迪維單抗(REGN-Cov2))、重組融合蛋白質(諸如MK-7110(CD24Fc/SACCOVID))、抗凝血劑(諸如肝素和阿哌沙班)、IL-6受體促效劑(諸如托西珠單抗(Actemra)和沙瑞盧單抗(Kevzara))、PIKfyve抑制劑(諸如阿匹莫德二甲磺酸鹽)、RIPK1抑制劑(諸如DNL758)、VIP受體促效劑(諸如PB1046)、SGLT2抑制劑(諸如達格列淨)、TYK抑制劑(諸如阿畢替尼)、激酶抑制劑(諸如ATR-002、貝西替尼、阿卡拉布魯替尼和洛嗎莫德)、H2阻斷劑(諸如啡莫替定)、驅蟲劑(諸如耐克螺)、弗林蛋白酶抑制劑(諸如重氮胺苯脒)。 術語「SARS-CoV-2抑制劑」意指本文所述之任何SARS-CoV-2相關性冠狀病毒3CL蛋白酶抑制劑化合物或其醫藥上可接受的鹽、水合物、前藥、活性代謝物或溶劑合物，或以任何方式抑制SARS-CoV-2複製之化合物。 術語「干擾或預防」在細胞中的SARS-CoV-2相關性冠狀病毒(「SARS-CoV-2」)病毒複製意指與未經核糖酵素或編碼核糖酵素之載劑瞬時或穩定地轉導之細胞相比，減少SARS-CoV-2複製或在細胞中的子代病毒必要的SARS-CoV-2組分生產。測定SARS-CoV-2病毒複製是否已減少之簡單且方便的方法包括針對個體血液中的抗SARS-CoV-2抗體存在、不存在或存在減少之ELISA檢定法(Nasoff等人之PNAS 88:5462-5466, 1991)、RT-PCR (Yu等人之in Viral Hepatitis and Liver Disease 574-577, Nishioka, Suzuki and Mishiro (Eds.); Springer-Verlag, Tokyo, 1994)。此等方法為那些熟習本技術之普通技能者所熟知。另一選擇地，來自經轉導及感染之「對照」細胞的總RNA可單離，且接受以點狀墨點法或北方墨點法分析及以SARS-CoV-2特異性DNA探測以測定是否減少SARS-CoV-2複製。另一選擇地，降低SARS-CoV-2蛋白質表現亦可用作為抑制SARS-CoV-2複製之指標。與對照細胞相比，減少大於50%之SARS-CoV-2複製通常係量化SARS-CoV-2複製之預防。 若在本發明之方法中所使用的SARS-CoV-2抑制劑化合物為鹼，則所欲鹽可以本技術中已知的任何適合的方法製備，包括以無機酸(諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及類似者)或以有機酸(諸如乙酸、順丁烯二酸、琥珀酸、苦杏仁酸、反丁烯二酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、柳酸、吡喃糖苷酸(諸如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸)、α-羥基酸(諸如檸檬酸或酒石酸)、胺基酸(諸如天冬胺酸或麩胺酸)、芳香酸(諸如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(諸如對甲苯磺酸或乙磺酸)及類似者處理游離鹼。 若在本發明之方法中所使用的SARS-CoV-2抑制劑化合物為酸，則所欲鹽可以本技術中已知的任何適合的方法製備，包括以無機或有機鹼(諸如胺胺(一級、二級或三級))、鹼金屬氫氧化物或鹼土金屬氫氧化物處理游離酸。適合的鹽類的例證性實例包括自胺基酸(諸如甘胺酸和精胺酸)、氨、一級胺、二級胺、三級胺及環胺(諸如哌啶、嗎啉和哌𠯤)衍生之有機鹽類，以及自鈉、鈣、鉀、鎂、錳、鐵、銅、鋅、鋁和鋰衍生之無機鹽類。 在SARS-CoV-2抑制劑化合物、前藥、鹽類或溶劑合物為固體的例子中，那些熟習本技術領域者應理解在本發明之方法中所使用的羥胺酸鹽化合物、前藥、鹽類和溶劑合物可以不同的多晶形或晶形存在，意欲使所有此等皆在本發明及指定之化學式的範圍內。另外，在本發明之方法中所使用的羥胺酸鹽化合物、鹽類、前藥和溶劑合物可以互變異構物存在，意欲使所有此等皆在本發明之廣泛的範圍內。 在一些例子中，在本發明之方法中所使用的SARS-CoV-2抑制劑化合物、鹽類、前藥和溶劑合物可具有手性中心。當手性中心存在時，羥胺酸鹽化合物、鹽類、前藥和溶劑合物可以單一立體異構物、消旋物及/或鏡像異構物及/或非鏡像異構物之混合物存在。意欲使所有此等單一立體異構物、消旋物及其混合物皆在本發明之廣泛的範圍內。 如那些熟習本技術領域者概括的理解，光學上純的化合物為鏡像異構性純的化合物。如本文所使用的術語「光學上純的」旨在意指包含至少足夠活性之化合物。得到具有所欲藥理學純的本發明化合物之化合物的光學上純量之單一鏡像異構物較佳地包含至少90%之單一異構物(80%之鏡像異構物過量)，更佳為至少95% (90% e.e.)，甚至更佳為至少97.5% (95% e.e.)，且最佳為至少99% (98% e.e.)。 如本文所使用的術語「治療(treating)」，除非另有其他指示，意指逆轉、減輕、抑制此術語適用之疾患或病症或此疾患或病症的一或多種症狀之進展，或預防此等疾患或病症或此疾患或病症的一或多種症狀。如本文所使用的術語「治療(treatment)」，除非另有其他指示，係指如上文剛定義之「治療(treating)」的治療行為。在本發明較佳的實施態樣中，「治療(treatment)」或「治療(treating)」意指至少減輕人類的疾病狀況，亦即以抑制SARS-CoV-2 3C樣蛋白酶(其為COVID-19之病原體的SARS-CoV-2之主要蛋白酶)之活性來緩解。發燒、疲倦及乾咳為遭受COVID-19的患者之主要疾病表現形式，而鼻塞、流鼻涕及上呼吸道的其他症狀不常見。北京市疾病控制及預防中心表明COVID-19的典型病例為漸進的惡化過程。COVID-19可基於2019-nCoV引起的肺炎診斷及治療(試驗版本4)而由中華人民共和國國家衛生健康委員會(National Health Commission of the People’s Republic of China)以疾病的嚴重性分類成輕症、一般、重症及危重症型。可於線上取得： http://www.nhc.gov.cn/jkj/s3577/202002/573340613ab243b3a7f61df260551dd4/files/c791e5a7ea5149f680fdcb34dac0f54e.pdf (在2020年2月6日登錄)：(1)輕症病例—臨床症狀為輕微的且以胸部電腦斷層攝影(CT)未發現肺炎；(2)一般病例—發熱、呼吸道症狀，且發現患者具有肺炎的影像學表現；(3)重症病例—下列三種狀況之一：呼吸窘迫、呼吸頻率≥30次/分鐘(靜息狀態，其係指氧飽和度≤93%)、動脈血氧分壓(PaO2)/吸氧濃度(FiO2) ≤300 mmHg (1mmHg=0.133 kPa)；(4)危重症病例—下列三種狀況之一：呼吸衰竭及需要機械通氣、休克或需要監護病房之其他器官的相關衰竭。目前的臨床數據顯示大多數死亡發生在老年患者中。然而，文件記載有重症病例發生在具有獨特因素的年輕人中，特別為那些患有慢性疾病(諸如糖尿病或B型肝炎)的年輕人。那些長期使用激素或免疫抑制劑及免疫功能下降的人很可能會被嚴重地感染。 用於減輕疾病狀況(諸如COVID-19)之治療方法包括以任何常規上可接受的方式使用本發明化合物中一或多者。根據本發明之特定較佳的實施態樣，將本發明之方法中所使用的化合物或化合物類投予對其有需要的哺乳動物(諸如人類)。對其有需要的哺乳動物較佳地經冠狀病毒(諸如COVID-19之病原體，亦即SARS-CoV-2)感染。 本發明亦包括預防方法，其包含對處於SARS-CoV-2感染風險的哺乳動物(諸如人類)投予有效量的本發明之SARS-CoV-2抑制劑或其醫藥上可接受的鹽、前藥、醫藥活性代謝物或溶劑合物。根據特定較佳的實施態樣，將有效量的一或多種本發明化合物或其醫藥上可接受的鹽、前藥、醫藥活性代謝物或溶劑合物投予處於SARS-CoV-2 (COVID-19之病原體)感染風險的人類。本發明之預防方法包括以任何常規上可接受的方式使用本發明化合物中一或多者。 下列為本發明之特定的實施態樣的實例： 在本發明之方法中所使用的某些化合物為已知的且可以本技術中已知的方法製得。 最新的證據表明新型冠狀病毒SARS-Cov-2為COVID-19之病原體。SARS-CoV-2冠狀病毒以及最新確定的L和S亞型之核苷酸序列已於最近確定且公開可取得。 作為SARS-CoV-2病毒活性抑制劑之抑制劑化合物的活性可以本技術中可取得的適合方法中任一者測量，包括活體內或試管內檢定法。作為冠狀病毒3C樣蛋白酶活性(諸如SARS-CoV-2冠狀病毒之3C樣蛋白酶)抑制劑之本發明化合物的活性可以那些熟習本技術領域者已知的適合方法中任一者測量，包括活體內或試管內檢定法。適合於活性測量之檢定法的實例包括本文所述之抗病毒細胞培養檢定法以及本文所述之抗蛋白酶檢定法，諸如在實施例章節中所述之檢定法。 SARS-CoV-2抑制劑化合物及其醫藥上可接受的前藥、鹽類、活性代謝物和溶劑合物的投予可根據那些熟習本技術領域者可取得的公認之投予模式中任一者執行。適合的投予模式之例證性實例包括經口、鼻、肺、腸胃外、局部、靜脈內、注射、經皮和直腸。以經口、靜脈內和鼻投遞較佳。 SARS-CoV-2抑制劑可作為任何適合的醫藥形式之醫藥組成物投予。適合的醫藥形式包括固體、半固體、液體或凍乾型調配物，諸如錠劑、粉末、膠囊、栓劑、懸浮液、脂質體和氣溶膠。SARS-CoV-2抑制劑可使用各種方法中任一者製備成溶液。例如，可將SARS-CoV-2抑制劑以酸(例如1M HCl)溶解且以足夠體積的5%之右旋糖水溶液(D5W)稀釋，以得到所欲最終濃度的SARS-Cov-2抑制劑(例如約15 mM)。另一選擇地，可使用含有約15 mM HCl之D5W溶液提供適當濃度的SARS-CoV-2抑制劑溶液。再者，SARS-Cov-2抑制劑可使用例如1%之羧甲基纖維素(CMC)溶液製備成懸浮液。 製備適合的醫藥形式之醫藥組成物的可接受方法為已知的或可由那些熟習本技術領域者依慣例測定。例如，醫藥製劑可依照醫藥化學家之常規技術製備，包含諸如在必要時用於錠劑形式之混合、造粒和壓縮的步驟，或視情況之混合、填充及溶解成分的步驟，以給出用於靜脈內、經口、腸胃外、局部、陰道內、鼻內、支氣管內、眼球內、耳內及/或直腸投予之所欲產物。 本發明之醫藥組成物亦可取決於意欲用途而包括適合的賦形劑、稀釋劑、媒劑和載劑，以及其他的醫藥活性劑。醫藥上可接受的固體或液體載劑、稀釋劑、媒劑或賦形劑可用於醫藥組合物中。例證性固體載劑包括澱粉、乳糖、硫酸鈣二水合物、白陶土、蔗糖、滑石、明膠、果膠、阿拉伯膠、硬脂酸鎂和硬脂酸。例證性液體載劑包括糖漿、花生油、橄欖油、鹽水溶液和水。載劑或稀釋劑可包括單獨或連同蠟之適合的延長釋放材料，諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。當使用液體載劑時，製劑可呈漿液、酏劑、乳液、軟明膠膠囊、無菌可注射液體(例如溶液)或非水性或水性液體懸浮液之形式。 醫藥組成物之劑量可含有至少治療有效量的SARS-CoV-2抑制劑，且較佳地由一或多種醫藥劑量單位構成。所選擇之劑量可以任何已知或適合的劑量投予方法投予需要以抑制SARS相關性冠狀病毒活性而媒介之治療的哺乳動物(例如人類病患)，該投予方法包括局部，例如作為軟膏或乳膏；經口；直腸，例如作為栓劑；以注射之腸胃外；靜脈內；或連續經陰道內、鼻內、支氣管內、耳內或眼球內輸液。 短語「治療有效量」及「有效量」旨在意指當投予需要治療的哺乳動物時，本發明之藥劑的量足以實現由抑制SARS-CoV-2病毒複製來緩解損傷或疾病狀況之治療。在本發明之方法中所使用的SARS-CoV-2抑制劑給出之治療有效量係取決於下列因素而改變，諸如特定的SARS-CoV-2抑制劑、疾病狀況和其嚴重性、對其有需要的哺乳動物之身分和特徵，該量可由那些熟習本技術領域者依慣例測定。 應理解在本發明之醫藥組成物中所使用的SARS-CoV-2抑制劑之真實劑量係根據欲使用之特定藥劑的性質、所調配之特定組成物、投予模式和特定位點及欲治療之宿主和狀況來選擇。對給出之狀況設定的最優劑量可由那些熟習本技術領域者使用常規的劑量測定試驗來確定。例如，可用於經口投予之劑量為約0.01至約1000mg/kg體重，較佳為約0.1至約500mg/kg體重，且甚至更佳為約1至約500 mg/kg體重，其為以適當的間隔重複之治療過程。可以每天至多5克之劑量用於靜脈內給藥。靜脈內投予可在一天的期間內間歇發生或經24小時期間內連續發生。 如本文所使用之術語「細胞色素P450抑制量」及「細胞色素P450酵素活性抑制量」係指在此化合物的存在下降低細胞色素P450酵素或特定的細胞色素P450酵素同功型之活性所需之化合物的量。特定的化合物是否降低細胞色素P450酵素活性及達到該降低所需之此化合物的量可由那些熟習本技術之普通技能者已知的方法及本文所述之方法測定。 冠狀病毒複製及轉錄所需要之蛋白質功能係以所謂的「複製酶」基因編碼。兩種重疊之多蛋白質係自此基因轉譯，且由病毒蛋白酶大規模地處理。C近端區域係在11個保守型結構域間接合處以冠狀病毒主體或「3C樣」蛋白酶處理。名稱「3C樣」蛋白酶係源自於冠狀病毒酵素與熟知的微小核醣核酸病毒3C蛋白酶之間特定的相似性。該等相似性包括受質偏好性、使用半胱胺酸作為催化的活性位點親核劑及其推定之整體多肽折疊的相似性。以SARS-Cov-2相關性冠狀病毒3C樣蛋白酶與其他已知冠狀病毒(諸如SARS-CoV)之胺基酸序列的比較顯示胺基酸序列具有約96%之共享同源性。 在蛋白酶切割位點上的受質之胺基酸係自N至C末端以如下方式編號：-P3-P2-P1-P1’-P2’-P3’，切割發生在P1與P1’殘基之間(Schechter & Berger, 1967)。受質特異性主要係由P2、P1及P1’位置決定。冠狀病毒主要蛋白酶切割位點特異性為高度保守，在P1需要麩醯胺酸及在P1’需要小胺基酸(Journal of General Virology , 83, pp. 595-599 (2002))。 實施例 化合物2,6-二氯苯甲酸(3S)-3-({4-甲基-N-[(2R)-四氫呋喃-2-基羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯可如WO2005/113580的實施例39中提出且如下文再現方式製備。化合物環丙烷羧酸(3S)-3-({N-[(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯可如WO2005/113580的實施例37中提出且如下文再現方式製備。化合物N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3,3-二甲基丁基)-1H-吲哚-2-甲醯胺可如WO2005/113580的實施例16中提出且如下文再現方式製備。化合物N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}戊基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺可如WO2005/113580的實施例8中提出且如下文再現方式製備。化合物N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺可如WO2005/113580的實施例2中提出且如下文再現方式製備。該等化合物在下文再現時稱為參考實施例。 在下文所述之實施例中，除非另有其他指示，否則所有的溫度均以攝氏度數提出，且所有份數及百分比係以重量計。試劑可自市售供應商購得，諸如Sigma-Aldrich Chemical Company或Lancaster Synthesis Ltd.，且可使用而無需進一步純化，除非另有其他指示。四氫呋喃(THF)及N,N-二甲基甲醯胺(DMF)可自Aldrich以Sure Seal瓶購得，且以收到的樣子使用。所有的溶劑可使用那些熟習本技術領域者已知的標準方法純化，除非另有其他指示。 下列實施例之化合物的結構係以下列中一或者者確認：質子磁共振光譜術、元素微分析及熔點。質子磁共振(1 H NMR)光譜係使用在300至400百萬赫(MHz)之場強度下操作之Bruker光譜儀測定。化學位移係自內部四甲基矽烷標準物於低磁場以每百萬之份數(ppm，δ)記述。另一選擇地，1 H NMR光譜係參考如下的殘留質子溶劑信號：CHCl3 =7.26ppm，DMSO=2.49ppm，C6 HD5 =7.15ppm。峰多重性係標示如下：s，單峰；d，雙重峰；dd，二個雙重峰；t，三重峰；q，四重峰；br，寬共振；m，多重峰。偶合常數係以赫茲給出。元素微分析係由Atlantic Microlab Inc., Norcross, GA執行且以理論值的±0.4%之設定給出元素的結果。快速管柱層析術係使用矽膠60(Merck Art 9385)或各種MPLC系統執行。分析性薄層層析術(TLC)係使用矽膠60 F254 之預塗覆板(Merck Art 5719)執行。所有的反應係在氬氣或無水氮氣之低正壓下於隔膜密封的燒瓶中執行，除非另有其他註明。 在本發明之方法中所使用的其他較佳化合物可以類似於那些在下文具體說明之方式製得。 下文提供的實施例及製備法進一步例證及例示本發明化合物及製備此等化合物之方法。應理解本發明之範圍不以任何方式受到下列實施例及製備法之範圍的限制。在下列的實施例中，具有單一手性中心之分子，除非另有其他註明，係以消旋性混合物存在。那些具有二或更多個手性中心之分子，除非另有其他註明，係以非鏡像異構物之消旋性混合物存在。單一鏡像異構物/非鏡像異構物可以那些熟習本技術領域者已知的方法獲得。 在下文的製備法及實施例中述及HPLC層析術時，所使用的通用條件係如下，除非另有其他指示。所使用的管柱為150 mm長度及4.6mm內徑之ZORBAXµ RXC18管柱(由Hewlett Packard製造)。樣品係在Hewlett Packard-1100系統上操作。使用100%之乙酸銨/乙酸緩衝劑(0.2M)至100%之乙腈的梯度溶劑方法操作10分鐘。系統接著以100%之乙腈經1.5分鐘及接著以100%之緩衝劑溶液經3分鐘進行清洗循環。在整個期間的流速為固定的3mL/分鐘。 在實施例及說明書中，「Et」意指乙基，「Ac」意指乙醯基，「Me」意指甲基，「ETOAC」或「ETOAc」意指乙酸乙酯，「THF」意指四氫呋喃及「Bu」意指丁基。Et2 O係指二乙醚，DMF係指N,N -二甲基甲醯胺。DMSO係指二甲亞碸。MTBE係指三級丁基甲醚。其他縮寫包括：CH3 OH (甲醇)，EtOH(乙醇)，EtOAc (乙酸乙酯)，DEM (乙二醇二甲醚)。DCM係指二氯甲烷，1,2 DCE係指1,2-二氯乙烷，Ph(苯基)，Tr (三苯基甲基)，Cbz(苯甲氧基羰基)，Boc(三級丁氧基羰基)，TFA(三氟乙酸)，DIEA (N,N -二異丙基乙胺)，TMEDA (N,N,N’,N’ -四甲基乙二胺)，AcOH (乙酸)，Ac2 O (乙酸酐)，NMM (4-甲基嗎啉)，HOBt (1-羥基苯并三唑水合物)，HATU [O -(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’ -四甲脲六氟磷酸鹽]，EDC[1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二醯亞胺鹽酸鹽]，TEA三乙胺，LDA二異丙基胺化鋰，DCC (二環己基碳二醯亞胺)，DDQ(2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌)，DMAP (4-二甲基胺基吡啶)，Gln (麩醯胺酸)，Leu(白胺酸)，Phe (苯基丙胺酸)，Phe(4-F) (4-氟苯基丙胺酸)，Val (纈胺酸)，胺基-Ala (2,3-二胺基丙酸)及(S )-吡咯-Ala[(2S ,3’S )-2-胺基-3-(2’-側氧吡咯啶-3’-基)-丙酸]。另外，「L」代表天然生成之胺基酸的構型。 在本發明之方法中所使用的下列化合物為WO2005/ 13580的實施例2、8、16、23、37和39且以參考實施例述及。 參考實施例2：N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S ) 2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺 將DMR(6.5mL)中的N -((1S )-1{[((1S )-3-氯-2-側氧基-1-{[3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4甲氧基-1H- 吲哚-2-甲醯胺(488mg，0.99mmol)及苯甲醯基甲酸(195mg，1.3mmol)之溶液放置在N2 氛圍下。將此淡黃色澄清溶液以氟化銫(350mg，2.3mmol)處理，隨後加熱至65℃。在4小時後，將當前的黃色懸浮液冷卻至RT，以乙酸乙酯(60mL)稀釋，以水(30mL)清洗三次，以鹽水(30mL)清洗一次，經MgSO4 乾燥，過濾且濃縮，以給出成為黃色粗製發泡體的側氧基(苯基)乙酸(3S )-3-({N -[(4-甲氧基-1H -吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基-2-側氧基-4-[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯。C32 H36 N4O8 之MS (ESI+)m/z 605.2(M+H)+ 。將甲醇(40mL)中的粗製物側氧基(苯基)乙酸(3S )-3-({N -[(4-甲氧基-1H -吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基-2-側氧基-4-[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯之溶液放置在N2 氛圍下且以碳酸鉀(7mg，0.05mmol)處理，伴隨劇烈攪拌。在1小時後，在真空下移除揮發物(浴＜30℃)，以給出黃色玻璃狀粗製物。將此材料以Biotage MPLC (25M管柱，6%之甲醇/氯仿)純化，以供給成為灰白色固體的346 mg (73%)標題化合物。1 H NMR (DMSO-d6 ) δ 11.56 (s, 1H), 8.44(d,J =8Hz, 1H), 8.39(d,J =8Hz, 1H), 7.61(s, 1H), 7.35(s, 1H), 7.08(t,J =8Hz, 1H), 6.99(d,J =8Hz, 1H), 6.49(d,J =8Hz, 1H), 5.04(t,J =8Hz, 1H), 4.46(m, 2H), 4.25(dd,J =8, 20Hz, 1H), 4.13(dd,J =8, 20Hz, 1H), 3.87(s, 3H), 3.10(m, 2H), 2.28(m, 1H), 2.08(m, 1H), 1.92(m, 1H), 1.70-1.53(m, 5H), 0.93(d,J =8Hz, 3H), .89(d,J =8Hz, 3H)；C24 H32 N4 O6 之MS(ESI+)m/z 473.2(M+H)+ 。 下列為本發明之固體形式的實施例：N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺之固體形式的實施例N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺之形式1和形式2 材料製備：在以PXRD測試後，N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺樣品之延長貯存得到以形式2表示之結晶形式(在圖8中所示)。將約9mg之此批料藉由添加100μL之等分試樣而懸浮在1mL之THF：甲苯(3:7 vol/vol)中且在每次添加後渦漩樣品。未觀察到材料溶解且將小瓶放置在40℃的輥混合器上。在平衡30分鐘後，將固體使用離心過濾管過濾，以PXRD分析且以形式1表示(在圖7中所示)。N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺水合物(形式3)之製備
Figure 02_image003
上文描述形式3的非種晶之結晶過程的實施例。將PF-00835231(1.0eq，2.0g)、丙酮(9.2mL，4.6mL/g)及水(1.6 mL，0.81mL/g)在20℃下裝入夾套反應器中。將混合物在20℃下攪拌以供給澄清溶液。以仍得到澄清溶液的緩慢方式添加額外的水(4.1mL；2mL/g)。在真空下移除溶劑以提供膠狀固體。添加丙酮(9mL；4.5mL/g)且將漿液加熱至回流。緩慢地添加水(20mL；10mL/g)，使產物結晶，隨後經1h添加更多水(30mL；15mL/g)。將所得漿液經1h冷卻至10℃且經最少1h粒化，然後過濾且清洗。將固體在20℃下經1h乾燥以提供PF-00835231水合物(形式3)，85%之產率。 形式3之種晶過程的實施例：將2.8mL之預準備的水/丙酮(15：85，v/v)溶液添加至8打蘭小瓶中的1.85g之PF-00835231中。加入攪拌棒且將小瓶放置在攪拌器盤上(~500rpm)。添加約5mg之形式3種晶且觀察到固體在幾分鐘內沉澱以產生漿液。將3.8mL之水經約5分鐘逐滴添加至攪拌之漿液中，接著將小瓶密封且留置在周圍條件下攪拌約5小時。將漿液過濾且將固體殘餘物以約6mL之水清洗。將固體殘餘物轉移至乾淨的4打蘭小瓶中且放置在50℃之真空烘箱中。將固體產物以PXRD特徵化且確認與形式3一致。使用此特徵化產生峰表及選擇特徵峰。單晶製品(work)顯示結晶形式3具有1:1之化學計量的水：N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺，但是在特定的貯存條件下可得到1.2：1之化學計量的水：N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺。 粉末X射線繞射N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺之形式1、2和3的粉末X射線繞射圖案係使用配備有Cu輻射源之Bruker AXS D8 Endeavor繞射儀產生。管電壓及安培數分別設定至40kV及40mA。電動發散狹縫設定至11mm固定照明。繞射輻射係使用具有設定至4.00°之位置敏感檢測器(PSD)開口之LYNXEYE XE-T能量色散X射線檢測器檢測。數據係在使用0.019°2θ之步階及每步0.1秒之時間自2.0至55.0 2-θ度(°2θ)的Cu Kα波長之θ-θ測角儀上收集。將樣品放置在矽低背景平板固定架中以準備分析且在數據收集期間以15rpm旋轉。數據係以DIFFRAC.EVA v4.2軟體分析。峰列表係使用每一各自的繞射圖案中具有相對強度≥5%之最強譜帶的反射來準備。以峰位置之± 0.2° 2θ的典型誤差(USP-941)應用於此數據。與此測量相關聯的小誤差可因為各種因素而發生，包括：(a)樣品準備(例如樣品高度)，(b)儀器特徵，(c)儀器校正，(d)操作員輸入(例如測定峰位置)，及(e)材料的本性(例如較佳的定向及透明度效應)。 為了獲得絕對峰位置，應將粉末圖案與參考比對。這可為來自室溫下解析之相同形式的晶體結構或內標準物(例如二氧化矽或剛玉)之模擬粉末圖案。將所收集之形式3的粉末圖案與模擬粉末圖案比對。 將N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺水合物(形式3)之PXRD輪廓提供在圖6中及相應的峰列表提供在表PXRD1中。形式3之特徵峰為8.6、11.9、14.6、18.7、19.7 °2θ位置上的峰，各峰± 0.2°2θ。形式1和形式2之參考PXRD圖案分別提供於圖7和8中。 表PXRD1：形式3之PXRD峰列表(以2-θ度計，各峰±0.2度2-θ)
Figure 02_image005
固態NMR 固態NMR(ssNMR)分析係在Bruker-BioSpin Avance Neo 400MHz (1 H頻率) NMR光譜儀上進行。13 C ssNMR光譜係在4 mm MAS探針上以15kHz之魔角旋轉速率與調節至25℃之溫度下收集。13 C交叉極化(CP)光譜係以2.5ms CP接觸時間及30秒之循環延遲記述。在光譜擷取期間施加~100kHz經相位調變之質子去耦場。碳光譜參考係相對於純四甲基矽烷，藉由設定來自外部α-甘胺酸樣品之高頻信號至176.5ppm 來進行。 自動化峰揀選係使用ACD Labs 2019 Spectrus Processor軟體執行，以3%之相對強度的閥值用於初步的峰選擇。自動化峰揀選的輸出係以目測檢查以確保正確性且若必要時以手動調整。儘管在本文記述具體的13 C ssNMR值，但是由於儀器、樣品及樣品準備的差異而使該等峰值確實以範圍存在。結晶固體的13 C化學位移x軸值之典型的可變量為正或負0.2ppm之等級。本文所記述之ssNMR峰高度為相對強度。ssNMR強度可取決於實驗參數的實際設定及樣品的熱歷史而改變。 表ssNMR1–形式2之ssNMR峰列表
Figure 02_image007
N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺之調配實施例N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺(在下文稱為PF-00835231)具有適度的親脂性與有限的水性溶解度。PF-00835231在整個生理相關性pH範圍內為中性且因此具有pH非依賴性溶解度行為。PF-00835231之物理化學性質限制可應用以改進其於腸胃外投予的溶解度之方法。 由於有限的水性溶解度、低的滲透性及短的半生期，使PF-00835231最適合作為水溶液經由靜脈內(IV)輸液之腸胃外投予。用於輸液之水溶液的代表性實例包括具有用於注射之USP水、0.9% w/v之氯化鈉、5% w/v之右旋糖、在5% w/v之右旋糖中的0.9% w/v之氯化鈉及乳酸鹽林格氏(Ringer’s)溶液醫藥組成物。經由連續IV輸液之PF-00835231的預測之有效日劑量預計在約300mg至3300mg的範圍內。約250mL至約500mL之每日連續輸液體積通常較佳，以便於保持以高於許多醫院所使用的最低輸液速率之「保持靜脈通暢(keep vein open)」(KVO)實施。可考慮至多約1000mL之每日連續IV輸液體積，但是此大量的流體可限制附加流體的共同投予。基於預計之劑量範圍及較佳的IV輸液體積，目標的IV輸液濃度係以250mL之IV輸液體積為約1.2mg/mL至約13.2mg/mL，以500mL之IV輸液體積為約0.6mg/mL至約6.6mg/mL，及以1000mL之IV輸液體積為約0.3mg/mL至約3.3mg/mL。 為了達成約0.3mg/mL至約13.2mg/mL之IV輸液濃度，考慮多種增溶方法。用於IV醫藥組成物之典型的增溶方法包括水性pH調整、鹽形式修飾、共溶劑增溶、界面活性劑增溶和複合化。在PF-00835231的例子中，中性電荷對pH調整或鹽形式修飾提供有限的機會且因此評估增溶賦形劑。增溶賦形劑應以安全的水平調配，且理想地以相同的投予途徑為先導，以便使任何對患者可能的不良作用減至最低。 為了改進具有差的水性溶解度之化合物的溶解度，時常使用溶劑之混合物。如本文所使用的共溶劑可定義為適用於經由腸胃外投予之醫藥用途的與水可混溶的非水性溶劑。共溶劑的代表性實例包括但不限於苯甲醇(BA)、二甲基丙烯醯胺(DMA)、二甲亞碸(DMSO)、乙醇、N-甲基吡咯啶酮(NMP)、聚乙二醇(例如PEG200、PEG300、PEG400、PEG600)和丙二醇(PG)。增溶之共溶劑方法可能使溶解度改進多個數量級，且已成功地用於跨越多種投予途徑之商業產品，以達成更高的劑量水平。然而，增溶之共溶劑方法對IV投予具有多重限制。第一，所使用的溶劑必須以不引起局部刺激、全身毒性或其他不良作用之水平投予。該等安全性考慮時常限制可投予之上限濃度，尤其在立即使用型(RTU)IV調配物中。第二，溶劑應與藥物產品包裝及投予套件可相容，且不應反應、降解或提取任何非所欲化合物。第三，預期在共溶劑含量與藥物溶解度之間呈指數關係。因此，若藥產物經製備成粉末或濃縮的立即稀釋型(RTD)調配物，則用於IV投予之稀釋可引起溶解度的指數下降，其導致藥物沉澱。因此必須謹慎地注意經稀釋之調配物的物理穩定性。 改進親脂性化合物的溶解度之替代或附加方法包含使用界面活性劑或聚合物賦形劑。界面活性劑的代表性實例包括但不限於聚乙烯基吡咯啶酮(PVP)、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙氧基化蓖麻油、卵磷脂、聚山梨醇酯80 (PS80)、聚山梨醇酯20 (PS20)和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯。界面活性劑為典型的兩親性分子，其在高於臨界微胞濃度(CMC)下自組合以形成微胞，在此CMC及形成之結構係取決於調配物的組成而定。在水性溶液中，微胞通常使分子的親水性區域定向至水性溶液中及使分子的親脂性區域定向至微胞之內腔內以限制與水的相互作用。在此等微胞中，兩親性及親脂性化合物可分別溶解在微胞壁或內腔中，得到改進的藥物溶解度。在共溶劑或油的存在下，共溶劑可形成油水型乳液，其係以界面活性劑穩定。與僅共溶劑之調配物一樣，基於界面活性劑之調配物具有許多相同的安全性及相容性限制。與僅共溶劑之系統相反，基於界面活性劑之調配物在界面活性劑濃度與藥物溶解度之間不具有相同的指數關係。反而，藥物溶解度通常係以界面活性劑濃度高於CMC來維持。因此，在稀釋用於IV投予時，基於界面活性劑之調配物通常展現減少的沉澱作用。 複合劑為替代的增溶方法，其中受質(亦即藥物)與一或多種配體(亦即複合劑)形成有利的非共價相互作用。複合劑的代表性實例包括但不限於環糊精(CD)、增溶物、胺基酸或聚合物。最常見的複合劑類別為環糊精(CD)。CD特別為具有可變數目的D-葡萄糖單元(例如α-CD具有6個，β-CD具有7個或γ-CD具有8個)及在羥基上可變的取代基(例如羥基丙基，HP或磺丁基醚，SBE)之環狀寡醣。CD形狀提供可容納親脂性藥物之親脂性錐形穴，其中D-葡萄糖單元的數目修飾腔的大小及取代基修飾複合物的溶解度和複合的有利性。CD具有幾個超越共溶劑或基於界面活性劑之增溶方法的優點，其通常包括降低的毒性、減少的容器密閉相容性問題和改進的可製造性。與CD複合時常比基於共溶劑之增溶更易溶解，得到改進的物理穩定性。然而，CD複合受到可裝入CD穴中及形成有利的複合物之親脂性分子的限制。另外，CD複合時常需要大量的CD才能顯著地提高溶解度，其可能導致不良作用。另外，最初的CD複合物之形成可能受到藥物溶解的限制，其最終可能限制溶解藥物的能力。 為了提高以CD之藥物增溶性，研究員研究添加聚合物賦形劑以形成三元複合物。已特別顯示水溶性聚合物(包括羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙烯基吡咯啶酮(PVP)和高分子量聚乙二醇(PEG))提高藥物的藥物溶解速率且能夠改進與CD之複合。 與聚合物賦形劑相反，共溶劑連同CD之使用與單獨的CD相比，時常導致降低的藥物溶解度。在參考書Water-Insoluble Drug Formulation 中，Tong和Wen總結主要的問題：「使用有機共溶劑的一個主要問題為大多數有機共溶劑競爭以包容在CD穴中且因此抑制複合物形成」。Tong, W.-Q.; Wen, H; Application of Complexation in Drug Development for Insoluble Compounds in Liu, R. (Ed.) Water Insoluble Drug Formulation, CRC Press, Boca Raton, 2018, pp 149-176。在共溶劑的存在下降低CD增溶之另一種假設為共溶劑降低水性介質的極性且因此降低親脂性藥物進入親脂性CD穴之驅動力。多項文獻研究支持此結論。參見例如：P. Li, L. Zhao, S.H. Yalkowsky之Combined effect of cosolvent and cyclodextrin on solubilization of nonpolar drugs, Journal of Pharmaceutical Sciences, 88(1999)1107-1111；H. Viernstein, P. Weiss-Greiler, P. Wolschann之Solubility enhancement of low soluble biologically active compounds—temperature and cosolvent dependent inclusion complexation, International journal of pharmaceutics, 256 (2003) 85-94；Y. He, P. Li, S.H. Yalkowsky之Solubilization of Fluasterone in cosolvent/cyclodextrin combinations, International journal of pharmaceutics, 264 (2003) 25-34；T. Loftsson, B.J. Ólafsdóttir, H. Friðriksdóttir, S. Jónsdóttir之Cyclodextrin complexation of NSAIDSs: physicochemical characteristics, European Journal of Pharmaceutical Sciences, 1 (1993) 95-101；及J. Pitha, T. Hoshino之Effects of ethanol on formation of inclusion complexes of hydroxypropylcyclodextrins with testosterone or with methyl orange, International journal of pharmaceutics, 80(1992) 243-251。例如，Viernstein等人研究殺真菌劑賽福座(triflumizole)，差的水溶性化合物，且發現：「共溶劑與β-環糊精之組合通常不增加化合物之溶解度，因為共溶劑使包容複合物不穩定」。Loftsson等人研究多種非類固醇抗發炎藥物(NSAID)，具有差的水性溶解度，且發現：「所有測試之NSAIDS皆與CD形成包容複合物，但是添加乙醇或丙二醇至水性CD溶液中使彼等複合程度降低」。 吾等驚訝地發現可使用複合劑改進 PF-00835231之水性溶解度，賦予腸胃外適合的組成物之目標溶解度範圍的低端。較佳的複合劑包括CD、胺基酸和增溶物；更佳的複合劑包括β-CD、γ-CD、菸鹼醯胺、苯甲酸鈉和柳酸鈉；最佳的複合劑包括HP-β-CD和SBE-β-CD。驚訝的是β-CD可與PF-00835231形成複合物，儘管藥物具有適度的親脂性。PF-00835231的基於複合劑之醫藥組成物的較佳實施態樣係調配成溶液，接著可將其無菌過濾，填充至適當的容器密閉系統中且以溶液供應。溶液可作為RTU溶液供應，其在IV投予前不需要進一步稀釋，或作為RTD溶液供應，其在IV投予前必須稀釋。PF-00835231的基於複合劑之醫藥組成物的另外較佳實施態樣係調配成溶液，接著可將其無菌過濾，填充至適當的容器密閉系統中且冷凍乾燥以製造親液物。經凍乾之產物可在IV投予前重構及/或稀釋。 甚至更驚訝的是PF-00835231之溶解度在含有一或多種複合劑及一或多種共溶劑之調配物中增加，其賦予更大的目標劑量覆蓋範圍。這是令人驚訝的發現，因為先前報告許多共溶劑對複合可具有不穩定的效應，如上文所述。較佳的複合劑包括CD和增溶物；更佳的複合劑包括β-CD、γ-CD、菸鹼醯胺、苯甲酸鈉和柳酸鈉；且最佳的複合劑包括HP-β-CD和SBE-β-CD。在最終的藥產物中(及在用於IV投予之水性液體組成物中)的CD量係基於CD對PF-00835231之莫耳比而較佳為約1.5：1至約25：1之範圍內，更佳為約1.5：1至約8：1之範圍內，且最佳為約2：1至6：1之範圍內。較佳的共溶劑可包括 一或多種水可混溶的極性質子性及非質子性溶劑，更佳的共溶劑可包括二甲基丙烯醯胺(DMA)、N-甲基吡咯啶酮(NMP)和苯甲醇(BA)，且最佳的共溶劑包括乙醇、丙二醇(PG)、二甲亞碸(DMSO)和聚乙二醇(例如PEG200、PEG300、PEG400、PEG600)。在一些調配物中，與共溶劑之組合較佳，以降低溶液黏度及限制任何與溶劑相互作用相關聯的物理不穩定性。在最終的藥產物中(及在用於IV投予之水性液體組成物中)最佳的兩種共溶劑為乙醇和二甲亞碸(DMSO)中一者；及另一共溶劑係選自由下列所組成的群組：PEG300、PEG400和丙二醇，其中乙醇或DMSO對PEG300、PEG400或PG之比較佳為約1:1至約1:9之範圍內，且最佳為約1：2至約1：4之範圍內。在最終的調配物中(及在用於IV投予之水性液體組成物中)的共溶劑總量係基於體積分率而較佳為至多約15% v/v，且最佳為至多約6% v/v。PF-00835231的基於複合劑及共溶劑之調配物的較佳實施態樣係調配成溶液，其中將PF-00835231先溶解在一或多種共溶劑中且隨後與較佳地含有複合劑之水性混合物組合。驚訝的是溶解度改進的幅度受到賦形劑之此添加順序的影響。PF-00835231的基於複合劑及共溶劑之調配物的較佳實施態樣係調配成溶液，接著可將其無菌過濾，填充至適當的容器密閉系統中且以溶液供應。溶液可作為RTU溶液供應，其在IV投予前不需要進一步稀釋，或作為RTD溶液供應，其在IV投予前必須稀釋。PF-00835231的基於複合劑及共溶劑之調配物的替代較佳實施態樣係調配成溶液，接著可將其無菌過濾，填充至適當的容器密閉系統中且冷凍乾燥以製造親液物。經凍乾之產物可在IV投予前重構及/或稀釋。PF-00835231的基於複合劑及共溶劑之調配物的替代實施態樣係於適當的容器密閉系統中供應成為粉末的PF-00835231，具有至少兩個分別含有所欲共溶劑及所欲界面活性劑之專用稀釋劑。PF-00835231粉末的實例可為無菌結晶材料或以冷凍乾燥製備。在此實施態樣中，粉末及稀釋劑可以適當的順序混合以產生RTU或RTD產物，其可類似於其他實施態樣進一步稀釋。PF-00835231的基於複合劑及共溶劑之調配物的替代實施態樣係調配成濃縮的共溶劑溶液，可將其無菌過濾，填充至適當的容器密閉系統中且作為RTD溶液供應，具有含有所欲增溶劑之專用稀釋劑。 吾等亦發現PF-00835231之溶解度亦可在含有一或多種界面活性劑及一或多種共溶劑之調配物中增加，其賦予比單獨的複合劑更大的目標劑量覆蓋範圍，但是比複合劑及共溶劑更小的目標劑量覆蓋範圍。較佳的共溶劑可包括水可混溶的極性質子性及非質子性溶劑，更佳的共溶劑可包括PG、DMA，且最佳的共溶劑包括BA、DMSO、乙醇、NMP和聚乙二醇(例如PEG300、PEG400)。在用於IV投予之水性液體組成物中，共溶劑之較佳的量為至多約30% v/v，共溶劑之更佳的量為至多約20% v/v，且共溶劑之最佳的量為至多約10% v/v。較佳的界面活性劑包括非離子性聚合物、離子性聚合物和脂質，更佳的界面活性劑包括PVP、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、HPMC、聚乙氧基化蓖麻油、卵磷脂，且最佳的界面活性劑包括聚山梨醇酯80 (PS80)、聚山梨醇酯20 (PS20)和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯。在用於IV投予之水性液體組成物中，界面活性劑之較佳的量為至多約100 mg/mL，且界面活性劑之最佳的量為至多約12.5 mg/mL。PF-00835231的基於界面活性劑及共溶劑之醫藥組成物的較佳實施態樣係調配成溶液，接著可將其無菌過濾，填充至適當的容器密閉系統中且以溶液供應。溶液可作為RTU溶液供應，其在IV輸液前不需要進一步稀釋，或作為RTD溶液供應，其在IV輸液前必須稀釋。PF-00835231的基於界面活性劑及共溶劑之醫藥組成物的另外較佳實施態樣係調配成溶液，接著可將其無菌過濾，填充至適當的容器密閉系統中且冷凍乾燥以製造親液物。經凍乾之產物可在IV輸液前重構及/或稀釋。PF-00835231的基於界面活性劑及共溶劑之醫藥組成物的另外較佳實施態樣係於適當的容器密閉系統中供應成為粉末的PF-00835231，具有含有所欲共溶劑及所欲界面活性劑之專用稀釋劑。在此實施態樣中，粉末及稀釋劑可以適當的順序混合以產生RTU或RTD產物，其可類似於其他實施態樣進一步稀釋。粉末可包含PF-00835231之形式3水合物。 在其中將藥產物調配成溶液之上述較佳的實施態樣之各者中，觀察到pH依賴性降解。為了使藥物穩定性達到最大，最終的醫藥組成物較佳地具有在約2至約6，最佳在約3至約5之範圍內的視pH。為了維持所需pH，將醫藥組成物緩衝，較佳的緩衝劑為乙酸、乳酸、磷酸和酒石酸，最佳的緩衝劑為檸檬酸。驚訝的是pH調整與CD之組合得到最佳的化學穩定性。 在其中將藥產物凍乾之上述較佳的實施態樣之各者中，亦可包括增積劑、張力修飾劑或水清除賦形劑。較佳的賦形劑包括糖、多元醇、聚合物和胺基酸，更佳的賦形劑包括PVP、蔗糖、甘露醇、乳糖和甘胺酸，且最佳的賦形劑包括海藻糖、聚葡萄糖和低或高分子量PEG。 實施例之通用方法 超性能液相層析術(UPLC)檢定方法 Waters Acquity UPLC系統配備有四元溶劑管理器(Quaternary Solvent Manager)、樣品管理器、管柱管理器及配備有分析流通槽檢測器之TUV檢測器(檢測波長292 nm)。Cortecs T3、1.6µm、2.1mm x 100mm管柱設定在40±2℃之溫度下。設定1 µL之注射體積，在0.3mL/min之流速下操作。使用移動相A (10mM甲酸銨，pH 3.0)及移動相B (甲醇)梯度達成所欲分離。設定95：5的移動相A：移動相B之比經0至1min，接著在15min記號點設定至5：95之比，維持相同的比，直到16min，隨後在16.10min以95：5及以相同的比操作20min。 超性能液相層析術(UPLC)純化方法 Waters Acquity UPLC系統配備有四元溶劑管理器、樣品管理器、管柱管理器及PDA檢測器(檢測波長292nm)。Kinetex F5、1.7µm、2.1mm x 150mm管柱設定在60±2℃之溫度下。設定5µL之注射體積，在0.4mL/min之流速下操作。使用移動相A(20mM甲酸銨，pH3.0)及移動相B (20 mM甲酸銨於甲醇中)梯度達成所欲分離。設定65：35的移動相A：移動相B之比經0至1min，接著在31min記號點設定至45：55之比，隨後在46min以5：95及在46.5min設定至65：35且操作56min。 粉末X射線繞射方法1 粉末X射線繞射(PXRD)係以約20 mg之PF-00835231樣品裝載於固定架中來執行。測量係在Miniflex-600上使用具有10mm x 0.2mm孔樣品固定架之Rigaku 906163來執行。系統使用Rigaku PDXL2軟體(V 2.8.4.0)及Miniflex Guidance (V 3.2.20)。將系統設定在步階模式且自2°2θ度開起及40°2θ度終止操作，在1秒鐘期間內以0.019°2θ之步階，具有40V之電壓及15 mA之電流。 粉末X射線繞射方法2 粉末X射線繞射圖案係使用配備有Cu輻射源之Bruker AXS D8 Endeavor繞射儀產生。管電壓及安培數分別設定至40 kV及40mA。電動發散狹縫設定至11mm固定照明。繞射輻射係使用設定至4.00°之位置敏感檢測器(PSD)開口之LYNXEYE XE-T能量色散X射線檢測器檢測。數據係在使用0.019°2θ之步階及每步0.1秒之時間自2.0至55.0°2θ的Cu波長之θ-θ測角儀上收集。將樣品放置在矽低背景固定架中以準備分析且在數據收集期間以15rpm旋轉。數據係以DIFFRAC.EVA軟體分析。 檸檬酸鹽緩衝劑製備 100mL之50mM檸檬酸鹽緩衝劑溶液係在量瓶中自純水、無水檸檬酸及檸檬酸鈉二水合物製備至3.0、5.0和7.0之目標pH值。將緩衝劑溶液以1N氫氧化鈉或1N氫氯酸調整以達到目標pH。 例如，pH5之50mM檸檬酸鹽緩衝劑之製備係藉由先將約25mL之純水添加至100mL量瓶中。將約331mg之無水檸檬酸(Sigma Aldrich，Ph.Eur / USP)及約963mg之檸檬酸三鈉二水合物(Sigma Aldrich，Ph. Eur. / USP)添加至此量瓶中。將純水添加至量瓶至目標體積且倒置混合，直到均勻。測量pH且不需要進一步的pH調整。 調配實施例F1：PF-00835321水性溶解度 飽和溶解度測量 在製備檸檬酸鹽緩衝劑溶液後，將必需pH的1000μL之緩衝劑溶液添加至乾淨的微量離心管(Eppendorf tube)中。接著將約7mg之PF-00835231水合物形式添加至微量離心管中的檸檬酸鹽緩衝劑溶液中。在各pH值下重複此過程共3次。觀察溶液以確保PF-00835321不完全溶解(亦即使溶液飽和)。接著將試管以封口膜密封，放入打蘭小瓶內部且放置在約4℃之溫控環境中的輥混合器上。 在48小時後，自輥混合器移出調配物，且檢查pH及發現與原來的值一致。接著將樣品轉移至具有離心過濾器之新的微量離心管中。接著將調配物在約4℃下以每分鐘13,000轉(rpm)離心3分鐘。將過濾器中收集的固體滯留物樣品經由PXRD分析及將通過過濾器的過濾物樣品經由UPLC分析(見上文)。來自該等飽和溶解度實驗的結果可見於以下調配表F1中，以平均值記述。 調配表F1. 來自PF-00835231在4℃下的水性飽和溶解度實驗的數據。溶解度數據係以3次重複的平均值記述。
Figure 02_image009
該等飽和溶解度數據確認PF-00835231具有差的水性溶解度，與3.0至7.0之pH無關，且因此需要使用賦予溶解度之調配方法，以便於達成至多約1000mL體積的適合劑量。 調配實施例F2：在共溶劑/水混合物中的PF-00835231溶解度 飽和溶解度測量 PF-00835231在共溶劑/水混合物中的飽和水性溶解度係以水中至多25% v/v之共溶劑含量研究。 先製備用於各調配物的2.5% v/v、10% v/v或25% v/v之濃度的共溶劑儲備溶液。為了製備25% v/v之共溶劑儲備溶液，將5mL之共溶劑添加至20mL量瓶中，隨後添加1 mL之50mM檸檬酸鹽緩衝劑(pH5)，隨後添加水至體積。為了製備10% v/v之共溶劑儲備溶液，將1mL之共溶劑添加至10mL量瓶中，隨後添加1mL之50mM檸檬酸鹽緩衝劑(pH5.0)，隨後添加水至體積。為了製備2.5% v/v之共溶劑儲備溶液，將1mL之25% v/v之共溶劑儲備溶液添加至10mL量瓶中，隨後添加0.9mL之50mM檸檬酸鹽緩衝劑(pH 5.0)，隨後添加水至體積。 接著將2000μL經緩衝之共溶劑儲備溶液添加至HPLC小瓶中。接著將約10mg之PF-00835231水合物形式添加至HPLC小瓶中的溶液中。將溶液經由渦漩混合約1分鐘，且觀察調配物以確保PF-00835231不完全溶解(亦即使溶液飽和)。接著將試管以封口膜密封且放入溫控保溫器中及旋轉混合。將溫控保溫器控制在40℃下經8小時，15℃下經5小時及25℃下經12小時。在實驗結束時，將調配物自保溫器移出且轉移至具有0.2μm PVDF離心過濾器之新的微量離心管中。接著將溶液在13,000rcf下離心3分鐘。將通過過濾器的過濾物樣品經由HPLC分析。溶解度數據顯示於表2中。 調配表F2. PF-00835231在25℃下在不同量的共溶劑存在下以mg/mL計的飽和溶解度數據。NC表示未以該濃度製備調配物。*表示未以實驗達成飽和。
Figure 02_image011
該等溶解度數據證明在共溶劑濃度與飽和溶解度之間的指數關係。在所測試的共溶劑之中，彼等可以如下排序：PG ＜ DMSO、乙醇、PEG300、PEG400 ＜ NMP ＜ BA。在該等結果中最驚訝的方面為PG對溶解度的改進最少(在10%和25% v/v下，DMSO、乙醇、PEG300和PEG400為~50%)及NMP和對溶解度的改進最多(在10% v/v下，與DMSO、乙醇、PEG300和PEG400相比分別為~3倍和~10倍)。NMP可能不適合於靜脈內投予，因為經由此途徑之有限的先例性及毒性報告，但是若化合物係經由另一投予途徑(亦即皮下)，則其可能適合。關於4種表現可相比的共溶劑，在添加25% v/v之共溶劑時，觀察到~1.5mg/mL之最適度的溶解度改進。當與0.3mg/mL至13.2mg/mL之PF-00835231的目標輸液濃度範圍相比時，此數據顯示至多25% v/v之單一共溶劑僅可覆蓋目標劑量範圍的低端。因此，研究不同的共溶劑之混合物以查看這是否可進一步改進溶解度，同時降低所需的賦形劑含量。 調配實施例F3：在共溶劑/共溶劑/水混合物中的PF-00835231溶解度 飽和溶解度測量 以調節至pH 5及具有5 mM檸檬酸鹽緩衝劑之水中至多50% v/v之共溶劑總含量研究PF-00835231在共溶劑/共溶劑/水混合物中的飽和水性溶解度。乙醇、PEG400和PG係由於彼等於IV投予產品中的先例使用而列為共溶劑。10mL之儲備溶液係以1% v/v至25% v/v之各共溶劑濃度製備，以10%v/v之50mM檸檬酸鹽緩衝劑調整至pH5.0且以水稀釋至目標體積。 各樣品以約10mg之水合物形式(PF-00835231水合物，形式3)秤重至HPLC小瓶中且添加關注的1mL體積之共溶劑媒劑。重複完成兩次此過程。將樣品渦漩且放置在25℃烘箱中的輥混合器上48小時。在48小時後，目測評定樣品以確保PF-00835321不完全溶解(亦即使溶液飽和)。將樣品轉移至具有0.2μm PVDF離心過濾器的塑膠離心管中。測量溶液的pH以確認pH在添加PF-00835231後沒有變化。將樣品在13,000rcf下離心3分鐘。收集上清液且以HPLC分析。將溶解度數據顯示於調配表F3中。 調配表F3. 來自PF-00835231在25℃下在不同量的共溶劑存在下之飽和溶解度實驗的數據。溶解度數據係以重複2次之平均值記述。
Figure 02_image013
該等溶解度數據證明在共溶劑總含量與溶解度之間的相互關係，其中PEG400和乙醇達成可相比的增溶作用，其大於PG。在含有25% v/v之PEG400及25% v/v之乙醇的調配物中觀察到至多7.7mg/mL之適度改進的溶解度。當與0.3至13.2mg/mL之PF-00835231的目標輸液濃度範圍相比時，此數據顯示兩種至多25% v/v之共溶劑各可覆蓋更大的部分，但不是整個的目標劑量範圍。因此，研究共溶劑與界面活性劑之混合物以查看這是否可進一步改進溶解度，同時降低所需的賦形劑含量。 調配實施例F4：在共溶劑/共溶劑/界面活性劑混合物中的PF-00835231溶解度 研究共溶劑與界面活性劑之混合物以改進具有減少的共溶劑含量之PF-00835231的溶解度及降低在稀釋時沉澱的風險。 飽和溶解度測量 研究PF-00835231在共溶劑/共溶劑/界面活性劑混合物中的飽和水性溶解度。使用DMSO、乙醇、PEG400和PG作為共溶劑。使用聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯作為界面活性劑。 用於各調配物之共溶劑/共溶劑/界面活性劑儲備溶液先在量瓶以下列製備： •  25% v/v之共溶劑1、25% v/v之共溶劑2及12.5mg/mL之界面活性劑 •  10% v/v之共溶劑1、10% v/v之共溶劑2及5mg/mL之界面活性劑 •  5% v/v之共溶劑1、5% v/v之共溶劑2及2.5mg/mL之界面活性劑 所有的調配物係以約pH5.0之5mM檸檬酸鹽緩衝劑的最終濃度製備。所選擇的濃度包含可能的RTU和RTD調配物且有助於計畫可能的調配設計空間。 將約20mg之水合物形式的PF-00835231添加至各HPLC小瓶中。接著將1.5mL經緩衝之共溶劑/共溶劑/界面活性劑儲備溶液添加至HPLC小瓶中。將溶液經由渦漩混合約1分鐘，且觀察調配物以確保PF-00835231不完全溶解(亦即使溶液飽和)。接著將試管以封口膜密封且放入溫控保溫器中及旋轉混合。將溫控保溫器在12rpm旋轉下控制在40℃下經8小時，15℃下經5小時及25℃下經12小時。在實驗結束時，將調配物自保溫器移出且轉移至具有0.2μm PVDF離心過濾器之新的微量離心管中。接著將溶液在13,000rcf下離心3分鐘。將通過過濾器的過濾物樣品經由HPLC分析。將溶解度數據顯示於調配表F4中。 調配表F4. 共溶劑/共溶劑/界面活性劑溶解度數據
Figure 02_image015
當與兩種單獨的共溶劑相比時，該等溶解度數據證明改進含有兩種共溶劑與界面活性劑之混合物的溶解度(調配實施例F3)。共溶劑溶解度的趨勢與先前的實施例一致。所使用的所有3種界面活性劑(PS20、PS80和Kolliphor HS-15)達成可相比的溶解度。來自該等結果，在添加25% v/v之乙醇、25% v/v之PEG400及12.5mg/mL之PS80時可達成~16.6mg/mL之溶解度，其比沒有PS80之相同調配物大~9mg/mL。當與0.3mg/mL至13.2mg/mL之PF-00835231的目標輸液濃度範圍相比時，此數據顯示此組成物可覆蓋完全的目標劑量範圍。然而，具有高的共溶劑含量之調配物可能存在安全性風險，其可能阻止該等調配物在臨床上用於覆蓋目標劑量範圍的高端。因此，可能需要具有較低的共溶劑含量之調配物以覆蓋目標劑量範圍的低端，或具有較高的共溶劑含量之調配物可能在投予前必須先稀釋。 在純共溶劑及界面活性劑混合物中的溶解度及穩定性 為了研究含有共溶劑及界面活性劑之調配物的最濃縮之選項，以純共溶劑及界面活性劑製備調配物。關注的媒劑係藉由添加所需量的乙醇(Merck)、PEG400(Sigma Aldrich)及超精製的聚山梨醇酯80(Croda)至25mL量瓶中且以乙醇補足體積來製備。將組成顯示於調配表中。將約30mg之水合物形式的PF-00835231添加至HPLC小瓶中，隨後添加約0.5mL關注的媒劑。接著將樣品放置在25℃烘箱中的輥混合器上。在48小時後，所有的溶液澄清，表明未達到飽和溶解度。接著將溶液在13,000rcf下離心3分鐘。收集上清液且以HPLC分析。因為未達到飽和溶解度，所以HPLC數據為達到的最小溶解度，如調配表F5中所示。 調配表F5. 來自PF-00835231在25℃下在不同量的共溶劑及界面活性劑存在下之飽和溶解度實驗的數據。溶解度數據係以重複2次之平均值記述。
Figure 02_image017
在調配表F5中的數據表明純共溶劑與界面活性劑之混合物可使PF-00835231溶解而大於0.3mg/mL至13.2mg/mL之目標輸液濃度範圍。然而，在調配表F5中所示之濃縮共溶劑混合物可能不適合以250mL至500mL之目標輸液體積用於IV投予，因為有共溶劑及界面活性劑的量存在。因此，該等調配物必須以相關的稀釋劑(亦即0.9% w/v之鹽水)稀釋且必須監測所得摻合物之物理穩定性(亦即藥物是否維持在溶液中或沉澱出來)。 調配表F6. 欲在稀釋研究中使用的共溶劑與界面活性劑之媒劑混合物
Figure 02_image019
將調配表F6中所示之所需量的賦形劑秤重至50mL量瓶中。為了控制最終的pH，將245μL在乙醇中的0.1M無水檸檬酸添加至媒劑1中及將288μL在乙醇中的0.1M無水檸檬酸添加至媒劑2中。將媒劑1以純水補足至體積及將媒劑2以乙醇補足至體積且攪拌，直到混合。 將約800mg之水合物形式的PF-00835231添加至20mL量瓶中且以媒劑1或媒劑2補足至體積。加入小的磁性轉子(magnetic flea)且將量瓶轉移至磁攪拌盤上。攪拌混合物，直到達成約40mg/mL之均勻溶液。接著調配物立即進行稀釋研究，其中具有PF-00835231之媒劑1說明為調配物1及具有PF-00835231之媒劑2說明為調配物2。基於HPLC測量可發現PF-00835231在調配物1中的濃度為約36mg/mL及在調配物2中的濃度為約37mg/mL。 稀釋係在無菌條件下在層流通風櫥中執行，使外來粒子減至最少。將玻璃器皿預清洗且以過濾水沖洗10次以減少可見及微可見微粒。在實驗前，將玻璃器皿留置在層流通風櫃中經隔夜乾燥。為了執行稀釋，將調配物1及調配物2經由0.50μm PVDF針筒過濾器過濾至單獨的保存容器中。關於調配物1，將約5.56mL添加至含有0.9% w/v之鹽水的100mL之燒瓶中(以1比18稀釋至約2mg/mL)。一次性添加全部5.56mL體積之調配物1，且接著將燒瓶加蓋及經由倒置混合。將此過程以總共3個樣品重複。關於調配物2，將約4.17mL添加至100mL之燒瓶中且以鹽水稀釋至100 mL(以1比24稀釋至約1.5mg/mL)。一次性添加全部4.17mL體積之調配物2，且接著將燒瓶加蓋及經由倒置混合。將此過程以總共3個樣品重複。 將燒瓶留置在室溫下。在約5分鐘、10分鐘、30分鐘、1小時、2小時、3小時、16小時、20小時和24小時完成對量瓶的目測外觀評定，且與安慰劑對照組物相比(安慰劑對照物為在鹽水中稀釋的沒有PF-00835231之調配物1及2，如上文所述)。在所有的例子中，在16小時的時間點在含有PF-00835231之量瓶中觀察到粒子，表明在3小時至16小時之間發生沉澱。觀察到安慰劑對照物為澄清的。 該等數據表明純共溶劑與界面活性劑之混合物可顯著地改進PF-00835231之溶解度，賦予目標劑量範圍的低端。然而，由於受到較高濃度的調配物在稀釋後之物理穩定性的限制，因此完全覆蓋劑量範圍是不可能的。因此，評估替代調配物。 調配實施例F5：在CD/水混合物中的PF-00835231溶解度 由於基於共溶劑及界面活性劑之增溶方法有限的成功性，因此評估替代方法。具體地研究以SBE-β-CD和HP-β-CD作為複合劑。 飽和溶解度實驗 PF-00835231之飽和溶解度係在以5mM檸檬酸鹽緩衝劑調整至pH5之具有15mg/mL至100mg/mL之改變的CD濃度之溶液中評估。CD溶液係藉由將2.5mL之50mM檸檬酸鹽緩衝劑(pH5.0)至25mL量瓶中來製備。將以水含量校正之所需量的SBE-β-CD(Carbonate，醫藥級)及HP-β-CD (Roquette，腸胃外級，EP-USP/NF)秤重至量瓶中。將量瓶以純水補足至體積，接著攪拌直到完全溶解，且混合。 秤重約5 mg之水合物形式的PF-00835231且轉移至2 mL微量離心管中。添加1mL之CD溶液且將樣品渦漩。獲得懸浮液且將樣品聲波處理5分鐘。在聲波處理後，將樣品放入經適當標記之打蘭小瓶中且接著保持在25℃烘箱中的輥混合器上48小時。重複此過程，使得以各CD溶液產生兩個樣品。在48小時後觀察樣品。將樣品在離心過濾裝置(0.22 μm PVDF過濾器)中以13,000rpm離心3分鐘。收集過濾物且測量pH，以確認沒有變化，且以HPLC分析樣品的效力。 調配表F7. 來自PF-00835231在25℃下於CD混合物中的飽和溶解度實驗的數據
Figure 02_image021
基於調配表F7中的數據，CD能夠在100 mg/mL之CD濃度下使PF-00835231之溶解度對SBE-β-CD改進至1.5 mg/mL及對HP-β-CD改進至1.9mg/mL。當與0.3mg/mL至13.2mg/mL之PF-00835231的目標輸液濃度範圍相比時，此數據顯示至多100mg/mL之CD可覆蓋目標劑量範圍的低端。 用於室溫輥混合實驗之方法 製備在5mM檸檬酸鹽緩衝劑中的100mg/mL之HP-β-CD溶液。將約5mg之水合物形式的PF-00835231秤重至2mL微量離心管中。將5mM檸檬酸鹽緩衝劑中的1mL之CD溶液添加至2mL微量離心管中。將樣品渦漩，接著放入經適當標記之打蘭小瓶中且保持在25℃烘箱中的輥混合器上48小時。重複此過程，使得以各CD溶液產生兩個樣品。在48小時後觀察樣品且仍有固體剩餘。接著將樣品在離心過濾裝置(0.22μm PVDF過濾器)中以13,000rpm離心3分鐘。收集上清液。測量pH且以PXRD測試殘留固體之固體形式。未檢測出固體形式的變化。以HPLC分析樣品的效力，將結果顯示於調配表F8中(對照物未經聲波處理，在25℃下在輥混合器上48小時)。 延伸之聲波處理實驗 製備在5mM檸檬酸鹽緩衝劑中的100mg/mL之HP-β-CD溶液。將約5mg之水合物形式的PF-00835231秤重至2mL微量離心管中。將5mM檸檬酸鹽緩衝劑中的1mL之CD溶液添加至2mL微量離心管中。將樣品渦漩且接著經聲波處理20分鐘。接著將樣品放入打蘭小瓶中且保持在25℃烘箱中的輥混合器上48小時。重複此過程，使得以各CD溶液產生兩個樣品。在48小時後觀察樣品且有固體存在。接著將樣品在離心過濾裝置(0.22μm PVDF過濾器)中以13,000rpm離心3分鐘。收集過濾物，測量pH以確認沒有變化且以HPLC分析過濾物的效力。將結果顯示於調配表F8中(經聲波處理20分鐘，接著在25℃下在輥混合器上48小時)。 調配表F8. 來自PF-00835231在經由各種製備方法所製備之CD混合物中的飽和溶解度實驗的數據
Figure 02_image023
用於加熱，輥混合器實驗之方法 在5mM檸檬酸鹽緩衝劑中製備100mg/mL之SBE-β-CD溶液及HP-β-CD溶液。將約5mg之水合物形式的PF-00835231秤重至2mL微量離心管中。將5mM檸檬酸鹽緩衝劑中的1mL之CD溶液添加至2mL微量離心管中。將樣品渦漩，接著放入打蘭小瓶中且保持在40℃烘箱中的輥混合器上24小時。接著將樣品放置在25℃烘箱中的輥混合器上48小時。重複此過程，使得以各CD溶液產生兩個樣品。接著將樣品在離心過濾裝置(0.22μm PVDF過濾器)中以13,000rpm離心3分鐘。收集過濾物，測量pH以確認沒有變化且以HPLC分析過濾物的效力。將結果顯示於調配表F8中(在40℃下加熱24小時，接著在25℃下在輥混合器上48小時)。基於調配表F8之溶解度數據，相對於調配表F7，PF-00835231之溶解度實質上不受加熱或聲波處理的影響。 當與0.3mg/mL至13.2mg/mL之PF-00835231的目標輸液濃度範圍相比時，此數據顯示含有至多100mg/mL之CD的調配物僅可覆蓋目標劑量範圍的低端部分。因此，研究CD與其他賦形劑之混合物以查看這是否可進一步改進溶解度，同時降低所需的賦形劑含量。 調配實施例F6：在CD/水混合物與聚合物賦形劑中的PF-00835231溶解度 飽和溶解度實驗 PF-00835231之飽和溶解度係在以5mM檸檬酸鹽緩衝劑調整至pH5之具有固定在15mg/mL之CD濃度的溶液中評估。當一起研究時，不同的聚合物賦形劑效應係基於提高溶解度之文獻報告來研究。 以表8列出之各調配物的10mL之儲備溶液係如下在10 mL量瓶中製備：藉由將1mL之50mM檸檬酸鹽緩衝劑、1 mL之150mg/mL之HP-β-CD儲備溶液與目標量的聚合物賦形劑混合。將儲備溶液以純水稀釋至目標體積。使用下列的聚合物賦形劑：PEG400(Fisher Chemical，NF)、PEG3350 (Spectrum Chemical，USP)、HPMC (Sigma，黏度2600至5600cP)及PVP (Alfa Aesar，分子量8000Da)。 接著將約2.5mg之水合物形式的PF-00835231添加至各調配物的HPLC小瓶中且添加約0.5mL之儲備溶液以產生約5mg/mL之PF-00835231的飽和溶液。將調配物經聲波處理5分鐘且接著在周圍條件下放置在搖動器上約24小時。接著將調配物轉移至具有0.1μm PVDF離心過濾器之離心管中且在13,000rcf下離心3分鐘。收集過濾物且經由HPLC相對於PF-00835231標準物進行分析，以提供PF-00835231之檢定值。 調配表F9. 來自PF-00835231在25℃下以不同的聚合物賦形劑所製備之CD混合物中的飽和溶解度實驗的數據
Figure 02_image025
基於調配表F9中的溶解度數據，PF-00835231之溶解度實質上不受研究之添加賦形劑的影響。因此，基於CD之調配物的臨床應用未因研究之添加劑改進。 調配實施例F7：在以不同的添加順序製備之CD/共溶劑/水混合物中的PF-00835231溶解度 溶解度實驗 PF-00835231之溶解度係在含有乙醇及HP-β-CD之水溶液中研究。約300mg/mL之HP-β-CD儲備溶液係藉由將約6.00g之HP-β-CD(Ashland，醫藥級)粉末秤重至20mL量瓶中且以純水稀釋至體積來製備。將燒瓶加蓋且倒置混合，直到澄清。隨後約15mg/mL之HP-β-CD儲備溶液係藉由將0.5mL之約300mg/mL之HP-β-CD儲備溶液及調整至pH5.0的1mL之約50mM檸檬酸鹽緩衝劑添加至10 mL量瓶中且以純水稀釋至體積來製備。 PF-00835231調配物係在4mL小瓶中藉由先將約8mg之水合物形式的PF-00835231添加至小瓶中來製備。在一個實例中，將約100μL之乙醇(Pharmco-AAPER，ACS/USP級)添加至PF-00835231中，將溶液渦漩，直到溶解，隨後添加3.9mL之約15mg/mL之HP-β-CD儲備溶液。所得調配物具有約15mg/mL之HP-β-CD及2mg/mL之PF-00835231的最終組成物，得到約2.5的CD：PF-00835231之莫耳比及2.5% v/v之共溶劑。在另一實例中，將100μL之乙醇添加至PF-00835231中，將溶液渦漩，直到溶解，且添加3.9 mL之5mM檸檬酸鹽緩衝溶液(pH5.0)。在另一實例中，將3.9mL之15mg/mL之HP-β-CD之儲備溶液添加至PF-00835231中，將溶液渦漩，直到溶解，且添加100μL之乙醇。 將調配物經聲波處理約3分鐘且接著放置在周圍條件下放置在搖動器上約24小時。接著將調配物轉移至具有0.1μm PVDF離心過濾器之離心管中且在13,000rcf下離心3分鐘。收集過濾物且經由HPLC相對於PF-00835231標準物進行分析，以提供PF-00835231之檢定值。 調配表F10. 來自PF-00835231在25℃下在經由不同的添加順序所製備之含有乙醇及HP-β-CD之水性混合物中的溶解度實驗的數據
Figure 02_image027
基於調配表F10中的溶解度數據，若乙醇相對於CD之添加順序顛倒，則PF-00835231之溶解度改進約5倍，自0.4mg/mL至1.9mg/mL。特別地，若將PF-00835231先溶解在乙醇中，隨後以含有CD之溶液稀釋，則此導致改進的溶解度。以目測觀察進一步支持改進的溶解度數據，其顯示具有較低的溶解度之溶液在24小時後具有可見的微粒，而具有較高的溶解度之溶液在24小時後為澄清的。先溶解PF-00835231於乙醇中，隨後不以CD稀釋之對照實驗顯示CD為達成目標溶解度及生產物理上穩定的調配物所必需的。 當調配表F10中的溶解度數據與0.3mg/mL至13.2 mg/mL之PF-00835231的目標輸液濃度範圍相比時，此數據顯示約15mg/mL之HP-β-CD與約2.5% v/v之乙醇可能覆蓋目標劑量範圍的低端，但不足以覆蓋完全的目標劑量範圍。 冷凍-解凍實驗 在溶解度實驗後，將溶液放入-20℃冷凍器中~24小時，移出且放置在室溫下及容許解凍。接著調配物係經由目測檢查來分析。在任何樣品中未觀察到微粒，證明該等調配物對冷凍具有物理穩定性。 調配實施例F8：在以不同的組成製備之CD/共溶劑/水混合物中的PF-00835231溶解度 為了研究PF-00835231之替代的共溶劑組合是否可得到可相比的結果，所以製備額外的調配物。將PF-00835231先溶解在固定體積的一或兩種共溶劑中。隨後將共溶劑混合物與水液組合以生產分別具有約80mg/mL之SBE-β-CD、約3.0% v/v之5mM檸檬酸鹽緩衝劑及約4mg/mL之PF-00835231濃度的醫藥組成物。目標組成物具有約4.2：1的CD：PF-00835231之莫耳比。該等調配物能夠以250mL、500mL或1000 mL投予體積投遞至多1g、2g或4 g劑量之PF-00835231。 特別地，在調配表F11中的各共溶劑組合之10mL儲備溶液係如下在10mL量瓶中製備：通過測量2.5mL之共溶劑1，隨後以共溶劑2稀釋至體積，以製備以體積計約75%之共溶劑1/25%之共溶劑2的儲備溶液。將燒瓶倒置幾次混合且在實驗前放入40℃烘箱中約30分鐘。約300mg/mL之SBE-β-CD儲備溶液係藉由將約3.00g之SBE-β-CD粉末秤重至10mL量瓶中且以純水稀釋至體積來製備。將燒瓶加蓋且倒置混合，直到澄清。 PF-00835231儲備溶液係在2mL HPLC小瓶中藉由先將約20mg之水合物形式的PF-00835231添加至小瓶中，隨後添加約150μL經加熱之共溶劑儲備混合物來製備。接著將溶液渦漩混合~1分鐘。將所得PF-00835231儲備溶液放入40℃之溫控保溫器中，樣品在此旋轉混合。在20分鐘後，當完全溶解時移出溶液。 在單獨的2mL HPLC小瓶中，將調整至pH5.0的0.15 mL之約50mM檸檬酸鹽溶液與0.4mL之300mg/mL之SBE-β-CD儲備溶液混合。隨後將0.905mL之純水添加至小瓶中。在此添加後，接著將45mL之PF-00835231溶液轉移至含有CD之溶液中以產生1.5mL之約4mg/mL之PF-00835231溶液。接著將溶液加蓋且渦漩混合。接著將溶液在周圍條件下放置在搖動器上。 在約1及5天後，移出各調配物的等分試樣用於經由HPLC之檢定。特別地，將150μL之等分試樣添加至具有0.1μm PVDF過濾器之離心過濾器中且在13,000rcf下離心3分鐘。收集過濾物且經由HPLC相對於PF-00835231標準物進行分析，以提供PF-00835231之檢定值，將其記述在調配表F11中。 調配表F11. 經過濾之PF-00835231調配物在5天內之檢定值。檢定值在5天內沒有變化，其反映調配物之物理穩定性。效力未對雜質及水含量進行校正，其導致檢定值低於目標值。所有的調配物係在pH5.0下以80 mg/mL之SBE-β-CD及5mM檸檬酸鹽緩衝劑、4mg/mL之PF-00835231的目標濃度下製備。
Figure 02_image029
調配表F11證明一或多種共溶劑可用於增溶PF-00835231，且隨後可將共溶劑混合物與含有CD之水溶液組合以產生物理上穩定的調配物。在25℃下混合5天後，所有的溶液維持澄清。此外，在1至5天之間觀察到一致的PF-00835231檢定值，在測量的誤差範圍內。在調配表F11中的數據顯示以下列共溶劑製備之調配物可相比的物理穩定性：單獨的DMSO、單獨的PG；乙醇與DMSO、PG、PEG300或PEG400之組合；或DMSO與PEG400之組合。 調配實施例F9：使沉澱減至最少且使溶解度及穩定性達到最大之組合最適化 在調配實施例F8中，發現以PF-00835231溶解在共溶劑中，隨後與含有CD之溶液混合得到改進的溶解度及物理穩定性。在此實驗方法的進一步研究時，PF-00835231在添加至乙醇時(在添加CD前)不一致地自溶液沉澱出來。為了使此實驗方法能有更一致的結果且降低PF-00835231沉澱的可能性，將額外的共溶劑(PEG400)添加至乙醇中。收集來自50種以約10mg/mL至240mg/mL之PF-00835231濃度範圍及0%至100%之相對於乙醇的PEG400之體積分率範圍的不同調配物的數據。 調配物製備 在代表性實驗中，20mL之共溶劑混合物儲備溶液係如下在20mL量瓶中製備：通過測量0mL、2mL、4mL、5mL、10mL、15mL或20mL之乙醇(Pharmco-AAPER，ACS/USP級)，隨後以PEG400 (Fisher Chemical，卡波蠟(Carbowax)，NF級)稀釋至體積，以製備約100%、90%、80%、75%、50%、25%或0%之PEG400的儲備溶液。 在代表性實驗中，約300mg/mL之SBE-β-CD或HP-β-CD儲備溶液係藉由將約6.00g之SBE-β-CD或HP-β-CD粉末秤重至20mL量瓶中且以純水稀釋至體積來製備。將燒瓶加蓋且倒置，直到澄清。 在代表性實驗中，PF-00835231調配物係如下在2 mL HPLC小瓶中製備：藉由先將指定量的PF-00835231水合物形式添加至小瓶中，隨後添加少量的共溶劑儲備混合物，通常為100μL至500μL。接著將溶液以渦漩及/或加熱溶液至40℃溶解，直到溶液以目測為澄清的。若觀察到沉澱，則樣品不再繼續進行。 在單獨的2mL HPLC小瓶中，將調整至pH5.0的100μL之50mM檸檬酸鹽溶液、指定量的300mg/mL之SBE-β-CD或HP-β-CD儲備溶液與指定量的純水混合。接著將共溶劑中的PF-00835231溶液與含有CD之溶液混合。接著將合併的溶液加蓋且渦漩混合。接著將溶液在周圍條件下放置在搖動器上約24小時。接著將調配物轉移至具有0.1μm PVDF離心過濾器之離心管中且在13,000rcf下離心3分鐘。收集過濾物且經由HPLC相對於PF-00835231標準物進行分析，以提供PF-00835231之檢定值。基於在0之數據，可結論出具有高體積分率的乙醇(50%或更大)及高濃度的PF-00835321(大於100mg/mL)之溶液傾向有利於沉澱。因此，為了限制沉澱的可能性及能使PF-00835231在共溶劑混合物中完全增溶，應利用至少50%之PEG400的體積分率，較佳為至少75%之PEG400。在該等條件下，可達成至少200mg/mL之PF-00835231溶解度。另外，溶液在100%之PEG400的體積分率下變得非常黏及緩慢地進行溶解，表明潛在的加工挑戰。 具有不同的共溶劑及CD含量之調配物的溶解度及穩定性 進一步瞭解共溶劑及CD含量對PF-00835231溶解度及物理穩定性的影響，如上述製備具有不同濃度的溶液。將PF-00835231溶解在75%之PEG400對25%之乙醇的固定體積分率的固定體積之共溶劑中。隨後將溶液與水溶液混合以生產具有約5mM檸檬酸鹽緩衝劑及不同濃度的SBE-β-CD或HP-β-CD之醫藥組成物。接著將所有溶液混合約48小時，能夠在室溫下完全平衡，隨後將溶液如上述過濾且經由HPLC相對於PF-00835231標準物進行PF-00835231檢定分析。此數據係基於調配物是否在90%之檢定目標範圍內記述在圖11中。 基於圖11所描述之數據，具有越高的CD對PF-00835321之莫耳比及越低的共溶劑總含量之調配物觀察到越高的物理穩定性。相對於PF-00835231而更多的CD可能有助於有利的複合且因此增溶，而更多的共溶劑破壞複合且抑制增溶。 調配實施例F10：具有80mg/mL之SBE-β-CD、不同的共溶劑含量之PEG400和乙醇及不同的PF-00835231濃度之調配物的溶解度及穩定性 為了研究是否可以較高濃度的PF-00835231製備穩定的溶液，以比調配實施例F7高的CD濃度製備溶液。將PF-00835231溶解在約3：1的PEG400：乙醇之固定體積分率的固定體積之共溶劑中。隨後將溶液與達到約80mg/mL之SBE-β-CD及5 mM檸檬酸鹽緩衝劑的最終濃度之水溶液混合。該等稀釋液得到約1.5%、3.0%、4.5%和6.0% v/v之共溶劑總濃度。目標組成物以2mg/mL、4mg/mL、6mg/mL和8mg/mL之PF-00835231濃度分別具有約8.4：1、4.2：1、2.8：1和2.1：1的CD：PF-0083231之莫耳比。最高濃度調配物能夠以250mL、500mL或1000mL之投予體積投遞至多2g、4g或8g之PF-00835231劑量，儘管較高的投予體積可能受到先例之賦形劑含量的限制。 特別地，10mL之共溶劑儲備溶液係如下在10mL量瓶中製備：通過測量2.5mL之乙醇(Pharmco-AAPER，ACS/USP級)，隨後以PEG400(Fisher Chemical，卡波蠟，NF級)稀釋至體積，以製備以體積計約75%之PEG400/25%之乙醇的儲備溶液。將燒瓶倒置幾次混合且在實驗前放入50℃烘箱中約30分鐘。約300mg/mL之SBE-β-CD儲備溶液係藉由將約3.00g之SBE-β-CD(Carbosynth，醫藥級)粉末秤重至10 mL量瓶中且以純水稀釋至體積來製備。將燒瓶加蓋且倒置混合，直到澄清。 PF-00835231儲備溶液係如下在2mL HPLC小瓶中製備：藉由先將約40 mg之水合物形式的PF-00835231添加至小瓶中，隨後添加約300μL經加熱之共溶劑儲備混合物。接著將溶液渦漩混合~1分鐘。將所得PF-00835231儲備溶液放入50℃之烘箱中且每5分鐘移出，渦漩，直到完全溶解。 在單獨的2mL HPLC小瓶中，將調整至pH5.0的100μL之約50mM檸檬酸鹽溶液與267μL之300mg/mL之SBE-β-CD儲備溶液混合。隨後將對應於2、4、6或8mg/mL之PF-00835231的618μL、603μL、588μL或573μL之純水添加至小瓶中。在此添加後，接著將15、30、45或60mL之PF-00835231溶液轉移至含有CD之溶液中，分別產生1mL之約2mg/mL、4 mg/mL、6mg/mL或8mg/mL之PF-00835231溶液。接著將溶液加蓋且渦漩混合。接著將溶液在周圍條件下放置在搖動器上。 在約1、3和7天後，移出各調配物的等分試樣用於經由HPLC之檢定。特別地，將150μL之等分試樣添加至具有0.1μm PVDF過濾器的離心過濾器中且在13,000rcf下離心3分鐘。收集過濾物且經由HPLC相對於PF-00835231標準物進行分析，以提供PF-00835231之檢定值，將其記述在圖12中。圖12描述在2mg/mL、4mg/mL、6mg/mL和8mg/mL之4種不同的PF-00835231濃度下含有乙醇、PEG400及SBE-β-CD的經過濾之PF-00835231調配物在7天內的檢定值。檢定值在7天內沒有變化，其反映調配物之物理穩定性。效力未對雜質及水含量進行校正，其導致檢定值低於目標值。 當圖12中的溶解度數據(至多8 mg/mL之PF-00835231)與0.2至13.2mg/mL之PF-00835231的目標輸液濃度範圍相比時，此數據顯示約80mg/mL之SBE-β-CD與乙醇和PEG400可能覆蓋幾乎完全的目標濃度範圍。若以目標輸液體積製備，該等醫藥組成物可含有在用於IV投予之藥產物的先例之日劑量水平內的賦形劑。 調配實施例F11：按比例放大的具有80mg/mL之SBE-β-CD、1.1% v/v之乙醇、3.4% v/v之PEG400及6mg/mL之PF-00835231的調配物之化學穩定性及物理穩定性 調配物製備 為了進一步評定以調配實施例F10製備之調配物的強化性，選擇單一調配物按比例放大而用於穩定性研究。特別地，製備具有80mg/mL之SBE-β-CD、4.5% v/v之總共溶劑(1.1% v/v之乙醇、3.4% v/v之PEG400)及6mg/mL之PF-00835231的調配物。目標組成物具有約2.8的CD：PF-00835231之莫耳比。此調配物能夠以250mL、500mL或1000 mL之投予體積投遞1.5g、3g或6g之PF-00835231劑量，儘管較高的投予體積可能受到先例之賦形劑含量的限制。 為了製備此調配物，10mL之共溶劑儲備溶液係如下在10mL量瓶中製備：通過測量2.5mL之乙醇(Pharmco-AAPER，ACS/USP級)，隨後以PEG400 (Fisher Chemical，卡波蠟，NF級)稀釋至體積，以製備以體積計約75%之PEG400/25%之乙醇的儲備溶液。將燒瓶倒置幾次混合且在實驗前放入50℃烘箱中約30分鐘。約300mg/mL之SBE-β-CD儲備溶液係藉由將約3.00g之SBE-β-CD粉末秤重至10 mL量瓶中且以純水稀釋至體積來製備。將燒瓶加蓋且倒置混合，直到澄清。以類似的方式製備額外20mL之300 mg/mL之SBE-β-CD溶液。 在100mL量瓶中，將調整至pH5的10.5mL之約50mM檸檬酸鹽溶液及28mL之300mg/mL之SBE-β-CD儲備溶液混合，隨後以純水稀釋至目標體積。將燒瓶加蓋且倒置混合。這得到水溶液，以其製備具有5 mM檸檬酸鹽緩衝劑及80mg/mL之SBE-β-CD的最終濃度之調配物。 PF-00835231儲備溶液係如下在2mL HPLC小瓶中製備：藉由先將約200mg之水合物形式的PF-00835231添加至小瓶中，隨後添加約1.5mL經加熱之共溶劑儲備混合物。接著將溶液渦漩混合~1分鐘。將所得PF-00835231儲備溶液放入50℃之烘箱中且每5分鐘移出，渦漩，直到完全溶解。 接著將14.29mL之檸檬酸鹽緩衝劑及SBE-β-CD儲備溶液添加至兩個單獨的20mL閃爍小瓶中。在此添加後，接著將0.71mL之PF-00835231儲備溶液轉移至小瓶中以產生15mL之約6mg/mL之PF-00835231。接著將溶液加蓋且渦漩混合。將藥產物溶液經隔夜混合且通過0.2um PVDF過濾器過濾。接著將藥產物溶液的0.5mL之等分試樣填充至4mL小瓶中，加塞、旋緊且放入-20℃、4℃和25℃之溫控室中。 物理穩定性 在1、3、7、16或30天後，移出各調配物之等分試驗用於經由HPLC之檢定及純度測定。特別地，將0.2mL之等分試樣添加至具有0.1μm PVDF過濾器之離心過濾器中且以13,000rcf離心3分鐘。收集過濾物且經由HPLC相對於PF-00835231標準物進行分析，以提供PF-00835231之檢定值。 若所製備之藥產物溶液為超飽和或另外為物理上不穩定的，則預期檢定值會隨著時間下降，因為在HPLC樣品製備期間的過濾步驟應移出任何沉澱的 PF-00835231。此外，若溶液在室溫下超飽和，則暴露於冷藏或冷凍之儲存溫度應誘導沉澱且引起檢定值下降。在-20℃下的檢定值在所測試的7天期間內似乎一致，且在4℃和25℃下的檢定值在所測試的30天期間內似乎一致，如圖中所示。因此，此數據示意溶液在研究的期間內為物理上穩定的。圖13描述以mg/mL計的PF-00835231檢定值係以天計的時間及3種溫度：-20℃(上圖)、4℃(中圖)和25℃(下圖)為函數來繪製。以來自兩個單獨樣品之各條件的數據進行繪製且顯示與數據之線性擬合。數據顯示所有的樣品在研究的期間內一致的檢定值。 摻合物之物理穩定性 為了進一步評定物理穩定性，將藥產物溶液以0.9% w/v之氯化鈉分別稀釋2.5倍和10倍至2.4mg/mL和0.6 mg/mL之濃度。該等稀釋模擬可能的IV投予條件，其中藥產物可製備成投予前稀釋的即用型濃縮物。稀釋實驗亦進一步評定調配物的物理及化學穩定性。 為了製備2.5倍稀釋，將1.6mL經過濾之調配物添加至4mL小瓶中的2.4mL之0.9% w/v之氯化鈉中。為了製備10倍稀釋，將0.4mL經過濾之調配物添加至4mL小瓶中的3.6 mL之0.9% w/v之氯化鈉中。在25℃下0和3天後，移出各調配物之等分試驗用於經由HPLC之檢定及純度測定。特別地，將0.2mL之等分試樣添加至具有0.1μm PVDF過濾器之離心過濾器中且在13,000rcf下離心3分鐘。收集過濾物且經由HPLC相對於PF-00835231標準物進行分析，以提供PF-00835231之檢定值。 當比較沒有稀釋、2.5倍稀釋和10倍稀釋之樣品時，檢定值在3天內為一致的，表明物理穩定性，如調配表F12中所示。另外，PF-00835231之化學穩定性在遍及各稀釋皆為可相比的。 調配表F12. 顯示在25℃下0和3天後沒有稀釋、2.5倍稀釋和10倍稀釋之PF-00835231檢定值及純度。
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調配實施例F12：具有和不具有CD的PF-00835231調配物之化學穩定性 為了研究CD對PF-00835231之化學穩定性的影響，以及不以CD製備溶液。特別地，10mL之溶液係以約1mg/mL之PF-00835231、5% v/v之總共溶劑(2.5% v/v之PEG400、2.5% v/v之乙醇)、5mM檸檬酸鹽緩衝劑及視需要的15mg/mL之SBE-β-CD的最終組成物製備。兩種調配物係在pH4下製備，且2種調配物係在pH5下以具有和不具有CD之溶液製備，以瞭解pH的影響。關於具有CD之調配物，目標組成物具有約3.2的CD：PF-00835231之莫耳比。此調配物能夠以250mL、500mL或1000mL之投予體積投遞0.25g、0.5g或1g之PF-00835231劑量。 特別地，約75mg/mL之SBE-β-CD儲備溶液係藉由將約3.75g之SBE-β-CD粉末秤重至50mL量瓶中且以純水稀釋至體積來製備。將燒瓶加蓋且倒置幾次混合，直到溶液澄清。隨後將20mL之約75mg/mL之SBE-β-CD儲備溶液與pH4或5的10mL之約50mM緩衝劑在100mL量瓶中混合。接著將所得溶液以純水稀釋至目標體積且倒置混合，直到澄清。所得溶液具有約15mg/mL之SBE-β-CD及pH4或5的5mM檸檬酸鹽緩衝劑之最終組成物，pH4和5的5mM檸檬酸鹽緩衝劑係以類似的方式而不以SBE-β-CD製備。 將約10mg之水合物形式的PF-00835231添加至2mL HPLC小瓶中，隨後添加250mL之PEG400 (Fisher Chemical，卡波蠟，NF級)及250mL之乙醇(Pharmco-AAPER，ACS/USP級)。將PF-00835231調配物經聲波處理，直到溶解。 將9.5mL之約15mg/mL之SBE-β-CD儲備溶液或9.5mL之檸檬酸鹽緩衝劑添加至10mL閃爍小瓶中，隨後添加溶解在共溶劑中的PF-00835231。接著將調配物細分且放置在4℃、22℃或40℃下穩定。在約0、1、3和7天後移出等分試樣且經由HPLC檢查純度輪廓。 從此實驗中，所有樣品在4℃下皆未觀察到降解。具有CD之樣品在多輪冷凍及解凍後在物理上為穩定的(亦即沒有微粒形成)，而不具有CD之樣品顯示在解凍後沉澱。在22℃下，觀察到所有樣品降低的色譜純度少於0.5%，在pH4下及SBE-β-CD存在下具有最低的降解。在40℃下觀察到相同的趨勢。因此，此實驗驚訝地證明CD對PF-00835231之化學及物理穩定性兩者提供保護效應。圖14描述在具有CD(虛線)及不具有CD(實線)之溶液中的PF-00835231在pH4 (黑色，空心圓)和pH5 (灰色，實心圓)及40℃(上圖)和22℃(下圖)下的化學穩定性。 參考實施例8：N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}戊基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺 依照用於製備N -((1S )-1-{[((1S) -3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺所述之程序，但是取代N -((1S )-1-{[((1S )-3-氯-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}戊基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺且進行非關鍵的改變以提供粗製黃色泡沫體。將此材料以Biotage MPLC (25M管柱，5至6%之甲醇/氯仿)純化，以供給成為灰白色固體的的82mg(35%)之標題化合物。1 H NMR (DMSO-d6 ) δ 11.57(s, 1H), 8.42(d,J= 8Hz, 1H), 8.38(d,J =4Hz, 1H), 7.62(s, 1H), 7.35(s, 1H), 7.09(t,J =8Hz, 1H), 6.99(d,J =8Hz, 1H), 6.49(d,J =8Hz, 1H), 5.06(t,J =8Hz, 1H), 4.44(m, 2H), 4.25(dd,J =8, 20Hz, 1H), 4.14(dd, J=8, 20Hz, 1H), 3.87(s, 3H), 3.08(m, 2H), 2.28(m, 1H), 2.10(m, 1H), 1.91(m, 1H), 1.74-1.54(m, 4H), 1.32(m, 4H), 0.87(t,J = 8Hz, 3H)；C24 H32 N4 O8 之MS(ESI+)m/z 473.2(M+H)+ ；自C24 H32 N4 O6 •0.6 H2 O &•0.2乙酸乙酯之分析計算值：C, 59.46；H, 7.01；N, 11.18。實測值：C, 53.37；H, 6.94；N, 11.23：C24 H32 N4 O6 +H1之HRMS(ESI+)計算值473.2395，實測值473.2382。 中間物之製備：N -[9H -茀-9-基甲氧基)羰基]-5-甲基-L-正白胺酸甲酯 將甲苯(30mL)添加至甲醇(15 mL)中的N -[(9H -茀-9-基甲氧基)羰基]-5-甲基-L-正白胺酸(2.14g，5.8mmol)之溶液中，隨後逐滴添加TMS-重氮甲烷(2.9 mL，2M 於己烷中，5.8mmol)。TLC分析表明不完全反應且逐滴添加TMS-重氮甲烷，直到黃色持續存在。在此時，將反應以添加AcOH (1 mL)淬滅，隨後在真空中濃縮。將殘餘物以乙酸乙酯/己烷溶析之Biotage快速層析術純化，以供給成為白色固體的標題化合物，2.18g，98%。1 H NMR(400MHz，CDCI3 ) δ 7.76(2H, d,J =7.6Hz), 7.60(2H, dd,J =7.2, 3.9Hz), 7.40(2H, t,J =7.2Hz), 7.31(2H, t,J =7.5Hz), 5.26(1H, dJ= 8.6Hz), 4.31-4.51(3H, m), 4.23(1H, t,J =7.1.Hz), 3.75(3H, s), 1.78-1.93(1H, m), 1.6-1.76(1H, m), 1.45-1.60(1H, m), 1.05-1.34(2H, m), 0.88(d,J =4Hz, 3H), 0.86(d,J =4Hz, 3H)，C23 H27 NO4 之MS(APCI+)m/z 160.1(M-Fmoc+H)+ 。 中間物之製備：N -(三級丁氧基羰基)-5-甲基-L-正白胺酸甲酯 將KF (2.33g，40.04mmol)添加至DMF(50mL)中的N -[(9H -茀-9-基甲氧基)羰基]-5-甲基-L-正白胺酸(2.18g，5.72mmol)之溶液中，隨後添加三乙胺(1.70mL，12.24mmol)及碳酸二-三級丁酯(7.39mmol)，且將混合物在周圍溫度下攪拌。在4小時後，TLC分析表明不完全反應且將反應混合物以KF(2.7g，46.55mmol)及BOC2 O(800mg，3.67mmol)分批處理。在16小時後，將混合物以二乙醚(300mL)稀釋，以飽和NaHCO3 (2 x 50mL)、1M氫氯酸 (2 x 50mL)、NaHCO3 (50mL)、鹽水(50mL)清洗，經MgSO4 乾燥，過濾且在真空中蒸發溶劑，以得到粗製產物，將其以二氯甲烷/己烷溶析之Biotage快速層析術純化，以供給成為澄清油的標題化合物，980mg，66%。1 H NMR (400 MHz，CDCI3 ) δ 4.96(1H, d,J =6.8Hz), 4.21-4.32(1H, m), 3.72 (3H, s) 1.72-1.85(1H, m), 1.46-166(2H, m) 1.43(9H, s), 1.11-1.29 (2H, m) 0.99(d,J =4Hz, 3H), 0.86, (d,J =4Hz, 3H)；C13 H25 NO4 之MS (API-ES+)m/z 282.2 (M+Na)+ 。 中間物之製備：N -(三級丁氧基羰基)-5-甲基-L-正白胺酸酯 將LiOH溶液(預冷卻至5℃)(1M，11.3mL，11.33mmol)添加至0℃下在THF(30mL)中的N -(三級丁氧基羰基)-5-甲基-L-正白胺酸甲酯(980mg，3.78mmol)之溶液中，且將所得混合物在0℃下攪拌1小時，接著容許溫熱至周圍溫度。將反應以1M氫氯酸酸化至p H2且以乙酸乙酯(3 x 60mL)萃取。將合併的有機物以鹽水(100mL)清洗，經MgSO4 乾燥，過濾且在真空中移除溶劑，以得到成為澄清油的標題化合物，990mg，99%。1 H NMR(400MHz，CDCI3 ) δ 4.96 (1H, d,J =7.8Hz), 4.23-4.34(1H, m), 1.75-1.93(2H, m), 1.60 -1.72(1H, m), 1.50-1.59(1H, m), 1.44(9H, s), 1.19-1.30(1H, m), 0.88(d,J =4Hz, 3H), 0.86(d,J =4Hz, 3H)；C12 H23 NO4 之MS(API-ES+)m/z 268.1(M+Na)+ 。 中間物之製備：N 2 -(三級丁氧基羰基)-N 1 -((1S)-3-氯-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)-5-甲基-L-正白胺醯胺 依照用於製備N2 -(三級丁氧基羰基)-N1 -((1S)-3-氯-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基-L-白胺醯胺所述之程序，但是取代N -(三級丁氧基羰基)-5-甲基-L-正白胺酸且進行非關鍵的改變以提供粗製金色油。將此材料以甲醇/二氯甲烷溶析之Biotage快速層析術純化，以供給成為灰白色固體的標題化合物，360mg，41%。1 H NMR(400MHz，DMSO-d6 ) δ 8.45(1H, d,J =8.1Hz), 7.62(1H, s), 7.02(1H, d,J =7.1Hz), 4.49-4.62(2H, m), 4.33-4.44(1H, m), 3.78(1H, m), 3.15(1H, t,J =8.7Hz), 3.00-3.10(1H, M), 2.18-2.30(1H, m), 2.04-2.14(1H, m), 1.92-2.02(1H, M), 1.40 -1.68(5H, m), 1.36(9H, s), 1.05-1.25(2H, m,J =7.3Hz), 0.83 (3H, d,J =1.52Hz), 0.82(3H, d,J =1.52Hz)；C20 H34 N3 O5 CI之MS(API-ES+)m/z 454.2(M+Na)+ 。 參考實施例16：N -((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3,3-二甲基丁基)-1H -吲哚-2-甲醯胺 依照用於製備N- ((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺所述之程序，但是取代N- ((1S)-1-{[((1S)-3-氯-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3,3-二甲基丁基)-1H -吲哚-2-甲醯胺且進行非關鍵的變化以提供粗製黃色泡沫體。將此材料以Biotage MPLC純化(40M管柱，4.5至5.5%之甲醇/氯仿)，以供給成為白色固體的730mg (72%)之標題化合物。1 H NMR(DMSO-d6 ) δ 11.59(s, 1H), 8.49(d,J =8Hz, 1H), 8.43(d,J =8Hz, 1H), 7.62(s, 1H), 7.60(s, 1H), 7.41(d,J =8Hz, 1H), 7.23(s, 1H), 7.17(t,J =8Hz, 1H), 7.02(t,J= 8Hz, 1H), 5.05(t,J =8Hz,, 1H), 4.56(m, 1H), 4.43(m, 1H), 4.25(dd, J=8, 20Hz, 1H), 4.13(dd,J =8, 20Hz, 1H), 3.10(m, 2H), 2.25(m, 1H), 2.07(m, 1H), 1.93(m, 1H), 1.80(m, 1H), 1.64(m, 3H), 0.94(s, 9H)；C24 H32 N4 O5 之MS(ESI+)m/z 457.1(M+H)+ ；C24 H32 N4 O5 •0.2 CHCl3 •0.2乙酸乙酯•0.25H2 O之分析計算值：C, 59.75；H,6.88；N, 11.15。實測值C, 59.67；H, 6.72；N, 11.03；C24 H32 N4 O5 之HRMS(ESI+)計算值457.2446，實測值457.2439。 參考實施例23：N -((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)-N -[(4-甲氧基-1H -吲哚-2-基)羰基]-L-苯基丙胺醯胺 依照用於製備N -((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺所述之程序，但是取代N -((1S)-3-氯-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)-N -[(4-甲氧基-1H -吲哚-2-基)羰基]-L-苯基丙胺醯胺且進行非關鍵的改變以提供粗製綠色膠。將材料以甲醇/二氯甲烷溶析之Biotage快速層析術純化，以供給成為灰白色固體的標題化合物，123mg，44%。1 H NMR(400MHz DMSO-d6 ) δ 11.50(1H, d,J =2.0Hz), 8.58(2H, dd,J =8.2, 3.9Hz), 7.63(1H, s), 7.35-7.43(2H, m), 7.31(1H, d,J =1.8Hz), 7.27 (2H, t,J =7.6Hz), 7.17(1H, t,J =7.3Hz), 7.08(1H, t,J =8.0Hz), 6.98(1H, d,J =8.1Hz), 6.48(1H, d,J =7.8Hz), 5.06(1H, d,J =6.1Hz), 4.72(1H, m), 4.48(1H, m), 4.16(2H, m), 3.89(3H, s), 2.97-3.18(4H, m), 2.24-2.36(1H, m), 2.04-2.18(1H, m), 1.88-2.01(1H, m), 1.55-1.76(2H, m)；C27 H30 N4 O6 之MS(APCI+)m/z 507.1(M+H)+ 。 中間物之製備：N2 -(三級丁氧基羰基)-N1 -((1S)-3-氯-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)-N 2 -甲基-L-白胺醯胺 依照用於製備N2 -(三級丁氧基羰基)-N1 -((1S)-3-氯-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)-L-白胺醯胺所述之程序，但是取代Boc-N-甲基-Leu-OH且進行非關鍵的改變以提供粗製綠色膠。將此材料以甲醇/二氯甲烷溶析之Biotage快速層析術純化，以供給成為橘色泡沫體的標題化合物，2.08 g，46%。1 H NMR(400 MHz DMSO-d6 ) δ 8.54(1H, d,J =7.1Hz), 7.69(1H, d,J =11.1Hz), 4.58(2H, s), 4.48(1H, d,J =11.9Hz), 4.40(1H, s), 3.02-3.22(2H, m), 2.69-2.79(3H, m), 2.14-2.27(1H, m), 2.03-2.14(1H, m), 1.87-2.00(1H, m), 1.48-1.76(4H, m), 1.38(9H, brd,J =5.8Hz), 0.79-0.97(6H, m)。 參考實施例36：乙酸(3S)-3-({N -[(4-甲氧基-1H -吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯 將乙酸(27mg，0.46mmol)裝入具有旋轉棒的經烘箱乾燥之40mL閃爍小瓶中，隨後裝入在DMF (3.5mL)中的N -((1S)-1-{[((1S)-3-氯-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺(172mg，0.35mmol)之溶液且以N2 吹洗。接著將此淡黃色溶液以 CsF (122mg，0.81mmol)處理，以內襯特夫綸(Teflon)之旋轉蓋密封且在劇烈攪拌的反應塊上以65℃加熱。在3小時後，將反應冷卻至RT，以水(30mL)稀釋且以二氯甲烷(4 x 7mL)萃取。將合併的有機層以水(2 x 20 mL)、鹽水(20 mL)清洗且在真空中濃縮。將此材料以Biotage MPLC純化(25M，2.5至4.5%之甲醇/二氯甲烷)，以供給成為白色固體的78 mg (45%)之標題化合物。1 H NMR(400 MHz，DMSO-d6 ) δ 11.57(s, 1H), 8.57(d,J =7.8Hz, 1H), 8.43(d,J =7.6H z, 1H), 7.64(s, 1H), 7.36(d,J =1.8Hz, 1H), 7.08(t,J =8.0Hz, 1H), 6.99(d,J =8.1Hz, 1H), 6.49(d,J =7.6H z, 1H), 4.83(d,J =3.0Hz, 1H), 4.76-4.95(m, 1H), 4.35-4.50(m, 2H), 3.87(s, 3H), 3.03-3.17(m, 2H), 2.22-2.35(m, 1H), 2.09-2.22(m, 1H), 2.07(s, 3H), 1.90-2.04(m, 1H), 1.65-1.77(m, 2H), 1.48-1.65(m, 3H), 0.94(d,J =6.3Hz, 3H), 0.89(d,J =6.3Hz, 3H)；C26 H34 N4 O7 之MS(ESI+)m/z 515.2(M+H)+ 。 參考實施例37：環丙烷羧酸(3S)-3-({N-[(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯 依照用於製備乙酸(3S)-3-({N -[(4-甲氧基-1H -吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯所述之程序，但是取代環丙烷羧酸且進行非關鍵的變化以提供粗製產物。將此材料以Biotage MPLC純化(25M，2.5至4.5%之甲醇/二氯甲烷)，以供給82mg (43%)之標題化合物。1 H NMR(400 MHz，DMSO-d6 ) δ 11.57(d,J =2.0Hz, 1H), 8.56(d,J =7.8Hz, 1H), 8.43(d,J =7.6Hz, 1H), 7.63(s, 1H), 7.36(d,J =1.5Hz, 1H), 7.08(t,J =8.0Hz, 1H), 6.97-7.02(m, 1H), 6.49(d,J =7.6Hz, 1H), 4.85 (d, 1H), 4.78-4.96(m, 1H), 4.33-4.51(m, 2H), 3.87(s, 3H), 3.02 -3.16(m, 2H), 2.22-2.35(m, 1H), 2.01-2.11(m, 1H), 1.89-2.00(m, 1H), 1.65-1.77(m, 3H), 1.46-1.65(m, 3H), 0.81-0.98(m, 10H)；C28 H36 N4 O7 之MS(ESI+)m/z 541.2(M+H)+ 。 參考實施例39：2,6-二氯苯甲酸(3S)-3-({4-甲基-N-[(2R)-四氫呋喃-2-基羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯 依照用於製備乙酸(3S)-3-({N -[(4-甲氧基-1H -吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯所述之程序，但是取代N1 -((1S)-3-氯-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)-4-甲基-N2 -[(2R )-四氫呋喃-2-基羰基]-L-白胺醯胺和2,6-二氯苯甲酸且進行非關鍵的變化以提供淺琥珀色殘餘物。將殘餘物以含有0.1%之AcOH的水中的含有0.1%之AcOH的MeCN梯度溶析之製備性HPLC (Luna 10μ C18)純化，以給出成為奶油色固體的0.155g(54%)之標題化合物。1 H NMR(300MHz，DMSO-d6 ) δ 8.52(d,J= 8Hz, 1H), 7.79(d,J= 8Hz, 1H), 7.71(s, 1H), 7.66-7.55(m, 3H), 5.18(s, 2H), 4.54-4.40(m, 1H), 4.37-4.35(m, 1H), 4.25(m, 1H), 3.98-3.91(m, 1H), 3.84-3.72(m, 1H), 3.23-3.07(m, 2H), 2.33-2.23(m, 1H), 2.16-2.05(m, 2H), 1.86-1.74(m, 3H),1.72-1.62(m, 5H), 0.89(s, 9H)；C27 H35 Cl2 N3 O7 之MS(ESI+)m/z 584(M+H)。C27 H35 Cl2 N3 O7 •0.5H2 O之分析計算值：C, 54.64；H, 6.11；N, 7.08。實測值：C, 54.26；H, 6.00；N, 6.87。C27 H35 Cl2 N3 O7 +H1之HRMS(ESI+)計算值584.1925，實測值：584.1921。 化合物N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環丙基-1-側氧丙-2-基)甲吡啶醯胺；N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環戊基-1-側氧丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；及N-((S)-2-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-1-環戊基-2-側氧乙基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺係以類似於那些上文所提出和WO2005/113580中所述之其他化合物及如下文所述的方式製備。N -(三級丁氧基羰基)-3-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]-L-丙胺酸之製備 將水(120mL)中的NaOH(14g，350mmol)之溶液緩慢地添加至冷卻至0℃之甲醇(100mL)中的N -(三級丁氧基羰基)-3-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]-L-丙胺酸甲酯(根據PCT國際申請公開案WO 01/14329 A1，文中的化合物3，流程9製備)(20g，70mmol)之溶液中。將混合物在0℃下攪拌1h且在真空中濃縮，保持溫度低於25℃，直到產物之鈉鹽沉澱。將混合物以冰浴冷卻經濃縮之HCl水溶液中和至pH5且以1N HCl水溶液進一步酸化至pH1。將混合物以乙酸乙酯萃取3次。將合併的有機相以鹽水清洗，經MgSO4 乾燥，過濾，在真空中濃縮且在高真空下經隔夜進一步乾燥，以給出所欲酸(19 g，100%之產率)。1 H NMR(400 MHz，CD3 OD) δ 4.12(m, 1H), 3.33(m, 2H), 2.48(m, 1H), 2.35(m, 1H), 2.08(m, 1H), 1.81(m, 2H), 1.44(s, 9H)。 ((1S )-2-[甲氧基(甲基)胺基]-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}乙基)胺甲酸三級丁酯之製備 將N,O -二甲基羥胺鹽酸鹽(6.97g，70mmol)、N -甲基嗎啉(26.9mL，24.78g，245mmol)及羥基苯并三唑水合物(9.46g，70mmol)添加至二氯甲烷(150mL)中的N -(三級丁氧基羰基)-3-[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]-L-丙胺酸(19g，70mmol)之溶液中。將混合物冷卻至0℃且添加固體的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二醯亞胺鹽酸鹽(16.1g，84mmol)。將混合物在0℃下攪拌4h且將150mL之 1N HCl水溶液添加至其中。將有機相與水相分開。將水層以二氯甲烷(1 x 200mL)萃取。將合併的有機層經Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮。將殘餘物以快速管柱層析術純化(以二氯甲烷中的6至10%之甲醇溶析)，以提供成為白色固體的所欲產物(17g，77%之產率)。1 H NMR(400MHz，CDCl3 ) δ 6.00(bs, 1H), 5.41(d,J =8.6 Hz, 1H), 4.68(d,J =8.9 Hz, 1H), 3.78(s, 3H), 3.35(m, 2H), 3.21(s, 3H), 2.50(m, 2H), 2.11(t,J =10.8 Hz), 1.84(m, 1H), 1.68(m, 1H), 1.43(s, 9H)。LCMS ESI(M+Na+ )：338.1。N -{(1S )-1-環戊基-2-[((1S )-2-[甲氧基(甲基)胺基]-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}乙基)胺基]-2-側氧乙基}-4-甲氧基-1H-吲哚甲醯胺之製備 將1,4-二㗁烷中的4.0M HCl(~10當量)添加至無水1,4-二㗁烷中的((1S )-2-[甲氧基(甲基)胺基]-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}乙基)胺甲酸三級丁酯(473 mg，1.5mmol)之溶液中。將混合物在室溫下攪拌隔夜且在真空中濃縮，以得到成為白色泡沫體的去保護之胺的HCl鹽。將胺溶解在二氯甲烷及N -甲基嗎啉(~4當量)中，將N -Boc-L-環戊基甘胺酸(~1當量)、羥基苯并三唑(~1當量)及1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二醯亞胺鹽酸鹽(~1.2當量)添加至此溶液中。將混合物在周圍溫度下攪拌1h且倒入1N水性HCl中。將有機相以1N水性HCl清洗，經Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮。將殘餘物以快速層析術純化，以提供((1S)-1-環戊基-2-(((2S)-1-(甲氧基(甲基)胺基)-1-側氧基-3-(2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-2-側氧乙基)胺甲酸三級丁酯。接著將((1S)-1-環戊基-2-(((2S)-1-(甲氧基(甲基)胺基)-1-側氧基-3-(2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-2-側氧乙基)胺甲酸三級丁酯之Boc保護基以酸催化之去保護作用(諸如以二㗁烷中的HCl)移除，在整理後，其提供胺，(2S)-2-((S)-2-胺基-2-環戊基乙醯胺基)-N-甲氧基-N-甲基-3-(2-側氧吡咯啶-3-基)丙醯胺。接著將(2S)-2-((S)-2-胺基-2-環戊基乙醯胺基)-N-甲氧基-N-甲基-3-(2-側氧吡咯啶-3-基)丙醯胺與4-甲氧基-1H-吲哚-2-羧酸在N -甲基嗎啉及二氯甲烷中的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二醯亞胺鹽酸鹽(~1.2當量)、二甲基胺基吡啶(DMAP)存在下偶合。獲得成為白色固體的所欲化合物N -{(1S )-1-環戊基-2-[((1S )-2-[甲氧基(甲基)胺基]-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}乙基)胺基]-2-側氧乙基}-4-甲氧基-1H-吲哚甲醯胺(699mg，90%之產率)。1 H NMR(300 MHz，CDCl3 ) δ 10.79(s, 1H), 8.53(bs, 1H), 7.15(t,J =7.9 Hz, 1H), 7.09(d,J =1.7 Hz, 1H), 7.04(d,J =8.3 Hz, 1H), 6.94(d,J =9 Hz, 1H), 6.48(d,J =7.6 Hz, 1H), 6.39(bs, 1H), 5.18-5.05(m, 2H), 3.95(s, 3H), 3.83(s, 3H), 3.30(s, 3H), 3.13(m, 2H), 2.50-2.25(m, 3H), 2.15(m, 1H), 1.75-1.40(m, 10H)。LCMS ESI(M+H+ ) 514.2,(M+Na+ ) 536.2。N -{(1S )-2-[((1S )-2-(1,3-苯并噻唑-2-基)-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}乙基)胺基]-1-環戊基-2-側氧乙基}-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺之製備 將正丁基鋰(2.5M於己烷中，2.20mL，5.50mmol)緩慢地添加至-78℃下在無水四氫呋喃中的苯并噻唑(0.597 mL，5.50mmol)之溶液中，將混合物在-78℃下攪拌30分鐘，將無水四氫呋喃中的N -{(1S )-1-環戊基-2-[((1S )-2-[甲氧基(甲基)胺基]-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}乙基)胺基]-2-側氧乙基}-4-甲氧基-1H-吲哚甲醯胺(257 mg，0.50mmol)之溶液添加至此混合物中。將所得混合物在-78℃下攪拌2h且以飽和水性氯化銨淬滅。容許混合物冷卻至室溫，接著倒入乙酸乙酯及水中。將有機層分開，以水及接著以鹽水清洗，經Na2 SO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮。將殘餘物以二氯甲烷中的1至5%之甲醇梯度溶析之快速管柱層析術純化，以提供成為淡黃色固體的所欲化合物(219mg，74%之產率)。1 HNMR(300MHz，DMSO-d 6 ) δ 11.57(s, 1H), 8.75-9.02(m, 1H), 7.53-7.80(m, 3H), 7.35(s, 1H), 6.83-7.20(m, 2H), 6.38-6.59(m, 1H), 5.39-5.66(m, 1H), 4.14-4.64(m, 1H), 3.87(s, 3H), 2.91-3.26(m, 2H), 1.96-2.37(m, 3H), 1.65-1.99(m, 3H), 1.13-1.66(m, 8H)。C31 H33 N5 O5 S· 0.3CH2 Cl2 之分析計算值：C, 61.31；H, 5.52；N, 11.42；實測值：C, 61.18；H, 5.59；N, 11.29。LCMS ESI(M+H+ ): 588.20。 3-環戊基-N -[(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)羰基]-L-丙胺醯基-N1 -甲氧基-N1 -甲基-3-[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]-L-丙胺醯胺之製備 此材料係以類似於N -{(1S )-1-環戊基-2-[((1S )-2-[甲氧基(甲基)胺基]-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}乙基)胺基]-2-側氧乙基}-4-甲氧基-1H-吲哚甲醯胺(如上文所述)的方式，自((1S )-2-[甲氧基(甲基)胺基]-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}乙基)胺甲酸三級丁酯(268mg，0.85mmol)開始製備，除了使用Boc-β-環戊基-L-丙胺酸(200mg，0.777mmol)代替N -Boc-L-環戊基甘胺酸以外，以給出成為白色固體的所欲化合物(287mg，70%之產率)。1 H NMR(400 MHz，CDCl3 ) δ 10.01(bs, 1H), 8.05 (bs, 1H), 7.17(t,J =8.1 Hz, 1H), 7.08(d,J =1.5 Hz, 1H), 7.03 (t,J =8.3 Hz, 1H), 6.84(d,J =8 Hz, 1H), 6.49(d,J =7.6 Hz, 1H), 5.95(bs, 1H), 5.03(m, 1H), 4.93(m, 1H), 3.95(s, 3H), 3.82(s, 3H), 3.26(s, 3H), 3.22(m, 2H) 2.43(m, 2H), 2.17(m, 1H), 1.95-1.70(m, 8H), 1.60-1.40(m, 3H), 1.14(m, 2H)。LCMS ESI(M+H+ ) 528.2,(M+Na+ ) 550.2。N -{(1S )-2-[((1S )-2-(1,3-苯并噻唑-2-基)-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}乙基)胺基]-1-(環戊基甲基)-2-側氧乙基}-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺之製備 標題化合物係以類似於上述用於N -{(1S )-2-[((1S )-2-(1,3-苯并噻唑-2-基)-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}乙基)胺基]-1-環戊基-2-側氧乙基}-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺之方式，自苯并噻唑(928mg，6.86mmol)、正丁基鋰(2.5M於己烷中，2.74mL，6.86mmol)及3-環戊基-N -[(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)羰基]-L-丙胺醯基-N1 -甲氧基-N1 -甲基-3-[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]-L-丙胺醯胺 (181 mg，0.34 mmol)製備，以給出成為灰白色固體的所欲標題化合物(105 mg，51%之產率)。1 H NMR(400MHz，CDCl3 ) δ 9.45(s, 1H), 8.52(d, J=7 Hz, 1H), 8.08(m, 1H), 7.97(m, 1H), 7.51(m, 2H), 7.18(m, 1H), 7.09(d,J =1.5 Hz, 1H), 7.00(d,J =8.4 Hz, 1H),  6.89(d,J =8 Hz, 1H), 6.49(d,J =7.8 Hz, 1H), 6.00(s, 1H), 5.73(m, 1H), 4.84(m, 1H), 3.94(s, 3H), 3.33(m, 2H), 2.66(m, 1H), 2.51(m, 1H), 2.22(m, 2H), 2.05-1.80(m, 7H), 1.60-1.45(m, 3H), 1.17(m, 2H)。LCMS ESI(M+H+ ) 602.1,(M+Na+ ) 624.1。 3-環丙基-N -(吡啶e-2-基羰基)-L-丙胺醯基-N1 -甲氧基-N1 -甲基-3-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]-L-丙胺醯胺之製備 將((1S )-2-[甲氧基(甲基)胺基]-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}乙基)胺甲酸三級丁酯使用二㗁烷中的HCl去保護，如上文所述，且將所得胺以類似於上述方法與Boc-β-環丙基-L-丙胺酸使用在二氯甲烷中的羥基苯并三唑(~1當量)及1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二醯亞胺鹽酸鹽(~1.2當量)及N -甲基嗎啉偶合，以提供N -(三級丁氧基羰基)-3-環丙基-L-丙胺醯基-N1 -甲氧基-N1 -甲基-3-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]-L-丙胺醯胺。移除(以二㗁烷中的HCl)N -(三級丁氧基羰基)-3-環丙基-L-丙胺醯基-N1 -甲氧基-N1 -甲基-3-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]-L-丙胺醯胺(426.5mg，1.0mmol)之Boc基團，且將所得胺與吡啶-2-羧酸(129mg，1.05mmol)在二氯甲烷(5mL)中的1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二醯亞胺鹽酸鹽(201mg，1.05mmol)、N,N-二甲基胺基吡啶(12mg，0.1mmol)、N-甲基嗎啉(0.55 mL，5.0mmol)存在下偶合，以給出成為白色固體的所欲化合物(272mg，63%之產率)。1H NMR(400MHz，CDCl3 ) δ 8.65(d,J =8 Hz, 1H), 8.58(d,J =1.6 Hz, 1H), 8.17(d,J =7.8 Hz, 1H), 7.84(td,J =7.7, 1.7 Hz, 1H), 7.45-7.41(m, 2H), 5.70(s, 1H), 4.97(m, 1H), 4.74(m, 1H), 3.81(s, 3H), 3.30(m, 2H), 3.20(s, 3H), 2.46(m, 2H), 2.18(m, 1H), 1.88-1.73(m, 4H), 0.85(m, 1H), 0.50(m, 2H), 0.17(m, 2H)。LCMS ESI(M+H+ ) 432.1,(M+Na+ ) 454.1。N -[(1S )-2-[((1S )-2-(1,3-苯并噻唑-2-基)-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}乙基)胺基]-1-(環丙基甲基)-2-側氧乙基]吡啶-2-甲醯胺之製備 標題化合物係以類似於N -{(1S )-2-[((1S )-2-(1,3-苯并噻唑-2-基)-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}乙基)胺基]-1-環戊基-2-側氧乙基}-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺的方式(上述)自苯并噻唑(669mg，4.95mmol)、正丁基鋰(2.5 M於己烷中，1.98mL，4.95mmol)及3-環丙基-N -(吡啶-2-基羰基)-L-丙胺醯基-N1 -甲氧基-N1 -甲基-3-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]-L-丙胺醯胺(178mg，0.41mmol)開始製備，以給出成為白色固體的所欲化合物(123mg，59%之產率)。1H NMR(400MHz，CDCl3 ) δ 8.68(d,J =8.3Hz, 1H), 8.58(d,J =4Hz, 1H), 8.29(d,J =6.8Hz, 1H), 8.15(d,J =7.8Hz, 1H), 8.11-8.09(m, 1H), 7.99-7.97(m, 1H), 7.82(td, J=7.7,1.8 Hz, 1H), 7.54(m, 2H), 7.42(m, 1H), 5.77(m, 1H), 5.71(bs, 1H), 4.81(m, 1H), 3.38(m, 2H), 2.61(m, 2H), 2.29-2.14(m,2H), 2.04(m,1H), 1.90-1.80(m, 2H), 0.87(m, 1H), 0.51(m, 2H), 0.19(m, 2H)。LCMS ESI(M+H+ ) 506.1, (M+Na+ ) 528.1。 化合物菲立布韋(filibuvir)，(2R )-2-環戊基-2-[2-(2,6-二乙基吡啶-4-基)乙基]-5-[(5,7-二甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)甲基]-4-羥基-3H -吡喃-6-酮(HCV聚合酶抑制劑)之合成說明於三篇連續的發表中。第I部分，參見：R. A. Singer等人之Org. Process Res. Dev. 2014, 18, 26。第II部分，參見：Z. Peng, J. A. Ragan等人之Org. Process Res. Dev. 2014, 18, 36。菲立布韋之發現合成，參見：H. Li等人之J. Med. Chem. 2009, 52, 1255。 奈非那韋(Nelfinivir)，(3S ,4aS ,8aS )-N -三級丁基-2-[(2R ,3R )-2-羥基-3-[(3-羥基-2-甲基苯甲醯基)胺基]-4-苯基硫烷基丁基]-3,4,4a ,5,6,7,8,8a -八氫-1H -異喹啉-3-甲醯胺，抗反轉錄病毒蛋白酶抑制劑可根據B.A. Dressman等人之WO 9509843；及US 5484926 (1995、1996，兩者皆頒予Agouron)中所述之方法製備。 蘆平曲韋(Ruprintrivir)可如美國專利6,995,142的實施例17及以Dragovich, P.S.等人之Structure-based design, synthesis, and biological evaluation of irreversible human rhinovirus 3C protease inhibitors. 3. Structure-activity studies of ketomethylene-containing peptidomimetics. J Med Chem, 1999, 42: 1203–1212；及in Lin, D.等人之Improved synthesis of rupintrivir; Science China Chemistry, June 2012 Vol.55 No.6: 1101–1107 doi: 10.1007/s11426-011-4478-5所述方式製備。 (R)-3-((2S,3S)-2-羥基-3-{[1-(3-羥基-2-甲基-苯基)-甲醯基]-胺基}-4-苯基-丁醯基)-5,5-二甲基-噻唑啶-4-羧酸烯丙基醯胺可根據美國專利第6,953,858號和第7,169932號，以及WO 2005/054214和WO 2005/054187中所述之方法製備。 對接實驗(Docking Experiment) 方法： 同源性建模。在SARS及COVID-19中的3C樣蛋白酶之序列可在來自RCSB (例如3IWM)1 及NCBI (例如參考序列：YP_009725301.1NCBI)2 之參考文獻中發現。 SARS 3C蛋白酶序列(PDB 3IWM)：
Figure 02_image033
新的武漢冠狀病毒SARS-CoV-2序列(相同的區段)：
Figure 02_image035
同源性模式係使用Schrödinger’s PRIME3 自輝瑞數據庫中的SARS 3C樣蛋白酶之晶體結構建立。在檢查具有該等配體部分的其他SARS 3C樣晶體結構之蛋白質構形後，使用與配體複合的同源性模式之最小化來移除與含有苯並噻唑酮或苯甲基側鏈之配體的衝突。在185至190環、His41及Met49中的殘基鬆弛導致同源性模式之三種不同的最小化型式。催化性Cys突變成Gly (C145G)以促進AGDOCK5 核心對接及隨後的評分，而不與催化性Cys衝突。 對接：將九種(9)化合物使用核心對接4 與AGDOCK5 對接至同源性模式中。執行對接而不形成蛋白質-配體共價鍵。反而，在配體中鑑定出包括內醯胺側鏈及反應性酮之共同核心，且將其固定在晶體結構方向上，作為共價對接之模擬(參見圖2)。AGDOCK核心對接之親和力測量為HT Score6 。 方法參考：
Figure 02_image037
結果： 同源性模式：在SARS-CoV與SARS-CoV-2之間的序列同源性係介於96.1%。在306個殘基中有12個不同的殘基(在圖1中突顯的T35V、A46S、S65N、L86V、R88K、S94A、H134F、K180N、L202V、A267S、T285A & I286L)轉譯成96.1%之同一性。 與用於建構同源性模式之晶體結構相關聯的配體為化合物B，N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺。與化合物B，N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺最接近之胺基酸殘基(其在SARS 3C樣蛋白酶與SARS-CoV-2 3C樣蛋白酶模式之間不同)為A46S，且自Cα 至配體的最小距離為8.3Å。其他殘基係介於自化合物B中最接近的原子起11Å與38Å之間。 表1. 自SARS-CoV-2中的Cα 原子至化合物B，N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺的近似距離
Figure 02_image039
圖1. 圖1描述在SARS-CoV與SARS-CoV-2之間的殘基差異。殘基變化的位置係以SARS-CoV-2同源性模式之此條紋描述中的灰色球表示。化合物B，N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺的位置(左上側)係以棒狀格式顯示。在SARS-CoV-2胺基酸殘基之Cα與化合物B，N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺中最接近的原子之間的近似距離係顯示於以上表1中。 對接結果： SARS-CoV-2 3CL與SARS-CoV 3CL的約96%之同源性及在配體之間的相似性容許比較在SARS-CoV中的xtal配體(參見圖2)與SARS-CoV-2 3CL模式中的對接配體之肽主鏈之間的RMSD。核心對接配體RMSD與肽主鏈的差異不超過0.32Å(平均0.28Å)。參見圖2的實例。在化合物B，N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺的例子中，整個分子之RMSD為0.37 Å。 圖2.具有核心對接配體(化合物B，N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺)存在之SARS-CoV-2 3CL的同源性模式之結合位點。使用化合物B，N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺之晶體結構的一部分(肽主鏈、內醯胺側鏈及附著之酮)測量不同的配體至主鏈的RMSD(灰碳色，粗條)。用於核心對接之核心係以球體表示(淺碳色)及嵌入化學結構中的11個重原子顯示。距離係以埃顯示。 在以下表2中的對接結果表明幾種化合物具有通常與目標識別及結合相稱的預測之親和力(ΔG結合 ，kcal/mol)。用於估計ΔG之方法為HTS評分功能。6 有效的效力可取決於幾個因素(諸如細胞攝取、外排、輔因子競爭或受質競爭)而與ΔG結合條件不同。 表2：
化合物 預測之ΔG結合 (kcal/mol) 對接之化合物的化學名稱
A -8.9 2,6-二氯苯甲酸(3S)-3-({4-甲基-N-[(2R)-四氫呋喃-2-基羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯
B -9.5 N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺
C -10 環丙烷羧酸(3S)-3-({N-[(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯
D -9.4 N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}戊基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺
E -10 N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3,3-二甲基丁基)-1H-吲哚-2-甲醯胺
F -10.1 N-((S)-2-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-1-環戊基-2-側氧乙基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺
G -10.4 N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環戊基-1-側氧丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺
H -7.8 N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環丙基-1-側氧丙-2-基)甲吡啶醯胺
I -9.8 N-((S)-1-(((S)-4-羥基-3-側氧基-1-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丁-2-基)胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺
圖3.在與對比SARS的基於FRET之IC50值相比的預測之ΔG COVID-19 (HT)之間的擬合。有0.35之R-sq且9種化合物之擬合對在90%之信賴水平下為顯著的(在95%之信賴水平下為不顯著的)。 上述化合物係以FRET生化檢定法及試管內病毒學檢定法使用細胞培養技術分析。 防止SARS感染：中性紅終點 化合物保護細胞免於SARS冠狀病毒感染的能力係以細胞生存力檢定法測量，其類似於Borenfreund, E.和Puerner, J.之1985. Toxicity determinedin vitro by morphological alterations and neutral red absorption Toxicology Letters. 24:119-124中所述，其係利用中性紅染色作為終點。簡言之，將含有適當濃度的化合物之培養基或僅培養基添加至 Vero細胞中。將細胞以SARS相關病毒感染或僅以培養基模擬感染。在一至七天後，移出培養基且將含有中性紅之培養基添加至測試盤中。在37℃下培育兩小時後，將細胞以PBS清洗兩次且添加50%之EtOH、1%之乙酸溶液。將細胞搖動1至2分鐘且在37℃下培育5至10分鐘。將中性紅的量以分光光度方式在540nm下量化。數據係以經化合物處理之細胞的孔中之中性紅與未經感染、無化合物之細胞的孔中之中性紅相比的百分比表示。50%之有效濃度(EC50)係以經感染、經化合物處理之細胞中的中性紅產量百分比增加至未經感染、無化合物之細胞中的中性紅產量百分比的50%之化合物濃度計算。50%之細胞毒性濃度(CC50)係以未經感染、經化合物處理之細胞中產生之中性紅百分比降低至未經感染、無化合物之細胞中產出之中性紅百分比的50%之化合物濃度計算。治療指數係以細胞毒性(CC50)除以抗病毒活性(EC50)來計算。 防止SARS-CoV-2感染：Glo終點 化合物保護細胞免於SARS-CoV-2冠狀病毒感染的能力係以細胞生存力檢定法測量，其係利用螢光素酶測量作為終點的細胞內ATP。簡言之，將含有適當濃度的化合物之培養基或僅培養基添加至Vero細胞中。將細胞以SARS-CoV-2病毒感染或僅以培養基模擬感染。在一至七天後，移出培養基，且細胞內ATP的量係依照Promega Technical Bulletin No. 288: CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay (Promega，Madison, WI)測量。將CellTiter-Glo®試劑添加至試驗盤中，且在37℃下培育1.25小時後，將信號量使用光亮度計在490nm下量化。數據係以經化合物處理之細胞的孔中之發光信號與未經感染、無化合物之細胞的孔中之發光信號相比的百分比表示。50%之有效濃度(EC50)係以經感染、經化合物處理之細胞的發光信號百分比增加至未經感染、無化合物之細胞的發光信號之50%的化合物濃度計算。50%之細胞毒性濃度(CC50)係以未經感染、經化合物處理之細胞的發光信號百分比降低至未經感染、無化合物之細胞的發光信號之50%的化合物濃度計算。治療指數係以細胞毒性(CC50)除以抗病毒活性(EC50)來計算。 細胞毒性 化合物引起細胞中之細胞毒性的能力係以細胞生存力檢定法測量，其類似於Weislow, O.S., Kiser, R., Fine, D.L., Bader, J., Shoemaker, R.H.和Boyd, M. R.之1989. New Soluble-Formazan Assay for HIV-1 Cytopathic Effects: Application to High-Flux Screening of Synthetic and Natural Products for AIDS-Antiviral Activity. Journal of the National Cancer Institute 81(08): 577-586中所述，其係利用甲䐶(formazan)作為終點。簡言之，將Vero細胞懸浮於含有適當濃度的化合物之培養基或僅培養基中。在一至七天後，將XTT及PMS添加至試驗盤中，且在37℃下培育兩小時後，將產出之甲䐶量以分光光度方式在540nm下量化。數據係以經化合物處理之細胞中產出之甲䐶與無化合物之細胞的孔中產出之甲䐶相比的百分比表示。50%之細胞毒性濃度(CC50)係以未經感染、經化合物處理之細胞中產出之甲䐶百分比降低至未經感染、無化合物之細胞中產出之甲䐶百分比的50%之化合物濃度計算。 防止SARS-CoV-2冠狀病毒感染 化合物保護細胞免於SARS-CoV-2感染的能力係以細胞生存力檢定法測量，其類似於Weislow, O.S., Kiser, R., Fine, D.L., Bader, J., Shoemaker, R.H.和Boyd, M.R.之1989. New Soluble-Formazan Assay for HIV-1 Cytopathic Effects: Application to High-Flux Screening of Synthetic and Natural Products for AIDS-Antiviral Activity. Journal of the National Cancer Institute 81(08): 577-586中所述，其係利用甲䐶作為終點。簡言之，將含有適當濃度的化合物之培養基或僅培養基添加至MRC-5細胞中。將細胞以人類冠狀病毒SARS-CoV-2感染或僅以培養基模擬感染。在一至七天後，將XTI及PMS添加至試驗盤中，且在37℃下培育兩小時後，將產出之甲䐶量以分光光度方式在540nm下量化。數據係以經化合物處理之細胞的孔中之甲䐶與未經感染、無化合物之細胞的孔中之甲䐶相比的百分比表示。50%之有效濃度(EC50)係以經感染、經化合物處理之細胞中的甲䐶產量百分比增加至以未經感染、無化合物之細胞中的甲䐶產量百分比的50%之化合物濃度計算。50%之細胞毒性濃度(CC50)係以未經感染、經化合物處理之細胞中產出之甲䐶百分比降低至未經感染、無化合物之細胞中產出之甲䐶百分比的50%之化合物濃度計算。治療指數係以細胞毒性(CC50)除以抗病毒活性(EC50)來計算。 SARS-CoV-2冠狀病毒3C蛋白酶FRET檢定法及分析 SARS-CoV-2冠狀病毒3CL蛋白酶之蛋白分解活性係使用連續螢光共振能量轉移檢定法測量。SARS-CoV-2 3CLpro FRET檢定法測量TAMRA-SITSAVLQSGFRKMK-(DABCYL)-OH至TAMRA–SITSAVLQ及SGFRKMK(DABCYL)-OH之蛋白酶催化切割。經切割之TAMRA肽之螢光(激發558nm/發射581nm)係使用TECAN SAFIRE螢光盤讀取機經10min過程測量。典型的反應溶液含有20 mM HEPES(pH7.0)、1mM EDTA、4.0uM FRET受質、4%之DMSO及0.005%之Tween-20。檢定係以添加25 nM SARS 3CLpro (SARS冠狀病毒完全基因組序列(NCBI登錄號AY278741)之厄巴尼株(Urbani strain)的核苷酸序列9985-10902)開始。抑制百分比係在0.001mM抑制劑水平下重複測定。數據係使用以下公式的非線性回歸分析程式Kalidagraph分析： FU =偏移(offset) + (限值(limit))(1- e-(kobs) t) 其中偏移等於未切割之肽受質的螢光信號及限值等於完全切割之肽受質的螢光。kobs為此反應之第一級速率常數，且在沒有任何抑制劑存在下代表受質的利用率。在含有不可逆的抑制劑及其中計算限值小於理論最大限值的20%之酵素啟動反應中，經計算之kobs代表冠狀病毒3C蛋白酶之失活率。kobs相對於[I]之繪圖的斜率(kobs/I)為抑制劑對酵素之親留性(avidity)量度。關於非常幾乎不可逆的抑制劑，kobs/I係自僅一或兩個[I]之觀測值計算，而不作為斜率。 另一選擇地，化合物可使用以下的SARS CoV-2 FRET檢定法評定。 SARS CoV-2蛋白酶FRET檢定法及分析 SARS-CoV-2的主要蛋白酶3CLpro之蛋白分解活性係使用連續螢光共振能量轉移(FRET)檢定法監測。SARS-CoV-2 3CLpro檢定法係測量切割具有在共有肽上建模之下列序列Dabcyl-KTSAVLQ-SGFRKME-Edans的合成螢光受質之全長SARS-CoV-2 3CL蛋白酶的活性。經切割之Edans肽的螢光(激發340nm/發射490nm)係使用螢光強度方案在Flexstation讀取機(Molecular Devices)上測量。螢光信號在N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺，SARS-CoV-2 3CL pro之有效力抑制劑的存在下降低。檢定反應緩衝劑含有20mM Tris-HCl(pH7.3)、100nM NaCl、1mM EDTA、5mM TCEP及25μM肽受質。酵素反應係以添加15 nM SARS-CoV-2 3CL蛋白酶引發且容許在23℃下進行60min。抑制及活性百分比係基於不含有化合物(0%之抑制/100%之活性)之對照孔及對照化合物(100%之抑制/0%之活性)來計算。IC50 值係使用四參數擬合模式及使用ABASE軟體(IDBS)產生。Ki 值係使用Activity Base軟體(IDBS)以固定至15nM之酵素濃度參數、固定至14μM之Km 參數及固定至25uM之受質濃度參數擬合莫理森(Morrison)方程式。 當以上述檢定法評估時，化合物2,6-二氯苯甲酸(3S)-3-({4-甲基-N-[(2R)-四氫呋喃-2-基羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯具有17nM之IC50 (16nM至18nM的95%之信賴區間，以n=32)及2.71nM之Ki(2.29nM至3.13nM的95%之信賴區間，以n=32)。當以上述檢定法評估時，化合物N -((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)-N -[(4-甲氧基-1H -吲哚-2-基)羰基]-L-苯基丙胺醯胺具有375nM之IC50 (260 nM至489nM的95%之信賴區間，以n=4)及139nM之Ki(65.8 nM至212nM的95%之信賴區間，以n=2)。當以上述檢定法評估時，化合物環丙烷羧酸(3S)-3-({N-[(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯具有128 nM之IC50 (107nM至149nM的95%之信賴區間，以n=5)及42.7nM之Ki(37.9nM至47.5nM的95%之信賴區間，以n=2)。當以上述檢定法評估時，化合物N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3,3-二甲基丁基)-1H-吲哚-2-甲醯胺具有24 nM之IC50 (16 nM至32 nM的95%之信賴區間，以n=6)及2.81nM之Ki (1.39nM至4.22nM的95%之信賴區間，以n=4)。當以上述檢定法評估時，化合物N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺具有7nM之IC50 (6nM至8nM的95%之信賴區間，以n=7)及0.27nM之Ki(0.17nM至0.37nM的95%之信賴區間，以n=6)。當以上述檢定法評估時，化合物N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環丙基-1-側氧丙-2-基)甲吡啶醯胺具有8402nM之IC50 (4396nM至12407nM的95%之信賴區間，以n=3)及3048nM之Ki(n=1)。當以上述檢定法評定時，化合物AG-0011859、菲立布韋、奈非那韋及蘆平曲韋全部皆具有＞30μM之IC50。 N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺係使用生化螢光共振能量轉移(FRET)蛋白酶活性檢定法以對抗來自各種代表冠狀病毒科之α、β和γ群組的其他冠狀病毒之3CLpro進行評估。檢定法類似於上述之FRET檢定法且可使用來自指定之病毒的全長蛋白酶序列。N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺證明對抗所有測試之冠狀病毒3CLpro之有效力的抑制活性，該冠狀病毒包括下列成員：α-冠狀病毒(NL63-CoV、PEDV-CoV-2、FIPV-CoV-2)、β-冠狀病毒(HKU4-CoV、HKU5-CoV、HKU9-CoV、MHV-CoV、OC43-CoV、HKU1-CoV)和γ-冠狀病毒(IBV-CoV-2)，以Ki值及所測試之酵素濃度包括在表3中。此抑制活性僅限於冠狀病毒3CL蛋白酶，因為N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺對一組人類蛋白酶及HIV蛋白酶沒有活性。N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺顯示對抗人類組織蛋白酶B之可檢測的活性，但是與3CLpro相比而具有100倍裕度(表4)。該等數據集體支持N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺作為泛冠狀病毒(pan coronavirus) 3 CL蛋白酶抑制劑。 表3. N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺對抗冠狀病毒之3CLpro的活性
Figure 02_image041
表4：N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺對抗人類蛋白酶及HIV蛋白酶的活性
Figure 02_image043
N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺與SARS-CoV-2 3CLpro之熱位移結合數據表明試管內與SARS-CoV-2 3CL之緊密及特異性結合。 鑑於N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺以0.27nM之Ki值有效力地抑制SARS-CoV-2 3CLpro的能力，所以進行進一步的研究。N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺及SARS-CoV-2 3CLpro之X射線共晶體結構的研究係與化合物在活性位點之催化性半胱胺酸殘基上與3CL酵素以共價及可逆式相互作用之結合一致，因此抑制3CLpro之活性。亦使用熱位移檢定法評估N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺與其目標蛋白質SARS-CoV-2 3CLpro之間的直接結合。在SARS-CoV-2 3CLpro與N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺結合時，SARS-CoV-2 3CLpro之熔融溫度位移14.6℃，自55.9+/-0.11℃(n=16)至70.5+/-0.12℃ (n=8)。熔融溫度(Tm)係使用Protein Thermal Shift軟體v1.3中的波茲曼(Boltzmann)模式以天然蛋白質至變性蛋白質之過渡相的中間對數計算。該等數據支持N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺與SARS-CoV-2 3CLpro之緊密及特異性結合(參見圖4)，且由此提供此化合物作為SARS-CoV-2 3CLpro之抑制劑的分子機制之進一步證據。 SARS-CoV-2細胞抗病毒活性於試管內受到N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺之抑制。 N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺在細胞培養物中對抗SARS-CoV-2之抗病毒活性係以細胞病變效應(CPE)檢定法使用富含ACE2受體之VeroE6細胞(VeroE6-enACE2)或組成上表現EGFP之VeroE6細胞(VeroE6-EGFP)進行評估。將該等細胞系分別以具有相同的3CLpro胺基酸序列之 SARS-CoV-2華盛頓株(Washington strain) 1或βCov GHB-03021/2020株感染。N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺分別以39.7µM和88.9µM保護細胞免於病毒CPE (EC50 ，表5)。然而，Vero細胞表現高水平的外排轉運蛋白P-gp (亦稱為MDR1或ABCB1)，其中N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺為已知的受質。因此，在P-gp外排抑制劑，CP-100356，4-(3,4-二氫-6,7-二甲氧基-2(1H)-異喹啉yl)-N-2[2-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]-6,7-二甲氧基-2-喹唑啉胺的存在下重複檢定。N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺係在2 µM P-gp抑制劑的存在下展現增加117至173倍的活性，在VeroE6–enACE2細胞中具有0.23µM之EC50 值及在VeroE6-EGFP細胞中具有0.76µM之EC50 值(表5)。單獨的P-gp抑制劑在該等濃度下不具有抗病毒或細胞毒活性且在蛋白酶抑制劑的存在下不引起細胞毒性。對增加劑量的N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺有陡峭的反應，在兩種細胞類型中的EC50 與EC90 之間(亦即介於50%與90%之有效濃度之間)具有~2至3倍的差異(在P-gp抑制劑的存在下，在VeroE6-enACE2細胞中的EC90 =0.48uM及在VeroE6-EGFP細胞中的EC90= 1.6uM)。當在P-gp抑制劑的存在及不存在下測試肺細胞系(A549-ACE2及MRC5)之抗病毒劑效力時，觀察到抗病毒效力沒有顯著的差異(表5)。另外，以2uM P-gp在兩種veroE6細胞系中的EC50 及EC90 值類似於以不同的細胞類型使用不同的檢定法所獲得的該等值，該等檢定法包括藉由檢測A549-ACE2細胞中的病毒蛋白質以及在其中Pg-p表現較低的極化之人類呼吸道上皮細胞中使用噬菌斑檢定法。 表5：N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺之試管內抗病毒活性、細胞毒性及治療指數(TI)
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Figure 02_image047
N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺與阿奇黴素或瑞德西韋之組合對抗VeroE6細胞中的SARS-CoV-2之抗病毒活性效力。簡言之，將富含hACE2表現之VeroE6細胞在BSL-3 lab中分批以 0.002之感染複數(multiplicity of infection)的SARS-CoV-2 (USA_WA1/2020)接種。接著將經病毒接種之細胞以4,000個細胞/孔之密度添加至檢定即用型化合物盤中。在3天長期培育後，此時經病毒誘導之細胞病變效應在未經處理、經感染之對照條件下達到95%，細胞生存力係使用量化ATP含量之Cell Titer-Glo (Promega)根據製造商方案評估。化合物之細胞毒性係以平行的未感染細胞評定。 為了檢查組合治療是否具有協同或累加效應，各化合物係以劑量矩陣中的濃度進行測試。使用Chalice分析儀計算羅威(Loewe)累加性及過量模式。通常使用羅威過量表明過量的抑制百分比；過量的百分比抑制係藉由自實驗抑制百分比值減去各種組合之預期的抑制百分比值來計算，假設在各種模式中以非協同性配對(nonsynergy pairing)。容許以該等數據計算各配對的等效線圖(isobologram)、協同分數及最好的組合指數(CI)。通常＞1之協同分數及＜1之CI表明組合治療具有協同效應；1之協同分數及1之CI表明組合治療僅具有累加效應。Antimicrob Agents Chemother. 2015 Apr; 59(4): 2086–2093. doi: 10.1128/AAC.04779-14。 為了評定協同性是否可在高抑制水平下達成，將等效線圖水平設置在 0.9以捕捉具有減少90%之病毒(相當於減少1-log10 )的有意義的協同性。 N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺加上阿奇黴素之組合產生協同性，具有3.76之協同分數及0.4之CI。所觀察到的協同性不是由於細胞毒性，因為所有測試之組合沒有顯著的細胞毒性。N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺與瑞德西韋之組合證明累加性，具有5.1之協同分數及0.21之CI。所觀察到的協同性可能用於減少劑量且因此增加抑制劑的安全範圍，以達成活體內治療範圍。另外，可利用組合療法使藥物抗性減至最低。 進行額外的研究以進一步評定N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺與瑞德西韋組合之抗病毒組合效益的潛力。 抗病毒劑之組合，尤其為那些靶向病毒複製週期中的不同步驟之組合為治療病毒疾病常使用的治療策略。因為N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺及瑞德西韋(核苷RNA依賴性RNA聚合酶抑制劑)係靶向病毒複製週期中的不同步驟，所以兩種化合物之抗病毒活性係使用HeLa-ACE2細胞單獨及組合評估。病毒蛋白質在此檢定法中係使用來自兩個不同的COVID-19患者之恢復期人類多株血清來檢測。單獨的N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺(在表6中以化合物1標示)抑制SARS-CoV-2複製，具有0.14 µM之平均EC50 及0.40 µM之平均EC90 ；而瑞德西韋具有0.074 µM之平均EC50 及0.17 µM之平均EC90 (表6)。 表6：N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺(化合物1)及瑞德西韋在HeLa-ACE2細胞中的試管內活性
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組合研究係使用藥物測試矩陣執行，且藥物組合的數據係使用參考模式(羅威、布利斯(Bliss)、HSA)分析，以分類藥物組合為累加、協同或拮抗效應(等效線圖、協同分數及組合指數)。通常＞1之協同分數及＜1之組合指數表明組合治療具有協同效應(Yeo等人，2015)。為了評定協同性是否可在高抑制水平下達成，將等效線圖水平設置在 0.9以捕捉具有減少90%之病毒(相當於減少1-log10 )的有意義的協同性。 如表7之總結，N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺與瑞德西韋之組合在兩個獨立的實驗中以來自患者#1之血清展現協同性及在單一實驗中以來自患者#2之血清展現累加性(表7)。不同的分類最有可能是由於不同的恢復期血清用作為檢測試劑。該等相同的抗病毒數據亦使用Synergyfinder程式分析，其亦表明2種藥物為累加至協同，具有以圖5所示之代表圖。在該等研究中，未證明N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺與瑞德西韋之組合具有拮抗作用。將連續稀釋的N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺(在圖5中以PF-00835231標示)與瑞德西韋(濃度係沿著圖5的軸顯示)係以矩陣格式組合。使用GeneData程式對所有測試之濃度分析的3維藥物相互作用橫式繪製之協同分數(三次重複的中位數分數)顯示於圖5中。在3維圖中，平面上方的分數面積表明協同作用，在平面的下方表明拮抗作用。所觀察到的累加性/協同性不是由於細胞毒性，因為所有測試之組合在經病毒感染之宿主細胞中沒有可檢測的細胞毒性。 表7：N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺與瑞德西韋之組合協同分數
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HSA=最高的單一劑；n=測定次數；數據顯示平均值；(個別值) 圖5A提供N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺與瑞德西韋之組合在HELA-ACE2細胞檢定法中的活性之圖形代表。在此檢定法中發現N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺之EC90 (nM)係隨著瑞德西韋的濃度增加而降低(亦即當瑞德西韋濃度分別自0增加至48至95至190時，EC90係自433nM降低至123nM至54.5nM，接著至＜0.78nM)。 在A549+ACE2細胞中的試管內藥物功效及細胞毒性。將A549+ACE2細胞以70%之匯合率(confluency)接種在黑色壁的96孔盤中。在隔天，在感染前兩小時移出培養基且以含有化合物/載劑之完全培養基替換。接著將細胞在37℃下以基於Vero E6效價的0.425之感染複數(MOI)感染。在添加病毒後1小時，移出病毒且添加含有化合物/載劑之培養基。在感染後24和48小時，將細胞以浸沒於10%之福馬林溶液中經30至45min固定。在固定後，將細胞以H2O清洗一次以移出過量福馬林。將盤乾燥且每孔添加PBS，然後離開BSL-3設備。將固定之細胞以Triton-X通透化且以小鼠單株SARS-CoV抗N抗體1C7(其與SARS-CoV-2交叉反應)、山羊抗小鼠AlexaFluor 647及DAPI染色。將盤在CellInsight CX7 LZR高內涵篩選平台(high-content screening platform)上掃描。總共收集9張以4倍放大之影像以跨越整個孔。將影像使用HCS Navigator分析以獲得細胞總數/孔(經DAPI染色之細胞)及經SARS-CoV-2感染之細胞(AlexaFluor 647陽性細胞)的百分比。為了能夠精確量化，將各通道的曝光時間調整至飽和度的25%且在分析中排除在各影像邊緣的細胞。閘控經SARS-CoV-2感染之細胞以包括具有平均螢光強度比經模擬感染及經載劑處理之細胞的該強度大3個標準偏差之細胞。病毒簇之代表性影像係在SARS-CoV-2感染後48小時(hpi)使用BZ-X810以40倍放大固定之盤獲取。將用於細胞毒性測定之A549+ACE2細胞接種在不透明的白色壁96-724孔盤中。在隔天，移出培養基，以含有化合物/載劑或星形孢菌素(staurosporine)之培養基替換且分別培育24或48小時。在該等時間點，以使用BioTek Synergy HTX多模式讀取機之CellTiter-Glo 2.0(Promega，目錄號G9242)測定ATP含量。 當評估在A549+ACE2細胞中對抗SARS-CoV-2 USA-WA1/2020時，PF-00835231在感染後24小時具有0.221μM之EC50(95%之CI 0.137-0.356)、0.734μM之EC90 (95%之CI 0.391-1.38)及＞10 μM之CC50；在感染後48小時具有0.158 μM之EC50 (95%之CI 0.0795-0.314)、0.439μM之EC90 (95%之CI 0.380-0.508)及＞10μM之CC50；當評估對抗SARS-CoV-2 USA-NYU-VC-003/2020時，PF-00835231在感染後24小時具有0.184μM之EC50(95%之CI 0.016-0.377)、0.591 μM之EC90 (95%之CI 0.534-0.654)及＞10 μM之CC50。 人類呼吸道上皮培養物(HAEC)。為了產生HAEC，將Bci-NS1.1平舖(7.5E+04個細胞/孔)在經鼠尾膠原蛋白1型包覆之可滲透的Transwell膜支架(6.5mm；Corning，目錄號3470)上，且以頂部和底側浸入Pneumacult Ex Plus培養基(StemCell，目錄號05040)中。在達到匯合率時，自頂面移出培養基(「氣升式(airlift)」)且將底側室中的培養基更換成Pneumacult ALI維持培養基(StemCell，目錄號05001)。將底側室中的培養基每2至3天以新鮮的Pneumacult ALI維持培養基更換經12至15天，以形成類似於活體內擬複層黏液纖毛上皮(mucociliary epithelium)的經分化之極化培養物。培養物係在分化的4至6週內使用。使用HAEC進行細胞毒性檢定及SARS-688 CoV-2感染。 化合物獲取、稀釋及製備。PF-00835231、瑞德西韋及CP-100356係溶解在100%之DMSO中且由輝瑞(Pfizer, Inc.)提供。將在DMSO中稀釋至30mM之化合物儲備液儲存在-20℃下。將化合物在完全培養基或Pneumacult ALI維持培養基中稀釋至10μM工作濃度。所有後續的化合物稀釋係在相當於10μM化合物之含有DMSO的相應培養基中執行。 在人類呼吸道上皮培養物(HAEC)中的試管內功效及細胞毒性。在感染前48小時，將2至6週齡的HAEC以含有鈣和鎂的預溫熱之PBS於頂部清洗兩次各30min，以移除在頂部表面上的黏液。在感染前2小時，將HAEC以含有化合物或載劑之新鮮培養基更換在底室中的ALI維持培養基以進行預處理。使用10、0.5和0.025μM之瑞德西韋及PF-00835231及使用1μM之CP-100356。在感染前1小時，將培養物以含有鈣和鎂的預溫熱之PBS於頂部清洗兩次各30min。將各培養物在37℃下於每一培養物以1.35E+05 PFU(Vero E6)進行2小時感染。將接種物樣品保存且儲存在-80℃下，用於在Vero E6細胞上以噬菌斑檢定法反滴定。將用於化合物毒性評定之額外的培養物如感染之培養物的方式清洗及預處理。將代替感染的該等培養物僅以含有鈣和鎂之PBS培育，作為模擬處理物。將HAEC在37℃下以病毒稀釋物或模擬處理物培育2小時。移出接種物且將培養物以含有鈣和鎂的預溫熱之PBS清洗三次。將用於各清洗步驟之緩衝劑添加至頂部表面且將培養物在37℃下培育30min，然後移出緩衝劑。收集第三次清洗液且儲存在-80℃下，用於在Vero E6細胞上以噬菌斑檢定法滴定。將感染之培養物在37℃下總共培育72小時。每 12小時藉由添加60 μL之含有鈣和鎂的預溫熱之PBS以收集感染性子代病毒，在37℃下培育30min且收集頂部清洗液，儲存在-80℃下，直到滴定。另外，測量未經感染，但是經處理之HAEC中的跨上皮電阻(trans-epithelial electrical resistance) (TEER)以量化反應經化合物或載劑處理之組織完整性。在終點，將培養物以浸沒於10%之福馬林溶液中24小時固定且以含有鈣和鎂之PBS清洗三次，然後進一步用於組織學加工。另一選擇地，在終點，將transwell膜切離且浸沒於RLT緩衝劑中，使用RNAeasy套組(Qiagen，目錄號74104)提取RNA。cDNA合成係使用SuperScript™ III系統(ThermoFisher，目錄號18080051)，隨後以使用QuantStudio 3即時PCR系統的附有TaqMan universal PCR master mix(ThermoFisher，目錄號4305719)及TaqMan基因表現檢定探針(ThermoFisher GAPDH，目錄號4333764F、BAX，目錄號Hs00180269_m1、BCL2，目錄號Hs00608023_m1)之RT-qPCR執行。 將用於未分化之HAEC前驅細胞中的細胞毒性之額外測定的Bci-NS1.1細胞接種至不透明的白色壁96孔盤中。在隔天，移出培養基，以含有化合物/載劑或星形孢菌素之培養基替換且分別培育24或48小時。在該等時間點，以使用BioTek Synergy HTX多模式讀取機之CellTiter-Glo 2.0 (Promega，目錄號G9242)測定ATP含量。 在HAEC中的PF-00835231抗SARS-CoV-2活性係以0.025、0.5或10 μM PF-00835231或瑞德西韋，或DMSO載劑對照物至HAEC之底側室評定。HAEC係在頂部受到SARS-CoV-2 USA-WA1/2020的挑戰，且病毒感染效價係自12小時增量收集之頂部清洗液測定。在感染後12小時，在來自經DMSO處理之培養物的頂部清洗液中有子代病毒顆粒存在，表明在HAEC細胞中的SARS-CoV-2生命週期在該時間已完成。PF-00835231及瑞德西韋兩者係以劑量依賴方式有效力地抑制SARS-CoV-2效價，以10μM劑量導致病毒效價在大多數的時間點低於366之檢測限度。 N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺之有利的臨床前ADME及藥物動力學輪廓 N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺之代謝穩定性係在試管內使用儲集的人類肝微粒體(HLM)及肝細胞評估。顯示藥物係以細胞色素P450酵素代謝，展現14µl/min/mg的未結合之Clint 。使用化學抑制劑及重組異源表現酵素鑑定出CYP3A4為參與此化合物代謝的主要 CYP。亦注意到多態性表現之CYP3A5亦可代謝N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺且清除率在CYP3A5表現者(expresser)中可能略高。化合物可逆地抑制人類細胞色素P450酵素(CYP1A2、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6和3A)的潛力係使用儲集之HLM中的探針受質(補充)評估，且對CYP3A4/5之時間依賴性抑制提供＞200µM之IC50 值及弱信號，表明N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺提供與其他藥物共同投予時引起藥物-藥物相互作用(DDI)的低風險。N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺抑制一系列轉運蛋白(BCRP、Pgp、OATP1B1/1B3、OCT1/2、OAT1/3和MATE1/2K)的潛力係使用試管內系統評估。＞20 µM之IC50 值表明引起DDI的低風險，其係由於在預計之臨床暴露量下的轉運蛋白抑制作用。N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺之血漿蛋白結合係使用平衡透析進行跨物種測量，顯示與血漿蛋白之適度結合，具有0.26至0.46之跨物種的血漿游離分數。 N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺係經靜脈內投予大鼠、狗和猴子(1或2 mg/kg)，且展現跨物種之適度的血漿清除率(35至60%之肝血流量)、低的分布體積(＜1L/Kg)及短的半生期(＜1.5h)，保持其中性的生理化學及親脂性(SFLogD7.4 =1.7)。在經口投予大鼠(2mg/kg)及猴子(5mg/kg)後，N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺展現低的生物利用率(＜2%)，有可能由於以下的組合：低吸收性(因為其低滲透率，1.3x10-6 cm/sec之視MDCK-LE滲透率28,34 )、低溶解度、以P-gp和BCRP 在腸道中主動外排的潛力，以及以胃腸道中的消化酵素水解醯胺的潛力。在大鼠、狗和猴子中，約10%之N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺係在尿液中以未改變的形式排除，表明腎臟排除亦可扮演清除人類中的N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺之次要角色。 適用於IV投予之人類藥物動力學預測–考慮人類的試管內代謝數據及大鼠、狗和猴子的活體內藥物動力學(PK)數據，預測N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺在人類中展現~6mL/min/kg之血漿清除率(CLp )(主要以CYP，次要以腎臟路徑)、1L/kg之穩態的分布體積(Vdss )及約2 h之半生期。由於有限的經口生物利用率、短的消除半生期及可能需要隨時間維持游離系統濃度，因此提議連續靜脈內(IV)輸液作為最適化給藥途徑及方案。 達成目標Ceff之有效的目標濃度及可行的人類劑量預測 抑制商數(IQ)已成為轉譯臨床前抗病毒效力至臨床上跨多種病毒性疾病之有用的指標。IQ經定義為抗病毒檢定中的人類Cmin,u 未結合之濃度除以試管內未結合(經血清調整)之EC50,u 值(公式 1)。
Figure 02_image053
一些抗病毒療法係以接近1之IQ顯示出顯著的效益；然而，快速控制病毒複製時常需要維持比試管內EC50 高至少10倍的暴露量。當考慮到蛋白質結合及作用暴露位點時，臨床上批准之蛋白酶抑制劑在以1至100之IQ值給藥時有效地降低病毒載量。重要的是當抗病毒劑(一般且尤其為蛋白酶抑製劑)係以低於1之IQ給藥時，則其可能地導致增加的突變及額外的耐藥性。 需要多高的IQ值係取決於劑量反應曲線之斜率。希爾(Hill)係數(m)及EC50 係以公式2與一系列濃度(C)下的試管內抗病毒活性有關：
Figure 02_image055
N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺在一系列試管內抗病毒檢定中顯示高斜率(m=3)，如那些靶向HIV及HCV之臨床蛋白酶抑制劑之檢定。在抗病毒劑EC50 與EC90 濃度之間僅有2至3倍的差異，而不是具有1之希爾係數的抗病毒劑之典型的 9 倍差異。因此，暴露量對EC50值(3至10)之相對小的比率係與幾乎完全的病毒抑制有關。 選擇經預測之最低有效濃度(Ceff )以匹配試管內EC90 ，與批准之蛋白酶抑制劑的臨床前至臨床轉譯一致。因為提議N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺以連續輸液投予，所以經預測之穩態暴露量等於在給藥間隔期間維持之Cmin 。在生理相關細胞類型人類肺癌中執行的劑量反應檢定法得到0.44µM之平均EC90 值。當添加P-gp抑制劑以更好地反映在肺中缺乏大量的P-gp轉運蛋白時，這與Hela-ACE2細胞(EC90 =0.4µM)及Vero細胞系(EC90 =-0.48至1.6µM)中額外的抗病毒數據一致。此外，抗病毒抑制受到在原代人類呼吸道上皮模式中執行之抗病毒時程實驗的支持(初步數據表明未結合之EC90 ＜0.5µM)，表明N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺在跨不同的細胞類型中具有一致固有的抗SARS-CoV-2活性。因此，所提出之目標Ceff 為~0.5µM。 由於通過肺的快速血液灌注及連續穩態靜脈內輸液方案，假定游離血漿及游離肺濃度係處於平衡狀態，且因此游離血漿濃度在疾病的主要作用位點上提供合理的替代濃度。基於人類PK預測，達成此暴露量必要的N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺之最低有效劑量為作為連續靜脈內輸液投予之320 mg/天。療效所需之給藥持續時間仍不確定且需要在人類中進行評估。基於來自瑞德西韋之臨床結果，可能需要至多10天的給藥持續時間以提供改善之患者預後。 將上文所述之所有專利及出版物以其完整內容特此併入以供參考。儘管本發明已根據各種較佳的實施態樣及具體實施例予以說明，但應理解本發明不受前文詳細說明的限制，但是以所附之申請專利範圍及其等效物限定。
[圖1]：在活性位點上以所示之抑制劑化合物在SARS-CoV與SARS-CoV-2之間的殘基差異之描繪。 [圖2]：SARS-CoV-2 3CL之同源性模式與核心對接配體(core-docked ligand)(化合物B，N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺)之結合位點。 [圖3]：在與對比SARS的基於FRET之IC50值相比的經預測之ΔG COVID-19之間的擬合。 [圖4]：N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺與SARS-CoV-2 3CLpro之代表性熱位移結合數據。 [圖5]：N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺與瑞德西韋之組合對抗SARS-CoV-2之抗病毒活性的3維描繪。 [圖5A]：在0nm、48nm、95nm和190nm下，在瑞德西韋的存在下以N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺濃度為函數之活性(%)。 [圖6]： N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺水合物(形式3)之PXRD圖案。 [圖7]： N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺(形式1)之PXRD圖案。 [圖8]： N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺(形式2)之PXRD圖案。 [圖9]： N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺(形式2)之13C固態NMR光譜。 [圖10]：記述在含有相對於乙醇而不同體積分率的PEG400之溶液中的不同PF-00835231濃度之調配物的沉澱之目測觀察。[ 圖11]：總共溶劑百分比(%v/v)相對於環糊精對PF-00835231之比。 [圖12]：含有乙醇、PEG400、SBE-β-環糊精及2、4、6和8 mg/mL之PF-00835231的PF-00835231調配物經7天之檢定值。 [圖13]：80 mg/mL之SBE-β-環糊精、4.5% v/v之總共溶劑(1.1% v/v之乙醇、3.4% v/v之PEG400)及6mg/mL之PF-00835231溶液在-20℃(上圖)、4℃(中圖)及25℃(下圖)下的穩定性。 [圖14]：在具有CD (虛線)及不具有CD (實線)之溶液中的PF-00835231在pH 4 (黑色，空心圓)和pH 5 (灰色，實心圓)及40℃(上圖)和22℃(下圖)下的化學穩定性。
Figure 110107704-A0101-11-0003-1

Claims (43)

  1. 一種化合物，其係選自由下列所組成的群組： 2,6-二氯苯甲酸(3S)-3-({4-甲基-N-[(2R)-四氫呋喃-2-基羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯； 環丙烷羧酸(3S)-3-({N-[(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯； N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環丙基-1-側氧丙-2-基)甲吡啶醯胺(picolinamide)； N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環戊基-1-側氧丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺； N-((S)-2-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-1-環戊基-2-側氧乙基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺； N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3,3-二甲基丁基)-1H-吲哚-2-甲醯胺； N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}戊基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺； N-((S)-1-(((S)-4-羥基-3-側氧基-1-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丁-2-基)胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺； N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺； (2R)-2-環戊基-2-[2-(2,6-二乙基吡啶-4-基)乙基]-5-[(5,7-二甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)甲基]-4-羥基-3H-吡喃-6-酮； (3S,4aS,8aS)-N-三級丁基-2-[(2R,3R)-2-羥基-3-[(3-羥基-2-甲基苯甲醯基)胺基]-4-苯基硫烷基丁基]-3,4,4a,5,6,7,8,8a-八氫-1H-異喹啉-3-甲醯胺； (E,4S)-4-[[(2R,5S)-2-[(4-氟苯基)甲基]-6-甲基-5-[(5-甲基-1,2-㗁唑-3-羰基)胺基]-4-側氧庚醯基]胺基]-5-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]戊-2-烯酸乙酯；及 (R)-3-((2S,3S)-2-羥基-3-{[1-(3-羥基-2-甲基-苯基)-甲醯基]-胺基}-4-苯基-丁醯基)-5,5-二甲基-噻唑啶-4-羧酸烯丙基醯胺； 或其醫藥上可接受的鹽，其係用於治療冠狀病毒疾病2019 (COVID-19)。
  2. 如請求項1使用之化合物，其中該化合物係經口或經靜脈內投予。
  3. 如請求項2使用之化合物，其中該化合物係經靜脈內投予。
  4. 如請求項3使用之化合物，其中該化合物係經24小時期間內間歇投予或經24小時期間內連續投予。
  5. 如請求項1至4中任一項使用之化合物，其中該化合物為N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。
  6. 一種化合物，其係選自由下列所組成的群組： 2,6-二氯苯甲酸(3S)-3-({4-甲基-N-[(2R)-四氫呋喃-2-基羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯； 環丙烷羧酸(3S)-3-({N-[(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)羰基]-L-白胺醯基}胺基)-2-側氧基-4-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]丁酯； N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環丙基-1-側氧丙-2-基)甲吡啶醯胺； N-((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-3-環戊基-1-側氧丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺； N-((S)-2-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-側氧基-3-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丙-2-基)胺基)-1-環戊基-2-側氧乙基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺； N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3,3-二甲基丁基)-1H-吲哚-2-甲醯胺； N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}戊基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺； N-((S)-1-(((S)-4-羥基-3-側氧基-1-((S)-2-側氧吡咯啶-3-基)丁-2-基)胺基)-1-側氧基-3-苯基丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺； N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺； (2R)-2-環戊基-2-[2-(2,6-二乙基吡啶-4-基)乙基]-5-[(5,7-二甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)甲基]-4-羥基-3H-吡喃-6-酮； (3S,4aS,8aS)-N-三級丁基-2-[(2R,3R)-2-羥基-3-[(3-羥基-2-甲基苯甲醯基)胺基]-4-苯基硫烷基丁基]-3,4,4a,5,6,7,8,8a-八氫-1H-異喹啉-3-甲醯胺； (E,4S)-4-[[(2R,5S)-2-[(4-氟苯基)甲基]-6-甲基-5-[(5-甲基-1,2-㗁唑-3-羰基)胺基]-4-側氧庚醯基]胺基]-5-[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]戊-2-烯酸乙酯；及 (R)-3-((2S,3S)-2-羥基-3-{[1-(3-羥基-2-甲基-苯基)-甲醯基]-胺基}-4-苯基-丁醯基)-5,5-二甲基-噻唑啶-4-羧酸烯丙基醯胺； 或其醫藥上可接受的鹽； 其係用於抑制或預防SARS-CoV-2病毒複製。
  7. 如請求項6使用之化合物，其中該化合物為N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺；或其醫藥上可接受的鹽。
  8. 一種化合物N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺，其係用於治療COVID-19。
  9. 如請求項8使用之化合物，其中投予0.2 g/天至4 g/天之N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺。
  10. 如請求項9使用之化合物，其中投予0.3 g/天至3 g/天之N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺。
  11. 如請求項8至10中任一項使用之化合物，其中該N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺係經連續靜脈內輸液投予。
  12. 如請求項10使用之化合物，其中約0.3g/天至3g/天之N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺係經連續靜脈內輸液投予。
  13. 如請求項12使用之化合物，其中N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺係以足夠維持約0.5μM之有效濃度(Ceff )的量經連續靜脈內輸液投予。
  14. 如請求項8至13中任一項使用之化合物，其中該N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺係與一或多種附加的治療劑組合投予。
  15. 如請求項14使用之化合物，其中該附加的治療劑為瑞德西韋(remdesivir)及阿奇黴素(azithromycin)。
  16. 如請求項15使用之化合物，其中瑞德西韋係經連續靜脈內輸液共同投予。
  17. 一種晶形化合物N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺水合物(形式3)，其具有包含三或更多個選自8.6 ± 0.2、11.9 ± 0.2、14.6 ± 0.2、18.7 ± 0.2和19.7 ± 0.2之以2-θ度計的X射線繞射峰的粉末X射線繞射圖案。
  18. 如請求項17之晶形化合物，其中以2-θ度計的該粉末X射線繞射峰為14.6 ± 0.2、18.7 ± 0.2和19.7 ± 0.2。
  19. 如請求項17之晶形化合物，其中以2-θ度計的該粉末X射線繞射峰為8.6 ± 0.2、14.6 ± 0.2、18.7 ± 0.2和19.7 ± 0.2。
  20. 如請求項17之晶形化合物，其中以2-θ度計的該粉末X射線繞射峰為8.6 ± 0.2、11.9 ± 0.2、14.6 ± 0.2、18.7 ± 0.2和19.7 ± 0.2。
  21. 一種水性液體組成物，其包含： a)   約0.2mg/mL至約2.0mg/mL之N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽； b)   一或多種共溶劑； c)    視需要的一或多種界面活性劑；及 d)   緩衝劑， 其中該組成物具有約1.5至約6之pH，且該一或多種共溶劑的總量為至多約30% (v/v)，該組成物係經腸胃外使用以治療COVID-19。
  22. 如請求項21使用之組成物，其中該組成物係以每天約1000mL或更少的體積經靜脈內投予，具有約3至約5之pH，且該一或多種共溶劑的總量為至多約20% (v/v)。
  23. 如請求項22使用之組成物，其中該組成物包含： a)   約0.2mg/mL至約1.0mg/mL之N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽； b)   一或多種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：苯甲醇(BA)、二甲基丙烯醯胺(DMA)、二甲亞碸(DMSO)、乙醇、N-甲基吡咯啶酮(NMP)、聚乙二醇和丙二醇(PG)，其中該一或多種共溶劑的總量為至多約10% (v/v)； c)   一或多種界面活性劑，當存在時，其係選自由下列所組成的群組：聚乙烯基吡咯啶酮(PVP)、泊洛沙姆(poloxamer) 407、泊洛沙姆188、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙氧基化蓖麻油、卵磷脂、聚山梨醇酯80 (PS80)、聚山梨醇酯20 (PS20)和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯；及 d)   緩衝劑，其係選自由下列所組成的群組：乙酸、檸檬酸、乳酸、磷酸和酒石酸。
  24. 如請求項23使用之組成物，其中該組成物包含： a)   一或兩種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：二甲亞碸(DMSO)、乙醇、PEG300和PEG400； b)   一或兩種界面活性劑，當存在時，其係選自聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯；及 c)    緩衝劑，其為至多50mM檸檬酸。
  25. 如請求項24使用之組成物，其中該組成物係經連續靜脈內輸液投予，且所投予之該組成物體積為每天約250mL至約500mL。
  26. 一種醫藥組成物，其包含： a)   治療有效量的N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽； b)   複合劑，其係選自由下列所組成的群組：α-環糊精、β-環糊精、γ-環糊精、菸鹼醯胺、苯甲酸鈉和柳酸鈉，其中該複合劑對N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺之莫耳比為約1.5：1至約25：1；及 c)    緩衝劑。
  27. 如請求項26之醫藥組成物，其中該醫藥組成物為立即使用型或立即稀釋型腸胃外溶液，其： a)   視需要地包含一或多種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：苯甲醇(BA)、二甲基丙烯醯胺(DMA)、二甲亞碸(DMSO)、乙醇、N-甲基吡咯啶酮(NMP)、聚乙二醇和丙二醇(PG)； b)   另外視需要地包含界面活性劑，其係選自由下列所組成的群組：聚乙烯基吡咯啶酮(PVP)、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙氧基化蓖麻油、卵磷脂、聚山梨醇酯80 (PS80)、聚山梨醇酯20 (PS20)和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯； c)   緩衝劑，其係選自由下列所組成的群組：乙酸、檸檬酸、乳酸、磷酸和酒石酸；及 d)   該腸胃外溶液之pH為約3至約5。
  28. 如請求項27之醫藥組成物，其包含： a)   約0.2mg/mL至約16mg/mL之濃度的N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽； b)   該複合劑，其為羥基丙基-β-環糊精(HP-β-CD)或磺丁基醚-β-環糊精(SBE-β-CD)，其中該複合劑對N-((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺之莫耳比為約1.5：1至約8：1； c)   一或兩種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：二甲亞碸(DMSO)、乙醇、PEG300、PEG400和丙二醇，且該共溶劑之總濃度為該總溶液之至多約15% (v/v)； d)   視需要的界面活性劑，其係選自由下列所組成的群組：聚山梨醇酯80 (PS80)、聚山梨醇酯20 (PS20)和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯；及 e)    緩衝劑，其為檸檬酸。
  29. 如請求項28之醫藥組成物，其包含： a)   約0.2mg/mL至約8mg/mL之濃度的N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽； b)   該複合劑，其為羥基丙基-β-環糊精(HP-β-CD)和磺丁基醚-β-環糊精(SBE-β-CD)，其中該複合劑對N-((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺之莫耳比為約2：1至約6：1；及 c)   一或兩種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：二甲亞碸(DMSO)、乙醇、PEG300、PEG400和丙二醇，且該共溶劑之總濃度為該總溶液之至多約10% (v/v)。
  30. 一種製備如請求項28之醫藥組成物之方法，其中該方法包含以下步驟： a)   將N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽溶解在一或多種共溶劑中以提供第一非水性溶液，該共溶劑係選自由下列所組成的群組：二甲亞碸(DMSO)、乙醇、PEG300、PEG400和丙二醇； b)   將羥基丙基-β-環糊精(HP-β-CD)或磺丁基醚-β-環糊精(SBE-β-CD)溶解在含水溶液中以提供第二水性溶液，該含水溶液含有檸檬酸緩衝劑和視需要的界面活性劑；及 c)   將來自步驟a)的該第一非水性溶液與來自步驟b)的該第二水性溶液組合以提供該醫藥組成物。
  31. 如請求項29之醫藥組成物，其包含約1.1%之乙醇(v/v)、約3.4%之PEG400 (v/v)、約80mg/mL之SBE-β-環糊精、約6mg/mL之N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺、至多約50mM檸檬酸，且其中pH為約4至約5。
  32. 如請求項26之醫藥組成物，其中該組成物為立即經重構成適合於腸胃外投予之溶液的親液物或粉末。
  33. 如請求項32之醫藥組成物，其中該組成物 a)   視需要地包含一或多種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：苯甲醇(BA)、二甲基丙烯醯胺(DMA)、二甲亞碸(DMSO)、乙醇、N-甲基吡咯啶酮(NMP)、聚乙二醇和丙二醇(PG)； b)   視需要地包含界面活性劑，其係選自由下列所組成的群組：聚乙烯基吡咯啶酮(PVP)、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙氧基化蓖麻油、卵磷脂、聚山梨醇酯80 (PS80)、聚山梨醇酯20 (PS20)和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯；且 c)   包含緩衝劑，其係選自由下列所組成的群組：乙酸、檸檬酸、乳酸、磷酸和酒石酸。
  34. 如請求項33之醫藥組成物，其為立即經重構成腸胃外溶液的粉末，其中該粉末包含N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺水合物(形式3)。
  35. 如請求項26至29及31至34中任一項之醫藥組成物，其係用於治療COVID-19。
  36. 一種水性液體組成物，其包含a)約0.2 mg/mL至約16mg/mL之N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽；b)複合劑；c)緩衝劑；d)視需要的一或多種共溶劑；及e)視需要的一或多種界面活性劑；其中該最終組成物具有約1.5至約6之pH，且該一或多種共溶劑當存在時的總量為該總溶液之至多15% (v/v)。
  37. 如請求項36之組成物，其中該組成物：a)係以每天約1000mL或更少的體積經靜脈內投予；b)具有約3至約5之pH；且c)具有該總溶液之至多約10%(v/v)的當存在時之一或多種共溶劑總量。
  38. 如請求項37之組成物，其中該組成物包含：a)約0.2mg/mL至約8.0mg/mL之N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺或其醫藥上可接受的鹽；b)複合劑，其係選自由下列所組成的群組：α-環糊精、β-環糊精、γ-環糊精、菸鹼醯胺、苯甲酸鈉和柳酸鈉，其中該複合劑對N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺之莫耳比為約1.5：1至約25：1；c)緩衝劑，其係選自由下列所組成的群組：乙酸、檸檬酸、乳酸、磷酸和酒石酸；d)一或多種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：苯甲醇(BA)、二甲基丙烯醯胺(DMA)、二甲亞碸(DMSO)、乙醇、N-甲基吡咯啶酮(NMP)、聚乙二醇和丙二醇(PG)，其中該一或多種共溶劑當存在時的總量為該總溶液之至多約6% (v/v)；及e)視需要的一或多種界面活性劑，其係選自由下列所組成的群組：聚乙烯基吡咯啶酮(PVP)、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙氧基化蓖麻油、卵磷脂、聚山梨醇酯80 (PS80)、聚山梨醇酯20 (PS20)和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯。
  39. 如請求項38之組成物，其中：a)該複合劑為β-環糊精；b) β-環糊精對N-((1S)-1-{[((1S)-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S)-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲醯胺之莫耳比為約1.5：1至約8：1；且c)該緩衝劑為至多約50mM檸檬酸。
  40. 如請求項39之組成物，其中：a)該組成物包含一至兩種共溶劑，其係選自由下列所組成的群組：二甲亞碸(DMSO)、乙醇、PEG300、PEG400和丙二醇(PG)；b)該複合劑係選自由下列所組成的群組：羥基丙基-β-環糊精(HP-β-CD)和磺丁基醚-β-環糊精(SBE-β-CD)；且c)該界面活性劑，當存在時，係選自聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20和聚乙二醇(15)-羥基硬脂酸酯。
  41. 如請求項40之組成物，其中：a)該兩種共溶劑為乙醇和二甲亞碸(DMSO)中一者且另一共溶劑係選自由下列所組成的群組：PEG300、PEG400和丙二醇(PG)，其中乙醇或DMSO對PEG 300、PEG400或PG之比為約1：2至約1：4；或該兩種共溶劑為乙醇和DMSO，其中乙醇對DMSO之比為約1：2至約1：4；b)羥基丙基-β-環糊精(HP-β-CD)或磺丁基醚-β-環糊精(SBE-β-CD)對N -((1S )-1-{[((1S )-3-羥基-2-側氧基-1-{[(3S )-2-側氧吡咯啶-3-基]甲基}丙基)胺基]羰基}-3-甲基丁基)-4-甲氧基-1H -吲哚-2-甲醯胺之莫耳比為約2：1至約6：1；且c)該檸檬酸緩衝劑之濃度為至多50mM。
  42. 如請求項41之組成物，其中該組成物適合連續靜脈內輸液，且該組成物的體積為約250mL至約500mL。
  43. 如請求項36至42中任一項之醫藥組成物，其係用於治療COVID-19。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114502566A (zh) * 2019-10-11 2022-05-13 住友化学株式会社 核酸寡聚物的制造方法
CN118909031A (zh) * 2021-12-29 2024-11-08 上海柯君医药科技有限公司 抗冠状病毒化合物及其组合物和用途
US12509483B2 (en) 2019-10-11 2025-12-30 Sumitomo Chemical Company, Limited Method for producing nucleic acid oligomers

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2023519158A (ja) * 2020-03-23 2023-05-10 グレッグ、ジョン、エムエイチ 抗ウィルス化合物
US12485157B2 (en) * 2020-04-05 2025-12-02 Pfizer Inc. Method of treating COVID-19
US20230143775A1 (en) * 2020-04-10 2023-05-11 Eagle Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating coronavirus infections
JP2024102382A (ja) * 2021-05-18 2024-07-31 国立研究開発法人国立国際医療研究センター 抗ウイルス活性等の生理活性を有する化合物
WO2022266363A1 (en) * 2021-06-16 2022-12-22 The Scripps Research Institute Protease inhibitors for the treatment of coronavirus infections
WO2023044171A1 (en) * 2021-09-20 2023-03-23 Pardes Biosciences, Inc. Inhibitors of cysteine proteases and methods of use thereof
CN115806570B (zh) * 2021-11-15 2023-09-12 南京知和医药科技有限公司 一种拟肽衍生物及其药物组合物和用途
WO2023133174A1 (en) * 2022-01-07 2023-07-13 Merck Sharp & Dohme Llc Protease inhibitors for treating or preventing coronavirus infection
JP2025508115A (ja) * 2022-03-08 2025-03-21 マスタリー バイオテック カンパニー，リミテッド レチノイン酸および炭水化物を含む医薬組成物ならびにその使用
EP4522128A1 (en) * 2022-05-13 2025-03-19 Suntec Medical, Inc. Method for treating infectious disease
CN115429812B (zh) * 2022-08-31 2023-11-17 深圳海王医药科技研究院有限公司 一种Molnupiravir磷脂复合物及其制备方法
WO2024227410A1 (zh) * 2023-05-04 2024-11-07 广东众生睿创生物科技有限公司 一种抗新冠药物组合物及其制备方法

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1996A (en) 1841-03-03 grimes
US5484926A (en) 1993-10-07 1996-01-16 Agouron Pharmaceuticals, Inc. HIV protease inhibitors
KR20010043004A (ko) 1998-04-30 2001-05-25 개리 이. 프라이드만 피코르나 바이러스 억제 화합물, 그의 제조 방법 및 용도
PE20010517A1 (es) 1999-08-24 2001-05-16 Agouron Pharma Las rutas sinteticas eficientes para la preparacion de los inhibidores de la proteasa del rinovirus y los intermedios claves
US7169932B2 (en) 2001-06-11 2007-01-30 Pfizer Inc. HIV protease inhibitors, compositions containing the same, their pharmaceutical uses, material for their synthesis
HN2002000136A (es) 2001-06-11 2003-07-31 Basf Ag Inhibidores de la proteasa del virus hiv, compuestos que contienen a los mismos, sus usos farmaceuticos y los materiales para su sintesis
WO2005054214A1 (en) 2003-12-04 2005-06-16 Pfizer Inc. Methods of preparing compounds useful as protease inhibitors
KR20060097047A (ko) 2003-12-04 2006-09-13 화이자 인코포레이티드 프로테아제 억제제로서 유용한 화합물의 제조 방법
WO2005113580A1 (en) 2004-05-21 2005-12-01 Pfizer Inc. Anticoronviral compounds and compositions, their pharmaceutical uses and materials for their synthesis
US10925889B2 (en) * 2014-05-12 2021-02-23 Gholam A. Peyman Method of treating, reducing, or alleviating a medical condition in a patient

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114502566A (zh) * 2019-10-11 2022-05-13 住友化学株式会社 核酸寡聚物的制造方法
CN114502566B (zh) * 2019-10-11 2025-02-11 住友化学株式会社 核酸寡聚物的制造方法
US12509483B2 (en) 2019-10-11 2025-12-30 Sumitomo Chemical Company, Limited Method for producing nucleic acid oligomers
CN118909031A (zh) * 2021-12-29 2024-11-08 上海柯君医药科技有限公司 抗冠状病毒化合物及其组合物和用途

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