TW202126689A

TW202126689A - 抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的cd20陽性癌之細胞增殖的藥劑，及其相關之醫藥組成物、醫藥、製造、抑制細胞增殖的方法、治療方法、ii型抗cd20抗體、化合物及其組合、增強劑以及誘導劑

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Publication number: TW202126689A
Application number: TW109132309A
Authority: TW
Inventors: 藤村多嘉朗; 加島依子
Original assignee: 日商中外製藥股份有限公司
Priority date: 2019-10-04
Filing date: 2020-09-18
Publication date: 2021-07-16
Also published as: JP7590334B2; US20240050562A1; AR122307A1; JPWO2021065568A1; KR20220079858A; TWI870465B; AU2020356896A1; WO2021065568A1; CA3151560A1

Abstract

在CD20陽性癌中，有對奧比妥珠單株抗體（obinutuzumab）具有耐受性的情形或在進行包含奧比妥珠單株抗體的治療之後復發的情形。對於對奧比妥珠單株抗體具有耐受性的CD20陽性癌或在進行包含奧比妥珠單株抗體的治療之後復發的CD20陽性癌，合併使用II型抗CD20抗體和選自由培尼皮質醇（prednisolone）、艾黴素（doxorubicin）及長春新鹼（vincristine）、以及該等的鹽類及前驅藥物（prodrug）所組成的群組之至少一化合物。這些化合物之中，可選擇培尼皮質醇及艾黴素、以及該等的鹽類及前驅藥物。再者，這些化合物之中，可選擇培尼皮質醇或其鹽或前驅藥物。

Description

抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之細胞增殖的藥劑，及其相關之醫藥組成物、醫藥、製造、抑制細胞增殖的方法、治療方法、II型抗CD20抗體、化合物及其組合、增強劑以及誘導劑

本發明關於抑制具奧比妥珠單株抗體（obinutuzumab）耐受性的CD20陽性癌之細胞增殖的藥劑，及其相關之醫藥組成物、醫藥、製造、抑制細胞增殖的方法、治療方法、II型抗CD20抗體、化合物及其組合、增強劑以及誘導劑。

專利文獻1記載，CD20陽性癌的治療中，合併使用具有增加的抗體依賴性細胞毒性（ADCC）的II型抗CD20抗體，和選自由環磷醯胺（cyclophosphamide）、長春新鹼（vincristine）及艾黴素（doxorubicin）所組成的群組之一個以上的化療劑。

專利文獻1：國際專利公開案第2009/118142號

在CD20陽性癌中，有對奧比妥珠單株抗體（obinutuzumab）具有耐受性的情形，或在進行包含奧比妥珠單株抗體的治療之後復發的情形。對於對奧比妥珠單株抗體具有耐受性的CD20陽性癌、或在進行包含奧比妥珠單株抗體的治療之後復發的CD20陽性癌，由本發明人等檢討提高使用了II型抗CD20抗體、特別是奧比妥珠單株抗體的治療之效果的手段。

本發明人等了解，對於對奧比妥珠單株抗體具有耐受性的CD20陽性癌、或在進行包含奧比妥珠單株抗體的治療之後復發的CD20陽性癌，經由合併使用選自由培尼皮質醇（prednisolone）、艾黴素（doxorubicin）及長春新鹼（vincristine）、以及該等的鹽類及前驅藥物（prodrug）所組成的群組之至少一化合物，可提高使用了II型抗CD20抗體、特別是奧比妥珠單株抗體的治療之效果。這些化合物之中，可選擇培尼皮質醇及艾黴素、以及該等的鹽類及前驅藥物。再者，這些化合物之中，可選擇培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物。基於這些見解，提供以下發明。

［1］一種用於抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之藥劑，包含II型抗CD20抗體，且和化學療法合併使用，該化學療法包含選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物的投予。［2］一種經由和包含選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物的投予的化學療法合併使用之用於抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之藥劑，其包含II型抗CD20抗體。［3］一種用於抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之藥劑，包含選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物，且和經由II型抗CD20抗體的治療合併使用。［4］一種經由和經由II型抗CD20抗體的治療合併使用之用於抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之藥劑，其包含選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物。［5］一種用於抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之醫藥，其係組合II型抗CD20抗體和選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物，同時地、分別地、或連續地投予。［6］如［1］～［4］任一項之藥劑，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤（B-cell non-Hodgkin's lymphoma）。［7］如［5］之醫藥，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［8］如［1］～［4］、及［6］任一項之藥劑，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［9］如［5］或［7］之醫藥，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［10］如［1］～［4］、［6］及［8］任一項之藥劑，其中，上述一化合物選自由培尼皮質醇及艾黴素、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組。［11］如［5］、［7］及［9］任一項之醫藥，其中，上述一化合物選自由培尼皮質醇及艾黴素、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組。［12］如［1］～［4］、［6］、［8］及［10］任一項之藥劑，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［13］如［5］、［7］、［9］、及［11］任一項之醫藥，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［14］如［1］～［4］、［6］、［8］、［10］、及［12］任一項之藥劑，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療（induction therapy）後的經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。［15］如［5］、［7］、［9］、［11］、及［13］任一項之醫藥，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療（maintenance therapy）開始後復發的癌。

［16］一種用於治療具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之醫藥組合物，包含II型抗CD20抗體，且和包含選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物的投予的化學療法合併使用。［17］一種經由和包含選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物的投予的化學療法合併使用之用於治療具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之醫藥組合物，包含II型抗CD20抗體。［18］一種用於治療具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之醫藥組合物，包含選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物，且和經由II型抗CD20抗體的治療合併使用。［19］一種經由和藉由II型抗CD20抗體的治療合併使用之用於治療具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之醫藥組合物，包含選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物。［20］一種用於治療具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之醫藥組合物，其係組合II型抗CD20抗體和選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物，同時地、分別地、或連續地投予。［21］如［16］～［20］任一項之醫藥組合物，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［22］如［16］～［21］任一項之醫藥組合物，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［23］如［16］～［22］任一項之醫藥組合物，其中，上述一化合物選自由培尼皮質醇及艾黴素、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組。［24］如［16］～［23］任一項之醫藥組合物，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［25］如［16］～［24］任一項之醫藥組合物，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。

［26］一種II型抗CD20抗體之用途，其係用於製備用於抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之藥劑，經由和包含選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物的投予的化學療法合併使用。［27］一種選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物之用途，其係用於製備用於抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之藥劑，經由和藉由II型抗CD20抗體的治療合併使用。［28］一種II型抗CD20抗體之用途，其係用於製備用於治療具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之醫藥組合物，經由和包含選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物的投予的化學療法合併使用。［29］一種選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物之用途，其係用於製備用於治療具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之醫藥組合物，經由和藉由II型抗CD20抗體的治療合併使用。［30］一種II型抗CD20抗體和選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物之用途，其係用於製備用於治療具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之醫藥組合物。［31］如［26］～［30］任一項之用途，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［32］如［26］～［31］任一項之用途，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［33］如［26］～［32］任一項之用途，其中，上述一化合物選自由培尼皮質醇及艾黴素、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組。［34］如［26］～［33］任一項之用途，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［35］如［26］～［34］任一項之用途，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。［36］一種用於在具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖的抑制中使用的II型抗CD20抗體，其係經由和包含選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物的投予的化學療法合併使用。［37］一種用於在具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖的抑制中使用的、選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物，經由和藉由II型抗CD20抗體的治療合併使用。［38］一種用於在具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖的抑制中使用的II型抗CD20抗體、和選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物之組合。［39］一種用於在具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的治療中使用的II型抗CD20抗體，其係經由和包含選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物的投予的化學療法合併使用。［40］一種用於在具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的治療中使用的選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物，經由和經由II型抗CD20抗體的治療合併使用。［41］一種用於在具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的治療中使用的II型抗CD20抗體、和選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物之組合。［42］如［36］或［39］之II型抗CD20抗體，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［43］如［37］或［40］之一化合物，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［44］如［38］或［41］之組合，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［45］如［36］、［39］及［42］任一項之II型抗CD20抗體，其係奧比妥珠單株抗體。［46］如［37］、［40］、及［43］任一項之一化合物，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［47］如［38］、［41］、及［44］任一項之組合，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［48］如［36］、［39］、［42］、及［45］任一項之II型抗CD20抗體，其中，上述一化合物選自由培尼皮質醇及艾黴素、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組。［49］如［37］、［40］、［43］、及［46］任一項之一化合物，其係選自由培尼皮質醇及艾黴素、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組。［50］如［38］、［41］、［44］、及［47］任一項之組合，其中，上述一化合物選自由培尼皮質醇及艾黴素、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組。［51］如［36］、［39］、［42］、［45］、及［48］任一項之II型抗CD20抗體，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［52］如［37］、［40］、［43］、［46］、及［49］任一項之一化合物，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［53］如［38］、［41］、［44］、［47］、及［50］任一項之組合，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［54］如［36］、［39］、［42］、［45］、［48］、及［51］任一項之II型抗CD20抗體，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。［55］如［37］、［40］、［43］、［46］、［49］、及［52］任一項之一化合物，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。

［56］一種抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之方法，包含對具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞， i）投予II型抗CD20抗體， ii）投予選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物。［57］如［56］之方法，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［58］如［56］或［57］之方法，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［59］如［56］～［58］任一項之方法，其中，上述一化合物選自由培尼皮質醇及艾黴素、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組。［60］如［56］～［59］任一項之方法，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［61］如［56］～［60］任一項之方法，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。［62］如［56］～［61］任一項之方法，其係活體外（in vitro）及人類以外的活體內（in vivo）之方法。

［63］一種具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之治療方法，包含對具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的活體， i）投予II型抗CD20抗體， ii）投予選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物。［64］如［63］之治療方法，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［65］如［63］或［64］之治療方法，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［66］如［63］～［65］任一項之治療方法，其中，上述一化合物選自由培尼皮質醇及艾黴素、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組。［67］如［63］～［66］任一項之治療方法，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［68］如［63］～［67］任一項之治療方法，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。

［69］一種經由II型抗CD20抗體的具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞之細胞週期停止或細胞死亡的增強劑，包含培尼皮質醇（prednisolone）或其鹽類或前驅藥物。［70］一種增強劑，包含培尼皮質醇、或其鹽類或前驅藥物，經由和II型抗CD20抗體合併使用而投予，經由上述合併使用，用於增強對具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡。［71］一種用於增強對具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡的誘導之增強劑，包含培尼皮質醇、或其鹽類或前驅藥物，且和II型抗CD20抗體合併使用。［72］一種具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞之細胞週期停止或細胞死亡的誘導劑，包含II型抗CD20抗體，經由和包含培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物的投予的化學療法合併使用而投予，經由上述合併使用，用於增強對具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡的誘導。［73］一種用於增強對具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡的誘導之誘導劑，包含II型抗CD20抗體，和包含培尼皮質醇、或其鹽類或前驅藥物的投予的化學療法合併使用。［74］一種用於增強對具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡的誘導之藥劑，其係組合II型抗CD20抗體、和培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物，同時地、分別地、或連續地投予。［75］如［69］～［74］任一項之藥劑，其中，上述的前驅藥物為普賴鬆（prednisone），上述II型抗CD20抗體及上述普賴鬆投予至活體。［76］如［69］～［75］任一項之藥劑，其中，上述細胞週期停止為停止於G0/G1期。［77］如［69］～［76］任一項之藥劑，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［78］如［69］～［77］任一項之藥劑，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［79］如［69］～［78］任一項之藥劑，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［80］如［69］～［79］任一項之藥劑，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。

［81］一種培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物之用途，其係用於製備藉由II型抗CD20抗體的具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡的增強劑。［82］一種II型抗CD20抗體之用途，其係用於製造具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡的誘導劑，經由和包含培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物的投予的化學療法的合併使用而投予，經由上述合併使用，用於增強對具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡的誘導。［83］一種II型抗CD20抗體、及培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物之用途，其用於製造用於增強具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡的誘導的藥劑。［84］如［81］～［83］任一項之用途，其中，上述的前驅藥物為普賴鬆（prednisone），上述II型抗CD20抗體及上述普賴鬆投予至活體。［85］如［81］～［84］任一項之用途，其中，上述細胞週期停止為停止於G0/G1期。［86］如［81］～［85］任一項之用途，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［87］如［81］～［86］任一項之用途，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［88］如［81］～［87］任一項之用途，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［89］如［81］～［88］任一項之用途，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。［90］一種培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物，其係用於在經由II型抗CD20抗體的具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡的增強中使用。［91］一種II型抗CD20抗體，其係經由和包含培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物的投予的化學療法的合併使用，用於在對具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡的誘導的增強中使用。［92］一種II型抗CD20抗體、及培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物之組合，其係用於在對具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡的誘導的增強中使用。［93］如［90］之培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物，其中，上述的前驅藥物為普賴鬆（prednisone），上述II型抗CD20抗體及上述普賴鬆投予至活體。［94］如［91］之II型抗CD20抗體，其中，上述的前驅藥物為普賴鬆，上述II型抗CD20抗體及上述普賴鬆投予至活體。［95］如［92］之組合，其中，上述的前驅藥物為普賴鬆，上述II型抗CD20抗體及上述普賴鬆投予至活體。［96］如［90］或［93］之培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物，其中，上述細胞週期停止為在G0/G1期的停止。［97］如［91］或［94］之II型抗CD20抗體，其中，上述細胞週期停止為在G0/G1期的停止。［98］如［92］或［95］之組合，其中，上述細胞週期停止為在G0/G1期的停止。［99］如［90］、［93］、及［96］任一項之培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［100］如［91］、［94］、及［97］任一項之II型抗CD20抗體，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［101］如［92］、［95］、及［98］任一項之組合，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［102］如［90］、［93］、［96］、及［99］任一項之培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［103］如［91］、［94］、［97］、及［100］任一項之II型抗CD20抗體，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［104］如［92］、［95］、［98］、及［101］任一項之組合，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［105］如［90］、［93］、［96］、［99］、及［102］任一項之培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［106］如［91］、［94］、［97］、［100］、及［103］任一項之II型抗CD20抗體，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［107］如［92］、［95］、［98］、［101］、及［104］任一項之組合，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［108］如［90］、［93］、［96］、［99］、［102］、及［105］任一項之培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後、復發的癌。［109］如［91］、［94］、［97］、［100］、［103］、及［106］任一項之II型抗CD20抗體，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後、復發的癌。［110］如［92］、［95］、［98］、［101］、［104］、及［107］任一項之組合，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後、復發的癌。

［111］一種經由II型抗CD20抗體增強具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡之方法，包含投予培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物。［112］一種誘導具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡之方法，包含經由和含有培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物的投予的化學療法的合併使用，投予II型抗CD20抗體，經由上述合併使用，增強對具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡。［113］如［111］或［112］之方法，其中，上述的前驅藥物為普賴鬆（prednisone），上述II型抗CD20抗體及上述普賴鬆投予至活體。［114］如［111］～［113］任一項之方法，其中，上述細胞週期停止為在G0/G1期的停止。［115］如［111］～［114］任一項之方法，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［116］如［111］～［115］任一項之方法，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［117］如［111］～［116］任一項之方法，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［118］如［111］～［117］任一項之方法，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。［119］如［111］～［118］任一項之方法，其係活體外（in vitro）及人類以外的活體內（in vivo）之方法。

［120］一種用於抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之藥劑，包含II型抗CD20抗體，且和包含凋亡蛋白酶（caspase）活化劑的投予的化學療法合併使用。［121］一種經由和包含凋亡蛋白酶活化劑的投予的化學療法合併使用之用於抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之藥劑，包含II型抗CD20抗體。［122］一種用於抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之藥劑，包含凋亡蛋白酶活化劑，且和經由II型抗CD20抗體的治療合併使用。［123］一種經由和藉由II型抗CD20抗體的治療合併使用之用於抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之藥劑，包含凋亡蛋白酶活化劑。［124］一種用於抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之藥劑，其係組合II型抗CD20抗體、和凋亡蛋白酶活化劑，同時地、分別地、或連續地投予。［125］如［120］～［123］任一項之藥劑，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［126］如［124］之醫藥，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［127］如［120］～［123］、及［125］任一項之藥劑，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［128］如［124］或［126］任一項之藥劑，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［129］如［120］～［123］、［125］、及［127］任一項之藥劑，其中，上述凋亡蛋白酶活化劑為艾黴素（doxorubicin）或其鹽類。［130］如［124］、［126］、及［128］任一項之醫藥，其中，上述凋亡蛋白酶活化劑為艾黴素或其鹽類。［131］如［120］～［123］、［125］、［127］、及［129］任一項之藥劑，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［132］如［124］、［126］、［128］、及［130］任一項之醫藥，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［133］如［120］～［123］、［125］、［127］、［129］、及［131］任一項之藥劑，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。［134］如［124］、［126］、［128］、［130］、及［132］任一項之醫藥，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。

［135］一種用於治療具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之醫藥組合物，包含II型抗CD20抗體，且和包含凋亡蛋白酶活化劑的投予的化學療法合併使用。［136］一種經由和包含凋亡蛋白酶活化劑的投予的化學療法合併使用之用於治療具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之醫藥組合物，包含II型抗CD20抗體。［137］一種用於治療具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之醫藥組合物，包含凋亡蛋白酶活化劑，且和經由II型抗CD20抗體的治療合併使用。［138］一種經由和經由II型抗CD20抗體的治療合併使用之用於治療具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之醫藥組合物，包含凋亡蛋白酶活化劑。［139］一種用於治療具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之醫藥組合物，其係組合II型抗CD20抗體、和凋亡蛋白酶活化劑，同時地、分別地、或連續地投予。［140］如［135］～［139］任一項之醫藥組合物，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［141］如［135］～［140］任一項之醫藥組合物，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［142］如［135］～［141］任一項之醫藥組合物，其中，上述凋亡蛋白酶活化劑為艾黴素（doxorubicin）或其鹽類。［143］如［135］～［142］任一項之醫藥組合物，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［144］如［135］～［143］任一項之醫藥組合物，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。

［145］一種II型抗CD20抗體之用途，其係用於製備用於抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之藥劑，經由和包含凋亡蛋白酶活化劑的投予的化學療法合併使用。［146］一種凋亡蛋白酶活化劑之用途，其係用於製備用於抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之藥劑，經由和藉由II型抗CD20抗體的治療合併使用。［147］一種II型抗CD20抗體之用途，其係用於製備用於治療具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之醫藥組合物，經由和包含凋亡蛋白酶活化劑的投予的化學療法合併使用。［148］一種凋亡蛋白酶活化劑之用途，其係用於製備用於治療具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之醫藥組合物，經由和經由II型抗CD20抗體的治療合併使用。［149］一種II型抗CD20抗體及凋亡蛋白酶活化劑之用途，其係用於製備用於治療具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之醫藥組合物。［150］如［145］～［149］任一項之用途，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［151］如［145］～［150］任一項之用途，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［152］如［145］～［151］任一項之用途，其中，上述凋亡蛋白酶活化劑為艾黴素或其鹽類。［153］如［145］～［152］任一項之用途，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［154］如［145］～［153］任一項之用途，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。［155］一種II型抗CD20抗體，其係用於在具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖的抑制中使用，經由和包含凋亡蛋白酶活化劑的投予的化學療法合併使用。［156］一種凋亡蛋白酶活化劑，其係用於在具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖的抑制中使用，經由和經由II型抗CD20抗體的治療合併使用。［157］一種II型抗CD20抗體，其係用於在具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的治療中使用，經由和包含凋亡蛋白酶活化劑的投予的化學療法合併使用。［158］一種凋亡蛋白酶活化劑，其係用於在具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的治療中使用，經由和經由II型抗CD20抗體的治療合併使用。［159］一種II型抗CD20抗體及凋亡蛋白酶活化劑之組合，其係用於在具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的治療中使用。［160］如［155］或［157］之II型抗CD20抗體，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［161］如［156］或［158］之凋亡蛋白酶活化劑，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［162］如［159］之組合，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［163］如［155］、［157］、及［160］任一項之II型抗CD20抗體，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［164］如［156］、［158］、及［161］任一項之凋亡蛋白酶活化劑，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［165］如［159］或［162］之組合，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［166］如［155］、［157］、［160］、及［163］任一項之II型抗CD20抗體，其中，上述凋亡蛋白酶活化劑為艾黴素或其鹽類。［167］如［156］、［158］、［161］、及［164］任一項之凋亡蛋白酶活化劑，其中，上述凋亡蛋白酶活化劑為艾黴素或其鹽類。［168］如［159］、［162］、及［165］任一項之組合，其中，上述凋亡蛋白酶活化劑為艾黴素或其鹽類。［169］如［155］、［157］、［160］、［163］、及［166］任一項之II型抗CD20抗體，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［170］如［156］、［158］、［161］、［164］、及［167］任一項之凋亡蛋白酶活化劑，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［171］如［159］、［162］、［165］、及［168］任一項之組合，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［172］如［155］、［157］、［160］、［163］、［166］、及［169］任一項之II型抗CD20抗體，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。［173］如［156］、［158］、［161］、［164］、［167］、及［170］任一項之凋亡蛋白酶活化劑，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。［174］如［159］、［162］、［165］、［168］、及［171］任一項之組合，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。

［175］一種抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之方法，包含對具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞， i）投予II型抗CD20抗體， ii）投予凋亡蛋白酶活化劑。［176］如［175］之方法，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［177］如［175］或［176］之方法，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［178］如［175］～［177］任一項之方法，其中，上述凋亡蛋白酶活化劑為艾黴素或其鹽類。［179］如［175］～［178］任一項之方法，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［180］如［175］～［179］任一項之方法，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。［181］如［175］～［180］任一項之方法，其係活體外（in vitro）及人類以外的活體內（in vivo）之方法。

［182］一種具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之治療方法，包含對具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的活體， i）投予II型抗CD20抗體， ii）投予凋亡蛋白酶活化劑。［183］如［182］之治療方法，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。［184］如［182］或［183］之治療方法，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。［185］如［182］～［184］任一項之治療方法，其中，上述凋亡蛋白酶活化劑為艾黴素或其鹽類。［186］如［182］～［185］任一項之治療方法，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。［187］如［182］～［186］任一項之治療方法，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。［發明效果］

根據本發明，對於具奧比妥珠單株抗體（obinutuzumab）耐受性的CD20陽性癌或進行包含奧比妥珠單株抗體的治療之後復發的CD20陽性癌，經由合併使用選自由培尼皮質醇（prednisolone）、艾黴素（doxorubicin）及長春新鹼（vincristine）、以及該等的鹽類及前驅藥物（prodrug）所組成的群組之至少一化合物，可提高藉由使用II型抗CD20抗體、特別是奧比妥珠單株抗體的治療之效果。這些化合物之中，可選擇培尼皮質醇及艾黴素、以及該等的鹽類及前驅藥物。再者，這些化合物之中，可選擇培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物。

［為實施發明之形態］

A. 抑制細胞增殖之藥劑或醫藥（a1）第1態樣在一態樣，本發明提供用於抑制具奧比妥珠單株抗體（obinutuzumab）耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之藥劑或醫藥。在該態樣中的第一例，該藥劑含有II型抗CD20抗體。該藥劑和化學療法合併使用，該化學療法包含選自由培尼皮質醇（prednisolone）、艾黴素（doxorubicin）及長春新鹼（vincristine）、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物的投予。在該態樣中的第二例，該藥劑含有選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物。該藥劑和藉由II型抗CD20抗體的治療合併使用。在該態樣中的第三例，該醫藥為組合II型抗CD20抗體和選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物，同時地、分別地、或連續地投予之醫藥。

在該態樣中，B細胞性淋巴瘤為該CD20陽性癌之例。在該態樣，B細胞性非何杰金氏淋巴瘤（B-cell non-Hodgkin's lymphoma）為該B細胞性淋巴瘤之例。在該態樣，CD20陽性癌較佳為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。根據WHO的分類，B細胞性非何杰金氏淋巴瘤例如，以前驅B細胞腫瘤為來源細胞的前驅B淋巴母細胞白血病/淋巴瘤，以及以成熟B細胞腫瘤為來源細胞的B細胞慢性淋巴性白血病/小淋巴球性淋巴瘤、B細胞前淋巴球性白血病、淋巴漿細胞性淋巴瘤、B細胞脾臟緣帶淋巴瘤（±毛淋巴球）、毛細胞白血病、漿細胞骨髓瘤/漿細胞瘤、MALT型的結外緣帶B細胞淋巴瘤、結節性緣帶B細胞淋巴瘤（±單核球狀B細胞）、濾泡性淋巴瘤、被套細胞淋巴瘤（mantle cell lymphoma）、瀰漫性大細胞型B細胞淋巴瘤（包含縱膈大細胞型B細胞淋巴瘤、及原發性滲出液淋巴瘤）、以及勃奇氏淋巴瘤（Burkitt's lymphoma）。在該態樣中，此等之中，B細胞性非何杰金氏淋巴瘤較佳為濾泡性淋巴瘤。非何杰金氏淋巴瘤，根據其惡性程度，分類為低惡性度淋巴瘤、中惡性度淋巴瘤、及高惡性度淋巴瘤。再更詳細分類B細胞性非何杰金氏淋巴瘤，例如第1、2級的濾泡性淋巴瘤及MALT淋巴瘤為低惡性度淋巴瘤，第3級的濾泡性淋巴瘤、被套細胞淋巴瘤、及瀰漫性大細胞型B細胞淋巴瘤為中惡性度淋巴瘤，勃奇氏淋巴瘤為高惡性度淋巴瘤。在根據惡性度的情況下，由於B細胞性非何杰金氏淋巴瘤包含濾泡性淋巴瘤，因此較佳為低惡性及中惡性度淋巴瘤。

在該態樣中，舉例具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌作為具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之例。該「具奧比妥珠單株抗體耐受性」可和「具奧比妥珠單株抗體抗性」互換。有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌包含在進行包含奧比妥珠單株抗體的治療後復發的CD20陽性癌。在該態樣中，具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌較佳為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌更佳為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。在此，本說明書中，所謂「耐受性」是指，只要是細胞或個體對於疾病的處置或治療沒有反應性（也稱為敏感性），且/或產生有意義的反應（例如，部分奏效及/或完全奏效）的能力降低的狀態，則沒有特別限制。例如，具奧比妥珠單株抗體耐受性的癌對使用了奧比妥珠單株抗體的處置完全沒有反應性，或者不顯示所謂的部分奏效或完全奏效的有意義反應的癌。對對於藥劑具有「耐受性」的癌投予該藥劑，不僅無法獲得所期望的效果，甚至有更加進展或轉變為惡性度高的癌的情形。又所謂「耐受性」可以是「先天性耐受性」，也可以是「後天性耐受性」。特別是，本發明之藥劑，在醫藥等中的後天性耐受性也可以是經過習知的奧比妥珠單株抗體處理後所產生的耐受性。例如，也有在治療初期有效而重複繼續治療，最後對於該治療，癌獲得耐受性，即使在奧比妥珠單株抗體的存在下也不退縮、或更為進展的情形。又，所謂「奧比妥珠單株抗體耐受性」如在G段所說明，可和「抗CD20抗體耐受性」一詞互換。如後述，除了奧比妥珠單株抗體在醫藥品通用名稱（JAN）中指定為「奧比妥珠單株抗體（基因重組）（Obinutuzumab（Genetical Recombination））」外，也可包含其生物相似物（biosimilar）或生物改良藥（biobetter）、及相對於奧比妥珠單株抗體的胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、98%、99%的序列相同性之胺基酸序列的抗體、或為其抗原結合片段的II型抗CD20抗體。因此，所謂「奧比妥珠單株抗體耐受性」也包含對「奧比妥珠單株抗體（基因重組）（Obinutuzumab（Genetical Recombination））」、其生物相似物或生物改良藥、及上述II型抗CD20抗體的耐受性。具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的其他例子，例如在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後的經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。該誘導治療為，經由奧比妥珠單株抗體和其他化學療法的合併使用的強力治療而得到部分奏效以上的奏效者，或者以確認病情不進展為目標的療法。包含該部分奏效或該病情進展的抗腫瘤效果係根據國際工作小組（IWG：International Working Group）的「惡性淋巴癌效果判定標準（修訂版）」來評估。該誘導治療通常持續24週。在經由奧比妥珠單株抗體和CHOP療法或CVP療法的合併使用的誘導治療中，奧比妥珠單株抗體的投予以3週為1個循環，進行8個循環。在經由和苯達莫司汀（bendamustine）的合併使用的誘導治療，奧比妥珠單株抗體的投予以4週為1個循環，進行6個循環。在該誘導治療的第1個循環，奧比妥珠單株抗體在第1、8、15日投予，在第2個循環以後在第1日投予。在誘導治療中因毒性等的原因而停止其他化學療法的情形時，可繼續奧比妥珠單株抗體的單獨投予。另一方面，該維持治療在該誘導治療中獲得部分奏效以上的奏效的患者中，在該誘導治療後以奧比妥珠單株抗體單劑最長2年持續治療。在該維持治療中，奧比妥珠單株抗體在2個月投予1次。在該誘導治療及該維持治療中，投予1日1次、每次1000mg的奧比妥珠單株抗體。投予方法沒有特別限定，較佳為靜脈注射。除了上述在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後、經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌，在上述誘導治療中停止該其他化學療法、之後繼續奧比妥珠單株抗體的單獨投予的情形時，對奧比妥珠單株抗體形成抗性的CD20陽性癌為具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的其他例。在這些所有態樣中，具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的癌瘤較佳為濾泡性淋巴瘤。

在該態樣中，II型抗CD20抗體可在該藥劑製造時從公知者中適宜選擇。在該態樣中，奧比妥珠單株抗體為II型抗CD20抗體之例。在該態樣中，II型抗CD20抗體較佳為奧比妥珠單株抗體。

本說明書所使用之用語「抗CD20抗體」為和CD20特異性結合的抗體。根據抗CD20抗體對CD20抗原的結合性及生物學活性，抗CD20抗體的2個型（I型及II型的抗CD20抗體），依Cragg, M. S.等，Blood 103（2004）2738-2743及Cragg, M. S. 等，Blood 101 （2003）1045-1052而區分。參照表1。

［表1］表1 I型及II型的抗CD20抗體的特性

I型抗CD20抗體	II型抗CD20抗體
I型CD20抗原決定位	II型CD20抗原決定位
CD20定位於脂筏（lipid raft）	CD20不定位於脂筏
增加的CDC（IgG1同型的情形）	減少的CDC（IgG1同型的情形）
ADCC活性（IgG1同型的情形）	ADCC活性（IgG1同型的情形）
完全的結合能力	減少的結合能力
同型凝集（homotypic aggregation）	較強的同型凝集
在交聯時細胞凋亡誘導	非交聯時誘導強的細胞死亡

I型及II型的抗CD20抗體的一個必要特性為其結合形式。因此，根據相對於利妥昔單株抗體（rituximab），抗體的抗CD20的比，即對於Raji氏細胞（ATCC編號CCL-86）的CD20的結合能力，來分類I型及II型的抗CD20抗體。

II型抗CD20抗體相對於利妥昔單株抗體（rituximab）所具有的抗CD20抗體的對於Raji氏細胞（ATCC編號CCL-86）的CD20的結合能力的比，為0.3～0.6、較佳為0.35～0.55、更佳為0.4～0.5。如此的II型抗CD20抗體之例，包括托西莫單株抗體（tositumomab）（B1IgG2a）、人源化B-Ly1抗體IgG1（國際專利公開案第2005/044859號所揭示之嵌合人源化IgG1抗體）、11B8IgG1（國際專利公開案第2004/035607號所揭示）、及AT80I g G1。較佳為，上述II型抗CD20抗體為和人源化B-Ly1抗體結合於相同抗原決定位的單株抗體（國際專利公開案第2005/044859號所揭示）。

相對於II型抗CD20抗體，I型抗CD20抗體相對於利妥昔單株抗體（rituximab）所具有的抗CD20抗體的對於Raji氏細胞（ATCC編號CCL-86）的CD20的結合能力的比，為0.8～1.2、較佳為0.9～1.1。如此的I型抗CD20抗體之例，包括利妥昔單株抗體（rituximab）、1F5IgG2a（ECACC，融合瘤; Press, O. W. 等，Blood 69/2 （1987） 584-591）、HI47IgG3（ECACC，融合瘤）、2C6IgG1（國際專利公開案第2005/103081號所揭示）、2F2IgG1（國際專利公開案第2004/035607號及國際專利公開案第2005/103081號所揭示）及2H7IgG1（國際專利公開案第2004/056312號所揭示）。

所謂「相對於利妥昔單株抗體（rituximab）的抗CD20抗體的對於Raji氏細胞（ATCC編號CCL-86）的CD20的結合能力的比」是在以實施例2所記載的Raji氏細胞（ATCC編號CCL-86）的FACS Array（Becton Dickinson），使用和Cy5複合的上述抗CD20抗體及和Cy5複合的利妥昔單株抗體（rituximab），經由直接的免疫螢光測量所測量（測量平均螢光強度（MFI）），如下述計算。

對於Raji氏細胞（ATCC編號CCL-86）上的CD20的結合能力的比

MFI為平均螢光強度。本說明書所使用的「Cy5標記率」表示每抗體分子的Cy5標記分子數。典型為，上述II型抗CD20抗體具有0.3～0.6、較佳為0.35～0.55、更佳為0.4～0.5的相對於和利妥昔單株抗體（rituximab）的II型抗CD20抗體的對於Raji氏細胞（ATCC編號CCL-86）的CD20的結合能力的比。本說明書中的II型抗CD20抗體具有增加的抗體依賴性細胞毒性（ADCC）。所謂「有增加的抗體依賴性細胞毒性（ADCC）的抗體」或「具有增加的抗體依賴性細胞毒性（ADCC）的抗體」，如本說明書所定義，具有依此技術領域之人士公知的任意適宜方法所決定的增加的ADCC。一個被承認的活體外（in vitro）ADCC分析法如下述： 1）上述分析法使用表現被該抗體的抗原結合區域辨識的目標抗原之已知的標靶細胞； 2）上述分析法使用從隨機選擇的健康捐贈者的血液分離的人類周邊血液單核細胞（PBMC）作為作用細胞（effector cell）； 3）上述分析法根據以下步驟實施： i）PBMC使用標準的濃度離心法分離，在RPMI細胞培養基中以5×10⁶ 細胞/mL懸浮； ii）標靶細胞以標準的組織培養法進行增殖，以超過90%的生存性從指數成長期採集，以RPMI細胞培養基洗淨，用100μCi的⁵¹ Cr標記，以細胞培養基清洗2次，以10⁵ 細胞/mL的濃度於細胞培養基再懸浮； iii）將100μL的上述最終標靶細胞懸浮液移到96-孔微滴定盤的各孔； iv）抗體在細胞培養基中階段性稀釋至4000ng/mL～0.04 ng/mL，將50μL的所得抗體溶液加到96-孔微滴定盤的標靶細胞，以覆蓋上述濃度範圍整體，3點測試各種抗體濃度； v）關於最大釋放（MR）對照，在含有已標記的標記細胞的盤中的3個追加的孔，加入50μL的2%（VN）非離子界面活性劑水溶液（Nonidet，Sigma，St. Louis），取代抗體溶液（上述的iv）； vi）關於自動釋放（SR）對照，在含有已標記的標記細胞的盤中的3個追加的孔，加入50μL的RPMI細胞培養基，取代抗體溶液（上述的iv）； vii）之後，96-孔微滴定盤以50×g離心1分鐘，在4℃培養1小時； viii）將50μL的PBMC懸浮液（上述的I）加入各孔，獲得作用細胞：標靶細胞為25：1的比例，將盤放置在37℃、4小時、5%CO₂ 環境的培養箱中； ix）從各孔採集無細胞的上清液，用γ計數器定量實驗性釋放的放射活性（ER）； x）特定的溶解物的百分比為，根據公式（ER-MR）/（MR-SR）×100（ER為關於抗體濃度所定量的平均放射活性（參照上述ix），MR為關於MR對照（參照上述v）所定量的平均放射活性（參照上述ix），SR為關於SR對照（參照上述vi）所定量的平均放射活性（參照上述ix））的各抗體濃度進行計算； 4）「增加的ADCC」定義為在上述試驗的抗體濃度範圍內所觀察的特定溶解物的最大百分比的增加，及/或為了達到在上述所試驗的抗體濃度內所觀察的特定溶解物的最大百分比的一半所必要的抗體濃度的減少。ADCC的增加是，使用上述分析法，透過使用此技術領域之人士公知的相同標準生產、純化、形成及保存法，經同種的宿主細胞所產生的相同抗體所測量的ADCC，但並非經由使GnTIII過度表現所製作的宿主細胞產生的ADCC。

上述「增加的ADCC」經由上述抗體的糖鏈工程方法獲得。其意指經由製作如Umana P. 等，Nature Biotechnol. 17（1999）176-180、及美國專利第6,602,684號說明書所記載的其寡糖成分之單株抗體的天然的、細胞-媒介的作用細胞功能。

用語「補體依賴性細胞毒性（CDC）」是指在補體存在下經本發明之抗體的人類腫瘤標靶細胞的分解。CDC較佳為，在補體存在下，經本發明之抗CD20抗體的CD20表現細胞的調配物的處理所測量。在該抗體100nM的濃度、4小時後誘導腫瘤細胞20%以上的分解（細胞死亡）的情形下，觀察為CDC。此分析法較佳使用⁵¹ Cr或Eu標記腫瘤細胞、及釋放的⁵¹ Cr或Eu的量測。對照者包含無該抗體、經補體的腫瘤標靶細胞的培養。

典型地，IgG1同型（isotype）的II型抗CD20抗體顯示特徵的CDC。II型抗CD20抗體較IgG1同型的I型抗CD20抗體具有減少的CDC（在為IgG1同型的情形）。較佳為，II型抗CD20抗體為IgG1同型抗體。

所謂「利妥昔單株抗體（Rituximab）」抗體（參照抗體；I型抗CD20抗體之例）為經基因重組製作、包含人類γ1恆定域（constant domain）的針對人類CD20抗原的嵌合小鼠單株抗體。此嵌合抗體在1998年4月17日發行的IDEC Pharmaceuticals Corporation的美國專利第5,736,137號說明書（Anderson, K. C. 等）中鑑定為「C2B8」之名稱。利妥昔單株抗體被認定用於患有復發性、難治性為低度的、濾泡性的、CD20陽性的B細胞非何杰金氏淋巴瘤之患者的治療。作用研究的活體外（in vitro）機制已清楚利妥昔單株抗體顯示人類補體依賴性細胞毒性（CDC）（Reff, M. E. 等, Blood 83（2）（1994） 435-445）。再者，其在測量抗體依賴性細胞毒性（ADCC）的分析法中顯示顯著的活性。

上述寡糖成分顯著地影響包含物理安定性、對蛋白酶攻擊的耐受性、和免疫系統的交互作用、藥物動力學、及特定生物學活性的治療上的醣蛋白的效果的相關特性。這些特性不僅取決於寡糖的存在或不存在，還有其特定的結構。寡糖結構和醣蛋白功能之間有一些共通化。例如，某寡糖結構經由和特定的糖鍵結蛋白的交互作用，媒介血流中的醣蛋白快速清除（clearence），但其他的寡糖結構因抗體而結合，誘發不期望的免疫反應（Jenkins, N. 等, Nature Biotechnol. 14 （1996）975-81）。

由於以適合人類的最適合形態使蛋白質糖基化的能力，哺乳動物細胞是用於產生治療性的醣蛋白的較佳宿主（Cumming, D. A.等, Glycobiology 1 （1991）115-30；Jenkins, N. 等, Nature Biotechnol. 14 （1996） 975-81）。細菌幾乎不將蛋白質糖基化，如酵母菌、絲狀菌、昆蟲、及植物細胞般的一般宿主的其他種類，提供與從血流的快速清除、不期望的免疫交互作用、視情況減少的生物學活性相關的糖基化形式（glycosyl pattern）。哺乳動物細胞之中，在近20年間是最通常使用中國倉鼠卵巢（CHO）細胞。除了指定的較佳的糖基化形式外，這些細胞允許基因穩定地高生產性的選殖細胞株一致性生成。該等可使用無血清的媒介物在單一生物反應中高濃度培養，進行安全且可再生的生物製程的開發。其他一般使用的動物細胞包括幼倉鼠腎（BHK）細胞、NSO-及SP2/0-小鼠骨髓瘤細胞。近期也試驗由基因轉殖動物產生（Jenkins, N. 等, Nature Biotechnol. 14（1996）975-981）。

所有的抗體在重鏈恆定區中的保留性位置包含醣鏈結構，各同位素具有可變性地影響蛋白質組裝（assembly）、分泌或功能性活性的N端連接的醣鏈結構的不同排列（Wright, A.及Monison, S. L., Trends Biotech. 15（1997）26-32）。已連結的N端連接的醣鏈結構根據加工（processing）的程度而有相當地改變，可包含高甘露糖型、多分歧型（multiply-branched）及雙分歧型（biantennary）的複雜寡糖（Wright, A.及Morrison, S. L., Trends Biotech. 15（1997）26-32）。典型地，和特定的糖基化部位結合的核心的寡糖結構的不均一加工，因此即使單株抗體都存在複數個糖型（glycoform）。同樣地，可知抗體的糖基化的主要差異發生在細胞株之間，對於在不同培養條件下成長的指定細胞數也可見微小的差異（Lifely, M. R. 等, Glycobiology 5（8）（1995）813-22）。

獲得能力大幅增加、同時維持單一的產生過程、潛在地避免顯著不期望的副作用的一方法為，製作根據Umana, P. 等, Nature Biotechnol. 17（1999）176-180及美國專利第6,602,684號說明書所記載之寡糖成分，使單株抗體的天燃的、細胞媒介的作用功能亢進。IgG1型抗體為癌症免疫療法最通常使用的抗體，是在各CH2域的Asn297具有保留性N端連接的糖基化部位的醣蛋白。和Asn297連接的2個複合體的分歧為二的寡糖，埋於CH2域之間，和多胜肽骨架大幅接觸，為了使該抗體媒介如抗體依賴性細胞毒性（ADCC）的作用功能，其存在是必要的（Lifely, M. R. 等, Glycobiology 5 （1995） 813-822; Jefferis, R. 等, Immunol. Rev. 163 （1998） 59-76; Wright, A. and Morrison, S. L., Trends Biotechnol. 15 （1997） 26-32）。

至今已了解，β（1,4）-N-乙醯基葡萄糖胺基轉移酶III （"GnTIII7y）、即催化二等分的寡糖的形成的糖基轉移酶，在中國倉鼠卵巢（CHO）細胞中的過度表現，使經由所製作的CHO細胞所產生的抗神經母細胞瘤嵌合單株抗體（chCE7）的活體外ADCC活性顯著增加（Umana, P. 等, Nature Biotechnol. 17 （1999） 176-180及國際專利公開案第99/154342號，其全部內容作為參照併入本說明書）。上述抗體chCE7具有高腫瘤親和性及特異性，屬於多數的非複合化單株抗體，但在缺乏GnTIII酵素的標準的產業的細胞株中生產時，幾乎沒有臨床上有利的可能性（Umana, P., 等, Nature Biotechnol. 17 （1999） 176-180）。該研究是第一個顯示經由製作表現GnTIII的抗體產生細胞，而使ADCC活性大幅增大，此等也導致與恆定區（Fc）相關的分歧為二的寡糖（包含分歧為二的非岩藻糖化的寡糖）的比例增加，該等為在天然抗體中可見的水平。

奧比妥珠單株抗體（obinutuzumab）通常為糖鏈變異型的基因重組人源化抗CD20單株抗體，顯示II型抗CD20抗體的特性，為由449個胺基酸殘基所構成的H鏈2條及由219個胺基酸殘基所構成的L鏈2條所構成的醣蛋白，分子量為約148,000～150,000。在該H鏈中，CDR（complementarity-determining region（互補性決定區）的簡寫。以下相同。）1以序列識別號：1所形成的胺基酸序列表示，CDR2以序列識別號：2所形成的胺基酸序列表示，CDR3以序列識別號：3所形成的胺基酸序列表示。在該L鏈中，CDR1以序列識別號：4所形成的胺基酸序列表示，CDR2以序列識別號：5所形成的胺基酸序列表示，CDR3以序列識別號：6所形成的胺基酸序列表示。該H鏈的可變區（HV區）以序列識別號：7表示。該L鏈的可變區（LV區）以序列識別號：8表示。該H鏈為具有由序列識別號：9所形成的胺基酸序列之多胜肽，該L鏈為具有由序列識別號：10所形成的胺基酸序列之多胜肽。在一實施態樣中，II型抗CD20抗體也可為相對於奧比妥珠單株抗體的胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、98%、99%的序列相同性之胺基酸序列的抗體，或其抗原結合片段。在一實施態樣中，II型抗CD20抗體也可為含有相對於奧比妥珠單株抗體的重鏈及輕鏈中的各CDR的胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、98%、99%的序列相同性之胺基酸序列的各CDR的抗體或其抗原結合片段。在一實施態樣中，II型抗CD20抗體也可為含有相對於奧比妥珠單株抗體的HV區及LV區的各胺基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、98%、99%的序列相同性之胺基酸序列的HV區及LV區的抗體或其抗原結合片段。本說明書中，奧比妥珠單株抗體除醫藥通用名稱（JAN）中特定為「奧比妥珠單株抗體（基因重組）（Obinutuzumab（Genetical Recombination））」外，包含其生物相似物（biosimilar）或生物改良藥（biobetter）。奧比妥珠單株抗體較佳為該「奧比妥珠單株抗體（基因重組）（Obinutuzumab（Genetical Recombination））」及其生物相似物（biosimilar）。本說明書中，生物相似物（biosimilar）是指具有和上述H鏈及L鏈相同的胺基酸序列，視情況具有和「奧比妥珠單株抗體（基因重組）（Obinutuzumab（Genetical Recombination））」不同的糖鏈，以及具有和「奧比妥珠單株抗體（基因重組）（Obinutuzumab（Genetical Recombination））」同等以上的生物學活性之抗體。本說明書中，生物改良藥（biobetter）是指具有和上述H鏈及L鏈具有90%以上且小於100%的胺基酸序列的相同性，視情況具有和「奧比妥珠單株抗體（基因重組）（Obinutuzumab（Genetical Recombination））」不同的糖鏈，以及具有和「奧比妥珠單株抗體（基因重組）（Obinutuzumab（Genetical Recombination））」同等以上的生物學活性之抗體。 II型抗CD20抗體根據對CD20抗原的結合性及生物學活性和I型區分、分類，詳細資料如國際專利公開案第2009/118142號所記載。

該II型抗CD20抗體使用製造時的公知技術製劑化後，投予至對象的活體。II型抗CD20抗體的投予方法和後述「E.治療方法」所述的態樣相同。

普賴鬆（prednisone）為培尼皮質醇（prednisolone）的前驅藥物之例。培尼皮質醇（prednisolone）、艾黴素（doxorubicin）及長春新鹼（vincristine）的鹽類可從用於醫藥的公知物中適宜選擇。鹽酸鹽為艾黴素的鹽類之例。硫酸鹽為長春新鹼的鹽類之例。

培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及此等的鹽類在使用製造時的公知技術製劑化後，投予至對象的活體。該等的投予方法和後述「E.治療方法」所述的態樣相同。

該態樣中，選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及此等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物，較佳選自由培尼皮質醇及艾黴素、以及此等的鹽類及前驅藥物所組成的群組。再者，以培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物較佳，最佳為培尼皮質醇或普賴鬆。

（a2）第2態樣在其他態樣，上述第1態樣中的「選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及此等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物」可置換成凋亡蛋白酶（caspase）活化劑。凋亡蛋白酶活化劑之例記載於國際專利公開案第2004/002428號、及國際專利公開案第2003/097806號。在該其他態樣中，凋亡蛋白酶3/7的活化劑為凋亡蛋白酶活化劑之例。艾黴素（doxorubicin）或其鹽類為該凋亡蛋白酶3/7的活化劑之例。除了艾黴素或其鹽類外，可選擇公知的凋亡蛋白酶3/7的活化劑。公知的凋亡蛋白酶3/7的活化劑之例記載於國際專利公開案第2006/128173號、國際專利公開案第2006/074187號、特開2008-308455號公報、特開2008-189649號公報、及國際專利公開案第2004/053144號。凋亡蛋白酶活化劑較佳為艾黴素或其鹽類。該態樣的其他具體構成和上述第1態樣相同。

（a3）第3態樣在其他態樣中，上述第1態樣中的「抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之藥劑」可置換成經由II型抗CD20抗體的具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞周期停止或細胞死亡之增強劑。在該態樣中，該藥劑含有培尼皮質醇（prednisolone）或其鹽類或前驅藥物。

再者，在其他態樣中，上述第1態樣中的「抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之藥劑」可置換成用於增強具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞周期停止或細胞死亡的誘導之誘導劑。在該態樣中，該藥劑含有II型抗CD20抗體。又，在其他態樣中，上述第1態樣中的「抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之醫藥」可置換成組合II型抗CD20抗體、及培尼皮質醇（prednisolone）或其鹽類或前驅藥物，同時地、分別地、或連續地投予之用於增強對具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞周期停止或細胞死亡的誘導之藥劑。

在第3態樣中，細胞週期停止沒有特別限制，可選自G0/G1期、S期、G2期及M期任一期的停止。這些之中，細胞週期停止較佳為G0/G1期。

在第3態樣中，在使用普賴鬆（prednisone）作為培尼皮質醇的前驅藥物的情形時， II型抗CD20抗體及普賴鬆被投予至活體。在此情形，在該活體，普賴鬆轉變為培尼皮質醇、和II型抗CD20抗體一起對具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌進行作用。在第3態樣中，培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物，較佳為培尼皮質醇或普賴鬆。

在第3態樣的任一者中的其他具體構成，和上述第1態樣相同。

（a4）第1～第3態樣中的其他構成在上述第1～第3態樣中，在將該藥劑製劑化的情形，經由將具有所希望的純度的抗體和1個或複數個任意的藥學上容許載劑（Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. （1980））混合，以冷凍乾燥製劑或水溶液的形態調製。藥學上容許載劑，一般來說，以使用時的用量及濃度對接受者為非毒性，不限於此等，包含下述：磷酸鹽、檸檬酸鹽、及其他有機酸等的緩衝液；含有抗壞血酸及甲硫胺酸的抗氧化劑；防腐劑（十八烷基二甲基苄基氯化銨（octadecyl dimethyl benzyl ammonium chloride）；氯化六羥季銨（hexamethonium chloride）；羥基氯苯胺（benzalkonium chloride）；氯化本索寧（benzethonium chloride ）；酚基、丁基、或苄基醇；甲基或丙基對羥基苯甲酸酯等的烷基對羥基苯甲酸酯（alkyl paraben）；兒茶酚（catechol）；間苯二酚（resorcinol）；環己醇；3-戊醇；及m-甲酚等）；小分子（小於約10個殘基）多胜肽；血清白蛋白、明膠、或免疫球蛋白等的蛋白質；聚乙烯吡咯烷酮等的親水性聚合物；甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸、或離胺酸等的胺基酸；包含葡萄糖、甘露糖、或糊精的單糖、雙糖、及其他碳水化合物；EDTA等的螯合劑；蔗糖、甘露醇、海藻糖、山梨糖醇等的糖類；鈉等的鹽形成的相對離子類；金屬錯合物（例如Zn-蛋白質錯合物）；及/或聚乙二醇（PEG）等的非離子類界面活性劑。本說明書舉例的藥學上容許載劑更包含可溶性中性活性型玻尿酸酶醣蛋白（sHASEGP）（例如rHuPH20 （HYLENEX（註冊商標），Baxter International, Inc.）等的人類可溶性PH-20玻尿酸酶醣蛋白）等的間質性藥劑分散劑。特定例的sHASEGP及其使用方法（包含rHuPH20）記載於美國專利申請公開案第2005/0260186號及第2006/0104968號。另一方面，sHASEGP能夠和軟骨素酶（chondroitinase）等的1個或複數個追加的醣胺聚醣酶（glycosaminoglycanase）組合。

冷凍乾燥抗體製劑之例記載於美國專利第6,267,958號。水溶液抗體製劑包含美國專利第6,171,586號及國際專利公開案第2006/044908號所記載者，後者的製劑包含組胺酸-醋酸鹽（histidine-acetate）緩衝液。

有效成分可包含於微膠囊，例如經由液滴形成（凝聚作用（coacervation））方法或經由界面聚合所調製的（分別為例如羥甲基纖維素或明膠微膠囊、及聚（甲基丙烯酸甲酯）微膠囊），也可包含於膠體狀藥物遞送系統（例如微脂體、血清白蛋白微球體、微乳液（microemulsion）、奈米粒子、及奈米膠囊），也可包含於巨乳液（macroemulsion）。如此方法揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed.（1980）。

也可調製緩釋性製劑。緩釋性製劑的較佳例為，包含含有抗體的固體疏水性聚合物的半透過性基質，該基質例如為膜或微膠囊等的造型品的形態。

為了活體內（in vivo）投予所使用的製劑通常為無菌。無菌狀態例如經由通過滅菌的過濾膜進行過濾等而容易達成。

將此等有效成分各別製劑化而使有效成分為2種以上的製劑之情形時，可同時、或間隔一定時間間隔、分別地或連續地投予各別製劑。該2種以上的製劑也可在1日各別以不同次數投予。本發明之藥劑、醫藥、醫藥組合物可全身或局部地、經口投予或非經口投予。在將此等有效成分各別製劑化而為2種以上的製劑的情形，也可以不同路徑投予各別的製劑。

B.醫藥組合物在一態樣中，本發明提供治療具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌用之醫藥組合物。在該態樣的第1例中，該醫藥組合物含有II型抗CD20抗體。在該醫藥組合物中，合併使用包含選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物的投予的化學療法。在該態樣的第2例中，該醫藥組合物含有選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物。在該醫藥組合物中，合併使用由II型抗CD20抗體的治療。在該態樣的第2例中，該醫藥組合物為，II型抗CD20抗體、和選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物的組合，同時地、各別地、或連續地投予之醫藥組合物。

在該態樣中，「II型抗CD20抗體」、「選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物」、「具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌」、及「製劑化」的一般例及較佳例，和上述「抑制細胞增殖之藥劑或醫藥」所述者相同。在上述「抑制細胞增殖之藥劑或醫藥」的第2態樣所述，「選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物」置換為「凋亡蛋白酶活化劑」和其具體的構成，也可適用於該態樣。在該態樣中，上述「第1~第3態樣中的其他構成」也可適用作為組合物中的其他構成。

C.製造方法在一態樣中，本發明提供抑制細胞增殖的藥劑或醫藥之製造。在該態樣中，該細胞為具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞。在該態樣的第1例中，在該製造使用II型抗CD20抗體。該藥劑和化學療法合併使用，該化學療法包含選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物的投予。在該態樣的第2例中，在該製造使用選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物。該藥劑和經由II型抗CD20抗體的治療合併使用。在該態樣的第3例中，在該醫藥的製造使用II型抗CD20抗體、及選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物。

在其他態樣，本發明提供用於治療癌的醫藥組合物之製造。在該態樣中，該癌為具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌。在該其他態樣的第1例中，在該製造使用II型抗CD20抗體。該醫藥組合物和化學療法合併使用，該化學療法包含選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物的投予。在該其他態樣的第2例中，在該製造使用選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物。該醫藥組合物和經由II型抗CD20抗體的治療合併使用。在該其他態樣的第3例中，在該製造使用II型抗CD20抗體、及選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物。組合II型抗CD20抗體、及選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物，同時地、各別地、或連續地投予。

在這些態樣中，奧比妥珠單株抗體可根據國際專利公開案第2005/044859號所示之公知方法由此技術領域之人士製造。該藥劑及該醫藥組合物可經由一般技術將奧比妥珠單株抗體和其他原料混合而製造。

在此等態樣中，「II型抗CD20抗體」、「選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物」、及「具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌」的一般例及較佳例，和上述「抑制細胞增殖之藥劑或醫藥」所述者相同。在上述「抑制細胞增殖之藥劑或醫藥」的第2態樣所述，「選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物」置換為「凋亡蛋白酶活化劑」和其具體的構成，也可適用於此等態樣。

和上述「抑制細胞增殖之藥劑或醫藥」的第3態樣所述相同，在上述「抑制細胞增殖的藥劑之製造」的態樣中的第1例為，該藥劑可置換為經由II型抗CD20抗體的具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡之增強劑。在置換後的該態樣的製造中，使用培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物。再者，第2例為，該藥劑可置換為具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡之誘導劑。在置換後的該態樣的製造中，使用II型抗CD20抗體。該藥劑經由和包含培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物的投予的化學療法合併使用而投予。經由此合併使用，增強對具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞周期停止或細胞死亡。在這些例中，細胞週期停止沒有特別限制，可選自G0/G1期、S期、G2期及M期任一期的停止。這些之中，細胞週期停止較佳為G0/G1期。再者，在使用普賴鬆（prednisone）作為培尼皮質醇的前驅藥物的情形時， II型抗CD20抗體及普賴鬆被投予至活體。在此情形，在該活體，普賴鬆轉變為培尼皮質醇，和II型抗CD20抗體一起作用於具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌。這些例子的任一個的其他具體構成和上述「抑制細胞增殖的藥劑之製造」的態樣、及上述「抑制細胞增殖之藥劑或醫藥」的第3態樣相同。

D.細胞增殖的抑制方法在一態樣中，本發明提供抑制細胞增殖的方法。在該態樣中，該細胞為具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞。在一態樣中，該方法包含對具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞，i）投予II型抗CD20抗體，ii）投予選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物。在該態樣中的方法為活體外（in vitro）或活體內（in vivo）之方法。在該態樣中的方法較佳為活體外（in vitro）或人類以外的活體內（in vivo）之方法。

在該態樣中，「II型抗CD20抗體」、「選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物」、及「具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌」的一般例及較佳例，和上述「抑制細胞增殖之藥劑或醫藥」所述者相同。在該態樣中，上述「抑制細胞增殖之藥劑或醫藥」所述的其他態樣之「選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物」置換為「凋亡蛋白酶活化劑」也可適用。

和上述「抑制細胞增殖之藥劑或醫藥」的第3態樣相同，在上述「抑制細胞增殖之方法」的態樣中的第1例為，該方法可置換為增強經由II型抗CD20抗體的具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡之方法。在置換後的該態樣的方法中，包含投予培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物。再者，第2例為，該方法可置換為誘導具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡之方法。置換後的該態樣的方法，包含投予II型抗CD20抗體。此投予和包含培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物的投予的化學療法合併使用。經由此合併使用，增強對具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞周期停止或細胞死亡。在這些例中，細胞週期停止沒有特別限制，可選自G0/G1期、S期、G2期及M期任一期的停止。這些之中，細胞週期停止較佳為G0/G1期。再者，在使用普賴鬆（prednisone）作為培尼皮質醇的前驅藥物的情形時， II型抗CD20抗體及普賴鬆被投予至活體。在此情形，在該活體，普賴鬆轉變為培尼皮質醇、和II型抗CD20抗體一起作用於具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌。這些例子的任一個的其他具體構成和上述「抑制細胞增殖的方法」的態樣、及上述「抑制細胞增殖之藥劑或醫藥」的第3態樣相同。

E.治療方法在一態樣中，本發明提供CD20陽性癌的治療方法。在該態樣中，該CD20陽性癌為具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌。該治療方法包含對患有CD20陽性癌的活體，i）投予II型抗CD20抗體，ii）投予選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物。

在該態樣中，II型抗CD20抗體的投予，可經此技術領域之人士依公知投予方法投予其治療上有效劑量。靜脈內投予及皮下投予為該投予方法之例。在該態樣中，選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物的投予，可經此技術領域之人士依公知予方法投予其治療上有效劑量。靜脈內投予、皮下投予及經口投予為該投予方法之例。

所謂「治療上有效劑量」為至少為了達到在特定障礙的可測量的改善或預防的效果所要求的最小濃度。本說明書中治療上有效劑量根據因子、例如患者的疾病狀態、年齡、性別、及體重、以及抗體在個人誘發所期望的反應的能力等而變動。又，治療上有效劑量是在治療上有益效果勝過抗體的任意毒性或有害效果。

在本發明之治療方法，以II型抗CD20抗體、和選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物組合投予為佳，也可以同時地、各別地、或連續地投予。

II型抗CD20抗體、和培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物，作為本說明書記載之藥劑、醫藥、醫藥組合物等，作為各別製劑，可同時、或間隔一段時間間隔各別地、或連續地投予。該2種以上的製劑可1日各別以不同次數投予，也可在一定天數中各別以不同次數投予。各製劑也可如下述例之各別投予時程投予至一對象。

II型抗CD20抗體可例如以點滴靜脈注射，對成年人對象每1次投予約1mg～約10g，較佳為每1次投予約10mg～約10g，較佳為每1次投予約100mg～約10g，最佳為每1次投予約1000mg。II型抗CD20抗體的投予以每1日投予1次為佳，但考慮患者狀態、治療效果等，也可將每1日的投予量分成2次以上投予。

II型抗CD20抗體的投予計畫只要是可獲得所期望效果的範圍則不限定，可根據患者的狀態、治療經歷、治療的步驟（誘導治療或維持治療），由此技術領域之人士適宜決定。使用II型抗CD20抗體的治療期間，基於患者的狀態、治療效果，最長可持續約2年。

II型抗CD20抗體的投予能夠以約1～約8週為1循環，較佳以約2～約4週為1循環，最佳以約3～約4週為1循環。治療用的循環次數只要是在可獲得所期望效果的範圍則不限定，可進行約1～約20個循環，較佳進行約3～10個循環，最佳進行約5～約8個循環。又，在組合II型抗CD20抗體、和培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物之任一個投予的期間，II型抗CD20抗體的投予較佳為約3週為1循環，進行8個循環。

在構成治療的各投予循環中，II型抗CD20抗體能夠以相同間隔投予，也能夠以不同間隔投予。例如，在治療的第1個循環，在治療開始第1、8、15日、1日投予1次，在第2個循環以後，在各循環的第1日、1日投予1次。

又，II型抗CD20抗體在誘導治療、和維持治療中，治療用的1個循環的長度、及循環次數也可不同。例如，在誘導治療，約3～約4週為1個循環，進行約6～約8個循環，在維持治療，以約8週（約2個月）為1個循環，進行約2年（約12個循環）。

II型抗CD20抗體，例如在誘導治療中，約3～約4週為1個循環，在第1個循環在治療開始的第1、8、15日投予，在第2個循環以後在各循環的第1日投予。之後，在維持治療中，以約8週（約2個月）為1個循環，持續最長2年的治療。

培尼皮質醇或其鹽類、或其前驅藥物可基於例如患者狀態、治療效果，對成年人對象以每1日約1～約200mg經口投予，較佳為每1日約5～約60mg經口投予。又，能夠以1日1次投予該投予量，或者也可以1日分2次以上投予，較佳為1日1次投予該投予量，或1日分2～4次投予。

艾黴素（doxorubicin）或其鹽類、或其前驅藥物可基於例如患者狀態、治療效果，例如以點滴靜脈注射，對成年人對象以每1日約5～約100mg投予，較佳為每1日約20（0.4mg/kg體重）～約30mg（0.6mg/kg體重）投予。又，每1投予的投予量，及每1日的投予量，可根據投予計畫適宜改變，例如在1日1次、2~3日靜脈內一次性（one-shot）投予，之後7～約10日停藥（withdrawal）的情形，1日1次投予約20mg，重複此循環2～3個循環為佳。或者，例如在1日1次、連續3日靜脈內一次性（one-shot）投予，之後18日停藥的情形，1日1次投予約20～約30mg，重複此循環2～3個循環為佳。又，艾黴素或其鹽類、或其前驅藥物特別在和其他抗腫瘤劑合併使用的情形時，也可1日1次靜脈內投予約25～約50mg/m² （體表面積）（在重複的情形時，與開始下一次的投予間隔2週以上），或者也可以靜脈內投予第1日約40mg/m² （體表面積）、第8日約30mg/m² （體表面積），之後20日停藥，重複此循環。

長春新鹼（vincristine）或其鹽類、或其前驅藥物可基於例如患者狀態、治療效果，例如以點滴靜脈注射，對成年人對象以每1次投予約0.01～約0.1mg/kg體重投予，較佳為每1次投予約0.02～約0.05mg/kg體重投予。考慮副作用，較佳每1次投予不超過2mg為佳。又，長春新鹼或其鹽類、或其前驅藥物能夠以約1～約14日1次的投予間隔投予，較佳在約1週投予1次。

在該態樣中，治療對象為患有CD20陽性癌的活體。該對象只要是患有CD20陽性癌的活體，沒有特別限制。在該態樣中，包含人類的哺乳動物為該活體之例。在該態樣中，該活體較佳為包含人類的哺乳動物。在該態樣中，齧齒類及包含人類的靈長類為該哺乳動物之例。在該態樣中，小鼠及大鼠為齧齒類之例。在該態樣中，人類及食蟹猿為包含人類的靈長類之例。在該態樣中，該哺乳動物較佳為包含人類的靈長類。在該態樣中，包含人類的靈長類較佳為人類及食蟹猿，更佳為人類。

在該態樣中，「II型抗CD20抗體」、「選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物」、及「具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌」的一般例及較佳例，和上述「抑制細胞增殖之藥劑或醫藥」所述者相同。在該態樣中，在上述「抑制細胞增殖之藥劑或醫藥」所述的其他態樣之「選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物」置換為「凋亡蛋白酶活化劑」也可適用。

F. II型抗CD20抗體、化合物、及組合在一態樣中，本發明提供在具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖的抑制、具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的治療、對於具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡的誘導的增強、或者用於具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡的增強中使用之II型抗CD20抗體、化合物、及此等之組合。在該態樣的第1例中，本發明之II型抗CD20抗體為用於與化學療法併用而使用之II型抗CD20抗體，該化學療法包含選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物的投予。在該態樣的第2例中，本發明之II型抗CD20抗體為，用於和包含凋亡蛋白酶活化劑的投予的化學療法併用所使用的II型抗CD20抗體。在該態樣的第3例中，本發明之化合物為用於和經由II型抗CD20抗體的治療併用所使用的至少一化合物，該至少一化合物選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組。在該態樣的第4例中，化合物為用於和經由II型抗CD20抗體的治療併用所使用的凋亡蛋白酶活化劑。在該態樣的第5例中，組合為 II型抗CD20抗體、及選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物之組合。在該態樣的第6例中，組合為II型抗CD20抗體、及凋亡蛋白酶活化劑之組合。

在一態樣中，本發明提供用於在具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡的增強中所使用的培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物。在一態樣中，本發明提供用於在具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞的細胞週期停止或細胞死亡的誘導的增強中所使用的II型抗CD20抗體、以及II型抗CD20抗體和培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物之組合。在此，細胞週期停止只要是誘導細胞死亡的範圍則沒有限定，也可以是在G0/G1期停止。

關於本發明之II型抗CD20抗體、化合物、及組合，CD20陽性癌可以是B細胞性非何杰金氏淋巴瘤，II型抗CD20抗體也可以是奧比妥珠單株抗體，化合物也可以是選自由培尼皮質醇及艾黴素、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組。又，具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌也可為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌，或者在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。

關於本發明之II型抗CD20抗體、化合物、及組合，「II型抗CD20抗體」、「選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物」、「培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物」、及「具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌」的一般例及較佳例，和上述「抑制細胞增殖之藥劑或醫藥」所述者相同。在該態樣中，在上述「抑制細胞增殖之藥劑或醫藥」所述的其他態樣之「選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物」置換為「凋亡蛋白酶活化劑」也可適用。

G.抗CD20抗體耐受性的CD20陽性癌在一態樣中，在上述A至F態樣中，「具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌」可置換為「抗CD20抗體耐受性的CD20陽性癌」。該「抗CD20抗體耐受性的CD20陽性癌」中的抗CD20抗體包含上述A定義的和CD20特異性結合的抗體。該抗CD20抗體包含表1所定義的I型及II型的抗CD20抗體。該抗CD20抗體較佳為II型的抗CD20抗體。在II型的抗CD20抗體之中，較佳為奧比妥珠單株抗體。

在CD20陽性癌中，對於具有奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌或進行包含奧比妥珠單株抗體的治療後復發的CD20陽性癌，如何繼續使用奧比妥珠單株抗體等的II型抗CD20抗體，在臨床上是困擾的。本發明發現，在那樣狀況下的一態樣中，對於具有奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌、或進行包含奧比妥珠單株抗體的治療後復發的CD20陽性癌，藉由併用選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物，提高經由使用II型抗CD20抗體、特別是奧比妥珠單株抗體的治療效果的方法。其中，以培尼皮質醇及艾黴素、及該等的鹽類及前驅藥物容易發揮該效果，特別是以培尼皮質醇或其鹽類或前驅藥物容易發揮該效果。推測其機制為，經由奧比妥珠單株抗體和培尼皮質醇的合併使用，在G0/G1期的細胞週期停止和該效果相關。

出處揭示之引用在此所述之所有出版物、專利、及專利申請案，恰如各出版物、專利、或專利申請案應透過出處揭示特別且各別引用所示，透過出處揭示在此全部引用。如有矛盾的情形時，以包含此處之定義的本申請案為優先。［實施例］

（實施例1）將人類胚胎中心類B細胞瀰漫性大細胞型B細胞性淋巴瘤細胞株SU-DHL-4以100μg/mL的N-乙基-N-亞硝基脲（N-ethyl-N-nitrosourea）處理24小時，隨機導入基因變異。之後，添加奧比妥珠單株抗體（obinutuzumab）使成為200μg/mL，在5%CO₂ 存在下、37℃培養3週。增殖的細胞在顯微鏡目視下使用微微吸量管（pico-pipette）進行選殖（cloning），建立選殖株1A2、選殖株1D2、選殖株3A4作為源自單一細胞的具奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株。經過4天的細胞增殖試驗的結果，奧比妥珠單株抗體的50%細胞增殖抑制濃度在SU-DHL-4為0.037μg/mL，相對地，在具奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株的3個選殖株全部為200μg/mL以上，可知具奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株在活體外（in vitro）對奧比妥珠單株抗體的敏感性降低。

將具奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株以各1×10⁴ 個細胞接種於96孔盤，使奧比妥珠單株抗體（1μg/mL）、和選自烷基化劑環磷醯胺（cyclophosphamide）的活性代謝物4-氫過氧環磷醯胺（4-hydroperoxycyclophosphamide）（100nM）、蒽環類（anthracyclines）抗癌性抗生素艾黴素（doxorubicin）（10nM）、長春花生物鹼類（vinca alkaloids）抗癌劑長春新鹼（vincristine）（1nM）、合成糖質副腎上腺皮質素培尼皮質醇（prednisolone）（1μM）的抗癌劑合併使用。在5%CO₂ 存在下、37℃培養，將4日後的活細胞數以CellTiter-Glo 3D Cell Viability Assay（Promega）測量。從各藥劑單劑添加及二劑添加的細胞相對於未添加藥劑的細胞的細胞增殖比例，參考Bliss independence model將合併使用的效果數值化，結果顯示於表2。合併使用的效果根據log₁₀ （二劑添加時的細胞增殖比例）- log₁₀ （奧比妥珠單株抗體單劑添加時的細胞增殖比例）- log₁₀ （抗癌劑單劑添加時的細胞增殖比例）所求得的數值進行評估。在此，合併使用效果的數值，小於0表示加乘以上的效果，0表示加乘效果，高於0表示加乘以下的效果（J Biopharm Stat. 2012；22（3）：535-543）。

［表2］

合併使用藥劑	1A2	1D2	3A4
4-氫過氧環磷醯胺	-0.03	0.02	0.00
艾黴素	-0.44	-0.14	-0.14
長春新鹼	-0.35	-0.10	-0.13
培尼皮質醇	-0.43	-0.10	-0.05

結果顯示，在所有的具奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株，奧比妥珠單株抗體和艾黴素、培尼皮質醇或長春新鹼合併使用時，顯示加乘以上的合併使用效果。另一方面，奧比妥珠單株抗體和4-氫過氧環磷醯胺的合併使用在所有的具奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株顯示加乘效果程度的合併使用效果。

（實施例2）將具奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株1A2以各1×10⁴ 個細胞接種於96孔盤，添加奧比妥珠單株抗體（0.00015～10μg/mL）和培尼皮質醇（0.2、1μM）。在5%CO₂ 存在下、37℃培養，將4日後的活細胞數以CellTiter-Glo 3D Cell Viability Assay（Promega）測量。將添加各濃度的培尼皮質醇時的相對於未添加奧比妥珠單株抗體的細胞數的細胞增殖率（平均值＋標準差）顯示於圖1。

結果顯示，在具奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株，經由和培尼皮質醇合併使用，增強奧比妥珠單株抗體的細胞增殖抑制效果。

（實施例3）將具奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株1A2以各2×10⁵ 個細胞接種於6孔盤，添加奧比妥珠單株抗體（1μg/mL）和培尼皮質醇（1μM）。在5%CO₂ 存在下、37℃培養，將48小時後的細胞根據生產者建議的步驟以DAPI染色，以NC-3000（chemometec）觀察螢光。以Flow Jo. Version 7.6.5分析細胞週期。進行3次獨立的試驗之結果（平均值＋標準差）顯示於圖2。又，圖2中，合併使用為奧比妥珠單株抗體和培尼皮質醇兩藥劑的添加。

結果顯示，奧比妥珠單株抗體和培尼皮質醇兩劑添加時，相較於各單劑添加時，G0/G1期的細胞比例增加具統計學上顯著差異。

將具奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株1A2以各3×10⁶ 個細胞接種於25cm² 細胞培養瓶，添加奧比妥珠單株抗體（1μg/mL）和培尼皮質醇（1μM）。在5%CO₂ 存在下、37℃培養48小時後，萃取蛋白。將蛋白表現量以西方點漬法（western blotting）觀察，結果顯示於圖3。又，圖中-表示未添加藥劑，＋表示添加藥劑。

結果顯示，在奧比妥珠單株抗體和培尼皮質醇合併使用時，p27的泛蛋白連接酶（ubiquitin ligase）之Skp2的蛋白質的量減少，週期蛋白依賴激酶（cyclin-dependent kinase）抑制蛋白質的p27的蛋白質的量增加，磷酸化Rb的量減少。因此，在圖2所見的奧比妥珠單株抗體和培尼皮質醇兩藥劑添加時的G0/G1期的細胞增加，推測是因為起因於Skp2減少的p27增加及磷酸化Rb減少。由上顯示，在奧比妥珠單株抗體和培尼皮質醇合併使用時，相較於各單劑更較強地誘導G1期停止。

將具奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株1A2以各1×10⁶ 個細胞接種於6孔盤，添加奧比妥珠單株抗體（1μg/mL）和培尼皮質醇（1μM）。在5%CO₂ 存在下、37℃培養72小時後，以APO-BrdU TUNEL Assay Kit（Thermo Fisher）使細胞染色。以FACS Fortessa（Becton Dickinson）觀察螢光，以Flow Jo. Version 10分析，結果顯示於圖4。圖4中，合併使用為奧比妥珠單株抗體和培尼皮質醇兩藥劑的添加。

結果顯示，奧比妥珠單株抗體和培尼皮質醇的合併使用，相較於各單劑，使DNA的片斷化亢進。因此，此合併使用和各單劑相比，顯示較強的增強誘導細胞死亡。從以上結果考量，經由增強G1期的停止和誘導細胞死亡，奧比妥珠單株抗體和培尼皮質醇顯示較強的合併使用效果。

（實施例4）將具奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株1A2以各1×10⁴ 個細胞接種於96孔盤，添加奧比妥珠單株抗體（0.00015～10μg/mL）和艾黴素（2.5～10nM）。在5%CO₂ 存在下、37℃培養，將4日後的活細胞數以CellTiter-Glo 3D Cell Viability Assay（Promega）測量。以添加各濃度的艾黴素時未添加奧比妥珠單株抗體的細胞增殖率作為100%，將添加奧比妥珠單株抗體時的細胞增殖率（平均值＋標準差）顯示於圖5。

結果顯示，在具奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株，經由和艾黴素合併使用，增強奧比妥珠單株抗體的細胞增殖抑制效果。

（實施例5）將具奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株1A2以各1×10⁴ 個細胞接種於96孔盤，添加奧比妥珠單株抗體（1μg/mL）和艾黴素（10nM）。在5%CO₂ 存在下、37℃培養48小時後，以CaspaseGlo 3/7 assay（Promega）測量凋亡蛋白酶3/7活性。相對於未添加兩藥劑的細胞的凋亡蛋白酶3/7活性（平均值＋標準差）顯示於圖6。結果顯示，奧比妥珠單株抗體和艾黴素的合併使用，和各單劑相比，顯示統計學上有顯著差異的高凋亡蛋白酶3/7活性（P＜0.05）。

將具奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株1A2以各1×10⁶ 個細胞接種於6孔盤，添加奧比妥珠單株抗體（1μg/mL）和艾黴素（10nM）、泛凋亡蛋白酶抑制劑Z-VAD-FMK（40μM）。在5%CO₂ 存在下、37℃培養72小時後，以APO-BrdU TUNEL Assay Kit（Thermo Fisher）使細胞染色。以FACS Fortessa（Becton Dickinson）觀察螢光，以Flow Jo. Version 10分析，結果顯示於圖7。又，圖7中，合併使用顯示奧比妥珠單株抗體和艾黴素兩藥劑的添加，上層圖顯示未添加Z-VAD-FMK時的結果，下層圖顯示添加Z-VAD-FMK時的結果。

結果顯示，奧比妥珠單株抗體和艾黴素的合併使用，相較於各單劑，使DNA的片斷化亢進。因此，此合併使用和各單劑相比，顯示較強的增強誘導細胞死亡。再者，此DNA的片斷化因Z-VAD-FMK的添加而受到抑制。因此暗示，經由奧比妥珠單株抗體和艾黴素的合併使用所增強的細胞死亡，受到凋亡蛋白酶依賴性的誘導。

將具奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株1A2以每1×10⁴ 個細胞接種於96孔盤，添加奧比妥珠單株抗體（0.1、1μg/mL）和艾黴素（10nM）、泛凋亡蛋白酶抑制劑Z-VAD-FMK（40μM）。在5%CO₂ 存在下、37℃培養4日後的活細胞數以CellTiter-Glo 3D Cell Viability Assay（Promega）測量。將各藥劑添加時的相對於未添加奧比妥珠單株抗體的細胞數的細胞增殖率（平均值＋標準差）顯示於圖8。結果顯示，因艾黴素所增強的奧比妥珠單株抗體的細胞增殖抑制活性因Z-VAD-FMK的添加而受到抑制。

從上述結果顯示，由於凋亡蛋白酶依賴性的細胞死亡受到增強，奧比妥珠單株抗體和艾黴素誘導較強的合併使用效果。

（實施例6）將人類非何杰金氏淋巴瘤細胞株RL以300μg/mL的N-乙基-N-亞硝基脲（N-ethyl-N-nitrosourea）處理24小時，隨機導入基因變異。添加CD16（158V）/NK-92細胞作為作用細胞（effector cell），使作用細胞：標靶（ET）細胞的比例成為20：1，和奧比妥珠單株抗體0.1μg/mL一起在37℃一晚進行ADCC反應。對於已增殖的細胞，進行在MACS使用抗CD56抗體（Biolegend）的負向選擇（negative selection）、和使用抗CD20抗體（BD Biosciences）的正向選擇（positive selection）。

重複進行上述的ADCC反應和經MACS的選擇共3次之後，選殖增殖的細胞，建立RL-E300-1、RL-E300-2、RL-E300-8、RL-E300-22作為具奧比妥珠單株抗體誘導性ADCC耐受性株。

對於RL親株和各耐受性株，以Calcein-AM（FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation）染色活細胞後，以每1×10⁴ 細胞/孔接種於96孔盤，以0.0001～100ng/mL的濃度添加奧比妥珠單株抗體。以CD16（158V）/NK-92細胞作為作用細胞（effector cell），和ET比例為1：1添加，在37℃培養4小時。又添加1% Triton X-100為最大溶解物（Maximum Lysis）。將盤進行離心、收集上清液後，以盤計數器測量Calcein的螢光。ADCC敏感性以（測量值-背景值）/（最大溶解物-背景值）×100（%）評估。

結果確認，所有的ADCC耐受性株，相較於親株，顯著地ADCC敏感性降低。（圖9）

（實施例7）對於RL親株及各耐受性株，以每4×10⁵ 個細胞接種於盤，添加培尼皮質醇（10μM），在37℃培養72小時。收集細胞，以對照的IgG抗體或抗CD20抗體（BD Biosciences）染色，以FACS Fortessa（Becton Dickinson）分析CD20的表現。

結果可知，在親株及耐受性株，經培尼皮質醇前處理，CD20的表現亢進（圖10）。

（實施例8）對於RL親株及各耐受性株，添加培尼皮質醇（10μM），在37℃前培養72小時。收集細胞，以Calcein-AM（FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation）染色活細胞後，以每1×10⁴ 細胞/孔接種於96孔盤，以1ng/mL的濃度添加奧比妥珠單株抗體。以CD16（158V）/NK-92細胞作為作用細胞（effector cell），和ET比例為1：1添加於此等，在37℃培養4小時。又添加1% Triton X-100為最大溶解物（Maximum Lysis）。將盤進行離心、收集上清液後，以盤計數器測量Calcein的螢光。ADCC敏感性以（測量值-背景值）/（最大溶解物-背景值）×100（%）評估。

結果可知，在親株及耐受性株，經培尼皮質醇前處理，ADCC敏感性亢進（圖11）。

（實施例9）將RL-E300-1耐受性株以各5×10⁶ 細胞/隻皮下移植到小鼠 C.B-17/Icr-scid/scidJcl（日本Clea），在腫瘤產生後，依下述分群（各n=6）。 1. IgG（30mg/kg）＋載劑投予群（IgG＋Dw群） 2. 奧比妥珠單株抗體（30mg/kg）＋載劑投予群（OBI＋Dw群） 3. IgG（30mg/kg）＋培尼皮質醇（4mg/kg）投予群（IgG＋PSL群） 4. 奧比妥珠單株抗體（30mg/kg）＋培尼皮質醇（4mg/kg）投予群（OBI＋PSL群）關於此等，進行投予（奧比妥珠單株抗體或IgG（人類IgG，CAPPEL，Cat#55908）：第1、8、15日（每週1次（q.w.）、靜脈注射（i.v.）、培尼皮質醇或載劑（Dw）：第1-5日，經口投予（p.o.））及腫瘤直徑計算測量。

結果確認，在第18日進行比較時，和各對照群（IgG＋Dw、OBI＋Dw、IgG＋PSL群）相比，合併使用群（OBI＋PSL群）顯示顯著地抗腫瘤效果（圖12）。

無。

［圖1］圖1顯示，對於奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株（obinutuzumab-directed cell death tolerant clone）1A2，在只有奧比妥珠單株抗體作用的情形時，或在合併使用奧比妥珠單株抗體和培尼皮質醇（prednisolone）作用的情形時，在添加各濃度的培尼皮質醇時，和未添加奧比妥珠單株抗體相比的細胞增殖率。［圖2］圖2顯示，經由DAPI染色，觀察對於奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株1A2，使只有奧比妥珠單株抗體、只有培尼皮質醇、或奧比妥珠單株抗體和培尼皮質醇合併使用、進行作用之細胞週期的比例之結果。所謂「合併使用」表示奧比妥珠單株抗體和培尼皮質醇的合併使用。［圖3］圖3顯示，經西方點漬法（western blotting），觀察對於奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株1A2，使只有奧比妥珠單株抗體、只有培尼皮質醇、或奧比妥珠單株抗體和培尼皮質醇合併使用、進行作用之細胞內蛋白質Rb、Skp2、及p27的表現量以及Rb的磷酸化之結果。［圖4］圖4顯示，經由使用TUNEL法的FACS分析，觀察對於奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株1A2，使只有奧比妥珠單株抗體、只有培尼皮質醇、或奧比妥珠單株抗體和培尼皮質醇合併使用、進行作用之DNA片段化之結果。所謂「合併使用」表示奧比妥珠單株抗體和培尼皮質醇的合併使用。［圖5］圖5顯示對於奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株1A2，在只有奧比妥珠單株抗體作用的情形時，或在合併使用奧比妥珠單株抗體和艾黴素作用的情形時，在添加各濃度的艾黴素時，和未添加奧比妥珠單株抗體相比的細胞增殖率。［圖6］圖6顯示，對於奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株1A2，在只有奧比妥珠單株抗體作用的情形時、只有艾黴素作用的情形時、或奧比妥珠單株抗體和艾黴素合併使用作用的情形時，和未添加兩藥劑相比之凋亡蛋白酶（caspase）3/7活性。［圖7］圖7顯示，經由使用TUNEL法的FACS分析，觀察分別在添加泛凋亡蛋白酶抑制劑的情形和未添加的情形時，對於奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株1A2，只有奧比妥珠單株抗體、只有艾黴素、或奧比妥珠單株抗體和艾黴素合併使用作用之DNA片段化的結果。所謂「合併使用」表示奧比妥珠單株抗體和艾黴素的合併使用。［圖8］圖8顯示，對於奧比妥珠單株抗體直接的細胞死亡耐受性的選殖株1A2，在泛凋亡蛋白酶抑制劑的存在下或不存在下，在只有奧比妥珠單株抗體作用的情形、或合併使用奧比妥珠單株抗體和艾黴素作用的情形時，和未添加奧比妥珠單株抗體相比的細胞增殖率。［圖9］圖9顯示，在使奧比妥珠單株抗體對於RL親株及ADCC耐受性株RL-E300-1、RL-E300-2、RL-E300-8、RL-E300-22作用的情形時的ADCC敏感性。［圖10］圖10顯示，在RL親株及ADCC耐受性株RL-E300-1、RL-E300-2、RL-E300-8、RL-E300-22的培尼皮質醇處理群及非培尼皮質醇處理群中的CD20表現。［圖11］圖11顯示，對於RL親株及ADCC耐受性株RL-E300-1、RL-E300-2，在培尼皮質醇處理後和奧比妥珠單株抗體作用的情形時，及未以培尼皮質醇處理而使奧比妥珠單株抗體作用的情形時的ADCC敏感性。［圖12］圖12顯示，對於ADCC耐受性株RL-E300-1的移植小鼠，投予IgG（30mg/kg）＋載劑（IgG＋Dw群）、奧比妥珠單株抗體（30mg/kg）＋載劑（OBI＋Dw群）、IgG（30mg/kg）＋培尼皮質醇（4mg/kg）（IgG＋PSL群）、及奧比妥珠單株抗體（30mg/kg）＋培尼皮質醇（4mg/kg）（OBI＋PSL群）的情形時的腫瘤體積。

無。

Claims

一種用於抑制具奧比妥珠單株抗體（obinutuzumab）耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之藥劑，包含II型抗CD20抗體，且和化學療法合併使用，該化學療法包含選自由培尼皮質醇（prednisolone）、艾黴素（doxorubicin）及長春新鹼（vincristine）、以及該等的鹽類及前驅藥物（prodrug）所組成的群組之至少一化合物的投予。
一種用於抑制具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌的細胞增殖之藥劑，包含選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物，且和經由II型抗CD20抗體的治療合併使用。
如請求項1或2所述之藥劑，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤（B-cell non-Hodgkin's lymphoma）。
如請求項1至3任一項所述之藥劑，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。
如請求項1至4任一項所述之藥劑，其中，上述一化合物選自由培尼皮質醇及艾黴素以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組。
如請求項1至5任一項所述之藥劑，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。
如請求項1至6任一項所述之藥劑，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後的經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。
一種用於治療具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之醫藥組合物，包含II型抗CD20抗體，且和化學療法合併使用，該化學療法包含選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物的投予。
一種用於治療具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌之醫藥組合物，包含選自由培尼皮質醇、艾黴素及長春新鹼、以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組之至少一化合物，且和經由II型抗CD20抗體的治療合併使用。
如請求項8或9所述之醫藥組合物，其中，上述CD20陽性癌為B細胞性非何杰金氏淋巴瘤。
如請求項8至10任一項所述之醫藥組合物，其中，上述II型抗CD20抗體為奧比妥珠單株抗體。
如請求項8至11任一項所述之醫藥組合物，其中，上述一化合物選自由培尼皮質醇及艾黴素以及該等的鹽類及前驅藥物所組成的群組。
如請求項8至12任一項所述之醫藥組合物，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為具有奧比妥珠單株抗體治療經驗的CD20陽性癌。
如請求項8至13任一項所述之醫藥組合物，其中，上述具奧比妥珠單株抗體耐受性的CD20陽性癌為，在使用奧比妥珠單株抗體的誘導治療後的經由奧比妥珠單株抗體單獨投予的維持治療開始後復發的癌。