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TW202110885A - 靶向ＭＡｄＣＡＭ之免疫耐受性 - Google Patents

靶向ＭＡｄＣＡＭ之免疫耐受性 Download PDF

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TW202110885A
TW202110885A TW109116695A TW109116695A TW202110885A TW 202110885 A TW202110885 A TW 202110885A TW 109116695 A TW109116695 A TW 109116695A TW 109116695 A TW109116695 A TW 109116695A TW 202110885 A TW202110885 A TW 202110885A
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瓊安 Ｌ 維尼
凱文 路易斯 歐提波比
喬斯納維斯 韋斯瓦拉亞
薩瓦托爾 阿里歐圖
琳賽 Ｊ 愛德華斯
埃里克 桑普森
雅各布 格蘭維爾
大衛 毛爾
薩拉 艾夫斯
克里斯蒂娜 佩特斯
勞倫 施維默
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美商潘迪恩治療公司
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Abstract

本發明係關於賦予位點特異性或局部免疫赦免之方法及化合物，諸如靶向表現MAdCAM之細胞。

Description

靶向MAdCAM之免疫耐受性 [關申請之交叉引用]
本申請係主張2019年5月20日遞交之美國臨時申請第62/850,172號之優先權及權益，該臨時申請係藉由引用而整體併入本文。
本申請亦關於2018年8月23日遞交之美國臨時申請第62/721,644號、2018年5月24日遞交之美國臨時申請第62/675,972號、2017年12月6日遞交之美國臨時申請第62/595,357號、2017年12月6日遞交之美國臨時申請第62/595,348號、2018年8月23日遞交之美國臨時申請第16/109,875號、2018年8月23日遞交之美國臨時申請第16/109,897號、2018年5月24日遞交之美國臨時申請第15/988,311號、2018年5月4日遞交之PCT申請第PCT/US2018/034334號以及2018年11月28日遞交之第PCT/US2018/062780號，其各自係藉由引用而以其整體併入本文。
本文所提供之態樣係關於，舉例而言，用於局部或靶向免疫赦免之方法及組成物。
一些不希望之免疫應答，例如，如在經移植之組織的排斥反應或自體免疫性疾病中者，係構成全世界數百萬人之主要健康問題。器官移植之長期結果往往以慢性排斥反應以及經移植之器官的最終衰竭為特徵。已知有超過二十種自體免疫疾患，幾乎影響身體之每一個器官，並且僅在北美就有超過五千萬人受到影響。於兩種方案中，用以抗擊致病性免疫應答之廣譜活性免疫抑制藥物均具有嚴重的副作用。
本文係揭露提供位點特異性免疫赦免的方法及治療性化合物。本文揭露之態樣係藉由引用併入這一章節。
於一些態樣中，該治療性化合物係包含經工程化之多特異性化合物，例如，經工程化之雙特異性分子，例如，經工程化之雙特異性抗體分子，其係包含：
1)一個選自下列之特異性靶向部分：
a)供體特異性靶向部分，其係例如優先地結合供體靶標(優先地相較於結合至接納者抗原)並且可用於提供對於來自供體之移植組織例如器官的位點特異性免疫赦免；或
b)組織特異性靶向部分，其係例如優先結合受驗者靶標組織(優先地相較於受驗者非靶標組織)並且可用於向正在經歷不希望之免疫攻擊例如處於自體免疫疾患之受驗者組織提供位點特異性免疫赦免；以及
2)選自下列之效應子結合/調控部分：
(a)免疫細胞抑制分子結合/調控部分(本文中指為ICIM結合/調控部分)；
(b)免疫壓制性免疫細胞結合/調控部分(本文中指為IIC結合/調控部分)；
(c)效應子結合/調控部分，其作為治療性化合物之一部分，係例如藉由在靶標附近提供物質抑制或最小化該靶標之免疫系統造成之攻擊而促成免疫壓制性局部微環境(本文中指為SM結合/調控部分)；或
(d)免疫細胞刺激分子結合/調控部分(本文中指為ICSM結合/調控部分)，其中該ICSM係藉由例如阻斷共刺激分子與其相對結構間的交互作用而抑制免疫活化。
效應子結合/調控部分可落入類別a、b及c之一者以上。例如，如下所示，CTLA4結合分子係落入a及b兩類型。
於一些態樣中，該治療性化合物係包含ICIM結合/調控部分。於一些態樣中，ICIM結合/調控分子係結合並促效抑制分子例如抑制性免疫檢查點分子，或此外之抑制或降低免疫細胞例如細胞毒性T細胞、B細胞、NK細胞或骨髓細胞例如嗜中性球或巨噬細胞的活性。
於一些態樣中，該治療性化合物係包含經工程化之多特異性化合物，例如，經工程化之雙特異性分子，例如，經工程化之雙特異性抗體分子，其係包含：
1)特異性靶向部分，例如，供體特異性靶向部分(其係結合供體靶標並且可用於向來自供體之移植組織例如器官提供位點特異性免疫赦免)或組織特異性靶向部分(其係結合受驗者組織靶標並且可用於向正在經歷不希 望之免疫攻擊例如處於自體免疫性疾病之受驗者組織提供位點特異性免疫赦免)；以及
2)效應子結合/調控部分，其係包含結合至免疫細胞之效應子分子例如抑制性受體例如PD-1的ICIM結合/調控部分，其中，當該特異性靶向部分結合至其靶標時以及當該ICIM結合/調控部分結合至免疫細胞細胞之效應子分子時，免疫細胞活性，例如，該免疫細胞發動免疫攻擊之能力，係透過依賴於該免疫細胞上之效應子分子群聚的抑制性訊號而予以下調。於一些態樣中，經工程化之多特異性化合物係包含附加結合部分，使得其結合超過兩個特異性分子諸如但不限於3個或4個。
於一些態樣中，該治療性化合物係包含ICIM結合/調控部分並且具有下列特性之一者或兩者：(a)當該治療性化合物結合至其靶標時，免疫細胞之下調量係大於當該治療性化合物未結合至其靶標時；以及(b)該治療性化合物當與免疫細胞之細胞表面抑制性分子(例如PD-1)接合時，其不抑制或不實質上抑制該細胞表面抑制性分子結合內源性配位子的能力。
於一些態樣中，當該治療性化合物結合至其靶標時，免疫細胞下調量係大於當該治療性化合物未結合至其靶標時。於多個態樣中，藉由靶標結合治療性化合物之下調量係大於或等於當其未結合至其靶標時所見者的1.5倍、2倍、4倍、8倍或10倍。於多個態樣中，當治療性化合物未結合至靶標時，其不下調或不顯著下調免疫細胞。因此，抑制性受體(例如PD-1)的無差別或不希望之促效作用係得以最小化或消除。例如，當該治療性化合物結合至免疫細胞但未結合至靶標部分時，抑制性免疫檢查點 分子與該治療性化合物之接合不導致下調或不導致實質上下調，例如，該治療性化合物所結合至免疫細胞的抑制性受體不群聚或群聚不足以導致足以給出對該免疫細胞之下調或實質上抑制的抑制性訊號。
於多個態樣中，該治療性化合物當與免疫細胞之細胞表面抑制性受體(例如PD-1)接合時，不抑制或不實質上抑制該細胞表面抑制性受體結合內源性配位子的能力。於一些態樣中，該治療性化合物可結合至PD-1的PD-L1/2結合位點。因此，抑制性受體(例如PD-1)的無差別或不希望之拮抗係得以最小化或消除。於多個態樣中，該治療性化合物結合至免疫細胞的抑制性受體(例如PD-1)係不妨礙或不實質上妨礙該抑制性受體結合天然配位子(例如PD-L1)的能力。於多個態樣中，該治療性化合物結合至免疫細胞的抑制性受體(例如PD-1)係降低與天然配位子(例如PD-L1)之結合，少於不存在治療性化合物時所見者之50%、40%、30%、20%、10%或5%。
於一些態樣中，該治療性化合物係包含ICIM結合/調控部分，並且當以治療有效劑量給藥至受驗者時，其係不導致如同當出現對一種類型之全部免疫細胞(例如全部T細胞)之抑制性受體的無差別促效作用時可能的不可接受量之系統性免疫壓制，或者如同當該治療性化合物拮抗該抑制性受體與其天然配位子之交互作用時可能的不可接受量之系統性免疫活化。
儘管不欲受縛於理論，咸信，當給藥至受驗者時，包含ICIM結合/調控部分之治療性化合物可以下列四種狀態之一者存在：i)未結合並且處於游離溶液中；ii)僅透過該ICIM結合/調控部分結合至表現在免疫細 胞(例如T細胞)之表面的抑制性受體；iii)僅透過該靶向部分結合至靶標移植物或受驗者組織的表面；以及iv)透過該靶向部分結合至靶標移植物或受驗者組織的表面並且透過該ICIM結合/調控部分結合至免疫細胞(例如T細胞)所表現之抑制性受體。當該治療性化合物僅透過該靶向部分結合至靶標移植物或受驗者組織時(iii)，其係不影響或不實質上影響該靶標移植物或組織。當該治療性化合物透過該靶向部分結合至靶標移植物或組織並且透過該ICIM結合/調控部分結合至由免疫細胞(例如T細胞)所表現之抑制性受體時(iv)，其係在該靶標器官或組織處創建免疫赦免。儘管不欲受縛於理論，咸信，此係藉由該靶標移植物或供體組織於其表面藉由以高密度及價態固定複數個該治療性化合物分子以多聚化該治療性化合物而達成。該治療性化合物分子之多聚化允許該治療性化合物之ICIM結合/調控部分促成表現於免疫細胞(例如致病性T細胞)表面之抑制性受體的群聚，以及發揮靜默或下調免疫細胞功能之抑制性訊號的傳輸。例如，在T細胞之情況，可使用包含ICIM結合/調控部分之治療性化合物，該ICIM結合/調控部分係包含PD-L1分子或抗-PD-1 Ab。複數個治療性化合物分子結合至靶標係導致該治療性化合物分子之多聚化，其轉而憑藉該PD-L1分子或功能性抗-PD-1抗體分子造成PD-1於該T細胞的群聚。如果該群聚出現在靶標MHC向T細胞之T細胞受體呈遞抗原的情況，則生成負訊號並且該T細胞將被失活。於多個態樣中，該ICIM結合/調控部分(例如功能性抗體分子)係結合效應子分子但不抑制或不實質上抑制該效應子分子與其天然配位子之相互作用。
於一些態樣中，該治療性化合物係包含IIC結合/調控部分，其係結合並將免疫壓制性免疫細胞，例如Treg，例如Foxp3+CD25+Treg，召集到靶標組織附近。
於一些態樣中，該治療性化合物係包含SM結合/調控部分，其係調控例如結合並抑制、隔絕、降解或此外之中和例如調控免疫應答的可溶性分子之物質例如ATP或AMP。
於一些態樣中，該治療性化合物係包含對於免疫細胞之靶標為特異性的靶向部分。於一些態樣中，該靶標係如本文中揭示者。於一些態樣中，該靶標係MAdCAM。於一些態樣中，該靶向部分係結合至MAdCAM之抗體。
於一些態樣中，該治療性化合物係包含ICSM結合/調控部分，其係結合刺激性分子，例如共刺激分子。於一些態樣中，該ICSM係抑制該共刺激分子相對結構。結合/調控該共刺激分子或該共刺激分子相對結構可用來下調免疫細胞發動免疫應答的能力。於一些態樣中，該ICSM結合/調控部分可結合免疫細胞之刺激性(例如共刺激分子)，例如T細胞之OX40或者該刺激性分子的相對成員，例如另一細胞的OX40L，該另一細胞係諸如但不限於免疫細胞諸如NK細胞、肥大細胞、樹突細胞或例如非免疫細胞諸如內皮細胞或平滑肌細胞。
於一些態樣中，該治療性化合物係包含供體特異性靶向部分，並且向植入受驗者體內之供體移植物組織提供位點特異性免疫赦免。於一些態樣中，該治療性化合物係包含組織特異性靶向部分，並且向受驗 者之組織，例如苦於自體免疫性疾患中不希望之免疫應答的組織，提供位點特異性免疫赦免。
該靶向部分係對於欲保護免於免疫系統之供體移植物或受驗者組織為特異性。於一些態樣中，該效應子分子結合部分係包含從頭生成之結合域，例如功能性抗體分子。於一些態樣中，該效應子結合/調控部分係包含衍生自天然配位子之胺基酸序列，該天然配位子係識別表現在免疫細胞例如T細胞表面的抑制性受體。
於一些態樣中，該治療性化合物係靜默該欲保護之移植物或供體組織附近的免疫細胞，例如T細胞，但不靜默非鄰近靶標的免疫細胞，例如T細胞，蓋因該治療性化合物係需要該靶標移植物或供體組織之存在以發揮功能。此係與當該治療性化合物僅結合至由免疫細胞例如T細胞表現之抑制性受體時相反，於後者之情況下，不存在功能性後果。
本文所揭示之方法及治療性化合物係至少部分地基於提供位點特異性免疫赦免。本文所揭示之治療性化合物及使用它們的方法係允許臨床環境中免疫壓制性治療劑的非位點特異性全身性給藥之最小化例如減少或消除，例如該臨床環境係其中免疫應答之逆轉及壓制係所欲者，諸如自體免疫性疾病或組織例如器官、移植物。儘管當異常免疫系統所驅動之潛在病理生理學受到影響時係能夠進行臨床上有意義的應答，但廣泛作用之免疫壓制劑係具有非所欲之降低患者全身性免疫系統功能的效果。由於正常發揮功能之免疫系統的角色為抗擊存在於周邊環境中不斷湧現的致病性及機會性有機體並且恆定地清除健康個體之癌細胞，因此正在經歷慢性免疫壓制之患者係處於發展出感染及癌症的增加風險。本文所揭示之方 法及治療性化合物係提供選擇性地靶向並減弱、降低或消滅僅位於病理位點的致病性免疫應答，同時對於別處的正常全身性免疫系統功能具有最小抑制。
於一些態樣中，治療性化合物係提供為如本文中提供者。於一些態樣中，該化合物係包含i)選自下列之特異性靶向部分：a)供體特異性靶向部分，其係例如優先結合至供體靶標；或b)組織特異性靶向部分，其係例如優先結合受驗者之靶標組織；以及ii)選自下列之效應子結合/調控部分：(a)免疫細胞抑制性分子結合/調控部分(ICIM結合/調控部分)；(b)免疫壓制性免疫細胞結合/調控部分(IIC結合/調控部分)；或(c)效應子結合/調控部分，其係作為治療性化合物之一部分，促成免疫壓制性之局部微環境，例如，藉由在該靶標附近提供一種物質，該物質係抑制或最小化該靶標之免疫系統造成之攻擊(SM結合/調控部分)。
於一些態樣中，該效應子結合/調控部分係包含ICIM結合/調控部分。於一些態樣中，該效應子結合/調控部分係包含ICIM結合/調控部分，該ICIM結合/調控部分係包含抑制性免疫檢查點分子配位子分子。於一些態樣中，該抑制性免疫分子相對配位子分子係包含PD-L1分子。於一些態樣中，該ICIM係其中該抑制性免疫分子相對配位子分子與選自PD-1、KIR2DL4、LILRB1、LILRB或CTLA-4的同源抑制性免疫檢查點分子接合。於一些態樣中，該ICIM係抗體。於一些態樣中，該ICIM係包含結合至PD-1、KIR2DL4、LILRB1、LILRB或CTLA-4的抗體。於一些態樣中，該ICIM結合/調控部分係包含結合至細胞表面抑制性分子的功能性抗體分子。
於一些態樣中，該細胞表面抑制性分子係抑制性免疫檢查點分子。於一些態樣中，該抑制性免疫檢查點分子係選自PD-1、KIR2DL4、LILRB1、LILRB2、CTLA-4，或選自表1。
於一些態樣中，該效應子結合/調控部分係包含IIC結合/調控部分。
於一些態樣中，該化合物係具有從N端至C端之式：
R1---鏈結基區A-R2或R3-鏈結基區B-R4，
其中，R1、R2、R3及R4係各自獨立包含效應子結合/調控部分，例如，ICIM結合/調控部分、IIC結合/調控部分、ICSM結合/調控部分、或SM結合/調控部分；特異性靶向部分；或不存在；限制條件為存在效應子結合/調控部分及特異性靶向部分。
於一些態樣中，係提供包含結合至靶標細胞之靶向部分以及效應子結合/調控部分的多肽，其中該效應子結合/調控部分係IL-2突變蛋白質多肽(IL-2突變蛋白質)，其係突變體IL-2蛋白質。於一些態樣中，該靶向部分係包含結合至靶標細胞表面之靶標蛋白質的抗體。於一些態樣中，該多肽係包含如本文中所提供的二種多肽鏈。於一些態樣中，該第一鏈係包含抗體的VH域，第二鏈係包含抗體的VL域，該抗體係結合至靶標細胞或表現在靶標細胞的蛋白質，諸如但不限於MAdCAM。於一些態樣中，該靶向部分係結合至MAdCAM之抗體。於一些態樣中，該靶向部分係結合至OAT1(SLC22A6)及OCT2(SLC22A2)。於一些態樣中，該靶向部分係結合至OAT1(SLC22A6)及OCT2(SLC22A2)的抗體。於一些態樣中，該靶向部分係不結合至OAT1(SLC22A6)及OCT2(SLC22A2)。為了避免 引起懷疑，本文引用之OCT2並非轉錄因子，而是表現於腎臟組織的表面蛋白質。於一些態樣中，該靶向部分係特異性結合至胰臟觀察到的蛋白質。於一些態樣中，該靶向部分係結合至FXYD2、TSPAN7、DPP6、HEPACAM2、TMEM27或GPR119。於一些態樣中，該靶向部分不結合至FXYD2、TSPAN7、DPP6、HEPACAM2、TMEM27或GPR119。於一些態樣中，該靶向部分係結合至FXYD2、TSPAN7、DPP6、HEPACAM2、TMEM27或GPR119的抗體。
於一些態樣中，該多肽係包含第一鏈及第二鏈，該第一鏈及第二鏈係形成該多肽或治療性化合物，其中
該第一鏈係包含：
VH -Hc -鏈結基-C1 ，其中VH 係重鏈可變域，其與該第二鏈之VL 域結合至靶標細胞；Hc 係包含CH1-CH2-CH3域之抗體的重鏈；該鏈結基係如本文中所提供之甘胺酸/絲胺酸胺基酸序列或不存在；以及，C1 係如本文所提供之IL-2突變蛋白質，其可以N端或C端取向融合至Fc蛋白質，其中可存在將該IL-2突變蛋白質鏈結至該Fc區的甘胺酸/絲胺酸鏈結基；以及
該第二鏈係包含：
VL -Lc ，其中VL 係輕鏈可變域，其與該第一鏈之VH 域結合至靶標細胞；並且該Lc域係輕鏈CK域。於一些態樣中，該第一鏈係包含C1 -鏈結基-VH -Hc ，變量係如上文定義。
於一些態樣中，該多肽係包含式C1 -鏈結基-CH2-CH3-鏈結基-scFv，其中C1 及鏈結基係如上文及本文中定義，CH2及CH3係重鏈域，並且scFv係單鏈抗體如作為靶向部分作用以結合至組織靶標的片段， 如本文中所提供。於一些態樣中，如本文所提供，該突變蛋白質係融合至該Fc區，並且該等鏈結基之一者或多者係不存在。於一些態樣中，該鏈結基係甘胺酸/絲胺酸鏈結基，如本文所提供者。於一些態樣中，該鏈結基係肽序列。
於一些態樣中，治療自體免疫性疾病或病症之方法係提供於本文中，包含給藥該治療性化合物或多肽之一者或多者的方法係提供於本文中。
於一些態樣中，治療本文所揭示之疾病或病症的方法係提供於本文中，包含給藥該治療性化合物或多肽之一者或多者的方法係提供於本文中。
於一些態樣中，係提供治療患有炎症性腸病之受驗者的方法，該方法係包含給藥本文所提供之治療性化合物或多肽至該受驗者以治療炎症性腸病。於一些態樣中，該受驗者係患有克隆氏症及/或潰瘍性結腸炎。
於一些態樣中，係提供治療患有自體免疫性肝炎之受驗者的方法，該方法係包含給藥本文所提供之治療性化合物或多肽至該受驗者以治療自體免疫性肝炎。
於一些態樣中，係提供治療原發性硬化性膽管炎的方法，該方法係包含給藥本文所提供之治療性化合物或多肽至該受驗者以治療原發性硬化性膽管炎。
於一些態樣中，係提供治療(例如，減輕)腸之炎症的方法，該方法係包含給藥本文所提供之治療性化合物或多肽至該受驗者以治療腸 之炎症。於一些態樣中，該炎症係處於小腸內。於一些態樣中，該炎症係處於大腸內。於一些態樣中，該炎症係處於腸道或結腸內。
於一些態樣中，係提供治療(例如，減輕)胰臟之炎症的方法，該方法係包含給藥本文所提供之治療性化合物或多肽至該受驗者以治療胰臟之炎症。於一些態樣中，該方法係治療胰臟炎。
於一些態樣中，係提供治療1型糖尿病的方法，該方法係包含給藥本文所提供之治療性化合物或多肽至該受驗者以治療1型糖尿病。
於一些態樣中，係提供治療移植受驗者的方法，該方法係包含給藥治療有效量之本文所提供之治療性化合物或多肽至該受驗者，從而治療移植(接納者)受驗者。
於一些態樣中，係提供治療業經移植供體組織之受驗者之GVHD的方法，該方法係包含給藥治療有效量之本文所提供之治療性化合物或多肽至該受驗者。
於一些態樣中，係提供治療患有自體免疫性疾病、或處於患病風險或患病風險提高之受驗者的方法，該方法係包含給藥治療有效量之本文所提供之治療性化合物或多肽至該受驗者，從而治療該受驗者。
於一些態樣中，該化合物係具有從N端至C端之式：
A1---鏈結基A---A2---鏈結基B---A3或A3---鏈結基A---A2---鏈結基B---A1，
其中，A1及A3係各自獨立為效應子結合/調控部分，例如，ICIM結合/調控部分、IIC結合/調控部分、ICSM結合/調控部分、或SM結合/調控 部分；或特異性靶向部分，其中A2係包含Fc區或不存在；以及，鏈結基A及鏈結基B係鏈結基但不必相同。
圖1係示出本文所提供之治療性化合物的非限制性態樣。
圖2係示出本文所提供之治療性化合物如何發揮功能的非限制性示例性說明。
圖3係示出本文所提供之治療性化合物的非限制性示例性說明。
圖3A係示出本文所提供之治療性化合物的非限制性示例性說明。
圖4係示出本文所提供之治療性化合物的非限制性示例性說明。
圖5係示出本文所提供之治療性化合物的非限制性示例性說明。
圖6係示出本文所提供之治療性化合物的非限制性示例性說明。
圖7係示出本文所提供之治療性化合物的非限制性示例性說明。
圖8係示出本文所提供之治療性化合物的非限制性示例性說明。
圖9係示出本文所提供之治療性化合物的非限制性示例性說明。
圖10係示出本文所提供之治療性化合物的非限制性示例性說明。
圖11係示出本文所提供之治療性化合物的非限制性示例性說明。
圖12係示出本文所提供之治療性化合物的非限制性示例性說明。
圖13係示出本文所提供之治療性化合物的非限制性示例性說明。
圖14係示出本文所提供之治療性化合物的非限制性示例性說明。
圖15係示出本文所提供之治療性化合物的非限制性示例性說明。
圖16係示出本文所提供之治療性化合物的非限制性示例性說明。
圖17係示出本文所提供之治療性化合物的非限制性示例性說明。
圖18係示出本文所提供之治療性化合物的非限制性示例性說明。
圖19係示出本文所提供之治療性化合物的非限制性示例性說明。
本申請係藉由引用下列之每一者而將其整體併入本文：2018年3月15日遞交之美國申請案15/922,592號以及2018年3月15日遞交之PCT申請第PCT/US2018/022675號。本申請亦藉由引用下列之每一者而將其整體併入本文：2018年8月23日遞交之美國臨時申請第62/721,644號、2018年5月24日遞交之美國臨時申請第62/675,972號、2017年12月6日遞交之美國臨時申請第62/595,357號、2017年12月6日遞交之美國臨時申請第62/595,348號、2018年8月23日遞交之美國臨時申請第16/109,875號、2018年8月23日遞交之美國臨時申請第16/109,897號、2018年5月24日遞交之美國臨時申請第15/988,311號、2018年5月4日遞交之PCT申請第PCT/US2018/034334號以及2018年11月28日遞交之第PCT/US2018/062780號。
如本文中所用並且除非另做指明，否則術語「約」係旨在意指其所修飾之值的±5%。因此，約100係意指95至105。
如本說明書及所附申請專利範圍中所用，除非上下文中明確另外指出，否則單數形式「一」及「該」係包括複數形式。
如本文中所用，術語「約」係意指近似之數值，並且小的異動將不會顯著影響對所揭露之態樣的實踐。若使用數值限制，除非上下文中另做指明，否則「約」係意指該數值可異動±10%並且保留在所揭露之態樣的範疇內。
如本文中所用，術語「動物」係包括但不限於，人及非人脊椎動物諸如野生動物、家畜及農畜。
如本文中所用，術語「接觸」係意指於體外系統或體內系統中將兩個元素帶至一起。舉例而言，治療性化合物「接觸」個體或患者或細胞係包括將該化合物給藥至個體或患者諸如人，以及，舉例而言，將化合物引入含有含靶標之細胞或純化製劑的樣本中。
如本文中所用，術語「包含」(以及任意形式之包含，諸如單數主動形式、複數主動形式及被動形式)、「具有」(以及任意形式之具有，諸如單數形式及複數形式)、「包括」(以及任意形式之包括，諸如單數形式及複數形式)、或「含有」(以及任意形式之含有，諸如單數形式及複數形式)係涵括性或開放性，並且不排除額外之未引述的元素或方法步驟。引述術語「包含」之任意組成物或方法亦應理解為亦揭示此類組成物為由、僅由或基本上由所引述之組分或元素組成。
如本文中所用，當參考具有不同域或異源序列之蛋白質而使用時，術語「融合」或「鏈結」係意指該等蛋白質域係相同之肽鏈的一部分，該等蛋白質域係經由肽鍵或其它共價鍵結而彼此連接。該等域或節段可直接鏈結或融合至彼此，或者另一域或肽序列可介於兩個域或序列之間並且此類序列仍將會被視為融合或鏈結至彼此。於一些態樣中，本文所提供之多個域或蛋白質係直接鏈結或融合至彼此，或者本文中揭示之鏈結基序列諸如甘胺酸/絲胺酸序列將兩個域鏈結在一起。
如本文中所用，可互換使用之術語「個體」、「受驗者」或「患者」係意指任何動物，包括哺乳動物諸如小鼠、大鼠、其它嚙齒動物、兔、狗、貓、豬、牛、綿羊、馬或靈長動物諸如人。
如本文中所用，術語「抑制」係指結果、症候或活性相較於不存在抑制該結果、症候或活性之化合物時的活性或結果被降低。於一些態樣中，該結果、症候或活性被抑制約或至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或99%。如果結果、症候或活性被完全消除或消滅，則亦可視為其被抑制。
如本文中所用，短語「有此需要」係意指受驗者已經被鑒別需要進行特定方法或治療。於一些態樣中，該鑒別可藉由任何診斷手段進行。於本文所揭示之任何方法及治療中，該受驗者可係有此需要者。於一些態樣中，該受驗者係處於或將要前往特定疾病、疾患或病症盛行之環境。
如本文中所用，短語「X至Y之整數」係意指包括端點在內之任何整數。舉例而言，短語「X至Y之整數」係意指1、2、3、4或5。
如本文中所用，術語「哺乳動物」係意指嚙齒動物(亦即，小鼠、大鼠或豚鼠)、猴、貓、狗、牛、馬、豬或人。於一些態樣中，該哺乳動物係人。
於一些態樣中，治療性化合物係提供於本文中。於一些態樣中，該治療性化合物係蛋白質或多肽，其係具有彼此相互作用之多個鏈。該等多肽可透過非共價相互作用或共價相互作用，諸如透過二硫鍵或其它共價鍵，彼此交互作用。因此，如果一個態樣係指治療性化合物，則其亦可稱為指如本文所提供之蛋白質或多肽，反之亦然，如上下文指示。
如本文中所用，短語「眼科可接受」係意指對於所治療之眼睛或其功能沒有持續之有害作用，或對於被治療之受驗者的通常健康情況沒有持續之有害作用。惟，應知悉，短暫效果諸如輕微刺激或「刺痛」感係藥物之局部眼部給藥常見者，並且此類短暫效果之存在並不與所提及的本文所定義之「眼科可接受」之組成物、製劑或成分(例如，賦形劑)不一致。於一些態樣中，該藥物組成物可係眼科可接受或適用於眼部給藥。
「特異性結合」或「特異性結合至」或「特異性於」特定抗原、靶標或表位係意指顯著不同於非特異性相互作用的結合。舉例而言，特異性結合可藉由測定分子之結合與對照分子之結合的比較而量測，該對照分子通常係具有相似結構但不具有結合活性的分子。舉例而言，特異性結合可藉由與類似於靶標之對照分子競爭而測定。
舉例而言，對特定抗原、靶標或表位的特異性結合可藉由對於抗原或表位具有10-4M 、至少約10-5M 、至少約10-6M 、至少約10-7M 、至少約10-8M 、至少約10-9M ，或者至少約10-10M 、至少約10-11M 、至少約10-12M 或更大之KD 的抗體顯現，其中KD 係指特定抗體-靶標相互作用的解離速率。典型地，特異性結合抗原或靶標之抗體將具有KD 為或比對照分子相對於該抗原或表位至少較大2倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍、500倍、1000倍、5,000倍、10,000倍。
於一些態樣中，舉例而言，對特定抗原、靶標或表位之特異性結合可藉由具有比該抗原、靶標或表位相對於對照物較大至少2倍、4倍、5倍、20倍、50倍、100倍、500倍、1000倍、5,000倍、10,000倍 之KA 或Ka 的抗體顯現，其中KA 或Ka 係指特定抗體-抗原相互作用的締合速率。
如本文所提供，該等治療性化合物及組成物可用於如本文所提供之治療方法中。如本文所用，「治療」、「治療的」或「正在治療」係意指治療性治療及預防性措施兩者，其中目標係減緩(減少)非所欲之生理狀況、疾患或疾病或者獲得有益或所欲之臨床結果。對於此等態樣之目的，有益或所欲之臨床結果係包括但不限於，症候之減輕；病症、疾患或疾病程度之衰退；病症、疾患或疾病狀態之穩定化(亦即，不惡化)；病症、疾患或疾病進展之發作延遲或減緩；病症、疾患或疾病狀態之改善或緩解(無論部分或整體的)，無論可偵檢或不可偵檢；至少一種可量測之物理參數之改善，不必為患者所察覺；或病症、疾患或疾病之提升或好轉。治療係包括引起臨床顯著應答而沒有過量之副作用。「治療」亦包括相較於不接受治療的預期之生存期而延長生存期。
本文係提供治療性化合物，例如，治療性蛋白質分子，例如，融合蛋白質，其係包括典型作為分離之域的靶向部分及效應子結合/調控部分。亦提供使用及作成該等治療性化合物的方法。該靶向部分係用來將該治療性化合物並因此將該效應子結合/調控部分定位至希望獲得免疫赦免之位點處。該效應子結合/調控部分係包含下列之一者或多者：(a)免疫細胞抑制性分子結合/調控部分(ICIM結合/調控部分)；(b)免疫壓制性免疫細胞結合/調控部分(IIC結合/調控部分)；(c)可溶性分子結合/調控部分(SM結合/調控部分)或(d)阻斷或抑制免疫細胞刺激性分子結合/調控部分的分子(本文中指為ICSM結合/調控部分)。於一些態樣中，ICSM係藉由例如 阻斷共刺激分子與其相對結構間的相互作用而抑制免疫活化。於一些態樣中，治療性化合物係包含：(a)及(b)；(a)及(c)；(a)及(d)；(b)及(c)；(b)及(d)；(c)及(d)；或(a)、(b)、(c)及(d)。
本揭露係提供，舉例而言，可作用為PD-1促效劑之分子。不受縛於任何特定理論，PD-1之促效作用係抑制T細胞活化/訊號傳導並且可藉由不同機制施行。舉例而言，交聯可導致促效作用，微珠結合之功能性PD-1促效劑業經得以揭示(英國牛津基督教堂學院博士論文《抑制性抗體超級促效劑對PD-1通路之調控》(kkaya.Ph.D.Thesis：Modulation of the PD-1 pathway by inhibitory antibody superagonists.Christ Church College,Oxford,UK,2012))，其係藉由引用併入本文。PD-1與兩個結合非重疊表位之mAb的交聯係誘導PD-1訊號傳導(Davis,US 2011/0171220)，該文件係藉由引用併入本文。另一實例係透過使用藉由引用併入本文之山羊抗-PD-1抗血清(例如，AF1086,R&D Systems)例示性說明，當可溶解時，其係作用為促效劑(Said et al.,2010,Nat Med)，該文獻係藉由引用併入本文。可用於本發明之態樣中之PD-1促效劑的非限制性實例係包括但不限於，UCB純株19或純株10、PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4及PD1AB-5、PD1AB-6(Anaptys/Celgene)、PD1-17、PD1-28、PD1-33及PD1-35(Collins et al,US 2008/0311117 A1 Antibodies against PD-1 and uses therefor，其係藉由引用併入本文)，或可係雙特異性單價抗-PD-1/抗-CD3(Ono)等。於一些態樣中，該PD-1促效劑抗體可係阻斷PD-L1至PD-1之結合的抗體。於一些態樣中，該PD-1促效劑抗體可係不阻斷PD-L1至PD-1之結合的抗體。
PD-1促效作用可藉由任何方法諸如實施例中所揭示之方法量測。舉例而言，可將細胞構造為表現(包括穩定地表現)包括1)融合至b-半乳糖苷酶的人PD-1多肽(「酶供體」)以及2)融合至b-半乳糖苷酶的SHP-2多肽(「酶接收體」)的構造體。不受縛於任何理論，當接合PD-1時，SHP-2被召集至PD-1。該酶接受體及酶供體係形成可被檢定之完全活化b-半乳糖苷酶。但是，該檢定不直接顯示PD-1促效作用，而是顯示PD-1訊號傳導的活化。PD-1促效作用亦可藉由量測對T細胞活化之抑制而量測，不欲受縛於任何理論，此係因為PD-1促效作用抑制抗-CD3誘導的T細胞活化。舉例而言，PD-1促效作用可藉由使用PHA(對於人T細胞)或ConA(對於小鼠T細胞)預活化T細胞使得它們表現PD-1而量測。該等細胞隨後可在抗-PD-1(或PD-L1)之存在下使用抗-CD3再次活化，進行PD-1促效作用檢定。在抗-CD3之存在下接受PD-1促效劑訊號的T細胞將顯示相對於單獨使用抗-CD3刺激為降低之活化。活化可藉由增殖或細胞因子(IL-2、IFNg、IL-17)或其它標記物諸如CD69活化標記物的產生而讀出。因此，PD-1促效作用可藉由細胞因子產生或細胞增殖而量測。其它方法亦可用來量測PD-1促效作用。
PD-1係表現於經活化之T細胞及其它免疫細胞的Ig超家族成員。PD-1之天然配位子為PD-L1及PD-L2。不受縛於任何特定理論，當PD-L1或PD-L2結合至經活化之T細胞的PD-1時，啟動抑制性訊號傳導級聯，導致經活化之T效應子細胞功能的衰減。因此，已知使用PD-1拮抗劑阻斷T細胞之PD-1與另一細胞(例如腫瘤細胞)之PD-L1/2間的交互作用作為檢查點抑制，並且將T細胞從抑制中釋放出來。相比之下，PD-1 促效劑抗體可結合至PD-1，發送抑制性訊號並衰減T細胞之功能。因此，PD-1促效劑抗體可作為效應子分子結合/調控部分併入本文所揭示之多個態樣中，當與靶向部分配對時，其可施行經定位之組織特異性免疫調控。
該效應子分子結合/調控部分可以多種途徑提供免疫壓制性訊號或環境。於一些態樣中，該效應子結合/調控部分係包含ICIM結合/調控部分，其係直接結合並(在如本文所揭示之適宜條件下)活化由負責驅動疾病病理學之免疫細胞表現的抑制性受體。於另一態樣中，該效應子結合/調控部分係包含IIC結合/調控部分，並且結合並蓄積免疫壓制性免疫細胞。於一些態樣中，所蓄積之免疫壓制性細胞係促成免疫赦免。於另一態樣中，該效應子結合/調控部分係包含SM結合/調控部分，其係操縱周邊微環境以使得免疫細胞例如驅動疾病病理學之免疫細胞被較少允許發揮功能。於一些態樣中，該SM結合/調控部分係耗竭促成免疫攻擊或活化之實體。於一些態樣中，該效應子結合/調控部分係包含ICSM結合/調控部分，其係結合一對刺激性分子例如共刺激分子之成員，抑制該共刺激分子與共刺激分子相對結構(諸如但不限於OX40或CD30或CD40以及OX40L或CD30L或CD40L)間的相互作用，並且抑制包含該對之成員的細胞(諸如但不限於T細胞、B細胞、NK細胞或其它免疫細胞)的免疫刺激。
該靶向部分及效應子結合/調控部分係共價或非共價地、直接或透過鏈結基實體而物理上繫結至彼此，例如，作為治療性蛋白質分子中相同蛋白質分子的成員。於一些態樣中，該靶向部分及效應子部分係提供於治療性蛋白質分子例如融合蛋白質中，典型係作為分離之域。於一些態樣中，該靶向部分、該效應子結合/調控部分、或兩者係各自包含單域抗 體分子，例如，駱駝抗體VHH分子或人類可溶性VH域。其亦可含有單鏈片段可變(scFv)或Fab域。於一些態樣中，該治療性蛋白質分子或編碼該治療性蛋白質分子之核酸，例如mRNA或DNA，可給藥至受驗者。於一些態樣中，該靶向部分及效應子分子結合/調控部分係鏈結至第三實體，例如載劑例如聚合物載劑、樹枝狀聚合物、或顆粒例如奈米顆粒。該治療性化合物可用來下調所選擇靶標或位點處之組織處或組織中的免疫應答，同時不具有或具有實質上更低的全身性免疫壓制功能。該靶標或位點可包含供體組織或自源性組織。
本文係提供使用本文所揭露之治療性化合物提供對於經移植之供體組織的位點特異性免疫赦免的方法，該供體組織係例如異種移植組織，例如本文所揭示之組織，例如異種移植肝臟、異種移植腎臟、異種移植心臟、異種移植胰臟、異種移植胸腺或胸腺組織、異種移植皮膚、或異種移植肺。於多個態樣中，該治療係最小化供體移植組織之排斥作用，最小化對於供體移植組織的免疫效應子介導之損害，延長供體移植組織之接受性，或延長供體移植組織之功能壽命。
本文亦提供使用本文所揭露之治療性化合物抑制移植物抗宿主疾病(GVHD)的方法，該方法係藉由最小化供體免疫細胞例如供體T細胞之介導對於接納者組織之免疫攻擊的能力進行該治療。
本文亦提供治療例如治療性地治療或預防性地治療(或預防)受驗者自體免疫性疾患或應答的方法，該方法係藉由給藥本文所揭露之治療性化合物以例如提供對免疫系統的位點或組織特異性調控而進行該治療。於一些態樣中，該方法係提供對受驗者組織的耐受性、最小化對受驗 者組織之排斥作用、最小化免疫效應子細胞介導的對受驗者組織的損害、或延長受驗者組織的功能。於一些態樣中，該治療性化合物係包括靶向部分，其係以例如特異性地以正處於自體免疫攻擊或處於自體免疫攻擊風險的組織為靶向。非限制性的示例性組織係包括但不限於，胰臟、髓鞘質、唾液腺、滑膜細胞、及肌細胞。
如本文所用，術語「治療」、「治療的」或「正在治療」係關於治療性治療，其中目標係減緩(減少)非所欲之生理狀況、疾患或疾病或者獲得有益或所欲之臨床結果。舉例而言，有益或所欲之臨床結果係包括但不限於，症候之減輕；病症、疾患或疾病程度之衰退；病症、疾患或疾病狀態之穩定化(亦即，不惡化)；病症、疾患或疾病進展之發作延遲或減緩；病症、疾患或疾病狀態之改善或緩解(無論部分或整體的)，無論可偵檢或不可偵檢；至少一種可量測之物理參數之改善，不必為患者所察覺；或病症、疾患或疾病之提升或好轉。治療係包括引起臨床顯著應答而沒有過量之副作用。「治療」亦包括相較於不接受治療的預期之生存期而延長生存期。因此，「自體免疫性疾病/疾患之治療」係意指減輕或改善於自體免疫性疾病/疾患或本文所揭示之其它狀況相關之任何原發性現象或繼發性症候的活性。各種疾病或病症係提供於本文中。治療性治療亦可預防性地施予以在發病之前防止或降低該疾病或病症。
於一些態樣中，該治療性化合物之給藥係於疾患出現之後開始。於一些態樣中，該治療性化合物之給藥係於該疾患發作或完全發作之前開始。於一些態樣中，該治療性化合物之給藥係於該疾患發作或完全發作之前開始，例如，對於患有該疾患之受驗者、高風險受驗者、具有指示 該疾患風險或存在之生物標記物的受驗者、具有該疾患家族病史的受驗者、或該疾患風險之指標或無症狀存在。舉例而言，於一些態樣中，係治療具有胰島細胞損害但尚未罹患糖尿病的受驗者。
儘管不欲受縛於理論，咸信該靶向部分係發揮功能以將該治療性化合物結合並蓄積至被選擇性地表現於希望具有免疫赦免之解剖位點處的靶標。於一些態樣中，例如，在供體組織移植的情境中，該靶向部分係結合至存在於該供體組織而不存在於接納者體的靶標，例如等位基因產物。對於自體免疫性疾患之治療，該靶向部分係結合優先表現在希望具有免疫赦免之解剖位點處，例如胰臟中的靶標。對於GVHD之治療，該靶向部分係靶向宿主組織，並且保護該宿主免受來自衍生自所移植組織之所移植免疫效應子細胞的攻擊。
又，儘管不欲受縛於理論，咸信該效應子結合/調控部分係用來遞送免疫壓制訊號或此外之創建免疫赦免微環境。
除非另做定義，否則本文中使用之所有科技術語係具有與具有此等態樣所屬領域通常知識之人士所一般理解者相同之意。儘管在本發明態樣之實踐或測試中可使用與本文中揭示之方法及材料類似或等效者，但適宜之方法及材料係揭示於下。本文中述及之所有出版物、專利申請案及其它參考文獻係藉由引用而以其整體併入本文。此外，材料、方法及實施例係僅做例示性說明之用而非意圖限制。標題、副標題或編號或字母元素例如(a)、(b)、(i)等，係僅為了便於閱讀而存在。本檔案中標題或編號或字母元素之使用不需要該等步驟或元素以字母順序實施，也不需要該等步 驟或元素必須彼此離散。態樣之其它特徵、目標及優點將會從該具體實施方式和圖式以及申請專利範圍中明顯可見。
另外之定義
除非另做定義，否則本文中使用之所有科技術語係具有與具有該等態樣所屬領域通常知識之人士所一般理解者相同之意。於揭示及主張本發明態樣中，下列術語及本申請通篇以其它方式引用之術語將根據其提供定義之處如何定義而使用。
亦應理解，本文所用之術語係用於揭示特定態樣之目的，並且不試圖限制。
如本文中所使用的該術語，抗體分子係指多肽，例如免疫球蛋白鏈或其片段，其係包含至少一個功能性免疫球蛋白可變域序列。抗體分子係涵蓋抗體(例如，全長度抗體)及抗體片段。於一些態樣中，抗體分子係包含全長度抗體之抗原結合或功能性片段，或全長度免疫球蛋白鏈。舉例而言，全長度抗體係天然的或藉由正常免疫球蛋白基因片段重組製程所形成的免疫球蛋白(Ig)分子(例如，IgG抗體)。於多個態樣中，抗體分子係指免疫球蛋白分子之免疫活性的抗原結合部分，諸如抗體片段。抗體片段，例如功能性片段，係包含抗體之一部分，例如，Fab、Fab' 、F(ab' )2、F(ab)2、可變片段(Fv)、域抗體(dAb)、或單鏈可變片段(scFv)。功能性抗體片段係結合至與完整(例如，全長度)抗體所識別者相同之抗原。術語「抗體片段」或「功能性片段」亦包括由可變區組成之經單離片段，諸如由重鏈與輕鏈之可變區組成的「Fv」片段，或其中輕可變區與重可變區係藉由肽鏈結基連接之重組單鏈多肽分子(「scFv蛋白質」)。於一些態樣中，抗體片段係 不包括抗體之不具抗原結合活性的部分，諸如Fc片段或單個胺基酸殘基。示例性抗體分子係包括全長度抗體及抗體片段，例如，dAb(域抗體)、單鏈、Fab、Fab’及F(ab’)2片段、以及單鏈可變片段(scFv)。
術語「抗體分子」亦涵蓋整個域抗體或單域抗體或其抗原結合片段，其亦可指為「sdAb」或「VHH」。域抗體係包含VH 或VL ，其係可用作獨立之抗體片段。此外，域抗體係包括僅重鏈之抗體(HCAb)。域抗體亦包括IgG之CH2域作為CDR環圈被接枝於其的基礎支架。其亦可通常定義為包含胺基酸序列之多肽或蛋白質，該胺基酸序列係由四個框架區構成，該框架區係藉由三個互補性決定區中斷。此係表示為FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。sdAb可於駱駝科動物諸如駱馬體內產生，但亦可使用該技藝中習知之技術合成性生成之。sdAb或多肽之胺基酸殘基的編號係根據Kabat等人(美國公立衛生服務部國立衛生研究院醫學博士，《免疫學意義上之蛋白質序列》，第91號出版物("Sequence of proteins of immunological interest," US Public Health Services,NIH Bethesda,MD,Publication No.91)，其係藉由引用併入本文)規定之用於VH域的通常編號進行。根據這一編號，sdAb之FR1係包含位置1至30之胺基酸殘基，sdAb之CDR1係包含位置31至36之胺基酸殘基，sdAb之FR2係包含位置36至49之胺基酸殘基，sdAb之CDR2係包含位置50至65之胺基酸殘基，sdAb之FR3係包含位置66至94之胺基酸殘基，sdAb之CDR3係包含位置95至102之胺基酸胺基，以及，sdAb之FR4係包含位置103至113之胺基酸殘基。域抗體亦揭示於WO2004041862及WO2016065323中，其各自係藉由引用併入本文。域抗體可係如本文所揭示之靶向部分。
抗體分子可係單特異性(例如，一價或二價)、雙特異性(例如，二價、三價、四價、五價或六價)、三特異性(例如，三價、四價、五價或六價)，或具有更高階之特異性(例如，四特異性)及/或超過六價之更高階之價態。抗體分子可包含輕鏈可變區之功能性片段及重鏈可變區之功能性片段，或者重鏈及輕鏈可融合在一起成為單一多肽。
多特異性治療性化合物型式之實例，例如，雙特異性抗體分子，係顯示於下列非限制性實例中。儘管使用抗體分子予以例示性說明，但它們可用作包括其它非抗體部分作為特異性結合或效應子部分的治療性分子之平台。於一些態樣中，此等非限制性實例係基於對稱或不對稱Fc型式。
舉例而言，圖式係例示性說明非限制性且可變之對稱同二聚體方案。於一些態樣中，該二聚作用界面係以人IgG1 CH2-CH3域為中心，其係經由跨越CH2/CH2及CH3/CH3兩者之接觸界面二聚合。所顯示之所得雙特異性抗體係具有由四個結合單元構成之總價態，其中兩個相同之結合單元係位於該二聚體之每一側的N端，而兩個相同單元係位於該二聚體之每一側的C端。在每種情況下，位於該同二聚體之N端的結合單元係不同於彼等位於該同二聚體之C端者。使用這一類型之二價態即可用於該分子之任一端之抑制性T細胞受體，亦可在該分子之任一端達成組織繫結抗原。
舉例而言，於圖3中，係示例性說明非限制性態樣。該同二聚體之N端係含有兩個相同之由兩個相同輕鏈構成的Fab域，其係分離之多肽，經由VH/VL相互作用以及Cκ或Cλ與CH1之相互作用與每一重鏈 之N端VH-CH1域交界。Cκ或Cλ與CH1之間係存在天然二硫鍵，其係提供輕鏈與重鏈之間的共價錨定。於這一設計的C端係兩個相同之scFv單元，藉由該scFv(於這一實例中)，Fc之CH3域的C端之後為典型由(但不限於此)絲胺酸、甘胺酸、丙胺酸及/或蘇胺酸殘基構成的撓曲疏水性鏈結基，之後為每一scFv單位之VH域，之後為富含甘胺酸/絲胺酸之鏈結基，之後為VL域。此等串聯至VH域及VL域係相關聯以形成附接在該Fc之C端的單鏈片段可變區(scFv)。由於以該Fc為中心之同二聚屬性，兩個此類單元係存在於這一分子的C端。scFv之域順序可構造成形成從N端至C端為VH-鏈結基-VL或VL-鏈結基-VH。於其不同末端具有不同結合區之分子的非限制性實例係，其中一端係PD-1促效劑，並且提供靶標特異性之抗體係抗-MAdCAM-1抗體。這可如例如圖3A中所示而示例性說明，該圖係示例性說明不同取向之分子。
於一些態樣中，該MAdCAM抗體係如本文中別處所揭示之阻斷性或非阻斷性抗體。不欲受縛於任何理論，業經顯示MAdCAM係經由其兩個Ig超家族I-set域內之多個殘基與表現於淋巴細胞之整合素α4β7的頭段相互作用，並且已經揭示了用於該相互作用的原子層級結構基礎(Viney JL et al.(1996).J Immunol.157,2488-2497；Yu Y et al(2013).J Biol Chem.288,6284-6294；Yu Y et al(2012).J Cell Biol.196,131-146，其各自藉由引用而以其整體併入)。業經顯示，於人(Chen J et al(2003).Nat Struct Biol.10,995-1001；de Chateau M et al(2001).Biochemistry.40,13972-13979)及小鼠(Day ES et al(2002).Cell Commun Adhes.9,205-219；Hoshino H et al(2011).J Histochem Cytochem.59,572-583)兩 者之分子系統中，業經於結構、機制及功能方面詳盡地顯示，MAdCAM與α4β7之任何相互作用係取決於存在於類整合素β7亞單位I域中的三個指示結合位點，並且此等金屬結合位點可與Ca2+、Mn2+及Mg2+配位。在高層級之Ca2+存在下並且具有或不具有Mg2+或Mn2+而使用細胞黏附檢定、流式細胞分析技術、及/或流式腔檢定，MAdCAM/α4β7相互作用係顯示為較低之功能親和性並且允許淋巴細胞之滾動黏附，而於活化整合素之低Ca2+但較高Mg2+或Mn2+下，MAdCAM/α4β7相互作用係具有較高之功能親和性並且介導牢固之淋巴細胞黏附(Chen J et al(2003).Nat Struct Biol. 10 ,995-1001)。多個研究團隊業經顯示，可使用各種基於細胞：細胞、細胞：膜製劑、及/或細胞：蛋白質的黏附/相互作用檢定，與FACS、基於細胞流式腔之計數、或基於IHC之讀數合用，以監控抗-MAdCAM或抗-α4β7抗體對於MAdCAM與α4β7相互作用的影響，允許鑒別阻斷性或非阻斷性抗體(Nakache,M et al(1989).Nature. 337 ,179-181；Streeter,PR et al(1988).Nature.331 .41-46；Yang Y et al(1995).Scand J Immunol. 42 .235-247；Leung E et al(2004).Immunol Cell Biol. 82 .400-409；Pullen N et al(2009).B J Pharmacol. 157 .281-293；Soler D et al(2009).J Pharmacol Exp Ther. 330 .864-875；Qi J et al(2012).J Biol Chem. 287 .15749-15759)。
此係業經於小鼠系統設定中得以例證，並且鑒別了抗小鼠MAdCAM抗體諸如MECA-89(非阻斷性)及MECA-367(阻斷性)(Nakache,M et al(1989).Nature. 337 ,179-181；Streeter,PR et al(1988).Nature.331 .41-46；Yang Y et al(1995).Scand J Immunol. 42 .235-247)。 於人類系統中，業經鑒別了阻斷人MAdCAM與人α4β7相互作用的抗體諸如抗人MAdCAM PF-00547659(Pullen N et al(2009).B J Pharmacol. 157 .281-293)及抗人α4β7維多珠單抗(vedolizumab)(Soler D et al (2009).J Pharmacol Exp Ther. 330 .864-875)，以及不阻斷相互作用的抗體諸如抗人MAdCAM純株17F5(Soler D et al(2009).J Pharmacol Exp Ther. 330 .864-875)及抗人α4β7純株J19(Qi J et al(2012).J Biol Chem. 287 .15749-15759)。因此，基於所希望之效果，該抗體可係阻斷性或非阻斷性。於一些態樣中，該抗體係非阻斷性MAdCAM抗體。於一些態樣中，該抗體係阻斷性MAdCAM抗體。證明抗體係阻斷性或非阻斷性的一個非限制性實例可見於實施例6中，但可使用任何方法。本文所揭示之每一參考文獻係藉由引用而以其整體併入。於一些態樣中，該PD-1促效劑係替代為IL-2突變蛋白質，諸如但不限於，本文所揭示者。
於另一實例中並且如圖4中所示，該同二聚體之N端係含有由兩個相同輕鏈構成的兩個相同Fab域，其係分離之多肽，經由VH/VL相互作用以及與CH1之Cκ或Cλ相互作用與每一重鏈之N端VH-CH1域交界。Cκ或Cλ與CH1之間係存在天然二硫鍵，其係提供輕鏈與重鏈之間的共價錨定。於這一設計之C端係兩個相同之VH單元(但非抗體部分亦可於此處或於四個末端附接/融合點之任一處被取代)，藉由該VH單元(於這一實例中)，該Fc之CH3域的C端之後為典型由(但不限於此)絲胺酸、甘胺酸、丙胺酸及/或蘇胺酸殘基構成的撓曲疏水性鏈結基，之後為基於可溶性獨立VH3生殖系家族的VH域。由於以該Fc為中心之同二聚屬性，兩個此類單元係存在於這一分子的C端。
於另一非限制性實例中，如圖5中所示，該同二聚體之N端係含有由兩個相同輕鏈構成的兩個相同Fab域，與圖3及圖4不同，該等輕鏈係經由位於Cκ或Cλ之C端與該VH之N端之間的鏈結基而於N端與重鏈物理性聯合。該鏈結基可係36至80個胺基酸之長度，並且由絲胺酸、甘胺酸、丙胺酸及蘇胺酸殘基構成。該等物理性接合之N端輕鏈係經由VH/VL相互作用以及Cκ或Cλ與CH1之相互作用而與每一重鏈之N端VH-CH1域交界。Cκ或Cλ與CH1之間係存在天然二硫鍵，其係提供輕鏈與重鏈之間的額外安定性。於這一設計的C端係兩個相同之Fab單元，藉由該Fab(於這一實例中)，Fc之CH3域的C端之後為典型由(但不限於此)絲胺酸、甘胺酸、丙胺酸及/或蘇胺酸殘基構成的撓曲疏水性鏈結基，之後為CH1域，之後為C端之VH域。被設計為與C端CH1/VH域配對之輕鏈係表現為分離之多肽，不同於所揭示之聯合到N端VH/CH1域的N端輕鏈。該C端輕鏈係於VH/VL之間及Cκ或Cλ與CH1之間形成界面。該天然二硫鍵係將這一輕鏈錨定至該重鏈。又，位於四個附接/融合點至任意處的任何抗體部分可取代為非抗體部分，例如，不包含抗體分子之效應子結合/調控部分。
該雙特異性抗體亦可係不對稱者，如下列非限制性實例中所示。非限制性實例亦於圖6、圖7及圖8中示出，該等圖係示例性說明不對稱/異二聚體途徑。又，以此等型式之任一者，位於四個附接/融合點之任意處的任何抗體部分可取代為非抗體部分，例如，不包含抗體分子之效應子結合/調控部分。於一些態樣中，該二聚作用界面係以人IgG1 CH2-CH3域為中心，其係經由跨越CH2/CH2及CH3/CH3兩者之接觸界面二聚合。 惟，為了達成每一重鏈之異二聚化替代同二聚化，係將突變引入每一CH3域。該異二聚化突變係包括位於一個CH3域之T366W突變(kabat)，以及位於另一CH3域之T366S突變、L368A突變及Y407V突變(kabat)。經由CH3/CH3界面之相對側的天然殘基諸如S354及Y349至半胱胺酸殘基的突變，可使用從頭二硫鍵進一步安定化該異二聚化界面。所顯示之所得雙特異性抗體係具有由四個結合單元構成之總價態。使用這一方案，整個分子可設計成僅在一端具有雙特異性並且在另一端具有單特異性(總體為三特異性)，或於任一端為雙特異性並且總體分子特異性為雙特異性或四特異性。於下文例示性說明之實例中，該C端係包含兩個相同之結合域，舉例而言，該等結合域將會向組織繫結靶標提供二價之單特異性。於全部三個例示性實例的N端，兩個結合域係包含不同之識別元件/互補位並且其將會達成對相同效應子部分靶標之兩個不同表位的識別，或者將會識別例如T細胞抑制性受體及CD3。於一些態樣中，該等N端結合部分可與其它單一多肽型式諸如scFv、單鏈Fab、串聯scFv、VH或VHH域抗體組態交換。亦可使用其它類型之識別元件諸如線性或環狀肽。
不對稱分子之一個實例係於圖6中示出。參照圖6，該等分子之N端係由第一輕鏈及共價繫帶構成，該第一輕鏈係與第一重鏈經由VH/VL相互作用以及Cκ或Cλ/CH1相互作用配對，並且該繫帶係由天然重/輕鏈二硫鍵構成。於這一異二聚分子之相對側的N端係第二輕鏈及第二重鏈，該第二輕鏈及第二重鏈係經由位於Cκ或Cλ之C端與VH之N端之間的鏈結基物理性聯合。該鏈結基可係36至80個胺基酸之長度，並且由絲胺酸、甘胺酸、丙胺酸及蘇胺酸殘基構成。該等物理性聯合之N端輕 鏈係經由VH/VL相互作用以及Cκ或Cλ與CH1之相互作用而與每一重鏈之N端VH-CH1域交界。Cκ或Cλ與CH1之間係存在天然二硫鍵，其係提供輕鏈與重鏈之間的額外安定性。於該分子之C端係兩個相同的可溶性VH3生殖系家族VH域，該等域係經由基於N端甘胺酸/絲胺酸/丙胺酸/蘇胺酸之鏈結基聯接至重鏈1及重鏈2兩者之CH3域的C端。
於一些態樣中，不對稱分子可如圖7中示出者例示性說明之。舉例而言，該分子之N端係由兩個不同之基於VH3生殖系的可溶性VH域構成，該等可溶性VH域係經由基於甘胺酸/絲胺酸/丙胺酸/蘇胺酸之鏈結基鏈結至人IgG1鉸鏈區。連接至第一重鏈之VH域係不同於連接至第二重鏈之VH域。於每一重鏈之C端係額外之基於VH3生殖系的可溶性VH域，其係與位於兩個重鏈中每一者相同。該重鏈係經由先前揭示之節入孔突變而異二聚化為呈遞於Fc模組之CH3界面。
於一些態樣中，不對稱分子可係如圖8例示性說明者。這一實例係與圖7中所示者類似，但兩個N端Fab單元係以下列方式構造：輕鏈1及輕鏈2係經由位於Cκ或Cλ之C端與每一相對應VH之N端之間的鏈結基與重鏈1及重鏈2物理性聯合。在每種情況下，該鏈結基可係36至80個胺基酸之長度，並且由絲胺酸、甘胺酸、丙胺酸及蘇胺酸殘基構成。該等物理性聯合之N端輕鏈係經由VH/VL相互作用以及Cκ或Cλ與CH1之相互作用而與每一重鏈之N端VH-CH1域交界。Cκ或Cλ與CH1之間係存在天然二硫鍵，其係提供輕鏈與重鏈之間的額外安定性。
雙特異性分子亦可具有混合型式。此係於例如圖9、圖10及圖11中示例性說明。
舉例而言，如圖9所例示者，係例示性說明基於同二聚體Fc之方案(參見圖3、圖4圖及5)，與圖7之部分型式選擇組合，藉此，總分子價態係四價，但特異性被限定為兩個特異性。該N端係由基於VH3生殖系的兩個相同之可溶性VH域構成，並且該C端係由對於N端域具有不同特異性的基於VH3生殖系的兩個相同之可溶性VH域構成。因此，每個特異性係具有二價。又，以此型式，位於四個附接/融合點之任意處的任何抗體部分可取代為非抗體部分，例如，不包含抗體分子之效應子結合/調控部分。
圖10係示例性說明另一實例。於此實例中，該分子係由四個基於VH3生殖系之可溶性VH域構成。前兩個域係具有相同之特異性(例如抑制性受體)，從N端起第三個域可具有對於組織抗原之特異性，並且從N端起第四個域可具有對於人血清白蛋白(HSA)之特異性，從而在不存在Ig Fc域之情況下賦予該分子延長之半衰期。三個富含甘胺酸、絲胺酸、丙胺酸及/或蘇胺酸之鏈結基係存在於域1與域2之間、域2與域3之間、以及域3與域4之間。這一型式可構造為具有最多四特異性，但每一特異度為單價，或構造每一情況為具有二價之雙特異性。域之次序可改變。又，以此型式，任何抗體部分可取代為非抗體部分，例如，不包含抗體分子之效應子結合/調控部分。
圖11係示例性說明又一方案。這一實例係與圖3及圖4中類似，其中係以Fc同二聚體為基礎，並且兩個相同之Fab單元(二價之單特異性)係位於該分子之N端。這一實例之不同之處在於，每一重鏈之C端係附加有串聯scFv。因此，於每種情況下，該Fc之CH3域的C端係經由 基於甘胺酸/絲胺酸/丙胺酸/蘇胺酸之鏈結基鏈結至第一VH域之N端，該第一VH域之C端係經由12至15個胺基酸的富含甘胺酸/絲胺酸之鏈結基鏈結至第一VL域之N端，該第一VL域之C端係經由25至35個胺基酸的基於甘胺酸/絲胺酸/丙胺酸/蘇胺酸之鏈結基鏈結至第二VH域之N端，該第二VH域之C端係經由12至15個胺基酸的基於甘胺酸/絲胺酸之鏈結基鏈結至第二VL域之N端。於這一基於Fc同二聚體之分子中，係因此存在位於該分子之C端的兩個相同之串聯scFv，提供例如用於單一組織抗原之四價或用於兩個不同分子之二價。這一型式亦可適用異二聚體Fc芯，經由使用如圖5、圖6及圖7中所示之單鏈Fab組態，允許兩個不同之串聯scFv位於該Fc之C端，允許單價之四特異性位於C端，同時於N端保留二價之單特異性或於N端保留單價之雙特異性。這一分子可因此被構造為具有2、3、4、5或6個特異性。串聯scFv單元內的scFv之域順序可構造成形成從N端至C端為VH-鏈結基-VL或VL-鏈結基-VH。又，以此型式，位於四個附接/融合點之任意處的任何抗體部分可取代為非抗體部分，例如，不包含抗體分子之效應子結合/調控部分。
雙特異性抗體亦可構造為具有例如更短之系統性PK，同時具有增加之組織滲透性。此等類型之抗體可基於，例如，基於人VH3的域抗體型式。此等係於例如圖12、圖13及圖14中例示。圖12、圖13及圖14係各自由基於VH3生殖系家族的可溶性VH域模組構成。每個域係大約12.5kDa，允許小的總體MW，不受縛於任何特定理論，此係有益於提升組織滲透性。於此等實例中，該等VH域無一者識別任何半衰期延長之靶標諸如FcRn或HSA。如圖12中所例示，該分子係由兩個VH域構成， 該等VH域係使用位於第一域之C端與第二域之N端之間的基於甘胺酸/絲胺酸之撓曲疏水性鏈結基結合。於這一實例中，一個域可識別T細胞共刺激性受體，並且第二個域可識別組織繫結抗原。如圖13中所例示，該分子係由三個VH域構成，該等VH域係具有基於甘胺酸/絲胺酸之疏水性鏈結基的N-C端鏈結。該分子可構造為三特異性，但對於每一靶標係單價。其可係雙特異性，其中對於一個靶標為二價而對於另一個靶標為單價。如圖14中所例示，該分子係由四個VH域構成，該等VH域係具有位於每個域之間的富含甘胺酸/絲胺酸之N-C端鏈結基。這一分子可構造為四特異性、三特異性或雙特異性，並且每種情況具有各種的抗原價態。又，以此型式，任何抗體部分可取代為非抗體部分，例如，不包含抗體分子之效應子結合/調控部分。
雙特異性抗體之其它態樣係例示於圖15及圖16中。圖15及圖16係由人IgG CH1/Cκ界面的天然異二聚化芯構成，包括共價錨定該相互作用的C端重/輕鏈二硫鍵。這一型式不含Fc或用於半衰期延長的任何部分。如圖15中所例示，該分子係於該恆定κ域之N端附接由N端VH域組成之scFv片段，於其C端係經由12至15個胺基酸之基於gly/ser的鏈結基鏈結至VL域之N端，該VL域係經由天然VL-Cκ肘部序列將其C端鏈結至該恆定κ域之N端。該CH1域係於N端附接由N端VL域組成之scFv片段，其C端係經由12至15個胺基酸之gly/ser鏈結基鏈結至VH域之N端，該VH域係於其C端經由天然VH-CH1肘部序列鏈結至CH1域之N端。如圖16中所例示，該分子係具有與實施例13相同之N端組態。惟，該恆定κ域及CH1域之C端係附接scFv模組，該等模組可係 VH-VL組態或VL-VH組態並且可係對於相同抗原為特異性或對於兩個不同抗原為特異性。該VH/VL域間鏈結基可係12至15個胺基酸之長度並且由gly/ser殘基組成。該scFv結合亞單元可經調換為可溶性VH域，或肽識別元件，或甚至串聯scFv元件。這一方案亦可構造成使用可變λ域及/或恆定λ域。又，以此型式，位於附接/融合點之任意處的任何抗體部分可取代為非抗體部分，例如，不包含抗體分子之效應子結合/調控部分。
圖17係示例性說明另一態樣。圖17係表示由下列所組成之串聯scFv型式：第一N端VL域，其C端係使用12至15個胺基酸之富含gly/ser鏈結基鏈結至第一VH域之N端；該第一VH之C端係經由25至30個胺基酸之基於gly/ser/ala/thr的鏈結基鏈結至第二VL域之N端。該第二VL域係於其C端藉由12至15個胺基酸之gly/ser鏈結基鏈結至第二VH域之N端。每個scFv係識別不同靶標抗原諸如共刺激T細胞分子以及組織繫帶靶標。又，以此型式，任何抗體部分可取代為非抗體部分，例如，不包含抗體分子之效應子結合/調控部分。
圖18係示例性說明另一態樣。圖18係F(ab’)2 scFv融合體。此係由兩個相同之Fab組件組成，該等Fab組件係經由人IgG CH1域之天然人IgG1鉸鏈區C端中的兩個二硫鍵結合。該人IgG1之CH2域及CH3域係不存在。於重鏈1及重鏈2之C端係兩個相同之scFv片段，該等scFV片段係經由富含gly/ser/ala/thr之鏈結基鏈結至該人IgG1鉸鏈區之C端。以所示之組態，該VH係位於每個scFv單元之N端並且經由12至15個胺基酸之富含gly/ser的鏈結基鏈結至VL域之N端。另選之組態可係N端-VL-鏈結基-VH-C端。以此設計，該構造物係對於每一靶標為 二價之雙特異性。又，以此型式，位於四個附接/融合點之任意處的任何抗體部分可取代為非抗體部分，例如，不包含抗體分子之效應子結合/調控部分。
如本文中所用之術語，CD39分子係指具有足夠CD39序列之多肽，作為治療性化合物之一部分，其係將ATP磷酸水解為AMP。於一些態樣中，CD39係將ATP磷酸水解為AMP，等效於或至少為天然出現之CD39例如該CD39分子自其衍生之CD39之速率的10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、或95%。於一些態樣中，CD39分子係與天然出現之CD39具有至少60%、70%、80%、90%、95%、99%、或100%的序列同一性或實質之序列同一性。
可使用任何功能性同工型(與CD39或本文所檢討之其它蛋白質相比)。示例性CD39序列係包括Genbank登錄號NP_001767.3或來自下列序列之成熟形式：
Figure 109116695-A0202-12-0040-1
Figure 109116695-A0202-12-0041-3
Figure 109116695-A0202-12-0041-4
(SEQ ID NO：1)。
於一些態樣中，CD39分子係包含可溶性催化活性形式的CD39，該CD39係見於人類或小鼠血清，參見，例如，《循環ADP於血流中之代謝係經由可溶性腺苷酸激酶-1及NTPDase1/CD39活性之整合作動介導》(Metabolism of circulating ADP in the bloodstream is mediated via integrated actions of soluble adenylate kinase-1 and NTPDase1/CD39 activities,Yegutkin et al.FASEB J.2012 Sep；26(9)：3875-83)。可溶性重組CD39片段亦揭示於《重組可溶性ecto-ADPase/CD39對血小板功能之抑制》(Inhibition of platelet function by recombinant soluble,Gayle,et al.,J Clin Invest.1998 May 1；101(9)：1851-1859)。
如本文中所用之術語，CD73分子係指具有足夠CD73序列之多肽，作為治療性化合物之一部分，其係將細胞外AMP去磷酸化為腺苷。於一些態樣中，CD73分子將細胞外AMP去磷酸化為腺苷，等效於或至少為天然出現之CD73例如該CD73分子自其衍生之CD73之速率的10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、或95%。於一些態樣中，CD73分子係與天然出現之CD73具有至少60%、70%、80%、90%、95%、99%、或100%的序列同一性或實質之序列同一性。示例性CD73序列係包括GenBank AAH65937.1 5'-核苷酸酶，外(CD73)[智人(Homo sapiens)]或來自下列序列之成熟形式，
Figure 109116695-A0202-12-0041-5
Figure 109116695-A0202-12-0042-6
Figure 109116695-A0202-12-0042-7
(SEQ ID NO：2)。
於一些態樣中，CD73分子係包含可溶形式之CD73，且可藉由蛋白質水解性裂解或藉由剪切應力之GPI錨之水解而從內皮細胞膜脫落，參見，例如，參考文獻：Yegutkin G,Bodin P,Burnstock G.Effect of shear stress on the release of soluble ecto-enzymes ATPase and 5’-nucleotidase along with endogenous ATP from vascular endothelial cells.Br J Pharmacol 2000；129：921-6。對於CD73功能，參見Colgan et al.,Physiological roles for ecto-5’-nucleotidase(CD73),Purinergic Signalling,June 2006,2：351。
如本文中所用之術語，細胞表面分子結合劑係指結合例如特異性地結合至細胞表面分子例如免疫抑制性免疫分子例如Treg的分子，典型係多肽。於一些態樣中，該細胞表面結合劑係具有來自該細胞表面分子的天然出現之配位子的足夠序列，其可特異性地結合細胞表面分子(細胞表 面分子配位子)。於一些態樣中，該細胞表面結合係結合例如特異性地結合該細胞表面分子的抗體分子。
如本文中所用之術語，供體特異性靶向部分係指部分例如抗體分子，其作為治療性化合物之組分，係將該治療性化合物優先定位至所移植之供體組織而不是接納者之組織。作為治療性化合物之組分，該供體特異性靶向部分係向來自供體之移植物組織，例如器官，提供位點特異性免疫赦免。
於一些態樣中，供體特異性靶向部分係結合至存在於基因座之等位基因的產物例如多肽產物，該等位基因係不存在於該(接納者)受驗者之基因座。於一些態樣中，供體特異性靶向部分係結合至產物之表位，該表位係不存在於該(接納者)受驗者體內。
於一些態樣中，作為治療性化合物之組分，供體特異性靶向部分係優先結合至供體靶標或抗原，例如，其對於供體靶標之結合親和性較其對於受驗者抗原或組織之親和性較大例如至少2、4、5、10、50、100、500、1,000、5,000、或10,000倍。於一些態樣中，供體特異性靶向部分對於存在於供體組織內(但不存在於受驗者體內)之基因座之等位基因產物的結合親和性較其對於存在於供體組織內(該等位基因不存在於受驗者體內)之基因座之等位基因產物的結合親和性較大至少2、4、5、10、50、100、500、1,000、5,000、或10,000倍。該供體特異性部分作為其組分之治療性化合物的親和性，可於細胞懸浮液中量測，例如，將對於具有該等位基因之懸浮細胞的親和性與對於不具有該等位基因之懸浮細胞的親和性相比較。於一些態樣中，對於該供體等位基因細胞之結合親和性係低於10nM。 於一些態樣中，對於該供體等位基因細胞之結合親和性係低於100pM、50pM、或10nM。
於一些態樣中，當該供體特異性靶向部分與免疫下調效應子偶聯時，對於供體等位基因產物之特異性係足以：i)所移植之組織的免疫攻擊，例如，如藉由臨床設定中之組織學炎症應答、浸潤性T效應子細胞、或器官功能量測者，例如，肌苷酸對於腎臟之免疫攻擊，係得以實質性降低，例如，如相較於可見於與在其它類似移植物但缺乏該供體特異性靶向部分與免疫下調效應子之偶聯時；及/或ii)該接納者中之所移植組織之外或遠離所移植組織處的免疫功能該係得以實質性保留。於一些態樣中，係觀察到下列之一者或多者：在治療性水準之治療性化合物之情況下，外周血淋巴細胞計數未受到實質性影響，例如，T細胞之水準係處於正常之25%、50%、75%、85%、90%、或95%以內，B細胞之水準係處於正常之25%、50%、75%、85%、90%、或95%以內，及/或粒細胞(PMN)之水準係處於正常之25%、50%、75%、85%、90%、或95%以內，或單核細胞之水準係處於正常之25%、50%、75%、85%、90%、或95%以內；在治療性水準之治療性化合物的情況下，PBMC(外周血單核細胞)之對抗非疾病相關抗原的離體增殖功能係實質上正常或處於正常之70%、80%、或90%以內；在治療性水準之治療性化合物的情況下，與免疫壓制相關聯之機會性感染及癌症的發病率或風險並未比正常情況實質性增加；或者，在治療性水準之治療性化合物的情況下，與免疫壓制相關聯之機會性感染及癌症的發病率或風險係實質上低於使用護理標準或非靶向免疫壓制時可見者。 於一些態樣中，該供體特異性靶向部分係包含抗體分子、靶標特異性結合多肽、或靶標配位子結合分子。
如本文中所用之術語，效應子係指實體，例如細胞或分子，例如可溶性或細胞表面分子，其係介導免疫應答。
如本文中所用，效應子配位子結合分子係指具有足夠之來自天然出現之效應子相對配位子的序列，其可以足以令其可用作效應子結合/調控分子之特異性結合該效應子。於一些態樣中，其係以該天然出現之相對配位子親和性之至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、或95%結合至效應子。於一些態樣中，其係與天然出現之效應子相對配位子具有至少60%、70%、80%、90%、95%、99%、或100%的序列同一性或實質之序列同一性。
如本文中所用，效應子特異性結合多肽係指可以足以令其可用作效應子結合/調控部分的特異性結合的多肽。於一些態樣中，特異性結合多肽係包含效應子配位子結合分子。
如本文中所用，提高之風險係指受驗者中之疾患之風險，其中該受驗者係具有下列之一者或多者：該疾患之醫療史或該疾患之症候、與該疾患或該疾患之症候相關聯的生物標記物、或該疾患或該疾患之症候的家族病史。
如本文中所用之術語，對於效應子或抑制性免疫檢查點分子之功能性抗體分子係指下述抗體分子，當其作為多聚化治療性化合物之ICIM結合/調控部分存在時，可結合並識別該效應子或抑制性免疫檢查點分子。於一些態樣中，該抗效應子或抑制性免疫檢查點分子抗體分子，當 作為單體結合(或當該治療性化合物並非多聚化而結合)至該效應子或抑制性免疫檢查點分子時，其不拮抗、不實質上拮抗、不阻止或不實質上阻止該抑制性免疫檢查點分子的內源性相對配位子結合至抑制性免疫檢查點分子。於一些態樣中，該抗效應子或抑制性免疫檢查點分子抗體分子，當作為單體結合(或當該治療性化合物並非多聚化而結合)至該抑制性免疫檢查點分子時，其不促效或不實質上促效該效應子或抑制性分子。
如本文中所用之術語，ICIM結合/調控部分係指效應子結合/調控部分，其係作為治療性化合物之一部分而結合並促效細胞表面抑制性分子，例如抑制性免疫檢查點分子例如PD-1，或結合或調控細胞訊號傳導，例如結合FCRL例如FCRL1-6，或結合並拮抗促成免疫功能之分子。
如本文中所用之術語，IIC結合/調控部分係指效應子結合/調控部分，其係作為治療性化合物之一部分而結合免疫壓制性免疫細胞。於一些態樣中，該IIC結合/調控部分係增加位於該結合位點處之免疫壓制性免疫細胞的數目或濃度。
如本文中所用之術語，ICSM結合/調控部分係指效應子結合/調控部分，其係拮抗刺激性(例如共刺激)結合對的免疫刺激效應。如本文中所用之術語，刺激性或共刺激之結合對係包含兩個成員，1)位於免疫細胞表面之分子；以及2)該細胞分子之結合夥伴，其可係另一免疫細胞或非免疫細胞。通常，當一個成員結合至另一成員時，假設其它要求得以滿足，則該免疫細胞表面之成員係刺激該免疫細胞，該成員例如共刺激分子，並且免疫應答得以促成。於其中共刺激分子及共刺激分子相對結構兩者皆表現於免疫細胞的情境中，可能出現兩種細胞之雙向活化。於一個態樣中， ICSM結合/調控部分係結合並拮抗表現結合對之成員的免疫細胞。舉例而言，其係結合並拮抗OX40。於另一態樣中，ICSM結合/調控部分係結合並拮抗自身結合該免疫細胞所表現之成員之該結合對的成員，例如，其係結合並拮抗OX40L。於任一情況下，係達成對免疫細胞之刺激或共刺激的抑制。於一個態樣中，該ICSM結合/調控部分係減少位於該結合位點處之免疫刺激性免疫細胞的數目或活性。
如本文中所用之術語，IL-2突變蛋白質分子係指IL2突變體，其係以高親和性結合至CD25(IL-2R α鏈)並且以低親和性結合至其它IL-2R訊號傳導組件CD122(IL-2R β)及CD132(IL-2R γ)。此類IL-2突變蛋白質分子係優先活化Treg細胞。於一些態樣中，單獨地或作為治療性化合物之組分，IL-2突變蛋白質係活化Treg，比細胞毒T細胞或效應子T細胞至少多2、5、10或100倍。示例性IL-2突變蛋白質分子係揭示於WO2010085495、WO2016/164937、US2014/0286898A1、WO2014153111A2、WO2010/085495、WO2016014428A2、WO2016025385A1及US20060269515中。此等參考文獻中揭露之包括附加域例如Fc域或其它用於延長半衰期之域的突變蛋白質可用於本文本文所揭示之治療性化合物及方法中，而無需此類附加域。於另一態樣中，IIC結合/調控部分係包含IL-2突變蛋白質或其活性片段，其係偶聯例如融合至另一多肽例如延長體內半衰期之多肽，例如免疫球蛋白恆定區，或其多聚體或二聚體，例如AMG 592。於一個態樣中，該治療性化合物係包含AMG 592之IL-2部分。於一個態樣中，該治療性化合物係包含AMG 592之IL-2部分但非之免疫球蛋白部分。於一些態樣中，該突變蛋白質不包含 Fc區。對於一些IL-2突變蛋白質，該等突變蛋白質係工程化為含有Fc區，因為此區業經顯示增加該突變蛋白質之半衰期。於一些態樣中，對於本文所揭示並例示之方法，延長之半衰期並非必要。於一些態樣中，與該IL-2突變蛋白質融合之Fc區係包含N297突變，諸如但不限於N297A。於一些態樣中，與該IL-2突變蛋白質融合之Fc區係不包含N297突變，諸如但不限於N297A。
如本文中所用之術語，「抑制性免疫檢查點配位子分子」係指具有足夠之抑制性免疫檢查點配位子序列的多肽，例如，在PD-L1分子之情況下係具有足夠之PD-L1序列，當其作為多聚化治療性化合物之ICIM結合/調控部分存在時，可結合並促效其同源抑制性免疫檢查點分子，例如，再次地於PD-L1分子之情況下係結合並促效PD-1。
於一些態樣中，該抑制性免疫檢查點分子配位子分子例如PD-L1分子，當作為單體結合(或當該治療性化合物並未多聚化而結合)至其同源配位子例如PD-1時，其係不拮抗或不實質上拮抗、或不阻止或不實質上阻止內源性抑制性免疫檢查點分子配位子結合至該抑制性免疫檢查點分子。例如，在PD-L1分子之情況下，該PD-L1分子並不拮抗內源性PD-L1結合至PD-1。
於一些態樣中，該抑制性免疫檢查點分子當作為單體結合至其同源抑制性免疫檢查點分子時，其並不促效或不實質上促效該抑制性免疫檢查點分子。舉例而言，例如PD-L1分子當結合至PD-1時，其並不促效或不實質上促效PD-1。
於一些態樣中，抑制性免疫檢查點分子配位子分子係與天然出現之抑制性免疫檢查點分子配位子具有至少60%、70%、80%、90%、95%、99%、或100%的序列同一性或實質之序列同一性。
示例性抑制性免疫檢查點分子配位子分子係包括：PD-L1分子，其係結合至抑制性免疫檢查點分子PD-1，並且於一些態樣中，係與天然出現之PD-L1例如包含下述序列之PD-L1分子具有至少60%、70%、80%、90%、95%、99%、或100%的序列同一性或實質之序列同一性：
Figure 109116695-A0202-12-0049-8
Figure 109116695-A0202-12-0049-9
(SEQ ID NO：3)，或其活性片段；於一些態樣中，該活性片段係包含PD-L1序列之殘基19至290；HLA-G分子，其係結合至抑制性免疫檢查點分子KIR2DL4、LILRB1及LILRB2中之任一者，並且於一些態樣中，係與天然出現之HLA-G具有至少60%、70%、80%、90%、95%、99%、或100%之序列同一性或實質上之序列同一性。示例性HLA-G序列係包括，例如，見於下列序列中之成熟形式：GenBank P17693.1 RecName：Full=I類HLA組織相容性抗原，α鏈G；AltName：Full=HLA G抗原；AltName：Full=I類MHC抗原G；標籤：前驅物，或序列
Figure 109116695-A0202-12-0050-10
Figure 109116695-A0202-12-0050-12
(SEQ ID NO：4)。
如本文中所用之術語，抑制性分子相對配位子分子係指多肽，其係具有足夠之抑制性分子相對配位子序列，使得當其作為多聚化治療性化合物之ICIM結合/調控部分存在時，可結合並促效同源抑制性分子。於一些態樣中，該抑制性分子相對配位子分子當作為單體結合(或當該治療性化合物並非多聚化而結合)至該抑制性分子時，其並不拮抗、不實質上拮抗、不阻止或不實質上阻止該抑制性分子的內源性相對配位子結合至該抑制性分子。於一些態樣中，該抑制性分子相對配位子分子當作為單體結合(或當該治療性化合物並非多聚化而結合)至該抑制性分子時，其並不促效或不實質上促效該抑制性分子。
如本文中所用之彼等術語，序列同一性、百分比同一性及相關術語，係指兩個序列例如兩個核酸序列或兩個胺基酸或多肽序列之相關性。於胺基酸序列之語境中，本文中所用之術語「實質上相同」係指第一胺基酸序列係含有足夠或最小數目之與第二胺基酸序列中所對準之胺基酸殘基為i)相同或ii)保守性取代，使得該第一胺基酸序列與第二胺基酸序列可具有共有之結構域及/或共有之功能活性。舉例而言，該等胺基酸序列 係含有與參考序列例如本文所提供之序列具有至少約85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的共有結構域。
於核苷酸序列之語境中，本文中所用之術語「實質上相同」係指第一核酸序列係含有足夠或最小數目之與第二核酸序列中之所對準之核苷酸相同的核苷酸，使得該第一核苷酸序列與第二核苷酸序列係編碼具有共有功能活性之多肽，或編碼共有結構多肽域或共有功能性多肽活性。舉例而言，核苷酸序列係與參考序列例如本文所提供之序列具有至少約85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的同一性。
術語「功能性變體」係指多肽，其係具有與天然出現之序列實質上相同之胺基酸序列，或係藉由實質上相同之核苷酸序列編碼，並且能夠具有該天然出現序列之一種或多種活性。
序列間之同源性或序列同一性(本文中，該等術語係可互換使用)的計算係如下述者實施。
為了測定兩個胺基酸序列或兩個核酸序列之百分比同一性，該等序列係對準以用於最優比較目的(例如，可將空位引入第一及第二胺基酸或核酸序列中以用於最優對準，並且為了比較目的，可忽略非同源序列)。於較佳態樣中，經對準用於比較目的之參考序列的長度係該參考序列之長度的至少30%，較佳至少40%，更佳至少50%、60%，並且甚至更佳至少70%、80%、90%、100%。隨後，比較位於相對應胺基酸位置或核苷酸位置處之胺基酸殘基或核苷酸。當第一序列中之一位置由與第二序列中相對應位置為相同之胺基酸殘基或核苷酸佔據時，則該等分子係於該位置相同 (如本文中所用，胺基酸或核酸「同一性」係與胺基酸或核酸「同源性」等效)。
兩個序列間之百分比同一性係該等序列共享之同一位置數目的函數，慮及為了兩個序列之最優對準而需要引入之空位的數目及每一空位之長度。
序列之比對以及兩個序列間百分比同一性之測定可使用數學演算法實現。於一較佳態樣中，兩個胺基酸序列間之百分比同一性係使用Needleman及Wunsch之演算法((1970)J.Mol.Biol.48：444-453)測定，該演算法業經併入GCG套裝軟體(可於http：//www.gcg.com獲得)之GAP程式中，使用Blossum 62矩陣或PAM250矩陣，空位權重(gap weight)為16、14、12、10、8、6、或4，並且長度權重為1、2、3、4、5、或6。於又一較佳態樣中，兩個核苷酸序列間之百分比同一性係使用併入GCG套裝軟體(可於http：//www.gcg.com獲得)中之GAP程式測定，使用NWSgapdna.CMP矩陣，空位權重(gap weight)為40、50、60、8、70、或80，並且長度權重為1、2、3、4、5、或6。特佳之參數集(以及除非明另做指定，否則應使用者)係Blossum 62評分矩陣，其中空位罰分(gap penalty)為12，空位擴張罰分為4，並且框移空位罰分為5。
兩個胺基酸或核苷酸序列間之百分比同一性可使用E.Meyers及W.Miller之演算法((1989)CABIOS,4：11-17)測定，該算法業經併入ALIGN程式(2.0版)中，係使用PAM120權重殘基表，空位長度罰分為12，並且空位罰分為4。
本文所揭示之核酸及蛋白質序列可用作「查詢序列」以實施對公共資料庫之檢索，以例如鑒別其它家族成員或相關序列。此類檢索可使用Altschul,et al.(1990)J.Mol.Biol.215：403-10之NBLAST及XBLAST程式(2.0版)實施。BLAST核苷酸檢索可使用NBLAST程式(評分為100且字長為12)實施，以獲得與例如本文所提供之任意核酸序列同源的核苷酸。BLAST蛋白質檢索可使用XBLAST程式(評分為50且字長為3)實施，以獲得於例如本文所提供之蛋白質分子同源的胺基酸序列。為了獲得用於比對目的之帶空位對準，可使用如Altschul et al.,(1997)Nucleic Acids Res.25：3389-3402中所揭示之Gapped BLAST。當使用BLAST及Gapped BLAST程式時，可使用相應程式(例如，XBLAST及NBLAST)之預設參數。參見，http：//www.ncbi.nlm.nih.gov。
如本文中所用，術語「於低嚴格度、中嚴格度、高嚴格度、或超高嚴格度條件下雜交」係揭示用於雜交及洗滌的條件。實施雜交反應之指南可見於藉由引用併入本文之《現代分子生物學方法》(Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley & Sons,N.Y.(1989),6.3.1-6.3.6)中。水性及非水性方法係揭示於該參考文獻中並可使用任一者。本文中所指之具體雜交條件係如下：1)低嚴格度雜交條件：約45℃之6X氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)中，之後於0.2X SSC、0.1% SDS中於至少50℃洗滌兩次(對於低嚴格度條件，洗滌溫度可增加至55℃)；2)中嚴格度雜交條件：約45℃之6X SSC中，之後於0.2X SSC、0.1% SDS中於60℃洗滌一次或多次；3)高嚴格度雜交條件：約45℃之6X SSC中，之後於0.2X SSC、0.1% SDS中於65℃洗滌一次或多次；以及較佳地4)超高嚴格度雜交條件 係65℃之0.5M磷酸鈉、7% SDS，之後以0.2X SSC、1% SDS於65℃洗滌一次或多次。超高嚴格度條件(4)係較佳之條件，並且係除非另做指定否則應使用者。
應理解，本發明態樣之分子及化合物可具有額外之保守或非必需胺基酸取代，該取代對分子及化合物功能不具有實質性影響。
術語「胺基酸」係旨在包含，無論天然或合成者，其係包括胺基官能性及酸官能性兩者並且能夠包括於天然出現之胺基酸的聚合物中的全部分子。示例性胺基酸係包括天然出現之胺基酸；其類似物、衍生物及同源物；具有變體側鏈之胺基酸類似物；以及前述任一者之全部立體異構物。如本文中所用，術語「胺基酸」係包括D或L光學異構物及擬肽物兩者。
「保守胺基酸取代」係其中胺基酸殘基被替代為具有類似側鏈之胺基酸殘基。具有類似側鏈之胺基酸殘基的家族業經於該技藝中定義。此等家族係包括：具有鹼性側鏈之胺基酸(例如，離胺酸、精胺酸、組胺酸)、具有酸性側鏈之胺基酸(例如，天冬胺酸、麩胺酸)、具有不帶電之極性側鏈之胺基酸(例如，甘胺酸、天冬醯胺、麩胺醯胺、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、天冬胺酸)、具有非極性側鏈之胺基酸(例如，丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸)、具有β分支側鏈之胺基酸(例如，蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)以及具有芳族側鏈之胺基酸(例如，酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)。CD39分子、CD73分子、細胞表面分子結合劑、供體特異性靶向部分效應子配位子結合分子、ICIM結合/調 控部分IIC結合/調控部分、抑制性免疫檢查點分子配位子分子、抑制性分子相對配位子分子、SM結合/調控部分、或ICSM結合/調控部分。
如本文中所用之術語，SM結合/調控部分係指效應子結合/調控部分，其作為治療性化合物之一部分，係例如藉由在靶標附近提供抑制或最小化該靶標之免疫系統造成之攻擊的物質而促成免疫壓制性局部微環境。於一些態樣中，該SM結合/調控部分係包含或結合一分子，該分子係抑制或最小化該靶標之免疫系統造成之攻擊。於一些態樣中，治療性化合物係包含SM結合/調控部分，該部分係結合並蓄積具有免疫壓制功能之可溶性物質，例如內源性或外源性物質。於一些態樣中，治療性化合物係包含SM結合/調控部分，該部分係結合並抑制、隔絕、降解或以外之中和促成免疫攻擊之物質，例如可溶性物質，典型係內源性可溶性物質。於一些態樣中，治療性化合物係包含SM結合/調控部分，該部分係包含免疫壓制性物質，例如已知為免疫壓制性者之蛋白質片段。舉例而言，效應子分子結合部分係結合或包含一物質例如CD39分子或CD73分子，該分子係耗竭促成免疫效應子細胞發揮功能之組分例如ATP或AMP。
如本文中所用之術語，特異性靶向部分係指供體特異性靶向部分或組織特異性靶向部分。
如本文中所用之術語，受驗者係指哺乳動物受驗者例如人類受驗者。於一些態樣中，該受驗者係非人哺乳動物，例如馬、狗、貓、牛、山羊或豬。
如本文中所用，靶標配位子結合分子係指多肽，係具有靶標配位子之來自天然出現之相對配位子的充足序列，該多肽可以令其用作特 異性靶向部分之充足特異性結合靶標組織(例如，供體組織或受驗者靶標組織)之靶標配位子。於一些態樣中，其係以該天然出現之相對配位子親和性之至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、或95%結合至靶標組織或細胞。於一些態樣中，其係與靶標配位子之天然出現之相對配位子具有至少60%、70%、80%、90%、95%、99%、或100%的序列同一性或實質之序列同一性。
如本文中所用之術語，靶標位點係指含有藉由靶向部分結合之實體例如表位的位點。於一些態樣中，該靶標位點係建立免疫赦免之處的位點。
如本文中所用之術語，組織特異性靶向部分係指部分例如抗體分子，其作為治療性分子之組分，係將該治療性分子優先定位至靶標組織而不是受驗者之其它組織。作為治療性化合物之組分，該組織特異性靶向部分係向靶標組織，例如正在經歷自體免疫攻擊或處於其風險之器官或組織，提供位點特異性免疫赦免。於一些態樣中，組織特異性靶向部分係結合至產物例如多肽產物，該產物於靶標組織外部係不存在或以足夠低之水準存在，在治療性濃度之治療性分子的情況下，係不存在或實質上不存在不可接受水準的免疫壓制。於一些態樣中，組織特異性靶向部分係結合至表位，該表位在該靶標位點之外係不存在或實質上不存在。
於一些態樣中，作為治療性化合物之組分，組織特異性靶向部分係優先結合至靶標組織或靶標組織抗原，例如，其對於靶標組織或抗原之結合親和性比其對於存在於該靶標組織外部之非靶標組織或抗原之親和性，例如至少較大2、4、5、10、50、100、500、1,000、5,000、或10,000 倍。該組織特異性部分作為其組分之治療性化合物的親和性，可於細胞懸浮液中量測，例如，將對於具有該靶標抗原之懸浮細胞的親和性與對於不具有該靶標抗原之懸浮細胞的親和性相比較。於一些態樣中，對於該帶有靶標抗原之細胞的結合親和性係低於10nM。
於一些態樣中，對於該帶有靶標抗原之細胞的結合親和性係低於100pM、50pM、或10nM。於一些態樣中，當該組織特異性靶向部分與免疫下調效應子偶聯時，對於靶標抗原之特異性係足夠：i)靶標組織的免疫攻擊，例如，如藉由臨床設定中之組織學炎症應答、浸潤性T效應子細胞、或器官功能量測者，例如，肌苷酸對於腎臟之免疫攻擊，係得以實質性降低，例如，如可見於相較與在其它類似移植物但缺乏該組織特異性靶向部分與免疫下調效應子之偶聯時；及/或ii)該接納者之靶標組織之外或遠離的免疫功能該係得以實質性保留。
於一些態樣中，係觀察到下列之一者或多者：之治療性化合物之治療性水準，外周血淋巴細胞計數未受到實質性影響，例如，T細胞之水準係處於正常之25%、50%、75%、85%、90%、或95%以內，B細胞之水準係處於正常之25%、50%、75%、85%、90%、或95%以內，及/或粒細胞(PMN)之水準係處於正常之25%、50%、75%、85%、90%、或95%以內，或單核細胞之水準係處於正常之25%、50%、75%、85%、90%、或95%以內；在之治療性化合物的治療性水準，PBMC(外周血單核細胞)之對抗非疾病相關抗原的離體增殖功能係實質上正常或處於正常之70%、80%、或90%以內；在治療性化合物的治療性水準，與免疫壓制相關聯之機會性感染及癌症的發病率或風險並未比正常情況實質性增加；或者，在 治療性化合物的治療性水準，與免疫壓制相關聯之機會性感染及癌症的發病率或風險係實質上低於使用照護標準或非靶向免疫壓制時可見者。於一些態樣中，該組織特異性靶向部分係包含抗體分子。於一些態樣中，該供體特異性靶向部分係包含抗體分子、靶標特異性結合多肽、或靶標配位子結合分子。於一些態樣中，該組織特異性靶向部分係結合產物或產物之位點，該產物係唯一地或實質上唯一地存在或表現於靶標組織上。
ICIM結合/調控部分：結合抑制性受體之效應子結合/調控部分
本文所揭示之方法及化合物係提供具有包含ICIM結合/調控部分之效應子結合/調控部分的治療性化合物，其係直接結合並活化免疫細胞表面之抑制性受體以例如降低或消除或實質上消除該免疫細胞介導免疫攻擊的能力。該ICIM結合/調控部分偶聯至靶向實體，係促成對免疫細胞應答之位點特異性或局部下調，例如，實質上限定為具有靶向部分結合位點之定位。因此，正常之全身性免疫功能得以實質上保留。於一些態樣中，ICIM結合/調控部分係包含抑制性免疫檢查點分子相對配位子分子，例如，天然配位子，或該抑制性免疫檢查點分子之天然配位子(例如，PD-L1或HLA-G)的片段。於一些態樣中，ICIM結合/調控部分係包含功能性抗體分子，例如，包含scFv結合域之功能性抗體分子，其係與抑制性免疫檢查點分子接合。
於一些態樣中，包含例如功能性抗體分子或抑制性免疫檢查點分子配位子分子的ICIM結合/調控部分，係結合該抑制性受體但不阻止該抑制性受體之天然配位子結合至該抑制性受體。於多個態樣中，係使用一種型式，其中靶向部分係偶聯例如融合至包含例如scFv域之ICIM結合 /調控部分，並且被構造成當在溶液中(例如，在血液或淋巴中)(並且假定為單體型式)結合抑制性受體時，該治療性分子係i)無法促效或實質上無法促效(例如，以比使用完全促效分子時可見者少於至少30%、20%、15%、10%、或5%的水準促效)該免疫細胞之該抑制性受體；及/或ii)無法拮抗或實質上無法拮抗(例如，以比使用完全拮抗子時可見者少於至少30%、20%、15%、10%、或5%的水準拮抗)該免疫細胞之該抑制性受體。可在不表現該靶標之基於體外細胞的檢定中評估備選分子之藉由其增加或減少免疫應答之能力而促效或不促效的能力，例如，使用基於MLR(混合淋巴細胞反應)之檢定。
於一些態樣中，備選ICIM結合/調控部分可降低、完全地或實質上消除全身性免疫抑制及全身性免疫活化。於一些態樣中，該治療性化合物之靶向域當結合至靶標時，該靶向域可用來將該治療性化合物群聚或多聚化在希望免疫保護之組織的表面。於一些態樣中，該ICIM結合/調控部分，例如，包含scFv域之ICIM結合/調控部分，係需要群聚或多聚狀態以能夠將促效及免疫壓制訊號或實質性水準之此訊號遞送至局部免疫細胞。這一類型之治療劑可例如提供局部免疫壓制，同時使全身性免疫系統不受干擾或實質上不受干擾。換言之，該免疫壓制被定位至需要該壓制之處而不是全身，並且不被定位至特定區域或組織類型。
於一些態樣中，當結合至靶標例如靶標器官、組織或細胞類型時，該治療性化合物係包覆該靶標例如靶標器官、組織或細胞類型。當循環淋巴細胞嘗試接合並摧毀該靶標時，這一治療劑將僅於或在更大程度於治療性化合物蓄積之位點處提供「脫離」訊號。
例如，可藉由ELISA(一種基於細胞之檢定)或表面電漿子共振評估備選治療性化合物之結合例如特異性結合其靶標之能力。這一特性通常應予以最大化，因為其係介導該免疫赦免之位點特異性及定位屬性。例如，可藉由基於細胞之活性檢定評估備選治療性化合物之當結合至靶標時下調免疫細胞的能力。這一特性通常應予以最大化，因為其係介導該免疫赦免之位點特異性及定位屬性。例如，可藉由基於細胞之活性檢定來評估由單體(或非結合)形式之備選治療性化合物所致的下調水準。這一特性通常應予以最小化，因為其係介導免疫系統之全身性下調。例如，可藉由基於細胞之活性檢定來評估由單體(或非結合)形式之備選治療性化合物所致的對細胞表面抑制性分子例如抑制性免疫檢查點分子之拮抗作用水準。這一特性通常應予以最小化，因為其係介導免疫系統之不希望的全身性活化。通常，該等特性應予以選擇及平衡，以產生足夠穩健之位點特異性免疫赦免而無不可接受水準的抑制性免疫檢查點分子之非位點特異性促效或拮抗。
例示性抑制性免疫檢查點分子
例示性抑制性分子(例如，抑制性免疫檢查點分子)(與其相對配位子一起)可見於表1中。本表係列述例示性ICIM結合部分可結合的分子。
Figure 109116695-A0202-12-0061-13
PD-L1/PD-1路徑
程式性細胞死亡蛋白1(一般指為PD-1)係屬於免疫球蛋白超家族的細胞表面受體。PD-1係表現於T細胞及包括但不限於B細胞、骨髓細胞、樹突細胞、單核細胞、T調節細胞、iNK T細胞的其它細胞類型上。PD-1係結合兩個配位子PD-L1及PD-L2，並且係抑制性免疫檢查點分子。在攜帶抗原之MCH與T細胞之T細胞受體接合的情境中，與同源配位子PD-L1或PD-L2之接合係最小化或阻止T細胞之活化及功能。PD-1之抑制效果可包括促成淋巴結之抗原特異性T細胞的凋亡(程式性細胞死亡)以及減少調節性T細胞(抑制性T細胞)的凋亡。
於一些態樣中，治療性化合物係包含ICIM結合/調控部分，該部分係促效PD-1抑制。ICIM結合/調控部分可包括抑制性分子相對配位子分子，其係包含例如PD-1之配位子的片段(例如，PD-L1或PD-L2的片段)；或另一部分，例如，功能性抗體分子，其係包含結合PD-1之scFv域。
於一些態樣中，治療性化合物係包含靶向部分，其係優先結合在該受驗者係不存在或以實質上較低之水準存在的供體抗原，例如來自表2之供體抗原，並且被定位至受驗者的供體移植物組織。於一些態樣中，其不結合或基本上不結合其它組織。於一些態樣中，治療性化合物可包括靶向部分，該靶向部分對於HLA-A2係特異性並且特異性地結合供體異種移植物組織但不結合或實質上不結合宿主組織。於一些態樣中，該治療性化合物係包含ICIM結合/調控部分例如抑制性分子相對配位子分子，其係包含例如PD-1之配位子的片段(例如，PD-L1或PD-L2的片段)；或另一 部分，例如，功能性抗體分子，其係包含結合PD-1之scFv域，使得該治療性化合物例如當結合至靶標時係活化PD-1。該治療性化合物係以異種移植物為靶標，並且向該異種移植物提供局部免疫赦免。
於一些態樣中，治療性化合物係包含優先結合至表3中之抗原的靶向部分，並且被定位至受驗者例如患有自體免疫性疾患例如表3之自體免疫性疾患的受驗者之靶標處。於一些態樣中，其不結合或不實質上結合其它組織。於一些態樣中，該治療性化合物係包含ICIM結合/調控部分例如抑制性分子相對配位子分子，其係包含例如PD-1之配位子的片段(例如，PD-L1或PD-L2的片段)；或另一部分，例如，功能性抗體分子，其係包含結合PD-1之scFv域，使得該治療性化合物例如當結合至靶標時係活化PD-1。該治療性化合物係以遭受自體免疫攻擊的組織為靶標，並且向該組織提供局部免疫赦免。
PD-L1及PDL2，或自其衍生之多肽，可提供備選的ICIM結合部分。惟，以單體形式存在例如當治療性化合物係於血液或淋巴中循環時，這一分子可具有非所欲之拮抗PD-L1/PD-1途徑的效果，並且可僅在被群聚或多聚化於靶標例如靶標器官之表面時方促效該PD-1途徑。於一些態樣中，治療性化合物係包含ICIM結合/調控部分，該部分係包含功能性抗體分子例如scFv域，該治療性化合物為可溶性形式時對於該PD-1途徑係惰性或實質上惰性，但當其(藉由靶向部分)多聚於組織表面時係促效並驅動抑制性訊號。
HLA-G：KIR2DL4/LILRB1/LILRB2路徑
KIR2DL4、LILRB1及LILRB2係見於T細胞、NK細胞、及骨髓細胞之抑制性分子。HLA-G係每一者之相對配位子。
KIR2DL4亦稱為CD158D、G9P、KIR-103AS、KIR103、KIR103AS、KIR、KIR-2DL4、類殺手細胞免疫球蛋白受體、以及二Ig域及長胞質尾4。LILRB1亦稱為LILRB1、CD85J、ILT-2、ILT2、LIR-1、LIR1、MIR-7、MIR7、PIR-B、PIRB、類白血球免疫球蛋白受體B1。LILRB2係稱為CD85D、ILT-4、LIR-2、LIR2、MIR-10、MIR10及ILT4。
包含HLA-G分子之治療性化合物可用以提供抑制性訊號至包含KIR2DL4、LILRB1及LILRB2中任一者之免疫細胞，例如，使用多聚化之包含HLA-G分子的治療性化合物分子，並因此提供位點特異性免疫赦免，
包含促效性抗-KIR2DL4、抗-LILRB1、或抗-LILRB2抗體分子之治療性化合物可用以提供抑制性訊號至包含KIR2DL4、LILRB1及LILRB2中任一者之免疫細胞。
僅當HLA-G多聚化時，例如當表現於細胞表面時或當連接至微珠表面時，其方遞送抑制性訊號。於多個態樣中，係提供包含HLA-G分子之治療性化合物，該治療性化合物於溶液中並不多聚化(或並不多聚化至足以導致顯著水準之抑制性分子促效作用)。使用最小化溶液中之多聚作用的HLA-G分子，將最小化免疫細胞的全身性促效作用及不希望之免疫壓制。
儘管不欲受縛於理論，咸信，除非多聚化，否則HLA-G係非有效於下調效果，於多聚化中，透過該靶向部分將該治療性化合物結合 至靶標係令該ICIM結合實體多聚化，並且該已多聚化之ICIM結合實體係結合並群聚抑制性分子於免疫細胞表面，從而介導下調該免疫細胞之負訊號。因此，正在嘗試破壞靶標組織之浸潤性免疫細胞，包括抗原呈遞細胞及其它骨髓細胞、NK細胞及T細胞，係得以下調。
儘管當以單體形式存在時之HLA-G分子最小化拮抗作用係所欲者，但LILRB1及LILRB2之冗餘將使其對全身之影響最小，即便具有一些單體性拮抗作用。
於一些態樣中，該治療性化合物係包含ICIM結合/調控部分，該部分係包含HLA-G分子，例如無B2M之同工型(例如，HLA-G5)，參見，Carosella et al.,Advances in Immunology,2015,127：33。於無B2M之型式中，HLA-G係優先結合LILRB2。
適用於構造HLA-G分子之序列係包括GenBank P17693.1 RecName：Full=I類HLA組織相容性抗原，α鏈G；AltName：Full=HLA G抗原；AltName：Full=I類MHC抗原G；標籤：前驅體，或
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(SEQ ID NO：5)。可藉由類似於《用於移植中治療 用途的合成性HLA-G蛋白質》(「Synthetic HLA-G proteins for therapeutic use in transplantation,」LeMaoult et al.,2013 The FASEB Journal 27：3643)中揭示之彼等的方法測試備選HLA-G分子用於本發明方法及化合物中的適用性。
於一些態樣中，治療性化合物係包含靶向部分，其係優先結合在該受驗者係不存在或以實質上較低之水準存在的供體抗原例如來自表2之供體抗原，並且被定位至受驗者的供體移植物組織。於一些態樣中，其不結合或不實質上結合其它組織。於一些態樣中，治療性化合物可包括靶向部分，該靶向部分係對於HLA-A2為特異性並且特異性地結合供體異種移植物但不結合宿主組織，並且該靶向部分係與ICIM結合/調控部分組合，該ICIM結合/調控部分係包含結合KIR2DL4、LILRB1或LILRB2之HLA-G分子，使得該治療性化合物例如當結合至靶標時係活化KIR2DL4、LILRB1或LILRB2。該治療性化合物係以異種移植物為靶標，並且向該異種移植物提供局部免疫赦免。
於一些態樣中，治療性化合物係包含優先結合至組織特異性抗原例如來自表3之抗原的靶向部分，並且被定位至受驗者，例如患有自體免疫性疾患例如來自表3之自體免疫性疾患的受驗者之靶標位點。於一些態樣中，其不結合或不實質上結合其它組織。於多個態樣中，該治療性化合物係包含ICIM結合/調控部分，該ICIM結合/調控部分係包含結合KIR2DL4、LILRB1或LILRB2的HLA-G分子，使得該治療性化合例如當結合至靶標時係活化KIR2DL4、LILRB1或LILRB2。該治療性化合物係以遭受自體免疫攻擊的組織為靶標，並且向該組織提供局部免疫赦免。
很可能工程化出一種安定且可溶之HLA-G-B2M融合蛋白，其亦可結合LILRB1。舉例而言，HLA-G之晶體結構係使用HLA-G/B2M單體測定(Clements et al.2005 PNAS 102：3360)。
FCRL家族
FCRL1至6通常係抑制B細胞活化或功能。此等類型1之跨膜醣蛋白係由5種類型之類免疫球蛋白域之不同組合構成，其中每一蛋白質係由3至9個域組成，並且全部FCRL蛋白質中無保守類型單獨域。通常，FCRL表現係限定於淋巴細胞，並且主要表現於B淋巴細胞中。通常，FCRL係發揮功能以壓抑B細胞活化。
ICIM結合/調控部分可包含促效性抗-BCMA抗體分子。於一些態樣中，該治療性化合物係包含抗-FCRL抗體分子及抗-B細胞受體(BCR)抗體分子。儘管不欲受縛於理論，咸信，包含兩種特異性之抗體分子的治療性化合物將會把FCRL帶至緊鄰BCR並且抑制BCR訊號傳導。
嗜乳脂蛋白及類嗜乳脂蛋白分子
效應子結合/調控部分可包含嗜乳脂蛋白之促效劑或拮抗劑。於一些態樣中，效應子結合/調控部分係包含促效性或功能性BTN1A1分子、BTN2A2分子、BTNL2分子、或BTNL1分子。
如本文中所用之術語，功能性BTNXi分子(其中Xi=1A1、2A2、L2或L1)係指具有足夠BTNXi序列之多肽，作為治療性化合物之一部分，其係抑制T細胞。於一些態樣中，BTNXi分子係與天然出現之嗜乳脂蛋白或類嗜乳脂蛋白分子具有至少60%、70%、80%、90%、95%、99%、或100%的序列同一性或實質之序列同一性。
於一些態樣中，效應子結合/調控部分係包含拮抗性BTNL8分子。
如本文中所用之術語，拮抗性BTNL8分子係指具有足夠BTNL8序列之多肽，作為治療性化合物之一部分，其係抑制藉由靜息T細胞之細胞因子的活化、增殖或分泌。於一些態樣中，BTNL8分子係與天然出現之嗜乳脂蛋白具有至少60%、70%、80%、90%、95%、99%、或100%的序列同一性或實質上之序列同一性。
IIC結合/調控部分：召集免疫壓制性T細胞之效應子結合/調控部分
於一些態樣中，治療性化合物係包含效應子結合/調控部分例如IIC結合/調控部分，其係結合、活化或保持位於藉由該靶向部分介導之位點處的免疫壓制性細胞例如免疫壓制性T細胞，提供位點特異性免疫赦免。該IIC結合/調控部分，例如包含具有例如scFv結合域之抗體分子的IIC結合/調控部分，係結合免疫壓制性細胞類型例如Treg例如Foxp3+CD25+Treg。器官、組織或特異性細胞類型耐受度係與該靶標器官附近以及浸潤該靶標器官之Treg的壓倒性增加相關聯；於多個態樣中，本文所揭示之方法及化合物係系統性地重建並模擬這一生理學狀態。當Treg蓄積時，係創建用來保護感興趣之器官免受免疫系統作用之免疫壓制微環境。
作為TREG及TGFB靶向分子之GARP結合劑
GARP係用於表現在活化之Treg表面之潛在TGF-β的膜蛋白受體(Tran et al.2009 PNAS 106：13445以及Wang et al.2009 PNAS 106：13439)。於一些態樣中，治療性化合物係包含IIC結合實體及靶向部 分，該實體係結合可溶性GARP及GARP表現細胞之一者或兩者諸如活化之人Treg，該靶向部分係令該治療性化合物靶向感興趣之靶標組織。包含GARP結合劑之IIC結合/調控部分係包括，例如，包含抗-GARP抗體分子例如抗-GARP scFv域的IIC結合/調控部分。儘管不欲受縛於理論，咸信，包含GARP結合劑之治療性化合物係影響GARP表現Treg於該治療性化合物之靶向部分所靶向之位點例如移植物或器官損傷位點處的蓄積。又，儘管不欲受縛於理論，咸信，包含GARP結合劑之治療性化合物亦可影響可溶性GARP於器官損傷位點處的蓄積，其將用來以局部方式結合並活化TGFB1--一種免疫壓制性細胞因子(Fridrich et al.2016 PLoS One 11：e0153290；doi：10.1371/journal.pone.0153290及Hahn et al.2013 Blood 15：1182)。因此，包含GARP結合劑之效應子結合/調控部分可用作IIC結合/調控部分或SM結合/調控部分。
作為TREG靶向及T效應子細胞靜默分子之CTLA4
於一些態樣中，效應子結合/調控部分係例如包含抗體分子例如scFv域，其係結合表現於Treg表面的CTLA4。該治療性分子係於靶標位點處蓄積或保持CTLA4+Treg，結果為局部免疫壓制。
儘管更多地表現於Treg，但CTLA4亦表現於活化之T細胞。包含效應子結合/調控部分例如抗-CTLA4抗體或功能性抗-CTLA4抗體之治療性化合物可下調表現CTLA4之T細胞。因此，與包含結合CTLA4之效應子結合/調控部分的治療性化合物中，該效應子部分亦可用作ICIM結合/調控部分。
於一些態樣中，當以單體型式存在時，該抗-CTLA4結合劑既不拮抗也不促效，並且在結合至該靶標而群聚或多聚時僅促效。
儘管不欲受縛於理論，咸信，該治療性化合物經由該靶向部分結合至該靶標係影響治療性化合物之多聚化作用。在記憶性及活化之T細胞的情況下，藉由該治療性化合物之效應子結合/調控部分結合的CTLA4係群聚，並且藉由記憶性及活化之T細胞表現之CTLA4的接合而產生抑制性訊號。
於一些態樣中，當以單體型式存在時，該抗-CTLA4結合劑既不拮抗也不促效，並且當在結合至該靶標而群聚或多聚時僅促效。
IL-2突變蛋白質分子：活化TREG之IL2受體結合劑
優先擴張或刺激Treg細胞(優先於細胞毒T細胞)之IL-2突變蛋白質分子可用作IIC結合/調控部分。
於一些態樣中，IIC結合/調控部分係包含IL-2突變蛋白質分子。如本文中所用，術語「IL-2突變蛋白質分子」或「IL-2突變蛋白質」係指優先活化Treg細胞之IL-2變體。於一些態樣中，單獨地或作為治療性化合物之組分，IL-2突變蛋白質分子係活化Treg，比細胞毒T細胞至少多2、5、10或100倍。用於評估Treg細胞之優先活化的適當檢定可見於美國專利第9,580,486號中例如實施例2及3，或見於WO2016014428中例如實施例3、4及5，其各自係藉由引用而以其整體併入。成熟IL-2序列係
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Figure 109116695-A0202-12-0071-17
(成熟IL-2序列)(SEQ ID NO：6)
不成熟IL-2序列可藉由下列表示：
Figure 109116695-A0202-12-0071-18
Figure 109116695-A0202-12-0071-19
(SEQ ID NO：15)。
於一些態樣中，IIC結合/調控部分係包含IL-2突變蛋白質或其活性片段，其係偶聯至例如融合至另一多肽例如延長體內半衰期之多肽，例如免疫球蛋白恆定區，或其多聚體或二聚體。
IL-2突變蛋白質分子可藉由突變IL-2之一個或多個殘基而製備。IL-2突變蛋白質之非限制性實例可見於WO2016/164937、US9580486、US7105653、US9616105、US 9428567、US2017/0051029、US2014/0286898A1、WO2014153111A2、WO2010/085495、WO2016014428A2、WO2016025385A1及US20060269515，其各自係藉由引用而以其整體併入。
於一些態樣中，係刪除位於該序列位置1之丙胺酸。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質分子係包含位於成熟IL-2序列之位置125用以取代半胱胺酸的絲胺酸。IL-2突變蛋白質分子之突變及取代的其它組合係揭示於US20060269515中，其係藉由引用而以其整體併入。於一些態樣中，位置125之半胱胺酸亦以纈胺酸或丙胺酸取代。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質分子係包含V91K取代。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質 分子係包含N88D取代。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質分子係包含N88R取代。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質分子係包含H16E、D84K、V91N、N88D、V91K或V91R或其任意組合之取代。於一些態樣中，此等IL-2突變蛋白質分子亦包含位置125處之取代，如本文所揭示者。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質分子係包含選自由下列所組成之群組的一個或多個取代：T3N、T3A、L12G、L12K、L12Q、L12S、Q13G、E15A、E15G、E15S、H16A、H16D、H16G、H16K、H16M、H16N、H16R、H16S、H16T、H16V、H16Y、L19A、L19D、L19E、L19G、L19N、L19R、L19S、L19T、L19V、D20A、D20E、D20H、D20I、D20Y、D20F、D20G、D20T、D20W、M23R、R81A、R81G、R81S、R81T、D84A、D84E、D84G、D84I、D84M、D84Q、D84R、D84S、D84T、S87R、N88A、N88D、N88E、N88I、N88F、N88G、N88M、N88R、N88S、N88V、N88W、V91D、V91E、V91G、V91S、I92K、I92R、E95G及Q126。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質分子之胺基酸序列係與成熟IL-2序列中詳述之胺基酸序列不同於具有C125A或C125S取代並且具有選自下列之一個或多個取代：T3N、T3A、L12G、L12K、L12Q L12S、Q13G、E15A、E15G、E15S、H16A、H16D、H16G、H16K、H16M、H16N、H16R、H16S、H16T、H16V、H16Y、L19A、L19D、L19E、L19G、L19N、L19R、L19S、L19T、L19V、D20A、D20E、D20F、D20G、D20T、D20W、M23R、R81A、R81G、R81S、R81T、D84A、D84E、D84G、D84I、D84M、D84Q、D84R、D84S、D84T、S87R、N88A、N88D、N88E、N88F、N88I、N88G、N88M、N88R、N88S、N88V、N88W、V91D、V91E、V91G、V91S、I92K、I92R、E95G、Q126I、Q126L及Q126F。 於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質分子係與成熟IL-2序列中詳述之胺基酸序列不同於具有C125A或C125S取代並且具有選自下列之一個或多個取代：D20H、D20I、D20Y、D20E、D20G、D20W、D84A、D84S、H16D、H16G、H16K、H16R、H16T、H16V、I92K、I92R、L12K、L19D、L19N、L19T、N88D、N88R、N88S、V91D、V91G、V91K及V91S。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含N88R及/或D20H突變。
於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質分子係於多肽序列中包含突變，該突變係位於選自由胺基酸30、胺基酸31、胺基酸35、胺基酸69、及胺基酸74所組成之群組的位置處。於一些態樣中，位置30之突變係N30S。於一些態樣中，位置31之突變係Y31H。於一些態樣中，位置35之突變係K35R。於一些態樣中，位置69之突變係V69A。於一些態樣中，位置74之突變係Q74P。於一些態樣中，該突變係包含V69A突變；Q74P突變；N88D或N88R突變；以及L53I、L56I、L80I或L118I突變之一者或多者。於一些態樣中，該突變係包含V69A突變；Q74P突變；N88D或N88R突變；以及選自由L53I、L56I、L80I及L118I突變所組成之群組的L至I突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含V69A、Q74P、N88D或N88R突變，以及L53I突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含V69A、Q74P、N88D或N88R突變，以及L56I突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含V69A、Q74P、N88D或N88R突變，以及L80I突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含V69A、Q74P、N88D或N88R突變，以及L118I突變。如本文中所提供，該突變蛋白質亦可包含C125A或C125S突變。
於一些態樣中，該突變蛋白質係包含T3A突變。本文所提供之全長度IL-2突變蛋白質可不使用T3A或本文所提供之其它突變例示性說明，但可以如本文例示性說明之任何其它突變的情況一樣，此類突變可加入本文所提供之突變蛋白質中。據此，於一些態樣中，該突變蛋白質係包含T3N突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含T3A突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含L12G突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含L12K突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含L12Q突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含L12S突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含Q13G突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含E15A突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含E15G突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含E15S突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含H16A突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含H16D突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含H16G突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含H16K突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含H16M突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含H16N突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含H16R突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含H16S突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含H16T突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含H16V突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含H16Y突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含L19A突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含L19D突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含L19E突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含L19G突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含L19N突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含L19R突變。 於一些態樣中，該突變蛋白質係包含L19S突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含L19T突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含L19V突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含D20A突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含D20E突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含D20H突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含D20I突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含D20Y突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含D20F突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含D20G突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含D20T突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含D20W突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含M23R突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含R81A突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含R81G突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含R81S突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含R81T突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含D84A突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含D84E突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含D84G突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含D84I突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含D84M突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含D84Q突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含D84R突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含D84S突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含D84T突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含S87R突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含N88A突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含N88D突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含N88E突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含N88I突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含N88F突變。於一些態 樣中，該突變蛋白質係包含N88G突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含N88M突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含N88R突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含N88S突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含N88V突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含N88W突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含V91D突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含V91E突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含V91G突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含V91S突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含I92K突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含I92R突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含E95G突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含Q126突變。
儘管突變係以列述形式例示性說明，但此係僅為便利起見，該等突變蛋白質可具有本文中提供之取代中的一者或多者。
於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質分子係包含選自由下列所組成之群組的取代：N88R、N88I、N88G、D20H、D109C、Q126L、Q126F、D84G或D84I，相對上文提供之成熟人IL-2序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質分子係包含D109C之取代以及N88R取代及C125S取代之一者或兩者。於一些態樣中，位於IL-2突變蛋白質分子位置109之半胱胺酸係鏈結至聚乙二醇部分，其中該聚乙二醇部分係具有界於5kDa與40kDa之間的分子量。
於一些態樣中，本文中所揭示之任意取代係與位置125之取代組合。該取代可係C125S、C125A或C125V取代。
除了本文中所揭示之取代或突變之外，於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係具有位於對應於SEQ ID NO：15之位置73、76、100或138中一處或多處或者位於對應於SEQ ID NO：6之位置53、56、80或118中一處或多處的取代/突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含位於對應於SEQ ID NO：15之下述位置的突變：73及76；73及100；73及138；76及100；76及138；100及138；73、76及100；73、76及138；73、100及138；76、100及138；或73、76、100及138之每一處。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含位於對應於SEQ ID NO：6之下述位置的突變：53及56；53及80；53及118；56及80；56及118；80及118；53、56及80；53、56及118；53、80及118；56、80及118；或53、56、80及118之每一處。由於該IL-2可融合或繫結至其它蛋白質，如本文中所用，對應於參照SEQ ID NO：6或15之術語係指該等序列將如何使用對準軟體之預設設定對準，諸如可使用NCBI網站。於一些態樣中，該突變係白胺酸至異白胺酸。因此，該IL-2突變蛋白質可包含位於對應於SEQ ID NO：15之位置73、76、100或138處或位於對應於SEQ ID NO：6之位置53、56、80或118中一處或多處的一個或多個異白胺酸。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含位於對應於SEQ ID NO：6之L53處的突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含位於對應於SEQ ID NO：6之L56處的突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含位於對應於SEQ ID NO：6之L80處的突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含位於對應於SEQ ID NO：6之L118處的突變。於一些態樣中，該突變係白胺酸至異白胺酸。於一些態樣中，該突變蛋白質亦包含位於對應於SEQ ID NO：6之 此等突變蛋白質中位置69、74、88、125或其任意組合處的突變。於一些態樣中，該突變係V69A突變。於一些態樣中，該突變係Q74P突變。於一些態樣中，該突變係N88D或N88R突變。於一些態樣中，該突變係C125A或C125S突變。
於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含位於對應於SEQ ID NO：15之位置49、51、55、57、68、89、91、94、108及145中一處或多處或對應於SEQ ID NO：6之位置29、31、35、37、48、69、71、74、88及125中一處或多處的突變。該等取代可單獨使用或彼此組合。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含位置49、51、55、57、68、89、91、94、108及145中之2、3、4、5、6、7、8、9或者每一處之取代。此類組合之非限制性實例係包括但不限於，位於下述位置之突變：49、51、55、57、68、89、91、94、108及145；49、51、55、57、68、89、91、94及108；49、51、55、57、68、89、91及94；49、51、55、57、68、89及91；49、51、55、57、68及89；49、51、55、57及68；49、51、55及57；49、51及55；49及51；51、55、57、68、89、91、94、108及145；51、55、57、68、89、91、94及108；51、55、57、68、89、91及94；51、55、57、68、89及91；51、55、57、68及89；55、57及68；55及57；55、57、68、89、91、94、108及145；55、57、68、89、91、94及108；55、57、68、89、91及94；55、57、68、89、91及94；55、57、68、89及91；55、57、68及89；55、57及68；55及57；57、68、89、91、94、108及145；57、68、89、91、94及108；57、68、89、91及94；57、68、89及91；57、68及89；57及68；68、89、91、94、108 及145；68、89、91、94及108；68、89、91及94；68、89及91；68及89；89、91、94、108及145；89、91、94及108；89、91及94；89及91；91、94、108及145；91、94及108；91及94；或94及108。每一突變可與彼此組合。相同取代可於SEQ ID NO：6中作成，但該編號將適宜地調整，如本揭露中所見者(SEQ ID NO：6之編號比SEQ ID NO：15中相對應位置之編號小20)。
於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含突變位於對應於SEQ ID NO：15之位置35、36、42、104、115或146中或位於SEQ ID NO：6之等效位置(例如，位置15、16、22、84、95或126)中一處或多處。此等突變可與本文中所揭示之其它白胺酸至異白胺酸之突變或位於對應於SEQ ID NO：15之位置73、76、100或138處或位於對應於SEQ ID NO：6之位置53、56、80或118中一處或多處的突變組合。於一些態樣中，該突變係E35Q、H36N、Q42E、D104N、E115Q或Q146E，或其任意組合。於一些態樣中，此等取代之一者或多者係野生型。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含位於對應於SEQ ID NO：15之位置35、36、42、104、115或146中或位於SEQ ID NO：6之等效位置(例如，位置15、16、22、84、95及126)中一處或多處的野生型殘基。
位於此等位置之突變可與本文中所揭示之任何其它突變組合，包括但不限於，本文及上文所述的位於對應於SEQ ID NO：15之位置73、76、100或138或位於對應於SEQ ID NO：6之位置53、56、80或118中一處或多處的取代。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含對應於SEQ ID NO：15的N49S突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係 包含對應於SEQ ID NO：15的Y51S或Y51H突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含對應於SEQ ID NO：15的K55R突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含對應於SEQ ID NO：15的T57A突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含對應於SEQ ID NO：15的K68E突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含對應於SEQ ID NO：15的V89A突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含對應於SEQ ID NO：15的N91R突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含對應於SEQ ID NO：15的Q94P突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含對應於SEQ ID NO：15的N108D或N108R突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含對應於SEQ ID NO：15的C145A或C145S突變。此等取代可單獨使用或彼此組合。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含此等取代中之每一者。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含1、2、3、4、5、6、7或8個此等突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含野生型殘基位於對應於SEQ ID NO：15之位置35、36、42、104、115或146或位於SEQ ID NO：6之等效位置(例如，位置15、16、22、84、95及126)中一處或多處。
於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含對應於SEQ ID NO：6的N29S突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含對應於SEQ ID NO：6的Y31S或Y31H突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含對應於SEQ ID NO：6的K35R突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含對應於SEQ ID NO：6的T37A突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含對應於SEQ ID NO：6的K48E突變。於一些態樣 中，該IL-2突變蛋白質係包含對應於SEQ ID NO：6的V69A突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含對應於SEQ ID NO：6的N71R突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含對應於SEQ ID NO：6的Q74P突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含對應於SEQ ID NO：6的N88D或N88R突變。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含對應於SEQ ID NO：6的C125A或C125S突變。此等取代可單獨使用或彼此組合。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含1、2、3、4、5、6、7或8個此等突變。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含此等取代中之每一者。於一些態樣中，該突變蛋白質係包含野生型殘基於對應於SEQ ID NO：15之位置35、36、42、104、115或146中或位於SEQ ID NO：6之等效位置(例如，位置15、16、22、84、95及126)中一處或多處。
對於本文所揭示之任意IL-2突變蛋白質，於一些態樣中，對應於SEQ ID NO：15之位置35、36、42、104、115或146或SEQ ID NO：6之等效位置(例如，位置15、16、22、84、95或126)的一處或多處係野生型(例如，係如SEQ ID NO：6或15中所示)。於一些態樣中，對應於SEQ ID NO：15之位置35、36、42、104、115或146中或位於SEQ ID NO：6之等效位置(例如，位置15、16、22、84、95及126)中2、3、4、5、6個位置或每一處係野生型。
於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含以下序列：
Figure 109116695-A0202-12-0081-21
Figure 109116695-A0202-12-0082-22
Figure 109116695-A0202-12-0082-23
(SEQ ID NO：16)
於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含以下序列：
Figure 109116695-A0202-12-0082-24
Figure 109116695-A0202-12-0082-25
(SEQ ID NO：17)
於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含以下序列：
Figure 109116695-A0202-12-0082-26
Figure 109116695-A0202-12-0082-27
(SEQ ID NO：18)
於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含以下序列：
Figure 109116695-A0202-12-0082-28
Figure 109116695-A0202-12-0082-29
(SEQ ID NO：19)
於一些態樣中，本文所揭示之IL-2突變蛋白質序列係不包含IL-2前導序列。IL-2前導序列可藉由MYRMQLLSCIALSLALVTNS(SEQ ID NO：20)之序列表示。因此，於一些態樣中，上文例示之序列亦可涵蓋不具有前導序列之肽。儘管SEQ ID NO：16至20係僅例示僅突變於對應於SEQ ID NO：15之位置73、76、100或138中一處或多處或於 對應於SEQ ID NO：6之位置53、56、80或118中一處或多處，但此等肽可包含於此等位置處之1、2、3或4個突變。於一些態樣中，於每一位置之取代係異白胺酸或其它類型之保守胺基酸取代。於一些態樣中，於所引述位置之白胺酸係獨立地以異白胺酸、纈胺酸、甲硫胺酸或苯丙胺酸取代。
於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質分子係融合至Fc區或其它鏈結基區，如本文中所揭示。此類融合蛋白質之實例可見於US9580486、US7105653、US9616105、US9428567、US2017/0051029、WO2016/164937、US2014/0286898A1、WO2014153111A2、WO2010/085495、WO2016014428A2、WO2016025385A1、US2017/0037102及US2006/0269515，其各自係藉由引用而以其整體併入。
於一些態樣中，該Fc區係包含被稱之為LALA突變者。使用Fc區之Kabat編號，這一突變將會對應於L247A、L248A及G250A。於一些態樣中，使用Fc區之EU編號，該Fc區係包含L234A突變、L235A突變、及/或G237A突變。無論使用何種編號系統，於一些態樣中，該Fc部分可包含對應於此等殘基之突變。於一些態樣中，該Fc區係包含N297G突變或N297A(kabat編號)突變。Kabat編號係基於全長度序列，但可用於基於熟識該技藝者用於Fc區之傳統對準的片段。
於一些態樣中，該Fc區係包含下列序列：
Figure 109116695-A0202-12-0083-30
Figure 109116695-A0202-12-0084-31
Figure 109116695-A0202-12-0084-32
(SEQ ID NO：21)
或
Figure 109116695-A0202-12-0084-33
Figure 109116695-A0202-12-0084-34
(SEQ ID NO：28)
於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係鏈結至Fc區。鏈結基之非限制性實例係甘胺酸/絲胺酸鏈結基。舉例而言，甘胺酸/絲胺酸鏈結基可係GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)或GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)之序列。此僅係非限制性實例，並且該鏈結基可具有不同數量之GGGGS(SEQ ID NO：23)或GGGGA重複(SEQ ID NO：29)。於一些態樣中，該鏈結基係包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個GGGGS(SEQ ID NO：23)或GGGGA重複(SEQ ID NO：29)。於一些態樣中，該鏈結基之長度係10個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係5個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係15個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係20個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係25個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係30個胺基 酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係35個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係5至50個胺基酸。
因此，該IL-2/Fc融合體可藉由式ZIL-2M -Lgs -ZFc 表示，其中ZIL-2M 係如本文所揭示之IL-2突變蛋白質，Lgs 係如本文所揭示之鏈結基序列(例如，甘胺酸/絲胺酸鏈結基)，並且ZFc 係如本文所揭示或熟識該技藝者所知之Fc區。於一些態樣中，該式可係反向取向ZFc -Lgs -ZIL-2M 。
於一些態樣中，該IL-2/Fc融合體係包含以下序列：
Figure 109116695-A0202-12-0085-35
Figure 109116695-A0202-12-0085-37
(SEQ ID NO：24)
Figure 109116695-A0202-12-0085-36
Figure 109116695-A0202-12-0086-38
Figure 109116695-A0202-12-0086-39
(SEQ ID NO：25)
Figure 109116695-A0202-12-0086-40
Figure 109116695-A0202-12-0086-41
(SEQ ID NO：26)
Figure 109116695-A0202-12-0086-42
Figure 109116695-A0202-12-0086-43
(SEQ ID NO：27)。
於一些態樣中，該IL-2/Fc融合體係包含選自下述表3之序列：
Figure 109116695-A0202-12-0087-44
Figure 109116695-A0202-12-0088-45
Figure 109116695-A0202-12-0089-46
於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含下表中提供之序列中的一者或多者，於一些態樣中，其係顯示與其它蛋白質或鏈結基融合之IL-2突變蛋白質。該表亦提供該IL-2可與之融合的Fc域或變體的多種序列：
Figure 109116695-A0202-12-0090-47
Figure 109116695-A0202-12-0091-48
Figure 109116695-A0202-12-0092-49
Figure 109116695-A0202-12-0093-50
Figure 109116695-A0202-12-0094-51
Figure 109116695-A0202-12-0095-52
Figure 109116695-A0202-12-0096-53
Figure 109116695-A0202-12-0097-54
於一些態樣中，該表或通篇中顯示之序列係包含或不包含對應於位置L53、L56、L80及L118的一個或多個突變。於一些態樣中，表中或本申請通篇所顯示之序列係包含或不包含對應於位置L59I、L63I、I24L、L94I、L96I或L132I的一個或多個突變或於相同位置之其它取代。於一些態樣中，該突變係白胺酸至異白胺酸。於一些態樣中，該突變蛋白質不包含除所顯示者或本文所揭示者之外的另一突變。於一些態樣中，該肽係包含下列之序列：SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO： 40、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、或SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：59、或SEQ ID NO：60。
於一些態樣中，該蛋白質係包含如本文中所提供之IL-2突變蛋白質。於一些態樣中，係提供包含SEQ ID NO：59或SEQ ID NO：60之多肽，其中X1 、X2 、X3 及X4 之至少一者係I並且剩餘者係L或I。於一些態樣中，X1 、X2 及X3 係L，並且X4 係I。於一些態樣中，X1 、X2 及X4 係L，並且X3 係I。於一些態樣中，X2 、X3 及X4 係L，並且X1 係I。於一些態樣中，X1 、X3 及X4 係L，並且X2 係I。於一些態樣中，X1 及X2 係L，並且X3 及X4 係I。於一些態樣中，X1 及X3 係L，並且X2 及X4 係I。於一些態樣中，X1 及X4 係L，並且X2 及X3 係I。於一些態樣中，X2 及X3 係L，並且X1 及X4 係I。於一些態樣中，X2 及X4 係L，並且X1 及X3 係I。於一些態樣中，X3 及X4 係L，並且X1 及X2 係I。於一些態樣中，X1 、X2 及X3 係L，並且X4 係I。於一些態樣中，X2 、X3 及X4 係L，並且X1 係I。於一些態樣中，X1 、X3 及X4 係L，並且X2 係I。於一些態樣中，X1 、X2 及X4 係L，並且X3 係I。
於一些態樣中，係不包括該融合體之Fc部分。於一些態樣中，該肽係基本上由本文中所提供之IL-2突變蛋白質組成。於一些態樣中，該蛋白質係不含Fc部分。
僅用於例示性說明之目的，與Fc融合以及與靶向部分融合之IL-2的態樣係於圖19中例示性說明。
該等序列係僅用於例示性說明之目的並且不意圖限制。於一些態樣中，該化合物係包含SEQ ID NO：53、54、55或56之胺基酸序列。於一些態樣中，該化合物係包含SEQ ID NO：53、54、55或56之胺基酸序列，具有或不具有C125A或C125S突變。於一些態樣中，於位置125之殘基係C、S或A。於一些態樣中，該化合物係包含SEQ ID NO：59或SEQ ID NO：60之胺基酸序列，其中X1 、X2 、X3 及X4 之至少一者係I並且剩餘者係L或I。於一些態樣中，該蛋白質係包含如本文中所提供之IL-2突變蛋白質。於一些態樣中，係提供包含SEQ ID NO：59或SEQ ID NO：60之多肽，其中X1 、X2 、X3 及X4 之至少一者係I並且剩餘者係L或I。於一些態樣中，X1 、X2 及X3 係L，並且X4 係I。於一些態樣中，X1 、X2 及X4 係L，並且X3 係I。於一些態樣中，X2 、X3 及X4 係L，並且X1 係I。於一些態樣中，X1 、X3 及X4 係L，並且X2 係I。於一些態樣中，X1 及X2 係L，並且X3 及X4 係I。於一些態樣中，X1 及X3 係L，並且X2 及X4 係I。於一些態樣中，X1 及X4 係L，並且X2 及X3 係I。於一些態樣中，X2 及X3 係L，並且X1 及X4 係I。於一些態樣中，X2 及X4 係L，並且X1 及X3 係I。於一些態樣中，X3 及X4 係L，並且X1 及X2 係I。於一些態樣中，X1 、X2 及X3 係L，並且X4 係I。於一些態樣中，X2 、X3 及X4 係L，並且X1 係I。於一些態樣中，X1 、X3 及X4 係L，並且X2 係I。於一些態樣中，X1 、X2 及X4 係L，並且X3 係I。
該等蛋白質之每一者亦可視為具有如本文所提供之C125S以及LALA及/或G237A突變。該C125取代亦可係如本申請通篇所揭示之C125A。
於一個態樣中，IL-2突變蛋白質分子係包含與天然出現之人IL-2分子例如本文所揭露之天然出現之IL-2序列或彼等藉由引用併入者的至少60%、70%、80%、85%、90%、95%、或97%序列同一性或同源性。
如本文所揭示，該等IL-2突變蛋白質可係雙特異性分子之一部分，該雙特異性分子係具有繫結部分，諸如將令該IL-2突變蛋白質以表達MAdCAM之細胞為靶向的MAdCAM抗體。如本文所揭示，該雙特異性分子可自兩個多肽鏈產生。於一些態樣中，可使用下列者：
Figure 109116695-A0202-12-0100-55
Figure 109116695-A0202-12-0101-56
無論該IL-2突變蛋白質中具有或不具有C125A或C125S突變，皆可產生該等蛋白質。可包括之IL-2突變蛋白質的實例係例示於本文中，諸如但不限於，SEQ ID NO：59或SEQ ID NO：60之序列。
於一些態樣中，任意輕鏈中之恆定κ域可取代為恆定λ域。
GITR-結合劑
GITR(CD357)係呈遞於Treg之細胞表面標記物。GITR-GITRL相互作用之阻斷係維持Treg功能。於一些態樣中，治療性化合物 係包含結合表現GITR之Treg細胞的IIC結合實體以及令該治療性化合物靶向感興趣之靶標組織為的靶向部分。
於一些態樣中，治療性化合物係包含抗-GITR抗體分子，例如，抑制GITR結合至GITRL之抗-GITR抗體分子。
於一些態樣中，治療性化合物係包含抗-GITR抗體分子、抑制GITR結合至GITRL之抗-GITR抗體分子、以及PD-1促效劑、IL-2突變蛋白質分子、或本文所揭示之其它效應子。
儘管不欲受縛於理論，咸信，包含GITR結合劑之治療性化合物係影響表現GITR之Treg於該治療性化合物之靶向部分所靶向之位點例如移植物或器官損傷位點處的蓄積。
嗜乳脂蛋白/類嗜乳脂蛋白分子
效應子結合/調控部分可包含促效性BTNL2分子。儘管不欲受縛於理論，咸信，促效性BTNL2分子係誘導Treg細胞。
如本文中所用之術語，促效性BTNL2分子係指具有足夠BTNL2序列之多肽，作為治療性化合物之一部分，其係誘導Treg細胞。於一些態樣中，BTNL2分子係與天然出現之嗜乳脂蛋白具有至少60%、70%、80%、90%、95%、99%、或100%的序列同一性或實質上之序列同一性。
於一些態樣中，效應子結合/調控部分係包含拮抗性BTNL8分子。
包含SM結合/調控部分之治療性化合物：局部微環境之操作
治療性化合物可包含效應子結合/調控部分，例如藉由在靶標附近提供抑制或最小化該靶標之免疫系統造成之攻擊的物質而促成免疫壓制性局部微環境，本文中指為SM結合/調控部分。
於一些態樣中，該SM結合/調控部分係包含一分子，該分子係抑制或最小化該靶標之免疫系統造成之攻擊(本文中係指為SM結合/調控部分)。於一些態樣中，治療性化合物係包含SM結合/調控部分，該部分係結合並蓄積具有免壓抑制功能之可溶性物質，例如內源性或外源性物質。於一些態樣中，治療性化合物係包含SM結合/調控部分例如CD39分子或CD73分子或鹼性磷酸酶分子，其係結合、抑制、隔絕、降解或以此外之中和促成免疫攻擊之可溶性物質，該可溶性物質典型係內源性可溶性物質，例如在CD39分子或鹼性磷酸酶分子情況下的ATP或者在CD73分子情況下的AMP。於一些態樣中，治療性化合物係包含SM結合/調控部分，該部分係包含免疫壓制性物質，例如作為免疫壓制性者之蛋白質片段。
包含ICSM結合/調控部分之治療性化合物：刺激之抑制，例如，免疫細胞之共刺激的抑制
治療性化合物可包含ICSM結合/調控部分，該部分係抑制或拮抗刺激性例如共刺激結合對，例如OX40與OX40L。該ICSM結合/調控部分可結合並拮抗該對之任一成員。
於一個態樣中，該ICSM結合/調控部分係包含抗體分子，該抗體分子係結合並拮抗刺激性例如共刺激結合對之任一成員。於一個態樣中，該ICSM結合/調控部分係包含該結合對成員之一者的拮抗性類似物。於此類態樣中，該ICSM結合/調控部分可包含結合另一成員之一個成 員的可溶性片段。典型地，該類似物將與結合該對之靶標成員的天然出現之成員具有至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、或98%的同源性或序列同一性。在ICSM結合/調控部分係結合呈遞於免疫細胞表面之成員的情況下，該ICSM結合/調控部分典型係結合但不活化或允許內源性相對成員結合並活化。
因此，在包括例如OX40免疫細胞成員及OX40L相對成員之結合對的情況下，ICSM結合/調控成員可包含下列之任一者：
a)抗體分子，其係結合該OX40免疫細胞成員並例如藉由阻斷內源性OX40L相對成員之結合而拮抗刺激作用；
b)抗體分子，其係結合該OX40L相對成員並例如藉由阻斷內源性OX40L相對成員與該OX40免疫細胞成員之有效結合而拮抗刺激作用；
c)OX40L相對成員之可溶性片段或類似物，其係結合OX40免疫細胞成員並拮抗刺激作用；以及
d)OX40免疫細胞成員之可溶性片段或類似物，其係結合OX40L相對成員並拮抗刺激作用。
舉例而言，該ICSM結合/調控部分例如抗體分子或該相對成員之拮抗性類似物可結合至CD2、ICOS、CD40L、CD28、LFA1、SLAM、TIM1、CD30、OX40(CD134)、41BB(CD137)、CD27、HVEM、DR3、GITR、BAFFR、TACI、BCMA、CD30、或CD40。於另一態樣中，該ICSM結合/調控部分例如該相對成員之抗體分子或拮抗性類似物可結合至B7.1、B7.2、ICOSL(B7-H2、B7RP1)、LFA3、CD48、CD58、ICAM1、SLAM、 TIM4、CD40、CD30L、OX40L(CD252)、41BBL(CD137L)、CD70、LIGHT、TL1A、GITRL、BAFF、APRIL、CD30、或CD40L。
於一些態樣中，該ICSM結合/調控分子係結合並拮抗呈遞於免疫細胞之活化或共刺激分子例如共刺激分子，或係結合該相對成員，從而阻止該相對成員活化呈遞於該免疫細胞之共刺激分子。於一些態樣中，該ICSM係包括拮抗性抗體分子，例如，結合免疫細胞之共刺激分子或結合該ICSM之相對成員，從而阻止該相對成員活化該免疫細胞之共刺激分子，並導致抑制該共刺激分子之活性。於一些態樣中，該ICSM係包括拮抗性相對體分子例如分子片段，其係結合該共刺激分子並導致該共刺激分子活性之抑制。
於一些態樣中，該結合對之一個成員將位於免疫細胞例如T細胞、B細胞或NK細胞或者樹突細胞之表面，同時該相對成員將位於另一免疫細胞或APC諸如樹突細胞或位於非免疫細胞諸如平滑肌細胞或內皮細胞。
下表係提供共刺激分子及相對結構對之非限制性實例。
Figure 109116695-A0202-12-0106-57
供體組織
本文所揭示之治療性化合物及方法可與將供體組織移植入受驗者體內合用，並且可最小化供體移植物組織之排斥作用、最小化免疫效應子細胞介導之對供體移植物組織之損害、延長對供體移植物組織之接 受度、或延長供體移植物組織之功能壽命。該組織可係異種移植物組織或同種異體物組織。所移植之組織可包含器官例如肝臟、腎臟、心臟、胰臟、胸腺、皮膚或肺之全部或部分。
於多個態樣中，本文所揭示之治療性化合物係減少或消除對於全身性免疫壓制之需求。本文所揭示之治療性化合物及方法亦可用以治療GVHD。於一些態樣中，宿主細胞係包覆有治療性化合物，該治療性化合物係包含作為效應子結合/調控部分之PD-L1分子。
表2係提供用於移植物適應症之靶標。靶標分子係靶向部分所結合之靶標。如本文中別處所檢討，於一些態樣中，靶向部分係選擇為結合供體組織所存在之等位基因產物並且不為該受驗者(接納者)所表現或以不同(例如，降低或實質上降低之)水準表現。
Figure 109116695-A0202-12-0107-58
自體免疫性疾病
本文所揭示之治療性化合物可用來治療具有不希望之自體免疫應答或處於其風險下的受驗者，例如1型糖尿病、多發性硬化、心肌炎、白斑症、脫髮、炎症性腸病(IBD，例如克隆氏症或潰瘍性結腸炎)、Sjogren氏症候群、局灶性節段性腎小球硬化(FSGS)、硬皮症/全身性硬化(SSc)或類風濕性關節炎中之自體免疫應答。於一些態樣中，該治療係最小化正在經歷自體免疫攻擊或處於其風險下之受驗者組織的排斥作用，最小化免疫效應子細胞對該受驗者組織之損害，延長該受驗者組織之存活期。表3係提供用於若干自體免疫適應症及器官/細胞類型的靶標分子。靶標分子係靶向部分所結合之靶標。
Figure 109116695-A0202-12-0108-59
Figure 109116695-A0202-12-0109-60
可使用本文所揭示之化合物治療的自體免疫疾患及疾病的其它實例係包括但不限於，心肌炎、心肌梗塞後症候群、心包膜切開後症候群、亞急性細菌性心內膜炎、抗腎小球基底膜腎炎、間質性膀胱炎、狼瘡性腎炎、膜性腎小球腎疾患、慢性腎病(「CKD」)、自體免疫性肝炎、原發性膽汁性肝硬化、原發性硬化性膽管炎、抗合成酶症候群、斑禿、自體免疫性血管性水腫、自體免疫黃體激素皮膚炎、自體免疫性蕁麻疹、大疱性類天疱瘡、疤痕性類天疱瘡、泡疹樣皮膚炎、盤狀紅斑狼瘡、後天性水皰性表皮鬆解症、結節性紅斑、妊娠性類天疱瘡、化膿性汗腺炎、扁平苔蘚、硬化性苔蘚、線性iga病(lad)、侷限性硬皮病、尋常型天疱瘡、急性痘瘡樣苔蘚樣糠疹、mucha-habermann二氏病、牛皮癬、全身性硬皮症、白斑病、Addison氏病、1型自體免疫多內分泌症候群(APS)、2型自體免疫多內分泌症候群(APS)、3型自體免疫多內分泌症候群(APS)、自體免疫胰臟炎(AIP)、1型糖尿病、自體免疫甲狀腺炎、Ord氏甲狀腺炎、Graves氏病、自體免疫性卵巢炎、子宮內膜異位症、自體免疫性睪丸炎、Sjogren氏症候群、自體免疫性腸疾患、乳糜瀉、克隆氏症、顯微鏡下結腸炎、潰瘍性結腸炎、血小板減少症、痛性肥胖症、成年發病Still氏病、關節黏連性脊椎炎、CREST症候群、藥源性狼瘡、點炎症相關之關節炎、嗜伊紅球性筋膜炎、Felty氏症候群、IgG4相關疾病、青少年關節炎、Lyme氏病(慢性)、混合型結締組織疾病(MCTD)、復發性風濕病、Parry Romberg二氏症候群、Parsonage-Turner二氏症候群、牛皮癬性關節炎、反應性關節炎、復發性多軟骨炎、腹膜後纖維變性、風濕熱、類風濕性關節炎、肉瘤病、Schnitzler氏症候群、全身性紅斑狼瘡(SLE)、未分化型結締組織病 (UCTD)、皮肌炎、纖維肌痛症、包涵體肌炎、肌炎、重症肌無力、神經性肌僵直、副腫瘤性小腦變性、多發性肌炎、急性瀰漫性腦脊髓炎(ADEM)、急性運動軸索性神經疾患、抗-N-甲基-D-天冬胺酸(抗-NMDA)受體性腦炎、Balo氏同心性硬化、Bickerstaff氏腦炎、慢性發炎脫髓鞘性多發神經疾患、Guillain-Barre二氏症候群、Hashimoto氏腦疾患、特發性炎症性脫髓鞘病、Lambert-Eaton二氏肌無力症候群、多發性硬化、Oshtoran氏症候群、與鏈球菌相關之二酮自體免疫性神經精神疾患(PANDAS)、進行性炎症性神經疾患、不寧腿症候群、僵人症候群、Sydenham氏舞蹈病、橫貫性脊髓炎、自體免疫性視網膜疾患、自體免疫性眼色素層炎、Cogan氏症候群、Graves氏眼疾患、中間眼色素層炎、木樣結膜炎、蠶蝕性角膜潰瘍、視神經脊鞘炎、斜視眼陣攣肌陣攣症候群、視神經炎、鞏膜炎、Susac氏症候群、交感性眼炎、Tolosa-Hunt二氏症候群、自體免疫性內耳病(AIED)、Ménière氏病、Behcet氏病、嗜酸性多血管炎性肉芽腫(EGPA)、巨大細胞動脈炎、多血管炎性肉芽腫(GPA)、IgA血管炎(IgAV)、Kawasaki氏病、白血球破碎性血管炎、狼瘡性血管炎、類風濕性血管炎、顯微鏡下多血管炎(MPA)、結節性多動脈炎(PAN)、風濕性多肌痛症、血管炎、原發性免疫缺陷等。
可使用本文所揭示之化合物治療的潛在自體免疫疾患及疾病以及自體免疫性共病的其它實例係包括但不限於，慢性疲勞症候群、複雜區域性疼痛症候群、嗜酸細胞性食管炎、胃炎、間質性肺部疾病、POEMS症候群、Raynaud氏現象、原發性免疫缺陷、壞疽性膿皮病、無γ球蛋白血症、澱粉樣變性、肌萎縮性脊髓側索硬化症、抗管狀基底膜神經炎、異 位性過敏、異位性皮膚炎、自體免疫性周圍神經疾患、Blau氏症候群、Castleman氏病、Chagas氏病、慢性阻塞性肺病、慢性復發性多灶性骨髓炎、補體組分2缺乏、接觸性皮膚炎、Cushing氏症候群、皮膚白血球分解型血管炎、Dego氏病、濕疹、嗜酸性胃腸炎、嗜酸性肺炎、胎兒紅血球母細胞增多症、進行性骨纖維發育不良、胃腸道類天疱瘡、低伽瑪球蛋白血症、特發性巨細胞心肌炎、特發性肺纖維變性、IgA神經疾患、免疫調節脂蛋白、IPEX症候群、木樣結膜炎、Majeed氏症候群、發作性睡病、Rasmussen氏腦炎、思覺失調症、血清病、脊椎關節疾患、Sweet氏症候群、Takayasu氏關節炎等。
於一些態樣中，該自體免疫疾患不包含尋常型天疱瘡、天疱瘡。於一些態樣中，該自體免疫疾患不包含落葉型天疱瘡。於一些態樣中，該自體免疫疾患不包含大疱性類天疱瘡。於一些態樣中，該自體免疫疾患不包含Goodpasture氏病。於一些態樣中，該自體免疫疾患不包含牛皮癬。於一些態樣中，該自體免疫疾患不包含皮膚疾患。於一些態樣中，該自體免疫疾患不包含腫瘤疾病例如癌症。
治療性化合物
治療性化合物係包含功能地與效應子結合/調控部分相關聯之特異性靶向部分。於一些態樣中，該特異性靶向部分與效應子結合/調控部分係藉由共價或非共價鍵例如直接將一者鏈結至另一者之共價或非共價鍵鏈結至彼此。於其它態樣中，特異性靶向部分與效應子結合/調控部分係例如透過鏈結基部分共價或非共價地鏈結。例如，在融合多肽的情況下，包含該靶向部分及多肽序列的多肽序列可直接鏈結至彼此或透過鏈結基序 列鏈結至彼此。於一些態樣中，該鏈結基部分係包含多肽。惟，鏈結基係不限於多肽。於一些態樣中，鏈結基部分係包含其它骨幹，例如非肽聚合物，例如PEG聚合物。於一些態樣中，鏈結基部分可包含顆粒，例如奈米顆粒，例如聚合物奈米顆粒。於一些態樣中，鏈結基部分可包含分支鏈分子或樹枝狀聚合物。惟，於多個態樣中，應避免該效應子結合/調控部分在不存在靶標結合之情況下包含導致群聚的ICIM結合/調控部分(其係結合如PD-1之效應子)結構，因為它們可在不存在靶標結合的情況下導致群聚。因此，於多個態樣中，該治療性化合物係具有以下結構，例如，ICIM之拷貝數係受到足夠限制，使得在不存在靶標結合情況下之群聚得以最小化或實質上消除、或消除、或足夠最小化，從而不出現實質上之全身性免疫壓制。
於一些態樣中，治療性化合物係包含多肽，該多肽係包含與效應子結合/調控部分共價或非共價連接的特異性靶向部分。於一些態樣中，治療性分子係包含具有特異性靶向部分之融合蛋白質，該靶向部分係例如直接地或透過包含一個或多個胺基酸殘基之鏈結部分融合至效應子結合/調控部分。於一些態樣中，治療性分子係包含具有特異性靶向部分之多肽，該靶向部分係藉由非共價鍵或共價鍵，例如除肽鍵之外的共價鍵例如二硫鍵，鏈結至效應子結合/調控部分。
於一些態樣中，治療性化合物係包含多肽，例如融合多肽，該多肽係包含：
1.a)包含靶標特異性結合多肽之特異性靶向部分；
1.b)包含靶標配位子結合分子之特異性靶向部分；
1.c)包含抗體分子之特異性靶向部分；
1.d)包含單鏈抗體分子例如scFv域之特異性靶向部分；或
1.e)包含抗體分子之第一輕鏈或重鏈可變區的特異性靶向部分，並且其中另一可變區係共價或非共價地與第一可變區相關聯；
以及
2.a)包含效應子結合多肽之效應子結合/調控部分；
2.b)包含效應子配位子結合分子之效應子結合/調控部分；
2.c)包含抗體分子之效應子結合/調控部分；
2.d)包含單鏈抗體分子例如scFv域之效應子結合/調控部分；或
2.e)包含抗體分子之第一輕鏈或重鏈可變區的效應子結合/調控部分，並且其中另一可變區係共價或非共價地與第一可變區相關聯。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.a及2.a。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.a及2.b。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.a及2.c。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.a及2.d。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.a及2.e。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.b及2.a。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.b及2.b。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.b及2.c。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.b及2.d。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.b及2.e。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.c及2.a。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.c及2.b。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.c及2.c。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.c及2.d。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.c及2.e。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.d及2.a。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.d及2.b。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.d及2.c。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.d及2.d。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.d及2.e。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.e及2.a。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.e及2.b。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.e及2.c。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.e及2.d。
於一些態樣中，治療性化合物係包含1.e及2.e。
舉例而言，本文所揭露之治療性化合物可包含複數個效應子結合/調控部分及特異性靶向部分。任何適當之鏈結基或平台可用來呈遞該複數個部分。該等鏈結基典型地係偶合或融合至一個或多個效應子結合/調控部分及靶向部分。
於一些態樣中，兩個(或更多個)鏈結基係或共價或非共價地關聯例如以形成異二聚或同二聚之治療性化合物。例如，該鏈結基可包含Fc區以及彼此相關聯之兩個Fc區。於治療性化合物包含兩個鏈結基區之一些態樣中，該等鏈結基區可例如作為兩個相同之Fc區而自我關聯。於治 療性化合物包含兩個鏈結基區之一些態樣中，該等鏈結基區不能夠或實質上不能夠自我關聯，例如，該兩個Fc區可係節-孔對之成員。
治療性化合物之非限制性示例性組態係包含下列(例如，N端至C端之順序)：
R1---鏈結基區A-R2
R3---鏈結基區B---R4，
其中，
R1、R2、R3及R4係各自獨立包含效應子結合/調控部分，例如，ICIM結合/調控部分、IIC結合/調控部分、ICSM結合/調控部分、或SM結合/調控部分；特異性靶向部分；或不存在；
鏈結基區A及鏈結基B係包含彼此相關聯至部分，例如，鏈結基A及鏈結基B係各自包含Fc部分，限制條件為效應子結合/調控部分及特異性靶向部分係存在。
於一些態樣中：
R1係包含效應子結合/調控部分，例如，ICIM結合/調控部分、IIC結合/調控部分、ICSM結合/調控部分、或SM結合/調控部分；或不存在；
R2係包含特異性靶向部分，或不存在；
R3係包含效應子結合/調控部分，例如，ICIM結合/調控部分、IIC結合/調控部分、ICSM結合/調控部分、或SM結合/調控部分；或不存在；
R4係包含特異性靶向部分，或不存在；
鏈結基區A及鏈結基B係包含相關聯至彼此的部分，例如，鏈結基A及鏈結基B係各自包含Fc部分，限制條件為R1或R3係存在並且R2或R4之一者係存在。
於一些態樣中：
R1係包含特異性靶向部分，或不存在；
R2係包含效應子結合/調控部分，例如，ICIM結合/調控部分、IIC結合/調控部分、ICSM結合/調控部分、或SM結合/調控部分；或不存在；
R3係包含特異性靶向部分，或不存在；
R4係包含效應子結合/調控部分，例如，ICIM結合/調控部分、IIC結合/調控部分、ICSM結合/調控部分、或SM結合/調控部分；或不存在；
鏈結基區A及鏈結基B係包含相關聯至彼此的部分，例如，鏈結基A及鏈結基B係各自包含Fc部分，限制條件為R1或R3係存在並且R2或R4之一者係存在。
非限制性實例係包括但不限於：
Figure 109116695-A0202-12-0117-61
Figure 109116695-A0202-12-0118-62
Figure 109116695-A0202-12-0119-63
於一些態樣中：
R1、R2、R3及R4係獨立包含效應子結合調控部分，其係活化免疫細胞例如T細胞或B細胞之抑制性受體，例如PD-L1分子或功能性抗-PD-1抗體分子(PD-1之促效劑)；特異性靶向部分；或不存在；
限制條件為效應子結合部分及特異性靶向部分係存在。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc部分(例如，自配對Fc部分)。
於一些態樣中：
R1及R3係獨立包含效應子結合調控部分，其係活化免疫細胞例如T細胞或B細胞之抑制性受體，例如PD-L1分子或功能性抗-PD-1抗體分子(PD-1之促效劑)；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc部分(例如，自配對Fc部分)。
於一些態樣中：
R1及R3係獨立包含功能性抗-PD-1抗體分子(PD-1之促效劑)；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc部分(例如，自配對Fc部分)。
於一些態樣中：
R1及R3係獨立包含特異性靶向部分，例如，抗組織抗原抗體；以及
R2及R4係獨立包含功能性抗-PD-1抗體分子(PD-1之促效劑)，例如，scFv分子。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc部分(例如，自配對Fc部分)。
於一些態樣中：
R1及R3係獨立包含PD-L1分子(PD-1之促效劑)；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子；以及
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc部分(例如，自配對Fc部分)。
於一些態樣中：
R1及R3係獨立包含特異性靶向部分，例如，抗組織抗原抗體；以及
R2及R4係獨立包含PD-L1分子(PD-1之促效劑)。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc部分(例如，自配對Fc部分)。
於一些態樣中：
R1、R2、R3及R4係各自獨立包含：SM結合/調控部分，其係調控例如結合並抑制、隔絕、降解或此外之中和一種物質，例如調控免疫應答之可溶性分子例如ATP或AMP，例如，CD39分子或CD73分子；特異性靶向部分；或不存在；
限制條件為SM結合/調控部分及特異性靶向部分係存在。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一些態樣中：
R1及R3係各自獨立包含SM結合/調控部分，其係調控例如結合並抑制、隔絕、降解或此外之中和一種物質，例如調控免疫應答之可溶性分子例如ATP或AMP，例如，CD39分子或CD73分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一些態樣中：
R1及R3係獨立包含CD39分子或CD73分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一些態樣中：
R1及R3係各自包含CD39分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子；以及
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一些態樣中：
R1及R3係各自包含CD73分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一些態樣中：
R1及R3之一者係包含CD39分子並且另一者係包含CD73分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一些態樣中：
R1、R2、R3及R4係各自獨立包含：HLA-G分子；特異性靶向部分，或不存在；
限制條件為HLA-G分子及特異性靶向部分係存在。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一些態樣中：
R1及R3係各自包含HLG-A分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一些態樣中：
R1及R3係各自包含促效性抗-LILRB1抗體分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一些態樣中：
R1及R3係各自包含促效性抗-KIR2DL4抗體分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一些態樣中：
R1及R3係各自包含促效性抗-LILRB2抗體分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一些態樣中：
R1及R3係各自包含促效性抗-NKG2A抗體分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一些態樣中：
R1及R3之一者係包含選自下列之第一部分，並且另一者係包含選自下列之不同部分：拮抗性抗-LILRB1抗體分子、促效性抗-KR2DL4抗體分子、及促效性抗-NKG2A抗體分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一些態樣中：
R1及R3之一者係包含拮抗性抗-LILRB1抗體分子並且另一者係包含促效性抗-KR2DL4抗體分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一些態樣中：
R1及R3之一者係包含拮抗性抗-LILRB1抗體分子並且另一者係包含促效性抗-NKG2A抗體分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一個態樣中：
R1、R2、R3及R4係各自獨立包含：IL-2突變蛋白質分子；特異性靶向部分，或不存在；
限制條件為IL-2突變蛋白質分子及特異性靶向部分係存在。
於一個態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
R1、R2、R3及R4之一者係包含IL-2突變蛋白質分子，一者係包含抗-GITR抗體分子，例如抑制GITRL結合至GITR之抗-GITR抗體分子，以及，一者係包含特異性靶向部分。
於一個態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一個態樣中：
R1及R3係各自包含IL-2突變蛋白質分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一個態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一個態樣中：
R1及R3之一者係包含GARP結合分子，例如抗-GARP抗體分子或GITR結合分子，例如抗-GITR抗體分子，並且另一者係包含IL-2突變蛋白質分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一個態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一個態樣中：
R1及R3之一者係包含GARP結合分子，例如抗-GARP抗體分子，並且另一者係包含IL-2突變蛋白質分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一個態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一個態樣中：
R1及R3之一者係包含GITR結合分子例如抗-GITR抗體分子，並且另一者係包含IL-2突變蛋白質分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一個態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一些態樣中：
R1、R2、R3及R4係獨立包含效應子結合調控部分，其係活化B細胞之抑制性受體，例如抗-FCRL抗體分子，例如促效性抗-FCRL抗體分子；特異性靶向部分；或不存在；
限制條件為效應子結合部分及特異性靶向部分係存在。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一個態樣中，該抗-FCRL分子係包含：抗-FCRL抗體分子，例如針對FCRL1、FCRL2、FCRL3、FCRL4、FCRL5或FCRL6之促效性抗-FCRL抗體分子。
於一些態樣中：
R1及R3係各自包含促效性抗-FCRL抗體分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一個態樣中，該抗-FCRL分子係包含：抗-FCRL抗體分子，例如針對FCRL1、FCRL2、FCRL3、FCRL4、FCRL5或FCRL6之促效性抗-FCRL抗體分子。
於一些態樣中：
R1及R3係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之抗體分子；以及
R2及R4係各自包含抗-FCRL抗體分子，例如促效性抗-FCRL抗體分子，例如scFv分子。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一個態樣中，該抗-FCRL分子係包含：抗-FCRL抗體分子，例如針對FCRL1、FCRL2、FCRL3、FCRL4、FCRL5或FCRL6之促效性抗-FCRL抗體分子。
於一些態樣中：
R1、R2、R3及R4之一者係包含抗-BCR抗體分子，例如拮抗性抗-BCR抗體分子，一者係包含抗FCRL抗體分子，以及，一者係包含特異性靶向部分。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一些態樣中，該抗-FCRL分子係包含：抗-FCRL抗體分子，例如針對FCRL1、FCRL2、FCRL3、FCRL4、FCRL5或FCRL6之促效性抗-FCRL抗體分子。
於一些態樣中：
R1、R2、R3及R4之一者係包含雙特異性抗體分子，該雙特異性抗體分子係包含抗-BCR抗體分子，例如拮抗性抗-BCR抗體分子，以及抗FCRL抗體分子，以及，一者係包含特異性靶向部分。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
於一個態樣中，該抗-FCRL分子係包含：抗-FCRL抗體分子，例如針對FCRL1、FCRL2、FCRL3、FCRL4、FCRL5或FCRL6之促效性抗-FCRL抗體分子。
於一些態樣中：
R1、R2、R3及R4係各自獨立包含：
i)效應子結合/調控部分例如ICIM結合/調控部分、IIC結合/調控部分、ICSM結合/調控部分或SM結合/調控部分，其係最小化或抑制T細胞活性、擴張或功能(T細胞效應子結合/調控部分)；
ii)效應子結合/調控部分例如ICIM結合/調控部分、IIC結合/調控部分、ICSM結合/調控部分或SM結合/調控部分，其係最小化或抑制B細胞活性、擴張或功能(B細胞效應子結合/調控部分)；
iii)特異性靶向部分；或
iv)不存在；
限制條件為T細胞效應子結合/調控部分、B細胞效應子結合/調控部分及特異性靶向部分係存在。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc部分(例如，自配對Fc部分)。
於一些態樣中，R1、R2、R3及R4之一者係包含促效性抗-PD-1抗體且一者係包含HLA-G分子。
於一些態樣中，R1、R2、R3及R4之一者係包含SM結合/調控部分，例如CD39分子或CD73分子。於一些態樣中，R1、R2、R3及R4之一者係包含實體，該實體係結合、活化或維持調節性免疫細胞例如Treg細胞或Breg細胞，舉例而言，IL-2突變蛋白質分子。
於一些態樣中，R1、R2、R3及R4之一者係包含促效性抗-PD-1抗體，或一者係包含HLA-G分子，並且一者係包含ILIL-2突變蛋白質分子。於一些態樣中，該PD-1抗體係取代為IL-2突變蛋白質分子。於一些態樣中，R1、R2、R3及R4之一者係包含促效性抗-PD-1抗體，一者係包含HLA-G分子，並且一者係包含CD39分子或CD73分子。於一些態樣中，該PD-1抗體係取代為IL-2突變蛋白質分子。
鏈結基區
如本文中別處所檢討，特異性靶向部分及效應子結合/調控部分可藉由鏈結基區鏈結。本文所揭示之任意鏈結基區可用作鏈結基。舉例而言，鏈結基區A及B可包含Fc區。於一些態樣中，治療性化合物係 包含可自身關聯之鏈結基區。於一些態樣中，治療性化合物係包含具有最小化自身關聯之部分的鏈結基區，並且典型地，鏈結基區A與鏈結基區B係異二聚體。鏈結基亦包括甘胺酸/絲胺酸鏈結基。於一些態樣中，該鏈結基可包含GGGGS(SEQ ID NO：23)之一個或多個重複。於一些態樣中，該鏈結基係包含SEQ ID NO：23之1、2、3、4或5個重複。於一些態樣中，該鏈結基係包含GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)或GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)。此等鏈結基可用於本文所提供之任意治療性化合物或組成物中。
該鏈結基區可包含業經修飾(例如，突變)以產生異二聚體之Fc區。於一些態樣中，該Fc區之CH3域可經突變。此類Fc區之實例可見於，舉例而言，藉由引用而以其整體併入本文之美國專利第9,574,010號。如本文中定義之Fc區係包含CH3域或其片段，並且可額外包含一個或多個附加恆定區之域或其片段，包括鉸鏈、CH1或CH2。應理解，Fc胺基酸殘基之編號係EU指數之編號，如Kabat等人於1991年編撰之NIH出版物91-3242(Kabat et al.,1991,NIH Publication 91-3242,National Technical Information Service,Springfield,Va)中的編號。「如Kabat中詳述之EU指數」係指人IgG1 Kabat抗體之EU指數編號。便利起見，美國專利第9,574,010號之表B係提供根據如Kabat中詳述之EU指數編號的來自人IgG1之CH2及CH3域的胺基酸，該專利係藉由引用併入本文。美國專利第9,574,010號之表1.1係提供可用作鏈結基區之變體Fc異二聚體的突變。美國專利第9,574,010號之表1.1係藉由引用併入本文。
於一些態樣中，該鏈結基區A係包含第一CH3域多肽且該鏈結基區B係包含第二CH3域多肽，該第一及第二CH3域多肽係獨立包含相較於野生型CH3域多肽之胺基酸修飾，其中該第一CH3域多肽係包含位置T350、L351、F405及Y407之胺基酸修飾，並且該第二CH3域多肽係包含位置T350、T366、K392及T394之胺基酸修飾，其中位置T350之胺基酸修飾係T350V、T3501、T350L或T350M；位置L351之胺基酸修飾係L351Y；位置F405之胺基酸修飾係F405A、F405V、F405T或F405S；位置Y407之胺基酸修飾係Y407V、Y407A或Y407I；位置T366之胺基酸修飾係T366L、T366I、T366V或T366M；位置K392之胺基酸修飾係K392F、K392L或K392M，以及，位置T394之胺基酸修飾係T394W，並且其中胺基酸殘基之該編號係根據Kabat中詳述之EU指數進行。
於一些態樣中，位置K392之胺基酸修飾係K392M或K392L。於一些態樣中，位置T350之胺基酸修飾係T350V。於一些態樣中，該第一CH3域多肽復包含選自Q347R以及S400R或S400E之一者的一個或多個胺基酸修飾。於一些態樣中，該第二CH3域多肽復包含選自L351Y、K360E以及N390R、N390D或N390E之一者的一個或多個胺基酸修飾。於一些態樣中，該第一CH3域多肽復包含選自Q347R以及S400R或S400E之一者的一個或多個胺基酸修飾，並且該第二CH3域多肽復包含選自L351Y、K360E以及N390R、N390D或N390E之一者的一個或多個胺基酸修飾。於一些態樣中，位置T350之胺基酸修飾係T350V。於一些態樣中，位置F405之胺基酸修飾係F405A。於一些態樣中，位置Y407 之胺基酸修飾係Y407V。於一些態樣中，位置T366之胺基酸修飾係T366L或T366I。於一些態樣中，位置F405之胺基酸修飾係F405A，位置Y407之胺基酸修飾係Y407V，位置T366之胺基酸修飾係T366L或T366I，並且位置K392之胺基酸修飾係K392M或K392L。於一些態樣中，該第一CH3域多肽係包含胺基酸修飾T350V、L351Y、S400E、F405V及Y407V，並且該第二CH3域多肽係包含胺基酸修飾T350V、T366L、N390R、K392M及T394W。於一些態樣中，該第一CH3域多肽係包含胺基酸修飾T350V、L351Y、S400E、F405T及Y407V，並且該第二CH3域多肽係包含胺基酸修飾T350V、T366L、N390R、K392M及T394W。於一些態樣中，該第一CH3域多肽係包含胺基酸修飾T350V、L351Y、S400E、F405S及Y407V，並且該第二CH3域多肽係包含胺基酸修飾T350V、T366L、N390R、K392M及T394W。於一些態樣中，該第一CH3域多肽係包含胺基酸修飾T350V、L351Y、S400E、F405A及Y407V，並且該第二CH3域多肽係包含胺基酸修飾T350V、L351Y、T366L、N390R、K392M及T394W。於一些態樣中，該第一CH3域多肽係包含胺基酸修飾Q347R、T350V、L351Y、S400E、F405A及Y407V，並且該第二CH3域多肽係包含胺基酸修飾T350V、K360E、T366L、N390R、K392M及T394W。於一些態樣中，該第一CH3域多肽係包含胺基酸修飾T350V、L351Y、S400R、F405A及Y407V，並且該第二CH3域多肽係包含胺基酸修飾T350V、T366L、N390D、K392M及T394W。於一些態樣中，該第一CH3域多肽係包含胺基酸修飾T350V、L351Y、S400R、F405A及Y407V，並且該第二CH3域多肽係包含胺基酸修飾T350V、T366L、N390E、K392M 及T394W。於一些態樣中，該第一CH3域多肽係包含胺基酸修飾T350V、L351Y、S400E、F405A及Y407V，並且該第二CH3域多肽係包含胺基酸修飾T350V、T366L、N390R、K392L及T394W。於一些態樣中，該第一CH3域多肽係包含胺基酸修飾T350V、L351Y、S400E、F405A及Y407V，並且該第二CH3域多肽係包含胺基酸修飾T350V、T366L、N390R、K392F及T394W。
於一些態樣中，單離之異二聚體係包含具有第一CH3域多肽及第二CH3域多肽的異二聚CH3域，該第一CH3域多肽係包含位置F405及Y407之胺基酸修飾，並且該第二CH3域多肽係包含位置T366及T394之胺基酸修飾；其中：(i)該第一CH3域多肽復包含位置L351之胺基酸修飾，以及(ii)該第二CH3域多肽復包含位置K392之胺基酸修飾，其中位置F405之胺基酸修飾係F405A、F405T、F405S或F405V；並且位置Y407之胺基酸修飾係Y407V、Y407A、Y407L或Y407I；位置T394之胺基酸修飾係T394W；位置L351之胺基酸修飾係L351Y；位置K392之胺基酸修飾係K392L、K392M、K392V或K392F；以及，位置T366之胺基酸修飾係T366I、T366L、T366M或T366V，其中該異二聚CH3域係具有約攝氏70度或更高之解鏈溫度(Tm)以及大於約90%之純度，以及，其中胺基酸殘基之該編號係根據Kabat中詳述之EU指數進行。
於一些態樣中，該鏈結基區A係包含第一CH3域多肽並且該鏈結基區B係包含第二CH3域多肽，其中該第一CH3域多肽係包含位置F405及Y407之胺基酸修飾，並且該第二CH3域多肽係包含位置T366及T394之胺基酸修飾；其中：(i)該第一CH3域多肽復包含位置L351之 胺基酸修飾，以及(ii)該第二CH3域多肽復包含位置K392之胺基酸修飾，其中位置F405之胺基酸修飾係F405A、F405T、F405S或F405V；並且位置Y407之胺基酸修飾係Y407V、Y407A、Y407L或Y407I；位置T394之胺基酸修飾係T394W；位置L351之胺基酸修飾係L351Y；位置K392之胺基酸修飾係K392L、K392M、K392V或K392F；以及，位置T366之胺基酸修飾係T366I、T366L、T366M或T366V，其中該異二聚CH3域係具有約70度C或更高之解鏈溫度(Tm)以及大於約90%之純度，以及，其中胺基酸殘基之該編號係根據Kabat中詳述之EU指數進行。於一些態樣中，位置F405處之胺基酸修飾係F405A。於一些態樣中，位置T366處之胺基酸修飾係T366I或T366L。於一些態樣中，位置Y407處之胺基酸修飾係Y407V。於一些態樣中，位置F405處之胺基酸修飾係F405A，位置Y407處之胺基酸修飾係Y407V，位置T366處之胺基酸修飾係T366I或T366L，並且位置K392處之胺基酸修飾係K392L或K392M。於一些態樣中，位置F405處之胺基酸修飾係F405A，位置Y407處之胺基酸修飾係Y407V，位置T366處之胺基酸修飾係T366L，並且位置K392處之胺基酸修飾係K392M。於一些態樣中，位置F405處之胺基酸修飾係F405A，位置Y407處之胺基酸修飾係Y407V，位置T366處之胺基酸修飾係T366L，並且位置K392處之胺基酸修飾係K392L。於一些態樣中，位置F405處之胺基酸修飾係F405A，位置Y407處之胺基酸修飾係Y407V，位置T366處之胺基酸修飾係T366I，並且位置K392處之胺基酸修飾係K392M。於一些態樣中，位置F405處之胺基酸修飾係F405A，位置Y407處之胺基酸修飾係Y407V，位置T366處之胺基酸修飾係T366I，並且位 置K392處之胺基酸修飾係K392L。於一些態樣中，該第一CH3域多肽復包含選自S400D及S400E之位置S400處的胺基酸修飾，並且該第二CH3域多肽復包含胺基酸修飾N390R。於一些態樣中，位置F405處之胺基酸修飾係F405A，位置Y407處之胺基酸修飾係Y405V，位置S400處之胺基酸修飾係S400E，位置T366處之胺基酸修飾係T366L，並且位置K392處之胺基酸修飾係K392M。
於一些態樣中，該經修飾之第一及第二CH3域係藉由Fc構造體基於G型免疫球蛋白(IgG)構成。該IgG可係IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
包含變體CH3域之其它鏈結基區A及鏈結基區B係揭示於美國專利第9,499,634號及第9,562,109號中，其各自係藉由引用而以其整體併入。
鏈結基區A及鏈結基區B可係蛋白質例如天然出現之蛋白質諸如人血清白蛋白之互補性片段。於多個態樣中，鏈結基區A及鏈結基區B之一者係包含該蛋白質例如之hSA第一片段例如N端片段，而另一者係包含該蛋白質例如has之第二片段例如C端片段。於一個態樣中，該等片段係包含N端及C端片段。於一個態樣中，該等片段係包含兩個內部片段。典型地，該等片段係不重疊。於一個態樣中，該第一片段與第二片段一起係提供該原始蛋白質例如hSA之完整序列。該第一片段係提供用於鏈結例如融合至另一序列例如R1、R2、R3或R4(如本文中定義)之序列的N端及C端。
該鏈結基區A及鏈結基區B可衍生自白蛋白多肽。於一些態樣中，該白蛋白多肽係選自天然人血清白蛋白多肽及人異白蛋白(alloalbumin)多肽。該白蛋白多肽可經修飾，使得該鏈結基區A及鏈結基區B彼此相互作用以形成異二聚體。經修飾之白蛋白多肽的實例係揭示於美國專利第9,388,231號及第9,499,605號中，其各自係藉由引用而以其整體併入本文。
據此，本文係提供式R1---鏈結基區A-R2及R3---鏈結基區B---R4之多功能異二聚體蛋白質，其中該鏈結基區A及鏈結基區B係形成異二聚體。於一些態樣中，該鏈結基區A係包含第一多肽且該鏈結基區B係包含第二多肽；其中該第一及第二多肽係各自包含胺基酸序列，該胺基酸序列係包含選自天然人血清白蛋白多肽及人異白蛋白多肽之白蛋白多肽的節段；其中該第一及第二多肽係藉由將該白蛋白多肽於分段位點進行分段而獲得，使得分段導致位於該分段位點之0至3個胺基酸殘基被刪除；其中該第一多肽係包含選自A194C、L198C、W214C、A217C、L331C及A335C之至少一個突變，並且該第二多肽係包含選自L331C、A335C、V343C、L346C、A350C、V455C及N458C之至少一個突變；以及，其中該第一及第二多肽可自組裝以形成單體形式之白蛋白多肽的準天然結構。
於一些態樣中，該分段位點係處於該白蛋白多肽之環圈，其係具有高溶劑可及表面積(SASA)並且限制與該白蛋白表面之剩餘部位的接觸；b)該分段係導致界於轉運子多肽之間的互補性界面。此等分段位點係揭示於，舉例而言，藉由引用而以其整體併入本文之美國專利第9,388,231號。
於一些態樣中，該第一多肽係包含該白蛋白多肽之殘基1至337或殘基1至293，並具有本文所揭示之一個或多個突變。於一些態樣中，該第二多肽係包含該白蛋白多肽之殘基342至585或殘基304至585，並具有本文所揭示之一個或多個突變。於一些態樣中，該第一多肽係包含該白蛋白多肽之殘基1至339、1至300、1至364、1至441、1至83、1至171、1至281、1至293、1至114、1至337、或1至336。於一些態樣中，該第二多肽係包含該白蛋白多肽之殘基301至585、365至585、442至585、85至585、172至585、282至585、115至585、304至585、340至585、或342至585。
於一些態樣中，該第一及第二多肽係包含如下表中所述之該白蛋白的殘基。白蛋白之序列係揭示於下。
Figure 109116695-A0202-12-0138-64
於一些態樣中，該第一及第二多肽係包含可與彼此形成共價鍵諸如二硫鍵之鏈結基。該鏈結基之非限制性實例係肽鏈結基。於一些態樣中，該肽鏈結基係包含GGGGS(SEQ ID NO：23)。該鏈結基可融合至該第一多肽之C端及該第二多肽之N端。該鏈結基亦可用以附加本文所揭示之部分而不廢除該等鏈結基形成二硫鍵之能力。於一些態樣中，該第一及第二多肽不包含可形成共價鍵之鏈結基。於一些態樣中，該第一及第二多肽係具有下列取代。
Figure 109116695-A0202-12-0139-65
該白蛋白多肽之序列可係如所示者之人白蛋白的序列，為N端訊號傳導殘基經移除後之蛋白質形式
Figure 109116695-A0202-12-0139-68
Figure 109116695-A0202-12-0140-66
Figure 109116695-A0202-12-0140-67
(人白蛋白，SEQ ID NO：42)
於一些態樣中，該鏈結基區A與該鏈結基區B係形成如本文所揭示之異二聚體。
於一些態樣中，該肽係包含位於N端之由IgG1 Fc骨幹之F(ab’)2構成的抗體，該F(ab’)2係融合至該IgG Fc骨幹之C端的scFv。於一些態樣中，該IgG Fc骨幹係IgG1 Fc骨幹。於一些態樣中，該IgG1骨幹係取代為IgG4骨幹、IgG2骨幹或其它類似之IgG骨幹。這一段落中揭示之IgG骨幹可用於本申請案通篇中，其中Fc區係指為治療性化合物之一部分。因此，於一些態樣中，由IgG1 Fc骨幹之F(ab’)2構成的抗體可係IgG1 Fc之抗-MAdCAM抗體或抗-PD-1抗體或者係本文所提供之任 意其它靶向部分或效應子結合/調控部分。於一些態樣中，如果N端區係抗-MAdCAM抗體，則融合至C端之scFV節段可係抗-PD-1抗體；或者，如果N端區係抗-PD-1抗體，則融合至C端之scFV節段可係抗-MAdCAM抗體。於這一非限制性實例中，該N端可係靶向部分諸如本文中所提供者中之任一者，並且該C端可係效應子結合/調控部分諸如本文中所提供者中之任一者。或者，於一些態樣中，該N端可係效應子結合/調控部分諸如本文中所提供者中之任一者，並且該C端可係靶向部分諸如本文中所提供者中之任一者。
於一些態樣中中，該N端可係靶向部分諸如本文中所提供者中之任一者，並且該C端可係效應子結合/調控部分諸如本文中所提供者中之任一者。
於一些態樣中，該治療性化合物係包含兩個同二聚之多肽。於一些態樣中，該多肽之N端係包含效應子結合/調控部分，該部分係融合至人IgG1 Fc域(例如，CH2及/或CH3域)。於一些態樣中，該Fc域之C端係另一融合至該靶向部分之鏈結基。因此，於一些態樣中，該分子可使用式R1-鏈結基A-Fc區-鏈結基B-R2表示，其中R1可係效應子結合/調控部分，R2係靶向部分，鏈結基A及鏈結基B係獨立為如本文所提供者之鏈結基。於一些態樣中，鏈結基1與鏈結基2係相異。
於一些態樣中，該分子可使用式R1-鏈結基A-Fc區-鏈結基B-R2表示，其中R1可係靶向部分，R2係效應子結合/調控部分，鏈結基A及鏈結基B係獨立為如本文所提供者之鏈結基。於一些態樣中，鏈結基A與鏈結基B係相異。該等鏈結基可係選自本文所提供之非限制性實例。 於一些態樣中，R1及R2係獨立選自F(ab’)2及scFV抗體域。於一些態樣中，R1及R2係相異之抗體域。於一些態樣中，該scFV係VL-VH域取向。
於一些態樣中，該治療性化合物係雙特異性抗體。於一些態樣中，該等雙特異性抗體係由包含下列之多肽鏈構成：
鏈1：nt-VH1-CH1-CH2-CH3-鏈結基A-scFv[VL2-鏈結基B-VH2]-ct
鏈2：nt-VH1-CH1-CH2-CH3-鏈結基A-scFv[VL2-鏈結基B-VH2]-ct
鏈3：nt-VL1-CL-ct
鏈4：nt-VL1-CL-ct，
其中鏈1與鏈2係彼此相同，並且鏈3與鏈4係彼此相同，
其中鏈1係與鏈2形成同二聚體；並且鏈3及鏈4係與鏈1及鏈2相關聯。換言之，當每一輕鏈係與每一重鏈相關聯時，VL1係與VH1相關聯並且CL係與CH1相關聯以形成兩個功能性Fab單元。不受縛於任何特定理論，每一scFv單元本質上係功能性，因為VL2及VH2係串聯地與如本文所提供之鏈結基(例如，GGGGS(SEQ ID NO：23)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)或GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)共價鏈結。彼此獨立之鏈結基A及鏈結基B的序列可係相同或相異，或如本申請通篇另做揭示者。因此，於一些態樣中，鏈結基A係包含GGGGS(SEQ ID NO：23)或其兩個重複、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)、或 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)。於一些態樣中，鏈結基B係包含GGGGS(SEQ ID NO：23)或其兩個重複、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)、或GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)。該scFv可以NT-VH2-VL2-CT or NT-VL2-VH2-CT取向排列。NT或nt係表示蛋白質之N端，並且CT或ct係表示蛋白質之C端。CH1、CH2及CH3係來自IgG Fc區之域，並且CL係表示恆定輕鏈，其可係κ或λ家族輕鏈。其它定義係表示它們於該技藝中正常使用之方式。
於一些態樣中，該VH1及VL1域係衍生自該效應子分子，並且該VH2及VL2域係衍生自該靶向部分。於一些態樣中，該VH1及VL1域係衍生自該靶向部分，並且該VH2及VL2域係衍生自該效應子結合/調控部分。
於一些態樣中，該VH1及VL1域係衍生自抗-PD-1抗體，並且該VH2及VL2域係衍生自抗-MAdCAM抗體。於一些態樣中，該VH1及VL1域係衍生自抗-MAdCAM抗體，並且該VH2及VL2域係衍生自抗-PD-1抗體。
於一些態樣中，鏈結基A係包含1、2、3、4或5個GGGGS(SEQ ID NO：23)重複。於一些態樣中，鏈結基B係包含1、2、3、4或5個GGGGS(SEQ ID NO：23)重複。為避免產生疑問，於本申請通篇所使用之鏈結基A及鏈結基B的序列係彼此獨立。因此，於一些態樣中，鏈結基A與鏈結基B可係相同或相異。於一些態樣中，鏈結基A係包含GGGGS(SEQ ID NO：23)或其兩個重複、 GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)、或GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)。於一些態樣中，鏈結基B係包含GGGGS(SEQ ID NO：23)或其兩個重複、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)、或GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)。
於一些態樣中，該治療性化合物係包含輕鏈及重鏈。於一些態樣中，該輕鏈及重鏈係於N端以靶向部分之VH域起始，之後為人IgG1之CH1域，該CH1域係融合至人IgG1之Fc區(例如，CH2-CH3)。於一些態樣中，Fc區之C端係融合至如本文所提供之鏈結基，諸如但不限於，GGGGS(SEQ ID NO：23)或其兩個或三個重複、或者GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)。隨後，該鏈結基可融合至效應子結合/調控部分，諸如本文所體用之效應子部分中的任一者。該等多肽可同二聚化，因為透過該重鏈同二聚作用，係導致治療性化合物具有兩個效應子部分，諸如兩個抗-PD-1抗體。以此取向，該靶向部分係IgG型式，存在兩個Fab臂，每一Fab臂係識別該靶向部分之結合夥伴，例如，藉由抗-MAdCAM靶向部分結合之MAdCAM。
於一些態樣中，該治療劑或多肽係包含下列式：
具有可變重鏈及可變輕鏈之呈IgG同工型的抗體(靶向部分)，例如，具有效應子分子諸如IL-2突變蛋白質。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係融合於該可變重鏈之C端。這可藉由式VL及VH-IgG恆定域-L1-E表示，其中L1係鏈結基諸如本文所提供之甘胺酸/絲胺酸鏈結基，E係效 應子分子諸如IL-2突變蛋白質，並且VL及VH係可變輕鏈及可變重鏈。該VL域可係κ域。於一些態樣中，該IgG恆定域係包含下列之序列：
Figure 109116695-A0202-12-0145-69
(SEQ ID NO：44)
於一些態樣中，該鏈結基係包含GGGGS。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含本文所提供之IL-2突變蛋白質諸如SEQ ID NO：31至41中之一者，其亦可具有附接至該IL-2突變蛋白質之N端或C端的Fc分子。該Fc域可包含SEQ ID NO：21或43。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：47至60中之一者。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：41或SEQ ID NO：56。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：40或SEQ ID NO：55。
於 一些態樣中，該靶向部分係MAdCAM抗體。
於一些態樣中，該MAdCAM抗體係選自下表。
Figure 109116695-A0202-12-0146-70
Figure 109116695-A0202-12-0147-72
Figure 109116695-A0202-12-0148-73
Figure 109116695-A0202-12-0149-75
Figure 109116695-A0202-12-0150-76
Figure 109116695-A0202-12-0151-77
Figure 109116695-A0202-12-0152-78
Figure 109116695-A0202-12-0153-79
Figure 109116695-A0202-12-0154-80
Figure 109116695-A0202-12-0155-81
Figure 109116695-A0202-12-0156-82
Figure 109116695-A0202-12-0157-83
Figure 109116695-A0202-12-0158-84
Figure 109116695-A0202-12-0159-85
Figure 109116695-A0202-12-0160-86
Figure 109116695-A0202-12-0161-87
Figure 109116695-A0202-12-0162-88
Figure 109116695-A0202-12-0163-89
Figure 109116695-A0202-12-0164-90
於一些態樣中，該抗體係包含表6或表7中詳述之CDR集。 於一些態樣中，該抗體係包含表6中純株ID：6、純株ID：59或純株ID：63之CDR。
該等抗體可係scFv型式，其亦於表6中之非限制性態樣中例示。
於一些態樣中，該MAdCAM抗體係選自下表，其可係如表7中例示之IgG型式。
Figure 109116695-A0202-12-0165-91
Figure 109116695-A0202-12-0166-92
Figure 109116695-A0202-12-0167-93
Figure 109116695-A0202-12-0168-94
Figure 109116695-A0202-12-0169-95
Figure 109116695-A0202-12-0170-96
Figure 109116695-A0202-12-0171-97
Figure 109116695-A0202-12-0172-98
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Figure 109116695-A0202-12-0182-189
Figure 109116695-A0202-12-0183-190
Figure 109116695-A0202-12-0184-191
Figure 109116695-A0202-12-0185-192
Figure 109116695-A0202-12-0186-193
於一些態樣中，該抗體係包含表6中純株ID：6、純株ID：75或純株ID：79之CDR。
本文所例示之IgG及scFv型式係僅為非限制性實例。本文所提供之CDR可置於不同型式包括不同VH及VL/VK型式中並且仍能夠結合至MAdCAM。
儘管該等CDR係於本文所提供之表中例示，但存在注釋或鑒別CDR之其它途徑。舉例而言，於一些態樣中，該HCDR2可具有位於N端之額外胺基酸。舉例而言，對於純株6之HCDR2，該表係表明其係具有系列：SRINSYGTSTTYA(SEQ ID NO：91)。惟，於一些態樣中，該HCDR2係具有序列VSRINSYGTSTTYA(SEQ ID NO：629)，其係顯示於該HCDR2之N端具有額外殘基纈胺酸。該纈胺酸係清楚地例示於本文所提供之表的VH肽中。因此，於一些態樣中，該HCDR2係包含緊鄰該表中所列述之HCDR2之N端的一個附加胺基酸。該殘基將係緊鄰見於該表中所提供之VH序列中之HCDR2的N端的殘基。具有這一訊息之熟悉該技藝者可立即設想HCDR2肽，該肽係具有緊鄰該表中所列示之HCDR2之N端的附加胺基酸殘基。
類似地，該HCDR3可不包括該半胱胺酸殘基。該表中提供之HCDR3多肽中之每一者係始於半胱胺酸殘基。於一些態樣中，該 HCDR3並不包括該半胱胺酸，但當存在其它CDR時仍能夠結合至靶標抗原。此外，於一些態樣中，該HCDR3並不具有本文所提供之表中例示的最末一個C端殘基。因此，於一些態樣中，該HCDR3並不具有該半胱胺酸及/或該等表中例示之最末一個C端殘基。具有這一信息之熟悉該技藝者可立即設想HCDR3肽序列，該肽序列並不具有該半胱胺酸及/或該等表中例示之最末一個C端殘基。
於一些態樣中，該LCDR2可具有位於N端之一個或兩個額外胺基酸。此等額外殘基將係彼等緊鄰存在於本文所提供之VL/VK鏈中之LCDR2的N端者。舉例而言，純株6之LCDR2係提供為GASSLQS，但於一些態樣中可係IYGASSLQS(SEQ ID NO：630)或YGASSLQS(SEQ ID NO：631)。具有這一訊息之熟悉該技藝者可立即設想LCDR2肽，該肽係具有位於本文所提供之LCDR2序列之N端的一個或兩個額外胺基酸殘基。
於一些態樣中，該抗體係鏈結至另一抗體或治療劑。於一些態樣中，該MAdCAM抗體係鏈結至如本文或藉由引用併入本文中者提供之PD-1抗體或抗體或IL-2突變蛋白質。
於一些態樣中，該MAdCAM抗體係包含如表6中所示之序列。於一些態樣中，該抗體係如表6中例示之scFV型式。於一些態樣中，該抗體係包含來自表6之純株1至66中任一者的CDR1，來自純株1至84中任一者的CDR2，以及來自表6之純株1至66中任一者的CDR3。於一些態樣中，該抗體係包含來自表6之純株1至66中任一者的LCDR1，來自表6之純株1至66中任一者的LCDR2，以及來自表6之純株1至66 中任一者的LCDR3。於一些態樣中，上文所述之CDR的胺基酸殘基係含有突變。於一些態樣中，該等CDR係含有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個取代或突變。於一些態樣中，該取代係保守性取代。
於一些態樣中，該MAdCAM係具有選自表7之純株1至84中任一者的VH區以及選自表7中詳述之純株1至84中任一者的VL區。於一些態樣中，該抗體係包含來自表7之純株1至84中任一者的CDR1，來自純株1至84中任一者的CDR2，以及來自表7之純株1至84中任一者的CDR3。於一些態樣中，該抗體係包含來自表7之純株1至84中任一者的LCDR1，來自表7之純株1至84中任一者的LCDR2，以及來自表7之純株1至84中任一者的LCDR3。於一些態樣中，上文所述之CDR的胺基酸殘基係含有突變。於一些態樣中，該等CDR係含有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個取代或突變。於一些態樣中，該取代係保守性取代。
於一些態樣中，該分子係包含結合至MAdCAM之抗體。於一些態樣中，該抗體係包含(i)包含重鏈CDR1、CDR2及CDR3序列之重鏈可變區，其中該重鏈CDR1序列係具有表6或表7中詳述之任意CDR1序列的胺基酸序列，該重鏈CDR2序列係具有表6或表7中詳述之任意CDR2序列的胺基酸序列，以及該重鏈CDR3序列係具有表6或表7中詳述之任意CDR3序列的胺基酸序列；或前述任一者之變體；以及(ii)包含輕鏈CDR1、CDR2及CDR3之輕鏈可變區，其中該輕鏈CDR1序列係具有表6或表7中詳述之任意LCDR1序列的胺基酸序列，該輕鏈LCDR2序列係具有表6或表7中詳述之任意LCDR2序列的胺基酸序列，以及該輕 鏈CDR3序列係具有表6或表7中詳述之任意LCDR3序列的胺基酸序列；或前述任一者之變體。
於一些態樣中，該抗體係包含(i)包含重鏈CDR1、CDR2及CDR3序列之重鏈可變區，其中該重鏈CDR1、CDR2及CDR3序列係具有表1之抗體6或表2之抗體6中詳述之胺基酸序列；或前述任一者之變體；以及(ii)包含輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列之輕鏈可變區，其中該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列係具有表1之抗體6或表2之抗體6中詳述之胺基酸序列；或前述任一者之變體。
於一些態樣中，該抗體係包含(i)包含重鏈CDR1、CDR2及CDR3序列之重鏈可變區，其中該重鏈CDR1、CDR2及CDR3序列係具有表1之抗體59或表2之抗體75中詳述之胺基酸序列；或前述任一者之變體；以及(ii)包含輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列之輕鏈可變區，其中該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列係具有表1之抗體59或表2之抗體75中詳述之胺基酸序列；或前述任一者之變體。
於一些態樣中，該抗體係包含(i)包含重鏈CDR1、CDR2及CDR3序列之重鏈可變區，其中該重鏈CDR1、CDR2及CDR3序列係具有表1之抗體63或表2之抗體79中詳述之胺基酸序列；或前述任一者之變體；以及(ii)包含輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列之輕鏈可變區，其中該輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列係具有表1之抗體63或表2之抗體79中詳述之胺基酸序列；或前述任一者之變體。
此等係非限制性例示之實例，並且該等抗體可具有本文所提供之表中詳述的CDR並且係在沒有寫出前述關於每一CDR集情況下之明確引用。
於一些態樣中，該MAdCAM抗體係包含如本文所提供之VH及VL(VK)鏈，諸如表7中列述之彼等。於一些態樣中，該VH肽係包含SEQ ID NO：414、591或599之序列。於一些態樣中，該VK鏈係包含415、592或600之序列。於一些態樣中，該抗體係包含SEQ ID NO：414之VH及SEQ ID NO：415之VK。於一些態樣中，該抗體係包含SEQ ID NO：591之VH及SEQ ID NO：592之VK。於一些態樣中，該抗體係包含SEQ ID NO：599之VH及SEQ ID NO：600之VK。該VH及VK亦可係如表6中例示性說明之scFV格式。
於一些態樣中，係提供包含下列多肽之一者或多者的治療劑：
Figure 109116695-A0202-12-0190-194
Figure 109116695-A0202-12-0191-195
Figure 109116695-A0202-12-0192-196
於一些態樣中，該多肽係包含SEQ ID NO：620、622或624之一個肽以及SEQ ID NO：621、623或625之第二肽。於一些態樣中，係提供包含多肽，該多肽係包含SEQ ID NO：620之第一肽以及包含SEQ ID NO：621之序列的第二肽。於一些態樣中，係提供包含多肽，該多肽係包含SEQ ID NO：620之第一肽以及包含SEQ ID NO：623之序列的第二肽。於一些態樣中，係提供包含多肽，該多肽係包含SEQ ID NO：620之第一肽以及包含SEQ ID NO：625之序列的第二肽。於一些態樣中，係提供包含多肽，該多肽係包含SEQ ID NO：622之第一肽以及包含SEQ ID NO：621之序列的第二肽。於一些態樣中，係提供包含多肽，該多肽係包含SEQ ID NO：622之第一肽以及包含SEQ ID NO：623之序列的第二 肽。於一些態樣中，係提供包含多肽，該多肽係包含SEQ ID NO：622之第一肽以及包含SEQ ID NO：625之序列的第二肽。於一些態樣中，係提供包含多肽，該多肽係包含SEQ ID NO：624之第一肽以及包含SEQ ID NO：621之序列的第二肽。於一些態樣中，係提供包含多肽，該多肽係包含SEQ ID NO：624之第一肽以及包含SEQ ID NO：623之序列的第二肽。於一些態樣中，係提供包含多肽，該多肽係包含SEQ ID NO：624之第一肽以及包含SEQ ID NO：625之序列的第二肽。
於一些態樣中，該多肽係指為抗體或抗原結合蛋白質。
於一些態樣中，如本文所提供，該MAdCAM抗體或其結合片段係直接或間接鏈結至PD-1抗體或其結合片段。
於一些態樣中，如本文所提供，該MAdCAM抗體或其結合片段係直接或間接鏈結至IL-2突變蛋白質或其結合片段。該IL-2突變蛋白質可係如本文所提供之任意突變蛋白質或熟悉該技藝者已知之其它IL-2突變蛋白質。
於一些態樣中，如果該治療性化合物係包含Fc部位，則該Fc域(部位)係攜帶突變以使得該Fc區為不能結合FcR之「非效應子」。使得Fc區為非效應子之突變係已知者。於一些態樣中，根據已知編號系統編號的Fc區中之突變係選自下列所組成之群組：K322A、L234A、L235A、G237A、L234F、L235E、N297、P331S、或其任意組合。於一些態樣中，該等Fc突變係包含位於L234及/或L235及/或G237處之突變。於一些態樣中，該等Fc突變係包含L234A突變及/或L235A突變，其可指為LALA 突變。於一些態樣中，該等Fc突變係包含L234A、L235A及G237A突變。
本文係揭露鏈結基區多肽、治療性肽、編碼該多肽之核酸(例如，治療性化合物)、包含該核酸序列之載體、以及包含該核酸或載體之細胞。
治療性化合物可包含複數個特異性靶向部分。於一些態樣中，該治療性化合物係包含複數個供體特異性靶向部分、供體特異性靶向部分之複數個拷貝、或複數個組織特異性靶向部分。於一些態樣中，治療性化合物係包含第一及第二供體特異性靶向部分，例如，對於第一供體靶標為特異性之第一供體特異性靶向部分以及對於第二供體靶標為特異性之第二供體特異性部分，例如，其中該第一及第二靶標係見於相同供體組織。於一些態樣中，該治療性化合物係包含，例如，用於第一組織特異性靶標之第一特異性靶向部分以及用於第二供體靶標之第二供體特異性部分，例如，其中該第一及第二靶標係見於相同或不同之靶標組織。
於一些態樣中，治療性化合物係包含複數個效應子結合/調控部分，該等部分係各自包含ICIM結合/調控部分，ICIM結合/調控部分之數目係足夠低，使得該等ICIM結合/調控部分之配位子於免疫細胞的群聚(於不存在靶標結合之情況下)得以最小化，例如，以避免在不存在該治療性化合物結合至靶標之情況下對免疫細胞的全身性促效作用。
於一些態樣中，該治療性化合物係具有從N端至C端之式：
A1---鏈結基A---A2---鏈結基B---A3
A3---鏈結基A---A2---鏈結基B---A1，
其中，
A1及A3係各自獨立包含效應子結合/調控部分，例如，ICIM結合/調控部分、IIC結合/調控部分、ICSM結合/調控部分、或SM結合/調控部分；或特異性靶向部分；
A2係包含Fc區或不存在；以及
鏈結基A及鏈結基B係各自為獨立之鏈結基。
於一些態樣中，
A1係包含IL-2突變蛋白質分子，
A3係包含特異性靶向部分，例如，抗人MAdCAM Ab諸如scFv，
A2係包含Fc區，以及
鏈結基A及鏈結基B係各自為復包含甘胺酸/絲胺酸鏈結基的獨立之鏈結基。
於一些態樣中，係提供多肽，其中該多肽係包含下式之肽：
Ab-恆定域-鏈結基A-IL2突變蛋白質-鏈結基B-Fc區，其中該Ab係結合至MAdCAM之可變重鏈域，該恆定域係Ig恆定域諸如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4，鏈結基A係鏈結基諸如本文中提供之彼等，以及，該IL2突變蛋白質係IL-2突變蛋白質諸如本文共提供之彼等。於一些態樣中，該可變重域係如表7中例示之可變重鏈域。於一些態樣中，該可變重鏈域係包含表7之純株ID：6、75或79的可變重鏈域。於一些態樣中，該可變重鏈域係包含表7之6、75或79之重域的CDR。於一些態樣中，該VH係包含SEQ ID NO：414、SEQ ID NO：591及SEQ ID NO：599之序列。
於一些態樣中，該恆定域係包含IgG1恆定域諸如本文中提供之彼等。於一些態樣中，該恆定域係包含突變以使得該恆定區為不能結合FcR之「非效應子」。使得恆定區為非效應子之突變係已知者。於一些態樣中，根據已知編號系統編號的恆定區中之突變係選自下列所組成之群組：K322A、L234A、L235A、G237A、L234F、L235E、N297、P331S、或其任意組合。於一些態樣中，該等恆定區突變係包含位於L234及/或L235及/或G237處之突變。於一些態樣中，該等恆定區突變係包含L234A突變及/或L235A突變，其可指為LALA突變。於一些態樣中，該等恆定區突變係包含L234A、L235A及G237A突變。於一些態樣中，該恆定域係包含SEQ ID NO：44。
於一些態樣中，該可變重鏈域係包含SEQ ID NO：90之第一CDR、SEQ ID NO：91之第二CDR、以及SEQ ID NO：92之第三CDR。於一些態樣中，該可變重鏈域係包含SEQ ID NO：359之第一CDR、SEQ ID NO：170之第二CDR、以及SEQ ID NO：360之第三CDR。於一些態樣中，該可變重鏈域係包含SEQ ID NO：135之第一CDR、SEQ ID NO：381之第二CDR、以及SEQ ID NO：382之第三CDR。此等僅係例示，並且亦提供如本文及表中詳述者之CDR集。
於一些態樣中，該鏈結基A係甘胺酸/絲胺酸鏈結基，其可係本文提供之任意甘胺酸/絲胺酸鏈結基。於一些態樣中，該鏈結基係GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)或GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)之序列。此等係非限制性實例，並且該鏈結基可具有不同數量之GGGGS(SEQ ID NO：23)或GGGGA重 複(SEQ ID NO：29)、或兩者之混合物。於一些態樣中，該鏈結基係包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個GGGGS(SEQ ID NO：23)及/或GGGGA重複(SEQ ID NO：29)。於一些態樣中，該鏈結基之長度係10個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係5個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係15個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係20個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係25個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係30個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係35個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係5至50個胺基酸。
於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：31之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：32之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：33之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：34之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：35之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：36之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：37之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：38之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：39之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：40之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：41之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質復包含T3A取代(突變)。於一些態樣中，該Fc區係包含具有SEQ ID NO：21之序列的肽。於一些態樣中，該Fc區係包含具有SEQ ID NO：28之序列的肽。於一些態樣中，該Fc區之C端係鏈結至該可變重鏈或IL-2突變蛋 白的N端或C端。於一些態樣中，將該Fc區鏈結至該可變重鏈或IL-2突變蛋白質之鏈結基係甘胺酸/絲胺酸或甘胺酸/丙胺酸鏈結基。於一些態樣中，將該Fc區鏈結至該可變重鏈或IL-2突變蛋白質之C端或N端的鏈結基係甘胺酸/絲胺酸鏈結基，其可係GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)或GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)之序列。此等係非限制性實例，並且該鏈結基可具有不同數量之GGGGS(SEQ ID NO：23)或GGGGA重複(SEQ ID NO：29)、或兩者之混合物。於一些態樣中，該鏈結基係包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個GGGGS(SEQ ID NO：23)及/或GGGGA重複(SEQ ID NO：29)。於一些態樣中，該鏈結基之長度係10個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係5個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係15個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係20個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係25個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係30個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係35個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係5至50個胺基酸。
於一些態樣中，該多肽復包含式VL-恆定域輕之多肽，其中VL係可變輕鏈，並且恆定域輕係IgG輕鏈恆定域，其中該多肽可係具有式Ab-恆定域-鏈結基A-IL2突變蛋白質-鏈結基B-Fc區之多肽或可與之相關聯之多肽。於一些態樣中，該VL係包含SEQ ID NO：415、SEQ ID NO：592或SEQ ID NO：600之序列。此等僅係例示，並且該VL域可係本文中諸如表7中提供之VL/VK序列。於一些態樣中，該可變輕鏈域係包含SEQ ID NO：93之第一CDR、SEQ ID NO：87之第二CDR、以及SEQ ID NO：94之第三CDR。於一些態樣中，該可變輕鏈域係包含SEQ ID NO： 361之第一CDR、SEQ ID NO：362之第二CDR、以及SEQ ID NO：363之第三CDR。於一些態樣中，該可變重鏈域係包含SEQ ID NO：383之第一CDR、SEQ ID NO：384之第二CDR、以及SEQ ID NO：385之第三CDR。此等僅係例示，並且亦提供如本文及表中詳述者之CDR集。
於一些態樣中，該恆定域亦包含突變以使該效應子功能無效，諸如本文中提供之彼等。於一些態樣中，該恆定域輕係包含下列之序列：
Figure 109116695-A0202-12-0199-197
Figure 109116695-A0202-12-0199-198
(SEQ ID NO：45)
式IL2突變蛋白質-鏈結基A-Fc區-鏈結基B-Ab及VL-恆定域輕之不同多肽可彼此互換。於一些態樣中，該多肽係包含可變重鏈及可變輕鏈，該可變重鏈係包含SEQ ID NO：90之第一CDR、SEQ ID NO：91之第二CDR及SEQ ID NO：92之第三CDR，該可變輕鏈係包含SEQ ID NO：93之第一CDR、SEQ ID NO：87之第二CDR及SEQ ID NO：94之第三CDR。於一些態樣中，該多肽係包含可變重鏈及可變輕鏈，該可變重鏈係包含SEQ ID NO：359之第一CDR、SEQ ID NO：170之第二CDR及SEQ ID NO：360之第三CDR，該可變輕鏈係包含SEQ ID NO：361之第一CDR、SEQ ID NO：362之第二CDR及SEQ ID NO：363之第三CDR。於一些態樣中，該多肽係包含可變重鏈及可變輕鏈，該可變重鏈係包含SEQ ID NO：135之第一CDR、SEQ ID NO：381之第二CDR及SEQ ID NO：382之第三CDR，該可變輕鏈係包含SEQ ID NO：383之 第一CDR、SEQ ID NO：384之第二CDR及SEQ ID NO：385之第三CDR。此等係非限制性實例，並且於MAdCAM抗體表1及表2中例示之CDR組合亦可使用並提供於本文中。
於一些態樣中，係提供包含下式之化合物，從N端至C端：
IL2突變蛋白質-鏈結基A-Fc區-鏈結基B-Ab，其中該IL2突變蛋白質係任意IL-2突變蛋白質，其可例如優先活化Treg；該鏈結基A及鏈結基B係各自獨立為如本文所提供之鏈結基；該Fc區可係諸如本文所提供者之任一者；以及，該Ab係組織特異性部分諸如本文所提供之彼等。於一些態樣中，該Ab係結合至MAdCAM或另一細胞表面靶標之抗體，如本文中提供者。於一些態樣中，該抗體係scFV型式。於一些態樣中，該scFV型式之抗體係如表6中提供之抗體。於一些態樣中，該scFV型式之抗體係包含如表6或表7中詳述之CDR的抗體。
於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質之C端係鏈結至Fc區之N端。於一些態樣中，該鏈結係直接進行或透過鏈結基諸如本文揭示之彼等進行。於一些態樣中，該鏈結基係甘胺酸/絲胺酸鏈結基。於一些態樣中，將該IL-2突變蛋白質鏈結至該Fc區的鏈結基係甘胺酸/絲胺酸鏈結基，其可係GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)或GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)之序列。此等係非限制性實例，並且該鏈結基可具有不同數量之GGGGS(SEQ ID NO：23)或GGGGA重複序列(SEQ ID NO：29)、或兩者之混合物。於一些態樣中，該鏈結基係包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個GGGGS(SEQ ID NO：23)及/或GGGGA重複(SEQ ID NO：29)。於一些態樣中，該鏈結基之長度係10 個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係5個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係15個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係20個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係25個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係30個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係35個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係5至50個胺基酸。
於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：31之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：32之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：33之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：34之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：35之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：36之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：37之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：38之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：39之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：40之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：41之序列。於一些態樣中，該IL-2突變蛋白質復包含T3A取代(突變)。於一些態樣中，該Fc區係包含具有SEQ ID NO：21之序列的肽。於一些態樣中，該Fc區係包含具有SEQ ID NO：28之序列的肽。於一些態樣中，該Fc區之C端係鏈結至可變重鏈之N端。於一些態樣中，將該Fc區鏈結至該可變重鏈之鏈結基係甘胺酸/絲胺酸或甘胺酸/丙胺酸鏈結基。於一些態樣中，將該Fc區鏈結至該可變重鏈之N端的鏈結基係甘胺酸/絲胺酸鏈結基，其可係GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO：22)或GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)之序列。此等係非限制性實例，並且該鏈結基可具有不同數量之GGGGS(SEQ ID NO：23)或GGGGA重複(SEQ ID NO：29)、或兩者之混合物。於一些態樣中，該鏈結基係包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個GGGGS(SEQ ID NO：23)及/或GGGGA重複(SEQ ID NO：29)。於一些態樣中，該鏈結基之長度係10個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係5個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係15個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係20個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係25個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係30個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係35個胺基酸。於一些態樣中，該鏈結基之長度係5至50個胺基酸。
於一些態樣中，該可變重鏈係包含如表6或表7中詳述之CDR。於一些態樣中，該可變重鏈係包含HCDR1、HCDR2及HCDR3，其中該HCDR1、HCDR2及HCDR3係如表6或表7中所詳述。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株1詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株2詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株3詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株4詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株5詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株6詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有 如表6中關於純株7詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株8詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株9詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株10詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株11詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株12詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株13詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株14詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株15詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株16詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株17詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株1詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株18詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株19詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株20詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株21詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株22詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株 23詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株24詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株25詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株26詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株27詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株28詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株29詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株30詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株31詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株32詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株33詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株34詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株35詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株36詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株37詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株38詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株39詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株40詳述之 HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株41詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株42詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株43詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株44詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株45詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株46詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株47詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株48詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株49詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株50詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株51詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株52詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株53詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株54詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株55詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株56詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株57詳述之HCDR1、 HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株58詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株59詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株60詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株61詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株62詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株63詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株64詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株65詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株66詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。
於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株1詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株2詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株3詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株4詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株5詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株6詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株7詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株8詳述之HCDR1、 HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株9詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株10詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株11詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株12詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株13詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株14詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株15詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株16詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株17詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株1詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株18詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株19詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株20詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株21詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株22詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株23詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株24詳述之HCDR1、HCDR2及 HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株25詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株26詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株27詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株28詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株29詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株30詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株31詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株32詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株33詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株34詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株35詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株36詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株37詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株38詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株39詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株40詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株41詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於 一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株42詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株43詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株44詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株45詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株46詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株47詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株48詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株49詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株50詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株51詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株52詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株53詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株54詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株55詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株56詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株57詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株58詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣 中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株59詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株60詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株61詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株62詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株63詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株64詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株65詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株66詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株67詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株68詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株69詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株70詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株71詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株72詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株73詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株74詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株75詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變 重鏈係具有如表7中關於純株76詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株77詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株78詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株79詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株80詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株81詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株82詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株83詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株84詳述之HCDR1、HCDR2及HCDR3。
於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株1詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株2詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株3詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株4詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株5詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株6詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株7詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株8詳述之LCDR1、LCDR2 及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株9詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株10詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株11詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株12詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株13詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株14詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株15詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株16詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株17詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株1詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株18詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株19詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株20詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株21詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株22詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株23詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株24詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣 中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株25詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株26詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株27詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株28詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株29詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株30詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株31詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株32詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株33詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株34詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株35詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株36詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株37詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株38詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株39詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株40詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株41詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變 重鏈係具有如表6中關於純株42詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株43詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株44詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株45詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株46詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株47詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株48詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株49詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株50詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株51詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株52詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株53詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株54詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株55詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株56詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株57詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株58詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具 有如表6中關於純株59詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株60詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株61詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株62詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株63詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株64詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株65詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表6中關於純株66詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。
於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株1詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株2詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株3詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株4詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株5詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株6詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株7詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株8詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株9詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中 關於純株10詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株11詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株12詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株13詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株14詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株15詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株16詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株17詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株1詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株18詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株19詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株20詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株21詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株22詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株23詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株24詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株25詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株26詳述之 LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株27詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株28詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株29詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株30詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株31詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株32詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株33詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株34詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株35詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株36詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株37詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株38詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株39詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株40詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株41詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株42詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株43詳述之LCDR1、 LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株44詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株45詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株46詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株47詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株48詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株49詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株50詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株51詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株52詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株53詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株54詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株55詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株56詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株57詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株58詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株59詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株60詳述之LCDR1、LCDR2及 LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株61詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株62詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株63詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株64詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株65詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株66詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株67詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株68詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株69詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株70詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株71詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株72詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株73詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株74詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株75詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株76詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株77詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於 一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株78詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株79詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株80詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株81詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株82詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株83詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。於一些態樣中，該可變重鏈係具有如表7中關於純株84詳述之LCDR1、LCDR2及LCDR3。
於一些態樣中，該等CDR係彼此調換。舉例而言，純株1之HCDR1可取代為純株10之HCDR1，反之亦然。可對本文提供之純株之HCDR(例如，HCDR1調換為HCDR1；HCDR2調換為HCDR2；或HCDR3調換為HCDR3)或LCDR(例如，LCDR1調換為LCDR1；LCDR2調換為LCDR2；或LCDR3調換為LCDR3)的任一者進行這一CDR調換。因此，於一些態樣中，該抗體係包含如表6之純株1至66或表7之純株1至84之任一者中詳述之HCDR1、如表6之純株1至66或表7之純株1至84之任一者中詳述之HCDR2、如表6之純株1至66或表7之純株1至84之任一者中詳述之HCDR3、如表6之純株1至66或表7之純株1至84之任一者中詳述之LCDR1、如表6之純株1至66或表7之純株1至84之任一者中詳述之LCDR2、如表6之純株1至66或表7之純株1至84之任一者中詳述之LCDR3、或前述任一者之變體。
於一些態樣中，該MadCAM抗體係如純株6、59或63中所示之scFV型式。如彼等序列中所示之鏈結基可係20個胺基酸殘基之長度，但亦可係5、10或15個胺基酸殘基之長度。於一些態樣中，鏈結該抗體之VH及VL(或VK)序列的鏈結基係甘胺酸/絲胺酸鏈結基，其可係GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)或GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)之序列。此僅係非限制性實例，並且該鏈結基可具有不同數量之GGGGS(SEQ ID NO：23)或GGGGA重複(SEQ ID NO：29)。於一些態樣中，該鏈結基係包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個GGGGS(SEQ ID NO：23)或GGGGA重複(SEQ ID NO：29)。因此，表6中所述之鏈結基係非限制性實例，並且可經任意其它鏈結基諸如本文所提供之彼等取代。
於一些態樣中，該多肽係包含下列式：
Figure 109116695-A0202-12-0221-199
Figure 109116695-A0202-12-0221-202
-鏈結基1-
Figure 109116695-A0202-12-0221-200
Figure 109116695-A0202-12-0221-203
-鏈結基2-Ab，
其中鏈結基1、鏈結基2及Ab係如本文所提供者。於一些態樣中，鏈結基1係GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)或GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)。於一些態樣中，鏈結基2係GGGGS(SEQ ID NO：23)。於一些態樣中，鏈結基2係GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：619)。於一些態樣中，鏈結基2係GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)。於一些態樣中，Ab係MAdCAM Ab表1中詳述之scFV。於一些態樣中，該Ab係包含SEQ ID NO：95之序列。於一些態樣中，該Ab係包含SEQ ID NO：364之序列。於一些態樣中，該Ab係包含SEQ ID NO：386之序列。於一些態樣中，該Ab係包含VH鏈段以及VK或VL鏈段。於一些態樣中，該VH係包含表7中詳述之序列。於一些態樣中，該VK係包含表7中詳述之序列。於一些態樣中，該Ab係包含表7中關於純株詳述之VH及VK。於一些態樣中，該VH與VK係藉由鏈結基鏈結。於一些態樣中，該VH與VK係藉由包含GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)之肽的肽鏈結基鏈結。於一些態樣中，該VH與VK係藉由包含GGGGS之肽的肽鏈結基鏈結。於一些態樣中，該VH與VK係藉由包含GGGGSGGGG(SEQ ID NO：619)之肽的肽鏈結基鏈結。於一些態樣中，該VH與VK係藉由包含GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)之肽的肽鏈結基鏈結。
於一些態樣中，該Ab係包含SEQ ID NO：414之VH及SEQ ID NO：415之VK。於一些態樣中，該Ab係包含SEQ ID NO：591之VH及SEQ ID NO：592之VK。於一些態樣中，該Ab係包含SEQ ID NO：599之VH及SEQ ID NO：600之VK。
於一些態樣中，該肽係包含：
Figure 109116695-A0202-12-0223-204
其中Ab係如本文中所詳述。於一些態樣中，該Ab係包含SEQ ID NO：95之序列。於一些態樣中，該Ab係包含SEQ ID NO：364之序列。於一些態樣中，該Ab係包含SEQ ID NO：386之序列。於一些態樣中，該Ab係包含VH鏈段以及VK或VL鏈段。於一些態樣中，該VH係包含表7中詳述之序列。於一些態樣中，該VK係包含表7中詳述之序列。於一些態樣中，該Ab係包含表7中關於純株詳述之VH及VK。於一些態樣中，該VH與VK係藉由鏈結基鏈結。於一些態樣中，該VH與VK係藉由包含GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)之肽的肽鏈結基鏈結。於一些態樣中，該VH與VK係藉由包含GGGGS(SEQ ID NO：23)之肽的肽鏈結基鏈結。於一些態樣中，該VH與VK係藉由包含GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：619)之肽的肽鏈結基鏈結。
於一些態樣中，該Ab係包含SEQ ID NO：414之VH及SEQ ID NO：415之VK。於一些態樣中，該Ab係包含SEQ ID NO：591之VH及SEQ ID NO：592之VK。於一些態樣中，該Ab係包含SEQ ID NO：599之VH及SEQ ID NO：600之VK。此等實例係非限制性，並且亦提供如表7中所示之VH與VK的組合。
於一些態樣中，該治療性化合物或多肽係包含抗-PD-1重鏈及輕鏈之式，其中該PD-1重鏈係於該PD-1 IgG重鏈之C端鏈結至MAdCAM抗體(scFV)諸如本文所提供之彼等。該多肽可具有式A1-A2-鏈結基1-A4-鏈結基2-A5及A6，其中A1係PD-1重鏈；A6係PD-1輕鏈；A2係IgG恆定域(例如，IgG1恆定域)；鏈結基1係如本文所提供者諸如但不限於甘胺酸/絲胺酸鏈結基，其可係GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)或GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)之序列，此等僅係非限制性實例，並且該鏈結基可具有不同數目之GGGGS(SEQ ID NO：23)或GGGGA(SEQ ID NO：29)重複，並且於一些態樣中，該鏈結基係包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個GGGGS(SEQ ID NO：23)或GGGGA(SEQ ID NO：29)重複；A4係VH域，諸如表7中詳述之彼等；鏈結基2係如本文所提供者諸如但不限於甘胺酸/絲胺酸鏈結基，其可係GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)或GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)之序列，此等僅係非限制性實例，並且該鏈結基可具有不同數目之GGGGS(SEQ ID NO：23)或GGGGA(SEQ ID NO：29)重複，並且於一些態樣中，該鏈結基係包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個GGGGS(SEQ ID NO：23)或GGGGA(SEQ ID NO：29)重複；以及，A5係VK/VL域，諸如表7中詳述之彼等。於一些態樣中，鏈結基2係GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)。於一些態樣中，該A4-鏈結基2-A5係scFV抗體，諸如表6中詳述之彼等。表6中所述之鏈結基可取代為GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)之鏈結基。於一些態樣中，該A4-鏈結基2-A5係包含如表6或表7中詳述之HCDR集(例如，HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3)。為了避免產生疑問，CDR集係指例示用於該等表中提供之不同抗體純株之每一種的CDR。於一些態樣中，A4係包含SEQ ID NO：414之肽，並且A5係包含SEQ ID NO：415之肽。於一些態樣中，A4係包含SEQ ID NO：591之肽，並且A5係包含SEQ ID NO：592之肽。於一些態樣中，A4係包含SEQ ID NO：599之肽，並且A5係包含SEQ ID NO：600之肽。此等實例係非限制性，並且亦提供如表7中所示之VH與VK的組合。
於一些態樣中，A2係包含下列之序列：
Figure 109116695-A0202-12-0225-205
(SEQ ID NO：44)
一旦被表現，該PD-1抗體之重鏈及輕鏈係結合至彼此以形成包含鏈結至抗-MAdCAM抗體之抗-PD-1抗體的化合物。該抗-MAdCAM抗體可係任意抗體，其係結合至MAdCAM，諸如本文所提供之彼等。
衍生自參考物質例如人類多肽之多肽
於一些態樣中，治療性分子之組分係衍生自或基於參考分子，例如，於用於人體內之治療性分子的情況下，係衍生自天然出現之人類多肽。例如，於一些態樣中，全部或部分之CD39分子、CD73分子、細胞表面分子結合劑、供體特異性靶向部分、效應子結合分子、ICIM結合/調控部分、IIC結合/調控部分、抑制性免疫檢查點分子配位子分子、抑制性分子相對配位子分子、SM結合/調控部分、特異性靶向部分、靶標配位子結合分、或組織特異性靶向部分，可係基於或衍生自天然出現之人類多肽。例如，PD-L1分子可係基於或衍生自人類PD-L1序列。
於一些態樣中，治療性化合物組分例如PD-L1分子係：
a)包含天然出現形式之人類多肽的全部或部位例如活性部位；
b)包含具有出現於資料庫例如2017年1月11日之GenBank資料庫中之序列的人類多肽的全部或部位例如活性部位，該人類多肽係不與疾病狀態相關聯之天然出現形式的人類多肽；
c)包含具有與a)或b)之序列相異不超過1、2、3、4、5、10、20或30個胺基酸殘基之序列的人類多肽；
d)包含具有與a)或b)之序列相異不超過1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%或30%胺基酸殘基之序列的人類多肽；
e)包含具有與a)或b)之序列實質上無相異之序列的人類多肽；或
g)包含具有c)、d)或e)之序列的人類多肽，其在生物學活性例如增強或抑制免疫應答方面與具有a)或b)之序列的人類多肽實質上無相異之處。
於一些態樣中，治療性化合物可包含複數個效應子結合/調控部分。舉例而言，治療性化合物可包含選自下列之兩者或多者：
(a)ICIM結合/調控部分；(b)IIC結合/調控部分；(c)SM結合/調控部分；或(d)ICSM結合/調控部分。於一些態樣中，舉例而言，治療性化合物可包含複數個例如兩個ICIM結合/調控部分(其中它們可係相同或相異)；舉例而言，兩個活化或促效PD-1之部分；複數個例如兩個IIC結合/調控部分(其中它們可係相同或相異)；複數個例如兩個SM結合/調控部分(其中它們可係相同或相異)；或複數個例如兩個ICSM結合/調控部分(其中它們可係相同或相異)。於一些態樣中，該治療性化合物可包含ICIM結合/調控部分及IIC結合/調控部分；ICIM結合/調控部分及SM結合/調控部分；IIC結合/調控部分及SM結合/調控部分；ICIM結合/調控部分及ICSM結合/調控部分；IIC結合/調控部分及ICSM結合/調控部分；或ICSM結合/調控部分及SM結合/調控部分。於一些態樣中，該治療性化合物係包含複數個靶向部分。於一些態樣中，該等靶向部分可係相同或相異。
藥物組成物及套組
於另一方面，本發明之態樣係提供組成物，例如，藥學可接受之組成物，其係包括與藥學可接受之載體配置在一起的本文所揭示之治療性化合物。如本文中所用，「藥學可接受之載劑」係包括生理學相容之任意及全部溶劑、分散介質、等張劑及吸收延遲劑等。
該載劑可係適用於靜脈內給藥、肌肉內給藥、皮下給藥、胃腸外給藥、直腸給藥、局部給藥、眼內給藥、外用給藥、脊髓給藥或表皮給藥(例如，藉由注射或輸注)。如本文中所用，術語「載劑」係意指化合物可與之一起給藥的稀釋劑、佐劑或賦形劑。於一些態樣中，藥學載劑亦可係液體諸如水及油類，包括石油、動物、植物或合成來源之彼等，諸如花生油、大豆油、礦物頭、芝麻油等。該等藥學載劑亦可係鹽水、阿拉伯樹膠、明膠、澱粉糊、滑石、角蛋白、膠質氧化矽、尿素等。此外，可使用佐劑、安定劑、增稠劑、潤滑劑及著色劑。該等載劑可用於包含本文所提供之治療性化合物的藥物在組成物中。
本文所提供之態樣的組成物及化合物可係多種形式。此等係包括，舉例而言，液體、半固體及固體劑型，諸如溶液(例如，可注射溶液及可輸注溶液)、分散液、懸浮液、脂質體及栓劑。較佳之形式係取決於所希望之給藥模式及治療性應用。典型之組成物係可注射或可輸注溶液之形式。於一些態樣中，該給藥模式係胃腸外(例如，靜脈內、皮下、腹膜內、肌肉內)給藥。於一些態樣中，該治療性分子係藉由靜脈內輸液或注射而給藥。於另一態樣中，該治療性分子係藉由肌肉內或皮下注射而給藥。於另一態樣中，該治療性分子係例如藉由注射局部給藥或外用施加至靶標位點。
如本文中所用，短語「胃腸外給藥」及「胃腸外地給藥」係意指除腸內及外用給藥之外的給藥模式，通常係藉由注射進行，並且包括而不限於靜脈內、肌肉內、動脈內、鞘內、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、氣管內、皮下、皮內、關節內、包膜下、蛛網膜內腔、椎管內、硬膜外及胸骨內注射及輸注。
治療性組成物於製造及儲存條件下典型應係無菌且安定。該組成物可配製為溶液、微乳液、分散液、脂質體或其它適用於高治療性化合物濃度之有序結構。無菌之可注射溶液可藉由按需要將所需量之活性化合物(亦即，治療性分子)於適宜溶劑中與上文枚舉之成分的一種或多種組合合併，必要時，之後進行無菌過濾而製備。通常，分散於係藉由將該活性化合物併入含有基礎分散介質以及來自上文枚舉之彼等之其它所需成分的無菌媒介物中而製備。於用於製備無菌可注射溶液之無菌粉末的情況下，較佳之製備方法係真空乾燥及冷凍乾燥，其係獲得活性成分加上任意添加之來自先前所述之其無菌過濾溶液之所欲成分的粉末。溶液之適宜流動性可藉由例如使用包衣諸如卵磷脂、藉由在分散劑之情況下保留所需之粒度、以及藉由使用界面活性劑予以保持。可注射組成物之延長的吸收可藉由在該組成物中包括延遲吸收之劑例如單硬脂酸鹽類及明膠而帶來。
如熟練技術人士將了解者，給藥路徑及/或模式將依據所欲之結果而變。於某些態樣中，該活性化合物可使用將保護該化合物免於快速釋放之載劑製備，諸如控制釋放製劑，包括移植物、穿皮貼劑、以及微膠囊化遞送系統。可使用生物可降解、生物相容聚合物，諸如乙烯醋酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯及聚乳酸。此類製劑之多種製備方法業經專利化或係彼等熟識該技藝之人士通常所知者。參見，例如，《緩釋及控釋藥物遞送系統》(Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems,J.R.Robinson,ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York,1978)。
於某些態樣中，治療性化合物可係口服給藥，例如，與惰性稀釋劑或可吸收之食用載劑一起口服給藥。該化合物(若需要，以及其它成 分)亦可密封於硬殼或軟殼明膠膠囊中，壓製為片劑，或直接併入受驗者之飲食中。對於口服治療劑給藥，該等化合物可與賦形劑合併並且以可消化之片劑、口頰片劑、錠劑、膠囊劑、酏劑、懸浮劑、糖漿劑、粉片等形式使用。為了藉由除胃腸外給藥以外之途徑給藥化合物，可能必需使用材料包覆該化合物或將該化合物與材料聯合給藥，以防止該化合物失活。治療性化合物亦可與該技藝中已知之醫療裝置一起給藥。
劑量方案係經調整以提供最優之所欲應答(例如，治療性應答)。例如，可一次性給藥，可隨著時間推移給藥若干個經分割之劑量，或根據治療狀況之迫切需要而按比例減少或增加劑量。尤其較佳者係以易於給藥及劑量均勻性之劑量單位形式配製胃腸外組成物。如本文中所用，劑量單位形式係指適合作為用於待治療受驗者之單一劑量的物理上離散之單位；每一單位係含有經計算以產生所欲之療效的預設量之活性化合物以及與之關聯之所需的藥學載劑。該將單位形式之規格係由下述者規定並且直接取決於下述者：(a)該活性化合物之獨特特徵以及待達成之特定療效，以及(b)配合此用於治療個體敏感性之活性化合物之技藝的固有限制性。
治療性化合物之治療有效量或預防有效量的一個例示性非限制性範圍係0.1至30mg/kg，更佳係1至25mg/kg。該治療性化合物之劑量及治療方案可由熟練之專業人士確定。於某些態樣中，該治療性化合物係藉由注射(例如，皮下注射或靜脈注射)以約1至40mg/kg，例如1至30mg/kg，例如約5至25mg/kg、約10至20mg/kg、約1至5mg/kg、1至10mg/kg、5至15mg/kg、10至20mg/kg、15至25mg/kg、或約3mg/kg之劑量給藥。投藥排程可從例如每週一次至每2週一次、每3週一 次或每4週一次變化。於一個態樣中，該治療性化合物係以每兩週約10至20mg/kg之劑量給藥。該治療性化合物可藉由靜脈內輸注以大於20mg/min，例如20至40mg/min，並且典型大於或等於40mg/min之速率給藥，以達到約35至440mg/m2，典型約70至310mg/m2，且更典型約110至130mg/m2之劑量。於多個態樣中，約110至130mg/m2之輸注速率係達成約3mg/kg之水準。於其它態樣中，該治療性化合物可藉由靜脈內輸注以小於10mg/min，例如小於或等於5mg/min之速率給藥，以達到約1至100mg/m2，例如約5之50mg/m2，約7至25mg/m2，或約10mg/m2之劑量。於一些態樣中，該治療性化合物係於約30min之期間內輸注。應注意，劑量值可根據待緩解之症狀的類型及嚴重性而變。應進一步理解，對於任意特定受驗者，應隨時間推移而根據個體需要以及給藥該組成物或監督該組成物之給藥至人士的專業判斷來調整具體劑量方案，以及本文中詳述之劑量範圍係僅為例示性並且不試圖限制所請之組成物的範疇或實踐。
該藥物組成物可包括「治療有效量」或「預防有效量」之治療性分子。「治療有效量」係指在以必需之劑量及時間段達成所欲之治療性結果中有效的量。治療性分子之治療有效量可根據多種因素改變，諸如個體之疾病狀態、年齡、性別及體重、以及該治療性化合物於該個體中引起所欲應答的能力。治療有效量亦係下述之量，於該量下，治療性分子之任意毒性或有害效果係為治療性有益效果所超過。「治療有效劑量」較佳係抑制可量測之參數例如免疫攻擊，相對於未治療之受驗者，抑制程度係至少約20%，更佳至少約40%，甚至更佳至少約60%，並且再更佳至少約 80%。化合物抑制可量測之參數例如免疫攻擊的能力可於預測移植物排斥作用或自體免疫性疾患之動物模型系統中評估。或者，組成物之這一特性可透過藉由熟練行業者已知之檢定檢查該化合物抑制能力諸如體外抑制作用而評估。
「預防有效量」係指在以必需之劑量及時間段達成所欲之預防性結果中有效的量。典型地，由於預防劑量係於疾病早期之前或疾病早期用於受驗者，該預防有效量將係小於該治療有效量。
亦處於該等態樣範疇內者係包含本文所揭示之治療性化合物的套組。該套組可包括一種或多種其它元件，包括：使用說明；其它試劑，例如，標記物、治療劑、可用於將治療性分子螯合或以其它方式偶聯至標記物或其它治療劑之劑、或放射保護性組成物；用於製備該用於給藥之治療性分子的裝置或其它材料；藥學可接受之載劑；以及用於給藥至受驗者之裝置或其它材料。
於一些態樣中，本文所提供之態樣亦包括但不限於：
1.一種治療性化合物，其係包含：
i)一個選自下列之特異性靶向部分：
a)供體特異性靶向部分，其係例如優先結合供體靶標；或
b)組織特異性靶向部分，其係例如優先結合受驗者之靶標組織；以及
ii)選自下列之效應子結合/調控部分：
(a)免疫細胞抑制分子結合/調控部分(ICIM結合/調控部分)；
(b)免疫抑制性免疫細胞結合/調控部分(IIC結合/調控部分)；或
(c)效應子結合/調控部分，其作為治療性化合物之一部分，係例如藉由在靶標附近提供抑制或最小化該靶標之免疫系統造成之攻擊而促成免疫抑制性局部微環境(SM結合/調控部分)。
2.如態樣1之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分係直接結合並活化抑制性受體。
3.如態樣2之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分係抑制性免疫檢查點分子。
4.如態樣1至3中任一者之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分係由免疫細胞表現。
5.如態樣4之治療性化合物，其中該免疫細胞係對不希望之免疫應答有所貢獻。
6.如態樣4或5之治療性化合物，其中該免疫細胞係造成疾病之病理。
7.如態樣1之治療性化合物，其中當該治療化合物透過靶向部分結合至靶標時，該治療性分子促效該效應子結合/調控所結合至分子的能力比當該治療性化合物不透過靶向部分結合至靶標時較大例如2、5、10、100、500或1,000倍。
8.如態樣1至7之治療性化合物，其中作為單體結合(或當該治療性化合物未經多聚化而結合)至其同源配位子例如抑制性免疫檢查點分子，係不促效或實質上不促效該同源配位子。
9.如態樣1至8之治療性化合物，其中就治療有效劑量之治療性化合物而言，存在該效應子結合/調控部分所結合之分子的顯著、系統性之促效作用。
10.如態樣1至9之治療性化合物，其中就治療有效劑量之治療性化合物而言，該效應子結合/調控部分所結合之分子的促效作用係實質上僅出現在該靶向部分所結合之靶標位點處。
11.如態樣1至9之治療性化合物，其中該治療性化合物與其同源配位子例如抑制性免疫檢查點分子之結合，並不抑制或實質上不抑制內源性相對配位子與天然配位子例如抑制性免疫檢查點分子之結合。
12.如態樣1至11之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分與其同源配位子之結合，係抑制內源性對應配位子與該效應子結合/調控部分之同源配位子的結合少於60%、50%、40%、30%、20%、10%、或5%。
14.如態樣1至11之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分與該同源配位子之結合係實質上不導致對該效應子結合/調控分子之同源配位子的拮抗作用。
15.如態樣1之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分係包含ICIM結合/調控部分。
16.如態樣15之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分係包含ICIM結合/調控部分，該ICIM結合/調控部分係包含抑制性免疫檢查點分子配位子。
17.如態樣16之治療性化合物，其中該抑制性免疫分子相對配位子分子係包含PD-L1分子。
18.如態樣15之治療性化合物，其中該ICIM係其中該抑制性免疫分子相對配位子分子與選自PD-1、KIR2DL4、LILRB1、LILRB或CTLA-4的同源抑制性免疫檢查點分子接合。
19.如態樣18之治療性化合物，其中該ICIM係抗體。
20.如態樣18之治療性化合物，其中該ICIM係包含結合至PD-1、KIR2DL4、LILRB1、LILRB或CTLA-4的抗體。
21.如態樣20之治療性化合物，其中該抗體係結合至PD-1之抗體。
22.如態樣20之治療性化合物，其中該抗體係結合至PD-1之抗體並且係PD-1促效劑。
23.如態樣20之治療性化合物，其中該抗體係結合至PD-1之抗體並且當繫結於靶標位點時係PD-1促效劑。
24.如態樣16之治療性化合物，其中該抑制性免疫分子相對配位子分子係包含HLA-G分子。
25.如態樣15之治療性化合物，其中該ICIM係其中該抑制性免疫分子相對配位子分子與選自PD-1、KIR2DL4、LILRB1、LILRB或CTLA-4的同源抑制性免疫檢查點分子接合。
26.如態樣15之治療性化合物，其中該抑制性免疫分子相對配位子分子與選自表1的同源抑制性免疫檢查點分子接合。
27.如態樣15之治療性化合物，其中，當作為單體結合至其同源抑制性免疫檢查點分子時，其不促效或實質上不促效該抑制性免疫檢查點分子。
28.如態樣15之治療性化合物，其中該抑制性免疫分子相對配位子係與天然出現之抑制性免疫檢查點分子配位子具有至少60%、70%、80%、90%、95%、99%、或100%的同一性。
29.如態樣1之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分係包含ICIM結合/調控部分，該部分係包含對細胞表面抑制性分子起作用的功能性抗體分子。
30.如態樣1之治療性化合物，其中該細胞表面抑制性分子係抑制性免疫檢查點分子。
31.如態樣30之化合物，其中該抑制性免疫檢查點分子係選自PD-1、KIR2DL4、LILRB1、LILRB2、CTLA-4，或選自表1。
32.如態樣1至31中任一者之治療性化合物，其中，該治療性化合物於治療有效劑量下之全身性免疫抑制水準係低於使用全身性免疫壓制劑照護之標準所給出者(若相關)，或係低於等莫耳量之游離(並非作為治療性化合物之組分)效應子結合/調控分子所給出者。
33.如態樣1至32之治療性化合物，其中，例如，該治療性化合物於治療有效劑量下之全身性免疫活化水準係低於等莫耳量之游離(並非作為治療性化合物之組分)效應子結合/調控分子所給出者。
34.如態樣1至33之治療性化合物，其復包含第二效應子結合/調控部分。
35.如態樣34之治療性化合物，其中該第二效應子結合/調控部分係結合不同於該效應子結合/調控部分之靶標。
36.如態樣34或35之治療性化合物，其中該第二效應子結合/調控部分係包含IIC結合/調控部分。
.如態樣34或35之治療性化合物，其中該第二效應子結合/調控部分係包含SM結合/調控部分。
37.如態樣1之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分係包含IIC結合/調控部分。
38.如態樣1之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分係包含IIC結合/調控部分，該部分係於該靶標位點增加、召集或蓄積免疫壓制性免疫細胞。
39.如態樣1之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分係包含細胞表面分子結合劑，其係結合或特異性地結合免疫壓制性免疫細胞的細胞表面分子。
40.如態樣1之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分係包含細胞表面分子配位子分子，其係結合或特異性地結合免疫壓制性免疫細胞的細胞表面分子。
41.如態樣1之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分係包含抗體分子，其係結合免疫壓制性免疫細胞的細胞表面分子。
42.如態樣38至41中任一者之治療性化合物，其中該免疫壓制性免疫細胞係包含T調節細胞諸如Foxp3+CD25+ T調節細胞。
43.如態樣1至42中任一者之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分係結合GARP，並且例如包含抗體分子，該抗體分子係結合表達GARP之免疫壓制性細胞例如Treg的GARP。
44.如態樣1之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分係包含SM結合/調控部分。
45.如態樣44之治療性化合物，其中該SM結合/調控部分係促成免疫壓制性局部微環境。
46.如態樣44及45中任一者之治療性化合物，其中該效應子分子結合部分係增加可用性，例如，藉由增加抑制免疫細胞功能之物質的濃度或量，該物質係例如抑制免疫細胞活化或經活化之免疫細胞功能的物質。
47.如態樣44至46中任一者之治療性化合物，其中該效應子分子結合部分係結合並蓄積具有免疫壓制性功能之可溶性物質，例如，內源性或外源性物質。
48.如態樣44至47中任一者之治療性化合物，其中該效應子分子結合部分係降低可用性，例如，藉由降低促成免疫細胞功能之物質的濃度或量或隔絕該物質，該物質係例如促成免疫細胞活化或經活化之免疫細胞功能的物質。
49.如態樣44至48中任一者之治療性化合物，其中該SM結合/調控部分係例如藉由在靶標附近提供抑制或最小化該靶標之免疫系統造成之攻擊而促成免疫壓制性局部微環境。
50.如態樣44至49中任一者之治療性化合物，其中該SM結合/調控部分係包含抑制或最小化該靶標之免疫系統造成之攻擊的分子。
51.如態樣44至50中任一者之治療性化合物，其中該SM結合/調控部分係結合及/或蓄積具有免疫壓制性功能之可溶性物質，例如，內源性或外源性物質。
52.如態樣44至51中任一者之治療性化合物，其中該SM結合/調控部分係結合及/或抑制、隔絕、降解或此外之中和促成免疫攻擊之物質，例如可溶性物質，典型係內源性可溶性物質。
53.如態樣44至52中任一者之治療性化合物，其中該效應子分子結合部分係降低ATP或AMP之可用性。
54.如態樣44至53中任一者之治療性化合物，其中該SM結合/調控部分係結合或包含一物質例如CD39或CD73，該物質係耗竭促成免疫效應子細胞功能之組分例如ATP或AMP。
55.如態樣44至54中任一者之治療性化合物，其中該SM結合/調控部分係包含CD39分子。
56.如態樣44至54中任一者之治療性化合物，其中該SM結合/調控部分係包含CD73分子。
57.如態樣44至54中任一者之治療性化合物，其中該SM結合/調控部分係包含抗-CD39分子。
58.如態樣44至54中任一者之治療性化合物，其中該SM結合/調控部分係包含抗-CD73抗體分子。
59.如態樣44至54中任一者之治療性化合物，其中該效應子分子結合部分係包含免疫壓制性物質，例如，免疫壓制性蛋白質之片段。
60.如態樣44至54中任一者之治療性化合物，其中該SM結合/調控部分係包含鹼性磷酸酶分子。
61.如態樣1之治療性化合物，其中該化合物係具有從N端至C端之式：
R1---鏈結基區A-R2或R3-鏈結基區B-R4，
其中，
R1、R2、R3及R4係各自獨立包含效應子結合/調控部分，例如，ICIM結合/調控部分、IIC結合/調控部分、或SM結合/調控部分；特異性靶向部分；或不存在；限制條件為存在效應子結合/調控部分及特異性靶向部分。
62.如態樣61之治療性化合物，其中鏈結基區A及鏈結基區B係各自包含Fc區。
63.如態樣61之治療性化合物，其中R1與R2之一者係抗-PD-1抗體，並且R1與R2之一者係抗-MAdCAM抗體。
64.如態樣61之治療性化合物，其中R1之一者係抗-PD-1抗體，並且一個R2係抗-MAdCAM抗體。
65.如態樣61之治療性化合物，其中R1之一者係抗-MAdCAM抗體，並且一個R2係抗-PD-1抗體。
66.如態樣61之治療性化合物，其中R3與R4之一者係抗-PD-1抗體，並且R3與R4之一者係抗-MAdCAM抗體。
67.如態樣61之治療性化合物，其中R3之一者係抗-PD-1抗體，並且一個R4係抗-MAdCAM抗體。
68.如態樣61之治療性化合物，其中R3之一者係抗-MAdCAM抗體，並且一個R4係抗-PD-1抗體。
69.如態樣61至68中任一者之治療性化合物，其中該鏈結基係不存在。
70.如態樣61至68中任一者之治療性化合物，其中該鏈結基係Fc區。
71.如態樣61至68中任一者之治療性化合物，其中該鏈結基係甘胺酸/絲胺酸鏈結基，諸如1、2、3、4或5個重複的GGGGS(SEQ ID NO：23)。
72.如態樣61至68中任一者之治療性化合物，其中該鏈結基係包含Fc區及甘胺酸/絲胺酸鏈結基，諸如1、2、3、4或5個重複的GGGGS(SEQ ID NO：23)。
73.如態樣61至72中任一者之治療性化合物，其中該PD-1抗體係PD-1促效劑。
74.如態樣61之治療性化合物，其中：
R1及R3係獨立包含功能性抗-PD-1抗體分子(PD-1之促效劑)；以及，R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
75.如態樣73及74中任一者之治療性化合物，其中：
R1及R3係獨立包含特異性靶向部分，例如，抗組織抗原抗體；以及，R2及R4係獨立包含功能性抗-PD-1抗體分子(PD-1之促效劑)。
76.如態樣73及74中任一者之治療性化合物，其中：
R1、R2、R3及R4係各自獨立包含：SM結合/調控部分，其係調控例如結合並抑制、隔絕、降解或此外之中和一種物質例如調控免疫應答之可溶性分子例如ATP或AMP，例如，CD39分子或CD73分子；特異性靶向部分；或不存在；
限制條件為SM結合/調控部分及特異性靶向部分係存在。
77.如態樣61之治療性化合物，其中：
R1及R3係獨立包含CD39分子或CD73分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
78.如態樣77之治療性化合物，其中：
R1及R3係各自包含CD39分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
79.如態樣61或77之治療性化合物，其中：
R1及R3係各自包含CD73分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
80.如態樣61之治療性化合物，其中：
R1及R3之一者係包含CD39分子並且另一者係包含CD73分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
81.如態樣61之治療性化合物，其中：
R1、R2、R3及R4係各自獨立包含：HLA-G分子；特異性靶向部分，或不存在；
限制條件為HLA-G分子及特異性靶向部分係存在。
82.如態樣61或81之治療性化合物，其中：
R1及R3係各自包含HLG-A分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
83.如態樣81及82中任一者之治療性化合物，其中：
R1及R3係各自包含促效性抗-LILRB1抗體分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
84.如態樣81及82中任一者之治療性化合物，其中：
R1及R3係各自包含促效性抗-KIR2DL4抗體分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
於一些態樣中，鏈結基A及鏈結基B係包含Fc區(例如，自配對Fc部分，或不自配對或實質上不自配對的Fc部分)。
85.如態樣81至84中任一者之治療性化合物，其中：
R1及R3係各自包含促效性抗-LILRB2抗體分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
86.如態樣81至84中任一者之治療性化合物，其中：
R1及R3係各自包含促效性抗-NKG2A抗體分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
87.如態樣81至84中任一者之治療性化合物，其中：
R1及R3之一者係包含選自下列之第一部分，並且另一者係包含選自下列之不同部分：拮抗性抗-LILRB1抗體分子、促效性抗-KR2DL4抗體分子、及促效性抗-NKG2A抗體分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
88.如態樣81至84中任一者之治療性化合物，其中：
R1及R3之一者係包含拮抗性抗-LILRB1抗體分子並且另一者係包含促效性抗-KR2DL4抗體分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
89.如態樣81至84中任一者之治療性化合物，其中：
R1及R3之一者係包含拮抗性抗-LILRB1抗體分子並且另一者係包含促效性抗-NKG2A抗體分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
90.如態樣81至84中任一者之治療性化合物，其中：
R1、R2、R3及R4係各自獨立包含：IL-2突變蛋白質分子；特異性靶向部分，或不存在；以及
限制條件為IL-2突變蛋白質分子及特異性靶向部分係存在。
91.如態樣90之治療性化合物，其中：
R1及R3係各自包含IL-2突變蛋白質分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
92.如態樣90或91之治療性化合物，其中：
R1及R3之一者係包含MAdCAM結合分子例如抗-MAdCAM抗體分子或GITR結合分子例如抗-GITR抗體分子，並且另一者係包含IL-2突變蛋白質分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
93.如態樣90或91之治療性化合物，其中：
R1及R3之一者係包含GARP結合分子例如抗-GARP抗體分子，並且另一者係包含IL-2突變蛋白質分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
94.如態樣90或91之治療性化合物，其中：
R1及R3之一者係包含GARP結合分子例如抗-GARP抗體分子或GITR結合分子例如抗-GITR抗體分子，並且另一者係包含IL-2突變蛋白質分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
95.如態樣90或91之治療性化合物，其中：
R1及R3之一者係包含GARP結合分子例如抗-GARP抗體分子，並且另一者係包含IL-2突變蛋白質分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
96.如態樣90或91之治療性化合物，其中：
R1及R3之一者係包含GITR結合分子例如抗-GITR抗體分子，並且另一者係包含IL-2突變蛋白質分子；以及
R2及R4係獨立包含特異性靶向部分，例如，對抗組織抗原之scFv分子。
97.如態樣1之治療性化合物，其中該化合物係多肽或蛋白質，其中該多肽或蛋白質係包含結合靶標細胞之靶向部分以及效應子結合/調控部分，其中該效應子結合/調控部分係IL-2突變多肽(IL-2突變蛋白質)。
98.如態樣97之治療性化合物，其中該靶向部分係包含結合至靶標細胞表面之靶標蛋白質的抗體。
99.如態樣98之治療性化合物，其中該抗體係結合至MAdCAM、OAT1(SLC22A6)、OCT2(SLC22A2)、FXYD2、TSPAN7、DPP6、HEPACAM2、TMEM27或GPR119的抗體。
100.如態樣98之治療性化合物，其中該IL-2突變蛋白質係結合至藉由免疫細胞表現之受體。
101.如態樣98之治療性化合物，其中該免疫細胞係對不希望之免疫應答有所貢獻。
102.如態樣97至101中任一者之治療性化合物，其中該免疫細胞係造成疾病之病理。
103.如態樣97至102中任一者之治療性化合物，其中該靶向部分係包含抗-MAdCAM抗體。
104.如態樣97之治療性化合物，其中該化合物係具有從N端至C端之式：
R1---鏈結基區A-R2或R3-鏈結基區B-R4，
其中，
R1、R2、R3及R4係各自獨立包含該效應子結合/調控部分、該靶向部分，或不存在。
105.如態樣104之治療性化合物，其中鏈結基區A及鏈結基區B係各自包含Fc區。
106.如態樣104或105之治療性化合物，其中R1與R2之一者係IL-突變蛋白質抗體，並且R1與R2之一者係抗-MAdCAM抗體。
107.如態樣104、105或106之治療性化合物，其中R1係IL-突變蛋白質抗體，並且R2係抗-MAdCAM抗體。
108.如態樣104、105或106之治療性化合物，其中R1之一者係抗-MAdCAM抗體，並且一個R2係抗-PD-1抗體。
109.如態樣104、105或106之治療性化合物，其中R3與R4之一者係IL-2突變蛋白質，並且R3與R4之一者係抗-MAdCAM抗體。
110.如態樣104、105或106之治療性化合物，其中R3係IL-2突變蛋白質抗體，並且R4係抗-MAdCAM抗體。
111.如態樣104、105或106之治療性化合物，其中R3係抗-MAdCAM抗體，並且一個R4係IL-2突變蛋白質。
112.如態樣104至111中任一者之治療性化合物，其中該鏈結基係不存在。
113.如態樣104至111中任一者之治療性化合物，其中該鏈結基係Fc區或包含Fc區。
114.如態樣104至111中任一者之治療性化合物，其中該鏈結基係包含甘胺酸/絲胺酸鏈結基。
115.如態樣104至111中任一者之治療性化合物，其中該鏈結基係包含GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)、 GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：619)、或GGGGS(SEQ ID NO：23)之序列。
116.如態樣97之治療性化合物，其中該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：6之IL-2序列，其中該肽係包含對應於SEQ ID NO：6之位置53、56、80或118之位置的突變。
117.如態樣97至116中任一者之治療性化合物，其中該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：6之IL-2序列，其中該肽係包含對應於SEQ ID NO：6之位置53、56、80或118之位置處的突變。
118.如態樣116之治療性化合物，其中該突變係位置53、56、80或118的L至I突變。
119.如態樣117之治療性化合物，其中該突變係位置53、56、80或118的L至I突變。
120.如態樣97至11至84中任一者之治療性化合物，其中該IL-2突變蛋白質復包含對應於SEQ ID NO：6中彼等位置之29、31、35、37、48、69、71、74、88及125之一或多個位置的突變。
121.如態樣97至120中任一者之治療性化合物，其中該IL-2突變蛋白質復包含位置E15、H16、Q22、D84、E95或Q126一或多個之突變，或位置E15、H16、Q22、D84、E95或Q126之1、2、3、4、5或每個係野生型。
122.如態樣97至至121中任一者之治療性化合物，其中該突變蛋白質中之突變係E15Q、H16N、Q22E、D84N、E95Q或Q126E之之一者或多者。
123.如態樣97至122中任一者之治療性化合物，其中該突變蛋白質係包含SEQ ID NO：6中之N29S突變。
124.如態樣97至123中任一者之治療性化合物，其中該突變蛋白質係包含Y31S或Y51H突變。
125.如態樣97至124中任一者之治療性化合物，其中該突變蛋白質係包含K35R突變。
126.如態樣97至125中任一者之治療性化合物，其中該突變蛋白質係包含T37A突變。
127.如態樣97至126中任一者之治療性化合物，其中該突變蛋白質係包含K48E突變。
128.如態樣97至127中任一者之治療性化合物，其中該突變蛋白質係包含V69A突變。
129.如態樣97至128中任一者之治療性化合物，其中該突變蛋白質係包含N71R突變。
130.如態樣97至129中任一者之治療性化合物，其中該突變蛋白質係包含Q74P突變。
131.如態樣97至130中任一者之治療性化合物，其中該突變蛋白質係包含N88D或N88R突變。
132.如態樣97至131中任一者之治療性化合物，其中該突變蛋白質係包含C125A或C125S突變。
133.如態樣97至132中任一者之治療性化合物，其中該IL-2突變蛋白質係融合或鏈結至Fc肽。
134.如態樣133之治療性化合物，其中該Fc肽係包含L234、L247、L235,L248、G237及G250之一個或多個位置之突變。
135.如態樣134之治療性化合物，其中該突變係L至A突變或G至A突變。
136.如態樣134之治療性化合物，其中該Fc肽係包含L247A、L248A及/或G250A突變(Kabat編號)。
137.如態樣134之治療性化合物，其中該Fc肽係包含L234A突變、L235A突變及/或G237A突變(EU編號)。
138.如態樣97之治療性化合物，其中該多肽係包含形成該多肽之第一鏈及第二鏈，其中
該第一鏈係包含：
VH -Hc -鏈結基-C1 ，其中VH 係重鏈可變域，其係使用該第二鏈之VL 域結合至靶標細胞；Hc 係包含CH1-CH2-CH3域之抗體的重鏈；該鏈結基係甘胺酸/絲胺酸鏈結基；以及，C1 係以N端或C端取向融合或鏈結至Fc蛋白質的IL-2突變蛋白質；以及
該第二鏈係包含：
VL -Lc ，其中VL 係輕鏈可變域，其係使用該第一鏈之VH 域結合至靶標細胞；並且該Lc域係輕鏈CK域。
139.如態樣138之治療性化合物，其中該VH及VL域係結合至表現於細胞之MAdCAM的抗-MAdCAM可變域。
140.如態樣138或139之治療性化合物，其中該IL-2突變蛋白質係包含對應於SEQ ID NO：6之位置53、56、80或118之位置的突變。
141.如態樣140之治療性化合物，其中該突變係位置53、56、80或118處的L至I突變。
142.如態樣140或141之治療性化合物，其中該突變蛋白質復包含對應於位置69、75、88或125之位置的突變及/或其任意組合。
143.如態樣140或141之治療性化合物，其中該IL-2突變蛋白質係包含選自由下列所組成之群組的突變：L53I、L56I、L80I及L118I之一者以及V69A、Q74P、N88D或N88R之突變，並且視需要為C125A或C125S。
144.如態樣143之治療性化合物，其中該IL-2突變蛋白質係包含L53I突變。
145.如態樣143之治療性化合物，其中該IL-2突變蛋白質係包含L56I突變。
146.如態樣143之治療性化合物，其中該IL-2突變蛋白質係包含L80I突變。
147.如態樣143之治療性化合物，其中該IL-2突變蛋白質係包含L118I突變。
148.如態樣143之治療性化合物，其中該IL-2突變蛋白質係不包含任何其它突變。
149.如態樣138至148中任一者之治療性化合物，其中該Fc肽係包含根據KABAT編號之L247A、L248A及G250A突變或L234A突變、L235A突變及/或G237A突變。
150.如態樣138至149中任一者之治療性化合物，其中該鏈結基係包含GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)或GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)之序列。
151.如態樣138至149中任一者之治療性化合物，其中該多肽係包含Fc肽，該Fc肽係包含本文所揭示之序列。
152.如態樣81至84中任一者之治療性化合物，其中：
R1、R2、R3及R4之一者係包含抗-BCR抗體分子例如拮抗性抗-BCR抗體分子，一者係包含抗FCRL抗體分子，以及，一者係包含特異性靶向部分。
153.如態樣152之治療性化合物，其中：
該抗-FCRL分子係包含：抗-FCRL抗體分子，例如針對FCRL1、FCRL2、FCRL3、FCRL4、FCRL5或FCRL6之促效性抗-FCRL抗體分子。
154.如態樣81至84中任一者之治療性化合物，其中：
R1、R2、R3及R4係各自獨立包含：
i)效應子結合/調控部分例如ICIM結合/調控部分、IIC結合/調控部分或SM結合/調控部分，其係最小化或抑制T細胞活性、擴張或功能(T細胞效應子結合/調控部分)；
ii)效應子結合/調控部分例如ICIM結合/調控部分、IIC結合/調控部分或SM結合/調控部分，其係最小化或抑制B細胞活性、擴張或功能(B細胞效應子結合/調控部分)；
iii)特異性靶向部分；或
iv)不存在；限制條件為T細胞效應子結合/調控部分、B細胞效應子結合/調控部分及特異性靶向部分係存在。
155.如態樣154之治療性化合物，其中：
R1、R2、R3及R4之一者係包含促效性抗-PD-1抗體且一者係包含HLA-G分子。
156.如態樣154至155之治療性化合物，其中：
R1、R2、R3及R4之一者係包含SM結合/調控部分，例如CD39分子或CD73分子。
157.如態樣154至156中任一者之治療性化合物，其中：
R1、R2、R3及R4之一者係包含實體，該實體係結合、活化或維持調節性免疫細胞例如Treg細胞或Breg細胞。
158.如態樣154至157中任一者之治療性化合物，其中：
R1、R2、R3及R4之一者係包含促效性抗-PD-1抗體或一者係包含HLA-G分子。
159.如態樣158之治療性化合物，其中：
R1、R2、R3及R4之一者係包含促效性抗-PD-1抗體，一者係包含HLA-G分子，並且一者係包含CD39分子或CD73分子。
160.如態樣1至159中任一者之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分係包含多肽。
161.如態樣1至160中任一者之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分係包含多肽，該多肽係具有至少5、10、20、30、40、50、150、200或250個胺基酸殘基。
162.如態樣1至161中任一者之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分係具有5、10、15、20或40Kd之分子量。
163.如態樣1至162中任一者之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分不包含載脂蛋白CIII、蛋白激酶A、Src激酶、或β1整合素之表現的抑制劑。
164.如態樣1至162中任一者之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分不包含載脂蛋白CIII、蛋白激酶A、Src激酶、或β1整合素之活性的抑制劑。
165.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向選自肺、皮膚、胰臟、視網膜、前列腺、卵巢、淋巴結、腎上腺、肝或腸組織的組織。
166.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向管狀細胞例如近端管狀上皮細胞。
167.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向TIE-2、APN、TEM4、TEM6、ICAM-1、核仁素P2Z受體、Trk-A、FLJ10849、HSPA12B、APP或OX-45。
168.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向管腔表現之蛋白質。
169.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該供體靶標不包含心臟特異性靶標。
170.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向肺組織。
171.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向腎組織。
172.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向胰臟組織。
173.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向腸組織。
174.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向前列腺組織。
175.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向腦組織。
176.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向CD71。
177.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向CD90。
178.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向MAdCAM。
179.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向白蛋白。
180.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向碳酸酐酶IV。
181.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向ZG16-p。
182.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向二肽基肽酶IV。
183.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向血管內皮細胞膜之管腔表面。
184.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向心臟組織。
185.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向腫瘤、實體腫瘤或實體腫瘤之血管。
186.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向皮膚組織。
187.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向表皮組織。
188.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向基底膜。
189.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向Dsg多肽。
190.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向Dsg1。
191.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向Dsg3。
192.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向BP180。
193.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不特異性地靶向橋粒芯蛋白。
194.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不包含補體調控子例如補體抑制劑，諸如但不限於，藉由引用而以其整體併入本文之美國專利第8,454,963號中揭示之彼等。
195.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不包含成像劑。
196.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不包含選自下列所組成之群組的成像劑：放射活性劑、放射性同位素、放射性藥物、造影劑、奈米顆粒；酶、輔基、螢光材料、發光材料以及生物發光材料，諸如但不限於，藉由引用而以其整體併入本文之美國專利第8,815,235號中所揭示之彼等。
197.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不包含放射性核素，諸如但不限於，藉由引用而以其整體併入本文之美國專利第6,232,287號中揭示之彼等。
198.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不被其所結合之供體細胞內化。
199.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不進入該特異性靶向部分所靶向之細胞。
200.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不殺死該特異性靶向部分所靶向之細胞。
201.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不進入該效應子結合/調控部分所結合之細胞。
202.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不殺死該效應子結合/調控部分所結合之細胞。
203.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不包含自體抗原性肽或多肽。
204.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不包含自體抗原性肽或多肽，例如，不包含對抗該受驗者所具有之自體抗體的肽或多肽。
205.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不包含衍生自具有自體免疫性疾患之哺乳動物例如人的抗體分子。
206.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不包含衍生自具有急性黏膜皮膚PV之哺乳動物例如人的抗體分子。
207.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不包含衍生自具有Goodpasture氏病之哺乳動物例如人的抗體分子。
208.如態樣1至163中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物不包含衍生自具有尋常型天疱瘡之哺乳動物例如人的抗體分子。
209.如態樣1至208中任一者之治療性化合物，其係包含供體特異性靶向部分。
210.如態樣209中任一者之治療性化合物，其係優先定位化至所移植之供體組織處而非接納者之組織處。
211.如態樣209至210之治療性化合物，其中該供體特異性靶向部分係向來自供體之移植物組織例如器官提供位點特異性免疫赦免。
212.如態樣209至211之治療性化合物，其中該供體特異性靶向部分係結合至存在於該供體基因座之等位基因的產物例如多肽，該等位基因係不存在於該接納者之基因座。
213.如態樣209至212中任一者之治療性化合物，其中，與表現於受驗者組織之基因的等位基因相比，該供體特異性靶向部分係優先結合至表現於供體組織例如移植物組織例如器官之基因的等位基因。
214.如態樣209至213中任一者之治療性化合物，其中該供體特異性靶向部分係具有對於表現於供體組織例如移植物組織例如器官之基因之等位基因的結合親和性，其係比對於表現於受驗者組織之基因之 等位基因的結合親和性較大至少2、4、5、10、50、100、500、1,000、5,000或10,000倍。
215.如態樣209至214中任一者之治療性化合物，其中該供體特異性靶向部分係結合至存在於該供體基因座之等位基因的產物例如多肽，該等位基因係不存在於該接納者之基因座。
216.如態樣209至215中任一者之治療性化合物，其中該結合係足夠特異性，使得例如治療性化合物在臨床有效劑量，係出現不希望的、實質上的或臨床上不可接受的全身性免疫抑制。
217.如態樣209至216中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物係蓄積於該靶標位點，例如，該供體特異性靶向部分之結合係導致該治療性化合物於該靶標位點蓄積。
218.如態樣209至217中任一者之治療性化合物，其中該供體特異性靶向部分係結合選自表2之基因座，例如HLA基因座，例如HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DP、HLA-DQ或HLA-DR基因組之等位基因的產物，該等位基因係存在於供體中而非接納者中。HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DP、HLA-DQ或HLA-DR基因座。
219.如態樣209至218中任一者之治療性化合物，其中該供體特異性靶向部分係結合HLAA之等位基因、HLA-B之等位基因、HLA-C之等位基因、HLA-DP之等位基因、HLA-之等位基因、或HLA-之等位基因。
220.如態樣209至219中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物係適用於治療具有、將會具有或正需要移植物的受驗者。
221.如態樣220之治療性化合物，其中該移植物係包含器官例如肝臟、腎臟、心臟、胰臟、胸腺、皮膚或肺之全部或部分。
222.如態樣209至221中任一者之治療性化合物，其中該供體特異性靶向部分係包含抗體分子。
223.如態樣209至221中任一者之治療性化合物，其中該供體特異性靶向部分係包含靶標特異性結合多肽或靶標配位子結合分子。
224.如態樣1至223中任一者之治療性化合物，其係包含組織特異性靶向部分。
225.如態樣224之治療性化合物，其中該組織特異性靶向部分係特異性地結合至MAdCAM的分子。
226.如態樣224之治療性化合物，其中該組織特異性靶向部分係特異性地結合至MAdCAM的抗體。
227.如態樣224至226中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物係適用於治療具有自體免疫性疾患例如本文所揭示之自體免疫性疾患或處於具有該疾患風險下或具有該疾患之風險升高的受驗者。
228.如態樣224至227中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物係蓄積於該靶標位點，例如，該組織特異性靶向部分之結合係導致該治療性化合物於該靶標位點蓄積。
229.如態樣224至228中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物係優先定位化至靶標組織而非受驗者之其它組織。
230.如態樣224至229中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物係提供對於受驗者靶標組織之位點特異性免疫赦免，該靶標 組織係例如正在經歷不希望之免疫攻擊例如在自體免疫性疾患中，或處於該免疫攻擊之風險下或遭受該免疫攻擊之風險升高。
231.如態樣224至229中任一者之治療性化合物，其中該組織特異性靶向部分，作為該治療性化合物之組分，係優先結合正在經歷不希望之免疫攻擊例如在自體免疫性疾患的受驗者靶標組織。
232.如態樣224至231中任一者之治療性化合物，其中該組織特異性靶向部分係結合至產物例如多肽，該產物於靶標組織外部係不存在或以足夠低之水準存在，治療性分子在治療性濃度，係不存在或實質上不存在不可接受水準的免疫壓制。
233.如態樣224至232中任一者之治療性化合物，其中該組織特異性靶向部分係結合產物或產物之位點，該產物於靶標組織中之豐度係大於非靶標組織中者。
234.如態樣224至233中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物係結合產物或產物之位點，該產物係實質上唯一地存在或表現於靶標組織。
235.如態樣224至234中任一者之治療性化合物，其中該組織特異性靶向部分所結合之產物或產物之位點係被充分限制在該靶標組織處，使得治療性化合物在治療有效水準，該受驗者不受苦於不可接受水準例如臨床顯著水準之全身性免疫壓制。
236.如態樣224至235中任一者之治療性化合物，其中，作為治療性化合物之組分，組織特異性靶向部分係優先結合至靶標組織或靶標組織抗原，例如，其對於靶標組織或抗原之結合親和性比其對於存在 於該靶標組織外部之非靶標組織或抗原之親和性較大例如至少2、4、5、10、50、100、500、1,000、5,000、或10,000倍。
237.如態樣224至236中任一者之治療性化合物，其中該組織特異性靶向部分係結合至產物例如多肽產物或產物之位點，該產物係存在於預先選擇之位點例如自體免疫性疾患中之不希望之免疫應答的位點。
238.如態樣224至237中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物係適用於治療具有1型糖尿病或處於具有該疾病風險下或具有該疾病之風險提高的受驗者。
239.如態樣224至238中任一者之治療性化合物，其中該靶標組織係包含胰臟組織例如胰島或胰β細胞、腸組織(例如，腸內皮細胞)、腎組織(例如，腎上皮細胞)、或肝組織(例如，肝上皮細胞)。
240.如態樣224至239中任一者之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分或靶向部分係結合選自本文所揭示之彼等的多肽，諸如表3中列述之彼等，例如SEZ6L2、LRP11、DISP2、SLC30A8、FXYD2、TSPAN7或TMEM27。
241.如態樣224至236中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物係適用於治療具有多發性硬化或處於具有該疾病風險下或具有該疾病之風險提高的受驗者。
242.如態樣241之治療性化合物，其中該靶標組織係包含CNS組織、髓鞘、或少樹突細胞之髓鞘。
243.如態樣241至242中任一者之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分或靶向部分係結合選自本文所揭示之彼等的多肽，該多肽係包括但不限於表3中列述者，例如MOG、PLP或MBP。
244.如態樣224至236中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物係適用於治療具有心肌炎或處於具有該疾病風險下或具有該疾病之風險提高的受驗者。
245.如態樣244之治療性化合物，其中該靶標組織係包含心肌細胞、單核細胞、巨噬細胞或骨髓細胞。
246.如態樣224至245中任一者之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分或該靶向部分係結合如本文所揭示之多肽，包括但不限於選自表3之彼等例如SIRPA(CD172a)。
247.如態樣224至236中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物係適用於治療具有炎症性腸病、自體免疫性肝炎(AIH)、原發性硬化性膽管炎(PSC)、原發性膽管硬化(PBC)或移植物或處於具有該疾病風險下或具有該疾病之風險提高的受驗者。
248.如態樣224至236中任一者之治療性化合物，其中該受驗者係具有克隆氏症或潰瘍性結腸炎或處於具有該疾病風險下或具有該疾病之風險增加。
249.如態樣247或248之治療性化合物，其中該靶標組織係包含腸細胞，諸如腸上皮細胞或肝細胞，諸如肝上皮細胞。
250.如態樣247至249中任一者之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分係結合如本文所揭示之多肽，包括但不限於選自表3之彼等例如PD-1。
251.如態樣247至249中任一者之治療性化合物，其中該靶向部分係結合如本文所揭示之多肽，包括但不限於MAdCAM。
252.如態樣224至236中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物係適用於治療具有類風濕性關節炎或處於具有該疾病風險下或具有該疾病之風險提高的受驗者。
253.如態樣252之治療性化合物，其中該靶標組織係包含心肌細胞、單核細胞、巨噬細胞或骨髓細胞。
254.如態樣252或253之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分或靶向部分係結合選自表3之多肽，例如SIRPA(CD172a)。
255.如態樣224至254中任一者之治療性化合物，其中該組織特異性靶向部分係包含抗體分子。
256.如態樣224至254中任一者之治療性化合物，其中該組織特異性靶向部分係包含靶標特異性結合多肽或靶標配位子結合分子。
257.如態樣224至254中任一者之治療性化合物，其中該組織特異性靶向部分係包含結合至MAdCAM的靶標特異性結合多肽。
258.如態樣1至257中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物係結合免疫效應子細胞例如T細胞、B細胞、NK細胞或其它免疫細胞的細胞表面分子，該細胞係傳播促免疫應答。
259.如態樣1至258中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物係降低免疫效應子細胞例如T細胞、B細胞、NK細胞或其它免疫細胞之傳播促免疫應答的能力。
260.如態樣1至259中任一者之治療性化合物，其中該特異性靶向部分係靶向哺乳動物靶標例如哺乳動物多肽，並且該效應子結合/調控部分係結合/調控哺乳動物免疫組分，例如人類免疫細胞，例如哺乳動物B細胞、T細胞或巨噬細胞。
261.如態樣1至259中任一者之治療性化合物，其中該特異性靶向部分係靶向哺人類靶標例如人類多肽，並且該效應子結合/調控部分係結合/調控人類免疫組分例如人類免疫細胞例如人類B細胞、T細胞或巨噬細胞。
262.如態樣1至261中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物係構造為用於人體。
263.如態樣1至260中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物係構造為用於非人哺乳動物中。
264.如態樣1至263中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物例如該效應子結合/調控部分係包含PD-1促效劑。
265.如前述態樣中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物係包含SEQ ID NO：15之IL-2突變蛋白質，其中該突變蛋白質係包含位置73、76、100或138之突變。
266.如態樣265之治療性化合物，其中該突變係位置73、76、100或138處的L至I突變。
267.如態樣265或266之治療性化合物，其中該IL-2突變蛋白質復包含位置49、51、55、57、68、89、91、94、108及145之一或多個突變。
268.如態樣265至267中任一者之治療性化合物，其中該突變蛋白質復包含位置E35、H36、Q42、D104、E115或Q146之一或多個的突變，或E35、H36、Q42、D104、E115或Q1461之1、2、3、4、5個或每一個係野生型。
269.如態樣268之治療性化合物，其中該突變係E35Q、H36N、Q42E、D104N、E115Q或Q146E中之一者或多者。
270.如態樣265至269中任一者之治療性化合物，其中該IL-2突變蛋白質係包含N49S突變。
271.如態樣265至270中任一者之治療性化合物，其中該IL-2突變蛋白質係包含Y51S或Y51H突變。
272.如態樣265至271中任一者之治療性化合物，其中該IL-2突變蛋白質係包含K55R突變。
273.如態樣265至272中任一者之治療性化合物，其中該IL-2突變蛋白質係包含T57A突變。
274.如態樣265至272中任一者之治療性化合物，其中該IL-2突變蛋白質係包含K68E突變、V89A(V69A)突變、N91R(N71R)突變、Q94P或Q74P突變、(N88D)或N108R(N88R)突變、C145A(C125A)或C145S(C125S)突變。
275.如態樣265至274中任一者之治療性化合物，其中該治療性化合物係包含SEQ ID NO：6之IL-2突變蛋白質，其中該突變蛋白質係包含位置53、56、80或118之突變，以及態樣265至274中引用之突變之一者或多者。
276.如態樣265至275中任一者之治療性化合物，其中該IL-2突變蛋白質係融合或鏈結至Fc肽。
277.如態樣276之治療性化合物，其中該Fc肽係包含L234、L247、L235,L248、G237及G250(EU編號)之一個或多個位置之突變。
278.一種治療患有炎症性腸病之受驗者的方法，該方法係包含向該受驗者給藥如態樣1至277中任一者之治療性化合物以治療該炎症性腸病。
279.如態樣278之方法，其中該患有炎症性腸病之受驗者係患有克隆氏症。
280.如態樣278之方法，其中該患有炎症性腸病之受驗者係患有潰瘍性結腸炎。
281.一種治療患有自體免疫性肝炎之受驗者的方法，該方法係包含向該受驗者給藥如態樣1至277中任一者之治療性化合物以治療該自體免疫性肝炎。
282.一種治療原發性硬化性膽管炎的方法，該方法係包含向該受驗者給藥如態樣1至277中任一者之治療性化合物以治療該原發性硬化性膽管炎。
283.一種治療1型糖尿病的方法，該方法係包含向該受驗者給藥如態樣1至277中任一者之治療性化合物以治療該1型糖尿病。
284.一種治療移植受驗者的方法，係包含向該受驗者給藥治療有效量之如態樣1至277中任一者之治療性化合物，
從而治療移植(接納者)受驗者。
285.一種治療具有經移植之供體組織之受驗者的GVHD的方法，係包含向該受驗者給藥治療有效量之如態樣1至277中任一者之治療性化合物。
286.如態樣285之方法，其中該治療性化合物係給藥至該受驗者於：接受該移植物之前；發展出GVHD症候之前；接受該移植物之後或同時；或者發展出GVHD症候之後或同時。
287.一種治療患有自體免疫疾患或處於罹患該疾患之風險下或罹患該疾患之風險提高之受驗者的方法，係包含向該受驗者給藥治療有效量之如態樣1至277中任一者之治療性化合物，從而治療該受驗者。
288.如態樣287之方法，其中該受驗者係已經接受、將要接受或需要同種異體物供體組織。
289.如態樣287至288中任一者之方法，其中該供體組織係包含實體器官例如肝、腎、心臟、胰臟、胸腺或肺。
290.如態樣287至288中任一者之方法，其中該供體組織係包含實體器官例如肝、腎、心臟、胰臟、胸腺或肺之全部或一部分。
291.如態樣287至288中任一者之方法，其中該供體組織係包含皮膚。
292.如態樣287至288中任一者之方法，其中該供體組織係不包含皮膚。
293.如態樣287至292中任一者之方法，其中該供體組織係呈遞或表現基因座之等位基因的產物，該等位基因係不存在於或表現於該受驗者體內。
294.如態樣287至292中任一者之方法，其中該供體組織係呈遞或表現基因座之等位基因的產物，該基因座係選自表2例如HLA基因座例如HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DP、HLA-DQ或HLA-DR基因座，該等位基因係不存在於或表現於該受驗者體內。
295.如態樣287至294中任一者之方法，係包含將該移植物組織引入該受驗者體內。
296.如態樣278至295中任一者之方法，係包含監控該受驗者之位於遠離該靶標位點之位點處例如在外周循環或淋巴系統中的免疫細胞失活(例如，監控不希望的對免疫抑制性檢查點分子的促效作用)。
297.如態樣278至296中任一者之方法，係包含監控該受驗者之位於遠離該靶標位點之位點處例如在外周循環或淋巴系統中的免疫細胞活化(例如，監控不希望的對免疫抑制性檢查點分子的拮抗作用)。
298.如態樣278至297中任一者之方法，其中，因應監控之結果，係選擇用於該受驗者之治療進程，例如，增加治療性化合物之劑量、減少該治療性化合物之劑量、使用該治療性化合物而不改變劑量繼續治療。
299.如態樣278至298中任一者之方法，係包含給藥如態樣1至277中任一者之化合物至該接納者。
300.如態樣278至298中任一者之方法，其中給藥係包含全身性給藥例如給藥至外周循環系統。
301.如態樣278至298之任一者之方法，其中給藥係包含局部給藥例如給藥至靶標組織、供體組織或該靶標組織或該供體組織被或將被定位化之位點。
302.如態樣301之方法，係包含於將該供體組織引入該接納者之前，給藥該治療性化合物至該接納者。
303.如態樣301之方法，係包含於將該供體組織引入該接納者之後，給藥該治療性化合物至該接納者。
304.如態樣295之方法，係包含於將該供體組織引入該接納者的同時，給藥該治療性化合物至該接納者。
305.如態樣295之方法，係包含於將該供體組織引入該接納者之前，令該治療性化合物與該供體組織接觸。
306.如態樣295之方法，係包含提供該治療性化合物至該受驗者，其中該移植物組織業經在引入該受驗者之前與治療性化合物接觸。
307.如態樣295之方法，係包含於將該供體組織引入該接納者之後，令該治療性化合物與該供體組織接觸，例如，藉由局部給藥至該供體組織。
308.如態樣278至307中任一者之方法，係包含給藥如本文所提供之治療性化合物，使得治療性水準係存在至少1、5、10、14或28天，例如連續天數或非連續天數。
309.如態樣278至308中任一者之方法，其中該受驗者係不接受非靶向免疫壓制劑。
310.如態樣278至308中任一者之方法，其中，於初始給藥該治療性化合物之前至少1、15、30、60或90天，該受驗者係未接受非靶向免疫壓制劑。
311.如態樣295之方法，其中，於引入該移植物組織之前至少1、15、30、60或90天，該受驗者係未接受非靶向免疫壓制劑。
312.如態樣278至311中任一者之方法，其中，於初始給藥該治療性化合物之後至少1、15、30、60、90或180天，該受驗者係不接受非靶向免疫壓制劑。
313.如態樣278至311中任一者之方法，其中，於引入該移植物組織之後至少1、15、30、60、90或180天，該受驗者係不接受非靶向免疫壓制劑。
314.如態樣278至313中任一者之方法，係包含給藥非靶向免疫壓制劑至該受驗者。
315.如態樣278至314中任一者之方法，其中，於初始給藥該治療性化合物之前至少1、15、30、60或90天，該受驗者係接受非靶向免疫壓制劑。
316.如態樣295之方法，其中，於引入該移植物組織之前至少1、15、30、60或90天，該受驗者係接受非靶向免疫壓制劑。
317.如態樣316之方法，其中，於初始給藥該治療性化合物之後至少1、15、30、60、90或180天，該受驗者係接受非靶向免疫壓制劑。
318.如態樣278至317中任一者之方法，其中，於引入該移植物組織之後至少1、15、30、60、90或180天，該受驗者係接受非靶向免疫壓制劑。
319.如態樣278至317中任一者之方法，其中，於初始給藥該治療性化合物之前，該受驗者係接受非靶向免疫壓制劑，但不超過1、15、30、60、90或180天。
320.如態樣295之方法，其中，於引入該移植物組織之前，該受驗者係接受非靶向免疫壓制劑，但不超過1、15、30、60、90或180天。
321.如態樣278至320中任一者之方法，其中，於初始給藥該治療性化合物之後，該受驗者係接受非靶向免疫壓制劑，但不超過1、15、30、60、90或180天。
322.如態樣295之方法，其中，於引入該移植物組織之後，該受驗者係接受非靶向免疫壓制劑，但不超過1、15、30、60、90或180天。
323.如態樣295之方法，其中係監控該受驗者對於該移植物組織的排斥作用。
324.如態樣278至323中任一者之方法，非靶向免疫壓制劑之劑量係經選擇，或其中非靶向免疫壓制劑之劑量係因應該監控而選擇。
325.如態樣324之方法，其中係給藥該劑量。
326.如態樣325之方法，其中所選擇之劑量係零，亦即，係不給藥非靶向免疫壓制劑。
327.如態樣325之方法，其中所選擇之劑量係非零，亦即，係給藥非靶向免疫壓制劑。
328.如態樣325之方法，其中該劑量係小於在給藥治療性化合物不存在之情況下將給藥者。
329.如態樣278至328中任一者之方法，其中該受驗者係哺乳動物，例如，非人哺乳動物。
330.如態樣278至328中任一者之方法，其中該受驗者係人。
331.如態樣295之方法，其中該供體及受驗者係於HLA基因座例如主要或次要基因座誤配。
332.如態樣331之方法，其中該受驗者係哺乳動物，例如，非人哺乳動物。
333.如態樣331之方法，其中，該受驗者係人。
334.一種治療患有自體免疫疾患或處於罹患該疾患之風險下或罹患該疾患之風險提高之受驗者的方法，係包含向該受驗者給藥治療有效量之如態樣1至277中任一者之治療性化合物，從而治療該受驗者。
335.如態樣334之方法，其中該治療性化合物之供給係初始於該自體免疫性疾患之症候發作之前或於識別該症候之發作之前。
336.如態樣334至335中任一項之方法，其中該治療性化合物之供給係初始於該自體免疫性疾患之症候發作之後或於識別該症候之發作之後。
337.如態樣334至336之方法，其中自體免疫性疾患係包含1型糖尿病。
338.如態樣334至337中任一者之治療性化合物，其中該靶標組織係包含胰島或胰β細胞、腸組織(例如，腸內皮細胞)、腎組織(例如，腎上皮細胞)、或肝組織(例如，肝上皮細胞)。
339.如態樣334至338任一者之治療性化合物，其中該效應子結合/調控部分或靶向部分係結合選自表3的多肽，例如MAdCAM、OAT1、OCT、DPP、SEZ6L2、LRP11、DISP2、SLC30A8、FXYD2、TSPAN7或TMEM27多肽。
340.如態樣334至339中任一者之方法，其中該治療性化合物之供給係初始於1型糖尿病之症候發作之前或於識別該症候之發作之前。
341.如態樣334至340中任一者之方法，其中該治療性化合物之供給係初始於該受驗者具有預先選擇之特徵或症候之前或於識別該受驗者具有預先選擇之特徵或症候之前。
342.如態樣334至341中任一項之方法，其中該治療性化合物之供給係初始於1型糖尿病之症候發作之後或於識別該症候之發作之後。
343.如態樣334至342中任一者之方法，其中該治療性化合物之供給係初始於該受驗者具有預先選擇之特徵或症候之後或於識別該受驗者具有預先選擇之特徵或症候之後。
344.如態樣334至343中任一者之方法，其中該治療性化合物係態樣1至227中任一者之治療性化合物。
345.如態樣334至339中任一者之方法，其中該治療性化合物係適用於治療具有多發性硬化或處於具有該疾病風險下或具有該疾病之風險提高的受驗者。
346.如態樣345之方法，其中該靶標組織係包含CNS組織、髓鞘、或少樹突細胞之髓鞘。
347.如態樣345或346之方法，其中該效應子結合/調控部分或靶向部分係結合選自表3之多肽，例如MOG、PLP、或MBP多肽。
348.如態樣345至347中任一者之方法，其中該治療性化合物之供給係初始於多發性硬化之症候發作之前或於識別該症候之發作之前。
349.如態樣345至347中任一者之方法，其中該治療性化合物之供給係初始於該受驗者具有預先選擇之特徵或症候之前或於識別該受驗者具有預先選擇之特徵或症候之前。
350.如態樣345至347中任一項之方法，其中該治療性化合物之供給係初始於多發性硬化之症候發作之後或於識別該症候之發作之後。
351.如態樣345至347中任一者之方法，其中該治療性化合物之供給係初始於該受驗者具有預先選擇之特徵或症候之後或於識別該受驗者具有預先選擇之特徵或症候之後。
352.如態樣345至351中任一者之方法，其中該治療性化合物係態樣1至227中任一者之治療性化合物。
353.如態樣334至339中任一者之方法，其中該治療性化合物係適用於治療具有心肌炎或處於具有該疾病風險下或具有該疾病之風險提高的受驗者。
354.如態樣353之方法，其中該靶標組織係包含心肌細胞、單核細胞、巨噬細胞或骨髓細胞。
355.如態樣353或354之方法，其中該效應子結合/調控部分或靶向部分係結合選自表3之多肽，例如SIRPA(CD172a)多肽。
356.如態樣353至355中任一者之方法，其中該治療性化合物之供給係初始於心肌炎之症候發作之前或於識別該症候之發作之前。
357.如態樣353至355中任一者之方法，其中該治療性化合物之供給係初始於該受驗者具有預先選擇之特徵或症候之前或於識別該受驗者具有預先選擇之特徵或症候之前。
358.如態樣353至355中任一項之方法，其中該治療性化合物之供給係初始於心肌炎之症候發作之後或於識別該症候之發作之後。
359.如態樣353至355中任一者之方法，其中該治療性化合物之供給係初始於該受驗者具有預先選擇之特徵或症候之後或於識別該受驗者具有預先選擇之特徵或症候之後。
360.如態樣353至359中任一者之方法，其中該治療性化合物係態樣1至227中任一者之治療性化合物。
361.如態樣334至339中任一者之方法，其中該治療性化合物係適用於治療具有風濕性關節炎於或處於具有該疾病風險下或具有該疾病之風險提高的受驗者。
362.如態樣361之方法，其中該靶標組織係包含心肌細胞、單核細胞、巨噬細胞或骨髓細胞。
363.如態樣361或362之方法，其中該效應子結合/調控部分或靶向部分係結合選自表3之多肽，例如SIRPA(CD172a)多肽。
364.如態樣361至363之方法，其中該治療性化合物之供給係初始於類風濕性關節炎之症候發作之前或於識別該症候之發作之前。
365.如態樣361至363之方法，其中該治療性化合物之供給係於初始該受驗者具有預先選擇之特徵或症候之前或於識別該受驗者具有預先選擇之特徵或症候之前。
366.如態樣361至363之方法，其中該治療性化合物之供給係初始於類風濕性關節炎之症候發作之後或於識別該症候之發作之後。
367.如態樣361至363之方法，其中該治療性化合物之供給係初始於該受驗者具有預先選擇之特徵或症候之後或於識別該受驗者具有預先選擇之特徵或症候之後。
368.如態樣361至367之方法，其中該治療性化合物係態樣1至227中任一者之治療性化合物。
369.如態樣278至368中任一者之方法，係包含監控該受驗者之位於遠離該靶標位點之位點處例如在外周循環或淋巴系統中的免疫細胞失活(例如，監控不希望的對免疫抑制性檢查點分子的促效作用)。
370.如態樣278至369中任一者之方法，係包含監控該受驗者之位於遠離該靶標位點之位點處例如在外周循環或淋巴系統中的免疫細胞活化(例如，監控不希望的對免疫抑制性檢查點分子的拮抗作用)。
371.如態樣278至370中任一者之方法，其中，因應監控之結果，係選擇用於該受驗者之治療進程，例如，增加治療性化合物之劑量、減少該治療性化合物之劑量、使用該治療性化合物而不改變劑量繼續治療。
372.如態樣278至371中任一者之方法，其中係監控該受驗者之對該靶標組織的自體免疫攻擊。
373.如態樣372之方法，其中該治療劑之將係因應該監控而選擇。
374.如態樣373之方法，其中係給藥該劑量。
375.MBP如態樣372之方法，其中所選擇之劑量係零，亦即，治療性化合物之給藥係停止。
376.如態樣372之方法，其中所選擇之劑量係非零。
377.如態樣372之方法，其中所選擇之劑量係增加之劑量。
378.如態樣372之方法，其中所選擇之劑量係減少之劑量。
379.如態樣278至378中任一者之方法，其中給藥係包含全身性給藥例如給藥至外周循環系統。
380.如態樣278至379中任一者之方法，其中給藥係包含局部給藥例如給藥至靶標組織。
381.如態樣278至380中任一者之方法，係包含給藥如本文所提供之治療性化合物，使得治療性水準係存在至少1、5、10、14或28天，例如連續天數或非連續天數。
382.如態樣278至381中任一者之方法，其中該受驗者係哺乳動物，例如，非人哺乳動物。
383.如態樣278至381中任一者之方法，其中該受驗者係人。
384.一種核酸分子或複數核酸分子，其係編碼如態樣1至77中任一者之治療性化合物。
385.一種載體或複數載體，其係包含如態樣384之核酸分子。
386.一種細胞，係包含如態樣384之核酸分子或如態樣385之載體。
387.一種作成治療性化合物之方法，該方法係包括培養如態樣386之細胞以作成該治療性化合物。
388.一種作成編碼如態樣1至277中任一者之治療性化合物之核酸序列的方法，該方法係包含
a)提供一種包含編碼靶向部分之序列的載體，該序列插入至編碼效應子結合/調控部分之載體序列中，以形成編碼治療性化合物之序列；或
b)提供一種包含編碼應子結合/調控部分之序列的載體，該序列插入至編碼效靶向部分之載體序列中，以形成編碼治療性化合物之序列，
從而作成編碼治療性化合物之序列。
389.如態樣388之方法，其中該靶向部分係因應受驗者之需求而選擇。
390.如態樣388或389之方法，其中該效應子結合/調控部係因應受驗者之需求而選擇。
391.如態樣388或389之方法，復包括表現該編碼治療性化合物之序列以產生該治療性化合物。
392.如態樣388至391中任一者之方法，復包括將該序列或自該序列作成之多肽轉移至另一實體，例如，將會給藥該治療性化合物至受驗者之健康照護提供者。
393.一種治療受驗者之方法，係包括：
擷取例如從另一實體接受藉由本文提供者但不限於態樣399至392之任一方法作成的治療性化合物或編碼治療性化合物之核酸；
將該治療性化合物或編碼治療性化合物之核酸給藥至受驗者，
從而治療該受驗者。
394.如態樣393之方法，復包括由另一實體鑒別該治療性化合物或編碼治療性化合物之核酸，該另一實體係例如將會作成該治療性化合物或編碼治療性化合物之核酸的實體。
395.如態樣393或394之方法，復包括從另一實體索取該治療性化合物或編碼治療性化合物之核酸，該另一實體係例如作成該治療性化合物或編碼治療性化合物之核酸的實體。
396.如態樣393至395中任一者之方法，其中該受驗者係具有自體免疫性疾患且該治療性化合物係不包含該自體免疫性疾患之自體抗原性肽或多肽特徵，例如，不包含對抗該受驗者所具有之自體抗體的肽或多肽。
397.如態樣97之治療性化合物，其中該化合物係具有從N端至C端之式：
A1---鏈結基A---A2---鏈結基B---A3或A3---鏈結基A---A2---鏈結基B---A1，
其中，
A1及A3係各自獨立包含該效應子結合/調控部分或該靶向部分，
A2係包含Fc區，以及
鏈結基A及鏈結基B係各自為獨立之鏈結基。
398.如態樣397之治療性化合物，其中鏈結基區A及鏈結基區B係各自包含獨立之鏈結基。
399.如態樣397之治療性化合物，其中A1係抗-MAdCAM抗體，並且A3係IL-突變蛋白質抗體。
400.如態樣397之治療性化合物，其中A2係包含Fc區。
401.如態樣397至400之治療性化合物，其中鏈結基A及鏈結基B係各自獨立為甘胺酸/絲胺酸之鏈結基。
402.如態樣397至401之治療性化合物，其中鏈結基A及鏈結基B係各自獨立包含GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：619)或GGGGS(SEQ ID NO：23)。
下述實施例係本文所揭示之化合物、組成物及方法之例示而非限制。彼等熟識該技藝者已知之其它適當修飾及調整係處於下列態樣之範疇內。
[實施例]
實施例1：靶向HLA之PD-1促效性治療性化合物。
HLA-靶向之PD-1促效性治療劑的工程化
HLA-A2特異性之結合域係藉由從BB7.2融合瘤(ATCC)克隆Ig重鏈及輕鏈的可變區並轉化為單鏈Ab(scFv)而獲得。scFv之活性及特異性可藉由評估比較BB7.2與表現HLA-A2之細胞的結合以及其與表現其它HLA-A等位基因之細胞的結合而證實。PD-1結合活性所需之最小PD-L1殘基係藉由系統性地評估對應於胺基酸68至114之PD-L1 IgV域之3’及5’胺基酸的要求而鑒別。表現構造物係經設計、蛋白質合成以及純化，並藉由Biacore測試PD-1結合活性。PD-L1 IgV域結合PD-1所需之最小必要胺基酸係指為PD-L1-IgV。為了生成BB7.2 scFv及PD-L1-IgV雙特異性分子，係合成具有域排列VLBB7.2 -VHBB7.2 -PD-L1-IgV-IgG4 Fc的編碼該雙特異性單鏈抗體BB7.2 x PD-L1-IgV之DNA片段，並且選殖至含有DHFR選擇匣的表現載體中。
表現載體質體DNA係瞬時轉染至293T細胞內，並且BB7.2 x PD-L1-IgV雙特異性抗體係使用蛋白質A/G管柱從上清液中純化之。BB7.2 x PD-L1-IgV雙特異性抗體完整性係藉由聚丙烯醯胺凝膠評估。BB7.2 scFv域與HLA-A2之結合以及PD-L1-IgV域與PD-1之結合係藉由ELISA或基於細胞之FACS檢定進行評估。
BB7.2 x PD-L1-IgV雙特異性抗體之體外功能係使用混合淋巴細胞反應(MLR)檢定進行評估。於96孔板型式中，將來自HLA-A2+ 供體之100,000經輻照之人PBMC等量種植於每孔中，並用作活化劑。HLA-A1- 應答者T細胞係隨後與遞增量之BB7.2 x PD-L1-IgV雙特異性抗體一起加入。應答者T細胞於72小時期間增殖之能力係藉由BrdU併入法評估之，並且藉由ELISA額外地評估共培養上清液中IFNg及IL2細胞因子之產生。係發現BB7.2 x PD-L1-IgV雙特異性抗體阻抑MLR反應，如藉由抑制HLA-A2- 應答者T細胞增殖以及細胞因子產生而證明。
BB7.2 x PD-L1-IgV雙特異性抗體之體內功能係使用鼠科動物小鼠之皮膚同種異體物耐受模型評估。將C57BL/6-Tg(HLA-A2.1)1Enge/J(Jackson Laboratories,Bar Harbor Maine)系小鼠與Balb/cJ系小鼠雜交，獲得表現HLA-A2.1轉基因之F1子代，用作同種異體物供體。將C57BL/6J小鼠剃毛，並手術移植取自安樂死之C57BL/6-Tg(HLA-A2.1)1Enge/J x Balb/cJ F1小鼠的皮膚。同時，宿主小鼠開始接受腹膜內注射之經工程化以含有鼠IgG1 Fc的BB7.2 x PD-L1-IgV雙特異性抗體、或僅BB7.2之對照物、或僅PD-L1-IgV之對照物。於30天之期間內監控 皮膚同種移植移植排斥作用或接受性，其中宿主係經安樂死，並將淋巴結及同種異體移植物內駐留之淋巴細胞群體定量。
實施例2：作為效應子域，CD39及/或CD73創建環繞感興趣之細胞類型或組織的嘌呤能暈
將CD39及/或CD73之催化活性片段融合至靶向域。一旦結合並蓄積於該靶標位點，CD39即將ATP磷酸解為AMP。一旦結合並蓄積於該靶標位點，CD73即將細胞外AMP去磷酸化為腺苷。業經發現，適用於本文中之可溶性催化活性形式的CD39係於人類及鼠科動物血液中循環，參見，例如，Yegutkin et al.FASEB J.2012 Sep；26(9)：3875-83。可溶性重組CD39片段亦揭示於《重組可溶性ecto-ADPase/CD39對血小板功能之抑制》(Inhibition of platelet function by recombinant soluble,Gayle,et al.,J Clin Invest.1998 May 1；101(9)：1851-1859)中。適當之CD73分子係包含可溶形式之CD73，且可藉由蛋白質水解性裂解或藉由剪切應力之GPI錨之水解而從內皮細胞膜上脫落，參見，例如，參考文獻：Yegutkin G,Bodin P,Burnstock G.Effect of shear stress on the release of soluble ecto-enzymes ATPase and 5’-nucleotidase along with endogenous ATP from vascular endothelial cells.Br J Pharmacol 2000；129：921-6。
ATP至AMP或AMP至腺苷之局部催化將耗竭爆發性T效應子細胞功能所需之局部能量儲備。Treg功能應不受ATP耗竭之影響，引物它們依賴於氧化性磷酸化滿足能量需求(其係需要較少之ATP)，其中記憶性T細胞及其它效應子細胞應受到ATP耗竭之影響，因為它們依賴於醣解(需要高ATP用量)發揮爆發性功能。
實施例3：量測抗體誘導之PD-1訊號傳導。
Jurkat細胞係穩定地表現2種構造物，1)融合至b-半乳糖苷酶之人PD-1多肽，其可指為「酶供體」及2)融合至b-半乳糖苷酶之SHP-2多肽，其可指為「酶受體」。PD-1抗體係與該細胞接觸，並且當該PD-1被接合時，SHP-2被召集至PD-1。該酶供體及酶接受體係形成可被檢定至完全活性β-半乳糖苷酶。這一檢定可用來顯示PD-1訊號傳導之活化。
實施例4：量測PD-1促效作用。PD-1促效劑係抑制T細胞活化。
不受縛於任何特定理論，PD-1促效劑係抑制抗-CD3誘導之T細胞活化。人細胞或鼠細胞係使用PHA(對於人T細胞)或ConA(對於小鼠T細胞)預活化，使得它們表現PD-1。該等T細胞隨後可在抗-PD-1(或PD-L1)之存在下使用抗-CD3「再次活化」，進行PD-1促效作用檢定。在抗-CD3之存在下接受PD-1促效劑訊號的T細胞將顯示相對於單獨使用抗-CD3刺激時降低之活化。活化可藉由增殖或細胞因子(IL-2、IFNg、IL-17)且可能藉由其它標記物諸如CD69活化標記物的產生而讀出。
實施例5：抗-MAdCAM/鼠PD-L1融合蛋白質之表現及功能係不受分子組態之影響。
包含抗鼠MAdCAM Ab/鼠PD-L1分子之雙特異性融合分子係表現為兩種取向。第一取向係由抗鼠MAdCAM IgG以及融合在其重鏈C端的鼠PD-L1組成。第二取向係由融合在Ig Fc域N端之鼠PD-L1以及融合在C端之抗鼠MAdCAM scFv組成。發現兩種分子皆良好地表現於哺乳動物表現系統中。亦發現，該等分子可同步地結合至其各自之結合 夥伴，於兩種取向中之MAdCAM或PD-1。此等結果表明，由融合至PD-L1之抗-MAdCAM抗體組成的分子可表現為其中PD-L1係N端或C端地融合至Fc的組態，並且保留適宜之功能性結合活性。
簡而言，係將pTT5載體轉染至HEK293 Expi細胞內，該載體係含有編碼單一多肽之單一基因，於該多肽中，小鼠PD-L1係N端地融合人IgG1 Fc域並且C端係融合至抗-MAdCAM scFv MECA-89。或者，兩種質體係以等莫耳比率共轉染。第一質體係編碼MECA-89之輕鏈，而第二質體係編碼C端融合至小鼠PD-L1之MECA-89的全長度IgG1重鏈。5至7天之後，係收穫表現該等分子之細胞培養上清液，並且藉由離心予以澄清化，透過0.22μm過濾裝置過濾。該等雙特異性分子係捕獲於proA樹脂。該樹脂係以PBS pH 7.4洗滌，並使用100mM甘胺酸pH 2.5洗脫所捕獲之分子，使用十分之一體積的1M Tris pH 8.5中和。該蛋白質係經緩衝交換至PBS pH 7.4中，並藉由粒徑排阻層析術於Superdex 200 3.2/300上分析。對1μg經純化之材料的分析係藉由還原性及非還原性SDS-PAGE於Bis-Tris 4-12%凝膠執行。
如藉由粒徑排阻層析術以及還原性/非還原性SDS-PAGE所顯示，兩種蛋白質，無論何種取向，係以超過10mg/L表現，並且純化之後的單分散性係大於95%。據此，這表明於Fc域之N端及C端具有不同免疫調節子之雙功能雙特異性分子的產生及活性。這亦特異性地顯示，PD-1促效劑及結合夥伴可表現於Ig Fc域之N端或C端。
實施例6：包含繫結至MAdCAM之PD-1促效劑原型的雙特異性分子可同步結合MAdCAM及PD-1。
簡言之，使用1μg/mL於PBS pH 7.4中之濃度的鼠PD-1以75μl/孔塗覆免疫吸附板，並於4℃溫育過夜。各孔用含有0.05% Tween-20之PBS pH 7.4(洗滌緩衝液)洗滌三次，隨後使用PBS pH 7.4中之1% BSA(封阻緩衝液)以200μl/孔於室溫封阻兩小時。使用洗滌緩衝液洗滌三次之後，包含位於N端或C端之PD-1促效劑的兩種雙特異性分子係於含有1% BSA及0.05% Tween-20之PBS(檢定緩衝液)中稀釋至1nM、10nM及100nM。於室溫，將經稀釋之材料以75μl/孔加至經鼠PD-1塗覆之板，加入時間為1小時。使用洗滌緩衝液洗滌三次之後，於室溫將於檢定緩衝液中濃度為10nM的鼠MAdCAM以75μl/孔加至該板，加入時間為1小時。使用洗滌緩衝液洗滌三次之後，於室溫將於檢定緩衝液中稀釋至0.5μg/mL之山羊生物素化抗鼠MAdCAM多株抗體以75μl/孔加至該板，加入時間為1小時。使用洗滌緩衝液洗滌三次之後，於室溫將以1：5000稀釋於檢定緩衝液中之高敏感度鏈黴親和素HRP以75μl/孔加至該板，加入時間為15分鐘。使用洗滌緩衝液洗滌三次並且使用不含tween-20之洗滌緩衝液洗滌一次之後，該檢定係使用TMB進行，並使用1N HCL終止。量測OD 450nm。該實驗係包括用於在不存在鼠PD-1之情況下非特異性結合至板/阻斷的適宜對照物，以及無MAdCAM對照物，及單特異性對照物，其係不能形成介於鼠PD-1與鼠MAdCAM之間的橋。
結果表明，於1nM、10nM及100nM之濃度下，兩種雙特異性分子皆能夠同步地與鼠MAdCAM及鼠PD-L1相互作用，而該單特異性對照物係不創建橋接訊號。此外，於所測試之任意濃度下，當鼠PD-1不存在於該板表面時，係無任何化合物結合至MAdCAM，表明該等測試化合 物係無一與該板表面非特異性地相互作用。因此，此等結果係表明，靶向結合至MAdCAM及PD-1之雙特異性分子可成功地結合至兩種分子。儘管該等實驗係使用PD-L1作為PD-1抗體之替代品而實施，但預期該PD-1抗體將以類似之方式發揮功能。
實施例7：於PD-1促效劑檢定中，雙特異性PD-L1原型分子係抑制T細胞。
模擬PD-1促效劑抗體之雙特異性分子係經測試以表明PD-1促效作用可抑制T細胞。簡而言，係將7週齡之雌性C57LB/6小鼠犧牲並單離其脾細胞。該等脾細胞係曝露於ConA中3天，並隨後於存在或不存在PD-1類型分子之情況下曝露於抗-CD3，於這一實施例中，該抗-CD3係使用抗人IgG繫結至板之PD-L1雙特異性分子。隨後係將T細胞引入該PD-L1雙特異性分子。觀察到模擬PD-1抗體之PD-L1係T細胞促效劑並且抑制T細胞活化。相同之實驗係使用與抗-MAdCAM抗體融合之PD-L1雙特異性分子重複之，該抗體係藉由與經MAdCAM塗覆之板相互作用而繫結至板。觀察到該模擬PD-1促效劑之PD-L1/抗-MAdCAM抗體係T細胞活性之有效促效劑。此等結果係表明，模擬PD-1抗體/MAdCAMAb融合蛋白質之雙特異性分子可在當該分子經由位於該分子末端之MAdCAM抗體組分而被捕獲時，向初代鼠T細胞原始細胞發出功能性抑制訊號。
實施例8：於PD-1檢定中，具有不同組織繫帶之雙特異性PD-1原型分子可抑制T細胞。
PD-L1之融合分子係用作PD-1抗體之替代品並且係鏈結至I類H-2Kk抗體。該MHC I類H-2Kk繫結之PD-L1分子係具有類似於實 施例6及7中所揭示之資料的功能性結合。簡而言，使用伴刀豆球蛋白A(ConA)及IL-2刺激來自C57B1/6小鼠之脾細胞3天。於4℃，使用抗-CD3(2C11)塗覆板，洗滌。於37℃，使用抗人IgG塗覆板3小時並洗滌。加入單特異性抗-H-2Kk(16-3-22)或雙特異性抗-H-2Kk：mPD-L1，於37℃溫育3小時並洗滌。全部測試製品係皆含有人IgG1-Fc部位。加入PBS(無Tx)以測定檢定背景。將ConA原始細胞洗滌2次，加入該板中並37℃溫育。24小時之後，移除上清液。藉由MSD測定IFNg水準。48小時之後，藉由Cell Titer-glo分析細胞活力/新陳代謝。於鼠PD-1促效作用檢定中，當經由該IgG Fc域而被捕獲時，MHC I類繫結之PD-L1雙特異性分子可衰減T細胞活化。因此，這一實施例表明，當不同之雙特異性原型分子經由不同之組織繫帶而被步驟時，該分子可向初代鼠T細胞原始細胞發出功能性抑制訊號，於這一情況下，該分子係抗MHC I類H-2Kk之鼠抗體。據此，這一資料表明，繫結並非MAdCAM特異性者，並且使用如本文所提供之其它可用作靶向部分之分子係可能者。
實施例9：PD-1促效劑可於Jurkat細胞中誘導訊號傳導
表現融合至β-半乳糖苷酶供體之PD-1以及融合至β-半乳糖苷酶受體之SHP-2兩者的Jurkat細胞係於測試條件下加至板中並溫育2小時。促效劑PD-1抗體係誘導訊號傳導及SHP-2召集、酶互補及活性β-半乳糖苷酶之形成。加入β-半乳糖苷酶受質，並且可於標準發光板讀板器上量測化學發光。藉由化學發光量測促效作用，其中所量測之化學發光愈強表明促效作用愈大。
PD-1/MAdCAM雙特異性分子之促效作用係於這一檢定中量測。Cl10(UCB)及CC-90006(Celgene/Anaptys)係用作PD-1促效劑抗體。兩者皆係活性者，並且係於Ig捕獲檢定型式之功能檢定中顯現PD-1促效作用。簡而言，於4℃使用抗人IgG塗覆板過夜，並洗滌。加入抗破傷風毒素(TT)或基準促效劑抗-PD-1單株抗體Cl10或CC-90006，於37℃溫育1小時並洗滌。全部測試製品係皆含有人IgG1-Fc。加入介質(無Tx)以測定檢定背景。板係洗滌3次。表現融合至β-半乳糖苷酶供體之PD-1以及融合至β-半乳糖苷酶受體之SHP-2兩者的Jurkat細胞係加至板中並溫育2小時。促效劑PD-1抗體係誘導訊號傳導及SHP-2召集、酶互補及活性β-半乳糖苷酶之形成。加入β-半乳糖苷酶受質，並且係於標準發光板讀板器上量測化學發光。於Jurkat報告基因檢定中，兩種人PD-1促效劑抗體(Cl10及CC-90006)係結合並誘導訊號傳導(促效作用之代用品)。因此，這一檢定係功能性PD-1促效劑檢定。Cl10：MECA89(MECA89係已知之MAdCAM抗體)係新穎之雙特異性分子，係藉由融合MAdCAM抗體MECA89[scFv]至Cl10之重鏈之C端而創建。發現這一融合蛋白質係活性者，並且於功能性檢定中，當經由IgG Fc域而被捕獲時係顯現PD-1促效作用，Cl10純蛋白亦如此。惟，於使用MAdCAM作為捕獲劑之功能性檢定型式中，僅Cl10：MECA89係活性者(該等單特異性組分並不傳導訊號)。
簡言之，於4℃使用抗人IgG或重組mMAdCAM-1塗覆板過夜，並洗滌。加入單特異性抗破傷風毒素(TT)、抗-MAdCAM-1(MECA89)或促效劑抗-PD-1(Cl10)或雙特異性Cl10：MECA89，於37℃溫育1小時並洗滌。全部測試製品係皆含有人IgG1-Fc部位。加入PBS(無 Tx)以測定檢定背景。板係洗滌2次。表現融合至β-半乳糖苷酶供體之PD-1以及融合至β-半乳糖苷酶受體之SHP-2兩者的Jurkat細胞係加至板中並溫育2小時。促效劑PD-1抗體係誘導訊號傳導及SHP-2召集、酶互補及活性β-半乳糖苷酶之形成。加入β-半乳糖苷酶受質，並且係於標準發光板讀板器上量測化學發光。結果：於Jurkat報告基因檢定中，當使用抗-IgG Fc捕獲劑塗覆該板時，Cl10以及該MAdCAM繫結之Cl10雙特異性分子兩者皆可誘導PD-1訊號傳導；但當使用重組MAdCAM蛋白質塗覆該板時，僅該MAdCAM繫結之雙特異性分子可於該報告基因檢定中誘導PD-1訊號傳導。此等結果係表明，使用MAdCAM繫結並且含有PD-1促效劑抗體之分子係功能性者，此係類似於使用PD-L1作為該PD-1促效劑代用品所顯示之結果。
實施例10：PD-1促效劑抗體之生成
於生成針對PD-1之免疫應答的條件下，使用鼠PD-1將PD-1缺陷小鼠免疫。生成54種融合瘤，並鑒別結合小鼠PD-1者。根據實施例4及6中揭示之方法，分析藉由不同融合瘤產生之抗體的T細胞促效作用。該等54種融合瘤中，至少6種係經鑒別為PD-1促效劑。亦測試該等抗體與PD-1之結合，並且發現係於與PD-L1結合位點相同之位點結合。
簡言之，係使用下列檢定測定與PD-L1結合位點之結合。使用75μL的處於1x PBS,pH 7.4中之重組小鼠PD-L1-Fc(2μg/mL)塗覆免疫吸附板過夜。板隨後使用1x PBS洗滌3次，並於室溫使用以1% BSA補充之1x PBS阻斷2小時。於室溫振盪下，使用100nM的所指明之處於以1% BSA及0.05% Tween20補充之1x PBS(檢定緩衝液)中的抗 鼠PD-1抗體將重組小鼠PD-1-Fc(1nM)溫育1小時。阻斷之後，用以0.05% Tween20 PBST補充之1x PBS洗滌3次，並使用板結合之小鼠PD-L1溫育抗體-PD-1綴合物。使用PBST洗去未結合之PD-1之後，使用75μL的處於檢定緩衝液中之生物素化多株抗-PD-1抗體(0.5μg/mL)溫育，之後使用亦稀釋於檢定緩衝液中之1：5000伴刀豆球蛋白HRP擴增。於先後加入100μL TMB及100μL 1M HCl以終止該顯影之前，係使用PBST洗滌該等板3次，之後使用1x PBS洗滌三次。讀取於450nm之吸收，並歸一化至在不存在抗體之情況下PD-1與PD-L1的結合。結果顯示，活性抗體係結合至PD-L1結合位點。無活性抗體並不結合至PD-L1結合位點。因此，這一實施例表明除了產生先前鑒別之本文所揭示之PD-1促效劑抗體之外，亦產生作為促效劑之抗-PD-1抗體的能力。
實施例11：經繫結之抗-PD-1抗體係用作PD-1促效劑。
針對重組人、小鼠及食蟹獮猴PD-1蛋白質，透過重複選擇輪篩選人抗體scFv噬菌體庫，以富集識別全部三種前述PD-1種同源物之抗體純株。該等scFv純株係構造為nt-VH-鏈結基-VL-ct型式並且係經由pIII外殼蛋白融合至M13噬菌體表面。選擇之後，係篩查結合至表現於CHO細胞之細胞表面之人、小鼠及食蟹獮猴PD-1的純株性scFv。使用標準分子生物學技術，將所發現之與全部三種細胞表面表現之PD-1種同源物交叉反應的純株轉換為人IgG1型式，藉此每一分子係由總計四個肽鏈(2條重鏈及2條輕鏈)構成。兩條輕鏈係彼此相同，並且兩條重鏈係彼此相同，如所提供者。
兩條相同之重鏈係均二聚化，並且兩條相同之輕鏈係與每一重鏈配對以形成完整之人IgG1。該Fc域係含有L234A、L235A及G237A突變以消除FcγR相互作用。所轉化之人IgG1抗-PD-1抗體係經轉染並表現於HEK293 Expi細胞中，並藉由蛋白質A層析術純化。使用超微量分光光度計與抗體比消光係數結合來測定蛋白質濃度。抗體係配製於PBS pH 7.4中。
接著，於本文所揭示之Jurkat檢定中測試該等抗-PD-1抗體之促效劑活性。簡言之，組織培養板係使用抗-IgG塗覆或保留為未塗覆。對於經捕獲之型式，測試製品或對照物係以100nM、25nM或12.5nM將入該抗-IgG塗覆之孔中並於37℃溫育3小時。洗滌該板，並加入Jurkat PD-1細胞。對於可溶之型式，可溶性測試製品或對照物係以100nM、25nM或12.5nM加入已經含有Jurkat PD1細胞之孔匯總。發光係於讀板器中量測。結果表明，於Jurkat檢定中，當該等-PD-1抗體係經由抗-IgG而非以可溶性型式被捕獲時，抗十二種人/鼠交叉反應之PD-1抗體中的九種係顯示劑量依賴性之活性。這一資料表明，當該抗-PD-1抗體藉由靶向部分被繫結至其靶標時，係可用作促效劑。
總之，不受縛於任何特定理論，本文中呈遞之資料係表明，PD-1促效劑/MAdCAM雙特異性分子可結合MAdCAM及PD-1兩者並且亦促效T細胞活性。因此，該等分子可用以治療本文所提供之各種病症，並且提供局部化之及/或組織特異性之免疫調節以及下調之T細胞應答。
實施例12：IL-2突變蛋白質之生成
將含有編碼於N端(SEQ ID NO：57)或C端(SEQ ID NO：58)融合至人IgG1 Fc域之人IL-2M多肽之單個基因的pTT5載體轉染至HEK293 Expi細胞中。5至7天之後，係收穫表現IL-2M之細胞培養上清液，並且藉由離心予以澄清化，透過0.22μm過濾裝置過濾。IL-2M係捕獲於proA樹脂。該樹脂係以PBS pH 7.4洗滌，並使用0.25%乙酸pH 3.5沖提所捕獲之蛋白質，使用十分之一體積的1M Tris pH 8.0中和。該蛋白質係經緩衝交換至30mM HEPES 150mM NaCl pH 7，並藉由粒徑排阻層析術於Superdex 200 3.2/300管柱分析。對5μg經純化之材料的分析係藉由還原性及非還原性SDS-PAGE於Bis-Tris 4-12%凝膠上執行。如藉由粒徑排阻層析術以及還原性/非還原性SDS-PAGE所顯示，IL-2M係以超過10mg/L表現，並且純化之後的單分散性係大於95%。
實施例13：IL-2M分子可結合CD25
使用0.5μg/mL於PBS pH 7.4中之濃度的CD25以75μl/孔塗覆免疫吸附板，並於4℃溫育過夜。各孔用含有0.05% Tween-20之PBS pH 7.4(洗滌緩衝液)洗滌三次，隨後使用PBS pH 7.4中之1% BSA(封阻緩衝液)以200μl/孔於室溫封阻兩小時。使用洗滌緩衝液洗滌三次之後，將實施例12之IL-2M分子於含有1% BSA及0.05% Tween-20(檢定緩衝液)中稀釋為十一倍至兩倍之連續稀釋，最高濃度為2nM。於室溫，將經稀釋之材料以75μl/孔加至經CD25塗覆之板，加入時間為1小時。使用洗滌緩衝液洗滌三次之後，於室溫將於檢定緩衝液中稀釋至0.05μg/mL之山羊生物素化抗-IL-2多株抗體以75μl/孔加至該板，加入時間為1小時。使用洗滌緩衝液洗滌三次之後，於室溫將以1：5000稀釋於檢定 緩衝液中之高敏感度鏈黴親和素HRP以75μl/孔加至該板，加入時間為15分鐘。使用洗滌緩衝液洗滌三次並且使用不含tween-20之洗滌緩衝液洗滌一次之後，該檢定係使用TMB顯影，並使用1N HCL終止。量測OD 450nm。該實驗係包括用於在不存在CD25之情況下IL-2M分子非特異性結合至該板/封阻的適宜對照物，以及不能結合CD25之陰性對照分子。
結果指示，於2nM至1.9pM之濃度下，IL-2M分子係能夠結合CD25，且EC50低於奈莫耳。此外，於所測試之任意濃度下，當CD25不存在於該板表面時，係未偵檢到任何化合物，表明該等測試化合物係無一與該板表面非特異性地相互作用(資料未顯示)。
實施例14：測定IL-2M分子之潛能及選擇性的體外P-STAT5檢定。
使用FICOLL-PAQUE Premium及Sepmate管，從新鮮單離之肝素化人類全血製備外周血單核細胞(PBMC)。於存在野生型IL-2或實施例12之IL-2M的情況下，將PBMC於10%胎牛血清RPMI培養基中培養20分鐘，隨後使用BD Cytofix固定10分鐘。
之後，經固定之細胞係先後使用BD Perm III及BioLegend FOXP3透化緩衝液透化。使用人血清封阻10分鐘之後，細胞係使用磷酸化STAT5 FITC、CD25 PE、FOXP3 AF647及CD4 PerCP Cy5.5的抗體染色30分鐘，隨後於具有讀板器之Attune NXT擷取。實施例12之IL-2M係潛在地並且選擇性地誘導Treg而非Teff之STAT5磷酸化。
實施例15：生成雙特異性MAdCAM繫結之IL-2M分子的方法
將pTT5載體轉染至HEK293 Expi細胞內，該載體係含有編碼單一B0001多肽之單一基因，該多肽係包含具有N88D、V69A及Q74P 突變的IL-2突變蛋白質及scFV抗體，該IL-2突變蛋白質係經由GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)鏈結基融合至如本文所提供的具有LALA突變之Fc蛋白質，該scFV抗體係經由GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)鏈結基B0002結合至MAdCAM或類似分子，並且人IL-2M係於N端融合人IgG1 Fc域並且於C端融合抗-mMAdCAM scFv MECA-89。對於B0003，兩種質體係以等莫耳比率共轉染。第一質體係編碼MECA-89之輕鏈，而第二質體係編碼C端融合至人IL-2M之MECA-89的全長度IgG1重鏈。5至7天之後，係收穫表現B0001、B0002及B0003之細胞培養上清液，並且藉由離心予以澄清化，透過0.22μm過濾裝置過濾。B0001、B0002及B0003係捕獲於proA樹脂。該樹脂係以PBS pH 7.4洗滌，並使用0.25%乙酸pH 3.5洗脫所捕獲之蛋白質，使用十分之一體積的1M Tris pH 8.0中和。該蛋白質係經緩衝交換至30mM HEPES 150mM NaCl pH 7，並藉由粒徑排阻層析術於Superdex 200 3.2/300分析。對1μg經純化之材料的分析係藉由還原性及非還原性SDS-PAGE於Bis-Tris 4-12%凝膠執行。
如藉由粒徑排阻層析術以及還原性/非還原性SDS-PAGE所顯示，B0001、B0002及B0003係以超過8mg/L表現，並且純化之後的單分散性係大於95%。這一實驗顯示，可產生免疫調節子位於N端或C端之雙功能雙特異性分子，並且該IL-2M蛋白質之位置(或於N端或於C端)並不顯著改變表現並因此可使用任一型式。
實施例16：雙特異性MAdCAM繫結之IL-2M分子可同步地結合MAdCAM及CD25
使用1μg/mL於PBS pH 7.4中之濃度的重組小鼠MAdCAM-1以75μl/孔塗覆免疫吸附板，並於4℃溫育過夜。各孔用含有0.05% Tween-20之PBS pH 7.4(洗滌緩衝液)洗滌三次，隨後使用PBS pH 7.4中之1% BSA(封阻緩衝液)以200μl/孔於室溫封阻兩小時。使用洗滌緩衝液洗滌三次之後，將B0001、B0002、B0003於含有1% BSA及0.05% Tween-20之PBS(檢定緩衝液)中稀釋至1nM、10nM及100nM。於室溫，將經稀釋之材料以75μl/孔加至經鼠MAdCAM-1塗覆之板，加入時間為1小時。使用洗滌緩衝液洗滌三次之後，於室溫將於檢定緩衝液中濃度為10nM的人CD25以75μl/孔加至該板，加入時間為1小時。使用洗滌緩衝液洗滌三次之後，於室溫將於檢定緩衝液中稀釋至0.4μg/mL之山羊生物素化抗人CD25多株抗體以75μl/孔加至該板，加入時間為1小時。使用洗滌緩衝液洗滌三次之後，於室溫將以1：5000稀釋於檢定緩衝液中之高敏感度鏈黴親和素HRP以75μl/孔加至該板，加入時間為15分鐘。使用洗滌緩衝液洗滌三次並且使用不含tween-20之洗滌緩衝液洗滌一次之後，該檢定係使用TMB顯影，並使用1N HCL終止。量測OD 450nm。該實驗係包括用於在不存在鼠MAdCAM-1之情況下實施例15之蛋白質非特異性結合至板/封阻的適宜對照物，以及無CD25對照物，及單特異性對照物，其係不能形成介於人CD25與鼠MAdCAM之間的橋。
觀察到於1nM、10nM及100nM之濃度下，實施例15之雙特異性分子能夠同步地與鼠MAdCAM及人CD25相互作用，而該單特異性對照物係不創建橋接訊號。此外，於所測試之任意濃度下，當鼠MAdCAM-1不存在於該板表面時，係無任何化合物結合至CD25，表明該 等測試化合物係無一與該板表面非特異性地相互作用。此等結果表明，於功能性結合檢定諸如ELISA中，該等雙特異性分子皆可結合MAdCAM及CD25兩者。
實施例17：表明當於溶液中或當繫結時雙特異性MAdCAM繫結之IL-2M之活性及選擇性的體外P-STAT5檢定
重組小鼠MAdCAM係於96孔高結合板(Corning)之孔塗覆過夜。使用PBS洗滌2次之後，使用10% FBS RPMI介質將該板封阻1小時。實施例15之雙特異性MAdCAM繫結之IL-2M或未繫結之IL-2M對照物(諸如彼等於實施例12中製備者)係經捕獲1小時。使用PBS洗滌2次之後，新鮮單離之人PBMC係使用所捕獲之IL-2M刺激60分鐘，或使用溶液中之IL-2M刺激作為對照。細胞隨後使用BD Cytofix固定10分鐘，依序使用BD Perm III及BioLegend FOXP3透化緩衝液透化，使用人血清阻斷，使用磷酸化STAT5 FITC(CST)、CD25 PE、FOXP3 AF647及CD4 PerCP Cy5.5(BD)的抗體染色30分鐘，並於具有讀板器之Attune NXT上擷取。於溶液中，兩種分子對於Treg及Teff係具有可比較之活性及選擇性。使用小鼠MAdCAM塗覆之板係能夠捕獲實施例15之雙特異性分子，並且所捕獲/固定化之雙特異性分子仍能夠相對於Teff 而選擇性地活化Treg 。這一實施例表明，當處於溶液中時或當被捕獲/固定化時，MAdCAM繫結之IL-2M分子可保留生物學活性。
實施例18：IL-2突變蛋白質之免疫原性
使用可於www“dot”cbs“dot”dtu“dot”dk/services/NetMHCIIpan/發現之NetMHCIIPan 3.2軟體分析IL-2突變蛋白質序列。 人工神經網路係用以測定與MHC II類等位基因之肽親和性。於該分析中，具有潛在地與MHC II類分子直接相互作用之具有9個殘基的肽係被識別為結合核心。鄰近結合核心的具有間接影響該結合之潛能的殘基亦作為掩蔽殘基而考察之。當其與MHC II類分子之預計KD 係低於包含50nM時，該等結合核心及掩蔽殘基兩者之肽係標記為強結合劑。強結合劑係具有更大之誘導T細胞免疫原性的機會。
總計9個MHCII等位基因係包括於該計算機模擬分析中，這9個等位基因在北美及歐洲具有高度代表性。所測試之IL-2M(IL-2突變蛋白質)分子組係包括具有L53I、L56I、L80I或L118I突變的IL-2突變蛋白質。僅MHCII等位基因DRB1_1101、DRB1_1501、DRB1_0701及DRB1_0101為任何所評估之分子所命中。於包括具有C125S突變之野生型IL-2在內的全部所測試構造物之間，DRB_1501所命中之肽係相同。L80I之加入移除了1個關於DRB1-0101之T細胞表位[ALNLAPSKNFHLRPR(SEQ ID NO：626)]，並且適度降低了其它兩個T細胞表位[EEALNLAPSKNFHLR(SEQ ID NO：627)及EALNLAPSKNFHLRP(SEQ ID NO：628)]之親和性。對於MHCII等位基因DRB1-0701，L80I係移除1個T細胞表位[EEALNLAPSKNFHLR(SEQ ID NO：627)]。因此，該資料表明，包含L80I突變之IL-2突變蛋白質之免疫原性應較低，此係來自該計算機模擬分析之令人驚奇者且意外的結果。
實施例19：額外之IL-2突變蛋白質的生成
將含有編碼SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：56(及IL-2M對照物；SEQ ID NO：50)多肽之單 一IL-2M(IL-2突變蛋白質)之單一基因的pTT5載體轉染至HEK293 Expi細胞內，該多肽中，人IL-2M係於N端融合人IgG1 Fc域。5至7天之後，收穫表現SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：56(及IL-2M對照物；SEQ ID NO：50)之細胞培養上清液，藉由離心以及透過0.22μm過濾裝置過濾而使之澄清。SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：56(及IL-2M對照物；SEQ ID NO：50)係捕獲於proA樹脂。該樹脂係以PBS pH 7.4洗滌，並使用0.25%乙酸pH 3.5沖提所捕獲之蛋白質，使用十分之一體積的1M Tris pH 8.0中和。該蛋白質係經緩衝交換至30mM HEPES 150mM NaCl pH 7，並藉由粒徑排阻層析術於Superdex 200 3.2/300管柱分析。對5μg經純化之材料的分析係藉由還原性及非還原性SDS-PAGE於Bis-Tris 4-12%凝膠執行。
如藉由粒徑排阻層析術以及還原性/非還原性SDS-PAGE所顯示，SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：56(及IL-2M對照物；SEQ ID NO：50)之IL-2M係以超過8mg/L表現，並且純化之後的單分散性係大於95%。
實施例20：實施例19之IL-2M可結合CD25
使用0.5μg/mL於PBS pH 7.4中之濃度的CD25以75μl/孔塗覆免疫吸附板，並於4℃溫育過夜。各孔用含有0.05% Tween-20之PBS pH 7.4(洗滌緩衝液)洗滌三次，隨後使用PBS pH 7.4中之1% BSA(封阻緩衝液)以200μl/孔於室溫封阻兩小時。使用洗滌緩衝液洗滌三次之後，將SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：56之IL-2M於含有1% BSA及0.05% Tween-20(檢定緩衝液)中稀釋為十 一倍至兩倍之連續稀釋，最高濃度為2nM。於室溫，將經稀釋之材料以75μl/孔加至經CD25塗覆之板，加入時間為1小時。使用洗滌緩衝液洗滌三次之後，於室溫將於檢定緩衝液中稀釋至0.05μg/mL之山羊生物素化抗-IL-2多株抗體以75μl/孔加至該板，加入時間為1小時。使用洗滌緩衝液洗滌三次之後，於室溫將以1：5000稀釋於檢定緩衝液中之高敏感度鏈黴親和素HRP以75μl/孔加至該板，加入時間為15分鐘。使用洗滌緩衝液洗滌三次並且使用不含tween-20之洗滌緩衝液洗滌一次之後，該檢定係使用TMB顯影，並使用1N HCL終止。量測OD 450nm。該實驗係包括用於在不存在CD25之情況下該分子非特異性結合至該板/封阻的適宜對照物。結果指示，於2nM至1.9pM之濃度下，實施例19之突變蛋白質係能夠結合CD25，且EC50低於奈莫耳。此外，於所測試之任意濃度下，當CD25不存在於該板表面上時，係未偵檢到任何化合物，表明該等測試化合物係無一與該板表面非特異性地相互作用。因此，實施例19之突變蛋白質可結合CD25。
實施例21：實施例19之IL-2突變蛋白質係具潛能及選擇性者
使用FICOLL-PAQUE Premium及Sepmate管，從新鮮單離之肝素化人類全血製備外周血單核細胞(PBMC)。於存在野生型IL-2或實施例19之突變蛋白質的情況下，將PBMC於10%胎牛血清RPMI培養基中培養20分鐘，隨後使用BD Cytofix固定10分鐘。之後，經固定之細胞係先後使用BD Perm III及BioLegend FOXP3透化緩衝液透化。使用人血清封阻10分鐘之後，細胞係使用磷酸化STAT5 FITC(CST)、CD25 PE、FOXP3 AF647及CD4 PerCP Cy5.5(全部BD)的抗體染色30分鐘，隨後 於具有讀板器之Attune NXT擷取。發現，實施例19之IL-2突變蛋白質係具潛能者，並且具有相對於Teff的Treg選擇性。發現，與其它突變蛋白質相比，包含L118I突變之突變蛋白質係具有增加之活性及選擇性。
實施例22：於人源化小鼠中，IL-2突變蛋白質係擴張Treg
使用人CD34+造血幹細胞人源化之NSG小鼠係購自傑克遜實驗室(Jackson Labs)。於第0天及第7天，小鼠係經皮下投藥1μg IL-2突變蛋白質(SEQ ID NO：50)或其它IL-2突變蛋白質SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55或SEQ ID NO：56。於第7天，小鼠係經安樂死，並收集全血及脾臟。全血係以等量小樣置於96孔深孔板中，並使用BD Fix Lyse固定10分鐘。使用70μm過濾器(BD)單離脾細胞，並使用來自BioLegend之RBC裂解緩衝液裂解紅血球。使用2%胎牛血清PBS洗滌之後，脾細胞係使用近紅外活死細胞染色劑(Invitrogen)染色20分鐘，隨後使用BioLegend固定緩衝液固定20分鐘。全血細胞及脾細胞兩者隨後係使用BioLegend FOXP3透化緩衝液透化，使用人血清封阻，使用人CD8a FITC(BL)、人CD25 PE(BD)、人FOXP3 AF647(BD)CD4 PerCP Cy5.5(BD)、人Siglec-8 PE Cy7(BL)、人CD3 BV421(BL)、人CD45 BV605(BL)、人CD56 BV785(BL)及鼠CD45(BV711)的抗體染色30分鐘，並於具有載板器之Attune NXT擷取。
與媒介對照物相比，IL-2M SEQ ID NO：54及SEQ ID NO：56係選擇性地誘導小鼠脾臟及全血中之Treg(p<0.0005，藉由使用鄧恩多重比較檢驗之變異數分析(ANOVA with Dunn’s Multiple Comparison Test))。其它IL-2M亦增加Treg之頻次，但此等改變與媒介物群組相比係 統計學不顯著。投藥SEQ ID NO：54及SEQ ID NO：56之小鼠之CD56pos NK細胞、CD3pos T細胞、CD8pos細胞毒T淋巴細胞、CD4pos協助者T細胞或CD25lo/FOXP3neg T效應子的頻次無顯著改變。此等結果表明，IL-2突變蛋白質係增加調節性T細胞之頻次。
實施例23：雙特異性mMAdCAM繫結之IL-2M分子的生成
使用抗體產生雙特異性MAdCAM-IL-2突變蛋白，該抗體係MECA89之重鏈或輕鏈。此係使用以等莫耳比率共轉染之兩種編碼重鏈及輕鏈兩者的質體產生。第一質體係編碼MECA-89之輕鏈，而第二質體係編碼C端融合至包含L118I突變之人IL-2M之MECA-89的全長度IgG1重鏈。3至5天之後，係收穫表現該雙特異性分子之細胞培養上清液，並且藉由離心予以澄清化，透過0.22μm過濾裝置過濾。該雙特異性分子係捕獲於proA樹脂。該樹脂係以PBS pH 7.4洗滌，並使用0.25%乙酸pH 3.5洗脫所捕獲之蛋白質，使用十分之一體積的1M Tris pH 8.0中和。該蛋白質係經緩衝交換至30mM HEPES 150mM NaCl pH 7，並藉由粒徑排阻層析術於AdvanceBio SEC管柱分析。對1μg經純化之材料的分析係藉由還原性及非還原性SDS-PAGE於Bis-Tris 4-12%凝膠執行。
如藉由粒徑排阻層析術以及還原性/非還原性SDS-PAGE所顯示，該雙特異性分子係以超過17mg/L表現，並且純化之後的單分散性係大於95%。此等結果表明，能夠產生具有位於C端之免疫調節子的雙功能雙特異性分子。
實施例24：MAdCAM抗體之生成
針對重組人、小鼠及食蟹獮猴MAdCAM蛋白質，透過重複選擇輪篩選人抗體scFv噬菌體庫，以富集識別全部三種前述MAdCAM種同源物之抗體純株。該等scFv純株係構造為nt-VH-鏈結基-VL-ct型式並且係經由pIII外殼蛋白融合至M13噬菌體表面。選擇之後，係藉由ELISA篩查結合至表現於CHO細胞之細胞表面之人、小鼠及食蟹獮猴MAdCAM的純株性scFv。使用標準分子生物學技術或基因合成，將所發現之與全部三種細胞表面表現之MAdCAM種同源物交叉反應的純株轉換為人IgG1型式，藉此每一分子係由總計四個肽鏈(2條重鏈及2條輕鏈)構成。兩條輕鏈係彼此相同，並且兩條重鏈係彼此相同。兩條相同之重鏈(1及2)係均二聚化，並且兩條相同之輕鏈(3及4)係與每一重鏈配對以形成完整之人IgG1。該Fc域係含有L234A、L235A及G237A突變以消除FcγR相互作用。型式可例示如下：
鏈1：nt-VH1-CH1-CH2-CH3-ct
鏈2：nt-VH1-CH1-CH2-CH3-ct
鏈3：nt-VK1-CK-ct
鏈4：nt-VK1-CK-ct
此外，亦使用標準分子生物學技術(諸如Gibson選殖過程)或基因合成將MAdCAM scFv轉化為雙特異性型式，藉此，IL-2M係位於MAdCAM抗體之IgG重鏈的C端，如下所述：
鏈1：nt-VH1-CH1-CH2-CH3-ct-鏈結基-IL-2M
鏈2：nt-VH1-CH1-CH2-CH3-ct-鏈結基-IL-2M
鏈3：nt-VK1-CK-ct
鏈4：nt-VK1-CK-ct
ELISA係用以分析抗-MAdCAM scFv與經捕獲或板結合之人、食蟹獮猴及鼠MAdCAM的結合。生物素化之人及食蟹獮猴MAdCAM係捕獲於伴刀豆球蛋白塗覆之板，而小鼠MAdCAM-Fc直接塗覆於免疫吸附板。於封阻步驟之後，洗滌該板，並將細胞周質粗裂解液中之scFv施加至該板表面。適應抗-V5 HRP綴合物偵檢scFv結合。該檢定係使用TMB受質進行並使用酸終止。量測於450nm之吸收。於該ELISA之每一步驟之間，係應用適宜之洗滌步驟。評估人與食蟹獮猴之比較以及人與小鼠之比較。亦使用表面電漿子共振技術分析該等scFv。經由該V5標籤被捕獲在生物感測器表面之後，可溶之單體性人MAdCAM係經滴定，量測結合及解離兩者，並擬合至允許推導結合及解離速率的1：1結合模型。
量測結果指示，所測試之純株大多數係具有人與食蟹獮猴MAdCAM結合交叉反應性，而少部分係具有額外的與小鼠MAdCAM交叉反應性。生物感測器實驗表明，該等純株係顯現一定範圍內之對人MAdCAM的結合及解離速率，k a 值係103 1/Ms至107 1/Ms之範圍，並且k d 值係10-1 至10-4 1/s之範圍。某些純株係具有小於2x10e2 1/s之解離速率。因此，MadCAM抗體係經生成並且可用於雙特異性型式中。
實施例25：實施例19之雙特異性人MAdCAM繫結之IL-2M的生成
兩種質體係各自以等莫耳比率共轉染。於每一情況下，第一質體係編碼人MAdCAM之輕鏈，並且第二質體係編碼C端融合至包含L118I突變之人IL-2M的人MAdCAM之全長度IgG1重鏈，如本文所提供之MAdCAM-IL-2突變蛋白質雙特異性化合物表中所例示者。3至5天 之後，係收穫表現人MAdCAM-IL-2M雙特異性分子之細胞培養上清液，並且藉由離心予以澄清化，透過0.22μm過濾裝置過濾。人MAdCAM-IL-2M雙特異性分子係捕獲於proA樹脂。該樹脂係以PBS pH 7.4洗滌，並使用0.25%乙酸pH 3.5洗脫所捕獲之蛋白質，使用十分之一體積的1M Tris pH 8.0中和。該等蛋白質係經緩衝交換至30mM HEPES 150mM NaCl pH 7，並藉由粒徑排阻層析術於AdvanceBio SEC管柱分析。對1μg經純化之材料的分析係藉由還原性及非還原性SDS-PAGE於Bis-Tris 4-12%凝膠上執行。如藉由粒徑排阻層析術以及還原性/非還原性SDS-PAGE所顯示，人MAdCAM-IL-2M雙特異性分子係以超過10mg/L表現，並且純化之後的單分散性係大於95%。因此，此等結果表明，可產生具有位於C端之免疫調節子之完全的人雙功能雙特異性分子。
實施例26：藉由IL-2突變蛋白質誘導之訊號傳導的耐久性
使用FICOLL-PAQUE Premium及Sepmate管，從新鮮單離之肝素化人類全血製備外周血單核細胞(PBMC)。於存在IL-2M之情況下，將PBMC於10%胎牛血清RPMI培養基中培養60分鐘。細胞隨後經洗滌3次，並另外溫育3小時。細胞隨後使用BD Cytofix固定10分鐘。之後，經固定之細胞係先後使用BD Perm III及BioLegend FOXP3透化緩衝液透化。使用人血清封阻10分鐘之後，細胞係使用磷酸化STAT5 FITC、CD25 PE、FOXP3 AF647及CD4 PerCP Cy5.5的抗體染色30分鐘，隨後於具有讀板器之Attune NXT擷取。與對照物相比，實施例19之全部四種IL-2突變蛋白質皆誘導Treg而非Teff之耐久的訊號傳導。SEQ ID NO：56之IL-2突變蛋白質係優於SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：53之IL-2突變蛋白質。此等結果表明，IL-2可誘導Treg中之耐久且選擇性之訊號傳導，這應導致更大程度之體內Treg擴張並且允許使用功能更低頻次之投藥以達成Treg擴張。
實施例27：表明當於溶液中或當繫結時雙特異性人MAdCAM繫結之IL-2突變蛋白質之活性及選擇性的體外P-STAT5檢定
重組人MAdCAM係於96孔高結合板(Corning)之孔塗覆過夜。使用PBS洗滌2次之後，使用10% FBS RPMI介質將該板封阻1小時。MAdCAM繫結之IL-2M突變蛋白質雙特異性分子或未繫結之IL-2M對照物係經捕獲1小時。使用PBS洗滌2次之後，新鮮單離之人PBMC係使用所捕獲之IL-2MM刺激60分鐘，或使用溶液中之IL-2MM刺激作為對照。細胞隨後使用BD Cytofix固定10分鐘，依序使用BD Perm III及BioLegend FOXP3透化緩衝液透化，使用人血清封阻，使用磷酸化STAT5 FITC(CST)、CD25 PE、FOXP3 AF647及CD4 PerCP Cy5.5(BD)的抗體染色30分鐘，並於具有讀板器之Attune NXT擷取。
結果：於溶液中，繫結至人MAdCAM之IL-2M雙特異性分子以及對照物係具有可比較之活性以及相對於Teff之Treg選擇性。使用MAdCAM塗覆之板係能夠捕獲雙特異性分子，並且所捕獲/固定化至雙特異性分子仍能夠相對於Teff而選擇性地活化Treg。這一實施例表明，當處於溶液中時或當被捕獲/固定化時，靶向人MAdCAM之IL-2MM雙特異性分子可保留生物學活性。
實施例28：IL-2突變蛋白質誘導人Treg中之pSTAT5。
從來自六位健康供體之肝素化全血純化的PBMC係於37℃使用IL-2突變蛋白質之連續稀釋物處理30分鐘，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：59之序列，其中X3 係I並且X1 、X2 及X4 係L，或係包含SEQ ID NO：59之序列，其中X4 係I並且X1 、X2 及X3 係L。細胞係經固化、洗滌、透化及洗滌。細胞係使用抗體染色，該等抗體係偵檢表面標記物及細胞內/細胞核標記物兩者(pSTAT5及FOXP3)。資料係於Attune NxT流式細胞儀收集。Treg係分選為單核、單態、CD3pos、CD4pos、CD25hi、FoxP3pos。量測所分選之表現經磷酸化之STAT5的Treg之百分比。最佳擬合曲線係擬合至pSTAT5之劑量應答，並測定EC50值。測定全部6位供體的SEQ ID NO：59(其中X3 係I並且X1 、X2 及X4 係L)之IL-2的平均EC50值(37.26±7.30；n=16)以及SEQ ID NO：59(其中X4 係I並且X1 、X2 及X3 係L)之IL-2的平均EC50值(23.11±5.35；n=15)。資料表明，該等IL-2突變蛋白質可誘導人Treg中之pSTAT5。包含SEQ ID NO：59(其中X4 係I並且X1 、X2 及X3 係L)之序列的IL-2比包含SEQ ID NO：39之IL-2更有效，但兩者對於多種細胞群體皆係活性者。
實施例29：IL-2突變蛋白質係於體外誘導猴PBMC中之pSTAT5。
從來自三隻健康猴之肝素化全血純化的PBMC係於37℃使用IL-2突變蛋白質之連續稀釋物處理60分鐘，該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：59之序列，其中X3 係I並且X1 、X2 及X4 係L，或係包含SEQ ID NO：59之序列，其中X4 係I並且X1 、X2 及X3 係L。於該IL-2突變蛋白質處理之最終30分鐘，加入螢光團綴合之抗-CD25及抗-CD4。細胞係經固化、洗滌、透化及洗滌。細胞係使用剩餘抗體染色，該等抗體 係偵檢表面標記物及細胞內/細胞核標記物兩者(pSTAT5及FOXP3)。資料係於Attune NxT流式細胞儀收集。Treg係分選為單核、單態、CD4pos、CD25hi、FoxP3pos。量測所分選之表現經磷酸化之STAT5的Treg之百分比。發現，IL-2突變蛋白質係誘導猴體內之pSTAT5。
實施例30：IL-2突變蛋白質係於活體內誘導擴張Treg細胞並且誘導Treg增殖。
於投藥SEQ ID NO：59(其中X3 係I並且X1 、X2 及X4 係L)或SEQ ID NO：59(其中X4 係I並且X1 、X2 及X3 係L)之序列的IL-2突變蛋白質之前(每隻食蟹獮猴2個時間點，5隻食蟹獮猴)以及投藥SEQ ID NO：59(其中X3 係I並且X1 、X2 及X4 係L)之IL-2突變蛋白質或SEQ ID NO：59(其中X4 係I並且X1 、X2 及X3 係L)之序列的IL-2突變蛋白質之後(每隻食蟹獮猴5個時間點，3隻食蟹獮猴)，將來自猴(食蟹獮猴)的靜脈全血收集於K2EDTA管中。樣本係分為兩組，並且分別對兩個FACS組染色。一者係「Treg組」，一者係通用免疫表型分型組。RBC係經裂解，並且於固定及透化之後對細胞進行表面及細胞內標記物染色。對於FAC分析，係藉由ADVIA測定總細胞數/μl。隨後，使用該總數/μl及總數之百分比計算給定亞群之細胞數/μl。對於每一隻猴，將兩種投藥前之血流的給定細胞類型平均數/μl取平均，並用以正常化投藥後之血流，使得「與投藥前相比之倍變」得以測定。為了分析血清細胞因子及趨化因子，來自K2EDTA全血之血漿係經冷凍直至研究結束。藉由多重MSD檢定使用標準對照物之連續稀釋物將趨化因子及細胞因子之量定量。MCP-1及IP-10之平均及範圍係於投藥前之血流中測定。觀察到兩種突變蛋白質於猴體皆擴張Treg 並且誘導Treg增殖。此等結果表明，該等IL-2突變蛋白質係於類似於人之動物模型體內發揮功能。亦發現，無一分子顯著地擴張猴(非人靈長動物)體內之Tconv細胞、CD4細胞(T天然)或CD8細胞(細胞毒T)、NK細胞。亦發現，無一細胞顯著地誘導血清趨化因子。這一資料表明，該等IL-2突變蛋白質可擴張Treg細胞並且誘導Treg細胞增殖而無非所欲之其它途徑的擴張或活化。因此，該等IL-2突變蛋白質係令人驚奇地有潛力、有效並且具有對於Treg擴張及增殖的選擇性。
總而言之，本文所提供之態樣及實施例表明，可靶向某些組織之IL-2突變蛋白質可如所希望者發揮功能並且係用以治療本文所揭示之疾病及病症。此外，本文所提供之實施例表明下述令人驚奇且出乎意料的結果，包含MAdCAM抗體及IL-2突變蛋白質之雙特異性分子可發揮功能以相對於Teff而選擇性地且強力地活化Treg，這表明該等分子可用以治療或減輕本文所揭示之病症。該等實施例亦表明，但IL-2突變蛋白質單獨使用(或鏈結至Fc蛋白質)時，其可相對於Teff而選擇性地且強力地活化Treg，如本文所提供者。
實施例31：抗體係結合至MAdCAM。
測試本文所提供之某些抗體的結合至MAdCAM之能力。下表係提供對於各種靶標之結合訊息及其它活性。該等抗體，無論scFv或IgG型式，係經測試它們結合表現MadCAM之人細胞或小鼠細胞的能力以及結合至食蟹獮猴MadCAM蛋白質的能力。結果係呈遞為表示無顯著結合之「-」或以不同水準結合(例如，「+」、「++」及「+++」)。
Figure 109116695-A0202-12-0312-206
Figure 109116695-A0202-12-0313-207
Figure 109116695-A0202-12-0314-208
Figure 109116695-A0202-12-0315-209
Figure 109116695-A0202-12-0316-210
Figure 109116695-A0202-12-0317-211
Figure 109116695-A0202-12-0318-212
實施例32：於皮下投藥之後，包含MAdCAM抗體及IL-2突變蛋白質之雙特異性分子係特異性地定位化至小鼠之腸內的高內皮小靜脈(HEV)。
小鼠係經皮下投藥未繫結之IL-2M或MAdCAM繫結之IL-2M。腸組織係於4天後收穫，並且進行人IgG1染色(以偵檢未繫結之分子或繫結之分子兩者的測試製品Ig骨幹)或MECA367染色(以偵檢表現MAdCAM之HEV)。發現，僅該MAdCAM繫結之IL-2M分子特異性地 定位化至HEV，而未繫結之IL-2M不顯示可偵檢或顯著之相同組織處的定位化。
實施例33：雙特異性MadCAM-IL2M不封阻MADCAM：α4/β7相互作用並因此不影響細胞遷移。
MAdCAM繫結之IL-2M分子係經測試以確定其是否封阻α4/β7整合素結合至MAdCAM。該檢定表明並不封阻。亦發現該雙特異性分子因此並不具有對於細胞遷移之影響。該結合活性係藉由ELISA或細胞相互作用檢定實施。
實施例34：繫結至MAdCAM抗體之IL-2M係功能性者。
使用人或小鼠MAdCAM轉染CHO細胞以生成表現MAdCAM之CHO細胞，隨後令其於板生長。加入測試製品，令其結合，隨後洗去未附接之測試製品。加入人PBMC，於30分鐘後藉由FACS評估STAT5 Treg之磷酸化，pSTAT5+表示被IL-2M活化，但Tconv細胞保持未被活化，儘管細胞表面之雙特異性分子之推定局部濃度高。
實施例35：MAdCAM繫結之IL2M係減少人源化小鼠之由TNBS誘導之結腸炎造成的體重減輕，與低劑量IL-2類似。
小鼠係於D-7使用TNBS致敏，於D0使用TNBS激發。從D-7至D3，小鼠係每天投藥低劑量之IL-2(陽性媒介對照物)或媒介物(陰性媒介對照物)。於D-7及D0，係投藥MAdCAM繫結之IL2M至小鼠。觀察到由MAdCAM繫結之IL2M導致的對體重減輕之減少係類似於由LD IL-2導致的對體重減輕之減少。因此，此等結果表明，經繫結之途徑係功能性者，即便其係特異性地定位化至HEV，如先前實施例中所示。
實施例22至24中揭示之MAdCAM繫結之IL2M的型式為，其中MAdCAM組分係IgG，其係具有融合於該重鏈之C端的IL-2突變蛋白質部分。惟，如本文所揭示，該IL-2突變蛋白質係具有位於其N端之Fc部位，諸如SEQ ID NO：56。該雙特異性分子係多鏈多肽，其可表示為下列型式：重鏈：NT-[VH_MAdCAM]-[CH1-CH2-CH3]-[鏈結基_B]-[IL-2_突變蛋白質]-CT，其中
NT=N端
[VH_MAdCAM]=本文中提供之任意VH域或包含如表6或表7中揭示之CDR1、CDR2或CDR3的VH域；
[CH1-CH2-CH3]=人IgG1之第1恆定重域(CH1)、第2恆定重域(CH2)、及第3恆定重域(CH3)，其可具有下列之序列：
Figure 109116695-A0202-12-0320-213
(SEQ ID NO：44)；
[鏈結基_B]=GGGGS(SEQ ID NO：23)，其亦可係GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)；
[IL-2_Mutein]=本文中提供之任何IL2突變蛋白質，包括但不限於SEQ ID NO：56；以及
CT=C端。
該分子亦可具有以下之輕鏈型式：
輕鏈：NT-[VK_MAdCAM]-[CK]-CT，其中
NT=N端；
[VK_MAdCAM]=如表6或表7中例示者；
[CK]=人類恆定κ域，其可具有以下序列：
Figure 109116695-A0202-12-0321-214
Figure 109116695-A0202-12-0321-215
(SEQ ID NO：45)；以及
CT=C端。
實施例36：測試多種MAdCAM抗體的結合至不同種MAdCAM之能力。
該等抗體係含有表1之抗體6、抗體59、抗體63的CDR。儘管抗體係以如表6中所例示之scFV型式測試，但該MAdCAM抗體亦可如表7中所示為傳統之VH/VL型式。發現，該等抗體能夠結合至人及食蟹獮猴MAdCAM，並且除了抗體純株6之外，它們皆亦可結合至小鼠MAdCAM。該抗體可結合MAdCAM，且KD 為奈莫耳至微莫耳之範圍。
實施例37：抗體之表位映射
將人或鼠MAdCAM-avitag/聚組胺酸標籤以0.5μg/mL於penta-his生物感測器固定化180秒。基線步驟係於檢定緩衝液(於1x PBS 中之1% BSA及0.05% Tween-20)中建立，建立時間為120秒。締合之第一步驟係於具有40nM分子之孔中實施，該等分子係包含表1之抗體6、抗體59、抗體63之抗體CDR以及來自PF-00547659(整合素封阻抗體；Pfizer；Pullen et al.,Br J Pharmacol.2009 May；157(2)：281-93)、MECA89(非整合素封阻劑)及MECA367(整合素封阻劑)之其它MAdCAM抗體。
觀察到對於人MAdCAM結合，表1之抗體59係與抗體6競爭。對於人MAdCAM結合，表1之抗體63不與表1之抗體59或抗體6競爭。抗體63與Pfizer基準抗體競爭，而其它抗體不與Pfizer基準抗體競爭。該等結果亦顯示，對於小鼠MAdCAM結合，抗體59不與抗體63競爭。抗體63與MECA367競爭但不與MECA89競爭。抗體59與MECA89競爭但不與MECA367競爭。這一資料例示，該等抗體係結合至不同表位。
實施例38：MAdCAM-IL2突變蛋白質分子對於藉由人蛋白質陣列(Retrogenix)結合至MAdCAM及IL-2係特異性者。
5528個編碼ZsGreen1以及全長度人血漿膜蛋白或細胞表面繫結之人分泌蛋白兩者的表現載體係一式兩份陣列於16個微陣列載玻片上。人HEK293細胞係用於反向轉染/表現。於細胞固定之後，將測試抗體加至每一載玻片。將包含抗體59及包含L118I突變之IL-2突變蛋白質的測試分子與包含抗體63及包含L118I突變之IL-2突變蛋白質的測試分子作為組合進行篩查。結合之偵檢係藉由使用如預篩查中所用者之相同螢光二次抗體實施。螢光圖像係使用ImageQuant軟體分析並定量(用於轉染)。「命中」之蛋白質係定義為完全一樣之點，其係顯示比背景水準升高 之訊號。此係藉由使用ImageQuant軟體之網格化圖像進行目視檢查而達成。依據該等完全一樣之點的強度，命中者係歸類為「強、中、弱或極弱」。發現，兩種分子皆特異性地僅與其兩個主要靶標相互作用，亦即，IL2RA(強度強)及MADCAM1之2個同功型(強度中/強)。未偵檢到其它顯著相互作用。此等結果表明，該等雙特異性分子係能夠結合至其各自對應之靶標。該分子從N端至C端之型式係MAdCAM抗體-IL-2突變蛋白質，惟，亦發現反向之型式係活性者並且能夠結合至其各自對應之靶標。
實施例40：安定性。
某些雙特異性分子之安定性係於4℃及37℃測試。發現，包含抗體59或抗體63之雙特異性抗體及包含L118I突變之IL-2突變蛋白質於4℃係安定至少28天內。
實施例41：MAdCAM-IL2突變蛋白質雙特異性分子係降低來自同種基因移植物抗宿主疾病小鼠之肝組織內的TNF-α水準。
於治療之前35天，向免疫受損之NSG小鼠移植人PBMC。小鼠係使用MADCAM-IL-2突變蛋白質雙特異性分子(0.03mg/kg)治療一個禮拜並犧牲之。經結腸組織均質化，並藉由ELISA量測結腸裂解液中之TNF-α濃度。數值係正常化至總蛋白質濃度，以補償組織等分大小的差異。媒介物及未繫結之IL-2突變蛋白質係分別具有0.982±0.271及0.912±0.199(pg/mg)±S.E.M)的結腸裂解液中之TNF-α水準，而該雙特異性分子MAdCAM抗體59及包含L118I突變之IL-2突變蛋白質係具有更低(0.538±0.167(pg/mg)±S.E.M)的TNF-α水準。因此，該雙特異性且靶向表現MAdCAM之結腸的分子可以位點特異性模式減少TNF-α之產 生。靶標組織中這一促炎性細胞因子水準的降低係意味著MADCAM-IL2突變蛋白質之治療性效果以及誘導免疫耐受性。
實施例42.MADCAM-IL2突變蛋白質雙特異性分子係增加來自同種基因移植物抗宿主疾病小鼠之結腸組織內的FOXP3基因表現。
於治療之前27天，向免疫受損之NSG小鼠移植人PBMC。小鼠係使用MADCAM-IL-2突變蛋白質雙特異性分子(與實施例41中相同)(0.1mg/kg)治療一個禮拜並犧牲之。將肝組織均質化，並藉由qRT-PCR量測肝臟裂解液中之人FOXP3表現。基因表現係正常化至人GAPDH水準。媒介物之FOXP3水準測量值係1.32±0.36，而該MAdCAM抗體59及包含L118I突變之IL-2突變蛋白質係將FOXP3水準之測量值增加至2.21±0.36。資料係表示為均值±S.E.M.。靶標組織中FOXP3表現之增加係指示，業經存在調節性T細胞之增加。
本文所提供之實施例表明，本文所提供之分子可用以特異性地局部化治療劑諸如IL-2M以及其它治療性分子諸如本文揭示之彼等，該等分子係具有特異性且具有治療性效果諸如減少TNF-α以及增加T調節性細胞，其可例如透過FOX3P表現之增加而得以監控。
本文引用之各及每一專利、專利申請及出版物的揭露內容係藉由引用而以其整體併入本文。儘管業經參照具體方面揭露多種態樣，但明顯可見，熟悉該技藝之其他人士將作出其它方面及此等態樣之變更而不悖離該等態樣之真實精神及範疇。所附申請專利範圍係旨在被解釋為包括全部此類方面及等效變更。
<110> 美商潘迪恩治療公司(Pandion Therapeutics,Inc.)
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<212> PRT
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Figure 109116695-A0202-12-0326-216
Figure 109116695-A0202-12-0327-217
Figure 109116695-A0202-12-0328-218
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<212> PRT
<213> 智人
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Figure 109116695-A0202-12-0328-219
Figure 109116695-A0202-12-0329-220
Figure 109116695-A0202-12-0330-221
Figure 109116695-A0202-12-0331-222
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<213> 智人
<400> 3
Figure 109116695-A0202-12-0331-223
Figure 109116695-A0202-12-0332-224
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<213> 智人
<400> 4
Figure 109116695-A0202-12-0332-225
Figure 109116695-A0202-12-0333-226
Figure 109116695-A0202-12-0334-227
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Figure 109116695-A0202-12-0334-228
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<212> PRT
<213> 智人
<400> 6
Figure 109116695-A0202-12-0336-230
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
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Figure 109116695-A0202-12-0337-232
Figure 109116695-A0202-12-0338-233
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
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Figure 109116695-A0202-12-0339-235
Figure 109116695-A0202-12-0340-236
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<220>
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Figure 109116695-A0202-12-0341-238
Figure 109116695-A0202-12-0342-239
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<220>
<223> 合成序列
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Figure 109116695-A0202-12-0342-240
Figure 109116695-A0202-12-0343-241
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<220>
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Figure 109116695-A0202-12-0346-245
Figure 109116695-A0202-12-0347-246
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<212> PRT
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<220>
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Figure 109116695-A0202-12-0348-248
Figure 109116695-A0202-12-0349-249
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<213> 人工序列
<220>
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Figure 109116695-A0202-12-0350-251
Figure 109116695-A0202-12-0351-252
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Figure 109116695-A0202-12-0351-253
Figure 109116695-A0202-12-0352-254
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<212> PRT
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<220>
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Figure 109116695-A0202-12-0353-256
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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Figure 109116695-A0202-12-0354-259
Figure 109116695-A0202-12-0355-260
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<213> 人工序列
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<223> 合成序列
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Figure 109116695-A0202-12-0355-261
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<213> 人工序列
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Figure 109116695-A0202-12-0357-263
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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Figure 109116695-A0202-12-0357-266
Figure 109116695-A0202-12-0358-614
Figure 109116695-A0202-12-0359-615
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<213> 人工序列
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Figure 109116695-A0202-12-0359-616
Figure 109116695-A0202-12-0360-617
Figure 109116695-A0202-12-0361-618
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<213> 人工序列
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Figure 109116695-A0202-12-0361-619
Figure 109116695-A0202-12-0362-620
Figure 109116695-A0202-12-0363-621
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<213> 人工序列
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<223> 合成序列
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Figure 109116695-A0202-12-0363-622
Figure 109116695-A0202-12-0364-623
Figure 109116695-A0202-12-0365-624
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<213> 人工序列
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<223> 合成序列
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Figure 109116695-A0202-12-0365-625
Figure 109116695-A0202-12-0366-626
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<213> 人工序列
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Figure 109116695-A0202-12-0366-627
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<213> 人工序列
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<223> 合成序列
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Figure 109116695-A0202-12-0367-629
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 合成序列
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Figure 109116695-A0202-12-0368-630
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 合成序列
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Figure 109116695-A0202-12-0369-631
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<213> 人工序列
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<223> 合成序列
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Figure 109116695-A0202-12-0369-632
Figure 109116695-A0202-12-0370-633
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 合成序列
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Figure 109116695-A0202-12-0371-635
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<213> 人工序列
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<223> 合成序列
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Figure 109116695-A0202-12-0371-636
Figure 109116695-A0202-12-0372-637
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 合成序列
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<213> 人工序列
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Figure 109116695-A0202-12-0374-641
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<213> 人工序列
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Figure 109116695-A0202-12-0375-644
Figure 109116695-A0202-12-0376-645
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<213> 智人
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Figure 109116695-A0202-12-0376-646
Figure 109116695-A0202-12-0377-647
Figure 109116695-A0202-12-0378-648
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<213> 人工序列
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<223> 合成序列
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Figure 109116695-A0202-12-0379-649
Figure 109116695-A0202-12-0380-650
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 合成序列
<400> 44
Figure 109116695-A0202-12-0380-651
Figure 109116695-A0202-12-0381-652
<210> 45
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<213> 人工序列
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<223> 合成序列
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Figure 109116695-A0202-12-0382-654
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<213> 人工序列
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<223> 合成序列
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Figure 109116695-A0202-12-0382-655
Figure 109116695-A0202-12-0383-656
Figure 109116695-A0202-12-0384-657
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Figure 109116695-A0202-12-0386-660
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<213> 人工序列
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Figure 109116695-A0202-12-0386-661
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<213> 人工序列
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Figure 109116695-A0202-12-0390-666
Figure 109116695-A0202-12-0391-667
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<213> 人工序列
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Figure 109116695-A0202-12-0391-668
Figure 109116695-A0202-12-0392-669
Figure 109116695-A0202-12-0393-670
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Figure 109116695-A0202-12-0393-671
Figure 109116695-A0202-12-0394-672
Figure 109116695-A0202-12-0395-673
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 合成序列
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Figure 109116695-A0202-12-0395-674
Figure 109116695-A0202-12-0396-675
Figure 109116695-A0202-12-0397-676
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<213> 人工序列
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Figure 109116695-A0202-12-0397-677
Figure 109116695-A0202-12-0398-678
Figure 109116695-A0202-12-0399-679
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Figure 109116695-A0202-12-0399-680
Figure 109116695-A0202-12-0400-681
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<213> 人工序列
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Figure 109116695-A0202-12-0401-682
Figure 109116695-A0202-12-0402-683
<210> 57
<211> 379
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 57
Figure 109116695-A0202-12-0403-684
Figure 109116695-A0202-12-0404-685
<210> 58
<211> 364
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 58
Figure 109116695-A0202-12-0404-686
Figure 109116695-A0202-12-0405-687
Figure 109116695-A0202-12-0406-688
<210> 59
<211> 379
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (53)..(53)
<223> Xaa為任何天然的胺基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (56)..(56)
<223> Xaa為任何天然的胺基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (80)..(80)
<223> Xaa為任何天然的胺基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (118)..(118)
<223> Xaa為任何天然的胺基酸
<400> 59
Figure 109116695-A0202-12-0407-689
Figure 109116695-A0202-12-0408-690
<210> 60
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (53)..(53)
<223> Xaa為任何天然的胺基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (56)..(56)
<223> Xaa為任何天然的胺基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (80)..(80)
<223> Xaa為任何天然的胺基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (118)..(118)
<223> Xaa為任何天然的胺基酸
<400> 60
Figure 109116695-A0202-12-0409-691
<210> 61
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 61
Figure 109116695-A0202-12-0410-692
<210> 62
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 62
Figure 109116695-A0202-12-0410-693
<210> 63
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 63
Figure 109116695-A0202-12-0410-694
<210> 64
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 64
Figure 109116695-A0202-12-0410-695
<210> 65
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 65
Figure 109116695-A0202-12-0411-696
<210> 66
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 66
Figure 109116695-A0202-12-0411-697
<210> 67
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 67
Figure 109116695-A0202-12-0411-698
Figure 109116695-A0202-12-0412-699
<210> 68
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 68
Figure 109116695-A0202-12-0412-700
<210> 69
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 69
Figure 109116695-A0202-12-0413-701
<210> 70
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 70
Figure 109116695-A0202-12-0413-702
<210> 71
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 71
Figure 109116695-A0202-12-0413-703
<210> 72
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 72
Figure 109116695-A0202-12-0413-704
<210> 73
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 73
Figure 109116695-A0202-12-0414-705
<210> 74
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 74
Figure 109116695-A0202-12-0414-706
Figure 109116695-A0202-12-0415-707
<210> 75
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 75
Figure 109116695-A0202-12-0415-708
<210> 76
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 76
Figure 109116695-A0202-12-0415-709
Figure 109116695-A0202-12-0416-710
<210> 77
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 77
Figure 109116695-A0202-12-0417-711
<210> 78
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 78
Figure 109116695-A0202-12-0417-712
<210> 79
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 79
Figure 109116695-A0202-12-0417-713
<210> 80
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 80
Figure 109116695-A0202-12-0417-714
<210> 81
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 81
Figure 109116695-A0202-12-0418-715
<210> 82
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 82
Figure 109116695-A0202-12-0418-716
Figure 109116695-A0202-12-0419-717
<210> 83
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 83
Figure 109116695-A0202-12-0419-718
<210> 84
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 84
Figure 109116695-A0202-12-0419-719
<210> 85
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 85
Figure 109116695-A0202-12-0420-720
<210> 86
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 86
Figure 109116695-A0202-12-0420-721
<210> 87
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 87
Figure 109116695-A0202-12-0420-722
<210> 88
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 88
Figure 109116695-A0202-12-0420-723
<210> 89
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 89
Figure 109116695-A0202-12-0421-724
Figure 109116695-A0202-12-0422-725
<210> 90
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 90
Figure 109116695-A0202-12-0422-726
<210> 91
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 91
Figure 109116695-A0202-12-0422-727
<210> 92
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 92
Figure 109116695-A0202-12-0422-728
<210> 93
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 93
Figure 109116695-A0202-12-0423-729
<210> 94
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序序
<400> 94
Figure 109116695-A0202-12-0423-730
<210> 95
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 95
Figure 109116695-A0202-12-0423-731
Figure 109116695-A0202-12-0424-732
<210> 96
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 96
Figure 109116695-A0202-12-0424-733
<210> 97
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 97
Figure 109116695-A0202-12-0425-734
<210> 98
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 98
Figure 109116695-A0202-12-0425-735
<210> 99
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 99
Figure 109116695-A0202-12-0425-736
<210> 100
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 100
Figure 109116695-A0202-12-0425-737
<210> 101
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 101
Figure 109116695-A0202-12-0426-738
Figure 109116695-A0202-12-0427-739
<210> 102
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 102
Figure 109116695-A0202-12-0427-740
<210> 103
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 103
Figure 109116695-A0202-12-0427-741
<210> 104
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 104
Figure 109116695-A0202-12-0427-742
Figure 109116695-A0202-12-0428-743
<210> 105
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 105
Figure 109116695-A0202-12-0428-744
<210> 106
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 106
Figure 109116695-A0202-12-0428-745
<210> 107
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 107
Figure 109116695-A0202-12-0428-746
<210> 108
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 108
Figure 109116695-A0202-12-0428-747
Figure 109116695-A0202-12-0429-748
Figure 109116695-A0202-12-0430-749
<210> 109
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 109
Figure 109116695-A0202-12-0430-750
<210> 110
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 110
Figure 109116695-A0202-12-0430-751
<210> 111
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 111
Figure 109116695-A0202-12-0430-752
<210> 112
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 112
Figure 109116695-A0202-12-0431-753
<210> 113
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 113
Figure 109116695-A0202-12-0431-754
<210> 114
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 114
Figure 109116695-A0202-12-0431-755
<210> 115
<211> 250
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 115
Figure 109116695-A0202-12-0431-756
Figure 109116695-A0202-12-0432-757
<210> 116
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 116
Figure 109116695-A0202-12-0433-758
<210> 117
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 117
Figure 109116695-A0202-12-0433-759
<210> 118
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 118
Figure 109116695-A0202-12-0433-760
<210> 119
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 119
Figure 109116695-A0202-12-0433-761
<210> 120
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 120
Figure 109116695-A0202-12-0434-762
<210> 121
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 121
Figure 109116695-A0202-12-0434-763
Figure 109116695-A0202-12-0435-764
<210> 122
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 122
Figure 109116695-A0202-12-0435-765
<210> 123
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 123
Figure 109116695-A0202-12-0435-766
<210> 124
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 124
Figure 109116695-A0202-12-0436-767
<210> 125
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 125
Figure 109116695-A0202-12-0436-768
<210> 126
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 126
Figure 109116695-A0202-12-0436-769
<210> 127
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 127
Figure 109116695-A0202-12-0436-770
Figure 109116695-A0202-12-0437-771
Figure 109116695-A0202-12-0438-772
<210> 128
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 128
Figure 109116695-A0202-12-0438-773
<210> 129
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 129
Figure 109116695-A0202-12-0438-774
<210> 130
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 130
Figure 109116695-A0202-12-0438-775
<210> 131
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 131
Figure 109116695-A0202-12-0438-776
<210> 132
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 132
Figure 109116695-A0202-12-0439-777
<210> 133
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 133
Figure 109116695-A0202-12-0439-778
<210> 134
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 134
Figure 109116695-A0202-12-0439-779
Figure 109116695-A0202-12-0440-780
<210> 135
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 135
Figure 109116695-A0202-12-0441-781
<210> 136
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 136
Figure 109116695-A0202-12-0441-782
<210> 137
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 137
Figure 109116695-A0202-12-0441-783
<210> 138
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 138
Figure 109116695-A0202-12-0441-784
<210> 139
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 139
Figure 109116695-A0202-12-0441-785
Figure 109116695-A0202-12-0442-786
<210> 140
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 140
Figure 109116695-A0202-12-0442-787
<210> 141
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 141
Figure 109116695-A0202-12-0442-788
Figure 109116695-A0202-12-0443-789
<210> 142
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 142
Figure 109116695-A0202-12-0443-790
<210> 143
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 143
Figure 109116695-A0202-12-0444-791
<210> 144
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 144
Figure 109116695-A0202-12-0444-792
<210> 145
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 145
Figure 109116695-A0202-12-0444-793
<210> 146
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 146
Figure 109116695-A0202-12-0444-794
<210> 147
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 147
Figure 109116695-A0202-12-0445-795
Figure 109116695-A0202-12-0446-796
<210> 148
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 148
Figure 109116695-A0202-12-0446-797
<210> 149
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 149
Figure 109116695-A0202-12-0446-798
<210> 150
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 150
Figure 109116695-A0202-12-0446-799
<210> 151
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 151
Figure 109116695-A0202-12-0447-800
<210> 152
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 152
Figure 109116695-A0202-12-0447-801
<210> 153
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 153
Figure 109116695-A0202-12-0447-802
<210> 154
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 154
Figure 109116695-A0202-12-0447-803
Figure 109116695-A0202-12-0448-804
<210> 155
<211> 9
<212> PRT
<212> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 155
Figure 109116695-A0202-12-0449-805
<210> 156
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 156
Figure 109116695-A0202-12-0449-806
<210> 157
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 157
Figure 109116695-A0202-12-0449-807
<210> 158
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 158
Figure 109116695-A0202-12-0449-808
<210> 159
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 159
Figure 109116695-A0202-12-0450-809
<210> 160
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 160
Figure 109116695-A0202-12-0450-810
<210> 161
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 161
Figure 109116695-A0202-12-0450-811
Figure 109116695-A0202-12-0451-812
<210> 162
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 162
Figure 109116695-A0202-12-0451-813
<210> 163
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 163
Figure 109116695-A0202-12-0452-814
<210> 164
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 164
Figure 109116695-A0202-12-0452-815
<210> 165
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 165
Figure 109116695-A0202-12-0452-816
<210> 166
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 166
Figure 109116695-A0202-12-0452-817
<210> 167
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 167
Figure 109116695-A0202-12-0453-818
<210> 168
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 168
Figure 109116695-A0202-12-0453-819
Figure 109116695-A0202-12-0454-820
<210> 169
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 169
Figure 109116695-A0202-12-0454-821
<210> 170
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 170
Figure 109116695-A0202-12-0454-822
<210> 171
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 171
Figure 109116695-A0202-12-0455-823
<210> 172
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 172
Figure 109116695-A0202-12-0455-824
<210> 173
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 173
Figure 109116695-A0202-12-0455-825
<210> 174
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 174
Figure 109116695-A0202-12-0455-826
Figure 109116695-A0202-12-0456-827
Figure 109116695-A0202-12-0457-828
<210> 175
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 175
Figure 109116695-A0202-12-0457-829
<210> 176
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 176
Figure 109116695-A0202-12-0457-830
<210> 177
<211> 250
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 177
Figure 109116695-A0202-12-0457-831
Figure 109116695-A0202-12-0458-832
<210> 178
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 178
Figure 109116695-A0202-12-0459-833
<210> 179
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 179
Figure 109116695-A0202-12-0459-834
<210> 180
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 180
Figure 109116695-A0202-12-0459-835
<210> 181
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 181
Figure 109116695-A0202-12-0459-836
<210> 182
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 182
Figure 109116695-A0202-12-0460-837
Figure 109116695-A0202-12-0461-838
<210> 183
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 183
Figure 109116695-A0202-12-0461-839
<210> 184
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 184
Figure 109116695-A0202-12-0461-840
<210> 185
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 185
Figure 109116695-A0202-12-0461-841
<210> 186
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 186
Figure 109116695-A0202-12-0462-842
<210> 187
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 187
Figure 109116695-A0202-12-0462-843
<210> 188
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 188
Figure 109116695-A0202-12-0462-844
Figure 109116695-A0202-12-0463-845
<210> 189
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 189
Figure 109116695-A0202-12-0463-846
<210> 190
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 190
Figure 109116695-A0202-12-0464-847
<210> 191
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 191
Figure 109116695-A0202-12-0464-848
<210> 192
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 192
Figure 109116695-A0202-12-0464-849
Figure 109116695-A0202-12-0465-850
<210> 193
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 193
Figure 109116695-A0202-12-0466-851
<210> 194
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 194
Figure 109116695-A0202-12-0466-852
<210> 195
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 195
Figure 109116695-A0202-12-0466-853
<210> 196
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 196
Figure 109116695-A0202-12-0466-854
<210> 197
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 197
Figure 109116695-A0202-12-0467-855
<210> 198
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 198
Figure 109116695-A0202-12-0467-856
<210> 199
<211> 250
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 199
Figure 109116695-A0202-12-0467-857
Figure 109116695-A0202-12-0468-858
<210> 200
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 200
Figure 109116695-A0202-12-0468-859
<210> 201
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 201
Figure 109116695-A0202-12-0469-860
<210> 202
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 202
Figure 109116695-A0202-12-0469-861
Figure 109116695-A0202-12-0470-862
<210> 203
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 203
Figure 109116695-A0202-12-0470-863
Figure 109116695-A0202-12-0471-864
<210> 204
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 204
Figure 109116695-A0202-12-0472-865
<210> 205
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 205
Figure 109116695-A0202-12-0472-866
<210> 206
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 206
Figure 109116695-A0202-12-0472-867
<210> 207
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 207
Figure 109116695-A0202-12-0472-868
<210> 208
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 208
Figure 109116695-A0202-12-0473-869
<210> 209
<211> 256
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 209
Figure 109116695-A0202-12-0473-870
Figure 109116695-A0202-12-0474-871
<210> 210
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 210
Figure 109116695-A0202-12-0474-872
<210> 211
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 211
Figure 109116695-A0202-12-0474-873
<210> 212
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 212
Figure 109116695-A0202-12-0475-874
<210> 213
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 213
Figure 109116695-A0202-12-0475-875
<210> 214
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 214
Figure 109116695-A0202-12-0475-876
Figure 109116695-A0202-12-0476-877
<210> 215
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 215
Figure 109116695-A0202-12-0476-878
<210> 216
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 216
Figure 109116695-A0202-12-0477-879
<210> 217
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 217
Figure 109116695-A0202-12-0477-880
<210> 218
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 218
Figure 109116695-A0202-12-0477-881
<210> 219
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 219
Figure 109116695-A0202-12-0477-882
Figure 109116695-A0202-12-0478-883
<210> 220
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 220
Figure 109116695-A0202-12-0479-884
<210> 221
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 221
Figure 109116695-A0202-12-0479-885
<210> 222
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 222
Figure 109116695-A0202-12-0479-886
<210> 223
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 223
Figure 109116695-A0202-12-0480-887
Figure 109116695-A0202-12-0481-888
<210> 224
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 224
Figure 109116695-A0202-12-0481-889
<210> 225
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 225
Figure 109116695-A0202-12-0481-890
<210> 226
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 226
Figure 109116695-A0202-12-0481-891
<210> 227
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 227
Figure 109116695-A0202-12-0482-892
Figure 109116695-A0202-12-0483-893
<210> 228
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 228
Figure 109116695-A0202-12-0483-894
<210> 229
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 229
Figure 109116695-A0202-12-0483-895
<210> 230
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 230
Figure 109116695-A0202-12-0483-896
<210> 231
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 231
Figure 109116695-A0202-12-0484-897
<210> 232
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 232
Figure 109116695-A0202-12-0484-898
Figure 109116695-A0202-12-0485-899
<210> 233
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 233
Figure 109116695-A0202-12-0485-900
<210> 234
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 234
Figure 109116695-A0202-12-0485-901
<210> 235
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 235
Figure 109116695-A0202-12-0486-902
<210> 236
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 236
Figure 109116695-A0202-12-0486-903
Figure 109116695-A0202-12-0487-904
<210> 237
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 237
Figure 109116695-A0202-12-0487-905
<210> 238
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 238
Figure 109116695-A0202-12-0487-906
<210> 239
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 239
Figure 109116695-A0202-12-0488-907
<210> 240
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 240
Figure 109116695-A0202-12-0488-908
<210> 241
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 241
Figure 109116695-A0202-12-0488-909
<210> 242
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 242
Figure 109116695-A0202-12-0488-910
<210> 243
<211> 250
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 243
Figure 109116695-A0202-12-0489-911
Figure 109116695-A0202-12-0490-912
<210> 244
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 244
Figure 109116695-A0202-12-0490-913
<210> 245
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 245
Figure 109116695-A0202-12-0490-914
Figure 109116695-A0202-12-0491-915
<210> 246
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 246
Figure 109116695-A0202-12-0492-916
<210> 247
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 247
Figure 109116695-A0202-12-0492-917
<210> 248
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 248
Figure 109116695-A0202-12-0492-918
<210> 249
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 249
Figure 109116695-A0202-12-0492-919
Figure 109116695-A0202-12-0493-920
<210> 250
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 250
Figure 109116695-A0202-12-0494-921
<210> 251
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 251
Figure 109116695-A0202-12-0494-922
<210> 252
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 252
Figure 109116695-A0202-12-0494-923
<210> 253
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 253
Figure 109116695-A0202-12-0494-924
<210> 254
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 254
Figure 109116695-A0202-12-0495-925
<210> 255
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 255
Figure 109116695-A0202-12-0495-926
Figure 109116695-A0202-12-0496-927
<210> 256
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 256
Figure 109116695-A0202-12-0496-928
<210> 257
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 257
Figure 109116695-A0202-12-0496-929
<210> 258
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 258
Figure 109116695-A0202-12-0497-930
<210> 259
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 259
Figure 109116695-A0202-12-0497-931
<210> 260
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 260
Figure 109116695-A0202-12-0497-932
Figure 109116695-A0202-12-0498-933
<210> 261
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 261
Figure 109116695-A0202-12-0498-934
<210> 262
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 262
Figure 109116695-A0202-12-0499-935
<210> 263
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 263
Figure 109116695-A0202-12-0499-936
<210> 264
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 264
Figure 109116695-A0202-12-0499-937
<210> 265
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 265
Figure 109116695-A0202-12-0500-938
<210> 266
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 266
Figure 109116695-A0202-12-0500-939
Figure 109116695-A0202-12-0501-940
<210> 267
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 267
Figure 109116695-A0202-12-0501-941
<210> 268
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 268
Figure 109116695-A0202-12-0501-942
<210> 269
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 269
Figure 109116695-A0202-12-0502-943
<210> 270
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 270
Figure 109116695-A0202-12-0502-944
Figure 109116695-A0202-12-0503-945
<210> 271
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 271
Figure 109116695-A0202-12-0503-946
<210> 272
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 272
Figure 109116695-A0202-12-0503-947
<210> 273
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 273
Figure 109116695-A0202-12-0504-948
<210> 274
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 274
Figure 109116695-A0202-12-0504-949
<210> 275
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 275
Figure 109116695-A0202-12-0504-950
<210> 276
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 276
Figure 109116695-A0202-12-0504-951
Figure 109116695-A0202-12-0505-952
<210> 277
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 277
Figure 109116695-A0202-12-0506-953
<210> 278
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 278
Figure 109116695-A0202-12-0506-954
<210> 279
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 279
Figure 109116695-A0202-12-0506-955
<210> 280
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 280
Figure 109116695-A0202-12-0506-956
<210> 281
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 281
Figure 109116695-A0202-12-0507-957
Figure 109116695-A0202-12-0508-958
<210> 282
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 282
Figure 109116695-A0202-12-0508-959
<210> 283
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 283
Figure 109116695-A0202-12-0508-960
<210> 284
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 284
Figure 109116695-A0202-12-0508-961
<210> 285
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 285
Figure 109116695-A0202-12-0509-962
Figure 109116695-A0202-12-0510-963
<210> 286
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 286
Figure 109116695-A0202-12-0510-964
<210> 287
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 287
Figure 109116695-A0202-12-0510-965
<210> 288
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 288
Figure 109116695-A0202-12-0511-966
<210> 289
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 289
Figure 109116695-A0202-12-0511-967
<210> 290
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 290
Figure 109116695-A0202-12-0511-968
<210> 291
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 291
Figure 109116695-A0202-12-0511-969
<210> 292
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 292
Figure 109116695-A0202-12-0512-970
Figure 109116695-A0202-12-0513-971
<210> 293
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 293
Figure 109116695-A0202-12-0513-972
<210> 294
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 294
Figure 109116695-A0202-12-0513-973
Figure 109116695-A0202-12-0514-974
<210> 295
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 295
Figure 109116695-A0202-12-0514-975
<210> 296
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 296
Figure 109116695-A0202-12-0515-976
<210> 297
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 297
Figure 109116695-A0202-12-0515-977
Figure 109116695-A0202-12-0516-978
<210> 298
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 298
Figure 109116695-A0202-12-0516-979
<210> 299
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 299
Figure 109116695-A0202-12-0516-980
<210> 300
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 300
Figure 109116695-A0202-12-0517-981
<210> 301
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 301
Figure 109116695-A0202-12-0517-982
<210> 302
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 302
Figure 109116695-A0202-12-0517-983
Figure 109116695-A0202-12-0518-984
<210> 303
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 303
Figure 109116695-A0202-12-0518-985
<210> 304
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 304
Figure 109116695-A0202-12-0519-986
<210> 305
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 305
Figure 109116695-A0202-12-0519-987
<210> 306
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 306
Figure 109116695-A0202-12-0519-988
<210> 307
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 307
Figure 109116695-A0202-12-0520-989
<210> 308
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 308
Figure 109116695-A0202-12-0520-990
<210> 309
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 309
Figure 109116695-A0202-12-0520-991
Figure 109116695-A0202-12-0521-992
<210> 310
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 310
Figure 109116695-A0202-12-0521-993
<210> 311
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 311
Figure 109116695-A0202-12-0522-994
<210> 312
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 312
Figure 109116695-A0202-12-0522-995
<210> 313
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 313
Figure 109116695-A0202-12-0522-996
<210> 314
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 314
Figure 109116695-A0202-12-0522-997
<210> 315
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 315
Figure 109116695-A0202-12-0523-998
Figure 109116695-A0202-12-0524-999
<210> 316
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 316
Figure 109116695-A0202-12-0524-1000
<210> 317
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 317
Figure 109116695-A0202-12-0524-1001
<210> 318
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 318
Figure 109116695-A0202-12-0524-1002
<210> 319
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 319
Figure 109116695-A0202-12-0525-1003
<210> 320
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 320
Figure 109116695-A0202-12-0525-1004
<210> 321
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 321
Figure 109116695-A0202-12-0525-1005
<210> 322
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 322
Figure 109116695-A0202-12-0525-1006
Figure 109116695-A0202-12-0526-1007
<210> 323
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 323
Figure 109116695-A0202-12-0527-1008
<210> 324
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 324
Figure 109116695-A0202-12-0527-1009
<210> 325
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 325
Figure 109116695-A0202-12-0527-1010
<210> 326
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 326
Figure 109116695-A0202-12-0527-1011
<210> 327
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 327
Figure 109116695-A0202-12-0528-1012
<210> 328
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 328
Figure 109116695-A0202-12-0528-1013
<210> 329
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 329
Figure 109116695-A0202-12-0528-1014
Figure 109116695-A0202-12-0529-1015
<210> 330
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 330
Figure 109116695-A0202-12-0529-1016
<210> 331
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 331
Figure 109116695-A0202-12-0530-1017
<210> 332
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 332
Figure 109116695-A0202-12-0530-1018
<210> 333
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 333
Figure 109116695-A0202-12-0530-1019
<210> 334
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 334
Figure 109116695-A0202-12-0530-1020
Figure 109116695-A0202-12-0531-1021
Figure 109116695-A0202-12-0532-1022
<210> 335
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 335
Figure 109116695-A0202-12-0532-1023
<210> 336
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 336
Figure 109116695-A0202-12-0532-1024
<210> 337
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 337
Figure 109116695-A0202-12-0532-1025
<210> 338
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 338
Figure 109116695-A0202-12-0532-1026
<210> 339
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 339
Figure 109116695-A0202-12-0533-1027
Figure 109116695-A0202-12-0534-1028
<210> 340
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 340
Figure 109116695-A0202-12-0534-1029
<210> 341
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 341
Figure 109116695-A0202-12-0534-1030
<210> 342
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 342
Figure 109116695-A0202-12-0535-1031
<210> 343
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 343
Figure 109116695-A0202-12-0535-1032
<210> 344
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 344
Figure 109116695-A0202-12-0535-1033
<210> 345
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 345
Figure 109116695-A0202-12-0535-1034
Figure 109116695-A0202-12-0536-1035
<210> 346
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 346
Figure 109116695-A0202-12-0537-1036
<210> 347
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 347
Figure 109116695-A0202-12-0537-1037
<210> 348
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 348
Figure 109116695-A0202-12-0537-1038
<210> 349
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 349
Figure 109116695-A0202-12-0537-1039
Figure 109116695-A0202-12-0538-1040
<210> 350
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 350
Figure 109116695-A0202-12-0539-1041
<210> 351
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 351
Figure 109116695-A0202-12-0539-1042
<210> 352
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 352
Figure 109116695-A0202-12-0539-1043
<210> 353
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 353
Figure 109116695-A0202-12-0539-1044
<210> 354
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 354
Figure 109116695-A0202-12-0540-1045
Figure 109116695-A0202-12-0541-1046
<210> 355
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 355
Figure 109116695-A0202-12-0541-1047
<210> 356
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 356
Figure 109116695-A0202-12-0541-1048
<210> 357
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 357
Figure 109116695-A0202-12-0541-1049
Figure 109116695-A0202-12-0542-1050
<210> 358
<211> 244
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 358
Figure 109116695-A0202-12-0542-1051
Figure 109116695-A0202-12-0543-1052
<210> 359
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 359
Figure 109116695-A0202-12-0543-1053
<210> 360
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 360
Figure 109116695-A0202-12-0543-1054
<210> 361
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 361
Figure 109116695-A0202-12-0544-1055
<210> 362
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 362
Figure 109116695-A0202-12-0544-1056
<210> 363
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 363
Figure 109116695-A0202-12-0544-1057
<210> 364
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 364
Figure 109116695-A0202-12-0544-1058
Figure 109116695-A0202-12-0545-1059
<210> 365
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 365
Figure 109116695-A0202-12-0546-1060
<210> 366
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 366
Figure 109116695-A0202-12-0546-1061
<210> 367
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 367
Figure 109116695-A0202-12-0546-1062
<210> 368
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 368
Figure 109116695-A0202-12-0546-1063
<210> 369
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 369
Figure 109116695-A0202-12-0547-1064
<210> 370
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 370
Figure 109116695-A0202-12-0547-1065
Figure 109116695-A0202-12-0548-1066
<210> 371
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 371
Figure 109116695-A0202-12-0548-1067
<210> 372
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 372
Figure 109116695-A0202-12-0548-1068
<210> 373
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 373
Figure 109116695-A0202-12-0549-1069
<210> 374
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 374
Figure 109116695-A0202-12-0549-1070
<210> 375
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 375
Figure 109116695-A0202-12-0549-1071
Figure 109116695-A0202-12-0550-1072
<210> 376
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 376
Figure 109116695-A0202-12-0550-1073
<210> 377
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 377
Figure 109116695-A0202-12-0551-1074
<210> 378
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 378
Figure 109116695-A0202-12-0551-1075
<210> 379
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 379
Figure 109116695-A0202-12-0551-1076
<210> 380
<211> 250
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 380
Figure 109116695-A0202-12-0551-1077
Figure 109116695-A0202-12-0552-1078
<210> 381
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 381
Figure 109116695-A0202-12-0553-1079
<210> 382
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 382
Figure 109116695-A0202-12-0553-1080
<210> 383
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 383
Figure 109116695-A0202-12-0553-1081
<210> 384
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 384
Figure 109116695-A0202-12-0553-1082
<210> 385
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 385
Figure 109116695-A0202-12-0554-1083
<210> 386
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 386
Figure 109116695-A0202-12-0554-1084
Figure 109116695-A0202-12-0555-1085
<210> 387
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 387
Figure 109116695-A0202-12-0555-1086
<210> 388
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 388
Figure 109116695-A0202-12-0555-1087
Figure 109116695-A0202-12-0556-1088
<210> 389
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 389
Figure 109116695-A0202-12-0556-1089
<210> 390
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 390
Figure 109116695-A0202-12-0556-1090
<210> 391
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 391
Figure 109116695-A0202-12-0556-1091
<210> 392
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 392
Figure 109116695-A0202-12-0556-1092
Figure 109116695-A0202-12-0557-1093
Figure 109116695-A0202-12-0558-1094
<210> 393
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 393
Figure 109116695-A0202-12-0558-1095
<210> 394
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 394
Figure 109116695-A0202-12-0558-1096
<210> 395
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 395
Figure 109116695-A0202-12-0558-1097
<210> 396
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 396
Figure 109116695-A0202-12-0559-1098
<210> 397
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 397
Figure 109116695-A0202-12-0559-1099
<210> 398
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 398
Figure 109116695-A0202-12-0559-1100
Figure 109116695-A0202-12-0560-1101
<210> 399
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 399
Figure 109116695-A0202-12-0560-1102
<210> 400
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 400
Figure 109116695-A0202-12-0561-1103
<210> 401
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 401
Figure 109116695-A0202-12-0561-1104
<210> 402
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 402
Figure 109116695-A0202-12-0561-1105
<210> 403
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 403
Figure 109116695-A0202-12-0561-1106
<210> 404
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 404
Figure 109116695-A0202-12-0562-1107
Figure 109116695-A0202-12-0563-1108
<210> 405
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 405
Figure 109116695-A0202-12-0563-1109
<210> 406
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 406
Figure 109116695-A0202-12-0564-1110
<210> 407
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 407
Figure 109116695-A0202-12-0564-1111
Figure 109116695-A0202-12-0565-1112
<210> 408
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 408
Figure 109116695-A0202-12-0565-1113
<210> 409
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 409
Figure 109116695-A0202-12-0566-1114
<210> 410
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 410
Figure 109116695-A0202-12-0566-1115
Figure 109116695-A0202-12-0567-1116
<210> 411
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 411
Figure 109116695-A0202-12-0567-1117
Figure 109116695-A0202-12-0568-1118
<210> 412
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 412
Figure 109116695-A0202-12-0568-1119
<210> 413
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 413
Figure 109116695-A0202-12-0569-1120
<210> 414
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 414
Figure 109116695-A0202-12-0569-1121
Figure 109116695-A0202-12-0570-1122
<210> 415
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 415
Figure 109116695-A0202-12-0570-1123
<210> 416
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 416
Figure 109116695-A0202-12-0571-1124
<210> 417
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 417
Figure 109116695-A0202-12-0571-1125
<210> 418
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 418
Figure 109116695-A0202-12-0571-1126
<210> 419
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 419
Figure 109116695-A0202-12-0571-1127
<210> 420
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 420
Figure 109116695-A0202-12-0572-1128
<210> 421
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 421
Figure 109116695-A0202-12-0572-1129
<210> 422
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 422
Figure 109116695-A0202-12-0572-1130
Figure 109116695-A0202-12-0573-1131
<210> 423
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 423
Figure 109116695-A0202-12-0573-1132
<210> 424
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 424
Figure 109116695-A0202-12-0574-1133
<210> 425
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 425
Figure 109116695-A0202-12-0574-1134
Figure 109116695-A0202-12-0575-1135
<210> 426
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 426
Figure 109116695-A0202-12-0575-1136
<210> 427
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 427
Figure 109116695-A0202-12-0575-1137
<210> 428
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 428
Figure 109116695-A0202-12-0575-1138
<210> 429
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 429
Figure 109116695-A0202-12-0576-1139
<210> 430
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 430
Figure 109116695-A0202-12-0576-1140
<210> 431
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 431
Figure 109116695-A0202-12-0577-1141
<210> 432
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 432
Figure 109116695-A0202-12-0577-1142
Figure 109116695-A0202-12-0578-1143
<210> 433
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 433
Figure 109116695-A0202-12-0578-1144
<210> 434
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 434
Figure 109116695-A0202-12-0579-1145
<210> 435
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 435
Figure 109116695-A0202-12-0579-1146
Figure 109116695-A0202-12-0580-1147
<210> 436
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 436
Figure 109116695-A0202-12-0580-1148
Figure 109116695-A0202-12-0581-1149
<210> 437
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 437
Figure 109116695-A0202-12-0581-1150
<210> 438
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 438
Figure 109116695-A0202-12-0582-1151
<210> 439
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 439
Figure 109116695-A0202-12-0582-1152
Figure 109116695-A0202-12-0583-1153
<210> 440
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 440
Figure 109116695-A0202-12-0583-1154
<210> 441
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 441
Figure 109116695-A0202-12-0583-1155
<210> 442
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 442
Figure 109116695-A0202-12-0583-1156
Figure 109116695-A0202-12-0584-1157
<210> 443
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 443
Figure 109116695-A0202-12-0584-1158
<210> 444
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 444
Figure 109116695-A0202-12-0584-1159
<210> 445
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 445
Figure 109116695-A0202-12-0585-1160
<210> 446
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 446
Figure 109116695-A0202-12-0585-1161
Figure 109116695-A0202-12-0586-1162
<210> 447
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 447
Figure 109116695-A0202-12-0586-1163
Figure 109116695-A0202-12-0587-1164
<210> 448
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 448
Figure 109116695-A0202-12-0587-1165
<210> 449
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 449
Figure 109116695-A0202-12-0588-1166
<210> 450
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 450
Figure 109116695-A0202-12-0588-1167
Figure 109116695-A0202-12-0589-1168
<210> 451
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 451
Figure 109116695-A0202-12-0589-1169
<210> 452
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 452
Figure 109116695-A0202-12-0590-1170
<210> 453
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 453
Figure 109116695-A0202-12-0590-1171
Figure 109116695-A0202-12-0591-1172
<210> 454
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 454
Figure 109116695-A0202-12-0591-1173
Figure 109116695-A0202-12-0592-1174
<210> 455
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 455
Figure 109116695-A0202-12-0592-1175
<210> 456
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 456
Figure 109116695-A0202-12-0592-1176
Figure 109116695-A0202-12-0593-1177
<210> 457
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 457
Figure 109116695-A0202-12-0593-1178
Figure 109116695-A0202-12-0594-1179
<210> 458
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 458
Figure 109116695-A0202-12-0594-1180
<210> 459
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 459
Figure 109116695-A0202-12-0595-1181
<210> 460
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 460
Figure 109116695-A0202-12-0595-1182
Figure 109116695-A0202-12-0596-1183
<210> 461
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 461
Figure 109116695-A0202-12-0596-1184
<210> 462
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 462
Figure 109116695-A0202-12-0597-1185
<210> 463
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 463
Figure 109116695-A0202-12-0597-1186
Figure 109116695-A0202-12-0598-1187
<210> 464
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 464
Figure 109116695-A0202-12-0598-1188
<210> 465
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 465
Figure 109116695-A0202-12-0598-1189
<210> 466
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 466
Figure 109116695-A0202-12-0599-1190
<210> 467
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 467
Figure 109116695-A0202-12-0599-1191
<210> 468
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 468
Figure 109116695-A0202-12-0599-1192
<210> 469
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 469
Figure 109116695-A0202-12-0599-1193
Figure 109116695-A0202-12-0600-1194
<210> 470
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 470
Figure 109116695-A0202-12-0600-1195
<210> 471
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 471
Figure 109116695-A0202-12-0601-1196
<210> 472
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 472
Figure 109116695-A0202-12-0601-1197
Figure 109116695-A0202-12-0602-1198
<210> 473
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 473
Figure 109116695-A0202-12-0602-1199
<210> 474
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 474
Figure 109116695-A0202-12-0602-1200
<210> 475
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 475
Figure 109116695-A0202-12-0603-1201
<210> 476
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 476
Figure 109116695-A0202-12-0603-1202
Figure 109116695-A0202-12-0604-1203
<210> 477
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 477
Figure 109116695-A0202-12-0604-1204
Figure 109116695-A0202-12-0605-1205
<210> 478
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 478
Figure 109116695-A0202-12-0605-1206
<210> 479
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 479
Figure 109116695-A0202-12-0605-1207
Figure 109116695-A0202-12-0606-1208
<210> 480
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 480
Figure 109116695-A0202-12-0606-1209
Figure 109116695-A0202-12-0607-1210
<210> 481
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 481
Figure 109116695-A0202-12-0607-1211
<210> 482
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 482
Figure 109116695-A0202-12-0608-1212
<210> 483
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 483
Figure 109116695-A0202-12-0608-1213
Figure 109116695-A0202-12-0609-1214
<210> 484
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 484
Figure 109116695-A0202-12-0609-1215
Figure 109116695-A0202-12-0610-1216
<210> 485
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 485
Figure 109116695-A0202-12-0610-1217
<210> 486
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 486
Figure 109116695-A0202-12-0610-1218
Figure 109116695-A0202-12-0611-1219
<210> 487
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 487
Figure 109116695-A0202-12-0611-1220
<210> 488
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 488
Figure 109116695-A0202-12-0611-1221
<210> 489
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 489
Figure 109116695-A0202-12-0611-1222
<210> 490
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 490
Figure 109116695-A0202-12-0612-1223
<210> 491
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 491
Figure 109116695-A0202-12-0612-1224
<210> 492
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 492
Figure 109116695-A0202-12-0612-1225
<210> 493
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 493
Figure 109116695-A0202-12-0612-1226
Figure 109116695-A0202-12-0613-1227
<210> 494
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 494
Figure 109116695-A0202-12-0613-1228
Figure 109116695-A0202-12-0614-1229
<210> 495
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 495
Figure 109116695-A0202-12-0614-1230
<210> 496
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 496
Figure 109116695-A0202-12-0614-1231
Figure 109116695-A0202-12-0615-1232
<210> 497
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 497
Figure 109116695-A0202-12-0615-1233
<210> 498
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 498
Figure 109116695-A0202-12-0615-1234
Figure 109116695-A0202-12-0616-1235
<210> 499
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 499
Figure 109116695-A0202-12-0616-1236
Figure 109116695-A0202-12-0617-1237
<210> 500
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 500
Figure 109116695-A0202-12-0617-1238
<210> 501
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 501
Figure 109116695-A0202-12-0618-1239
<210> 502
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 502
Figure 109116695-A0202-12-0618-1240
Figure 109116695-A0202-12-0619-1241
<210> 503
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 503
Figure 109116695-A0202-12-0619-1242
<210> 504
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 504
Figure 109116695-A0202-12-0620-1243
<210> 505
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 505
Figure 109116695-A0202-12-0620-1244
Figure 109116695-A0202-12-0621-1245
<210> 506
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 506
Figure 109116695-A0202-12-0621-1246
Figure 109116695-A0202-12-0622-1247
<210> 507
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 507
Figure 109116695-A0202-12-0622-1248
<210> 508
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 508
Figure 109116695-A0202-12-0623-1249
<210> 509
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 509
Figure 109116695-A0202-12-0623-1250
<210> 510
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 510
Figure 109116695-A0202-12-0623-1251
Figure 109116695-A0202-12-0624-1252
<210> 511
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 511
Figure 109116695-A0202-12-0624-1253
<210> 512
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 512
Figure 109116695-A0202-12-0624-1254
Figure 109116695-A0202-12-0625-1255
<210> 513
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 513
Figure 109116695-A0202-12-0625-1256
Figure 109116695-A0202-12-0626-1257
<210> 514
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 514
Figure 109116695-A0202-12-0626-1258
<210> 515
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 515
Figure 109116695-A0202-12-0627-1259
<210> 516
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 516
Figure 109116695-A0202-12-0627-1260
Figure 109116695-A0202-12-0628-1261
<210> 517
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 517
Figure 109116695-A0202-12-0628-1262
<210> 518
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 518
Figure 109116695-A0202-12-0629-1263
<210> 519
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 519
Figure 109116695-A0202-12-0629-1264
Figure 109116695-A0202-12-0630-1265
<210> 520
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 520
Figure 109116695-A0202-12-0630-1266
Figure 109116695-A0202-12-0631-1267
<210> 521
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 521
Figure 109116695-A0202-12-0631-1268
<210> 522
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 522
Figure 109116695-A0202-12-0631-1269
Figure 109116695-A0202-12-0632-1270
<210> 523
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 523
Figure 109116695-A0202-12-0632-1271
Figure 109116695-A0202-12-0633-1272
<210> 524
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 524
Figure 109116695-A0202-12-0633-1273
<210> 525
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 525
Figure 109116695-A0202-12-0634-1274
<210> 526
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 526
Figure 109116695-A0202-12-0634-1275
<210> 527
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 527
Figure 109116695-A0202-12-0635-1276
<210> 528
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 528
Figure 109116695-A0202-12-0635-1277
<210> 529
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 529
Figure 109116695-A0202-12-0636-1278
<210> 530
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 530
Figure 109116695-A0202-12-0636-1279
Figure 109116695-A0202-12-0637-1280
<210> 531
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 531
Figure 109116695-A0202-12-0637-1281
<210> 532
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 532
Figure 109116695-A0202-12-0638-1282
<210> 533
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 533
Figure 109116695-A0202-12-0638-1283
Figure 109116695-A0202-12-0639-1284
<210> 534
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 534
Figure 109116695-A0202-12-0639-1285
Figure 109116695-A0202-12-0640-1286
<210> 535
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 535
Figure 109116695-A0202-12-0640-1287
<210> 536
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 536
Figure 109116695-A0202-12-0640-1288
Figure 109116695-A0202-12-0641-1289
<210> 537
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 537
Figure 109116695-A0202-12-0641-1290
Figure 109116695-A0202-12-0642-1291
<210> 538
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 538
Figure 109116695-A0202-12-0642-1292
<210> 539
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 539
Figure 109116695-A0202-12-0643-1293
<210> 540
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 540
Figure 109116695-A0202-12-0643-1294
Figure 109116695-A0202-12-0644-1295
<210> 541
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 541
Figure 109116695-A0202-12-0644-1296
Figure 109116695-A0202-12-0645-1297
<210> 542
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 542
Figure 109116695-A0202-12-0645-1298
<210> 543
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 543
Figure 109116695-A0202-12-0645-1299
Figure 109116695-A0202-12-0646-1300
<210> 544
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 544
Figure 109116695-A0202-12-0646-1301
Figure 109116695-A0202-12-0647-1302
<210> 545
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 545
Figure 109116695-A0202-12-0647-1303
<210> 546
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 546
Figure 109116695-A0202-12-0648-1304
<210> 547
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 547
Figure 109116695-A0202-12-0648-1305
Figure 109116695-A0202-12-0649-1306
<210> 548
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 548
Figure 109116695-A0202-12-0649-1307
<210> 549
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 549
Figure 109116695-A0202-12-0650-1308
<210> 550
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 550
Figure 109116695-A0202-12-0650-1309
Figure 109116695-A0202-12-0651-1310
<210> 551
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 551
Figure 109116695-A0202-12-0651-1311
Figure 109116695-A0202-12-0652-1312
<210> 552
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 552
Figure 109116695-A0202-12-0652-1313
<210> 553
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 553
Figure 109116695-A0202-12-0653-1314
<210> 554
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 554
Figure 109116695-A0202-12-0653-1315
<210> 555
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 555
Figure 109116695-A0202-12-0653-1316
<210> 556
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 556
Figure 109116695-A0202-12-0653-1317
Figure 109116695-A0202-12-0654-1318
<210> 557
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 557
Figure 109116695-A0202-12-0654-1319
<210> 558
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 558
Figure 109116695-A0202-12-0655-1320
<210> 559
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 559
Figure 109116695-A0202-12-0655-1321
<210> 560
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 560
Figure 109116695-A0202-12-0655-1322
<210> 561
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 561
Figure 109116695-A0202-12-0655-1323
<210> 562
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 562
Figure 109116695-A0202-12-0656-1324
<210> 563
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 563
Figure 109116695-A0202-12-0656-1325
Figure 109116695-A0202-12-0657-1326
<210> 564
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 564
Figure 109116695-A0202-12-0657-1327
Figure 109116695-A0202-12-0658-1328
<210> 565
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 565
Figure 109116695-A0202-12-0658-1329
<210> 566
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 566
Figure 109116695-A0202-12-0659-1330
<210> 567
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 567
Figure 109116695-A0202-12-0659-1331
Figure 109116695-A0202-12-0660-1332
<210> 568
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 568
Figure 109116695-A0202-12-0660-1333
<210> 569
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 569
Figure 109116695-A0202-12-0660-1334
<210> 570
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 570
Figure 109116695-A0202-12-0660-1335
<210> 571
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 571
Figure 109116695-A0202-12-0661-1336
<210> 572
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 572
Figure 109116695-A0202-12-0661-1337
<210> 573
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 573
Figure 109116695-A0202-12-0661-1338
Figure 109116695-A0202-12-0662-1339
<210> 574
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 574
Figure 109116695-A0202-12-0662-1340
<210> 575
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 575
Figure 109116695-A0202-12-0663-1341
<210> 576
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 576
Figure 109116695-A0202-12-0663-1342
Figure 109116695-A0202-12-0664-1343
<210> 577
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 577
Figure 109116695-A0202-12-0664-1344
<210> 578
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 578
Figure 109116695-A0202-12-0664-1345
<210> 579
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 579
Figure 109116695-A0202-12-0665-1346
<210> 580
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 580
Figure 109116695-A0202-12-0665-1347
<210> 581
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 581
Figure 109116695-A0202-12-0665-1348
Figure 109116695-A0202-12-0666-1349
<210> 582
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 582
Figure 109116695-A0202-12-0666-1350
<210> 583
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 583
Figure 109116695-A0202-12-0666-1351
<210> 584
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 584
Figure 109116695-A0202-12-0667-1352
<210> 585
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 585
Figure 109116695-A0202-12-0667-1353
<210> 586
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 586
Figure 109116695-A0202-12-0667-1354
<210> 587
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 587
Figure 109116695-A0202-12-0667-1355
Figure 109116695-A0202-12-0668-1356
<210> 588
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 588
Figure 109116695-A0202-12-0668-1357
Figure 109116695-A0202-12-0669-1358
<210> 589
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 589
Figure 109116695-A0202-12-0669-1359
<210> 590
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 590
Figure 109116695-A0202-12-0670-1360
<210> 591
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 591
Figure 109116695-A0202-12-0670-1361
Figure 109116695-A0202-12-0671-1362
<210> 592
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 592
Figure 109116695-A0202-12-0671-1363
<210> 593
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 593
Figure 109116695-A0202-12-0672-1364
<210> 594
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 594
Figure 109116695-A0202-12-0672-1365
Figure 109116695-A0202-12-0673-1366
<210> 595
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 595
Figure 109116695-A0202-12-0673-1367
Figure 109116695-A0202-12-0674-1368
<210> 595
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 596
Figure 109116695-A0202-12-0674-1369
<210> 597
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 597
Figure 109116695-A0202-12-0674-1370
Figure 109116695-A0202-12-0675-1371
<210> 598
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 598
Figure 109116695-A0202-12-0675-1372
Figure 109116695-A0202-12-0676-1373
<210> 599
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 599
Figure 109116695-A0202-12-0676-1374
<210> 600
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 600
Figure 109116695-A0202-12-0677-1375
<210> 601
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 601
Figure 109116695-A0202-12-0677-1376
<210> 602
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 602
Figure 109116695-A0202-12-0678-1377
<210> 603
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 603
Figure 109116695-A0202-12-0678-1378
<210> 604
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 604
Figure 109116695-A0202-12-0678-1379
Figure 109116695-A0202-12-0679-1380
<210> 605
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 605
Figure 109116695-A0202-12-0679-1381
<210> 606
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 606
Figure 109116695-A0202-12-0679-1382
Figure 109116695-A0202-12-0680-1383
<210> 607
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 607
Figure 109116695-A0202-12-0680-1384
Figure 109116695-A0202-12-0681-1385
<210> 608
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 608
Figure 109116695-A0202-12-0681-1386
<210> 609
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 609
Figure 109116695-A0202-12-0682-1387
<210> 610
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 610
Figure 109116695-A0202-12-0682-1388
Figure 109116695-A0202-12-0683-1389
<210> 611
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 611
Figure 109116695-A0202-12-0683-1390
<210> 612
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 612
Figure 109116695-A0202-12-0684-1391
<210> 613
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 613
Figure 109116695-A0202-12-0684-1392
<210> 614
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 614
Figure 109116695-A0202-12-0684-1393
<210> 615
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 615
Figure 109116695-A0202-12-0684-1394
<210> 616
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 616
Figure 109116695-A0202-12-0685-1395
<210> 617
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 617
Figure 109116695-A0202-12-0685-1396
<210> 618
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 618
Figure 109116695-A0202-12-0686-1397
<210> 619
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 619
Figure 109116695-A0202-12-0686-1398
<210> 620
<211> 588
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 620
Figure 109116695-A0202-12-0687-1399
Figure 109116695-A0202-12-0688-1400
Figure 109116695-A0202-12-0689-1401
<210> 621
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 621
Figure 109116695-A0202-12-0689-1402
Figure 109116695-A0202-12-0690-1403
<210> 622
<211> 586
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 622
Figure 109116695-A0202-12-0690-1404
Figure 109116695-A0202-12-0691-1405
Figure 109116695-A0202-12-0692-1406
Figure 109116695-A0202-12-0693-1407
<210> 623
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 623
Figure 109116695-A0202-12-0693-1408
Figure 109116695-A0202-12-0694-1409
<210> 624
<211> 587
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 624
Figure 109116695-A0202-12-0694-1410
Figure 109116695-A0202-12-0695-1411
Figure 109116695-A0202-12-0696-1412
Figure 109116695-A0202-12-0697-1413
<210> 625
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 625
Figure 109116695-A0202-12-0697-1414
Figure 109116695-A0202-12-0698-1415
<210> 626
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 626
Figure 109116695-A0202-12-0698-1416
<210> 627
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 627
Figure 109116695-A0202-12-0699-1417
<210> 628
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 628
Figure 109116695-A0202-12-0699-1418
<210> 629
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 629
Figure 109116695-A0202-12-0699-1419
<210> 630
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 630
Figure 109116695-A0202-12-0699-1420
<210> 631
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 631
Figure 109116695-A0202-12-0700-1421

Claims (117)

  1. 一種結合至MadCAM之抗體，其中該抗體係包含如表6或表7中提供之一個或多個序列。
  2. 如請求項2所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包含：
    (i)包含重鏈CDR1、CDR2及CDR3序列之重鏈可變區，其中該重鏈CDR1序列係具有表6或表7中詳述之任意CDR1序列的胺基酸序列；該重鏈CDR2序列係具有表6或表7中詳述之任意CDR2序列的胺基酸序列；並且該重鏈CDR3序列係具有表6或表7中詳述之任意CDR3序列的胺基酸序列；或前述任一者之變體；以及
    (ii)包含輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列之輕鏈可變區，其中該輕鏈LCDR1序列係具有表6或表7中詳述之任意LCDR1序列的胺基酸序列；該輕鏈LCDR2序列係具有表6或表7中詳述之任意LCDR2序列的胺基酸序列；並且該輕鏈LCDR3序列係具有表6或表7中詳述之任意LCDR3序列的胺基酸序列；或前述任一者之變體。
  3. 如請求項1至2中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包含：
    (i)包含重鏈CDR1、CDR2及CDR3序列之重鏈可變區，其中該重鏈CDR1序列係具有SEQ ID NO：90、359或135的胺基酸序列；該重鏈CDR2序列係具有SEQ ID NO：91、170或381的胺基酸序列；並且該重鏈CDR3序列係具有SEQ ID NO：92、360或382的胺基酸序列；或前述任一者之變體；以及
    (ii)包含輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列之輕鏈可變區，其中該輕鏈CDR1序列係具有SEQ ID NO：93、361或383的胺基酸序列；該輕鏈LCDR2序列係具有SEQ ID NO：87、362或384的胺基酸序列；並且該輕鏈CDR3序列係具有SEQ ID NO：94、363或385的胺基酸序列；或前述任一者之變體。
  4. 如請求項1至2中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包含：
    (i)包含重鏈CDR1、CDR2及CDR3序列之重鏈可變區，其中該重鏈CDR1序列係具有SEQ ID NO：90的胺基酸序列；該重鏈CDR2序列係具有SEQ ID NO：91的胺基酸序列；並且該重鏈CDR3序列係具有SEQ ID NO：92的胺基酸序列；或前述任一者之變體；以及
    (ii)包含輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列之輕鏈可變區，其中該輕鏈CDR1序列係具有SEQ ID NO：93的胺基酸序列；該輕鏈LCDR2序列係具有SEQ ID NO：87的胺基酸序列；並且該輕鏈CDR3序列係具有SEQ ID NO：94的胺基酸序列；或前述任一者之變體。
  5. 如請求項1至2中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包含：
    (i)包含重鏈CDR1、CDR2及CDR3序列之重鏈可變區，其中該重鏈CDR1序列係具有SEQ ID NO：135的胺基酸序列；該重鏈CDR2序列係具有SEQ ID NO：381的胺基酸序列；並且該重鏈CDR3序列係具有SEQ ID NO：382的胺基酸序列；或前述任一者之變體；以及
    (ii)包含輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列之輕鏈可變區，其中該輕鏈CDR1序列係具有SEQ ID NO：383的胺基酸序列；該輕鏈LCDR2序列係具有SEQ ID NO：384的胺基酸序列；並且該輕鏈CDR3序列係具有SEQ ID NO：385的胺基酸序列；或前述任一者之變體。
  6. 如請求項1至2項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包含：
    (i)包含重鏈CDRI、CDR2及CDR3序列之重鏈可變區，其中該重鏈CDR1序列係具有SEQ ID NO：359的胺基酸序列；該重鏈CDR2序列係具有SEQ ID NO：170的胺基酸序列；並且該重鏈CDR3序列係具有SEQ ID NO：360的胺基酸序列；或前述任一者之變體；以及
    (ii)包含輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列之輕鏈可變區，其中該輕鏈CDR1序列係具有SEQ ID NO：361的胺基酸序列；該輕鏈LCDR2序列係具有SEQ ID NO：362的胺基酸序列；並且該輕鏈CDR3序列係具有SEQ ID NO：363的胺基酸序列；或前述任一者之變體。
  7. 如前述請求項中任一項所述之抗體，其中該重鏈可變區及該輕鏈可變區係scFv型式。
  8. 如請求項3所述之抗體，其中該重鏈可變區及該輕鏈可變區係scFv型式。
  9. 如請求項4所述之抗體，其中該重鏈可變區及該輕鏈可變區係scFv型式。
  10. 如請求項5所述之抗體，其中該重鏈可變區及該輕鏈可變區係scFv型式。
  11. 如請求項6所述之抗體，其中該重鏈可變區及該輕鏈可變區係scFv型式。
  12. 如請求項7至11中任一項所述之抗體，其中該重鏈可變區及該輕鏈可變區係與肽鏈結基諸如甘胺酸/絲胺酸鏈結基鏈結。
  13. 如請求項1所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體係包含如表7中所示之VK 序列。
  14. 如請求項13所述之抗體，其中該VK 序列係包含SEQ ID NO：415、592或600之序列。
  15. 如請求項1所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體係包含如表7中所示之VH 序列。
  16. 如請求項15所述之抗體，其中該VH 序列係包含SEQ ID NO：414、591或599之序列。
  17. 如請求項1所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體係包含如表7中所示之VK 序列以及如表7中所示之VH 序列。
  18. 如請求項17所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體係包含SEQ ID NO：415之VK 或其變體以及SEQ ID NO：414之VH 序列或其變體。
  19. 如請求項17所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體係包含SEQ ID NO：592之VK 或其變體以及SEQ ID NO：591之VH 序列或其變體。
  20. 如請求項17所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體係包含SEQ ID NO：600之VK 或其變體以及SEQ ID NO：599之VH 序 列或其變體。
  21. 如請求項1至20中任一項所述之抗體，其中該抗體係與效應子分子鏈結或相關聯。
  22. 如請求項21所述之抗體，其中該效應子分子係IL-2突變蛋白質。
  23. 如請求項22所述之抗體，其中該IL-2突變蛋白質係包含下列之一種或多種突變：E15Q、H16N、Q22E、D84N、E95Q、Q126E、N29S、Y31S、Y31H、K35R、T37A、K48E、N71R、L53I、L56I、L80I、L118I、V69A、Q74P、N88D、N88R、C125A或C125S。
  24. 如請求項22或23所述之抗體，其中該IL-2突變蛋白質係包含L53I、L56I、L80I或L118I突變。
  25. 如請求項22至24中任一項所述之抗體，其中該IL-2突變蛋白質係包含N88D突變。
  26. 如請求項22至25中任一項所述之抗體，其中該IL-2突變蛋白質係包含E15Q、H16N、Q22E、D84N、E95Q或Q126E突變。
  27. 如請求項22或23所述之抗體，其中該IL-2突變蛋白質係包含N29S、Y31S、Y51H、K35R、T37A、K48E、V69A、N71R、Q74P、N88D、N88R、C125A或C125S突變。
  28. 如請求項22至27中任一項所述之抗體，其中該IL-2突變蛋白質係融合或鏈結至Fc肽。
  29. 如請求項28所述之抗體，其中該Fc肽係包含突變，該突變係位於根據EU編號系統之L234、L235及G237位置以及根據Kabat 編號系統之L247、L248及G250的一個或多個位置。
  30. 如請求項28所述之抗體，其中該Fc肽係包含根據EU編號系統之L234A突變、L235A突變及/或G237A突變。
  31. 如請求項21所述之抗體，其中該鏈結至效應子分子之抗體係包含第一多肽鏈及第二多肽鏈，該第一多肽鏈及第二多肽鏈係形成靶向效應子多肽，其中
    該第一鏈係包含具有下式之多肽：
    VH -Hc -鏈結基-C1 ，其中VH 可如請求項1至20項中任一項所述之抗體的重鏈可變域；Hc 係重鏈恆定域諸如CH1-CH2-CH3域(SEQ ID NO：44)，該鏈結基係甘胺酸/絲胺酸鏈結基，並且C1 係該融合或鏈結至Fc蛋白質之IL-2突變蛋白質，其中該Fc蛋白質係融合或鏈結於該IL-2突變蛋白質之N端或C端；以及
    該第二鏈係包含具有式VL -Lc 之多肽，其中VL 係如申請專利範圍1至中任一項所述之抗體的輕鏈可變域，並且該Lc 域係κ輕鏈恆定域。
  32. 一種多肽，係具有下式：
    Ab-恆定域-鏈結基A-IL2突變蛋白質-鏈結基B-Fc區，
    其中該Ab係如請求項1至20項中任一項所述之重鏈可變區；
    該恆定域係IgG恆定域，諸如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4；
    鏈結基A係諸如本文中所提供之彼等的鏈結基；
    IL2突變蛋白質係諸如本文中所提供之彼等的IL-2突變蛋白質；
    鏈結基B係肽鏈結基；以及
    Fc區係諸如本文中所提供之彼等的Fc區。
  33. 如請求項32所述之多肽，其中該重鏈可變區係如表7中提供之重鏈可變區。
  34. 如請求項32所述之多肽，其中該重鏈可變區係如表7中純株ID為6、75或79之重鏈可變區。
  35. 如請求項32所述之多肽，其中該重鏈可變區係包含表7之6、75或79之重鏈域的CDR。
  36. 如請求項32所述之多肽，其中該重鏈可變區係包含SEQ ID NO：414、SEQ ID NO：591或SEQ ID NO：599之序列。
  37. 如請求項32所述之多肽，其中該重鏈可變區係包含：
    SEQ ID NO：90之第一CDR、SEQ ID NO：91之第二CDR、以及SEQ ID NO：92之第三CDR；
    SEQ ID NO：359之第一CDR、SEQ ID NO：170之第二CDR、以及SEQ ID NO：360之第三CDR；或
    SEQ ID NO：135之第一CDR、SEQ ID NO：381之第二CDR、以及SEQ ID NO：382之第三CDR。
  38. 如請求項32至38中任一項所述之多肽，其中鏈結基A係包含(GGGGS)n 或(GGGGA)n 或其混合物的序列，其中n係各自獨立為1至10。
  39. 如請求項32所述之多肽，其中該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：32、33、34、35、36、37、38、39、40或41中之任一者的序列。
  40. 如請求項32或39所述之多肽，其中該IL-2突變蛋白質 係包含T3A突變。
  41. 如請求項32至40中任一項所述之多肽，其中鏈結基B係鏈結基，諸如包含(GGGGS)n 或(GGGGA)n 或其混合物之序列的肽鏈結基，其中n係各自獨立為1至10。
  42. 如請求項32至41中任一項所述之多肽，其中該Fc區係包含具有SEQ ID NO：21或SEQ ID NO：28之序列的肽。
  43. 如請求項32至42中任一項所述之多肽，其中該多肽包含具有式VL-恆定域輕的第二多肽，其中VL係如請求項1至20項中任一項所述之抗體的輕鏈可變域，並且該恆定域輕係IgG輕鏈恆定域。
  44. 如請求項43所述之多肽，其中VL係包含SEQ ID NO：415、SEQ ID NO：592或SEQ ID NO：600之序列，或VL序列係如表7中所提供者。
  45. 如請求項43所述之多肽，其中該VL係包含：
    SEQ ID NO：93之第一CDR、SEQ ID NO：87之第二CDR、以及SEQ ID NO：94之第三CDR；
    SEQ ID NO：361之第一CDR、SEQ ID NO：362之第二CDR、以及SEQ ID NO：363之第三CDR；或
    SEQ ID NO：383之第一CDR、SEQ ID NO：384之第二CDR、以及SEQ ID NO：385之第三CDR。
  46. 如請求項42至45中任一項所述之多肽，其中該恆定域輕係包含SEQ ID NO：45之序列。
  47. 一種包含式IL2突變蛋白質-鏈結基A-Fc區-鏈結基B- Ab的多肽，其中：
    IL2突變蛋白質係本文中提供之任意IL-2突變蛋白質；
    鏈結基A及鏈結基B係各自獨立為如本文所提供者之鏈結基；
    Fc區係諸如本文所提供之Fc肽；以及
    該Ab係組織靶向部分，諸如本文中提供之彼等。
  48. 如請求項47所述之多肽，其中該Ab係結合至MAdCAM或另一細胞表面靶標之抗體，如本文中提供者。
  49. 如請求項48所述之多肽，其中該結合至MAdCAM之抗體係如請求項1至20中任一項所述之抗體。
  50. 如請求項49所述之多肽，其中該抗體係scFV型式。
  51. 如請求項50所述之多肽，其中該scFV型式之抗體係如表6中提供之抗體。
  52. 如請求項49所述之多肽，其中該結合至MAdCAM之抗體係包含如表6或表7中詳述之CDR。
  53. 如請求項21所述之抗體，其中該效應子分子係結合至PD-1之抗體。
  54. 如請求項53所述之抗體，其中該結合至PD-1之抗體係PD-1促效劑。
  55. 一種多肽，其係包含結合至表現MAdCAM之靶標細胞的MAdCAM靶向部分以及效應子結合/調控部分，
    其中該MAdCAM靶向部分係如請求項1至20中任一項所述之抗體，
    其中該效應子結合/調控部分係IL-2突變蛋白質多肽(IL-2突變蛋白質)，其中該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：60之序列，其中X1、X2、X3及X4之至少一者係I且剩餘者係L或I。
  56. 如請求項55所述之多肽，其中該IL-2突變蛋白質係結合至藉由免疫細胞表現之受體。
  57. 如請求項55所述之多肽，其中該化合物係具有從N端至C端之式：
    R1---鏈結基區A-R2或R3-鏈結基區B-R4，
    其中，
    R2、R3及R4係各自獨立包含該效應子結合/調控部分、該靶向部分，或不存在。
  58. 如請求項57之多肽，其中鏈結基區A及鏈結基區B之一者或兩者係包含Fc區。
  59. 如請求項57之多肽，其中R1及R2之一者係IL-突變蛋白質，並且R1及R2之一者係如請求項1至20項中任一項所述之抗MAdCAM抗體。
  60. 如請求項57之多肽，其中R1係IL-突變蛋白質，並且R2係如請求項1至20中任一項所述之抗MAdCAM抗體。
  61. 如請求項57之多肽，其中R1之一者係如請求項1至20中任一項所述之抗MAdCAM抗體，並且一個R2係抗PD-1抗體。
  62. 如請求項57之多肽，其中R3及R4之一者係IL-2突變蛋白質，並且R3及R4之一者係如請求項1至20中任一項所述之抗 MAdCAM抗體。
  63. 如請求項57之多肽，其中R3係IL-2突變蛋白質，並且R4係抗MAdCAM抗體。
  64. 如請求項57之多肽，其中R3係如請求項1至20中任一項所述之抗MAdCAM抗體，並且一個R2係IL-2突變蛋白質。
  65. 如請求項57至64中任一項所述之多肽，其中，該鏈結基係不存在。
  66. 如請求項57至64中任一項所述之多肽，其中，該鏈結基係Fc區。
  67. 如請求項57至64中任一項所述之多肽，其中，該鏈結基係甘胺酸/絲胺酸鏈結基。
  68. 如請求項57所述之多肽，其中該鏈結基係GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：619、或GGGGS(SEQ ID NO：23)。
  69. 如請求項55所述之多肽，其中該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：6之IL-2序列，其中該肽係包含對應於SEQ ID NO：6之位置53、56、80或118之位置的突變。
  70. 如請求項55至69中任一項所述之多肽，其中該IL-2突變蛋白質係包含SEQ ID NO：6之IL-2序列，其中該肽係包含對應於SEQ ID NO：6之位置53、56、80或118之位置的突變。
  71. 如請求項69所述之多肽，其中該突變係位置53、56、80 或118的L至I突變。
  72. 如請求項70所述之多肽，其中該突變係位置53、56、80或118的L至I突變。
  73. 如請求項55、69或72所述之多肽，復包含SEQ ID NO：6中位置29、31、35、37、48、69、71、74、88及125之一處或多處的突變。
  74. 如請求項55至73中任一項所述之多肽，其中該突變蛋白質復包含位於E15、H16、Q22、D84、E95或Q126之一處或多處之突變，或位置E15、H16、Q22、D84、E95或Q126之1、2、3、4、5或每個係野生型。
  75. 如請求項55至74中任一項所述之多肽，其中該突變蛋白質中之突變係E15Q、H16N、Q22E、D84N、E95Q或Q126E之一者或多者。
  76. 如請求項55至75中任一項所述之多肽，其中該突變蛋白質係包含V69A突變。
  77. 如請求項55至76中任一項所述之多肽，其中該突變蛋白質係包含Q74P突變。
  78. 如請求項55至77中任一項所述之多肽，其中該突變蛋白質係包含N88D或N88R突變。
  79. 如請求項55至78中任一項所述之多肽，其中該突變蛋白質係包含C125A或C125S突變。
  80. 如請求項55至79中任一項所述之多肽，其中該IL-2突 變蛋白質係融合或鏈結至Fc肽，諸如包含SEQ ID NO：59之序列的蛋白質。
  81. 如請求項80所述之多肽，其中該Fc肽係包含L234、L247、L235、L248、G237及G250之一個或多個位置之突變。
  82. 如請求項80所述之多肽，其中該突變係L至A突變或G至A突變。
  83. 如請求項80所述之多肽，其中該Fc肽係包含L247A、L248A及G250A突變。
  84. 如請求項80所述之多肽，其中該Fc肽係包含L234A突變、L235A突變及/或G237A突變。
  85. 如請求項55所述之多肽，其中該多肽係包含形成該多肽之第一鏈及第二鏈，其中
    該第一鏈係包含：
    VH -Hc -鏈結基-C1 ，其中VH 係重鏈可變域，其係使用該第二鏈之VL 域結合至表現在細胞之MAdCAM；Hc 係包含CH1-CH2-CH3域之抗體的重鏈；該鏈結基係甘胺酸/絲胺酸鏈結基；以及，C1 係以N端或C端取向融合至Fc蛋白質的IL-2突變蛋白質；以及
    該第二鏈係包含：
    VL -Lc ，其中VL 係輕鏈可變域，其係使用該第一鏈之VH 域結合至表現在細胞之MAdCAM；並且該Lc 域係輕鏈CK 域，
    其中VL 及VH 係包含如請求項1至20中任一項所述之抗體的序列。
  86. 如請求項85所述之多肽，其中該IL-2突變蛋白質係包 含對應於SEQ ID NO：6之位置53、56、80或118之位置的突變。
  87. 如請求項86所述之多肽，其中該突變係位置53、56、80或118的L至I突變。
  88. 如請求項85所述之多肽，其中該突變蛋白質復包含對應於位置69、75、88或125之位置的突變或其任意組合。
  89. 如請求項85所述之多肽，其係包含選自由下列所組成之群組的突變：L53I、L56I、L80I及L118I之一者以及V69A、Q74P、N88D或N88R之突變，並且視需要為C125A或C125S。
  90. 如請求項89所述之多肽，其中該IL-2突變蛋白質係包含L53I突變。
  91. 如請求項89所述之多肽，其中該IL-2突變蛋白質係包含L56I突變。
  92. 如請求項89所述之多肽，其中該IL-2突變蛋白質係包含L80I突變。
  93. 如請求項89所述之多肽，其中該IL-2突變蛋白質係包含L118I突變。
  94. 如請求項89至93中任一項所述之多肽，其中該IL-2突變蛋白質係包含T3A突變。
  95. 如請求項89或94所述之多肽，其中該IL-2突變蛋白質不包含任何其它突變。
  96. 如請求項85所述之多肽，其中該Fc蛋白質係包含根據KABAT編號之L247A、L248A及G250A突變或L234A突變、L235A突 變及/或G237A突變。
  97. 如請求項85所述之多肽，其中該鏈結基係包含GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)或GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：22)之序列。
  98. 如請求項55至97中任一項所述之多肽，其中該多肽係包含Fc肽，該Fc肽係包含本文所揭示之序列。
  99. 一種治療患有炎症性腸病之受驗者的方法，該方法係包含向該受驗者給藥如請求項1至98中任一項所述之多肽或抗體以治療該炎症性腸病。
  100. 如請求項99所述之方法，其中該患有炎症性腸病之受驗者係患有克隆氏症。
  101. 如請求項99所述之方法，其中該患有炎症性腸病之受驗者係患有潰瘍性結腸炎。
  102. 一種治療患有自體免疫性肝炎之受驗者的方法，該方法係包含向該受驗者給藥如請求項1至98項中任一項所述之多肽或抗體以治療該自體免疫性肝炎。
  103. 一種治療原發性硬化性膽管炎的方法，該方法係包含向該受驗者給藥如請求項1至98中任一項所述之多肽或抗體以治療該原發性硬化性膽管炎。
  104. 一種治療1型糖尿病的方法，該方法係包含向該受驗者給藥如請求項1至98項中任一項所述之多肽或抗體以治療該1型糖尿病。
  105. 一種治療移植受驗者的方法，係包含向該受驗者給藥治 療有效量之如請求項1至98中任一項所述之多肽或抗體，從而治療移植(接納者)受驗者。
  106. 一種治療具有經移植之供體組織之受驗者的GVHD的方法，係包含向該受驗者給藥治療有效量之如請求項1至98項中任一項所述之多肽或抗體。
  107. 一種治療患有自體免疫疾患或處於罹患該疾患之風險下或罹患該疾患之風險提高之受驗者的方法，係包含向該受驗者給藥治療有效量之如請求項1至98中任一項所述之多肽或抗體，從而治療該受驗者。
  108. 一種核酸，其係編碼如請求項1至98中任一項所述之多肽或抗體。
  109. 一種載體，係包含如請求項108所述之核酸。
  110. 一種細胞，係包含如請求項108所述之核酸或如請求項109項所述之載體。
  111. 一種作成如請求項1至98中任一項所述之多肽或抗體的方法，係包含培養如請求項110所述之細胞以作成如請求項1至98中任一項所述之多肽或抗體。
  112. 一種蛋白質，係包含如表6或表7中提供之序列。
  113. 一種結合至MadCAM之抗體，其中該抗體係包含如表6或表7中提供之序列。
  114. 如請求項113所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係包含：
    (i)包含重鏈CDR1、CDR2及CDR3序列之重鏈可變區，其中該重鏈CDR1序列係具有表6或表7中詳述之任意CDR1序列的胺基酸序列；該重鏈CDR2序列係具有表6或表7中詳述之任意CDR2序列的胺基酸序列；並且該重鏈CDR3序列係具有表6或表7中詳述之任意CDR3序列的胺基酸序列；或前述任一者之變體；以及
    (ii)包含輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列之輕鏈可變區，其中該輕鏈LCDR1序列係具有表6或表7中詳述之任意LCDR1序列的胺基酸序列；該輕鏈LCDR2序列係具有表6或表7中詳述之任意LCDR2序列的胺基酸序列；並且該輕鏈LCDR3序列係具有表6或表7中詳述之任意LCDR3序列的胺基酸序列；或前述任一者之變體。
  115. 一種藥物組成物，其係包含如請求項1至98或第112至114中任一項所述之多肽或抗體。
  116. 一種藥物組成物，其係包含如請求項1至98或第112至114中任一項所述之多肽或抗體。
  117. 一種藥物組成物，係包含任何包含如本文所提供之序列的肽。
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