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TW202116774A - 炔類衍生物及其製備方法和用途 - Google Patents

炔類衍生物及其製備方法和用途 Download PDF

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TW202116774A
TW202116774A TW109122819A TW109122819A TW202116774A TW 202116774 A TW202116774 A TW 202116774A TW 109122819 A TW109122819 A TW 109122819A TW 109122819 A TW109122819 A TW 109122819A TW 202116774 A TW202116774 A TW 202116774A
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Abstract

本發明涉及炔類衍生物、其製備方法及其在醫藥上的應用。具體而言，本發明涉及式(I)所示的炔類衍生物、其製備方法及其可藥用的鹽，以及它們作為治療劑，特別是磷脂醯肌醇-3-激酶γ(PI3Kγ)抑制劑的用途，其中式(I)中各取代基的定義與說明書中的定義相同。

Description

炔類衍生物及其製備方法和用途
本發明涉及一種新的炔類衍生物、其製備方法及含有該衍生物的藥物組合物以及其作為治療劑特別是作為磷脂醯肌醇-3-激酶γ(PI3Kγ)抑制劑的用途。
本發明要求發明名稱為“炔類衍生物及其製備方法和用途”於2019年7月8日提交到中國專利局的中國專利申請201910608212.0的優先權，其內容通過引用以整體併入本文。
磷酸肌醇3-激酶(PI3-激酶或PI3K(Phosphoinositide-3 kinase))是一種胞內的磷脂醯激酶，與病毒癌基因相關，由其介導的PI3K-Akt-mTOR信號通路在腫瘤的發生發展中起著重要作用，可以調節腫瘤細胞生成、存活、增殖、遷移、代謝和凋亡。基於序列同源性和脂質底物特異性，PI3K家族分為I型、II型和III型。I型PI3K是研究的比較廣泛的一種類型，也是眾多藥物研究的重要靶標。所有I型PI3K都是異二聚體蛋白質，每個包含小的調節結構域和大的110kDa催化結構域，其以四種亞型存在，分化為p110α，p110β，p110γ和p110δ。I型PI3K(p110α、p110β、p110δ或p110γ)通常由酪氨酸激酶或G-蛋白偶聯受體活化以生成PIP3，所述PIP3接合下游效應物如Akt/PDK1通路、mTOR、Tec家族激酶和Rho家族GTP酶。II型和III型PI3K通過PI(3)P和PI(3,4)P2的合成在細胞內運輸中起到關鍵作用。PI3K是控制細胞生長(mTORC1)或監測基因組完整性(ATM、ATR、DNA-PK和hSmg-1)的蛋白激酶。四種I型PI3K亞型在體內表現出特徵性的表達模式。PI3Kα和PI3Kβ表達極其普遍，對於細胞生長、存活和增殖等發揮關鍵作用；抑制PI3Kα和PI3Kβ主要針 對癌症的治療；PI3Kγ在粒細胞、單核細胞和巨噬細胞中廣泛表達，而PI3Kδ亞型也在B細胞和T細胞中發現。含有編碼PI3Kδ或PI3Kγ的基因的敲除小鼠可存活，但在先天免疫和適應性反應中表現出明顯的缺陷，因此，特異性PI3Kδ或PI3Kγ抑制劑可能對自身免疫疾病具有治療益處，而不會干擾一般PI3K信號傳導對其他細胞系統的正常功能。
目前多種針對PI3K的抑制劑已進入臨床研究甚至上市，如BEZ235、GDC-0941、CAL-101等。近年來的研究發現PI3Kγ與自身免疫系統、炎性疾病、呼吸疾病等密切相關，因此PI3Kγ選擇性抑制劑成為免疫治療癌症、炎性疾病、骨障礙、呼吸疾病、自身免疫性疾病(Matthew W.D.等，Journal of Medicinal Chemistry(2019),62(10),4783-4814；Perrotta等，International Journal of Molecular Sciences(2016),17(11),1858/1-1858/9；Okkenhaug,Klaus等，Cancer Discovery(2016),6(10),1090-1105.；Hirsch E,等.Science(80-).2000；287：1049-1053.；Li Z.等，Science(80-).2000；287：1046-1049.；Kaneda MM等，Nature.2016；1-21)的熱門靶點。PI3Kγ選擇性抑制劑是潛在治療癌症的藥物，癌症包括血液腫瘤和實體瘤；其中所述的血液腫瘤選自急性淋巴細胞性白血病(Acute Lymphocytic Leukemia，ALL)、慢性淋巴細胞性白血病(Chronic Lymphocytic Leukemia，CLL)、幼淋巴細胞白血病(Prolymphocytic Leukemia，PLL)、毛細胞白血病(Hairy Cell Leukemia，HCL)、華氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's Macroglobulinemia，WM)、外周T細胞淋巴瘤(Peripheral T cell Lymphoma，PTCL)、成人T細胞白血病/淋巴瘤(Adult T Cell Leukemia-lymphoma，ATL)、皮膚T細胞淋巴瘤(Cutaneous T cell Lymphoma，CTCL)、大顆粒淋巴細胞白血病(Large Granular Lymphocyte，LGL)、急性髓性白血病(Acute Myeloid Leukemia，AML)、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin's Lymphoma，HL)、非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin Lymphoma，NHL)、濾泡性淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤(Diffuse Large B-cell Lymphoma，DLBCL)、套細胞淋巴瘤(Mantle Cell Lymphoma，MCL)、肥大細胞增多症、多發性骨髓瘤(Multiple Myeloma，MM)、骨髓增生異常綜合徵(Myelodysplastic Syndromes，MDS) 或骨髓增生障礙(Myeloproliferative Disorders，MPD)；其中所述的實體瘤優選選自腦癌、皮膚癌、頭頸癌、神經內分泌癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、睪丸癌、食道癌、肝癌、胃癌、結腸癌、結腸直腸癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、膀胱癌、腎癌、病毒引起的癌症、成神經管細胞瘤、基底細胞癌、膠質瘤、肝細胞癌、胃腸道間質瘤(Gastrointestinal Stromal Tumor，GIST)、黑素瘤、原始神經外胚層腫瘤(Primitive Neuroectodermal Tumor，PNET)、纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、內皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴血管內皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、平滑肌肉瘤、膀胱中的移行細胞癌、上皮癌、鱗狀細胞癌、腺癌、支氣管癌、腎細胞癌和類癌瘤。PI3Kγ抑制劑對於呼吸疾病也有治療益處，包括哮喘、囊腫型纖維化、肺氣腫、慢性阻塞性肺病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease，COPD)、慢性支氣管炎、支氣管擴張、急性呼吸窘迫綜合徵、呼吸道疾病、胸腔疾病和肺動脈高血壓等。
目前唯一進入臨床研究的PI3Kγ選擇性抑制劑是Infinity公司的IPI-549，其可以逆轉腫瘤對免疫檢查點抑制劑(如PD-1抑制劑和PD-L1抑制劑)的抵抗，在腫瘤免疫治療方面顯示出潛力。IPI-549結構如下所示，專利申請WO2015051244A1公開了IPI-549的製備方法。
除此之外，習知技術還公開了一系列的PI3Kγ選擇性抑制劑專利申請，其中包括WO2012052753、WO2011008302等。
儘管PI3Kγ選擇性抑制劑的研究和應用已取得一定的進展，但是這類新型抑制劑尚未研究成熟，仍有很多問題需要解決，例如生物活性不夠理想、選擇性不夠好、脫靶風險較大或者安全性和耐受性不夠好等，其提升的空間仍然巨大，仍有必要繼續研究和開發新的PI3Kγ選擇性抑制劑。
針對上述的技術問題，本發明提供了式(I)所示的炔類化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽：
Figure 109122819-A0202-12-0004-3
其中：
X選自CH或N；
R1選自環烷基或雜環基，其中所述的環烷基或雜環基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基或-NR5R6的取代基所取代；優選地，R1選自氧雜環丁烷基、環丙基、環丁基、環戊基或環己基；更優選為環丙基或氧雜環丁烷基；
R2和R3各自獨立地選自氫原子、烷基、烷氧基、氰基或鹵素，其中所述的烷基或烷氧基任選進一步被一個或多個鹵素所取代；
R4相同或不同，各自獨立地選自氫原子、烷基、烷氧基、氰基或鹵素，其中所述的烷基或烷氧基任選進一步被一個或多個鹵素所取代；
R5和R6各自獨立地選自氫原子、烷基或環烷基，其中所述的烷基或環烷基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、氰基、烷基、烷氧基、環烷基或雜環基的取代基所取代；且
m為0、1、2、3、4或5。
在本發明的優選方案中，R1優選為環丙基、環丁基、環戊基、環己基或氧雜環丁烷基；更優選為環丙基或氧雜環丁烷基。
在本發明的優選方案中，R2和R3各自獨立地選自氫原子或鹵素，所述鹵素優選為氟。
在本發明的優選方案中，R4相同或不同，各自獨立地選自氫原子、烷基或鹵素，且m為0、1、2或3；優選地，R4為氫。
在本發明的優選方案中，X選自CH或N，R1選自環丙基和氧雜環丁烷基，R2和R3選自氫原子和F。
本發明的典型化合物包括，但不限於：
Figure 109122819-A0202-12-0005-4
Figure 109122819-A0202-12-0006-5
或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽。
更進一步，本發明提供一種藥物組合物，所述的藥物組合物含有有效劑量的式(I)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，及可藥用的載體、賦形劑或它們的組合。
本發明提供了本發明所述的式(I)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或其藥物組合物在製備用作磷脂醯肌醇-3-激酶γ抑制劑的藥物中的用途。
本發明提供了式(I)所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或其藥物組合物在製備用於治療由磷脂醯肌醇-3-激酶γ介導的疾病的藥物中的用途，其中所述由磷脂醯肌醇-3-激酶γ介導的疾病優選為癌症、骨障礙、呼吸疾病、炎性疾病或自身免疫疾病；其中所述呼吸疾病優選為哮喘、囊腫型纖維化、肺氣腫、慢性阻塞性肺病、慢性支氣管炎、支氣管擴張、急性呼吸窘迫綜合徵、呼吸道疾病、胸腔疾病和肺動脈高血壓；其中所述癌症優選為血液腫瘤和實體瘤；其中所述血液腫瘤優選選自急性淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、幼淋巴細胞白血病、毛細胞白血病、華氏巨球蛋白血症、外周T細胞淋巴瘤、成人T細胞白血病/淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、大顆粒淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、肥大細胞增多症、多發性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合徵或骨髓增生障礙；其中所述實體瘤優選選自腦癌、皮膚癌、頭頸癌、神經內分泌癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、睪丸癌、食道癌、肝癌、胃癌、結腸癌、結腸直腸癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮癌、 子宮內膜癌、膀胱癌、腎癌、病毒引起的癌症、成神經管細胞瘤、基底細胞癌、膠質瘤、肝細胞癌、胃腸道間質瘤、黑素瘤、原始神經外胚層腫瘤、纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、內皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴血管內皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、平滑肌肉瘤、膀胱中的移行細胞癌、上皮癌、鱗狀細胞癌、腺癌、支氣管癌、腎細胞癌和類癌瘤。
本發明還提供了式(I)所述的化合物或其立體異構體化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或其藥物組合物與一種或多種第二治療劑之聯合在製備用於治療由磷脂醯肌醇-3-激酶γ介導的疾病的藥物中的用途，其中所述由磷脂醯肌醇-3-激酶γ介導的疾病優選為癌症、骨障礙、呼吸疾病、炎性疾病或自身免疫疾病；所述呼吸疾病優選為哮喘、囊腫型纖維化、肺氣腫、慢性阻塞性肺病、慢性支氣管炎、支氣管擴張、急性呼吸窘迫綜合徵、呼吸道疾病、胸腔疾病和肺動脈高血壓；所述癌症優選為血液腫瘤和實體瘤；所述血液腫瘤優選選自急性淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、幼淋巴細胞白血病、毛細胞白血病、華氏巨球蛋白血症、外周T細胞淋巴瘤、成人T細胞白血病/淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、大顆粒淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、肥大細胞增多症、多發性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合徵或骨髓增生障礙；所述實體瘤優選選自腦癌、皮膚癌、頭頸癌、神經內分泌癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、睪丸癌、食道癌、肝癌、胃癌、結腸癌、結腸直腸癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、膀胱癌、腎癌、病毒引起的癌症、成神經管細胞瘤、基底細胞癌、膠質瘤、肝細胞癌、胃腸道間質瘤、黑素瘤、原始神經外胚層腫瘤、纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、內皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴血管內皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、平滑肌肉瘤、膀胱中的移行細胞癌、上皮癌、鱗狀細胞癌、腺癌、支氣管癌、腎細胞癌和類癌瘤；其中所述的第二治療劑選自 PI3Kδ抑制劑、mTOR抑制劑、共刺激調節劑、免疫刺激劑、CXCL12/CXCR4抑制劑、HDAC抑制劑、蛋白酶體抑制劑、CD28抗體、CD30抗體、CD40抗體、GM-CSF、吉西他濱、環磷醯胺、多西紫杉醇、紫杉醇、5-FU、替莫唑胺、抗血管生成劑、阿昔替尼、PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑或其混合物；優選為PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑。
本發明提供了一種抑制磷脂醯肌醇-3-激酶γ活性的方法，其包括給予式(I)所述的化合物或其立體異構體化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或其藥物組合物。
本發明提供了一種通過抑制磷脂醯肌醇-3-激酶γ活性來治療癌症、骨障礙、呼吸疾病、炎性疾病或自身免疫疾病的病症的方法，其包括給予所需患者式(I)所述化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或其藥物組合物；其中所述呼吸疾病優選選自哮喘、囊腫型纖維化、肺氣腫、慢性阻塞性肺病、慢性支氣管炎、支氣管擴張、急性呼吸窘迫綜合徵、呼吸道疾病、胸腔疾病和肺動脈高血壓；所述癌症優選為血液腫瘤和實體瘤；其中所述血液腫瘤優選選自急性淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、幼淋巴細胞白血病、毛細胞白血病、華氏巨球蛋白血症、外周T細胞淋巴瘤、成人T細胞白血病/淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、大顆粒淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、肥大細胞增多症、多發性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合徵或骨髓增生障礙；其中所述實體瘤優選選自腦癌、皮膚癌、頭頸癌、神經內分泌癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、睪丸癌、食道癌、肝癌、胃癌、結腸癌、結腸直腸癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、膀胱癌、腎癌、病毒引起的癌症、成神經管細胞瘤、基底細胞癌、膠質瘤、肝細胞癌、胃腸道間質瘤、黑素瘤、原始神經外胚層腫瘤、纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、內皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴血管內皮肉瘤、 滑膜瘤、間皮瘤、平滑肌肉瘤、膀胱中的移行細胞癌、上皮癌、鱗狀細胞癌、腺癌、支氣管癌、腎細胞癌和類癌瘤。
在一些優選的實施方案中，上述治療癌症、骨障礙、呼吸疾病、炎性疾病或自身免疫疾病的病症的方法還包括另外給予所述患者一種或多種第二治療劑，其中所述呼吸疾病優選選自哮喘、囊腫型纖維化、肺氣腫、慢性阻塞性肺病、慢性支氣管炎、支氣管擴張、急性呼吸窘迫綜合徵、呼吸道疾病、胸腔疾病和肺動脈高血壓；其中所述癌症優選自血液腫瘤和實體瘤；其中所述血液腫瘤優選選自急性淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、幼淋巴細胞白血病、毛細胞白血病、華氏巨球蛋白血症、外周T細胞淋巴瘤、成人T細胞白血病/淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、大顆粒淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、肥大細胞增多症、多發性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合徵或骨髓增生障礙；其中所述實體瘤優選選自腦癌、皮膚癌、頭頸癌、神經內分泌癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、睪丸癌、食道癌、肝癌、胃癌、結腸癌、結腸直腸癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、膀胱癌、腎癌、病毒引起的癌症、成神經管細胞瘤、基底細胞癌、膠質瘤、肝細胞癌、胃腸道間質瘤、黑素瘤、原始神經外胚層腫瘤、纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、內皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴血管內皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、平滑肌肉瘤、膀胱中的移行細胞癌、上皮癌、鱗狀細胞癌、腺癌、支氣管癌、腎細胞癌和類癌瘤。其中所述第二治療劑選自PI3Kδ抑制劑、mTOR抑制劑、共刺激調節劑、免疫刺激劑、CXCL12/CXCR4抑制劑、HDAC抑制劑、蛋白酶體抑制劑、CD28抗體、CD30抗體、CD40抗體、GM-CSF、吉西他濱、環磷醯胺、多西紫杉醇、紫杉醇、5-FU、替莫唑胺、抗血管生成劑、阿昔替尼、PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑及其混合物；優選為PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑。
發明的詳細說明
除非有相反陳述，否則本發明在說明書和申請專利範圍中所使用的部分術語定義如下：
“烷基”當作一基團或一基團的一部分時是指包括C1-C20直鏈或者帶有支鏈的脂肪烴基團。優選為C1-C10烷基，更優選為C1-C6烷基，以及C1-C4烷基。烷基基團的實施例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代或未取代的。
“環烷基”是指飽和或部分飽和的單環、稠環、橋環和螺環的碳環。優選為C3-C12環烷基，更優選為C3-C8環烷基，最優選為C3-C6環烷基。單環環烷基的實施例包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環庚三烯基、環辛基等，優選環丙基、環己烯基。所述環烷基環可以稠合於芳基、雜芳基或雜環基環上，其中與母體結構連接在一起的環為環烷基，非限制性實施例包括茚滿基、四氫萘基、苯並環庚烷基等。環烷基可以是任選取代的或未取代的。
“雜環基”或“雜環”在本發明中可交換使用，都是指非芳香性雜環基，其中一個或多個成環的原子是雜原子，如氧、氮、硫原子等，包括單環、稠環、橋環和螺環。優選具有5至7元單環或7至10元雙-或三環，其可以包含1、2或3個選自氮、氧和/或硫中的原子。“雜環基”的實例包括但不限於嗎啉基，氧雜環丁烷基，硫代嗎啉基，四氫吡喃基，1,1-二氧代-硫代嗎啉基，哌啶基，2-氧代-哌啶基，吡咯烷基，2-氧代-吡咯烷基，哌嗪-2-酮，8-氧雜-3-氮雜-雙環[3.2.1]辛基和哌嗪基。雜環基可以是取代或未取代的。所述雜環基環可以稠合於芳基、雜芳基或環烷基環上， 其中與母體結構連接在一起的環為雜環基。雜環基可以是任選取代的或未取代的。
“芳基”是指含有一個或者兩個環的碳環芳香系統，其中所述環可以以稠合的方式連接在一起。術語“芳基”包括比如苯基、萘基、四氫萘基的芳香基團。優選芳基為C6-C10芳基，更優選芳基為苯基和萘基，最優選為苯基。芳基可以是取代或未取代的。所述“芳基”可與雜芳基、雜環基或環烷基稠合，其中與母體結構連接在一起的為芳基環，非限制性實施例包括但不限於：
Figure 109122819-A0202-12-0011-6
“雜芳基”是指芳香族5至6元單環或8至10元雙環，其可以包含1、2、3或4個選自氮、氧和/或硫中的原子。“雜芳基”的實施例包括但不限於呋喃基，吡啶基，2-氧代-1，2-二氫吡啶基，噠嗪基，嘧啶基，吡嗪基，噻吩基，異惡唑基，惡唑基，惡二唑基，咪唑基，吡咯基，吡唑基，三唑基，四氮唑基，噻唑基，異噻唑基，1，2，3-噻二唑基，苯並間二氧雜環戊烯基，苯並噻吩基、苯並咪唑基，吲哚基，異吲哚基，1，3-二氧代-異吲哚基，喹啉基，吲唑基，苯並異噻唑基，苯並惡唑基和苯並異惡唑基。雜芳基可以是取代或未取代的。
“烷氧基”是指(烷基-O-)的基團。其中，烷基見本文有關定義。C1-C6烷氧基或C1-C4烷氧基為優先選擇。其實例包括，但不限於：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基等。
“羥基”指-OH基團。
“鹵素”是指氟、氯、溴或碘。
“氨基”指-NH2。
“氰基”指-CN。
“硝基”指-NO2。
“羧基”指-C(O)OH。
“羧酸酯基”指-C(O)O-烷基或-C(O)O-環烷基，其中烷基、環烷基的定義如上所述。
“DMSO”指二甲基亞碸。
“Me”指甲基。
“Et”指乙基。
“TMS”指三甲基甲矽烷基。
“取代的”指基團中的一個或多個氫原子，優選為最多5個，更優選為1個、2個或3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基取代。不言而喻，取代基僅處在它們的可能的化學位置，本領域技術人員能夠在不付出過多努力的情況下確定(通過實驗或理論)可能或不可能的取代。例如，具有遊離氫的氨基或羥基與具有不飽和(如烯屬)鍵的碳原子結合時可能是不穩定的。
本說明書所述的“取代”或“取代的”，如無特別指出，均是指基團可被一個或多個選自以下的基團取代：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、鹵素、疏基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、氨基、鹵代烷基、羥烷基、羧基、羧酸酯基、=O和-NR5R6的取代基所取代；
R5和R6各自獨立地選自氫原子、烷基或環烷基，其中所述的烷基或環烷基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、氰基、烷基、烷氧基、環烷基或雜環基的取代基所取代。特別優選地，R5和R6各自獨立地選自氫原子。
“可藥用的鹽”是指上述化合物能保持原有生物活性並且適合於醫藥用途的某些鹽類。式(I)所表示的化合物的可藥用的鹽可以為與合適的酸形成的銨鹽。
“藥物組合物”表示含有一種或多種本文所述化合物或其生理學上可藥用的鹽或前體藥物與其他化學組分的混合物，以及其他組分例如生理學可藥用的載體和賦形劑。藥物組合物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。
在本發明中，用語“多個”表示數量上多於1個，例如2個、3個、4個或更多個。
以下結合實施例用於進一步描述本發明，但這些實施例並非限制著本發明的範圍。
實施例
實施例給出了式(I)所表示的代表性化合物的製備及相關結構鑒定資料。必須說明，下述實施例是用於說明本發明而不是對本發明的限制。1H NMR圖譜是用Bruker儀器(400MHz)測定而得，化學位移用ppm表示。使用四甲基矽烷內標準(0.00ppm)。1H NMR的表示方法：s=單峰，d=雙重峰，t=三重峰，m=多重峰，br=變寬的，dd=雙重峰的雙重峰，dt=三重峰的雙重峰。若提供偶合常數時，其單位為Hz。
質譜是用LC/MS儀測定得到，離子化方式可為ESI或APCI。
薄層層析矽膠板使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254矽膠板，薄層色譜法(TLC)使用的矽膠板採用的規格是0.15mm~0.2mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4mm~0.5mm。
柱層析一般使用煙臺黃海矽膠200~300目矽膠為載體。
在下列實施例中，除非另有指明，所有溫度為攝氏溫度，除非另有指明，各種起始原料和試劑來自市售或者是根據已知的方法合成，市售原料和試劑均不經進一步純化直接使用，除非另有指明，市售廠家包括但不限於Aldrich Chemical Company，ABCR GmbH & Co.KG，Acros Organics，廣贊化工科技有限公司和景顏化工科技有限公司等處購買。
CD3OD：氘代甲醇。
CDCl3：氘代氯仿。
DMSO-d 6：氘代二甲基亞碸。
氬氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氬氣氣球。
實施例中無特殊說明，反應中的溶液是指水溶液。
對化合物進行純化，採用矽膠柱層析洗脫劑體系和薄層色譜法，其中洗脫劑體系選自：A：石油醚和乙酸乙酯體系；B：二氯甲烷和甲醇體系；C：二氯甲烷：乙酸乙酯；其中溶劑的體積比根據化合物的極性不同而不同，也可以加入少量的酸性或鹼性試劑進行調節，如醋酸或三乙胺等。
實施例1
(S)-2-amino-N-(1-(8-((1-cyclopropyl-1H-pyrazol-4-yl)ethynyl)-1-oxo-2-phenyl-1,2-dihydroisoquinolin-3-yl)ethyl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide
(S)-2-氨基-N-(1-(8-((1-環丙基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氫異喹啉-3-基)乙基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
Figure 109122819-A0202-12-0015-13
Figure 109122819-A0202-12-0015-12
第一步
(Z)-3-氨基-4,4,4-三氯-2-氰基丁-2-烯酸乙酯
將2-氰基乙酸乙酯1a(16.48g,0.1448mol)和2,2,2-三氯乙腈1b(40g,0.289mol)溶於50mL的乙醇中，冰浴下緩慢滴加三乙胺(1.1mL,7.9mmol)，反應2小時。減壓濃縮，得到(Z)-3-氨基-4,4,4-三氯-2-氰基丁-2-烯酸乙酯1c(37g，黃色固體)，產率：100%。
MS m/z(ESI)：258.8[M+H]
第二步
3,5-二氨基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯
將(Z)-3-氨基-4,4,4-三氯-2-氰基丁-2-烯酸乙酯1c(37g,0.1448mmol)和水合肼(18g,0.362mol)溶於75mL的N,N-二甲基甲醯胺中，加熱至100℃，反應3小時。減壓濃縮，得到的殘留物通過矽膠柱層析進一步分析純化(洗脫劑：B體系)，得到3,5-二氨基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯1d(24.6g，黃色固體)，產率：100%。
MS m/z(ESI)：171.1[M+H]
第三步
2-氨基吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯
將3,5-二氨基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯1d(23.5g,0.138mol)和1,1,3,3-四甲基氧丙烷(24.9g,0.152mol)加入到140mL的2M鹽酸中，加熱至50℃，反應2小時。冷卻至室溫，以氨水調節pH=9，以二氯甲烷(200mL×3)萃取，合併有機相，減壓濃縮，得到2-氨基吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯1e(15.2g，黃色固體)，產率：53.5%。
MS m/z(ESI)：206.9[M+H]
第四步
2-氨基吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲酸
將2-氨基吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-羧酸乙酯1e(16.7g,0.081mol)和一水合氫氧化鋰(14.98g,0.356mol)加入到150mL甲醇和水的混合溶劑(V/V=1：4)中，加熱至50℃，反應2小時。減壓濃縮，以4M鹽酸調節pH=6，固體洗出，過濾乾燥，得到2-氨基吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲酸1f(7.8g，黃色固體)，產率：54%。
MS m/z(ESI)：178.9[M+H]
第五步
1-環丙基-4-((三甲基甲矽烷基)乙炔基)-1H-吡唑
氬氣保護下，將1-環丙基-4-碘-1H-吡唑1k(28g,0.12mol，根據專利申請“WO 2015134701”製備而得)溶於500mL四氫呋喃，加入雙三苯基磷二氯化鈀(4.2g,0.006mol)、碘化亞銅(2.28g,0.012mol)和0.6mL的三乙胺，溫度控制在0℃，緩慢加入乙炔基三甲基矽烷(23.5g,0.24mol)，室溫反應過夜。過濾，濾液減壓濃縮，得到的殘留物通過矽膠柱層析進一步分析純化(洗脫劑：A體系)，得到1-環丙基-4-((三甲基甲矽烷基)乙炔基)-1H-吡唑1l(20.5g，棕黑色液體)，產率：83.7%。
MS m/z(ESI)：205.1[M+H]
第六步
1-環丙基-4-乙炔基-1H-吡唑
將1-環丙基-4-((三甲基甲矽烷基)乙炔基)-1H-吡唑1l(20.5g,0.1mol)溶於120mL的四氫呋喃中，溫度控制在0℃，加入四丁基氟化銨四氫呋喃溶液(120mL,0.12mol,1mol/L)，室溫反應1小時。減壓濃縮，得到的殘留物通過矽膠柱層析進一步分析純化(洗脫劑：A體系)，得到1-環丙基-4-乙炔基-1H-吡唑1m(12g，淡黃色液體)，產率：90.9%。
MS m/z(ESI)：133.1[M+H]
第七步
2-氯-6-甲基-N-苯基苯甲醯胺
將2-氯-6-甲基苯甲酸1g(17g,0.1mol)溶於100mL的二氯甲烷中，滴加0.2mL的N,N-二甲基甲醯胺，冰浴下，緩慢滴加草醯氯(9.3mL,0.11mol)，室溫下反應3小時。減壓濃縮，殘留物溶於70mL的二氯甲烷中，冰浴下，緩慢滴加溶解有苯胺(9.76g,0.105mol)和三乙胺(30mL,0.210mol)的100mL二氯甲烷溶液，室溫下反應2小時。加入 100mL水和100mL二氯甲烷，以無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，加入20mL的乙酸乙酯和200mL的正己烷，攪拌，固體析出，過濾乾燥。得到2-氯-6-甲基-N-苯基苯甲醯胺1h(18.9g，黃色固體)，產率：77.14%。
MS m/z(ESI)：246.0[M+H]
第八步
(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基異喹啉-1(2H)-酮
將2-氯-6-甲基-N-苯基苯甲醯胺1h(490mg,2mmol)加入到5mL的四氫呋喃中，溫度控制在-30℃，緩慢滴加正丁基鋰(2.5mL,5mmol)，在此溫度下反應半小時。同時將(S)-(1-(甲氧基(甲基)氨基)-1-氧代丙基-2-基)氨基甲酸叔丁酯1i(696mg,3mmol，根據J.Med.Chem. 2003, 43,3434-3442自製)加入到5mL的四氫呋喃中，溫度控制在-30℃，緩慢滴加異丙基氯化鎂(1.65mL,3.3mmol)，在此溫度下反應0.5小時。溫度控制在-15℃，將1i的反應液緩慢滴加入到1h的反應液中，反應1小時。加入1mL的水淬滅反應液，以濃鹽酸調節pH=2，減壓濃縮，殘留物溶於10mL甲醇，加入5mL濃鹽酸，加熱回流1小時。減壓濃縮，以200mL乙酸乙酯和石油醚的混合溶劑(乙V/V=1：1)萃取2次，水相以氨水調節pH=10，以100mL二氯甲烷萃取，二氯甲烷層減壓濃縮，殘留物製備液相分離得到(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基異喹啉-1(2H)-酮1j(300mg，淡黃色固體)，產率：50%。
MS m/z(ESI)：299.0[M+H]
第九步
(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((1-環丙基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基異喹啉-1(2H)-酮
氬氣保護下，將(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基異喹啉-1(2H)-酮1j(200mg,0.67mmol)、雙乙腈二氯化鈀(34mg,0.132mmol)、碳酸銫(659mg,2.01mmol)、2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(95mg,0.2 mmol)和1-環丙基-4-乙炔基-1H-吡唑1m(174mg,1.32mmol)加入到10mL的乙腈中，加熱至75℃，反應4小時。減壓濃縮，加入二氯甲烷，矽藻土過濾，水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，薄層製備分離，得到(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((1-環丙基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基異喹啉-1(2H)-酮1n(120mg，黃色固體)，產率：45%。
MS m/z(ESI)：394.9[M+H]
第十步
(S)-2-氨基-N-(1-(8-((1-環丙基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氫異喹啉-3-基)乙基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
氬氣保護下，將(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((1-環丙基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基異喹啉-1(2H)-酮1n(120mg,0.304mmol)、2-氨基吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲酸1f(56.92mg,0.319mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(69.93mg,0.364mmol)、1-羥基苯並三唑(4mg,0.0304mmol)、N,N-二異丙基乙胺(0.16mL,0.912mmol)溶於3mL的N,N-二甲基甲醯胺中，室溫反應過夜。緩慢加入冷的碳酸鉀溶液(10mL,0.1mol)，過濾，水洗，以無水硫酸鈉乾燥，濾液濃縮，薄層製備分離，得到(S)-2-氨基-N-(1-(8-((1-環丙基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氫異喹啉-3-基)乙基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺1(70mg)，產率：41.6%。
MS m/z(ESI)：554.9[M+H]
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 8.93(d,J=6.7Hz,1H),8.55(d,J=4.6Hz,1H),8.09(s,1H),8.00(d,J=6.6Hz,1H),7.54-7.67(m,5H),7.43-7.53(m,3H),7.34-7.41(m,1H),7.02(dd,J=6.7,4.5Hz,1H),6.74(s,1H),6.43(brs,2H),4.55(t,J=6.7Hz,1H)3.72(dq,J=7.5,3.8Hz,1H),1.35(d,J=6.7Hz,3H),1.01-1.08(m,2H),0.90-0.98(m,2H).
實施例2
(S)-2-amino-N-(1-(5-((1-cyclopropyl-1H-pyrazol-4-yl)ethynyl)-4-oxo-3-phenyl-3,4-dihydroquinazolim-2-yl)ethyl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide
(S)-2-氨基-N-(1-(5-((1-環丙基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氫喹唑啉-2-基)乙基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
Figure 109122819-A0202-12-0020-14
Figure 109122819-A0202-12-0020-15
第一步
(S)-2-(1-氨基乙基)-5-((1-環丙基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮
氬氣保護下，將(S)-2-(1-氨基乙基)-5-氯-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮2a(5g,16.7mmol，根據US 20180105527自製)、雙乙腈二氯化鈀(217mg,0.835mmol)、碳酸銫(16.3g,50.1mmol)、2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(796mg,1.67mmol)和1-環丙基-4-乙炔基-1H-吡唑1m(2.9g,21.7mmol)加入到100mL的乙腈中，加熱至85℃，反應5小時。減壓濃縮，加入二氯甲烷，矽藻土過濾，水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，得到的殘留物通過矽膠柱層析進一步分析純化(洗脫劑：B體系)， 得到(S)-2-(1-氨基乙基)-5-((1-環丙基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮2b(5.2g)，產率：78.8%。
MS m/z(ESI)：396.1[M+H]
第二步
(S)-2-氨基-N-(1-(5-((1-環丙基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氫喹唑啉-2-基)乙基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
氬氣保護下，將(S)-2-(1-氨基乙基)-5-((1-環丙基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮2b(25.6g,64.7mmol)、2-氨基吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲酸1f(13.8g,77.5mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(18.6g,97.05mmol)、1-羥基苯並三唑(4.37g,32.3mmol)、N,N-二異丙基乙胺(17g,129.4mmol)溶於300mL的N,N-二甲基甲醯胺中，40℃反應3小時。減壓濃縮，加水500mL，乙酸乙酯萃取(500mL×3)，合併有機相，500mL飽和氯化鈉溶液洗滌，得到的殘留物通過矽膠柱層析進一步分析純化(洗脫劑：B體系)，得到(S)-2-氨基-N-(1-(5-((1-環丙基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-4-氧代-3-苯基-3,4-二氫喹唑啉-2-基)乙基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺2(21.3g)，產率：59.2%。
MS m/z(ESI)：556.2[M+H]
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ ppm 8.91(dd,J=6.7,1.0Hz,1H),8.71(d,J=7.4Hz,1H),8.64(d,J=4.5,1.6Hz,1H),8.11(s,1H),7.81(t,J=7.8Hz,1H),7.71(dd,J=8.1,1.3Hz,1H),7.56-7.66(m,6H),7.50-7.55(m,1H),7.02(dd,J=6.7,4.4Hz,1H),6.44(brs,2H),4.75(t,J=6.9Hz,1H),3.73(dt,J=7.3,3.6Hz,1H),1.33(d,J=6.6Hz,3H),1.01-1.08(m,2H),0.91-0.98(m,2H).
實施例3
(S)-2-amino-N-(1-(5-((1-cyclopropyl-1H-pyrazol-4-yl)ethynyl)-6-fluoro-4-oxo-3-phenyl-3,4-dihydroquinazolin-2-yl)ethyl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide
(S)-2-氨基-N-(1-(5-((1-環丙基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-6-氟-4-氧代-3-苯基-3,4-二氫喹唑啉-2-基)乙基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
Figure 109122819-A0202-12-0022-19
Figure 109122819-A0202-12-0022-17
第一步
(S)-(1-(5-氯-6-氟-4-氧代-3-苯基-3,4-二氫喹唑啉-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
氬氣保護下，將6-氨基-2-氯-3-氟苯甲酸3a(95mg,0.5mmol)、三苯基氧膦(388mg,1.25mmol)和(叔丁氧羰基)-L-丙氨酸(95mg,0.5mmol)加到5mL吡啶中，加熱至75℃，反應3小時。再加入苯胺(55μL,0.6mmol)，反應4小時。減壓濃縮，得到的殘留物通過矽膠柱層析進一步分析純化(洗脫劑：A體系)，得到(S)-(1-(5-氯-6-氟-4-氧代-3-苯基-3,4-二氫喹唑啉-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯3b(200mg)，產率：96%。
MS m/z(ESI)：418.1[M+H]
第二步
(S)-2-(1-氨基乙基)-5-氯-6-氟-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮
將(S)-(1-(5-氯-6-氟-4-氧代-3-苯基-3,4-二氫喹唑啉-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯3b(200mg,0.479mmol)和三異丙基矽烷(294μL,1.436mmol)加到10mL的二氯甲烷中，再加入1.2mL的三氟乙酸，室溫下反應3小時。減壓濃縮，加入飽和碳酸氫鈉溶液中和，以乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合併有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到的殘留物通過矽膠柱層析進一步分析純化(洗脫劑：A體系)，得到(S)-2-(1-氨基乙基)-5-氯-6-氟-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮3c(174.7mg)，產率：100%。
MS m/z(ESI)：318.1[M+H]
第三步
(S)-2-氨基-N-(1-(5-氯-6-氟-4-氧代-3-苯基-3,4-二氫喹唑啉-2-基)乙基)吡唑並[1,5-α]嘧啶-3-甲醯胺
氬氣保護下，將(S)-2-(1-氨基乙基)-5-氯-6-氟-3-苯基喹唑啉-4(3H)-酮3c(174.7mg,0.479mmol)、2-氨基吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲酸1f(102mg,0.575mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(139mg,0.719mmol)、1-羥基苯並三唑(32mg,0.24mmol)、N,N-二異丙基乙胺(237μL,1.437mmol)溶於5mL的N,N-二甲基甲醯胺中，35℃反應4小時。加入乙酸乙酯，以稀鹽酸中和，分別以飽和碳酸氫鈉和氯化鈉溶液洗滌，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到的殘留物通過矽膠柱層析進一步分析純化(洗脫劑：B體系)，得到(S)-2-氨基-N-(1-(5-氯-6-氟-4-氧代-3-苯基-3,4-二氫喹唑啉-2-基)乙基)吡唑並[1,5-α]嘧啶-3-甲醯胺3d(210mg)，產率：92%。
MS m/z(ESI)：478.1[M+H]
第四步
(S)-2-氨基-N-(1-(5-((1-環丙基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-6-氟-4-氧代-3-苯基-3,4-二氫喹唑啉-2-基)乙基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
氬氣保護下，將(S)-2-氨基-N-(1-(5-氯-6-氟-4-氧代-3-苯基-3,4-二氫喹唑啉-2-基)乙基)吡唑並[1,5-α]嘧啶-3-甲醯胺3d(210mg,0.440mmol)、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(35mg,0.044mmol)、碳酸銫(468mg,1.437mmol)、2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(46mg,0.096mmol)和1-環丙基-4-乙炔基-1H-吡唑1m(96mg,0.719mmol)加入到20mL的1,4-二氧六環中，加熱至100℃，反應過夜。矽藻土過濾，濾液減壓濃縮，加入乙酸乙酯，以稀鹽酸中和，分別以飽和碳酸氫鈉和氯化鈉溶液洗滌，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到的殘留物通過矽膠柱層析進一步分析純化(洗脫劑：B體系)，得到(S)-2-氨基-N-(1-(5-((1-環丙基-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-6-氟-4-氧代-3-苯基-3,4-二氫喹唑啉-2-基)乙基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺3(147.4mg)，產率：58.4%。
MS m/z(ESI)：574.2[M+H]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.92(d,J=6.7Hz,1H),8.69(d,J=7.4Hz,1H),8.64(d,J=4.5Hz,1H),8.16(s,1H),7.72-7.87(m,2H),7.49-7.67(m,6H),6.97-7.07(m,1H),6.44(s,2H),4.69-4.80(m,1H),3.69-3.79(m,1H),1.32(d,J=6.8Hz,3H),1.03-1.09(m,2H),0.90-0.99(m,2H).
實施例4
(S)-2-amino-N-(1-(8-((1-(oxetan-3-yl)-1H-pyrazol-4-yl)ethynyl)-1-oxo-2-phenyl-1,2-dihydroisoquinolin-3-yl)ethyl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide(S)-2-氨基-N-(1-(8-((1-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氫異喹啉-3-基)乙基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
Figure 109122819-A0202-12-0025-20
Figure 109122819-A0202-12-0025-21
第一步
4-碘-1-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-吡唑
將4-碘-1H-吡唑4a(5g,25.78mmol)溶於20mL的N,N-二甲基甲醯胺中，溫度控制在0℃，加入氫化鈉(1.34g,33.52mmol)，反應10分鐘後再加入3-碘氧雜環丁烷(2.44mL,28.35mmol)，加熱至65℃，反應3小時。將反應液加入飽和氯化銨溶液中，以乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合併有機相，水洗，以無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到4-碘-1-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-吡唑4b(5.412g)，產率：82.8%。
MS m/z(ESI)：250.8[M+H]
第二步
1-(氧雜環丁烷-3-基)-4-((三甲基甲矽烷基)乙炔基)-1H-吡唑
氬氣保護下，將4-碘-1-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-吡唑4b(5.412g,21.65mmol)溶於50mL四氫呋喃，加入雙三苯基磷二氯化鈀(758 mg,1.08mmol)、碘化亞銅(410.4mg,2.16mmol)和14mL的三乙胺，溫度控制在0℃，緩慢加入乙炔基三甲基矽烷(6.7mL,47.62mmol)，室溫反應5小時。加水10mL，以乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合併有機相，水洗，以無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到的殘留物通過矽膠柱層析進一步分析純化(洗脫劑：A體系)，得到1-(氧雜環丁烷-3-基)-4-((三甲基甲矽烷基)乙炔基)-1H-吡唑4c(2.6g)，產率：54.6%。
MS m/z(ESI)：221.0[M+H]
第三步
4-乙炔基-1-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-吡唑
氬氣保護下，將1-(氧雜環丁烷-3-基)-4-((三甲基甲矽烷基)乙炔基)-1H-吡唑4c(0.6g,2.73mmol)溶於5mL的四氫呋喃中，溫度控制在0℃，加入四丁基氟化銨(855mg,3.27mmol)，室溫反應1小時。減壓濃縮，得到的殘留物通過矽膠柱層析進一步分析純化(洗脫劑：A體系)，得到4-乙炔基-1-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-吡唑4d(0.236g)，產率：58.6%。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.73(s,1H),7.69(s,1H),5.42(p,J=6.9Hz,1H),4.99-5.07(m,4H),3.03(s,1H).
第四步
(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((1-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基異喹啉-1(2H)-酮
氬氣保護下，將(S)-3-(1-氨基乙基)-8-氯-2-苯基異喹啉-1(2H)-酮1j(200mg,0.67mmol)、雙乙腈二氯化鈀(17mg,0.067mmol)、碳酸銫(659mg,2.01mmol)、2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(95mg,0.2mmol)和4-乙炔基-1-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-吡唑4d(148mg,1.0mmol)加入到10mL的乙腈中，加熱至75℃，反應4小時。減壓濃縮，加入二氯甲烷，矽藻土過濾，水洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，薄層製備 分離，得到(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((1-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基異喹啉-1(2H)-酮4e(110mg)，產率：40%。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 7.82(s,1H),7.74(s,1H),7.64(d,J=7.2Hz,1H),7.50-7.58(m,3H),7.42-7.50(m,2H),7.27-7.35(m,2H),6.75(s,1H),5.40(p,J=6.9Hz,1H),4.97-5.05(m,4H),3.71(q,J=6.5Hz,1H),2.00(brs,2H),1.28(d,J=6.5Hz,3H).
第五步
(S)-2-氨基-N-(1-(8-((1-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氫異喹啉-3-基)乙基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
氬氣保護下，將(S)-3-(1-氨基乙基)-8-((1-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-2-苯基異喹啉-1(2H)-酮4e(110mg,0.268mmol)、2-氨基吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲酸1f(50.1mg,0.28mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(61.6mg,0.32mmol)、1-羥基苯並三唑(3.6mg,0.0268mmol)、N,N-二異丙基乙胺(0.15mL,0.804mmol)溶於3mL的N,N-二甲基甲醯胺中，室溫反應5小時。緩慢加入冷的碳酸鉀溶液(10mL,0.1mol)，加水15mL，乙酸乙酯萃取(15mL×3)，合併有機相，30mL飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，薄層製備分離，得到(S)-2-氨基-N-(1-(8-((1-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氫異喹啉-3-基)乙基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺4(110mg)，產率：72%。
MS m/z(ESI)：570.8[M+H]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.93(dd,J=6.7,1.6Hz,1H),8.55(dd,J=4.6,1.7Hz,1H),8.21(s,1H),8.00(d,J=6.7Hz,1H),7.76(s,1H),7.61-7.66(m,2H),7.54-7.60(m,2H),7.44-7.52(m,3H),7.36-7.40 (m,1H),7.01(dd,J=6.8,4.5Hz,1H),6.75(s,1H),6.42(s,2H),5.55(q,J=6.9Hz,1H),4.83-4.92(m,4H),4.53-4.58(m,1H),1.35(d,J=6.7Hz,3H).
生物學評價
測試例1、本發明化合物對PI3K激酶抑制活性的測試
以下方法用於測定本發明化合物在體外條件下對重組人源PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ和PI3Kδ激酶活性的抑制程度。本方法使用Promega公司的ADP-GloTM Kinase Assay試劑盒(貨號V9102)。上述試劑盒是一種發光法激酶檢測試劑盒，用於檢測激酶反應產生的ADP含量，ADP的含量與激酶活性正相關，通過測定ADP的含量，反映化合物對PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ和PI3Kδ激酶活性的抑制強弱。詳細實驗操作可參考試劑盒說明書。重組人源PI3Kα、PI3Kγ和PI3Kδ購於Invitrogen，PI3Kβ購自Promega(貨號分別為PI3Kα：PV4788、PI3Kβ：V1751、PI3Kγ：PV4786和PI3Kδ：PV6451)。
將實驗流程簡述如下：受試化合物首先溶解於DMSO中製備為貯存液，隨後按照試劑說明書中提供的緩衝液配方配置緩衝液(HEPES 50mM，MgCl2 3mM，EGTA 1mM，CHAPS 0.03%，NaCl 100mM，pH7.5)，使用該緩衝液進行梯度稀釋，受試化合物在反應體系中的終濃度範圍為1000nM~0.05nM。使用梯度稀釋的ATP溶液(來自ADP-GloTM Kinase Assay試劑盒)測定PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ和PI3Kδ的ATP Km值，依據實驗所得的ATP Km值，設定反應體系中的ATP濃度均為10μM。反應在384孔微孔板中進行，首先向孔中加入化合物和一定量的PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ或PI3Kδ蛋白，並在室溫下孵育15分鐘，隨後向反應液中加入ATP溶液及PIP2：3PS(終濃度為0.01mg/mL)，並在室溫下振盪孵育60分鐘。隨後向反應體系中加入5μL ADP-Glo Reagent(含有10mM MgCl2)，並在室溫下繼續振盪孵育40分鐘。之後向反應體系中加入10μL Kinase Detection Reagent，並在室溫下繼續振盪孵育40分鐘。孵育結束後，在酶標儀以Luminescence模式測定各孔的化學發光強度值。 通過與對照組(0.1% DMSO)的發光強度比值進行比較計算化合物在各濃度下的百分比抑制率，並通過GraphPad Prism 5軟體以化合物濃度對數值-抑制率進行非線性回歸分析，獲得化合物的IC50值，見表1。
Figure 109122819-A0202-12-0029-22
Figure 109122819-A0202-12-0029-23
從表1和2可以看出，與IPI-549相比，本發明實施例1、實施例2和實施例3化合物對於PI3Kγ激酶具有顯著的抑制活性，且對於PI3Kγ激酶的抑制活性顯著優於對PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kδ的抑制活性，本發明的化合物具有顯著的PI3Kγ選擇性抑制作用。
測試例2、本發明化合物對PI3K各亞型抑制的細胞活性測試
以下方法用於測定本發明化合物在不同細胞中對PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ和PI3Kδ激酶活性的抑制程度。本方法使用PE公司的AlphaLISA SureFire Ultra p-AKT1/2/3(pS473)試劑盒(#ALSU-PAKT-B500)。上述試劑盒使用AlphaLISA技術，利用供體和受體的微珠來進行 檢測生物分子的相互作用，用於檢測p-AKT(pS473)的含量，反映化合物在細胞層面對PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ和PI3Kδ激酶活性的抑制強弱。詳細實驗操作可參考試劑盒說明書。
將實驗流程簡述如下：該實驗在384孔板中進行，使用Multidrop分液器(Thermo，#836-4049)，針對不同PI3K亞型使用不同細胞(PI3Kα：C2C12細胞(成肌細胞)；PI3Kβ：PC-3細胞(人前列腺癌細胞)；PI3Kγ：Raw264.7細胞(單核巨噬細胞)；PI3Kδ：Raji細胞(淋巴瘤細胞))，將6μL相應細胞移至384孔板孔中，500RPM離心30秒後放置37℃，5%CO2培養箱內2小時；受試化合物首先溶解於DMSO中製備為10mM貯存液，使用DMSO進行4倍梯度稀釋，利用Echo(Labcyte，#550)移取30nL至每孔(終濃度為10000nM-0.2nM)，並孵育30分鐘。而後針對PI3Kα亞型使用的C2C12細胞，加入2uL IGF-1(R&D，# 291-G1-200，終濃度1200ng/mL)並孵育20分鐘；針對PI3Kβ亞型使用的PC-3細胞，加入2μL LPA(Sigma，# L7260，終濃度15ug/mL)並孵育20分鐘；針對PI3Kγ亞型使用的Raw264.7細胞，加入2uL C5α(Biotang，#RPR9899，終濃度80ng/mL)並孵育5分鐘；針對PI3Kδ亞型使用的Raji細胞，加入2μL IgM(Jackson ImmunoResearch，# 109-006-129，終濃度3ug/mL)並孵育10分鐘；待孵育結束後，使用AlphaLISA SureFire Ultra p-AKT1/2/3(pS473)試劑盒測定AlphaLISA信號。試劑盒測定方式簡述如下：使用2μL Lysis Buffer裂解細胞10分鐘，之後在384孔板中加入5uL acceptor mix和5uL donor mix，室溫下振盪孵育2小時，使用Envision(PE，#2104)讀取AlphaLISA信號。通過與對照組(0.5%DMSO)的信號強度比值進行比較計算化合物在各濃度下的百分比抑制率，並通過GraphPad Prism 5軟體以化合物濃度對數值-抑制率進行非線性回歸分析，獲得化合物的IC50值，見表3。
Figure 109122819-A0202-12-0031-24
Figure 109122819-A0202-12-0031-25
從表3和4可以看出，本發明實施例2化合物對於PI3Kγ亞型的細胞活性具有顯著的抑制效果，且對於PI3Kγ亞型的細胞抑制活性顯著優於對PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kδ亞型的細胞抑制活性，因此本發明的化合物對於PI3Kγ亞型具有顯著地選擇性抑制作用。
測試例3、本發明化合物在小鼠肝微粒體中代謝穩定性研究
1.實驗目的
本實驗研究的目的是考察本發明化合物在小鼠肝微粒體中的代謝穩定性。
2.試劑資訊(見表5)
Figure 109122819-A0202-12-0031-26
Figure 109122819-A0202-12-0032-27
3.實驗方案
將受試化合物與人肝微粒體進行共孵育，加入輔酶NADPH啟動反應。在0、5、15、30和60分鐘取出20μL孵育液並轉移至200μL含有內標的乙腈中終止反應。蛋白沉澱後，3,700rpm離心10分鐘，取上清。上清液加水1：1稀釋後由LC-MS/MS方法分析。根據受試化合物在孵育體系中的清除半衰期算出體外內在清除率。咪達唑侖作為內部參考化合物，均平行孵育2份。孵育條件總結如下表6：
Figure 109122819-A0202-12-0032-28
Figure 109122819-A0202-12-0033-29
4.資料分析
分析物/內標峰面積之比(Aanalyte/AIS)將由儀器得出，剩餘百分比(%Control)由非零時間點樣品與零時刻樣品中Aanalyte/AIS之比計算出。將Ln(%Control)對孵育時間作圖並進行線性擬合。受試化合物清除常數(k，min-1)、清除半衰期(T1/2，min)以及體外內在清除率(CLint，mL．min-1．mg-1 proteins)由以下方程式計算得到。
k=-slope
T1/2=0.693/k
CIint=k/Cprotein
Cprotein(mg．mL-1)指孵育體系中的微粒體蛋白質濃度。
5.實驗結果(見表7)
Figure 109122819-A0202-12-0033-30
結論：與IPI-549以及WO2015051244A1中公開的化合物21相比，本發明實施例1、實施例2和實施例3化合物的半衰期明顯延長，人肝微粒體穩定性顯著提高。
專利申請WO2015051244A1中公開的化合物21結構如下：
Figure 109122819-A0202-12-0034-31
測試例4、本發明化合物ICR小鼠口服藥代動力學研究
1、實驗目的
以ICR小鼠為受試動物，採用LC/MS/MS法測定小鼠灌胃給予本發明化合物，測定其不同時刻血漿中的藥物濃度，研究本發明化合物在小鼠體內的藥代動力學特徵。
2、實驗方案
2.1 實驗藥品與動物
IPI-549、本發明實施例1化合物和實施例2化合物；
健康成年雄性ICR小鼠27隻，購自維通利華實驗動物技術有限公司，動物品質合格證號：1903040021。
2.2 藥物配製與給藥
稱取適量的待測化合物，加入0.5%羧甲基纖維素鈉(含0.05%Tween80)，渦旋振盪，超聲使固體分散均勻，得到混懸液；吸取100μL×2製劑，裝入1.5-mL EP管，2~8℃保存，製劑濃度為0.5mg/mL。
健康成年ICR雄性小鼠27隻，禁食過夜後灌胃給藥(給藥劑量5mg/kg)，給藥4小時後進食。
2.3 樣品採集
於給藥前和給藥後0.083小時、0.25小時、0.5小時、1小時、2小時、4小時、8小時、12小時和24小時經眼眶靜脈采血80uL采約0.08mL血液，置於EDTA-K2抗凝管。血液樣本採集後置於冰上，離心分離血漿(離心條件：1500g，10分鐘)。收集的血漿分析前存放於-40~-20℃。用LC-MS/MS法測定不同的化合物灌胃給藥後ICR小鼠血漿中的待測化合物的含量。
3、藥代動力學參數結果
本發明實施例化合物和陽性對照化合物IPI-549的藥代動力學參數如下表8所示。
Figure 109122819-A0202-12-0035-32
結論：與IPI-549相比，本發明實施例1和實施例2化合物在ICR小鼠中的血藥濃度和曲線下面積顯著增加，藥代吸收良好，半衰期延長，生物利用度明顯提高，具有較好的藥代動力學性質。
測試例5、本發明化合物SD大鼠口服藥代動力學研究
1、實驗目的
以SD大鼠為受試動物，採用LC/MS/MS法測定灌胃給予本發明化合物，測定其不同時刻血漿中的藥物濃度，研究本發明化合物在大鼠體內的藥代動力學特徵。
2、實驗方案
2.1 實驗藥品與動物
IPI-549、本發明實施例1和實施例2化合物；
健康成年Sprague Dawley(SD)雄性大鼠9隻，購自維通利華實驗動物技術有限公司，生產許可證號：11400700271077。
2.2 藥物配製與給藥
口服灌胃組：
稱取適量的待測化合物，加入0.5%羧甲基纖維素鈉(含0.05%Tween80)，渦旋振盪，超聲使固體分散均勻，得到混懸液；吸取100μL×2過濾後製劑，裝入1.5-mL EP管，2~8℃保存，製劑濃度為0.5mg/mL。
健康成年SD雄性大鼠9隻，禁食過夜後灌胃給藥(給藥劑量5mg/kg)，給藥4小時後進食。
2.3 樣品採集
於給藥前和給藥後0.083小時、0.25小時、0.5小時、1小時、2小時、4小時、8小時、12小時和24小時經頸靜脈采約0.2mL血液，肝素鈉抗凝。血液樣本採集後置於冰上，離心分離血漿(離心條件：1500g，10分鐘)。收集的血漿分析前存放於-40~-20℃。用LC-MS/MS法測定不同的化合物灌胃給藥後SD大鼠血漿中的待測化合物的含量。
3、藥代動力學參數結果
本發明實施例化合物和陽性對照化合物IPI-549的藥代動力學參數如下表9所示。
Figure 109122819-A0202-12-0037-33
結論：與IPI-549相比，本發明實施例1和實施例2化合物在SD大鼠中藥代吸收良好，半衰期延長，血藥濃度、曲線下面積、生物利用度明顯提高，具有較好的藥代動力學性質。
測試例6、本發明化合物聯合PD-L1單抗對CT26小鼠結腸癌細胞皮下移植瘤模的生長抑制作用的藥效學測試
1、實驗目的
評價實施例2化合物和PD-L1單抗之聯合在CT26小鼠結腸癌細胞皮下移植瘤模型中的抗腫瘤作用。
2、受試物配製
2.1 空白給藥製劑配製：
空白對照組給予5%NMP(N-甲基吡咯烷酮)+95%PEG400，給藥體積0.1mL/10g。
2.2 實施例2化合物給藥製劑配製
稱量適量實施例2化合物至離心管中，加入5%NMP 95%PEG400，渦旋至全溶溶液，濃度為6mg/mL，渦旋至全溶溶液，現配現用。
2.3 PD-L1單抗配製
重組抗PD-L1全鼠源單株抗體(InVivoMAb anti-mouse PD-L1(B7-H1)，購買於Bioxcell，Clone 10F.9G2，貨號：BE0101，批號：720619F1)，用PBS稀釋，濃度為1mg/mL，現配現用。
3.實驗動物
BALB/c小鼠，雌性，7-8周(腫瘤細胞接種時的小鼠周齡)，體重18.4-19.1g，每組9隻。購自浙江維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號：SCXK(浙)2019-0001。
4.CT26小鼠結腸癌培養
CT26小鼠結腸癌細胞培養在含10%胎牛血清、100U/mL青黴素和100μg/mL鏈黴素的RPMI-1640培養液中。收集指數生長期的CT26細胞，PBS重懸至適合濃度用於小鼠皮下腫瘤接種。
5．動物接種及分組
雌性BALB/c小鼠背部皮下接種2.5×105 CT26細胞。待腫瘤平均體積約127mm3時，根據腫瘤大小隨機分組，每組9隻，分為4組，分組當天定義為第0天。
6．動物給藥和觀察
腫瘤接種後，常規監測包括了腫瘤生長及治療對動物正常行為的影響，具體內容有實驗動物的活動性，攝食和飲水情況，體重增加或降低情況，眼睛、被毛及其它異常情況。每週稱重和測量腫瘤體積2次，給藥週期21天，於第21天稱量體重測量腫瘤體積後次日處死小鼠取瘤塊稱重，計算腫瘤體積(Tumor Volume，TV)、相對腫瘤體積 (Relative Tumor Volume，RTV)、相對腫瘤增殖率(T/C)、腫瘤抑制百分率(IR)和相對腫瘤抑制率(Tumor Growth Inhibition value，TGI)，做統計學檢測。計算公式如下：
(1) TV=1/2×a×b2，其中a、b分別表示腫瘤的長和寬；
(2) RTV=Vt/V0，其中V0為分組給藥時(即d0)所測得的腫瘤體積，Vt為每一次測量時的腫瘤體積；
(3) TGI(%)=(1-T/C)×100%；其中，T/C%為相對腫瘤增殖率，在某一時間點，治療組和對照組相對腫瘤體積的百分比值，T和C分別為治療組和對照組某一特定時間點的相對腫瘤體積，T/C(%)=TRTV/CRTV×100%，其中TRTV為治療組的RTV，CRTV為對照組的RTV；
(4) IR(%)=(1-TWt/TWc)×100%，其中TWt為治療組瘤重，TWc為對照組瘤重。
7.結果
給藥後第21天在CT26小鼠結腸癌模型中各組藥效參數如下表10所示，各組小鼠腫瘤重量分析表如下表11所示。
Figure 109122819-A0202-12-0039-34
Figure 109122819-A0202-12-0040-35
Figure 109122819-A0202-12-0040-36
由表10和11可知，給藥後第21天，在CT26小鼠結腸癌模型中，本發明實施例2化合物的60mg/kg單藥治療組、聯合治療組和Anti-PD-L1組的TGI分別為51.2%、77.3%和38.7%，IR分別為52.1%，79.0%和35.8%，體重均無明顯變化，這表明本發明實施例2化合物的60mg/kg單藥治療組、聯合治療組均表現出顯著有效的抑制腫瘤生長作用，聯合治療組抑制腫瘤生長作用更優於單藥治療組。

Claims (14)

  1. 式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽：
    Figure 109122819-A0202-13-0001-37
    其中：
    X選自CH或N；
    R1選自環烷基或雜環基，其中所述的環烷基或雜環基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、硝基、氰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基或-NR5R6的取代基所取代；
    R2和R3各自獨立地選自氫原子、烷基、烷氧基、氰基或鹵素，其中所述的烷基或烷氧基任選進一步被一個或多個鹵素所取代；
    R4相同或不同，各自獨立地選自氫原子、烷基、烷氧基、氰基或鹵素，其中所述的烷基或烷氧基任選進一步被一個或多個鹵素所取代；
    R5和R6各自獨立地選自氫原子、烷基或環烷基，其中所述的烷基或環烷基任選進一步被一個或多個選自羥基、鹵素、氰基、烷基、烷氧基、環烷基或雜環基的取代基所取代；且
    m為0、1、2、3、4或5。
  2. 如請求項1所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中：R1為環丙基、環丁基、環戊基、環己基或氧雜環丁烷基。
  3. 如請求項1或2所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中：R1為環丙基或氧雜環丁烷基。
  4. 如請求項1~3中任何一項所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中：R2和R3各自獨立地選自氫原子或鹵素，所述鹵素優選為氟。
  5. 如請求項1~4中任何一項所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中：R4相同或不同，各自獨立地選自氫原子、烷基或鹵素，且m為0、1、2或3；優選地，R4為氫。
  6. 如請求項1~5中任何一項所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，其中所述的化合物選自：
    Figure 109122819-A0202-13-0002-38
  7. 一種藥物組合物，所述的藥物組合物含有有效劑量的如請求項1~6中任何一項所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，及可藥用的載體、賦形劑或它們的組合。
  8. 如請求項1~6中任何一項所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或如請求項7所述的藥物組合物在製備用作磷脂醯肌醇-3-激酶γ抑制劑的藥物中的用途。
  9. 如請求項1~6中任何一項所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或如請求項7所述的藥物組合物在製備用於治療由磷脂醯肌醇-3-激酶γ介導的疾病的藥物中的用途，其中所述由磷脂醯肌醇-3-激酶γ介導的疾病優選為癌症、骨障礙、呼吸疾病、炎性疾病或自身免疫疾病；其中所述呼吸疾病優選為哮喘、囊腫型纖維化、肺氣腫、慢性阻塞性肺病、慢性支氣管炎、支氣管擴張、急性呼吸窘迫綜合徵、呼吸道疾病、胸腔疾病和肺動脈高血壓。
  10. 如請求項9所述的用途，其中所述癌症為血液腫瘤和實體瘤；其中所述血液腫瘤優選選自急性淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、幼淋巴細胞白血病、毛細胞白血病、華氏巨球蛋白血症、外周T細胞淋巴瘤、成人T細胞白血病/淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、大顆粒淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、肥大細胞增多症、多發性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合徵或骨髓增生障礙；其中所述實體瘤優選選自腦癌、皮膚癌、頭頸癌、神經內分泌癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、睪丸癌、食道癌、肝癌、胃癌、結腸癌、結腸直腸癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、膀胱癌、腎癌、病毒引起的癌症、成神經管細胞瘤、基底細胞癌、膠質瘤、肝細胞癌、胃腸道間質瘤、黑素瘤、原始神經外胚層腫瘤、纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、內皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴血管內皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、平滑肌肉瘤、膀胱中的移行細胞癌、上皮癌、鱗狀細胞癌、腺癌、支氣管癌、腎細胞癌和類癌瘤。
  11. 如請求項9或10所述的用途，其中所述如請求項1~6中任何一項所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或如請求項7所述的藥物組合物與一種或多種第二治療劑聯合，其中所述第二治療劑選自PI3Kδ抑制劑、mTOR抑制劑、共刺激調節劑、免疫刺激劑、CXCL12/CXCR4抑制劑、HDAC抑制劑、蛋白酶體抑制劑、CD28抗體、CD30抗體、CD40抗體、GM-CSF、吉西他濱、環磷醯胺、多西紫杉醇、紫杉醇、5-FU、替莫唑胺、抗血管生成劑、阿昔替尼、PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑或其混合物；優選為PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑。
  12. 一種抑制磷脂醯肌醇-3-激酶γ活性的方法，其包括給予所需患者治療有效劑量的如請求項1~6中任何一項所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或如請求項7所述的藥物組合物。
  13. 一種通過抑制磷脂醯肌醇-3-激酶γ活性來治療癌症、骨障礙、呼 吸疾病、炎性疾病或自身免疫疾病的方法，其包括給予所需患者如請求項1~6中任何一項所述的化合物或其立體異構體、互變異構體或其可藥用的鹽，或如請求項7所述的藥物組合物；其中所述呼吸疾病優選選自哮喘、囊腫型纖維化、肺氣腫、慢性阻塞性肺病、慢性支氣管炎、支氣管擴張、急性呼吸窘迫綜合徵、呼吸道疾病、胸腔疾病和肺動脈高血壓；其中所述癌症優選選自血液腫瘤和實體瘤；其中所述血液腫瘤優選選自急性淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、幼淋巴細胞白血病、毛細胞白血病、華氏巨球蛋白血症、外周T細胞淋巴瘤、成人T細胞白血病/淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、大顆粒淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、肥大細胞增多症、多發性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合徵和骨髓增生障礙；其中所述實體瘤優選選自腦癌、皮膚癌、頭頸癌、神經內分泌癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、睪丸癌、食道癌、肝癌、胃癌、結腸癌、結腸直腸癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、膀胱癌、腎癌、病毒引起的癌症、成神經管細胞瘤、基底細胞癌、膠質瘤、肝細胞癌、胃腸道間質瘤、黑素瘤、原始神經外胚層腫瘤、纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、內皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴血管內皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、平滑肌肉瘤、膀胱中的移行細胞癌、上皮癌、鱗狀細胞癌、腺癌、支氣管癌、腎細胞癌和類癌瘤。
  14. 如請求項13所述的方法，其還包括另外給予所述患者一種或多種第二治療劑，其中所述第二治療劑選自PI3Kδ抑制劑、mTOR抑制劑、共刺激調節劑、免疫刺激劑、CXCL12/CXCR4抑制劑、HDAC抑制劑、蛋白酶體抑制劑、CD28抗體、CD30抗體、CD40抗體、GM-CSF、吉西他濱、環磷醯胺、多西紫杉醇、紫杉醇、5-FU、替莫唑胺、抗血管生成劑、阿昔替尼、PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑及其混合物；優選為PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑。
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