TW202035438A - 阿茲海默症之判定藥及判定方法 - Google Patents
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Abstract
本發明提供一種對阿茲海默症之判定有用之包含以下任一胺基酸序列之多肽：
(1)序列編號：1表示之胺基酸序列；或
(2)序列編號：1表示之胺基酸序列中置換、缺失、附加或插入1個～數個胺基酸而成之胺基酸序列
等。
Description
本發明係關於一種阿茲海默症之判定藥、阿茲海默症之判定方法、阿茲海默症之治療方法、阿茲海默症之治療藥之候選物質之篩選方法及新穎之抗S38AA抗體等。
阿茲海默症係自短期記憶力下降、輕度學習障礙開始，伴隨高級腦功能障礙、尤其是視空間失認、意念性失用、結構性失用等，最終發展到運動障礙或所謂人格破壞之進行性失智症，目前尚未發現根治性治療方法。亦預測到，於2040年世界上阿茲海默症患者將達到240萬人，其根治療法或早期診斷之重要性正在提高。業界認為，其發展過程與日本屢屢可見之血管障礙性失智症不同，會持續數年至十年以上。於阿茲海默症之一種之由基因變異之異常所引起之家族性阿茲海默症患者之情形時，其特徵在於，多數患者在數年內其症狀迅速惡化，發病年齡亦較早為30歲～40歲。作為基因變異以外之阿茲海默症之危險因子，已知有年齡、家族史、基因型、高血壓、糖尿病、吸煙等。
作為阿茲海默症所特有之病理變化，眾所周知的是於細胞外累積以β澱粉樣蛋白為主要構成成分之澱粉樣蛋白斑、及於神經細胞內累積高度磷酸化之Tau蛋白。關於空間上、時間上之腦內之病理變化，已發現早期阿茲海默症患者之海馬區、尤其是被稱為CA1之區域的視錐細胞內磷酸化Tau之累積，因此認為，本區域之視錐細胞於空間上、時間上均強烈地且於早期受到阿茲海默症之影響，即表現出脆弱性(非專利文獻2)。另一方面，如上所述，運動障礙係於阿茲海默症之大致最終階段出現，因此認為小腦之浦金埃氏細胞最對阿茲海默症表現出抵抗性。
認為關於阿茲海默症之發病率，以75歲為分界迅速增加，為了藉由對症藥物療法抑制病態發展，重要的是早期發現並開始早期治療。因現狀為不存在阿茲海默症之根治療法，故正積極地探索用於阿茲海默症之早期發現之診斷標記物，認為最有力的是測定血中或腦脊髓液中之β澱粉樣蛋白(Aβ40、Aβ42)、磷酸化Tau蛋白。然而，即便單獨使用該等標記物，或者使用該等標記物之組合(例如Aβ40與Aβ42比)，亦難以明確地找出將來之阿茲海默症之罹患、即阿茲海默症預備群。
另一方面，作為阿茲海默症之診斷標記物，報告有S38AA、尤其是其細胞外區域(專利文獻1)。
然而，由於阿茲海默症早期發現並開始早期治療較為重要，故謀求一種能夠以更高感度判定阿茲海默症之發病或阿茲海默症預備群之方法。
[先前技術文獻]
[專利文獻]
[專利文獻1]國際公開第2012/091138號說明書
[非專利文獻]
[非專利文獻1]Exp Gerontol. (2000)35: 851-64
[發明所欲解決之問題]
本發明之課題在於提供一種阿茲海默症之判定藥、阿茲海默症之判定方法、阿茲海默症之治療方法、阿茲海默症之治療藥之候選物質之篩選方法等。
[解決問題之技術手段]
已知S38AA片段於阿茲海默症患者(以下，有時稱為「AD患者」)之腦脊髓液及血漿中增加，故而本發明者等人發現了與阿茲海默症相關性特別高之2種S38AA片段(S38AA短片段(以下，有時簡稱為「短片段」)、及S38AA長片段(以下，有時簡稱為「長片段」)。進而，反覆進行努力研究，結果本發明者等人發現，S38AA短片段作為高精度之阿茲海默症之發病或預備群之判定及該疾病之發展程度之判定的指標具有極高之可靠性，從而完成本發明。
即，本發明關於以下。
[1]一種多肽，其包含以下之任一胺基酸序列：
(1)序列編號：1表示之胺基酸序列；或
(2)序列編號：1表示之胺基酸序列中置換、缺失、附加或插入1個～數個胺基酸而成之胺基酸序列。
[2]一種抗體，其特異性地識別如[1]所記載之多肽。
[3]一種核酸，其編碼如[1]所記載之多肽。
[4]一種套組，其包含如[2]所記載之抗體。
[5]如[4]所記載之套組，其進而包含如[1]所記載之多肽。
[6]一種檢測如[1]所記載之多肽之方法，其包括使受檢試樣與如[2]所記載之抗體接觸之步驟。
[7]如[4]或[5]所記載之套組，其用於判定阿茲海默症。
[8]一種阿茲海默症之判定藥，其含有可測定如[1]所記載之多肽之量之單一或複數種抗S38AA抗體。
[9]如[8]所記載之判定藥，其中上述抗S38AA抗體為如[2]所記載之抗體。
[10]一種如[2]所記載之抗體之用途，其用以製造阿茲海默症之判定藥。
[11]一種判定動物目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性之方法，其特徵在於檢測自該受檢動物採取之試樣中之如[1]所記載之多肽。
[12]如[11]所記載之方法，其包括以下之(i)～(iii)之步驟：
(i)對自受檢動物採取之試樣中之如[1]所記載之多肽進行定量；
(ii)將藉由(i)所定量之上述多肽之量與自健康動物採取之試樣中之上述多肽之量(以下，稱為對照值)進行比較；及
(iii)基於(ii)之結果，於藉由(i)所定量之上述多肽之量大於對照值之情形時，判定上述受檢動物有目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性。
[13]一種輔助阿茲海默症之發展度之判定之方法，其包括以下之(i)～(iii)之步驟：
(i)對自罹患阿茲海默症或有罹患阿茲海默症之可能性之受檢動物採取之試樣中之如[1]所記載之多肽進行定量；
(ii)將藉由(i)所定量之上述多肽之量與自該受檢動物過去所採取之試樣中之上述多肽之量(以下，稱為對照值)進行比較；及
(iii)基於(ii)之結果，於藉由(i)所定量之上述多肽之量大於對照值之情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在發展，於小於對照值之情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在改善。
[14]如[11]至[13]中任一項所記載之方法，其中受檢動物為人類。
[15]如[11]至[14]中任一項所記載之方法，其中試樣為血液、腦脊髓液、唾液、淚液或尿。
[16]如[11]至[15]中任一項所記載之方法，其進而包括檢測其他1種以上之阿茲海默症診斷標記物。
[17]一種阿茲海默症之治療或預防方法，其包括以下之(i)～(iv)之步驟：
(i)對自受檢動物採取之試樣中之如[1]所記載之多肽進行定量；
(ii)將藉由(i)所定量之上述多肽之量與自健康動物採取之試樣中之上述多肽之量(以下，稱為對照值)進行比較；
(iii)基於(ii)之結果，於藉由(i)所定量之上述多肽之量大於對照值之情形時，判定上述受檢動物目前罹患阿茲海默症或有罹患阿茲海默症之可能性、或者有將來罹患阿茲海默症之可能性；及
(iv)基於(iii)之結果，對判定目前罹患阿茲海默症或有罹患阿茲海默症之可能性、或者有將來罹患阿茲海默症之可能性之受檢動物投予阿茲海默症治療藥或預防藥。
[18]一種用以治療或預防阿茲海默症之投藥方法，其包括以下之(i)～(v)之步驟：
(i)對自目前罹患阿茲海默症或有罹患阿茲海默症之可能性之受檢動物採取之試樣中之如[1]所記載之多肽進行定量；
(ii)將藉由(i)所定量之上述多肽之量與自該受檢動物過去所採取之試樣中之上述多肽之量(以下，稱為對照值)進行比較；
(iii)基於(ii)之結果，於藉由(i)所定量之上述多肽之量大於對照值之情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在發展，於小於對照值之情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在改善；
(iv)基於(iii)之判定結果，選定阿茲海默症治療藥或預防藥；及
(v)將藉由(iv)所選定之阿茲海默症治療藥投予至受檢動物。
[19]如[17]或[18]所記載之方法，其中阿茲海默症治療藥係選自由膽鹼酯酶抑制藥、NMDA(N-methyl-D-aspartic acid，N-甲基-D-天冬胺酸)受體拮抗藥、β澱粉樣蛋白去除藥及累積抑制藥、以及Tau蛋白去除藥及累積抑制藥所組成之群。
[20]如[19]所記載之方法，其中膽鹼酯酶抑制藥為多奈哌齊、加蘭他敏、利凡斯的明、石杉鹼甲A或他克林，NMDA受體拮抗藥為美金剛。
[21]一種阿茲海默症治療藥，其用於藉由以下之(i)～(iv)之步驟已被判定阿茲海默症之發展度之患者：
(i)對自目前罹患阿茲海默症或有罹患阿茲海默症之可能性之受檢動物採取之試樣中之如[1]所記載之多肽進行定量；
(ii)將藉由(i)所定量之上述多肽之量與自該受檢動物過去所採取之試樣中之上述多肽之量(以下，稱為對照值)進行比較；
(iii)基於(ii)之結果，於藉由(i)所定量之上述多肽之量大於對照值之情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在發展，於小於對照值之情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在改善；及
(iv)基於(iii)之判定結果，決定投予阿茲海默症治療藥。
[22]一種阿茲海默症之治療藥或預防藥，其含有減少阿茲海默症患者或有罹患阿茲海默症之可能性者之生物體內之如[1]所記載之多肽之量的藥劑、或者抑制阿茲海默症患者或有罹患阿茲海默症之可能性者之生物體內之該多肽之產生的藥劑作為有效成分。
[23]一種篩選阿茲海默症之治療藥或預防藥之候選物質之方法，其係以受檢物質減少阿茲海默症患者或有罹患阿茲海默症之可能性者之生物體內之如[1]所記載之多肽之量、或者抑制阿茲海默症患者或有罹患阿茲海默症之可能性者之生物體內之該多肽之產生作為指標。
[24]一種抗體，其識別序列編號1或2之多肽，
上述抗體之重鏈可變區之胺基酸序列與序列編號4、序列編號6、序列編號8、序列編號10、序列編號12、序列編號14、序列編號16、序列編號18、序列編號20或序列編號22具有至少95%之同一性，
上述抗體之輕鏈可變區之胺基酸序列與序列編號5、序列編號7、序列編號9、序列編號11、序列編號13、序列編號15、序列編號17、序列編號19、序列編號21或序列編號23具有至少95%之同一性。
[25]一種抗體，其識別序列編號1或2之多肽，且包括：
(1)序列編號4之重鏈可變區及序列編號5之輕鏈可變區、
(2)序列編號6之重鏈可變區及序列編號7之輕鏈可變區、
(3)序列編號8之重鏈可變區及序列編號9之輕鏈可變區、
(4)序列編號10之重鏈可變區及序列編號11之輕鏈可變區、
(5)序列編號12之重鏈可變區及序列編號13之輕鏈可變區、
(6)序列編號14之重鏈可變區及序列編號15之輕鏈可變區、
(7)序列編號16之重鏈可變區及序列編號17之輕鏈可變區、
(8)序列編號18之重鏈可變區及序列編號19之輕鏈可變區、
(9)序列編號20之重鏈可變區及序列編號21之輕鏈可變區、或者
(10)序列編號22之重鏈可變區及序列編號23之輕鏈可變區。
[26]一種套組，其包含如[24]或[25]所記載之抗體。
[27]如[26]所記載之套組，其進而包含序列編號1之多肽。
[28]一種檢測序列編號1之多肽之方法，其包括使受檢試樣與如[24]或[25]所記載之抗體接觸之步驟。
[29]如[26]或[27]所記載之套組，其用於判定阿茲海默症。
[30]一種阿茲海默症之判定藥，其含有可測定序列編號1之多肽之量之如[24]或[25]所記載之抗體。
[31]一種判定動物目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性之方法，其特徵在於使用如[24]或[25]所記載之抗體檢測自該受檢動物採取之試樣中之序列編號1之多肽。
[32]如[31]所記載之方法，其包括以下之(i)～(iii)之步驟：
(i)使用如[24]或[25]所記載之抗體，對自受檢動物採取之試樣中之序列編號1之多肽進行定量；
(ii)將藉由(i)所定量之上述多肽之量與自健康動物採取之試樣中之上述多肽之量(以下，稱為對照值)進行比較；及
(iii)基於(ii)之結果，於藉由(i)所定量之上述多肽之量大於對照值之情形時，判定上述受檢動物有目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性。
[33]一種進行阿茲海默症之發展度之判定之方法，其包括以下之(i)～(iii)之步驟：
(i)使用如[24]或[25]所記載之抗體，對自罹患阿茲海默症或有罹患阿茲海默症之可能性之受檢動物採取之試樣中之如技術方案1所記載之多肽進行定量；
(ii)將藉由(i)所定量之上述多肽之量與自該受檢動物過去所採取之試樣中之上述多肽之量(以下，稱為對照值)進行比較；及
(iii)基於(ii)之結果，於藉由(i)所定量之上述多肽之量大於對照值之情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在發展，於小於對照值之情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在改善。
[34]如[31]至[33]中任一項所記載之方法，其中受檢動物為人類。
[35]如[31]至[34]中任一項所記載之方法，其中試樣為血液、腦脊髓液、唾液、淚液或尿。
[36]如[31]至[35]中任一項所記載之方法，其進而包括檢測其他1種以上之阿茲海默症診斷標記物。
[37]一種阿茲海默症之治療方法，其特徵在於：對已被判定阿茲海默症之發展度之患者投予阿茲海默症治療藥，該治療方法包括以下之(i)～(iv)之步驟：(i)使用如[24]或[25] 中任一項所記載之抗體，對自目前罹患阿茲海默症或有罹患阿茲海默症之可能性之受檢動物採取之試樣中之序列編號1所記載之多肽進行定量；
(ii)將藉由(i)所定量之上述多肽之量與自該受檢動物過去所採取之試樣中之上述多肽之量(以下，稱為對照值)進行比較；
(iii)基於(ii)之結果，於藉由(i)所定量之上述多肽之量大於對照值之情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在發展，於小於對照值之情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在改善；及
(iv)基於(iii)之判定結果，對需要其之受驗動物投予阿茲海默症治療藥。
[38]一種阿茲海默症之治療方法或預防方法，其含有減少使用如[24]或[25]所記載之抗體所診斷之阿茲海默症患者或有罹患阿茲海默症之可能性者之生物體內之序列編號1之多肽之量的藥劑、或者抑制上述阿茲海默症患者或上述有罹患阿茲海默症之可能性者之生物體內之該多肽之產生的藥劑作為有效成分。
[39]一種使用如[24]或[25]所記載之抗體之篩選阿茲海默症之治療藥或預防藥之候選物質之方法，其係以受檢物質減少阿茲海默症患者或有罹患阿茲海默症之可能性者之生物體內之序列編號1所記載之多肽之量、或者抑制阿茲海默症患者或有罹患阿茲海默症之可能性者之生物體內之該多肽之產生作為指標。
[項1]一種多肽，其包含以下之任一胺基酸序列：
(1)序列編號1表示之胺基酸序列；或
(2)序列編號1表示之胺基酸序列中置換、缺失、附加或插入1個～數個胺基酸而成之胺基酸序列。
[項2]如項1所記載之多肽，其包含序列編號1表示之胺基酸序列。
[項3]一種核酸，其編碼如項1或2所記載之多肽。
[項4]一種抗體，其識別如項1或2所記載之多肽。
[項5]如項4所記載之抗體，其進而識別序列編號2之多肽。
[項6]如項4或5所記載之抗體，其中上述抗體之重鏈可變區之胺基酸序列與序列編號4、序列編號6、序列編號8、序列編號10、序列編號12、序列編號14、序列編號16、序列編號18、序列編號20或序列編號22具有至少95%之同一性，且
上述抗體之輕鏈可變區之胺基酸序列與序列編號5、序列編號7、序列編號9、序列編號11、序列編號13、序列編號15、序列編號17、序列編號19、序列編號21或序列編號23具有至少95%之同一性。
[項7]如項4至6中任一項所記載之抗體，其中上述抗體之重鏈可變區之胺基酸序列與序列編號4、序列編號6、序列編號8、序列編號10、序列編號12、序列編號14、序列編號16、序列編號18、序列編號20或序列編號22具有至少99%之同一性，且
上述抗體之輕鏈可變區之胺基酸序列與序列編號5、序列編號7、序列編號9、序列編號11、序列編號13、序列編號15、序列編號17、序列編號19、序列編號21或序列編號23具有至少99%之同一性。
[項8]如項4至6中任一項所記載之抗體，其中上述抗體之重鏈可變區之胺基酸序列為序列編號4、序列編號6、序列編號8、序列編號10、序列編號12、序列編號14、序列編號16、序列編號18、序列編號20或序列編號22，且
上述抗體之輕鏈可變區之胺基酸序列為序列編號5、序列編號7、序列編號9、序列編號11、序列編號13、序列編號15、序列編號17、序列編號19、序列編號21或序列編號23。
[項9]如項4至8中任一項所記載之抗體，其係(1)包含序列編號4之重鏈可變區及序列編號5之輕鏈可變區之抗體；
(2)包含序列編號6之重鏈可變區及序列編號7之輕鏈可變區之抗體；
(3)包含序列編號8之重鏈可變區及序列編號9之輕鏈可變區之抗體；
(4)包含序列編號10之重鏈可變區及序列編號11之輕鏈可變區之抗體；
(5)包含序列編號12之重鏈可變區及序列編號13之輕鏈可變區之抗體；
(6)包含序列編號14之重鏈可變區及序列編號15之輕鏈可變區之抗體；
(7)包含序列編號16之重鏈可變區及序列編號17之輕鏈可變區之抗體；
(8)包含序列編號18之重鏈可變區及序列編號19之輕鏈可變區之抗體；
(9)包含序列編號20之重鏈可變區及序列編號21之輕鏈可變區之抗體；或
(10)包含序列編號22之重鏈可變區及序列編號23之輕鏈可變區之抗體。
[項10]一種檢測如項1或2所記載之多肽之方法，其包括使受檢試樣與如項4至9中任一項所記載之抗體接觸之步驟。
[項11]一種套組，其包含如項4至9中任一項所記載之抗體。
[項12]如項11所記載之套組，其進而包含如項1或2所記載之多肽。
[項13]如項11或12所記載之套組，其用於判定阿茲海默症。
[項14]一種阿茲海默症之判定藥，其含有可測定如項1或2所記載之多肽之量之單一或複數種抗S38AA抗體。
[項15]如項14所記載之判定藥，其中上述抗S38AA抗體係如項4至9中任一項所記載之抗體。
[項16]一種如項4至9中任一項所記載之抗體之用途，其用以製造阿茲海默症之判定藥。
[項17]一種判定動物目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性之方法，其特徵在於檢測自該受檢動物採取之試樣中之如項1或2所記載之多肽。
[項18]如項17所記載之方法，其特徵在於使用如項4至9中任一項所記載之抗體檢測如上述項1或2所記載之多肽。
[項19]如項17或18所記載之方法，其包括以下之(i)～(iii)之步驟：
(i)對自受檢動物採取之試樣中之如項1或2所記載之多肽進行定量；
(ii)將藉由(i)所定量之上述多肽之量與自健康動物採取之試樣中之上述多肽之量(以下，稱為對照值)進行比較；及
(iii)基於(ii)之結果，於藉由(i)所定量之上述多肽之量大於對照值之情形時，判定上述受檢動物有目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性。
[項20]如項19所記載之方法，其特徵在於藉由上述(i)所定量之上述多肽之量為對照值之1.1倍以上之量。
[項21]如項17或18所記載之方法，其包括以下之(i)～(iii)之步驟：
(i)對自受檢動物採取之試樣中之如項1或2所記載之多肽進行定量；
(ii)於藉由(i)所定量之上述多肽之量大於臨界值之情形時，判定上述受檢動物有目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性。
[項22]如項21所記載之方法，其特徵在於上述臨界值為45～75單元。
[項23]如項21所記載之方法，其特徵在於上述臨界值為45～75 ng/mL。
[項24]如項17至23中任一項所記載之方法，其中上述受檢動物為人類。
[項25]如項17至24中任一項所記載之方法，其中上述試樣為血液、腦脊髓液、唾液、淚液或尿。
[項26]如項17至25中任一項所記載之方法，其進而包括檢測其他1種以上之阿茲海默症診斷標記物。
[項27]一種判定阿茲海默症之發展度之方法，其特徵在於檢測自受檢動物採取之試樣中之如項1或2所記載之多肽。
[項28]如項27所記載之判定阿茲海默症之發展度之方法，其特徵在於使用如項4至9中任一項所記載之抗體檢測如上述項1或2所記載之多肽。
[項29]如項27或28所記載之判定阿茲海默症之發展度之方法，其包括以下之(i)～(iii)之步驟：
(i)對自受檢動物採取之試樣中之如項1或2所記載之多肽進行定量；
(ii)將藉由(i)所定量之上述多肽之量與自健康動物採取之試樣中之上述多肽之量(以下，稱為對照值)進行比較；及
(iii)基於(ii)之結果，於藉由(i)所定量之上述多肽之量大於對照值之情形時，判定上述受檢動物有目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性。
[項30]如項29所記載之判定阿茲海默症之發展度之方法，其特徵在於藉由上述(i)所定量之上述多肽之量為對照值之1.1倍以上之量。
[項31]如項27或28所記載之判定阿茲海默症之發展度之方法，其包括以下之(i)～(ii)之步驟：
(i)對自受檢動物採取之試樣中之如項1或2所記載之多肽進行定量；
(ii)於藉由(i)所定量之上述多肽之量大於臨界值之情形時，判定上述受檢動物有目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性。
[項32]如項31所記載之判定阿茲海默症之發展度之方法，其特徵在於上述臨界值為45～75單元。
[項33]如項31所記載之判定阿茲海默症之發展度之方法，其特徵在於上述臨界值為45～75 ng/mL。
[項34]如項27至33中任一項所記載之方法，其中上述受檢動物為人類。
[項35]如項27至34中任一項所記載之判定阿茲海默症之發展度之方法，其中上述試樣為血液、腦脊髓液、唾液、淚液或尿。
[項36]如項27至35中任一項所記載之判定阿茲海默症之發展度之方法，其進而包括檢測其他1種以上之阿茲海默症診斷標記物。
[項37]一種阿茲海默症之治療或預防方法，其特徵在於檢測自受檢動物採取之試樣中之如項1或2所記載之多肽，對受檢動物投予阿茲海默症治療藥。
[項38]如項37所記載之治療或預防方法，其特徵在於使用如項4至9中任一項所記載之抗體檢測如上述項1或2所記載之多肽。
[項39]如項37或38所記載之治療或預防方法，其包括以下之(i)～(iv)之步驟：
(i)對自受檢動物採取之試樣中之如項1或2所記載之多肽進行定量；
(ii)將藉由(i)所定量之上述多肽之量與自健康動物採取之試樣中之上述多肽之量(以下，稱為對照值)進行比較；
(iii)基於(ii)之結果，於藉由(i)所定量之上述多肽之量大於對照值之情形時，判定上述受檢動物目前罹患阿茲海默症或有罹患阿茲海默症之可能性、或者有將來罹患阿茲海默症之可能性；及
(iv)基於(iii)之結果，對判定目前罹患阿茲海默症或有罹患阿茲海默症之可能性、或者有將來罹患阿茲海默症之可能性之受檢動物投予阿茲海默症治療藥或預防藥。
[項40]如項39所記載之治療或預防方法，其特徵在於藉由上述(i)所定量之上述多肽之量為對照值之1.1倍以上之量。
[項41]如項37或38所記載之治療或預防方法，其包括以下之(i)～(ii)之步驟：
(i)對自受檢動物採取之試樣中之如項1或2所記載之多肽進行定量；
(ii)於藉由(i)所定量之上述多肽之量大於臨界值之情形時，判定上述受檢動物有目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性。
[項42]如項41所記載之治療或預防方法，其特徵在於上述臨界值為45～75單元。
[項43]如項41所記載之治療或預防方法，其特徵在於上述臨界值為45～75 ng/mL。
[項44]如項37至43中任一項所記載之治療或預防方法，其中上述受檢動物為人類。
[項45]如項37至44中任一項所記載之治療或預防方法，其中上述試樣為血液、腦脊髓液、唾液、淚液或尿。
[項46]如項37至45任一項所記載之治療或預防方法，其進而包括檢測其他1種以上之阿茲海默症診斷標記物。
[項47]如項37至46中任一項所記載之治療或預防方法，其中阿茲海默症治療藥係選自由膽鹼酯酶抑制藥、NMDA受體拮抗藥、β澱粉樣蛋白去除藥及產生抑制藥、以及Tau蛋白去除藥及產生抑制藥所組成之群。
[項48]如項47所記載之治療或預防方法，其中上述膽鹼酯酶抑制藥係選自由多奈哌齊、加蘭他敏、利凡斯的明、石杉鹼甲A及他克林所組成之群中之至少一者。
[項49]如項47所記載之治療或預防方法，其中上述NMDA受體拮抗藥為美金剛。
[項50]如項47所記載之治療或預防方法，其中上述β澱粉樣蛋白去除藥及產生抑制藥係選自由β澱粉樣蛋白疫苗、β澱粉樣蛋白去除抗體、β澱粉樣蛋白產生酵素抑制劑、β澱粉樣蛋白凝集抑制劑及β澱粉樣蛋白分解促進劑所組成之群中之至少一者。
[項51]如項47所記載之治療或預防方法，其中上述β澱粉樣蛋白去除藥及產生抑制藥係選自由CNP-520、E-2609、aducanumab、蘇蘭珠單抗(solanezumab)、gantenerumab、克雷內治單抗(crenezumab)、amilomotide、ASD-005、HSH-971、ELND-005、ALZT-OP1、尼伐地平(nilvadipine)、ACI-24、UB-311、AFFITOPE AD-02、LY-3002813、BAN-2401、Neurostem-AD、CT-1812、ID-1201、NIC5-15、BI-425809、Posiphen、PQ-912、苔蘚蟲素(bryostatin)-1、Apabetalone、PBT-2、RIV-1061-IR、MEDI-1814、PF-05236812、SAR-228810、Lu-AF20513、PRI-002、IRX-4204、GC-021109、AAD-2004、CTS-21166、LY-3323795、苯磷硫胺(benfotiamine)、bisnorcymserine、MDR-1339、KHK-6640及NPT-088所組成之群中之至少一者。
[項52]如項47所記載之治療或預防方法，其中上述Tau蛋白去除藥及產生抑制藥係選自由Tau蛋白疫苗、Tau蛋白去除抗體、Tau蛋白修飾抑制劑、Tau蛋白凝集抑制劑及Tau蛋白分解促進劑所組成之群中之至少一者。
[項53]如項47所記載之治療或預防方法，其中上述Tau蛋白去除藥及產生抑制藥係選自由TRx-237、TPI-287、ABBV-8E12、RG-6100、AADvac1、RO7105705、PTI-80、JNJ-63733657、UCB-0107、BIIB-076、MC-1、ACI-35及AZP-2006所組成之群中之至少一者。
[項54]一種用以治療或預防阿茲海默症之投藥方法，其特徵在於對自受檢動物採取之試樣中之如項1或2所記載之多肽進行定量，選定阿茲海默症治療藥或預防藥，對受檢動物投予阿茲海默症治療藥。
[項55]如項54所記載之投藥方法，其特徵在於使用如項4至9中任一項所記載之抗體對如上述項1或2所記載之多肽進行定量。
[項56]如項54或55所記載之投藥方法，其包括如下步驟：
(i)對自目前罹患阿茲海默症或有罹患阿茲海默症之可能性之受檢動物採取之試樣中之如[1]所記載之多肽進行定量；
(ii)將藉由(i)所定量之上述多肽之量與自該受檢動物過去所採取之試樣中之上述多肽之量(以下，稱為對照值)進行比較；及
(iii)基於(ii)之結果，於藉由(i)所定量之上述多肽之量大於對照值之情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在發展，於小於對照值之情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在改善；
(iv)基於(iii)之判定結果，選定阿茲海默症治療藥或預防藥；及
(v)將藉由(iv)所選定之阿茲海默症治療藥投予至受檢動物。
[項57]如項56所記載之投藥方法，其特徵在於：於藉由上述(i)所定量之上述多肽之量為對照值之1.1倍以上之量的情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在發展。
[項58]如項56所記載之投藥方法，其特徵在於：於藉由上述(i)所定量之上述多肽之量為對照值之0.9倍以下之量的情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在改善。
[項59]如項54至58中任一項所記載之投藥方法，其中上述受檢動物為人類。
[項60]如項54至59中任一項所記載之投藥方法，其中上述試樣為血液、腦脊髓液、唾液、淚液或尿。
[項61]如項54至60中任一項所記載之投藥方法，其進而包括檢測其他1種以上之阿茲海默症診斷標記物。
[項62]如項54至61中任一項所記載之投藥方法，其中阿茲海默症治療藥係選自由膽鹼酯酶抑制藥、NMDA受體拮抗藥、β澱粉樣蛋白去除藥及產生抑制藥、以及Tau蛋白去除藥及產生抑制藥所組成之群。
[項63]如項62所記載之投藥方法，其中上述膽鹼酯酶抑制藥係選自由多奈哌齊、加蘭他敏、利凡斯的明、石杉鹼甲A及他克林所組成之群中之至少一者。
[項64]如項62所記載之投藥方法，其中上述NMDA受體拮抗藥為美金剛。
[項65]如項62所記載之投藥方法，其中上述β澱粉樣蛋白去除藥及產生抑制藥係選自由β澱粉樣蛋白疫苗、β澱粉樣蛋白去除抗體、β澱粉樣蛋白產生酵素抑制劑、β澱粉樣蛋白凝集抑制劑及β澱粉樣蛋白分解促進劑所組成之群中之至少一者。
[項66]如項62所記載之投藥方法，其中上述β澱粉樣蛋白去除藥及產生抑制藥係選自由CNP-520、E-2609、aducanumab、蘇蘭珠單抗、gantenerumab、克雷內治單抗、amilomotide、ASD-005、HSH-971、ELND-005、ALZT-OP1、尼伐地平、ACI-24、UB-311、AFFITOPE AD-02、LY-3002813、BAN-2401、Neurostem-AD、CT-1812、ID-1201、NIC5-15、BI-425809、Posiphen、PQ-912、苔蘚蟲素-1、Apabetalone、PBT-2、RIV-1061-IR、MEDI-1814、PF-05236812、SAR-228810、Lu-AF20513、PRI-002、IRX-4204、GC-021109、AAD-2004、CTS-21166、LY-3323795、苯磷硫胺、bisnorcymserine、MDR-1339、KHK-6640及NPT-088所組成之群中之至少一者。
[項67]如項62所記載之投藥方法，其中上述Tau蛋白去除藥及產生抑制藥係選自由Tau蛋白疫苗、Tau蛋白去除抗體、Tau蛋白修飾抑制劑、Tau蛋白凝集抑制劑及Tau蛋白分解促進劑所組成之群中之至少一者。
[項68]如項62所記載之投藥方法，其中上述Tau蛋白去除藥及產生抑制藥係選自由TRx-237、TPI-287、ABBV-8E12、RG-6100、AADvac1、RO7105705、PTI-80、JNJ-63733657、UCB-0107、BIIB-076、MC-1、ACI-35及AZP-2006所組成之群中之至少一者。
[項69]一種阿茲海默症治療藥，其用於對自受檢動物採取之試樣中之如項1或2所記載之多肽進行定量而已被判定阿茲海默症之發展度之患者。
[項70]如項69所記載之阿茲海默症治療藥，其特徵在於使用如項4至9中任一項所記載之抗體對如上述項1或2所記載之多肽進行定量。
[項71]如項69或項70所記載之阿茲海默症治療藥，其用於藉由以下之(i)～(iv)之步驟已被判定阿茲海默症之發展度之患者：
(i)對自目前罹患阿茲海默症或有罹患阿茲海默症之可能性之受檢動物採取之試樣中之如項1或2所記載之多肽進行定量；
(ii)將藉由(i)所定量之上述多肽之量與自該受檢動物過去所採取之試樣中之上述多肽之量(以下，稱為對照值)進行比較；
(iii)基於(ii)之結果，於藉由(i)所定量之上述多肽之量大於對照值之情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在發展，於小於對照值之情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在改善；及
(iv)基於(iii)之判定結果，決定投予阿茲海默症治療藥。
[項72]如項71所記載之阿茲海默症治療藥，其特徵在於：於藉由上述(i)所定量之上述多肽之量為對照值之1.1倍以上之量的情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在發展。
[項73]如項71所記載之阿茲海默症治療藥，其特徵在於：於藉由上述(i)所定量之上述多肽之量為對照值之0.9倍以下之量的情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在改善。
[項74]如項69或項70所記載之阿茲海默症治療藥，其用於藉由以下之(i)～(iv)之步驟已被判定有目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性的患者：
(i)對自目前罹患阿茲海默症或有罹患阿茲海默症之可能性之受檢動物採取之試樣中之如項1或2所記載之多肽進行定量；
(ii)於藉由(i)所定量之上述多肽之量大於臨界值之情形時，判定上述受檢動物有目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性；及
(iii)基於(ii)之判定結果，決定投予阿茲海默症治療藥。
[項75]如項74所記載之阿茲海默症治療藥，其特徵在於上述臨界值為45～75單元。
[項76]如項74所記載之阿茲海默症治療藥，其特徵在於上述臨界值為45～75 ng/mL。
[項77]如項69至76中任一項所記載之阿茲海默症治療藥，其中上述受檢動物為人類。
[項78]如項69至77中任一項所記載之阿茲海默症治療藥，其中上述試樣為血液、腦脊髓液、唾液、淚液或尿。
[項79]如項69至78中任一項所記載之阿茲海默症治療藥，其進而包括檢測其他1種以上之阿茲海默症診斷標記物。
[項80]如項69至79中任一項所記載之阿茲海默症治療藥，其中阿茲海默症治療藥係選自由膽鹼酯酶抑制藥、NMDA受體拮抗藥、β澱粉樣蛋白去除藥及產生抑制藥、以及Tau蛋白去除藥及產生抑制藥所組成之群。
[項81]如項80所記載之阿茲海默症治療藥，其中上述膽鹼酯酶抑制藥係選自由多奈哌齊、加蘭他敏、利凡斯的明、石杉鹼甲A及他克林所組成之群中之至少一者。
[項82]如項80所記載之阿茲海默症治療藥，其中上述NMDA受體拮抗藥為美金剛。
[項83]如項80所記載之阿茲海默症治療藥，其中上述β澱粉樣蛋白去除藥及產生抑制藥係選自由β澱粉樣蛋白疫苗、β澱粉樣蛋白去除抗體、β澱粉樣蛋白產生酵素抑制劑、β澱粉樣蛋白凝集抑制劑及β澱粉樣蛋白分解促進劑所組成之群中之至少一者。
[項84]如項80所記載之阿茲海默症治療藥，其中上述β澱粉樣蛋白去除藥及產生抑制藥係選自由CNP-520、E-2609、aducanumab、蘇蘭珠單抗、gantenerumab、克雷內治單抗、amilomotide、ASD-005、HSH-971、ELND-005、ALZT-OP1、尼伐地平、ACI-24、UB-311、AFFITOPE AD-02、LY-3002813、BAN-2401、Neurostem-AD、CT-1812、ID-1201、NIC5-15、BI-425809、Posiphen、PQ-912、苔蘚蟲素-1、Apabetalone、PBT-2、RIV-1061-IR、MEDI-1814、PF-05236812、SAR-228810、Lu-AF20513、PRI-002、IRX-4204、GC-021109、AAD-2004、CTS-21166、LY-3323795、苯磷硫胺、bisnorcymserine、MDR-1339、KHK-6640及NPT-088所組成之群中之至少一者。
[項85]如項80所記載之阿茲海默症治療藥，其中上述Tau蛋白去除藥及產生抑制藥係選自由Tau蛋白疫苗、Tau蛋白去除抗體、Tau蛋白修飾抑制劑、Tau蛋白凝集抑制劑、及Tau蛋白分解促進劑所組成之群中之至少一者。
[項86]如項80所記載之阿茲海默症治療藥，其中上述Tau蛋白去除藥及產生抑制藥係選自由TRx-237、TPI-287、ABBV-8E12、RG-6100、AADvac1、RO7105705、PTI-80、JNJ-63733657、UCB-0107、BIIB-076、MC-1、ACI-35及AZP-2006所組成之群中之至少一者。
[項87]一種阿茲海默症之治療藥或預防藥，其含有減少阿茲海默症患者或有罹患阿茲海默症之可能性者之生物體內之如項1或項2所記載之多肽之量的藥劑、或者抑制阿茲海默症患者或有罹患阿茲海默症之可能性者之生物體內之該多肽之產生的藥劑作為有效成分。
[項88]如項87所記載之阿茲海默症之治療藥或預防藥，其特徵在於使用如項4至9中任一項所記載之抗體檢測如上述項1或2所記載之多肽。
[項89]一種篩選阿茲海默症之治療藥或預防藥之候選物質之方法，其係以受檢物質減少阿茲海默症患者或有罹患阿茲海默症之可能性者之生物體內之如項1或2所記載之多肽之量、或者抑制阿茲海默症患者或有罹患阿茲海默症之可能性者之生物體內之該多肽之產生作為指標。
[項90]如項89所記載之篩選阿茲海默症之治療藥或預防藥之候選物質之方法，其特徵在於使用如項4至9中任一項所記載之抗體檢測如上述項1或2所記載之多肽之量之減少。
[發明之效果]
根據本發明，可提供一種阿茲海默症之判定藥、阿茲海默症之判定方法、阿茲海默症之治療方法、篩選阿茲海默症之治療藥之候選化合物之方法、及新穎之抗S38AA抗體等。
於本說明書中，「阿茲海默症」包含上述「家族性阿茲海默症」及「偶發性阿茲海默症」兩者。
於本發明中，「罹患阿茲海默症」、即「為阿茲海默症患者」係指根據基於記憶或認知功能障礙之臨床診斷、或基於腦萎縮等之圖像診斷，而能夠被診斷為阿茲海默症發病之狀態。
於本說明書中，「阿茲海默症發病」係表示基於以下阿茲海默症之臨床診斷基準診斷為阿茲海默症之狀態，例如美國國立神經疾病與腦中風研究所及阿茲海默症與相關障礙協會(NINCDS-ADRDA)之診斷基準、或由美國國立老化研究所及阿茲海默症協會(NIA-AA)提出之阿茲海默症修訂診斷基準(以下，簡稱為「阿茲海默症修訂診斷基準(2011)」)等。
不管是任一診斷基準，均是將以記憶障礙為中心之認知功能障礙之存在、緩慢發病及進行性過程、伴隨認知功能障礙之社會生活或日常生活動作障礙、非AD型失智症之鑑別、排除等作為診斷指標。
又，阿茲海默症發病之狀態根據其症狀之嚴重程度，大致分為3個階段(輕度、中等度(或中度)、高度(或重度)、或第一期(或健忘期)、第二期(或混亂期)、第三期(或臥床期))。關於嚴重程度之評估，除測定認知功能障礙之程度之簡易精神狀態檢查(MMSE)、以日常生活動作作為主體判定嚴重程度之失智症功能評估分級(FAST)、臨床上判定嚴重程度之臨床失智症評估量表(CDR)等以外，亦可使用臨床試驗中所使用之阿茲海默症認知功能評估量表(ADAS-cog)或高度認知功能障礙檢查(SIB)等進行。
作為評估阿茲海默症之認知功能障礙之程度之方法，例如可使用簡易精神狀態檢查(MMSE)之得分作為判斷基準之一，於0～30分之量表中，作為標準，9分以下判定為重度阿茲海默症，10～19分判定為中等度阿茲海默症，20～23分判定為輕度阿茲海默症，24分以上判定為輕度認知障礙或正常。
於本說明書中，作為「阿茲海默症預備群」(Pre-Alzheimer's disease)、即「有罹患阿茲海默症之可能性者(人類)」、「阿茲海默症高風險群者(人類)」，可列舉雖然無法藉由上述診斷而診斷為阿茲海默症發病，但腦組織中開始累積Aβ或Tau蛋白，於不久之將來阿茲海默症發病之可能性較高之阿茲海默症發病前階段之狀態、即腦組織中Aβ或Tau蛋白累積之狀態(亦稱為Preclinical AD)之人。此處，腦組織中Aβ或Tau蛋白之累積可以澱粉樣蛋白PET(positron emission tomography，正電子發射斷層攝影法)、Tau PET、腦髓液中之Aβ或磷酸化Tau等作為生物標記物進行確認。
於本說明書中，「發病前階段之阿茲海默症(Preclinical AD)」如上述阿茲海默症修訂診斷基準(2011)中之Preclinical AD之研究基準所定義，為如下狀態：提示阿茲海默症之病態之生物標記物為陽性，但認知功能正常、或僅可見不滿足輕度認知障礙(MCI)之診斷基準之極輕微之認知功能障礙。
又，未診斷為罹患阿茲海默症但診斷為輕度認知障礙之狀態之人由於該症狀為阿茲海默症之前兆之症狀，有將來罹患阿茲海默症之可能性，故而包含於「有罹患阿茲海默症之可能性者(人類)」。
於本說明書中，「輕度認知障礙(或輕度認知功能障礙)」(MCI)表示正常與失智症之中間之狀態，認知功能超過正常範圍而較差，但保持日常生活，未診斷為失智症之狀態、即失智症之前驅狀態。
輕度認知障礙之診斷例如可基於2003年之MCI Key Symposium所提倡之診斷基準(Winblad B等人，(2004) J. Intern. Med. 256: 240-246)、或上述由NIA-AA提出之阿茲海默症修訂診斷基準(2011)中所記載之輕度認知障礙之診斷基準等進行。
於以失智症之嚴重程度之評估量表作為指標之情形時，作為標準，CDR(Clinical Dementia Rating，臨床失智評定量表)得分為0.5(懷疑為失智症)、或FAST(Functinal Assessment Staging，功能評估分級)階段為3(懷疑為失智症)之狀態相當於輕度認知障礙。又，於以上述MMSE得分作為指標之情形時，作為標準，得分為24以上且未診斷為阿茲海默症之狀態相當於輕度認知障礙，若該得分為24～28，則可謂為輕度認知障礙之可能性較高。
1.本發明之多肽
本發明者等人首先發現於AD患者之血液中，於S38AA之膜外部分受到切斷所產生之S38AA長片段量上升，進而發現於AD患者之血液中，存在將該長片段之C末端側特異性地切斷之酵素或該酵素之活性較高，S38AA短片段量大幅上升，且阿茲海默症之嚴重程度(認知功能障礙之發展度)為輕度、中程度及嚴重之任一種中，血中之S38AA短片段量均高於健康人，進而，於中等度及重度下高於輕度，並且發現該S38AA短片段量作為高精度之阿茲海默症之發病或預備群之判定的指標具有極高之可靠性。
因此，本發明首先提供一種包含作為S38AA短片段之序列編號1表示之胺基酸序列之多肽(相當於序列編號3表示之S38AA之胺基酸序列(1～1119)中第617號～第1049號之胺基酸序列部分)、及包含作為S38AA長片段之序列編號2表示之胺基酸序列之多肽(相當於序列編號3表示之S38AA之胺基酸序列(1～1119)中第399號～第1049號之胺基酸序列部分)。
又，S38AA短片段只要被下述與包含序列編號1表示之胺基酸序列之多肽特異性地結合之抗體識別，則於該胺基酸序列中，可置換、缺失、附加或插入1個～數個胺基酸。同樣地，S38AA長片段只要被下述與包含序列編號2表示之胺基酸序列之多肽特異性地結合之抗體識別，則於該胺基酸序列中，可置換、缺失、附加或插入1個～數個胺基酸。此處，數個並無特別限定，例如可為2～10個，可為2～8個，可為2～6個，可為2～4個，可為2～3個，亦可為2個。
S38AA短片段可適當於其N末端、C末端或側鏈利用業者所周知之方法、例如N末端之乙醯基修飾、C末端之醯胺基修飾、蛋白標籤(His標籤等)於N末端及/或C末端之附加、及糖鏈於側鏈之附加等進行修飾。
本發明之多肽可按照公知之肽合成法、例如固相合成法、液相合成法等進行製造。所獲得之多肽可利用公知之純化法、例如溶劑萃取、蒸餾、管柱層析法、液體層析法、再結晶、該等之組合等進行純化單離。
又，本發明之多肽亦可藉由培養含有編碼其之核酸之轉形體，自所獲得之培養物分離純化多肽而製造。編碼本發明之多肽之核酸可為DNA，亦可為RNA，或者亦可為DNA/RNA嵌合體，較佳為DNA。該核酸可為雙鏈，亦可為單鏈。於雙鏈之情形時，可為雙鏈DNA、雙鏈RNA或DNA：RNA之混合體。於單鏈之情形時，可為正義鏈(即編碼鏈)，亦可為反義鏈(即非編碼鏈)。
於本說明書中，「序列編號」與「序列編號：」同義。例如「序列編號1」與「序列編號：1」同義。
作為編碼本發明之多肽之DNA，可列舉合成DNA等，可使用本身公知之方法、例如逆轉錄酶(Reverse Transcriptase)-PCR(polymerase chain reaction，聚合酶鏈反應)法及ODA-LA(Oligonucleotide-directed Dual Amber，寡核苷酸介導之雙琥珀酸)PCR法、Gapped duplex法、Kunkel法等，或者使用菌落或噬菌斑雜交法或PCR法而取得。
2.抗S38AA抗體
作為本說明書中所使用之「抗S38AA抗體」，只要為特異性地識別S38AA之抗體、或特異性地識別S38AA長片段及/或S38AA短片段之抗體，則並無特別限定，例如可列舉：識別S38AA長片段之N末端側區域之抗體、識別S38AA長片段之C末端側區域之抗體、識別S38AA長片段及S38AA短片段共通之C末端側區域之抗體等。
抗S38AA抗體可為市售之抗S38AA抗體、使用公知之方法所製造之多株或單株抗體、或該等之片段(例如Fab、F(ab')2
、ScFv、微抗體(minibody)等)。
作為本發明中所使用之抗S38AA抗體，較佳為源自哺乳動物之單株抗體及多株抗體。
作為源自哺乳動物之單株抗體及多株抗體，可列舉：動物之血中所產生者；融合瘤所產生者；及利用基因工程方法，藉由包含抗體基因之表現載體進行轉形之宿主所產生者；藉由噬菌體呈現，自包含1兆個分子之龐大之選殖基因庫篩選最佳抗體，自該基因藉由CHO細胞進行大量生產者；或自生產人類抗體之基因轉殖小鼠直接獲得之人類抗體等。
單株抗體及多株抗體可利用業者所公知之方法製作。
(1)單株抗體之製作
本發明之多肽係對哺乳動物於可藉由投予而產生抗體之部位投予其本身或者與載體、稀釋劑一起投予。為了於投予時提高抗體產生能力，可投予完全弗氏佐劑或不完全弗氏佐劑。投予通常每2～6週進行1次，共計進行2～10次左右。作為所使用之哺乳動物，例如可列舉：猴、兔、狗、豚鼠、小鼠、大鼠、綿羊、山羊，可良好地使用小鼠及大鼠。
於製作單株抗體產生細胞時，自對抗原免疫之哺乳動物、例如小鼠中選擇可見抗體效價之個體，於最終免疫之2～5天後採取脾臟或淋巴結，使該等所包含之抗體產生細胞與骨髓瘤細胞融合，藉此可製備單株抗體產生融合瘤。抗血清中之抗體效價之測定例如可藉由使下述標記化S38AA與抗血清進行反應後，測定與抗體結合之標記劑之活性而進行。融合操作可按照已知之方法、例如科勒與米爾斯坦之方法[Nature, 256, 495(1975年)]實施。作為融合促進劑，例如可列舉聚乙二醇(PEG)或仙台病毒等，較佳為使用PEG。進而，為了提高融合效率，亦可適當使用二甲基亞碸等助劑。
作為骨髓瘤細胞，例如可列舉：NS-1、P3U1、SP2/0等，可良好地使用P3U1。所使用之抗體產生細胞(脾臟細胞)數與骨髓瘤細胞數之較佳之比率為1：1～20：1左右，以10～80%左右之濃度添加PEG(較佳為PEG1000～PEG6000)，於約20～40℃、較佳為約30～37℃下培養約1～10分鐘，藉此可高效率地實施細胞融合。
單株抗體產生融合瘤之篩選可使用各種方法，例如可列舉如下方法：於直接或與載體一起吸附蛋白等抗原之固相(例如微量盤)添加融合瘤培養上清液，其次，加入藉由放射性物質或酵素等標記之抗免疫球蛋白抗體(於細胞融合所使用之細胞為小鼠之情形時，使用抗小鼠免疫球蛋白抗體)或蛋白A，檢測與固相結合之單株抗體；於吸附有抗免疫球蛋白抗體或蛋白A之固相添加融合瘤培養上清液，加入藉由放射性物質或酵素等標記之蛋白等，檢測與固相結合之單株抗體；等。
單株抗體之篩選可按照本身公知或依據其之方法進行，通常可藉由添加有HAT(次黃嘌呤、胺基喋呤、胸苷)之動物細胞用培養基等進行。作為篩選及育種用培養基，只要為可培育融合瘤者，則可使用任意培養基。例如可使用包含1～20%、較佳為10～20%之胎牛血清之RPMI 1640培養基、包含1～10%之胎牛血清之GIT培養基(和光純藥工業股份有限公司)或融合瘤培養用無血清培養基(SFM-101，日水製藥股份有限公司)等。培養溫度通常為20～40℃，較佳為約37℃。培養時間通常為5天～3週，較佳為1週～2週。培養通常可於5%二氧化碳氣體下進行。融合瘤培養上清液之抗體效價可與上述抗血清中之抗體效價之測定同樣地進行測定。
單株抗體之分離純化可與通常之多株抗體之分離純化同樣地按照免疫球蛋白之分離純化法[例如鹽析法、乙醇沈澱法、等電點沈澱法、電泳法、藉由離子交換體(例如DEAE(diethylaminoethyl，二乙胺基乙基))之吸附脫附法、超離心法、凝膠過濾法、利用與抗原結合之固相或者蛋白A或蛋白G等活性吸附劑僅採取抗體並使結合解離而獲得抗體之特異性純化法]進行。
(2)多株抗體之製作
與本發明之多肽對應之多株抗體可按照其本身公知或依據其之方法製造。例如可藉由製作免疫抗原(蛋白等抗原)與載體蛋白之複合體，與上述單株抗體之製造法同樣地對哺乳動物進行免疫或對雞進行免疫，自該免疫動物採取含有與S38AA對應之抗體之物質，並進行抗體之分離純化而製造。
關於用於使哺乳動物及雞免疫之免疫抗原與載體蛋白之複合體，載體蛋白之種類及載體與半抗原之混合比只要對與載體交聯所免疫之半抗原高效率地形成抗體，則可使任意種類以任意比率進行交聯，例如使用如下方法：使牛血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白、匙孔螺血氰蛋白等以按重量比計相對於半抗原1份為約0.1～20份、較佳為約1～5份之比率偶合。
又，半抗原與載體之偶合可使用各種縮合劑，可使用戊二醛或碳二醯亞胺、順丁烯二醯亞胺活性酯、含有硫醇基、二硫代吡啶基之活性酯試劑等。
縮合產物係對哺乳動物或雞於可產生抗體之部位投予其本身或與載體、稀釋劑一起投予。為了於投予時提高抗體產生能力，可投予完全弗氏佐劑或不完全弗氏佐劑。投予通常可每約2～6週進行1次，共計進行約3～10次左右。
多株抗體可自藉由上述方法免疫之哺乳動物之血液、腹水、母乳等、較佳為血液採取，於雞之情形時，可自血液及蛋黃採取。
抗血清中之多株抗體效價之測定可與上述血清中之抗體效價之測定同樣地進行測定。多株抗體之分離純化可按照與上述單株抗體之分離純化相同之免疫球蛋白之分離純化法進行。
作為本發明中之多株抗體，例如可列舉源自兔之抗S38AA多株抗體(以下，亦稱為「MBL」或「長片段用抗體」)。長片段用抗體具有特異性地識別S38AA長片段，不識別S38AA短片段之特徵。長片段用抗體藉由與抗體A、B或C一起使用，可用於下述長ELISA。
(3)特異性地識別S38AA短片段之抗體
作為本發明之一態樣，可列舉特異性地識別序列編號1表示之S38AA短片段之抗體。作為特異性地識別S38AA短片段之抗體，例如可列舉識別S38AA短片段之C末端序列或N末端序列之抗體。特異性地識別S38AA短片段之抗體可藉由業者所周知之方法製作。例如可藉由選擇以自S38AA短片段之N末端(序列編號3表示之胺基酸序列中之第617號之甘胺酸)起數個胺基酸之肽作為免疫抗原，於較其更靠近N末端側附加數個胺基酸而成之肽；或對S38AA長片段為陰性之抗體而取得。具體而言，可分別依據上述(1)或(2)之方法而取得單株抗體或多株抗體。
作為特異性地識別S38AA短片段之抗體，例如可列舉下述抗體A、抗體B或抗體C。
抗體A(以下，亦稱為「源自小鼠之抗S38AA單株抗體A」)係識別S38AA之C末端側區域之抗體，意指以S38AA片段之C末端胺基酸序列之一部分肽作為免疫源而建立抗體產生融合瘤，進行分離純化而得之抗體。抗體A具有特異性地識別S38AA短片段及S38AA長片段之特徵。抗體A可與「長片段用抗體」一起用於長ELISA。抗體A藉由與抗體B或C一起使用，可用於下述全ELISA。
作為抗體A，較佳可例舉的是選自由以下：
(1)包含序列編號4之重鏈可變區之抗體、
(2)包含序列編號6之重鏈可變區之抗體、
(3)包含序列編號8之重鏈可變區之抗體、及
(4)包含序列編號10之重鏈可變區之抗體
所組成之群中之抗體。
作為抗體A，作為另一較佳之態樣，可列舉選自由以下：
(1)包含序列編號5之輕鏈可變區之抗體、
(2)包含序列編號7之輕鏈可變區之抗體、
(3)包含序列編號9之輕鏈可變區之抗體、及
(4)包含序列編號11之輕鏈可變區之抗體
所組成之群中之抗體。
作為抗體A，更佳可例舉的是選自由以下：
(1)包含序列編號4之重鏈可變區及序列編號5之輕鏈可變區之抗體、
(2)包含序列編號6之重鏈可變區及序列編號7之輕鏈可變區之抗體、
(3)包含序列編號8之重鏈可變區及序列編號9之輕鏈可變區之抗體、及
(4)包含序列編號10之重鏈可變區及序列編號11之輕鏈可變區之抗體
所組成之群中之抗體。
抗體B係識別S38AA之C末端側區域之抗體，意指以S38AA片段之C末端胺基酸序列之一部分肽作為免疫源而建立抗體產生融合瘤，進行分離純化而得之抗體。抗體B具有特異性地識別S38AA短片段及S38AA長片段之特徵。抗體B可與「長片段用抗體」一起用於長ELISA。抗體B藉由與抗體A或C一起使用，可用於全ELISA。
作為抗體B，較佳可例舉的是選自由以下：
(5)包含序列編號12之重鏈可變區之抗體、
(6)包含序列編號14之重鏈可變區之抗體、
(7)包含序列編號16之重鏈可變區之抗體、及
(8)包含序列編號18之重鏈可變區之抗體
所組成之群中之抗體。
作為抗體B，作為另一較佳之態樣，可列舉選自由以下：
(5)包含序列編號13之輕鏈可變區之抗體、
(6)包含序列編號15之輕鏈可變區之抗體、
(7)包含序列編號17之輕鏈可變區之抗體、及
(8)包含序列編號19之輕鏈可變區之抗體
所組成之群中之抗體。
作為抗體B，更佳可例舉的是選自由以下：
(5)包含序列編號12之重鏈可變區及序列編號13之輕鏈可變區之抗體、
(6)包含序列編號14之重鏈可變區及序列編號15之輕鏈可變區之抗體、
(7)包含序列編號16之重鏈可變區及序列編號17之輕鏈可變區之抗體、及
(8)包含序列編號18之重鏈可變區及序列編號19之輕鏈可變區之抗體
所組成之群中之抗體。
抗體C係識別S38AA之C末端側區域之抗體，意指以S38AA長片段之大腸桿菌重組蛋白作為免疫源而建立抗體產生融合瘤，進行分離純化而得之抗體。抗體C具有特異性地識別S38AA短片段及S38AA長片段之特徵。抗體C可與「長片段用抗體」一起用於長ELISA。抗體C藉由與抗體A或B一起使用，可用於全ELISA。
作為抗體C，較佳可例舉的是選自由以下：
(9)包含序列編號20之重鏈可變區之抗體、及
(10)包含序列編號22之重鏈可變區之抗體
所組成之群中之抗體。
作為抗體C，作為另一較佳之態樣，可列舉選自由以下：
(9)包含序列編號21之輕鏈可變區之抗體、及
(10)包含序列編號23之輕鏈可變區之抗體
所組成之群中之抗體。
作為抗體C，更佳可例舉的是選自由以下：
(9)包含序列編號20之重鏈可變區及序列編號21之輕鏈可變區之抗體、及
(10)包含序列編號22之重鏈可變區及序列編號23之輕鏈可變區之抗體
所組成之群中之抗體。
本發明之抗體A、B及C只要可特異性地識別S38AA短片段及S38AA長片段，則該各抗體可包含與其所包含之上述可變區之胺基酸序列具有90%以上、較佳為95%以上、更佳為96%以上、進一步較佳為97%以上、進而較佳為98%、進而更佳為99%以上、最佳為99.5%以上之同一性之可變區。
於本說明書中，「同一性」意指使用該技術領域中公知之數學演算法使2個胺基酸序列對準之情形時最佳之對準(較佳為該演算法為了進行最佳之對準，可考慮對序列之一者或兩者導入間隙)中之重疊之同一胺基酸及類似胺基酸殘基相對於所有胺基酸殘基的比率(%)。
本說明書中之胺基酸序列之同一性可使用同一性計算演算法NCBI BLAST(National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool，美國國家生物技術資訊中心鹼基局部對準檢索工具)，於以下之條件(期待值＝10；容許間隙；矩陣＝BLOSUM62；過濾＝OFF)下進行計算。作為用以確定胺基酸序列之同一性之其他演算法，例如可列舉：Karlin等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 5873-5877(1993)中所記載之演算法[該演算法引入至NBLAST及XBLAST程式(version 2.0)中(Altschul等人，Nucleic Acids Res., 25: 3389-3402(1997))]；Needleman等人，J. Mol. Biol., 48: 444-453(1970)中所記載之演算法[該演算法引入至GCG套裝軟體中之GAP程式中]；Myers及Miller，CABIOS, 4: 11-17(1988)中所記載之演算法[該演算法引入至作為CGC序列對準套裝軟體之一部分之ALIGN程式(version 2.0)中]；Pearson等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85：2444-2448(1988)中所記載之演算法[該演算法引入至GCG套裝軟體中之FASTA程式中]等，該等亦同樣可良好地使用。
又，關於本發明之抗體A、B及C中所包含之CDR，只要該抗體可特異性地識別S38AA短片段及S38AA長片段，則可對1個CDR之胺基酸序列置換、缺失、插入及/或附加1個～數個(2、3、4、5等)、較佳為2個以內、更佳為1個胺基酸。又，關於上述各抗體所具有之胺基酸被置換、缺失、插入及/或附加之CDR之數量，只要該各抗體可特異性地識別S38AA短片段及S38AA長片段，則並無特別限定，對1個輕鏈可變區較佳為2個以內，更佳為1個，對1個重鏈可變區較佳為2個以內，更佳為1個。胺基酸之置換、缺失、插入及/或附加可於輕鏈可變區及重鏈可變區兩者中進行，亦可僅於任一者中進行。
例如「類似胺基酸」意指物理化學性質中類似之胺基酸，例如可列舉：芳香族胺基酸(Phe、Trp、Tyr)、脂肪族胺基酸(Ala、Leu、Ile、Val)、極性胺基酸(Gln、Asn)、鹼性胺基酸(Lys、Arg、His)、酸性胺基酸(Glu、Asp)、具有羥基之胺基酸(Ser、Thr)、側鏈較小之胺基酸(Gly、Ala、Ser、Thr、Met)等分為同一群之胺基酸。預測藉由此種類似胺基酸進行之置換不會對蛋白之表現型帶來變化(即保守性胺基酸置換)。保守性胺基酸置換之具體例係於該技術領域中所周知，記載於各種文獻(例如參照Bowie等人，Science, 247: 1306-1310(1990))。
作為將一個或複數個胺基酸殘基置換為目標其他胺基酸之方法，例如可列舉定點突變誘發法(Hashimoto-Gotoh, T, Mizuno, T, Ogasahara, Y, and Nakagawa, M. (1995) An oligodeoxyribonucleotide-directed dual amber method for site-directed mutagenesis. Gene 152, 271-275、Zoller, MJ, and Smith, M. (1983) Oligonucleotide-directed mutagenesis of DNA fragments cloned into M13 vectors. Methods Enzymol. 100, 468-500、Kramer, W, Drutsa, V, Jansen, HW, Kramer, B, Pflugfelder, M, and Fritz, HJ(1984) The gapped duplex DNA approach to oligonucleotide-directed mutation construction. Nucleic Acids Res. 12, 9441-9456、Kramer W, and Fritz HJ (1987) Oligonucleotide-directed construction of mutations via gapped duplex DNA Methods. Enzymol. 154, 350-367、Kunkel, TA (1985) Rapid and efficient site-specific mutagenesis without phenotypic selection. Proc Natl Acad Sci USA. 82, 488-492)。可使用該方法，將抗體所需之胺基酸置換為目標其他胺基酸。又，藉由使用架構改組(Mol Immunol. 2007 Apr; 44(11): 3049-60)及CDR修復(US2006/0122377)等基因庫技術，亦可將架構及CDR中之胺基酸置換為適當之其他胺基酸。
3.阿茲海默症之判定藥
本發明之判定藥包含可檢測S38AA短片段量之一種或複數種抗S38AA抗體，不僅可進行是否罹患阿茲海默症之判定、目前罹患該疾病之可能性是否較高之判定，亦可進行阿茲海默症預備群之判定、即尚未罹患該疾病，但於不久之將來罹患之可能性是否較高之判定。換言之，本發明之判定藥可識別阿茲海默症之嚴重程度為輕度、或中等度、重度之任一種。因此，於本發明中，阿茲海默症之「判定」係以包括如下內容之含義使用：不僅進行是否已罹患阿茲海默症之判定、目前罹患阿茲海默症之可能性是否較高之判定，亦判定尚未罹患阿茲海默症，但於不久之將來罹患之可能性是否較高。
4.用以判定阿茲海默症之套組
本發明提供一種用以判定阿茲海默症之套組。於本發明之套組中，包含用以測定S38AA短片段量之試劑。藉由使用本發明之套組而測定S38AA短片段量，可判定阿茲海默症。
本發明之套組包含作為可對S38AA短片段進行定量之單一或複數種抗體之組合的抗S38AA抗體，具體而言，可列舉：特異性地識別S38AA短片段之抗體、或者識別S38AA長片段且不識別S38AA短片段之抗體、以及識別S38AA長片段及S38AA短片段兩者之抗體之組合。作為識別S38AA長片段且不識別S38AA短片段之抗體，例如可列舉上述識別S38AA長片段之N末端側區域之抗體。又，作為識別S38AA長片段及S38AA短片段兩者之抗體，可列舉識別S38AA長片段與S38A短片段共通之C末端側區域之抗體。
作為本發明之套組中所使用之抗體，較佳可例舉的是長片段用抗體、抗體A、抗體B及/或抗體C。
又，抗體亦可為螢光標記抗體、酵素標記抗體、抗生蛋白鏈菌素標記抗體、生物素標記抗體或放射性標記抗體。
抗S38AA抗體通常於以成為適當之濃度之方式溶解於水或適當之緩衝液(例如TE緩衝液、PBS等)中而成之水溶液之態樣、或冷凍乾燥品之態樣下包含於本發明之套組中。
又，於測定S38AA短片段及/或S38AA長片段量時，可藉由1種抗體進行測定，亦可使用複數種、較佳為2種抗體進行測定(例如三明治ELISA法等)。
本發明之套組亦可根據S38AA短片段之測定方法，進而包含該方法之實施所需之其他成分作為構成。例如於藉由西方印跡法進行測定之情形時，本發明之套組可進而包含印跡緩衝液、標記化試劑、印跡膜等檢測試劑、標準液等。此處，作為「標準液」，可列舉以成為特定之濃度之方式將S38AA短片段及/或S38AA長片段之純化標準試樣、例如本發明之肽溶解於水或適當之緩衝液(例如TE緩衝液、含有胎牛血清之PBS等)中而成之水溶液。
又，於藉由三明治ELISA進行測定之情形時，本發明之套組除上述以外，亦可進而包含固層化抗體測定板、清洗液等。於藉由包含乳膠凝集法之凝集法進行測定之情形時，可包含經抗體塗覆之乳膠、明膠等。於藉由化學螢光法、化學螢光電子法進行測定之情形時，可包含結合有抗體之磁性粒子、適當之緩衝液。於使用LC/MS、LC-MS/MS或免疫層析法之S38AA之檢測中，可包含經抗體塗覆之管柱或微管柱、微晶片作為檢測機器之一部分。進而，若為時間分辨螢光測定法或與其類似之螢光測定法，則亦可包含複數種標幟化之抗S38AA抗體及必需之其他成分作為構成。
作為本發明之套組，例如可列舉以下者。再者，關於下述套組中所包含之抗體，可為標記化者(例如藉由過氧化酶或生物素之標記等)，於未標記化之情形時，可另外包含用以與抗體結合而標記該抗體之標記化抗體。
1)1種或2種「特異性地識別S38AA短片段之抗體」、清洗液、顯色試劑、反應終止液、稀釋用緩衝液及標準液；
2)1種或2種「識別S38AA長片段之N末端側區域之抗體」、1種或2種「識別S38AA長片段之C末端側區域之抗體(即識別S38AA長片段及S38AA短片段共通之C末端側區域之抗體)」、清洗液、顯色試劑、反應終止液、稀釋用緩衝液及標準液；
3)「特異性地識別S38AA短片段之第一抗體」、「識別S38AA短片段之第二抗體」、清洗液、顯色試劑、反應終止液、稀釋用緩衝液及標準液；
4)「識別S38AA長片段之N末端側區域之第1抗體」及「識別S38AA長片段之第2抗體」、1種或2種「識別S38AA長片段之C末端側區域之抗體(即識別S38AA長片段及S38AA短片段共通之C末端側區域之抗體)」、清洗液、顯色試劑、反應終止液、稀釋用緩衝液及標準液。
此處，作為「特異性地識別S38AA短片段之抗體」、「特異性地識別S38AA短片段之第一抗體」、及「識別S38AA短片段之第二抗體」，較佳可例舉的是抗體A、抗體B及抗體C。
此處，作為「識別S38AA長片段之N末端側區域之抗體」及「識別S38AA長片段之N末端側區域之第1抗體」，較佳可例舉的是「長片段用抗體」。
此處，作為「識別S38AA長片段之C末端側區域之抗體(即識別S38AA長片段及S38AA短片段共通之C末端側區域之抗體)」，較佳可例舉的是抗體A、抗體B及抗體C。作為可特異性地檢測S38AA長片段及S38AA短片段之抗S38AA長片段抗體及抗S38AA短片段抗體，例如可列舉「2.本發明之抗體」中所詳述之抗體。
5.本發明之方法
(1)阿茲海默症之判定及試驗方法
如上所述，本發明者等人首先發現於AD患者之血液中，於S38AA之膜外部分受到切斷所產生之S38AA長片段量上升，進而發現於AD患者之血液中，存在特異性地切斷該長片段之酵素或該酵素之活性較高，或者因於S38AA之膜外部分直接被切斷而產生之S38AA短片段量大幅上升，且不論阿茲海默症之嚴重程度(認知功能障礙之發展度)為輕度、中等度/重度，血中之S38AA短片段量均上升，進而，於中等度及重度下高於輕度，並且發現該S38AA短片段量作為高精度之阿茲海默症之發病或預備群之判定、及阿茲海默症之進行之程度之判定的指標具有極高之可靠性。
因此，本發明提供一種藉由檢測自受檢動物採取之試樣中之S38AA短片段而判定阿茲海默症、例如輕度或中等度/重度之阿茲海默症的方法。
本發明之判定方法不僅可進行是否罹患阿茲海默症之判定、目前罹患該疾病之可能性是否較高之判定，亦可進行雖然尚未罹患該疾病，但於不久之將來罹患之可能性是否較高之判定。
又，本發明亦提供一種藉由檢測自受檢動物採取之試樣中之S38AA短片段而對目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性進行試驗的方法。
上述可能性之判定及試驗(結果)至少對輔助醫師進行阿茲海默症之確診有用。
本發明之判定及試驗方法之特徵在於檢測自受檢動物採取之試樣中之S38AA短片段。又，本發明之判定及試驗方法例如可包括(i)對自受檢動物採取之試樣中之S38AA短片段進行定量之步驟、及(ii)將藉由(i)所定量之S38AA短片段之量與自健康動物採取之試樣中之S38AA短片段之量(以下，稱為「對照值」)進行比較之步驟作為具體之步驟。
作為(ii)之比較之結果，於藉由(i)所定量之S38AA短片段之量大於對照值之情形時，表示上述受檢動物罹患阿茲海默症、或者有目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性。
進而，本發明之判定及試驗方法除上述步驟以外，亦可包括如下步驟：(iii)基於(ii)之結果，於藉由(i)所定量之S38AA短片段之量大於對照值之情形時，判定上述受檢動物罹患阿茲海默症、或者有目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性。
進而，如上所述，不論阿茲海默症之嚴重程度(認知功能障礙之發展度)為輕度、中等度、重度，血中之S38AA短片段之值均上升，進而，於中等度及重度下高於輕度，故而本發明提供一種輔助阿茲海默症之發展度之判定之方法。
本發明之輔助判定之方法之特徵亦在於檢測自受檢動物採取之試樣中之S38AA短片段。又，本發明之輔助判定之方法例如可包括(i)對自罹患阿茲海默症或有罹患阿茲海默症之可能性之受檢動物採取之試樣中之S38AA短片段進行定量之步驟、及(ii)將藉由(i)所定量之S38AA短片段之量與自該受檢動物過去所採取之試樣中之S38AA短片段之量(以下，稱為「對照值」)進行比較之步驟作為具體之步驟。
作為(ii)之比較之結果，於藉由(i)所定量之S38AA短片段之量大於對照值之情形時，表示上述受檢動物之阿茲海默症正在發展或者罹患阿茲海默症之可能性較高，於小於對照值之情形時，表示上述受檢動物之阿茲海默症正在改善或者未罹患阿茲海默症之可能性較高。
本發明之輔助判定之方法除上述步驟以外，亦可包括如下步驟：(iii)基於(ii)之結果，
於藉由(i)所定量之S38AA短片段之量大於對照值之情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在發展，於小於對照值之情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在改善。
而且，如上所述，不論阿茲海默症之嚴重程度(認知功能障礙之發展度)為輕度、中等度、重度，血中之S38AA短片段量均上升，進而，於中等度及重度下高於輕度，故而本發明亦提供一種對阿茲海默症之治療中之患者或用以預防阿茲海默症之發病之治療中之阿茲海默症預備群評估其治療效果的方法。
本發明之評估治療效果之方法之特徵亦在於檢測自受檢動物採取之試樣中之S38AA短片段。又，本發明之評估治療效果之方法例如可包括(i)對自開始阿茲海默症之投藥治療或用以預防阿茲海默症之發病之投藥治療之受檢動物採取之試樣中之S38AA短片段進行定量之步驟、及(ii)將藉由(i)所定量之S38AA短片段之量與自該受檢動物過去所採取之試樣(例如於投藥治療開始前採取之試樣、於投藥治療開始後且(i)之採取時間前採取之試樣)中之S38AA短片段之量(以下，稱為「對照值」)進行比較之步驟作為具體之步驟。
作為(ii)之比較之結果，於藉由(i)所定量之S38AA短片段之量大於對照值之情形時，表示目前之投藥治療(或選定之治療藥)無效，於小於對照值之情形時，表示目前之投藥治療(或選定之治療藥)有效。
本發明之評估治療效果之方法除上述步驟以外，亦可包括如下步驟：(iii)基於(ii)之結果，於藉由(i)所定量之S38AA短片段之量大於對照值之情形時，評估為目前之投藥治療(或選定之治療藥)無效，於小於對照值之情形時，評估為目前之投藥治療(或選定之治療藥)有效。
於本說明書中，投藥治療中所使用之治療藥係不僅包含已批准且上市之治療藥，亦包含臨床試驗中之臨床試驗藥之概念。即，本發明之評估治療效果之方法亦可用於臨床試驗中之藥效之監控等。
可成為本發明之方法之受檢對象之動物只要為表現S38AA者，則並無特別限制，例如可列舉：哺乳動物(例如人類、猴、牛、豬、馬、狗、貓、綿羊、山羊、兔、倉鼠、豚鼠、小鼠、大鼠等)、鳥類(例如雞等)等。較佳為哺乳動物，更佳為人類。
成為試樣之源自受檢動物之生物體試樣並無特別限定，例如可列舉：血液、血清、血漿、唾液、淚液、尿、腦脊髓液等。更佳為血漿或腦脊髓液。
血清或血漿可藉由按照常規方法自受檢動物採血，分離液性成分而製備。腦脊髓液可藉由脊椎穿刺等公知之方法採取。
試樣中之S38AA長片段及S38AA短片段之檢測(定量)可藉由公知之方法實施。例如可藉由供於西方印跡法、凝膠電泳(例如SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳)、二維凝膠電泳等)、或各種分離純化法(例如離子交換層析法、疏水性層析法、凝膠過濾層析法、親和層析法、逆相層析法、等電點層析法、毛細管電泳等)、離子化法(例如電子衝擊電離化法、場解吸法、二次離子化法、高速原子碰撞法、基質輔助雷射解吸離子化(MALDI)法、電灑離子化法等)、質譜儀(例如雙聚焦質譜儀、四極質譜儀、飛行時間質譜儀、傅立葉變換質譜儀、離子回旋質譜儀等)等而進行。又，藉由應用該等測定原理之測定裝置之檢測(定量)亦包含於本發明之方法中。
又，S38AA長片段及S38AA短片段之檢測(定量)亦可藉由公知之免疫化學方法(散射比濁法、競爭法、免疫測定法、化學螢光法、化學螢光電子法及三明治法等)實施。該等免疫化學方法例如可參照入江寬編「放射免疫測定法」(講談社，1974年發行)、入江寬編「放射免疫測定法續」(講談社，1979年發行)、石川榮治等人編「酵素免疫測定法」(第3版)(醫學書院，1987年發行)、「Methods in ENZYMOLOGY」Vol. 121(Immunochemical Techniques(Part I: Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodies))(Academic Press公司發行)等。
作為具體之S38AA長片段及S38AA短片段之檢測(定量)方法，可自使用「識別S38AA長片段及S38AA短片段共通之C末端側區域之抗體」所獲得之試樣中之S38AA長片段及S38AA短片段之測定值，減去僅使用「識別S38AA長片段之N末端側區域之抗體」、或者組合使用「識別S38AA長片段之N末端側區域之抗體」與「識別S38AA長片段之C末端側區域之抗體」所獲得之試樣中之S38AA長片段之測定值，藉此對S38AA短片段量進行定量，可將藉由相同之方法所獲得之測定值作為S38AA短片段量相對於S38AA長片段量之比定量，亦可使用本發明之「特異性地識別S38AA短片段之抗體」，直接對S38AA短片段量進行定量。作為可特異性地檢測S38AA長片段及S38AA短片段之抗S38AA長片段抗體及抗S38AA短片段抗體，例如可列舉「2.本發明之抗體」中所詳述之抗體。
此處，作為「識別S38AA長片段及S38AA短片段共通之C末端側區域之抗體」，較佳可例舉的是抗體A、B及C。
作為「識別S38AA長片段之N末端側區域之抗體」，較佳可例舉的是「長片段用抗體」。
作為「識別S38AA長片段之C末端側區域之抗體」，較佳可例舉的是抗體A、B及C。
作為「特異性地識別S38AA短片段之抗體」，較佳可例舉的是抗體A、B及C。
作為本發明中之測定方法，例如可列舉「長ELISA」。「長ELISA」係檢測(定量)S38AA長片段之量之方法，具有係使用「長片段用抗體」、及「選自由抗體A、B及C所組成之群中之至少一種抗體」之三明治ELISA法的特徵。
作為本發明中之測定方法，例如可列舉「全ELISA」。「全ELISA」係檢測(定量)「S38AA長片段及S38AA短片段之總量」之方法，具有係使用「選自由抗體A、B及C所組成之群中之至少兩種抗體」之三明治ELISA法的特徵。
作為本發明中之「檢測(定量)S38AA短片段之量之方法」，可列舉自上述「全ELISA中之測定結果(定量值)」減去「長ELISA中之測定結果(定量值)」之方法。
作為本發明之方法中所使用之「對照值」，可使用對照試樣中之S38AA短片段量、或者預先對對照等所測定或設定之S38AA短片段量，無須與本發明之方法同時進行測定。
此處，為了設定對照值，亦可使用複數個個體作為對照群，使用複數個個體之測定值之平均值作為對照值。即，使用已取得之來自對照群(健康動物、罹患處於特定之發展度之阿茲海默症之動物等)之對照試樣中之S38AA短片段量作為對照值來進行上述判定等亦包含於本發明之方法之範疇。
例如於使用源自健康動物之試樣作為對照試樣之情形時，於受檢試樣中之S38AA短片段量多於對照試樣中之該量之情形時，可判定或確定為罹患阿茲海默症、或者有目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性。
又，藉由使用源自罹患處於特定之發展度之阿茲海默症之動物之試樣作為對照試樣，於受檢試樣中之S38AA短片段量多於對照試樣中之該量之情形時，可判定或確定為阿茲海默症之發展度高於作為對照之罹患該疾病之動物之發展度。
進而，藉由使用自採取受檢試樣之受檢動物過去所採取之試樣作為對照試樣，於受檢試樣中之S38AA短片段量多於對照試樣中之該量之情形時，可判定阿茲海默症正在發展，於少於對照試樣中之該量之情形時，可判定該疾病正在改善。
而且，藉由使用源自阿茲海默症發病之動物之對照試樣及源自健康動物之對照試樣等複數個對照試樣，亦能夠以受檢試樣中之S38AA短片段量大於源自健康動物之對照試樣且小於源自阿茲海默症發病之動物之對照試樣作為指標，判定為阿茲海默症預備群、即雖然尚無法確診該疾病正在發病，但Aβ或Tau蛋白開始累積，於不久之將來阿茲海默症發病之可能性較高。
又，藉由使用自採取受檢試樣之開始阿茲海默症之投藥治療之受檢動物過去所採取之試樣作為對照試樣，亦能夠於受檢試樣中之S38AA短片段量多於對照試樣中之該量之情形時，評估為目前之投藥治療無效，於少於對照試樣中之該量之情形時，評估為該投藥治療有效。
於「自受檢動物採取之試樣中之序列編號1之多肽」大於「自健康動物採取之試樣中之序列編號1之多肽之量(對照值)」的情形時，可判定受檢動物有目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性。
作為「自受檢動物採取之試樣中之序列編號1之多肽」之量，較佳可例舉的是對照值之1.1倍～10倍。更佳可例舉的是1.1倍～8倍。進而較佳可例舉的是1.2～5倍。最佳可例舉的是1.2倍～3倍。
於「自受檢動物採取之試樣中之序列編號1之多肽」大於「自受檢動物過去所採取之試樣中之上述多肽之量(對照值)」的情形時，可判定受檢動物之阿茲海默症正在發展。
作為「自受檢動物採取之試樣中之序列編號1之多肽」之量，較佳可例舉的是對照值之1.1倍～10倍。更佳可例舉的是1.1倍～8倍。進而較佳可例舉的是1.2～5倍。最佳可例舉的是1.2倍～3倍。
於「自受檢動物採取之試樣中之序列編號1之多肽」小於「自受檢動物過去所採取之試樣中之上述多肽之量(對照值)」的情形時，可判定受檢動物之阿茲海默症正在改善。
作為「自受檢動物採取之試樣中之序列編號1之多肽」之量，較佳可例舉的是對照值之0.1倍～0.9倍。更佳可例舉的是0.2倍～0.9倍。進而較佳可例舉的是0.3～0.9倍。最佳可例舉的是0.4倍～0.9倍。
S38AA短片段之定量分析可藉由以標準蛋白(內標蛋白)之量將試樣中之S38AA短片段量進行標準化而實施。即，只要使用上述方法，對試樣中之S38AA短片段量及標準蛋白之量進行定量後，算出兩者之訊號之比(S38AA短片段/標準蛋白)，以與標準蛋白之存在量之比表示試樣中之S38AA短片段量即可。
標準蛋白只要為恆常地表現一定量之蛋白即可，較佳為於大量之組織或細胞中共通表現之蛋白。例如可列舉：細胞之生存必需之蛋白、例如RNA合成酵素、能量生成系統酵素、核糖體之蛋白、細胞骨架蛋白等由基因(管家基因)編碼之蛋白。具體而言，例如可列舉：β肌動蛋白、甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)、β微管蛋白等蛋白，但並無特別限定。尤佳可例舉的是β肌動蛋白。
又，亦可預先設定血中之S38AA短片段量之與阿茲海默症或輕度認知障礙相關之臨界值以代替上述對照值，將受檢動物之血中之S38AA短片段量與該臨界值進行比較。
例如於受檢動物之血中之S38AA短片段量為臨界值以上之情形時，可判定受檢動物罹患阿茲海默症、或者具有目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性。
「臨界值」係於以該值作為基準進行疾病之判定之情形時，可滿足較高之診斷感度(有病正診率)及較高之診斷特異度(無病正診率)兩者之值。例如可將於阿茲海默症發病之個體中表現出較高之陽性率且於阿茲海默症未發病之個體中表現出較高之陰性率的值設定為臨界值。
臨界值之算出方法係於該領域中所周知。例如算出阿茲海默症發病之個體及阿茲海默症未發病之個體中之血中之S38AA短片段量，求出所算出之值之診斷感度及診斷特異度，基於該等值，使用市售之分析軟體而製作ROC(Receiver Operating Characteristic，受試者工作特徵)曲線。然後，可求出診斷感度及診斷特異度儘可能接近100%時之值，將該值設為臨界值。又，例如亦較佳為將多數健康動物中之血中之S38AA短片段量之「平均值＋2標準偏差」設為臨界值，若使用該值，則可以良好之感度及特異性判定阿茲海默症發病。又，例如根據ROC曲線求出診斷感度與診斷特異度之概似比成為最大之值，將該值設為臨界值，藉此可高感度地判定阿茲海默症。或者亦較佳為將ROC曲線中診斷能力最低之點、即最遠離ROC曲線下面積成為0.5之線之點設為臨界值，即計算「感度＋特異度－1」，將該值成為最大值之點設為臨界值。
作為本案說明書之藉由重組蛋白換算之S38AA短片段量之臨界值，例如可列舉45～75單元。較佳可例舉的是49～69單元作為臨界值。更佳可例舉的是54～64單元作為臨界值。更佳可例舉的是56～62單元作為臨界值。進而較佳可例舉的是58～61單元作為臨界值。最佳可例舉的是59單元作為臨界值。
關於作為臨界值之其他較佳之值，可列舉：45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74及75單元。
作為生物內所包含之S38AA短片段量之臨界值，例如可列舉45～75 ng/mL。較佳可例舉的是49～69 ng/mL作為臨界值。更佳可例舉的是54～64 ng/mL作為臨界值。更佳可例舉的是56～62 ng/mL作為臨界值。進而較佳可例舉的是58～61 ng/mL作為臨界值。最佳可例舉的是59 ng/mL作為臨界值。
關於作為臨界值之其他較佳之值，可列舉：45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74及75 ng/mL。
本發明之方法於阿茲海默症之判定等時，除S38AA短片段以外，亦可調查其他阿茲海默症之診斷標記物之變動。作為其他阿茲海默症之診斷標記物，例如可列舉：正研究作為血漿生物標記物之可能性之Aβ、升半胱胺酸、神經纖毛、各種炎症相關蛋白(C反應性蛋白、IL-1β、TNF、IL-6及TGFβ)、膽固醇、Tau、磷酸化Tau等公知之標記物，該等可按照周知慣用之檢測法進行檢測。
(2)阿茲海默症之治療及預防方法
於上述本發明之阿茲海默症之判定方法等中，於判定受檢動物罹患阿茲海默症、具有目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性之情形時，基於該判定結果，決定應當對該受檢動物投予之阿茲海默症治療藥或預防藥，對該受檢動物投予治療有效量之該治療藥或預防藥，藉此可治療或預防阿茲海默症。
於本說明書中，「阿茲海默症治療藥」不僅包含以阿茲海默症之根治治療作為目的之醫藥，例如亦包含以阿茲海默症之進行抑制作為目的之醫藥，該以進行抑制作為目的之醫藥可用作「阿茲海默症預防藥」。
作為阿茲海默症治療藥，例如可列舉：膽鹼酯酶抑制藥、NMDA受體拮抗藥、β澱粉樣蛋白去除藥及產生抑制藥、以及Tau蛋白去除藥及產生抑制藥。
作為膽鹼酯酶抑制藥，例如可列舉：多奈哌齊、加蘭他敏、利凡斯的明、石杉鹼甲A、及他克林。
作為NMDA受體拮抗藥，例如可列舉美金剛。
作為β澱粉樣蛋白去除藥及產生抑制藥，例如可列舉：β澱粉樣蛋白疫苗、β澱粉樣蛋白去除抗體、β澱粉樣蛋白產生酵素抑制劑、β澱粉樣蛋白凝集抑制劑及β澱粉樣蛋白分解促進劑。具體而言，可列舉：CNP-520、E-2609、aducanumab、蘇蘭珠單抗、gantenerumab、克雷內治單抗、amilomotide、ASD-005、HSH-971、ELND-005、ALZT-OP1、尼伐地平、ACI-24、UB-311、AFFITOPE AD-02、LY-3002813、BAN-2401、Neurostem-AD、CT-1812、ID-1201、NIC5-15、BI-425809、Posiphen、PQ-912、苔蘚蟲素-1、Apabetalone、PBT-2、RIV-1061-IR、MEDI-1814、PF-05236812、SAR-228810、Lu-AF20513、PRI-002、IRX-4204、GC-021109、AAD-2004、CTS-21166、LY-3323795、苯磷硫胺、bisnorcymserine、MDR-1339、KHK-6640及NPT-088。
作為Tau蛋白去除藥及產生抑制藥，例如可列舉：Tau蛋白疫苗、Tau蛋白去除抗體、Tau蛋白修飾抑制劑、Tau蛋白凝集抑制劑、及Tau蛋白分解促進劑。具體而言，可列舉：TRx-237、TPI-287、ABBV-8E12、RG-6100、AADvac1、RO7105705、PTI-80、JNJ-63733657、UCB-0107、BIIB-076、MC-1、ACI-35及AZP-2006。
上述治療藥可配合患者之症狀，適當組合而使用。
6.本發明之治療藥
上述阿茲海默症治療藥由於根據其症狀之嚴重程度(輕度、中等度、重度等)可使用者不同，故而可使用上述本發明之輔助阿茲海默症之發展度之判定之方法的判定結果，決定應當對受檢動物投予之治療藥。
因此，本發明提供一種用於已判定阿茲海默症之發展度之受檢動物(患者)之阿茲海默症治療藥。
又，如上所述，於AD患者之血液中S38AA短片段量大幅上升，且血中之S38AA長片段量與阿茲海默症之嚴重程度(認知功能障礙之發展度)之間存在正相關，故而本發明提供一種阿茲海默症之治療藥或預防藥，其含有減少阿茲海默症患者或有罹患阿茲海默症之可能性者(人類)之生物體內之S38AA短片段之量的藥劑、或者抑制阿茲海默症患者或有罹患阿茲海默症之可能性者(人類)之生物體內之S38AA短片段之產生的藥劑作為有效成分。此處，作為患者或有罹患可能性者之生物體內之S38AA短片段之量，可列舉患者或有罹患可能性者之生物體內組織或體液中所包含之S38AA短片段之量，具體而言，可列舉：血液、腦脊髓液、尿、唾液或淚液等。
作為減少S38AA短片段之量之藥劑，例如可列舉中和抗體，藉由與患者或有罹患可能性者之生物體內之S38AA短片段進行結合，可減少生物體中之游離之S38AA短片段。作為抑制S38AA短片段之產生之藥劑，例如可列舉切斷S38AA長片段而產生38AA短片段之酵素之抑制劑，各者本身可藉由業者所周知之方法而取得。
7.阿茲海默症之治療藥或預防藥之候選物質之篩選方法
本發明提供一種以受檢物質是否去除S38AA短片段或者是否抑制S38AA短片段之生成作為指標的篩選阿茲海默症之治療藥或預防藥之候選物質之方法、及可藉由該方法取得之物質。於本發明之篩選方法中，篩選降低血中之S38AA短片段之量之物質、或下調S38AA短片段之生成之物質作為阿茲海默症之治療藥或預防藥之候選物質。
供於本發明之篩選方法之受檢物質可為任意公知化合物及新穎化合物，例如可列舉：核酸、糖類、脂質、蛋白、肽、有機低分子化合物、使用組合化學技術所製作之化合物庫、隨機肽庫、或源自微生物、動植物、海洋生物等之天然成分等。
本發明之篩選方法例如可包括如下步驟：(i)使受檢物質與可測定S38AA短片段之生成之細胞接觸；(ii)測定接觸受檢物質之細胞中之S38AA短片段之生成量，將該生成量與不接觸受檢物質之對照細胞中之S38AA短片段之生成量進行比較；及(iii)基於(ii)之比較結果，篩選下調S38AA短片段之生成量之受檢物質作為阿茲海默症之治療藥或預防藥之候選物質。
又，本發明之篩選方法例如亦可包括如下步驟：(i)使受檢物質與生成S38AA短片段之酵素接觸；(ii)測定接觸受檢物質之酵素中之S38AA短片段之生成量，將該生成量與不接觸受檢物質之對照酵素中之S38AA短片段之生成量進行比較；及(iii)基於(ii)之比較結果，篩選下調S38AA短片段之生成量之受檢物質作為阿茲海默症之治療藥或預防藥之候選物質。作為上述酵素之受質，只要生成S38AA短片段，則並無特別限定，例如可列舉：S38AA、S38AA長片段、S38AA片段等。
進而，例如亦可包括如下步驟：(i)使受檢物質與S38AA短片段接觸；(ii)測定接觸受檢物質後殘存之游離之S38AA短片段之存在量，將該游離之S38AA短片段量與不接觸受檢物質之情形時之游離之S38AA短片段量進行比較；及(iii)基於(ii)之比較結果，篩選與S38AA短片段結合，下調游離之S38AA短片段量之受檢物質作為阿茲海默症之治療藥或預防藥之候選物質。該方法可藉由於包含上述生成S38AA短片段之酵素及其受質之系統中添加受檢物質而進行，亦可藉由於預先準備之包含S38AA短片段之系統中添加受檢物質而進行。又，於(i)之使受驗物質與S38AA短片段接觸之步驟中，可藉由該接觸使S38AA短片段沈澱(例如免疫沈澱等)。
本發明之篩選方法中所使用之「細胞」係指可評估測定對象之S38AA短片段之生成水準的細胞。作為該細胞，可列舉：可天然生成測定對象之S38AA短片段之細胞、藉由施加刺激而可生成S38AA短片段之S38AA表現細胞、或以可生成S38AA短片段之方式進行基因重組而成之細胞等。
可天然生成S38AA短片段之細胞並無特別限定，作為該細胞，可使用哺乳動物(例如人類、小鼠等)之初代培養細胞、自該初代培養細胞誘導之細胞株等。公知S38AA於U251細胞或SHSY-5Y細胞中表現，S38AA亦於BE(2)-C細胞、SK-N-MC細胞中表現。亦能夠使用公知技術，製作使S38AA、或FLAG標籤等標幟化S38AA等過度表現之基因重組細胞。S38AA表現細胞藉由培養而經過S38AA之切斷等，S38AA短片段游離。於生成之S38AA短片段之量較少之情形時，藉由適當地於S38AA容易被切斷等之條件下培養，可測定S38AA短片段之生成。作為S38AA容易被切斷等之條件，例如可列舉利用消耗葡萄糖之培養基、或包含已知生理上對腦造成刺激之物質之培養基進行培養。作為該物質，具體而言，可例示：TNFα、干擾素γ、介白素1、介白素6等細胞激素、β澱粉樣蛋白或其凝集體等。
受檢物質與可測定S38AA短片段之生成之細胞之接觸係於培養基中進行。培養基係根據可測定S38AA短片段之生成之細胞適當選擇，例如為包含約5～20%之胎牛血清之最低必需培養基(MEM)、杜爾貝科改良伊格爾培養基(DMEM)等。培養條件亦同樣地適當決定，例如培養基之pH值為約6～約8，培養溫度通常為約30～約40℃，培養時間為約0.1～約72小時。
又，受檢物質與生成S38AA短片段之酵素之接觸係於包含該酵素及其受質之反應系統中進行。反應系統之酵素濃度、受質濃度、pH值、溫度等、酵素受質、反應時間等可適當設定。
此處，作為生成S38AA短片段之酵素，可使用包含該酵素之溶液。作為該溶液，可列舉：可生成S38AA短片段之體液(血漿等)、器官/組織萃取物、及細胞萃取物等。
S38AA短片段之生成量之測定可藉由按照(5.本發明之方法)之項中所述之方法測定細胞之培養上清液中或反應系統中游離之S38AA短片段量而進行。
生成量之比較較佳為可基於有意義差之有無而進行。再者，不接觸受檢物質之對照細胞或酵素中之S38AA短片段之生成量可為相對於接觸受檢物質之細胞或酵素中之S38AA短片段之生成量之測定事先測定之生成量，亦可為同時測定之生成量。
藉由本發明之篩選方法所獲得之物質作為用以開發新穎阿茲海默症之治療藥或預防藥之候選物質有用。
[實施例]
以下，列舉實施例詳細地說明本發明，但本發明不受該等任何限定。
實施例1：人類血漿中S38AA長片段之N末端切斷部位之鑑定
藉由聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離源自AD患者之血漿中蛋白後，切出包含S38AA片段之凝膠片，於藉由胰蛋白酶進行凝膠內消化後，藉由液體層析法-質譜法(LC-MS/MS)進行分析，對測定資料進行MASCOT資料庫調查(database search)，確定S38AA片段之N末端之序列。
作為具體之操作，將混合複數名AD患者之血漿所得之樣本應用於4-12% Bis-Tris凝膠(invitrogen)，藉由SDS-PAGE(25 mA、110分鐘、MOPS(morpholineopropanesulfonic acid，嗎啉丙磺酸)緩衝液)實施蛋白之分離。藉由考馬斯亮藍染色將凝膠染色後，切出於80-100 kDa出現之帶，前進至消化步驟。
將切出之凝膠片放入至96孔微量盤，添加乙腈，進行減壓離心乾燥，加入10 mM之DTT(dithiothreitol，二硫蘇糖醇)/100 mM之NH4
HCO3
，進行培養。去除溶劑後，加入55 mM之ICH2
CONH2
/100 mM之NH4
HCO3
，進行培養。去除溶劑後，加入100 mM之NH4
HCO3
，對凝膠進行減壓離心乾燥，加入0.1% RapiGest/25 mM之NH4
HCO3
，進行培養。其後，進行減壓離心乾燥，添加酵素溶液(50 mM之NH4
HCO3
、12.5 ng/μL之胰蛋白酶)，進行酵素消化。反應後，將肽溶液轉移至另一96孔微量盤，將乙腈：milliQ：三氟乙酸(TFA)＝500：500：1之混合溶劑加入至凝膠中，將所獲得之肽萃取液進行減壓濃縮。於其中加入TFA，進行減壓濃縮，獲得MS分析用樣本。
將所獲得之樣本藉由LC-MS/MS進行分析。針對藉由Orbitrap質譜儀所獲得之資料，對S38AA蛋白之胺基酸序列實施MASCOT資料庫調查，結果鑑定出S38AA蛋白之胺基酸序列中之複數種肽片段(圖1)。該等序列中位於最靠N末端側之肽係第399號至第413號之胺基酸序列，觀察到表示該序列之MS/MS光譜(圖2)。又，該切斷部位位於第398號之絲胺酸(S)之C末端側。消化酵素胰蛋白酶之切斷係特異性地切斷離胺酸(K)或精胺酸(R)之C末端之酵素，於本片段之絲胺酸(S)之C末端側不發生切斷反應，故而提示已於該部位被切斷。藉由檢測出本肽片段，可知純化之S38AA片段之N末端側係於第398號至第399號S/E被切斷。將此處鑑定之S38AA片段稱為S38AA長片段。
實施例2：人類血漿中S38AA短片段之N末端切斷部位之鑑定
於利用藉由識別S38AA長片段之N末端之源自兔之抗S38AA多株抗體(亦稱為「MBL」、「S38AA長片段用抗體」或「長片段用抗體」)進行之免疫沈澱法去除S38AA長片段後，使用源自小鼠之抗S38AA單株抗體A(以S38AA片段之C末端胺基酸序列之一部分肽作為免疫源而建立抗體產生融合瘤，進行分離純化而成者；抗體A)、源自小鼠之抗S38AA單株抗體B(以S38AA片段之C末端胺基酸序列之一部分肽作為免疫源而建立抗體產生融合瘤，進行分離純化而成者；抗體B)、或源自小鼠之抗S38AA單株抗體C(以S38AA長片段之大腸桿菌重組蛋白作為免疫源而建立抗體產生融合瘤，進行分離純化而成者；抗體C)，使殘存之S38AA片段免疫沈澱，將其組分藉由逆相管柱進行純化，藉由胰蛋白酶消化後，藉由LC-MS/MS進行分析，確定該S38AA片段之N末端之序列。
作為具體之操作，於AD患者之血漿之混合物中加入包含蛋白酶抑制劑(cOmplete Tablets Mini，Roche)之PBS，進而加入Protein G Mag Sepharose Xtra(磁珠，GE healthcare)，進行混合，藉此去除內源性免疫球蛋白。於去除磁珠後之上清液中添加長片段用抗體，實施抗原抗體反應。混合後，重新加入磁珠，去除包含長片段用抗體及吸附於抗體之S38AA長片段之回收蛋白。於去除磁珠後之上清液中添加上述抗體A、B或C，實施抗原抗體反應。混合後，重新加入磁珠，其後回收磁珠，藉此獲得該抗體及吸附於該抗體之S38AA片段。向藉由免疫沈澱所回收之磁珠添加8 M之脲/1%TFA溶液，使S38AA片段溶出。將所獲得之包含S38AA片段之溶液進行濃縮，將全量藉由逆相管柱(ZORBAX 300SB-C3，4.6×150 mm附保護管柱，Agilent)進行分離。分離條件如下表1所示。利用藉由識別S38AA片段之C末端側區域之2種抗體進行的三明治ELISA而測定所獲得之各組分，藉由酵素溶液(1 M之NH4
HCO3
、10 mM之CaCl2
、1 ng/μL之胰蛋白酶)消化包含S38AA片段之組分，將所獲得之肽藉由GL-tip SDB及GL-Tip GC(GL Science)進行濃縮。
將所獲得之肽藉由LC-MS/MS進行分析。針對藉由Q-Exactive HF質譜儀所獲得之資料，對SwissProt資料庫實施MASCOT資料庫調查，結果以最高之得分鑑定出S38AA，鑑定出複數種肽片段(圖3)。該等序列中位於最靠N末端側之肽係第617號至第627號之序列，觀察到表示該序列之MS/MS光譜(圖4)。又，該切斷部位位於第616號之天冬醯胺(N)之C末端側。消化酵素胰蛋白酶之切斷係特異性地切斷離胺酸(K)或精胺酸(R)之C末端之酵素，於本片段之天冬醯胺(N)之C末端側不發生切斷反應，故而表示已於該部位被切斷。藉由檢測出本肽片段，可知純化之S38AA片段於第617號至第618號之N/G被切斷。將此處鑑定之S38AA片段稱為S38AA短片段。
[表1]
| 表1 逆相管柱純化分離條件 | |
| 流量1 ml/min | Temp 70 |
| A：0.1%TFA/H2 O | |
| B：0.1%TFA/乙腈 | |
| 梯度條件 min | %B |
| 0 | 20 |
| 40 | 80 |
| 41 | 95 |
| 46 | 95 |
| 47 | 20 |
| 57 | 20 |
實施例3：人類血漿中S38AA長片段之C末端切斷部位之鑑定
利用藉由實施例2中所使用之「源自兔之S38AA長片段用多株抗體(長片段用抗體)」進行之抗體管柱純化法分取S38AA長片段，藉由SDS-PAGE分離其組分後，切出包含S38AA長片段之凝膠片，於藉由胰蛋白酶進行凝膠內消化後，藉由LC-MS/MS進行分析，對測定資料進行MASCOT資料庫調查，確定S38AA長片段之C末端之片段之序列。
作為具體之操作，於混合複數名AD患者之血漿所得之樣本中添加50 mM之Tris-HCl/0.05% Tween-20(pH值7.4)，應用於陰離子交換管柱純化(Hitrap Q FF，GE healthcare)。繼而，藉由50 mM之磷酸/0.05% Tween-20/500 mM之NaCl(pH值7.4)溶出。將溶出組分應用於結合有長片段用抗體之管柱(HiTrap NHS活化HP管柱，GE healthcare)。將管柱藉由PBS-T進行清洗後，藉由0.1 M之甘胺酸(Glycine)-HCl/0.05% Tween-20(pH值2.7)溶出。溶出液係藉由1 M之Tris-HCl(pH值9.0)立即恢復至中性。將所獲得之樣本應用於預先藉由50 mM之Tris-HCl(pH值7.4)平衡化之HiTrap Q FF管柱(GE healthcare)，去除界面活性劑。將樣本藉由減壓離心進行濃縮，於其中添加50 mM之DTT/LDS緩衝液，進行加熱。將本樣本全量應用於4-12% Bis-Tris凝膠(invitrogen)，藉由SDS-PAGE(50 mA、90分鐘、MOPS緩衝液)實施蛋白之分離。將凝膠藉由Sypro Ruby(pierce)染色後，切出於80-100 kDa出現之帶，前進至消化步驟。
將切出之凝膠片放入至96孔微量盤，添加乙腈，進行音波處理。其後，進行減壓離心乾燥，加入10 mM之DTT/25 mM之NH4
HCO3
，進行培養。去除溶劑後，加入55 mM之ICH2
CONH2
/25 mM之NH4
HCO3
，於遮光下進行培養。去除溶劑後，加入50 mM之NH4
HCO3
靜置後，添加乙腈，進行音波處理。去除溶劑後，對凝膠進行減壓離心乾燥，加入0.1% RapiGest/25 mM之NH4
HCO3
，進行培養。其後，進行減壓離心乾燥，進行培養後，添加酵素溶液(50 mM之NH4
HCO3
、5 ng/μL之胰蛋白酶)，進行培養。去除溶劑後，加入50 mM之NH4
HCO3
，進行培養，進行酵素消化。反應後，將肽溶液轉移至另一96孔微量盤，將乙腈：milliQ：TFA＝500：500：1之混合溶劑加入至凝膠中，進行音波處理。將該操作再重複進行一次，將所獲得之肽萃取液進行減壓濃縮，獲得MS分析用樣本。
將所獲得之肽藉由LC-MS/MS進行分析。針對藉由Orbitrap質譜儀所獲得之資料，對S38AA蛋白之胺基酸序列實施MASCOT資料庫調查，結果鑑定出S38AA蛋白之胺基酸序列中之複數種肽片段(圖5)。該等序列中位於最靠C末端側之肽係第1040號至第1049號之序列，觀察到表示該序列之MS/MS光譜(圖6)。又，該切斷部位位於第1049號之白胺酸(L)之C末端側。消化酵素胰蛋白酶之切斷係特異性地切斷離胺酸(K)或精胺酸(R)之C末端之酵素，於本片段之白胺酸(L)之C末端側不發生切斷反應，故而提示已於該部位被切斷。藉由檢測出本肽片段，可知純化之S38AA長片段之C末端側於第1049號至第1050號之L/R被切斷。再者，認為由於S38AA短片段對實施例2中所使用之「識別S38AA長片段之C末端之抗體(抗體A、抗體B或抗體C)」之反應性相同，故而S38AA短片段之C末端亦於同一部位被切斷。
實施例4：S38AA長片段及S38AA短片段大腸桿菌重組蛋白之製作及藉由ELISA之測定
製作S38AA長片段及S38AA短片段之大腸桿菌重組蛋白，以該等作為標準試樣，構建僅對S38AA長片段進行定量之長ELISA、及對兩者之片段進行定量之全ELISA。
作為具體之操作，製作導入有S38AA長片段序列(399-1049胺基酸序列)及S38AA短片段序列(617-1049胺基酸序列)之質體DNA之大腸桿菌BL21(DE3)之轉形體。持續進行振動培養後，進行離心而集菌。於少量之菌體中加入蛋白萃取試劑B-PER(Thermo Fisher Scientific)而懸浮，將該離心上清液藉由SDS-PAGE進行電泳，確認目標蛋白之表現。於本菌體中加入緩衝液A(20 mM之Tris HCl pH值 8.0、200 mM之NaCl、10%甘油、20 mM之咪唑)、蛋白酶抑制劑cOmplete EDTA-free(Roche)及核酸分解酵素Benzonase，加以懸浮並使菌體破碎，進行離心。使用0.22 μm過濾器自離心上清液去除殘存菌體後，使用HisTrap HP進行Ni親和純化。收集目標蛋白之溶出組分作為標準試樣。測定標準試樣之蛋白濃度，結果分別為1.4 mg/mL(長片段)、1.6 mg/mL(短片段)。
製作藉由「針對S38AA長片段之識別N末端側區域之抗體(實施例2中所使用之長片段用抗體)」及「識別C末端側區域之抗體A」、「抗體B」或「抗體C」之三明治ELISA(長ELISA)；及藉由選自識別S38AA長片段與S38AA短片段兩者共通之C末端側區域之「抗體A」、「抗體B」及「抗體C」中之2種抗體之三明治ELISA(全ELISA)。作為用於定量之標準試樣，準備上述大腸桿菌重組蛋白(標準蛋白)，藉由兩種ELISA進行測定。將樣本應用於使各抗體固相之板，進行培養。清洗3次後，添加各HRP標記抗體，進行培養。清洗3次後，添加3% 3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB)溶液，於遮光下進行培養。最後添加8%硫酸而終止反應，測定450 nm之吸光度(O.D.)。其結果為可見標準蛋白濃度依賴性反應，獲得良好之校準曲線(圖7)。於長ELISA中，未見與S38AA短片段標準蛋白之反應。
實施例5：人類血漿中S38AA長片段及S38AA短片段之定量(全ELISA-長ELISA減法)
為了對人類血漿中所包含之S38AA長片段及S38AA短片段進行定量，實施使用減法之藉由ELISA之定量。
作為具體之操作，使用上述全ELISA及長ELISA對源自4名健康者及8名中等度及重度AD患者之血漿中分別所包含之S38AA短片段量進行定量。定量係依據實施例4中所記載之方法實施。各ELISA之校準曲線係藉由測定S38AA長片段標準蛋白而製作。S38AA短片段量係藉由自全ELISA之定量值減去長ELISA之定量值而算出。其結果，獲得各樣本中之S38AA長片段及S38AA短片段之定量值(圖8)。
基於所獲得之結果，分析源自健康者及AD患者之血漿中所包含之S38AA短片段及S38AA長片段量，結果可知與S38AA長片段量相比，S38AA短片段量之健康者與AD患者之識別性較高，可高感度地判定中等度及重度AD患者(圖9)。
實施例6：人類血漿中S38AA長片段及S38AA短片段之定量(長片段免疫沈澱去除法)
為了對人類血漿中所包含之S38AA長片段及S38AA短片段進行定量，實施使用免疫沈澱法之S38AA長片段之去除及ELISA定量。
作為具體之操作，於混合複數名健康者及AD患者之血漿而得之樣本中分別添加PBS，加入Protein G Mag Sepharose Xtra(磁珠，GE healthcare)進行混合，藉此，去除內源性免疫球蛋白。反應後，於上清液中添加源自兔之S38AA長片段用多株抗體(長片段用抗體)，進行抗原抗體反應。反應後，向新的磁珠混合本反應液，將抗原抗體複合體回收至磁珠。藉由於回收之磁珠添加0.1 M之Gly-HCl(pH值2.8)，而使包含S38AA長片段之回收蛋白溶出。溶出液係藉由1 M之Tris-HCl(pH值9.0)立即設為中性。分別使用全ELISA對所獲得之溶出液(S38AA長片段組分)及上清液(S38AA短片段組分)中所包含之S38AA長片段及S38AA短片段之量進行定量。定量係依據實施例4中所記載之方法實施。各ELISA之校準曲線係藉由測定S38AA長片段標準蛋白而製作。其結果，獲得各樣本中之S38AA長片段及S38AA短片段之定量值(圖10)。根據本結果，提示於AD患者中，與S38AA長片段相比，S38AA短片段量大幅上升。
實施例7：藉由各S38AA片段之定量之AD診斷能力比較(全ELISA-長ELISA減法)
為了藉由各S38AA片段之定量進行AD診斷能力之比較，實施使用減法之ELISA定量。
具體而言，使用全ELISA及長ELISA對源自10名健康者及10名輕度AD患者之血漿中分別所包含之S38AA短片段量及S38AA長片段量進行定量。定量係依據實施例4中所記載之方法實施。各ELISA之校準曲線係藉由測定S38AA長片段標準蛋白而製作。S38AA短片段量係藉由自全ELISA之定量值減去長ELISA之定量值而算出。其結果，獲得各樣本中之S38AA長片段及S38AA短片段之定量值(圖11)。又，提示與總量或S38AA長片段量相比，藉由僅對S38AA短片段量進行定量，可高感度地診斷輕度AD(圖12)。
實施例8：組合各種抗S38AA片段抗體之人類血漿中S38AA片段之定量1
為了對人類血漿中所包含之『「S38AA短片段之量」與「S38AA長片段之量」之總量』進行定量，實施組合使用各種抗S38AA片段抗體之ELISA定量。
具體而言，使用「使用包含抗體A、抗體B、抗體C中之2種之組合之抗體的ELISA(模式1、2或3)」，對源自4名健康者及8名AD患者之血漿分別進行定量。定量係依據實施例4中所記載之方法實施。各ELISA之校準曲線係藉由測定S38AA長片段標準蛋白而製作，取得各樣本中之定量值(圖14)。
模式1：使用抗體A及抗體B之ELISA
模式2：使用抗體A及抗體C之ELISA
模式3：使用抗體B及抗體C之ELISA
測定之結果，『「S38AA短片段之量」與「S38AA短片段之量」之總量』之測定值於各樣本中同等，不論所使用之抗體之組合，均獲得一貫之定量性。
實施例9：組合各種抗S38AA片段抗體之人類血漿中S38AA片段之定量2
為了對人類血漿中所包含之「S38AA長片段之量」進行定量，實施組合使用各種抗S38AA片段抗體之ELISA定量。
具體而言，使用「一者為長片段用抗體且另一者為抗體A、抗體B、抗體C中之1種之組合ELISA(模式4、5或6)」，對源自4名健康者及8名AD患者之血漿分別進行定量。定量係依據實施例4中所記載之方法實施。各ELISA之校準曲線係藉由測定S38AA長片段標準蛋白而製作，取得各樣本中之定量值(圖15)。
模式4：使用長片段用抗體及抗體A之ELISA
模式5：使用長片段用抗體及抗體B之ELISA
模式6：使用長片段用抗體及抗體C之ELISA
測定之結果，「S38AA長片段之量」之測定值於各樣本中同等，不論所使用之抗體之組合，均獲得一貫之定量性。
實施例10：使用實施例8及9之結果之人類血漿中S38AA短片段之定量
自實施例8中所取得之『「S38AA短片段之量」與「S38AA短片段之量」之總量』，減去實施例9中所取得之「S38AA長片段之量」，藉此求出「S38AA短片段之量」(圖16)。
具體而言，藉由以下之組合進行減法。
模式1-4：自「模式1下之測定結果」減去「模式4下之測定結果」所獲得之結果
模式1-5：自「模式1下之測定結果」減去「模式5下之測定結果」所獲得之結果
模式1-6：自「模式1下之測定結果」減去「模式6下之測定結果」所獲得之結果
模式2-4：自「模式2下之測定結果」減去「模式4下之測定結果」所獲得之結果
模式2-5：自「模式2下之測定結果」減去「模式5下之測定結果」所獲得之結果
模式2-6：自「模式2下之測定結果」減去「模式6下之測定結果」所獲得之結果
模式3-4：自「模式3下之測定結果」減去「模式4下之測定結果」所獲得之結果
模式3-5：自「模式3下之測定結果」減去「模式5下之測定結果」所獲得之結果
模式3-6：自「模式3下之測定結果」減去「模式6下之測定結果」所獲得之結果
進行減法所求出之「S38AA短片段之量」使用任一抗體之組合均可獲得一貫之定量性。
本發明係以於日本提出申請之日本專利特願2018-148924(申請日：2018年8月7日)作為基礎，其內容全部包含於本說明書中。
[產業上之可利用性]
本發明對阿茲海默症之診斷及治療等有用。
圖1表示S38AA之胺基酸序列。其中，以粗體字表示於S38AA長片段之N末端之鑑定中藉由LC-MS/MS法檢測之肽之序列。
圖2表示於S38AA長片段之N末端之鑑定中藉由LC-MS/MS法檢測之399
EEVPEDLAEEAPGGR413
肽之MS/MS波峰光譜。縱軸表示各離子之波峰強度，橫軸表示m/z。
圖3表示S38AA之胺基酸序列。其中，以粗體字表示於S38AA短片段之N末端之鑑定中藉由LC-MS/MS法檢測之肽之序列。
圖4表示於S38AA短片段之N末端之鑑定中藉由LC-MS/MS法檢測之617
GLAVGGGEKAK627
肽之MS/MS波峰光譜。縱軸表示各離子之波峰強度，橫軸表示m/z。
圖5表示S38AA之胺基酸序列。其中，以粗體字表示於S38AA長片段之C末端之鑑定中藉由LC-MS/MS法檢測之肽之序列。
圖6表示於S38AA長片段之C末端之鑑定中藉由LC-MS/MS法檢測之1040
DLKLQAGSDL1049
肽之MS/MS波峰光譜。縱軸表示各離子之波峰強度，橫軸表示m/z。
圖7表示藉由長ELISA(Long ELISA)及全ELISA(Total ELISA)測定系統分別測定大腸桿菌重組S38AA長片段及S38AA短片段之表現量時之定量性(校準曲線)。各圖表之縱軸表示450 nm下之吸光度，橫軸表示各蛋白之濃度。
圖8表示藉由減法進行人類血漿中S38AA長片段及S38AA短片段之定量時各樣本中之定量值。縱軸表示S38AA長片段及S38AA短片段之定量值，橫軸表示各樣本。D開頭之編號表示健康者，AG開頭之編號表示中等度及重度AD患者。
圖9表示藉由減法進行人類血漿中S38AA長片段(左圖)及S38AA短片段(右圖)之定量時之各群中之定量值。縱軸表示S38AA長片段及S38AA短片段之定量值，橫軸表示各群。藉由各描點表示各樣本。附誤差槓圖形表示(各群之平均值±標準偏差)。
圖10表示藉由免疫沈澱去除法進行人類血漿中S38AA長片段及S38AA短片段之定量時之各群中之定量值。縱軸表示S38AA長片段及S38AA短片段之定量值，橫軸表示各群。
圖11表示藉由減法進行人類血漿中S38AA長片段及S38AA短片段之定量時各樣本中之定量值。縱軸表示S38AA長片段及S38AA短片段之定量值，橫軸表示各樣本。TSUM開頭之編號表示健康者，ASUM開頭之編號表示輕度AD患者。
圖12表示藉由減法進行人類血漿中S38AA長片段及S38AA短片段(左圖)、S38AA短片段(中圖)以及S38AA長片段(右圖)之定量時之各群中之定量值。縱軸表示S38AA長片段及S38AA短片段之定量值，橫軸表示各群。藉由各描點表示各樣本。附誤差槓圖形表示(各群之平均值±標準偏差)。
圖13係表示長片段用抗體、抗體A、抗體B及抗體C之識別部位之圖。
圖14表示組合各種抗S38AA片段抗體進行人類血漿中S38AA片段之定量時各樣本中之定量值。抗體之組合係抗體A與抗體B、抗體A與抗體C、及抗體B與抗體C此3個模式，藉由該組合而進行ELISA。縱軸表示S38AA片段總量之定量值，橫軸表示各樣本。TSUM開頭之編號表示健康者，ASUM開頭之編號表示AD患者。
圖15表示組合各種抗S38AA片段抗體進行人類血漿中S38AA片段之定量時各樣本中之定量值。抗體之組合係長片段用抗體與抗體A、長片段用抗體與抗體B、及長片段用抗體與抗體C此3個模式，藉由該組合而進行ELISA。縱軸表示S38AA長片段之定量值，橫軸表示各樣本。TSUM開頭之編號表示健康者，ASUM開頭之編號表示AD患者。
圖16表示根據圖14及15之結果，藉由減法進行人類血漿中S38AA短片段之定量時各樣本中之定量值。縱軸表示S38AA短片段之定量值，橫軸表示各樣本。TSUM開頭之編號表示健康者，ASUM開頭之編號表示AD患者。
Claims (18)
- 一種多肽，其包含以下之任一胺基酸序列： (1)序列編號：1表示之胺基酸序列；或 (2)序列編號：1表示之胺基酸序列中置換、缺失、附加或插入1個～數個胺基酸而成之胺基酸序列。
- 一種抗體，其特異性地識別如請求項1之多肽。
- 一種核酸，其編碼如請求項1之多肽。
- 一種套組，其包含如請求項2之抗體。
- 如請求項4之套組，其進而包含如請求項1之多肽。
- 一種檢測如請求項1之多肽之方法，其包括使受檢試樣與如請求項2之抗體接觸之步驟。
- 如請求項4或5之套組，其用於判定阿茲海默症。
- 一種阿茲海默症之判定藥，其含有可測定如請求項1之多肽之量之單一或複數種抗S38AA抗體。
- 如請求項8之判定藥，其中上述抗S38AA抗體為如請求項2之抗體。
- 一種判定動物目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性之方法，其特徵在於檢測自該受檢動物採取之試樣中之如請求項1之多肽。
- 如請求項10之方法，其包括以下之(i)～(iii)之步驟： (i)對自受檢動物採取之試樣中之如請求項1之多肽進行定量； (ii)將藉由(i)所定量之上述多肽之量與自健康動物採取之試樣中之上述多肽之量(以下，稱為對照值)進行比較；及 (iii)基於(ii)之結果，於藉由(i)所定量之上述多肽之量大於對照值之情形時，判定上述受檢動物有目前罹患阿茲海默症之可能性或將來罹患阿茲海默症之可能性。
- 一種輔助阿茲海默症之發展度之判定之方法，其包括以下之(i)～(iii)之步驟： (i)對自罹患阿茲海默症或有罹患阿茲海默症之可能性之受檢動物採取之試樣中之如請求項1之多肽進行定量； (ii)將藉由(i)所定量之上述多肽之量與自該受檢動物過去所採取之試樣中之上述多肽之量(以下，稱為對照值)進行比較；及 (iii)基於(ii)之結果，於藉由(i)所定量之上述多肽之量大於對照值之情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在發展，於小於對照值之情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在改善。
- 如請求項10至12中任一項之方法，其中受檢動物為人類。
- 如請求項10至13中任一項之方法，其中試樣為血液、腦脊髓液、唾液、淚液或尿。
- 如請求項10至14中任一項之方法，其進而包括檢測其他1種以上之阿茲海默症診斷標記物。
- 一種阿茲海默症治療藥，其用於藉由以下之(i)～(iv)之步驟已被判定阿茲海默症之發展度之患者： (i)對自目前罹患阿茲海默症或有罹患阿茲海默症之可能性之受檢動物採取之試樣中之如請求項1之多肽進行定量； (ii)將藉由(i)所定量之上述多肽之量與自該受檢動物過去所採取之試樣中之上述多肽之量(以下，稱為對照值)進行比較； (iii)基於(ii)之結果，於藉由(i)所定量之上述多肽之量大於對照值之情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在發展，於小於對照值之情形時，判定上述受檢動物之阿茲海默症正在改善；及 (iv)基於(iii)之判定結果，決定投予阿茲海默症治療藥。
- 一種阿茲海默症之治療藥或預防藥，其含有減少阿茲海默症患者或有罹患阿茲海默症之可能性者之生物體內之如請求項1之多肽之量的藥劑、或者抑制阿茲海默症患者或有罹患阿茲海默症之可能性者之生物體內之該多肽之產生的藥劑作為有效成分。
- 一種篩選阿茲海默症之治療藥或預防藥之候選物質之方法，其係以受檢物質減少阿茲海默症患者或有罹患阿茲海默症之可能性者之生物體內之如請求項1之多肽之量、或者抑制阿茲海默症患者或有罹患阿茲海默症之可能性者之生物體內之該多肽之產生作為指標。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2018-148924 | 2018-08-07 | ||
| JP2018148924 | 2018-08-07 |
Publications (1)
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