TW201940503A - 促進局部肌肉增長、減緩或防止局部肌肉萎縮之組合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本發明係關於一種促進局部肌肉增長或減緩或防止局部肌肉萎縮之組合物，其包含一金黃色葡萄球菌腸毒素C2區域的多肽，以及一肌生成抑制素多肽。藉由本發明之組合物，克服現有技術僅能全身性肌肉增長的缺陷，以達成促進局部肌肉增長、減緩或防止局部肌肉萎縮的效果。

Description

促進局部肌肉增長、減緩或防止局部肌肉萎縮之組合物及其用途

本發明係關於一種組合物，特別是指一種促進局部肌肉增長之組合物；本發明另提供一種組合物的用途，特別是指一種用於製造促進局部肌肉增長的藥物的用途。本發明係另關於一種組合物，特別是指一種減緩或防止局部肌肉萎縮之組合物；本發明另提供一種組合物的用途，特別是指一種用於製造減緩或防止局部肌肉萎縮的藥物的用途。

肌生成抑制素(myostatin)就其序列而言，與轉化生長因子(transforming growth factor β，TGF-β)家族其他成員高度相似。肌生成抑制素的基因結構包括有三部分︰(1) 作為蛋白質分泌釋放信號的N端疏水結構域；(2) 高度保守的蛋白質切割位置RXRR；以及(3) 富含半胱氨酸(cysteine)的C端活性結構域。許多研究報告指出，脊椎動物中肌生成抑制素的胺基酸序列在C端活性結構域具有高度的保守性。現有研究提出對肌生成抑制素具有高特異性的單株抗體JA16 (Whittemoreet al ., 2003,Biochemical and Biophysical Research Communications 300:965-971)，藉由分析肌生成抑制素的結合位置，發現結合位置位在小鼠肌生成抑制素C端15個胺基酸DFGLDCDEHSTESRC，從而可知C端結構域為抗原片段(antigenic fragment)。

然而，目前施予肌生成抑制素之抗體皆會產生全身性的反應，如Camporez等人於2016年的文獻指出，局部注射抗肌生成抑制素抗體後，使年老的小鼠全身性的肌肉增長，進而使全身重量增加。此外，針對肌生成抑制劑ACE-031(myostatin inhibitor)於2010年之臨床試驗結果顯示雖可用於增加全身肌肉及加強肌肉力量，但受試者分別出現自發性出血(spontaneous bleeding)、流鼻血(nosebleeds)、皮膚微血管擴張(small expansion of blood vesselsin skins)或頭痛(headaches)等副作用，因此該臨床試驗不得不因負面現象(negative phenomena)而於2011年中止試驗；尤其抗體會引起受體免疫系統的全身性作用，諸如過敏反應、寒顫、腹瀉、噁心嘔吐、皮膚瘙癢等症狀。此外，如H.N. Peiris於2012年的文獻[Placenta 33(2012 902-907)]指出，在“雙重肌肉”基因型(double-muscling)的牛種中，產犢(calving)和生育(fertility)都存在困難；然而在myostatin基因缺乏的小鼠(Mstn^-/- )卻是可生育的(fertile)；由此推測，肌肉生長抑制素可能與妊娠期促成胎盤及其功能有關。

中華民國發明專利I540968揭露含有肌肉倍增片段(myostatin)與綠膿桿菌外毒素區域Ia片段融合形成多肽片段或抗體，其中綠膿桿菌外毒素片段之目的在於有效增強誘導免疫反應；然而，就所屬領域技術人員所知，綠膿桿菌在細菌生產過程中可能會產生內涵體(inclusion body)，因此萃取片段或抗體時需要額外添加尿素(urea)去破壞細胞而導致尿素殘留，以及重新摺疊(refolding)片段而可能影響蛋白質功能；更重要的是，該篇專利所揭露的效果仍是全身性的反應，因此，現有技術之肌生成抑制素抗體仍有改善之空間。

另外，目前研究顯示，金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 分泌的腸外蛋白(enterotoxin)可被分為A、B、C1、C2、D、E和F等幾種類型，其中金黃色葡萄球菌腸毒素(Staphylococcal enterotoxin)SEA、SEB、SEC1及SEC2)的腸毒素蛋白分子量都相近似且在結構上有較高的類似性，故皆會引起全身性的免疫反應並具有相同的臨床症狀，如發燒、血壓升高等較大的副作用。

有鑑於此，如何發展出只影響局部肌肉而不引起全身性反應的藥劑，實為各相關業者積極研究開發之目標。

為了克服現有技術之缺點，本發明的目的在於提供一種組合物，以達成局部肌肉增長的效果。

在一個態樣中，本發明係關於一種促進局部肌肉增長、延緩局部肌肉萎縮或防止局部肌肉萎縮的組合物，其包含：一第一多肽，其係如SEQ ID NO：8所示具有相似度至少90%以上的序列；以及一第二多肽，其包含如SEQ ID NO：14所示序列1至10個重複單元(repeat units)。

較佳的，所述之第二多肽為縱列重複單元(tandem repeated units)的線性排列重複抗原(linear array epitope，LAE)，其中該第二多肽為如SEQ ID NO：14所示序列1至10個重複單元。

更佳的，所述之第二多肽為縱列重複單元的線性排列重複抗原，其中該第二多肽包含如SEQ ID NO：14所示序列6個重複單元。

較佳的，所述之第一多肽在SEQ ID NO：8對應於位點7具有T或L、位點9具有G或E、位點13具有Y或V及位點105具有H或Y。

較佳的，所述之第一多肽係選自由如SEQ ID NO：4、5、6、7、8、9、10、11及12所組成之群組。

較佳的，所述之組合物，其更包含：一連接子，其係介於該第一多肽以及該第二多肽之間；其中該組合物之序列如SEQ ID NO：17所示。

在一個較佳的製備例中，該第一多肽與該第二多肽可選自以下例示：

在另一個態樣中，本發明係關於一種促進局部肌肉增長、延緩局部肌肉萎縮或防止局部肌肉萎縮的組合物，其包含：一金黃色葡萄球菌腸毒素的多肽；以及一肌生成抑制多肽。

較佳的，所述之金黃色葡萄球菌腸毒素的多肽係選自於由金黃色葡萄球菌腸毒素A、B、C1、C2、D、E、F、G及H所組成之群組。

SEC2具有27 kDa的分子量，含有239個胺基酸。甫經轉錄之SEC2為266個胺基酸的蛋白質，分子量計為30 kDa；於丙氨酸27處切斷SEC2多肽可產生成熟毒素，其含有239個胺基酸，分子量計為27 kDa。藉由N端多肽定序可確定SEC2中的訊息多肽切割位置並確認成熟毒素的N端，藉此可證明SEC2能夠有效地增強所引發之免疫反應。更佳的，所述之金黃色葡萄球菌腸毒素C2 序列的多肽序列與SEQ ID NO：8中所示序列具有至少90%以上的序列一致性，舉例而言，對應於SEQ ID NO：8所示序列中選自由位點7具有T或L、位點9具有G或E、位點13具有Y或V及位點105具有H或Y所組成的群組。

較佳的，所述之肌生成抑制多肽包含、但不限於生長分化因子8 (growth differentiation factor 8，GDF8)、濾泡抑素(follistatin)或第二型活化素受體(activin receptor type-2B，ACTR-IIB)。

更佳的，所述之肌生成抑制多肽係選自由生長分化因子8如SEQ ID NO：13所示序列、濾泡抑素如SEQ ID NO：15所示序列及第二型活化素受體如SEQ ID NO：16所示序列所組成之群組。

較佳的，所述之肌生成抑制素的抗原決定位多肽為縱列重複單元(tandem repeated units)的線性排列重複抗原(linear array epitope，LAE)。

在另一態樣中，本發明係關於一種促進局部肌肉增長、延緩局部肌肉萎縮或防止局部肌肉萎縮的醫藥組成物，其包含如前所述之組合物以及一藥學上可接受之載劑。

在本文中，所述之「藥學上可接受之載劑」包含，但不限於水、醇(alcohols)、甘醇(glycol)、碳氫化合物(hydrocarbons)[諸如石油膠(petroleum jelly)以及白凡士林(white petrolatum)]、蠟(wax)[諸如石蠟(paraffin)以及黃蠟(yellow wax)]、保存劑(preserving agents)、抗氧化劑(antioxidants)、溶劑(solvent)、乳化劑(emulsifier)、懸浮劑(suspending agent)、分解劑(decomposer)、黏結劑(binding agent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizing agent)、螯合劑(chelating agent)、稀釋劑(diluent)、膠凝劑(gelling agent)、防腐劑(preservative)、潤滑劑(lubricant)、吸收增強劑(absorption enhancers)、活性劑(active agents)、保濕劑(humectants)、氣味吸收劑(odor absorbers)、香料(fragrances)、pH調整劑(pH adjusting agents)、閉塞劑(occlusive agents)、軟化劑(emollients)、增稠劑(thickeners)、助溶劑(solubilizing agents)、滲透增強劑(penetration enhancers)、抗刺激劑(anti-irritants)、著色劑(colorants)、推進劑(propellants)表面活性劑(surfactant)、佐劑(adjuvant)，及其他類似或適用本發明之載劑。

在本文中，所述之「佐劑」包括，但不限於，明礬沉澱、弗朗氏完全佐劑(Freund’s complete adjuvant)、弗朗式不完全佐劑(Freund’s incomplete adjuvant)、及單磷氧基-脂質A/海藻糖dicorynomycolate佐劑。

本發明所述之醫藥組成物可以多種形式存在。該等形式包括，但不限於液體、半固體及固體藥劑形式，其中液體包括，但不限於分散液或懸浮液；半固體及固體包括，但不限於錠劑、丸劑、粉劑、脂質體及栓劑。較佳的形式取決於預期之投藥模式及治療應用。更佳的，所述之醫藥組合物係呈可口服或可輸注溶液形式。

在另一態樣中，本發明係關於一種促進局部肌肉增長、延緩局部肌肉萎縮或防止局部肌肉萎縮的核酸，其編碼由SEQ ID NO：17中所示之胺基酸序列組成的組合物。

在另一態樣中，本發明係關於一種如前所述之組合物的用途，其係用於製造促進局部肌肉增長的藥物，其係將藥物以有效劑量施予受體局部以使局部肌肉達到增長之效果。

在本發明的一個較佳實施例中，使用前述組合物以達成促進哺乳類局部肌肉增長，包括給予肌生成抑制素片段和SEC2的融合蛋白，從而獲得抗肌生成抑制素之特異性免疫細胞。本發明的免疫細胞可以由肌生成抑制素片段之抗原決定位引入其他動物中，並經過純化或藉由將免疫細胞或其抗原決定位引入哺乳動物體內，以使哺乳動物身體本身能夠增加肌肉生長。本發明的免疫細胞可為多株B淋巴球或T細胞殖株；較佳的是，前述免疫細胞是調節型T細胞。

在另一態樣中，本發明係關於一種如前所述之組合物的用途，其係用於製造防止局部肌肉萎縮的藥物，其係將藥物以有效劑量施予受體局部以減緩或防止使局部肌肉萎縮之效果。在一實施例中，係使一側腿神經受損後，施予前述組合物於被受損神經一側的腿部肌肉，以使該側腿部肌肉可維持肌肉大小避免因神經受損而造成肌肉萎縮的現象。在一實施例中，係使一側腿神經阻斷後，施予前述組合物於被阻斷神經一側的腿部肌肉，以使該側腿部肌肉可維持肌肉大小避免因神經阻斷而造成肌肉萎縮的現象。

前述組合物及用途適用於動物。較佳的是，適用於脊椎動物；更佳的是，人、豬、牛、羊、犬和家禽、水禽等動物的肌生成抑制素已獲選殖，且其胺基酸序列具有高度的保守性，因此可假定前述動物之肌生成抑制素具有相同的功能；更佳的是，前述哺乳動物屬於人、豬、牛、羊或犬。

本發明所述之組合物適用於各種肌肉萎縮症狀，肌肉萎縮可由藥物引起，其包括，但不限於由使用糖皮質激素(諸如皮質醇(cortisol)、地塞米松(dexamethasone)、倍皮質醇(betamethasone)、普賴松(prednisone)、甲基培尼皮質醇(methylprednisolone)或去氫皮質醇(prednisolone)治療引起。肌肉萎縮亦可由神經創傷造成去神經化或由退化性、由神經壞死所引起、代謝性或發炎性神經病變，例如格巴二氏症候群(Guillian-Barre syndrome)、周邊神經病變，或暴露於環境毒素引起。

此外，肌肉萎縮另可由肌肉疾病所引起，包括，但不限於肌肉強直症(myotonic dystrophy)、先天性肌病(congenital myopathies)、家族週期性麻痹(familial periodic paralysis，FPP)、代謝性肌肉病(metabolic myopathies；諸如由肝糖或脂質儲存疾病所致)、皮肌炎(dermatomyositis)、多發性肌炎(polymyositis)、包涵體肌炎(inclusion body myositis，IBM)、骨化性肌炎(myositis ossificans)或橫紋肌溶解症(rhabdomyolysis)所致。

肌肉萎縮亦可由以下疾病引起，包括，但不限於成人運動神經元疾病(motorneuron diseases，MND)、脊髓性肌肉萎縮症(spinal muscular atophy，SMA)、肌萎縮性脊髓側索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis)、少年型脊髓性肌萎縮症(juvenile spinal muscular atrophy；又稱SMA-Ⅲ)、肌無力症(myasthenia Gravis，MG)、因中風或脊髓損傷之癱瘓、因創傷之骨骼固定化、長期臥床、自主不活動、非自主不活動、代謝壓力或營養不足、癌症、愛滋病(AIDS)、禁食、甲狀腺病症、糖尿病、肌中央軸空病(central core disease，CCD)、燒燙傷、慢性阻塞性肺病、肝病(諸如纖維化、硬化)、敗血症、腎衰竭、充血性心臟衰竭、衰老、太空航行或在零重力環境中度過一段時間所引起之肌肉萎縮。

另一方面，在本文中，用語「抗原決定位(epitope)」是指能夠引發免疫反應以產生蛋白質抗原中的抗原的片段，其可以藉由結構預測或藉由選擇蛋白片段來觀察免疫動物的免疫反應。

另一方面，在本文中，用語「有效劑量」係指在劑量上及對於所需要之時間而言對達成所要促進局部肌肉增長或減緩或防止局部肌肉萎縮有效之量；其如本發明所例示者，有效促進局部肌肉增長之劑量可透過促進局部肌肉增長試驗(實施例1)而得知；有效減緩或防止局部肌肉萎縮之劑量可透過減緩或防止局部肌肉萎縮試驗(實施例2、3)而得知。

由於該抗原決定位是小型多肽片段，如果以該小型多肽片段在動物中直接進行免疫，則免疫反應可能未盡理想。較佳的是，建構含有縱列重複單元的線性排列重複抗原(linear array epitope，LAE)，以改善免疫反應。此外，可以使用細菌毒素來幫助抗原的傳遞，藉由使用消除毒素活性的毒素作為運輸系統，從而以毒素的性質來加強整體免疫效果。在一態樣中，本發明的肌生成抑制素C端的抗原決定位的線性排列重複抗原與金黃色葡萄球菌腸毒素C2 (SEC2)融合。

一種宿主細胞包含該上述核酸是可被生產的。實施例包括大腸桿菌、昆蟲細胞、植物細胞、酵母菌細胞及哺乳動物細胞。該核酸分子可以用於表達本說明書所述之多肽或融合蛋白，操作上可將該核酸分子連接至合適的載體的多種限制酶酵素切位(multiple cloning site，MCS)以產生所述之多肽或融合蛋白。

載體實施例包含一質體。該載體較佳的是包括啟動子、增強子、多種限制酶酵素切位等，核酸分子連接至合適的載體的多種限制酶酵素切位後，該表達載體可以被導入該宿主細胞以產生本說明書所述之多肽或融合蛋白。該宿主細胞包括，但不限於大腸桿菌、百日咳桿菌、芽孢桿菌、非洲綠猴腎臟細胞、嗜血桿菌、真菌或酵母。

本發明的優點在於藉由包含金黃色葡萄球菌腸毒素C2序列的多肽以及肌生成抑制素C端的抗原決定位多肽的組合物，以達成促進局部肌肉增長的效果，是突破現有技術之困難且未有前例的。此外，所述之組合物施予前述組合物於神經損傷或神經阻斷一側的腿部肌肉，意外地發現該側腿部肌肉可維持肌肉大小，將有助於臨床上遇到神經損傷或神經阻斷時可有效地避免病人局部肌肉萎縮的現象。

以下配合圖示及本發明之較佳實施例，進一步闡述本發明為達成預定發明目的所採取的技術手段。以下實施例僅係用以說明本發明，而非意圖限制本發明的範圍。

製備例1、製備含SEC2片段與肌生成抑制素片段之組合物

本實施例所採用之融合蛋白係採用大腸桿菌(E. coli )之pET表現系統表現之載體；較佳的，係選用pET-28a。其中第一多肽「SEC2m」所示係金黃色葡萄球菌腸毒素C2具有點突變(point mutation)，核酸序列如SEQ ID NO：1所示、蛋白質序列如SEQ ID NO：8 (突變點於位點7具有L、位點9具有E、位點13具有V及位點105具有Y)；第二多肽「Myo epitope」所示則為肌生成抑制素的抗原決定位，其係肌生成抑制素C端15個胺基酸(如序列SEQ ID NO：14所示；該序列具有高度的保守性，因此多個物種皆具有此序列)具有6個重覆片段，其單一片段之核酸序列如SEQ ID NO：2所示。位於pET載體多種限制酶酵素切位(multiple cloning site，MCS)內之基因序列從N端依序為「SEC2m」、連接子(linker)與「Myo epitope」，如序核酸列SEQ ID NO：3所示。

建立35L發酵培養程序以在50L發酵罐中培養含有SEQ ID NO：3pET載體的大腸桿菌BL21(DE3)菌株。4管5 mL菌株在37ºC下用LB／氨芐青黴素(Ampicillin)培養基培養過夜，各菌株分別接種到0.2公升之LB／氨芐青黴素培養基中，共1公升，於37ºC持續搖動培養至OD₆₀₀ 為0.3。其後加入至35 μL培養基中進行培養，並以每兩小時取樣測定OD₆₀₀ 為以監測生長曲線的變化，並根據生長曲線進一步選擇合適的時間點，加入最終濃度為0.1 mM的異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside，IPTG)誘導大腸桿菌以高度表現融合蛋白，於37ºC持續搖動培養3小時，離心回收菌株。藉由SDS-PAGE電泳和西方墨點法測定融合蛋白的表現，以確定最佳35 L發酵條件。大致上，係將大腸桿菌BL21 (DE3)表達的融合多肽在細胞裂解後，進行該融合多肽的萃取與分離，最終獲得一組合物(如SEQ ID NO：17所示)；由於該表現蛋白的萃取與分離係屬習知技術，在此不再贅述。

實施例1、促進局部肌肉增長試驗

本實施例之動物實驗所採用之小鼠為「C57BL/6」品系8週齡(12個月齡)的母鼠共9隻小鼠，實驗時間為6個月。自小鼠成長至12個月齡時，開始採用高脂質飼料，並使用含高果糖漿的飲水飼育。飼料及飲水，每兩天更換一次，以避免變質。飼料保存於-20ºC，高果糖漿則保存於4ºC；每兩週量測一次體重。實驗動物經6個月的餵食後，開始每週以肌肉內注射該組合物一次。取自製備例1的組合物(以生理食鹽水將組合物稀釋成不同濃度)分別注射於小鼠左後小腿之肌肉成為不同劑量之實驗組，右後小腿則為注射生理食鹽水(saline)；其實驗分組如下表1所示。 表1、動物實驗分組與組合物之施予方式

實驗數據的收集，是每週以游標量尺測量一次、量測肌肉之長徑(a)及短徑(b)和體重，量測位置為注射藥物之位置。將所得數值以橢圓面積計算公式︰「a × b × 3.14」，算得肌肉概約截面積，計算範圍如圖4(A)、4(B)、4(C)、4(G)、4(H)、4(I)上下虛線之間為肌肉體積計算之區域，以進行各實驗組間之比較。

(1) 比較實驗組(左後小腿)及對照組(右後小腿)注射組合物後之肌肉截面積

請參閱圖1至圖3所示，於第19週時將各實驗組與其對照組相比，其中注射高劑量組合物的小腿橫截面積相較於高劑量對照組增加了8.19%，接受中劑量組合物的小腿橫截面積相較於中劑量對照組增加5.5%，而接受低劑量組合物的橫截面積相較於低劑量對照組也增加5.67%。

(2) 比較實驗組(左後小腿)及對照組(右後小腿)注射組合物後之肌肉體積

請參閱圖4，小鼠後腿電腦斷層縱截面掃描圖及橫截面掃描圖，各橫截面掃描圖係相應縱截面掃描圖之剖面線標示處之橫截面。其中圖4(A)、圖4(B)、圖4(C)、圖4(G)、圖4(H)、圖4(I)虛線之間為計算肌肉體積的範圍，將各截面積以積分獲得肌肉體積。投藥至19週，結束實驗，將小鼠犧牲並取其兩隻小腿，以10%福馬林固定，進行電腦斷層掃描。

請參閱圖5至圖7所示，肌肉體積中，低劑量實驗組相較於低劑量對照組增加4.6%，中劑量實驗組相較於中劑量對照組增加8.5%，高劑量實驗組相較於高劑量對照組增加19.2%。由於本試驗是以同一小鼠的左後小腿之肌肉為實驗組，右後小腿則為對照組，因此結果顯示，將本發明之組合物注射於左側小腿只會造成該側小腿肌肉增長，另一側(右側)小腿之肌肉並無增長，故本發明所述之組合物經由局部施予後僅於該局部產生肌肉增長之效果，並無產生全身肌肉變大之反應。

(3) 測量實驗組(左後小腿)及對照組(右後小腿)之注射組合物後肌絲纖維粗細情形

於第19週犧牲後並經電腦斷層掃描後，將實驗小鼠的小腿骨取出，肌肉部分則進行石蠟包埋及切片，並以H-E組織染色比較肌絲纖維粗細。請參閱圖8及圖9所示，圖8為高劑量對照組小鼠後小腿肌絲纖維、圖9為高劑量實驗組小鼠後小腿肌絲纖維，可知高劑量實驗組小鼠肌絲纖維較對照組顯著增大。

(4) 測量實驗組(左後小腿)及對照組(右後小腿)之注射組合物後肌生成抑制素含量分布

於第19週犧牲後並經電腦斷層掃描後，將實驗小鼠的小腿骨取出，肌肉部分則進行石蠟包埋及切片，並以肌生成抑制素抗體進行免疫組織化學染色(immunohistochemistry，IHC)觀察肌生成抑制素含量分布。請參閱圖10所示，圖10(A)、圖10(B)、圖10(C)不同劑量之對照組(左後小腿)肌生成抑制素可明顯被染色；反觀圖10(D)、圖10(E)、圖10(F)，無論是低劑量、中劑量、或高劑量實驗組(右後小腿)肌生成抑制素的表現明顯被抑制。也就是說，無論低劑量、中劑量或是高劑量，同一隻老鼠的右小腿(即對照組)之肌生成抑制素濃度高，右小腿肌肉並無明顯變大；但同一隻小鼠的左小腿(即實驗組)之肌生成抑制素被本發明之組合物所抑制，故肌生成抑制素濃度低，左小腿肌肉變大，即本發明所述之組合物具有能夠使局部肌肉變大之效果(不受全身血液循環影響)。

(5) 比較注射低劑量、中劑量、或高劑量之組合物後體重變化

於第19週時量測體重，請參閱圖11所示，無論是低劑量、中劑量、或高劑量實驗組在施予組合物之後，各組間體重並沒影顯著差異。因此，本試驗藉由局部施予組合物只會在施予部位之局部增大肌肉，並不會造成全身性肌肉增大。

實施例2、減緩或防止局部肌肉因神經損傷導致萎縮之試驗

準備10隻ICR小鼠(八週齡，購自於樂斯科生技股份有限公司)以正常飼料餵食1週至2週後，分成2組(每組各5隻)，於實驗第1天進行坐骨神經破壞手術使各組小鼠之左腿坐骨神經造成神經損傷(各組小鼠之右腿皆不進行坐骨神經破壞手術)，並於第28天犧牲，其中各組分別為：控制組(左腿進行坐骨神經破壞手術，但不給藥)，實驗組(左腿進行坐骨神經破壞手術，且每隻小鼠於第1、3、7、14天以肌肉內注射施予本發明製備例1所述之組合物1000 ng，最後觀察小鼠肌肉萎縮程度來評估本發明之組合物對於減緩或防止肌肉萎縮的效果。

坐骨神經破壞手術是對小鼠施予麻醉劑(腹腔麻醉)後，剔除小鼠手術側膝蓋至臀部之體毛，固定小鼠腿部並以酒精棉消毒手術部位，找到大腿股骨位置，於靠近臀部處開一道平行股骨之切口，剝離肌肉層後可看見平行於股骨之坐骨神經，將坐骨神經挑起，以特殊工具損傷小鼠之坐骨神經後，將其坐骨神經放回原本位置，縫合皮膚後每日觀察小鼠之傷口癒合情況、步態變化及整體狀態，其目的為模擬神經損傷的狀態。

結果顯示，於第28天測量其中一隻控制組小鼠的左大腿肌肉體積約為1373 立方毫米(mm³ )、右大腿肌肉體積約為1595 mm³ ，由於右腿未進行坐骨神經破壞手術，故將右大腿肌肉體積做為基準比率1、左大腿肌肉體積比率則為左大腿肌肉體積除以右大腿肌肉體積(如圖12控制組所示)，顯示控制組小鼠左腿肌肉相較於右腿肌肉呈現萎縮現象；另測量其中一隻實驗組小鼠左大腿肌肉體積約為1888 mm³ 、右大腿肌肉體積約為1705 mm³ ，將右大腿肌肉體積做為基準比率1、左大腿肌肉體積比率則為左大腿肌肉體積除以右大腿肌肉體積(如圖12實驗組所示)，儘管小鼠左腿進行坐骨神經破壞手術但因施予本發明所述之組合物，故顯示左腿肌肉並無萎縮現象。

如圖13所示，控制組之左大腿/右大腿肌肉體積比率約為0.86 (小於1即表示呈現萎縮狀態)；實驗組之左大腿/右大腿肌肉體積比率約為1.11，故實驗組相較於控制組因施予本發明所述之組合物而呈現維持肌肉量體積之現象。由此可見，於神經損傷的情況下，經由施予本發明所述之組合物可減少或舒緩局部肌肉萎縮、甚至維持原本肌肉體積之現象。

實施例3、減緩或防止局部肌肉因神經截斷導致萎縮之試驗

準備10隻ICR小鼠(八週齡，購自於樂斯科生技股份有限公司)以正常飼料餵食1週至2週後，分成2組(每組各5隻)，於實驗第1天進行坐骨神經截斷手術，並於第28天犧牲，其中各組分別為：控制組(左腿進行坐骨神經截斷手術，但不給藥)，實驗組A (左腿進行坐骨神經截斷手術，且每隻小鼠於第1、3、7、14天以肌肉內注射施予本發明製備例1所述之組合物1000 ng，實驗組B(左腿進行坐骨神經截斷手術，且每隻小鼠於第1、3、7、14天以肌肉內注射施予本發明製備例1所述之組合物5000 ng，最後觀察小鼠肌肉萎縮程度來評估本發明之組合物對於抗肌肉萎縮的效果(以上各組小鼠之右腿皆不進行坐骨神經截斷手術)。坐骨神經截斷手術方式大略同實施例2，差異在於將坐骨神經挑起後直接截斷。

結果顯示，於第28天測量控制組小鼠左大腿肌肉體積約為1375 mm³ 、右大腿肌肉體積約為1560 mm³ ，由於右腿未進行坐骨神經破壞手術，故將右大腿肌肉體積做為基準比率1、左大腿肌肉體積比率則為左大腿肌肉體積除以右大腿肌肉體積(如圖14控制組所示)，顯示控制組小鼠左腿肌肉相較於右腿肌肉呈現萎縮，右腿肌肉亦無萎縮現象；實驗組A小鼠左大腿肌肉體積約為1289 mm³ 、右大腿肌肉體積約為1394 mm³ ，由於右腿未進行坐骨神經破壞手術，故將右大腿肌肉體積做為基準比率1、左大腿肌肉體積比率則為左大腿肌肉體積除以右大腿肌肉體積(如圖14實驗組A所示)，在坐骨神經截斷手術後，左腿肌肉萎縮現象顯著減緩；實驗組B小鼠左大腿肌肉體積約為1958 mm³ 、右大腿肌肉體積約為1869 mm³ ，由於右腿未進行坐骨神經破壞手術，故將右大腿肌肉體積做為基準比率1、左大腿肌肉體積比率則為左大腿肌肉體積除以右大腿肌肉體積(如圖14實驗組B所示)，儘管小鼠左腿歷經坐骨神經破壞手術，但因左腿肌肉施予本發明所述之組合物5000 ng，並無產生萎縮現象。

如圖15所示，控制組之左大腿/右大腿肌肉體積比率約為0.87呈現萎縮狀態(小於1即表示呈現萎縮狀態)；實驗組A之左大腿/右大腿肌肉體積比率約為0.92實驗組A相較於控制組呈現減緩肌肉萎縮；實驗組B之左大腿/右大腿肌肉體積比率約為1.04，實驗組B相較於控制組甚至可以維持肌肉體積。由此可見，於坐骨神經截斷的情況下，經由施予本發明所述之組合物，除了如實施例2可減少或舒緩局部肌肉萎縮、本實施例3甚至可維持原本肌肉體積之現象。

根據本發明可作之不同修正及變化對於熟悉該項技術者而言均顯然不會偏離本發明的範圍與精神。雖然本發明已敘述特定的較佳具體事實，必須瞭解的是本發明不應被不當地限制於該等特定具體事實上。事實上，在實施本發明之已述模式方面，對於熟習該項技術者而言顯而易知之不同修正亦被涵蓋於下列申請專利範圍之內。

圖1係本發明低劑量實驗組與低劑量對照組對比之肌肉截面積比率折線圖。其中，低劑量實驗組以標示●之折線表示、低劑量對照組以標示■之折線表示。 圖2係本發明中劑量實驗組與中劑量對照組對比之肌肉截面積比率折線圖。其中，中劑量實驗組以標示●之折線表示、中劑量對照組以標示■之折線表示。 圖3係本發明高劑量實驗組與高劑量對照組對比之肌肉截面積比率折線圖。其中，高劑量實驗組以標示●之折線表示、高劑量對照組以標示■之折線表示。 圖4係本發明小鼠後腿電腦斷層縱截面掃描圖及橫截面掃描圖，各橫截面掃描圖係相應縱截面掃描圖之剖面線標示處之橫截面；圖4(A)係低劑量對照組之縱截面掃描圖，上下虛線之間為肌肉體積計算之區域；圖4(B)係中劑量對照組之縱截面掃描圖，上下虛線之間為肌肉體積計算之區域；圖4(C)係高劑量對照組之縱截面掃描圖，上下虛線之間為肌肉體積計算之區域；圖4(D)係低劑量對照組之橫截面掃描圖；圖4(E)係中劑量對照組之橫截面掃描圖；圖4(F)係高劑量對照組之橫截面掃描圖；圖4(G)係低劑量實驗組之縱截面掃描圖，上下虛線之間為肌肉體積計算之區域；圖4(H)係中劑量實驗組之縱截面掃描圖，上下虛線之間為肌肉體積計算之區域；圖4(I)係高劑量實驗組之縱截面掃描圖，上下虛線之間為肌肉體積計算之區域；圖4(J)係低劑量實驗組之橫截面掃描圖；圖4(K)係中劑量實驗組之橫截面掃描圖；圖4(L)係高劑量實驗組之橫截面掃描圖。 圖5係本發明低劑量對照組及低劑量實驗組之小鼠後腿體積比率之柱狀圖；A.U.表示Arbitrary Unit (任意單位)。 圖6係本發明中劑量對照組及中劑量實驗組之小鼠後腿體積比率之柱狀圖；A.U.表示Arbitrary Unit (任意單位)。 圖7係本發明高劑量對照組及高劑量實驗組之小鼠後腿體積比率之柱狀圖；A.U.表示Arbitrary Unit (任意單位)。 圖8係本發明高劑量對照組小鼠後小腿肌絲纖維蘇木素-伊紅染色(hematoxylin-eosin，H-E)組織組織染色圖。 圖9係本發明高劑量實驗組小鼠後小腿肌絲纖維H-E組織染色圖。 圖10係本發明小鼠後腿肌絲纖維針對肌生成抑制素之免疫組織染色圖；其中圖10(A)至(C)為對照組；圖10(D)至(F)分別為50奈克(ng)(低劑量)、500 ng(中劑量)與5000 ng(高劑量)實驗組。 圖11係本發明低、中、高劑量實驗組小鼠在施予組合物後的體重變化折線圖。其中，低劑量實驗組以標示●之折線表示、中劑量實驗組以標示■之折線表示、高劑量實驗組以標示▲之折線表示。 圖12係控制組與實驗組小鼠局部肌肉歷經坐骨神經破壞手術後，實驗組施予本發明組合物1000 ng後觀察肌肉體積比率之柱狀圖；其中左腿歷經坐骨神經破壞手術，右腿沒有歷經坐骨神經破壞手術。 圖13係圖12之控制組與實驗組各別以左腿肌肉體積比除以右腿肌肉體積比獲得之肌肉比率之柱狀圖。 圖14係控制組、實驗組A與實驗組B小鼠局部肌肉歷經坐骨神經截斷手術後，實驗組A、B分別施予本發明組合物1000ng、5000 ng觀察肌肉體積比率之柱狀圖；其中左腿歷經坐骨神經破壞手術，右腿沒有歷經坐骨神經破壞手術。 圖15係圖14之控制組、實驗組A、與實驗組B各別以左腿肌肉體積比除以右腿肌肉體積比獲得之肌肉比率之柱狀圖。

＜110＞ 維多利亞生物醫學控股股份有限公司 ＜120＞ 促進局部肌肉增長、減緩或防止局部肌肉萎縮之組合物及其用途 ＜130＞ P118502 ＜160＞ 17 ＜170＞ PatentIn version 3.5 ＜210＞ 1 ＜211＞ 678 ＜212＞ DNA ＜213＞ Staphylococcus aureus ＜400＞ 1 tcaagtgagt ttactggtct gatggagaat atgaaagttt tatatgatga tcattatgta 60 tcagcaacta aagttatgtc tgtagataaa tttttggcac atgatttaat ttataacatt 120 agtgataaaa aactaaaaaa ttatgacaaa gtgaaaacag agttattaaa tgaagattta 180 gcaaagaagt acaaagatga agtagttgat gtgtatggat caaattacta tgtaaactgc 240 tatttttcat ccaaagataa tgtaggtaaa gttacaggtg gtaaaacttg tatgtatgga 300 ggaataacaa aatatgaagg aaaccacttt gataatggga acttacaaaa tgtacttata 360 agagtttatg aaaataaaag aaacacaatt tcttttgaag tgcaaactga taagaaaagt 420 gtaacagctc aagaactaga cataaaagct aggaattttt taattaataa aaaaaatttg 480 tatgagttta acagttcacc atatgaaaca ggatatataa aatttattga aaataacggc 540 aatacttttt ggtatgatat gatgcctgca ccaggcgata agtttgacca atctaaatat 600 ttaatgatgt acaacgacaa taaaacggtt gattctaaaa gtgtgaagat agaagtccac 660 cttacaacaa agaatgga 678 ＜210＞ 2 ＜211＞ 45 ＜212＞ DNA ＜213＞ Homo sapiens ＜400＞ 2 gattttggac tcgactgtga tgagcactca acagaatctc gatgc 45 ＜210＞ 3 ＜211＞ 954 ＜212＞ DNA ＜213＞ Artificial Sequence ＜220＞ ＜223＞ 含SEC2m片段與肌生成抑制素片段之組合物。 ＜400＞ 3 tcaagtgagt ttactggtct gatggagaat atgaaagttt tatatgatga tcattatgta 60 tcagcaacta aagttatgtc tgtagataaa tttttggcac atgatttaat ttataacatt 120 agtgataaaa aactaaaaaa ttatgacaaa gtgaaaacag agttattaaa tgaagattta 180 gcaaagaagt acaaagatga agtagttgat gtgtatggat caaattacta tgtaaactgc 240 tatttttcat ccaaagataa tgtaggtaaa gttacaggtg gtaaaacttg tatgtatgga 300 ggaataacaa aatatgaagg aaaccacttt gataatggga acttacaaaa tgtacttata 360 agagtttatg aaaataaaag aaacacaatt tcttttgaag tgcaaactga taagaaaagt 420 gtaacagctc aagaactaga cataaaagct aggaattttt taattaataa aaaaaatttg 480 tatgagttta acagttcacc atatgaaaca ggatatataa aatttattga aaataacggc 540 aatacttttt ggtatgatat gatgcctgca ccaggcgata agtttgacca atctaaatat 600 ttaatgatgt acaacgacaa taaaacggtt gattctaaaa gtgtgaagat agaagtccac 660 cttacaacaa agaatggact cgaggatttt ggactcgact gtgatgagca ctcaacagaa 720 tctcgatgcg attttggact cgactgtgat gagcactcaa cagaatctcg atgcgatttt 780 ggactcgact gtgatgagca ctcaacagaa tctcgatgcg attttggact cgactgtgat 840 gagcactcaa cagaatctcg atgcgatttt ggactcgact gtgatgagca ctcaacagaa 900 tctcgatgcg attttggact cgactgtgat gagcactcaa cagaatctcg atgc 954 ＜210＞ 4 ＜211＞ 257 ＜212＞ PRT ＜213＞ Staphylococcus aureus ＜400＞ 4 Met Lys Lys Thr Ala Phe Thr Leu Leu Leu Phe Ile Ala Leu Thr Leu 1 5 10 15 Thr Thr Ser Pro Leu Val Asn Gly Ser Glu Lys Ser Glu Glu Ile Asn 20 25 30 Glu Lys Asp Leu Arg Lys Lys Ser Glu Leu Gln Gly Thr Ala Leu Gly 35 40 45 Asn Leu Lys Gln Ile Tyr Tyr Tyr Asn Glu Lys Ala Lys Thr Glu Asn 50 55 60 Lys Glu Ser His Asp Gln Phe Leu Gln His Thr Ile Leu Phe Lys Gly 65 70 75 80 Phe Phe Thr Asp His Ser Trp Tyr Asn Asp Leu Leu Val Asp Phe Asp 85 90 95 Ser Lys Asp Ile Val Asp Lys Tyr Lys Gly Lys Lys Val Asp Leu Tyr 100 105 110 Gly Ala Tyr Tyr Gly Tyr Gln Cys Ala Gly Gly Thr Pro Asn Lys Thr 115 120 125 Ala Cys Met Tyr Gly Gly Val Thr Leu His Asp Asn Asn 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Arg Val Ile Gly Ala Asn Val Trp Val Asp Gly Ile Gln 130 135 140 Lys Glu Thr Glu Leu Ile Arg Thr Asn Lys Lys Asn Val Thr Leu Gln 145 150 155 160 Glu Leu Asp Ile Lys Ile Arg Lys Ile Leu Ser Asp Lys Tyr Lys Ile 165 170 175 Tyr Tyr Lys Asp Ser Glu Ile Ser Lys Gly Leu Ile Glu Phe Asp Met 180 185 190 Lys Thr Pro Arg Asp Tyr Ser Phe Asp Ile Tyr Asp Leu Lys Gly Glu 195 200 205 Asn Asp Tyr Glu Ile Asp Lys Ile Tyr Glu Asp Asn Lys Thr Leu Lys 210 215 220 Ser Asp Asp Ile Ser His Ile Asp Val Asn Leu Tyr Thr Lys Lys Lys 225 230 235 240 Val ＜210＞ 13 ＜211＞ 375 ＜212＞ PRT ＜213＞ Homo sapiens ＜400＞ 13 Met Gln Lys Leu Gln Leu Cys Val Tyr Ile Tyr Leu Phe Met Leu Ile 1 5 10 15 Val Ala Gly Pro Val Asp Leu Asn Glu Asn Ser Glu Gln Lys Glu Asn 20 25 30 Val Glu Lys Glu Gly Leu Cys Asn Ala Cys Thr Trp Arg Gln Asn Thr 35 40 45 Lys Ser Ser Arg Ile Glu Ala Ile Lys Ile Gln Ile Leu Ser Lys Leu 50 55 60 Arg Leu Glu Thr Ala Pro Asn Ile Ser Lys Asp Val Ile Arg Gln Leu 65 70 75 80 Leu Pro Lys Ala Pro Pro Leu Arg Glu Leu Ile Asp Gln Tyr Asp Val 85 90 95 Gln Arg Asp Asp Ser Ser Asp Gly Ser Leu Glu Asp Asp Asp Tyr His 100 105 110 Ala Thr Thr Glu Thr Ile Ile Thr Met Pro Thr Glu Ser Asp Phe Leu 115 120 125 Met Gln Val Asp Gly Lys Pro Lys Cys Cys Phe Phe Lys Phe Ser Ser 130 135 140 Lys Ile Gln Tyr Asn Lys Val Val Lys Ala Gln Leu Trp Ile Tyr Leu 145 150 155 160 Arg Pro Val Glu Thr Pro Thr Thr Val Phe Val Gln Ile Leu Arg Leu 165 170 175 Ile Lys Pro Met Lys Asp Gly Thr Arg Tyr Thr Gly Ile Arg Ser Leu 180 185 190 Lys Leu Asp Met Asn Pro Gly Thr Gly Ile Trp Gln Ser Ile Asp Val 195 200 205 Lys Thr Val Leu Gln Asn Trp Leu Lys Gln Pro Glu Ser Asn Leu Gly 210 215 220 Ile Glu Ile Lys Ala Leu Asp Glu Asn Gly His Asp Leu Ala Val Thr 225 230 235 240 Phe Pro Gly Pro Gly Glu Asp Gly Leu Asn Pro Phe Leu Glu Val Lys 245 250 255 Val Thr Asp Thr Pro Lys Arg Ser Arg Arg Asp Phe Gly Leu Asp Cys 260 265 270 Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys Arg Tyr Pro Leu Thr Val 275 280 285 Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp Ile Ile Ala Pro Lys Arg Tyr 290 295 300 Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu Phe Val Phe Leu Gln Lys 305 310 315 320 Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gln Ala Asn Pro Arg Gly Ser Ala 325 330 335 Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser Pro Ile Asn Met Leu Tyr 340 345 350 Phe Asn Gly Lys Glu Gln Ile Ile Tyr Gly Lys Ile Pro Ala Met Val 355 360 365 Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser 370 375 ＜210＞ 14 ＜211＞ 15 ＜212＞ PRT ＜213＞ Homo sapiens ＜400＞ 14 Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys 1 5 10 15 ＜210＞ 15 ＜211＞ 344 ＜212＞ PRT ＜213＞ Homo sapiens ＜400＞ 15 Met Val Arg Ala Arg His Gln Pro Gly Gly Leu Cys Leu Leu Leu Leu 1 5 10 15 Leu Leu Cys Gln Phe Met Glu Asp Arg Ser Ala Gln Ala Gly Asn Cys 20 25 30 Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu Tyr Lys Thr 35 40 45 Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu Ser Thr Ser 50 55 60 Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys Trp Met Ile 65 70 75 80 Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu Thr Cys Glu 85 90 95 Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn Lys Lys Asn 100 105 110 Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile Thr Trp Lys 115 120 125 Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn Glu Cys Ala 130 135 140 Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu Val Gln Tyr 145 150 155 160 Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys Pro Gly Ser 165 170 175 Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys Val Thr Cys 180 185 190 Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr Leu Cys Gly 195 200 205 Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg Lys Ala Thr 210 215 220 Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly Lys Cys Ile 225 230 235 240 Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly Lys Lys Cys 245 250 255 Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu Cys Asp Glu 260 265 270 Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala Ser Asp Asn 275 280 285 Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala Cys Ser Ser 290 295 300 Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn Ser Ile Ser 305 310 315 320 Glu Asp Thr Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Gln Asp Tyr Ser Phe 325 330 335 Pro Ile Ser Ser Ile Leu Glu Trp 340 ＜210＞ 16 ＜211＞ 288 ＜212＞ PRT ＜213＞ Homo sapiens ＜400＞ 16 Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu 1 5 10 15 Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu 20 25 30 Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys 35 40 45 Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu 50 55 60 Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn 65 70 75 80 Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile 85 90 95 Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn 100 105 110 Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu 115 120 125 Val Gln Tyr Gln Gly Arg Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys 130 135 140 Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys 145 150 155 160 Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ala Ser Ser Glu Gln Tyr 165 170 175 Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg 180 185 190 Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly 195 200 205 Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Thr Gly Gly 210 215 220 Lys Lys Cys Leu Trp Asp Phe Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu 225 230 235 240 Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala 245 250 255 Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala 260 265 270 Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn 275 280 285 ＜210＞ 17 ＜211＞ 318 ＜212＞ PRT ＜213＞ Artificial Sequence ＜220＞ ＜223＞ 含SEC2m片段與肌生成抑制素片段之組合物 ＜400＞ 17 Ser Ser Glu Phe Thr Gly Leu Met Glu Asn Met Lys Val Leu Tyr Asp 1 5 10 15 Asp His Tyr Val Ser Ala Thr Lys Val Met Ser Val Asp Lys Phe Leu 20 25 30 Ala His Asp Leu Ile Tyr Asn Ile Ser Asp Lys Lys Leu Lys Asn Tyr 35 40 45 Asp Lys Val Lys Thr Glu Leu Leu Asn Glu Asp Leu Ala Lys Lys Tyr 50 55 60 Lys Asp Glu Val Val Asp Val Tyr Gly Ser Asn Tyr Tyr Val Asn Cys 65 70 75 80 Tyr Phe Ser Ser Lys Asp Asn Val Gly Lys Val Thr Gly Gly Lys Thr 85 90 95 Cys Met Tyr Gly Gly Ile Thr Lys Tyr Glu Gly Asn His Phe Asp Asn 100 105 110 Gly Asn Leu Gln Asn Val Leu Ile Arg Val Tyr Glu Asn Lys Arg Asn 115 120 125 Thr Ile Ser Phe Glu Val Gln Thr Asp Lys Lys Ser Val Thr Ala Gln 130 135 140 Glu Leu Asp Ile Lys Ala Arg Asn Phe Leu Ile Asn Lys Lys Asn Leu 145 150 155 160 Tyr Glu Phe Asn Ser Ser Pro Tyr Glu Thr Gly Tyr Ile Lys Phe Ile 165 170 175 Glu Asn Asn Gly Asn Thr Phe Trp Tyr Asp Met Met Pro Ala Pro Gly 180 185 190 Asp Lys Phe Asp Gln Ser Lys Tyr Leu Met Met Tyr Asn Asp Asn Lys 195 200 205 Thr Val Asp Ser Lys Ser Val Lys Ile Glu Val His Leu Thr Thr Lys 210 215 220 Asn Gly Leu Glu Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu 225 230 235 240 Ser Arg Cys Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser 245 250 255 Arg Cys Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg 260 265 270 Cys Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys 275 280 285 Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Asp 290 295 300 Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys 305 310 315

Claims (12)

1. 一種促進局部肌肉增長、延緩局部肌肉萎縮或防止局部肌肉萎縮的組合物，其包含： 一第一多肽，其係如SEQ ID NO：8所示具有相似度至少90%以上的序列；以及 一第二多肽，其包含如SEQ ID NO：14所示序列1至10個重複單元(repeat units)。
2. 如請求項1所述之組合物，其中該第二多肽為縱列重複單元(tandem repeated units)的線性排列重複抗原(linear array epitope，LAE)，其中該第二多肽為如SEQ ID NO：14所示序列1至10個重複單元。
3. 如請求項1所述之組合物，其中該第一多肽在SEQ ID NO：8對應於位點7具有T或L、位點9具有G或E、位點13具有Y或V及位點105具有H或Y。
4. 如請求項1所述之組合物，其中該第一多肽係選自由如SEQ ID NO：4、5、6、7、8、9、10、11及12所組成之群組。
5. 如請求項1至4中任一項所述之組合物，其更包含： 一連接子，其係介於該第一多肽以及該第二多肽之間；其中該組合物之序列如SEQ ID NO：17所示。
6. 一種促進局部肌肉增長、延緩局部肌肉萎縮或防止局部肌肉萎縮的核酸，其編碼由SEQ ID NO：17中所示之胺基酸序列組成的組合物。
7. 一種促進局部肌肉增長、延緩局部肌肉萎縮或防止局部肌肉萎縮的醫藥組成物，其包含如請求項1至5中任一項所述之組合物以及一藥學上可接受之載劑。
8. 一種如請求項1至5中任一項所述之組合物用於製造促進局部肌肉增長的藥物的用途。
9. 一種如請求項1至5任一項所述之組合物用於製造減緩或防止局部肌肉萎縮的藥物的用途。
10. 如請求項9所述之用途，其係用於製造適用於藥物引起之肌肉萎縮、神經創傷引起之肌肉萎縮、神經壞死所引起之肌肉萎縮、自體免疫反應引起之肌肉萎縮、環境毒素引起之肌肉萎縮或外力引起之肌肉萎縮。
11. 一種促進局部肌肉增長、延緩局部肌肉萎縮或防止局部肌肉萎縮的組合物，其包含： 一金黃色葡萄球菌腸毒素的多肽；以及， 一肌生成抑制多肽。
12. 如請求項11所述之組合物，其中該肌生成抑制多肽係選自於由生長分化因子8 (growth differentiation factor 8，GDF8)、濾泡抑素(follistatin)及第二型活化素受體(activin receptor type-2B，ACTR-IIB)所組成之群組。