TW201908342A

TW201908342A - 用於治療之藥劑、用途及方法

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Publication number: TW201908342A
Application number: TW107124976A
Authority: TW
Inventors: 羅恩拉斯克里斯昂畢歐曼恩; 伊布拉希曼約翰馬力克; 傑弗Ｂ史蒂芬翰爵恩; 索倫克里斯登森; 珍伊傑布賈格; 緹娜史圖曼恩; 阿那堤傑立堤森; 丹布林克愛德華比恩; 保羅帕瑞恩
Original assignee: 丹麥商Ｈ朗德貝克公司
Priority date: 2017-07-20
Filing date: 2018-07-19
Publication date: 2019-03-01
Also published as: NI202000005A; JOP20200007A1; WO2019016247A3; CR20200027A; IL271728B2; CL2020000070A1; CA3069391A1; AR112563A1; JP7563975B2; ECSP20002935A; CN110945029B; SG11201912228WA; MA49633A; AU2018303175B2; PH12019502869A1; JP2024119866A; CN110945029A; JP2020527152A; CO2019014090A2; IL271728B1

Abstract

本發明涉及單株抗分揀蛋白抗體，已經發現它們在校正缺陷水平的顆粒蛋白前體(PGRN)中是有用的。具體而言，該等抗體可以用於額顳失智(FTD)和肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)以及其他神經退行性障礙(如阿茲海默症(AD))的治療。

Description

用於治療之藥劑、用途及方法

本發明涉及在校正缺陷水平的顆粒蛋白前體(PGRN)中是有用的單株抗分揀蛋白(Sortilin)抗體。具體而言，該等抗體可以用於額顳失智(FTD)和肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)之治療。此外，預期該等單株抗體還可以有用於治療神經退行性障礙(如阿茲海默症(AD))。

〔序列表的引用〕

本申請包括一個或多個序列表(依照37 C.F.R.1.821等等)，其係以電腦可讀介質形式揭露的(文件案名：0993_ST25.txt，創建於2016年6月22日，並且大小為144kB)，將該文件藉由引用以其全部內容結合在此。

分揀蛋白係一種已經被報導介導前神經營養因子的促凋亡效應並且介導神經營養因子受體的運輸和分揀的受體(Nykjær等人，2012,Trends Neurosci.[神經科學趨勢]2012；35(4)：261-70；Glerup等人，Handb Exp Pharmacol[實驗藥理學手冊],2014；220：165-89，Carlo等人，J Mol Med(Berl).[分子醫學雜誌(柏林)]2014年9月；92(9)：905-11)。已經鑒定了多種分揀蛋白配位基，包括藉由X射線晶體學將其高親和力結合位點定位到分揀蛋白分子的β螺旋槳通道內的神經降壓素(Quistgaard等人，Nat Struct Mol Biol.[自然結構與分子生物學]2009年1月；16(1)：96-8；Quistgaard等人，Protein Sci.[蛋白質科學]2014年9月；23(9)：1291-300)。最近，顯示分揀蛋白作為生長因子顆粒蛋白前體(PGRN)的高親和力受體起作用(PGRN,Hu等人，Neuron.[神經元]2010年11月18日；68(4)：654-67)。

PGRN((前上皮因子，顆粒體蛋白-上皮因子先質，PC細胞衍生的生長因子，acrogranin))係一種具有抗炎和神經營養樣作用的分泌型糖基化蛋白(關於最新綜述，Nguyen,Trends Endocrinol Metab.[內分泌與代謝趨勢]2013年12月；24(12)：597-606)。PGRN被蛋白水解地切割為顆粒體蛋白，但是關於PGRN和顆粒體蛋白的生理作用以及其受體的身份還有許多需要瞭解。PGRN已經被牽涉於若干細胞功能中，包括細胞週期調節和細胞運動(He,Z.& Bateman,A.,J.MoI.Med.[分子醫學雜誌]57：600-612(2003)；Monami,G.等人，Cancer Res.[癌症研究](5(5：7103-7110(2006))、創面修復、炎症(Zhu,J.等人，Cell[細胞]777：867-878(2002))、生長因子(如血管內皮生長因子(VEGF))的誘導(Tangkeangsiπsin,W.& Serrero,G,Carcinogenesis[致癌作用]25.1587-1592(2004))以及腫瘤發生(He,Z.& Bateman,A.,J.MoI.Med.[分子醫學雜誌]81：600-612(2003),Monami,G.等人，Cancer Res[癌症研究](5(5：7103-7110(2006)；Serrero,G.,Biochem Biophys.Res.Commun.[生物化學和生物物理研究通訊]505-409-413(2003)，Lu,R & Serrero,G.,Proc.Natl Acad Sci U.SA[美國國家科學院院刊]98 142-147(2001)；Liau,LM.，等人，Cancer Res[癌症研究].60：1353-1360(2000))。已經報導PGRN結合TNF受體(Tang W等人，Science[科學]2011，332(6028)：478-84)，但是這種觀察已經受到了別人的質疑(Chen等人，J Neurosci.[神經科學雜誌]2013，33(21)：9202-9213)。

PGRN與分揀蛋白的結合已經被映射到神經降壓素位點並且被報導按與神經降壓素類似的方式僅由PGRN C末端結構域介導(Zheng等人，PLoS One.[公共科學圖書館期刊]2011；6(6)：e21023；Lee等人，Hum Mol Genet. [人分子遺傳學]2013)，並且與其一致，已經顯示神經降壓素阻斷分揀蛋白與PGRN以及其他配位基的相互作用。結合後，分揀蛋白介導PGRN的溶酶體清除並且由此調節細胞外PGRN水平(Hu等人，2010)。因此，已經顯示分揀蛋白的敲減或過表現調節細胞培養物中的細胞外PGRN水平(Carrasquillo等人，Am J Hum Genet.[美國人遺傳學雜誌]2010年12月10日；87(6)：890-7)，並且在小鼠中，報導分揀蛋白缺陷增加PGRN水平並且恢復PGRN +/-小鼠中的血漿和腦PGRN水平(Hu等人，2010)。有趣的是，分揀蛋白附近的單核苷酸多態性(SNP)與降低的血漿PGRN水平和增加的分揀蛋白mRNA水平相關(Carrasquillo等人，Am J Hum Genet.[美國人遺傳學雜誌]2010年12月10日；87(6)：890-7)。該等觀察表明分揀蛋白係一種關鍵的細胞外PGRN調節劑。

PGRN已經與額顳失智(FTD，一種由行為和語義改變表徵的進行性失智)以及額顳葉退化(FTLD)和含有TAR DNA結合蛋白-43(TDP-43)的神經元包涵體或τ包涵體聯繫(Baker等人，2006，Nature.[自然]2006年8月24日；442(7105)：916-9；Cruts等人，2006，Nature[自然].2006年8月24日；442(7105)：916-9；Cruts等人，Nature[自然]442：920-924(2006)；Am J Hum Genet.[美國人遺傳學雜誌]2010年12月10日；87(6)：890-7，M等人，Trends in Genetics[遺傳學趨勢]24：186-194(2008))。大部分的散發性和家族性FTD病例顯示出與ALS類似的TDP-43病理學(約50%)，並且FTD-TDP43和ALS被一些人認為構成疾病譜(Ito D Neurology.[神經病學]2011年10月25日；77(17)：1636-43；Boxer AL等人，Alzheimers Dement.[阿茲海默症與失智症]2013年3月；9(2)：176-88；Rademakers等人，Nat Rev Neurol.[神經病學自然評論]2012年8月；8(8)：423-434)，這係由於共同的病理和遺傳因素以及症狀學中的一些重疊。沒有可供FTD用的疾病修飾治療選擇。具有TDP-43病理學的一小群額顳失智患者在顆粒體蛋白基因(GRN)中具有功能缺失突變，從而導致PGRN單倍型不足。顆粒體蛋白基因中的超過75個不同突變(全部都導致PGRN水平和/或功能減少)已經與FTD相關聯並且據信升高血漿和腦中的細胞外PGRN將阻礙疾病過程。

PGRN突變還已經與阿茲海默症(AD)聯繫(Sheng等人，2014,Gene.[基因]2014年6月1日；542(2)：141-5；Brouwers等人，2008,Neurology.[神經病學]2008年8月26日；71(9)：656-64)，表明PGRN缺陷可能在AD發病機制中發揮重要作用。此外，已經在小鼠AD模型中觀察到PGRN的神經保護作用(Minami等人，2014,Nat Med.[自然醫學]2014年10月；20(10)：1157-64)，從而為以下觀點提供支持，即增強的PGRN在AD和可能地其他神經退行性疾病中可能是有益的。

本申請描述了抗人分揀蛋白抗體的產生和鑒定，該等抗體可以調節細胞模型和小鼠中的PGRN。那些抗體出人意料地結合到分揀蛋白上的遠離先前報導的顆粒蛋白前體結合位點(所謂的神經降壓素-位點)的區域，並且仍能夠增加細胞外PGRN。

諸位發明人已經定義了六個分揀蛋白結合區並且鑒定出結合區域(“E區”)的有效的抗體。該等抗體不阻斷PGRN與分揀蛋白的結合，但影響/增加PGRN水平，表明該等抗體具有新穎的作用模式。因為PGRN具有神經保護和抗炎作用，諸位發明人的發現指示靶向分揀蛋白的此類抗體在一系列神經退行性障礙(包括FTD/FTLD)的治療中可能具有有益效果。具有TDP-43病理學的一個亞組的FTD/FTLD患者在編碼PGRN的基因中攜帶突變，從而導致PGRN單倍型不足。預期分揀蛋白抗體可阻礙此PGRN缺陷並且可能對於患有其中PGRN水平可以影響TDP43功能和病理的其他TDP-43蛋白質病(包括ALS)的患者，以及在其中增加的PGRN功能可能是神經保護性的其他神經退行性疾病(包括AD)中具有類似的治療益處。

本發明的諸位發明人已經產生了單株抗體，該等抗體能夠出人意料地結合到被命名為如在SEQ ID NO：146中所定義的“E-區”的新穎分揀蛋白區，並且能夠調節患者腦中的PGRN水平。

本發明還涉及一種預防或治療與患者的腦中降低的PGRN水平相關的疾病之方法，該方法包括給予有效劑量的結合到分揀蛋白的E-區的抗體或其抗原結合片段。特別地，該等疾病包括FTD、ALS和蛋白質病(如AD、PD)。

圖1說明了抗體選擇中的步驟。A-E係指基於如描述於實例1和SEQ ID No 147-155中的改組構建體，對應的分揀蛋白結合抗體所分配的區域。“其他”係指不能被分配到一個區域並且可以結合在A-區與B-區之間的介面處的抗體。Tet係指還結合四齒魨屬-分揀蛋白的抗體。

圖2示出了基於與分揀蛋白改組構建體的結合之抗體區域分配。

圖A示出了用於抗體區域分配的如實例1中所述的改組構建體之線性說明。基於人分揀蛋白序列(SEQ ID NO：145)(以灰色描繪的區段)產生分揀蛋白改組構建體，在該序列中胺基酸殘基被交換為來自四齒魨屬分揀蛋白序列(以黑色描繪)(SEQ ID NO：149)的相應胺基酸(實例1-3)。

圖B示出了在A中線性地說明的改組構建體之預測結構。深色殘基指示在改組構建體中變為相應的四齒魨屬序列的殘基。

圖C說明了分別被分配到D-區和E區類別的抗體之結合模式。“+”指示與給定的改組構建體結合，並且“-”指示缺少結合。基於與不同改組構建體的結合模式，為抗體分配區域。所得抗體區域類別由A-E指示。對於說明的D和E區抗體，兩者均結合如由“+”指示的人序列(全部為灰色)並且均不結合如由“-”指示的四齒魨屬序列(全部為黑色)，而E區抗體結合hB45678改組構建體，然而D區抗體並不結合，從而產生如圖A中說明的結合定位。對於E區抗體，觀察到與以下改組區域結合：hsort、hB06-10、B12390、hB45678。該等抗體不與hB01-05和四齒魨屬構建體結合。

該等抗體並不與完全四齒魨屬的分揀蛋白結合，兩個除外。這兩個能夠結合四齒魨屬序列的抗體被表示為“tet”。“其他”係指不能被分配到一個區域的抗體。

圖3示出了人E-區抗體的結合親和力。使用Octet384RED，藉由生物膜層干涉技術如實例2中描述的確定與分揀蛋白構建體的結合親和力(EC50，ng/ml)。NB指示沒有結合。0.1ng/ml-10ng/ml和>10ng/ml之間的值指示結合。區域分配係基於抗體與不同分揀蛋白改組構建體的結合模式(圖2)。與分揀蛋白構建體hB01-05和Tetra缺少結合表明該等抗體與E區結合。

圖4示出了E-區抗體之間的交叉阻斷。每種抗體與人野生型分揀蛋白結合以形成抗體-分揀蛋白複合物。針對與預成型的抗體-分揀蛋白複合物的結合對所有其他E結構域抗體進行測試(實例8)。藉由分析與抗體-分揀蛋白結合的干擾來確定來自相同或不同結構域的分揀蛋白抗體之間的交叉阻斷。使用Octet 384RED藉由生物膜層干涉技術測量抗體與分揀蛋白-ECD-His的結合(如前所述)。左欄指示一級(固定)抗體並且頂行指示二級抗體(針對固定抗體進行測試的抗體)。一級和二級抗體與分揀蛋白-ECD-His的結合都將產生高於0.1的應答值並且指示兩種抗體都結合到該蛋白的不同區域。小於0.1的應答值顯示缺少二級抗體的結合和被固定(一級)抗體有效的交叉阻斷，這表明兩種抗體結合到分揀蛋白的同一區域。‘x’指示沒有結合，並且因此抗體彼此阻斷。 ‘b’指示兩種抗體與分揀蛋白的結合，並且因此不彼此交叉阻斷。

來自E結構域的26種抗體中的22種交叉阻斷來自該組的所有抗體，並且剩餘4種抗體交叉阻斷26種抗體中的20種抗體，表明大多數抗體結合到分揀蛋白上的相同區域或相鄰區域。

圖5示出了分揀蛋白抗體對從明顯健康的男性(18歲)產生的神經元分化的誘導多能幹細胞(iPSC)中的細胞外PGRN之影響。(實例9)

圖6示出了用分揀蛋白人E-區結合抗體處理的人分揀蛋白的敲入(KI)小鼠中之血漿PGRN水平(實例10)。與同種型對照抗體抗HEL治療的小鼠相比，抗體#30增加血漿PGRN水平。

藉由皮下給藥給小鼠注射10mg/kg的測試抗體。將它們在48小時後處死，並收集血液樣品進行分析。藉由ELISA測量血漿PGRN。數據呈現為平均值±SD。藉由t檢驗分析數據。***p<0.001

圖7A和B示出了分揀蛋白抗體對從明顯健康的個體以及從PGRN R493X患者產生的神經元分化的誘導多能幹細胞(iPSC)中的細胞外PGRN之影響(實例11)。

圖8(A-F)示出了涵蓋抗體30的構象表位之代表肽。示出的所有肽都顯示出受保護免於交換大於0.5D(實例12)。

如在此使用的，術語“分揀蛋白(Sortilin)”與“分揀蛋白(Sortilin protein)”係同義的(在例如UniProt中鑒定為Q99523，1和2)。分揀蛋白的胺基酸編號相對於SEQ ID NO：145如下所示的給出，蛋胺酸(M)係胺基酸1：

如在此使用的，術語“E區”旨在係指分揀蛋白上的由如下所示的SEQ ID NO：146中的胺基酸組成的區域(對應於SEQ ID NO：145的殘基612-753)：

對於E區抗體，觀察到與以下改組區域結合：hsort、hB06-10、B12390、hB45678。該等抗體不與hB01-05和tetra結合。

PGRN基因(前上皮因子，顆粒體蛋白-上皮因子先質，PC細胞衍生的生長因子，acrogranin)編碼68.5kDa的分泌型糖蛋白，該糖蛋白具有較小的顆粒體蛋白基序(範圍從6kDa-25kDa)的7.5倍重複，該重複可以從先質PGRN中蛋白水解地切割下來(He,Z.& Bateman,J.MoI.Med.[分子醫學雜誌]81：600-6X2(2003))。在非神經元細胞中，PGRN已經與多個事件相關聯，如細胞週期調節和細胞運動(He,Z.& Bateman,A.,J.MoI.Med.[分子醫學雜誌]57：600-612(2003)；Monami,G.等人，Cancer Res.[癌症研究](5(5：7103-7110(2006))、創面修復、炎症(Zhu,J.等人，Cell[細胞]777：867-878(2002))、生長因子(如血管內皮生長因子(VEGF))的誘導(Tangkeangsiπsin,W.& Serrero,G,Carcinogenesis[致癌作用]25.1587-1592(2004))以及腫瘤發生(He,Z.& Bateman,A.,J.MoI.Med.[分子醫學雜誌]81：600-612(2003)，Monami,G.等人，Cancer Res[癌症研究](5(5：7103-7110(2006)；Serrero,G.,Biochem Biophys.Res.Commun.[生物化學和生物物理研究通訊]505-409-413(2003)，Lu,R & Serrero,G.,Proc.Natl Acad Sa U.SA[美國國家科學院院刊]98 142-147(2001)；Liau,L M.等人，Cancer Res.[癌症研究]60：1353-1360(2000))。

PGRN突變導致單倍型不足(Baker,M.等人，Nature[自然]442：916-919(2006)；Cruts,M.等人，Nature[自然]442：920-924(2006))並且已知存在於將近50%的家族性FTD病例中，使得PGRN突變成為FTD的主要遺傳促成因素(Cruts,M.& Van Broeckhoven,C,Trends Genet.[遺傳學趨勢]24：186-194(2008)；Le Ber,I.等人，Brain[腦]129：3051-3065(2006))。PGRN突變的功能缺失雜合性狀意味著在健康個體中，PGRN表現在保護健康個體免於患上FTD中發揮劑量依賴性的關鍵作用。

在本發明的背景下，術語“抗體”(Ab)係指免疫球蛋白分子或根據本發明的一些實施方式，免疫球蛋白分子的具有結合到分子(“抗原”)的表位上的能力的片段。天然存在的抗體典型地包含四聚體，該四聚體通常由至少兩條重(H)鏈和至少兩條輕(L)鏈構成。每條重鏈由重鏈可變域(在此縮寫為VH)和重鏈恒定域構成，重鏈恒定域通常由3個結構域(CH1、CH2和CH3)構成。重鏈可以具有任何同種型，包括IgG(IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亞型)。每條輕鏈由輕鏈可變域(在此縮寫為VL)和輕鏈恒定域(CL)構成。輕鏈包括κ鏈和λ鏈。重鏈和輕鏈可變域典型地負責抗原識別，而重鏈和輕鏈恒定域可以介導免疫球蛋白與宿主組織或因子(包括免疫系統的各種細胞(例如，效應細胞)和經典補體系統的第一組分(C1q))的結合。VH和VL域還可以被進一步細分成稱作“互補性決定區”的超變區，它們中間穿插著更保守的稱為“構架區”(FR)的區域。每個VH和VL由三個CDR域和四個FR域構成，按以下順序從胺基末端排到羧基末端：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。重鏈和輕鏈可變域含有與抗原相互作用的結合域。特別相關的是已經“被分離”以便存在於與它可以在自然界中存在的不同於物理環境中的或者已經被修飾以便在胺基酸序列上不同於天然存在的抗體的抗體及其抗原結合片段。

術語“表位”意指能夠特異性結合抗體的抗原決定簇。表位通常由如胺基酸或糖側鏈分子的表面基團組成，並且通常具有特定的三維結構特徵以及特定的電荷特徵。構象表位和線性表位的區別在於與前者而非後者的結合在變性溶劑的存在下常常缺失。表位可以包含直接牽涉在結合中的胺基酸殘基以及其他沒有直接牽涉在結合中的胺基酸殘基，如被特異性抗原結合肽有效阻斷的胺基酸殘基(換言之，胺基酸殘基在特異性抗原結合肽的影響範圍之內)。

如在此使用的，術語“抗體的抗原結合片段”意指能夠與表位結合的抗體的片段、部分、區域或結構域(無論它係如何產生的(例如，經由切割、重組、合成等))，並且因此術語“抗原結合”旨在意指與“表位結合”係相同的，這樣使得例如，“抗體的抗原結合片段”旨在係與“抗體的表位結合片段”係相同的。抗原結合片段可以含有這樣的抗體的1、2、3、4、5或所有6個CDR域，並且儘管能夠結合到這樣的表位，仍可以展現出對不同於這樣的抗體的表位的這樣的表位的特異性、親和力或選擇性。然而，較佳的是，抗原結合片段含有這樣的抗體的所有6個CDR域。抗體的抗原結合片段可以是單條多肽鏈(例如，scFv)的一部分或包含單條多肽鏈，或者可以是兩條或更多條多肽鏈(各自具有胺基末端和羧基末端)(例如，雙抗體、Fab片段、Fab₂片段等)的一部分或包含兩條或更多條多肽鏈。可以例如藉由完整抗體的蛋白酶切割來獲得展現出抗原結合能力的抗體片段。更較佳的是，儘管Fv片段的兩個結構域VL和VH由單獨基因或編碼這樣的基因序列的多核苷酸(例如，其編碼cDNA)天然地編碼，但是可以將這兩個結構域使用重組方法藉由柔性接頭連接，該柔性接頭使得這兩個結構域能夠成為單條蛋白鏈，在該單條蛋白鏈中VL區和VH區締合以形成單價抗原結合分子(稱為單鏈Fv(scFv)；參見例如，Bird等人，(1988)Science[科學]242：423-426；和Huston等人，(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)[美國國家科學院院刊]85：5879-5883)。可替代地，藉由採用太短(例如，小於約9個殘基)的柔性接頭以使得單條多肽鏈的VL域和VH域締合在一起，可以形成雙特異性抗體、雙抗體或類似分子(其中兩條這樣的多肽鏈締合在一起以形成二價抗原結合分子)(關於雙抗體的描述，參見例如PNAS USA 90(14),6444-8(1993))。本發明所包括的抗原結合片段的實例包括(i)Fab'或Fab片段，由VL、VH、CL和CH1域組成的單價片段，或如描述於WO 2007059782中的單價抗體；(ii)F(ab')2片段，包含兩個由二硫鍵在鉸鏈結構域連接的Fab片段的二價片段；(iii)基本上由VH域和CH1域組成的Fd片段；(iv)Fv片段，實質上由VL和VH結構域組成，(v)dAb片段(Ward等人，Nature[自然]341，544-546(1989))，實質上由VH結構域組成，並且還稱為域抗體(Holt等人；Trends Biotechnol.[生物技術趨勢]2003年11月；2i(ll)：484-90)；(vi)駱駝抗體或奈米抗體(Revets等人；Expert Opin Biol Ther.[生物理論專家觀點]2005年1月；5_(l)：l ll-24)以及(vii)分離的互補決定區(CDR)。此外，儘管Fv片段的兩個結構域VL和VH由分離基因編碼，但是可以使用重組方法藉由合成接頭將它們連接，該合成接頭使得它們能夠成為單條蛋白鏈，在該單條蛋白鏈中VL域和VH域配對以形成單價分子(稱為單鏈抗體或單鏈Fv(scFv)；參見例如，Bird等人，Science[科學]242，423-426(1988)和Huston等人，PNAS USA 85，5879-5883(1988))。在此進一步討論在本發明的背景下的該等和其他有用抗體片段。還應理解的是，除非另外指明，否則術語抗體還包括抗體樣多肽，如藉由任何已知技術(如酶促切割、肽合成和重組技術)提供的嵌合抗體和人源化抗體以及保留與抗原結合能力的抗體片段(抗原結合片段)。這樣產生的抗體可以具有任何同種型。如在此使用的，“同種型”係指由重鏈恒定結構域基因編碼的免疫球蛋白類別(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。使用熟習該項技術者已知的常規技術獲得這類抗體片段；可以按與完整抗體相同的方式針對實用性容易地對能夠與希望的表位結合的適合片段進行篩選。

術語“雙特異性抗體”係指含有各自靶向獨立靶標的兩個獨立抗原結合片段的抗體。該等靶標可以是存在於不同蛋白質上的表位或存在於相同靶標上的不同表位。可以使用親本單特異性二價抗體分子的HC的恒定域中的補償胺基酸變化製備雙特異性抗體分子。所得異源二聚體抗體含有一個由兩個不同親本單特異性抗體貢獻的Fab。Fc域中的胺基酸變化導致具有隨時間穩定的雙特異性的異源二聚體抗體的穩定性增加。(Ridgway等人，Protein Engineering[蛋白質工程]9，617-621(1996)；Gunasekaran等人，JBC 285，19637-1(2010)；Moore等人，MAB 3：6 546-557(2011)；Strop等人，JMB 420，204-219(2012)；Metz等人，Protein Engineering[蛋白質工程]25：10 571-580(2012)；Labrijn等人，PNAS 110：113，5145-5150(2013)；Spreter Von Kreudenstein等人，MAB 5：5 646-654(2013))。雙特異性抗體還可以包括使用ScFv融合物產生的分子。然後將兩個單特異性scfv獨立地連接至能夠形成穩定異源二聚體的Fc域，以產生單個雙特異性分子(Mabry等人，PEDS 23：3 115-127(2010))。雙特異性分子具有雙重結合能力。

“抗分揀蛋白抗體”或“分揀蛋白抗體”(取決於書寫它的背景，在此可互換地使用)係特異性地結合到分揀蛋白，並且尤其是結合到分揀蛋白E區SEQ ID NO：146的抗體、其抗原結合片段。結合到分揀蛋白E區的抗分揀蛋白抗體通常將以或低於22nM，如在22nM與1nM之間、在10nM與1nM之間或在5nM與1nM之間，或甚至更高，如在約1pM或1pM至5pM的親和力(IC50)結合到E-區內的1、2、3、4、5、6或7個連續胺基酸的構象表位或線性表位。

如在此使用的，術語“人抗體”(其可以縮寫為“humAb”或“HuMab”)旨在包括具有衍生自人種系免疫球蛋白序列的可變域和恒定域的抗體。本發明的人抗體可以包括不是由人種系免疫球蛋白序列編碼的胺基酸殘基(例如，在體外藉由隨機或位點特異性誘變或在基因重排期間或在體內藉由體細胞突變引入的突變)。

如在此使用的，術語“單株抗體”或“單株抗體組成物”係指單分子組成物的抗體分子製劑。常規的單株抗體組成物表現出對特定表位的單一結合特異性和親和力。在某些實施方式中，單株抗體可以由多於一種Fab域構成，由此增加對多於一種靶標的特異性。術語“單株抗體”或“單株抗體組成物”並不旨在受限於任何具體產生方法(例如，重組的、轉基因的、雜交瘤等)。

術語“抗體XX”旨在表示以下抗體或其抗原結合片段(例如抗體“6003-056”)，其包含如由其對應SEQ ID NO定義的輕鏈、輕鏈可變域或輕鏈可變域CDR1-3和如由其對應SEQ ID NO定義的重鏈、重鏈可變域或重鏈可變域CDR1-3或者由其組成。在某些實施方式中，抗體或其抗原結合片段藉由如由其SEQ ID NO定義的其整個重鏈可變域和如由其SEQ ID NO定義的其輕鏈可變域定義。

胺基酸殘基的編號可以藉由以下進行：IMGT®，國際免疫遺傳學資訊系統®(the international ImMunoGeneTics information system®)或Kabat, E.A.、Wu,T.T.、Perry,H.M.、Gottesmann,K.S.& Foeller,C.(1991).Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫學目的蛋白質序列]，第5版，NIH出版號91-3242美國健康與人服務部(U.S.Department of Health and Human Services)；Chothia,C.& Lesk,A.M.(1987)，或Canonical structures For The Hypervariable domains Of Immunoglobulins.[免疫球蛋白的高變結構域的典型結構]，J.Mol.Biol.[分子生物學雜誌]196,901-917。

如在此使用的，抗體或其抗原結合片段被說成“特異性地”結合另一分子的區域(即，表位)，如果它相對於替代表位與該表位更加頻繁地、更加快速地、以更長的持續時間和/或以更大的親和力或親合力反應或締合的話。在一個實施方式中，本發明的抗體或其抗原結合片段相對於另一分子至少強10倍地與其靶標(分揀蛋白)結合；較佳的是強至少50倍並且更較佳的是強至少100倍。較佳的是，抗體或其抗原結合片段在生理條件下(例如，在體內)結合。因此，所謂“特異性地結合到分揀蛋白”，我們包括該抗體或其抗原結合片段以這樣的特異性和/或在這樣的條件下結合到分揀蛋白上的能力。適合於確定這樣的結合的方法係熟習該項技術者已知的，並且示例性方法描述在所附實例中。如在此使用的，在抗體與預定抗原結合的背景下，術語“結合”典型地是指以對應於約10^-7M或更小(如約10^-8M或更小、如約10^-9M或更小)的KD的親和力結合，當用抗原作為配位基並且抗體作為分析物在BIAcore® 3000或T200儀器中藉由例如表面電漿共振(SPR)技術確定時，並且以對應於以下KD的親和力結合到預定抗原，該KD比該抗體對與除預定抗原或緊密相關抗原之外的非特異性抗原(例如，BSA、酪蛋白)結合的親和力低至少十倍，如低至少100倍、例如低至少1,000倍、如低至少10,000倍、例如低至少100,000倍。使親和力更低的量依賴於抗體的KD，從而當抗體的KD非常低時(即抗體係高度特異性的)，則使針對抗原的親和力低於針對非特異性抗原的親和力的量可以是至少10,000倍。具體而言，本發明涉及抗分揀蛋白抗體，當使用Octet 384RED藉由例如生物膜層干涉技術確定時(實例7)，其展現出對應於或低於22nM(如在22nM與1nM之間、在10nM與1nM之間或在5nM與1nM之間)的結合親和力。

在本發明的某些實施方式中，本發明涉及能夠與humAb抗體30或humAb抗體900競爭與分揀蛋白結合的抗體或其抗原結合片段。在另一個實施方式中，本發明涉及能夠與抗體30競爭與如在SEQ ID NO：146中定義的分揀蛋白的E區結合的抗體或其抗原結合片段。這種競爭性結合抑制可以使用本領域熟知的測定和方法確定，例如使用固定有人分揀蛋白的BIAcore®晶片並且與參考抗體(如抗體“30”或“900”)，與和不與有待測試的抗體多肽孵育。可替代地，可以使用成對映射方法，其中參考抗體(如抗體“30”或“900”)被固定到BIAcore®晶片的表面，人分揀蛋白抗原被結合到固定的抗體，並且然後測試第二抗體同時結合人分揀蛋白的能力(參見‘BIAcore® Assay Handbook[BIAcore®測定手冊]’，GE醫療集團生命科學部(GE Healthcare Life Sciences)，29-0194-00 AA 05/2012；將其揭露藉由引用結合在此)。可替代地，使用Octet 384Red(實例7 & 8)或類似方法以證明競爭性結合。

如在此使用的，術語“kd”(sec-1或1/s)係指特定抗體-抗原相互作用的解離速率常數。所述值又稱為koff值。

如在此使用的，術語“ka”(M-1 x sec-1或1/Msec)係指特定抗體-抗原相互作用的締合速率常數。

如在此使用的，術語“KD”(M)係指特定抗體-抗原相互作用的解離平衡常數並且藉由kd除以ka獲得。

如在此使用的，術語“KA”(M-1或1/M)係指特定抗體-抗原相互作用的締合平衡常數並且藉由ka除以kd獲得。

在一個實施方式中，本發明涉及展現出以下特性中的一種或多種的抗體或其抗原結合片段：(i)在0.5nM-10nM(如1nM-5nM或1nM-2nM)之間的對分揀蛋白的結合親和力(K_D)；(ii)減少和/或抑制表現分揀蛋白的細胞清除PGRN的能力；(iii)減少和/或抑制表現分揀蛋白的細胞對PGRN的內吞的能力；(iv)增加表現人分揀蛋白的敲入小鼠的血漿中的PGRN量和/或濃度的能力。

術語“減少和/或抑制表現分揀蛋白的細胞清除PGRN的能力”包括將培養基中的PGRN濃度增加至少20%(如在25%與500%之間、在25%與400%之間或在25%與200%之間)的能力，如藉由ELISA測定如實例9中所揭露的測量的。

“增加表現人分揀蛋白的敲入小鼠的血漿中的PGRN量和/或濃度的能力”包括將血漿中的PGRN濃度增加至少25%但較佳的是在50%與500%之間的能力，如藉由ELISA測定如實例10中所揭露的測量的。

在一些抗體中，僅需CDR的一部分(即結合所需的CDR殘基亞群，稱為SDR)在人源化抗體中保持結合。可以藉由分子建模和/或憑經驗或者如在Gonzales,N.R.等人，(2004)“SDR Grafting Of A Murine Antibody Using Multiple Human Germline Templates To Minimize Its Immunogenicity[使用多個人種系範本對鼠類抗體進行SDR接枝以最小化其免疫原性],”Mol.Immunol.[分子免疫學]41：863-872中所述的，基於先前研究(例如CDR H2中的殘基H60-H65通常是不需要的)從位於喬西亞(Chothia)超變環外的卡巴特CDR區域(參見，Kabat等人，(1992)Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫學關注的蛋白質序列],National Institutes of Health[美國國立衛生研究院]公開號91-3242；Chothia,C.等人，(1987)“Canonical Structures For The Hypervariable Regions Of Immunoglobulins[免疫球蛋白的超變區的典型結構],”J.Mol.Biol.[分子生物學雜誌]196：901-917)中鑒定不接觸相關表位並且不在SDR中的CDR殘基。在此類人源化抗體中，在一個或多個供體CDR殘基不存在或整個供體CDR被省略的位置處，佔據該位置的胺基酸可以是在受體抗體序列中佔據相應位置(藉由Kabat編號)的胺基酸。在包含在內的CDR中受體對供體胺基酸的這樣的取代的數目反映了競爭考慮的平衡。這樣的取代在降低人源化抗體中的小鼠胺基酸的數目方面並且因此在降低潛在的免疫原性方面是潛在有利的。然而，取代還可以引起親和力變化，並且較佳的是避免親和力的顯著減少。還可以憑經驗選擇CDR內的取代位置和待取代的胺基酸。

CDR殘基的單個胺基酸改變可以導致失去功能性結合的事實(Rudikoff,S.等人，(1982)“Single Amino Acid Substitution Altering Antigen-binding Specificity[單個胺基酸取代改變抗原結合特異性],”Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)[美國國家科學院院刊]79(6)：1979-1983)提供了用於系統性鑒定可替代的功能性CDR序列的手段。在用於獲得此類變體CDR的一個較佳方法中，誘變編碼CDR的多核苷酸(例如經由隨機誘變或藉由定點方法(例如聚合酶鏈介導的採用編碼突變座位的引物進行的擴增))以產生具有經取代的胺基酸殘基的CDR。藉由比較原始(功能性)CDR序列中的相關殘基的身份與取代的(非功能性)變體CDR序列的身份，可以鑒定出該取代的BLOSUM62.iij取代得分。BLOSUM系統提供了藉由分析序列數據庫創建的胺基酸取代矩陣，用於可信比對(Eddy,S.R.(2004)“Where Did The BLOSUM62 Alignment Score Matrix Come From？[BLOSUM62比對得分矩陣來自哪裡？]”Nature Biotech.[自然生物技術]22(8)：1035-1036；Henikoff,J.G.(1992)“Amino acid substitution matrices from protein blocks[來自蛋白質嵌段的胺基酸取代矩陣],”Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)[美國國家科學院院刊]89：10915-10919；Karlin,S.等人，(1990)“Methods For Assessing The Statistical Significance Of Molecular Sequence Features By Using General Scoring Schemes[藉由使用通用評分方案評估分子序列特徵的統計顯著性的方法]”Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)[美國國家科學院院刊]87：2264-2268；Altschul,S.F.(1991)“Amino Acid Substitution Matrices From An Information Theoretic Perspective[來自資訊理論視角的胺基酸取代矩陣]”J.Mol.Biol.[分子生物學雜誌]219,555-565)。目前，最先進的BLOSUM數據庫係BLOSUM62數據庫(BLOSUM62.iij)。表1呈現了BLOSUM62.iij取代得分(得分越高取代越保守，並且因此更加可能地，該取代將不會影響功能)。如果包含所得CDR的抗原結合片段不能結合到分揀蛋白，例如，則BLOSUM62.iij取代得分被認為是不充分保守的，並且選擇且產生新的具有更高取代得分的候選取代。因此，例如，如果原始殘基係穀胺酸(E)並且非功能性取代殘基係組胺酸(H)，則BLOSUM62.iij取代得分將為0，並且更保守的變化(如到天冬胺酸、天冬醯胺、穀胺醯胺或賴胺酸)係較佳的。

本發明因此考慮了隨機誘變用於鑒定改進的CDR的用途。在本發明的背景下，保守取代可以由反映在以下三個表中的一個或多個中的胺基酸類別內的取代定義：

保守取代的胺基酸殘基類別：

替代性保守胺基酸殘基取代類別：

胺基酸殘基的可替代性物理和功能分類：

更保守的取代分組包括：纈胺酸-亮胺酸-異亮胺酸、苯丙胺酸-酪胺酸、賴胺酸-精胺酸、丙胺酸-纈胺酸以及天冬醯胺-穀胺醯胺。

另外組的胺基酸還可以使用描述於例如Creighton(1984)Proteins：Structure and Molecular Properties[蛋白質：結構和分子特性](第2版，1993)，W.H.弗裡曼公司(W.H.Freeman and Company)中的原則來配製。

噬菌體展示技術可以可替代地用於增加(或降低)CDR親和力。被稱為親和力成熟的這種技術採用誘變或“CDR步移”並且重選擇使用靶抗原或其抗原性抗原結合片段來鑒定具有如下CDR的抗體，該等CDR當與初始抗體或親本抗體相比時以更高(或更低)親和力結合到抗原(參見例如，Glaser等人，(1992)J.Immunology[免疫學雜誌]149：3903)。誘變整個密碼子而不是單個核苷酸產生胺基酸突變的半隨機譜。可構建由一組變體殖株所組成的庫，每一殖株都在單個CDR中相差單個胺基酸改變，並且該等殖株包含代表了每個CDR殘基的每個可能胺基酸取代的變體。可藉由使固定化突變體與標記的抗原相接觸來篩選對抗原的結合親和力增加(或減少)的突變體。本領域中已知的任何篩選方法(例如ELISA)可以用於鑒定對抗原具有增加或降低的親和力的突變體抗體(參見Wu等人，1998，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)[美國國家科學院院刊]95：6037；Yelton等人，1995，J.Immunology[免疫學雜誌]155：1994)。可以可能地使用使輕鏈隨機化的CDR步移(參見例如Schier等人，1996，J.Mol.Bio.[分子生物學雜誌]263：551)。

用於完成此類親和力成熟的方法描述於以下中，例如：Krause,J.C.等人(2011)“An Insertion Mutation That Distorts Antibody Binding Site Architecture Enhances Function Of A Human Antibody[扭曲抗體結合位點構造的插入突變增強了人類抗體的功能]”，MBio.2(1)pii：e00345-10.doi：10.1128/mBio.00345-10；Kuan,C.T.等人(2010)“Affinity-Matured Anti-Glycoprotein NMB Recombinant Immunotoxins Targeting Malignant Gliomas And Melanomas[靶向惡性膠質瘤和黑色素瘤的親和力成熟的抗糖蛋白NMB重組免疫毒素]”，Int.J.Cancer[國際癌症雜誌]10.1002/ijc.25645；Hackel,B.J.等人(2010)“Stability And CDR Composition Biases Enrich Binder Functionality Landscapes[穩定性和CDR組成偏移豐富了結合物功能景觀]”，J.Mol.Biol.[分子生物學雜誌]401(1)：84-96；Montgomery,D.L.等人(2009)“Affinity Maturation And Characterization Of A Human Monoclonal Antibody Against HIV-1 gp41[針對HIV-1 gp41的人類單株抗體的親和力成熟和表徵]”，MAntibodies[M抗體]1(5)：462-474；Gustchina,E.等人(2009)“Affinity Maturation By Targeted Diversification Of The CDR-H2 Loop Of A Monoclonal Fab Derived From A Synthetic Naïve Human Antibody Library And Directed Against The Internal Trimeric Coiled-Coil Of Gp41 Yields A Set Of Fantibodies With Improved HIV-1 Neutralization Potency And Breadth[藉由源自合成原初人類抗體文庫並且針對Gp41的內部三聚捲曲螺旋的單株F抗體的CDR-H2環的靶向多樣化的親和力成熟產生了一組具有改進的HIV-1中和效力和幅度的Fab]，Virology[病毒學]393(1)：112-119；Finlay,W.J.等人(2009)“Affinity Maturation Of A Humanized Rat Antibody For Anti-RAGE Therapy：Comprehensive Mutagenesis Reveals A High Level Of Mutational Plasticity Both Inside And Outside The Complementarity-Determining Regions[用於抗RAGE治療的人源化大鼠抗體的親和力成熟：全面誘變揭示在互補決定區內外同時存在的高水平的突變可塑性]”，J.Mol.Biol.[分子生物學雜誌]388(3)：541-558；Bostrom,J.等人(2009)“Improving Antibody Binding Affinity And Specificity For Therapeutic Development[改進抗體結合親和力和特異性用於治療開發]”，Methods Mol.Biol.[分子生物學方法]，525：353-376；Steidl,S.等人(2008)“In Vitro Affinity Maturation Of Human GM-CSF Antibodies By Targeted CDR-Diversification[藉由靶向的CDR多樣化的人類GM-CSF抗體的體外親和力成熟]”，Mol.Immunol.[分子免疫學]46(1)：135-144；和Barderas,R.等人(2008)“Affinity Maturation Of Antibodies Assisted By In Silico Modeling[藉由電腦建模輔助的抗體的親和力成熟]”，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)[美國國家科學院院刊]105(26)：9029-9034。

因此，所包含的抗體或其抗原結合片段的CDR變體的序列可以藉由取代而不同於親本抗體的CDR的序列；例如取代的4個胺基酸殘基、3個胺基酸殘基、2個胺基酸殘基或胺基酸殘基中的1個。根據本發明的實施方式，進一步設想的是在CDR區中的胺基酸可以用如在上表3中定義的保守取代來取代。

術語“轉基因非人動物”係指具有包含一個或多個人重鏈和/或輕鏈轉基因或轉染色體(整合或未整合進動物的天然基因組DNA)的基因組並且能夠表現全人抗體的非人動物。例如，轉基因小鼠可以具有人輕鏈轉基因和人重鏈轉基因或人重鏈轉染色體，這樣使得當用分揀蛋白抗原和/或表現分揀蛋白的細胞免疫時，該小鼠產生人抗分揀蛋白抗體。人重鏈轉基因可以被整合進小鼠的染色體DNA中，轉基因小鼠就是這樣，例如HuMAb小鼠，如HCo7或HCo12小鼠，或者人重鏈轉基因可以被維持在染色體外，如描述於WO 02/43478中的轉染色體KM小鼠就是這樣。這樣的轉基因和轉染色體小鼠(在此統稱為“轉基因小鼠”)藉由經歷V-D-J重組和同種型轉換能夠產生多種針對給定抗原的人單株抗體同種型(如IgG、IgA、IgM、IgD和/或IgE)。

轉基因非人動物還可以藉由引入編碼這樣的特異性抗體的基因(例如藉由將該等抗體基因可操作地連接到在該動物的乳中表現的編碼蛋白質的基因)而用於產生針對特定抗原的抗體。

如在此使用的術語“治療(treatment)”或“治療(treating)”意指改善、減緩、減弱或逆轉疾病或障礙的進展或嚴重性，或者改善、減緩、減弱或逆轉這種疾病或障礙的一種或多種症狀或副作用。出於本發明的目的，“治療(treatment)”或“治療(treating)”另外意指用於獲得有益的或希望的臨床結果的方法，其中“有益的或希望的臨床結果”包括但不限於症狀的緩解、障礙或疾病程度的減小、穩定化的(即沒有惡化的)疾病或障礙狀態、疾病或障礙狀態進展的延緩或減緩、疾病或障礙狀態的改善或減輕以及疾病或障礙的緩解，不論是部分地或全部地、可檢出的或不可檢出的。

當應用於本發明的抗體或其抗原結合片段時，“有效量”係指以所需劑量並且持續所需時間段足以達到預期生物效應或希望的治療結果(包括但不限於臨床結果)的量。當應用於本發明的抗體或其抗原結合片段時，短語“治療有效量”旨在表示足以改善、減輕、穩定、逆轉、減緩、減弱或延緩障礙或疾病狀態的進展，或者該障礙或疾病的症狀的進展的抗體或其抗原結合片段的量。在實施方式中，本發明的方法提供了抗體或其抗原結合片段與其他化合物組合的給藥。在此類情況下，“有效量”係足以引起預期的生物效應的該組合的量。

本發明的抗分揀蛋白抗體或其抗原結合片段的治療有效量可以根據以下因素而變化，如個體的疾病狀態、年齡、性別和體重，以及抗分揀蛋白抗體或其抗原結合片段在個體中引起希望的應答的能力。治療有效量還係抗體或抗體部分的有益治療效果超過其任何毒性或有害效果的量。

本發明的抗體較佳的是人或人源化抗體。

這個區域中的胺基酸殘基的編號可以使用以下來進行，例如：IMGT®，國際免疫遺傳學資訊系統®(the international ImMunoGeneTics information system®)或Kabat,E.A.、Wu,T.T.、Perry,H.M.、Gottesmann,K.S.& Foeller,C.(1991).Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫學目的蛋白質序列]，第5版，NIH出版號91-3242美國健康與人服務部(U.S.Department of Health and Human Services)；Chothia,C.& Lesk,A.M.(1987)，或Canonical structures For The Hypervariable domains Of Immunoglobulins.[免疫球蛋白的高變結構域的典型結構]J.Mol.Biol.[分子生物學雜誌]196,901-917。

抗體6003-028：

因此，本發明涉及包含以下或由其組成的抗體或其抗原結合片段：(a)具有SEQ ID NO：1的胺基酸序列的重鏈CDR1；(b)具有SEQ ID NO：2的胺基酸序列的重鏈CDR2；(c)具有SEQ ID NO：3的胺基酸序列的重鏈CDR3；(d)具有SEQ ID NO：4的胺基酸序列的輕鏈CDR1； (e)具有SEQ ID NO：5的胺基酸序列的輕鏈CDR2；及(f)具有SEQ ID NO：6的胺基酸序列的輕鏈CDR3；較佳的是，單株抗體可以包含SEQ ID NO：109的重鏈可變域和SEQ ID NO：110的輕鏈可變域或者由其組成。

抗體6003-056：

因此，本發明涉及包含以下或由其組成的抗體或其抗原結合片段：a.包含SEQ ID NO：7的重鏈可變域CDR1；b.包含SEQ ID NO：8的重鏈可變域CDR 2；c.包含SEQ ID NO：9的重鏈可變域CDR 3；d.包含SEQ ID NO：10的輕鏈可變域CDR 1；e.包含SEQ ID NO：11的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含SEQ ID NO：12的輕鏈可變域CDR 3。

較佳的是，單株抗體可以包含SEQ ID NO：111的重鏈可變域和SEQ ID NO：112的輕鏈可變域或者由其組成。

抗體6003-1286：

因此，本發明涉及包含以下或由其組成的抗體或其抗原結合片段：a.包含SEQ ID NO：13的重鏈可變域CDR1；b.包含SEQ ID NO：14的重鏈可變域CDR 2；c.包含SEQ ID NO：15的重鏈可變域CDR 3；d.包含SEQ ID NO：16的輕鏈可變域CDR 1；e.包含SEQ ID NO：17的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含SEQ ID NO：18的輕鏈可變域CDR 3。

較佳的是，單株抗體可以包含SEQ ID NO：113的重鏈可變域和SEQ ID NO：114的輕鏈可變域或者由其組成。

抗體6003-030：

因此，本發明涉及包含以下或由其組成的抗體或其抗原結合片段：a.包含SEQ ID NO：19的重鏈可變域CDR1；b.包含SEQ ID NO：20的重鏈可變域CDR 2；c.包含SEQ ID NO：21的重鏈可變域CDR 3；d.包含SEQ ID NO：22的輕鏈可變域CDR 1；e.包含SEQ ID NO：23的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含SEQ ID NO：24的輕鏈可變域CDR 3。

較佳的是，單株抗體可以包含SEQ ID NO：115的重鏈可變域和SEQ ID NO：116的輕鏈可變域或者由其組成。

抗體6003-1277：

因此，本發明涉及包含以下或由其組成的抗體或其抗原結合片段：a.包含SEQ ID NO：25的重鏈可變域CDR1；b.包含SEQ ID NO：26的重鏈可變域CDR 2；c.包含SEQ ID NO：27的重鏈可變域CDR 3；d.包含SEQ ID NO：28的輕鏈可變域CDR 1；e.包含SEQ ID NO：29的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含SEQ ID NO：30的輕鏈可變域CDR 3。

較佳的是，單株抗體可以包含SEQ ID NO：117的重鏈可變域和SEQ ID NO：118的輕鏈可變域或者由其組成。

抗體6003-381：

因此，本發明涉及包含以下或由其組成的抗體或其抗原結合片段：a.包含SEQ ID NO：31的重鏈可變域CDR1；b.包含SEQ ID NO：32的重鏈可變域CDR 2；c.包含SEQ ID NO：33的重鏈可變域CDR 3；d.包含SEQ ID NO：34的輕鏈可變域CDR 1；e.包含SEQ ID NO：35的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含SEQ ID NO：36的輕鏈可變域CDR 3。

較佳的是，單株抗體可以包含SEQ ID NO：119的重鏈可變域和SEQ ID NO：120的輕鏈可變域或者由其組成。

抗體6003-083：

因此，本發明涉及包含以下或由其組成的抗體或其抗原結合片段：a.包含SEQ ID NO：37的重鏈可變域CDR1；b.包含SEQ ID NO：38的重鏈可變域CDR 2；c.包含SEQ ID NO：39的重鏈可變域CDR 3；d.包含SEQ ID NO：40的輕鏈可變域CDR 1；e.包含SEQ ID NO：41的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含SEQ ID NO：42的輕鏈可變域CDR 3。

較佳的是，單株抗體可以包含SEQ ID NO：121的重鏈可變域和SEQ ID NO：122的輕鏈可變域或者由其組成。

抗體6003-799：

因此，本發明涉及包含以下或由其組成的抗體或其抗原結合片段：a.包含SEQ ID NO：43的重鏈可變域CDR1；b.包含SEQ ID NO：44的重鏈可變域CDR 2；c.包含SEQ ID NO：45的重鏈可變域CDR 3；d.包含SEQ ID NO：46的輕鏈可變域CDR 1；e.包含SEQ ID NO：47的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含SEQ ID NO：48的輕鏈可變域CDR 3。

較佳的是，單株抗體可以包含SEQ ID NO：123的重鏈可變域和SEQ ID NO：124的輕鏈可變域或者由其組成。

抗體6003-910：

因此，本發明涉及包含以下或由其組成的抗體或其抗原結合片段：a.包含SEQ ID NO：49的重鏈可變域CDR1；b.包含SEQ ID NO：50的重鏈可變域CDR 2；c.包含SEQ ID NO：51的重鏈可變域CDR 3；d.包含SEQ ID NO：52的輕鏈可變域CDR 1；e.包含SEQ ID NO：53的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含SEQ ID NO：54的輕鏈可變域CDR 3。

較佳的是，單株抗體可以包含SEQ ID NO：125的重鏈可變域和SEQ ID NO：126的輕鏈可變域或者由其組成。

抗體6003-423：

因此，本發明涉及包含以下或由其組成的抗體或其抗原結合片段：a.包含SEQ ID NO：55的重鏈可變域CDR1； b.包含SEQ ID NO：56的重鏈可變域CDR 2；c.包含SEQ ID NO：57的重鏈可變域CDR 3；d.包含SEQ ID NO：58的輕鏈可變域CDR 1；e.包含SEQ ID NO：59的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含SEQ ID NO：60的輕鏈可變域CDR 3。

較佳的是，單株抗體可以包含SEQ ID NO：127的重鏈可變域和SEQ ID NO：128的輕鏈可變域或者由其組成。

抗體6003-822：

因此，本發明涉及包含以下或由其組成的抗體或其抗原結合片段：a.包含SEQ ID NO：61的重鏈可變域CDR1；b.包含SEQ ID NO：62的重鏈可變域CDR 2；c.包含SEQ ID NO：63的重鏈可變域CDR 3；d.包含SEQ ID NO：64的輕鏈可變域CDR 1；e.包含SEQ ID NO：65的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含SEQ ID NO：66的輕鏈可變域CDR 3。

較佳的是，單株抗體可以包含SEQ ID NO：129的重鏈可變域和SEQ ID NO：130的輕鏈可變域或者由其組成。

抗體6003-886：

因此，本發明涉及包含以下或由其組成的抗體或其抗原結合片段：a.包含SEQ ID NO：67的重鏈可變域CDR1；b.包含SEQ ID NO：68的重鏈可變域CDR 2；c.包含SEQ ID NO：69的重鏈可變域CDR 3； d.包含SEQ ID NO：70的輕鏈可變域CDR 1；e.包含SEQ ID NO：71的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含SEQ ID NO：72的輕鏈可變域CDR 3。

較佳的是，單株抗體可以包含SEQ ID NO：131的重鏈可變域和SEQ ID NO：132的輕鏈可變域或者由其組成。

抗體6003-072：

因此，本發明涉及包含以下或由其組成的抗體或其抗原結合片段：a.包含SEQ ID NO：73的重鏈可變域CDR1；b.包含SEQ ID NO：74的重鏈可變域CDR 2；c.包含SEQ ID NO：75的重鏈可變域CDR 3；d.包含SEQ ID NO：76的輕鏈可變域CDR 1；e.包含SEQ ID NO：77的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含SEQ ID NO：78的輕鏈可變域CDR 3。

較佳的是，單株抗體可以包含SEQ ID NO：133的重鏈可變域和SEQ ID NO：134的輕鏈可變域或者由其組成。

抗體6003-900：

因此，本發明涉及包含以下或由其組成的抗體或其抗原結合片段：a.包含SEQ ID NO：79的重鏈可變域CDR1；b.包含SEQ ID NO：80的重鏈可變域CDR 2；c.包含SEQ ID NO：81的重鏈可變域CDR 3；d.包含SEQ ID NO：82的輕鏈可變域CDR 1；e.包含SEQ ID NO：83的輕鏈可變域CDR 2；及 f.包含SEQ ID NO：84的輕鏈可變域CDR 3。

較佳的是，單株抗體可以包含SEQ ID NO：135的重鏈可變域和SEQ ID NO：136的輕鏈可變域或者由其組成。

抗體6003-936：

因此，本發明涉及包含以下或由其組成的抗體或其抗原結合片段：a.包含SEQ ID NO：85的重鏈可變域CDR1；b.包含SEQ ID NO：86的重鏈可變域CDR 2；c.包含SEQ ID NO：87的重鏈可變域CDR 3；d.包含SEQ ID NO：88的輕鏈可變域CDR 1；e.包含SEQ ID NO：89的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含SEQ ID NO：90的輕鏈可變域CDR 3。

較佳的是，單株抗體可以包含SEQ ID NO：137的重鏈可變域和SEQ ID NO：138的輕鏈可變域或者由其組成。

抗體6003-408：

因此，本發明涉及包含以下或由其組成的抗體或其抗原結合片段：a.包含SEQ ID NO：91的重鏈可變域CDR1；b.包含SEQ ID NO：92的重鏈可變域CDR 2；c.包含SEQ ID NO：93的重鏈可變域CDR 3；d.包含SEQ ID NO：94的輕鏈可變域CDR 1；e.包含SEQ ID NO：95的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含SEQ ID NO：96的輕鏈可變域CDR 3。

較佳的是，單株抗體可以包含SEQ ID NO：139的重鏈可變域和 SEQ ID NO：140的輕鏈可變域或者由其組成。

抗體6003-471：

因此，本發明涉及包含以下或由其組成的抗體或其抗原結合片段：a.包含SEQ ID NO：97的重鏈可變域CDR1；b.包含SEQ ID NO：98的重鏈可變域CDR 2；c.包含SEQ ID NO：99的重鏈可變域CDR 3；d.包含SEQ ID NO：100的輕鏈可變域CDR 1；e.包含SEQ ID NO：101的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含SEQ ID NO：102的輕鏈可變域CDR 3。

較佳的是，單株抗體可以包含SEQ ID NO：141的重鏈可變域和SEQ ID NO：142的輕鏈可變域或者由其組成。

抗體6003-972：

因此，本發明涉及包含以下或由其組成的抗體或其抗原結合片段：a.包含SEQ ID NO：103的重鏈可變域CDR1；b.包含SEQ ID NO：104的重鏈可變域CDR 2；c.包含SEQ ID NO：105的重鏈可變域CDR 3；d.包含SEQ ID NO：106的輕鏈可變域CDR 1；e.包含SEQ ID NO：107的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含SEQ ID NO：108的輕鏈可變域CDR 3。

較佳的是，單株抗體可以包含SEQ ID NO：143的重鏈可變域和SEQ ID NO：144的輕鏈可變域或者由其組成。

根據一個實施方式，以上所提及的抗體可以進一步包括與所述 CDR1、CDR2和/或CDR3(HC和/或VC)序列具有不超過4個胺基酸差異、或不超過3個胺基酸差異、或不超過2個胺基酸差異或不超過1個胺基酸差異的變體。

此外，抗體可以與藥學上可接受的載體一起處於組成物中。本發明的抗體可以在治療中使用。具體而言，本發明的抗體可以用於治療FTD或ALS或蛋白質病(如阿茲海默症(AD))。

藉由本發明所設想的治療可以是長期的並且患者可以接受至少2週(如至少持續1個月、6個月、1年或更久)治療。

本發明的抗體可以例如是藉由雜交瘤方法產生的單株抗體，該方法首次由Kohler等人，Nature[自然]256，495(1975)進行描述，或者可以是藉由重組DNA或其他方法產生的單株抗體。還可以使用例如，在Clackson等人(Nature[自然]352，624-628(1991))和Marks等人，J.Mol.Biol.[分子生物學雜誌]222，581-597(1991)中描述的技術從噬菌體抗體展示文庫中分離單株抗體。單株抗體可以從任何適合的來源獲得。因此，例如，單株抗體可以從製備自鼠類脾臟B淋巴細胞的雜交瘤獲得，該等淋巴細胞獲得自用感興趣的抗原或編碼感興趣的抗原的核酸免疫的小鼠，例如，該等淋巴細胞處於在表面表現該抗原的細胞的形式。單株抗體還可以從來源於免疫的人的或來自非人哺乳動物(如大鼠、兔、狗、綿羊、山羊、靈長類動物等)的表現抗體的細胞的雜交瘤獲得。

在一個實施方式中，本發明的抗體係人抗體。可以使用攜帶部分人免疫系統而非小鼠系統的轉基因或轉染色體小鼠產生針對分揀蛋白的人單株抗體。這樣的轉基因和轉染色體小鼠包括在此分別稱為HuMAb小鼠和KM小鼠的小鼠。

HuMAb小鼠含有人免疫球蛋白基因微座位連同定向突變，該微座位編碼非重排人重鏈可變和恒定(μ和Y)以及輕鏈可變和恒定(κ)免疫球蛋白序列，該等定向突變使內源μ和K鏈座位失活(Lonberg,N.等人，Nature[自然]368，856-859(1994))。因此，該等小鼠展示出小鼠IgM或κ的表現減少，並且響應於免疫，所引入的人類重鏈和輕鏈轉基因經歷類別轉換和體細胞突變以產生高親和力人類IgG、κ單株抗體(Lonberg,N.等人(1994)，同上；評論於Lonberg,N.，Handbook of Experimental Pharmacology[實驗藥物學手冊]113，49-101(1994)中；Lonberg,N.和Huszar,D.，Intern.Rev.Immunol.[國際免疫學評論]第13卷65-93(1995)，以及Harding,F.和Lonberg,N.，Ann.N.Y.Acad.Sci.[紐約科學院年刊]764 536-546(1995))。HuMAb小鼠的製備詳細描述於Taylor,L.等人，Nucleic Acids Research[核酸研究]20，6287-6295(1992)，Chen,J.等人，International Immunology[國際免疫學]5，647-656(1993)，Tuaillon等人，J.Immunol.[免疫學雜誌]152，2912-2920(1994)，Taylor,L.等人，International Immunology[國際免疫學]6，579-591(1994)，Fishwild,D.等人，Nature Biotechnology[自然生物技術]14，845-851(1996)。還參見US 5,545,806、US 5,569,825、US 5,625,126、US 5,633,425、US 5,789,650、US 5,877,397、US 5,661,016、US 5,814,318、US 5,874,299、US 5,770,429、US 5,545,807、WO 98/24884、WO 94/25585、WO 93/1227、WO 92/22645、WO 92/03918以及WO 01/09187。

HCo7、HCo12、HCo17和HCo20小鼠在其內源輕鏈(κ)基因中具有JKD破壞(如描述於Chen等人，EMBO J.[歐洲分子生物學學會雜誌]12，811-820(1993))，在其內源重鏈基因中具有種CMD破壞(如描述於WO 01/14424的實例1)以及KCo5人κ輕鏈轉基因(如描述於Fishwild等人，Nature Biotechnology[自然生物技術]14，845-851(1996))。此外，HCo7小鼠具有HCo7人重鏈轉基因(如描述於US 5,770,429)，HCo12小鼠具有HCo12人重鏈轉基因(如描述於WO 01/14424的實例2)，HCo17小鼠具有HCo17人重鏈轉基因(如描述於WO 01/09187的實例2)並且HCo20小鼠具有HCo20人重鏈轉基因。所得小鼠在對內源小鼠重鏈和κ輕鏈座位破壞純合的背景下表現人免疫球蛋白重鏈和κ輕鏈轉基因。

在KM小鼠品系中，內源小鼠κ輕鏈基因已經純合地破壞，如Chen等人EMBO J.[歐洲分子生物學學會雜誌]12，811-820(1993)中所述，並且內源性小鼠重鏈基因已經純合地破壞，如在WO 01/09187的實例1中所述。這個小鼠品系攜帶人κ輕鏈轉基因KCo5，如描述於Fishwild等人，Nature Biotechnology[自然生物技術]14，845-851(1996)中。這個小鼠品系還攜帶由染色體14片段hCF(SC20)構成的人重鏈轉染色體，如描述於WO 02/43478中。HCo12-Balb/c、HCo17-Balb/c和HCo20-Balb/c小鼠可以藉由將HCo12、HCo17和HCo20與KCo5[J/K](Balb)雜交來產生，如描述於WO 09/097006中。

在KM小鼠品系中，內源小鼠κ輕鏈基因已經純合地破壞，如Chen等人EMBO J.[歐洲分子生物學學會雜誌]12，811-820(1993)中所述，並且內源性小鼠重鏈基因已經純合地破壞，如在WO 01/09187的實例1中所述。這個小鼠品系攜帶人κ輕鏈轉基因KCo5，如描述於Fishwild等人，Nature Biotechnology[自然生物技術]14，845-851(1996)中。這個小鼠品系還攜帶由染色體14抗原結合片段hCF(SC20)構成的人重鏈轉染色體，如描述於WO 02/43478中。

來自該等轉基因小鼠的脾細胞可以用於根據熟知的技術產生分泌人單株抗體的雜交瘤。本發明的人單株抗體或多株抗體或者源於其他物種的本發明的抗體還可以藉由產生對於感興趣的免疫球蛋白重鏈和輕鏈序列而言轉基因的另一非人哺乳動物或植物並且從其中產生可回收形式的抗體而轉基因地產生。與哺乳動物中的轉基因生產相結合，抗體可以從山羊、奶牛或其他哺乳動物的乳中產生和回收。參見例如US 5,827,690、US 5,756,687、US 5,750,172和US 5,741,957。

本發明的抗體可以具有任何同種型。同種型的選擇典型地將由希望的效應子功能(如ADCC誘導)來指導。示例性同種型係IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。可以使用人輕鏈恒定域κ或λ中任一者。如果希望的話，可以藉由已知方法轉換本發明的抗分揀蛋白抗體的類別。例如，最初係IgM的本發明抗體可以類別轉換為本發明的IgG抗體。此外，類別轉換技術可以用來將一個IgG亞類轉化成另一亞類，例如從IgG1到IgG2。因此，本發明的抗體的效應子功能可以藉由同種型切換變為例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4抗體，用於各種治療用途。在一個實施方式中，本發明的抗體係IgG1抗體，例如IgG1,κ。抗體被說成屬於特定同種型，如果其胺基酸序列相對於其他同種型與該同種型大部分同源的話。

在一個實施方式中，本發明的抗體係全長抗體，較佳的IgG抗體，特別是IgG1,κ抗體。在另一個實施方式中，本發明的抗體係抗體抗原結合片段或單鏈抗體。

抗體及其抗原結合片段可以例如使用常規技術藉由抗原結合片段化來獲得，並且按與如在此針對完整抗體描述的相同方式針對實用性對抗原結合片段進行篩選。例如，F(ab')2抗原結合片段可以藉由用胃蛋白酶處理抗體而產生。可以處理所得F(ab')2抗原結合片段，以減少二硫鍵，從而產生Fab'抗原結合片段。Fab抗原結合片段可以藉由用木瓜蛋白酶處理IgG抗體而獲得；Fab'抗原結合片段可以用胃蛋白酶消化IgG抗體而獲得。F(ab')抗原結合片段還可以經由硫醚鍵或二硫鍵藉由結合以下描述的Fab’而產生。Fab'抗原結合片段係藉由切割F(ab')₂的鉸鏈域的二硫鍵獲得的抗體抗原結合片段。Fab'-抗原結合片段可以藉由用還原劑(如二硫蘇糖醇)處理F(ab')₂抗原結合片段而獲得。抗體抗原結合片段還可以藉由在重組細胞中表現編碼此類抗原結合片段的核酸而產生(參見例如Evans等人，J.Immunol.Meth.[免疫學方法雜誌]184,123-38(1995))。例如，編碼F(ab')2抗原結合片段的一部分的嵌合基因可以包括編碼H鏈的CH1域和鉸鏈域的DNA序列，隨後是翻譯終止密碼子，以產生這樣一種截短的抗體抗原結合片段分子。

在一個實施方式中，抗分揀蛋白抗體係單價抗體，較佳的是如在WO 2007059782(將其藉由引用以其全部內容結合在此)中描述的具有鉸鏈區缺失的單價抗體。因此，在一個實施方式中，抗體係單價抗體，其中所述抗分揀蛋白抗體藉由以下方法構建，該方法包括：i)提供編碼所述單價抗體的輕鏈的核酸構建體，所述構建體包含編碼所選抗原特異性抗分揀蛋白抗體的VL區的核苷酸序列和編碼Ig的恒定CL區的核苷酸序列，其中編碼所選抗原特異性抗體的VL區的所述核苷酸序列和編碼Ig的CL區的所述核苷酸序列被可操作地連接在一起，並且其中，在IgG1亞型的情況下，編碼CL區的核苷酸序列已經被修飾，這樣使得在多株人IgG的存在下或當給予給動物或人時，該CL區不含有能夠與包含該CL區的一致胺基酸序列的其他肽形成二硫鍵或共價鍵的任何胺基酸；ii)提供編碼所述單價抗體的重鏈的核酸構建體，所述構建體包含編碼所選抗原特異性抗體的VH區的核苷酸序列和編碼人Ig的恒定CH區的核苷酸序列，其中編碼CH區的核苷酸序列已經被修飾，這樣使得在多株人IgG的存在下或當給予給動物、人時，對應於鉸鏈區和(如由Ig亞型所要求的)CH區的其他區域(如CH3區)的區域不包含參與和包含人Ig的CH區的一致胺基酸序列的其他肽形成二硫鍵或共價或穩定的非共價重鏈間鍵的任何胺基酸殘基，其中編碼所選抗原特異性抗體的VH區的所述核苷酸序列和編碼所述Ig的CH區的所述核苷酸序列被可操作地連接在一起；iii)提供用於產生所述單價抗體的細胞表現系統；iv)藉由在(iii)的細胞表現系統的細胞中共表現(i)和(ii)的核酸構建體來產生所述單價抗體。

類似地，在一個實施方式中，抗分揀蛋白抗體係單價抗體，其包含：(i)如在此描述的本發明抗體的可變域或所述結構域的抗原結合部分，以及(ii)免疫球蛋白的CH域或其包含CH2和CH3域的結構域，其中該CH域或其結構域已經被修飾，這樣使得對應於鉸鏈域和(如果該免疫球蛋白不是IgG4亞型的話)CH域的其他結構域(如CH3域)的結構域不包含任何胺基酸殘基，該等任何胺基酸殘基能夠與相同CH域形成二硫鍵或在多株人IgG的存在下與相同CH域形成其他共價或穩定的非共價重鏈間鍵。

在一個另外的實施方式中，單價抗體的重鏈已經被修飾，這樣使得已經缺失整個鉸鏈區。

在另一個另外的實施方式中，單價抗體的序列已經被修飾，這樣使得它不包含用於N-連接的糖基化的任何受體位點。

本發明還包括“雙特異性抗體”，其中抗分揀蛋白結合區(例如，抗分揀蛋白單株抗體的分揀蛋白結合區)係靶向一種以上表位的二價或多價雙特異性支架的一部分(例如第二表位可以包含主動轉運受體的表位，這樣使得該雙特異性抗體將展現出跨生物障壁(如血腦障壁)的改進的胞轉作用)。因此，在另一個另外的實施方式中，抗分揀蛋白抗體的單價Fab可以連接到另外的靶向不同蛋白的Fab或scfv，以產生雙特異性抗體。雙特異性抗體可以具有雙重功能，例如由抗分揀蛋白結合域賦予的治療功能和可以結合到受體分子以增強跨生物障壁(如血腦障壁)轉移的轉運功能。

本發明的抗體及其抗原結合片段還包括單鏈抗體。單鏈抗體係重鏈和輕鏈Fv域被連接的肽。在一個實施方式中，本發明提供了單鏈Fv (scFv)，其中本發明的抗分揀蛋白抗體的Fv中的重鏈和輕鏈由柔性肽接頭(典型地為約10、12、15或更多個胺基酸殘基)連接成單條肽鏈。產生此類抗體的方法描述於例如US 4,946,778；Pluckthun，在The Pharmacology of Monoclonal Antibodies[單株抗體藥理學]，第113卷，Rosenburg和Moore編輯，施普林格出版公司(Springer-Verlag)，紐約，第269-315頁(1994)；Bird等人，Science[科學]242，423-426(1988)；Huston等人，PNAS USA 85，5879-5883(1988)和McCafferty等人，Nature[自然]348，552-554(1990)。單鏈抗體可以是單價的，如果僅使用單個VH和VL的話；可以是二價的，如果使用兩個VH和VL的話；或可以是多價的，如果使用兩個以上VH和VL的話。

可以藉由包含任何適合數目的經修飾的胺基酸和/或與此類軛合取代基締合來修飾在此描述的抗體及其抗原結合片段。在此背景下適合性通常由至少基本上保留與非衍生化親本抗分揀蛋白抗體相關的分揀蛋白選擇性和/或分揀蛋白特異性的能力決定。一個或多個經修飾的胺基酸的包含在例如增加多肽血清半衰期、降低多肽抗原性或增加多肽儲存穩定性中可以是有利的。對一種或多種胺基酸進行修飾，例如，在重組產生的過程中與翻譯同時進行或在翻譯之後進行(例如，在哺乳動物細胞中表現過程中在N-X-S/T基序上的N-連接的糖基化作用)，或藉由合成手段進行修飾。經修飾的胺基酸的非限制性實例包括糖基化的胺基酸、硫酸化的胺基酸、異戊二烯化(例如，法尼基化(farnesylated)、香葉基-香葉基化(geranyl-geranylated))的胺基酸、乙醯化的胺基酸、醯化的胺基酸、聚乙二醇化的胺基酸、生物素醯化的胺基酸、羧基化的胺基酸、磷酸化的胺基酸等。足夠指導熟習該項技術者進行胺基酸修飾的參考文獻在文獻中相當充分。示例性方案見於Walker(1998)Protein Protocols On CD-Rom[唯讀型光碟蛋白質指南]，胡馬納出版社(Humana Press)，托托華(Totowa)，新澤西州。經修飾的胺基酸可以例如選自糖基化的胺基酸、聚乙二醇化的胺基酸、法尼基化的胺基酸、乙醯化的胺基酸、生物素醯化的胺基酸、軛合到脂質部分的胺基酸或軛合到有機衍化劑的胺基酸。

本發明的抗體及其抗原結合片段還可以藉由共價軛合到聚合物而化學地修飾，以例如增加其循環半衰期。示例性聚合物和將其附接至肽的方法展示於例如US 4,766,106；US 4,179,337；US 4,495,285和US 4,609,546。另外的說明性聚合物包括聚氧乙基化多元醇和聚乙二醇(PEG)(例如，具有在約1,000g/mol與約40,000g/mol之間，例如在約2,000g/mol與約20,000g/mol之間，例如約3,000g/mol-12,000g/mol的分子量的PEG)。

本發明的抗體及其抗原結合片段可以進一步用在診斷方法中或用作診斷成像配位基。

在一個實施方式中，提供了本發明的包含一個或多個放射性標記的胺基酸的抗體及其抗原結合片段。放射性標記的抗分揀蛋白抗體可以用於診斷和治療兩種目的(軛合到放射性標記的分子係另一可能特徵)。此類標記的非限制性實例包括但不限於鉍(²¹³Bi)、碳(¹¹C、¹³C、¹⁴C)、鉻(⁵¹Cr)、鈷(⁵⁷Co、⁶⁰Co)、銅(⁶⁴Cu)、鏑(¹⁶⁵Dy)、鉺(¹⁶⁹Er)、氟(¹⁸F)、釓(¹⁵³Gd、¹⁵⁹Gd)、鎵(⁶⁸Ga、⁶⁷Ga)、鍺(⁶⁸Ge)、金(¹⁹⁸Au)、鈥(¹⁶⁶Ho)、氫(³H)、銦(¹¹¹In、¹¹²In、¹¹³In、¹¹⁵In)、碘(¹²¹I、¹²³I、¹²⁵I、¹³¹I)、銥(¹⁹²Ir)、鐵(⁵⁹Fe)、氪(^81mKr)、鑭(¹⁴⁰La)、鑥(¹⁷⁷Lu)、錳(⁵⁴Mn)、鉬(⁹⁹Mo)、氮(¹³N、¹⁵N)、氧(¹⁵O)、鈀(¹⁰³Pd)、磷(³²P)、鉀(⁴²K)、鐠(¹⁴²Pr)、鉕(¹⁴⁹Pm)、錸(¹⁸⁶Re、¹⁸⁸Re)、銠(¹⁰⁵Rh)、銣(⁸¹Rb、⁸²Rb)、釕(⁸²Ru、⁹⁷Ru)、釤(¹⁵³Sm)、鈧(⁴⁷Sc)、硒(⁷⁵Se)、鈉(²⁴Na)、鍶(⁸⁵Sr、⁸⁹Sr、⁹²Sr)、硫(³⁵S)、鍀(⁹⁹Tc)、鉈(²⁰¹Tl)、錫(¹¹³Sn、¹¹⁷Sn)、氙(¹³³Xe)、鐿(¹⁶⁹Yb、¹⁷⁵Yb、¹⁷⁷Yb)、釔(⁹⁰Y)以及鋅(⁶⁵Zn)。用於製備放射性標記的胺基酸和相關肽衍生物的方法在本領域是已知的(參見例如，Junghans等人，Cancer Chemotherapy and Biotherapy[在癌症化療和生物療法]655-686(第2版，Chafner和Longo編輯，利平科特瑞文公司(Lippincott Raven)(1996))以及US 4,681,581、US 4,735,210、US 5,101,827、US 5,102,990(US RE35,500)、US 5,648,471和US 5,697,902)。例如，放射性同位素可以氯胺T方法進行軛合(Lindegren,S.等人(1998) “Chloramine-T In High-Specific-Activity Radioiodination Of Antibodies Using N-Succinimidyl-3-(Trimethylstannyl)Benzoate As An Intermediate[使用N-琥珀醯亞胺基-3-(三甲基錫烷基)苯甲酸酯作為中間體的抗體的高比活放射性碘化中的氯胺-T]”，Nucl.Med.Biol.[核醫學與生物學]25(7)：659-665；Kurth,M.等人(1993)“Site-Specific Conjugation Of A Radioiodinated Phenethylamine Derivative To A Monoclonal Antibody Results In Increased Radioactivity Localization In Tumor[放射性碘化的苯乙胺衍生物至單株抗體的位點特異性軛合在腫瘤中產生增加的放射性]”，J.Med.Chem.[藥物化學雜誌]36(9)：1255-1261；Rea,D.W.等人(1990)“Site-specifically radioiodinated antibody for targeting tumors[用於靶向腫瘤的位點特異性放射性碘化的抗體]”，Cancer Res.[癌症研究]50(3增刊)：857s-861s)。

本發明還提供了使用以下可檢測地標記的抗分揀蛋白抗體及其抗原結合片段：螢光標記(如稀土螯合物(例如，銪螯合物))、螢光素型標記(例如，螢光素、螢光素異硫氰酸酯、5-羧基螢光素、6-羧基螢光素、二氯三基胺螢光素)、玫瑰紅型標記(例如，ALEXA FLUOR® 568(英傑公司(Invitrogen))、TAMRA®或丹磺醯氯)、VIVOTAG 680 XL FLUOROCHROME^TM(珀金埃爾默公司(Perkin Elmer))、藻紅素；繖形酮、麗絲胺(Lissamine)；花菁；藻紅素、德克薩斯紅、BODIPY FL-SE®(英傑公司)或其類似物，所有該等都適用於光學檢測。可以採用化學發光標記(例如，發光胺、螢光素酶、螢光素和水母蛋白(aequorin))。這種診斷和檢測還可以藉由將本發明的診斷分子偶合至可檢測物質(包括但不限於各種酶，酶包括但不限於辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙醯膽鹼酯酶)或者偶合至輔基複合體(如但不限於鏈黴親和素/生物素和抗生物素蛋白/生物素)來完成。

可以採用化學發光標記(例如，發光胺、螢光素酶、螢光素和水母蛋白)。這種診斷和檢測還可以藉由將本發明的診斷分子偶合至可檢測物質(包括但不限於各種酶，酶包括但不限於辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙醯膽鹼酯酶)或者偶合至輔基複合體(如但不限於鏈黴親和素/生物素和抗生物素蛋白/生物素)來完成。還可以採用順磁性標記，並且較佳的是使用正電子發射斷層術(PET)或單光子發射電腦斷層術(SPECT)進行檢測。這樣的順磁性標記包括但不限於含有鋁(Al)、鋇(Ba)、鈣(Ca)、鈰(Ce)、鏑(Dy)、鉺(Er)、銪(Eu)、釓(Gd)、鈥(Ho)、銥(Ir)、鋰(Li)、鎂(Mg)、錳(Mn)、鉬(M)、釹(Nd)、鋨(Os)、氧(O)、鈀(Pd)、鉑(Pt)、銠(Rh)、釕(Ru)、釤(Sm)、鈉(Na)、鍶(Sr)、鋱(Tb)、銩(Tm)、錫(Sn)、鈦(Ti)、鎢(W)和鋯(Zi)並且特別是Co⁺²、CR⁺²、Cr⁺³、Cu⁺²、Fe⁺²、Fe⁺³、Ga⁺³、Mn⁺³、Ni⁺²、Ti⁺³、V⁺³和V⁺⁴的順磁離子的化合物，使用各種正電子發射斷層術的正電子發射金屬以及非放射性順磁金屬離子。

因此，在一個實施方式中，可以用螢光標記、化學發光標記、順磁性標記、放射性同位素標記或酶標記來標記本發明的抗分揀蛋白抗體或其分揀蛋白結合片段。可以使用經標記的抗體或片段檢測或測量所述分揀蛋白在受試者的腦中的存在或量。這種方法可以包括結合到所述分揀蛋白的抗分揀蛋白抗體或分揀蛋白結合片段的體內成像的檢測或測量並且可以包括結合到這樣的分揀蛋白的所述抗分揀蛋白抗體或分揀蛋白結合片段的離體成像。

在另外的方面，本發明涉及編碼本發明的抗體或其抗原結合域的一條或多條多肽鏈的表現載體。此類表現載體可以用於重組產生本發明的抗體和抗原結合片段。

在本發明的背景下，表現載體可以是任何適合的DNA或RNA載體，包括染色體載體、非染色體載體和合成核酸載體(包含一組適合的表現控制元件的核酸序列)。此類載體的實例包括SV40的衍生物、細菌質粒、噬菌體DNA、桿狀病毒、酵母質粒、衍生自質粒與噬菌體DNA的組合的載體以及病毒核酸(RNA或DNA)載體。在一個實施方式中，編碼抗分揀蛋白抗體的核酸被包含在裸DNA或RNA載體中，包括例如線性表現元件(如描述於例如Sykes和Johnston，Nat Biotech[自然生物技術]12，355-59(1997))、緊湊型核酸載體(如描述於例如US 6,077,835和/或WO 00/70087)、質粒載體(如pBR322、pUC 19/18或pUC 118/119)、“侏儒(midge)”最小尺寸的核酸載體(如描述於例如Schakowski等人，MoI Ther[分子治療學]3，793-800(2001))，或作為沈澱型核酸載體構建體，如CaPO₄沈澱型構建體(如描述於例如WO 00/46147；Benvenisty和Reshef，PNAS USA 83，9551-55(1986)；Wigler等人，Cell[細胞]14，725(1978)以及Coraro和Pearson，Somatic Cell Genetics[體細胞遺傳學]2，603(1981))。此類核酸載體及其使用在本領域是熟知的(參見例如US 5,589,466和US 5,973,972)。

在一個實施方式中，載體適用於在細菌細胞中表現抗分揀蛋白抗體或其抗原結合片段。此類載體的實例包括以下表現載體，如BlueScript (Stratagene公司)、pIN載體(Van Heeke & Schuster，J Biol Chem[生物化學雜誌]264，5503-5509(1989))、pET載體(Novagen公司，麥迪森，威斯康辛州)等。

表現載體還可以是或可替代地是適用於在酵母系統中進行表現的載體。可以採用任何適用於在酵母系統中進行表現的載體。適合的載體包括例如包含組成型或誘導型啟動子(如α因子、醇氧化酶和PGH)的載體(綜述於：F.Ausubel等人編輯的Current Protocols in Molecular Biology[分子生物學實驗指南]，格林出版和威利國際科學(Greene Publishing and Wiley InterScience)紐約(1987)；Grant等人，Methods in Enzymol[酶學方法]153，516-544(1987)；Mattanovich,D.等人，Methods Mol.Biol.[分子生物學方法]824，329-358(2012)；Celik,E.等人，Biotechnol.Adv.[生物技術進展]30(5)，1108-1118(2012)；Li,P.等人，Appl.Biochem.Biotechnol.[應用生物化學與生物技術]142(2)，105-124(2007)；Böer,E.等人，Appl.Microbiol.Biotechnol.[應用微生物學與生物技術]77(3)，513-523(2007)；van der Vaart,J.M.，Methods Mol.Biol.[分子生物學方法]178，359-366(2002)和Holliger,P.,Methods Mol.Biol.[分子生物學方法]178，349-357(2002))。

在本發明的表現載體中，編碼抗分揀蛋白抗體的核酸可以包含任何適合的啟動子、增強子和其他有助於表現的元件或者與其締合。此類元件的實例包括強表現型啟動子(例如，人CMV IE啟動子/增強子連同RSV、SV40、SL3-3、MMTV和HIV LTR啟動子)、有效的聚(A)終止序列、用於在大腸桿菌中產生質粒的複製起點、作為選擇性標記的抗生素抗性基因和/或便利的選殖位點(例如，多聚接頭)。核酸還可以包含與組成型啟動子(如CMV IE)相對的誘導型啟動子(熟習該項技術者應認識到此類術語實際上是在某些條件下的基因表現程度的描述語)。

在甚至另外的方面，本發明涉及重組真核或原核宿主細胞(如轉染瘤)，其產生如在此定義的本發明的抗體或其抗原結合片段或如在此定義的本發明的雙特異性分子。宿主細胞的實例包括酵母、細菌和哺乳動物細胞 (如CHO或HEK細胞)。例如，在一個實施方式中，本發明提供了包含穩定地整合進細胞基因組中的核酸的細胞，該基因組包含編碼本發明的抗分揀蛋白抗體或其抗原結合片段的表現的序列。在另一個實施方式中，本發明提供了包含非整合型核酸(如質粒、黏粒、噬菌粒或線性表現元件)的細胞，該核酸包含編碼本發明的抗分揀蛋白抗體或其抗原結合片段的表現的序列。

在另外的方面，本發明涉及用於產生本發明的抗分揀蛋白抗體的方法，所述方法包括以下步驟：a)培養如在上文描述的本發明的雜交瘤或宿主細胞，並且b)從培養基中純化本發明的抗體。

在一個實施方式中，本發明涉及一種製劑，如此術語在此使用的，該製劑包含如在此定義的抗分揀蛋白抗體，並且基本上不含天然產生的不能結合到分揀蛋白或不實質性地改變該製劑的抗分揀蛋白功能性的抗體。因此，這樣一種製劑不包括天然產生的血清或這樣的血清的經純化的衍生物，該製劑包含抗分揀蛋白抗體和另一種抗體的混合物，所述另一種抗體不改變該製劑的抗分揀蛋白抗體的功能性，其中這樣的功能性係：(i)對分揀蛋白的結合親和力(K_D)；(ii)a；(iii)減少和/或抑制表現分揀蛋白的細胞清除PGRN的能力；(iv)減少和/或抑制表現分揀蛋白的細胞對PGRN的內吞的能力；(v)增加表現人分揀蛋白的敲入小鼠的血漿中的PGRN量和/或濃度的能力；增加腦中的PGRN量和/或濃度的能力和/或(vi)當長期給予時，提供額顳失智(FTD)和/或肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)的治療的能力。

本發明具體涉及在其胺基酸序列中(在任何其CDR、可變域、構架殘基和/或恒定域中)相對於天然存在的抗分揀蛋白抗體的結構具有結構改變的這樣一種抗分揀蛋白抗體的製劑，其中所述結構改變使得抗分揀蛋白抗體單株抗體相對於由所述天然存在的抗分揀蛋白抗體展現出的功能性展現出顯著改變的功能性(即，在功能性方面，差異超過20%、差異超過40%、差異超過60%、差異超過80%、差異超過100%、差異超過150%、差異超過2倍、差異超過4倍、差異超過5倍或差異超過10倍)；其中這樣的功能性係：(i)對分揀蛋白的結合親和力(K_D)；(ii)減少和/或抑制表現分揀蛋白的細胞清除PGRN的能力；(iii)減少和/或抑制表現分揀蛋白的細胞對PGRN的內吞的能力；(iv)增加表現人分揀蛋白的敲入小鼠的血漿中的PGRN量和/或濃度的能力；(v)增加腦中的PGRN量和/或濃度的能力和/或(vi)當長期給予時，提供額顳失智(FTD)、肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)和/或阿茲海默症(AD)的治療的能力。

尤其是其中這樣改變的功能性係結構改變的結果並且因此與它不可分。

術語“基本不含”天然產生的抗體係指在此類製劑中完全不存在此類天然產生的抗體，或在此類製劑中包含不實質上影響該等製劑的分揀蛋白結合特性的濃度的此類天然產生的抗體。如果抗體不具有天然產生的對應物或已經從天然伴隨該抗體的組分中分離或純化，則認為該抗體係“分離的”。

當它涉及此類製劑時，術語“天然產生的抗體”係指作為活的人或其他動物的免疫系統發揮功能的自然結果在活的人或其他動物體內誘出的抗體(包括天然產生的自身抗體)。

因此，本發明的製劑不排除並且的確明確地包括含有抗分揀蛋白抗體和有意添加的另外的抗體的此類製劑，該另外的抗體能夠結合到不為分揀蛋白所具有的表位。此類製劑具體包括製劑在治療額顳失智(FTD)和/或肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)中展現出增強的功效的其實施方式。

本發明的抗體或其抗原結合片段可以在不同細胞系中產生，如人細胞系、非人哺乳動物細胞系和昆蟲細胞系，例如CHO細胞系、HEK細胞系、BHK-21細胞系、鼠類細胞系(如骨髓瘤細胞系)、纖維肉瘤細胞系、PER.C6細胞系、HKB-11細胞系、CAP細胞系和HuH-7人細胞系(Dumont等人，2015,Crit Rev Biotechnol.[生物技術評論性綜述]9月18日：1-13.，將其內容藉由引用包括在此)。

在甚至另外的方面，本發明涉及藥物組成物，其包含：(i)抗分揀蛋白抗體或其抗原結合片段，兩者均如在此定義的，或包含這樣一種抗分揀蛋白抗體或其抗原結合片段的製劑，如此術語在此定義的；及(ii)藥學上可接受的載體。

藥物組成物可以用藥學上可接受的載體或稀釋劑連同任何其他已知的佐劑和賦形劑根據常規技術配製，該等常規技術係如以下揭露的那些：Remington：The Science and Practice of Pharmacy[雷明頓：藥學科學與實踐]，第22版，Gennaro編輯，Mack Publishing Co.[馬克出版公司]，伊斯頓，賓夕法尼亞州，2013。

藥學上可接受的載體或稀釋劑連同任何其他已知的佐劑和賦形劑應該適合於本發明的所選化合物和所選給藥方式。基於就表位結合而言對本發明的所選化合物或藥物組成物的所希望的生物特性的顯著不利影響的缺少(例如，小於實質性影響(10%或更少相對抑制、5%或更少相對抑制等))來確定藥物組成物的載體和其他組分的適合性。

本發明的藥物組成物還可以包含稀釋劑、填充劑、鹽、緩衝劑、洗滌劑(例如，非離子型洗滌劑，如Tween-20或Tween-80)、穩定劑(例如，糖或無蛋白胺基酸)、防腐劑、組織固定劑、增溶劑和/或適於包含在藥物組成物中的其他材料。將稀釋劑選擇為不影響組合的生物活性。此類稀釋劑的實例為蒸餾水、生理磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏(Ringer)溶液、右旋糖溶液和漢克氏溶液。此外，藥物組成物或配製物還可以包含其他載體，或無毒的、非治療性的、非免疫原性的穩定劑等。組成物還可以包含大的、緩慢代謝的大分子，如蛋白質、多糖(像殼聚糖)、聚乳酸、聚乙醇酸和共聚物(例如，乳膠功能化的交聯瓊脂糖、瓊脂糖、纖維素等)、聚合胺基酸、胺基酸共聚物以及脂質聚集體(例如，油滴或脂質體)。

本發明藥物組成物中活性成分的實際劑量水平可以變化，以獲得對於特定患者、組成物和給藥方式而言有效實現所希望的治療應答的活性成分量。所選的劑量水平將取決於多種藥代動力學因素，包括所採用的本發明具體組成物或其醯胺的活性，給藥路徑，給藥時間，所採用的具體化合物的排泄速率，治療持續時間，與所採用的具體組成物組合使用的其他藥物、化合物和/或材料，所治療患者的年齡、性別、體重、病情、一般健康狀況和既往病史以及醫學領域熟知的類似因素。

藥物組成物可以藉由任何適合的途徑和方式給予，包括：用於預防性和/或治療性治療的胃腸外、局部、口服或鼻內手段。在一個實施方式中，胃腸外地給予本發明的藥物組成物。如在此使用的短語“胃腸外給藥(parenteral administration)”和“胃腸外地給藥(administered parenterally)”意指除腸內和局部給藥之外的給藥方式，通常是藉由注射，並且包括表皮、靜脈內、肌內、動脈內、鞘內、囊內、眼眶內、心內、真皮內、腹膜內、腱內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛網膜下、椎管內、顱內、胸腔內、硬膜外以及胸骨內注射和輸注。另外的適合的在體內和在體外給予本發明化合物的途徑在本領域是熟知的並且可以由熟習該項技術者進行選擇。在一個實施方式中，藉由靜脈內或皮下注射或輸注給予該藥物組成物。

藥學上可接受的載體包括任何和所有適合的溶劑、分散介質、包衣、抗細菌劑和抗真菌劑、等滲劑、抗氧化劑和吸收延遲劑以及可與本發明的化合物生理上相容的類似物。

可以在本發明藥物組成物中採用的適合的水性和非水性載體的實例包括水、鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水、乙醇、右旋糖、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其適合的混合物、植物油(如橄欖油、玉米油、花生油、棉籽油和芝麻油)、羧甲基纖維素膠體溶液、黃蓍膠和可注射有機酯(如油酸乙酯)和/或各種緩衝劑。其他載體在製藥領域是熟知的。

藥學上可接受的載體包括無菌水溶液或分散體和用於臨時製備無菌注射液或分散體的無菌粉劑。使用此類介質和試劑用於藥物活性物質在本領域是已知的。除了在任何常規介質或試劑與活性化合物不相容的情況下，考慮了其在本發明藥物組成物中的使用。

可以例如藉由使用包衣材料(如卵磷脂)，藉由維持所需的粒度(在分散體的情況下)和藉由使用表面活性劑來維持適當的流動性。

本發明的藥物組成物還可以包含藥學上可接受的抗氧化劑，例如(1)水溶性抗氧化劑，如抗壞血酸、鹽酸半胱胺酸、硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉等；(2)油溶性抗氧化劑，如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基羥基茴香醚(BHA)、丁基羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α-生育酚等；以及(3)金屬螯合劑，如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。

本發明的藥物組成物還可以在組成物中包含等滲劑，如糖、多元醇(如甘露醇、山梨醇、甘油)或氯化鈉。

本發明的藥物組成物還可以含有一種或多種適用於所選給藥途徑的佐劑，如防腐劑、潤濕劑、乳化劑、分散劑、防腐劑或緩衝劑，該等試劑可以增強藥物組成物的保質期或有效性。本發明的化合物可以與載體一起製備，該等載體可以保護化合物免於被快速釋放，如控釋配製物，包括植入物、透皮貼劑和微囊化遞送系統。此類載體可以包括明膠、單硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、可生物降解的生物相容聚合物(如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸)(單獨的或與蠟一起)或本領域熟知的其他材料。用於製備此類配製物的方法通常是熟習該項技術者已知的。參見例如，Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems[緩釋和控釋遞藥系統]，J.R.Robinson編輯，馬歇爾德克公司(Marcel Dekker,Inc.)，紐約，1978。

在一個實施方式中，可以將本發明的化合物配製成確保在體內恰當分佈。用於胃腸外給藥的藥學上可接受的載體包括無菌水溶液或分散體和用於臨時製備無菌注射液或分散體的無菌粉劑。使用此類介質和試劑用於藥物活性物質在本領域是已知的。除了在任何常規介質或試劑與活性化合物不相容的情況下，考慮了其在本發明藥物組成物中的使用。還可以將補充活性化合物摻入組成物中。

注射用藥物組成物通常在生產和保存條件下典型地必須是無菌且穩定的。可以將組成物配製為溶液、微乳液、脂質體或適於高藥物濃度的其他有序結構。載體可以是含有例如水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其適合的混合物、植物油(如橄欖油)和可注射有機酯(如油酸乙酯)的水性或非水性溶劑或分散介質。可以例如藉由使用包衣(如卵磷脂)，藉由維持所需的粒度(在分散體的情況下)和藉由使用表面活性劑來維持適當的流動性。在許多情況下，較佳的是在組成物中包括等滲劑，例如糖、多元醇(如甘油、甘露醇、山梨醇)或氯化鈉。可注射組成物的延長吸收可以藉由在組成物中包括延遲抗體吸收的試劑(例如單硬脂酸鹽和明膠)來實現。無菌可注射溶液可藉由按需要將處於適當溶劑中的所需量的活性化合物與例如如上文列舉的成分中的一種或組合摻在一起、隨後微濾除菌來製備。通常，藉由將活性化合物摻入無菌運載體中來製備分散體，該無菌運載體包含基礎分散介質以及例如來自以上列舉的那些的所需的其他成分。在無菌粉末用於製備無菌可注射溶液的情況下，製備方法的實例係真空乾燥和冷凍乾燥(凍乾)，該等方法由其先前無菌過濾的溶液得到活性成分加任何另外所希望的成分的粉末。

無菌可注射溶液可以藉由按需要將所需量的活性化合物與一種上文列舉的成分或成分的組合摻在適當溶劑中，隨後滅菌微孔過濾來製備。通常，藉由將活性化合物摻入無菌載體中來製備分散體，該無菌載體含有基礎分散介質和來自上文列舉的那些的其他所需成分。在無菌粉末用於製備無菌可注射溶液的情況下，製備方法的實例係真空乾燥和冷凍乾燥(凍乾)，該等方法由其先前無菌過濾的溶液得到活性成分加任何另外所希望的成分的粉末。

調整在以上治療方法和在此描述的使用中的劑量方案，以提供最佳期望應答(例如，治療應答)。例如，可以給予單次推注，可以隨時間給予若干分次劑量或者可以由治療情況的緊迫性所指示的按比例減少或增加劑量。為了便於給藥和劑量統一，胃腸外組成物可以被配製為劑量單位形式。如在此使用的劑量單位形式係指作為針對待治療受試者的單一劑量適合的物理上離散的單位；每個單位含有經計算產生與所需藥物載體相關的所希望的治療效果的活性化合物的預定量。針對本發明的劑量單位形式的描述受指示於並且直接取決於(a)活性化合物的獨特特徵和待達到的具體治療效果，以及(b)在複合這樣的活性化合物以在個體中獲得靈敏治療的領域中固有的限制。

抗分揀蛋白抗體的有效劑量和劑量方案取決於待治療的疾病或病症並且可以由熟習該項技術者確定。本發明抗體的治療有效量的示例性、非限制性範圍係約0.1mg/kg-10mg/kg體重，如約0.1mg/kg-5mg/kg體重，例如約0.1mg/kg-2mg/kg體重，如約0.1-1mg/kg體重，例如約0.15mg/kg、約0.2 mg/kg、約0.5mg/kg、約1mg/kg、約1.5mg/kg或約2mg/kg體重。

具有本領域普通技術的醫師或獸醫可以容易地確定並且開出所需藥物組成物的有效量。例如，醫師或獸醫可以按低於為了達到所希望的治療效果所需的水平開始給予藥物組成物中採用的抗分揀蛋白抗體，並且逐步增加劑量直至達到所希望的效果。通常，本發明組成物的適合日劑量將是有效產生治療效果的最低劑量的化合物量。這樣一個有效劑量通常將取決於上述因素。給藥可以例如是靜脈內的、肌內的、腹膜內的或皮下的，或者例如臨近靶標位點給予。如果希望的話，藥物組成物的有效日劑量可以在一整天以適當的時間間隔分開為兩個、三個、四個、五個、六個或更多個子劑量來給予，視情況以單位劑型給予。雖然本發明的化合物可以單獨給予，但是較佳的是作為如上描述的藥物組成物給予該化合物。

本發明的標記抗體或其抗原結合片段可以用於診斷目的，以檢測、診斷或監測疾病或障礙。本發明提供了用於對神經退行性或認知疾病或障礙的檢測或診斷，所述疾病或障礙包括但不限於FTD、ALS或蛋白質病(如阿茲海默症(AD))，該檢測或診斷包括：(a)使用特異性地結合至分揀蛋白的一種或多種抗體，測定焦穀胺酸化的Aβ片段在受試者細胞或組織樣品中的存在；並且(b)將該抗原的水平與對照水平(例如，在正常組織樣品中的水平)進行比較，借此相比於該抗原的對照水平而言該抗原的測定水平的增加指示該疾病或失調，或指示該疾病或失調的嚴重性。

使用本領域熟知的免疫組織化學方法，本發明的抗體或其抗原結合片段可以用於測定生物樣品中的分揀蛋白或分揀蛋白抗原結合片段。有用於檢測蛋白質的其他基於抗體的方法包括免疫測定(如酶聯免疫測定(ELISA)和放射免疫測定(RIA))以及基於中型發現平臺(mesoscale discovery platform)的測定(MSD)。適合的抗體標記可以用在此類套組 (kit)和方法中，並且本領域已知的標記包括酶標記，如鹼性磷酸酶和葡萄糖氧化酶；放射性同位素標記，如碘(¹²⁵I、¹³¹I)、碳(¹⁴C)、硫(³⁵S)、氚(³H)、銦(¹²¹In)和鍀(^99mTc)；和發光標記，如發光胺和螢光素酶；以及螢光標誌，如螢光素和玫瑰紅。

可以在體內檢測標記的抗分揀蛋白抗體或其分揀蛋白結合片段的存在，用於診斷目的。在一個實施方式中，診斷包括：a)向受試者給予有效量的這樣的標記分子；b)在給藥後等待一定時間間隔，以允許標記的分子在Aβ沈積位點(如果有的話)聚集並且以允許未結合的標記分子被清除至背景水平；c)確定背景水平；並且d)檢測受試者中經標記的分子，使得對超過背景水平的經標記的分子的檢測指示受試者患有該疾病或障礙，或者指示該疾病或障礙的嚴重性。根據這樣的實施方式，該分子用成像部分標記，以用於使用熟習該項技術者已知的具體成像系統檢測。背景水平可以藉由本領域中已知的不同方法來確定，包括將檢測到的標記抗體的量與先前確定的針對具體成像系統的標準值進行比較。可用於本發明的診斷方法中的方法以及系統包括但不限於電腦斷層攝影(CT)、全身掃描諸如正電子發射體層攝影(PET)、磁共振成像(MRI)、以及超音波檢查。

在另外的方面，本發明涉及用於在醫學中使用的抗體或其抗原結合片段。

在另外的方面，本發明涉及用於在治療與患者的腦中降低的PGRN水平相關的疾病中使用的本發明的抗體或其抗原結合片段。

在另外的方面，本發明涉及本發明的抗體或其抗原結合片段在生產用於治療與患者的腦中降低的PGRN水平相關的疾病的藥物中之用途。

在另外的方面，本發明涉及預防或治療與患者的腦中降低的PGRN或降低的功能PGRN水平相關的疾病之方法，該方法包括給予有效劑量的本發明的抗體或其抗原結合片段。

較佳的是在本發明的那些方面的用途和方法中，該疾病係：FTD、ALS或蛋白質病如AD。

較佳的是，在本發明的那些方面的用途和方法中，治療係長期的，並且較佳的是持續至少2週，如至少持續1個月、6個月、1年或更久。

在另外的方面，本發明提供了包含本發明的抗體或其抗原結合片段之套組。

在明顯在先公開的文獻的說明書中的清單或討論並不一定要視為承認該文獻係先前技術的一部分或是公知常識。

具體實例

如應從文本和實例顯而易見的，本發明進一步涉及以下實施方式：

1.一種抗體或其抗原結合片段，能夠特異性地結合到分揀蛋白並且抑制PGRN與分揀蛋白的結合。

2.根據實施方式1所述的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含完整抗體或由其組成。

3.根據實施方式1或2所述的抗體或其抗原結合片段，其中該抗原結合片段包含選自下組的抗原結合片段或由其組成，該組由以下組成：Fv片段(例如單鏈Fv或二硫化物鍵合的Fv)；Fab樣片段(例如Fab片段或F(ab’)₂片段)；以及結構域抗體(例如單個V_H可變域或V_L可變域)。

4.根據任何前述實施方式所述的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體選自由以下各項組成之群組：亞型IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的抗體。

5.根據任何前述實施方式所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段特異性地結合到如在SEQ ID NO：146中定義的分揀蛋白的E區。

6.根據任何前述實施方式所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段特異性地結合到如在SEQ ID NO：146中定義的分揀蛋白的E區的至少3個連續胺基酸，如4、5、6或7個連續胺基酸。

7.根據任何前述實施方式所述的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段展現出以下特性中的一種或多種：(i)在0.5nM-10nM(如1nM-5nM或1nM-2nM)之間，或甚至更高，如在0.5pM與500pM之間的對分揀蛋白的結合親和力(K_D)(ii)減少和/或抑制表現分揀蛋白的細胞清除PGRN的能力；(iii)減少和/或抑制表現分揀蛋白的細胞對PGRN的內吞的能力；(iv)增加表現人分揀蛋白的敲入小鼠的血漿中的PGRN量和/或濃度的能力。

8.根據實施方式5所述的抗體或其抗原結合片段，其係人類的或人源化的。

9.根據實施方式6所述的抗體或其抗原結合片段，其係人類的或人源化的。

10.根據任何以上實施方式所述的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係人的或是人源化的。

11.根據任何前述實施方式所述的抗體或其抗原結合片段，包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含如針對表5中所定義的抗體中的每者列出的CDR 1-3輕鏈中的一條或多條，或具有不超過4個胺基酸差異、或不超過3個胺基酸差異、或不超過2個胺基酸差異、或不超過1個胺基酸差異的胺基酸序列。

12.根據實施方式11所述的抗體或其抗原結合片段，包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含如針對表5中所定義的抗體中的每者列出的CDR 1-3輕鏈。

13.根據實施方式11或12所述的抗體或其抗原結合片段，包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含如針對表5中所定義的抗體中的每者列出的胺基酸序列VL或由其組成。

14.根據實施方式11至13項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，包含輕鏈，該輕鏈包含如針對表5中所定義的抗體中的每者列出的VL的胺基酸序列或由其組成。

15.根據任何前述實施方式所述的抗體或其抗原結合片段，包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含如針對表5中所定義的抗體中的每者列出的一條或多條CDR 1-3重鏈，或具有不超過4個胺基酸差異、或不超過3個胺基酸差異、或不超過2個胺基酸差異、或不超過1個胺基酸差異的胺基酸序列。

16.根據實施方式15所述的抗體或其抗原結合片段，包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含如針對表5中所定義的抗體中的每者列出的CDR 1-3重鏈。

17.根據實施方式15或16所述的抗體或其抗原結合片段，包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含如針對表5中所定義的抗體中的每者列出的VH的胺基酸序列或由其組成。

18.根據實施方式15至17項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，包含重鏈，該重鏈包含如針對表5中所定義的抗體中的每者列出的胺基酸序列VL或由其組成。

19.根據任何前述實施方式所述的抗體或其抗原結合片段，包含輕鏈可變域以及重鏈可變域，該輕鏈可變域包含如針對表5中所定義的抗體中的每者列出的VL的胺基酸序列或由其組成，該重鏈可變域包含如針對表5中所定義的抗體中的每者列出的VH的胺基酸序列或由其組成。

20.根據任何前述實施方式所述的抗體或其抗原結合片段，包含輕鏈以及重鏈，該輕鏈包含如針對表5中所定義的抗體中的每者列出的VL的胺基酸序列或由其組成，該重鏈包含如針對表5中所定義的抗體中的每者列出的VH的胺基酸序列或由其組成。

21.根據任何前述實施方式所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段與在實施方式20中所定義的抗體或其抗原結合片段競爭與分揀蛋白的結合。

22.根據任何前述實施方式所述的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段包含Fc區。

23.根據任何前述實施方式所述的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段進一步包含用於增加體內半衰期的部分。

24.根據實施方式22所述的抗體或其抗原結合片段，其中用於增加體內半衰期的該部分選自由以下各項組成之群組：聚乙二醇(PEG)、人血清白蛋白、糖基化基團、脂肪酸以及葡聚糖。

25.根據任何前述實施方式所述的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段進一步包含可檢測部分。

26.根據實施方式25所述的抗體或其抗原結合片段，其中該可檢測部分選自由以下各項組成之群組：螢光標記、化學發光標記、順磁性標記、放射性同位素標記、或酶標記。

27.根據實施方式25或26所述的抗體或其抗原結合片段，其中該可檢測部分包含放射性同位素或由其組成。

28.根據實施方式26或27所述的抗體或其抗原結合片段，其中該放射性同位素選自由以下各項組成之群組：^99mTc、¹¹¹In、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、⁷²As、⁸⁹Zr、¹²³I以及²⁰¹Tl。

29.根據實施方式25所述的抗體或其抗原結合片段，其中該可檢測部分包含順磁性同位素或由其組成。

30.根據實施方式29所述的抗體或其抗原結合片段，其中該順磁性同位素選自由以下各項組成之群組：¹⁵⁷Gd、⁵⁵Mn、¹⁶²Dy、⁵²Cr以及⁵⁶Fe。

31.根據實施方式25至30項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該可檢測部分可藉由成像技術如SPECT、PET、MRI、光學或超音波成像檢測到。

32.根據實施方式25至31項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該可檢測部分經由連接部分間接地連接到該抗體或其抗原結合片段。

33.根據實施方式32所述的抗體或其抗原結合片段，其中該連接部分選自由以下各項組成之群組：1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7,10，四乙酸(DOTA)的衍生物，去鐵胺(DFO)，二伸乙基三胺五乙酸(DTPA)的衍生物，S-2-(4-異硫氰基苄基)-1,4,7-三氮雜環壬烷-1,4,7-三乙酸(NOTA)的衍生物，以及1,4,8,11-四氮雜環十二烷-1,4,8,11-四乙酸(TETA)的衍生物。

34.一種分離的核酸分子，編碼如在實施方式1-33的任一項中所定義的抗體或其抗原結合片段。

35.根據實施方式34所述的核酸分子，其中該分子係cDNA分子。

36.一種載體，包含如在實施方式34或35中所定義的核酸分子。

37.一種重組宿主細胞，包含如在實施方式34-36的任一項中所定義的核酸分子。

38.一種用於產生如在實施方式1-33的任一項中所定義之抗體或抗原結合片段之方法，該方法包括在允許表現所編碼的抗體或其抗原結合片段的條件下培養如在實施方式37中所定義的宿主細胞。

39.一種包含根據以上實施方式項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段的製劑，其中所述製劑基本上不含天然產生的抗體，該等抗體不能結合到分揀蛋白或不實質上改變該製劑的抗分揀蛋白功能性，所述功能性選自由以下各項組成之群組：(i)對分揀蛋白的結合親和力(K_D)；(ii)減少和/或抑制表現分揀蛋白的細胞清除PGRN的能力；(iii)減少和/或抑制表現分揀蛋白的細胞對PGRN的內吞的能力；(iv)增加表現人分揀蛋白的敲入小鼠的血漿中的PGRN量和/或濃度的能力；和/或(v)當長期給予時，提供額顳失智(FTD)和/或肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)的治療的能力。

40.一種包含根據以上實施方式項中任一項所述之單株抗體或其抗原結合片段之製劑，其中所述單株抗體在其胺基酸序列中相對於天然存在的抗分揀蛋白抗體的結構具有結構改變，其中所述結構改變使得所述單株抗體相對於由所述天然存在的抗分揀蛋白抗體展現出的功能性展現出改變的功能性，其中所述功能性係：(i)對分揀蛋白的結合親和力(KD)；(ii)減少和/或抑制表現分揀蛋白的細胞清除PGRN的能力；(iii)減少和/或抑制表現分揀蛋白的細胞對PGRN的內吞的能力；(iv)增加表現人分揀蛋白的敲入小鼠的血漿中的PGRN量和/或濃度的能力；和/或(v)當長期給予時，提供額顳失智(FTD)和/或肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)的治療的能力。

41.一種藥物組成物，包含如在實施方式1-33的任一項中所定義的抗體或其抗原結合片段，或如實施方式39-40項中任一項所述之製劑，以及藥學上可接受的載體。

42.如在實施方式1-33的任一項中所定義的抗體或其抗原結合片段，或如實施方式39-40項中任一項所述之製劑，用於在醫學中使用。

43.如在實施方式1-33的任一項中所定義的抗體或其抗原結合片段，或如實施方式39-40項中任一項所述之製劑，用於在預防和/或治療與患者的腦中降低的PGRN或降低的功能PGRN水平相關的疾病中使用。

44.如在實施方式1-33的任一項中所定義之抗體或其抗原結合片段，或如實施方式39-40項中任一項所述之製劑在生產用於預防和/或治療與患者的腦中降低的PGRN水平相關的疾病的藥物中之用途。

45.根據實施方式43所述供使用的抗體或其抗原結合片段，或根據實施方式44所述的用途，其中該疾病選自由以下各項組成之群組：FTD；ALS；蛋白質病如AD、PD。

46.一種預防或治療與患者的腦中降低的PGRN水平相關的疾病之方法，該方法包括給予有效劑量的如在實施方式1-33的任一項中所定義的抗體或其片段、如實施方式39-40項中任一項所述之製劑、或如實施方式41所述的藥物組成物。

47.根據實施方式43所述供使用的抗體或其抗原結合片段，或根據實施方式44所述之用途，或根據實施方式46所述的方法，其中該疾病選自由以下各項組成之群組：FTD；ALS；或蛋白質病如AD、PD。

48.根據實施方式46或47所述的供使用的抗體或其抗原結合片段；或用途；或方法，其中該治療係長期的。

49.根據實施方式48所述的供使用的抗體或其抗原結合片段；或用途；或方法，其中該長期治療持續至少2週，如至少持續1個月、6個月、1年或更久。

50.如在實施方式1-33的任一項中所定義的抗體或其抗原結合片段，如實施方式39-40項中任一項所述之製劑，或如實施方式41所述的藥物組成物，其能夠特異性地結合到分揀蛋白，但是該結合不抑制或基本上不抑制神經降壓素或AF38469與分揀蛋白的結合(Schrøder TJ等人，Bioorg Med Chem Lett.[生物有機化學與藥物化學快報]2014年1月1日；24(1)：177-80)。

51.一種套組，包含如在實施方式1-33的任一項中所定義的抗體或其抗原結合片段、如在實施方式39-40的任一項中所定義的製劑、或如在實施方式41中所定義的藥物組成物。

現在將參照附圖描述採用本發明的某些方面的較佳的、非限制性實例。

〔實例〕

實例1-3描述了分揀蛋白構建體的產生

實例1揭露了改組構建體。實例2揭露了分揀蛋白構建體的表現。實例3揭露了分揀蛋白構建體的純化。

實例4-6描述了分揀蛋白抗體的產生

實例4揭露了免疫和雜交瘤。實例5揭露了序列分析。實例6揭露了抗體的純化。

實例7-11描述了分揀蛋白抗體的表徵

實例7揭露了與分揀蛋白的結合。實例8揭露了分揀蛋白抗體的交叉阻斷能力。實例9揭露了iPSC中的細胞外PGRN水平。實例10揭露了血漿PGRN水平。

實例1

用於在雜交瘤篩選過程中使用和用作抗體組的多樣化兩者，設計、構建並且產生了所謂的“改組構建體”，從而製備一組含有來源於人分揀蛋白和具有顯著降低的序列同源性的遠親物種(四齒魨屬)兩者的胺基酸序列的嵌合分揀蛋白分子。基本原理係該等嵌合構建體的整體分揀蛋白結構和功能性將被保留，但是抗體與某些嵌合構建體的結合損失將指示在結合中涉及特定交換區域。將可溶性胞外區(ECD，aa 1-755)構建體用BAP標籤(生物素受體肽)(使得能夠藉由共表現生物素連接酶而進行蛋白質的“體外”生物素醯化)或His標籤(使得能夠容易地純化)進行標記。製備編碼以下蛋白質的表現載體：SORT-ECDBAP、SORT-ECDBAP-hB01-05、SORT-ECDBAP-hB06-10、SORT-ECDBAP-hB12390、SORT-ECDBAP-hB45678、SORT-ECDBAP-tetra、SORT、SORT-tetra。

分揀蛋白序列可以發現於SEQ ID NO：147-155中並且圖2示出了基於與分揀蛋白改組構建體的結合的抗體區域分配的示意性展示。

實例2

在抗體表現的情況下，在HEK-293F細胞中共表現適當的重鏈和輕鏈載體，如在實例4、5和6中描述的。

實例3：His標記的分揀蛋白的純化

在HEK-293F細胞中表現SORTECDHis。蛋白質中的His-標籤使得能夠藉由固定化金屬親和層析進行純化。在這種方法中，將NiNTA超流柱體(NiNTA Superflow Cartridge)(凱傑公司(Qiagen))用50mM NAH₂PO₄、300mM NaCl和10mM咪唑(pH 8.0)平衡。柱裝載有His標記的蛋白，其中停留時間為1分鐘。將柱用50mM NAH₂PO₄、300mM NaCl和20mM咪唑(pH 8.0)洗滌。將蛋白質用50mM NAH₂PO₄、300mM NaCl和250mM咪唑(pH 8.0)洗提。隨後，將蛋白質使用截留為10.000mwco的Slide-A-Lyzer(賽默科技公司(Thermo Scientific))用PBS透析。透析後，將蛋白質使用0.2微米SFCA過濾器(賽默科技公司)無菌過濾。

使用qPCR針對分揀蛋白mRNA表現對殖株進行表徵。然後使用抗分揀蛋白多株抗體(多株山羊分揀蛋白生物素醯化的Ab，目錄號：BAF2934(R&D系統公司(R&D Systems)))藉由FACS(Guava，密理博公司(Millipore))分析最高的表現殖株，以確定分揀蛋白的表面表現水平。

實例4

A-轉基因小鼠的免疫程序

抗體HuMab分揀蛋白來源於HuMAb小鼠品系HCo12、HCo17、HCo20、HCo12-BALB/c、HCo17-BALB/c和HCo20-BALB/c(人單株抗體；梅達瑞克斯公司(Medarex Inc.)，聖約瑟，加利福尼亞州，美國)的免疫。該等小鼠被雙敲除了小鼠免疫球蛋白(Ig)重鏈和小鼠κ輕鏈，這基本上使完全鼠類的抗體表現失活。藉由插入人Ig重鏈和人Ig κ輕鏈座位使得不同小鼠品系成為轉基因的並且區別在於人VH(重鏈的可變域)和VL(輕鏈的可變域)基因的數目。藉由用KCo5-BALB/c(κ輕鏈轉基因的)小鼠雜交繁育得到HCo12-BALB/c小鼠。

將48隻小鼠用20μg SORTECDHis(SEQ ID NO：155)腹膜內地(IP)並且用相同蛋白皮下地(SC，在尾根處)交替免疫，間隔為14天。進行最多八次免疫，4次IP和4次SC。

在一個方案中，用完全弗氏佐劑(CFA；Difco實驗室(Difco Laboratories)，底特律，密西根州，美國)中的SORTECDHis進行第一次免疫，之後的免疫在不完全弗氏佐劑(IFA)中進行。第二方案在所有免疫步驟中使用SAS作為佐劑。當發現血清滴度足夠(針對至少兩個連續的、雙週的、篩選事件，在抗原特異性篩選測定中，發現1/50或更低的血清稀釋度呈陽性)時，在融合之前四天和三天，將小鼠另外用100μL PBS中的10μg SORTECDHis蛋白靜脈內地(IV)強化兩次。

B-HuMab雜交瘤-產生

將具有如上定義的足夠抗原特異性滴度發生的HuMAb小鼠處死並且收集腹主動脈與腔靜脈兩側的脾臟和淋巴結。基本上根據製造商的說明書，使用CEEF 50電融合系統(細胞脈衝科學(Cyto Pulse Sciences)，葛籣伯尼，馬里蘭州，美國)藉由電融合進行脾細胞和淋巴結細胞與小鼠骨髓瘤細胞系的融合。將融合的細胞接種在融合培養基中，該培養基含有10% Fetal Clone I牛血清(普達生物公司(Perbio))、1mM丙酮酸鈉(康伯司公司(Cambrex))、0.5U/mL青黴素、0.5U/mL鏈黴素(康伯司公司)、50μM 2-巰基乙醇(英傑公司)、600ng/mL白介素6(IL-6)(施特拉特曼公司(Strathmann))、1 x HAT(西格瑪公司(Sigma))和0.5mg/mL卡那黴素(英傑公司)，在HyQ mADCF-Mab(普達生物公司)中。十天之後，收穫上清液並且將細胞培養基更換為收穫培養基，該收穫培養基含有10% Fetal Clone I牛血清、0.5U/mL青黴素、0.5U/mL鏈黴素、600ng/mL IL-6和1 x proHT(康伯司公司)，在HyQ mADCF-Mab中。藉由初級篩選測定和偶合到SORTECDBAP(SEQ ID NO 147)、SORTECDBAPhB06-10(SEQ ID NO 152)、SORTECDBAPhB12390(SEQ ID NO 153)上的鏈黴親和素珠對雜交瘤培養物上清液進行篩選，以檢測產生人(或嵌合)抗分揀蛋白抗體的雜交瘤。將來自最佳初級孔的雜種瘤細胞接種於半固體培養基中，該培養基由40%殖株培養基(CloneMedia)(基因有限公司(Genetix)，漢普郡，英國)和60% HyQ 2x完全培養基(Hyclone公司，沃爾瑟姆，美國)製成。對於每個初級孔，接種Genetix黑色6孔板的孔。使用ClonePix系統(基因有限公司)從每個孔中挑取25個亞殖株。將亞殖株挑取在收穫培養基中。七天之後，針對分揀蛋白特異性人IgG結合再次對亞殖株上清液進行篩選並且使用Octet 384red(Fortebio公司，門洛派克，美國)測量人IgG濃度。從每個初級孔選擇最佳亞殖株並且在僅含有600ng/mL IL-6、0.5U/mL青黴素、0.5U/mL鏈黴素和1 x proHT的擴增培養基中進行擴增。將亞殖株從一個96孔板孔擴增到一個24孔板孔，到四個24孔板孔，到六個6孔板孔。藉由這種方法得到的殖株被指定為初級殖株(PC)。

對本發明的抗分揀蛋白HuMab抗體進行鑒定並且使其經受序列分析。

實例5：分揀蛋白特異性HuMab可變域的序列分析與表現載體中的殖株

從0.2至5 x 106個雜交瘤細胞製備總RNA並且根據製造商的說明書，使用SMART RACE cDNA擴增套組(克羅泰克公司(Clontech))從100ng總RNA製備5’-RACE-互補DNA(cDNA)。藉由PCR擴增VH和VL編碼區並且框內地直接在p33G1f和p33κ表現載體(含有人IgG1./κ恒定域編碼序列)中藉由連接獨立殖株進行選殖(Aslanidis,C.和P.J.de Jong，Nucleic Acids Res[核酸研究]1990；18(20)：6069-74)。對於每個抗體，對16個VL殖株和16個VH殖株進行測序。選擇具有正確開放閱讀框(ORF)的殖株進行進一步研究和表現。使用293fectin在FreestyleTM 293-F細胞中暫態共表現重鏈和輕鏈的所有組合的載體。

所得序列示於在此的序列表(SEQ ID NO：1-144)中。根據公開的指南定義CDR序列。

實例6：抗體的純化

將培養物上清液經0.2μm死端過濾器進行過濾，裝載在5mL蛋白A柱(rProtein A FF，阿莫仙生物科學公司(Amersham Bioscience))上並且用0.1M檸檬酸-NaOH(pH 3)洗提。將洗提物立即用2M Tris-HCl(pH 9)中和並且用12.6mM NaH₂PO₄、140mM NaCl，pH 7.4(貝朗公司(B.Braun))，O/N透析(過夜)。透析之後，將樣品經0.2μm死端過濾器進行無菌過濾。藉由SDS-PAGE確定純度並且藉由比濁法和280nm處的吸光度測量濃度。將純化的抗體等分並且儲存在-80℃下。一旦解凍，便將純化的抗體等分部分保持在4℃下。進行質譜法，以鑒定由雜交瘤表現的抗體重鏈和輕鏈的分子量。

實例7：分揀蛋白特異性HuMab對分揀蛋白的重組胞外區的親和力

使用Octet 384RED(Fortebio公司，門洛派克，美國)確定抗分揀蛋白HuMab抗體對分揀蛋白的結合動力學。藉由稀釋於樣品稀釋劑(Fortebio公司，品號18-5028)中製備2μg/ml的HuMab溶液。將Prot A傳感蛋白(Fortebio公司，品號18-0004)用動力學緩衝液(PBS中的1：10樣品稀釋液)預濕至少600秒。隨後，將傳感蛋白用HuMab溶液固定600秒。藉由在動力學緩衝液中浸漬120秒獲得基線應答。在1000秒孵育期間進行SORTECD構建體的締合。這之後在動力學緩衝液中解離100秒。解離之後，使傳感蛋白再生(10mM甘胺酸pH 1.0)並且中和(動力學緩衝液)3次，每次持續5秒。使用四個濃度的SORTECD構建體(10、5、2.5和1.25μg/ml)分析所有HuMab。將76.8kDA的分子量用於SORTECDHis。將數據使用全球全擬合(global full fit)用ForteBio分析6.4軟體進行擬合。結果在圖3中示出。

實例8：抗分揀蛋白人抗體(HuMantibody)的抗體交叉阻斷

使用Octet 384RED(Fortebio公司，門洛派克，美國)進行抗體交叉阻斷研究。藉由稀釋於樣品稀釋劑(Fortebio公司，品號18-5028)中製備2μg/ml的HuMab抗體溶液。將胺反應性傳感蛋白(Fortebio公司，品號18-0008)用於人抗體的固定。在偶合至胺反應性傳感蛋白之前，將人抗體稀釋在MES pH 6.0緩衝液(18-5027)中。如下在30℃和1000rpm下進行偶合：將胺反應性傳感蛋白在PBS中預濕並且隨後用EDC/NHS(Fortebio公司，品號18-1033/18-1034)活化溶液(根據製造商的說明書)活化300秒。在600秒期間用人抗體固定活化的傳感蛋白。由於剩餘的胺與乙醇胺(Fortebio公司，目錄號18-1039)的反應性，將固定的傳感蛋白淬滅。淬滅之後，將傳感蛋白置於PBS中直到使用。在30℃和1000rpm下藉由建立基線應答開始交叉阻斷分析。藉由在樣品稀釋液中浸漬120秒獲得基線應答。在300秒期間進行SORTECDHis的締合，隨後直接進行HuMab的締合持續300秒。HuMab的締合之後，使傳感蛋白再生(10mM甘胺酸pH 1.0)並且中和(樣品稀釋液)3次，每次持續5秒。使用ForteBio分析6.4軟體處理數據。

基於它們在不同分揀蛋白改組構建體上的結合譜將抗體分組(圖2和圖3)。為了證實來自E區的所有抗體都結合到人野生型分揀蛋白ECD的同一區域，使用Octet384 red在交叉阻斷研究中表徵它們阻斷彼此與野生型人分揀蛋白ECD的結合的能力。例如，當測試來自同一區域的抗體時，一級抗體將阻斷二級抗體的結合，反之亦然。然而，當測試來自從不同區域的抗體時，將不會存在交叉阻斷，因為僅有一個區域被該一級抗體阻斷並且其餘的區域可供二級抗體結合使用。圖4示出了來自E結構域的26種抗體中的22種交叉阻斷來自該組的所有抗體，並且剩餘4種抗體交叉阻斷26種抗體中的20種抗體，這證實了大多數該等抗體在分揀蛋白上的相同區結合，並且其餘的具有重疊的結合位點和/或在E區周圍結合。這證實了基於改組構建體對E區的抗體的分類。另外，該等數據還證實嵌合分揀蛋白構建體保留與天然人野生型分揀蛋白ECD的相似性。

實例9：

iPSC中的細胞外PGRN的ELISA測定

分揀蛋白E區抗體900增加PGRN水平，而對照抗體B12不影響細胞外顆粒蛋白前體(progranulin)水平。將生長因子成熟的iPSC神經元鋪板在96孔板中來進行測定。將抗體添加到細胞培養基中。根據製造商的說明書，在暴露72小時後收集培養基並藉由人PGRN ELISA(Biovendor公司)進行分析並分析樣品。分揀蛋白人抗體900增加了從iPSC神經元收集的培養基中的PGRN水平，而對照抗體B12沒有觀察到效果(圖5)。沒有暴露於細胞的抗體的培養基在PGRN ELISA中顯示沒有信號。CellTiter-Glo發光細胞活力測定(Promega)顯示對抗體應用的活力沒有影響。數據呈現為平均值±SD。藉由單因素方差分析，隨後是鄧尼特分析對數據進行分析***p<0.001。

根據如Rasmussen等人描述的非整合方法，藉由重程式設計從明顯健康的男性(18歲)取樣的人成纖維細胞產生iPSC系(Stem Cell Reports.[幹細胞報告]2014年9月9日；3(3)：404-13)。使用命名為NHDF K1_shp53的殖株(作為BIONi010-A保藏在誘導多能幹細胞的歐洲庫(European Bank of induced Pluripotent Stem Cells)中)。將iPSC在mTeSR1培養基(幹細胞科技公司(Stemcell Technologies))中在基質膠(BD生物科學(BD Biosciences))上以單層進行培養。在高密度鋪板的iPSC的N3培養基(補充有0.5% N2、具有RA的1% B27、0,5mM GlutaMAX-I、0,5% NEA、50μM 2-巰基乙醇和2.5μg/mL胰島素的50% DMEM/F12+50% Neurobasal培養基)中藉由雙重SMAD抑制(100nM LDN和10μM SB431542)在第0天啟動神經元分化。細胞在第12天分裂並從現在開始鋪板在聚-L-鳥胺酸/層連結蛋白上。LDN和SB431542從第13天取出。從這個時間點開始，細胞大約每隔5天分裂一次，直到神經元祖細胞(NPC)在第21天冷凍以產生NPC庫。將該等NPC解凍，允許增殖大約4天，然後在第25天重新鋪板並從第26天起使其經受日最終成熟培養基(具有20ng/mL BDNF、10ng/mL GDNF、500μM db-cAMP、200μM抗壞血酸的N3)。在第32天，使該等細胞經受最終重新鋪板到測定板中的成熟培養基中。FACS研究證實了以相似方式產生的來自其他系的iPSC神經元上的分揀蛋白受體的表面表現。在第56天施用抗體，並在第59天收集樣品。

實例10：抗體對小鼠中血漿PGRN水平的影響

為了分析抗體對血漿中PGRN水平的影響，藉由皮下注射向人源化分揀蛋白KI小鼠給予單次分揀蛋白抗體或同種型對照注射(10mg/kg)。在給藥後48小時將動物麻醉並且處死，並且藉由ELISA確定血漿PGRN水平。

將小鼠用0,4ml阿佛丁腹膜內地麻醉，並且收集心臟血並且轉移到500ul kEDTA小瓶中。將樣品保持在冰上，直到在4℃以3600G離心15min。將血漿移液到micronic小瓶中並且冷凍於-20℃下。按照製造商的說明書使用PGRN ELISA套組(Adipogen公司)測量樣品中的PGRN。

與抗HEL同種型對照抗體相比，用分揀蛋白humab#30處理的小鼠在48小時後顯示血漿PGRN水平增加。結果可以見於圖6中。

實例11

圖7A和B示出了分揀蛋白抗體對從明顯健康個體以及從PGRN R493X患者產生的神經元分化的誘導多能幹細胞(iPSC)中的細胞外PGRN的影響。

抗分揀蛋白人抗體#72、#1277、#83、#900、#799、#886、#28、#471、#1286、#822、#423、#56、#381、#936增加了細胞外PGRN水平，而對照抗體B12則不增加細胞外PGRN水平。將生長因子成熟的iPSC神經元鋪板在96孔板中來進行測定。將抗體添加到細胞培養基中。根據製造商的說明書，在暴露72小時後收集來自iPSC神經元的培養基並藉由人PGRN ELISA(Biovendor公司)進行分析。沒有暴露於細胞的抗體的培養基在PGRN ELISA中顯示沒有信號。CellTiter-Glo發光細胞活力測定(Promega)顯示對抗體應用的活力(細胞內ATP水平的定量)沒有影響。數據表示為三次實驗運行的平均值±SEM，各運行重複六次。藉由單因素方差分析，隨後是鄧尼特分析對數據進行分析*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001、****p<0.0001。

將iPSC系根據非整合方法將從明顯健康的個體(18歲男性)以及從PGRN R493X患者(65歲男性)採樣的人成纖維細胞重程式設計。使用的殖株命名為BIONi010-A(明細健康的個體)和LUBi001-A(PGRN R493X患者)。它們被保藏在誘導多能幹細胞的歐洲庫中，並由認證細胞培養物歐洲保藏中心(European Collection of Authenticated Cell Cultures)分佈。將iPSC分別在mTeSR1培養基(幹細胞科技公司(Stemcell Technologies))和Essential 8培養基(Gibco公司)中在基質膠(BD Biosciences)上以單層進行培養。在高密度鋪板的iPSC的N3培養基(補充有0.5% N2、具有RA的1% B27、0,5mM GlutaMAX-I、0,5% NEA、50μM 2-巰基乙醇和2.5μg/mL胰島素的50% DMEM/F12+50% Neurobasal培養基)中藉由雙重SMAD抑制(100nM LDN和10μM SB431542)在第0天啟動神經元分化。細胞在第12天分裂並從現在開始鋪板在聚-L-鳥胺酸/層連結蛋白上。從第13天起，LDN和SB431542被20ng/ml的FGF2取代。從這個時間點開始，細胞大約每隔5天分裂一次，直到神經元祖細胞(NPC)在第21天冷凍以產生NPC庫。將該等NPC解凍，允許增殖，然後在第25天重新鋪板並從第26天起使其經受成熟培養基(具有20ng/mL BDNF、10ng/mL GDNF、500μM db-cAMP、200μM抗壞血酸的N3)。在第32天，將該等細胞最終重新鋪板到測定板中的成熟培養基中。對BIONi010-A iPSC神經元的FACS研究證實了分揀蛋白受體的表面表現。在第57天施用抗體，並在72小時(即第60天)後收集樣品。

實例12：藉由氫/氘交換隨後藉由質譜法對靶向顆粒蛋白前體-分揀蛋白相互作用的抗體進行表位作圖

在氫/氘交換，隨後是質譜法(HDX-MS)中，測量蛋白質中的骨架醯胺氫的交換速率。由此，有可能探測到整個蛋白質骨架的構象動力學，除了在脯胺酸殘基處之外。交換反應的速率由骨架醯胺的氫鍵合狀態並且在較小程度上由其溶劑可及性決定。可以觀察到作為氘摻入變化的例如由配位基的存在引起的這兩個參數的微妙變化。

為了對氘摻入變化進行亞定位，將蛋白質用酸穩定蛋白酶(例如胃蛋白酶)處理，這產生典型地為十至十五個胺基酸的局部區域。在配位基的存在下顯示出擾動的區域直接牽涉在結合介面中或者別構性地受結合事件的影響。

抗體的表位作圖

在不存在和存在mAb30(其結合E區)的情況下測量分揀蛋白的胞外區(SEQ ID NO：156)的氘摻入。為了保證在穩態條件下進行測量，在啟動交換反應之前，使複合物在25℃下平衡15min。藉由將蛋白樣品1：9(v/v)地稀釋到氘化的緩衝液(99% D2O、20mM tris、150mM NaCl，pDread=7.6)中啟動交換反應。在不同時間點(15s、1min、10min、1h和8h)之後，藉由用冰冷的淬滅緩衝液(2M甘胺酸、0.8M三-(2-羧乙基)膦(TCEP)，pH=2.3)1：1(v/v)地稀釋將交換反應淬滅，由此使pH降至2.46。立即將淬滅的樣品置於-80℃冷凍箱中並且儲存直到分析。藉由將分揀蛋白樣品1：9(v/v)地稀釋到氘化的變性緩衝液(6M鹽酸胍、99% D2O、20mM tris、150mM NaCl，pDread=7.6)中，隨後在25℃下孵育16h來製備完全氘化的對照樣品，之後如上所述的將它們淬滅並處理。

將淬滅的樣品解凍並且注入配備有家庭裝胃蛋白酶柱(60μL的內體積，獲得自賽默科技公司(Thermo Scientific Inc.)的胃蛋白酶珠)的冷卻(0℃)反相UPLC-HDX系統(沃特斯公司(Waters Inc.)，美國)中。這裡，使氘化的蛋白樣品在20℃下經受線上胃蛋白酶消化，並且藉由反相UPLC分離所得胃酶解肽。在最終的質量測定之前，將肽藉由電噴射離子化電離到質譜儀(Synapt G2質譜儀，沃特斯公司，英國)中，在該質譜儀中肽藉由離子遷移被進一步分離。

使用數據獨立(MSe)和數據依賴採集的組合藉由串聯質譜法在完全還原且非氘化的樣品上進行肽的鑒定。

數據分析

肽的鑒定

將採集的質譜針對GFP進行鎖定質量校正並且在PLGS 3.0中進行分析，其將先質和片段離子匹配到本地蛋白質數據庫中。手動地謹慎評估所有肽鑒定。

氘摻入的確定：將採集的質譜針對GFP進行鎖定質量校正並且使用軟體DynamX 3.0(沃特斯公司，美國)來確定在不存在或存在抗體的情況下分揀蛋白的所有肽的氘摻入。

肽被認為是結合表位的一部分，如果在抗體的存在下觀察到保護免於交換大於0.5D的話。

<110> 丹麥商H．朗德貝克公司(H.Lundbeck A/S)

<120> 分揀蛋白E結構域抗體

<130> 1079-DK-NP

<160> 156

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 6003-028 HC CDR 1

<400> 1

<210> 2

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-028 HC CDR2

<400> 2

<210> 3

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-028 HC CDR3

<400> 3

<210> 4

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-028 LC CDR1

<400> 4

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-028 LC CDR2

<400> 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-028 LC CDR3

<400> 6

<210> 7

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-056 HC CDR1

<400> 7

<210> 8

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-056 HC CDR2

<400> 8

<210> 9

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-056 HC CDR3

<400> 9

<210> 10

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-056 LC CDR1

<400> 10

<210> 11

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-056 LC CDR2

<400> 11

<210> 12

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-056 LC CDR3

<400> 12

<210> 13

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-1286 HC CDR1

<400> 13

<210> 14

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-1286 HC CDR2

<400> 14

<210> 15

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-1286 HC CDR3

<400> 15

<210> 16

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-1286 LC CDR1

<400> 16

<210> 17

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-1286 LC CDR2

<400> 17

<210> 18

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-1286 LC CDR3

<400> 18

<210> 19

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-030 HC CDR1

<400> 19

<210> 20

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-030 HC CDR2

<400> 20

<210> 21

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-030 HC CDR3

<400> 21

<210> 22

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-030 LC CDR1

<400> 22

<210> 23

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-030 LC CDR2

<400> 23

<210> 24

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-030 LC CDR3

<400> 24

<210> 25

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-1277 HC CDR1

<400> 25

<210> 26

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-1277 HC CDR2

<400> 26

<210> 27

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-1277 HC CDR3

<400> 27

<210> 28

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-1277 LC CDR1

<400> 28

<210> 29

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-1277 LC CDR2

<400> 29

<210> 30

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-1277 LC CDR3

<400> 30

<210> 31

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-381 HC CDR1

<400> 31

<210> 32

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-381 HC CDR2

<400> 32

<210> 33

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-381 HC CDR3

<400> 33

<210> 34

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-381 LC CDR1

<400> 34

<210> 35

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-381 LC CDR2

<400> 35

<210> 36

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-381 LC CDR3

<400> 36

<210> 37

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-83 HC CDR1

<400> 37

<210> 38

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-83 HC CDR2

<400> 38

<210> 39

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-83 HC CDR3

<400> 39

<210> 40

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-83 LC CDR1

<400> 40

<210> 41

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-83 LC CDR2

<400> 41

<210> 42

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-83 LC CDR3

<400> 42

<210> 43

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-799 HC CDR1

<400> 43

<210> 44

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-799 HC CDR2

<400> 44

<210> 45

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-799 HC CDR3

<400> 45

<210> 46

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-799 LC CDR1

<400> 46

<210> 47

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-799 LC CDR2

<400> 47

<210> 48

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-799 LC CDR3

<400> 48

<210> 49

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-910 HC CDR1

<400> 49

<210> 50

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-910 HC CDR2

<400> 50

<210> 51

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-910 HC CDR3

<400> 51

<210> 52

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-910 LC CDR1

<400> 52

<210> 53

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-910 LC CDR2

<400> 53

<210> 54

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-910 LC CDR3

<400> 54

<210> 55

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6002-423 HC CDR1

<400> 55

<210> 56

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-423 HC CDR2

<400> 56

<210> 57

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-423 HC CDR3

<400> 57

<210> 58

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-423 LC CDR1

<400> 58

<210> 59

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-423 LC CDR2

<400> 59

<210> 60

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-423 LC CDR3

<400> 60

<210> 61

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-822 HC CDR1

<400> 61

<210> 62

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-822 HC CDR2

<400> 62

<210> 63

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-822 HC CDR3

<400> 63

<210> 64

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-822 LC CDR1

<400> 64

<210> 65

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-822 LC CDR2

<400> 65

<210> 66

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-822 LC CDR3

<400> 66

<210> 67

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-886 HC CDR1

<400> 67

<210> 68

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-886 HC CDR2

<400> 68

<210> 69

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-886 HC CDR3

<400> 69

<210> 70

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-886 LC CDR1

<400> 70

<210> 71

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-886 LC CDR2

<400> 71

<210> 72

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-886 LC CDR3

<400> 72

<210> 73

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-72 HC CDR1

<400> 73

<210> 74

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-72 HC CDR2

<400> 74

<210> 75

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-72 HC CDR3

<400> 75

<210> 76

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-72 LC CDR1

<400> 76

<210> 77

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-72 LC CDR2

<400> 77

<210> 78

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-72 LC CDR3

<400> 78

<210> 79

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-900 HC CDR1

<400> 79

<210> 80

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-900 HC CDR2

<400> 80

<210> 81

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-900 HC CDR3

<400> 81

<210> 82

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-900 LC CDR1

<400> 82

<210> 83

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-900 LC CDR2

<400> 83

<210> 84

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-900 LC CDR3

<400> 84

<210> 85

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-936 HC CDR1

<400> 85

<210> 86

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-936 HC CDR2

<400> 86

<210> 87

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-936 HC CDR3

<400> 87

<210> 88

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-936 LC CDR1

<400> 88

<210> 89

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-936 LC CDR2

<400> 89

<210> 90

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-936 LC CDR3

<400> 90

<210> 91

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-408 HC CDR1

<400> 91

<210> 92

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-408 HC CDR2

<400> 92

<210> 93

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-408 HC CDR3

<400> 93

<210> 94

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-408 LC CDR1

<400> 94

<210> 95

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-408 LC CDR2

<400> 95

<210> 96

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-408 LC CDR3

<400> 96

<210> 97

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-471 HC CDR1

<400> 97

<210> 98

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-471 HC CDR2

<400> 98

<210> 99

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-471 HC CDR3

<400> 99

<210> 100

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-471 LC CDR1

<400> 100

<210> 101

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-471 LC CDR2

<400> 101

<210> 102

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-471 LC CDR3

<400> 102

<210> 103

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-972 HC CDR1

<400> 103

<210> 104

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-972 HC CDR2

<400> 104

<210> 105

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-972 HC CDR3

<400> 105

<210> 106

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-972 LC CDR1

<400> 106

<210> 107

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-972 LC CDR2

<400> 107

<210> 108

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-972 LC CDR3

<400> 108

<210> 109

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-28 HC

<400> 109

<210> 110

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-28 LC

<400> 110

<210> 111

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-56 HC

<400> 111

<210> 112

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-56 LC

<400> 112

<210> 113

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-1286 HC

<400> 113

<210> 114

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-1286 LC

<400> 114

<210> 115

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-30 HC

<400> 115

<210> 116

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-30 LC

<400> 116

<210> 117

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-1277 HC

<400> 117

<210> 118

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-1277 LC

<400> 118

<210> 119

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-381 HC

<400> 119

<210> 120

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-381 LC

<400> 120

<210> 121

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-83 HC

<400> 121

<210> 122

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-83 LC

<400> 122

<210> 123

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-799 HC

<400> 123

<210> 124

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-799 LC

<400> 124

<210> 125

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-910 HC

<400> 125

<210> 126

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-910 LC

<400> 126

<210> 127

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-423 HC

<400> 127

<210> 128

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-423 LC

<400> 128

<210> 129

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-822 HC

<400> 129

<210> 130

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-822 LC

<400> 130

<210> 131

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-886 HC

<400> 131

<210> 132

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-886 LC

<400> 132

<210> 133

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-72 HC

<400> 133

<210> 134

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-72 LC

<400> 134

<210> 135

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-900 HC

<400> 135

<210> 136

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-900 LC

<400> 136

<210> 137

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-936 HC

<400> 137

<210> 138

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-936 LC

<400> 138

<210> 139

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-408 HC

<400> 139

<210> 140

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-408 LC

<400> 140

<210> 141

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-471 HC

<400> 141

<210> 142

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-471 LC

<400> 142

<210> 143

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-972 HC

<400> 143

<210> 144

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 6003-972 LC

<400> 144

<210> 145

<211> 831

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 人分揀蛋白同種型1

<400> 145

<210> 146

<211> 145

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> E-區

<400> 146

<210> 147

<211> 700

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 分揀蛋白"hSORTECDBAP"

<400> 147

<210> 148

<211> 700

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 分揀蛋白SORTECDBAP_hBACK

<400> 148

<210> 149

<211> 700

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 分揀蛋白SORTECDBAP_tetra

<400> 149

<210> 150

<211> 701

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 分揀蛋白SORTECDBAP_hB01-05

<400> 150

<210> 151

<211> 700

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 分揀蛋白SORTECDBAP_hRIM

<400> 151

<210> 152

<211> 699

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 分揀蛋白SORTECDBAP_hB06-10

<400> 152

<210> 153

<211> 700

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 分揀蛋白SORTECDBAP_hB12390

<400> 153

<210> 154

<211> 700

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 分揀蛋白SORTECDBAP_hB45678

<400> 154

<210> 155

<211> 763

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> 分揀蛋白SORTECD_HIS

<400> 155

<210> 156

<211> 696

<212> PRT

<213> 人工

<220>

<223> HDX-MS序列

<400> 156

Claims

一種抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段能夠在如由 SEQ ID NO：146定義的分揀蛋白的E區內特異性結合。
如申請專利範圍第1項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗原結合片段選自由以下各項組成之群組：Fv片段(例如單鏈Fv或二硫化物鍵合的Fv)；Fab樣片段(例如Fab片段、Fab’片段或F(ab)2片段)；以及結構域抗體(例如單個VH可變域或VL可變域)。
如任何前述申請專利範圍所述之抗體，其中該抗體由完整抗體組成。
如任何前述申請專利範圍所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體選自由以下各項組成之群組：亞型IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的抗體。
如任何前述申請專利範圍所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段結合到如由 SEQ ID NO：146定義的分揀蛋白的E區。
如任何前述申請專利範圍所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段結合到如在 SEQ ID NO：146中定義的分揀蛋白的E區內的至少1個或多個連續胺基酸，如1、2、3、4、5、6或7個連續胺基酸。
如任何前述申請專利範圍所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段展現出以下特性中的一種或多種：a.在0.5nM-10nM之間，如1nM-5nM或1nM-2nM之間，或甚至更高，如在0.5pM與500pM之間的對分揀蛋白的結合親和力(KD)b.減少和/或抑制表現分揀蛋白的細胞清除PGRN的能力；c.減少和/或抑制表現分揀蛋白的細胞對PGRN的內吞的能力；d.增加腦中的PGRN量和/或濃度的能力，和/或 e.增加表現人分揀蛋白的敲入小鼠的血漿中的PGRN量和/或濃度的能力。
根據任何前述申請專利範圍1-7項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段減少和/或抑制清除PGRN的能力包括以或低於22nM，如在22nM與1nM之間、或在10nM與1nM之間、或在5nM與1nM之間的IC50減少和/或抑制清除PGRN。
如任何前述申請專利範圍所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係人抗體、人源化抗體、重組抗體或嵌合抗體。
如任何前述申請專利範圍所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 SEQ ID NO：1的重鏈可變域CDR1；b.包含 SEQ ID NO：2的重鏈可變域CDR 2；c.包含 SEQ ID NO：3的重鏈可變域CDR 3；d.包含 SEQ ID NO：4的輕鏈可變域CDR 1；e.包含 SEQ ID NO：5的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含 SEQ ID NO：6的輕鏈可變域CDR 3。
如申請專利範圍第10項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含 SEQ ID NO：109。
如申請專利範圍第10項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含 SEQ ID NO：110。
如申請專利範圍第10項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含如在申請專利範圍第11和12項中所定義之重鏈可變域和輕鏈可變域兩者。
如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 SEQ ID NO：7的重鏈可變域CDR1；b.包含 SEQ ID NO：8的重鏈可變域CDR 2；c.包含 SEQ ID NO：9的重鏈可變域CDR 3；d.包含 SEQ ID NO：10的輕鏈可變域CDR 1；e.包含 SEQ ID NO：11的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含 SEQ ID NO：12的輕鏈可變域CDR 3。
如申請專利範圍第14項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含 SEQ ID NO：111。
如申請專利範圍第14項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含 SEQ ID NO：112。
如申請專利範圍第14項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含如在申請專利範圍第15和16項中所定義之重鏈可變域和輕鏈可變域兩者。
如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 SEQ ID NO：13的重鏈可變域CDR1；b.包含 SEQ ID NO：14的重鏈可變域CDR 2；c.包含 SEQ ID NO：15的重鏈可變域CDR 3；d.包含 SEQ ID NO：16的輕鏈可變域CDR 1；e.包含 SEQ ID NO：17的輕鏈可變域CDR 2；及 f.包含 SEQ ID NO：18的輕鏈可變域CDR 3。
如申請專利範圍第18項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含 SEQ ID NO：113。
如申請專利範圍第18項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含 SEQ ID NO：114。
如申請專利範圍第18項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含如在申請專利範圍第19和20項中所定義之重鏈可變域和輕鏈可變域兩者。
如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 SEQ ID NO：19的重鏈可變域CDR1；b.包含 SEQ ID NO：20的重鏈可變域CDR 2；c.包含 SEQ ID NO：21的重鏈可變域CDR 3；d.包含 SEQ ID NO：22的輕鏈可變域CDR 1；e.包含 SEQ ID NO：23的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含 SEQ ID NO：24的輕鏈可變域CDR 3。
如申請專利範圍第22項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含 SEQ ID NO：115。
如申請專利範圍第22項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含 SEQ ID NO：116。
如申請專利範圍第22項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含如在申請專利範圍第23和24項中所定義之重鏈可變域和輕鏈可變域兩者。
如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 SEQ ID NO：25的重鏈可變域CDR1；b.包含 SEQ ID NO：26的重鏈可變域CDR 2；c.包含 SEQ ID NO：27的重鏈可變域CDR 3；d.包含 SEQ ID NO：28的輕鏈可變域CDR 1；e.包含 SEQ ID NO：29的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含 SEQ ID NO：30的輕鏈可變域CDR 3。
如申請專利範圍第26項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含 SEQ ID NO：117。
如申請專利範圍第26項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含 SEQ ID NO：118。
如申請專利範圍第26項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含如在申請專利範圍第27和28項中所定義之重鏈可變域和輕鏈可變域兩者。
如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 SEQ ID NO：31的重鏈可變域CDR1；b.包含 SEQ ID NO：32的重鏈可變域CDR 2； c.包含 SEQ ID NO：33的重鏈可變域CDR 3；d.包含 SEQ ID NO：34的輕鏈可變域CDR 1；e.包含 SEQ ID NO：35的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含 SEQ ID NO：36的輕鏈可變域CDR 3。
如申請專利範圍第30項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含 SEQ ID NO：119。
如申請專利範圍第30項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含 SEQ ID NO：120。
如申請專利範圍第30項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含如在申請專利範圍第31和32項中所定義之重鏈可變域和輕鏈可變域兩者。
如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 SEQ ID NO：37的重鏈可變域CDR1；b.包含 SEQ ID NO：38的重鏈可變域CDR 2；c.包含 SEQ ID NO：39的重鏈可變域CDR 3；d.包含 SEQ ID NO：40的輕鏈可變域CDR 1；e.包含 SEQ ID NO：41的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含 SEQ ID NO：42的輕鏈可變域CDR 3。
如申請專利範圍第34項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含 SEQ ID NO：121。
如申請專利範圍第34項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含 SEQ ID NO：122。
如申請專利範圍第34項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含如在申請專利範圍第35和36項中所定義之重鏈可變域和輕鏈可變域兩者。
如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 SEQ ID NO：43的重鏈可變域CDR1；b.包含 SEQ ID NO：44的重鏈可變域CDR 2；c.包含 SEQ ID NO：45的重鏈可變域CDR 3；d.包含 SEQ ID NO：46的輕鏈可變域CDR 1；e.包含 SEQ ID NO：47的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含 SEQ ID NO：48的輕鏈可變域CDR 3。
如申請專利範圍第38項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含 SEQ ID NO：123。
如申請專利範圍第38項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含 SEQ ID NO：124。
如申請專利範圍第38項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含如在申請專利範圍第39和40項中所定義之重鏈可變域和輕鏈可變域兩者。
如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 SEQ ID NO：49的重鏈可變域CDR1；b.包含 SEQ ID NO：50的重鏈可變域CDR 2；c.包含 SEQ ID NO：51的重鏈可變域CDR 3；d.包含 SEQ ID NO：52的輕鏈可變域CDR 1；e.包含 SEQ ID NO：53的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含 SEQ ID NO：54的輕鏈可變域CDR 3。
如申請專利範圍第42項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含 SEQ ID NO：125。
如申請專利範圍第42項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含 SEQ ID NO：126。
如申請專利範圍第42項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含如在申請專利範圍第43和44項中所定義之重鏈可變域和輕鏈可變域兩者。
如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 SEQ ID NO：55的重鏈可變域CDR1；b.包含 SEQ ID NO：56的重鏈可變域CDR 2；c.包含 SEQ ID NO：57的重鏈可變域CDR 3；d.包含 SEQ ID NO：58的輕鏈可變域CDR 1；e.包含 SEQ ID NO：59的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含 SEQ ID NO：60的輕鏈可變域CDR 3。
如申請專利範圍第46項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含 SEQ ID NO：127。
如申請專利範圍第46項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含 SEQ ID NO：128。
如申請專利範圍第46項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含如在申請專利範圍第47和48項中所定義之重鏈可變域和輕鏈可變域兩者。
如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 SEQ ID NO：61的重鏈可變域CDR1；b.包含 SEQ ID NO：62的重鏈可變域CDR 2；c.包含 SEQ ID NO：63的重鏈可變域CDR 3；d.包含 SEQ ID NO：64的輕鏈可變域CDR 1；e.包含 SEQ ID NO：65的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含 SEQ ID NO：66的輕鏈可變域CDR 3。
如申請專利範圍第50項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含 SEQ ID NO：129。
如申請專利範圍第50項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含 SEQ ID NO：130。
如申請專利範圍第50項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含如在申請專利範圍第51和52項中所定義之重鏈可變域和輕鏈可變域兩者。
如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 SEQ ID NO：67的重鏈可變域CDR1；b.包含 SEQ ID NO：68的重鏈可變域CDR 2；c.包含 SEQ ID NO：69的重鏈可變域CDR 3；d.包含 SEQ ID NO：70的輕鏈可變域CDR 1；e.包含 SEQ ID NO：71的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含 SEQ ID NO：72的輕鏈可變域CDR 3。
如申請專利範圍第54項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含 SEQ ID NO：131。
如申請專利範圍第54項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含 SEQ ID NO：132。
如申請專利範圍第54項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含如在申請專利範圍第55和56項中所定義之重鏈可變域和輕鏈可變域兩者。
如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 SEQ ID NO：73的重鏈可變域CDR1；b.包含 SEQ ID NO：74的重鏈可變域CDR 2；c.包含 SEQ ID NO：75的重鏈可變域CDR 3； d.包含 SEQ ID NO：76的輕鏈可變域CDR 1；e.包含 SEQ ID NO：77的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含 SEQ ID NO：78的輕鏈可變域CDR 3。
如申請專利範圍第58項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含 SEQ ID NO：133。
如申請專利範圍第58項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含 SEQ ID NO：134。
如申請專利範圍第58項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含如在申請專利範圍第59和60項中所定義之重鏈可變域和輕鏈可變域兩者。
如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 SEQ ID NO：79的重鏈可變域CDR1；b.包含 SEQ ID NO：80的重鏈可變域CDR 2；c.包含 SEQ ID NO：81的重鏈可變域CDR 3；d.包含 SEQ ID NO：82的輕鏈可變域CDR 1；e.包含 SEQ ID NO：83的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含 SEQ ID NO：84的輕鏈可變域CDR 3。
如申請專利範圍第62項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含 SEQ ID NO：135。
如申請專利範圍第62項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含 SEQ ID NO：136。
如申請專利範圍第62項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含如在申請專利範圍第63和64項中所定義之重鏈可變域和輕鏈可變域兩者。
如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 SEQ ID NO：85的重鏈可變域CDR1；b.包含 SEQ ID NO：86的重鏈可變域CDR 2；c.包含 SEQ ID NO：87的重鏈可變域CDR 3；d.包含 SEQ ID NO：88的輕鏈可變域CDR 1；e.包含 SEQ ID NO：89的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含 SEQ ID NO：90的輕鏈可變域CDR 3。
如申請專利範圍第66項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含 SEQ ID NO：137。
如申請專利範圍第66項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含 SEQ ID NO：138。
如申請專利範圍第66項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含如在申請專利範圍第67和68項中所定義之重鏈可變域和輕鏈可變域兩者。
如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： a.包含 SEQ ID NO：91的重鏈可變域CDR1；b.包含 SEQ ID NO：92的重鏈可變域CDR 2；c.包含 SEQ ID NO：93的重鏈可變域CDR 3；d.包含 SEQ ID NO：94的輕鏈可變域CDR 1；e.包含 SEQ ID NO：95的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含 SEQ ID NO：96的輕鏈可變域CDR 3。
如申請專利範圍第70項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含 SEQ ID NO：139。
如申請專利範圍第70項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含 SEQ ID NO：140。
如申請專利範圍第70項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含如在申請專利範圍第71和72項中所定義之重鏈可變域和輕鏈可變域兩者。
如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 SEQ ID NO：97的重鏈可變域CDR1；b.包含 SEQ ID NO：98的重鏈可變域CDR 2；c.包含 SEQ ID NO：99的重鏈可變域CDR 3；d.包含 SEQ ID NO：100的輕鏈可變域CDR 1；e.包含 SEQ ID NO：101的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含 SEQ ID NO：102的輕鏈可變域CDR 3。
如申請專利範圍第74項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含 SEQ ID NO：141。
如申請專利範圍第74項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含 SEQ ID NO：142。
如申請專利範圍第74項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含如在申請專利範圍第75和76項中所定義之重鏈可變域和輕鏈可變域兩者。
如申請專利範圍第1至9項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 SEQ ID NO：103的重鏈可變域CDR1；b.包含 SEQ ID NO：104的重鏈可變域CDR 2；c.包含 SEQ ID NO：105的重鏈可變域CDR 3；d.包含 SEQ ID NO：106的輕鏈可變域CDR 1；e.包含 SEQ ID NO：107的輕鏈可變域CDR 2；及f.包含 SEQ ID NO：108的輕鏈可變域CDR 3。
如申請專利範圍第78項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變域，該重鏈可變域包含 SEQ ID NO：143。
如申請專利範圍第78項所述之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變域，該輕鏈可變域包含 SEQ ID NO：144。
如申請專利範圍第78項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含如在申請專利範圍第79和80項中所定義之重鏈可變域和輕鏈可變域兩者。
一種包含根據以上申請專利範圍項中任一項所述之抗體或其抗原結合片段之製劑，其中所述製劑基本上不含天然產生的抗體，該等抗體不能結合到分揀蛋白或不實質上改變該製劑的抗分揀蛋白功能性，所述功能性選自由以下各項組成之群組：(i)對分揀蛋白的結合親和力(K _D)；(ii)減少和/或抑制表現分揀蛋白的細胞清除PGRN的能力；(iii)減少和/或抑制表現分揀蛋白的細胞對PGRN的內吞的能力；(iv)增加表現人分揀蛋白的敲入小鼠的血漿中的PGRN量和/或濃度的能力；和/或(v)當長期給予時，提供額顳失智(FTD)、肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)或阿茲海默症(AD)的治療的能力。
一種包含如以上申請專利範圍中任一項所述之單株抗體或其抗原結合片段之製劑，其中所述單株抗體在其胺基酸序列中相對於天然存在的抗分揀蛋白抗體的結構具有結構改變，其中所述結構改變使得所述單株抗體相對於由所述天然存在的抗分揀蛋白抗體展現出的功能性展現出改變的功能性，其中所述功能性選自由以下各項組成之群組：(i)對分揀蛋白的結合親和力(KD)；(ii)減少和/或抑制表現分揀蛋白的細胞清除PGRN的能力；(iii)減少和/或抑制表現分揀蛋白的細胞對PGRN的內吞的能力；(iv)增加表現人分揀蛋白的敲入小鼠的血漿中的PGRN量和/或濃度的能力；(v)增加腦中的PGRN量和/或濃度的能力，或(vi)當長期給予時，提供額顳失智(FTD)、肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)和/或阿茲海默症(AD)的治療的能力。
一種藥物組成物，包含如在申請專利範圍第1至81項的任一項中所定義的抗體或其抗原結合片段，或如申請專利範圍第82-83項中任一項所述之製劑，以及藥學上可接受的載體。
一種在醫學中使用之如在申請專利範圍第1至81項的任一項中所定義的抗體或其抗原結合片段，或如申請專利範圍第82-83項中任一項所述之製劑，或如申請專利範圍第84項所述之藥物組成物。
一種用於在治療與患者的腦中降低的PGRN水平或降低的功能PGRN相關的疾病中使用之如在申請專利範圍第1至81項的任一項中所定義的抗體或其抗原結合片段，或如申請專利範圍第82-83項中任一項所述之製劑，或如申請專利範圍第84項所述之藥物組成物。
一種如在申請專利範圍第1至81項的任一項中所定義的抗體或其抗原結合片段、或如申請專利範圍第82-83項中任一項所述之製劑、或如申請專利範圍第84項所述之藥物組成物之用途，其係用於生產用於治療與患者的腦中降低的PGRN或降低的功能PGRN水平相關的疾病的藥物。
一種預防或治療與患者的腦中降低的PGRN或降低的功能PGRN水平相關的疾病之方法，該方法包括給予有效劑量的如在申請專利範圍第1-81項的任一項中所定義的抗體或其抗原結合片段、或如申請專利範圍第82-83項中任一項所述之製劑、或如申請專利範圍第84項所述之藥物組成物。
如申請專利範圍第86項所述供使用的抗體或其抗原結合片段，或如申請專利範圍第87項所述之用途，或如申請專利範圍第88項所述之方法，其中該疾病係FTD；ALS；或蛋白質病如AD。
如申請專利範圍第86所述供使用的抗體或其抗原結合片段，或如申請專利範圍第87項所述之用途，或如申請專利範圍第88項所述之方法，其中該治療係長期的，並且較佳的是持續至少2週，如至少持續1個月、或至少持續6個月、或至少持續1年。
一種套組，該套組包含如在申請專利範圍1-81項的任一項中所定義的抗體或其抗原結合片段、或如申請專利範圍82-83項中任一項所述之製劑、或如申請專利範圍84項所述之藥物組成物。
如在申請專利範圍1-81的任一項中所定義的抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段已經在細胞系中產生或生產，該細胞系係如人細胞系、非人哺乳動物細胞系、昆蟲、酵母或細菌細胞系。
如申請專利範圍第92項所述之抗體或其抗原結合片段，在CHO細胞系、HEK細胞系、BHK-21細胞系、鼠類細胞系(如骨髓瘤細胞系)、纖維肉瘤細胞系、PER.C6細胞系、HKB-11細胞系、CAP細胞系以及HuH-7人細胞系中產生。