TW201801738A - 包括羊蹄甲屬(bauhinia)的組成物、其製造方法以及將其使用於皮膚抗老化及其他皮膚應用的方法 - Google Patents

Abstract

說明用於改善皮膚外觀或至少一項皮膚老化跡象之包括卡奇娜(Kachnar)的外用組成物、包裝系統及方法。

Description

包括羊蹄甲屬(BAUHINIA)的組成物、其製造方法以及將其使用於皮膚抗老化及其他皮膚應用的方法

發明領域 本專利文件依據專利法第35號法典第119(e)條主張美國暫准專利申請案序號 62/357,611的提申日期利益，該暫准專利申請案於2016年7月1日提申，其在此併入本案以為參考資料。

本發明係有關於包括羊蹄甲屬(BAUHINIA )的組成物、其製造方法以及將其用於抗皮膚老化及其他皮膚應用的方法。

背景 說明單獨包括羊蹄甲屬(Bauhinia )或與至少一種其他植物萃取物組合之外用組成物，及使用該等組成物之方法，以提供抗皮膚老化及其他皮膚功效。所揭露的組成物與方法可預防、減少或逆轉過早老化跡象，及/或增進皮膚美觀。使用該等組成物可刺激皮膚的天然能力而得以從所承受的環境壓力中恢復過來，及預防過早老化跡象以及讓皮膚有光澤。該等組成物包括從天然植物材料所衍生的天然活性成分，連同用於修復DNA損傷的酵素以及賦形劑與載體。

皮膚的組成主要有二層。角質層或表皮係皮膚的頂層或外層。角質層的主要功能係提供保護性覆蓋及阻滯水分從含水的內部蒸發流失。這通常稱作障壁功能。角質層提供保護，而免於機械性傷害、外來化學物質入侵及微生物侵害。其亦提供對抗紫外線的第一道防線，隔離了超過80%的入射紫外線B輻射。

真皮位於表皮之下，及構成皮膚厚度的90%。真皮含有緻密網狀的膠原蛋白與彈性蛋白，賦予皮膚強度與彈性。纖維母細胞是真皮中所存在的主要細胞類型。纖維母細胞負責合成與分泌真皮基質組分，包括膠原蛋白、彈性蛋白及醣胺聚醣類(諸如玻尿酸)。當膠原蛋白賦予皮膚強度及彈性蛋白賦予彈性之際，醣胺聚醣的作用係維持皮膚的濕潤與飽滿。

為維持健康的皮膚，皮膚必須因應環境條件的變化，同時立即修復損傷。環境因子在老化、皺紋、皮膚變色及退化性皮膚病況方面扮演最主要角色。曝露於日光與紫外線輻射係造成皮膚損傷的主要因子，這些皮膚損傷佔了過早老化症狀的90%。更重要地，曝露於氧氣、日光及其他環境或生活型態的壓力引發自由基之形成。自由基可藉由活化金屬蛋白酶諸如膠原蛋白酶造成皺紋，該等蛋白酶負責分解皮膚的結締組織(膠原蛋白與彈性蛋白)。所造成的結果是過早老化。自由基的傷害亦可能造成真皮層厚度減少。這可能造成皮膚鬆弛。皮膚鬆弛是最先出現且最明顯可見的老化跡象，及為皺紋與細紋的肇因。

日光也可能藉由觸發金屬蛋白酶的過度生產而造成異常彈性蛋白之累積。在正常情況下，金屬蛋白酶係藉由製造與重組膠原蛋白而改造因日光受損的皮膚。讓皮膚重複經歷這不完全的重建過程可能導致形成皺紋或日光性疤痕。曝曬日光亦可能奪去皮膚所必需的水分及產生一個無法正常運作的受壓障壁。當水分流失及刺激程度加增時，皮膚變得敏感、鱗狀及乾燥。

雖然氧氣與日光是構成自由基損傷的主要來源，其他貢獻因子尚包括香菸煙霧、環境毒素、除草劑、殺蟲劑、氣候、飲食、壓力、睡眠不足、酒精攝取過量及汚染。

來自太陽的紫外線輻射亦可損傷DNA及可產生數種有害效應，包括細胞死亡、突變及贅生性轉形。研究指出該等有害效應的一部分係歸因於形成二種主要類型的二嘧啶DNA光產物，即環丁烷嘧啶二聚物(CPD)與(6-4)光產物(6-4PP)。生物體已演化出從細胞DNA移除CPD與6-4PP的數種不同途徑。該等途徑包括不同的切除式修復途徑，其等可能對於CPD與6-4PP具有高度特異性或不具特異性。

鑑於影響皮膚的眾多有害效應，故存在對於用於改善皮膚外觀與狀況的美容組成物與美容方法之需求。消費者尋求“抗老化”美容產品，該等產品治療或延緩實際老化與歷經滄桑的皮膚之明顯可見的跡象，諸如皺紋、細紋、下垂、色素過度沉著及老人斑。消費者亦尋求美容產品在抗老化以外的功效。例如，“敏感性皮膚”的觀念已提高對於改善敏感、乾燥及/或易脫皮屑的皮膚之外觀與狀況及舒緩發紅及/或受刺激皮膚之美容產品的需求。消費者亦渴望治療斑點、面皰、瑕疵等或減少罹患皮膚癌風險的美容產品。

雖然市面上已有用於治療皮膚的抗老化美容產品，但對於提供皮膚、頭髮及/或指甲抗老化或恢復青春之功效及使用天然成分作為活性組分的有效外用美容組成物仍存有需求。非天然的化學合成產物可能被認為對環境或對個人不安全。反之，天然產物被認為是純淨、溫和及優於化學合成產物。

自植物或草本植物萃取之以天然為主的產物據信含有抗氧化劑/自由基清除劑，可以中和自由基損傷所造成的影響。此外，以天然為主的產物可含有作用劑，而刺激真皮中的受損結締組織之合成與恢復及表皮中的障壁功能。

然而，要從“天然”來源諸如植物或草本植物傳遞美容功效並非微不足道的小事。若要從該等來源傳遞真正功效，則需要辨識出特定的植物/草本植物萃取物或成分；其等的最低活性濃度；及其等與其他成分組合而在賦予抗老化及/或皮膚改善功效方面之附加或協同活性。

本發明的組成物進一步解決與去角質劑相關聯之經常發生的刺激問題，去角質劑諸如維生素A酸類(如視網酸、視網醇及視網醛)；羧酸類，包括α-羥酸類(如乳酸、乙醇酸)、β-羥酸類(如柳酸)、α-酮酸類、乙酸與三氯乙酸、1-吡咯啶酮-5-羧酸、辛醯基柳酸、α-羥基癸酸、α-羥基辛酸、葡萄糖酸內酯、甲氧基丙基葡萄醯胺、草酸、蘋果酸、酒石酸、苦杏仁酸、苯甲酸、葡萄糖酸、過氧化苯甲醯與苯酚等。去角質劑與其他成分亦可增加皮膚對於環境狀況諸如日光、風、冷溫及乾燥空氣的敏感性，或可能加劇由於一預先存在的皮膚疾病所導致之刺激。

提供具有抗老化、抗氧化、抗刺激、抗發炎及/或增進美觀性質及供局部使用的美容組成物。

概要 一實施例係有關於一外用組成物，其包括有效改善皮膚外觀或至少一項皮膚老化跡象之一量之羊蹄甲屬(Bauhinia )的一植物成分及/或植物萃取物(亦稱為卡奇娜(Kachnar))；及至少一種藥學上或美容上可接受的載劑。在特定實施例中，該外用組成物可進一步包括至少一種其他植物成分及/或一植物萃取物，諸如胡麻屬(Sesamum )的一植物萃取物及/或植物成分(亦稱為芝麻素)。該外用組成物可進一步包含至少一種DNA修復酵素。該至少一種DNA修復酵素可為一種嘧啶醣苷/無鹼基解離酶。該至少一種DNA修復酵素可選自由下列所組成之群組：對於噬菌體T4嘧啶二聚物具特異性的內切酶、藤黃微球菌(Micrococcus luteus )的N-醣苷酶/AP解離酶、啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae )的N-醣苷酶/無嘌呤-無嘧啶解離酶、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe )的紫外線損傷內切酶(UVDE)、對於綠球藻(Chlorella )病毒分離物PBCV-I嘧啶二聚物具特異性的醣苷酶、巢狀組囊藻(Anacystis nidulans )光解酶及其組合。該組成物可為選自由下列所組成之群組之一產品形式：氣霧劑、乳霜劑、乳劑、固體劑、液體劑、分散劑、泡沫劑、凝膠劑、乳液劑、慕斯劑(mousse)、軟膏劑、散劑、貼劑、香膏劑、液劑、泵送噴劑、棒劑、小紙巾及其組合。該至少一種藥學上或美容上可接受的載劑可包括選自由下列所組成之群組之一或多種成分：水、甘油、C1-C4醇、脂肪醇、脂肪醚、脂肪酯、多元醇、乙二醇、植物油、礦物油、微脂體、層狀脂質物質、矽油及其組合。該組成物可具有實質上中性的pH值。該外用組成物可進一步包括選自由酪胺酸酶抑制劑、自由基清除劑及其混合物所組成之群組之一皮膚美白劑。在外用組成物中，羊蹄甲屬(Bauhinia )的一植物成分及/或植物萃取物係單獨存在或與來自胡麻屬(Sesamum )的至少一植物成分或植物萃取物組合，其改善皮膚外觀或至少一項皮膚老化跡象的有效量可為總組成物重量之約0.0001%至5%。任擇地，在外用組成物中，羊蹄甲屬(Bauhinia )的一植物成分及/或植物萃取物係單獨存在或與來自胡麻屬(Sesamum )的一植物成分或植物萃取物組合，其改善皮膚外觀或至少一項皮膚老化跡象的有效量可為總組成物重量之約0.001%至約0.5%。任擇地，在外用組成物中，羊蹄甲屬(Bauhinia )的一植物成分及/或植物萃取物係單獨存在或與來自胡麻屬(Sesamum )的一植物成分或植物萃取物組合，其改善皮膚外觀或至少一項皮膚老化跡象的有效量可為總組成物重量之約0.01%至約0.1%。

另一實施例係有關於用於改善皮膚外觀或至少一項皮膚老化跡象之一包裝系統，其包括共同含有該組成物之一或多個容器，該組成物包括有效改善皮膚外觀或至少一項皮膚老化跡象的一量之羊蹄甲屬(Bauhinia )的一植物成分及/或植物萃取物及至少一種藥學上或美容上可接受的載劑；及包括從該一或多個容器施用該組成物之說明書。在特定實施例中，該組成物可進一步包括至少一種其他植物成分及/或一植物萃取物，諸如胡麻屬(Sesamum )的一植物萃取物及/或植物成分。

另一實施例係有關於改善皮膚外觀或至少一項的皮膚老化跡象之一種方法，該方法包括按足以改善皮膚外觀或至少一項皮膚老化跡象的一美容有效量，在皮膚上局部施用一組成物，其中該組成物包含有效改善皮膚外觀或至少一項皮膚老化跡象之一量的羊蹄甲屬(Bauhinia )的一植物成分及/或植物萃取物；及至少一種藥學上或美容上可接受的載劑。在特定實施例中，該組成物可進一步包括至少一種其他植物成分或一植物萃取物，諸如胡麻屬(Sesamum )的一植物萃取物及/或植物成分。在該方法中，該組成物係選自由下列所組成之群組之一產物形式：氣霧劑、乳霜劑、乳劑、固體劑、液體劑、分散劑、泡沫劑、凝膠劑、乳液劑、慕斯劑(mousse)、軟膏劑、散劑、貼劑、香膏劑、液劑、泵劑噴劑、棒劑、小紙巾及其組合。在該方法中，至少一種藥學上或美容上可接受的載劑係包括選自由下列所組成之群組之一或多種成分：水、甘油、C1-C4 醇、脂肪醇、脂肪醚、脂肪酯、多元醇、乙二醇、植物油、礦物油、微脂體、層狀脂質物質、矽油及其組合。

另一實施例係有關於一種用於改善皮膚外觀或至少一項的皮膚老化跡象之外用美容組成物，其含有選自由下列所組成之群組之一或多種美容成分：醇類、脂肪類、油類、表面活性劑、脂肪酸類、矽油類、保濕劑、潤濕劑、黏度調節劑、乳化劑、安定劑、著色劑及香料，其中該改善作用係包含有效改善皮膚外觀或至少一項皮膚老化跡象之一量的羊蹄甲屬(Bauhinia )的一植物成分及/或植物萃取物。在特定實施例中，該外用美容組成物可進一步包括至少一種其他植物成分及/或一植物萃取物，諸如胡麻屬(Sesamum )的一植物萃取物及/或植物成分。

又一實施例係有關於調控醌還原酶(QR)蛋白表現及/或其在皮膚細胞中的活性之一種方法，該方法包括按足以調控QR蛋白表現及/或其在皮膚細胞中的活性之一美容有效量，對於一個體的皮膚施用一組成物，其中該組成物包含一量之羊蹄甲屬(Bauhinia )的一植物成分或植物萃取物，其係單獨存在或與一量之來自胡麻屬(Sesamum )的一植物成分或植物萃取物組合；及至少一種藥學上或美容上可接受的載劑。

詳細說明 應理解本發明並非受限於本申請案所述的特定組成物、方法或操作程序。此外，除非另有界定，本申請案所用的所有技術與科學術語的含義係與本發明所屬領域的普通技術人員通常所理解者相同。亦應理解本申請案所用的術語僅為了說明特定實施例之目的，而無意限制本發明的範圍，本發明的範圍將僅由申請專利範圍限定之。

隨著年齡增長，我們的身體功能開始退化，運作效率降低，導致更容易罹患慢性疾病。一理論即老化的自由基理論表示，年齡相關疾病部分係歸因於自由基所增加的氧化傷害。自由基係具有一或多個未配對電子之原子或分子，未配對電子使得自由基不安定。因為自由基傾向於安定的配對電子狀態，其等能從附近的分子“偷取”電子，這會破壞關鍵細胞標的，如DNA、蛋白及脂質。結果，對於辨識自由基的標的與效應以及辨識可減少氧化傷害 的化合物諸如抗氧化劑方面之興趣漸增。

本發明係基於一項令人意外的發現：單獨存在或與來自胡麻屬(Sesamum )的一植物成分或一植物萃取物組合之羊蹄甲屬(Bauhinia )的一植物成分及/或一植物萃取物提供抗皮膚老化的功效及/或改善美觀以及延續皮膚青春的功效。此外，本發明係基於該項令人意外的發現：單獨存在或與來自胡麻屬(Sesamum )的一植物成分或植物萃取物組合之羊蹄甲屬(Bauhinia )的一植物成分及/或植物萃取物預防、減少及/或抑制自由基所增加的氧化傷害 ；抑制細胞的羰基化作用；調控(如刺激)第二相去毒酵素NAD(P)H，即醌氧化還原酶1，其亦稱為醌還原酶(QR)；及增加抗氧化回應元件(ARE)。該成分或萃取物可為來自羊蹄甲屬(Bauhinia )與胡麻屬(Sesamum )群組的任何物種成員。

在特定實施例中，意外地發現相較於個別植物組分的效應，當使用植物成分或植物萃取物的組合物時，其抗皮膚老化的功效可至少具有累加性，及較佳具有協同性。因此，在此說明組成物及其等的用途，該組成物係按足以達成抗皮膚老化功效的充分量包括羊蹄甲屬(Bauhinia )的一植物成分及/或植物萃取物及選擇性地包括來自胡麻屬(Sesamum )的一植物成分及/或植物萃取物。

定義

“組成物”一詞係指治療、改善、促進、增加、管理、控制、維持、最佳化、調節、減少、抑制或預防與一天然狀態、生物程序或者疾病或疾患相關聯的一特定狀況之一產物。例如，一組成物改善一個體的至少一項老化跡象及/或改善皮膚外觀等。組成物一詞係包括但不限於藥學(即藥物)、非處方(OTC)、美容、食品、食品成分或膳食增補劑組成物，其包括一有效量的一萃取物、其至少一組分或其混合物。例示性組成物包括乳霜劑、美容乳液劑、成包或散劑，或為一乳劑、乳液劑、擦劑泡沫劑、錠劑、藥膠布、顆粒劑或軟膏劑之形式。

如本申請案中所用之“萃取物”或“植物萃取物”一詞，係指包括一植物物質的活性成分之一固態、黏質或液態物質或製劑，該植物諸如羊蹄甲屬(Bauhinia )(如宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea L )；亦稱為卡奇娜(Kachnar))及/或胡麻屬(Sesamum )(如胡麻(Sesamum indicum ))。該成分或萃取物可為來自羊蹄甲屬(Bauhinia )與胡麻屬(Sesamum )群組的任何物種成員。“萃取物”一詞係意欲不僅包括從羊蹄甲屬(Bauhinia )(如宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea L ))與胡麻屬(Sesamum )(如胡麻(Sesamum indicum ))產生及藉由使用選自下列之一溶劑：水；具有1至4個碳原子的低級醇類，諸如甲醇、乙醇、丁醇等；乙烯；丙酮；已烷；乙醚；氯仿；乙酸乙酯；乙酸丁酯；二氯甲烷；N,N-二甲基甲醯胺(DMF)；二甲基亞碸(DMSO)；1,3-丁二醇；丙二醇及其組合所產生的粗萃物；亦包括該粗萃物在該一溶劑中的一部分。在確保萃取出及保有活性成分之前提下，任何萃取方法皆可採用。植物萃取物的實例係包括來自羊蹄甲屬(Bauhinia )(如宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea L ))與胡麻屬(Sesamum )(如胡麻(Sesamum indicum ))之萃取物。

如本申請案中所用之一種純化合物、組成物、萃取物、萃取物混合物、萃取物的組分及/或活性劑或有效成分或其組合的“有效量”或“治療有效量”一詞，係指在劑量足以有效達成所期望結果達一段時間之一量。例如，“有效量”或“治療有效量”係指本發明之一種純化合物、組成物、萃取物、植物萃取物、萃取物混合物、萃取物的組分及/或活性劑或有效成分或其組合的量，當其投予至一個體(如哺乳類動物及諸如人類)時，係足以達成治療，諸如在一個體中藉由如預防、減少及/或抑制自由基所增加的氧化傷害，而改善至少一項老化跡象及/或改善皮膚外觀等。構成“有效量”或“治療上有效的治療”之本揭露內容的一組成物、萃取物、植物萃取物、萃取物混合物、植物萃取物混合物、萃取物的組分及/或活性劑或有效成分的量，將依該活性劑或化合物、所治療的病況及其嚴重性、投藥方式、治療持續時間或所治療個體的年齡而異，但可由本領域普通技術人員依其本身知識與本揭露內容而例行性地決定。

“改善至少一項老化跡象”與“改善一項老化跡象”在本申請案中係以可互換方式使用，及用以表示預防、阻止、逆轉、改善、縮小及/或減少一老化跡象，尤其是皮膚老化跡象。代表性的老化跡象係包括但不限於紋路、細紋、皺紋、魚尾紋、黑眼圈、瑕疵、老人斑、黑斑、妊娠紋或其組合。

“改善皮膚外觀”與“改善皮膚的美觀”在本申請案中係以可互換方式使用，及用以表示增進皮膚外觀的美觀程度。代表性的改善作用可係包括但不限於與下列相關的有利特徵及/或性質：皮膚厚度、彈性、彈力、保濕性、光滑度、膚色、紋理、光彩、明亮度(即皮膚去斑)、光澤、明亮、通透度、外形、緊緻度、緊繃度、柔嫩度、柔軟度、敏感性、毛孔尺寸或其組合。該等詞彙亦用於指改善不良的皮膚狀況。可影響、產生或引起代表性不良狀況之皮膚不良病況係包括但不限於牛皮癬、濕疹、皮脂漏、皮膚炎、曬傷、雌激素不平衡、色素過度沉著、色素過少症、變色、黃化、雀斑、皮膚萎縮、皮膚長粉刺、皮膚脆弱、乾燥、觸感粗糙、皸裂、下垂、變薄、增生、纖維變性、毛孔擴大、橘皮組織形成、瘀青、粉刺形成、細胞凋亡、細胞分化、細胞逆分化、預防腫瘤誘發作用或腫瘤進程、病毒感染、真菌感染、細菌感染、蜘蛛網型靜脈曲張(毛細血管擴張)、多毛症、紅斑、搔癢性皮炎、繭皮、疣、雞眼或其組合。

“藥學上可接受的”一詞係指該等藥物、藥劑、萃取物或惰性成分適合用於接觸人類及較低等動物的組織，而無不當的毒性、不相容性、不穩定性、刺激等，並且與合理的利益/風險比相稱。

“投藥(administer)”、“投藥(administered)”、“投藥(administers)”及“投藥(administering)”等詞係界定為經由技藝中已知的一途徑提供一個體一組成物，該等途徑係包括但不限於靜脈內、動脈內、口、不經腸、頰、外用、經皮、直腸、肌內、皮下、骨內、經黏膜或腹膜內投藥途徑。在較佳的實施例中，一組成物的外用投藥途徑係適宜的。

“調控”或“調節”等詞係指羊蹄甲屬(Bauhinia )(如宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea L ))的一種純化合物、組成物、萃取物、萃取物混合物、萃取物的組分及/或活性劑或有效成分或其組合，其係單獨存在或與胡麻屬(Sesamum )(如胡麻(Sesamum indicum ))的一種純化合物、組成物、萃取物、萃取物混合物、萃取物的組分及/或活性劑或有效成分或其組合組合，在增加、刺激或增強或降低、預防或抑制一特定分子的表現作用或活性方面之能力。例如，“調控”一詞可指單獨存在或與胡麻屬(Sesamum )組合之羊蹄甲屬(Bauhinia )在降低自由基所增加的氧化傷害 、刺激醌還原酶(QR)活性及/或增加及/或刺激抗氧化回應元件(ARE)之能力。

“減少”、“降低”、“抑制(inhibit)”或“抑制(inhibiting)”等詞係指當相較於在單獨存在或與來自胡麻屬(Sesamum )(胡麻(Sesamum indicum))的一植物成分或萃取物組合之羊蹄甲屬(Bauhinia )(如宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea L))的一植物成分或植物萃取物不存在下之蛋白活性及/或表現，諸如在一對照組樣本中之蛋白活性及/或表現，在單獨存在或與來自胡麻屬(Sesamum )(胡麻(Sesamum indicum))的一植物成分或萃取物組合之羊蹄甲屬(Bauhinia )(如宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea L))的一植物成分或植物萃取物的存在下之蛋白活性及/或表現及/或其下游效應之降低或減少。蛋白活性及/或表現及/或其下游效應的降低或抑制程度，將依所存在之單獨存在或與來自胡麻屬(Sesamum )(胡麻(Sesamum indicum))的一植物成分或萃取物組合之羊蹄甲屬(Bauhinia )(如宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea L))的一植物成分或植物萃取物之性質與量而異，但將為顯而易見的，如蛋白活性及/或表現之降低係可檢測出的；當相較於在單獨存在或與來自胡麻屬(Sesamum )的一植物成分或萃取物組合之羊蹄甲屬(Bauhinia )不存在下之蛋白活性及/或表現時，期望降低程度係大於10%、25%、50%、75%、90%、95%或99%。

“增加”、“增加”或“刺激” 等詞係指當相較於單獨存在或與來自胡麻屬(Sesamum )(胡麻(Sesamum indicum))的一植物成分或萃取物組合之羊蹄甲屬(Bauhinia )(如宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea L))的一植物成分或植物萃取物不存在下之蛋白活性及/或表現，諸如在一對照組樣本中之蛋白活性及/或表現，在單獨存在或與來自胡麻屬(Sesamum )(胡麻(Sesamum indicum))的一植物成分或萃取物組合之羊蹄甲屬(Bauhinia )(如宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea L))的一植物成分或植物萃取物的存在下之蛋白活性及/或表現及/或其下游效應的增加。蛋白活性及/或表現及/或其下游效應的增加程度，將依所存在之單獨存在或與來自胡麻屬(Sesamum )(胡麻(Sesamum indicum))的一植物成分或萃取物組合之羊蹄甲屬(Bauhinia )(如宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea L))的一植物成分或植物萃取物之性質與量而異， 但將為顯而易見的，如蛋白活性及/或表現之增加係可檢測出的；當相較於在單獨存在或與來自胡麻屬(Sesamum )(胡麻(Sesamum indicum))的一植物成分或萃取物組合之羊蹄甲屬(Bauhinia )(如宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea L))的一植物成分或植物萃取物不存在下之蛋白活性及/或表現時，期望增加程度係大於10%、25%、50%、75%、90%、95%或99%。

如本申請案中所用之“個體”或”個人”一詞係包括可對其投予一組成物之哺乳類動物。哺乳類動物的非限制性實例包括人類、人類以外的靈長動物、囓齒動物(包括基因轉殖型與非基因轉殖型小鼠)等。在一些實施例中，該個體係一哺乳類動物；而在一些實施例中，該個體係人類。

一實施例係有關於一外用組成物，其包括有效改善皮膚外觀或至少一項皮膚老化跡象之一量的羊蹄甲屬(Bauhinia )的一植物成分或植物萃取物(亦稱為卡奇娜(Kachnar))；及至少一種藥學上或美容上可接受的載劑。在特定實施例中，該外用組成物可進一步包括至少一種其他植物成分或一植物萃取物，諸如胡麻屬(Sesamum )的一植物萃取物或植物成分。

其他特定實施例係有關於一種美容治療系統，其具有一外用組成物，該組成物包括羊蹄甲屬(Bauhinia )(如宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea L))的一植物成分、植物萃取物或一天然複合物，其係單獨存在或與來自胡麻屬(Sesamum )(如胡麻(Sesamum indicum))的一植物成分或植物萃取物組合；及一種藥學上或美容上可接受的載劑。在特定實施例中，當使用植物成分或植物萃取物的組合時，相較於個別植物組分的效應，該所欲效應可至少具累加性，及較佳具協同性。

羊蹄甲屬(Bauhinia )(如宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea L))係一種夏威夷蘭花，原產於中國南方，及生長於夏威夷、德州南部及佛羅里達州西南部。羊蹄甲屬(Bauhinia )有數個名稱，諸如卡奇娜(Kachnar)、坎錢(Kanchan)、西哈普馬塔雷(Sihappu mantarai)、山烏木、柯維達(Kovidar)等；該等名稱在本說明書中可按可互換方式使用。羊蹄甲是中小型樹，生長至10至12公尺(33至39英呎)高，在旱季落葉。葉片長10至20公分(3.9至7.9英吋)及為寬闊、圓弧狀，並在其基部與頂部隆起。花朵明顯，為亮粉紅色或白色，直徑為8至12公分(3.1至4.7英吋)，有五個花瓣。果實為長度15至30公分(5.9至11.8英吋)的莢果，其中含有數顆種子。

在亞洲傳統藥物中使用羊蹄甲屬(Bauhinia )，先前已研究過其抗發炎與抗細菌活性。如下所述，亦已發現羊蹄甲屬(Bauhinia )具有AOX(ARE與醌還原酶)活性。此外，顯示羊蹄甲屬(Bauhinia )與胡麻屬(Sesamum )之組合誘發NRF2，其係一種鹼性白胺酸拉鏈蛋白(bZIP)蛋白， 其調節抗氧化蛋白的表現，而抗氧化蛋白係保護免於因受傷與發炎所觸發的氧化傷害。

可從不同來源商購取得羊蹄甲屬(Bauhinia )及/或胡麻屬(Sesamum )的植物萃取物，包括美國紐澤西州恩格爾伍德克利夫斯(Englewood Cliffs)的巴納特產品公司(Barnet Products Corp)；日本廣島縣尾道市(Onomichi-City)的丸善製薬株式會社(Maruzen Pharmaceuticals Co. Ltd)；及荷蘭海爾倫(Heerlen)的帝斯曼(DSM)公司。此外，可使用下文中更充分討論或本技藝領域中已知的萃取與純化技術，獲得羊蹄甲屬(Bauhinia )及/或胡麻屬(Sesamum )之適宜的植物成分與植物萃取物。

在一實例中，可使用一種有機溶劑萃取技術，獲得適用於本發明的獨特組成物之一植物萃取物。

在另一實例中，可使用溶劑逐級分離法，獲得適用於本發明的獨特組成物之一植物萃取物。

亦可使用總體水乙醇萃取技術，獲得適用於本發明的獨特組成物之一植物萃取物。一般而言，其係稱作總體萃取作用。該方法所產生的植物萃取物將含有存在於所萃取物質中之廣泛種類的植物性化合物，包括脂溶性與水溶性物質。在收集植物萃取物溶液之後，將溶劑蒸發除去，而產生植物萃取物。

在本發明中亦可使用總體乙醇萃取作用。該技術使用乙醇作為溶劑，而非使用水-乙醇。該萃取技術所產生的萃取物除了水溶性化合物之外，另可包括脂溶性及/或親脂性化合物。

可用於獲得適用於本發明的一萃取物之另一萃取技術實例係超臨界流體二氧化碳萃取作用(SFE)。在該萃取程序中，待萃取的物質並未暴露於任何有機溶劑。反之，萃取溶劑係具有或不具有修飾劑之處於超臨界狀態(高於31.3℃與高於73.8巴)的二氧化碳。本技術領域的該等嫻熟技術人員將明白可變換溫度與壓力條件，以獲得最佳的萃取物產量。該技術產生由脂溶性及/或親脂性化合物組成的萃取物，類似於上述的總體已烷與乙酸乙酯萃取技術。

本技術領域的該等嫻熟技術人員將明白，有其他許多萃取方法係同為本技術領域所知及述於各種專利與發表文獻中，該等方法可用於獲得待用於實施本發明之萃取物。例如，在此併入本案以為參考資料之下列參考文獻中所述的萃取程序，可用於實施 本發明：Murga等人於2000年8月期刊“J. Agric Food Chem. ”第48(8)卷第3408-12頁之“藉由使用二氧化碳與酒精的超臨界混合物從葡萄籽萃取天然複合酚與單寧”乙文；Hong等人於2001年期刊“Nat Prod Lett. ”第15(3)卷第197-204頁之“從葡萄籽中萃取酚類化合物之微波輔助型萃取作用”乙文；Ashraf-Khorassani等人於2004年5月期刊“J. Agric Food Chem. ”第52(9)卷第2440-4頁之“通過使用二氧化碳式流體的單一系統將葡萄籽逐級分離成油類、多酚及前花青素”乙文。

施用本發明外用組成物可改善皮膚的美觀，及可恢復青春或改善皮膚。本發明的該等組成物亦可提供各種抗老化與皮膚肌理方面的功效。相對於其他抗皮膚老化的市售外用產物，相信包含單獨存在或與諸如胡麻屬(Sesamum )的至少一植物成分或萃取物組合之羊蹄甲屬(Bauhinia )之一組成物提供顯著的抗老化與皮膚肌理方面的功效。相對於施用其中個別成分，當局部施用該成分或成分的組合時可產生累加性或協同性功效。在本申請案中，“協同性功效”、“加乘性效應”或“協同性效應”等詞係界定為二或多種組合組成物(如一萃取物混合物)之交互作用，使得所產生的一合併生物效應或功效大於其等個別效應的總和(即1+1＜2或1+1+1＜3)。協同效應可約為各組成物的加總(累加)效應，或較其高約10、20、30、50、75、100、120、150、200、250、350或500%或甚至更多。該效應可為本申請案所述之可測量效應中的任一者。“累加性功效”一詞係指一合併生物效應或功效等於二或多種組合組成物(如一萃取物混合物)的個別效應之總和。

包含單獨存在或與胡麻屬(Sesamum )的一植物成分或萃取物組合的羊蹄甲屬(Bauhinia )之組成物係提供抗老化及增進美觀的相關皮膚功效。因此，特定實施例係有關於外用組成物與其等用於治療皮膚以預防、阻止、逆轉、改善、縮小、減少或改善老化跡象之方法，老化跡象包括自然老化、荷爾蒙老化及/或光致老化或與其相關聯者。老化跡象可係包括但不限於皮膚脆弱；喪失膠原蛋白及/或彈性蛋白；皮膚中的雌激素不平衡；皮膚萎縮；紋路及/或皺紋出現及/或加深，包括細紋在內；皮膚變色，包括黑眼圈在內；魚尾紋；皮膚下垂；皮膚疲乏及/或承受壓力，如皮膚因為環境壓力諸如汚染及/或溫度變化而長粉刺；皮膚乾燥、由於皮膚乾燥所產生的細紋、皮膚粗糙；皮膚易脫皮屑；細胞老化；失去膚色、彈性、通透度、發光性及/或光澤；失去皮膚緊緻度；皮膚肌理不佳；失去皮膚彈性及/或彈力；皮膚變薄；及發炎。

皮膚美觀方面的功效與改善可表現在下列任何一項：減少毛孔尺寸、細紋、皺紋、觸感粗糙度及發炎；改善膚色、光彩、通透度及/或緊繃度；促進抗氧化活性；改善皮膚緊緻度、飽滿度、柔嫩度及/或柔軟度；改善膠原蛋白原及/或膠原蛋白之生成；改善皮膚肌理及/或促進再肌理化；改善皮膚障壁的修復及/或功能；改善皮膚外形輪廓的外觀；恢復皮膚光澤、通透度及/或明亮；補充因老化及/或停經而減少之皮膚中的必需營養素及/或組分；改善皮膚細胞之間的聯繫交通；增加細胞增生及/或增殖；使得因老化及/或停經而減少的皮膚細胞代謝增加；改善皮膚的保濕性；促進及/或加速細胞更新；增加皮膚厚度；增加皮膚彈性及/或彈力；及在使用或未使用α或β羥酸、酮酸或其他去角質劑之下增強去角質作用。

其他功效可包括增加皮膚光滑度及/或柔軟度；提升對於皮膚狀況的感覺；增加皮膚水分；減少皮膚壓力與細紋；增加明亮及/或去斑；改善皮膚肌理與皮膚緊緻度。

在本發明的一實施例中，該外用組成物包括其量足以提供抗老化及增進美觀的相關皮膚功效之羊蹄甲屬(Bauhinia )；及一種藥學上或美容上可接受的載劑。具體而言，羊蹄甲屬(Bauhinia )的存在量係約為總組成物重量的0.0001%至5%，理想地約為0.001重量%至約0.5重量%，更理想地約為0.01重量%至約0.1重量%。

在特定實施例中，該等組成物包括羊蹄甲屬(Bauhinia )的一植物成分、一植物萃取物或一天然複合物，亦可包括來自胡麻屬(Sesamum )的一植物成分或植物萃取物。該成分或萃取物可為來自該等屬群組的任何物種成員。

其他特定實施例係有關於外用組成物，其包括與諸如胡麻屬(Sesamum )的至少一種其他植物成分或植物萃取物組合之羊蹄甲屬(Bauhinia )，其量係足以提供抗老化及增進美觀的相關皮膚功效；及包括一種藥學上或美容上可接受的載劑。

在一特定實施例中，該外用組成物可包括與胡麻屬(Sesamum )組合之羊蹄甲屬(Bauhinia )。與羊蹄甲屬(Bauhinia )組合用於本發明中之植物成分或植物萃取物單獨或集體存在於組成物中的量一般約為總組成物重量的0.0001%至5%，理想地約為0.001重量%至約0.5重量%，更理想地約為0.01重量%至約0.1重量%。

一特佳的實施例係有關於一種美容治療系統，其採用經適當配製供治療眼睛周圍區域之一外用組成物。在不希望受到理論束縛之同時，相信當使用浸漬一組成物的一貼劑時，可增進眼睛部位的治療，該組成物包含單獨存在或與諸如胡麻屬(Sesamum )的至少一植物成分或植物萃取物組合之羊蹄甲屬(Bauhinia )。

該等組成物的pH值可介於約6.0至約8.0之間，或任擇地該組成物的pH值可為實質上中性。在特定實施例中，使用植物萃取物的該等組成物係具有大致中性的pH值。

在其他特定實施例中，本發明的組成物可進一步包括DNA修復酵素。用於本發明中的DNA修復酵素可包括涉及鹼基切除式修復(BER)、核苷酸切除式修復(NER)途徑或如第6,368,594號美國專利所述的交替性切除式修復途徑之酵素。該等途徑係由可進行切開DNA、移除損傷、填補缺口及接合反應之不同組的蛋白所媒介。

核苷酸切除式修復(NER)途徑係構成一種廣泛分佈式的損傷非特異性修復途徑，其經由在損傷位點的上游與下游的雙重切口反應而籌畫移除DNA損傷，導致含有損傷的寡核苷酸之釋出。在移除受損DNA之後，填補所產生的缺口並將DNA末端連接在一起。

鹼基切除式修復(BER)途徑係針對所有主要的DNA鹼基損傷形式之主要防禦。該途徑負責檢測及在未受損DNA的大量群體中移除各種特定的個別鹼基損傷。BER途徑典型地涉及具CPD特異性之N-醣苷酶/AP解離酶酵素的活性。N-醣苷酶/AP解離酶酵素首先切割CPD5’嘧啶的N-糖苷鍵，然後經由β-解離酶機制在無鹼基位點切割磷酸二酯主鏈。

適用於本發明中的DNA修復酵素具有能辨識、切除及修復受損DNA諸如CPD與(6-4)光產物之N-醣苷酶/AP解離酶活性。該等酵素的活性可具有光依賴性(如光解酶)或與光無關。在該群組中的例示性DNA修復酵素係包括但不限於噬菌體T4嘧啶二聚物-特異性內切酶(denV內切酶)、藤黃微球菌(Micrococcus luteus )的N-醣苷酶/AP 解離酶、啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae )的N-醣苷酶/無嘌呤-無嘧啶解離酶、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe )的紫外線損傷內切酶(UVDE)、綠球藻(Chlorella )病毒分離物PBCV-1嘧啶二聚物-特異性醣苷酶、巢狀組囊藻(Anacystis nidulans )的光解酶，及其經修飾的非天然(如重組型)酵素產物。

DNA修復酵素亦可包括來自BER、NER或交替性途徑的其他成員。該等酵素可包括O⁶ -甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉移酶、尿嘧啶-DNA醣苷酶與次黃嘌呤-DNA醣苷酶、DNA外切酶、受損鹼基醣苷酶(如3-甲基腺嘌呤-DNA醣苷酶)、單獨型或複合型內切酶(如大腸桿菌uvrA/uvrB/uvrC內切酶複合物)，以及目前僅部分理解其等活性的其他酵素與酵素複合物，諸如，人類ERCC基因及酵母菌RAD基因的產物。例示性DNA修復酵素係包括但不限於尿嘧啶DNA醣苷酶、3-甲基腺嘌呤DNA醣苷酶、內切酶III/胸腺嘧碇乙二醇DNA醣苷酶、內切酶VIII、甲醯胺基嘧啶(fapy)/8-羥基鳥嘌呤DNA醣苷酶、A-G-誤配DNA醣苷酶、G-T誤配DNA醣苷酶、甲醯基尿嘧啶DNA醣苷酶、羥基甲基尿嘧啶DNA醣苷酶、XPC-hHR23B、XPA、RPA、XPB、TFIIH、XPG、XPF-ERCC1、Rad-4-Rad23、Rad14、Rfa、Rad25/Ss12、Rad3、Rad2、Rad1-Rad10、各種DNA聚合酶、DNA接合酶等。該等酵素的例示性來源可包括細菌或哺乳類動物細胞來源，係包括但不限於大腸桿菌、啤酒酵母菌(S. cerevisiae )、粟酒裂殖酵母(S. pombe )、人類、人類、猴、小鼠、大鼠、倉鼠等。

如本申請案中所用之“DNA修復酵素”一詞係意欲包括前述的酵素及現在已知或之後發現或開發的其他酵素，包括醣苷酶、無嘌呤/無嘧啶內切酶或具有修復受損DNA活性的其他酵素。

DNA修復酵素可衍生或萃取自適宜來源，諸如大腸桿菌(E. coli )、球菌屬(Micrococcus)等。可將DNA修復酵素包覆於微脂體中，如第5,296,231號美國專利所述，其全部內容在此併入本案以為參考資料。例如，在含有卵磷脂與水的微脂體調配物中提供衍生自藤黃微球菌(Micrococcus luteus )細胞裂解產物的一種DNA修復酵素，及可從美國紐約弗里波特(Freeport)之應用遺傳學(Applied Genetics)有限公司的德美蒂(Dermatics)部門以ULTRASOMES™商品取得，或從美國紐澤西州恩格爾伍德克利夫斯(Englewood Cliffs)的巴納特產品公司(Barnet Products Corp)以ULTRASOMES-V™商品取得。可從應用遺傳學(Applied Genetics)有限公司的德美蒂(Dermatics)部門(美國紐約弗里波特(Freeport))以PHOTOSOMES™或PHOTOSOMES-V™商品，取得包覆巢狀組囊藻(Anacystis nidulans )裂解產物的微脂體，該裂解產物中含有巢狀組囊藻(Anacystis nidulans )光解酶。該等微脂體可包括來自植物衍生來源如黃豆之習用的磷脂類、油酸及/或膽固醇半琥珀酸酯，或其等可從本技術領域的嫻熟技術人員所習知的其他適宜來源產生。

例示性實施例可納入ULTRASOMES™、ULTRASOMES-V™、PHOTOSOMES™或PHOTOSOMES- V™，其量約為總組成物重量的0.01%至20%，理想地約為0.1重量%至約10重量%，更理想地約為0.5重量%至約3重量%。

微脂體可作為輸送劑，促進美容活性劑諸如本發明的DNA修復酵素或植物或植物成分轉移進入皮膚的真皮。可取代該等微脂體而用於皮膚輸送的其他輸送劑，係包括但不限於本技術領域的嫻熟技術人員所知的皮膚輸送載劑，包括乳劑、微乳劑、奈米乳劑、奈米粒子、微球體、醇脂體(ethosome)、轉移體及非離子表面活性小體(niosome)。

在特定實施例中，該美容組成物亦可包括附加的美容成分，其係包括但不限於存在於下列各者的成分：甘草、甘草萃取物、甘草衍生物(如甘草酸鹽)；檸檬萃取物；黃瓜萃取物；葵花籽萃取物；蓖麻籽油；燕麥蛋白、燕麥萃取物、水解燕麥；絲蛋白(如絲膠蛋白)；玻尿酸及其衍生物(如玻尿酸鈉)；維生素；礦物質；抗氧化劑；磷脂、神經鞘脂質、膽固醇；及/或具有抗老化、抗氧化、抗發炎、抗刺激、抗癌或其他皮膚保護性質、增進美觀性質及/或增加皮膚輸送性質之其他成分或其組合。

如本發明之供局部施用的美容上有用的維生素、礦物質及/或抗氧化劑係包括具有抗氧化性質的植物成分與萃取物(如迷迭香萃取物、雷公根屬(Centella )的積雪草苷等)；維生素A及其前驅物或衍生物(如β-胡蘿蔔素、視黃醇棕櫚酸酯)；維生素B3及其前驅物或衍生物(如菸鹼醯胺)；維生素B5及其前驅物或衍生物(如泛醇)；維生素C及其前驅物或衍生物(如抗壞血酸四己基癸酯、棕櫚酸抗壞血酯)；維生素E及其前驅物或衍生物(如d-α-生育酚，乙酸生育酚酯)；維生素K及其前驅物或衍生物；硒及其衍生物(如L-硒代甲硫胺酸)；及α類脂酸(ALA)。

α類脂酸(ALA)係一種天然存在的強力抗氧化劑，因其同時在水與脂質中具有活性與溶解度，有時被稱作“萬用抗氧化劑”。ALA能滲透進入皮膚細胞中；能阻止負責分解膠原蛋白與彈性蛋白的促炎性NF-kB途徑之活化作用；並能提升維生素E與C的保護性效應，從而促進細胞內天然存在的抗氧化劑。

在一實施例中，可在本發明的組成物中納入抗壞血酸四己基癸酯。抗壞血酸四己基癸酯係維生素C的一種穩定的脂溶性酯衍生物。已有報導指出維生素C促進膠原蛋白合成作用；抑制脂質分解；再生維生素E；減少細紋與皺紋；治癒曬傷；及係一種強效的抗氧化性自由基清除劑，並具有顯著的抗發炎性質，阻礙如二十碳四烯酸之產生。

在另一實施例中，在該組成物中考慮一起使用泛醇或其等效物與。泛醇係一種有效的成膜性潤濕劑，並具有抗發炎性質。泛醇等效物可包括泛酸的醇衍生物，諸如該等述於化妝品、盥洗用品暨香料協會有限公司(The Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association. Inc.)之1992年CTFA化妝品成分手冊第272-273頁。就最佳效用而言，應選擇泛醇的量，使得該組成物相當快速地乾燥。當在皮膚或其他表面施用該組成物時，組成物中的泛醇越多，該組成物乾燥所需的時間越長。

維生素、礦物質及/或抗氧化劑可按總組成物重量的約0.01%至20%之集體量存在，理想地約為0.1重量%至約10重量%，更理想地約為0.5重量%至約3重量%。

選擇性地，本發明的組成物可另外包括一或多種麻醉劑、抗過敏劑、抗刺激劑、抗真菌劑、抗微生物劑、抗發炎劑、消毒劑、螯合劑、著色劑、脫色劑、潤膚劑、乳化劑、成膜劑、香氛、保濕劑、驅昆蟲劑、潤滑劑、潤濕劑、藥劑、光穩定劑、防腐劑、皮膚保護劑、皮膚滲透增強劑、防曬劑、安定劑、表面活性劑、增稠劑、黏度調節劑或其任一組合。

特定實施例係有關於具有用以對抗潛在皮膚刺激的抗刺激或抗炎性質之植物或植物成分及天然的活性成分。雖然一些實施例並未使用去角質劑，但在所包括的抗刺激/抗發炎劑足以改善去角質劑的刺激性效應之前提下，可包括該等去角質劑。例示性抗刺激劑係包括但不限於蘆薈；α-甜沒藥醇；咖啡因或其他二苯并哌喃類；洋甘菊；白可樂樹(cola nitida )萃取物；甘草酸二鉀；甘草酸苷及其衍生物；綠茶萃取物；卵磷脂或氫化卵磷脂；甘草萃取物；茶樹油；類固醇類或非類固醇類抗發炎劑，其係包括但不限於環氧合酶抑制劑(如柳酸、乙醯柳酸)、NF-κΒ抑制劑、乙酸鍶、氯化鍶、硝酸鍶、尿素或其組合。理想的抗刺激劑可包括甘草酸二鉀、卵磷脂及氫化卵磷脂。

抗刺激或抗發炎劑可單獨存在或集體存在，其量約為總組成物重量的0.01%至10%，理想地約為0.05重量%至約5重量%，更理想地約為0.2重量%至約1.5重量%。

可按單獨或集體方式，將植物成分、植物萃取物、油類、維生素、礦物質、抗氧化劑、抗刺激劑或其他活性劑包括在一種藥學上或美容上可接受的載劑中。適用於本發明的實施例之藥學上或美容上可接受的載劑實例係包括但不限於水、C1-C4醇類、脂肪醇類、脂肪醚類、脂肪酯類、甘油、乙二醇類、植物油、礦物油、卵磷脂、氫化卵磷脂、微脂體、層狀脂質物質、磷脂、聚乙二醇類、多元醇類、丙基醇、矽油、植物油或其任一組合。

用於本發明的該等組成物之藥學上或美容上可接受的載劑可為一均相調配物的形式；或為一乳劑或微乳劑的形式，其係包括但不限於水包油型、油包水型及包括三相在內的多相乳劑。該等乳劑可涵蓋廣範圍的稠度，包括輕爽型乳液劑(其亦可適用於噴劑或氣霧劑輸送)、乳膏狀乳液劑、輕爽型乳霜劑及滋潤型乳霜劑。其他適宜的外用載體包括無水的液態溶劑，諸如油與醇；水基單相液態溶劑(如水醇溶劑系統)；無水的固體與半固態(諸如凝膠劑與棒劑)；及水基凝膠劑與慕斯(mousse)系統。

該藥學上或美容上可接受的載劑通常佔總組成物重量的約5%至約99.9%，理想地約25%至約80%，及更理想地佔該組成物重量的約50%至約70%，及可在其他美容補佐劑不存在下，構成該組成物的餘量。

潤滑劑係藉由提供一保護性潤滑劑塗層而讓皮膚保濕或恢復水分之潤濕劑。潤膚劑可按一般化學物質類別分類為酯類、脂肪酸類與醇類、多元醇及碳氫化合物。酯類可為酯或二酯。脂肪酸二酯類的代表性實例係包括但不限於甘草酸二鉀、己二酸二丁酯、癸二酸二乙酯、二聚酸二異丙酯及琥珀酸二辛酯。可接受的支鏈脂肪酸酯係包括但不限於2-乙基-己基肉豆蔻酸酯、硬脂酸異丙酯及棕櫚酸異硬脂基酯。可接受的三元酸酯類係包括但不限於三亞油酸三異丙酯與檸檬酸三月桂基酯。可接受的直鏈脂肪酸酯係包括但不限於棕櫚酸月桂基酯、乳酸肉豆蔻基酯及油酸硬脂基酯。

適宜的脂肪醇類與脂肪酸類可係包括但不限於具有約10至20個碳原子的醇類或酸類。例如，可使用醇類諸如鯨蠟基醇、肉豆蔻基醇、棕櫚基醇與硬脂基醇及酸類。

可使用多元醇類作為潤膚劑，其係包括但不限於直鏈與支鏈的烷基多羥基化合物。代表性多元醇類係包括但不限於丁烯、丙二醇、山梨糖醇、甘油、聚合型多元醇類諸如聚丙二醇與聚乙二醇等。

可使用碳氫化合物作為潤滑劑，及可包括在烴鏈中具有12至30個碳原子的碳氫化合物，其係包括但不限於礦物油、石油膠、角鯊烯及異烷烴類。

例示性潤滑劑係包括但不限於丁烯、辛酸甘油三酯/癸酸甘油三酯、蓖麻油、鯨蠟硬脂醇聚醚(ceteareth)-20、鯨蠟硬脂醇聚醚-30、鯨蠟硬脂基醇、鯨蠟醇聚醚(ceteth) 20、鯨蠟硬脂醇、鯨蠟基醇、鯨蠟基硬脂醯醇、膽固醇、可可脂、己二酸二異丙基酯、甘油、單油酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、異烷烴類、肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、羊毛脂、羊毛脂醇、氫化羊毛脂、異烷烴類、液態石蠟、亞麻油酸、礦物油、油酸、石油膠、磷脂、聚乙二醇、聚乙二醇-7椰油酸甘油酯、聚乙二醇-18甲基酯二甲基矽烷、聚氧乙二醇脂肪酸醇醚、聚氧丙烯15-硬脂醯醚、聚丙二醇丙二醇、丙二醇硬脂酸酯、山梨糖醇、神經鞘脂質、角鯊烯、硬脂醇聚醚(steareth)-2或硬脂醇聚醚-100、硬脂酸、硬脂醯醇、尿素、白石蠟脂等。

潤滑劑可單獨存在或集體存在，其量係約為總組成物重量的0.005%至20%，理想地約為0.1重量%至約10重量%，更理想地約為1.0重量%至約5.0重量%。

保濕劑係可與水結合並將其保留在皮膚表面上之潤濕劑。例示性保濕劑係包括但不限於乙醯基葡萄糖胺、雙醣膠、丁二醇、乙氧基二甘醇、乙二醇聚丙烯、葡萄糖、甘油聚醚(glycereth)-26、甘油、丙三醇、乙二醇、乳糖醇、麥芽糖醇、丙二醇、絲膠蛋白、玻尿酸鈉、山梨糖醇、木糖醇、檸檬酸鈉、葡萄糖等。

保濕劑可按集體方式存在，其量係約為總組成物重量的0.1%至40%，理想地約為2.5重量%至約25重量%，更理想地約為5重量%至約15重量%。

本發明的組成物可提供一或多種防腐劑。適宜的防腐劑包括乙二胺四乙酸(EDTA)二鈉、苯甲醇、羥基苯甲酸甲酯、苯氧基乙醇、羥基苯甲酸丙酯、羥基苯甲酸乙酯、羥基苯甲酸丁酯及羥基苯甲酸異丁酯。

增稠劑係存在於本發明的美容組成物中之另一類別的功能成分。所存在的增稠劑之集體量係通常約為組成物重量的0.01至10重量%，理想地約為0.05至5重量%，更理想地約為0.1%至1%。例示性增稠劑係交聯型聚丙烯酸酯物質。可使用膠類諸如黃原膠、鹿角菜膠、明膠、刺梧桐膠、果膠及刺槐豆膠。在特定情況下，增稠功能可由亦作為聚矽氧或潤滑劑之一物質來達成。例如，超過10厘司的聚矽氧膠類及諸如丙三醇硬脂酸酯的酯類均具有雙重功能性。

在特定實施例中，可在本發明的該等組成物中包括皮膚美白劑。皮膚美白劑係包括但不限於酪胺酸酶抑制劑、自由基清除劑及其混合物。

可在本發明的美容組成物中納入粉末。該等粉末包括白堊、滑石、高嶺土、澱粉、膨潤石黏土、化學改質型矽酸鎂鋁、有機改質型蒙脫石黏土、水合矽酸鋁、燻矽石、鋁澱粉琥珀酸辛烯酯及其混合物。

亦可在該美容組成物中納入其他輔助性次要組分。該等成分可包括著色劑、遮光劑及香料。該等其他輔助性次要組分的量可為組成物重量的0.001%至20%不等。

可將本發明的該等組成物配製成適合局部施用至皮膚的任何方便形式。該等產品形式係包括但不限於氣霧噴劑、乳霜劑、分散劑、乳劑、泡沫劑、凝膠劑、液體劑、乳液劑、慕斯(mousse)、軟膏劑、貼劑、香膏劑、成包或散劑、泵送噴劑、固體劑、液劑、棒劑及小紙巾。理想的美容品形式係屬於水包油型乳劑的一種乳霜劑。油包水型與聚矽氧乳劑包水型亦在考慮之列。在各調配物中，可納入各種已知的習用美容成分。例如，可包括諸如醇類、脂肪類與油類、表面活性劑、脂肪酸類、矽油、保濕劑、潤濕劑、黏度調節劑、乳化劑、安定劑、著色劑及香料之美容成分。 該等組成物可根據需要而每天、每天數次或以任何適宜方案進行施用，使得達成所期望的結果。該等組成物可連續施用或間歇施用。

特定實施例係有關於一種美容治療系統，其包括浸漬本發明的外用組成物之一貼劑。供用於本發明之貼劑可具有適用於治療特定標的區域之任何形狀。貼劑可覆蓋針對特定區域的小幅面積；或者可覆蓋大幅面積，例如覆蓋臉部的面膜形式。目前供在眼睛周圍施用藥物之貼劑的整體尺寸與幾何形狀，可能使得難以在眼睛附近施用眼睛治療產品。

圖1描述本發明的代表性貼劑1。該貼劑包括一前側3與浸漬外用組成物5之一背側7。當治療眼睛部位時，貼片1可為具有凸形端部的腎形，第一端部9的圓角較小，第二端部11係與第一端部9相對及具有更大的圓角，該貼劑的頂部部分10所具有的表面係實質上與鄰近一個體眼睛的顴骨弧度平行。圖1所述眼睛貼劑1之較短且較圓之設計使得一個體13更容易將貼劑1定位在眼底17與眼側19靠近眼睛15之處。然而，為了治療眼睛周圍的區域，可以變化如圖1所示的貼劑1之長度、寬度和幾何形狀，而不損及其效用。此外，本發明可包括分別用於治療各隻眼睛15的一對貼劑1，或者其可含有同時治療二隻眼睛之連接再一起的單一貼劑。用於本發明的貼劑1可進一步依據待治療區域的特定的輪廓與形狀而調整、貼合及/或剪切。本技術領域的嫻熟技術人員當然理解，依貼劑1的定向或所治療的特定眼睛而定，貼劑1的前側5或背側7可浸漬外用組成物5。

貼劑1可由適於吸收、含有及釋放本發明的組成物之任何可移除性材料製成。例如，貼劑1可由非紡織材料製成。非紡織材料可包括棉、棉/聚酯混紡或其他適宜的天然或合成材料組合物。該貼劑可進一步適於提供一閉塞性、半閉塞性或非閉塞性障壁。該貼劑可具有黏性或不具黏性。如圖1所描述，貼劑1可包括單層的材料21，或者可包括多層相同及/或不同的材料以提供附加的結構完整性及/或可撓性。適宜的貼劑或貼劑材料係揭露於例如第6,096,334號、第6,120,792號、第6,495,158號、第6,623,751號、第8,697,099號美國專利；第2002/0086043號美國專利申請案；第2003/0152610號美國專利申請案；第2003/0175328美國專利申請案；及本申請案中所引述的參考文獻，其等的內容在此併入本案以為參考資料。

在即將施用貼劑1至一個體13之前，可將外用組成物5塗覆至貼劑1的至少一部分。任擇地，貼劑1可預先塗覆外用組成物而立即可供使用。較佳地，外用組成物5係施用至貼劑1之背側7的實質上整個表面。貼劑1及/或外用組成物5可進一步包括一黏著劑23。可在將外用組成物5施用至貼劑1之前或之後，將黏著劑23施用至貼劑1的背側7。黏著劑23可為本技術領域的嫻熟技術人員所知及適合按可移除方式將貼劑及/或外用組成物黏附至一基材諸如人類皮膚之任何黏著劑。該黏著劑可施用至貼劑1的前側5或背側7，依貼劑1的定向或浸漬該外用組成物的特定側而定。

本發明的美容治療系統可包括一包裝系統，其係用於放置該美容治療系統的個別組分。在一較佳實施例中，該美容治療系統包括一貼劑；至少一容器；及配製供治療鄰近眼睛的一區域之一外用組成物。

可使用一或多個容器來安置該美容治療系統的組分中之一或多者。如本技術領域的嫻熟技術人員所知之習用操作，可使用適用於放置該美容治療系統的組分之任何容器。圖3描述適於放置貼劑1之一代表性容器25。該矩形容器25包括一內部27、一頂蓋29及一底座部分31。頂蓋29可包括用於開啟頂蓋29或將頂蓋29與底座部分31分開之一個凹痕33，以便於取出放置在具有充分深度35與形狀37的一個凹腔之貼劑1，深度35與形狀37係依互補方式適於將圖1的貼劑1穩固地放置在底座部分31中。任擇地，可將該貼劑包裝在覆蓋有一個可密封且可移除式蓋子的凹盤形式之一容器中，以在使用前讓該貼劑穩固地放置在該凹盤中。

可藉由一適宜材料諸如聚丙烯的熱成型或薄壁注塑成型作用，製備該容器。可修改容器25的設計，使其適於特定貼劑的形狀 。可將容器25配製成僅用於放置貼劑，或者可將其配製成用於放置貼劑1以及該美容治療系統的其他組分，包括外用組成物5及/或用於促進外用組成物5及/或貼劑1黏附至如圖2中所示的一個體13之黏著劑23。適用於放置本發明的貼劑之容器係揭露於第6,623,751號美國專利，其內容在此併入本案以為參考資料。

特定實施例係有關於可包裝於適合其黏度及消費者的預期用途之一適宜容器中之外用組成物。例如，可將乳液劑或乳霜劑包裝於一瓶或一滾珠塗抹器中，或一種推進劑驅動式氣霧劑裝置或容器中，或配備有適合手指操作的泵之一容器。當組成物為乳霜劑時，可簡單地將其存放於不變形的瓶中或擠壓式容器中，如管或蓋罐。在特定實施例中，可使用一封閉容器，其中含有如本申請案中所界定之一美容上可接受的組成物。

其他特定實施例係有關於一種美容治療系統，其包括含有一適宜量的美容組成物之一包裝系統，該美容組成物係適合供一段所欲時間使用，諸如14天。如該實施例，該美容治療系統係包括含有多個容器之一包裝系統，各容器具有適合單次使用的一量之如本發明的美容組成物。該容器可為小瓶或其他適宜的放置裝置之形式。

在一實施例中，該美容治療系統係包括具有多個小瓶的一包裝系統，各小瓶含有適合供單次施用該美容組成物至皮膚之一足量的美容組成物。可將該包裝系統配製成提供數個小瓶，其數目係與施用該美容組成物至皮膚的天數相匹配。任擇地，可將該包裝系統配製成提供每天施用一次以上。在一實施例中，該包裝系統可含有14個小瓶供在14天期間每日治療皮膚。該包裝系統可進一步包含供施用該等組成物之一或多個塗抹器，及可進一步包括使用與該美容治療系統相關聯的包裝系統之一套說明書。

本發明亦包括藉由局部施用本發明的美容組成物而治療皮膚之方法。當使用時，從一適宜容器或塗抹器將例如自0.1至100毫升的少量組成物施用至皮膚的暴露區域，及必要時再使用手或手指或一適宜裝置將其推展開來及/或揉入皮膚中。任擇地，該組成物可按已浸漬該組成物的一貼劑之形式施用至皮膚。該貼劑可由非紡織材料製成，及可進一步含有將貼劑黏附至皮膚的一黏著劑。

特定實施例係有關於用於預防、阻止、逆轉、改善、縮小、減少或改善一老化跡象之一種方法，其中按足以預防、阻止、逆轉改善、縮小、減少或改善皮膚的一老化跡象之一美容有效量， 將本發明的一組成物局部施用至皮膚。例示性的老化跡象係包括但不限於臉部紋路、細紋、皺紋、魚尾紋、黑眼圈、瑕疵、老人斑、妊娠紋或其組合。

其他特定實施例係有關於用於改善皮膚美觀之一種方法，其中按足以改善皮膚美觀之一美容有效量， 將本發明的一組成物局部施用至皮膚。改善之處係有關於皮膚厚度、彈性、彈力、保濕性、膚色、紋理、光彩、光澤、去斑、明亮、通透度、外形、緊緻度、緊繃度、柔嫩度、柔軟度、敏感性、毛孔尺寸或其組合。

改善可進一步有關於改善不良皮膚狀況，該不良皮膚狀況係受到由下列所組成之群組之影響、由其產生或由其引起：牛皮癬、濕疹、皮脂漏、皮膚炎、曬傷、雌激素不平衡、色素過度沉著、色素過少症、變色、黃化、雀斑、皮膚萎縮、皮膚長粉刺、皮膚脆弱、乾燥、皸裂、下垂、變薄、增生、纖維變性、毛孔擴大、橘皮組織形成、瘀青、粉刺形成、細胞凋亡、細胞分化、細胞逆分化、預防腫瘤誘發作用或腫瘤進程、病毒感染、真菌感染、細菌感染、蜘蛛網型靜脈曲張(毛細血管擴張)、多毛症、紅斑、搔癢性皮炎、繭皮、疣、雞眼或其組合。

老化跡象或不良皮膚狀況可能由自由基損傷、環境用藥、污染物、飲食、自然老化、過早老化、荷爾蒙老化、光致老化或其組合所導致。因此，選擇用於增進抗老化特徵或改善不良皮膚狀況的本發明組成物與方法可採用局部施用抑制酵素或介質之活性成分，該等酵素或介質係加速或促進老化、損傷、自由基形成或皮膚成分分解及係包括但不限於金屬蛋白酶、膠原蛋白酶、彈性蛋白酶、玻尿酸酶及蛋白酶。該等活性成分可具有抗氧化活性、自由基 清除或抗發炎活性及/或其等可抑制膠原蛋白、彈性蛋白、纖連蛋白、玻尿酸、醣胺聚醣(GAG)或其他細胞外基質成分或NF-kB訊息傳導途徑的調節酵素或介質之分解。該等活性劑亦可抑制與老化相關聯的其他訊息傳導途徑，包括與該等途徑相關聯的介質與調節劑或其組合。

在特定實施例中，該等活性劑亦可調控醌還原酶(QR)(即促進高QR活性)，從而預防氧化傷害及/或增加抗氧化回應元件(ARE)。

特定實施例係有關於一種調控皮膚細胞中的醌還原酶的表現及/或活性之方法，其包括按足以調控皮膚之醌還原酶蛋白的表現及/或活性的一美容有效量，對於一個體的皮膚施用一組成物；其中該組成物包含一量之羊蹄甲屬(Bauhinia )的一植物成分或植物萃取物，其係單獨存在或與一量之胡麻屬(Sesamum )的一植物成分或植物萃取物組合；及至少一種藥學上或美容上可接受的載劑。如圖4所示，經卡奇娜(Kachnar)刺激的醌還原酶活性證實了卡奇娜的強力抗氧化活性。

其他實施例係有關於一種預防或抑制皮膚細胞的羰基化作用之方法，其包括按足以預防或抑制皮膚的羰基化作用之一美容有效量，對於皮膚施用一組成物；其中該組成物包含一量之羊蹄甲屬(Bauhinia )的一植物成分或植物萃取物，其係單獨存在或與一量之胡麻屬(Sesamum )的一植物成分或植物萃取物組合；及至少一種藥學上或美容上可接受的載劑。如圖6所示，卡奇娜(Kachnar)抑制了HepG2細胞中的羰基化作用。

其他實施例係有關於一種增加皮膚細胞中的NRF2之方法，其包括按足以增加皮膚中的NRF2之一美容有效量，對於皮膚施用一組成物；其中該組成物包含一量之羊蹄甲屬(Bauhinia )的一植物成分或植物萃取物，其係單獨存在或與一量之胡麻屬(Sesamum )的一植物成分或植物萃取物組合；及至少一種藥學上或美容上可接受的載劑。如圖7所示，卡奇娜(Kachnar) 增加了NRF2的蛋白表現，NRF2係總體抗氧化劑的主調節劑。

另一實施例係有關於一種增加皮膚細胞中的ARE回應之方法，其包括按足以增加皮膚中的ARE回應之一美容有效量，對於皮膚施用一組成物；其中該組成物包含一量之羊蹄甲屬(Bauhinia )的一植物成分或植物萃取物，其係單獨存在或與一量之胡麻屬(Sesamum )的一植物成分或植物萃取物組合；及至少一種藥學上或美容上可接受的載劑。抗氧化回應元件(ARE)媒介包含大部分化學保護反應系統在內之一系列基因的轉錄誘導作用。

除了改善皮膚的美學或美容外觀之外，可局部施用本發明的外用組成物以增強皮膚的整體健康、活力和外觀。例如，本發明的組成物可施用於皮膚，以改善微循環、皮膚細胞間的聯繫、補給必需營養素或皮膚組分，或改善皮膚細胞的代謝、增生、增殖、更新及/或去角質作用。

可使用或未使用α-或β羥酸或其他去角質劑或其組合，藉由局部施用至皮膚，而進行去角質作用。當在本發明的該等組成物中使用去角質劑時，係包括充足的抗刺激/抗發炎劑以中和潛在刺激，潛在刺激係在中和劑不存在時之與去角質劑相關聯的刺激。

在特定實施例中，本申請案所述的該等組成物可用於各種美容及/或藥學應用，包括皮膚美白與去斑。

特定實施例係有關於一種皮膚美白方法，其包括在皮膚上局部施用上述任何組成物及其任何組合。

如下係本發明的非限制性實例。所有比例與百分比均以重量計，除非另有說明。 實例

如下係如本發明的調配物與方法之實例。

例1：醌還原酶分析

該方法之研發係為了篩檢植物萃取物，以辨識醌還原酶的誘導劑，醌還原酶係由NRF2所活化之一酵素。

該分析係提供一種在培養細胞中直接測量醌還原酶活性之方式，以辨識抗氧化回應途徑的誘導劑。將Hepa 1c1c7鼠科肝腫瘤細胞接種在96孔式微滴定平皿中，讓其生長24小時，然後暴露於誘導劑達48小時。然後將細胞裂解，及進行醌還原酶活性分析。

醌還原酶係催化藉由NADPH將甲萘醌還原為二氫萘醌之作用，及藉由二氫萘醌將MTT還原而導致形成藍色， 其係在微滴定平皿讀數器上及在610nm進行測量。

包括下列的試劑與溶液：

MiliQ等級的去離子水或其等效物

50 mM 磷酸鉀(飛世爾科技(Fisher Scientific)公司#SB108-20)或其等效物。

乙腈(飛世爾(Fisher)公司#A998-4)或其等效物

來自白芥(Sinapis alba )的硫葡萄糖苷酶(芥子酶)(西克瑪(Sigma)公司#T-4528或其等效物)

EDTA二鈉鹽(飛世爾(Fisher)公司 #AC40997或其等效物)

HPLC等級的二甲基亞碸(DMSO)或其等效物

毛地黃皂苷(西克瑪(Sigma)公司#D-141或其等效物)

Tris鹼(飛世爾(Fisher)公司#BP154-1或其等效物

牛血清白蛋白(西克瑪(Sigma)公司#A3294 或其等效物)

吐溫(Tween)-20(艾爾迪希公司(Aldrich)公司#27,434-8或其等效物)

黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)(西克瑪(Sigma)公司#F-6625或其等效物)

葡萄糖-6-磷酸(西克瑪(Sigma)公司#G-7250或其等效物)

NADP(西克瑪(Sigma)公司#N-0505或其等效物)

葡萄糖-6-磷酸去氫酶(西克瑪(Sigma)公司#G7877或其等效物)

MTT(西克瑪(Sigma)公司#M21-28或其等效物)

甲萘醌(西克瑪(Sigma)公司#M-9429或其等效物)

雙香豆素(西克瑪(Sigma)公司#M-1390或其等效物)

DL-蘿蔔硫素(Sulforaphane)(西克瑪(Sigma)公司#S4441或其等效物)

皮爾斯(Pierce) BCA蛋白分析套組(賽默科技(THERMO SCIENTIFIC)公司#23225或其等效物)

細胞株與培養基係包括鼠科肝腫瘤細胞(Hepa 1c1c7)，ATCC#CRL-2026；α-最低必需培養基(吉柏柯(Gibco)公司#32561-037或其等效物)；盤尼西林/鏈黴素(西克瑪(Sigma)公司#P7539或其等效物)；兩性黴素 B(塞爾格洛(Cellgro)#30-003CF)或其等效物；及經炭吸附處理的胎牛血清(FBS)，(飛世爾(Fisher)公司# NC9581766或其等效物)。

藉由在pH 7.8的2mM EDTA中加入0.08%毛地黃皂苷而製備裂解緩衝液。藉由將2.5毫克雙香豆素溶於250微升的0.1N氫氧化鈉中，及添加5mM 磷酸鉀緩衝液至體積為25毫升，而製備0.3mM雙香豆素之終止液。

製備細胞培養平皿，以供使用適當成分進行處理。將約20,000個/毫升的細胞接種至經澄清細胞培養處理的96孔式平皿，及在37℃與5%二氧化碳中培養過夜。

藉由將100毫克的植物材料稱重置入1毫升的離心管中，而製備樣本(100毫克/毫升的萃取物)。在該管中添加1毫升的70%DMSO，該管進行渦旋混合及音波振動處理達60分鐘。

在一深孔式稀釋平皿中，藉由在含有3.5% DMSO的生長培養基中稀釋各樣本至下列濃度，而製備工作用液：100微克/毫升、50微克/毫升、25微克/毫升、12.5微克/毫升、6.25微克/毫升、3.125微克/毫升及0微克/毫升。

如下製備對照組。

藉由在DMSO中將DL-蘿蔔硫素稀釋至100mM，按50 微升/管的量置於PCR管中冷凍，及將該等儲備稀釋液儲存-20℃至多6個月，而製備儲備溶液。

初級稀釋係在生長培養基中稀釋至50μM。

在一深孔式稀釋平皿中，藉由在生長培養基中稀釋各樣本至下列濃度，而製備工作用液：5uM、4uM、1.35uM、0.450uM、0.150uM及0uM。

處理程序包括在分析平皿的適當孔中添加200微升的各樣本或對照組(圖4)，及在37℃與5%二氧化碳中培養48小時。

為裂解細胞，藉由添加0.5%毛地黃皂苷而製備一裂解緩衝液，在孔中混合及從所有孔中吸出處理培養基。接著，在所有孔中添加50微升的裂解緩衝液， 及所有孔係在室溫培養20分鐘。

試劑製劑包括： ü 0.5M三羥甲基胺基甲烷鹽酸鹽(Tris-HCl) ü 1.5%吐溫(Tween) 20 ü 150mM 葡萄糖-6-磷酸鹽(120毫克+2毫升的水) ü 7.5mM FAD(12.4毫克+2毫升的水) ü 50mM NADP(76.5毫克+2毫升的水) ü 1000單位/毫升的葡萄糖-6-磷酸去氫酶(2KU+2毫升的水) ü 50mM甲萘醌(17.2毫克+2毫升的水)

反應混合物包括下列各者： ü 2.5 毫升的0.5M三羥甲基胺基甲烷鹽酸鹽(Tris-HCl) ü 333微升的 1.5%吐溫(Tween) 20 ü 333微升的150mM 葡萄糖-6-磷酸鹽 ü 33.3微升的7.5mM FAD ü 30微升的 50mM NADP ü 100微升之1000單位/毫升的葡萄糖-6-磷酸去氫酶 ü 33.3克的牛血清白蛋白 ü 15 毫克的MTT ü 46.74 毫升的Mili Q水 ü 在即將添加至平皿之前，才添加50mM甲萘醌。

終止試劑包括： ü 2.5毫克的雙香豆素+250微升的1N氫氧化鈉+250微升的水。進行渦旋混合。 ü 2.5毫升的50mM磷酸鹽緩衝液+22毫升的水+125微升的鹽酸(pH 7.4)

接著，在平皿振動器上使分析平皿成為室溫。在所有孔中添加200微升的反應混合物，及該等孔在室溫培養5分鐘。在所有孔中添加50微升的終止液。

在M5平皿讀數器上，從底部讀取610 nm的吸光度。

接著計算0%(未處理)與100%(1nM)對照組的吸光度之間之線性關係。基於100%至0%的線性迴歸，測定各樣本濃度相對於對照組之百分比。亦測定EC50，其係基於滴定樣本的迴歸分析。樣本係以微克/毫升的EC50之形式顯示，其係基於相對於對照組之百分比。

參考文獻：

Prochaska, H.J.; Santamaria, A.B. (1988年)於期刊“Anal. Biochem .”第169卷第328-336頁乙文。

Fahey等人(2004年)於期刊“Meth. Enzymol .”第382卷第243-258頁乙文。

如圖4所示，醌還原酶活性係依劑量依賴性方式增加及其刺激係經由ARE傳訊途徑，這證實了卡奇娜(Kachnar)的強力抗氧化活性。

例2：對於卡奇娜(Kachnar)的抗羰基化活性之檢測

該實驗之目的係在使用Hep G2[HEPG2] (ATCC#HB-8065)細胞株之抗羰基化分析上，檢測卡奇娜(Kachnar)。羰基化過程係與蛋白變性有關，及與氧化作用和糖化作用相似。

使用下列材料： ü MEM(吉柏柯(GIBCO)公司 #16600-082) ü 胎牛血清(吉柏柯(GIBCO)公司 #10099-141) ü DPBS(拜爾塞拉(Biosera)公司 #LM-S2041) ü 胰蛋白酶-EDTA(吉柏柯(GIBCO)公司#25200-072) ü 96孔式細胞培養平皿(康寧(Corning)公司#3599) ü 96孔式V底平皿(葛萊娜(Greiner)公司#651101) ü 96孔式圓底平皿(康寧(Corning)公司#3365) ü 96孔式UV 多孔平皿(康寧(Corning)公司#3635) ü DMSO(西克瑪(SIGMA)公司#D2650) ü OxiSelect™蛋白羰基酵素連結免疫吸附分析(ELISA)套組(細胞生物(Cell Biology)公司#STA- 310)

在該程序的第一天，將Hep G2[HEPG2]細胞接種至96孔式細胞培養平皿上。為進行此項，用胰蛋白酶處理該平皿，及測定細胞密度。將細胞漿液稀釋至所需體積，其密度為625,000細胞/毫升密度。將160微升/孔的細胞漿液分配至分析平皿上。(每孔100,000個細胞)。該等分析平皿係在潮濕條件下，在37℃與5%二氧化碳中培養過夜。

在第二天，用卡奇娜(Kachnar)處理該等細胞，及以氫醌或維生素C作為參比基準。

在100% DMSO中製備200×化合物。將5微升的200×化合物 轉移至95微升的完全培養基(具有10%胎牛血清的MEM培養基)中，及混合5次。 稀釋系統 參比基準/環丁烷嘧啶二聚物(200×) 5微升/孔

培養基 95微升/孔 總計(10×) 100微升/孔

將20微升的10×化合物溶液轉移至分析平皿上。在潮濕條件下，該等分析平皿在37℃與5%二氧化碳中培養。

第3天包括用過氧化氫處理。製備30mM過氧化氫溶液，及按20微升/孔的量將過氧化氫溶液分配至分析平皿(過氧化氫的最終濃度為3mM)。在潮濕條件下，該等分析平皿在37℃與5%二氧化碳中培養4小時。 反應系統 參比基準/環丁烷嘧啶二聚物(10×) 20微升/孔 過氧化氫(10×) 20微升/孔

培養基 160微升/孔 總計 200微升/孔

在培養之後，將細胞培養基棄置，及用PBS清洗細胞一次。在分析平皿上添加60微升的PBS，及於-80℃冷凍。

第4天包括處理樣本及製備酵素連結免疫吸附分析(ELISA)平皿。

回收冷凍樣本3次。將裂解的樣本轉移至V底平皿，在4℃與3000rpm離心10分鐘。然後將液態上清液轉移至化合物平皿。獲得各細胞的5微升裂解液，及檢測蛋白濃度。用PBS與還原牛血清白蛋白(總蛋白濃度為10微克/毫升)將蛋白濃度調整為5微克/毫升，及混合5次。然後將100微升之5微克/毫升的樣本轉移至96孔式蛋白結合平皿上，及在4℃培養過夜。

為在第5天進行酵素連結免疫吸附分析(ELISA)分析，用每孔250微升的PBS清洗該等孔3次，及除去多餘的清洗溶液。添加100微升之0.04毫克/毫升的DNPH工作用液，及在室溫及黑暗中培養該等平皿達45分鐘。然後用250微升的PBS/乙醇(體積/體積為1:1)清洗該等平皿5次，及在迴轉式振盪器上培養5分鐘。接著，用250 微升的PBS清洗該等平皿2次。在每孔添加200微升的阻斷液，及該等平皿在室溫及在迴轉式振盪器上培養達2小時，然後用250微升的1×清洗緩衝液清洗3次，及在各次清洗之間徹底地吸出。添加100微升的抗DNP抗體，及該等平皿在室溫及在迴轉式振盪器上培養1小時。接著，清洗該等條孔3次(使用1×清洗緩衝液)，在所有孔中添加100微升之經稀釋的HRP接合型二級抗體，及該等平皿在室溫及在迴轉式振盪器上培養1小時。然後清洗該等條孔5次(使用1×清洗緩衝液)。將受質溶液加溫至室溫及在各孔中添加100微升的受質溶液，5至20分鐘。 藉由在各孔中添加100微升的終止液而停止酵素反應。使用完全還原型牛血清白蛋白標準品作為吸光度空白試樣，使用450 nm作為主波長，在平皿讀數器上讀取各孔的吸光度。

數據處理包括： ü 訊號=樣本在450nm之訊號－10微克/毫升的還原型牛血清白蛋白之訊號 ü 蛋白羰基濃度(PCC)=(訊號–Y軸截距)/斜率 ü 抑制%=(最大PCC–樣本PCC)/(最大PCC–最小PCC)×100 o 自過氧化氫所處理的細胞獲得最大PCC o 自未經處理的細胞獲得最小PCC ü 使用GraphPad Prism 5.0版軟體，計算IC50

卡奇娜(Kachnar)相較於氫醌的毒性結果係歸納於下表，及示於圖5中。

卡奇娜(Kachnar)相較於維生素C之羰基化抑制結果係歸納於下表，及示於圖6中。

總而言之，數據表明相較於維生素C，卡奇娜(Kachnar)具有相等或更高的蛋白羰基化抑制活性。

例3：藉著芝麻素與卡奇娜(Kachnar)之NRF2誘發作用

為測定卡奇娜(Kachnar)及/或芝麻素是否誘發身為總體抗氧化劑的主調節劑之NRF2，將表現ARE螢光素酶報導子之穩定轉染的HepG2細胞接種(1x10⁴ 個細胞/孔)在白壁、透明底的96孔式平皿中，及在37℃與5%二氧化碳的培養箱中培養48小時。然後再用特定濃度的芝麻素與卡奇娜(Kachnar)化合物處理該等細胞48小時。使用已知的NRF2活化劑即蘿蔔硫素(Sulforaphane)(10 µM)作為正對照組。使用一種螢光素酶分析套組(美國加州海沃德(Hayward)的Biotium有限公司)，依據製造商的說明書，量化螢光素酶活性。簡而言之，用PBS(100微升)沖洗細胞，然後在室溫用裂解緩衝液(20微升)進行裂解15分鐘。添加D-螢光素(100微升)，及立即在SpectraMax M5光譜儀(美國加州桑尼維爾(Sunnyvale)的分子器件(Molecular Devices)公司)上讀取發光。使用GraphPad Prism 軟體(美國加州聖地牙哥)，按相對光單位(RLU)相對於試驗化合物之方式將數據繪製成圖。

為測定蛋白表現作用，進行西方印漬術分析如下：用不同濃度的芝麻素與卡奇娜(Kachnar)處理HepG2細胞，及培養過夜。隔天用冰冷的磷酸鹽緩衝鹽水清洗細胞，然後使用細胞刮刀將細胞收集至一微量離心管中。在冰中，使用RIPA緩衝液進行細胞裂解達30分鐘。在裂解之後，該等管進行離心及將細胞裂解產物轉移至一個新管中。測定蛋白，將各樣本總共為50微克的總蛋白加載至聚丙烯醯胺凝膠中及進行電泳。接著，經由電流，將進行電泳後的蛋白轉移至一膜。在室溫中，用阻斷緩衝液阻斷該電印漬膜達1小時。該膜與NRF2抗體在8℃進行雜合過夜，然後用清洗緩衝液清洗3次。然後添加二級抗體，與NRF2抗體結合達1小時，及清洗除去過量的二級抗體。在該膜添加顯影緩衝液，使得NRF2蛋白可視化， 並使用伯瑞(BIO-RAD)公司凝膠記錄系統進行拍照。

如圖7所示，相較於對照組，卡奇娜(Kachnar)(12.5微克/毫升與25微克/毫升)及芝麻素(25微克/毫升與50微克/毫升)個別地誘發NRF2，NRF2係總體抗氧化活性的主調節劑。

例4：血紅素加氧酶基因之表現

將Hepa1c1c7細胞(2x10⁵ 個細胞/孔)接種至6孔式培養平皿中，培養過夜，然後與所選擇濃度的木蘭樹皮萃取物一起培養24小時。用PBS沖洗該等細胞，及依據製造商的說明書，使用RNeasy Plus迷你套組進行總RNA之純化。使用A260/A280比例進行總RNA之量化，稀釋至各反應1微克，及使用iScript cDNA合成套組進行逆轉錄。

在CFX96即時熱循環儀(伯瑞(BIO-RAD)公司)上，使用SsoFast EvaGreen qPCR混合物，進行即時qPCR反應。反應條件如下：於95℃達30秒；於58℃達5秒及進行40個循環；及於95℃達5秒。在完成各循環之後，進行螢光檢測。在與對照組樣本比較之前，藉由2(-Delta Delta C(T))方法(Livak與Schmittgen於2001年乙文)，將NRF2依賴型基因的循環次數與持家基因GAPDH常態化。

如圖8所示，如藉由qPCR所測定，25與50微克/毫升的芝麻素與卡奇娜(Kachnar)均誘發血紅素加氧酶基因之表現。在所研究的該二濃度，相較於芝麻素，卡奇娜(Kachnar)處理所誘發的血紅素加氧酶基因之表現較大。

例 5：水解的宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea L. )(卡奇娜(Kachnar))樹皮萃取物中的植物性化合物之特性分析

從美國印第安那州諾布爾斯維爾(Noblesville)的韋迪爾科學(Verdure Sciences)公司獲得乾燥的研磨粉末形式之宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea L. )(通用名稱：卡奇娜(Kachnar)，起源於印度)樹皮的水萃取物。

粉末狀萃取物的酸水解程序：

試劑：HPLC等級的甲醇(MeOH)；ACS等級的濃鹽酸(HCl)

稱取約150毫克的粉末狀萃取物及準確至0.1毫克，及置入25毫米x150毫米之具有螺旋蓋的派拉克斯(Pyrex)管中。吸量置入10毫升之85/15的甲醇/鹽酸，及將蓋子鎖緊。該管然後進行渦旋至少2分鐘，及在該派拉克斯(Pyrex)管中置入一個迷你攪拌棒。將派拉克斯(Pyrex)管置於配備有磁攪拌器的加熱組中，並以高速進行攪拌。將溫度維持在90℃至95℃達1小時。接著，將派拉克斯(Pyrex)管從加熱組中移出，及冷卻至室溫。接著，將20 毫升的甲醇吸量置入派拉克斯(Pyrex)管中，將該管的蓋子重新蓋好，及充分混合。將一等分試樣過濾通過0.45微米的HVLP注射器式過濾器，及置入一個HPLC小瓶中。

高效液相層析(HPLC)分析之程序如下：

儀器：配備有自動採樣器、管柱加熱器、紫外線檢測器及數據系統之HPLC系統。

試劑：HPLC等級的水；HPLC等級的乙腈；ACS等級的磷酸(H3PO4)。

溶劑：溶劑A係位於水中的0.2%磷酸；溶劑B係乙腈

HPLC分析管柱：Phenomenex Kinetex 2.6微米C18 100 Å，100x 4.6毫米。

梯度移動相程序：

流速：0.7 毫升/分鐘，管柱溫度：40℃，注入體積：10微升，檢測波長：210奈米，積分：峰面積，運行時間：12分鐘

圖9係顯示宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea )之未水解的樹皮萃取物之層析圖。

圖10係顯示宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea )之酸水解的樹皮萃取物之層析圖。基於滯留時間、紫外線光譜及質量光譜分析辨識出尖峰：1為奎尼酸；2為原兒茶酸；3為咖啡酸；4為香草酸；及5為阿魏酸。

因此，上述詳細說明係視為說明性質而非限制性質，並且應當理解本發明的精神與範圍係意欲由下列申請專利範圍及包括所有等效部分在內界定之。

1‧‧‧貼劑
3‧‧‧前側
5‧‧‧外用組成物
7‧‧‧背側
9‧‧‧第一端部
10‧‧‧頂部部分
11‧‧‧第二端部
13‧‧‧個體
15‧‧‧眼睛
17‧‧‧眼底
19‧‧‧眼側
21‧‧‧材料
23‧‧‧黏著劑
25‧‧‧容器
27‧‧‧內部
29‧‧‧頂蓋
31‧‧‧底座部分
33‧‧‧凹痕
35‧‧‧深度
37‧‧‧形狀

圖1係顯示用於治療眼睛周圍區域之一代表性貼劑。

圖2係顯示圖1的貼劑貼在一個體臉部的左眼下方部分。

圖3係顯示用於放置圖1的貼劑之一代表性容器。

圖4係顯示卡奇娜(Kachnar)對於醌還原酶活性之劑量依賴性刺激作用，其係與1µM蘿蔔硫素(Sulforaphane)相比較。

圖5所示的一圖係顯示卡奇娜(Kachnar)的細胞毒性-CTG，其係與HepG2細胞中的氫醌相比較。

圖6所示的一圖係顯示卡奇娜(Kachnar)的羰基化抑制作用，其係與HepG2細胞中的維生素C相比較。

圖7係顯示西方印漬術結果之一圖，其顯示芝麻素與卡奇娜(Kachnar)之RF2誘發作用。

圖8所描述的圖係顯示芝麻素與卡奇娜(Kachnar)之血紅素加氧酶基因表現的qPCR結果。

圖9係顯示宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata)/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea L)之未水解的樹皮萃取物之層析圖。

圖10係顯示宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/ 紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea L )之酸水解的樹皮萃取物之層析圖。

1‧‧‧貼劑

3‧‧‧前側

5‧‧‧外用組成物

7‧‧‧背側

9‧‧‧第一端部

10‧‧‧頂部部分

11‧‧‧第二端部

21‧‧‧材料

23‧‧‧黏著劑

Claims (20)

1. 一種外用組成物，其包含： a.一量之來自羊蹄甲屬(Bauhinia )的一植物成分及/或植物萃取物，該量係有效改善皮膚外觀或至少一項皮膚老化跡象；及 b.至少一種藥學上或美容上可接受的載劑。
2. 如請求項1之外用組成物，其進一步包含一量之來自胡麻屬(Sesamum )的一植物成分或植物萃取物。
3. 如請求項1至2中任一項之外用組成物，其進一步包含至少一種DNA修復酵素。
4. 如請求項3之外用組成物，其中該至少一種DNA修復酵素係一種嘧啶醣苷/無鹼基解離酶。
5. 如請求項3之外用組成物，其中該至少一種DNA修復酵素係選自由下列所組成之群組：對於噬菌體T4嘧啶二聚物具特異性的內切酶、藤黃微球菌(Micrococcus luteus )的N-醣苷酶/AP解離酶、啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae )的N-醣苷酶/無嘌呤-無嘧啶解離酶、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe )的紫外線損傷內切酶(UVDE)、對於綠球藻(Chlorella )病毒分離物PBCV-I嘧啶二聚物具特異性的醣苷酶、巢狀組囊藻(Anacystis nidulans )光解酶及其組合。
6. 如請求項1至5中任一項之外用組成物，其中該組成物係選自由下列所組成之群組之一產物形式：氣霧劑、乳霜劑、乳劑、固體劑、液體劑、分散劑、泡沫劑、凝膠劑、乳液劑、慕斯劑(mousse)、軟膏劑、散劑、貼劑、香膏劑、液劑、泵劑噴劑、棒劑、小紙巾及其等之組合。
7. 如請求項1至6中任一項之外用組成物，其中該至少一種藥學上或美容上可接受的載劑係包括選自由下列所組成之群組之一或多種成分：水、甘油、C1-C4醇、脂肪醇、脂肪醚、脂肪酯、多元醇、乙二醇、植物油、礦物油、微脂體、層狀脂質物質、矽油及其等之組合。
8. 如請求項1至7中任一項之外用組成物，其中該組成物係具有實質上中性的pH值。
9. 如請求項1至8中任一項之外用組成物，其進一步包含選自由酪胺酸酶抑制劑、自由基清除劑及其等之混合物所組成之群組之一種皮膚美白劑。
10. 如請求項2至8中任一項之外用組成物，其中該羊蹄甲屬(Bauhinia )的量係單獨存在或與來自胡麻屬(Sesamum )的一植物成分或植物萃取物組合，該羊蹄甲屬(Bauhinia )的量係有效改善皮膚外觀或至少一項皮膚老化跡象之量，其範圍係總組成物重量的約0.0001%至5%。
11. 如請求項2至8中任一項之外用組成物，其中該羊蹄甲屬(Bauhinia )的量係單獨存在或與來自胡麻屬(Sesamum )的一植物成分或植物萃取物組合，該羊蹄甲屬(Bauhinia )的量係有效改善皮膚外觀或至少一項皮膚老化跡象之量，其範圍係在總組成物重量的約0.001%至約0.5%。
12. 如請求項2至8中任一項之外用組成物，其中該羊蹄甲屬(Bauhinia )的量係單獨存在或與來自胡麻屬(Sesamum )的一植物成分或植物萃取物組合，該羊蹄甲屬(Bauhinia )的量係有效改善皮膚外觀或至少一項皮膚老化跡象之量，其範圍係在總組成物重量的約0.01%至約0.1%。
13. 如請求項1至12中任一項之外用組成物，其中羊蹄甲屬(Bauhinia )係宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea L. )。
14. 一種用於改善皮膚外觀或至少一項皮膚老化跡象之包裝系統，其包含： a.一或多個容器，其共同含有如請求項1至13中任一項之組成物；及 b.從該一或多個容器施用該組成物之說明書。
15. 一種改善皮膚外觀或至少一項皮膚老化跡象之方法，該方法包括將足以改善皮膚外觀或至少一項皮膚老化跡象的一美容有效量的組成物局部施用至皮膚，其中該組成物包含： a.一量之來自羊蹄甲屬(Bauhinia )的一植物成分或植物萃取物，其係單獨存在或與一量之來自胡麻屬(Sesamum )的一植物成分或植物萃取物組合，該個別量或組合量係有效改善皮膚外觀或至少一項皮膚老化跡象；及 b.至少一種藥學上或美容上可接受的載劑。
16. 如請求項15之方法，其中該組成物係選自由下列所組成之群組之一產物形式：氣霧劑、乳霜劑、乳劑、固體劑、液體劑、分散劑、泡沫劑、凝膠劑、乳液劑、慕斯劑(mousse)、軟膏劑、散劑、貼劑、香膏劑、液劑、泵劑噴劑、棒劑、小紙巾及其等之組合。
17. 如請求項16之方法，其中該至少一種藥學上或美容上可接受的載劑係包括選自由下列所組成之群組之一或多種成分：水、甘油、C1-C4 醇、脂肪醇、脂肪醚、脂肪酯、多元醇、乙二醇、植物油、礦物油、微脂體、層狀脂質物質、矽油及其組合。 b.至少一種藥學上或美容上可接受的載劑。
18. 如請求項15至17中任一項之方法，其中羊蹄甲屬(Bauhinia )係宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea L. )。
19. 一種刺激或增加皮膚細胞中的醌還原酶活性之方法，其包括將足以刺激或增加皮膚中的醌還原酶活性之一美容有效量的組成物施用至皮膚，其中該組成物包含： a.來自羊蹄甲屬(Bauhinia )的一植物成分或植物萃取物，其係單獨存在或與一量之來自胡麻屬(Sesamum )的一植物成分或植物萃取物組合，該個別量或組合量係能刺激或增加醌還原酶活性；及 b.至少一種藥學上或美容上可接受的載劑。
20. 如請求項19之方法，其中羊蹄甲屬(Bauhinia )係宮粉羊蹄甲(Bauhinia variegata )/紅花羊蹄甲(Bauhinia purpurea L. )。