TW201609798A

TW201609798A - Ｅｘｅｎｄｉｎ－４胜肽類似物

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Publication number: TW201609798A
Application number: TW103143202A
Authority: TW
Inventors: 托爾斯滕哈克; 麥克瓦格納; 班德漢高; 齊格弗里德斯滕格林; 安德烈斯艾佛斯; 馬丁伯斯亞特; 迪特卡德萊特
Original assignee: 賽諾菲公司
Priority date: 2013-12-13
Filing date: 2014-12-11
Publication date: 2016-03-16
Also published as: AR098740A1; WO2015086732A1; US20150166625A1; EP3080151A1

Abstract

本發明是有關於exendin-4衍生物及其醫學用途，例如治療包括糖尿病與肥胖症之代謝症候群的病症，以及減少食物攝取過量。

Description

EXENDIN-4胜肽類似物

本發明是有關於exendin-4胜肽衍生物，相對於純GLP-1促效劑exendin-4，exendin-4胜肽衍生物活化GLP-1以及升糖素受體這兩者；以及有關於其例如在治療代謝症候群之病症以及用於減少食物攝取過量的醫學用途，代謝症候群包括糖尿病與肥胖症。

exendin-4是一個具有39個胺基酸的胜肽，其由毒蜥(吉拉毒蜥)的唾腺所製造(Eng J.et al.,J.Biol.Chem.,267：7402-05,1992)。exendin-4是類升糖素胜肽-1(GLP-1)受體的活化因子，但它不會明顯活化升糖素受體。

exendin-4與GLP-1被發現到共有一些葡萄糖調節作用。臨床與非臨床研究已顯示，exendin-4具有數種有益的抗糖尿病特性，包括在胰島素合成與分泌時的葡萄糖依賴性增高、升糖素分泌的葡萄糖依賴性壓抑、減緩胃排空、減少食物攝取與體重，以及增加β細胞質量與β細胞功能的標記(Gentilella R et al.,Diabetes Obes Metab.,11：544-56,2009；Norris SL et al,Diabet Med.,26：837-46,2009；Bunck MC et al,Diabetes Care.,34：2041-7,2011)。

這些效用不僅是對糖尿病有益，對於罹患肥胖症的患者也有益。肥胖症患者有更高的風險得到糖尿病、高血壓、高血脂、心血管疾病與肌肉骨骼疾病。

相對於GLP-1，exendin-4對於二肽基肽酶-4(DPP4)的切割更為具有抗性，使其在活體內有較長的半衰期與作用持續時間(Eng J.,Diabetes,45(Suppl 2)：152A(abstract 554),1996)。

當與GLP-1、升糖素或調酸素相比較時，exendin-4也顯示對於中性胜肽內切酶(NEP)的分解更為穩定(Endocrinology,150(4),1712-1721,2009)。但是，因為在位置14中的甲硫胺酸氧化(Hargrove DM et al.,Regul.Pept.,141：113-9,2007)以及在位置28中的天冬醯胺酸的去醯胺化與異構化(WO 2004/035623)，exendin-4在化學上是不穩定的。

exendin-4的胺基酸序列顯示為SEQ ID NO：1

HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH₂

GLP-1(7-36)-醯胺的胺基酸序列顯示為SEQ ID NO 2

HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-NH₂

利拉魯肽(liraglutide)是一種市售經化學修飾的GLP-1類似物，其中在其他修飾中，脂肪酸被連結至位置20中的離胺酸，使得作用持續時間延長(Drucker DJ et al,Nature Drug Disc.Rev.9,267-268,2010；Buse,JB et al.,Lancet,374：39-47,2009)。

利拉魯肽的胺基酸序列顯示為SEQ ID NO 4。

HAEGTFTSDVSSYLEGQAAK((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基-)EFIAWLVRGRG-OH

升糖素是一個具有29個胺基酸的胜肽，當循環葡萄糖為低的時，其被釋放至血流中。升糖素的胺基酸序列顯示於SEQ ID NO 3中。

HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT-OH

在低血糖症期間，若血糖濃度降至正常值以下，則升糖素通知肝臟分解肝醣並釋放葡萄糖，使得血糖濃度上升達到正常濃度。低血糖症在因為糖尿病而帶有高血糖症(血糖濃度升高)且以胰島素治療的患者中是一種常見的副作用。因此，升糖素在葡萄糖調控中最為主要的角色在於抵銷胰島素作用並維持血糖濃度。

Holst(Holst,J.J.Physiol.Rev.2007,87,1409)與Meier(Meier,J.J.Nat.Rev.Endocrinol.2012,8,728)描述GLP-1受體促效劑(諸如GLP-1、利拉魯肽與exendin-4)在帶有T2DM的患者中藉由降低禁食與餐後葡萄糖(FPG與PPG)來增進血糖控制而具有三個重要的藥理學活性：(i)增加葡萄糖依賴性胰島素分泌(改善第一期與第二期)、(ii)在高血糖症病況下的升糖素壓抑活性、(iii)延遲胃排空速率，致使餐食衍生之葡萄糖吸收推遲。

Pocai et al(Obesity.2012；20：1566-1571；Diabetes 2009,58,2258)以及Day et al.(Nat Chem Biol 2009；5：749)描述GLP-1與升糖素受素的雙重活化，例如藉由將GLP-1與升糖素的作用合併於一個分子中，產生具有抗糖尿病作用以及顯著減重效用的治療原理。

同時結合並活化升糖素與GLP-1受體(Hjort et al.Journal of Biological Chemistry,269,30121-30124,1994；Day JW et al,Nature Chem Biol,5：749-757,2009)且壓抑增重和減少食物攝取的胜肽描述於專利申請案WO 2008/071972、WO 2008/101017、WO 2009/155258、WO 2010/096052、WO 2010/096142、WO 2011/075393、WO 2008/152403、WO 2010/070251、WO 2010/070252、WO 2010/070253、WO 2010/070255、WO 2011/160630、WO 2011/006497、WO 2011/152181、WO 2011/152182、WO2011/117415、WO2011/117416以及WO 2006/134340中，其內容併入本文做為參考資料。

此外，不僅活化GLP-1與升糖素受體，還活化GIP受體的三重共促效胜肽描述於WO 2012/088116與VA Gault et al(Biochem Pharmacol,85,16655-16662,2013；Diabetologia,56,1417-1424,2013)中。

Bloom et al.(WO 2006/134340)揭示結合並活化升糖素與GLP-1受體的胜肽能夠自升糖素與exendin-4被構築為混合分子，其中N-端部分(例如殘基1-14或1-24)源於升糖素，而C-端部分(例如殘基15-39或25-39)源於exendin-4。

DE Otzen et al(Biochemistry,45,14503-14512,2006)揭示N-端與C-端疏水區涉及升糖素的纖維化，因為下面殘基的疏水性及/或高β-折片傾向。

本發明化合物為exendin-4胜肽類似物，其包含在位置10的白胺酸以及在位置13的麩醯胺酸。

Krstenansky et al(Biochemistry,25,3833-3839,1986)證實升糖素之殘基10-13(YSKY)對於其受體交互作用以及活化腺苷酸環化酶的重要性。在本發明中所述的exendin-4衍生物中，下面殘基中的數者不同於升糖素。具體而言，殘基Tyr10以及Tyr13，其已知提供升糖素的纖維化(DE Otzen,Biochemistry,45,14503-14512,2006)，在位置10被Leu取代而在位置13被Gln(一種非芳香族極性胺基酸)取代。這個取代，尤其是結合在位置23的異白胺酸與在位置24 的麩胺酸，會使得exendin-4衍生物具有經增強的強力生物物理特性，如在溶液中的溶解度或聚集行為。在exendin-4類似物的位置13中，芳香族胺基酸被極性胺基酸非守恆性取代出乎意料地產生對升糖素受體具有高度活性且視情況對GIP受體具有高度活性的胜肽。

本發明化合物更對中性胜肽內切酶(NEP)以及二肽基肽酶-4(DPP4)的裂解具有耐受性，使得當與GLP-1和升糖素相比時，在活體內的半衰期及作用持續時間更長。

本發明化合物較佳地不僅在中性pH下可溶解，在pH 4.5下亦可溶解。這個特性有效容許與胰島素或胰島素衍生物，且較佳與基礎胰島素(像是胰島素甘精(glargine)/Lantus®)一起共調配用於組合療法。

本文提供exendin-4衍生物，其有效地活化GLP-1與升糖素受體並視情況活化GIP受體。在這些exendin-4衍生物(於這些置換之中)中，位置14處的甲硫胺酸被白胺酸取代

本發明提供具有式(I)的胜肽化合物：R¹-Z-R² (I)

其中Z為具有式(II)的胜肽部分His-X2-X3-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Leu-Asp-Glu-Gln-X18-Ala-X20-X21-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-X28-Gly-Gly-Pro-X32-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (II)

X2代表選自Ser、D-Ser與Aib的胺基酸殘基，X3代表選自Gln與His的胺基酸殘基，X18代表選自Leu與His的胺基酸殘基， X20代表選自His、Arg、Lys、(S)MeLys與Gln的胺基酸殘基，X21代表選自Asp與Glu的胺基酸殘基，X28代表選自Lys、Ser與Ala的胺基酸殘基，X32代表選自Ser與Val的胺基酸殘基，R¹代表NH₂，R²代表OH或NH₂，或其鹽或溶劑合物。

本發明化合物為GLP-1與升糖素受體促效劑以及視情況GIP受體促效劑，如藉由發現到它們能夠刺激細胞內cAMP形成所測定。

依據另一個具體例，相較於GLP-1(7-36)對GLP-1受體(EC50=0.7pM)，本發明的胜肽化合物表現至少0.1%(亦即EC50<700pM)、較佳至少0.7%(亦即EC50<100pM)、更佳至少1.4%(亦即EC50<50pM)以及又更佳至少7%(亦即EC50<10pM)的相對活性。

依據另一個具體例，相較於天然升糖素對升糖素受體(EC50=1.0pM)，本發明的胜肽化合物表現至少0.1%(亦即EC50<1000pM)、較佳至少0.33%(亦即EC50<300pM)、更佳至少1%(亦即EC50<100pM)以及又更佳至少1.43%(亦即EC50<70pM)的相對活性。

術語”活性”如本文所用，較佳意指一個化合物活化人類GLP-1受體以及人類升糖素受體的能力。更佳地，術語”活性”如本文所用，意指一個化合物刺激細胞內cAMP形成的能力。術語”相對活性”如本文所用，應理解為意指一個化合物相較於另一種受體促效劑或相較於另一種受體以某個比率活化受體的能力。受體受到促效劑而活化(例如藉由測量cAMP濃度)是如本文所述來進行測定，例如在實例中所述。

本發明化合物較佳對hGLP-1受體具有100pmol或更低、更佳90pmol或更低、更佳80pmol或更低、更佳70pmol或更低、更佳60pmol或更低、更佳50pmol或更低、更佳40pmol或更低、更佳30pmol或更低、更佳25pmol或更低、更佳20pmol或更低、更佳15pmol或更低、更佳10pmol或更低、更佳9pmol或更低、更佳8pmol或更低、更佳7pmol或更低、更佳6pmol或更低，以及更佳5pmol或更低、更佳4pmol或更低、更佳3pmol或更低，以及更佳2pmol或更低的EC₅₀，及/或對h升糖素受體具有600pmol或更低，較佳300pmol或更低；更佳150pmol或更低、更佳100pmol或更低、更佳90pmol或更低、更佳80pmol或更低、更佳70pmol或更低、更佳60pmol或更低、更佳50pmol或更低、更佳40pmol或更低、更佳30pmol或更低、更佳25pmol或更低、更佳20pmol或更低、更佳15pmol或更低、更佳10pmol或更低的EC₅₀。尤佳地，對兩種受體的EC₅₀為600pmol或更低，更佳300pmol或更低、更佳150pmol或更低、更佳100pmol或更低、更佳75pmol或更低、更佳50pmol或更低、更佳40pmol或更低、更佳30pmol或更低、更佳25pmol或更低、更佳20pmol或更低、更佳15pmol或更低、更佳10pmol或更低。對hGLP-1受體以及h升糖素受體的EC₅₀可如本文方法中所述測定並用於產生實例4中所述結果。

依據另一個具體例，本發明對hGIP受體具有500pM或更低、更佳200pM或更低、更佳150pM或更低、更佳100pM或更低、更佳90pM或更低、更佳80pM或更低、更佳70pM或更低、更佳60pM或更低、更佳50pM或更低、更佳40pM或更低、更佳30pM或更低、更佳20pM或更低、更佳10pmol或更低的EC₅₀。

在又另一個具體例中，對所有三種受體(亦即對hGLP-1受體、對h升糖素受體以及對GIP受體)的EC₅₀為600pM或更低、更佳300pM或更低、更佳150pM或更低、更佳100pM或更低、更佳90pM或更低、更佳80pM或更低、更佳70pM或更低、更佳60pM或更低、更佳50pM或更低、更佳40pM或更低、更佳30pM或更低、更佳20pM或更低、更佳10pmol或更低。

本發明化合物能夠降低腸通過、增加胃內容物及/或減少患者的食物攝取。本發明化合物的這些活性可以在習於技藝者熟知的動物模型中進行評估。當以單一皮下劑量投與時，本發明的較佳化合物可增加小鼠(較佳為雌性NMRI-小鼠)的胃內容物至少達25%、更佳達至少30%、更佳達至少40%、更佳達至少50%、更佳達至少60%、更佳達至少70%、更佳達至少80。較佳地，這個結果是在投與個別化合物之後1小時，以及在投與藥丸之後30分鐘所測得，及/或當以單一皮下劑量投與時，降低小鼠(較佳為雌性NMRI-小鼠)的腸通過至少達45%；更佳達至少50%、更佳達至少55%、更佳達至少60%，且更佳至少65%；及/或當以單一皮下劑量投與時，減少小鼠(較佳為雌性NMRI-小鼠)的食物攝取達至少10%、更佳15%，及更佳20%。

本發明化合物能夠降低患者的血糖濃度，及/或降低患者的HbA1c濃度。本發明化合物的這些活性可在習於技藝者熟知還有如本文在方法中所述的動物模型中進行評估。當以0.1mg/kg體重的單一皮下劑量投與時，本發明的較佳化合物可降低小鼠(較佳在雌性瘦素-受體缺乏糖尿病db/db小鼠中)的血糖濃度達至少4mmol/L；更佳達至少8mmol/L，更佳達至少12mmol/L。

本發明化合物能夠降低患者的體重。本發明化合物的這些活性可在習於技藝者熟知的動物模型中進行評估。

出乎意料地發現到，式(I)的胜肽化合物顯示非常有效的GLP-1與升糖素受體活化作用。

此外，出現於exendin-4核心結構中的甲硫胺酸的氧化作用(活體外或活體內)對於式(I)胜肽化合物來說是不可能的。

在一個具體例中，本發明化合物較佳在酸性及/或生理pH值下具有高溶解度，例如在25℃、pH 4.5及/或在pH 7.4下，在另一個具體例中，溶解度為至少0.5mg/ml以及在一個特定具體例中溶解度為至少1.0mg/ml。

此外，本發明化合物當儲存於溶液中時較佳具有高穩定性。用於測定穩定性的較佳分析條件為在40℃下於pH 4.5或pH 7的溶液中儲存歷時7天。藉由如實例中所述的層析分析測定胜肽餘量。較佳地，在40℃下於pH 4.5或pH 7的溶液中7天之後，胜肽餘量為至少80%，更佳至少85%、又更佳至少90%以及又再更佳至少95%。

較佳地，本發明化合物包含胜肽部分Z(式II)，其為39個胺基羧酸的線性序列，具體而言是藉由胜肽(亦即甲醯胺鍵)連結之α-胺基羧酸。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中R²為NH₂。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中 X2代表選自Ser、D-Ser與Aib的胺基酸殘基，X3代表選自Gln與His的胺基酸殘基，X18代表Leu X20代表選自His、Arg、Lys、Gln與(S)MeLys的胺基酸殘基，X21代表選自Asp與Glu的胺基酸殘基，X28代表選自Lys、Ser與Ala的胺基酸殘基，X32代表選自Ser與Val的胺基酸殘基。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中X2代表Aib，X3代表選自Gln與His的胺基酸殘基，X18代表選自His與Leu的胺基酸殘基；X20代表選自His、Arg、Lys、Gln與(S)MeLys的胺基酸殘基，X21代表選自Asp與Glu的胺基酸殘基，X28代表選自Lys、Ser與Ala的胺基酸殘基，X32代表選自Ser與Val的胺基酸殘基。

又一個具體例是有關於一群組合物，其中X2代表Ser，X3代表選自Gln與His的胺基酸殘基，X18代表Leu，X20代表Lys，X21代表Asp，X28代表Ala，X32代表Ser。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中 X2代表D-Ser，X3代表選自Gln與His的胺基酸殘基，X18代表Leu，X20代表Lys，X21代表Asp，X28代表Ala，X32代表Ser。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中X2代表選自Ser、D-Ser與Aib的胺基酸殘基，X3代表His，X18代表選自His與Leu的胺基酸殘基，X20代表選自His、Arg、Lys、Gln與(S)MeLys的胺基酸殘基，X21代表選自Asp與Glu的胺基酸殘基，X28代表選自Lys、Ser與Ala的胺基酸殘基，X32代表選自Ser與Val的胺基酸殘基。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中X2代表選自Ser、D-Ser與Aib的胺基酸殘基，X3代表Gln，X18代表Leu，X20代表Lys，X21代表選自Asp與Glu的胺基酸殘基，X28代表Ala，X32代表Ser。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中 X2代表Aib，X3代表選自Gln與His的胺基酸殘基，X18代表Leu，X20代表Gln，X21代表選自Asp與Glu的胺基酸殘基，X28代表Ala，X32代表Ser。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中X2代表選自Ser、D-Ser與Aib的胺基酸殘基，X3代表選自Gln與His的胺基酸殘基，X18代表選自His與Leu的胺基酸殘基，X20代表Lys，X21代表選自Asp與Glu的胺基酸殘基，X28代表選自Lys、Ser與Ala的胺基酸殘基，X32代表選自Ser與Val的胺基酸殘基。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中X2代表選自Ser、D-Ser與Aib的胺基酸殘基，X3代表選自Gln與His的胺基酸殘基，X18代表選自His與Leu的胺基酸殘基，X20代表選自His、Arg、Lys、Gln與(S)MeLys的胺基酸殘基，X21代表Asp，X28代表選自Lys、Ser與Ala的胺基酸殘基，X32代表選自Ser與Val的胺基酸殘基。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中 X2代表Aib，X3代表選自Gln與His的胺基酸殘基，X18代表Leu，X20代表選自Lys與Gln的胺基酸殘基，X21代表Glu，X28代表Ala，X32代表Ser。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中X2代表選自Ser、D-Ser與Aib的胺基酸殘基，X3代表選自Gln與His的胺基酸殘基，X18代表選自His與Leu的胺基酸殘基，X20代表選自His、Arg、Lys、Gln與(S)MeLys的胺基酸殘基，X21代表選自Asp與Glu的胺基酸殘基，X28代表Ala，X32代表選自Ser與Val的胺基酸殘基。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中X2代表選自Ser、D-Ser與Aib的胺基酸殘基，X3代表選自Gln與His的胺基酸殘基，X18代表選自His與Leu的胺基酸殘基，X20代表選自His、Arg、Lys、Gln與(S)MeLys的胺基酸殘基，X21代表選自Asp與Glu的胺基酸殘基，X28代表選自Lys、Ser與Ala的胺基酸殘基，X32代表選自Ser與Val的胺基酸殘基。

式(I)之胜肽化合物的特定實例為SEQ ID NO：5-22之化合物，及其鹽與溶劑合物。

式(I)之胜肽化合物的特定實例為SEQ ID NO：5-19之化合物，及其鹽與溶劑合物。

式(I)之胜肽化合物的特定實例為SEQ ID NO：5、7、9、15、21之化合物，及其鹽與溶劑合物。

在某些具體例中，亦即當式(I)化合物包含遺傳編碼的胺基酸殘基時，本發明進一步提供編碼該化合物的核酸(其可為DNA或RNA)、包含該核酸的表現載體，以及含有該核酸或表現載體的宿主細胞。

在又一個態樣中，本發明提供包含本發明化合物與載劑混合的組成物。在較佳具體例中，該組成物為醫藥上可接受的組成物，且該載劑為在醫藥上可接受的載劑。本發明化合物可以呈鹽的形式，例如醫藥上可接受的鹽或溶劑合物，例如水合物。在又一個態樣中，本發明提供用於醫學治療，尤其是人類醫學中之方法的組成物。

在某些具體例中，該核酸或表現載體可在例如基因療法中用作為治療劑。

式(I)化合物適用於治療用途而不需要額外的治療有效劑。然而，在另一個具體例中，如”組合療法”中所述與至少一種額外治療活性劑一起使用該等化合物。

式(I)化合物尤其適用於治療或預防由醣類及/或脂肪代謝混亂所致、與其相關及/或伴隨其發生的疾病或病症，例如用於治療或預防高血糖症、第2型糖尿病、葡萄糖耐受不良、第1型糖尿病、肥胖症與代謝症候群。此外，本發明化合物尤其適用於治療或預防退化性疾病，尤其是神經退化性疾病。

所述化合物尤其用於預防增重或促進減重。”預防”表示當相較於治療不存在時抑制或降低，但不必然表示病症完全中止。

本發明化合物可使得食物攝取減少及/或增加能量消耗，在體重方面產生可觀察到的影響。

本發明化合物對循環膽固醇濃度具有效的效用而與其對體重的影響無關，進而能夠改善脂肪含量，尤其是LDL與HDL含量(例如增加HDL/LDL比率)。

因此，本發明化合物可用於任何由體重過重所致或特徵在於體重過重之病況的直接或間接療法，諸如治療及/或預防肥胖症、病態肥胖症、肥胖症相關的發炎、肥胖症相關的膽囊疾病、肥胖症引起的睡眠呼吸中止。它們也可以用於治療與預防代謝症候群、糖尿病、高血壓、致動脈粥樣硬化性血脂異常、動脈粥樣硬化、動脈硬化症、冠心病或中風。它們在這些病況中的效用是因為與其對體重的影響有關，或可能與其無關。

較佳的醫學用途包括在第2型糖尿病中延遲或預防疾病進展、治療代謝症候群、治療肥胖症或預防過重、用以減少食物攝取、增加能量消耗、降低體重、延遲從葡萄糖耐受不良(IGT)進展至第2型糖尿病；延遲從第2型糖尿病進展至需要胰島素的糖尿病；調節食慾；引起飽足感；在成功減重後預防體重又再增加；治療與過重或肥胖症有關的疾病或狀態；治療暴食症；治療狂食；治療動脈粥樣硬化、高血壓、第2型糖尿病、IGT、血脂異常、冠心病、脂肪肝、治療貝他-阻斷劑中毒、用以抑制胃腸道活動、可使用諸如X射線、CT以及NMR掃描的技術用於與胃腸道的研究組合。

更多較佳醫學用途包括治療或預防退化性疾病，具體而言神經退化性疾病，諸如阿茲海默症、帕金森氏症、亨廷頓氏症、共濟失調(例如脊髓小腦共濟失調)、甘迺迪氏症、強直型肌肉萎縮症、路易體癡呆症、多系統性萎縮症、肌萎縮性側索硬化、原發性側索硬化、脊椎肌肉萎縮症、普恩蛋白相關的疾病(例如庫賈氏病)、多發性硬化症、毛細管擴張、巴登氏病、皮質基底核退化症、皮質基底核退化症、亞急性脊髓聯合退化、運動失調、泰薩斯病、中毒性腦病變、嬰兒雷夫敘姆病、雷夫敘姆病、神經棘細胞症、尼曼匹克症、萊姆病、Machado-Joseph病、山多夫氏病、Shy-Drager症候群、刺蝟搖擺不定症、蛋白質構像病、大腦β-澱粉樣血管病變、青光眼的視網膜神經節細胞退化、共核蛋白病、Tau蛋白病變、額顳葉退化(FTLD)、癡呆症、cadasil症候群、帶有類澱粉症的遺傳性腦出血、亞歷山大病、seipinopathies、家族性類澱粉神經病變、老年全身性類澱粉症、絲胺酸蛋白病變(serpinopathies)、AL(輕鏈)類澱粉症(原發性全身性類澱粉症)、AH(重鏈)類澱粉症、AA(繼發性)類澱粉症、主動脈中層類澱粉症、ApoAI類澱粉症、ApoAII類澱粉症、ApoAIV類澱粉症、芬蘭型家族性類澱粉症(FAF)、溶菌酶類澱粉症、纖維蛋白原類澱粉症、透析類澱粉症、包涵體肌炎/肌病、白內障、帶有視紫質突變的色素性視網膜炎、髓質性甲狀腺癌、心房類澱粉症、垂體催乳素瘤、遺傳性格子狀角膜營養不良、苔蘚狀皮膚類澱粉症、馬洛裏小體、角膜乳鐵蛋白類澱粉症、肺泡蛋白沉著症、齒源性(平博氏)腫瘤類澱粉症、囊腫纖維化、鎌狀細胞病或重病性肌病(CIM)。

更多醫學用途包括治療高血糖症、第2型糖尿病、肥胖症，尤其是第2型糖尿病。

發明詳細說明定義

本發明胺基酸序列含有習知用於天然胺基酸的一個字母以及三個字母代碼，還有就其他胺基酸而言普遍認可的三個字母代碼，諸如Aib(α-胺基異丁酸)。

此外，使用於胺基酸的下列代碼顯示於表1中：

術語”天然exendin-4”意指具有序列HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH₂(SEQ ID NO：1)的天然exendin-4。

本發明提供如上所定義的胜肽化合物。

本發明胜肽化合物包含胺基羧酸藉由胜肽(亦即甲醯胺鍵)連結的線性骨架。除非另有指明，否則胺基羧酸較佳為α-胺基羧酸且更佳為L-α-胺基羧酸。胜肽化合物較佳包含具有39個胺基羧酸的骨架序列。

為免疑問，在本文提供的定義中，胜肽部分(II)的序列通常希望在說明容許變異之彼等位置中的至少一者處是不同於天然exendin-4。胜肽部分(II)內的胺基酸可考慮為以習知N端至C端方向從1至39連續編號。因此，提及胜肽部分(II)內的”位置”應理解為如提及天然exendin-4與其他分子中的位置。

在又一個態樣中，本發明提供一種包含如本文所述之本發明化合物，或其鹽或溶劑合物與載劑混合的組成物。

本發明亦提供本發明化合物用作藥物，尤其是治療如下所述病況的用途。

本發明亦提供一種組成物，其中該組成物為醫藥上可接受之組成物，而該載劑為醫藥上可接受之載劑。

胜肽合成

習於技藝者知道各種不同方法來製備本發明中所述的胜肽。這些方法包括(但不限於)合成方法以及重組基因表現。因此，製備該等胜肽的一個方法是在溶液中或在固體撐體上合成，然後分離並純化。製備胜肽的一個不同方法為在宿主細胞中的基因表現，其中編碼該胜肽的DNA序列已被引入該宿主細胞中。或者，基因表現可以在不使用細胞系統的情況下達致。上述方法也可以任何方式加以組合。

製備本發明之胜肽的一個較佳方法為在適當樹脂上的固相合成。固相胜肽合成是已充分建立的方法學(參見例如：Stewart and Young,Solid Phase Peptide Synthesis,Pierce Chemical Co.,Rockford,Ill.,1984；E.Atherton and R.C.Sheppard,Solid Phase Peptide Synthesis.A Practical Approach,Oxford-IRL Press,New York,1989)。固相合成是藉由將N-端受保護的胺基酸以其羧基端附接至帶有可切割連接子的惰性固體撐體而開始。這個固體撐體可以是容許起始胺基酸偶合的任一種聚合物，例如三苯甲基樹脂、氯三苯甲基樹脂、Wang樹脂或Rink樹脂，其中羧基(或Rink樹脂的甲醯胺)與樹脂的鍵聯對於酸是敏感的(當使用Fmoc策略時)。聚合物撐體必須是在胜肽合成期間α-胺基去保護所用條件下穩定者。

在第一個胺基酸已被偶合至固體撐體之後，這個胺基酸的α-胺基保護基被移除。剩餘受保護的胺基酸以胜肽序列所表示的順序使用適當醯胺偶合試劑(例如BOP(苯并三唑-1-基-氧基-參-(二甲基胺基)-鏻)、HBTU(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基-脲)、HATU(O-(7-氮雜苯并三唑-1-基-氧基-參-(二甲基胺基)鏻)或DIC(N,N'-二異丙基碳二醯亞胺)/HOBt(1-羥基苯并三唑))一個接著一個偶合，其中BOP、HBTU與HATU與三級胺鹼一起使用。或者，被釋離的N-端可以經胺基酸以外的基團(例如羧酸等)官能化。

通常，胺基酸的反應性側鏈基團經適當阻斷基保護。這些保護基在所要胜肽已組裝之後被移除。它們隨著所要產物從樹脂切除的同時在相同條件下被移除。保護基與引入保護基的程序可以在Protective Groups in Organic Synthesis,3d ed.,Greene,T.W.and Wuts,P.G.M.,Wiley & Sons(New York：1999)中找到。

在一些情況下，帶有可被選擇性移除的側鏈保護基團同時其他側鏈保護基團保持完整將會是合於需要的。在這種情況下，被釋出的官能性可選擇性地被官能化。例如，離胺酸可以用ivDde)保護基團予以保護(S.R.Chhabra et al.,Tetrahedron Lett.39,(1998),1603)，其僅對極親核性鹼(例如DMF(二甲基甲醯胺)中的4%肼)是不穩定的。因此，若N-端胺基與所有側鏈官能性以酸不穩定性保護基團予以保護時，ivDde([1-(4,4-二甲基-2,6-二側氧基環己-1-亞基)-3-甲基丁基)基團可以選擇性地使用DMF中的4%肼予以移除且對應游離胺基可接著被進一步修飾，例如藉由醯化。或者離胺酸可以偶合至經保護的胺基酸，且這個胺基酸的胺基則可以去保護，產生另一個可被醯化或附接至另一個胺基酸的游離胺基。

最後，從樹脂切下胜肽。這可以藉由使用金氏混合物(King’s cocktail)來達致(D.S.King,C.G.Fields,G.B.Fields,Int.J.Peptide Protein Res.36,1990,255-266)。若需要的話，原料接著藉由層析(例如製備型RP-HPLC)被純化。

效力

如本文所用，術語”效力”或”活體外效力”是關於在以細胞為主的分析中，化合物活化GLP-1、升糖素或視情況GIP之受體的能力的一種度量方法。其以數值表示為”EC50值”，其為化合物在劑量反應實驗中引起半最大反應增加(例如細胞內cAMP形成)的化合物有效濃度。

治療用途

依據一個態樣，本發明化合物用於醫學中，尤其適用於人類醫學中。

本發明化合物為GLP-1與升糖素，還有視情況GIP之受體之促效劑(例如”雙重或三角促效劑”)，且可藉由容許同時治療糖尿病與肥胖症對靶定代謝症候群的臨床需要提供引人注意的選擇。

代謝症候群為醫學病症之一種組合，當同時發生時，增加發生第2型糖尿病還有動脈粥樣硬化血管疾病(例如心臟病與中風)的風險。用於代謝症候群的定義醫學參數包括糖尿病、葡萄糖耐受不良、禁食葡萄糖升高、胰島素抗性、尿白蛋白分泌、腹部肥胖、高血壓、三酸甘油酯升高、LDL膽固醇升高與HDL膽固醇降低。

肥胖症是一種醫學病況，其中過量體脂積累至可能對健康與預期餘命具有不利影響的程度，且因為其增加在成人與兒童中的盛行率，變成現代死亡的主要可預防病因之一。其增加各種其他疾病的可能性，包括心臟病、第2型糖尿病、阻塞性睡眠呼吸中止、某些類型的癌症，以及骨關節炎，而且它最通常是由過量食物攝取、能量消耗降低，以及遺傳易感性的組合所致。

糖尿病(diabetes mellitus)，通常簡稱為糖尿病(diabetes)，是一群代謝疾病，其中某人具有高血糖濃度(不論是因為身體未能產生足夠胰島素，或因為細胞無法對製造出的胰島素有所作出反應)。最常見的糖尿病類型為：(1)第1型糖尿病，其中身體無法製造胰島素；(2)第2型糖尿病，其中身體無法適當地使用胰島素，加上隨著時間有胰島素缺乏的增加，以及(3)妊娠型糖尿病，其中女性因為懷孕而產生糖尿病。所有形式的糖尿病增加在數年後發生長期併發症的風險。這些長期併發症中的大多數是基於對血管的損傷且可以分成兩類：”大血管"疾病(因為較大血管的動脈粥樣硬化所致)以及”小血管”疾病(因為小血管損傷所致)。大血管疾病病況的實例為缺血性心臟病、心肌梗塞、中風與周邊血管疾病。小血管疾病的實例為糖尿病視網膜病變、糖尿病腎病變，還有糖尿病神經病變。

GLP-1、升糖素與GIP的受體是G蛋白偶合受體家族B的成員。它們在結構上彼此相關且不僅共有一個明顯程度的序列同一性，還具有相似的配體辨識機制和細胞內訊號傳遞路徑。

類似地，胜肽GLP-1、GIP與升糖素共有高序列同一性/相似性的區域。GLP-1與升糖素是由相同的前驅體前原升糖素所製成，前原升糖素以組織特異性的方式受到差異加工處理而產生例如腸內分泌細胞的GLP-1以及胰島之阿伐細胞中的升糖素。GIP是衍生自較大的原GIP原激素前軀體且由位於小腸的K細胞合成並釋放。

肽腸促胰島素激素GLP-1與GIP是由腸內分泌細胞對食物反應所分泌，且佔飲食刺激之胰島素分泌至多70%。證據暗示，GLP-1分泌在帶有葡萄糖耐受不良或第2型糖尿病的個體中是降低的，但在這些患者中對GLP-1的反應性仍維持不變。因此，以適當促效劑靶定GLP-1受體對治療代謝病症(包括糖尿病)提供充滿吸引力的方法。GLP-1的受體分布廣泛，主要在胰島、腦、心臟、腎臟與胃腸道中被發現到。在胰臟中，GLP-1以嚴格葡萄糖依賴性的方式藉由增加胰島素從貝他細胞分泌來作用。這個葡萄糖依賴性顯示，活化GLP-1受體不會致使低血糖症。GIP的受體也廣泛地表現在周邊組織中，周邊組織包括胰島、脂肪組織、胃、小腸、心臟、骨、肺臟、腎臟、睪丸、腎上腺皮質、垂體、內皮細胞、氣管、脾臟、胸腺、甲狀腺與腦。

與其作為腸促胰島素激素的生物功能相同，胰臟β-細胞在人類體內表現最高程度的GIP受體。有一些GIP-受體媒介訊號傳遞的臨床證據在帶有T2DM的患者中顯示受到障礙，但GIP-作用顯示為可逆且可以利用改善糖尿病狀態而獲得回復。值得注意的是，藉由腸促胰島素激素(GIP與GLP-1)刺激胰島素分泌是嚴格的葡萄糖依賴性以確保與在低血糖症的風險下相關的失靈安全機制。

在貝他細胞濃度下，GLP-1與GIP已顯示會增進原胰島素的葡萄糖敏感性、新生、增生、轉錄和肥大，還有抗細胞凋亡。對GLP-1與GIP受體帶有雙重促效活性的胜肽預期具有加成或協同抗糖尿病益處。GLP-1在胰臟以外的其他相關影響包括延遲胃排空、增加飽足感、減少食物攝取、降低體重，以及神經保護性和心臟保護性效用。在帶有第2型糖尿病的患者中，考慮到像是肥胖症與心血管疾病之合併症的高比率，胰臟外效用可能尤其重要。在胰臟以外的周邊組織中的更多GIP作用包含骨形成增加且骨再吸收降低，以及神經保護性效用，對於治療骨質疏鬆與認知障礙(像是阿茲海默症)是有益的。

升糖素是一個具有29個胺基酸的胜肽激素，它是由胰臟阿伐細胞所製造並且在循環葡萄糖低時被釋放至血流中。升糖素的一個重要生理角色是在肝臟中刺激葡萄糖輸出，對胰島素來說，在活體內維持葡萄糖恆定狀態是一個提供重要相對調節機制的過程。

但是，升糖素受體也在肝臟外組織(諸如腎臟、心臟、脂肪細胞、淋巴母細胞、腦、視網膜、腎上腺與胃腸道)中表現，暗示在葡萄糖恆定以外有更為廣泛的生理學角色。因此，近來的研究已報導，升糖素對於能量管理在治療上具有正向的效用，能量管理包括刺激能量消耗以及生熱作用，伴有減少食物攝取以及體重減輕。總之，刺激升糖素受體在治療肥胖症與代謝症候群方面可能有用。

調酸素是一種由含括八個胺基酸之帶有C-端延伸部分的升糖素構成的胜肽激素。像是GLP-1與升糖素，其預先形成為前原升糖素且以組織特異性的方式被小腸的內分泌細胞切割並分泌。調酸素已知會刺激GLP-1與升糖素的受體並因而是雙重促效劑的原型。

如同GLP-1以及GIP已知其抗糖尿病效用，GLP-1與升糖素均已知其抑制食物攝取效用，而升糖素也是額外能量消耗的中介因子，可想像兩種激素的活性組合於一個分子中可以產生強效藥物供治療代謝症候群，以及具體而言其構成要素糖尿病和肥胖症之用。

因此，本發明化合物可用於治療葡萄糖耐受不良、胰島素抗性、前糖尿病、禁食葡萄糖增加、第2型糖尿病、高血壓、血脂異常、動脈硬化症、冠心病、周邊動脈疾病、中風或此等個別疾病構成要素之任何組合。

此外，它們可用於控制食慾、進食以及熱量攝取、增加能量消耗、預防增重、促使減重、減少體重過重以及治療肥胖症(包括病態肥胖症)。

可使用本發明化合物治療的更多疾病狀態和健康病況為肥胖症連結的發炎、肥胖症連結的膽囊病及肥胖症引起的睡眠呼吸中止。

儘管所有此等病況可能與肥胖症直接或間接相關，本發明化合物的效用可以整體或部分經由對體重的影響或與其無涉來進行媒介。

此外，待治療的疾病為神經退化性疾病，諸如阿茲海默症或帕金森氏症，或如上述的其他退化性疾病。

相較於GLP-1、升糖素以及調酸素，exendin-4具有有益的物理化學特性，諸如在溶液中與在生理條件下的溶解度以及穩定性(包括對酵素(諸如DPP-4或NEP)分解的酶穩定性)，其在活體內產生更長的作用持續期間。因此，exendin-4作為良好的起始骨架，以獲得具有雙重或甚至三重藥理學(例如GLP-1/升糖素以及視情況額外的GIP促效作用)的exendin-4類似物。

然而，exendin-4也顯示為化學不穩定的，因為在位置14的甲硫胺酸氧化以及在位置28的天門冬醯胺酸的去醯胺化和異構化。因此，穩定性可藉由置換在位置14處的甲硫胺酸，且避免已知容易經由天冬醯胺形成而分解的序列(尤其是在位置28與29的Asp-Gly或Asn-Gly)進一步獲得改善。

醫藥組成物

術語”醫藥組成物”指明一種含有當混合且投與時可相容之成分的混合物。醫藥組成物可包括一或多種醫學藥物。此外，醫藥組成物可包括載劑、緩衝劑、酸化劑、鹼化劑、溶劑、佐劑、張力調節劑、柔軟劑、膨脹劑、防腐劑、物理與化學安定劑(例如界面活性劑)、抗氧化劑與其他組分，不論這些組分被視為是活性或非活性成分。對於習於製備醫藥組成物者可找到的指南為例如在Remington：The Science and Practice of Pharmacy,(20th ed.)ed.A.R.Gennaro A.R.,2000,Lippencott Williams & Wilkins與R.C.Rowe et al(Ed),Handbook of Pharmaceutical Excipients,PhP,May 2013 update中找到。

本發明之exendin-4胜肽衍生物或其鹽可與作為醫藥組成物一部分的可接受醫藥載劑、稀釋劑或賦形劑組合投與。”醫藥上可接受之載劑”為生理上可接受(例如生理上可接受pH)同時維持與其一起投與之物質的治療特性的載劑。標準可接受醫藥載劑及其調配物為習於技藝者熟知且描述於例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy,(20th ed.)ed.A.R.Gennaro A.R.,2000,Lippencott Williams & Wilkins與R.C.Rowe et al(Ed),Handbook of Pharmaceutical excipients,PhP,May 2013 update中。一個例示性醫藥上可接受載劑為生理鹽水溶液。

在一個具體例中，載劑是選自由緩衝劑(例如檸檬酸鹽 /檸檬酸)、酸化劑(例如鹽酸)、鹼化劑(例如氫氧化鈉)、防腐劑(例如苯酚)、共溶劑(例如聚乙二醇400)、張力調節劑(例如甘露醇)、安定劑(例如界面活性劑、抗氧化劑、胺基酸)之群。

使用的濃度在生理上可接受的範圍內。

可接受醫藥載劑或稀釋劑包括那些於口服、直腸、鼻或非經腸(包括皮下、肌肉內、靜脈內、皮內以及穿皮)投與的調配物中所使用者。本發明化合物通常是非經腸投與。

術語”醫藥上可接受之鹽”表示本發明化合物的鹽，就使用於哺乳動物中來說其為安全且有效的。醫藥上可接受之鹽可包括，但不限於酸加成鹽以及鹼性鹽。酸加成鹽的實例包括氯鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸(氫)鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、甲苯磺酸鹽或甲磺酸鹽。鹼性鹽的實例包括與無機陽離子形成的鹽(例如鹼或鹼土金屬鹽，諸如鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽或鈣鹽)，以及與有機陽離子形成的鹽(諸如胺鹽)。醫藥上可接受之鹽的更多實例描述於Remington：The Science and Practice of Pharmacy,(20th ed.)ed.A.R.Gennaro A.R.,2000,Lippencott Williams & Wilkins或Handbook of Pharmaceutical Salts,Properties,Selection and Use,e.d.P.H.Stahl,C.G.Wermuth,2002,jointly published by Verlag Helvetica Chimica Acta,Zurich,Switzerland,and Wiley-VCH,Weinheim,Germany中。

術語”溶劑合物”表示本發明化合物或其鹽與溶劑分子(例如有機溶劑分子及/或水)的複合物。

在醫藥組成物中，exendin-4衍生物可以呈單體或寡聚形式。

術語化合物的”治療有效量”意指無毒但足量的化合物以提供所要效用。達到所要生物效用所需的式I化合物數量取決於數種因素，例如選擇的特定化合物、所要用途、投與模式以及患者的臨床病況。適當”有效”量在任何個別的情況下可由習於技藝者使用慣常實驗來決定。例如，式(I)化合物的”治療有效量”為約0.01至50mg/劑量，較佳0.1至10mg/劑量。

本發明醫藥組成物為彼等適於非經腸(例如皮下、肌肉內、皮內或靜脈內)、口服、直腸、局部與經口(例如舌下)投與者，儘管最為適宜的投與模式在每一個別情況下會取決於待治療病況之本質和嚴重性，以及在各個情況下使用之式I化合物的特質。

適當的醫藥組成物可以呈分散單位，例如膠囊、錠劑與小瓶或安瓿中的粉劑，其各自含有定量的化合物；作為粉劑或膠囊；作為呈水性或非水性液體的溶液或懸浮液；或做為水包油或油包水乳液。其可呈單劑量可注射形式來提供，例如呈筆的形式。該等組成物可(如已經提及)藉由任何適當醫藥方法來製備，該等醫藥方法包括其中活性成分與載劑(其可由一或多種額外成分組成)相接觸的步驟。

在某些具體例中，醫藥組成物可與施用裝置一起提供，例如與注射器、注射筆或自動注射器一起提供。此等裝置可以與醫藥組成物分開提供或者是預先充填醫藥組成物。

組合療法

本發明化合物(GLP-1與升糖素受體的雙重促效劑)可廣泛地與其他藥學活性化合物組合，諸如所有在Rote Liste 2013中所提及的藥物，例如與在Rote Liste 2013第1章中提到的所有減重劑或食慾抑制劑、在Rote Liste 2013第58章中提到的所有降脂劑、在Rote Liste 2013中提到的所有抗高血壓劑及腎保護劑，或在Rote Liste 2013第36章中提到的所有利尿劑。

活性成分組合尤其可用於協同增進作用。它們可以藉由對患者分開投與活性成分或呈組合產物的形式來施用，在組合產物的形式中，數種活性成分存在於一個醫藥製品中。當活性成分藉由分開投與活性成分來投與時，這可以同時或依序完成。

下文提及的大多數活性成分揭示於USP Dictionary of USAN and International Drug Names,US Pharmacopeia,Rockville 2011中。

適用於此等組合的其他活性物質尤其包括彼等例如就所提指示症之一者使一或多種活性物質的治療效用變成可能及/或容許一或多種活性物質劑量降低者。

適於組合的治療劑包括，例如抗糖尿病劑，諸如：胰島素與胰島素類似物，例如：甘精(Glargine)/Lantus®、270-330U/mL胰島素甘精(insulin glargine)(EP 2387989 A)、300U/mL胰島素甘精(EP 2387989 A)、穀賴胰島素(Glulisin)/Apidra®、地特胰島素(Detemir)/Levemir®、賴脯胰島素(Lispro)/Humalog®/Liprolog®、德谷胰島素(Degludec)/德谷胰島素Plus(DegludecPlus)、門冬胰島素(Aspart)、基礎胰島素與類似物(例如LY-2605541、LY2963016、NN1436)、聚乙二醇化胰島素Lispro、Humulin®、Linjeta、SuliXen®、NN1045、胰島素加上Symlin、PE0139、速效與短效胰島素(例如Linjeta、PH20、NN1218、HinsBet)、(APC-002)水膠、口服、可吸入、穿皮與舌下胰島素(例如Exubera®、Nasulin®、Afrezza、Tregopil、TPM 02、Capsulin、Oral-lyn®、 Cobalamin®口服胰島素、ORMD-0801、NN1953、NN1954、NN1956、VIAtab、Oshadi口服胰島素)。另外亦包括彼等藉由雙功能性連接子結合至白蛋白或另一種蛋白質的胰島素衍生物。

GLP-1、GLP-1類似物以及GLP-1受體促效劑，例如：利西拉來(Lixisenatide)/AVE0010/ZP10/Lyxumia、艾塞那肽(Exenatide)/Exendin-4/Byetta/Bydureon/ITCA 650/AC-2993、利拉魯肽(Liraglutide)/Victoza、塞馬魯肽(Semaglutide)、他司魯肽(Taspoglutide)、Syncria/阿必魯肽(Albiglutide)、度拉魯肽(Dulaglutide)、rExendin-4、CJC-1134-PC、PB-1023、TTP-054、Langlenatide/HM-11260C、CM-3、GLP-1 Eligen、ORMD-0901、NN-9924、NN-9926、NN-9927、Nodexen、Viador-GLP-1、CVX-096、ZYOG-1、ZYD-1、GSK-2374697、DA-3091、MAR-701、MAR709、ZP-2929、ZP-3022、TT-401、BHM-034、MOD-6030、CAM-2036、DA-15864、ARI-2651、ARI-2255、艾塞那肽-XTEN及升糖素-Xten。

DPP-4抑制劑，例如：阿格列汀(Alogliptin)/Nesina、利拉利汀(Trajenta)/Linagliptin/BI-1356/Ondero/Trajenta/Tradjenta/Trayenta/Tradzenta、沙格列汀(Saxagliptin)/Onglyza、西格列汀(Sitagliptin)/佳糖維(Januvia)/西他列汀(Xelevia)/Tesave/Janumet/Velmetia、Galvus/維格列汀(Vildagliptin)、阿拉格列汀(Anagliptin)、吉格列汀(Gemigliptin)、特力利汀(Teneligliptin)、美格列汀(Melogliptin)、曲格列汀(Trelagliptin)、DA-1229、Omarigliptin/MK-3102、KM-223、Evogliptin、ARI-2243、PBL-1427、哌諾沙星(Pinoxacin)。

SGLT2抑制劑，例如：Invokana/卡格列淨 (Canaglifozin)、Forxiga/達格列淨(Dapagliflozin)、瑞格列净(Remoglifozin)、舍格列净(Sergliflozin)、依帕列净(Empagliflozin)、伊格列净(Ipragliflozin)、托格列淨(Tofogliflozin)、魯格列净(Luseogliflozin)、LX-4211、Ertuglifozin/PF-04971729、RO-4998452、EGT-0001442、KGA-3235/DSP-3235、LIK066、SBM-TFC-039，雙胍類(例如美福明(Metformin)、丁福明(Buformin)、苯乙福明(Phenformin))、噻唑烷二酮類(例如吡格列酮(Pioglitazone)、利格列酮(Rivoglitazone)、羅格列酮(Rosiglitazone)、曲格列酮(Troglitazone))、雙重PPAR促效劑(例如阿格列扎(Aleglitazar)、莫格列扎(Muraglitazar)、替格列扎(Tesaglitazar))、磺醯脲類(例如甲苯磺丁脲(Tolbutamide)、格列苯脲(Glibenclamide)、格列美脲(Glimepiride)/瑪爾胰(Amaryl)、格列吡嗪(Glipizide))、美格列奈類(例如那格列奈(Nateglinide)、瑞格列奈(Repaglinide)、米格列奈(Mitiglinide))、α-葡萄糖苷酶抑制劑(例如阿卡波糖(Acarbose)、米格列醇(Miglitol)、伏格列波糖(Voglibose))，兔胰澱素(Amylin)及兔胰澱素類似物(例如普蘭林肽(Pramlintide)、Symlin)。

GPR119促效劑(例如GSK-263A、PSN-821、MBX-2982、APD-597、ZYG-19、DS-8500)、GPR40促效劑(例如Fasiglifam/TAK-875、TUG-424、P-1736、JTT-851、GW9508)。

其他適宜組合夥伴為：塞克洛瑟(Cycloset)、11-β-HSD的抑制劑(例如LY2523199、BMS770767、RG-4929、BMS816336、AZD-8329、HSD-016、BI-135585)、葡萄糖激酶的活化劑(例如TTP-399、AMG-151、TAK-329、GKM-001)、DGAT的抑制劑(例如LCQ-908)、蛋白質酪胺酸磷酸酶1的抑制劑(例如曲度奎明 (Trodusquemine))、葡萄糖-6-磷酸酶的抑制劑、果糖-1,6-二磷酸酶的抑制劑、肝醣磷酸酶的抑制劑、磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶的抑制劑、肝醣合成酶激酶的抑制劑、丙酮酸去氫酶的抑制劑、α2-拮抗劑、CCR-2拮抗劑、SGLT-1抑制劑(例如LX-2761)。

一或多種降脂劑亦適於作為組合夥伴，諸如(例如)：HMG-CoA-還原酶抑制劑(例如辛伐他汀(Simvastatin)、阿托伐他汀(Atorvastatin))、纖維酸類(例如苯扎貝特(Bezafibrate)、菲諾貝特(Fenofibrate))、菸鹼酸及其衍生物(例如菸鹼酸)、PPAR-(α、γ或α/γ)促效劑或調節劑(例如阿格列扎(Aleglitazar))、PPAR-δ促效劑、ACAT抑制劑(例如阿伐麥布(Avasimibe))、膽固醇吸收抑制劑(例如依折麥布(Ezetimibe))、膽酸結合物質(例如考來烯胺(Cholestyramine))、迴腸膽酸運輸蛋白抑制劑、MTP抑制劑，或PCSK9的調節劑。

HDL-升高化合物，諸如：CETP抑制劑(例如托徹普(Torcetrapib)、安塞曲匹(Anacetrapid)、達塞曲匹(Dalcetrapid)、依塞曲匹(Evacetrapid)、JTT-302、DRL-17822、TA-8995)或ABC1調節劑。

其他適宜的組合夥伴為用於治療肥胖症的一或多種活性物質，諸如(例如)：西布曲明(Sibutramine)、特索芬辛(Tesofensine)、羅氏鮮(Orlistat)、大麻素-1受體的拮抗劑、MCH-1受體拮抗劑、MC4受體促效劑、NPY5或NPY2拮抗劑(例如韋利貝特(Velneperit))、β-3-促效劑、瘦素或瘦素擬似物、5HT2c受體的促效劑(例如氯卡色林(Lorcaserin))，或布普品(bupropione)/那曲酮(naltrexone)、布普品/唑尼沙胺(zonisamide)、布普品/芬特明(phentermine)或普蘭林肽/美曲普汀(metreleptin)的組合。

其他適宜的組合夥伴為：更多胃腸胜肽，諸如胜肽YY 3-36(PYY3-36)或其類似物、胰多胜肽(PP)或其類似物。

升糖素受體促效劑或拮抗劑、GIP受體促效劑或拮抗劑、飢餓素拮抗劑或反向促效劑、類爪蟾肽及其類似物。

此外，與影響高血壓、慢性心臟衰竭或動脈粥樣硬化的藥物組合，該等藥物為諸如(例如)：血管收縮素II受體拮抗劑(例如替米沙坦(telmisartan)、坎地沙坦(candesartan)、纈沙坦(valsartan)、氯沙坦鉀(losartan)、依普羅沙坦(eprosartan)、厄貝沙坦(irbesartan)、奥美沙坦(olmesartan)、他索沙坦(tasosartan)、阿齊沙坦(azilsartan))、ACE抑制劑、ECE抑制劑、利尿劑、β-阻斷劑、鈣拮抗劑、中樞抑制降血壓藥、α-2-腎上腺素受體拮抗劑、中性胜肽內切酶的抑制劑、血小板聚集抑制劑以及其他藥物或其適宜組合。

在另一個態樣中，本發明是有關於本發明化合物或其生理學上可接受之鹽組合至少一種上文所述之作為組合伴侶的活性物質組合的用途，其用以製備適於治療或預防可能受到結合至GLP-1與升糖素之受體並調節其活性而發生作用之疾病或病況的藥物。較佳在代謝症候群的疾病中，尤其是上列疾病或病況中之一者，最為尤其是糖尿病或肥胖症或其併發症。

本發明化合物或其生理學上可接受之鹽組合一或多種活性物質的使用可同時、分開或依序發生。

本發明化合物或其生理學上可接受之鹽組合另一種活性物質的使用可同時或在交錯的時間，但尤其是在一段短時間裡發生。若它們同時被投與，則兩種活性物質被一起給予患者；或它們以交錯時間被使用，則兩種活性物質在少於或等於12小時，但尤其少於或等於6小時的時間時段內被給予患者。

因此，在另一個態樣中，本發明是有關於一種藥物，其包含本發明化合物或該一化合物之生理學上可接受之鹽與上述活性物質之至少一者作為組合夥伴的藥物，視情況一起選用一或多種惰性載劑及/或稀釋劑。

本發明化合物或其生理學上可接受之鹽或溶劑合物，以及要與其組合的其他活性物質可一起存在於一個調配物(例如錠劑或膠囊)中，或分開在兩個相同或不同調配物(例如所謂套組的部件)中。

圖1. 在非禁食雌性糖尿病dbdb-小鼠中以100μg/kg的SEQ ID NO：9 s.c.處理對於葡萄糖降低的效用，表示為相對於基線的變化。數據為平均值+S。

方法

使用的縮寫如下：AA 胺基酸

cAMP 環磷酸腺苷

Boc 第三-丁基氧基羰基

BOP (苯并三唑-1-基氧基)參(二甲基胺基)六氟磷酸鏻

BSA 牛血清白蛋白

tBu 第三丁基

Dde 1-(4,4-二甲基-2,6-二側氧基環己二烯)-乙基

ivDde 1-(4,4-二甲基-2,6-二側氧基環己二烯)3-甲基-丁基

DIC N,N'-二異丙基碳二醯亞胺

DIPEA N,N-二異丙基乙胺

DMEM 杜貝可氏改良伊格氏培養基

DMF 二甲基甲醯胺

EDT 乙二硫醇

FBS 胎牛血清

Fmoc 芴甲氧基羰基

HATU O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸

HBSS 漢克氏平衡鹽溶液

HBTU 2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基-脲六氟磷酸

HEPES 2-[4-(2-羥基乙基)哌嗪-1-基]乙磺酸

HOBt 1-羥基苯并三唑

HOSu N-羥基琥珀醯亞胺

HPLC 高效液相層析

HTRF 均性時差性螢光

IBMX 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤

LC/MS 液相層析/質譜

Palm 棕梠醯基

PBS 磷酸鹽緩衝溶液

PEG 聚乙二醇

PK 藥動學

RP-HPLC 逆相高效液相層析

TFA 三氟乙酸

Trt 三苯甲基

UPLC 超高效液相層析

UV 紫外線

胜肽化合物的一般性合成材料：

使用不同Rink-醯胺樹脂(4-(2’,4’-二甲氧基苯基-Fmoc-胺基甲基)-苯氧基乙醯胺基-正白胺醯基胺基甲基樹脂(Merck Biosciences；4-[(2,4-二甲氧基苯基)(Fmoc-胺基)甲基]苯氧基乙醯胺基甲基樹脂，Agilent Technologies)供合成帶有負載範圍為0.3-0.4mmol/g的胜肽醯胺。

經Fmoc保護的天然胺基酸是得自於Protein Technologies Inc.、Senn Chemicals、Merck Biosciences、Novabiochem、Iris Biotech或Bachem。在整個合成中使用下列標準胺基酸：Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-L-Asn(Trt)-OH、Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-L-Cys(Trt)-OH、Fmoc-L-Gln(Trt)-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-L-His(Trt)-OH、Fmoc-L-Ile-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Lys(Boc)-OH、Fmoc-L-Met-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Pro-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Trp(Boc)-OH、 Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Val-OH。

此外，由相同供應商購得如下特殊胺基酸：Fmoc-L-Lys(ivDde)-OH、Fmoc-Aib-OH、Fmoc-D-Ser(tBu)-OH、Fmoc-D-Ala-OH、Boc-L-His(Boc)-OH(獲得如甲苯溶劑合物)與Boc-L-His(Trt)-OH、Fmoc-L-Nle-OH、Fmoc-L-Met(O)-OH、Fmoc-L-Met(O2)-OH、Fmoc-(S)MeLys(Boc)-OH、Fmoc-(R)MeLys(Boc)-OH、Fmoc-(S)MeOrn(Boc)-OH以及Boc-L-Tyr(tBu)-OH。

例如在Prelude Peptide Synthesizer(Protein Technologies Inc)或類似的自動合成儀上使用標準Fmoc化學以及HBTU/DIPEA活化實施固相胜肽合成。DMF用作為溶劑。去保護：20%派啶/DMF歷時2 x 2.5min。洗滌：7 x DMF。偶合2：5：10 200mM AA/500mM HBTU/2M DIPEA於DMF中，2 x歷時20min。洗滌：5 x DMF。

使用金氏切割混合物(由82.5% TFA、5%苯酚、5%水、5%硫代苯甲醚、2.5% EDT構成)將所有已合成的胜肽從樹脂切下。接著在二甲基醚或二異丙基醚中沉澱粗製胜肽、離心並冷凍乾燥。藉由分析型HPLC分析胜肽且透過ESI質譜來檢核。粗製胜肽是藉由習知製備型HPLC純化程序來予以純化。

分析型HPLC/UPLC

方法A：在215nm下偵測

管柱：Aeris Peptide，3.6μm，XB-C18(250 x 4.6mm)在60℃下

溶劑：H₂O+0.1%TFA：ACN+0.1%TFA(流速1.5ml/min)

梯度：90：10(0min)至90：10(3min)至10：90(43min)至10：90(48 min)至90：10(49min)至90：10(50min)

方法B：在220nm下偵測

管柱：Zorbax，5μm，C18(250 x 4.6mm)在25℃下

溶劑：H₂O+0.1%TFA：90% ACN+10% H₂O+0.1%TFA(流速1.0ml/min)

梯度：100：0(0min)至98：2(2min)至30：70(15min)至5：95(20min)至0：100(25min)至0：100(30min)至98：2(32min)至98：2(35min)

方法C1：在210-225nm下偵測，視情況偶合至質量分析儀Waters LCT Premier，電噴霧正離子模式

管柱：Waters ACQUITY UPLC^® BEH^TM C18 1.7μm(150 x 2.1mm)在50℃下

溶劑：H₂O+1%FA：ACN+1%FA(流速0.5ml/min)

梯度：95：5(0min)至95：5(1.80min)至80：20(1.85min)至80：20(3min)至60：40(23min)至25：75(23.1min)至25：75(25min)至95：5(25.1min)至95：5(30min)

方法C2：在210-225nm下偵測，視情況偶合至質量分析儀Waters LCT Premier，電噴霧正離子模式

管柱：Waters ACQUITY UPLC^® BEH^TM C18 1.7μm(150 x 2.1mm)在50℃下

溶劑：H₂O+1%FA：ACN+1%FA(流速0.6ml/min)

梯度：95：5(0min)至95：5(1min)至65：35(2min)至65：35(3min)至45：55(23min)至25：75(23.1min)至25：75(25min)至95：5(25.1min)至95：5(30min)

方法C3：在210-225nm下偵測，視情況偶合至質量分析儀Waters LCT Premier，電噴霧正離子模式

管柱：Waters ACQUITY UPLC ^® BEH ^TM C18 1.7μm(150 x 2.1mm)在50℃下

溶劑：H ₂ O+1%FA：ACN+1%FA(流速1ml/min)

梯度：95：5(0min)至95：5(1min)至65：35(2min)至65：35(3min)至45：55(20min)至2：98(20.1min)至2：98(25min)至95：5(25.1min)至95：5(30min)

方法C4：在210-225nm下偵測，視情況偶合至質量分析儀Waters LCT Premier，電噴霧正離子模式

管柱：Waters ACQUITY UPLC^® BEH^TM C18 1.7μm(150 x 2.1mm)在50℃下

溶劑：H₂O+1%FA：ACN+1%FA(流速1ml/min)

梯度：95：5(0min)至95：5(1.80min)至80：20(1.85min)至80：20(3min)至60：40(23min)至2：98(23.1min)至2：98(25min)至95：5(25.1min)至95：5(30min)

方法D：在214nm下偵測

管柱：Waters X-Bridge C18 3.5μm 2.1 x 150mm

溶劑：H₂O+0.5%TFA：ACN(流速0.55ml/min)

梯度：90：10(0min)至40：60(5min)至1：99(15min)

方法E：在210-225nm下偵測，視情況偶合至質量分析儀Waters LCT Premier，電噴霧正離子模式

管柱：Waters ACQUITY UPLC^® BEH^TM C18 1.7μm(150 x 2.1 mm)在50℃下

溶劑：H₂O+1%FA：ACN+1%FA(流速0.9ml/min)

梯度：95：5(0min)至95：5(2min)至35：65(3min)至65：35(23.5min)至5：95(24min)至95：5(26min)至95：5(30min)

一般製備型HPLC純化程序：

在Äkta Purifier System上或在Jasco semiprep HPLC System上純化粗製胜肽。取決於待純化粗製胜肽的數量，使用不同尺寸以及不同流速的製備型RP-C18-HPLC管柱。採用乙腈+0.05至0.1% TFA(B)及水+0.05至0.1% TFA(A)作為洗提液。或者，使用由乙腈與水加上少量乙酸組成的緩衝系統。收集含有產物的溶離份並冷凍乾燥而獲得純化產物，通常為TFA或乙酸鹽。

exendin-4衍生物的溶解度與穩定性測試

在測試胜肽批料的溶解度與穩定性之前，測定其內容物。因此，研究兩個參數，其純度(HPLC-UV)以及批料的鹽負載量(離子層析)。

關於溶解度測試，目標濃度為1.0mg/mL純化合物。因此，從固體樣品製備於不同緩衝系統中的溶液，其濃度依據先前測定的內容物為1.0mg/mL化合物。在輕柔攪動上清液2小時之後進行HPLC-UV，上清液是藉由在4000rpm下離心20min而獲得。

接著藉由與使用胜肽濃度為2mg/mL之原液(於純水或不同量乙腈中)所得UV峰面積(全部化合物溶解的光學對照)比較來決定溶解度。這個分析也作為穩定性測試的起始點(t0)。

關於穩定性測試，將溶解度所得之等份試樣上清液儲存在25℃或40℃下歷時7天。在時間過程之後，在4000rpm下離心樣品歷時20分鐘並使用HPLC-UV分析上清液。關於測定胜肽餘量，比較在t0與t7時的目標化合物峰面積，遵循下列等式得到”剩餘胜肽%”剩餘胜肽%=[(峰面積胜肽t7)x 100]/峰面積t0。

可溶性分解產物的數量是由比較所有觀察到之不純物的峰面積總和減去在t0時觀察到的峰面積總和而算出(亦即決定新形成的胜肽相關物質數量)。遵循下列等式，以相對於胜肽在t0的起始數量來提供呈百分比相關性的這個數值：可溶性分解產物%={[(不純物的峰面積總和t7)-(不純物的峰面積總和t0)]x 100}/胜肽峰面積t0

”剩餘胜肽%”以及”可溶性分解產物%”之總和與100%的潛在差異反映在壓力條件之後未維持可溶的胜肽數量，遵循下列等式：沉澱%=100-([剩餘胜肽%]+[可溶性分解產物%])

這個沉澱包括非可溶性分解產物、聚合物及/或纖維，其藉由離心而從分析被移除。

化學穩定性表示為”剩餘胜肽%”。

陰離子層析

儀器：Dionex ICS-2000，pre/管柱：Ion Pac AG-18 2 x 50mm(Dionex)/AS18 2 x 250mm(Dionex)，洗提液：氫氧化鈉水溶液，流速：0.38mL/min，梯度：0-6min：22mM KOH，6-12min：22-28mM KOH，12-15min：28-50mM KOH，15-20min：22mM KOH，抑制劑：ASRS 300 2mm，偵測：傳導性

使用方法D或E作為HPLC/UPLC方法。

GLP-1受體、升糖素受體以及GIP受體效力的活體外細胞分析

化合物對於受體的促效作用是藉由功能分析測量穩定表現人類GIP、GLP-1或升糖素受體之HEK-293細胞株的cAMP反應來決定。

細胞的cAMP含量是基於HTRF(均性時差性螢光)使用來自Cisbio Corp.的套組(cat.no.62AM4PEC)測定。關於製備，將細胞分至T175培養瓶中並在培養基(DMEM/10% FBS)中生長過夜至接近匯聚。接著移除培養基並以無鈣與鎂的PBS洗滌細胞，然後以accutase(Sigma-Aldrich cat.no.A6964)進行蛋白酶處理。洗滌脫離的細胞並再懸浮於分析緩衝液(1 x HBSS；20mM HEPES,0.1% BSA,2mM IBMX)中且測定細胞密度。接著將它們稀釋至400000細胞/ml並將25μl-等分試樣分配於96孔盤的孔中。關於測量，將25μl於分析緩衝液中的測試化合物添加至孔，然後在室溫下培育30分鐘。在添加稀釋於溶解緩衝液(套組組分)中的HTRF試劑之後，培育盤1小時，接著在665/620nm下測量螢光比率。促效劑的活體外效力是藉由測定產生活化50%最大反應的濃度(EC50)來進行量化。

在雌性糖尿病dbdb-小鼠中降低葡萄糖

在研究開始時，使用10週齡大的雌性糖尿病dbdb-小鼠(BKS.Cg-+Leprdb/+Leprdb/OlaHsd)。使小鼠習慣餵食與居住條件歷時至少2週。在研究開始前7天，測定HbA1c以將小鼠針對低、中與高HbA1c-值來進行分組，且因此組平均值(n=8)盡可能相同。在研究當天，移除食物，就在進行基線葡萄糖評估的取樣之前(t=0min)。之後，立刻皮下投與化合物或媒劑(磷酸緩衝食鹽水，PBS)，100μg/kg，10ml/kg。然後，在15、30、60、90、120、150、180、240、360、480分以及24小時之時藉由尾端切入取出血液樣品。在480分的取樣之後重新提供食物。

對重複測量值藉由2-W-ANOVA，接著是Dunnett’s檢定作為事後評估來分析數據，顯著水準p<0.05。

實例

本發明進一步藉由下列實例來說明。

實例1：合成SEQ ID NO：5

在Novabiochem Rink-Amide樹脂[(4-(2’,4’-二甲氧基苯基-Fmoc-胺基甲基)-苯氧基乙醯胺基-正白胺醯基胺基甲基樹脂)，100-200目，0.34mmol/g的負載]上進行固相合成。與HBTU/DIPEA-活化一起實施Fmoc-合成策略。使用金氏混合物將胜肽從樹脂切下(D.S.King,C.G.Fields,G.B.Fields,Int.J.Peptide Protein Res.36,1990,255-266)。使用乙腈/水梯度(兩者緩衝液均為0.1% TFA)經由製備型HPLC在Waters管柱(Sunfire,Prep C18)上純化粗產物。最後，藉由LC-MS確認經純化胜肽的分子量。

實例2：合成SEQ ID NO：6

以類似的方式合成表2中所列的其他胜肽。

實例3：化學穩定性與溶解度

如方法中所述評估胜肽化合物的溶解度與化學穩定性。結果提供於表3中。

實例4：GLP-1及升糖素受體的活體外數據

胜肽化合物對GLP-1及升糖素受體的效力是藉由將表現人類升糖素受體(h升糖素R)或人類GLP-1受體(hGLP-1 R)的細胞暴露於濃度漸增的列表化合物並如方法中所述測量形成的cAMP。

結果顯示於表4中：

實例5：在雌性糖尿病dbdb-小鼠中降低葡萄糖

雌性db/db小鼠在時間0min之時皮下接受100μg/kg的SEQ ID NO：9或磷酸鹽緩衝食鹽水(媒劑對照)。SEQ ID NO：9立刻降低葡萄糖值(基線平均為28mmol/l)，達到~12mmol/l葡萄糖降低的最大效用。

相比於媒劑對照，SEQ ID NO：10從t=60min直到240min達到統計學上顯著降低葡萄糖(p<0.05，對重複測量值的雙因子 ANOVA，接著為Dunnetts氏事後檢定)。

<110> Sanofi

<120> EXENDIN-4胜類似物

<130> DE2013/244

<160> 22

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 39

<212> PRT

<213> 吉拉毒蜥

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 1

<210> 2

<211> 30

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> MOD_RES

<222> (30)..(30)

<223> 醯胺化C-端

<400> 2

<210> 3

<211> 29

<212> PRT

<213> 智人

<400> 3

<210> 4

<211> 31

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 利拉魯肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (20)..(20)

<223> 在N6處以(S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基衍生化的Lys

<400> 4

<210> 5

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Exendin-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 5

<210> 6

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Exendin-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (20)..(20)

<223> (S)-α-甲基離胺酸

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 6

<210> 7

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Exendin-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 7

<210> 8

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Exendin-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為D-Ser

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 8

<210> 9

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Exendin-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 9

<210> 10

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Exendin-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 10

<210> 11

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Exendin-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 11

<210> 12

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Exendin-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 12

<210> 13

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Exendin-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 13

<210> 14

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Exendin-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 14

<210> 15

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Exendin-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 15

<210> 16

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Exendin-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為D-Ser

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 16

<210> 17

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Exendin-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 17

<210> 18

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Exendin-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 18

<210> 19

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Exendin-4類似物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 19

<210> 20

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> Exendin-4類似物

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<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

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<223> 醯胺化C-端

<400> 20

<210> 21

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> Exendin-4類似物

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<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

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<221> MOD_RES

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<223> 醯胺化C-端

<400> 21

<210> 22

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Exendin-4類似物

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<222> (2)..(2)

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<223> 醯胺化C-端

<400> 22

Claims

一種具有式(I)的胜肽化合物：R¹-Z-R² (I)其中Z為具有式(II)的胜肽部分His-X2-X3-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Leu-Asp-Glu-Gln-X18-Ala-X20-X21-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-X28-Gly-Gly-Pro-X32-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (II)X2代表選自Ser、D-Ser與Aib的胺基酸殘基，X3代表選自Gln與His的胺基酸殘基，X18代表選自Leu與His的胺基酸殘基，X20代表選自His、Arg、Lys、(S)MeLys與Gln的胺基酸殘基，X21代表選自Asp與Glu的胺基酸殘基，X28代表選自Lys、Ser與Ala的胺基酸殘基，X32代表選自Ser與Val的胺基酸殘基，R¹代表NH₂，R²代表OH或NH₂，或其鹽或溶劑合物。
如申請專利範圍第1項之化合物，其為GLP1及升糖素受體促效劑。
如申請專利範圍第1至2項中任一項之化合物，其中R²為NH₂。
如申請專利範圍第1至3項中任一項之化合物，其中相較於天然升糖素對升糖素受體，該胜肽化合物具有至少0.1%的相對活性。
如申請專利範圍第1至4項中任一項之化合物，其中相較於GLP-1(7-36)對GLP-1受體，該胜肽化合物表現至少0.1%的相對活性。
如申請專利範圍第1至5項中任一項之化合物，其中 X2代表選自Ser、D-Ser與Aib的胺基酸殘基，X3代表His，X18代表選自His與Leu的胺基酸殘基，X20代表選自His、Arg、Lys、Gln與(S)MeLys的胺基酸殘基，X21代表選自Asp與Glu的胺基酸殘基，X28代表選自Lys、Ser與Ala的胺基酸殘基，X32代表選自Ser與Val的胺基酸殘基。
如申請專利範圍第1至6項中任一項之化合物，其中X2代表選自Ser、D-Ser與Aib的胺基酸殘基，X3代表Gln，X18代表Leu，X20代表Lys，X21代表選自Asp與Glu的胺基酸殘基，X28代表Ala，X32代表Ser。
如申請專利範圍第1至7項中任一項之化合物，其中X2代表選自Ser、D-Ser與Aib的胺基酸殘基，X3代表選自Gln與His的胺基酸殘基，X18代表選自His與Leu的胺基酸殘基，X20代表Lys，X21代表選自Asp與Glu的胺基酸殘基，X28代表選自Lys、Ser與Ala的胺基酸殘基，X32代表選自Ser與Val的胺基酸殘基。
如申請專利範圍第1至8項中任一項之化合物，其中 X2代表選自Ser、D-Ser與Aib的胺基酸殘基，X3代表選自Gln與His的胺基酸殘基，X18代表選自His與Leu的胺基酸殘基，X20代表選自His、Arg、Lys、Gln與(S)MeLys的胺基酸殘基，X21代表選自Asp與Glu的胺基酸殘基，X28代表Ala，X32代表選自Ser與Val的胺基酸殘基。
如申請專利範圍第1至9項中任一項之化合物，其是選自SEQ ID NO：5-22之化合物，及其鹽與溶劑合物。
如申請專利範圍第1至10項中任一項之化合物，其用於醫學中，尤其是人類醫學中。
如申請專利範圍第11項中所用之化合物，其作為活性劑與至少一醫藥上可接受之載劑一起存在於醫藥組成物中。
如申請專利範圍第11或12項之化合物，其與至少一額外治療活性劑一起使用，其中該額外治療活性劑是選自以下系列：胰島素與胰島素衍生物、GLP-1、GLP-1類似物與GLP-1受體促效劑、聚合物結合的GLP-1與GLP-1類似物、雙重GLP1/升糖素促效劑、雙重GLP1/GIP促效劑、PYY3-36或其類似物、胰多肽(PP)或其類似物、升糖素受體促效劑、GIP受體促效劑或拮抗劑、飢餓素拮抗劑或反向促效劑、類爪蟾肽及其類似物、DPP-IV抑制劑、SGLT2抑制劑、雙重SGLT2/SGLT1抑制劑、雙胍類、噻唑烷二酮類、雙重PPAR促效劑、磺醯脲類、美格列奈類、α-葡萄糖苷酶抑制劑、兔胰澱素(Amylin)及兔胰澱素類似物、GPR119促效劑、GPR40促效劑、GPR120促效劑、GPP142促效劑、全身性或低可吸收性TGR5促效劑、塞克洛瑟 (Cycloset)、11-β-HSD的抑制劑、葡萄糖激酶的活化劑、DGAT的抑制劑、蛋白質酪胺酸磷酸酶1的抑制劑、葡萄糖-6-磷酸酶的抑制劑、果糖-1,6-二磷酸酶的抑制劑、肝醣磷酸酶的抑制劑、磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶的抑制劑、肝醣合成酶激酶的抑制劑、丙酮酸去氫酶的抑制劑、α2-拮抗劑、CCR-2拮抗劑、葡萄糖運輸蛋白-4的調節劑、生長抑制素受體3促效劑、HMG-CoA-還原酶抑制劑、纖維酸類、菸鹼酸及其衍生物、菸鹼酸受體1促效劑、PPAR-α、γ或α/γ)促效劑或調節劑、PPAR-δ促效劑、ACAT抑制劑、膽固醇吸收抑制劑、膽酸結合物質、IBAT抑制劑、MTP抑制劑、PCSK9的調節劑、依據肝臟選擇性甲狀腺素受體β促效劑的LDL受體-調高劑、HDL-升高化合物、脂肪代謝調節劑、PLA2抑制劑、ApoA-I促進劑、甲狀腺素受體促效劑、膽固醇合成抑制劑、ω-3脂肪酸及其衍生物、治療肥胖症的活性物質(諸如西布曲明(Sibutramine)、特索芬辛(Tesofensine)、羅氏鮮(Orlistat))、CB-1受體拮抗劑、MCH-1拮抗劑、MC4受體促效劑與部分促效劑、NPY5或NPY2拮抗劑、NPY4促效劑、β-3-促效劑、瘦素或瘦素擬似物、5HT2c受體的促效劑、或布普品(bupropione)/那曲酮(naltrexone)(CONTRAVE)、布普品/唑尼沙胺(zonisamide)(EMPATIC)、布普品/芬特明(phentermine)或普蘭林肽/美曲普汀(metreleptin)的組合、QNEXA(芬特明+托比拉邁)、脂肪酶抑制劑、血管新生抑制劑、H3拮抗劑、AgRP抑制劑、三單胺吸收抑制劑(正腎上腺素與乙醯膽鹼)、MetAP2抑制劑、鈣離子通道阻斷劑地爾硫卓的鼻調配物、對抗纖維母細胞生長因子受體4生成的反義物、抑制素靶定肽-1、影響高血壓、慢性心臟衰竭或動脈粥樣硬化的藥物，諸如血管收縮素II受體拮抗劑、ACE抑制劑、ECE抑制劑、利尿劑、 β-阻斷劑、鈣拮抗劑、中樞作用性高血壓藥、α-2-腎上腺素受體的拮抗劑、中性胜肽內切酶的抑制劑、血小板聚集抑制劑。
如申請專利範圍第10至12項中任一項使用之化合物，其用於治療或預防高血糖症、第2型糖尿病、葡萄糖耐受不良、第1型糖尿病、肥胖症、代謝症候群與神經退化性病症，尤其是在第2型糖尿病中延遲或預防疾病進展、治療代謝症候群、治療肥胖症或預防過重、用以減少食物攝取、增加能量消耗、降低體重、延遲從葡萄糖耐受不良(IGT)進展至第2型糖尿病；延遲從第2型糖尿病進展至需要胰島素的糖尿病；調節食慾；引起飽足感；在成功減重後預防體重又再增加；治療與過重或肥胖症有關的疾病或狀態；治療暴食症；治療狂食；治療動脈粥樣硬化、高血壓、IGT、血脂異常、冠心病、脂肪肝、治療貝他-阻斷劑中毒、用以抑制胃腸道活動、可使用諸如X射線、CT以及NMR掃描的技術用於與胃腸道的研究組合。
如申請專利範圍第11至14項中任一項使用之化合物，其用於治療或預防高血糖症、第2型糖尿病、肥胖症。
一種醫藥組成物，包含至少一種如申請專利範圍第1至10項中任一項之化合物或其任一者的生理學上可接受之鹽或溶劑合物，其用作為藥劑。
一種治療患者之高血糖症、第2型糖尿病或肥胖症的方法，該方法包含向該患者投與有效量之至少一種如申請專利範圍第1至10項中任一項之式I化合物及有效量之至少一種用於治療高血糖症、第2型糖尿病或肥胖症的其他化合物。
如申請專利範圍第17項之方法，其中該有效量之至少一種如申請專利範圍第1至10項中任一項之式I化合物及該額外活性成分被同時投與給該患者。
如申請專利範圍第17項之方法，其中該有效量之至少一種如申請專利範圍第1至10項中任一項之式I化合物及該額外活性成分被連續投與給該患者。