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TW201408337A - 長效胰促泌素肽接合物之液體製劑 - Google Patents

長效胰促泌素肽接合物之液體製劑 Download PDF

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Sung-Hee Hong
Dae-Jin Kim
Sung-Min Bae
Se-Chang Kwon
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Abstract

本發明係有關一種長效胰促泌素肽接合物之液體製劑及製備該製劑之方法，該製劑包括：醫藥上有效量之由生理活性肽、胰促泌素肽及免疫球蛋白Fc區組成之長效胰促泌素肽接合物；及不含白蛋白的安定劑，其中該安定劑包括緩衝劑、糖醇、非離子性界面活性劑、及等張劑。為了防止微生物污染可添加保藏劑。本發明之液體製劑係不含人血清白蛋白及其他對身體具潛在危險的因子，無病毒污染風險，因而可對高濃度胰促泌素肽接合物提供優異儲存安定性。

Description

長效胰促泌素肽接合物之液體製劑
本發明係有關於一種長效胰促泌素肽接合物之液體製劑及一種製備該製劑之方法，該製劑包括醫藥上有效量之長效胰促泌素肽接合物，其中生理活性肽係胰促泌素肽鏈接至免疫球蛋白Fc區者；以及不含白蛋白的安定劑；其中該安定劑包括緩衝劑、糖醇、非離子性界面活性劑、及等張劑。
糖尿病係為由多重致病因子所衍生的疾病，一般而言有兩型糖尿病。患有第I型糖尿病或胰島素依賴型糖尿病(IDDM)的病人幾乎不會產生或無法生成胰島素，胰島素乃調整碳水化合物運用的激素。患有第II型糖尿病或非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)的病人與未患有糖尿病之病人顯示相同的或增高的血漿胰島素濃度。但第II型糖尿病病人在主要胰島素敏感組織亦即肌肉、肝臟、及脂肪組織，發展出對胰島素刺激葡萄糖及脂質代謝的抗性。雖然血漿胰島素濃度可能升高，但不足以克服顯著胰島素抗性，因而造成高血糖。持續性的或未經調節的高血糖係與早期罹病率及致死率升高相聯結。經常，糖濃度的異常升高係與疾病中與脂質、脂蛋白、阿朴脂蛋白等的代謝變化及血液動力學變 化有直接及間接關係。舉例言之，第II型糖尿病病人特別有發展成冠心病、中風、周邊血管病、高血壓、腎病變、及神經病變以及巨型血管瘤及微小血管併發症的高風險。
目前用於治療第II型糖尿病的療法包括投予外來胰島素、投予口服藥物、膳食療法、及運動療法。2005年，艾塞那肽(exenatide)(艾塞素(Exendin)-4：拜塔(Byetta ®))由美國食品藥物管理局(FDA)核准用於作為即使服用二甲雙胍(metformin)及/或磺醯脲也無法獲得血糖適當調節之第II型糖尿病病人的補充療法。
艾塞那肽(艾塞素-4)乃強力GLP-1受體促效劑，係在蜥蜴的唾液腺製造。艾塞素-4顯示對胰島素的親和力，抑制食物的攝取及胃排空，及於齧齒類顯示對β細胞的親和力(Parks等人，代謝，50：583-589，2001；Aziz及Anderson，營養學期刊，132：990-995，2002；及Egan等人，臨床內分泌代謝，87：1282-1290，2002)。此外，不似GLP-1，因甘胺酸存在於艾塞素-4N端的位置2，故艾塞素-4非為DPP IV的基質。使用艾塞那肽的缺點是半生期(half-life)(t1/2)短，只有2至4小時，故每日須注射兩次(Kolterman等人，臨床內分泌代謝，88：3082-3089，2003及Fineman等人，糖尿病照護，26：2370-2377，2003)。
胜肽類例如前述艾塞那肽由於安定性低，在體內容易由於蛋白酶而變性或分解因而喪失活性。又，由於艾塞那肽的尺寸相當小，易由腎臟清除。因此，含有胜肽類作為醫藥活性成分的藥物須對病人頻繁投藥以維持目標血清濃度及其效價。通常，胜肽藥物係呈注射劑型且以高頻次投予病人以維持生理活性肽的血清濃度，但造成病人的許多痛苦。
曾經多所嘗試意圖解決此等問題，其中之一者為藉增加胜肽藥物的生物膜通透性以經由口服或經鼻吸入而將胜肽藥物遞送入體內。但使用此種方法將胜肽遞送入體內的效率比起注射法顯著為低。因此，將活體內胜肽藥物之活性維持於要求的水平仍有許多限制。
同時，連續嘗試藉由改良胜肽藥物於血中之安定性及長期維持血中高藥物濃度以使藥物的療效最大化。此等胜肽藥物之長效製劑須促進胜肽藥物安定性的提升，也維持藥物本身夠高的效價而不會誘發病人的免疫反應。
至於穩定化胜肽及防止胜肽被蛋白酶分解的方法，曾經多所嘗試意圖對蛋白酶敏感的特定胺基酸序列加以改性。舉例言之，GLP-1(7-37或7-36醯胺)係藉由減低血中葡萄糖濃度而可有效用於治療第II型糖尿病，其係具有短至4分鐘以下之半生期(Kreymann等人，1987)。半生期短的原因在於GLP-1的8號(Ala)與9號(Asp)胺基酸間因二肽基肽酶IV(DPP IV)使肽鍵裂解而喪失GLP-1的效價。如此，進行許多研究發展對DPP IV具有抗性的GLP-1衍生物，其中，Ala8係由Gly取代(Deacon等人，1998；Burcelin等人，1999)，或由Leu或D-Ala取代(Xiao等人，2001)以提高對DPP IV的抗性，同時維持胜肽活性。又，GLP-1的N端胺基酸His7乃GLP-1活性的重要胺基酸，也是DPP IV之標靶，因此於US 5,545,618中，該N端係由烷基或醯基取代。同理，於Gallwitz等人中，His7係經N-甲基化或經α-甲基化，或整個His係由咪唑取代以提高胜肽對DPP IV的抗性，同時維持生物利用率(Baptist Gallwitz等人，調節胜肽86，103-111，2000)。
除了此等變異體外，艾塞那肽(艾塞素-4，US 5,424,686)其係為自大毒蜥唾液腺純化的GLP-1衍生物，具有對DPP IV的抗性及比GLP-1更高的生物利用率，因而在體內有2至4小時長度的半生期，比GLP-1長許多。但無法僅藉提高胜肽對DPP IV的抗性而獲得活體內夠長的生物利用率時間。舉例言之，目前可獲得的艾塞素-4(艾塞那肽)每日須經注射投予病人兩次，造成病人不當的負擔。
此等胰促泌素肽的限制在於胜肽的大小太小無法在腎臟收集，而容易流失至體外。因此，為了防止胜肽在腎臟的流失，將高度可溶性大分子諸如聚乙二醇(PEG)附接至胜肽表面。
PEG非特異性地結合至標靶肽的特定位置或各種不同位置，及增加胜肽的分子量，可防止胜肽在腎臟的流失及胜肽的水解而不會造成副作用。舉例言之，WO2006/076471揭示藉由將PEG附接至B型利尿鈉肽(BNP)，係藉結合至NPR-A而活化cGMP的生成，及降低動脈間血壓，因而可有效用作為充血性心衰竭的治療劑，可維持BNP的生物利用率。同理，US 6,924,264描述一種藉由將PEG附接至艾塞素-4的離胺酸殘基而延長艾塞素-4的活體內耐久性之方法。但雖然此等方法可藉增加PEG分子量而延長胜肽的活體內耐久性，但隨著PEG分子量的增加，胜肽藥物的效價顯著降低，且PEG與胜肽的反應性也減低，因而降低產率。
至於另一種提高生理活性胜肽的活體內安定性之方法，已經發展出一種製備融合蛋白質之方法，係使胜肽與生理活性胜肽之基因透過基因重組鏈接在一起，並培養以重組基因轉形的細胞。例如，先前報告一種生產艾塞素-4之融合蛋白質，係透 過多肽鏈接基而融合至轉鐵蛋白(Tf)的融合蛋白質(韓國專利申請案第10-2009-7003679號)。至於使用免疫球蛋白之方法，先前也揭示一種GLP-1衍生物之融合蛋白質，於該處GLP-1衍生物係融合至IgG4 Fc(韓國專利申請案第10-2007-7014068號)。
近來，作為可促進活性減低極少而安定性增高的長效蛋白質及胜肽藥物製劑，一種藉組合免疫球蛋白Fc區、非肽基聚合物、及生理活性多肽而生成的接合物係揭示於韓國專利登記案第10-056902號(具有改良活體內耐久性的生理活性多肽接合物)及韓國專利登記案第10-0725315號(使用免疫球蛋白片段之蛋白質複合體及其製備方法)。
透過前述方法，胰促泌素肽可應用作為生理活性胜肽，用於製備長效胰促泌素肽接合物(韓國專利登記案第10-2008-0001479號)。為了製備包含長效胰促泌素肽接合物之藥物，主要需防止物理化學變化，諸如熱誘變性、聚集、吸附、或於儲存及遞送處理期間因光、熱或添加劑中的雜質而造成水解，同時維持活體內功效。更明確言之，長效胰促泌素肽接合物比較胰促泌素肽本身具有較大體積及分子量，因而難以穩定化。
一般而言，蛋白質及胜肽具有短半生期，且當暴露於不適當溫度、水-空氣界面、高壓、物理或機械應力、有機溶劑、及微生物污染時會發生變性諸如，單體聚集、因聚集而沈澱、及吸附至容器表面。已變性蛋白質及胜肽喪失其固有之物理化學性質及生理活性。由於大半情況下的蛋白質變性皆為不可逆，已變性蛋白質及胜肽無法回復其固有性質。又，亦可能蛋白質不穩定，容易受外在因素的影響，諸如溫度、濕度、氧氣、紫外線，而產 生物理或化學變化，包含聚集、聚合或氧化，而喪失活性。
又，已吸附的蛋白質及胜肽當變性時容易聚集，而當已聚集的蛋白質及胜肽導入體內時，可能引發抗體形成。因而必須投予足夠安定的蛋白質及胜肽。就此方面而言，已經發展出多種方法以防止蛋白質及胜肽於溶液中變性(John Geigert，腸道外科學技術期刊，43卷第5期，220-224，1989；David Wong，藥物技術，10月，34-48，1997；Wei Wang，國際藥物期刊，185，129-188，1999；Willem Norde，高等膠體界面科學，25，267-340，1986；Michelle等人，國際藥物期刊，120，179-188，1995)。
為了生產某些蛋白質及胜肽藥物，曾使用凍乾法來解決安定性問題。但此種方法不便之處在於使用前，凍乾產品須再度溶解於注射用水，且需要大規模投資成本，因凍乾法涉及製程故須使用大量凍乾機。另外，也曾運用使用噴乾機的粉化方法。但此種方法的經濟價值低，由於產品產率低，且因蛋白質暴露於高溫而對產品安定性造成負面影響。
至於解決此等限制之替代方案，其它研究試圖添加安定劑至溶液中的蛋白質及胜肽，以防止長時間儲存期間蛋白質藥物的物理化學變化，同時保有其活體內功效。一類型蛋白質亦即人血清白蛋白，已經廣用作為各種蛋白質藥物的安定劑，且已證實其功效(Edward Tarelli等人，生物學(1998)26，331-346)。
人血清白蛋白的純化涉及生物性污染物諸如黴漿菌、普里昂蛋白(prion)、細菌及病毒引起的鈍化(inactivated)，或篩檢或檢視一或多種生物污染物或病原，但即便使用此等方法，該等污染物仍可能無法完全去除或鈍化。如此，當病人被投予人 血清白蛋白時，病人可能暴露於生物污染物或病原體。舉例言之，雖然篩檢過程涉及檢查捐贈者血樣中的某些病毒，但檢查方法並非經常可靠，也無法檢測出小量存在的某些病毒。
由於其化學差異，於儲存期間於不同條件下，不同蛋白質可能以不同速率而逐漸鈍化。換言之，藉安定劑延長儲存期，針對不同蛋白質係不相同。因此，用以改良蛋白質之儲存安定性的安定劑之合宜比例、濃度、及種類係根據標靶蛋白質的物理化學性質而改變。此外，當不同安定劑一起使用時，由於競爭性交互作用及副作用之故，可能誘生與期望者不同的不良效應。又，於儲存期間，儲存的蛋白質性質或其濃度可能改變，因而引發不同效應。
因此將蛋白質穩定於溶液需要耗用大量努力及小心。更明確言之，具有改良活體內耐久性及安定性的長效胰促泌素肽接合物具有胰促泌素肽組合免疫球蛋白Fc區的形式，如此，與常見胰促泌素肽相較，其係具有顯著不同的分子量及體積。因此需要特殊組成物以安定化蛋白質。又，胰促泌素肽與免疫球蛋白Fc區乃物理化學上不同的胜肽或蛋白質，因而須並行地穩定化。但如前文說明，由於其物理化學差異之故，於儲存期間於不同條件下，不同胜肽或蛋白質可能逐漸以不同速率而逐漸鈍化。又，當適用於各胜肽或蛋白質的不同安定劑一起使用時，由於競爭性交互作用及副作用之故，可能誘生與期望者不同的不良效應。因此，作為長效胰促泌素肽接合物，極難找出可同時安定化胰促泌素肽與免疫球蛋白Fc區二者的安定劑組成物。
近來已經發展出可供病人方便且重複使用的蛋白質 及胜肽製劑。但多次使用製劑須含保藏劑以防止在重複投藥後與棄置前的微生物污染。含保藏劑的多次使用製劑比起單次使用製劑有數項優點。舉例言之，單次使用製劑，取決於劑量差異有大量藥物被浪費。但藉使用多次使用製劑，可減少浪費的產品量。此外，多次使用製劑可多次使用，在某一段時間內無需擔憂微生物生長，且因可以單一容器供給，故包裝堆積體積可最小化，而導致經濟效益。
但保藏劑的使用可能影響蛋白質安定性。保藏劑使用中最為眾所周知的問題為沈澱問題。蛋白質沈澱可能減低藥物療效，當投予身體時可能誘發出人意表的免疫反應。因此，選擇保藏劑之類型及適當濃度在防止微生物污染能力的維持，且不影響蛋白質安定性方面具有關鍵重要性。
本發明意圖提出一種穩定的長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其可長時間儲存長效胰促泌素肽接合物而無病毒污染風險，本發明發現藉使用包含緩衝劑、糖醇、非離子性界面活性劑、及等張劑，或額外地包含蛋胺酸之安定劑可提供增進長效胰促泌素肽接合物之安定性的製劑；及當該製劑中進一步包含保藏劑時，該製劑可使用多次，藉此完成具有成本效益且安定的液體製劑。
本發明之一個目的係提出一種長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其包括醫藥上有效量之長效胰促泌素肽接合物， 其中生理活性肽亦即胰促泌素肽係鏈接至免疫球蛋白Fc區；及不含白蛋白的安定劑，其中該安定劑包括緩衝劑、糖醇、非離子性界面活性劑、及等張劑。
本發明之另一個目的係提出一種用於多次投藥的長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，係除了胰促泌素肽接合物及不含白蛋白的安定劑外，進一步包含保藏劑。
本發明之另一個目的係提出一種製備該長效胰促泌素肽接合物之液體製劑的方法。
由於本發明之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑包含緩衝劑、等張劑、糖醇、及非離子性界面活性劑，或額外包含蛋胺酸，但不含人血清白蛋白及對身體的其它潛在危險因子，因而無虞病毒污染之風險。又，可提供包含胰促泌素肽及免疫球蛋白Fc區的長效胰促泌素肽接合物之優異的儲存安定性，因而與野生型蛋白質相較，具有較高分子量及提升的生理活性之活體內耐久性。本發明之此種液體製劑以簡單配方可提供優異儲存安定性，及與其它安定劑及凍乾機相較，可提供更具成本效益的胜肽藥物。若添加保藏劑至該製劑，則該製劑可使用多次。又，本製劑與習知胰促泌素肽製劑相較，可在體內長期保有蛋白質活性，如此可用於作為有效藥物製劑。
第1圖為線圖，顯示於下列各者中之胜肽安定性的RP-HPLC分析：最終擇定的液體製劑於pH 5.2(液體製劑#1)；藉施用長效胰 促泌素肽接合物至市售胰促泌素肽藥物艾塞那肽，亦即艾塞素-4(拜塔)之液體製劑的安定劑組成物所製備的液體製劑(液體製劑#2)；藉施用長效胰促泌素肽接合物至免疫球蛋白融合蛋白質藥物依那西普(TNFR-Fc融合蛋白質，恩伯(ENBREL))之液體製劑的安定劑組成物所製備的液體製劑(液體製劑#3)；及對照組(液體製劑#4)，全部皆係儲存於25±2℃歷時8週。
第2圖為線圖，顯示於下列各者中之已氧化的長效胰促泌素肽接合物比例的RP-HPLC分析：最終擇定的液體製劑於pH 5.2缺蛋胺酸(液體製劑#1)；及最終擇定的液體製劑於pH 5.2含蛋胺酸(液體製劑#2)，其係儲存於25±2℃及40±2℃歷時4週。
第3圖顯示使用肉眼於40℃監測根據表18之長效胰促泌素肽接合物組成物中沈澱的出現，歷時48小時的結果。不存在沈澱之時間係指在儲存該胜肽後未出現蛋白質沈澱的時間。
第4圖顯示使用肉眼於40℃監測根據表19之長效胰促泌素肽接合物組成物中沈澱的出現，歷時7日的結果。不存在沈澱之時間係指在儲存該胜肽後未出現蛋白質沈澱的時間。
就一態樣而言，本發明提出一種長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，包括醫藥上有效量之長效胰促泌素肽接合物，其中，胰促泌素肽係鏈接至免疫球蛋白Fc區；及不含白蛋白的安定劑，其中該安定劑包括緩衝劑、糖醇、非離子性界面活性劑、及等張劑。
此外，本發明提出一種用於多次投藥的長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，除了該胰促泌素肽接合物及不含白蛋白 的安定劑外，該製劑進一步包含保藏劑。
如本文所使用「長效胰促泌素肽接合物」一詞係指一種接合物，其係包含衍生物、變異體、前驅物、及片段的生理活性胰促泌素肽與免疫球蛋白Fc區鏈接者；又進一步指稱與野生型胰促泌素肽相較，具有增高的活體內生理活性耐久性的接合物。
本文所使用「長效」一詞係指生理活性耐久性較野生型增加。「接合物」一詞係指胰促泌素肽係與免疫球蛋白Fc區組合的形式。
本發明使用之胰促泌素肽具有分泌胰島素的功能，其刺激胰島素於胰臟β細胞的合成及表現。胰促泌素肽的類別包含前驅物、促效劑、衍生物、片段、及變異體。較佳地，該胰促泌素肽可為升糖素樣肽-1(GLP-1)、升糖素樣肽-2(GLP-2)、艾塞素-3、艾塞素-4、及咪唑基乙醯基(CA)艾塞素-4，及更佳地咪唑基乙醯基(CA)艾塞素-4。任一種胰促泌素肽無論為天然或重組皆可使用，且較佳地為使用大腸桿菌(E.coli)作為宿主細胞所生成的重組胰促泌素肽。只要不顯著影響其生物活性，則藉由胺基酸的取代、刪除、或插入所生成的任一種衍生物皆可用於本發明。
胰促泌素肽之序列可得自資料庫諸如NCBI基因庫(Gen Bank)，及可具有70%或以上，較佳80%或以上，更佳90%或以上，及又更佳95%或以上，及最佳地98%或以上與野生型蛋白質的序列為同源性者，只要其顯示胰促泌素肽的活性即可。
又，本發明有用的免疫球蛋白Fc可為人免疫球蛋白Fc或其密切相關的類似物或衍生自動物諸如牛、羊、豬、小鼠、兔、倉鼠、大鼠、及天竺鼠的免疫球蛋白Fc。此外，免疫球蛋白 Fc區可衍生自IgG、IgA、IgD、IgE、IgM或其組合或混成體(hybrid)。較佳地，免疫球蛋白Fc係衍生自人體血液中含量最豐富的IgG或IgM，及最佳地，係衍生自IgG，已知IgG可增進配體結合蛋白質的半生期。又，免疫球蛋白Fc區可為具有相同來源(origin)功能域的單鏈免疫球蛋白之二聚體或多聚體。免疫球蛋白Fc可藉使用某種蛋白酶處理天然IgG或藉使用基因重組技術使細胞轉形而生成。較佳地，免疫球蛋白Fc係為在大腸桿菌內製造的重組人免疫球蛋白Fc。
同時，IgG可劃分成IgG1、IgG2、IgG3、及IgG4亞類，及於本發明中可使用其組合或混成體。較佳者為IgG2及IgG4亞類，及最佳為IgG4之Fc區，其甚少具有效應物功能，諸如補體相依性胞毒性(CDC)。換言之，最佳作為本發明之藥物載體的免疫球蛋白Fc區係為人IgG4衍生之配糖基化Fc區。人衍生Fc區係比非人衍生Fc區更佳，後者可能於人體作為抗原，並造成非期望的免疫反應，諸如生成新抗體。
本發明使用的長效胰促泌素肽接合物係藉由將合成胰促泌素肽與免疫球蛋白Fc區組合而製備。組合二者的方法可為透過非肽基聚合物交聯胰促泌素肽與免疫球蛋白Fc區或製備融合蛋白質，其中胰促泌素肽與免疫球蛋白Fc區係藉基因重組而鏈接。
用於交聯的非肽基聚合物可選自下列所成組群：聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇與丙二醇之共聚物、聚氧乙基化多元醇、聚乙烯醇、多醣、葡聚糖、聚乙烯基乙基醚、生物分解性聚合物諸如聚乳酸(PLA)、及聚乳酸-乙醇酸(PLGA)、脂質聚合物、幾丁質、玻尿酸或其組合。較佳地可使用聚乙二醇但非限制性。 本項技藝領域周知的其等衍生物及可方便使用本項技藝領域已知方法製備的衍生物也落入於本發明之範圍內。
為了製備本發明使用之長效胰促泌素肽接合物，可參考韓國專利登記案第10-0725315號、韓國專利公開案第10-2009-0008151號及韓國專利登記案第10-1058290號。熟諳本項技藝人士藉由參考此等參考文獻將可製備本發明之長效胰促泌素肽接合物。
本發明之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑包含治療有效量之長效胰促泌素肽接合物。一般而言，治療有效量之胰促泌素肽，尤其是艾塞素-4(拜塔)係指於筆型注射器內250微克(mcg)。本發明使用的長效胰促泌素肽接合物之濃度可於0.1毫克/毫升至200毫克/毫升之範圍，及較佳地為0.5毫克/毫升至150毫克/毫升。胰促泌素肽較佳為長效CA艾塞素-4接合物。本發明之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑可穩定地儲存接合物而不會沈澱，且不僅包括胰促泌素肽接合物以低濃度存在之情況，同時也包括以高濃度存在之情況。因此，本製劑可穩定地提供高濃度胰促泌素肽進入體內。
本文中使用「安定劑」一詞係指可穩定地儲存長效胰促泌素肽接合物的物質。「安定化」一詞係指在某一期間且在特定儲存條件下，活性成分的喪失係低於某個量，典型地係低於10%的狀態。儲存於5±3℃兩年、於25±2℃六個月，或於40±2℃ 1至2週後，當其中長效胰促泌素肽接合物的殘餘純度為90%或以上，及更佳地92%至95%，該製備即被視為穩定之製劑。至於蛋白質例如長效胰促泌素肽接合物，其儲存安定性針對提供準確劑量以 及抑制對長效胰促泌素肽接合物的抗原性物質的潛在生成相當重要。儲存期間10%長效胰促泌素肽接合物的損失為實際投藥可接受者，除非其在組成物中形成聚集體或片段，結果導致抗原性化合物的形成。
本發明之安定劑較佳地包含緩衝劑、糖醇、等張劑諸如氯化鈉、及非離子性界面活性劑，及更佳地額外包含蛋胺酸以穩定長效胰促泌素肽接合物。
緩衝劑的功用係維持溶液之pH以防止液體製劑的急遽pH變化，用以穩定化長效胰促泌素肽接合物。緩衝劑可包括鹼鹽(磷酸鈉或磷酸鉀或其氫鹽或二氫鹽)、檸檬酸鈉/檸檬酸、乙酸鈉/乙酸、組胺酸/鹽酸組胺酸、本項技藝領域已知之任何其它醫藥上可接受之pH緩衝劑及其組合。此等緩衝劑之較佳實例包括檸檬酸鹽緩衝劑、乙酸鹽緩衝劑、及組胺酸緩衝劑。緩衝劑濃度較佳為5mM至100mM，更佳為10mM至50mM。緩衝劑之pH較佳為4.0至7.0，更佳為5.0至7.0，甚至更佳為5.2至7.0，及又更佳為5.2至6.0。
糖醇的作用係提高長效胰促泌素肽接合物的安定性。以溶液總體積為基準，用在本發明之糖醇濃度較佳為1%至20%(w/v)，更佳地以溶液總體積基準計，為3%至10%(w/v)。糖醇可為選自甘露糖醇、山梨糖醇、及蔗糖所成組群中之一或多者，但非限制性。
等張劑之作用係當將於溶液中的長效胰促泌素肽接合物投予體內時，維持適當滲透壓，也係用以穩定化溶液中的長效胰促泌素肽接合物。製劑的滲透壓係調整成與血液等張。此等 等張性液體製劑通常具有約300mOsm/kg的滲透壓。等張劑之代表例包括糖醇、水溶性無機鹽、及胺基酸，及其較佳實例為水溶性無機鹽亦即氯化鈉。氯化鈉作為等張劑的濃度較佳為0至150mM，且可取決於含括於製劑中的成分的類別及用量加以調整，使得含全部混合物的液體製劑變成等張性。
非離子性界面活性劑減低蛋白質溶液的表面張力以防止蛋白質吸收或聚集至疏水性表面。本發明有用的非離子性界面活性劑包括聚山梨酸酯、波洛聚體(poloxamer)及其組合，以聚山梨酸酯為佳。聚山梨酸酯的非離子性界面活性劑包括聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯40、聚山梨酸酯60、及聚山梨酸酯80。最佳非離子性界面活性劑係為聚山梨酸酯20。
不適合於液體製劑中使用高濃度非離子性界面活性劑，原因在於實際上高濃度非離子性界面活性劑在透過諸如UV-光譜或等電聚焦等分析方法測量蛋白質濃度及決定蛋白質安定性時會引發干擾效應，因而造成準確地檢驗蛋白質安定性的困難。因此，本發明之液體製劑較佳地包含不超過0.2%(w/v)，更佳地0.001%(w/v)至0.05%(w/v)低濃度的非離子性界面活性劑。
依據本發明之一個實例，證實當於緩衝劑、糖醇、及非離子性界面活性劑的存在下添加氯化鈉作為等張劑時，長效胰促泌素肽接合物於低濃度的儲存安定性顯著增高。此係指出使用緩衝劑、糖醇、及非離子性界面活性劑且同時使用氯化鈉作為等張劑會引發協同增效效果，藉此使長效胰促泌素肽接合物具有高安定性。至於高濃度之長效胰促泌素肽接合物，則當排除氯化鈉時，會防止沈澱的出現及改良蛋白質之溶解度。此等結果提示 當氯化鈉用於作為等張劑時，其含量可根據長效胰促泌素肽接合物之濃度進行調整。
此外，證實低濃度長效胰促泌素肽接合物於pH5.2之緩衝劑中最穩定，而高濃度長效胰促泌素肽接合物則於pH5.4或5.6之緩衝劑中最穩定。如此判定緩衝劑的pH可根據接合物之濃度而予適當調整。
包含於本發明之安定劑中的蛋胺酸可抑制由於溶液中之蛋白質氧化而生成的雜質，藉此更進一步穩定化標靶蛋白質。以溶液總體積為基準，蛋胺酸濃度為0.005%至0.1%(w/v)，較佳地0.01%至0.1%(w/v)。
較佳地本發明之安定劑不含白蛋白。由於可用作為蛋白質安定劑的人血清白蛋白係從人血清獲得，經常性地可能污染有人類來源的病原性病毒。明膠或牛血清白蛋白可能對有些病人引發疾病，或可能誘發過敏反應。由於不含異種蛋白質諸如人或動物來源的血清白蛋白或純化的明膠，本發明之安定劑不可能引發病毒性污染。
此外，本發明之安定劑可進一步包含糖類、多元醇類、或胺基酸類。可進一步添加以提高長效胰促泌素肽接合物的儲存安定性之糖類，其實例包括單醣類諸如甘露糖、葡萄糖、岩藻糖、及木糖；及多醣類諸如乳糖、麥芽糖、蔗糖、鼠李糖、及葡聚糖。多元醇之較佳實例包括丙二醇、低分子量聚乙二醇、甘油、低分子量聚丙二醇、及其組合。
除了前述接合物、緩衝劑、等張劑、糖醇、及非離子性界面活性劑或額外的蛋胺酸外，本發明之液體製劑可進一步 包含保藏劑用以防止多次使用製劑的微生物污染。
本文中使用「保藏劑」一詞係指一種化合物添加至醫藥製劑用作為抗微生物劑。保藏劑之實例包括苄索銨(benzethonium)、氯己啶(chlorohexidine)、酚(phenol)、間甲酚、苯甲醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、氯丁醇、鄰-甲酚、對-甲酚、氯甲酚、氯化苄烷銨(benzalconium chloride)、硝酸苯基汞、乙汞硫柳酸鈉(thimerosal)、及苯甲酸但非限制性。單一類型保藏劑可個別地使用，或可使用二或更多類的隨機組合。較佳地，本發明之液體製劑可包含間甲酚、酚、及苯甲醇中之一或多者作為保藏劑。
本發明之液體製劑可包含0.001%至1%(w/v)保藏劑，及較佳地，0.001%至0.5%(w/v)保藏劑，及更佳地0.001%至0.25%(w/v)保藏劑。
於本發明之一個實例中，添加0.22%(w/v)間甲酚作為本發明之液體製劑中的保藏劑，及評估甲酚對胰促泌素肽接合物的安定性的影響。結果證實接合物在添加保藏劑的製劑中維持穩定不會沈澱。因此本發明之胰促泌素肽接合物之液體製劑除了安定劑外可包含保藏劑，用於多次投藥。
除了前述緩衝劑、等張劑、糖醇、及非離子性界面活性劑，或額外的蛋胺酸及保藏劑之外，本發明之液體製劑可選擇性地進一步包含本項技藝領域已知的其它物質及材料，只要不影響本發明之效果即可。
依據本發明之不含白蛋白的長效胰促泌素肽接合物液體製劑可賦與長效胰促泌素肽接合物安定性而無病毒污染風 險，同時以簡單配方提供優異的儲存安定性，因此本製劑比起其它安定劑或凍乾製劑提供更高成本效益。
又因本發明之液體製劑包含長效胰促泌素肽接合物，其比較野生型具有提升之生理活性耐久性，比起習知胰促泌素肽製劑，其藉在體內保有蛋白質活性歷經更長時間而可用作為有效藥物製劑。又，本液體製劑可提供儲存於高濃度及於低濃度的長效胰促泌素肽接合物的優異安定性。
至於另一面向，本發明提出一種本發明之液體製劑的製法。
經由生成長效胰促泌素肽接合物，並將所生成的長效胰促泌素肽接合物與包含緩衝劑、糖醇、非離子性界面活性劑、及等張劑的安定劑加以混合，可製備安定的長效胰促泌素肽接合物之液體製劑。又，為了供多次使用，除了該等安定劑外，藉進一步混合保藏劑，可製成安定的長效胰促泌素肽接合物之液體製劑。
後文中將參照實施例以進一步詳細描述本發明。但此等實施例僅用於舉例說明目的，本發明並非意圖受此等實施例所限。
實施例1：於有或無等張劑諸如鹽存在下，進行長效胰促泌素肽接合物安定性之評估。
長效胰促泌素肽接合物(15.41微克/毫升CA艾塞素-4，標稱濃度)之安定性係於包含緩衝劑、糖醇、及非離子性界面活性劑作為安定劑之製劑中；及於包含緩衝劑、糖醇、非離子性界面活性劑、及蛋胺酸作為安定劑之製劑中，於有或無氯化鈉作為等張劑之存在下進行評估。為了達成此項目的，長效胰促泌素 肽接合物係於如下表1之組成中，於25℃及40℃儲存0至4週，然後藉反相高效液相層析(RP-HPLC)及尺寸排阻高效液相層析(SE-HPLC)分析接合物之安定性。使用檸檬酸鹽緩衝劑作為緩衝劑，使用甘露糖醇作為糖醇，及使用聚山梨酸酯20作為非離子性界面活性劑。於表2及3中，RP-HPLC(%)及SE-HPLC(%)表示「面積%/起始面積%」之值，顯示相對於初始純度，長效胰促泌素肽接合物之殘餘純度。表2顯示長效胰促泌素肽接合物於25℃儲存後之殘餘純度，及表3顯示長效胰促泌素肽接合物於40℃儲存後之殘餘純度。
基於表2及表3中試驗組#1與#2及#3與#4間之比較，顯然當長效胰促泌素肽接合物之液體配方於25℃及40℃，特別於40℃儲存4週時，於NaCl特別於150mM NaCl等張劑存在下，長效胰促泌素肽接合物安定性之維持顯著較高(表2及3)。
實施例2：以各不同pH之緩衝劑評估長效胰促泌素肽接合物之安定性
雖然通常液化蛋白質藥的pH範圍係為5至7，但艾塞素-4(拜塔)胰促泌素肽藥之pH為4.5，其係低於一般pH範圍。因此於本實施例中，檢視對包含胰促泌素肽及免疫球蛋白Fc蛋白質之接合物，較佳為長效咪唑基乙醯基(CA)艾塞素-4接合物，緩衝劑pH對接合物安定性之影響。
使用檸檬酸緩衝劑作為緩衝劑，甘露糖醇作為糖醇，氯化鈉作為等張劑，及聚山梨酸酯80作為非離子性界面活性劑。下表4所顯示之組成係使用作為長效胰促泌素肽接合物之安定劑。然後長效胰促泌素肽接合物之組成物於25±2℃儲存4週，藉尺寸排阻層析術(SE-HPLC)及逆相層析(RP-HPLC)分析其安定性。表5中之RP-HPLC(%)及SE-HPLC(%)表示「面積%/起始面積%」，證實相對於初始純度，長效胰促泌素肽接合物之殘餘純度。
如上所示，當於前述液體製劑中之pH為5.2時，長效胰促泌素肽接合物為最安定(表5)。
實施例3：評估非離子性界面活性劑之類別及濃度對長效胰促泌素肽接合物安定性之影響
長效胰促泌素肽接合物之安定性係使用不同類別及濃度之聚山梨酸酯檢視，聚山梨酸酯為本發明安定劑中之非離子性界面活性劑。
非離子性界面活性劑亦即聚山梨酸酯80及聚山梨酸酯20係於0.005%及0.01%兩種濃度檢驗。安定劑之組成包含緩衝劑、糖醇、及等張劑以及界面活性劑，如前述實施例使用來對長效胰促泌素肽接合物提供安定性者。使用於實施例2顯示高安定性之pH 5.2之檸檬酸鹽緩衝劑作為緩衝劑，甘露糖醇作為糖 醇，及氯化鈉作為等張劑。
下表6顯示之組成係用作為長效胰促泌素肽接合物之安定劑，較佳用於長效CA艾塞素-4接合物。然後組成物於25±2℃儲存8週及藉RP-HPLC及SE-HPLC分析其安定性。表7中之RP-HPLC(%)及SE-HPLC(%)表示相對於初始純度，長效胰促泌素肽接合物之殘餘純度。
如上述，根據SE-HPLC分析結果，甚至當使用不同類別及濃度之聚山梨酸酯時，長效胰促泌素肽接合物之安定性亦幾乎相等。但根據RP-HPLC分析結果，觀察到當使用聚山梨酸酯 20時，肽接合物之安定性係類似於或高於使用相等濃度之聚山梨酸酯80者。又，與包含0.01%聚山梨酸酯20之液體製劑相較，於包含0.005%聚山梨酸酯20之液體製劑中，長效胰促泌素肽接合物之安定性較高(表7)。
實施例4：最終選用的長效胰促泌素肽接合物之液體製劑與市售包含該接合物之肽或蛋白質藥的液體製劑間之安定性比較。
於本實施例中，評估經實施例1至3之安定性試驗選用的製劑之安定性。最終選用的長效胰促泌素肽接合物製劑包含pH 5.2之檸檬酸鹽緩衝劑，氯化鈉、甘露糖醇、及聚山梨酸酯20。為了用於此項目的，比較藉施用長效胰促泌素肽接合物至市售胰促泌素肽藥，艾塞素-4(拜塔)的液體製劑所得的液體製劑；與免疫球蛋白融合蛋白質藥，伊塔納賽(Etanercept)(TNFR-Fc融合蛋白質，恩伯(ENBREL))液體製劑間之藥物製劑安定性。
使用表8顯示之如下組成，製備下述製劑：長效胰促泌素肽接合物，更佳為長效CA艾塞素-4接合物之液體製劑(液體製劑#1)；藉施用長效胰促泌素肽接合物至胰促泌素肽藥液體製劑艾塞素-4(拜塔)之安定劑組成物所製備的液體製劑(液體製劑#2)；及藉施用長效胰促泌素肽接合物至免疫球蛋白融合蛋白藥伊塔納賽(TNFR-Fc融合蛋白質，安伯瑞)液體製劑之安定劑組成物所製備之液體製劑(液體製劑#3)。對照組係藉將長效胰促泌素肽接合物施用至只含PBS的安定劑組成物所製備之液體製劑(液體製劑#4)。隨後，製劑於25±2℃儲存8週，藉RP-HPLC及SE-HPLC分析安定性。表9中RP-HPLC(%)及SE-HPLC(%)顯示相對於初始純度，長效胰促泌素肽接合物之殘餘純度。
至於安定性試驗結果，觀察得如第1圖及表9所示，本發明之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑較藉施用長效胰促泌素肽接合物至市售胰促泌素肽藥艾塞素-4(拜塔)之液體製劑及免疫融合蛋白質藥伊塔納賽(TNFR-Fc融合蛋白質，恩伯)所製備的液體製劑顯示更高安定性。
實施例5：評估添加蛋胺酸對長效胰促泌素肽接合物之安定性之影響
為了決定蛋胺酸對接合物之安定性的影響，藉添加預防氧化用的蛋胺酸至包含pH 5.2之檸檬酸鹽緩衝劑、氯化鈉、甘露糖醇、及聚山梨酸酯20之組成物(其係選用於前述實施例)製備液體製劑。製劑於25±2℃儲存4週及於40±2℃儲存4週，然後分析其安定性。
長效胰促泌素肽接合物，特別是長效CA艾塞素-4接合物之液體製劑係以表10顯示之如下組成製備，且分析其安定性。表11至表14的RP-HPLC(%)及SE-HPLC(%)表示於各個時間點長效胰促泌素肽接合物與雜質的比例。表11顯示藉RP-HPLC(25±2℃)之加速安定性試驗結果，及表12顯示藉SE-HPLC(25±2℃)之加速安定性試驗結果。表13顯示藉RP-HPLC(40±2℃)之不安定性嚴重度試驗結果及表14顯示藉SE-HPLC(40±2℃)之不安定性嚴重度試驗結果。雜質#3表示長效胰促泌素肽接合物之氧化形。但因SE-HPLC係藉分子量分離試樣，而氧化形與非氧化形間之分子量差異小，幾乎無法透過SE-HPLC分離長效胰促泌素肽接合物之氧化形。
至於加速安定性試驗及不安定性嚴重度試驗結果即如第2圖所示，觀察得於不含蛋胺酸之液體製劑中經氧化之長效 胰促泌素肽接合物(RP-HPLC分析中的雜質#3)的比例增高，但於包含0.01%蛋胺酸之液體製劑則未增高(第2圖)。因此證實含蛋胺酸之液體製劑可更有效地對長效胰促泌素肽接合物提供安定性。
實施例6：最終選用的長效胰促泌素肽接合物之液體製劑的長期儲存安定性之評估
於本實施例中，由前述實施例最終選用的液體製劑評估其長期儲存安定性及加速安定性。最終選用的液體製劑包含pH 5.2之檸檬酸鹽緩衝劑、氯化鈉、甘露糖醇、聚山梨酸酯20、及蛋胺酸。為此項目的，製劑係於5±3℃儲存6個月及於25±2℃儲存6個月及分析其安定性。結果顯示於表15及16，RP-HPLC(%)、SE-HPLC(%)、蛋白質含量(%)、及比活性試驗(%)表示相對於初始純度，接合物之殘餘純度。表15顯示於5±3℃儲存後受試製劑之長期儲存安定性之結果，及表16顯示於25±2℃儲存後的加速安定性試驗之結果。
至於長期儲存安定性試驗結果，於本發明之液體製劑中長效胰促泌素肽接合物可維持安定超過6個月。又，即便於加速條件下儲存6個月，RP-HPLC分析結果顯示95.4%或以上之肽接合物於製劑中維持完好，因而證實本液體製劑賦與長效胰促泌素肽接合物優異之儲存安定性。
實施例7：評估蛋白質濃度對長效胰促泌素肽接合物安定性之影響
檢視包含pH 5.2之檸檬酸鹽緩衝劑、氯化鈉、甘露糖醇、聚山梨酸酯20及用以預防氧化之蛋胺酸的最終選用液體製劑對高接合物濃度之影響。為此項目的，使用肉眼監視於40℃及於表17顯示的各個接合物濃度製劑中之沈澱。監視72小時後，於高濃度(4毫克/毫升或以上)之本製劑全部皆出現沈澱。又隨著濃度增加，沈澱的出現也增加。
實施例8：評估鹽及糖醇之濃度及蛋胺酸存在對高濃度長效胰促泌素肽接合物安定性之影響
氯化鈉及作為糖醇之甘露糖醇對預防沈澱的效果係針對最終選用的高濃度長效胰促泌素肽接合物液體製劑進行檢驗。以下表18顯示之組成製備製劑及使用肉眼於40℃監視沈澱的出現經歷48小時。第3圖顯示之不存在沈澱的時間係證實儲存後未出現蛋白質沈澱的時間。
如上結果顯示，根據肉眼的觀察，證實氯化鈉濃度 不會顯著影響沈澱的出現及胰促泌素肽接合物於高濃度之安定性。但當作為糖醇之甘露糖醇濃度從5%增至10%時，沈澱可被顯著抑制(第3圖)。又當蛋胺酸未添加至製劑時，也可抑制沈澱。
實施例9：評估鹽的存在及各pH對長效胰促泌素肽接合物於高濃度安定性之影響
具有如藉實施例8選用的10%甘露糖醇，檢驗pH對高濃度長效胰促泌素肽接合物之沈澱的抑制及安定性的加強效果。使用檸檬酸鹽緩衝劑作為緩衝劑，及聚山梨酸酯20作為非離子性界面活性劑。雖依據實施例8，藉從製劑中排除蛋胺酸可抑制沈澱。但為了防止蛋白質氧化目的仍然添加蛋胺酸至製劑。此外，為了證實NaCl與pH之協同性效果，於製劑中添加150mM NaCl或排除。以下表19顯示之組成製備高濃度長效胰促泌素肽接合物及監視於40℃沈澱的出現經歷7日。儲存7日後，藉RP-HPLC及SE-HPLC分析試樣。
第4圖顯示不存在沈澱的時間係指儲存後未出現蛋白質沈澱的時間。表20之RP-HPLC(%)及表21之SE-HPLC(%)係指出相對於初始純度，長效胰促泌素肽接合物之殘餘純度。
如上所示，於pH 5.4及5.6之高pH，相較於pH 5.2可更優異地抑制沈澱。儲存7日後，全部製劑皆觀察到沈澱。但 於包含10%甘露糖醇及150mM NaCl於pH 5.6之組成物(組成物號碼6)，所產生的雜質量最小。於pH 5.4及5.6，NaCl的存在不會對高濃度長效胰促泌素肽接合物之安定性具有顯著影響，但沈澱除外(表20及21及第4圖)。
實施例10：評估糖醇濃度及各pH對高濃度長效胰促泌素肽接合物安定性之影響
基於前述實施例，檢驗糖醇濃度及pH對高濃度長效胰促泌素肽接合物之安定性的影響。使用檸檬酸鹽緩衝劑作為緩衝劑，聚山梨酸酯20作為非離子性界面活性劑。又，添加蛋胺酸至製劑用於防止氧化。此外，根據於實施例9觀察的結果，於高濃度長效胰促泌素肽接合物製劑中排除NaCl。高濃度長效胰促泌素肽接合物係以表22顯示的下列組成物配方，於40℃儲存5日，移至25℃溫度又儲存4週。每週藉SE-HPLC、IE-HPLC、及RP-HPLC分析蛋白質之安定性。表23之SE-HPLC(%)、表24之IE-HPLC(%)、及表25之RP-HPLC(%)表示長效胰促泌素肽接合物之殘餘純度。
如上所示，相較於pH為高時，當pH為低時安定性也減低。接合物之安定性於10%甘露糖醇為最高，2%及5%甘露糖醇不影響高濃度長效胰促泌素肽接合物之安定性。
實施例11：評估糖醇類別及濃度對高濃度長效胰促泌素肽接合物安定性之影響
為了發展等張性液體製劑，於前述實施例之相同條件下檢查影響製劑的滲透壓最顯著的糖醇類別及濃度對胰促泌素肽接合物之安定性的影響。糖醇類別改成蔗糖。根據實施例10之製劑1號，10%甘露糖醇以5%及7%蔗糖置換(表26)。製劑於25℃儲存4週，每週藉SE-HPLC、IE-HPLC、及RP-HPLC分析其安定性。表27之SE-HPLC(%)、表28之IE-HPLC(%)、及表29之RP-HPLC(%)表示長效胰促泌素肽接合物之殘餘純度。
如上顯示，當使用蔗糖替代甘露糖醇時，可維持接合物之安定性，接合物之安定性於7%蔗糖時較5%蔗糖略增，但無顯著差異。
實施例12：評估緩衝劑類別、滲透壓之調整及保藏劑之添加對高濃度長效胰促泌素肽接合物安定性之影響
為了發展等張性液體製劑，調整對滲透壓有最大影響的糖醇濃度及試驗不同類別的緩衝劑，以提供於前述實施例條件下之接合物安定性。又，於相同條件下，添加0.22%間甲酚作為保藏劑，也試驗其對接合物安定性的影響。長效胰促泌素肽接合物係以表30顯示的下列組成配方及於25℃儲存2週。然後每週藉SE-HPLC、IE-HPLC、及RP-HPLC分析試樣之安定性。表31之SE-HPLC(%)、表32之IE-HPLC(%)、及表33之RP-HPLC(%)表示長效胰促泌素肽接合物之殘餘純度。
如上所示，當使用不同類別緩衝劑時，各個製劑之肽接合物安定。又，添加間甲酚不影響肽的安定性。
此等結果證實本發明之液體製劑的組成可維持胰促泌素肽接合物於高濃度的高安定性。
根據前文說明，熟諳本項技藝之人士顯然易知在不悖離本發明之範圍及精髓可做出之各種修改及變化。因此須瞭解前述實施例並非限制性反而於全部面向皆為說明性。本發明之範圍係由隨附申請專利範圍界定而非由前文詳細說明部分定義，因此落入於申請專利範圍之範疇及界限內的全部變化及修正或此等範圍及界限的相當範圍意圖皆涵蓋於申請專利範圍之範圍內。

Claims (30)

  1. 一種長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其係包括醫藥上有效量之長效胰促泌素肽接合物及不含白蛋白的安定劑，該接合物係屬於生理活性肽的胰促泌素肽鏈接至免疫球蛋白Fc區；其中該安定劑係包括緩衝劑、糖醇、非離子性界面活性劑、及等張劑。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，該胰促泌素肽係選自下列所成組群：升糖素樣肽-1(GLP-1)、升糖素樣肽-2(GLP-2)、艾塞素(exendin)-3、艾塞素-4、前驅物、促效劑、衍生物、片段、及其變異體、及其組合。
  3. 如申請專利範圍第2項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，該胰促泌素肽變異體係為咪唑基-乙醯基艾塞素-4。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，該免疫球蛋白Fc區係為衍生自IgG、IgA、IgD、IgE、或IgM的Fc區。
  5. 如申請專利範圍第4項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，該免疫球蛋白Fc區係由選自IgG、IgA、IgD、IgE、及IgM所成組群之免疫球蛋白衍生而得的不同來源的功能域之混成體。
  6. 如申請專利範圍第4項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，該免疫球蛋白Fc區係包含由相同來源的功能域所組成的單鏈免疫球蛋白的二聚體或多聚體。
  7. 如申請專利範圍第4項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體 製劑，其中，該免疫球蛋白Fc區係為IgG4 Fc區。
  8. 如申請專利範圍第7項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，該免疫球蛋白Fc區係為人配糖基化IgG4 Fc區。
  9. 如申請專利範圍第1項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，該接合物係藉由使用非肽基聚合物或重組技術所生成。
  10. 如申請專利範圍第9項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，該非肽基聚合物係為聚乙二醇。
  11. 如申請專利範圍第10項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，該非肽基聚合物係選自下列所成組群：可生物分解聚合物諸如聚丙二醇、乙二醇與丙二醇之共聚物、聚氧乙基化多元醇、聚乙烯醇、多醣、葡聚糖、聚乙烯基乙基醚、聚乳酸(PLA)、及聚乳酸-乙醇酸(PLGA)；脂質聚合物；幾丁質；玻尿酸；及其組合。
  12. 如申請專利範圍第1項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，醫藥上有效量之長效胰促泌素肽接合物係具有0.5毫克/毫升至150毫克/毫升之濃度。
  13. 如申請專利範圍第1項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，該糖醇係為選自甘露糖醇、山梨糖醇、及蔗糖所成組群中之一或多者。
  14. 如申請專利範圍第13項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，以溶液總體積為基準，該糖醇之濃度係為3%(w/v)至15%(w/v)。
  15. 如申請專利範圍第1項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體 製劑，其中，該緩衝劑係為檸檬酸鹽緩衝劑、乙酸鹽緩衝劑、或組胺酸緩衝劑。
  16. 如申請專利範圍第1項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，該緩衝劑之pH範圍係為4至7。
  17. 如申請專利範圍第16項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，該緩衝劑之pH範圍係為5至7。
  18. 如申請專利範圍第1項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，該等張劑係為具有0mM至200mM濃度之氯化鈉。
  19. 如申請專利範圍第1項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，該非離子性界面活性劑係為聚山梨酸酯(polysorbate)80或聚山梨酸酯20。
  20. 如申請專利範圍第19項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，該非離子性界面活性劑係具有0.001%(w/v)至0.05%(w/v)之濃度。
  21. 如申請專利範圍第1項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，該安定劑係進一步包括蛋胺酸。
  22. 如申請專利範圍第21項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，以溶液總體積為基準，該蛋胺酸之濃度係為0.005%(w/v)至0.1%(w/v)。
  23. 如申請專利範圍第1項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，該安定劑係進一步包括選自糖類、多元醇類、及胺基酸類所成組群中之一或多種物質。
  24. 一種長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其係包括一長效胰促 泌素肽接合物及不含白蛋白的安定劑，其中胰促泌素肽及免疫球蛋白Fc區係藉聚乙二醇鏈接；該安定劑係包括檸檬酸鹽緩衝劑、甘露糖醇、聚山梨酸酯20、及氯化鈉。
  25. 如申請專利範圍第1項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其係進一步包括選自間甲酚、苯酚、及苯甲醇所成組群中之一或多種保藏劑。
  26. 如申請專利範圍第25項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，以溶液總體積為基準，該保藏劑之濃度係為0.001%至1%(w/v)。
  27. 如申請專利範圍第25項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其中，該保藏劑係為間甲酚。
  28. 如申請專利範圍第25項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑，其係供多次使用。
  29. 一種製備如申請專利範圍第1至24項中任一項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑之方法，該方法係包含(a)製備長效胰促泌素肽接合物；及(b)將步驟(a)製備的長效胰促泌素肽接合物與安定劑加以混合，該安定劑係包括緩衝劑、糖醇、非離子性界面活性劑、作為等張劑之氯化鈉、及蛋胺酸。
  30. 一種製備如申請專利範圍第27至30項中任一項所述之長效胰促泌素肽接合物之液體製劑之方法，該方法係包含(a)製備長效胰促泌素肽接合物；及(b)將步驟(a)製備的長效胰促泌素肽接合物與安定劑加以混合，該安定劑係包括緩衝劑、糖醇、非離子性界面活性劑、作為等張劑之氯化鈉、及蛋胺酸，及保藏劑。
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