[go: up one dir, main page]

TW201341387A - 芳基醚結構之激酶抑制劑 - Google Patents

芳基醚結構之激酶抑制劑 Download PDF

Info

Publication number
TW201341387A
TW201341387A TW102108352A TW102108352A TW201341387A TW 201341387 A TW201341387 A TW 201341387A TW 102108352 A TW102108352 A TW 102108352A TW 102108352 A TW102108352 A TW 102108352A TW 201341387 A TW201341387 A TW 201341387A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
pyridin
mmol
amine
group
methyl
Prior art date
Application number
TW102108352A
Other languages
English (en)
Inventor
菲佛卡南達Ｍ 福魯赫拉
潘森梁
羅庫瑪 雷賈曼恩
約翰Ｅ 馬可
瓊安Ｊ 布朗森
卡洛琳 戴安 德茲爾巴
瑟斯希爾 傑森安德 那拉
瑪希斯瓦倫 希法沙賓 卡拉索魯胡
Original Assignee
必治妥美雅史谷比公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 必治妥美雅史谷比公司 filed Critical 必治妥美雅史谷比公司
Publication of TW201341387A publication Critical patent/TW201341387A/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A61P29/02—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID] without antiinflammatory effect
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems
    • C07D491/044—Ortho-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring
    • C07D491/052—Ortho-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring the oxygen-containing ring being six-membered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D491/20—Spiro-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/99—Enzyme inactivation by chemical treatment

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

本發明大體上係關於可抑制AAK1(轉接子結合激酶1)之化合物、包含該等化合物之組合物及抑制AAK1之方法。

Description

芳基醚結構之激酶抑制劑 相關申請案之交叉參考
本申請案主張2012年3月9日申請之美國臨時申請案第61/608,737號之權益。
本發明大體上係關於可抑制轉接子結合激酶1(AAK1)之化合物、包含該等化合物之組合物及抑制AAK1之方法。
轉接子結合激酶1(AAK1)為絲胺酸/蘇胺酸激酶之Ark1/Prk1家族之成員。AAK1 mRNA以兩種拼接形式(稱為短形式及長形式)存在。長形式為主要形式且高度表現於腦及心臟中(Henderson及Conner,Mol.Biol.Cell.2007,18,2698-2706)。AAK1富含於突觸體標本中且與所培養細胞中之內飲結構共定位。AAK1調節網格蛋白包覆之內飲作用，其為突觸小泡再循環及受體介導之內飲作用中的一個重要過程。AAK1與AP2複合物有關，該複合物為將運貨受體(receptor cargo)連接於網格蛋白包覆物之雜四聚體。網格蛋白結合於AAK1可刺激AAK1激酶活性(Conner等人，Traffic 2003,4,885-890；Jackson等人，J.Cell.Biol.2003,163,231-236)。AAK1磷酸化AP-2之mu-2次單元，此促進mu-2結合於運貨受體上含有分選基元之酪胺酸(Ricotta等人，J.Cell Bio.2002,156,791-795；Conner及Schmid,J.Cell Bio.2002,156,921-929)。受體吸收並不需要Mu2磷酸化，但磷酸化可提高內化之效率(Motely等人，Mol.Biol.Cell.2006,17,5298-5308)。
AAK1已鑑別為PC12細胞中進行信號傳導之神經調節蛋白 (Neuregulin)-1/ErbB4的抑制劑。經由RNA干擾介導之基因沉默或用激酶抑制劑K252a(此抑制AAK1激酶活性)處理使AAK1表現缺失會使得神經調節蛋白-1誘導之神經突生長增強。此等處理使質膜中或質膜附近ErbB4之表現及ErbB4之積累增加(Kuai等人，Chemistry and Biology 2011,18,891-906)。NRG1及ErbB4為推定的精神分裂症敏感基因(Buonanno,Brain Res.Bull.2010,83,122-131)。兩種基因中之SNP與多種精神分裂症內表現型有關(Greenwood等人，Am.J.Psychiatry 2011,168,930-946)。神經調節蛋白1及ErbB4基因剔除小鼠模型已顯示精神分裂症相關形態變化及行為表型(Jaaro-Peled等人，Schizophrenia Bulletin 2010,36,301-313；Wen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.2010,107,1211-1216)。另外，AAK1基因之內含子中的單核苷酸多形現象與帕金森氏病(Parkinson's disease)之發作年齡有關(Latourelle等人，BMC Med.Genet.2009,10,98)。此等結果表明抑制AAK1活性在治療精神分裂症、精神分裂症中之認知缺陷、帕金森氏病、神經痛、躁郁症及阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)中可具有效用。
在第一態樣中，本發明提供式(I)化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中：R1及R2獨立地選自氫、C3-C6環烷基及C1-C3烷基，其中該C1-C3烷 基視情況經一個、兩個或三個獨立地選自C1-C3烷氧基、C1-C3烷基胺基、胺基、氰基、C1-C3二烷基胺基、鹵基及羥基之基團取代；或R1及R2一起為側氧基；或R1及R2與其所連接之碳原子一起形成氧雜環丁烷環；R3為C1-C3烷基-Y或C2-C8烷基，其中該C2-C8烷基視情況經一個、兩個、三個或四個獨立地選自以下之基團取代：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基胺基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基胺基、胺基、芳基、鹵基、C1-C3鹵烷基胺基、C1-C3鹵烷基羰基胺基、羥基、-NRxRy及C3-C8環烷基，其中該環烷基進一步視情況經一個、兩個或三個獨立地選自以下之基團取代：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、C1-C3烷基胺基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基胺基、胺基、芳基、芳基C1-C3烷基、鹵基、C1-C3鹵烷基、C1-C3鹵烷基胺基及羥基；R4選自氫、C1-C3烷氧基、C1-C3烷氧基羰基胺基、C1-C3烷基、C1-C3烷基胺基、C1-C3烷基羰基胺基、胺基、芳基胺基、芳基羰基胺基、C3-C6環烷基胺基、C3-C6環烷基羰基胺基、C3-C6環烷氧基、鹵基、C1-C3鹵烷氧基、C2-C3鹵烷基胺基、C2-C3鹵烷基羰基胺基及羥基；R5選自氫、C1-C3烷基、氰基、C3環烷基及鹵基；R6選自氫、C1-C3烷基、C1-C3烷基羰基胺基、胺基，R7選自氫、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、氰基、-CH2OH、-CH2OCH3、CH(CH3)OH、C(CH3)2OH、鹵基及C1-C3鹵烷基；R8選自氫、C1-C3烷氧基、氰基及鹵基；Rx及Ry與其所連接之氮原子一起形成三至六員環；且Y選自： 其中R9選自氫、C1-C6烷基、C3-C6環烷基及C1-C6烷基羰基；n為0、1、2或3；各R10獨立地選自氫、C1-C6烷基、芳基、芳基C1-C3烷基、C3-C6環烷基、鹵基及C1-C3鹵烷基；且各R11獨立地選自氫、C1-C3烷氧基及羥基。
在第一態樣之第一實施例中，本發明提供式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R1及R2各為氫。
在第一態樣之第二實施例中，本發明提供式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R1及R2中之一者為C1-C3烷基且另一者選自氫及C1-C3烷基。
在第一態樣之第三實施例中，本發明提供式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R1及R2中之一者為氫且另一者為C3-C6環烷基。
在第一態樣之第四實施例中，本發明提供式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R1及R2一起為側氧基；或R1及R2與其所連接之碳原子一起形成氧雜環丁烷環。
在第二態樣中，本發明提供式(II)化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中：R1及R2獨立地選自氫、C3-C6環烷基及C1-C3烷基，其中該C1-C3烷基視情況經一個、兩個或三個獨立地選自C1-C3烷氧基、C1-C3烷基胺基、胺基、氰基、C1-C3二烷基胺基、鹵基及羥基之基團取代；或R1及R2一起為側氧基；R3為C1-C3烷基-Y或C2-C8烷基，其中該C2-C8烷基視情況經一個、兩個或三個獨立地選自以下之基團取代：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基胺基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基胺基、胺基、芳基、鹵基、C1-C3鹵烷基胺基、C1-C3鹵烷基羰基胺基、羥基、-NRxRy及C3-C8環烷基，其中該環烷基進一步視情況經一個、兩個或三個獨立地選自以下之基團取代：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、C1-C3烷基胺基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基胺基、胺基、芳基、芳基C1-C3烷基、鹵基、C1-C3鹵烷基、C1-C3鹵烷基胺基及羥基；R4選自氫、C1-C3烷氧基、C1-C3烷氧基羰基胺基、C1-C3烷基、C1-C3烷基胺基、C1-C3烷基羰基胺基、胺基、芳基胺基、芳基羰基胺基、C3-C6環烷基胺基、C3-C6環烷基羰基胺基、C3-C6環烷氧基、鹵基、C1-C3鹵烷氧基、C2-C3鹵烷基胺基、C2-C3鹵烷基羰基胺基及羥基；R5選自氫、C1-C3烷基、氰基、C3環烷基及鹵基；Rx及Ry與其所連接之氮原子一起形成三至六員環；且Y選自： 其中R6選自氫、C1-C6烷基、C3-C6環烷基及C1-C6烷基羰基；n為0、1、2或3；各R7獨立地選自氫、C1-C6烷基、芳基、芳基C1-C3烷基、C3-C6環烷基、鹵基及C1-C3鹵烷基；且各R8獨立地選自氫、C1-C3烷氧基及羥基。
在第三態樣中，本發明提供一種組合物，其包含醫藥學上可接受之量的式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑。
在第四態樣中，本發明提供一種抑制轉接子結合激酶1(AAK1)活性之方法，其包含使AAK1與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽接觸。
在第五態樣中，本發明提供一種治療或控制由AAK1活性介導之疾病或病症的方法，該方法包含投與有需要之患者治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在第五態樣之第一實施例中，該疾病或病症選自阿茲海默氏病、躁鬱症、疼痛、帕金森氏病及精神分裂症。在第五態樣之第二實施例中，疼痛為神經痛。在第五態樣之第三實施例中，神經痛為肌肉纖維疼痛或周邊神經病。
本發明之其他態樣可包括本文中所揭示之實施例之合適組合。
其他態樣及實施例可見於本文所提供之描述中。
圖1說明本發明之態樣，該圖展示自使用AAK1同種接合子(-/-)基因剔除小鼠及其野生型(+/+)同窩出生者之福馬林疼痛模型獲得的結果。AAK1同種接合子(-/-)基因剔除小鼠展示相較於其野生型(+/+)同窩出生者短暫與持續疼痛反應均明顯減少。
本發明部分基於AAK1基因剔除小鼠對疼痛展現高抗性之發現。此發現促成最終發現AAK1抑制劑、包含其之組合物及其使用方法之 研究。
本文中，本發明之描述應理解為符合化學鍵結之規則及原理。在一些情況下，可能需要移除氫原子以在任何既定位置上容納取代基。
應瞭解，本發明所涵蓋之化合物為適當地穩定而可用作藥劑之化合物。
規定在分子中之特定位置處之任何取代基或變數的定義與其在該分子中之其他位置處之定義無關。例如，當n為2時，兩個R10基團各自可相同或不同。
本說明書中所引用之所有專利、專利申請案及參考文獻均以全文引用的方式併入本文中。在不一致之情況下，以本發明(包括定義)為準。
除非上下文另外明確規定，否則如本文中所用之單數形式「一」及「該」包括複數個指示物。
在一些情況下，在任何特定基團之敍述之前面示出該基團中之碳原子數。舉例而言，術語「C1-6烷基」表示含有一至六個碳原子之烷基。若存在此等命名，則其取代本文所含之所有其他定義。
本發明化合物中可存在不對稱中心。應瞭解，本發明涵蓋所有立體化學異構形式或其混合物，其具有抑制AAK1之能力。化合物之個別立體異構體可由含有對掌性中心之市售起始物質以合成方式製備，或藉由製備對映異構產物之混合物繼而分離(諸如轉化為非對映異構體之混合物繼而分離或再結晶、層析技術或直接在對掌性層析管柱上分離對映異構體)來製備。特定立體化學之起始化合物可購得或可藉由此項技術中已知之技術來製備且解析。
本發明之某些化合物亦可以可分離之不同穩定構形形式存在。歸因於例如由於位阻或環應力而產生的圍繞不對稱單鍵之限制性旋轉 的扭轉不對稱性可允許分離不同構象異構體。本發明包括此等化合物之各構形異構體及其混合物。
術語「本發明化合物」及等效表述意欲涵蓋式(I)化合物及其醫藥學上可接受之對映異構體、非對映異構體及鹽。類似地，若上下文允許，則提及中間物意欲涵蓋其鹽。
本發明意欲包括本發明化合物中存在之原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序數、但不同質量數之彼等原子。舉一般實例且不加以限制，氫同位素包括氘及氚。碳同位素包括13C及14C。經同位素標記之本發明化合物一般可藉由熟習此項技術者已知之習知技術或藉由類似於本文所述之方法使用適當經同位素標記之試劑替代另外使用之未經標記之試劑來製備。該等化合物可具有各種可能用途，例如在測定生物活性時作為標準物及試劑。在穩定同位素之情況下，該等化合物可具有有利地修改生物學、藥理學或藥物動力學特性之潛能。
本發明化合物可以醫藥學上可接受之鹽形式存在。如本文所用之術語「醫藥學上可接受之鹽」表示本發明化合物之可溶解或分散於水或油的鹽或兩性離子形式，其在合理醫學判斷範疇內適於與患者之組織接觸使用而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症，與合理之效益/風險比相符，且對於其所欲用途為有效的。該等鹽可在化合物最終分離及純化期間製備或各別地藉由使適合氮原子與適合酸反應來製備。代表性酸加成鹽包括乙酸鹽、己二酸鹽、褐藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽；二葡糖酸鹽、二氫溴酸鹽、二氫氯化物、二氫碘化物、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、甲酸鹽、反丁烯二酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、均三甲苯磺酸鹽、甲烷磺酸鹽、伸萘基磺酸鹽、 菸鹼酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、丁二酸鹽、酒石酸鹽、三氯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、磷酸鹽、麩胺酸鹽、碳酸氫鹽、對甲苯磺酸鹽及十一烷酸鹽。可用於形成醫藥學上可接受之加成鹽的酸之實例包括無機酸，諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸及磷酸；及有機酸，諸如草酸、順丁烯二酸、丁二酸及檸檬酸。
鹼加成鹽可在化合物最終分離及純化期間藉由使羧基與適合鹼(諸如金屬陽離子之氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽)或與氨或有機一級、二級或三級胺反應來製備。醫藥學上可接受之鹽的陽離子包括鋰、鈉、鉀、鈣、鎂及鋁，以及無毒四級胺陽離子，諸如銨、四甲銨、四乙銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N,N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基嗎啉、二環己胺、普魯卡因(procaine)、二苯甲胺、N,N-二苯甲基苯乙胺及N,N'-二苯甲基乙二胺。適用於形成鹼加成鹽之其他代表性有機胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶及哌嗪。
本發明之一個實施例涵蓋活體外與活體內抑制轉接子結合激酶1(AAK1)之方法，其包含使AAK1與式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽接觸。
當有可能將治療有效量之式(I)化合物以及其醫藥學上可接受之鹽作為化學原料投藥以用於治療時，可以醫藥組合物形式提供活性成分。因此，本發明進一步提供醫藥組合物，其包括治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。除非另外指明，否則化合物之「治療有效量」為在治療或控制疾病或病狀中足以提供治療效益、或延緩或最小化一或多種與該疾病或病狀有關之症狀的量。術語「治療有效量」可涵蓋改良總體治療、減少或避免疾病或病症之症狀或原因、或提高另一治療劑 之治療功效的量。
如本文所用之術語「治療有效量」指在治療或控制疾病或病狀中足以提供治療效益、或延緩或最小化一或多種與該疾病或病狀有關之症狀的一種化合物或多種化合物之量。化合物之「治療有效量」意謂單獨或與其他治療組合的治療劑在治療或控制疾病或病狀中提供治療效益之量。術語「治療有效量」可涵蓋改良總體治療、降低或避免疾病或病狀之症狀或原因、或提高另一治療劑之治療功效的量。當應用於單獨給與之個別活性成分時，該術語僅指該成分。當應用於組合時，該術語指產生治療作用之活性成分的組合量，無論是組合、連續抑或同時投與該等活性成分皆然。式(I)化合物及其醫藥學上可接受之鹽如上所述。載劑、稀釋劑或賦形劑必須在與調配物之其他成分相容且對其接受者無害的意義上為可接受的。根據本發明之另一態樣，亦提供一種製備醫藥調配物之方法，其包括混合式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。如本文所用之術語「醫藥學上可接受」指此等化合物、材料、組合物及/或劑型在合理醫學判斷範疇內適於與患者之組織接觸使用而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症，與合理之效益/風險比相符，且對於其所欲用途為有效的。
醫藥調配物可以每單位劑量含有預定量之活性成分的單位劑型提供。每天每公斤體重約0.01毫克至約250毫克(「mg/kg」)、較佳每天每公斤體重約0.05 mg至約100 mg劑量的本發明化合物為預防及治療疾病之單一療法中的典型劑量。通常，本發明之醫藥組合物將每天投與約1至約5次，或者以連續輸注方式投與。該投藥可用作長期或短期治療。可與載劑材料組合以產生單一劑型之活性成分之量將視所治療之病狀、病狀之嚴重性、投藥時間、投藥途徑、所用化合物之排泄 率、治療持續時間及患者之年齡、性別、體重及健康狀況而變化。較佳單位劑量調配物為含有如上文所述之日劑量或次劑量或其適當分率的活性成分的調配物。可以實質上小於最佳劑量之小劑量的化合物開始治療。此後，以小增量增加劑量直至達到該等情況下之最佳效果。一般而言，化合物最適宜以一般將提供有效結果但不會導致任何有害或不利副作用之濃度水準投與。
當本發明組合物包含本發明化合物與一或多種其他治療性或預防性藥劑之組合時，該化合物與該其他藥劑通常以單一治療方案中通常所投與劑量的約10%至150%且更佳為約10%至80%的劑量來提供。
本發明化合物可與一或多種其他治療性或預防性藥劑組合投與。舉例而言，當用於治療疼痛時，可能的其他藥劑包括免疫抑制劑、消炎劑及/或用於治療疼痛之其他藥劑。
適用於本發明之方法及組合物的免疫抑制劑包括此項技術中已知之免疫抑制劑。實例包括胺基喋呤(aminopterin)、硫唑嘌呤(azathioprine)、環孢素A(cyclosporin A)、D-青黴胺(D-penicillamine)、金鹽、羥氯喹(hydroxychloroquine)、來氟米特(leflunomide)、甲胺喋呤(methotrexate)、米諾環素(minocycline)、雷帕黴素(rapamycin)、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、他克莫司(tacrolimus)(FK506)及其醫藥學上可接受之鹽。特定免疫抑制劑為甲胺喋呤。
免疫抑制劑之其他實例包括抗TNF抗體，諸如阿達木單抗(adalimumab)、賽妥珠單抗(certolizumab pegol)、依那西普(etanercept)及英利昔單抗(infliximab)。其他免疫抑制劑包括介白素-1阻斷劑，諸如阿那白滯素(anakinra)。其他免疫抑制劑包括抗B細胞(CD20)抗體，諸如利妥昔單抗(rituximab)。其他免疫抑制劑包括T細胞活化阻斷劑，諸如阿巴西普(abatacept)。
其他免疫抑制劑包括肌苷單磷酸去氫酶抑制劑，諸如黴酚酸嗎啉乙酯(CellCept®)及黴酚酸(Myfortic®)。
適用於本發明之方法及組合物的消炎藥包括此項技術中已知之消炎藥。實例包括糖皮質激素及NSAID。糖皮質激素之實例包括醛固酮(aldosterone)、倍氯米松(beclometasone)、倍他米松(betamethasone)、皮質酮(cortisone)、脫氧皮質酮(deoxycorticosterone)、地塞米松(dexamethasone)、氟氫可的松(fludrocortisone)、氫皮質酮(hydrocortisone)、甲基潑尼松龍(methylprednisolone)、潑尼松龍(prednisolone)、潑尼松(prednisone)、曲安西龍(triamcinolone)及其醫藥學上可接受之鹽。
NSAID之實例包括水楊酸鹽(例如阿司匹林(aspirin)、阿莫西林(amoxiprin)、貝諾酯(benorilate)、水楊酸膽鹼鎂、二氟尼柳(diflunisal)、法斯拉胺(faislamine)、水楊酸甲酯、水楊酸鎂、水楊酸柳酯及其醫藥學上可接受之鹽)、芳基烷酸(例如雙氯芬酸(diclofenac)、醋氯芬酸(aceclofenac)、阿西美辛(acemetacin)、溴芬酸(bromfenac)、依託度酸(etodolac)、吲哚美辛(indometacin)、萘丁美酮(nabumetone)、舒林酸(sulindac)、托美丁(tolmetin)及其醫藥學上可接受之鹽)、芳基丙酸(例如布洛芬(ibuprofen)、卡洛芬(carprofen)、芬布芬(fenbufen)、非諾洛芬(fenoprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、酮洛酸(ketorolac)、洛索洛芬(loxoprofen)、萘普生(naproxen)、奧沙普嗪(oxaprozin)、噻洛芬酸(tiaprofenic acid)、舒洛芬(suprofen)及其醫藥學上可接受之鹽)、芳基鄰胺基苯甲酸(例如甲氯芬那酸(meclofenamic acid)、甲芬那酸(mefenamic acid)及其醫藥學上可接受之鹽)、吡唑啶衍生物(例如阿紮丙宗(azapropazone)、安乃近(metamizole)、羥布宗(oxyphenbutazone)、苯基丁氮酮(phenylbutazone)、磺吡酮(sulfinprazone)及其醫藥學上可接受之鹽)、 昔康(oxicam)(例如氯諾昔康(lornoxicam)、美洛昔康(meloxicam)、吡羅昔康(piroxicam)、替諾昔康(tenoxicam)及其醫藥學上可接受之鹽)、COX-2抑制劑(例如塞來昔布(celecoxib)、依託昔布(etoricoxib)、羅美昔布(lumiracoxib)、帕瑞昔布(parecoxib)、羅非昔布(rofecoxib)、伐地昔布(valdecoxib)及其醫藥學上可接受之鹽)及磺醯替苯胺(sulphonanilide)(例如尼美舒利(nimesulide)及其醫藥學上可接受之鹽)。
用於治療疼痛(包括(但不限於)神經痛及發炎性疼痛)之其他藥劑包括(但不限於)如下藥劑：普瑞巴林(pregabalin)、利多卡因(lidocaine)、度洛西汀(duloxetine)、加巴噴丁(gabapentin)、卡馬西平(carbamazepine)、辣椒鹼(capsaicin)及其他血清素/去甲腎上腺素/多巴胺再吸收抑制劑，及鴉片劑(諸如奧施康定(oxycontin)、嗎啡(morphine)及可待因(codeine))。
在治療由已知疾病或病狀(諸如糖尿病、感染(例如帶狀疱疹或HIV感染)或癌症)引起之疼痛中，本發明化合物可與一或多種針對潛在疾病或病狀之其他治療性或預防性藥劑組合投與。舉例而言，當用於治療糖尿病性神經病時，本發明化合物可與一或多種抗糖尿病劑、抗高血糖劑、降血脂/降脂劑、減肥劑、抗高血壓劑及食慾抑制劑組合投與。抗糖尿病劑之實例包括雙胍(例如二甲雙胍(metformin)、苯乙雙胍(phenformin))、葡糖苷酶抑制劑(例如阿卡波糖(acarbose)、米格列醇(miglitol))、胰島素(包括胰島素促泌素及胰島素增敏劑)、美格列奈(meglitinide)(例如瑞格列奈(repaglinide))、磺醯脲(sulfonylurea)(例如格列美脲(glimepiride)、格列本脲(glyburide)、格列齊特(gliclazide)、氯磺丙脲(chlorpropamide)及格列吡嗪(glipizide))、雙胍/格列本脲組合(例如格魯瓦斯(Glucovance))、噻唑啶二酮(thiazolidinedione)(例如曲格列酮(troglitazone)、羅格列酮 (rosiglitazone)及吡格列酮(pioglitazone))、PPAR-α促效劑、PPAR-γ促效劑、PPAR α/γ雙重促效劑、糖原磷酸化酶抑制劑、脂肪酸結合蛋白(aP2)之抑制劑、類升糖素肽-1(GLP-1)或GLP-1受體之其他促效劑、二肽基肽酶IV(DPP4)抑制劑及鈉-葡萄糖共轉運蛋白2(SGLT2)抑制劑(例如達格列淨(dapagliflozin)、卡格列淨(canagliflozin)及LX-4211)。
醫藥調配物可配合藉由任何適當途徑投與，例如藉由經口(包括頰內或舌下)、經直腸、經鼻、表面(包括頰內、舌下或經皮)、經陰道或非經腸(包括皮下、皮內、肌肉內、關節內、滑膜內、胸骨內、鞘內、病灶內、靜脈內或皮內注射或輸注)途徑投與。該等調配物可由藥劑學技術中已知之任何方法(例如，使活性成分與載劑或賦形劑組合)製備。以經口投藥或注射投藥較佳。
適合於經口投與之醫藥調配物可呈離散單位形式提供，諸如膠囊或錠劑；粉末或顆粒；水性或非水性液體中之溶液或懸浮液；可食用發泡體或發泡劑；或水包油型液體乳液或油包水型乳液。
舉例而言，為了呈錠劑或膠囊之形式經口投與，可將活性藥物組分與口服用無毒之醫藥學上可接受之惰性載劑(諸如乙醇、甘油、水及其類似物)組合。粉末係藉由將化合物粉碎至合適細度且與類似經粉碎之醫藥載劑(諸如可食用碳水化合物，例如澱粉或甘露糖醇)混合來製備。亦可包含調味劑、防腐劑、分散劑及著色劑。
膠囊係藉由如上所述製備粉末混合物且填充成型之明膠外殼來製備。在填充操作之前，可將助滑劑及潤滑劑(諸如二氧化矽膠體、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或固體聚乙二醇)添加至粉末混合物中。亦可添加崩解劑或增溶劑(諸如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉)以改良攝取膠囊時藥物之可利用性。
此外，有必要或需要時，亦可將合適黏合劑、潤滑劑、崩解劑及著色劑併入混合物中。合適黏合劑包括澱粉、明膠、天然糖(諸如 葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味劑、天然膠及合成膠(諸如阿拉伯膠、黃蓍膠或褐藻酸鈉)、羧甲基纖維素、聚乙二醇及其類似物。用於此等劑型中之潤滑劑包括油酸鈉、氯化鈉及其類似物。崩解劑包括(但不限於)澱粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、三仙膠及其類似物。錠劑係例如藉由製備粉末混合物、粒化或擊壓、添加潤滑劑及崩解劑且壓成錠劑來調配。粉末混合物係藉由將經適當粉碎之化合物與上述稀釋劑或基質混合且視情況與黏合劑(諸如羧甲基纖維素、褐藻酸鹽、明膠或聚乙烯基吡咯啶酮)、溶液延遲劑(諸如石蠟)、再吸收促進劑(諸如四級鹽)及/或吸收劑(諸如膨潤土、高嶺土或磷酸氫鈣)混合來製備。粉末混合物可藉由用黏合劑(諸如糖漿、澱粉糊、阿卡迪亞黏液(acadia mucilage)或纖維素或聚合物質之溶液)潤濕且迫使其穿過篩網來粒化。作為粒化之替代方法，可使粉末混合物穿過壓錠機且結果為不完全成形之擊壓物裂解為顆粒。可藉助於添加硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石或礦物油來潤滑顆粒以防止黏附於錠劑成形模具。隨後，將經潤滑之混合物壓製成錠劑。亦可將本發明化合物與自由流動性惰性載劑組合且不經粒化或擊壓步驟直接壓製成錠劑。可提供由蟲膠之密封塗層、糖或聚合物質之塗層及蠟之拋光塗層組成的透明或不透明保護塗層。可將染料添加至此等塗層中以區分不同單位劑量。
可以單位劑型製備口服液(諸如溶液、糖漿及酏劑)以使得給定量含有預定量之化合物。糖漿可藉由將化合物溶解於經適當調味之水溶液中來製備，而酏劑經由使用無毒媒劑來製備。亦可添加增溶劑及乳化劑(諸如乙氧基化異硬脂醇及聚氧乙烯山梨糖醇醚)、防腐劑、調味添加劑(諸如薄荷油或天然甜味劑，或糖精或其他人工甜味劑)及其類似物。
適當時，用於經口投與之劑量單位調配物可經微膠囊化。亦可例如藉由塗佈或包埋微粒物質於聚合物、蠟或其類似物中來製備調配 物以延長或持續釋放。
式(I)化合物及其醫藥學上可接受之鹽亦可以脂質體傳遞系統(諸如單層小微脂粒、單層大微脂粒及多層微脂粒)之形式投與。脂質體可由各種磷脂(諸如膽固醇、硬脂胺或磷脂醯基膽鹼)形成。
式(I)化合物及其醫藥學上可接受之鹽亦可藉由使用單株抗體作為與化合物分子偶合之個別載劑來傳遞。該等化合物亦可與作為可靶向藥物載劑之可溶性聚合物偶合。該等聚合物可包括聚乙烯吡咯啶酮、哌喃共聚物、聚羥基丙基甲基丙烯醯胺酚、聚羥基乙基天冬醯胺酚或經棕櫚醯基殘基取代之聚氧化乙烯聚離胺酸。此外，該等化合物可與一類適用於達成藥物受控釋放之可生物降解聚合物偶合，該等聚合物例如有聚乳酸、聚ε己內酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二氫哌喃、聚氰基丙烯酸酯及水凝膠之交聯或兩性嵌段共聚物。
適合於經皮投與之醫藥調配物可以意欲與接受者之表皮保持緊密接觸較長時段之離散貼片形式提供。舉例而言，活性成分可藉由如Pharmaceutical Research 1986,3(6),318中大體描述之離子導入療法自貼片傳遞。
適合於局部投與之醫藥調配物可調配成軟膏、乳膏、懸浮液、洗劑、粉末、溶液、糊狀物、凝膠、噴霧劑、氣霧劑或油劑。
適合於經直腸投與之醫藥調配物可以栓劑形式或以灌腸劑形式提供。
適合於經鼻投與之醫藥調配物(其中載劑為固體)包括粒徑例如在20至500微米範圍內之粗粉末，其以用鼻吸氣之方式投與，亦即藉由自貼近鼻固持的粉末容器經由鼻孔快速吸入來投與。用於以經鼻噴霧劑或滴鼻劑形式投與之適合調配物(其中載劑為液體)包括活性成分之水溶液或油溶液。
適合於藉由吸入投與之醫藥調配物包括細粒粉劑或霧狀物，其 可藉助於各種類型之定劑量加壓氣霧器、霧化器或吹入器而產生。
適合於經陰道投與之醫藥調配物可以子宮托、棉塞、乳膏、凝膠、糊狀物、發泡體或噴霧調配物形式提供。
適合於非經腸投與之醫藥調配物包括可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑細菌劑及使得調配物與預定接受者之血液等張之溶質的水性及非水性無菌注射溶液；及可包括懸浮劑及增稠劑之水性及非水性無菌懸浮液。調配物可於單位劑量或多劑量容器(例如密封安瓿及小瓶)中提供，且可儲存於冷凍乾燥(凍乾)條件下，僅需要在臨使用前添加無菌液體載劑(例如注射用水)。臨時注射溶液及懸浮液可自無菌粉末、顆粒及錠劑製備。
應瞭解，除以上特別提及之成分以外，考慮到所述調配物之類型，調配物亦可包括此項技術中習知之其他藥劑，例如適用於經口投與之調配物可包括調味劑。
術語「患者」包括人類與其他哺乳動物。除非另外指明，否則術語「控制」涵蓋防止已罹患指定疾病或病症之患者的該疾病或病症復發、及/或延長已罹患疾病或病症之患者保持緩解之時間。該等術語涵蓋調節疾病或病症之臨限值、發展及/或持續時間、或改變患者對疾病或病症作出反應之方式。
術語「治療」指：(i)防止可能易患某一疾病、病症及/或病狀但尚未被診斷為患有該疾病、病症及/或病狀之患者的該疾病、病症或病狀出現；(ii)抑制該疾病、病症或病狀，亦即使其發展停滯；及(iii)緩解該疾病、病症或病狀，亦即使該疾病、病症及/或病狀消退。
本發明意欲涵蓋藉由合成方法或藉由代謝過程(包括在人類或動物體內(活體內)進行之代謝過程或在活體外進行之代謝過程)製備的具有式(I)之化合物。
本申請案、尤其包括以下說明性流程及實例中所用之縮寫為熟 習此項技術者所熟知。使用之一些縮寫如下：RT或rt或r.t.為室溫；t R為滯留時間；min為分鐘；h或hr為小時；MeOD為CD3OD；THF為四氫呋喃；ACN或MeCN為乙腈；DCM為二氯甲烷；MeOH為甲醇；EtOH為乙醇；t-BuOH為第三丁醇，DMSO為二甲亞碸；DMF為N,N-二甲基甲醯胺；EtOAc為乙酸乙酯；BOC或Boc為第三丁氧基羰基；Me為甲基；Et為乙基；Cyc-Pr為環丙基；phth為酞醯基；Ac為乙醯基；Ph為苯基；DPPA為二苯基磷醯基疊氮化物；Et3N或TEA為三乙胺；n-BuLi為正丁基鋰；TFA為三氟乙酸；NBS為N-溴丁二醯亞胺；NCS為N-氯丁二醯亞胺；NIS為N-碘丁二醯亞胺；DEA為二乙胺；LDA為二異丙基胺基鋰；LAH為氫化鋰鋁；DBU為1,8-二氮雜雙環十一碳-7-烯；DMAP為N,N-二甲基胺基吡啶；DPPF或dppf為1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵；LDA為二異丙基胺基鋰；NBS為N-溴丁二醯亞胺；TMS為三甲基矽烷基；TBAF為氟化四丁銨；NCS為N-氯丁二醯亞胺；TFA為三氟乙酸；NIS為N-碘丁二醯亞胺；且Ac為乙醯基。
本發明現將結合某些實施例進行描述，該等實施例不欲限制其範疇。相反地，本發明涵蓋可包括於申請專利範圍之範疇內的所有替代、修改及等效形式。因此，以下實例(包括特定實施例)將說明本發明之一實務，應瞭解該等實例係用於說明某些實施例之目的，且經呈現以提供咸信為對其程序及概念性態樣之最有用及易於理解之描述的內容。
本發明化合物可使用此部分中所述之反應及技術以及一般技術者已知之其他合成方法製備。該等反應在適合於所用試劑及材料且適合於實現轉化之溶劑中執行。此外，在描述下述合成方法時，應瞭解所提出之所有反應條件(包括所選溶劑、反應溫度、實驗持續時間及處理程序)經選擇為該反應之標準條件，其易於由熟習此項技術者所 識別。熟習有機合成之技術者應瞭解，分子各部分上所存在之官能基必須與所提出之試劑及反應相容。該等對於與反應條件相容之取代基的限制將為熟習此項技術者所顯而易知，且因此必須可使用替代方法。
式6之化合物(其中R1及R2為H、烷基、環烷基或烯基)藉由流程1中所概述之方法製備。可在環境溫度下用經適當取代之炔丙基鹵化物烷基化適當苯酚鈉，得到所要炔丙基醚2。2中之醛官能基與適當維蒂希試劑(Wittig reagent)發生維蒂希反應(Wittig reaction)可形成呈E型、Z型異構體之混合物形式的所要烯烴，其中E-異構體為主產物。由此獲得之α,β-不飽和醛異構混合物3可藉由在溶劑(諸如二氯甲烷)中在脫水劑(諸如MgSO4)存在下與1,1-二甲基肼反應而轉化為腙衍生物4。由此獲得之粗腙4可在自由基清除劑(諸如2,6-二-第三丁基-4-甲基酚)存在下在溶劑(諸如均三甲苯)中進行分子內[4+2]環加成反應(Dolle,R.E.等人，Tetrahedron Lett. 1988,29,6349-6352)，得到環化產物5。5中之溴可藉由在鈀催化之偶合反應中使用熟習此項技術者熟知之反應條件按照諸如Gowrisankar等人，J.Am.Chem.Soc. 2010,132,11592-11598所述之程序與醇反應而被置換。出於自溴化物5製備由6表示之醚的目的，可用Protective Groups in Organic Synthesis(Greene,Wuts；第3版，1999,John Wiley & Sons,Inc.)中所述之適當保護基試劑保護R3OH中能夠干擾Pd偶合反應之任何其他官能基。此等保護基可隨後藉由以上相同參考文獻中所述之方法去遮蔽。舉例而言，胺基可保護為酞醯亞胺基衍生物而在Pd偶合反應後得到7，7可如流程1所示藉由在乙醇中用肼處理去遮蔽，得到8。
式17之化合物(其中R1為H、烷基、烯基，R5為H、鹵基、CN，且R3為H，烷基，環烷基)藉由流程2中所概述之方法來製備。如Knutsen,L.等人(Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters,2007,17,662-667)所述，4-溴吡啶或4-氯吡啶鹽酸鹽可用鹼(諸如二異丙基胺基鋰)進行鹼介導之甲醯基化反應，得到相應3-甲醯基吡啶。如Zhang,Lei等人(Journal of Medicinal Chemistry,2011,54,1724-1739)所述，如此獲得之醛9可與適當偶合搭配物(諸如氟酸11)在標準鈴木條件(Suzuki condition)下使用鹼(諸如碳酸銫)及催化劑(諸如Pd(PPh3)4)進行鈴木交叉偶合反應(Suzuki cross coupling reaction)。聯芳基醛10可隨後用標準還原劑(諸如硼氫化鈉)還原為相應一級醇12(R1=H)。為形成二級醇12(R1=烷基、環烷基或烯基)，可在低溫下在溶劑(諸如無 水四氫呋喃)中用適當格林納試劑(Grignard reagent)處理醛10(先前由Itoh,Toshiyuki等人，Chemistry-A European Journal,2006,12,9228-9237及Zhang等人，Tetrahedron Lett.,2010,51,3927-3930描述)。一級或二級醇12在惰性氛圍下於溶劑(諸如THF)中用氫化物源(諸如氫化鈉)處理後可得到限制性經鹵基取代之核心13。在由式13表示之化合物中，經烯基取代(R1=乙烯基)之化合物可使用標準氫化條件(諸如在氫氣氛圍下用鈀/碳處理)來氫化，得到相應經烷基取代之類似物。式13之化合物可隨後按照諸如由Gowrisankar等人(J.Am.Chem.Soc.2010,132,11592-11598)描述之程序進行鈀催化之醚合成(包括熟習此項技術者熟知之反應條件)。可使用經適當保護之光學純(S)或(R)-胺基醇執行反應，得到光學純醚14。式15之化合物(其中R5為鹵基)可藉由用鹵化劑(視情況可諸如為N-溴丁二醯胺、N-氯丁二醯胺或N-碘丁二醯胺)處理14來製備。式16之化合物(其中R5為氰基)可由相應鹵基化合物經由銅催化之偶合反應製備，反應條件為熟習此項技術者所熟知(J.E.Callen,Organic syntheses,CV 3,1955,212)。或者，可在20℃至150℃範圍內之溫度下，在催化劑(諸如Pd(PPh3)4、Pd2(dba)3或PdCl2(PPh3)2)存在下，在有或無配位體(諸如DPPF)之情況下，在溶劑(諸如甲苯、二氯乙烷、THF、DMF、甲醇、乙醇、水或其組合)中用氰化鋅經由標準根岸偶合條件(Negishi coupling condition)引入氰基。出於自氯化物13製備由14表示之醚、或自鹵化物15製備由16表示之氰化物的目的，可用Protective Groups in Organic Synthesis(Greene,Wuts；第3版，1999,John Wiley & Sons,Inc.)中所述之適當保護基試劑保護R3OH中能夠干擾Cu或Pd偶合反應之任何其他官能基。此等保護基可隨後藉由以上相同參考文獻中所述之方法去遮蔽。如此獲得之非對映異構混合物可使用製備型對掌性HPLC或製備型對掌性SFC技術解析。
式23之化合物藉由流程3中所概述之方法來製備。4-氯吡啶吡啶3-甲酸17(其中R6=H或烷基)可使用如Protective Groups in Organic Synthesis(Greene,Wuts；第3版，1999,John Wiley & Sons,Inc.)中所述之方法轉化為相應酯18。如Zhang,Lei等人(Journal of Medicinal Chemistry,2011,54,1724-1739)所述，該酯可隨後與適當偶合搭配物(諸如氟酸11)在標準鈴木條件下使用鹼(諸如碳酸銫)及催化劑(諸如Pd(PPh3)4)進行鈴木交叉偶合反應，得到由式19表示之化合物。聯芳基酯19可在標準皂化條件下在溶劑(諸如甲醇、水、THF或其組合)中使用鹼(諸如氫氧化鈉或氫氧化鋰)進行水解，得到相應羧酸20。該酸可隨後在鹼性條件下加熱，得到內酯21。內酯可使用熟習此項技術者熟知之反應條件按照諸如由Gowrisankar等人(J.Am.Chem.Soc. 2010,132,11592-11598)描述之程序進行鈀催化之醚合成。可使用經適當保護之光學純(S)或(R)-胺基醇執行反應，得到光學純醚。出於自鹵化物21製備由22表示之醚的目的，可用Protective Groups in Organic Synthesis(Greene,Wuts；第3版，1999,John Wiley & Sons,Inc.)中所述之適當保護基試劑保護R3OH中能夠干擾Pd偶合反應之任何其他官能基。式22之化合物(其中R5=鹵基)可藉由使用鹵化劑(諸如N-氯丁二醯胺)鹵化相應醚來製備。必要時，可使用如Protective Groups in Organic Synthesis(Greene,Wuts；第3版，1999,John Wiley & Sons,Inc.)中所述之適當條件去除醚類似物側鏈胺基之保護基，得到式23之化合物。
式32及33之化合物(其中R6為NH2或NHAc)藉由流程4中所概述之方法來製備。如Leslie等人(Australian Journal of Chemistry,1982,35,2025-2034)所述，合成可以4-氯吡啶-2-甲酸24之庫爾修斯重排(Curtius rearrangement)開始，得到N-Boc-2-胺基-4-氯吡啶25。使用諸如由Charles等人(J.Med.Chem.,2010,53,3330-3348)描述之方法定向鄰位金屬化繼而用二甲基甲醯胺處理可提供吡啶醛衍生物26。如Zhang,Lei等人(Journal of Medicinal Chemistry,2011,54,1724-1739) 所述，該醛可隨後與適當偶合搭配物(諸如氟酸11)在標準鈴木條件下使用鹼(諸如碳酸銫)及催化劑(諸如Pd(PPh3)4)進行鈴木交叉偶合反應，得到27。使用如Protective Groups in Organic Synthesis(Greene,Wuts；第3版，1999,John Wiley & Sons,Inc.)中所述之適當條件移除胺上之保護基，繼而由諸如硼氫化鈉之試劑介導還原醛28(Eisai R&D Management Co.,Ltd.,專利：EP1782811 A1,2007)，可得到醇29。為形成二級醇29(R1=烷基)，可在低溫下在溶劑(諸如無水四氫呋喃)中用適當格林納試劑處理醛28(先前由Itoh,Toshiyuki等人，Chemistry-A European Journal,2006,12,9228-9237及Zhang等人，Tetrahedron Lett.,2010,51,3927-3930描述)。由鹼(諸如氫化鈉)介導之環化可產生中間物30。在溶劑(諸如二氯甲烷)中在鹼(諸如吡啶)存在下用乙醯氯進行鹼催化之乙醯化可得到31。芳基氯31可隨後使用熟習此項技術者熟知之反應條件按照諸如由Gowrisankar等人(J.Am.Chem.Soc. 2010,132,11592-11598)描述之程序進行鈀催化之醚合成，得到相應芳基醚。出於自鹵化物31製備由32表示之醚的目的，可用Protective Groups in Organic Synthesis(Greene,Wuts；第3版，1999,John Wiley & Sons,Inc.)中所述之適當保護基試劑保護R3OH中能夠干擾Pd偶合反應之任何其他官能基。可使用如相同參考文獻中所述之適當條件達成保護基移除，得到式32之化合物(其中R6為NHAc)。N-乙醯基可藉由使用鹼(諸如氫氧化鉀)進行水解來移除，得到式33之化合物(其中R6為NH2)。
流程4
式35之化合物(其中R5為鹵基)藉由流程5中所概述之方法來製備。由34表示之醚類似物可如流程2中製備且用鹵化劑(諸如N-鹵代丁二醯胺)處理以在R5上安置鹵素。使用如Protective Groups in Organic Synthesis(Greene,Wuts；第3版，1999,John Wiley & Sons,Inc.)中所述之適當條件去除側鏈胺基之保護基可得到由式33表示之化合物(其中R5為鹵基)。
式47之化合物藉由流程6中所概述之方法來製備。可用溴化劑(諸如N-溴丁二醯胺)處理4-氯吡啶-2-胺36，得到溴-胺基吡啶37。在溶劑 (諸如二氯甲烷)中在鹼(諸如吡啶)存在下用乙醯氯進行37之鹼催化之乙醯化可得到醯基吡啶38。如Zhang,Lei等人(Journal of Medicinal Chemistry,2011,54,1724-1739)所述，化合物38可與乙烯基酸酐在標準鈴木條件下使用鹼(諸如碳酸銫)及催化劑(諸如Pd(PPh3)4)進行鈴木交叉偶合反應而安置乙烯基。乙烯基吡啶39可用氧化劑(諸如四氧化鋨及過碘酸鈉)在溶劑(諸如二噁烷及水)中進行氧化，得到醛40。如Zhang,Lei等人(Journal of Medicinal Chemistry,2011,54,1724-1739)所述，如此獲得之醛40可與適當偶合搭配物(諸如氟酸41)在標準鈴木條件下使用鹼(諸如碳酸銫)及催化劑(諸如Pd(PPh3)4)進行鈴木交叉偶合反應。聯芳基醛42可隨後用標準還原劑(諸如硼氫化鈉)還原為相應一級醇43(R1=H)。為形成二級醇43(R1=烷基、環烷基、烯基)，可在低溫下在溶劑(諸如無水四氫呋喃)中用適當格林納試劑處理醛42(先前由Itoh,Toshiyuki等人，Chemistry-A European Journal,2006,12,9228-9237及Zhang等人，Tetrahedron Lett.,2010,51,3927-3930描述)。在溶劑(諸如THF)中，在惰性氛圍下，在環境溫度下用鹼(諸如氫化鈉)處理化合物43、或在加熱條件下用鹼(諸如碳酸鉀)處理化合物43之後可得到限制性經氯取代之核心44。式44之化合物(其中R=Me)可藉由在低溫下在溶劑(諸如THF)中使用鹼(諸如氫化鈉)及烷基化試劑(諸如甲基碘)使相應核心44(R=COOH)甲基化來製備。式44之化合物(其中R=COcyc-Pr、CO(OCH3))可基於Protective Groups in Organic Synthesis(Greene,Wuts；第3版，1999,John Wiley & Sons,Inc.)中所述之安置保護基及去除保護基程序藉由在溶劑(諸如水及甲醇)中用試劑(諸如氫氧化鉀)使44(R=COCH3)脫去醯基，繼而在鹼(諸如吡啶)存在下用相應酸氯化物醯基化來製備。式44之化合物可隨後按照諸如由Gowrisankar等人(J.Am.Chem.Soc.2010,132,11592-11598)描述之程序進行鈀催化之醚合成(包括熟習此項技術者熟知之反應條件)。可例 如使用經適當保護之外消旋或光學純(S)或(R)-胺基醇執行反應，分別得到外消旋或光學純醚。出於自鹵化物44製備由45表示之醚的目的，可用Protective Groups in Organic Synthesis(Greene,Wuts；第3版，1999,John Wiley & Sons,Inc.)中所述之適當保護基試劑保護R3OH中能夠干擾Pd偶合反應之任何其他官能基(諸如胺基醇之胺基)。可使用如相同參考文獻中所述之適當條件達成保護基移除，得到式47之化合物。式46之化合物(其中R5=鹵基)可藉由使用鹵化劑(諸如N-氯丁二醯胺)鹵化相應醚(R5=H)來製備。經由鈀催化反應獲得之由化合物46表示之醚類似物必要時可使用如Protective Groups in Organic Synthesis(Greene,Wuts；第3版，1999,John Wiley & Sons,Inc.)中所述之適當條件去除R3之保護基，得到由式47表示之化合物。如此獲得之非對映異構混合物可使用製備型對掌性HPLC或製備型對掌性SFC技術解析。
式53之化合物藉由流程7中所概述之方法來製備。經取代之4-溴吡啶或4-氯吡啶可用鹼(諸如二異丙基胺基鋰)及乾冰進行鹼介導之羧 基化，得到相應吡啶-3-甲酸48。可使用熟習此項技術者已知之標準條件(諸如用鹼(諸如DBU)及烷基化試劑(諸如甲基碘)處理)使該酸酯化，得到由式49表示之酯。如Zhang,Lei等人(Journal of Medicinal Chemistry,2011,54,1724-1739)所述，鹵基吡啶49可隨後與適當偶合搭配物(諸如氟酸11)在標準鈴木條件下使用鹼(諸如碳酸銫)及催化劑(諸如Pd(PPh3)4)進行鈴木交叉偶合反應，得到由式50表示之化合物。酯可藉由用還原劑(諸如LAH)處理而轉化為由式51表示之相應醇。該醇在惰性氛圍下於溶劑(諸如THF)中用氫化物源(諸如氫化鈉)處理後可得到限制性經鹵基取代之核心52。式52之化合物可隨後按照諸如由Gowrisankar等人(J.Am.Chem.Soc. 2010,132,11592-11598)描述之程序進行鈀催化之醚合成(包括熟習此項技術者熟知之反應條件)。出於自氯化物52製備由53表示之醚的目的，可用Protective Groups in Organic Synthesis(Greene,Wuts；第3版，1999,John Wiley & Sons,Inc.)中所述之適當保護基試劑保護R3OH中能夠干擾Pd偶合反應之任何其他官能基。此等保護基可隨後藉由以上相同參考文獻中所述之方法去遮蔽。
使用流程1-7合成之各種類似物列於表1a中。所選化合物之AAK1功能(AAK1 IC50值(nM))及細胞(細胞IC50值(nM))效能展示於表1b中且以如下範圍之IC50值形式列出，其中：a=<1 nM；b=1-10 nM；c=10-100 nM；d=100-1000 nM。
在以下實例中，在Bruker 400或500 MHz NMR光譜儀上記錄質子NMR譜。化學位移以相對於四甲基矽烷得出之δ值報導。在與Water Micromass ZQ耦接之Shimadzu LC上操作液相層析(LC)/質譜分析。HPLC滯留時間使用以下方法中之至少一者獲得：
LC-MS方法：
方法A：Phenomenex C18 2×50 mm(3 μm)，A=95% H2O/5% MeCN，B=95% MeCN/5% H2O，調節劑10 mM NH4OAc，0.00分鐘=0% B，4分鐘=100% B，5分鐘=100% B，流速=0.8 mL/min
方法B：Phenomenex C18 2×50 mm(3 μm)，A=95% H2O/5% ACN，B=95% MeCN/5% H2O，調節劑10 mM NH4OAc，0.00分鐘=30% B，4分鐘=100% B，5分鐘=100% B，流速=0.8 mL/min
LC/MS方法C=管柱：PUROSPHER@star RP-18(4×55 mm)，3 μm；緩衝液：20 mM NH4OAC水溶液；移動相A：緩衝液+ACN(90+10)；移動相B：緩衝液+MeCN(10+90)；流速：2.5 ml/min
LC/MS方法D=管柱：ZORBAX SB C18(46×50 mm)，5 μm；正離子模式移動相A：10% MeOH-90% H2O-0.1% TFA；移動相B：90% MeOH-10% H2O-0.1% TFA；流速：5 ml/min
LC/MS方法E=管柱-Ascentis Express C8(5×2.1 mm)，2.7 μm； 移動相A：2% MeCN-98% H2O-10 mM NH4COOH；移動相B：98% ACN-2% H2O-10 mM NH4COOH；流速：1 mL/min
LC/MS方法F=管柱-ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×50 mm)，1.7 μm；移動相A：0.1% TFA水溶液；移動相B：1% TFA之ACN溶液；流速：1 mL/min
LC/MS方法G=管柱-ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×50 mm)，1.7 μm；移動相A：5 mM NH4OAc：ACN(95：5)；移動相B：5 mM NH4OAc：can(5：95)；流速：1mL/min
LC/MS方法H=管柱：Xbridge BEH C18(50×2.1 mm)2.5 μm，移動相A-1% HCOOH之H2O溶液；移動相B：ACN，流速1mL/min；t R=1.55分鐘
LC/MS方法I=管柱-ACE Excel 2 C18(50×3.0)mm-2 μm；移動相A：2% MeCN-98% H2O-10 mM NH4COOH；移動相B：98% ACN-2% H2O-10 mM NH4COOH；流速：1.2 mL/min：
LC/MS方法J=管柱：Xbridge C18(50×2.1 mm)2.5 μm，移動相A-10 mM碳酸氫銨，移動相B：ACN，流速1 mL/min
LC/MS方法K=管柱：Kinetex C18(50×2.1 mm-2.6 μm)，移動相A-2% ACN-98% H2O-10 mM甲酸銨，移動相B：98% ACN-2% H2O-10 mM甲酸銨，流速1 mL/min
製備型HPLC方法：
方法A：Waters Atlantis 30×100 mm，A=90% H2O/10% MeOH，B=90% MeOH/10% H2O，調節劑0.1% TFA，0.00分鐘=10% B，12分鐘=100% B，15.0分鐘=100% B，流速=40 mL/min。
方法B：Waters Atlantis OBD 30×100 mm S5，A=90% H2O/10% MeOH，B=90% MeOH/10% H2O，調節劑0.1% TFA，0.00分鐘=10% B，15分鐘=100% B，18.0分鐘=100% B，流速=40 mL/min。
方法C：Waters Atlantis 30×100 mm，A=90% H2O/10% MeOH，B=90% MeOH/10% H2O，調節劑0.1% TFA，0.00分鐘=10% B，15分鐘=100% B，流速=40 mL/min。
對掌性HPLC方法：
方法A：CHIRALCEL OJH(250×4.6)mm 5微米
移動相：0.2% DEA之正己烷溶液：乙醇(80：20)
方法B：CHIRALPAK AD-H(250×4.6)mm 5微米
移動相A：0.2% DEA之正己烷溶液(70)B：乙醇(30)
方法C：CHIRALPAK-ASH(250×4.6)mm 5微米
移動相A：0.2% DEA之正己烷溶液：乙醇(90：10)
分析型HPLC方法：
方法A：Waters分析型sunfire管柱(4.6×150 mm，3.5 μm)；移動相： 緩衝液：0.05% TFA之H2O溶液，pH=2.5，用氨調節
A=緩衝液及乙腈(95：5)，B=乙腈及緩衝液(95：5)；0-15分鐘，0% B→50% B；15-18分鐘，50% B→100% B；18-23分鐘，100% B；流速=1 mL/min；λ=254 nm及220 nm；操作時間=28分鐘。
方法B：Waters分析型phenyl xbridge管柱(4.6×150 mm，3.5 μm)；移動相：緩衝液：0.05% TFA之H2O溶液，pH=2.5，用氨調節
A=緩衝液及乙腈(95：5)，B=乙腈及緩衝液(95：5)；0-15分鐘，0% B→50% B；15-18分鐘，50% B→100% B；18-23分鐘，100% B；流速=1 mL/min；λ=254 nm及220 nm；操作時間=28分鐘。
實例1
(R)-1-(5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
部分A. 4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯甲醛
如下使4-溴-2-羥基苯甲醛轉化為其鈉鹽：用1 N NaOH水溶液(15.7 mL，1.05當量)處理4-溴-2-羥基苯甲醛(3.0 g，24.9 mmol)於MeOH(約150 mL)中之溶液。在減壓下濃縮所得淺黃色溶液。向殘餘物中添加EtOH(30 mL)且在減壓下濃縮溶液。用EtOH(30 mL)隨後用庚烷(50 mL)重複此操作。將所得黃色粉末狀鈉鹽在攪拌下溶解於DMF(60 mL)中且向其中添加丙炔基溴之甲苯溶液(80 wt%，2.33 mL，1.4當量)。在環境溫度下攪拌反應混合物22小時，之後在減壓下濃縮揮發物。使殘餘物分配於EtOAc(70 mL)與水(40 mL)之間。分離有機層且用木炭(約1 g)處理，隨後乾燥(Na2SO4)且過濾。在減壓下濃縮濾液。使所得殘餘物自EtOAc及己烷(3：7)結晶。產物I提供呈無色針狀之4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯甲醛(893 mg)。在減壓下濃縮母液且再次自EtOAc及己烷(7：93)結晶，獲得另一產物II4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯甲醛(1.902 g)。再次濃縮母液且如先前所述再進行一次結晶。產物III產生額外4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯甲醛(344 mg)。合併所有三批產物，總共得到3.14 g(87%產率)呈無色針狀之4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯甲醛。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 10.43(s,1 H),7.74(d,J=8.2 Hz,1 H),7.31(d,J=1.5 Hz,1 H),7.24-7.28(m,1 H),4.85(d,J=2.4 Hz,2H),2.64 (t,J=2.4 Hz,1H)；LCMS(方法A)(ESI)m/e 239.0,241.0 Br模式[(M+H)+,C10H7BrO2之計算值為239.0]；相較於起始物質醛之R f 0.43，SiO2 TLC(EtOAc：己烷=1：9)顯示R f 為0.32。
部分B. (E)-3-(4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯基)丙烯醛
在環境溫度下在氮氣下攪拌4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯甲醛(0.852 g，3.56 mmol)及甲醯基亞甲基三苯基磷烷(2.2g，7.12 mmol，2當量)懸浮於THF(20 mL)中之混合物18小時，隨後在50℃下再攪拌24小時。經由矽膠床(約25 g)用EtOAc：己烷(1：4，300 mL)溶離來過濾反應混合物。在減壓下濃縮濾液且藉由矽膠層析使用EtOAc：己烷(1：19至1：9)之線性梯度來純化殘餘物。在減壓下濃縮含有標題化合物及其Z-異構體(比率為39：11，藉由NMR獲悉)之經彙總溶離份，得到(E)-3-(4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯基)丙烯醛(0.69 g，2.6 mmol，57%產率)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 9.71(d,J=7.6 Hz,1H),7.77(d,J=16.2 Hz,1H),7.45(d,J=8.2 Hz,1H),7.26-7.17(m,2H),6.77(dd,J=16.2,7.6 Hz,1H),4.82(d,J=2.4 Hz,1H),4.80-4.75(m,1H),2.62(t,J=2.4 Hz,1H)。Z-異構體在δ 9.87(d,J=7.9 Hz)下展示醛質子，且在δ 6.22下展示烯烴質子之較小順式偶合(J=11.4 Hz)。LCMS(方法B)(ESI)m/e 265.0,267.0 Br模式[(M+H)+,C12H9BrO2之計算值為265.0]。
部分C. (E)-2-((E)-3-(4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯基)亞烯丙基)-1,1-二甲基肼
在冰浴中在攪拌下冷卻(E)-3-(4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯基)丙烯醛(2.85 g，10.8 mmol)於含有無水MgSO4(16 g)之二氯甲烷(200 mL)中之溶液。向冰冷溶液中逐滴添加1,1-二甲基肼(2.45 mL，32.4 mmol)且使反應混合物升溫至環境溫度且攪拌18小時。在減壓下濃縮揮發物且將殘餘物依序與二氯甲烷(50 mL)、二氯乙烷(50 mL)及庚烷(50 mL)一起共蒸發。獲得呈黃色粉狀之(E)-2-((E)-3-(4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯基)亞烯丙基)-1,1-二甲基肼(2.7 g，8.79 mmol，90%產率，90%純度)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 7.39(d,J=7.9 Hz,1H),7.20-7.10(m,3H),7.00-6.86(m,2H),4.75(d,J=2.3 Hz,2H),2.95(s,6H),2.58(t,J=2.3 Hz,1H)；LCMS(方法B)(ESI)m/e 307.0,309.0 Br模式[(M+H)+,C14H15BrN2O之計算值為307.0]。
部分D. 8-溴-5H- 烯并[3,4-c]吡啶
在50℃下藉由氬氣鼓泡約15分鐘同時在厚玻璃小瓶中音波處理將(E)-2-((E)-3-(4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯基)亞烯丙基)-1,1-二甲基肼(116 mg，374 mmol)及2,6-二第三丁基-4-甲基酚(82 mg，374 mmol)於均三 甲苯(4.5 mL)中之溶液脫氣。在氬氣下將小瓶封蓋且在攪拌下在油浴中加熱至140℃後維持138小時(5.75天)。冷卻反應混合物至環境溫度且在減壓下濃縮溶劑。藉由矽膠層析用EtOAc：二氯甲烷(1：19)作為溶離劑來純化深色殘餘物。合併含有所要產物之溶離份且在減壓下濃縮，得到呈淺黃色粉末狀之8-溴-5H-烯并[3,4-c]吡啶(27 mg，0.088 mmol，25%產率，基於89%純度)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.63(d,J=5.2 Hz,1H),8.45(s,1H),7.62(d,J=8.2 Hz,1H),7.52(d,J=5.2 Hz,1H),7.27-7.22(m,2H),5.20(s,2H)；LCMS(方法A)(ESI)m/e 262.0,264.0 Br模式[(M+H)+,C14H15BrN2O之計算值為262.0]。
部分E. (R)-2-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮
如WO 2005/041684 A2中所述製備標題化合物(75%產率，基於4 mmol規模)。所得產物具有與所報導類似之光譜特徵。
部分F. (R)-1-(5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
使氮氣緩慢鼓泡通過厚玻璃小瓶中8-溴-5H-烯并[3,4-c]吡啶(26 mg，0.1 mmol)、(R)-2-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(116 mg，0.47 mmol，4.7當量)、5-(二第三丁基膦基)-1',3',5'-三苯基-1'H-1,4'-聯吡唑(30 mg，0.06 mmol，0.6當量)、Cs2CO3(49 mg，0.15 mmol，1.5當量)及Pd(OAc)2(7 mg，0.03 mmol，0.3當量)於甲苯(0.5 mL)中之懸浮液5分鐘。將小瓶封蓋，隨後在80℃下加熱19小時。冷卻反應混合物至環境溫度且經由矽藻土用二氯甲烷洗滌來過濾。在減壓下濃縮經合併之濾液且經由矽膠層析用EtOAc：DCM(1：4)作為溶離劑來純化所得殘餘物。在減壓下濃縮含有所要產物(以及雜質)之溶離份，得到(R)-2-(1-(5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮：1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.54(d,J=5.2 Hz,1H),8.37(s,1H),7.89-7.82(m,2H),7.77-7.70(m,2H),7.59(d,J=8.9 Hz,1H),7.41(d,J=5.5 Hz,1H),6.60(dd,J=8.7,2.6 Hz,1H),6.51(d,J=2.4 Hz,1H),5.12(s,2H),4.85-4.75(m,1H),4.57(t,J=9.5 Hz,1H),4.18(dd,J=9.5,4.9 Hz,1H),2.27-2.17(m,1H),1.63-1.54(m,2H),1.00(d,J=5.8 Hz,3H),0.97(d,J=6.1 Hz,3H)。藉由質子NMR確定混合物為所要產物、試劑及衍生自催化劑之氧化膦，比率相應為約10：10：3。此混合物不經進一步純化即如下進行下一步驟-去除酞醯亞胺基之保護基：將(R)-2-(1-(5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(44 mg，0.102 mmol)於乙醇(2 mL)中之溶液與肼(0.022 mL，714 mmol)組合且在45℃下攪拌溶液3小時。冷卻反應混合物至室溫且用乙醚(10 mL)稀釋，隨後過濾。在減壓下濃縮濾液且藉由製備型HPLC(方法A)純化殘餘物。獲得呈淺黃色油狀之(R)-1-(5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺(23 mg，0.077 mmol，43%產率，兩個步驟)。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ 8.71-8.57(m,2H),8.24(d,J=6.4 Hz,1H),8.08(m,1H),6.95(dd,J=8.9,2.4 Hz,1H),6.80(d,J=2.4 Hz,1H),5.37(s,2H),4.36(m,1H),4.19(dd,J=10.5,6.4 Hz, 1H),3.78-3.66(m,1H),1.88-1.76(m,1H),1.75-1.60(m,2H),1.09-0.98(m,6H)；LCMS(方法A)(ESI)m/e 299.2[(M+H)+,C18H22N2O2之計算值為299.2]；旋光度：[α]20 D(MeOH)=-5.9°。
實例2
(R)-1-(5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-3-苯基丙-2-胺
部分A. (R)-2-(1-羥基-3-苯基丙-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮
按照實例1部分E中關於合成(R)-2-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮所述之相同方案製備標題化合物。由此製備之化合物具有Sikoraiova,J.等人，J.Heterocyclic.Chem.2002,39,383中所述之特性。
部分B. (R)-1-(5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-3-苯基丙-2-胺
按照實例1部分F中所述之相同方案製備標題化合物(46%產率，基於30 mg(103 mmol)規模)。在製備型HPLC(方法B)純化後，獲得呈淺黃色油狀之(R)-1-(5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-3-苯基丙-2-胺。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ 8.72-8.59(m,2H),8.24(d,J=6.4 Hz,1H),8.07(d,J=8.9 Hz,1H),7.43-7.36(m,2H),7.36-7.29(m,3H),6.93(dd,J=8.9,2.4 Hz,1H),6.74(d,J=2.4 Hz,1H),5.36(s,2H),4.27(dd,J=10.7,3.1 Hz,1H),4.11(dd,J=10.7,5.5 Hz,1H),3.96-3.88(m,1H),3.15(d,J=7.6 Hz,2H)；LCMS(方法A)(ESI)m/e 333.2[(M+H)+,C21H21N2O2之計算值為333.2]。
實例3
(R)-1-(5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丁-2-胺
部分A. (R)-2-(1-羥基丁-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮
按照實例1部分E中關於合成(R)-2-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮所述之相同方案製備標題化合物。由此製備之化合物具有Sikoraiova,J.等人，J.Heterocyclic.Chem. 2002,39,383中所述之特性。
部分B. (R)-1-(5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丁-2-胺
按照實例1部分F中所述之相同方案製備標題化合物(21%產率，基於26 mg(100 mmol)規模)。在製備型HPLC純化(方法B)後，獲得呈淺黃色油狀之(R)-1-(5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丁-2-胺：1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ 8.74-8.60(m,2H),8.24(d,J=6.4 Hz,1H),8.08(d,J=8.9 Hz,1H),6.95(dd,J=8.9,2.4 Hz,1H),6.80(d,J=2.4 Hz,1H),5.37(s,2H),4.36(dd,J=10.4,3.4 Hz,1H),4.21(dd,J=10.5,6.6 Hz,1H),3.59(m,1H),1.96-1.77(m,2H),1.13(t,J=7.6 Hz,3H)；LCMS(方法A)(ESI)m/e 271.1[(M+H)+,C16H19N2O2之計算值為271.1]。
實例4
(S)-1-(5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丁-2-胺
部分A. (S)-2-(1-羥基丁-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮
按照實例1部分E中關於合成(R)-2-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮所述之相同方案製備標題化合物。由此製備之化合物具有(Sikoraiova,J.等人，J.Heterocyclic.Chem. 2002,39,383)中所述之特性。
部分B. (S)-1-(5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丁-2-胺
按照實例1部分F中所述之相同方案製備標題化合物(19%產率，基於26 mg(100 mmol)規模)。在製備型HPLC純化(方法C)後，獲得呈淺黃色油狀之(S)-1-(5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丁-2-胺：1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ 8.74-8.60(m,2H),8.24(d,J=6.4 Hz,1H),8.08(d,J=8.9 Hz,1H),6.95(dd,J=8.9,2.4 Hz,1H),6.80(d,J=2.4 Hz,1H),5.37(s,2H),4.36(dd,J=10.4,3.4 Hz,1H),4.21(dd,J=10.5,6.6 Hz,1H),3.59(m,1H),1.96-1.77(m,2H),1.13(t,J=7.6 Hz,3H)；LCMS(方法A)(ESI)m/e 271.1[(M+H)+,C16H19N2O2之計算值為271.1]。
實例5
(S)-1-(5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
部分A. 4-溴菸鹼醛
在-78℃下在氮氣氛圍下向經攪拌之二異丙胺(9.02 mL，63.3 mmol)於THF(75 mL)中之溶液中逐滴添加正丁基鋰(1.6 M己烷溶液)(30 mL，76 mmol)。完成添加後，在-78℃下攪拌溶液30分鐘。逐份添加4-溴吡啶鹽酸鹽(5 g，31.6 mmol)且在-78℃下攪拌所得溶液1小時。隨後在-78℃下向溶液中逐滴添加DMF(2.94 mL，38.0 mmol)。使反應混合物緩慢升溫至室溫且攪拌12小時。用3 N HCl淬滅反應混合物且攪拌2小時。用飽和碳酸氫鈉溶液中和溶液，用EtOAc(75 mL)萃取，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到4-溴菸鹼醛(3.75 g，20.16 mmol，64%產率)。粗產物不經純化即用於下一步驟中。1H NMR(400 MHz,CDCl 3 )δ 10.39(s,1H),9.00(s,1H),8.56(d,J=5.2 Hz,1H),7.62(d,J=5.2 Hz,1H)。
部分B. 4-(4-氯-2-氟苯基)菸鹼醛
向4-溴菸鹼醛(3.00 g，16.13 mmol)、(4-氯-2-氟苯基)硼酸(2.81 g，16.13 mmol)、碳酸銫(10.51 g，32.3 mmol)及Pd(PPh3)4(0.932 g，0.806 mmol)之混合物中添加THF(50 mL)及水(8 mL)。使氮氣鼓泡通過經攪拌之懸浮液5分鐘。在85℃下在氮氣氛圍下攪拌反應混合物6小時。隨後冷卻反應混合物至室溫且經由矽藻土過濾。用乙酸乙酯(30 mL)稀釋濾液且用水(1×25 mL)及鹽水(1×25 mL)洗滌。經硫酸鈉乾燥經合併之有機萃取物且在減壓下濃縮。經由矽膠層析(乙酸乙酯/己烷)純化粗殘餘物，得到4-(4-氯-2-氟苯基)菸鹼醛(1.5 g，6.37 mmol，39%產率，兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl 3 )δ 10.01(s,1H),9.18(s,1H),8.86(d,J=5.1 Hz,1H),7.30(m,4H)。
部分C. (4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)甲醇
向已冷卻至0℃之4-(4-氯-2-氟苯基)菸鹼醛(3 g，12.73 mmol)於甲醇(5 mL)與四氫呋喃(5 mL)之混合物中之溶液中添加NaBH4(0.722 g，19.10 mmol)且攪拌溶液30分鐘。藉由添加水(10 mL)淬滅反應物。用乙酸乙酯(3×15 mL)萃取溶液。用水(1×15 mL)及鹽水(1×15 mL)洗滌經合併之有機萃取物，用硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)甲醇，其不經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS(ESI)m/e 238[(M+H)+,C12H10ClFNO之計算值為238.0]。
部分D. 8-氯-5H- 烯并[3,4-c]吡啶
在0℃下向(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)甲醇(2.89 g，12.14 mmol)於THF(10 mL)中之經冷卻溶液中添加氫化鈉(1.94 g，48.6 mmol)於THF(10 mL)中之懸浮液，且在0℃下攪拌所得混合物40分 鐘。藉由添加冷水(15 mL)淬滅反應物且用乙酸乙酯(3×15 mL)萃取。用硫酸鈉乾燥經合併之有機萃取物且在減壓下濃縮。藉由管柱層析(50%乙酸乙酯之石油醚溶液)純化如此獲得之殘餘物，得到呈白色固體狀之8-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶(1.6 g，7.35 mmol，61%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.54(d,J=5.60 Hz,1H),8.43(s,1H),7.89(d,J=8.40 Hz,1H),7.76(d,J=5.60 Hz,1H),7.14(dd,J=2.40,8.40 Hz,1H),7.07(d,J=2.00 Hz,1H),5.24(s,2H)；LCMS(ESI)m/e 218[(M+H)+,C12H9ClNO之計算值為218.0]。
部分E. (S)-2-(1-((5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮
向經攪拌之8-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶(1 g，4.59 mmol)、(S)-2-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(3.43 g，13.88 mmol)、二第三丁基(2',4',6'-三異丙基-[1,1'-聯苯]-2-基)膦(1.17 g，2.76 mmol)及碳酸銫(2.245 g，6.89 mmol)於甲苯(4 mL)中之懸浮液中添加乙酸鈀(II)(0.309 g，1.38 mmol)。使氮氣鼓泡通過混合物5分鐘，隨後在80℃下加熱混合物14小時。用乙酸乙酯(25 mL)稀釋反應物且經由矽藻土過濾。用水(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌濾液，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。經由矽膠管柱層析(60%乙酸乙酯之己烷溶液)純化殘餘物，得到呈半固體狀之(S)-2-(1-((5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4- 甲基戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(2 g，4.67 mmol，定量產率)。LCMS(ESI)m/e 429[(M+H)+,C26H25N2O4之計算值為429.2]。
部分F. (S)-1-(5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
在室溫下在氮氣氛圍下向(S)-2-(1-((5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(1.47 g，3.43 mmol)於乙醇(8 mL)中之溶液中添加肼(0.754 mL，24.02 mmol)，隨後在45℃下於油浴中攪拌反應混合物3小時。在反應過程中形成白色沈澱物。藉由添加水(15 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(3×15 mL)萃取產物。用硫酸鈉乾燥經合併之有機萃取物且在減壓下濃縮。藉由製備型HPLC在逆相C-18管柱上使用10 mM乙酸銨緩衝液及乙腈梯度純化殘餘物。在減壓下濃縮溶離份且凍乾，得到呈黃色固體狀之(S)-1-((5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺(0.4 g，0.970 mmol,39%產率)。1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.48(d,J=5.6 Hz,1H),8.37(s,1H),7.86(d,J=8.8 Hz,1H),7.70(d,J=5.2 Hz,1H),6.83(dd,J=8.4,2.4,1H),6.70(d,J=2.4 Hz,1H),5.20(s,2 H),4.28(dd,J=11.2,3.6,1H),4.10(dd,J=10.4,6.4,1H),3.66(m,1H),1.82(m,1H),1.69-1.63(m,2H),1.04(m,6H)；LCMS(ESI)m/e 299.2[(M+H)+,C18H22N2O2之計算值為299.38]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.78分鐘。HPLC滯留時間(方法A)：t R=7.97分鐘；對掌性HPLC滯留時間(方法C)：t R=12.87分鐘；旋光度：[α]20 D(MeOH)=+7.1°。
實例6
(2S)-4-甲基-1-(5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺
部分A. 1-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)乙醇
在-60℃下向4-(4-氯-2-氟苯基)菸鹼醛(0.12 g，0.509 mmol)(如實例5部分B製備)於無水THF(15 mL)中之溶液中逐滴添加溴化甲基鎂(3.0 M之乙醚溶液)(0.364 g，3.06 mmol)。完成添加後，在-60℃下攪拌溶液10分鐘。隨後使反應混合物升溫至室溫且攪拌1小時。藉由添加飽和氯化銨水溶液(15 mL)淬滅反應物。用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取有機相且用水(1×15 mL)及鹽水(1×15 mL)洗滌。經硫酸鈉乾燥經合併之有機萃取物且在減壓下濃縮。經由製備型TLC(20%乙酸乙酯之己烷溶液)純化殘餘物，得到呈灰白色固體狀之1-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)乙醇(40 mg，0.159 mmol，31%產率)：1H NMR(400 MHz,CDCl 3 )δ 8.89(s,1H),8.50(s,1H),7.15-7.26(m,3H),7.07(d,J=3.8 Hz,1H),4.82(q,J=6.3 Hz,1H),3.06(bs,1H),1.40(d,J=6.3 Hz,3H)。
部分B. 8-氯-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶
向經攪拌之NaH(3.81 mg，0.159 mmol)於無水THF(5 mL)中之懸浮液中逐滴添加1-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)乙醇(20 mg，0.079 mmol)於THF(5 mL)中之溶液，且在室溫下攪拌反應混合物4小時。藉由添加飽和氯化銨溶液(15 mL)淬滅反應物且用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取產物。用水(1×15 mL)及鹽水(1×15 mL)洗滌經合併之有機相，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。經由製備型TLC(40%乙酸乙酯之己烷溶液)純化殘餘物，得到8-氯-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶(12 mg，0.052 mmol，63%產率)。1H NMR(400 MHz,CDCl 3 )δ 8.59(d,J=5.2 Hz,1H),8.42(s,1H),7.66(d,J=8.3 Hz,1H),7.49(d,J=5.2 Hz,1H),7.06(m,2H),5.36(q,J=6.6 Hz,1H),1.66(d,J=6.6 Hz,3H)；LCMS(ESI)m/e 232[(M+H)+,C13H11ClNO之計算值為232.1]。
部分C. 2-((2S)-4-甲基-1-(5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮
向經攪拌之8-溴-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶(200 mg，0.724 mmol)於甲苯(4 mL)中之溶液中添加(S)-2-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(537 mg，2.173 mmol)、二第三丁基(2',4',6'-三異丙基-[1,1'-聯苯]-2-基)膦(185 mg，0.435 mmol)、碳酸銫(354 mg，1.086 mmol)及乙酸鈀(II)(48.8 mg，0.217 mmol)。使氮氣鼓泡通過反應混合物10分鐘且在80℃下加熱混合物12小時。冷卻反應混合物至室溫，經由矽藻土過濾且用乙酸乙酯沖洗殘餘物。在減壓下濃縮濾液且經由製備型TLC(60%乙酸乙酯之石油醚溶液)純化，得到2-((2S)-4-甲基-1-(5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(205 mg，0.463 mmol，64%產率)。LCMS(ESI)m/e 443.2[(M+H)+,C27H27N2O4之計算值為443.2]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=2.27分鐘。
部分D. (2S)-4-甲基-1-(5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺
向1-((2S)-4-甲基-1-((5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)吡咯啶-2,5-二酮(205 mg，0.520 mmol)於乙醇(20 mL)中之溶液中添加單水合肼(260 mg，5.20 mmol)。在45℃下加熱反應混合物5小時。冷卻反應混合物至室溫，添加乙醚(50 mL)且過濾混合物。在減壓下濃縮濾液。將殘餘物溶解於二氯甲烷(2 mL)中且冷卻至0℃。添加4 M HCl之二噁烷溶液，攪拌溶液1小時。在減壓下濃縮反應混合物且將殘餘物溶解於水(5 mL)中。用乙酸乙酯(3×25 mL)洗滌水層。向水層中添加乙腈(2 mL)且凍乾溶液，得到鹽酸鹽形式之(2S)-4-甲基-1-(5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺。經由製備型HPLC(0.1% TFA水溶液及MeCN)純化粗產物，得到(2S)-4-甲基-1-(5- 甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺，2TFA(145 mg，0.268 mmol，52%產率)：1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.64(d,J=6.1 Hz,1H),8.60(s,1H),8.19(d,J=6.1 Hz,1H),8.05(d,J=8.9 Hz,1H),6.92(m,1H),6.78(d,J=2.5 Hz,1H),5.5(m,1H),4.35(m,1H),4.17(m,1H),3.72(m,1H),1.79(m,1H),1.73(d,J=6.6 Hz,3H),1.67(m,2H),1.04(m,6H)；LCMS(ESI)m/e 313.2[(M+H)+,C19H25N2O2之計算值為313.2]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.69分鐘。
藉由製備型對掌性HPLC(0.2% DEA之正己烷溶液、乙醇)解析如此獲得之非對映異構混合物。
非對映異構體1：獲得呈淺黃色油狀之非對映異構體1(0.023 g，0.072 mmol，27%產率)：1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.46(d,J=5.36 Hz,1H),8.36(s,1H),7.83(d,J=8.7 Hz,1H),7.69(d,J=5.2 Hz,1H),6.76(m,1H),6.62(d,J=2.48 Hz,1H),5.39(m,1H),4.03(m,1H),3.85(m,1H),3.32(m,1H),1.82(m,1H),1.64(m,3H),1.43(m,2H),0.99(m,6H)；HPLC滯留時間(方法A)：t R=7.41分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=8.97分鐘。對掌性HPLC滯留時間(方法B)：t R=14.88分鐘。
非對映異構體2：獲得呈淺黃色油狀之非對映異構體2(0.022 g，0.070 mmol，26%產率)：1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.46(d,J=5.36 Hz,1H),8.36(s,1H),7.83(d,J=8.7 Hz,1H),7.69(d,J=5.2 Hz,1H),6.76(m,1H),6.62(d,J=2.48 Hz,1H),5.39(m,1H),4.03(m,1H),3.85(m,1H),3.33(m,1H),1.82(m,1H),1.64(m,3H),1.43(m,2H),0.99(m,6H)；HPLC滯留時間(方法A)：t R=7.45分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=8.93分鐘。對掌性HPLC滯留時間(方法B)：t R=19.41分鐘。
實例7
(2R)-4-甲基-1-(5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺
以類似於實例6之方式製備(2R)-4-甲基-1-(5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺。藉由製備型對掌性HPLC(0.2% DEA之正己烷溶液、乙醇)解析如此獲得之非對映異構混合物。
非對映異構體1：獲得呈黃色固體狀之非對映異構體1(19 mg，0.061 mmol，26%產率)：1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.67(d,J=6.40 Hz,1H),8.65(s,1H),8.26(d,J=6.40 Hz,1H),8.09(d,J=8.80 Hz,1H),6.95(q,J=2.40 Hz,1H),6.80(d,J=2.40 Hz,1H),5.58(q,J=6.40 Hz,1H),4.36(q,J=3.20 Hz,1H),4.18(q,J=6.40 Hz,1H),3.73(q,J=2.80 Hz,1H),1.74-1.85(m,1H),1.72(d,J=2.80 Hz,3H),1.61-1.70(m,2H),1.05(q,J=3.60 Hz,6H)；LCMS(ESI)m/e 313.2[(M+H)+,C19H25N2O2之計算值為313.2]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.73分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=8.06分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=9.11分鐘；對掌性HPLC滯留時間(方法B)：t R=15.34分鐘。
非對映異構體2：獲得呈黃色固體狀之非對映異構體2(31 mg，0.099 mmol，43%產率)：1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.68(d,J=6.40 Hz,1H),8.65(s,1H),8.27(d,J=6.40 Hz,1H),8.09(d,J=8.80 Hz,1H),6.95(dd,J=2.40,8.80 Hz,1H),6.80(d,J=2.80 Hz,1H),5.58(q,J=6.80 Hz,1H),4.36(dd,J=3.60,10.60 Hz,1H),4.19(q,J=6.40 Hz,1H),3.70-3.76 (m,1H),1.74-1.85(m,1H),1.72(d,J=3.20 Hz,3H),1.61-1.70(m,2H),1.05(q,J=4.00 Hz,6H)；LCMS(ESI)m/e 313.2[(M+H)+,C19H25N2O2之計算值為313.2]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.72分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=13.14分鐘，對掌性HPLC滯留時間(方法B)：t R=12.06分鐘。
實例8
(2S)-1-(5-環丙基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
部分A. (4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)(環丙基)甲醇
經20分鐘向已冷卻至-78℃之4-(4-氯-2-氟苯基)菸鹼醛(1.6 g，6.79 mmol)(如實例5部分B中製備)於THF(32 mL)中之溶液中逐滴添加溴化環丙基鎂(27.2 mL，13.58 mmol)。在-78℃下攪拌反應混合物3小時。移除乾冰浴且使反應混合物達室溫。藉由添加飽和氯化銨水溶液(30 mL)淬滅反應混合物。用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取反應混合物。用鹽水(1×50 mL)洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(30%乙酸乙酯之石油醚溶液)純化粗產物，得到(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)(環丙基)甲醇(900 mg，3.24 mmol，48% 產率)。LCMS(ESI)m/e 278.0[(M+H)+,C15H14ClFNO之計算值為278.1]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.62分鐘。
部分B. 8-氯-5-環丙基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶
經10分鐘向已冷卻至0℃之NaH(389 mg，9.72 mmol)於THF(9 mL)中之懸浮液中逐滴添加(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)(環丙基)甲醇(900 mg，3.24 mmol)於THF(9 mL)中之溶液。在0℃下攪拌反應混合物15分鐘，隨後升溫至室溫且攪拌15小時。藉由添加冷水(10 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(3×25 mL)萃取。用鹽水(1×25 mL)洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。經由矽膠管柱層析(乙酸乙酯/己烷)純化粗殘餘物，得到8-氯-5-環丙基-5H-烯并[3,4-c]吡啶(630 mg，2.45 mmol，75%產率)。LCMS(ESI)m/e 258.0[(M+H)+,C15H13ClNO之計算值258.1]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=2.08分鐘。
部分C. 第三丁基-(2S)-1-(5-環丙基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基胺基甲酸酯
向經攪拌之8-氯-5-環丙基-5H-烯并[3,4-c]吡啶(275 mg，1.067 mmol)於甲苯(3 mL)中之溶液中添加(S)-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(696 mg，3.20 mmol)、碳酸銫(427 mg，1.310 mmol)、二第三丁基(2',4',6'-三異丙基-[1,1'-聯苯)-2-基)膦(272 mg，0.640 mmol)及乙酸鈀(II)(71.9 mg，0.320 mmol)。使氮氣鼓泡通過反應混合物10分鐘且在80℃下加熱混合物12小時。冷卻反應混合物至室溫且經由矽藻土過濾。用水(10 mL)稀釋濾液且用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取。用鹽水(1×15 mL)洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。經由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚)純化粗產物，得到第三丁基-(2S)-1-(5-環丙基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基胺基甲酸酯(205 mg，0.57 mmol，50%產率)。LCMS(ESI)m/e 439.2[(M+H)+,C26H35N2O4之計算值為439.3]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=2.16分鐘。
部分D. (2S)-1-(5-環丙基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
經5分鐘向已冷卻至0℃之((2S)-1-((5-環丙基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(250 mg，0.570 mmol)於CH2Cl2(4 mL)中之溶液中緩慢添加1 N HCl之二噁烷溶液(2 mL，0.570 mmol)。在0℃下攪拌反應混合物5分鐘，隨後升溫至室溫且攪拌2小時。藉由在減壓下濃縮移除溶劑。用乙酸乙酯洗滌粗產 物，得到鹽酸鹽形式之(2S)-1-(5-環丙基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺(240 mg 42%產率)。LCMS(ESI)m/e 339.2[(M+H)+,C21H27N2O2之計算值339.2]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.28分鐘。藉由製備型HPLC(0.2% DEA之正己烷溶液、乙醇)解析胺之非對映異構混合物。
非對映異構體1：獲得呈黃色油狀之非對映異構體1(45 mg，0.133 mmol，23%產率)。1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.48(s,1H),8.47(d,J=5.5 Hz,1H),7.83(d,J=8.7 Hz,1H),7.70(d,J=5.3 Hz,1H),6.75(m,1H),6.65(d,J=2.4 Hz,1H),4.52(d,J=8.9 Hz,1H),4.04(m,1H),3.87(m,1H),3.29(m,1H),1.82(m,1H),1.39(m,3H),0.99(m,6H),0.70(m,2H),0.61(m,1H),0.52(m,1H)；LCMS(ESI)m/e 339.2[(M+H)+,C21H27N2O2之計算值為339.2]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.46分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=8.92分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=10.33分鐘；對掌性HPLC滯留時間(方法C)：t R=10.3分鐘。
非對映異構體2：獲得呈黃色油狀之非對映異構體2(35 mg，0.103 mmol，18%產率)。1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.48(s,1H),8.47(d,J=5.4 Hz,1H),7.83(d,J=8.7 Hz,1H),7.70(d,J=5.3 Hz,1H),6.75(m,1H),6.65(d,J=2.4 Hz,1H),4.52(d,J=8.9 Hz,1H),4.04(m,1H),3.85(m,1H),3.33(m,1.H),1.83(m,1H),1.39(m,3H),0.99(m,6H),0.70(m,2H),0.53-0.61(m,2H)；LCMS(ESI)m/e 339.2[(M+H)+,C21H27N2O2之計算值為339.2]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.46分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=8.89分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=10.34分鐘；對掌性HPLC滯留時間(方法C)：t R=14.11分鐘。
實例9
(2R)-4-甲基-1-(5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺
以類似於實例8之方式製備(2R)-4-甲基-1-(5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺。使用對掌性製備型HPLC(0.2% DEA之正己烷溶液及乙醇)解析非對映異構混合物。
非對映異構體1：獲得呈黃色油狀之非對映異構體1(0.03 g，0.089 mmol，19%產率)：1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.48(d,J=1.60 Hz,1H),8.47(s,1H),7.83(d,J=8.80 Hz,1H),7.70(d,J=5.20 Hz,1H),6.76(dd,J=2.80,8.60 Hz,1H),6.66(d,J=2.40 Hz,1H),4.52(d,J=9.20 Hz,1H),4.05(dd,J=3.60,9.40 Hz,1H),3.87(q,J=7.20 Hz,1H),3.32-3.33(m,1H),1.81-1.84(m,1H),1.32-1.52(m,3H),0.98-1.02(m,6H),0.71(dd,J=2.80,4.60 Hz,2H),0.50-0.54(m,2H)；LCMS(ESI)m/e 339.2[(M+H)+,C21H27N2O2之計算值為339.2]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.33分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=4.51分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=5.18分鐘；對掌性HPLC滯留時間(方法C)：t R=11.01分鐘。
非對映異構體2：獲得呈黃色油狀之非對映異構體2(0.028 g，0.083 mmol，18%產率)：1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.48(d,J=1.60 Hz,1H),8.47(s,1H),7.83(d,J=8.80 Hz,1H),7.70(d,J=5.60 Hz,1H),6.75(dd,J=2.40,8.80 Hz,1H),6.65(d,J=2.40 Hz,1H),4.52(d,J=9.20 Hz,1H),4.03(dd,J=3.60,9.40 Hz,1H),3.86(dd,J= 7.20,9.40 Hz,1H),3.20-3.28(m,1H),1.79-1.86(m,1H),1.38-1.46(m,3H),1.00(q,J=6.40 Hz,6H),0.72(d,J=2.80 Hz,2H),0.51-0.65(m,2H)，LCMS(ESI)m/e 339.2[(M+H)+,C21H27N2O2之計算值為339.2]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.34分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=4.55分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=5.18分鐘；對掌性HPLC滯留時間(方法C)：t R=14.57分鐘。
實例10
(2S)-1-(5-乙基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
部分A. 1-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)丙-2-烯-1-醇
在-70℃下向經攪拌之4-(4-氯-2-氟苯基)菸鹼醛(0.5 g，2.122 mmol)(如實例5部分B中製備)於THF(25 mL)中之溶液中逐滴添加溴化乙烯基鎂(1.0 M之THF溶液)(6.37 mL，6.64 mmol)且在此溫度下攪拌溶液45分鐘。用飽和氯化銨水溶液(20 mL)淬滅反應物且用乙酸乙酯(2×15 mL)萃取。用鹽水(1×15 mL)洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。粗產物不經純化即用於下一步驟中。LCMS(ESI)m/e 264[(M+H)+,C14H12ClFNO之計算值為264.0]；LC/MS滯留 時間(方法C)：t R=1.59分鐘。
部分B. 8-氯-5-乙烯基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶
向經攪拌之NaH(0.182 g，7.58 mmol)於THF(30 mL)中之懸浮液中添加1-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)丙-2-烯-1-醇(0.5 g，1.896 mmol)溶解於THF(5 mL)中之溶液，且在室溫下攪拌反應混合物2小時。藉由添加飽和氯化銨水溶液(5 mL)淬滅反應物且用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取。用鹽水(1×10 mL)洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。粗8-氯-5-乙烯基-5H-烯并[3,4-c]吡啶不經純化即用於下一步驟中。1H NMR(400 MHz,CDCl 3 )δ 8.61(d,J=5.2 Hz,1H),8.40(s,1H),7.65(d,J=8.8 Hz,1H),7.5(d,J=5.2 Hz,1H),7.06(d,J=2.2 Hz,2H),6.09(m,1H),5.70(d,J=6.2 Hz,1H),5.37(m,1H),5.28(m,1H)。
部分C. 2-((2S)-4-甲基-1-(5-乙烯基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮
向經攪拌之8-氯-5-乙烯基-5H-烯并[3,4-c]吡啶(0.2 g，0.821 mmol)、(S)-2-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(0.609 g，2.462 mmol)、2-二第三丁基膦基-2,4,6-三異丙基聯苯(0.209 g，0.492 mmol)及碳酸銫(0.401 g，1.231 mmol)於甲苯(25 mL)中之懸浮液中添加乙酸鈀(II)(0.055 g，0.246 mmol)。使氮氣鼓泡通過混合物5分鐘，隨後加熱反應混合物至80℃後維持14小時。用乙酸乙酯(25 mL)稀釋反應物且經由矽藻土過濾。用水(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌濾液，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。經由矽膠管柱層析(60%乙酸乙酯之己烷溶液)純化殘餘物，得到2-((2S)-4-甲基-1-(5-乙烯基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(0.3 g，0.660 mmol，40%產率，三個步驟)。LCMS(ESI)m/e 455.2[(M+H)+,C28H27N2O4之計算值為455.2]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=2.16分鐘。
部分D. 2-((2S)-1-(5-乙基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮
向經攪拌之2-((2S)-4-甲基-1-((5-乙烯基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(0.3 g，0.660 mmol)於甲醇(15 mL)中之溶液中添加10%鈀/碳(0.070 g，0.660 mmol)。在室溫下在氫氣氛圍(1個大氣壓)下攪拌所得混合物12小時。隨後經由矽藻土過濾 反應混合物且在減壓下濃縮，得到粗2-((2S)-1-(5-乙基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(0.28 g，0.221 mmol，33%粗產率)；LCMS(ESI)m/e 457.2[(M+H)+,C28H29N2O4之計算值為457.2]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=2.32分鐘。
部分E. (2S)-1-(5-乙基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
向經攪拌之2-((2S)-1-(5-乙基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(0.25 g，0.548 mmol)於乙醇(15 mL)中之溶液中添加肼(0.172 mL，5.48 mmol)，且在40℃下攪拌反應混合物6小時。冷卻反應物至室溫，隨後用DCM(20 mL)稀釋且經由矽藻土床過濾。在減壓下濃縮濾液且藉由製備型HPLC(0.1% TFA水溶液及甲醇)純化，得到(2S)-1-((5-乙基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺(40 mg，21%產率)。藉由SFC(0.5% DEA之甲醇溶液)解析非對映異構混合物。
非對映異構體1：獲得呈灰白色黏稠固體狀之非對映異構體1(2S)-1-((5-乙基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺(12 mg，0.037 mmol，7%產率)。1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.45(d,J=5.4 Hz,1H),8.32(s,1H),7.81(d,J=8.7 Hz,1H),7.69(d,J=5.3 Hz,1H),6.74(m,1H),6.62(d,J=2.4 Hz,1H),5.21(m,1H),4.02(m, 1H),3.83(m,1H),3.25(m,1H),1.94(m,1H),1.79(m,2H),1.42(m,2H),1.06(m,3H),0.99(m,6H)；LCMS(ESI)m/e 327.2[(M+H)+,C20H27N2O2之計算值為327.2]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.48分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=14.09分鐘。
非對映異構體2：獲得呈灰白色黏稠固體狀之非對映異構體2(2S)-1-((5-乙基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺(13 mg，0.04 mmol，7%產率)：1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.45(d,J=5.4 Hz,1H),8.32(s,1H),7.81(d,J=8.7 Hz,1H),7.69(d,J=5.3 Hz,1H),6.74(m,1H),6.62(d,J=2.4 Hz,1H),5.21(m,1H),4.02(m,1H),3.83(m,1H),3.25(m,1H),1.94(m,1H),1.79(m,2H),1.42(m,2H),1.06(m,3H),0.99(m,6H)；LCMS(ESI)m/e 327.2[(M+H)+,C20H27N2O2之計算值為327.2]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.48分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=13.85分鐘。
實例11
(S)-8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-5-酮
部分A. 4-氯菸鹼酸甲酯
在室溫下向4-氯菸鹼酸(0.5 g，3.17 mmol)於CH2Cl2(60 mL)中之 溶液中逐滴添加乙二醯氯(1.007 g，7.93 mmol)，繼而添加DMF(0.4 mL)。在室溫下攪拌溶液3小時。逐滴添加甲醇(1.9 mL，46.8 mmol)且進一步攪拌透明溶液30分鐘。在減壓下蒸發溶劑，得到4-氯菸鹼酸甲酯(0.67 g，3.90 mmol，50%產率)。LCMS(ESI)m/e 172.5[(M+H)+,C7H7ClNO2之計算值為172.0]；LCMS滯留時間(方法D)：t R=1.15分鐘。
部分B. 4-(4-氯-2-氟苯基)菸鹼酸甲酯
向用氮氣吹洗之經攪拌之4-氯菸鹼酸甲酯(7 g，40.8 mmol)、(4-氯-2-氟苯基)硼酸(7.11 g，40.8 mmol)及碳酸銫(26.6 g，82 mmol)於二噁烷(60 mL)與水(8 mL)之混合物中之溶液中添加Pd(PPh3)4(2.83 g，2.448 mmol)，且在85℃下加熱所得混合物15小時。添加水(30 mL)且用EtOAc(1×50 mL)萃取混合物。用水(1×30 mL)及鹽水(1×30 mL)洗滌有機層，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。經由矽膠管柱(30% EtOAc之己烷溶液)純化殘餘物，得到4-(4-氯-2-氟苯基)菸鹼酸甲酯(5 g，18.82 mmol，40%產率)。LCMS(ESI)m/e 266.7[(M+H)+,C13H10ClFNO2之計算值為266.0]；LCMS滯留時間(方法C)：t R=1.73分鐘。
部分C. 4-(4-氯-2-氟苯基)菸鹼酸
向4-(4-氯-2-氟苯基)菸鹼酸甲酯(1 g，3.76 mmol)於MeOH(10 mL)及水(10 mL)中之溶液中添加NaOH(0.602 g，15.06 mmol)且在室溫下攪拌溶液2小時。在減壓下蒸發揮發性有機溶劑。冷卻反應混合物至0℃且用50% HCl水溶液酸化。藉由真空過濾收集如此形成之沈澱物，得到呈灰白色固體狀之4-(4-氯-2-氟苯基)菸鹼酸(0.3 g，1.192 mmol，30%粗產率)，其可直接帶入下一步驟中。1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 9.12(s,1H),8.78(d,J=5.20 Hz,1H),7.29-7.48(m,4H)。
部分D. 8-氯-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-5-酮
向4-(4-氯-2-氟苯基)菸鹼酸(0.3 g，1.192 mmol)於無水DMSO(1 mL)中之溶液中添加Cs2CO3(0.388 g，1.192 mmol)且在60℃下對混合物進行微波加熱2小時。用水稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(2×15 mL)萃取。用水(1×15 mL)及鹽水(1×15 mL)洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到8-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶-5-酮(0.2 g，0.863 mmol，72%產率，2個步驟)。1H NMR(400 MHz,CDCl 3 )δ 9.57(d,J=0.40 Hz,1H),8.98(d,J=5.60 Hz,1H),8.01(d,J=8.80 Hz,1H),7.88(q,J=0.40 Hz,1H),7.44(d,J=2.00 Hz,1H),7.39(q,J=2.00 Hz,1H)；LCMS(ESI)m/e 232.6[(M+H)+,C12H7ClNO2之計算值為232.0]；LCMS滯留時間(方法D)：t R=0.81分鐘。
部分E. (4-甲基-1-((5-側氧基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯
以類似於實例8部分C之方式製備(4-甲基-1-((5-側氧基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯，得到標題產物(0.18 g，0.436 mmol，50%產率)。1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 9.36(s,1H),8.85(d,J=5.6 Hz,1H),8.22(d,J=8.8 Hz,1H),8.15(d,J=5.6 Hz,1H),7.08(m,1H),7.01(d,J=2.4 Hz,1H),4.04-4.07(m,3H),1.48(m,1H),1.46(s,9H),1.36(m,2H),0.94-1.01(m,6H)；LCMS(ESI)m/e 413[(M+H)+,C23H29N2O5之計算值為413.2]；LCMS滯留時間(方法D)：t R=0.96分鐘。
部分F (S)-8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-5-酮
以類似於實例8部分D之方式去除(4-甲基-1-((5-側氧基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯之保護基，得到呈白色固體狀之(S)-8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-5-酮(0.065 g，0.208 mmol，44%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 9.37 (s,1 H),8.80(d,J=10.6 Hz,1 H),8.28(d,J=8.9 Hz,1H),8.22(d,J=5.6 Hz,1 H),7.17(m,1H),7.09(d,J=2.4 Hz,1 H),4.23(m,1 H),4.07(m,1H),3.50(m,1H),1.84(m,1H),1.57(m,2H),1.17(m,6H)；LCMS(ESI)m/e 313.2[(M+H)+,C18H21N2O3之計算值為313.2]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.25分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=4.90分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=5.47分鐘。
實例12
(S)-N-(8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙醯胺
部分A. 4-氯吡啶-2-基胺基甲酸第三丁酯
用氮氣吹洗經攪拌之4-氯吡啶甲酸(0.2 g，1.269 mmol)、DPPA(0.351 g，1.269 mmol)及TEA(0.354 mL，2.54 mmol)於第三丁醇(15 mL)中之溶液5分鐘且在100℃下加熱反應混合物12小時。冷卻混合物至室溫且在減壓下移除揮發物。用水(15 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(3×15 mL)萃取。用鹽水(1×15 mL)洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(15%乙酸乙酯之己烷溶液)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(4-氯吡啶-2-基)胺基甲 酸第三丁酯(0.17 g，0.743 mmol，59%產率)。1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.23(d,J=5.2 Hz,1H),7.88(d,J=5.2 Hz,1H),7.16(m,1H),1.48(s,9 H)。
部分B. 4-氯-3-甲醯基吡啶-2-基胺基甲酸第三丁酯
向已冷卻至-78℃之經攪拌之(4-氯吡啶-2-基)胺基甲酸第三丁酯(1.00 g，4.37 mmol)於THF(30 mL)中之溶液中逐滴添加正丁基鋰(2.55 M之己烷溶液，4.1 mL，10.06 mmol)。完成添加後，在-78℃下攪拌溶液1小時。逐滴添加DMF(1.591 mL，20.55 mmol)且在-78℃下再攪拌所得溶液1小時。隨後藉由添加飽和氯化銨水溶液(20 mL)淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(2×25 mL)萃取。用鹽水(1×20 mL)洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。經由中性氧化鋁凝膠層析(乙酸乙酯/己烷)純化粗殘餘物，得到呈黃色固體狀之(4-氯-3-甲醯基吡啶-2-基)胺基甲酸第三丁酯(530 mg，2.07 mmol，27%產率)。1H NMR(400 MHz,CDCl 3 )δ 10.73(s,1H),10.55(s,1H),8.52(d,J=5.3 Hz,1H),7.06(d,J=5.3 Hz,1H),1.56(s,9 H)；LCMS(ESI)m/e 255.2[(M-H)-,C11H12ClN2O3之計算值為255.0]；LCMS滯留時間(方法C)：t R=1.73分鐘。
部分C. 4-(4-氯-2-氟苯基)-3-甲醯基吡啶-2-基胺基甲酸第三丁酯
向經攪拌之(4-溴-3-甲醯基吡啶-2-基)胺基甲酸第三丁酯(100 mg，0.332 mmol)、(4-氯-2-氟苯基)硼酸(57.9 mg，0.332 mmol)及碳酸銫(216 mg，0.664 mmol)於THF(50 mL)及水(8 ml)中之懸浮液中添加Pd(PPh3)4(19.19 mg，0.017 mmol)，且加熱反應混合物至85℃隔夜。冷卻反應混合物至室溫，用水(30 mL)稀釋且用乙酸乙酯(2×25 mL)萃取。用鹽水(1×25 mL)洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。經由矽膠層析(乙酸乙酯/己烷)純化粗殘餘物，得到4-(4-氯-2-氟苯基)-3-甲醯基吡啶-2-基胺基甲酸第三丁酯(60 mg，0.171 mmol，35%產率)。LCMS(ESI)m/e 349.2[(M-H)-,C17H15ClFN2O3之計算值為349.1]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=2.05分鐘。
部分D. 2-胺基-4-(4-氯-2-氟苯基)菸鹼醛
向經攪拌之(4-(4-氯-2-氟苯基)-3-甲醯基吡啶-2-基)胺基甲酸第三丁酯(0.9 g，2.57 mmol)於CH2Cl2(15 mL)中之溶液中添加TFA(3.95 mL，51.3 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物3小時。藉由添加飽和碳酸氫鈉水溶液溶液(15 mL)淬滅反應物且用CH2Cl2(2×15 mL)萃取。用鹽水(1×15 mL)洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。粗2-胺基-4-(4-氯-2-氟苯基)菸鹼醛(0.6 g，2.40 mmol，41%產率)不經進一步純化即帶入下一步驟中。LCMS(ESI)m/e 251.0[(M+H)+,C12H9ClFN2O之計算值為251.0]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R =1.67分鐘。
部分E. (2-胺基-4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)甲醇
向經攪拌之2-胺基-4-(4-氯-2-氟苯基)菸鹼醛(50 mg，0.199 mmol)於MeOH(2 mL)及THF(5 mL)中之溶液中添加硼氫化鈉(9.06 mg，0.239 mmol)，隨後攪拌溶液1小時。在減壓下移除揮發性有機物且藉由添加飽和氯化銨水溶液(10 mL)淬滅殘餘物。用CH2Cl2(2×10 mL)萃取反應混合物。用鹽水(1×10 mL)洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到(2-胺基-4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)甲醇(50 mg，0.198 mmol，21%產率，兩個步驟)。LCMS(ESI)m/e 253[(M+H)+,C12H11ClFN2O之計算值為253.0]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.48分鐘。
部分F. N-(8-氯-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙醯胺
在0℃下向經攪拌之8-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶-4-胺(0.08 g，0.344 mmol)於吡啶(5 mL)中之溶液中添加乙醯氯(0.024 mL，0.344 mmol)且攪拌溶液2小時。在減壓下移除揮發性有機物且用水(5 mL)稀釋殘餘物。用CH2Cl2(2×15 mL)萃取反應混合物。用鹽水(1×10 mL)洗 滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。粗殘餘物不經純化即進行下一步驟。LCMS(ESI)m/e 273[(M)-,C14H10ClN2O2之計算值為273.1]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.89分鐘。
部分G. (S)-N-(8-((2-(1,3-二側氧基異吲哚啉-2-基)-4-甲基戊基)氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙醯胺
在室溫下向經攪拌之N-(8-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙醯胺(47 mg，0.171 mmol)、(S)-2-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(127 mg，0.513 mmol)、2-二第三丁基膦基-2,4,6-三異丙基聯苯(43.6 mg，0.103 mmol)及碳酸銫(84 mg，0.257 mmol)於甲苯(25 mL)中之溶液中添加乙酸鈀(II)(11.52 mg，0.051 mmol)。使氮氣鼓泡通過溶液5分鐘，且在80℃下加熱混合物14小時。冷卻反應混合物至室溫且用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，隨後經由矽藻土過濾。添加水(30 mL)，分離有機層且用鹽水(1×25 mL)洗滌，用硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。殘餘物不經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS(ESI)m/e 486.2[(M+H)+,C28H28N3O5之計算值為486.2]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=2.07分鐘。
部分H. (S)-N-(8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙醯胺
在室溫下向經攪拌之(S)-(1-((4-乙醯胺基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(150 mg，0.329 mmol)於CH2Cl2(10 mL)中之溶液中添加TFA(0.025 mL，0.329 mmol)且在室溫下攪拌溶液3小時。在減壓下濃縮溶液且藉由製備型HPLC(0.1% TFA水溶液及甲醇)純化樣品，得到呈灰白色固體狀之(S)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙醯胺(40 mg，0.113 mmol，33%產率，三個步驟)。1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.34(d,J=5.3 Hz,1H),7.81(d,J=8.7 Hz,1H),7.58(d,J=5.4 Hz,1H),6.77(m,1H),6.63(d,J=2.4 Hz,1H),4.94(s,2H),4.03(m,1H),3.85(m,1H),3.33(m,1H),2.21(s,3H),1.81(m,1H),1.43(m,2H),0.99(m,6H)；LCMS(ESI)m/e 356.2[(M+H)+,C20H26N3O3之計算值為356.2]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.26分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=8.02分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=9.08分鐘。
實例13
(S)-8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-4-胺
向經攪拌之(S)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙醯胺(20 mg，0.056 mmol)(如實例12部分H中製備)於乙醇(10 mL)與水(2 mL)之混合物中之溶液中添加KOH(31.6 mg，0.563 mmol)，且在70℃下加熱反應物14小時。完成反應後，在減壓下移除揮發性有機溶劑，添加水(20 mL)且用二氯甲烷(2×20 mL)萃取溶液。用水(1×20 mL)洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，獲得呈灰白色固體狀之(S)-8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-4-胺(2.31 mg，7.15 μmol，13%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 7.90(d,J=5.6 Hz,1 H),7.69(d,J=8.7 Hz,1 H),6.98(d,J=5.6 Hz,1 H),6.72(m,1 H),6.6(d,J=2.5 Hz,1 H),5.07(s,2 H),4.10(m,1 H),3.92(m,1 H),3.40(m,1 H),1.82(m,1 H),1.49(m,2 H),1.01(m,6 H)；LCMS(ESI)m/e 314.2[(M+H)+,C18H24N3O2之計算值為314.2]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.21分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=7.52分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=8.68分鐘。
實例14
(S)-1-(9-溴-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
部分A. (S)-1-(5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基胺 基甲酸第三丁酯
向8-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶(0.489 g，2.247 mmol)(如實例5部分D中製備)、(S)-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(1.474 g，6.79 mmol)、二第三丁基(2',4',6'-三異丙基-[1,1'-聯苯]-2-基)膦(0.572 g，1.348 mmol)、乙酸鈀(II)(0.151 g，0.674 mmol)及碳酸銫(1.098 g，3.37 mmol)中添加甲苯(4 mL)。使氮氣鼓泡通過混合物5分鐘，且在80℃下加熱混合物15小時。冷卻反應混合物至室溫且經由矽藻土床過濾。向濾液中添加水(10 mL)且用乙酸乙酯(3×15 mL)萃取產物。用鹽水(1×10 mL)洗滌經合併之有機萃取物，用硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。藉由製備型TLC使用(50%乙酸乙酯之石油醚溶液)純化如此獲得之殘餘物，得到呈半固體狀之(1-((5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(0.4 g，1.00 mmol，45%產率)。LCMS(ESI)m/e 399.2[(M+H)+,C23H31N2O4之計算值為399.5]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=2.16分鐘。
部分B. (S)-1-(9-溴-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯
冷卻(1-((5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(0.072 g，0.181 mmol)於乙腈(5 mL)中之溶液至0℃且攪拌2分鐘。單份添加NBS(0.029 g，0.163 mmol)且在0℃下攪拌反應混合物2小時。在減壓下移除溶劑且添加水(10 mL)。用乙酸乙酯(3×15 mL)萃取產物。用水(1×20 mL)洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾 燥且在減壓下濃縮。經由製備型TLC(40% EtOAc：石油醚)純化殘餘物，獲得(S)-1-(9-溴-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯(30 mg，0.063 mmol，35%產率)。1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.48(d,J=5.4 Hz,1H),8.38(s,1H),8.07(s,1H),7.68(d,J=5.4 Hz,1H),6.73(s,1H),5.21(s,2 H),4.02-3.98(m,3H),1.92-1.71(m,1H),1.56-1.52(m,2H),0.97(t,J=6.8 Hz,6H)。
部分C. (S)-1-(9-溴-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
經5分鐘向已冷卻至0℃之(1-((9-溴-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(0.045 g，0.094 mmol)於二氯甲烷(4 mL)中之溶液中緩慢添加2 M鹽酸之乙醚溶液(6 mL，0.094 mmol)。在0℃下攪拌反應混合物5分鐘，隨後在室溫下攪拌2小時。藉由在減壓下濃縮移除溶劑。將粗產物溶解於水(10 mL)中且用乙醚(3×10 mL)洗滌。濃縮水層且藉由逆相HPLC(0.1% TFA水溶液及乙腈)純化，得到呈黃色固體狀之1-((9-溴-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺(0.016 g，0.042 mmol，45%產率)。1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.68(bs,2H),8.35(s,1H),8.26(s,1H),6.90(s,1H),5.39(s,2H),4.41(m,1H),4.27(m,1H),3.76(m,1H),1.82(m,2H),1.69(m,1H),1.05(m,6H)。LCMS(ESI)m/e 377.0[(M+H)+,C18H22BrN2O2之計算值為377.1]；LC/MS滯留時間(方法D)：t R=1.25分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=8.59分鐘；HPLC滯留時間(方法B)： t R=10.33分鐘。
實例15
8-(((S)-2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-4-胺
部分A. 1-(2-胺基-4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)乙醇
在-60℃下向經攪拌之2-胺基-4-(4-氯-2-氟苯基)菸鹼醛(0.2 g，0.798 mmol)(如實例12部分D中所述製備)於THF(15 mL)中之溶液中添加溴化甲基鎂(3.0 M之THF溶液)(0.82 mL，2.394 mmol)且攪拌反應物30分鐘。用飽和氯化銨溶液淬滅反應物，用乙酸乙酯(2×10 mL)萃取。用鹽水(1×10 mL)洗滌經合併之有機層，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到1-(2-胺基-4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)乙醇(0.2 g，0.691 mmol，87%產率)。LCMS(ESI)m/e 267.0[(M+H)+,C13H13ClFN2O之計算值為267.1]；LC/MS滯留時間(方法D)：t R=1.36分鐘。
部分B. 8-氯-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-4-胺
如實例5部分D中所述使用1-(2-胺基-4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)乙醇製備，得到8-氯-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-4-胺(0.15 g，0.557 mmol，74%產率)。LCMS(ESI)m/e 247.0[(M+H)+,C13H12ClN2O之計算值為247.05]；LC/MS滯留時間(方法D)：t R=1.52分鐘。
部分C. N-(8-氯-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙醯胺
如實例12部分F中所述使用8-氯-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-4-胺製備，得到N-(8-氯-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙醯胺(0.142 g，0.398 mmol，66%產率)。LCMS(ESI)m/e 289.0[(M+H)+,C15H14ClN2O2之計算值為289.1]；LC/MS滯留時間(方法B)：t R=1.62分鐘。
部分D. (S)-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯
在室溫下向經攪拌之(S)-2-胺基-4-甲基戊-1-醇(5 g，42.7 mmol)於四氫呋喃(100 mL)中之溶液中逐滴添加BOC2O(9.91 mL，42.7 mmol)且在室溫下攪拌反應物5小時。完成反應後，在減壓下移除溶劑，得到呈無色油狀之(S)-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(6.3 g，29.0 mmol，68%產率)。1H NMR(400 MHz,DMSO-d-6)δ 6.42(d,J=8.8 Hz,1 H),4.55(m,1 H),3.32(m,1 H),3.27(m,1 H),3.17(m,1 H),1.47(m,1 H),1.37(s,9 H),1.22(m,2 H),0.85(m,6 H)。
部分E. ((2S)-1-((4-乙醯胺基-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯
如實例8部分C中所述使用(S)-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯及N-(8-氯-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙醯胺製備，得到呈黃色固體狀之((2S)-1-((4-乙醯胺基-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(0.6 g，0.882 mmol，51%產率)。LCMS(ESI)m/e 470.2[(M+H)+,C26H36N3O5之計算值為470.3]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.89分鐘。
部分F. N-(8-(((S)-2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙醯胺
在室溫下向經攪拌之((2S)-1-((4-乙醯胺基-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(0.15 g，0.319 mmol)於二氯甲烷(25 mL)中之溶液中添加TFA(0.246 mL，3.19 mmol)且攪拌混合物12小時。完成反應後，在減壓下移除溶劑，得到呈棕色油狀之N-(8-(((S)-2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙醯胺(0.18 g，0.281 mmol，58%產率)。產物不經進一步純化即繼續帶入下一步驟中。LCMS(ESI)m/e 370.2[(M+H)+,C21H28N3O3之計算值為370.2]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.14分鐘。
部分G. 8-(((S)-2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-4-胺
如實例13中所述使用N-(8-(((S)-2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙醯胺製備，得到呈黃色固體狀之8-(((S)- 2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-4-胺(15 mg，0.045 mmol，9%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 7.95(m,2H),7.35(m,1H),6.92(m,1H),6.74(s,1H),5.66(m,1H),4.35(m,1H),4.15(m,1H),3.74(m,1H),1.82-1.72(m,3H),1.52(m,3H),1.04(m,6H)；LCMS(ESI)m/e 328.2[(M+H)+,C19H26N3O2之計算值為328.2]；LC/MS滯留時間(方法D)：t R=1.25分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=8.78分鐘；HPLC滯留時間(方法C)：t R=12.78分鐘。
實例16
(S)-1-((1-氟-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺
部分A. 4-氯-5-氟菸鹼酸
向THF(20 mL)中添加1.6 M正丁基鋰之己烷溶液(9.50 mL，15.21 mmol)且冷卻至-78℃。向此溶液中依序添加二異丙胺(2.167 mL，15.21 mmol)及4-氯-3-氟吡啶(2 g，15.21 mmol)且在-78℃下攪拌溶液6小時。隨後將反應混合物傾倒於碎乾冰上且攪拌直至反應混合物升溫至室溫。藉由添加氯化銨水溶液淬滅反應物，使用濃鹽酸酸化至pH=2用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取。用鹽水(10 mL)洗滌經合併之有機層，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到呈淺黃色固體狀之4-氯-5-氟菸鹼酸(1.7 g，9.68 mmol，64%產率)。LCMS(ESI)m/e 175.9[(M+H)+, C6H4ClFNO2之計算值為176.0]；LC/MS滯留時間(方法F)：t R=0.57分鐘。
部分B. 4-氯-5-氟菸鹼酸甲酯
冷卻4-氯-5-氟菸鹼酸(1.7 g，9.68 mmol)於乙腈(18 mL)中之溶液至0℃。向此溶液中逐滴添加DBU(3.65 mL，24.21 mmol)且攪拌所得溶液30分鐘。逐滴添加碘甲烷(3.03 mL，48.4 mmol)且在室溫下攪拌12小時。在減壓下完全移除揮發物且經由矽膠層析使用乙酸乙酯之己烷溶液的梯度純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之4-氯-5-氟菸鹼酸甲酯(1.2 g，6.33 mmol，65%產率)。LCMS(ESI)m/e 190.0[(M+H)+,C7H6ClFNO2之計算值為190.0]；LC/MS滯留時間(方法F)：t R=0.77分鐘。
部分C. 4-(4-氯-2-氟苯基)-5-氟菸鹼酸甲酯
向4-氯-5-氟菸鹼酸酯(1.2 g，6.33 mmol)於1,4-二噁烷(12 mL)及水(0.5 mL)中之溶液中添加(4-氯-2-氟苯基)硼酸(1.214 g，6.96 mmol)及磷酸氫二鉀(2.205 g，12.66 mmol)。向此混合物中添加PdCl2(dppf)(0.371 g，0.506 mmol)且用N2吹洗溶液10分鐘，隨後加熱至80℃後維持12小時。冷卻混合物至室溫且添加水(25 mL)。用乙酸 乙酯(3×25 mL)萃取溶液。用鹽水(25 mL)洗滌經合併之有機層且在減壓下濃縮，得到殘餘物，藉由矽膠管柱使用乙酸乙酯之己烷溶液的梯度純化，得到呈黃色固體狀之4-(4-氯-2-氟苯基)-5-氟菸鹼酸甲酯(900 mg，3.17 mmol，50%產率)。LCMS(ESI)m/e 284.0[(M+H)+,C13H9ClF2NO2之計算值為284.0]；LC/MS滯留時間(方法F)：t R=1.01分鐘。
部分D. (4-(4-氯-2-氟苯基)-5-氟吡啶-3-基)甲醇
向已冷卻至0℃之4-(4-氯-2-氟苯基)-5-氟菸鹼酸酯(300 mg，1.058 mmol)於四氫呋喃(7 mL)中之溶液中逐滴添加LAH(0.441 mL，1.058 mmol)之THF溶液且攪拌溶液30分鐘。隨後使反應物升溫至室溫且攪拌12小時。用飽和氯化銨水溶液(5 mL)淬滅反應物且用乙酸乙酯(2×5 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥經合併之有機層且在減壓下濃縮，得到呈淺棕色油狀之(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-氟吡啶-3-基)甲醇(200 mg，0.782 mmol，74%產率)。LCMS(ESI)m/e 255.9[(M+H)+,C12H9ClF2NO之計算值為256.0]；LC/MS滯留時間(方法F)：t R=0.89分鐘。
部分E. 8-氯-1-氟-5H- 烯并[3,4-c]吡啶
如實例8部分B中所述使用(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-氟吡啶-3-基)甲醇 製備，得到呈白色固體狀之8-氯-1-氟-5H-烯并[3,4-c]吡啶(35 mg，0.149 mmol，19%產率)。LCMS(ESI)m/e 235.9[(M+H)+,C12H8ClFNO之計算值為236.0]；LC/MS滯留時間(方法F)：t R=0.92分鐘。
部分F. (S)-(1-((1-氟-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯
如實例8部分C中所述使用8-氯-1-氟-5H-烯并[3,4-c]吡啶製備，得到呈淺黃色固體狀之(S)-(1-((1-氟-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(35 mg，0.084 mmol，66%產率)。LCMS(ESI)m/e 417.1[(M+H)+,C23H30FN2O4之計算值為417.2]；LC/MS滯留時間(方法F)：t R=1.00分鐘。
部分G. (S)-1-((1-氟-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺
如實例8部分D中所述使用(S)-(1-((1-氟-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯製備，得到呈白色固體狀之(S)-1-((1-氟-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺，2TFA(12.47 mg，0.022 mmol，26%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD) δ 9.46(d,J=3.2 Hz,1 H),8.29(s,1 H),8.05(d,J=9.2 Hz,1 H),6.87(m,1 H),6.77(d,J=2.4 Hz,1 H),5.2(s,2 H),4.33(m,1 H),4.12(m,1 H),3.69(m,1 H),1.85-1.71(m,3 H),1.1(m,6 H)。LCMS(ESI)m/e 317.0[(M+H)+,C18H22FN2O2之計算值為317.2]；LC/MS滯留時間(方法F)：t R=0.62分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=10.68分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=11.50分鐘。
實例17
1-(5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-5,5,5-三氟戊-2-胺
部分A. 2-(二苯基亞甲基胺基)-5,5,5-三氟戊酸第三丁酯
在氮氣氛圍下經30分鐘向已冷卻至-78℃之經攪拌之2-((二苯基亞甲基)胺基)乙酸第三丁酯(1 g，3.39 mmol)於THF(20 ml)中之溶液中逐滴添加2 M LDA於THF/庚烷/乙基苯(2.54 ml，5.08 mmol)中之溶液。隨後向此混合物中添加三氟甲烷磺酸3,3,3-三氟丙酯(1.083 g，4.40 mmol)。使反應物逐漸升溫至室溫且攪拌4小時。藉由在0℃下添加飽和氯化銨水溶液淬滅反應混合物。隨後用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取反應混合物。用水及鹽水洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥，隨後在減壓下濃縮。藉由矽膠管柱層析使用2%乙酸乙酯之己烷溶液純化粗產物，得到呈黃色油狀之2-((二苯基亞甲基)胺基)-5,5,5-三氟戊酸 第三丁酯(800 mg，2.02 mmol，60%產率)。LCMS(ESI)m/e 391.9[(M+H)+,C22H24F3NO2之計算值為392.2]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=2.49分鐘。
部分B. (S)-2-胺基-5,5,5-三氟戊酸(鹽酸鹽)
在100℃下加熱經攪拌之2-((二苯基亞甲基)胺基)-5,5,5-三氟戊酸第三丁酯(800 mg，2.023 mmol)於50%鹽酸水溶液(0.123 mL，2.023 mmol)中之溶液至回流後維持8小時。冷卻反應混合物至室溫且用乙酸乙酯(10 mL)洗滌。在減壓下濃縮水層，得到呈白色固體狀之2-胺基-5,5,5-三氟戊酸鹽酸鹽(400 mg，1.82 mmol，90%產率)。LCMS(ESI)m/e 171.7[(M+H)+,C5H7F3O2之計算值為172.1]；LC/MS滯留時間(方法H)：t R=0.80分鐘。
部分C. (S)-2-(第三丁氧基羰基胺基)-5,5,5-三氟戊酸
在室溫下向經攪拌之2-胺基-5,5,5-三氟戊酸鹽酸鹽(400 mg，1.503 mmol)於THF(8 mL)及水(8 mL)中之溶液中添加K2CO3(831 mg，6.01 mmol)且攪拌溶液10分鐘。向此混合物中添加BOC2O(656 mg，3.01 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物8小時。在減壓下濃縮反應混合物。用乙酸乙酯(3×5 mL)洗滌水層。用飽和檸檬酸溶液(5 mL)酸化水層，隨後用乙酸乙酯(3×8 mL)萃取。依序用水(3×5 mL)及鹽水(10 mL)洗滌經合併之有機層，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到呈無色油狀之定量2-((第三丁氧基羰基)胺基)-5,5,5-三氟戊酸(500 mg，1.84 mmol)。粗物質不經進一步純化即原樣進行下一步驟。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 5.04(s,1H),4.38(s,1H),2.15-2.28(m,2H),1.91-1.95(m,2H),1.46(s,9H)。
部分D. 5,5,5-三氟-1-羥基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯
在氮氣氛圍下向已冷卻至-10℃之經攪拌之2-((第三丁氧基羰基)胺基)-5,5,5-三氟戊酸(500 mg，1.843 mmol)於THF(15 ml)中之溶液中依序逐滴添加N-甲基嗎啉(0.223 ml，2.028 mmol)及氯甲酸異丁酯(0.266 ml，2.028 mmol)且攪拌30分鐘。過濾反應混合物。將濾液添加至硼氫化鈉(147 mg，3.87 mmol)於水(10 mL)中之溶液中且攪拌5分鐘。用乙酸乙酯(10 mL)稀釋混合物。分離有機層且用鹽水(2×10 mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)且在減壓下蒸發，得到呈白色固體狀之(5,5,5-三氟-1-羥基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(400 mg，1.55 mmol，84%產率)，其不經任何純化即進行下一步驟。1H NMR(400 MHz,CDCl 3 )δ 3.73-3.59(m,3H),2.24-2.16(m,2H),1.87-1.69(m,2H),1.44(s,9H)。
部分E. 1-(5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-5,5,5-三氟戊-2-基胺基甲酸第三丁酯
如實例8部分C中所述使用8-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶製備，得到呈棕色固體狀之(1-((5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-5,5,5-三氟戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(25 mg，9.12 μmol，4%產率)。LCMS(ESI)m/e 439.2[(M+H)+,C22H26F3N2O4之計算值為439.2]LC/MS滯留時間(方法C)：t R=2.04分鐘。
部分F. 1-(5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-5,5,5-三氟戊-2-胺
如實例8部分D中所述使用(1-((5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-5,5,5-三氟戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯製備，得到呈黃色油狀之1-(5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-5,5,5-三氟戊-2-胺(15 mg，0.041 mmol，18%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.68(m,2 H),8.27(d,J=6.4 Hz,1 H),8.11(d,J=8.8 Hz,1 H),6.97(m,1 H),6.83(d,J=2.4 Hz,1 H),5.39(s,2 H),4.39(m,1 H),4.26(m,1 H),3.78(m,1 H),2.5-2.43(m,2 H),2.15-2.07(m,2 H)；LCMS(ESI)m/e 339.1[(M+H)+,C17H18F3N2O2之計算值為339.1]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.76分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=7.46分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=8.75分鐘。
實例18
(S)-N-(8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
部分A. 4-氯吡啶-2-胺
在室溫下向經攪拌之4-氯吡啶-2-胺(8 g，62.2 mmol)於乙腈(600 mL)中之溶液中逐份添加NBS(11.08 g，62.2 mmol)且攪拌反應物14小時。在減壓下濃縮反應混合物。使殘餘物在乙酸乙酯及水中復原。用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取有機相。用水(100 mL)、鹽水(100 mL)洗滌經合併之有機層且經硫酸鈉乾燥。在減壓下濃縮有機相，得到呈黃色固體狀之5-溴-4-氯吡啶-2-胺(13 g，99%產率)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS(ESI)m/e 207.0[(M+H)+,C5H5BrClN2之計算值為206.9]；LC/MS滯留時間(方法B)：t R=0.8分鐘；1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.17(s,1H),6.63(s,1H),4.59(s,2H)。
部分B. N-(5-溴-4-氯吡啶-2-基)乙醯胺
在0℃下向經攪拌之5-溴-4-氯吡啶-2-胺(11.6 g，55.9 mmol)於吡啶(100 mL)中之溶液中添加乙醯氯(3.98 mL，55.9 mmol)且在室溫下攪拌反應物3小時。用冷水淬滅反應物。在減壓下濃縮反應混合物。使殘餘物在乙酸乙酯及水中復原。用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取有機相。用水(100 mL)、鹽水(100 mL)洗滌經合併之有機層且經硫酸鈉乾 燥。在減壓下濃縮有機相，得到呈白色固體狀之N-(5-溴-4-氯吡啶-2-基)乙醯胺(14.6 g，55.9 mmol，定量產率)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS(ESI)m/e 249[(M+H)+,C7H7BrClN2O之計算值為248.9]LC/MS滯留時間(方法B)：t R=1.64分鐘；1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ 10.87(s,1H),8.58(s,1H),8.33(s,1H),2.11(s,3H)。
部分C. N-(4-氯-5-乙烯基吡啶-2-基)乙醯胺
向經攪拌之N-(5-溴-4-氯吡啶-2-基)乙醯胺(7 g，28.1 mmol)、2,4,6-三乙烯基-1,3,5,2,4,6-三氧三硼與吡啶之複合物(1：1)(8.78 g，36.5 mmol)及碳酸鈉(5.95 g，56.1 mmol)於7 mL水中之溶液在甲苯(50 mL)與乙醇(8 mL)之混合物中之溶液中添加Pd(PPh3)4(0.973 g，0.842 mmol)。藉由用氮氣鼓泡5分鐘吹洗溶液，隨後在85℃下加熱14小時。冷卻反應物至室溫且用乙酸乙酯(50 mL)稀釋，隨後經由矽藻土床過濾。用水稀釋濾液且分離有機層，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥。在減壓下濃縮有機相且藉由矽膠管柱層析使用乙酸乙酯之己烷溶液的梯度純化殘餘物。在30%乙酸乙酯之己烷溶液下溶離產物且濃縮所要溶離份，得到呈黃色固體狀之N-(4-氯-5-乙烯基吡啶-2-基)乙醯胺(5.92 g，27.7 mmol，99%產率)。LCMS(ESI)m/e 197.2[(M+H)+,C9H10ClN2O之計算值為197.04]LC/MS滯留時間(方法A)：t R=1.50分鐘；1H NMR(400 MHz,DMSO-d 6 )δ 10.79(s,1H),8.64(s,1H),8.18(d,J=6.40 Hz,1H),6.88(dd,J=11.2,17.6 Hz,1H),5.99(dd,J=17.60,0.80 Hz,1H),5.47(dd,J=11.40,0.80Hz,1H),2.12(s,3H)。
部分D. N-(4-氯-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺
在0℃下向經攪拌之N-(4-氯-5-乙烯基吡啶-2-基)乙醯胺(6 g，30.5 mmol)及2,6-二甲基吡啶(7.11 mL，61.0 mmol)於二噁烷(110 mL)與水(25 mL)之混合物中之溶液中添加2.5 wt%四氧化鋨於2-甲基-2-丙醇中之溶液(9.58 mL，30.5 mmol)，繼而添加過碘酸鈉(19.58 g，92 mmol)且攪拌反應物4小時。用水稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(2×100 mL)萃取。用鹽水溶液洗滌經合併之有機層，經硫酸鈉乾燥，在減壓下濃縮。藉由二氧化矽管柱使用己烷/乙酸乙酯純化殘餘物，得到呈灰白色固體狀之N-(4-氯-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺(5.8 g，28.1 mmol，92%產率)。LCMS(ESI)m/e 197.0[(M)-,C8H6ClN2O2之計算值為197.04]LC/MS滯留時間(方法A)：t R=1.21分鐘；1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ 11.20(s,1H),10.18(s,1H),8.76(s,1H),8.27(s,1H),2.16(s,3H)。
部分E. N-(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺
向經攪拌之N-(4-氯-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺(3 g，15.11 mmol)、(4-氯-2-氟苯基)硼酸(2.63 g，15.11 mmol)、碳酸銫(9.84 g，30.2 mmol)於水(8 mL)與THF(25 mL)之混合物中之溶液中添加Pd(PPh3)4(19.19 mg，0.017 mmol)且加熱反應物至85℃後維持12小時。用水稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(2×25 mL)萃取。用水、鹽水 洗滌經合併之有機層，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析使用己烷/乙酸乙酯作為溶離劑來純化殘餘物，得到呈灰白色固體狀之N-(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺(2.8 g，9.01 mmol，60%產率)。LCMS(ESI)m/e 291.0[(M)-,C14H9ClFN2O2之計算值為291.0]LC/MS滯留時間(方法A)：t R=1.69分鐘；1H NMR(400 MHz,DMSO-d 6 )δ 11.14(s,1H),9.84(d,J=Hz,1H),8.88(s,1H),8.13(s,1H),7.61(dd,J=2.00,10.00 Hz,1H),7.46-7.48(m,2H),2.11(s,3H)。
部分F. N-(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-(羥基甲基)吡啶-2-基)乙醯胺
如實例5部分C中所述使用N-(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺(9 g，24.29 mmol)製備，得到呈棕色油狀之N-(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-(羥基甲基)吡啶-2-基)乙醯胺(9 g，定量產率)。其不經純化即用於下一步驟中。LCMS(ESI)m/e 295.2[(M)-,C14H13ClFN2O2之計算值為295.1]LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.44分鐘。
部分G. N-(8-氯-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
向經攪拌之N-(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-(羥基甲基)吡啶-2-基)乙醯胺(9 g，23.82 mmol)於DMF(90 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(9.88 g，71.5 mmol)，緊密密封所得混合物且在95℃下加熱16小時。隨後冷卻反應混合物至室溫且在減壓下移除揮發物。將粗物質溶解於水(200 mL)中且過濾。用水(2×250 mL)洗滌殘餘物且在減壓下乾燥16小時，得到呈淺棕色固體狀之N-(8-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺(5.5 g，20.02 mmol，84%產率)。LCMS(ESI)m/e 275.2[(M)-,C14H12ClN2O2之計算值為275.1]LC/MS滯留時間(方法D)：t R=1.77分鐘；1H NMR(400 MHz,DMSO-d 6 )δ 10.6(s,1 H),8.41(s,1 H),8.25(s,1 H),7.78(d,J=8.4 Hz,1 H),7.22-7.15(m,2 H),5.2(s,2 H),2.2(s,3 H)。
部分H. (S)-1-(2-乙醯胺基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯
用氬氣吹洗經攪拌之N-(8-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺(2.5 g，9.10 mmol)、(S)-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(5.93 g，27.3 mmol)、二第三丁基(2',4',6'-三異丙基-3-甲氧基-6-甲基-[1,1'-聯苯]-2-基)膦(RockPhos)(0.171 g，0.364 mmol)、碳酸銫(4.45 g，13.65 mmol)及分子篩4Å(1.5 g，9.10 mmol)於甲苯(10 mL)中之懸浮液10分鐘，隨後用氯化烯丙基鈀(II)(0.067 g，0.182 mmol)處理。使氬氣再次鼓泡15分鐘，緊密密封所得混合物且在90℃下加熱21小時。冷卻反應物至室溫，用乙酸乙酯(15 mL)稀釋且經由矽藻土墊過濾。在減壓下蒸發濾液，得到粗物質，藉由矽膠管柱層析(3%甲醇之氯仿溶液)純化，得到被Boc-白胺醇污染之所要產物。隨後用己烷(2×10 mL)處理油狀混合物，得到白色固體，藉由SFC方法(管柱：Chiracel OJ-H，(250×4.6)mm，5 μ，0.5% DEA之乙腈溶液)純化，得到(S)-(1-((2-乙醯胺基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(2.4 g，5.24 mmol，58%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.31(s,1 H),8.09(s,1 H),7.72(d,J=8.4 Hz,1 H),6.71(dd,J=2.4 Hz,J=8.8 Hz,1 H),6.56(d,J=2.4 Hz,1H),5.09(s,2 H),3.95(m,3 H),2.20(s,3 H),1.72(m,1 H),1.51-1.39(m,2 H),1.47(s,9 H),1.16(m,6 H)。
部分I. (S)-N-(8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
如實例8部分D中所述使用(S)-1-(2-乙醯胺基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯(4.8 g，10.54 mmol)製備，得到呈黃色固體狀之(S)-N-(8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺(3.26 g，9.06 mmol，86%產率)。LCMS(ESI)m/e 356.2[(M)-,C20H26N3O3之計算值為356.2]LC/MS滯留時間(方法H)：t R=1.55分鐘；1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.31(s,1 H),8.15(s,1 H),7.83(d,J=8.4 Hz,1 H),6.85(dd,J=2.4 Hz,8.8 Hz,1 H),6.71(d,J=2.8 Hz,1 H),5.15(s,2 H),4.31(dd,J=3.2 Hz,10.8 Hz,1 H),4.11(dd,J=6.4 Hz,10.4 Hz,1 H),3.72(m,1 H),2.25(s,3 H),1.65-1.85(m,3 H),1.04(m,6 H)。
實例19
(S)-4-甲基-1-(螺[ 烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧雜環丁烷]-8-基氧基) 戊-2-胺
部分A. 3-(4-氯吡啶-3-基)氧雜環丁烷-3-醇
藉由與無水甲苯一起在圓底燒瓶中共沸蒸餾來乾燥4-氯吡啶(5 g，44.0 mmol)鹽酸鹽。在氮氣氛圍下向其中添加無水THF(100 mL)且冷卻至-78℃。15分鐘後，逐滴添加2 M LDA於THF/庚烷/乙基苯(48.4 mL，97 mmol)中之溶液且攪拌反應物30分鐘。隨後添加氧雜環丁烷-3-酮(3.81 g，52.8 mmol)且在-78℃下攪拌反應物5分鐘，隨後移除冷水浴且使反應物逐漸升溫至室溫(約1小時)。藉由添加氯化銨水溶液淬滅反應物且用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取有機相。乾燥經合併之有機萃取物且在減壓下濃縮，得到呈黃色油狀之3-(4-氯吡啶-3-基)氧雜環丁烷-3-醇(3.8 g，20.47 mmol，46%產率)。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ 8.6(s,1 H),8.51(d,J=5.6 Hz,1 H),7.56(d,J=5.2 Hz,1 H),6.46(s,1 H),5.14(m,2 H),4.73(m,2 H)。
部分B. 3-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)氧雜環丁烷-3-醇
如實例5部分B中所述使用3-(4-氯吡啶-3-基)氧雜環丁烷-3-醇製備，得到呈灰白色固體狀之3-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)氧雜環丁烷-3-醇(750 mg，2.68 mmol，50%產率)。LCMS(ESI)m/e 280.0[(M+H)+,C14H12ClFNO2之計算值為280.0]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.90分鐘。
部分C. 8-氯螺[ 烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧雜環丁烷]
如實例5部分D中所述使用3-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)氧雜環丁烷-3-醇製備，得到呈淡棕色固體狀之8-氯螺[烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧雜環丁烷](40 mg，0.154 mmol，22%產率)。LCMS(ESI)m/e 260.0[(M+H)+,C14H11ClNO2之計算值為260.0]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.92分鐘。
部分D. (S)-2-(4-甲基-1-(螺[ 烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧雜環丁烷]- 8-基氧基)戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮
如實例5部分E中所述使用8-氯螺[烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧雜環丁烷]製備，得到呈淡棕色固體狀之2-(4-甲基-1-(螺[烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧雜環丁烷]-8-基氧基)戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮(35 mg，0.074 mmol，64%產率)。LCMS(ESI)m/e 471.2[(M+H)+,C28H27N2O5之計算值為471.2]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=2.14分鐘。
部分E. (S)-4-甲基-1-(螺[ 烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧雜環丁烷]-8-基氧基)戊-2-胺
如實例5部分F中所述使用(S)-2-(4-甲基-1-(螺[烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧雜環丁烷]-8-基氧基)戊-2-基)異吲哚啉-1,3-二酮製備，得到呈淺棕色固體狀之(S)-4-甲基-1-(螺[烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧雜環丁烷]-8-基氧基)戊-2-胺(13 mg，0.038 mmol，51%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.87(s,1 H),8.56(d,J=5.2 Hz,1 H),7.85(d,J=8.4 Hz,1 H),7.76(d,J=4.8 Hz,1 H),6.82-6.78(m,2 H),5.04(d,J=8 Hz,2 H),4.93(d,J=8 Hz,2 H),4.05(m,1 H),3.87(m,1 H),3.32(m,1 H),1.83(m,1 H),1.43(m,2 H),1.0(m,6 H)；LCMS(ESI)m/e 341.2[(M+H)+,C20H25N2O3之計算值為341.2]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.71分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=6.93分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=8.53分鐘。
實例20
(8-(((S)-2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5-(氯甲基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-5-基)甲醇
向已冷卻至0℃之((S)-(4-甲基-1-(螺[烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧雜環丁烷]-8-基氧基)戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(10 mg，0.023 mmol)(如實例19部分D中所述製備)於二氯甲烷(1 mL)中之溶液中逐滴添加1 M HCl之乙醚溶液(23 μL，0.023 mmol)且攪拌溶液30分鐘。隨後使反應物升溫至室溫且攪拌2小時。完成反應後，在減壓下移除揮發物且藉由製備型HPLC純化，得到呈黃色固體狀之產物(8-(((S)-2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5-(氯甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-5-基)甲醇(2.08 mg，5.52 μmol，24%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.82(m,1H),8.69(m,1H),8.35(m,1H),8.09(m,1H),6.94(m,1H),6.82(s,1H),4.36-4.20(m,6H),3.73(m,1H),1.82-1.68(m,3H),1.04(m,6H)；LCMS(ESI)m/e 377.2[(M+H)+,C20H26ClN2O3之計算值為377.2]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.71分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=8.12分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=9.87分鐘。
實例21
(2S)-1-(9-溴-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
部分A. (2S)-1-(9-溴-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯
如實例14部分B中所述使用(2S)-4-甲基-1-(5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-基胺基甲酸第三丁酯(如實例6中所述製備)製備，得到(2S)-1-(9-溴-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯(120 mg，0.24 mmol，定量)。LCMS(ESI)m/e 491.2[(M+H)+,C24H32BrN2O4之計算值為491.1]LC/MS滯留時間(方法C)：t R=2.44分鐘。
部分B. (2S)-1-(9-溴-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺.
如實例8部分D中所述使用((2S)-1-((9-溴-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(20 mg，0.041 mmol)製備，得到呈黃色固體狀之(2S)-1-((9-溴-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺(7 mg，0.018 mmol，44%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.69(bs,2 H),8.39(s,1 H),8.31(bs,1 H),6.92(s,1 H),5.63(d,J=5.6 Hz,1 H),4.42(m,1 H),4.28(m,1 H),3.77(bs,1 H),1.83-1.70(m,6 H),1.04(m,6 H)。LCMS(ESI)m/e 391.0[(M+H)+,C19H24BrN2O2之計算值為391.1]LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.64分鐘。HPLC滯留時間(方法A)：t R=8.36分鐘及8.44分鐘(非對映異構混合物)；HPLC滯留時間(方法B)：t R=5.23分鐘。
實例22
8-((S)-2-胺基-4-甲基戊氧基)-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-9-甲腈
部分A. (2S)-1-(9-氰基-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯
向((2S)-1-((9-溴-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(100 mg，0.203 mmol)(如實例21部分A中 所述製備)及L-脯胺酸(23.43 mg，0.203 mmol)於DMF(2 mL)中之混合物中添加氰化銅(I)(36.5 mg，0.407 mmol)。使氬氣鼓泡通過經攪拌之懸浮液5分鐘。在120℃下在氬氣氛圍下攪拌反應混合物12小時。隨後冷卻混合物至室溫，用乙酸乙酯(10 mL)稀釋且經由矽藻土過濾。用水(10 mL)及鹽水(10 mL)洗滌濾液。經硫酸鈉乾燥經合併之有機萃取物且在減壓下濃縮，得到粗物質，經由矽膠層析(石油醚：乙酸乙酯移動相)純化，得到((2S)-1-((9-氰基-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(15 mg，0.034 mmol，17%產率)。LCMS(ESI)m/e 438.2[(M+H)+,C25H32N3O4之計算值為438.2]LC/MS滯留時間(方法D)：t R=1.81分鐘。
部分B. 8-((S)-2-胺基-4-甲基戊氧基)-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-9-甲腈
經1分鐘向已冷卻至0℃之((2S)-1-((9-氰基-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(15 mg，0.034 mmol)於二氯甲烷(2 mL)中之溶液中緩慢添加4 M HCl之二噁烷溶液(1.0 mL，4.00 mmol)。在0℃下攪拌反應混合物5分鐘，隨後升溫至室溫且攪拌2小時。在減壓下移除溶劑且用5%甲醇之乙酸乙酯溶液洗滌粗物質，得到呈黃色固體狀之8-(((S)-2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-9-甲腈(9 mg，0.025 mmol，73%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.74(bs,2 H),8.58(s,1 H),8.34(d,J=6 Hz,1 H),7.01(s,1 H),5.74(t,J=6.4 Hz,1 H),4.48(m,1 H),4.33(m,1 H),3.78(m,1 H),1.82-1.68(m,6 H),1.06(m,6 H)。LCMS(ESI)m/e 338.2[(M+H)+,C20H24N3O2之計算值為338.2]LC/MS滯留時間(方法D)：t R=1.17分鐘。HPLC滯留時間(方法A)：t R=7.97分鐘及8.03分鐘(非對映異構混合物)；HPLC滯留時間(方法B)：t R=8.77分鐘(峰重疊)。
實例23
(S)-8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-9-甲腈
部分A. (S)-1-(9-氰基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯
如實例22部分A中所述使用(S)-1-(9-溴-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯(0.029 g，0.061 mmol)製備，得到呈淡棕色固體狀之(S)-(1-((9-氰基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(8 mg，0.019 mmol，11%產率)。LCMS(ESI)m/e 424.2[(M+H)+,C24H30N3O4之計算值為424.2]LC/MS滯留時間(方法E)：t R=2.11分鐘。
部分B. (S)-8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-9-甲腈
如實例8部分D中所述使用(1-((9-氰基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(0.008 g，0.019 mmol)製備，得到呈黃色油狀之8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-9-甲腈(3.19 mg，9.86 μmol，52%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.66(bs,1 H),8.45(s,1 H),8.08(bs,1 H),6.95(s,1 H),5.43(s,2 H),4.48(m,1 H),4.24(m,1 H),3.86(m,1 H),3.69(m,1 H),1.92-1.74(m,3 H),1.05(m,6 H)；LCMS(ESI)m/e 324.2[(M+H)+,C19H22N3O2之計算值為324.2]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.79分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=7.05分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=7.87分鐘。
實例24
(2S)-1-環戊基-3-(5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丙-2-胺
部分A. 1-環戊基-3-羥基丙-2-基胺基甲酸第三丁酯
向已冷卻至-10℃之2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-環戊基丙酸(730 mg，2.84 mmol)於THF(7.5 mL)中之溶液中依序添加N-甲基嗎啉(0.312 mL，2.84 mmol)及氯甲酸異丁酯(0.373 mL，2.84 mmol)。隨後攪拌反應混合物5分鐘。藉由過濾移除所得固體且用THF(5 mL)洗滌。冷卻濾液至-10℃且用NaBH4(161 mg，4.26 mmol)於水(5 mL)中之溶液逐滴處理。在-10℃下攪拌反應混合物10分鐘，升溫至室溫且再攪拌30分鐘。隨後用冷水(5 mL)淬滅反應混合物。用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取水層。用鹽水(20 mL)洗滌經合併之有機層，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到殘餘物，藉由管柱層析(石油醚：乙酸乙酯)純化，得到1-環戊基-3-羥基丙-2-基胺基甲酸第三丁酯(500 mg，2.05 mmol，72%產率)。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ 6.38(m,1 H),4.51(m,1 H),3.85-3.65(m,1 H),3.42(m,1 H),3.25(m,1 H),3.8(m,1 H),2.75(m,1 H),1.85-1.65(m,4 H),1.6-1.25(m,12 H),1.15(m,2 H)。
部分B. (2S)-1-環戊基-3-(5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丙-2-基胺基甲酸第三丁酯
如實例8部分C中所述使用8-氯-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶(100 mg，0.432 mmol)製備，得到粗殘餘物，經由矽膠層析(石油醚及乙酸乙酯作為移動相)純化，得到呈灰白色固體狀之(1-環戊基-3-((5-甲基- 5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)丙-2-基)胺基甲酸第三丁酯(30 mg，0.062 mmol，14%產率)。LCMS(ESI)m/e 439.3[(M+H)+,C26H35N2O4之計算值為439.3]LC/MS滯留時間(方法C)：t R=2.44分鐘。
部分C. (2S)-1-環戊基-3-(5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丙-2-胺
如實例8部分D中所述使用(1-環戊基-3-((5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)丙-2-基)胺基甲酸第三丁酯(30 mg，0.068 mmol)製備，得到呈黃色油狀之1-環戊基-3-((5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)丙-2-胺(14 mg，0.040 mmol，59%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.45(s,1 H),8.35(s,1 H),7.95(m,1 H),7.8(d,J=2.4 Hz,1 H),6.75(m,1 H),6.6(s,1 H),5.42(m,1 H),4.05-4.15(m,1 H),3.9-3.85(m,1 H),3.3-3.1(m,1 H),2.0(m,1 H),1.95(m,2 H),1.9-1.4(m,9 H),1.3-1.02(m,2 H)；LCMS(ESI)m/e 339.2[(M+H)+,C21H27N2O2之計算值為339.2]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.53分鐘；HPLC滯留時間(方法：Eclipse XDB C18(4.6×150 mm，3.5 μm)，移動相：A=20 mM NH4OAc水溶液；移動相B=乙腈；0-12分鐘，0% B→10% B；12-15分鐘，10% B→100% B；15-17分鐘，100% B；流速=1 mL/min；λ=254 nm及220 nm；操作時間=17分鐘)：t R=8.22分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=9.34分鐘。
實例25
(S)-8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-9-溴-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-5-酮
部分A. (S)-1-(9-溴-5-側氧基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯
向經攪拌之(S)-(4-甲基-1-((5-側氧基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(0.100 g，0.242 mmol)(如實例11部分E中所述製備)於無水乙腈(2 mL)中之溶液中添加NBS(0.043 g，0.242 mmol)且加熱混合物至80℃後維持12小時。完成反應後，添加水(10 mL)且用乙酸乙酯(2×20 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥經合併之有機萃取物且在減壓下濃縮，得到粗化合物，藉由製備型TLC純化，得到呈淺黃色固體狀之(S)-(1-((9-溴-5-側氧基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(80 mg，0.163 mmol，67%產率)。LCMS(ESI)m/e 491.2[(M+H)+,C23H28BrN2O5之計算值為491.1]LC/MS滯留時間(方法F)：t R=1.12分鐘。
部分B. (S)-8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-9-溴-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-5-酮
如實例8部分D中所述使用(S)-(1-((9-溴-5-側氧基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯製備，得到呈白色固體狀之(S)-8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-9-溴-5H-烯并[3,4-c]吡啶-5-酮(6 mg，0.015 mmol，1%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 9.38(s,1 H),8.89(d,J=5.6 Hz,1 H),8.57(s,1 H),8.19(d,J=5.6 Hz,1 H),7.18(s,1 H),4.24(m,1 H),4.06(m,1 H),3.43(m,1 H),1.84(m,1 H),1.63-1.46(m,2 H),1.02(m,6 H)。LCMS(ESI)m/e 391.0[(M+H)+,C18H20BrN2O3之計算值為391.1]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.53分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=11.15分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=12.19分鐘。
實例26
4-氟-4-甲基-1-(5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺
部分A. 4-氟-1-羥基-4-甲基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯
如實例24部分A中所述使用2-(第三丁氧基羰基胺基)-4-氟-4-甲基戊酸(300 mg，1.203 mmol)製備，得到呈淺黃色油狀之4-氟-1-羥基-4-甲基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯(170 mg，0.73 mmol，60%產率)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 4.91(bs,1 H),3.85(m,1 H),3.65(m,2 H),2.46(bs,1 H),1.81(m,2 H),1.45(m,12 H),1.38(m,3 H)。
部分B. 第三丁基-4-氟-4-甲基-1-(5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-基胺基甲酸酯
如實例8部分C中所述使用(4-氟-4-甲基-1-((5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(100 mg，0.232 mmol)製備，得到呈淡棕色固體狀之第三丁基-4-氟-4-甲基-1-(5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-基胺基甲酸酯(100 mg，0.204 mmol，47%產率)。LCMS(ESI)m/e 431.2[(M+H)+,C19H24FN2O2之計算值為431.2]LC/MS滯留時間(方法D)：t R=1.02分鐘。
部分C. 4-氟-4-甲基-1-(5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基) 戊-2-胺
如實例8部分D中所述使用8-氯-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶(0.100 g，0.432 mmol)及(4-氟-1-羥基-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(0.168 g，0.712 mmol)製備，得到呈黃色油狀之4-氟-4-甲基-1-(5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺(80 mg，0.23 mmol，99%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.66(d,J=6.4 Hz,1 H),8.64(s,1 H),8.24(d,J=6.4 Hz,1 H),8.08(d,J=8.8 Hz,1 H),6.94(dd,J=2.4 Hz,8.8 Hz,1 H),6.78(d,J=2.8 Hz,1 H),5.57(q,J=6.4 Hz,1 H),4.38(dd,J=6.4 Hz,J=10.8 Hz,1 H),4.22(dd,J=6.4 Hz,10.8 Hz,1 H),3.99(m,1 H),2.16(m,2 H),1.75(d,J=6.8 Hz,3 H),1.55(s,3 H),1.50(s,3 H)；LCMS(ESI)m/e 331.2[(M+H)+,C19H24FN2O2之計算值為331.2]LC/MS滯留時間(方法D)：t R=0.97分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=8.04分鐘。
實例27
(2S)-1-((9-氯-5-(三氟甲基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺
部分A. 1-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)-2,2,2-三氟乙醇
在0℃下攪拌經攪拌之4-(4-氯-2-氟苯基)菸鹼醛(1.8 g，7.64 mmol)(如實例5部分B中所述製備)及TMS-CF3(0.521 mL，3.52 mmol)於二氯甲烷(20 mL)中之溶液20分鐘。逐滴緩慢添加TBAF(1.0 M之THF溶液)(0.4 mL，1.528 mmol)且攪拌溶液90分鐘。添加水且用二氯甲烷(2×25 mL)萃取溶液。用鹽水洗滌經合併之有機層，經硫酸鈉乾燥，濃縮且藉由製備型TLC使用25%乙酸乙酯之己烷溶液純化，得到呈黃色油狀之1-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)-2,2,2-三氟乙醇(1 g，2.64 mmol，35%產率)。LCMS(ESI)m/e 306.0[(M+H)+,C13H9ClF4NO之計算值為306.02]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=2.05分鐘。
部分B. 8-氯-5-(三氟甲基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶
如實例5部分D中所述使用1-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)-2,2,2-三氟乙醇製備，得到呈黃色固體狀之8-氯-5-(三氟甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶(800 mg，2.63 mmol，80%產率)。LCMS(ESI)m/e 286.0[(M+H)+,C13H8ClF3NO之計算值為286.01]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=2.11分鐘。
部分C. ((2S)-4-甲基-1-((5-(三氟甲基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8- 基)氧基)戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯
如實例8部分C中所述使用(S)-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯及8-氯-5-(三氟甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶製備，得到呈黃色固體狀之((2S)-4-甲基-1-((5-(三氟甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(0.28 g，0.516 mmol，49%產率)。LCMS(ESI)m/e 467.2[(M+H)+,C24H30F3N2O4之計算值為467.2]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=2.19分鐘。
部分D. ((2S)-1-((9-氯-5-(三氟甲基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯
在氮氣氛圍下加熱經攪拌之((2S)-4-甲基-1-((5-(三氟甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(50 mg，0.107 mmol)及NCS(14.31 mg，0.107 mmol)於乙腈(12 mL)中之溶液至60℃後維持12小時。在減壓下移除溶劑。將殘餘物分配於水(15 mL)與DCM(15 mL)之間。分離有機層，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到呈黃色固體狀之((2S)-1-((9-氯-5-(三氟甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(51 mg，0.092 mmol，86%產率)。LCMS(ESI)m/e 501.2[(M+H)+,C24H29ClF3N2O4之計算值為501.2]；LC/MS滯留時間(方法D)：t R=2.02分鐘。
部分E. (2S)-1-((9-氯-5-(三氟甲基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺
在室溫下向經攪拌之((2S)-1-((9-氯-5-(三氟甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(50 mg，0.100 mmol)於DCM(10 mL)中之溶液中添加1 M HCl之乙醚溶液(0.100 mmol)且攪拌溶液14小時。在減壓下移除溶劑，得到殘餘物，藉由製備型HPLC使用0.1% TFA之甲醇溶液純化。進行純化，得到呈淺黃色固體狀之(2S)-1-((9-氯-5-(三氟甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺(10 mg，0.023 mmol，23%產率)。1H NMR(400 MHz,DMSO-d 6 )δ 8.67(d,J=5.2 Hz,1 H),8.57(s,1 H),8.32(s,1 H),7.98(d,J=5.2 Hz,1 H),6.97(s,1 H),6.45(m,1 H),3.9(m,1 H),3.87(m,1 H),3.09(m,1 H),1.83(m,1 H),1.33(m,2 H),1.31-1.26(m,6 H)；LCMS(ESI)m/e 401.2[(M+H)+,C19H21ClF3N2O2之計算值為401.1]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.69分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=5.80分鐘，5.87分鐘(非對映異構混合物)；HPLC滯留時間(方法B)：t R=6.41分鐘，6.45分鐘(非對映異構混合物)。
實例27a及27b
(S)-1-(((R)-9-氯-5-(三氟甲基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺及(S)-1-(((S)-9-氯-5-(三氟甲基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺
借助於製備型對掌性HPLC使用0.5%二乙胺之甲醇溶液解析非對映異構體，得到2種各別非對映異構體(CF3之絕對化學為未知)。獲得呈黃色膠狀液體狀之非對映異構體1(36 mg，0.082 mmol，16%產率)。1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.62(d,J=5.2 Hz,1 H),8.52(s,1 H),8.02(s,1 H),7.84(d,J=5.2 Hz,1 H),6.88(s,1 H),6.10(q,J=7.6 Hz,1 H),4.08(dd,J=4.4 Hz,J=9.2 Hz,1 H)3.91(dd,J=6.8 Hz,J=9.2 Hz,1 H),3.32(m,1 H),1.83(m,1 H),1.45(m,2 H),0.99(m,6 H)；LCMS(ESI)m/e 401.2[(M+H)+,C19H21ClF3N2O2之計算值為401.1]；LC/MS滯留時間(方法I)：t R=1.87分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=5.76分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=6.28分鐘。對掌性SFC(0.5% DEA之甲醇溶液-管柱Chiralpak AD H(250×4.6)mm-5μ)：t R=1.52分鐘。獲得呈黃色膠狀之非對映異構體2(38 mg，0.089 mmol，17%產率)：1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.61(d,J=5.2 Hz,1 H),8.52(s,1 H),8.03(s,1 H),7.85(d,J=5.2 Hz,1 H),6.88(s,1 H),6.10(q,J=7.6 Hz,1 H),4.11(dd,J=4 Hz,J=9.2 Hz,1 H)3.89(dd,J=6.8 Hz,J=9.2 Hz,1 H),3.31(m,1 H),1.83(m,1 H),1.48(m,2 H),0.99(m,6 H)；LCMS(ESI)m/e 401.2[(M+H)+,C19H21ClF3N2O2之計算值為401.1]；LC/MS滯留時間(方法I)：t R=1.86分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=5.68分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=6.25分鐘。對掌性SFC(0.5% DEA之甲醇溶液-管柱Chiralpak AD H(250×4.6)mm-5μ)：t R=3.93分鐘。
實例28
(2S)-1-((9-溴-5-(三氟甲基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺
部分A. ((2S)-1-((9-溴-5-(三氟甲基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯
如實例14部分B中所述使用((2S)-4-甲基-1-((5-(三氟甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(實例27部分C)製備，得到呈黃色固體狀之((2S)-1-((9-溴-5-(三氟甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(0.42 g，0.579 mmol，75%產率)。LCMS(ESI)m/e 545.2[(M+H)+,C24H29BrF3N2O4之計算值為545.1]；LC/MS滯留時間(方法F)t R=1.1分鐘。
部分B. (2S)-1-((9-溴-5-(三氟甲基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺
在室溫下向經攪拌之((2S)-1-((9-溴-5-(三氟甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(50 mg，0.092 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加TFA(0.035 mL，0.458 mmol)且攪拌隔夜。在減壓下移除溶劑，得到殘餘物，藉由製備型HPLC使用0.1% TFA之MeOH溶液純化。進行純化，得到呈黃色固體狀之(2S)-1-((9-溴-5-(三氟甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺(15 mg，0.033 mmol，36%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.64(m,1 H),8.54(m,1 H),8.23(m,1 H),7.88(s,1 H),6.91(s,1 H),6.10(m,1 H),4.3(m,1 H),4.12(m,1 H),3.52(m,1 H),1.85(m,1 H),1.72-1.69(m,1 H),1.61-1.56(m,1 H),1.05(m,6 H)。LCMS(ESI)m/e 445.2[(M+H)+,C19H21BrF3N2O2之計算值為445.1]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.74分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=5.66分鐘，5.75分鐘(非對映異構混合物)；HPLC滯留時間(方法B)：t R=6.27分鐘，6.34分鐘(非對映異構混合物)。
實例29
8-(((S)-2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-胺
部分A. 8-氯-N,N-雙(4-甲氧基苯甲基)-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-胺
在室溫下向經攪拌之N-(8-氯-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺(250 mg，0.866 mmol)於DMF(25 mL)中之溶液中添加NaH(62.3 mg，2.60 mmol)且攪拌10分鐘。逐滴添加4-甲氧基苯甲基氯(0.236 mL，1.732 mmol)且在室溫下攪拌隔夜。用冰淬滅反應物且用乙酸乙酯(25 mL)萃取。分離有機層，用水(25 mL)、鹽水(25 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到呈黃色油狀之8-氯-N,N-雙(4-甲氧基苯甲基)-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-胺(200 mg，0.20 mmol，24%產率)。其不經純化即用於下一步驟中。LCMS(ESI)m/e 487.2[(M+H)+,C29H28ClN2O3之計算值為487.2]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=2.52分鐘。
部分B. (2S)-1-(2-(雙(4-甲氧基苯甲基)胺基)-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯
如實例8部分C中所述使用8-氯-N,N-雙(4-甲氧基苯甲基)-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-胺製備，得到呈棕色油狀之(2S)-1-(2-(雙(4-甲氧基苯甲基)胺基)-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基 戊-2-基胺基甲酸第三丁酯(110 mg，0.070 mmol，17%產率)。LCMS(ESI)m/e 668.6[(M+H)+,C40H50N3O6之計算值為668.4]；LC/MS滯留時間(方法F)：t R=1.49分鐘。
部分C. 8-(((S)-2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-胺
向經攪拌之((2S)-1-((2-(雙(4-甲氧基苯甲基)胺基)-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(110 mg，0.165 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加TFA(0.254 mL，3.29 mmol)且在室溫下攪拌反應物隔夜。蒸發揮發物且藉由製備型HPLC(0.1% TFA之MeOH溶液)純化粗物質，得到呈黃色固體狀之8-(((S)-2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-胺(25 mg，0.069 mmol，42%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 7.74(m,2 H),6.84(s,1 H),6.75(dd,J=2.4 Hz,J=8.4 Hz,1 H),6.63(d,J=2.4 Hz,1 H),5.18(m,1 H),4.32(m,1 H),4.15(m,1 H),3.65(m,1 H),1.83(m,1 H),1.65(m,5 H),1.04(m,6 H)；LCMS(ESI)m/e 328.2[(M+H)+,C19H26N3O2之計算值為328.2]；LC/MS滯留時間(方法D)：t R=1.24分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=8.42分鐘。
實例30
N-(8-(((S)-2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
部分A. N-(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-(1-羥基乙基)吡啶-2-基)乙醯胺
如實例6部分A中所述使用N-(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺(實例18部分E中所述之合成方法)製備，得到呈灰白色固體狀之N-(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-(1-羥基乙基)吡啶-2-基)乙醯胺(1.7 g，4.99 mmol，91%產率)。LCMS(ESI)m/e 309.2[(M+H)+,C15H15ClFN2O2之計算值為309.1]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.54分鐘。
部分B. N-(8-氯-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
如實例18部分G中所述使用N-(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-(1-羥基乙基)吡啶-2-基)乙醯胺製備，得到呈黃色固體狀之N-(8-氯-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺(1.5 g，3.58 mmol，65%產率)。LCMS(ESI)m/e 289.0[(M+H)+,C15H14ClN2O2之計算值為289.1]；LC/MS滯 留時間(方法D)：t R=1.65分鐘。
部分C. ((2S)-1-((2-乙醯胺基-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯
如實例8部分C中所述使用(S)-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯及N-(8-氯-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺製備，得到呈黃色油狀之((2S)-1-((2-乙醯胺基-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(290 mg，0.617 mmol，33%產率)。LCMS(ESI)m/e 470.3[(M+H)+,C26H36N3O5之計算值為470.3]；LC/MS滯留時間(方法F)：t R=0.99分鐘。
部分D. N-(8-(((S)-2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
如實例29部分C中所述使用((2S)-1-((2-乙醯胺基-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯製備，得到呈黃色固體狀之N-(8-(((S)-2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺(8 mg，0.020 mmol，15%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.35(s,1 H),8.12(s,1 H),7.78(d,J=8.8 Hz,1 H),6.78(m,1 H),6.64(d,J=2.4 Hz,1 H),5.43(m,1 H),4.24(m,1 H),3.95(m,1 H),3.55(m,1 H),2.22(s,3 H),1.81(m,1 H),1.55-1.65(m,3 H),1.35(m,2 H),1.15(m,6 H)；LCMS(ESI)m/e 370.2[(M+H)+,C21H28N3O3之計算值為370.2]；LC/MS滯留時間(方法D)：t R=1.36分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=9.09分鐘。
實例31a及31b
(2S)-1-(9-碘-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
部分A. (2S)-1-(9-碘-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯
向((2S)-4-甲基-1-((5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(200 mg，0.485 mmol)於乙腈(4 mL)中之溶液中添加NIS(654 mg，2.91 mmol)且使混合物在80℃下回流12小時。在減壓下移除揮發物。將殘餘物溶解於水(10 mL)中且用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水層。用鹽水(15 mL)洗滌經合併之有機層。經Na2SO4乾燥有 機層且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(石油醚：乙酸乙酯)純化粗產物，得到呈暗棕色油狀之((2S)-1-((9-碘-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(150 mg，0.237 mmol，49%產率)。LCMS(ESI)m/e 539.0[(M+H)+,C24H32IN2O4之計算值為539.1]；LC/MS滯留時間(方法D)：t R=1.84分鐘。
部分B. (2S)-1-(9-碘-5-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
如實例8部分D中所述使用((2S)-1-((9-碘-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(150 mg，0.279 mmol)製備，得到呈黃色油狀之(2S)-1-(9-碘-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺(85 mg，61%產率)。LCMS(ESI)m/e 439.0[(M+H)+,C19H24IN2O2之計算值為439.1]；LC/MS滯留時間(方法C)：t R=1.74分鐘。藉由製備型HPLC純化(TFA水溶液：MeCN)將外消旋物(28 mg，0.06 mmol)解析為非對映異構體，得到兩種非對映異構體(Me之絕對立體化學為未知)。獲得呈灰白色固體狀之非對映異構體1(7 mg，0.015 mmol，5%產率)及呈淺黃色黏稠固體狀之非對映異構體2(8 mg，0.017 mmol，6%產率)。
非對映異構體1： 1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.5(d,J=5.6 Hz,1 H),8.39(s,1 H),8.32(s,1 H),7.72(d,J=5.2 Hz,1 H),6.72(s,1 H),5.46(d,J=6.8 Hz,1 H),4.28(m,1 H),4.26(m,1 H),4.12(m,1 H),1.83(m,2 H),1.64(m,4 H),1.04(m,6 H)；LCMS(ESI)m/e 439.0[(M+H)+,C19H24IN2O2之計算值為439.1]LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.88分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=8.56分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=10.04分鐘。方法：對掌性OD-H(250×4.6)mm 5微米，移動相：0.2% DEA之正己烷溶液：乙醇(80：20)：t R=8.89分鐘。
非對映異構體2： 1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.6(d,J=5.2 Hz,1 H),8.54(s,1 H),8.45(s,1 H),8.01(d,J=5.6 Hz,1 H),.8(d,J=8.8 Hz,1 H),5.54(m,1 H),4.35(m,1 H),4.24(m,1 H),3.76(m,1 H),1.93(m,2 H),1.90(m,4 H),1.73(m,6 H)；LCMS(ESI)m/e 439.0[(M+H)+,C19H24IN2O2之計算值為439.1]LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.89分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=8.63分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=10.03分鐘。方法：對掌性OD-H(250×4.6)mm 5微米，移動相：0.2% DEA之正己烷溶液：乙醇(80：20)：t R=15.69分鐘。
實例32
(S)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-9-氯-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
部分A. (S)-(1-((2-乙醯胺基-9-氯-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧 基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯
加熱經攪拌之(S)-(1-((2-乙醯胺基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(100 mg，0.220 mmol)(如實例18部分H中所述製備)及NCS(29.3 mg，0.220 mmol)於乙腈(15 mL)中之溶液至80℃後維持12小時。冷卻反應混合物至室溫且在減壓下移除溶劑。使殘餘物分配於水(25 mL)與DCM(25 mL)之間。用鹽水洗滌有機層，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到呈灰白色固體狀之(S)-(1-((2-乙醯胺基-9-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(120 mg，0.174 mmol，79%產率)。產物不經純化即原樣用於下一步驟。LCMS(ESI)m/e 490.2[(M+H)+,C25H33ClN3O5之計算值為490.2]；LC/MS滯留時間(方法D)：t R=1.98分鐘。
部分B. (S)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-9-氯-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
如實例8部分D中所述使用(S)-(1-((2-乙醯胺基-9-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯製備，得到呈黃色固體狀之(S)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-9-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺(5 mg，0.012 mmol，11%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.19(s,1 H),8.08(s,1 H),7.95(s,1 H),6.88(s,1 H),5.22(s,2 H),4.42(m,1 H),4.24(m,1 H),3.75(m,1 H),2.29(m,3 H),1.79(m,2 H),1.72(m,1 H),1.18(m,6 H)；LCMS(ESI)m/e 390.2[(M+H)+,C20H25ClN3O3之計算值為390.2]；LC/MS滯留時間(方法D)： t R=1.53分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=9.17分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=5.14分鐘。
實例33
(S)-8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-胺
加熱經攪拌之(S)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺(40 mg，0.113 mmol)及NaOH(45.0 mg，1.125 mmol)於乙醇(10 mL)與水(4 mL)之混合物中之溶液至90℃後維持18小時。在減壓下移除揮發物且使殘餘物分配於水(20 mL)與二氯甲烷(15 mL)之間。分離各層且用二氯甲烷(15 mL)萃取水層。經硫酸鈉乾燥經合併之有機層且在減壓下濃縮，得到粗(S)-8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-胺(23 mg，0.068 mmol，60%粗產率)，將其溶解於MeOH(2 mL)中且冷卻至0℃。用1 M HCl之乙醚溶液(15 mL，0.068 mmol))處理所得溶液且在室溫下攪拌反應物14小時。隨後冷卻反應混合物至0℃，得到固體，過濾，用乙醚(10 mL)洗滌且在真空下乾燥，得到呈棕色固體狀之(S)-8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-胺二鹽酸鹽(11 mg，0.025 mmol，37%產率，兩個步驟)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 7.88(d,J=6.9 Hz,1 H),7.78(s,1 H),7.17(s,1 H),6.89(m,1 H),6.75(d,J=2.1 Hz,1 H),5.07(s,2 H),4.84-4.34(m,1 H),4.17-4.13(m,1 H),3.71(m,1 H),1.82-1.75(m,1 H),1.73-1.66(m,2 H),1.04(m,6 H)。LCMS(ESI)m/e 314.2[(M+H)+,C18H24N3O2之計算值為314.2]；LC/MS滯留時間(方法D)：t R= 1.1分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=5.16分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=8.96分鐘。
實例34
(S)-8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-4-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-5-酮
部分A. 2,4-二氯菸鹼醛
在-78℃下向2,4-二氯吡啶(2 g，13.51 mmol)於四氫呋喃(20 mL)中之溶液中添加2 M LDA於THF/庚烷/乙基苯中之溶液(8.11 mL，16.22 mmol)且攪拌溶液30分鐘。添加DMF(10.46 mL，135 mmol)，攪拌溶液1小時，隨後升溫至室溫。用飽和NH4Cl溶液淬滅反應混合物且用乙酸乙酯(50 mL)稀釋。用飽和NaHCO3(2×10 mL)、水(20 mL)洗滌有機層，經Na2SO4乾燥且在減壓下濃縮，得到呈黃色固體狀之2,4-二氯菸鹼醛(2 g，11.36 mmol，84%產率)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.49(s,1H),),8.44(d,J=5.4 Hz,1H),7.43(d,J=5.4 Hz,1H)。
部分B. 4-氯-2-甲基菸鹼醛
在100℃下加熱2,4-二氯菸鹼醛(1.1 g，6.25 mmol)、2,4,6二氯-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧三硼(0.942 g，7.50 mmol)、Cs2CO3(6.11 g，18.75 mmol)及PdCl2(dppf)(0.229 g，0.312 mmol)於1,4-二噁烷(9 mL)及水(1 mL)中之混合物18小時。冷卻後，用乙酸乙酯(15 mL)及水(20 mL)稀釋混合物。經Na2SO4乾燥乙酸乙酯層，濃縮且藉由矽膠層析純化，得到呈黃色固體狀之4-氯-2-甲基菸鹼醛(0.16 g，1.028 mmol，16%產率)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 10.69(s,1H),8.52(d,J=7.2 Hz,1H),7.32(d,J=7.2 Hz,1H),2.83(s,3H)。
部分C. 4-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基菸鹼醛
在90℃下加熱4-氯-2-甲基菸鹼醛(100 mg，0.643 mmol)、(4-氯-2-氟苯基)硼酸(123 mg，0.707 mmol)、Cs2CO3(628 mg，1.928 mmol)及Pd(Ph3P)4(52.0 mg，0.045 mmol)於甲苯(5 mL)中之混合物16小時。冷卻後，用EtOAc(10 mL)及水(10 mL)稀釋反應混合物。濃縮乙酸乙酯層且藉由矽膠層析(2：1己烷-EtOAc)純化，得到呈黃色固體狀之4-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基菸鹼醛(0.15 g，0.601 mmol，35%產率)。LCMS(ESI)m/e 250.04[(M+H)+,C13H10ClFNO之計算值為250.0]；LC/MS滯留時間(方法G)：t R=0.96分鐘。
部分D. (4-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基吡啶-3-基)甲醇
在0℃下向4-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基菸鹼醛(60 mg，0.240 mmol)於MeOH(2 mL)中之溶液中添加NaBH4(27.3 mg，0.721 mmol)且在室溫下攪拌溶液3小時。濃縮混合物且用EtOAc(15 mL)及水(10 mL)稀釋。經Na2SO4乾燥有機層，過濾且在減壓下濃縮，得到呈棕色固體狀之(4-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基吡啶-3-基)甲醇(0.15 g，0.596 mmol，89%產率)。LCMS(ESI)m/e 252.03[(M+H)+,C13H12ClFNO之計算值為252.1]；LC/MS滯留時間(方法G)：t R=0.80分鐘。
部分E. 8-氯-4-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶
在0℃下向(4-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基吡啶-3-基)甲醇(70 mg，0.278 mmol)於四氫呋喃(3 mL)中之溶液中逐份添加NaH(33.4 mg，0.834 mmol)。使溶液升溫至室溫且攪拌5小時。用冰冷水淬滅反應混合物且用EtOAc(15 mL)稀釋。經Na2SO4乾燥有機層，過濾且在減壓下濃縮，得到呈棕色固體狀之8-氯-4-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶(0.11 g，0.475 mmol，73%產率)。LCMS(ESI)m/e 232.00[(M+H)+,C13H12ClNO之計算值為232.01]；LC/MS滯留時間(方法G)：t R=1.00分鐘。
部分F. (S)-(4-甲基-1-((4-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯
在80℃下加熱8-氯-4-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶(60 mg，0.259 mmol)、(S)-(-)-2-(第三丁氧基羰基胺基)-4-甲基-1-戊醇(113 mg，0.518 mmol)、2-二第三丁基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯(6.60 mg，0.016 mmol)、Cs2CO3(127 mg，0.388 mmol)及Pd(OAc)2(1.744 mg，7.77 μmol)於甲苯(5 mL)中之混合物16小時。冷卻至室溫後，用EtOAc(10 mL)及水(10 mL)稀釋混合物。經Na2SO4乾燥有機層，過濾且在減壓下濃縮，得到呈黃色固體狀之(S)-(4-甲基-1-((4-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(0.2 g，0.485 mmol，30%產率)。LCMS(ESI)m/e 413.39[(M+H)+,C24H33N2O4之計算值為413.24]；LC/MS滯留時間(方法F)：t R=0.97分鐘。
部分G. (S)-8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-4-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-5-酮
冷卻(S)-(4-甲基-1-((4-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(35 mg，0.085 mmol)於DCM(3 mL)中之溶液 至0℃，隨後添加TFA(0.033 mL，0.424 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物2小時，隨後用飽和NaHCO3中和且用EtOAc(3×5 mL)萃取。經Na2SO4乾燥有機層，過濾且在減壓下濃縮，得到粗物質，藉由矽膠管柱層析純化，得到之物質在純化期間經空氣氧化，得到呈黃色固體狀之(S)-8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-4-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-5-酮(3 mg，9.19 μmol，10%產率)。1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.67(d,J=5.6 Hz,1H)8.19-8.23(m,1H)8.02-8.06(d,J=5.6 Hz,1H)7.06-7.10(m,1H,)6.98(s,1H),4.08-4.14(m,1H),3.91-3.97(m,1H),3.28-3.30(m,1H),3.01(s,3H),1.80-1.88(m,1H),1.41-1.48(m,2H),0.97-1.03(m,6H)；LCMS(ESI)m/e 327.2[(M+H)+,C19H23N2O3之計算值為327.2]；LC/MS滯留時間(方法G)：t R=0.82分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=8.47分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=8.90分鐘。
實例35
(S)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-7-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
部分A. 2-(4-氯-2-氟-3-甲基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
向已冷卻至-10℃之經攪拌之1-溴-4-氯-2-氟-3-甲基苯(1.70 g， 7.61 mmol)於四氫呋喃(45 mL)中之溶液中逐滴添加氯化異丙基鎂(2.9 M之THF溶液)(3.0 mL，8.75 mmol)。在-10℃下攪拌反應混合物1小時，隨後升溫至0℃且攪拌1小時。冷卻反應混合物至-10℃，繼而逐滴添加2-異丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼(1.785 mL，8.75 mmol)。使反應物升溫至室溫且攪拌14小時。用1 N氫氧化鈉水溶液淬滅反應混合物且攪拌10分鐘。用濃HCl調節反應物之pH值至3且用乙酸乙酯(2×30 mL)萃取溶液。用水(50 mL)、鹽水(50 mL)洗滌經合併之有機層，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到2-(4-氯-2-氟-3-甲基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼(1.75 g，6.47 mmol，85%產率)，其不經純化即進行下一步驟。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.47(m,1 H),7.14(d,J=8 Hz,1 H),2.29(d,J=2 Hz,3 H),1.36(s,12 H)。
部分B. N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲基苯基)-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺
如實例5部分B中所述使用2-(4-氯-2-氟-3-甲基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼製備，得到呈白色固體狀之N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲基苯基)-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺(1.02 g，3.04 mmol，82%產率)。LCMS(ESI)m/e 307.0[(M+H)+,C15H13ClFN2O2之計算值為307.1]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.95分鐘。
部分C. N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲基苯基)-5-(羥基甲基)吡啶-2-基)乙醯胺
如實例5部分C中所述使用N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲基苯基)-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺製備，得到呈灰白色固體狀之N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲基苯基)-5-(羥基甲基)吡啶-2-基)乙醯胺(1.1 g，2.39 mmol，73%產率)。LCMS(ESI)m/e 309.0[(M+H)+,C15H15ClFN2O2之計算值為309.1]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.85分鐘。
部分D. N-(8-氯-7-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
如實例5部分D中所述使用N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲基苯基)-5-(羥基甲基)吡啶-2-基)乙醯胺製備，得到呈白色固體狀之N-(8-氯-7-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺(150 mg，0.514 mmol，18%產率)。LCMS(ESI)m/e 289.0[(M+H)+,C15H14ClN2O2之計算值為289.1]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.9分鐘。
部分E. (S)-(1-((2-乙醯胺基-7-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯
如實例8部分C中所述使用(S)-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯及N-(8-氯-7-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺製備，得 到呈棕色油狀之(S)-(1-((2-乙醯胺基-7-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(168 mg，0.037 mmol，11%產率)。LCMS(ESI)m/e 470.3[(M+H)+,C26H36N3O5之計算值為470.3]；LC/MS滯留時間(方法F)：t R=0.96分鐘。
部分F. (S)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-7-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
如實例8部分D中所述使用(S)-(1-((2-乙醯胺基-7-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯製備，得到呈黃色固體狀之(S)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-7-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺TFA鹽(9 mg，0.022 mmol，64%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.18(s,1 H),8.11(s,1 H),7.76(d,J=8.4 Hz,1 H),6.87(d,J=8.8 Hz,1 H),5.19(s,2 H),4.33(m,1 H),4.20(m,1 H),3.75(m,1 H),2.27(s,3 H),2.23(s,3 H),1.8-1.67(m,3 H),1.07-1.04(m,6 H)。LCMS(ESI)m/e 370.2[(M+H)+,C21H28N3O3之計算值為370.2]；LC/MS滯留時間(方法I)：t R=1.75分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=9.34分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=10.3分鐘。
實例36
N-(8-((2-胺基-5,5,5-三氟戊基)氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
部分A. 1-(2-乙醯胺基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-5,5,5-三氟戊-2-基胺基甲酸第三丁酯
如實例18部分H中所述使用N-(8-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺(0.1 g，0.175 mmol)(如實例18部分G中所述製備)製備，得到呈黃色油狀之(1-((2-乙醯胺基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-5,5,5-三氟戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(0.023 g，0.021 mmol，12%產率)。LCMS(ESI)m/e 496.6[(M+H)+,C24H29F3N3O5之計算值為496.2]LC/MS滯留時間(方法F)：t R=0.88分鐘。
部分B. N-(8-((2-胺基-5,5,5-三氟戊基)氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
如實例8部分D中所述使用(1-((2-乙醯胺基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-5,5,5-三氟戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(0.023 g，0.021 mmol)製備，得到呈黃色半固體狀之N-(8-((2-胺基-5,5,5-三氟戊基)氧 基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺，2 TFA(6.02 mg，9.46 μmol，44%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.18(s,1H),8.01(s,1H),7.87(d,J=8.8 Hz,1H),6.89(m,1H),6.76(d,J=2.8 Hz,1H),5.20(s,2H),4.38(m,1H),4.25(m,1H),3.82(m,1H),2.52(m,2H),2.32(s,3H),2.15(m,2H)；LCMS(ESI)m/e 396.2[(M+H)+,C19H21F3N3O3之計算值為396.1]；LC/MS滯留時間(方法H)：t R=1.53分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=8.13分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=8.64分鐘。
實例37
(S)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-7-甲氧基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
部分A. 3-溴-6-氯-2-氟酚
向已冷卻至-78℃之經攪拌之1-溴-4-氯-2-氟苯(5 g，23.87 mmol)於四氫呋喃(40 mL)中之溶液中逐滴添加2 M LDA於THF/庚烷/乙基苯中之溶液(14.92 mL，29.8 mmol)且在此溫度下攪拌反應混合物30分鐘。使溶液升溫至-20℃且攪拌30分鐘。冷卻反應物至-78℃，逐滴添加溶解於THF(5 mL)中之硼酸三甲酯(3.47 mL，31.0 mmol)，使反應混合物升溫至-20℃且攪拌1小時。冷卻反應混合物至-78℃，逐滴添加過乙酸(16 mL，84 mmol)，使混合物升溫至室溫且攪拌12小時。冷卻 反應混合物至0℃，用5%氯化銨水溶液淬滅且用乙酸乙酯(2×50 mL)萃取。用鹽水(50 mL)洗滌經合併之有機層。經硫酸鈉乾燥有機層且在減壓下濃縮，得到呈黃色油狀之3-溴-6-氯-2-氟酚(4.99 g，18.25 mmol，76%產率)。LCMS(ESI)m/e 225.1[(M+H)+,C6H4BrClFO之計算值為224.9]；LC/MS滯留時間(方法G)：t R=0.87分鐘。
部分B. 1-溴-4-氯-2-氟-3-甲氧基苯
向經攪拌之3-溴-6-氯-2-氟酚(4.2 g，18.63 mmol)於乙腈(35 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(5.15 g，37.3 mmol)，繼而在室溫下逐滴添加甲基碘(2.330 mL，37.3 mmol)。在85℃下加熱反應混合物3小時。蒸發揮發物；添加水(50 mL)且用乙酸乙酯(2×80 mL)萃取溶液。用鹽水(100 mL)洗滌經合併之有機層，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。粗物質不經進一步純化即進行下一步驟。1H NMR(400 MHz,CDCl 3 )δ 7.20(m,1 H),7.05(m,1 H),3.98(s,3 H)。
部分C. 2-(4-氯-2-氟-3-甲氧基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
向已冷卻至-10℃之經攪拌之1-溴-4-氯-2-氟-3-甲氧基苯(2.6 g，10.86 mmol)於四氫呋喃(30 mL)中之溶液中逐滴添加溴化異丙基鎂 (4.49 mL，13.03 mmol)且在此溫度下攪拌反應混合物1小時。隨後使反應混合物升溫至0℃且攪拌1小時。冷卻反應混合物至-10℃且逐滴添加2-異丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼(2.215 mL，10.86 mmol)。使反應混合物升溫至室溫且繼續攪拌16小時。用5%氫氧化鈉水溶液淬滅反應物且用乙酸乙酯(2×25 mL)萃取。用鹽水(25 mL)洗滌經合併之有機層，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到呈棕色油狀之2-(4-氯-2-氟-3-甲氧基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼(2.15 g，7.50 mmol，69%產率)。1H NMR(400 MHz,CDCl 3 )δ 7.35(m,1 H),7.13(m,1 H),3.96(s,3 H),1.36(s,12 H)。
部分D. N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲氧基苯基)-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺
用氮氣吹洗經攪拌之N-(4-氯-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺(1.947 g，8.72 mmol)(如實例18部分D中所述製備)、2-(4-氯-2-氟-3-甲氧基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼(2.5 g，8.72 mmol)、碳酸銫(5.69 g，17.45 mmol)及Pd(PPh3)4(0.504 g，0.436 mmol)於二噁烷(30 mL)與水(5 mL)之混合物中之溶液5分鐘，隨後加熱至85℃後維持14小時。冷卻反應混合物至室溫且用水(10 mL)稀釋。用乙酸乙酯(2×15 mL)萃取混合物。用鹽水(20 mL)洗滌經合併之有機層，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析使用乙酸乙酯之己烷溶液的梯度純化殘餘物，得到呈白色固體狀之N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲氧基苯基)-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺(1.78 g，2.95 mmol，34%產率)。LCMS(ESI)m/e 322.9[(M+H)+,C15H13ClFN2O3之計算值為323.1]；LC/MS滯留時間(方法F)：t R=0.89分鐘。
部分E. N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲氧基苯基)-5-(羥基甲基)吡啶-2-基)乙醯胺
向經攪拌之N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲氧基苯基)-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺(1.7 g，2.370 mmol)於THF(15 mL)與甲醇(5 mL)之混合物中之溶液中分兩份添加硼氫化鈉(0.090 g，2.370 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物30分鐘。移除揮發物，添加水(15 mL)且用乙酸乙酯(2×20 mL)萃取溶液。用鹽水(15 mL)洗滌經合併之有機層，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到呈棕色固體狀之N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲氧基苯基)-5-(羥基甲基)吡啶-2-基)乙醯胺(1.6 g，1.88 mmol，38%產率)。化合物不經進一步純化即帶入下一步驟中。LCMS(ESI)m/e 324.9[(M+H)+,C15H15ClFN2O3之計算值為325.1]；LC/MS滯留時間(方法F)：t R=0.97分鐘。
部分F. N-(8-氯-7-甲氧基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
如實例5部分D中所述使用N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲氧基苯基)-5-(羥基甲基)吡啶-2-基)乙醯胺製備，得到呈白色固體狀之N-(8-氯-7-甲氧基- 5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺(250 mg，0.743 mmol，34%產率)。LCMS(ESI)m/e 305.0[(M+H)+,C15H14ClN2O3之計算值為305.1]；LC/MS滯留時間(方法G)：t R=0.88分鐘。
部分G. (S)-(1-((2-乙醯胺基-7-甲氧基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯
如實例18部分H中所述使用(S)-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯及N-(8-氯-7-甲氧基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺製備，得到呈棕色油狀之(S)-(1-((2-乙醯胺基-7-甲氧基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(112 mg，0.089 mmol，60%產率)。LCMS(ESI)m/e 486.2[(M+H)+,C26H36N3O6之計算值為486.2]；LC/MS滯留時間(方法F)：t R=0.91分鐘。
部分H. (S)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-7-甲氧基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
向經攪拌之(S)-(1-((2-乙醯胺基-7-甲氧基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(111 mg，0.088 mmol)於二氯甲烷(2 mL)中之溶液中逐滴添加TFA(0.027 mL，0.352 mmol)且在 室溫下攪拌反應混合物12小時。完成反應後，在減壓下移除揮發物，得到殘餘物，藉由製備型HPLC(Sunfire C18 3.5 μm，19×150 mm管柱及10 mM乙酸銨水溶液)純化，得到呈白色固體狀之(S)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-7-甲氧基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺(10 mg，0.022 mmol，25%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.38(s,1 H),8.17(s,1 H),7.6(d,J=8.8 Hz,1 H),6.88(d,J=8.8 Hz,1 H),5.18(s,2 H),3.9(s,3 H),2.2(s,3 H),1.94(m,3 H),1.86-1.81(m,1 H),1.70-1.65(m,1 H),1.63-1.55(m,1 H),1.04(m,6 H)；LCMS(ESI)m/e 386.2[(M+H)+,C21H28N3O4之計算值為386.2]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.99分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=8.80分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=9.73分鐘。
實例38
(S)-N-(8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-7-(二氟甲基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
部分A. N-(4-(4-氯-3-(二氟甲基)-2-氟苯基)-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺
如實例37部分D中所述使用N-(4-氯-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺 (如實例18部分D中所述製備)製備，得到N-(4-(4-氯-3-(二氟甲基)-2-氟苯基)-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺(40 mg，0.1 mmol，28%產率)。LCMS(ESI)m/e 343.0[(M+H)+,C15H11ClF3N2O2之計算值為343.03]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.91分鐘。
部分B. N-(4-(4-氯-3-(二氟甲基)-2-氟苯基)-5-(羥基甲基)吡啶-2-基)乙醯胺
如實例5部分C中所述使用N-(4-(4-氯-3-(二氟甲基)-2-氟苯基)-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺製備，得到呈棕色固體狀之N-(4-(4-氯-3-(二氟甲基)-2-氟苯基)-5-(羥基甲基)吡啶-2-基)乙醯胺(1.1 g，2.84 mmol，76%產率)。LCMS(ESI)m/e 345.0[(M+H)+,C15H13ClF3N2O2之計算值為345.0]；LC/MS滯留時間(方法：H)：t R=1.92分鐘。
部分C. N-(8-氯-7-(二氟甲基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
如實例5部分D中所述使用N-(4-(4-氯-3-(二氟甲基)-2-氟苯基)-5-(羥基甲基)吡啶-2-基)乙醯胺製備，得到呈淺黃色固體狀之N-(8-氯-7-(二氟甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺(900 mg，2.66 mmol，94%產率)。LCMS(ESI)m/e 325.0[(M+H)+,C15H12ClF2N2O2之計算值為325.0]；LC/MS滯留時間(方法：H)：t R=2.21分鐘。
部分D. (S)-1-(2-乙醯胺基-7-(二氟甲基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯
如實例18部分H中所述使用N-(8-(((S)-2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙醯胺製備，得到呈灰白色固體狀之(S)-(1-((2-乙醯胺基-7-(二氟甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(130 mg，0.152 mmol，12%產率)。LCMS(ESI)m/e 506.2[(M+H)+,C26H34F2N3O5之計算值為506.2]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=2.09分鐘。
部分E. (S)-N-(8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-7-(二氟甲基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
如實例8部分D中所述使用(S)-(1-((2-乙醯胺基-7-(二氟甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(130 mg，0.152 mmol)製備，得到呈白色固體狀之(S)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-7-(二氟甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺(50 mg，0.121 mmol，80%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.39(s,1 H),8.17(s,1 H),7.96(d,J=8.8 Hz,1 H),7.19(t,J=54 Hz,1 H),6.91(d, J=8.8 Hz,1 H),5.19(s,2 H),4.15(m,1 H),3.92(m,1 H),3.27(m,1 H),2.22(s,3 H),1.81(m,1 H),1.44(m,2 H),0.99(m,6 H)。LCMS(ESI)m/e 406.2[(M)+,C21H25F2N3O3之計算值為406.2]；LC/MS滯留時間(方法J)：t R=1.87分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=9.34分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=9.95分鐘。
實例39
(S)-4-甲基-1-((2-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-胺
部分A. 4-氯-6-甲基菸鹼酸甲酯
用氬氣使4,6-二氯菸鹼酸甲酯(2.0 g，9.71 mmol)、三甲基硼氧雜環己烷(0.731 g，5.82 mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.396 g，0.485 mmol)及Cs2CO3(9.49 g，29.1 mmol)於1,4-二噁烷(30 mL)及水(1.5 mL)中之溶液脫氣15分鐘，隨後加熱至110℃後維持16小時。冷卻後，用水稀釋(100 mL)溶液且用乙酸乙酯(150 mL)萃取。經Na2SO4乾燥有機層且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(20% EtOAc之石油醚溶液)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之4-氯-6-甲基菸鹼酸甲酯(0.1 g，0.539 mmol，22%產率)。LCMS(ESI)m/e 186.0[(M+H)+,C8H9ClNO2之計算值為186.02]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.75分鐘。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.94(s,1H),7.27(s,1H),3.95(s,3H),2.58(s,3H)。
部分B. 4-(4-氯-2-氟苯基)-6-甲基菸鹼酸甲酯
在80℃下加熱4-氯-6-甲基菸鹼酸甲酯(0.1 g，0.539 mmol)、(4-氯-2-氟苯基)硼酸(0.094 g，0.539 mmol)、Pd(PPh3)4(0.031 g，0.027 mmol)及Cs2CO3(0.527 g，1.616 mmol)於1,4-二噁烷(10 mL)中之混合物16小時。冷卻後，用水(30 mL)及乙酸乙酯(50 mL)稀釋混合物。收集有機相，經Na2SO4乾燥且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(20% EtOAc之石油醚溶液)純化殘餘物，得到呈黃色液體狀之4-(4-氯-2-氟苯基)-6-甲基菸鹼酸甲酯(0.045 g，0.161 mmol，30%產率)。LCMS(ESI)m/e 280.0[(M+H)+,C14H12ClFNO2之計算值為280.04]；LC/MS滯留時間(方法H)：t R=2.51分鐘。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.96(s,1H),7.13-7.29(m,3H),6.44(s,1H),3.94(s,3H),2.49(s,3H)。
部分C. (4-(4-氯-2-氟苯基)-6-甲基吡啶-3-基)甲醇
在-10℃下向4-(4-氯-2-氟苯基)-6-甲基菸鹼酸甲酯(0.32 g，1.144 mmol)於四氫呋喃(10 mL)中之溶液中逐份添加LAH(1.716 mL，1.716 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物2小時，隨後用飽和NH4Cl水溶液(50 mL)稀釋。用乙酸乙酯(80 mL)萃取混合物。分離有機層，經 Na2SO4乾燥且濃縮，得到呈灰白色固體狀之(4-(4-氯-2-氟苯基)-6-甲基吡啶-3-基)甲醇(0.25 g，0.993 mmol，87%產率)。LCMS(ESI)m/e 252.0[(M+H)+,C13H12ClFNO之計算值為252.0]；LC/MS滯留時間(方法H)：t R=1.60分鐘；1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.69(s,1H),7.52(s,1H),7.23(s,2H),7.04-7.17(m,1H),4.57(d,J=11.60 Hz,2H),2.60(s,3H)。
部分D. 8-氯-2-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶
在0℃下向經攪拌之(4-(4-氯-2-氟苯基)-6-甲基吡啶-3-基)甲醇(0.25 g，0.993 mmol)於四氫呋喃(25 mL)中之溶液中逐份添加NaH(0.06 g，1.49 mmol)。隨後在室溫下攪拌溶液16小時。用水(100 mL)淬滅反應混合物。藉由過濾收集沈澱物且風乾，得到呈白色固體狀之8-氯-2-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶(0.2 g，0.863 mmol，69%產率)。LCMS(ESI)m/e 232.0[(M+H)+,C13H11ClNO之計算值為232.0]；LC/MS滯留時間(方法D)：t R=2.06分鐘；1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.31(s,1H),7.65(d,J=4.40 Hz,1H),7.37(s,1H),7.07-7.03(m,2H),5.14(s,2H),2.61(s,3H)。
部分E. (S)-(4-甲基-1-((2-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯
加熱8-氯-2-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶(0.2 g，0.863 mmol)、(S)-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(0.225 g，1.036 mmol)、乙酸鈀(II)(5.81 mg，0.026 mmol)、Cs2CO3(0.422 g，1.295 mmol)及2-二第三丁基膦基-2',4',6'-三異丙基聯苯(0.022 g，0.052 mmol)於甲苯(5 mL)中之混合物至110℃後維持18小時。冷卻後，經由矽藻土過濾混合物且在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(70% EtOAc之石油醚溶液)純化粗產物，得到呈半固體狀之(S)-(4-甲基-1-((2-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(0.12 g，0.291 mmol，34%產率)。LCMS(ESI)m/e 413.4[(M+H)+,C24H33N2O4之計算值為413.2]；LC/MS滯留時間(方法D)：t R=2.42分鐘。
部分F. (S)-4-甲基-1-((2-甲基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-胺
向經攪拌之(S)-(4-甲基-1-((2-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(0.05 g，0.121 mmol)於MeOH(2 mL)中之溶液中添加4 N HCl之1,4-二噁烷溶液(0.5 mL，16.46 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物4小時。隨後濃縮反應混合物且將殘餘物溶解於乙酸乙酯(10 mL)中。用飽和NaHCO3(2×10 mL)及水(20 mL)洗滌有機層，經Na2SO4乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到殘餘物，藉由製備型 HPLC(0.1%乙酸銨之乙腈溶液)純化，得到呈膠狀固體狀之(S)-4-甲基-1-((2-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-胺(0.15 g，0.048 mmol，32%產率)。1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.21(s,1H)；7.80(d,J=8.80 Hz,1H),7.55(s,1H)；6.74(d,J=10.80 Hz,1H),6.60(d,J=2.40 Hz,1H),5.12(s,2H),4.01-3.96(m,1H),3.84-3.79(m,1H),3.24-3.22(m,1H),2.53(s,3H),1.82-1.79(m,1H),1.42-1.39(m,2H),0.99-0.95(m,6H)；LCMS(ESI)m/e 312.5[(M)+,C19H24N2O2之計算值為312.2]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.63分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=7.96分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=9.01分鐘。
實例40
(R)-N-(8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
部分A. (R)-1-(2-乙醯胺基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯
如實例18部分H中所述使用N-(8-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺(如實例18部分G中所述製備)製備，得到呈黃色固體狀之(R)-(1-((2-乙醯胺基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺 基甲酸第三丁酯(100 mg)。LCMS(ESI)m/e 456.4[(M+H)+,C25H34N3O5之計算值為456.2]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=2.06分鐘。
部分B. (R)-N-(8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
如實例8部分D中所述使用(R)-(1-((2-乙醯胺基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯製備，得到(R)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺(10.44 mg，0.029 mmol，47%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.25(s,1 H),8.15(s,1 H),7.83(d,J=8.8 Hz,1 H),6.84(m,1 H),6.72(d,J=2.8 Hz,1 H),5.16(s,2 H),4.34(m,1 H),4.15(m,1 H),3.75(m,1 H),2.26(s,3 H),1.89-1.65(m,3 H),1.15(m,6 H)；LCMS(ESI)m/e 356.2[(M+H)+,C20H26N3O3之計算值為356.2]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.63分鐘。
實例41
(S)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-7-氟-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
部分A. 1-溴-2,3-二氟-4-((4-甲氧基苯甲基)氧基)苯
在室溫下向經攪拌之4-溴-2,3-二氟酚(5 g，23.92 mmol)於乙腈(50 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(3.31 g，23.92 mmol)且攪拌反應混合物5分鐘，繼而逐滴添加1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(3.75 g，23.92 mmol)，隨後在室溫下攪拌反應混合物16小時。完成反應後，在減壓下移除揮發物。添加水(100 mL)且用乙酸乙酯(2×120 mL)萃取溶液。用鹽水(100 mL)洗滌經合併之有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下濃縮，得到呈淡棕色固體狀之1-溴-2,3-二氟-4-((4-甲氧基苯甲基)氧基)苯(7.58 g，23.03 mmol，96%產率)。產物不經進一步純化即繼續使用。LCMS(ESI)m/e 329.1[(M)-,C14H10BrF2O2之計算值為329.0]；LC/MS滯留時間(方法G)：t R=1.20分鐘。
部分B. 2-(2,3-二氟-4-((4-甲氧基苯甲基)氧基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼
如實例37部分C中所述使用1-溴-2,3-二氟-4-((4-甲氧基苯甲基)氧基)苯製備，得到呈淺黃色固體狀之2-(2,3-二氟-4-((4-甲氧基苯甲基)氧基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼(3.52 g，9.36 mmol，77%產率)。1H NMR(400 MHz,CDCl 3 )δ 7.35(m,3 H),6.90(m,2 H),6.76 (m,1 H),5.09(s,2 H),3.80(s,3 H),1.34(s,12 H)。
部分C. N-(4-(2,3-二氟-4-((4-甲氧基苯甲基)氧基)苯基)-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺
如實例5部分B中所述使用2-(2,3-二氟-4-((4-甲氧基苯甲基)氧基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼製備，得到呈白色固體狀之N-(4-(2,3-二氟-4-((4-甲氧基苯甲基)氧基)苯基)-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺(1.85 g，4.49 mmol，48%產率)。LCMS(ESI)m/e 413.2[(M+H)+,C22H19F2N2O4之計算值為413.1]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.99分鐘。
部分D. N-(4-(2,3-二氟-4-((4-甲氧基苯甲基)氧基)苯基)-5-(羥基甲基)吡啶-2-基)乙醯胺
如實例37部分E中所述使用N-(4-(2,3-二氟-4-((4-甲氧基苯甲基)氧基)苯基)-5-甲醯基吡啶-2-基)乙醯胺製備，得到呈淺棕色體狀之N-(4-(2,3-二氟-4-((4-甲氧基苯甲基)氧基)苯基)-5-(羥基甲基)吡啶-2-基)乙醯胺(2.1 g，3.29 mmol，75%產率)。LCMS(ESI)m/e 415.2[(M+H)+,C22H21F2N2O4之計算值為415.1]；LC/MS滯留時間(方法G)：t R=0.9分 鐘。
部分E. N-(7-氟-8-((4-甲氧基苯甲基)氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
如實例5部分D中所述使用N-(4-(2,3-二氟-4-((4-甲氧基苯甲基)氧基)苯基)-5-(羥基甲基)吡啶-2-基)乙醯胺製備，得到呈灰白色固體狀之N-(7-氟-8-((4-甲氧基苯甲基)氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺(750 mg，1.613 mmol，85%產率)。LCMS(ESI)m/e 395.2[(M+H)+,C22H20FN2O4之計算值為395.1]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.95分鐘。
部分F. 甲烷磺酸(S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊酯
在0℃下向經攪拌之(S)-(1-羥基-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(1.6 g，7.36 mmol)於二氯甲烷(15 mL)中之溶液中添加三乙胺(2.052 mL，14.73 mmol)且攪拌溶液5分鐘。在0℃下向此混合物中逐滴添加甲烷磺醯氯(0.574 mL，7.36 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物1小時。用水(15 mL)淬滅反應物且用DCM(2×15 mL)萃取。用鹽水(10 mL)洗滌經合併之有機層，經硫酸鈉乾燥，在減壓下濃縮，得到呈黃色固體狀之甲烷磺酸(S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊酯(1.7 g，5.75 mmol，78%產率)，其不經進一步純化即繼續使用。1H NMR (400 MHz,CDCl 3 )δ 4.55(m,1 H),4.25(m,1 H),4.16(m,1 H),3.92(m,1 H),3.05(s,3 H),1.66(m,2 H),1.56(m,10 H),0.92(m,6 H)。
部分G. N-(7-氟-8-羥基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
在室溫下向經攪拌之N-(7-氟-8-((4-甲氧基苯甲基)氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺(150 mg，0.380 mmol)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液中添加TFA(0.059 mL，0.761 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物2小時。完成反應後，在減壓下移除揮發物。用乙醚(7 mL)洗滌殘餘物且攪拌5分鐘。藉由真空過濾收集固體且在真空下乾燥，得到呈白色固體狀之N-(7-氟-8-羥基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺，TFA(70 mg，0.170 mmol，45%產率)。LCMS(ESI)m/e 275.0[(M+H)+,C14H12FN2O3之計算值為275.1]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=2.0分鐘。
部分H. (S)-(1-((2-乙醯胺基-7-氟-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯
在室溫下向經攪拌之N-(7-氟-8-羥基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺，TFA(70 mg，0.170 mmol)及碳酸鉀(97 mg，0.704 mmol)於DMF(4 mL)中之溶液中添加甲烷磺酸(S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-4- 甲基戊酯(52.0 mg，0.176 mmol)且加熱反應混合物至90℃後維持1小時。完成反應後，在減壓下移除揮發物，得到棕色殘餘物。向此殘餘物中添加水(15 mL)且用乙酸乙酯(2×20 mL)萃取溶液。用水(30 mL)、鹽水(20 mL)洗滌經合併之有機層，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到呈棕色油狀之(S)-(1-((2-乙醯胺基-7-氟-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(90 mg，0.066 mmol，37%產率)。產物不經進一步純化即繼續使用。LCMS(ESI)m/e 472.2[(M-H)-,C25H31FN3O5之計算值為472.2]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.99分鐘。
部分I. (S)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-7-氟-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
如實例37部分H中所述使用(S)-(1-((2-乙醯胺基-7-氟-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯製備，得到呈白色固體狀之(S)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-7-氟-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺，0.5 TFA(16 mg，0.037 mmol，19%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.42(s,1 H),8.19(s,1 H),7.65-7.62(m,1 H),6.97-6.93(m,1 H),5.2(s,2 H),4.30(m,1 H),4.27-4.10(m,1 H),3.59-3.51(m,1 H),2.23(s,3 H),1.79(m,1 H),1.66-1.56(m,2 H),1.21(m,6 H)；LCMS(ESI)m/e 372.2[(M-H)-,C20H23FN3O3之計算值為372.2]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=2.01分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=9.04分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=9.89分鐘。
實例42
(S)-N-(8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)環丙烷甲醯胺
部分A. 8-氯-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-胺
將N-(8-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺(0.05 g，0.182 mmol)溶解於50% HCl水溶液(3 mL，99 mmol)中且回流3小時。冷卻反應混合物至室溫且在減壓下蒸發揮發物。用水(3 mL)處理殘餘物且用二氯甲烷(2×6 mL)萃取。收集水層且在減壓下濃縮，得到呈黃色油狀之8-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-胺鹽酸鹽(50 mg，0.185 mmol，定量)。LCMS(ESI)m/e 233.3[(M+H)+,C12H10ClN2O之計算值為233.0]；LC/MS滯留時間(方法G)；t R=0.89分鐘
部分B. N-(8-氯-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)環丙烷甲醯胺
向經攪拌之8-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-胺，HCl(0.05 g，0.186 mmol)於氯仿(2 mL)中之溶液中添加吡啶(0.090 mL，1.115 mmol)，繼 而在氮氣氛圍下添加環丙烷羰基氯(0.034 mL，0.372 mmol)及DMAP(2.270 mg，0.019 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物12小時。用水(6 mL)稀釋混合物，隨後用二氯甲烷(2×10 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥經合併之有機層且在減壓下濃縮。藉由逆相HPLC(10 mM乙酸銨於乙腈及水中之溶液)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之N-(8-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)環丙烷甲醯胺(0.048 g，0.156 mmol，84%產率)。LCMS(ESI)m/e 301.0[(M+H)+,C16H14ClN2O2之計算值為301.1]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=2.53分鐘。
部分C. (S)-1-(2-(環丙烷甲醯胺基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯
如實例18部分H中所述使用N-(8-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)環丙烷甲醯胺(0.166 g，0.442 mmol)製備，得到(S)-1-(2-(環丙烷甲醯胺基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯(200 mg，0.415 mmol，55%產率)。LCMS(ESI)m/e 482.2[(M+H)+,C27H36N3O5之計算值為482.2]；LC/MS滯留時間(方法F)：t R=0.92分鐘。
部分D. (S)-N-(8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)環丙烷甲醯胺
如實例8部分D中所述使用(S)-(1-((2-(環丙烷甲醯胺基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(0.2 g，0.241 mmol)製備，得到呈白色固體狀之(S)-N-(8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)環丙烷甲醯胺(14 mg，0.036 mmol，15%產率)。LCMS(ESI)m/e 382.3[(M+H)+,C22H28N3O3之計算值為382.2]；LC/MS滯留時間(方法J)：t R=1.96分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=10.17分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=5.69分鐘。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.33(s,1H),8.12(s,1H),7.8(m,1H),6.77(m,1H),6.64(s,1H),5.12(s,2H),4.12(m,1H),3.96(m,1H),3.44(m,1H),1.93(m,1H),1.90(m,1H),1.51(m,2H),1.01(m,8H),0.93(m,2H)。
實例43
(S)-8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基胺基甲酸甲酯
部分A. 8-氯-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基胺基甲酸甲酯
如實例42部分B中所述使用8-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-胺(0.1 g，0.301 mmol)(如實例18部分G中製備)製備，得到粗物質，藉由逆相HPLC(10 mM乙酸銨於乙腈及水中之溶液)純化，得到呈白色固體狀之(8-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)胺基甲酸甲酯(0.011 g，0.036 mmol，12%產率)。LCMS(ESI)m/e 291.0[(M+H)+,C14H12ClN2O3之計算值為291]LC/MS滯留時間(方法E)：t R=1.96分鐘；1H NMR(400 MHz,DMSO-d 6 )δ 10.3(s,1 H),8.23(s,1 H),8.22(s,1 H),7.83(d,J=8.8 Hz,1 H),7.21(m,1 H),7.17(s,1 H),5.20(s,2 H),3.72(s,3 H)。
部分B. (S)-(8-((2-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊基)氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)胺基甲酸甲酯
如實例18部分H中所述使用(8-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)胺基甲酸甲酯(0.16 g，0.176 mmol)製備，得到粗物質，藉由使用矽膠層析(2.5%甲醇之氯仿溶液)純化，得到呈黃色油狀之(S)-(8-((2-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊基)氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)胺基甲酸甲酯(0.15 g，0.067 mmol，38%產率)。LCMS(ESI)m/e 472.2[(M+H)+,C25H34N3O6之計算值為472.2]；LC/MS滯留時間(方法F)：t R=0.95分鐘。
部分C. (S)-8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基胺基甲酸甲酯
如實例8部分D中所述使用胺基甲酸(S)-(8-((2-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊基)氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)酯(0.15 g，0.067 mmol)製備，得到粗物質，藉由逆相HPLC(10 mM乙酸銨於乙腈及水中之溶液)純化，得到呈白色固體狀之(S)-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)胺基甲酸甲酯(5 mg，0.013 mmol，19%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.14(s,1 H),8.06(d,J=0.8 Hz,1 H),7.78(d,J=8.8 Hz,1 H),6.77(m,1 H),6.62(d,J=2.4 Hz,1 H),5.11(s,2 H),4.04(m,1 H),3.86(m,1 H),3.82(s,3 H),3.32(m,1 H),1.86(m,1 H),1.42(m,2 H),0.99(m,6 H)；LCMS(ESI)m/e 372.2[(M+H)+,C20H26N3O4之計算值為372.2]；LC/MS滯留時間(方法E)：t R=2.13分鐘；HPLC滯留時間(方法A)：t R=9.39分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=10.15分鐘。
實例44
N-(8-(2-胺基-2,4-二甲基戊氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺
部分A. 2-(第三丁氧基羰基胺基)-2,4-二甲基戊酸
向經攪拌之2-胺基-2,4-二甲基戊酸(1 g，6.89 mmol)於四氫呋喃(15 mL)及水(15 mL)中之溶液中添加K2CO3(3.81 g，27.5 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物10分鐘。向所得混合物中逐滴添加(BOC)2O(3.20 mL，13.77 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物14小時。隨後在減壓下濃縮反應混合物。用乙酸乙酯(3×15 mL)洗滌水層且用飽和檸檬酸水溶液(25 mL)酸化，隨後用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取。用水(2×15 mL)、鹽水(20 mL)洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮，得到呈白色固體狀之2-((第三丁氧基羰基)胺基)-2,4-二甲基戊酸(1.6 g，6.89 mmol，定量產率)。1H NMR(400 MHz,CDCl 3 )δ 5.36(bs,1 H),2.10(m,1 H),1.77(m,2 H),1.74-1.65(m,3 H),1.59(s,9 H),0.89(m,3 H),0.94(m,3 H)。
部分B. 1-羥基-2,4-二甲基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯
在氮氣氛圍下向已冷卻至-10℃之經攪拌之2-((第三丁氧基羰基)胺基)-2,4-二甲基戊酸(1.6 g，6.52 mmol)於四氫呋喃(40 mL)中之溶液中添加N-甲基嗎啉(0.860 mL，7.83 mmol)，繼而逐滴添加氯甲酸異丁酯(1.028 mL，7.83 mmol)且攪拌反應混合物30分鐘。隨後過濾反應混合物且將濾液逐滴添加至NaBH4(0.494 g，13.04 mmol)於水(20.0 mL)中之懸浮液中。攪拌反應混合物10分鐘，隨後用乙酸乙酯(30 mL)稀釋。分離有機層且用鹽水(2×20)洗滌，經(Na2SO4)乾燥且在減壓下蒸發。藉由矽膠層析(30%乙酸乙酯及石油醚)純化殘餘物，得到呈油狀之(1-羥基-2,4-二甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(1.1 g，4.76 mmol，73%產率)。1H NMR(400 MHz,DMSO-d 6 )δ 6.09(s,1 H),4.61(t,J= 7.6 Hz,1 H),3.35(m,2 H),1.8-1.6(m,2 H),1.44-1.35(m,10 H),1.09(s,3 H),0.86(m,6 H)。
部分C. 1-(2-乙醯胺基-5H- 烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-2,4-二甲基戊-2-基胺基甲酸第三丁酯
如實例18部分H中所述使用N-(8-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺(0.3 g，1.092 mmol)(如實例18部分G中製備)製備，得到粗物質，藉由逆相HPLC(10 mM乙酸銨)純化，得到呈黃色半固體狀之外消旋(1-((2-乙醯胺基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-2,4-二甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(60 mg，0.116 mmol，12%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 9.33(s,1 H),8.11(s,1 H),7.74(d,J=8.8 Hz,1 H),6.74(m,1 H),6.58(d,J=2.4 Hz,1 H),5.11(s,2 H),4.18(d,J=9.2Hz,1 H),3.97(d,J=9.2 Hz,1 H),2.21(s,3 H),1.87(m,2 H),1.62(m,1 H),1.42(s,9 H),1.36(s,3 H),0.99(m,6 H)；LCMS(ESI)m/e 470[(M+H)+,C26H36N3O5之計算值為470.25]；LC/MS滯留時間(方法K)：t R=2.48分鐘。
部分D. N-(8-(2-胺基-2,4-二甲基戊氧基)-5H- 烯并[3,4-c]吡啶- 2-基)乙醯胺
如實例8部分D中所述使用(1-((2-乙醯胺基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-2,4-二甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁酯(0.55 g，0.433 mmol)製備，得到粗物質，藉由逆相HPLC(10 mM乙酸銨於乙腈及水中之溶液)純化，得到N-(8-(2-胺基-2,4-二甲基戊氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺。為了製備鹽酸鹽，將化合物溶解於甲醇(1 mL)中，冷卻至0℃且用4 M HCl之二噁烷溶液(1.5 mL)處理且攪拌10分鐘。在減壓下濃縮揮發物且凍乾溶液，得到呈淺黃色固體狀之外消旋N-(8-((2-胺基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺，HCl(0.013 g，0.030 mmol，7%產率)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δ 8.21(s,1 H),7.94(d,J=8.8 Hz,1 H),7.86(bs,1 H),6.94(m,1 H),6.79(s,1 H),5.25(s,2 H),4.29(d,J=10.4 Hz,1 H),4.16(d,J=10.4 Hz,1 H),2.33(s,3 H),1.88(m,2 H),1.72(m,1 H),1.52(s,3 H),1.06(m,6 H)；LCMS(ESI)m/e 370.4[(M+H)+,C21H28N3O3之計算值為370.2]；LC/MS滯留時間(方法J)；HPLC滯留時間(方法A)：t R=9.51分鐘；HPLC滯留時間(方法B)：t R=9.98分鐘。
方法 AAK1激酶分析
在U型底384孔盤中執行分析。最終分析體積為30 μl，其由將15 μl酶及受質(螢光化肽(5-FAM)-Aha-KEEQSQITSQVTGQIGWR-NH2及ATP)及測試化合物添加於分析緩衝劑(10 mM Tris-HCL(pH 7.4)、10 mM MgCl2、0.01% Tween-20及1.0 mM DTT)中製備。藉由組合在細菌中表現之GST-Xa-hAAK1與受質及測試化合物來引發反應。在室溫下培育反應物3小時且藉由向各樣品中添加60 μl 35 mM EDTA緩衝劑來終止反應。在Caliper LabChip 3000(Caliper,Hopkinton,MA)上藉由電泳分離螢光受質與磷酸化產物來分析反應物。藉由與經EDTA淬滅之 對照反應(100%抑制)及僅媒劑之反應(0%抑制)比較來計算抑制數據。分析中試劑之最終濃度為：ATP，22 μM；(5-FAM)-Aha-KEEQSQITSQVTGQIGWR-NH2，1.5 μM；GST-Xa-hAAK1，3.5 nM；及DMSO，1.6%。產生劑量反應曲線以確定抑制50%激酶活性所需之濃度(IC50)。將化合物以10 mM溶解於二甲亞碸(DMSO)中且在十一個濃度下進行評估。藉由非線性回歸分析得出IC50值。
基於HEK281細胞之分析
將HEK293F細胞培養於含有DMEM(Gibco，目錄號11965)、10% FBS(SAFC Biosciences，目錄號12103C)、1×GPS(麩醯胺酸、青黴素(penicillin)及鏈黴素(streptomycin))之培養基中。在第一天，將細胞塗佈於10 cm培養皿上，使得其在轉染時約80%匯合。在轉染時每10 cm培養皿中有約1200萬個細胞。在第二天，用48 μg DNA及144 μl脂染胺(Lipofectamine)2000(Invitrogen，目錄號11668-019)轉染各培養皿。DNA包含含有3 μg AAK1/HA/pIRES(全長人類，NCBI寄存編號NP_055726.2)、45 μg Flag/AP2MI/pcDNA(全長人類)及1.5 ml OPTI-MEM之混合物(每10 cm培養皿)。脂染胺2000由含有144 μl脂染胺2000及1.5 ml OPTI-MEM之混合物(每10 cm培養皿)構成。將各混合物轉移至個別15 ml管中且在室溫下培育5分鐘，隨後組合兩種混合物且在室溫下培育20分鐘。隨後自各10 cm培養盤吸出生長培養基且替換為10 ml DMEM+10% FBS(無GPS)。最後，向各10 cm培養皿中添加3 ml DNA/脂染胺混合物且輕柔混合，繼而在37℃及5% CO2下培育培養盤隔夜。
在第三天，用100% DMSO稀釋化合物至1000×最終濃度，繼而進行3倍連續稀釋，獲得總共5個測試濃度。每10 cm培養皿測試四種化合物。隨後將1 μl各化合物稀釋液吸移至深孔96孔盤中，繼而向各孔中添加500 μl DMEM+0.5% FBS以獲得2×最終濃度之各化合物。藉 由單純吸取(此時HEK293細胞易於自培養盤脫落)將細胞再懸浮於10 cm培養皿中，隨後轉移至50 ml錐形管中且在1000 rpm下離心5分鐘來集結。隨後將細胞集結粒再懸浮於2.75 ml DMEM+0.5% FBS中(每10 cm培養皿)且將100 μl細胞懸浮液轉移至96孔TC盤之各孔中。最後，隨後將100 μl用DMEM +0.5% FBS稀釋之2×化合物添加至含有細胞懸浮液之孔中，獲得1×最終濃度。隨後在37℃及5% CO2下培育培養盤3小時，繼而將細胞懸浮液自各孔轉移至12管PCR連排管(PCR strip)中。將PCR連排管放在吸頭置放架(tip rack)中，在1000 rpm下旋轉5分鐘，使細胞集結，且隨後藉由吸取但不擾動細胞集結粒來移除培養基。
為了準備進行西方墨點分析(Western Blot analysis)，將細胞集結粒再懸浮於40 μl 1×LDS-PAGE樣品緩衝液(Invitrogen，目錄號NP0008)+2×Halt磷酸酶及蛋白酶抑制劑混合物(Thermo Scientific，目錄號1861284)中，繼而用分別設定在第5檔下8-10秒之微量管(microtip)音波儀進行音波處理。向各樣品中添加5 μl 10×NuPage樣品還原劑(含50 mM DTT)，繼而在70℃下在PCR器上熱變性10分鐘。每種樣品總共取10 μl加載於4-20% Tris-甘胺酸Criterion 26孔凝膠(Biorad，目錄號345-0034)之各泳道中，獲得磷酸化mu2墨點，且在每泳道之4-12% Bis-Tris(+MES緩衝液)NuPAGE 26孔凝膠(Invitrogen，目錄號WG1403BX10)中加載10 μl，獲得mu2墨點。為進行對照，將2 ng磷酸化mu2或20 ng mu2/Flag蛋白質加載於各凝膠之最末孔中。在SDS-PAGE後，使用iBlot將各凝膠上之樣品轉移至PVDF膜中，且將膜在TBST+5%奶中阻斷1小時，繼而用TBST洗滌3次5-10分鐘。用含兔抗磷酸化mu2(1：5000；由New England Peptide製造且在Lexicon上進行親和性純化之兔多株抗體)之TBST+5% BSA探測Criterion凝膠，而用含小鼠抗Flag(1：500；Sigma，目錄號F1804)之TBST+5%奶探測 NuPAGE凝膠，且在4℃下在振盪器上培育此等初級抗體隔夜。
在第四天，用TBST洗滌西方墨點法之墨點3次持續5-10分鐘，在室溫下用含抗兔-HRP(1：2000；BioRad，目錄號170-6515)或抗小鼠-HRP(1：2000；Biorad，目錄號170-6516)之TBST+5%奶探測1小時，用TBST洗滌3次持續10分鐘，且用ECL試劑(GE Healthcare，目錄號RPN2132)在Versadoc上顯影。最後，安設相機以每30秒進行拍照持續10分鐘，且保留各墨點之無飽和信號的最佳影像(當信號飽和時，將以紅色突顯條帶)。對各條帶執行體積分析以獲得密度值。藉由首先針對總Mu2表現量進行校正隨後與0%及100%對照比較來計算各樣品之抑制百分比。隨後使用Excel擬合軟體計算IC50值。
AAK1基因剔除小鼠
藉由兩種方法製備破壞AAK1基因之小鼠同種接合子(-/-)：基因捕獲及同源重組。
基因捕獲為一種隨機插入突變誘發之方法，其使用DNA中編碼報導基因或可選擇標記基因之片段作為誘變劑。基因捕獲載體經設計而以使細胞拼接機制可將載體編碼之外顯子拼接於細胞mRNA的方式整合於內含子或基因中。一般而言，基因捕獲載體含有可選擇標記序列，其位於強拼接受體序列之前且不在啟動子之前。由此，當該等載體整合於基因中時，細胞拼接機制將所捕獲基因之外顯子拼接於可選擇標記序列之5'端上。通常，該等可選擇標記基因僅可在編碼該基因之載體整合於內含子中時被表現。隨後，所得基因捕獲事件藉由選擇可在選擇性培養中存活之細胞來鑑別。
藉由包括將經遺傳工程改造之載體序列的至少一部分插入所關注基因中的方法使胚胎幹細胞(來自衍生鼠類株A129之Lex-1細胞)突變，將經突變之胚胎幹細胞顯微注射於胚胞中，隨後引入假孕雌性宿主中且使用既定方法到達產期。參見例如「Mouse Mutagenesis」, 1998,Zambrowicz等人編，Lexicon Press,The Woodlands,TX。隨後使所得嵌合動物繁殖產生能夠生殖系傳遞所關注基因中含有經工程改造之突變的對偶基因的後代。
AAK1基因經破壞之小鼠亦藉由同源重組來製備。在此情況下，藉由此項技術中已知之方法移除鼠類AAK1基因之第二編碼外顯子(參見GenBank寄存編號NM_177762)。參見例如美國專利第5,487,992號、第5,627,059號及第5,789,215號。
結合破壞AAK1基因之小鼠異種接合子(+/-)及野生型(+/+)同窩出生者研究破壞AAK1基因之小鼠同種接合子(-/-)。在此分析期間，使用經設計用以評定哺乳動物個體之主要器官系統之功能的一整套醫療診斷程序對小鼠進行醫療處理。結合異種接合子(+/-)及野生型(+/+)同窩出生者研究同種接合子(-/-)「基因剔除」小鼠。藉由南方分析證實對AAK1基因之破壞。藉由RT-PCR在以下中偵測AAK1之鼠類同源物的表現：鼠腦；脊髓；眼睛；胸腺；脾；肺；腎；肝；骨骼肌；骨；胃、小腸及結腸；心臟；脂肪；哮喘之肺；LPS肝；血液；條帶狀心臟；主動脈樹；前列腺；及乳腺(5週齡未交配鼠、成熟未交配鼠、12 DPC、分娩後3天(泌乳期)、斷乳後3天(退化早期)及斷乳後7天(退化晚期))。
使用福馬林(formalin)爪測試來測試AAK1同種接合子(-/-)及其野生型(+/+)同窩出生者以評定其短暫及持續傷害感受性反應。在此等測試中，使用自動傷害感受分析儀(購自Ozaki實驗室，University of California,San Diego)。在測試前30分鐘將金屬帶置放在各小鼠左後爪周圍。30分鐘適應期後，將20 μl 5%福馬林皮下注射於左後爪之背面。將小鼠個別放置於圓柱形腔室中45分鐘。藉由用蒸餾水稀釋甲醛(Formalde-fresh 20%,Fisher Scientific,Fair Lawn,NJ)來製備新鮮5%福馬林溶液。在福馬林注射前30分鐘投與研究化合物。
電腦記錄由電磁場引起的每分鐘之退縮情況、階段I之總退縮情況(短暫階段=前8分鐘)及階段II之總退縮情況(持續階段=20-40分鐘之間的時間)。參見Yaksh TL,OzakiG,McCumber D,Rathbun M,Svensson C,Malkmus S,Yaksh MC.An automated flinch detecting system for use in the formalin nociceptive bioassay.J Appl Physiol.,2001；90：2386-402。
如圖1所示，使用同種接合子(-/-)雌性小鼠(n=16)、野生型雌性小鼠(n=15)、同種接合子(-/-)雄性小鼠(n=9)及野生型雄性小鼠(n=18)獲得階段1及階段2之數據。在所有群組中且在兩個階段中，AAK1同種接合子(-/-)小鼠展現之所記錄之縮爪現象顯著少於其野生型(+/+)同窩出生者。
AAK1基因剔除小鼠之研究展示，如使用上述福馬林爪測試所量測，破壞AAK1基因影響疼痛反應。使用相同測試證實投與AAK1抑制劑亦可影響疼痛反應。
在此分析中以不同劑量測試本發明化合物。使用加巴噴丁及普瑞巴林作為陽性對照組。結果展示於下表2中，其中認為200 mg/kg加巴噴丁之作用為100%反應，其他化合物之反應%係相對於200 mg/kg劑量之加巴噴丁來得出，「sc」意謂皮下投與。
<110> 美商必治妥美雅史谷比公司菲佛卡南達M福魯赫拉(VRUDHULA,VIVEKANANDA M.)
<120> 芳基醚結構之激酶抑制劑
<130> 11824 NP
<150> 61/608737
<151> 2012-03-09
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 螢光肽
<400> 1

Claims (13)

  1. 一種式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中：R1及R2獨立地選自氫、C3-C6環烷基及C1-C3烷基，其中該C1-C3烷基視情況經一個、兩個或三個獨立地選自C1-C3烷氧基、C1-C3烷基胺基、胺基、氰基、C1-C3二烷基胺基、鹵基及羥基之基團取代；或R1及R2一起為側氧基；或R1及R2與其所連接之碳原子一起形成氧雜環丁烷環；R3為C1-C3烷基-Y或C2-C8烷基，其中該C2-C8烷基視情況經一個、兩個、三個或四個獨立地選自以下之基團取代：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基胺基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基胺基、胺基、芳基、鹵基、C1-C3鹵烷基胺基、C1-C3鹵烷基羰基胺基、羥基、-NRxRy及C3-C8環烷基，其中該環烷基進一步視情況經一個、兩個或三個獨立地選自以下之基團取代：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、C1-C3烷基胺基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基胺基、胺基、芳基、芳基C1-C3烷基、鹵基、C1-C3鹵烷基、C1-C3鹵烷基胺基及羥基；R4選自氫、C1-C3烷氧基、C1-C3烷氧基羰基胺基、C1-C3烷基、C1-C3烷基胺基、C1-C3烷基羰基胺基、胺基、芳基胺基、芳基羰基胺基、C3-C6環烷基胺基、C3-C6環烷基羰基胺基、 C3-C6環烷氧基、鹵基、C1-C3鹵烷氧基、C2-C3鹵烷基胺基、C2-C3鹵烷基羰基胺基及羥基；R5選自氫、C1-C3烷基、氰基、C3環烷基及鹵基；R6選自氫、C1-C3烷基、C1-C3烷基羰基胺基、胺基，R7選自氫、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、氰基、-CH2OH、-CH2OCH3、CH(CH3)OH、C(CH3)2OH、鹵基及C1-C3鹵烷基；R8選自氫、C1-C3烷氧基、氰基及鹵基；Rx及Ry與其所連接之氮原子一起形成三至六員環；且Y選自： 其中R9選自氫、C1-C6烷基、C3-C6環烷基及C1-C6烷基羰基；n為0、1、2或3；各R10獨立地選自氫、C1-C6烷基、芳基、芳基C1-C3烷基、C3-C6環烷基、鹵基及C1-C3鹵烷基；且各R11獨立地選自氫、C1-C3烷氧基及羥基。
  2. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R1及R2各為氫。
  3. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R1及R2中之一者為C1-C3烷基且另一者選自氫及C1-C3烷基。
  4. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R1及R2中之 一者為氫且另一者為C3-C6環烷基。
  5. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R1及R2一起為側氧基；或R1及R2與其所連接之碳原子一起形成氧雜環丁烷環。
  6. 一種式(II)化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中：R1及R2獨立地選自氫、C3-C6環烷基及C1-C3烷基，其中該C1-C3烷基視情況經一個、兩個或三個獨立地選自C1-C3烷氧基、C1-C3烷基胺基、胺基、氰基、C1-C3二烷基胺基、鹵基及羥基之基團取代；或R1及R2一起為側氧基；R3為C1-C3烷基-Y或C2-C8烷基，其中該C2-C8烷基視情況經一個、兩個或三個獨立地選自以下之基團取代：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基胺基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基胺基、胺基、芳基、鹵基、C1-C3鹵烷基胺基、C1-C3鹵烷基羰基胺基、羥基、-NRxRy及C3-C8環烷基，其中該環烷基進一步視情況經一個、兩個或三個獨立地選自以下之基團取代：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、C1-C3烷基胺基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基胺基、胺基、芳基、芳基C1-C3烷基、鹵基、C1-C3鹵烷基、C1-C3鹵烷基胺基及羥基；R4選自氫、C1-C3烷氧基、C1-C3烷氧基羰基胺基、C1-C3烷基、C1-C3烷基胺基、C1-C3烷基羰基胺基、胺基、芳基胺基、 芳基羰基胺基、C3-C6環烷基胺基、C3-C6環烷基羰基胺基、C3-C6環烷氧基、鹵基、C1-C3鹵烷氧基、C2-C3鹵烷基胺基、C2-C3鹵烷基羰基胺基及羥基；R5選自氫、C1-C3烷基、氰基、C3環烷基及鹵基；Rx及Ry與其所連接之氮原子一起形成三至六員環；且Y選自： 其中R6選自氫、C1-C6烷基、C3-C6環烷基及C1-C6烷基羰基；n為0、1、2或3；各R7獨立地選自氫、C1-C6烷基、芳基、芳基C1-C3烷基、C3-C6環烷基、鹵基及C1-C3鹵烷基；且各R8獨立地選自氫、C1-C3烷氧基及羥基。
  7. 一種化合物，其係選自：(R)-1-(5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺；(R)-1-(5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-3-苯基丙-2-胺；(R)-1-(5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丁-2-胺；(S)-1-(5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丁-2-胺；(S)-1-(5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺；(2S)-4-甲基-1-(5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺；(2R)-4-甲基-1-(5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺；(2S)-1-(5-環丙基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2- 胺；(2R)-4-甲基-1-(5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺；(2S)-1-(5-乙基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺；(S)-8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-5-酮；(S)-N-(8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙醯胺；(S)-8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-4-胺；(S)-1-(9-溴-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺；8-(((S)-2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-4-胺；(S)-1-((1-氟-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺；1-(5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-5,5,5-三氟戊-2-胺；(S)-N-(8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺；(S)-4-甲基-1-(螺[烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧雜環丁烷]-8-基氧基)戊-2-胺；(8-(((S)-2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5-(氯甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-5-基)甲醇；(2S)-1-(9-溴-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺；8-((S)-2-胺基-4-甲基戊氧基)-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-9-甲腈；(S)-8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-9-甲腈； (2S)-1-環戊基-3-(5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丙-2-胺；(S)-8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-9-溴-5H-烯并[3,4-c]吡啶-5-酮；4-氟-4-甲基-1-(5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺；(2S)-1-((9-氯-5-(三氟甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺；(S)-1-(((R)-9-氯-5-(三氟甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺；(S)-1-(((S)-9-氯-5-(三氟甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺；(2S)-1-((9-溴-5-(三氟甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺；8-(((S)-2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-胺；N-(8-(((S)-2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺；(2S)-1-(9-碘-5-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺；(S)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-9-氯-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺；(S)-8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-胺；(S)-8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-4-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-5-酮；(S)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-7-甲基-5H-烯并[3,4-c] 吡啶-2-基)乙醯胺；N-(8-((2-胺基-5,5,5-三氟戊基)氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺；(S)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-7-甲氧基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺；(S)-N-(8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-7-(二氟甲基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺；(S)-4-甲基-1-((2-甲基-5H-烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-胺；(R)-N-(8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺；(S)-N-(8-((2-胺基-4-甲基戊基)氧基)-7-氟-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺；(S)-N-(8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)環丙烷甲醯胺；(S)-8-(2-胺基-4-甲基戊氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基胺基甲酸甲酯；及N-(8-(2-胺基-2,4-二甲基戊氧基)-5H-烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙醯胺；或其醫藥學上可接受之鹽。
  8. 一種組合物，其包含醫藥學上可接受之量的如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑。
  9. 一種抑制轉接子結合激酶1(AAK1)活性之活體外方法，其包含使AAK1與如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽接觸。
  10. 一種如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其係用於製造用以治療或控制由AAK1活性介導之疾病或病症的藥 物。
  11. 如請求項10之用途，其中該疾病或病症選自阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)、躁鬱症、疼痛、帕金森氏病(Parkinson's disease)及精神分裂症。
  12. 如請求項11之用途，其中該疼痛為神經痛。
  13. 如請求項12之用途，其中該神經痛為肌肉纖維疼痛或周邊神經病。
TW102108352A 2012-03-09 2013-03-08 芳基醚結構之激酶抑制劑 TW201341387A (zh)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261608737P 2012-03-09 2012-03-09

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW201341387A true TW201341387A (zh) 2013-10-16

Family

ID=47892007

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW102108352A TW201341387A (zh) 2012-03-09 2013-03-08 芳基醚結構之激酶抑制劑

Country Status (11)

Country Link
US (2) US8703953B2 (zh)
EP (1) EP2822952B1 (zh)
JP (1) JP2015510881A (zh)
CN (1) CN104144932A (zh)
AR (1) AR090293A1 (zh)
CA (1) CA2866671A1 (zh)
EA (1) EA201491647A1 (zh)
MX (1) MX2014010684A (zh)
TW (1) TW201341387A (zh)
UY (1) UY34666A (zh)
WO (1) WO2013134036A1 (zh)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8901305B2 (en) 2012-07-31 2014-12-02 Bristol-Myers Squibb Company Aryl lactam kinase inhibitors
JP2016509066A (ja) 2013-02-22 2016-03-24 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ アダプター関連キナーゼ１（ａａｋ１）の阻害剤としての５ｈ−クロメノ［３，４−ｃ］ピリジン
CN105518005B (zh) 2013-07-02 2018-07-20 百时美施贵宝公司 作为rock抑制剂的三环吡啶-甲酰胺衍生物
CN105492444B (zh) 2013-07-02 2018-09-07 百时美施贵宝公司 作为rock抑制剂的三环吡啶-甲酰胺衍生物
EP3019475A1 (en) 2013-07-08 2016-05-18 Bristol-Myers Squibb Company Aryl amide kinase inhibitors
CA2941192A1 (en) * 2013-09-11 2015-03-19 Bristol-Myers Squibb Company Aryl ether-base kinase inhibitors
WO2015054358A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Bristol-Myers Squibb Company Pyrrolotriazine kinase inhibitors
WO2015116060A1 (en) * 2014-01-29 2015-08-06 Bristol-Myers Squibb Company Aryl lactam kinase inhibitors
US9932320B2 (en) * 2014-01-31 2018-04-03 Bristol-Myers Squibb Company Quinoline-based kinase inhibitors
RS58062B1 (sr) 2014-04-02 2019-02-28 Bristol Myers Squibb Co Biaril inhibitori kinaze
ES2740224T3 (es) * 2015-04-10 2020-02-05 Bristol Myers Squibb Co 6H-isocromeno[3,4-c]piridinas y benzo[c][1,7]naftiridin-6-(5H)-onas como inhibidores de la cinasa asociada a adaptador 1 (AAK1)
CA2978972A1 (en) * 2015-05-22 2016-12-01 Dow Agrosciences Llc Recovery and/or reuse of palladium catalyst after a suzuki coupling
CN108290843B (zh) * 2015-10-01 2021-08-24 百时美施贵宝公司 联芳基激酶抑制剂
CN112142655A (zh) * 2015-10-01 2020-12-29 百时美施贵宝公司 联芳基激酶抑制剂
EP3825317A3 (en) 2016-12-15 2021-07-28 F. Hoffmann-La Roche AG Process for preparing btk inhibitors

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU673569B2 (en) 1992-12-02 1996-11-14 Pfizer Inc. Catechol diethers as selective PDE-IV inhibitors
US5709861A (en) 1993-04-22 1998-01-20 Emisphere Technologies, Inc. Compositions for the delivery of antigens
US20070060606A1 (en) * 1999-10-07 2007-03-15 Robertson Harold A Compounds and methods for modulating phosphodiesterase 10A
ES2301793T3 (es) 2002-04-05 2008-07-01 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc. Cianamidas utiles como inhibidores reversibles de cisteina proteasas.
WO2004056744A1 (en) 2002-12-23 2004-07-08 Janssen Pharmaceutica N.V. Adamantyl acetamides as hydroxysteroid dehydrogenase inhibitors
EP1593667A4 (en) 2003-02-12 2009-03-04 Takeda Pharmaceutical Amine derivative
WO2005000309A2 (en) 2003-06-27 2005-01-06 Ionix Pharmaceuticals Limited Chemical compounds
US20050288338A1 (en) 2004-06-24 2005-12-29 Wenqing Yao Amido compounds and their use as pharmaceuticals
CN100494167C (zh) 2005-08-02 2009-06-03 天津大学 抗乙肝病毒的叔胺氧化物及制备方法和制备药物的应用
JP2007217408A (ja) 2006-01-19 2007-08-30 Tanabe Seiyaku Co Ltd 医薬組成物
PT2674428T (pt) 2006-04-07 2016-07-14 Vertex Pharma Modeladores de transportadores de cassetes de ligação de atp
WO2008022154A2 (en) 2006-08-14 2008-02-21 Wyeth Methods of identifying agents for treating neurological disorders
EP2167976A2 (en) * 2007-05-29 2010-03-31 President And Fellows Of Harvard College Molecules involved in regulation of osteoblast activity and osteoclast activity, and methods of use thereof
DE102007025717A1 (de) * 2007-06-01 2008-12-11 Merck Patent Gmbh Arylether-pyridazinonderivate
US8497271B2 (en) 2009-10-07 2013-07-30 Bristol-Myers Squibb Company Modulators of G protein-coupled receptor 88
US8426414B2 (en) 2009-10-09 2013-04-23 Bristol-Myers Squibb Company Modulators of G protein-coupled receptor 88

Also Published As

Publication number Publication date
US20130237555A1 (en) 2013-09-12
EA201491647A1 (ru) 2014-12-30
EP2822952B1 (en) 2016-04-06
MX2014010684A (es) 2014-10-17
AR090293A1 (es) 2014-11-05
US8703953B2 (en) 2014-04-22
UY34666A (es) 2013-09-30
JP2015510881A (ja) 2015-04-13
WO2013134036A1 (en) 2013-09-12
US20140179725A1 (en) 2014-06-26
CA2866671A1 (en) 2013-09-12
CN104144932A (zh) 2014-11-12
EP2822952A1 (en) 2015-01-14
US8969564B2 (en) 2015-03-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TW201341387A (zh) 芳基醚結構之激酶抑制劑
KR102379518B1 (ko) 비아릴 키나제 억제제
EP3044226B1 (en) Aryl ether-base kinase inhibitors
US8901305B2 (en) Aryl lactam kinase inhibitors
US9932320B2 (en) Quinoline-based kinase inhibitors
AU2014315113B2 (en) Pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-based compounds, compositions comprising them, and methods of their use
US20150183791A1 (en) IMIDAZO[1,2-b]PYRIDAZINE-BASED COMPOUNDS, COMPOSITIONS COMPRISING THEM, AND METHODS OF THEIR USE
JP6276865B2 (ja) アリールラクタムキナーゼ阻害剤
US10174044B2 (en) Fused pyridines as kinase inhibitors
HK1217658B (zh) 基於吡唑并[1，5-a]嘧啶的化合物、包含其的组合物和其使用方法