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TW201309719A - 由故意增富且保留纖維蛋白分解抑制劑ａ１ａｔ之冷凍乾燥的高濃縮纖維蛋白原套組所構成之纖維蛋白密封劑（ｆｉｂｒｉｎｇｌｕｒａａｓ®） - Google Patents

由故意增富且保留纖維蛋白分解抑制劑ａ１ａｔ之冷凍乾燥的高濃縮纖維蛋白原套組所構成之纖維蛋白密封劑（ｆｉｂｒｉｎｇｌｕｒａａｓ®） Download PDF

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TW201309719A TW101107169A TW101107169A TW201309719A TW 201309719 A TW201309719 A TW 201309719A TW 101107169 A TW101107169 A TW 101107169A TW 101107169 A TW101107169 A TW 101107169A TW 201309719 A TW201309719 A TW 201309719A
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Abstract

本發明係有關於由故意增富且保留纖維蛋白分解抑制劑A1AT之冷凍乾燥的高濃縮纖維蛋白原套組，其可未經加熱或加熱到至少1℃及更高的溫度、較佳至少101℃，以及用以配混膠膜之冷凍乾燥的凝血酵素所構成之纖維蛋白密封劑(FIBRINGLURAAS®)，其直徑小於10微米，該纖維蛋白密封劑(FIBRINGLURAAS®)之膠膜的實際大小為自0.6微米至101℃加熱之0.005微米。凝血酵素(一蛋白質)含有良好健康的細胞。高濃縮纖維蛋白原(另一蛋白質)含有良好健康的細胞。AFOD(HDL ApoA1)(另一蛋白質)含有良好健康的細胞且其可局部施用於所有固態腫瘤癌。

Description

由故意增富且保留纖維蛋白分解抑制劑A1AT之冷凍乾燥的高濃縮纖維蛋白原套組所構成之纖維蛋白密封劑(FIBRINGLURAAS ® )
本發明係有關於由故意增富且保留纖維蛋白分解抑制劑A1AT之冷凍乾燥的高濃縮纖維蛋白原套組，其可未經加熱或加熱到至少1℃及更高的溫度、較佳至少101℃，以及用以配混膠膜之冷凍乾燥的凝血酵素所構成之纖維蛋白密封劑(FIBRINGLURAAS®)，其直徑小於10微米，該纖維蛋白密封劑(FIBRINGLURAAS®)之膠膜的實際大小為自0.6微米至101℃加熱之0.005微米。
凝血酵素(一蛋白質)含有良好健康的細胞。高濃縮纖維蛋白原(另一蛋白質)含有良好健康的細胞。AFOD(HDL ApoA1)(另一蛋白質)含有良好健康的細胞且其可局部施用於所有固態腫瘤癌。
發明者：KIEU HOANG WESTLAKE CALIFORNIA USA 有關申請案介紹
本申請案為2011年3月4日申請之先前申請案第13/064,070號的部份接續申請案，其全文在此併入本案以為參考資料，且本申請案為2008年7月15日申請之先前申請案第11/990,203號的部份接續申請案，其全文在此併入本案以為參考資料。因此，於2011年3月14日申請之臨時申請案第61/457,380號及於2011年3月14日申請之臨時申請案第61/457,380號及於2011年3月15日申請之臨時申請案第61/452,860號與於2011年4月7日申請之臨時申請案第61/472,930號(其等之全文皆在此併入本案以為參考資料) 之提交日期主張屬於35 USC 120的權利。
本發明及其目的之說明
1.一故意增富且保留纖維蛋白分解抑制劑α 1-抗胰蛋白酵素(A1AT)之冷凍乾燥的高濃縮纖維蛋白原(hcfng)套組，且在該高濃縮纖維蛋白原(HcFNG)之純化程序期間，可未經加熱或乾燥、經濕或蒸汽加熱高到至少1℃、較佳至少101℃，該套組係用於纖維蛋白密封劑套組(FinbinGluRAAS)大不同於品名“FibroRAAS®”之正規纖維蛋白原。
高濃縮的纖維蛋白原含有凝血第十三因子(Factor XIII)，可凝血的纖維蛋白原純度應該等於或高於80%。凝血活性應該小於或等於60秒。 且濃度範圍自5%至9%且應該局部施用，且而一般纖維蛋白原(FibroRAAS®)可經注射且需要一等於或大於240毫滲(mOsmol)/公斤的滲透壓且純度僅等於或小於70%，而濃度僅2%。
纖維蛋白密封劑(FibrinGluRAAS®)業經作為用於治療以下的局部用止血藥物：灼傷的表面、普通外科的腹部切口、肝手術中的血液滲出、及停止流血之血管手術。
纖維蛋白原FibroRAAS®可經注射且用於以下之治療：
1.先天性血纖維素原過少(hypofibrinogenaemia)或血內纖維蛋白原過多(fibrinogenaemia)。
2.後天性血纖維素原過少；嚴重的肝損害、肝硬化、散佈性血管內凝固、由於生產出血、大手術、外傷 或內出血所導致纖維蛋白原缺乏而發生的血液凝固病症。
一上述冷凍乾燥的高濃縮纖維蛋白原及冷凍乾燥的凝血酵素之套組係用以配混膠膜，該套組及膠膜皆具有該名稱FibrinGluRAAS®，該膠膜網目的直徑小於人類癌細胞(其等之大小為10-100微米)。該膠膜網目的最大尺寸為0.6微米或較小，且遠小於具10-100微米之人類腫瘤細胞(其等比所形成纖維蛋白網目大至少15倍)。在小鼠體內之胃腸癌的外科手術期間，該膠膜可防止癌細胞剝離並擴散入腹腔內。此種膠膜在臨床上可應用於人類體內之非胃及胃腸癌，諸如大腸及乳癌、與尚未擴散至身體之其它部位的所有固態腫瘤類型，諸如AIDS相關性癌、骨肉瘤、及肛門癌、膽道癌、膀胱癌、腦癌、乳癌、子宮頸癌、大腸癌、食道癌、眼癌、膽囊癌、頭癌、頸癌、心臟癌、肝癌、腎臟癌、喉癌、唇癌、口腔癌、肺癌、口癌、鼻旁竇癌及鼻腔癌、卵巢癌、胰臟癌、副甲狀腺癌、陰莖癌、攝護腺癌、直腸癌、唾液腺癌、皮膚癌、脾癌、咽喉癌、睪丸癌、尿道癌、及陰道癌、以及腎細胞癌。
2.用於根據本發明之該膠膜的化合物應該可經局部施加且不應該經注射並不應該用於白色病，其包括急性髓性白血病(M0-M7)、淋巴瘤、骨髓惡性腫瘤、急性淋巴白血病(小、中、大)、骨髓機能異常症候群(MDS)、貧血、狼瘡及腦內之硬化症。(在一不同申請案下之另一RAAS ATBG 1-9藥劑)
3.若單獨使用，則該纖維蛋白密封劑膜可截獲該等癌細胞。其意指該纖維蛋白密封劑膜可以分離出健康組織中的腫瘤細胞，且意指血管不能獲得癌細胞，因此理論上，該纖維蛋白密封劑膜(FibrinGluRAAS®)可抑制癌細胞，使其等不會釋放細胞素，其包括TNF(腫瘤壞死因子)，並使組織蛋白活化成健康組織。換言之，若單獨使用，則該纖維蛋白密封劑膜可抑制藉僅一次放射化學療法而產生的毒性，因為該纖維蛋白密封劑膜可截獲癌細胞並加以控制，所以可防止腫瘤細胞侵襲入健康組織內。在胃腸癌之外科手術期間，該纖維蛋白密封劑膜(FibrinGluRAAS®)可作為一能防止癌細胞剝離並擴散入腹腔內的輔助裝置。
4.該高濃縮的纖維蛋白原(亦即FibrinGluRAAS®)可以與能殺死該等腫瘤細胞之藥劑(諸如以品名RAAS 1至45 FU獲得的氟尿嘧啶(C4H3FN2O2))合併。經由使用本組合所獲得的總效用為可抑制腫瘤的成長。氟尿嘧啶為用於治療癌之嘧啶類似物。其可經由胸苷酸合成酶之非競爭性抑制反應而作用。
其係於1957年藉Charles Heidelberger而設計、合成並得到專利。當活體內一起施用氟尿嘧啶(C4H3FN2O2)及該纖維蛋白密封劑膜時，氟尿嘧啶之分子亦在該纖維蛋白密封劑膜(FibrinGluRAAS®)內經截獲，其可以使該等藥物分子貯存在該膜內，因此其等可經緩慢釋放。當與靜脈內注射該藥物比較時，本效用亦可以使該藥物非常具局部濃縮性。氟尿嘧啶為一可殺死該等腫瘤細胞的合適藥劑且可進 行如上述之任務。除了氟尿嘧啶外，可使用能殺死該等腫瘤細胞之其它藥劑以取代氟尿嘧啶。適於本發明使用的可殺死該等腫瘤之其它藥劑包括所有目前已知的此等藥劑、以及在未能可取得之所有此等藥劑。為了防止在移除癌腫瘤的外科手術後藉立即進行之僅一次化學放射療法而產生的毒性，可單獨局部或合併氟尿嘧啶(C4H3FN2O2)施用FibrinGluRAAS®，其可在該等外科手術後殺死任何殘留的癌腫瘤細胞。
5.若單獨使用FibrinGluRAAS®，則咽喉癌患者不會失去其等的味覺，因為未使用化學放射療法。
6.根據癌的類型，癌細胞可分泌TNF、各種其它細胞素、特殊蛋白質、甚至蛋白酶或某些特殊激素。例如某些肝癌細胞可分泌α胎兒蛋白質。某些乳癌、肺癌、攝護腺癌細胞可釋放像白血球間質一樣的細胞素。由於該等癌細胞被截獲在該纖維蛋白密封劑膜內並稍後被化療劑與該纖維蛋白密封劑的組合殺死，所以經分泌的TNF、各種其它細胞素、特殊蛋白質、甚至蛋白酶或某些特殊激素亦可被截獲在該纖維蛋白密封劑膜內。該纖維蛋白密封劑內之A1AT可抑制藉癌細胞或附近的健康細胞而分泌之某些蛋白酶的活性。
A.技術領域
本發明係有關於冷凍乾燥的凝血酵素及冷凍乾燥的高濃縮纖維蛋白原套組及其用以防止藉腫瘤手術時之切口及 外傷而導致的腫瘤細胞擴散之用途。本發明可處理許多問題。例如在腫瘤手術時，切口及外傷通常會導致腫瘤細胞擴散，其會增加腫瘤手術後之腫瘤復發及轉移的危險並縮短患者的壽命。
施加根據本發明之從該高濃縮纖維蛋白原及凝血酵素之化合物製成的膠膜以防止在腫瘤外科手術中藉切口及外傷而導致腫瘤細胞之擴散。該膠膜可降低手術後之該腫瘤之復發及轉移的危險並增加該患者的壽命。由於該膠膜可停止腫瘤細胞的播散，所以癌可不再復發。
該高濃縮纖維蛋白原(亦即FibrinGluRAAS®)可以與一藥劑(諸如以品名RAAS 1至45 FU得到的氟尿嘧啶(C4H3FN2O2))合併以作為一在胃腸癌之外科手術期間能防止癌細胞剝離並擴散入腹腔內的輔助裝置，且所形成膠膜內之該氟尿嘧啶可殺死該等腫瘤癌細胞。
在根本的乳房及腫塊切除術進行後，即使該乳房及一腫塊業經移除，腫塊仍有成長的傾向。將可形成根據本發明之該膠膜的該高濃度纖維蛋白原及凝血酵素塗抹在該乳房或一腫塊經移除的地方可減少傾向自其形成的腫塊之數量及/或大小。
已使用一含冷凍乾燥的凝血酵素及高濃縮纖維蛋白原之化合物作為局部止法藥物以治療灼傷的表面、一般外科的腹切口、肝手術時的血滲出、及血管外科。
發明概要
根據本發明，係使用一故意增富且保留纖維蛋白分解抑制劑α 1-抗胰蛋白酵素(A1AT)，且在高濃縮纖維蛋白原之純化程序進行期間並未經加熱或乾燥、或經蒸汽加熱高至至少1℃、較佳至少101℃之冷凍乾燥的凝血酵素及該高濃縮纖維蛋白原之化合物以配混一用以防止離散性腫瘤細胞擴散。在該純化程序進行期間，該A1AT藉透析而增富並保留而將該A1AT濃縮高至5%至9%，然而正規纖維蛋白原經濃縮高至2%，且添加純A1AT至該產物以使該膜之安定性及密度增至最大。
根據本發明之冷凍乾燥凝血酵素及高濃縮纖維蛋白原套組可製成一具有以下功用的固體網目狀膠膜：可防止離散性腫瘤細胞擴散並可在小鼠之胃腸癌及其它臨床應用(諸如大腸及乳癌)的外科手術期間防止癌細胞剝離並擴散入腹腔內。
由於該根據本發明之高濃縮纖維蛋白原的純化程序，該膠膜網目的直徑小於人類癌細胞(其大小為10-100微米)。該膠膜網目較佳為0.6微米，其係遠小於腫瘤細胞的大小(10-100微米)且比該大小小15倍。
FibrinGluRAAS®可抑制細胞素(其包括TNF(腫瘤壞死因子))之釋放、中止藉放射化學療法而產生的組織蛋白及毒性之活化以防止由於細胞素、TNF之釋放，導致癌患者的死亡、並中止藉若僅使用放射化學療法而產生的組織蛋白及毒性之活化。該高濃縮纖維蛋白原(亦即FibrinGluRAAS®)可以與一藥劑(諸如以品名RAAS 1至45 FU獲得的氟尿嘧啶 (C4H3FN2O2))合併以作為一在胃腸癌之外科手術期間能防止癌細胞剝離並擴散入腹腔內的輔助裝置，且所形成膠膜內之該氟尿嘧啶可殺死該等腫癌細胞。
圖式簡單說明
自連同附圖加以考慮的以下詳細說明可知本發明之其它目標及特徵。然而，應瞭解該等圖示經設計僅用於闡明且無意用以限制本發明。
第1及2圖為藉一層接著一層地將冷凍乾燥的凝血酵素溶液及冷凍乾燥的高濃縮纖維蛋白原塗抹在一與活體外研究有關之載玻片上而配混之膠膜的電子顯微相片。
第3A1及3A2圖為一不含膠膜的對照物之電子顯微相片。
第3B1及3B2圖為在一腫瘤細胞擴散實驗中一具有根據本發明之膠膜的材料表面之電子顯微相片。
第3C1及3C2圖為在一涉及根據本發明之膠膜處置法之腫瘤細胞擴散實驗中的膠膜之電子顯微相片。
較佳實施例之詳細說明
纖維蛋白原及凝血酵素對血栓形成之過程的影響已為吾人所熟知。
雖然有很多得自纖維蛋白原及凝血酵素的產物，但是在大多數情況下，該等產物係在手術後用以止血。
根據本發明，一藉冷凍乾燥的凝血酵素及在純化期間故意增富且保留纖維蛋白分解抑制劑α 1抗胰蛋白酵素(A1AT)且未經加熱或乾燥、經濕氣或蒸汽加熱高到至少1℃、較佳至 少101℃以強化高濃縮纖維蛋白原的安定性及持久性之高濃縮纖維蛋白原(FibrinGluRAAS®)而配混之固體網目狀膜具有一小於人類癌細胞(其大小為10-100微米)的網目。該膠膜網目之最大尺寸為0.6微米，且遠小於人類腫瘤細胞(10-100微米)。
自藉核酸試驗(NAT)而檢驗出具HIV 1&2、B型肝炎(HBV)及C型肝炎(HCV)負性之人類血漿獲得該高濃縮纖維蛋白原及凝血酵素。藉一使用三(正-丁基)磷酸酯(TNBP)及Tween 80之溶劑去污步驟(S/D)而使具有套膜的病毒及不具有套膜的病毒失活；使用奈米過濾法以兼移除該凝血酵素的具有套膜的病毒及不具有套膜的病毒；且未進行加熱或進行乾燥、濕或蒸汽加熱高到至少1℃、較佳至少101℃，費時30分鐘以使該高濃縮纖維蛋白原之該等不具套膜的病毒失活。藉這些步驟而使所有病毒(具有套膜及不具有套膜)失活。將這兩種組份(高濃縮纖維蛋白原及凝血酵素)冷凍乾燥並放入個別溶液內。
活體外研究：
在使用本發明的實驗中，係將薄且平滑層之高濃縮纖維蛋白原溶液塗抹在一載玻片的表面上、或塗抹在一檢定套組內之細胞培養插入物的底表面上以形成一塗覆物。經約5秒後，將一薄且平滑層之凝血酵素溶液相繼地塗抹在該高濃縮纖維蛋白原塗覆物上。重複先後塗抹該高濃縮纖維蛋白原溶液及凝血酵素溶液的步驟，約3-5次。很快形成一固體網目狀膠膜。該膠膜網目的直徑小於人類癌細胞(其大 小為10-100微米)。該膠膜網目的最大尺寸為0.6微米或較小、小如0.0微米，且遠小於人類腫瘤細胞(10-100微米)。該膠膜可抑制人類腫瘤細胞且防止其等擴散。
因此，可將該等高濃縮纖維蛋白原及凝血酵素溶液互相交替地塗抹在腫瘤組織的局部表面上，一次塗抹一層。在該局部組織表面上形成的固體網目狀膠膜可防止在手術時之離散性腫瘤細胞擴散，降低治療後之腫瘤的復發及轉移之危險，並改善患者的壽命，且癌可能不會再復發。該膠膜具有良好的生物相容性及方便的用法。
實例1： 膠膜的產生
(1)將根據本發明之該套組的高濃縮纖維蛋白原溶液及凝血酵素溶液交替地各別塗抹在0.8厘米×0.8厘米載玻片表面(藉450 IU凝血酵素及40毫莫耳/升之CaCl2配混)上，一次一層，共3次。
(2)將各該高濃縮纖維蛋白原溶液層及凝血酵素溶液層風乾且經電子顯微鏡檢查。
第1及2圖為該等經乾燥的高濃縮纖維蛋白原及凝血酵素層之電子顯微相片。其放大率為5000倍。
自這些相片可發現該平滑的膠膜表面。在該膠膜內並無顯著的洞。自該放大的比例可歸納出以下結論：該網目孔徑為0.6微米或更小、小如0.0微米。人類癌腫瘤細胞大小為10-100微米。因此，藉人類血漿高濃縮纖維蛋白原及凝血酵素而配混的該膠膜可抑制人類腫瘤細胞且可防止其擴散。
實例2：
從一根據本發明之用於防止離散性腫瘤細胞擴散的膠膜套組：
(1)藉使用實例1之方法而在細胞培養插入物(其等係放在市售細胞侵襲檢定套組ECM 550(得自Chemicon International of Temecula,California)之組織培養平皿的井內)的底表面上產生一薄且平滑的膠膜以於其上形成一塗覆物。然後，根據該細胞侵襲檢定套組內所提供的指示，進行一細胞侵襲實驗。被放在該等插入物內之細胞懸浮液中的侵襲性細胞包括得自中國上海的Ruijing Hospital的胃癌細胞株(胃的腫瘤)、人類胃腺癌細胞株KN45、及AGS人類培養的胃腺癌細胞、以及得自SBI(System Biosciences of Mountain View,California)的人類乳癌細胞MDA-MB-231與大腸癌細胞Ls 174T。
(2)根據該細胞侵襲檢定套組內的指示，係將廢培養基棄置，使用一棉花棒清理內膜，且將該等插入物染色，費時20分鐘並風乾。在該組織培養平皿之對照井內並無高濃縮纖維蛋白原或凝血酵素。
見第1及2圖。
(3)選取電子顯微相片，其包括第3A1圖、第3A2圖、第3B1圖、第3B2圖、第3C1圖及第3C2圖電子顯微相片，並做記錄。
第3A1圖、第3A2圖、第3B1圖、第3B2圖、第3C1圖及第3C2圖表示實例2該膠膜可抑制該等插入物內的離散性腫 瘤細胞並防止腫瘤細胞擴散通過該膠膜，因此，亦證實以下結論：該膠膜可抑制人類腫瘤細胞且可防止其擴散。
第3A1及3A2圖為不含膠膜的電子顯微相片，其表示若無膠膜，則細胞侵襲會發生。第3B1及3B2圖為在該膠膜的內側上防止細胞侵襲的相片。第3C1及3C2圖為在該膠膜之外側上防止細胞侵襲的相片。很清楚可知藉人類血漿高濃縮纖維蛋白原及凝血酵素而配混的膠膜的確可抑制人類腫瘤細胞且防止其擴散。
熟悉本項技藝者進一步可知且已預期只要不違背本發明的精神及範圍，可進行文中所闡明並描述之實施例的變異。
因此，已預期上述說明僅具闡明性，且可藉附加申請專利範圍而決定本發明的真實精神及範圍。
見第3A1圖、第3A2圖、第3B1圖、第3B2圖、第3C1圖及第3C2圖。
增加的熱溫度可強化該膠膜的密度。
各種倍數放大率已證明當放大3,810倍及1,600倍時，我們不能看到FS凝膠膜的任何細孔。於27,500倍率下，凝膠膜的細孔為0.005微米且該加熱溫度係於101oc.k下。
電子顯微鏡掃描結果：
在具有逐步增強的倍率(至高27,500倍的倍率)之電子顯微鏡分析下進行拍照。亦將在各種倍率下的對應尺度做記號。基本上，當放大3,810倍及1,600倍時，我不能看見FS凝膠膜的任何細孔。於27,500倍率下，我們可看見凝膠膜的細孔，我們可看到直徑小於0.1微米之該等凝膠膜細孔。
倍率27,500，在第4A圖內該尺度為0.005微米。
倍率15,000，在第4B圖內該尺度為1微米。
倍率3,810，在第4C圖內該尺度為2微米。
倍率1,600，在第4D圖內該尺度為10微米。
第5A~5E圖為於藉不同溫度而處置之FS凝膠膜的27,500倍之倍率下的典型電子顯微掃描相片。第5A圖係於0℃下，第5B圖係於30℃下，第5C圖係於60℃下，第5D圖係於90℃下，第5E圖係於101℃下。
可在FibrinGluRAAS®之高濃縮纖維蛋白原內偵檢A1AT。
1.該FibrinGluRAAS®之高濃縮纖維蛋白原內之A1AT的存在可改良FS膠膜的安定性。
2. A1AT之中和反應可促進該FS膠膜的降解。
3.該高濃縮纖維蛋白原內之A1AT的進一步增富可大大地改良FS膠膜的安定性。
實例
1.在第6圖中，A1AT係在FibrinFluRAAS®之高濃縮纖維蛋白原內增富。
藉西方墨點法(western blot)而使用抗人類A1AT之多選殖抗體以偵檢該A1AT蛋白質。“TB”及“FNG”代表FibrinGluRAAS®內之凝血酵素及高濃縮纖維蛋白原。TB係用於一負性對照物。“A1AT標準物”代表作為一正性對照物之市售A1AT。
如自第7圖可知，當藉一A1AT抗體而中和FNG內之 A1AT時，可加速FS膠膜的降解。添加一A1AT多選殖抗體至FibrinGluRAAS®之高濃縮纖維蛋白原。“-”代表FibrinGluRAAS®+ WFI，其意指A1AT可維持其活性。“+”代表FibrinGluRAAS® +抗-A1AT抗體，其意指A1AT經中和。使用SDS-PAGE(十二基硫酸鈉)偵檢FS膠膜的降解。當該A1AT經中和時，會早在該膠膜形成後15分鐘開始該等FS膠膜的降解。差異仍存在於該膠膜形成後之2小時、4小時、及8小時。
第8圖表示在高濃縮纖維蛋白原之純化程序內之A1AT的增富可以使FS膠膜具更高的穩定性。比較纖維蛋白原(FNG)與經A1AT增富之高濃縮纖維蛋白原(QFNG)的FS膠膜之降解。在凝膠形成後之前8小時內，具有經A1AT增富的FNG之FS膠膜並不會降解，其意指該FS膠膜具很高的安定性。
第9圖表示使用經A1AT增富的高濃縮纖維蛋白原，該FS膠膜可維持安定狀態48-72小時之久。第9圖表示該等膜形成後48小時的狀況。當使用經A1AT增富的高濃縮纖維蛋白原(QFNG)時，該膠膜仍呈安定狀態。然而，FNG之膠膜已降解。
活體外預備研究：
可消滅所有固體腫瘤癌細胞之含良好健康細胞的凝血酵素、高濃縮纖維蛋白原及AFOD(HDL Apoa1)蛋白質的活體外研究。
活體外研究內之胃癌細胞AGS。我們發現凝血酵素(其 係為一含良好健康細胞的蛋白質)、高濃縮纖維蛋白原(其係為另一含良好健康細胞的蛋白質)以及AFOD(HDL Apoa1)(其係為另一含良好健康細胞的蛋白質)的組合可消滅固體腫瘤業經移除之表面積內的所有殘餘癌細胞(根據另一專利申請案)：
以下9種癌細胞株已在我們的R/D Lab內之預備活體外研究中經凝血酵素/高濃縮纖維蛋白原及AFOD(HDL Apoa1)測試，且已發現於蛋白質濃度之某位準下，癌細胞業經殺死。
1.胃細胞株(AGS)
2.子宮頸癌細胞株HELA
3.乳癌細胞株SK-BR-3
4.卵巢癌細胞株SK-OV-3
5.肺腺癌細胞株SPC-A-1
6.食道癌細胞株TE-1
7.肝癌細胞株EBL-7402
8.胰腺癌細胞株PANC-1
9.白血病癌細胞株DAMI 見第10圖。
在上表內，黃色為與TB(凝血酵素)、FNG(纖維蛋白原)及AFOD(HDL Apoa1)比較的具0%蛋白質之對照培養基。
A. TB(凝血酵素)
1.胃細胞株(AGS)
見第11圖。亦見分別用於對照物、TB 5U/毫升及TB 25U/毫升之第12A圖、第12B圖及第12C圖。
2.子宮頸癌細胞株HELA
見第13圖。亦見分別用於對照物、TB5U/毫升及TB 25U/毫升之第14A圖、第14B圖及第14C圖。
3.乳癌細胞株SK-BR-3
見第15圖。亦見分別用於對照物、TB 5U/毫升及TB 25U/毫升之第16A圖、第16B圖及第16C圖。
4.卵巢癌細胞株SK-OV-3
見第17圖。亦見分別用於對照物、TB 5U/毫升及TB 25U/毫升之第18A圖、第18B圖及第18C圖。
5.肺腺癌細胞株SPC-A-1
見第19圖。亦見分別用於對照物、TB 5U/毫升及TB 25U/毫升之第20A圖、第20B圖及第20C圖。
6.食道癌細胞株TE-1
見第21圖。亦分別見用於對照物、TB 5U/毫及TB 25U/毫升之第22A圖、第22B圖及第22C圖。
7.肝癌細胞株BEL-7402
見第23圖。亦分別見用於對照物、TB 5U/毫升及TB 25U/毫升之第24A圖、第24B圖及第24C圖。
8.胰腺癌細胞株PANC-1
見第25圖。亦分別見用於對照物、TB 5U/毫升及TB 25U/毫升之第26A圖、第26B圖及第26C圖。
9.白血病癌細胞株DAMI
見第27圖。亦分別見用於對照物、TB 5U/毫升及TB 25U/毫升之第28A圖、第28A圖及第28C圖。
B. AFOD(HDL Apoa1)
1.胃細胞株(AGS)
分別見用於對照物、AFOD 0.1%、AFOD 0.5%及AFOD 2.5%之第29A圖、第29B圖、第29C圖及第29D圖。
2.子宮頸癌細胞株HELA
分別見用於對照物、AFOD 0.1%、AFOD 0.5%及AFOD 2.5%之第30A圖、第30B圖、第30C圖及第30D圖。
3.乳癌細胞株SK-BR-3
分別見用於對照物、AFOD 0.1%、AFOD 0.5%及AFOD 2.5%之第31A圖、第31B圖、第31C圖及第31D圖。
4.卵巢癌細胞株SK-OV-3
分別見用於對照物、AFOD 0.1%、AFOD 0.5%及AFOD 2.5%之第32A圖、第32B圖、第32C圖及第32D圖。
5.肺腺癌細胞株SPC-A-1
分別見用於對照物、AFOD 0.1%、AFOD 0.5%及AFOD 2.5%之第33A圖、第33B圖、第33C圖及第33D圖。
6.食道癌細胞株TE-1
分別見用於對照物、AFOD 0.1%、AFOD 0.5%及AFOD 2.5%之第34A圖、第34B圖、第34C圖及第34D圖。
7.肝癌細胞株BEL-7402
分別見用於對照物、AFOD 0.1%、AFOD 0.5%及AFOD 2.5%之第35A圖、第35B圖、第35C圖及第35D圖。
8.胰腺癌細胞株PANC-1
分別見用於對照物、AFOD 0.1%、AFOD 0.5%及AFOD 2.5%之第36A圖、第36B圖、第36C圖及第36D圖。
10.白血病癌細胞株DAMI
分別見用於對照物、AFOD 0.1%、AFOD 0.5%及AFOD 2.5%之第37A圖、第37B圖、第37C圖及第37D圖。
進一步的活體外研究：
在本研究內，我們想證明除了上述9種細胞株外，我們已添加0%、2%及最高濃度10%的更多種不同細胞株以完全殺死所有癌細胞。
活體內研究：
用於裸鼠模式之胃癌之腹膜播散的作為一預防法之纖維蛋白密封劑(FibrinGluRAAS ® )及一緩慢釋放的RAAS 1至45-FU藥劑
目標
評估在胃腸癌之手術期間，單獨使用纖維蛋白密封劑(FibrinGluRAAS®)或併用一緩慢釋放的RAAS 1至45 FU藥劑以作為可防止癌細胞剝離並擴散入腹腔內之輔助裝置的效力。
背景
胃腸癌仍然是全世界最常見的惡性腫瘤。就胃之腺癌而言，其係為20世紀大部份時期，全世界之與癌有關的死亡之主要，且其持續為發展中國家之大多數癌死亡的主因。全世界每年診斷出估計875,000個新病例。雖然在世界 的某些地區，在過去的100年期間，胃癌的發病率已降低(其主要原因為飲食、食物製備、及其它環境因素的改變)，但是，該降低趨勢業經受限於在食道及胃的接合處以下的癌。而且，本發明病率降低伴隨著以朝該疾病之更侵襲性變體的範型變化。美國每年仍診斷出估計22,700新病例，且每年約11,800人死亡。在亞洲及南美洲的地區，胃癌為主要常見的上皮惡性腫瘤及癌相關性死亡的主因。在中國大陸上海區域，新診斷出的胃癌病例數每年超過6,000件。
雖然除了外科根本切除術外，可進行包括化療、放射療法及免疫療法的合併療法，但是接近50%患者仍死於復發，且主要復發形式為腹膜播散。腹膜播散業經隨即被認為是GI癌之一重要預後因素。亦業經顯示增加的腹膜播散可起因於由於該外科操作法及機械性腫瘤散落，細胞自該原發性腫瘤釋放、播種及播散。而且，該剝離且粗糙的腹膜表面可作為用於彼等由醫師疏失所造成的腫瘤種子之合適“土壤”。除了在手術期間嚴格遵守“不接觸”原則外，絕對必需研發可減少非必要的“病院”腫瘤播散的新技術及輔助設備。
上海RAAS Blood Products Company最近已發現藉冷凍乾燥的凝血酵素及冷凍乾燥的高濃縮纖維蛋白原而形成之膠膜(纖維蛋白密封劑FibrinGluRAAS®)可成功地防止高侵襲性固體腫瘤細胞株(諸如胃癌細胞株MKN45及AGS、大腸癌細胞株LoVo、以及乳癌細胞株MCF-7)通過。在活體外研究中已完成的實驗證明FS在預防固體腫瘤播散方面可作 為一輔助策略(其可產生一緊實的機械障壁)的效力及潛在角色。
在電子顯微術下，藉纖維蛋白密封劑(FibrinGluRAAS®)而形成的膠膜之細孔經測定直徑為0.6微米或較小、小如0.0微米，而該固體腫瘤細胞的大小範圍為自10至100微米。理論上，藉纖維蛋白密封劑而形成之該稠密且良好交互織構的膜可提供一能防止腫瘤細胞侵襲且滲透的最佳機械障壁。如第1圖所示，經由使用細胞侵襲檢定(ECM550套組、Chemicon International)，已發現藉該纖維蛋白密封劑而形成之膠膜的確可防止上述高侵襲性腫瘤細胞株擴散。
除了此種令人興奮的活體外發現外，一活體內研究的結果亦證明FS施用可成功地腹膜內防止腫瘤細胞播散，確立裸鼠模式以評估此效力。
在麻醉後，裸鼠接受剖腹術。藉使用鉗而將該腹膜表面破壞成多點以產生用於癌細胞之“播種”的合宜環境(“土壤”)。使腫瘤細胞噴入各群組之小鼠的腹腔內。接著，施加纖維蛋白密封劑以覆蓋該纖維蛋白密封劑組內的腹膜表面，且僅藉正規鹽液而處置該對照組。該膠膜完全形成後，該腹膜腔經閉合。腫瘤細胞植入後兩週，經肉眼確定腹膜播散如生長在小腸及腹膜以及腸繫膜的表面上之小結。在該正規鹽液處置組內所發現的腹膜播散小結數明顯多於在該FS處置組內所發現的數量。而且，在自控制設計的小鼠內，腫瘤細胞植入後兩週，在該正規鹽液處置側內所發現的腹膜癌小結明顯比在該纖維蛋白密封劑處置側內所發現 的彼等小結更大且更融合。且上述活體內資料業經提交用於另一國際專利。
文中，已融合另一概念：不論FS是否與化療劑組合，皆可在腫瘤細胞播散的預防止獲得加乘性效力。
方法(研究設計及動物模式研發)
1.腫瘤細胞的製備
藉短暫的暴露於1%胰蛋白酵素而自亞融合性培養基(80-90%融合性)採集人類胃腺癌細胞(細胞株MKN45)。以一含10%胎牛血清的培養基中止胰蛋白酶化作用，且藉PBS而清洗該等細胞共兩次並使其等再懸浮於一無血清的培養基內。僅使用由具有90%存活力的單一細胞所組成之懸浮液以進行該實驗。用於腹膜內植入的腫瘤細胞數量為：
這些細胞存在於用於腹膜表面塗覆之0.2毫升無血清DMEM培養基內。
2.動物
自Shanghai Experimental Animal Center(License No.SYXK(Shanghai)2003-0026)(其係為具有國際執照的中國動物機構)購得6-7週大之體重~20克的雌無胸腺的nu/nu裸鼠(NCI)。在特定之無病原條件下，將該等小鼠安置並扶養在層狀氣流箱內，並在利用前安置至少7天。用於本實驗程序內之所有設施係藉the Animal Care and Use Committee of Shanghai Jiao-tong University許可。
3.該植入腹膜腫瘤之小鼠模式的確立
使該等小鼠經二乙醚麻醉，且經由中央切開術而進行簡單的剖腹。根據以下設計進行該等實驗：將該等小鼠無規化分類成以下4組：(1)FS組、(2)RAAS 1至45 FU組、(3)FS加上RAAS 1至45 FU組、及(4)對照組。麻醉後，使這4組內的小鼠進行剖腹。藉使用鉗而將腹膜表面破壞成多點以產生用於癌細胞之“播種”的合宜環境(“土壤”)。將腫瘤細胞噴入各組內之小鼠的腹腔中。接著，分別施加纖維蛋白密封劑、RAAS 1至45 FU、或兩者以覆蓋FS組小鼠、RAAS 1至45 FU組小鼠、及合併組小鼠內的腹膜表面，且僅藉正規鹽液處置該對照組。該膠膜完全形成後，該腹膜腔經閉合。
4.藥物調配及投藥
纖維蛋白密封劑(FibrinGluRAAS®)為一含以下之雙組份生物黏著劑：一人類纖維蛋白原的濃縮製劑、及一自藉使用冷酒精之科恩(Cohn)分級分離而自篩檢混合的人類血漿製成之人類凝血酵素的濃縮製劑。各套組含有50-90毫克高濃縮纖維蛋白原在1毫升用於注射的水中之溶液及500 IU之凝血酵素在1毫升氯化鈣中的溶液。
製備各該組份並吸入所提供混合裝置所連接的注射器內。將該注射器柱塞壓下，迫使該等組液溶液進入一混合噴霧器內以形成一薄層。
5.端點測定
模式確立後兩週，根據以下標準將經修飾的腹膜癌指 數(PCI)(其係取決於在該腹膜及腸繫膜表面上所形成的癌小結數及大小)評分。
如第38圖所示，該腹部及骨盆之腹膜表面係分成4個鑑定區。就各區域而言，計算該區域內之最大腫瘤(非該區域內之腫瘤數，僅為該特定區域內之最大腫瘤的大小)的病損大小(LS)評分。
●若在一區域內無腫瘤小結、則該區域之評分為零(LS-0)。
●若在一區域內之腫瘤小結小於2毫米，則該區域之LS評分為1(LS-1)。
●若一區域具有自4毫米算起的腫瘤小結，則其病損大小評分為2(LS-2)。
●若一區域具有大於5毫米之腫瘤小結或若其具有聚集(接合在一起)的腫瘤，則該區域之評分為了(LS-3)。
第38圖表示腹部之腹膜表面的4個區域(上左、上右、下左、下右四分之一)。
將各該區域的病損大小評分加在一起。最高評分為12(4乘3)。
6.小鼠宰殺及試樣收集
使用麻醉過量宰殺所有小鼠。藉直徑大於1毫米的小結數及藉該腫瘤體積評分而評估腹膜播散。手術移除腫瘤並於指定時間點切成一半。立即在液態氮內快速冷凍該腫瘤之半部並貯存於-80℃下，直到分析為止。藉10%中性緩衝福馬林(Richard-Allan Scientific,Kalamazoo,MI)而固定該 腫瘤之半部，費時24小時並藉石臘而包埋。
結果 (1)在該腹膜表面內的交叉呈現
腫瘤細胞植入後兩週，以肉眼可辨識腹膜播散呈小結生長在小腸及腹膜與腸繫膜的表面上。在該正規鹽液處置組內所發現的腹膜播散小結數明顯多於在其它處置組內所發現的彼等數量(第39圖)。
(2)在FS處置組及NS組內之腹膜癌指數(PCI)的評分
在對照組內之PCI的平均腫瘤體積評分明顯高於在其它組內的彼等評分且各組間的顯著差異為P<0.05。
結論
文中，活體外及活體內研究的結果皆證實FS合併RAAS 1至45 FU作為輔助策略以防止胃癌播散並產生一緊實機械障壁及細胞毒性效力的機制之效力及潛在加乘性效力。
第39圖在胃癌模式內之在FS處置組、Sino-Fuan組、合併組及對照組內的腹膜內腫瘤成長
A：在該對照組內，發現大且融合性腫瘤成長。
B：在FS處置組內，發現小、孤立性且良好被膜性腫瘤小結。
C：在該Sino-Fuan組內，發現較小的小結，且甚至仍殘留某些未降解的藥劑。
D：在該合併組內，發現微小的小結，在本組內可證實FS及Sino-Fuan(一緩慢釋放的化療劑)之加乘性抗腫瘤效力。
結論
於我們尚未發現如上文第39圖之含良好健康細胞的凝 血酵素、高濃縮纖維蛋白原及AFOD(HDL ApoA1)的研究時間，在僅經FS處置的小鼠體內，我們發現小、孤立性且良好被膜的腫瘤小結且胃腫瘤細胞業經摧毀。
第1圖為以6微米之尺度，於5000倍之放大率下的纖維蛋白密封劑膜之電子顯微術掃描相片；第2圖為上述第1圖之另一視場；第3A1圖為在一細胞過濾試驗套組上室內之胃癌細胞的培養物相片；第3A2圖為在一細胞過濾試驗套組上室內之大腸癌細胞的相片；第3B1圖為在一細胞過濾試驗套組下室內之未經纖維蛋白密封劑墊底的胃癌細胞之培養物相片；第3B2圖為在一細胞過濾試驗套組下室內之未經纖維蛋白密封劑墊底的大腸癌細胞之培養物相片；第3C1圖為在一細胞過濾試驗套組下室內之經纖維蛋白密封劑墊底的胃癌細胞之培養物相片；第3C2圖為在一細胞過濾試驗套組下室內之經纖維蛋白密封劑墊底的大腸癌細胞之培養物相片；第4A圖為於275,000倍之放大率及0.005微米之尺度下，一根據本發明之FS凝膠膜的電子顯微掃描相片；第4B圖為於15,000倍之放大率及1微米之尺度下，一根據本發明之FS凝膠膜的電子顯微掃描相片；第4C圖為於3,810倍之放大率及2微米之尺度下，一根 據本發明之FS凝膠膜的電子顯微掃描相片；第4D圖為於1,600倍之放大率及10微米之尺度下，一根據本發明之FS凝膠膜的電子顯微掃描相片；第5A圖為於27,500倍之放大率及0℃之溫度下，一根據本發明之FS凝膠膜的電子顯微掃描相片；第5B圖為於27,500倍之放大率及30℃之溫度下，一根據本發明之FS凝膠膜的電子顯微掃描相片；第5C圖為於27,500倍之放大率及60℃之溫度下，一根據本發明之FS凝膠膜的電子顯微掃描相片；第5D圖為於27,500倍之放大率及90℃之溫度下，一根據本發明之FS凝膠膜的電子顯微掃描相片；第5E圖為於27,500倍之放大率及101℃之溫度下，一根據本發明之FS凝膠膜的電子顯微掃描相片；第6圖為一根據本發明之經A1AT增富之高濃縮纖維蛋白原的電泳結果；第7圖為一表示具有經已藉A1AT抗體而中和之A1AT增副之高濃縮纖維蛋白原的纖維蛋白密封劑膠膜之降解反應的電泳結果；第8圖為一比較具有纖維蛋白原之纖維蛋白密封劑膠膜與具有經A1AT增富之高濃縮纖維蛋白原之纖維蛋白密封劑膠膜的降解反應之電泳結果；第9圖為在試管內之纖維蛋白密封劑膠膜材料的圖示，在左試管內之該材料含有經A1AT增富的高濃縮纖維蛋白原，而在右試管內之該材料含有纖維蛋白原； 第10圖為表示在活體外研究中藉凝血酵素、纖維蛋白原及HDL Apoa1而消滅胃癌細胞的結果之長條圖；第11圖為表示在活體外研究中藉HDL Apoa1及凝血酵素而消滅胃癌細胞的結果之長條圖；第12A圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用OU之胃癌細胞的顯微相片；第12B圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用5U之胃癌細胞的顯微相片；第12C圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用25U之胃癌細胞的顯微相片；第13圖為表示在活體外研究中藉HDL Apoa1及凝血酶素而消滅子宮頸癌細胞株hela的細胞之結果的長條圖；第14A圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用0U之子宮頸癌細胞的顯微相片；第14B圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用5U之子宮頸癌細胞的顯微相片；第14C圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用25U之子宮頸癌細胞的顯微相片；第15圖為表示在活體外研究中藉HDL Apoa1而消滅乳癌細胞株SK-BR-3之細胞的結果之長條圖；第16A圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用0U之乳癌細胞SK-BR-3的顯微相片；第16B圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用5U之乳癌細胞SK-BR-3的顯微相片； 第16C圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用25U之乳癌細胞SK-BR-3的顯微相片；第17圖為表示在活體外研究中藉HDL Apoa1及凝血酵素而消滅卵巢癌細胞株SK-OV-3之細胞的結果之長條圖；第18A圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用0U之卵巢SK-OV-3癌細胞的顯微相片；第18B圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用5U之卵巢SK-OV-3癌細胞的顯微相片；第18C圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用25U之卵巢SK-OV-3癌細胞的顯微相片；第19圖為表示在活體外研究中藉HDL Apoa1及凝血酵素而消滅肺腺癌細胞株SPC-A-1之細胞的結果之長條圖；第20A圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用0U之肺腺癌細胞SPC-A-1的顯微相片；第20B圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用5U之肺腺癌細胞SPC-A-1的顯微相片；第20C圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用25U之肺腺癌細胞SPC-A-1的顯微相片；第21圖為表示在活體外研究中藉HDL Apoa1及凝血酵素而消滅食道癌細胞株TE-1之細胞的結果之長條圖；第22A圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用0U之食道癌細胞株TE-1的顯微相片；第22B圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用5U之食道癌細胞株TE-1的顯微相片； 第22C圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用25U之食道癌細胞株TE-1的顯微相片；第23圖為表示在活體外研究中藉HDL Apoa1及凝血酵素而消滅肝癌細胞株BEL-7402之細胞的結果之長條圖；第24A圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用0U之肝癌細胞株BEL-7402的顯微相片；第24B圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用5U之肝癌細胞株BEL-7402的顯微相片；第24C圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用25U之肝癌細胞株BEL-7402的顯微相片；第25圖為表示在活體外研究中藉HDL Apoa1及凝血酵素而消滅胰腺癌細胞株PANC-1之細胞的結果之長條圖；第26A圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用0U之胰腺癌細胞株PANC-1的顯微相片；第26B圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用5U之胰腺癌細胞株PANC-1的顯微相片；第26C圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用25U之胰腺癌細胞株PANC-1的顯微相片；第27圖為表示在活體外研究中藉HDL Apoa1及凝血酵素而消滅白血病癌細胞株DAMI之細胞的結果之長條圖；第28A圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用0U之白血病癌細胞株DAMI的顯微相片；第28B圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用5U之白血病癌細胞株DAMI的顯微相片； 第28C圖為在活體外研究中以每毫升凝血酵素使用25U之白血病癌細胞株DAMI的顯微相片；第29A圖為在活體外研究中使用0%之AFOD之胃癌細胞株的顯微相片；第29B圖為在活體外研究中經0.1% AFOD處置之胃癌細胞株的顯微相片；第29C圖為在活體外研究中經0.5% AFOD處置之胃癌細胞株的顯微相片；第29D圖為在活體外研究中經2.5% AFOD處置之胃癌細胞株的顯微相片；第30A圖為在活體外研究中經0% AFOD處置之子宮頸癌細胞株HELA的顯微相片；第30B圖為在活體外研究中經0.1% AFOD處置之子宮頸癌細胞株HELA的顯微相片；第30C圖為在活體外研究中經0.5% AFOD處置之子宮頸癌細胞株HELA的顯微相片；第30D圖為在活體外研究中經2.5% AFOD處置之子宮頸癌細胞株HELA的顯微相片；第31A圖為在活體外研究中經0% AFOD處置之乳癌細胞株SK-BR-3的顯微相片；第31B圖為在活體外研究中經0.1% AFOD處置之乳癌細胞株SK-BR-3的顯微相片；第31C圖為在活體外研究中經0.5% AFOD處置之乳癌細胞株SK-BR-3的顯微相片； 第31D圖為在活體外研究中經2.5% AFOD處置之乳癌細胞株SK-BR-3的顯微相片；第32A圖為在活體外研究中經0% AFOD處置之卵巢癌細胞株SK-OV-3的顯微相片；第32B圖為在活體外研究中經0.1% AFOD處置之卵巢癌細胞株SK-OV-3的顯微相片；第32C圖為在活體外研究中經0.5% AFOD處置之卵巢癌細胞株SK-OV-3的顯微相片；第32D圖為在活體外研究中經2.5% AFOD處置之卵巢癌細胞株SK-OV-3的顯微相片；第33A圖為在活體外研究中經0% AFOD處置之肺腺癌細胞株SPC-A-1的顯微相片；第33B圖為在活體外研究中經0.1% AFOD處置之肺腺癌細胞株SPC-A-1的顯微相片；第33C圖為在活體外研究中經0.5% AFOD處置之肺腺癌細胞株SPC-A-1的顯微相片；第33D圖為在活體外研究中經2.5% AFOD處置之肺腺癌細胞株SPC-A-1的顯微相片；第34A圖為在活體外研究中經0% AFOD處置之食道癌細胞株TE-1的顯微相片；第34B圖為在活體外研究中經0.1% AFOD處置之食道癌細胞株TE-1的顯微相片；第34C圖為在活體外研究中經0.5% AFOD處置之食道癌細胞株TE-1的顯微相片； 第34D圖為在活體外研究中經2.5% AFOD處置之食道癌細胞株TE-1的顯微相片；第35A圖為在活體外研究中經0% AFOD處置之肝癌細胞株BEL-7402的顯微相片；第35B圖為在活體外研究中經0.1% AFOD處置之肝癌細胞株BEL-7402的顯微相片；第35C圖為在活體外研究中經0.5% AFOD處置之肝癌細胞株BEL-7402的顯微相片；第35D圖為在活體外研究中經2.5% AFOD處置之肝癌細胞株BEL-7402的顯微相片；第36A圖為在活體外研究中經0% AFOD處置之胰腺癌細胞株PANC-1的顯微相片；第36B圖為在活體外研究中經0.1% AFOD處置之胰腺癌細胞株PANC-1的顯微相片；第36C圖為在活體外研究中經0.5% AFOD處置之胰腺癌細胞株PANC-1的顯微相片；第36D圖為在活體外研究中經2.5% AFOD處置之胰腺癌細胞株PANC-1的顯微相片；第37A圖為在活體外研究中經0% AFOD處置之白血病癌細胞株DAMI的顯微相片；第37B圖為在活體外研究中經0.1% AFOD處置之白血病癌細胞株DAMI的顯微相片；第37C圖為在活體外研究中經0.5% AFOD處置之白病癌細胞株DAMI的顯微相片； 第37D圖為在活體外研究中經2.5% AFOD處置之白病癌細胞株DAMI的顯微相片；第38圖表示腹部之腹膜表面的4個區域(上左、上右、下左、下右的四分之一部)。將各該區之病損大小分數加在一起。最高分為12(4乘以3)；及第39圖在胃癌模式中之FS處置組、Sino-Fuan組、合併組及對照組內之腹膜內腫瘤成長。
A：在該對照組內，在NS處置組內發現大且融合性腫癌生長。
B：在FS處置組內，發現小、孤立性且經良好被膜性腫瘤小結。
C：在該Sino-Fuan組內，發現較小的小結，且甚至仍殘留某些未降解的藥劑。
D：在該合併組內，發現微小的小結，在本組內可證實FS及Sino-Fuan(其係為一緩慢釋放的化療劑)之加乘性抗腫瘤效力。

Claims (37)

  1. 一種從血漿溶離份I或自血漿冷沈澱物純化纖維蛋白原以獲得具更佳持久性及更佳安定性之纖維蛋白密封劑膠膜的方法，其包括a)從人類血漿收集血漿冷糊狀物或溶離份I；b)在預處置緩衝劑內溶解步驟a)內所獲得的該溶離份I或冷糊狀物，並進行具有套膜之病毒的S/D病毒失活作用；c)將得自步驟b)之該處置溶液裝填至陽離子層析儀；d)使用冷乙醇沈澱法以純化得自步驟c)之流程的纖維蛋白原；e)裝填溶析緩衝劑I以獲得VIII因子；f)藉使用緩衝劑II而溶解步驟d)之該糊狀物以進行最後調製；及g)透析並添加安定劑在步驟f)中所獲得的本體溶液內。
  2. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該溶離份I及可藉科恩(Cohn)乙醇分級分離法而獲得。
  3. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該預處置緩衝劑包括Tris-HCl、NaCl-檸檬酸鹽、蔗糖、及NaCl。
  4. 如申請專利範圍第1項之方法，其中一如A1AT之纖維蛋白分解抑制劑係在FibrinGluRAAS®纖維蛋白原之製造期間經故意增富並保留。
  5. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該FibrinGluRAAS®纖維蛋白原內之A1AT的存在可改善FS膠膜的安定性。
  6. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該纖維蛋白原內之A1AT的進一步增富可大大地改善FS膠膜的安定性。
  7. 一種冷凍乾燥的高濃縮纖維蛋白原及凝血酵素之套組，其中該高濃縮纖維蛋白原係經纖維蛋白分解抑制劑A1AT故意增富並保留且在該FibrinGluRAAS®之高濃縮纖維蛋白原的純化程序期間，未經加熱或乾燥、濕或蒸汽加熱高到至少1℃，較佳至少101℃以強化該配混膠膜之安定性及持久性，且使該高濃縮纖維蛋白原進行雙步驟之病毒失活作用以使所有具有套膜的病毒失活，及一步驟之病毒活化作用以使所有無套膜的病毒失活。
  8. 如申請專利範圍第7項之套組，其中該高濃縮纖維蛋白原及凝血酵素係取自藉用於HIV1-2、HBV、及HCV之NAT而測試具負性的人類血漿。
  9. 如申請專利範圍第7項之套組，其中該A1AT係在該純化程序期間藉透析而增厚並保留以濃縮該A1AT。
  10. 如申請專利範圍第7項之套組，其中該A1AT係在該純化程序期間藉添加更多純A1AT至最終本體溶液而增富並保留以使該配混之膠膜的安定性及密度最大化。
  11. 如申請專利範圍第7項之套組，其中該加熱係藉濕、乾及高到至少1℃及更高的溫度、較佳至少101℃的方式進行以強化該配混膠膜的密度。
  12. 如申請專利範圍第7項之套組，其中該用於使所有無套膜的病毒失活的病毒失活步驟包括加熱高到至少101℃。
  13. 如申請專利範圍第7項之套組，其中該等用於使所有具 有套膜的病毒失活之病毒失活步驟包括溶劑清潔劑(S/D)TNBP及Tween 80。
  14. 如申請專利範圍第7項之套組，其中係施加溶劑清潔劑(S/D)TNBP及Tween 80以使所有具有套膜的病毒失活，且使用奈米過濾法以使該凝血酵素中之所有無套膜的病毒及所有具有套膜的病毒失活。
  15. 如申請專利範圍第7項之套組，其中該套組可製造一配混的膠膜，其網目的直徑小於人類癌細胞(其大小為10-100微米)，該網目的實際大小為0.6微米。
  16. 如申請專利範圍第7項之套組，其中係在臨床手術中施加該套組以防止離散性腫瘤細胞擴散。
  17. 一種在臨床手術時防止離散性腫瘤細胞擴散的方法，其包括在癌腫瘤業經格除的部位之該等表面上產生一凝膠膜。
  18. 如申請專利範圍第17項之方法，其中該膠膜係藉施加冷凍乾燥的高濃縮纖維蛋白原溶液及凝血酵素溶液至癌腫癌業經移除的部位之該等表面而製成。
  19. 如申請專利範圍第18項之方法，其中係交替地施加該高濃縮纖維蛋白原溶液及凝血酵素溶液至癌腫瘤業經移除的部位之該等表面。
  20. 如申請專利範圍第18項之方法，其中係各施加該高濃縮纖維蛋白原溶液及凝血酵素溶液至癌腫瘤業經移除的部位之該等表面，共3至5次。
  21. 如申請專利範圍第18項之方法，其中係施加該高濃縮纖 維蛋白原溶液及凝血酵素溶液以配混一膠膜，其直徑小於人類癌細胞，人類癌細胞的大小為10-100微米。
  22. 如申請專利範圍第17項之方法，其中該膠膜可在小鼠之胃腸癌的外科手術期間防止癌細胞剝離而進入腹腔內。
  23. 如申請專利範圍第17項之方法，其可適用當未擴散至身體其它部位之所有種類的固體癌腫瘤，例如固體癌、AIDS相關性癌、骨肉瘤、及肛門癌、膽道癌、膀胱癌、腦癌、乳癌、子宮頸癌、大腸癌、食道癌、眼癌、膽囊癌、頭癌、頸癌、心臟癌、肝癌、腎臟癌、喉癌、唇癌、口腔癌、肺癌、口癌、鼻旁竇癌及鼻腔癌、卵巢癌、胰臟癌、副甲狀腺癌、陰莖癌、攝護腺癌、直腸癌、唾液腺癌、皮膚癌、脾癌、咽喉癌、睪丸癌、尿道癌、及陰道癌、以及腎細胞癌。
  24. 如申請專利範圍第17項之方法，其中該配混膠膜係經局部施用、非經注射且不適用於所有血液(液體)癌，例如白血病，其包括急性髓性白血病(M0-M7)、淋巴瘤、骨髓惡性腫瘤、急性淋巴白血病(小、中、大)、骨髓機能異常症候群(MDS)、貧血、狼瘡及腦內之硬化症。(在一不同專利申請案下之適於這些應用的另一RAAS ATBC1-9藥劑)。
  25. 如申請專利範圍第16項之方法，其中該方法可抑制細胞素(其包括TNF(腫瘤壞血因子))之釋放，且可中止藉一次放射化學療法而產生的組織蛋白及毒性之活化以防止由於若僅使用纖維蛋白密封劑(Fribin GluRAAS®)，在移 除癌腫瘤之外科手術後藉立即進行一次放射化療法而產生的細胞素、組織蛋白、及毒性之釋放而導致癌患者的死亡。
  26. 如申請專利範圍第17項之方法，其係合併該膠膜及一低釋放藥劑，諸如氟尿嘧啶(C4H3FN202)或RAAS 1至RAAS 45 FU之任何藥劑，以作為一可在胃腸癌之外科手術期間防止癌細胞剝離並擴散入腹腔內的輔助裝置，且所形成膠膜內之該氟尿嘧啶可殺死該等腫瘤癌細胞；氟尿嘧啶為一可殺死腫瘤癌細胞之合適藥劑；除了氟尿嘧啶外，可使用能殺死腫瘤癌細胞的其它藥劑代替；適用於本發明之可殺死腫瘤癌細胞的藥劑包括所有目前已知的此等藥劑： 以及未來可取得的所有此等藥劑。
  27. 如申請專利範圍第4項之方法，其中該A1AT可作為一用於纖維蛋白原、高濃縮纖維蛋白原、或需要安定性的任何其它產物之安定性。
  28. 如申請專利範圍第17項之方法，其進一步包括合併該膠 膜及一可殺死腫瘤癌細胞的藥劑。
  29. 如申請專利範圍第28項之方法，其中該藥劑為氟尿嘧啶。
  30. 一種單獨使用該套組(FibrinGluRAAS)，由於未使用化學放射療法，所以喉癌患者不會失去其等的味覺。
  31. 一種在該治療期間，如同未使用化學放射療法一般，單獨使用該套組(FibrinGluRAAS)可防止固體腫瘤癌患者掉髮。
  32. 一種該套組主張可經由使用得自任何來源(Animals,RDNA等)之任何藥劑或材料以配混一膠膜而製成具有直徑比其它方法製成的彼等直徑小10微米的膠膜。
  33. 一種該套組主張凝血酵素(其係為一含良好健康細胞的蛋白質)可殺死所有固體腫瘤癌細胞或血液(液體)癌細胞。
  34. 一種該套組主張高濃縮纖維蛋白質(其係為一含良好健康細胞的蛋白質)可殺死所有固體腫瘤癌細胞或血液(液體)癌細胞。
  35. 一種該套組主張AFOD(HDL ApoA1)(其係為一含良好健康細胞的蛋白質)可殺死所有固體腫瘤癌細胞或血液(液體)癌細胞。
  36. 一種該套組主張凝血酵素、高濃縮纖維蛋白原(其等係為含良好健康細胞的蛋白質)可殺死所有固體腫瘤癌細胞或血液(液體)癌細胞。
  37. 一種該套組主張凝血酵素、高濃縮纖維蛋白原及AFOD(HDL ApoA1)(其等皆為含良好健康細胞的蛋白質)的權利。本組合之蛋白質可更有效地殺死所有固體腫瘤癌細胞或血液(液體)癌細胞。
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