TW201002716A

TW201002716A - Fused pyrazine compounds useful for the treatment of degenerative and inflammatory diseases

Info

Publication number: TW201002716A
Application number: TW098115200A
Authority: TW
Inventors: Martin James Inglis Andrews; Mark Stuart Chambers; De Poel Herve Van; Gregory Louis Joseph Bar
Original assignee: Galapagos Nv
Priority date: 2008-05-07
Filing date: 2009-05-07
Publication date: 2010-01-16
Also published as: AR071619A1; CO6321159A2; EP2307426A1; BRPI0912412A2; ZA201008759B; CN102036997A; IL209104A0; US20090286798A1; MX2010011994A; CR11823A; AU2009245731A1; CA2723745A1; JP2011519897A; KR20110028445A; US8012983B2; WO2009135885A1; PE20091880A1; EA201071275A1; CL2009001064A1; UY31813A

Description

201002716 六、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於一類能夠與絲胺酸/蘇胺酸激酶之活性位點結合的稍合°比嗪化合物，該絲胺酸/蘇胺酸激酶之表現涉及於引起細胞外基質(ECM)降解、關節解及/或發炎之疾病的途徑。 …降涉及細胞外基質降解之疾病包括（但+限於）牛皮癖性關 ::炎、幼年型關節炎、早期關節炎、反應性關節炎‘、骨關即火、類風濕性關節炎、強直性脊椎炎、骨質疏鬆症、肌肉骨路疾病（如肌腱炎及牙周病）、癌症轉移、氣管疾病 (COPD、哮喘）、腎及肝之纖維化、心血管疾病(如動脈粥樣硬化及心臟衰竭）及神經疾病（如神經發炎及多發性硬化症）。主要涉及關節退化之疾病包括（但不限於）牛皮癖性關節炎、幼年型關節炎、早期關節《、反應性關節炎、類風濕性關節炎、骨關節炎及強直性脊椎炎。類風濕性關節炎（R A)係一種特徵為關節結構發炎及遭破壞的慢性關節退化性疾病。當該疾病未經檢查時，其由於喪失關節功能性而導致實質性殘疾及疼痛且甚至導致早亡。因此，RA療法之目標並非減緩疾病，而是實現緩解以使關節破壞停止。除疾病後果之嚴重性外，RA之高發病率（全世界約0.8%之成年人患病）意謂著巨大的社會經濟影響。（關於RA之評論，請參考Sm〇len及Sieiner (2〇〇3) ,· Lee 及 Weinblatt (2001) ; Choy 及 panayi (2〇〇1); (2004)及 Firestein (2003))。 139731.doc 201002716 雖然廣泛認為RA係一種自體免疫性疾，病，但關於驅動該疾病之’起始階段，的精確機制並未達成—致意見。已知的是起始觸發物在易感染宿主中介導導致各種細胞類⑽ 細胞、T細胞、巨嗤細胞、纖維母細胞、内皮細胞、樹突狀細胞及其他細胞）活化之事件級聯。肖此同日夺，在關節及關節周圍之組織中觀測到各種細胞素（例如，·_α、 IL 6 IL_1、IL-15、IL_18及其他細胞素）之產生增加。當 - 疾病進展時，細胞活化及細胞素產生之級聯變得具自身延續性（seif-perpetuating)。在此早期階段，關節結構之破壞已非ΐ月顯3 0 /〇患者在診斷時於放射景多像中具有骨侵雀虫之跡象且在兩年後此比例增加至60%。對RA患者之關節的組織學分析清楚顯示ra相關之退變性難中所涉及的機制。此分析展示引起RA相關之關節退變的主要效應子為血管翳，其中滑膜纖維母細胞藉由產生多種蛋白水解酶而成為軟骨及骨頭侵蝕之主要驅動者，（dnv:)。傳統上’關節含有兩塊相鄰的骨頭，該兩塊骨頭由關即連接於軟骨層上且由滑膜及關節囊圍繞。在晚期 RA心者中’關節滑膜之尺寸因滑膜纖維母細胞增殖及單核細胞（諸如，τ細胞、B細胞、單核細胞（m〇n〇cyte)、巨嗤細胞及嗜中性白血球)浸潤而增加，從而形成血管翳。血管翳介導相鄰軟骨之降解，導致關節間隙變窄，且有可能侵入相鄰骨頭及軟骨。因為骨頭及軟骨組織分別主要由里或II5L膠原蛋白組成，所以血管繫之破壞性及侵襲性係由合膠原蛋白酶（主要為基質金屬蛋白酶（MM?))之分泌來 139731.doc 201002716 介導。在軟骨下面且與軟骨相鄰之骨頭的侵蝕亦為RA過程之一部分，且主要由骨頭與血管翳之界面處破骨細胞之存在而引起。破骨細胞為在黏附至骨組織後形成封閉隔室之多核細胞，在該封閉隔室内破骨細胞分泌會使骨組織降解之蛋白酶（組織蛋白酶K，MMP9)。關節中之破骨細胞群體因由活化之SF及T細胞分泌NFkB配體受體活化劑 (RANKL)所誘發的骨母細胞自前驅細胞之形成而異常增加。各種膠原蛋白類型在界定細胞外基質（ECM)之穩定性中具有關鍵作用。舉例而言，I型膠原蛋白及II型膠原蛋白分別為骨頭及軟骨之主要組份。膠原蛋白通常組織成稱為膠原蛋白原纖維之多聚體結構。天然膠原蛋白原纖維對蛋白水解裂解極具抵抗力。已報導僅幾類ECM降解蛋白質具有使以下天然膠原蛋白降解之能力：MMP及組織蛋白酶。在組織蛋白酶中，主要在破骨細胞中具有活性之組織蛋白酶 K已得以充分表徵。在MMP中，已知MMP1、MMP2、 MMP8、MMP 13及MMP 1 4具有溶膠原性。滑膜纖維母細胞 (SF)對MMP1之表現增加與關節炎疾病之進展之間的相關性為吾人所公認且可預示關節侵蝕過程（Cunnane等人， 2001)。因此，在RA之情況下，MMP1為高度相關之膠原蛋白降解蛋白質。活體外，以與RA病理相關之細胞素（例如，TNF-α及ILip)處理所培養之SF將增加此等細胞對 MMP1之表現（Andreakos等人，2003)。因此，監測由SF表現之MMP 1之含量係與RA領域相關之讀數，因為其可指示 139731.doc 201002716 SF朝於活體㈣起軟骨降解之錢性表型的活化。抑㈣表現Μ Μ P1為一種對治療R a頗有價值之治療方法。㈣降解蛋白質之活性亦會引起不同於^之各種疾病 (如（例如）涉及關節退變之其他疾病）之進展或與其進展相互關聯。此等疾病包括（但不限於）牛皮癬性關節炎、幼年型關節炎、早期關節炎、反應性關節炎、骨關節炎及強直性脊椎炎。可用根據本發明及使用如本文所述之於表現中所涉及之標乾而確定的化合物治療之其他疾病為骨質疏鬆症、肌肉骨骼疾病（如肌腱炎及牙周病）（(3叩也等人，2004)、癌症轉移（Coussens等人，2〇〇2)、氣管疾病 (COPD、哮喘）（SuZUki等人，2004)、肺纖維化、腎纖維化 (Schanstra等人，2002)、與慢性c型肝炎有關之肝纖维化 (Reiff等人，2005)、心血管疾病（如動脈粥樣硬化及心臟衰竭XCreemers等人，2001)及神經疾病（如神經發炎及多發性硬化症）（R〇Senberg，2002)。罹患該等疾病之患者可自使 ECM穩定（藉由防止其降解）中得到益處。已鑑別為有絲分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶 5(MAPKAPK5或PRAK)之471個胺基酸之絲胺酸/蘇胺睃激 S#表現於廣泛組織中。該蛋白質在N末端含有其催化域且在其c末端含有核定位信號（NLS)及核輸出信號（NES)。雖然内源性MAPKAPK5主要存在於細胞質中，但細胞之應力或細胞素活化介導其移至核中（New等人，2003)〇此事件視MAPKAPK5之磷酸化而定。Thrl82為MAPKAPK5之調節性磷酸化位點。雖然ρ38α激酶能夠在過度表現環境中使 139731.doc 201002716 MAPKAPK5磷酸化，但關於内源性MAPKAPK5之實驗並不支持此假設（Shi等人，2003)。已產生可存活及有生殖力之 MAPKAPK5基因敲除小鼠。此等小鼠之表型與缺乏 MAPKAPK2(—種受ρ38α調節之MAPKAPK5相關激酶）之小鼠的表型完全不同（Shi等人，2003)。此指示各蛋白質之功能係獨特的且兩激酶皆不能補償對方之活性。總之， MAPKAPK5及MAPKAPK2為具有非冗餘作用之不同標靶。近來MAPK6(亦稱為ERK3)已經鑑別為MAPKAPK5之生理學相關受質，從而確定了一種新穎信號轉導途徑（Seternes 等人，2004)。【先前技術】 NSAID(非類固醇消炎藥）可用以減少與RA有關之疼痛且改良患者之生活品質。然而，此等藥物不會使RA相關之關節破壞停止。如以放射照相術所偵側，發現皮質類固醇可減缓R A之進展且可以低劑量用於治療部分RA患者（30至60%)。然而，長期使用皮質類固醇會伴隨發生嚴重副作用（皮膚變薄、骨質疏鬆、白内障、高血壓及高脂質血症）。合成DMARD(改善病情之抗類風濕藥物）（例如，曱胺喋口令（methotrexate)、來氟米特（leflunomide)、柳氮績胺°比0定 (sulfasalazine))主要對付RA之免疫發炎性組分。作為一主要缺點，此等藥物僅具有有限的功效（關節破壞僅被 DMARD減緩而並未被阻止，以至於自長遠看疾病繼續進展）。功效之缺乏係由以下事實所指示：平均僅30%患者在】3973】.doc 201002716 用曱胺喋呤治療24個月後獲得ACR50評分。此意謂根據美國風濕病學會（American College of Rheumatology)僅 30〇/〇患者實現其症狀有50%之改良（O'Dell等人，1996)。此外， DMARD之精確作用機制常為不清楚的。生物DMARD(英利昔單抗（Infliximab)、依那西普 (Etanercept)、阿達木單抗（Adalimumab)、利妥昔單抗 (Rituximab)、阿巴西普（Abatacept))係可使在RA病理生理學中具有重要作用之細胞素（例如，TNF-α)或細胞（例如， B細胞或T細胞）失活的治療蛋白質（Kremer等人，2003 ; Edwards等人，2004)。雖然TNF-a阻斷劑（英利昔單抗、依那西普、阿達木單抗）及曱胺喋呤組合療法為目前可利用之最有效的RA治療方法，但驚人的是即使是使用此療法亦僅於50-60%患者中在1 2個月治療後實現在疾病症狀方面有50%之改良（ACR50)(St Clair等人，2004)。存在關於抗 TNF-α藥物之一些不良事件警示信息，其可顯示出與此類藥物相關聯之副作用。已關於TNF-a阻斷劑描述了感染（結核）、血液學事件及脫髓鞘病症之風險增加（亦參見G〇mez_ Reino等人，2003)。除嚴重副作用之外，TNF-a阻斷劑亦具有生物學類別之治療劑的一般缺點，該等缺點為令人討厭之投藥方式（頻繁注射，伴隨有輸注位點反應）及高製造成本。處於後期研發階段中之較新藥劑靶向諸如IL-6之細胞素、T細胞共刺激分子及B細胞。預期此等藥劑之功效類似於TNF-a阻斷劑之功效。各種靶向療法具有類似但有限之功效的事實表明對於RA而言存在多種病理性因素。此 139731.doc 201002716 亦指:吾人對與RM關之病理性事件的瞭解有所欠缺。目丽用於RA之療法由於功效有限而不能令人滿意(聰患者未得到足夠之治療）。此需要其他策略㈣現症狀緩解。症狀緩解係必需的，因為殘留疾病擔有進行性關節損傷及因此之進行性殘疾的風險。抑制RA#、病之免疫發炎性組分（其為目前用於RA治療之藥物的主要標靶）並未導致關節退變（該疾病之主要標誌）之阻止。 US 2005/0009832描述作為包括MApKApK5之蛋白質激酶之調節劑的經取代之咪唑并n，2_a]吡嗪_8_基_胺。 WO02/056888描述作為tNF調節劑之]^八？1<：八1>尺5抑制劑，其能夠調節某些細胞素之表現。此等先前技術參考文獻中無一者揭不屬於下文所述之化合物類別之範疇内的任何化合物。【發明内容】本發明係基於如下發現：MAPKAPK5在引SMMP1表現之途徑中起作用且MAPKAPK5活性抑制劑（諸如，本發明之化合物）可用於治療涉及MMP活性異常高程度之表現之疾病。一般可將本發明之化合物描述為在5位上經芳基或雜芳基取代及在8位上經雜芳基胺基取代的[丨2 4]三唑并[丨，5_a] °比嗪及咪唑并[1,2-a] °比嗪。本發明之化合物可展示較小毒性、良好吸收、良好半衰期、良好浴解性、低蛋白結合親和力、較小藥物_藥物相互作用及優良代謝穩定性。在一特定態樣中，本發明之化 139731.doc -10- 201002716 合物展現在藥理學性質方面有意外 , 〈月顯的改良，尤1 ΤΛ 效及耐受性得到改良。民尤其功更特定言之明化合物：本發明係關於一種符合式（la)或（lb)之本發 (Ia) Ub)，其中： W、W'、γ及Y，各自獨立地馬LR或Ν ;其限制條件為 W、w’、Y及Y，不超過兩者可同時為t

R3 X為N或CH ; -S02_、_n(R2c)C0-及 L係選自單鍵、_c〇-、 -N(R2c)S02-；環P經取代或未經取代：

R1為Η或經取代或未經取代之Ci-q烷基； R2a各自係獨立地選自Η、麵％,b ，士取代或未經取代之CVC6烷 139731.doc 201002716 基、經取代或未經取代之CrC：8環烷基、Ci-Ce烷氧基、氰基及_基； R2e各自係選自H&C1-C6烷基； 112£|為^1、Cs-C8環烷基或視情況經鹵基或C3_c8環烷基取代之CVC6烷基；ml、m2及m3各自獨立地為1或2 ;且 R3係選自經取代或未經取代之C^-C6烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基及經取代或未經取代之雜芳基。在一項實施例中’對於符合式I之本發明之化合物而言 ’ R丨為 H、Me、Et、i-Pr 或 CF3。在一項實施例中，對於符合式〖之本發明之化合物而言，R1為Η。在另一項實施例中，對於符合式I之本發明之化合物而言，R3係選自經取代或未經取代之苯基。在另一項實施例中，對於符合式I之本發明之化合物而言’ R3係選自經取代或未經取代之吡啶基。在另—項實施例中’對於符合式I之本發明之化合物而言’ R3係選自各自可經取代或未經取代之苯基、吲哚基、異吲°木基、η比略基、吱喃基、嘆吩基、0比β坐基、β惡嗤基及 11 塞D坐基。在一項較佳實施例中，對於符合式I之本發明之化合物而吕’ R3為經取代或未經取代之吱喃基。在另—態樣中’本發明提供包含本發明之化合物及醫藥載劑、賦形劑或稀釋劑的醫藥組合物。在本發明之此態樣 139731.doc 12 201002716 中，醫藥組合物可包含一或多種本文所述之本發明之化合物。此外，可用於本文中所揭示之醫藥組合物及治療方法中的本發明之化合物在製備及使用時均為醫藥學上可捿受的。本發明之另一態樣係關於本發明之化合物在治療方法、醫藥組合物及該組合物之製造中的用途，其可用於治療涉及發炎、膠原蛋白降解之疾病及尤其特徵為異常基質金屬

蛋白酶（ΜΜΪΜ)及/或有絲分裂原活化蛋白質_激酶活化蛋白激酶5(MAPKAPK5)活性之疾病，在該等疾病中類風濕性關節炎（RA)為特定之此類疾病。本發明亦係關於製備本發明化合物之方法。根據隨後之[實施方式]且結合考慮以下說明性圖示，其他目標及優點將為熟習此項技術者所顯而易見。八【實施方式】定義以下術語意欲具有下文與此有關所呈現之含義且可用於瞭解本發明之說明及所欲範缚。當描述可包括化合物、含右兮玺 3有忒專化合物之醫藥組合物及使用該等化合物及組合物之方法 _ 乃，安的本發明時，除非另外指示’否則以下術語若存在則呈右以丁人μ ”有以下含義。亦應瞭解，當本文中描述時，下文定篇少乂工/ Α 、義之任何部分可經各種取代基取代，且各自定義意欲包括屬於又陳述之其把_内的該等經取代部分。除非另外說明，否則㈣「經取代」係如下所述來定義。應進-步瞭解可認為術語「基團（gr〇up)」與 139731.doc 201002716 「基團(r「adicai)」在本文令使用時為可互換的。 " J在本文中可用以指一個或一個以上（亦即， ;少;'個)該冠詞之語法對象。舉例而言，厂-類似物」意 5月一個類似物或一個以上的類似物。 ’酿，'或|烧醯基，係指基團_c(o)r20,其中r2o為氯、如本義之Cl C8烧基、C3_Cl0環院基、C3-C10環烧基γ 二4’員雜環院基、芳基、芳基烧基、5_1〇員雜芳基或里方：&基。代表性實例包括(但不限於”酿基、乙醯土％己幾基、環己基甲基幾基、苯Τ酿基及苯甲幾基。例不性’醯基，基團為-C⑼Η、_c(〇)_Ci_c道基、_c(〇)_ (CH2)t(cVc1Q芳基）、_c(〇HCH2)t(5_1()員雜芳基卜c(〇)_ (CH2)t(C3_Ci〇環烧基）及_C(〇)(CH2M4_1〇員雜環烧基），苴中t為〇至4之整數。 /、經=代之醯基，或，經取代之烷醯基，係指基團—，其中R21獨立地為 •經11基或羥基取代之<^-(：8烷基；或 •各自經未經取代之Cl_C4烷基、齒基、未經取代之Ci_ C4烷氧基、未經取代之C】_C4i烷基、未經取代之Cl_ C4經基垸基或未經取代之^^』烧氧基或經基取代的C3-C10環烷基、4_10員雜環烷基、c6_c⑺芳基、芳基炫•基、5-10員雜芳基或雜芳基烷基。胺基，係指基團樣nC(0)R23，其中r22為氫、如本文所疋義，c】-c8烧基、C3_Ci〇環燒基、4_1〇員雜環烧基、 10¾'基芳基烧基、5-10員雜芳基或雜芳基烧基且R23 139731.doc -14 - 201002716 為氳、如本文所定義之CrCs烷基、C3-C1G環烷基、4-10員雜環烧基、C6-C1{)芳基、芳基烷基、5_10員雜芳基或雜芳基烧基。例示性’醯胺基，包括（但不限於）甲醯胺基、乙醯胺基、環己基羰基胺基、環己基曱基羰基胺基、苯甲醯胺基及苯曱羰基胺基。例示性'醯胺基，基團為_Nr2i，C(0)_Ci_C8 烧基、-NR^’CCOHCHWCVC!。芳基）、-NR21'C(0)-(CH2)t(5-10 員雜芳基）、_nr2i.c(〇hCH2mc3_Ci。環烷基）及-NR21 C(O)-(CH2)t(4-10員雜環烷基），其中t為〇至4之整數’ R21'各自獨立地表示H4c1-c8烷基。經取代醯胺基'係指基團_NR24c(〇)r25，其中： R24獨立地為 • H、經鹵基或羥基取代之烷基；或 •各自經未經取代之Cl-c4烷基、_基、未經取代之C!-C4烧氧基、未經取代之Cl_C4鹵烷基、未經取代之c「 C4經基烧基或未經取代之匕-山鹵烷氧基或羥基取代基烧基、5-10員雜芳基或雜芳基烷基；且 R25獨立地為 • Η、經鹵基或羥基取代之烷基；或 •各自經未經取代之Ci-C4烷基、鹵基、未經取代之Cr C4烷氧基、未經取代之Ci_C4鹵烷基、未經取代之Ci_ C4經基烧基或未經取代之Ci_c4鹵烷氧基或羥基取代的C3-C1Q環烷基、4_10員雜環烷基、C6_Ci〇芳基、芳基烷基、5-10員雜芳基或雜芳基烷基； 139731.doc •15· 201002716 其限制條件為r、r25中之至少一者不為H。，烧氧基，係指基團-0R'其中r2、Ci_c8烧基氧基為曱氧某、^ 几勹τ減〔氧基、正丙氧基、異丙氧基、正基、第三丁氧某、铉__Γ备* 一第一丁氧基、正戊氧基、正已氧基及 1，2-二甲基丁氧基。特定烷氧基為低碳烷氧基，亦即具有1 個與6個之間的碳原子。更丁又将疋之烷軋基具有1個與4個之間的碳原子。 ’”呈取代之烷氧基’係指經本文中關於「經取代」之定義中所列之彼等基團中的—或多個基團取代之烧氧基，且詳言之係指具有一或多個選自由以下各基組成之群之取代基 (例如1至5個取代基，且尤其為丨至3個取代基，尤其為鴻取代基）的烷氧基：胺基、經取代之胺基、C6-CI0芳基、〇 ^基缓基、氰基、C3_C10環烧基、4-10員雜環院基、鹵素、5-10員雜芳基、羥基、硝基、硫烷氧基、硫基芳基、硫醇、烷基-s(〇)_、芳基-s(o)-、烷基-S(〇)2·及芳基-S(0)2_。例示性’經取代之烷氧基芳基）、-〇-(CH2)t(5-l〇員雜芳基）、_〇_(CH2)t(C3_Ci〇環烷基）及-〇_(CH2)t(4-l〇員雜環烷基），其中〖為〇至4之整數且所存在之任何芳基、雜芳基、環烷基或雜環烷基自身可經未經取代之c〗-c：4烷基、鹵基、未經取代之Ci_C4烷氧基、未經取代之CrC4鹵烷基、未經取代之Ci_C4羥基烷基或未經取代之C丨-C4鹵烷氧基或羥基取代。特定例示性，經取代之烷氧基’為 OCF3、0CH2CF3、〇CH2Ph、och2-環丙基、 OCH2CH2OH、OCH2CH2NMe2。 139731.doc -16- 201002716 '烧氧羰基，係指基團-C(0)-〇R27，其中R27表示如本文所定義之cvcs烷基、C3-C10環烷基、C3-C10環烷基烷基、 10員雜環烷基烷基、芳烷基或5_10員雜芳基烷基。例示性'烷氧羰基，基團為 0(Ο)〇-(ν(：8烷基、-C(0)0-(CH2)t(C6_ C10 芳基）、-C(〇)〇-(CH2)t(5-1〇員雜芳基）、c(〇)〇_ (CH2)t(C3-C1()環烷基）及-C(O)O_(CH2)t(4_10 員雜環烷基），其中t為1至4之整數。 '經取代之烷氧羰基|係指基團-C(〇)_〇R28，其中r28表不 · •各自經iS基、經取代或未經取代之胺基或羥基取代之匸广匸8烷基、C3-C10環烷基、C3-C10環烷基烷基或4_ 1〇員雜環烷基烷基；或 •各自經未經取代之C^-C4烷基、鹵基、未經取代之€l_ C4烷氧基、未經取代之Cl_c4鹵烷基、未經取代之Cl_ CU經基烷基或未經取代之Cl_C4鹵烷氧基或羥基取代的C6-C1()芳烷基或5-10員雜芳基烷基。芳基羰基，係指基團-c(o)-〇R29 ’其中R29表示如本文所定義之C6-C1()芳基。例示性r -〇_芳基羰基」基團為-c(o)o-(c6-c10芳基）。，經取代之_0-芳基羰基'係指基團_C(〇)_〇r30，其中r30 表示 •經未經取代之匚！·^4烧基、鹵基、未經取代之氧基、未經取代之C^-C：4鹵烷基、未經取代之（^-山羥基烧基或未經取代之烷氧基或羥基取代的c6- 139731.doc •17· 201002716 c10芳基。，雜-〇-芳基羰基’係指基團<(〇)_〇“！，其中R”表示如本文所定義之5-10員雜芳基。經取代之雜-Ο-芳基羰基•係指基團_c(〇)_〇R32，其中R32 表示： •經未經取代iCrC4烷基、鹵基、未經取代之— 氧基、未經取代之C^-C：4鹵烷基、未經取代之c「c4羥基烷基或未經取代之Cl_C4虐烷氧基或羥基取代的5_ 1〇員雜芳基。，烷基'意謂具有1至20個碳原子之直鏈或支鏈脂族烴。特疋烷基具有1至12個碳原子。更特定之烷基為具有1至6個碳原子之低碳烷基。更特定之基團具有〖至4個碳原子。例示性直鏈基團包括曱基、乙基、正丙基及正丁基。支鏈意謂一或多個低碳烷基（諸如，甲基、乙基、丙基或丁基）連接至線性烷基鏈，例示性支鏈基團包括異丙基、異丁基、第三丁基及異戊基。，經取代之烷基’係指經本文中關於「經取代」之定義中所列之彼等基團中的一或多個基團取代之如上定義之烷基，且詳言之係指具有一或多個選自由以下各基組成之群之取代基（例如1至5個取代基，且尤其為丨至3個取代基，尤其為1個取代基）的烷基：醯基、醯胺基、醯氧基（_〇_醯基或-oc(o)r2g)、烧氧基、炫氧幾基、烷氧羰基胺基（_NR,,_ 烷氧羰基或-NH-C(0)-0R27)、胺基、經取代之胺基、胺基羰基（胺甲醯基或醯胺基或_C(0)_NR··2)、胺基羰基胺基 139731.doc •18- 201002716 (-NR _C(0)-NRu2)、胺基羰氧基（_〇_c(〇)_NR’’2)、胺基磺醯基、磺醯基胺基、芳基、-〇_芳基、疊氮基、羧基、氰基、環烷基、_素、羥基、雜芳基、硝基、硫醇、_s_烷基、-S-芳基、-S(0)_烷基、_s(〇)_芳基、_s(〇)2_烷基及-S(0)2_芳基。在—特定實施例中，，經取代之烷基，係指經以下基團取代之C丨-Cs烷基：_基、氰基、硝基、三氟曱基、二氟曱氧基、疊氮基、-NR…S02R'，、_S〇2NR，.R'，·、 -C(0)R > -C(0)0R" , -〇C(〇)R" . -NR"'C(0)R" ^ -C(0)NR R" ^ -NR R或-(CR R )m0R”’；其中R’’各自係獨立地選自H、 CA 烷基、-(CH2)t(C6_Cl〇芳基）、_(CH2)t(5_l〇員雜芳基）、-(CH2)t(C3-Cl。環烷基）及_(CH2)i(4_1〇員雜環烷基），其中t為0至4之整數且所存在之任何芳基、雜芳基、環烷基或雜環烷基自身可經未經取代之Ci_C4烷基、鹵基、未經取代之4-〇：4烷氧基、未經取代之Ci_C4_烷基、未經取代之錢基或未經取代之Ci_C4㈣氧基或經基取代。R及R各自獨立地表示h*Ci_C8烷基。 '胺基'係指基團-NH2。，經取代之胺基’係指經本文中關於，經取代，之定義中所列之彼等基團中的一或多個基團取代之胺基，且詳言之係指基團-N(R33)2 ’其中R33各自係獨立地選自：、 •氯、CVC8烧基、（VC!。芳基、5-10員雜芳基、4__ 雜環烷基或C3-C1G環烷基；或 •經鹵基或羥基取代之(^-(：8烷基；或 •各自經未經取代之Cl_C4烷基、^基、未經取代之Cr 139731.doc -19- 201002716 C4烷氧基、未經取代之Ci_C4鹵烷基、未經取代之Ci_ C4羥基烷基或未經取代之Cl_C4鹵烷氧基或羥基取代的 _(CH2)t(C6-C10芳基）、-(CH2)t(5]〇員雜芳基）、 -(CH2)t(C3-C1G環烷基）或 _(CH2)t(4_10 員雜環烷基），其中t為0與8之間的整數；或 •兩個R33基團接合以形成伸烷基。當兩個R33基團為氫時，-N(R33)2為胺基。例示性，經取代之胺基’基團為-NR^’-Ci-Cg烷基、-NR33，-(CH2)t(C6-C1(^ 基）、-NR33-(CH2)t(5-l〇員雜芳基）、_NR33，-(CH2)t(C3-C1(^ 烧基）及-NR33'-(CH2)t(4-10員雜環烷基），其中t為〇至4之整數’ R33’各自獨立地表示烷基；且所存在之任何烧基自身可經鹵基、經取代或未經取代之胺基或羥基取代；且所存在之任何芳基、雜芳基、環烷基或雜環烷基自身可經未經取代之Crq烷基、鹵基、未經取代之CrQ烷氧基、未經取代之Ci-C*鹵烷基、未經取代之Ci-C*羥基烷基或未經取代之C!-C4齒烷氧基或羥基取代。為免存疑，術語「經取代之胺基」包括如下文定義之烷基胺基、經取代之烷基胺基、烷基芳基胺基、經取代之烷基芳基胺基、芳基胺基、經取代之芳基胺基、二烷基胺基及經取代之二烧基胺基。 1烷基胺基W系指基團-NHR34，其中烷基。 1經取代之烷基胺基'係指基團-NHR35，其中尺35為Ci-Cs 烷基；且該烷基經函基、經取代或未經取代之胺基、羥基、C3-C10環烷基、4-10員雜環烷基、C6-C10芳基、5-10員 139731.doc •20· 201002716 雜芳基'芳烷基或雜芳烷基取代；且所存在之任何芳基、雜芳基、環烷基或雜環烷基自身可經未經取代之基、鹵基、未經取代之Cl_c4烷氧基、未經取代之鹵烧基、未經取代之Crq羥基烷基或未經取代之(^-(：4鹵烷 :氧基或經基取代。 : ’烧基芳基胺基’係指基團_NR36R37,其中R36為c6_Ci〇芳基且尺37為Cl_c8烷基。 (、 ’經取代之烷基芳基胺基|係指基團-NR38R39，其中R38為 C6_C10芳基且R39為Ci_c8烷基，且該烷基經鹵基、經取代或未經取代之胺基、羥基、c3_CiG環烷基、4_1〇員雜環烷基、Ce-c1()芳基、5_10員雜芳基、芳烷基或雜芳烷基取代’且所存在之任何芳基、雜芳基、環烷基或雜環烷基自身可經未經取代之Cl_C4烷基、_基、氰基、未經取代之 CrC4烷氧基、未經取代之Ci_C4鹵烷基、未經取代之羥基烷基或未經取代之Ci_c4_烷氧基或羥基取代。 Ο 1芳基胺基1意謂基團-NHR40，其中R40係選自如本文所定義之C6-C1()芳基及5_10員雜芳基。 ’經取代之芳基胺基，係指基團_NHR41，其中R4!係獨立地選自C6_C1G芳基及5-10員雜芳基，且所存在之任何芳基或雜芳基自身可經未經取代之Cl_C4烷基、鹵基、氰基、未經取代之(：！-(：4烷氧基、未經取代之Ci_C4鹵烷基、未經取代之c^-c：4羥基烷基或未經取代之Ci_C4鹵烷氧基或羥基取代。 1二烷基胺基’係指基團_NR42r43，其中尺42及尺43各自係獨 139731.doc -21 - 201002716 立地選自CVCs烷基。 ’經取代之二烷基胺基I係指基團-NR44R45，其中R44及R45 各自係獨立地選自C]-C8烷基，且該烷基經鹵基、羥基、 <：3-(：1()環烷基、4-10員雜環烷基、（：6-(：1()芳基、5-10員雜芳基、^烧基或雜芳烧基獨立地取代，且所存在之任何芳基、雜芳基、環烷基或雜環烷基自身可經未經取代之Ci_ C4烷基、鹵基、未經取代之Ci_c4烷氧基、未經取代之Cn 鹵烷基、未經取代之CrC4羥基烷基或未經取代之Cl_c4. 烷氧基或羥基取代。一芳基胺基’係指基團-NR46R47，其中R46及R47各自係獨立地遥自C6-C〗〇芳基。胺基磺醯基」或「磺醯胺」係指基團_S(02)NH2。「經取代之胺基磺醯基」或「經取代之磺醯胺」係指諸如-S(〇2)N(R48)2之基團，其中R48各自係獨立地選自： H G-Cs烷基、C3-C1G環烷基、4_1〇員雜環烷基、c6_ 。。芳基、芳烷基、5]〇員雜芳基及雜芳烷基；或經鹵基或羥基取代之C丨_Cs烷基；或經未經取代之基、_、未絲代之LG烧基、未經取代之Cl-c4㈣基、未經取代之ci_c4經基基或未經取代之Ci-C鴻燒氧基或經基取代叫Cl。烧f、4:10員雜環燒基、c…芳基、芳烧基、5-i0 雜务基或雜芳燒基；其限制條件為至少一個R48不為Η。或•經取代之磺醯胺，基團例示性，經取代之胺基磺醯基 139731.doc -22- 201002716

為-SCOdNCR48’)·^-。烷基、-S(02)N(R48，)-(CH2)t(C6-C1(^ 基）、-S(O2)N(R48’)-(CH2)t(5-10 員雜芳基）、-S(〇2)N(R48，)-(CHWCVCi。環烧基）及 _S(〇2)N(R48’)-(CH2)t(4-10 員雜環炫基）’其中t為0至4之整數；R48’各自獨立地表示H4Cl_C8 烧基’且所存在之任何芳基、雜芳基、環烷基或雜環烷基自身可經未經取代之CrC4烷基、鹵基、未經取代之Cl_c4 烧氧基、未經取代之Ci-C4鹵烧基、未經取代之(^-〇4經基烷基或未經取代之CrC4鹵烷氧基或羥基取代。方烧基或方基烧基’係指經· 一或多個如上定義之芳基取代的如上定義之烷基。特定芳烷基或芳基烷基為經一個芳基取代之烧基。，經取代之芳烷基'或，經取代之芳基烷基，係指經一或多個芳基取代之如上定義之烧基；且所存在之任何芳基中之至少一者自身可經未經取代之Cl_C4烷基、鹵基、氰基、未經取代之（^-〇4烷氧基、未經取代之Ci_c4鹵烷基、未經取代之CrC4羥基烷基或未經取代之Ci_C4_烷氧基或羥基取代。，芳基，係指藉由自母芳環系統之單一碳原子移除一個氫原子而得到之單價芳族烴基。詳言之，芳基係指包括5至 12個環成員、更通常為6至1()個環成員之單環或多環芳環結構。在芳基為單環系統之情況下，其較佳含有6個碳原子。典型芳基包括(但不限於)源自以下各物之基團：乙烯合蒽、乙烯合萘、乙烯合菲、蒽、甘菊環、苯、荔、六苯并苯（coronene)、丙二烯合第、第、稠六苯、己芬 139731.doc -23- 201002716 (hexaphene)、己啉（hexalene)、as-二環戊二烯并苯、s-二環戊一稀并苯、節滿、節、萘、稠八苯（〇ctacene)、辛芬 (octaPhene)、艾氏劑（octalene)、間二蒽嵌四并苯（ovaiene)、戊一烯、并五苯、并環戊二烯（pentalene)、戊芬、苑、丙浠合奈、菲、起、蔔、祐、其（pyranthrene)、祐 (rublcene)、聯伸三苯及聯三萘（trinaphthalene)。特定芳基包括苯基、萘基、茚基及四氫萘基。 '經取代之芳基’係指經本文中關於「經取代」之定義中所列之彼等基團中的一或多個基團取代之芳基，且詳言之係指視情況可經一或多個取代基（例如1至5個取代基，且尤其為1至3個取代基’尤其為i個取代基）取代的芳基。特疋5之’’經取代之芳基’係指經一或多個選自以下各基之基團取代的芳基：鹵基、Ci_c8烷基、Ci_c8鹵烷基、鹵烷氧基、氰基、羥基、（^-(^烷氧基及胺基。代表性經取代之芳基之實例包括以下各基：

在此等式中，R49及r5〇中之一者可為氫且R49及R5〇中之至少一者各自係獨立地選自Ci_C8烷基、4_1〇員雜環烷基、烷4»基、Cl_Cs烷氧基、雜_〇_芳基、烷基胺基、芳基胺基、雜芳基胺基、NR51COR52、NR51SOR52 . nr51so2h52、 COO 烧基、COO 芳基、c〇NR51R52、CONR51〇R52、 NR51R52、S〇2NR、52、s-烧基、s⑽基、s〇2烧基、8芳 139731.doc -24- 201002716 基、SO芳基、s〇2芳基；或R49及r5Q可接合以形成具有5至 8個原子、視情況含有—或多個選自n、〇或s之雜原子的裱（飽和或不飽和）。^^及尺52獨立地為氫、Ci_C8烷基、鹵烷基、（：3_(：10環烷基、4_1〇員雜環烷基、C6_Ci〇芳基、 • 經取代之芳基、5 -1 〇員雜芳基。 ’芳基烷氧基’係指烷基芳基係如本文所定義之_〇_烷基芳基。 Γ '經取代之芳基烷氧基，係指烷基芳基係如本文所定義之0烧基务基，且所存在之任何芳基自身可經未經取代之C丨-C4烷基、鹵基、氰基、未經取代之C1_C4烷氧基、未經取代之^-4齒烷基、未經取代之C1_C4羥基烷基或未經取代之C1-C4鹵烷氧基或羥基取代。 '疊氮基’係指基團_N3。 |胺甲醯基或醯胺基I係指基團_C(⑺NH2。經取代之胺甲醯基或經取代之醯胺基，係指基團_ V C(C))N(r53)2 ’其中R53各自獨立地為 H Cl C8烷基、C3-C1。環烷基、4_10員雜環烷基、c6_ c1G芳基、芳烷基、5_1〇員雜芳基及雜芳烷基；或 •經齒基或羥基取代之匚丨-^烷基；或 •各^經未經取代之CA烧基、ΐ基、未經取代之Cl_C4 烷氧基、未經取代之Ci_C4鹵烷基、未經取代之Ci-q羥基^基或未經取代之Cl-C4_⑨氧基或經基取代的C3_ Cl〇環垸基、4-10員雜環烷基、ce-c1()芳基、芳烷基、5_ 10員雜芳基或雜芳烷基； 139731.doc -25- 201002716 其限制條件為至少一個R53不為Η。例不性'經取代之醯胺基/胺甲醯基，基團為_c(o)nr53，-cv c8 烷基、_c(0)NR53，_(CH2)t(C6_Ci〇芳基）、-c⑴州53._ (CH2)t(5-1()員雜芳基）、部)NR53’_(CH2)t(c3_Ci。環烧基）及-^服”-仰⑽以員雜環炫基卜其^為㈣之整數，^各自獨立地表示Η或Ci_C8^基且所存纟之任何芳土 t准芳基環炫基或雜環垸基自身可經未經取代之匸t · C4烧基、自基、未經取代之Ci_C4烧氧基、未經取代之 C4鹵f基、未經取代之基烧基或未經取代之Ci_C4 鹵炫氧基或羥基取代。 '羧基'係指基團_C(〇)〇H。一衣炫基係&具有3至丨G個碳原子之環狀非芳族烴基。該等環，基包括（例如）諸如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基及環辛基之單環結構。 ’經取代之㈣基|係指經本文中關於「經取代」之定義中所列之彼等基團中的—或多個基團取代之如上^義之環烷基’且评§之係指具有一或多個取代基(例如⑴個取 :基’且尤其為1至3個取代基，尤其^個取代基）的環垸基0 氰基’係指基團_CN。氯基（C1)、溴基（Br)及碘基，鹵基'或素，係指氟基（F)、 ⑴。特定鹵基為氟基或氯基。之基團時意謂化氧或硫之雜原子，雜’在用以說明化合物或化合物上存在合物或基團中之一或多個碳原子已經氮、 13973】 .doc -26- 201002716 置換。雜可應用於任何上述烴基，諸如具有1至5個且尤其為1至3個雜原子之烷基（例如，雜烷基）、環烷基（例如，雜 %烷基）、芳基（例如，雜芳基）、環烯基（例如，雜環烯基）及其類似基團。雜芳基’意謂包括一或多個雜原子及5至12個環成員、更通常為5至1〇個環成員之單環或多環芳環結構。雜芳基可為（例如）五員或六員單環或由稠合五員環與六員環或兩個 ' 稠口 ^員核或（作為另一實例）兩個稠合五員環形成的雙環結構。各環可含有多達四個通常選自氮、硫及氧之雜原子。雜芳環通常將含有至多4個雜原子，更通常為至多3個雜原子，更通常為至多2個雜原子，例如子:在一項實施財，雜芳環含有至少一個環氮原子= 在咪唾或吼咬之狀況下，雜芳環中之氮原子可為驗性的，且^在心朵或料氮之狀況下，基本上為非驗性的。-般而3，存在於雜芳基（包括環之任何胺基取代基）中之鹼性氮原子的數目將少於5個。五員單環雜芳基之實例包括（但不限於)吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、呋吖基、噁基、π比唾括π比咬、- 口生基…惡二唑基、噁三岵其、里過a甘 & .

括π比咬、- 員環與另不限於）ρ米員環與一限於）苯并 139731.doc -27- 201002716 基、異苯并噁唑基、苯并異噁唑基、苯并噻唑基、苯并異嗔唾基、異苯并吱喃基、吲β朵基、異吲哚基、異吲哚酮基、'1引嗓基、吲哚基、異。引哚琳基、嘌吟（例如，腺嘌 α令、烏°票呤）基、°引°坐基、π比唾并°密σ定基、三°坐并°密°定基、苯并間二氧雜環戊烯基及。比唑并吡啶基。含有兩個稠合六員環之雙環雜芳基之特定實例包括（但不限於）喹啉基、異喹琳基、咬基、硫代咬基、咬烯基、異咣烯基、咣基、異咣基、苯并二噁烷基、喹嗪基、苯并噁嗪基、苯并二嗓基、°比咬并°比π定基、啥° 惡σ林基、啥°坐琳基、σ辛琳基、酉太嗓基、峰咬基及蝶σ定基。特定雜芳基為源自°塞吩、°比 »各、苯并嗟吩、苯并吱喃、叫丨β朵、吼咬、啥琳、啼唾、喔唑及。比嗪之彼等雜芳基。具有雜原子且含有取代之代表性芳基之實例包括以下基團：

其中W各自係選自C(R54)2、NR54、Ο及S ;且Υ各自係選自羰基、NR54、Ο及S ;且R54獨立地為氫、Ci-Cg烷基、C3-C10環烷基、4-10員雜環烷基、C6-C1()芳基及5-10員雜芳基。代表性雜芳基之實例包括以下各基： 139731.doc -28· 201002716

其中γ各自係選自羰基、N、nr55 氫、CVC8烷基、C3-C1G環烷基、芳基及5-10員雜芳基。 4-10員雜環烷基、c6_c 10

如本文所用之術語，雜環烷基，係指4_1〇員穩定非環且/或包括與其稍合之含有一或多個獨立選自n、〇及^ 雜原子的環。稠合雜環系統可包括碳環且僅需包括一個： %。雜環之實例包括(但不限於)嗎啉、哌啶(例如，… 基、2-娘咬基、3_派咬基及⑷定基）…比㈣（例如各疋基2比各„定基及3_〇比咯咬基卜吡口各咬嗣、哌娘喃或4H，、二氯售吩、二氣娘喃、二氣咬味、二氯㈣、四虱。夫喃、四氫輕、H四氫㈣（例如，四風哌南基)、咪唑啉、咪唑啶酮、噁唑啉、噻唑啉、2_吡唾琳、、料及ν_錄^秦（諸如w基他實例包括硫喝# @ 1ς _ π π ώ ^ 木其物及S，S-二氧化物(尤其硫嗎 ’、例包括吖丁啶、哌啶酮、哌嗪酮（piperazone) 及N-烷基哌啶（語如 M ®甘〆 ^ 如，N-甲基哌啶）。雜環烷基之特定實例係用以T言兒明性實例來展示·· I39731.doc -29· 201002716

其中W各自係選自CR56、c(R56)2、NR56、〇及S ;且γ各自係選自NR56、〇及s ;且R56獨立地為氫、Cl_c8烷基、c3-C10環烧基、4-10員雜環烷基、C6_Ci()芳基、5_10員雜芳基。此等雜環烷基環視情況可經一或多個選自由以下各基組成之群之基團取代：醯基、醯胺基、醯氧基（-〇-醯基或-〇C(o)r2Q)、烷氧基、烷氧羰基、烷氧羰基胺基燒氧裁基或-NH-C(0)-〇R27)、胺基、經取代之胺基、胺基罗炭基（Si胺基或-C(0)_nr"2)、胺基羰基胺基（_nR"_c(0)_ NR 2)、胺基羰氧基（_〇_C(〇)_nr’’2)、胺基磺醯基、磺醯基胺基、芳基、_〇-芳基、疊氮基、羧基、氰基、環烷基、鹵素、羥基、硝基、硫醇、_s_烧基、_s_芳基、_s(〇)_烷基' -s(〇l·芳基、_s(〇)2_烷基及_s(0)2_芳基。取代基包括羰基或硫羰基，其提供（例如）内醯胺及脲衍生物。 '羥基'係指基團_〇H。 '硝基'係指基團_N〇2。心取代係指一或多個氫原子各自獨立地經相同或不同取代基置換之基團。典型取代基可選自由以下各基組成之 139731.doc -30- 201002716 群：鹵素、_R57、-〇、=0、-OR57、_SR57、_s·、=S、-NR57R58、 =NR57、-CC13、-CF3、-CN、-〇CN、-SCN、-NO、-N02、=N2、 -N3、-S(0)20·、-S(〇)2〇H、-S(0)2R57、_〇s(〇2)〇·、-〇S(0)2R57、 -p(〇)(〇-)2、-p(〇)(〇R57)(〇·)、-op(o)(〇r57)(〇r58)、_c(o)r57、 -C(S)R57、-C(0)〇R57、-C(〇)NR57R58、-C(0)〇-、-C(S)OR57、 -NR59C(0)NR57R58、-NR59C(S)NR57R58、-NR60C(NR59)NR57R58及 -C(NR59)NR57R58 ；其中R57、R58、R59及R6〇各自獨立地為： •氫、CVCs烷基、c6-c10芳基、芳基烷基、c3_Cl()環烷基、4-10員雜環烷基、5-10員雜芳基、雜芳基烷基；或 •經鹵基或羥基取代之匚！-^烷基；或 •經未經取代之C1-C4烷基、鹵基、未經取代之Ci_C4烷氧基、未經取代之Ci-C4鹵烷基、未經取代之Cl_c4羥基烷基或未經取代之C^-C：4鹵烷氧基或羥基取代的c6_Ci〇芳基、5-10員雜芳基、C6_CiQ環烷基或4_1〇員雜環烷基。在一特定實施例中，經取代之基團係經一或多個取代基、尤其1至3個取代基、尤其1個取代基取代。在另一特定實施例中，取代基係選自：鹵基、氰基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、疊氮基、_Nir，s〇2R' -S02NR "R" ^ -C(0)R ' , -C(〇)〇R" . -〇C(0)R'' > -NR-C(0)R" > ⑼NR’k’’_、-NR’k’”、-(CR’’’R’’’)m〇R”’，其中 R"各自係獨立地選自 H、CVC8烧基、芳基）、_(CH2M5 i〇員雜芳基）、-(CH2)t(C3-C1()環烷基）及-(CH2)t(4_1〇員雜環烷基）， 139731.doc •31 · 201002716 其中t為0至4之整數；且 •所存在之任何烷基自身可經！g基或羥基取代；且 •所存在之任何芳基、雜芳基、環烷基或雜環烷基自身可經未經取代之C 1 - C 4烧基、鹵基、未經取代之C丨_ C4烷氧基、未經取代之鹵烧基、未經取代之Cj-C4經基烷基或未經取代之鹵烷氧基或羥基取代。R"各自獨立地表示^或心-匕烷基。 '經取代之硫基’係指基團_SR6!，其中R6!係選自： • (VC8燒基、c3_Cl0環烷基、4_10員雜環烷基、C6_Ci〇芳基、芳烷基、5-10員雜芳基及雜芳烷基；或 •經函基、經取代或未經取代之胺基或羥基取代之CrQ 院基；或 •各自經未經取代之CrC4烧基、鹵基、未經取代之烷氧基、未經取代之Cl_(：4鹵烷基、未經取代之Ci_c4羥基烷基或未經取代之Cl_C4鹵烷氧基或羥基取代的c3_ c10環烷基、4_10員雜環烷基、C6_CiG芳基、芳烷基、5_ 10貝雜^基或雜芳烧基。例不性|經取代之硫基’基團為_S_(C1_C8烷基）及環烷基）、-S-(CH2)t(C6_Ci。芳基）、_s_(CH2)t(5_i〇員雜= 基）、-S-(CH2)t(C3-Cl0環烧基）及 _s (CH2M4_i〇員雜環烧基），其中t為0至4之整數且所存在之任何芳基、雜芳基、環烧基或雜環烧基自身可經未經取代之燒基、函基未紅取代之Cl_c4烧氧基、未經取代之燒基、未I取代之（VQ經基烧基或未經取代之Ci_C4 _院氧基或 139731.doc •32- 201002716 羥基取代。術語'經取代之硫基'包括如下文定義之'烷基硫基•或'烷硫基'、'經取代之烷基硫基'或'經取代之烷硫基'、 '環烷基硫基’或'環烷硫基、'經取代之環烷基硫基'或'經取代之環烷硫基'、'芳基硫基'或1芳硫基'及’雜芳基硫基，或’雜芳硫基'。

'烷硫基W烧基硫基•係指基團-SR62，其中R62為如本文所定義之C! -C8烷基。代表性實例包括（但不限於）甲硫基、乙硫基、丙硫基及丁硫基。，經取代之烷硫基I或，經取代之烷基硫基，係指基團_SR63，其中r63為經i基、經取代或未經取代之胺基或羥基取代之Ci-Cg院基。，環烷硫基1或I環烷基硫基•係指基團_SR64，其中R64為如 t文所定義之c3-c10環烷基。代表性實例包括(但不限於) 環丙硫基、環己硫基及環戊硫基。 =取代之環烧硫基，或，經取代之環烧基硫基，係指基團_ ^ ’其中r65為㈣基、經取代或未經取代之胺基或經基取代的C3_c1()環烷基。團-SR66，其中R66為如本文芳硫基，或，芳基硫基，係指基所定義之cvCl。芳基。雜芳硫基，或，雜芳基硫基，係指甘士 67 本文所玄i 相基團-SR ，其中r67為如所疋義之5-10員雜芳基。係選，經取代之亞績醢基，係指基團_s(〇)R68,其中_ • Ci-C8烷基 c3-c1Q環烷基

Ho員雜環烷基 C6-C10 芳 139731.doc -33- 201002716 基、芳烷基、5-10員雜芳基及雜芳烷基；或 •經_基、經取代或未經取代之胺基或羥基取代之CrCs 烷基；或 •經未經取代之(^-(^4烧基、鹵基、未經取代之Ci-C4烧氧基、未經取代之Ci-C4鹵烷基、未經取代之CrCi羥基烷基或未經取代之Ci-C*鹵烷氧基或羥基取代的c3_Cl〇環烧基、4-10員雜環烷基、c6-C1()芳基、芳烷基、5-10員雜芳基或雜芳烷基。例示性’經取代之亞磺醯基，基團為_s(〇)_(Ci_C8烷基）及-S(〇)-(c3-c10 環烷基）、_s(〇)_(CH2)t(C6-Ci〇芳基）、-S(O)-(CH2)t(5-10 員雜芳基）、_s(〇)_(CH2)t(C3_Ci〇環烧基）及-S(O)-(CH2)t(4-10員雜環烷基），其中t為〇至4之整數且所存在之任何芳基、雜芳基、環烷基或雜環烷基自身可經未經取代之(^-(：4烷基、鹵基、未經取代之Ci_C4烷氧基、未經取代之c^-c：4函烷基、未經取代之Ci_C4羥基烷基或未經取代之Cl-C4_烷氧基或羥基取代。術語經取代之亞磺醯基包括如本文所定義之，院基亞磺醯基，、，經取代之烷基亞磧醯基’、'環烷基亞磺醯基，、，經取代之環烷基亞磺醯基’、’芳基亞磺醯基，及|雜芳基亞磺醯基·。 1烷基亞磺醯基，係指基團_s(〇)R69，其中R69為如本文所定義之Cl_C8烷基。代表性實例包括（但不限於）甲基亞磺醯基、乙基亞磧醯基、丙基亞磺醯基及丁基亞磺醯基。 1經取代之烷基亞磺醯基，係指基團,其中r7〇為經鹵基、經取代或未經取代之胺基或羥基取代的如本文所 139731.doc -34- 201002716 定義之Ci-C8垸基。 :裒烷基亞磺醯基’係指基團-S(〇)R71，其中R、如本文斤疋義之C3 C10%烷基。代表性實例包括（但不限於）環丙基亞基、環己基亞磺醯基及環戊基亞磺醯基。 .經取代之環烷基亞磺醯基，係指基團-S(0)R72,其中R72 為、盈鹵基、經取代或未經取代之胺基或羥基取代之c3_Ci 環烷基。 3 1() 〇，芳基亞磺醯基'係指基團-S(〇)R73，其中R73為如本文所疋義之CpCio芳基。 '雜芳基亞磺醯基'係指基團-S(0)R74，其中R74為如本文所定義之5-10員雜芳基。，經取代之磺醯基，係指基團_S(〇)2R75，其中R75係選自： • Cl-C8烷基、C3-C1()環烷基、4_10員雜環烷基、C6_Ci〇芳基、芳虎基、5-10員雜芳基及雜芳烷基；或 •經i基、經取代或未經取代之胺基或羥基取代之 1/ 烧基；或 •各自經未經取代之Cl_C4烷基、鹵基、未經取代之Ci_C4 烧氧基、未經取代之Cl-c4鹵烷基、未經取代之羥基燒基或未經取代之Cl-c4鹵烷氧基或羥基取代的Cp c10環烧基、4-10員雜環烷基、c6_Cl〇芳基、芳烷基、 10員雜芳基或雜芳烷基。例示性’經取代之磺醯基，基團為_S(0)2_(C〗_C8烷基）及 _S(〇)2-(C3-C10 環烷基）、-S(〇)2-(CH2)t(C6-C10 芳基）、-S(O)2-(CH2)t(5-10 員雜芳基）、_s(O)2-(CH2)t(C3-Cl0 139731.doc -35· 201002716 環烷基）及-S(O)2_(CH2)t(4-10員雜環烷基），其中{為〇至4之整數且所存在之任何芳基、雜芳基、環烷基或雜環烷基自身可經未經取代之Cl-C4烷基、齒基、未經取代之Ci_c4^ 氧基、未經取代之CrQi烷基、未經取代之Cl_c4經基烧基或未經取代iCrC4鹵烷氧基或羥基取代。術語經取代之磺醯基包括烷基磺醯基、經取代之烷基磺醯基、環烷基只酉&基、經取代之環烧基磺醢基、芳基續醯基及雜芳基項酿基。，烷基磺醯基，係指基團_S(〇)2R76，其中R76為如本文所定義之C〗-C8烷基。代表性實例包括（但不限於）甲基磺醯基、乙基磺醯基、丙基磺醯基及丁基磺醯基。 1經取代之烷基磺醯基，係指基團_S(〇)2R77，其中R77為經鹵基I取代或未經取代之胺基或羥基取代的如本文所定義之Ci-Cg烧基。 ,環烷基磺醯基，係指基團_S(0)2R78,其中R78為如本文所定義之C3-C10環烷基。代表性實例包括（但不限於）環丙基石頁醯基、環己基磺醯基及環戊基磺醯基。，經取代之環烷基磺醯基，係指基團_S(0)2R79，其中R79為、’里ώ基、·座取代或未經取代之胺基或經基取代之Q_c丨〇環烷基。 '芳基磺醯基，係指基團_S(〇)2R80 ,其中RS〇為如本文所定義之CfClQ芳基。雜芳基h gm基係指基團_s(〇)2RS1 ,其中r8】為如本文所定義之5-1〇員雜芳基。 139731.doc -36- 201002716 ’石黃酸基'或'橫酸'係指諸如-S03H之基團。 ’經取代之磺酸基'或1續酸酯，係指基團_S(〇)2〇R82，其中 R82係選自： • C丨-C8烷基、C3-C1Q環烷基、4_1〇員雜環烷基、c6_Cl〇芳 •，基、芳烷基、5-10員雜芳基及雜芳烷基；或 •經鹵基、經取代或未經取代之胺基或羥基取代之CrC8 烷基；或 •各自經未經取代之CrC4烷基、鹵基、未經取代之crC4 烷氧基、未經取代之CrC4鹵烷基、未經取代之Cl-C4羥基烷基或未經取代之C〗-C4鹵烷氧基或羥基取代的C3-c10環院基、4-10員雜環烧基、c6-C10芳基、芳烧基、5-10員雜芳基或雜芳烷基。例示性'經取代之磺酸基'或’績酸酯，基團為_s(〇)2_〇_(Ci_ c8烧基）及-8(0)2-0-((^3-(^。環烧基）、-S(〇)2_〇_(CH2)t(c6_ C10 芳基）、-S(O)2-O-(CH2)t(5-10 員雜芳基）、_s(〇)2 〇_ O (CH2)t(C3-C丨〇環烷基）及-S(O)2-CKCH2)t(4-10 員雜環烧基）’其中ί為0至4之整數且所存在之任何芳基、雜芳疾、環烧基或雜環烷基自身可經未經取代之Cl_c4燒臭、自基、未經取代之c「C4烷氧基、未經取代之Cl_C4齒燒果、未經取代之CVC4羥基烧基或未經取代之CrC4豳燒氧尾成羥基取代。 i / '硫醇'係指基團-SH。一般有機合成技術者將認識到穩定、化學上了仃之雜環中之雜原子的最大數目無論該雜環為芳族抑或非芳於、^ 139731.doc -37- 201002716 ^由该％之尺寸、不飽和度及雜原子價數來決定。一般而 t隹袤可具有—至四個雜原子，只要該雜芳環在化學上可行且具穩定性即可。」醫藥學上可接受，意謂已獲或可由美國聯邦或州政府之官理機構或除美國以外之國家的相應機構批准或列於美國藥典或,於動物及更尤其人類之其他一般公認藥典中者。 ,醫藥學上可接受之鹽，係指在醫藥學上可接受且具有母體化合物之所要藥理學活性的本發明化合物之鹽。詳言之，忒寺鹽無毒，可為無機酸或有機酸加成鹽及鹼加成鹽。特定t之，該等鹽包括：⑴與無機酸形成之酸加成鹽，該等無機酸諸如鹽酸、氫演酸、硫酸、輕、石舞酸及八頒似物，或與有機酸形成之酸加成鹽，該等有機酸諸如乙駄丙馱、己酸、環戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、蘋果酸、，頓丁烯二酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、3_(4_經基苯甲酿基）苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、丨，2-乙烷-二磺酸、2-羥基乙烷磺酸、苯磺酸、‘氯苯磺酸、萘磺酸、4-甲苯績酸、樟腦續酸、心甲基雙環[2.2.2]_辛_2_烯_ 1-甲酸、葡糖庚酸、3_苯基丙酸、三甲基乙酸、第三丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、麩胺酸、羥萘甲酸、水楊酸、硬脂酸、黏康酸及其類似物；或⑺當存在於母體化合物中之酸性質子經金屬離子（例如，鹼金屬離子、鹼土金屬離子或鋁離子）置換時所形成的鹽；或當存在於母體化合物中之酸性質子與有機鹼（諸如，乙醇胺、二乙醇胺 139731.doc -38- 201002716 三乙醇胺、N_曱基還原葡糖胺及其類似物）配位時所形成的鹽。鹽進一步包括（僅舉例而言）鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、銨鹽、四烷基銨鹽及其類似物；且當化合物含有鹼性官能基時，包括無毒有機酸或無機酸之鹽，諸如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、乙酸鹽、順丁烯二酸 ^ 草自欠鹽及其類似物。術語「醫藥學上可接受之陽離子」係指酸性官能基之可接受之陽離子抗衡離子。該等陽 Γ 離子例如為鈉、鉀、鈣、鎂、銨、四烷基銨陽離子及其類似物。醫藥學上可接受之媒劑，係指可與本發明之化合物一起投與的稀釋劑、佐劑、賦形劑或載劑。 ’前藥|係指具有可裂解之基團且藉由溶劑分解或在生理條件下變成在活體内具有醫藥學活性之本發明化合物的化合物，包括本發明化合物之衍生物。該等實例包括（但不限於）膽驗®旨衍生物及其類似物、Ν-烧基嗎琳酯及其類似物。 ’溶劑合物，係指通常藉由溶劑分解反應與溶劑締合之化合物的形式。此物理性締合包括氫鍵鍵結。習知溶劑包括水、乙醇、乙酸及其類似物。本發明之化合物可（例如）以結晶形式製備且可溶劑合物或水合物。合適溶劑合物包括 w藥學上可接受之溶劑合物’諸如水合物，且更包括化學計量溶劑合物與非化學計量溶劑合物兩者。在某些情況下’例如當將一或多個溶劑分子併入結晶固體之晶格中時’溶劑合物將能夠分離。，溶劑合物I包含溶液相與可分 139731.doc -39- 201002716 離之/容丨合物。代表性溶劑合物包括水合物、乙醇化物及甲醇化物。 ’個體’包括人類。術語，人類，、，患者，及，個體，在本文中可互換使用。 /α療有效量’意謂當向個體投與以治療疾病時足以實現對"亥疾病之治療的本發明化合物之量。「治療有效量」可視化合物、疾病及其嚴重程度及待治療之個體之年齡、體重等而變化。糸指患得或患上某一疾病或病症之風險降低（亦，在疾病發作之前使疾病之至少一個臨床症狀在可能會蒙於弓丨、亡.士 u X μ、、β . 即 ’，〜丄〆 1叫认叩"I、7止I 口j 暴露於引起疾病之介質或易患該疾病的個體中不顯現）。 /语’預防治療，與，預防I有關，幻系指旨在預防疾病而非 =療或冶癒疾病的措施或程序。預防措施之非限制性實例可包括投與疫苗；向處於血栓塞（例如歸因於固定術 (lmm°bilizati°n))之風險之中的_院患者投與低分子量肝素，及在遊覽癔疾為地方流行病或感染廬疾之風險較高的地㈣域前投與抗癔疾劑，諸如氯扑hi⑽quine)。、⑺療任何疾病或病症在—項實施例中係指改善該疾病 2症（亦即，阻止該疾病或降低其至少―個臨床症狀之改=至程度或嚴重程度）。在另_項實施例中，，治療，係指。乂 —個不可由個體_之身體參數 ::學::r在身體上(例如，使可辨別之症二 =例如’使身體參數穩定)或在兩者上調節广丙症在另-項實施例中，，治㈣指減緩疾病之進展。 139731.doc •40- 201002716 如本文所用之術語，本發明之化合物，及等效表述意謂包含如本文所述之式的化合物，該表述包括該等化合物之醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物以及該等醫藥學上可接受之鹽之溶劑合物，例如水合物（在上下文如此允許之情況下）。類似地’提及中間物，無論是否主張其本身，均意 »月包含其鹽及溶劑合物（在上下文如此允許之情況下）。 Ο

當本文中提及範圍（例如（但不限於）Cl_c8烷基）時，應認為範圍之列舉代表該範圍之每一成員。雖然本發明化合物之其他衍生物呈其酸及酸衍生物形式時具有活性，但呈酸敏感性形式時通常提供溶解性、組織相容性或在哺乳動物生物體體内延遲釋放之優點（參見 Bundgard，H.，Design 〇f prodrugs，第 7_9頁、第 2124頁，

Elsevier’ Amsterdam丨985)。前藥包括此項技術之執業醫生熟知之酸衍生物，諸如藉由母體酸與合適醇反應而製備的酯或藉由母體酸化合物與經取代或未經取代之胺反應而製備的醯胺或酸酐或混合酸酐。源自本發明之化合物上之側位酸基的簡單脂族或芳族_、癒胺及㈣為尤其適用之前藥。在-些狀況下，t要製備雙重醋類前帛，諸如（酿氧基）烧基醋或（(烧氧！t基）氧基）烧基g|。特定之肖等前藥為本發明化合物之说基s旨、C2_C8烯基醋、芳基睹、 CVC!2取代之芳基酯及C7_Ci2芳烷基酯。如本文所用之術語'同位素變體，係指在構成該化合物之一以個原子處含有非天然比例之同位素的化合物。舉例而言’化合物之’同位素變體，可含有—或多個非放射性同 139731.doc 201002716 位素’諸如氛（2H或D)、碳-13(13C)、* , μ 蘇痛达 (C)、虱或其類似。應瞭解在進行該同位素取代之化合物巾，卩下原子 (若存f時）可變化，以便（例如）任何氫可為2細，任何碳 :為C，或任何氣可為且該等原子之存在及位置可在此項技術之技能範圍内確定。同樣，本發明可包括在 (例如)所得化合物可用於藥物及/或受質組織分布研究之产況下製備具有放射性同位素之同位素變體。馨於易於^ 且谓測方式容易，放射性同位音 ]4 耵注口位素矾（亦即，3H)及碳_;u(亦

即’ C)尤其可用於達成此目的。士从 A 丨5 ^此目的此外，可製備經諸如、〇及N之正電子發射同位素取代之化合物且 1 亥等化合物可用於正電子發射斷層攝影法卿)研究以檢查受質受體佔有率。本文中提供之本發明化合物之所有同位素變體（放射性或非放射性）均意欲包含在本發明之範心。亦應瞭解，具有相同分子式但在原子之鍵結性質或順序或原子之空間排列太& > ' 幻方面存在不同的化合物被稱為「異構體」。在原子之空間排刻歹J方面存在不同之異構體被稱體異構體’。彼此不為鏡像之立體異構體被稱為.非對映異構體，且彼 Μ不可重#之鏡像的異構體被稱為，對映異構體•。當化〇物’、有不對私中心時，例如當其與4個不同基團鍵& 時，則可能存在一斜w σ 對對映異構體。對映異構體可由其不對稱中。之、、邑對構型來表禮支，且係以及prel〇g之汉及^定序規則或以为子使偏振光平面旋轉之方式來說明，且被指 139731.doc •42- 201002716 定為右旋或左旋（亦即，分別為（+)或㈠異構體）。對掌性化合物可以個別對映異構體形式或以其混合物形式存在。含有相等比例之對映異構體之混合物被稱為，外消旋異構體，。，互變異構體'係指作為特定化合物結構之可互換形式且 ' 纟氫原子及電子之位移方面存在變化的化合物。因此，兩 : 個結構可經由π電子及原子（通之移動保持平衡。舉例而言，稀醇與酉同為互變異構體，此係因為其可藉由用酸线處理而快速互變。互變異構性之另-實例為苯基石肖基曱烧之酸形式及峭基形式，其同樣可藉由用酸或驗處理來形成。視情況而定，該等互變異構體包含在如本文中所揭示之本發明化合物的範疇内。互變異構形式可與所關注之化合物之最佳化學反應性及生物活性的達成有關。本發明之化合物可具有-或多個不對稱中心；因此此類化合物可以個別（R)或⑻_立冑異構體形式或以其混合物形式產生。除非另外指不，否則說明書及申請專利範圍中之特定化合物的描述或命名意欲包括個別對映異構體與其混合物 (外4旋或其他形式）兩者。用於測定立體化學及分離立體異構體之方法在此項技術中為吾人所熟知。化合物本發明係基於如下發現：MAPKAPK5在引aMMP1表現之途徑中起作用且MAPKAPK5活性抑制劑（諸如’本發明之化σ物）可用於治療涉及MMp活性異常高程度之表現的 139731.doc -43- 201002716 疾病。一般可將本發明之化合物描述為在5位上經芳基或雜芳基取代及在8位上經雜芳基胺基取代的[丨2 4]三唑并吼嗪及咪唑并[l，2-a]吡嗪。 ’ 本發明之化合物可展示較小毒性、良好吸收、良好半衰期、良好溶解性、低蛋白結合親和力、較小互作用及優良代謝穩定性。在—特定態樣中，本發合物展現在藥理學性質方面有意外之明顯的改良，尤其功效及耐受性得到改良。、更特定言之，本發明係關於符合式⑽或之本發明化

(la)

R3 (lb)，其中： W、W，、Y及Y，中不和π工h 赵過兩者可同時為N; X為N或CH ; L係選自單鍵、 ~ C 〇 - -SO-

及-N(R2e)SO 139731.doc -44- 201002716 環p經取代或未經取代：

R1為Η或經取代或未經取代之c〗_c6烧基；

自係獨立地選自Η、經取代或未經取代之炫基、經取代或未經取代之ere：8環烷基、Ci_C6烷氧基、氰基及1¾基， R2c各自係選自只及(^-(：6烧基； R2d為H、C3_CS環烷基或視情況經鹵基或c3_C8環烷基取代之CVCe烧基；ml、m2&m3各自獨立地為1或2 ;且 R3係選自經取代或未經取代之Cl_C6烷基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環烷基、經取代或未經取代之芳基及經取代或未經取代之雜芳基。在一項實施例中’對符合式Ia*Ib之本發明化合物而言，R1為 Η、Me、Et、i-Pr 或 CF3。在一項實施例中’對符合式la或lb之本發明化合物而言，R1為Η。在一項實施例中，對符合式la或lb之本發明化合物而言，L為單鍵、-CO-或-N(R2e)CO-。在一特定實施例中，對符合式I a或I b之本發明化合物而言，L為單鍵。在一項實施例中，對符合式la或lb之本發明化合物而言，R1 為 Me、Et 或 n-Pr 或 i-Pr。 139731.doc -45- 201002716 在另一項實施例中，對符合式la或lb之本發明化合物而言，R1為Η。在一項實施例中，對符合式la或lb之本發明化合物而言’ W、W1、Y及Y'各自獨立地為CR2a。在一項實施例中，對符合式Ia4Ib之本發明化合物而吕，W、W、Y及Y中之一者為N且其餘獨立地為cr23。在一項實施例中，對符合式13或比之本發明化合物而吕，W、W、Y及Y中之兩者為N且其餘獨立地為cR2a。在一特定實施例中，對符合式13或比之本發明化合物而言’ W、W’、Y及Y'各自獨立地為CH。在一項實施例中，對符合式“或几之本發明化合物而言，W、W'及Y各自獨立地為CH ;且Y，為N。在一項實施例中，對符合式:^或化之本發明化合物而言，W及W'各自獨立地為CH ;且Y及Y’各自為N。在一項實施例中’對符合式Ia之本發明化合物而言，化合物符合式Ila、lib、lie或lid :

,,a ， lib , lie 或 lid ，其中X、L及環P如針對式13所定義；Rh各自係獨立地選自Η、經取代或未經取代之CrC6烷基、經取代或未經取代 139731.doc •46· 201002716 之匸广。烷氧基、氰基及鹵基；且R3係獨立地選自經取代或未經取代之芳基及經取代或未經取代之雜芳基；以及其立體異構體、同位素變體及互變異構體。在另一項實施例中’對符合式lb之本發明化合物而言，化合物符合式lie、Ilf或Ilg :

其中L及環P如針對式比所定義；RZa各自係獨立地選自 H、經取代或未經取代之Ci_C6烷基、經取代或未經取代之 CVC6烧氧基 '氰基及_基；且獨立地選自經取代或

未經取代之芳基及經取代或未經取代之雜芳基；以及其立體異構體、同位素變體及互變異構體。在-項實施例中’對符合式Ia_„g中之任一者之本發明化合物而言’ R2a各自為Η。在一項實施例中，對符合式I，中之任-者之本發明化合物而言’Rh各自係選自 CN、OMe及 CF3。之任一者之本發明在一項實施例中，對符合式Ia-IIg中化合物而言，L為單鍵。 139731.doc -47- 201002716 在一項實施例中，對符合式Ia_IIg中之任一者之本發明化合物而吕，L為-CO-或-NHCO-。在一項實施例中，對符合式Ia_IIg中之任一者之本發明化合物而言，環P經取代或未經取代：

且其中R及1111如針對式];3或&所定義。在一項實施例中，對符合式Ia_IIg中之任一者之本發明化合物而言，R2a為Η、未經取代之Cl_C6烷基、未經取代之匚丨-匸6鹵烷基、未經取代之環烷基、未經取代之Ci_C6烷氧基、氰基或鹵基。在另一項實施例中，對符合式Ia_IIg中之任一者之本發明化合物而言，一個R2a係選自Me、Et、pr、丨七、d、 F、CN、OMe及CF3，且其餘為h。在一項實施例中，對符合式Ia_„g中之任—者之本發明化合物而言，W、W1、Y及 γι、X、L、環P、R1、R2a、r2c 及R2d各自描述於任一先前段落中，且R3係選自經未經取代之芳基。 2 在一項實施例中，對符合式Ia_IIg中之任—者之本發明化合物而言，W、W，、Y及 γ，、X、L、環p、Rl、R2a、r2c 及R2d各自描述於任一先前段落中，且R3為視情況經齒基、氰基、未經取代之Cl-c0烷氧基或視情況經未經取代 139731.doc • 48 - 201002716 iCi-C6烷基取代之醯胺基取代的苯基。在另一項實施例中，對符合式Ia_IIg中之任—者之本發明化合物而言’ W、W，、γ及Υ，、X、L、環p、R1、R2a、 R2c&R2d各自描述於任一先前段落中，且R3為視情況經f、 Cl、Br、氰基、OMe、OEt、0«-Pr、Ch:Pr 或視情況經 Me、Et、π-Pr或z_-Pr取代之醯胺基取代的苯基。

在另一項實施例中，對符合式Ia_IIg中之任—者之本發明化合物而言，W、W1、Y及γ，、X、L、環P、R1、R2a、 R2c及R2d各自描述於任一先前段落中，且R3係選自經取代或未經取代之雜芳基。在另一項實施例中，對符合式Ia_IIg中之任一者之本發明化合物而言，W、W，、Y及γ，、X、l、環p、Ri、R2a、尺2。及R2d各自描述於任一先前段落中，且R3係選自苯基、吼啶基、吲哚基、異吲哚基、吼咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、噁唑基及噻哇基，纟中之每一者可未經取代或經羥基、氰基、鹵基或視情况經未經取代之Ci_Cfi烷基取代之醯胺基取代。在另一項貫施例中，對符合式Ia_IIg中之任—者之本發明化合物而言，W、w，、Y及γ，、χ、L、環p、Rl、R2a、尺2(：及112£1各自描述於任一先前段落中，且R3係選自苯基、吼咬基“弓卜朵基、異十朵基、㈣基、β夫喃^吩^ 吡唑基、噁唑基及噻唑基1中之每一者可未經取代：經經基、氰基、F、C卜Br或視情況經Me、Et、”七”七取代之醯胺基取代。 139731.doc -49. 201002716 在一項實施例中，對符合式Ia_IIg中之任一者之本發明化合物而言，W、W，、γ及 Y，、X、L、環 P、R1、R2a、r2c 及R2d各自描述於任—先前段落中，且尺3為 sk, R3b 且A1、A2及A3各自係獨立地選自s、〇 ' N、NR3a及 CR3a ; R3a各自獨立地為H或經取代或未經取代之烷基；且 R3b為 CONH2、CONHMe或 CN。在一項實施例中，對符合式Ia-IIg中之任一者之本發明化合物而言，W、W'、Y及 Y'、X、L、環 p、Rl、R2a、r2c 及R2d各自描述於任一先前段落中，且r3為

在一項實施例中’對符合式Ia-IIg中之任一者之本發明化合物而言，W、W1、Y及 Y，、X、L、環 p、ri、R2a、r2c 及R2d各自描述於任一先前段落中，且R3為

139731.doc -50- 201002716 在一項實施例中，對符合式Ia_IIg中之任一者之本發明化合物而言，W、w，、Y及 γ，、X、L、環P、R1、R2a、r2c 及R各自描述於先前段落中之任一者中，且R3係選自

H2N

〇

在一項實施例中，對符合式Ia-IIg中之任一者之本發明化合物而言，W、W·、Y及 γ,、x、L、環p、Rl、R2a、R2 ‘ 及R d各自描述於任一先前段落中，且R3為 [Th—(R3d)m h2n 入。其中下標m係選自0、！、2、3及4且心各自獨立地為經取代或未經取代之Cl-C6烷基或函基。在一項實施例中，對符合式Ia_IIg中之任一者之本發明化合物而言，W ' W，、γ及 γ，、χ、L、環 P、Rl、R2a、r2c 及R各自描述於任一先前段落中，且R3為 139731.doc

其中下標m係選自〇、}、2、3及4且R3d各自獨立地為經 •51 · 201002716 取代或未經取代之Cl_C6烧基或鹵基。在一項實施例中，對符合式Ia-IIg中之任—者之本發明化合物而言 ’ w、W，、γ及 γ，、X、L、環 p、R丨、R2a、r2c 及R2d各自描述於任一先前段落中，且R3為

其中下標m係選自〇、1、2或3且厌“各自獨立地為經取代或未經取代之Ci_C6烧基或鹵基。在一項實施例中’對符合式Ia-IIg中之任—者之本發明化合物而言 ’ W、W，、γ及 γ’、X、L、環 p、R1、R2a、 R2c、R2d及R3各自如任一先前段落中所述；i或2 ,且 R各自為Me、C1或F。在某些實施例中，對符合式Ia_IIg中之任—者之本發明化合物而言，W ' W，、Y及 γ，、X、L、環 p、R1、R2a、 R 、尺2<1及r3各自如任—先前段落中所述且1^為c丨-c6烷基。在另一項實施例中’ 1133為（：1_(：4烷基。在某些實施例中，對符合式Ia_„g中之任一者之本發明化合物而言，w、W，、γ 及 γ，、X、L、環 p、R1、R2a、 R 、R r3各自如任—先前段落中所述且尺3£1為（^-(^烷基。在另一項實施例中，R3d為Ci_c4烷基。在一項實施例中’ CrC6烷基視情況經一或多個獨立選自以下各基之基團（諸如1至3個取代基、尤其丨個取代基）取 139731.doc -52- 201002716 代·函基、氰基、頌基、三氟甲基、三氟甲氧基、疊氮 & ^ -nr-so2r9._so2nr^r^.C(〇)r9 _c(〇)〇R9^ -OC⑼R9、·ΝΚΜογ、_c(◦輝V。、_取9r1q、_(cr1Qr〜〇r1。且其中m為1至5之整數。 m 在-項實施例中，Rl自係獨立地選自Η、。。烧基、-(CH2)t(C6_Cl〇芳基卜咖⑽”。。雜芳基)、

__2MC3_Cl。環烧基）A_(CH2)t(c”Ci。雜環院基），其中（為〇至4之整數。 —在一項實施例中，各R9如上所述且烧基視情況可經鹵基取代且視情況含有丨或]個選自〇、s&_N(Ri2)_之雜部分，其限制條件為兩個0原子、兩個s原？或一個〇原子與一個S原子彼此不直接連接。在-項實施例中，各R9如上所述且其芳基、雜芳基、環烧基或雜環烧基中之任一者自身可經Μ烧基、齒基、

Ci-q烷氧基、Cl_4南烷基、Ci_C4經基烷基或烧氧基或經基取代。在一項實施例中，各R9如上所述且汉⑺及…〗各自獨立地表示Η或Ci-Ce烷基。在一項實施例中’各R9如上所述且Rl2&R„各自獨立地表示烷基。在一項實施财，R10及R11各自獨立地表示^C1_C6烧基。在一項實施例中，各R9不為Η。在某些實施例中，對符合式Ia-IIg中之任一者之本發明 139731.doc -53- 201002716 化合物而言，氧基；且烷氧基為-OR9 ;且R9如以上實施例中之任一者中所述；其限制條件為R9不為Η。在一項實施例中，對符合式la之本發明化合物而言，化合物符合式Ilia、Illb或nic :

或且X為CH或N ; L為單鍵、-CO-或-NHC〇-;環P為

且尺2(3為Η、C3_CS環院基或視情況經鹵基或C3_CS環烷基取代之C^-Cs烧基。在另一項實施例中，對符合式比之本發明化合物而言，化合物符合式Illd或Ille :

139731.doc -54- 201002716 且X為CH或N; L為單鍵、-CO-或-NHCO-;環p為

且112£1為11、CyC：8環烷基或視情況經鹵基或C3-c8環烧基取代之烷基。在一特定實施例中’對符合式Hla-IIIe中之任一者之本發明化合物而言，L為單鍵。在一項實施例中，對符合式la之本發明化合物而言，化合物符合式IVa、IVb或IVc :

且尺2(1為Η、CVCs環烧基或視情況經鹵基或C3_c8i署产其取代之Cj-Ce烷基。在一項實施例中’對符合式lb之本發明化合物而言，化合物符合式IVd或IVe : 139731.doc -55- 201002716

IVe L 為單鍵、-COj_NHC〇_ ;環且X係如技術方案丨中定義 P為

且 R2t^H、Γ1 isa W « 代w 或視情況經自基或㈣丄符一在項實施例中’對符合式la之本發明化合物而言，合物符合式Va、Vb或Vc: 139731.doc

Va

或 -56 - 201002716 -CO-或-NHCO- 且X為CH或N ; L為單鍵、

且R為H C3 Cs環垸基或視情況經鹵基或c3-c8環烷基取代之Ci_C6烧基。在一項實施例中，對符合式Ib之本發明化合物而言，化合物符合式Vd或Ve :

U 且X為CH或N ; L為單鍵、-CO-或-NHCO-;環p為

且112<3為11、C3-Cs環烷基或視情況經鹵基或（：3-(：8環院基取代之烷基。在一特定實施例中，對符合式Va-Ve中之任一者之本發 139731.doc •57- 201002716 明化合物而言，L為單鍵。在一項實施例中，對符合式la之本發明化合物而言，化合物符合式Via、VIb或Vic :

V|a Vlb 气 Vic 且X為CH或N ; L為單鍵、-CO-或-NHCO-;環P為

且R為Η、C3-Cs環烧基或視情況經鹵基或（^^^環烧基取代之烷基。在—項實施例中，對符合式Ib之本發明化合物而言，化合物付合式VId或Vie :

Vld ， vie 139731.doc • 58 _ 201002716 且X為CH或N; L為單鍵、-匸⑴或_NHc〇-;環p為

且R2d為Η、CrC8環烷基或視情況經鹵基或環烷基取代之烷基。在一特定實施例中’對符合式Via-VIe中之任~者之本發明化合物而言，L為單鍵。在一項實施例中，對符合式Ia-VIe中之任一者之本發明化合物而言，L為單鍵。在一項實施例中，對符合式Ia_VIe中之任一者之本發明化合物而言，L為-CO-。在一項實施例中’對符合式Ia-VIe中之任一者之本發明化合物而言，L為-NHCO-。在一項實施例中，對符合式Ia-VIe中之任一者之本發明化合物而言，112£1為Η、Me、Et、i-Pr、t-Bu、環丙基〒基或 CH2CF3。在一項實施例中，對符合式I-VIe中之任一者之本發明化合物而言，112(1為 Η、Me、i-Pr、t-Bu、CH2CONH2、環丙基曱基或CH2CF3。在一項實施例中，對符合式Ia-VIe中之任一者之本發明化合物而言，R2d為Η。在一項實施例中’對符合式Ia_VIe中之任一者之本發明化合物而言，112(1為i-Pr。 139731.doc -59- 201002716 在一項實施例中，對符合式Ia_VIe中之任化合物而言，在—項實施例中，化合物而言’ R2d為驾在—項實施例中，化合物而言 ° 裱P為對符合式Ia-VIe中之任丙基甲基。對符合式Ia-VIe中之任

在一項實施例中化合物而言對符合式Ia-VIe中之任

在一項實施例中& 化合物而一對符合式Ia-VIe中之任 S，環P為

只w例中，f + $人』τ 、化合物而士對付合式la-、 S，X為 CH。在一項實施例中，&化合物而t對符合式la-' ° X 為 1ST。 '者之本發明 •者之本發明 •者之本發明者之本發明者之本發明者之本發明者之本發明 139731.doc -60 · 201002716 在—項實施例中’對符合式la之本發明化合物而言，化合物係選自表1中所列之化合物。在—項實施例中，對符合式Ia之本發明化合物而言，化合物係選自： α 5-(8-(4-((1 S，4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環[221]庚_2 基）

ϋ 苯基胺基）-[1，2,4]三。坐并[Μ♦比嗓_5_基）異。引㈣小綱' 4-(8-(4-((lS，4S)-5-異丙基 _2,5_二氮二環[2 2^庚 _2_基）苯基胺基）-[1,2,4]三唾并[以冲比嗪_5_基）咳喃曱醯胺； 4-(8-(4-((lS，4R)-5-第三丁基 _2,5—二氮二環[2 21]庚 _2_ 基）苯基胺基）-[1，2,4]三唑并[1,5-a]。比嗪_5_基）呋喃_2_甲醯胺； k 4- (8-(4-((1 S，4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2 21]庚 _2 基）苯基胺基）咪唑并[l，2-ap比嗪_5-基）呋喃_2_曱酸胺；土 5- {8-(4-((1S,4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環[22 七庚^ 基）苯基-胺基）-[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡嗪_5_基}_汨吡唑甲酸醯胺； 4-{8-(4-((lS，4S)-5-第三丁基-2,5-二氮二環[2 21]庚 _2 基）-苯基-胺基）咪唑并[l，2-a]。比嗔-5-基}·咭4 〇土 /太南-2-甲酸醯胺； 4-{8-(6-((lS，4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2 2 丨]庚 _2_基） °比啶-3-基胺基）-[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡嗪_5_基卜呋喃甲酸醯胺； 4-{8-(4-((1S，4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2 2 13庚 _2_基）本基- fee基）味。圭并[l，2-a]e比°秦- 比π定_2_鋼. 139731.doc -61 - 201002716 4-{8-(4-(5-異丙基-2,5 - —氮一玉衣[2*2.2]辛-2-基）苯基胺基）[1，2,4]-三唑并[l，5-a]吡嗪-5-基卜呋喃-2-曱酸醯胺； 4-{8-(4-(5-異丙基-2,5-二氮二環[2.2.2]辛-2-基）苯基胺基）-咪唑并[1,2-a]吡嗪-5-基}-咬喃-2-甲酸醯胺； 4-(8-(4-(3-異丙基-3,8-二氮二環[3.2.1]辛_8_基）苯基胺基）-咪唑并[l，2-a]吡嗪-5-基}-吱喃-2-曱酸醯胺； 4-{8-(4-(8-異丙基-3，8-二氮二環[3.2.1]辛_3_基）苯基胺基）[1，2,4]-三唑并[l，5-a]吡嗪-5-基}-呋喃-2-甲酸醯胺； 4-{8-(4-(3-異丙基-3,8-二氮二環[3.2.1]辛-8-基）苯基胺基）[1,2,4]-三唑并[1，5-&]°比嗪-5_基}-呋喃-2-曱酸醯胺； 4- {8-(4-(8-異丙基-3，8-二氮二環[3.2.1]辛_3-基）苯基胺基）-咪唑并[l，2-a]吡嗪-5-基}_°夫喃-2-甲酸醯胺； 5- {8-(6-((15,48)-5-異丙基-2,5_二氮二環[2.2.1]庚-2-基）吡啶-3-基胺基）-[1，2,4]三唑并H，5-a]吡嗪-5-基}-1仏咣唑-3 -曱酸醯胺； 5-{8-(4-((lS，4S)-5-第三丁基·2,5-二氮二環[2.2.1]庚-2-基）苯基胺基）-[1，2,4]三唑并_[l，5-a]吡嗪_5_基卜2,3_二氫_ 異吲哚-1-酮； 5-{8-(4-((lS，4S)-5-第三丁基-2,5-二氮二環[2·2庚-2_ 基）苯基-胺基）-[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡嗪_5_基}_ih-d比唑-3- 曱酸醯胺；及 5-{8-(6-((lS，4S)-5-異丙基 _2,5-二氮二環[2 21]庚·2_基）吼啶-3-基胺基）-[1,2,4]三唑并[Ha]。比嗪_5基卜2,3_二氫· 異吲哚-1 -酮； 13973l.doc -62· 201002716 以及其立體異構體、同位素式體及互變異構體。在另一項實施例中，對符人 ^之本發明化合物而言，化合物係選自： 4-(8-(3-((lS，4S)-5-異丙基 _25 一 # 一氮二環[2.2.1]庚 _2_ 基）本基胺基）-[1,2,4]三唑并[丨5】 L ’ a]比°秦-5-基）呋喃-2-甲醯胺； 4- (8-(3-((lS，4S)-5-異丙基 _25 —分土弋八―虱二環[2.2.1]庚-2-基）本基胺基）㈣并Π，2·啦嗪I基如·2_甲醢胺； 5- (8-(3-((lS，4S)-5-異丙基 _25 _ 土氮二環[2.2.1]庚-2-基）苯基胺基Hl，2,4]三料基則棒^嗣；以及其立體異構體、同位素變體及互變異構體。在:態樣中’根據本文中描述之任—實施例的本發明化合物係以游離驗形式存在。在心樣中’根據本文中描述之任一實施例的本發明化合物為醫藥學上可無受之鹽。在心樣中’根據本文中描述之任一實施例的本發明化合物為本發明化合物之溶劑合物。在一態樣中’根據本文中描述之任—實施例的本發明化合物為本發明化合物之醫藥學上可接受之鹽的溶劑合物。雖然已大體在上文單獨列出針對各實施例所指定之基團’但本發明之化合物包括其中如上化學式及本文中呈現之其他化學式中之若干或各實施例係選自—或多個針對各代娩分別指定之特定成員或基團之化合物。因&，本發明意欲包括屬於其範_内的該等實施例之所有組合。在某些態樣中，本發明提供符合如上化學式的本發明化 139731.doc -63· 201002716 合物之前藥及衍生物。前 . 則樂為具有可代謝裂解之基團且藉由溶劑分解或在生理條俅件下受成在活體内具有醫藥學活性之本發明化合物的本發明化合物之衍生物。雖然前藥在向個體杈與吩可為惰性的，但其可在活體内轉變為本發明之 =性化合物。如本文所用之「醫藥學上可接受之前藥」係指適用於本發明之化合物之彼等前藥，其在可靠的醫學判斷之範可内，適於與患者組織接觸使用而無不當的毒性、刺激過敏反應，且具有合理之益處/風險比，且可有效用於本發明化合物之所需用途。術語，前藥，意謂可在活體内轉化而產生可用於本發明之有效化合物或其醫藥學上可接文之鹽、水合物或溶劑合物的化合物。該轉化可藉由各種機制（諸如在血液中水解）發生。具有可代謝裂解之基團的化合物具有一項優點’即由於存在可代謝裂解之基團，故母體化合物賦予之溶解性及/或吸收速率增加，因此該等化合物可展現改良之生物可用性，因而該等化合物可充當前藥。完整的討論提供於以下文獻中：Design of Prodrugs, H. Bundgard編輯，Elsevier (1985) ; Methods in Enzymology; K. Widder 等人編輯，Academic Press, 42, 309-396 (1985) ； A Textbook of Drug Design and

Development, Krogsgaard-Larsen 及 H. Bundgard編輯，第5 章；「Design and Applications of Prodrugs」113-191 (1991) ； Advanced Drug Delivery Reviews, H. Bundgard, 8, 1-38, (1992) ； J. Pharm. Sci., 77,285 (1988) ； Chem. Pharm. Bull., N. Nakeya等人，32，692 (1984) ; Pro-drugs as Novel -64- 139731.doc 201002716

Delivery Systems，T. Higuchi 及 V. Stella, 14 A.C.S. Symposium Series及 Bioreversible Carriers in Drug Design, E.B. Roche編輯，American Pharmaceutical Association and

Pergamon Press, 1987，該等參考文獻以引用的方式併入本文中。該等實例包括（但不限於）膽鹼酯衍生物及其類似物、N-烧基嗎琳|旨及其類似物。

雖然本發明化合物之其他衍生物呈其酸及酸衍生物形式時具有活性，但呈酸敏感性形式時通常提供溶解性、組織相容性或在哺乳動物生物體體内延遲釋放之優點（參見

Bundgard，H.，Design of Prodrugs，第 7-9頁、第 21-24 頁，

Elsevier，Amsterdam 1985)。前藥包括習此相關技藝之人士熟知之酸衍生物，諸如藉由母體酸與合適醇反應而製備的酯或藉由母體酸化合物與經取代或未經取代之胺反應而製備的醯胺或酸酐或混合酸酐。源自本發明之化合物上之侧位酸基的簡單脂族或芳族酯、醯胺及酸酐為較佳前藥。在有些狀況下，需要製備雙重酯類前藥，諸如（醯氧基）烷基

酯或（（烷氧羰基）氧基）烷基酯。較佳為本發明化合物之A 至(：8烧基s旨、C2_Cs稀基醋、芳基酿、取代之芳基西旨及C7-C12芳燒基酯。醫藥組合物 ,當用作藥劑時’本發明之化合物通常係以醫藥組合物之形式投與。該等組合物可以醫藥技術中熟知之 A人7-丨、八表備且包含至少一種活性化合物。一般而言’本發明之化合物係以醫筚窗眾予上有效之量投 139731.doc -65 - 201002716 與。實際投與之化合物之量通常將由醫師根據相關情形確定，該等情形包括待治療之病狀、所選投藥途徑、所投與之實際化合物、個別患者之年齡、體重及反應、患者症狀之嚴重程度及其類似情形。本發明之醫藥組合物可藉由包括口服、經直腸、經皮、皮下、靜脈内、肌肉内及經鼻内之各種途徑投與。視所欲傳遞途徑而定，本發明之化合物較佳係調配為可注射或口服之組合物或調配為均用於經皮投藥之藥膏、洗劑或貼經口投與之組合物可採取散裳液體溶液或懸浮液或散裝散劑之形式。然而，更通常地，組合物係以單位劑型呈現以便於精確、給藥。術語「單位劑型」係指適用作用於人類個體及其他哺乳動物之單一劑量之物理離散單位，各單位 =可產生所欲治療效果之觀量之活性物質以及充、預量測之安二二型包括液體組合物之預填制戈射益或在固體組合物之狀況下的丸 I::常:囊或其類似物。在該等組合物中，—酸為有助於形成所要給藥形式之各種麵適於經口投與之液體以及緩衝劑、懸浮劑及=包=水性或非水性媒劑物。固體形式可包括(例如"冑色J 5周味劑及其類似之化合物：黏合劑，諸如彳^何以下成：或具有類似性質 4日日纖維素、黃蓍膠或明膠；賦 139731.doc -66 - 201002716 形劑，諸如澱粉或乳糖；崩解劑，諸如褐藻酸、殿粉經基乙酸鈉（Primogel)或玉米澱粉；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂；助流劑’諸如膠狀二氧化石夕；甜味劑，諸如嚴糖或糖精；或調味劑，諸如胡椒薄荷、水楊酸曱酯或柑橘調味劑。可注射組合物通常係基於可注射無g生理食鹽水或碟酸鹽緩衝生理食鹽水或此項技術中已知之其他可注射載劑。如則所述，該等組合物中之活性化合物通常為少量組份，通常為約0.05至H)重量％，其餘為可注射載劑及其類似物。經皮組合物通常係調配為含有含量一般在約〇〇1至約2〇重量％、較佳約0.1至約20重量％、較佳約〇1至約1〇重量％及更佳約0.5至約15重量％之範圍内的活性成份之局部軟膏或乳嘗。當調配為軟膏時，通常可將活性成份與石蠟或水可混溶之軟膏基質組合。或者，活性成份可與（例如）水包油型乳膏基質一起調配成乳膏。該等經皮調配物在此項技術中係熟知的且一般包括可增強活性成份或調配物之經皮穿透性或穩定性的額外成份^所有該等已知之經皮調配物及成份包括在本發明之範嘴内。本發明之化合物亦可藉由經皮裝置投與。因此，經皮投樂可使用儲庫型或多孔膜型或固體骨架類之貼片來實現。上述用於可經口投與、可注射或可局部投與之組合物的組份僅為代表性的。其他物質以及加工技術及其類似者闡述於 Remington's Pharmaceutical Sciences，第 17 版， 1985, Mack Publishing Company，Easton, Pennsylvania之第 139731.doc •67- 201002716 8部分中，該文獻以引用的方式併入本文中。本發明之化合物亦可以持續釋放形式或用持續釋放藥物傳遞系統投與。關於代表性㈣釋放㈣之描述可見於

Remingtons Pharmaceutical Sciencest = ' 以下調配實例說明可根據本發明製備之代表性醫藥组合物。然而，本發明不受限於以下醫藥組合物。、… 調配物1 -疑劑可將本發明之化合物與乾燥明膠黏合劑以約1之重量比混合為乾燥粉末。添加少量硬脂酸鎂作為潤滑劑。在製錠機中將混合物形成240_270 mg鍵劑（每一鍵劑8〇_ 性醯胺化合物）。 § 調配物2-膠囊可將本發明之化合物與殿粉稀釋劑以約丨：丨之重量比混合為乾燥粉末。將該混合物填充至25〇叫膠囊中(每一：囊125 mg活性醯胺化合物）。 ^ 調配物3-液體可將本發明之化合物（125 mg)與嚴糖〇乃§)及三仙膠（4 :g)混合且將所得混合物摻合’使其通過1〇號筛目之美國師’且接考與先前製備之微晶纖維素及羧甲基纖維素鈉 ⑴划，50 mg)於水中之溶液混合。將苯曱酸納⑽叫）、調味劑及著色劑用水稀釋且在授拌下進行添加。接著可添加足夠的水以產生5 mL之總體積。調配物4-錠劑可將本發明之化合物與乾燥明膠黏合劑以約1:2重量比 I3973I.doc •68· 201002716 混合為乾燥粉末。添加少量硬脂酸鎂作為潤滑劑。在製錠機中將混合物形成450-900 mg錠劑（150-300 mg活性醯胺化合物）。調配物5 -注射液可將本發明之化合物溶解或懸浮於經緩衝之無菌生理食鹽水可注射水性介質中，達約5 mg/mL之濃度。調配物6-局部型可使硬脂醇（250 g)及白石蠟脂（250 g)在約75它下熔融且接著可添加溶於水（約370 g)中之本發明化合物（5〇 g)、對經基苯曱酸曱酯（0.25 g)、對羥基苯甲酸丙酯（〇15 g)、十一烧基硫酸鈉（10 g)及丙二醇（12 0 g)之混合物且攪拌所得混合物直至其凝結。治療方法

本發明之化合物可用作用於治療哺乳動物之與ΜΜρι&/ 或MAPKAPK5之異常活性有因果關係或可歸因於後者之病狀的治療劑。因此’本發明之化合物及其醫藥組合物可用作用於預防及/或治療包括人類之哺乳動物之發炎性疾病的治療劑。因此且如前所述，本發明在其範疇内包括所述治療方法且延及該等治療方法以及用於該等方法中及用於製備可用於該等方法之藥劑的化合物。在治療方法之-態樣中，本發明提供—種治療易感染或已罹患與細胞外基質（ECM)降解相關之病狀、尤其關節产及更尤其類風濕性關節炎的哺乳動物之方法， ' / ，該方法包含投與有效量之一或多種本發明之化合物或如剛才描述之醫 139731.doc -69- 201002716 藥組合物。在：療方法之另一態樣中，本發明提供一種治療易感染 14 之異常細胞表現相關之病狀的哺乳動物法彳方法包含投與治療有效量之本發明之化合物或其醫藥组合物。 ^療=法之另—態樣中，本發明提供—種治療或預防八U吊基質金屬蛋白酶活性之病狀的方法，該方法包 .f金屬蛋白酶之治療有效量的—或多種本發明之化合物或其醫藥組合物。乂治療方法之另—態樣中，本發明提供治療易感染或已症介導或導致炎症之疾病及病症（諸如，類風濕 ^，及骨關節炎、心肌梗塞、各種自體免疫性疾病及二二炎及動脈粥樣硬化；發癢/瘙癢，諸如牛皮及腎臟病症）的嗜f丨叙私1 +七，j_ 之方法，該方法包含投與可 = 狀或預防病狀之量的-或多種本發明之化合物或如剛才描述之醫藥組合物。 =明亦係關於本發明之化合物用於製造酶活化蛋白激=:猎由投與有絲分裂原活化蛋白激特徵劑而預防、改善或消除之病狀或守寸欲為異常膠原蛋白狀或選自涉及發炎之疾;;:病㈣與ECM降解相關之病性關節炎。、倆，病狀’取佳為用於治療類風濕作為本發明之另—能用作特定言之用於治本發明之一種化合物，其 '、或預防上述病狀及疾病之藥劑。本 139731.doc -70. 201002716 文中亦提供本發明之化合物用於盤巾於製造用以治療或預防上述病狀及疾病中之一者之藥劑的用途。在另一態樣中，本發明提供用认π 捉1,、用於預防或治療哺乳動物之與ΜΜΡ1及/或ΜΑΡΚΑΡΚ5之显赍、术丄 /、㊉居性有因果關係或可歸因於後者之病狀的本發明之化合物。口物。坪言之’本發明提供用於治療或預防包括人類之哺乳動铷勿之發炎性疾病的本發明之化合物及/或其醫藥組合物。 η ο 在另一態樣中，本發明提供用认π Μ'用於預防或治療與細胞外基質（ECM)降解相關之病狀、尤复，、關即炎及更尤其類風濕性關節炎的本發明之化合物。在另一態樣中，本發明提供用 , ’、用於預防或治療與MMP1之異常細胞表現相關之病狀的本發明之化人物。在另一‘悲樣中’本發明提供用％ in ’、用於預防或治療特徵為異常基質金屬蛋白酶活性之病狀的本發明之化合物。在另-態樣中，本發明提供用於預防或治療受炎症介導或導致炎症之疾病及病症（諸如，類風濕性節炎、心肌梗塞、各種自體免疫 A及月關 f生疾病及病症、葡萄膜炎及動脈粥樣硬化；發癢/瘙疼，諸如牛皮癣；及腎臟病症的本發明之化合物。 ’ 本發明之方法之較佳方案包含向罹患㈣為細胞外美質，解之疾病病狀的個體投與可有效抑制基質金屬蛋㈣之

1的本發明之化合物，3主@ P 月之化“勿，持續足以降低患者體内細異常程度且較佳使引起該降解之自身延續性過㈣ _段。該方法之一特定實施例包含向羅患類風濕性 139731.doc 201002716 關節炎或易於患上類風濕性關節炎之患者個體投與可有效抑制基質金屬蛋白酶之量的本發明之化合物，持續足以分別降低或防止該患者之關節中之膠原蛋白及骨頭降解且較 4土使引起S亥降解之自身延續性過程終止的時間段。本發明之化合物可展示較小毒性、良好吸收、良好半衰期、良好溶解性、低蛋白結合親和力、較小藥物-藥物相互作用及優良代謝穩定性。在一特定態樣中，本發明之化合物展現在藥理學性質方面有意外之明顯的改良，尤其功效及耐受性得到改良。在化合物展現任一或多個此等改良的情況下，此可對其在本文所述之病狀中的用途具有影響。舉例而言，在化合物展現改良之功效的情況下，可預期化合物可以較低劑量投與，從而可減少任何可能之不當副作用的出現。類似地，在化合物展現增強之耐受性的情况下此可允5午化合物在不引起不必要之副作用的情況下以較高濃度給藥。可預期在功效或耐受性方面之該等改變引起本發明之該等化合物之治療窗得到改良。類似地，上列其他性質之改良亦賦予在化合物之潛在用途方面的優點。注射劑量在約0.1 mg/kg/h至至少10 mg/kg/h之範圍内，均歷時約1至约120小時及尤其24至96小時。亦可投與約 0-1 mg/kg至約10 mg/kg或10 mg/kg以上之預負載大丸劑以實現足夠之穩態量。不期望4〇至8〇 kg人類患者之最大總劑量超過約2公克/天。為預防及/或治療慢性病狀，諸如發炎性及自體免疫性 13973 丨.doc •72· 201002716 病狀’治療方案通常延續多月或多年，且因此，出於患者便利性及耐受性之目的，口服給藥為較佳的。在口服給藥之情況下，每天丨至5次及尤其2至4次及通常3次經口給藥為代表性方案。使用此等給藥模式，各劑量提供約〇〇1至約20 mg/kg之本發明之化合物，其中較佳劑量各自提供約 0.1至約10 mg/kg及尤其約1至約5 mg/kg。經皮劑量一般經選擇以提供與使用注射劑量所實現之血液含量類似或比後者低的血液含量。當用以預防發炎性病狀之發作時，通常將在醫師之建議及監督下以上述之劑量向處於患上該病狀之風險之中的患者投與本發明之化合物。處於患上某—特定病狀之風險: 中的患者-般包括具有該病狀之家族史的患者或已藉由遺傳測試或篩檢鑑別為特別易於患上該病狀的患者。本發明之化合物可作為唯一的活性劑而投與或其可與其他治療劑組合投與，該等其他治療劑包括展示相同或類似之治療活性且經測定對於該組合投藥而言安全及有效的其他化合物。在一特定實施例中，兩種(或更多)藥劑之共同投與允許顯著降低各自要用之劑量，it而減少可見之副作用0 本發明之化合物與用於治療及/或預在一項實施例中 γ及叙人之疾病的另一治療劑共同投與；特定藥劑包括 (但不限於）免疫調節劑’例如硫唾嗓呤（azathi — ne)、皮質颡口醇％石钟醯胺（cyclophosphamide)、環孢菌素蛛一叩〇如A)、阳〇6、黴齡酸醋（Myc〇phen〇late 139731.doc •73· 201002716

Mofetil)、OKT-3及 ATG。在一項貫紅例中’本發明之化合物與用於治療及/或預防k員風/燕性關節乂之另一治療劑共同投與；特定藥劑包括 (但不限於）鎮痛劑、非類固醇消炎藥（NSAIDS)、類固醇、合成DMARDS(例如（但不限於）曱胺喋呤、來氟米特、柳氮石買胺11比°定、金諾芬（auranofin)、金硫丁二鈉（s〇dium aurothiomalate)、青黴胺（peniciUamine)、氯喹、羥氯喹 (hydroxychloroquine)、硫唑嘌呤（azathi〇prine)及環孢素 (ciclosporin))及生物DMARDS(例如（但不限於）英利昔單抗、依那西普、阿達木單抗、利妥昔單抗及阿巴西普）。如可為熟習此項技術者所顯而易見，共同投與包括傳遞兩種或兩種以上治療劑至患者作為同—治療方案之一部分的任何方式。雖然可用單-調配物同時投與兩種或兩種以上藥劑，但此並非必需。該等藥劑可用不同調配物及在不同時間投與。可使用以下通用方法及程序自可容易獲得之起始物質備本發明之三㈣対及㈣H秦化合物。應瞭解除另外說明，否則在給與典型或較佳方法條件（亦即，幻，皿度、時間、反應物之莫耳比率、溶劑、塵力等: 下，亦可使用其他方法條件。雖 " _然最佳反應條件可隨所f 物或溶劑而變，但該等條件可由熟習此項技初者猎由常規最佳化程序確定。 ' 此外’如可為熟習此項技術者所顯而易見，習知保護, I39731.doc -74- 201002716 可為必需的，以防止某些官能基發生不當之反應。選擇適用於特定官能基之保護基以及適用於保護及去保護之條件在此項技術中係熟知的。舉例而言，大量保護基及其引入與移除描述於 T. W. Greene 及 P. G. M. Wuts, Proiec/Mg Grow/?·? ，第 2版，Wiley, New York, 1991及其中引用之參考文獻中。以下詳細地呈現關於已在上文列出之代表性雙環雜芳基之製備的方法。本發明之化合物可由熟習有機合成之技術者自已知或市售之起始物質及試劑製備。除非另外說明，否則所有試劑均為商品級且不經進一步純化而按原樣使用。將市售無水溶劑用於在惰性氛圍下進行之反應。除非另外說明，否則將試劑級溶劑用於所有其他狀況。管柱層析係在梦膠60(3 5-70 μιη)上執行。使用經預塗布之矽膠F-254培養盤（厚度為0.25 mm)進行薄層層析。1H NMR譜係用Bruker DPX 400核磁共振波譜儀（400 MHz)記錄。iH NMR譜之化學位移（δ)係以相對於作為内部參考之四曱基矽烷（δ 0.00)或合適剩餘溶劑峰（亦即， (：11(：13(5 7.27))的百萬分率報導。多重性係以單峰（8)、雙蜂（d)、三重峰⑴、四重岭（q)、多重峰（m)及寬峰（br)給出。搞合常數（J)係以Hz給出。用Micromass platform LC/MS光譜儀獲得電喷MS譜。用於所有LCMS分析之管柱：Waters Acquity UPLC BEH C18 1.7 μηι, 2.1 mm ID><50 mm L(部件號 186002350)。製備型HPLC: Waters XBridge Prep C18 5 μηι ODB 19 mm IDxlOO mm L(部件號 139731.doc -75- 201002716 186002978)。所有方法均使用MeCN/H20梯度。H20含有 0.1% TFA或 0.1% NH3。實驗部分中所用縮寫之列表： DCM 二氯甲烷 DiPEA AUV-二異丙基乙胺 MeCN 乙腈 BOC 第三丁氧羰基 DMF 7V；iV-二甲基曱醯胺 TFA 三氟乙酸 THF 四氫吱喃 NMR 核磁共振 DMSO 二曱亞颯 DPPA 二苯基填酸基疊氮化物 LC-MS 液相層析-質譜術 Ppm 百萬分率 EtOAc 乙酸乙酯 APCI 大氣壓力化學電離 Rt 滯留時間 s 單峰 brs 寬單峰 m 多重峰 d 雙峰 PdC^dppf [1，1'_雙(二苯膦基)二茂鐵]二氣鈀(II) TEA 三乙胺本發明之化合物之合成製備中間物之合成中間物la : 3,6-二溴-吡嗪-2-基胺之製備通用反應流程：

Br

㈧

LiOH, THF MeOH, H2〇

(B) 1. DPPA，t-巳uOH TEA,回流 2. TFA/DCM 4:1

(C) NH2 139731.doc -76- 201002716 步驟1 :如通用反應流程中所述之化合物（B)之合成；3 6_ 二溴比嗓-2-甲酸將LiOH(655 mg，27 mmol)添加至3,6-二溴-吡嗪_2甲酸甲酯（A)(J. Mec/. C/2㈣.1969, 12, 285-87)(2.7 g，9 mmol)於 THF :水：MeOH(18:4.5:4.5 mL)中之溶液中。將反應物在 5 °C下攪拌30 min’在真空中濃縮，溶解於DCM中且以in HC1洗滌。使有機相經無水MgS〇4乾燥且在真空中漢縮以產生化合物（B)。咕 NMR (250 MHz，CDC13) δ (ppm) 8.70 (s，1H)。步驟2 :如通用反應流程中所述之化合物之合成；二溴-a比嗪-2-基胺將二苯基填醯基疊氮化物（2.59 mL，12 mmol)及三乙胺 (1.67 mL，12 mmol)添加至 3,6-二溴-吡嗪-2-曱酸（3.52 g, 12 mmol)於第三丁醇（90 mL)中之溶液中。將反應物在回流下加熱1 8小時。用水使反應中止，接著將反應物在真空中濃縮且溶解於DCM中。將有機溶液以水及！ n NaOH洗滌，經MgS〇4乾燥’且在真空中濃縮。經由二氧化矽墊使用 EtOAc來過濾所得固體，接著濃縮且將TFa:dcm(4:1，12 mL)添加至固體中且攪拌3〇 min。將溶液在真空中濃縮，接著用IN NaOH中和，且用DCM萃取。使有機層經無水 MgSCU乾燥’且在真空中濃縮以產生產物。lH nmr (250 MHz, DMSO-i/d) δ (ppm) 7.25 (br s, 2H), 7.68 (s, 1H) ； m/z (APCI) 254 (M+H)+ ; m.p 135_i39〇c。中間物lb : 3_氯·6·溴-d比嗪-2-基-胺之製備 139731.doc -77- 201002716 或者，可使用3-氯-6-溴吼嗪_2-基-胺代替3,6_二溴_D比嗪 2-基胺且其根據以下流程製備：

步驟1 :如通用反應流程中所述之化合物（A，）之合成；3 6_ 二漠-2-氯。比嘻將1^(：14(2.41 g，12.692 mm〇l，i.oo當量）整份添加至冷卻至〇°C的2-胺基_3,5·二漠π比嗪（3 21 g，i2 692腿〇1)於 DCM(20 mL)中之經充分攪拌的溶液中，從而產生暗紅色漿狀物。接著逐滴添加亞硝酸第三丁酯（2 62 g，25.385 mmol，2_00當量），引起溶液變成亮黃色。接著移除冰浴且接著使反應在室溫下進行。添加更多Ticl4〇.5〇 g, 12當里）且再將混合物擾拌1小時。此刻，形成撥色溶液，且 LC-MS展示起始物質完全轉化成所要產物，該產物極少離子化。將水（100 mL)添加至反應物中，形成乳液。添加 DCM(5 0 mL) ’且分離DCM層，且將水層用dcm(3><50 mL) 進一步萃取直至DCM層無色。將DCM層合併，以鹽水洗滌且經無水NaJO4乾燥，以在溶劑移除後產生呈橙色油狀之化合物Α'(2·8 1 g，82%) ’其按原樣用於以下步驟中。步驟2 .如通用反應流程中所述之化合物（B’）之合成；氯-6-溴。比嗪-2-基胺將先前步驟中所述之化合物Α'(9·5 g，3 7.55 mm〇l)懸浮於濃NH4〇H(60 mL)中且將所得混合物在高壓爸中加熱至 139731.doc -78 - 201002716 80°C ’通常隔夜。接著使容器緩慢冷卻至室溫，且接著在冰浴中進-步冷卻，引起所要物質沈澱。藉由過濾分離固體，用環己烷洗滌，以在乾燥後產生呈區位異構體之 83/17混合物形式的標題化合物Bi(5 g)。接著藉由管柱層析純化該混合物。M+H+, m/z=209。中間物2 : 5,8-二溴-咪唾并[ihap比嗪

將溴代乙醛二乙醇縮乙醛（49 mL，326 mm〇1)及48%氫溴西文加熱至回流，歷時1.5 h，接著傾倒至丙_2_醇（6〇〇 mL)中且用NaHC〇3中止反應。過濾後，將3,6_二溴吡嗪_2_基胺 (41.34 g，163 mmol)添加至溶液中且在回流下加熱隔夜。使反應物冷卻且在真空中移除溶劑，接著添加NaHC〇3水溶液且用EtOAc萃取。使有機相經無水MgS〇4乾燥，過濾且在真空中濃縮以產生棕色固體。ijj NMR (250 MHz, CDC13) δ (ppm) 7.86 (s, 1H)，7.93-7.94 (d，1H), 7.98-7.99 (d，1H) ; w/z (APCI) 278 (M+H)+ ; m.p 132-135。。。中間物3 : 5,8-二溴_[1，2,4]三唑并吡噃通用流程：

Br 139731.doc 79- 201002716

步驟1 : N'-(3,6-二溴-吡嗪-2-基）-N，N-二甲基甲脒（D)

Br

將懸浮於乙醇（150 mL)中的3,6-二溴-吼嗪-2-基胺（15.37 g, 60.80 mmol)與N，N-二曱基甲醯胺二甲基縮醛（10.1 mL， 76.00 mmol)之混合物回流2小時。將反應混合物在真空中蒸發，產生標題化合物。W-NMR (400 MHz，CDC13) δ (ppm) 3.20 (s, 3H), 3.21 (s, 3H), 7.93 (s, 1H), 8.48 (s, 1H)。LCMS : Rt 3.81 min (99.1%), w/z (APCI) 307 (M+H)+。步驟2 : N-(3,6-二溴-吡嗪-2-基）-Ν·-羥基甲肺（E)

OH 向7V’-(3,6-二溴-吡嗪_2_基）_w_二甲基甲脒（18 6 g， 60.80 mmol)於曱醇（200 mL)中之溶液中整份添加鹽酸羥胺 (5-91 g，85 ·12 mmol)。將反應物在室溫下攪拌16小時。蒸發溶劑且將固體殘餘物用冷（冰冷卻）水處理且藉由過濾收 139731.doc -80· 201002716 集。將沈澱用水及石油醚洗滌兩次且在真空中乾燥，產生標題化合物。1h_NMR (400 MHz，DMSO-π) δ (ppm) 7.82 (br s，lH)，8.21 (s，1Η)，8.34 (m，1Η)，11.17 (br s，1Η)。 LCMS : Rt 3.17 min (98.7 %)，m/z (APCI) 295 (M+H)+。步驟3 : 5,8-二溴-[1，2,4]三唑并[l，5-a]吡嗪（F)

將 #-(3,6-二溴-吡嗪-2-基羥基甲脎（17.4 mg，58 8〇 mmol)用多填酸（1 50 g)在50°C下處理1小時且接著在7〇。〇下處理1.75小時。冷卻至室溫後，將水添加至反應混合物中。藉由分小份小心添加固體NaHC〇3，使所得懸浮液達到pH 8。藉由過濾收集所形成之沈澱，以in NaOH洗條1 次，以水洗滌3次且在真空中乾燥。使殘餘物在乙酸乙酯與IN NaOH之間分溶且再將有機相以1N Na〇H洗滌一次且 C) 以鹽水洗滌1次。使有機相經無水MgS〇4乾燥，過濾且蒸發，以產生呈白色固體狀之標題化合物（1015 g)。1h_ NMR (400 MHz，DMSO-必）δ (ppm) 8 43 (s，1H)，8 92 (s， 1H)。LCMS : Rt 2.73 min (94 2 0/〇)，(ApcI) 277 (M+H)+。中間物4 : 5-(4,4,5,5-四甲基jm】二氧硼戊烷_2基二氫-異°引°朵-1 -酮 139731.doc •81- 201002716

步驟1 : 4-溴-2-溴甲基-苯甲酸甲輯

將4->臭-2-甲基-苯甲酸（4_6 g，21.39 mmol)溶於MeOH中之2M HC1中且回流3小時。蒸發溶劑以產生4-溴-2-甲基-苯曱酸曱酯（4.24 g，86%)。將此中間物（18.51 mmol)溶於四氯化碳（100 mL)中且添加ΛΓ-溴代丁二醯亞胺（5.57 g，24.06 mmol)。接著添加AIBN(122 mg, 740 μπιοί)且將混合物用氣淨化5分鐘。接著將反應混合物回流4小時。冷卻至室溫後’過濾反應混合物，且蒸發濾液。藉由急驟層析（石夕膠’ 2·· 1石油醚/乙酸乙酯）純化殘餘物以產生標題化合物 (3.42 g，60%) ° 步驟2 : 5-溴-2,3-二氫-異，哚-1-酮

將4-溴-2-溴曱基-苯曱酸甲酯（0.5 g, 16 2 mm〇1)用曱醇氨（10 mL，於MeOH中之7N NH3)在9(TC下處理5分鐘。冷 139731.doc -82· 201002716 卻至室温後，濾去所形成之沈澱且以少量甲醇洗滌，產生呈無色固體狀之標題化合物（224 mg，65%)。 'H-NMR (400 MHz, OUSO-d6) δ (ppm) 4.41 (s, 2H, CH2), 7.64 (d, 1H, Har), 7.70 (d, 1H, Har), 7.87 (s, 1H, Har), 8.67 (bs，1H, NH)。LCMS 99.6 %，Rt = 2.49 min, m/z 212 (M+H, AP+ 曱酸）。步驟3 : 5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼戊烷-2-基）-2,3-二氫-異°引a朵-1 -酮

將 5-溴-2,3-二氫-異吲哚 _ι_ 酮（23〇 mg，} 〇8 mm〇1)、雙 (頻哪醇根基）二删（3〇〇 mg，】18 麵〇1)、pdci2dppf(25 mg, 31 μηιοί)及 KOAc(320 mg, 3.26 ramol)懸浮於二噁烷（4 mi) 中，以氮淨化5分鐘且接著在85乞下加熱隔夜。在真空中移除溶劑，且使殘餘物在乙酸乙酯與水之間分溶。用乙酸乙S曰萃取水層二次，且將組合之有機相用鹽水洗滌丨次，經由無水MgS〇4m蒸發。將固體殘餘物用己烧濕磨且在真空中乾燥以提供呈灰色固體狀之標題化合物(185 mg， 66%) ° ]H-NMR (400 MHz, CD( 4.45 (s, 2H, CH2), 6.38 7.93 (m, 2H，Har)。 ^ (s, 12H, 4xCH3), 7-87 (d, 1H, Har), CDC13) δ (ppm) 1.37 (s， 5-38 (bs, 1H, NH), 7.87 139731.doc •83- 201002716 中間物5 : 4-(4,4,5，S-四甲基_[1，3,2】二氧硼戊烷_2_基）_呋鳴-2-曱酸酿胺

步驟1 : 4-溴-吱喃_2-曱酸醢胺

將鋅粉（經活化，粉末化（以2M HC1、水、Me〇H、 CH2C12洗〉條）4.54 g，65.39 mmol)分小份添加至4,5-二溴_咳喃-2-甲酸（12.5 g，46.32 mmol)於 NH4OH(1〇〇 mL)中之冷卻 (使用冷水浴）溶液中。將反應混合物在室溫下授拌1 〇分鐘，接著經矽藻土過濾且以水洗滌。將濾液冷卻至_ 1 〇 C (冰/鹽冷）且使用濃鹽酸緩慢酸化至pH 1。將水層立即用乙酸乙酯萃取（4次）。將有機相以鹽水洗滌，經無水 MgS〇4乾燥’過濾且在真空中濃縮以產生油狀物（4 % g)，該油狀物一經靜置即凝固以產生白色固體，該白色固體未經進一步純化而使用。將固體（4.93 g，25.81 mmol)溶於亞硫醯氯（44.2 mL)中且回流1小時。在真空中移除溶劑後，將殘餘物溶於二氯甲烷（75 mL)中且添加0.5 Μ NH3於二噁烷（52 mL)中之溶液。將反應混合物在室溫下攪拌1小時，接著添加33% NH3水 139731.doc -84- 201002716 溶液（5 mL)且再將反應物攪拌2小時。在真空中移除溶劑且將殘餘物用飽和NaHC〇3溶液溶解。使用乙酸乙酯萃取鹼性溶液（3次）’使組合之有機層經無水MgS〇4乾燥且在真空中濃縮。藉由矽膠管柱層析法以（5〇:49:1)乙酸乙酯：石油醚：乙酸之混合物溶離來純化，產生標題化合物（12 g， 22%) 〇步驟2 . 4-(4’4,5,5-四甲基-[1>32]二氧硼戊烷_2_基卜呋喃_ 2 -甲酸酿胺

0 將4-溴-呋喃_2_甲酸醯胺（1·2 g，6 32 mm〇l)、雙（頻哪醇根基）—石朋（1.76 g，6.94 _〇l)、PdCl2dppf(0.154 g，0.189 ()腿。”及 KOAeG.85 §，18.94 mmol)懸浮於二噪烧（2〇 mL) 氣淨化5刀4里且接著在8 5 °C下加熱隔夜。在真空中移示’谷知丨，且使殘餘物在乙酸乙酯與鹽水之間分溶。將水 '層用乙酸乙酯萃取4次，經由無水MgS04過濾且蒸發。將〔□體殘餘物用己烷濕磨且在真空中乾燥以產生呈固體狀之 h題化σ物（〇 984 g，66%)。注意藉由化合物通常為 50-60°/。純。中間物S之替代途徑： 13973】.doc •85· 201002716

將3-(4,4,5,5-四甲基-ny二氧硼戊烷_2_基）_呋喃（5〇 g, 25.77 mmol)溶於無水乙腈（3〇 mL)中。在室溫下將溶於無水乙腈（20 mL)中之氯磺醯異氰酸酯（5 47 g, 38 65 mm〇1， 1 · 5 s里）整份添加至呋喃中，產生粉紅色溶液，沈降隔夜麦百。將所得溶液用冰浴冷卻且添加水（5 mL),引起放熱。使所得混合物在DCM(100 ml)與水（30 ml)之間分溶。再將水層用DCM(50 mL)萃取三次，接著合併有機層，以鹽水（10 mL)洗滌，經無水Na2S〇4乾燥，且最終在真空下移除溶劑。將油狀殘餘物溶於DCM(3 mL)中，超音波處理以產生結晶固體懸浮液。固體藉由過濾分離且濾餅以極少量之DCM、接著乙醚洗滌，且在抽吸下乾燥以產生3层呈白色粉末狀之標題化合物。中間物6 : 2-乙氧基吡啶基_4_酉朋酸頻哪醇酯

將2-乙氧基_4_溴吡啶（2.5 g, 124 mm〇1)、雙頻哪醇根基二硼（3.4 g，13_7 mmol)& 乙酸鉀（3.64 g，37 2〇 mm〇i)溶於 1，4-二噁烷（40 ml)中且用氮脫氣，歷時15分鐘。接著添加 139731.doc -86- 201002716

PdCl2dppf(3 mol%，0.37 mmol，0.3 g)且將混合物在90°C 下在密封容器中加熱16小時。添加水且用EtOAc萃取混合物。將有機物以鹽水洗滌且經無水MgS04乾燥，接著在真空中濃縮。藉由二氧化石夕上之急驟層析（汽油至汽油中1 0〇/〇 EtOAc)純化粗產物以產生呈淺色油狀之2-乙氧基吼0定基_4_ 蝴酸頻哪醇酯（2.5 8 g, 83%)。 NMR δ Η (400 MHz, DMSO-i/5): 8.16 (1H, m); 7.15 (1H, m); 7·11 (1H，s); 4.33 (2H，q); 1.38 (3H，t); 1.34 (12H, s)。中間物 7 : 4-((lS，4S)-5-異丙基 _2,5_ 二氮-二環 Ru]庚·2- 基）-苯胺步驟 1 . ((lS，4S)-5-(4-硝基-苯基）-2,5-二氮-二環[2.2.1]庚烧-2-甲酸第三丁醋

將 4-氟硝基苯基（4.00 g，28.348 mmol)、DiPEA(5.89 mL， 60.667 mmol，2.14當量）及（13,48)_23〇(：_2,5_二氮二環 [2.2.1]庚烷（6·〇2 g，30.333 mmol, 1.07 當量）混合於乙腈（2〇 mL)中。將所得溶液加熱至回流隔夜，接著發生完全轉化將’谷 > 丨在真二下移除，且將固體黃色殘餘物在環己烧 (50 mL)中攪拌〇·25 h，接著使之靜置，棄去上清液，且將該過程重複兩次。在第三次時，制體藉由過濾分離，在抽吸下使之乾燥’以產生呈黃色固體狀之純淨標題化合物 139731.doc -87- 201002716 (8.8 g) 〇步驟2 : (lS，4S)-2- (4-硝基-苯基μ25_

-二環[2.2.1]庚炫

〇2N

將先前步驟中獲得之固體(8.2 g)溶於DCM(12 ‘)與 TFA(】2 mL)之混合物中。使反應在室溫下進行2 h，此刻發生完全去保護。在真空下移除揮發性物fa所得粗固體未經進一步純化而按原樣使用。步驟3 : (1S，4S)-2-異丙基_5·(4_硝基·苯基）_25_二氮_二環 [2.2.1]庚烧

將先前步驟中獲得之粗化合物（622 g，28 356 mm〇i)溶於乙腈（70 mL)中。添加k2C03(19.59 g，141.770 mmol, 5.00當量）’接著添加異丙基碘（9 64 g, 56.708 mmol，2.00 當量）且將所得懸浮液在攪拌下加熱至回流，歷時3 h，此刻發生完全轉化。使反應混合物在DCM( 1 00 ml)與水（5 0 ml)之間分溶。將有機層以水（5〇 mL)、鹽水（25 mL)洗滌，經無水Na2S04乾燥，過濾且在真空中蒸發以產生呈黃色固體狀之標題化合物（9.90 g)。步驟 4 : 4-((1 S，4S)-5-異丙基-2,5-二氮-二環[2.2.1]庚-2- 139731.doc -88 - 201002716 基）-笨胺

將先前步驟中獲得之化合物（3.30 g, 9.35 mmol)溶於 EtOH(107 mL)中。將系統脫氣且置放於氮下。添加pd/c

10%(0.5 0 g，5 mol%) ’ 接著添加水中 35% 之肼（4.3 mL 46.75 mmol, 5當量），且使反應在1〇〇。(：下進行直至發生完全轉化（通常1 h)。接著使反應物冷卻，在矽藻土上過減且在真空中蒸發濾液以產生呈粉紅色油狀之標題化合物（2 〇7 g)。中間物 8 : ((lS，4S)-5-第三丁基-2,5_二氮-二環[2.21]庚-2_ 基）-苯胺步驟1 : (2S，4R)-4-經基-1-(4-硝基·苯基）_ 〇比„各咬_2_曱酸甲醋

將（25W7?)-L-脯胺醇甲酯（4.7 g，25.878 mmol)溶於乙腈 (10 mL)及 DiPEA(13.5 mL，77.635, 3 當量）中。接著將 4-氟确基苯添加至反應混合物中，將其加熱至5(rc隔夜。在真空下移除溶劑後，使撥色油狀殘餘物在DCM(5 0 mL)與 4之水（50 mL)之間分溶。將水層用DCM(4x5〇 mL)進一步 139731.doc •89· 201002716 萃取，使組合之有機層以鹽水洗滌且經無水MgS04乾燥，以產生呈橙色油狀之標題化合物。步驟2 : (3R，5S)-5-羥基甲基-1-(4-硝基-苯基）-吡咯啶-3-醇

將先前步驟中獲得之化合物（6.89 g, 25.878 mmol)溶於丁^^(50 111[)中，且將1^8114(51.756 111111〇1,1.1；3吕，2.00當量）逐份添加至所得溶液中，引起氣泡。使所得混合物在室溫下反應直至發生完全轉化。接著用1M HC1使反應中止，直至pH 7，且使所得溶液在DCM(100 mL)與水（50 mL)之間分溶。接著將水層用DCM(4x50 mL)萃取。將有機層合併，以鹽水洗滌且經無水Na2S04乾燥，以產生呈黃色油狀之標題化合物（3.2 g)，其按原樣用於下一步中。步驟3 : (3R，5S)-3-甲苯磺醯基氧基-5-甲苯磺醯基氧基甲基-1-(4-硝基-苯基）-吼咯。定

將先前步驟中獲得之二醇（6.2 g; 25·878 mmol)溶於吡啶 (31 mL)中，且冷卻至0°C。接著整份添加曱苯磺醯氣（14.8 g, 77.734 mmol, 3當量）且在彼溫度下攪拌混合物，且置放於冷凍機中以備需要時使用。 139731.doc -90- 201002716 步驟4 ·· (lS，4S)-2-第三丁基-5-(4-硝基-苯基）_25_二氮-二環[2.2.1]庚炫

將先前步驟中獲得之二甲苯磺酸化物質（1 g，1.829 mmol)溶於壓力管中之甲苯（3 mL)中，且添加第三丁胺 (0.67 g，9.147 mmol，5當量）’從而產生深酒紅色溶液。將管岔封且加熱至110C隔夜，此刻發生起始物質之完全轉化。使粗混合物冷卻至室溫，且稀釋於DCM(20 mL)中，接著以3 M HCl(2xlO mL)萃取。將酸性水層合併，以 DCM(5 mL)洗滌’接著藉由添加1〇% Na〇H驗化至pH=12- I3。將所得鹼性層用DCM(4x20 mL)萃取，將有機層合併，以鹽水洗滌且經無水Na2S04乾燥，以在移除溶劑及使用DCM/MeOH 96/4作為溶離劑進行二氧化矽層析後產生呈黃色油狀之標題化合物。

步驟5 基）-笨胺

根據針對中間物7步驟4所述之相同程序，製備此化合 139731.doc 201002716 中間物9 : 4-(5-異丙基-2,5- 氮二環[2.2.2]辛-2-基）苯胺 h2n

根據針對中間物7所述之相同程序，使用2,5二氮二環 [2.2.2]辛燒二鹽酸鹽製備此化合物 1974, 11, 449-451)〇中間物10 : 4-(8-里丙其3 s -电 « 1 /、丙基·3,8-一氮二環[3.2.1】辛-3-基）苯胺

η2ν *根據針對中間物7所述之相同程序(第三丁氧基叛基）-3,8-二氮二環[m]辛烷製備此化合物π她义

Chem.，1998, 41，674-681)。中間物11 : 4-(8-異丙基_3,8_二氮二環[321】辛_3基）苯胺步驟1 . 3-(第三丁氧基羰基）_8_異丙基_3,8_二氮二環 [夂2.1]辛焼

向8-(第三丁氧基羰基）_3,8_二氮二環[3·21]辛烷μ CTzem·，7㈣，仏 <57««^)(i_54 g，7.25 mmol)於曱醇（25 mL) 中之溶液中添加乙酸鈉（595.0 mg, 7.25 mmol)、乙酸 139731.doc -92- 201002716 (41 5 μΐ^，7.25 mmol)及丙 _(2.66 mL, 36.25 mmol)。將反應混合物在40°C下攪拌一小時，且接著添加氰基硼氫化鈉 (912.0，14.50 mmol)。將反應物在40°C下加熱18小時，在真空中濃縮，溶解於DCM中且以NaHC03水溶液洗滌。使有機相經無水MgSCU乾燥且在真空中濃縮以產生3_(第三丁氧基羰基）-8-異丙基_3,8_二氮二環[3 2丨]辛烷（1 51 g，82%)。步驟2 ·· 8-異丙基-3,8-二氮二環[3.2.1]辛炫

製備此化合根據針對中間物7步驟2所述之相同程序，步隸3 ·· 8 - -異丙基-3-(4-硝基苯基）_3,8_二氮二環[3.2.1]辛燒

根據針對t間物7步驟3所述之相同之相同程序，製備此化合

二環[3.2]]辛基）苯胺根據針對中間物7步驟4所物。中間物12 : 基）吡啶-3-胺述之相同程序，製備此化合

氮二環[2.2.1]庚-2- 139731.doc •93· 201002716

根據針對中間物7所述之相同程序，使用2-氯_5_硝基°比啶製備此化合物中間物13:3-((18,48)-5-異丙基-2,5-二氮二瓖[2.2.1]庚-2_ 基）苯胺步驟1 : (lS，4S)-2-異丙基-5-(3-硝基苯基）-2,5-二氮二環 [2.2.1]庚垸 e

將 BINAP(0.47 g, 0.75 mmol)及參（二亞节基丙酮）二把 (0)(0.34 g，0.37 mmol)於曱苯（120 mL)中之溶液在15分鐘期間於氮下加熱至90。(：。將反應混合物冷卻至40°C，接著添加 1-溴-3-硝基笨（1 89 g，9.37 mmol)、（lS,4S)-2-異丙基_ 2,5-二氮二環[2.2.1]庚烷二鹽酸鹽（2.0 g，9.37 mmol)及第二丁醇鈉（3.14 g，32.74 mmol)。將反應物在18小時期間於氮下加熱至90°C。回至室溫後，將反應物用乙酸乙酯稀釋且經由矽藻土過濾。在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠上以 DCM/7N NH3於甲醇中之混合物（96/4)溶離的急驟層析純化殘餘物以產生標題化合物（1.92 g，78%)。 139731.doc •94- 201002716 步驟2 苯胺 3-((lS，4S)-5-異丙基 _2,5-二氮

將先前步驟中 EtOH(50 mL)中。獲得之化合物（1.92 g，7.34 mm〇i)溶於將系統脫氣且置放於氮下。添加活性木炭上之Pd(OH)2(10%，0.2 g)且將所得懸浮液在室溫下於氫氛圍下攪拌18小時。揍著在矽藻土上過濾反應物且在真空中洛發濾、液以產生呈棕色油狀之標題化合物（1 89 g， 98%) 〇中間物14 : 2-((1S，4S)-5-異丙基_2,5_二氮·二環【2 21】庚_2_ 基）-嘧啶-5_基胺

以上類型之中間物可藉由DiMaUro等人（j Med. Chem.， 2008, 51，1681-1694)描述之方法產生。2_氯_5_硝基嘧啶與 (lS，4S)-2-BOC-2,5-二氮二環[2.2.1]庚烷進行起始反應，接著應用用於中間物7之程序，產生適於包括在本發明之化合物内的中間物。 -95- 13973l.doc 201002716 中間物15 : (4-胺基-苯基）-((lS，4S)-5-異丙基-2,5-二氮-二環[2.2.1】庚-2-基）-甲酮

以上類型之中間物可使用WO 2007/1 3 8072中描述之方法產生。4-硝基苯曱酸與（18,48)-2-異丙基-2,5-二氮二環 [2.2.1]庚烧進行起始反應，接著還原頌基，產生適於包括在本發明之化合物内的中間物。中間物 16 : (lS，4S)-5-異丙基-2,5-二氮-二環[2.2·l]庚烷-2-甲酸（4-胺基-苯基）_醯胺

以上類型中間物可使用Bioorg. Med Chem Lett, 2008; 4838-4843中描述之方法產生。i_異氰酸酯基-4-硝基苯與 (15,45)-2-異丙基-2,5-二氮二環[2·2.1]庚烷進行起始反應，接著還原硝基，產生適於包括在本發明之化合物内的中間物。本發明化合物之特定實例化合物1:5-{8-[4-((18,48)-5-異丙基-2,5-二氮-二環[2.2.1] 庚-2-基）-苯胺基]-[1，2,4]三吐并[l,5-a】n比"秦-5-基}-2,3 -二氮-異β5Ι嗓_1_網 139731.doc -96- 201002716

p 此化合物可根據與針對化合物2所述相同之程序使用上述相應中間物來製備。 lH NMR (400 MHz, DMSO-^)： δ 9.81 (s, ιΗ)； 8.65 (m, 2H); 8.19 (s, 1H); 8.07-8.05 (m, 1H); 7.93 )s, 1H); 7.82-7.79 (m, 2H); 7.75-7.73 (m, 2H); 6.60 (m, 2H); 4.47 (s, 2H); 4.25 (s, 1H); 3.69 (s, 1H); 3.18 (m, 1H); 2.99 (m, 1H); 2.39-2.36 (m, 2H); 1.80 (s, 2H); 0.93 (d, 6H) ； m/z: M+H+ (481.1； i〇〇%) 〇化合物 2 : 4-{8-[4-((lS，4S)-5-異丙基-2,5-二氮-二環[m] C/ 庚-2-基）-苯胺基】-[1，2,4】三峻并[l，5-a】°比嗓-5-基}-tr夫喃-2- 曱醯胺步驟 1 : (5-溴-[1，2,4]三哇并[1，5-a] °比 σ秦-8-基）-[4-(( 1S，4S)-5-異丙基-2,5-二氮-二環[2.2.1]庚-2-基）-苯基]-鞍

Br 139731.doc -97- 201002716 在氮氣下將5,8-二溴-[1，2,4]三唑并[l,5-a]。比嗪（2·26 g, 8_14 mmol)、4-((lS，4S)-5-異丙基-2,5-二氮-二環[2 2 1；]庚_

2-基）-苯胺（2.07 g, 8.95 mmol, 1_10 當量）及 DiPEA(4.3 mL 24·42 mmol，3.00當量）混合於異丙醇（28 mL)中。將反應物加熱至85 C，直至反應完成（通常5 h)。將溶劑在真空下移除且使殘餘物在60 mL水性磷酸鈉缓衝液（PH 7)與200 mL DCM之間分溶，將有機層以6〇 1TlL飽和NaC丨洗滌，經無水 NaaSCU乾燥’過濾且在真空中蒸發以產生呈綠色-黑色泡沐·固體狀之標題化合物（3.6 7 g)。步驟2 : 4-{8-[4-((lS，4S)-5-異丙基-2,5-二氮-二環[2·2」] 庚-2-基）-苯胺基]-[1，2,4]三。坐并[l，5-a] °比°秦-5-基}_。夫σ南_2_ 甲醯胺

將先前步驟中獲付之化合物（3.25 g, 7.59 mmol)與於1 4_ 二噁烷（51 mL)及水（13 mL)中之 4-(4,4,5,5-四曱基-[1，3,2] 二氧硼戊烷-2-基）-呋喃-2-曱酸醯胺（2.7〇 g, 11.40 mmel， 1.50當量）、PdCl2dppf.DCM(0.310 g，〇·38 mmol, 5 mol0/。）、

DiPEA(2_65 mL，15.20 mmol，2.00 當量;)混合。將系統密 139731.doc •98- 201002716 封，藉由真空/N2淨化且加熱至110。〇，歷時6 h，此刻發生完全轉化。將反應混合物用DCM(60 mL)及MeOH(60 mL) 稀釋且在矽藻土上過濾。蒸發濾液以產生混濁棕色殘餘物。將此殘餘物用 EtOH(50 mL)、MeOH(25 mL)及DCM(20 mL)處理，且蒸發至乾燥’接著再在真空中於4〇〇c下靜置 1 h ’且除去儘可能多之水分及醇。將無水殘餘物懸浮於 DCM(100 mL)中且經超音波處理約1 h，以分散所有固體碎粒。獲得微細固體懸浮液。將其冷卻至，在Buchner 上過渡’且將固體以DCM(30 mL)洗蘇且在真空下乾燥。將殘餘物用1M KOH(40 mL)處理，經超音波處理直至固體充分分散，且在燒結玻璃漏斗上過濾。最終，將固體溶於DCM(450 mL)及MeOH(50 mL)中，以飽和Nap水溶液 (250 mL)、水（500 mL)及iPrOH(250 mL)之混合物洗務。將有機層經無水NasSO4乾燥，過濾且在真空中蒸發以產生呈黃棕色固體狀之4-{8-[4-((13,48)-5-異丙基-2,5-二氮__二環 [2.2.1]庚-2-基）-苯胺基]-[1，2,4]三唑并[1，5-&]。比嗪_5_基}_ 呋喃-2-曱酸醯胺（2.34 g)。 NMR (400 MHz, DMSO-办)：δ 9.76 (s，1 H); 8 74 ， ^ (s, 1 H); 8·69 (d. 1 H); 8·13 (s，1 H); 7·93 (寬單峰，1 h); 7 86 (d，1 H); 7.72 (d，2 H); 7.54 (寬單峰，1 H); 6.59 (d, 2 Η)· 4.31 (d, 1 H (iPrOH)); 4.25 (s, l·1 H); 3.78 (m，！ H (iPrOH)); 3.69 (s，1 H); 3.30 (H20); 3.16 (d(d)，l H); 3 〇〇 (d(d)，1 H); 2.50 (DMSO); 2.42-2.37 (m, 2 H); 1·81 (s 2 H); 1.04 (d, 7 H) (i-PrOH); 0.95 (2 d, 6 H)。 139731.doc -99- 201002716 氡-°4 -5 二環 '基卜化合物 3 : 4-{8-[4-((lS，4S)-S-第三丁基、2，s _ · 1_ [2.2.1】庚-2-基）_苯胺基】-[1，2,4]三唑并[i，5 a】览呋喃-2-甲醯胺

h2n 此化合物可根據與上文針對化合物2所述 j. 用上述相應中間物來製備。斤使 !H NMR (400 MHz, DMSO-^)： δ 9.27 (s, 1Η) 8 7〇 , °· 72 (s, 1Η) 8.68 (d，1Η)，8.11 (s，1Η)，7.91 (寬單峰，1Η)，7 84 (d， 1Η)，7.68 (d，2Η)，7.58 (寬單蜂’114),6_55((1,211),3 40- 3.36 (m, 2H), 2.89-2.80 (m, 4H), 1.72-1.70 (d, 1H), 1.63-1.60 (d，1H)，0.97 (s, 9H) ; m/z: M+H+ (473.1; 100%)。化合物 4 : 4-{8-[4-((lS，4S)-5-異丙基-2,5-二氮-二環[2.2.1] 庚-2-基）-苯基胺基卜咪吐并[l，2-a]"比嗓-5-基}•吱味-2-甲醯胺 139731.doc -100- 201002716

此化合物可根據與針對化合物2所述相應中間物來製備。相同之程序使用上 4 NMR _ MHz，DMS〇，： δ 9 33 (s，ιη)，8 μ ^ 即 8.17 (s, 1H), 7.94 (brs, 1H), 7.75-7.72 (m, 3H), 7.62 (d； 2H)5 7.59 (brs, 1H), 6.58 (d, 2H), 4.24 (s, 1H), 3.69 (s, 1H), 3.32 (d3 1H), 3.15 (d, 1H), 2.98 (d, 1H), 2.43-2.38 (m, 2H), 1.81 (s, 2H), 0.98 (d, 3H), 0.92 (d, 3H) ； m/z: M+H+ (458; 100%) 〇化合物 5 : 5-{8-(4-((lS,4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環丨 2.2.1] 庚-2-基）苯基-胺基）-[1,2,4】三唑并[l，5_al吼嗪_5-基}-1!1^比唑-3-甲醯胺步驟 1 ·· 5-(8-(4-((lS，4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2.2.1]庚_ 2-基）苯胺基）-[1，2,4]三唑并[1,5-a]吼嗪-5-基）-1Η-吡唑-3-曱酸乙醋 139731.doc • 101 · 201002716

將5-(三丁基錫烷基）-1 Η-吡唑-3-甲酸乙酯（109.0 mg， 0.25 mmol)(//e化roc少/e·?, 1992，813-818)、（5-溴-[1，2,4]三 11坐并[1，5-3]11比':7秦-8-基）-[4-((18,48)-5-異丙基-2,5-二氮二環 [2.2_1]庚-2-基）-苯基]胺（163.0 mg, 0.38 mmol)及 Pd(PPh3)2Cl2(27_0 mg, 0.04 mmol)於 THF(3 mL)中之混合物回流1 8小時。回至室溫後，在減壓下移除溶劑。藉由矽膠官柱層析法以DCM/7N NH3於曱醇中之混合物（97/3)溶離來純化殘餘物’產生標題化合物（3 5. 〇 m g，2 8 % j。

苯胺基)-[1,2,4]-三。坐并[l，5-a]吡嗓-5-基卜11{_。比。坐冬甲醯胺步驟2 ··

139731.doc •102· 201002716 將先前步驟中獲得之化合物（30.0 mg，〇〇6 mm〇i)、氯化錢（200 mg)及氯氧化銨（2 mL)於曱醇（12 mL)中之混合物在 8 5°C下加熱18小時。回至室溫後，在減壓下移除溶劑。藉由石夕膠管柱層析法以DCM/7N NH3於曱醇中之混合物（95/5) 溶離來純化殘餘物，產生標題化合物（20.0 mg，71 。 4 NMR (400 MHz, DMSO-办)：δ 14.01 (寬單峰，1H); 9 83 (s，1H); 8.73 (s，1H); 8.23 (s, 1H); 8.14 (寬單峰，1H); H7.75 (m，3H); 7.32 (寬單峰，1H); 6.64-6.62 (m, 2H); 4-65 (s, 1H); 4.35 (s, 1H); 3.21-3.19 (m, lH)； 3.04-3.02 (m, 1H); 2.54 (s, 1H); 2.45-2.41 (m, 2H); 1.84-1.82 (m, 2H); 1.01 (2d，6H) ; m/z: 459 (m+H)+。化合物 6 : 4-{8-(4-((lS，4S)-5-第三丁基 _2,5_ 二氮二環 [2.2.1】庚-2-基）-苯基-胺基）咪嗤并[i，2_a】D比嗓_5_基卜呋喃_ 2-曱醯胺

此化合物可根據與針對化合物2所述相同之程序使用上述相應中間物來製備。 NMR (400 MHz, DMSO-^): δ 9.33 (s> 1Η); 8 46 (s? 139731.doc •103- 201002716 1H); 8.11 (s，1H); 7.99 (寬單峰，1H); 7.72-7.70 (m, 3H); 7.62-7.59 (m, 3H); 6.56-6.54 (m, 2H); 4.28 (s, 1H); 4.67 (s, 1H); 3.91-3.76 (m, 4H); 1.73 (d, 1H); 1.65 (d, 1H); 0.98 (s, 9H) ; m/z: 472 (M+H)+。化合物 7 : 4-{8-(6-((lS，4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環丨2.2.1】庚-2-基）"比咬-3-基胺基）-[1，2,4】三唑并[l，5-a】"比嗓-5-基}-咬喃-2-甲酿胺

此化合物可根據與針對化合物2所述相同之程序使用上述相應中間物來製備。 H NMR (400 MHz MHz, DMSO-^<5): δ 9.94 (s, 1H); 8.80 (s，

(d, 1H); 2.51-2.48 (m, 1H); 2.39 (d, 1H); j 86_1-83 (m, 2H); 0.98 (2d, 6H) ; m/z: 460 (M+H)+ 〇化合物 8 : 4-{8-(4-((lS，4S)-5-異丙基·2，&:氮二環[Hi】庚-2-基）苯基-胺基）咪唾并[i，2-a]»比嗪_5_基}_111吼咬_2_酮 139731.doc •104- 201002716 步驟1:5-(2-乙氧基吼。定-4-基）—N_(4_((1s，4S)_5_ 異丙基 _2 5_ & [ i]庚-2-基）苯基）咪。坐并[1，2-α] σ比嗓_8_胺

ΗΝ

此化合物可根據與針對化合物2所述相同之程序使用上述相應中間物來製備。步驟2 ·· 4♦㈣1S，4S)_5_異丙基_25二氮二環口 2⑴庚― 2-基）苯胺基）咪唑并_[12·α] Β比嗓·％基卜ih吼啶^-嗣

將先前步驟中獲得之化合物（135〇 mg，〇.29随〇1)與鹽酸吡啶（332.0 mg，2.90 mmol)之混合物加熱至丨⑼它，歷時 18小時。回至室錢，將粗物質溶於曱醇中，乾燥負載至二氧化矽上。藉由矽膠管柱層析法以DCM/7N ΝΑ於〒醇 139731.doc •105- 201002716 中之混合物（96/4)溶離來純化，產生標題化合物（46 〇 3 6%) ° 咕 NMR (400 MHz，CDC13): δ 12.51 (寬單峰，1H); 8 〇〇 (s lH);7.82(s，lH);7.64-7.59 (m，4H);7.50-7.48 (m,lH). 6.86 (s, 1H); 6.60-6.59 (m, 2H); 6.55-6.53 (m, 1H); 4.20 (s 1H); 3.81 (s, 1H); 3.49-3.41 (m, 2H); 3.21-3.18 (m, iH)； 2.51-2.49 9m, 2H); 2.05-2.03 (m, 1H); 1.97-1.95 (m, 1H); 1.07 (d, 3H); 1.02 (d, 3H) ; m/z: 442 (M+H)+。化合物9:4-{8-(4-(5-異丙基-2,5-二氮二環[2.2.2]辛-2-基）苯胺基）[1，2,4]-三嗤并丨1，5-8]»比°秦-5-基}-吱味甲醯胺

此化合物係根據與針對化合物2所述相同之程序使用上述相應中間物來製備。 NMR (400 MHz, DMSO-州：δ 9.80 (s, ih); 8.78 (s 1H); 8.73 (s，1H); 8·17 (s, 1H); 7.98 (寬單峰，m); 7 89 (s, 1H); 7.76 (d，2H); 7.59 (寬單峰，1^1);6.68(4 211);3.92-3.91 (m，1H); 3.58 (d，1H); 3.22-3.19 (m，2H); 2.96-2.94 (m，2H); 2.71-2.68 (m, 1H); 1.94-1.76 (m, 3H); 1.60-1.59 139731.doc -106- 201002716 (m, 1H); 1.04 (2d, 6H) ； m/z: 473 (M+H)+ 〇化合物10 : 4-{8_(4_(5_異丙基_2,5_二氮二環[2 2 2】辛_2基）苯胺基）-咪唑并[l，2-a]吡嗪_5_基卜呋喃_2_甲醯胺

h2n 此化合物係根據與針對化合物2所述相同之程序使用述相應中間物來製備。 ]H NMR (400 MHz, DMSO-J(5): δ 9.23 (s, ιΗ)· 8 38 1H); 8.02 (s，1H); 7.86 (寬單峰，1H); 7·68_7 64 (m 3h)S’ 7.55-7.52 (m，2H); 7.47 (寬單峰，1H); 6.59 ’ 、u，化）；3.79 (s, 1H); 3.48-3.45 (m, 1H); 3.11-3.08 (m, 2H); 2.84-2 82 (m，2H); 2.59-2.57 (m，1H); 1.83-1.74 (m，3H); l 6 i. 6 5 (m，1H); 0.94 (2d, 6H) ; m/z: 472 (M+H)+ 〇化合物11 : 4-{8-(4-(3-異丙基-3,8-二氮二環【3.2辛_8美）苯胺基）-咪唑并[l，2-a]吨嗪-5-基}-呋喃-2-甲酿胺 139731.doc •107· 201002716

此化合物係根據與針對化合物2所述相同之程序使用上述相應中間物來製備。 ]H NMR (400 MHz, DMSO-^): δ 9.29 (s, 1H)； 8.38 (s, 1H); 8_03 (s，1H); 7_86 (寬單峰，1H); 7 72 (d, 2H); 7 69 (S，1H); 7,55 (s，lH); 7·54 (s，1H); 7·47 (寬單峰，m); 6 73 (d, 2H); 4.13-4.11 (m, 2H); 2.47-2.36 (m, 5H); 1.78-1.73 (m，4H); 0.84 (2d，6H) ; m/z: 472 (M+H)+。化合物 12 : 4-{8-(4-(8-異丙基-3,8-二氮二環基）苯胺基）[1，2,4】-三嗤并[以-中比嗪_5基卜夫味_2甲醯胺

此化合物係根據與針對化合物2所述相同之程序使用上 139731.doc -108- 201002716 述相應中間物來製備。 'H NMR (400 MHz, DMSO-c?d): δ 9.79 (s, 1H)； g 69 (s 1H); 8.64 (s，1H); 8.09 (s，1H); 7.93-7.91 (寬單峰，出)· 7.71 (s，1H); 7.69 (d，2H); 7.53-7.51 (寬單峰，674 (d, 2H); 4.07-4.04 (m5 1H); 3.51-5.48 (m, 2H); 3.1〇.3.〇9 (m, 2H); 2.77-2.75 (m, 2H); 1.76-1.74 (m, 2H); 1.59-1.57 (m, 2H); 0.96 (2d，6H) ; m/z: 473 (M+H)+。化合物 13 : 4-{8-(4-(3-異丙基-3,8-二氮二環[3.2.1]辛_8•基）苯胺基）[1，2,4]-三唑并[i，5_a】吡嗪_5_基卜呋喃_2_甲醯胺

h2n 此化合物係根據與針對化合物2所述相同之程序使用上述相應中間物來製備。 Ή NMR (400 MHz, DMSO-^): δ 9.84 (s, 1H); 8.76 (d, 2H); 8.19 (s，1H); 7.99 (寬單峰，1H); 7.90 (s, 1H); 779 (d, 2H); 7.59 (寬單峰，1H); 6.86 (d，2H); 4.22-4.25 (m, 2H); 2.56-2.47 (m, 5H)； 1.89-1.84 (m, 4H); 0.95 (2d, 6H)； m/z: 473 (M+H)+。 139731.doc •109- 201002716 化合物14 : 4-(8-(4-(8-異丙基-3,8-二氮二環[3.21】辛_3基）苯胺基）-咪嗤并[l，2-a】《tb嗓-5-基}-吱味-2-甲酿胺

h2n 此化合物係根據與針對化合物2所述相同之程序使用述相應中間物來製備。】H NMR (400 MHz，DMSO-cM): δ 9.42 (s, 1H); 8.47 (s j 8.11 (s, 1H); 7.96 (寬單峰，1H); 7.81-7.79 (m，2Η). 7 ’ (s，1H); 7.63-7.61 (m, 2H); 7.57 (寬單峰，1H); 6 8〇6 78 (m, 2H); 3.55-3.53 (m, 2H); 3.34-3.31 (m, 2H); 2 83 2 80 (m, 2H); 2.53-2.51 (m, 1H); 1.82-1.81 (m, 2H)； 1 66 1 54 (m，2H); 1.04 (2d, 6H) ; m/z: 472 (M+H)+。化合物15:5-{8-(6-((18,48)-5-異丙基-2,5-二氮二環[221】庚-2 -基）咕咬-3-基胺基）-[1，2,4】三唾并[l，5-a] π比嗓基} 1H-吡唑-3-甲酸醯胺 139731.doc -110- 201002716

此化合物係根據與針對化合物2所述相同之程序使用上述相應中間物來製備。 ]H NMR (400 MHz，DMSO-tM): δ 14.04 (寬單峰，1H); 10.06 (s, 1H); 8.79 (s, 1H); 8.68 (s, 1H); 8.22 (s, 1H); 8.04-8.02 (m, 2H); 7.74 (寬單峰，1H); 7.69 (寬單峰，1H); 6.59-6.57 (m, 1H); 4.58 (s, 1H); 3.76 (s, 1H); 3.49-3.42 (m, 1H); 3.35-3.31 (m, 1H); 3.08-3.06 (m, 1H); 2.49-2.42 (m, 2H); 1.84-1.83 (m, 2H); 0.98 (d, 3H); 0.79 (d, 3H) ； m/z: 460 (M+H)+。 O 化合物 16 : 5-{8-(4-((lS,4S)-5-第三丁基-2,5-二氮二環 [2.2.1]庚-2-基）苯胺基）-[1，2,4】三唑并-[1，5-3】啦嗪-5-基}-2,3-二氫-異吲哚-1-酮

139731.doc -111 - 201002716 此化合物係根據與針對化合物2所述相同之紅序使用上述相應中間物來製備。 NMR (400 MHz，CDC13): δ 8.38 (s, 1H); 8_09 (s，1H); 8.02-7.95 (m，2H); 7.84 (s, 1H); 7.73 Ο, 1H); 7·52 (d，2H); 6.62 (d，2H); 6.25 (寬單峰，ih); 4.56 (s，2H); 4.27 (s， 1H); 3.71 (S, 1H); 3.50-3.48 (m, 1H)； 3.15-3.10 (m, 2H); 2.88-2.86 (m, 1H); 1.83-1.81 (m, 2H)； l·05 (s, 9H) ； m/z: 495 (M+H)+。化合物 17 : 5-{8-(4-((lS，4S)-5-第三丁基-2,5-二氮二環 [2.2.1]庚-2-基）苯基-胺基）三唑并[154】B比嗪_5_ 基}-111-»比唾-3-甲酸酿胺

HI 同之程序使用上此化合物係根據與針對化合物2所述相同之述相應中間物來製備。，1H); 9.70 1H); 7.65 (寬單峰，】抝; JH); 6.51-6.49 (m, 2H); 35 (m, 1H)； 2.83-2.77 (m, NMR (400 MHz，DMSO-办)：δ 13 82 (寬單峰 (s，1H); 8.66 (s，1H); 8.11 (s，lfi); 7 65 (寬 7.65-7.62 (m，3H); 7.37 (寬單峰，1H); 6 516 ‘ 4.24 (s, 1H); 3.62 (s, 1H); 3.36-3.35 (m, 1H). 2 13973】.doc •112· 201002716 3H); 1.64-1.57 (m，2H); 0.92 (s, 9H) ; m/z: 473 (M+H)+。化合物18:5-{8-(6-((18,48)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2.2.1] 庚-2-基）。比啶-3-基胺基）-[1，2,4】三唑并[l，5-ap比嗪-5-基}-2，3-二風-異β引嗓-1-嗣

此化合物係根據與針對化合物2所述相同之程序使用上述相應中間物來製備。 !H NMR (400 MHz, DMSO-i/6): δ 9.89 (s, 1H); 8.61 (s, 1H); 8·59 (寬單峰，1H); 8.49-8.47 (m, 1H); 8.11 (s, 1H); U 7.99-7.95 (m, 2H); 7.85 (s, 1H); 7.74-7.72 (m, 1H); 6.49-6.47 (m, 1H); 4.48 (s, 1H); 4.41 (s, 2H); 3.65 (s, 1H); 3.41-3.39 (m, 1H); 3.20-3.18 (m, 1H); 2.97-2.95 (m, 1H); 2.40-2.38 (m, 1H); 2.28-2.26 (m, 1H); 1.74-1.72 (m, 2H); 0.93 ' (d, 3H); 0.86 (d，3H) ; m/z: 482 (M+H)+。化合物 24 : 4-(8-(3-((1 心4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2.2.1] 庚-2-基）苯胺基）-[1，2,4]三唑并[1，5-α]π比嗪-5-基）呋喃-2-曱醯胺 139731.doc -113- 201002716

同之程序使用上此化合物係根據與針對化合物2所述相述相應中間物來製備。 8.72 (s，1H)， (s, 1H), 7.51 1H), 6.27 (d, 3.16 (d，1H)， °-92 (d, 3H), *H NMR δ (400 MHz, DMSO-d6): 9.71 (s, lH) 8.65 (s，1H)，8.17 (s，1H), 7.92 (brs，1H), 7 73 (brs, 1H), 7.32 (d, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.〇8 (m 1H)，4.18 (s，1H), 3.62 (s, 1H), 3.24 (d, lH) 2.98 (d，1H), 2.44-2.39 (m, 2H)，1.76 (s， 0.89 (d，3H)。 ’ 氮二環丨2.2.lj -2-甲醯胺化合物 2S : 4-(8-(3-((lS,4S)-5-異丙基 _2，S、二庚-2-基）苯胺基）咪唑并[u-a】吼嗪_5_基）咳喃

尸㈣相同之程序使用上此化合物係根據與針對述相應中間物來製備。

'H NMR δ (400 MHz, DMSO-d6)· Q 3 (s，1H), 8 42 (s 1H)，8.07 (s，1H)，7.87 (brs，1H)，7.69 (s ’ V 5 7.61 (S, 1H) 7.58 (s, 1H), 7.48 (brs, 1H), 7.38 (m , ’ ’ H)，7.21 (s, 1H), 139731.doc -114- 201002716 7.02 (t，1H)，6.21 (d，1H)，4.15 (s，1H)，3.64 (s，1H), 3.32 (d, 1H), 3.14 (d, 1H), 2.95 (d, 1H), 2.36-2.32 (m, 2H), 1.75 (s，2H), 0.92 (d，3H)，0.85 (d，3H)。化合物 26 : 5-(8-(3-((lS，4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2.2.1] 庚-2-基）苯胺基）-[i，2,4]三唑并"jj】吡嗪_5_基）異吲哚咻_ 1-酮

此化合物係根據與上文針對化合物2所述相同之程序使用上述相應中間物來製備。 !H NMR δ (400 MHz, DMSO-d6): 9.87 (s, 1H), 8.71 (m, 2H); 8.24 (m, 1H), 8.12 (m, 1H), 8.01 (m, 1H), 7.81 (m, 1H), 7.43 (m, 1H), 7.24 (m, 1H), 7.12 (m, 1H), 6.37 (m, 1H); 4.50 (s, 2H); 4.25 (s, 1H); 3.74 (s, 1H); 3.44 (m, 1H), 3.21 (m, 1H); 3.03 (m, 1H); 2.43-2.46 (m, 2H); 1.85 (s, 2H); 0.96 (d, 6H)。純化條件及表徵按照常規’合成後之所有化合物可使用逆相hplc使用

Gilson製備型 HPLC 系統（322泵，155 UV/VIS债測器，215 液體處理機）純化。Gilson 2 1 5充當自動採樣器及溶離份收 139731.doc -115· 201002716 集器。化合物亦可藉由矽膠急驟層析法來純化。藉由質譜分析法使用具有電噴霧源之單四極測試儀來表徵化合物。生物實例實例1 : MAPKAP-K5檢定以 FlashPlate格式使用 0.1 或 0.2 pCi 33P-ATP、0_6 μΜ ATP、1 mU ΜΑΡΚΑΡ-Κ5、3 μΜ ΜΑΡΚΑΡ-Κ5肽受質（已在室溫下培育30分鐘）來執行ΜΑΡΚΑΡ-Κ5反應。

FlashPlate檢定：在 384 孔聚丙烯盤（Matrix Technologies)中進行 MAPKAP-K5激酶反應，且接著轉移至塗布抗生蛋白鏈菌素之384孔 Flashplate(Perkin-Elmer)中。使用 Hydra(Robbins Scientific) 將1 3 μί酶混合物或稀釋劑添加至含有2 μΕ測試化合物或標準抑制劑之孔中。藉由使用 Multidrop(Thermo-Labsystems) 添加10 pL [2.5χ]受質混合物使反應開始，以得到以下各物在檢定中之最終濃度： 1 mU MAPKAP-K5 ； 3 μΜ MAPKAP-K5肽受質； 0.6 μΜ ATP ； 0.004 μα [33Ρ]-γ-ΑΤΡ/μί ； 1 χ反應緩衝液。將培養盤在室溫下培育30分鐘。藉由使用Micro-fill(Biotek)將25 μί EDTA(50 mM)添加至各孔中來使反應終止。使用Zymark機器人系統將反應物轉移至塗布抗生蛋 139731.doc •116· 201002716 白鏈菌素之Flashplate中。將培養盤在室溫下培育60分鐘。使用Tecan盤式洗滌機將所有孔用100 μΐ磷酸鹽緩衝生理食鹽水洗務3次。藉由用Packard TopCount對Flashplate(空孔）閃爍計數來測定放射性。酶混合物：酶 50 mM Tris HCl(pH 7.5)

0.1 mM EGTA r 2 mM DTT 1 mg/mL BSA 反應缓衝液： 50 mM Tris HC1 (pH 7.5)

0.1 mM EGTA 1 0 mM乙酸鎂

2 mM DTT ^ 實例2.用於鑑別活化之初級滑膜纖維母細胞之MMP1表現之調節劑之檢定法的研發為鑑別出可降低細胞之ECM降解活性之化合物，可誘發細胞之ECM降解活性，以便適當偵測此活性且達成更清楚之讀數。在RA之情況下，所選細胞為哺乳動物滑膜織維母細胞，且可用以誘發ECM降解活性之觸發物為與關節炎領域相關之細胞素：例如TNF-α、ILip、IL6、OSM、IL17 及MIF1 -ct。此列舉並不全面，因為在RA發病機理中可能涉及極多的細胞素（Smolen及Steiner, 2003)。為建立一種 139731.doc -117- 201002716 儘可能地接近該病理之複雜性的活體外檢定，所應用之觸發物應為藉由使與關節炎領域相關之產生細胞素之細胞 (諸如’单核細胞、巨嗟細胞、τ細胞及b細胞）與觸發物接觸而產生的因子之混合物。產生細胞素之細胞將藉由產生因子之複4且無偏差之混合物而對該接觸起反應。若亦在血管翳中發現所用之產生細胞素之細胞且在類風濕性關節炎患者之滑液中發現用於產生此觸發物之細胞素，則最終產生之因子混合物將含有存在於關節炎患者之關節中之因子的一部分。 ’ΜΜΡ檢定’之原理基質金屬蛋白酶（ΜΜΡ)具有各種生理學作用，如（例如）使其他蛋白酶、生長因子成熟及使細胞外基質組份降解。 ΜΜΡ1為ΜΜΡ家族成員之一，其能夠使骨頭及軟骨之主要組份天然膠原蛋白降解。滑膜纖維母細胞現增加時’可診斷關節炎疾病之進展且可預示關節中之侵蝕過程（Cunnane等人，2〇〇1)。817之]^]^?1表現可藉由採用與類風濕性關節炎相關之觸發物（如細胞素，如TNF_a或 IL1 β)活化SF而增加（Andreakos等人’ 2003)。總之，由、、舌化之SF產生之MMP1含量的量測結果與ra之情況具高度相關性’因為此點可反映出如血管翳中所見之SF偏向侵蝕表型之活化程度。若活化之SF中候選藥物標靶之表現降低導致此等細胞之MMP1表現降低，則證明該藥物標耙涉及調節MMP1表現’且因此認為其與用於治療ra之治療策略的研發相關。 139731.doc -118- 201002716 在以下貫例中，研發一種檢定（另稱為，MMp檢定，），其監測滑膜纖維母細胞（SF)因應各種不同活化觸發物而產生 MMP1之程度（實例2.1)。接著栺述此檢定用於驗證被認為係RA療法研發之樂物標靶的基因產物之用途（實例2 2)。使用可介導細胞中shRNA之表現且可藉由基於RNAi(RNA 干擾）之機制降低#巴向基因之表現程度的重組腺病毒（另稱為阻斷基因表現（knock-down)之病毒或Ad-siRNA)進行藥物標靶之驗證（參見WO 03/020931)。接著在表3中說明調卽經驗證之藥物標乾之活性的化合物之鑑別。下文進一步描述'MMP檢定|用於測試可調節所鑑別之藥物標靶之活性的化合物之用途。檢定實例所用之對照病毒：下文列出此等研究中所用之對照病毒。如W099/64582 中所述’ dEl/dE2A腺病毒係由此等銜接質體（adapter plasmid)藉由在PER.E2A包裝細胞中共轉染輔助質體 PWEAd5AflII-rITR.dE2A而產生。陰性對照病毒：

Ad5-eGFP_KD :標靶序歹ij : GCTGACCCTGAAGTTCATC (SEQ ID NO: 1)。如 W003/020931 中所述使用 Sapl-位點選殖至載體中且產生病毒。

Ad5-Luc_vl3_KD :標靶序列：GGTTACCTAAGGGTGTGGC (SEQ ID NO: 2)。如W003/020931中所述使用Sap卜位點選殖至載體中且產生病毒。 139731.doc -119- 201002716

Ad5-M6PR_vl_KD ：標靶序列：CTCTGAGTGCAGTGAA ATC(SEQ ID NO: 3)。如 W003/02093 1 中所述使用 Sapl-位點選殖至載體中且產生病毒。陽性對照病毒：

Ad5-MMPl_vlO_KD :標靶序列：ACAAGAGCAAGATGTGG AC(SEQ ID NO: 4)。如 W003/020931 中所述使用 Sapl-位點選殖至載體中且產生病毒。用於標靶驗證之病毒：

Ad5-MAPKAPK5_vl3—KD :標靶序列：CGGCACTTTACAG AGAAGC(SEQ ID NO: 5)。如 W003/02093 1 中所述使用 Sapl-位點選殖至載體中且產生病毒。

Ad5-MAPKAPK5_vl2JCD :標靶序列：ATGATGTGTGCCACAC ACC(SEQ ID NO: 6)。如 W003/02093 1 中所述使用 Sap 1 -位點選殖至載體中且產生病毒。實例2.1 : MMP檢定之研發

研發用於量測MMP1之384孔格式的ELISA。測試各種一次抗體以及各種ELISA方案。研發以下方案且加以驗證以量測384孔盤中之SF上清液中的MMP1含量：將白色 Lumitrac 600 384 孔盤（Greiner)用 2 pg/mL 抗 MMP1 抗體 ]^入813 46(〇1^111丨(；〇11)塗布。將抗體稀釋於缓衝液40(1；1 milliQ水中 1.21 g Tris驗（Sigma)、0·58 g NaCl(Calbiochem) 及5 ml 10% NaN3(Sigma)，且調至pH 8.5)中。在4°C 下培育隔夜後，將培養盤以PBS(10 L milliQ水中80 g NaCl、2 g KCl(Sigma) ' 11.5 g Na2HP04.7H20及 2 g KH2P04 ; pH 139731.doc -120- 201002716 7.4)洗滌且用每孔100 pL之酪蛋白緩衝液（PBS中2%酪蛋白 (VWR International))阻斷。第二天，將酪蛋白緩衝液自 ELISA培養盤移除且由每孔50 pL之EC缓衝液（1 L milliQ水中 4 g酷蛋白、2.13 g Na2HP04(Sigma)、2 g牛白蛋白（Sigma)、 0.69 g NaH2P〇4-H20(Sigma) ' 0.5 g CHAPS(Roche) ' 23.3 g NaCl、4 ml 0.5 M EDTA pH 8(Invitrogen)、5 ml 10% NaN3，且調至 pH 7.0)置換。將 0.25 mM DTT(Sigma)添加至融解樣品盤中。在移除EC緩衝液後，將20 pL樣品轉移至ELISA培養盤中。在4°C下培育隔夜後，將培養盤以PBS 洗滌兩次且用PBST(具有0.05% Tween-20(Sigma)之PBS)洗滌一次且用每孔35 μί生物素標記之抗MMP 1抗體溶液 (R&D)培育。將此二次抗體以5 pg/mL之濃度稀釋於緩衝液 C(2 L milliQ水中 0.82 g NaH2P04.H20、4.82 g Na2HP04、 46.6 g NaCn、20 g牛白蛋白及4 mL 0.5M EDTA pH 8，且調至pH 7·0)中。在室溫下培育2 h後，如上所述洗滌培養盤且用每孔50 pL之抗生蛋白鏈菌素-HRP接合物 (Biosource)培育。將抗生蛋白鏈菌素-HRP接合物以0.25 pg/mL之濃度稀釋於緩衝液C中。在45 min後，如上所述將培養盤洗滌且用每孔5〇 μί之BM Chem ELISA受質（Roche) 培育5 min。在具有200毫秒之積分時間或具有Envision讀數器（Perkin Elmer)之Luminoscan Ascent 光度計（Labsystems) 上進行讀數。在用與RA領域相關之細胞素（TNF-α、ILip及OSM)或其組合處理後SF之MMP1表現的增加在圖2中係展示為白色 139731.doc -121 - 201002716 條形。對於此實驗而言，將SF以3,000個細胞/孔接種於96 孔盤中。24 h後，將培養基換成補充有1% FBS之M199培養基。在培養基更換後第1天，將細胞素或其組合添加至培養物中，各細胞素係添加至25 ng/mL之最終濃度。在添加細胞素後72 h，收集上清液且用如上文給出之方案中所述之MMP1 ELISA對其進行處理。與此實驗同時，使用相同方案來觸發8?，其中在^1199培養基+ 1°/〇?68中將丁1^1 細胞上清液（在Μ199+1 % FBS中2倍稀釋）用相同細胞素或細胞素之組合處理48 h。此等樣品之ΜΜΡ 1含量在圖2中係展示為灰色條形。如與單獨用重組TNF-ot觸發之SF(3倍誘發）相比，對於用經TNF-ot處理之THP1細胞之上清液觸發的SF之MMP1表現的誘發更強（>4.5倍誘發），且幾乎等於由3種經純化細胞素（TNF-α、ILipb、OSM)之混合物獲得之5倍誘發。此結果指示TNF-a誘發之THP1細胞之上清液除TNF-a之外還含有可使SF朝MMP1表現活化之其他促炎性因子。因為證實TNF-a在RA發病機理中之作用（諸如英利昔單抗及依那西普之TNF-a阻斷劑在治療RA患者時展示一定之功效）且THP-1細胞代表存在於RA患者之關節中之單核細胞/巨嗟細胞，所以藉由使THP -1細胞與TNF-ot接觸而製備之基於TNF-a之觸發物混合物將含有存在於RA患者之關節中的因子且隨後與RA相關聯。此基於TNF-a之複合觸發物（另稱為'複合觸發物’）另外將用作’MMP檢定’之基礎。

使用地塞米松（dexamethasone)展示'複合觸發物'對於SF 139731.doc -122- 201002716 活化之抑制作用，此處之地塞米松係一種亦町有力地減少齧齒動物之膠原蛋白誘發性關節炎的有效消炎劑（Yang等人，2004)(圖3)。已顯示地塞米松劑量依賴性地減少由經複合觸發物活化之SF產生的MMP1之量。將SF以3000個細胞/孔之密度接種於96孔盤中。在接種後24 h ’將增加濃度之地塞米松添加至細胞中。在隔夜培育後，將每一孔之培養基更新為經TNF-α處理之THP-1細胞之上清液（在 Μ199 + 0.5% FBS中50%稀釋），且添加與前一夭相同濃度之地塞米松。在處理後48 h，將上清液收集且使其經受上述之MMP1 ELISA。地塞米松之添加可明顯減低SF之MMP1 表現，其中IC5〇值為約1 nM(參見圖3)。此等資料顯示活化 SF之MMP1表現可藉由添加生理學相關之抑制劑而減低且可證明’MMP檢定1之原理。實例2.2 : MAPKAPK5調節SF，複合觸發物，誘發之MMP1表現 (A) Ad-siRNA病毒用以阻斷MAPKAPK5表現。根據W003/020931中描述之程序，產生介導靶向 MAPKAPK5及eGFP之siRNA之表現的重組腺病毒。用於重組腺病毒之標靶序列為：CGGCACTTTACAGAGAAGC(SEQ ID 撒5)以及八丁0八丁0丁0丁0(^八€八€八(：(：（8£(5 10麗：6)。用於重組腺病毒之eGFP mRNA内的標靶序列為： GCTGACCCTGAAGTTCATC(SEQ ID NO: 1)。使用 Sapl位點將此等序列選殖至銜接質體中。如W099/64582中所述，dEl/dE2A腺病毒係由此等銜接質體藉由在PER.E2A包裝細胞中共轉染輔助質體pWEAd5AflII-rITR.dE2A而產 139731.doc •123· 201002716 生。靶向MAPKAPK5之腺病毒之功能係如下測試。將此等腺病毒用以感染如下培養在皮氏培養皿（petri dish)中之初級人類SF。在第1天，每一皮氏培養皿接種5〇〇,〇〇〇個SF。1 天後，將細胞以4000之MOI(基於藉由Q-rt-PCR針對該等病毒所測定之力價（每毫升之病毒粒子數））用Ad5-MAPKAPK5-vl3—KD(1.6E9 VP/mL)或 Ad5-eGFP-v5—KD(1.3E10 VP/mL)感染。在第7天’根據標準程序使用胰蛋白酶EDTA溶液將細胞自皮氏培養皿分離。接著藉由添加補充有1 〇% FBS之 DMEM生長培養基使胰蛋白酶中和。接著藉由離心步驟 (1000 rpm, 5 min)收集該等細胞。將離心塊溶解於1〇〇 pL 新鮮 RIPA緩衝液（50 mM Tris pH 7.5、150 mM NaCl、1% 去氧膽酸鹽、1% Triton XI 00、0.1% SDS)中。接著對該等樣品進行超音波處理歷時10秒。接著使用BCA套組 (Pierce，目錄號23227)根據供應者之描述使用BSA作為標準來測定樣品之蛋白質濃度。向已在RIPA緩衝液中稀釋至 19_5 μΐ之30 pg細胞溶解產物中添加3.5 pL還原劑（NuPage 還原劑10號，Invitrogen NP0004)及7.5 pL樣品緩衝液 (NuPage LDS樣品缓衝液，Invitrogen NP0007)。接著使30 μΐ^樣品沸騰5 min且負載於10%聚丙烯醯胺凝膠（Invitrogen NP0301)上。為允許估計蛋白質阻斷表現程度，亦將15 pg、 7.5 pg及3.75 pg的經Ad5-eGFP-v5_KD感染之細胞之溶解產物負載於凝膠上。接著在lxMOPS/SDS NuPage運行緩衝液 (Invitrogen ΝΡ00 1)中在100 V下跑膠2小時。使用10 μΐ經 139731.doc -324 - 201002716

Seablue Plus預染色之標準物（lnvitrogen LC5925)來評估凝膠上之蛋白質尺寸。接著藉由濕墨點程序使用藉由將100 ml Nupage 轉移緩衝液 20*(NP0006-1)、400 mL 曱醇及 1500 mL MilliQ水混合而製備的轉移缓衝液，將凝膠上之蛋白質轉移至PVDF膜（lnvitrogen LC2002)上。在轉移之前，首先將膜浸於曱醇及轉移緩衝液中。轉移係在100 V下進行歷時90分鐘。接著藉由浸於在PBST(補充有〇. 1 % Tween 2〇(Sigma，ΡΠ79)之PBS)中製備之阻斷缓衝液（2°/。阻斷粉末 (Amersham，RPN 2109))30 min來阻斷該膜。在阻斷之後，使用已在阻斷緩衝液中作250倍稀釋之針對MAPKAPK5之小鼠單株抗體（BD Biosciences，目錄號612080)執行免疫偵側。在以此一次抗體培育隔夜後，將膜以PBST洗滌3次且用已在阻斷緩衝液中作50000倍稀釋之二次抗體（多純系山羊抗小鼠Ig，HRP接合（DAKO P0447))培育1 h。接著將墨點在PBST中洗滌 3次且根據製造商說明書用Kodakimager 上之ECL Advance(RPN2109，Amersham)進行请測。西方墨點法顯示與經Ad5-eGFP-v5_KD陰性對照病毒感染之細胞相比，經 Ad5-MAPKAPK5-vl3_KD感染之細胞中 MAPKAPK5 之表現程度較低。與經稀釋之Ad5-eGFP-v5_KD感染的樣品比較允許估出表現降低2倍。在藉由，汽提程序'（在PBST 中使膜沸騰5分鐘）移除MAPKAPK5抗體後，藉由免疫偵側 β-肌動蛋白來證明30 pg樣品之同等負載。根據針對 MAPKAPK5偵測所述之方法，但使用稀釋1〇〇〇倍之針對β-肌動蛋白之山羊多株抗體（Santa Cruz，目錄號SC-1615)作 139731.doc ^ 125- 201002716 為一次抗體且使用稀釋50000倍之兔抗山羊抗體作為二次抗體來進行β-肌動蛋白之免疫偵側。圖4中給出此實驗之結果。總之，此實驗證明所產生之Ad-siRNA病毒能降低初級人類SF中之MAPKAPK5表現程度的功能。 (Β) MAPKAPK5阻斷表現之Ad-siRNA降低SF誘發之 MMP1表現

Ad5-MAPKAPK5-vl3_KD病毒在·ΜΜΡ檢定，中之功效係如下測試。在第1天，將SF(繼代9至10次）以每孔3000個細胞之密度接種於96孔盤中之完全滑膜生長培養基（Cell Applications)中。1天後，將該等細胞用漸增量（3、6、9、 12 或 15 μΐ)之以下病毒感染：Ad5-eGFP-v5_KD、Ad5-MAPKAPK5-vl2_KD、Ad5-MAPKAPK5-v 13_KD ' Ad5-MMPl-vlO_KD。藉由添加中性病毒（neutral virus)Ad5-Luc-vl3_KD使每一孔中細胞上之最終病毒體積為15 μί來校正病毒負荷。此校正確保所觀測到之效應並非由施加於細胞之病毒負荷引起。接著將該等細胞培育5天，接著進行活化步驟。此步驟包含每一孔中生長培養基經補充有25 μΙ複合觸發物'之75 pL Μ199培養基置換。在活化步驟後 48 h，將上清液收集且使其經受如實例1中所述之MMP1 ELISA。實驗結果展示於圖5中。用靶向MMP1自身之Ad-siRNA病毒的功效來證明實驗品質。此陽性對照病毒大大地降低了 SF之MMP 1表現，而經設計成靶向螢光素酶表現之陰性對照病毒並未影響MMP1表現程度。用以驗證 MAPKAPK5 標靶之兩種病毒（Ad5-MAPKAPK5-vl2_KD 及 139731.doc -126- 201002716

Ad5-MAPKAPK5-vl3)亦導致初級人類SF之複合觸發物誘發之MMP 1表現明顯降低。根據此實驗可推斷MAPKAPK5 為一種頗有價值之藥物標靶，已展示其能調節SF中之 MMP 1表現。類似地，可預期利用小分子化合物抑制 ΜΑΡΚΛΡΚ5酶促活性可在'MMP檢定，中降低’複合細胞素’ 誘發之MMP1表現。亦可預測利用小分子化合物抑制 ΜΑΡΚAPK5酶促活性能減少與RA相關之關節退變。 (C)抑制MAPKAPK5之化合物的活體外，MMP檢定，測試根據以下方案在'MMP檢定'中測試在生物化學檢定（亦即無細胞，使用純化酶）中抑制MAPKAPK5活性之化合物。將化合物母儲備液（均為在100% DMSO中10 mM之濃度）在水（蒸餾水，GIBCO，無DNAse及RNAse)中稀釋10倍以獲得在1 0% DMSO中1 mM之中間工作儲備液。將此中間工作儲備液在10% DMSO中進一步稀釋3倍（或10倍）以獲得在 10°/〇 DMSO中分別為333 μΜ(或100 μΜ)濃度之中間工作儲備液。接著將1 mM以及333 μΜ(或100 μΜ)中間工作儲備液在1.1 % DMSO中進一步稀釋10倍以獲得在2% DMSO中為100 μΜ及33.3 μΜ(或10 μΜ)濃度之1〇χ工作儲備液。接著將此l〇x工作儲備液在補充有1% FBS之Μ199培養基中稀釋10倍以獲得含有10 μΜ及3.33 μΜ(或1 μΜ)之化合物以及 0.2% DMSO的最終'lx化合物製劑'。此等者為針對細胞測試化合物所用之最終條件。同時，將1〇χ工作儲備液在已在補充有1% FBS之M199中稀釋2倍的1複合觸發物·（亦即，如實例1中所述產生之經TNF-α處理之THP1細胞的上清液） 139731.doc -127- 201002716 中稀釋10倍以產生'50%複合觸發物中lx化合物之製劑'。在第1天，將RASF以3000個細胞/孔之密度接種於96孔盤（平底，經組織培養物處理，Greiner)中之完全滑膜生長培養基（Cell Applications)中。第5天，如下將化合物添加至經培養之細胞中。將培養基自細胞完全移除且經在補充有l%FBS及0.2%DMSO之M199培養基中含有10μM或3·3 3 μΜ(或1 μΜ)之化合物的75 pL 'lx化合物製劑'置換。在2小時之培育時期（此允許化合物達到平衡且進入細胞）後，將 25 pL '50%複合觸發物中1 X化合物之製劑’添加至該等孔中 •lx化合物製劑’之上，在該等孔中含有相應濃度之相應化合物。以此方式，最終將稀釋8倍之複合觸發物施加於細胞。接著進行48小時之培育且接著用如上所述之MMP1 ELISA對20 μΐ細胞上清液進行處理，從而輸出原始資料 (RLU :相對發光單位）。以下對照組包括於實驗中：最大信號對照組，其中藉由複合觸發物活化細胞，但僅添加 0.2% DMSO媒劑（且因此無化合物）。此對照組指示可在測試中實現之MMP 1之最大含量。最小信號對照組亦包括在此等實驗内。此處，細胞並未觸發。接著在第5天將細胞培養基換成補充有1% FBS之100 μΐ Μ199培養基。此對照組反饋由RASF產生之基礎ΜΜΡ1含量。接著基於由ELISA 反饋之RLU資料，使用以下之式來計算由化合物實現之對 MMP 1表現之抑制％ : [[(最大MMP1含量-最小MMP1含量）-(在濃度Y之化合物X 情況下的MMP1含量-最小MMP1含量）]/(最大MMP1含量- 139731.doc -128- 201002716 最小MMP1含量）]xl〇〇。化口物之毒性係如下評估。在第工天，將SF以每孔3 個細胞之密度接種於經組織培養物處理之白色％孔盤中的 100 pL凡全滑膜生長培養基中。如此實例中關於測定 ΜΜΡ1含量所描述進一步進行化，合物之處理、化合物向細胞之添加以及細胞之活化。在48 h之培育時期後，將培養基自孔移除，經補充有1% FBS之5〇吣新鮮M199培養基置換。接著將50 pL受質（promega celltiter Glow細胞活力套組）添加至孔中。在1〇 min之培育時期後，量測發光信號。 s忍為與最大對照孔相比發光信號降低超過5〇%反映顯著毒性。未觀測到1MMP檢定’中測試之化合物具有毒性。應瞭解’諸如各種化合物之差異性細胞穿透能力的因素可促成活體外生物化學檢定與細胞MMP檢定中化合物活性之間的差異。實例3 :評估化合物對人類PBmc釋放細胞素之影響的檢定將人類周邊血液單核細胞（PBMC)自由健康志願者之血液製備的「白血球層（buffy coat)」分離，基本上根據 Befyum (1984)之方法來分離。簡言之，將白血球層用 lxPBS(Gibco)l:l 稀釋且將 30 mL小心地置於 50 mL Falcon 管中之20 mL LymphoprepTM(Lucron Bioproducts)之上。在離心（3 5 min, 400 g，18°C )後，將單核細胞自白色相界面收集且藉由再懸浮及離心（10 min, 200 g)以lxPBS洗滌3次。最終使經分離之PBMC再懸浮於補充有10%熱失活 FBS(Hyclone)之 RPMI 1640(目錄號 21875, Gibco)中。 139731.doc -129· 201002716 對於該檢定而言，將PBMC以160 pL按2.5E6個細胞/毫升接種於96孔盤（Nunc)中。首先在DMSO(Sigma)中進行測試化合物之連續稀釋，且接著在含有1%熱失活FBS之 Μ199培養基（Gibco)中作50倍稀釋。將化合物在檢定培養盤中進一步作1/10稀釋以獲得0.2%之最終DMSO濃度。將細胞在37°C、5% C02下用化合物預培育1 h。接著，將細胞用LPS(大腸埃希氏菌（Escherichia coli)血清型026:B6，目錄號L2654，Sigma)刺激’該LPS係以20 mL之體積添加至1 pg/mL之最終濃度，且將細胞進一步培養24 h。將培養盤離心且將上清液收集並儲存在-80°C ’直至用ELISA分析合適稀釋液。研發以下3 84孔的化學發光ELIS A方案以量測上清液中之TNFa含量：將白色Lumitrac 600 384孔盤（Greiner)用（每孔40 μΙ〇抗TNFa捕捉抗體（目錄號551220，BD Pharmingen) 塗布，此處之該抗體已在lxPBS(Gibco)中稀釋至1 pg/mL。在4°C下培育隔夜後，將培養盤以lxPBS(10 L MilliQ水中 80 g NaCU、2 g KCl(Sigma)、11·5 g Na2HP04.7H20 及2 g KH2P04 ; pH 7·4)洗滌且用每孔100 pL之緩衝液B(含有 1% BSA(Sigma)、5%嚴糖（Sigma)及 0.05% NaN3(Sigma) 之lxPBS)阻斷。在室溫下培育4 h後，移除阻斷緩衝液且將培養盤以 PBST(具有 0.05% Tween-20(Sigma)之 lxPBS)洗滌一次。接著’將40 μί樣品轉移至ELISA培養盤中且在 4°C下培育培養盤。第二天，將培養盤洗滌3次（PBST兩次及PBS —次）且添加每孔35 μί生物素標記之抗TNFa抗體（目 139731.doc -130- 201002716 錄號5 545 1 1，60?1^〇11丨叫611)，此處之該抗體最初已在緩衝液D(具有1% BSA之lxPBS)中稀釋至250 ng/ml之濃度。在室溫下培育2 h後，如上所述洗滌培養盤且添加每孔3 5 pL的抗生蛋白鏈菌素-HRP接合物（目錄號SNN2004, Biosource)在緩衝液D中之1/2000稀釋液。在45 min後，如上所述洗滌培養盤且用每孔50 kL BM化學發光ELISA受質 POD(Roche)培育5 min。在具有100毫秒之積分時間的 Luminoscan Ascent光度計（Labsystems)上進行讀數，從而輸出原始資料（RLU :相對發光單位）。以下對照組包括在實驗中：最大信號對照組，其中藉由LPS活化細胞，但僅添加0.2% DMSO媒劑（且因此無化合物）。此對照組指示可在測試中實現之TNFot之最大含量。最小信號對照組亦包括在此等實驗内。此處之細胞並未觸發。此對照組反饋由 PBMC產生之基礎TNFtx含量。接著基於由ELISA反饋之 RLU資料，用以下之式來計算由化合物實現之對TNFa釋放之抑制％(PIN) : 100-[((在濃度Y之化合物X情況下的TNFa 含量-最小TNFa含量）/(最大TNFa含量-最小TNFa含量））χ100]。在測試8個濃度（1/3連續稀釋）之化合物的情況下，可藉由對針對各測試濃度之化合物所獲得的PIN數據之平均值進行曲線擬合來計算EC50值。為檢定化合物對受LPS刺激之PBMC培養物釋放IL1及IL6 之影響，可使用與上文所述相同之ELISA方案量測上清液之合適稀釋液。可如下使用IL1及IL6 ELISA之配對抗體 (均來自R&D Systems):以0.5 pg/mL使用抗IL1捕捉抗體 139731.doc -131 - 201002716 (目錄號MAB601);以50 ng/mL使用生物素標記之抗IL1偵測抗體（目錄號BAF201);以1 gg/mL使用抗IL6捕捉抗體 (目錄號MAB206);以50 ng/mL使用生物素標記之抗IL6偵測抗體（目錄號BAF206)。實例4 : MMP13檢定在部分4.1中描述MMP13 ELISA之方案，接著在部分4.2 中描述化合物對於SW13 53軟骨肉瘤細胞株中IL1/OSM之釋放驅動的MMP1 3表現之影響的測試。 4.1 MMP13 ELISA方案研發用於量測MMP13之384孔格式的ELISA。測試各種一次抗體以及各種ELIS A方案。研發以下方案且加以驗證以量測3 84孔盤中的細胞培養物之上清液中的MMP 13含量 0

將 Maxisorb 黑色 384 孔盤（Nunc 460518)用含有 1.5 pg/mL 抗MMP13抗體MAB511(R&D systems)之35 μΐ緩衝溶液塗布。將抗體稀釋於碳酸鹽-碳酸氫鹽塗布緩衝液（1 L MilliQ 水中 1.59 g Na2C03(Sigma S-7795)及 2.93 g NaHC03(Sigma S-5 761)，調至pH 9·6)中。在4°C下培育隔夜後，將孔以 100 pL PBST(10 L milliQ 水中 80 g NaCl 、2 g KCl(Sigma)、11.5 g Na2HP04.7H20及 2 g KH2P〇4 ; pH 7.4 + 0.05% Tween-20(Sigma))洗務兩次且用每孔100 μί之阻斷緩衝液（PBS中5%無脂奶粉）阻斷。在4°C下培育隔夜後，將孔用100 μί PBST洗滌兩次。移除PBST且將35 pL樣品轉移至ELISA培養盤中。在室溫培育4 h後，將培養盤用PBST 139731.doc -132 - 201002716 自低保存之等分試樣開始，藉由每週兩次以ι/5_1/8比率經由胰蛋白酶化繼代培養而使細胞進一步生長。自化合物母儲備液（均為1〇〇% DMS〇中之1〇 mM濃度）開始，在100。/。DMSO中在96孔盤中進行3倍連續稀釋。接著將培養盤用補充有1%熱失活FBSiM199培養基進一步稀釋5 0倍以獲得中間工作儲備液。在第1天，將SW1353細胞以在12〇叫生長培養基中 15000個細胞/孔之密度接種於96孔盤（平底，經組織培養物處理，Greiner)中。第二天，添加15 來自中間工作儲備液之化合物。在培育60分鐘之時期（此允許化合物達到平衡且進入細胞）後，將細胞用江_113與〇SMi混合物刺激，該混合物係以15 μί之體積添加以獲得i ng/ml IL_ip及25 ng/ml OSM之最終濃度。對此，將IL_1(1〇 ^/ml)及〇SM(25 pg/ml)(均來自PeproTech)之儲備液在補充有i % FBS之M199培養基中分別稀釋至1〇 ng/ml&25〇 ng/ml。培育48 h後’收穫細胞上清液且用如上所述之mmp ! 3 ELISA處理合適稀釋液，從而輸出原始資料（RFU :相對螢光單位）。以下對照組包括在實驗中：最大信號對照組：其中藉由IL卜β/OSM細胞素混合物活化細胞，但僅添加 0.2% DMSO媒劑（且因此無化合物）。此對照組指示可在測試中實現之最大MMP13含量。亦包括最小信號對照組，其中細胞僅接受0.2% DMSO媒劑且無觸發物。此對照組反饋由SW1353細胞產生之基礎MMP13含量。接著基於由ELISA反饋之RLU資料’用以下之式來計算由化 139731.doc -134- 201002716 洗務兩次且在37°C下用每孔3 5 μί 1.5 mM ΑΡΜΑ溶液（在1 天前製備 10 mM ΑΡΜΑ儲備溶液（10 mL 0.1Μ NaOH(Merck 1.06469.1000)中 35.18 mg APMA(Sigma A-9563))且儲存在 4°C下）培育1 h。使用之前，將i〇 mM ΑΡΜΑ儲備溶液在 lxAPMA緩衝液（ΙΟχΑΡΜΑ緩衝液：500 mM Tris(R〇che 708976)、50 mM CaCl2(Sigma C-5080)、500 μΜ ZnCl2(Sigma Z-0173)、1.5 M NaCl(Calbiochem 567441)、 0.5% Brij3 5(Sigma 43 0 AG-6)，且調至pH 7.0)中稀釋至 1.5 mM。在藉由ΑΡΜΑ活化MMP13之後，將培養盤用每孔loo μ；ί PBST再次洗滌兩次且將35 μί受質溶液添加至各孔中。受質溶液係如下製備：將OmniMMP螢光受質（Biomol Ρ-126)儲備溶液（DMSO中2 mM，儲存在-20°C下）在1 X OmniMMP 緩衝液（1〇 X OmniMMP 緩衝液：500 mM Hepes(Sigma H4034)、100 mM CaCl2(Sigma C5080)、0.5% Brij35(Sigma 430 AG-6 ;調至 pH 7.0))中稀釋至 0.01 mM之最終濃度。在37°C下培育隔夜後，樣品中之活性MMP13已使受質裂解且釋放螢光。在使用320 nm激發/405 nm發射滤波器之EnVision(Perkin Elmer)上進行讀數。 4.2評估化合物對SW1353細胞中細胞素驅動之MMP13表現的影響人類軟骨肉瘤細胞株SW1 3 5 3係自ATCC獲得且使其生長於濕潤5% C02恆溫箱（37°C )中補充有1〇%熱失活FBS及lx 盤尼西林（penicillin)/鍵 Μ 素（streptomycin)(Invitrogen)之 DMEM中。將細胞之等分試樣冷凍且低溫保存在液氮中。 139731.doc -133 - 201002716 合物實現之對MMP13表現之抑制％ :[[(最大MMP 1 3含量-最小MMP13含量）-(在濃度Y之化合物X情況下的MMP13含量-最小ΜΜΡ13含量）]/(最大ΜΜΡ13含量-最小ΜΜΡ13含量）]χ100。基於抑制％與Log(莫耳濃度）之關係曲線及曲線擬合，可計算出特定化合物之IC50值。以下化合物已或可根據上述合成方法製備。為達成以下表1之目的，可使用實例1中所述之MAPKAPK5檢定法測定的各化合物之活性係如下表示：

++++ 化合物展現 MAPKAPK5 IC50 為 0.1-100 nM +++ 化合物展現MAPKAPK5 IC50為 101-500 nM ++ 化合物展現 MAPKAPK5 IC50 為 501-1000 nM + 化合物展現 MAPKAPK5 IC50 >1000 nM 表1 實例編號結構名稱 MW Μ+Η+， m/z MAPKAPK5 IC50 nM 1 广人 χτΝ^ HN φ, 5-(8-(4-((1 S，4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2.2.1] 庚-2-基)苯胺基)-[1，2,4]三唑并 [1,5-a]11 比嘻-5-基）異吲哚·#-1-Ι同 481 482 於ΝΗ 〇 139731.doc -135- 201002716 實例編號結構名稱 MW M+H+， m/z MAPKAPK5 IC50 nM 2 j〇r HN n^Vn、 h2n 4.(8-(4-(( 1S?4S)-5-異丙基-2,5-二 [2.2.1]^；-2-基)苯胺基)-[1，2,4]三唑并 [l，5-a]nb 嗪-5-基）呋喃-2-曱醯胺 458 459 ++++ 3 j〇r HN n^Vnn h2n 4- (8-(4-(( IS,4S)- 5- 第三丁基-2,5-二氮二環 P.2.1] 庚-2-基)苯胺基)- [1，2,4]三唑并 [l，5-a]D 比口秦-5-基）呋喃-2-曱醯胺 472 473 ++++ 4 Q人 j〇rN^ n^Vn、 ^>0 h2n 4- (8-(4-(( 1S,4S)- 5- 異丙基-2,5-二氮二環P.2.1]庚-2-基)苯胺基)咪唑并[l,2-a]°lt。秦-5-基)呋喃-2-曱醯胺 457 458 +++ 139731.doc 136· 201002716

實例編號結構名稱 MW M+H+, m/z MAPKAPK5 IC5〇 nM 5 人 fQ ΗΝ n^Vnn HN^S Ni〇 h2n 5_{8-(4-((lS,4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2.2.1 ]庚-2-基)苯基-胺基)-[1，2,4]三唑并 [1,5-3]°比嗪-5-基}-111-吡唑-3-甲醯胺 459 459 +++ 6 Xjb HN ^>〇 H2N 4- {8-(4-(( 1S,4S)- 5- 第三丁基-2,5-二氮二環[2.2.1] 庚-2-基)-苯基-胺基)。米唑并[l，2-a] 吼°秦-5-基}-°夫喃- 2-曱醯胺 472 472 +++ 7 ^人 Cy £rN^ HN [V/〉、n、n h2n 4- (8-(6-((1 S,4S)- 5- 異丙基-2,5-二氮二環[2.2.1]庚-2-基)吼啶-3-基胺基)-[1，2,4]三唑并 [l,5-a]Dtt°#-5-基}-D夫喃-2-曱醯胺 460 460 ++++ 139731.doc 137- 201002716 實例編號結構名稱 MW M+H+， m/z MAPKAPK5 IC5〇 nM 8 ^人 χτΝ^ HN CX K 0 4- {8-(4-(( is,4S)- 5- 異丙基-2,5-二氮二環[2.2.1]庚-2-基)苯基-胺基）咪唾并[1,2-a]。比嗪-5-基}-1Η-0比°定-2-酮 442 442 +++ 9 q人 XT HN n^Vnn h2n 4-{8-(4-(5-異丙基-2,5-二氮二環 [2.2.2]辛-2-基)笨胺基)[1，2,4]-三唑并[l,5-a]° 比嗪-5-基}_α夫喃_2-曱醯胺 473 473 ++++ 10 q人 XT” HN Nir> ^>〇 h2n 4-(8-(4-(5-異丙基-2,5-二氮二環 [2.2.2]辛-2-基)笨胺基)-咪唑并 [l,2-a]°t。秦-5- 基}-口夫口南-2- 曱醯胺 472 472 +++ 138- 139731.doc 201002716 實例編號結構名稱 MW Μ+Η+， m/z MAPKAPK5 IC50 nM 11 XT) HN n^Vnn h2n 4-{8-(4-(3-異丙基-3,8-二氮二環 [3.2.1]辛-8-基)苯胺基)-咪唑并 [l，2-a]°t。秦-5-基}_π夫。南-2-甲醯胺 472 472 +++ 12 γ〇人 χτΝ^ HN fV》 ^>〇 h2n 4-{8-(4-(8-異丙基-3,8-二氮二環 [3.2.1]辛-3-基)苯胺基)[1，2,4]-三唑并[1,5-a]。比嗓-5-基}-π夫喃-2-曱醯胺 473 473 +4-h+ [^人 XT) 4-{8-(4-(3-異丙基-3,8-二氮二環 [3.2.1]辛-8-基)苯 13 L X/) 胺基)[1,2,4]-三唑 473 473 ++Ί-+ ^Vn'n 并[l，5-a]° 比嗪-5- 基}-π夫喃-2- Q 甲醯胺 h2n 139· 139731.doc 201002716 實例編號結構名稱 MW M+H+， m/z MAPKAPK5 IC50 nM 14 人 XrN^ HN h2n 4-{8-(4-(8-異丙基-3,8-二氮二環 [3.2.1]辛-3-基)苯胺基)-咪唑并 [l,2-a]Dtt°#-5-基}-α夫喃-2-甲醯胺 472 472 +++ 15 广人 Cjn fYN^ ηνΛ-Ν HN^S Ni〇 h2n 5-{8-(6-((lS，4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2.2.1]庚-2-基)°比°定-3-基胺基)-[1,2,4]三唑并基}-1沁吡唑-3- 曱醯胺 460 460 +++ 16 £rN^ HN VN'N y> ^NH 〇 5-(8-(4-((1 S,4S)-5-第三丁基-2,5-二氮二環[2.2.1] 庚-2-基)苯胺基)-[1,2,4]三唑并-[l,5-a]°tb#-5-基}-2,3-二氫-異吲哚-1-酮 495 495 +++ 139731.doc 140- 201002716 實例編號結構名稱 MW M+H+， m/z MAPKAPK5 IC5〇nM 17 HN n^Vnn HN^S Ni〇 h2n 5-(8-(4-((1 S,4S)-5-第三丁基-2,5-二氮二環[2.2.1] 庚-2-基)苯基-胺基)-[1，2,4]三唑并 [1,5-3]°比口秦-5-基}-1沁吡唑-3-甲醯胺 473 473 +++ 18 f人 fYN^ hn^n 、n、n 於NH 〇 5-(8-(6-((1 S,4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2.2.1]庚-2-基)吡啶-3-基胺基)-[1，2,4]三唑并 [1,54]吡°秦-5-基}-2,3-二氮-異0引哚-1-酮 482 482 +++ 19 q人 XT) HN 5-(2-乙氧基吡啶-4-基)-N-(4-((lS，4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環 [2.2.1]庚-2-基)苯基)-[1,2,4]三唑并 [1，5-&]。比。秦-8-胺 471 471 + 141 - 139731.doc 201002716 實例編號結構名稱 MW M+H+， m/z MAPKAPK5 IC5〇 nM 20 Q人 j〇rN) HN n〜nn 士、N’〉丨K 0 4- (8-(4-(( IS,4S)- 5- 異丙基-2,5-二氮二環[2.2.1] 庚- 2-基)苯胺基)-[1,2,4]三唑并 [l,5-a]nb 嗓-5-基） °比°定-2(11^)-酮 443 443 + 21 Θ人 XT) HN N^VNv <(NH 〇 5-(8-(4-((lS?4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2.2.1] 庚-2-基)苯胺基)-[1，2,4]三唑并 [1,5-3]°比唤-5-基)_ lH-ntbai-3-曱醆乙酯 488 488 + 22 Q人 rrN^ HN N^VN\ kyN) 5-(2-乙乳基°比°定· 4-基)-N-(4-((lS,4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環 [2.2.1]庚-2-基)苯基)咪唑并[1,2-a] 吡嗪-8-胺 470 470 + 139731.doc 142- 201002716

實例編號結構名稱 MW M+H+, m/z MAPKAPK5 IC5〇 nM 23 ΝΗ \Γ/Ν νη2 3-(8-(4-(( IS,4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2.2.1 ]庚-2-基)苯胺基)-[1，2,4]三唑并 [1，5-3]。比嗪-5-基)-1,2,4-噁二唑-5-曱醯胺 461 461 + 24 丫 φ Η力 η2ν、〇 4- (8-(3-(( 1S,4S> 5- 異丙基-2,5-二氮二環[2.2.1] 庚- 2-基)苯胺基)-[1，2,4]三唑并 [1 ^-a]” 比嗪-5-基）呋喃-2-甲醯胺 458 459 ++++ 25 丫 $ ηα η2ν^ 〇 4- (8-(3-((1 S,4S)- 5- 異丙基-2,5-二氮二環P.2.1]庚-2-基)苯胺基)咪唑并[l,2-a]° 比。秦-5-基)呋喃-2-曱醯胺 457 458 +++ 139731.doc -143- 201002716 實例編號結構名稱 MW M+H+, m/z MAPKAPK5 ICs〇 nM 26 ΝΗ Sa N H 5-(8-(3-(( IS,4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2.2.1] 庚-2-基)苯胺基)-[1，2,4]三唑并 [l，5-a]。比嗪-5-基）異吲°朵琳-1-明 480 481 +++ 27 Q人 j〇r HN人〆 n^Vn、 y-NH2 〇 4- {8-[4-((]R，4R)- 5- 異丙基-2,5-二氮-二環[2.2.1]庚- 2-基)-苯胺基]-[1，2,4]三唑并 [l,5-a]°tL°#-5-基}-呋喃-2-曱酸醯胺 458 459 ++++ MMP1資料

§§化合物展現MMP1IC50為1-lOOOnM § 化合物展現MMP1 IC50 >1000 nM 實例編號 MMP1 IC50 nM 1 § 2 §§ 3 § 4 § 5 6 § 7 N/A 8 §§ 9 §§ 10 § 139731.doc •144- 201002716 實例編號 MMP1 IC50 nM 11 § 12 § 13 N/A 14 § 15 § 16 § 17 § 18 § 19 § 20 § 21 § 22 § 23 § 24 § 25 § 26 § MMP13資料

*** 化合物展現 MMP13 IC50 為 1-500 nM ** 化合物展現MMP13 IC50為 501-1000 nM * 化合物展現 MMP13 IC5〇 >1000 nM

實例編號 MMP13 IC50 nM 1 氺 2 氺氺氺 3 氺氺氺 4 氺 5 氺 6 氺 7 氺氺氺 8 氺氺氺 9 氺 10 Ν/Α 11 氺 12 氺 13 * 14 Ν/Α 15 氺 16 氺 17 氺氺 18 氺 19 氺 139731.doc -145 - 201002716 實例編號 MMP13 IC50 nM 20 氺 21 氺 22 氺 23 氺 24 氺 25 氺 26 氺活體内研究實例5 :化合物之耐受性設計此方案旨在評估本發明化合物在健康DBA/1J小鼠體内之对受性以確定如由介於有效劑量（小鼠治療性膠原蛋白誘發之關節炎模型）與毒性劑量之間的給藥範圍所界定之「治療窗（therapeutic window)」。動物使用DBA/1J裸小鼠（CERJ(法國）），小鼠為10-11週大，且具有約20 g之體重。化合物製備針對100 mg/kg/d游離鹼口服給藥方案，以每隻10 g小鼠 0.1 mL之注射液的標準體積（相當於10 mg/1 mL)製備化合物。為製備溶液，將化合物溶於0.5%曱基纖維素及1°/〇 DMSO中，一週一次。實驗組基於體重進行隨機分組且加以處理歷時達兩週。各組含有5隻小鼠且接受每天每隻小鼠200 kL之給藥體積的1 00 mg/kg測試化合物、100 mg/kg/d之對照化合物（化合物A)或媒劑。 139731.doc -146- 201002716

化合物A 動物監測（臨床徵象及體重) 藉由每天觀測及藉由針對重量減輕而言一週記錄體重三次來監測潛在藥物毒性。所有統計分析係使用司徒頓“則武（Student'ttest)來執行。為sf估治療之一般耐受性，在整個研究過程中跟縱總體重。圖6 A展示化合物i及化合物2對總體重之影響，圖6B 展示對照化合物A(關於結構參見下文）之影響。資料指示對橋接化合物之耐受性優於非橋接化合物。詳言之，與媒劑相比’在經1〇〇 mg/kg/d之化合物1或2處理的動物之重量之間不存在統計學上顯著之差異性。實例6 : CIA模型在貫驗開始時將完全弗氏佐劑/膠原蛋白 Π，牛）注射（1 mg/mL，每隻動物1〇〇叫）至尾部（真皮内）中。在CFA/Coll II注射21天後將不完全弗氏佐劑/膠原蛋白II(IFA/Coll II)以相同之量（1 mg/mL，每隻動物1〇〇 μ[) 139731.doc • 147· 201002716 注射至尾部中。接著基於評分對動物作隨機選擇且分配給處理組，此確保評分在不同組中同等分布。在IFA/Coll II加強注射後第8天（亦即，實驗之第28天）開始用測 s式化合物（1 mg/kg/d、3 mg/kg/d或 30 mg/kg/d)、陽性對照物（恩博（Enbrel)，1 0 mg/kg，每週3次，腹膜内）或媒劑（甲基纖維素，1 〇/0 DMSO)處理。每天向動物投與測試化合物、陽性對照物或媒劑，歷時 14天。每天針對臨床症狀對動物評分，針對個別爪記錄評分。在處理期間，監測動物之體重。藉由X射線成像分析骨頭保護。在3或30mg/kd/d下，所選之本發明化合物為有效的。實例7:敗血性休克模型注射脂多醣（LPS)會誘發可溶性腫瘤壞死因子（tnf-ci)快速釋放至周圍。將此模型用以分析活體内TNF釋放之預期阻斷劑。將每組六隻BALB/cJ雌小鼠（20 g)以預定之口服給藥方式處理一次。三十分鐘後，腹膜内注射Lps(15 μ§/]^ ;大腸桿菌（Ε· Coh)血清型oiii :B4)。九十分鐘後，處死小鼠且收集血液。使用市售ELISA套組測定循環TNFa含量。將地塞米松（5 pg/kg)用作參考消炎化合物。在3、1〇及2〇 mg/kg之口服劑量下所選之本發明化合物為有效的。實例8 :小鼠膠原蛋白抗體誘發之關節炎（CAIA)模型（亦稱為小鼠單株抗體（MAB)模型） 139731.doc •148- 201002716 將每組8隻BALB/cJ雌小鼠（20 g)以預定之口服給藥方式處理一次。同一天，向每隻小鼠靜脈内注射2 mg四種單株抗體（MDBiosciences ;參考號：CIA-MAB-50)之混合物。三天後腹膜内投與LPS(每隻小鼠50 gg ;大腸桿菌血清型 55:B5)。在抗體注射之日，開始用測試化合物、陽性對照物（恩博，1 〇 mg/kg，每週3次，腹膜内；或地塞米松，1 mg/kg，每天，口服）或媒劑（曱基纖維素，1% DMS0)處理。每天向動物投與測試化合物、陽性對照物或媒劑，長達10天。針對臨床症狀對動物評分且針對個別爪記錄評分。在處理期間，監測動物之體重。參考文獻

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Suzuki R等人（2004)。Treat Respir Med. 3:17-27。熟習此項技術者應瞭解，以上之描述實質上為例示性及說明性的，且意在說明本發明及其較佳實施例。經由常規實驗，技術人員應認識到可在不偏離本發明之精神的情況下作出之明顯的修改及變更。因此，本發明意在並非由以上之描述界定，而是由以下之申請專利範圍及其等效體界定。根據以上之描述，熟習此項技術者可想到關於本發明之組合物及方法的各種修改及變化。在隨附申請專利範圍之範疇内的所有該等修改意欲包括於其中。應瞭解，諸如各種化合物之差異性細胞穿透能力的因素可促成活體外生物化學檢定與細胞檢定中化合物活性之間的差異。本說明書中所引用之所有公開案（包括（但不限於）專利及專利申請案）皆以引用的方式併入本文中，該引用程度就如同特定地及單獨地指示各個別公開案係如充分闡述般以 139731.doc -151 - 201002716 引用的方式併入本文中一般。如本申請案中給出及闡述之本發明化合物之至少一些化學名稱已可藉由使用市售化學命名軟體程式自動產生且尚未經獨立證實。執行此功能之代表性程式包括由Open Eye Software，Inc.出售之Lexichem命名工具及由MDL，Inc.出售之Autonom軟體工具。在所指化學名稱及所示結構不同之情況下，應以圖示結構為準。使用ChemDraw®或ISIS®/DRAW繪製本文中所示之化學結構。在本文中之結構中碳、氧或氮原子上出現的任何開價（open valency)指示存在氫原子。在某一對掌性中心存在於某一結構中但並未展示關於該對掌性中心之特定立體化學的情況下，該結構涵蓋與該對掌性結構有關之兩種對映異構體。【圖式簡單說明】圖1.此圖展示健康關節與RA患者之關節之間的顯著組織學差異；圖2.此圖展示由類風濕性關節炎病理中所涉及之細胞素觸發的滑膜纖維母細胞中MMP1之表現增加；圖3.此圖展示已知之消炎化合物對於「基於TNF-α之觸發物」誘發的SF對MMP1之表現的劑量依賴性抑制作用；圖4.此凝膠展示藉由以靶向MAPKAPK5之Ad-siRNA病毒感染細胞可在蛋白質含量上使SF中MAPKAPK5之表現降低；圖5.此圖展示靶向MAPKAPK5之Ad-siRNA病毒對於'複 139731.doc -152- 201002716 合觸發物，發之SF對MMP1之表現程度的降低作用；圖6A.此圖展示使用本發明之化合物進行的耐受性研究之結果，其中所量測之影響係相對於總體重而言；圖6B.此圖展示相對於對照化合物之对受性研究的結果；圖7.此圖展示在注射已知會引起敗血症中之膽汁鬱積的 LPS(細菌月旨多酷）後由本發明化合物達成之對於TNFot釋放之抑制百分比。此處之基準為熟知之地塞米松（100%抑 f . 制）(DEX)。

C 139731.doc -153·

Claims

201002716 七、申請專利範圍： 1. 一種式la化合物：

(la)，其中： w、w’、Y及Y’各自獨立地為CR、N;其限制條件為 W、W'、Y及Y'中不超過兩者可同時為N; X為N或CH ; -N(R2c)CO- L係選自單鍵、-C〇-、、_ 及-n(r2c)so2-;

環P經取代或未經取代：

R1為Η或經取代或未經取代2Ci_c6烷基； R2a各自係獨立地選自H、經取代或未經取代之Ci_Ce烷基、未經取代之C丨-(：6鹵烷基、經取代或未經取代之c3_ cs環烧基、經取代或未經取代iCl_c6烷氧基、氰基及鹵 139731.doc 201002716 基； r2c各自係獨立地選自h&Ci_C6烷基； R2d為Η、ο：3-。環烷基或視情況經_基或crq環烷基取代之CVC6烷基；ml、m2&m3各自獨立地為1或2 ; R3係選自、經取代或未經取代之芳基及經取代或未經取代之雜芳基；及或其醫藥學上可接受之鹽或該化合物或該㈣學上可接受之鹽之溶劑合物。 2. 一種式lb化合物：

(lb)，其中： w W Y及Y各自獨立地為CR2a或其限制條件為 W、W、Y及Y’中不超過兩者可同時為& X為N或CH ; L係選自單鍵、 -N(R2c)S〇2-; -CO-、-SO-、-S〇2- -N(R2c)CO-及環P經取代或未經取代： 139731.doc 201002716

R1為Η或經取代或未經取代之C!-C6烷基； R2a各自係獨立地選自Η、經取代或未經取代之烷基、未經取代之鹵烷基、經取代或未經取代之C3-C8環烷基、經取代或未經取代之匚广匕烷氧基、氰基及鹵基； R2e各自係獨立地選自烷基；尺2(1為Η、C3_(：8環貌基或視情況經鹵基或c3-C8環烷基取代之CVC6烷基；ml、m2及m3各自獨立地為1或2 ; R3係選自經取代或未經取代之芳基及經取代或未經取代之雜芳基；及或其醫藥學上可接受之鹽或該化合物或該醫藥學上可接受之鹽之溶劑合物。 3.如凊求項1或2之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中l 為單鍵、-CO-或-N(R2c)CO-。 4·如凊求項1或2之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中r1 為 Me、Et、n-Pr 或 i-Pr。 5·如請求項1或2之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其 ’為H。戴八 6.如睛求項！之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物符合式 Ila、lib、lie或 lid : 139731.doc 201002716

其中L及環P係如請求項丨中定義；Rh各自係獨立地選自 Η、經取代或未經取代之Cl-C6烷基、經取代或未經取代之(^-(：6烧氧基、氰基及鹵基；且尺3係獨立地選自經取代或未經取代之芳基及經取代或未經取代之雜芳基；咬其醫樂學上可接受之鹽、溶劑合物或前藥；以及其立體異構體、同位素變體及互變異構體。如請求項2之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物符合式lie、Ilf或Ilg :

硖3 其中L及環P係如請求項丨中定義；R2a各自係獨立地選自 Η、經取代或未經取代之Cl_C0烷基、經取代或未經取代之C丨-C6烧氧基、氰基及鹵基；且尺3係獨立地選自經取代或未經取代之芳基及經取代或未經取代之雜芳基；或其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物或前藥；以及其立體異 139731.doc 201002716 構體、同位素變體及互變異構體。 8.如請求項1、2、6或7中任—項之化合物戒醫藥學上可接受之鹽’其中該環p經取代或未經取代：

且其中R ^及m 1係如請求項丨中定義。 9_如請求項1、2、ό或7中任一項之化合物或醫藥學上可接又之鹽，其中R2a為Η、未經取代之c丨_C6烷基、未經取代 2Cl_C6鹵烷基、未經取代之環烷基、未經取代之烷氧基、氰基或齒基。 1〇_如請求項9之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中R2a& Me、Et、Pr、i_Pr、α、ρ、CN、OMe 或 CF3。 11. 如清求項1、2、6或7中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中R2a為η。 12. 如清求項1、2、6或7中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽’其中r3係選自經取代或未經取代之芳基。 13. 如請求項12之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中以為視情况經鹵基、氰基、視情況經未經取代之Ci_c6烷基取代之酸胺基或未經取代之Ci_C6烷氧基取代的苯基。 14 _如凊求項丨3之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中r3為視況經 f、Cl、Br、氰基、OMe、〇Et、O-n-Pr、0小 Pr或視情況經Me、Et、w_pr、z._pr取代之醯胺基取代的 139731.doc 201002716 苯基。 15.如請求項丨、2、6或7中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中R3係選自經取代或未經取代之雜芳基。 16·如請求項15之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中R3係選自D比啶基、吲哚基、異吲哚基、D比咯基、呋喃基、噻吩基、η比唑基、噁唑基及噻唑基，其中之每一者可未經取代或鉍羥基、氰基、鹵基或視情況經未經取代之C 1 ^ 6 烧基取代之醯胺基取代。 17.如請求項16之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中…係選自吧啶基、吲哚基、異吲哚基、吡咯基、呋喃基、嗟吩基、吡唑基、噁唑基及噻唑基’其中之每一者可未經取代或經羥基、氰基、F、Cl、Br或視情況經Me、Et、 …Pr或LPr取代之醯胺基取代。 1 8·如請求項丨、2、6或7中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中R3為 R3b 或 R% ，且A A及A各自係獨立地選自s、0、n、NR3a及 CR3a ; R3a各自獨立地為η或經取代或未經取代之Ci_c6^ 基，且汉31)為（：〇]^幵2、CONHMe 或 CN。 1 9.如明求項i、2、6或7中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中R3為 139731.doc 201002716 Λ Ν-Ν Η ，

20.如請求項1、2、6或7中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中R3為

f h2n

h2n

21.如請求項1、2、6或7中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中R3為

22.如請求項1、2、6或7中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中R3為

139731.doc 201002716 且其中下標m係選自〇、1、2、3及4;且R3d各自獨立地為經取代或未經取代2Ci_C6烷基或鹵基。 23. 如請求項丨、2、6或7中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中R3為

Xp~-(R3d)m 且其中下標m係選自Ο、1、2、3及4 ; _ER3d各自獨立地為經取代或未經取代2Cl_c6烷基或鹵基。 24. 如請求項1、2、6或7中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽’其中R3為

且其中下標m係選自0、1、2或3 ;且R3d各自獨立地為經取代或未經取代之CrG烷基或鹵基。 25·如請求項22之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中爪為 0 ° 26.如請求項23之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中^^為 0 〇 27·如請求項1之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物符合式Ilia、Illb或IIIc : 139731.doc 201002716

且X係如請求項1中定義；L為單鍵、-CO-或-NHCO-;環 P為

或且R2d為Η、C3-C8環烷基或視情況經鹵基或C3-C8環烷基取代之Ci_C6烧基。 28.如請求項2之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物符合式Illd或Ille :

且X係如請求項1中定義；L為單鍵、-CO-或-NHCO-;環 P為 139731.doc 201002716

且R2d&H、C3-C8環烷基或視情況經鹵基或C3-C8環烷基取代之(：丨-(：6烷基。 29.如請求項1之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物符合式IVa、IVb或IVc :

IVa

且X係如請求項1中定義；L為單鍵、_c〇_*_NHCO_ ;環 P為

且112£1為11、C^C：8環烷基或视情況經鹵基或C3-C8環烷基取代之C丨-c6烷基。 3 0 ·如請求項2之化合物或醫筚段/ 甘士 & ΰ永学上可接党之鹽，其中該化合物符合式IVd或IVe : 139731.doc •10- 201002716

且X係如請求項1中定義；L為單鍵、-CO-或-NHCO-;環 P為

且112£1為11、C3-C8環烷基或視情況經鹵基或C3-C8環烷基取代之C!-C6烧基。 3 1.如請求項1之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物符合式Va、Vb或Vc :

且X係如請求項1中定義；L為單鍵、-CO-或-NHCO-;環 P為 139731.doc -11 - 201002716

且R為h、C3_C8環烧基或視情況經函基或取代之Ci-C6燒基。其中該化 32.如請求項2之化合物或醫藥學上可接受之鹽合物符合式Vd或Ve: ^

且X係如請求項1中定義；L為單鍵 P為 -CO-4-NHCO.；環

且R為Η、C：3-C8環烧基或視情況經鹵基痞「^

R2d 3'C8環烷基取代之CrG烷基。 33.如請求項丨之化合物或醫藥學上可接受之_ .ι ’其中該化合物付合式Via、VIb或Vic : 139731.doc -12- 201002716

nh2 nh2 Via Vlb 或且X係如請求項1中定義；L為單鍵、-CO-或-NHCO-;環 P為

且尺2£1為11、C3-C8環烷基或視情況經鹵基或C3-C8環烷基取代之Ci_C6烧基。 3 4.如請求項2之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物符合式VId或Vie :

且X係如請求項1中定義；L為單鍵、-CO-或-NHCO-;環 P為 139731.doc 13· 201002716

且R2daH、c^c：8環烷基或視情況經鹵基或c3_C8環烷基取代之CVC6烷基。 35. 36. 37. 38. 39. 40. 41. 42. 43. 如凊求項27-34中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽’其中L為單鍵。如凊求項27-34中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中L為-CO-。如凊求項27-34中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中L為-NHCO-。如請求項27-34中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中 R2d為 Η、Me、i-Pr、t-Bu、CH2CONH2、環丙基曱基或CH2CF3。如請求項27-34中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽’其中R2d為η。如請求項27-34中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽’其中 R2c^i-pr。如請求項27-34中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽’其中R2c^t-Bu。如明求項27-34中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽’其t R2、環丙基甲基。如咱求項27-34中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中L為單鍵；且該環p為 139731.doc 201002716

44. 士 a求項27_34中任一項之化合物或醫藥學上可接鹽’其中L為單鍵；且該環p為

或

45. 如明求項27-34中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽’其中L為單鍵；且該環p為

46.如明求項丨、2、6、7或2?_34中任一項之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中X為CH。 47·如請求項！、2、6、7或27-34中任—項之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中X為N。 48.如請求項丨之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物係選自： H8-(4-((1S，4S)_5-異丙基 _2,5_二氣二環[2.21]庚 _2_ 基）笨胺基）-[1，2,4]三唑并[l，5_a]吡嗪_5_基）異吲哚啉j· 酮； 4-(8-(4-((1S，4S)-5-異丙基 _2,5_二氮二環[2 2…庚 _2· 139731.doc 15· 201002716 基）苯胺基）-[1,2,4]三唑并[1,5-a]。比嗪-5-基）呋喃-2-曱醯胺； 4-(8-(4-((lS，4R)-5-第三丁基-2,5-二氮二環[2.2.1]庚-2-基）苯胺基）-[1,2,4]三唑并[1,5-aP比嗪-5-基）呋喃-2-甲醯胺； 4- (8-(4-((18,48)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2.2.1]庚-2-基）苯胺基）咪唑并[1,2-a]吡嗪-5-基）呋喃-2-曱醯胺； 5- {8-(4-((lS，4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2.2.1]庚-2-基）苯基-胺基）-[1，2,4]三唑并[l，5-a]吼嗪-5-基}-1Η-。比唑-3 -曱酸醯胺； 4-{8-(4-((lS,4S)-5-第三丁基-2,5-二氮二環[2.2.1]庚-2-基）-苯基-胺基）咪唑并[l，2-a]°比嗪-5-基}-呋喃-2-曱酸醯胺； 4-{8-(6-((18,48)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2_2.1]庚-2-基）吡啶-3-基胺基）-[1，2,4]三唑并[1,5-a]吼嗪-5-基}-呋喃-2-甲酸醯胺； 4-{8-(4-((1 S,4S)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2.2.1]庚-2-基）苯基-胺基）咪哇并[1,2-a]。比嗪-5-基}-1Η-吼啶-2-酮； 4-{8-(4-(5-異丙基-2,5-二氮二環[2.2.2]辛-2-基）苯胺基）[1,2,4]-三唑并[1,5-3]吡嗪-5-基}-呋喃-2-曱酸醯胺； 4-{8-(4-(5-異丙基-2,5-二氮二環[2.2.2]辛-2-基）苯胺基）-咪唑并[1,2-a]吡嗪-5-基}-呋喃-2-曱酸醯胺； 4-(8-(4-(3 -異丙基-3,8-二氮二環[3.2.1]辛-8-基）苯胺基）-咪唑并[1,2-a]。比嗪-5-基}-呋喃-2-甲酸醯胺； 139731.doc -16- 201002716 4-{8-(4-(8-異丙基-3，8-二氮二環[3.2.1]辛-3-基）苯胺基）[1,2,4]-三唑并[1,5-a]吼嗪-5-基}-呋喃-2-甲酸醯胺； 4-{ 8-(4-(3-異丙基-3,8-二氮二環[3.2.1]辛-8-基）苯胺基）[1,2,4]-三唑并[1,5-&]吡嗪-5-基}-呋喃-2-曱酸醯胺； 4- {8-(4-(8-異丙基-3,8-二氮二環[3.2.1]辛-3-基）苯胺基）-咪唑并[l，2-a]吡嗪-5-基}-呋喃-2-曱酸醯胺； 5- {8-(6-((18,48)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2.2.1]庚-2- 基）。比啶-3-基胺基）-[1,2,4]三唑并[1,5-a]。比嗪-5-基}-1Η- I ' 吡唑-3 -甲酸醯胺； 5-{8-(4-((18,48)-5-第三丁基-2,5-二氮二環[2.2.1]庚-2-基）笨胺基）-[1,2,4]三唑并-[1,5-a]啦嗪-5-基}-2,3-二氫-異吲哚-1 -酮； 5-{8-(4-((18,48)-5-第三丁基-2,5-二氮二環[2.2.1]庚-2-基）苯基-胺基）-[1，2,4]三唑并[l，5-a]吼嗪-5-基}-1Η-吼唑-3 -甲酸醯胺；及 I) 5-{8-(6-((13,48)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2_2.1]庚-2- 基）吨啶-3-基胺基）-[1，2,4]三唑并[1,5-a]。比嗪-5-基}-2,3-二ίι_異°引°朵-1_嗣， '或其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物或前藥；以及其立 •體異構體、同位素變體及互變異構體。 49.如請求項2之化合物或醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物係選自： 4-(8-(3-((18,43)-5-異丙基-2,5-二氮二環[2.2.1]庚-2-基）苯胺基）-[1，2,4]三唑并[1,5-aP比嗪-5-基）呋喃-2-曱醯 139731.doc -17- 201002716 胺； 4普(3-((1S科5_異丙基H 基）苯胺謂唾并tl，2、啦嗪_5_基庚_2. 5-(8-(3倘，4私、甲酸胺；基）苯胺基MW]三’二—環[⑴]庚-2-或其醫藥學上可接受皿、洛劑合物或前邀. 體異構體、同位素變舻n j樂，以及其i 系文體及互變異構體。 5 〇 · —種醫藥組合物，复' ”包含醫藥學上可接學有效量的如請求項〗交又之載劑及醫# 八貝1、2、6、7或27-34中杯_ s 物或醫藥學上可接受之趟_ 項之化洽其中該载劑為非經腸載劑其中該載劑為口服載劑。其中該載劑為局部載劑 51. 如請求項50之醫藥組合物 52. 如請求項50之醫藥組合物，" 穴丨峨軾劑马局部栽劑。 54. —種如請求項【、2、6 ―离或27-34中任一項之化合物或樂：上可接受之鹽的用途，其係用於製造用以治療或防4寸徵為ECM降解之病狀的藥劑。 53. 如請求項50之醫藥組合物 55.種如凊求項1、2、ό、7或27-34中任一項之化合物或醫尔子上可接受之鹽的用途，其係用於製造用以治療或預防選自涉及發炎之疾病之病狀的藥劑。 56·如請求項54之化合物或醫藥學上可接受之鹽之用途，其中°亥疾病為類風濕性關節炎。 57.如％求項55之化合物或醫藥學上可接受之鹽之用途，其中該疾病為類風濕性關節炎。 139731.doc -18- 201002716 58·如請求項1、2、6、7或27·34中任上可技— 中任—項之化合物或醫藥學八裂冑之鹽，其係用於治療或預防可藉由投與受有絲 '"原活化蛋白激酶活化之蛋白激酶5之抑制劑而預防、改善或消除的病狀。士 °月求項5 8之化合物，其中該病狀係選自涉及細胞外基質降解之疾病、涉及ΜΜΡ1之異常細胞表現之疾病及發炎性疾病。

139731.doc -19-