TW201002346A - Combination of HGF inhibitor and EGF inhibitor to treat cancer - Google Patents

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201002346 六、發明說明 相關申請的交叉引用 本申請依據35 U.S.C.§U9(e)的規定，要求2008年4 月11號提交的美國專利申請第61/044,440號的權益，該 專利申請因此全部倂入本文用於各種目的。 政府利益的聲明 本申請中所描述的發明部分是利用美國國立衛生硏究 院的5R44CA1 0 1 283-03和R01CA129192的資助基金完成 的。美國政府享有本發明的某些權利。 【發明所屬之技術領域】 發明領域 本發明大致涉及癌症的治療，例如，尤其涉及以抑制 肝細胞生長因數的試劑與阻斷另一種細胞信號通路的試劑 一起來治療癌症。 【先前技術】 背景技術 人肝細胞生長因數（HGF )是由間質細胞產生的多功 能異二聚多狀。已經顯示HGF可激發（stimulate)血管 生成、形態形成和細胞遷移（m 〇 t 〇 g e n e s i s )以及各種細 胞類型的生長及散佈（Bussolino et al.，J. Cell. Biol. 119: 629， 1 9 9 2; Zarnegar and Michalopoulos, J. Cell. Biol. 129:1 1 77， 1 9 9 5; Matsumoto et al., C ib a. Found. S ymp. 212:198， 1 9 9 7; Birchmeier and Gherardi, Trends Cell.

Biol. 8:404, 1 99 8; Xin et al. Am. J. Pathol. 158:1111, 2001)。HGF的多效活性通過其受體、由原癌基因cMet所 201002346 編碼的跨膜酪氨酸激酶來介導。除了調節各種正常細胞功 能外，已經顯示HGF及其受體c-Met參與腫瘤的啓動、 侵襲及轉移（Jeffers et al.，J. Mol. Med. 74:505，1996; Comoglio and Trusolino，J. Clin. Invest. 1 09:8 5 7，2002)。 HGF/cMet在包括源自肺、結腸、直腸、胃、腎、卵巢、 皮膚、多發性骨髓瘤和甲狀腺組織的腫瘤的各種人實體瘤 上共表達，並常常過度表達（Prat et al.，Int. J. Cancer 49:323，19 9 1; Chan et al., Oncogene 2:5 93, 1988; Weidner et al., Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. 8:229, 1 993;

Derksen et al., B 1 ο o d 9 9 : 1 4 0 5，2 0 0 2 )。H GF 作爲用於這些 腫瘤的自分泌（Rong et al·，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 9 1:473 1，19 94; Koochekpour et al., Cancer Res. 5 7:53 9 1， 1997)和旁分泌生長因數（Weidner et al·，Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. 8:2 29, 1 993)以及抗細胞凋亡調節劑（Gao et al., J. Biol. Chem. 2 76:4725 7，2001 )。 HGF是102 kDa的蛋白質，其具有與血液凝固的纖溶 酶原和其他酶序列和結構的相似性（Nakamura et al.， Nature 342:440, 1 989; Weidner et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 8:229，1 993，其各個文獻在此通過引用倂入本 文）。人 HGF 被合成作爲 728 個氨基酸前體 (preproHGF )，其經歷細胞內分裂，成爲無活性的、單 鏈形式（proHGF ) (Nakamura et al., Nature 342:440, 1 9 89; Rosen et al., J. C e 11 · B i o 1 · 1 2 7 : 1 7 8 3 , 1 9 9 4)。經過 胞外分泌，proHGF分裂產生生物活性的二硫鍵相連的異 201002346 二聚分子，該二硫鍵相連的異二聚分子由α亞基和沒亞基 組成（Nakamura et al·, Nature 342:440, 1989; Naldini et al·，EMBO J. 11 :4825, 1992)。該 α 亞基含有 440 個殘基 (用糖基化 69kDa )，由 N端基髮夾結構域和四個 kringle結構域組成。所述点亞基含有 234個殘基 (34kDa)，並且具有類絲氨酸蛋白酶結構域，其沒有蛋 白水解活性。HGF的分裂對於受體活化是必須的，但對於 受體結合並不是（Hartmann et al.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:1 1 574， 1 992; Lokker et al., J. Biol. Chem. 268:17145，199 2)。HGF含有4個推定的N糖基化位點， 1個在α亞基中，3個在卢亞基中。HGF具有2個獨特的 細胞特異性結合位點：用於cMet受體的高親和力（Kd= 2 X 10-10 Μ)結合位點和用於硫酸肝素蛋白多糖（HSPG) 的低親和力（Kd = 10-9 Μ )結合位點，其存在於細胞表 面和細胞外基質中（Naldini et al., Oncogene 6:501，1991; Bardelli et al., J. Biotechnol. 37:1 09，1 9 9 4; Sakata et al., J. Biol. Chem., 272:9457, 1 997)。 cMet是IV類蛋白質酪氨酸激酶受體家族的成員。全 長cMet基因被克隆並被識別爲cMet原癌基因（Cooper et al., Nature 3 1 1:29, 1 984; Park et al., Proc. Natl. Acad.

Sci. USA 84:63 79, 1 987)。cMet受體最初被作爲單鏈、部 分糖基化的前體pl7〇(MET)而合成 （Park et al·, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:63 79, 1 9 8 7; Giordano et al.,

Nature 3 3 9:1 5 5, 1 9 8 9; Giordano et al., Oncogene, 4:1 3 83, 201002346 1 989; Bardelli et al., J. Biotechnol.，37: 1 09，1 994)。經過 進一步糖基化，該蛋白質蛋白水解分裂爲異二聚體 190kDa成熟蛋白（ 1385個氨基酸），其由5 0kDaa亞基 (殘基1-307)和145 kDa/3亞基組成。該沒亞基的細胞質 酪胺酸激酶結構域參與信號轉導。 已經調查了幾種不同的方法來獲得HGF抑制劑，即 拮抗劑。這種抑制劑包括截短型H G F蛋白，諸如N K1 ( N 端結構域和 kringle 結構域 1; Lokker et al., J. Biol. Chem 268:17145，1 99 3 ) ; NK2 ( N 端結構域以及 kringle 結構 域 1 和 2; Chan et al·, Science 254:1382, 1991) •，以及 NK4 ( N端結構域和四個kringle結構域），顯示其部分 抑制裸小鼠模型中的鼠肺腫瘤LLC的初級生長及轉移 (Kuba et al., Cancer Res. 60:673 7, 2000)。 作爲另一種途徑，Dodge (碩士論文，三藩市州立大 學， 1 998 )設計出拮抗劑抗 c-Met單克隆抗體 (mAb )。一個mAb、5D5在ELISA中表現出強的拮抗活 性，但誘導cMet表達的BAF-3細胞的增殖反應，大槪是 由於膜受體的二聚作用。爲此，所述抗cMet mAb 5D5的 單域形式已經作爲拮抗劑而被開發（Nguyen et al., Cancer Gene Ther. 1 0:840,2003)。 曹等在 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98:7443，200 1 中 報導，施用三種抗HGF mAb的雞尾酒（cocktail )(基於 其抑制體外HGF的分散活性的能力而選擇）能夠抑制異 種移植裸小鼠模型中的人腫瘤的生長。 -8- 201002346

近來，已經報導了幾種中和的（抑制的）抗HGF mAb，包括 L2G7 (Kim et al.，Clin Cancer Res 12:1292, 2006以及美國專利第 7,220,4 1 0號）、HuL2G7 (WO 07 1 1 5049 A2)、在 WO 2005/0 1 71 07 A2 中描述的人 mAb 以及在 WO 07143090 A2或 WO 07143098 A2中描述的 HGF結合蛋白。也已經報導了抗HGF mAb L2G7，當全身 施用時，能夠強烈地抑制常位（顱內）神經膠質瘤的生長 或甚至誘導其退化以及延長動物存活（Kim et al.，op. cit. and WO06 1 3 0773A2)。 表皮生長因數（EGF )是廣泛分佈的生長因數，其在 癌中能夠激發癌細胞增殖、阻斷凋亡、活化入侵和轉移， 並且能夠激發血管生成（Citri et al.，Nat· Rev. Mol. Cell. Biol. 7:505，2006; Hynes et al.，Nat. Rev. Cancer 5:341， 2005)。EGF受體（EGFR或ErbB)是跨膜、酪氨酸激酶 受體，其屬於四個相關受體家族。因爲大多數人上皮癌通 過該家族的生長因數和受體的功能性活化來標記 (Ciardiello et al., New Eng. J. Med. 3 58: 1160, 2008) > 戶斤 以EGF和EGFR是用於癌症治療的自然目標。EGFR的活 化通常與突變相關，例如，在某些肺癌中外顯子19和 21，或者在許多神經膠質瘤中形成EGF受體變異體ΠΙ (EGFRvIII )的外顯子 2-7 的缺失（Rosell et al.，Clin. Cancer Res. 1 2:7222, 2006; Ji et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1 03:78 1 7，2006)。 EGF/EGFR通路的四種抑制劑已經被批准作爲藥物銷 201002346 售：Erbitux® (西妥昔單抗，嵌合體抗EGFR mAb解剖治 療化學（ATC )代碼L01XC06，商業上可得自英克隆/百 時美施貴寶公司（Imclone/Bristol Myers Squibb))用於 結腸癌以及頭部與頸部癌症的鱗狀上皮細胞癌； Vectibix® (帕尼單抗，人抗 EGFR mAb ACT 代碼 L01XC08 )，用於結腸癌，商業上可得自安進公司 (Amgen) ) ; Tar ceva® (埃羅替尼，N-(3 -乙炔苯）-6,7- 二（2-甲氧基乙氧基）-4-喹唑啉胺，商業上可得自基因技術 公司（Genentech))，以及Iressa® (吉非替尼，4 -喹哩 啉胺，N-(3-氯-4-氟苯基）-7-甲氧基-6-[3-4-嗎啡啉丙氧 基]，商業上可得自阿斯利康公司（AstraZeneca ))， EGFR的酪氨酸激酶活性的兩個小分子抑制劑，其中， Tarceva用於治療非小細胞肺癌和胰腺癌，lressa用於治 療在特殊條件下的非小細胞肺癌。然而，癌細胞能夠迅速 地將其來自EGFR的依賴性轉換至cMet (RTK Switching; Stommel et al·，Science 3 1 8:28 7，2007)，以及 EGFR 依賴 性的腫瘤能夠通過cMet的擴增來產生對於EGFR抑制劑 埃羅替尼和吉非替尼抑制劑的抵抗性（Bean et al.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1 04:20932, 2007)。 【發明內容】 發明內容 本發明提供治療癌症的方法，該方法向需要這種治療 的患者施用第一試劑（該第一試劑抑制肝細胞生長因數 (HGF ))聯合第二試劑（該第二試劑抑制除由HGF激 -10- 201002346 發的（HGF/cMet通路）以外的細胞信號通路）。在優選 的實施方式中，所述第一試劑是結合至並中和HGF的單 克隆抗體（mAb )。嵌合體、人及人源化抗HGF mAb是 特別優選的，尤其是人源化L2G7。在一些實施方式中， 所述第二試劑是表皮生長因數（EGF )的抑制劑，例如結 合至EGF受體的mAb，從而抑制EGF的結合，諸如西妥 昔單抗或帕尼單抗；或者EGF通路的小分子抑制劑，諸 如埃羅替尼或吉非替尼。所述方法對於治療肺、結腸、頭 部與頸部癌症以及諸如神經膠質瘤的腦腫瘤是特別優選 的。 【實施方式】 本發明提供治療癌症的方法，該方法向需要這種治療 的患者施用第一試劑（該第一試劑抑制肝細胞生長因數 (HGF )的活性，即HGF拮抗劑或cMet掊抗劑）聯合 (即連同）第二試劑（該第二試劑抑制除由HGF激發的 (HGF/cMet通路）以外的細胞信號通路）。在很多實施 方式中’所述第一試劑/或第二試劑是單克隆抗體 (mAb )。 1.抗體 抗體是具有複雜內部結構的非常巨大、複雜的分子 (〜150,000的分子量或約1320個氨基酸）。天然抗體分 子含有兩對等同的多肽鏈，每對具有一個輕鏈和一個重 鏈。每個輕鏈和重鏈又由兩個區域組成：參與結合目標抗 -11 - 201002346 原的可變（‘‘ V ’’ ）區域和與免疫系統的其他成分相互作 用的恒定（‘‘ C ”）區域。輕鏈和重鏈可變區在三維空間 中折疊在一起以形成結合抗原的可變區域（例如，在細胞 表面上的受體）。在每個輕鏈或重鏈可變區域內，存在三 個短片段（長度平均個氨基酸），其被稱爲互補決定 區（“CDR” ）。在抗體可變結構域中的六個CDR (三個 來自輕鏈，三個來自重鏈）在三維空間中折疊以形成鎖定 在目標抗原上的實際的抗體結合位點。C D R的位置和長 度已經被精確地確定（Kabat, E. et al·, Sequences of Proteins of Immunological Interest, U. S. Department of Health and Human Services, 1 9 8 3, 1 98 7 )。未在 CDR 中 含有的可變區域的部分被稱爲框架（framework )，其形 成C D R的環境。 單克隆抗體（mAb)是抗體的單個分子種類，並因此 不包括以下多克隆抗體：通過給動物（諸如齧齒動物、兔 子或山羊）注射抗原並且從該動物提取血清而產生。人源 化抗體是基因工程單克隆抗體，其中來自小鼠抗體（“供 體抗體”，其也可以是大鼠、倉鼠或其他類似的物種）的 CDR被移植到人抗體（“受體抗體”）上。人源化抗體 也能夠用來自小鼠抗體的低於（less than)完整CDR而 希(I 得（仿!1 女口， Pascalis et al., J . Immunol. 169:3076， 2002)。 因此，人源化抗體具有來自供體抗體的CDR與來自人抗 體的可變區域框架和恒定區域。輕鏈和重鏈受體框架可以 來自相同或不同的人抗體’並且每個可以是兩個或多個人 -12- 201002346 抗體框架的複合物；或者可選擇地爲一系列人框架的共有 序列（例如’在上文所引的Kabat等人的文獻中所定義的 人抗體的亞群），即具有在各個位置處的系列中的最常發 生的序列。另外，爲了保持高結合力，至少能夠使用兩個 另外的結構元素中的一個。參見美國專利第5,5 3 0，1 0 1和 5，5 8 5,0 89號，其各自以引用方式倂入本文中，其提供用 於人源化抗體的構建的詳細指導。 在第一個結構元素中，通過適當地從很多已知的人抗 體中選擇受體抗體來選擇人源化抗體的重鏈的可變區域的 框架，以與供體抗體的重鏈可變區域的框架具有最大的序 列同源性（在65%與95%之間）。當根據Kabat編號約定 來比對經比較的抗體序列時，序列同源性被確定。在第二 結構元素中，在構建人源化抗體中，根據指定規則，用來 自供體抗體的相應的氨基酸來替換在人受體抗體（在 CDR外）的框架中所選的氨基酸。特別地，基於其與 CDR相互作用的能力來在框架中選擇要替換的氨基酸。 例如，經替換的氨基酸能夠接近於供體抗體序列中的 CDR或者如在三維空間中測量的人源化抗體中的CDR的 4~6埃以內。 嵌合抗體是以下抗體：其中小鼠（或其他齧齒動物） 抗體的可變區域與人抗體的恒定區域相結合；其採用基因 工程的構建是已知的。這種抗體保留小鼠抗體的結合特異 性，同時具有約三分之二人的抗體。在小鼠、嵌合和人源 化抗體中存在的非人類序列的比例顯示：嵌合抗體的免疫 -13- 201002346 原性是在小鼠和人源化抗體之間的中間。可能相對於小鼠 抗體已經減弱免疫原性的基因工程抗體的其他類型’包含 使用噬菌體展示方法（D〇wer et a1.， w〇9 1 / 1 727 1; McCafferty et al., W092/001 047; Winter, WO92/2079 1； and Winter，FEBS Lett. 23:92，1 998,其各自以引用方式 倂入本文中）或者使用轉基因動物（Lonberg et al^ W093/12227; Kucherlapati WO91/10741,其各自以引用方 式倂入本文中）而制得的人抗體。 如本文所使用的，術語“類人（human-like ) ”抗體 指以下mAb :其中一個或兩個鏈的氨基酸序列的大部分 (例如約5 0 %或以上）源自於人免疫球蛋白基因。因此， 類人抗體包括，但不限於嵌合、人源化和人抗體。如本文 所使用的，“免疫原性減弱的”抗體是以下抗體：當施用 于人類患者時，預期具有比小鼠抗體更顯著低的免疫原 性。這種抗體包括嵌合、人源化和人抗體，以及通過在可 以有助於B或T細胞抗原決定部位的小鼠抗體中替換特 異性的氨基酸來制得的抗體，例如暴露的殘基（Padlan, Mol. Immunol· 28:489，1991)。如本文使用的，“基因工 程”抗體是以下抗體：在重組DNA技術的幫助下，用於 其的基因已經被構造或置入非自然環境（例如小鼠中或噬 菌體上的人基因），並且因此，例如，將不會包括用常規 雜交瘤技術制得的小鼠mAb。 mAb的抗原決定部位是mAb所結合的抗原的區域。 如果每個競爭地抑制（阻斷）與其他抗原的結合，那麼兩 -14- 201002346 個抗體結合相同或重疊的抗原決定部位。也就是說，如在 與缺少競爭抗體的對照相比較的競爭性結合測定中，一個 抗體的lx、5x、l〇x、20χ或ΙΟΟχ的過量將其他的結合抑 制了至少50%，優選地75%、90%或甚至99% (參見，例 如 Junghans et al., Cancer Res. 50:1495，1 9 9 0 > 其各自以 引用方式倂入本文中）。另外，如果實際上減少或消除一 個抗體的結合的抗原中的所有的氨基酸突變，減少或消除 其他的結合，那麼兩個抗體具有相同的抗原決定部位。如 果減少或消除一個抗體的結合的一些氨基酸突變，減少或 消除其他的結合，那麼兩個抗體具有重疊的抗原決定部 位。 2.本發明中使用的抗體

與 HGF結合的單克隆抗體（mAb )(即抗 HGF mAb )能夠使HGF中和或是中和的--如果該結合部分 地或完全抑制HGF的一種或多種活性（即當mAb用作單 一試劑時）。在中和抗體可以抑制的HGF的生物學特性 中，是HGF結合其cMet受體的能力，以引發某些細胞系 (諸如Madin-Darby犬腎（MDCK )細胞）的分散；以激 發某些細胞的增殖（即促進有絲分裂），這些細胞包括肝 細胞、Mv 1 Lu鼬鼠肺上皮細胞和各種人腫瘤細胞；或以 激發血管生成，例如通過人血管內皮細胞（HUVEC )增 殖或導管形成的激發或者通過血管的誘導——當應用於雞 胚絨毛膜尿囊膜（CAM )。用於本發明的抗體優選地與人 HGF結合，即結合由GenBank序列（保藏號D90334)進 -15- 201002346 行編碼的蛋白質。 中和抗HGF mAb優選地用作本發明中的第一試劑’ 並且在例如 〇.〇1、0.1、0.5、1、2、5、10、20 或 50 pg /ml的濃度下，用本領域的已知的方法’將HGF的生物功 能（例如增殖或散射的激發）抑制了約至少5 0% ’優選地 75%，更優選地90%或者95%或甚至99%，並且更爲優選 地大約1 0 0 % (基本上完全地）。如果活性水準對於缺少 HGF的負誤差在誤差界限內，認爲抑制完全。典型地’當 使用的HGF的量僅足以完全激發生物活性或者爲〇_〇5、

0.1、0 · 5、1、3或1 0 μ g /m 1，測定抑制的範圍。優選 地，當抗體與 HGF的摩爾比 0.5x、lx、2x、3x、5x或 1 0 x時，至少 5 0 %、7 5 %、9 0 %或 9 5 %或者基本上實現完 全抑制。優選地，當用作單個試劑時，mAb是中和的，即 抑制生物活性，但是任選地2個m Ab能夠一起使用來產 生抑制。更優選的是’ mAb中和不止一種，而是上文列出 的生物活性中的若干種；用於本文的目的，用作單試劑的 抗HGF mAb中和HGF的全部生物活性，被稱爲“完全中 和”，並且這種mAb是最爲優選的。本發明使用的抗 HGF mAb優選地對HGF是特異性的，也就是說它們不會 結合或僅更小程度地結合至（例如K a爲至少十倍更少） 與HGF (諸如成纖維細胞生長因數（FGF )以及血管內皮 生長因數（VEGF))有關的蛋白。優選的抗體缺乏對於 HGF的對抗活性。也就是說，所述抗體阻斷HGH與cMet 的相互作用，而沒有直接激發產生HGF的細胞。M 201002346 地，本發明中所使用的抗HGF mAb對於HGF具有結合力 (Ka)，其濃度至少爲107M-1，優選地108M-1或更 高，且最優選地爲109 M-1或更高，或者甚至1010 M-1 或更高。 本發明使用的MAb包含以天然四聚體形式存在的抗 體（2個輕鏈和2個重鏈），且可以是已知同型IgG、 IgA、IgM、IgD和IgE以及它們的亞型中的任何，即人 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4 和 /J、鼠 IgGl、IgG2a、IgG2b 和 IgG3。mAb也包含抗體（諸如Fv、Fab和F(ab，）2 )的片 段；雙功能雜交抗體（例如Lanzavecchia et al.，Eur. J. Immunol. 1 7:1 0 5, 1 987 )、單鏈抗體（H u s t ο n e t al., P ro c . Natl. Acad. Sci. USA 8 5:5 879, 1 98 8; Bird et al., Science 242:423, 1 988)；單臂抗體（Nguyen et al., Cancer Gene

Ther. 1 0:840，2003 );以及具有改變的恒定區域的抗體（例 如，美國專利第5,624,82 1號）。mAb可以是動物（例如 小鼠、大鼠或雞）源的，或它們可以是基因工程的。齧齒 mAb通過本領域中已知的標準方法制得，包括在腹膜內、 靜脈注射或進入腳墊（footpad )的適合的佐劑中使用 H GF的多重免疫法，隨後用適合的變異細胞株提取脾或淋 巴結細胞和融合物，且隨後針對產生結合HGF抗體的雜 交瘤而選擇，例如參見以下的實施例。本發明優選地使用 嵌合及人源化mAb，其通過上述本領域中已知的方法而制 得。通過例如噬菌體展示或轉基因小鼠方法（例如，參見 前述 Dower et al·，McCafferty et al.，Winter，Lonberg et -17- 201002346 al., Kucherlapati)而制得的人抗體也是優選的。更爲普 遍的，本文所定義的類人的、免疫原性減弱的和基因工程 抗體都是優選的。 中和抗HGF mAb L2G7 (其通過根據布達佩斯條約在 美國模式培養物保藏所以ATCC編號PTA-5162保藏的雜 交瘤（而產生），如 Kim et al.，Clin Cancer Res 12:1292, 2006和美國專利第7,220,410號中所敍述的，且尤其是其 嵌合和人源化形式（諸如 HuL2G7，如在 WO 07115049 A2中敍述的）特別優選地作爲本發明中的第一試劑。具 有如 L2G7的相同的或重疊抗原決定部位和/或爲結合 HGF而與L2G7競爭的中和 mAb，也是優選的。當根據 Kabat編號約定進行比對時，至少在CDR中，MAb與 L 2 G 7的氨基酸序列 9 0 %、9 5 %或 9 9 %相同，並且維持其 功能特徵，或通過小量的功能無意義的氨基酸取代（例如 保守置換）、缺失或插入，在本發明也能夠使用。 在WO 2005/0 1 7 1 07 A2中敍述的抗HGF mAb在本發 明中優選地作爲第一試劑使用，無論通過名稱或序列明確 地或者通過敍述或關係含蓄地以明確地敍述mAb。特別優 選的 mAb是通過雜交瘤產生的，其指定爲 1.24.1、 129.1、1.60.1、1.61.3、1_74_3、1.75.1、2.4.4、2.12.1、 2-40.1和3.10.1，並且分別通過其由SEQ ID NO的24〜43 (最優選的是2 . 1 2. 1 )提供的重鏈和輕鏈可變區域序列確 定；mAb具有如這些任何列出的mAb的相同的各自的 CDR; mAb具有輕鏈和重鏈可變區域，其與這些所列出的 -18 - 201002346 mAb至少90%、95 %或99%相同或通過不連貫氨基的酸取 代、缺失或插入而與它們不同；如任何這些列出的mAb， mAb與HGF的相同的抗原決定部位結合，且權利要求1 通過其中94包括所有mAb。 作爲選擇，在 W007143090A2 或 WO07143098A2 中 所描述的任何H G F結合蛋白可以作爲本發明的第一試劑 使用。 本發明使用的天然（native ) mAb可以由它們的雜交 瘤產生。基因工程的mAb，例如嵌合體或人源化mAb， 可以通過本領域已知的各種方法來表達。例如，編碼它們 的輕鏈和重鏈V區域的基因可以由重疊的寡核苷酸合 成’與可獲得的C區域一起插入表達載體（例如市售的 Invitrogen試劑盒）’該載體提供必要的調節區域，例如 啓動因數、強化因數、多A位點等等。優選使用CMV啓 動-強化因數。然後可以採用各種已知的方法（諸如脂轉 染法或電穿孔法）將表達載體轉染至哺乳動物細胞株，諸 如CH0或非產骨髓瘤中，包含Sp2/0和NS0，通過適當 的抗性篩選選擇表達抗體的細胞。例如，參見美國專利第 5,53 0,1 0 1號。較大量的抗體可以通過在市售的生物反應 器中培養細胞而產生。 一旦被表達，本發明使用的mAb可以根據本領域的 標準程式進行純化，諸如微量過濾、超濾，蛋白A或G 親和色譜、空間排阻色譜、陰離子交換色譜、陽離子交換 色譜和/或基於有機染色的其他親和色譜形式等等。優選 -19- 201002346 至少約90%或95%同質性的大量純抗體，更優選98%或 9 9%或更高同質性’用於製劑。製劑配方中典型地提供 mAb ’即在生理學可接受的載體中，任選輔料或穩定劑。 可接受的載體、輔料或和穩定劑在所用劑量和濃度下對受 者是無毒的，包含緩衝液，諸如pH典型地爲5.0至8.0， 更常見的爲6·0至7.0的硫酸鹽、枸櫞酸鹽、醋酸鹽； 鹽，諸如氯化鈉、氯化鉀等等用於製備等滲溶液；抗氧化 劑、防腐劑、低分子量多肽、蛋白、親水高分子材料，諸 如聚山梨醇酯8 0、氨基酸、碳水化合物、螯合物試劑、 糖類和本領域技術人員已知的其他標準成分（Remington’s Pharmaceutical Science 16th edition, Osol， A. Ed. 1 98 0)。mAb的典型濃度爲1 - 100 mg/ml，例如濃度爲10 m g/m1。 3 .本發明使用的其他試劑

除了抗-HGF mAb之外，本發明使用的第一試劑可以 是抑制HGF的任何其他試劑，即抑制HGF的生物活性， 因此可以被稱爲HGF拮抗劑。實施例爲cMet的可溶性形 式（例如，參見 Michieli et al·, Cancer Cell 6:61，2004)和 幾種抗- HGF mAb 的雞尾酒（Caoetal.，Proc.Natl.Acad· Sci. USA 98:7443, 2001)。本文中使用的術語“抑制HGF 的試劑”或“ HGF抑制劑”也包含與HGF的cMet受體相 互作用的試劑，以便通過cMet抑制HGF信號；這種試劑 也被稱爲cMet抑制劑或拮抗劑。然而，如本文所使用 的，H G F或c M e t或H G F / c M e t通路的抑制劑或拮抗劑不 -20- 201002346 意味著包含抑制信號事件（signaling events)的試劑，諸 如MAP激酶的啓動發生在（即下游）HGF-cMet相互作用 和cMet的啓動之後，以及HGF/cMet通路與其他配體/受 體系統共用的信號。cMet拮抗劑可以通過結合至cMet和 競爭地阻斷HGF的結合或通過HGF啓動而起作用。示例 試劑包含截短的HGF蛋白，諸如NK1、NK2和NK4(如前 述），以及抗-cMet mAb。優選的實施例是基因工程的僅有 —隻“臂”的抗cMet抗體，即結合區域，諸如OA-5D5 (Martens et al., Clin. Cancer Res. 12:6144, 2006)。這樣 的試劑也可以是cMet的酪氨酸激酶活性的小分子抑制 劑，包含 SU5416 (Wang et al·，J Hepatology 41:267, 2004) 和由 ArQule，Inc.公司開發的、可以口服的 ARQ 197(在 2〇〇7年美國臨床腫瘤學會年會的摘要編號爲3525)。 本發明使用的第二試劑是細胞信號通路而非 HGF/cMet通路的任何抑制劑。這種試劑可以結合至刺激 該通路的配體上，或結合至該通路的受體上，或結合至下 游信號分子上。該試劑可以是蛋白，諸如mAb，優選結合 至配體或受體的嵌合體、人源化或人mAb，或可以是小分 子（即具有相對低分子量、通常小於500或600或1〇〇〇 kDa的化合物）。蛋白是典型的非經腸道施用，例如靜脈 內施用，而小分子可以經腸道施用或口服施用。配體經常 是細胞因數或生長因數，而受體經常是酪氨酸激酶，因此 本發明中將酪氨酸激酶抑制劑優選作爲第二試劑。例|如， 第二試劑可以是一種抑制E G F的試劑，優選人e G F，即 -21 - 201002346 抑制E G F的生物活性。抑制E G F的試劑”或‘‘ e G F抑 制劑”包含與egfr相互作用的試劑，優選人EGFR，以 便通過EGFR抑制EGF信號；這種試劑也可以被稱爲 EGFR抑制劑或拮抗劑。EGFR拮抗劑可以通過結合至 EGFR和競爭地阻斷EGF的結合或通過egf啓動而起作 用’例如抗-EGFR mAb西妥普單抗和帕尼單抗，或通過 抑制EGFR的酪氨酸激酶活性，例如埃羅替尼和吉非替 尼。EGF和EGFR是眾所周知的人蛋白，其序列可從 UniProtKB/Swiss-Prot和相似的資料庫中獲得。由於個體 間天然等位基因變異而使物種中的蛋白具有多於一種已知 形式，就這種蛋白而論’抑制劑能夠結合或抑制任何或全 部這種已知的等位元基因形式，優選地結合和抑制野生 型，最常見或首先公佈的等位基因形式。EGF和EGFR示 例序列的UniProtKB/Swiss-Prot蛋白標識號被分別指定爲 P0 1 133和P005 3 3。一般地，本發明中可以被第二試劑抑 制的下游信號通路包含 RASORAFOMEKC] APK通路和 PI3K-AKT通路。許多其他信號通路及它們的抑制劑對於 細胞生物學領域的技術人員來說是眾所周知的。 4 .處理方法 本發明提供以下處理方法：將所表明的第一和第二試 劑施用於患有癌症（治療處理）或處於癌症發生或復發的 風險中（預防處理）的患者。術語“患者”包含人類患 者；獸醫患者，諸如貓、狗和馬；農場動物，諸如牛、羊 和豬；以及用於試驗目的的試驗動物’諸如小鼠和大鼠。 -22- 201002346 所述方法用於人類患者的治療。在一些方法中’患者患有 腫瘤，所述腫瘤包含具有在EGFR受體中的變異的細胞， 諸如外顯子2 - 7的缺失。任選地，能夠在治療前在DN A 或蛋白質水準上進行腫瘤活組織檢查。也能夠在其他種類 中使用針對人類蛋白質的mAb或其他試劑，在該種類 中，種類同系物具有與人類蛋白質的抗原交叉反應性。在 缺少這種交叉反應性的種類中，抗體或其他試劑與針對在 該種類中存在的種類同系物的適當的特異性一起使用。然 而，在試驗動物中的異種移植實驗中，普遍使用對於人類 蛋白質（由異種移植表達）具有特異性的mAb或其他試 劑。 能夠將在本發明的方法中用作第一或第二試劑mAb 或其他蛋白質施用給患者，施用是通過任何適當的途徑進 行的’尤其是像雙親地經由靜脈（IV )注入或靜脈團注、 肌肉注射或皮下或腹膜注射。IV注入能夠在僅1 5分鐘內 給予’當通常更長，如30分鐘、60分鐘、90分鐘或甚至 2或3小時。也能夠將試劑直接注射入至疾病的位置（例 如’腫瘤本身 '或大腦或其在腦腫瘤的病例中的外周膜或 腦脊液）或在載體（諸如脂質體）中膠囊化。然而，當治 療腦腫瘤（即在患者的大腦中存在的腫瘤），：mAb的全身 用藥（例如’通過IV注入）可能並甚至是優選的（參見 WO 06 13 0773 A2 )。給予癌症患者的劑量足以減輕或至 少部分地阻止所治療的疾病（“治療有效劑量”）並且有 時爲0.1至5mg/kg體重，例如1、2、3、4、5或6 -23- 201002346 mg/kg，但可以高至 10mg/kg或甚至 15 或 20 或 3 0mg/kg。也可以施予固定單位劑量，例如，50、100、 2 00、500或1 000 mg，或該劑量可以基於患者的表面積’ 例如100 mg/m2。經常施用在1和8劑量之間（例如1、 2、3、4、5、6、7、或8 )的劑量以治療癌症，但可以給 予1 0、1 2、2 0或更多的劑量。該試劑能夠按照如下給 予：每天一次、每週兩次、每週一次、隔週一次，每月一 次，或以某一其他時間間隔，例如取決於其半衰期，如1 周、2周、4周、8周、3-6個月或更長，或者直到疾病進 行。也可能有相關療程，按現狀長期施用。 當使用小分子作爲第一或第二試劑，其典型地更頻繁 地施用，優選地每天一次，但也可能每天2、3、4或更多 次，按現狀每兩天一次、每週一次或某一其他間隔。小分 子藥物經常是口服給藥但也能夠是腸胃外給藥，例如，經 由IV注入或靜脈團注或皮下或肌內注射。小分子藥物的 劑量典型地位10至1000 mg，其中100、150、200或250 mg是非常典型的，具有在臨床試驗中建立的最優劑量。 對於蛋白質或小分子藥物，劑量的方案（regime )和給藥 間隔（其減輕或至少部分地阻止疾病（生物化學、組織學 和/或臨床的疾病，包括其在疾病的發展中的合倂症和過 度病理學表型）的症狀）是指治療有效的方案。 當第一試劑（HGF抑制劑）與第二試劑（EGF抑制 劑）聯合使用時，聯合可以在任何方便的時間表內進行。 例如，可以在同一天將各個試劑施用給患者，該試劑甚至 -24 - 201002346 在相同的靜脈注入中施用。然而，該試劑也可以隔數曰或 隔數周、每兩周或數月施用，等等。在一些方法中’在足 夠相近的時間內施用各個試劑，以便這些試劑在治療患者 的可檢測的水準上同時存在（例如在血清中）。在一些方 法中，試劑的一個完整療程（由一個時間段上許多劑量組 成，參見上文）跟隨著另一個試劑的療程（其也由許多劑 量組成）。在一些方法中，如果患者對於具有最初施用的 試劑的耐藥性或產生耐藥性，則開始二次施用該試劑的治 療。該患者可以僅接受使用單個試劑或具有一個或兩個試 劑的單一療程。如果主治醫師的判定對於患者是有益的， 劑給藥之間允許1天、2天或數天或數周的恢復期。當針 對一種試劑適合的治療方案已經確立後，當該試劑與其他 聯合使用時，優選地使用該方案。例如，每天服用100 mg或150 mg的Tarceva® (埃羅替尼）藥九一次，每天 服用 25 0 mg 的 Iressa® (吉非替尼）藥片。Erbitux® (西妥昔單抗）首次劑量爲400 mg/m2 IV注入，隨後每 週250 mg/m2的劑量，Vectibix® (帕尼單抗）每2周IV 注入施用6 mg/kg。典型地，施用這些試劑直到疾病好 轉。 來自若干能夠用在本方法中的人抗EGFR抗體的重鏈 或輕鏈可變區域的序列’所述抗體在US 6,235,883 (通過 引用倂入本文）中公開。Vectibix (不包含信號序列）的 全長序列在圖6A和6B(參見安進公司用於，833專利的 專利期限延長的提交）中複製。愛必妥是小鼠2 2 5抗體 -25- 201002346 (在 US 4,943,533中敍述）的嵌合形式（人 IgG1 Kappa )。該抗體的輕鏈和重鏈可變區域的氨基酸序列在 US 7,060,808中敍述（通過引用倂入本文）且在圖7A和 7B中複製。所述’808專利也敍述了 2M抗體的人源化形 式。該人源化抗體也能夠在本方法中使用。 任選地，HGF和EGF抑制劑能夠在試劑盒中結合， 例如，如同在相同包裝或容器中的分離的小瓶。該試劑盒 能夠含有用於進行本文所述的任何方法的指令。EGF和 H GF抑制劑的一些組合（例如，兩個抗體）也能夠在相同 的組分中混合。這種組合和試劑盒能夠通過製造商或通過 醫療服務供應商來形成。 本發明的方法也能夠用於具有癌症風險的患者的預 防。這種患者包括具有癌症遺傳易感性的患者、經歷過暴 露於致癌因素（諸如輻射或毒素）的患者以及以前患過癌 症或有復發風險的患者。預防性劑量能夠足以消除或降低 該風險、減小嚴重性或延遲該疾病的發生，包括該疾病的 生物化學的、組織學的和/或臨床症狀，其合倂症和過渡 病理學表型在該疾病的發展中出現。有效作用這些物件的 一個或多個的劑量和間隔的藥物組合物的施用指作爲預防 有效的方案。用於治療處理的上文公開的劑量和方案也用 於預防治療。 對使用本發明的方法的治療特別敏感的癌症的類型包 含：需要血管發生或伴隨有HGF或cMet的水準下降的已 知或疑似的實體瘤（其在相對於同樣類型的非癌性組織的 -26- 201002346 mRNA或蛋白質水準上測量，任選地來自相同的患者）， 例如卵巢癌、乳腺癌、肺癌、（小細胞或非小細胞）、結 腸癌、前列腺癌、胰腺癌、膀胱癌、子宮頸癌、腎癌、胃 癌、肝癌、頭頸部癌、間皮癌、黑素瘤和肉瘤以及腦腫 瘤。也能夠將治療施用於具有白血病或淋巴瘤的患者。本 發明的方法尤其適用於腦腫瘤（諸如腦膜瘤）的治療；神 經膠質瘤，包括腦室室管膜細胞瘤、少突神經膠質細胞瘤 和全部類型的星形細胞瘤（低度惡性、間變的和少突神經 膠質細胞瘤或僅爲成膠質細胞瘤）；骨髓胚細胞瘤、神經 節神經膠質瘤、神經鞘瘤、脊索瘤；以及兒童原發性腦腫 瘤，包括原發性神經外胚層瘤。原發性腦腫瘤（即在腦部 產生）和轉移的腦腫瘤能夠通過本發明的方法治療。當第 二試劑是EGF抑制劑時，已知對於批准的EGF抑制劑藥 物的一種或多種敏感的腫瘤是特別優選的，例如肺癌、結 腸癌、頭頸癌和腦癌。腫瘤類型或個體腫瘤（其中EGFR 是活性過度的，典型地因爲變異（例如，EGFRvIII )或擴 增）作爲治療的靶向是最優選的。 因爲癌症的嚴重性，治療疾病的幾種藥物經常聯合給 予。因此，在本發明的優選的實施方式中，將第一試劑 (HGF抑制劑）和第二試劑（例如EGF抑制劑）與另外 的抗癌藥物一起施用。能夠在所述其他抗癌藥物前、期間 或之後施用第一試劑盒第二試劑。例如，能夠將第一和第 二試劑與腫瘤學領域中一般技術人員已知的化療藥物的任 何一種或多種一起施用’例如烷化劑，諸如卡莫司汀、苯 -27- 201002346 丁酸氮芥、順鈾、卡鉑、奧沙利鉑、丙卡巴肼和環磷醯 胺；抗代謝藥物，諸如氟尿嘧啶、氟脲嘧啶去氧核苷、氟 達拉濱、吉西他濱、甲氨蝶呤和羥基脲；天然產物，包括 植物生物鹼和抗生素，諸如博來黴素、多柔比星、柔紅黴 素、伊達比星、依託泊苷、絲裂黴素、長春域、長春新城 和紫杉醇（紫杉醇（p a c 1 i t a X e 1 ))或相關化合物諸如 Taxotere® (多西紫杉醇）；拓撲異構酶1抑制劑伊立替 康；特別批准的腦腫瘤試劑，包括替莫唑胺和Glia del® (卡氮芥糯米紙膠囊劑）；以及酪氨酸激酶的抑制劑，諸 如Gleevec® (伊馬替尼）和Sutent® (紆癌特）（蘋果酸 舒尼替尼）；以及所有的批准的和實驗性的抗癌試劑，其 在WO 2005/017107 A2(其通過引用倂入本文）中列出。 第一和第二試劑能夠與在標準治療方案中使用的1、2、3 或更多種的這些其他試劑聯合施用。正常地，其他試劑是 那些已知對於所治療的癌症的特定的類型有效的那些試 劑。而且，第一和第二試劑能夠以放射治療的任何形式一 起施用，包括外線束輻射、強度調控放射治療（IMRT ) 和任何形式的放射外科學，其包括伽馬刀、電腦刀、線性 電子加速器和組織內放射療法（例如植入的放射性粒源、 GliaSite氣球）和/或外科手術。與放射治療的聯合能夠特 別地適用於頭頸部和腦腫瘤。第一和第二試劑能夠與其他 試劑一起施用’所述其他試劑包括諸如單克隆抗體（包括 對抗HER2抗原的Herceptin™ (赫賽汀）和對抗VEGF的 Avastin™ (阿瓦斯丁））生物製品。 -28 - 201002346 與同樣地治療（例如，具有標準化學療法或無特殊療 法）但無第一和第二試劑的患者相比較，根據本發明的方 法使用第一和第二試劑治療的癌症（例如，卵巢、前列 腺、乳腺、肺、結腸、胰腺、腎、頭頸和腦，尤其是復發 或頑固性的癌症）患者的無疾病進展存活期或總存活期可 以延長至少 1 0 %、2 0 %、3 0 %或 4 0 %，但優選地爲 5 0 %、 6 0 %至 7 0 %，或甚至 8 0 %、9 0 %、1 0 0 %或者更長。經由根 據本發明的方法的治療，中値無疾病進展存活期或總存活 期也可以延長至少10天，但優選地30天、60天，或3、 4、5個月或1年或者更長。另外或可選擇地，通過本發 明的方法的治療可以將患者的完全反應率、部分反應率或 客觀反應率（完全+部分）提高至少1 0 %、2 0 %、3 0 %或 4 0 %但優選地 5 0 %、6 0 %至 7 0 %或甚至 8 0 %、9 0 %或 1 〇 〇 %。而且，當施用兩個試劑的治療時，施用各個試劑 的方案以這樣的一種方式（各個試劑均能夠促進治療）結 合’如此，相對於使用一個所述試劑且沒有其他試劑的治 療，根據本發明的使用第一和第二試劑的治療能夠延長無 疾病進展或總存活期，或者將完全、部分或客觀反應率提 高至少 1〇%、20%、30%或40%，但優選地 50%、60%至 7 〇 %或甚至8 0 %、9 0 %或1 0 0 %。的確，優選地，使用第一 和第二試劑的治療是協同的，即比添加的要更好。任選 地，根據本發明的方法的治療能夠抑制腫瘤侵入或轉移。 典型地，在臨床試驗（例如，Π期、ΙΙ/ΠΙ期或III 期試驗）中，相對於僅接受標準療法的患者的對照組，上 -29- 201002346 述用本發明的方法與標準療法（例如，化學療法方案）聯 合治療的患者的中値無疾病進展存活率和/或反應率的增 加在統計學上是顯著的，例如在P<〇.05或0.01或甚至 0.001水準。完全和部分反應率能夠通過在癌症的臨床治 療中經常使用的客觀標準而測定，例如，按照由國家癌症 硏究中心和/或食品藥品管理局所列出或接受。 實施例 1.在在異種移植模型中的L2G7和抗EGFR mAb 具有抑制HGF的活性的第一試劑（即HGF拮抗劑或 cMet拮抗劑）與抑制除由HGF ( HGF/cMet通路）激發 的以外的信號通路的第二試劑的抑制人腫瘤生長的治療能 力，在免疫缺陷小鼠或其他諸如大鼠的齧齒動物的異種移 植模型中表明。小鼠的免疫缺陷株的說明性但非限制性的 實施例能夠被用於裸小鼠，諸如CD-1裸、Nu/Nu、Balb/c 裸、NIH-III (NIH-bg-nu-xid BR); scid (重度聯合免疫缺 陷病）小鼠，諸如 F o x C h a s e (斯·蔡斯）S C I D ( C . B -1 7 SCID)、Fox Chase 遠親後代的 S C ID 和 S CID B e i g e (拜格 小鼠）：缺少RAG酶的小鼠；以及裸大鼠。按照先前所 敍述的進行實驗（Kim et al·，Nature 3 62:84 1，1 992，其通 過引用倂入本文）。典型地在完整DMEM介質中生長的人 腫瘤細胞典型地在HB S S中收穫。在背部區域給例如雌性 免疫缺陷的無胸腺的裸小鼠（4〜6周大）皮下注射5x106 細胞（〇 . 2 m L的 Η B S S中）。當腫瘤大小達到 5 0 -1 0 0 -30- 201002346 mm3時，將小鼠隨機分組並施用適當量的試劑。例如， 腹腔施用抗HGF或其他mAb (典型地在〇.1至i.〇mg之 間，例如〇 · 5 m g )，每週一次、兩次或三次，體積爲例如 0.1 mL，實驗持續的時間爲例如1、2、3或4周。可以在 通過飮水或注射施用經口服有效的小分子試劑。典型地每 週兩次通過測量兩個尺寸（長度（a )和寬度（b ))來測 定腫瘤大小。根據V = ab2/2計算腫瘤體積，並表達爲平 均腫瘤體積± SEM。在各個治療組中的小鼠的數量至少爲 3只，但通常爲5到1 0只，例如7只。一個組的小鼠用 所述兩種試劑來處理，其他組不用試劑處理或用除了另一 種試劑外的一種試劑處理。不施用的試劑可以任選地由 “安慰劑”一類的來替代，例如替代活性mAb的不相關 的mAb。可以使用例如T檢驗（Student’s t test)來進行 統計分析。在該實驗的變化中，在注射該腫瘤細胞的同時 或稍後施用所述試劑。所述試劑的作用可以通過以下來測 定：腫瘤生長與時間的關係、小鼠存活期的延長或在給定 的或無限期的時間內小鼠存活百分比的提高。 在單獨的實驗中使用已知分泌或應答HGF的各種腫 瘤細胞株，例如U87或U1 18人成膠質細胞瘤，和/或GB-d 1人膽囊腫瘤細胞。在本發明中作爲的第一試劑使用的 優選的抗體（例如類人的和免疫原性減弱的抗體和L2G7 抗體及其嵌合的和人源化的形式以及具有和L2G7同樣的 抗原決定部位的抗體），當和第二試劑聯合使用時，能夠 將腫瘤的生長抑制至少2 5 %，但優選地4 0 %或5 0 %以及差 -31 - 201002346 不多75 %或90%或更高，或甚至在一定時間階段後完全抑 制腫瘤生長或使腫瘤退化或消失。當所述兩個試劑與僅一 個比較時，也存在這種程度的抑制的提高。可以對於最少 的腫瘤細胞株產生抑制，例如在至少一個小鼠株（諸如 NIH III Beige/nude)中的 U87或 U188，但優選地對於 2、3、若千、很多或甚至基本上特定的（例如神經膠質 瘤）或任何類型的全部HGF表達腫瘤細胞株——當在一 個或多個免疫缺陷的小鼠株（其不產生對抗注射的抗體的 中和抗體應答）中檢測時。在異種移植模型的一個或多個 中所使用第一和第二試劑的一些組合的治療導致50%、 7 5 %或甚至基本上所有小鼠的無限期的存活，否則小鼠將 死去或由於其腫瘤的生長而需要被處死。 例如，用 GB-dl膽囊腫瘤異種移植來進行這種實 驗。將雌性NIH III xid/Beige/nude小鼠（4〜6周大）用 腫瘤通過在背部區域的106 GB-dl細胞皮下注射來移植。 當腫瘤尺寸達到〜100 mm3時，將小鼠隨機分配4組，每 組5只。各組的小鼠接受以下之一 ：PBS ;人源化L2G7 抗 HGF mAb (也稱爲 HuL2G7 或 T AK-70 1 ) ； M225 (小 鼠抗EGFR mAb，嵌合西妥昔單抗mAb是衍生於小鼠抗 EGFR mAb的）或HuL2G7和M22 5組合（即兩者）。從 第13天開始，每週施用兩次1〇〇 gg (約5 mg/kg體重） 的mAb。按照上文所述每週測定腫瘤尺寸兩次。圖1表明 儘管使用HuL2G7或M225的治療抑制腫瘤的生長，mAb 的組合物協同地且完全地抑制腫瘤生長。 -32- 201002346 使用抗HGF和抗EGFR mAb來進行相似的腫瘤抑制 實驗，抗HGF和抗EGFR mAb與一種或多種化學治療試 劑（參見上文）一起施用，且期望該腫瘤類型應答所述化 學治療試劑（如在 Ashkenize et al·, J. Clin. Invest. 1 04:1 5 5，1 999中敍述）。兩種mAb和化學治療試劑藥物 的組合物可以產生比單獨一種試劑更強的抑制腫瘤的作 用。該作用可以是附加的或協同的，且強烈地將生長抑制 例如80%或90%或更多，或甚至導致腫瘤退化或消失。也 可以將抗HGF和抗EGFR mAb與對抗另一個生長因數或 血管生成因數的抗體（例如抗VEGF )聯合施用，以獲得 附加的或協同的生長抑制和/或腫瘤退化或消失。 2.在異種移植模型中的L2G7和埃羅替尼

另一個實驗使用細胞株U87EGFRvIII，其中將EGFR 的變異體III (Ji et al.,上文引用的文獻）已經不變地轉染 至U87神經膠質瘤細胞株。該細胞株是對於很多表達 EGFRvIII的神經膠質瘤的模型。將所述U87EGFRvIII細 胞皮下移植到免疫缺陷的小鼠中，其被分爲4組。當腫瘤 的大小達到大約 200 mm3時，使用不相關的對照 mAb 5G8、或使用抗HGF mAb L2G7、或者使用L2G7和埃羅 替尼來處理這些組的小鼠。在第8、12和1 5天以5 mg/kg 腹腔輸送mAb，而每週施用埃羅替尼（150 mg/kg )六 次。如圖2中所示，L2G7僅溫和地抑制U87EGFRvIII異 種移植的生長，與其在先前的實驗中所示的普通U87異 種移植的完全抑制相對比。這是由於由活性的EGFRvIII -33- 201002346 受體所誘導的細胞的增強的侵佔性。同樣，埃羅替尼僅溫 和地抑制腫瘤的生長。相反，使用L 2 G 7和埃羅替尼的組 合物的治療協同地且幾乎完全地抑制U87EGFR異種移植 的生長（圖2)。 3.顱內異種移植模型中的L2G7和埃羅替尼 在該實驗中’自移植後第5至21天（5 mg/kg mAb， 每週兩次；150 mg埃羅替尼，每週6次），使用所敍述 (Kim et al，上文引用的文獻）的U87EGFRvIII細胞來移植 小鼠以便更精確地刺激腦腫瘤。用對照mAb 5G8或抗 HGF mAb L27處理（單獨或與埃羅替尼聯合）的四組小 鼠。如在圖3中所示，相對於使用無活性試劑的治療（僅 5G8) ’使用L2G7或埃羅替尼僅作爲活性劑的治療輕微 地但顯著地延長小鼠的存活：對於埃羅替尼對5 G 8，p = 0.0012以及對於L2G7對5G8，p = 〇.〇〇〇4。相反，使用 L 2 G 7和埃羅替尼的組合物的治療，與單獨的l 2 G 7或埃 羅替尼相比’將存活期延長得更長（P < 〇·〇〇〇1對任何其 他組）。實際上’自從在第2 1天治療停止，使用L 2 G 7 與埃羅替尼一起的繼續治療甚至可能進一步延長存活期。 該結果和在圖2中所示的結果表明，腫瘤表達EGFRvI II (例如表達EGFRvIII的神經膠質瘤）特別地適用于根據 本發明的方法的治療。 4 .對於在本發明中使用的優選的抗HGF mAb的序列 如上所述’中和抗- HGF mAb L2G7的人源化形式， 例如HuL2G7，是本發明尤其優選的第一試劑。huL2G7 -34- 201002346 的重鏈和輕鏈序列見圖4A和B，具有成熟序列的第一 基酸（即實際的mAb HuL2G7的第一氨基酸）是雙下劃 的。HuL2G7的重鏈和輕鏈的第一氨基酸前端的單一序 在表達和分泌過程中分裂。重鏈的C-端賴氨酸在表達 分泌過程中可能分裂，可能不會出現在終產物中。同樣 其優選作爲第一試劑使用的是WO 2005/0 1 7 1 07 A2中描 的抗HGF mAb 2.12.1;該mAb的輕鏈和重鏈的不同區 的序列見圖5 A和5 B，具有成熟序列的第一氨基酸（即 際的 mAb 2.12.1的第一氨基酸）是雙下劃線的 mAb2.12.1的重鏈和輕鏈的第一氨基酸前端的單一序列 表達和分泌過程中分裂。2.1 2.1 mAb具有分別與這些輕 和重鏈可變區序列人kappa恒定區和人伽馬-2恒定區域 鄰近的人恒定區域，但是具有這些恒定區域的mAb和 他人恒定區域（諸如伽馬-1 )也在本發明中優選地使用 MAb具有輕鏈和重鏈可變區（具有與在圖4A和4B圖 和5 B中所示的那些相同的C D R )也在本發明中優選地 用。也能夠在本發明中使用MAb，其具有在圖4A和 或者圖5 A和5B中所示的那些具有90%、95 %或99%相 的氨基酸序列（至少在CDR中）--當根據Kabat編 約定進行比對時一 一或其與圖4A和4B或者圖5A和 存在少量的功能上無意的氨基酸置換（例如保守置換） 缺失或插入的不同--加入它們分別保持 HuL2G7 2.1 2.1的功能性質。 儘管本發明是參考本文優選的實施方式進行敍述的 氨 線 列 和 尤 述 域 實 〇 在 鏈 向 其 〇 5 A 使 4B 同 號 5B 、 或 -35- 201002346 但應該理解的是，可以進行不偏離本發明的各種修改。如 果未在本文中出現，本發明的任何步驟、元件、實施方 式、特徵或方面使用任何其他的。 所引用的所有的出版物（包括GenBank識別號、 UniProtKB/Swiss-Prot識別號等等）專利和專利出版物通 過引用整體合併入本文，就各方面而言，對於相同的範 圍，如同各個出版物、專利和專利出版物明確地且個別地 指示爲就各方面整體通過引用併入。如果存在任何具有與 Genbank and UniProtKB/Swiss-Prot 識別號等等的序列有 關的變化，本申請指與引用的截止到本申請的優先權曰 (200 8年4月1 1號）的識別號相關的序列。 2 00 8年4月11號提交的美國申請第61/044,444和 6 1/044,446號也指出了通過聯合HGF的抑制劑和抑制第 二通路的第二試劑來治療癌症的方法。如果未在本文中出 現，本發明的任何步驟、元件、實施方式、特徵或方面能 夠與美國申請第 6 1 /044,444和 6 1 /044,446號的任何步 驟、元件、實施方式、特徵或方面組合，該兩個專利通過 引用合倂入本文。 ATCC號PTA-5 1 62已經根據布達佩斯條約下以ATCC 號PTA-5 162保藏在美國模式培養物保藏所（P.O. Box 1549 Manassas，VA 20108)。對於在保藏日後至少三十年 的期間，或在相關專利的可實施期內（以最長期限爲 准），該保存物將在法定保管處所處存放，且如果在保管 處所收到最近的提供樣品的請求後至少五年期間內發生變 -36- 201002346 化、死亡或破壞，該保存物將被替換。針對本發明的專利 的頒佈，對於這些細胞株的公開的可用性的限制將是不能 撤回。 【圖式簡單說明】 附圖說明 圖1 :將GB-dl膽囊腫瘤異種移植的腫瘤植入以 PBS、抗 HGF mAb HuL2G7 (也稱爲 TAK-701 )、抗 EGFR mAb M225或HuL2G7與M225的組合處理過的小鼠 中之後的腫瘤生長對天數的曲線圖。 圖2:將U87EGFRvIII異種移植的腫瘤植入以對照 mAb 5G8、抗 HGF mAb HuL2G7 (也稱爲 TAK-701 )、 EGFR拮抗劑埃羅替尼或L2G7與埃羅替尼的組合處理過 的小鼠中之後的腫瘤生長對天數的曲線圖。箭頭表示施用 mAb的天數。 圖 3 :以對照 mAb 5G8、抗 HGF mAb L2G7、5G8 和 埃羅替尼或 L2G7和埃羅替尼處理過的，並具有 U87EGFRVIII顱內異種移植的小鼠的存活曲線圖。 圖 4A 和 4B:全部 HuL2G7 重鏈（A) (SEQ ID ΝΟ:1) 和輕鏈（B) (SEQ ID NO:2)的氨基酸序列。成熟重鏈和輕 鏈可變區（即在信號序列分裂之後）的第一個氨基酸是雙 下劃線的，並以數位1標記；這些氨基酸因此是實際 HuL2G7 mAb的輕鏈和重鏈的第一氣基酸。在所述重鏈 中，CH1、鉸鏈、CH2和CH3區域的第一氨基酸是下劃線 -37- 201002346 的’且在輕鏈中’ Ck區域的第一氨基酸是下劃線的。 圖 5A 和 5B:在 w〇 2005/017107 A2 中公開的 2.12.1 人單克隆抗體的輕鏈（A) (SEq ID NO:3)和重鏈（B) (SEQ ID NO :4)可變區的氨基酸序列，在其中分別指定爲SEQ ID NO 3 8和3 9。成熟重和輕可變區（即在信號序列分裂 之後）的第一氨基酸，並且因此實際2.12.1 mAb的第一 氨基酸是雙下劃線的。 圖6A和6B : Vectibix® (不包括信號序列）的輕鏈 (A) (SEQ ID NO:5)和重鏈（B) (SEQ ID NO:6)的氨基酸序 列。該重鏈的C末端K在加工過程中分裂並且不顯著存 在於最終產物中。 圖7A和7B: M225抗體的輕鏈可變區（A) (SEQ ID NO:7)和重鏈可變區（B) (SEQ ID NO:8)的氨基酸序列。包 括信號序列。成熟可變重鏈和輕鏈可變區的第一氨基酸是 雙下劃線的。 -38- 201002346 859135 序列表 <11〇>蓋勒斯生化科技有限責任公司 瓊斯霍普金斯大學 甘迺迪克里爵協會股份有限公司 <120>供治療癌症之肝細胞生長因子(HGF)抑制劑與表皮生長因子(EGF)抑制劑的組合物 <140> TW 098111515 <141> 2009-04-07 <150> US 61/044,440 <151> 2008-04-11 <160> 8 <170> PatentIn}iS^3.5 <210> 3 <211> 469 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <220〉 <221〉訊號 <222> (1)..(19) <220> <221> mat一肽 <222> (20)..(469) <400> 1

Met Asp Cys Thr Trp Arg He Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly -15 -10 -5

Thr His Ala Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys -11 5 10

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe 15 20 25

Ser Gly Asn Trp lie Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 30 35 40 45

Glu Trp lie Gly Glu lie Leu Pro Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn 50 55 60

Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp 65 70 75

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 80 85 90

Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly His Tyr Tyr Gly Ser Ser Trp Asp Tyr 95 100 105

Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 110 115 120 125

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 201002346

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 160 165 170

Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 175 180 185

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val 190 195 200 205

Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys 210 215 220

Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 225 230 235

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 240 245 250

Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 255 260 265

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 270 275 280 285

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser 290 295 300

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu 305 310 315

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 320 325 330

Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro 335 340 345

Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin 350 355 360 365

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala 370 375 380

Va】G】u Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 400 405 410

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 415 420 425

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser 430 435 440 445 -2- 201002346

Leu Ser Pro Gly Lys 450 <210> 2 <211> 234 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <220〉 <221>訊號 <222> (1)..(20) <220> <221> mat—肽 <222> (21)..(234) <400> 2

Met Glu Ala Pro Ala Gin Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro -20 -15 -10 -5

Asp Thr His Gly Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser -11 5 10

Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asn 15 20 25

Val Val Thr 丁yr Val Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro 30 35 40

Lys Leu Leu He Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Va) Pro Asp 45 50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser 65 70 75

Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Gin Gly Tyr 80 85 90

Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 95 100 105

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin 110 115 120

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 125 130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser 145 150 155

Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr 160 165 170

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 175 180 185

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro -3- 201002346 190 195 200

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 205 210 <210> 3 <211> 128 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400> 3

Met Glu AJa Pro A】a G】n Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu 丁rp Leu Pro 15 10 15

Asp Thr Thr Gly Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu SeT 20 25 30

Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser 35 40 45

Val Asp Ser Asn Leu Ala 丁rp Tyr Arg Gin Lys Pro Gly G】n Ala Pro 50 55 60

Arg Leu Leu lie Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala 65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser 85 90 95

Ser Leu Gin Ser Glu Asp Phe Ala Val 丁yr 丁yr Cys Gin G]n Tyr lie 100 105 110

Asn Trp Pro Pro lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 115 120 125 <210> 4 <211> 139 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400> 4

Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 15 10 15

Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys 20 25 30

Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie 35 40 45

Ser lie Tyr Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60

Glu Trp lie Gly Tyr Val Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn 丁yr Asn Pro 65 70 75 80 -4- 201002346

Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin 85 90 95

Phe Ser Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr 100 105 110

Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Phe Asp Tyr 115 120 125

Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 130 135 <210> 5 <211> 214 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400〉 5

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr He Thr Cys Gin Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp lie Ala Thr Tyr Phe Cys Gin His Phe Asp His Leu Pro Leu 85 90 95

Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110

Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140

Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 -5- 201002346

Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210〉 6 <211> 445 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400> 6

Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30

Asp Tyr Tyr Trp Thr Trp lie Arg Gin Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45

Trp lie Gly His lie Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Ser lie Asp Thr Ser Lys Thr Gin Phe 65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala lie Tyr 丁yr 85 90 95

Cys Val Arg Asp Arg Val Thr Gly Ala Phe Asp lie Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 220 125

Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175

Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190

Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu 210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 -6 - 201002346

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin 260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300

Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys 325 330 335

Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365

Gly Phe 丁yr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly G]n 370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 405 410 415

Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430

His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 7 <211> 127 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400> 7

Met Arg Ala Pro Ala Gin Phe Leu Gly Phe Leu Leu Phe Trp lie Pro 15 10 15

Ala Ser Arg Ser Asp lie Leu Leu Thr Gin Ser Pro Val lie Leu Ser 20 25 30

Val Ser Pro Gly Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser 35 40 45 201002346 lie Gly Thr Asn lie His Trp 丁yr Gin Gin Arg Thr Asn Gly Ser Pro 50 55 60

Arg Leu Leu lie Lys Tyr Ala Ser Glu Ser He Ser Gly lie Pro Ser 65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser lie Asn 85 90 95

Ser Val Glu Ser Glu Asp lie Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Gin Asn Asn 100 105 110

Asn Trp Pro Thr Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 115 120 125 <210> 8 <211> 138 <212> PRT <2]3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400> 8

Met Ala Val Leu Ala Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys 15 10 15

Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Lys Gin Ser Gly Pro Gly Leu Val Gin 20 25 30

Pro Ser Gin Ser Leu Ser lie Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu 35 40 45

Thr Asn 丁yr Gly Val His Trp Val Arg G]n Ser Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60

Glu Trp Leu Gly Val lie Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Thr 65 70 75 80

Pro Phe Thr Ser Arg Leu Ser lie Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gin 85 90 95

Val Phe Phe Lys Met Asn Ser Leu Gin Ser Asn Asp Thr Ala lie Tyr 100 105 110

Tyr Cys Ala Arg Ala Leu Thr Tyr Tyr Asp Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp 115 120 125

Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 130 135 -8-

Claims (1)

1. 201002346 七、申請專利範圍 1 . 一種治療患者癌症的方法，包括向所述患者施用 第一試劑聯合第二試劑，所述第一試劑爲肝細胞生長因數 (HGF )的抑制劑，所述第二試劑是除HGF/cMet通路以 外的細胞信號通路的抑制劑。 2 .根據申請專利範圍第1項所述的方法，其中所述 第一試劑是單克隆抗體。 3 .根據申請專利範圍第2項所述的方法，其中所述 單克隆抗體作爲單一試劑結合至並中和HGF。 4.根據申請專利範圍第3項所述的方法，其中所述 單克隆抗體是人類的、人源化的或嵌合的。 5 .根據申請專利範圍第4項所述的方法，其中所述 單克隆抗體是人源化的。 6.根據申請專利範圍第5項所述的方法，其中所述 單克隆抗體是人源化L2G7抗體。 4 7.根據申請專利範圍第4項所述的方法，其中所述 單克隆抗體是人類的。 8 . —種治療患者癌症的方法，包括向所述患者施用 肝細胞生長因數（HGF )的抑制劑聯合表皮生長因數 (EGF )的抑制劑。 9.根據申請專利範圍第8項所述的方法，其中所述 H GF的抑制劑是單克隆抗體。 1 0.根據申請專利範圍第9項所述的方法，其中所述 單克隆抗體作爲單一試劑結合至並中和HGF。 201002346 1 1.根據申請專利範圍第1 〇項所述的方法，其中所 述單克隆抗體是基因工程的。 1 2.根據申請專利範圍第1 0項所述的方法，其中所 述單克隆抗體是人類的。 1 3 ·根據申請專利範圍第1 0項所述的方法，其中所 述單克隆抗體是人源化的。 1 4.根據申請專利範圍第1 3項所述的方法，其中所 述單克隆抗體是人源化L2G7抗體。 1 5.根據申請專利範圍第8項所述的方法，其中所述 EGF的抑制劑是EGF受體（EGFR)拮抗劑。 1 6.根據申請專利範圍第1 5項所述的方法，其中所 述EGFR拮抗劑是結合EGFR的單克隆抗體，從而抑制 EGF結合至EGFR。 1 7 •根據申請專利範圍第1 6項所述的方法，其中所 述單克隆抗體是西妥普單抗或帕尼單抗。 1 8.根據申請專利範圍第1 5項所述的方法，其中所 述EGFR拮抗劑是埃羅替尼或吉非替尼。 1 9.根據申請專利範圍第8項所述的方法，其中所述 癌症選自由肺癌、結腸癌和頭部與頸部癌症組成的組。 2 〇 _根據申請專利範圍第8項所述的方法，其中所述 癌症是神經膠質瘤。 2 1 _根據前述任一申請專利範圍所述的方法，其中所 述癌症包含具有突變體EGFR基因的細胞。 22 _根據申請專利範圍第2 1項所述的方法，其中所 -2- 201002346 述突變是所述EGFR基因的外顯子2-7的缺失。 23. 一種組合物或試劑盒，其包括選自由西妥普單 抗、帕尼單抗、埃羅替尼和吉非替尼組成的組中的人源化 L2G7抗體和藥物。