TW201004644A

TW201004644A - Use of a virus regimen for the treatment of diseases

Info

Publication number: TW201004644A
Application number: TW098115462A
Authority: TW
Inventors: Werner Krause
Original assignee: Bayer Schering Pharma Ag
Priority date: 2008-05-09
Filing date: 2009-05-08
Publication date: 2010-02-01
Also published as: PE20091899A1; AR071755A1; WO2009135614A3; US20090280122A1; UY31819A; WO2009135614A2; PA8826101A1

Description

201004644 六、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於病毒療程、尤其溶瘤病毒療程用於製備用以治療疾病、尤其癌症之藥劑的用途。病毒療程係在以受 . 控方式降低、關閉或修飾免疫系統功能後應用。在較佳實

^ 施例中，使用T細胞去除或T細胞修飾來控制免疫系統。T 細胞去除劑或T細胞修飾劑可單獨投與或作為病毒療法療程之一部分投與。 # 本發明涉及在局部或在整個有機體内以受控方式暫時關閉或降低機體免疫系統之功能以改善病毒療法之功效。在較佳實施例中暫時降低T細胞之數量及功能。亦可將T細胞完全去除一段有限時間。T細胞降低/去除/修飾程序可在病毒療法之前或期間實施或者可作為病毒療法療程之一部分。該程序能夠有效地改善病毒療法。【先前技術】溶瘤病毒療法係一種新穎的乾向腫瘤之癌症治療方法（A.

Stief, Expert Opin. Biol. Ther. (2008) 8(4):463-473)。溶瘤病毒可選擇性靶向、感染並殺死癌細胞，並使正常細胞保持完好，因而能將對正常組織的毒性降至最低。迄今為止，人們已鑑別出若干具有溶瘤潛力之病毒。該等病毒包括DNA病毒：複製型腺病毒、單純皰療病毒、牛疫病毒及黏液瘤病毒，及RN A病毒·麻療病毒、水泡性口炎病毒 (VSV)、呼腸孤病毒（reovirus)、新城疫病毒、柯薩奇病毒 (coxsackievirus)A21及其他（Russell SJ. Cancer Gene Ther 140027.doc 201004644 2002; 9: 961-6) ° 溶瘤腺病毒係雙鏈DNA病毒。人們已將非複製型腺病毒廣泛地用作基因療法載體，同時將複製型腺病毒改造為腫瘤特異性因子。人們已按三種方式對腺病毒之該等腫瘤靶向性質進行改造：去除關鍵病毒基因、插入腫瘤/組織特異性啟動子及修飾細胞進入所用之病毒纖突結。典型的腫瘤選擇性複製型腺病毒係ONYX 015，其中已去除E1B 55K 基因（Heise C, Sampson-Johannes A, Williams A等人）。 ONYX-01 5可引發腫瘤特異性細胞溶解及抗腫瘤功效，其可藉由標準化學治療藥劑而得到增強（Nat Med 1997; 3 (6): 639-45) ° 麻療病毒（副黏液病毒科之一員）係負鏈RNA病毒。儘管野生型麻疹病毒係人類病原體，但疫苗株Edmonston B (MV-Edm)在正常人類細胞中呈高度減毒狀態。儘管呈高度減毒狀態，但MV-Edm仍係有效溶瘤病毒。水泡性口炎病毒（VSV)係彈狀病毒科（r/mWoWWc/ae)之微小負鏈RNA病毒。儘管其天然具有寬廣的組織向性，但其在人類中卻僅會引起極輕的感染，此可能係因其對IFN 之異常敏感之故（Rose JK，Whitt MA，Fields Virology. Fields BN, Knipe DM, Howley PM編輯；Philadelphia， Lippincott Williams & Wilkins; 2001，第 1221-43 頁）。在正常細胞中，雙鏈RNA可激活蛋白激酶（PKR)之磷酸化及 IFN反應基因之誘導係對VSV感染之重要的抗病毒反應 (Stojdl DF, Abraham N, Knowles S等人，J Virol 2000 ; 74 140027.doc 201004644 (20): 9580-5)。前人已闡述了若干可誘導IFN產生之突變型 VSV。與感染野生型病毒之小鼠相比，此可增加對感染突變型VSV之小鼠的保護，從而提高該等病毒之安全特性 (Stojdl DF, Lichty BD，Oever BR等人，Cancer Cell 2003; 4: 263-75)。由於許多癌細胞之IFN途徑具有缺陷，故其顯示可支持生產性VSV感染並因此可被選擇性殺死。先前已顯示，VSV可選擇性複製並殺死具有異常尸53、厂似或信號轉導之腔瘤（Balachandran S, Porosnicu M, Barber GN. J Virol 2001; 75 (7): 3474-9)，該等腫瘤在癌症中所佔比例高達90%。呼腸孤病毒係屬於呼腸孤病毒科之雙鍵RNA 病毒（Nibert ML, Schiff LA，Fields Virology. Fields BN， Knipe DM, Howley PM 編輯；Philadelphia，Lippincott Williams & Wilkins; 2001，第 1679-720頁）。其在人類中不會引起任何已知病狀，此使其成為溶瘤病毒療法之理想候選者。前人發現，當呼腸孤病毒優先在具有激活途徑之癌細胞中複製時具有溶瘤性質（Coffey MC，Strong JE， Forsyth PA, Lee PWK. Science 1998; 282: 1332-4)且最近發現，其可利用途徑（Norman KL，Hirasawa K， Yang A-D等人，Proc Natl Acad Sci USA 2004; 101(30): 11099-104) 〇已顯示，溶瘤病毒療法領域之相對較新者柯薩奇病毒 A21 (CAV21)對黑色素瘤（Shafren DR，Au GG，Nguyen T等人，Clin Cancer Res 2004; 10: 53-60)及近年之多發性骨髓 140027.doc 201004644 瘤（Au GG, Lincz LF，Enno A, Shafren DR. Br J Haematol 2007; 137: 133-41)具有溶瘤活性。CAV21係正鏈RNA病毒及細小 RNA病毒科之一員（Racaniello VR_ Picornaviridae: Fields Virology. Knipe DM, Howley PM編輯；Philadelphia, Lippincott, Williams & Wilkins; 2001，第685-722頁）。儘管CAV21係引起人類普通感冒症狀之一種因子，但其尚未引起任何重大疾病。CAV21之腫瘤特異性係經由結合至兩種細胞受體來達成：細胞間黏附分子 l(ICAM-l)及衰變加速因子（DAF);與在正常組織中相比，兩者在人類腫瘤中皆受到上調。抗病毒免疫反應可阻礙溶瘤病毒之遞送及腫瘤内傳播。抗病毒抗體可迅速且不可逆地中和病毒，因而人們擔憂全身性投與溶瘤病毒未必能在血流中保持足夠長時間以到達腫瘤位置。Dingli等人之發現（Dingli D，Peng K-W，Harvey ME等人，Biochem Biophys Res Comm 2005; 337: 22-9)顯示，與年齡匹配之對照相比，多發性骨髓瘤患者具有明顯更少的抗麻疹病毒抗體，此使得人們對MM患者之上述擔憂要少一些。儘管如此，人們已提出回避對溶瘤病毒之免疫反應之策略。該等策略包括利用細胞載體作為病毒之遞送媒介，及抑制對病毒感染之干擾素反應。對細胞病毒感染之第一反應係早期基因活化，包括彼等針對1型IFN者。 1型IFN透過下述而成為抗病毒狀態之有效觸發因子：誘導Janus激酶（Jak)/信號轉導及轉錄活化因子（STAT)途徑、產生IFN調節因子3及7及最終誘導遲發性1型基因（在初始 140027.doc 201004644 感染期間不受誘導之第二組IFN刺激基因）及抗病毒狀態所需基因（例如，PKR及2’-5'-寡腺苦酸合成酶；Grandvaux N， tenOever BR, Servant MJ, Hiscott J. Curr Opin Infect Dis 2002; 15: 259-67)。為阻斷IFN反應途徑之一或多個步驟，病毒會編碼拮抗劑分子，例如副黏病毒之P/V/C蛋白 (Haralambieva I，Iankov I，Hasegawa K等人，Mol Ther 2007; 15 (3): 588-97)。麻疹磷蛋白（P)構成病毒RNA聚合酶之基本組份；C蛋白及V蛋白係P基因内編碼之非結構輔助蛋白。P蛋白及V蛋白可藉由抑制STAT1及STAT2磷酸化及抑制IFN所誘導之STAT核轉位而有利於回避MV免疫 (Haralambieva I，Iankov I，Hasegawa K等人，Mol Ther 2007; 15 (3): 588-97) ° 溶瘤MV(MV-eGFP，Edmonston株系衍生物）可誘導人類多發性骨髓瘤及卵巢癌細胞中產生IFN，由此可抑制腫瘤細胞中表現MV基因及產生病毒子代。為減輕此種情形，可藉由用野生型基因（MV-eGFP-Pwt)替代P (Edmonston)基因來改造MV-eGFP以增強腫瘤内傳播。該病毒顯示IFN誘導在BJAB淋巴細胞、ARH-77骨髓瘤細胞及活化外周血單核細胞中之降低。在活體内，IV MV-eGFP-Pwt在帶有人類多發性骨髓瘤異種移植物之免疫缺損小鼠中展示出明顯優於MV-eGFP之功效。對抗先天細胞免疫反應之蛋白主要在P基因内編碼，因此存在以下擔憂：表現野生型P基因之重組MV可能產生毒性更強之因子並危害患者安全。經由增強病毒回避先天免疫反應之天然能力來製備更強效力溶 140027.doc 201004644 瘤病毒的策略需要權衡患者之安全性並具有進一步研究及研發的潛力。聯邦藥品管理局（Federal Drug Administration) (FDA)尚未批准任何可供出售之人類病毒療法產品。現行病毒療法僅為實驗性且尚未證明在臨床試驗中非常成功。問題在於是什麼因素一直在阻礙病毒療法成為對疾病之有效治療。以下因素尤其重要： •病毒載想之問題-在大多數病毒療法研究中選擇載體時’病毒對患者呈現多種潛在問題-毒性反應、免疫 _ 反應及炎症反應’及乾向組織。另外，人們一直擔心病毒載體在進入患者體内後可能會恢復其引發疾病之能力。 •免疫反應-在異物被引入人類組織中之任何時刻，免疫系統一定會攻擊該侵入物。以降低病毒療法功效之方式來刺激免疫系統之風險一直係一種潛在風險。此外’免疫系統對其先前遇見的侵入物之增強反應使得難以在患者中重複病毒療法。 φ 如上文所述’採用病毒療法仍明顯存在缺乏功效及發生併發症之風險。最緊迫的問題係由被免疫系統識別為異物之病毒所引發的免疫反應、及所導致的活性降低及無法進行多次治療。吾人現已驚奇地發現以受控方式將免疫系統關閉或「減弱」一段特定時間以防止免疫系統攻擊及鈍化溶瘤病毒可克服業内中之該等問題。此可藉由（例如）減少或清除有機 140027.doc 201004644 體中之τ細胞或藉由降低其功能性來達成。然而，亦可利用關閉免疫系統或降低其功能之任何其他方法。該療程之一個優點在於不損害免疫系統而僅關閉免疫系統或使其功能降低，而且此作用係可逆的。一旦溶瘤病毒已到達其靶標且腫瘤已開始萎縮及溶解，τ細胞之數量/功能即可恢復正常。另外，該方法允許在關閉免疫系統或降低其功能性期間實施多次病毒療法治療。在中斷治療後，免疫系統會再次具有全部功能。端視關閉或降低免疫系統功能之方法而疋’欲使免疫系統恢復其全部功能可能需要一定時間，例如，在Τ細胞清除之情形中欲使τ細胞重現正常數量即如此。該時間不僅取決於（例如）為去除Τ細胞所使用之特定藥物或方法，且亦取決於諸如G-CSF或GM-CSF等免疫刺激因子之額外使用。重新建立有效的免疫系統並不僅限於該等兩個實例（G-CSF或GM-CSF)。可採用業内已知之任何其他措施。在治療期間及在免疫系統恢復期間，可對患者進行仔細監測並在需要時使用抗菌藥物進行治療以預防或減輕感染。該預防為彼等熟習此項技術者所習知且係使用免疫抑制藥物或Τ細胞去除劑治療之癌症或移植患者之曰常生活（Semin Hematol. 2004年 7 月；41(3): 224-33，Leuk

Lymphoma 2004年 4月；45(4): 711 _4)。【發明内容】根據本發明，使用能夠關閉或降低免疫系統功能之藥物或方法來治療指定接受病毒療法之患者。在一個特定實施例中’此係藉由殺死T細胞或藉由修飾τ細胞之功能來達 140027.doc 201004644 成。τ細胞舍除劑/修飾劑可為病毒療法療程本身之一部分。該類藥物可係（例如）單株抗體，其結合至τ細胞上之特異性表位並可有效殺死該等細胞，例如，CD3或CD4抗原特異性單株抗體。結合至T3抗原之藥物係莫羅單抗 (muromonab)_CD3(奥素克隆（Orthoclone) OKT3)。另一潛在表位係C D 5 2抗原’其被發現於B -細胞及T細胞上。结合至CD52表位之抗體的一個實例係阿來組單抗（alemtuzumab) (Campath®)。然而，本發明並不僅限於該等類型之化合物。可使用任何T細胞去除劑/修飾劑。此外，可利用可被藥物或抗體定向之位於T細胞上之任何表位，亦可利用可殺死T細胞或降低其數量或功能性之任何藥物。此外，可使用能夠殺死T細胞或降低其數量或功能之任何其他類型之藥物，即’任何T細胞去除劑或T細胞功能修飾劑，而不論其個別作用機理如何。T細胞去除劑之另一實例係抗胸腺細胞球蛋白ATG(抗胸腺球蛋白（Thym〇gl〇bulin))。抗胸腺球蛋白係抗胸腺細胞兔免疫球蛋白，其可因τ細胞去除及免疫調節而誘導免疫抑制。抗胸腺球蛋白由可識別丁細胞上關鍵受體之多種抗體組成且可導致τ細胞失活及死亡。就修飾Τ細胞之藥物而言，只要可達成τ細胞數量降低或清除或其功能受到影響之結果的所有藥物均適宜。一個此類實例性修飾係一其他受體之結合，其其功能。一種抗體與諸如上文所述之彼等受體或其中該結合並不殺死Τ細胞而僅僅修飾已廣泛地證明諸如阿來組單抗或抗胸腺球蛋白等藥物可 140027.doc -10· 201004644 去除τ細胞。單劑量阿來組單抗（campath®)能夠殺死所有循環T細胞。此繪示於圖1中（Weinblatt等人，Arth &

Rheum 38(1 1):1589-1594, 1995)。由圖 1可見，τ細胞完全

恢復需要3個月或更長時間。若重複該治療，則τ細胞計數將在延長時期期間保持較低值或〇 ^在該期間，可實施多次病毒療法治療而無免疫系統清除病毒之危險。在CLL 中，阿來組單抗係以每週3次3〇 mg之劑量給與，總共個連續週。在第一週中由3 11^經1〇 111§至3〇 mg逐步增加之後達到最終劑量30 my在病毒療法中，顯示遠為較小的劑里，因為在該療法第一部分投與期間CLL中之腫瘤負荷消耗了大多數藥物。在多發性硬化⑽)中，亦對阿來組單抗進行研究，給藥限制在每天5次1〇_3〇 mg劑量持續一週。在MS中，可在i整年後重複該療法。對於病毒療法， 5-l〇mg或以下之單劑量可能適宜。使用抗胸腺球蛋白後之τ細胞去除緣示於圖2(取自抗來腺球蛋白處方資訊（㈣咖伽inf〇rma )。在GVHD預防中抗胸腺球蛋白經靜脈内輸注4至6値小時。典㈣量係在l.5.3.75mg/kg範圍心每天輸注一次’持續⑴週。在治療後，該藥物仍保持活性並㈣免疫細胞數天至數週。該時間表—般適用病毒療法。根據本發明用於改善病毒療法之了細胞去除並不限於本文所=確^及之藥物。可使用任何能夠關閉或降低免疫系統功旎之樂物或方法。在一個特定實施例中，使用可移除、殺死或修飾T細胞之藥物或方法。其他實例蘭述於例 140027.doc 201004644 如 Van Oosterhout 等人之 Blood 2000, 95: 3693-3701 中。或者’可使用「四聚體複合物」或離體T細胞去除，例如免疫磁化分離（Υ. Xiong, The 2005 Annual Meeting, Cincinnati， ΟΗ) 。其他實例包括FN18-CRM9 、 SBA-ER (O’Reilly,

Blood 1998; Aversa，JCO 1999)、CFE (de Witte, BMT 2000) 或使用CliniMACS系統之白血球分離術。其他物理離體方法包括密度梯度分級分離、大豆凝集素凝集+ E-玫瑰花結去除或對流離心洗脫。除上述方法外之免疫方法包括針對 T細胞上之不同受體（例如，CD6或CD8)的單株抗體《亦可 ❹ 採用免疫毒素，例如，抗CD5蓖麻毒素。可以看出’根據本發明，T細胞去除劑及修飾劑的用量及投與療程可以一般方式確定並類似於此等藥劑用於其他目的之已知用法。較佳地，T細胞去除程度或功能損失程度為至少約50%、75%、90%、以及基本上完全清除。端視藉由所選藥物或程序所誘導之去除及恢復時程而定，可1次性地投與上文所述由T細胞去除或修飾組成之治療或一直投與至病毒療法結束。此後，恢復免疫系統。由 ❹ 於該系統係以受控方式關閉，故新形成之任何T細胞均具有全部功能。業内已知用於免疫系統恢復之藥物可支持該目的。實例係G-CSF或GM-CSF。然而，亦可利用任何其他適用藥物或措施。本發明之另一優點係在免疫阻斷期間病毒療法可在同一患者上重複實施。若不阻斷免疫系統，則被機體免疫系統視為「異物」之重複注射病毒治療將會遭到反擊且-若反 -12· 140027.doc m 201004644 擊成功-病毒將在能夠到達其乾標之前被破壞。無需進一步詳細闡述，相信熟悉此項技術之人員可運用前述說明最大程度地利用本發明。因此，前述較佳具體實施例僅應理解為具有闡釋性，i無論如何不應理解為以任何方式限制其餘揭示内容。本文所引用申請案、專利及公開案之全部揭示内容皆以引用方式併入本文中。【實施方式】 ® 實例實例1 以類似於臨床試驗NCT00651 157(惡性黑色素瘤患者之病毒療法）之方式實施階段π研究。在該研究中，使用呼腸孤病毒血清型3-Dearing株（Re〇lySin®)來治療黑色素瘤。主要結果指標： •臨床受益率 φ •腫瘤反應率次要結果指標： •存活時間 •疾病加劇時間 •藉由NCICTCAEv3.0評價之毒性 •免疫學參數 •治療開始後1週時轉移性黑色素瘤沈積物中之病毒複製 •治療前腫瘤樣品中之p38表現 140027.doc -13· 201004644 •氟[18F]脫氧葡糖之基線吸收及治療開始後4週時之吸收估計參與人數：47 目的：主要目的 •以腫瘤反應率及臨床受益率（即，部分反應及完全反應）來評價野生型呼腸孤病毒（Re〇lysin®)及阿來組單抗在轉移性黑色素瘤患者中之抗腫瘤作用。 •評價Reolysin®及阿來組單抗（Campath®)在該等患者中 ❹ 之毒性特徵。次要目的 •評價該等患者之無加劇存活率及總體存活率。 •評價在靜脈内投與Re〇lysin®及阿來組單抗後轉移性黑色素瘤沈積物中之病毒複製。 •評價已存在的抗呼腸孤病毒免疫性（如藉由治療前腫瘤樣βυ中之p3 8表現所呈現）對Re〇iySin®及阿來組單抗之功效及毒性的影響。 _ •以腫瘤樣品中之樹突細胞活化、T細胞活化、Treg細胞之存在及T細胞、B細胞、NK細胞及肽特異性細胞毒性τ淋巴細胞對黑色素瘤分化抗原肽類（gpl〇〇、 mart-i及酿胺酸酶）反應之頻率來衡量Re〇lysin®及阿來組單抗對免疫系統之作用。 •以腫瘤樣品中所存在的黑色素瘤分化抗原（gpl〇〇、 MART-1及絡胺酸酶）來評價黑色素瘤特異性免疫反應 140027.doc

•14· 201004644 之誘導。患者在第1至5天經60分鐘經由iv接受野生型呼腸孤病毒 (Reolysin®)。在不發生疾病加劇或不可接受之毒性之情形下每28天重複一次該治療並持續長達12個療程。在病毒療法前一天投與阿來組單抗。經2小時靜脈内輸注或由皮下注射5 mg單劑量阿來組單抗。如用於治療CLL患者之阿來組單抗（Campath®) SmPC中所述對即時及後期不良反應實施預防。 ' 於基線處及治療開始後丨週時收集腫瘤組織試樣以供進行相關實驗室研究。藉由IHC分析組織試樣之ρ38/ΜΑρκ活化狀嘘；藉由電子顯微鏡術分析其轉移性沈積物中之呼腸孤病毒複製情況；並藉由IHC分析其免疫學參數。於基線處、治療開始後4週時及隨後每2個月收集血樣。藉由四聚體及ELISPOT技術來分析血樣之免疫學參數及對於抗呼腸孤病毒抗體之中和。在研究治療完成後，每6個月對患者實施一次追蹤並持續2年且隨後每年對患者實施一次追蹤並持續長達5年。適合性適合研究年齡：18週歲及以上適合研究性別：男女皆可是否接受健康志願者：否疾病特徵： •經組織學或細胞學所證實之惡性黑色素瘤 0所有黑色素瘤皆可，無論來源如何 140027.doc -15- 201004644 〇轉移性疾病 •可量測疾病，定義為^ 1個可在^ 1個方向上（所記錄之最長直徑）藉由習用技術精確量測為220 ΠΠΠ或藉由螺旋CΤ掃描精確量測為2 1 0 mm之病灶 •必須具有>1個可進行安全活組織檢查之轉移性病灶 •必須接受過次針對轉移性疾病之預先治療 •不為轉移性疾病治療手術之候選者 •無已知腦轉移患者特徵：

• ECOG體力狀態0-2 •期望壽命>12週 •總 WBC 2 3,000/mcL •絕對嗜中性白血球計數21,500/mcL •血小板計數2100,000/mcL •血紅蛋白2 9 g/dL •總膽紅素<1.5倍正常上限值（ULN) • AST<2.5倍 ULN •肌酸酐S1.5倍ULN •肌鈣蛋白T正常 • LVEF之藉由ECHO或MUGA量測之50% •未懷孕或哺乳 •妊娠測試為陰性 •育齡患者必須採用有效避孕 •同意提供血樣及組織試樣進行該研究之規定轉化研究 140027.doc -16- 201004644 部分 •必須能夠在研究期間及在給予最後劑量之研究藥劑後 _免與懷孕或喷乳婦女、嬰兒及免疫低弱個體直接接觸 •無併發性不受控痂串，& &, /a t m 又t获思，包括（但不限於）下述之任一者：

〇進行性或主動性感染〇症狀性充血性心力衰竭〇在過去1年内發生不穩定型心絞痛、心律不整或心肌梗塞〇可妨礙研究服從性之精神疾患/社會處境 •無已知HIV陽性〇需要對顯示免疫低弱狀態臨床病史之患者實施HIV 測試先前同時療法： •參見疾病特徵 •距離先前化學療法（絲裂黴素C或亞硝基脲治療6週）超過4週並恢復 •距離先前放射療法、免疫療法或小分子細胞週期抑制劑治療超過2週 •無其他同時研究藥劑 •無其他同期抗癌療法建議在階段II試驗之前實施階段I研究以優化給藥方案並測試組合治療之耐受性。 140027.doc •17· 201004644 實例2 以類似於臨床試驗NCT00602277(病毒療法用於治療對鉑化學療法無反應之卵巢上皮癌、原發性腹膜癌或輸卵管癌患者）實施階段Π研究。在該研究中，使用野生型呼腸孤病毒血清型 3-Dearing株（REOLYSIN®) (NSC 729968)治療卵巢癌。主要結果測量： •當以固定劑量經IV投與野生型呼腸孤病毒時腹膜内 (IP)野生型呼腸孤病毒之最大耐受劑量（階段I) •藉由RECIST標準所測量之表現目標抗腫瘤反應（部分反應及完全反應）之患者的比例（階段Π) 次要結果測量： • Ras癌基因及分子標記與目標反應之關聯性估計參與人數：70 目的：主要目的 •確定靜脈内（IV)及腹膜内（IP)投與野生型呼腸孤病毒 (REOLYSIN®)及阿來組單抗之安全性及耐受性（階段I) •確定當與固定劑量之IV REOLYSIN®及阿來組單抗一起使用時IP REOLYSIN®之最大耐受劑量（階段I) •確定經IV及IP REOLYSIN®及阿來組單抗治療在復發性鉑難治型卵巢上皮癌、腹膜癌或輸卵管癌患者中之目標反應率（符合RECIST標準之完全反應及部分反應）（階段II) 140027.doc •18- 201004644 次要目的 •鑑別在經由iv投與呼腸孤病毒後腫瘤中之病毒複製。 •鑑別經受IV及IP REOLYSIN®療法及經受阿來組單抗療法之患者中之抗呼腸孤病毒抗體。 •鑑別經由IV及IP實施REOLYSIN®及阿來組單抗療法之患者的腹腔洗液中之病毒複製。 •使對療法之反應與Ras癌基因狀態相關聯。 •評價腫瘤中雙鏈RNA活化蛋白激酶之活性。 ® •使對REOLYSIN®及阿來組單抗療法之反應的分子預測劑相關聯概要：此係當以固定劑量經由IV投與野生型呼腸孤病毒時腹膜（IP)野生型呼腸孤病毒之階段I劑量遞增研究，之後為階段II研究。 •階段I:患者在第1個療程中之第1至5天經60分鐘經由 IV接受野生型呼腸孤病毒，之後插入IP入口。在第2 個療程開始時，患者在第1至5天經60分鐘經由IV及在 φ 第1及公天經10分鐘經由IP接受野生型呼腸孤病毒。在不發生疾病加劇或不可接受之毒性之情形下，每28 天重複一次經由IV及IP之野生型呼腸孤病毒療法。 •階段II :在開始治療前對患者實施IP入口插入。患者在第1至5天經60分鐘經由IV及在第1及天經10分鐘經由IP(以階段I中所確定之最大耐受劑量）接受野生型呼腸孤病毒。在不發生疾病加劇或不可接受之毒性之情形下每28天重複一次治療。 140027.doc -19- 201004644 注：患者在第3個療程中之第2天及第3天經由ιρ接受野生型呼腸孤病毒。在病毒療法前一天投與阿來組單抗。經2小時靜脈内輸注或由皮下注射5 mg單劑量阿來組單抗。如用於治療cll 患者之阿來組單抗（Campath®) SmPC中所述對即時及後期不良反應實施預防。在每次投與IP野生型呼腸孤病毒之前，經由1]?導管投與生理鹽水並在第2及第3個療程（階段u或第1及第2個療程 (階段II)中將其取出以供進行相關研究。在第3個療程中之第2天（階段I或Π)時，亦對患者實施經CT引導的經皮腫瘤活組織檢查。藉由免疫組織化學、RT_pCR及電子顯微鏡術來分析試樣之野生型呼腸孤病毒對腫瘤及正常組織之相關分子作用。在研究治療完成後’對患者實施追蹤並持續長達12週。適合研究年齡：18週歲及以上適合研究性別：女性是否接受健康志願者：否疾病特徵： •經組織學所證實之卵巢上皮癌、原發性腹膜癌或輸卵管癌 •在基於鉑之化學療法後之復發性疾病〇必須已經歷過一種在初始基於鉑之療法期間持續存在或在基於始之化學療法完成後12個月内復發 (「鉑難治型」或「鉑抵抗型」疾病）之疾病 140027.doc 20· 201004644 吾人認為接受針對鉑敏感性疾病之第二療程基於鉑之化學療法且隨後發展為該疾病持續存在或在 12個月内復發之患者係適於該試驗之患者。 •必須具有藉由RECIST標準可衡量之疾病（階段II) •必須已接受次含有卡鉑、順鉑或其他有機鉑化合物之基於鉑之先前細胞毒性化學療法療程（對於原發性疾病）〇初始治療可包括下述中之任一者： • 高劑量療法鞏固療法腹膜内（IP)療法 •在手術或非手術評估後之長期療法〇 —種允許用於復發性或持續性疾病之額外非細胞毒療程（例如，單株抗體、細胞因子、小分子抑制劑或激素） •不存在預期對於病毒之IP分佈不可行之分隔性腹水 9 •無已知腦轉移患者特徵：納入標準： • GOG體力狀態（PS) 0-2(卡諾夫斯基（Karnofsky)PS 60-100%) •預期壽命>12週

•白細胞 23，000/mcL

•絕對嗜中性白血球計數21,500/mcL 140027.doc -21- 201004644 •血紅蛋白2l0g/dL •血小板2100,000/mcL •總膽紅素正常 • AST/ALT<2.5倍正常上限值 •肌酸酐正常 •射血分數>藉由超音心動圖或MUGA之50% •心肌酶正常 •未懷孕或哺乳 •在進入研究前或在研究參與期間育齡患者必須採用充分避孕（生育控制之激素法或屏障法或禁欲） •必須能夠在研究時及投與最後劑量之研究藥劑後23週避免與懷孕或哺乳婦女、嬰兒或免疫低弱個體直接接觸 •若在進入研究前心臟狀態已穩定6個月，則允許心臟傳導異常（例如，束支性傳導阻滯、心臟傳導阻滞）淘汰標準： •因手術禁忌症或腹部及骨盆黏連而使IP導管插入不可行之患者 •已知HIV感染或B型或C型肝炎 •臨床上顯著之心臟病（紐約心臟學會III類或IV類心臟病），其包括下述之任一者：〇預先存在心律不整〇不受控心绞痛〇進入研究前1年發生心肌梗塞 140027.doc -22- 201004644 ο免疫低弱性左心室射血分數2藉由MUGA或超音心動圖量測之2級 •不受控併發疾患’包括（但不限於）進行性或主動性感染、或可限制對研究要求之服從性的精神疾患/社會處境先前同期治療：納入標準： •參見疾病特徵 •距離最近細胞毒性化學療法（經亞硝基脲或絲裂黴素C 治療6週）至少4週 •自因在多於4週之前投與藥劑所致之不良事件中恢復 •先削未針對腹部或骨盆實施放射療法未同時投與其他研究藥劑 •除彼等下文所述者外未投與用以治療患者之惡性腫瘤的研究藥劑或市售藥劑淘汰標準： •以每天5 mg之潑尼松（prednisone)等效劑量長期口服類固醇〇允許吸入類固醇 •接受免疫抑制療法之患者 •同時常規預防性使用生長因子（非格司亭（filgrastim) [G-CSF]或沙格司亭（sargrarn〇stim) [GM-CSF]) 建議在階段I前小型研究中優化阿來組單抗與 REOLYSIN®組合之劑量。 140027.doc -23- 201004644 實例3 以類似於臨床試驗NCT00348842(新城疫病毒（NDV)，用於對習用抗癌方案有抵抗性之癌症患者）之方式實施階段II 研究。在該研究中，使用新城疫病毒之溶瘤株系（MTH-68H)來治療癌症。 NDV係對雞有害而對人無害之病毒。存在兩種主要的 NDV亞株，一種為溶瘤亞株且一種為非溶瘤亞株。溶瘤 NDV (MTH-68H)優先在癌細胞中寄居及複製且因此經靜脈内或優先在瘤内藉由直接注射或藉由注射至輸入動脈中投與NDV可直接導致腫瘤細胞溶胞。NDV可激活癌細胞中之凋亡機制並由此導致自然細胞死亡。溶瘤與非溶瘤NDV二者在臨床上應用於全世界成百上千之不同類型癌症患者中。已證明NDV對人無害。臨床研究已進行10年以上且已記載NDV在臨床前動物模型以及人中之功效。研究類型：干預研究設計：治療、非隨機化、開放標籤、不受控、單組指派、安全性/功效研究官方標題：階段II :新城疫病毒及阿來組單抗用於治療對所有習用方案有抵抗性之患者的臨床應用安全性及主要功效適合性適合研究性別：男女皆可是否接受健康志願者：否 140027.doc -24- 201004644 標準納入標準： •具有下述疾病類別之患者為適合者：患有轉移性肺癌、轉移性01癌、轉移性泌尿生殖器癌、皮膚癌及軟組織癌之患者。 •對抗癌方案失效及儘管優化應用所有可用之相關抗癌方案但仍表明患有進行性疾病。 •表示同意的患者。 • •患者應簽署一份同意書，聲明其將保證避免與雞或任何其他禽類物種之任何接觸。淘汰標準： •不滿足任何上述標準。 •垂死患者或預期壽命<3個月之患者。 •卡諾夫斯基體力狀態<6〇%。 •懷孕或哺乳婦女。 $ ·需要治療之主動性局部或系統感染。 •除基本癌症外之共同發病或危及生命之臨床病況。如試驗NCT00348842中所述投與病毒。在病毒療法前一天投與阿來組單抗。經2小時靜脈内輸注或由皮下注射5 mg單劑量阿來組單抗。如用於治療cll患者之阿來組單抗 (Campath®) SmPC中所述對即時及後期不良反應實施預防。建議在上述試驗前之小型研究中優化阿來組單抗與NDv 組合治療之劑量。 140027.doc -25- 201004644 上述實例可藉由用以一般或具體方式闡述之本發明反應物及/或作業條件替代彼等在上述實例中所使用者來重複實施並獲得類似成功。自以上闡述’熟悉此項技術之人員可易於確定本發明之本質特徵，且可對本發明實施各種改變及修飾以使其適於各種用途及條件，此並不背離本發明之精神及範疇。

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Claims

201004644 七、申請專利範圍： 1. 一種病毒療程用於製備用以治療疾病之藥劑的用途，其特徵在於局部或整個有機體中暫時關閉或修飾免疫系統功能性後應用該病毒療程。 2. 如請求項丨之用途，其特徵在於該病毒療程係溶瘤病毒療程。 3·如請求項1之用途，其特徵在於該疾病係癌症。 4·如凊求項丨之用途，其特徵在於該病毒療程包含可降低τ 籲細胞之數量及/或功能性的T細胞去除劑（depletor)或T細胞修飾劑。 5·如請求項4之用途，其特徵在於在去除（depleting)該等τ 細胞或修飾其功能性後應用該病毒療程。 6. 如請求項5之用途，其特徵在於離體（ex vivo)實施該T細胞去除或修飾。 7. 如請求項4之用途，其特徵在於該τ細胞去除劑或修飾劑應用獨立於該病毒療程。 8·如凊求項4或5之用途，其特徵在於該τ細胞去除劑或修飾劑係該病毒療程之一部分。 9.如凊求項4或5之用途，其特徵在於應用針對cD3之單株抗體。 10·如請求項4或5之用途，其特徵在於應用針對CD4之單株抗體。 n.如請求項4或5之用途，其特徵在於應用針對ce>52之單株抗體。 140027.doc 201004644 12. 如請求項4或5之用途，其特徵在於應用莫羅單抗 (muromonab)-CD3 ° 13. 如請求項4或5之用途，其特徵在於應用阿來組單抗 (alemtuzumab) 〇 14. 如請求項4或5之用途，其特徵在於應用抗胸腺細胞球蛋白。 15. 如請求項4或5之用途’其特徵在於應用該τ細胞自殺基因轉導（Tk-基因）。 16. 如請求項4或5之用途，其特徵在於在使用該病毒療程之前應用該T細胞去除劑或τ細胞修飾劑。 17. 如請求項4或5之用途，其特徵在於該丁細胞去除劑或τ細胞修飾劑係應用或作用至已成功地應用一或多輪病毒療程為止。 18.如請求項丨之用途，其特徵在於該丁細胞去除/修飾伴隨或隨後增強免疫系統之治療。 19·如請求項1之用途，其特徵在於該T細胞去除劑或修飾劑係合併使用或隨後應用G-CSF或GM-CSF治療。 20·如請求項1之用途除T細胞。其特徵在於該T細胞去除劑基本上清 21.如吻求項4之用途，其特徵在於投與τ細胞調節劑。青求項1之用途，其特徵在於該Τ細胞調節劑基 Τ細胞沉默。使· 23.如凊求項丨之用途，其特徵在於τ細胞去 so〇/. „ 狂度係至少 140027.doc 201004644 24.如請求項1之用途，其特徵在於T細胞功能損失程度係至少 50%。

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