TW200916126A

TW200916126A - Organic compounds

Info

Publication number: TW200916126A
Application number: TW097132233A
Authority: TW
Inventors: Fadi Eskandar
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2007-08-24
Filing date: 2008-08-22
Publication date: 2009-04-16
Also published as: CL2008002479A1; WO2009027337A1; PE20090607A1; AR067997A1

Description

200916126 九、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於含有一或多種囊封於脂質囊泡中之藥物物質的新穎醫藥組合物及乾粉調配物。本發明亦係關於製造此等組合物及調配物之方法及以此等組合物及調配物治療疾病或病症之方法。本發明之其他態樣、目標及優勢將自下文描述而明白。【先前技術】活性面藥成份[API]或藥物物質若以足夠治療有效量達到治療位點則其在患者中僅能具有藥理學作用。治療上潛在地極具活性之藥物因其不穩定、由非目標系統吸收或僅僅不能進入相關細胞而有時在活體内無效。已知可藉由將藥物囊封於脂質體中來改良某些藥物向其治療目標之傳遞。以此古—1 , J、’可經由減小巨噬細胞吞噬作用來而生物可用率卫/七分、| 用羊且/或減少副作用。0地樂物囊封於脂質體中之嘗低覆埋效率、不能可再二到以下AW包括AH之 λ 7jc ^ . 也囊封足量API、不穩定性（尤其在水性核境中歷時延县 u 在儲存期門… ）、對機械應力之敏感性、在儲存期間納自囊泡滲質、加工鲁拄更用毋理學上不適合之脂因不經濟之大規模製造能力。 b 而要經由脂質囊封偖谦— 其克服上述問題中之一或多者:、樂物物質之醫藥組合物’ 用替代。對製備經由脂；至少向已知組合物提供適的簡單且有效之方、、專遞藥物物質之醫藥組合物〜乃凌亦存在需要。 133847.doc 200916126 【發明内容】、第〜、樣中，本發明提供醫藥組合物，其包含：（a) 或夕種藥物物質；脂質；（C)輔脂質；及（D)流動性增強劑；該醫藥組合物之特徵在於脂質、輔脂質及流動性增強W起形成包含囊封該或該等藥物物質之脂質囊泡的脂質分散液。在第二態樣中，本發明提供乾粉調配物，其包含：（A) 或夕種藥物物質；脂質；輔脂質；及⑴）流動性增強劑；該調配物之特徵在於脂質、輔脂質及流動性增強劑起形成包含囊封該或該等藥物物f之脂質囊泡的脂質分散液且該脂質分散液經乾燥以形成自由流動之乾粉調配物。【實施方式】月曰貝囊泡之平均直徑較佳在7〇 11111與55〇之間，更佳在100 nm與450 nm之間，且甚至更佳在1〇〇 11111與25〇間。士乾粉調配物較佳$於吸入投肖。當冑配物為可吸入粉末時，平均空氣動力學粒度較佳不大於1〇微米，更佳不大於 5微米，且甚至更佳不大於3微米。或者，乾粉調配物適用於以復水後之液體形式或以乾粉形式經鼻投與。當調配物為經鼻粉末時，平均空氣動力與粒度較佳大於1 〇微米。在第三態樣中，本發明提供製備醫藥組合物之方法，嗜方法包含以下步驟： 133847.doc 200916126 (a) 在高剪切下混合脂質與輔脂質； (b) 拌合一或多種藥物物質；及封該或該等藥物物質粉調配物之方法，該 (C)拌合流動性增強劑以形成包含囊之脂質囊泡的脂質分散液。在第四態樣中，本發明提供製備乾方法包含以下步驟： (a) 在高剪切下混合脂質與輔脂質； (b) 拌合一或多種藥物物質； (c) # 口机動性增強劑以形成包含曩封該或s亥專藥物物質之月曰負囊泡的脂質分散液； (d) 視情況稀釋該脂質分散液；及 0)乾燥該脂質分散液以形成粉末調配物。用於本說明書中之術語具有以下含義：如本文t所用之”卡爾指數（CarrlsIndex)”為粉末流動性之指示。其係如下來計算：卡爾指數（％)=(敲緊密度_容積密度）*丨00/敲緊密度如本文中所用之，·辅脂質，，為使脂質穩定之物質，：如脂質囊泡穩定劑。如所用之”dsRNA"表示經改質或未經改質之募核糖核苷酸或多核糖核苷酸，及其片段或部分，其為染色體組或合成來源或源自載體表現，其可經部分或完全雙股化且其可為純端或含有5’-懸垂物及/或3，_懸垂物，且亦可具有包含單一寡核糖核苷酸之髮夾形式，該單一寡核糖核苷酸向後指疊於自身上以得到雙股化區域^ dsRNA亦可含有經改質 133847.doc 200916126 之核苷酸殘基。如本文中所用之π發射劑量”或"ED”為在致動後自器件發射之藥物物質的總質量。其並不包括於器件内部或表面上所剩餘之物質。藉由自適當裝置（例如劑量均勻性取樣裝置（DUSA))中之器件收集總發射質量且藉由經確認之定量濕式化學檢定將此回收來量測ED。如本文中所用之”囊封效率”通常係定義為覆埋於脂質結構中之藥物物質之量且以百分比表示。如本文中所用之”細顆粒劑量”或"FPDn為在致動後自器件發射之藥物物質之總質量，該藥物物質係以小於界定限值之空氣動力學粒度存在。若非明確說明為替代性限值 (諸如1 μιη或3 μηι等），則一般將此限值視為5 μιη。使用慣性衝擊器或撞擊器，諸如雙級撞擊器（TSI)、多級液體撞擊器（MSLI)、安得生級聯衝擊器（Andersen Cascade Impactor，ACI)或 Next Generation 衝擊器（NGI)來量測 FPD。各衝擊器或撞擊器在界定之流率下對於各級具有預 " 定之空氣動力學粒度收集截止點。藉由闡明藉由經確認定量濕式化學檢定所定量之逐級活性劑回收率來獲得FPD 值，在該經確認定量濕式化學檢定中，將簡單級切割（cut) 用以測定FPD或使用逐級沈積之較複雜數學内插法。如本文中所用之”細顆粒部分”或"FPF"通常係定義為FPD 除以ED且表示為百分比。此處，將ED之FPF稱為FPF(ED) 且計算為FPF(ED)=(FPD/ED)xlOO%。”細顆粒部分”亦可定義為FPD除以MD且表示為百分比。此處，將MD之FPF稱 133847.doc 200916126 為 FPF(MD)且計算為 FPF(MD)=(FPD/MD)x 1 〇〇%。如本文中所用之”流動性增強劑”為增強醫藥組合物之流動性的物質。如本文中所用之"幾何標準差"或"GSD，，為自雷射繞射粒度分布資料之氣溶膠多分散性之度量且如下來計算： GSD = ^ VX10 其中X90及Χίο為顆粒之90%及10%在此尺寸以下之粒度。如本文中所用之"離子平衡劑"為中和藥物物質離子且便於囊封於脂質中之物質。如本文中所用之"脂質"意謂醫藥學上可接受之脂質，包括（例如）中性脂質、聚乙二醇化脂質、陽離子脂質、兩性離子脂質（諸如輔助脂質）及陰離子脂質。如本文中所用之”脂質分散液"意謂由包含雙層膜之球形囊泡組成之結構，其可包含天然或合成磷脂或純界面活性劑組份。將此等囊泡分散於如水、有機溶劑或油基介質之合適分散介質中。如本文中所用之"質量中值空氣動力學直徑"或”μμα〇" ^明與所纣淪之顆粒具有相同沈降速度之球形單元緻密顆粒的中值尺寸。平句粒度為如藉由雷射光繞射所量測的顆粒之平均直 ^ χ90平均粒度為—平均粒度，9〇%試樣顆粒具有在該平均粒度以下更低之平均粒度。Χ50平均粒度為一平均粒又0 /〇試才篆顆粒具有在該平均纟度以Τ更低之平均粒 133847.doc 200916126 10%試樣顆粒具有在該度。Χίο平均粒度為一平均粒度平均粒度以下更低之平均粒度。如本文中所用之乾粉調配物之"計量劑量”或” Μ 由相關吸入器器件遞呈之為以稭旦^ Φ式存在的樂物物質之始晳量。舉例而言，MD可為存在之〜質用於特疋乾粉吸入器之膠囊中或存在於適用於特定乾粉吸入器器物物質之質量。货汜甲的樂如，文中所用之”非經腸投與"意謂經由諸如以下各者之途控藉由靜脈内、皮下、古内、时而咖夂卜皮内、肌肉内、關節内、眼内、顱内、鞘内注射來投與：靜脈内、 αλ_ 汉广皮·内、肌肉内、關節内、眼内、顱内、鞘内戋稍円次至任何其他身體部分或組織0 ”醫藥學上可接受”係指在合理醫學判斷範内之化合物、材料、組合物及/或劑型’其適於與哺乳動物（尤其: 類)之組織接觸，而無過多毒性、刺激、過敏性反應：與合理益處/風險比率相稱之其他問題併發症。如本文中所用之”RNA”意謂介導核糖核酸干擾之單股或雙股核酸分子，其包括（但不限於）雙股核酸（"dsNA”）、雙股 RNA(”dsRNA，，）、微型 RNA(，，miRNA”）、短髮夾 rna ("shRNA")、短干擾核酸（”siNA")及短干擾核糖核酸 ("siRNA”）。如本文中所用之”siRNA"意謂短干擾RNA且係指適用於 RNA干擾之短雙股核糖核酸。此等siRNA具有（例如）在⑺ 至50個核苷酸，尤其（例如）丨5至25個核苷酸之間的長度。 133847.doc -10- 200916126 如本文中所用之”體積平均直徑"或” vmd”意謂使用雷射繞射或任何其他合適技術所量測的與相關顆粒具有相同體積之球形單元緻密顆粒的平均尺寸。在本》兒明書通篇且在其下之申請專利範圍中，除非文中斤而否則將3 3吾&含"視為表示包括所述整數或步驟或數或Y驟之群但不排除任何其他整數或步驟或整數或步驟之群。就廣義的術浯而言’本發明係關於醫藥組合物。該組合物匕3 . (A)一或多種藥物物質；（B)脂質；（C)輔脂質；及、)M·動11 i曰強劑。該醫藥組合物之特徵在於脂質、輔脂 2机動性增H起形成包含囊封該或該等藥物物質之脂質囊泡的脂質分散液。可將醫藥組合物乾燥以形成自由流動亡較佳適於吸入及經鼻投與之乾粉調配物。將藥物物質覆埋於脂質雙層中以形成脂質囊泡。藉由脂質層進-步塗佈若干脂質囊泡以形成脂質乾粉囊。藉由較佳=結晶物質之流動性增強劑進—步塗佈此囊以形成具有所而平均粒度之顆粒。最終顆粒結構形成因小接觸面積故㈣㈣聚力之自由流動脂質粉末。藉由囊封藥物物質’可能增大局部及全身生物可用率，降低大分子及帶負電荷分子之巨噬細胞吞噬作用，因此減少副作用（例如，經鼻刺激及對鼻上皮層之損害）且降低藥物物貝之吸濕特徵，藉此改良物該-等藥物物質為包括小分子量化合二：分子之任何醫樂活性物質。合適小分子量化合物包括(但不限於)(例 133847.doc 200916126 如）P2_腎上腺素能受體促效劑（p2-adrenoceptor agonist)、簟毒驗结抗劑、糖皮質類固醇、非類固醇糖皮質激素受體促效劑、Aza促效劑、A2B拮抗劑、抗組織胺、卡斯蛋白酶 (caspase)抑制劑、LTB4拮抗劑、LTD4拮抗劑、磷酸二酯酶抑制劑（尤其PDE4抑制劑或PDE5抑制劑）、黏液溶解藥 (mueolytics)、抗生素、基質金屬蛋白酶抑制劑（MMpi 的）、白三烯受體拮抗劑（LTRA)、IgE合成抑制劑、抗生素、干擾素、钟通道抑制劑、免疫調節劑、抗腫瘤劑、彈性蛋白酶抑制劑、在CRTH2受體處之前列腺素D2(pGD2) 拮抗劑活性劑及列關康（prostatin)抑制劑。合適大分子包括（但不限於）肽、蛋白質、寡核苷酸、RNA(包括dsNA、 dsRNA、miRNA、shRNA、siNA及 siRNA)、DNA、質體、胰島素、介白素、生長激素、肝素、雌二醇、GLP-l、抗生素、抗腫瘤劑及抗體。各藥物物質係以治療有效量或濃度存在。此治療有效量或濃度為一般技術者所知’因為該量或濃度係隨所用治療劑及所處理之適應症而改變。在某些較佳實施例中，藥物物質為寡核苷酸或rNa(尤其 siRNA) 〇在某些較佳實施例中，該或該等藥物物質適於吸入投與或經鼻施用。 ” 脂質為醫藥學上可接受之脂質，其包括中性脂質、陽離子脂質、兩性離子脂質及陰離子脂質。中性脂質之實例為 (但不限於）磷脂醯膽鹼（其可能經或可能不經氫化或聚乙二 133847.doc •12- 200916126 醇化）*然或合成麟脂醯乙醇胺、麟脂酿絲胺酸、鱗脂酿甘油、麟脂醯肌醇。在某些較佳實施例中，月旨質為鱗脂醯膽鹼（例如一-肉豆蔻醯基加⑽咖⑴磷脂醯膽鹼 (DMPC))、一-軟脂醯基磷脂醯膽鹼（Dppc)、氫化磷脂醯膽驗（例如，類脂S PC_3)或大豆麟脂（例如，類脂π或大旦卵磷月曰）。月曰質較佳為二_肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼、二-軟脂醢基填脂醯膽驗、夫自^ > 職大丑卵磷脂或氫化磷脂醯膽鹼。陽離子月曰質之實例包括(但不限於”，2_二油醯基小三甲銨丙烧（DOTAP) ’ N-[l-2(2,3-二油基氧基）丙基]_N，N，N_s 甲基氣化銨（DOTMA) ; 2,3-二油醯基氧基·N_叫精胺曱醯胺基）乙基]-N，N-一甲基+丙錢（D〇spA);二（十八幻酿胺基二醇（giycu)精胺（DOGS);及 3，[n_n1，N-二甲基乙二胺）_ 胺甲醯基]_膽固醇(D-膽固醇）。兩性離子脂質之實例包括 (C不限於）1，2-一油醯基·sn_甘油基_3_填酸乙醇胺（D〇pE) 及膽固醇。輔月曰貝（其為使脂質穩定，尤其使脂質囊泡穩定之物質）可為(仁不限於)膽固肖、聚乙二醇化磷脂醯膽、磷脂醯甘油、聚山梨醇酷、中7 t乙一知（PEG)、聚乙烯吡咯啶（PVP) 或膽固酵。在某此動! #香& y , 一1佳實施例中，輔脂質為聚乙二酵化磷脂醯膽驗或膽固醇。脂質/輔脂質組合之實例包括（但T限於）二-軟脂醯基碟㈣膽驗[DPPC]/N-(幾基-曱氧基聚乙二醇-2000)- i，2_二硬月曰醯基sn-甘油_3_磷酸乙醇胺、鈉鹽[MpEG_a〇〇_ SPE] 一 _軟知醯基磷脂醯膽鹼[Dppc]/N_(羰基_甲氧基 133847.doc -13. 200916126 聚乙二醇-2000)-1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、鈉鹽[MPEG-2000-DSPE]/膽固醇、二-軟脂醯基磷脂醯膽鹼 [DPPC]/N-(羰基-曱氧基聚乙二醇-2000)-1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、鈉鹽[MPEG-750-DSPE]、二-軟脂醯基磷脂醯膽鹼[DPPC]/N-(羰基-甲氧基聚乙二醇-2000)-1，2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、鈉鹽[MPEG-750-DSPE]/膽固醇、二-軟脂醯基磷脂醯膽鹼[DPPC]/N-(羰基-甲氧基聚乙二醇-5000)-1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、鈉鹽[MPEG-5000-DMPE]、二-軟脂醯基磷脂醯膽鹼[DPPC]/N-(羰基-甲氧基聚乙二醇-5000)-1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、鈉鹽[MPEG-5000-DMPE]/膽固醇、二-軟脂醯基磷脂醯膽鹼[DPPC]/N-(羰基-曱氧基聚乙二醇-2000)-1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、鈉鹽[MPEG-2000-DMPE]及二-軟脂醯基磷脂醯膽鹼 PPPC]/N-(羰基-曱氧基聚乙二醇-2000)-1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、鈉鹽[MPEG-2000-DMPE]/膽固醇0 流動性增強劑（其為增強醫藥組合物之流動性的物質）可為（但不限於）疏水性非吸濕性物質，諸如胺基酸、甘露糖醇、菊粉、蔗糖、乳糖、L-白胺酸、D-白胺酸、異白胺酸、血清白蛋白、右旋糖、麥芽糖、甘胺酸、麥芽糖醇、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、赤藻糖醇或其混合物。在某些較佳實施例中，流動性增強劑為結晶。結晶流動性增強劑傾向於在脂質分散液中在脂質囊泡之外表面上結 133847.doc 200916126 曰曰 …増強劑為麥芽糖、甘露糖走糖麥芽糖醇'甘胺酸、硬在某些較佳實施例中，醇、菊粉、蔗糖、乳糖、脂酸鈣或硬脂酸鎂。當藥物物質為離子時，經常需㊉而要醫樂組合物含有離早承衡劑及/或緩衝系統。離子平 3有離子千 (其為減少藥物物質離子且以便囊封於中性脂質中之物質貞）了為（但不限於）硬脂酸鈣、虱化鈣、鱗酸三鈣、碟酸急_ 技嶙駸虱—鈣 '山梨酸鈣、丙醆舞、氯化鎮或硬脂酸鎂。在某些較佳實施例中，離子平衡劑為氯储、魏三㉝s切脂_。緩衝系統調節脂質分散液之ΡΗ值且調節藥物物質上之離子電荷。其可為（但不限於）乳酸、#檬酸、乙酸鹽緩衝液、甘胺酸、鱗酸鹽緩衝液或tris緩衝液。在某些較佳實施例中，緩衝液為乳酸 (pH 4.0)及磷酸鹽緩衝液（pH 6 5)。如上所述，本發明之醫藥組合物可經乾燥以形成自由流動且較佳適於吸入及/或經鼻投與之乾粉調配物。根據本發明，提供改善人類個體（例如患者）中之藥物物質誘發之炎症的方法，該方法包含提供如本文中所述之乾粉調配物。在較佳實施例中，乾粉調配物包含脂質分散液’該脂質分散液包含諸如DPCC之中性脂質。吾人因此亦提供包含一或多種藥物物質以便投與人類患者之乾粉調配物’其中該調配物一旦投與該人類患者，即改善由該藥物物質誘發之炎症，該乾粉調配物包含諸如DPCC之中性月曰質、輔脂質及流動性增強劑（例如，結晶流動性增強 133847.doc -15- 200916126 劑）°該乾粉調配物可藉由如本文所述經由呼吸道之藥物傳遞對於全身及局部作的藥物投與途徑。與API(尤其為生物分用^為誘人經腸投藥相比，其經由呼吸道之投目前習知非皮或非經腸途徑相比之大量優勢、，’ 為較簡單之自身投靼，脯支― 口途徨相比其繞過肝臟收提供大的黏_， … 降低藥物之酶促及ΡΗ降解。

胃吸入傳遞藥物物質亦使得能夠局部施用於肺中，減少副作用且改良在較高局部濃度下藥物之有效性。以供在治療呼吸道疾病中吸人之乾粉調配物—般藉由混合微粉化活性醫藥成份與粗载劑顆粒來調配以得到有序混合物。然而，超細顆粒傾向於具有不良流動性及氣溶膠化特導致相對較低之可呼吸部分’亦即沈積於肺周邊之氣溶膠部分。另一擔心為顆粒-顆粒間的相互作用力，諸如疏水結合、靜電及毛細.管水相互作用’其可導致形成聚集物及聚結物。此等因素可導致習知製備之乾粉系統的效率之顯著^。此可使得製造昂貴大分子之乾粉不經濟且導致長期穩定性之擔心。就廣義術語而言，鼻内投與途徑僅傾向於用以傳遞習知藥物以治療局部不適，諸如鼻充血及竇感染。然而，新近某些臨床試驗已證明當治療諸如哮喘、過敏症、囊腫性纖維化、嚴重急性呼吸道症候群及由呼吸道融合病毒及流感病毒引起之感染的嚴重呼吸道疾病時，鼻内途徑亦可適用--參見 Hussain Α.，Jc/v. Drwg £)以 7?ev_ (1998) 29·· 3 9-49; 133847.doc •16- 200916126

Nyce及 Metzger, iVa/wre (1997) 385:721-725; Finotto等人，五：Φ· Md. (2001) 193: 1247-1260; Allakhverdi等人， J. Respir. Crit. Care Med. (2002) 165: 1015-1021, Aurora J.，Drwg 幻；（2007) 85。經鼻投藥可為用於藥物全身性施用之誘人方法，因為其允許非侵襲性施用同時期望獲得改良之患者順應性。鼻腔為吸收提供大的表面積’其係經充當界面活性劑之表面活性脂蛋白所覆蓋且因此可有助於藥物物質之細胞内攝取，該等藥物物質包括消炎劑、免疫刺激劑、激素、肽、蛋白質、抗體、募核苷酸、疫苗、pDNA、RNA、DNA及抗腫瘤劑。液體經鼻喷霧劑及液滴為最常用於鼻内投藥之藥物調配物。然而’乾粉調配物可比液艚舖献

股Π将定區域且提供持續釋放作用。續釋放作用。另外，可將經鼻傳遞系統設計為靶向鼻腔中之特定區域

沈積，其中滲透性一般較高，仍网配物可靶向鼻後部中之因此在鼻中提供較短滯留時 I33847.doc 200916126 間及因此之全身性吸收，且此乾粉形成本發明之—實施儘管使用液體經鼻噴霧傳遞系統來靶向特定鼻區由於所產生液滴之廣;乏分布以及對噴霧模式之依賴性而具有挑戰性，但本發明之經鼻乾粉娜物可精確且有效地將藥物傳遞至鼻中之相關區域。 ’ 以供經鼻及/或肺投藥之自由流動乾粉的本發明之乾粉

調配物提供多種適用益處。舉例而言，其傾向於比傳：：質分散液調配物更穩定m有效地傳遞藥物物質且允許減少待施用之劑量，其使得藥物物質能夠靶向鼻腔、上氣管或肺泡沈積之特定區_以便局部《全身十生施用且其並不需要使用防腐劑。諸如硬脂酸鎂之抗黏劑已用以處理在含有低分子量藥物物質之乾粉調配物中的此等問題中之一些。然❿，當調配大刀子為肽、蛋白質、寡核普酸、rna*dna時，此等藥 W並不適合。另外，其並不有助於使API靶向細胞中或中止肺之天然清除機制直至已有效傳遞藥物。脂質囊封之乾燥顆粒通常具有不良流動性及高黏性，其在包括填充及包裝之下游加工中產生問題n令人驚 °牙地本發明之乾粉調配物大體上自由流動，同時具有低黏性。 _ 本發明之乾粉調配物亦具有良好物理化學粉末特徵，如 j員粒/顆粒接觸面積及顆粒/包裝材料接觸面積減小而黏著性/内平：fr，人減小。此可確保所需粉末氣溶膠化特徵及 133847.doc -18· 200916126 主要包裝或吸人器件中之較少粉末保留。乾粉調配物亦可含有醫藥劑、佐劑、穩定劑、防腐劑、分形劑，諸如載項技術中習知之其他試劑(已顧及：劑’諸如碌酸鹽、擰檬酸鹽、丁二酸越、性；緩衝酸或其鹽；抗氧化劑，諸如抗壞血酸；夂=他有機如聚乙烯吡咯啶酮；單醣、_ ’ D物’諸鑪維去七甘/ 一醣及其他碳水化合物，包括 =素U生物、葡萄糖、甘露糖或糊精如贿A;糖醇，諸如甘露糖醇或山梨糖醇；平衡科諸如及/或非離子型界面活性劑，諸如聚Γ=: 剞之拉〜挪^ 叙技術者可根據非經腸劑上过賦二：特性藉由常規實驗且無任何不當負擔來選擇上述賦㈣彳中之_或多者。所用各賦形#j 術中習知之範圍内變化。 j在此項技就廣義術語而言，藉由包含之醫藥組合物·· …下步驟之方法製備本發明 (a) 在高剪切下混合脂質與辅脂質； (b) 拌合一或多種藥物物質；及 ⑷拌合流動性增強劑以形成包含囊封該或該等藥物物質之脂質囊泡的脂質分散液。寸在料中，藉由在有或無超音輔助之諸如c〇iieu# :切::合益（Niro Pharmasystems，⑽一)之高剪切混合斋中混合脂質與輔脂質來形成脂質顆粒。較佳將脂質顆粒 133847.doc -19· 200916126 2節在月日貝轉移溫度以上之恆溫下。脂質及輔脂質可與包 '或夕種'谷背彳之溶劑系統混合在一起，脂質、輔脂質、樂物物質溶解於該溶劑系統中。此通常為諸如醇（例如乙醇或異丙醇）之有機溶劑。在步驟（b)中，可使用任何此項技術已知之適用於所用藥物物質之方法混合藥物物質與脂質。然而，此較佳以連續混σ方式緩慢進行以促進充分且均質之混合及藥物物質於月曰貝囊泡中之覆埋但避免藥物物質之降解或變性。在一較佳實施例中，使用抽吸系統（對於在1〇…與⑺❹L之間的批料尺寸而言流率例如為（M „11/„1丨11至55〇 ml/min)以連續此合之方式在受控溫度下將藥物物質緩慢注射於脂質顆粒分散液中。當藥物物質為離子時，經常需要醫藥組合物含有離子平衡劑及/或緩衝系統。該等物質可在步驟（b)中與藥物物質混合。在步驟（c)中，使用任何此項技術已知之適於形成囊封於脂質囊泡中之該或該等藥物物質的脂質分散液之方法使流動性增強劑（有或無缓衝鹽）與脂質顆粒與藥物物質之混合物混合。如藉由使用 Master ZetaSiZer(Malvem Inst]«uments

Ltd，UK)進行之動態光散射技術來測定，囊泡之平均直徑較佳在70 nm與550 nm之間，更佳在10〇 nm與45〇 nm2 間，且甚至更佳在1〇〇 nm與250 nm之間。可進一步加工本發明之醫藥組合物以製備乾粉調配物。額外步驟包含： (d)視情況稀釋該脂質分散液；及 133847.doc •20- 200916126 ⑷乾燥該脂質分散液以形成乾粉調配物。在步驟⑷中，當需要稀釋時，使用水或緩衝溶液將脂質分散液較佳稀釋至最終滚度之，％，較佳2%至5%且最佳=2。/。。然而，當製備用於經鼻投與之乾粉調配物時，使用水或緩衝溶液將脂質分散液較佳稀釋至最終濃度之2% 至20% ’較佳5%至10%。 /步驟⑷中’使用任何此項技術已知且合適之方法（- 較佳方法更詳細地描述於下文中）乾燥脂質分散液。較佳將脂質分散液噴霧乾燥。所得乾粉調配物大體上自由流動。根據本發明，提供製造包含囊封一或多種藥物物質（例如，siRNA及/或募核苷酸）之脂質囊泡的脂質分散液之乾辛刀調配物（例如具有大於2〇 μιη之平均粒度以便將粉末傳遞至鼻础部或例如具有在1 〇 1^111至2〇 μιη之間的平均粒度以便傳遞至鼻後部）的方法，該方法包含： (a) 在高剪切（例如5〇 rpm45〇 rpm以上）下混合脂質與辅脂質； (b) 拌合一或多種藥物物質；及 (c) 拌合流動性增強劑以形成包含囊封該或該等藥物物質之脂質囊泡的脂質分散液； (d) 視情況使用水或緩衝溶液將脂質分散液稀釋至最終濃度之5%至10%之間； (e) 乾燥脂質分散液（例如藉由在約13(TC或130°C以上之溫度下噴霧乾燥）以形成粉末調配物。 133847.doc -21 - 200916126 在-些實施例中’此方法係以順燥步驟係在13(rCn_ u ()至（）來進仃且乾去…Γ 丁。本發明擴展至藉由本發明之方法製&的乾粉調配物。

::用最優化噴霧乾燥技術來進行步驟⑷之乾燥方法，二中使用旁路噴霧噴嘴來霧化月旨f分散液，該旁路嘴係使用如空氣或氮氣之加壓氣體來操作以形成尺寸為5 叫之液滴。將此等液滴懸浮於例如空氣或氮氣之妖氣體中以便乾燥。在此乾料程期間，水細基於乾燥;^ 之擴政速率來蒸發。同日寺’包括脂質囊泡之調配物的所有親水性組合物均向液滴中心移動，而如額外脂質疏水性尾部1)之疏水性組合物向氣體/液滴界面移動。藉由經由擴散過程之潮式控制(tide controlling)來調節此動力學過程’可製仔有效囊封一或多種藥物物質之脂質乾粉顆粒。另外，流動性増強劑沈澱於此等粉末囊之表面上，使得降低顆粒-顆粒接觸面積，其顯著改良粉末流動性及氣溶膠化效能。因此，相應地提供製造包含囊封一或多種藥物物質（例如，siRNA及/或募核苷酸）之脂質囊泡的脂質分散液之乾粉調配物的方法，該方法包含： (a) 在尚剪切（例如5〇卬爪或” rpm以上）下混合脂質與輔脂質； ' (b) 拌合一或多種藥物物質；及 (c) 拌合流動性增強劑（例如呈結晶形式），諸如麥芽糖、甘露糖醇、_、蔗糖、乳糖、右旋糖、麥芽糖醇、甘胺 133847.doc -22- 200916126 酸、硬脂酸鈣或硬脂酸鎂以形成包含囊封該或該等藥物物質之脂質囊泡的脂質分散液； (句視情況稀釋該脂質分散液； (e)乾燥脂質分散液以形成粉末調配物，其中該乾燥方法包含在（約）13〇t：或130°C以上之溫度下將脂質分散液噴霧乾燥以形成懸浮於氣態氣氛（例如，空氣、氧氣、氮氣）中之在5 μπι與5 0 μηι之間的分散液小滴。在一些實施例中，此方法係以順序0)至進行。在某些較佳實施例中，乾粉調配物可以不大於1〇微米但較佳不大於5微米之1量巾值空氣動力學直徑（MMAD)吸入。對於某些粉末組合物而言，平均mmad不大於丨至3微米，其可確保肺臟深沈積，及不大於35微米，但較佳不大於25微米之體積平均直徑（viyiD)。在f些較佳實施例中，當乾粉具有大於10微米之質量中值空氣動力學直徑（MMAD)或平均粒度時，乾粉調配物適於經鼻施用。如上所述，其中粉末平均粒度大於約20 _ 的本發明之乾粉調配物可靶向鼻前部中之藥物沈積且產生局部效應。而其中粉末平均粒度㈣_與20_之間的本發明之乾粉調配物可靶向鼻後部中之藥物沈積性吸收。、 /、土对〇J s周整該方法以製造具有受板其*7乾向肺道之任何所需區域。本發明之醫藥組合物及乾粉調配物可用以治療多種疾病及病症’其係藉由藥物物質之選擇來規定。組合物可藉由 133847.doc -23- 200916126 任何合適途徑來投與，例如經口，例如以錠劑或膠囊之形式；非經腸，例如靜脈内；局部投與至皮膚（例如在牛皮癖治療中）；鼻内；或較佳藉由吸入。口服劑型可包括錠劑及膠囊。用於局部投與之調配物可採用乳膏、軟膏、凝膠或例如貼片劑之經皮傳遞系統的形式。用於吸入之組合物可包含氣溶膠或其他可霧化調配物或乾粉調配物。然而，在本發明之一較佳實施例中，醫藥組合物係呈適於吸入投與之乾粉調配物的形式。在本發明之一較佳實施例中，醫藥組合物為適於吸入投與之脂質分散液。在本發明之另一較佳實施例中，醫藥組合物係呈適於經鼻投與之乾粉調配物的形式。在本發明之一較佳實施例中，醫藥組合物為適於經鼻投與之脂質分散液。本發明之可吸入乾粉調配物可採用常用於醫藥行業中之各種形式。例如可將其包裝於膠囊、發泡或任何其他包裝系統中且使用各種吸入/經鼻器件將其以乾粉形式施用於呼吸道或鼻腔。用於傳遞囊封形式之乾粉的合適器件為例如（但不限於）在US 3,991，761(包括AEROLIZER™器件）或 WO 05/1 13042中之描述，而合適DPI器件包括在WO 97/20589(包括 CERTIHALER™器件）、WO 97/30743(包括 TWISTHALER™ 器件）、WO 05/14089(包括 GEMINI™ 器件）、WO 05/37353(包括 GYROHALERtm 器件）及 w〇 99/64095(MicroDoseTM)中所述之彼等者。用於將乾粉傳遞至鼻腔之合適單位劑量器件包括在WO 96/22802(包括DIRECTHALERtm器件）、us 6626379(包括 133847.doc -24- 200916126

Pfeiffer乾粉經鼻施用器）中所述之彼等者。用於經鼻投與之合適多劑量DPI器件包括在WO 04/33009(包括POWERJET™ 器件）、WO 06/90149(包括OPTINOSE™乾粉經鼻施用器）及 WO 90/13328 及 WO 96/16687(包括 TURBOHALER™ 器件）中所述之彼等者。本發明之脂質分散液及可吸入乾粉調配物在施用之前即刻亦可在媒劑中復水且使用喷霧器、水性液滴吸入器或經鼻施用器來氣溶膠化。合適喷霧器包括傳統喷霧器，諸如噴射喷霧器’例如PARI LC系列（PARI GmbH)以及振動膜喷霧器’諸如 OMRON Micro A-I-R、（OMRON)、

Aeroneb®(Nektar Therapeutics Inc.) ' PARI eFlow®(PARI GmbH)、PARI eFlow®rapid、iNeb吸入器（Respironics)以及軟霧或軟喷霧吸入器，諸如AERx®(Aradigm Corp.，US)、

Mystic(Ventaira Pharmaceuticals Inc.)、Aria(Chrysalis

Techn〇logles Inc.)或 Respimat®(Boehringer Ingelheim)。亦可在合適推進劑系統中分配本發明之可吸入乾粉調配物，該推進劑系統係諸如（但不限於）氫氟烷烴（hfa)，諸如HFA134a或d HFA227，其有或無其他賦形劑且使用合適加壓計量吸入器（PMDI)來氣溶膠化。因此根據本發明，提供用於吸入及/或經鼻傳遞一或多種藥物物質(諸如寡核苷酸及/或siRNA)之醫藥組合物，該組合物包含脂質分散液，藥物物質之脂質囊泡。根據本發明之另一態樣該脂質分散液包含囊封—或多種 ’提供用於吸入及/或經鼻傳遞 133847.doc -25- 200916126 一或多種藥物物質（諸如寡核苷酸及/或siRNA)之乾粉調配物’該組合物包含脂質分散液，該脂質分散液包含平均直徑在70 nm與550 nm之間（較佳在1〇〇 nm與250 nm之間）的囊封該或該等藥物物質之脂質囊泡。因此根據本發明’提供用於吸入及/或經鼻傳遞一或多種藥物物質（諸如募核苷酸及/&siRNA)之醫藥組合物，該組合物包含脂質分散液，該脂質分散液包含囊封一或多種藥物物質之脂質囊泡’其中藉由包含以下步驟之方法形成該分散液： (a) 在南到切下混合脂質與輔脂質（諸如聚乙二醇化磷脂醯膽驗或膽固醇）； (b) 拌合一或多種藥物物質；及 (0掉合流動性增強劑以形成包含囊封該或該等藥物物質之脂質囊泡的脂質分散液。根據本發明之另一態樣，提供用於吸入及/或經鼻傳遞一或多種藥物物質（諸如募核苷酸及/或siRNA)之乾粉調配物，該組合物包含脂質分散液，該脂質分散液包含囊封該或π亥等藥物物質之脂質囊泡，其中藉由包含以下步驟之方法形成該調配物： (a) 在高剪切下混合脂質與輔脂質； (b) 拌合一或多種藥物物質； (c) 拌合流動性增強劑以形成包含囊封該或該等藥物物質之脂質囊泡的脂質分散液； (d) 視情況稀釋該脂質分散液；及 133847.doc •26- 200916126 (e)乾燥該脂質分散液以形成粉末調配物。根據本發明之另一態樣’提供用於經由鼻前部來鼻内投與一或多種藥物物質（諸如寡核苷酸及/或siRNA)之自由流動乾粉調配物，該調配物包含脂質分散液，該脂質分散液包含囊封該或該等藥物物質之脂質囊泡’其中如藉由雷射繞射所量測之平均囊泡尺寸分布為： (a) 10°/。在X 1〇值以下 (a) 50%在χ5〇值以下 (c) 90%在χ9〇值以下。在本發明之另一態樣中，提供包含一或多種藥物物質 (諸如募核苷酸及/或siRNA)之大體上如組合物a、Β、c或 D中任一者中所述之醫藥組合物。根據本發明之另一態樣，提供以一或多種吸入或經鼻傳遞藥物物質治療人類患者（受例如哮喘、過敏性鼻炎、 COPD、肺部纖維化、肺循環血壓過高及/或囊腫性纖維化所折磨）之方法，該方法包含提供如在上文中所述之醫藥組合物或乾燥調配物。在另一恶樣中，提供如在上文中所述之適用於醫學治療人類患者之醫藥組合物或乾粉調配物。本發明亦提供包含與一或多種傳遞器件聯合之如上文中所述之醫藥組合物的醫藥產品。在另一態樣中，本發明提供傳遞器件或兩個或兩個以上傳遞器件之包，其含有如上文中所述之醫藥組合物。範例 133847.doc •27· 200916126 藉由以下實例來說明本發明。實例實例1 製備本發明之醫藥組合物

自以下各物製備醫藥組合物A、B、C及D : 組合物A 組份量(％) 功能寡核苷酸A 1.5 藥物物質氫化PC(類脂SPC-3) 70 用於囊封之脂質材料聚乙二醇化磷脂醯膽鹼 8 輔脂質(脂質囊泡穩定劑）磷酸鈣 5 負離子補償乳酸，pH 4.0 0.1 緩衝液甘露糖醇 10 流動性增強劑牛血清白蛋白 2 稀釋劑磷酸鹽缓衝鹽，pH 6.5 3.4 緩衝液

組合物B 組份量(％) 功能寡核苷酸A 1.5 藥物物質二-軟脂醯基磷脂醯膽鹼(DPPC) 60 用於囊封之脂質材料聚乙二醇化磷脂醯膽鹼 8 輔脂質(脂質囊泡穩定劑） CaCl2.2H20 5 負離子補償乳酸，pH 4.0 0.1 緩衝液甘胺酸 5 流動性增強劑牛血清白蛋白 17 稀釋劑磷酸鹽缓衝鹽，pH 6.5 3.4 緩衝液

組合物C 組份量(％) 功能 SiRNA A 3 藥物物質 DPPC 60 用於囊封之脂質材料聚乙二醇化磷脂醯膽鹼 8 輔脂質(脂質囊泡穩定劑） CaCl2.2H20 5 負離子補償乳酸’ pH 4.0 0.1 緩衝液麥芽糖 5 流動性增強劑牛血清白蛋白 15.5 稀釋劑磷酸鹽緩衝鹽，pH 6.5 3.4 緩衝液 133847.doc -28- 200916126

組合物D 組份量(％) 功能 SiRNA A 3 藥物物質氫化PC(類脂S PC-3) 60 用於囊封之脂質材料聚乙二醇化磷脂醯膽鹼 10 輔脂質(脂質囊泡穩定劑）硬脂酸鈣 3 負離子補償乳酸，pH 4.0 0.1 緩衝液甘胺酸 5 流動性增強劑牛血清白蛋白 15.5 稀釋劑磷酸鹽緩衝鹽，pH 6.5 3.4 缓衝液寡核苷酸A為具有TLR9-促效劑活性的適用於治療過敏性發炎疾病（包括過敏性鼻炎）之免疫調節性寡核苷酸或”免疫物（immunomer)1'。其結構可表示如下： 5'-TCR2AACR2TTCR2-Y-TCTTRlCTGTCT-5' (SEQ.I.D.NO:l) 其中C為胞嘧啶，T為胸腺嘧啶，G為鳥嘌呤，Y為丙二醇連接子且R1/R2為合成鳥苷衍生物，如下所示： OH ΟΗ

Rl =阿糖鳥苦（Arabinoguanosine) 〇

瞧 R2=2’-脫氧基_7_脫氮雜鳥苷 133847.doc -29- 200916126 在國際專利申請案WO 2006/002038中（參見彼處之SEQ ID NO 22)描述寡核苷酸A及其製備方法。亦在國際專利申請案 WO 2003/035836 及 WO 2003/057822 中描述免疫物（一般而言）及其製造方法。所有三個文獻之内容均以引用的方式併入本文中。寡核苷酸A為水溶性的，因此將其溶解於0.1%乳酸溶液 (pH 4)中以中和分子上之負電荷。 siRNA A為用於Flu之siRNA。其為在大流行性感冒治療中使Flu-mRNA靜止（silence)之經化學合成之RNA。使用中之SiRNA為每股包含21個核苷酸之短雙股寡物質（MW : 14 kDa)。其結構可表示如下：有義股序列： 5,-GAGCCUAUGUGGAUGGAUUTsT-3, (SEQ.I.D.NO: 2) 反義股序列： 5'-AAUCCAUCCACAUAGGCUCTsT-3' (SEQ.I.D.NO: 3) 其中單字母核苷酸編碼為：A為腺苷，C為胞嘧啶核苷，G為鳥苷，U為尿嘧啶核苷、sT為胸苷且連字符表示 3'-5'磷酸二酯鍵。此藥物物質亦為帶負電荷及水溶性的，因此將其溶解於0.1 %乳酸溶液（pH 4)中以減少分子上之負電荷。在各情況下，將脂質、輔脂質及溶劑系統傾入高剪切混合器（Collette Micro Gral高剪切混合器，Niro Pharmasystems, Denmark)中且在 40-60°C 下在 50-150 rpm 之葉輪速度及200-600 rpm之切碎機速度下混合約20分鐘直 133847.doc -30- 200916126 至形成脂質顆粒。使用提供0 5_丨〇 mL/min之流率的抽吸系先 ISMATEC樓動聚（ISMATECH SA，Switzerland)將藥物物質、稀釋劑、乳酸（pH 4.0)及離子平衡劑注入脂質顆粒中。添加流動性增強劑及緩衝液（pH 6.5)以形成該或該等囊封於脂質囊泡中之藥物物質的脂質分散液。此係藉由脂質分散液之濁度歷時兩個小時以上無明顯沈積而明顯。如藉由使用 Master Zetasizer(Malvern Instruments Ltd，UK)進行之動態光散射技術所測定，脂質分散液中之脂質囊泡具有在70 nm與5 50 nm之間的平均直徑。實例2 製備本發明之乾粉調配物進一步加工實例1中所製備之醫藥組合物A、b、c及D以製備本發明之乾粉調配物。在A及B之情況中，將在實例丨中所形成之奈米懸浮液稀釋至每體積具有2%固體含量重量，而在實例1 + C&D之情況中，將其稀釋至每體積具有〇 5%固體含量重量以得到具有低黏度之脂質分散液，其可易於在噴霧乾燥器中霧化且形成小的可吸入自由流動粉末顆粒（小於1〇 μηι)〇接著使用 Biichi 191 噴霧乾燥器（Biich lab〇r Technick Α(}，

Switzerland)將各經稀釋之脂質分散液噴霧乾燥，在該噴霧乾燥器中使分散液在9G°C ·1抓之熱空氣中霧化以得到自由流動之乾粉組合物。如藉由HEL〇s雷射繞射儀 (Sympatech GmbH，Germany)所量測，乾粉之平均幾何粒度為約4 -1 3 μιη。 133847.doc 31 200916126 實例3 本發明之乾粉調配物之流動性使用 STAV Π绝、度 s十（j Engelsmann AG，Germany)來測試實例2 t製備之乾粉調配物。在各情況下，將丨〇 g乾粉調配物置於量筒中。量測粉末體積且如下以g/cm3&單位計异容積密度或"BD": BD [g/cm3]=^>末重量（g)/粉末床體積⑻丨或cy) 將乾粉敲拍1250次且量測粉末床體積。如下來計算敲緊密度或"TBD": TBD [g/cm3] =粉末重量（g)/敲緊粉末床體積（ml或cm3) 如下來計算卡爾指數：卡爾指數[%]=(敲緊密度-容積密度）*100/敲緊密度在下表1中給出四種乾粉調配物之卡爾指數：乾粉卡爾指數(％) A 22 B 29 —~-—c 30 D 17 此等結果表明乾粉調配物粉末為自由流動的。實例4 本發明之乾粉調配物之粒度特徵 …藉由HEL〇S雷射繞射儀[SymPateeh GmbH，Germany]測定實例2中所製備之乾粉調配物的粒度特徵。下表2中給出結果（n=3): 133847.doc • 32- 200916126 表2 乾粉 VMDium) GSD "^Ί A 12,90 ±2.74 5.10 ±0.37 B 7.58 ±0.05 2.20 ±0.01 ' C 4.18 ±0.03 1.95 ±0.01 D 4.46 ±0.01 1·92±0.00 在該表中’ VMD為體積平均直徑且GSD為幾何標準差。此等粒度特徵表明乾粉調配物應靶向肺道之所需區域。實例5

自醫藥組合物C所製備之乾粉調配物的進一步分析進一步分析自實例2中醫藥組合物C所製備之乾粉調配物。將此粉末之特徵概括於下表3中：表3 參數結果 ΧΙΟ (μιη) 1.88 ±0.02 —~ Χ50 (μιη) 3.66 ±0.04 Χ90 (μηι) 7.17 ±0.03 容積滲透濃度(mOsmo) 6.33 ±0.58 —~ 粉末密度(g/cm3) 0.1015 卡爾指數 Γ30% VMD(“m) 4.18 ±0.03 GSD 1.95 ±0.01 "1 度，50%之顆粒具有在X50值度量以下之平均粒度且9〇%之顆粒具有在X90值度量以下之平均粒度。如藉由微滲壓計 (Advanced Inst, lnc, US)量測之容積滲透濃度表明siRNA係經有效囊封。VMD為體積平均直徑且GSD為幾何標準差。質量中值空氣動力學直徑[MMAD或daer]可自體積直徑 [dv]藉由下式來計算： 133847.doc -33- 200916126 d〇er 其中P為以g/cm3為單位之粉末密度此粉末之低密度可確保低MMAD，其產生高精細細顆粒部分[FPF<5 μηι]。藉由雷射繞射所量測之脂質分散液粒度分布展示於附圖之圖1中。藉由雷射繞射所量測之粉末粒度分布展示於圖2 中〇脂質分散液之平均粒度為517 5 nm。脂質分散液具有 0.47之多分散指數。 ' 此等結果展示乾粉調配物包含適用於吸入投藥且大體上自由流動之單分散顆粒。實例6 自醫藥組合物D所製備之乾粉調配物的進一步分析進一步分析自實例2中醫藥組合物D所製備之乾粉調配物。此粉末之特徵係概括於下表4中： ΎΚ " 結果 Χ10 (um) 2.01 ±0.00 X50 (um) 3.97 ±0.00 X90 (um) 7.42 ± 0.02 谷積參透濃度(mOsmo) 0 粉末密度(g/cm3) 0.07 卡爾指數 19% VMDium) 4.46 ±0.01 GSD 1_92±0.00 在此表中，10%之顆粒具有在χ10值度量以下之平均粒度，50%之顆粒具有在χ5〇值度量以下之平均粒度且90%之 133847.doc -34- 200916126 顆粒具有在X90值度量以下之平均粒度。如藉由微渗壓計（Advanced Inst. Inc, US)量測之容積滲透濃度表明siRNA係經有效囊封。VMD為體積平均直徑且 GSD為幾何標準差。質量中值空氣動力學直徑（MMAD或daer)可自體積直徑 [dv]藉由下式來計算： daer = 其中為以g/cm3為單位之粉末密度丨此粉末之低密度可確保低MMAD，其產生高精細顆粒部分（FPF <5 μιη) 〇藉由雷射繞射所量測之脂質分散液粒度分布展示於附圖之圖3中。藉由雷射繞射（Malvern Zetasizer, UK)所量測之粉末粒度分布展示於圖4中。脂質分散液之平均粒度為229.5 nm。脂質分散液具有 0.261之多分散指數。此等結果展示乾粉調配物適用於吸入投與且大體上自由 '流動。實例7 製備本發明之其他醫藥組合物自以下各物製備醫藥組合物E、F、G及Η : 組合物Ε 組份量(g/i) 功能募核苷酸A 0.075 藥物物質二-軟脂醯基磷脂醯膽鹼(DPPC) 3.000 用於囊封之脂質材料 PEG-峨脂醯膽驗 0.250 輔脂質(脂質囊泡穩定劑） 133847.doc -35- 200916126 組份量(g/i) 功能 CaCl2.2H20 0.250 負離子補償乳酸，pH 4.5 0.005 緩衝液 Na2HP04.H20 > pH 6.5 0.170 緩衝液牛血清白蛋白 1.150 稀釋劑菊粉 0.100 流動性增強劑/顆粒表面改質劑

組合物F 組份量(g/i) 功能寡核苷酸A 0.075 藥物物質二-軟脂醯基磷脂醯膽鹼(DPPC) 3.000 用於囊封之脂質材料 PEG-磷脂醯膽鹼 0.250 輔脂質(脂質囊泡穩定劑） CaCl2.2H20 0.250 負離子補償乳酸，pH 4.5 0.005 緩衝液 Na2HP04.H20，pH 6.5 0.170 緩衝液 D,L-白胺酸 1.150 稀釋劑菊粉 0.100 流動性增強劑/顆粒表面改質劑

組合物G 組份量(g/1) 功能 siRNAB 0.140 藥物物質二-肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC) 2.000 用於囊封之脂質材料 PEG-填脂酿膽驗 0.250 輔脂質(脂質囊泡穩定劑）磷酸鈣 0.150 負離子補償乳酸，pH 4.5 0.005 緩衝液 Na2HP04.H20，pH 6.5 0.170 缓衝液牛血清白蛋白 1.785 稀釋劑甘胺酸 0.500 流動性增強劑組合物Η 組份量_ 功能 siRNAB 0.140 藥物物質二-肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC) 3.500 用於囊封之脂質材料膽固醇 0.250 輔脂質(脂質囊泡穩定劑） CaCl2.2H20 0.250 負離子補償乳酸，pH 4.5 0.005 緩衝液 Na2HP04.H20，pH 6.5 0.170 緩衝液牛血清白蛋白 0.435 稀釋劑硬脂酸鎂 0.250 流動性增強劑為脂質分散液之此等組合物係如實例1中所述來製備， 133847.doc -36- 200916126 其中寡核苷酸A為具有TLR9-促效劑活性之相同免疫調節寡核苷酸，然而寡核苷酸帶負電荷，其具有-45 mV(使用 Master Zetasizer，Malvern Instruments Ltd, UK來量測）之 g(Zeta)電位，且在囊封之後，ζ電位向具有（0 mV至-6 mV) 之中性值增加。以此方式減少寡核苷酸上之負電荷避免鼻黏膜中之刺激且使得藥物物質以適於吸收之未電離形式存在。 siRNA B為相對於螢光素酶設計之siRNA。其為使水解蟲螢光素（luciferine)從而產生光之螢火蟲蛋白靜止的經化學合成之RNA。使用中之SiRNA為每股包含21個核苷酸之短雙股寡物質（MW : 13486 Da)。其結構可表示如下：有義股序列： 5'-CUUACGCUGAGUACUUCGAdTsdT-3' (SEQ.I.D.NO: 4) 反義股序列： 5'-UCGAAGUACUCAGCGUAAGdTsdT-3' (SEQ.I.D.NO: 5) 其中單字母核苷酸編碼為：A為腺苷，C為胞嘧啶核苷，G為鳥苷，U為尿嘧啶核苷、sT為胸苷且連字符表示 3·-5'磷酸二酯鍵。此藥物物質亦帶負電荷且為水溶性的，因此將其溶解於0.1%乳酸溶液（pH 4)中以減少分子上之負電荷。將脂質分散液中組合物之固體濃度設為5% w/w。實例8 用於鼻内投與之本發明之乾粉調配物的製備將實例7中所製備之醫藥組合物E、F、G及Η喷霧乾燥以 133847.doc -37- 200916126 得到適用於鼻内投與的本發明之乾粉調配物。使用 Biichi 191喷霧乾燥器（Biich lab〇r Techniek AG，

Switzerland)進行噴霧乾燥以得到自由流動之乾粉。將2 mm喷族噴嘴用以製備用於經鼻施用之具有大於2〇 μηι平均粒度之乾粉調配物以供標靶之前鼻沈積。將〇 .7 mm噴霧喷嘴用以製備用於經鼻施用之具有在1〇 μηι與20 μιη之間的平均粒度之乾粉調配物以供標靶之後鼻沈積。實例9 用於鼻内投與之本發明之乾粉調配物的表徵藉由動態光散射技術使用Master Zetasizer(Malvern

Instruments Ltd，UK)來測定實例7之組合物E、F、G及Η中母一者之平均囊泡尺寸。因此測定各組合物之多分散指數 (PDI)。其為顆粒分布寬度之指示，低？；^可指示窄分布。結果展示於下表5中：表5 脂質分散液囊泡尺寸(rnn) 多分散指數 Ε 220.7 0.291 F 352.6 0.251 G 207.3 0.205 Η 379.6 0.208 實例10 用於鼻内投與之乾粉調配物的囊封效率藉由高效液相層析（HPLC)，藉由凝膠電泳且藉由毛細管凝膠電泳（CGE)來測定調配物E v F、G及Η中每一者之囊封效率。在HPLC方法中’將各乾粉調配物再懸浮於磷酸鹽緩衝生理食鹽水（PBS)中，簡單地混合，藉由離心萃取非 133847.doc • 38 - 200916126 囊封养核苷酸，且分析上清液之游離寡核苷酸的存在。使用此方法，將募核苷酸A及siRNA A之囊封效率計算為 >95°/。。在凝膠電泳方法中，將醫藥組合物£、ρ、〇及η中每一者負載於4%瓊脂糖Ε-凝膠（In vitro gen™)上，在其上帶負電荷之游離寡核苷酸向帶正電荷之陰極移動。使用uv 透照器來測定寡核苦酸之定性偵測。在毛細管凝膠電泳中，將脂質體試樣注射於含有可替換凝膠之經塗佈之毛細管中以便篩分。已使用配備有固定波長價測器之BECKMAN PA800毛細管電泳儀。組合物E及F 之實例係呈現於圖5中。所有方法均展示脂質體以及粉末中之囊封效率的一致結果。實例11 用於鼻内投藥之乾粉調配物的粒度使用HELOS雷射繞射以濕分散液（自Synipateeh GmbH， Germany)來量測乾粉調配物e、F、G及Η中每一者之粒度。結果展不於下表6中：表6 乾粉艘積平均直徑(μηι) 目標 νΜΐ)(μιη) E 16.98 ± 1.16 >10 “m _ F 30.03 士 0.26 >10 um 「 G 11.01 ±0.19 >10 HXYi Η 10.53 ±0.06 >10 um 在各情況下，發現體積平均直徑（VMD)對於經鼻沈積而言最佳。質量中值空氣動力學直徑（MMAE^tdaer)可自體積直控[dv]藉由下式來計算： 133847.doc •39- 200916126 daer=dv^[p 其中p為以g/cm3為單位之粉末密度粒度之選擇可用以乾向鼻腔中之特定區域。舉例而言，乾粉調配物E具有藉由雷射繞射量測的圖6中所示且概括於表7中之粒度分布⑲向鼻前部中之藥物沈積，其中渗透性一般低於鼻中其他處：表7 參δ Ί Χ10 (ixm) 16.75 ±0.49 _Χ50 (μιη) 31.25 ±0.18 " Χ90 (μιη) 43.53 ±0.85 GSD 1·16±〇·〇3 其中10%之顆粒具有在X10值度量以下之平均粒度，50% 之顆粒具有在X5G值度量以下之平均粒度且9G%之顆粒具有在X90值度量以下之平均粒度，在各情況下其係藉由 ELOS田射繞射以濕分散液（自GmbH，Germa㈣來測定，且GSD為先前所量測粒度之幾何標準差。圖认义中―所不之粒度分布由於沈積於鼻之由皮膚樣上皮加概的前三分之—而提供長於平常之鼻中滯留時間，該部位限制吸收’且gj此尤其適用於提供局部治療作用。 …'而’乾粉調配物F具有藉&雷射繞射量測的圖7中所示且概括於表8中之粒度分布以乾向鼻閣下方之鼻後部中之樂物沈積，該區域係由薄層黏膜及緻密之血管網所覆蓋，其中滲透性一般高於鼻中其他處： 133847.doc -40- 200916126 表8 參數結果 ΧΙΟ(μηι) 3.40 ±0.05 Χ50(μιη) 9.60 ±0.19 Χ90(μηι) 20.83 ± 0.36 GSD 2.48 ± 0.00 其中ΧΙΟ、Χ5〇、χ9〇及GSD具有與前文相同之含義且圖 7及表8中所示之粒度分布由於在此區域中之緻密血管網因此提供短於平常之鼻中滯留時間，且因此尤其適用於提供全身性吸收。實例12 用於鼻内投藥之乾粉調配物的pH值各乾粉調配物之pH值為酸性，亦即在約pH 4.5與pH 6.5 之間使得投與各調配物之鼻腔的pH有足夠酸性以避免存在於鼻中之溶菌酶失活且用以抗擊任何通向鼻中之細菌。舉例而言’乾粉調配物E、F、G及Η分別具有5.3、5.5、6.8 及5.5之pH值。實例13 用於鼻内投與之本發明之乾粉調配物的流動性參考容積密度（BD)、敲緊密度（TBD)及尤其卡爾指數（使用 STAVII密度計（J Engelmann AG, Germany))之量測值來測定乾粉調配物E、F、G及Η之流動性。在各情況下，將1 g乾粉調配物置於量筒中。量測粉末體積且如下以g/cm3為單位計算容積密度或"BD·，： BD [g/cm3] =粉末重量（g)/粉末床體積（mi或cm3) 133847.doc •41 - 200916126 將乾粉敲拍1250次且量測粉末體積床。如下來計算敲緊密度或"TBD” ： TBD [g/cm3] =粉末重量（g)/敲緊粉末床體積或cm” 如下來計算卡爾指數：卡爾指數[°/。]=(敲緊密度-容積密度）*100/敲緊密度結果為三個量測值之平均值且展示於下表9中：表9 乾粉調配物容積密度(g/cm3) 敲緊密度(g/cm3) 卡爾指數(％) E 0.150 0.177 16 F 0.123 0.166 26 G 0.166 0.200 17 Η 0.222 0.250 11 ------- 決I 1Χ· cur. J.o, 7’ 2.936>)，此4粉末具有良好流動性。儘管不欲受 =論限制，但此良好流動性可歸因於在粉末顆粒上部形成 ^ m增強劑奈米晶體’如藉由掃描電子顯微術（p⑻咖紅20, PhiUips B.v.，The如㈣心）及χ射線粉末繞射分析（Stoe & Cie GmbH，Gemany)所偵測，例如乾粉調配物 G(參見圖8)。實例14 用於鼻内投與之乾粉調配物的喷霧乾燥之最佳化置喷霧乾燥器之旋風器的割點(cuUp〇int)以能夠選 ^度部分從而最優化喷霧乾燥法之產率。抗靜電塗料進一步塗佈旋' 铷、：KW，，紘、石夕石衍峰聚（3,4-伸乙二氧基噻吩） )汆（本乙烯磺酸酯）或兩親媒 133847.doc -42- 200916126 性表面活性劑來塗佈）來增大產率。舉例而言，在Β. γ 191噴霧乾燥n⑽Chi AG，Switzerland)中將f藥組合物 E、F、G及Η(其為脂質分散液）喷霧乾燥。藉由諸如（但限於)羥丙基甲基纖維素之抗靜電界面活性劑塗佈内禋為 6_3 cm之高效玻璃旋風器。將旋風器内徑設為6 3 二改良可引起後置過濾、器（baek fil㈣上產品損失的較小顆粒之分離。在下表10中給出藉由將上述醫藥組合物中每— 霧乾燥所製得之各乾粉調配物的產率。表10 乾粉調配物方法產率 E 68 F 62 G 74 Η 75 在實驗室規模下各產率係在6〇%以上，其表明進一步按比例放大之步驟具有較高產率。女實例15 : 在此實例中，使用一種調配物組合物。藉由定製製備方法，可製備具有兩種不同粒度之自由流動之脂質粉末”吏用方法1產生之自由流動乾粉顆粒係足夠小以靶向肺泡沈積使用方法2製備之顆粒係較大以靶向上氣管沈積。兩種私末均具有窄粒度分布，其確保有效地局部沈積於肺中之向部位。 133847.doc -43· 200916126 組合物實例i 組份量[g/L] 功能 siRNAB 0.300 藥物物質二-軟脂醯基磷脂醯膽鹼(DPPC) 3.500 用於嚢封之脂質材料 PEG-磷脂醯膽鹼 0.200 輔脂質(脂質囊泡穩定劑）膽固醇 0.500 輔脂質(脂質囊泡穩定劑） CaCl2.2H20 0.250 負離子補償乳酸，pH 4.5 0.006 缓衝液 Na2HP04.H20 ' pH 6.5 0.017 緩衝液甘胺酸 0.227 流動性增強劑/顆粒表面改質劑如前所述，製備方法包含2個步驟。步驟I保持恆定，而步驟II為經定製以靶向特定乾粉粒度分布之喷霧乾燥法。步驟1(在高剪切混合下之溶劑注射技術）： •將製劑A(DPPC、PEG-PC及膽固醇）溶解於100 ml乙醇中且置於高剪切混合器中且調節在45士5°C之溫度下。 • 將製劑B(siRNA B、CaCl2.2H20)溶解於800 ml乳酸鹽緩衝液（pH 4.5)中且使用抽吸系統以3 ml/min之流率緩慢注射於製劑A中，同時進行連續混合。 • 以10 ml/min之流率使製劑C(溶解於100 ml磷酸鹽緩衝液（pH 6.5)中之甘胺酸）與製劑A+B混合。 • 所形成之脂質分散液具有〇. 5% w/w之固體含量。步驟11(喷霧乾燥）： • 使用Btichi B-191實驗室規模喷霧乾燥器（Biichi AG， Flawil, Switzerland)將所製備之脂質分散液喷霧乾燥以形成用於肺部施用之具有定製空氣動力學直徑以 133847.doc -44- 200916126 靶向肺泡區域（方法1)或上氣管（方法2)之自由流動顆粒。兩種方法之設置參數的完整描述均呈現於表11 中：表11

參數方法1 方法2 目標肺泡沈積上氣管沈積噴霧噴嘴兩個流體平行流喷嘴兩個流體平行流喷嘴噴嘴直徑 0.5 mm1 0.7 mm1 進料空氣壓力 7巴1 5巴吸氣器氣流 120 L/min1 90 L/min 液體進料速率 2.5 mL/min 6 mL/min1 入口溫度 115±5〇C 130±5〇C - 出口溫度 50 ± 5°C 50 ± 5°C *影響粒度之主要因素。以下發現可源自此實驗： • 因為對於兩個批料而言調配物組成及步驟I均相同，所以製備具有相同特徵（囊泡尺寸及ζ電位）之脂質分散液，使用 Master Zetasizer(Malvern Instruments Ltd， UK)測定該等特徵[表12]。 ί, •藉由先前所述之毛細管凝膠電泳方法來量測siRNA於脂質分散液中之囊封效率。資料呈現於表12中。表12 脂質分散液結果粒度 423 士 20 nm 多分散指數(PDI) 0.28 ±0.01 ζ電位 0·0±3.1 mV 囊封效率[%] 47.0 ±0.08 133847.doc • 45· 1 使用HELOS雷射繞射以濕分散液（Sympatech GmbH， Germany)量測基於粉末體積之粒度[表1 3]: 200916126 表13 乾粉方法1 方法2 目標肺泡沈積上氣管沈積 XI0 [μιηΐ 1.61 ±0.02 2.71 ±0·04 Χ50 Γμιηΐ 3.09 ±0.06 10.62 ±0.07 Χ90 ίμιηΐ 5.29 ±0.03 1 5.52 ±0.02 νΜϋ*Γμιη1 3.73 ± 0.04 12.03 ±0.03 GSD** 1.81 ±0.01 2.39 ±0.08 *νΜϋ=體積平均直徑 **GSD=幾何標準差 •使用 Next Generation 級聯衝擊器[NGI](Copley Scientific Inc., UK)在60 L/min下量測空氣動力學粒度分布。使用DP4 PennCentury乾粉吸入器（PennCenury Inc.，USA(n=2))使5 mg粉末在該衝擊器中氣溶膠化 [表 14、圖 9、圖 10]。表14 乾粉方法1 方法2 目標肺泡沈積上氣管沈積標記siRNA劑量[μΕ] 300 300 每吸入器之注射數目 1 1 流率[L/min] 60 60 自NGI之總回收率[%LC* * *] 93.3 ±3.1 95.7 ±2.0 細顆粒劑量<5 μηι [jig] 198.3 ±8.3 94.6 ±4.8 細顆粒部分<5 μηι [°/〇] 70.8 ± 0.6 33.1 ± 2.4 MMAD*_1 1.5 ±0.0 7.7 ±0.4 GSD** 2.4 ±0.1 4.1 ±0.7 囊封效率[%] 78 ±0.6 80 ±0.8 *MMAD=質量中值空氣動力學直徑 **GSD=幾何標準差 * * *LC=Labelle Claim=300 μ§ siRNA • 方法1產生MMAD為1.5 μηι之顆粒，其確保有效肺泡 133847.doc -46- 200916126 沈積，方法2產生河河入1)為7.7 μηι之顆粒，其主要沈積於上氣管中。 •方法1產生71%之細顆粒部分（FPF)<5 μιη的顆粒，其表示約71%之深肺沈積》此高沈積效率可歸因於此粉末之良好流動及空氣動力學特徵。根據此高效率，可達成所施用治療劑量之降低，其在昂貴大分子之情況下為所需的。 •相反地，使用方法2，可產生具有66%顆粒>5 4爪之 FPF，其確保上氣管沈積。 •呈現於圖9及圖10中之粒度分布[PSD]強調兩種方法均產生具有單模式分布之顆粒。方法1產生小於方法 2之顆粒，然而其亦產生多於方法2之聚結物，其可自較高咽喉沈積來推斷。此可歸因於與7_8 μιη顆粒相比1 -2 μιη顆粒所具有之較高表面積。方法1在第4 及第5階段中產生具有高沈積之顆粒，其在6〇 L/min 下分別具有2.82 μιη及1_66 μηι之截斷直徑。與此相反’方法2在第1及第2階段中產生具有高沈積之顆粒，其在60 L/min下分別具有>8.06 μιη及8.06 μιη之截斷直徑。實例16 •將組合物實例1(實例1 5)用以囊封刺激IF?及TNFa之雙股 siRNA。 •藉由使用 Malvern Zetasizer(Malvern Instruments Ltd.， UK)或使用 Helos Sympatech 顆粒分級機（Sympatech I33847.doc -47- 200916126

GmbH，Germany)來量測粒度分布及ζ電位從而表徵脂質調配物。 •使用前述毛細管凝膠電泳方法來量測siRNA於脂質體及粉末中之囊封效率 •使用動態蒸氣吸附裝置（SMS Inc.，UK)來量測藥物物質粉末及自由流動脂質粉末之吸水。表15 參數 siRNA 脂質體粉末平均粒度 N/A 423 士 20 run 3.09 ± 0 06 多分散指數(PDI) N/A 0.28 ± 0.01 31.25 ± 0 18 ζ電位 -45,3 ± 4.0 mV 0.0 ±3.1 mV N/A . ~ 囊封效率 N/A 33 ± 0.1% 82 ±3 6 在SO% K.H.下之最大吸皮 30% w/w N/A 1.9% w/w

可自呈現於表1 5中之資料推斷，當可觀察到ζ電位自_ 45 mV減小至〇 mV時，調配物可有效囊封siRNA。另外’與脂質調配物相比粉末具有高得多之囊封效率其可強調各粉末顆粒為完整囊，該囊將脂質囊泡及游離311^八囊封於其中。此可由SEM資料[圖夏q 證實。另外，自由流動粉末產生囊封siRNAs其中且因此降低其吸濕特徵且因此允許更好穩定性的顆粒。，然而其此可藉由如圖10中之SEM所示，此囊並非為多孔的在其内部具有如花粉粒顆粒之空的空間，此專顆粒之體積平均直徑及2氣動力##量中值直徑之差異來強調。此等顆粒具有3.73 _之侧，同時之MMAD，此意謂顆粒體積比其空氣動力學 133847.doc -48- 200916126 尺寸之兩倍還大，其表明此等囊中空間之一半為* 的。另外’可如下來計算此等顆粒之實際密度： ^aer ~ ^ ν λ[ρ 其中Ρ為以g/cm3為單位之實際密度，daer為以μηι為單位之空氣動力學粒度且dv為以μηι為單位之體積直徑。可如下來計算密度： /?-(l.5/3.7)2 此等顆粒之密度=0.16 g/cm3 顆粒中之空的空間可如下來計算：進入囊中之空的空間％ = [1_ (敲緊密度/顆粒密度）]X 100=[1-(0.25/0.16)]χ 1〇〇] = 56% •將此siRNA囊封於如DPPC之中性脂質中，Dppc為肺部生物流體之天然組成，中和荷且降低可能之副作用，諸如由IF?及TNFa之刺激所產生之發炎反應[圖1 2]。 •另外，因為在使用PennCentury DP4氣管内吸入器件 (PennCentury lnc，USA)以兩個劑量，每劑量為} mg/kg以1〇^對80隻大氣給藥後，未能觀察到副作用，所以s周配物在活體内係得以良好地耐受。實例17 -按比例放大試驗 •將組合物實例！（參見實例15)用於按比例放大試驗。 •该方法使用UltimaGral高剪切混合器（GEA pr〇cess

Engineering，Denmark)自i [批料尺寸按比例放大至 1〇 L批料尺寸。對於兩個批料而言方法參數係相同 133847.doc -49- 200916126 的。唯一例外為溶劑進料速率，其對於1 L批料而言設為3 ml/min且對於1 0 L批料而言設為30 ml/min。 •使用 Niro Mobile Minor 喷霧乾燥器（GEA process Engineering，Denmark)使喷霧乾燥過程自5 g按比例放大至100 g。在表16中說明方法參數：表16 參數粉末喷霧喷嘴 0.5 mm旁路喷嘴進料氮氣壓力 5.-7 巴吸氣器氣流 80-110 m3/hr 入口溫度 110-150。。出口溫度 45-65〇C 進料液體流 0.5-3 kg/hr •按比例放大方法之完整描述呈現於圖12中。 • 當自試驗規模批料獲得之資料可與使用實驗室規模批料獲得之貧料相當時’成功地進行了方法之試驗按比例放大[表17]。表17

實驗室規模試驗規模脂質體批料尺寸 1 L 100 L 粉末批料尺寸 5 g 1〇〇 g 粒度 423 ± 20 nm 445 士 6 nm 多分散指數(PDI) 0.28 ±0.01 0·20±0_02 ζ電位_ 0·0±3·1 mV 0.0 士 1.6 mV. ΧΙΟ [μιηΐ 1.61 ±0.02 2.23 ± 0.02 Χ50 [μιηΐ 3.09 士 0.06 3.69±0_03 Χ90 [μιηΐ 5.29 ±0.03 6.09 ±0.06 VMD*_1 3.73 ± 0.04 , 3.84 土 0_03 GSD** 1.81 ±0.01 1.77±0.02 . 卡爾指數[%]， 25% 30% 方法產率[%] 70% 65% . 粉末流動性良好流動粉末良好流動粉末 133847.doc -50- 200916126 *VMD=體積平均直徑 “GSDs幾何標準差實例18 -加速穩定性資料 •將組合物實例】（參見實例15)儲存於使用鬆開（untied)橡皮塞封閉（開放儲存穩定性）之白玻璃小瓶中在以下三個不同條件下歷時兩個月：5。〇、25t：/6〇0/〇 R H•及 40t/75% R.H·。以每種粉末5 mg來分配粉末，其貢獻每小瓶300 pg之siRNA B。 •表18中所示之資料表明根據本發明之siRNA的長期穩定性。唯一例外為在40T：及75% R.H.下儲存兩個月之後觀察到囊封效率降低且粒度分布增大。此可歸因於在2個月後在75% RH之高相對濕度下CaCl2自調配物中再結晶出，此為當本文所用之包裝系統鬆開時所預期的。此係由SEM資料[參見圖14]證實。經由此等資料外推，在5 °C下穩定最少8個月且在 25°C/60% R.H.下穩定2個月。另外，藉由將粉末包裝於潮式包裝系統（如Alu/Alu發泡）中以減少水蒸氣向粉末中之擴散’可達到在4(TC/70% r.h.下長期穩定性顯著改良之目的。表18 穩定性資料 0時間兩個月 5°C _25°C/60% R,H. _ 40°Γ /7S% R Η 目測白色粉末白色粉末卜白色粉末白色粉末 <LOD* 降解產物[%] <LOD* <LOD* <LOD* ΧΙΟ [μη]粉末 1.61 ±0.02 1.61 ±0.03 1.66 ± 0.03 3 81 ± 0 03 Χ50 [μιη]粉末 3.09 ±0.06 3.10 ±0.05 _ 3.30 ±0.09 15.91 ± 0.04 133847.doc -51 - 200916126 X90 [μπι]粉末 5.29 ±0.03 5.69 ±0.01 6.26 ± 0.04 29.40 ± 0.10 VMD* [μιη]粉末 3.73 士 0.04 3.62 ± 0.03 3.71 ±0.04 17.84 ± 0.20 GSD”粉末 1.81 土 0.01 1.88 ±0.01 1.94 ±0.02 2.78 ± 0.09 siRNA囊封效率 Γ%1 82.0 ± 3.6% 80.0 ± 0.8% 82.0 ±2.1% 72.0 ± 1.0% 水含量[°/。]**** 1.49% 1.56% 1.69% 1.80% 粉末流動性良好流動之粉末良好流動之粉末良好流動之粉末良好流動之粉末 *LOD=偵測之限制 ^VMDz體積平均直徑 + s|t*GSD=幾何標準差 “"使用熱解重量分析器（Perkin Elmer，UK)來量測實例19 •將5 mg含有300 pg siRNA B之組合物I粉末填充於2〇 DIRECTHALER 吸人器件（DireetHaler A/S，Denmark) 中。以12 L/min測試自此等器件之自由流動粉末的發射劑量均勻性，於玻璃纖維過濾器上收集粉末。 •平均發射劑量等於4.14 土 0.35 mg(n=20)且進入器件中之粉末的殘餘量為17.5%。所有個別值以及平均值均在 EU藥典說明書中。參見圖14。實例20 •使用於肺臟中模擬生物情況的特定釋放模型來測試經由生物流體之siRNA擴散釋放概況。 •將20 μm厚之人工肺界面活性劑（ALS)層設於6個在具有 4〇 nm孔直徑之PET過濾器的頂部之板中。使用具有0.05%(w/w) DPPC之磷酸鹽緩衝液（pH 7〇)作為受體培養基。 133847.doc -52- 200916126 •將組合物實例I(參見實例1 5)之5 mg粉末（含有300 pg siRNA B)或0.5 ml脂質體（含有300 pg siRNA B)分配於 ALS層頂部，且使用Rp_HPLC歷經24 hr測定在37°C下經由ALS及PET膜過濾器擴散至受體培養基的siRNA之量。 •作為對照物將進入磷酸鹽緩衝液（pH 7.0)中之0.5 ml之 600 pg/ml siRNA B溶液分配於ALS層頂部且如前述來進行測試。與siRNA溶液及脂質分散液相比，粉末展示較快之 siRNA釋放概況，因為在2 hr之後siRNA之約660/。自粉末中釋放’相比之下，siRNA溶液及脂質分散液之分別53%及32%釋放（參見圖15)。【圖式簡單說明】圖1 :使用Malvern Zetasizer量測的組合物C之脂質分散液粒度分布。圖2 :使用Sympatech雷射繞射儀量測的組合物c之粉末粒度分布資料。圖3 :使用Malvern Zetasizer量測的組合物d之脂質分散液粒度分布。圖4 :使用Sympatech雷射繞射儀量測的組合物d之粉末粒度分布資料。圖5 .使用毛細管凝膠電泳評估募核苷酸a於調配物組合物E及F中之囊封效率’其展示大於9〇%之囊封效率。圖6 :使用Sympatech雷射繞射儀量測的組合物E之粉末 133847.doc -53- 200916126 粒度分布資料，其可靶向進入鼻腔中之前沈積。圖7 .使用Sympatech雷射繞射儀量測的組合物E之粉末粒度分布資料，其可靶向至鼻腔中之後沈積。圖8 :組合物G之粉末的與掃描電子顯微鏡影像組合之X 射線繞射貧料’其強調流動性增強劑奈米晶體在粉末顆粒上部之存在，其改良粉末流動特徵。圖9:使用 Next Generation Impactor(NGI)在 60 L/min 下使用PennCentury DP4吸入器件來量測的組合物〗之空氣動力學粒度分布。方法1展示在較低階段中與方法2相比更高之沈積。圖 1〇 :使用 Next Generation Impactor(NGI)在 60 L/min 下使用PennCentury DP4吸入器件來量測的組合物〗之累積空氣動力學粒度分布。與方法2之4 5 μπι相比，使用方法1產生之顆粒的5 0 %係在1.1 以下。圖11 :組合物I之粉末的掃描電子顯微鏡（sem)影像，其展示各粉末顆粒為完整囊。圖1 2 :使用本發明來囊封發炎觸發之siRNA對細胞因子表現之作用。儘管裸siRNA觸發INF?及TNFa，但囊封於本發明之脂質體以及本發明粉末之安慰劑脂質體中的siRNA 並不觸發任何細胞因子介導之炎症。圖13 : SuperSomes™技術之按比例放大製造過程圖。圖14 :在40。〇/75〇/〇 R.H.下開放儲存兩個月的組合物I之掃描電子顯微鏡資料。圖1 5 .組合物e之使用DirectHaler經鼻器件之計量劑量 133847.doc • 54- 200916126 均勻性資料。圖1 6 :對於以下三種不同調配物之經由人工肺界面活性劑之siRNA釋放曲線之間的比較：溶解於pH 7.0緩衝液中之siRNA、囊封於脂質分散液組合物I中之siRNA及囊封於組合物I之粉末中的siRNA。 ί.. 133847.doc -55- 200916126 序列表 <H0>瑞士商諾華公司 <120>有機化合物 <130> 52227-EP-EPA2 <140> 097132233 <141> 2008-08-22 <150> EP 07114981.9 <151> 2007-08-24 <150> EP 07123163.3 <151> 2007-12-17 <160> 6 <170> Patentln version 3.3 <210> 1 <211> 11 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223>合成序列：寡核苷酸A、免疫調節性寡核苷酸或具有 TLR9促效劑活性之11免疫物（i腿unomer)”的部分 <220〉 <221> misc_feature <222> (3,7jl) <223> η為2'_脱氧基_7_脫氛雜烏苦 <220> <221> misc_feature <222> (11).7(11) <223>經由丙二醇連接子與SEQIDNO:2連接 <400> 1 tcnaacnttc η 11 <210> 2 <211> 11 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223>合成序列：寡核苷酸A、免疫調節性寡核苷酸或具有 TLR9促效劑活性之11免疫物（i腿unomer)”的部分 <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> n為阿糖烏苷 <220> <221〉misc一feature <222> (11)..(11) <223>經由丙二醇連接子與SEQIDNO:l連接 <400> 2 tctgtcnttc t Π <210〉 3 <211> 21 133847-序列表.doc 200916126 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223>合成序列：siRNA <220> <221> misc_feature <222> (20).7(21) <223>硫代磷酸酯鍵 <400> 3 gagccuaugu ggauggauut t 21 <210〉4 <211> 21 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223>合成序列：siRNA <220> <221> misc_feature <222> (20).7(21) <223>硫代磷酸酯鍵 <400> 4 aauccaucca cauaggcuct t 21 <210> 5 <211> 21 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223>合成序列：siRNA <220> <221> misc_feature <222> (20).7(21) <223>疏代磷酸酯鍵 <400> 5 cuuacgcuga guacuucgat t 21 <210> 6 <211> 21

\ <212> DNA <213>人造序列 <220> <223>合成序列：siRNA <220> <221> misc_feature <222> (20)..(21) <223>硫代磷酸酯鍵， <400> 6 ucgaaguacu cagcguaagt t 21 -2- 133847-序列表.doc

Claims

200916126 十、申請專利範圍： 1. 一種醫藥組合物，其包含： (A) —或多種藥物物質； (B) 脂質； (C) 辅脂質；及 (D) 流動性增強劑；該醫藥組合物之特徵在於該脂質、該辅脂質及該流動性增強劑一起形成包含囊封該或該等藥物物質之脂質囊泡的脂質分散液。 2. 如請求項1之組合物’其中該等脂質囊泡之平均直徑係在70 nm與550 nm之間。 3. 如請求項1或2之組合物，其中該或各藥物物質為β2_腎上腺素能受體促效劑、蕈毒鹼拮抗劑、糖皮質類固醇、非類固醇糖皮質激素受體促效劑、Αζα促效劑、α2β拮抗劑、抗組織胺、卡斯蛋白酶（CASPASE)抑制劑、；lTB4拮抗劑、LTD4拮抗劑、磷酸二酯酶抑制劑、黏液溶解藥 s / (muc〇lytic)、基質金屬蛋白酶抑制劑、白三烯受體抬抗劑、生長激素、肝素、雌二醇、前列腺素！)2拮抗劑、 CRTH2受體拮抗劑、色甘酸鈉、ig^合成抑制劑、抗生素、干擾素、鉀通道抑制劑、免疫調節劑、細胞生長抑制劑、彈性蛋白酶抑制劑、抗腫瘤劑、列關康 (PROSTATIN)抑制劑、肽、寡核芽酸、rna(諸如 siRNA)、DNA、質體、胰島素、介白素、GLp]、抗腫瘤劑或抗體。 133847.doc 200916126 4.如珂述請求項中任一技硫w 、H其中該脂質為二肉奇蔻醯基碟脂酿勝給、_ n_a _ S —軟月日醯基磷脂醯膽鹼、大豆卵珑月曰或虱化磷脂醯膽鹼。 P W 5. 如前述請求項中任一項二醇化磷月”⑯ 輔脂質為聚乙月曰醯膽鹼或膽固醇。 6. 如前述請求項中任―@ Λ ....、、之、·且5物，其中該流動性增強劑為麥芽糖、甘露糖醇、菊粉㈣往庶糖孔糖、右旋糖、麥 =、甘胺酸、血清白蛋白、L-白胺酸、D-白胺酸、二胺酸、硬脂酸每、硬脂酸鎮、赤藻糖醇或其混合物0 7·如别述請求項中任―項之組合物，其另外包含離子平衡劑及/或緩衝系統。 8·如前述請求項中任一項之組合物，其呈乾粉調配物之形式。 9. 一種乾粉調配物，其包含：（Α)一或多種藥物物質；（β) 脂質；（C)輔脂質；及（D)流動性增強劑；該調配物之特徵在於該脂質、該輔脂質及該流動性增強劑一起形成包含囊封該或該等藥物物質之脂質囊泡的脂質分散液且該月曰質分散液經乾燥以形成自由流動之乾粉調配物。 1 〇·如請求項9之乾粉調配物，其中該粉末之平均粒度不大於約10微米以便吸入。 1 1.如請求項9之乾粉調配物，其中該粉末之平均粒度不大於約10微米以便經鼻投與。 12.如請求項11之乾粉調配物，其中該平均粒度係在1 〇 μηι 133847.doc 200916126 與20 μπι之間叫向鼻後部中之藥物沈積。 13·如％求項11之乾粉調配物，其中該平均粒度大於以|&向該鼻前部中之藥物沈積。 -種製備醫藥組合物之方法，該方法包含以下步驟： (a) 在鬲剪切下混合脂質與輔脂質； (b) 拌合一或多種藥物物質；及 ⑷:合流動性增強劑以形《包含囊封It或該等藥物物質之脂質囊泡的脂質分散液。 15· -種製備乾粉調配物之方法，該方法包含以下步驟： (a) 在高剪切下混合脂質與輔脂質； (b) 拌合一或多種藥物物質； ⑷拌合流動性增強劑以形《包含囊封該或該等藥物物質之脂質囊泡的脂質分散液； (d)視情況稀釋該脂質分散液；及 ⑷乾燥該脂質分散液以形成該乾粉調配物。 133847.doc