TW200846363A - Novel human anti-R7V antibodies and uses thereof - Google Patents
Novel human anti-R7V antibodies and uses thereof Download PDFInfo
- Publication number
- TW200846363A TW200846363A TW097109297A TW97109297A TW200846363A TW 200846363 A TW200846363 A TW 200846363A TW 097109297 A TW097109297 A TW 097109297A TW 97109297 A TW97109297 A TW 97109297A TW 200846363 A TW200846363 A TW 200846363A
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- sequence
- antibody
- antibodies
- cells
- seq
- Prior art date
Links
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 71
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 34
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 34
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 31
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 claims description 28
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 24
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 claims description 21
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 20
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 18
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 18
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 17
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 15
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 15
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 11
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims description 8
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 7
- 238000011225 antiretroviral therapy Methods 0.000 claims description 7
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000013066 combination product Substances 0.000 claims description 2
- 229940127555 combination product Drugs 0.000 claims description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 claims description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims 1
- 101100004288 Caenorhabditis elegans best-9 gene Proteins 0.000 claims 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 claims 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 abstract description 4
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 abstract 1
- 101000690301 Homo sapiens Aldo-keto reductase family 1 member C4 Proteins 0.000 abstract 1
- 101001116548 Homo sapiens Protein CBFA2T1 Proteins 0.000 abstract 1
- 102000054751 human RUNX1T1 Human genes 0.000 abstract 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 abstract 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 22
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 20
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 20
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 17
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 14
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 14
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 13
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 11
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 11
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 11
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 11
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 7
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 7
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 7
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 7
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 6
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 6
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 6
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 6
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 6
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- 229960002555 zidovudine Drugs 0.000 description 6
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 description 6
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 5
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 5
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 5
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 5
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 5
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 4
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 4
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XQSPYNMVSIKCOC-NTSWFWBYSA-N Emtricitabine Chemical compound C1=C(F)C(N)=NC(=O)N1[C@H]1O[C@@H](CO)SC1 XQSPYNMVSIKCOC-NTSWFWBYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 3
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 3
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 229960000366 emtricitabine Drugs 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 3
- NQDJXKOVJZTUJA-UHFFFAOYSA-N nevirapine Chemical compound C12=NC=CC=C2C(=O)NC=2C(C)=CC=NC=2N1C1CC1 NQDJXKOVJZTUJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 101710182846 Polyhedrin Proteins 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 2
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 2
- QWXOJIDBSHLIFI-UHFFFAOYSA-N [3-(1-chloro-3'-methoxyspiro[adamantane-4,4'-dioxetane]-3'-yl)phenyl] dihydrogen phosphate Chemical compound O1OC2(C3CC4CC2CC(Cl)(C4)C3)C1(OC)C1=CC=CC(OP(O)(O)=O)=C1 QWXOJIDBSHLIFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- JXTHNDFMNIQAHM-UHFFFAOYSA-N dichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)Cl JXTHNDFMNIQAHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 2
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 2
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037432 silent mutation Effects 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 229960004556 tenofovir Drugs 0.000 description 2
- VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N tenofovir disoproxil fumarate Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O.N1=CN=C2N(C[C@@H](C)OCP(=O)(OCOC(=O)OC(C)C)OCOC(=O)OC(C)C)C=NC2=C1N VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 2
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- RALRVIPTUXSBPO-UHFFFAOYSA-N 4-[4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl]piperidin-4-ol Chemical compound C=1C=C(Cl)C(C(F)(F)F)=CC=1C1(O)CCNCC1 RALRVIPTUXSBPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 208000029483 Acquired immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 241001203868 Autographa californica Species 0.000 description 1
- 241000201370 Autographa californica nucleopolyhedrovirus Species 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241001474374 Blennius Species 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 102000009410 Chemokine receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050000299 Chemokine receptor Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- XPOQHMRABVBWPR-UHFFFAOYSA-N Efavirenz Natural products O1C(=O)NC2=CC=C(Cl)C=C2C1(C(F)(F)F)C#CC1CC1 XPOQHMRABVBWPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTANTQQOYSUMLC-UHFFFAOYSA-O Ethidium cation Chemical compound C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 QTANTQQOYSUMLC-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 241000255896 Galleria mellonella Species 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 101000604674 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 4-1 Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 102100038198 Immunoglobulin kappa variable 4-1 Human genes 0.000 description 1
- KJHKTHWMRKYKJE-SUGCFTRWSA-N Kaletra Chemical compound N1([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C[C@H](O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)COC=2C(=CC=CC=2C)C)CC=2C=CC=CC=2)CCCNC1=O KJHKTHWMRKYKJE-SUGCFTRWSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101000822667 Mus musculus Something about silencing protein 10 Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241000382353 Pupa Species 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 241001598112 Rachiplusia ou MNPV Species 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- NCDNCNXCDXHOMX-UHFFFAOYSA-N Ritonavir Natural products C=1C=CC=CC=1CC(NC(=O)OCC=1SC=NC=1)C(O)CC(CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)N(C)CC1=CSC(C(C)C)=N1 NCDNCNXCDXHOMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- 241000239226 Scorpiones Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- XNKLLVCARDGLGL-JGVFFNPUSA-N Stavudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1C=C[C@@H](CO)O1 XNKLLVCARDGLGL-JGVFFNPUSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000865057 Thermococcus litoralis DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- XEFQLINVKFYRCS-UHFFFAOYSA-N Triclosan Chemical compound OC1=CC(Cl)=CC=C1OC1=CC=C(Cl)C=C1Cl XEFQLINVKFYRCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 101710090322 Truncated surface protein Proteins 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000003429 anti-cardiolipin effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- 238000013321 baculovirus-insect cell expression system Methods 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 229940112129 campath Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 238000011509 clonal analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 1
- 230000001427 coherent effect Effects 0.000 description 1
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 1
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229960005215 dichloroacetic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 229960003804 efavirenz Drugs 0.000 description 1
- XPOQHMRABVBWPR-ZDUSSCGKSA-N efavirenz Chemical compound C([C@]1(C2=CC(Cl)=CC=C2NC(=O)O1)C(F)(F)F)#CC1CC1 XPOQHMRABVBWPR-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000012997 ficoll-paque Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036252 glycation Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 229940098197 human immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001627 lamivudine Drugs 0.000 description 1
- JTEGQNOMFQHVDC-NKWVEPMBSA-N lamivudine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1O[C@@H](CO)SC1 JTEGQNOMFQHVDC-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229960004525 lopinavir Drugs 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000000311 mannosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229960000689 nevirapine Drugs 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- -1 nucleoside nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N phthalocyanine Chemical compound N1C(N=C2C3=CC=CC=C3C(N=C3C4=CC=CC=C4C(=N4)N3)=N2)=C(C=CC=C2)C2=C1N=C1C2=CC=CC=C2C4=N1 IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 208000012934 primary antiphospholipid syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003751 purification from natural source Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 229940064914 retrovir Drugs 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- NCDNCNXCDXHOMX-XGKFQTDJSA-N ritonavir Chemical compound N([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C[C@H](O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)OCC=1SC=NC=1)CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N(C)CC1=CSC(C(C)C)=N1 NCDNCNXCDXHOMX-XGKFQTDJSA-N 0.000 description 1
- 229960000311 ritonavir Drugs 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J sodium diphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 229940079862 sodium lauryl sarcosinate Drugs 0.000 description 1
- 229940048086 sodium pyrophosphate Drugs 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- ADWNFGORSPBALY-UHFFFAOYSA-M sodium;2-[dodecyl(methyl)amino]acetate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCN(C)CC([O-])=O ADWNFGORSPBALY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 1
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 229960001203 stavudine Drugs 0.000 description 1
- FRGKKTITADJNOE-UHFFFAOYSA-N sulfanyloxyethane Chemical compound CCOS FRGKKTITADJNOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013595 supernatant sample Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 235000019818 tetrasodium diphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001577 tetrasodium phosphonato phosphate Substances 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000005758 transcription activity Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 229960003500 triclosan Drugs 0.000 description 1
- ZSDSQXJSNMTJDA-UHFFFAOYSA-N trifluralin Chemical compound CCCN(CCC)C1=C([N+]([O-])=O)C=C(C(F)(F)F)C=C1[N+]([O-])=O ZSDSQXJSNMTJDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002264 triphosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 description 1
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2833—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
- C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
200846363 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 人類免疫缺乏病毒感染仍然是公共衛生流行病。藥物 治療可抑制人類免疫缺乏病毒感染後的複製與毒性，但目 刖尚無預防與治療方法。此外，高效能抗反轉錄病毒治療 法（hi§hly active antiretroviral therapy (HAART)) 強調對抗人類免疫缺乏病毒之額外治療法的需求，此治療 _ 法除了降低後天免疫不全症候群（AIDS)之外，還會造成 一些副作用以及產生抗藥性病毒。然而，有一些人類免疫 缺乏病毋感染的病人係屬非發展者（n〇n—pr〇gress〇r)，他 們在感染病毒後1〇、15年以後才發生後天免疫不全症候 群’攻顯不人類免疫缺乏病毒疾病可以各種方式延續發 、 病，例如··減毒疫苗、缺陷病毒（defective viruses) 2、 人類免疫缺乏病毒輔助受體突變（HIV coreceptors mutations) 或中和抗體的存在。一般誘發疫苗的被 ⑩膜基抗體（envel〇Pe-based antibody)都具有抑制病毒 之高突變速率的好處以及具有致免疫性。在先前的研究中 ，目如已證實從非發展者之血清所純化出來的廣譜中和抗
只7V 抗體（broad spectrum neutralizing anti-R7V antibodies)的潛力。這些免疫球蛋白對抗一種衍生自 万2-微球蛋白並在出芽（budding)期間與人類免疫缺乏 病毋膜結合的細胞抗原決定位—其稱為胺 基酸序列）7’8。吾人的目的是要藉由一桿狀病毒載體從非 發展者病人之B淋巴細胞分離出對應基因之後再製造出一 5 6087-9509-PF;Kai 200846363 重組抗-R7V抗體。 桿狀病毒技術可製造和分泌正確聚集與糖化的免疫球 蛋白9。這些重組抗體具有其母免疫球蛋白的所有功能性 並且表現有效的效應物（e f f e c t 〇 r )功能，例如·衾士 合（υ補體成分Clq —3或C3 “與（ii)誘發抗體直接細 胞毒性（antibody direct celluiar cy1:〇t〇xicity)所 需的免疫球蛋白G (IgG) Fc受體15，16，13。 在本發明中，吾人製造一種對抗人類免疫缺乏病毒出 芽時所需之細胞抗原決定位R7V重組抗體。由一非發展者 病人之B淋巴細胞複製出編碼抗-R 7 V抗體之可變區的互補 去氧核糖核酸。建立含有此抗體之重鏈與輕鏈之完整編碼 序列的轉移載體’並且經由桿狀病毒去氧核糖核酸與二轉 移載體間的雙重組（double rec〇mbinati〇n)產生—重組 桿狀病毒。受此桿狀病毒感染的昆蟲細胞產生—完整的人 類抗-m免疫球蛋白。吾人已證明吾人所製造之對於㈣ 肽專-的重組抗體能辨識財和所有分枝的人類免疫缺乏 病毒1 ’包括··抗性病毒（resistant viruses)，這開啟 了抗-人類免疫缺乏病毒治療的新觀念。 【先前技術】 本發明係有關於能夠專一地結合至人類免疫缺乏病毒 之R7V抗原決定位的新錯 …’穎人類抗體。這些抗體具有所有的 人類互補決疋區並且能翁皇 此夠專一地中和所有的人類免疫缺乏 病毋株，包括：逃避突變姓 <大芟株Cescapemutants)。這些抗體 6087-9509-PF；Kai 200846363 可用來治療人類免疫缺乏病毒感染，特別是對高效能抗反 轉錄病毒治療法 （HAAET)無效的病人。 【發明内容】 因此，根據第一個實施例，本發明提供一分離的抗體 或其功能性片段之一，該抗體或其片段之一能夠專一地結 合至R7V抗原決定位（RTPKIQV -序列識別號·· 11)以 _ 及能夠中和人類免疫缺乏病毒株，其包括： i) 一輕鏈’包含含有胺基酸序列識別號：1 (QSVLYSSNNKNY)、序列識別號：2 (WAS)與序列識別號：3 (QQYYSTPQT)的互補決定區或在最佳對齊之後包含與序列 • 識別號：1、2或3至少有80% (最好是90%)相似序列的 • 互補決定區，以及 11) 一重鏈’包含含有胺基酸序列識別號：6 (GGS! SSYγ)、 序列識別號· 7 (IYYSGST)與序列識別號：8 (ARGRSWFSY) _ 的互補決定區或在最佳對齊之後包含與序列識別號·· 6、7 或8至少有80% (最好是9〇%)相似序列的互補決定區。 在本發明的敘述中，連接至抗體化合物或其序列的多 肽、多肽序列、肽與蛋白質等名稱是可互相交換的。 吾人必須了解本發明無關天然形式的抗體，亦即這些 抗體並不存在於天然環境下，但是它們可從天然來源中純 化而分離或取得，或經由基因重組、化學合成而取得，然 後它們便可含有之後將敘述的非天然胺基酸。
Kabat et al. (Rabat et al., Sequences of 6087-9509-PF;Kai 7 200846363 proteins of immunological interest, 5th Ed., U. S Department of Health and Human Services, NIH^ 1991^ and later editiQns)的定義，互補決定區係指免疫球蛋 白之重鏈與_的高度變異區。冑3個重鏈互補決定區與 3個輕鏈互補決定區存在。根據此例，此處所稱的互補決 定區係指這些區域其中之一區、其中之數區或甚至全部， 這些區域包含使抗體與抗原或抗體與其識別之抗原決定位 經由親和力而結合的大部分胺基酸殘基。 在本發明中，兩核酸或胺基酸序列之間的“相似百分 比”係指在最佳對齊之後兩序列之間之核苷酸或相同胺基 酸殘基的百分比，此百分比純粹由統計得之，同時兩序列 . 之間的差異係隨機分佈且佈及其全長。兩核酸或胺基酸序 * 列之間序列的比較通常是以最佳方法對齊這些序列後再進 行比較，該比較可分段進行或以“比較窗（c〇mparis〇n window)’’進行。為了比較而作的序列最佳對齊除了可利用 • 人工進行之外，還可利用以下方法進行：Smi th與Waterman (1981) [Ad· App. Math. 2:482]的局部同源演算法 (1 ocal homology algor i thm)、Neddl eman 與 Wunsch (1 970) [J· Mol· Biol. 48:443]的局部同源演算法、Pears〇n與
Lipman (1988) [Proc· Natl· Acad. Sci· USA 85:2444)的 相似性比對法（similarity search method)、使用這些演 算法的電腦軟體（GAP，BESTFIT，FASTA and TFASTA in the Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr. , Madison, WI，or else 6087-9509-PF;Kai 8 200846363 by BLAST N or BLAST P comparison software)。 經由比較最佳對齊後的兩序列可確定兩核酸或胺基酸 序列之間的相似百分比，其中，相較於兩序列間最佳排列 的對照序列，被比較的核酸或胺基酸序列可包括加成或刪 除。相似百分比的計算如下：確定兩序列之間的核苷酸或 胺基酸序列為相同位置的數目，將此相同位置的數目除以 比較窗中的位置總數，然後將結果乘以1 〇〇便可得到兩序 列之間的相似百分比。 舉例來說，相似百分比可利用blast程式來計算，由 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ g〇rf/bl2.h1:ml 網址可得 到 BLAST 2 sequences” (Tatusova et al. , “Blast 2 sequences - a new tool for comparing protein and nucleotide sequences” ， FEMS Microbiol Lett· 174:247-250)，所使用的參數係系統設定值（“打開間隔 之扣分（open gap penalty)”的特別參數為5， “延伸間 隔之扣分（extension gap penalty)，，的特別參數為2; 而矩陣（matrix)則可選擇例如程式的預設值“ bl〇sum 62”），該程式便可直接計算出相互比較之兩序列的相似度 百分比。 胺基酸序列與對照的胺基酸序列至少有8 〇% (最好為 8 5 %、9 0 %、9 5 %與9 8 % )相同，相較於對照序列，這些胺基 酸序列有某些程度的修改，尤其是至少有一胺基酸被刪 除、加成或取代，而最好為截斷（truncati〇n)或延長 (elongation)。在一個或以上之連貫或非連貫胺基酸的取 6087-9509-PF;Kai 9 200846363 代中，‘被取代的胺基I最好被“相等的，，胺基酸所取代。 所。月相等的胺基酸係指能夠以驗基結構之其中之一胺 基酸取代而且基本上不改變對應抗體之生物活性的任何胺 基酸，其定義將描述於下文，特別是在實施例中。 欲確定這些相等的胺基酸可由它們與其取代之胺基酸 的結構同源性或由不同抗體之間之生物活性的比較試驗結 果來確定。 利用實施例的方式可進行取代而不會全然改變對應之 修飾抗體的生物活性。因此有可能以纈胺酸（valine)或 異白胺酸（isoleucine)取代白胺酸（leucine)，以麩胺 酸（glutamic acid)取代天冬胺酸（aspartic acid)， 以天冬醯胺（asparagine)取代麩醯胺（glutamine)，以 離胺酸（lysine)取代精胺酸（arginine)等，而在相同 條件下，相反的取代自然可想而知。 本發明的抗體最好是完全人源性單株抗體或其功能性 片段。 在一特定實施例中，本發明之抗體的特色如下：經過 最佳對齊之後具有一包含胺基酸序列的輕鏈，該胺基酸序 列與第3B圖序列識別號：4所示的胺基酸序列具有至少80% (最好是90%)的相似度；或是具有被一核苷酸序列編碼的 輕鏈，此核苷酸序列包含第3A圖序列識別號：5所描繪的 序列或在最佳對齊後包含與序列識別號：5至少有80% (最 好是90%)相似的序列。 在另一特定實施例中，本發明之抗體的特色如下：經 6087-9509-PF;Kai 10 200846363 過最佳對齊之後具有一包含胺基酸序列的重鏈，該胺基酸 序列與第3D圖序列識別號：9所示的胺基酸序列具有至少 、（最好疋90%)的相似度；或是具有被一核苦酸序列編 碼的重鏈，該核苷酸序列包含第3C圖序列識別號：1〇所 不的序列或在最佳對齊後包含一與序列識別號：丨〇至少有 8 〇 % (敢好疋9 0 % )相似的序列。在另一特定實施例中，本
發明之抗體包含一輕鏈與一重鏈，輕鏈包含第3B圖SEQ ID
No 4所示或被一核苷酸序列，此核苷酸序列包含第3a圖 SEQ ID No 5所示的序列編碼的胺基酸序列，而重鏈包含 第3D圖SEQ ID No 9所示或被一核苷酸序列，此核苷酸序 歹J l s第3C圖SEQ ID No 10所示的序列編碼的胺基酸序 列。 本發明之抗體的功能性片段特別是指抗體片段，例 如.Fv、scFv (sc 代表單鏈）、Fab、F(ab，）2、Fab，、scFv—Fc 片段或雙鏈抗體（diab〇dies)或半衰期會經由化學修飾 —例如聚烯烴基二醇（p〇ly(alkylene) glyc〇1)(例如： 聚乙二醇（聚乙二醇化（“PEGyla1：i〇n，，）（聚乙二醇化
的片段稱為 Fv-PEG、scFv一peg、Fab-PEG、F(ab，）2-PEG 或Fab’ -PEG，其中之“PEG，，為聚乙二醇）））的加成—而 增加的任何片段’或因為與脂質體合併而增加半衰期的任 何片段’在本發明中，該等片段具有序列識別號：1、2、3、 6、7與8的互補決定區，特別的是它可以中和人類免疫缺 乏病毒株。 該功能性片段最好構成或包含其衍生源頭之抗體之重 6087-9509-PF;Kai 11 200846363 或輕變異鏈的部分序列， 直一 Μ。$丄 汴幻疋从保持相同的結合 F(a 能性片段最好為Fv、scFv、Fab、F(ab, )2、 /生㈣之I V士形式或雙鏈抗體的片段，它們通常如其 何生源頭之抗體一般具有相同的結合專— 如•田丰々丄 陵。利用酶（例 .月，素或木瓜酶）消化等方法和/或 硫鍵斷裂並以上述之浐駚盔从成 予遷原使又 之抗體為始’便可得到本發明之抗體片 方法中，本發明之抗體片段可利用基因重組技
:、此技術亦為熟悉習知技術人員所知）或利用肽自動 、儀（|J如Applied Blosystems等公司所提供的儀器） 等方法的肽合成而獲得。 、在-更佳的方法中，本發明包含利用基因重組或化學 合成的抗體或其功能性片段。 在一較佳的方法中，本發明之功能性片段將選自片段 Fv、SCFV、Fab、（Pab’、恤★或雙鍵抗體， 或半衰期經由化學修釋(特別是聚乙二醇化)或與脂質體合 併而增加的任何功能性片段。 本發明也有關於一被分離的核酸，此核酸包含一序 列，該序列在最佳對齊後與序列SEQ iD N〇. 5至少有8〇% (最好為85%、90%、95%與98%)相似度。 本發明也有關於一被分離的核酸，該核酸包含一序 列，該序列在最佳對齊後與序列SEQ ID Ν〇· 1〇至少有8〇% (最好為 85%、90°/。、95%與 98%)相似。 在與一較佳序列最佳對齊後，核酸序列（nucleic seqUences)與其具有至少8〇% (最好為85%、9〇%、95%與 6087-950 9-PF;Kai 12 200846363 9 8 % )相似，亦 P相較於對照的核酸序列，該核酸序列經過 '、一 /飾尤其疋刪除、截斷、延長、化學融合和/或取代 特別疋點取代。最好關注於那些與對照序列一樣編碼相 同胺基I序列的序列一這關係到基因密碼的退化或那些能 夠專地與對照序列雜交的互補序列—該雜交最好在高嚴 苛條件下進行’尤其是以下所述的狀態。 问嚴可條件下的雜交表示所選擇的溫度狀態與離子強 籲度可維持互補去氧核糖核酸之兩片段之間雜交。用以確定 上述之夕核苷酸片段所進行之雜交步驟的有利高嚴格度狀 悲係以實例方式描述於下。 去虱核糖核酸-去氧核糖核酸或去氧核糖核酸-核糖核 •酸的雜交係以二步驟進行：⑴在42t;的碟酸鹽緩衝液 • _ ΡΗ 7· 中預雜交3小時一該磷酸鹽緩衝液含有 5 豕酸鈉缓衝溶》夜（5 χ ssc) (1倍檸檬酸鈉緩衝溶液 相田於〇· 15摩爾氯化鈉加上〇· 〇15摩爾檸檬酸鈉溶液）、 _ 5〇/°甲馱胺（formamide)、7%十二基硫酸鈉（SDS)、1〇 倍 ardt /合液、5%硫酸葡聚糖（dextran sulphate)與 1%鮭魚精子去氧核糖核酸；（2 ”艮據探針的大小在不同的 溫度下實際雜交2喝（例如:探針大於1〇〇個核普酸時 的/皿度為42 C)，接著在2Gt：下以2倍檸檬酸納緩衝溶液 與2%十二基硫酸鈉的混合液沖洗2〇分鐘並沖洗2次，在 2〇C下以〇.；1倍檸檬酸鈉緩衝溶液與〇1%十二基硫酸鈉的 混合液沖洗20分鐘並沖洗！次。#探針大於⑽個核普酸 時，最後一次的沖洗則是在6{rc下以〇1倍擰檬酸鈉緩衝 6087-9509-pf；Kai 13 200846363 溶液與0· 1%十二基硫酸鈉的混合液沖洗30分鐘。根據
Sambrook 等人（1989，Molecular cloning: a laboratory manual· 2nd Ed· Cold Spring Harbor)所述，熟悉較大 或較小之寡核苷酸技術者可更改被指定大小之多核苷酸的 上述南嚴格度雜交條件。 本發明也有關於包含以上定義之核酸的載體，尤其是 序列識別號：5與序列識別號：1 〇的核酸。 _ 本發明特別以含有本發明之核苷酸序列的選殖載體和 /或表現載體為目標。例如以含有以上定義之核酸序列 (尤其是序列識別號·· 5與序列識別號：1 0 )的桿狀病毒轉 移載體為目標。 本發明之載體最好包含可以使核苷酸序列表現和/或 - 分泌在一確定之宿主細胞的元素。因此該載體必須包含一 啟動子、轉譯的啟動與終止訊息以及適當的轉錄調節區。 該載體必須以一穩定的方法維持在宿主細胞中並且可隨意 _ 地具有明確指定轉譯蛋白質之分泌作用的特定訊息。熟悉 此技術者選擇與最佳化這些不同的元素作為所用之宿主細 胞的功旎。為了達到此作用，可將本發明之核苷酸序列插 入所選宿主的自動複製載體中或該核苷酸序列可為所選宿 主的整合載體。 該等載體可利用熟悉此技術者近來使用的方法製備， 可利用標準方法（例如：脂質素轉染法（lipofection)、 電牙孔技術、熱衝擊或化學方法）將產生的純系（ci〇nes) 載入一適當的宿主。 14 6087-9509-PF;Kai 200846363 本發明之載體為例如質體或病毒起源的載體。為了複 製或表現本發明的核苦酸序列，該等載體係用以轉化宿主 細胞。 本發明也包含被本發明之載體轉化的宿主細胞或含有 本發明之載體的宿主細胞。 該宿主細胞可選自原核或真核系統，例如：細菌細胞、 酵母菌細胞或動物細胞，特別是哺乳動物細胞。亦可能使 用昆蟲或植物細胞。 因此，本發明另一方面係有關於一分泌以上定義之抗 -R7V人類抗體的細胞株。例如，以上抗體可從 Epstein-Barr病毒轉化的永生b淋巴細胞（EBV immortalized B lymphocytes)、使用一桿狀病毒載體的昆 蟲細胞（例如：Sf9細胞）而獲得；或從其他會產生CH〇 (ATCC number CCL-61)(基因修飾的CH0會產低岩藻糖化 (fucosylated)的抗體）或 YB2/0 (ATCC CRL-1 662)等細 胞株的抗體所獲得。 另一方面，本發明的目的係提供一種製造抗體或其功 能性片段的方法，該方法包括以下步驟： 根據本發明在適當的培養基中培養一宿主細胞；以及 從該培養細胞的培養基中萃取出該等抗體。 月b夠以上述方法獲得的抗體或其功能性片段的其中之_皆 在本發明之範圍内。 另——方面，本發明係有關於一種如上所定義的抗體或 其如藥劑般的功能性片段之一。本發明也涉及一種藥學組 6087-9509-PF;Kai 15 200846363 « 合物’其包括作為活性來源的本發明抗體或其功能性片段 之一，以及一賦形劑和/或一藥學上可接受的載體。 在另一實施例中，本發明主要敘述一種如上所述的組 曰物該、"物進一步地包含一組合產品（COfflbination product)，可同時、分開或連續的使用，其中至少包含一 種一般用來治療後天免疫不全症候群的製劑以及上述的抗 體。同時使用”表示本發明之组合物中的兩化合物係以 _ 單一且相同的劑型投與。“分開使用，，表示本發明之組合 物中的兩化合物係以不同的劑型同時投與。“連續使用，， 表示本發明之組合物中的兩化合物係以不同的劑型依次投 與。 例如，抗-R7V抗體可與以下藥劑結合投與： 、 依法韋侖（efavirenz) +齊多夫定（zidovudine) +拉 脈優錠（lamivudine) 依法早侖+泰諾福早（tenofovir) +恩曲他濱 _ (emtricitabine) 司他夫定 （stavudine) + 拉脈優錠 + 奈韋拉平 (nevirapine) 以利托那韋 （ritonavir)增加效果的洛匹那韋 Uopinavir) +齊多夫定+拉脈優錠 以利托那韋增加效果的洛匹那韋+泰諾福韋+恩曲他 濱 本發明包含此處所述之抗體在製備藥劑上的使用，該 藥劑特別用於治療人類免疫缺乏病毒感染、後天免疫不全 6087-9509-PF;Kai 16 200846363 症候群-❹··接受高效能抗反轉錄病毒治祕的病人， 特別疋以該治療法治療無效的病人。 以下將以實施例與圖示詳細地說明本發明，然而並不 因此限定本發明的範圍。 【實施方式】 貫施例 貝&例1 ·有效之人類重組抗-R7V抗體的分離與製造 1 · 1材料與方法 1 · 1. 1細胞與病毒 利用Ficoll - Paque (Amersham)梯度離心法從健康、 血清檢查陰性之捐贈者的新鮮K2E-EDTA血液樣本中分離 出人類週邊血液單核細胞（PBMC)。以1 X 1〇6細胞/毫升 密度在下列組成的完全RPMI培養基中培養細胞使其生 長：補充10%熱不活化胎牛血清（GIBC0)的RPMI 1640 (Biowhittaker)、1%盤尼西林/麩醯胺（GIBC〇)、10 uI/mi 介白素2 (IL2) (Euromedex)、前三天期間使用1〇 # g/mi 的植物血凝素P (PHA-P) (Di f co)、以及2 // g/ml聚凝胺 (polybrene) (Biowhittaker) 〇 在0·5 x 10δ細胞/毫升下，將CEM細胞株培養在 RPMI-10%培養基（含有10%熱不活化胎牛血清、1%盤尼西 林/麩醯胺、2 /zg/ml聚凝胺的RPMI 1640)中。 抗NDK (分枝系D)與抗AZT的RTMC (分枝系B)病 毒係於感染的CEM細胞上製得。92UG029 (分枝系A)、 6087-9509-PF;Kai 17 200846363 92BR021 (分枝系 B)、92BR025 (分枝系 c)與 93BR029 (分 枝糸 F)病毋最初由 AIDS Research and Reference
Reagent Program, Division of AIDS，NIAID，NIH 提供 並且在週邊血液單核細胞上製造出來。病毒Bcf 0 6 (分枝 糸 0)與 YBF30 (舊分枝糸）由 J?· Barre-Sinoussi (Pasteur Institute，France)熱心提供。由感染細胞之 上清液得來之滴定病毒的等量樣本維持冷柬在—8 。 將Sf9細胞維持在28°C的TC100培養基（GIBC0) 中’並補充5%熱不活化胎牛血清 （gibco)。野生型 hi叹raMa 多核型多角體（AcMNPV)病毒株 1 · 2 17與重組桿狀病毒係於sf 9細胞中繁殖。 1 · 1 · 2由非發展者病人分離出週邊血液單核細胞 將被告知且同意接受試驗之人類免疫缺乏病秦血清檢 查陽性的（seropositive)非發展者病人納入本研究中，並 且以FicoU-Paque密度梯度法從新鮮的K2E-EDTA靜脈血 液分離純化出週邊血液單核細胞。在補充不含有介白素2 與植物血凝素之15%熱不活化胎牛血清與1%盤尼西林/麩 醯胺的RPMI 1640培養基中預培養這些週邊血液單核細胞 2天’以促進β淋巴細胞在永生化（i麵〇rtai izati〇n)之 兩的生長。 1·1·3利用Epsi：ein-Barr病毒（EBV)使b淋巴細胞永生 (Immortalization) 然後在50毫升圓錐管中，在含有3毫升之1〇%熱不活 化之胎牛血清、1%盤尼西林/麩醯胺之rPMI 164〇下混合2 6087-9509-PF;Kai 18 200846363 毫升之Β_95· 8培養上清液（產生Epstein-Barr病毒的細 胞株）與9 X 106個預培養之週邊血液單核細胞，使b淋巴 細胞永生化。在37t：水浴中靜置2小時之後，加入5毫升 含有1⑽熱不活化胎牛血清、1 // g/ml環孢靈 (Calbiochem)與1%盤尼西林/麩醯胺的rpmi 1640。將1〇 毫升的細胞懸浮液轉移至一 25平方公分的細胞培養瓶，並 置於37°C、5%二氧化碳且不受干擾的潮濕培養器中4週。 • 培養4週之後，Epstein-Barr病毒永生化的細胞 (EBV-immortal ized cel Is)形成肉眼可見的團塊，之後每 週再給與2次RPMI-20%使該細胞株維持在1〇6細胞/毫升。 1 · 1 · 4分離B淋巴細胞分泌之抗—R7V抗體 - 以胺基己酸形式的R7V肽包覆磁性微粒：在37°C下將 • 10微克的R一8一Ahx胜肽（Neosystem)與1〇7磁性曱苯績酸活 化的微粒（Dynal Dynabeads M450)以慢速傾斜旋轉培養 16-24小時。根據製造商的程序清洗微粒，並且再將其以 # 4· 10個微粒/耄升旋浮於PH 7· 4的磷酸鹽緩衝溶液。 分泌B淋巴細胞之抗-R7V抗體的磁性選擇：在4。〇下 將保存於1毫升之無菌磷酸鹽緩衝溶液的i〇?Epstein—Barr 病毒永生化B淋巴細胞與24 x i〇6個被R-8—Ahx包覆的微 粒混合20分鐘，然後重覆此步驟3次直到細胞不再黏附於 微粒上。將該管置於磁鐵± 2分鐘分離出向四方生長的細 胞UoseUedceUs)。在不攪動微粒情況下移出上清液， 然後將細胞再懸浮於磷酸鹽清洗緩衝溶液。清洗3次之 後，將黏附微粒的細胞培養於37它、5%二氧化碳的 6087-9509-PF;Kai 19 200846363 RPMI-20%胎牛血清。該細胞在1天之後會從微粒上脫離並 且生長至106細胞/毫升。 利用相同流程培養這些預選擇之分泌B淋巴細胞的抗 -R7V抗體2週之後，重覆此磁性的選擇。 1.1.5酵素連結免疫吸附法（ELISA)流程 根據製造商所示地利用抗-R7V酵素連結免疫吸附法分
析（Anti R7VTM IVR96000，IVAGEN，France)偵測抗—R7V 抗體。簡單地來說，陽性、陰性對照組、切斷校正器 (cut-off caiibrator)與稀釋的抗體（1〇〇微升/孔盤） 被加入一塗覆R7V的測試盤，並在室溫下培養3〇分鐘。然 後以抗人類免疫球蛋白G抗體偶聯的辣根過氧化物酶
(horseradish peroxidase-conjugated anti_human IgG antibody)偵測附著的抗—R7V抗體。 1 · 1 · 6中和分析 為了在每次分析擁有100的5〇%細胞感染量（TCID5〇) 18 ’事先進行下列的稀釋並滴定病毒株：人類免疫缺乏病毒 -1隨（稀釋成ΗΓ5)、抗ATZ之人類免疫缺乏病毒—“Μ (HIV Irtmc AZT-resistant)(稀釋成 5 X 1〇-5)、92UG029 (稀 釋成10 )、92BR021 (稀釋成10’、92BR〇25 (稀釋成 1〇 )、THA92022 (稀釋成 1〇-2)、93BR〇29 (稀釋成 1〇_2)、 BCF〇63(稀釋成10-4)以及人類免疫缺乏病毒-1⑽。（稀釋 成10 )病f的稀釋（50微升）預先在含有1〇〇 #以蚪 抗體之5〇微升則卜_ 96孔盤的微滴定皿（最後濃度為 5〇 eg/ml)中進行，並在潮濕的抓、⑽二氧化碳培養器 20 6087-9509*-pp；Kai 200846363 中培養1小時。在37°C下將週邊血液單核細胞（50微升中 含有1 X 106個細胞）添加至病毒-抗體混合物中1小時， 然後以培養基清洗細胞3次，接著將細胞（濃度為1 〇6細胞 /毫升）培養在含有50 /zg/ml抗體之完全RPMI-10%的24 孔盤微滴定皿中3天。讓培養物生長10天並且每3天再給 與培養基。針對對照病毒（未給與抗體的人類免疫缺乏病毒 感染細胞）、對照細胞（未給與抗體的未感染細胞）與對照 抗體（用以抵抗非人類免疫缺乏病毒相關之抗原決定位的 非相關病毒）進行相同試驗。為了測試每一樣本的病毒複 製’以下列方式定量反轉錄酶。每3天收集1毫升無細胞 的上清液樣本，在4°C下以9 5，0 0 0 rpm超速離心5分鐘 (TL10 0 Beckman)。病毒顆粒再懸浮於10微升之〇. 1 % Triton X-100 NTE(氣化鈉 100 mM，Tris 10 mM，乙二胺 四乙酸（EDTA) 1 mM)缓衝液中並釋出病毒酶。該酶反應係 於含有pH 7· 8之50毫摩爾Tris、20毫摩爾之氯化鎂、 20毫摩爾之氯化鉀、2毫摩爾之二硫蘇糖醇（DTT)、0. 25 光學密度（0D)/毫升之〇lig〇dT、0.25光學密度/毫升之 poly rA與50微居里（jjCi)/毫升之3H dTTP的50微升反 應混合物中進行。在37°C下經過1小時後，以1毫升溶於 5%二氯醋酸（TCA)的焦磷酸鈉停止該反應，並以20%三氯錯 酸沉澱出合成的去氧核糠核酸產物以及以Mi 11 ip0re 〇. 45 微米過濾膜過濾並收集該產物，然後利用packard閃爍計 數器測量其沒放射性，該石放射性以每分鐘之分解量 (dpm)/毫升表示。中和百分比以下式表示： 6087-9509-PF;Kai 21 200846363
[1 0 0 -(樣本的反轉錄酶活性/病毒的反轉錄酶活性）X 100)]。 1 · 1. 7表現抗R7V專一性之抗體可變區的分離與複製 (Isolation and cloning of the variable regions of antibodies expressing the anti R7V specificity) 該流程係由鼠可變抗體區之增殖技術19演變而來。利 用RNeasy套組（Qiagen)從大約5 X 1 〇6個永生化b淋巴 細胞萃取出全部核糖核酸。簡單地來說，細胞係以6〇〇微 升之 RLTTM/沒-硫氫乙醇缓衝液 (RLT //3 -mercaptoethanol buf f er)溶化，並連續通過20 號標準針達到均質。加入6 〇 〇 m 1之7 〇 %乙醇之後，將該混 合物置於RNeasy管柱上並以12,〇〇〇 rpm (Biofuge， Heraeus)離心15秒。依序以700 ml之說1'緩衝液與500 微升之RPETM緩衝液沖洗管柱。以5〇 ml之不含核糖核酸酶 的水沖提出核糖核酸，在使用該核糖核酸之前均將其保存 於-80〇C。 全核糖核酸與5個在人類免疫球蛋白之固定區雜交的 專一引子hCLa、hCLb、hCK、hCG與hCM (表3)係用以合 成第一股互補去氧核糖核酸，其分別相對應於A、&、7 1 與V信使核糖核酸。反轉錄作用如下進行：混合1微克 之全核糖核酸、4微升之1〇倍RT'緩衝液（Qiagen)、4 # j 之5 mM的每一脫氧核苷酸三磷酸（dNTp) (Qiagen)、4微 升的特定引子（濃度為1〇 pM〇ies/ " ! 2〇單位的核糖核酸 抑制劑）（Roche)與8單位的〇mniscript反轉錄酶 6087-9509-PF;Kai 22 200846363 (Qiagen)，最後體積為4〇 #】。在3rc下培養該混合物】 小枯。在9 3 C下5分鐘不活化反轉錄活性係熱。 使用设计於人類免疫球蛋白之重與輕鏈之訊息肽序列 的特定引子（表3)以及使用λ、/c、r與#第一股互補 核糖核酸為基質，然後使用聚合酶連鎖反應（pCR)擴增全長 的重鏈與輕鏈可變異序列。該聚合酶連鎖反應係於含有2 // 1之10倍Vent去氧核糖核酸聚合酶（Bi〇labs)、2 # J 馨之10 mM的每一脫氧核苷酸三磷酸（Bi〇labs)、2〇㈣之每 一引子、1·5 "1之25 mM硫酸鎂、：！單位之Vent去氧核 糖核酸聚合酶（Biolabs)、〇.5 之反轉錄混合物的20 微升混合物中進行。進行3〇個循環的擴增，其條件為95 - °C下30秒、55°C下45秒以及72°C下1分鐘。在72°c下延 * 伸1 〇刀鐘之後，在L 5%洋菜糖膠（SeaKem，FMC)上分餾 聚合酶連鎖反應產物並以溴化乙錠（ethidium br⑽ide)染 色。 • 該聚合酶連鎖反應產物係以膠純化，以Advantage Taq
聚合酶擴增並且在質體pGemT easy (Promega)中進行純 株繁殖（cloned)。利用聚合酶連鎖反應擴增所用的3，與 5’引子在兩股上將插入子定序（MWGBi〇tech)。使用BusT 20與IMGT Database 21進行可變區的序列比較與胚系基因 分析。 1 · 1. 8表現抗R7V抗體之重組桿狀病毒的製造 將重鏈可變異與輕鏈可變異序列插入含有一人類免疫 球蛋白訊息肽序列、二個獨特限定區以及分別編嫣人類7工 6087—9509—PF;Kai 23 200846363 與/c固定區之序列的特定轉移載體pVTC r 1與pVTC /c (第 1圖）。pVTC r 1載體在訊息肽序列中包含一獨特的Af 111 位點，以及包含一 Nhe I位點，此Nhe I位點含有r 1序列 的兩個第一密碼子·，而pVTC /c在訊息肽序列中包含一獨特 的BssHI I位點，以及一 BsiWI位點一J區域之最後保存胺 基酸與固定/c區的第一胺基酸在此位置重疊。 使用下列引子並以聚合酶連鎖反應將適當的限定位點 引入重鏈可變異與輕鏈可變異序列的5’與3’端： F0R-M4 ： CCATCTTAAGGGTGTCCAGTGTCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAG GACTGGTGAAGC (序列識別號：16)， BAC-M4: GCATGCTAGCTGAGGAGACGGTGACCAGGGT (序列識別 號：17)， FOR-K4: CGATGCGCGCTGTGACATCGTGATGACCCAGTCT (序列識 別號：18)，以及 BAC-K4 : CGATCGTACGTTTGATCTCCAGCTTGGTCCCCTGGCC (序列 識別號：1 9)。 針對重鏈可變異區與輕鏈可變異區分別純化出以 Aflll-Nhel消化以及以BssHI I-BsiWI消化的聚合酶連鎖 反應產物，然後將其插入分別的轉移載體pVTC τ 1與 pVTC/c。 經由定序來控制最後的pVTCr 1-M4與pVTC/c -K4組 成。 如先前所述地經過 Sf9 細胞的共轉染 6087-9509-PF;Kai 24 200846363 (C〇transfect ion)之後即產生表現抗體的重組桿狀病毒 广 2 2 10 11 ( )。以酵素連結免疫吸附法篩選生產的純系23。簡 單地來說，將被100从1之从g/ml抗人類重鏈Fdr i多 株抗體（結合區）塗覆之微滴定孤中的細胞培養上清液 連續稀釋並培養在37t：下2小時。利用辣根過氧化物酶標 示的抗人類/c輕鏈抗體（Sigma)偵測附著的重組免疫球蛋 白G 〇 _ 以南方墨點法控制重組病毒的基因組。在35, 000 rpm 下旋轉40分鐘（（TL100.4, Beckman))，使7毫升之細胞 培養上清液中的病毒顆粒沉澱。使顆粒再懸浮於1 ml之 TEK 緩衝液（〇· i M 之 Tris、〇·」摩爾之以2£：1)1^2112〇、 * 〇·2摩爾之氯化鉀，ΡΗ 7· 5)—該ΤΈΚ緩衝液含有1〇微升 ’ /谷於水的蛋白®^ K (濃度為20 mg/ml) (Roche)與10微升 之溶於水的十二烷基肌氨酸鈉（N-lauryi sarcosine) (Sigma) (/辰度為1 〇% (重量/體積））—中，並在5〇°c下培 _ 養整仗連績地以齡和氯仿-異戊醇（24:1 v/v)萃取出 病毒的去氧核糖核酸，並且以乙醇沉澱之。使其在水中再 懸洋之後，以flindlll消化去氧核糖核酸。然後在1%洋菜 糖膠上以電/永分析限定的去氧核糖核酸，並將該去氧核糖 核酸轉移至一 Nitran 膜（Schleicher and Schtill)上。 根據製造商的建議，以異羥基洋地黃毒苷元（dig〇xigeni^ (Roche)標記分別編碼人類固定之71與固定之冗區的互 補去氧核糖核酸，並將該等互補去氧核糖核酸作為雜交探 針。β洗之後’墨點與偶合至鹼性磷酸酶的抗毛地黃 6087-9509—PF;Kai 25 200846363 (antidigoxin)抗體（Roche，稀釋比例 1 ·· 1 〇, 〇〇〇) — 起 靜置。以化學發光基質CSPD (chemioluminescent substrate CSPD) (Roche)"[貞測標記的去氧核糖核酸。 1 · 1 · 9重組抗體的製造與純化 將S f 9細胞種於含有4 0 0毫升之無血清培養基的轉瓶 中，使其濃度為5 0 0，〇 〇 〇細胞/毫升，然後使每個細胞重覆 感染2次。在2 8 C培養4天之後，收集上清液，並根據製 造商所示方法在蛋白質A sepharose (Amersham)上純化 出分泌重組抗體。以酵素連結免疫吸附法測量純化之免疫 球蛋白G的量23。 在相似條件下，重組的抗-R7V抗體也可在CH0表現系 統中製得。 1 · 2結果 1.2.1分泌B淋巴細胞之抗-R7V抗體的選擇 製造B淋巴細胞的抗—R7V抗體係利用包覆R7V之磁性 微粒選自非發展者人類免疫缺乏病毒感染的病人。第一次 選擇得到27%分泌抗-R7V抗體的B淋巴細胞，第二次則選 擇14%預選擇之分泌b淋巴細胞的抗—R7V抗體。抗_R7VB 酵素連結免疫吸附法未在B細胞培養上清液中偵測到游離 的抗-R7V抗體，表示抗體可能附著到分泌的b淋巴細胞膜 或低於酵素連結免疫吸附法的偵測極限。 1 · 2 · 2被選擇之永生化b淋巴細胞表現之重鏈可變異與輕 鏈可變異序列的分離與純系繁殖 如同吾人之前對小鼠免疫球蛋白所進行的反轉錄聚合 6087-9509-PF;Kai 26 200846363 酶連鎖反應（RT-PCR)，被所選B淋巴細胞表現之抗體的輕 鏈可變異區與重鏈可變異區也以同樣的方法進行擴增ig。 如第2圖所示，只有少數組合的引子可使片段擴增至 適當的大小一重鏈可變異區大约為45〇鹼基對，而輕鏈可 變異區大約為400鹼基對。當使用 hCM/hVH3時只可觀察到模糊帶，使用hCM/hVH4時可看到 更多物質。主要的產物也是以hCK/hVK4合成。然而，當使 用hCLa與hCLb引子時，在任何組合下皆未偵測到擴增（未 顯示）。聚合酶連鎖反應產物的定序與BUST分析顯示這些 片段當中只有M4片段（hCG/hVH4)與K4片段（hCK/hVK4) 分別對應於人類重鏈與輕鏈的可變區域。這些結果顯示所 選永生化B淋巴細胞族群可能為單株的，其表現膜免疫球 蛋白 M /c 抗體（membrane igM kappa antibody)。將這些 序列與IMGT資料庫比較後顯示VH—M4重鏈可變異區序列係 由 IGHV-4-59*01 24、IGHD2-21*01 25 與 IGHJ4*02 26 胚系基 因重新排列而來（第3C圖）。其V/c —K4對應物顳示為 IGKV4-1*01 /IGKJ2*0 2 28，為重新排列的輕鏈可變異區 (第3A圖）。有趣的是此抗體從κ輕鏈指令（Hght chairi repertory)使用大多數的j近端igkmi基因。該輕鏈區 大部分皆未突變，只在IGKV/IGKJ接合點的互補決定區3 具有一犬變（Fig· 3B)。另一方面，在VH-M4序列中可見造 成互補決定區3之4個胺基酸突變的7個核苷酸取代 (nucleotide replacement)，而在骨架區（framework regions)中只可看到2個沉默核苷酸取代（第3C圖，第 6087-9509-PF;Kai 27 200846363 3D 圖）。 1 · 2. 3抗-R7V抗體在桿狀病毒表現系統的表現 將編碼抗-R 7V抗體之可變異區的序列插入輕鏈與重鏈 暗箱桿狀病毒轉移載體（1 ight and heavy chain e&ssette baculovirus transfer vectors) (i)設計來再結合於多 角體蛋白基因座（polyhedrin locus)中的pVT-CK以及 (ii)设计來再結合於Pl〇基因座的pVT-Cyl。在這些概 念當中，輕鏈與重鏈基因分別受到合成之P1 〇啟動子、 P’ 1 0 22與P10啟動子的控制（第1圖）。設計特定的引子 來擴增K4與M4片段，使得片段如第1圖所示地與免疫球 蛋白訊息肽序列以及固定區直接地在骨架中作純系繁瘦。 以定序控制兩最後的結構PVT-Ck-K4與pVT-Cr 1-M4，並 且在純化之病毒去氧核糖核酸存在下使用該兩結構共轉染 Sf 9細胞。如之前文獻所述，在二回合的重組之後即得到 雙重重組病毒（double recombinant viruses) 10,11。重組 病毒係純化與擴增的病毒溶斑（plaque)。以抗人類抗體酵 素連結免疫吸附法分析感染細胞之細胞培養上清液當中的 抗體。利用南方墨點法並且使用人類7 1與k固定區去氧 核糖核酸為探針來控制4生產性純系的基因組。選擇 dcR7VI/K4-M4病毒純系作進一步的實驗。 1.2.4重組抗R7V抗體的專一性 在IVAGEN Anti-R7V ELISA套組中，重組抗-R7V抗體 即使在6.25微克/毫升（相當於在孔盤中含有〇 625微克 的抗體）濃度下皆顯示為陽性。無關的抗體無論濃度為何皆 6087-9509-PF;Kai 28 200846363 弩 顯示為陰性。 如同之前對於非發展者病人身上所純化之抗抗體 所作的流式細胞分析結果，重組單株抗體並未結合至任何 細胞（此處未顯示實驗數據）。 1.2.5數個人類免疫缺乏病毒—1分枝系的中和試驗 (Neutralization assay for several clades of HIV-1) 先前已經敘述由病人純化出來的抗—R7V抗體會顯現寬 馨 廣的中和圖譜，所以此抗單株抗體與數個分枝系便在 相同條件下作測試並相互比對。為了確定該抗體可作為治 療抗體，也同時以抗藥性病毒（RTMC)進行中和試驗。為 了測量抗-R7V重組抗體的中和作用，在感染細胞之前，將 稀釋至50 /zg/ml的抗體與數個人類免疫缺乏病毒—1分枝 ' 系混合。該抗-R7V抗體中和8個人類免疫缺乏病毒―丨分枝 系與抗AZT之分枝系B的RTMC病毒（第4圖）。在相同條件 下’在桿狀病毒系統中表現以及作為對照組的無關抗體未 % 表現中和作用。有5個分枝系（B、C、D、F與0)獲得超 過85%的中和作用。以50 // g/ml之重組抗—R7V抗體與不 同的病毒反應會得到不同百分比的中和作用。此異源的結 果與那些自人類免疫缺乏病毒非發展者病人所純化之抗 -R7V抗體的結果相同，其原因可能是存在於病毒中的R7v 抗原決定位量不同。 重組抗-R7V抗體在CH0表現系統中的製造 1) K4M4 lot number 13.11.06: anti—R7V ELISA 在 40 # g/ml 時產生 p0Sitif 6087-9509-PF;Kai 29 200846363 表1.被抗-R7V抗體中和的百分比 抗-R7V抗體濃度（/zg/ml) 病毒 分枝系 70 μg/ml 50/zg/ml 25/zg/ml RW92009 A 30% 12% YBF30 N 25% 10% 21% 一 BCF06 0 30% 48% BR92021 B 24% 12% BR92025 C 77% 47% BR93029 F 18% 11% 2) K4M4 lot number 28·02·07 : anti-R7V ELISA 在 50 //g/ml 時產生 posit if 表2.被抗-R7V抗體中和的百分比 抗-R7V抗體濃度（#g/ml) 病毒 分枝系 70 //g/ml 50 /zg/ml 25 βg/ml 10 /zg/ml RW92009 A 60 % 12% BR92021 B 30% UG92035 D 74% 26% 51% 1. 3結論 本發明已經在此記述以桿狀病毒表現系統製造重組人 類抗-R7V抗體的結果。此系統可非常快速、有效地製造大 量的功能性重組抗體1()’ n’ 29。所有在哺乳動物細胞中觀察 到的轉譯後修飾均發生在表現於鱗翅類細胞 (lepidop ter an cel Is)中的重組蛋白質上。然而，N連結 寡醣 （#~linked oligosaccharides)較短且具有高甘露 糖或少甘露糖（paucimannose)形式3iJ’ 31。抗體的生物活 性高度地決定於連接至免疫球蛋白之CH2固定區當中之 Asn-292的N聚醣32 ’33。儘管此為不完全的糖化作用模式， 表現於S f 9細胞的重組抗體仍展現專一的生物活性，例 如··透過C1 q與F c 7 R結合而由補體依賴與抗體依賴細胞 6087-9509-PF;Kai 30 200846363 促成的細胞毒性i4’ i6, 13。 非發展者病人所製造 Epstein-Barr 病毒永 為了分離由人類免疫缺乏病毒一i 出來的抗-R7V抗體以及描述其特性， 生化之R7V反應B細胞 (EBV-immortal!zed R7V-reactive
Bcells)係選自一病人，並且使用反轉錄聚合酶連鎖反應 專一地擴增編碼免疫球蛋白G與免疫球蛋白M之可變異區 的互補去氧核糖核酸。為達到此目的，吾人設計原始的3
組共有引子以作為任何可變異區基因（Vgene)家族之人 類重鏈可變異區與輕鏈可變異區的特定擴增之用。 這些在訊息序列中雜交的引子係用來與一組分別指向 人類固定區τ、βκ與λ的3，引子連接。相較於以 “骨架區（FR)”擴增策略（其可經歷體細胞突變）為目 標的骨架1區域％ 35，在單一序列中的突變頻率非常低， 所以在此區啟動可擴增整個序列而不發生突變。 這些互補去氧核糖核酸的序列分析顯示這些永生化細 胞可能為只表現一個膜免疫球蛋白Μ的單株&抗體。輕鏈 可變異序列大部分都未突變，只在vj接合點（VJ junctiQ〇 具有一個沉默突變，而互補決定區3當中之重鏈可變異區 的VDJ接合點發現了 6個突變的胺基酸，其中，骨架區3 只具有2個緘默突變。儘管在重組抗體的可變異區觀察到 低突變率，但在流式細胞儀分析之後發現此重組抗體不與 任何細胞反應，其不具多反應性。 此完全之人類重組抗體在人類免疫缺乏病毒—丨亞型 A、B、C、D、E、F、N、0以及具有抗反轉錄病毒治療法抗 6087-9509-PF;Kai 31 200846363 性之病毒上的中和能力顯然與來自非發展者病人的多株抗 體相同。這些結果確定了細胞衍生之R7V抗原決定位係經 由所有的人類免疫缺乏病毒_丨變異體而獲得。以5〇微克/ 毫升之抗-R7V抗體所獲得的不同中和百分比可能與存在於 病毒上之不同含量的R7V有關。為了對每一分枝系達到 100%的中和，必須測試漸增的抗體量。 對於作為人類免疫缺乏病毒感染病人之治療劑的單株 抗體來說，其中一個最重要的特性為其中和的廣譜（broad spectrum)。已知人類免疫缺乏病毒會因為感染的時間以及 抗反轉錄病毒治療而從一個體至另一個體產生持續的改變 (逃逸突變株（escape mutan1:s)的出現），此即免疫系統 難以控制病毒複製的原因。現今除了抗—R7V抗體之外，還 有其他4種廣泛中和的單株抗體（皆被培養來抵抗人類免 疫缺乏病毒-1亞型B)顯現該效力。免疫球蛋白（；11)12(其 以表面糖蛋白120(gPl20)上的CD4結合位為標靶）係利 用噬菌體展示技術（phage display techni(jue)從無症 狀之人類免疫缺乏病毒陽性個體身上得到η, π μ。5與 4E10抗體辨認糖蛋白41的固定部位a㈣，而2G12則以糖 蛋白120上的抗原決定位為目標u，η。有報告敘述此4種 抗體係廣泛中和的抗體（broadly neutralizing antibodies)，但當它們混合在一起時可得到最佳的效果43 44 〇 在吾人的結果當中，吾人已證明重組抗—R7V抗體會中 和人類免疫缺乏病毒亞型C分離株（is〇late)。單株抗 6087-9509-PF;Kai 32 200846363 ' 體2F5與2G12在此亞型上無效果，免疫球蛋白Glbl2具有 部分的效果，只有4E10有顯著的活性45。 所以抗-R7V抗體似乎是目前所述對抗人類免疫缺乏病 毒-1最明顯有效的其中一種單株抗體（Mab)。R7V抗原決 定位不論其細胞起源為何都不會引起自體免疫反應，就像 產生抗-R7V抗體的病人都不會產生任何自體免疫疾病的臨 床症狀5。這確定了此抗-R 7 V抗體是一種治療人類免疫缺 乏病毒感染病人的強效候選物。
表3 :為了鑑別輕鏈與重鏈可變異區而用以篩選人類淋巴細胞互補去氧核糖核酸之基因 家族專一的聚合酶連鎖反應引子 _____ 在人類免疫球蛋白之單一肽序列雜交的引子 序列 在人類免疫球蛋白之固定區雜交的 引子序列 重鏈 WH1/VH7 ATGGACTGGACCTGGAG (序列識別號： 20) hVH2 ATGGACATACTTTGTTCC (序列識別號：21) hVH3 ATGGAGTTTGGGCTGAGC (序列識別號:22) hVH4 ATGAAACACCTGTGGTT (序列識別號:23) hVH5 ATGGGGTCAACCGCCATC (序列識別號：24) hVH6 ATGTCTGTCTCCTTCCTC (序列識別號：25) jarama hCG GGAAGTAGTCCTTGACCAGGCAG (序列識別號：26) in hCM GGAGACGAGGGGGAAMGGGT (序 列識別號：27) 輕鏈 ^arabda hVLla TCACTGCACAGGSTCCWGGGCC (序列識別 號：28) hYLlb TCACTGTGCAGGGTCCTGGGCC (序列識別 號：29) hVL2 CTCCTCACTCAGGRCACAGG (序列識別號： 30) hVL3a CTCCTCACTYTCTGCACAG (序列識別號： 31) hVL3b CTCCTCTCTCACTGCACAG (序列識別號： 32) hVL3c TCCTTGCTTACTGCACAGGA (序列識別 號：33) hVL3d TCACTCTTTGCATAGGTTCTGTG (序列識別 號·· 34) hVL4 CTCCTCCTCCACTGSACAGGG (序列識別 號：35) hVL5 TTCCTCTCTCACTGCACAGG (序列識別號： 36) Lambda hCLa CTCAGAGGAGGGCGGGMCAGAGTGAC (序 列識別號：42) hCLb CTCAGAGGACGGCAGGAACAGAGTGAC (序 列識別號：43) 6087-9509-PF;Kai 33 200846363 hVL6 CTCCTCGCTCACTGCACAG (序列識別號·· 37) hVL7 CTCCTCACTYGCTGCCCAGGG (序列識別 號：38) hVL8 CTCCTTGSTTATGGRTCAGG (序列識別號： 39) hVL9 CTCCTCAGTCTCCTCACAGGG (序列識別
號：40) hVLIO CTCCTCACTCACTCTGC (序列識別號：41) Kappa Kappa hVKl TCAGCTCCTGGGGCTYCTG (序列識別號：|hCl GATGGCGGGAAGATGAAGACAGATGG 44) (序列識別號：51) hVK2a CTGGGGCTGCTMTGCTCTGG (序列識別
號：45) hVK2b CTGGGGCTGCTCCTGGTCTGG (序列識別 號:46) hYK3 TCCTGCTACTCTGGCTCCCAG (序列識別 號：47) hVK4 TGCTCTGGATCTCTGGTGC (序列識別號： 48) hVK5 CTCCTCCTTTGGATCTCTGATACCAGGGCA (序 列識別號：49) hVK6 CTCTGGGTTCCAGCCTCCAGGGGT (序列識別 號：50) 混合區使用標準的縮寫·· R=A或G，Y=T或C，W= A或T。 參考文獻
l.Oelrichs R, Tsykin A, Rhodes D, Solomon A, Ellett k, McPhee D, et al. : Genomic sequences of HIV type 1 from four members of the Sydney Blood Bank Cohort of long-term nonprogressors. AIDS Res Hum Retrovir 1998; 14:811-814. 2. Sanchez G, Accumulation peripherical
Xu X, Chermann JC and Hirsch I: of defective viral genomes in blood mononuclear cells of Human 6087-9509-PF;Kai 34 200846363
Immunodeficiency Virus type 1-infected individual. J Virol 1997; 71:2233-2240. 3. Connor RI, Sheridan KE, Ceradini D， Choe S， Landau NR: Change in coreceptor use correlates with disease progression in HIVI-infected individuals. J Exp Med 1997; 185:621-628·
4. De Roda Busman AM, Schuitemaker H: Chemokine receptors and the clinical course of HIV-1 infection. Trends Microbiol 1998; 6:244-249. 5. Has 1 in C， Chermann JC: Anti-R7V antibodies as therapeutics for HIV-infected patients in failure of HAART. Curr Opin Biotechnol 2002; 13(6):621-624. 6. Galea P， Le Conte 1 C， Coutton C, Chermann JC: Rationale for a vaccine using cellular-derived epitope presented by HIV isolates. Vaccine 1999; 17:1700-1705. 7. Arthur LO, Bess JW Jr, Sowder RC 2nd, Benveniste RE,
Mann DL，Chermann JC, et a 1. : Cellular proteins bound to immunodeficiency viruses: implications for pathogenesis and vaccines. Science 1992; 258:1935-1938. 8·Le Contel C，Galea P，Si Ivy F，Hirsch I，Chermann JC: Identification of the beta-2-microglobulin-derivated epitope responsible 6087-9509-PF;Kai 35 200846363 for neutralisation of HIV isolates. Cell Pharmacol 1996; 3:68-73. 9. Hasemann CA， Capra D: High-level production of a functional immunoglobulin heterodimer in a baculovirus expression system. Proc Natl Acad Sci USA 1990; 87:3942-3946.
10. Poul MA, Cerutti M, Chaabihi 1, Ticchioni M, Deramoult FX, Bernard A, et al.: Cassette baculovirus vectors for the production of chimeric, humanized, or human antibodies in insect cells. Eur J Immunol 1995; 25:2005-2009. 11. Poul MA, Cerutti M, Chaabihi H, Devauchelle G,
Kaczoreck M, Lef ranc MP: Design of cassette baculovirus vectors for the production of therapeutic antibodies in insect cells. Immunotechnology 1995; 1:189-196. 12. zu Putlitz J, Kubasek WL, Duchene M, Marget M, von Specht BU， Domdey H: Antibody production in Baculovirus-infected insect cells. Biotechnology (New York) 1990; 8:651-654.
13. Troadec S, Chentouf M, Cerutti M, Nguyen B, Olive D， Bes C, Chardes T: In vitro anti-tumoral activity of baculovirus-expressed chimeric recombinant anti-CD4 antibody 13B8.2 on T-cell lymphomas. J 6087-9509-PF;Kai 36 200846363
Immunother (in press) 2006. 14. Carayannopoulos L, Max EE, Capra JD: Recombinant human IgA expressed in insect cells. Proc Natl Acad Sci USA 1994; 91:8348-8352. 15. Nesbit M, Fu ZF, McDonald-Smith J, Steplewski Z, Curtis PJ: Production of a functional monoclonal
antibody recognizing human colorectal carcinoma cells from a baculovirus expression system. J Immunol Methods 1992; 151:201-208. 16.Edelman L, Margaritte C, Chaabihi H, Monchatre E, Blanchard D, Cardona A, et al. : Obtaining a functional recombinant anti-rhesus (D) antibody using the baculovirus- insect cell expression system. Immunology 1997; 91:13-19. 1 7.Croizier G, Croizier L，Quiot J-M，Lereclus D: Recombination of Autographa cali fornica and Rachiplusia ou nuclear polyhedrosis viruses in Galleria mellonella L· J Gen Virol 1988; 69:177-185· 18. Rey F, Donker G, Hirsch I， and Chermann JC: Productive infection of CD4+ cel Is by selected HIV strains is not inhibited by anti-CD4 monoclonal antibodies. Virology 1991 ; 181:165-171. 19. Chardes T，Vi 1 lard S，Ferrieres G，Piechaczyk M, Cerutti M， Devauchel le G， et al. : Efficient 6087-9509-PF;Kai 37 200846363 amplification and direct sequencing of mouse variable regions from any immunoglobulin gene family. FEBS Lett 1999; 452:386-394. 20. Altschul SF, Madden TL, Schaffer AA, Zhang J, Zhang Z, Miller W, et al. : Gapped BLAST and PSI-BLAST: A new generation of protein database search programs. Nucleic Acids Res 1997; 25:3389-3402. 21. Lefranc MP, Giudicelli V, Kaasl Q, Duprat E,
Jabado-Michaloud J, Scaviner D: IMGT, the international ImMunoGeneTi cs information system®. Nucleic Acids Research 2005; 33: D593-D597. 22. Cerutti M, Chaabihi H, Devauchel1e G, Gautier L, Kaczorek M, Lefranc MP, et al. : Recombinant Baculovirus and use thereof in the production of monoclonal antibodies. INRA-CNRS Patent, France, FR 94/01015 1994· 23. Bes C, Briant-Longuet L, Cerutti M, Heitz F, Troadec S, Pugniere M，et a 1. : Mapping the paratope of the anti-CD4 recombinant Fab 13B8. 2 by combining parallel peptide synthesis and site-directed mutagenesis. J Biol Chem 2003; 278:14265-14273. 24. Van der Maarel S, van Dijk KW, Alexander CM, Sasso EH, Bull A, Milner EC: Chromosomal organization of the human VH4 gene family. Location of individual gene 6087-9509-PF;Kai 38 200846363 segments. J Immunol 1993; 150:2858-2868. 25.Siebenlist U, Ravetch JV, Korsmeyer S, Waldmann T, Leder P: Human immunoglobulin D segments encoded in tandem multi genic families. Nature 1981; 294:631-635.
26. Mattila PS, Schugk J, Wu H and Makela 0: Extensive allelic sequence variation in the J region of the human immunoglobulin heavy chain gene locus. Eur J
Inimuiiol : 27. Klobeck HG, Bornkamm GW, Combriato G, Mocikat R, Pohlenz HD, Zachau HG: Subgroup IV of human immunoglobulin K light chains is encoded by a single germline gene. Nucleic Acids Res 1985; 13:6515-6529. 28.Sahota SS, Leo R, Hamblin TJ, Stevenson FK: Myeloma VL gene sequences reveal somatic hypermutation with intraclonal homogeneity, and a role for VL in antigen selection (Unpublished, access number: Z70260) 1996. 29. Lieby P, Soley A, Levallois H, Hugel B, Freyssinet JM， Cerutti M: The clonal analysis of anticardiolipin antibodies in a single patient with primary antiphospholipid syndrome reveals an extreme antibody heterogeneity. Blood 2001; 97:3820-3828. 30. Marchal I，Mir AM，Kmiecik D，Verbert A，Cacan R: Use of inhibitors to characterize intermediates in 6087-9509-PF;Kai 39 200846363 # the processing of N-glycans synthesized by insect cells: a metabolic study with S f 9 cell line.
Glycobiology 1999; 9:645-654. 31. Marchal I， Jarvis DL， Cacan R， Verbert A: Glycoproteins from insect cells: sialylated or not ? Biol Chem 2001; 382:151-159.
32. Boyd PN, Lines AC, Patel AK: The effect of the removal of sialic acid, galactose and total carbohydrate on the functional activity of Campath~lH. Mol Immunol 1995; 32:1311-1318, 33.Shinkawa T, Nakamura K， Yamane N, Shoji-Hosaka E， Kanda Y, Sakurada M, et al. : The absence of fucose but not the presence of galactose or bisecting N-acety1 glucosamine of human IgGl comp1 ex-type oligosaccharides shows the critical role of enhancing ant ibody-dependent cellular cytotoxicity. J Biol Chem 2003; 278:3466 - 3473. 34.Kettleborough CA, Saldanha J, Ansell KH, Bendig MM: Optimization of primers for cloning libraries of mouse immunoglobulin genes using the polymerase chain reaction. Eur J Immunol 1993; 23:206-211. 35.Orlandi R，Gussow, DH，Jones PT，Winter G: Cloning immunoglobulin variable domains for expression by the polymerase chain reaction. Proc Natl Acad Sci USA 1 989; 6087-9509-PF;Kai 40 200846363 Λ " " 86:3833-3837. 36.Burton DR, Barbas CF 3rd, Persson MA, Koenig S, Chanock RM, Lerner RA: A large array of human monoclonal antibodies to type 1 human immunodeficiency virus from combinatorial libraries of asymptomatic seropositive individuals. Proc Nat 1 Acad Sci U S A 1991; 88(22):10134-10137.
37. Burton DR, Pyati J, Koduri R, Sharp SJ, Thornton GB, Parren PW, et al.: Efficient neutralization of primary isolates of HIV-1 by a recombinant human monoclonal antibody. Science 1994; 266 (5187) :1024-1027. 38.Roben P, Moore JP, Thali M, Sodroski J, Barbas CF 3rd， Burton DR: Recognition properties of a panel of human recombinant Fab fragments to the CD4 binding site of gp!20 that show differing abilities to neutralize human immunodeficiency virus type 1. J Virol 1994; 68(8):4821-4828. 39. Muster T, Steindl F, Purtscher M, Trkola A, Klima A, Himmler G, et aL : A conserved neutralizing epitope on gp41 of human immunodeficiency virus type 1. I Virol 1993; 67(11):6642-6647. 40. Zwick MB, Labrijn AF, fang M, Spenlehauer C, Saphire EO, Binley JM, et al. : Broadly neutralizing 6087-9509-PF;Kai 41 200846363
I
antibodies targeted to the membrane-proximal external region of human immunodeficiency virus type 1 glycoprotein gp41. J Virol 2001; 75(22):10892-10905. 41.Trkola A, Purtscher M， Muster T， Ballaun C， Buchacher A， Sullivan N, et al. : Human monoclonal antibody 2G12 defines a distinctive neutralization epitope on the gpl20 glycoprotein of human immunodeficiency virus type 1. J Virol 1996; 70(2):1100-1108· 42.Scanlan CN, Pantophlet R, Wormald MR, Ollmann Saphire E, Stanfield R, Wilson IA，et al. : The broadly neutralizing anti-human immunodeficiency virus type 1 antibody 2G12 recognizes a cluster of alphal-->2 mannose residues on the outer face of gpl20. J Virol 2002; 76(14):7306-7321. 43. Binley JM, Wrin T, Korber B, Zwick MB, Wang M, Chappey C, et al·: Comprehensive cross-clade neutralization analysis of a panel of anti-human immunodeficiency virus type 1 monoclonal antibodies. J Virol 2004; 78(23):13232-13252. 44. Mehandru S, Wrin T, Gaiovich J, Stiegler G, Vcelar B, Hurley A, et al·: Neutralization of newly transmitted human immunodeficiency virus type 1 by 6087-9509-PF;Kai 42 200846363 * monoclonal antibodies 2G12, 2F5 and 4E10. J Virol 2004； 78:14039-14042· 45.Gray ES, Meyers T, Gray G, Montefiori DC, Morris L: Insensitivity of Paediatric HIV-l Subtype C Viruses to Broadly Neutralising Monoclonal Antibodies Raised against Subtype. B PLoS Med 2006; 18; 3(7):e255. ®【圖式簡單說明】 第1圖：用來表現抗-R7V抗體之免疫球蛋白特異轉移 載體的圖示。 - 第1A圖：pVT-Ck的圖示一使輕鏈表現的轉移載體。 第1B圖：pVT-Cr 1的圖示一使重鏈表現的轉移載體。 第2圖：由R7V抗原選出之永生B淋巴細胞萃取之全 部核糠核酸所合成之互補去氧核糖核酸上所呈現之重鏈可 φ 變異（VH)(第2A圖）或輕鏈可變異（VL)(第2B圖）序 列的聚合酶連鎖反應擴增。如材料與方法所述，以指定之 重鏈可變異或輕鏈可變異基因家族之適當、不變的3，引 子（primer)與數組的5’引子進行擴增。在15%洋菜糖 膠（agarose gel)上分餾20微升1)的聚合酶連鎖 反應’然後以 >臭化乙錠（ethidium bromide)染色。Cvh 行：控制的重鏈可變異序列。Cu行：控制的輕鏈可變異序 列。MW 行：SmartLadder 分子量標記（Eur〇gentec) ·· 2〇〇、 400 、 600 、 800 、 1000 、 1500 、 2000 、 2500 、 3000 、 4000 、 6087-9509-PF;Kai 43 200846363 ‘r， 1 50 00、6 00 0、80 00、1〇, 〇〇〇 鹼基對（bp) 0 第3圖：第3A圖與第3C圖：核普酸序列以及第3B圖 與弟3D圖·與最南同源胚糸基因（most homologous germline gene)比較後，表現於永生B淋巴細胞中之抗體 之輕鏈（K4)與重鏈（M4)可變異區的胺基酸序列。胺基 酸序列以一個字母代碼表示。使用的編號系統係以IMGT (http: / /img*t· cines. fr)的慣例為基準。重鏈可變異序列 與輕鏈可變異序列的互補決定區會特別標示。序列中之破 _ 折號代表與上列指定的殘基相同。IGHJ、IGHD與IGKJ基 因被分隔。 第4圖：由50微克/ ¾升之抗- R7V或不相關抗體造成 • 之人類免疫缺乏病毒1为枝糸（HIVi clades)的中和作 用0
【主要元件符號說明】 無0 6087-9509-PF;Kai 44
Claims (1)
- 200846363 十、申請專利範圍： ' - ·? - ... - .. 1 · 一種分離的抗體或其功能性片段之一，該抗體或其 功能性片段能夠專一地結合至R7V抗原決定位（RTPKIQV -序列識別號：11)以及中和人類免疫缺乏病毒株（Ηϊν)，其 中，該抗體或其功能性片段包括： (i) 一輕鏈，包括含有胺基酸序列序列識別號：1 (QSVLYSS丽KNY)、序列識別號：2 (WAS)與序列識別號：3 φ (QQYYSTPQT)的互補決定區或包含在最佳排列之後與序列 SEQ ID No 1、2或3至少具有80% (最好為9〇%)相似序 列的互補決定區；以及 (11) 一重鏈’包括含有胺基酸序列識別號：6 '(GGSISSYY)、序列識別號：7 (IYYSGST)與序列識別號：8 ' (ARGRSWFSY)的互補決定區或包含在最佳排列之後與序列 識別號：6、7與8至少具有80% (最好為9〇%)相似序列 的互補決定區。 2·如申明專利範圍第1項所述的抗體，該抗體為完 的人類單株抗體或其功能性片段。 3·如申請專利範圍第！或2項所述的抗體，其中該: 體包括在最佳排列之後含有與第3β目所示之序列識」 胺基酉文序列至少具有8〇% (最好為議）相似度之』 土·序歹】的輕鏈，或被_核普酸序列編碼的輕鏈，該核: 酉夂序列包含第3A圖所述的序列識別號：5或包含在最佳^ 皮】之後一序列識別號·· 5具有8⑽（最好為9⑽)相似度g 序列。 1 6087-9509-PF；Kai 200846363 i A ^ 4·如申請專利範圍第1或第2項所述的抗體，其中， 人 - - _ ” . 該抗體包含在最佳排列之後含有與第3D圖所示之序列識 別號：9胺基酸序列至少具有80%(最好為90%)相似度之 胺基、酸序列的重鏈，或被一核苷酸序列編碼的重鏈，該核 _酸序列包含第3C圖所述的序列識別號：1 0或包含在最 佳排列之後與序列識別號：1 0具有80% (最好為90%)相似 度的序列。 0 5·如申請專利範圍第1項所述的抗體，其中該抗體包 括含有第3B圖所示之序列識別號：4胺基酸序列的輕鏈， 以及含有第3D圖所示之序列識別號：9胺基酸序列的重 鏈’或其選自 Fv、scFv、Fab、F(ab，）2、F(ab，）、scFv-Fc ' 形式或雙鏈抗體（diabodies)的功能性片段。 ^ 6 · —種分離的核酸’包括一在最佳排列後與序列識別 號：5具有80% (最好為9〇%)相似度的序列。 7 · —種分離的核酸，其包括一在最佳排列之後與序列 • 識別號：10具有80% (最好為90%)相似度的序列。 8. 一種載體，其包括申請專利範圍第6或7項所定義 的核酸。 9 · 一種桿狀病毒轉移載體，包括申請專利範圍第6項 所定義的核酸序列以及申請專利範圍第7項所定義的核酸 序列。 10·—種宿主細胞，其根據申請專利範圍第8或9項被 載體轉化或包含一載體。 11·如申請專利範圍第10項所述的宿主細胞，其中， 6〇87~95〇9~PF;Kai 2 200846363 j ^ 該宿主細胞為昆蟲細胞（例如·· Sf 9細胞）、細菌細胞、酵 母菌細胞、動物細胞、哺·乳動物細胞，Epstein—garr病毒 永生化的β淋巴細胞、CH0、產生低岩藻糖化抗體之基因修 飾的CH0或ΥΒ2/0 〇 12· —種製造申請專利範圍第〗至5項所定義之其中一 種抗體或其功能性片段的方法，該方法包括： a)在一適當條件下的培養基中培養如申請專利範圍第 10或11項所述的宿主細胞；以及 b )從該培養細胞的培養基中萃取出該抗體。 13· —種如申請專利範圍第1至5項其中之一所定義且 作為藥劑的抗體或其功能性片段。 - I4· 一種藥學組合物，包括申請專利範圍第1至5項其 ， 中之一所定義的抗體或其功能性片段之一，以及一賦形劑 及/或藥學上可接受的載體。 15. —種同時、分開或連續使用的組合產品，其中至少 # 現今m療後天免疫不全症候群的製劑以及申請 專利範圍第1至5項其中之一所述的抗體。 16. 如申請專利範圍第m項其中之—所述之抗體的 使用，該抗體係用以治療人類免疫缺乏病毒感染、後天免 疫不全症候群，例如· π:力推f A , 、 ·正在進仃馬效能抗反轉錄病毒治療 法的病人，尤其是以高效能抗反轉錄病毒治療法治療無效 的病人。 6087-9509-PF;Kai 3
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US89635907P | 2007-03-22 | 2007-03-22 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TW200846363A true TW200846363A (en) | 2008-12-01 |
Family
ID=39473318
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TW097109297A TW200846363A (en) | 2007-03-22 | 2008-03-17 | Novel human anti-R7V antibodies and uses thereof |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20110123536A1 (zh) |
| EP (1) | EP2137214A1 (zh) |
| JP (1) | JP2010521189A (zh) |
| KR (1) | KR20100014495A (zh) |
| CN (1) | CN101679515A (zh) |
| AR (1) | AR066396A1 (zh) |
| AU (1) | AU2008228246A1 (zh) |
| BR (1) | BRPI0808287A2 (zh) |
| CA (1) | CA2681130A1 (zh) |
| CL (1) | CL2008000820A1 (zh) |
| IL (1) | IL201034A0 (zh) |
| MA (1) | MA31256B1 (zh) |
| MX (1) | MX2009009982A (zh) |
| RU (1) | RU2009138922A (zh) |
| TN (1) | TN2009000380A1 (zh) |
| TW (1) | TW200846363A (zh) |
| WO (1) | WO2008113833A1 (zh) |
| ZA (1) | ZA200906516B (zh) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9517257B2 (en) | 2010-08-10 | 2016-12-13 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) | Erythrocyte-binding therapeutics |
| CN108117586A (zh) | 2010-08-10 | 2018-06-05 | 洛桑聚合联合学院 | 红细胞结合性治疗剂 |
| US9850296B2 (en) | 2010-08-10 | 2017-12-26 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) | Erythrocyte-binding therapeutics |
| KR102473834B1 (ko) * | 2011-05-31 | 2022-12-02 | 바이오젠 엠에이 인코포레이티드 | Pml의 위험을 판단하는 방법 |
| HK1216546A1 (zh) | 2013-05-28 | 2016-11-18 | Biogen Ma Inc. | 评估pml风险的方法 |
| EA201691686A1 (ru) | 2014-02-21 | 2017-03-31 | Эколь Политекник Федераль Де Лозан (Эпфл) | Терапевтические средства с углевод-опосредованной адресной доставкой |
| US10046056B2 (en) | 2014-02-21 | 2018-08-14 | École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) | Glycotargeting therapeutics |
| US10953101B2 (en) | 2014-02-21 | 2021-03-23 | École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) | Glycotargeting therapeutics |
| US10946079B2 (en) | 2014-02-21 | 2021-03-16 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne | Glycotargeting therapeutics |
| CN105020678B (zh) * | 2015-08-04 | 2017-10-13 | 珠海金晟照明科技有限公司 | 透镜单元、透镜组件和路灯灯头 |
| US11185582B2 (en) | 2016-05-09 | 2021-11-30 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Broadly neutralizing anti-human cytomegalovirus (HCMV) antibodies and methods of use thereof |
| WO2018232176A1 (en) | 2017-06-16 | 2018-12-20 | The University Of Chicago | Compositions and methods for inducing immune tolerance |
| JP2021519305A (ja) * | 2018-03-26 | 2021-08-10 | ザ・ユニバーシティ・オブ・シカゴＴｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｃｈｉｃａｇｏ | 肝臓およびリンパ節の類洞内皮細胞Ｃ型レクチン（ＬＳＥＣｔｉｎ）を標的とするための方法および組成物 |
| EA202092723A1 (ru) | 2018-05-09 | 2021-04-09 | Зе Юниверсити Оф Чикаго | Композиции и способы, касающиеся иммунной толерантности |
| US20230374114A1 (en) * | 2020-04-16 | 2023-11-23 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Coronavirus antibodies and methods of use thereof |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2735984B1 (fr) * | 1995-06-30 | 1997-09-19 | Inst Nat Sante Rech Med | Vaccin contre des agents infectieux ayant une phase intracellulaire, composition pour le traitement et la prevention des infections a hiv, anticorps et procede de diagnostic |
| US20030021800A1 (en) * | 1995-06-30 | 2003-01-30 | Jean-Claude Chermann | Vaccine against infectious agents having an intracellular phase, composition for the treatment and prevention of HIV infections, antibodies and method of diagnosis |
| FR2836146B1 (fr) * | 2002-02-15 | 2005-01-07 | Urrma R & D | IMMUNOGLOBULINE IgG3 MARQUEUR DE PROTECTION CONTRE LES MALADIES VIRALES INFECTIEUSES ET SES UTILISATIONS |
-
2008
- 2008-03-17 TW TW097109297A patent/TW200846363A/zh unknown
- 2008-03-19 RU RU2009138922/10A patent/RU2009138922A/ru not_active Application Discontinuation
- 2008-03-19 MX MX2009009982A patent/MX2009009982A/es not_active Application Discontinuation
- 2008-03-19 CA CA002681130A patent/CA2681130A1/en not_active Abandoned
- 2008-03-19 AR ARP080101151A patent/AR066396A1/es not_active Application Discontinuation
- 2008-03-19 JP JP2009554021A patent/JP2010521189A/ja active Pending
- 2008-03-19 WO PCT/EP2008/053317 patent/WO2008113833A1/en not_active Ceased
- 2008-03-19 BR BRPI0808287-1A2A patent/BRPI0808287A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2008-03-19 AU AU2008228246A patent/AU2008228246A1/en not_active Abandoned
- 2008-03-19 CN CN200880016515A patent/CN101679515A/zh active Pending
- 2008-03-19 KR KR1020097019607A patent/KR20100014495A/ko not_active Withdrawn
- 2008-03-19 EP EP08718038A patent/EP2137214A1/en not_active Withdrawn
- 2008-03-19 US US12/531,843 patent/US20110123536A1/en not_active Abandoned
- 2008-03-20 CL CL200800820A patent/CL2008000820A1/es unknown
-
2009
- 2009-09-17 IL IL201034A patent/IL201034A0/en unknown
- 2009-09-18 MA MA32224A patent/MA31256B1/fr unknown
- 2009-09-18 TN TNP2009000380A patent/TN2009000380A1/fr unknown
- 2009-09-18 ZA ZA200906516A patent/ZA200906516B/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2681130A1 (en) | 2008-09-25 |
| JP2010521189A (ja) | 2010-06-24 |
| MA31256B1 (fr) | 2010-03-01 |
| AR066396A1 (es) | 2009-08-19 |
| WO2008113833A1 (en) | 2008-09-25 |
| IL201034A0 (en) | 2010-05-17 |
| EP2137214A1 (en) | 2009-12-30 |
| CN101679515A (zh) | 2010-03-24 |
| US20110123536A1 (en) | 2011-05-26 |
| MX2009009982A (es) | 2010-03-04 |
| BRPI0808287A2 (pt) | 2014-10-07 |
| KR20100014495A (ko) | 2010-02-10 |
| CL2008000820A1 (es) | 2008-08-22 |
| TN2009000380A1 (en) | 2010-12-31 |
| AU2008228246A1 (en) | 2008-09-25 |
| RU2009138922A (ru) | 2011-04-27 |
| ZA200906516B (en) | 2010-05-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TW200846363A (en) | Novel human anti-R7V antibodies and uses thereof | |
| US10344077B2 (en) | HIV-1 neutralizing antibodies and uses thereof (V3 antibodies) | |
| US10450368B2 (en) | HIV-1 neutralizing antibodies and uses thereof (CD4bs antibodies) | |
| US12492241B2 (en) | Broadly neutralizing antibodies against HIV | |
| TW201920258A (zh) | 靶向hiv gp120及cd3之多特異性抗體 | |
| Wibmer et al. | Structure and recognition of a novel HIV-1 gp120-gp41 interface antibody that caused MPER exposure through viral escape | |
| US20200199204A1 (en) | Broadly Neutralizing Monoclonal Antibodies Against HIV-1 V1V2 Env Region | |
| EP2707388B1 (en) | Focused evolution of hiv-1 neutralizing antibodies revealed by crystal structures and deep sequencing | |
| WO2017011413A1 (en) | Bispecific molecules comprising an hiv-1 envelope targeting arm | |
| WO2016054023A1 (en) | Hiv-1 antibodies and uses thereof (adcc and bispecific abs) | |
| Sun et al. | Construction of a recombinant full-length membrane associated IgG library | |
| CN103755805B (zh) | HIV-1 Env特异性的全人单克隆抗体 | |
| CN107383190B (zh) | 人源抗HIV gp41特异性抗体及其应用 | |
| Haslin et al. | A recombinant human monoclonal anti-R7V antibody as a potential therapy for HIV infected patients in failure of HAART | |
| Winnall et al. | The maturation of antibody technology for the HIV epidemic | |
| HK40046504A (zh) | 针对hiv-1 v1v2 env区域的广谱中和性单克隆抗体 | |
| Spencer | Functional Impact of IGHG3 Genetic Variation in HIV-1 Infection | |
| Pedrioli | LCMV-specific antibody characterization upon chronic infection | |
| von Boehmer | Targeting the CD4 Binding Site of HIV | |
| JPWO2010087131A1 (ja) | Ｈｉｖ複製抑制剤、及びその利用 | |
| Gorlani | Development of llama single-domain antibodies as ingredient for an HIV-1 entry-inhibitor microbicide |