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TW200813065A - Conjugates of aziridinyl-epothilone analogs and pharmaceutical compositions comprising same - Google Patents

Conjugates of aziridinyl-epothilone analogs and pharmaceutical compositions comprising same Download PDF

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Publication number
TW200813065A
TW200813065A TW096118796A TW96118796A TW200813065A TW 200813065 A TW200813065 A TW 200813065A TW 096118796 A TW096118796 A TW 096118796A TW 96118796 A TW96118796 A TW 96118796A TW 200813065 A TW200813065 A TW 200813065A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
substituted
group
alkyl
compound
cancer
Prior art date
Application number
TW096118796A
Other languages
English (en)
Inventor
Gregory D Vite
Francis Y Lee
Christopher P Leamon
Iontcho Vlahov
Original Assignee
Bristol Myers Squibb Co
Endocyte Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bristol Myers Squibb Co, Endocyte Inc filed Critical Bristol Myers Squibb Co
Publication of TW200813065A publication Critical patent/TW200813065A/zh

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Description

200813065 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於吖丙啶基·埃坡黴素類似物之共軛物’更 . 明確而言係關於吖丙啶基-埃坡黴素類似物之葉酸共軛 物，係關於包含該等共輛物之醫藥組合物，且係關於使用 讓等共軛物及醫藥組合物之方法。 【先前技術】 埃坡黴素A與埃坡黴素B為由H6fle等人發現的自微生物 〇 纖維堆囊菌（Sorangium cellulosum)之酸酵產物分離出的天 然存在之化合物（參見，例如，WO 93/10121)。H0fle等人 亦發現由纖維堆囊菌產生的37種天然埃坡黴素變異體及相 關化合物，包括埃坡黴素C、D、E、F以及其他異構體及 變異體。參見，例如，美國專利第6,624,3 10號。在1993年 Hofle等人對埃坡黴素A與埃坡黴素B之細胞毒素作用進行 報導的同時，在1995年研究者與Merck報導埃坡黴素B發揮 類似於紫杉醇（TAXOL®)之微管穩定作用（參見，D.M· 〇
Bollag，"Epothilones，a New Class of Microtubule-Stabilizing Agents with a Taxol-like Mechanism of • Action”，Cancer Research，第 55 卷（1995 年 6 月），在第 . 2325-2333 頁）。
Bristol-Myers Squibb Co.已發現天然存在之埃坡黴素的 多種衍生物及類似物。埃坡黴素類似物之實例包括稱為伊 沙匹隆（ixabepilone)之氮雜-埃坡黴素B類似物、包括21-胺 基類似物的埃坡黴素B之21-經取代之類似物、2,3·烯烴類 121203.doc 200813065 似物、C_3氰基類似物、環丙基類似物及包括吖丙啶基-埃 坡黴素類似物之雜環類似物。#!，勿如，美國專利第 6,605,599 號；第 6,262,094 號；第 6,399,638 號；第 ' 6,498,257 號；第 6,380,395 號；及第 6,800,653 號，該等專 _ 利之每一者以引用的方式併入本文中。其他人亦已對其他
埃坡黴素衍生物及類似物之發現進行報導。參見，例如， WO 99/65913、美國專利第6,441，186號、美國專利第 6,284,781 號；美國專利第 6,660,758 號；WO 98/25929 ; WO 00/99/07692 ； WO 99/67252 ； WO 00/00485 ； WO 00/37473 ;美國專利第6,380,394號；美國專利第6,242,469 號；美國專利第6,531，497號；美國專利申請案第 2004/0072870A1 號；美國專利申請案第 2003/0023082 A1 號；WO 01/83 800 ;美國專利第6,441，186號；美國專利第 6,489,314號；美國專利第6,589,968號、美國專利申請案第 2004/0053910 A1號；美國專利申請案第 2004/0152708 A1 號；WO 99/67253 ； WO 99/07692 ； WO 00/00485 ； WO 〇
00/49021 ； WO 00/66589 ； WO 03/045324 ； WO 04/014919 ; WO 04/056832 ; WO 03/022844 ;及美國專利 ^ 第6,930,102 B2號，所有專利之全文以引用的方式併入。 - 天然存在之埃坡黴素及其類似物如同其他微管穩定劑一 樣可適用於治療諸如癌症之增生性疾病，其通常藉由殺滅 腫瘤細胞、其他病原性細胞及外來病原體（或阻止其生長） 而起作用。然而，抗癌藥常常不僅攻擊腫瘤細胞，而且攻 擊正常組織，引起不希望有之副作用。另外，抗癌藥通常 121203.doc 200813065 有溶解性問題，使得藥劑之調配及傳遞可存在難題，從而 導致使用諸如Cremophoi^i助溶劑。已知一些抗癌藥及/ 或調配物成份之細胞毒性引起神經病或其他副作用，諸 如，過敏反應。該等不利副作用突出顯示需要對病原性細 胞群有選擇性且因此引起宿主毒性下降之抗癌治療。 然而，如WO 2004/054622 A1中所論述，多年來科學家 試圖在用於將化學治療劑傳遞至患者之目標藥物治療中使 用單株抗體（mAb)，但已在（特別）可裂解部分、連接子及 釋放於細胞中之藥物形式方面遇到困難。據報導用mAh進 行之成功腫瘤治療為抗體不充分渗透入腫瘤中所限制且為 相應之腫瘤相關抗原於腫瘤組織中的不均勻分布所限制。 參見，Klar 等人之 WO 05/074901(讓渡於 Schering AG)。因 此，在此項技術中對使用（例如）埃坡黴素類似物的用於癌 症治療之目標藥物治療存在需求。 【發明内容】 某些疾病病況（諸如，癌症）之特徵為獨特表現、過度表 現或優先表現葉酸、葉酸類似物或其衍生物可利用之結合 位點的細胞群。申請者已發現可選擇性地以含有該等結合 位點之細胞作為目標，進而降低與典型化學療法相關之許 多副作用的具有下式I之共軛化合物（包括其醫藥學上可接 受之鹽及/或溶劑合物）。 121203.doc 200813065
V T Q — Μ-Κ*—A
其中： ν為葉酸，或其類似物或衍生物； O Q為 〇、s 或 nr7 ; Μ為可釋連接子； Κ為 Ο、S 或 NR7a ; A 為-(CR8R9)-(CH2)m-Z-，其中 2為 _(CHRi〇)_、_c(==〇)_ 、-C(=0)-C(哪、_oc(=0)_、_n(Ri )c(=〇)、_s〇2 或-N(Rn)S02-;
Bi為羥基或氰基，且Rl為氫，或比與心一起形成一雙 鍵； u p 2、R3及Rs獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、芳基或 經取代之芳基；或I與I可與其所連接之碳一起形成視情 • 況經取代之環烷基； R4為氫、烷基、烯基、經取代之烷基、經取代之烯基、 芳基或經取代之芳基； 為氫、烧基或經取代之烧基； R7a、R7、R8、R9、r1g及Rn獨立地為氫 '烷基、經取代 之烷基、環烷基、經取代之環烷基、芳基、經取代之芳 121203.doc 200813065 基、雜環烷基、經取代之雜環烷基、雜芳基或經取代之雜 芳基；
Ri2為Η、炫基、經取代之烧基或鹵素；
Ru為芳基、經取代之芳基、雜芳基或經取代之雜芳 基； m為〇至6 ; T具有下式：
其中：
Ru在各狀況下獨立地為氫、烧基、經取代之烧基、芳 基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、環烷 基、經取代之環烷基、環烷基烷基、經取代之環烷基烷 基、雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、經取代 之雜芳基、雜環烷基或經取代之雜環烷基； q為1至ίο ;且 尺15、Ri6及Ri7獨立地為氫、烧基、經取代之烧基或環烧 基。 【實施方式】 在某些癌細胞中過度表現或優先表現之一種蛋白質為葉 酸受體。葉酸為DNA合成所需要的，且已知某些人類腫瘤 細胞過度表現葉酸結合蛋白。例如，campbell等人之 121203.doc -10- 200813065 ’’Folate Binding Protein is a Marker for Ovarian Cancer，" (Cancer Research，第 51 卷（1991 年 10月 1 日），在第 5329-3 8 頁）及 Coney 等人之’’Cloning of a Tumor-Associated Antigen: MOvl8 and MOvl9 Antibodies Recognize Folate-binding
Protein，"（Cancer Research，第 51 卷（1991 年 11 月 15日），在 第6125-31頁）報導葉酸結合蛋白為卵巢癌之標記物。亦已 知諸如皮膚癌、腎癌、乳癌、肺癌、結腸癌、鼻癌、咽喉 癌、乳腺癌及腦癌以及本文所提及之其他癌症的其他癌症 過度表現葉酸受體。 如所提及的，根據本發明之一實施例，提供包含葉酸或 其類似物或衍生物（V)及吖丙啶基埃坡黴素類似物之共輛 化合物’其可選擇性地及/或優先傳遞至具有維生素或其 類似物或衍生物之可利用結合位點的細胞群，其中該結合 位點（諸如，葉酸受體）係由該等細胞獨特表現，過度表現 或優先表現。 術語之定義 以下所述為用於本說明書中之術語的定義。除非另有陳 述’否則本文提供給一基團或術語之初始定義適用於整個 本說明書中單獨或作為另一基團之部分的彼基團或術語。 如本文所使用之術語”葉酸結合部分或其類似物或衍生 物’’意謂將與葉酸受體蛋白結合之部分（非單株抗體）。例 如’已知如上所論述葉酸受體（FR)在卵巢癌細胞及其他癌 細胞中過度表現。葉酸之例示性類似物及衍生物係揭示於 以引用的方式併入本文中的Viah〇v等人之美國專利申請案 121203.doc 200813065 US 2005/0002942(下文中稱為，，vlah〇v”）中。 如本文所使用之術語”可釋連接子，，意謂包括至少一個在 生理條件下可斷裂之可裂解鍵（例如，值不穩定之鍵、 還原性不穩定之鍵、酸不穩定之鍵、氧化性不穩定之鍵或 酵素不穩定之鍵）的二價連接子。應瞭解引起鍵斷裂之該 等生理條件包括標準化學水解反應，其（例如）在生理？11值 下發生或由於區域化至諸如pH值比胞内pH值低之内體的 、、、田胞器内或由於與諸如麵胱甘肽之細胞還原劑反應而發 生。 應瞭解可裂解之鍵可連接可釋連接子内之兩個鄰近原子 且/或在連接子之任一端或兩端如本文中所述將諸如Q及K 之其他基團與可釋連接子連接。 術語Η烷基η單獨或與一些其他基團組合時係指在任何可 用碳原子處連接之直鏈或支鏈烧（烴）基，其含有丨至⑺個碳 原子’較佳1至6個碳原子，更佳1至4個碳原子。示範性之 該等基團包括（但不限於）甲基、乙基、丙基、異丙基、正 丁基、第三丁基、異丁基、戊基、己基、庚基、4,4-二甲 基戊基、辛基、2,2,4-三甲基戊基及其類似基團。”低碳烧 基’’或”低碳伸烷基，，意謂具有丨至4個碳原子之直鏈或支鏈 烷基。當使用關於烷基或其他基團之下標時，該下標係指 基團可含有之碳原子數。舉例而言，術語”C()_4烷基，，包括 一鍵及含有1至4個碳原子之烷基，且術語"Cl·4烷基，，意謂 含有1至4個碳原子之烷基。 術語”伸烷基”係指如上"烷基"中所述但具有兩個連接點 121203.doc -12- 200813065 之二價烴基。例如，亞甲基為-CHr基團且伸乙基為_〇112_ ch2-基團。 當如在雜環烷基或環烷基烷基中，術語烷基結合另一某 團使用時，此意謂另一確定（首先命名）之基團係直接經由 如上所疋義之烧基（例如，其可為支鏈或直鏈）鍵結。因 而，在該狀況下術語，，烷基”係用來指示具有兩個可用連接 點之伸烷基，例如，二價烷基。舉例而言，環丙基c14烷 基意謂經由具有1至4個碳原子之直鏈或支鏈伸烷基鍵結之 環丙基，且魏基烷基意謂經由具有1黾1〇個碳原子見較佳 具有1至6個碳原子且更佳具有丨至4個碳原子之直鏈或支鏈 伸烧基鍵結的基團OH。就取代基而言，如在"經取代之環 烷基烷基”中，基團之伸烷基部分除支鏈或直鏈外還可如 下經取代之烷基中所述被取代，且/或首先命名之基團（例 如，環烷基）可如本文彼命名基團（例如，環烷基）中所述被 取代。 ’·經取代之烷基’’係指在任何可用連接點處經一或多個取 代基且較佳經1至4個取代基取代之烷基。然而，當烷基係 經多個_基取代基取代時，該烷基可隨價數允許含有多達 10個取代基，更佳含有多達7個取代基。烷基取代基可包 括一或多個以下基團：_基（例如，所形成之單函基取代 基或多_基取代基，在後種狀況下，基團係諸如全氟烷基 或具有Cl3或CF3之烧基）、氰基、、SRa、_c( = 〇)Ra、 -C(=0)0Ra > -〇C(=〇)Ra > -OC(=〇)〇Ra . -NRaRb ^ -C(=0)NRaRb 、-0C( = 0)NRaRb、-S( = 0)Ra、·δ(0)2^、_NHS(〇)2Ra、 121203.doc •13· 200813065 -NHS(0)2NHRa、-NHC(=0)NHRa、-NHC(=〇)Ra、-NHC(〇)2Rs 、-NHC(=N-CN)Ra、芳基、雜環基、環烷基及/或雜芳 基’其中基團Ra及Rb獨立地選自氫、烷基、烯基、環烧 ' 基、雜環基、芳基及雜芳基，且其中各Ra及/或Rb又視情
二 況經1至4個選自以下基團之基團取代：烷基、烯基、A 素、鹵烧基、i烷氧基、氰基、硝基、胺基、烷基胺基、 胺基烷基、羥基、羥基烷基、烷氧基、硫醇基、烷硫基、 、 苯基、苯甲基、苯基氧基、苯甲氧基、C3-7環烷基、5員或 € I ^ 6員雜環基或雜芳基及/或經1至4個選自羥基^ 素、鹵基C!·4烷基、鹵基μ烷氧基、氰基、硝基、胺基、 C!·4烧基胺基、胺基Cl·4烷基、羥基Cl_4烷基、Cl-4烷氧 基、硫醇基及烷硫基之基團取代的低碳烷基或低碳 浠基。為避免產生疑義，"經取代之低碳烷基”意謂具有i 至4個碳原子及1至4個選自以上經取代之烷基中剛述及之 彼等基團之取代基的烷基。就經取代之低碳烷基而言，基 Q 團Ra&Rb較佳係選自氫、低碳烷基、低碳烯基、C3-7環烷 基、苯基及5至6員單環雜環基及/或雜芳基，其又如上視 情況經取代。 術語”烯基”係指含有2至12個碳原子及至少一個碳^炭雙 ’ 鍵之直鏈或支鏈烴基。示範性之該等基團包括乙烯基或烯 丙基。’’經取代之烯基”係指在任何可用連接點處經一或多 個取代基且較佳經丨至4個取代基取代之烯基。示範性取代 基包括燒基、經取代之烷基及以上作為烷基取代基所述的 彼等基團。 121203.doc -14- Ο Ο 限 200813065 術語’’烷氧基’’及”烷硫基Μ係指分別經由氧鍵（-〇-)或硫鍵 (-S-)鍵結的如上所述之烷基。術語η經取代之烷氧基”及 ”經取代之烷硫基"係指分別經由氧鍵或硫鍵鍵結的如上所 述之經取代之烷基。”低碳烷氧基”或Cw烷氧基為基團 OR，其中R為低碳烷基（含有1至4個碳原子之烷基）。 π胺基”為-NH2。烷基胺基為-NRcRd，其中心與以中之至 少一者為烷基或經取代之烷基，且1與Rd中之另一者係選 自氫、烷基及經取代之烷基。”胺基烷基，，意謂經由伸烷基 鍵結之胺基（_伸烷基_NH?)，且烷基胺基烷基意謂經由伸烷 基鍵結的如上所定義之烷基胺基（-伸烷基-NReRd)。 術語”芳基"係指具有⑴個芳環之環狀芳族烴基，尤直 環或雙環基團，諸如，苯基或萘基。為雙環或三環之 方基必須包括至少一個完全芳族之碳 環可為芳族的4非婪始从 次其他稍 制條件為在，：非方族的，且可視情況含有雜原子，其限 條件為在該4狀況下連接點將連 當芳基已稠合至雜广+ 方。另外， 基環可具有一或 于該雜％及/或環烷 飞夕個羰基碳原子，亦 子連接以界定猙意 ‘由雙鍵與氧原 於）： 之實例可包括（但不
121203.doc 200813065
及其類似
術語"伸芳基”係指二價芳基，亦即，在 用連接點處具有連接至兩個其他基 = 何可 M 、他I團之兩個連接點的如上 斤疋義之芳基。伸芳基環亦可經適於在本文所定義之芳基 上取代之基團的任何基團取代。 經取代之芳基"係指在任何連接點處經—或多個取代其 且較佳經丨至4個取代絲代的如上較義之芳基或㈣ 基。取代基包括烧基、經取代之絲、絲、經取代之婦 基以及以上作為烷基取代基所述的彼等基團。 術語"碳環"意謂鮮或殘和單環、雙環或三 單環或雙環），其中所有環之所有 為 ,1衣 < 尸/Γ有原子為碳。因而，術語 包括環院基環及芳基環。碳環可被取代，在該狀況下，取 代基係選自以上環院基及芳基巾所述之彼等取代基。 術語"環烷基"係指含有13個環且每環含有3至7個碳原 子之完全飽和或部分飽和環烴基。示範性完全飽和環烧基 包括環丙基、環丁基、環戊基及環己基。示範性部分飽和 環院基包括環T烯基、環戊縣及環，己縣。術語"環燒 基”包括具有含3至4個碳原子之橋的該等基團。另外，為 雙環或三環之環烧基必須包括至少—個完全飽和或部分飽 121203.doc -16- 200813065 含有雜原+，二：稠環可為芳族的或非芳族的，且可 不限於）： 因而’ ”環炫基"之實例可包括（但
環狀之非芳族煙基。另外，二；：狀況下連接點將連接至 成碳氧雙鍵以界定㈣ 》凡土 < 一或多個碳原子可形 術語"伸我基"係指二價環院基，亦即，在環烧基環的 任何可用之兩個連接點處具有連接至兩個其他基團之兩個 連接點的如上所定義之環烷基。 ”經取代之環烷基”係指在任何可用連接點處經一或多個 取代基且較佳經1至4個取代基取代的如上所定義之環烷 基。環烷基取代基包括烷基、經取代之烷基、烯基、經取 代之烯基以及以上作為烷基取代基所述的彼等基團。
NH 術語”胍基"意謂基團。因而，胍基烷基意謂與 121203.doc -17- 200813065 ΝΗ ¥之基團 溴及峨。 胍基鍵結之烷基，諸如具有式 術語 術語 術語 齒素，•或、基”係指氟、氯 雜原子"包括氧、硫及氮。 鹵烷基’’意謂具有一或多個鹵基取代基之烷基’包 括（但不限於）諸如_CH2F、_CHF2及_Cf3之基團。 衍_烧氧基意謂具有一或多個鹵基取代基之烧氧 基。舉例而言，烷氧基"包括-ocf3。 #當：語"不飽和"在本文中用來指示環或基團時，該環或 基團°」為无全不飽和或部分不飽和。 ϋ 術"。雜芳基’係指為4至7員單環系统、7至U員雙環系 統或10至15員三環系統之芳族基團，其具有至少一個含有 至乂個雜原子之環。含有雜原子的雜芳基之各環可含有 個或兩個乳原子或硫原子及/或個氮原子，其限制 條件為各環中雜原子之總數為4或小於4且各環具有至少_ 個碳原子。構成雙環及三環基團之稠環可僅含㈣原子且 可^飽和的、部分飽和的或不飽和的。氮原子及硫原子可 視情況被氧化且氮原子可視情況被季錢化^為雙環或 之雜芳基必須包括至少一個完全芳 ^ 稠環可為芳族的或非芳族的且可二〜但另一或其他 兮^ W’其限制條件為在 該#狀況下連接點將在含有雜原子 卞炙方嶮的任何可用氮原 子次奴原子處。另夕卜’雜芳基其自身之定義包 多個碳原子係、經由雙鍵與氧原子連接以基^ 限制條件為雜芳基為芳族的)，且亦當雜芳基已稠合至(雜 121203.doc 200813065 環或環烷基環上時，該雜環及/或環烷基環可具有一或多 個魏基。 、〇比唑基、吡唑啉基、咪 示範性單環雜芳基包括吨咯基 唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基（亦即，噻二唑 基、異嗔嗤基、吱喃基、喧吩基…惡二唾基…比。定基…比 唤基、鳴咬基、噠唤基、三嗪基及其類似基團。另外，因 雜芳基其自身之定義包括其中—或多個碳原子界^幾基之
U %，故包括諸如2,4-二氫—[1，2,4]三唑酮（亦即，、了） 及其類似基團之環。 示範性雙環雜芳基包括吲哚基、苯幷噻唑基、苯幷間二 氧雜戊烯基、苯幷嗯,坐基、苯幷嗟吩基、㈣基、四氯異 喹啉基、異喹啉基、苯幷咪唑基、苯幷哌喃基、吲嗪基、 苯幷呋喃基、色酮基、香豆素基、苯幷哌喃基、啐喏啉 基、喹喏啉基、吲唑基、吡咯幷吡啶基、呋喃幷吡啶基、 二氫異吲哚基、四氫喹啉基及其類似基團。 不範性二環雜芳基包括咔唑基、苯幷吲哚基、啡啉基、 吖啶基、啡啶基、咄基及其類似基團。 術m雜伸芳基”係指二價雜芳基，亦即，在雜芳基環的 任何可用之兩個連接點處具有連接至兩個其他基團之兩個 連接點的如上所定義之雜芳基。 、、二取代之雜务基”基團為在任何可用連接點處經一或多 個取代基且較佳經丨至4個取代基取代的如上所定義之雜芳 基。不範性取代基包括（但不限於）烷基、經取代之烷基、 121203.doc -19· 200813065 :::經取代之一以上作為燒基取代基所述的彼等 術語"雜環"係指完全飽和或部分不飽 團’其可經取代或未經取代，舉例而言，其為c 糸統、7至11員等摄条处斗、 貝單環 7至U貝雙¥糸統或難。員三環系統， =-個在至少一個含碳原子之環中的㈣：： :雜環基之各環可具有1個，或3個選自氫、氧 子之雜原子，其中氮及硫 ’、 原早介、目& ^卞丌視N况可被氧化且氮雜 Π 可被季錄化。較佳地，兩個鄰近之雜原子不 同％選自氧及氮。為雙環或三環之雜環基必須包括至少一 個非芳族之非碳環’但另一或其他稠環可為芳族的或非芳 =且可為碳環’其限制條件為在該等狀況下連接點將在 3雜原子之非芳環的任何可用氮原子或碳原子處。另 外，雜環基其自身之定義包括其中一或多個碳原子係經由 雙鍵，氧原子連接以界定幾基的環（其限制條件為雜環基 二@芳私的）’且亦當雜環基已稠合至另一環上時，該另 一^可具有一或多個羰基。 不範性單環雜環基包括吡咯啶基、咪唑啶基、四氫呋喃 土 底定基、哌嗪基、吡唑啶基、咪唑啉基、吡咯啉基、 四氫哌喃基、嗎啉基、噻嗎啉基及其類似基團。 ”經取代之雜環”係指在任何可用連接點處經一或多個取 代基且較佳經丨至4個取代基取代的如上所定義之雜環基。 不乾性取代基包括烷基、經取代之烷基 、浠基、經取代之 稀土以及以上作為示範性烧基取代基所述的彼等基團。 121203.doc 200813065 ”羥基”係指-OH。 π硫醇基”意謂基團-SH。 術語”四級氮”係指四價正 、 虱原子，包括（例如）四烷 基叙群（例如，四甲基銨或 叙）中之正電性氮、質 類（例如，三甲基氫銨或N·氫讀）中之正電性氮、 胺N-氧化物（例如，N_甲基_嗎琳_N_氧化物或吼唆善氧化 物）中之正電性氮-胺基·銨群（例如，N-胺基吡錠）中之 正電性氮。 ο 當稱官能基為"受保護官能基"時，此意謂該基團係呈經 修飾之形式以減少且特別為排除在保護位點處發生不希望 有之副反應。用於本文所述之方法及化合物的合適保護基 包括（但不限於）標準教科書中所述之彼等，該等標準教科 書包括以引用的方式併入本文中的Greene，T.W·等人之 Protective Groups in Organic Synthesis， Wiley, N.Y.(1991)。 υ 對於能夠插入式I之化合物中的本文所列出之任何二價 基團（諸如，-(CR8R9)_(CH2)m-Z-)而言’
121203.doc 200813065 插入應自左向右進行。舉例而言，在A界定為_(cr8R9)_(ch山·z_ 之以下情況中’亞甲基與κ連接，且z基團與。丫丙咬基環 之氮連接，如下所示： (RsReC)
本發明之替代性實施例 如上所述，本發明包含具有下式〗之化合物， V-T——Q ~ Μ—Κ—Α
且包括其醫藥學上可接受之鹽及/或溶劑合物。 根據本發明之一實施例， K為〇 ; A為C2.4伸烷基； _〇H ; R2、R3、R4及Rs獨立地為氫或低碳烷基； R6為氫或甲基； 121203.doc •22- 200813065 R!3為視情況經取代之5員或6員雜芳基，較佳為視情況 經取代之嗟嗤基、^定基或嚼哇基；且 Μ為LR3(r〇_C(=〇) ^s 或各汉3也〇 〇 ，其中·· V ； 3。為低兔伸烧基或經取代之低碳伸烧基；且〜為伸芳 基或經取代之稀菩其· … 土，且Rl、、T及Q係如本文其他地 方所述’例如’如在以上發明内容或以下替代性實施例中 所述。 Ο 在本發明之''實施例中，提供具有下式la之化合物：
la 其中V為葉酸雙體社人 L 股、、、口 u 刀且T、Q、Μ及r6係如本文1 他地方所述，你丨‘ l 々 八 ,, 例如，如在以上發明内容或替代性實施例中 或在以下替代性實施例中所述。
V u 舉例而言，V可具有下式：
121203.doc -23- 200813065 其中W及X獨立地為CH或氮； R20為氫、胺基或低碳烷基； R21為氫、低碳烷基，或與R23形成環烷基； 尺22為氫、低碳烷基、低碳烯基或低碳炔基；且 尺23為氫，或與R21形成環燒基。 根據本發明之一實施例，V為：
Ο 根據本發明之一實施例，提供具有下式沁之化合物：
Ο 其中： v為葉酸受體結合部分； Q為 〇、s 或 nr7 ; Μ為具有下式之可釋連接子：
121203.doc •24- 〇 Ο
200813065 較佳為 j/s ; 在各狀況下獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、芳 基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、環烷 基、、工取代之％烧基、環烧基烧基、經取代之環燒基燒 基、雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、經取代 之雜茅基、雜環烷基或經取代之雜環烷基；且較佳為選自 H、甲基、胍基丙基、-(CH2V2-C02H、-CH2-SH、-CH2-OH、 味嗤基（甲基）、胺基丁基及_CH(OH)-CH3之基團；且更佳 為經-C(=〇)-OH 或-NH-C(=NH)_NH2 中之一者取代的 Cl-c3 烷基； q為1至10(較佳為1至5，更佳為1至3);
Ri5、以^及！^ 7獨立地為氫、低碳烷基、經取代之低碳烷 基；且
Rl8、R19、R31、R32、R33、R24、R25、R26、R27、R28 及 R29各自獨立地為Η、低碳烷基、經取代之低碳烧基、環烧 基或經取代之環烷基，或尺以與！^、r31與r32、Ri9與r3i、 R33與R24、R25與R26、R24與R25或R27與R28中之任一組可一 起形成環烷基。 根據本發明之一實施例，提供具有下式之化合物：
121203.doc 25- 200813065 且包括其醫藥學上可接受之鹽及溶劑合物。 根據本發明之一實施例，如本文所述提供治療癌症之方 法，其包含將治療有效量的本發明之共軛物投予需要該治 療之患者。根據一較佳實施例，提供用於治療葉酸受體相 關之癌症的方法，其包含將具有下式之共軛物投予需要該 治療之患者： Ο h2n〆 h2n^-nh co2h
人 使葉酸受體（FR)含量上調之藥劑的使用可在某些癌細胞 或腫瘤類型中有效增強FR表現以增加將本發明之共軛化合 物投予患者後所獲得之優勢及/或增加可用根據本發明之 葉酸受體結合共軛化合物進行治療的多種疾病或腫瘤類 型。在某些癌症中葉酸受體之表現可藉由投予葉酸受體誘 導物而上調，該葉酸受體誘導物在癌症細胞中選擇性增加 葉酸受體含量，從而增強葉酸受體目標治療之有效性。舉 例而言，雌激素受體陽性（ER+)乳癌表現低含量之葉酸受 體。已知用諸如雌激素拮抗劑三苯氧胺之葉酸受體誘導物 進行治療可在ER+乳癌中使葉酸受體之表現上調，增加 ER+乳癌細胞對用葉酸受體目標治療進行治療之易感性。 本發明之一態樣提供一種在有此需要之患者中治療癌症 或增生性疾病之方法，其包含視情況投予有效量之至少_ 121203.doc -26- 200813065 種葉酸受體誘導物及投予有效量的至少一種式I之共輛化 合物。葉酸受體誘導物可在用式I之共軛化合物之前投予 或同時投予。在一實施例中，葉酸受體誘導物係在式 共軛化合物之前投予。葉酸受體誘導物之有效量係指在所 要細胞中使葉酸受體上調以便葉酸受體共軛化合物之投予 在治療上有效之量。 用於使葉酸受體a(FRa)上調之葉酸受體誘導物的實例包 括：雌激素受體拮抗劑，諸如，三苯氧胺；孕酮受體促效 劑，諸如，孕激素；雄激素受體促效劑，諸如，睪固酮及 二羥基睪固酮；及糖皮質激素受體促效劑，諸如，地塞米 松（dexamethasone) ° 用於使葉酸受體P(FRp)上調之葉酸受體誘導物的實例包 括·視黃酸受體促效劑，諸如，全反式視黃酸（ATRA)、四 甲基萘基丙烯基苯甲酸（TTNPB)、9-順式視黃酸（9_順式 RA)、CD33336、LG101093及 CD2781。 在一實施例中，提供一種治療有此需要之患者之癌症或 增生性疾病之方法，其包含投予有效量之至少一種葉酸受 體誘導物及投予有效量之至少一種式I之共輛化合物；其 中該葉酸受體誘導物使葉酸受體α上調。較佳地，該癌症 或增生性疾病係選自諸如ER+乳癌之乳癌以及卵巢癌。 在本發明之一實施例中，提供一種治療有此需要之患者 之癌症或增生性疾病之方法，其包含投予有效量之至少一 種葉酸受體誘導物及投予有效量之至少一種式I之共軛化 合物；其中該葉酸受體誘導物使葉酸受體β上調。較佳 121203.doc -27- 200813065 地，該癌症或增生性疾病係選自白血病，且更佳係選自急 性骨髓性白血病（AML)及慢性骨髓性白血病（CML)。 在另一實施例中，提供一種治療有此需要之患者之癌症 或增生性疾病之方法，其包含投予有效量之至少一種葉酸 受體誘導物，投予至少一種組蛋白脫乙醯基酶抑制劑及投 予有效量之至少一種式I之共軛化合物。組蛋白脫乙酸基 酶抑制劑之一實例為曲古菌素A(trichostatin A，TS A)。美 國專利申請公開案第2003/0170299 A1號、WO 2004/082463 j Kelly，Κ· Μ·、B.G. Rowan及 ML Ratnam， Cancer Research 63, 2820-2828(2003) j Wang ^ Zheng ^ Behm及 Ratnam，，96:3529-3536(2000) o 式（I)之化合物可形成亦在本發明之範疇内的鹽或溶劑合 物。除非另有陳述，否則應瞭解本文中提及式（I)之化合物 包括提及其鹽及溶劑合物。如本文所採用之術語’’鹽”表示 用無機及/或有機酸及鹼形成之酸性及/或鹼性鹽。此外， 當式（I)之化合物含有諸如（但不限於）吡啶基咪唑基、胺或 胍基之鹼性部分及諸如（但不限於）羧酸之酸性部分時，兩 性離子可形成且係包括在如本文所使用之術語”鹽π内。儘 管其他鹽亦可用於（例如）製備期間可採用之分離或純化步 驟中，但醫藥學上可接受（亦即，無毒之生理學上可接受） 之鹽係較佳的。式（I)之化合物之鹽可例如藉由將式（I)之化 合物與諸如當量數之一定量之酸或鹼在諸如其中鹽發生沈 澱之介質的介質中或在水性介質中反應且接著凍乾而形 成0 121203.doc -28- 200813065 含有諸如（但不限於）胺、胍基、。比咬基或咪嗤基環之鹼 性部分的式（I)之化合物可與多種有機酸及無機酸形成鹽。 示範性酸加成鹽包括乙酸鹽（諸如，用乙酸或三鹵乙酸（例 如，三氟乙酸）形成之彼等鹽）、己二酸鹽、海藻酸鹽、抗 壞血酸鹽、天門冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫 鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、擰檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸 鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙炫 石黃酸鹽、反丁烯一酸鹽、葡糖庚酸鹽、甘油填酸鹽、半硫 酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、 羥基乙烷磺酸鹽（例如，2-羥基乙烷磺酸鹽）、乳酸鹽、順 丁烯二酸鹽、甲燒續酸鹽、萘續酸鹽（例如，2_萘項酸 鹽）、煙驗酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、果膠酸鹽、過氧硫酸 鹽、苯基丙酸鹽（例如，3 -苯基丙酸鹽）、麟酸鹽、苦味酸 鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、水揚酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽 (諸如，用硫酉文形成之彼等鹽）、石黃酸鹽（諸如本文中提及之 彼等鹽）、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、諸如甲苯磺酸鹽之甲苯 磺酸鹽類、十一烷酸鹽及其類似鹽。 含有諸如（但不限於）羧酸之酸性部分的式（I)之化合物可 與多種有機鹼及無機鹼形成鹽。示範性鹼性鹽包括銨鹽； 鹼金屬鹽，諸如鈉鹽、鋰鹽及鉀鹽；鹼土金屬鹽，諸如鈣 鹽及鎂鹽；用有機鹼（例如，有機胺，諸如，Ν，Ν，_雙苯甲 基伸乙基二胺、二環己基胺、海卓胺（用队冰雙（脫氫松香 基）伸乙基二胺形成）、Ν-甲基_D_葡糖胺、斗甲基_D_甘醯 胺、第三丁基胺）形成之鹽；及用諸如精胺酸、離胺酸之 121203.doc -29- 200813065 胺基酸形成的鹽；及其類似物。鹼性含氮基團可用如下試 劑來季銨化：低碳烷基_化物（例如，甲基、乙基、丙基 及丁基氯化物、溴化物及碘化物）、二烷基硫酸鹽（例如， 二甲基、二乙基、二丁基及二戊基硫酸鹽）、長鏈_化物 (例如，癸基、十二烷基、十四烷基及十八烷基氯化物、 溴化物及碘化物）、芳烷基鹵化物（例如，苯曱基及苯乙基 溴化物）及其他試劑。 Ο
(J 本發明之化合物之溶劑合物亦涵蓋於本文中。式（I)之化 合物之溶劑合物包括（例如）水合物。 包括對映異構體形式及非對映異構體形式的本發明之化 合物的所有立體異構體（例如，可由於各種取代基上之不 對稱碳而存在之彼等物質）係涵蓋於本發明之範疇内。本 發明之化合物的個別立體異構體可（例如）大體上不含其他 異構體（例如，呈具有指定活性的純或大體上純之光學異 構體），或可為混雜的，例如作為外消旋體，或與所有其 他立體異構體或其他選定之立體異構體混雜。本發明之對 掌性中心可具有如由囊C 1974建議所定義之組 匕外/肖％形式可藉由諸如非對映異構體衍生物之分步結 晶、、分離或結晶或藉由對掌性管柱層析進行之分離的物= =法進行拆分。個別光學異構體可自立體特異性方法獲 仔其中選擇具有與最終產物所要之立體化學相一致之立 體化學的起始物質及/或中間物，且該立體化學在整個反 2=維持，且/或異構體可藉由包括（但不限於）諸如用光 予活性酸形成鹽接著結晶之習知方法的任何合適方法自外 121203.doc -30 - 200813065 消旋體獲得。 本發明涵蓋以混雜物形式或以純或大體上純之形式的本 發明之化合物的所有組態異構體。如可瞭解的，較佳組態 可隨敎化合物及所要活性而變化。組態異構體可藉由本 文所述之可為立體選擇性的方法來製備。換言之，最終化 口物之所要立體化學可藉由使用具有相應之所要立體化學 的起始物質且接著在整個製備方法期間維持立體選擇性而 達成或者化合物可作為外消旋體或非對映異構體來製 備，且接著所要立體化學可經由分離可藉由此領域中已知 之任何合適方法（諸如，管柱層析）達成的組態異構體而達 成0 、在整個說明書中，可選擇基團及其取代基以提供穩定部 分及化合物，其適用作在製造醫藥學上可接受之化合物中 適用的醫藥學上可接受之化合物及/或中間化合物。熟習 此領域者將瞭解變數之合適選擇以獲得穩定化合物。 〇 本文中表不為示範性或較佳之實施例意欲為例證性的且 非限制性。 例如鑒於以上所提及之實施例的組合，本發明之其他實 施例對於熟習此領域者而言將易於瞭解，且係涵蓋於本文 • 所包含的本發明之範疇内。 效用 本發明之共輛化合物係適用於將由埃坡黴素衍生之微管 穩定劑傳遞至表現葉酸受體之腫瘤中。其適用於治療多種 癌症及其他增生性疾病，尤其係特徵為癌細胞或腫瘤表現 121203.doc -31 - 200813065 葉酸受體之彼等癌症。如本文所使用之術語”葉酸受體相 .關之病況”包含特徵為表現葉酸受體之疾病或病症，或換 §之’包含可基於患病組織中葉酸受體之表現含量與正常 • 組織比較來診斷或治療之彼等疾病或病症。 1 作為一非限制性實例，該等葉酸受體相關之癌症包括卵 巢癌及皮膚癌、乳癌、肺癌、結腸癌、鼻癌、咽喉癌、乳 腺癌、肝癌、腎癌、脾癌及/或腦癌；間皮瘤、垂體腺 〇 瘤、子宮頸癌、腎細胞癌或其他腎癌、脈絡叢癌及上皮腫 瘤（參見，Asok，Ant〇ny，"Folate Receptors: Reflections on a Personal Odyssey and a Perspective on Unfolding
Truth ’ Advanced Drug Delivery Reviews 56(2004)，在 1059-66頁）。 另外，抗雌激素（諸如，三苯氧胺、ICI 182，78〇)之使用 可在某些癌細胞或腫瘤類型中有效增強FR表現以增加將本 發明之共軛化合物投予患者後所獲得之優勢及/或增加可 〇 用根據本發明之共軛化合物進行治療的各種疾病或腫瘤類 型。 舉例而言，可用本發明之共輛化合物及/或藉由包含與 抗雌激素組合的本發明之共軛化合物之組合治療進行治療 的疾病可進一步包括（但不限於）以下疾病： -癌’包括以上所列出之彼等癌及/或膀胱癌、胰腺 癌、月癌、甲狀腺癌及前列腺癌； -淋巴系統之造血組織腫瘤，包括白血病，諸如急性淋 巴細胞白血病及急性淋巴母細胞白血病；及淋巴瘤，諸 121203.doc -32- 200813065 如，Β細胞淋巴瘤、Τ細胞淋巴瘤、霍奇金（Hodgkins)淋巴 瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛細胞淋巴瘤及伯基特氏（Burkitts) 淋巴瘤； -骨髓系統之造血組織腫瘤，包括急性及慢性骨髓性白 血病及前髓細胞白血病； -中樞及周邊神經系統之腫瘤，包括星形細胞瘤、神經 母細胞瘤、神經膠質瘤及神經鞘瘤；
Ο -間葉細胞來源之腫瘤，包括纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤及 骨肉瘤；及 -其他腫瘤，包括黑素瘤、著色性乾皮病、精原細胞 瘤、角化棘皮瘤、甲狀腺濾泡癌及畸胎癌。 本發明之共輛化合物適用於治療先前已接受過癌症治療 之患者以及先4未接受癌症治療之彼等患者。本發明之方 法及組合物可用於第一線及第二線癌症治療中。此外，式 I之共軛化合物可適用於治療難治癒或抗性癌症。 本發明之共軛化合物亦可適用於治療對經由葉酸受體傳 遞之微管穩定劑有反應的其他病況，包括（但不限於）關節 炎’尤其為發炎性關節炎及其他由活化巨噬細胞介導之發 人病况’以及中樞神經系統病，症，諸如，阿茲海默氏病 (Alzheimer丨s disease)。 此外，本發明之共軛化合物可與適用於治療癌症或其他 增生性疾病之其他抗癌劑及細胞毒素藥劑及治療組合投 予在。療癌症中，本發明之化合物與一或多種額 及/或其他治療之組合可為有利的。第二藥劑可具有與; 121203.doc -33 - 200813065 ⑴之化合物相同或不同 與細胞毒素藥物組合， 化合物的活性藥物部分 段起作用。 之作用機制。尤其有用的係抗癌藥 其中選定之第二藥物以與本發明之 不同之方式或在不同之細胞週期階 抗癌劑類及細胞毒素藥劑類型之實例包括（但不限於）垸 基化1諸如’鼠芥、院基續酸鹽、亞磺基尿素、伸乙美 亞胺及三氮烯；抗代謝物質，諸如，葉酸拮抗劑、嗓吟： 似物及㈣類似物；抗生素或抗體，諸如單株抗體，·酵 素，法呢基（farnesyl)蛋白質轉移酶抑制劑；激素藥劑，諸 如糖皮質激素、雌激素/抗雌激素、雄激素/抗雄激素、 孕激素及黃體促素釋放拮抗劑；微管破裂劑，諸如，依特 那斯/丁（eeteinaseidin)或其類似物及衍生物；微管穩定劑； 植物來源之產物’諸如長春花屬生物鹼、表鬼臼脂素及紫 杉烷；拓撲異構酶抑制劑；含異戊二烯基之蛋白質轉移酶 抑制劑；鉑配位錯合物；激酶抑制劑，包括多激酶抑制劑 及/或Src激酶或Src/abl之抑制劑；信號轉導抑制劑；及用 作抗癌劑及細胞毒素藥劑之其他藥劑，諸如，生物反應改 貝劑、生長因子或免疫調節劑。式j之共輛化合物亦可結 合放射性治療使用。 可與本發明之化合物組合使用之抗癌劑的其他實例包括 Six激酶抑制劑ν·(2_氣-6-甲基苯基）_2-[[6-[4_(2_羥基乙 基）-1-哌嗪基]-2-甲基-4-嘧啶基]胺基]•噻唑甲醯胺及以 引用的方式併入本文中之美國專利第6,5 96,746號及2〇〇5年 2月4日申請之美國專利申請案第11/〇51，2〇8號中所述的其 121203.doc -34- 200813065 他化合物；氮雜-埃坡黴素B類似物伊沙匹隆及/或美國專 利第 6,605,599 號；第 6,262,094 號；第 6,288,237 號；第 6,291，684 號； 第 6,359，140 號； 第 6,365,749 號； 第 6,380,395 號； 第 6,399,638 號； 第 6,498,257 號； 第 6,518,421 號； 第 6,576,651 號； 第 6,593，115 號； 第 6,613,912號；第6,624,310號、2003年3月公開之美國申請 案第2003/0060623號；德國專利第4138042.8號；WO 97/19086 > WO 98/22461、WO 98/25929、WO 98/38192、 WO 99/01124、WO 99/02224、WO 99/02514、WO 99/03848 > WO 99/07692 > WO 99/27890、WO 99/28324、 WO 99/43653、WO 99/54330、WO 99/54318、WO 99/54319、WO 99/65913、WO 99/67252、WO 99/67253、 WO 00/00485、美國專利申請案第2004/0053910號及第 2004/0152708號中所述之其他埃坡黴素類似物；WO 99/24416中可見之週期素依賴性激酶抑制劑（亦參見美國專 利第 6,040,321號）；WO 97/30992及 WO 98/54966中可見的 含異戊二烯基之蛋白質轉移酶抑制劑；美國專利第 6,011，029號中所述之法呢基蛋白質轉移酶藥劑；卩(：丁公開 案第冒〇01/14424號中所述之（：11^-4抗體及/或？(：丁公開案 第WO 00/37504號中所述之CTLA-4抗體，諸如，稱為CP-675206(替斯莫納（ticilimunab))，ORENCIA® ; MDX-010 ; 長春氟寧（vinflunine，JavlorTM)及愛必妥（Erbitux，西妥昔 單抗（cetuximab))之抗體。 可能適用於組合本發明之化合物的其他藥劑可包括紫杉 121203.doc •35· 200813065 醇（TAX0L⑧）、多烯紫杉醇（TAXOTERE®)、各種其他藥劑 (諸如’羥基脲、甲基苄肼、鄰氯苯對氯苯二氯乙烷、六 甲搶fe、順氣胺叙（cisplatin)及卡波翻（carboplatin);阿瓦 斯丁（Avastin);及赫赛汀（Herceptin))。 本發明之化合物亦可與因其在與上述病況相關之投予治 療中的特殊適用性而選出之其他治療劑一起調配或共投 予。舉例而§ ’本發明之化合物可與諸如抗唱劑以及％及 H2抗組胺劑的預防噁心、過敏及胃受刺激之藥劑一起調 上述其他治療劑當與本發明之化合物組合採用時可（例 如）以Physicians’ Desk Reference(pDR)中所示或如另外由 一般技術者所確定之彼等量來使用。
U 本發明之化合物可藉由任何合適方法（例如，非經腸， 諸藉由皮下、靜脈内、肌肉内或胸骨内注射或輸注技術 (例如’以無菌可注射水性或非水性溶液或懸浮液））且/或 以含有無毒之醫藥學上可接受之媒劑或稀釋劑的劑量單位 調配物來投予以㈣本文所述之用途中的任—種。本發明 之化口物可(例如)以適於立即釋放或延遲釋放之形式投 予。立即釋放或延遲釋放可藉由使用包含本發明之化合物 的合適醫藥組合物或尤其在延遲釋放之狀況下藉由使用諸 如皮下植入物或滲透泵之裝置而達成。 ，^腸Μ之示範性組合物包括可注射之溶液或懸 ’、σ S有（例如）合適的無毒非經腸可接受之稀釋劑 ^谷劑，諸如，甘露醇…二醇、水、林格氏溶液 121203.doc -36 - 200813065 (Ringer’s solution)、等張氯化鈉溶液（〇9%氯化鈉注射劑 [生理鹽水]或5 %右旋糖注射劑），或可含有其他合適之分 散劑或濕潤劑及懸浮劑，其包括合成之甘油一酸酯或甘= 二酸酯及脂肪酸。投予本發明之化合物的醫藥學上可接受 之組合物及/或方法可包括使用包括（但不限於）乙醇、N，N_ 二甲基乙醯胺、丙二醇、甘油及聚乙二醇（例如，聚乙二 醇300及/或聚乙二醇400)之共溶劑，可包含使用界面活性 劑（可用於藉由減小化合物之表面張力而增強其分散或濕 潤性質的醫藥學上可接受之表面活性劑），包括（但不限 於）CREMOPHOR、S〇LUTOL HS W、聚山梨醇酯 8〇、 聚山梨醇酯20、泊洛沙姆（p〇i〇xamer)、諸如N_烷基吡咯啶 酮（例如，N-甲基吡咯啶酮）及/或聚乙烯吡咯啶_之吡咯啶 酮；亦可包含使用一或多種”緩衝液”（例如，在添加增量之 酸或鹼後賦予抵抗介質之有效酸度或鹼度變化之能力的成 份），包括（但不限於）磷酸鈉、檸檬酸鈉、二乙醇胺、三乙 醇fe L·精胺酸、L-離胺酸、L-組胺酸、L-丙胺酸、甘胺 酸、碳酸鈉、緩血酸胺（a/k/as[羥基甲基]胺基甲烷或THs) 及/或其混合物。 本發明之化合物之有效量可由一般技術者來確定，且包 括約0.01-10 mg(活性化合物）/kg(體重）的示範性成人日劑 蓋’其可以單劑量投予或以個別分次劑量之形式（諸如， 每天1至4次）投予。較佳之範圍包括約0.02至5 mg/kg(體重） 之劑量，其中範圍為約0.05-0.3最佳。應瞭解用於任何特 殊文檢者之特定劑量及給藥頻率可變化且將視包括如下因 121203.doc -37- 200813065 素之多種因素而定··所採用之特定化合物之活性、彼化合 物之代謝穩定性及作用持續時間、受檢者之種類、年齡、 體重、一般健康狀況、性別及飲食、投藥模式及時間、排 泄速率、藥物組合及特殊病況之嚴重程度。較佳受治療之 文檢者包括患有微管穩定性相關之病況的動物，最佳為哺 乳動物類（諸如，人類）及家畜（諸如，狗、貓及其類似家 畜）。 諸如在一或多個以下實例中所揭示之化合物的本發明之 化合物已在一或多個以下所述檢定及/或此領域中已知之 檢定中進行測試，且顯示作為微管穩定劑的可量測之活性 水平。 核心集團細胞群存活檢定 將癌細胞以3 · 0 E+0 5個細胞接種於具有不含葉酸但含有 10%胎牛血清及25 mM HEPES之10 ml RPMI1640培養基的 T75燒瓶中。使細胞在含有5% c〇2之37°C恆溫箱中生長2 天。於第2天將上清液自燒瓶移除，且將燒瓶分為兩組。 一組細胞係用含有1〇〇 Μ葉酸（Sigma)之5 ml培養基培養3〇 分鐘’且其他細胞係在未添加葉酸之5…培養基中生長。 接著用20 nM埃坡黴素 '埃坡黴素類似物、共扼埃坡黴素 或共輛埃坡黴素類似物處理細胞1小時。在培養結束時將 藥物自燒瓶移除且用PBS緩衝液洗滌細胞3次。洗滌後，將 5 ml完全培養基添加入各燒瓶中，且使細胞在c〇2恆溫箱 中生長23小時。次日早晨，藉由胰酶消化將細胞自燒瓶移 出’測定細胞數，且接著將細胞塗於一 6孔板中。在塗後 121203.doc -38- 200813065 1 〇天，用結晶紫對群落進行染色，且計數。測定出存活 率。 活體外MTS增殖/細胞毒性檢定 活體外細胞毒性係在腫瘤細胞中使用基於四唑鏽之比色 檢定進行評估，該檢定利用MTS(3-(4,5-二甲基售嗤_2_ 基）-5-(3-羧基甲氧基苯基）-2-(4-次磺醯基）-2H-四唑鏽，内 鹽）代謝性轉化為吸收492 nm之光的還原形式。細胞係在 添加埃坡黴素、埃坡黴素類似物、共軛埃坡黴素或共軛埃 坡黴素類似物前24小時接種。在用連續稀釋之化合物於 3 7 C下培養72小時後’將與電子偶合劑啡唤硫酸甲酯組合 之MTS添加至細胞中。繼續培養3小時，接著用分光光度 計量測492 nm處的培養基之吸光度以獲得存活細胞相對於 對照群體之數量。結果係以中值細胞毒性濃度值）表 示。 葉睃受體檢定 用於FR檢定之所有樣品製備程序係在4。〇下執行。使用 PowerGen 125均質機將組織樣品在均質化缓衝液（1〇 mM Tris，pH8.0，焭抑蛋白酶肽及抗蛋白酶各為〇 〇2 mg/ml ; 1 ml緩衝液/5〇 mg組織）中均質化。藉由溫和離心（3〇〇〇 X g，15 min)將大碎片移除。接著藉由以4〇 〇〇〇 χ g離心6〇 匀鐘而收集膜小球，且將其重懸浮於助溶緩衝液（5 〇 mM Tris，pH 7.4, 150 mM Naa，25 罐正辛基 _βΐ)葡萄哌 喃糖苷，5 mM EDTA及0.02%疊氮化鈉）中。藉由再一次離 心（4M〇〇 X g’ 60分鐘）將*溶物質移除，且藉由二啥淋 121203.doc -39- 200813065 甲酸（BC A)方法（Pierce Chemical)測定上清液之總蛋白濃 度。接著以助溶緩衝液將各樣本稀釋至〇·25 mg/ml，且將 100 μΐ置於兩台 Microcon-30微型濃縮器（30,000-MW cutoff， Millipore)之每一者内。接著在室溫下以14,000 X g使樣品 離心1 0分鐘以使所有液體通過膜且以將溶解之FR保留於微 型濃縮器膜之表面上。所有隨後的離心步驟係使用該等相 同參數執行。接著將55 μΐ 30 mM乙酸鹽缓衝液（pH 3.0)添 加至各微型濃縮器中，隨後進行離心步驟。緊接著將55 μΐ 磷酸鹽緩衝鹽水（PBS)分配至各微塑濃縮器中，接著進行 又一次離心。接著將50 μΐ [3H]葉酸結合試劑（120 nM [3H] 葉酸（Amersham)在含有 500 mM NaCl、2·7 mM KC1 及 25 mM正辛基-β-D-葡萄哌喃糖苷之10 mM Na2P04，1.8 mM KH2P〇4, pH 7·4中）或50 μΐ競爭試劑（結合試劑加上120 μΜ 未標記之葉酸）添加至適當濃縮器中。室溫下培養20分鐘 後，用75 μΐ 50 mM正辛基-β-D-葡萄哌喃糖苷，0.7 Μ NaCl(在PBS中，pH 7·4)洗滌/離心濃縮器三次。最終洗滌 後，藉由兩次用含有4% Triton X-100之100 μΐ PBS進行沖 洗而自微型濃縮器之膜表面回收含有溶解之FR的保留物。 接著在液體閃爍計數器（Packard Bio science)中對樣品進行 計數。基於已知標準品之cpm將每分鐘計數（cpm)值轉化為 FR之皮莫耳數，且根據樣品蛋白質含量將最終結果正規 化。 動物及腫瘤 在該等研究中使用保持在受控環境中且以適量水及食物 121203.doc -40- 200813065 供應的雌性CD2F1小鼠（Harlan Sprague_Dawley Inc.，20-22 g) ° 鼠 FRaO)馬迪遜（Madison)109(M109)肺癌（Marks 等 人’ 1977)及FR-表現（FRa(+))98M109變異體係用來評估埃 - 坡黴素、埃坡黴素類似物（例如，埃坡黴素衍生物）、葉酸_ ! 埃坡黴素共軛物或葉酸-埃坡黴素類似物共輛物之功效。 此外’在裸鼠中生長之人類頭及頸表皮樣癌KB亦用於此 目的。 藥物治療及抗腫瘤功效評估 〇 為將埃坡黴素或埃坡黴素類似物投予小鼠，使用由以下 物質組成之賦形劑：CREMOPHOR®/乙醇/水（1:1:8，v/v)。 將化合物首先溶解於CREMOPHOr，乙醇（50:50)之混合物 中。在藥物投予前1小時以内進行最終稀釋直至所需劑量 濃度。藉由經尾靜脈之團式靜脈注射將藥劑投予大鼠。葉 酸-埃坡黴素共軛物或葉酸-埃坡黴素類似物共軛物係於無 菌磷酸鹽緩衝鹽水中製備且藉由經尾靜脈之團式靜脈注射 〇 以0·01 mL/g(小鼠）之體積投予小鼠。各動物之治療係基於 個別體重。 • 在實驗開始時，集中偵測有意義反應所需之動物的所需 數里且對各動物進行腫瘤漿（2% w/v)之皮下接種。使腫瘤 生長4天。在第4天，將動物均一地分配至各個治療組及對 照組。每天核查經治療之動物的治療相關毒性/死亡率。 在治療開始前稱重各組動物（wtl)然後在最後治療給藥後 再次稱重各組動物（Wt2)。體重之差（Wt2-Wtl)提供治療相 關毒性之量度。 121203.doc -41 · 200813065 腫瘤反應係每週兩次藉由用測徑規量測腫瘤來判定，直 至腫瘤達到預定"目標”尺寸i gm。腫瘤重量（mg)係根據下 式來估計： 腫瘤重量=(長度X寬度2)+2。 抗腫瘤活性係以最大耐受劑量（MTD)來評估，被定 義為低於且最接近過度毒性（亦即，一隻以上死亡）出現之 劑里的劑量。當出現死亡時，記錄死亡日期。在腫瘤達到 目標尺寸前死亡的經治療之小鼠視為已因藥物毒性而死 亡。沒有具有小於目標尺寸之腫瘤的對照小鼠死亡。有一 隻以上因藥物毒性而死亡之治療組視為已接受了過度毒性 治療，且其資料不包括在化合物之抗腫瘤功效評估中。 腫瘤反應終點係以腫瘤生長延遲（T_C值）表示，該腫瘤 生長延遲被定義為經治療之腫瘤（τ)達到預定目標尺寸所 需之時間（天）與對照組（C)之彼等時間的差。 為評估腫瘤細胞殺滅，首先根據下式計算腫瘤體積倍增 時間（TVDT): TVDT 一對照腫瘤達到目標尺寸之中值時間(天)_對照腫瘤 達到一半目標尺寸之中值時間（天） 且， 對數細胞殺滅=T-C+(3.32x1^1)1^ 資料之統計評價係使用格翰氏廣義威爾卡遜測試（Qehan generalized Wilcoxon test)來執行。 縮寫 為了便於參考 在本文之流程及實例中使用α下縮寫·· 121203.doc -42- 200813065 CBZ-OSu=N-(苯甲氧基羰基氧基）琥珀醯亞胺 DCM=二氯甲烷 DEA=二乙胺 DIAD =偶氮二甲酸二異丙酉旨 DIPEA=二異丙基乙胺 DMA=二曱胺 DMF =二甲基甲醯胺 D M S Ο =二甲亞石風 EDC= 1-(3-二甲基胺基丙基）-3-乙基碳化二醯亞胺鹽酸鹽
EtOH=乙醇
EtOAc=乙酸乙酯 HOBt=n-羥基苯幷三唑 HPCL=高效液相層析 iPr-OH或IPA=異丙醇 LC/MS =液相層析/質譜分析 LDA=二異丙基醯胺鋰
MeOH=曱醇 OTES = o-三乙基矽烷基 OMs=甲磺酸鹽
Ph=苯基
Pd/C =碳載姜巴
PyBOP =六氟磷酸苯幷三唑-1-基·氧基三吡咯啶基鱗 Py= 口比唆基 RT=室溫 121203.doc -43- 200813065
Sat’d=飽和 THF=四氯ϋ夫喃 TFA=三I乙酸 TLC=薄層層析 TESCL=氯三乙基碎烧 uv=紫外線 製備方法 本發明之化合物一般可根據以下流程及熟習此項技術者 》 之知識及/或使用美國專利第6,605,599號；第6,831，090 號；第 6,800,653 號；第 6,291，684號；第 6,719,540號；美 國專利申請公開案第2005/0002942號及OgaWc ZeiierL 2001，3，2693-2696(其揭示内容以引用的方式併入本文中） 中及/或在以下實例中所述之方法進行製備。 如流程1中所示，式X之化合物可自式II之化合物來製 備。式II之化合物可藉由醱酵（參見，例如，Gerth等人之 、 M Studies on the Biosynthesis of Epothilones: The
J
Biosynthetic Origin of the Carbon Skeleton”，Journal of Antibiotics，第53卷，第12號（2000年12月）及Hofle等人之 "Epothilone A and B_ Novel 16-Membered Macrolides: Isolation， Crystal Structure, and Conformation in Solution”，Angew. Chem. Int· Ed. Engl·，第 35卷，第 13/14 號，1567-1569(1996)，其揭示内容以引用的方式併入本文 中）或藉由合成（參見，例如，Vite等人之美國專利第 6,605,599號；第 6,242,469號；第 6,867,333 號、美國專利 121203.doc -44- 200813065 申請公開案第2006/004065號；及Johnson等人之 2000，2:15 37-40，其揭示内容之全文以引用的方 式併入本文中）獲得。舉例而言，式Π之化合物（其中r2、 : R3、R4、Rs及R12為甲基，；^為羥基，1^與116為氫，且R2 ： 為2_甲基噻唾基）係稱為埃坡黴素A且如以上所提及可自 •猶·鱗准#苈之醱酵獲得。式II之化合物可轉化為p為矽燒 基保護基（諸如，三乙基矽烷基、第三丁基二甲基矽燒 基、第二丁基二苯基石夕烧基、三異丙基石夕炫基及其類似基 團）的弍I了了之化合物（參見，例如，Greene等人， Protective groups in Organic Synthesis** j John Wiley and Sons，Inc·)。例如，p為三乙基矽烷基的式⑴之化合物可藉 由在胡尼格氏鹼（Hunig，s base)存在下用氯三乙基矽烷處理 式II之化合物而製備。在Bl於式^之化合物中為羥基之狀 況下，則B!亦將轉化為相應之矽烷基醚。式IV之鹵醇（γ為 Cl、Br或I)可藉由此項技術中已知之方法，藉由用金屬鹵 (J 化物鹽處理而自式111之化合物製備。舉例而言，在低溫 (-20至-5 C)下使用溴化鎂醚合物之環氧化物開環可提供非 • 對映異構體鹵醇，其中Y為溴。式V之化合物可藉由使用 (例如）疊氮化鈉在諸如二甲基甲醯胺之極性溶劑中置換鹵 素而自式IV之化合物製備。一般技術者將認識到如流程j 中所示的<^2處之立體化學不應解釋為限制性的，而應解 釋為示範性的。必要時，則Ci2位置處之立體化學的反轉 可按照此項技術中所確定之光延（Mitsun〇bu)方案達成。例 如，用對石肖鮮甲酉楚、偶氮二賴二乙_及三苯鱗處理式 121203.doc •45- 200813065 v之化合物提供相應之硝基苯甲酸酯，其可接著使用（例 如）氨之曱醇溶液的溫和酯水解而裂解以提供式VI之化合 物。同樣地，如化合物VI中所示的c12之立體化學為非限 制性的，且如此圖示以顯示如所述的化合物V之處理將反 轉彼位置處之立體化學。或者，其他有機酸、偶氮二羧酸 酯及有機膦可用於實現光延反轉。OG為脫離基（諸如，甲 石黃酸S旨基、甲苯石黃酸酯基、石肖基苯磺酸醋基、三氟甲石黃酸 酯基及其類似基團）的式VII之化合物可藉由此項技術中已 知之方法自式VI之化合物來製備。例如，在諸如二氣甲烷 之合適有機溶劑中用甲烷磺醯氯及三乙胺處理VI提供OG 為甲磺酸酯基的式VII之化合物。式VIII之化合物可藉由用 諸如有機膦（例如，三曱膦）之還原劑使疊氮基還原而自式 VII之化合物製備。或者，式VIII之化合物可使用諸如三苯 膦之有機膦還原劑自式VI之化合物直接製備。式IX之化合 物可藉由此項技術中已知之方法自式VIII之化合物來製備 (參見，例如，美國專利第6,800,653號；及Regueiro-Ren等 A 5 Organic Letters, 2001，3，2693-2696) 〇 舉例而言，H-K-A-為2-羥基乙基的式IX之化合物可使用（例如）過量2-溴 乙醇及諸如碳酸鉀之鹼，藉由氮丙啶環之烷基化作用自式 VIII之化合物來製備。式X之化合物可藉由使用此項技術 中已知之方法移除矽烷基醚保護基而自式IX之化合物製備 (參見，例如，Greene等人，’’Protective groups in Organic Synthesis’’，John Wiley and Sons，Inc.)。例如，當 P為三乙 基矽烷基時，在二氯曱烷中用三氟乙酸處理式IX之化合物 121203.doc -46- 200813065 實現去保護作用以提供式χ之化合物。 流程1
〇 葉酸類似物或衍生物V及式I之化合物的二價連接子T-Q 可使用此項技術中已知之方法進行裝配，特別係在V為葉 酸或葉酸類似物（如揭示内容以引用的方式併入本文中之 Jackson等人之 Drwg 56(2004) 1111- 1125所述進行裝配）及T-Q為肽之狀況下。例如，肽基葉酸 XI可如流程2中所示來製備。用Fmoc保護之天門冬胺酸、 精胺酸、天門冬胺酸及接著麩胺酸使負載半胱胺酸之聚苯 乙烯樹脂發生連續肽偶合可使用PyBOP作為偶合劑及哌啶 121203.doc -47- f
200813065 作為Fmoc去保護劑而實現。N1G-三氟乙醯胺保護之喋酸可 藉由將葉酸酶促（羧肽酶G)轉化為喋酸且接著使用三氟乙 酸酐進行N1G-保護而以兩步來製備。接著，N1G-保護之喋 酸與樹脂結合肽偶合，隨後用三氟乙酸自樹脂裂解出且使 用氳氧化銨移除N1G-三氟乙醯基提供式I之化合物的V-T-Q 片段，其中V為葉酸且T-Q為-Asp-Arg-Asp-Cys-OH。或 者，可使用喋酸類似物替代喋酸，且可使用其他胺基酸替 代流程2中所說明之彼等胺基酸。 流程2 H-Cys(4-甲氧基三苯甲基)-2-氯三苯甲基-樹脂（負載〇.57mmol/g) 1) Fmoc-Asp(OtBu)-OH5 PyBOP? DIPEA, DMF, 接著為哌啶 2) Fmoc-Arg(Pbf)-OH，PyBOP，DIPEA，DMF， 接著為哌啶 3) Fmoc-Asp(OtBu)-OH5 PyBOP? DIPEA, DMF5 接著為哌啶 4) Fmoc-Glu-OtBu，PyBOP，DIPEA，DMF， 接著為哌D定
5) N10TFA 喋酸，PyBOP，DIPEA，DMSO 6) 92.5% TFA，2.5% H20, 2.5% i-Pr3SiH， 及2.5%乙烷二硫醇 η 7)腿4〇脉溶液，接著添加HC冰溶液
XI 式I之化合物的最終裝配可藉由使式X之埃坡黴素類似物 121203.doc -48- 200813065 與片段V-T-Q偶合且藉由逐步併入可釋連接子Μ而達成。 舉例而言，-Α-Κ-Η為-CH2CH2OH的式X之化合物可使用式 XII之活化苯幷三唑化合物而轉化為碳酸二硫基乙酯XIII。 式XII之化合物可自酼基乙醇、甲氧羰基次磺醯氯及視情 況經取代之2-巯基吡啶來製備以提供中間物2-(2-吡啶-2· 基）二硫基）乙醇，其可接著藉由用雙碳醯氯及視情況經取 代之1-羥基苯幷三唑處理而轉化為式XII之化合物。二硫 化物與諸如XI之肽基葉酸的隨後交換提供式I之化合物， 其中 V 為葉酸，T-Q 為-Asp-Arg-Asp-Cys-OH ， Μ 為-sch2ch2o(c=o)-，Α為-CH2CH2·且Κ為 〇。 流程3
流程4闡明一種自式XIV之化合物製造式X之化合物的替 代性方法。式XIV之化合物可藉由此領域中熟知之方法獲 得，例如，藉由醱酵（參見，例如，Gerth等人，"Studies 121203.doc -49- 200813065 on the Biosynthesis of Epothilones: The Biosynthetic Origin of the Carbon Skeleton”，Journal of Antibiotics，第 53卷， 第 12 號（2000 年 12 月）及 Hofle 等人，，’Epothilone A and B-Novel 16-Membered Macrolides: Isolation， Crystal
Structure, and Conformation in Solution”，Angew. Chem. Int. Ed· Engl·，第 35卷，第 13/14號，1567-1569(1996)，其 揭示内容以引用的方式併入本文中）或藉由全合成（參見， 例如，Vite等人，美國專利第6,605,599號；第6,242,469 號；第6,867,333號及美國專利申請公開案2006/004065， 其揭示内容之全文以引用的方式併入本文中）獲得。舉例 而言，式XIV之化合物（其中R2、R3、R4、R5及R12為曱 基，Bia羥基，心與！^為氫，且R2為2-甲基噻唑-4-基）係 稱為埃坡黴素C，且如上所提及可自.鐵，韓准農磨之醱酵獲 得。式XIV之化合物可轉化為P為矽烷基保護基（諸如，三 乙基矽烷基、第三丁基二甲基矽烷基、第三丁基二苯基矽 烷基、三異丙基矽烷基及其類似基團）的式XV之化合物（參 見，例如，Greene 等人，’’Protective groups in Organic Synthesis”，John Wiley and Sons，Inc.)。例如，卩為三乙基 矽烷基的式XV之化合物可藉由在諸如胡尼格氏鹼之鹼存 在下用氣三乙基矽烷處理式XIV之化合物而製備。在Βι於 式XIV之化合物中為羥基之狀況下，則I亦將轉化為相應 之矽烷基醚。式XVI或XVII之i醇（Y為Cl、Br或I)可藉由 此項技術中已知之方法，藉由用鹵素Υ2處理而自式XV之 化合物製備。例如，使用碘在諸如乙腈之極性溶劑中的親 121203.doc -50- 200813065 電子加成可立體選擇性地提供式XVI及XVII之區位異構鹵 醇，其中Y為碘。或者N-鹵基琥珀醯亞胺亦可用於相同轉 化。式XVIII之化合物可在諸如乙腈/水之極性/水性溶劑系 統中於諸如三乙胺或胡尼格氏鹼之鹼存在下藉由環氧化物 閉環而自式XVI及/或XVII之化合物製備。必要時，則化合 物XIV可直接轉化為式XVI及/或XVII之化合物（其中P為 H)，其可接著轉化為環氧化物XVIII(其中P為H)。式XVIII 之化合物可在醇溶劑中於無機疊氮化物鹽或四烷基銨疊氮 化物存在下藉由疊氮化物置換而轉化為式VI及XIX之疊氮 基醇。在P為矽烷基保護基之狀況下，OG為脫離基（諸 如，甲績酸g旨基、甲苯績酸g旨基、硝基苯石黃酸@旨基、三氟 曱磺酸酯基及其類似基團）的式XX及/或XXI之化合物可藉 由此項技術中已知之方法自式VI及/或XIX之化合物來製 備。例如，在諸如二氯甲烷之合適有機溶劑中用甲烷磺醯 氣及三乙胺處理VI及/或XIX提供OG為甲磺酸酯基的式XX 及XXI之化合物。式VIII之化合物可經由此項技術中已知 之方法，藉由疊氮基之還原自式XX及/或XXI之化合物製 備。例如，化合物VIII可在諸如乙腈之極性溶劑中經由與 諸如有機膦（例如，三甲膦）之還原劑反應而自式XX及/或 XXI之化合物製備。或者，當P為Η時，式VIII之化合物可 在諸如乙腈之極性溶劑中藉由用諸如有機膦（例如，三苯 膦）之還原劑使疊氮基還原而自式VI及/或XIX之化合物直 接製備。式IX之化合物可藉由此項技術中已知之方法自式 VIII之化合物製備（參見，例如，美國專利第6,800,653號； 121203.doc -51 - 200813065
及 Regueiro-Ren 等人，Organic Letters，2001，3，2693-2696)。舉例而言，H-K-A·為2-羥基乙基的式IX之化合物 可使用（例如）過量2-溴乙醇及諸如碳酸鉀之鹼，藉由氮丙 啶環之烷基化作用自式VIII之化合物製備。在P為三烷基 矽烷基之狀況下，式X之化合物可藉由使用此項技術中已 知之方法移除矽烷基醚保護基而自式IX之化合物製備（參 見，例如，Greene 等人，’’Protective groups in Organic Synthesis”，John Wiley and Sons，Inc·)。舉例而言，當 P為 三乙基矽烷基時，在二氯曱烷中用三氟乙酸處理式IX之化 合物實現去保護作用以提供式X之化合物。 流程4
121203.doc •52- 200813065 現將根據以下例證性實例來進一步描述本發明。 實例 實例1 葉酸共輛埃坡擻素類似物 如以上詳細描述中所述般，葉酸類似物及衍生物係描述 於Vlahov中。在針對共軛埃坡黴素及埃坡黴素類似物化合 物的葉酸受體靶向腫瘤細胞之研究與開發中，一些化合物 係與葉酸共輛。例如，化合物AA與化合物BB被視為與葉 酸共輛之候選物。
化合物AA在II期臨床試驗中具有活性，且製備化合物 AA(化合物AA.I至AA.VI ;參見圖1)之六種葉酸共軛物且 視情況在細胞培養中測試其化學穩定性、FR結合及FR介 導之活性。 化合物AA之葉酸共軛物與FR的結合係在量測放射性標 記之葉酸自生長至匯合之KB腫瘤細胞上所表現之FR移位 的檢定中測得。化合物AA.I及AA.II之葉酸共軛物的結合 被認為係可接受的[相對親和力（RA)大於0.25 ;葉酸之RA 等於1.0]。然而，令人驚訝的係圖1中所示的化合物AA之 六種共軛物中沒有一種共軛物在量測3H-胸苷併入之抗增 121203.doc •53 · 200813065 殖檢定中顯示明顯抗KB腫瘤細胞之細胞毒性（資料未顯 示）。 因化合物AA之共軛物顯示不令人滿意的抗腫瘤細胞之 細胞毒性’故使用化合物BB(化合物BB.I至BB.III)之三種 共軛物進行研究。化合物BB亦稱為埃坡黴素F，且為化合 物AA(其中21-胺基係由21-羥基取代）之類似物。化合物 ΒΒ·ΙΙ(圖2)在高濃度下顯示細胞毒性的同時，活性在使用 過量葉酸之競爭性研究中無衰減。因此，所觀測之細胞毒 性係歸因於化合物ΒΒ.ΙΙ之非特異性釋放。 其他埃坡黴素類似物（例如，吖丙啶基埃坡黴素）在此項 技術中係已知的（參見，例如，美國專利第6,399,638號；
Regueiro-Ren，Α等人，（2001)0rg· 3:2693-96)且顯 示有效抗腫瘤細胞毒性。例如，進行比較許多種埃坡黴素 類似物抗一對抗紫杉院癌細胞株（HCTVM46與A2790Tax) 之相對細胞毒性效能的MTS檢定（參見表1)。HCTVM46為 源自敏感性HCT116母株之人類結腸癌細胞株，且由於170 kD p-糖蛋白藥物流出轉運體之過度表現而對紫杉烷有抗 性。A2780Tax為源自A2780母株之人類卵巢癌細胞株，且 因微管蛋白胺基酸序列中使結合紫杉醇之能力削弱的突變 故對紫杉醇有抗性。 如表1中所示，與其他已知抗腫瘤劑（例如，紫杉醇、化 合物AA及埃坡黴素B)相比，各種吖丙啶基埃坡黴素類似 物（化合物CC-EE)顯示抗HCT116結腸癌細胞株及A2780卵 巢癌細胞株之有效抗腫瘤活性。 121203.doc -54- 200813065 表1 12,13-吖丙啶基埃坡黴素之活體外活性
化合物 R HCT116 IC5〇 (nM)1 R/S比率2 A2780 IC5〇 (nM)1 R/S比率3 CC -H 4.2 ±2.8 3.1 3.4 士 1·5 4.7 DD -ch3 0.37 + 0.13 0-6 0.25 + 0.06 4.1 EE -CH2CH2OCH3 0.40 ± 0.25 0.8 0.22 ±0.12 4.7 紫杉醇 — 3.3 ±1.0 150 3.1 ±1.0 22.1 AA -- 1.2 ±0.3 14.8 1·1±0·4 3 埃坡黴素B — 0.40 ±0.13 0.5 0·23 士 0.09 2.5 1平均1<1：5()±80，由四組單獨實驗進行計算。 R/S 比率=HCT116 IC5〇/HCT116VM46IC50 Ο 3 R/S 比率=A2780 IC5〇/A2780Tax IC50 不論吖丙啶基埃坡黴素化合物CC-EE之抗腫瘤活性如 • 何，可用於與葉酸共軛之該等分子上的僅有羥基為存在於 C3及C7破原子上之彼等。因此，在已對許多坡黴素化合物 及類似物進行研究後，仍需要發現將容易用於與葉酸共輛 且將經由活性埃坡黴素部分在腫瘤細胞中之特異性釋放而 表現活性的化合物。 發現具有下式之吖丙啶基埃坡黴素化合物G。 121203.doc -55- 200813065
HQ
化合物G 化合物G(參見實例2及3)令人驚訝地顯示出容易與葉酸 共輛以形成化合物J(參見實例2)，當與葉酸相比時，其與 葉酸受體之相對親和力為〇. 7 7。 思外的係氮丙啶側鏈上之極性羥基不對氮丙啶埃坡黴素 類似物之抗腫瘤活性產生不利影響。此點係重要的，原因 在於係氮丙啶埃坡黴素類似物（例如，化合物G)在自葉酸 釋放後介導抗腫瘤作用。化合物G及三種其他高度有效之 埃坡黴素類似物（伊沙匹隆、化合物AA及化合物BB)之效 能係藉由以上所述之群落形成檢定來評估。殺滅9〇%核心 集團KB癌細胞所需之濃度（IC9〇)係在藥物暴露持續時間為 17小時後進行測定。如圖3中所示，化合物G呈現IC9〇為4·3 ιιΜ，且效能分別為化合物cc、化合物人八及伊沙匹隆之約 2倍、4倍及6倍。 形成化合物J的化合物G之共軛不影響化合物抗腫瘤 活性。化合物J在活體内表現相當高的抗腫瘤細胞之細胞 毒素活性。在KB活體内FRa(+)腫瘤模型中，化合物：在最 大耐受劑量（MTD)及在產生最低毒性之兩個較低劑量下表 現活性（參見圖4)。相比之下，伊沙匹隆僅在其mtd(5 121203.doc -56- 200813065 μιηοΐ/kg)下有活性。當在MTD比較時，化合物J產生比伊 沙匹隆高之抗腫瘤作用（圖4)。
化合物J 相比之下，在FRa(-) Ml 09母瘤模型中，化合物J在所有 刎姑澈I 蔷 f 白杯；& t MTTV9 4 ..mnl/Va^nr 1. ^ ^ ^ ^ .H , >4 /-14 -=*=- V 'ί Η*- /、 ▲ ▼ ▲ ▲ —^ \ — · 卜I /、 /4 l^v » *- ·-*- 而伊沙匹隆在其為5 μηιοΐ/kg之MTD下有活性（圖5)。該等 結果表明FRa (_) Μ109對伊沙匹隆敏感且化合物J之無活性 可能在很大程度上為該腫瘤不表現FRa之結果。該等結果 亦提供化合物J之抗腫瘤活性可經由FRa受體來介導的證 據。 化合物J的FRa介導之藥物傳遞機制之另外證據係由觀測 到共投予劑量為化合物J劑量之20倍的過量葉酸類似物可 充分與化合物J競爭與受體之結合且使FRa(+)98M109腫瘤 免於受化合物J之抗腫瘤作用的影響來提供（圖6)。因化合 物G及共軛物（化合物J)在活體外及在活體内具有驚人之抗 腫瘤作用且因化合物J之抗腫瘤活性可歸因於FRa(+)_介導 之作用，故本文中亦描述形成化合物J(參見實例2)的吖丙 啶基埃坡黴素類似物化合物G(參見實例2及3)之共軛。 實例2 化合物J之製備 121203.doc -57- 200813065 H2Nv^NH2
Ο u (S)-2-(4-((2-胺基-4-側氧基-3,4-二氫喋啶-6-基）甲基胺基） 苯甲醯胺基）-5-((S)-3-羧基-l-((S)-l-((S)-3-羧基-l-((R)-i-羧基-2-(2-(2-((2-((lS，3S，7S，10R，llS，12S，16R)-7，ll-二羥 基-8,8，10，12-四曱基-3-((£)-1-(2_甲基嘆嗤-4-基）丙-1-稀-2· 基）-5,9·二側氧基_4·氧雜-17_氮雜-雙環[14·1·0】十七烷-17-基）乙氧基）羰基氧基）乙基）二硫基）乙基胺基）·1_側氧基丙 烷_2_基胺基）-5-胍基-1_側氧基戊烷-2-基胺基）-1-側氧基丙 烷-2-基胺基）_5_側氧基戊酸 A. [1S-[1RS3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*】]-8,8，10，12-四甲基-3_[ι-甲基·2-(2_甲基_4_噻唑基）乙烯基]·7，ιι_雙 [(三乙基矽烷基）氧基]-4，17·二氧雜雙環[14·1·0]十七 烷·5,9-二酮
在A氣氛下將三乙基矽烷基氯（15.0 mL，89.4 mmol)添加 至埃坡黴素 Α(5·0 g，10.1 mmol)、咪唾（3·40 g，49.9 mmol) 及 DIPEA(28.5 mL，163.6 mmol)於無水 DMF(100 mL)中之 攪拌溶液中。添加完成後，將反應溶液保溫在55°CT(油 浴溫度）歷時12小時以得到所要產物之單點（tic)。 121203.doc -58 - 200813065 將上述反應又重複兩次。在高真空下使組合溶液之DMF 蒸餾。藉由管柱層析（石夕膠，Ε· Merck，230-400目，600 g; 5:95、10:90及15:85 EtOAc/己烷）將泡沫狀殘餘物純化 以得到19.4 g(88.6%)呈白色固體之化合物A。 HPLC : ES Industries FluoroSep RP苯基，4.6x250 mm， 等度，30 min，100%B，（B=90% MeOH/H2O+0.2% H3P〇4)，流動速率為 1·0 ml/min，UV 254，t=23.15 min。 LC/MS (ES+) 722 (M+H)。 Β· [4S_[4R*，7S*，8R*，9R*，13S*，14S*，16R*(E)]】_14_ 溴-13-羥基-5,5,7,9_四甲基-16·[1-甲基-2-(2-甲基_4-噻唑基） 乙烯基卜4,8-雙[(三乙基矽烷基）氧基]-1-氧雜環十六烷-2,6-二酮之製備
QH
〇 於-20°c 下，在Ν2 氣氛下將 MgBr2_Et20(3x2.13 g，24.78 mmol)分三份每隔兩小時一次添加至[1S-[1R*，3R*(E)， . 7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-8,8，10，12-四甲基-3-[l-甲 胃 基-2-(2•甲基-4-噻唑基）乙烯基]-7,11-雙[(三乙基矽烷基）氧 基]-4，17-二氧雜雙環[14.1.0]十七烷-5,9_ 二酮（5.0 g，6.92 mmol)於無水二氯甲烧（140 mL)中之授拌溶液中同時維持 内部溫度低於-5°C。約7小時後，將反應混合物用二氣甲 烷稀釋，且用飽和NaHC03洗滌2次，經無水Na2S04乾燥且 121203.doc -59- 200813065 在真空中蒸發以得到發泡體。藉由管柱層析（矽膠，Ε· Merck，230-400 目，180 g ; 5:95、7.5:92.5 及 12.5:87.5 EtOAc/己烷）使殘餘物純化以得到與回收之起始物質（〇·9 g，18%)—起的呈白色發泡體之化合物Β(2·5 g，45%產 率）。 HPLC : ES Industries FluoroSep RP苯基，4.6x250 mm， 等度，30 min，100%B，（B=90% MeOH/H2O+0.2% H3P〇4)， 流動速率為 1·0 ml/min，UV 254，t =14.37 min。（100%純 度）[r/MS (ES+): 802 (M+H)。 C. [4S-[4R*，7S*，8R*，9R*，13S*，14R*，16R*(E)】】-14-疊氮 基-13 -沒基 5，5，7，9 -四甲基-16 - [ 1 -甲基 _ 2 ( 2 -甲基-4 唑基）乙烯基]-4,8-雙[(三乙基矽烷基）氧基]-1-氧雜環十 六烷-2,6-二酮之製備
在室溫下，於N2氣氛下將疊氮化鈉（8.01 g，123.3 mmol) 及 18-冠（crown)-6(3.26 g，12.3 mmol)添加至[4S-[4R*， 78*，811*，911*，138*，148*，1611*0)]]-14-溴-13-羥基-5,5,7,9· 四甲基_16-[1-曱基-2-(2-甲基-4·噻唑基）乙烯基]_4,8_雙[(三 乙基矽烷基）氧基]-1-氧雜環十六烷·2,6-二酮（9.9 g，12.3 mmol)於1 ·2 l DMF中之溶液中。在室溫下將澄清溶液機械 攪拌7天。將溶液用EtOAc(4 L)稀釋，且用H20(6x3 L)洗 121203.doc -60- 200813065 滌。乾燥（Na2S04)有機層，且接著蒸發以得到9.2 g粗產 物。管柱層析（矽膠450 g，5 - 15% EtOAc/己烷）提供6.7 g(71G/〇產率）呈白色發泡體之化合物c。 HPLC · YMC ODS-A S5，4.6x50 mm，等度，30 ixiin， 100%B，（B = 90% MeOH/H2O+0.2% H3P〇4)，流動速率為 4·0 mL/min，UV 254 nm，t=2.00 min 〇 LC/MS (ES+) 765 (M+H)。 D· [4S-[4R*，7S*，8R*，9R*，13R*，14R*，16R*(E)】]-14-疊氮 基_5,5,7,9_四甲基-16-[1-甲基-2-(2-甲基-4-雀嗤基）乙 烯基卜13-[(4·硝基苯甲醯基）氧基】-4,8-雙[(三乙基矽烷 基）氧基】-1·氧雜環十六烧-2,6_二嗣之製備
將[4S-[4R*，7S*，8R*，9R*，13S*，14R*，16R*(E)]]-14·疊氮 基-13_每基_5,5,7,9·四甲基-16-[1-甲基-2_(2_甲基-4_σ塞口坐 基）乙烯基]-4,8-雙[(三乙基矽烷基）氧基]_1_氧雜環十六 烧-2，6-二嗣（7.0 g，9.15 mmol)、4-石肖基苯甲酸（3.82 g，22.9 mmol)及三苯膦（6.0 g，22.9 mmol)溶解於 THF(100 mL)中。 經5分鐘之時段添加偶氮二羧酸二乙酯（9.0 mL 40%於曱苯 中之溶液，22·9 mmol)。將反應混合物在室溫下維持4小 時，濃縮，且藉由矽膠層析（5%乙酸乙酯/己烷至15%乙酸 121203.doc -61 - 200813065 乙酯/己烷之階式梯度）純化以分離出呈白色發泡體之硝基 苯甲酸酯（7.3 g，87%)。 LC-MS : Phenomenex C18，4.6x50 mm，等度，15 min，1〇〇%Β，（B=90% MeOH/H2〇+(Ki% TFA)，流動速率 為 4·0 mL/min，UV 220 nm。滞留時間=8·9 min。MS (ESI) Μ+Η=886·7 ° Ε· [4S-[4R*，7S*，8R*，9R*，13R*，14R*，16R*(E)]]-14_ 疊氮 基-13·羥基-5,5,7,9-四甲基·16·[1-甲基-2-(2-甲基-4-咳 唑基）乙烯基]-4,8·雙[(三乙基矽烷基）氧基]氧雜環十 六烷-2,6-二酮之製備
(^) 將石肖基苯甲酸醋化合物D(7·3 g，7.98 mmol)溶解於乙酸 乙酯（3 5 mL)中且冷卻至0°C。添加於甲醇中之氨（35〇 mL 2 • Μ於甲醇中之溶液）’且在室溫下將反應混合物搅拌4小 時，濃縮，且藉由矽膠層析（10%乙酸乙酯/己烷至3〇%乙酸 烏 乙酯/己烷之階式梯度）純化以分離出呈玻璃狀白色固體之 [4S-[4R'7S*，8R*’9R*，13R*，14R*，16R*(E)]]-14-疊氮基-13-經基_5,5,7,9-四甲基-16-[1-甲基_2-(2_甲基_4_嗟〇坐基）乙 烯基]-4,8·雙[(三乙基矽烷基）氧基]-1-氧雜環十六烧_2,6_二 酮（5.97 g，98%)。 121203.doc -62- 200813065 LC-MS : Phenomenex C18，4.6x50 mm，等度，5 min， 100%B，（B=90% MeOH/H2O+0.1% TFA)，流動速率為4.0 mL/min，UV 220 nm。滞留時間=2.25 min。MS (ESI) Μ+Η=765·66。 F. [1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*】】-8,8，10，12· 四甲基-3-[l_甲基-2-(2•甲基-4-噻唑基）乙烯基]-7，11-雙 [(三乙基矽烷基）氧基]-4-氧雜-17-氮雜雙環[14.1.0]十 七烷-5,9-二酮之製備
將[4S-[4R*，7S*，8R*，9R*，13R*，14R*，16R*(E)]]-14-疊氮 基-13_經基-5,5,7,9-四甲基-16-[1-甲基-2-(2_甲基-4-嗟〇坐 基）乙烯基]-4,8-雙[(三乙基矽烷基）氧基]-1-氧雜環十六 烷-2,6-二酮（5.97 g，7.8 mmol)及三乙胺（4.34 mL，31.2 mmol)溶解於二氣甲烷（85 mL)中且冷卻至0°C。經5分鐘之 時段逐滴添加甲烧石黃醯氯（1.8 mL，23.4 mmol)。1 〇分鐘 後，將反應混合物自冰浴移出，且在室溫下攪拌。3小時 後，將反應混合物溶解於飽和NaHC03(300 mL)中，用二 氣甲烷（3x100 mL)萃取，經Na2S04乾燥，濃縮且在未進一 步純化下用於下一步。 將粗甲烷磺酸酯溶解於THF/H20(12:1, 130 mL)中。添加 三乙胺（2·2 mL, 16 mmol)及三曱膦（16 mmol，16 mL 1.0 Μ 121203.doc -63- 200813065 於THF中之溶液），且將反應混合物在室溫下攪拌。3小時 後，將反應物在45°C下加熱7小時，濃縮，且藉由矽膠層 析（2%甲醇/三氯甲烷至5〇/〇甲醇/三氯甲烷之階式梯度）純化 以分離呈白色固體之化合物F(5 〇8 g，88%，對兩個步驟 而言）。 LC-MS : Phenomenex C18，4.6x50 mm，等度，5 min， 100%Β，（B=90% MeOH/H2O+0.1% TFA)，流動速率為4.0 mL/min，UV 220 nm，滞留時間=0·298 min。MS (ESI) M+H=72L58。 G· [1S_[1R%3R*(E)，7R、10S%11R、12R、16S”]-7，11_ 二 經基-17_[2-經基乙基]-8,8,10,12-四甲基-3-[1-甲基-2· (2-甲基_4_噻唑基）乙烯基】-4-氧雜-17-氮雜雙環[14.1.0] 十七烷_5,9·二酮之製備
將 K2C03(1.4 g，10.2 mmol)及 2-溴乙醇（0.52 mL，7.3 mmol)添加至乙腈（20 mL)中之[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*， 1111*，1211*，168*]]-8,8，10，12-四甲基，3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基）乙烯基]-7,11-雙[(三乙基矽烷基）氧基]-4-氧 雜·17-氮雜雙環[14.1.0]十七烷-5,9·二酮（1.05 g，1·46 mmol)中，且加熱至82°C。4小時後，添加另外2-溴乙醇 (0.52 mL，7.3 mmol)及 K2C〇3(1.4 g，10.2 mmol)。5小時 121203.doc -64- 200813065 後，添加另外2_溴乙醇（0·^ mL，2 92 mm〇1)。3小時後， 將反應混合物冷卻至室溫，經由矽藻土過濾，用乙腈（5χ5 mL)、二氣甲烧（2x5 mL)洗滌，濃縮且在未進一步純化下 用於下一步。 將粗反應產物溶解於二氯甲烷（4〇 mL)中，冷卻至〇。〇， 且添加三氟乙酸（8.〇 mL)。i小時後，將反應混合物濃縮， 溶解於飽和NaHC03(200 mL)中，用二氣甲烷（3xl00mL)萃 取’經NaeCU乾燥，濃縮，且藉由矽膠層析（1〇%甲醇/二 氯甲烷）純化以分離出呈透明薄膜之[1S-[1R*;3R*(E); 7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羥基-17-[2-羥基乙 基]-8,8,10,12-四曱基·3-[ 1 -甲基-2-(2-甲基-4嗟σ坐基）乙稀 基]-4-氧雜-17-氮雜雙環[14.1.0]十七烷·5,9-二酮（化合物 G)(0.62 g，79%，對兩個步驟而言）。 LC-MS : Waters Sunfire C18，4.6x50 mm，梯度，〇至 100%B，經 4 分鐘。（A=10% MeOH/H2O+0.1% TFA ; B=90% MeOH/H2O+0.1% TFA)，流動速率為 4.0 mL/min， UV 220 nm 。滯留時間=2·12 min 。 MS (ESI) Μ+Η=537·52。 Η· (S)-2-(4-((2·胺基-4-側氧基_3,4-二氫喋啶_6-基）甲基胺 基）苯甲醯胺基）-5-((S)-3-羧基 _l-((S)-l-((S)-3-羧 基-1-((S)-1-羧基-2-髄基乙基胺基）·1·側氧基丙烷-2-基 胺基）-5-脈基_1-側氧基戍烧-2-基胺基）-1_侧氧基丙烧_ 2-基胺基）-5-側氧基戊酸之製備 121203.doc -65- 200813065
(S)-2-(4-((2 -胺基-4-側氧基_3,4_二氮嗓σ定-6-基）甲基胺 基）苯甲酿胺基）-5-((S)-3-竣基- l- ((S)_l-((S)-3-竣基-1-((S)-1_ 竣基-2-疏基乙基胺基）-1-側氧基丙烧_2_基胺基）_5_脈基-1-側氧基戊烷-2-基胺基）-1-侧氧基丙烷-2-基胺基）-5-側氧基 戊酸係藉由固相肽合成自H-Cys(4-甲氧基三苯甲基）_2-氣 三苯甲基-樹脂開始以5步合成。表2顯示合成中所使用之 試劑的量。 表2
Mmol 當量 MW 量 H-Cys(4-甲乳基二苯曱基)_2_氣二苯甲基_ 樹脂(負載〇.57mmol/g) 1.14 2.0 g Fmoc-Asp(OtBu)-OH(溶解於 15 mLDMF 中） 1.14 2 411.5 0.938 g Fmoc-Arg(Pbf)-OH(15mL DMF) 1.14 2 648 1.477 g Fmoc-Asp(OtBu)-OH(溶解於 15 mLDMF 中） 1.14 2 411.5 0.938 g Fmoc-Glu-OtBu (15 mL DMF) 1.14 2 425.5 0.970 g N1GTFA喋酸(溶解於15 mL DMSO中） 1.14 1.25 408 0.581 g DIPEA 1.14 4 174 0.793 PyBOP 1.14 2 520 1.185 g 121203.doc -66- 200813065 使用以下程序： 偶合步驟： 將胺基酸溶液、DIPEA及PyBOP添加至肽合成容器中之 籲 . 樹脂中。使混合物起泡1小時，且用DMF及異丙醇洗務3 .· 一人。FM0C去保護係在各胺基酸偶合前藉由用dmf中之 20%哌啶處理2次（1〇 min)而實現。為各胺基酸偶合步驟重 複該程序。 N -TFA保護之嗓酸的合成： 〇 將20〇 g(0,45^ mo丨）葉酸添加至一配僙有一加熱套之22 機械攪拌之圓底燒瓶中的1〇 L 〇·1 Μ三羥甲基胺基甲燒 (tris base)溶液（121.1 g三羥甲基胺基甲烷於1〇L水中）中。 攪拌混合物以溶解葉酸且接著添加5〇〇 mg(3 67 mm〇1)氣化 鋅。添加羧肽酶G(13x20單位小瓶（unit vials)，可自Sigma 獲得）且用1 N HC1將pH值調至7.3，且在整個反應期間保 持此pH值。使混合物避光，且在3〇t：下加熱8_1〇天（使用 〇 一自動滴定器以保持pH值不變使得轉化時間減少4_5天）。 反應係藉由分析型HPLC來監控直至達到go%轉化率（另外 轉化率係適當的但並非最佳的）。藉由使用6 N HC1將溶液 之pH值w周至3 · 〇而將產物自反應混合物沈澱出。將聚料轉 移至一離心小瓿中且以400〇 rpm離心1〇分鐘。傾析出上清 液。接著如下直接純化濕固體（濕固體可經冰凍以便儲存 或為先涞乾的，然而，濕固體在溶解前館存於冷;東器中更 為有效）。將1·0 M NaOH添加至700 rnL水中之40 g粗喋酸 中直至PH值為1〗·5。將混合物過濾（惠特曼（Whatman)1型） 121203.doc -67- 200813065 且接著進行層析（管柱：1〇χ12〇 cm ;固定相：8 kg DEAE 纖維素；移動相：1_〇 M NaCl/0.01 M NaOH，pH=11.5 ; 流動速率：1 7 ml/min)。收集1公升黃色溶離份且藉由 HPLC對其進行分析。用6 M HC1將含有純喋酸之溶離份調 節至pH值為3以使喋酸沈澱。以3000 rpm使混合物離心2〇 分鐘。傾析出上清液，且用水洗滌三次。將固體凍乾至少 72小時。殘餘水對下一反應之影響未知。 在鬲真空下經P2〇5使喋酸進一步乾燥24小時以上（注意 保濩步驟中在沒有該另外乾燥步驟之狀況下獲得類似結 果）。隨後將100 g(0.32 mol)喋酸添加至一配備有一機械授 拌器及一氬氣入口之5 L·圓底燒瓶中，且在高真空下隔夜 儲存。添加氬氣，接著添加3500 g(2316 mL)三氟乙酸酐。 用一橡皮塞或氬氣入口轉接器密封燒瓶，且接著用力攪 拌。使燒瓶避光且在室溫、氬氣氣氛下攪拌7天（反應係藉 由各自用水及DMSO稀釋20倍之等分試樣的HPLC來監 控）。將混合物旋轉蒸發至乾燥且用水中之2·5 L 3%三氟乙 酸處理。將混合物在室溫下隔夜攪拌以水解酸酐副產物。 旋轉蒸發得到乾燥固體。將固體懸浮於2 L水中，且接著 在250 mL離心管中以3〇〇〇 rpm離心20分鐘。移除上清液， 且用水洗滌固體並離心（4次）。將固體凍乾3天，轉移至琥 珀色瓶中，且在P2〇5存在下於高真空下乾燥2天（純度 295% ;藉由元素分析評估殘餘TFA)。 裂解步驟： 使用自 92·5%(50 mL)TFA、2.5%(1·34 mL)H20、2.5% 121203.doc -68 - 200813065 (1 ·34 mL)二異丙基石夕烧及2·5%(1·34 mL)乙烧二硫醇製備 之裂解劑將受保護中間物自樹脂釋放。將裂解劑添加至反 應容器（25 mL)中。使氬氣發泡通過混合物歷時1 · 5小時。 將液體自谷器排出，且用剩餘試劑（3 X8 mL)洗滌樹脂。藉 由旋轉蒸發使揮發物濃縮至體積為1〇 mL。添加乙醚（35.0 mL)以實現沈澱。藉由離心收集固體，且乾燥以得到丨·25 g裂解產物。 去保護步驟： 在鹼性條件下移除喋酸部分中之/V10-三氟乙醯基保護 基。以10 mL水中之250 mg保護中間物開始，使用4:1 H2〇:氫氧化銨（1-2 mL)將pH值調節至9.3且維持！小時。 時後，用1 N HC1(約1 mL)將pH值調節至5，且藉由製備型 HPLC純化產物以得到125 mg化合物Η。 HPLC純化條件： 管柱：Waters NovaPak Ci8 300x 19 mm 溶劑A : 10 mM乙酸銨緩衝液，pH=5 溶劑B :乙腈 溶離：1%B至 20%B，40 min，15 mL/min 自組合反應之總產量：625 mg I·碳酸2-((18,38,78，1011，118，128，1611)-7，11-二羥基_8,81〇12 四甲基_3·((Ε)-1-(2甲基嘆嗅_4_基）丙-1-歸_2•基）·5 9_ 二側氧基-4 -氧雜-Ι7-氮雜-雙環[14.1.0]十七燒基） 乙酯2·(2_(吡啶基）二硫基）乙酯之製備 1. 2-(2-(吡啶-2-基）二硫基）乙醇之製備 121203.doc -69- 200813065 Ο 將魏基乙醇（7.6 mL，110 mmol)逐滴添加至甲氧基羰基 次磺醯氣（10 mL，110 mmol)於二氯甲烷（1〇〇 mL)中的冷卻 至〇°C之溶液中。使反應混合物在〇它下攪拌3〇分鐘。此 時’添加2-疏基η比唆（12.2 g，110 mmol)於二氣甲烧（16〇 mL)中之溶液。使溶液在〇它下反應1小時且接著使其溫至 室溫’歷時又一小時。觀察到固體產物已自溶液沈下。 TLC(1:1 Pet醚/EtOAc)顯示已形成有效產物。將反應混合 物濃縮至體積為125 mL。經由布赫納（Buchner)漏斗過濾 混合物。用二氯曱烧洗務濾餅且接著在真空下隔夜乾燥以 得到呈鹽酸鹽之2-(2-(吡啶-2-基）二硫基）乙醇（23.6 g)。 TLC: Rf=0.45
板-EMD 石夕膠 60 F254，5x10 cm，250 Μ 2·碳酸苯幷[d][l，2,3]三唑-1·基酯2_(2_(吡啶-2-基）二硫 基）乙酯之製備 1/2當量雙碳醯氯 1.1 當量 Et3N
將雙碳醯氯（2.28 g，11.5 mmol)於15 mL無水二氣曱烧中 之〉合液在鼠氣下於一圓底燒瓶中擾摔且藉由冰/鹽浴冷 卻。將一具有2-(吡啶·2·基二硫基）乙醇（5.01 g，22.4 mmol) 與三乙胺（2 ·25 g，22_2 mmol)於65 mL無水二氣曱燒中之混 合物的加料漏斗置於圓底燒瓶上。經20分鐘之時段逐滴添 121203.doc -70- 200813065 加混合物。使反應混合物溫至室溫，且再攪拌一小時。反 應混合物之TLC分析顯示消耗起始物質，且形成"條紋狀" 的極性較小之氯甲酸酯產物，TLC(6:4Et〇Ac:己烷）：起始 物質之1^為〇.4;氣甲酸酯產物之1為〇.8。 將反應混合物在一圓底燒瓶中於氬氣下攪拌且藉由冰/ 鹽浴冷卻。將 3·02 g，22·4 mm〇1 H〇B^2 23 g，22 〇 三乙胺於10 mL無水二氯甲烷中之混合物添加至一固定於 圓底燒瓶上之滴液漏斗中。將混合物緩慢添加至圓底燒瓶 中，同時維持反應溫度在2。(：。使反應混合物溫黾室溫， 且隔夜攪拌。接著在大氣壓力下將約27 mL二氯甲烷自反 應此a物蒸館出。隨後使混合物冷卻至室溫且攪拌2小 時。藉由過濾收集固體，且用20 mL二氣甲烷洗滌濾餅。 接著藉由一旋轉式汽化器在真空、4〇。〇下乾燥固體以得到 7.81 g灰白色固體。藉由1η-ΝΜΚ對該固體進行分析且確定 為所要產物。 四曱基_3-((£)_1_(2_甲基噻唑-4_基）丙烯-2_基）_5，、 二側氧基-4-氧雜-17_氮雜雙環[14丄〇】十七烷_1?_基） 乙醋2_(2十比啶_2_基）二硫基）乙酯之製備
121203.doc -71- 200813065 將DMAP(1.2當量）及碳酸苯幷[d][l，2,3]三唑-1-基酯2_(2-(吡啶-2-基）二硫基）乙酯（1.0當量）先後添加至
[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11·二經 基-17-[2-羥基乙基]-8,8，10，12_四甲基-3-[1-甲基_2-(2-甲 基-4-噻唑基）乙烯基]-4-氧雜-17-氮雜雙環[14.1.0]十七 烷-5，9-二酮於無水二氯甲烷中於〇。〇下的溶液中。將反應 混合物在0°C、氬氣下攪拌且藉由TLC每隔10分鐘進行監 控。必要時添加另外之DMAP(1.2當量）及化合物1(2)(1.0當 量）直至消耗所有化合物G。在0°C下用MeOH(l mL)使反應 中止，在真空下使溶劑移除，且藉由層析（矽膠，dcm中 之2.5-5% MeOH)純化殘餘物以得到呈米色固體之標題化合 物。以下在表3中列出了化合物之量及回收量。化合物I自 2.95 g化合物G獲得之總產量為2·80 g(67.9%)。 表3
第1批 第2批 第3批 第4批 化合物G (mg) 303 952 921 775 化合物I (2)(mg) 197x3 683x3 661x3 556x3 DMAP (mg) 82.8x3 26〇χ3 251x3 211x3 DCM (mL)8.0 22.022.0 18.0 化合物I (mg)* 204 984 761 851 *各層析純化通常得到純產物與一些不純（8〇_9〇%純度）產 物將不純產物與層析純化之下一批的粗產物組合。對第 • 2批及第4批而言，進行兩次層析純化。 (S)-2-(4-((2_胺基側氧基-3,4_二氩喋啶_6_基）甲基胺 121203.doc -72- 200813065 基）苯曱醯胺基）-5-((S)-3-羧基-l_((S)-l-((S)-3_羧基-1_ ((R)-l-羧基-2-(2-(2-((2-((1S，3S，7S，1〇r，11S，12S，16R)-7，11-二羥基-8,8，10，12-四甲基-3-((£)-1_(2-甲基噻唑-4-基）丙-1-烯-2-基）-5,9-二側氧基-4-氧雜-17-氮雜-雙環 [14·1·0]十七烷-17-基）乙氧基）羰基氧基）乙基）二硫基） 乙胺基）-1-側氧基丙烷-2-基胺基）-5-胍基-1-側氧基戊 烷-2-基胺基）-1-側氧基丙烷-2-基胺基）-5-側氧基戊酸 之製備 〇
ϋ 將15 mL &0(使用前用氬氣起泡10分鐘）添加至於5〇 mL 大小之離心管中之（S)-2-(4-((2-胺基-4·側氧基-3,4-二氫喋 咬基）甲基胺基）苯甲醯胺基）-5_((s)_3_羧基(⑻小 ((S)-3-羧基-1-((S)-1-羧基_2_巯基乙基胺基）-；1_侧氧基丙 烷-2-基胺基）-5-胍基-1_側氧基戊烷_2_基胺基卜丨_侧氧基丙 烧·2-基胺基）-5-側氧基戊酸（498 mg，0.534 mmol)中。在用 121203.doc •73- 200813065 氬氣起泡的同時，將飽和NaHCCh溶液（使用前用氬氣起泡 10分鐘）逐滴添加至該懸浮液中直至所得溶液之pH值達到 6.9。快速添加於 THF 中之碳酸 2-((lS，3S，7S，10R，llS， 12S，16R)-7，11-二經基-8,8，10，12-四甲基 _3-((E)-l-(2-甲基 嗟嗤-4-基）丙-1-烯-2-基）-5,9-二側氧基_4_氧雜_17-氮雜-雙 環[14· 1 ·0]十七烧-17-基）乙酯2-(2_(n比σ定_2_基）二硫基）乙酯 (400 mg，0.534 mmol)，且在氬氣下將所得均質溶液授拌3〇 分鐘。在15分鐘時藉由分析型HPLC檢查反應進程。在分 析型HPLC條件下產物峰值在約6·4分鐘時出現。用約15 mL磷酸鹽緩衝液稀釋混合物且在真空下將thf移除。將渾 濁溶液離心且過濾。將黃色濾液分為兩份且藉由製備型 HPLC純化。使純溶離份（純度大於98%)集中且凍乾。收集 殘餘溶離份（純度小於98%)且每隔3-6輪層析再純化以得到 700 mg呈白色粉末之標題化合物（含有118重量％水以及8.7 重量％鈉鹽及磷酸鈉鹽，如藉由卡耳費雪（Karl Fischer)法 及元素分析所測定的）。 製備型HPLC參數： 管柱：Waters Nova-Pak HR C18 6 μιη 30x300 mm 移動相A : 7.0 mM填酸納缓衝液，ρΗ=7.2 移動相Β :乙腈 方法：10%Β-50%Β，30分鐘，流動速率：4〇 mL/min 分析型HPLC參數： 管柱：Waters Symmetry C18 3.5 μιη 4.6x75 mm 移動相A : 10 mM乙酸二乙基錐（TEAOAc)緩衝液，ρΗ=7·5 121203.doc • 74· 200813065 移動相B :乙腈 方法：20%Β·40%Β，10分鐘，流動速率：1.0 mL/min 精確質量 m/z(C67H92Ni6〇22S3): 計算值：1570.58907 (M+2H)，785.29454 (M+2H)2 +， 523.86563 (M+3H)3 + 5 393.1 5 1 1 8 (M+4H)4+ 實驗值：（M+2H)2+，785.29100(4.5 ppm) ; (M+3H)3+， 523.86431(2.5 ppm) ; (M+4H)4+，393.14996(3.1 ppm) 實例3 化合物J之替代性製備 h2nNs^nh2
(S)-2-(4-((2-胺基-4-側氧基-3,4·二氫喋啶-6·基）甲基胺基） 苯甲醯胺基）-5-((S)-3-羧基-l-((S)-l-((S)-3-羧基 羧基-2-(2-(2-((2-((lS，3S，7S，10R，llS，12S，16R)-7，ll_ 二經 基-8,8，10，12_四甲基-3_((Ε)-1_(2·甲基噻唑-4_基）丙-基）_5,9_二側氧基-4-氧雜-17-氮雜-雙環[14.1.0】十七烷-17-基）乙氧基）羰基氧基）乙基）二硫基）乙胺基）-1-側乾基丙 烧-2-基胺基）-5_脈基-1-側氧基戍烧-2-基胺基）_1-側氧基丙 烷-2-基胺基）-5_側氧基戊酸 A. [48,7尺，88，1011，98，1311，168]-4,8，13-三羥基-14-碘-5,5,7,9· 四曱基-16-[(Ε)-1-[2-甲基噻唑-4·基]丙-1-烯-2-基]氧雜 環十六烷-2,6-二酮之製備 121203.doc -75- 200813065
將埃坡Μ素C(54.3 g，113.7 mmol)溶解於乙腈（480 mL) • 及水（50 mL)中。將溶液冷卻至-5°C至-l〇°C。將碘（144.3 g， 568.4 mmol)添加至反應中，且保持反應至少15小時。 用15%偏亞硫酸氫鈉溶液（9〇〇 mL)使反應中止。用乙酸 q 乙醋（2x 1 ·1 L)萃取混合物。收集有機相，且依次用飽和碳 跋氫鈉溶液（675 mL)及飽和氯化鈉溶液（675 mL)洗滌。在 減壓下使溶劑蒸發以得到黃色油狀之粗化合物a(85.6 g)。 化合物A在未進一步純化之狀況下用於下一反應中。 HPLC : Phenomex Luna C8 (2) 3 um，4.6x150 mm，等 度，18 min，36%B，17 min，56%B，（移動相 A=於 ACN: 水（5:95)中之 0·01 M NH4OAc，移動相 B =於 ACN:水（95:5) 中之 0.01 M NH4OAc)，流動速率為 ι·〇 mi/min，UV 245， ◎ Rt=22.4 min 〇 B· [1心38,78，1011，118，128，168]_7，11-二羥基-8,8，10，12_四 , 曱基_3_[(Ε)-1·[2-甲基噻唑-4-基】丙-1-烯-2基】-4，17-二 氧雜雙環[14·1·0]十七烷_5,9·二酮之製備
將[48,711，88，1011，98，1311，168]-4,8，13-三羥基-14-碘-5,5,7,9_ 121203.doc -76- 200813065
十六烷-2,6-二酮（85.6 g)溶解於乙腈（670 mL)及水（13〇 mL) 中。將三乙胺（135 mL，968.5 mmol)添加至溶液中。將反 應加熱至50°C至60°C，歷時至少8小時。 在溶液冷卻至室溫後，在減壓下使其濃縮。用 EtOAc(1.2 L)稀釋殘餘物，且用飽和氯化納溶液（3χ5〇〇 mL)洗滌。在減壓下使溶劑蒸發以得到呈黃色油狀之粗產 物。藉由石夕膠塾過濾、（石夕膠700 g，庚烧中之66% EtOAc， 2x4 L，及1x3 L)純化得到具有HPLC AP 80的呈發泡體之 化合物B(5 0.3 g，90%產率）。 HPLC : Phenomex Luna C8 (2) 3 um，4.6x150 mm，等 度，18 min，36%B，17 min，56%B，（移動相 A=於 ACN: 水（5:95)中之 0.01 M NH4OAc，移動相 B =於 ACN:水（95:5) 中之 0.01M NH4OAc)，流動速率為 l.o ml/min，UV 245， Rt=15.〇 min。 C/D· (4S，7R，8S，9S，13R，14R，16S)-13-疊氮基-4,8，14·三羥 基-5,5,7,9-四甲基_16·((Ε)-1-(2_甲基噻唑-4·基） 丙-1-稀_2_基）氧雜環十六烧_2,6-二酮及 (4S，7R，8S，9S，13S，14S，16S)-14-疊氮基-4,8，13-三羥 基- 5,5,7,9-四甲基 _16_((Ε)_1_(2-甲基1^ 嗤-4 -基）丙-1 -烯-2-基）氧雜環十六烷-2,6-二酮之製備
200813065 將疊氮化鈉（11.45 g，174.41 mmol)及氣化銨（3·14 g， 58.14 mmol)添加至表_埃坡黴素 A(14 35 g，29 〇7 mm〇1)於 乙醇（240 mL)及水（48 mL)中之攪拌溶液中。將混合物在 60°C下攪拌17-20小時。在減壓下，於低於5(rc之溫度下藉 由旋轉式汽化器使揮發物蒸發。將殘餘物溶解於乙酸乙酯 (287 mL)與水（50 mL)之混合物中。使各相分離，且用乙酸 乙醋（115 mL)對底部水相進行萃取。用25%氣化鈉水溶液 (鹽水）洗滌組合之有機相。在減壓下使溶劑蒸發，且使殘 餘物通過一用乙酸乙酯/正庚烷（2:1)混合物溶離之矽膠 墊。減壓下溶劑之蒸發提供呈白色發泡體的疊氮基醇， (4S，7R，8S，9S，13R，14R，16S)-13-疊氮基-4,8，14-三羥 基-5,5,7,9-四甲基甲基噻唑_4_基）丙小烯_2_ 基）氧雜環十六烷_2,6_二酮及（4S，7R，8S，9S，13S，14S，16S)- 14-疊氮基-4,8，13·三羥基 _5,5,7,9_四曱基-16-((£)-1-(2-曱基 噻唑-4-基）丙-1-烯-2-基）氧雜環十六烷_2,6_二酮以約6:1比 率之區位異構混合物（12.8 g，82%)。 LC_MS : Phenomenex Lima C8(2)管柱：3 μιη，4.6x50 mm。梯度：15 min，〇%Β至 100% Β，10 min，接著 10〇〇/0
B，5 min。移動相：八=於 CH3cN/H2〇 5:95 中之 〇 〇1 M NH4OAc; B=於 CH3CN/H20 95:5 中之 0·01 M NH4〇Ac。流 動速率：3.0 mL/min。波長：UV 250 nm。滯留時間=5·52 min。MS (ESI) (Μ+Η)+=537·69 該反應亦在諸如丙酮、乙腈、四氫呋喃、丙醇、二甲 基甲醯胺、二甲亞石風及Ν-甲基-π比咯啶酮之其他溶劑中進 121203.doc -78- 200813065 行。 疊氮化四丁基銨試劑亦可替代疊氮化鈉/氣化銨使用。 E. (1S，3S，7S，10R，11S，12S16R)-7，11·二羥基-8,8，10，12-四 曱基_3_((Ε)-1-(2-甲基噻唑_4_基）丙-1_烯_2_基）_4_氧雜-17_氮雜雙環（14.1.0)十七烷-5,9_二酮之製備
將三苯膦（9.48 g，35.77 mmol)在氮氣氛下添加至 (4S，7R，8S，9S，13R，14R，16S)-13-疊氮基·4,8，14-三羥基-5,5,7,9- 四曱基-16-((Ε)-1-(2-甲基嗟唾-4-基）丙-1-稀-2-基）氧雜環 十六烷 _2,6_ 二酮與（4S，7R，8S，9S，13S，14S，16S)-14_4l 基-4,8，13-三經基·5,5,7,9-四甲基-16·((Ε)·1-(2-甲基嘆〇坐_4- 基）丙-1-烯-2-基）氧雜環十六烷-2,6·二酮混合物（12 8 g， 23.85 mmol)於無水乙腈（90 mL)中之攪拌溶液中。將澄清 溶液在20-40°C下攪拌19-40小時。使反應混合物冷卻至 0-5°C，歷時3-4小時，且將產物過濾。用庚烷（64 mL)洗務 濾餅，且在減壓下，於40°C下乾燥15·18小時以得到呈白色 固體之（lS，3S，7S，10R，llS，12S16R)_75ll-:.*-8,8，1〇，12_ra 曱基-3-((E)_ 1_(2_甲基嗟嗤-4-基）丙-1-烯-2-基）-4-氧雜·ΐ7_ 氮雜雙環（14.1.0)十七烧-5,9-二_(5.41 g，46%)。 LC-MS : Phenomenex Luna C8(2)管柱:3 μηι 4 6x50 mm。梯度：15 min，0%Β至 100% Β，10 min，接著 1〇〇0/〇 121203.doc -79- 200813065 B，5 min。移動相：八=於 CH3CN/H20 5:95 中之 0.01 Μ NH4OAc; Β =於 CH3CN/H20 95:5 中之 0.01 Μ NH4OAc。流 動速率：3.0 mL/min。波長：UV 250 nm。滯留時間=4.43 min。MS (ESI) (Μ+Η)+=493·68。 該反應亦用諸如三環己基膦、三甲膦、三丁膦及三（4· 甲氧基苯基）-膦之其他膦及另一溶劑四氫呋喃進行。 F. [1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*】】-7，11-二羥 基_17_[2_羥基乙基]-8,8，10，12_四甲基-3-[1-甲基-2_(2· 甲基-4-噻唑基）乙烯基】-4-氧雜-17-氮雜雙環[14.1.0】十 七烷-5,9·二酮之製備
化學式:C26H40N2O5S 精磁質量:492.27 分子量:492.67 Δ
BrCH2CH2〇H Et3N, CH3CN
性Si: C28H44N206S 精確質量：536.29 分子量：536.72
將 Et3N(4.95 mL，35.52 mmol)及 2-溴乙醇（3.02 mL，42.62 mmol)添加至於乙腈（35 mL)中之（1 S，3S，7S, 1 OR，11 s， 128，1611)-7，11-二羥基-8,8，10，12-四甲基-3-(斤)-1-(2-甲基 噻唑-4-基）丙-1-烯-2-基）-4-氧雜-17-氮雜雙環[14.1.0]十七 烷-5,9-二酮（3.50 g，7.10 mmol)中且加熱至 72.5°C。20 小時 後，將反應混合物冷卻至室溫，經由旋轉真空蒸餾濃縮至 乾燥。將粗產物溶解於乙酸乙酯（50 mL)中且與去離子水 (3 5 mL)混合。將混合物用乙酸乙酯（3x35 mL)萃取，經 Na2S04乾燥，過濾，濃縮，在乙腈（35 mL)中結晶，用乙 121203.doc -80 - 200813065 腈（2x5 mL)洗滌，且在真空烘箱中於45.5°C下隔夜乾燥以 分離出呈白色結晶粉末之（1S，3S，7S，10R，11S，12S，16R)-7，11-二羥基-17-(2_羥基乙基）-8,8，10，12-四甲基-3-((丑)-1-. (2-曱基嗟唾-4-基）丙-1-稀-2-基）-4-氧雜-17-氣雜雙ί辰 .· [14.1.0]十七烷-5,9-二酮（2.6〇8，11?1^八？97.1，68.2%產 率）。 LC-MS · Phenomenex C8，3 μηι，4.6x150 mm，梯度， 10% 至 50%B(經 10 min)，且在 20 min 時停止。（A=5% 〇
MeCN/H2O + 0.01 M NH4〇Ac; B = 95% MeOH/H2〇 + 〇.〇 1 M NH4OAc)，流動速率為 1 ·0 mL/min，UV 254 nm。滯留時 間=9·43 min。MS (ESI) Μ+Η=537·21。 一般技術者將認識到如由該實例3製備之化合物3G與如 由實例2製備之化合物G相同，且因而化合物3G可用於製 備化合物Η、I及J，其製備方法及化合物係描述在實例2 中〇 尊、 【圖式簡單說明】 圖1為埃坡黴素類似物化合物AA之六種葉酸共軛物（共 軛物編號為AA.I至AA-VI)之化學結構、相對親和力及抗 KB腫瘤細胞之EC50(nM)值。 • 圖2為埃坡黴素類似物化合物BB之三種葉酸共軛物（共輛 物編號為BB.I至BB-III)之化學結構、相對親和力及抗KB 腫瘤細胞之EC50(nM)值。 圖3表明用濃度增加（濃度（nM) ; X軸）之化合物G(橫條）、 化合物CC(三角形）、化合物AA(菱形）或伊沙匹隆（正方形） 121203.doc -81 - 200813065 處理後存活之KB純系的百分率（存活率；y軸）。 圖4表明以（A)腫瘤植入後若干天（乂軸）中值腫瘤重量 (mg，y轴）或（B)腫瘤植入後若干天（义軸）之重量減輕（％體重 變化；y軸）量度的，相較於未經處理組（對照；黑色圓 圈）’用各種劑量之化合物j(灰色正方形、白色正方形、灰 色菱形）或伊沙匹隆（黑色橫條）處理裸鼠中之KB鼻咽表皮 樣癌異種移植物的活體内抗腫瘤功效。 圖5表明以腫瘤植入後若干天（义軸）中值腫瘤重量（mg ; 丫 軸）董度的，相較於未經處理組（對照；黑色圓圈），化合物 J(灰色正方形）或伊沙匹隆（白色正方形(_) M1〇9鼠肺 癌之活體内抗腫瘤作用。 圖6表明以腫瘤植入後若干天（X軸）中值腫瘤重量（mg ; y 軸）量度的，未經處理組（對照；黑色圓圈）、用單獨之化合 物J(灰色正方形）處理、用葉酸類似物存在下之化合物"黑 色杈條）處理或用化合物G(灰色菱形）處理的活體内抗腫瘤 作用。 121203.doc -82 -

Claims (1)

  1. 200813065 十、申請專利範圍： 1· 一種具有式（I)之共軛化合物， V τ--Q-Μ-Κ一A
    ζ) 或其醫藥學上可接受之鹽及/或溶劑合物，其中： V為葉酸受體結合部分； Q 為 Ο、S 或 NR7 ; Μ為可釋連接子； κ為 Ο、s 或 NR7a ; A為-(CR8R9)-(CH2)m-Z-，其中 Z為-(CHR10)-、-C卜〇). 、-C(=〇)-C(=〇)_、-〇c(=〇)-、-N(Ru)C(=0)-、-S〇2_ 或NdDSOy ; U Bi為羥基或氰基且1^為氫，或心與心一起形成一雙 鍵； • 尺2、R3及R5獨立地為氫、烧基、經取代之烧基、芳義 或經取代之芳基，·或R2與R3可與其所連接之碳一起形^ 視情況經取代之環烧基； I為氫、烷基、烯基、經取代之烷基、經取代之烯 基、芳基或經取代之芳基； 為氫、烧基或經取代之燒基； R7a、R7、R8、R9、R10及R"獨立地為氫、烷基、經取 121203.doc 200813065 代之烷基、環烷基、經取代之環烷基、芳基、經取代之 芳基、雜環烷基、經取代之雜環烷基、雜芳基或經取代 之雜芳基； 為H、烷基、經取代之烷基或鹵素； Rn為芳基、經取代之芳基、雜芳基或經取代之雜芳 基； ’、 m為0至6 ; τ具有下式：
    其中Ru在各狀況下獨立地為氫、烷基、經取代之烷基、 芳基經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、 裱烷基、經取代之環烷基、環烷基烷基、經取代之環烷 基烷基、雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、 經取代之雜芳基、雜環烷基或經取代之雜環烷基； q為1至10 ;且 15 R16及汉17獨立地為氫、低碳烧基或經取代之低碳 烷基，或尺^與尺17 一起形成環烷基。 2·如請求項1之共輛化合物，其中： K為〇 ; A為C 2 - 4伸燒基； BA -OH ; 121203.doc -2- 200813065 R2、R3、汉4及r5獨立地為氫或低碳烷基； R6為氫或曱基； Rn為視情況經取代之5員或6員雜芳基；且 Μ為-S-R3(r〇-C(=0)-、-S-R3(rc(=0)-或 ϋ134Ι13〇·0-(：(=0)- ，其中： R3〇為低碳伸烷基或經取代之低碳伸烷基；且R34為伸 芳基或經取代之伸芳基。 3·如請求項2之共軛化合物，其中Rls為視情況經取代 口坐基、口比口定基或口惡口坐基。 土 4·如請求項2之共輛化合物，其具有式ia:
    121203.doc 200813065 其中： V為葉酸’或其類似物或衍生物； R6為Η或低碳烧基； Q為 〇、s 或 nr7 ; Μ為
    Ri4在各狀況下獨立地為氫、烷基 '經取代之烷基、芳 基、經取代之芳基、芳基烷基、經取代之芳基烷基、環 烷基、經取代之環烷基、環烷基烷基、經取代之環烷基 烷基、雜芳基、雜芳基烷基、經取代之雜芳基烷基、經 取代之雜^•基、雜環烧基或經取代之雜環烧基； q為1至ίο ; 、Ru及獨立地為氫、低碳烷基或經取代之低碳 烧基；且 R18、R19、R31、R32、R33、R24、r25、、& 及R29各自獨立地為烷基、經取代之烷基、環烷基或經取 代之^烷基；或化18與、ll與R32、Rl9與尺31、R33與 R24 ^^與尺26、R24與R25或R27與R28中之任一組可一起形 成環燒基。 、4或5中任一項之共軛化合物，其中q 6 ·如請求項1、2、 為1至5 ’且各Rl4獨立地為H、甲基、脈基丙基、-(CH^-CC^H 121203.doc 200813065 、-CHySH、-CHrOH、咪唑基（甲基）、胺基丁基 或-CH(〇H)-CH3。 7·如請求項1、2、3、4、5或6中任一項之共軛化合物，其 中Μ為： 〇
    8·如睛求項1、2、3、4、5、6或7中任一項之共軛化合 物’其中V為：
    且 界與父獨立地為CH或氮； R2〇為氫、胺基或低碳烷基； 為氫、低碳烷基，或與R23形成環烷基； R22為氫、低碳烷基、低碳烯基或低碳炔基；且 R23為氫，或與R21形成環烷基。 9.如°月求項1、2、3、4、5、6、7或8中任一項之共輛化合 物’其中V為··
    121203.doc 200813065 10·如請求項1之共軛化合物，其具有下式··
    或其醫藥學上可接受之鹽及/或溶劑合物。 11.如請求項10之共軛化合物，其具有下式： Ο η2Ν、/ΝΗ
    或其醫藥學上可接受之鹽及/或溶劑合物。 12· —種醫藥組合物，其包含在醫藥學上可接受之載劑中的 如請求項 1、2、3、4、5、6、7、8、9、1〇4U 中任一 項之共軛化合物或其醫藥學上可接受之鹽及/或其溶劑合 物。 13· 一種如請求項 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 或 11 中 任一項之化合物之用途，其係用於製備供治療患者之葉 酸雙體相關病況用的藥劑。 月求項13之用途，其中該病況為選自由下列癌症組成 :群之癌症：印巢癌' 皮膚癌、乳癌、肺癌、結腸癌、 鼻癌、咽喉癌、乳腺癌、肝癌、腎癌、脾癌、腦癌、間 121203.doc 200813065 腎細胞癌或其他腎癌、脈 皮瘤、垂體腺瘤、子宮頸癌 絡叢癌或上皮腫瘤。
    U 121203.doc
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