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TW200530588A - Compositions and methods for modulating c-Rel-dependent cytokine production - Google Patents

Compositions and methods for modulating c-Rel-dependent cytokine production Download PDF

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Publication number
TW200530588A
TW200530588A TW093134232A TW93134232A TW200530588A TW 200530588 A TW200530588 A TW 200530588A TW 093134232 A TW093134232 A TW 093134232A TW 93134232 A TW93134232 A TW 93134232A TW 200530588 A TW200530588 A TW 200530588A
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TW
Taiwan
Prior art keywords
cell
rel
cells
nucleus
compound
Prior art date
Application number
TW093134232A
Other languages
English (en)
Inventor
Rong-Zhen Lu
James Barsoum
Yumiko Wada
Original Assignee
Synta Pharmaceuticals Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Synta Pharmaceuticals Corp filed Critical Synta Pharmaceuticals Corp
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Description

200530588 九、發明說明： 本申請案係主張分別於2003年11月1〇日及2〇〇3年 η月11日所提出美國專利臨時申請案Ν〇·60/51 9,048與 Ν〇·60/51 9,040之優先權，其申請書之全部内容在此合併 作為參考文獻。 【發明所屬之技術領域】 本發明係有關用於調節C—Rel依賴型細胞激素產生但 不顯著改變NF/cB表現量及/或I/cB數量之組成物及方 法。本發明亦有關藉由分析C-Re 1之經改變的細胞内定位 來篩選不顯著改變NF/cB表現量及/或I/cB數量之c—Rel 活性調節劑。 【先前技術】 已知細胞激素於自體免疫疾病及炎症疾患之發展中所 扮演的角色。細胞激素如介白素_12(IL_12)會對炎性刺激 產生急性反應（acute phase response)，提高巨噬細胞及 其他細胞之抗菌作用，並且促進特定之淋巴細胞反應。 IL-12涉及多重-了…顯性之自體免疫疾病’該等自體免疫 疾病包括’但不限於’多發性硬化症、重症肌無力、自體 免疫性神經病變、基蘭巴爾症候群（GuiUain_Barre， syndrome)、自體免疫性葡萄膜炎、自體免疫溶血性貧血、 惡性貧血、自體免疫性血小板減少症、顧動脈炎（temp〇ral artentis)、抗磷脂症候群、血管炎、韋格納氏肉芽腫 (Wegener，s granul⑽atosls)、貝歇特氏病 disease)、疱疹樣皮膚炎、天疱瘡、白斑、克隆氏症（Cr〇hn，s 92729 5 200530588 disease) '潰癌性結腸炎、原發性膽汁性肝硬化、自體免 疫性肝炎、第1型或免疫媒介性糖尿病、葛雷夫氏症 (Grave’s (Hsease)、橋本氏甲狀腺炎（Hashim〇t〇，s thyroiditis)、自體免疫性卵巢炎及睪丸炎、腎上腺之自 體免疫性疾病、類風滅性關郎炎、全身紅斑性狼瘡、硬皮 症、夕卷性肌炎、皮肌炎、脊椎關節病變、僵直性脊椎炎、 修格連氏症候群（S j〇gren，s syndr〇me)以及移植物對抗宿 主疾病。 介白素-12UL-12)為以雙硫鍵連結之雜二元體型 (heterodimeric)細胞激素（p70)，其係由兩個經獨立調節 之次單兀p35及p40所組成。il-12係於細菌、細菌產物 如脂多醣（1 iP〇P〇lySaccharide; Lps)以及細胞内寄生物刺 激期間，由吞噬細胞（phagocytieceUs)及抗原呈現細胞 (antigen presenting cells)(尤其係巨噬細胞及樹突細胞） 所製造。IL-12經充分證明之生物功能係誘導干擾素自 丁細胞及ΝΚ細胞表現，並分化朝向ΤΜ τ淋巴細胞型。由 IL 12誘$表現之IFN- γ (干擾素-τ )為一種強烈且具選 擇f生的增強子，可促進〖L-丨2自單核球及巨噬細胞產生。 此作用在以LPS或金黃色葡萄球菌c〇wan工株 SAC)刺激前，使用 j評一 7持、、、貝處理至少8小時後頗為顯著，而推測，尤其於慢性 疾病中，INF- γ係不間斷地產生，而α—丨2之產生則由inf-:所乓加。推測於誘導〖L—丨2產生之感染性或炎症性的刺 /放後及強有力之回饋迴路會促使受丨L-12所誘導之！ 一 92729 6 200530588 7進一步提尚IL-12之產生，而後導致發炎前細胞激素 (pro-inflammatory cytokine)之過量生產。IL-23 細胞激 素係為由pl9次單元以及該與il-12相同之p40次單元所 組成的雜二元體。 LPS會刺激巨噬細胞中之p5〇/c一Rel及p5〇/p65由細 胞質轉位至細胞核。此等雜二元體均會結合至p4〇之啟動 子的NF /c B位置。然而，卻僅c-Rei顯現出其在活體外或 活體内於大量發炎前細胞激素刺激後，使LPS所誘導之訊 心通過 Toll 樣受體 4(Toll-like receptor 4, TLR4)而導 致p40產生之重要性。 對本發明而言，於此說明書之第2節或其他任何一節 中，任何文獻之引用或認同均不應視為特徵，因為此等文 獻係為可取得之先前技術。 【發明内容】 本發明提供用於鑑定可選擇性改變c_Re卜依賴型轉 錄作用之分子的方法，該方法係藉由下述方式進行：相幸 於未與候選分子接觸或與陰性對照組如石粦酸鹽緩衝液. (Phosphate buffered saline，PBS)接觸之細胞，偵測言 、-二疋位至與一種或一種以上候選分子接觸之細胞（例如，< 疫細=)之核中的c-Re丨分子之濃度改變，而不偵測Νρ ^ 表現I及/或I /c B數量之任何改變，（例如，評估但不偵 無顯著改變之NF/cB及/或I/cB表現量)。於一具體實施: 中，本發明提供驗鑑定可選擇性改變❿卜依賴型^ 作用之分子的方法，係包括下列步驟：（a)使細胞(例如 92729 7 200530588 免疫細胞如自然殺手細胞、τ細胞、巨噬細胞、樹突細胞 或單核球）與一種或/種以上候選分子接觸；以及（b)偵測
该細胞中de 1分子之定位，其中，在不顯著改變财a： B 表現量及/或I κ B數量的情況下，若該細胞核中之c-Re 1 夏相較於未與候選分子接觸或與陰性對照組如磷酸鹽緩衝 液（phosphate buffered saline，PBS)接觸之細胞中所測 得者更為增加或減少時，則顯示該候選分子改變C-Rel一依 賴型之轉錄作用。根據此具體實施例，該細胞可於接觸候 選分子的同時再以IFN-τ及/或脂多醣（LPS)刺激之。較佳％ 者’根據此具體實施例，該細胞係與候選分子接觸後，接 著再以IFN-r及/或脂多醣（LPS)刺激之。於特定具體實施 例中’该與候選分子接觸之細胞係巨嗤細胞、單核球或樹 突細胞。
於另一具體實施例中，本發明提供用於鑑定可選擇性 改、欠c-Re 1 -依賴型轉錄作用之分子的方法，係包括下列指 疋順序之步驟：（a)接觸重組表現一種或一種以上候選分子 之細胞（例如，免疫細胞如自然殺手細胞、τ細胞、巨噬細 胞、樹突細胞或單核球）；以及（b)偵測該細胞中c —Rel分 子之定位’其中’在不顯著改變NF/cB表現量及/或I/cB 數量的心況下’若該細胞核中之c-Re 1數量相較於不表現 一種或一種以上候選分子之細胞中所測得者更為增加或減 夕日才’則喊示該候選分子改變c-Re 1 -依賴型之轉錄作用。 根據此具體實施例，該細胞可於誘導候選分子表現之前、 同時或之後以IFN-7及/或脂多醣（LPS)刺激之。於特定具 8 92729 200530588 體實施例中’該表現候選分子之細胞係巨嗟細胞 或樹突細胞。 " 於此技勢中，任何已知之方法均可用於測量該定位至 ' I核之c Re 1的濃度。例如，細胞中1之定位可藉 由下述方法偵測··將該細胞與抗c—Rel之抗體或與該抗體 之結合d，以及該抗體之經螢光標定結合對象於有利於免 疫f 一性結合之條件下接觸。或者，細胞中c-Rel之定位 可藉由將该細胞與為C — Rel之具有螢光標定抗體或與該抗 月且之…口區在有利於免疫專一性結合之條件下接觸而偵 · 測。細胞中c-Rel之定位亦可藉由將自細胞單離出之核蛋 :以質譜儀定序而偵測。此外，細胞中c—Rel之定位復可 2由測量該c-Rel-依賴型轉錄作用之量而偵測，例如，測 置P40轉錄作用，或細胞之p4〇蛋白總濃度，或核之“ο 蛋白總濃度。 於此技蟄中，任何已知之方法均可用於測量肿κ B之 表現量，其包括，但不限於，藉由免疫專一性結合來測量 NF/cB家族成員p5Q、p65以及c —Rel之濃度或測量其編碼· mRNA之濃度。於特定具體實施例中，當例如使用完整細胞 蛋白卒取物進行西方墨點分析法測量時，Νρ π k表現係 與肿/cB家族成員p50、p65以及c—Re丨之表現相關。於此 技蟄中’任何已知之方法均可用於測量！ κ B之數量，其包 括’但不限於，例如使用完整細胞或細胞質蛋白萃取物進 打西方墨點分析法測量，以測得細胞中！《β蛋白或其編瑪 mRNA之總量，或例如測量該經處理之細胞内的蛋白 92729 9 200530588 、之人未處理之細胞比較以測得I κ β之降解濃度。 ;下文中之服“及/或1κΒ(包括I/cBa及I/cB =:見或數量，該用於本文之術語「顯著改變」係指 人κ ^表現里及/或I/cB數量之濃度改變大於10%，較佳大 方、2(U 3(U、40%、50%、60%、70%、75%、8 0%、90%或 95%。 4何依賴C—Rel轉錄作用之蛋白表現均可藉由改變 c Rel一依賴型轉錄作用❿改變。此等蛋白之實例包括，但 不限方、IL-6、IL-10、IL-12、IL-15、IL-23、IFN- 7、 BCl XL、^卜1、Jagged]、IRF — 4 以及 Ciyc。因此，一 種或種以上之此等蛋白的表現可經由根據本發明之方法 所鑑定之可選擇性改變C-Re卜依賴型轉錄作用之分子而 =變。於較佳具體實施例中，IL—12及/或IL —23之表現量 係由根據本發明之方法所鑑定之可選擇性改變C-Re卜依 賴型轉錄作用之分子而改變。 本發明提供用於鑑定可選擇性改變卜“卜依賴型細 胞激素產生之分子的方法，該方法係藉由下述方式進行： 相較於未與候選分子接觸或與陰性對照組如磷酸鹽緩衝液 (Phosphate buffered saline, PBS)接觸之細胞，偵測該 疋位至與一種或一種以上候選分子接觸之細胞（例如，免疫 細胞）之核中的C—Rel分子之濃度改變，而不偵測 表現量及/或I/cB數量之任何改變，（例如，評估但不偵測 無顯著改變之肝/c B及/或I /c B表現量）。依賴c_Rei以產 生蛋白之細胞激素之實例包括，但不限於，丨L_6、丨丨〇、 IL-12、IL-15、IL-23 及 IFN-r。因此，—種或一種以上 ]〇 92729 200530588 之此等、，，田月已/放素的表現可藉由該根據本發明之方法所鑑定· 之可選擇性改變C - R e i -依賴型細胞激素產生之分子而改/ 變。於較佳具體實施例中，I⑽及eIL_23之表現量係 由根據本發明之方法所鑑定之可選擇性改變CL依賴 型細胞激素產生之分子而改變。 方、^版貝鈿例中，本發明提供用於鑑定細胞中可選 擇性改變c-Re卜依賴型細胞激素產生之分子的方法，其係 包括下列指定順序之步驟：（a)使細胞（較佳者，係於驗 r及/或LPS刺激後或於】NF_ r及/或Lps刺激之同時）與# 一種或-種以上候選分子接觸；以及⑻偵測該細胞中 c Re 1刀子之疋位，其中，在不顯著改變肝凡b表現量及/ 或I /c B數里的'丨月況下’若該細胞核中之數量相較於 未與候選分子接觸或與陰性對照組如卿接觸之細胞中所 測得者更為增加或減少時，則顯示該候選分子改變c_Re卜 依賴型之細胞激素產生。根據此具體實施例’該與候選分 子接觸之細胞較佳為巨嗔細胞、單核球或樹突細胞。 於另-具體實施例中’本發明提供用於鑑定細胞中可馨 、擇!·生改义c Re卜依賴型細胞激素產生之分子的方法，其 匕括下列才曰疋順序之步驟：（a)於細胞中重組表現一種或 —種以上之候㉖分子；以及（b)偵測該細胞中分子之 疋位’其中’在不顯著改變NF《B表現量及/或工《B數量 的情況下’若該細胞核中之c_Rel數量相較於不表現一種 或-種以上之候選分子的細胞中所測得者更為增加或減少 時，則顯示該候選分子改變c_Rel_依賴型之細胞激素產 92729 200530588 生。根據此具體實施例，該細胞可於誘導候選分子表現之 前、同時或之後以IFN- 7及/或脂多醣（LPS)刺激之。於特 定具體實施例中，該表現候選分子之細胞係巨噬細胞、單 核球或樹突細胞。 於另一具體實施例中，本發明提供用於鑑定細胞中（於 1肝-7及/或LPS刺激後或於iNF-r及/或LPS刺激之同時） 可選擇性改變c-Re卜依賴型細胞激素產生之分子的方 法，其係包括下列指定順序之步驟：（a)將一種或一種以上 之候選分子經顯微注射入細胞中；以及偵測該細胞中 c - Rel分子之定位，其中，在不顯著改變NF/c b表現量及/ 或I κ B數量的情況下，若該細胞核中之C-Re丨數量相較於 未以一種或一種以上之候選分子顯微注射或以陰性對照組 顯微注射之細胞中所測得者更為增加或減少時，則顯示該 ，選分子改變c-Re卜依賴型之細胞激素產生。根據此具體 貫施例，該與候選分子接觸之細胞較佳為巨噬細胞、單核 球或樹突細胞。
於-具體實施例中，根據本發明之方法所鑑定之可方 細胞中選擇性改變心卜依賴型轉錄作用及/或c-ReH 賴型細胞激素產生之分子，並不會改變—種或—種以上戈 下列蛋白的表現量及/或活性：pu-1、Jau、了如、 朴明之A方B及P 3 8激酶。於另—具體實施例中，根招: ^明之方法所鑑定之可於細胞中選擇性改變C-Re卜依 貝,㈣用及/或心卜依賴型細胞激 係降低細㈣中卿P”。於衫具體實施财1據 92729 12 200530588 本發明之方法所鑑定之可於細胞中選擇性改變c_Rel_依 賴型轉錄作用及/或C-Rel_依賴型細胞激素產生之分子， 係降低細胞核中干擾素共有序列結合蛋白（i n t e r f e consensus sequence blndlng pr〇tein, icsBp)之量至少 10/車乂^土者’至4 15%、至少18%、至少2⑽、至少25%、 至少30%、至少35%、至少40%或至少45%。 方'另-具體貫施例中，根據本發明之方法所鑑定之可 於細胞中選擇性改變c_Re卜依賴型轉錄作用及/或Η. ㈣型細胞激素產生之分子，係會降低細胞核中_之 二方；另一具體貫施例中，根據本發明之方法所鑑定之可 二::胞中選擇性改變C-Re卜依賴型轉錄作用及/或c_Rei — 田胞激素產生之分子’係會增加細胞核中p65之 二。Γ二具體實施例中’根據本發明之方法所鑑定之可 c-Rel- 5 P65.t, 3W較仏為至少4〇%、至少似、至少⑽、至少㈣、 至少59%、至少60%、至少65%、至少 。 少85%。於另—具體實施例中，根據°、 > 75%或至 之可於細胞中選擇性改變 x之方法所鐘定 ❿卜依賴型細胞激素產生rm夂轉錄作用及/或 用。又於另-具體實施例中，根據^低邮之轉錄作 可於細胞中選擇性改變c - R e卜依賴❹日錄之/法所鑑定之 c~Re：l-依賴型細胞激素產生之分子，；用及/或 種以上之影響：降低細胞核中ICSBP:，：列兩種或兩 时之I、降低細胞核中 92729 13 200530588 p 5 0之量 用。 增加細胞核中 P65之量以及降低P35之轉錄作 本發明亦提供鑑定可 錄作用之、n摆μ & & 胞中媒介C—Re卜依賴型轉 ，、乍用之k擇性抑制作 法，其係包括下列指定川g皮 ^的（drug target)之方 可卩夂^ 疋順序之步驟··（a)將一種或一種以j
了 ί1牛低細胞核中C-]曰J ^ τ 里但不顯著改變NF/c β表現量及/ 或I/cB數量之藥劑進行 、铩疋之樂劑於可在該一種或一
經標定藥劑及該藥物標的 之 ]間幵/成複合物之條件下接觸； (C)早離該複合物；以 … (d)由该禝合物鑑定該藥物標的。 '/、Ή〜例中’本發明提供鑑定可於細胞中選擇性 抑制c-Re 1 -依賴型细妝〜本立1 , 生、、用胞，放素產生之藥物標的之方法，並俜 包括下列指定順序之步驟：（^ /乐 ^哪U)將一種或一種以上可降低細
ί核中C_Rel量但不顯著改變NW表現量及/或I/cB數 R藥劑進行標定；⑻使細胞與該-種或-種以上經標定 之樂劑於可在該-種或—種以上之經標定藥劑及該藥物標 的之間形成複合物之條件τ接觸；⑹單離該複合物；以及 ⑷由該複合物鑑^該藥物標的。接著可再使用該鑑定出之 樂物標的來鑑定可改變細胞激素表現量（尤其係C-Re卜依 賴型細胞激素量）之化合物。 本發明亦有關用於鑑定可經由C — Rel細胞内定位之改 變而改變其表現量或活性之分子的方法，亦即，包括將細 胞與可改變c-Rel細胞内定位但卻不改變NF/cB表現量或 UB數量之分子接觸，以改變c_Rel之細胞内定位，藉以 92729 14 200530588 增加或降低細胞核中之c_Rel，以及相較於未與該分子接 觸或與陰性對照組如pBS接觸之細胞，鑑定與該分子接觸 之細胞中其表現量或活性經改變之分子。 方；本發明之一具體實施例中，係提供調節C-Re 1活性 之方法，其包括將表現c_Rel之細胞與可改變c_Rel細胞 内疋位之刀子（尤其係降低細胞核之c - R e 1，但不顯著改變 細胞中NF /c B表現量或I /c B數量者）接觸。於此具體實施 例之一實施態樣中，該細胞中c-Rel蛋白之總量並未改 變。於另一實施態樣中，該細胞中c一Rel蛋白之總量則已 改變。於本發明之另—具體實施例中，係提供調節細胞中 c-Re卜依賴型細胞激素產生但不顯著改變細胞中肿疋b表 見虽或I /c B數昼之方法，其包括將表現1之細胞與可 改變c-Rel細胞内定位但不顯著改變細胞中肿凡b表現量 或I/cB數量之分子㈣。於上述具體冑施例之實施態樣 I ’該分子係藉由上述一種或一種以上之筛選分析法鑑 ^。於特定具體實施例中，該分子係藉由下述篩選方法鑑 定，該方法包括：將細胞與一種或一種以上之候選分子接 f ;以及偵測c-Rel分子於細胞中之定位，以便鑑定出彼 等可&成細胞核中之c_Rel數量減少（其係相對於未與彼 等^子接觸或與陰性對照組如pBS接觸之細胞中的c；_Rei 數量）但卻不會顯著改變肿/€6表現量及/或jkb數量之分 〇 於特定具體實施例中，本發明提供用以抑制細胞中 c Rel依軔型細胞激素產生但不顯著改變NF/cB表現量及 92729 ]5 200530588 或/cB數置之方法，係包括將細胞與可降低細胞 C —㈣數量但不顯著改變迎“表現量及/或Ι,Β數量之 分細如，於上述筛選分析法所鐘定之分子)接觸。㈣ 具體貝施例之-實施態樣中，該方法係包括將細胞盘可降 低細胞核中C-Rel數量但不顯著改變細胞中表現量 ^分：接觸，其中該NF/C Μ現量係藉由例如細胞萃取物 中掛Ρ65以及c-Rel之數量所估計。於另_實施態樣中， 該方法係包括將細胞與可降低細胞核中c_Rei數量但不顯 ^改變細胞中I/cB數量之分子接觸，其中該μ數量係 藉由例如細胞中I /c B之數量所估計。 本發明亦提供用於診斷或篩選存在下述疾病或不適、 或具有發展該疾病或不適之傾向的方法，該疾病或不適係 以患者體内具有異常之^61細胞内定位但存在正常肿凡 B表現量及/或ΐκ B數量為特徵’該特徵係藉由測量取自 患者之樣本中c-Rel定位至細胞核的量而定，其中，相對 於不具有該疾#或不it、或者不具有發展該疾病或不適之 傾向的類似樣本，該c-Rel之細胞核定位量的減少或增加 係顯示存在該疾病或不適、或者具有發展該疾病或不^之 傾向。 本發明亦提供用於有需要之患者治療與C — Rel -依賴 型細胞激素產生有關之疾病或不適的方法，其係包括：投 與有效量之分子至患者’以使表現C-Rel依賴型細胞激素 之細胞的細胞核中之C-Rel量降低，但不顯著改變細胞中 NF /ί B之表現量及/或I /c B之數量。此等分子之非限制性 92729 16 200530588 =係等利用本文所述之分析法所鐘定之分子。較 =二=/於此具體實施例之-實施麵^ 例中#… 關之疾病。於另-具體實施 例中，忒疾病或不適係自體免疫疾病。 枝供於有需要患切強^卩㈣—細胞激 :ί=藥劑的活性之方法，其係包括··將第-藥劑 ΜΡ 又/、至心者而该弟二藥劑係於表現第一 或弟-細胞激素之細胞中抑制第二細胞激素產生但卻 f顯著改變服7^之表現量及/或I/CB之數量者，其中， 该弟二細胞激素係c_Rel依賴型細胞激素。於此具體實施 :之-實施態樣中，該第一及第二細胞激素係相同或.相異 者。較佳者’該患者係人。於某些實施態樣中，該第一藥 劑係用於治療自體免疫/炎症性疾病，並不改變卜Rel之活 性或細胞内定位。 曰f發明亦提供用於評估該降低細胞核中C-Rel量但卻 不顯著改變細胞中NF/cB表現量及/或⑽數量之藥劑的 —、二之方法，邊方法係包括使細胞與該藥劑接觸並觀 务、細胞中之任何表現型效應（phen〇typic ef 。於另 一具體實施例中，本發明係有關用於評估於患者降低細胞 核中c Re 1置但不顯著改變細胞中評κ B表現量及/或I《 B數1之樂劑的生物效應之方法，該方法係包括將該藥劑 才又與至患者並觀察患者之任何表現型效應。該患者係哺乳 動物，例如小鼠、大鼠、猴子、狗、豬、人等等。 本發明提供包含可降低細胞核中c-Re 1量但卻不顯著 92729 17 200530588 改變細胞中NF /c B表現量及/或I /c B數量之分子的組成 物。本發明復提供治療或預防與異常C—Rel—依賴型細胞激 素產生有關之疾病或不適（例如，自體免疫疾病）的方法， 邊方法係包括投與至需要此組合物之患者。於某些具體實 施例中，該分子不具有如下列文獻中所述之化合物··美國 專利案No. 6, 384, 032;於2002年5月7日所提出之美國 專利申請案No. 09/594,362 ;於2001年U月3〇日所提 出之美國專利申請案No. 1 0/006, 624(公開號N〇 _2〇082259);於謂年w 3〇日所提出之美國專利申 清案 No. 1 0/000, 742(公開號 No· 20030139403);於 2002 年7月10曰所提出之美國專利申請案Ν〇. ι〇/ΐ92，如（公 開號No. 2〇0301 14446);於2〇〇2年11月％日所提出之 美國專利申請案如.1 0/305,039;國際專利如·卯〇〇/ 78757 ;國際專利 No. W0 03/0451 6 ;於 2003 年 1〇 月 14 日所提出之國際專射請案PCT/USG3/32546，·於2003年 11月10日所提出之美國專利臨時申請案如._ ’於2GG3年11月10日所提出之美國專利臨時申 u. 60/518,787;於 2003 年 u 月 1〇 國專利臨時中請案 N。· 6G/518,788;Mitsun〇ri()n〇 = 於測年11月10日所提出之pct申請案代理人样 (50586)61250,名稱為「辆人灿s 午代里人木號 箄人於2f]fU主 。σ雜％化合物」；Mitsunori Ono 寻人於2004年U月ι〇日所楛 ⑽⑻㈣2,名稱為「雜申請案代理人案號 等人於2004年1!月1〇曰玲 物」；MltSUn〇ri0no 曰所提出之PCT申請案代理人案號 92729 18 200530588 (50586)61253 ’名稱為「吡啶化合物」，其中，各案之全部· 内谷在此均合併作為參考文獻。 於某些具體實施例中，該分子不具有如下列文獻中所 述之化合物：美國專利案No· 6, 384, 032 ;於2002年5月 7日所提出之美國專利申請案N〇. 〇9/594, 362 ;於 年11月30日所提出之美國專利申請案No. 1 0/006 624(八 開號No. 20020082259);於2001年η月3〇日所提出之A 美國專利申請案No. 10/000, 742(公開號Ν〇· 30139403);於2002年7月1〇日所提出之美國專利申_ 请案 No. 1 0/1 92,347(公開號 ν〇· 200301 14446);國際專 利 No. W0 00/78757 ;國際專利 N〇. w〇 〇3/〇4516，其中， 各案之全部内容在此均合併作為參考文獻。 於某些具體實施例中，該分子不具有如下列文獻中所 述之化合物：美國專利案6, 680, 315，·美國專利案N〇. 6,693,097 ’·美國專利案N〇. 6,66〇,733，·美國專利申請案 No. 10/655,672;美國專利申請案 N〇. 1〇/656,671;於 年11月26日所提出之美國專利申請案Ν〇. ι〇/3〇5⑽馨 於2003年9月5日所提出之美國專利申請案ν〇 ι〇/ ， 656, 360 ;於2003年10月14日所提出之國際專利申請幸 PCT/US03/32546;於2003年U月10曰所提出之美國專利 臨時申請案No. 60/518, 791 ;於2003年n月1〇日所提 出之美國專利臨時申請案Νο· 60/51 8,787;於·3年η 月1 〇日所提出之美國專利舴R主由主& λτ ⑵寻扪^日才申凊案Ν〇· 60/51 8,788 ;
Mltsunori0no等人於2004年w 日所提出之PCT申 92729 ]9 200530588 凊案代理人案號（50586)61 250，名稱為「稠合雜環化八 物」’· MHsunor! 〇no等人於2〇〇4年n月1〇日所提出之 pct申請案代理人案號（50586)61 252，名稱為「雜芳基腙 化合物」；MHsunon 〇no等人於2〇〇4年u月1〇日所^ 出之pct申請案代理人案號（50586)61 253，名稱為「 化合物」，其中，各案之全部内容在此均合併作為參考文 獻0 於某些具體實施例中，該分子不具有如下列文獻中所 述之化合物··美國專利案No. 6,680,31 5;美國專利案n〇. 6, 384, 032;於2003年9月5日所提出之美國專利申靖安 版1 0/656,360;於2002年5月7日所提出之美國專利; 請案 No. 〇9/594,362 ;美國專利申請案 N〇. 1〇/655,672 ; 美國專利申請案Νο· 1 0/656,671 ;於2〇〇1年U月％日 所提出之美國專利申請案Ν〇. 1〇/〇〇6,624(公開號此 _2_2259);於漏年u月3〇曰所提出之美國專利申 凊案 No. 1〇/〇〇〇,742(公開號 Ν〇. 2〇〇3〇1 394〇3);於 22 年7月10日所提出之美國專利申請案Ν〇. ι〇/ΐ 92,347(公 開號 No. 200301 14446” 國際專利如.w〇〇〇/78?57;國 際專利No. W0 03/0451 6;於2003年1〇月14日所提出之 國際專利中請案PCT/觀/32546，其中，各案之全部内容 在此均合併作為參考文獻。 於某些具體實施例中，該分子並不具有如下列文獻中 料之化合物：於誦年η㈣日所提出之美國專利臨 日寸申請案No. 6G/518,791;於簡年^ 1(}日所提出 92729 20 200530588 之美國專利臨時申請案Ν〇· 60/51 8, 787 ;於2003年11月· 10日所提出之美國專利臨時申請案Ν〇. 60/51 8, 788 ; Mitsunori 〇no等人於2〇〇4年n月1〇日所提出之ρα申 μ案代理人案號（5 〇 5 8 6) 61 2 5 0，名稱為「稠合雜環化合 物」；MitSunori Οηο等人於2〇〇4年u月1〇日所提出之 PCT申請案代理人案號（50586)61 252，名稱為「雜芳基腙 化合物」；MitSun〇ri Ono等人於2004年π月1〇日所提 出之PCT申請案代理人案號（5〇586)61253，名稱為「吡啶 化口物」’其中，各案之全部内容在此均合併作為參考文φ 獻0 於其他具體實施射，該分子具有如下敎獻中所; 之結構：美國專利案No. 6, 384, 032 ’·於2002年5月7 所提出之美國專利申請案No. 09/594,362 ;於2001年1 月30日所提出之美國專利申請案Ν〇. ，似（公開' I 20020082259)，·於2001年η月3〇日所提出之美國』
利申請案Nq. 1()/_，742(公㈣Nq. 2咖13_);求 加〇2年7月1〇日所提出之美國專利申請案34 (公開號120咖議）；於職年丨丨月26日所提社 之吴國專利申請案N〇.議5,㈣；國際專利 了觀’國際專利版㈣湖別：於別⑽年“月“ 日所=之國際專财請案ρα觸3/32546;於細年 曰所提出之美國專利臨時申請案N〇. 6〇/ I18. Γ 2003 ^11 ^10 a ^ ^ t 5月木。.60/518,787;於_年1^0日所提出之美 92729 21 200530588 國專利臨時申請案NQ.，5l8,788;Mlts_ri 〇n〇等人 於2004年11月1〇日所提出之代丁申請案代理 (50586)61250，名摇 A「如四 — 為稠5雑環化合物」；Mi tsunor i Ono 等人方、2004年11月1〇日所提出之似申請案代理人案號 二〇586)61 252，名稱為「雜芳基腙化合物」;Mltsunori Ono 等人方、2004年11月1〇日所提出之pcT申請案代理人案號 (5 = 86)61253，名稱為「_化合物」，其中，各案之全部 内=在此均合併作為參考文獻。於—實施態樣中，該分子 係=由任何於本文中所揭示之篩選方法所鑑定。於另一實 施態樣中’該分子係經由此項技藝中習知之技術所純化。 於其他具體貫施例中，該分子具有如下列文獻中所述 之結構：美國專利案Ν〇· 6, 384, 032 ;於2002年5月7日 所提出之美國專利申請案No· 09/594,362 ;於2001年U 月30日所提出之美國專利申請案Ν〇· 1〇/〇〇6,624(公開號 Ν〇· 20020 082259);於2001年11月30日所提出之美國專 利申 w 案 No· 1〇/〇〇〇5 742(公開號 Νο· 200301 39403);於 20〇2年7月1〇日所提出之美國專利申請案Ν〇. 1〇/ 1 92, 347(公開號 Ν〇· 200301 14446);國際專利 No. W〇 〇〇/ 78757 ;國際專利ν〇· w〇 03/0451 6，其中，各案之全部内 谷在此均合併作為參考文獻。於一實施態樣中，該分子係 藉由任何於本文中所揭示之篩選方法所鑑定。於另一實施 悲木X中’該分子係經由此項技藝中習知之技術所純化。 方、其他具體實施例中’該分子具有如下列文獻中所述 之結構：美國專利案No· 6, 680, 31 5 ;美國專利案No. 92729 22 200530588 6，693，097，美國專利案 N〇 6 7Μ· " ^ 木⑽· b，bbU，733，吴國專利申請案 No_ 1G/655,672;美國專利巾請案11G/656,671;於謂 年11月26日所提出之美國專财請案Nq. 1G/3G5,〇39; 方、2003年9月5日所提出之美國專利申請案如.… 656, 360;於2003年1〇月14日所提出之國際專利申請荦 PCT/US03/32546;於2003年11月日所提出之美國專利 臨時申請案Mo.ι〇日所提 出之美國專利臨時申請案Ν〇· 6〇/518, 787 ;於2〇〇3年g 月5日所提出之美國專利臨時申請案Ν〇. 6〇/5ΐ8 788. MitsUn〇ri0no等人於2〇〇4年u月1〇日所提出之pcT申 請案代理人案號（50586)61250，名稱為「铜合雜環化合 物」；Mltsunori Ono等人於2〇〇4年u月1〇日所提出之 pct申請案代理人案號（50586)61252，名稱為「雜芳基腙 化合物」；Mitsunori 〇no等人於2〇〇4年U月1〇日所提 出之pct申請案代理人案號（50586)61253，名稱為「吡啶 化合物」，其中，各案之全部内容在此均合 之篩選方法所鑑定。於另一實施態樣中，該分子係經由此 項技藝中習知之技術所純化。 於其他具體實施例中，該分子具有如下列文獻中所述 之結構：美國專利案No. 6, 680, 315 ;美國專利案N〇 6, 384, 032 ;於2003年9月5日所提出之美國專利申請案 No. 1 0/656, 360 ;於2002年5月7日所提出之美國專 請案 No. 09/594, 362 ;美國專利申請案 Ν〇. 1〇/655, 672 ; 獻。於一實施態樣中，該分子係藉由任何於本文^；所揭示 92729 23 200530588 美國專利申請案No· 1 0/656, 671 ;於2001年π月3〇日 所#疋出之美國專利申請案Ν〇· 1 〇/〇〇6, 624(公開號No 20020082259);於2001年11月30日所提出之美國專利申 請案 No. 1〇/〇〇〇,742(公開號 No· 200301 39403);於 2002 年7月10日所提出之美國專利申請案ν〇· 1〇/1 92,347(公 開號 No· 200301 14446);國際專利 ν〇· W0 00/78757 ;國 際專利No· W0 03/0451 6 ;於2003年10月14日所提出之 國際專利申請案PCT/US03/32546,其中，各案之全部内容 在此均合併作為參考文獻。於一實施態樣中，該分子係藉 由任何於本文中所揭示之篩選方法所鑑定。於另一實施態 才$中，该分子係經由此項技藝中習知之技術所純化。 於其他具體實施例中，該分子具有如下列文獻中所述 之結構··於2003年11月1〇日所提出之美國專利臨時申請 案如.60/51 8,791;於2〇〇3年11月1〇日所提出之美國 專利臨時申請案No· 60/518, 787 ;於2003年11月1〇日 所提出之美國專利臨時申請案Ν〇· 6〇/51 8, 788;Mitsun〇h 〇no等人於2004年11月10日所提出之pCT申請案代理人 案唬（50586)61 250,名稱為r稠合雜環化合物」；…化仙沉土 〇no等人於2004年11月1〇日所提出之pCT申請案代理人 案號（50586)61 252,名稱為「雜芳基腙化合物」·，Mits_ri 〇no等人於2004年11月1〇日所提出之ρα申請案代理人 案號（50586)61 253,名稱為「吡啶化合物」，其中，各案之 全部内容在此均合併作為參考文獻。於一實施態樣中，該 分子係藉由任何於本文中所揭示之筛選方法所鑑定。於另 92729 24 200530588 一實施態樣中，該分子係經由此項技藝中習知之技術所純. 化。 其他具體實施例 於其他具體實施例中，本發明係有關抑制細胞中 c-Re ；1 -依賴型細胞激素產生但不顯著改變NF κ b轉錄因數 之表現量以及不顯著改變I zc B之降解量的方法，該方法係 包括將該降低細胞核中c-Re 1量但不顯著改變肝/c B轉錄 因數之表現量以及不顯著改變I zc B之降解量的分子與細 胞接觸。於特定具體實施例中，該C—Re 1 —依賴型細胞激素· 係IL-12。於此具體實施例之某些實施態樣中，係會使 IL 12之轉錄作用受到抑制，或者使細胞核中p 6 $之量增 加或使c-Rel轉位（translocation)至細胞核之作用受到 抑制，或者不顯著改變C — Rel之表現。於其他實施態樣中， 係使IL-12 / IL-23 ρ40之表現受到抑制，或者使2/23 次單兀ρ40啟動子之NF/cB成分受到抑制，或者使il_12/ IL - 23次單元P40啟動子之Est-2成分的活化作用受到抑 制。於其他實施態樣中，IL—12次單元p35之表現受到抑· 制，及/或IL-12次單元P35啟動子之NF/C B成分受到抑 制。又於其他貫施悲樣中，亦使細胞核中^ UBp之量降低， 或者使ICSBP之表現受到抑制。於某些實施態樣中，該細 胞係選自巨嗟細胞、單核球及樹突細胞所構成之群組。 又於另-具體實施例中，該C — Rel-依賴型細胞激素係 IL—23。於此具體實施例之某些實施態樣中，係使細胞核中 P65之量增加，或者使❿）轉位至細胞核之作用受到抑 25 92729 200530588 制，或者不顯著改變c-Re 1之表現。又於其他實施態樣中， 係使IL-1 2/IL-23次單元p40之表現受到抑制，或者使 IL 12/23认早元ρ40啟動子之NF/c B成分受到抑制，或者 使IL-12/23次單元ρ40啟動子之Est-2成分的活化作用受 到抑制，或者使細胞核中ICSBP之量亦降低。又於其他實 施態樣中，係使ICSBP之表現受到抑制。於某些實施態樣 中，該細胞係選自巨噬細胞、單核球及樹突細胞所構成之 群組。 於，、他具體貫施例中 一 π〜w τ ,个％饰名關鑑疋可選擇性抑 2 c-Rel依賴型細胞激素產生之藥劑（亦稱候選分子或化 5物）的方法，5亥方法係包括將試驗藥劑與細胞接觸之；偵 測.玄細胞核中之c_Rel量；以及選擇彼等降低細胞核之
量但不顯著改變NF/cB轉錄因數之表現量以及不顯 :改變I/cB之降解量的藥劑。於此具體實施 =中’該細胞核之咖量係使用螢光酵素分料A 辛：二ssay)之步驟偵測。該c-Rei依賴型細胞激 京可為IL-12或IL-23。 又於另一具體實施例中’本發明係提供標 (target dlsc〇Very)之方法。於一 ^ 定可選擇性抑制 、4枚中，係提供鑑 ._ —Rel依賴型細胞激素產生之華，的方 法，该方法包括將可降低細胞核 ：::方 ⑽轉錄因數之表現量以及不里二不_者改變 藥劑進行標定；使細旳彳 、又UB之降解量的 92729 26 200530588 :合物；以及由該複合物鑑定藥物標的。於此具體實施例 中，該c-Rel依賴型細胞激素係IL—12或il_23。 本發明亦有關於所需患者治療與c _ R e i _依賴型細胞 激f產生相關之不適的方法，該方法係包括對病患投與有 效里之可降低細胞（該細胞會產生細胞激素）核巾量 但不顯著改變卵^轉錄因數之表現量以及不會顯著改變 I/cB之降解量的藥劑。於一實施態樣中，該不適係選自下
^所^群組之自體免疫疾病：多發性硬化症、重症肌無 免Γ神經病變、基蘭巴爾症候群、自體免疫性 1= 免疫溶血性貧血、惡性貧血、自體免疫性 血小板減少症、職脈炎L旨症候群、血f炎
歇膚炎、天， 氏症、$隸、纟。腸炎、原紐膽汁性肝硬化' 太炎、第1型糖尿病、免疫媒介性糖尿病、葛 狀腺炎、自體免疫性印巢炎及睪丸炎、 ㈣腺免疫性疾病、類風濕性關節炎、全身紅斑性 “脊推/正代夕發性肌炎、皮肌炎、脊椎關節病變、傷 =椎火、修格連氏症候群、移植物對抗宿主 — 二另-具體實施例中，本發明亦有關治療患者體内盘 广1依賴型細胞激素產生相關之不適的方 :、 =為，此治療者。該患者可經由醫療專業人：鏗！ 有兮曰〜蚜為需要此治療者。該方法係包括對患者投盘 =置之可降低細胞（該細胞會產生細胞激素）核中^el、 里旦不-者改變NF/cB轉錄因數之表現量以及不顯 92729 27 200530588 =:解量的藥劑。於一實施態樣中，該不適係選自下 募：君f組之自體免疫疾病：多發性硬化症、重症肌無 力 自月豆免疫性神經病變、美蘭p吊、广代< , 基闌巴爾症候群、自體免疫性 «萄月吴火、自體免疫溶血性貧 惡性貝血、自體免疫性 ，症、顳動脈炎、抗磷脂症候群、血管炎、韋柊 納氏肉芽腫、貝寒:拉床广 σ 、赛谷氏病、乾癬、疱疹樣皮膚炎、天疱瘡、 白斑、克隆氏症、潰瘍性 σ 4 炎、料㈣汁性肝硬化、 自體免疫性肝炎、第]刑铋β t 也士 帝夫氏、广*B /储尿病、免疫媒介性糖尿病、葛 症:橋本氏甲狀腺炎、自體免疫性印巢炎及畢丸炎、 月上腺之自體免疫性疾病、類風濕性 =脊:=r肌炎、皮肌炎、脊椎關節 隹火、μ連氏症候群、移植物對抗宿主疾病。 於另-具體實施例中，根據本發明 之化合物係依據使用說明蚩彳# ' / i疋 ^^ ^^^月曰才不疋之。该說明書可包括投與 至而要此治療之患者的用法 續時門。a * 便用刎置、劑型以及持 、、男％間。患者可為哺乳動物 豬、牛或猶。 人亚長㈣物、狗、馬、 又於另一具體實施例中， ^ ^ .. I月仏有關於需要此治療 之心#i曰強用以抑制第—細胞激素 — 之方法，該方法係包括：將第弟一樂劑的活性 丰著峰伯4將弟—樂劑與會抑制第二細胞激 /丁、產生仁σρ不嘁者改變NF K B轉錄因 著改變之降解量的第 、及不顯 第二細胞激素之產生& Rel =、⑴又與至患者，其中， 度王句C-Re卜依賴型。於 中，該第一細胞激素盥兮篦一 έ B/^主、某二声'轭怨才水 "亥弟一細胞激素為相同者或該第- 92729 28 200530588 細胞激素與該第二細胞激素為相異者。於其他實施態樣 中，該第二細胞激素為IL—12或IL-23。 。 又於另-具體實施例中，本發明係有關評估該降低細 胞核中之c-Rel量但不顯著改變NF κ B轉錄因數之表現量 以及不頒著改變I /c B之降解量的藥劑之生物效應的方 法，該方法係包括使細胞與該藥劑接觸並觀窣細胞中之任 何表現型效應。又於另-具體實施例中，本發明係有關坪 估該於患者會降低細胞核之c_Rel量但不顯著改變肝^ 轉錄因數之表現量以及不顯著改變I/cB之降解量的越巧 效應的方法’該方法係包括使細胞與該藥劑接： 親祭心者之任何表現型效應。 又於另-具體實施例中，本發明係有關降低細胞核中 量但不顯著改變NF.B轉錄因數之表現量 顦者改變I/cB之降解量的化合物，惟該化合物不具有於美 國專利案1 6,384’032 1(：丁案_〇〇/787 、 結構。 T q ϋ之 【實施方式】 本發明在某種程度上係以發明人之發現為基礎，彼等 發明人發現可在不顯著改變NF/CB表現量或^數量之情 增加或減少C —Rel之活性，尤其係細胞核内之c-Rel 里 ° 本發明係有關用於鑑定可於細胞中選擇性改變 =賴型轉錄作用之分子的方法，其係包括下列指定順序之 ^驟:⑷使細胞與一種或一種以上候選分子接觸; 92729 29 200530588 偵測該細胞中c娜子之定位’其令，在不顯著改變肝 χβ表現量及/或Ι/ίβ數量的情況下，若該細胞核中之 C Rel數里相較於未與一種或一種以上之候選分子接觸之 細胞中所測得者更為增加或減少時，則顯示該候選分子改 變c-Re卜依賴型轉錄作用。於另一具體實施丫列中，本發明 係有關用於鑑定細胞中可選擇性改變c_Re卜依賴型細胞 激素產生之分子的方法’其係包括下列指定順序之步驟： (a)使細胞與—種或—種以上候選分子接觸；以及㈦ 該細胞h-Rel分子之定位，其中，在不顯著改變 表^及/或UB數量的情況下，若該細胞核中之c咖 數量二目較於未與一種或一種以上之候選分子接觸之細胞中 所測得者更為增加或減少時，則顯示該候選分子改総 c-ReH衣賴型之細胞激素產生。於另—具體實施例=，本 發明係有關用於鑑定細胞中可選擇性改變卜以卜依賴型 細胞激素產生之分子的方法，其係包括下列指定順序之+ 驟.（a)於細胞中重組表現—種或—種以上之候選分子.^ 及（bH貞測該細胞中c_Rel分子之定位，其中，在不顯著 變表現量及/或⑽數量的情況下’若該細胞核中 之c-Rem量相較於未與—種或—種以上之候選分子 之細胞中所測得者更為增加錢少時，則顯示該候選 改變c-Re卜依賴型之細胞激素產生。於特定具體實施例 中，該c-Rel依賴型細胞激素為IL〜12或Μ。 本發明亦有關於所需患者增強用以抑制第__細胞 產生之第一藥劑的活性之方法，該方法係包括：將第一藥 92729 30 200530588 劑與抑制細胞中（該細胞會表現第_及/或第二細胞激素）
第二細胞激素產生但不顯著改變NF斤B表現量及/或I κ B 數量的第二藥劑共同投與至患者5其中，該第二細胞激素 為c-Re卜依賴型細胞激素。於此具體實施例之實施態樣 中，該第一與第二細胞激素為相同或相異者。較佳者，該 患者為人。 C-Re 1 / /c B細胞内定位之偵測 此項技藝中任何用以偵測C-Rel細胞内定位（亦即，定 位至細胞核或細胞質）之已知方法均可用於本發明中。例 如，但不限於，此類偵測方法之—係將細胞與對c_Rei具 有專一性之抗體接觸，接著再偵測該抗體是否定位至細胞 核。债測C-Rel細胞内定位之特定方法係將經標定之抗 -c-Rel抗體（例如，以螢光染料標定之）及經標定之抗邛财 抗體（例如，使用不同於抗个Rel抗體之螢光染料）與所有 細胞接觸，然後再以例如雷射掃描顯微鏡技術债測細胞内 含有經共同定位（co-locallzed)之兩標定物的細胞。 因此’本發明所包含之作為c_Rel原位（ms⑽侧 伯法係包括免疫螢光法或免疫電子顯微鏡術。原位 稭由下述方式完成：將内生性表現或重組表現 二？子之細胞與可結合C_Rel之經標定分子接觸，再 ==位至細胞核所發生的結合。或者，可組合使 法，：：二：與該分子之經標定結合對象。使用此分析 定位2Γ1分子之存在，亦可敎其細胞内 細胞核内）。或者，可使c-Rel與可偵測 92729 3] 200530588 部分（例如’基因標記⑴ag tag))_起表現。而後，再使 用對該標記具有專一性之抗體偵測該重組之c_Rei分子。 典型之c-Rel免疫分析法係包括：於對C-Rel具有專 -性的可制之經標定分子（例如，心士丨之抗體）存在 下培養樣本，該樣本為活體内或活體外培養細胞，接著再 以此項技藝中任何已知之某些技術偵測該結合之分子。
於特定具體實施例巾’可將生物樣本例如新鮮取得之 細胞，與可固t細胞之固態支樓物或承載物如硝化纖維 素、玻璃、聚苯乙烯或其他固體支#物接觸或使樣本細胞 固定於其上。接著可使用適當緩衝劑洗滌該支撐物，再以 可偵測之經標定分子處理之。然後再使用該緩衝劑洗滌該 固態支撐物第二次，以移除未結合之分子。接著可再經由 習知方法偵測該結合於固體支撐物上之標定物量。 所使用抗c-Re 1分子之抗體的結合活性可根據習知方 法測疋之。彼等於此技術領域中具有通常知識者可藉由使 用例行實驗以決定各項測定之操作與最適分析條件。 抗c-Rel抗體可進行可偵測標定的方法之一係使該抗 體與酵素連結’再使用於酵素免疫分析法（e n z y ni e immunoassay ， EIA)中（Voller， A·， “The Enzyme Linked
Immunosorbent Assay(ELISA)”，1 987，Diagnostic
Horizons 2*· 1-7, Microbiological Associates Quarterly
Publicat ion, Walkersvi1le, MD) ； Voller et a 1. , 1 9 78, J· Clin· Pathol· 21:507-520; Butler，1981，Meth·
Enzymol. ·· 482-523 ; Maggi。，E· (ed. )，1980, Enzyme 32 92729 200530588
Immunoassay, CRC Press, Boca Raton，FL，； ishjk 1 Ja. S W 3, ^ ^ (eds. ), 1981, Enzyme Immunoassay, Kgaku Shoin, Tokyo))。該結合於與c_Rel分子結合之抗體商 當受質(較佳為呈色受質)反應之，於此方法係產 =由適 例如分光光度法、螢光分析法或經由光學方法偵測之化與 部分。 子 亦可使用螢光或化學冷光或生物發光化合物，或使用 :射性部分或其他於此技藝中已知之標定物對抗體進行標 债測及/或測量C-Rel之細胞核定位的另一方法俜經 :=藝中已知之任何方法單離核蛋白’並制於該核 二二㈣。。1)中是否存在心卜較佳者係藉由質譜 經由此技藝中任何: = 蛋白。核蛋白之單離可 1 夫之方法元成。於核蛋白單離後， 進二之藉由下述方法完成例如以抗—抗體 e《核或使之與免疫親和性管柱上之抗 點法顯現蛋白。於本㈣千板上或槽中或經由西方墨 位至枋 又月之另一具體實施例中，c-Rel定 位至細胞核之作用可經 ^ 咖-PAGE膠體上單離方法债測及/或測量：於 之蛋白，再將該沖提之疋Γ ’自該膠體沖提所離析 序列。此質譜分析法可譜分析法以測定胺基酸 任何適當方法進行 。玄項技蟄中已知之質譜分析的 ㈣ureGenetlcs2〇:46^°^⑽a町以5人，1 998, 0U>Neubauer etaJ. ? 1 997, Proc. 92729 33 200530588
NaU. Acad. Sci. USA 94:385_390;以及 WUmetai /
Nature 379 :466-469中所述之方法。僅作為例示使用而，' 不用以限制者，該沖提之胜肽係溶於5%甲醇/5%甲酸溶液 中，並使用如 WilmandMann，1 996，Anal· Chem. 68: 卜8中所述之毛細管柱進行去鹽。接著將該胜肽以5⑽甲醇 /5%甲酸溶液（0.5至2微升）經單一步驟直接稀釋於奈電喷 灑離子源之喷灑針中。取得該胜肽之質譜。然後再於第一' 支四極棒（first qUadr叩〇le)中依次選擇胜肽。該質譜儀 之第一部份係作為質量過濾器使用，以允許一種m/z^之· 胜肽離子種類於同一時間穿透。其後再於碰撞室中以氬氣 進行碰撞誘導解離而使各胜肽分別斷裂成碎片。該所得之 胜肽碎片係於第三支四極管中分離再偵測之。對於胰蛋白 酶解性胜肽（tryptlc peptides)而言，此方法通常會導致 包含該鼓基端之「巢狀」胜肽碎片。當兩鄰近片段間之質 量差異與相對應胺基酸之殘基質量相符時，則可測定該胜 肽自其羧基端至胺基端的部分序列。 細胞中c-Rel之定位可於活體外（例如，於細胞培養中馨 單離）或活體内偵測及/或測量。該於細胞中偵測卜⑽細 胞内定位之細胞可為任何細胞，例如會内生性地或重組地 表現c Re 1或其片丰又或其同源基因之細胞。該細胞可為脊 椎動物、昆蟲（例如’果蝇）、線蟲（^他廳）、哺乳動 物、牛、鼠、大鼠、，|、魚、靈長類動物、人等等之細胞。 昆蟲、線蟲（〔· 、 魚、靈長類動物、人等等 該表現之c-Rel可為脊椎動物 哺乳動物、牛、鼠、大鼠、鳥 92729 34 200530588 之c-Rel。该細胞可為原生組織（pr imary tissue)之細胞、. 細胞株、或包含及表現C-Rel轉殖基因之動物細胞。例如， 該基因轉殖動物可為果蠅（例如，黃果蠅（melan〇gaster)) 或線蟲。於較佳具體實施例中，該轉殖基因 係編碼人類c-Rel。基因轉殖動物可由此項技藝中習知之 標準方法產生。 於本發明之特定具體實施例中，係使用包含該 結合區（binding d⑽ain)(係針對c_Rel)之抗體及片段以 偵測上述方法之特定具體實施例中的c_Rel。因此，del φ 蛋白、或其片段或相似物或衍生物，尤其係人類c_Rei蛋 白或其片段，均可使用作為免疫原以產生抗_c_Rei蛋白之 抗體。此等抗體可為多株抗體、單株抗體、歲合抗體、單 鏈抗版FabU/L原結合）片段或來自Fab表現庫者。此類抗 體之製造方法為該項技藝中所習知，且部分方法將於下文 敛述之。 / j對c-Rel具專一性之抗體可用於此技藝中已知者以 =寺方;上文中討論之與本發明c_Rei蛋白的定位及/或 =相關的方法中，例如使此等蛋白成像、 理 =測量其濃度1於診斷方法中等等。此亦適用於c = ^之仿生物、同源物或相似物。 表現里或I /c B之數量亦可使用此技藝中 Ϊ:方：偵測，包括使用對NF/cB家族成員或；任何： 使用對UB具專一性之抗體，例如經由教示於下 92729 35 200530588 文實施例乙f中所例示之方法，則可測定UB之數量。仲 “之表現夏可經由測量p5Q、p65或c_Rei的量而測定。 其他用於偵測C-Rel是否位於細胞核内之方法可 測量蛋白或其編碼姻分子的存在，關㈣依 之轉錄活性以及其於表現量是否增加（細胞核中增加之 c-Rel)或減少（細胞核中減少之c-Rei)而定。 抗體生產 此項技蟄中已知之各種製程均可用於生產抗c〜Re卜 NF/cB家族成員或其任何次單元、或或該蛋白之片 段、衍生物、同源物或相似物之抗體。本發明之抗體包括， 但不限於，合成抗體、單株抗體、重組製造之抗體、胞内 抗體UntrabocHes)、多專一性抗體（包括雙專一性抗體）、 人類抗體、擬人化抗體、嵌合抗體（chimericantib〇dy)、 合成抗體、單鏈Fvs (scFv)(包括雙專一性scFvs)、單鏈 抗月且Fab片|又、F(ab’）片段、經雙硫鍵連結之Fvs (sd{?v) 及抗個肢基因型（anH-]；d，antUdotype)抗體，以及上 述任一者之抗原決定基（epit〇pe)結合片段。尤其，本發明 之抗體包括免疫球蛋白分子以及免疫球蛋白分子之免疫活 性蛋白，亦即該分子包含可免疫專一性地結合於抗原之抗 原結合位（例如，抗體之一個或一個以上的互補決定區 (CDRs)) 〇 為生產抗體，可藉由注射例如天然C—Re 1蛋白或其合 成變化形式或其衍生物而使各種宿主動物免疫。此等宿主 動物包括，但不限於，兔子、小鼠、大鼠等等。依據宿主 36 92729 200530588 之種類可使用各種佐劑以增加免疫反應，該佐劑包括，但 不限，，弗氏（Fr_d，s)(完全與不完全）佐劑^物凝^ 如虱虱化鋁、介面活性物質如溶血卵磷脂、共聚物多元妒 (pluromc P〇lyols)、聚陰離子（p〇lyani〇n二:胜二兀油子 乳劑、二硝基酚以及潛在有益之人類佐劑如卡介苗、/ (bacilli Calmette-Guerin，BCG)及短小棒狀桿菌 (Corynebacterium parvum)。雖然下列事物係尤指於 c-Rel，但本文所述之任何方法亦同樣適用於、二二:肝& B家族成員或其次單元、或lag。 為了製備針對c-Rel或其衍生物、片段、同源物或相 似物之單株抗體，可使用任何提供於經由培養持續性細胞 株以製備單株抗體之技術。此等技術包括，但不受限於， 起初由 Kohler 與 Milstem (1 975, Nature 256 : 495-497) 發展之融合瘤技術、tric)ma技術（Gustafss〇n以5人，MM，
Hum· Antibodies Hybrid〇mas 2 : 26-32)、人類 B 細胞融 合瘤技術（Kozboretal:，1 983，Immun〇1〇gyT〇day4: 72)以及生產人類單株抗體之Εβν融合瘤技術My·， 1985, In . Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R· Liss，Inc·，pp· 77—96)。於本發明之其他具體 貫施例中，可利用國際專利申請案pct/[JS9〇/〇2545所述之 新近技術於無菌（germ-free)動物中生產單株抗體。 根據本發明，可使用人類抗體且該人類抗體可經由使 用人類融合瘤（Cote etal.，1 983, Proc. Natl. Acad. Sci 卟A 80 : 2026-2030)或經由於活體外將Εβν病毒轉形至人 92729 37 200530588 類 B 細胞（Cote et al·，1 985，In ·· Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy， Alan R. Liss， Inc·， pp·77-96) 而獲得。事實上，根據本發明，可使用經下述方式處理發 展出之「嵌合抗體」生產技術（Morrison ei a人，1 984，Proc Natl. Acad. Sci. USA 81 ： 6851-6855 ； Neuberger et aL ? 1 984, Nature 312 ： 604-608 ； Takeda et al. ? 1 985, Nature 314: 452-454):將該來自對C—Rel具有專一性之小鼠抗體 分子的基因連同該來自具適當生物活性之人類抗體分子的 基因進行剪接；此類抗體係包含於本發明之範φ壽中。 根據本發明，經敘述用於生產單鏈抗體之技術（美國專 利弟4，946，778號案）可適用於生產C—Rei —專一性抗體。 本發明之其他具體實施例係利用該經敘述用於構築Fab表 現庫之技術（Huse et al·，1 989, Science 246 : 1275-1281) 以快速且輕易地鑑定對C-Rel蛋白、其衍生物或相似物具 有預期專一性之單株Fab片段。非人類抗體可藉由已知技 術「擬人化」（例如，美國專利第5,225,539號案）。 包含c-Rel之個體基因型的抗體片段可經由該項技藝 中已知之技術產生。例如，此等片段包括，但不限於，可 經由抗體分子之胃蛋白酶分解作用而產生之F(ab，）2片 奴，可經由遝原F(ab’）2片段之雙硫鍵橋（disulf ide bridge)而產生之Fab’片段；經由使用木瓜酵素及還原劑 處理抗體分子而產生之Fab片段；以及Fv片段。合成抗體， 例如以化學合成方式產生之抗體，係使用於本發明中。 於抗體之生產中，可使用該項技藝中已知之技術筛選 92729 38 200530588 欲得之抗體，例如ELISA(酵辛 妞也蚪於D , 運結免疫吸附分析法）。為 挑进對方；c-Rel或其衍生物、 區U_ln)具有專一性術门：物或相似物之特定功能 £且結合於c-Rel蛋白哎j：科斗i 段的融合瘤產物。 …生物、同源物或相似物之片 重組表現 用:本發明筛選方法之c_Rei及其衍生物 :摘重組生產方法為該項技藝中具有通常知識者所熟 知編碼c - R e 1、或盆名干在抓 u + 次/、何生物、片段以及同源物之核酸為 ' 知。第1圖係提供已知之編碼該例示之人類 ::广邮酸序列_ ID N0:1)。編碼c_Rel之核 項技藝中已知之任何方法獲得，例如使用可雜交 式:列之3及5,端的合成引子進行PCR放大技術，及/ 二：對於各序列具專—性之寡聚核脊酸自應 體組基因庫進行選殖。 同源基因（例如，編碼除了人類以外之物種的卜㈣ 夂序列）或其他相關序列（例如，同物種同源基因）可經 =用d項技#中習知之核酸雜交或選殖方法，與該作為 Γ之王部或部分的特^人類序列以低、中或高嚴格度雜 父而獲得。 ^ ^述方；第1圖之經編碼c-Rel蛋白（SEQ ID NO : 2)可 !由該項技藝中已知之蛋白純化及重組蛋白表現方法而獲 1疋為重組表現一種或一種以上之該蛋白，可將包含編碼 ^ A白之全部或部分核苷酸序列的核酸插入適當表現載體 92729 39 200530588 中，亦即，包含該經插入之編碼序列的轉錄作用及轉譯作 用之必需單元的載體。必需之轉錄及轉譯訊號亦可由 C Rel基因及/或其側翼區（fiankingregi〇ns)之天然啟動 子所提供。 ' 可利用各種宿主-載體系統以表現該蛋白編碼序列。此 =系:統包括，但不限於，以病毒（例如，牛疫病毒、腺病毒 感染之哺乳動物細胞系統；以病毒（例如，桿狀病毒） =染之昆蟲細胞系統；微生物如包含酵母菌載體之酵母 =或以1菌體、舰、質體腿、或凝聚載體（_如舰 :形之細_。載體之表現單元係依其強度及特性而有所不 同。依據所利用之宿主—韻㈣备姑 „ . 錄及轉譯作用單元。 使用任一種適當之轉 於較佳具體實施财，人類係 21編碼序列而獲得。而於另-具體實施例中，則是： 、、且方式表現c-Re 1之衍生物、片 、 直中二l:Rel蛋白係表現為嵌合或融合蛋白形式’ h二=用方^之胺基酸序列係經由肽鍵連結 白的相異氨基酸;===現之嵌合或融合蛋 tag)。 马钻緘序列如基因標記（flag 此項技藝中任何可# 入載體以構築包含由、可使用於將遍片段插 卞匕3由適當轉錄/轉 序列所構成之嵌入^工制讯唬及蛋白編碼 外重組_及的表現載體。此等方法可包括活體 及。成技術《及活體内重紐技術（基因重組）。 92729 40 200530588 扁馬c Re 1《其知生物、片段或同源物之核酸序列的表 現作用可由第二個核酸序列調節，以使經重組_分子样 形之宿主表現該基因或其W段。例如，該蛋白的表現可： 該項技藝中已知之任何啟動子/增強子控制。於特定呈體實 施例二，該啟動子並#C-Re丨基因之天然啟動子。二‘二 具體實施射，該啟動子於免疫細胞内（例#，周邊血液單 核細胞、樹突細胞或單核球或脾細胞）具有活性。可使用之 啟動子包括但不限於SV40早期啟動子（Bern〇ist and
Chambon，1981，Nature 290 : 304-31 0)、包含於勞氏肉瘤 病毒（Rous sarcoma virus)之3,長末端重複中的啟動子 (Yamamoto ei W·，1 980，Cell 22 ·· 787-797)、皰疹胸腺 嘧啶激酶啟動子（Wagner以沒人，1981，Proc· Natl. Acad. Sci · USA 78 :1441-1445)、金屬硫蛋白基因的調控序列 (Brinstereia7·，1 982，Nature 296:39-42);原核生物 表現載體如冷-内醯胺酶啟動子（Villa-Kamaroff ei a/·， 1 978，Pr〇c. Natl· Acad· Sci· USA 75:3727 - 3731 )或 tac 啟動子（DeBoer eia/·，1 983，Proc· Natl· Acad. Sci· USA 80 · 21-25 ； Gilbert et al. 5 1 980, Scientific American 242 : 79-94);包括胭脂鹼合成酶啟動子（Herrar-Estrella M a7·，1 984，Nature 303 :209-21 3)或花椰菜嵌紋病毒 35S RNA 啟動子（Garder eia人，1984，Nucleic Acids Res. 9 : 2871 )之植物表現載體，以及光合酵素核酮糖雙磷酸羧 化酶之啟動子（Herrera-Estrella ei a/·，1984，Nature 310 : 115-120);來自酵母菌及其他真菌之啟動子單元如 41 92729 200530588
Gal4 啟動子（Johnston eis 人，1 987，Microbiol. Rev. 51 : 458-476)、醇脫氫酶啟動子（Schibler ei s人，1 987, Annual Review Genetics 21 : 237-257)、石粦酸甘油激酶啟 動子（Struhl ez" a/·，1 995，Annual Review Genetics 29 : 651-674 ； Guarente 1987, Annual Review Genetics 21 · 425-452)、鹼性磷酸酶啟動子（Struhl以a/,，1 995， Annual Review Genetics 29 ： 651-674 ； Guarente 1987, Annual Review Genetics 21 : 425-452)，以及下列顯現組 織特異性且已利用於轉殖動物中之動物轉錄控制區：於胰 臟腺泡細胞中具有活性之彈性蛋白酶I基因控制區（Swi ft et al. , 1 984, Cell 38 · 639-646 ； Ornitz et al. ? 1 986,
Cold Spring Harbor Symp· Quant· Biol· 50 : 399-409 ; MacDonald 1 987，Hepatology 7 : 425-515);於胰臟 yg 細 胞中具有活性之胰烏素基因控制區（Hanahan ei a/.，1 985, Natural 315 : 115-122)、於淋巴細胞中具有活性之免疫球 蛋白基因控制區（Grosschedl eia/·，1984，Cell 38: 647-658 ； Adams et al. ? 1985, Nature 318 ： 533-538 ； Alexander et al., 1987, Mol. Cell Biol. 7 ： 1436-1444)、於睪丸、乳房、淋巴及肥大細胞中具有活性之小鼠 乳腺腫瘤病毒控制區（Leder β W·，1 986，Cell 45 : 485-495)、於肝臟中具有活性之白蛋白基因控制區 (Pmckert et al. , 1 987, Genes and Devel. 1 ： 268-276) ^ 於肝臟中具有活性之α -胎兒蛋白基因控制區（Krunilauf etal^ 1 985, Mol. Cell Biol. 5 ： 1 639-1 648 ； Hammer et 92729 42 200530588 a/·，1987，Science 235 : 53-58)、於肝臟中具有活性之. α-1抗胰蛋白酶基因控制區（Kelsey 人，i 987，Genes and Devel· 1 : 161 -171)、於骨髓細胞中具有活性之万球 蛋白基因控制區（Mogram ei ，1 985，Nature 315 :
SSS-SAOJKolliaseia/MigSG’CelldGUgO'M 月s部之券樹突神經膠質細胞中具有活性之髓鞍驗性蛋白基 因控制區（Readhead ei a/·，1 987，Cell 48 : 703-712)、 於骨絡肌中具有活性之肌凝蛋白輕鏈一2基因控制區（gan 土 1985，Nature 314 ·· 283-286)及於下視丘之促性腺激素細鲁 胞中具有活性之促性腺激素釋放激素基因控制區（Mas〇n d a人，1 986，Science 234 ·· 1372-1378)。 於特定具體實施例中，係使用包含下述特徵之載體： 可連結至該編碼C-Rel或其片段、衍生物或同源物之核酸 序列的啟動子、一個或一個以上之複製起點、且視需要包 含種或一種以上可篩選之標誌、（marker)(例如，抗生素抗 性基因）。 ” 於另-特定具體實施例中，係藉由將C — Rel基因次選傷 殖入二個pGEX載體之各价冰I限制酶切位以產生包含該 c_Rel之編碼序列或其部分序列之表現載體（麩胺基硫s- 轉移酶表現載體；Smith and Johnson，1 988，Gene 7 ·· 31- 40)。此方法允許該產物於正確編碼股表現。 …·包含該重要序列之表現載體可經由三種一般方法鑑 定.（a)核酸雜交、（b)r標誌」基因功能之存在或不存在， 以及（c)所插入序列之表現。於第一方法中，c — Rei序列可 92729 43 200530588 藉由將之與探針（與該插入序列同源或互補之序列）進行 酸雜交而摘測。於第二方法中，該重組载體/宿主系統= 該經由將重要序列插入載體造成某些「標認」功能（例如 =生素具抗性、於桿狀病毒形成包含體(〇cciusi 寺寺）的存在或不存在為基礎而進行鐘定或筛選。例如，如 =將C Rel基因或其部分序列插入載體之標諸基因序列 能之❿1片段之重組體將可藉由該標誌基因功 第:例如’石'"半乳糖®酶活性之喪失）來鑑定。於 之c_Rel來鑑定。 山由刀析该由重組载體表現 姑〜旦重組之C—如分子經鑑定與單離後，可使用古玄頊 種方法將之增殖。利用適當宿主系統:生 1 置增殖並放大重組表現載體。如先前所ϋ、 该可使用之表現載體或衍生物包括先爾， 物病毒如牛癌病毒或腺病i=;r限於，人類或動 菌載體；嗟菌體載體如桿狀病毒、酵母 此外，可in#人1 口肢，以及質體或凝聚載體。 疋方式修飼或加工處理該經表或以所奴之特 自某些啟動子之表現可於某蛋白的宿主細胞株。來 控制該經基因改造C_R ¥劑存在下提升；因此可 對於蛋白之轉譯 f現。再者’不同的宿主細胞 磷酸化等尊）量士 、ϋ工處理與修飾（例如，醣化、 或宿主系統以=卜= 王里。例如，於細菌系統中之表2所欲之修飾及加工處 見可用於產生未醣化之核心 92729 44 200530588 蛋白’而於哺乳動物細胞中之表現則可確保異源 :」醣化作帛。而且，不同載體/宿主表現系統對 二 理反應之影響程度亦不相同。 '力工處 表其他特定具體實施例中，該卜㈤蛋白或 可經表現為包含該經由肽鍵連結;又蛋 列物… 物此寺肷合產物可藉由使用該項技蓺中p 碼所欲胺基酸之適當核酸序列相互i合於 產物而產生\讀“項技藝中習知之方法表現該歲合 用於鑑定調節劑之篩選方法 Μ /本發明之—具體實施例中’係提供e-Rei活性之調 即J (例如，抑制劑、拮抗劑或促效劑）的鑑定方法，兮方 法:系藉由_候選分子於不顯著改變表現量及^幻 二數量之情況下對於，細胞内定位之改變的影塑能 力，故因此，或許亦可鑑$c_Rel於活化基因之轉錄作用 白勺活性’其巾c_Rel係藉由在該基因之啟動子及/或增強子 的NF/cB結合位形成序列專一性醜結合複合物以袁予 t錄起始複合物之產生。此類基因之說明實例為d卜依 知型細胞激素，例如IL~12及IL-23,其次單元p4〇及p35 分別於啟動子中包含NF/cB結合位。於本發明之此呈㉙實 施例的-實施態樣中，該用於鑑定c_Rel活性調節劑之方 法包括：提供細胞與候選調節劑分子並谓測或測量該與細 月匕核共純化或共定位之c_Rel的量（在不顯著改變肿“ 92729 45 200530588 杨B數量之情況下)，其中，相較於未與候選 刀子接觸之細胞，該共純化或共定位至細胞核之c_Rei的 存在或數量上之差異顯示該候選分子調節del活性。於 本發明之筛選方法中所使用之例示細胞及細胞株包括，作 =，巨嗟細胞、樹突細胞、單核球、周邊血液單核細 =激其之較佳係於與候選分子接觸之前以IFN^及/或奶 —本發明之特定實施態樣係有關鑑定抑制或促進c_Rel 二位至細胞核之分子。於另—特定實施態樣，係 P制或促進c-Rel定位至細胞核但不影響細φ , 量（不管是在轉錄或轉譯層次上）的分子。於 該經鑑定之分子係藉由例如抑制c_Rei轉： 中之加細胞核中C-Rel之降解速度以降低細胞核 量二二t其他實施態樣中，細胞核之
^位至'、·田胞核之數量係受到抑制，但該NF =存：:::之數量則増加。又於另-實施態樣 方、存在或不存在對I㈣_A或蛋白的影響下，卜 ==胞核之作用係受到抑制且該_之數量亦降 小 表另一貫施態樣中，當與細胞核中c—Rel數量 二之細胞相比較時’ c_Rel轉位至細胞核之作用係卩欠/ 5亥P40之啟動子中的Ets_2結 '了'牛-且 作用之能力。 力月^不再具有活化轉錄 叫似蝴該賴巾所習知者及 • p中之方法。用於本發明此具體實 92729 46 200530588 方;可内生性地或重組地表現，、或 /、片奴、何生物或相似物。c_Rel之重 -飞 5 · 1. 1節中所揭露之方法或使用該項技㈠習知2如 :·將C-Re 1編码核酸序列送入表現载；中白接著::: t送入細胞中以表現c_Re卜或者單純將e s:序列送入細胞中表現。於特定具體實施例中，c:Rel: 連同標諸表現以易於债測，但該標言志並不影塑C—Rel、、舌t 或細胞内定位。已有來自某些物種之編碼c —Li㈣序t 經選殖並定序，且其表現係為此項技藝中所習知。 :—Rel核㈣及胺基酸序列之說明實例係示於第i圖;1 :㈣··1及2)。表現可來自表現載體或染色體内。 ^疋具體貫施例中，係使用標準人類細胞株，如 =麟或人轉核轴料ΤΗίΜ、或人㈣邊血液單十 析。於特定實施態樣中，當使用免疫細 二Τ 係於與—種或一種以上候選分子接觸之 :;;Γ 免疫活化化合物如脂多釀则或干擾 素-？’（INF- r )接觸之。 :此項技藝中具有通常知識者所知之可將e_Rei_編 身任何方法均可用於構築作為表現之表現 載f，包括彼等於上文第5.1節中所揭露之方法。此外， 可選擇會調節c-Rel表現或者會將該基因產物修飾或加工 處理為所欲之特定形式的宿主細胞株。來自某些啟動子之 表現可於某些誘導劑存在下提升；因此可控制蛋白 之表見再者不同的伯主細胞對於蛋白之轉譯及轉譯後 92729 47 200530588 的加工處理與修飾（例如， 搪制。 醣化、切割）具有獨特 _。可爾當之細胞株或宿主系統以確：：之 c-Rel蛋白達成所欲之修飾及加工處 ：之 彼等於下文實施例乙節中所揭露者。 ”之'，·田胞株為 p ^本Y之另—具體實施例係提供用於鐘定可媒入 法之一係包括下列指it 1之方法°此例示方 可降低細胞核中曰 、 〆種以上 ^ T _ Rel置但不顯著改變NF/cB表現量及/ 或I/cB數量之藥劑進杆轳 里及/ r; " μ 仃軚疋，（b)使細胞與該一種或一錄 上、4定之藥劑於可在該—種或—種以上之經 及該藥物標的之間形成複合物之條件下接觸.（c) 人妝·丨、；B丄 计'忏卜接觸，（c)早離該複 ° ， d)由該複合物鑑定該藥物標的。 候選分子 於此技藝中任何已知分子對於調節（提高或降低） 丨生：此力皆可藉由偵測c —Rel於細胞内定位( :!)上之變化而測試。經由實施例，於定位上之變二 下述方式偵測：在暴露於候選分子之前及之後，侦測1 人細胞核-恤之或定位至細版_ '上:： 巧Γ錳疋凋即c—Rel之分子，可直接將候選分子供 二至表現c-Rel之細胞，或者對於候選蛋白而言，可藉由 下述ir、件下提供其編碼核酸而提供：該核酸序列可於 C — Rel.表現細胞中經重組表現產生候選蛋白。 抑制c-Re 1轉位至細胞核但不顯著改變NF B表現量 及/或I /c B數量之較佳化合物係包括下列化合物： 92729 48 200530588 化合物1 ·· N-(1H-吲哚-3-基亞曱基）_N，—[4 一嗎啉 基-6-(2-吡啶-2-基-乙氧基）-[1，3, 5]三哄-2-基；μ聯胺； 化合物2:Ν-(3-甲基-苯亞曱基）-Ν，—[6一嗎啉_4_基— (2-吡啶-2-基-乙氧基）-嘧啶-4-基]一聯胺； 土 化合物3 : Ν-(1Η-吲哚-3-基亞曱基）_Ν，一[4一嗎啉 基-6-(2-嗎啉-4-基-乙氧基）-吡啶-2-基μ聯胺； 化合物4 : Ν_[3,5_二氟_2_嗎啉_4_基_6_(2_嗎啉—4 — 基-乙氧基）-吡啶-4-基]-Ν，-(3-曱基-苯亞曱基）一聯胺； 化合物5:Ν-(3-曱基-苯亞甲基）-Ν，一[4_嗎啉一基4一 (2-嗎啉-4-基-乙氧基）_吡啶一2一基]_聯胺； 土 化合物6:Ν-甲基-Ν，-(3-曱基—苯亞甲基）务[4_ 4-基-6-(2-嗎啉-4-基-乙氧基）—吡啶_2_基卜聯胺.”、 ，合物7:4-甲基-2-{[4-嗎啉+基娜嗎啉+美 乙虱基）-吡啶—2-基]亞肼基曱基}-苯胺； 土 化口物8 · N-(6, 7_二甲氧基嗎啉-4-基-喹啉.幻 -N，-(3-甲基一苯亞甲基）一聯胺； 土杯4基） 化合，9 ·· Ν_(7_Ή—嗎啉+基，哇啉+基）泰 (3曱基—本亞甲基）-聯胺，· 化合物10: N-口—曱氧基一2-嗎啉—4—基 乙氧:)，一]…基-笨亞…：:减- 化合：⑴嗎琳…(2餐 氧 山疋—4一基亞甲幻-Ν,-間1苯基-聯胺； 孔基） ^定:口：二.N~(3 —氯—苯基)—N，—[6’林.基 1(2-土乙乳基）-嘧啶—4_基亞^基卜聯胺； 92729 49 200530588 化合物13 : N-(3-甲氧基-苯基）-N，_[6_嗎啉_4_基一2_ (2-吡啶-2-基-乙氧基）-嘧啶_4 —基亞曱基]_聯胺；以及 化合物14 : N-（2, 5-二曱基-苯基）—N，一[6一嗎啉一4_基 -2-(2-吡啶-2-基-乙氧基）—嘧啶_4_基亞曱基卜聯胺。 本發明之此具體實施例係相當適用於筛選分子之化學 庫（chemical libraries)，其中，該分子係經由改變該與 細胞核一起純化或定位至細胞核之c_Rel數量而調節（例 如，抑制、拮抗或促進）c_Rei活性。該化學庫可為胜肽庫、 模擬胜肽庫（peptidomimetic libraries)、化學合成庫、 重組體例如噬菌體展示庫，以及於活體外以轉譯為基礎之 文庫（translation-based libraries)、其他非胜肽合成有 械庫（non-peptide synthetic organic libraries)等等。 使用本發明之方法所篩選之化學庫可包括各種型式之 化合物。可根據本發明方法篩選之化學庫實例包括，但不 限於’甘胺酸胺基取代之陽離子寡聚合物（一種胜狀衍生 物，pept01ds);隨機生物寡聚合物；多樣體（divers⑽打5) :乙内醯脲、苯二氮呼以及雙胜肽；類乙烯“—Μ) 多胜肽；非胜肽之模擬胜肽；寡絲甲酸;肽基膦酸醋； 胜肽核齩庫、抗體庫；碳水化合物庫；以及小分子庫（較佳 者总小的有機分子庫）。於某些具體實施例中，該經篩選之 化學庫中的化合物為核酸或胜肽分子。於非限制性實施例 肽刀子可存在噬菌體展示庫中。於其他具體實施例 人’化合物之型式包括，但不限於，胜肽類似物包括該包 3非天然存在之胺基酸（例如，D_胺基酸）的胜肽、胺基酸 92729 50 200530588
樣員似物如r-胺基磷酸、或具有非胜肽鍵之胺基酸、核 酸類似物如硫代磷酸酯及PN s何爾豕、抗原、合成或天 二ΐ在之㈣、鸦片劑、多巴胺、血清素、兒茶I分胺、凝 -母乙膽驗、w列腺素、有機分子、費洛蒙、腺脊、 嚴糖、葡萄糖、乳糖以及半乳糖。多胜肽或蛋白庫亦可使 用於本發明之分析中。 於較佳具體實施例巾，餘合化學庫為小的有機分子 庫，其包括但不限於，異戊二稀、噻哇啉酮、間嚷啡酮 (metathlazanones)、吡咯啶、嗎啉基化合物以及苯二氮 呼。於另一具體實施例中，該組合化學庫係包括甘胺酸胺 基取代之陽離子寡聚合物；隨機生物寡聚合物，·苯二氮呼； d/vers⑽ers如乙内醯脲、苯二氮呼以及雙胜肽；類乙烯 夕肽，非胜肽之模擬胜肽，寡胺基曱酸酯；肽基膦酸酯； 肽核&L庫、抗體庫或碳水化合物庫。組合化學庫本身為 商業上可購得者（參見，例如C⑽Genex，貯丨此^⑽，
Jersey ， Asinex， Moscow， RU， Tripos， Inc.， st. Louis，
Missouri , ChemStar, Ltd, Moscow, Russia ； 3D Pharmaceuticals, Exton, Pennsylvania ； Martek Biosciences，Columbia，Maryland ;等等）。 衣車父佳具體貫施例中，該化學庫係先經過篩選，因此 该化學庫之化合物可更易於細胞吸收。例如，化合物係依 據特定參數如（但非受限於）大小、親脂性、親水性以及氫 鍵進行篩選，其中該參數可提高化合物進入細胞之可能 )±。於另一具體實施例中，該化合物係以三維或四維電腦 92729 5] 200530588 計算裎式分析。 成方方法所使用之组合化合物庫。合 之大里衣造，其可對藥理學、生物學或其他 犀 該用於製造大量组合化學座 订師k。 中邊r 〇 5成方法係於溶液中或固態 ::仃，亦即於固體支持物上。固態合成法較易於 ^私反應且驅使反應以高產率完、 ,,^ U句過里试劑可輕层 ;且：母個反應步驟後洗除。固態组合合成法亦可促 化學更能支援廣泛多種的有機反應'f之液聽學則比固態 本發明之組合化合物庫可使用揭露於美國專利 6，190,619號案(Kllc〇ln等人)之設備合成，而該宰之全部 此係合併作為參考文獻。美國專利第6，19〇,619號 木揭鉻可支承多個反應容器之裝置’該多個反應容界係提 供多樣不連續化合物或化合物之組合庫的平行合成。 於一具體實施例中，該組合化合物庫可於㈣中合 成。該方法揭露於美國專利第6，194,612號案打等 人），而該案之全部内容係在此合併作為參考文獻，1特色 2使用化合物作為組合庫之液態合成法的模板。該模板係 設計為可允許反應產物以液/液或@ /液萃取法㈣地由未 反應之反應物中純化。該使用模板而經由人 之編較佳為小的有機分子。該化學庫中二=: 可模擬非胜肽類或胜肽類之作用。相較於組合化合物庫之 固態合成法，液態合成法並不需要使用專門程式以監測多 92729 52 200530588 步驟固態合成法之個別步驟（Egnereia/.，1995，J· Org. Chem. 60 · 2650 ； Anderson et al. 5 1 995, J. Org. Chem. 6 0 ·· 2652 ; Fitch ei a/·，1994，J· Org· Cheni· 59 ·· 7955 ; Look et al. 5 1 994, J. Org. Chem. 49 · 7588 i Metzger et al., 1 993, Angew. Chem., Int. Ed. Engl. 32· 894； Youngquist ei a；. ? 1 994, Rapid Commun. Mass Spect. 8： 77 ;Chuem 1 995，J· Am· Chem. Soc· 117:5419; Brummel eiW·，1 994, Science 264:399;以及 Stevanovic
et aL , 1 993, Bioorg. Med. Chem. Lett. 使用於本發明方法之組合化合物庫可於固體支持物」 合成。於一具體實施例中，係使用分離之合成方法，於^ 成期間分離及混合㈣支持物之程式，以於固體支持物j 合成化合物庫（參見例如Lam M#，1 997, Chem Rev 97 · 41-448 ；〇hlmeyere^7., 1993, Proc. Natl. Acad Sen. USA 90 : i0922_1〇926 及 噩攸介風虑Λ 、汀引用之蒼考文獻^於 取…化子庫中之各個固體支持物實質上
化合物附著方《i主二 、句，、有種型式之 者方、其表面。於固體支持 方法（其中，夂古姓仏於,了切上。烕組合庫之其他 蓺中且有通當。“ ―種產物)將為彼等於此項技
et a1· , 199 I :中^有通吊知識者所知(參見例如 匕員技
Chem. Rev. 97 : 449—472)。 於本文所使用「固體支持 式之固體切I多數支持 心Μ限於特定3 具有通常知識者所知。固^可購得者且為該項技 塑膠膜、麵珠、棉、塑；珠=括”、樹脂、衍生 命本乙烯珠、鋁膠以及多 92729 53 200530588 醣。適當固體支持物可以所欲之最終用途以及於各種合成 步I♦之適用性為基礎而進行篩選。例如，對胜肽合成法而 °固脰支持物可為樹脂如對-甲基二苯甲胺（pMBHA )樹脂 (Peptides Internati〇nal，L〇ulsville，κγ)、聚苯乙烯 (例如，得自 Bachem inc·，peninsula Lab〇ra1：〇ries 等等 之PAM-樹脂）包括氯甲基聚苯乙烯、羥甲基聚苯乙烯以及 月女曱基♦乙稀、聚（一甲基丙烯醯胺）一接枝之苯乙烯共一二 乙烯基-苯（例如P0LYHIPE樹脂，得自Amin〇tech，
Canada)、聚醯胺樹脂（得自 peninsula Lab〇rat〇^es)、 與聚乙二醇接枝之聚苯乙烯樹脂（例如tentagel或 ARG0GEL，Bayer，Tubingen，Germany)、聚二甲基丙烯醯 胺樹脂（得自 MUUgen/Wosearch，Calif〇rnia)或
Sepharose(Pharmacia， Sweden)。 於本發明之某些具體實施例中，化合物可經由連結物 (nnker)附著於㈣支持物。連結物可為整體性的且為固 體支持物的-部份，或者可為非整體性的，係合成於固體 支持物上或者於合成後附著於固體支持物。連結物不僅可 提供附著點使化合物附著至固體φ U "且支持物，亦可依據連結物 =性質於不同條件下使分子之不同基團自固體支持物切 剔。例如，連結物尤其可為親電性切割、親核性切割、光 可切割、酵素切割、以金屬切宝，丨、！ ^ ^ ° t遇原狀態下切割或於 氧化狀態下切割。於較佳呈辦念# 八私旦一 ε 八虹"、苑例中，該化合物係於化 〇物之咼通里師選丽自固體支持物切判。 於本發明之某些具體實施例中 ⑺甲，邊化合物為小分子。 92729 54 200530588 例示之化學庫為來自數個來源（ArQule，Trip〇s/ PanLabs, ChemDesign，Pharmacopoeia)之商業上可購得 者於某些貝例中，這些化學庫是使用組合策略 、
(C⑽binatQrial stmegies)所產生，該組合策略編碼位 之化學庫各成員的特性於基板（成員化合物係附著於基 材）因此可直接且立即地鑑定作為有效調節劑之分子。因 此，於許多組合方法中，該化合物位於平板的位置明確說 明瞭化合物之組成。此外’於—實施例中，單—個平板位 置：具有1至20個化學分子，該化學分子可藉由投與至含 有交互作關係的孔洞中篩選。因此，若仙到調節作用， 則可分析越來越小之集合的相互作用配對物之調節活性。 經由此類方法可篩選許多候選分子。 許多適於使用之多樣性化學庫係為此項技蔹中已知 者’且可經❹於提供_本發明所試驗之化合物 =用標準方法構築化學庫。化學（合成）庫、重組表現庫、 ’夕核糖體基庫（PQlyS⑽e_based 之化學庫的例示型式。 便用 該化學庫可為受限的或半硬式的（具有某些程度之結 限制者線性的或非受限的。該化學庫可為⑽或 二口表現4 Ik機胜肽表現庫或化學合成之隨機胜狀表現 =、或非_庫。將表現庫送人細㈣錢行分析， 该庫之核酸係經表現以產生其所編碼之蛋白。 、 於一具體實施例中， 於活體外經化學合成之庫 該可使用於本發明之胜肽庫可為 。此類化學庫之實例係由 92729 55 200530588
Houghten ei a人，1991，Nature 354 : 84-86 所提供，其 敛述了自由/、胜狀類之混合物，於該六胜狀中，各胜肽之 第一個及第二個殘基係經個別且具體地定義；Lam巴广， 1991，Nature 354 : 82-84 揭露了「一珠，一胜肽」之方 法，該方法之固態分離合成系統生產了胜肽庫，其中，該 集合物之各個珠體係已固定單一個隨機序列之胺基酸殘 基；Medynski，1 994，Bio/Technology 12 : 709-71 0 敘述 了分離合成法及T-bag合成方法；以及Gaii〇p以习人， 1 994’ J· Medicinal Chemistry 37(9) ·· 1 233-1251。單由 其他貫加例，可根據下列文獻所敘述之方法製備組合化學 庫以供使用 lOhlmeyerez^y., 1 993, Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 90： 1 0922-1 0926； Erb , 1 994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91： 1 1422-1 1426 ；Houghtene^7., 1 992, Biotechniques 13： 412； Jayawickreme 1994, Pr〇c
Natl. Acad. Sci. USA 91 : 1614-1618;或 Salmonei5人， 1993，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: m〇8-11712。 PCT 公開號 WO 93/20242 以及 Brenner and Lerner，1 992,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA89:5381_5383 敘述了「編 碼之組合化學庫」，其包含各個化學聚合物庫成員之寡聚核 苷酸識別符（identif i ers) ° 於較佳具體實施例中，該經篩選之化學庫為生物表現 庫’其係隨機胜肽嗟菌體展示庫，其中，該隨機胜狀為限 制性的（例如，以具有雙硫鍵之功效限制之）。 此外’亦可使用較普遍且結構上受限之有機多樣性(非 92729 56 200530588 胜肽）庫。經由實施例，可使用苯二氮呼庫（參見例如Bunin et al., 1 994, proc. Natl. Acad. Sci. USA 91 ： 4708-4712)。 可使用之構形上受限的化學庫包括，但不限於，彼等 已έ不义之半胱胺酸殘基者（半胱胺酸於氧化環境中會藉 由雙硫鍵交聯而形成胱胺酸）、經修飾之胜肽（例如，加入 氟、金屬、同位素標記物、經磷酸化等等）、包含一個或一 個以上非天然發生之胺基酸的胜肽、非胜肽結構以及包含 顯著部分r -羧基麵胺酸之胜肽。 胜肽庫亦可使用例如胜肽衍生物（例如，包含一個以上 非天然存在之胺基酸者）。此類之其中一實例為胜肽庫 (Simon et aj., j 992, Proc. Natl. Acad. Sci USA 89： 9367-9371 )。甘胺酸胺基取代的陽離子寡聚合物為具有天 然存在之側鏈附接於骨架胺基氮上而非附接於〇碳上之非 天然胺基酸聚合物。因為甘胺酸胺基取代的陽離子寡聚合 物不易經人類消化性酵素降解，所以更益於適用為藥物。 可使用之化學庫的另一實例為敘述於Ostresh Μ :994，，划.Acad· Sd USA 91:1驗⑴42 者， 。亥化學庫巾胜肽之醒胺功能已經由預先甲基化產生化學 換之組合庫。 可根據本發明篩選之胜肽庫成員並*受限於包含該 20個天然存在之胺基酸。特^言之，化學合成庫與核糖體 基庫可使用除了該20個天然存在之胺基酸以外的胺基酸 (、’工由化子庫產生所使用之胺基酸前驅物集合物的内含 92729 57 200530588 物）。於特定具體實施例巾，該化學庫成貞包括—個或一個 、上非天然或非典型之胺基酸或環狀胜肽。非典型胺基酸 不限方、.般胺基酸之D-異構物、α —胺基異丁酸、 4月女^ 丁酉夂、Abu、2一胺基丁酸；γ _仙、^ __、6_胺 =己I，Abi、2-胺基異丁酸；3_胺基丙酸；鳥胺酸；正白 胺酸；正綠胺酸、經脯胺酸、肌胺酸、瓜胺酸、氧化半耽 胺酸、第三丁基甘胺酸；第三丁基丙胺酸、苯基甘胺酸、 環己基丙胺酸、万-丙胺酸、設計之胺基酸如石-甲基胺基 酉文、ca-甲基胺基酸、Να_甲基胺基酸、說—胺基酸以及一 般胺基酸類似物。此外，該胺基酸可為D(右旋性）或l(左 旋性）。 於知疋具體貫施例中，係篩選C-Re丨之片段或相似 物，特別是模擬胜肽，作為C-Rel細胞核定位或運輸之競 爭性或非競爭性抑制劑的活性。 方、本奄明之另一具體實施例中，可使用組合化學鑑定 C - Rel細胞核定位或運輸之調節劑。組合化學可創造含有 數百個或數千個化合物之化學庫，且其中許多化合物可具 有相似結構。雖然高通量篩選程式可篩選此等龐大化學庫 之已知標靶的親和性，但卻仍發展出可完成具有較小維度 但部提供最大化學多樣性之化學庫的新方法。（參見例如
Matter, 1997, Journal of Medicinal Chemistry 40： 1219-1229)。 組合化學方法之一：親和性指紋分析法（affinity finger print ing) ’已先用於試驗小分子之不連續化學庫對 92729 58 200530588 蛋白之鑑定板（defined panel)的結合親和性。經篩選得到 之指紋係用於預測個別化學庫成員對於其他感興趣（於本 發明，c-Rel)之蛋白或受體的親和性。將該指紋與由其他 已知可與感興趣之蛋白反應的化合物所得之指紋相比較， 以預測該化學庫化合物是否可能具有相似反應。例如，可 試驗彼等具有與其他已知具有該活性之化合物相似指紋的 配位子，而不試驗魔大化學庫中每個配位子與丨之交 互作用。（參見例如 Kauvar ei//·，1 995, Chemistry and
Biology 2 : 107-118 ; Kauvar， 1995， Affinity fingerprinting, Pharmaceutical Manufacturing
International· 8 : 25-28 ;以及 Kauvar，Toxic-Chemical
Detection by Pattern Recognition in New Frontiers in
Agrochemical Immunoassay, D. Kurtz. L. Stanker and J. H. Skerritt. Editors, 1 9955 AOAC ： Washington, D. C.5 305-312)。
Kayeia/·，1 993，Genel 28:59_65(Kay)揭露 了構 染胜狀庫之方法，該胜肽庫係編碼完全隨機序列之胜肽， 且该序列係比任何先前傳統化學庫之序列更長。揭露於 Kay之化學庫編碼出長度大於約2〇個胺基酸之完全合成的 Ik機胜肽。此類化學庫可利於經篩選以鑑定1調節 劑。（亦蒼見1 996年3月12日美國專利第5, 498, 538號案； 以及1 994年8月18日PCT公開號W0 94/1831 8案）。 其他化學庫可包含抗體庫以及於細胞中表現胞内體之 化學庫。 59 92729 200530588 若化學庫包含化合物之陣列或微陣列（其中，夂 皆具有位址或識別符)，則化合物可例如藉由相互 2品對原始化合物之列表（其係適用於個別之試驗分析）而 去旋轉（deconvoluted)。 斤）而 若該化學庫為胜肽或核酸庫，則化合物之序 胜肽或核酸定序而測定。此類方法為 』 具有通常知識者所熟知。 ""中 各種類型之胜肽庫的综合評論可參見於㈤ 习人，J. Med· Chem. 37 : 1233 —1251。 於篩選分析法所鑑定之化合物 本發明復有關經由上述篩選分析法鑑定之化 =由㈣此等分析法生產此類製劑之方法。該 括，但不限於，核酸、反義核酸、核醣核酸酵素、三虫^ 鍊anPlehellx)、抗體以及多輯分^疋 機分子。因此，於一且俨每竑加山 …、饨或有 卜…八4 …施例巾，本發明包括經由包含 以…析法之任一步驟之方法所得到之化合物。例 如，該化合物係由包含下述步驟之方法所得到： 一種以上=候選分子與細胞接觸；以及偵測c_Rel分子於 細胞内之疋位’其中，係在不顯著改變NFU表現量及/ 或Ι/cB數量的情況下，該細胞核中u_Rei量相較於未盘 -種或-種一上之候選分子接觸之細胞中 量為、 增加或減少者。 S又与 -，試驗化合物經本發㈣選方法鑑^為具有適當活 试驗化合物可進行進—步之試驗，例如，於動 92729 60 200530588 之，2二確°心其於動物體内作為C-Rel活性或細胞内定位 δ周印制的活性，或其潛在之副作用。亦可於 亦或細胞内定位之分子的作用，以確認其預期之 ㈣村對於該經鎧定之化合物進行試驗以制其毒性 5田1用（该毒性或副作用可能與此類化合物之投與有 關）。或者’可將此處料經鑑定之化合模式 測定此化合物之作用機制。 杈式中以 此等例*之用於評估可降低細胞核心_Re =變崎嶋表現量及……心心^ 之任仃表現型（phenotype)影響。另一例示之 法係包括：將該製劑投藥至試驗對象/動物，並觀察該試於 對象/動物體内之任何表現型影響。 人$礼 本發明亦有_財文所述之處理方法❹經上 逬分析法所鑑定之化合物。因此，如 ^ 入$方〜士凡上+ 处使用此等化 十、§周配配方、合成、製造及/或生產用於珍斷、 預後或治療之藥物或醫藥組成物，皆包含於本發明之範⑯ 内。例如’於—具體實施例中，本發明包括藉由瞭解化I 物（、該化合物可經由上述筛選分析法得到）之結構及/或性口 貝以口成或生產藥物或鲁樂組成物之方法。例如，藥物或 醫藥組成物可以上述㈣方法所得之化合物的結構及/或 性負為基礎而合成。 此外，該經鑑定之化合物可於經調配使用於治療或預 92729 61 200530588 防之方法前，先以該項技藝中已知之方法進行修飾以使該 化合物更為合適，亦即增加其於試驗對象體内之半生期， 或使該化合物更易於吸收至試驗對象之組織内。此等修飾 方法包括，但不限於，聚乙二醇處理法（PEGy丨ati〇n)、多 元聚合作用（multlmerizatlon)。此等修飾方法係藉由藥劑 化學師進行以使該化合物更適於投藥。此外，該經鑑定之 化合物可經修飾以穿越通過血腦障壁。
该顯現預期生物活性之化合物可使用作為發展或設言 具有有效藥理活性之同類物（congener)或相似物之先導j 口物。例如’—旦先導化合物經鑑^，則可使用分子模指 技術設計該化合物之可更為有效的變化體。分子模擬^ 之實例為 CHARM 及 QUANTA 程式（Polygen c〇rp〇rati〇n、
Wa 1 tham，ΜΑ)。CHARM執行能量之最小化及分子之動力風 函數。QUANTA執行分子結構之㈣、圖像模擬以及予 QUANTA可提供分子間作用的相互構築、修飾、形像化及/ 析。可使用作為發展或設計具有有效藥理活性之同類物^ 相似物之先導化合物的例示化合物係敘述於美國專利- 6」取_號案；於讀年5月7日提出申請之美國專矛 弟09/594,362號申請案；於咖年η月30日提出申过 之吳國專利第1 0/006,624號申請案(公開號 " 咖咖9);於湖年U月30日提出申請之美國相 弟1 0/000,742唬申請案（公開號2〇〇3〇1 394〇3);於2 年7月1〇曰提出申請之美國專利第1〇/ (公開號議u遍）；於咖年η^6日提 92729 200530588 美國專利第1 0/305，039號申請案；國際專利第wo 00/ 78757號案；國際專利第w〇 〇3/〇4516號案，·於2〇〇3年 月14日提出申請之國際專利申請案pcT/us〇3/32546 ;於 2003年11月1 〇曰提出申請之美國專利臨時申請案第 518,791號案，於2〇〇3年η月1〇日提出申請之美國專利 臨時申請案第60/51 8, 787號案；於2003年11月10日提 出申明之美國專利臨時申請案第60/518, 788號案；於2004 年π月ίο曰提出申請之pCT申請案代理人案號（50586) 61250名稱為「稠合之雜環化合物（Fused Heterocyclic
Compounds)」’ Mitsunori Ono ei a/·，；於 2004 年 11 月 10曰提出申請之PCT申請案代理人案號（50586)61 252，名 稱為「雜芳基腙化合物（Heteroaryi Hy打azone
Compounds)」，Mitsunori Ono ei a/·，；於 2004 年 11 月 10曰提出申請之PCT申請案代理人案號（50586)61 253，名 稱為吼°疋化合物（Pyridine Compounds)」，Mitsunori On〇 以5/.，，其中，各者之全部内容均在此合併作為參考文獻。 許多文章重新探討了藥物與特定蛋白間交互作用的電 腦模擬，例如 Rotivinen ei a/.，1 998，Acta Pharmaceutical Fennica 97 : 1 59-1 66 ; Ripka，1 998，New Scientist 54-57;McKinaly& Rossmann，1 989，Annu· Rev· Pharmacol. Toxiciol. 29 · 111-122 ； Perry & Davies, OSAR ： Quant i tat ive Structure-Activity Relationships in Drug Design pp. 189-193(Alan R. Liss, Inc. 1 989)； Lewis & Dean, 1 989, Proc. R. Soc. Lond. 236 ： 125-140 63 92729 200530588 及 141 162，Askew eh/. , 1 989，j. Am. Chem. s〇c· ln : 1 082-1G9G。其他篩選與透過圖像描述化學藥品之電腦程式 可由下列公司購得’例如Bi〇Design Inc.⑻㈣⑽， ornia) Allelix, inC- (Mississauga, Ontario, Canada)以及 Hypercube，Inc. (Cambridge，〇11加1〇)。雖 然此等程式原先係設計於藥物對料蛋白之專—性的應 用’但其亦可適用於設計對任何特定區域具有專—性之藥 物。或者’具有微少或無生物活性之先導化合物（於筛選中 所確認者）亦可用於設計具有生物活性之化合物的類似物 及同類物。 醫藥組成物及治療/預防性投與 本i明提供藉由投與有效量之本發明治療劑（亦即，經 本發明篩選方法所鑑定之化合物）至試驗對象之治療（及預 防）方法。於較佳實施態樣中’該治療劑本質上係經純化。 該試驗對象較佳為動物，其包括但不限於下列動物：例如 牛豬4、f田、狗等等，且較佳為哺乳動物，以及最佳 為人類。於特定具體實施例中，該試驗對象為非人類哺乳 動物。 於特定具體實施例中，本發明提供治療具有異常 del細胞内定位但不顯著改變NF/cβ表現量及/或 數量之疾病或不適之方法，該方法包括：將包含可降低 細胞核定位但不顯著改變肿^6表現量及/或 數里之分子以及醫藥上可接受之載劑的組成物投與至具有 此類疾病或不適之試驗對象m定具體實施例中， 92729 64 200530588 本發明提供治療與IL-12產生有關之疾病或不適之方法， 該方法包括：將包含可降低C — Rel細胞核内定位但不顯著 改、交NF/cB表現量及/或ΐ/ζβ數量之分子以及醫藥上可接 又之載劑的組成物投與至具有此類疾病或不適之試驗對 象。於另一特定具體實施例中，本發明提供治療與c_Re；l-依賴i細胞，放素產生有關之疾病或不適之方法，該方法包 括將包含可降低C — Re 1細胞核内定位但不顯著改變肝凡 B表現里及/或ΐκβ數量之分子以及醫藥上可接受之載劑 的組成物投與至具有此類疾病或不適之試驗對象。又於另 一特定具體實施例中，本發明提供㈣自體免疫疾病或不 適之方法，該方法包括··將包含可降低c—Rel細胞核内定 ::不顯著改變m現量及/或I/cB數量之分子以及 醫樂^可接受之載劑的組成物投與至具有此類疾病或不適 二、1¾對象孩可降低de 1細胞核定位但不顯著改變仙 μt現里及/或I & B數量之分子，可為彼等經本文所述 之師砥方法所鑑定者（例如彼等於詳細說明書中所描述 文所揭示之化合物及組成物係用於治療或預防任何 :“，12產生相關之不適，例如，炎症疾患、免疫疾病、 ^性疾病以及骨質流失疾病。亦提供治療及預防之方法。 亥術ϋσ火症疾患」包括任何由iL-12產生所造成、 ^心媒介之炎症疾病、不適或症狀。此類炎症疾患可包 瘡旦Γ!於：氣喘、成人呼吸困箸症侯群、全身紅斑性狼 昆u性腸道疾病（包括克隆氏症（Crohn’s dlsease)以 92729 65 200530588 及潰瘍性結腸炎）、多發性硬化症、胰島素依賴型糖尿病、_ 自體免疫性關節炎（包括類風濕性關節炎、幼年型類風濕性 關節炎、乾癖性關節炎）、發炎性肺症候群、天疱瘡、特發 性血小板低下性紫斑症、自體免疫性腦脊髓膜炎、重症肌 無力、自體免疫性曱狀腺炎、皮膚炎（包括異位性皮膚炎及 微疹型皮膚炎）、乾癣、修格連氏症候群（包括修格連氏症 候群之繼發性乾眼症）、簇型禿髮、節肢動物咬傷造成之過 敏反應、口腔潰瘍、虹膜炎、結膜炎、角膜結膜炎、皮膚 性紅斑狼瘡症、硬皮症、陰道炎、直腸炎、藥物疹（例如I · 蒂文斯-強生症候群（stevens-Johnson syndr_e))、痲瘋 逆行反應（leprosy reversal reacti〇ns)、痲瘋結節性紅 斑、自體免疫性葡萄膜炎、過敏性腦脊髓炎、再生不良性 I血、純粹性紅血球再生不良、血小板減少症、多發:軟 骨炎、韋格納氏肉芽腫、慢性活動性肝炎、葛瑞夫茲氏眼 病變（Graves’ ophthalmopathy)、原發性膽道性肝硬化、 後段葡萄膜炎以及間質性肺纖維化。 「炎症疾患」明確包含急性炎症疾患。急性炎症疾患馨 之實例包括：移植物對抗宿主疾病、移植排斥反應、敗血 性休克、内毒素血症、萊姆關節炎（Lymearthritis)、感 ，性腦膜炎（例如，病毒性、細菌性、與萊姆症相關者）、 氣喘之急性發作以及自體免疫疾病之急性發作。 火症疾患」明確包含慢性炎症疾患。慢性炎症疾患 —非限制)·生只例包括.氣喘、德國麻療關節炎以及慢性自 體免疫性疾病如全身紅斑性狼瘡、乾癖、發炎性腸道疾病 92729 66 200530588 (匕括克隆氏症（CrQhn’s disease)以及潰瘍性結腸炎）、多 务性硬化症、類風濕性關節炎。 /亥術°°「自體免疫性疾病」包括任何由IL-12產生所 成加劇或媒介之免疫性疾病、不適或症狀。此類免疫 柯=可包括但不限於：類風濕性關節炎、幼年型類風濕 :即火、全身型幼年型類風濕性關節炎、乾癖性關節炎、 =脊椎炎、胃潰瘍、血清陰性關節炎、骨關節炎、發 ，疾病、*'瘍性結腸炎、全身紅斑性狼瘡、抗碟脂 几候群、虹膜睫狀體炎/葡萄膜炎/視神經炎、原因不 7性梅化、全身性血管炎/韋格納氏肉芽腫、類肉瘤 :σ山睪丸輪精管結紮回復步驟、過敏性/異位性疾病、 二2 :敏性鼻炎、濕疹、過敏性接觸皮膚病、過敏性結 二==炎二器官移植、器官移植排斥反應、移植 0 ;夫；丙王身性發炎反應症候群、敗血症、革蘭 罐敗血症、革蘭氏陰性敗血症、培養陰性敗血症 白：:二二了…卿心)、真菌引起之敗血症、嗜中性 血广=成的發燒、泌尿道感染敗血症、腦膜炎球菌 :症=/出血；出血、燒傷、遊離輕射暴露、急性姨臟 二成=困箸症侯群、類風濕性關節炎、酒精誘導性 二1性病變、類肉瘤病、克隆氏病變、鐮刀形 ^球:血症、糖尿病、腎臟病變、異位性疾病、過敏性 反應、過破性鼻炎、花粉熱、常年性鼻炎、結膜炎 Γ異位、氣喘、#麻療、全身性過敏性、皮膚炎、亞性 貝血、溶血性疾病、血小板減少症、任何器官或組織:移 92729 67 200530588 植排斥反應、腎臟移植排斥反應、心臟移植排斥反應、肝 臟移植排斥反應、胰臟移植排斥反應、肺臟移植排斥反應、 骨髓移植（BMT)排斥反應、皮膚異體移植排斥反應、軟骨移 植排斥反應、骨移植排斥反應、小腸移植排斥反應、胎兒 胸腺移植排斥反應、副曱狀腺移植排斥反應、任何器官或 組織之異種排斥反應、異體移植排斥反應、抗受體過敏反 應、葛雷夫氏症、雷諾氏症、B型胰島素阻抗性糖尿病、 氣°而、重症肌無力、抗體媒介之細胞毒性、第111型過敏 反應、全身紅斑性狼瘡、p0EMS症候群（多發性神經病變、 器官腫大、内分泌病變、單株免疫球蛋白增多症以及皮膚 病變症）、多發性神經錢、器官腫大、内分泌病變、單株 免疫球a白立曰夕症以及皮膚病變症、抗碟脂抗體症候群、 天疱瘡、硬皮病、混合性結締組織疾病、特發性艾迪 症、料病、慢性活動性肝炎、原發性膽道性肝硬化、白 =血官火、MI心臟切開手術後症候群、第IV型過敏反 胞内病原體所引起之肉芽異體移植排斥反應、細 性、威爾森氏症、血色素、、少著/物敏感性、代謝性/特發 她P、产、...京/L者症、α卜抗胰蛋白酶缺乏痄、 糖尿病視網膜病變、橋本 丘-腦下垂體-腎上腺轴二質疏鬆症、下視 病質、纖維囊腫、新生兒慢 J腺火:腦脊髓炎、惡 (C0PD)、家族性嗟血症候群;疾病1性阻塞性肺病 徵候群、腎炎、腎絲球腎炎、急癬、充髮、腎病 毒癥、毒性、子癇前 ^月衷欠、血液透析、尿 〇kt3療法、抗cd3療法、細胞激 92729 68 200530588 素療法'化學療法、放射線治療（例如，包括但不限於：虛· 弱無力、貧血、惡病質等等）、慢性水楊酸中毒等等。參見 例如：默克手冊…灿Manual)，第12至1?版，
Company, Rahway，Ν· J (197? 1 〇77 ι ^ · uy/z，1 977，1 982，1 987，1 992， 1 999)，Pharmacotherapy Handbook，Wells eds 第 2 版，Applet〇n and Lange，Stamf〇rd，二二·，(二〜，’ 2 0 0 0)，其全部内容係合併作為參考文獻。 該術語「神經性疾病」包括任何由IL—12產生所造成、 加劇或媒介之神經性疾病、不適或症狀。此類神經性疾病% 可包括，但不限於··神經退化性疾病、多發性硬化症、偏 頭痛、AIDS癡呆複合症、髓勒脫失性疾病如多發性硬化症 及急性橫貫性脊髓炎；錐體外及小腦疾病如皮質脊髓損 傷；基底核（basal ganglia)疾病或小腦疾病；運動機能亢 進性疾病如亨丁頓舞蹈症及老年性舞蹈症；藥物誘發性運 動異常如彼等由阻斷多巴胺受體之藥物所誘發者；運動不 足症如帕金森氏症；進行性上核麻痺；小腦結構損傷丨脊 髓小腦退化症如脊髓性運動失調、弗利德來運動失調 (FHedreich’sataxh)、小腦皮質退化、多發性系統退化 症（Mencel 型、Dejerine-Thomas 型、Shi-Drager 型以及
Machado- Joseph型）；系統性疾病（雷弗素姆氏病 (Refsuin’ s disease)、澱粉/3肽脂蛋白症 (abetalipoprotemia)、毛細血管擴張性運動失調症 (ataxia telangiectasia)以及粒線體複合系統疾病）；髓 勒脫失性疾病如多發性硬化症及急性橫貫性脊髓炎；以及 92729 69 200530588 運動單元失調如神經性肌肉萎縮（前角細胞退化如肌萎縮 性脊髓側索硬化症、嬰兒脊髓性肌肉萎縮症、幼年脊髓性 肌肉萎縮症）；阿茲海默症；中年唐氏症候群；泛發性路易 體疾病；路易體型老年癡呆症；韋尼克—科爾薩科夫症候群 (Wernicke Korsakoff syndrome);慢性酒精中毒；庫賈氏 症（Creutzfeldt-Jakob Disease)、亞急性硬化性全腦炎、 荷裏羅登-斯帕茲症（Hall errorden-Spatz disease);以及 拳擊性失智症等等。該方法可選擇性包含下述步驟··將有 效量之組成物或包含至少一種TNF抗體或指定蛋白或變化 體之醫藥組成物投與至需要此類調節、治療或醫療之 月匕、、且織、杰g或病患。苓見例如·· Merck Manual，16 Edition，Merk& Company，Rahway，Ν· J· (1 992)。 &、該術語「骨質流失疾病」係包括任何由lL-i2產生好 造成、加劇或媒介之骨質流失疾病、不適或症狀，例如: 2周病、非惡性骨骼疾病(例如，骨質疏鬆症、骨骼之柏屯 德氏症（Paget，sdlsease)、成骨不全症、纖維性再生不^ ^原毛性釗甲狀腺機能亢進症）、動情激素匱乏、發炎性 ::流失、骨惡性腫瘤、關節炎、骨石化症以及某些癌症 h相竈以及㈣及其他轉移癌之溶骨㈣轉移）。 適視義相重疊之實例中，可將該疾病、症狀或不 /為上列任-類與IL_i21生相關之疾病的成員。與 症產生相關的特定疾病包括：類風濕性關節炎、敗血 隆氏症、多發性硬化症、氣喘或姨島素依賴型糖尿 92729 70 200530588 病。 當該治療劑包括由上述分析法所鑑定之調節化合物 日寸’則可使用於投藥配方或方法；附加之適當配方及投， 途徑可選自下文中所述者。此外，本發明之治療劑亦可與 任竹已知可冶療本發明之疾病或不適之藥物組合投藥。 匕知有谷樘投與系統可用於投與本發明之治療劑，令 如·包覆於微脂粒、微粒子以及微膠囊中；利用可表現全 治療劑之細胞；利用受體所媒介之胞飲作用（例如，Wuan
Wu’ 1 987’ J. Biol. Chem. 262: 4429-4432);將治療齊 核酸構築為反轉錄病毒或其他載體的一部份等等。送入之 方法包括但不限於：皮内、肌肉内、腹腔内、靜脈内、皮 :、鼻内、硬腦脊膜外以及σ服途徑。化合物可經任何適 :=投藥，例如：輸注、濃注、通過上皮或黏膜與皮膚 私、如，經口、直腸及小腸黏膜等等），且可盘1他生 =生製劑共同投藥。投藥可為全身性或局部性。此外， 、:二由任何適當途徑將本發明醫藥組成物送入 可：J途徑包括：腦室内及脊髓内注射；職注射 ㈣容官協助’例如附接於儲液槽如歐麻亞半球 汉乳務化試劑之配方。 華。：::具體實施例中’該治療劑係調配作為口服投 市。此類劑型包括錠劑（經 服奴 膠膠囊、軟明膠膠#、口、含旋:未經包覆）、膠囊、硬明 溶液等等，hi 31 疋、糖衣錠、分散劑、懸浮劑、 包括輪藝中習知之持續性釋放配方。 92729 11 200530588 例如：Introduction t〇 Pharmaceutlcal D〇sage F〇rms， · 1985， Ansel， H. C·， Lea and Febiger， Philadelphia， PA； Remington^ Pharmaceutical Sciences, 1995, Mack Publ· Co.，Easton，PA。因為錠劑與膠囊易於投藥，故其 為較佳者並具有最有利之口服劑量單位型，而在此實例中 係使用固體醫藥賦形劑。視需要，可使用標準水溶液或非 水溶液技術包覆錠劑或片劑或膠囊。 於特定具體實施例中，可預期將本發明醫藥組成物局 部投藥至需治療之區域。該局部投藥可藉由下述方法達養| 成，例如（但非受限於）··於手術期間局部輸液、於手術後 經由下列方式與癒傷敷料同時施用於局部，例如：經注射、 經導管方式、經栓劑方式或經植入方式，而該植入物為多 孔丨生、非多孔性或政膠材料，包括膜類如矽橡膠膜類或纖 維類。於一具體貫施例中，可於惡性腫瘤或瘤性組織或癌 月ίι期組織之位置（或該位置前）經由直接注射投藥。 於另一具體實施例中，該治療劑可於小泡（vesicie) 中運送’尤其係於微脂粒中（Langer，199〇，Science 249 : 1527-1533: Treat etal.^ 1989, In ： Liposomes m the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein andFidler, eds. 5 Liss, New York, PP.353-365;Lopez-Berestein， ibid·， pp.317-327;通 常參見上述出處）。 又於另一具體實施例中，該治療劑可經由控制釋放系 統傳遞。於一具體實施例中，可使用泵（上述之Langer， 92729 200530588
Supra; Sefton，1 987，CRCCrit. Ref· Biomed· Eng· 14: 20 1 -240 ； Buchwald et al. ? 1 980, Surgery 88 ： 507-5 1 6 ； Saudek et aL , 1 989, N. Engl. J. Med. 321 ： 574-579) 於另一具體實施例中，可使用聚合材料（Medi ca 1 Applications of Controlled Release, Langer and Wise, eds. 5 CRC Press, Boca Raton, Florida, 1 974； Control 1 ed Drug Bioavailability， Drug Product Design and Performance， Smolen and Ball, eds.? Wiley, New York, 1984 ； Ranger and Peppas, 1983, Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23 ： 61 ； Levy et al., 1985, Science 228 ： 1 90-1 92 ； During et al. 5 1 989, Ann. Neural. 25 ： 351-356 ； Howard et al. , 1989, J. Neurosurg. 71 ： 858-836)。又於另一具體實施例中，控制釋放系統可置於 治療標的之鄰近處，亦即腦，因此僅需要全身劑量之小部 份（例如，Goodson，1 984，In : Medical Applications 〇f Controlled Release，supra，Vol· 2，ρρ· 115-138)。其 他控制釋放系統係詳述於Langer所著之回顧文章中（1990
Science 249 : 1527-1533)。 本發明亦提供醫藥組成物。此組成物包括醫療有效劑 量之治療劑以及醫藥上可接受之載劑。於特定具體實施例 中，該術語「醫藥上可接受」係經美國聯邦政府管理局 或州政府#准或列於美國藥典或其他f見經認可之華业中 可使用於動物，且更料言之為人類者。該術語「载劑」 ί“曰稀釋劑]左背]、賦形劑或媒齊丨，而治療劑係與此等載 92729 73 200530588 剑共同投樂。此等醫藥載劑可 括彼等來自石油、動物、植“二囷“如水或油，係包 限於花生油、大豆油、礦物成來源者包括但非受 組成物為經口投藥時，水由等等。當該醫藥 砰脈内投藥時，生理食鶊 _ >、、、成物為 較佳係使用生理食踐水甸糖水溶液為較佳載劑。 ^ ^ '合液及匍萄糖溶液及甘油溶液作為 瞻、乳糖、隸、明：::牙:樂 凝膠、硬脂酸納、單硬脂酸甘 •甘油，、乙二醇、水:二脂 組成物可呈二==化劑或。H缓衝劑。此等 丸、膠囊、粉東、4 <心’予液、礼狀液、錠劑、藥 ㈣、、W性釋放調配物等等。該組成物可經 調配物可包含^哉載^如二酸甘油脂之检齊卜口服 硬脂心==辛醫藥!:甘露糖醇、乳糖，、 ^ r ,,、滅、准素、石厌馱鎂等等。適當醫藥載劑 之耗例係敘述於E.w. Martin所著之“RemingtGn,s :r::eutlcal ，’巾。此等組合物係包含醫療有 >亥治療制（較佳者為經純化之形式）以及適量之載 :藥=於提供適於投藥至病患之形式。該配方應適合於 於佳具體實施例中.，該組合物係根據例行步驟 為切經靜脈内投藥至人類之醫藥組成物。典型地，靜脈 内投樂之組成物為含於無菌等張緩衝劑水溶液中之 、 92729 74 200530588 若需要，該組成物亦可包含助溶劑及局部麻醉㈣利多卡 因（hdo⑶ne)以減輕注射部位之疼痛。$ 開施用或共同混合於單_劑型 “寻、、且成刀刀 有活性製劑量之密封容心如，可為裝於標示 或無水濃縮物。若該組成物為妳_ 如末 ^ ^ ^ …— 风物為纟工知液投樂，則可調配於含 有…囷之醫樂等級水或生理食鹽水之輸液瓶。若 為經注射投藥，則可提供注射用無菌水或生理食I水^ 瓿，以使組成分可於投藥前混合。 | K之女 〃本發明之治療劑可調配為中性或鹽形式。醫藥上 文之鹽係包括彼等與遊離㈣形成者，如彼等衍生自鹽 酸、麟酸、醋酸、草酸、丨g ^ m 〜 寺者；彼等與遊離胺基 嫩，如彼寺竹生自異丙胺、三乙胺、2_乙基胺基乙醇、 =酸、普卡因（procaine)等等者；以及彼等衍生自納、 鉀、銨、鈣及氫氧化鐵等等者。 較佳醫藥組成物及劑型係包括本發明之治療劑或直醫 樂上可接受之前藥、鹽、溶劑合物或籠合物⑷州恤） 且可視需要與-種或-種以上附加之活性藥劑组合。 本發㈣療劑之可有效治療特定疾病或症狀的量係依 據她或症狀之性質而定’且可經由標準臨床技術測定 此外，可視f要制活體外分析法以協料認最佳劑 量範圍。該❹於航物之料料亦依據投藥途徑以及 該疾病或不紅嚴重㈣^，且應取決騎醫者之判斷 情m ’㈣内投藥之適#劑量範圍通常 為每公斤體重大約u 5〇毫克活性化合物。鼻内投藥之適 92729 75 200530588 當劑量範圍通常為大約0. J /k . g Kg月旦重至5〇 mg/kg體重。 、 有效劑量可由得自活體外或動物模式試驗 應曲線推算出。 ^ 栓劑通常含有範圍為0 5至1〇重量％之活性成分；口 服配方較佳含有10%至95%之活性成分。 小分子之例示劑量係包括試驗對象或樣本每公斤體重 中小分子之毫克或微克量(例如，大約1//g/kg至大約 5〇〇mg/kg、大約 100/zg/kg 至大約 5mg/kg、或大約 至大約 50 // g/kg)。 _ 就j發明所包含之抗體、蛋白、多胜肽、胜肽及融合 a白而3，该投樂至病患之劑量典型為病患體重之〇•⑽ mg/kg至1〇〇 mg/kg。較佳者，該投藥至病患之劑量係界於 病患體重之下述範圍之間：〇·〇〇〇1呢/“與2〇 mg/kg、 〇· 000 1 mg/kg與 10 mg/kg、〇· 0001 mg/kg與 5 mg/kg、〇· 〇〇〇1 與 2 mg/kg、〇· oooi mg/kg 與丨 mg/kg、〇· 〇〇〇1 mg/kg 與 〇· 75 mg/kg、〇· 〇〇〇1 mg/kg 與 〇· 5 mg/kg、〇· 〇〇()1 mg/kg 籲 至 〇· 25 mg/kg、〇· 000 1 至 〇· 15 mg/kg、〇· 000 1 至 〇· 10 mg/kg、〇· 〇〇1 至 〇· 5 mg/kg、〇· 〇1 至 〇· 25 mg/kg 或 〇. 〇1 至〇· 10 mg/kg。大致而言，由於對外來多胜肽之免疫反應， 使人類抗體較來自其他物種之抗體於人體中具有較長半生 期。因此’往往使用較低劑量之人類抗體以及較低之投藥 ^貝率再者’本發明抗體或其片段之投藥劑量及頻率可經 由下述方式降低：藉由進行修飾作用如脂化作用以增加抗 體之攝入及組織穿透力。 92729 76 200530588 此外’於某些且濟每a 丨士 丄 一 ”月旦只細例中，由於IL-1 2之產生可於 二低=1;ί到抑制(其係抑制il'6或⑽1續 包括彼等可選擇性抑制1l-12產生但 σΡ不抑制其他細胞激素者。 本2㈣療劑亦可由該項技藝中具有通常知識者所孰 專。空t放方法或傳輪裝置投藥，例如彼等揭露於美國 ，m,77〇 號案；第 3,91 6,899 號案；第 =案；第3,598，123號案；以及第4，_，719號幸、第 第 674 :3 · :f ’ 8 ㈣ I5,073,543 號案、第 5,639,476 號 ::5,354,556號案及5,733,566號案者。這些控制釋 放j物可用於提供本文所使用一種或—種以上活性成分 之緩慢或經控制之釋放’該控制釋放組成物係例如，經丙 ，曱基纖維素、其他聚合物基質、凝膠、滲透性膜、^透 本統、多層被覆、微粒子、微脂粒、微顆粒等等，或者可 使用其組合以於改變調配比例時提供所預期之釋放能型。 該項技藝中具有通常知識者可輕易選擇所知之適當控制釋 放配方以用於本發明之醫藥組成物。 所有控制釋放醫藥產物均具有透過其非控制互補物以 達成改善藥物治療之共同目標。理想上，該用於藥物治療 之最佳設計控制釋放製劑係使用最小量之藥物物質以於最 短時間治癒或控制病症。控制釋放調配物之優點可包括取 延長藥物活性、降低劑量頻率及/或提高病患之配合。 大多數控制釋放調配物係設計為於起始時釋放可立即 92729 77 200530588 ，並逐漸地且持續地釋放其 治療作用維持一段延長時 定濃度，則該治療劑必須以 泄的量之速度自組成物釋 各種誘導物刺激之，例如： 理條件或化合物。於本發明 類控制釋放成分係包括但不 凝膠、滲透性膜、微脂粒、 產生所預期治療效果之製劑量 他量之治療劑以使適當程度之 門為了維持體内治療劑之固 可補足治療劑自身體代謝及排 放。該治療劑之控制釋放可由 pH、溫度、酵素、水或其他生 中協助活性成分控制釋放之此 限於··聚合物、聚合物基質、 微粒體等等、或其組合。、 =明亦提供包括一種或—種以上之填滿一種或一種 损物之組成分的容器之醫藥包或套組。 :” m &相關之標示可為由管理醫藥或生物產品 之=、使用或販售的政府行政機構所規定之形式，該標 政府行政機構批准可料人類投藥之製造、使用 或販售。 用於治療或預防需I 士笙 万而要此寺治療之病患中與IL-12產生 =之：病或不適、或彼等與c_Rei細胞内定位相關之疾 病^適、或自體免疫疾病或不適之方法，復可包括：將 一種或一種以上有效晋夕甘Μ 之八他、療劑投藥至經投與本發明 化3物之病患。此類治療密丨丨可 '、 匕括其他治療劑如彼等習用 方；預防或治療與IL -12產生右關夕广— ^ …、 關之疾病、或c-Rel細胞内 疋位異常或其症狀者。另一錄、Λ 種〉°療劑可為類固醇或非類固 子几^劑。可用之非類固醇抗發炎劑係包括但不限於： 阿斯匹靈（aSp i r丨n )、布、夂（ 布〜分Ghprofen)、雙氯芬酸 92729 78 200530588 (diclofenac)、蔡晋生（napr〇xen)、苯惡洛芬 (benoxaprofen)、氟比洛芬（fiurbiprofen)、非諾洛芬 (fenoprofen)、氟布芬（f iubufen)、酮洛芬（ket〇profen)、 引朵洛分（indoprofen)、皮若洛芬（piroprofen)、卡洛芬 (carprofen)、奥沙普嗪（oxaprozin)、普莫洛芬 (pramoprofen)、木若洛s(mur〇profen)、三惡洛芬 (trioxaprofen)、舒洛芬（SUprofen)、胺洛芬 (aminoprofen)、噻洛芬酸（tiaprofenic acid)、氟洛芬 (fluprofen)、布氣酸（bucloxic acid)、引朵美辛 (indomethacin)、舒林酸（sunndac)、托美丁（t〇lmetin)、 佐美酸（zomepirac)、硫平酸（tiopinac)、齊多美辛 (zidometacin)、阿西美辛（acemetacin)、芬替酸 (fentiazac)、ί衣氣印酸（clidanac)、夸平酸（〇xpinac)、 曱芬那酸（mefenamic acid)、曱氯芬那酸（meclofenamic acid)、氟芬那酸（f lufenamic acid)、尼氟酸（nif iumic acid)、托芬那酸（tolfenamic acid)、二氟瑞柳 (dif lurisal)、氟苯柳（flufenisal)、吡羅昔康 (piroxicam)、舒多昔康（sudoxicam)、伊索昔康 (isoxicam);水楊酸衍生物包括阿斯匹靈、水楊酸納、三 水揚酸膽鹼鎂（chol ine magnesium trisal icy late)、雙水 楊酸酷（s a 1 s a 1 a t e )(水楊酸水楊酸g旨）、二氟尼柳 (diflunisal)、柳基柳酸、柳氮磺吡啶（sulfasaiazine) 及歐塞拉嗪（ο 1 sa 1 az i η)，對胺基驗衍生物包括乙酸胺基酴 (acetaminophen)及非那西汀（phenacet in); D引 D朵及乙酸 92729 79 200530588 類包括引朵美辛、舒林酸（sul indac)及依託度酸 (etodolac);雜芳基乙酸類包括托美丁（t0丨metin)、雙氯 芬酸（diclofenac)及酮洛酸（ketorolac);鄰胺基苯甲酸類 (fenamates)包括曱芬那酸（mefenamic acid)及曱氯芬那 酸（medoienamic acid);烯醇酸類（enolic acids)包括歐 昔康（oxicams)(吡羅昔康（pir〇xiCam)、替諾昔康 (tenoxicam))及吡唑烷二酮類（苯丁唑酮 (phenylbutazone)、氧苯赛松（oxyphenthartazone);及烷 酮類包括萘丁美酮（nabumet one)以及其醫藥上可接受之鹽 及其混合物。NSAIDs之更詳盡說明請參見：户抓/ Α ΜπΛ Analgesic-Antipyretic and Antiinflammatory Agents and Drugs Employed in the Treatment of Gout, in Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics 617-57 (Perry B. Molinhoff and Raymond W. Ruddon eds·，9th ed 1 996)以及 Glen R· Hanson， Analgesic，Antipyretic and Anti-Inflammatory Drugs in Remington: The Science and Practice of Pharmacy Vol // 1 196-1221 (A· R· Gennaro ed· 19th ed· 1 995)，其 全部内容將於此合併作為參考文獻。 其他預防性及治療性製劑之實例包括但不限於：免疫 調節劑、抗發炎劑（例如腎上腺皮質素、皮質類固醇（例如， 倍氯米松（beclomethasone)、布地萘德（budesonide)、氟 尼縮松（flunisolide)、氟替卡松（fluticasone)、曲安奈 德（triamcinol ine)、曱潑尼龍（methylprednisolone)、潑 80 92729 200530588 尼松龍（predni solone)、潑尼松（predni sone)、氫化可體 . 松（hydrocortisone))、葡萄糖皮質素、類固醇、非類固醇 抗發炎藥物（例如，阿斯匹靈、布洛芬、雙氯芬酸及⑶χ — 2 抑制劑）、以及白三烯拮抗劑（例如，孟魯司特 (montelukast)、曱基黃嘌吟（methy 1 xanthines)、紮魯司 特（zafirlukast)及齊留通（zileuton))、万2-促效劑（例 如，艾丁胺醇（albuterol)、必特洛（biterol)、菲諾特洛 (fenoterol)、艾索赛瑞（isoetharie)、奥西那林 (metaproterenol )、D比布特羅（pirbuterol)、沙 丁胺醇 _ (salbutamol)、特布他林福莫特羅（terbutaiin formoterol )、沙美特羅（saimeter〇i )及沙丁胺醇特布他林 (salbutamol terbutaline))、抗膽鹼藥劑（例如，異丙托 溴銨（ipratropium bromide)及氧托溴銨（oxitrapium bromide))、柳氮石黃 d比 π定（suiphasaiazine)、青徽胺 (penicillamine)、氨苯楓（dapsone)、抗組織胺、抗瘧劑（例 如，羥基氯喹（hydroxychloroquine))、抗病毒劑以及抗生籲 素（例如，放線菌素（dactinomycin)(以前的放線菌素 (actinomycin))、平陽黴素（bie⑽yCin)、紅徵素 (erythomycin)、青黴素（peniciiiin)、普卡攩支素 (mithramycin)及安曲黴素（anthramycin，AMC)))。 於組合治療之處理中，係使用習知方法將本發明化合 物與其他樂劑共同投藥至哺乳動物（例如：人類，男性或女 性）。該製劑可以單一劑型或以分開劑型投與。其他治療劑 之有效量為該項技藝中具有通常知識者所熟知。缺 92729 8] 200530588 項技藝中具有通常知識者係有能力 有效量範圍。於本發明之—且俨每:疋，、他治療劑之最佳 劑投藥至動物，則本發明治療;;：：：：，若將另-治療 與其他治療劑時之有效量 々里係少於其於未投 藥劑之有效量係少於i於未^ ”體實施例中，該習知 里於此方法，可將任一筚劍φ 了,文 作用降至最低。其他潛在之作二广^量有關的非預期副 劑量及/或藥物成本但不⑽：改善攝取 見。 ’、/、支π中具有通常知識者所顯 於各具體實施例中，該萝南 ^ 衣例如，預防性或治療性製 ::二嶋 Γ:二”:1小時、間隔大約1小時、間隔大約丨小時 至大約2小時、間隔士的0 , + j 丁 3 、力2小日寸至大約3小時、間隔大約 竭時、間隔大約4小時至大約5小時、間 J、、、、勺5小呀至大約6小時、間隔大約6小時至大約7小 間1^大約7小時至大約8小時、間隔大約8小時至大 ::小時、間隔大約9小時至大約i。小時、間隔大約10 寸至大約11小時、間隔大約11小時至大約12小時、間 大、勺士 1 2小日寸至18小時、間隔18小時至24小時、間隔 τ至36小日守、間隔36小時至48小時、間隔48小時 至5士2小時、間隔52小時至60小時、間隔60小時至72 才間隔72小時至84小時、間隔84小時至96小時、 3 ^隔96小日守至120小時。於較佳具體實施例中，係將兩 重或兩種以上之治療劑投藥至相同就診病患。 92729 82 200530588 於某些具體實施例中，係將—種或 化合物以及—種或—種以上之其他治：本發明 療麵如，第-預防性二與第:? 與第一治療劑（例如，I _ τ 接著投 間，且視需要，二广性或治療性製劑)-段時 視而要，再投與第三治療劑（例如 W劑）-段時間等等，並重複此 方 ^療性 為了降低對其中—種治療劑：亦^ 其中一種治療判夕^展以避免或降低 物，且該化合物之投與可間隔至重;^ 1〇天、15天，天、45天、2個月752天天f、5、天、 二二其他具體實施例中’除了本發明化::二至 f)，且該製劑之投與可間隔至少！天、2天、3:『天 :天個r，天、45天、2個"天^ 劑皆一何免疫㈣ ^ f市去以及本發明之組成物中。赍/哨 :劑:影響試驗對象體内一種或多種或所有類型之= 疫反應類型包括但不限於：發炎反應、補體連鎖反 "血球及淋巴細胞之分化、增殖、及/或受動器 (effect。：*)功能、單核球及/或·細胞總數、以 統細胞間之細胞聯繫。於本發明之某些具體實施例中： 92729 83 200530588 疫調節劑係調節— 中，$ ^ 1重 免疫反應。於其他具體實施例 二係調節一種以上類型之免疫反應。於料 低C=，:::疫調節劑投藥至試驗對象係抑㈣ ^ R 之一種或一種以上類型的免疫反應能力。於本 :日之特定具體實施例中，該免疫調節劑係抑制或抑止試 驗對象體内之免疫反應。根據本發明，免疫調節劑並非： 疫專斤地結合於C—Rel之抗體。於某些具體實施例中，免 ，调即劍不為抗發炎劑。於某些具體實施例中，免疫調節 劑不為抗血管生成劑。於某些具體實施例中，免疫調節劑 為1 5 π、拕4几劑Gntegrin antagonist)。於某些具體實 施例中免疫调節劑不為TNF- α拮抗劑。於某些具體實施 例中，免疫調節劑為化學治療劑。於某些具體實施例中， 免疫調節劑不為化學治療劑。 免疫調節劑之實例包括，但不限於：蛋白質製劑如細 胞激素、模擬胜肽及抗體（例如，人類、擬人化、嵌合、單 株、多株、Fvs、ScFvs、Fab或F(ab)2片段或抗原決定位籲 結合片段）、核酸分子（例如，反義核酸分子或三螺旋鍊）、 小分子、有機化合物以及無機化合物。特定言之，免疫調 節劑包括’但不限於··甲氨蝶呤（meth〇trexate)、來氟米 斗寸（leflunomide)、環石粦酸胺、（Cyt〇xan)、依木蘭 (immuran)、環孢靈（cyclosp〇rine A)、二曱胺四環素 (minocycl in)、硫咬 σ票吟（azathi〇pr ine)、抗生素（例如， FK506他克莫司（tacrolimus))、曱潑尼龍（mp)、皮質類固 醇、類固醇、M S分酸g旨嗎啉乙醋（myC〇pheno丨ate 84 92729 200530588 mofet i 1)、雷帕黴素（rapamycin)(西羅莫司 (sirol imus))、°米 ϋ坐立賓（mizoribine)、脫氧司加林 (deoxyspergualin)、布喹那（brequinar)、丙二腈酸胺類 (例如，來氟那米特（1 e f unam i de))、T細胞受體調節劑、 細胞激素受體調節劑以及調節肥大細胞調節劑。 T細胞受體調節劑之實例包括，但不限於：抗T細胞 受體抗體（例如：抗-C D 4抗體（例如：c Μ - T 41 2 (Boeringer)、IDEC-CE9. 1®(IDEC 及 SKB)、mAB4162W94、 Orthoclone 及 0KTcdr4a(Janssen-Cilag))、抗-CD3 抗體 (例如：Nuvion(Product Design Labs)、0KT3(Johnson & Johnson)或利妥昔（Ri tuxan) ( IDEC))、抗-CD5 抗體（例 如··抗-CD5蓖麻毒蛋白連結之免疫交聯物）、抗-CD7抗體 (例如：CHH-380(Novar1:is))、抗-CD8 抗體、抗-CD40 配位 子單株抗體（例如：IDEC-131 (IDEC))、抗-CD52抗體（例 如：CAMPATH 1H (Ilex))、抗-CD2 抗體（例如：MEDI-507 (Medlmmune，Inc.，國際公開號 W0 02/098370 及 W0 02/ 069904))、抗-CDlla 抗體（例如：灑耐琳（Xanelim) (Genentech))以及抗-B7 抗體（例如：IDEC-114) (IDEC)))、CTLA4-免疫球蛋白以及 LFA-3TIP (Biogen，國 際公開號W0 93/08656及美國專利第6, 1 62, 432號案）。 細胞激素受體調節劑之實例包括，但不限於··可溶性 細胞激素受體（例如：TNF- α受體之胞外功能區或其片段、 IL-1/3受體之胞外功能區或其片段以及IL-6受體之胞外 功能區或其片段）、細胞激素或其片段（例如：介白素 85 92729 200530588 IL 2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-io IL-H、IL-13、IL-15、IL-23、TNF-α、TNF-万、干择素 (IFN)-a、IFN-A、1心_7及（^_(：邡）、抗_細胞激素=體 抗體（例如：抗-IFN受體抗體、抗-IL-2受體抗體（例如紅 賽尼哌（Zenapax)(Protein Design Labs)、抗—IL—3 受許 抗體、抗-IL-4受體抗體、抗-IL-6受體抗體、抗—= 月豆抗脸、抗-IL12受體抗體、抗-IL13受體抗體、抗 受體抗體以及抗-IL23受體抗體）、抗細胞激素抗體。 於特定具體實施例中，細胞激素受體調節劑為i卜3、 IL-4、IL-10、或其片段。於另一具體實施例中，細胞激素 受體調節劑為TNF- α受體之胞外功能區或其片段。於某些 具體實施例中，細胞激素受體調節劑不為，^^拮抗劑。 於一具體實施例中，細胞激素受體調節劑為肥大細胞 调節劑。於另一具體實施例中，細胞激素受體調節劑不為 肥大細胞調節劑。肥大細胞調節劑之實例包括，但不限於： 幹細胞因數（c-kit受體配位子）抑制劑（例如：mAb 7Η6、 mAb 8H7a、pAb 1337、FK506、CsA、地塞米松（dexamethasone) 及氟康昔諾耐得（f luconcinonide))、c-ki ΐ受體抑制劑 (例如：STI57U過去已知為CGP 57148Β))、肥大細胞蛋白 酶抑制劑（例如：GW-45、GW-58、渥曼青黴素（wortmannin)、 LY 2940 02、舞石粦酸蛋白C(calph〇stin C)、細胞鬆弛素D (cytochalasinD)、染料木素（genistein)、KT5926、史陶 若普因（staurosproine)以及乳鐵蛋白）、鬆弛素（“RLX”）、
IgE拮抗劑（例如··抗體rhuMAb-E25奥馬佐（omalizumab)、 86 92729 200530588 ΗΜΚ-12 及 6HD5、以及 mAB Hu-901)、IL-3 拮抗劑、iL-4 拮抗劑、IL-1 0拮抗劑、以及TGF - /3。 可選擇免疫調節劑以干擾T輔助細胞亞群（ΤΗ 1或ΤΗ2 ) 與B細胞間之交互作用，進而抑制中和抗體形成。影響或 阻斷該由TH (T輔助）細胞活化B細胞所需之交互作用並藉 以阻斷中性抗體產生之抗體係使用為本發明方法中之免疫 調節劑。例如，T細胞所媒介之B細胞活化作用係需要透 過某些交互作用而發生（Durie et al·，Immun〇i· Today， 1 5(9) · 406-41 0(1 994))，例如使T輔助細胞上之⑶40配 位子結合至B細胞上之CD40，以及使T細胞上之CD28及/ 或CTLA4配位子結合至B細胞上之B7抗原。若無此兩種交 互作用，則B細胞將無法受到活化以誘導中性抗體產生。 CD40配位子（CD40L)-CD40交互作用為阻斷免疫反應 所預期之處，因為其除了於T輔助細胞活化作用及功能上 均具有廣泛活性外，其訊息傳遞路徑亦不冗餘（absence 〇f reducdancy)。因此，於本發明之特定具體實施例中，係於 投與本發明之一種或一種以上化合物以及免疫調節劑時， 將CD40L與CD40之交互作用短暫阻斷。此阻斷作用可藉由 使用製劑處理而達到，該製劑係會阻斷TH細胞上之⑶ 配位子並影f τ輔助細胞上《CD4〇配位子# [細胞上之 CD40抗原的正常結合。根據本發明方法，可選擇並使用抗 CD40配位子之抗體（antl_G峨）⑽自BristQi_M卿 S Q U1 b b C 〇 ;參見例如於19 9 3年8月i 8曰公開之歐洲專利 公告555,88G)或可溶性⑶4()分子作為免疫調節劑。 92729 87 200530588 可選擇免疫調節劑以抑制TH1細胞與毒殺性τ淋巴細 胞（CTL )間之父互作用，進而降低ctl所媒介之毒殺作 用。可選擇免疫調節劑以改變（例如’抑制或抑止）〇1)4+及 /或CD8+T細胞之增殖、分化、活性及/或功能。例如，可 使用對T細胞具有專一性之抗體作為免疫調節劑以減少或 改變CD4+及/或CD8+ T細胞之增殖、分化、活性及/或功 能0 於本發明 係根據本發明方法將可 =低或減少T細胞（較佳為記憶Μ細胞）之免疫調節劑投 樂至可能患有或已患有下列病症之試驗對象：與9多胜 肽之異常表現及/或活性有關或以此為特徵之疾病或不 適、與c-Rel之異常細胞内定位有關或以此為特徵之疾病 或不適、自體免疫疾病、炎症疾病、增殖性疾病、或感染（較 佳者為呼吸道感染）。參見例如：美國專利第4,658 〇、19 號案。於本發明之另-具體實施例中，係根據本發明方法 將可使CD8 + T細胞去活化（2 navt!加e)之免疫調節劑投藥 至可能患有或已患有下列病症之試驗對象：與del之显 常細胞内定位有關或以此為特徵之疾病或不適、； =、炎症疾病、增殖性疾病、或感染（較佳為呼吸道感又 木）。於特定具體實施例巾，係使用抗 減少CD8 + T細胞。 机…牛低或 於另-具體實施例中，係根據本發明方法將可 中制CD4+T輔助細胞之·、加、及/或挪亞 / 或—種以上生物活性（例如，分殖 —種 刀亿心殖、及/或受動器功 92729 88 200530588 能)的免疫調節劑投藥至可能患有或已患有下列病症之試 驗對象·與c-Rel細胞内定位之異常表現有關或以 之異常細胞内定位為特徵之疾病或不適、自體免疫疾病、 炎症疾病、增殖性疾病、或感染（較佳為呼吸道感毕）。此 類免疫調節劑之-實例為IL+IW於消耗m細胞功能 下提南TH2細胞之抗原專一性活性（參見例如：Y〇k〇h μ al·，1986, Proc. Natl. Acad. Sci. , USA, 83：5894- 測8;以及美國專利第5,017,69u虎案）。影響丁輔助細胞 (尤其TH1及/或ΤΗ2細胞）之生物活性（例如：增殖、分化、 及/.或受動器功能）的免疫調節劑之其他實例包括但不限 於· IL一 2、IL一 4、下 ί — R、τ τ — β τ τ 干擾素。 1〇 IL 13 ^ IL~15 ^ 口；另/、月且貝鈿例中，係根據本發明方法將可避免抗 ”見之免疫凋節劑（该免疫調節劑為細胞激素）投藥至可 能患有或已患有下列病症之試驗對象：與卜W之異常細 I内，關或以此為特徵之疾病或不適、自體免疫疾 你二症疾病、增殖性疾病、或感染（較佳為呼吸道感染）。 定具體實施例中，用於本發明該方法之免疫調節劑為 0 u—1 〇亦會降低或抑制巨噬細胞作用，該作用係涉 及細菌，除作用(bacterlal ellmlnatl命 用ϋ選擇免疫调筇劑以降低或抑制肥大細胞之活化作 杏Α去顆粒作用、增殖作用、及/或浸潤作用。於某些具體 貝施例中，令合旦，鄉 Μ Θ衫专肥大細胞與肥大細胞活化劑間之交互 用的免疫調節劑係包括，但不限於：幹細胞因數(c_klt 89 92729 200530588 配=:)、igE、IL—4、S境刺激物、及致病因數。於特定 ㈣實施例中，該免疫調節劑會降低或抑制肥大細胞對環 境刺激物之反應，該環境刺激物係如，但不限於··花粉、 土蟎日煙煙務、及/或龍物氣味。於另一具體實施例'中， 該免疫調節劑會降低或抑制肥大細胞對致病因數如：病 毒、細菌以及真菌之反應。可降低或抑制肥大細胞之活化 作用、去顆粒作用、增殖作用、及/或浸潤作用之肥大細胞 ϋ周郎；=1彳包括，但不限於·幹細胞因數（c - k i t受體配位子） 抑制劑（例如：mAb 7H6、mAb 8H7a、及 pAb 1 337)(參見 Mendiaz et al. ? 1 996, Eur J Biochem 293(3) ： 842-849) ^ FK506 及 CsA (Ito <9/·， 1 999， Arch Dermatol Res 291(5): 275-283)、地塞米松（dexamethasone)及氟康昔諾 而寸得（fluconcinonide)(參見 Finooto ei a7·，J Clin Invest 1 997 99(7) : 1 721-1 728))、c-kit 受體抑制劑（例 如：STI 571(過去已知為 CGP 57148B)(參見 Heinrich a/·，2000 Blood 96(3) : 925-932))、肥大細胞蛋白酶抑 制劑（例如：GW-45 及 GW-58(參見 Temkin a/·，20 02 J Immunol 1 69(5) : 2662-2669))、渥曼青黴素 (wortmanniη)、LY 294002、妈石粦酸蛋白 C(calphos1;in C)、 細胞鬆他素 D (cytochalasin D)(參見 Vosseller ez" 3人， 1 997，Mol Biol Cell 1 997 : 909-922)、染料木素 (genistein)、KT5926、史陶若普因（3七3,111'〇301"〇1116)(參見 Nagai et al. , 1995, Biochem Biophys Res Commun 208 (2) : 576-581 )、以及乳鐵蛋白（參見He ei a人，20 03 90 92729 200530588 瞻
Biochem Pharmacol 65 (6 ) : 1 007-1 0 1 5))、鬆弛素（“RLX”）" (參見831^6^3人，2〇〇2 1111:11111111111〇0113〇1&(：〇12(8): 1 1 95-1294)、IgE拮抗劑（例如：抗體rhuMAb-E25奥馬佐 (omalizumab)(參見 Finn et a/·, 2003 J Allergy Clin Immuno 111(2) · 278-284 ； Corren et al. ? 2003 J Allergy Clin Immuno 111(1) · 87-90 ； Busse and Neaville, 2001 Curr Opin Allergy Clin Immuno 1(1) ·· 105-108 ;以及 Tang and Powell, 2001, Eur J Pediatr 160(12) ： 696- 704)、HMK-12 及 6HD5(參見 Miyajima β 5人，2002 Int _ Arch Allergy Immuno 1 28( 1 ): 24-32)、以及 mAB Hu-901(參 見 van Neerven 以 a/· ， 2001 Int Arch Allergy Immuno 124(1-3) : 400)、IL-3 拮抗劑、IL-4 拮抗劑、IL-10 拮抗 劑、以及 TGF-/3 (參見 Metcalfe 以 5人，1 995，Exp Dermatol 4(4 Pt 2) : 227-230)。 於較佳具體實施例中，經利用作為免疫調節劑之蛋 白、多胜肽或胜肽（包括抗體）係得自與該蛋白、多胜肽或· 胜肽接受者相同之物種，以便降低對彼等蛋白、多胜肽或 胜肽產生免疫反應的可能性。於另一較佳具體實施例中， 當試驗對象為人類時，該利用作為免疫調節劑之蛋白、多 胜肽或胜肽係人類的或擬人化的。 根據本發明之一具體實施例，係於本發明之可改變 c/ei細胞内定位但不顯著改變NF“表現及/或丨“數 量之化合物投藥之前、之後或同時，將一種或一種以上之 免疫調節劑投藥至可能患有或已患有下列病症之試驗對 92729 9] 200530588 象：與c-Rel之異常細胞内定位有關或以此為特徵之疾： 或不適、自體免疫疾病、炎症疾病、增殖性疾病、或❹ 佳為呼吸道感染）。較佳者’當該項技藝中具有通常知^ ^ 認為需要時，可將-種或-種以上之免疫調節劑與本^明 之可改變c-Rel細胞内定位但不顯著改變nf《b表現及 或I /c B數量之化合物組合投藥至可能患有或已患有下列 病症之試驗對象：與c-Rek異常細胞内定位有關或以此 為特徵之疾病或不適、自體免疫疾病、炎症疾病、辦殖性 疾病、或感染（較佳為呼吸道感染），以降低或抑制二種或 :種以上類型之免疫反應。該項技藝中具有通常知識者所 熟知之任何技術皆可使用於測量特定試驗對象體内之一種 或-種以上類型的免疫反應，並藉此決定何時需要將免疫 調節劑投藥至該試驗對象。於較佳具體實施例中，試驗^ 象體内之淋巴細胞平均絕對計數係維持在大約5〇〇 ⑻ 13/咖3，較佳為 _ cells/_3、65〇 灿顧、7〇〇 cells/mm3 ^ 750 cells/mm3 > 800 cells/mm3 ^ 900 cells/ 1 000 cel 1 s/nim3^ 11 〇〇 cells/mm31200 cells/mm3° 於另一較佳具體實施例中，若該試驗對象之淋巴細胞絕對 叶數為下列各值時，則不投與本發明化合物：5〇〇 _3 或更低、550 cells/_3 或更低、6〇〇 ceUs/mm3 或更 低、65G cells/麵3 或更低、7〇〇 cells/mm3 或更低、75〇 cells/_3或更低、或者8〇〇 ceUs/_3或更低。 〜於較佳具體實施例中，係將一種或一種以上之免疫調 節劑與本發明化合物組合投藥，以便立即降低或抑制一種 92729 92 5 以上㈣之免疫反應。此—種 疫系統的瞬時抑制作用或降 種以上類型之免 數週或數月。較佳者，重可持續數小時、數天、 的瞬時抑制作用或降低作用料類型之免疫反應 4小時、6小時、8小時、、小寸(例如：2小時、 小時、24小時、36小時支4/”、14小時、16小時、18 天、5天、fi: 小時)、幾天(例如：3天、4 天、7天或14天）、咬幾讲“ 5週或6週）。 次成週（例如：3週、4週、 〔勺括用於=中/、有通系知識者所熟知之任何抗發炎劑 (:括用於治療炎症疾病之治療劑)皆可使用於本發明之組 成及=法中。抗發炎劑之非限制性實例包括：非類固醇 抗發炎樂物（NSAIDs)、類固醇抗發炎藥物、抗膽驗藥物（例 如：硫酸阿托平（atropine sulfate )、曱基硝酸阿托平 (atropine methylnitrate)及異丙托溴銨（i奵atr〇pi· bromide))、/5 2-促效劑（例如：艾丁胺醇〇£：财〇11]^及 proventiltm)、必特洛（bitolterol)(T0RNALATETM)、左旋 丁胺醇（16乂&1131^61，〇1)(1(^〇腿乂1)、奥西那林 (iHet3<proterenol)(ALU0PENT )、卩比布特羅（pirbuterol) (MAXAIRtm)、特布他林（terbutlaine)(BRETHAIRETM& BRETHINEtm)、艾丁胺醇（PR〇VENTILtm、REPETABStm& V0LMAXtm)、福莫特羅（f ooioterol) (FORADIL AEROLIZERTM) 及沙美特羅（salmeterol )(SEREVENTTM 及 SEREVENT DISKUSTM)、及曱基黃嘌呤類（例如：茶鹼（UNIPHYLTM、 THE0-DURtm、SL0-BIDTM、及 THE0-42TM))。NSAIDs 之實例包 93 92729 200530588 括但不限於：阿斯匹靈、布洛芬、希樂葆（celecoxlb) (CELEBREXTM)、雙氯芬酸（V0LTARENtm)、依託度酸 (lodinetm)、非諾洛芬（nalfontm)、引朵美辛（indocintm)、 克多炎（ket〇ralac)(T0RAD0LTM)、奥沙普嗪（DAYPR0TM)、舒 林酸（CLIN0RILTM)、托美丁（T0LECTINTM)、羅菲可西保 (rofecoxib)(VI0XXTM)、萘普生（ALEVETM、NAPR0SYNTM)、酮 洛芬（ACTR0Ntm)以及萘丁美酮（RELAFENTM)。此類NSAIDs係 藉由抑制環氧化酵素（例如：C0X-1及/或C0X-2)而作用。 類固醇抗發炎劑藥物之實例包括但不限於：葡萄糖皮質 素、地塞米松（DECADR0NTM)、皮質類固醇（例如：甲潑尼龍 (MEDR0Ltm))、可體松（cort i sone)、氫化可體松、潑尼松 (PREDNIS0NETM& DELTAS0NEtm)、潑尼龍（prednisolone) (PREL0NETM& PEDIAPREDTM)、曲安西龍（triamcinolone)、 柳氮續胺吼咬（azu 1 f i d i ne)及類二十烧酸之抑制劑（例 如：前列腺素、凝血脂素（thromboxane)及白三稀）。抗發 炎治療劑及其劑量、投藥途徑與建議用法為該項技藝中已 知者且業已接露於此文獻中：yPe/ere/jce (57th ed.， 2003)。 對於關節炎、發炎造成之骨質流失以及其他具有發炎 成分之疾病而言，使用於與本發明化合物或組成物組合治 療之較佳習知治療劑包括（但不限於）：萘普生鈉（naproxen s〇dium)(Anaprox⑧及 Anaprox® DS，Roche)、氟比洛芬 (Ansa id®; Pharmacia)、雙氯芬酸納（diclofenac sodium) + 米索前列醇（11^3(^1'031^1)(八1'1±1'〇士6。©;8631，16)、伐地 94 92729 200530588 昔布（valdecoxib)(Bextra®5 Pharmacia)、雙氯芬酸鉀 (Cataflam⑧及 Voltaren®, Novartis)、希樂葆 (Celebrex®，Pharmacia)、舒林酸（Clinoril®, Merck)、 奥沙普嗪（Daypro⑧，Pharmacia)、雙水楊酸酯（Disalcid®， 3M)、二氟尼柳（Dolobid®，Merck)、萘普生鈉（EC Naprosyn®，Roche)、D比羅昔康（Feldene⑧，Pfizer)、引 朵美辛（Indoci n⑧及Indoc in SR®，Merck)、依託度酸 (Lodine⑧及 Lodine XL®，Wyeh)、美洛昔康（meloxicam) (Mobic®，Boehringer Ingelheim)、布洛芬（Motrin®， Pharmacia)、萘普生（Naprelan®，Elan)、萘普生 (Naprosyn®，Roche)、酮洛芬（Orudis®及 Oruvail®， Wyeth)、萘丁美酮（Reiafen ⑧，SmithKline)、托美丁鈉 (tolmetin sodium)(Tolec1;in®，McNeil)、三水楊酸膽驗 鎂（Tri 1 isate㊣，Purdue Fredrick)及羅菲可西保（Vi〇xx®， Merck) 〇 於任何情況下，若目標疾病之成分含有疼痛時，則該 其他治療劑可為止痛劑。可用之止痛劑包括但不限於：非 那西 /Γ (phenacet in)、布他西丁（butacetin)、乙酿胺基 酚、奈福泮（nef0pam)、乙醯胺基醌（ace1：〇amid〇quin〇ne) 及其混合物。 對於治療骨質疏鬆、變形性骨炎（Paget，s dlsease) 乂及其他與月骨各惡化相關之疾病而言，可用於與本發明化 合物或組成物組合治療之較佳習知治療劑包括（但不限 方、）·雙膦酸鹽類（例如：依替膦酸鹽（e1：idr⑽Me) 92729 95 200530588 (Didronel®，Procter & Gamble)、帕米膦酸鹽 (pamidronate)(Aredia®，Ncn，artis)及阿余膦酸鹽 (alendronai:e)(Fosamax®，Merl〇)、堤路膦酸鹽 (tiludronate)(Skelid®, Sanofi-Synthelabo，Inc.)-利塞膦酸鹽（ri sedronate) (Actonel®，Procter &
Gamble/Aventis)、抑弼素（Miacalcin®)、雌激素 (Cl imara®、Estrace®、Estraderm®、Estratab®、Ogen®、 〇1*让0-£31：^、¥卜6 116@、？厂6111&1^1^及其他等）、雌激素 及貫體素（ActivellaTM、FemHrt®、Premphase®、Prempro® 及其他等）、副曱狀腺素（parathyr〇id hormone)及其部份 如特立帕肽（teriparatide)(Forteo®，Eli Lilly and
Co·)、選擇性雌激素受體調節劑（SERMs)(如雷洛昔芬 (ral〇xlfene) (Evista⑧））及目前於研究中之治療劑（如其 他副甲狀腺素、氟化鈉、維他命D代謝物以及其他雙膦酸 鹽與選擇性雌激素受體調節劑）。 任何副曱狀腺素（PTH)皆可與本發明化合物組合使 =副甲狀腺素一詞係指副甲狀腺素、其片段或代謝物 及八結構類似物，其可刺激骨骼形成並增加骨質密度。 卜㈣相11 _ ’段以及副^腺 之類似物(參見PCT公開號w"4/0_。此 常知二== 生係藉由彼等於該項技藝中具有通 係接露並—易測定。此等化合物之變化 中呈有通二:、、D下。然而’其他副甲狀腺素則為該項技蓺 有通“，者所知。例示之副甲狀腺素係接露下列： 92729 96 200530588 獻中。“Human Parathyroid Peptide Treatment of Vertebral Osteoporosis” ， Osteoporosis Int·， 3, (Supp 1) · 1 99-203· “PTH 1 -34 Treatment of
Osteoporosis with Added Hormone Replacement Therapy ： Biochemical, Kinetic and Histological
Responses’，Osteoporosis Int· 1 ·· 162-170· 任何生長激素或生長激素促泌素皆可與本發明化合物 組合使用。該生長激素促泌素一詞係指可刺激生長激素釋 2或可模仿生長激素作用（例如：增加骨骼形成以提高骨質 在度）之化合物。此類作用係由該項技藝中具有通常知識者 所熟知之於該項技藝中習用的標準分析法輕易測定。此等 化合物之變化係揭露於下列所公開之PCT專利申請案··卯 95/14666 , W0 95/13069 ； W0 94/19367 ； W0 94/13696 ； ^ =5m然而’其他生長激素或生長激素促泌素則為 :促泌具有通常知識者所知。特定言之，較佳生長激 _3 4:二广[1(R)-[1，2 —二氫+甲伽基螺[3H-卩引噪 胺基]K苯基甲氧基）乙基]-2-.土 ㈣胺：MK —667。其他較佳生長 括·2,基 i(2_(3a_(R)_ 苯甲基 _ 基甲基基-乙基”丁心：基)+⑻-苯甲氧 基-3-嗣基—2 3 土 土 ( (R) +氟-苯甲基)-2-甲 基)-2-酮a，| 氫'吡唑並-[4,3-c]吡啶-5- 基'乙基）異丁酿月安；胺基^2-(3a-⑻-苯甲 92729 97 200530588 基3酮基~2,3,38,4,6,7-六氫-口比哇並-[4,3-(：]〇比。定_5- 基）-1-00-苯曱氧基曱基-2-酮基-乙基）_異丁醯胺；及2_ 胺基-N-(l-(2, 4-二氟-苯曱氧基曱基）_2_酮基—2(3-酮基 -3a-吡啶-2-基甲基-2-(2, 2, 2-三氟-乙基）_2, 3, 3a, 4, f 六氫-吡唑並-[4,3 —c]吡啶_5_基）_乙基）_2_甲基—丙醯 胺。 本發明之任何方法皆可包括：投與有效量之包括至少 種本發明化合物之組成物或醫藥組成物至需要此類調 節、處理或治療之細胞、組織、器官、動物或病患。此方 法可視需要進一步包括用於治療與2產生相關之疾病 的共同杈樂法及組合療法，其中，該投藥復包括於本發明 化合物投藥之前、同時及/或之後投與至少一種附加之選自 下列各者之活性劑.TNF拮抗劑（例如但不限於：丁肝抗體 或片段、可溶性TNF受體或片段、其融合蛋白或小分子ΤΝρ 拮抗劑）、抗類風濕藥物（例如：甲氨蝶呤（meth〇trexate)、 金諾芬（aUranofin)、硫代葡萄糖金（aur〇thi〇gluc〇se)、 硫唑嘌呤（azath1〇prine)、依那西普（etanercept)、硫代 蘋果S夂納金（go Id sodium thioma late)、硫酸經氯酉昆 (hydroxychloroquine suHate)、來氟米特、柳氮磺胺吡 啶）、肌肉鬆弛劑、麻醉劑（narc〇tic)、非類固醇抗發炎藥 物（NSAID)、止痛劑、麻醉劑㈠的以“衍幻、鎮靜劑、局部 麻醉劑、神經肌肉阻斷劑、抗微生物劑（例如：胺基糖苷 (aminoglycoslde)、抗真菌劑、抗寄生蟲劑、抗病毒劑、 碳青徽烯（carbapenem)、頭孢菌素、氟喹諾嗣 92729 98 200530588
(fluoioquinol〇ne)、大環内脂物（macr〇Hde)、青黴素、
尹、函皿5女四環破素、另一抗微生物劑）、抗牛皮癬劑、皮質 類固醇、合成代謝類固醇、糖尿病相關製劑、礦物、營養 劑、曱狀腺劑、維他命、鈣相關賀爾蒙、止瀉劑、止咳劑、 止吐劑、抗潰瘍藥、輕瀉劑、抗凝血劑、紅血球生成素 (erythropiei tin)(例如：紅血球生成素α )、非格司亭 (f i lgrast im)(例如：g-CSF、Neupogen)、沙格司亭 Csai*gfamostin〇(GM-CSF、Leukin)、免疫作用、免疫球蛋
白、免疫抑制劑（例如：巴裏西單抗（basiliximab)、環孢 靈、達克珠單抗（daclizumab))、生長激素、贺爾蒙替代藥 物、雌激素X體調節劑、散賸劑、睫狀肌鬆弛劑、烷化劑、 抗代謝劑、有絲分裂抑制劑、放射藥物、抗憂鬱藥物、抗 炼症劑、抗精神病藥物、抗焦慮劑、安眠藥、刺激性藥物、 多奈哌齊（d〇nepezii)、塔克寧（tacrine)、氣喘藥物、冷 促效劑、吸入式類固醇、白三烯抑制劑、曱基黃嘌呤、咽 達永樂（crom〇lyn)、腎上腺素或類似物、多馬斯α (d⑽ alfa)(Pulmozyme)、細胞激素或細胞激素拮抗劑。適當劑 1為該項技藝中所熟知。參見例如：We! is et al.，
Pharmacotherapy Handbook，2· sup. nd Edition，Appleton and Lange, Stamford, Conn. (2000) ; PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition,
Tarascon Publishing，Loma Linda，Calif. (2000 )，其中 各文獻之全部内容係於此合併作為參靠考文獻。 適用於本發明之組成物、組合療法、共同投藥法、設 92729 99 200530588 計物及/或方法之TNF拮抗劑包括但不限於：抗-TNF抗體 (如 Remicade(英利昔單抗（infHximab))或 Humira(艾達 木單抗（adalimumab)))例如或其抗原結合片段，以及專一 f生、I合於TNF之受體分子（例如Enbrel (依那西普 (Etanercept)));阻止及/或抑制TNF合成、TNF釋放或其 於目標細胞上之作用的化合物，如：沙利竇邁 (thal ldomide)、替尼達普（tenidap)、磷酸二酯酶抑制劑 (例如·己酮可可驗（pent〇xifyl丨ine)及洛利普南 (rolipram))、A2b腺苷受體促效劑及A2b腺苷受體增強 阻止或抑制TNF受體信號傳遞之化合物，如致裂原活 化蛋白（MAP)激酶抑制劑；阻斷及/或抑制膜tnf裂解之化 :物如至屬蛋白酶抑制劑，·阻斷及/或抑制TNF活性之化 合物’如血管收縮素轉化酵素⑽）抑 (了。灿以及阻斷及/或抑制TNF產生及/或合成存二 化合物，如map激酶抑制劑。 在此說明，「腫瘤壞死因子抗體」、「TNF抗體」 ^體」或片段等係於活體外、原位置及/或活體内減少、 人^!1、廢除或影響TNF活性。例如，本發明之適當τ: 段^以H結合TNFa’並包括抗—TNF抗體、其抗原結合 二專一性結合至，"之特定突變株或功能區 二TNF “或片段亦可減少、阻斷、廢除、影響、妨‘ 2抑制TN_、職或蛋白合成、τ ; =:、膜则解、TNF活性、TNF產生及/或合成: 处及其他可用之組合療法將為彼等於該項技藝中具心 92729 100 200530588 =:=及領會。此組合療法之潛在優點包括·可 :用1!之各早獨活性組成分㈣毒性副作用降至最 ^於效用上有所增進改善、促使投藥或使用之容易及/ 或P牛低化合物製劑或調配物之總消耗。本發明化合物之生 物活性可藉由數種以細胞為基礎之分析法評估。此類分析 法之-可經由使用來自人類周邊血液單核細胞（顺C)或人 類單核球細胞株（ΤΗΡ-υ實施。該細胞係以人類干擾素1 (IFN-r )及脂多醣之組合或以與金黃色葡萄球菌 Cowanl株之組合於試驗化合物存在下刺激之。il_i2產生I 之抑制程度可藉由例如使用三明治酵素結合免疫吸附 (sandwich ELISA)分析法與抗-人類IL—12抗體測定p7〇 之量而測量。接著可測定該試驗化合物之IC5g。尤其，pMBc 或THP-1細胞係與該試驗化合物一起培養。細胞存活率 (cell viability)係使用 MTS [3-（4,5-二曱基噻唾-2-基） 5(3叛基曱氧基本基）-2-(4-石黃苯基）-211-四°坐鐵]之生
化還原作用（bioreduction)評估（pr〇mega，Madison，WI)。 其他治療劑可包括骨骼抗-溶蝕劑，例如黃體素類 (progestins)、多膦酸鹽類（polyphosphonates)、雙膦酸 鹽（類）、雌激素促效弹j /拮抗劑類（如Premar i η㊣）、雌激素 /黃體素組合類、及雕激素衍生物類（如雕素酮（es t rone)、 雌三醇（631：1^〇1)或17(3：、17/3-乙：^基雌二醇 (estradiol))。例示之黃體素類為商業來源可購得者且係 包括：阿孕苯奈德（algestone acetophenide)、四烯雌酮 (al trenogest)、醋酸阿馬地酮（amadinone acetate)、醋 101 92729 200530588 酸曱孕酮（anagestone acetate)、醋酸氣地孕酮 (chlormadinone acetate) 、 ；)# 孕商享（cingestol)、酉t 酉曼氯 孕酮（cl oge st one acetate)、醋酸氯美孕酮（cl omege stone acetate)、醋酸地馬孕酮（del mad in one acetate)、去氧孕 稀（desogestrel )、地美炔嗣（dimethisterone)、地屈孕酮 (dydrogesterone)、艾昔孕酉同（ethynerone)、（dthynodiol diacetate)、依託孕稀（etonogestrel)、醋酸氟孕酉同 (f lurogestone acetate)、孕氣 S同（gestaclone)、孕二稀 酮（gestodene)、己酸孕諾酮（gestonorone caproate)、孕 三烯酮（gestrinone)、鹵孕酮（haloprogesterone)、己酸 經孕酮（hydroxyprogesterone caproate)、左旋炔諾孕酮 (levonorgestrel )、利奈孕酮（lynestrenol)、美屈孕西同 (medrogestone)、醋酸曱經孕酮（medroxyprogesterone acetate)、醋酸美命孕酮（melengestrol acetate)、 (methynodiol diacetate)、火夫諾酉同（norethindrone)、酉皆 酸炔諾嗣（norethindrone acetate)、異炔諾酮 (norethynodrel)、諾孕酯（norgestimate)、諾孕美特 (norgestomet)、炔諾孕酮（norgesiirel)、苯丙酸奥索孕酮 (oxogestone phenpropionate)、黃體激素 (progesterone)、醋酸奎孕醇（quingestanol acetate)、 奎孕酮（quingestrone)以及替孕醇（tigestol)。較佳黃體 素類為曱羥孕酮、炔諾酮以及異炔諾酮。 例示之骨骨各溶I虫作用（bone re sorption)抑制多膦酸 鹽類包括揭露於美國專利第3, 683, 080號案之多膦酸鹽類 102 92729 200530588 型式。較佳多膦酸鹽類係成雙（gem i na 1)之二-多膦酸鹽類 · (dipolyphosphonates)(亦稱為雙-膦酸鹽類（bis-phosphonates))。替魯膦酸二鈉（Tiludronate disodiuni) 為特別佳之多膦酸鹽。伊班膦酸（Ibandronic acid)為特別 佳之多膦酸鹽。阿侖膦酸鹽（Alendronate)為特別佳之多鱗 酸鹽。唑來膦酸（Zoledronic acid)為特別佳之多膦酸鹽。 其他較佳之多膦酸鹽類為6-胺基-1-羥基-亞己基-二膦酸 及1-輕基-3(曱基戊基胺基）-亞丙基—二膦酸。該多膦酸鹽 類可以酸、或可溶性鹼金屬鹽或鹼土金屬鹽形式投藥。多每 膦酸鹽之可水解酯類亦同樣包括在内。特定實例包括乙烷
1 I工基 1，1 一 膦酸、曱烧二膦酸（methanediphosphoni ac i d)、戊烧-1 -輕基_ 1，1 -二膦酸、曱烧二氯二膦酸、曱穷 羥基二膦酸、乙烷-1-胺基-1，卜二膦酸、乙烷—2 —胺基—j，i 二膦酸、丙烷-3-胺基-1-羥基-丨，卜二膦酸、丙烷—N，N一二 曱基-3-胺基-1-羥基一1，1一二膦酸、丙烷一3, 3一二曱基_3一 胺基-卜羥基-1，1-二膦酸、苯基胺基甲烷二膦酸、N，N一二 曱基胺基曱烷二膦酸、N(2-羥乙基）胺基甲烷二膦酸、丁搞 -4-胺基-1-羥基-丨，丨-二膦酸、戊烷胺基―丨―羥基—丨，p 一騰S义、己烷-6-胺基-1-羥基—丨，丨-二膦酸以及其醫藥上习 接受之酯類或鹽類。 尤其’本發明化合物可與哺乳動物雌激素促效劑/拮抗 劑組合。任何雌激素促效劑/拮抗劑皆可用於此目的。該術 語雌激素促效侧#抗_指會與雌激素受體料、抑制骨 代謝（b〇ne turnQver)及/或預防f f流失之化合物。特定 92729 103 200530588 言之，雌激素促效劑於本文敎義為可結合至哺乳動物組 織中雌激素受體位置並模仿雕激素於一種或一種以上組織 内之作用的化學化合物。雌激素拮抗劑於本文係^義為可 結合至哺乳動物組織中雌激素受體位置；並阻斷雌激素於 :種或-種以上組織内之作用的化學化合物。此類活性係 藉由彼等該項技藝中f知之標準方法輕易測定，該標準方 j包括雌激素叉體結合分析法、標準之骨組織型態測定及 您度測定儀（densitometer)方法、以及下列文獻所述之方 法：E. FEriksen^y.，BoneHist⑽〇rph⑽etry，如
Press, New York, pp. 1-74( 1994) ; S. J. Grier etaj., The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry In ^ Animals, Inv. Radiol. 31 (1 ) : 50-62(1 996); Wahner H W·及 F〇gelman I.，The Evaluati〇n 〇f 〇ste〇p〇r〇sis:·
Dual Energy X-Ray Absorptiometry in Clinical
Practice., Martin Dunitz Ltd., London, pp. 1^96 ( 1 994)。此等化合物之變化係說明並參照如下。 幸父佳之雌激素促效劑/拮抗劑為屈洛昔芬 (dr〇l〇xlfene):(酚，3 —(1 —(4 一（2一（二曱基胺基）乙氧基） 苯基）-2-苯基-1-丁烯基）-，（e)-)及揭露於美國專利第 5, 047, 431號案之相關化合物。另一較佳雌激素促效劑/拮 抗劑為3-(4-(1，2-二苯基-丁-1-烯基苯基）丙烯酸，其 係揭路於 Wilson a_/·，Endocrinology 138: 3901-11 (1 997)中。另一較佳雌激素促效劑/拮抗劑為泰莫昔芬 (tamohfen):(乙胺，2-(4-(1，2-二苯基—卜丁烯基）苯氧 92729 104 200530588 基）-N，N-二曱基9 ，2 —搜基-1,2, 3-丙烷三羧酸酯 •及揭路於吳國專利第4, 536, 51 6號案之相關化合 物。另一相關化合物為4 . ^ , 專利第4, 623, 66M虎案中。…、吴曰分，其係揭路於美國 較佳之雌激素促效劑/拮抗劑為雷諾昔酚 (一lfene).(甲羥基-2-(4-羥基苯基)苯並㈤ 垂刀3基）（4-(2-(1'六氫吼咬基）乙氧基）苯基）氯化 其係揭露於美國專利第4, 418, 068號案中。另一較佳 雌激素促效劑/拮抗劑為托瑞米芬（to·”·):(乙胺 (ethanamine),« ι 〇 M M ^ (4—乳— i，2-二苯基-卜丁烯基）苯氧基 曱基一，（Z)-，2一羥基-1，2,3-丙烷三羧酸醋（1 ·· D)’其係揭露於美國專利第4, 996, 225號案中。另-較佳 雌激素促效劑/拮抗劑為升克洛曼（“Μ咖。_) ··卜（卜 ((4 (曱氧基' 2-二甲基—3 —苯基-色滿—4 —基）—苯氧基卜 ^基^吡各"疋，其係揭露於美國專利第3, 822, 287號案 N曰S 1ev〇rme 1oxi f ene)亦較佳。另一較佳雌激 素促效劑/拮抗劑為艾多昔芬（idQxifene) : (em —(2 —(4〜 (么1〜（1—峨:苯基）—2 一苯基—丁一1 一烤基）-乙基）—吼略烧酮，其 k揭路表美國專利第4,839,1 55號案中。另—較佳離激素 促1效拮抗劑為2一（4—曱氧基一苯基）—3—[4一（2 一六氫吼啶 。。基乙氧基）-苯氧基]—苯並[b]噻吩-6-醇，其係揭露於 吳國專利第5,488,058號案中。另一較佳雌激素促效劑/ ^ ”丨為6 (4 —羥基-苯基）-5-(4-(2-六氫吡啶-卜基-乙 氧基）笨甲基蔡—2 —醇，其係揭露於美國專利第 92729 105 200530588 ,, 狁木中。另一較佳雌激素促效劑/栌疒 (4-(2-(2-氮雜-雙環[2,之⑴庚― 為 (6-羥基-2-(4-芦美-笨芙、* , 土 虱基）-笨基）一 娜/·3中。其他較佳雄激素促效劑 ;^ 述於美國專利第5,552,412號案之化合物。本:;:、= :佳化合物為：順條氣-笨基) + (41六氫二 I:—:基)_5,6，叫 爪-2-知’順-6 —苯基_5一(4_(2_吡咯啶+基 ^)-2-^-6:,Λν2Τ : ^^'3，-Dft …… 氫奈；卜(4，-吡°各烷乙 乳基本基）-2-(4’’-氣苯基）_6 —經基一^卜四氣显嗤 順-6-U-經基苯基）_5(4—(2_六氫卩比唆_卜基_乙氧基> 苯基）-5,6,7,8-四氫-萘_2_醇；及卜（4，—叶卜各烷乙氧^苯 基”-苯基+經基^仏四氫㈣^其他雌激素促 效劑/拮抗劑係揭露於美國專利第4,丨33, 814號案中。美國 專利第4:133, 814號案揭露了 2_苯基|芳酿基_苯並嚷吩 以及2-苯基-3-芳醯基苯並噻吩氧化物之衍生物。 於》亥項技蟄中具有通常知識者應瞭解，其他骨絡合成 代謝劑（亦稱為骨質密度增加劑（bone mass augn]enting agent))係可與本發明化合物結合使用。 骨質密度增加劑為可將骨質密度提高至骨折閥值 (bone fracture threshold)以上之化合物，而該骨折閥值 92729 106 200530588 係詳述於 World Health Organization Study World Health Organization, "Assessment of Fracture Risk and its
Application to Screening for Postmenopausal Osteoporosis (1994). Report of a WHO Study Group.
World Health Organization Technical Series 843” 。 任何前列腺素或前列腺素促效劑/拮抗劑皆可與本發明化 合物組合使用。於該項技藝中具有通常知識者應瞭解，亦 了使用IGF 1、氟化鋼、副甲狀腺素（parathyr〇id hormone (PTH))、副曱狀腺素之活性片段、生長激素或生長激素促 泌素（secretagogues)。下節係詳加敘述可與本發明化合物 組合投藥之例示化合物。 前列腺素··該術語前列腺素係指為天然前列腺素 GD】PGD2、PGE2、PGE]及PGF2之類似物的化合物，該前 f腺素係詩治療骨質疏鬆症及其他與過m細胞骨f 合敍作用相關之疾病。此等化合物會結合至前列腺素受 體。此結合係藉由該項技藝中具有通常知識者所知之標与 ^T("，H〇：S* ClonmgandExpress^no ^ eP2 Subtype of Hu.an Receptors for Prostaglandi ioc enucal and Biophysical Research 〇_:1Catl〇nS，197⑴：263-27〇 (1 993))輕易測定。 相關：二:ί素為與基礎化合物前列腺酸(Pr〇Stanolc — 謂之％月日知化合物。美 由竣基碳原子心、/冊素之碳原子編號係依序 端碳原子。通；二二過％戊基環，而至鄰近側鏈上之末 通吊该郇近側鏈為反式方向（trans 92729 ]07 200530588 orientation)。甚女q班丄、社 Αϊ7、 示前歹彳腌去ρ ;衣戊土 刀之C—9處存在酮基，則表 y月】歹J腺素屬於Ε舞刑，徒其ppp a人 員土仏B PGE2包含位於C】3一c“之反式 已、，又、以及位於Cs-C6位置之順式雙鍵。 )列腺，τ、之笑化係敘述並參照如下。然而，其他前列 腺素則為該項技藝中具有通常知識者所知。例示之前列腺 素係揭露於美國專利第4，171，331號案及第3,927，197號 卞中·Norrdin ei a/·，The Role of pr〇stagiandins in
Bone in Vivo, Prostaglandins Leukotriene Essential ·· 139_15() (199G)為纽合成代謝前列腺 素之汴_文早。任何別列腺素促效劑/拮抗劑皆可與本發明 化a物、、且a使用。该術語前列腺素促效劑/拮抗劑係指可結 合至刖列腺素受體（例如：AnS·以习人，cl〇ningand
Expression of the EP2 Subtype of Human Receptors for Prostaglandin E2? Biochemical and Biophysical
Research Communications 1 97( 1 ) : 263-70 (1 993))並模 仿前列腺素於活體内作用（例如··刺激骨骼形成並增加骨質 密度）之化合物。此等作用係藉由該項技藝中具有通常知識 者所知之標準分析法輕易測定。Er iksen E. F. ei a/.，
Bone Histomorphometry， Raven Press， New York， 1994， PP· > S. J. Grier et si. , The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry In Animals, Inv. Radiol. 31(1)： 50-62(1996) ； H. W. Wahner and I. Fogelman, The Evaluation of Osteoporosis: Dual Energy X — Ray Absorptiometry in Clinical Practice， Martin Dunitz 108 92729 200530588
Ltd· London，pp.卜 296 (1 994)。數種此等化合物 ^ ' ’？、下。然而，其他前列腺素促效劑/拮抗劑則為> 誃項 技:中一有通¥知識者所知。例示之前列腺素促效劑/〜、 劑係揭露如下。美國專利第3, 932, 389號案揭露了玄= 骨絡形成活性之2_去叛基_2_(四M —基）_u_去氧、 、，二取代ω -五去甲基前列腺素類。美國專利第 ，18, 8 9 2號案揭鉻了有盈於骨絡形成活性之16 _芳 13, 14-一虱讦卯2對_聯苯基酯類。美國專利第4,2ig 號案揭露了有益於骨絡形成活性之2,3,6_經取代+叫 酮類。美國專利第4, 132, 847號案揭露了有益於骨絡部成 活性之2, 3, 6-經取代-4-吡喃酮類。美國專利第4,〇〇Q ^ 號案揭露了有益於骨骼形成活性之16_芳基_i3，丨4_二\ 啊2對-聯苯基酷類。美國專利第3,982,〇16號案揭^ 有益於骨路形成活性之16_芳基_13，14_二氫_pGE2對、与 基酿類。美國專利第4, 62U00號案揭露了有益於骨二 成活性之經取代環戊院類。美國專利第5,216，183號奉揭 露了有益於骨骼形成活性之環戊酮類。 氟化納可與本發明化合物組合使用。該術語氟化納係 指其所有形式（例如：緩釋型氟化納、持續釋放型氟化柄）。 持續釋放型氟化鈉係揭露於美國專利第4,9〇4,478號榘 中。氟化納之活性係藉由該項技藝中具有通常知識者所知 之生物方法輕易測定。 骨骼形成蛋白可與本發明化合物組合使用（例如參 見：OnodW.，Pr⑽〇tl0n〇f the〇ste〇geneticAcirvity 92729 109 200530588 〇ί Recombinant Human Bone Morphogenetic Protein by Prostaglandin E]， Bone 19(6) : 58卜588(1996))。 動物模式 自體免疫疾病之動物模式可用於評估本發明治療劑或 醫樂組成物之功效。自體免疫疾病如丨型糖尿病、甲狀腺 自體免疫性、全身紅斑性狼瘡及腎絲球腎炎之動物模式業 已發展完成^1抓化1^以3人，1 999，八111;〇1111111111147 29: 235-246 ; Krogh et al·，1 999, Biochimie 81 : 511-515 ; Forster， 1999， Semin· Nephrol· 19 : 12-24)。 下述系列之實施例係用於說明而非在限制本發明之範 田壽。 實施例 I·測量IL-12 p40之濃度 實施北方墨點分析法以檢測IL—12 p35及p4〇之mRNA 濃度。將人類PBMC及人類單核細胞株τΗρ-丨細胞於化合物 1存在或不存在下以iFN-?, /SAC刺激之。使用Fic〇u一
Paque(Pharmacia Biotech，Uppsala，Sweden)將人類 PBMC 經由離心單離出，並以補充有1〇%胎牛血清（Fcs)、 月Μ素及1 00 // g/ml鏈黴素之rpmi培養基製備於具有5χ 105cellS/well (細胞/孔）之96孔盤中。然後於存在不同濃 度之化合物2或其他化合物下，將IFN—r (1〇〇u/ml)注入 細胞，接著再注入〇· 〇l%SAC或！ V g/ml Lps。該試驗化合 物係製備於DMS0中，且包括不含化合物之對照組在内，該 DMS0於所有培養細胞中之終濃度係調整為〇· 25%。18小時 92729 110 200530588 後取不含細胞之上清液進行細胞激素測量。該了肝—丨細胞 係得自美國菌種保存中心（American Type Culture
Collection，ATCC)(Manassas，VA)，且係培養於補充有 10%FCS (ATCC，Manassas，VA)及 1%青黴素/鏈黴素 (Gibco-BRL，New York，Ν· Υ·)之 RPMI 1 640 (ATCC，
Manassas，VA)中。將總RNA單離出並使用IL-12 p35及 p40 cDNA探針進行北方墨點分析法。首先檢測於存在或不 存在1//M化合物1下，經注入IFN—^再注入SAC刺激之 hPBMC與THP-1細胞培養中之mRNA累積的動力學。 於hPBMC中，在SAC添加4小時後均可偵測到il-12 P35及P40 mRNA，且於SAC添加6小時後達到高峰。於所 有取樣日寸間中，P35 mRNA之表現係完全受到化合物i抑 制’反之p40次單元之mRNA表現則為顯著降低但不完全。 在經IFN-r/SAC刺激之THP—丨細胞中，於不含化合物之對 照組中IL-12 P35 mRNA係勉強可見，但於存在1//M化合 物1下則偵測不到。相較之下，IL—12 p40 mRNA於SAC添 加後4小時即可立即偵測到並於添加後β小時達到高峰。 卜化5物1係顯著但不完全地降低p4〇資訊之表現。 於經IFN-/SAC刺激之hPBMC中進行化合物1對 IL 12 mRNA之抑制作用的劑量反應研究。因為IL__12 p35 及之mRNA量於SAC添加後6小時為最大，因此即選擇 此時間點進行劑量反應研究。IFN-τ/SAC對於IL-12 p35 6 ΝΑ m積之誘導作用係經由3nM化合物1 (IC5G低於lnM) 完全逆轉。相較之下，IL—12 p4〇 mRNA之累積則僅輕微受 in 92729 200530588 到InM化合物】知^ 抑制作用。相對::制:盡管於_之最大值下仍為不完全 用可能是由於咖Γ#Γ，ρ4ϋ所顯見較微弱之抑制作 產生之P4G旦〜抑制作用較有效或僅可能是所 度之藥物。里遇超過P35以及其抑制作用可能需要更高濃 因此化合物1造成p35及p4〇之m驗量均降低 之細胞核行進轉錄分析實驗（nuclearrun n 、只 ^ 1 n — on exPeriments) 以不此作用係#⑨轉錄作用之起 II.化合物2對於IL_12 p35及p4〇啟動子活性之影響· 由北方墨點分析法之發現結果接著著手進行p35及 P40啟動子活性之研究。將臟構築體瞬時轉染至氣科巨 嗟細胞株RAW264. 7，該麵構築體中p35及p4〇啟動子係 直接表現螢光酵素報導基因。該以1264 7係得自美國菌種 保存中心（Manassas，VA)，且係培養於補充有1〇%fcs (ATCC，Manassas, VA)及 1%青黴素/鏈黴素（Gibc〇_BRL，
New York，N. Y.)之 DEME (ATCC，Manassas，VA)中。’ # 對於刺激作用之由p35及p40啟動子帶動之螢光酵素 產生均是於存在或不存在化合物i及化合物2下測定。為 構築該人類IL-12 p35及p40啟動子/螢光酵素報導構築 月豆’ ϋ產生包含人類IL-12 p35及p40基因之數個序列蛛 構區（motif)之 p35 (-1.5 kb 至+3 bp)及 p4〇 (-1·3 kb 至+ 5 6 bp)啟動子片段。该專片段係經由得自人類pbmc之 基因體DNA以下述引子進行PCR而產生：IL—12 p35 i 5 kb-F : 5，-GCAGCATTAGAAGGGGCCTTAGAGA-3， （SEQ ID Ν0·3) 92729 112 200530588 以及 IL-12 ρ35 1· 5 kb-R : 55-TTTTATAATTGTCCCGAGGCGCG-3，（SEQ ID N0:4) ; IL-12 ρ40 1· 3 kb-F ·· 5，-ACGGCGAGGAAA GTTAGCCCG-3，（SEQ ID NO : 5)以及 IL-12 p40 1· 3 kb-R : 5’-TTGCTCTGGGCAGGACGGAG-3’（SEQ ID NO : 6)。p40 啟動子 報導構築體之刪減（deletion)係使用下列引子進行PCR產 生：IL-12 p40 -250 bp 至+56bp (p40/-250 bp) F: 5，-CACCCAAAAGTCATTTCCTC-3，（SEQ ID NO: 7)以及 IL -12 p40 -250 bp 至+56bp (p40/-250 bp) R: 5’-TGCTCTGGGC AGGACGGAG-3，（SEQ ID N0:8) ; IL-12 p40 -150 bp 至+56bp (P40/-150 bp) F:5,-AGAGTTGTTTTCAATGTTGCAAC-3，（SEQ ID NO : 9)以及 IL-12 p40 -1 50 bp 至+56bp (p40/-150 bp) R : 5’-TGCTCTGGGCAGGACGGAG-3，（SEQ ID NO : 10)。所得之 PCR 產物係接合於pGL3-Basic載體（Promega)中螢光酵素基因 之上游。所有構築體皆經由DNA定序確認。 將RAW264. 7細胞瞬時轉染後，接著於存在或不存在不 同濃度之化合物1、化合物2或陰性對照組（結構上相關之 不具活性的化合物）下，以鼠科重組IFN-r (100 ng/ml)刺 激該細胞10小時，再以LPS(l//g/ml)或SAC(0.025%)刺激 1 6小時。轉染作用係使用Super Feet Transfect ion Reagent (Qiagen)以所述步驟完成。轉染DNA之總量（包括 各未插入之對照組質體）係維持不變。 將細胞以載體 pCMV (BD Biosciences Clontech)共轉 染（co-transfect)，該載體中已活化之CMV啟動子係主導 /3-半乳糖苷酶表現以用於偵測轉染效率。螢光酵素及/5 - Π3 92729 200530588 半乳糖音酶之活性係 另越止〇 丁、根琛更先酵素分析系統（Promega)
Bl〇SC—es Clontech)^f 螢光酵：、二？中測定。接著再使用該万-半乳糖苷酶值將 體之準化。含有IL~12州及p35啟動子構築 ===胞在經⑽搞^勝濟刺激 動早:舌性係受到強烈誘導。此由P40及P30啟 為▼力之蛋光酵素表現係於化合物1及化合物2存在下 j抑制但部不受該不具活性之陰性對照組化合物抑 。該結果示於第2A至2B圖。此結果顯示化合物2抑制 12—轉錄作用之機制。化合物2係比化合物！更有效地 P制緃IFN-γ /LPS刺激之由p35啟動子帶動的螢光酵素表 現，而陰性對照組化合物則完全不抑制啟動子活性。化合 物1、化合物2及陰性對照組化合物於THp—丨細胞中影響 ILJ2產生之ic5()分別為4〇 nM、1〇㈣、高於1〇⑽禮。 此等結果與由ELISA所評估之影響丨卜^蛋白產生之抑制 活性相符，表示P35啟動子活性之抑制作用即為對匕一12 之抑制活性的反應。ELISA係藉由下述方法進行。人類 L 12 p70 (雜一元體）係使用來自ceu Sciences (Norwood，ΜΑ)之ELI-PAIR套組，根據廠商說明書進行分 析。人類IL-12 p40係使用來自Cell Sciences (N〇rw〇〇d， )之EL ISA套組，根據廠商說明書進行分析。 用以檢測IL-12 p35及p40 mRNA量之北方墨點分析法 係用於說明該作用之機制。化合物i造成p35&p4〇tmRNA 1減少。細胞核行進轉錄分析實驗顯示此作用係位於轉錄 92729 114 200530588 I °作用之L段。當該以p35及p4〇啟動子主導螢光酵素 f導基因表現之DNA表現質體經轉染至細胞時，其係續二 贯光酵素之表現可由化合物丨及化合物2抑制。此等結果 證實化合物2抑制IL-12p35及p40基因轉錄作用之機°制。 _接著開始著手分析參與此作用之IL-12轉錄啟動子單 兀（transcripti〇nal pr⑽〇ter element)，並使用 p仙啟 動子進行刪減分析。選擇此啟動子而非p35啟動子是因為 P40啟動子之轉錄單元較為明確。為界限出該涉及基 因轉錄活化作用之^―以抑制劑反應單元，係構築三個^ 同啟動子並瞬時轉染至RAW264. 7細胞中。如第3人至 圖所示，該等由穿過AP1單元區所構成之啟動子係 顯不減弱之啟動子活化作用，當該啟動子包含p4〇啟動子 之5,側翼區但卻具有大量之近側刪減時，其對於ifn一 ^ /LPS之刺激作用則顯現顯著降低之啟動子活性。只有竽包 含Ets-2與PU-i、NF_ κ Β及AP1單元之啟動子對於/㈣二 :/LPS之刺激作用顯現出螢光酵素高活性，推測該£伪一2 早兀麥與了 IL-12p40啟動子活性之調節作用。此由iL_i2 啟動子驅動之螢光酵素活性於化合才勿i存在下受到顯著抑 制。由此等結果推測該對應於啟動子抑制作用之單元係位 於IL-12 P40啟動子中自TATA盒至_25〇如之區域。 為更細部確認各個p4〇啟動子轉錄單元之角色，係生 產許多此等單元之突m作之目的在於評估突變之影 響’該突變係於化合物2所媒介之抑制作用下減低但不消 除P40啟動子活性。所有於£忭_2單元内之突變皆完全消 92729 115 200530588 除了報導基因表現之誘導作用，因而更加突顯出此單元之 重要性。於NF- /c B單元内之定點突變致使p40啟動子具有 降低之但非明確可測量之由IFN-7 /LPS所媒介的誘導作 用。定點突變係使用GeneTai lor定點突變系統 (Invitrogen，Carlsbad，CA)，根據麻：商說明書進行。該 IL-12 p40 突變株引子序列如下：IL-12 p40-Ets2 mut-F : 5，-TATTCCCCACCCAAAAGTCACTTAGTTCATT-3，（SEQ ID NO: 11) 以及 IL-12 p40-Ets2 mut-R: 5，-TGACTTTTGGGTGGGGAATAAGG AAGGAGA-3，（SEQ ID NO : 12) ; IL-12 p4〇-AP-l mut-F : 5，-TTGTTTTCAATGTTGCAACATTTCTAGTTTA-3，（SEQ ID NO : 13) 以及 IL-12 p40-AP-l mut-R: 5，-TGTTGCAACATTGAAAACAA CTCTCAAAA03，（SEQ ID NO : 14) ; IL-12 p40-NFkB mut-F : 5’-CAAACAAAAAAGGAACTTCTCAGAAGGTTTT-3，（SEQ ID NO : 15) 以及 IL-12 p40-NFkB mut-R: 5’-AGAAGTTCCTTTTTTGTTTG TCTCTCTCTG-3，（SEQ ID NO : 16) ; IL-12 p40-PU-1 mut-F : 5，-ACAGAGAGAGACAAACAAAACTTCTTGAAAT-3，（SEQ ID NO ·· 17) 以及 IL-12 p40-PU-l mut-R: 5’-TTTTGTTTGTCTCTCTCTGTG TGTGTATCA-3，（SEQ ID NO : 18)。 有趣地，由化合物2所媒介之表現的抑制作用在此突 變構築體中降低了，因此暗示了 NF- /c B所扮演的角色。由 於已證明轉錄因數NF- /c B涉及IL-12 p40基因表現之調節 作用，因此我們檢測了 STA-1 856是否改變NF-/c B與其位 於p40啟動子上之同源位置（cognate si te)的結合。由注 入IFN- 7'之THP-1細胞製備細胞核萃取物，其中該THP-1 ]]6 92729 200530588 細胞係已使用或未使用SAC處理並於存在或不存在1//M 化合物1或10 nM ASA下培養。細胞核萃取物之單離係藉 由下述方法完成：首先將THP-1細胞懸浮於20倍體積之缓 衝溶液A中，該緩衝液A包含1〇 mM KC1、10 mM HEPES (pH 7· 9)、1 mM MgCh、1 mM 二硫代蘇糖醇（DTT)、〇· 1%諾納 德 P-40 (Nonidet P - 40，NP-40)以及 0.5 mM 苯甲基磺醯 基氟化物（PMSF) ’接著再進行均質化並於下以1 〇, 〇〇〇 rpm離心5分鐘。然後再將細胞核沈澱物懸浮於緩衝液c 中，該緩衝液 C 包含 400 mM NaCl、20 mM HEPES (pH 7· 9)、
15 mM MgCl2、0. 2 mM EDTA、1 mM DTT、25%甘油、1 mM PMSF 與l〇//g亮抑酶肽（leupeptin)、2〇//g胃蛋白酶抑制劑 (pepstatin)以及每毫升i〇// g胰蛋白酶抑制劑 (anUpam)，並於4。〇下培養3〇分鐘，再以14,〇〇〇 離心20分鐘。將上清液以包含1〇〇禮Nan、2〇 _ HEpEs (pH 7·9)、20%甘油、lmM PMSF以及i缝DTT之緩衝液β 透析。 將得自此步驟之萃取物用於凝膠位移分析法 shift assays)，該凝膠位移分析法係使用含有肝一目 標序列(相當於來自IL_12 p4〇轉錄起始位置_i2i至, 之區域）或突變之NF—U結合位的寡核酸。於經勝 /SAC刺激之™μ細胞中nu與包括其來自州 啟動子之同源序列的結合係受到強烈誘導。此交互作 ，有專-性’因為其會受過量之未標定探針競爭，但不受 Μ之寡核酸（其中兩個驗基對經取代）競爭。化合物】對 】Ϊ7 92729 200530588 於NF- /C B之結合並未顯現任何影塑 著降低了此結合作用，儘管= 化合物！及制ASA抑制的百分比分別為_及·。社 合化合物2對不具任何影響之結果，此等結果顯示: 合物17化合物2料1L—12產生之強烈抑制活性並非由於 總NF-zcB '结合活性之總量減少。故期望此後有可強有力阻 斷剛且具有比化合物y化合物2更廣大之細胞激素抑 制作用的化合物。
為瞭解化合物2對於NF-kb結合之作用，係使用以 ELISA為基礎之轉錄因數-DNA結合活性分析系統研究數個 NF-/CB家族成員、p50、c_Rel以及p65cDNA_轉錄因數結 合活性分析係使用EZ-偵測轉錄因數套組（Ez_detect transcription Factor !^11:)_肝_凡 β p5〇 或邱5 (pierce， Rockford，IL)以及 BD Mercury TransFact〇r 套組 _NFkB (BD Bi〇sciences Clontech，Pal〇 Alt〇，CA)，根據廠商 說明書進行。 於來自THP-1細胞（該THP-1細胞係經IFN- 7 /LPS刺 /放3小4 )之細胞核萃取物中，該p5〇、c—Re丨以及p65之 結合活性均顯著增加。而當化合物2 (500 nM)存在達3小 時’則c-Re 1之結合活性顯著降低且p5〇之結合活性輕微 降低。於p65之實例中，對於IFN-r /LPS之刺激，於化合 物2存在下則觀察到結合活性之增加。此不具結合競爭之 結果係由於p5〇及C-Rei的減少。 III· NF-kB 蛋白轉位作用（Translocation) 118 92729 200530588 由DM-蛋白相互作用之研究顯示，對於化合物2之處 理，c-Rel與P50 (其係於IL_12形成功能性活化雜二元體） 之結合活性為降低，而p65之結合活性則為增加。為瞭解 此變化，係使用西方墨點分析法進行NF_ ^ β蛋白細胞内定 位之研九才目對方；未處理之細胞，在以化合物2 (_ ) 處理3小時之細胞中’發m及P 6 5於細胞核之内數 量降低，—65於細胞核内之數量則顯著增加。此發現與 DNA-蛋白相互作用之研究相符，顯示卿卜^活性之減 少以及p65結合活性之增加可能造成細胞核㈣卜“蛋白 之不平衡，並影響P50/C-Rel之結合活性。 IV.化合物2對於C-Rel及ICSBp之影響（測量兩者於細胞 核之量） 於經分析之轉錄因數中，ICSBP& c_Rel兩個因數似 乎會受到化合物1/化合物2處理之影響。丨以卯係間接地 結合至Est-2位置。IL-12之主要NF/cB轉錄活化子 (trans-activat〇r)為 c-Rel/p5〇 雜二元體。其他二元體 (P65/P50及P50/P50)則皆缺乏活性或者具有抑制功能；因 此，由於透過NF-/cB活化作用以及其與ICSBPi相互作 用，使c-Rel參與了 IL-12轉錄作用。西方墨點分析法以 及DMA結合研究均顯示，於化合物2處理後細胞核之c_Re i 降低。如第4圖所示，係以下述方法進行THp_丨細胞核 c-Rel、p50以及p65蛋白之西方墨點分析法：將1〇%SDS 聚丙烯醯胺凝膠（I nv i trogen)轉移至純硝化纖維膜 (BioRed，Hercules，CA)。使該膜經了的丁缓衝液之5%牛 92729 119 200530588 . 奶阻隔，接著再使用抗-c-Rel、抗-p65、抗-p50、抗-ICSBP 或抗-PU-1抗體（所有抗體皆購自Santa Cruz)於1 : 500 之稀釋下，以室溫培養（incubated)l小時或以4°C培養一 夜。洗務該膜並使用與辣根過氧化酶（Horseradish Per oxidase)結合之抗-兔IgG或抗-小鼠IgG抗體 (Amersham，Engl and)於1 : 2000之稀釋下，以室溫培養1 小時。 以IFN-r加上LPS以及IFN-r加上SAC處理均可強烈 增加細胞核c-Re 1、p65以及p50之量。以化合物2處理則# 會顯著降低c-Rel量，且處理後之細胞核c-Rel量係相當 於或低於未經刺激的量。相較之下，以化合物2處理後， 細胞核p 6 5蛋白的量則為增加，但卻保持在未經刺激的量 之上。因此顯示以化合物2處理係造成細胞核c - R e 1 / p 5 0 (該主要IL-12活化NF-/c B二元體）之量的減少。 使用共轉染以IL-1 2啟動子-Luc報導系統大量表現 ICSBP (其表現受化合物2降低）。該ICSBP大量表現構築φ 體係使用下述引子由人類PBMC進行PCR F: 5，-CCGGAATTCAGGATGTGTGACCGGAATGG-3，（SEQ ID NO: 19) w&CSBP-exp-R:5，-ATATCTAGAATGGATGCAGGACGCAGAC-3’（SEQ ID NO : 20)，並將所得之PCR產物接合至pCI載體 (Promega)。ICSBP之大量表現增加了 p40之表現並降低了 化合物2之抑制作用。 V.化合物2對I /c B之影響 I /c B之降解作用為NF- /c B依賴型基因之訊息傳遞路 120 92729 200530588 徑步驟之一。化合物2誘導I/cBa及I/cBA降解之活性係 於THP-1細胞中使用西方墨點及FACS分析法進行研究。對 於IFN- 7' /LPS或IFN- 7' /SAC所媒介之誘導作用，THp—i 及RAW267· 4細胞之細胞質中I /c Βα及I /c B点的量於3〇 分鐘時顯著降低。然而，在使用或未使用化合物2 (5〇〇 ηΜ) 處理30分鐘及2小時之樣本間則未觀察到顯著差異。由化 合物2處理前樣本亦可觀察到相似結果，該化合物2處理 前樣本係於刺激前30分鐘加入化合物2。此等結果顯示化 合物2並不會誘導I/cBa及I/cB/9降解以使遊離之^^一凡 B轉位至細胞核而可作為轉錄因數。 VI.測量細胞核中Ets-2之量 轉錄因數ICSBP係經由結合於PU-1而間接結合至 Est-2單元。將細胞核卒取物結合至Ets-2 DNA單元微粒 子（bead)，自遊離蛋白單離出該微粒子以分離結合物，並 使用抗ICSBP或PU-1之抗體以西方墨點法分析該等蛋白。 E t s - 2 D N A與微粒子之結合係以下述方法完成。包含I l 一 12 p40 Ets-2位置（-292至-196)之生物素化DNA片段係使用 生物素化之引子經由PCR自1· 3kb野生型人類丨l-12 p40 X體合成，該引子詳述於The Journal 〇f immun〇i〇gy， 2000， vol 165， ρ· 27卜279。以 Qiaquick Kit (Qiagen， Chatsworth，CA)純化 PCR 產物。於含有；[〇 Tris-HCl， pH 8· 0、1 mM EDTA、0· 1 M NaCl 之緩衝液中，將 2 〆 g 生 物素化DNA結合至100// 1經鏈黴抗生物素蛋白 (streptavidin)結合之磁珠（magnetic bead)(Dynabeads， 92729 121 200530588 M280，Dynal，Lake Success，NY)。將結合至 2//g DNA 之 10 // 1 磁珠以 TGEDN 緩衝液（120 mM Tris-HC1，pH 8· 0、 1 mM EDTA、0· 1 M NaH、1 mM DTT、0· UTriton X100、 10%甘油）平衡，並與500 //gTHP-1細胞核萃取物及20//g 鲱魚精子 DNA (Herring sperm DNA) (Gibco)於 4°C 下培養
2小時。於TGEDN缓衝液中洗滌磁珠，並以補充有〇· 5%SDS 及1M NaC 1之20 // 1相同緩衝液將結合物質沖提出。將沖 提之物質以1 〇%SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳分離並使用抗 -ICSBP或抗-PU-1抗體以免疫轉潰分析法偵測之。 西方墨點分析法顯示，在經化合物1處理之THp —丨細 胞的細胞核萃取物中，ICSBP蛋白量顯著降低，參見第5 圖。相較之下，PU-1的量則不受化合物1處理影響，參見 第6圖。 ’ 4寸別有趣的發現是經化合物2處理之細胞的細胞核中 ICSBP及C-Rei量均降低。由於這兩個轉錄因數會相互作 用，因此預期這兩個因數數量之減少具有深遠的影響。化 合物2選擇性地抑制基因表現，其中該基因 化作用之ICSBP-c-Rel相互作用。 雖然c-Rel參與單核球及巨噬細胞中p35及p4〇以及 樹突細胞（DCs)中P35之表現，但是樹突細胞中p4〇之表赶 則為非 c-Rel 依賴型（Grum〇n1： dw·，j. Εχρ. 1 94: 1 021 -1 031 )。如果化合物2是透過C — Rel作用 則該藥物應抑制PBMCs產生之p4QAp7()。然而，化合物 應抑制DCs中P7Q之產生（透過p35之抑制作用），但應不 92729 122 200530588 會抑制DCs中之P40。此係根據下述方法藉由產生經單核 球衍生之樹突細胞進行試驗。將1χ 1(Γ ceUs/m丨之人類 PBMC懸浮於不含牛血清之DMEM中，並於37〇c、5%c〇2下谇 養2小時。接著將非黏著細胞以PBS洗條移除。缺後使勒口 著細胞於含有㈤W⑽U/ml)以及rhG㈣/⑽、 ϋ/,υ之則卜腿培養基中培養6至7天。每隔—天添加 一半體積之新鮮培養基及完全體積之新鮮細胞激素。 於存在不同濃度之化合物2或其他化合物下，先將ifNi (100 U/ml)注入細胞，然後再將〇. 〇1%SAC或丨# g/M Lps 注入之。該試驗化合物係製備於DMS〇中，且包括無化合 之對照組在内’該觸於所有培養細胞中之終濃度係調整 2 0.25%。18小時後取不含細胞之上清液進行細胞激素測 量。 事實上，化合物2抑制人類DCs中p7〇之產生，但不 抑制P40之產生（化合物2提高至心㈣無抑制作用一)。 此外’亦顯示於錢原蟲抗原（T_plasmaantig 刺激後^IL-12p40生產抑制作用為非c—_依賴型。因g) 匕右化。物2疋透過c_Rei作用，則應不會於灯“刺激 作用後觀察到IL-12P4G之有效抑制作用。初步結果頻干， 相較於IFN-r/SAC之刺激，以STAg誘導後化合物2所 介之P40抑制作用的IC5。大約高出麵倍，然而以、 SAC及STAg刺激之情況下’地塞美松之L均相同 果進-步證實化合物2所媒介之112產生的抑制作 用係經過c-Re 1路經。 92729 123 200530588 VII·經化合物2處理之細胞中，NF-kB成員細胞核轉位作 用之動力學 t 化合物2減弱了 c-Re 1及p50之細胞核轉位作用。接 著係檢測於以化合物2處理之經LPS刺激的細胞中，NF — /ί B家族成員之細胞核轉位動力學。於存在或不存在ι〇〇 化合物2之下’以LPS刺激ΤΗΡ1細胞，並經由處理後$ 分鐘、15分鐘、30分鐘、1小時、3小時及6小時所收集 之免疫轉潰細胞核（immunoblotting nuclear，n p 取 物測定NF -/cB家族成員之分佈。對於LPS之刺激作用，ρ5〇 早在刺激後5分鐘即轉位至細胞核並隨著時間累積（第7 圖，免疫轉潰及第8圖密度測定）。以化合物2處理經Lps 刺激之細胞，於刺激後5分鐘至1小時對於p5〇進入細胞 核之動力學均不具影響，且顯示細胞核部分之數量於3小 時輕微降低。該檢測P65細胞核轉位作用之實驗係顯示於 第9圖（免疫轉潰）以及第1〇圖（密度測定）。於Lps刺激之 細胞中，P65早在刺激後5分鐘即轉位入細胞核並於刺激 後15至30分鐘累積至最大量。以化合物2處理經Lps刺 激之細胞，對於P65進入細胞核之動力學並不具影響。相 對於未處理之細胞，於化合物2處理之細胞中，細胞核p65 之數量於稍後之時間（6小時）顯現輕微增加。 未預期與理論相結合’對於LPS之刺激作用，化合物 2並不影響p50及p65細胞核轉位作用之動力。於稍後之 時間，化合物2減弱了 p50之細胞核轉位作用（於3小時之 時間點）並增加了 P65之細胞核轉位作用（於6小時之時間 92729 124 200530588 點），顯示其對NF- /c β家族具選擇性之影響。 VIII.化合物2對Ρ52及Rel—β細胞核轉位作用之影響 Rel-B及P52為Rel家族之兩成員，其係相互優先形 成複合物。與P50及P65相似，P52實質上係發現於所有 細胞型中，而c-Rel&Rel B則僅於淋巴组織中偵測到。 為測定化合物2對於p 5 2及R e丨_ β細胞核轉位作用之影 響，係於存在或不存在100 ηΜ化合物2下以IFNg+Lj^刺 激THP1細胞，並於處理後6小時以免疫轉潰分析法測定 p52及Rel-B之分佈。如第u圖所示，於化合物2存在下， 細胞核Rel-B係輕微增加。於p52則無顯著影響。此結果 顯示化合物2專一性地抑制c_Rel及p5〇之細胞核轉位作 用^一對於其他NF- /c Β p52及Re 1-B之細胞核轉位作用則 否。 細胞株及培養條件： THP-1細胞株係得自美國菌種保存中心（Manassas， VA)。該THP-1細胞係培養於補充有1〇%FCS (ΑΤ(χ， Manassas，VA)及 1%青黴素/鏈黴素（Gibc〇:BRL，New γ〇^， N. Y.)之 RPMI l 640 (ATCC，Manassas, VA)中。該細胞係 於不同濃度化合物2存在下，先注入IFNg (1〇〇 u/mi)接 著再注入l#g/ml LPS。化合物2係製備於DMS〇中，且包 括無化合物之對照組在内，該DMS0於所有培養細胞中之終 濃度係調整為〇.25%。18小時後取不含細胞之上清液進行 細胞激素測量。 細胞核萃取物之單離·· 92729 ]25 200530588 將ΤΗΡ-1細胞懸浮於2 0倍體積之緩衝溶液a中，該緩 衝液 A 包含 10 mM KC1、10 mM HEPES (pH 7. 9)、1 mM MgCl2、
111^二硫代蘇糖醇（017)、0.1%諾納德1)4〇〇^_4〇)以及 〇· 5 mM苯曱基續醯基氟化物（PMSF)，接著再進行均質化並 於4°C下以1 0, 000 rpm離心5分鐘。然後再將細胞核沈澱 物懸浮於緩衝液C中，該緩衝液C包含40 0 mM NaCl、20 mM HEPES (pH 7· 9)、15 mM MgCl2、〇· 2 mM EDTA、1 mM DTT、
25%甘油、1 mM PMSF 與 10 // g 亮抑酶肽（leupep1：in)、2〇 Ag胃蛋白酶抑制劑（pepstatin)以及每毫升lo^g胰蛋白鲁 酶抑制劑（antipain)，並於4°C下培養30分鐘，再以14, 〇〇〇 rpm離心20分鐘。將上清液以包含1〇〇 mM NaC卜2〇 HEpES
(pH 7· 9)、20%甘油、ImM PMSF 以及 1 mM DTT 之緩衝液 D 透析。 西方墨點法： 將1 0% SDS聚丙稀酿胺凝膝（invi trogen)轉移至純硝 化纖維膜（BioRad，Hercules，CA)。使該膜經TBST緩衝液春 之5%牛奶阻隔’接著再使用抗-c一Rei、抗—、抗—p5〇、 抗ICSBP或抗-PU-1抗體（所有抗體皆購自ta Cruz)於 1 · 500之稀釋下’以室溫培養（incubated) 1小時或以4 C培養一夜。洗滌該膜並使用與辣根過氧化酶 (Horseradish Per〇xidase)結合之抗—兔IgG或抗〜小鼠 kG抗體（Amersham，England)於丨：2〇〇〇之稀釋下，以— 溫培養1小時。 至 預期化合物3至14於實施例I至VIII所述之步驟中 92729 126 200530588 具有與化合物]及2相似之活性。 如該項技藝中具有通常知 悖離其精神及範疇下進行許多修飾及=:可於不 實施例僅提供作為例示之用 = 附加之各項申請專利範 个各轉又限灰 專利範圍所主張之權利 /、王部範疇係等同於申請 利範圍之範田壽内。 則均包含於所附加申請專 入^引用之所有專利及非翻讀之全部内容伟於此 〇併作為麥考文獻且各個經、 文獻之個別刊物或專早獨才曰不合併作為參考 明相同範田壽 利或專利說明書之全部内容皆屬本發 代者露之所有特徵、特定具體實施例以及特定取 呈二:可組合結合。本說明書中所揭露之各特徵、 例代者皆可由任何可選擇之特徵、具體實施 J或取代者取代以提供相同、相當或相似之目的。於化學 化口物之貫例中’特定值可以任何組合結合以得到穩定結 構此外，於一種類型之化學結構中，取代者之特定值（不 官較佳與否）可以相同或相異類型之化學結構中的其他取 、者之值（不g較佳與否）結合。因此，除非明確聲明，否 則任何揭露之特徵、具體實施例或取代者僅為一系列相當 或相似之Φτ H具體實施例或取代者的範例。 【圖式簡單說明】 第1Α至1Β圖係顯示人類C-Re丨之核苷酸及胺基酸序 歹1J (其係分別為SEQ ID NOS ·· 1及2)。 92729 127 200530588 第2A及2B圖係顯示試驗分子抑制由IFN]及咖 r/LPS所誘導之p40(f 2A圖）及p35(第別圖）表現的能 力。 第3A圖係顯示所使用之不同試驗啟動子的示意圖，心 及第3B圖係顯示各種試驗啟動子對於iFN_r/Lps之刺激 的反應能力。 第4圖係喊不在受刺激與未受刺激之細胞中Hi 細胞核萃取物之西方墨點公#、+ 丄、 土"，、占刀析法，該分析係與NF/cL·家族 成員c-Rel、p65或p5〇之在太女扣 、 畀在有關；α -微管蛋白為内部 對照組（internal contr〇i)。 THP-l 第5♦圖係顯示在受刺激與未受刺激之細胞中 細胞核萃取物與抗-! C s B p抗體之西方墨點分析法 第6圖係顯示在受刺激與未受刺激之細胞中 細胞核萃取物與抗-PU4抗濟 丄机处之西方墨點分析法。 κ 第7圖為免疫墨點分析法，係顯示試驗分子對N F— p50細胞核轉位作用之影響。 第8圖為密度測定結果之 細胞核轉位仙之影響。口表W示試驗分子對p 第9圖為免疫墨點分析法 P65細胞核轉位作用之影響。 貝丁忒騃刀子對NFi 第10圖為密度測定結果之 一 p65細胞核轉位作用之影響。糸顯示試驗分子氅 第11圖免疫墨點分析法，係 成員之細胞核轉位作用的影響：不5〜刀子對 曰 匕括c rel。 92729 128

Claims (1)

  1. 200530588 十、申請專利範圍： 1 · 一種鑑定於細胞内改變c-Re 1細胞内定位 (subcellular location)之分子之方法，係包括： (a)使該細胞與一種或一種以上之候選分子接觸· 以及 (b)偵測該細胞中c-Rel分子之定位， 其中，在不顯著改變肿/€8表現量及/或Ikb數量之情 況下，當該C-Re 1定位至細胞核的量相較於未與一種戋 一種以上之候選分子接觸之細胞中所測得者更為辨加 或減少時，則顯示該候選分子改變c_Rel之細胞内 位。 一種鑑定於細胞内改變c-Rei細胞内定位之分子之 法，係包括： (a)於該細胞中重組表現一種或一種以上之候選分 其中’ j不顯著改變NF/cB表現量及/或I/cB數量的 冨c R e 1疋位至細胞核的量相較於在不表現 Ϊ或—種以上候選分子之細胞中所測得者更為增加^ 如Π直則顯示該候選分子改變c_Rei之細胞内定七 申6月專利範圍第1或第2項之方法，其中，牛 細胞與一之抗體或該抗體之結：二 几：之經營光標定結合對象於有利於免疫專，卜 、、、σ 5之條件下接觸。 、 92729 129 200530588 4. 如申請專利範圍第1或第2項之方法，其中，步驟（ 係包括使細胞與經營光標定之抗c一Rel之抗體=玄抗 體之結合區於有利於免疫專_性結合之條件下接觸。 5. 如申請專利範圍第i或第2項之方法，其中，步驟⑻ 係包括使用質譜儀將自細胞單離出之核蛋白—序 6·如申請專利範圍第1或第2項之方法，其中^細胞為 經培養之細胞。 7. —種鑑定於細胞内改變c-Rel細胞内定位之分子之 法，係包括： (a)將-種或一種以上之候選分子顯微注射入該細 胞中；以及 (b)偵測該細胞中c —Rei分子之定位， 其中，在残著改變NF/cB表現量及/或1；^數量的情 下田4 c Re 1疋位至細胞核的量相較於未以一種或 一種以上候選分子顯微注射之細胞中所測得者更為增 加或減少時，則顯示該候選分子改變c-Rel之細胞内曰定 位0 8. -種用於筛選調節e_Rel活性之分子之方法，係包括 (a)使表現c-Rel之細胞與一種或一種以上之候選 分子接觸；以及 、 主（b)在不顯著改變NF/cB表現量及/或I/cB數量的 T況下，偵測該細胞中c_Rel定位至細胞核的量，並相 較於未與该候選分子接觸之細胞中所測得者， 其中’於該候選分子存在下，當c_Rel定位至細胞核的 92729 】30 200530588 郎c - R e 1之活 量較高或較低時，則顯示該候選分子調 性。 之分子之方 9· 一種用於篩選直接或間接調節c-Rel活性 法’係包括： 種或一種以 (a)於表現之細胞中重組表現一 上之候選分子；以及 =不顯著改變即以表現量及蜮ί/ίβ數量的 3 月况下谓測该細胞中c - R e 1金/ffr $ 4 a 妒於T主 c Kel疋位至細胞核的量，並相 車乂方；不表現該候選分子之細胞中所測得者， 八中’於该候選分子存在下，者 A 量較古$ ^ Μ 士 田c Rel疋位至細胞核的 ^ 較低時，則顯示該候選分子調節心1之活 M·如申請專利範圍第8或第9 子降低c-Rel定你s 貝之方法，其中，該候選分 _ 疋位至細胞核的量，因此該候選分子A 卜⑽活性之候⑽卩制劑。 子為 1如申請專利範圍第8或第9項 子增加c-Re 1中A s /左关〒，该候選分 。士1、、舌)·生之後 細胞核的量，因此該候選分子為 K 1活性之候選促效劑。 12.如申請專利範圍第8或 子俜衍哇白心服 貝之方法，其申，該候選分 iT、何生自文限之隨機胜肽庫。 1 3·如申請專利範圍第8 定位至细旳枋次弟9項之方法，其中，偵測c-Rel 疋位至細胞核之方法係 之分子以及結合至除了 C二：細胞與結合至⑽ 白之分子於有利於結合 ^田胞核-專一性蛋 木件下接觸，並偵測該分子於 92729 131 200530588 200530588 裊 相同細胞内定位發生之任何結合。 14.如中請專利範圍第8或第9項之方法，其中，步驟⑻ 係包括·使細胞與經卷^中 體之結合區於有利；之抗體或該抗 另刃万、先及專一性結合之條件下接觸。 種^ D *係抑制e_Rel轉位至細胞核但不顯著改 NF/cB表現及/或I/cB數量。 16.-種醫藥組成物，包括申請專利範圍第…員之化人 物’以及醫藥上可接受之載劑或賦形劑。 = =專利範圍第16項之醫藥組成物，復 素或生長激素促泌素。 长激 ^申請專利範圍第16項之醫藥组成物，復包 抗劑。 ？口 種治療或改善與IL_12產生有關之疾病或不適之方 將申請專利範圍第17項之組成物以足以 Γ ί 疾病或不適之量投與至需要之對象。 机如申請專利範圍第19項之方法，復包 =長激素促泌素、，括抗劑、抗心 免疫調節劑。 4 療或改善與iL_12產生有關之疾病或不適之方 :’；中:治療或改善對象為經鑑定需要此治療或改盖 者’ h包括：將申請專利笳圍笛 〇 〜圍弟項之組成物以足以 99 “疾病或不適之量投與至需要之對象。 •If f组’包括申請專利範圍第】5項之化合物，該化 °係經標記為用於投與至經鑑定需要此化合物之對象。 92729 132
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Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2545258A1 (en) * 2003-11-10 2005-05-26 Synta Pharmaceuticals, Corp. Pyridine compounds
WO2005046619A2 (en) 2003-11-10 2005-05-26 Synta Pharmaceuticals, Corp. Compositions and methods for modulating c-rel-dependent cytokine production
EP1765325A4 (en) * 2004-07-01 2009-08-12 Synta Pharmaceuticals Corp HETEROARYL COMPOUNDS SUBSTITUTED IN 2
US20070032493A1 (en) * 2005-05-26 2007-02-08 Synta Pharmaceuticals Corp. Method for treating B cell regulated autoimmune disorders
TW200804307A (en) * 2005-10-27 2008-01-16 Synta Pharmaceuticals Corp Process for preparing mesylate salts of IL-12 inhibitory compounds
WO2007081978A2 (en) * 2006-01-11 2007-07-19 Angion Biomedica Corporation Modulators of hepatocyte growth factor / c-met activity
WO2007100631A2 (en) * 2006-02-22 2007-09-07 Synta Pharmaceuticals Corp. Compositions and methods for modulating cytokine production
JP4734647B2 (ja) * 2006-08-02 2011-07-27 国立大学法人金沢大学 胸腺腫合併重症筋無力症の診断方法
JP4599410B2 (ja) * 2007-02-28 2010-12-15 三菱重工業株式会社 計装案内管流動振動抑制構造
WO2011081171A1 (ja) * 2009-12-28 2011-07-07 味の素株式会社 スクリーニング方法
JP6545710B2 (ja) * 2014-01-22 2019-07-17 ユニバーシティー・オブ・ブレシアＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｂｒｅｓｃｉａ パーキンソン病を診断するｉｎ ｖｉｔｒｏの方法
WO2019164861A1 (en) 2018-02-21 2019-08-29 AI Therapeutics, Inc. Combination therapy with apilimod and glutamatergic agents
WO2021100828A1 (ja) * 2019-11-19 2021-05-27 マイキャン・テクノロジーズ株式会社 ヒト不死化ミエロイド系細胞を使用したｉｎ ｖｉｔｒｏにおける物質の安全性評価方法

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6469017B1 (en) * 1998-01-16 2002-10-22 Cell Therapeutics, Inc. Method of inhibiting interleukin-12 signaling
US5597898A (en) * 1995-02-15 1997-01-28 Yale University NF-κB activation regulatory protein, IκB-β
US6242253B1 (en) * 1997-10-09 2001-06-05 Regents Of The University Of California IkB kinase, subunits thereof, and methods of using same
US6001652A (en) * 1998-09-18 1999-12-14 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of cREL expression
US6693097B2 (en) 2001-11-30 2004-02-17 Synta Pharmaceuticals Corp. Pyrimidine compounds
MXPA04005181A (es) 2001-11-30 2005-06-17 Synta Pharmaceuticals Corp Compuestos de pirimidina.
US20080058297A1 (en) 2003-05-29 2008-03-06 Synta Pharmaceuticals Corp. Heterocyclic Compounds For Preventing And Treating Disorders Associated With Excessive Bone Loss
AU2004289305A1 (en) * 2003-11-10 2005-05-26 Synta Pharmaceuticals, Corp. Heteroaryl-Hydrazone compounds
WO2005046619A2 (en) 2003-11-10 2005-05-26 Synta Pharmaceuticals, Corp. Compositions and methods for modulating c-rel-dependent cytokine production
WO2005112938A2 (en) 2004-04-13 2005-12-01 Synta Pharmaceuticals Corp. Disalt inhibitors of il-12 production
US7923557B2 (en) 2004-11-10 2011-04-12 Synta Pharmaceuticals Corporation Process for preparing trisubstituted pyrimidine compounds
TW200628463A (en) 2004-11-10 2006-08-16 Synta Pharmaceuticals Corp Heteroaryl compounds
CA2587590A1 (en) 2004-11-19 2006-06-08 Synta Pharmaceuticals Corp. Pyrimidine compounds and uses thereof
US20070032493A1 (en) 2005-05-26 2007-02-08 Synta Pharmaceuticals Corp. Method for treating B cell regulated autoimmune disorders
EP2661445A2 (en) 2011-01-04 2013-11-13 Universität Zürich Modulators of il-12 and/or il-23 for the prevention or treatment of alzheimer's disease

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