TW200416036A - Medicinal preparation containing phenylethanoid glycosides extracted from herbaceous plant, cistanche tubulosa (schenk.) wight, process of making the same, and uses of the same - Google Patents

Description

200416036 软、發明明 發明所屬之技術領域： 本發明涉及一種來源於肉蓰蓉屬植物的含有苯乙醇苷 的製劑及其製備方法，和在抗老年癡呆、抑制血小板聚集 的應用。 先前技術： 隨著世界人口老齡化的日益嚴重，與衰老有關的許多 · 疾病如老年癡呆症等已成爲當今社會嚴重威脅老年人身體 健康的因素，由於致病機理複雜，目前尙未找到針對該病 的具有顯著療效的藥物。基於肉蓰蓉長期以來作爲傳統補 腎、壯陽、強精藥用於臨床，因此成爲被深入硏究的物件。 中藥肉蓰蓉//αδα 爲列當科肉蓰蓉屬多年生寄 生草本植物，主産於中國西北各省，藥用其肉質莖，具有 補腎陽、益精血、潤腸通便之功效，主治男子陽痿、女子 不孕、血枯便秘等症，有“沙漠人參”之美譽。其中管花 肉蓰蓉爲肉蓰蓉屬中産量最大的一種。 ® 從八十年代初，日本學者開始系統硏究肉蓰蓉屬植物 的化學成分和藥理活性，發現苯乙醇苷類化合物是肉蓰蓉 屬植物的主要活性成分，具有抗氧化、促進物質代謝、改 善學習記憶、增強性功能等作用，並對多種單體苯乙醇苷 類化合物進丫了 了丨朱入硏究（Sato T，et al. Yakugaku Zasshi， 1 985，105(12): 1131)，有關這方面的硏究還有大量文獻報 道（Jimenez C，et al· Nat Prod Rep，1994，11(6): 591; 6 200416036

Cometa F，et al· Fitoterapia，1 993，64(3): 195.) 〇 發明內容： 本案發明人在對肉蓰蓉屬進行十多年硏究的基礎上， 、 發現在該屬植物中管花肉蓰蓉的苯乙醇苷類化合物含量最 高，並提出了一種從管花肉蓰蓉提取苯乙醇苷類化合物的 新穎工藝，製備出含有苯乙醇苷的製劑，經過大量藥理試 驗，發現該製劑具有明顯的增強記憶力、抑制血栓、抑制 · 血小板聚集形成等作用。 本發明的目的之一是提供一種來源於管花肉蓰蓉的含 有苯乙醇苷的製劑；本發明的目的之二是提供從管花肉蓰 蓉獲得一含有苯乙醇苷的製劑的製備工藝；本發明的目的 之三是提供抗老年癡呆的醫藥組合物。本發明的另一目的 是提供抑制血小板聚集的醫藥組合物。 爲達成上述本發明目的，依照本發明內容完成的一種 從管花肉蓰蓉獲得的含有苯乙醇苷的製劑，包含10-70%松 果菊苷（echinacoside)及 1-40%類葉升麻苷（acteoside)，以 · 該製劑的重量爲基準。 優選的，本發明的製劑包含25-70%松果菊苷 (echinacoside)及 5-40% 類葉升麻苷（acteoside)，以該製劑 的重量爲基準。 優選的，本發明的製劑從管花肉蓰蓉的肉質莖製備。 優選的，本發明的製劑進一步包含乙醯基類葉升麻 苷（2,-acetylacteoside)、campneoside I、campneoside II、 7 200416036 管花肉蓰蓉苷 A(cistantubuloside A)、Bi、B2、Ci、C2、 crenatoside、去咖啡醯基類葉升麻苷 (decaffeoylacteoside)、異類葉升麻音（isoacteoside)、紅 景天苷（rhodioloside)、syringalide A 、 3’-cx-L-rhamnopyranoside 和管花苷 A (tubuloside A)，它們 於該製劑的含量均低於5%，以該製劑的重量爲基準。 本發明提供一種從管花肉蓰蓉製備一含有苯乙醇苷的 製劑的方法，包含下列步驟： · a) 將管花肉蓰蓉的地下部分以一第一極性溶劑加予 萃取； b) 將步驟a)獲得的萃取物加到裝有疏水大孔隙聚合 物的柱中，使得苯乙醇苷吸附在聚合物上； C)用第二極性溶劑作爲流動相流洗液洗脫該柱以除 去游離的化合物，而實質上大部份的苯乙醇苷仍然吸附在 聚合物上；以及 d)用第三極性溶劑將苯乙醇苷從聚合物上洗脫下 來，得到含有苯乙醇苷的洗脫液，該第三極性溶劑與第二 ® 極性溶劑相比極性較低。 優選的，本發明的製備方法的步驟a)的管花肉蓰蓉的 地下部分爲其肉質莖。 優選的，本發明製備方法的步驟a)的萃取包含將管花 肉蓰蓉的地下部分與第一極性溶劑的混合物煮沸0.5-10小 時，以過濾方式分離該混合物而得到一液體部份作爲該萃 取物，或減壓濃縮該萃取物而獲得一浸膏（extract)作爲該萃 8 200416036 取物。優選的，該管花肉蓰蓉的地下部分與第一極性溶劑 的混合物中的管花肉蓰蓉的地下部分與第一極性溶劑的重 量比例爲1 : 4〜20。 優選的，本發明的製備方法的步驟a)的第一極性溶劑 、 爲水，或水與乙醇的混合溶劑。 優選的，本發明的製備方法的步驟b)的該聚合物由交 聯聚芳族物質組成。更優選的，該聚合物由交聯的聚苯乙 烯，或交聯的苯乙烯和二乙烯苯共聚物所組成。 φ 優選的，本發明的製備方法的步驟c)的第二極性溶劑 爲水，步驟d)的第三極性溶劑包含甲醇，乙醇，水與甲醇 的混合溶劑，或水與乙醇的混合溶劑，更優選的第三極性 溶劑爲水與乙醇的混合溶劑。 優選的，本發明的製備方法還包含除去含有苯乙醇苷 的洗脫液中的溶劑以得到乾燥產物。 本發明還提供一種用於抗老年癡呆症的醫藥組合物， 包含一抗老年癒呆症治療有效量作爲有效成分的本發明的 含有苯乙醇苷的製劑；及與該有效成分共同使用之醫藥容 修 許載體或稀釋劑。 本發明還提供一種用於抑制血小板聚集的醫藥組合 物，包含一抑制血小板聚集有效量作爲有效成分的本發明 的含有苯乙醇苷的製劑；及與該有效成分共同使用之醫藥 容許載體或稀釋劑。 本發明還提供本發明的含有苯乙醇苷的製劑作爲活性 成分在製備預防和治療老年癡呆症藥物中的應用。 200416036 本發明還提供本發明的含有苯乙醇苷的製劑作爲活性 成分在製備抑制血小板聚集藥物中的應用。 實施方式： ^ 本發明從管花肉蓰蓉製備的一種含有苯乙醇苷的製劑 其中主要成分松果菊苷（echinacoside)和類葉升麻音 (acteoside)分別含10〜70%和1〜40%，以該製劑的重量 爲基準。本發明所述的來源於管花肉蓰蓉的苯乙醇苷類化 · 合物的結構通式爲：

包括松果菊苷、類葉升麻苷、2〜乙醯基類葉升麻苷 (2’-acetylacteoside)、campneoside I、campneoside II、管 花肉蓰蓉苷 A(cistantubuloside A)、Βι、B2、Ci、C2、 crenatoside、去咖啡醯基類葉升麻音 Φ (decaffeoylacteoside)、異類葉升麻苷（isoacteoside)、紅

景天苷（rhodioloside)、syringalide A 3 ^a-L-rhamnopyranoside 和管花苷 A (tubuloside A)等成分 (表1)，其中除松果菊苷及類葉升麻苷外均以少量或微量 存在於本發明的製劑中。表1中各成分係經高效液相色譜 指紋圖譜確定，該高效液相色譜指紋圖譜是在以下條件下 獲得的：固定相爲十八烷基矽烷鍵合矽膠；流動相爲乙腈 10 200416036 — 0.05M磷酸水溶液（ 4:96—1 5:85 )梯度洗脫，流速1 ml/min，檢測波長 330nm。 表1 含有苯乙醇苷的製劑所含主要成分_

Compound Name_Ri R2_R3 R4 R5_R7 2’_Acetylacteoside Ac Rha Cf Η Η ΟΗ ΟΗ Acteoside H Rha Cf Η Η ΟΗ ΟΗ Campneoside I H Rha Cf Η OMe(S/R) ΟΗ ΟΗ Campneoside II H Rha Cf Η OH(S/R) ΟΗ ΟΗ *Cistantubuloside A H Rha Cf Glc Η Η ΟΗ *Cistantubulosides B1/B2 H Rha Cm/c-Cm Glc Η ΟΗ ΟΗ *Cistantubulosides C1/C2 H Rha Cf Glc OH(S/R) ΟΗ ΟΗ Decaffeoylacteoside H Rha H Η Η ΟΗ ΟΗ Echinacoside H Rha Cf Glc Η ΟΗ ΟΗ Isoacteoside H Rha H Cf Η ΟΗ ΟΗ Rhodioloside (Salidroside) H H H Η Η Η ΟΗ Syringalide A 3 ’-a-L-rhamnopyranoside H Rha Cf Η Η Η ΟΗ Tubuloside A Ac Rha Cf Glc Η ΟΗ ΟΗ Crenatoside 結構見下式

*新化合物

Ac: Acetyl Cf: trans-CafFeoyl Cm: trans-Coumaroyl c-Cm: cis-Coumaroyl Glc: β-D-Glucopyranose Rha: a-L-Rhamnopyranose 11

Crenatoside 200416036 本發明是通過如下方案實現的：（1)溶劑提取法：以 管花肉蓰蓉 (Schenk·) Wight 藥材，切 成飮片或粉碎成粉末，選用一定量的水或乙醇或甲醇或其 他低級脂肪醇中的一種溶媒或者混合溶媒浸泡，在室溫下 滲漉提取，或用超聲波震蕩提取，或在加熱狀態下浸潤提 取或回流提取，濾液備用。藥渣再加適量溶液煎煮或回流 提取數次，濾過。合倂濾液，減壓濃縮，即得提取浸膏。（2 ) 純化方法：將提取浸膏以水加熱溶解，注入如D-101型、 AB-8型或其他類型的大孔吸附樹脂柱內，先用水洗脫，棄 去；再用水、甲醇、乙醇、含水甲醇或含水乙醇的一種或 多種進行洗脫，洗脫時可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫， 收集洗脫液，濃縮，利用常用乾燥方法乾燥，即得管花肉 蓰蓉製備含苯乙醇苷的製劑，並將該製劑作爲抗老年癡呆 症、抑制血小板聚集的有效成分，使之與藥學上可接受的 載體或其他適宜賦形劑相結合，按照常規方法製成膠囊 劑、顆粒劑、散劑、片劑、糖漿劑、酊劑等劑型，用於預 防和治療老年癡呆症，及抑制血小板聚集。 本發明的藥理試驗方案爲：利用水迷宮實驗，通過與 12 200416036 空白組和對照組比較，判斷給藥組小鼠學習記憶增加的統 計學意義。結果發現本發明含有苯乙醇苷的製劑可以明顯 提高正常小鼠的學習記憶；對乙醇誘導小鼠記憶再現缺失 有明顯的保護作用；對東莨菪鹼引起的小鼠記憶獲得障礙 有明顯的改善記憶作用；對亞硝酸鈉引起的小鼠記憶鞏固 障礙有明顯的保護作用；能明顯改善氫化可的松所致腎陽 虛小鼠的學習記憶功能，並顯著降低氫化可的松引起的小 鼠死亡率；改善局竈性腦缺血一再灌注癡呆大鼠學習記憶 障礙，此外，還能明顯抑制大鼠動一靜脈旁路血栓形成和 血小板聚集作用。在上述藥理活性試驗的基礎上，臨床可 被用於抗衰老、預防和治療老年癡呆症〔包括血管性癡呆 (VD)和阿爾海默氏綜合症（AD)〕。 下面結合實施例對本發明做進一步詳細的描述，但不 以此限制本發明。 提取方法： 實施例1. 管花肉蓰蓉藥材l〇kg，切成飮片，加8倍量水浸泡1 小時後煎煮提取2小時，濾過，濾液備用。藥渣再加6倍 量水煎煮提取2次，每次1小時，濾過。合倂三次濾液， 減壓濃縮至比重1.10 (50°C )，加乙醇至含醇量達60%，冷 藏12小時，傾出上淸液，將殘留的懸濁液過濾，合倂上淸 液和濾液，回收乙醇並減壓濃縮至比重1.10 (5(TC )，得提 13 200416036 取浸膏5.6kg。 實施例2. 管花肉薇蓉藥材1 〇kg，粉碎成粉末，加1 5倍量水浸 · 泡2小時後煎煮提取3小時，濾過，濾液備用。藥渣再加 1 2倍量水，煎煮提取4次，每次2小時，濾過。合倂濾液’ 減壓濃縮至比重1.25(50°C)，加乙醇至含醇量達80% ’冷 藏24小時，傾出上淸液，將殘留的懸濁液過濾，合倂上淸 · 液和濾液，回收乙醇並減壓濃縮至比重1·25 (50°C ) ’得提 取浸膏7.2kg。 實施例3. 管花肉蓰蓉藥材1 〇kg，切成飮片，加7倍量水浸泡3 小時後煎煮提取4小時，濾過，濾液備用。藥渣再加5倍 量水，煎煮提取4次，每次4小時，濾過。合倂濾液’減 壓濃縮至比重1·〇5 (50°C )，加1〇〇%乙醇至含醇量達50 %，冷藏1 〇小時，傾出上淸液，將殘留的懸濁液過濾’合 ® 倂上淸液和濾液，回收乙醇並減壓濃縮至比重1·1〇 (50 °C )，得提取浸膏6.5kg。 實施例4. 管花肉蓰蓉藥材l〇kg，粉碎成粉末，加4倍量40%乙 醇浸泡3小時後回流提取4小時，濾過，濾液備用。藥渣 再加4倍量4 0 %乙醇，回流提取4次，每次4小時，濾過。 14 200416036 合倂濾液，減壓濃縮至比重1.05 (5(TC )，得提取浸膏6.2kg。 純化方法： ' 實施例5. - 將提取浸膏6kg加0.5倍量水加熱溶解，徐徐注入已 處理好的D-101型大孔吸附樹脂柱內，先用水洗脫，收集 藥材2倍量水洗脫液備用；再用20%乙醇洗脫，收集藥材 2倍量20%乙醇洗脫液備用。將水洗脫液再注入大孔吸附 φ 樹脂柱中，先用藥材2倍量水洗脫，棄去水洗脫液；再用 20%乙醇洗脫，收集藥材2倍量20%乙醇洗脫液備用。合 倂2次20%乙醇洗脫液，濃縮，乾燥，即得含有苯乙醇苷 的製劑865g。 以高效液相色譜法測定松果菊苷及類葉升麻苷的含量 的測定： 固定相爲十八烷基矽烷鍵合矽膠；甲醇-0.15%醋酸 (30:70)爲流動相，流逮1 ml/分鐘，檢測波長333 nm。 精密稱取60°C減壓乾燥24小時的松果菊苷和類葉升 · 麻苷對照品適量，加50%甲醇製成每1 ml含0.1 mg的溶 液，作爲對照品溶液。 供試品溶液的製備係取前述含有苯乙醇苷的製劑50 mg，置於25ml量瓶中，加50%甲醇適量’超音波處理使 溶解，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 ml，置 於1〇 ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，用0_45 μιη濾 膜濾得過供試品溶液。 15 200416036 分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液各5 μΐ，注入 液相色譜儀，測定松果菊苷及類葉升麻苷的色譜峰的峰面 積，採用峰面積計算即得。松果菊苷的含量經計算爲37.5 重量％，及類葉升麻苷的含量經計算爲6.7重量％。 實施例6. 將提取浸膏6kg加5倍量水加熱溶解，徐徐注入已處 理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱內，先用水洗脫，收集藥 材8倍量水洗脫液備用；再用60%乙醇洗脫，收集藥材8 倍量60%乙醇洗脫液備用。將水洗脫液再注入大孔吸附樹 脂柱中，先用藥材6倍量水洗脫，棄去水洗脫液；再用60 %乙醇洗脫，收集藥材7倍量60%乙醇洗脫液備用。合倂 2次60%乙醇洗脫液，濃縮，乾燥，即得含有苯乙醇苷的 製劑1203g。採用實施例6的方法測定該製劑的松果菊苷 及類葉升麻苷的含量，它們分別爲48. 6重量％及11.8重量 %。 實施例7. 將提取浸膏6kg加3倍量水加熱溶解，徐徐注入已處 理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱內，先用水洗脫，收集藥 材8倍量水洗脫液備用；再用95%乙醇洗脫’收集藥材8 倍量95%乙醇洗脫液備用。將水洗脫液再注入大孔吸附樹 脂柱中，先用藥材6倍量水洗脫，棄去水洗脫液；再用95 %乙醇洗脫，收集藥材8倍量95%乙醇洗脫液備用。合倂 16 200416036 2次95%乙醇洗脫液，濃縮，乾燥，得含有苯乙醇苷的製 劑1260g。採用實施例6的方法測定該製劑的松果菊苷及 類葉升麻苷的含量，它們分別爲41· 3重量％及7.4重量％。 實施例8. 將提取浸膏6kg加1倍量水加熱溶解，徐徐注入已處 理好的大孔吸附樹脂柱內，先用水洗脫，收集藥材4倍量 水洗脫液備用；再用40%乙醇洗脫，收集藥材5倍量40 φ %乙醇洗脫液備用。將水洗脫液再注入大孔吸附樹脂柱 中，先用藥材3倍量水洗脫，棄去水洗脫液；再用40%乙 醇洗脫，收集藥材4倍量40%乙醇洗脫液備用。合倂2次 40%乙醇洗脫液，濃縮，乾燥，即得含有苯乙醇苷的製劑 11 〇7g。採用實施例6的方法測定該製劑的松果菊苷及類葉 升麻苷的含量，它們分別爲31. 7重量％及6.1重量％。 藥理作用： 實施例9. 含有苯乙醇苷的製劑對正常小鼠學習記憶的影響試驗 · LACA系小鼠，採用水迷宮實驗，以吡拉西坦片（腦複 康）爲陽性對照藥每周測定6天，共測27天。 結果：各給藥組與對照組小鼠逐日水迷宮測定反應時 間cl値結果總結於表2。 17 200416036 表2含有苯乙醇苷的製劑經口給藥27天對小鼠學習記憶 的影響 _ d値（n=27) 試驗 比較組別 >0.5 >0.8 20.5合計 天 % 天 % 天 % 第一次 對照組一含有苯乙醇苷的 製劑50mg/kg組 4 14.8 5 18.5 9 33.3 對照組一含有苯乙醇苷的 製齊 If 200mg/kg 組 10 37.0 3 11.1 13 48.2 第二次 對照組一含有苯乙醇苷的 製劑400mg/kg組 0 0 27 100.0 27 100.0 對照組—腦複康400mg/kg 組 5 18.5 2 7.4 7 25.5 腦複康組—含有苯乙醇苷 的製齊ί 400mg/kg組 7 25.9 16 59.3 23 85.2 從表2可見，經口服給予小鼠不同劑量含有苯乙醇苷 的製劑，各劑量組與對照組的反應時間比較，總趨勢呈含 有苯乙醇苷的製劑各劑量組的反應時間短於對照組的天 數，隨含有苯乙醇苷的製劑劑量增加，反應時間呈興奮作 用的天數（反應時間縮短）也增多。在27天測定中，根據 d値分析有顯著性差異的天數，含有苯乙醇苷的製劑50 mg/kg 組有 9 天，200 mg/kg 組有 13 天，400 mg/kg 組有 27天。顯示隨含有苯乙醇苷的製劑劑量增加，呈反應時間 興奮作用的天數明顯增加的劑量依賴關係。腦複康 400mg/kg組與對照組比較呈興奮作用的天數爲7天。與等 18 200416036 齊ί»含有苯乙醇苷的製劑比較明顯少於含有苯乙醇苷的製 劑組’表明含有苯乙醇苷的製劑組對小鼠學習記憶的興奮 作用明顯強於腦複康組。 、 實施例10. 含有苯乙醇苷的製劑對乙醇誘導小鼠記憶再現缺失的 保護作用 受試藥物與對照藥同實施例7。LACA系小鼠，採用水 · 迷宮實驗方法。 各組經口分別給藥，於給藥後1小時，經口給予30% 乙醇0.1ml/10gBW。給乙醇後30分鐘，進行水迷宮測定。 各組小鼠經訓練後到達目標的游泳時間，給予乙醇30 分鐘後到達目標游泳時間，以及錯誤出現次數、隻數試驗 結果整理見表3。 19 200416036 表3含有苯乙醇苷的製劑經口給藥1周對乙醇誘導LACA 系雄鼠記憶再現缺失的保護作用 組別 劑量 動 訓練後到達目標 給酒精後到達目標 mg/kg 物 時間 錯誤 時間 錯誤 錯誤 整組錯 數 (秒） 次數/ (秒） 次數/ 率 誤率 (隻） 隻數 隻數 次/隻 次/隻 蓰蓉 50 12 7.46 土 0/0 34.40 ± 47/8 5.88 3.92 製劑 0.13 21.71* 200 11 7.14 土 0/0 16.99 土 8/3δδ 2.67 0.73 0.18 9.06 赫 400 10 7.91 土 0/0 24.38 土 46/7 6.57 4.60 0.19 27.84 腦複康 400 10 8·00 土 0/0 24.08 土 54/6 9.00 5.40 0.46 32.52 對照 12 7.73 土 0/0 37.78 土 62/10 6.20 5.17 0.75 15.90

t檢驗：與對照組比較# # P<0.01，與200mg/kg組比較 *P<0.05

X2檢驗：與對照組比較△△!><〇.〇1 從表4可見，含有苯乙醇苷的製劑各組及腦複康組給予 乙醇後到達目標反應時間較對照組時間短，較未給乙醇明 顯延長。但僅含有苯乙醇苷的製劑200 mg/kg組與對照組 間差異有顯著性（P<0.01)，而且含有苯乙醇苷的製劑50 20 200416036 mg/kg組與200 mg/kg組間差異有顯著性（P<〇.〇5)，呈劑量 效應關係。而含有苯乙醇苷的製劑400 mg/kg組和腦複康 組與對照組間差異無顯著性。表明含有苯乙醇苷的製劑在 ^ 200 mg/kg劑量經口給藥，對乙醇誘導記憶再現缺失有明 - 顯保護作用。含有苯乙醇苷的製劑其他劑量組和腦複康組 雖然到達目標時間反應短於對照組，但無統計學差異，保 護作用不明顯。另外，從乙醇誘導後，水迷宮測定小鼠出 現錯誤次數和出現錯誤的動物數，也顯示含有苯乙醇苷的 · 製劑200 mg/kg組具有明顯保護乙醇誘導小鼠記憶再現缺 失作用。其餘給藥組雖然錯誤次數或隻數略少於對照組， 但保護作用不明顯，與對照組間差異無顯著性。 實施例11 含有苯乙醇苷的製劑對東莨菪鹼引起的小鼠記憶獲得 障礙的影響 (1)藥品與動物 受試藥物和對照藥同實施例9。採用小鼠跳臺訓練和 · 測試方法，隨機分爲正常對照組、模型組、吡拉西坦 600mg/kg組和含有苯乙醇苷的製劑400，200，100 mg/kg 組，每組15隻。以0. 2 ml/10g體重的體積灌胃給藥，正 常對照組和模型組灌胃等體積的蒸餾水，每日一次。在連 續給藥至29天時進行訓練，訓練前lh給藥，訓練前15 min 除正常對照組外各組腹腔注射東莨菪鹼1 mg/kg。第30天 進行測試，並於測試前lh給藥。結果見表4。 21 200416036 從表4可見，給予東莨菪鹼後，和正常對照組比較小 鼠跳臺試驗的測試潛伏期縮短，測試錯誤次數增多。與模 型組比較，吡拉西坦600 mg/kg，含有苯乙醇苷的製劑400， ^ 200 mg/kg能明顯延長測試潛伏期，減少測試錯誤次數， _ 有明顯的改善記憶作用。含有苯乙醇苷的製劑100 mg/kg 能明顯延長測試潛伏期，但測試錯誤次數與模型組比較無 顯著差異。 表4 含有苯乙醇苷的製劑對東莨菪鹼致小鼠記憶獲 _^障礙的影響（叉土SD) 組別 劑量 (mg/kg) 動物數 (隻） 測試潛伏期 (S) 測試錯誤次數 (次/5min) 正常對照 1 4(1) 194.1±101.5* 1.36±1.45* 模型組 15 67.1 ±78.4 3·13±2·47 吡拉西坦 600 15 144.5 ±117.4* 1.60±1.40* 製劑 400 12⑶ 206.1 ±98.8** 1·08±1·16** 200 12(3) 183.2土115.2** 1.42±1.38* 100 14(1) 191·8±117·5** 1·50±2·07 與模型組比較，*Ρ<0·05，**P<0.01 ;括弧中數位爲電擊死 亡數。 實施例12. 含有苯乙醇苷的製劑對大鼠動一靜脈旁路血栓形成的 影響 22 200416036 雄性SD大鼠，以阿斯匹林腸溶片爲對照’以下述方 程計算，結果見表5。 血栓抑制率（％ )= (蒸餾水對照組血栓重一用藥組血栓重）/蒸餾水對照組血栓重X100% 與蒸餾水對照組比較，含有苯乙醇苷的製劑200, 100mg/kg 灌胃給藥能抑制大鼠動靜脈旁路血栓形成，抑制率分別爲 16.04%和19.60%，但均明顯弱於10011^/]^阿斯匹林的作 用，其抑制率達34.97%。含有苯乙醇苷的製劑50mg/kg對 大鼠動靜脈旁路血栓形成無影響。 表5 含有苯乙醇苷的製劑灌胃給藥對大鼠動-靜脈旁路 血栓形成的影響 組別 劑量 (mg/kg) 動物數 (隻） 血栓濕重 (mg，x 土 SD) 血栓抑制率 (%) 蒸餾水 10 44.9 土 3.83 阿斯匹林 100 10 29.2±4.00** 34.97 製劑 200 10 37.7 土 7.42* 16.04 100 10 36·1±5·16* 19.60 50 10 42.6±7.12 5.12 與蒸餾水對照組比較*ρ<0.05，**ρ<〇.〇1。 實施例13. 苯乙醇總苷對大鼠血小板聚集功能的影響

200416036 二磷酸腺苷二鈉（ADP)，中科院上海生化東風生化技術 公司產品，批號爲9305122，用前配成1 mg/ml儲備液冰箱 保存，用時以磷酸緩衝液稀釋3倍。。 ^ 將雄性SD大鼠按體重隨機分爲5組’分別爲蒸餾水 - 對照組、阿斯匹林100 mg/kg、含有苯乙醇苷的製劑200， 100和50 mg/kg組，灌胃給藥，給藥體積爲〇·5 mg/100 g 體重，對照組給予等體積的蒸餾水，連續給藥7天’末次 給藥前禁食12小時，第7天給藥後1小時從腹主動脈抽取 · 血液，以3.8%的枸櫞酸鈉（1 : 9)抗凝，輕輕混勻後，以1〇〇〇 rpm離心3分鐘，吸出上層富含血小板血漿（PRP)，餘血繼 續在300 rpm離心lOmin，上淸爲貧血小皮血漿（PPP)比濁 管中加入200 // 1 PRP，並以PPP調零點，預保溫5 min後 加入50 μ 1的ADP溶液誘尋血小板聚集，測定血小板聚集 強度（SPA-4多功能血小板聚集儀，上海科達測試儀器廠生 產），計算血小板聚集抑制率。 聚集抑制率=對照組最大聚集強度-藥物組最大聚集強度xiQQ〇/ · 對瞧最大聚讎度 . 和蒸餾水對照組比較，含有苯乙醇苷的製劑200，100 和50 mg/kg灌胃給藥均能抑制ADP誘尋的大鼠血小板聚 集，以200 mg/kg組的抑制率最高，達到59.48%，見表6。 24 200416036

表6 含有苯乙醇苷的製劑灌胃給藥對大鼠血小板聚集功 能的影響 組別 制率 劑量 (mg/kg) 動物數 (隻） 血小板最大聚集(％) (* 土 SD) 血小板聚集抑 (%) 蒸餾水 10 54.82±7.88 阿斯匹林 100 11 32·73±11·14** 40.30 製劑 200 10 22.21 ±6.23** 59.48 100 11 34.54土 15.69* 36.99 50 10 31.65±12.81** 42.26 與蒸餾水對照組比較*p<〇.(H，**ρ<〇.〇〇1。

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Claims (1)

1. 200416036 \ 申請專利範圍 1· 一種從管花肉蓰蓉獲得的含有苯乙醇苷的製劑，包 含10-70%松果菊苷（echinacoside)及1-40%類葉升麻苷 (acteoside)，以該製劑的重量爲基準。 2. 如申請專利範圍第1項的製劑，其包含25-70%松 果菊苷（echinacoside)及 5-40%類葉升麻苷（acteoside)，以 該製劑的重量爲基準。 3. 如申請專利範圍第1項的製劑，其中該管花肉蓰蓉 包含管花肉蓰蓉的肉質莖。 4. 如申請專利範圍第1項的製劑，其進一步包含V-乙醯基類葉升麻苷（2’-acetyl acteoside)、campneo side I、 campneoside II、管花肉蓰蓉苷 A(cistantubuloside A)、Βι、 B2、Cl、c2、crenatoside、去咖啡醯基類葉升麻昔 (decaffeoylacteoside)、異類葉升麻苷（isoacteoside)、紅 景天苷（rhodioloside)、syringalide A 3'-a-L-rhamnopyranoside 和管花苷 A(tubulosideA)’ 它們 於該製劑的含量均低於5 % ’以該製劑的重量爲基準。 5. —種從管花肉蓰蓉製備一含有苯乙醇苷的製劑的 方法，包含下列步驟： a)將管花肉蓰蓉的地下部分以一第一極性溶劑加予 26 200416036 萃取； b) 將步驟a)獲得的萃取物加到裝有疏水大孔隙聚合 物的柱中，使得苯乙醇苷吸附在聚合物上； c) 用第二極性溶劑作爲流動相流洗液洗脫該柱以除 去游離的化合物，而實質上大部份的苯乙醇苷仍然吸附在 聚合物上；以及 d) 用第三極性溶劑將苯乙醇苷從聚合物上洗脫下 來，得到含有苯乙醇苷的洗脫液，該第三極性溶劑與第二 極性溶劑相比極性較低。 6. 如申請專利範圍第5項的製備方法，其中的步驟a) 的管花肉蓰蓉的地下部分爲其肉質莖。 7. 如申請專利範圍第5項的製備方法，其中的步驟a)的 萃取包含將管花肉蓰蓉的地下部分與第一極性溶劑的混合 物煮沸0.5-10小時，以過濾方式分離該混合物而得到一液 體部份作爲萃取物，或減壓濃縮該萃取物而獲得一浸膏 (extract)作爲萃取物。 8. 如申請專利範圍第7項的製備方法，其中步驟a)的第 一極性溶劑爲水，或水與乙醇的混合溶劑。 9. 如申請專利範圍第5項的製備方法，其中步驟b)的聚 合物由交聯聚芳族物質組成。 27

   200416036 10. 如申請專利範圍第9項的製備方法，其中該聚合物 由交聯的聚苯乙烯，或交聯的苯乙烯和二乙烯苯共聚物所 組成。 、 鲁 11. 如申請專利範圍第5項的製備方法，其中的步驟C) 的第二極性溶劑爲水，步驟d)的第三極性溶劑包含甲醇， 乙醇，水與甲醇的混合溶劑，或水與乙醇的混合溶劑。 12. 如申請專利範圍第11項的製備方法，其中該第三極 性溶劑爲水與乙醇的混合溶劑。 1 13. 如申請專利範圍第5項的製備方法，其還包含除去 步驟d)的含有苯乙醇苷的洗脫液中的溶劑以得到乾燥產 物。 14· 一種用於抗老年癡呆症的醫藥組合物，包含一抗老 年癡呆症治療有效量作爲有效成分的如申請專利範圍第1 · 至4項中任一項的含有苯乙醇苷的製劑；及與該有效成分 共同使用之醫藥容許載體或稀釋劑。 15·—種用於抑制血小板聚集的醫藥組合物，包含一抑 制血小板聚集有效量作爲有效成分的如申請專利範圔第1 至4項中任一項的含有苯乙醇苷的製劑；及與該有效成分 共同使用之醫藥容許載體或稀釋劑。 28 I 200416036 陸、(一）、本案指定代表圖爲：第_圖 (二）、本代表圖之元件代表符號簡單說明： 柒、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學 _____圖