TW200300798A

TW200300798A - Mutatant CYP2D6 genes

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Publication number: TW200300798A
Application number: TW091135321A
Authority: TW
Inventors: Mitsue Taniyama; Kazuo Ogawa; Naoko Tsuchiya; Tomoko Hibino
Original assignee: Tsumura & Co
Priority date: 2001-12-06
Filing date: 2002-12-05
Publication date: 2003-06-16
Also published as: WO2003050282A1; AU2002354430A1; JP2005176601A

Description

200300798 A7 B7 五、發明説明（1 ) 一、發明所屬之技術領域 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明係關於編碼藥物代謝酵素之CYP2D6基因的新穎多型者。且本發明係關於利用CYP2D6基因的多型變異判定藥劑代謝活性之方法。二、先前技術 CYP2D6係由9個外顯子所成之約4.5kbp的基因，基因性多型的多數已被報告之分子種類（Nelson， D.R.， Pharmacogenetics, 6， 1-42, 1996;及 Daly， Α·Κ.，

Pharmacogenetics，6，193_201，1996)。白色人種約 7%，曰本人約0.5%的酵素欠缺者（poor metabolizer:PM)存在，又，有報告（Dahl，M.L·，J. Pharmacol. Exp. Ther., 274, 5 1 6-5 20,1 995指出白色人種而言，單倍體基因（片段染色體；n 。一般體染色體爲2η)中有13個重複的CYP2D6之多酵素擁有者（或supermetabolizer:SM)，確認因個人基因情報之多樣性而有著代謝之個體差。然而，藥物代謝與CYP2D6基因的多型間之詳細關係則未知。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製三、發明內容本發明爲解決，決定CYP2D6變異基因之多型，解明經決定的基因多型與藥物反應性（藥物代謝能）或藥劑代謝活性之關係的課題。本發明者欲解決上述課題，首先檢查CYP2D6基因的多型。本發明者對這次檢查而言最重視其結果精確度，故採本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐5 . ~ 一~' 200300798 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7_ _五、發明説明（2 ) 用基因組-PCR直接定序法。又’關於基因完全欠缺型之 CYP2D6 * 5而言，原則上使用Long-PCR法進行檢測，有關陽性樣品則使用南方雜交法進行檢測。其結果’本發明者成功地定序出CYP2D6基因的新穎性複數之變異基因。本發明爲基於該見解所完成者。即，本發明爲提供以下發明者。 (1 ) 一種核酸，其如序列號碼1所記載的鹼基序列中至少 10個連續的核苷酸，其特徵爲含有包含任意選自該鹼基序列的第125號鹼基之G由A取代的變異、第1 85 8號鹼基之C由T 取代的變異、第2874號鹼基之T由C取代的變異、或第2875 號鹼基之C由T取代的變異之多型部位的該核苷酸之1 〇〜1 〇〇鹼基的核酸。 (2 )如（1 )之核酸，其爲DNA。 (3)如（1 )之核酸，其爲RNA。 (4 ) 一種對偶基因特異性寡核苷酸，其特徵爲含有任意選自序列號碼1所記載的鹼基序列的第125號鹼基之G由A取代的變異、第1858號鹼基之C由T取代的變異、第2874號鹼基之T由C取代的變異、或第2875號鹼基之C由T取代的變異之多型部位的序列、或與其互補體進行雜交者。 (5 )如（4 )之對偶基因特異性寡核苷酸，其中可作爲探針或引子使用。 (6 ) —種個體的基因多型分析分法，其特徵爲含有 (1 )由個體調製出核酸之步驟；及 (2 )對於步驟（1 )所調製出的核酸，任意選自序列號碼1 本紙張尺度適用中國國家標準（匸奶）八4規格（210父297公釐）_6_ " (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 200300798 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（3 ) 所記載的鹼基序列的第125號鹼基之G由A取代的變異、第 1858號鹼基之C由T取代的變異、第2874號鹼基之T由C取代的變異、或第2875號鹼基之C由T取代的變異之多型部位的驗基之鑑定步驟者。 (7 ) —種藥物代謝活性的判斷分法，其特徵爲含有 (1 )由個體調製出核酸之步驟； (2 )對於步驟（1 )所調製出的核酸，任意選自序列號碼1 所記載的鹼基序列的第125號鹼基之G由A取代的變異，第 1 85 8號鹼基之C由T取代的變異，第2874號鹼基之T由C取代的變異，或第2875號鹼基之C由T取代的變異之多型部位的鹼基之定序步驟；及 (3 )經步驟（2 )所定出的鹼基情報爲依據，預測該個體之藥劑代謝活性之步驟。 (8 ) —種基因，其特徵爲具有序列號碼2至5中任意記載的鹼基序列者。 (9 ) 一種蛋白質，其特徵爲具有序列號碼2至5中任意記載的胺基酸序列者。 (10 ) —種具有序列號碼2或序列號碼5所記載的鹼基序列之基因檢測方法，其特徵爲對含有對於由個體調製出的核酸，於序列號碼1所記載的鹼基序列中第100號鹼基的C由T 取代之變異、第2850號鹼基的C由T取代之變異、及第4180 號鹼基的G由C取代之變異有無進行檢測之步驟者。四、實施方式 ----*--*----- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐L 7 200300798 A7 ___—___B7__ 五、發明説明（4 ) 實施發明的最佳態樣 (I)本發明的核酸 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明提供一種核酸，其如序列號碼1所記載的鹼基序列中至少10個連續的核苷酸，其特徵爲含有包含任意選自該鹼基序列的第125號鹼基之G由A取代的變異、第1858號鹼基之C由T取代的變異、第2874號鹼基之T由C取代的變異、或第2875號鹼基之C由T取代的變異之多型部位的該核苷酸之10〜100鹼基的核酸。對於該核酸而言，於多型部位的鹼基爲，於序列號碼1 所記載的鹼基序列中，選自該鹼基序列的第1 25號鹼基之G 由A取代的變異、第1 85 8號鹼基之C由T取代的變異、第2874 號鹼基之T由C取代的變異、或第2875號鹼基之C由T取代的變異。上述的多型部位爲含有與藥劑代謝活性相關之鹼基者。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本發明更提供一種對偶基因特異性寡核苷酸，其特徵爲含有任意選自序列號碼1所記載的鹼基序列的第1 25號鹼基之G由A取代的變異、第1 858號鹼基之C由T取代的變異、第2 874號鹼基之T由C取代的變異、或第2875號鹼基之C由T 取代的變異之多型部位的序列、或與其互補體進行雜交者。如此的寡核苷酸可作用探針或引子使用。本發明說明書中所謂的核酸可爲DNA或RNA、單股或雙股皆可。既使寡核苷酸爲存在於自然界者，或合成者皆可，但一般爲合成者。本發明較佳的核酸，爲含有1以上任意之本發明定序的 ^氏張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐;)_ 8 _ ~ 200300798 A7 ____B7 五、發明説明（5 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 多型部位之DN A片段或該互補體，該長度一般爲1〇〜1〇〇個連續的鹼基。多型部位可存在於該片段內任意位置上。且，對於序列號碼1而言，符號T使用於DNA中的胸腺啶及RNA 中尿嘧啶之雙方，因此RNA寡核苷酸中符號T解釋爲尿嘧啶殘基。雜交探針可鹼基特異性地鍵結於核酸之互補鏈上。作爲如此探針，可舉出核酸、肽核酸。所謂引子，於適當緩衝液及適當溫度下，存在4種相異核苷三磷酸及核酸聚合酵素（DNA聚合酶、RNA聚合酶或逆轉錄酶等）時，可作爲模板上特異性DNA合成起始位置而作用之單鏈寡核苷酸。引子的適當長度依使用目的而不同，但一般爲10〜50核苷酸之範圍。所謂多型爲1個集團中存在2個以上經基因決定的替代序列或對偶基因者。多型標識物或部位表示產生多樣化之基因位置。較佳的標識物，至少具有2個對偶基因，其分別比經選擇的集團1 %還大之頻度，及較佳爲10%或20%以上的頻度下存在者。多型基因位置亦有1鹼基對的情況。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製如上述本發明的核酸，可由本說明書所揭示的序列號碼1所記載的鹼基序列情報爲依據，經斯業者以公知核酸合成方法容易合成。本發明更提供一種套組，其含有至少1個如上述的對偶基因特異性寡核苷酸。套組爲含有多型性相異形質下進行雜交，含有1對以上的對偶基因特異性寡核苷酸者。對於數種套組中可提供對偶基因特異性寡核苷酸固定化於支撐體本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS ) A4規格（210X297公釐）g 200300798 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 _B7_五、發明説明（6 ) 狀態者。作爲含於組套的任意成分，例如限制酶、逆轉錄酶或聚合酶或基質核苷三磷酸、標識所使用的方法（例如抗生物素蛋白-酵素鍵結體及酵素基質及標識爲生物素時的色素體）、及逆轉錄、PCR、或雜交反應上適當之緩衝液等可舉出。且含有組套、進行該方法的說明書。 (II)本發明的基因多型之分析方法本發明提供一種個體的基因多型分析分法’其特徵爲含有 (1 )由個體調製出核酸之步驟；及 (2 )對於步驟（1 )所調製出的核酸’任意選自序列號碼1 所記載的鹼基序列的第125號鹼基之G由A取代的變異、第 1 85 8號鹼基之C由T取代的變異、第2874號鹼基之T由C取代的變異、或第2875號鹼基之C由T取代的變異之多型部位的鹼基之定序步驟者。以下對本發明的分析方法之具體型態作說明 (A)核酸的調製本發明中的多型性係由，經分析的個體所調製出的標的核酸而檢測出。對基因組DNA的分析而言，任意的生物學樣本（除純紅血球以外）皆適合。例如作爲組織樣本可使用全血、精液、唾液、淚液、尿、糞便、汗、口腔黏膜 (buccal)、皮膚、及頭髮等。對於cDNA或mRNA的分析之組織樣本，可由表現標的核酸之器官中得到。本紙張尺度適用中國國家標準（€奶）八4規格（210'/ 297公釐]_1〇_ 一 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 200300798 Α7 Β7 五、發明説明（7 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 實施本發明方法時，必須由標的樣本中進行DNA的增幅，此可由例如PCR而進行。有關PCR的文獻’可參照 Principles and Applications for DNA Amplification (H.A. Erlich編、Freeman Press，NY，NY，1 992); PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Innis氏們編、Academic Press, San Diego，CA，1990); Mattila氏們、Nucleic Acids Res. 19，4967 ( 1 99 1); Eckert、PCR Methods and Applications 1，17(1991); PCR(McPherson氏們編、IRL Press，Oxford);及美國專利第4,683,202號等。作爲其他增幅方法可舉出、連接酶連鎖反應（LCR)(參照 Wu 及 Wallace，Genomics 4，560 ( 1989)、Landegren 氏們、

Science 241，1 077 ( 1 988))、轉錄增幅（Kwoh氏們、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86，1 1 73 ( 1989))、及自身持續性序列複製 (Guatelli氏們、Proc· Natl· Acad· Sci. USA，87，1 874 (1990)) 、及核酸作爲依據之序列增幅（NASBA)等。 (B)標的DNA的多型之檢測經濟部智慧財產局員工消費合作社印製序列號碼1所記載的鹼基序列中選自第125號鹼基之G由 A取代的變異、第1 8 5 8號鹼基之C由T取代的變異、第2874號鹼基之T由C取代的變異、或第2875號鹼基之C由T取代的變異之多型部位，於個體（例如，被分析的患者）中，例如可由以下（i )至（vi )之任意方法而定序。 (i)對偶基因特異性探針本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）_ ^ "~" ~ 200300798 A7 B7 五、發明説明（8 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 分析本發明的多型性之對偶基因特異性探針的設計及使用，例如可如 Saiki et al·，Nature 324，163-166(1986); Dattagupta，EP235,726;Saiki，W〇 89/1 1 548所記載。設計出於由某個體之標的DNA片段上會進行雜交，但對來自其他個體的對應片段則不會進行雜交（其原因爲來自該2個個體的各片段上因存在相異多型形態）之對偶基因特異性探針。雜交條件爲對偶基因間的雜交強度有著顯著差，因此探針必須十分嚴謹地僅可與其中1個對偶基因雜交。數個探針與標的DN A片段進行雜交，其結果，多型部位設計成排列於探針的中心位置（例如15個時爲第7號位置；16個時爲第8或第9號任一位置）。因適當地設計探針，相異的對偶基因型間之雜交可較易辨別。對偶基因特異性探針爲以對使用者。一對中一邊顯示與標的序列之對照組完全吻合，另一邊顯示與改變型的完全吻合。欲進行相同標的序列內的複數多型性之同時分析，可將探針的複數對固定化於相同支撐體上。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (ii)磁磚狀陣列本發明的多型性可由核酸陣列的雜交而定序。作爲具體例子，可舉出國際公開W〇95/1 1 995所記載的內容。國際公開W0 95/1 1995中記載多型性的改變型檢測中中經最適化的亞陣列，亦可使用該亞陣列。 (Hi)對偶基因特異性引子本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）_ 12 - 200300798 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（9 ) 對偶基因特異性引子，於多型性的重複標的DN A部位上進行雜交，引起對偶基因型（對於此引子顯示完全互補性）的增幅（參照 Gibbs，Nucleic Acid Res. 17，2427-2448( 1 989))。該引子可組合遠部位經雜交的第2引子而使用。增幅爲特定對偶基因型存在下生產可檢測的產物，由2 個引子開始。一般使用第2引子對做控制。此對的一邊顯示多型部位的1鹼基的錯誤配對（miss-match )，另一邊則顯示與遠部位完全地互補。1鹼基的錯誤配對會妨礙增幅進行，而無法形成可檢測的產物。該方法中，若錯誤配對含於多型性與經整列之寡核苷酸的3’-端位置上時爲最佳作用。例如可參照國際公開W093/22456。 (iv)直接序列定序本發明的多型性可使用雙去氧連鎖終止（dideoxy chain termination)法或Maxam-Gilbert法等公知的序列定序方法，經由直接序列定序而檢測出。 (v )變性梯度膠體電泳使用聚合酶連鎖反應所製造之增幅產物，可經變性梯度膠體電泳進行分析。此時，相異的對偶基因，於溶液中依相異序列所決定的熔融特性及DNA的電泳移動度做爲依據而鑑定。Erlich, PCR Technology, Principles and Applications for DNA Amplification(W. H. Freeman and Co·，New York，1992)，第 7章。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝·

、1T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐j 13 200300798 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（10) (vi)單股構象（conformation)多型性分析將標的序列的對偶基因，使用單股構象多型性分析進行分類。該方法如 Orita et al.，Proc. Natl. Acad. Sci. 86,2766-2770( 1 989)所記載，單股PCR產物之電泳移動度之變化可鑑定鹼基差異，形成單股增幅產物。單股核酸會再次成折疊狀，或形成部分取決於鹼基序列之二次構造。與單股增幅產物相異的電泳移動度，反映出標的序列的對偶基因間之鹼基序列的差異。 (III )本發明中基因多型的分析方法之利用本發明係關於編碼藥劑代謝酵素的CYP2D6基因之新穎多型者。該CYP2D6基因的多型性之檢測可判斷藥劑代謝活性。即’本發明中，如上述本發明的基因多型之分析方法中’更包含依據步驟（2 )所定序的鹼基情報，可預測該個體的藥劑代謝活性之步驟，提供一種藥劑代謝活性之判斷方法。本發明的多型性使用於一般的應用（例如，法醫學、血緣鑑定、連鎖分析、及位置選殖）。 &下’對於利用本發明的基因多型之分析方法做具體說明。 (i )與藥劑代謝活性之關連 $發明提供一種可預測影響到藥劑代謝活性之CYP2D6 ----.——*---I — (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) M規格（21GX297公釐） 200300798 A7 B7 五、發明説明（11) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 基因的新穎多型部位。經本發明的多型可預測代謝活性之 CYP2D6基質所成的藥劑具體例，可舉出下述者。本發明的多型對被驗者作分析，可判斷下述藥劑的代謝活性。卽律不整治療劑· Na通道阻斷藥（例如，pr〇pafenone HC1 ) 心動快速自卩侓不整治療劑（例如，醋酸flee a nide ) 節律不整（例如，阿馬林、mexlitine HC1、cibenzoline檸檬酸） /5-接受益阻斷藥（例如，timolol maleate、propranolol HCl 、penbuolol sulfate、bupranolol HC1、alprenolol HC1) 心選擇性A 1 -阻斷劑（例如，m e t o p r ο 1 ο 1 t a r t r a t e ) 持糸買性々-阻斷劑（例如，丙二酸p 〇 p i n d ο 1 ο 1 ) a，/5 -阻斷劑（例如，c a r v e d i 1 ο 1 ) 排尿阻礙改善•降壓劑（例如，urapidil) 酣_嗓系精神神經安定劑（例如，perphenazine ) 酌_嚷系精神神經用劑（例如，fluphenazine、thioridazine HC1) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製溴酣系抗精神病劑（例如，h a 1 o p e r i d ο 1 ) 二環系激動調節劑（例如，nortriptyline HC1 ) 二環系抗憂鬱劑（例如，amitriptyline HC1 ) 憂慮病•遺尿症治療劑（例如，clomipramine HCl、 imipramine HC1 ) 憂鬱症治療藥（例如，mainserin HC1) 麻藥性鎭咳劑（例如，磷酸codeine) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐：[15 ^ 200300798 A7 ____ B7 _ 五、發明説明（12) 中樞性銳咳劑（例如，dextromethorphan hydrobromide) 腦循環•代謝改善劑（例如，nicergorine) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 選擇性血淸素再回收阻礙劑（例如，馬來酸fluboxamine ) 青光眼•尚眼壓治療劑（例如，t i m ο 1 ο 1 m a 1 e a t e ) 抗組胺酸藥劑（例如，promethazine HC1 ) (ii )與各種疾病的關連對有關本發明的多型性、基因圖譜未鑑定之各種疾病 (例如，無丙種球蛋白血症、尿崩症、萊希-尼亨症候群、 myodystrophy、Wiskott-Aldrich症候群、Fabry’s病症、家族性高膽固醇症、多胞性腎臟疾病、基因性球狀血球症、 Willebrand症、管生硬化症、基因性出血性末梢血管擴張症、家族性大腸癔肉症、Ehlers-Danlos症候群、骨格發育不全症、及急性間歇性坡菲林病症）進行試驗。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製作爲表現型形質，可舉出可能與基因相關的多功能疾病（例如，自身免疫疾病、發炎、癌症、及經病原微生物之感染）之症狀或對於這些之感受性等。作爲自身免疫疾病的例子，可舉出慢性風濕性關節炎、泛發性硬化症、糖尿病（胰島素取決性及非取決性）全身性狼瘡、及甲狀腺功能亢進。作爲癌症的例子，可舉出膀胱、腦、乳房、大腸、食道、腎臟、白血病、肝臟、肺、口腔、卵巢、胰臟、前列腺、皮膚、胃、及子宮的癌症。表現型形質有可舉出如壽命、外觀（例如禿頭、肥胖症）、強度、敏捷性、耐久力、生殖能力等特徵。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐；L 16 _ 200300798 A7 _ B7 五、發明説明（13) (iii)法醫學 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 於對個體多型部位設定之多型形質的鑑定，可鑑定出區分個體的多型形質設定。一般爲參照National Research Council, The Evaluation of Forensic DNA Evidence(P〇llard氏們編，National Academy Press, DC，1996)。分析的部位越多，對某個體的多型設定而言與無關連的個體同的或然率越低。因此，本發明的多型性，可與遠位基因的多型性組合使用。法醫學上使用的較佳多型性係爲雙重對偶基因。其原因爲，2個多型形質的集團頻率，一般爲比複數對偶基因位置之複數多型形質者更能正確地測出。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製個體的法醫學用標識物設定之鑑定能力可是用於法醫學分析上。例如，測試懸疑犯所得之血液樣品是否與犯罪現場血液或其他組織樣品一致時，係由佔有經選擇的多型部位之多型設定，決定懸疑犯與樣品是否相同而做判斷。多型標識物的設定於懸疑犯與樣品間未相同時，可判斷爲懸疑犯並非爲樣品的供給源。若與標識物設定相同時，可判斷爲由懸疑犯所得之DNA與犯罪現場所見到者爲相同。判定（例如，適合個體的集團分析）經試驗的基因位置之多型形質頻率，可由統計學分析、判斷懸疑犯與犯罪現場樣品是否爲偶然之或然率。 (iv )父性試驗父性試驗的目的一般爲判斷男性是否爲孩子的父親。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）_ ' 200300798 A 7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（一般情況下孩子的母親爲已知’故可追蹤來自母親的孩子之基因型。父性試驗則爲非來自母親部分的孩子基因型部分，調查是否爲來自父親者而構成。父性試驗可由分析父親及孩子的多型性設定而實施。來自父親的孩子之多型性設定’若與該推測爲父親不一致時，若無試驗誤差，則可下結論爲該推測爲父親並非真正的父親。來自父親的孩子之多型性設定’若與該推測爲父親一致時，由統計學上可計算出偶然一致的或然率。幾種多型基因位置包含於該分析時’隨機選出的男性之排除累積或然率非常高。該或然率’可作爲評估具有與來自孩子父親的孩子多型標識設定一致之多型標識設定的父親之責任問題。 (v )表現型形質基因圖譜使用本發明的多型性，可確立與目的形質關連之基因位置多型標識（此雖與形質無關連，但與擔任該形質且同時分離的物理性基因位置連接）之間的物理性關係。該分析中，對於染色體的位置與表現型形質相關的基因位置進行mapping係爲有用的，經由此可進行該形質基因的選殖（ cloning )。參照 Lander et al·，Proc· Natl. Acad. Sci. (USA)83,7353-7357( 1986);Lander et al., Proc. Natl. Acad. Sci.(USA)84， 2363-2367( 1 987); Donis-Kell et al., Cell 5 1,3 1 9-337( 19 87); Lander et al., Genetics 1 21. 1 8 5- 1 99( 1989) 。相關的配置的基因可由directional cloning而選殖。參照 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）_ 18 200300798 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（15) Wainwright，Med. J· Australia 159，170- 174(1993); Collins， Nature Genetics 1,3-6( 1992) 0 連鎖硏究，例如可於家族中進行。對於家族成員是否有表現型形質，可對多型標識之設定做調查。其次，分析減數分裂的多型標識之分佈，決定出怎麼樣的多型標識與表現型形質同時分離。例如可參照Kerem et al.，Science 245，1 073- 1 080( 1 989); Monaco et al·，Nature 316，842( 1 985); Yamoka et al., Neurology 40, 222-226( 1 990)； Rossiter et al., FASEB Journal 5, 21 -27( 1991)。 IV.本發明的基因及蛋白質本發明提供含有序列號碼2至5中任意的驗基序列之基因。又，本發明的基因可由天然或於可與其他啓動子（ promoter )連結之重組表現載體中使其表現。一般而言，該啓動子爲哺乳動物細胞中使其表現之真核生物啓動子。作爲轉錄調節序列，可使用異種啓動紫、其若必要爲經宿主辨識的增強子等。取決於所選擇的宿主，可選擇適當的啓動子（例如，trp、lac、噬菌體啓動子、解糖酵素啓動子、及tRN A啓動子）。可使用市販的表現載體。表現載體可含有，辨識宿主的複製系、可增幅的基因、選擇性標識、插入宿主基因團之有用宿主序列等。將重組表面載體導入佰主細胞的方法，可對應表現載體及宿主細胞適當選擇。作爲導入方法的具體例子，可舉出融合法、結合法（conjugation) 、transfaction、轉形、電 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）_ 19 - 200300798 A7 _B7_ 五、發明説明（ie) 穿透作用或注入等。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 種種宿主細胞可使用於本發明基因的表現上。作爲適當的宿主細胞，可舉出大腸桿菌等細菌、酵母菌、絲狀菌、昆蟲細胞、哺乳動物細胞（作爲代表者爲經永生（ immortalized )處理的例如，老鼠、CHO、人類及猴子之細胞株）、及這些的衍生物。含本發明基因的重組表現載體下經轉形的宿主細胞，於適當條件下培養後，將所生成的蛋白質依據斯業者公知方法進行單離，而可得到實際上純化的產物。蛋白質於細胞外分泌的情況，由培養宿主細胞的培養澄淸液中單釐出蛋白質。蛋白質無分泌至細胞外的情況，蛋白質由宿主細胞的溶解產物中單離。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製如以下的實施例2所示，具有本發明便亦的 CYP2D6unkn〇wS3的酵素活性與野生型酵素活性做比較時爲5 %以下，對於活體內保有編碼本酵素之基因的個體顯示比 CYP2D6的活性弱。此被推測爲CYP2D6作爲負責代謝之酵素之化合物，與具有野生型基因的個體比較，其可長時間殘存於活體內有相當性地關係。又，本多型基因與野生型比較時有3處的胺基酸殘基經取代，則可推測爲基質變異性會有與野生型相異之舉動。因此，微立體作爲本發明的蛋白質使用，經由藥物代謝能測定，可預測出投與藥物時之藥效及副作用。 V·具有序列號碼2或序列號碼5所記載的鹼基序列之基因檢本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）_ ~ ' 200300798 A 7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（17) 測方法檢測出本發明中對於由固體調製出的核酸中，於序列號碼1所記載的鹼基序列中是否第1 00號之鹼基由C取代爲τ 之變異，是否第2850號的鹼基由C取代於Τ之變異，及是否第41 80號之鹼基由G取代爲C之變異，設計適當的引子’使用引子可進行PCR。引子的設計依據下述進行。含有CYP2D6基因的內含子的基因之轉譯啓始部位作爲第1位，製作出使朝翻譯終了部位的第1〇〇位鹼基作爲末端，朝轉譯終了部位所設計的20〜30鹼基所成之引子作爲上游引子2種類。其一爲3’-末端作爲野生型序列（l〇〇fw ) 、另一爲變異型序列（l〇〇fw)。製作出第2850位作爲3，-末端朝轉譯啓始部位所設計的 20〜30鹼基所成之引子作爲下游引子之2種類。其一爲3’-末端作爲野生型（ 2850rw)、另一爲變異序列（ 2850m) ° 製作出第2850位作爲3，-末端朝轉譯終了部位所設計的 20〜30鹼基所成之引子作爲上游引子之2種類。其一爲3’-末端作爲野生型（2850fw )、另一爲變異序列（2850fm ) ° 製作出第41 80位作爲3，-末端朝轉譯啓始部位所設計的 20〜30鹼基所成之引子作爲下游引子之2種類。其一爲3’-末端作爲野生型（4180rw)、另一爲變異序列（4180rm) ° 上述的引子如下。 100fw 5’ acgctgggctgcacgctacc 3’（序列號碼 45) 100fm 5’ acgctgggctgcacgctact 3’（序列號碼 46) 2850fw 5’ agcttcaatgatgagaacctgc 3’（序列號碼 47) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）_ 21 200300798 A7 B7 五、發明説明（is) 2850 fm 5’ agcttcaatgatgagaacctgt 3’（序列號碼 48) 2850rw 5’ aggtcagccaccactatgcg 3’（序列號碼 49) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 2850rm 5’ aggtcagccaccactatgca 3’（序列號碼 50) 4180rw 5’ aagctcatagggggatgggc 3、序列號碼 51) 4180rm 5’ aagctcatagggggatgggg 3’（序列號碼 52) 基因組DNA作爲模型，組合上述引子進行PCR反應。組合如下。 ① 100fw 及 2850 rw ② 100fw 及 2850rm ③ 1OOfm 及 2850rw ④ 1OOfm 及 2850rm ⑤ 2850fw 及 4180rw ⑥ 2850fw 及 41 80rm ⑦ 2850fm 及 4180rw ⑧ 2850fm 及 4180rm 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製基因組DNA中至少一邊具有如序列號碼2所記載的鹼基序列之基因（以下實施例u n k η 〇 w η 3 )時，組合④與⑧下同時增幅。基因組DN Α中至少一邊具有如序列號碼2所記載的驗基序列之基因（以下實施例unknown6 )時，組合③與⑤下同時增幅。因此，增幅產物以電泳等作分析可檢測出本發明新穎基因。以本發明所主張的優先權作爲基礎之日本專利申請案本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）_ 22 200300798 Μ Β7_ 一_— 五、發明説明（19) 之特願200 1 -372548號說明書所記載的所有內容引用於本發明說明書中作爲本發明說明書中一部份。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 以下藉由實施例更具體說明本發明，但並非限定於本發明實施例中。實施例實施例1 : (I)材料及方法 (1) 試驗材料作爲試驗樣品，使用凍結血液。 (2 ) 所使用的主要材料•試藥

TaqDNA聚合酶（布羅麥加公司）脫氧ATP、GTP、TTP、CTP (阿馬雪芙路西亞公司）瓊脂糖（寶酒造）

EtBr染色液（和光純藥工業）循環定序套組（阿馬雪芙路西亞公司）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (3) 所使用的主要機器電泳裝置（克斯拜歐公司）加熱循環裝置（PE阿布來特生化公司） ABI自動定序裝置373 ( PE阿布來特生化公司）冷卻離心機（佐久間製作所） (4) 引子合成引子：依據CYP2D6基因情報，設計出引子序列，進行使用公知數據之相同性檢索後，使用（股）塞美地亞所合本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）_ 200300798 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（2〇) 成者。引子序列（5%3’） CYP2D6elf gcaaaggccatcatcagctcc (序歹U 號碼 6) CYP2D6elr tctggtaggggagcctcagc (序歹丨J 號碼 7) CYP2D6e2f taggacctgtagtctggggt (序列號碼 8) CYP2D6e2r gctcggactacggtcatcac (序歹[J 號碼 9) CYP2D6e3f cgggagaccagggggagcat (序列號碼 10) CYP2D6e3r ggtgggagatgcgggtaagg (序歹丨J 號碼 11) CYP2D6e4f aaagcgggaactgggaaggc (序歹[J 號碼 12) CYP2D6e4r tgctcttccgaggccccagt (序歹[1 號碼 13) CYP2D6e5f gagatggctggggcctgaga (序列號碼 14) CYP2D6e5r ccaaccttttgcccagcctc (序歹[J 號碼 15) CYP2D6e6f cccgttctgtcccgagtatg (序列號碼 16) CYP2D6e6r ggtgtcccagcaaagttcat (序歹ij 號碼 17) CYP2D6e7f taagcctgacctcctccaacat (序列號碼 18) CYP2D6e7r agtgggcccacctggcagta (序歹[J 號碼 19) CYP2D6e8f ccccgtgtgtttggtggcag (序列號碼 20) CYP2D6e8r cgtcagtgagcctggctcct (序歹[J 號碼 21) CYP2D6e9f tcttgcaggggtatcaccca (序歹[J 號碼 22) CYP2D6e9r-l ttgccctgaggaggatgatc (序列號碼 23) CYP2D6e9r-2 ctcagcctcaacgtacccct (序列號碼24) CYP2D6elf-2 catttggtagtgaggcaggt (序列號碼 25) CYP2D6elr_2 ctccaggacctcctccctc (序歹ij 號碼 26) CYP2D6e2f_2 ggccctgaccctccctctgc (序列號碼 27) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 訂

本紙張尺度適用中國國家標準（cns ) A4規格（210X297公釐L

200300798 A7 B7 五、發明説明（21) CYP2D6e2r-2 ctctgtccccaccgctgctt (序列號碼28) CYP2D6e3f-2 tgcccgtcccaccccc (序列號碼 29) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) CYP2D6e3r-2 gcccttctgcccatcaccc (序列號碼30) CYP2D6e4f-2 cccgcatctcccaccccc (序列號碼31) CYP2D6e4r-2 cctcggtctctcgctccgc (序列號碼 32) CYP2D6e5f-2 gaccccgttctgtctggtgt (序列號碼 33) CYP2D6e5r-2 ccgtggcagccactctc (序列號碼34) CYP2D6e6f_2 gtatgctctcggccctgctc (序列號碼 35) CYP2D6e6r-2 actgtttcccagatgggctc (序列號碼36) CYP2D6e7f-2 gtggggacgcatgtctgtcc (序列號碼37) CYP2D6e7r-2 ggagggcgccaggcct (序列號碼 38) CYP2D6e8f-2 tcaccctgcatctcctgccc (序列號碼39) CYP2D6e8r-2 ccgggctccccacaggc (序列號碼 40) CYP2D6e9f-3 ccctcccctccccac (序列號碼 41) CYP2D6e9r-3 tggggactaggtaccccatt (序列號碼 42) CYP2D6*5f gcgacaattcaagtgtggtga (序列號碼 43) CYP2D6*5r gcatgagctaaggcacccaga (序列號碼 44) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (II)方法 (1) 基因組DNA的調製快速溶解樣品5ml，分爲200 // L及4ml各注入適當容量的試管中。200 //L的樣品添加3倍容量的PBND緩衝液（PCR buffer with Nonionic Detergents :50mmol/L KC1, lOmmol/L Tris-HCl(pH8.3)， 2.5mmol/L MgCh, O.lml/mL gelation, 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）_ 25 200300798 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（22) 0·45%ΝΡ40，0.45%Tween20)後，添加 8// L 的 1 Omg/mL 蛋白酶K，加溫至50〜60它下完全溶解。添加等量的TE飽和酚，混合、離心分離後，回收水層。回收的樣品中加入1 /1 〇倍容量的3mol/L乙酸鈉（pH5.3 )及等量的異丙酮，經離心分離回收DNA。以70%乙醇洗淨、乾燥後溶解於50// L的TE ( 0.1 mol/L Tris-HCl(pH7.5)、lmmol/L EDTA ( ρΗ8·0 )，使用 2·5 // L於PCR用模板。反應未使用部份以4°C保存。對於4mL的樣品，添加3倍容量的DNA調製用SDS緩衝液（150 mmol/L NaCl, 10 mmol/L Tris-HCl ( pH8.0) 、10 mmol/L EDTA ( ρΗ8·0) 、1% SDS )後，添加約 160// L 的 lOmg/mL 蛋白酶 K，加溫至50〜60t下完全溶解。反應後加入等量的TE飽和酚除蛋白後，進行離心分離回收水層。加入回收樣品1/10量之3mol/L醋酸鈉（ρΗ5·3)及等量異丙醇，沈澱DNA而回收。以70%乙醇洗淨、乾燥後溶解於800 // L的ΤΕ中，作爲 DNA樣品。所得之樣品分爲400 // L X 2支，添加40 // L 3mol/L醋酸鈉（ρΗ5.3 )及lmL的乙醇經混合後，於4°C下保存。以DNA調製用SDS緩衝液調製之DNA樣品，作爲PCR反應預備樣品級南方雜交法用樣品（必要時實施保存）。 (2) CYP2D6基因的增幅每2.5/zL的DNA樣品分別添加於200 //L管柱中，加入如表1組合的引子，經PCR法增幅CYP2D6全外顯子（Long PCR )有關CYP2D6* 5f及CYP2D6* 5r的弓[子糸且合，來自CYP2D6 * 5約1.5kbp片段之檢測作爲目的。CYP2D6elf-2及 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐26 - 200300798

A B 五、發明説明（23) CYP2D6e6f的組合以增幅CYP2D6外顯子1〜6區域爲目的，一部份作爲磨板獨立增幅外顯字1〜5。CYP2D6e6f及 CYP2D9e9f-2的組合以增幅CYP2D6外顯子6〜9區域爲目的，一*部份作爲模板獨立增幅外顯字6〜9 ( 2 n d P C R ) °各外絲頁子的增幅，以如表2所示第一選擇引子（first choice primer )之組合進行，對於未確認增幅的外顯子進行第二選擇引子（second choice primer)之增幅。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製表2: 增幅CYP2D6各外顯子之引子組合第一選擇引子對第二選擇引子對正向逆向正向逆向外顯子1 CYP2D6elf-2 CYP2D6elr-2 CYP2D6elf CYP2D6elr 外顯子2 CYP2D6e2f-2 CYP2D6e2r-2 CYP2D6e2f CYP2D6e2r 外顯子3 CYP2D6e3f CYP2D6e3r CYP2D6e3f-2 CYP2D6e3r_2 外顯子4 CYP2D6e4f-2 CYP2D6e4r-2 CYP2D6e4f CYP2D6e4r 外顯子5 CYP2D6e5f CYP2D6e5r CYP2D6e5f-2 CYP2D6e5r-2 外顯子6 CYP2D6e6f CYP2D6e6r CYP2D6e6f-2 CYP2D6e6r-2 外顯子7 CYP2D6e7f CYP2D6e7r CYP2D6e7f-2 CYP2D6e7r-2 外顯子8 CYP2D6e8f CYP2D6e8r CYP2D6e8f-2 CYP2D6e8r-2 外顯子9 CYP2D6e9f CYP2D6e9r-l CYP2D6e9f-2 CYP2D6e9r-3 表1: 增幅CYP2D6全外顯子區之引子組合_ 標的正向逆向外顯子1〜6 CYP2D6elf-2 CYP2D6e6r 外顯子6〜9 CYP2D6e6f CYP2D6e9r-2 CYP2D6*5 CYP2D6*5f CYP2D6*5r 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）_ 27 200300798 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 ___ B7__五、發明説明（24) (3 )基因多型解析法純化經PCR增幅的各外顯子片段，使用循環定序組套進行定序反應。反應終了後，使用ABI373定序裝置（PE阿布來特生化公司），分析鹼基序列。所得之鹼基序列數據，依據高峰波形數據而確認•修正。數據的解析使用GeneWorks ( intelligenetics Inc.)及公知基因數據進行。異型接合體的鑑定由ABI373所得之波峰確認出有義端及反義端。對於判斷爲必須南方雜交支樣品，委託三菱化學BCL股份有限公司進行試驗。樣品的判斷標準：若符合下述條件則進行南方雜交。使用 CYP2D6*5f 及 CYP2D6*5r 的引子之 Long PCR 中，檢測出來自CYP2D6*5約1.8kbp片段時；被分類爲活性階級3的基因中，構成對偶基因中含有 CYP2D6* 2時；及判斷爲新穎基因型時 (ΠΙ)結果及討論各樣品的基因偵察結果如表3所示。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（（：灿）八4規格（210'/297公釐）-28_ 200300798 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 、發明説明（表3 25) 對偶基因數頻率 (%) 表現型 (本硏究） 4 2( %) 表現製 (曰本人） n=324(%) 表現型 (白色人種） n=1344(%) 1A 61 42.96 45.77 40.1 33.7 1E 1 0.70 ID 2 1.41 1 (u n k η o w η 5) 1 0.70 2Α 6 4.23 5.63 12.9 26.9 2Α or Β 2 1.41 3 0 0.00 0.00 0.00 1.7 4 0 0.00 0.00 0.00 17.1 5 4 2.82 2.82 6.2 6.9 10Α 23 16.20 38.03 38.6 1.4 10Β 31 21.83 14 0 0.00 0.00 2.2 0.0 22 1 0.70 0.70 0.00 0.2 35 0 0.00 0.00 0.00 6.7 u n k η o w η 1 1 0.70 0.70 肇 u n k η o w η 2 1 0.70 0.70 _ unknown3 6 4.24 4.23 • unknown4 1 0.70 0.70 • unknown6 1 0.70 0.70 其他 5.4 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）_ 29 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 200300798 A7 B7 五、發明説明（26) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 對於經偵察的142對偶基因，檢測出的變異部位爲1 3 ( 其中新穎變異部位爲4) 、allelic valiant爲14 (其中新穎對偶基因爲6)，共17種基因型。預測經對偶基因轉譯的胺基酸，可由文獻報告（Kubota， T. British J. Clin. Pharmacol., 50, 3 1 -34, 2000; Marez, D., Pharmacogenetics, 7, 193-202, 1997; Johansson, I., Mol.

Pharmacol., 46, 452-459, 1994; Sachse, C. Am. J. Hum. Genet. 60，284-295， 1997;福田剛史們、Xenobio. Metabol. And 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Dispos.，15，1 65- 1 70，2000;及 Wang，S.L·，Drug Metabol. Disp·, 27, 3 85 - 3 8 8，1 998)推測出各胺基酸型的酵素活性。其後各對偶基因的表現量視爲相同者，推測各基因型之酵素活性。CYP2D6氺1A (野生型同型（homo))之活性作爲指標之活性階級分類下推測酵素活性強之樣品（Class 1 ;與氺1A/ * 1 A活性同程度）爲24例子（33.8% )，被推測爲雖活性較爲弱但不成問題的樣品（Class 2 ; * ΙΑ/* 1A活性的 50%以上）爲25例子（35.2% )，被推測爲活性較弱的樣品 (Class 3;氺1A/*1A活性的未達50%)爲22例子（30.9% )。未檢測出被推測爲完全無活性的樣品（Class 4)。對偶基因出現頻率如表3及圖1所示。於進化學中 CYP2D6並非爲維持生命所必須的基因，被推測爲經由環境選擇下爲多餘而未能發揮作用者。其結果至今報告出7 1種基因多型（Cytochrome 450(P450) Nomenclature Committee, http://www.imm.ki.se/CYP 對偶基因 s/cyp2d6.htm )，各對偶本紙張尺度適用中國國家標準（cns ) A4規格（210X297公釐）_ 3〇 . 200300798 A7 B7 五、發明説明（27) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 基因的出現頻率有著人種個人差。對本次樣品的對偶基因出現頻率與健康日本人報告（Kubota，T. et al·，British J. Clin. Pharmacol·，50，31-34，2000 )類似，於多數黃種人中所檢測出的CYP2D 6 *10爲38.03 % (健康日本人爲38.6%，白種人爲1.4% )，又，於多數白種人中所檢測出的酵素活性缺陷型之CYP2D6* 4(白種人爲17.1%)並無與健康日本人相同結果。基因完全缺陷型之CYP2D6 * 5的出現頻率爲 2.82%，與健康日本人爲6.2%，白色人種爲6.9%比較顯示較低傾向，但此被認爲爲被檢驗樣品數比其他試驗少之故〇經濟部智慧財產局員工消費合作社印製變異檢測部位的出現頻率如圖1所示。被確認最多的部位爲1661〇>(：( 49.30%)(1661〇>(：表示，第1661號的鹼基之G取代爲C，以下相同）。該部位不會因胺基酸取代而產生變異（silent mutatin )，此與白色人種之出現頻率（ 52.6% )爲同等結果。這可推測爲1661 G > C變異爲人種分爲黃種人與白種人前所發生。100C> T (胺基酸爲由脯胺酸 (P )取代爲絲胺酸（S ))及4 1 80G > C (由絲胺酸（S )取代爲蘇胺酸（P))的變異分別爲44.37 %及48.59 %，本結果爲反映含構成該區的要素之CYP2D6 * 10多數被檢測出結果（表3 )。對於白種人而言100C > T及4180G > C變異出現頻率分別爲18·4%及52.9%，特別對於l〇〇C>T而言確認較大出現頻率差。對100C > T變異的產生時期必須做詳細討論，至少100C > T及4180G > C作爲構成要素而保有之CYP2D6 * 10爲人類分歧以來，發生於黃色人種的對偶基因。 I紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）_ 31 _ ' 200300798 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 B7五、發明説明（2δ) 有報告指出CYP2D6 * 10於代謝比率（metabilic ratio(MR))中 * 1/ * 1、1/ * 10 及 * 10/ * 10 下有顯著差（ Johansson, I. et al., Mol. Pharmacol., 46，452-459, 1994 )、又有報告出基質特異性之變化（福田剛史氏們，Xenobio. Metabol. And Dispos·，15，165- 170,2000 )。過去以 CYP2D6 作爲主代謝酵素的藥物代謝能中，未能顯示具一般代謝能 extensive metabolizer(EM)及來自PM之明確2峰性，確認爲具有EM與PM的中間程度之代謝能的中間代謝（intermediate metabolize:r(IM))或具有EM的數倍至數十倍之代謝能的超代謝（super metabolizer(SM))之存在。由這次試驗結果中得知，30.9%可推定爲IM的且分類爲Class3者，其構成對偶基因的90%以上爲*10。由上述，當投與藉由CYP2D6進行代謝之藥物時，考慮到CYP2D6 * 10爲重要的事，依活性水準可設定數據解析·適當投與量。此次的71樣品142對偶基因的檢測中，檢測出具有新穎變異部分的3對偶基因（unknownl，2及4)及已存變異部位所構成之新穎3對偶基因。 unknownl及2由相同樣品所檢測出的對偶基因歸屬未決定之基因型。即一樣品而言檢測出100C > T、125G > A、 1039C>T、1661G>C、1858C>T、418 0G>C(其中，125G >八及1 85 8C> T爲新穎變異部位。同時該新穎變異部位分別引起G42E及R173C的胺基酸取代）皆爲異型。 Unknown4 的變異部位爲 100C>T、1039C>T、1661G〉 C、2874TC > CT、4180G > C (其中 2874TC > CT爲新的）之本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐L 32 . " " (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 200300798A7B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（29) 胺基酸變異爲P34S、S304L及S486T (其中S304L爲新的）。作爲其他新穎的對偶基因，檢測出unknown3 ( 100C > T 、1661G>C、2850C>T、3790C>T、4180C>T 胺基酸變異爲P34S、R29 6C及S48 6T )爲6樣品、6對偶基因，其出現頻率爲 4.23%。又，檢測出 unknown5 ( 1661G>C silent) 1 樣品、1對偶基因，其出現頻率爲0.7%。 unknown3、unknown4、unknown5及 unknown6的 cDNA 之鹼基序列與胺基酸序列分別記載於序列表序列號碼2、3、4 及5。使用複合CYP2D6之體外試驗中，導入100C>T變異之變異體會使CYP2D6 * 1A的酵素活性降至約1/20的程度（ Wang, S.L. et al., Drug Metabol. Disp., 27, 3 85-3 88, 1 998 ) 、可預測unknown3及6爲與CYP2D6* 10相同或更低活性。特別爲unknown3出現頻率爲較高的4.23%成爲必要檢測項目之 -- 〇實施例2 :使用桿狀病毒表現系統的新穎CYP2D6蛋白質之表現及活性確認欲確認人類基因組中新發現的新穎CYP2D6多型基因之酵素活性時，以人類肝臟cDNA基因庫所選殖（cl〇ning)的 CYP2D6 * 2爲準使用以下方法製作出新穎多型基因。 (I)材料及方法合成中心部分保有變異導入部分，前後1 〇〜30鹼基的序列所成之以下的引子。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）_ 33 ’ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 200300798 A7 B7 五、發明説明（30) 弓[子 1 atggggctagaagcactggt(序歹!1 號碼 53) 引子2 ggcagggggcctggtgagtagcgtg (序列號碼54) 弓[子 3 ctgggctgcacgctactcaccaggc (序歹!j 號碼 55) 弓[子 4 ctagcggggcacagcacaaag (序歹[J 號碼 56) 使用引子1及引子2由下述方法使用片段1 段4如下述方法製作片2。模板片段3及片

引子1(或引子3) 引子2(或引子4) 10x buffer(緩衝液） 20mmol/L dNTPs AdvantageHF2 DNA 聚合酶（Clontech) 以dH2〇調整成總體積50// L

l〇ng 20pmole 20pmole 5 β L 5 β L 1 β L (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製反應條件 94°C (熱變性） 57°C (鍛燒） 68°C (引子延伸反應） 30秒 30秒 3分上述作爲1次循環，實施32次循環。鍛燒溫度取決於引子序列而改變。目的片段由瓊脂糖電泳後切出、純化。純化後的片段1及片段2以1:1莫耳比混合，進行以下反應。片段1 50ng 片段2 5 0 n g 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐L 34 200300798 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（31)

10x buffer緩衝液（Clontech) 20mmol/L dNTPs(Clontech) AdvaiitageHF2 DNA聚合酶（Clontech) 以dH2〇調整全量爲50// L

5 β L 5 β L 1 (I L 反應條件 94°C (熱變性） 68t (引子延伸反應） 1分 3分 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

上述作爲1次循環，實施25次循環部分進行下述反應。模板引子1 引子4 1 0 X b u f f e r 緩衝液（C1 ο n t e c h) 20mmol/L dNTPs(Clontech) AdvantageHF2 DNA聚合酶（Clontech) 以dH2〇調整全量爲50 // L 反應條件 94°C (熱變性） 57°C (鍛燒） 68°C (引子延伸反應）本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）_ 35

使用其反應液的 10ng 20pmole 20pmole 5 β L 5 β L 1 β L 30秒 30秒 3分 200300798 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 _ B7五、發明説明（32) 上述作爲1次循環，實施32次循環。目的片段由瓊脂糖電泳後切出、純化（片段3 )。片段3插入以EcoRV切斷之 pT7Blue載體（Novagen)，轉形至大腸菌中。由插入正確的鹼基序列之克隆（clone )調製出質體，使用限制酶ΚρηΙ及 Bglll切出插入片段，次選殖於桿狀病毒轉移載體pPSC8。利用上述轉移載體依據常法得到目的蛋白質。目的蛋白質的濃度由西方墨點法求得。酵素活性的測定以3-〔 2- ( Ν,Ν-二乙基胺）乙基〕-7-甲氧基-4-甲基香豆素（以下稱爲AMMC: GENTES)爲基質之螢光法做測定。9 6溝的微滴皿中每1溝中添加1 0 0 // L的 NADPH-Cofactor mix ( 1.75// L Cofactors(GENTEST)、 1 // L GAPDH、0.67V // L 對照組蛋白質（GENTEST )及 96.5 8 // LH20 )。進行37°C 10分鐘的預加熱後，每1溝中添力口 100 // L的經加溫的酵素/基質混合物（69.25 // L H20 、75 // L 2 // 1 15nmol/L AMMC )。進行 37°C 下 30分鐘反應後，添加75//L的反應停止液（0.5mmol/L Tris Base)後，測定其螢光強度（Ex 3 90nm，Em 460nm)。(Π)結果 CYP2D6 氺 1 (野生型）作爲 100 時 CYP2D6unknown3 的酵素活性爲5 %以下。推測爲具有該基因的固體，與具有野生型基因的個體做比較，CYP2D6作爲責任代謝酵素的化合物代謝會延遲。又，本多型基因與野生型比較有3處之胺基酸被取代，以基質特異性而言其作用與野生型相異。因此本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）_ 36 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 200300798 A7 B7 五、發明説明（33) ，於預測投與藥物時之藥效及副作用時，必須調查基因組上的基因多型，及觀察使用微粒體與組合蛋白質之藥物的作用。產業上可利用性本發明中鑑定CYP2D6基因的新穎多型。利用本發明所鑑定的多型基因之情報，可判斷投與藥物之被驗者對藥物的代謝活性、或可檢索新穎藥物。五、圖示簡單說明圖1表示檢測出的CYP2D6變異部位與出現頻率° --------β-裝-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（。呢）八4規格（210父297公釐）_37- v _ —— 200300798 A7 B7 五’、發明説明（

SEQUENCE LISTING <110> Tsumura Inc. <120〉CYP2D6 突變基因 <130> FA2566A/TW <160> 56 <210〉 1 <211〉 4500 <212> DNA <213〉人類· <400> 1 atggggctag aagcactggt gcccctggcc gtgatagtgg ccatcttcct gctcctggtg 60 gacctgatgc accggcgcca acgctgggct gcacgctact caccaggccc cctgccactg 120 cccgggctgg gcaacctgct gcatgtggac ttccagaaca caccatactg cttogaccag 180 gtgagggagg aggtcctgga gggcggcaga ggtgctgagg ctcccctaco agaagcaaac 240 atggatggtg ggtgaaacca caggctggac cagaagccag gctgagaagg ggaagcaggt 300 ttgggggacg tcctggagaa gggcatttat acatggcatg aaggactgga ttttccaaag 360 gccaaggaag agtagggcaa gggcctggag gtggagctgg acttggcagt gggcatgcaa 420 gcccattggg caacatatgt tatggagtac aaagtccctt ctgctgacac cagaaggaaa 480 ggccttggga atggaagatg agttagtcct gagtgccgtt taaatcacga aatcgaggat 540 gaagggggtg cagtgacccg gttcaaacct tttgcactgt gggtcctcgg gcctcactgc 600 ctcaccggca tggaccatca tctgggaatg ggatgctaac tggggcctct cggcaatttt 660 ggtgactctt gcaaggtcat acctgggtga cgcatccaaa ctgagttcct ccatcacaga 720 aggtgtgacc cccacccccg ccccacgatc aggaggctgg gtctcctcct tccacctgct 780 cactcctggt agccccgggg gtcgtccaag gttcaaatag gactaggacc tgtagtctgg 840 ggtgatcctg gcttgacaag aggccctgac cctccctctg cagttgcggc gccgcttcgg 900 ggacgtgttc agcctgcagc tggcctggac gccggtggtc gtgctcaatg ggctggcggc 960 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 x 297公釐） . -38 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝·

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 200300798 A7 B7 五、發明説明（ cgtgcgcgag gcgctggtga cccacggcga ggacaccgcc gaccgcccgc ctgtgcccat 1020 cacccagatc ctgggttttg ggccgcgttc ccaaggcaag cagcggtggg gacagagaca 1080 gatttccgtg ggacccgggt gggtgatgac cgtagtccga gctgggcaga gagggcgcgg 1140 ggtcgtggac atgaaacagg ccagcgagtg gggacagcgg gccaagaaac cacctgcact 1200 agggaggtgt gagcatgggg acgagggcgg ggcttgtgac gagtgggcgg ggccactgcc 1260 gagacctggc aggagcccaa tgggtgagcg tggcgcattt cccagctgga atccggtgtc 1320 gaagtggggg cggggaccgc acctgtgctg taagctcagt gtgggtggcg cggggcccgc 1380 ggggtcttcc ctgagtgcaa aggcggtcag ggtgggcaga gacgaggtgg ggcaaagcct 1440 gccccagcca agggagcaag gtggatgcac aaagagtggg ccctgtgacc agctggacag 1500 agccagggac tgcgggagac cagggggagc atagggttgg agtgggtggt ggatggtggg 1560 gctaatgcct tcatggccac gcgcacgtgc ccgtcccacc cccaggggtg ttcctggcgc 1620 gctatgggcc cgcgtggcgc gagcagaggc gcttctccgt ctccaccttg cgcaacttgg 1680 gcctgggcaa gaagtcgctg gagcagtggg tgaccgagga ggccgcctgc ctttgtgccg 1740 ccttcgccaa ccactccggt gggtgatggg cagaagggca caaagcggga actgggaagg 1800 cgggggacgg ggaaggcgac pccttacccg catctcccac ccccaggacg cccctttcgc 1860 cccaacggtc tcttggacaa agccgtgagc aacgtgatcg cctccctcac ctgcgggcgc 1920 cgcttcgagt acgacgaccc tcgcttcctc aggctgctgg acctagctca ggagggactg 1980 aaggaggagt cgggctttct gcgcgaggtg cggagcgaga gaccgaggag tctctgcagg 2040 gcgagctccc gagaggtgcc ggggctggac tggggcctcg gaagagcagg atttgcatag 2100 atgggtttgg gaaaggacat tccaggagac cccactgtaa gaagggcctg gaggaggagg 2160 ggacatctca gacatggtcg tgggagaggt gtgcccgggt cagggggcac caggagaggc 2220 caaggactct gtacctccta tccacgtcag agatttcgat tttaggtttc tcctctgggc 2280 aaggagagag ggtggaggct ggcacttggg gagggacttg gtgaggtcag tggtaaggac 2340 aggcaggccc tgggtctacc tggagatggc tggggcctga gacttgtcca ggtgaacgca 2400 gagcacagga gggattgaga ccccgttctg tctggtgtag gtgctgaatg ctgtccccgt 2460 cctcctgcat atcccagcgc tggctggcaa ggtcctacgc ttccaaaagg ctttcctgac 2520 ccagctggat gagctgctaa ctgagcacag gatgacctgg gacccagccc agcccccccg 2580 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝.

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -39- 200300798 A7 . . B7 五、發明説明（ agacctgact gaggccttcc tggcagagat ggagaaggtg agagtggctg ccacggtggg 2640 gggcaagggt ggtgggttga gcgtcccagg aggaatgagg ggaggctggg caaaaggttg 2700 gaccagtgca tcacccggcg agccgcatct gggctgacag gtgcagaatt ggaggtcatt 2760 tgggggctac cccgttctgt cccgagtatg ctctcggccc tgctcaggcc aaggggaacc 2820 ctgagagcag cttcaatgat gagaacctgt gcatagtggt ggctgacctg ttctctgccg 2880 ggatggtgac cacctcgacc acgctggcct ggggcctcct gctcatgatc ctacatccgg 2940 atgtgcagcg tgagcccatc tgggaaacag tgcaggggcc gagggaggaa gggtacaggc 3000 gggggcccat gaactttgct gggacacccg gggctccaag cacaggcttg accaggatcc 3060 tgtaagcctg acctcctcca acataggagg caagaaggag tgtcagggcc ggaccccctg 3120 ggtgctgacc cattgtgggg acgcatgtct gtccaggccg tgtccaacag gagatcgacg 3180 acgtgatagg gcaggtgcgg cgaccagaga tgggtgacca ggctcacatg ccctacacca 3240 ctgccgtgat tcatgaggtg cagcgctttg gggacatcgt ccccctgggt gtgacccata 3300 tgacatcccg tgacatcgaa gtacagggct tccgcatccc taaggtaggc ctggcgccct 3360 cctcacccca gctcagcacc agcacctggt gatagcccca gcatggctac tgccaggtgg 3420 gcccactcta ggaaccctgg ccacctagtc ctcaatgcca ccacactgac tgtccccact 3480 tgggtggggg gtccagagta taggcagggc tggcctgtcc atccagagcc cccgtctagt 3540 ggggagacaa accaggacct gccagaatgt tggaggaccc aacgcctgca gggagagggg 3600 gcagtgtggg tgcctctgag aggtgtgact gcgccctgct gtggggtcgg agagggtact 3660 gtggagcttc tcgggcgcag gactagttga cagagtccag ctgtgtgcca ggcagtgtgt 3720 gtcccccgtg tgtttggtgg caggggtccc agcatcctag agtccagtcc ccactctcac 3780 cctgcatctc ctgcccaggg aacgacactc atcaccaacc tgtcatcggt gctgaaggat 3840 gaggccgtct gggagaagcc cttccgcttc caccccgaac acttcctgga tgcccagggc 3900 cactttgtga agccggaggc cttcctgcct ttctcagcag gtgcctgtgg ggagcccggc 3960 tccctgtccc cttccgtgga gtcttgcagg ggtatcaccc aggagccagg ctcactgacg 4020 cccctcccct ccccacaggc cgccgtgcat gcctcgggga gcccctggcc cgcatggagc 4080 tcttcctctt cttcacctcc ctgctgcagc acttcagctt ctcggtgccc actggacagc 4140 cccggcccag ccaccatggt gtctttgctt tcctggtgac cccatccccc tatgagcttt 4200 — -----——-— --— 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝·

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -40- 200300798 A7 B7 五、發明説明（ gtgctgtgcc ccgctagaat ggggtaccta gtccccagcc tgctccctag ccagaggctc 4260 taatgtacaa taaagcaatg tggtagttcc aactcgggtc ccctgctcac gccctcgttg 4320 ggatcatcct cctcagggca accccacccc tgcctcattc ctgcttaccc caccgcctgg 4380 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ccgcatttga gacaggggta cgttgaggct gagcagatgt cagttaccct tgcccataat 4440 cccatgtccc ccactgaccc aactctgact gcccagattg gtgacaagga ctacattgtc 4500 <210〉 2 <211〉 1567 <212〉 DNA <213〉人類 <400> 2 atg ggg eta gaa gca ctg gtg ccc ctg gee gtg ata gtg gee ate ttc 48

Met Gly Leu Glu Ala Leu Val Pro Leu Ala Val He Val Ala He Phe 1 5 10 15 ctg etc ctg gtg gac ctg atg cac egg ege caa ege tgg get gca ege 96

Leu Leu Leu Val Asp Leu Met His Arg Arg Gin Arg Trp Ala Ala Arg 20 25 30 tac tea cca ggc ccc ctg cca ctg ccc ggg ctg ggc aac ctg ctg cat 144

Tyr Ser Pro Gly Pro Leu Pro Leu Pro Gly Leu Gly Asn Leu Leu His 35 40 45 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 gtg gac ttc cag aac aca cca tac tgc ttc gac cag ttg egg ege ege 192

Val Asp Phe Gin Asn Thr Pro Tyr Cys Phe Asp Gin Leu Arg Arg Arg 50 55 60 ttc ggg gac gtg ttc age ctg cag ctg gee tgg aeg ccg gtg gtc gtg 240

Phe Gly Asp Val Phe Ser Leu Gin Leu Ala Trp Thr Pro Val Val Val 65 70 75 80 etc aat ggg ctg geg gee gtg ege gag geg ctg gtg acc cac ggc gag 288 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x 297公釐） -41 - 200300798 A7 B7 五、發明説明（

Leu Asn Gly Leu Ala Ala Val Arg Glu Ala Leu Val Thr His Gly Glu 85 90 95 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) gac acc gcc gac cgc ccg cct gtg ccc ate acc cag ate ctg ggt ttc 336 Asp Thr Ala Asp Arg Pro Pro Val Pro lie Thr Gin lie Leu Gly Phe 100 105 Π0 ggg ccg cgt tcc caa ggg gtg ttc ctg geg cgc tat ggg ccc geg tgg 384 Gly Pro Arg Ser Gin Gly Val Phe Leu Ala Arg Tyr Gly Pro Ala Trp 115 120 125 cgc gag cag agg cgc ttc tcc gtc tcc acc ttg cgc aac ttg ggc ctg 432 Arg Glu Gin Arg Arg Phe Ser Val Ser Thr Leu Arg Asn Leu Gly Leu 130 135 140 ggc aag aag teg ctg gag cag tgg gtg acc gag gag gcc gcc tgc ett 480 Gly Lys Lys Ser Leu Glu Gin Trp Val Thr Glu Glu Ala Ala Cys Leu 145 150 155 160 tgt gcc gcc ttc gcc aac cac tcc gga cgc ccc ttt cgc ccc aac ggt 528 Cys Ala Ala Phe Ala Asn His Ser Gly Arg Pro Phe Arg Pro Asn Gly 165 170 175 etc ttg gac aaa gcc gtg age aac gtg ate gcc tcc etc acc tgc ggg 576

Leu Leu Asp Lys Ala Val Ser Asn Val lie Ala Ser Leu Thr Cys Gly 180 185 190 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 cgc cgc ttc gag tac gac gac cct cgc ttc etc agg ctg ctg gac eta 624

Arg Arg Phe Glu Tyr Asp Asp Pro Arg Phe Leu Arg Leu Leu Asp Leu 195 200 205 get cag gag gga ctg aag gag gag teg ggc ttt ctg cgc gag gtg ctg 672

Ala Gin Glu Gly Leu Lys Glu Glu Ser Gly Phe Leu Arg Glu Val Leu 210 215 220 aat get gtc ccc gtc etc ctg cat ate cca geg ctg get ggc aag gtc 720 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇><297公釐） -42- 200300798 A7 B7 五、發明説明（

Asn Ala Val Pro Val Leu Leu His lie Pro Ala Leu Ala Gly Lys Val 225 230 235 240 eta ege ttc caa aag get ttc ctg acc cag ctg gat gag ctg eta act 768 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Leu Arg Phe Gin Lys Ala Phe Leu Thr Gin Leu Asp Glu Leu Leu Thr 245 250 255 gag cac agg atg acc tgg gac cca gcc cag ccc ccc ega gac ctg act 816

Glu His Arg Met Thr Trp Asp Pro Ala Gin Pro Pro Arg Asp Leu Thr 260 265 270 gag gcc ttc ctg gca gag atg gag aag gcc aag ggg aac cct gag age 864

Glu Ala Phe Leu Ala Glu Met Glu Lys Ala Lys Gly Asn Pro Glu Ser 275 280 285 age ttc aat gat gag aac ctg tgc ata gtg gtg get gac ctg ttc tet 912

Ser Phe Asn Asp Glu Asn Leu Cys lie Val Val Ala Asp Leu Phe Ser 290 295 300 gcc ggg atg gtg acc acc teg acc aeg ctg gcc tgg ggc etc ctg etc 960

Ala Gly Met Val Thr Thr Ser Thr Thr Leu Ala Trp Gly Leu Leu Leu 305 310 315 320 atg ate eta cat ccg gat gtg cag ege cgt gtc caa cag gag ate gac 1008

Met He Leu His Pro Asp Val Gin Arg Arg Val Gin Gin Glu lie Asp 325 330 335 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 gac gtg ata ggg cag gtg egg ega cca gag atg ggt gac cag get cac 1056

Asp Val lie Gly Gin Val Arg Arg Pro Glu Met Gly Asp Gin Ala His 340 345 350 atg ccc tac acc act gcc gtg att cat gag gtg cag ege ttt ggg gac Π04

Met Pro Tyr Thr Thr Ala Val lie His Glu Val Gin Arg Phe Gly Asp 355 360 365 ate gtc ccc ctg ggt gtg acc cat atg aca tee cgt gac ate gaa gta 1152 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2l〇x 297公釐） -43- 200300798 A7 , _B7____ 主、發明説明（40 lie Val Pro Leu Gly Val Thr His Met Thr Ser Arg Asp lie Glu Val 370 375 380 cag ggc ttc cgc ate cct aag gga aeg aca etc ate acc aac ctg tea 1200 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Gin Gly Phe Arg He Pro Lys Gly Thr Thr Leu lie Thr Asn Leu Ser 385 390 395 400 teg gtg ctg aag gat gag gee gtc tgg gag aag ccc ttc cgc ttc cac 1248

Ser Val Leu Lys Asp Glu Ala Val Trp Glu Lys Pro Phe Arg Phe His 405 410 415 ccc gaa cac ttc ctg gat gee cag ggc cac ttt gtg aag ccg gag gee 1296

Pro Glu His Phe Leu Asp Ala Gin Gly His Phe Val Lys Pro Glu Ala 420 425 430 ttc ctg cct ttc tea gca ggc cgc cgt gca tgc etc ggg gag ccc ctg 1344

Phe Leu Pro Phe Ser Ala Gly Arg Arg Ala Cys Leu Gly Glu Pro Leu 435 440 445 gee cgc atg gag etc ttc etc ttc ttc acc tee ctg ctg cag cac ttc 1392

Ala Arg Met Glu Leu Phe Leu Phe Phe Thr Ser Leu Leu Gin His Phe 450 455 460 age ttc teg gtg ccc act gga cag ccc egg ccc age cac cat ggt gtc 1440

Ser Phe Ser Val Pro Thr Gly Gin Pro Arg Pro Ser His His Gly Val 465 470 475 480 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ttt get ttc ctg gtg acc cca tee ccc tat gag ett tgt get gtg ccc 1488

Phe Ala Phe Leu Val Thr Pro Ser Pro Tyr Glu Leu Cys Ala Val Pro 485 490 495 cgc tag aat ggg gta cct agt ccc cag cct get cct age cca gag get 1536 Arg eta atg tac aat aaa gca atg tgg tag ttc c 1567 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐） -44- 200300798 A7 B7 五、發明説明（4) <210〉 3 <211> 1567 <212〉 DNA <213〉I人類 l <400> 3 atg ggg eta gaa gca ctg gtg ccc ctg gee gtg ata gtg gee ate ttc 48

Met Gly Leu Glu Ala Leu Val Pro Leu Ala Val He Val Ala lie Phe 15 10 15 ctg etc ctg gtg gac ctg atg cac egg ege caa ege tgg get gca ege 96

Leu Leu Leu Val Asp Leu Met His Arg Arg Gin Arg Trp Ala Ala Arg 20 25 30 tac tea cca ggc ccc ctg cca ctg ccc ggg ctg ggc aac ctg ctg cat 144 Tyr Ser Pro Gly Pro Leu Pro Leu Pro Gly Leu Gly Asn Leu Leu His 35 40 45 gtg gac ttc cag aac aca cca tac tgc ttc gac cag ttg egg ege ege 192 Val Asp Phe Gin Asn Thr Pro Tyr Cys Phe Asp Gin Leu Arg Arg Arg 50 55 60 ttc ggg gac gtg ttc age ctg cag ctg gee tgg aeg ccg gtg gtc gtg 240 Phe Gly Asp Val Phe Ser Leu Gin Leu Ala Trp Thr Pro Val Val Val 65 70 75 80 etc aat ggg ctg geg gee gtg ege gag geg ctg gtg ace cac ggc gag 288 Leu Asn Gly Leu Ala Ala Val Arg Glu Ala Leu Val Thr His Gly Glu 85 90 95 gac acc gee gac ege ccg cct gtg ccc ate acc cag ate ctg ggt ttt 336 Asp Thr Ala Asp Arg Pro Pro Val Pro lie Thr Gin lie Leu Gly Phe 100 105 110 ggg ccg cgt tee caa ggg gtg ttc ctg geg ege tat ggg ccc geg tgg 384 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇><297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -45- 200300798 A7 B7 五 - 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製發明説明（4)

Gly Pro Arg Ser Gin Gly Val Phe Leu Ala Arg Tyr Gly Pro Ala Trp 115 120 125 cgc gag cag agg cgc ttc tcc gtc tcc acc ttg cgc aac ttg ggc ctg 432 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Arg Glu Gin Arg Arg Phe Ser Val Ser Thr Leu Arg Asn Leu Gly Leu 130 135 140 ggc aag aag teg ctg gag cag tgg gtg acc gag gag gcc gcc tgc ett 480

Gly Lys Lys Ser Leu Glu Gin Trp Val Thr Glu Glu Ala Ala Cys Leu 145 150 155 160 tgt gcc gcc ttc gcc aac cac tcc gga cgc ccc ttt cgc ccc aac ggt 528

Cys Ala Ala Phe Ala Asn His Ser Gly Arg Pro Phe Arg Pro Asn Gly 165 170 175 etc ttg gac aaa gcc gtg age aac gtg ate gcc tcc etc acc tgc ggg 576

Leu Leu Asp Lys Ala Val Ser Asn Val lie Ala Ser Leu Thr Cys Gly 180 185 190 cgc cgc ttc gag tac gac gac cct cgc ttc etc agg ctg ctg gac eta 624

Ala Gin Glu Gly Leu Lys Glu Glu Ser Gly Phe Leu Arg Glu Val Leu 210 215 220 aat get gtc ccc gtc etc ctg cat ate cca geg ctg get ggc aag gtc 720

Asn Ala Val Pro Val Leu Leu His lie Pro Ala Leu Ala Gly Lys Val 225 230 235 240 eta cgc ttc caa aag get ttc ctg acc cag ctg gat gag ctg eta act 768

Leu Arg Phe Gin Lys Ala Phe Leu Thr Gin Leu Asp Glu Leu Leu Thr 245 250 255 gag cac agg atg acc tgg gac cca gcc cag ccc ccc ega gac ctg act 816 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（x 297公釐） -46- 200300798 A7 ' * B7 五、發明説明（43

Glu His Arg Met Thr Trp Asp Pro Ala Gin Pro Pro Arg Asp Leu Thr 260 265 270 gag gcc ttc ctg gca gag atg gag aag gcc aag ggg aac cct gag age 864 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Glu Ala Phe Leu Ala Glu Met Glu Lys Ala Lys Gly Asn Pro Glu Ser 275 280 285 age ttc aat gat gag aac ctg ege ata gtg gtg get gac ctg ttc ett 912

Ser Phe Asn Asp Glu Asn Leu Arg He Val Val Ala Asp Leu Phe Leu 290 295 300 gcc ggg atg gtg acc acc teg acc aeg ctg gcc tgg ggc etc ctg etc 960

Met lie Leu His Pro Asp Val Gin Arg Arg Val Gin Gin Glu lie Asp 325 330 335 gac gtg ata ggg cag gtg egg ega cca gag atg ggt gac cag get cac 1056

Asp Val He Gly Gin Val Arg Arg Pro Glu Met Gly Asp Gin Ala His 340 345 350 atg ccc tac acc act gcc gtg att cat gag gtg cag ege ttt ggg gac 1104

Met Pro Tyr Thx Thr Ala Val lie His Glu Val Gin Arg Phe Gly Asp 355 360 365 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ate gtc ccc ctg ggt gtg acc cat atg aca tee cgt gac ate gaa gta 1152 lie Yal Pro Leu Gly Val Thr His Met Thr Ser Arg Asp lie Glu Val 370 375 380 cag ggc ttc ege ate cct aag gga aeg aca etc ate acc aac ctg tea 1200

Gin Gly Phe Arg lie Pro Lys Gly Thr Thr Leu lie Thr Asn Leu Ser 385 390 395 400 teg gtg ctg aag gat gag gcc gtc tgg gag aag ccc ttc ege ttc cac 1248 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 公釐） -47 - 200300798 A7 B7 五、發明説明（d

Ser Val Leu Lys Asp Glu Ala Val Trp Glu Lys Pro Phe Arg Phe His 405 410 415 ccc gaa cac ttc ctg gat gcc cag ggc cac ttt gtg aag ccg gag gcc 1296

Pro Glu His Phe Leu Asp Ala Gin Gly His Phe Val Lys Pro Glu Ala 420 425 430 ttc ctg cct ttc tea gca ggc ege cgt gca tgc etc ggg gag ccc ctg 1344

Phe Leu Pro Phe Ser Ala Gly Arg Arg Ala Cys Leu Gly Glu Pro Leu 435 440 445 gcc ege atg gag etc ttc etc ttc ttc acc tee ctg ctg cag cac ttc 1392

Ser Phe Ser Val Pro Thr Gly Gin Pro Arg Pro Ser His His Gly Val 465 470 475 480 ttt get ttc ctg gtg acc cca tee ccc tat gag ett tgt get gtg ccc 1488

Phe Ala Phe Leu Val Thr Pro Ser Pro Tyr Glu Leu Cys Ala Val Pro 485 490 495 ege tag aat ggg gta cct agt ccc cag cct get cct age cca gag get 1536 Arg eta atg tac aat aaa gca atg tgg tag ttc c 1567

<210〉 4 <211〉 1567 <212〉 DNA <213〉人類 <400〉 4 atg ggg eta gaa gca ctg gtg ccc ctg gcc gtg ata gtg gcc ate ttc 48 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公羡） I--.——^---— I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、11 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 •48- 200300798 A7 B7 五、發明説明（

Met Gly Leu Glu Ala Leu Val Pro Leu Ala Val lie Val Ala lie Phe 1 5 10 15 ctg etc ctg gtg gac ctg atg cac egg ege caa ege tgg get. gca ege 96 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Leu Leu Leu Val Asp Leu Met His Arg Axg Gin Arg Trp Ala Ala Arg 20 25 30 tac cca cca ggc ccc ctg cca ctg ccc ggg ctg ggc aac ctg ctg cat 144

Tyr Pro Pro Gly Pro Leu Pro Leu Pro Gly Leu Gly Asn Leu Leu His 35 40 45 gtg gac ttc cag aac aca cca tac tgc ttc gac cag ttg egg ege ege 192

Phe Gly Asp Val Phe Ser Leu Gin Leu Ala Trp Thr Pro Val Val Val 65 70 75 80 etc aat ggg ctg geg gee gtg ege gag geg ctg gtg acc cac ggc gag 288

Leu Asn Gly Leu Ala Ala Val Arg Glu Ala Leu Val Thr His Gly Glu 85 90 95 gac acc gee gac ege ccg cct gtg ccc ate acc cag ate ctg ggt ttc 336

Asp Thr Ala Asp Arg Pro Pro Val Pro lie Thr Gin lie Leu Gly Phe 100 105 110 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ggg ccg cgt tee caa ggg gtg ttc ctg geg ege tat ggg ccc geg tgg 384

Gly Pro Arg Ser Gin Gly Val Phe Leu Ala Arg Tyr Gly Pro Ala Trp 115 120 125 ege gag cag agg ege ttc tee gtc tee acc ttg ege aac ttg ggc ctg 432

Arg Glu Gin Arg Arg Phe Ser Val Ser Thr Leu Arg Asn Leu Gly Leu 130 135 140 ggc aag aag teg ctg gag cag tgg gtg acc gag gag gee gee tgc ett 480 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） - 49- 200300798 A7 、 B7____ 五、發明説明（θ

Gly Lys Lys Ser Leu Glu Gin Trp Val Thr Glu Glu Ala Ala Cys Leu 145 150 155 160 tgt gcc gcc ttc gcc aac cac tcc gga cgc ccc ttt cgc ccc aac ggt 528 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Cys Ala Ala Phe Ala Asn His Ser Gly Arg Pro Phe Arg Pro Asn Gly 165 170 175 etc ttg gac aaa gcc gtg age ^ac gtg ate gcc tcc etc acc tgc ggg 576

Leu Arg Phe Gin Lys Ala Phe Leu Thr Gin Leu Asp Glu Leu Leu Thr 245 250 255 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 gag cac agg atg acc tgg gac cca gcc cag ccc ccc ega gac ctg act 816

Glu Ala Phe Leu Ala Glu Met Glu Lys Ala Lys Gly Asn Pro Glu Ser 275 280 285 age ttc aat gat gag aac ctg cgc ata gtg gtg get gac ctg ttc tet 912 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐） -50- 200300798 A7 _ B7 ____ 五、發明説明（θ

Ser Phe Asn Asp Glu Asn Leu Arg lie Val Val Ala Asp Leu Phe Ser 290 295 300 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) gcc ggg atg gtg acc acc teg acc aeg ctg gec tgg ggc etc ctg etc 960

Ala Gly Met Yal Thr Thr Ser Thr Thr Leu Ala Trp Gly Leu Leu Leu 305 310 315 320 atg ate eta cat ccg gat gtg cag ege cgt gtc caa cag gag ate gac 1008

Met He Leu His Pro Asp Val. Gin Arg Arg Val Gin Gin Glu He Asp 325 330 335 gac gtg ata ggg cag gtg egg ega cca gag atg ggt gac cag get cac 1056

Asp Val lie Gly Gin Val Arg Arg Pro Glu Met Gly Asp Gin Ala His 340 345 350 atg ccc tac acc act gee gtg att cat gag gtg cag ege ttt ggg gac 1104

Met Pro Tyr Thr Thr Ala Val lie His Glu Val Gin Arg Phe Gly Asp 355 360 365 ate gtc ccc ctg ggt gtg acc cat atg aca tee cgt gac ate gaa gta 1152 lie Val Pro Leu Gly Val Thr His Met Thr Ser Arg Asp lie Glu Val 370 375 380 cag ggc ttc ege ate cct aag gga aeg aca etc ate acc aac ctg tea 1200

Gin Gly Phe Arg lie Pro Lys Gly Thr Thr Leu lie Thr Asn Leu Ser 385 390 395 400 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 teg gtg ctg aag gat gag gee gtc tgg gag aag ccc ttc ege ttc cac 1248

Pro Glu His Phe Leu Asp Ala Gin Gly His Phe Val Lys Pro Glu Ala 420 425 430 ttc ctg cct ttc tea gca ggc ege cgt gca tgc etc ggg gag ccc ctg 1344 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐） -51 - 200300798 A7 , B7______ 五、發明説明（以

Phe Leu Pro Phe Ser Ala Gly Arg Arg Ala Cys Leu Gly Glu Pro Leu 435 440 445 gcc cgc atg gag etc ttc etc ttc ttc acc tcc ctg ctg cag cac ttc 1392 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Ser Phe Ser Val Pro Thr Gly Gin Pro Arg Pro Ser His His Gly Val 465 470 475 480 ttt get ttc ctg gtg age cca tcc ccc tat gag ett tgt get gtg ccc 1488 Phe Ala Phe Leu Val Ser Pro Ser Pro Tyr Glu Leu Cys Ala Val Pro 485 490 495 cgc tag aat ggg gta cot agt ccc cag cct get cct age cca gag get 1536 Arg eta atg tac aat aaa gca atg tgg tag ttc c 1567 <210〉 5 <211〉 1567 <212> DNA <213〉人類/ <400〉 5 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 atg ggg eta gaa gca ctg gtg ccc ctg gcc gtg ata gtg gcc ate ttc 48

Met Gly Leu Glu Ala Leu Val Pro Leu Ala Val lie Val Ala lie Phe 1 5 10 15 ctg etc ctg gtg gac ctg atg cac egg cgc caa cgc tgg get gca cgc 96

Leu Leu Leu Val Asp Leu Met His Arg Arg Gin Arg Trp Ala Ala Arg 20 25 30 tac tea cca ggc ccc ctg cca ctg ccc ggg ctg ggc aac ctg ctg cat 144 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -52- 200300798 A7 _B7_____ 五、發明説明（β

Tyr Ser Pro Gly Pro Leu Pro Leu Pro Gly Leu Gly Asn Leu Leu His 35 40 45 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) gtg gac ttc cag aac aca cca tac tgc ttc gac cag ttg egg ege ege 192

Leu Asn Gly Leu Ala Ala Val Arg Glu Ala Leu Val Thr His Gly Glu 85 90 95 gac acc gee gac ege ccg cot gtg ccc ate acc cag ate ctg ggt ttc 336

Asp Thr Ala Asp Arg Pro Pro Val Pro lie Thr Gin lie Leu Gly Phe 100 105 110 ggg ccg cgt tee caa ggg gtg ttc ctg geg ege tat ggg ccc geg tgg 384

Gly Pro Arg Ser Gin Gly Val Phe Leu Ala Arg Tyr Gly Pro Ala Trp 115 120 125 c^c gag cag agg ege ttc tee gtg tee acc ttg ege aac ttg ggc ctg 432

Arg Glu Gin Arg Arg Phe Ser Val Ser Thr Leu Arg Asn Leu Gly Leu 135 140 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ggc aag aag teg ctg gag cag tgg gtg acc gag gag gee gee tgc ett 480

Gly Lys Lys Ser Leu Glu Gin Trp Val Thr Glu Glu Ala Ala Cys Leu 145 150 155 160 tgt gee gee ttc gee aac cac tee gga ege ccc ttt ege ccc aac ggt 528

Cys Ala Ala Phe Ala Asn His Ser Gly Arg Pro Phe Arg Pro Asn Gly 165 170 175 etc ttg gac aaa gee gtg age aac gtg ate gee tee etc acc tgc ggg 576 — 一 _ ‘ > 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -53- 200300798 A7 B7 一五經濟部智慧財產局8工消費合作社印製發明説明（50 Leu Leu Asp Lys Ala Val Ser Asn Val lie Ala Ser Leu Thr Cys Gly 180 185 19〇 cgc cgc ttc gag tac gac gac cct cgc ttc etc agg ctg ctg gac eta 624 Arg Arg Phe Glu Tyr Asp Asp Pro Arg Phe Leu Arg Leu Leu Asp Leu 195 200 205 get cag gag gga ctg aag gag gag teg ggc ttt ctg cgc gag gtg ctg 672 Ala Gin. Glu Gly Leu Lys Glu Glu Ser Gly Phe Leu Arg Glu Val Leu 210 215 220 aat get gtc ccc gtc etc ctg cat ate cca geg ctg get ggc aag gtc 720 Asn Ala Val Pro Val Leu Leu His lie Pro Ala Leu Ala Gly Lys Val 225 230 235 240 eta cgc ttc caa aag get ttc ctg acc cag ctg gat gag ctg eta act 768 Leu Arg Phe Gin Lys Ala Phe Leu Thr Gin Leu Asp Glu Leu Leu Thr 245 250 255 gag cac agg atg acc tgg gac cca gcc cag ccc ccc ega gac ctg act 816 Glu His Arg Met Thr Trp Asp Pro Ala Gin Pro Pro Arg Asp Leu Thr 260 265 270 gag gcc ttc ctg gca gag atg gag aag gcc aag ggg aac cct gag age 864 Glu Ala Phe Leu Ala Glu Met Glu Lys Ala Lys Gly Asn Pro Glu Ser 275 280 285 age ttc aat gat gag aac ctg cgc ata gtg gtg get gac ctg ttc tet 912 Ser Phe Asn Asp Glu Asm Leu Arg lie Val Val Ala Asp Leu Phe Ser 290 295 300 gcc ggg atg gtg acc acc teg acc aeg ctg gcc tgg ggc etc ctg etc 960 Ala Gly Met Val Thr Thr Ser Thr Thr Leu Ala Trp Gly Leu Leu Leu 305 310 315 320 atg ate eta cat ccg gat gtg cag cgc cgt gtc caa cag gag ate gac 1008 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) (裝· 訂本紙張尺度適用中關家標準（CNS)M規格（2i〇x297公釐） -54- 200300798 A7 B7 五、發明説明（y

Met He Leu His Pro Asp Val Gin Arg Arg Val Gin Gin Glu He Asp 325 330 335 gac gtg ata ggg cag gtg egg ega cca gag atg ggt gac cag get cac 1056 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

Asp Val lie Gly Gin Val Arg Arg Pro Glu Met Gly Asp Gin Ala His 340 345 350 atg ccc tac acc act gcc gtg att cat gag gtg cag ege ttt ggg gac 1104

Met Pro Tyr Thr Thr Ala Val lie His Glu Val Gin Arg Phe Gly Asp 355 360 365 ate gtc ccc ctg ggt gtg acc cat atg aca tec cgt gac ate gaa gta 1152 lie Val Pro Leu Gly Val Thr His Met Thr Ser Arg Asp lie Glu Val 370 375 380 cag ggc ttc ege ate cct aag gga aeg aca etc ate acc aac ctg tea 1200 Gin Gly Phe Arg He Pro Lys Gly Thr Thr Leu He Thr Asn Leu Ser 385 390 395 400 teg gtg ctg aag gat. gag gee gtc tgg gag aag ccc ttc ege ttc cac 1248

Ser Val Leu Lys Asp Glu Ala Val Trp Glu Lys Pro Phe Arg Phe His 405 410 415 ccc gaa cac ttc ctg gat gcc cag ggc cac ttt gtg aag ccg gag gee 1296 Pro Glu His Phe Leu Asp Ala Gin Gly His Phe Val Lys Pro Glu Ala 420 425 430 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ttc ctg cct ttc tea gca ggc ege cgt gca tgc etc ggg gag ccc ctg 1344 Phe Leu Pro Phe Ser Ala Gly Arg Arg Ala Cys Leu Gly Glu Pro Leu 435 440 445 gcc ege atg gag etc ttc etc ttc ttc acc tee ctg ctg cag cac ttc 1392 Ala Arg Met Glu Leu Phe Leu Phe Phe Thr Ser Leu Leu Gin His Phe 450 455 460 age ttc teg gtg ccc act gga cag ccc egg ccc age cac cat ggt gtc 1440 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -55- 200300798 A7 B7

五、發明説明（

Ser Phe Ser Val Pro Thr Gly Gin Pro Arg Pro Ser His His Gly Val 465 470 475 480 ttt get ttc ctg gtg age cca tcc ccc tat gag ett tgt get gtg ccc 1488 Phe Ala Phe Leu Val Ser Pro Ser Pro Tyr Glu Leu Cys Ala Val Pro 485 490 495 ege tag aat ggg gta cct agt ccc cag cct get cct age cca gag get 1536 Arg eta atg tac aat aaa gca atg tgg tag ttc c 1567 〈210〉 6 <211〉 21 〈212〉 DNA <213〉人造序列1 - <220〉、 <223>1人造序列的描述：合成DNA <400〉 6 gcaaaggcca tcatcagctc c 21 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝· 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 7 <211〉 20 <212> DNA <213〉人造序列 1 <220〉 <223>人造序列的描述·合成DNA <400〉 7 tctggtaggg gagcctcagc 20 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -56- 200300798 A7 B7 五、發明説明（ <210〉 8 <211> 20

<212> DNA (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) <213〉1人造序列 <220〉 <223〉人造序列的描述:合成!^^^ <400〉 8 taggacctgt agtctggggt 20

<210〉 9 <2H> 20 <212> DNA <213>人造序列、 <220〉 <223〉人造序列的描述：合成DNA <400> 9 gctcggacta cggtcatcac 20 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

<210> 1〇 <211〉 20 <212> DNA 〈213> .人造序列 <220> <223〉人造序列的描述：合成DNA <400> 10 cgggagacca gggggagcat 20 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -57- 200300798 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 B7五、發明説明（54 <210〉 11 <211> 20 <212〉 DNA <213〉人造序列：、 <220〉 <223〉人造序列的描述：合成DNA <400> Π ggtgggagat gcgggtaagg 20 <210〉 12 <2Π> 20 <212> DNA <213> ;人造序列、 <220> 〈223> _人造序列的描述：合成DNA <400〉 12 aaagcgggaa ct.gggaaggc 20 <210> 13 <211> 20 <212> DNA <213〉人造序列丨、 <220〉 <223〉人造序列的描述··合成DNA <400> 13 tgctcttccg aggccccagt 20 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 加本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -58- 200300798 A7 B7 五、發明説明（5合 <210〉 14 <211〉 20

<212〉 DNA (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) <213〉人造序列 <220〉

<223〉人造序列的描述：合成DNA <400> 14 gagatggctg gggcctgaga 20 <210> 15 <211> 20 <212〉 DNA <213〉.人造序列 <220〉

〈223> 人造序列的描述：合成DNA <400〉 15 ccaacctttt gcccagcctc 20 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

<210〉 16 <211〉 20 <212〉 DNA <213〉人造序列 * <220〉 <223> .人造序列的描述：合成dna <400〉 16 cccgttctgt cccgagtatg 20 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格(· 210X 297公釐） -59- 200300798 A7 , Β7 五、發明説明（5》 <210> 17

<211〉 20 <212> DNA (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 人導序列 / Λ <220〉 <223> 人造序列的描述：合成DNA <400> 17 ggtgtcccag caaagttcat 20

<21〇> 18 <211〉 22 <212〉 DNA <213>.人造序列 <220〉

<223〉人造序列的描述：合成DNA <400> 18 taagcctgac ctcctccaac at 22 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

<210〉 19 <211> 20 <212〉 DNA <213>人造序列 ’ <220〉

<223> 人造序列的描述··合成DNA <400> 19 agtgggccca cctggcagta 20 本纸張尺度適用中國國家標率（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -60- 200300798 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 i、發明説明（ <210〉 20 <211〉 20 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列的描述：合成DNA <400〉 20 ccccgtgtgt ttggtggcag 20 <210〉 21 <211〉 20 <212> DNA <213>人造序列 <220〉 <223> 人造序列的描述：合成DNA <400> 21 cgtcagtgag cctggctcct 20 <210〉 22 <211> 20 <212> DNA <213> .人造序列 <220〉 <223>人造序列的描述：合成DNA <400〉 22 tcttgcaggg gtatcaccca 20 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝· 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -61 - 200300798 A7 . · B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（5έ <210〉 23 <2Π> 20 <212〉 DNA <2U>人造序列 <220〉 <223> 人造序列的描述：合成DNA . ________„ <400〉 23 ttgccctgag gaggatgatc 20 <21〇> 24 <211> 20 <212> DNA <213> 人造序列 <220〉 <223〉人造序列的描述：合成DNA 七 <400〉 24 ctcagcctca acgtacccct 20 <210> 25 <211〉 20 <212〉 DNA <213>人造序列 <220〉 <223〉人造序列的描述：合成DNA v <400〉 25 catttggtag tgaggcaggt 20 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -62- 200300798 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製昱、發明説明（5合 <210〉 26 <211〉 19 <212> DNA <213> 人造序列 <220> <223>人造序列的描述：合成DNA <400〉 26 ctccaggacc tcctccctc 19 <210〉 27 <211> 20 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223>人造序列的描述：合成DNA <400> 27 ggccctgacc ctccctctgc 20 <210〉 28 <211〉 20 <212> DNA 〈213〉人造序列 <220> <223> 人造序列的描述：合成DNA <400〉 28 ctctgtcccc accgctgctt 20 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) C· 訂 i# 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210'〆297公釐） -63- 200300798 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 B7 五、發明説明（60 <210> 29 <211> 16 <212> DNA <213> 人造序列 <220〉 <223〉人造序列的描述：合成DNA <400〉 29 tgcccgtccc accccc 16 <210〉 30 <211〉 19 <212〉 DNA <213> 人造序列 <220〉 <223〉人造序列的描述：合成DNA <400> 30 gcccttctgc ccatcaccc 19 <210〉 31 <211〉 18 <212〉 DNA <213> 人造序列 <220〉 <223>人造序列的描述：合成DNA <400〉 31 cccgcatctc ccaccccc 18 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂 .1# 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -64- 200300798 A7 B7 經濟部，智慧財產局員 X 消費合社印製五、發明説明（6) <210〉 32 <211〉 19 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列的描述：合成DNA <400> 32 cctcggtctc tcgctccgc 19 <210〉 33 <211〉 20 <212〉 DNA <213>人造序列 <220〉 <223〉人造序列的描述：合成DNA <400> 33 gaccccgttc tgtctggtgt 20 <210〉 34 <211> 17 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列的描述：合成DNA <400> 34 ccgtggcagc cactctc 17 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝-

、1T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -65- 200300798 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（ <210> 35 <211〉 20 <212〉 DNA <213> 人造序列 <220〉<223〉人造序列的描述：合成DNA <400〉 35 gtatgctctc ggccctgctc 20 <210〉 36 <211> 20 <212> DNA 〈213> 人造序列 <220〉 <223>人造序列的描述：合成DNA <400> 36 actgtttccc agatgggctc 20 <210〉 37 <211> 20 <212> DNA <213〉，人造序列 <220〉<223〉人造序列的描述：合成DNA <400〉 37 g^ggggacgc atgtctgtcc 20 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -66 - 200300798 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 B7五、發明説明（6知 <210> 38 <211〉 16 <212〉 DNA <213>人造序列 <220><223〉丨人造序列的描述：合成DNA <400> 38 gg^gggcgcc ^ggcct 16 <210> 39 <211〉 20 <212> DNA<213>人造序列 <220><223〉人造序列的描述：合成DNA <400> 39 tcaccctgca tctcctgccc 20 <210> 40 <211〉 17 <212> DNA <213〉人造序列 <220><223> 人造序列的描述··合成DNA <400〉 40 ccgggctccc cacaggc 17 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂 Μ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -67- 200300798 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（64 <210> 41 <211> 15 <212> DNA <213〉.人造序列 <220〉 <223〉人造序列的描述：合成DNA <400> 41 ccctcccctc cccac 15 <210〉 42 <211〉 20 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223>人造序列的描述：合成DNA <400> 42 tggggactag gtaccccatt 20 <210> 43 <2Π> 21 〈212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列的描述：合成DNA <400> 43 gcgacaattc aagtgtggtg a 21 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝'

、1T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -68- 200300798 A7 、， B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（6会 <210〉 44 〈211> 21 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列的描述：合成DNA <400> 44 gcatgagcta aggcacccag a 21 <210〉 45 <211〉 20 <212> DNA <213> 人造序列 <220〉〈223>人造序列的描述：合成DNA <400〉 45 acgctgggct gcacgctacc 20 .<210> 46 <211〉 20 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列的描述：合成DNA <400〉 46 acgctgggct gcacgctact 20 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 、11 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -69- 200300798 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 B7五、發明説明（ <210〉 47 <211〉 22 <212> DNA <213>人造序列 <220〉 • <223>人造序列的描述：合成DNA <400> 47 agcttcaatg atgagaacct go 22 <210> 48 <211〉 22 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223>人造序列的描述：合成DNA <400> 48 agcttcaatg atgagaacct gt 、 22 <210> 49 <211> 20 <212> DNA <213>人造序列 <220〉 <223〉人造序列的描述：合成DNA <400> 49 aggtcagcca ccactatgcg 20 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) C· 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210'〆297公釐） -70- 200300798 A7 ， 1 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（6> <210〉 50 <211〉 20 <212> DNA <213> 人造序列 <220〉 <223〉人造序列的描述：合成DNA <400> 50 aggtcagcca ccactatgca 20 <210> 51 <211〉 20 <212〉 DNA <213>人造序列 <220〉 <223〉人造序列的描述：合成DNA <400〉 51 aagctcatag ggggatgggc 20 <210〉 52 <211〉 20 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223>人造序列的描述：合成DNA <400〉 52 * aagctcatag ggggatgggg 20 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -71 - 200300798 A7 ‘ ‘ B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（6&<210> 53 <211〉 20〈212> DNA<213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序的描述：合成DNA <400> 53 atggggctag aagcactggt 20 <210〉 54 <2Π> 25 <212〉 DNA <213>人造序列 <220〉〈223>人造序列的描述··合成DNA <400〉 54 ggcagggggc ctggtgagta gcgtg 25 <210〉 55 <211> 25 <212> DNA〈213〉人造序列 <220><223〉人造序列的描述：合成DNA <‘400> 55 ctgggctgca cgctactcac caggc 25 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝.

、1T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 公釐） -72- 200300798 A7 * B7 _ I l ，五、發明説明（乂 <210〉 56 <211> 21

<212> DNA <213〉人造序列， <220〉

<223〉人造序列的描述：合成DNA ^etic I <400> 56 ctagcggggc acagcacaaa g 21 I--------裝-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -73-

Claims

200300798 A8 B8 C8 D8 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製六、申請專利範圍 1 1. 一種核酸，其如序列號碼1所記載的鹼基序列中至少 10個連續的核苷酸，其特徵爲含有包含任意選自該鹼基序列的第125號鹼基之G由A取代的變異、第1858號鹼基之C由T 取代的變異、第2874號鹼基之T由C取代的變異、或第2875 號鹼基之C由T取代的變異之多型部位的該核苷酸之10〜1〇〇鹼基的核酸。 2. 如申請專利範圍第1項之核酸，其爲DNA。 3. 如申請專利範圍第1項之核酸，其爲RNA。 4. 一種對偶基因特異性寡核苷酸，其特徵爲含有任意選自序列號碼1所記載的鹼基序列的第1 25號鹼基之G由A取代的變異、第1 85 8號鹼基之C由T取代的變異、第2874號鹼基之T由C取代的變異、或第2875號鹼基之C由T取代的變異之多型部位的序列、或與其互補體進行雜交者。 5. 如申請專利範圍第4項之對偶基因特異性寡核苷酸，其中可作爲探針或引子使用。 6. —種個體的基因多型分析分法，其特徵爲含有 (1 )由個體調製出核酸之步驟；及 (2 )對於步驟（1 )所調製出的核酸，任意選自序列號碼1所記載的鹼基序列的第1 25號鹼基之G由A取代的變異、第1 85 8號鹼基之C由T取代的變異.、第2874號鹼基之T由C 取代的變異、或第2875號鹼基之C由T取代的變異之多型部位的鹼基之決定步驟者。 7. —種藥物代謝活性的判斷分法，其特徵爲含有 (1 )由個體調製出核酸之步驟；本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) " ' " -74- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) £· 訂 200300798 A8 B8 C8 D8 __六、申請專利範圍 2 (2 )對於步驟（1 )所調製出的核酸，任意選自序列號碼1所記載的鹼基序列的第125號鹼基之G由A取代的變異，第1 85 8號鹼基之C由T取代的變異，第2874號鹼基之T由C 取代的變異，或第2875號鹼基之C由T取代的變異之多型部位的鹼基之決定步驟；及 (3 )經步驟（2 )定序出的鹼基情報爲依據，預測該個體之藥劑代謝活性之步驟。 8. —種基因，其特徵爲具有序列號碼2至5中任一記載的鹼基序列者。 9. 一種蛋白質，其特徵爲具有序列號碼2至5中任一記載的胺基酸序列者。 10. —種具有序列號碼2或序列號碼5所記載的鹼基序列之基因檢測方法，其特徵爲對含有對於由個體調製出的核酸，於序列號碼1所記載的鹼基序列中第1〇〇號鹼基的C由T 取代之變異、第2850號鹼基的C由T取代之變異、及第4180 號鹼基的G由C取代之變異有無進行檢測之步驟者。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 75-