[go: up one dir, main page]

TR201810411T4 - Özgün hücre geçirgen süksinat bileşikleri. - Google Patents

Özgün hücre geçirgen süksinat bileşikleri. Download PDF

Info

Publication number
TR201810411T4
TR201810411T4 TR2018/10411T TR201810411T TR201810411T4 TR 201810411 T4 TR201810411 T4 TR 201810411T4 TR 2018/10411 T TR2018/10411 T TR 2018/10411T TR 201810411 T TR201810411 T TR 201810411T TR 201810411 T4 TR201810411 T4 TR 201810411T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
butyl
propyl
acyl
alkyl
formula
Prior art date
Application number
TR2018/10411T
Other languages
English (en)
Inventor
Elmér Eskil
Joakim Hansson Magnus
Henrik Johannes Ehinger Karl
Moss Steven
Original Assignee
Neurovive Pharmaceutical Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=58804197&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=TR201810411(T4) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Neurovive Pharmaceutical Ab filed Critical Neurovive Pharmaceutical Ab
Publication of TR201810411T4 publication Critical patent/TR201810411T4/tr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/265—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carbonic, thiocarbonic, or thiocarboxylic acids, e.g. thioacetic acid, xanthogenic acid, trithiocarbonic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/155—Amidines (), e.g. guanidine (H2N—C(=NH)—NH2), isourea (N=C(OH)—NH2), isothiourea (—N=C(SH)—NH2)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/46—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing sulfur
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
    • A61K8/4906—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with one nitrogen as the only hetero atom
    • A61K8/4926—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with one nitrogen as the only hetero atom having six membered rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
    • A61K8/4973—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with oxygen as the only hetero atom
    • A61K8/498—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with oxygen as the only hetero atom having 6-membered rings or their condensed derivatives, e.g. coumarin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C327/00—Thiocarboxylic acids
    • C07C327/20—Esters of monothiocarboxylic acids
    • C07C327/28—Esters of monothiocarboxylic acids having sulfur atoms of esterified thiocarboxyl groups bound to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C327/00—Thiocarboxylic acids
    • C07C327/20—Esters of monothiocarboxylic acids
    • C07C327/30—Esters of monothiocarboxylic acids having sulfur atoms of esterified thiocarboxyl groups bound to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C327/00—Thiocarboxylic acids
    • C07C327/20—Esters of monothiocarboxylic acids
    • C07C327/32—Esters of monothiocarboxylic acids having sulfur atoms of esterified thiocarboxyl groups bound to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C327/00—Thiocarboxylic acids
    • C07C327/20—Esters of monothiocarboxylic acids
    • C07C327/32—Esters of monothiocarboxylic acids having sulfur atoms of esterified thiocarboxyl groups bound to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by carboxyl groups
    • C07C327/34—Esters of monothiocarboxylic acids having sulfur atoms of esterified thiocarboxyl groups bound to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by carboxyl groups with amino groups bound to the same hydrocarbon radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/68—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D211/72—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/74—Oxygen atoms
    • C07D211/76—Oxygen atoms attached in position 2 or 6
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D281/00—Heterocyclic compounds containing rings of more than six members having one nitrogen atom and one sulfur atom as the only ring hetero atoms
    • C07D281/18—Eight-membered rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D309/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings
    • C07D309/16—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D309/28—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D309/30—Oxygen atoms, e.g. delta-lactones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/10—General cosmetic use
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/12—Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring
    • C07C2601/14—The ring being saturated
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Nitrogen- Or Sulfur-Containing Heterocyclic Ring Compounds With Rings Of Six Or More Members (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)

Abstract

Mevcut buluş özgün hücre geçirgen süksinatlar ve mitokondride ATP üretimini arttırma amaçlı hücre geçirgen süksinat öncülleri sağlar.

Description

TARIFNAME ÖZGÜN HÜCRE GEÇIRGEN SÜKSINAT BILESIKLERI Bulusun Alani Mevcut bulus özgün hücre geçirgen süksinatlar ve mitokondride ATP üretimini arttirma amaçli hücre geçirgen süksinat öncülleri saglar. Ökaryotik hücrede üretilen ve kullanilan ATP'nin büyük kismi, yüksek enerjili elektronlarin Kreb döngüsüyle saglandigi mitokondriyal oksidatif fosforilasyondan kaynaklanir. Kreb döngüsü ara ürünlerinin tamami hücre zarindan kolaylikla geçmemekte olup, bunlardan birisi süksinattir. Yeni hücre geçirgen süksinatlarin saglanmasi, hücresel zar üzerinde geçisi saglamak için tasarlanmistir ve böylece hücre geçirgen süksinatlar, mitokondriyal ATP çiktisini Ayrica mevcut bulus, hücre geçirgen suksinatlar veya süksinat esdegerlerini saglamakta olup, bunlar hücre geçirgen olmalarinin ve sitozolde süksinat salimi yapmalarinin yani sira süksinat türevlerinin kimyasal veya enzimatik hidrolizinden kaynaklanan hidrolitik ürünler tarafindan organizmaya potansiyel olarak ilave enerji saglayabilir. Mevcut bulus ayrica, mevcut bulusun tip ve/veya kozmetik alaninda kullanim için gelismis özelliklere sahip olan bilesiklerinin hazirlanmasina yönelik metotlar saglar. Özellikle, bulusun bilesikleri, mitokondriye bagli bozukluklarin önlenmesinde veya tedavisinde, mitokondriyal fonksiyonun muhafaza edilmesinde, mitokondriyal fonksiyonun güçlendirilmesinde, yani normalden daha fazla ATP üretilmesinde veya mitokondriyal solunum sistemindeki kusurlarin düzeltilmesinde yararlidir. Bulusun Arka Plani Mitokondriler ökaryotik hücrede organellerdir. Hücrenin, bir enerji kaynagi olarak kullanilan adenozin trifosfat (ATP) kaynaginin çogunu üretirler. Böylece, mitokondri, ökaryotik hücrelerin hayatta kalmasi ve dogru hücresel fonksiyon amaciyla enerji üretimi için vazgeçilmezdir. Enerji saglamaya ek olarak, mitokondriler, hücre sinyallemesi, hücre farklilasmasi, hücre ölümü ayni zamanda hücre döngüsü ve hücre büyümesinin kontrolü gibi çesitli baska proseslerde de rol oynar. Özellikle mitokondriler, hücre apoptozunun kritik düzenleyicileridir ve ayni zamanda nekroz gibi apoptotik olmayan hücre ölümünün çesitli formlarinda da önemli bir rol oynarlar. Son yillarda çesitli hastaliklara mitokondriyal katkilari açiklayan birçok makale yayinlanmistir. Bazi hastaliklar mitokondriyal veya nükleer genomdaki mutasyonlar veya silinmelerden kaynaklanabilirken, digerleri mitokondriyal solunum sisteminin primer veya sekonder bozuklugundan veya mitokondriyal disfonksiyona bagli diger mekanizmalardan kaynaklanabilir. Günümüzde mitokondriyal hastaliklari iyilestirebilecek herhangi bir tedavi mevcut degildir. Normal bir mitokondriyal fonksiyonun muhafaza edilmesinin veya restore edilmesinin veya hücrenin enerji üretiminin (ATP) arttirilmasinin kabul edilmis önemi göz önünde bulunduruldugunda. asagidaki özelliklere sahip olan bilesiklerin gelistirilmesine ihtiyaç duyulmaktadir: Ana hücrenin hücre geçirgenligi, hücre içi süksinat veya süksinatin bir öncülünü serbest birakma yetenegi. ana bilesigin ve salgilanan ürünlerin düsük toksisitesi ve bir hastaya verilise uygun fizikokimyasal özellikler. Süksinat bilesikleri, diger aktif maddelerin ön ilaçlari olarak hazirlanmis olup, örnegin süksinik asit dibütiriloksimetil ester ve süksinik asit bis-(1-bütiriloksietil)ester tarif edilir. Bu bilesikler, formaldehit vermek için maddeler olarak hazirlanir ve mevcut bilesiklere farkli tibbi kullanimlar amaçlanir. Formaldehit, WO 2002/28345'e ait bilesiklere maruz kalan hücrelerdeki hem nükleer hem de mitokondriyal DNA için tespit edilebilen DNA'Ii eklenme ürünleri olusturabilir. Bu, bilesigin mitokondriye teslimini belgelemektedir. Önceki teknik bilesikleri arasinda bir dizi poliol süksinati tarif eden W09747584 bulunmaktadir. Burada verilen örnekte, Y ifadesi bir H veya alkil grubudur. Her bir süksinat bilesigi C(Y)-C(Q) yapisina sahip bir grup ile baglanan çok sayida süksinat parçasi içerir ve her bir ester asidi bu nedenle bir O-C-C etil grubu biçiminde en az iki karbon atomu içeren bir parçaya dogrudan baglanir. Açiklanan her bir bilesik birden fazla sayida süksinat parçasi içerir ve süksinat parçasi O-C-X tipi bir parça ile korunmamakta olup, burada X ifadesi bir heteroatomdur. Çesitli süksinat ester bilesikleri teknikte bilinmektedir. Dietil süksinat, monometil süksinat ve dimetil süksinatin, asagida örneklenen analizlerde etkisiz oldugu ve bulusun kapsaminin disinda kaldigi gösterilmistir. Ayrica, US 5,871,755 belgesi, oksidatif strese karsi ajanlar olarak ve kozmetik amaçli olarak kullanim için suksinamidlerin dehidroalanin türevleri ile ilgilidir. Bulusun Açiklamasi Mevcut bulusa göre bir bilesik Formül I'de verilmis veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu olup, özelligi; içerisinde A ve B arasindaki noktali bagin bir kapali halka yapisi olusturmak üzere istege bagli bir bagi belirtmesi ve içerisinde Z ifadesinin -CH2-CH2- veya CH(CH3) arasindan seçilmesi, A ifadesinin -SR, -OR ve NHR arasindan seçilmesi, ve R ifadesinin asagidaki gibi olmasi: R1 NH X7 X X #VE gSM-LL 1 R ` 14 RLRH B ifadesinin -O-R', -NHR", -SR,"' veya -OH arasindan seçilmesi; ve R' ifadesinin asagidaki formül Il ila lX arasindan seçilmesi: R3 (II) R', R" ve R'" ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya özdes olmasi ve asagidaki Formül Ri'î/N\n) R1 ve R3 ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya ayni olmasi ve H, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, O-asil, O-alkil, N-asil, N-alkil, X-asil, CH2X-alkil, CH2X-asil, F, CHzCOOH, CH2002alkil arasindan seçilmesi, X ifadesinin O, NH, NRe, S arasindan seçilmesi, R2 ifadesinin Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, C(O)CH3, C(O)CH20(O)CH3, C(O)CH2CH(OH)CH3 arasindan seçilmesi, p ifadesinin bir tamsayi olmasi ve 1 veya 2 olmasi Rs ifadesinin H, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, asetil, asil, propiyonil, benzoil veya formül il veya formül VIIl arasindan seçilmesi X5 ifadesinin -H, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, -COOH, - C(=O)XR6, CONRiRs arasindan seçilmesi veya asagidaki formüle göre olmasi: X7 ifadesinin R1, -NR1R3 arasindan seçilmesi, R9 ifadesinin H, Me, Et veya OzCCHzCHzCOXRs arasindan seçilmesi R10 ifadesinin Oasil, NHaIkil, NHasil, veya OzCCHzCH2COXeRs arasindan seçilmesi X5 ifadesinin O, NRs, NRng arasindan seçilmesi, içerisinde R5 ve R8 ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya ayni olmasi ve H, alkil, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, asetil, asil, propiyonil, benzoil arasindan seçilmesi veya formül II veya formül VIlI'e göre olmasi, R11 ve R12 ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya ayni olmasi ve H, Me, Et, propil, i- propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, asetil, propiyonil, benzoil, -CH2X-alkil, - CH2X-asil arasindan seçilmesi, burada X ifadesinin O, NRe veya 8 olmasi, Rc ve Rd ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya ayni olmasi ve CH2X-alkil, CH2X-asil arasindan seçilmesi, burada X = 0, NRs veya 8 olmasi, R13, R14 ve R15 ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya ayni olmasi ve H, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, -COOH, O-asil, O-alkil, N-asil, N-alkil, X-asil, CH2X-alkil arasindan seçilmesi; R13 ve R14 veya R13 ve R15 üzerindeki ornatiklarin köprü olusturarak bir siklik sistem olusturmasi ve böylece sikloalkil, heterosikloalkil, lakton veya Iaktamlar olusturmasidir. Rf, Rg ve Rh ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya ayni olmasi ve X-asil, - CH2X-alkil, - CH2X-asil ve R9 arasindan seçilmesi, alkilin Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil arasindan seçilmesi, asilin formil, asetil, propiyonil, Isopropiyonil, bütiril, tart-bütiril, pentanoil, benzoil, süksinil arasindan seçilmesi, asil ve/veya alkilin istege bagli olarak ornatilmis olabilmesi, ve A ve B arasinda noktali bag mevcut oldugunda, formül l'e göre bilesigin asagidaki gibi olmasi: içerisinde X4 ifadesinin -COOH, -C(=O)XR5 arasindan seçilmesi, bilesigin asagidakilerden biri olmamasi kosulu bulunmasidir: Formül l'in bilesikleri (ve bunlarin farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlari) buradan itibaren "bulusun bilesikleri", "bulusun bilesigi veya "mevcut bulusun bilesikleri" olarak adlandirilacaktir. Mevcut bulusun özellikle ilgi gösterilen bilesikleri, içerisinde 2 ifadesinin - CH20H2- ve A ifadesinin -SR oldugu bilesiklerdir. Mevcut bulusun özellikle ilgi gösterilen bilesikleri, içerisinde Z ifadesinin - CH2CH2-, A ifadesinin SR, ve B ifadesinin OH veya B ifadesinin SR'" oldugu bilesiklerdir. Mevcut bulusun özellikle ilgi gösterilen bilesikleri, içerisinde Z ifadesinin - CHzCH2-, A ifadesinin SR, B ifadesinin OH veya B ifadesinin SR"' oldugu, içerisinde R'" ifadesinin asagidaki gibi oldugu bilesiklerdir: Mevcut bulusun özellikle ilgi gösterilen bilesikleri, içerisinde Z ifadesinin - CH2CH2- ve A ifadesinin -SR ve B ifadesinin OH oldugu bilesiklerdir. Mevcut bulusun özellikle ilgi gösterilen bilesikleri, içerisinde 2 ifadesinin - CH20H2-, A ifadesinin SR, B ifadesinin OH veya B ifadesinin SR oldugu, içerisinde R ifadesinin asagidaki gibi oldugu bilesiklerdir: Mevcut bulusun özellikle ilgi gösterilen bilesikleri, içerisinde 2 ifadesinin -CH2CH2-, A ifadesinin NR, B ifadesinin OH ve R ifadesinin asagidaki gibi oldugu: ve X ifadesinin 8 oldugu bilesiklerdir. Tercihen ve formül Il'ye göre, R1 ve R3 ifadelerinden en az biri -H olup, böylece formül lI asagidaki gibi olur: R3 (ii) Tercihen ve formül Vll'ye göre, p=1 ve X5 ifadesi -H olup, böylece formül VII asagidaki Tercihen ve formül Vll'ye göre, p=1 ve X5 ifadesi COXRs olup, böylece formül VII asagidaki gibidir: R1%NH R5_X IR" R13Ri4 (Vll) Tercihen ve formül Vll'ye göre, p=1 ve X5 ifadesi CONR1R3 olup, böylece formül V" asagidaki gibidir: 1R' R'S p 3 RiîâRM (Vll) Formül l'e göre bir bilesik asagidaki gibi olabilmekte olup, özelligi; O Swxil içerisinde X4 ifadesinin -COOH, -C(=O)XR5 arasindan seçilmesi, Özellikle, mevcut bulusa göre bir bilesik Formül IA ile verilmekte: AÄZJLB ya da bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu olup, özelligi; içerisinde A ifadesinin -SR, -OR ve NHR arasindan seçilmesi, ve R ifadesinin asagidaki gibi olmasi: B ifadesinin -O-R', -NHR", -SR,"' veya -OH arasindan seçilmesi; ve R', R" ve R"' ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya özdes olmasi ve asagidaki formüllerden biri arasindan seçilmesi: R1 NH JL X5& 7%" R15 R Rp Riö R1R94 veya ` R1 ve R3 ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya özdes olmasi ve H, Me, Et, propil, 0- Me, O-Et, O-propil arasindan seçilmesi, X ifadesinin O, NH, 8 arasindan seçilmesi, p ifadesinin bir tamsayi olmasi ve 1 olmasi, Re ifadesinin H, Me, Et arasindan seçilmesi, X5 ifadesinin -H, Me, Et, -COOH, -C(=O)XR6, CONR1R3 arasindan seçilmesi X7 ifadesinin R1, -NR1R3 arasindan seçilmesi, R13, R14 ve R15 ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya ayni olmasi ve H, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, -COOH, O-asil, O-alkil, N-asil, N-alkil, X-asil, CH2X-alkil arasindan seçilmesi; içerisinde alkil ve asilin yukarida tanimlandigi gibi olmasidir. Özellikle ilgi çekici olan bir bilesik Formül IA ile verilmekte: A 2 B (iA) ya da bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu olup, özelligi; içerisinde A ifadesinin -SR, -OR ve NHR arasindan seçilmesi, ve R ifadesinin asagidaki gibi olmasi: B ifadesinin -O-R', -NHR", -SR,"' veya -OH arasindan seçilmesi; ve R', R" ve R'" ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya özdes olmasi ve asagidaki formüllerden biri arasindan seçilmesi: R1 NH xî/ILX X5& XSM R15 R15 RisRiija (VII) veya RiRei: R1 ve R3 ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya özdes olmasi ve H, Me, Et, propil, 0- Me, O-Et, O-propil arasindan seçilmesi, X ifadesinin O, NH, 8 arasindan seçilmesi, p ifadesinin bir tamsayi olmasi ve 1 olmasi, R5 ifadesinin H, Me, Et arasindan seçilmesi, X5 ifadesinin -H, Me, Et, -COOH, -C(=O)OR6, CONR1R3 arasindan seçilmesi, X7 ifadesinin R1, -NR1R3 arasindan seçilmesi, R13, R14 ve R15 ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya ayni olmasi ve H, Me, Et, -COOH arasindan seçilmesidir. belgesinden bilinmektedir. Bununla birlikte, mevcut bulus burada tartisilan mitokondrilerle iliskili hastaliklarin tedavisinde kullanima yönelik olan veya burada tartisilan mitokondrilerle iliskili hastaliklar için veya bunlarin tedavi için bir ilacin üretimine yönelik olan bu bilesikleri Mevcut bulusa göre spesifik bilesikler sunlardir:15 ÄH SNOH /lLN 5 OH ÄN/Ys OH o 0 0 H OMeO H NH 0 7/ Ogl/ Äü/VSNOH "î 0 OH Äu/Y OH Genel Kimya Metotlari Teknikte uzman kisi, mevcut bulusun bilesiklerinin herhangi bir bilinen sekilde, çesitli yollarla hazirlanabilecegini takdir edecektir. Asagidaki yollar sadece formül (l) bilesiklerinin sentezi için kullanilabilecek bazi metotlari göstermektedir. Mevcut bulusun bilesikleri süksinik asit, bir mono-korumali süksinik asit, bir mono-aktiflestirilmis metilmalonik asit, bir mono-korumali metilmalonik asit veya bir mono-aktiflestirilmis metilmalonik asit ile baslanarak yapilabilir. Koruyucu gruplar arasinda, sinirlandirma olmaksizin benzil ve tert-bütil bulunur. Karboniller için diger koruyucu gruplar ve bunlarin kaldirilmasi 'Greene's Protective Groups in Organic Synthesis' (Wuts and Greene. Wiley, 2006) belgesinde ayrintili olarak açiklanmaktadir. Koruyucu gruplar, benzil esterleri için heterojen bir katalizör varliginda hidrojenasyon ve tert-butil esterler için organik veya mineral asitler, tercihen trifloroasetik asit veya seyreltik HCI ile isleme dahil olmak üzere teknikte uzman bir kisi tarafindan bilinen metotlar ile kaldirilabilir. Aktiflestirici gruplarin arasinda sinirlandirma olmaksizin karistirilmis anhidritler ve asil klorürler bulunur. Bu nedenle, Formül I'in bilesikleri simetriktir ve dolayisiyla simetrik bir baslangiç malzemesi seçilir. Ya bir simetrik dikarboksilik asit seçilir ya da bir di-aktiflestirilmis karboksilik asit seçilir. Tercihen seçilen bilesik süksinik asit veya süksinil klorürdür. Formül I'in bilesigi asimetrik oldugunda, seçilen baslangiç malzemesi asimetriktir. Bu, içerir. Tercihen bu, süksinik asit mono-benzil ester, süksinik asit mono-tert bütil ester, 4- kloro-4-oksobütirik asidi içerir. Alternatif olarak, formül I'in asimetrik bir bilesigi için, simetrik bir baslangiç malzemesi, tercih edilen süksinik asit seçilir ve daha az türevlendirici bir baslangiç malzemesi kullanilir. Asagidaki genel metotlar kapsayici degildir ve mevcut bulusun bilesiklerinin üretilmesi için baska metotlarin kullanilabilecegi teknikte uzman kisiler tarafindan takdir edilecektir. Bu metotlar birlikte veya ayri ayri kullanilabilir. Formül I'in formül Il'yi içeren bilesikleri bir karboksilik asidin uygun bir alkil halojenür (formül X) ile tepkimeye sokulmasiyla yapilabilir. Örn. Formül X içerisinde Hal ifadesi bir halojendir (örn. F, CI, Br veya I) ve R1, R2 ve R3 ifadeleri formül Il'de tanimlandigi gibidir. Tepkime, uygun sekilde bir çözücü, örnegin diklorometan, aseton, asetonitril veya N,N-dimetilformamit içinde, uygun bir baz, örnegin trietilamin, diizopropiletilamin veya sezyum karbonat ile, örnegin -10°C ila 80°C arasindaki bir sicaklikta, özellikle oda sicakliginda gerçeklestirilir. Tepkime, sodyum iyodür veya tetraalkil amonyum halojenürler (örn. tetrabutil amonyum iyodür) gibi istege bagli katki maddeleri ile gerçeklestirilebilir. Formül X'in bilesikleri ya ticari olarak temin edilebilir ya da Journal of the American 687-94 belgelerinde belirtilenler gibi literatür yöntemleri ile uygun sekilde hazirlanabilir. Formül l'in, formül VIl'yi içeren bilesikleri, aktiflestirilmis bir karboksilik asidin formül XIV'ün bir bilesigiyle, istege bagli olarak aktiflestirici türler mevcutken tepkimeye sokulmasiyla yapilabilir. Formül XIV içerisinde X5 ve R1 ifadeleri formül Vll'de tanimlandigi gibidir ve X7 ifadesi Hal (Cl, F, Br) veya karisik anhidrittir. Tercihen X7 = Cl`dir. Tepkime, uygun sekilde bir çözücü, örnegin diklorometan, aseton, THF, asetonitril veya N,N-dimetilformamit içinde, uygun bir baz, örnegin trietilamin, diizopropiletilamin veya sezyum karbonat ile, örnegin -10°C ila 80°C arasindaki bir sicaklikta, özellikle oda sicakliginda gerçeklestirilir. Formül I'in, formül VIII'i içeren bilesikleri, aktiflestirilmis bir karboksilik asidin formül XIV'ün bir bilesigiyle, istege bagli olarak aktiflestirici türler mevcutken tepkimeye sokulmasiyla yapilabilir. Formül XV içerisinde Hal ifadesi bir halojendir (örn. F, CI, Br veya I) ve R11, R12 ve RC ve Rd ifadeleri formül VIII'de tanimlandigi gibidir. Tepkime, uygun sekilde bir çözücü, örnegin diklorometan, aseton, asetonitril veya N,N-dimetilformamit içinde, uygun bir baz, örnegin trietilamin, diizopropiletilamin veya sezyum karbonat ile, örnegin -10°C ila 80°C arasindaki bir sicaklikta, özellikle 80 °C'de gerçeklestirilir. Tepkime, sodyum iyodür veya tetraalkil amonyum halojenürler (örn. tetrabutil amonyum iyodür) gibi istege bagli katki maddeleri ile gerçeklestirilebilir. Formül X'un bilesikleri ya ticari olarak temin edilebilir ya da bir aminin bir asil klorür ile tepkimeye sokuldugu Iiteratüre uygun metotlarla uygun sekilde hazirlanabilir. Formül I'in, Formül IX'u içeren bilesikleri, yukarida tarif edilen metotlar ve teknikte uzman bir kisi tarafindan bilinen diger metotlarin birlestirilmesiyle yapilabilir. Mevcut bulusun bilesiklerinin genel kullanimi Burada tarif edilen bilesikler tipta veya kozmetikte veya böyle bir kullanima uygun bir bilesimin üretiminde kullanilabilir. Ilaçlar gelismis veya korunan bir enerji üretimi (ATP) istendigi herhangi bir durumda, örnegin metabolik hastaliklarin tedavisinde veya mitokondriyal fonksiyon bozuklugu hastaliklari veya rahatsizliklarinin tedavisinde, mitokondriyal bozukluklarin tedavisinde veya bastirilmasinda kullanilabilir. Bilesikler, mitokondriyal enerji üretiminin uyarilmasinda ve örnegin, sensörinöral isitme kaybi veya kulak çinlamasi (mitokondriyal toksisiteye bagli bazi antibiyotiklerin yan etkisi) veya Bilesikler kanser, diyabet, akut açlik, endotoksemi, septisemi, sistemik inflamatuvar yanit sendromu, çoklu organ fonksiyon bozuklugu sendromunun tedavisinde ve hipoksi, iskemi, inme, miyokart enfarktüsü, akut anjin, bir akut böbrek yaralanmasi, koroner oklüzyon ve atriyal fibrilasyon sonrasinda veya reperfüzyon yaralanmalarinin önlenmesi veya bunlara karsi konulmasinda kullanilabilir. Ayrica, mevcut bulusun bilesiklerinin erkekte kisirligin tedavisinde yararli olabilecegi öngörülmektedir. Bulusun bilesiklerinin Kreb döngüsünün bilesenlerini ve istege bagli olarak glikoliz yollarinin hücre geçirgen öncüllerini saglayacagi öngörülmektedir. Hücre içine girdikten sonra, enzimatik veya kimyasal hidrolizin, istege bagli olarak asetat ve glikoz gibi diger enerji saglayici malzemeler ile birlikte suksinat veya metil malonati serbest birakacagi düsünülmektedir. Mevcut bulusun bilesikleri mitokondrilerde enerji üretimini gelistirmede veya geri kazanmada kullanilabilir. Açikça, bilesikler tip veya kozmetik alaninda kullanilabilir. Bilesikler mitokondriyal fonksiyon bozuklugu ve/veya bir enerji (ATP) eksikligi bileseniyle ilgili bir bilesene sahip olan bozukluklar veya hastaliklarin önlenmesi ya da tedavisinde kullanilabilir. Enerji üretiminin arttirilmasi, örnegin bir mitokondriyal eksiklik, bozukluk veya hastaliktan muzdarip olan kisilerle ilgilidir. Mitokondriyal hastaliklar, alyuvarlar disinda vücudun her hücresinde bulunan özel bölümler olan mitokondrinin islev bozuklugundan kaynaklanir. Mitokondriyal fonksiyon azaldiginda, hücre içinde üretilen enerji azalir ve hücre hasari veya hücre ölümü takip eder. Bu islem vücutta tekrarlanirsa, kisinin yasami Mitokondri hastaliklari genellikle retina, koklea, beyin, kalp, karaciger, iskelet kaslari, böbrek ve endokrin ve solunum sistemi gibi çok enerji gerektiren organlarda görülür. Bir mitokondriyal hastaligin belirtileri motor kontrol kaybi, kas zayifligi ve agri, nöbetler, görme/isitme sorunlari, kalp hastaliklari, karaciger hastaliklari, gastrointestinal bozukluklar, yutma güçlükleri ve daha fazlasini içerebilir. Bir mitokondriyal hastalik kalitsal olabilir veya normalde mitokondride ikamet eden proteinlerin veya RNA moleküllerinin islevlerinde degisime yol açan kendiliginden mutasyonlara bagli olabilir. Kompleks I, II, III veya lV eksikligi veya örnegin piruvat dehidrojenaz eksikligi gibi bir enzim eksikligi benzeri birçok hastaligin bir mitokondriyal eksiklik içerdigi bulunmustur. Bununla birlikte, durum karmasiktir ve hastaliklarda birçok faktör bulunabilir. Günümüze kadar, iyilestirici tedaviler bulunmamistir. Mevcut olan tek tedavi çesidi, semptomlari hafifletebilen ve hastaligin ilerlemesini geciktirebilen tedavilerdir. Buna göre, mevcut bulus sahiplerinin bulgulari ve burada tarif edilenler, mitokondriyadaki enerji üretimi üzerindeki süksinik asit hücre geçirgen bilesiklerinin yararli etkisini göstermeleri bakimindan çok önemlidir. Ek olarak, bilinen süksinat ön ilaçlariyla karsilastirildiginda (örnegin, WO 97/47584'te bahsedilen), bunlar bu ve iliskili hastaliklarin tedavisi için gelismis özellikler göstermekte olup, örnegin daha iyi hücre geçirgenligi, daha uzun plazma yari ömrü, düsük toksisite, mitokondrilere enerji saliminda artis ve gelismis formülasyonu (çözünürlük artisi gibi gelismis özelliklerden kaynakli) içerir. Bazi durumlarda bilesiklerin ayrica oral yoldan biyolojik olarak kullanimi mümkün olup, bu da daha kolay uygulamaya izin verir. Bu nedenle, mevcut bulusun bilesiginin avantajli özellikleri asagidakilerden bir ya da daha fazlasini içerebilir: o Arttirilmis hücre geçirgenligi o Azaltilmis toksisite o Mitokondrilere arttirilmis enerji salimi o Gelismis formülasyon o Arttirilmis çözünürlük o Arttirilmis oral biyoyararlanim Mevcut bulus, bir farmasötik olarak, özellikle hücresel enerji (ATP) eksikliginin tedavisinde kullanilmak üzere mevcut bulusun bilesigini saglar. Mevcut bulusun bir bilesigi kompleks l bozuklugunun tedavisinde, kompleksin kendisinin fonksiyon bozuklugunun veya Kompleks l'e NADH teminini kisitlayan herhangi bir rahatsizlik ya da hastaligin, örn. Krebs döngüsü, glikoliz, beta-oksidasyon, piruvat metabolizmasi ve hatta glükoz veya diger Kompleks-l ile iliskili substratlarin tasinmasindaki fonksiyon bozuklugunun tedavisinde kullanilabilir. Mevcut bulusun bilesikleri mitokondriyal kompleks I ile iliskili bozukluklarin, örnegin sinirlandirma olmaksizin, Leigh Sendromu, Leber kalitsal optik nöropati (LHON), MELAS (mitokondriyal ensefalomiyopati, laktik asidoz ve inme benzeri nöbetler) ve MERRF (düzensiz kirmizi lifli miyoklonik epilepsi) tedavisinde kullanilabilmekte olup, ihtiyaci olan bir hastaya, mevcut bulusun bilesiginin etkili bir miktarinin uygulanmasini Mevcut bulus ayrica, mevcut bulusun bilesiginin, ilaca bagli olarak gelisen laktik asidozun tedavisine yönelik bir ilacin üretiminde kullanimini saglar. Bulusun bir bilesigi, ayrica, uzun süreli cerrahi ve yogun bakim gibi, ancak bunlarla sinirli olmamak üzere, ekstra enerji üretiminin potansiyel olarak yararli olabilecegi her durumda yararli olabilir. Mitokondriler Mitokondriler ökaryotik hücrede organeller olup, popüler olarak hücrenin "enerji santrali" olarak adlandirilir. Birincil fonksiyonlarindan biri oksidatif fosforilasyondur. Adenozin trifosfat (ATP) molekülü, bir enerji "para birimi" veya hücre içinde enerji tasiyicisi olarak islev görür ve ökaryotik hücreler, ATP'lerinin çogunu, mitokondri ile gerçeklestirilen biyokimyasal islemlerden alirlar. Bu biyokimyasal prosesler, oksitlenmis nikotinamit adenin dinükleotitten (NADt) indirgenmis nikotinamit adenin dinükleotit (NADH) ve oksitlenmis flavin adenin dinükleotitten (FAD) indirgenmis flavin adenin dinükleotit (FADH2) üreten sitrik asit döngüsünü (trikarboksilik asit döngüsü veya Kreb döngüsü) ve ayni zamanda NADH ve FADH2'nin yeniden NAD<+ ve FAD'ye oksitlendigi oksidatif fosforilasyonu içerir. NADH'nin oksidasyonuyla açiga çikan elektronlar, solunum zinciri olarak bilinen bir dizi protein kompleksleri (Kompleks I, Kompleks II, Kompleks III ve Kompleks IV) ile indirilir. Süksinatin oksidasyonu, kompleks ll'de (süksinat dehidrojenaz kompleksi) meydana gelir ve FAD, enzim kompleksi süksinat dehidrojenazda (kompleks II) bir prostetik gruptur. Solunum kompleksleri mitokondriyonun iç zarina gömülüdür. Zincirin sonundaki kompleks IV, elektronlari oksijene aktarir ve bu da suya indirgenir. Bu elektronlar kompleksleri geçerken salinan enerji, mitokondriyonun iç membrani boyunca bir proton gradyani olusturmak için kullanilmakta olup, bu iç membran boyunca bir elektrokimyasal potansiyel olusturur. Baska bir protein kompleksi olan Kompleks V (Kompleks l, II, III ve gradyan tarafindan depolanan enerjiyi kullanir. Sitrik asit döngüsü ve oksidatif fosforilasyon, bir glükoz molekülünün glükoz molekülü basina iki ATP molekülü ile birlikte iki moleküllü pirüvata ayrildigi glikolizden önce gelir. Piruvat molekülleri daha mitokondrilere girer, burada oksidatif fosforilasyon vasitasiyla tamamiyla 002 ve H20'ya oksitlenir (genel proses aerobik respirasyon olarak bilinir). Iki piruvat molekülünün karbondioksit ve suya tam oksidasyonu, glükozun iki piruvat molekülüne dönüstürülmesiyle üretilen 2 ATP molekülüne ek olarak en az 28-29 ATP molekülü verir. Oksijen mevcut degilse, piruvat molekülü mitokondrilere girmeyip, daha ziyade anaerobik solunum sürecinde laktata dönüsür. Glükoz molekülü basina toplam net verim yaklasik olarak en az 30-31 ATP molekülüdür. ATP, hücredeki hemen hemen her diger biyokimyasal reaksiyona dogrudan veya dolayli olarak enerji saglamak için kullanilir. Bu nedenle, aerobik solunum sirasinda oksidatif fosforilasyonun katkida bulundugu en az (yaklasik) 28 veya 29 adet ekstra ATP molekülü, hücrenin düzgün çalismasi Için kritik öneme sahiptir. Oksijen eksikligi aerobik solunumu önler ve neredeyse tüm aerobik organizmalarin ölümüne neden olmakta olup; mayalar gibi birkaç organizma, aerobik veya anaerobik solunumu kullanarak hayatta kalabilmektedir. Bir organizmadaki hücreler geçici olarak oksijenden yoksun kaldiginda, oksijen tekrar mevcut hale gelene veya hücre ölünceye kadar anaerobik solunum kullanilir. Glikoliz sirasinda üretilen piruvat, anaerobik solunum sirasinda Iaktata dönüstürülür. Laktik asit birikiminin, kas hücrelerine oksijen saglanamadiginda, yogun aktivite dönemlerinde kas yorgunlugundan sorumlu oldugu düsünülmektedir. Oksijen tekrar mevcut oldugunda, Mitokondriyal fonksiyon bozuklugu çesitli hastalik durumlarina katkida bulunur. Bazi mitokondriyal hastaliklar mitokondriyal genom veya nükleer mutasyonlar veya delesyonlardan kaynaklanir. Hücredeki mitokondri esik degeri kusurlu ise ve bir doku içindeki bu tür hücrelerin esik orani bozuk mitokondrileri varsa, doku veya organ fonksiyon bozuklugu semptomlari görülebilir. Pratikte, herhangi bir doku etkilenebilir ve farkli dokularin katkisina bagli olarak çok çesitli semptomlar bulunabilir. Mevcut bulusun bilesiklerinin kullanimi Mevcut bulusun bilesikleri gelismis veya korunan bir enerji üretimi (ATP) istendigi herhangi bir durumda kullanilabilir. Örneklerin tamami örnegin mitokondriyal ATP üretiminin artisinda veya mitokondriyal fonksiyonun restorasyonunda potansiyel bir yarar oldugu, örnegin ilaca bagli olarak gelisen mitokondriyal fonksiyon bozuklugu veya isitme kaybi, görsel keskinlik kaybi, sistemik Inflamatuvar yanit sendromu ve çoklu organ fonksiyon bozuklugu sendromu durumlarinda tamamiyla klinik kosullar altindadir. Bilesikler ayrica hipoksi, iskemi, inme, miyokard enfarktüsü, akut anjina, akut böbrek hasari, koroner oklüzyon, atriyal fibrilasyon ve reperfüzyon hasarlarinin önlenmesinde veya sinirlandirilmasinda da yararli olabilir. Özellikle, mevcut bulusun bilesikleri tip alaninda, özellikle mitokondrilerle iliskili bir rahatsizlik, hastalik ya da bozuklugun tedavisinde ya da önlenmesinde veya kozmetik alaninda kullanilabilir. Mitokondri fonksiyon bozuklugu ayrica renal tübüler asidoz; motor nöron hastaligi; diger nörolojik hastaliklar; epilepsi; genetik hastaliklar; Huntington hastaligi; duygudurum bozukluklari; sizofreni; bipolar rahatsizlik; yasla iliskili hastaliklar; serebral vasküler kazalar, maküler dejenerasyon; diyabet; ve kanserle iliskili olarak da tarif edilir. Mevcut bulusun mitokondriyle iliskili bozukluklar veya hastaliklarda kullanima yönelik bilesikleri Mevcut bulusa göre bilesikler asagidakilerin arasindan seçilen bir mitokondriyle iliskili hastaligin önlenmesi ya da tedavisinde kullanilabilir: 0 Alpers Hastaligi (Progresif Infantil Poliyodistrofi) o Amiyotrofik lateral skleroz (ALS) o Otizm o Barth sendromu (Ölümcül infantil kardiyomiyopati) Biyoenerji metabolizmasi eksikligi Karnitin-AsiI-Karnitin Eksikligi Karnitin eksikligi Kreatin Eksikligi Sendromlari (Serebral Kreatin Eksikligi Sendromlari (CCDS) sunlari içerir: Guanidinoaseteat Metiltransferaz eksikligi (GAMT Eksikligi), L- Arjinin:Glisin Amidinotransferaz eksikligi (AGAT Eksikligi) ve SL06A8 ile iliskili kreatin tasiyici eksikligi (SLCöA8 Eksikligi). Ko-enzim Q10 eksikligi Kompleks I Eksikligi (NADH dehidrojenaz (NADH-COQ redüktaz) eksikligi) Kompleks II Eksikligi (Süksinat dehidrojenaz eksikligi) Kompleks III Eksikligi (Ubikinon-sitokrom koksiidoredüktaz eksikligi) Kompleks IV Eksikligi/COX Eksikligi (Sitokrom koksidaz eksikligi, solunum zincirinin kompleks lV'ündeki bir bozukluktan kaynaklanir) Kompleks V eksikligi (ATP sentaz eksikligi) COX eksikligi CPEO (Kronik Progresif Dis Oftalmopleji Sendromu) CPT l Eksikligi CPT II Eksikligi Friedreich ataksisi (FRDA veya FA) Glutarik Asidüri Tip ll KSS (Kearns-Sayre Sendromu) Laktik asidoz LCAD (Uzun Zincirli Asil-CoA Dehidrojenaz Eksikligi) Leigh Hastaligi veya Sendromu (Subakut Nekrotizan Ensefalomiyelopati) nöbetler) LHON (Leber kalitsal optik nöropatisi) Luft Hastaligi MCAD (Orta-Zincirli Asil-CoA Dehidrojenaz Eksikligi) MELAS (Mitokondriyal Ensefalomiyopati Laktik asidoz ve inme benzeri MERRF (Miyoklonik Epilepsi ve Düzensiz Kirmizi Lif Hastaligi) MIRAS (Mitokondriyal Resesif Ataksi Sendromu) Mitokondriyal Sitopati Mitokondriyal DNA Tüketimi Mitokondriyal Ensefalopati sunlari içerir: Ensefalomiyopati, Ensefalomiyelopati hastaliklar Mitokondriyal miyopati MNGIE (Miyoneürogastrointestinal Bozukluk ve Ensefalopati) NARP (Nöropati, Ataksi ve Retinitis Pigmentosa) Parkinson, Alzheimer veya Huntington hastaligi ile iliskili nörodejeneratif Pearson sendromu Piruvat Karboksilaz Eksikligi Piruvat Dehidrojenaz Eksikligi POLG mutasyonlari Solunum Zinciri Eksiklikleri SCAD (Kisa Zinciri Asil-CoA Dehidrojenaz Eksikligi) SCHAD (Kisa Zincirli L-3-Hidroksiasil-COA Dehidrojenaz (SCHAD) Eksikligi, ayrica 3-Hidroksi Asil CoA Dehidrojenaz Eksikligi HADH olarak da adlandirilir VLCAD (Çok Uzun Zincirli Asil-CoA Dehidrojenaz Eksikligi) 0 Diyabet o Akut açlik o Endotoksemi o Septisemi o Sistemik inflamasyon yanit sendromu (SIRS) 0 Çoklu organ yetmezligi Birlesik Mitokondriyal Hastaliklar Vakfi'nin (www.umdf.org) web sayfasindan alinan bilgilere istinaden, yukarida bahsedilen hastaliklarin bazilari asagida daha ayrintili olarak ele alinmistir: Kompleks I eksikligi: Mitokondriyonun içinde dört zincir reaksiyonu (Kompleks I-lV) boyunca elektronlari tasiyan ve enerji üretimi ile sonuçlanan bir grup protein bulunur. Bu zincir, Elektron Tasima Zinciri olarak bilinir. Besinci bir grup (Kompleks V) ATP'yi seri olarak üretir. Birlikte, elektron tasima zinciri ve ATP sentaz respiratuvar zinciri olusturur ve tüm süreç oksidatif fosforilasyon veya OXPHOS olarak bilinir. Bu zincirdeki ilk adim olan Kompleks I, respiratuvar zincir eksikliklerinin üçte birini temsil eden mitokondriyal anormalliklerin en yaygin bölgesidir. Genellikle dogumda veya erken çocukluk döneminde ortaya çikan Kompleks I eksikligi genellikle ilerleyici bir nörodejeneratif bozukluktur ve özellikle beyin, kalp, karaciger ve iskelet kaslari gibi yüksek enerji seviyelerine ihtiyaç duyan organlarda ve dokularda çesitli klinik semptomlardan sorumludur. Belirli bazi mitokondriyal bozukluklar, asagidakileri içeren Kompleks I eksikligi ile iliskilendirilmistir: Leber'in kalitsal optik nöropatisi (LHON), MELAS, MERRF ve Leigh Sendromu (LS). MELAS, (mitokondriyal ensefalomyopati, laktik asidoz ve inme benzeri nöbetler) ve düzensiz kirmizi lifli miyoklonik epilepsi için MERRF standini temsil eder. LHON, ortalama 27 ila 34 yas arasinda görülen körlük ile karakterize edilmekte olup; körlük, her iki göze ayni anda veya ardisik olarak gelisebilir (bir göz körlük gelistirir, ardindan diger gözde ortalama olarak iki ay sonra görülür). Kardiyak anomalileri ve nörolojik komplikasyonlar gibi baska semptomlar da görülebilir. Kompleks I eksikliginin üç ana formu vardir: i) Zayif kas tonusu, gelisimsel gecikme, kalp hastaligi, laktik asidoz ve solunum yetmezligi ile karakterize edilen ölümcül infantil multisistem bozuklugu. ii) Çocukluk veya yetiskinlik döneminden baslayarak zayiflik veya egzersiz intoleransi ile karakterize edilen miyopati (kas hastaligi). iii) Çocukluk veya yetiskinlik döneminden baslayarak, göz kasi felci, pigmenter retinopati (görme kaybi ile retinal renk degisiklikleri), isitme kaybi, duyusal nöropati (duyu organlarini içeren sinir hasari), nöbetler, bunama, ataksi (anormal kas koordinasyonu) ve istemsiz hareketleri içerebilen çesitli semptom kombinasyonlarini içeren mitokondriyal ensefalomiyopati (beyin ve kas hastaligi). Kompleks I eksikliginin bu formu Leigh Sendromuna ve MELAS'a neden olabilir. Çogu Kompleks I eksikligi vakasi otozomal resesif kalitimin (hem anne hem de babadan gelen hatali nükleer genlerin kombinasyonu) sonucudur. Daha seyrek olarak, hastalik maternal kalitsal veya sporadiktir ve genetik bozukluk mitokondriyal DNA'dadir. Tedavi: Tüm mitokondriyal hastaliklarda oldugu gibi, su anda Kompleks I eksikligi için iyilestirici bir tedavi yoktur. Etkili olabilen veya olmayabilen çesitli tedaviler örnegin riboflavin, tiyamin, biyotin, ko-enzim Q10, karnitin ve ketojenik diyet gibi metabolik terapileri içerebilir. Infantil çok sistemli form için terapiler basarisiz olmustur. Kompleks I hastalari için klinik seyir ve prognoz oldukça degiskendir ve spesifik genetik bozuklugu, baslangiç yasina, dahil olan organlara ve diger faktörlere bagli olabilir. Kompleks III Eksikligi.' Semptomlar dört ana formu içerir: i) Ölümcül infantil ensefalomiyopati, konjenital Iaktik asidoz, hipotoni, distrofik durus, nöbetler ve koma. Kas dokusunda düzensiz kirmizi lifler yaygindir. ii) Daha sonra baslangiçli ensefalomiyopatiler (çocukluktan yetiskinlige): kuvvetsizlik, kisa boy, ataksi, bunama, isitme kaybi, duyusal nöropati, pigmenter retinopati ve piramidal isaretlerin çesitli kombinasyonlari. Düzensiz kirmizi lifler yaygindir. Olasi Iaktik asidoz. iii) Miyopati, egzersiz intoleransi ile birlikte sabit kuvvetsizlige dönüsmektedir. Düzensiz kirmizi lifler yaygindir. Olasi laktik asidoz. iv) Infantil histiositoid kardiyomiyopati. Kompleks IV Eksikligi/00X Eksikligi.' Semptomlar iki ana formu içerir: 1. Ensefalomiyopati: Tipik olarak yasamin ilk 6 ila 12 aylik süreci için normaldir ve daha sonra gelisimsel regresyon, ataksi, Iaktik asidoz, optik atrofi, oftalmopleji, nistagmus, distoni, piramidal isaretler ve solunum problemleri gösterir. Sik nöbetler. Leigh Sendromuna neden olabilir 2. Miyopati: Iki ana varyant bulunur: 1. Ölümcül infantil miyopati: dogumdan hemen sonra baslayabilir ve hipotoni, kuvvetsizlik, laktik asidoz, düzensiz kirmizi lifler, solunum yetmezligi ve böbrek problemleri eslik edebilir. 2. Benign infantil miyopati: dogumdan hemen sonra baslayabilir ve hipotoni, kuvvetsizlik, laktik asidoz, düzensiz kirmizi lifler, solunum problemleri eslik edebilir, ancak (eger çocuk hayatta kalirsa) spontan iyilesme ile devam edebilir. KSS (Kearns-Sayre Sendromu): KSS, siklikla göz kapaklarinin sarkmasiyla (ptozis) baslayan, yavas ilerleyen birçok sistemli mitokondriyal hastaliktir. Diger göz kaslari da nihai olarak dahil olur ve göz hareketinin felce ugramasina neden olur. Retina dejenerasyonu genellikle los isikli ortamlarda görme zorluguna neden olur. KSS üç ana özellik ile karakterize edilir: . tipik olarak 20 yasindan önce baslangiç, ancak bebeklik veya yetiskinlikte de ortaya çikabilir . Spesifik göz kaslarinin felci (kronik progresif dis oftalmopleji - CPEO olarak adlandirilir) . retinanin dejenerasyonu ve bunun sonucunda pigmentli (renkli) malzemenin anormal birikmesi (pigmenter retinopati). Ayrica, asagidaki kosullardan bir ya da daha fazlasi bulunur: . kalpte elektrik sinyallerinin bloke edilmesi (kalp iletim bozukluklari) . yüksek serebrospinal sivi proteini . hareketlerin koordinasyonsuzlugu (ataksi). KSS'II hastalarda ayrica sagirlik, bunama, böbrek fonksiyon bozuklugu ve kas güçsüzlügü gibi sorunlar da olabilir. Büyüme geriligi, kisa boy veya diyabet dahil olmak üzere endokrin anomalileri de belli olabilir. KSS nadir görülen bir hastaliktir. Genellikle, hücre çekirdeginin DNA'sindan çok, mitokondriya (mtDNA) DNA'sindaki genetik materyalin tek bir büyük delesyonundan (kaybindan) kaynaklanir. 150'den fazla türü olan bu delesyonlar genellikle kendiliginden ortaya çikar. Daha az siklikla, mutasyon anne tarafindan bulasir. Tüm mitokondriyal hastaliklarda oldugu gibi KSS için de iyilestirici tedavi yoktur. Tedaviler, dahil olan semptom ve organ tiplerine dayanir ve sunlari içerebilir: Koenzim Q10, diyabet insülini, kalp ilaçlari ve hayat kurtarici olabilen kalp pili. Göz kapaklarinin sarkmasi için cerrahi müdahale düsünülebilir, ancak oftalmik cerrahi merkezlerindeki uzmanlar tarafindan yapilmalidir. KSS yavas ilerler ve prognoz siddete bagli olarak degisir. Ölüm üçüncü veya dördüncü on yilda yaygindir ve organ sistemi yetmezliklerinden kaynaklanabilir. Leigh Hastaligi veya Sendromu (Subakut Nekrotizan Ensefalomiyelopati): Semptomlar: Nöbetler, hipotoni, yorgunluk, nistagmus, zayif refleksler, yeme ve yutma güçlügü, solunum problemleri, zayif motor fonksiyonu, ataksi. Nedenler: Piruvat Dehidrogenaz Eksikligi, Kompleks I Eksikligi, Kompleks II Eksikligi, Kompleks IV/ COX Eksikligi, NARP. Leigh Hastaligi, genellikle bir viral enfeksiyondan sonra bebeklik veya çocukluk çaginda genel bir baslangici olan ilerleyen bir nörometabolik rahatsizliktir, ancak ayni zamanda gençler ve yetiskinlerde de ortaya çikabilir. MRI'da beyin üzerinde, özellikle orta beyin ve beyin sapinda görülen nekrotizan (ölü veya ölmekte olan doku) Iezyonlari ile karakterize edilir. Çocuk dogumda genellikle normal görünür, ancak zamanlama daha erken veya daha geç olsa da genellikle birkaç aydan iki yasina kadar semptomlari ortaya çikarmaya baslar. Ilk belirtiler emme, kafa kontrolü, yürüme ve konusma gibi temel becerilerin kaybolmasini içerebilir. Bunlar, sinirlilik, istah kaybi, kusma ve nöbetler gibi baska problemler ile birlikte olabilir. Bazi fonksiyonlarda ani düsüs veya bazi islevlerin geçici olarak geri gelmesi görülebilir. Sonuç olarak, çocuk ayrica kalp, böbrek, görme ve nefes alma komplikasyonlarina da sahip olabilir. Leigh Hastaligina neden olan birden fazla kusur vardir. Bunlar bir piruvat dehidrojenaz (PDHC) eksikligini ve solunum zinciri enzim defektlerini (Kompleks I, II, IV ve V) içerir. Defektine bagli olarak, kalitim biçimi X'e bagli dominant olabilir (X kromozomunda bozukluk ve genellikle hastalik sadece erkeklerde görülür), otozomal resesif (hem anne hem de babadan alinan genler) ve maternal (sadece anneden) olabilir. Kalitimsal olmayan spontan vakalar da olabilir. Leigh hastaligi için iyilestirici tedavi yoktur. Tedaviler genellikle vitamin ve takviye terapilerinin varyasyonlarini, genellikle "kokteyl" kombinasyonunda içerir ve sadece kismen etkilidir. Çesitli kaynak alanlari tiyamin, koenzim Q10, riboflavin, biyotin, kreatin, süksinat ve Idebenonun olasi kullanimini içerir. Bazi kliniklerde dikloroasetat (DCA) gibi deneysel ilaçlar da denenmektedir. Bazi durumlarda, özel bir diyet verilebilir ve metabolik bozukluklar konusunda bilgili bir diyetisyen tarafindan izlenmesi gerekebilir. Leigh Hastaligi'nin prognozu zayiftir. Kusura bagli olarak, bireyler tipik olarak birkaç yildan onlu yaslarinin ortalarina kadar yasarlar. Leigh benzeri sendrom tanisi olan veya yetiskinlige kadar semptom göstermeyenler daha uzun yasama egilimindedir. MELAS (Mitokondriyal Ensefalomiyopati Laktik Asidoz ve Inme Benzeri Nöbetler): Semptomlar: Kisa boy, nöbetler, inme benzeri nörolojik eksiklikler, tekrarlayan bas agrilari, bilissel regresyon, hastalik progresyonu, düzensiz kirmizi lifler. Neden: Mitokondriyal DNA nokta mutasyonlari: A324SG (en yaygin) MELAS - Mitokondriyal miyopati (kas güçsüzlügü), Ensefalopati (beyin ve merkezi sinir sistemi hastaligi), Laktik Asidoz (anaerobik solunumu olusturan bir ürünün birikimi) ve Inme benzeri ataklar (kismi felç, kismi görme kaybi veya diger nörolojik anomaliler). MELAS, 2 ve 15 yaslari arasinda tipik baslangiçli, ilerleyici nörodejeneratif bir hastaliktir, ancak bebeklik döneminde veya yetiskinlik dönemlerinde ortaya çikabilir. Ilk belirtiler arasinda inme benzeri ataklar, nöbetler, migren bas agrilari ve tekrarlayan kusma sayilabilir. Genellikle, boy kisaligi yaygin olmasina ragmen, hasta bebeklik döneminde normal görünmektedir. Daha az yaygin olan, gelisimsel gecikme, ögrenme güçlügü veya dikkat eksikligi bozuklugunu içerebilen erken bebeklik belirtileridir. Egzersiz intoleransi, ekstremite zayifligi, isitme kaybi ve diyabet, inme benzeri ataklarin ortaya çikmasindan önce de olabilir. Siklikla nöbetlerin eslik ettigi inme benzeri ataklar MELAS'in belirleyici semptomudur ve kismi felç, görme kaybi ve fokal nörolojik defektlere neden olur. Bu bölümlerin asamali kümülatif etkileri, genellikle motor becerilerin (konusma, hareket ve yeme) kaybi, duyu bozuklugu (görme kaybi ve vücut duyularinin kaybi) ve zihinsel bozukluk (demans) gibi degisken kombinasyonlarla sonuçlanir. MELAS hastalari ayrica kas güçsüzlügü, periferik sinir disfonksiyonu, diyabet, isitme kaybi, kalp ve böbrek problemleri ve sindirim bozukluklari gibi ek semptomlara da maruz kalabilir. Laktik asit genellikle kanda, beyin omurilik sivisinda veya her ikisinde yüksek seviyelerde birikmektedir. MELAS, mitokondri içindeki DNA'daki bir kusur nedeniyle maternal olarak kalitilir. MELAS'a neden olabilecek en az 17 farkli mutasyon vardir. Simdiye kadar en yaygin olani, vakalarin yaklasik %80'inden sorumlu olan A324BG mutasyonudur. MELAS için iyilestirici tedavi veya spesifik tedavi yoktur. Klinik çalismalarin etkinligi kanitlanmamis olsa da, genel tedaviler su gibi metabolik tedavileri içerebilir: CoQ10, kreatin, fillokinon ve diger vitaminler ve takviyeler. Ek semptom yönetimi için nöbet ilaçlari ve insülin gibi ilaçlar gerekebilir. Kas disfonksiyonu olan bazi hastalar hafif gözetimli egzersizden yararlanabilir. Bazi durumlarda, reçete edilebilecek digertedaviler arasinda, diklorasetat (DCA) ve menadion bulunur; ancak bunlar, zararli yan etkilere sahip olma potansiyellerinden dolayi rutin olarak kullanilmaz. MELAS'in prognozu zayiftir. Tipik olarak, bazi hastalar daha uzun yasayabilmesine ragmen ölüm yasi 10 ila 35 arasindadir. Ölüm, ilerleyici demans ve kas güçsüzlügü veya kalp ya da böbrek gibi diger etkilenmis organlarin komplikasyonlari nedeniyle genel vücut tükenmesi sonucu ortaya çikabilir. MERRF, genellikle çocukluk döneminde baslayan, ancak eriskin dönemde ortaya çikabilen ilerleyici bir çok sistemli sendromdur. Ilerleme orani çok çesitli olarak degisir. Etkilenen kardesler arasinda semptomlarin baslangiç ve kapsami farkli olabilir. MERRF'nin klasik özellikleri sunlari içerir: . Miyoklonus (kisa, ani, kas spazmi segirmesi) - en karakteristik semptom Epileptik nöbetler . Düzensiz kirmizi lifler (MERRF ve diger mitokondriyal rahatsizliklari olan hastalarin kas biyopsisinde gözlenen karakteristik bir mikroskobik anomali) Ek semptomlar sunlari içerebilir: isitme kaybi, Iaktik asidoz (kanda yükselmis Iaktik asit seviyesi), kisa boy, egzersiz intoleransi, demans, kardiyak defektler, göz anomalileri ve konusma bozuklugu. Her ne kadar birkaç MERRF vakasi sporadik olsa da, çogu vaka, mitokondri içinde bir mutasyona bagli olarak maternal olarak kalitilmaktadir. En yaygin MERRF mutasyonu, vakalarin %80'inden fazlasini olusturan A8344G'dir. Dört adet baska mitokondriyal DNA mutasyonun MERRF'ye neden oldugu bildirilmistir. Bir anne MERRF mutasyonunu tüm yavrularina iletirken, bazilari hiçbir zaman semptom göstermeyebilir. Tüm mitokondriyal bozukluklarda oldugu gibi, MERRF için bir iyilestirici tedavi yoktur. Terapiler, genellikle "kokteyl" kombinasyonunda koenzim Q10, L-karnitin ve çesitli vitaminleri içerebilir. Nöbetlerin yönetimi genellikle antikonvülsan ilaçlar gerektirir. Diger semptomlarin kontrolü için ilaçlar da gerekli olabilir. MERRF için prognoz, baslangiç yaslarina, semptomlarin tipine ve siddetine, ilgili organlara ve diger faktörlere bagli olarak büyük ölçüde degisir. Mitokondriyal DNA Tükenmesi: Semptomlar üç ana formu içerir: 1. Konjenital miyopati: Yenidogan güçsüzlügü, destekli ventilasyon gerektiren hipotoni, olasi böbrek fonksiyon bozuklugu. Siddetli Iaktik asidoz. Öne çikan düzensiz kirmizi lifler. Solunum yetmezligine bagli ölüm genellikle bir yasindan önce gerçeklesir. 2. Infantil miyopati: Bir yasina kadar normal erken gelisimi takiben, kuvvetsizlik ortaya çikar ve hizla artar, solunum yetmezligine ve genellikle birkaç yil içinde ölüme neden 3. Hepatopati: Büyümüs karaciger ve inatçi karaciger yetmezligi, miyopati. Siddetli Iaktik asidoz. Ölüm tipik olarak ilk yil içinde gerçeklesir. Friedreich ataksisi Friedreich ataksisi (FRDA veya FA), protein frataksinin düsük düzeylerinden kaynaklanan otozomal resesif nörodejeneratif ve kardiyovenjeneratif bir hastaliktir. Frataksin mitokondriyal respiratuvar zincir komplekslerinde demir-kükürt kümelerinin bir araya getirilmesi için önemlidir. Amerika Birlesik Devletleri'ndeki FRDA'nin yayginligina www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/001411.htm). Hastalik, istemli motor koordinasyonunun progresif olarak kaybina (ataksi) ve kardiyak komplikasyonlarina neden olur. Semptomlar tipik olarak çocukluk döneminde baslar ve hasta büyüdükçe hastalik giderek artmakta olup; hastalar sonunda hareket yetmezliklerinden dolayi tekerlekli sandalye kullanmak zorunda kalirlar. Kalitsal kusurlu mitokondrileri içeren konjenital bozukluklara ek olarak, edinilmis mitokondriyal disfonksiyonun, özellikle Parkinson, Alzheimer ve Huntington Hastaliklari gibi yaslanma ile iliskili nörodejeneratif hastaliklar olmak üzere hastaliklara katkida bulunmasi önerilmistir. Mitokondriyal DNA'daki somatik mutasyonlarin insidansi, yasla birlikte üstel olarak yükselmekte olup; azalmis solunum zinciri aktivitesi yaslanan insanlarda evrensel olarak bulunur. Mitokondriyal disfonksiyon, eksitotoksisite, nöronal hasar, nöbetler, inme ve iskemi ile iliskili olan serebral vasküler kazalarda da rol oynamaktadir. Mevcut bulusun bir bilesigini içeren farmasötik bilesim/er Mevcut bulus ayrica, mevcut bulusun bilesigini, bir ya da daha fazla farmasötik olarak kabul edilebilir seyreltici veya tasiyici ile birlikte içeren bir farmasötik bilesim saglar. Mevcut bulusun bilesigi veya bunun bir formülasyonu herhangi bir konvansiyonel metotla, örnegin, sinirlandirma olmaksizin, parenteral olarak, oral olarak, topikal olarak (örnegin bukal, sublingual veya transdermal), bir tibbi cihaz vasitasiyla (örn. bir stent), inhalasyon yoluyla veya enjeksiyon yoluyla (subkütanöz veya intramusküler) uygulanabilir. Tedavi, tek bir doz veya bir süre boyunca çok sayida dozdan olusabilir. Tedavi, günde bir kez, günde iki kez, günde üç kez, günde dört kez vb. siklikla yapilabilir. Tedavi ayrica, örnegin damlatma yoluyla intravenöz uygulama gibi sürekli uygulama ile de olabilir. Bulusa ait bilesigin tek basina uygulanabilmesi mümkün olmakla birlikte, bir veya daha fazla kabul edilebilir tasiyici ile birlikte bir farmasötik formülasyon olarak sunulmasi tercih edilir. Tasiyicilar, mevcut bulusun bilesigiyle uyumlu olacak ve alicilarina zarar vermeyecek sekilde "kabul edilebilir" olmalidir. Uygun tasiyicilarin örnekleri asagida ayrintili olarak verilmektedir. Formülasyonlar, uygun sekilde, bir birim dozaj biçiminde sunulabilir ve eczacilik tekniginde iyi bilinen metotlarla hazirlanabilir. Bu tür metotlar, aktif bilesenin (mevcut bulusun bilesigi) bir ya da daha fazla yardimci içerik maddesi barindiran tasiyiciyla iliskiye sokulmasi adimini içerir. Genel olarak, bu formülasyonlar, aktif bilesenin, sivi tasiyicilar veya ince parçalanmis kati tasiyicilarla ya da her ikisi ile homojen olarak ve yakin temasla bir araya getirilmesi ve sonra, gerektigi takdirde, ürünün sekillendirilmesi yoluyla hazirlanir. Mevcut bulusun bilesigi normalde intravenöz olarak, oral olarak veya herhangi bir parenteral yolla, aktif bileseni, istege bagli olarak bir toksik olmayan organik ya da inorganik asit veya baz katilma tuzu biçiminde, farmasötik olarak kabul edilebilir bir dozaj biçimi içinde içeren bir farmasötik formülasyon biçiminde uygulanir. Bozukluga ve tedavi edilecek olan hastaya ve ayni zamanda uygulama yoluna bagli olarak, bilesimler degisen dozlarda uygulanabilir. Farmasötik bilesimler, üretim ve depolama kosullari altinda stabil olmalidir; bu nedenle, tercihen bakteri ve mantarlar gibi mikroorganizmalarin kirletici etkisine karsi korunmalidir. Tasiyici, örnegin, su, etanol, poliol (örn. gliserol, propilen glikol ve sivi polietilen glikol), bitkisel yaglar ve bunlarin uygun karisimlarini içeren bir çözücü veya dispersiyon ortami olabilir. Örnegin, mevcut bulusun bilesigi ayrica oral olarak, bukal olarak veya sublingual olarak, tabletler, kapsüller, ovüller, iksirler, solüsyonlar veya süspansiyonlar biçiminde uygulanabilmekte olup, bunlar aninda, gecikmeli veya kontrollü salimli uygulamalar için tatlandirici veya renk verici ajanlar içerebilir. Oral uygulama için uygun olan mevcut bulusa göre formülasyonlar ayri birimler halinde, örnegin kapsüller, kaseler veya tabletler halinde sunulabilmekte olup, bunlarin her biri önceden belirlenmis miktarda aktif bileseni; bir toz veya granül biçiminde; bir çözelti veya süspansiyon biçiminde, sulu veya susuz bir sivi içinde; veya bir su içinde yag sivi emülsiyonu veya bir yag içinde su sivi emülsiyonu biçiminde içerir. Aktif bilesen ayrica bir bolus, elektuar ya da macun biçiminde de sunulabilir. Mevcut bulusun bilesiginin oral uygulama için uygun olan çözeltileri veya süspansiyonlari ayrica, örn. N,N-dimetilasetamit, dagitici maddeler, örn. polisorbat 80, yüzey aktif maddeler ve çözündürücüler, örn. polietilen glikol, Phosal 50 PG (fosfatidilkolin, soya yag asitleri, etanol, mono/digliseritler, propilen glikol ve askorbil palmitattan olusur) içerebilir. Mevcut bulusa göre olan formülasyonlar, ayni zamanda, Formül l'e göre olan bir bilesigin, bir sulu yag emülsiyonunda mevcut olabildigi emülsiyonlar formunda da olabilir. Yag, örnegin, soya fasulyesi yagi veya aspur yagi, orta zincirli trigliserit (MCT yagi), örnegin hindistancevizi yagi, hurma yagi vb. veya bunlarin kombinasyonlari gibi herhangi bir yag benzeri madde olabilir. Tabletler örnegin mikrokristalli selüloz, Iaktoz (örn. laktoz monohidrat veya susuz laktoz), sodyum sitrat, kalsiyum karbonat, dibazik kalsiyum fosfat ve glisin, bütillenmis hidroksitolüen (E321), krospovidon, hipermeloz, bozundurucular, örnegin nisasta (tercihen misir, patates veya tapyoka nisastasi), sodyum nisasta glikolat, kroskarmeloz sodyum ve belirli kompleks silikatlar ve granülasyon baglayicilari, örnegin polivinilpirolidon, hidroksipropilmetilselüloz (HPMC), hidroksi-propilselüloz (HPC), makrogol 8000, sukroz, jelatin ve akasya gibi eksipiyanlari içerebilir. Ayrica, kayganlastirici ajanlar, örnegin magnezyum stearat, stearik asit, gliseril behenat ve talk da dahil edilebilir. Bir tablet sikistirma ya da kaliplama ile, istege bagli olarak bir ya da daha fazla yardimci bilesenle birlikte hazirlanabilir. Sikistirilmis tabletler uygun bir makina içinde, aktif bilesenin bir serbest akis formu, örnegin bir toz veya granüller içine, istege bagli olarak bir baglayici (örn. povidon, jelatin, hidroksipropilmetil selüloz), kayganlastirici, inert seyreltici, koruyucu, dagitici (örn. sodyum nisasta glikolat, çapraz bagli povidon, çapraz bagli sodyum karboksimetil selüloz), yüzey-aktif veya dispersan ajanla karistirilmis halde sikistirilmasiyla hazirlanabilir. Kaliplanan tabletler, uygun bir makine içinde, toz haline getirilmis bilesigin, inert bir sivi seyreltici ile nemlendirilerek kaliplanmasiyla hazirlanabilir. Tabletler, istege bagli olarak kapli ya da çentikli olabilir ve içlerinde bulunan aktif bilesenin yavas ya da kontrollü salimini saglayacak sekilde, örnegin istenen salim profilini saglamak üzere çesitli oranlarda hidroksipropilmetilselüloz kullanilarak formüle edilebilir. Benzer türde kati bilesimler de ayrica jelatin kapsüllerin içinde dolgular olarak kullanilabilir. Bu baglamda tercih edilen eksipiyanlar arasinda Iaktoz, nisasta, bir selüloz, süt sekeri veya yüksek moleküler agirlikli polietilen glikol bulunur. 8qu süspansiyonlar ve/veya iksirler için, mevcut bulusun bilesikleri çesitli tatlandirici veya lezzet verici ajanlar, renklendirici madde veya boyalarla, emülgatör ve/veya süspanse edici ajanlarla ve seyrelticiler, örnegin su, etanol, propilen glikol ve gliserinle ve bunlarin kombinasyonlariyla birlestirilebilir. Agizdan topikal uygulamaya uygun formülasyonlar arasinda, aktif bileseni çesnili olarak içeren, genellikle sukroz ve akasya veya kitreyle içeren pastiller; aktif bileseni inert olarak, örnegin jelatin ve gliserin veya sukroz ve akasya içinde içeren pastiller; ve aktif bileseni uygun bir sivi tasiyici içinde içeren gargaralar bulunur. Topikal uygulama için uyarlanmis farmasötik bilesimler, merhemler, kremler, süspansiyonlar, Iosyonlar, tozlar, çözeltiler, macunlar, jeller, emdirilmis sargilar, spreyler, aerosoller veya yaglar, transdermal cihazlar, tozlama tozlari ve benzerleri olarak formüle edilebilir. Bu bilesimler, aktif maddeyi içeren geleneksel yöntemlerle hazirlanabilir. Böylelikle, koruyucu maddeler, ilaç penetrasyonuna yardimci olan çözücüler, krem veya merhemlerde yumusatici ve Iosyonlar için etanol veya oleil alkol gibi uygun geleneksel tasiyicilar ve katki maddeleri de içerebilirler. Bu gibi tasiyicilar, bilesimin yaklasik %1 ila yaklasik %98'i kadar mevcut olabilir. Daha genel olarak, bilesimin yaklasik %80'ine kadarini olusturacaklardir. Yalnizca bir örnek olarak, bir krem veya merhem, arzu edilen kivama sahip bir krem veya merhem üretmek için yeterli miktarlarda bilesigin agirlikça yaklasik %5-10'unu içeren yeterli miktarda hidrofilik malzeme ve suyun karistirilmasiyla hazirlanir. Transdermal uygulama için uyarlanan farmasötik bilesimler, uzun bir süre boyunca alicinin epidermisi ile yakin temas halinde kalmasi amaçlanan ayri yamalar olarak sunulabilir. Örnegin, aktif ajan yamadan iyontoforez ile dagitilabilir. Dis dokulara, örnegin agiz ve deriye uygulamalarda, bilesimler tercihen bir topikal merhem veya krem olarak uygulanir. Bir merhem içinde formüle edildiginde, aktif madde bir parafinikle veya suyla karisabilir bir merhem bazi ile birlikte kullanilabilir. Alternatif olarak, aktif ajan, bir su içinde yag krem bazli olarak veya bir yag içinde su bazli olarak bir krem içinde formüle edilebilir. Parenteral uygulama için, sivi dozaj biçimleri aktif bilesen ve steril bir vehikül, örnegin, sinirlandirma olmaksizin, su, alkoller, polioller, gliserin ve bitkisel yaglar kullanilarak hazirlanmakta olup, su tercih edilir. Aktif ajan, kullanilan vehikül ve konsantrasyona dayali olarak, vehikül içinde kolloidal olabilir, askiya alinabilir ya da çözündürülebilir. Çözeltilerin hazirlanmasinda aktif bilesen enjeksiyon için suda çözülebilir ve uygun bir sise veya ampule doldurulmadan ve sizdirmaz hale getirilmeden önce filtreyle sterilize edilebilir. Avantajli olarak, lokal anestezikler, koruyucular ve tampon maddeleri gibi maddeler vehikül içinde çözülebilir. Stabiliteyi arttirmak için, bilesim sise içine doldurulduktan sonra dondurulabilir ve su vakum altinda çikarilabilir. Kuru Iiyofilize toz daha sonra viyal içinde kapatilir ve kullanimdan önce siviyi yeniden olusturmak için enjeksiyon için bir sise su temin edilebilir. Mevcut bulusun, enjekte edilebilir kullanima uygun farmasötik bilesimleri steril sulu çözeltiler ve dispersiyonlari içerir. Ayrica, bilesimler bu tür çözeltiler veya dispersiyonlarin ekstamporane hazirlanisi için steril tozlar biçiminde olabilir. Her durumda, nihai enjekte edilebilir form steril olmali ve kolay siringalama için etkili bir sekilde akiskan olmalidir. Parenteral süspansiyonlar, esas olarak çözelti ile ayni sekilde hazirlanir, ancak aktif bilesen, çözülmek yerine araç içinde süspansiyon haline getirilir ve sterilizasyon, filtrasyon ile gerçeklestirilemez. Aktif bilesen, steril vehikül içinde süspansiyon haline getirilmeden önce etilen okside maruz birakilarak sterilize edilebilir. Avantajli bir sekilde, aktif bilesenin homojen dagilimini kolaylastirmak için bilesime bir yüzey aktif madde veya islatici madde eklenir. Yukarida özellikle bahsedilen içerik maddelerine ek olarak, mevcut bulusun formülasyonlarinin, söz konusu formülasyonun tipine iliskin olarak sanayide geleneksel olarak bilinen baska maddeleri de içerebilecegi, örnegin oral uygulama için uygun olanlarin, tatlandirici maddeler içerebilecegi anlasilmalidir. Teknikte uzman bir kisi, uygun bir formülasyonun nasil seçilecegini ve nasil hazirlanacagini bilecektir (bkz. Örnegin Remington's Pharmaceutical Sciences 18. baski veya sonrasi). Teknikte uzman bir kisi, çesitli uygulama yollari için uygun formülasyonlarin nasil hazirlanacagini bilecektir. Teknikte uzman bir kisi tarafindan, mevcut bulusun bir bilesiginin en uygun miktari ve ayrik dozajlarin araliklandirilmasinin, tedavi edilen rahatsizligin yapisi ve kapsami, uygulama biçimi, yolu ve bölgesi ve tedavi edilen hastanin yasi ve durumuna bagli olarak belirenebilecegi ve kullanilacak olan uygun dozajlari nihai olarak bir doktorun belirleyecegi takdir edilecektir. Bu dozaj, uygun oldugu kadar siklikla tekrarlanabilir. Yan etkiler gelisirse, dozajin miktari ve/veya sikligi normal klinik uygulamaya uygun olarak degistirilebilir veya azaltilabilir. Baglam aksini gerektirmedikçe, burada belirtilen tüm %degerler %agirlik/agirliktir. Bulusa ait bilesiklerin hepsi, süksinik asit, süksinil koenzim A'yi veya bunun kanonik formlarini serbest birakmak için bir biyolojik matriste dönüstürülebilir. Bunu asagidaki gibi yapabilirler. R ', R" veya R'" ifadeleri formül Il'nin bir bilesigi oldugunda, Rz'yi içeren asil grubu, uygun bir enzimle, tercihen bir esteraz ile yarilabilir. Bu, bir karbonil, imin veya tiyokarbonil gruba ve bir serbest karboksilik aside kendiliginden kaplanabilen bir hidroksimetil ester, bir aminometil ester veya bir tiyol metil ester açiga çikarir. Örnek olarak, Formül I'de, A ifadesi OR' oldugunda, R' ifadesi formül ll ve B ifadesi H ve Z ifadesi -CH20H2-'dir. 515153 0 IL R` R* 0 R2 X @JK/Y R2 OH -XXOMOH B ifadesi -SR"' oldugunda bir tiyol grubu salinir. Bu, tiyol grubunun indirgeyici özellikleri oldugu için özellikle avantajli olarak kabul edilir. Birçok hastaligin hücre yapisina ve hücre islevine zarar verebilecek istenmeyen bir oksidatif stres bileseni vardir. Buna göre, bir anti-oksidan olarak hareket edebilen ve serbest radikalleri kaziyan veya oksijen- reaktif türleri azaltabilen bir bilesenin saliminin, tibbi veya kozmetik kullanimda ekstra fayda saglamasi beklenir. R', R" veya R'" ifadeleri formül V'in bir bilesigi oldugu durumda, Rio grubu üzerindeki ornatik, uygun bir enzimin etkisi veya iri vivo kimyasal hidroliz yoluyla uzaklastirilabilir. Örnek olarak, Formül l'de, A ifadesi OR' oldugunda ve R' ifadesi formül il ve B ifadesi H ve Z ifadesi -CH20H2- oldugunda, X ifadesi O ve R8 ifadesi H, R9 ifadesi Me ve R10 ifadesi O-asetildir. 2 x süksinat + 1 x AcOH R', R" veya R"' ifadeleri formül Vll'nin bir bilesigi oldugu durumda, grup, süksinik asidi serbest birakmak üzere uygun bir enzimin etkisiyle veya in vivo kimyasal hidroliz yoluyla uzaklastirilabilir. Örnek olarak, Formül l'de, A ifadesi SR oldugunda R ifadesi formül Vll ve B ifadesi OH ve Z ifadesi -CH2CH2- oldugunda, X5 ifadesi C02H ve R1 ifadesi Et'dir: /TNIASÄ/YOH &SH + HOÄ/Y Alternatif olarak, formül Vll'ye ait bilesikler için, entite kendi içinde, suksiniI-CoA'nin yerine dogrudan Krebs döngüsüne alinabilir. Formül I asagidaki gibi oldugunda: bilesik, asagidaki semaya ve X4 ifadesinin -COOH oldugu duruma göre bir bilesigi vermek üzere hidrolize olabilir. Bulusun diger yön/eri Mevcut bulus ayrica formül I'in bir bilesigi veya bunun yukarida tanimlanmis olan farmasötik olarak kabul edilebilir bir biçimi ve asagidakilerin arasindan bagimsiz olarak seçilen bir ya da daha fazla ajanin bir kombinasyonunu (örnegin, mitokondriyal fonksiyon bozuklugunun tedavisi için) saglar: - Kinon türevleri, örnegin ubikinon, idebenon, MitoQ . Vitaminler, örnegin Tokoferoller, Tokotrienoller ve Troloks (Vitamin E), Askorbat (C), Tiamin (B1), Riboflavin (B2), Nikotinamid (BS), Menadion (K3), . Vitaminlere ek olarak antioksidanlar, örnegin, TPP-bilesikleri (MitoQ), Sk- bilesikleri, Epikatekin, Katekin, Lipoik asit, Ürik asit, Melatonin . Dikloroasetat . Metilen Mavisi . I-arjinin . Szeto-Schiller peptitleri . Kreatin . Benzodiazepinler . PGC-ld modülatörleri . Ketojenik diyet Mevcut bulusun bir baska yönüne göre. burada açiklanan bilesiklerden herhangi biri herhangi bir baska bilesikle, örnegin sodyum bikarbonatla (bir bolus (örn., 1 mekv/kg) ve ardindan bir sürekli infüzyon olarak), burada açiklanan bilesiklere eslik eden ilaç olarak uygulanabilir. Mitokondriyal oksidatif fosforilasyonun kompleks I ile iliskili bozukluguna bag/i Iaktik asidoz veya ilaca bagli yan etkiler Mevcut bulus ayrica Iaktik asidozun ve mitokondriyal iliskili ilacin neden oldugu yan etkilerin önlenmesi veya tedavisi ile ilgilidir. Özellikle, mevcut bulusa göre bilesikler, Kompleks I'de veya bunun akis yukarisinda mitokondriyal iliskili ilaca bagli olarak gelisen yan etkilerin önlenmesi ya da tedavisinde kullanilir, ya da baska türlü ifade etmek gerekirse, mevcut bulus Kompleks I'in ilaca bagli olarak gelisen dogrudan inhibisyonunun veya Kompleks I'e NADH teminini kisitlayan herhangi bir ilaca bagli olarak gelisen etkinin (örnegin, sinirlandirma olmaksizin, Krebs döngüsü, glikoliz, beta- oksidasyon, piruvat metabolizmasi ve hatta glükoz veya diger kompleks I ile iliskili substratlarin tasinmasini veya düzeylerini etkileyen ilaçlar üzerindeki etkinin) önlenmesi ya da tedavisi için mevcut bulusa göre bilesikler saglar. Ilaçlar tarafindan indüklenen mitokondriyal toksisite istenen terapötik etkinin bir parçasi olabilir (örnegin, kanser ilaçlari tarafindan tetiklenen mitokondriyal toksisite), fakat çogu durumda ilaçlarin neden oldugu mitokondriyal toksisite istenmeyen bir etkidir. Mitokondriyal toksisite, oksidatif fosforilasyon ile mitokondriyal ATP olusumunun hücresel kaybini telafi etmek için glikolizi belirgin olarak artirabilir. Bu, Iaktik plazma seviyelerinde artisa neden olabilir ve bu artisin asiri olmasi halinde, ölümcül olabilecek olan Iaktik asidozla sonuçlanir. Tip A Iaktik asidoz, esas olarak doku hipoksisi ile iliskili iken, tip B aerobik Iaktik asidoz, ilaçlar, toksin veya karaciger hastaliklari, diyabet, kanser ve dogustan gelen metabolizma hatalari (örnegin mitokondriyal genetik defektler) gibi Sistemik bozukluklarla iliskilidir. Bilinen birçok ilaç, mitokondriyal solunumu (örnegin antipsikotikler, lokal anestezikler ve anti-diyabetikler) olumsuz etkilemektedir ve buna göre, böyle bir ilaç maddesi kullaniminin neden oldugu negatif mitokondriyal etkilerin ortadan kaldirilmasi veya azaltilmasi için kullanilabilen araçlarin tanimlanmasi veya gelistirilmesi gerekmektedir. Mevcut bulus Iaktik asidozun ve mitokondriyal iliskili ilacin neden oldugu yan etkilerin önlenmesi veya tedavisinde kullanima yönelik olarak bilesikler saglar. Özellikle, süksinat ön ilaçlari, Kompleks I'de veya bunun akis yukarisinda mitokondriyal iliskili ilaca bagli olarak gelisen yan etkilerin önlenmesi ya da tedavisinde kullanilir, ya da baska türlü ifade etmek gerekirse, mevcut bulus Kompleks I'in ilaca bagli olarak gelisen dogrudan inhibisyonunun veya Kompleks l'e NADH teminini kisitlayan herhangi bir ilaca bagli olarak gelisen etkinin (örnegin, sinirlandirma olmaksizin, Krebs döngüsü, glikoliz, beta- oksidasyon, piruvat metabolizmasi ve hatta glükoz veya diger kompleks I ile iliskili substratlarin tasinmasini veya düzeylerini etkileyen ilaçlar üzerindeki etkinin) önlenmesi ya da tedavisi için süksinat ön ilaçlari saglar. Yukarida belirtildigi gibi, mitokondriyal iliskili yan etkilere sahip olabilen ilaçlarla tedavi edilen hastalarda artmis Iaktat plazma seviyeleri görülür. Bu bulus, metforminin (tip 2 diyabet için birinci basamak tedavisi ve nadir görülen bir yan etki olarak Iaktik asidozla iliskilendirilmistir) Kompleks l'de insan periferal kan hücrelerinin mitokondriyal fonksiyonunu zamana ve doza bagimli bir sekilde, metformin intoksikasyonu için iliskili konsantrasyonlarda inhibe ettigini gösteren deneysel sonuçlara dayanir. Metformin ayrica, zamanla bozulmamis trombositler tarafindan laktat üretiminde önemli bir artisa neden olur. Bulusa göre bilesiklerin kullanimi, metformine maruz kalmis saglam trombositlerde laktat üretimini önemli ölçüde azaltmistir. Ekzojen olarak uygulanan süksinat, yani substratin kendisi, metforminin indükledigi Iaktat üretimini azaltmamistir. Baska bir çalismada, Iaktat üretimi, rotenon ile inhibe olan trombositlerde birkaç saat boyunca gözlemlenmistir (yani, kompleks I'in fonksiyonunun bozuldugu bir durumdur). Bulusa göre olan bilesiklerin (ancak süksinat degil) kullanimi, saglam insan trombositlerinin rotenon-indüklü Iaktat üretimini zayiflatmistir. Respirometrik deneyler insan fibroblastlarinda ve insan kalp kas Iiflerinde tekrarlanmis ve kan hücrelerinde görülen bulgulari dogrulamistir. Buna göre, mevcut bulus, laktik asidozun önlenmesinde veya tedavisinde kullanilmak üzere Formül l'e uygun bilesikler saglar. Bununla birlikte, burada rapor edilen sonuçlar Kompleks I'in dogrudan inhibisyonuyla iliskili Iaktik asidoza dayali oldugundan veya Kompleks I'de veya bunun akinti yukarisindaki bir arizayla iliskili oldugundan dolayi, mevcut bulusa göre bilesiklerin, Kompleks l'de veya bunun akinti yukarisinda mitokondriyal iliskili ilaca bagli olarak gelisen yan etkilerin önlenmesi ya da tedavisinde kullanima uygun oldugu düsünülmektedir. Mevcut bulusa göre bilesikler ayrica Kompleks I'in akis yukarisindaki metabolizmayi bozan ilaç etkilerine karsi da etki eder (Kompleks l'e NADH teminini kisitlayacak olan herhangi bir ilaç etkisini kapsayacak olan Kompleks I'in dolayli inhibisyonu, örnegin Krebs döngüsü, glikoliz, beta-oksidasyon, piruvat metabolizmasi üzerindeki etkiler ve hatta glükoz ve diger kompleks I ile iliskili substratlarin düzeylerini etkileyen ilaçlar). Bulusa göre bilesiklerin, endüstriyel uygulamalarda, örnegin Iaktat olusumunu azaltmak veya inhibe etmek veya ticari veya endüstriyel hücre hatlarinin ATP mevcudiyetini arttirmak için in vitro olarak kullanilabilecegi düsünülmektedir. Örnekler hücre kültüründe, organ korunmasinda vb. kullanimlari içerir. Bulusa göre bilesikler, ilaca bagli mitokondriyal iliskili yan etkilerin tedavisinde veya önlenmesinde veya tedavide hücresel enerji düzeylerinin (ATP) arttirilmasinda veya geri getirilmesinde kullanilir. Özellikle, dogrudan veya dolayli olarak ilaç kaynakli Kompleks l mitokondriyal iliskili yan etkilerin tedavisinde veya önlenmesinde kullanilirlar. Özellikle, bir ilaç maddesinin neden oldugu Iaktik asidoz gibi Iaktik asidozun tedavisinde veya önlenmesinde kullanilirlar. Mevcut bulus ayrica formül l'in bir bilesigi ve mitokondriyal iliskili bir yan etkiyi, özellikle ilaç maddesi tarafindan Kompleks I'in dogrudan ya da dolayli olarak bozulmasindan kaynaklanan bir yan etkiyi indükleyebilecek olan bir ilaç maddesinin bir kombinasyonu ile ilgilidir. Bu kombinasyon, mitokondriyal iliskili bir yan etkinin profilaktik olarak önlenmesi veya yan etkinin ortaya çikmasi durumunda, mitokondriyal yan etkilerin hafifletilmesinde ve/veya tedavi edilmesinde kullanilabilir. Asagida tarif edildigi gibi bilesiklerin, özellikle kompleks I'in dogrudan veya dolayli inhibisyonuna bagli yan etkilerde, ilaca bagli yan etkilerin tedavisinde veya önlenmesinde etkili olacagi düsünülmektedir. Kompleks l arizalarina, sorunlarina veya bozulmasina yol açtigi bilinen ve/veya yan etki olarak Iaktik asidoza yol açtigi bilinen ilaç maddeleri sunlardir: . Asetaminofen, kapsaisin de dahil olmak üzere analjezikler . Amiodaron, perhekzilin dahil antianjinaller . Linezolid, trovafloksasin, gentamisin dahil olmak üzere antibiyotikler . Mitomisin C, adriamisin dahil olmak üzere kinonlari içeren antikanser ilaçlari . Valproik asit dahil anti-konvulsant ilaçlar . Metformin, fenformin, butilbiguanid, troglitazon ve rosiglitazon, pioglitazon dahil olmak üzere anti-diyabetikler . Fialuridin dahil Anti-Hepatit B maddeleri . Antihistaminler . Tolkapon dahil Anti-Parkinson maddeleri . Anti-sizofreni zotepin, klozapin . Antiseptikler, kuaterner amonyum bilesikleri (QAC) . Izoniazit dahil olmak üzere anti-tüberküloz maddeleri . Klofibrat, siprofibrat, simvastatin dahil olmak üzere fibratlar . Propofol dahil hipnotikler - Immünosüpresif hastaligi modifiye edici antiromatizmal ilaç (DMARD) Leflunomid lokal anestetikler, örnegin bupivakain, diklofenak, indometasin ve lidokain Kas gevsetici, örnegin dantrolen . Klorpromazin, flufenazin ve haloperidol gibi antipsikotik nöroleptikler dahil olmak üzere nöroleptikler . Efavirenz, tenofovir, emtrisitabin, zidovudin, Iamivudin, rilpivirin, abakavir, didanozin dahil olmak üzere NRTI (nükleotit ters transkriptaz inhibitörleri) NSAlD'Ier, örnegin nimesülfit, mefenamik asit, sulindak . Barbiturik asitler. Yan etkiler olarak Iaktik asidozu oldugu bilinen diger ilaç maddeleri arasinda beta2- agonistleri, epinefrini teofilin veya diger herbisitler bulunur. Alkoller ve kokain de Iaktik asidozla sonuçlanabilir. Ayrica, bulusun bilesiklerinin, bir kompleks l kusuruyla iliskili olmasa bile, laktik asidozun tedavisinde veya önlenmesinde de etkili olabilecegi düsünülmektedir. Ilaçlar ve mevcut bulusun bilesikler/nin kombinasyonu Mevcut bulus ayni zamanda bir Iaktik asidozdan ve bir kompleks l kusuru, inhibisyonu veya arizasina bagli yan etkiden seçilen ilaca bagli bir yan etkinin tedavisinde ve/veya önlenmesinde kullanim için bir ilaç maddesinin ve bulusun bir bilesiginin kombinasyonuna iliskin olup, içerisinde i) ilaç maddesi, ilaç maddesinin endike oldugu bir hastaligin tedavisi için kullanilir ve ii) bulusa ait bilesik, ilaç maddesi tarafindan indüklenen veya indüklenebilen yan etkilerin önlenmesi veya hafifletilmesi için kullanilmakta olup; burada yan etkiler, Iaktik asidozdan ve Kompleks l kusuru, inhibisyonu veya islev bozukluguna bagli yan etkiler arasindan seçilir. Bu tür bir ilaç maddesinin mevcut bulusun herhangi bir bilesigiyle herhangi bir kombinasyonu mevcut bulusun kapsami dahilindedir. Buna göre, buradaki açiklamaya dayanarak, teknikte uzman bir kisi, bulusun özünün, burada tarif edilen yari etkilerin önlenmesi veya azaltilmasi için bulusun bilesiklerinin degerli özelliklerinin bulgulari oldugunu anlayacaktir. Bu nedenle, bu bulusa ait bilesiklerin, hücrelerin içine girme ve burada tarif edilen yan etkilere sahip olan ya da potansiyel olarak yan etkileri olan herhangi bir ilaç maddesi ile kombinasyon halinde süksinat ve muhtemelen diger aktif maddeleri iletme potansiyeli olan kullanimi, bu tarifnamede açikça görülmektedir. Mevcut bulus ayrica: i) bir ilaç maddesini ve bulusun bir bilesigini içeren bir bilesim olup, içerisinde ilaç maddesi, Iaktik asidoz ve Kompleks l kusuru, inhibisyonu ya da islev bozukluguna bagli yan etkilerden seçilen potansiyel olarak ilaç kaynakli bir yan etkiye sahiptir; ii) yukarida madde i'de tarif edilen sekilde bir bilesim olup, içerisinde bulusa ait bilesik, ilaç maddesi tarafindan indüklenen veya indüklenebilen yan etkilerin önlenmesi veya hafifletilmesi için kullanilmakta olup; burada yan etkiler, Iaktik asidozdan ve Kompleks I kusuru, inhibisyonu veya islev bozukluguna bagli yan etkiler arasindan seçilir. Bilesim iki ayri paket biçiminde olabilir: . Ilaç maddesini veya ilaç maddesini içeren bir bilesimi barindiran bir birinci paket . mevcut bulusun bilesigini veya mevcut bulusun bilesigini içeren bir bilesimi barindiran bir ikinci paket. Bilesim ayrica, hem ilaç maddesini hem de bulusun bilesigini içeren tek bir bilesim olabilir. Bilesimin iki ayri paket içermesi durumunda, ilaç maddesi ve mevcut bulusun bilesigi farkli uygulama yollarindan uygulanabilir (örn., ilaç maddesi oral uygulama yoluyla ve mevcut bulusun bilesigi parenteral veya mukozal uygulama yoluyla) ve/veya esas olarak ayni zamanda uygulanabilir veya ilaç maddesi mevcut bulusun bilesiginden önce veya tam tersi sekilde uygulanabilir. Kitler Mevcut bulus ayrica asagidakileri içeren bir kit saglar: i) Iaktik asidoz ve bir Kompleks I bozuklugu, inhibisyonu veya arizasiyla iliskili yan etkiler arasindan seçilen bir potansiyel ilaca bagli olarak gelisen yan etkiye sahip bir ilaç maddesi içeren bir birinci kap, ve ii) ilaç maddesi tarafindan indüklenen veya indüklenebilen yan etkilerin önlenmesi veya hafifletilmesi için potansiyele sahip olan; içerisinde yan etkilerin, Iaktik asidoz ve Kompleks I kusuru, inhibisyonu veya islev bozukluguna bagli yan etkiler arasindan seçildigi bir bilesik içeren ikinci bir kap. Yan etkilerin tedavisi/önlenmesi için metot Mevcut bulus ayrica Iaktik asidoz ve bir Kompleks l bozuklugu, inhibisyonu veya arizasi ile iliskili yan etki arasindan seçilen bir ilaca bagli olarak gelisen yan etkisi olan bir hastanin tedavisine yönelik bir metotla ilgili olup, bu metot, hastaya mevcut bulusun bir bilesiginin etkili bir miktarinin uygulanmasini içerir, ve Iaktik asidoz ve bir Kompleks I bozuklugu, inhibisyonu veya arizasi ile iliskili yan etki arasindan seçilen bir yan etkiyi potansiyel olarak indükleyen bir ilaç maddesi ile tedavi edilen bir hastaligi olan bir hastada, Iaktik asidoz ve bir Kompleks l bozuklugu, inhibisyonu veya arizasi ile iliskili yan etki arasindan seçilen bir ilaca bagli olarak gelisen yan etkinin önlenmesi veya hafifletilmesine yönelik bir metotla ilgili olup, bu metot, hastaya, bahsedilen ilaç maddesi ile tedaviden önce, tedavi sirasinda veya sonrasinda mevcut bulusun bir bilesiginin etkili bir miktarinin uygulanmasini içerir. Metformin Metformin biguanidler sinifina ait bir anti-diyabetik ilaçtir. ABD'de diyabet vakalarinin yaklasik %90'ini olusturan tip 2 diyabet için ilk basamak tedavisidir. Anti-diyabetik etki, hepatik glikoz üretiminin azalmasina, periferal dokularda artan glikoz alimiyla insülinin biyolojik etkisini artirmaya ve bagirsakta glukoz alimini azaltmaya atfedilmistir, ancak tam etki mekanizmalari tam olarak açiklanmamistir. Diger anti-diyabetiklere göre avantajlarina ragmen, nadir görülen Iaktik asidoz vakalari (LA) yan etki olarak tanimlanmistir. LA, artmis anyon boslugu, 5 mM'in üzerinde bir arteriyel kan laktat seviyesi ve pH 5 7.35 olarak tanimlanmaktadir. Metformin ile iliskili LA'nin kesin patojenezi hala tam olarak ortaya çikmamakla birlikte, glukoneojenezin bir inhibisyonu ve bunun sonucunda alanin, piruvat ve laktat gibi glukoneojenik öncülerin birikmesi önerilmistir. Bununla birlikte, digerleri, ilacin, hem birincil terapötik hem de glikoz düsürücü etkinin yani sira metformin ile iliskili LA'nin gelisimi için anahtar faktör olan mitokondriyal fonksiyonla etkilesimini önermektedir. Mitokondriyal inhibisyonun bir sonucu olarak, hücre kismen yükseltilmis laktat seviyeleri ile glikolizi tesvik ederek, aerobikten anaerobik metabolizmaya kismen degisecektir. Metformin ile ayni ilaç sinifinin baska bir anti-diyabetik maddesi olan feniformin, yüksek oranda LA (10000 tedavi yili basina 4 vaka) nedeniyle çogu ülkede piyasadan çekilmistir. Buna karsilik, metformin için LA insidansi, fenformin için bunun yaklasik onda biridir ve bu nedenle, oldukça güvenli bir terapötik madde olarak kabul edilir. Metforminle iliskili LA, çogunlukla kardiyovasküler sistemi, karacigeri veya böbrekleri etkileyen ek predispozan durumlari olan hastalarda görülür. Bu kosullar altinda, vücuttan gelen ilaç klirensi bozulmakta, bu da zamanla tespit edilmezse, metforminin artan kan konsantrasyonlarina yol açmaktadir. Metformin kullaniminin tip 2 diyabet prevalansinin artmasina bagli olarak artmasi beklendigi için metformin kaynakli mitokondriyal toksisite ve LA ile ilgili arastirma güncel ve acil bir konudur. Metformin mitokondriyal toksisitesi üzerine yapilan arastirmalar tutarsiz sonuçlara isaret etmektedir. Kane ve ark., (2010), siçanlarin iskelet kaslarinda in vivo olarak metformin ile bazal respirasyon ve maksimal respiratuvar kapasitelerin inhibisyonunu saptamamis ve ayni sekilde metforminle isleme tabi tutulmus tip 2 diyabet hastalarinin kas biyopsilerinde de bunu saptamamistir. Bunun aksine, digerleri metformin ve fenforminin toksik etkilerini mitokondriya ve bunun LA ile hayvan dokulari ile olan iliskisi üzerine tarif etmislerdir. Insan dokusu ile ilgili veriler, özellikle ex vivo veya iri vivo olarak az sayidadir. Metformin ve LA üzerindeki çogu insan verileri, insan doku örneklerinin elde edilmesinin zorlugu nedeniyle retrospektif çalismalara dayanmaktadir. Ancak, Protti ve ark. (2010), biguanidle iliskili LA olan hastalarda sistemik oksijen tüketiminde azalma bildirmis ve hem Protti ve ark. (2012b) hem de Larsen ve ark. (2012) sirasiyla insan iskelet kas ve trombositlerinde s mM metformin ekspozürüne yanit olarak in vitro mitokondriyal fonksiyon bozuklugu tarif etmistir. Protti ve ark., (2012b) ayrica, 1 mM'de metformin maruziyetine yanit olarak insan trombositlerinde artan Iaktat salinimi rapor etmistir. Her ne kadar metformin bu konsantrasyonda terapötik kosullarda bulunmasa da, bunun intoksikasyon sirasinda kanda bu düzeylere eristigi gösterilmistir ve plazmaya kiyasla gastrointestinal yol, böbrek, karaciger, tükürük bezleri, akciger, dalak ve kaslarda 7 ila 10 kata kadar biriktigi bilinmektedir. Burada bildirilen çalismada amaç, yüksek çözünürlüklü respirometri kullanilarak insan kan hücrelerinde metformin ve fenforminin mitokondriyal toksisitesini degerlendirmek olmustur. Benzer sekilde yapilandirilmis iki ilacin aktivitesini karsilastirmak ve mitokondriyal toksisite ile insan hastalarda tarif edilen LA insidansi arasindaki iliskiyi incelemek için fenformin dahil edilmistir. Membran geçirgenligini ve bu biguanitlerin spesifik toksisitesini arastirmak için, ilaç toksisitesini test etmek için bir model, hem komplike hem de permeabilize edilmis kan hücreleri kullanilarak, solunum kompleksine spesifik substratlar ve inhibitörlerin ardisik olarak eklenmesiyle uygulanmistir. Diger yönler ekteki istemlerden anlasilacaktir. Tüm detaylar ve bilgiler, gerekli degisikliklerin yapilmasi kosuluyla bu yönlere uygular. Tanim/ar bir) olacak sekilde ifade etmek için kullanilmistir. Örnek olarak "bir analog" ifadesi bir analog veya birden fazla analog anlamina gelir. Burada kullanildigi sekliyle, "hücre geçirgen süksinatlar", "mevcut bulusun bilesigi/bilesikleri", "hücre geçirgen süksinat türevleri" ve "süksinatin hücre geçirgen öncülleri" ifadeleri birbirlerinin yerine kullanilir ve formül I'in bilesiklerini belirtir. Burada kullanildigi sekliyle "biyoyararlanim" terimi, bir ilacin veya baska bir maddenin tatbik edildikten sonra biyolojik aktivite alaninda emildigi veya mevcut oldugu dereceyi ifade eder. Bu özellik bilesigin çözünürlügü, bagirsakta emilim orani, protein baglanma ve metabolizma derecesi gibi bir dizi faktöre baglidir. Teknikte uzman bir kisi tarafindan bilinen biyoyararlanim için çesitli testler burada tarif edilmistir (ayrica bakiniz Trepanier ve ark., 1998, Gallant-Haidner ve ark., 2000). Burada kullanildigi sekliyle, "bozukluk", "inhibisyon", "ariza" terimleri, respiratuvar zincirin Kompleks l'iyle iliskili olarak kullanildiginda, belirli bir ilaç maddesinin Kompleks l üzerinde veya Kompleks l'in akis yukarisindaki mitokondriyal metabolizma üzerinde negatif bir etkiye sahip oldugunu belirtmekte için kullanilmakta olup, bu etki Kompleks l'e NADH teminini kisitlayan herhangi bir ilaç etkisini, örn. Krebs döngüsü, glikoliz, beta- oksidasyon, piruvat metabolizmasi ve hatta glükoz veya diger kompleks I ile iliskili substratlarin tasinmasini veya düzeylerini etkileyen ilaçlar üzerindeki etkiyi kapsar. Burada tarif edilen sekilde, bir hastada laktat genellikle Kompleks I dahil olmak üzere aerobik respirasyon üzerinde negatif bir etkinin göstergesidir. Burada kullanildigi sekliyle, "yan etki" ifadesi, respiratuvar zincirin Kompleks I'inin fonksiyonu ile iliskili olarak kullanildiginda, laktik asidoza iliskin bir yan etki olabilir veya idiyosenkratik ilaç organ toksisitesiyle örn. hepatotoksisite, nörotoksisite, kardiyotoksisite, renal toksisite ve kas toksisitesiyle iliskili bir yan etki, örnegin, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, oftalmopleji, miyopati, sensorinöral isitme bozuklugu, nöbetler, inme, inme benzeri olaylar, ataksi, ptoz, bilissel yetersizlik, degisen bilinç durumlari, nöropatik agri, polinöropati, nöropatik gastrointestinal sorunlar (gastroözofageal reflü, kabizlik, bagirsak psödo tikanmasi), proksimal renal tübüler fonksiyon bozuklugu, kardiyak ileti defektileri (kalp bloklari), kardiyomiyopati, hipoglisemi, glükoneojenik bozukluklar, alkole bagli olmayan karaciger yetmezligi, optik nöropati, görsel kayip, diyabet ve ekzokrin pankreatik yetmezligi, bitkinlik, solunumla ilgili problemler, örnegin Burada kullanildigi sekliyle, "ilaca bagli olarak gelisen" terimi, "yan etki" terimiyle iliskili olarak kullanildiginda genis anlamda anlasilmalidir. Dolayisiyla, sadece ilaç maddelerini degil, ayni zamanda istenmeyen Iaktat varligina yol açabilecek diger maddeleri de kapsar. Örnekler herbisitier, toksik mantarlar, meyveler vs.'dir. Mevcut bulusun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlari, farmasötik olarak kabul edilebilir inorganik veya organik asitlerden veya organik asitler veya bazlardan ve ayni zamanda kuaterner amonyum asit katilma tuzlarindan olusan konvansiyonel tuzlari içerir. Uygun asit tuzlarinin daha spesifik örnekleri arasinda hidroklorik, hidrobromik, sülfürik, fosforik, nitrik, perklorik, fumarik, asetik, propiyonik, süksinik, glikolik, formik, benzoik, salisilik, fumarik, tolüensülfonik, metansülfonik, naftalin-2-sülfonik, benzensülfonik hidroksinaftoik, hidroiyodik, malik, steroik, tanik ve benzerleri bulunur. Oksalik gibi diger asitler, kendi içlerinde farmasötik olarak kabul edilebilir olmamakla birlikte, mevcut bulusun bilesiklerinin ve bunlarin farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlarinin elde edilmesinde ara ürünler olarak kullanisli olan tuzlarin hazirlanisinda kullanisli olabilir. Uygun bazik tuzlarin daha spesifik örnekleri arasinda sodyum, lityum, potasyum, magnezyum, alüminyum, kalsiyum, çinko, N,N'-dibenziletilendiamin, kloroprokain, kolin, dietanolamin, etilendiamin, N-metilglukamin ve prokain tuzlari Burada kullanildigi sekliyle, "alkil" terimi yalnizca sp3 karbon atomlarindan olusan, hidrojen atomlariyla tamamiyla doymus olan, örnegin düz zincirli alkiller için - CnH2n+1 seklinde olan, içerisinde n ifadesinin 1 ile 10 arasinda oldugu herhangi bir düz ya da dallanmis zinciri belirtmekte olup, örnegin metil, etil, propil, isopropil, n-bütil, isobütil, sec-bütil, tert-bütil, n-pentil, neopentil, isopentil, hekzil, isohekzil, heptil, oktil, nonil veya desildir. Burada kullanildigi sekliyle alkil ayrica ornatilabilir. Burada kullanildigi sekliyle, "sikloalkil" terimi -CnH2n-1 genel formülüne sahip olan ve içerisinde n ifadesinin 3-10 arasinda oldugu siklik/halkali yapida karbon Zincirlerini belirtmekte olup, örnegin siklopropil, siklobütil, siklopentil, siklohekzil, sikloheptil veya siklooktil, bisikl[3.2.1]oktil, spiro[4,5]desil, norpinil, norbonil, norkapril, adamantil ve benzeridir. Burada kullanildigi sekliyle, "alken" terimi, karbon ve hidrojen atomlarindan olusan bir düz ya da dallanmis zinciri belirtmekte olup, içerisinde en az iki karbon atomu bir çift bag ile, örnegin iki ila on adet karbon atomuna ve en az bir çift baga sahip olan C2- alkenil doymamis hidrokarbon zinciriyle baglanir. C2-e alkenil gruplarinin örnekleri arasinda, sinirlandirma olmaksizin vinil, 1-propenil, aIiI, iso-propenil, n-butenil, n- pentenil, n-hekzenil ve benzeri bulunur. Mevcut baglamda "01-10 alkoksi" terimi, tek basina veya kombinasyon halinde kullanilan bir -O-C-1-e alkil grubunu belirtmekte olup, Içerisinde 01-10 alkil yukarida tanimlandigi gibidir. Dogrusal alkoksi gruplarinin örnekleri arasinda metoksi, etoksi, propoksi, bütoksi, pentoksi ve hekzoksi bulunur. Dallanmis alkoksi örnekleri arasinda iso-propoksi, sec- bütoksi, tert-bütoksi, iso-pentoksi ve iso-hekzoksi bulunur. Siklik alkoksi örnekleri arasinda siklopropiloksi, siklobütiloksi, siklopentiloksi ve siklonksioksi bulunur. oksijen ve kükürt arasindan seçilen bir ya da daha fazla heteroatom içeren bir siklik hidrokarbon gibi tamamiyla doymus bir heterohalkanin bir radikalini belirtir. Heterohalkalarin örnekleri arasinda, sinirlandirma olmaksizin pirolidin (1-pir0lidin, 2- pirazolidin, 4-pirazolidin, 5-pirazolidin), imidazolidin (1-imidazolidin, 2-imidazolidin, 3- imidazolidin, 4-imidazolidin, 5-imidazolidin), zolidin (2-tiyazolidin, 3-tiyazolidin, 4- tiyazolidin, 5-tiyazolidin), piperidin (1-piperidin, 2-piperidin, 3-piperidin, 4-piperidin, 5- tetrahidropiran (2-tetrahidropiran, 3-tetrahidropiran, 4-tetrahidr0piran, 5-tetrahidropiran, 6-tetrahidropiran), hekzahidropiradizin, (1-(hekzahidropiradizin), 2-(hekzahidropiradizin), 3-(hekzahidr0piradizin), 4-(hekzahidr0piradizin), 5-(hekzahidr0piradizin), 6- (hekzahidropiradizin)) bulunur. Burada kullanilan sekliyle "01-10alkil-Cs-1osikloalkil" terimi, yukarida tanimlandigi gibi belirtilen sayida karbon atomuna sahip olan bir alkil grubu vasitasiyla baglanan yukarida tanimlandigi gibi bir sikloalkil grubunu belirtir. Burada kullanilan sekliyle "CmoalkiI-C3.7heterosikloalkil" terimi, yukarida tanimlandigi gibi belirtilen sayida karbon atomuna sahip olan bir alkil grubu vasitasiyla baglanan yukarida tanimlandigi gibi bir heterosikloalkil grubunu belirtir. Burada kullanilan "aril" teriminin karbosiklik aromatik halka sistemlerini içermesi amaçlanmistir. Aril ayrica, asagida siralanan karbosiklik sistemlerin kismen hidrojenlenmis türevlerini de kapsamaktadir. Burada kullanildigi sekliyle "heteroaril" terimi, azot, oksijen ve kükürt arasindan seçilen bir veya daha fazla heteroatom içeren, furil, tiyenil, pirrolil gibi heterosiklik doymamis halka sistemlerini kapsamaktadir ve ayrica asagida sayilan heterosiklik sistemlerin kismen hidrojene edilmis türevlerini kapsamasi amaçlanmistir. Burada kullanildigi sekliyle "aril" ve "heteroaril" terimleri istege bagli olarak ornatilmamis veya m0n0-, di- veya tri-ornatilmis olabilen bir arili veya istege bagli olarak ornatilmamis veya m0n0-, di- veya tri-ornatilmis olabilen bir heteroarili belirtir. "Aril" ve "heteroaril" örnekleri arasinda, sinirlandirma olmaksizin, fenil, bifenil, indenil, naftil (1-naftil, 2-naftil), N-hidroksitetrazolil, N-hidroksitriazolil, N-hidroksiimidazolil, antrasenil (1-antrasenil, 2- antrasenil, 3-antrasenil), fenantrenil, florenil, pentalenil, azulenil, bifenilenil, tiyofenil (1- tiyenil, 2-tiyenil), furil (1-furil, 2-furil), furanil, tiyofenil, isoksazolil, isotiyazolil, 1,2,3- tiyadiazinil, indolil, isoindolil, benzofuranil, benzotiyofenil (tiyanaftenil), indolil, oksadiazolil, isoksazolil, kinazolinil, florenil, ksantenil, isoindanil, benzhidril, akridinil, benzisoksazolil, purinil, kinazolinil, kinolizinil, kinolinil, isokinolinil, kinoksalinil, naftiridinil, fteridinil, azepinil, diazepinil, pirolil (2-pir0lil), pirazolil (3-pirazolil), 5-tiyofen-2-iI-2H- pirazoI-3-il, imidazolil (1-imidazolil, 2-imidazolil, 4-imidazolil, 5-imidazolil), triazolil (1,2,3- oksazolil, 5-oksazolil), tiyazolil (2-tiyazolil, 4-tiyazolil, 5-tiyazolil), piridil (2-piridil, 3-piridil, piridazinil (3-piridazinil, 4-piridazinil, 5-piridazinil), isokinolil (1-isokin0lil, 3-isokin0lil, 4- kinolil, 5-kinolil, 6-kinolil, 7-kin0lil, 8-kinolil), benzo[b]furanil (2-benzo[b]furanil, 3- benzo[b]furani|, 4-benzo[b]furanil, 5-benzo[b]furanil, 6-benzo[b]furanil, 7-ben20[b]furanil), 2,3-dihidro-benzo[b]furanil (2-(2,3-dihidro-benzo[b]furaniI), 3-(2,3-dihidr0- benzo[b]furanil), 4-(2,3-dihidro-benzo[b]furaniI), 5-(2,3-dihidro-benzo[b]furanil), 6-(2,3- dihidro-benzo[b]furanil), 7-(2,3-dihidro-benzo[b]furanil)), benzo[b]tiy0fenil (2- benzo[b]tiy0fenil, 3-benzo[b]tiyofenil, 4-benzo[b]tiyofenil, 5-benzo[b]tiy0feni|, 6- benzo[b]tiyofenil, 7-benzo[b]tiyofenil), 2,3-dihidro-benzo[b]tiy0fenil (2-(2,3-dihidro- benzo[b]tiy0fenil), 3-(2,3-dihidro-benzo[b]tiy0fenil), 4-(2,3-dihidro-benzo[b]tiyofenil), 5- (2,3-dihidro-benzo[b]tiyofenil), 6-(2,3-dihidro-benzo[b]tiyofenil), 7-(2,3-dihidr0- indazolil), benzimidazolil, (1-benzimidazolil, 2-benzimidazolil, 4-benzimidazolil, 5- benzimidazolil, 6-benzimidazolil, 7-benzimidazolil, 8-benzimidazolil), benzoksazolil (1- benzoksazolil, 2-benzoksazolil), benzotiyazolil (1-benzotiyazolil, 2-benzotiyazolil, 4- benzotiyazolil, 5-benzotiyazolil, 6-benzotiyazolil, 7-benzotiyazolil), karbazolil (1- karbazolili 2-karbazolil, 3-karbazolil, 4-karbazolil) bulunur. Kismen hidrojenlenmis türevlerin kisitlayici olmayan örnekleri 1,2,3,4-tetrahidronaftil, 1,4-dihidronaftil, pirolinil, pirazolinil, indolinil, oksazolidinil, oksazolinil, oksazepinil ve benzeridir. Burada kullanilan "asil" terimi, bir -C(=O) R karbonil grubunu belirtmekte olup, içerisinde R grubu yukarida tanimlanan gruplardan herhangi biridir. Spesifik örnekler formil, asetil, propiyonil, bütiril, pentanoil, hekzanoil, heptanoil, octanoil, nonanoil, dekanoil, benzoil ve benzerleridir. grubun, istendigi takdirde, ayni ya da farkli olabilen bir ya da daha fazla ornatikla ornatilabilecegi anlamina gelir. "Istege bagli olarak ornatilmis alkil" hem "alkil" hem de arasinda halo (floro, kloro, bromo veya iyodo), alkil, C3-e sikloalkil, hidroksi, C1-e alkoksi, siyano, amino, nitro, C1-s alkilamino, 02-6 alkenilamino, di-C1-ealkilamino, C1-s asilamino, di-C1-e asilamino, C1-6 aril. C1-6 arilamino, Ciaaroilamino, benzilamino, C1-s arilamido, karboksi, C1-e alkoksikarbonil veya (01-63 aril)(C1-10 alkoksi)karbonil, karbamoil, mono-Ci_ 6 karbamoil, di-C1-6 karbamoil veya yukaridakilerin içinden bir hidrokarbil parçasinin kendisinin halo, siyano, hidroksi, C1-2 alkoksi, amino, nitro, karbamoil, karboksi veya C1- 2 alkoksikarbonil ile ornatildigi herhangi birisi bulunur. Bir oksijen atomu içeren hidroksi ve alkoksi gibi gruplarda oksijen atomu kükürt ile degistirilerek örnegin tiyo (SH) ve tiyo- alkil (S-alkil) gibi gruplar yapilabilir. Istege bagli ornatiklar bu nedenle örnegin S-metil gibi gruplari içerir. Tiyo-alkil gruplarinda, kükürt atomu bir sülfoksit veya sülfonun yapilmasi için ayrica oksitlenebilir ve bu nedenle istege bagli ornatiklar S(O)-alki| ve S(O)2-alkil gibi gruplari içerir. Ornatim çift bag biçimini alabilir ve heteroatomlari içerebilir. Dolayisiyla bir CH2 yerine bir karbonili (C=O) olan bir alkil grubu, ornatilmis bir alkil grubu olarak düsünülebilir. Bu nedenle, ornatilmis gruplar, örnegin CFH2, CF2H, CF3, CH2NH2, CH20H, CH2CN, CHMe,i-Pr, SCFs, SOzMe, NMez, CONH2, CONMezve benzerlerini içerir. Aril gruplari durumunda, ornatimlar, aril halkasindaki bitisik karbon atomlarindan, örnegin O-CH2-O gibi siklik asetallerden gelen halka formunda olabilir. Mevcut bulus asagidaki sekillerde örneklendirilmistir: . Sekil 1. Kompleks l inhibe edilmis hücrelerde mitokondriyal enerji üretim fonksiyonunun gelistirilmesine yönelik sematik degerlendirme deneyi sekli.Mevcut bulusa göre bilesiklerin degerlendirilmesi için protokol. Deneyde, saglam hücrelerde mitokondriyal fonksiyon respiratuvar kompleks I inhibitörü rotenon ile bastirilir. Ilaç adaylari, biyoenerjetik artisi veya inhibisyonu degerlendirmek için plazma membraninin geçirgen hale getirilmesinden önce ve sonra endojen (hücre geçirgen olmayan) substratlarla karsilastirilir. . Sekil 2. Saglam hücrelerde mitokondriyal enerji üretim fonksiyonunun gelistirilmesine ve inhibisyonuna yönelik deneyin sematik sekli. Mevcut bulusa göre bilesiklerin etkinliginin degerlendirilmesi için protokol. Deneyde, mitokondriyal aktivite, protonofor FCCP ile mitokondrileri ayristirarak uyarilir. Ilaç adaylari, maksimum yakinsak (kompleks I ve kompleks Il'den türetilmis) respirasyon seviyesini elde etmek için titre edilir. Rotenon ilavesinden sonra, kompleks ll'ye bagimli stimülasyon elde edilir. Kompleks III inhibitörü Antimisin eklenerek mitokondriyal olmayan oksijen tüketimi degerlendirilir. . Sekil 3. Bir mitokondriyal kompleks l inhibitörüne maruz kalan hücrelerde bilesiklerin etkinliginin degerlendirilmesi için protokol. Deneyde, saglam hücrelerde mitokondriyal fonksiyon respiratuvar kompleks I inhibitörü rotenon ile bastirilir. Hücreler, glikoliz laktatina kaydikça ortamda birikmektedir. Ilaç adaylari endojen (hücre geçirgen olmayan) substratlarla karsilastirilir ve azalan laktat birikim orani, mitokondriyal ATP üretiminin restorasyonunu gösterir. . Sekil 4. Domuzda bir akut metabolik kriz modelinde Iaktat birikimi sekli. Domuzda bir akut metabolik kriz modelinde laktat birikimi. Hayvan modelinde, mitokondriyal fonksiyon respiratuvar kompleks I inhibitörü rotenonun infüzyonu yoluyla baskilanir. Hücreler, glikoliz laktatina kaydikça vücutta birikmektedir. Ortalama arteriyel laktat konsantrasyonlari, belirtilen infüzyon hizlarinda rotenon ve vehikül ile tedavi edilen hayvanlarda gösterilmistir. Ilaç adaylari rotenonla isleme tabi tutulan hayvanlarda degerlendirilmistir ve Iaktat birikimi oraninin azalmasi mitokondriyal ATP üretiminin restorasyonunu belirtir. . Sekil 5 Geçirgenlestirilmis insan periferal kan tek çekirdekli hücreleri (PBMC'Ier) ve trombositlerde mitokondriyal respirasyon üzerine metformin etkisi.(a) Eszamanli olarak ölçülen metformin (1 mM siyah iz) veya vehikül ile isleme tabi tutulan (H20, gri iz) geçirgenlestirilmis PBMC'Ierin 02 tüketimi, belirtilen respiratuvar komplekse özgü substratlar ve inhibitörlerin art arda eklenmesiyle degerlendirilmistir. Izlerin stabilizasyon fazi, haznenin yeniden oksijenlenmesinden ve kompleks lV substrat uygulamasindan kaynaklanan bozukluklar atlanmistir (kesikli çizgiler). izlerin altindaki kutular, verilen substratlarin, kompleks I (CI), kompleks II (CII) veya her ikisinin (CI + II) oksidasyonu sirasinda respirasyon için kullanilan respiratuvar kompleksleri ve ayni zamanda protokolün belirtilen bölümlerindeki respiratuvar durumlarini belirtir. Üç farkli respiratuvar durum ve substrat kombinasyonu için respiratuvar oranlar kontrol (H20) ve belirtilen metformin konsantrasyonlari için gösterilmis olup; kompleks I substratlari tarafindan desteklenen oksidatif fosforilasyon kapasitesi (OXPHOSci), protonofor FCCP'nin titrasyonunun ardindan elektron tasima sistemi (ETScii) içinden kompleks ll'ye bagimli maksimal aki ve kompleks IV (ClV) kapasitesi gösterilmistir. Degerler Sidak çoklu karsilastirma metoduyla birlikte tek yönlü ANOVA kullanilarak, n = 5. OXPHOS = oksidatif fosforilasyon. ETS = elektron tasima sistemi. ROX = artik oksijen konsantrasyonu. . Sekil 6 Metformin ve fenformin tarafindan görüntülenen toksisitenin, permeabilize edilmis insan trombositlerinde kompleks l'e bagli substratlarin (OXPHOSci) destekledigi oksidatif fosforilasyon sirasinda mitokondriyal solunum kapasitesine göre karsilastirilmasi. Solunum hizlari ortalama ± SEM olarak sunulmus ve metformin ve fenformin için yari maksimum inhibitör konsantrasyon (leo) degerlerini elde etmek için standart lineer olmayan egri uydurma uygulanmistir. *= P < 0.05, **= P < 0.01 ve ***= P < 0.001; Holm-Sidak çoklu karsilastirma metoduyla birlikte tek yönlü ANOVA kullanilarak kontrolle karsilastirilmistir, n = 5. . Sekil 7 Metforminin saglam insan trombositlerinde mitokondriyal respirasyon üzerindeki zamana ve doza bagimli etkileri. (a) trombositlerin rutin respirasyonu, yani, hücrelerin endojenöz substrat temini ve ATP talepleriyle respirasyonu, belirtilen konsantrasyonlardaki metformin veya vehikülün (H20) 60 dakikalik inkübasyon sirasinda görüntülenmis ve bunun ardindan (b) protonofor FCCP'nIn titrasyonu ile indüklenen maksimal respiratuvar kapasite izlenerek saglam hücrelerin elektron tasima sistemi (ETS) üzerinden maksimal aki belirlenmistir. Veriler ortalama ± SEM olarak ifade edilmistir, n = 5. *= P < ve iki yönlü ANOVA (a) ve HoIm-Sidak post-hoc testi kullanilmistir. . Sekil 8 Metformin ve fenforminin Iaktat üretimi ve bozulmamis insan trombosit süspansiyonlarinin pH'i üzerindeki etkisi Trombositler glükoz (10 mM) içeren fosfat tamponlu salin içinde 8 saat boyunca metformin (10 mM, 1 mM), fenformin (, kompleks l inhibitörü rotenon (2 (M) veya vehikül (DMSO, kontrol) ile inkübe edilmistir. (a) laktat düzeyleri her 2 saatte bir belirlenmis (n = 5), ve (b) pH düzeyi her 4 saatte bir ölçülmüstür (n = 4). Veriler ortalama ± SEM olarak ifade edilmistir. *= P < 0.05, **= P < 0.01 ve ***= P < 0.001; iki yönlü ANOVA ve HoIm-Sidak post-hoc testi kullanilmistir. . Sekil 9 10 mM glükoz içeren PBS içinde inkübe edilmis saglam trombositler uM'lik ardisik eklemelerde süksinat veya NV118 ile muamele edilmistir. NV118'in 0 saatte ilave edilmesinden önce, hücreler esit ilk laktat seviyelerini olusturmak için sadece metformin veya vehikül ile 1 saat inkübe edilmistir (veriler gösterilmemistir). Laktat konsantrasyonlari 30 dakikada bir örneklenmistir. (B) Laktat üretimi dogrusal olmayan uygun bir regresyon ile hesaplanmis ve zaman Iaktat egrileri için %95 güven araliklari hesaplanmistir. Metformin ile inkübe edilen hücreler kontrole göre önemli ölçüde daha yüksek Iaktat üretimine sahip olmus ve süksinat ilaveleri bunu degistirmemistir. Metformin ile inkübe edilen hücrelere NV118 eklendiginde Iaktat üretimi önemli ölçüde azalmistir. (C) Rotenon tarafindan indüklenen Iaktat üretimi benzer sekilde tekrarlanan NV118 ilaveleri ile zayiflatilabilir. . Sekil 10 10 mM glükoz içeren PBS içinde inkübe edilmis saglam trombositler uM'lik ardisik eklemelerde süksinat veya NV189 ile muamele edilmistir. NV119'un 0 saatte ilave edilmesinden önce, hücreler esit ilk laktat seviyelerini olusturmak için sadece metformin veya vehikül ile 1 saat inkübe edilmistir (veriler gösterilmemistir). Laktat konsantrasyonlari 30 dakikada bir örneklenmistir. (B) Laktat üretimi dogrusal olmayan uygun bir regresyon ile hesaplanmis ve zaman Iaktat egrileri için %95 güven araliklari hesaplanmistir. Metformin ile inkübe edilen hücreler kontrole göre önemli ölçüde daha yüksek Iaktat üretimine sahip olmus ve süksinat ilaveleri bunu degistirmemistir. Metformin ile inkübe edilen hücrelere NV189 eklendiginde Iaktat üretimi önemli ölçüde azalmistir. (C) Rotenon tarafindan indüklenen Iaktat üretimi benzer sekilde tekrarlanan NV189 ilaveleri ile zayiflatilabilir. Antimisin de eklendiginde, NV189'un kompleks 2 üzerindeki etkisi, antimisin'in kompleks III üzerindeki inhibitör etkisi ile ortadan kaldirilmistir. . Sekil 11 10 mM glükoz içeren PBS içinde inkübe edilmis saglam trombositler uM'lik ardisik eklemelerde süksinat veya NV241 ile muamele edilmistir. NV241'in 0 saatte ilave edilmesinden önce, hücreler esit ilk Iaktat seviyelerini olusturmak için sadece metformin veya vehikül ile 1 saat inkübe edilmistir (veriler gösterilmemistir). Laktat konsantrasyonlari 30 dakikada bir örneklenmistir. (B) Laktat üretimi dogrusal olmayan uygun bir regresyon ile hesaplanmis ve zaman Iaktat egrileri için %95 güven araliklari hesaplanmistir. Metformin ile inkübe edilen hücreler kontrole göre önemli ölçüde daha yüksek Iaktat üretimine sahip olmus ve süksinat ilaveleri bunu degistirmemistir. Metformin ile inkübe edilen hücrelere NV241 eklendiginde Iaktat üretimi önemli ölçüde azalmistir. (C) Rotenon tarafindan indüklenen laktat üretimi benzer sekilde tekrarlanan NV241 ilaveleri ile zayiflatilabilir. . Sekil 12 10 mM glükoz içeren PBS içinde, her 30 dakikada bir Iaktat konsantrasyonlarinin numunesi alinarak inkübe edilmis olan trombositler (2000106/ml). (A) 3 saatlik inkübasyon sirasinda, zaman içinde ortamdaki Iaktat konsantrasyonundaki degisimi görmek için hücreler rotenon (2 uM) ya da bunun vehikülü ile isleme tabi tutularak izlenmistir. Ayrica, hücreler, NV189 ile birlikte rotenon ile inkübe edilmis ve rotenon, NV189 ve kompleks IIl inhibitörü antimisin (1 ug/mL) içeren hücreler izlenmistir. NV189'un O saatte ilave edilmesinden önce, hücreler esit ilk edilmistir (veriler gösterilmemistir). Rotenon, hücrelerin laktat üretimini arttirir, ancak bu, NV189 ile birlikte (her 30 dakikada bir inkübasyonla normale (ayni egri egimi) geri getirilir. Antimisin de mevcut oldugunda, NV189, kompleks II seviyesinde çalisamaz ve Iaktat üretimi, sadece mevcut rotenon ile ayni seviyeye yükseltilir. (B) Rotenon ile oldugu gibi benzer bir Iaktat üretim hizi 10 mM konsantrasyonda metformin ile inkübasyon ile indüklenebilir. Deneysel Genel Biyoloji Yöntemleri Teknikte uzman bir kisi, teknikte uzman kisilerce bilinen in vivo ve in vitro metotlari, örnegin, sinirlandirma olmaksizin, asagida ve Gallant-Haidner ve ark., 2000 ve Trepanier ve ark., 1998 belgelerinde ve bunlarin referanslarinda tarif edilen metotlari kullanarak mevcut bulusun bilesiginin farmakokinetigini ve biyoyararlanimini belirleyebilir. Bir bilesigin biyoyararlanimi çesitli faktörlerle (örn., suda çözünürlük, hücre membrani geçirgenligi, protein baglanma kapsami ve metabolizma ve stabilite) belirlenmekte olup, bunlarin her biri buradaki örneklerde tarif edilen sekilde in vitro testlerle belirlenebilir. Teknikte uzman bir kisi tarafindan takdir edilecegi üzere, bu faktörlerden bir ya da daha fazlasindaki bir gelisim bir bilesigin biyoyararlaniminda bir gelisim saglayacaktir. Alternatif olarak, mevcut bulusun bilesiginin biyoyararlanimi, asagida veya buradaki örneklerde daha ayrintili olarak tarif edilen sekilde in vivo metotlar kullanilarak ölçülebilir. In vivo biyoyararlanimi ölçmek için, bir bilesik bir test hayvanina (örn., fare veya siçan) intraperitoneal olarak (i.p.) veya intravenöz olarak (i.v.) ve oral olarak (p.0.) uygulanabilir ve düzenli araliklarla kan örnekleri alinarak ilacin plazma konsantrasyonunun zamana bagli olarak nasil degistigi incelenebilir. Plazma konsantrasyonunun zamana bagli seyri, standart modeller kullanilarak bilesigin mutlak biyoyararliligini bir yüzde olarak hesaplamak için kullanilabilir. Tipik bir protokol örnegi asagida açiklanmistir. Örnegin, fareler veya siçanlar, mevcut bulusun bilesiginin 1 veya 3 mg/kg'i ile intravenöz olarak veya mevcut bulusun bilesiginin 1, 5 veya 10 mg/kg'i ile oral olarak dozlanmistir. Kan örnekleri 5 dakika, 15 dakika, 1 saat, 4 saat ve 24 saat araliklarla alinmistir ve örnekte bulusa ait bilesigin konsantrasyonu, LCMS-MS ile belirlenmistir. Plazma süreci veya tam kan konsantrasyonlari kullanilarak daha sonra plazma altindaki alan veya kan konsantrasyonu-zaman egrisi (AUC - sistemik dolasima erisen degismemis ilacin toplam miktari ile dogru orantilidir), maksimum (pik) plazma veya kan ilaç konsantrasyonu, maksimum plazma veya kan ilaç konsantrasyonunun meydana geldigi zaman (pik zaman) gibi kilit parametreler ve biyoyararlanimin hassas bir sekilde belirlenmesinde kullanilan ilave faktörler, örnegin bilesigin yari ömrü, toplam vücut klerensi, dagilimin duragan hal hacmi ve %F belirlenebilir. Bu parametreler daha sonra hesaplanan bir yüzdelik biyoyararlanimi elde etmek için bölümsel olmayan veya bölümsel yöntemlerle analiz edilir ve bu tip bir yönteme örnek olarak Gallant-Haidner ve ark., 2000 ve Trepanier ve arkadaslari, 1998 ve burada verilen referanslar verilebilir. Mevcut bulusun bilesiginin etkinligi asagida tarif edilen metotlardan bir ya da daha fazlasi kullanilarak test edilebilir: l. Saglam hücrelerde mitokondriyal enerji üretim fonksiyonunun gelistirilmesi ve inhibisyonunun degerlendirilmesine yönelik deneyler Yüksek çözünürlük/Ü Respirometri - A- genel metot Mitokondriyal respirasyonun ölçümü yüksek çözünürlüklü bir oksigraf içinde (Oksigraph- 2k, Oroboros Instruments, Innsbruck, Avusturya), 37 °C'Iik sabit bir sicaklikta gerçeklestirilir. izole edilmis insan trombositleri, akyuvarlar, fibroblastlar, insan kalp kasi ortamda 2 10 pmol 02 s-1 mL-1'Iik bir oksijen tüketimini vermeye yetecek bir konsantrasyonda askiya alinmistir. Yüksek çözünürlüklü respirometri- B (laktat çalismalarinda kullanilir) Gerçek zamanli respirometrik ölçümler yüksek çözünürlüklü oksigraflar (Oksigraph-2k, Oroboros Instruments, lnnsbruck, Avusturya) kullanilarak yapilmistir. Ölçümler sirasinda deney kosullari asagidaki gibi olmustur: 37 ° C, 2 mL aktif hazne hacmi ve 750 rpm karistirici hizi. 02 hazne konsantrasyonlari, deneyler sirasinda odadaki reoksijenasyon ile . Veri kaydi için DatLab yazilimi sürüm 4 ve 5 kullanilmistir (Oroboros Instruments, lnnsbruck, Avusturya). Ayarlar, günlük kalibrasyon ve enstrümantal arka plan düzeltmeleri üreticinin talimatlarina göre yapilmistir. Respiratuvar ölçümler, 0.5 mM EGTA, 3 mM sukroz ve 1 g/L bovin serum albumin (MIROS) veya glükoz (5 mM) ve EGTA (5 mM) içeren fosfat tamponlu salin (PBS) içeren bir tampon içinde, iliskin bölümlerde belirtilen sekilde gerçeklestirilmistir. Solunum degerleri, her iki ortamda (0.92) oksijen çözünürlük faktörü için düzeltilmistir (Pesta ve Gnaiger, 2012). Bozulmamis insan trombositlerinin konsantrasyonunda gerçeklestirilmistir. Bilesik/erin degerlendirilmesi Bozulmamis hücrelerde dört tipik degerlendirme protokolü kullanilir. (1) inhibe edi/mis respiratuvar kompleks l'li hücrelerde mitokondriyal enerji Üretme fonksiyonunun gelistirilmesine yönelik deney mM, KH2PO410 mM, EGTA 0.5 mM, BSA 1 g/l, pH 7.1 içeren bir tampon içine yerlestirilmistir. Endojenöz substratlarla referans hatti respirasyon belirlendikten sonra, kompleks I Rotenon 2 ;M ile inhibe edilmistir. Bilesikler DMSO içinde çözündürülmüs 10 pM ila 10 mM son konsantrasyon araliginda titre edilmistir. Ardindan hücre zarlari, hücre disi olarak salinan enerji substratinin veya hücre geçirimsiz enerji substratlarinin girisine izin vermek üzere digitonin (1mg/1*106 plt) ile geçirgen hale getirilmistir. Stabilize respirasyondan sonra, kompleks l'in akis asagisinda solunumu saglamak için bir referans olarak Süksinat 10 mM eklenir. Solunum stabilize edildikten sonra deney, 1 pg/mL nihai konsantrasyonda Antimisin ilavesiyle sonlandirilir ve herhangi bir artik mitokondriyal olmayan oksijen tüketimi ölçülür. Tarif edilen protokolde solunum hizindaki bir artis, hücreler ayrilmadikça (yani ATP üretimi olmaksizin proton sizintisi) oksidatif fosforilasyon ile ATP sentezine siki sikiya baglidir. Ayirma, bir protokolde ATP sentaz inhibitörü oligomisin (1-2 pg mL-l) eklenerek test edilmekte olup, burada ayrilma derecesi oligomisin ilavesini takiben solunum hizina karsilik gelir. (2) Saglam hücrelerde mitokondriyal enerji Üretim fonksiyonunun gelistirilmesine ve inhibisyonuna yönelik deney Ikinci protokolde, yukarida tarif edildigi gibi ayni tampon kullanilir. Bazal solunum saglandiktan sonra, mitokondriyal ayirici FCCP, metabolik talebi arttirmak için 2 nM'lik bir konsantrasyonda eklenir. DMSO içinde çözündürülmüs olan bilesikler birkaç adimda uM ila 10 mM son konsantrasyona titre edilerek respirasyonun gelisme ve/veya inhibisyonunun konsantrasyon araliginin degerlendirilmesi saglanir. Deney, solunum kompleksinin asagi akisinda kalan substrat kullanimini ortaya çikarmak üzere kompleks tüketimini ölçmek üzere 1 ug/mL kompleks III inhibitörü Antimisin eklenmesiyle sona (3) Bozu/mamis hücrelerde ayrilmayi degerlendirmek için deney Üçüncü protokolde, yukarida tarif edilenle ayni tampon kullanilir. Bazal solunum kurulduktan sonra, DMSO içinde çözülmüs 1 mM bilesik ilave edilir. Daha sonra, ATP- sentaz inhibitörü Oligomisin ilave edilir. Solunumda bir azalma ATP sentezine ne kadar oksijen tüketiminin baglandiginin bir ölçümünü verir. Hiç azalma olmamasi ya da sadece hafif bir azalma olmasi, bilesigin iç mitokondriyal membran üzerinde bir proton sizintisi indükledigini gösterir. Ayirici FCCP daha sonra maksimum ayrilmis solunumun indüklenmesi için titre edilir. Daha sonra bu solunum kompleksinin akis asagisinda kalan substrat kullanimini ortaya çikararak kompleks I'i inhibe etmek üzere Rotenon (2 uM) eklenir. Deney, mitokondriyal olmayan oksijen tüketimini ölçmek için 1 ug/mL kompleks III inhibitörü Antimisin ilavesi ile sona erdirilir. (4) Insan plazmasinda inhibe edilmis respiratuvar kompleks l'li hücrelerde mitokondriyal enerji üretme fonksiyonunun gelistirilmesine yöne/ik deney Bozulmamis insan kan hücreleri, ayni donörden plazma içinde inkübe edilmistir. Endojenöz substratlarla referans hatti respirasyon belirlendikten sonra, kompleks I Rotenone 2 uM ile inhibe edilmistir. Bilesikler DMSO içinde çözündürülmüs 10 pM ila 10 mM son konsantrasyon araliginda titre edilmistir. Deney, 1 ug/mL nihai konsantrasyonda Antimisin ilavesiyle sonlandirilmis ve herhangi bir artik mitokondriyal olmayan oksijen tüketimi ölçülmüstür. Solunum analizlerinde istenen bilesigin özellikleri Ideal bilesik, protokol 1'deki geçirgenlestirmenin ardindan süksinat ile stimüle edilmis respirasyon üzerinde veya protokol 2'de endojenöz respirasyon üzerinde inhibitör etki olmaksizin düsük konsantrasyonda saglam hücrelerde tarif edilen protokollerde respirasyonu stimüle eder. Maksimum uyarici etki ve inhibisyon arasindaki konsantrasyon mümkün oldugunca genis olmalidir. Kompleks lll'ün altinda veya sonunda mitokondriyal toksinlerle solunumun inhibisyonundan sonra solunum durmalidir. Lütfen Sekil 1'e ve asagidaki listeye bakiniz. Bilesiklerin istenen özellikleri: . maksimum 8 degeri düsük ilaç konsantrasyonunda erisilir. . a büyük ölçüde (a')'dan fazladir . a (b')'ye yaklasir . c (c')'ye yaklasir . d (d')'ye yaklasir Hücresel membrana nüfuz etmeyen bilesikler, tahlilde asagidaki gibi tanimlanir: . a (a')'ya yaklasir Ilaç adayinin neden oldugu mitokondriyal olmayan oksijen tüketimi asagida durumda tanimlanir: . d (d')den fazladir önlenmesine yönelik deney Bozulmamis insan trombositleri, beyaz kan hücreleri, fibroblastlar veya canli mitokondri içeren diger hücre tipleri, 8 saat boyunca 10 mM glukoz içeren fosfat tamponlu salin içinde, kompleks l inhibitör ilaçlar olan metformin (10 mM), fenformin ( veya rotenon (2 uM) ile inkübe edilmistir. Bu bilesikler tarafindan oksidatif fosforilasyon yoluyla mitokondriyal ATP üretiminin inhibisyonu, glikoliz ile laktat birikimini arttirir. Laktat seviyeleri, Lactate ProTM 2 kan Iaktat test cihazi (Arkray, Alere AB, Lidingö, Isveç) veya benzer tipteki ölçümler kullanilarak her 2 saatte bir (veya daha sik, öm. her 30 dakikada bir) belirlenir. Inkübasyon 37 °C'de gerçeklestirilir. pH degeri, baslangiçta, 4 ve 8 saat inkübasyondan sonra (veya daha sik), standart pH metre, örnegin PHM kullanilarak ölçülür. Ilaç adaylari, 10 pM - 5 pM araligindaki konsantrasyonlarda 30-60 dakika veya sonrasinda baslayarak analize eklenir. Laktat birikiminin önlenmesi, sadece DMSO olmak üzere bilesik vehikülüyle yapilan paralel deneylerle karsilastirilir. Ilaç adayinin spesifikligini degerlendirmek için, ayni zamanda, ilaç adayinin etkisini ortadan kaldiracak ve Iaktat üretimini geri kazandiracak olan 1 ug/mL'de kompleks llI inhibitörü Antimisin gibi bir akis asagi inhibitörü ile birlikte de test edilir. Bu nedenle antimisin kullanimi, ayni zamanda, ilaç adaylarinin testte kullanilan hücrelerin Iaktat üretme kabiliyeti üzerindeki gereksiz etkilerinin kontrolüdür. (Bkz., örn., Sekil 9, 10 ve 11). Veri analizi Istatistiksel analiz, Graph Pad PRISM yazilimi (GraphPad Software versiyon 6.03, La Jolla, Kaliforniya, ABD) kullanilarak yapilmistir. Tüm respiratuvar, Iaktat ve pH verileri ortalama ± SEM olarak ifade edilmistir. Oranlar bireyler ve ortalamalar olarak çizilmistir. Üç veya daha fazla grubun (ilaç konsantrasyonu) tek faktörlü karsilastirmasi için tek yönlü ANOVA ve üç veya daha fazla grubun iki faktörlü karsilastirmasi (ilaç/tedavi süresi ve konsantrasyonu) için iki yönlü karma model ANOVA kullanilmistir. Çoklu karsilastirmalarin telafi edilmesi için post-hoc testler Holm-Sidak'a göre yapilmistir. Korelasyonlar r2 ve P degerleri olarak ifade edilmistir. Yari maksimal inhibitör konsantrasyon (IC50) degerlerini hesaplamak için standart lineer olmayan egri oturtma uygulanmistir. Sonuçlar P <0.05 için istatistiksel olarak anlamli kabul edilmistir. Hücresel iaktat biriktirme deneyinde istenen bilesigin özellikleri (1) Ideal bilesik, kompleks I inhibisyonu ile olusan laktat birikimini önler, yani laktat birikimi, kompleks I ile inhibe edilmemis hücrelerdekine benzer bir orana yaklasir. (2) Laktat birikiminin önlenmesi, Antimisin gibi bir akis asagi solunum inhibitörüyle kaldirilir. önlenmesine yönelik deney Kursun ilaç adaylari, kompleks I'de mitokondriyal disfonksiyona bagli metabolik krizin in vivo modelinde bir kavram kaniti olarak test edilecektir. Model, mitokondriyal kompleks kompleks l'i inhibe eden klinik olarak kullanilan örnegin metformin gibi ilaçlarla tedavi edilen ve asiri doz alan hastalarda meydana gelebilecek olan ciddi durumlari taklit eder. Çalismada disi Iandrace domuzlar kullanilmistir. Anestezi uygulanmis, ameliyata alinmis ve infüzyon ve izleme aktiviteleri için kateterler yerlestirilmistir. Metabolik bir kriz, mitokondriyal kompleks l inhibitör rotenonun 3 saat boyunca 0.25 mg/kg/saat hizinda infüzyonu ve ardindan bir saat içinde 0.5 mg/kg/saat infüzyonu ile indüklenmistir (vehikül %25 NMP/%4 polisorbat 80/%71 sudan olusur). Arteriyel kan basinci gibi kardiyovasküler parametreler, femoral artere yerlestirilen bir kateter ile sürekli olarak ölçülmüstür. Kardiyak debisi (CO) her 15 dakikada bir termo-seyreltim ile ölçülmüs ve kaydedilmis, pulmoner arter basinci (PA, sistolik ve diyastolik), santral venöz basinç (CVP) ve Sv02 her 15 dakikada bir kaydedilmis ve pulmoner veç basinci (PCWP) Swan-Ganz kateterinden her 30 dakikada bir kaydedilmistir. Dolayli kalorimetri, örnegin bir Quark RMR ICU seçenegi (Cosmed, Roma, Italya) ekipmani vasitasiyla gerçeklestirilmistir. Kan gazlari ve elektrolitler, femoral arter ve Swan-Ganz kateterlerinden toplanan arteryel ve venöz kanda belirlenmis ve ABL725 kan gazi analizörü (Radiometer Medical Aps, Bronshoj, Danimarka) kullanilarak analiz edilmistir. Analizler pH, BE, Hemoglobin, HCOa p02, pCOz, K+, Na*, Glükoz ve Laktati içerir. In vivo metabolik kriz modelinde kavram kaniti olarak istenen bilesigin özellikleri Ideal bilesik, kompleks I inhibisyonu ile olusan metabolik kriz ile domuzlarda Iaktat birikimini ve pH düsüsünü azaltmalidir. Kompleks l inhibisyonunu takiben enerji tüketimindeki azalma hafifletilmelidir. Bilesik, kan ve hemodinamik analizlerle ölçülen herhangi bir asikar negatif etki olusturmamalidir. Metabolomik metot Beyaz kan hücreleri veya trombositler standart metotlarla toplanmis ve 110 mM sukroz, EGTA 0.5 mM, BSA 1 g/I ve istege bagli olarak 5 mM glükoz içeren pH 7.1 olan bir tampon olan MIROS içinde askiya alinmistir. Numune, 37 °C'de sabit bir sicaklikta yüksek çözünürlüklü bir oksigraf (Oksigraph-2k, Oroboros Instruments, lnnsbruck, Avusturya) içinde karistirilarak inkübe edilmistir. dakika sonra DMSO içinde rotenon ilave edilmis (2 pM) ve inkübasyon devam ettirilmistir. 5 Dakika daha geçtikten sonra DMSO içinde test bilesigi eklenmis, istege bagli olarak daha sonra bir baska test bilesigi eklenmis ve bir süre daha inkübasyon yapilmistir. Inkübasyon sirasinda 02 tüketimi gerçek zamanli olarak ölçülmüstür. Inkübasyonun sonunda hücreler santrifüjleme ile toplanmis ve %5 mannitol solüsyonu içinde yikanmis ve metanol içine ekstrakte edilmistir. Iç standardi içeren bir sulu çözelti ilave edilmis ve elde edilen çözelti, bir filtre ile uygun bir mikrofüj tüpünde santrifüjleme ile islenmistir. Elde edilen süzüntü, Ooga ve arkadaslari (2011) ve Ohashi ve arkadaslarinin (2008) metoduyla çesitli primer metabolitleri ölçmek için CE-MS analizinden önce vakum altinda kurutulmustur. Özellikle, TCA döngüsü ve glikolizdeki metabolit seviyeleri bulusun bilesiklerinin etkisi için degerlendirilmistir. Ooga ve ark., Metabolomic anatomy of an animal model revealing homeostatic Malzemeler Aksi belirtilmedikçe, asagidaki örneklerde kullanilan tüm reaktifler ticari kaynaklardan Örnekler Süksinil klorür (0.1 mol) ve trietilamin (0.4 mol) bilesikleri DCM içinde çözündürülmüs ve sistein eklenmistir. Tepkime oda sicakliginda karistirilmistir. Tepkime sulu seyreltik hidroklorik asit içine eklenmis ve ardindan su ve salamura ile yikanmistir. Organik katmanlar magnezyum sülfat üzerinde kurutulmus ve vakum içinde indirgenmistir. Hedef bilesik silika jel kromatografi ile saflastirilmistir. Sisteamin hidroklorür (5.0 9, 44 mmol) bilesiginin CH30H (50 mL) içindeki bir çözeltisine saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi vakum altinda konsantre edilir. Elde edilen artik madde CH2CI2 içinde çözündürülmüs, 2M HCI sulu çözeltisi ve salamura ile yikanmis, N32804 üzerinde kurutulmus, filtrelenmis ve buharlastirilarak tert-bütil 2-merkapt0etilkarbamat bilesigini renksiz bir yag biçiminde vermis ve bu da bir sonraki adimda daha fazla saflastirilmadan kullanilmistir. bilesikleri CH20I2 ( içinde çözündürülmüs, karisim 0 °C'ye sogutulmus, süksinil klorür (2.1 9, 13.8 mmol) damlatilarak eklenmistir. Ardindan, karisim oda sicakliginda 2 saat karistirilmistir. Tepkime karisimi konsantre edilmis ve artik madde kolon kromatografiyle saflastirilmistir (petrol eter/EtOAC = 1/10 ila 1/1). S,S-bis(2-(tert- bütoksikarboniIamin0)etil) bütanbis(tiyoat) bilesigini beyaz bir kati madde biçiminde vermistir. H 8 B TFA.CHZCI2 s NH Boc/ wSÄ/Y wa' OC _v HZN/\/ NSM 2 mL) bilesiklerinin CH20I2 (10 mL) içindeki bir karisimi oda sicakliginda 4 saat boyunca karistirilmistir. Tepkime karisimi konsantre edilerek S,S-bis(2-amin0etil) bütanbis(tiyoat) bilesigini sari bir yag biçiminde vermis ve bu da bir sonraki adimda daha fazla saflastirilmadan kullanilmistir. HiNNSWSNNHB WNWSMSWNJV 2 El-;N. CH2Cl2 o 0 H bilesikleri CH2CI2 (15 mL) içinde çözündürülmüs, karisim O °C'ye sogutulmus, propiyonil klorür (0.9 9, 10.07 mmol) damlatilarak eklenmistir. Ardindan, karisim oda sicakliginda 3 saat karistirilmistir. Tepkime karisimi konsantre edilmis ve artik madde hazirlayici TLC ile saflastirilmistir (CH2CI2/MeOH=15/1). S,S-bis(2-Pr0piy0namidoetil) bütanbis(tiyoat) bilesigini beyaz bir kati madde biçiminde vermistir. Örnek 3 - (R)-4-(2-karboksi-2-propiyonamidoetiItiyo)-4-oksobütanoik asit (NV-041, 01-041) sentezi HS 5 OH o o - H VY AcONa. THF/HQO HS\/\n/OH L-sistein L-sistein ( içindeki bir karisimina NaOAc (2.70 9, 33.0 mmol) eklenmistir. Karisim oda sicakliginda 20 dakika boyunca karistirilmistir. Tepkime 5 °C'ye sogutulmus ve ardindan propiyonik anhidrit (2.30 9, 17.6 mmol) damlatilarak eklenmistir. Tepkime karisimi oda sicakliginda gece boyunca karistirilmis ve ardindan 4 saat boyunca geri akisa isitilmistir. Tepkime karisimi sogutulmus ve 4N HCI eklenerek asitlestirilmistir. Elde edilen çözelti düsük basinç altinda buharlastirilarak THF uzaklastirilmistir. Artik madde hazirlayici HPLC ile saflastirilarak (HzO (%-3-merkapto-2- propiyonamidopropanoik asit bilesigini renksiz yag biçiminde vermistir. 3 ' -' HO geri akis. gece boyunca \/\n/ HNÄ/ 0 O 0 O HUJK/ (R)-3-merkapto-2-propiyonamidopropanoik asit (1.00 9, 5.65 mmol), süksinik anhidrit çözeltisi gece boyunca geri akis altinda isitilmistir. Tepkime karisimi konsantre edilmis ve artik madde hazirlayici HPLC ile saflastirilarak (HzO (% ve CH3CN ile ayristirilarak) (R)-4-(2-karboksi-2-propiyonamidoetiltiy0)-4-oksobütanoik asit bilesigini renksiz bir yag biçiminde vermistir. îHwSÄ/IÇOTOE/ Trietilamin (0.24 mol) bilesigi N-asetilsisteamin (0.2 mol) bilesiginin DCM içindeki bir çözeltisine eklenmistir. 4-KIOro-4-0ksobütan0ik asit (0.1 mol) damlatilarak eklenmis ve tepkime karisimi oda sicakliginda karistirilmistir. Karisim sulu seyreltik hidroklorik asit içine eklenmis ve etil asetatla ekstrakte edilmis ve ardindan su ve salamura ile yikanmistir. Organik katmanlar magnezyum sülfat üzerinde kurutulmus ve vakum içinde indirgenmistir. Adim 3'ün ürünü (0.1 mol), asetik asit 1-br0m0etil ester (0.1 mol) ve sezyum karbonat (0.12 mol) bilesikleri DMF içinde askiya alinmis ve 60 °C'de inert bir atmosfer altinda karistirilmistir. Süspansiyon oda sicakligina sogumaya birakilmis ve etil asetat eklenmis ve sirasiyla sulu seyreltik hidroklorik asit ve suyla yikanmistir. Organik maddeler magnezyum sülfat üzerinde kurutulmus ve vakum içinde indirgenmistir. Artik madde kolon kromatografiyle saflastirilmistir. /NWKLOJk/stN/lk Trietilamin (0.24 mol) bilesigi N-asetilsisteamin (0.2 mol) bilesiginin DCM içindeki bir çözeltisine eklenmistir. 4-KIOr0-4-0ksobütan0ik asit (0.1 mol) damlatilarak eklenmis ve tepkime karisimi oda sicakliginda karistirilmistir. Karisim sulu seyreltik hidroklorik asit içine eklenmis ve etil asetatla ekstrakte edilmis ve ardindan su ve salamura ile yikanmistir. Organik katmanlar magnezyum sülfat üzerinde kurutulmus ve vakum içinde indirgenmistir. Dimetilamin (0.1 mol) ve trietilamin (0.1 mol) bilesikleri diklorometan içinde seyreltilmis, çözelti 0 °C'ye sogutulmus ve DCM içinde 2-kl0r0propiyonil klorür (0.1 mol) eklenmis ve çözelti oda sicakligina isinmaya birakilmis ve inert bir atmosfer altinda karismaya birakilmistir. Çözelti suyla yikanmistir. Organik maddeler birlestirilmis ve uçucu maddeler vakum içinde uzaklastirilmistir. Artik madde silika jel kromatografiyle saflastirilmistir. 2-Kl0r0-N,N-dimetiI-propiyonamit (0.1 mol), Adim 1'in ürünü (0.1 mol), sezyum karbonat (0.1 mol) ve sodyum iyodür (0.01 mol) bilesikleri DMF içinde askiya alinmis ve süspansiyon 80 °C'de inert bir atmosfer altinda karistirilmistir. Süspansiyon oda sicakligina sogutulmus, etil asetat ile seyreltilmis ve suyla yikanmistir. Organik maddeler vakum içinde indirgenmistir. Artik madde silika jel kromatografiyle saflastirilarak hedef bilesigi vermistir. HCI 1) propiyonik anhidrit` KOH, HQO, 1 sa 2 2) KOH, 50 dk. dgw Propiyonik anhidrit ( bilesikleri karistirilmakta olan 24 mL su içindeki bir sisteamin hidroklorür (3.40 9, 30.0 mmol) çözeltisine damlatilarak eklenmistir. Karisim 2 N HCl ile nötralize edilmis ve 1 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Çözelti bir buz banyosu ile sogutulmus ve kati KOH (6.00 9, 105 mmol) yavasça eklenmistir. Karisim 50 dakika oda sicakliginda karistirilmistir. NaCI ile doyurulduktan ve GN HCI ile nötralize edildikten sonra, karisim CH2C|2 (4 X 30 mL) ile ekstrakte edilmistir. Birlestirilen CH2C|2 ekstraktlari kurutulmus (Na2804) ve vakum içinde konsantre edilerek N-(2-merkaptoetil)pr0piy0namit bilesigini renksiz yag biçiminde vermis ve bu da bir sonraki adimda daha fazla saflastirilmadan kullanilmistir. dNN Et;.,N, THF, geri akis N OH mmol) ve EtsN (1.50 9, 15.0 mmol) bilesiklerinin 20 mL THF içindeki bir çözeltisi geri akis altinda gece boyunca isitilmistir. Tepkime karisimi konsantre edilmis ve artik madde hazirlayici HPLC ile saflastirilarak (HzO (% 4-0kso-4-(2-propiyonamidoetiltiyo)bütanoik asit bilesigini renksiz bir yag biçiminde vermistir. Bu örnek mevcut bulusa göre degildir. 1 ) ACZO, KOH, HZO, 1 sa 2) KOH. 50 dk. H Asetik anhidrit ( bilesikleri karistirilmakta olan 24 mL su içindeki bir sisteamin hidroklorür (3.40 9, 30.0 mmol) çözeltisine damlatilarak eklenmistir. pH degeri daha sonra 2 N HCI eklenerek 7'ye getirilmistir. Karisim oda sicakliginda 1 saat boyunca karistirilmis ve ardindan çözelti bir buz banyosu ile sogutulmustur. Yukaridaki çözeltiye kati KOH (6.0 9, 105 mmol) yavasça eklenmis ve elde edilen karisim 50 dakika boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. NaCI ile doyurulduktan ve 6N HCI ile nötralize edildikten sonra, karisim CH2CI2 (4 X 30 mL) ile ekstrakte edilmistir. Birlestirilen CH2CI2 ekstraktlari kurutulmus (Na2804) ve vakum içinde konsantre edilerek N-(2-merkapt0etiI)asetamit bilesigini renksiz yag biçiminde vermis ve bu da bir sonraki adimda daha fazla saflastirilmadan kullanilmistir. 0 04410 0 0 H EtaN, THF. geri akis H EtsN (1.3 9, 12.7 mmol) bilesiklerinin 20 mL THF içindeki bir çözeltisi geri akis altinda gece boyunca isitilmistir. Tepkime karisimi konsantre edilmis ve artik madde hazirlayici HPLC ile saflastirilarak (H20 (% 4-(2- asetamidoetiltiyo)-4-oks0bütanoik asit bilesigini renksiz bir yag biçiminde vermistir. Örnek 8 - (R)-3-(4-((R)-2-karboksi-2-propiyonamidoetiltiyo)-4-oksobutanoiItiyo)-2- propiyonamidopropanoik asit (NV099, 01-099) sentezi v EIIGNVCHQCIQ F! 353 Q 0 0 eklenmistir. Karisim oda sicakliginda 3 saat boyunca karistirilmis ve ardindan suyla seyreltilmistir (60 mL). Elde edilen süspansiyon filtrelenmis, su ve CH2CI2 ile yikanmistir. Kek toplanmis ve kurutularak bis(2,5-dioksopirolidin-1-iI) süksinat bilesigini gri bir kati madde biçiminde vermistir. N' NOIN ` . HOMS/k/Y \/\],OH Et ,N, orucu. r'. 2 sa ; l süksinat ( bilesiklerinin 3.0 mL CH3CN içindeki bir karisimi oda sicakliginda 2 saat karistirilmistir. Berrak tepkime çözeltisi hazirlayici HPLC ile saflastirilmis (HzO (%- 3-(4-((R)-2-karboksi-2-propiyonamidoetiItiyo)-4-0ksobutanoiltiyo)-2- propiyonamidopropanoik asit bilesigini renksiz yag biçiminde vermistir. Örnek 9 - (R)-4-(1-karboksi-2-(propiyoniltiyo)etiIamino)-4-oksobütanoik asit (NV122, 01-122) sentezi 1)propiyonik anhidrit propiyonik O O 2) suksinik anhidrit geri akis gece boyunca /\n/S \/\n/OH (R)-3-merkapto-2-propiyonamidopropanoik asit (1.00 9, 8.25 mmol) ve propiyonik asit ( içindeki bir karisimina propiyonik anhidrit (1.13 9, 8.67 mmol) damlatilarak eklenmistir. Tepkime karisimi gece boyunca geri akisa isitilmistir. Tepkime karisimi sogutulmus ve süksinik anhidrit (1.00 9, 9.99 mmol) eklenmistir. Karisim gece boyunca geri akisa tabi tutulmus ve ardindan düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Artik madde hazirlayici HPLC ile saflastirilarak (H20 4-0ksobütanoik asit bilesigini beyazimsi bir kati madde biçiminde vermistir. 188) sentezi HCI1)ACA3 KOH HZO isa :&<`/NY HS 2)KOH 50dk o Sisteamin hidroklorür (2.00 9, 14.1 mmol) bilesiginin 15 mL su içinde karistirilan bir çözeltisine asetik anhidrit ( damlatilarak eklenmistir. Karisim daha sonra 2 N HCI ile nötralize edilmis ve 1 saat boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Bir buz banyosu ile sogutulmus olan çözeltiye yavasça kati KOH (2.80 9, 49.4 mmol) eklenmis ve karisim 50 dakika boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. NaCI ile doyurulduktan ve 6N HCl ile nötralize edildikten sonra, karisim CH2CI2 ile iki kez ekstrakte edilmistir. Birlestirilen CH2CI2 ekstraktlari kurutulmus (NazSO4) ve vakum içinde konsantre edilerek N-(2-merkapt0-2- metilpropil)asetamit bilesigini beyaz bir kati madde biçiminde vermis ve bu da bir sonraki adimda daha fazla saflastirilmadan kullanilmistir. geri akis. gece boyunca gece boyunca isitilmistir. Tepkime karisimi konsantre edilmis ve artik madde hazirlayici HPLC ile saflastirilarak (H20 (% 4-(1-asetamid0- 2-metilpropan-2-iItiyo)-4-oksobütanoik asit bilesigini sari yag biçiminde vermistir. Örnek 11 - S,S-bis((R)-3-(dietilamino)-3-okso-2-propiyonamidopropil) bütanbis(tiyoat) (NV185, 01-185) sentezi HNJK/ Trtci. DMF, 0 C~rt _ HN **SN/YO" gece boyunca Tn/SWOH mL) içindeki bir çözeltisine trifenilmetil klorür (8.70 9, 31.0 mmol) 0 °C'de eklenmistir. Karisim O °C'de 30 dakika boyunca karistirilmis ve ardindan gece boyunca oda sicakligina isitilmistir. Karisim su ile isleme tabi tutulmus ve EtOAc ile iki kez ekstrakte edilmistir. Birlestirilen organik katmanlar salamurayla yikanmis, Na2804 üzerinde kurutulmus ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Artik madde silika jel kolon 3-(tritiltiy0)propanoik asit bilesigini beyaz bir kati madde biçiminde vermistir. HN/k/ \/n\/ `Sl W T /8 ? OH DCC HOBT ci-igciz _ /\N 00 r W n. gece boyunca ) mmol) oda sicakliginda eklenmistir. Karisim oda sicakliginda 1 saat boyunca karistirilmis ve ardindan dietilamin (0.80 9, 8.0 mmol) eklenmistir. Karisim oda sicakliginda gece boyunca karistirilmistir. Karisim su ile yikanmis, NaZSO4 üzerinde kurutulmus ve düsük basinç altinda konsantre edilerek islenmemis ürün vermis ve bu da silika jel kolon kromatografi ile saflastirilarak (EtOAc / petrol eter = 1/6 ila 1/1) (R)- N,N-dietil-3-merkapto-2-propiyonamidopropanamit bilesigini sari yag biçiminde vermistir. N O OC~ri.25a N O mmol) eklenmistir. Karisim oda sicakligina isitilmis ve 2 saat karistirilmistir. Çözelti düsük basinç altinda buharlastirilmistir. Artik madde hazirlayici HPLC ile saflastirilmis (H20 (%-N,N-dietil-3-merkapto-2- propiyonamidopropanamit bilesigini sari yag biçiminde vermistir.0 N\/ kisi NOONO Cin_ EIMNCHCNrt &15 0 H gece boyunca [:1 N81 W CH30N ( içindeki bir karisimi oda sicakliginda gece boyunca karistirilmistir. Karisim düsük basinç altinda buharlastirilmistir. Artik madde hazirlayici HPLC ile saflastirilarak (H20 (%05 TFA) ve CH3CN ile ayristirilarak) S,S-bis((R)-3-(dietilamino)- 3-0kso-2-pr0piyonamidopropil) bütanbis(tiyoat) (%36 verim) bilesigini sari bir kati madde biçiminde vermistir. 01-193) sentezi. Br\/U\ , "H" DIPEA CH~CI4 BRÄN& 2-bromoasetil bromür ( bilesiklerinin 0 °C'de eklenmistir. Karisim 0 °C'de 30 dakika boyunca karistirilmistir. Çözelti düsük basinç altinda buharlastirilarak CH2CI2 uzaklastirilmistir. Artik madde silika jel kolon kromatografi ile saflastirilmis (EtOAc/petrol eter = 1/5 ila 1/2) ve 2-bromo-N,N- dietilasetamit bilesigini sari yag biçiminde vermistir. TrtCI, THF. 50 °C gece boyunca 2-merkapt0etan0l bilesiklerinin 100 mL THF içindeki bir çözeltisi geri akis altinda gece boyunca isitilmistir. Tepkime karisimi konsantre edilmis ve artik madde silika jel kolon kromatografi ile saflastirilarak (EtOAc / petrol eter = 1/5 ila 111) 2-(2,2,2-trifeniletiltiyo)etanol bilesigini beyaz bir kati madde biçiminde vermistir. NaH. THF. 0 "C-rt. asa l\ 2-( içindeki bir eklenmistir. Tepkime karisimi O °C'de 1 saat boyunca karistirilmistir. Ardindan, THF (5 mL) içinde 2-brom0-N,N-dietilasetamit (2.1 9, 10.9 mmol) bilesigi damlatilarak eklenmistir. Elde edilen karisim 2 saat boyunca oda sicakligina isitilmistir. Karisim suyla söndürülmüs ve EtOAc ile iki kez ekstrakte edilmistir. Birlestirilen organik katmanlar salamurayla yikanmis, N82SO4 üzerinde kurutulmus ve düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Artik madde silika jel kolon kromatografi ile saflastirilmis (EtOAc/petrol eter = 1/5 ila 1/2) ve N,N-dietil-2-(2-(tritiltiyo)etoksi)asetamit bilesigini beyaz bir kati madde biçiminde vermistir. Pr› SIH. TFA. CH »Clii Karisim oda sicakligina isitilmis ve 2 saat karistirilmistir. Çözelti düsük basinç altinda buharlastirilarak CH2CI2 uzaklastirilmistir. Artik madde silika jel kolon kromatografi ile saflastirilmis (EtOAc / petrol eter = 1/5 ila 1/1) ve N,N-dietiI-2-(2- merkaptoetoksi)asetamit bilesigini renksiz yag biçiminde vermistir. k EI3N, THF, geri akis. gece boyunca |\ geri akis altinda gece boyunca karistirilmistir. Tepkime karisimi vakum içinde konsantre edilmis ve artik madde hazirlayici HPLC ile saflastirilarak (HzO (%05 TFA) ve CH30N ile ayristirilarak) 4-(2-(2-(dietilamino)-2-0ksoetoksi)etiltiyo)-4-oksobütanoik asit bilesigini renksiz yag biçiminde vermistir. Örnek 13 - (R)-metil 3-(4-((R)-3-metoksi-3-okso-2-propiyonamidopropiltiyo)-4- (R)-3-(4-((R)-2-karboksi-2-propiyonamidoetiltiyo)-4-oksobutanoiltiyo)-2- boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. Tepkime karisimi filtrelenmis ve filtrat hazirlayici HPLC ile saflastirilarak (HzO (% dogrudan (R)-metil 3-(4-((R)-3-met0ksi-3-okso-2-propiyonamidopropiItiyo)-4- oksobutanoiItiy0)-2-propiyonamidopropanoate bilesigini beyazimsi bir kati madde biçiminde vermistir. Örnek 14 - NV189 Sentezi rt. gece boyunca içindeki bir karisimi oda sicakliginda gece boyunca karistirilmistir. Tepkime karisimi konsantre edilmis ve artik madde hazirlayici HPLC ile saflastirilarak (HzO (% ve CHsCN ile ayristirilarak) NV189 bilesigini beyazimsi bir kati madde biçiminde vermistir. 195) Sentezi ( tl-;N CH-;CN ri .. MENGI? * HSM )`/I\N/\ _- VNWo/VSNs/VDJNÄ 0 o 2 gece boyunca 0 0 2 içindeki bir çözeltisine bis(2,5-dioksopir0lidin-1-il) süksinat (374 mg, 1.2 mmol) ve EtaN (232 mg, 2.3 mmol) eklenmistir. Karisim oda sicakliginda gece boyunca karistirilmistir. Tepkime karisimi vakum içinde konsantre edilmis ve artik madde hazirlayici HPLC ile saflastirilarak (H2O (%05 TFA) ve CH30N ile ayristirilarak) S,S-bis(2-(2-(dietilamin0)-2- 0ksoetoksi)etil) bütanbis(tiyoat) bilesigini renksiz bir yag biçiminde vermistir. Örnek 16- NV206 Sentezi HOMS j; M CH (l K,L.U.. DMF HOMSO /\/ Jk/ N"" N VY" n. 6 sa ^r"" N W" (R)-3-(4-((R)-2-karboksi-2-propiyonamidoetiltiyo)-4-0ksobutanoiltiyo)-2- K2COs (190 mg, 1.37 mmol) bilesiklerinin 4 mL DMF içindeki bir karisimi oda sicakliginda 6 saat boyunca karistirilmistir. Tepkime karisimi filtrelenmis ve filtrat hazirlayici HPLC ile saflastirilarak (H20 (% dogrudan NV206 bilesigini renksiz bir sakiz biçiminde vermistir. Örnek 1? Biyolojik deneylerin sonuçlari Asagidaki tabloda verilen bilesikler, l. Saglam hücrelerde mitokondriyal enerji üretme fonksiyonunun gelistirilmesi ve inhibisyonunun degerlendirilmesine yönelik deney basligi altinda bahsedilen deney 1-4'e tabi tutulmustur. Asagidaki tabloda sonuçlar gösterilmekte olup, bu sonuçlar test edilen tüm bilesiklerin uygun özelliklere sahip oldugunu göstermektedir. Önemli bir biçimde, tüm bilesikler tarama protokolleri 1 ve 4'ten görüldügü üzere CIl-bagli respirasyon üzerinde spesifik etki göstermekte olup, Cl substratlar deney 2'de gösterildigi gibi mevcuttur. Tarama protokolleri 1-4'ün sonuçlari Örnek 1-16'da ortaya konan bilesik numaralari. Bilesik NV Konverjan Konverjan Cll CII Ayrilan Toksisite (Rutin) (FCCP) (plazma) 01-193 (++) + (+) + + 5 mM 01-188 +++ +++ + + (+) 5 mM 01-185 (+) + + + (+) 2 mM 01 _205 +++ ++ + ++ (+) 5 mM 01-114 +++ ++ + ++ (+) 10 mM 01-041 + +++ + ++ (+) 5 mM 01-108 ++ ++ (+) (++) + 10 mM Açiklama: Konverjan (Rutin) - tarama deneyi 3'te tarif edilen kosullar altinda bilesik tarafindan indüklenen mitokondriyal oksijen tüketimindeki artis; Konverjan (FCCP) - tarama deneyi 2'de (ayrilan kosullar) tarif edilen kosullar altinda bilesik tarafindan indüklenen mitokondriyal oksijen tüketimindeki artis; Konverjan (plazma) - tarama deneyi 4'te tarif edilen sekilde, insan plazmasi içinde inkübe edilen inhibe edilmis kompleks l'Ii hücrelerin içindeki bilesikle indüklenen mitokondriyal oksijen tüketimindeki artis; CII -tarama deneyi 1'de tarif edilen sekilde, inhibe edilmis kompleks I'Ii hücrelerin içindeki bilesikle indüklenen mitokondriyal oksijen tüketimindeki artis; Ayirma - tarama testi 3'te tarif edildigi gibi oligomisin eklendikten sonra oksijen tüketimi seviyesi. Her parametredeki yanit, artan güç sirasina göre +, ++ veya +++ olarak derecelendirilir. Parantezler [O] bir ara efekti gösterir, yani (+++) isareti ++ ve +++ arasindadir. Toksisite - oksijen tüketimindeki düsüsün tarama testi 2'de tarif edildigi gibi oldugu bilesik titrasyon sirasinda en düsük konsantrasyon. Metformin çalismalari Metformin çalismasinda, asagidaki bilesikler kullanilmistir (ve sekillerde bunlara atifta ÄOAQK/YOVOY Numune alimi ve hazir/anisi Çalisma, Isveç Lund Üniversitesi bölgesel etik kurulu onayi (etik inceleme kurulu izin no K2EDTA tüplerinde (BD Vacutainer® Brand Tube, dipotasyum EDTA, BD, Plymouth, UK), klinik standart prosedüre göre, yazili bilgilendirilmis riza alindiktan sonra alinmistir. Trombosit izolasyonu için tüm kari, 10 dakika boyunca oda sicakliginda (RT) 500 g'de santrifüj edilmistir (Multifuge 1 SR Heraeus, Thermo Fisher Scientifics, Waltham. ABD). Trombosit açisindan zengin plazma 15 mL'Iik falcon tüplerine toplanmis ve 8 dakika boyunca oda sicakliginda 4600 g'de santrifüjlenmistir. Elde edilen topak, donörün 1-2 mL kendi plazmasinda yeniden süspanse edilmistir. PBMC'ler Ficol gradyan santrifüjü kullanilarak izole edilmistir (Boyum, 1968). Trombositlerin izolasyonundan sonra kalan kan, esit hacimde fizyolojik salin ile yikanmis ve 3 mL LymphoprepTM üzerinde katmanlanmistir. 30 dakika boyunca oda sicakliginda 800 g'de santrifüjlemeden sonra PBMC toplanmis ve fizyolojik salin ile yikanmistir. 10 dakika boyunca oda sicakliginda 250 9'de bir santrifüjlemenin ardindan PBMC'lerin topagi iki ölçek fizyolojik salin ve bir ölçek donörün kendi plazmasi içinde yeniden süspanse edilmistir. Hem PBMC'ler hem de trombositler için hücre sayimi bir otomatik hemasitometre (Swelab Alfa, Boule Medical AB, Stockholm, Isveç) kullanilarak gerçeklestirilmistir. Örnek 18-19'da rapor edilen çalismanin amaci Metformin, spesifik mitokondriyal kompleks l inhibisyonu yoluyla periferik kari mononükleer hücrelerinde ve trombositlerde Iaktat üretimine neden olur. Metformin, ilaca bagli mitokondriyal disfonksiyona bagli oldugu düsünülen Iaktik asidozun nadir yan etkisiyle iliskili yaygin olarak kullanilan bir anti-diyabetik ilaçtir. Respirometri kullanilarak, asagidaki Örnek 1-2'de rapor edilen çalismanin amaci, çogu ülkede yüksek Iaktik asidoz insidansi nedeniyle alinan bir biguanid analogu olan fenformin ile iliskili olarak metforminin insan kan hücrelerine mitokondriyal toksisitesini degerlendirmek olmustur. Örnek 20'de rapor edilen çalismanin amaci Amaç, süksinat ön ilaçlarin metformin ve fenforminin istenmeyen etkilerini hafifletme veya yok etme yetenegini arastirmaktir. Örnek 18A Metformin ve fenforminin geçirgenlestirilmis insan trombositlerinde mitokondriyal respirasyon üzerindeki etkileri Biguanid toksisitesinin spesifik hedefini arastirmak için, kan hücrelerinin digitonin geçirgenlestirilmesi kullanilarak ve art arda respiratuvar komplekse özgü substratlar ve MIROS ortaminda inhibitörlerin eklenmesiyle bir protokol uygulanmistir. Rutin respirasyonun stabilizasyonundan, yani hücrelerin endojenöz substrat temini ve ATP talebiyle respirasyonunun saglanmasindan sonra metformin, fenformin veya bunlarin vehikülü (çift deiyonize su eklenmistir. Ilaçlarin genis bir konsantrasyon araligi uygulanmistir. 37 °C'de 10 dakika süreyle inkübasyon yapildiktan sonra, mitokondriyal fonksiyonu bozmadan ve maksimal respiratuvar kapasitelerin ölçümüne olanak taniyarak maksimal hücre membrani geçirgenlestirmesini indüklemek üzere önceden belirlenmis optimal bir digitonin konsantrasyonunda (1 pg 10'6 trombosit) trombositler geçirgenlestirilmistir (Sjövall ve ark., (2013a). Ilk önce kompleks I'e bagimli oksidatif fosforilasyon kapasitesinin (OXPHOSci) degerlendirilmesi için, NADH-baglantili substratlar olan piruvat ve malat (5 mM), daha sonra ADP (1 mM) ve son olarak, ilave kompleks I substrat glutamat (5 mM) art arda eklenmistir. Ardindan, FADHz-bagli substrat olan süksinat (10 mM), konverjan kompleks I ve II'ye bagli OXPHOS kapasitesini (OXPHOSci+ii) belirlemek için verilmistir. LEAKi+ii durumu, oksijen tüketiminin mitokondriyal membran boyunca protonlarin geri akisini telafi ettigi bir solunum durumu (Gnaiger, eklenerek degerlendirilmistir. Kompleks I ve ll (ETSci+ii) yoluyla konverjan giris ile desteklenen maksimum ayrilmamis respiratuvar elektron tasima sistemi kapasitesi, protonofor karboniI-siyanid p-(triflorometoksi) fenilhidrazon (FCCP) ile müteakip titrasyon ile degerlendirilmistir. Kompleks I inhibitör rotenonun (2 pM) eklenmesi, kompleks ll'ye bagimli maksimal ayrilmayan respirasyonu (ETScii) ortaya çikarmistir. Daha sonra rezidüel oksijen tüketimini (ROX) ortaya çikarmak için kompleks III inhibitör antimisin (1 ug mL'l) verilmistir. Son olarak, kompleks lV aktivitesini ve kimyasal arkaplani ölçmek için sirasiyla yapay kompleks IV substrat olan N,N,N',N'-tetrametiI-p- fenilendiamin dihidroklorür (TMPD, verilmistir. Kompleks IV aktivitesi, sodyum azit degerinin TMPD degerinden çikarilmasiyla hesaplanmistir. Kompleks IV aktivitesi haricinde, tüm respiratuvar durumlar kararli halde ölçülmüs ve ROX için düzeltilmistir. Kompleks lV aktivitesi, kararli halde degil, ROX tayininden sonra ölçülmüstür. Dis mitokondriyal membranin bütünlügü, vehikül, 100 mM metformin veya 500 uM fenformin varliginda OXPHOSci+ii sirasinda sitokrom c (8 pM) eklenerek incelenmistir. Örnek 18B Metforminin geçirgenlestirilmis insan periferal kan tek çekirdekli hücrelerinde mitokondriyal respirasyon üzerindeki ve saglam insan trombositlerinde mitokondriyal respirasyon üzerindeki etkisi Metformine (0.1, 1 ve 10 mM) yanit olarak geçirgenlestirilmis PBMC'lerin respirasyon analizi için, geçirgenlestirilmis trombositlerle ayni protokol kullanilmis, ancak digitonin konsantrasyonu 6 pg . Sonuçlar Kompleks I substratlarini kullanarak respirasyon, hem geçirgenlestirilmis insan PBMC'lerinde hem de trombositlerde metformin ile doza bagimli olarak inhibe edilmistir (Sekil 1). OXPHOSci kapasitesi, 10 mM'de kontrollerle karsilastirildiginda artan metformin konsantrasyonlariyla birlikte neredeyse tamamiyla inhibisyonla birlikte bunun sonucunda PBMC'Ier için ICso degeri 0.45 mM ve trombositler için 1.2 mM olmustur. Kompleks I ve kompleks Il'ye bagli substratlar OXPHOSci+iive ETSci+ii kullanilarak, respiratuar kapasiteler metformin ile OXPHOSci'ye benzer sekilde azaltilmis olup, vehikül ile isleme tabi tutulan ve 1 mM metformin ile isleme tabi tutulan geçirgenlestirilmis PBMC'lerin eszamanli olarak ölçülen 02 tüketiminin temsili izleriyle gösterilmektedir (Sekil 5a). Buna karsilik, ETScii kapasitesi ve kompleks lV aktivitesi, her iki hücre tipinde kontrollerle karsilastirildiginda metformin varliginda anlamli bir degisiklik göstermemis (Sekil 5b, c) ve LEAKi+ii respirasyonu da anlamli bir degisiklik göstermemistir (oksijen tüketiminin, protonlarin mitokondriyal membran üzerinden geri akisini telafi ettigi respiratuvar durum, geleneksel olarak izole mitokondrilerde durum 4 olarak adlandirilir, veriler gösterilmemistir). Metformin ile indüklenen kompleks l'in mitokondriyal inhibisyonu, hücrelerin sirasiyla yikanmasi ve permeabilize edilmesi yoluyla ilacin hücre disi ve hücre içi çikarilmasi üzerine tersinir görünmemektedir. Kompleks I inhibisyonunun hasarinin siddeti uzaklastirma ile zayiflatilmis olmasina ragmen (muhtemelen ilacin daha kisa bir maruz kalma süresine atfedilmistir) trombositler, kontrol ile karsilastirilabilir rutin ve maksimal mitokondriyal fonksiyonu geri kazanmamistir (veriler gösterilmemistir). Fenformin, benzer sekilde, OXPHOSci (Fig. 6), OXPHOSci+ii ve ETSci+ii'yi inhibe etse de, ETScii'yi veya kompleks lV'e özgü solunumu (veriler gösterilmemistir) inhibe etmemistir. Phenformin, metformin ile karsilastirildiginda, permeabilize trombositlerde OXPHOSci'nin 20 kat daha güçlü bir inhibisyonunu göstermistir (sirasiyla, IC50 . Metformin ve fenformin sitokrom o uygulandiktan sonra solunum artisini indüklememis ve dolayisiyla dis mitokondriyal membranin bütünlügünü bozmamistir. MIR05 ortaminda rutin solunumun stabilize edilmesinden sonra, vehikül (çift deiyonize su) veya 1, 10 ve 100 mM metformin eklenmistir. LEAK solunumunu degerlendirmek için ATP-sentaz inhibitörü oligomisin (1 pg mL-l) eklenmeden önce 37 °C'de 60 dakika boyunca rutin solunum izlenmistir. Endojen substratlar (ETS) tarafindan desteklenen maksimal ayrismamis solunum elektron tasima sistemi kapasitesine FCCP titrasyonu ile ulasilmistir. ROX'i degerlendirmek için kompleks I inhibitörü rotenon (2 pM), kompleks tarafindan respirasyon art arda bloke edilmis ve tüm respirasyon degerleri bunun için düzeltilmistir. Ek bir deneyde, tam kan trombositlerin izolasyonundan ve solunum analizlerinden 18 saat önce farkli metformin konsantrasyonlari (0.1, 0.5 ve 1 mM) ile K2EDTA tüplerinde inkübe edilmistir. Sonuçlar Bozulmamis insan trombositlerinde, metformin, doza ve zamana bagli bir sekilde rutin solunumu azaltmistir (Sekil 7a). Metformin veya vehiküllere maruz kaldiginda, trombositler zaman içinde rutin solunumda sürekli bir düsüs göstermistir. 60 dakika sonunda, rutin solunum, eklemenin ardindan yapilan ilk ölçüme kiyasla kontrolde - mM'da -%81.78 oraninda azalmistir. 100 mM'de metformin rutin solunumu, 15 dakikalik maruziyetin ardindan kontrolle karsilastirildiginda anlamli derecede azaltmistir (- (-%56.86, P <0.001) metformin ile önemli ölçüde inhibe edilmistir (Sekil 3b). Bozulmamis hücrelerde LEAK solunumu, metformin inkübasyonu ile önemli ölçüde degistirilmemistir (veriler gösterilmemistir). Tam kan, 18 saat boyunca 1 mM'lik bir metformin konsantrasyonunda inkübe edildiginde, bozulmamis insan trombositlerinin rutin solunumu %30.49 oraninda azalmistir (P <0.05). Örnek 19 Metformin ve fenforminin Iaktat üretimi ve bozulmamis insan trombositlerinin pH'i üzerindeki etkisi Trombositler 8 saat süreyle metformin (1 mM, 10 mM), fenformin (, rotenon (2 uM) veya rotenon (DMSO) vehikülü ile inkübe edilmistir. Laktat seviyeleri, Laotate ProTM 2 kan Iaktat test Cihazi (Arkray, Alere AB, Lidingö, Isveç) kullanilarak her 2 saatte bir (n = 5) belirlenmistir (Tanner ve ark., 2010). Inkübasyon, 750 rpm'lik bir karistirici hizinda 37 °C'de gerçeklestirilmis ve pH, bir PHM21O Standart pH Ölçer (Radiometer, Copenhagen, Danimarka) kullanilarak baslangiçta ve 4 ve 8 saat inkübasyondan (n = 4) sonra ölçülmüstür. Sonuçlar Laktat üretimi, insan trombositlerinde metformin ve fenformin ile inkübasyona yanit olarak zaman ve doza bagimli bir sekilde artmistir (Sekil 8a). Kontrolle karsilastirildiginda, metformin- (1 ve 10 mM), fenformin- ( ile muamele edilmis trombositlerin hepsi 8 saat tedavi boyunca önemli ölçüde daha fazla ve 7.00 ± 0.04'e düsmüstür. Fenformin ile tedavi edilen trombositler (, 10 mM metformin ile muamele edilmis numunelerle benzer seviyelerde Iaktat üretmistir. Laktat artis düzeyi, tüm tedavi gruplari için pH azalmasi ile korele olmustur. Metformin ile tedavi edilen saglam trombositlerdeki artmis laktat seviyeleri, metforminle tedavi edilen permeabilize trombositlerde görülen azalmis OXPHOSCi respiratuvar degerleri ile de korele olmustur (r2 = 0.60, P <0.001). Sinirli sayida deneyler ayrica, bozulmamis PBMC'Ierin ayrica 10 mM metformine maruz kaldiginda artan laktat salinimi gösterdigini göstermistir (veriler gösterilmemistir). Örnek 18-19'daki sonuçlarin tartisilmasi Bu çalisma, metforminin, metformin intoksikasyonunun klinik durumuyla ilgili konsantrasyonlarda insan plateletlerinde ve PBMC'Ierde kompleks I için spesifik mitokondri üzerindeki geri dönüsümsüz toksik etkisini göstermektedir. Trombositlerde azalmis Kompleks I solunumu ile artan Iaktat üretimi arasinda bir korelasyon oldugunu da ayrica göstermis bulunuyoruz. Metformin için gözlemledigimiz mitokondriyal toksisite, bozulmamis hücrelerde zaman içinde gelismistir. Fenformin günümüzde birçok ülkede yüksek LA insidansi nedeniyle geri çekilmis olan yapisal olarak iliskili bir bilesik olup, büyük ölçüde düsük konsantrasyonda bir kompleks l'e özgü etki vasitasiyla trombositlerde laktat salimini ve pH düsüsünü indüklemistir. Mevcut çalismada, insan trombositlerinin bütünlesik mitokondriyal fonksiyonunu degerlendirmek üzere yüksek çözünürlüklü respirometreli bir model kullanarak, hem metformin hem de fenforminin mitokondriyal toksisitesinin respiratuvar kompleks l'e spesifik oldugunu ve benzer bir spesifik inhibisyonun ayrica PBMC'Ierde bulundugunu göstermis bulunuyoruz. Permeabilize PBMC'lerin kompleks I respirasyonu, permeabilize (geçirgenlestirilmis) trombositlerinkine göre metformine 2.6 kat daha duyarli olmustur. Bununla birlikte, metforminin zamana bagli toksisitesinden dolayi (asagiya bakiniz), IC50 muhtemelen düsük bir tahmindir ve daha uzun pozlama süresinden sonra tespit edilirse daha düsük olabilir. Bu bulgular metforminin mitokondriyal toksisitesinin, daha önce baskalari tarafindan gösterildigi gibi spesifik dokularla sinirli olmadigini, daha ziyade hücreiçi seviyede genel bir etki olusturdugunu daha da güçlendirmektedir. Protti ve ark. 2012a, Protti ve ark. 2012b belgelerinde bildirilen trombositlerde metformin ile indüklenmis kompleks IV inhibisyonu bu çalismada veya izole bovin mitokondrileri kullanilan önceki bir çalismada (Dykens ve ark. (2008)) dogrulanmamistir. Ayrica, metformin ve fenformin, iç veya dis mitokondriyal membranlarin herhangi bir spesifik olmayan geçirgenlik degisimleri yoluyla solunum inhibisyonunu indüklememistir, çünkü ilaçlarin mevcudiyetinde sitokrom c ilavesini takiben ayrilma veya uyarma tepkisi olduguna dair bir kanit yoktur. Yüksek çözünürlüklü respirometri, yüksek hassasiyetli bir yöntemdir ve pikomolar aralikta 02 ölçümleri saglar. Insan kan hücrelerine ex vivo uygulandiginda, bozulmamis hücrelerde tam entegre halde solunumun degerlendirilmesine izin verir ve geçirgen hale getirilmis hücrelerde saglam mitokondriye ekzojen teminine ve substratlarin kontrolüne izin verir. Bu, metforminin mitokondriyal toksisitesi üzerine yapilan arastirmada, örnegin Dykens ve ark. (2008) ve Owen ve ark. (2000) arastirmalarinda büyük bir çogunlukla kullanilan enzimatik spektrofotometrik deneylerin aksidir. Bu analizler, tek komplekslerin bagimsiz, entegre olmayan fonksiyonlarini ölçer ve bu nedenle, çalismalarimizdaki sonuçlardaki farkliliklara katkida bulunabilecek sekilde daha az fizyolojiktir. Çalismanin sonuçlari, halihazirda 8 ila 8 saat sonunda intoksikasyonla iliskili konsantrasyonlarda metformin tarafindan kaynaklanan saglam trombosit süspansiyonlarindaki belirgin respiratuvar inhibisyonu, laktat artisini ve pH düsüsünü göstermistir. Mitokondriyal respirasyonun zamana bagli inhibisyonu ve bununla birlikte, hücre disi tamponun degisimi ve çözünür metforminin hücre geçirgenlestirilmesiyle birlikte hücre içi miktarinin seyreltiminin ardindan tersine çevrilme eksikligi, mitokondriyal birikmenin ilaca bagli olarak gelisen mitokondriyal fonksiyon bozukluguna iliskin LA'de, digerleri tarafindan önerildigi gibi (Chan ve ark., 2005, Lalau, 2010) önemli bir faktör oldugunu göstermektedir. Fenforminin mitokondriyal toksisitesi daha önce örnegin HepG2 hücreleri, bir karaciger karsinomu hücre çizgisi ve siçan ve inegin izole edilmis mitokondrilerinde gösterilmistir. Burada insan kan hücrelerini kullanarak spesifik mitokondriyal toksisite gösterilmistir. Metformin ile karsilastirildiginda, fenformin insan trombositlerinde daha güçlü bir mitokondriyal toksik potansiyele sahiptir (sirasiyla ICso . Fenformin ve metformin klinik dozda 10 ila 15 kat fark ve terapötik plazma konsantrasyonunda 3 ila kat fark gösterir. Bu çalismada, kompleks l'in engellenme potansiyeline yönelik fenformin ve metformin arasinda 20 katlik bir fark gözlemledik. Hastalara çevrildiginde, klinik dozlama ile iliskili olarak mitokondriyal toksisitede bu farklilik fenforminin fenformin ile iliskili LA insidansinin daha yüksek oldugunu açiklayabilir. Metforminin standart terapötik plazma konsantrasyonlari 0.6 ve 6.0 uM araligindadir ve toksik konsantrasyonlar 60 uM ve 1 mM arasindadir. Hemodiyalizden önce istemsiz metformin zehirlenmesi olgusunda, 2 mM'in üzerinde bir metformin düzeyi bildirilmistir (AI-Abri ve ark. 2013). Doku dagilimi çalismalari ayrica kararli durumdaki metformin konsantrasyonunun plazma/serumda diger organlara göre daha düsük oldugunu göstermistir. Mide-bagirsak yolunda 7 ila 10 kat daha yüksek konsantrasyonlarda biriktigi ve böbrek, karaciger, tükürük bezleri, akciger, dalak ve kaslarda plazma düzeylerine kiyasla bundan daha az, ancak yine de anlamli düzeyde yüksek miktarlarda biriktigi gösterilmistir. Kardiyovasküler sistemi, karacigeri veya böbrekleri etkileyen predispozan durumlar gibi metforminin temizlenmesinin zayif oldugu durumlarda, toksik düzeylere ulasabilir. Bu çalismada görülen metforminin toksik konsantrasyonu (1 mM) böylelikle metformin intoksikasyonu olan hastalarin kaninda bulunanlarla karsilastirilabilir. Metformin, bu çalismada gösterildigi gibi, kan hücreleri için toksik olmasina ragmen, trombositlerin ve PBMC'lerin LA'nin gelisimine önemli katkilari olmasi olasi degildir. Metformin diger organlarda biriktiginden ve ayrica bu organlar daha metabolik olarak aktif oldugundan, diger dokularda ilk olarak Iaktat üretiminin artmasi muhtemeldir. Sonuçlarimiz, baskalari tarafindan önerilen sekilde (Brunmair ve ark., metformin ile indüklenen LA'nin nedeni oldugu önerisini güçlendirmektedir. Daha önceki çalismalara ve mevcut bulgulara dayanarak, metforminin anti-diyabetik etkisinin aerobik solunumun inhibisyonu ile iliskili olabilecegi olasiligi hakkinda spekülasyon yapmak ilgi çekicidir. Metformin ile tedavi edilen diyabetik hastalarda karacigerdeki azalmis glikoz seviyeleri ve ince bagirsakta kana glikoz aliminin azalmasi, kismi kompleks l inhibisyonuna bagli olabilir. Kompleks l inhibisyonu, düsük ATP üretimi, artan AMP miktarlari, enzim AMP ile aktiflestirilmis protein kinaz (AMPK) aktivasyonu ve azalan ATP üretimini telafi etmek için artan glikolizle birlikte hizlandirilmis glükoz dönüsümüne neden olur. Simdiye kadar, metformin iliskili LA için tedavi önlemleri toksinin uzaklastirilmasi için hemodiyaliz ve hemofiltrasyon, asidoz için dogrulama yapilmasi ve böbrek kari akisinin arttirilmasindan olusmustur. Örnek 20 Hücre geçirgen süksinat ön ilaçlari ile laktat üretiminde metformin kaynakli artisa müdahale Yeni gelistirilen ve sentezlenmis hücre geçirgen süksinat ön ilaçlari ile intakt insan trombositlerinde Iaktat üretiminde metformin kaynakli artisa müdahale 10 mM glukoz içeren PBS içinde yapilmistir. Trombositler ya tek basina rotenona (2 pM) maruz birakilmis veya rotenon (2 uM) ve antimisin (sadece NV 189 ile tedavi edilen hücreler için 1 ug/mL) veya 10 mM metformin ve 60 dakika sonra vehikül (DMSO, kontrol), hücre dakikada bir 250 uM konsantrasyonda eklenmistir. Laktat seviyeleri, deneyin baslangici ile 30 dakikalik araliklarla ölçülmüstür. Ek olarak, ilk vehikülün (dmso, kontrol), farkli hücre geçirgen süksinat ön ilaçlarinin (NV118, NV189, NV241) veya süksinatin eklenmesinden önce ve deneyin sonunda pH ölçülmüstür. Laktat üretim hizi, Iaktat- zaman egrisinin %95 güven araligi (Cl) ile lineer olmayan bir uyumla hesaplanmistir (Sekil 9, 10, 11 ve 12). Örnek 20 ile ilgili sonuçlar, burada tarif edilen analizlere dayanmaktadir. Trombositlerde rotenon ve metformin inkübasyonuna bagli Iaktat üretimi, hücre geçirgen suksinat ön ilaçlarinin ilavesiyle zayiflatilmaktadir 2 uM Rotenon ile inkübe edilen trombositlerde Iaktat üretim hizi 0.86 mmol Iaktat olarak antimisin ile inkübe edilen hücreler, hücre geçirgen suksinat ön ilaçlarinin spesifik mitokondriyal etkisini gösteren, rotenon ile muamele edilmis hücreye (0.89 mmol [0.81- 0.97]) benzer bir Iaktat üretimine sahip olmustur (Sekil 10). 10 mM metformin ile inkübe 0.30) hizinda üretmistir (Sekil 12). Üç süksinat ön ilacindan herhangi biri ile birlikte inkübasyon sonucunda metformin etkisi zayiflatilmakta olup, NV118 için 0.43 mmol Mevcut tarifname ve devaminda gelen istemler boyunca, baglamda aksi açikça belirtilmedigi sürece, "içerir" ifadesi ve bunun "içeren", "içerdigi" vb. varyasyonlarinin, belirtilen tamsayi ya da adim ya da tamsayi ya da adim gruplarina dahil edildigini, ancak herhangi bir baska tamsayi ya da adimin ya da tamsayi ya da adim grubunun disarida birakilmadigi takdir edilecektir. "Içermek" kelimesi "içerir" ve "...'den olusur" ifadelerini kapsar. Mevcut bulusun bilesiginin ait oldugu bilesik sinifinin genel açiklamasi Bilesiklerin sinifi asagidaki Formül IB ile tanimlanabilir: AK 2 ,8 ya da bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzudur. A ve B arasindaki noktali bag, kapali halka yapisi olusturmak üzere istege bagli bir bagi belirttiginde, özelligi; içerisinde 2 ifadesinin -CH2-CH2- veya CH(CH3), -O, 8 arasindan seçilmesi, A ve B ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya ayni olmasi ve -O-R', -NHR". - SR'" veya -OH arasindan seçilmesi, hem A hem de B'nin H olmamasi kosulu bulunmasi, R', R" ve R"' ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya ayni olmasi ve asagidaki Formül "8 ila lXB arasindan seçilmesi: RZÄxJrî R3 (HB) kâri& (IIlB) O R9 R10 RBXNOXMJ 2:? (WE) 9 (VIIB) R1 = H, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, O-asil, O-alkil, N-asil, N-alkil, X-asil, CH2X-alkil, CH2X-asil, F, CHzCOOH, CH2C02alkil veya asagidaki formül a-f'den herhangi biri olmasidir: Tercih edilen yapilarda, R1 = H, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, O-asil, O- alkil, N-asil, N-alkil, X-asil, CH2X-alkil, CH2X-asil, F, CHzcOOH. X = 0, NH, NRe, S R2= Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, -C(O)CH3, -C(O)CH20(O)CH3, - R3 = R1, yani, R1 altinda belirtildigi gibi ayni ya da farkli gruplardir X1 = CR'3R'3, NR4 n = 1-4, p = 1-2 X2 = OR5, NR1R'2 R's = H, Me, Et, F R4 = H, Me, Et, I-Pr R5 = asetil, propiyonil, benzoil, benzilkarbonil R'2 = H.HX3, asil, asetil, propiyonil, benzoil, benzilkarbonil X3 = F, CI, Br vel Re: H veya alkil, örnegin Me, Et, n-propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil veya asetil, örnegin asil, propiyonil, benzoil, veya formül IIB, formül IIBI veya formül VIIIB X5 = -H, -COOH, -C(=O)XRe, X5 ayrica CONRiRs olabilir. R9 = H, Me, Et veya OzCCH2CH2COXR3 R10 = Oasil, NHalkil, NHasil veya OZCCH2CH2COX6R8 X6 = 0, NRS R8: H, alkil, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, asetil, asili propiyonil, benzoilor formula (llB), R11 ve R12 Ifadeleri bagimsiz olarak H, alkil, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, asetil, asil, propiyonil, benzoil, asil, -CH2X-alkil, -CH2X-asil olup, burada X = 0, NReveya Rc ve Rd ifadeleri bagimsiz olarak CH2X-alkil, CH2X-asil olup, burada X = 0, NRs veya 8, Rf, Rg ve Rh ifadeleri bagimsiz olarak X-asil, - CH2X-alkil, -CH2X-asil ve R9 arasindan seçilir, içerisinde alkil örnegin metil, etil, propil, isopropil, n-bütil, isobütil, sec-bütil, tert-bütil, n- pentil, neopentil, isopentil, hekzil, isohekzil, heptil, oktil, nonil veya desildir ve asil örnegin formil, asetil, propiyonil, bütiril pentanoil, benzoil ve benzeridir ve içerisinde asiller ve alkiller istege bagli olarak ornatilabilir, A ve B arasindaki noktali bag, formül I'in bir halkali yapisini olusturmak üzere istege bagli bir bagi belirtmekte olup, bu tür halkali bir bag mevcut oldugunda, formül I'e göre bilesigin asagidakilerin arasindan seçilmesi kosulu bulunur: Içerisinde X4 ifadesi -COOH, -C(=O)XR6 arasindan seçilir, ve içerisinde Rx ve Ry ifadeleri bagimsiz olarak R1, R2, R6 veya R', R" veya R"' arasindan seçilmekte olup, RX ve Ry ifadelerinin her ikisi birden -H olamaz. Tercih edilen bir yönde, R', R" ve R"' ifadeleri bagimsiz olarak farkli veya aynidir ve asagidaki formül IIB, VB, VIIB veya VIIIB arasindan seçilir: R9 Ri_ Tercihen ve formül IIB'ye göre, R1 ve R3 ifadelerinden en az biri -H olup, böylece formül Tercihen ve formül VIl'ye göre, p ifadesi 1 veya 2 olup, tercihen p ifadesi 1'dir ve X5 ifadesi -H olup, örnegin formül VIlB asagidaki gibidir: Tercihen ve formül IXB'ye göre, Rf, R9, Rh ifadelerinden en az biri -H veya alkil olup, alkil burada tanimlandigi gibidir. Ayrica, Formül IXB'ye göre, Rf, Rg, Rh ifadelerinden en az birinin -CHzX-asil olmasi ve asilin burada tanimlandigi gibi olmasi tercih edilir. Yukarida bahsedilen sinifin ilginç bir alt sinifi Formül I'in bilesikleriyle: ya da bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzuyla ilgilidir. A ve B arasindaki noktali bag, kapali halka yapisi olusturmak üzere istege bagli bir bagi belirtir. Formül lC'de, Z ifadesi -CH2-CH2- veya CH(CH3) arasindan seçilmekte olup, A ifadesi -SR, -OR ve NHR arasindan seçilir ve içerisinde R ifadesi asagidaki gibidir: B ifadesi -O-R', -NHR", -SR'" veya -OH arasindan seçilmekte olup; R' ifadesi asagidaki Formül IIC ila IXC arasindan seçilir: Tercihen, R' ifadesi asagidaki formül llC, VC ila IXC arasindan seçilir: R1ÄNH R', R" ve R'" ifadeleri bagimsiz olarak farkli veya aynidir ve asagidaki Formül lVC-VlllC arasindan seçilir: 9 (VlIC) 8d RI1R12 R1 = H, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, O-asil, O-alkil, N-asil, N-alkil, X-asil, CH2X-alkil, CH2X-asil, F, CH2000H, CHzcozalkil veya formül a-f'den herhangi biridir ww 8) 0 (b) 0 (C) 0 (d) Tercihen, R1 = H, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, O-asil, O-alkil, N-asil, N- X = 0, NH, NRs, S R2: Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, C(O)CH3, C(O)CH2C(O)CH3, C(O)CH20H(OH)CH3, R3 = R1 olup, yani R1 altinda tanimlananla ayni veya farkli bir grup olabilir, X1 = CR'3R'3, NR4 n = 1-4, p = 1-2 X2 = ORs, NR1R'2 R4 = H, Me, Et, i-Pr R5 = asetil, propiyonil, benzoil, benzilkarbonil R'2 = H.HX3, asil, asetil, propiyonil, benzoil, benzilkarbonil X3 = F, CI, Br vel Rs = H, alkil, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, asetil, asil, propiyonil, benzoil veya formül IIC, formül IIIC veya formül VIIIC X5 = -H, -COOH, -C(=O)XR6, YI" _ KÄN'SR X5 ayrica CONR1R3 olabilir R9 = H, Me, Et veya OzCCHzCHzCOXRs R10 = Oasil, NHalkiI, NHasiI veya OzCCHzCH2COX6R8 X6 = 0, NRs R8 = H, alkil, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, asetil, asil, propiyonil, benzoil veya formül IIC, formül IllC veya formül VIIIC Rn ve R12 Ifadeleri bagimsiz olarak H, alkil, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, asetil, asil, propiyonil, benzoil, asil, -CH2X-alkil, -CH2X-asil olup, burada X = 0, NRsveya RC ve Rd ifadeleri bagimsiz olarak CH2X-alkil, CH2X-asil olup, burada X = 0, NRs veya 8, Rf, Rg ve Rh ifadeleri bagimsiz olarak X-asil, - CH2X-alkil, -CHzX-asil ve R9 arasindan seçilir alkil örnegin Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil and asil is e.g. formil, asetil, propiyonil, isopropiyonil, bütiril, tert-bütiril, pentanoil, benzoil ve benzeridir ve içerisinde asiller ve alkiller istege bagli olarak ornatilabilir, ve A ve B arasinda noktali bag mevcut oldugunda, formül I'e göre bilesik asagidaki gibi içerisinde X4 ifadesi -COOH, -C(=O)XR6 arasindan seçilir, Tercihen ve formül IIC'ye göre, R1 ve R3 ifadelerinden en az biri -H olup, böylece formül FQJLXÄ_g R3 (IIC) Tercihen ve formül VIlC'ye göre, p ifadesi 1 veya 2 olup, tercihen p ifadesi 1'dir ve X5 ifadesi -H olup, örnegin formül VIIC asagidaki gibidir: irk/H" (VIIC) Tercihen ve formül IXC'ye göre, Rf, R9, Rh ifadelerinden en az biri -H veya alkil olup, alkil burada tanimlandigi gibidir. Ayrica, Formül IXC'ye göre, Rf, Rg, Rh ifadelerinden en az birinin -CH2X-asil olmasi ve asilin burada tanimlandigi gibi olmasi tercih edilir. Formül lC'ye göre ilgi çekici bilesikler asagidakiler olup: içerisinde X4 ifadesi -COOH, -C(=O)XR6 arasindan seçilir, EÄN "kin/S`Ri *5 o r ` içerisinde R1 ve X5 ifadeleri burada tanimlandigi gibidir. Tercihen X5 ifadesi -H'dir. içerisinde R6, X5 ve R1 ifadeleri burada tanimlandigi gibidir. Tercihen X5 ifadesi -H'dir. içerisinde X5 ve R1 ifadeleri burada tanimlandigi gibidir. Tercihen X5 ifadesi -H'dir. 5285:( 29061 - Aday ilaç Referans ilaç, endojenöz substrat 2252& i - Aday ilaç Referans ilaç, endojenöz substrat mM Metmorfin ile inkübe edilmis Trombositler (200°106/ml) 4- + Referans ilaç, endojenöz substrat Aday ilaç Laktat (mmoI/l) - 0 V h`k"| g` 0_.25 mg/kg/h 0.5 mg/kg/h . Rotenon g 5- I I I I I I I I Sîiggiigisiigiigzzi (a) PBMCS - permeabilize g 3 g 8› _ 'lmMMeUcirnin 5 +3 . . g 5, 9. 62 .9 . '5 g 53 i' Ö Ci < . 10 - dakka Substral ci ' ` Vci . ii ' cu . . Respiralu-:ar durum O (M PBMCs - permeabilize 55 8 '- - _ _ T `S` ........... T; 2 ` - ~ -- CN akîivneSi - ~ - ` - Melformin (mM) lrombosnler (C) Trombositler ~ permeabilizeEa 3 Y' 20 _, â "" CN anrinesi "`-" n -i UXVHUS. i i I Metformin (mM) 1 g . **Hz --------- D. E 15 i " "- °°° MGIformin g "3 'Cv 12 mM c é 10 '* "` g: . ' ' Tenformin " '7: 3 cm 5 . Cm 0058 mM " 4' 3 _o " `\ (a) Trombositler - saglam .. . î Konîrol i.- îmM Metformin E 7.7', A ' ' ' 10 mM Mctformin V 100 mM Mclfoimin g 2 ' .* i' ` ` (ti- 1 $ n: 3 ` + ` 0 20 40 60 Maruziyet süresi (dakika) (b) Trombositler - saglam *g 20 « 0 (3 15 . I" 9 5 ~ ELIF!! o 1 10 100 Metformin (mM) (a) Trombositler - saglam O - Rotenon (2 pM) g, 6 I ' ' x 4 - i i i i O ___i _*_ _-_ ...... Vu_;hr 7.4 4 5" ______ 7.0 - .3. " i .da 6.8 ' I 7 O «0. O 2 4 6 8 mM liîclmorfin içinCe inkube edilmis Trombosnler;200~1ü'"ml2 1'5 4 + Suçu-:ala NVI'B «o :ro 3 ..- 10 ~- 10 e _1 V ü . Medormin ~ + + + Rotenon - + + Zaman isa` Suksinat r - + ~ Nv118 - + - NV118 - + - - ml.! !Jetmorfin içinde inkube edilmis Tromnosnierizoo-io' ml;- .E 15 %955"'e°"a*am° _E 15 %QECIiIeoriaiama .1- -O- Suksirial g g E 4' 3/ EL . 3 "5 i 05 Zamanisai Suksinat - - + ` Anîimisin - - - + NV189 - + - - NV189 + _ . + /10 ml.! !Jetmorhn içinde mkube edilmis 4 + Suksinat g g i 3 9 1.0 S 10 E _1 (3 :1 `I ta .. 1' 2 05 ;2 0.5 C 1 2 "v 0.0 0.0 Zaman 'sa' Mertonnin - + + + Rotenon _ + + Suksinat - . . . NV241 _ + _ NV241 - o . . A 4 v ~ Rotenon B 4 -- Merfcrmin 10mM Vehikul *- Su ' + Rotenon __ 3 .: .- Rotenon, NV189 g 2 geçen sure (sa) TR TR TR TR TR TR TR TR TR TR

Claims (15)

ISTEMLER
1. Mevcut bulusa göre bir bilesik, Formül l'e göre veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu olup, özelligi; içerisinde A ve B arasindaki noktali bagin bir kapali halka yapisi olusturmak üzere istege bagli bir bagi belirtmesi ve içerisinde 2 ifadesinin -CH2-CH2- veya >CH(CH3) arasindan seçilmesi, A ifadesinin -SR, -OR ve NHR arasindan seçilmesi, ve R ifadesinin asagidaki gibi olmasi: R1JLNH X7JLX R15 R15 Raif.: _veya wa?.. B ifadesinin -O-R', -NHR", -SR,'" veya -OH arasindan seçilmesi; ve R' ifadesinin asagidaki formül Il ila lX arasindan seçilmesi: R', R" ve R'" ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya özdes olmasi ve asagidaki Formül R1 ve R3 ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya ayni olmasi ve H, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, O-asil, O-alkil, N-asil, N-alkil, X-asil, CH2X-alkil, CH2X-asil, F, CH2000H, CH2002aIkiI arasindan seçilmesi, X ifadesinin O, NH, NRe, S arasindan seçilmesi, 10 R2 ifadesinin Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, C(O)CH3, C(O)CH2C(O)CH3, C(O)CH20H(OH)CH3 arasindan seçilmesi, p ifadesinin bir tamsayi olmasi ve 1 veya 2 olmasi Re ifadesinin H, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, asetil, asil, propiyonil, benzoil veya formül ll veya formül Vlll arasindan seçilmesi X5 ifadesinin -H, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, -COOH, - C(=O)XR6, CONRiRs arasindan seçilmesi veya asagidaki formüle göre olmasi: IHLÄN ' &NIS`R` X7 ifadesinin R1, -NR1R3 arasindan seçilmesi, R9 ifadesinin H, Me, Et veya O2CCH2CH2COXR8 arasindan seçilmesi R10 ifadesinin Oasil, NHaIkiI, NHasil, veya OzCCHzCHzCOXsRa arasindan seçilmesi X6 ifadesinin O, NRs, NRsRa arasindan seçilmesi, içerisinde Re ve R8 ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya ayni olmasi ve H, alkil, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, asetil, asil, propiyonil, benzoil arasindan seçilmesi veya formül Il veya formül Vlll'e göre olmasi, R11 ve R12 ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya ayni olmasi ve H, Me, Et, propil, i- propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, asetil, propiyonil, benzoil, -CH2X-alkil, - CH2X-asil arasindan seçilmesi, burada X ifadesinin O, NRe veya 8 olmasi, Rc ve Rd ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya ayni olmasi ve CH2X-alkil, CH2X-asil arasindan seçilmesi, burada X = 0, NRa veya 8 olmasi, R13, R14 ve Ris ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya ayni olmasi ve H, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, -COOH, O-asil, O-alkil, N-asil, N-alkil, X-asil, CH2X-alkil arasindan seçilmesi; R13 ve R14 veya R13 ve R15 üzerindeki ornatiklarin köprü olusturarak bir halkali sistem olusturmasi, Ri, R9 ve Rh ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya ayni olmasi ve X-asil, - CH2X-alkil, - CH2X-asil ve R9 arasindan seçilmesi, alkilin Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil arasindan seçilmesi, asilin formil, asetil, propiyonil, isopropiyonil, bütiril, tert-bütiril, pentanoil, benzoil arasindan seçilmesi, asil ve/veya alkilin istege bagli olarak ornatilmis olabilmesi, ve A ve B arasinda noktali bag mevcut oldugunda, formül I'e göre bilesik asagidaki gibi içerisinde X4 ifadesinin -COOH, -C(=O)XRs arasindan seçilmesi, ”12`“ _ 12`” R1 bilesigin asagidakilerden biri olmamasi kosulu bulunmasidir: HOWSNOH #V NCI.'
2. Istem 1'e göre, Formül IA'ya uygun bir bilesik veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu olup, özelligi; içerisinde A ifadesinin -SR, -OR ve NHR arasindan seçilmesi, ve R ifadesinin asagidaki gibi olmasi: RiÄNH X7 X 1` RiRGG R1BF134 B ifadesinin -O-R', -NHR", -SR,"' veya -OH arasindan seçilmesi; ve R', R" ve R'" ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya özdes olmasi ve asagidaki formüllerden biri arasindan seçilmesi: RiaRÃG (VII) 1' Rßgg R1 ve R3 ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya özdes olmasi ve H, Me, Et, propil, 0- Me, O-Et, O-propil arasindan seçilmesi, X ifadesinin O, NH, 8 arasindan seçilmesi, p ifadesinin bir tamsayi olmasi ve 1 olmasi, Rs ifadesinin H, Me, Et arasindan seçilmesi, X5 ifadesinin -H, Me, Et, -COOH, -C(:O)XR6, CONRiRs arasindan seçilmesi X7 ifadesinin R1, -NR1R3 arasindan seçilmesi, R13, R14 ve R15 ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya ayni olmasi ve H, Me, Et, propil, i-propil, bütil, iso-bütil, t-bütil, -COOH, O-asil, O-alkil, N-asil, N-alkil, X-asil, CH2X-alkil arasindan seçilmesi; içerisinde alkil ve asilin yukarida tanimlandigi gibi olmasidir.
3. istem 1 veya 2'ye göre, Formül IA'ya uygun bir bilesik A 2 B (iA) veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu olup, özelligi; içerisinde 5 A ifadesinin -SR, -OR ve NHR arasindan seçilmesi, ve R ifadesinin asagidaki gibi olmasi: mia?.. veya R1?” B ifadesinin -O-R', -NHR", -SR,'" veya -OH arasindan seçilmesi; ve R', R" ve R'" ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya özdes olmasi ve asagidaki 10 formüllerden biri arasindan seçilmesi: X5 `111. 3& R15 R15 7 .veya R1 ve R3 ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya özdes olmasi ve H, Me, Et, propil, 0- Me, O-Et, O-propil arasindan seçilmesi, X ifadesinin O, NH, 8 arasindan seçilmesi, 15 p ifadesinin bir tamsayi olmasi ve 1 olmasi, Rs ifadesinin H, Me, Et arasindan seçilmesi, X5 ifadesinin -H, Me, Et, -COOH, -C(=O)ORe, CONR1R3 arasindan seçilmesi, X7 ifadesinin R1, -NR1R3 arasindan seçilmesi, R13, R14 ve R15 ifadelerinin bagimsiz olarak farkli veya ayni olmasi ve H, Me, Et, -COOH arasindan seçilmesidir.
4. Yukaridaki istemlerden herhangi birine göre bir bilesik olup, özelligi; içerisinde Z ifadesinin -CH20H2- ve A ifadesinin -SR olmasidir.
5. Yukaridaki istemlerden herhangi birine göre bir bilesik olup, özelligi; içerisinde 2 ifadesinin -CH20H2-, A ifadesinin -SR ve B ifadesinin OH veya SR'" olmasidir.
6. Yukaridaki istemlerden herhangi birine göre bir bilesik olup, özelligi; içerisinde Z ifadesinin -CH2CH2-, A ifadesinin -SR, B ifadesinin OH veya SR"' olmasi, burada R'" ifadesinin asagidaki gibi olmasidir: X5wmll.
7. Yukaridaki istemlerden herhangi birine göre bir bilesik olup, özelligi; içerisinde Z ifadesinin -CH20H2- ve A ifadesinin SR ve B ifadesinin OH olmasidir.
8. Istem 1 ila 3'ten herhangi birine göre bir bilesik olup, özelligi; içerisinde 2 ifadesinin -CH20H2-, A ifadesinin NR, B ifadesinin OH ve R ifadesinin asagidaki gibi olmasi: ve X ifadesinin S olmasidir.
9. Yukaridaki istemlerden herhangi birine göre bir bilesik olup, özelligi; içerisinde R ve/veya R'" ifadesinin asagidaki gibi olmasi: x5 "5. 13R14 ve p=1 ve X5 ifadesinin -H olmasi, formül VII'nin asagidaki gibi olmasidir: R1 »YERI- R13R14 (vii)
10. istem 1 ila 8'den herhangi birine göre bir bilesik olup, özelligi; içerisinde R 5 ve/veya R'" ifadesinin asagidaki gibi olmasi: ><5 `HL ve p=1 ve X5 ifadesinin COXRe olmasi, formül Vll'nin asagidaki gibi olmasidir: Ri/UÖNH
11. Istem 1 ila 8'den herhangi birine göre bir bilesik olup, özelligi; içerisinde R 10 ve/veya R'" ifadesinin asagidaki gibi olmasi: ve p=1 ve X5 ifadesinin CONR1R3 olmasi, formül Vll'nin asagidaki gibi olmasidir: R1 ONH 1R' R'S p
12. Yukaridaki istemlerden herhangi birine göre bir bilesik olup, özelligi; içerisinde bilesigin asagidakilerin arasindan seçilmesidir: HOMSVYOH &NR/SMG* ÄNNSNOH ML ”WSXKHEF OMeO o co,m
13. Istem 1 ila 12'den herhangi birine göre bir bilesik olup, özelligi; tip alaninda kullanima yönelik olmasidir.
14. istem 1 ila 12'den herhangi birine göre bir bilesik olup, özelligi; kozmetik alaninda kullanima yönelik olmasidir.
15. Istem 1 ila 12'den herhangi birine göre tanimlanan sekilde Formül I'in bir bilesigini ve farmasötik olarak veya kozmetik olarak kabul edilebilir eksipiyanlari içeren bir bilesimdir.
TR2018/10411T 2014-04-08 2015-04-08 Özgün hücre geçirgen süksinat bileşikleri. TR201810411T4 (tr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DKPA201470190 2014-04-08

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201810411T4 true TR201810411T4 (tr) 2018-08-27

Family

ID=58804197

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2018/10411T TR201810411T4 (tr) 2014-04-08 2015-04-08 Özgün hücre geçirgen süksinat bileşikleri.

Country Status (25)

Country Link
US (2) US11147789B2 (tr)
EP (2) EP3129016B1 (tr)
JP (4) JP7082861B6 (tr)
KR (1) KR102322543B1 (tr)
CN (1) CN106458957B (tr)
AU (2) AU2015243346C9 (tr)
CA (1) CA2944565C (tr)
CY (1) CY1120650T1 (tr)
DK (1) DK3129016T3 (tr)
EA (1) EA035678B1 (tr)
ES (2) ES2953522T3 (tr)
HR (1) HRP20181126T1 (tr)
IL (1) IL247904B (tr)
LT (2) LT3129016T (tr)
MA (2) MA39855B1 (tr)
MX (1) MX378072B (tr)
PL (1) PL3129016T3 (tr)
PT (2) PT3129016T (tr)
RS (1) RS57624B1 (tr)
SG (1) SG11201607907PA (tr)
SI (1) SI3129016T1 (tr)
SM (1) SMT201800429T1 (tr)
TR (1) TR201810411T4 (tr)
WO (1) WO2015155231A1 (tr)
ZA (1) ZA201606608B (tr)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA035678B1 (ru) * 2014-04-08 2020-07-24 Ньюроувив Фармасьютикал Аб Новые клеточно-проницаемые сукцинатные соединения
AU2015243345A1 (en) * 2014-04-08 2016-10-13 Neurovive Pharmaceutical Ab Prodrugs of succinic acid for increasing ATP production
WO2015155238A1 (en) 2014-04-08 2015-10-15 Neurovive Pharmaceutical Ab Succinate prodrugs for use in the treatment of lactic acidosis or drug-induced side-effects due to complex i-related impairment of mitochondrial oxidative phosphorylation
WO2017060418A1 (en) * 2015-10-07 2017-04-13 Neurovive Pharmaceutical Ab Protected carboxylic acid-based metabolites for the treatment of mitochondria-related diseases
WO2017060422A1 (en) * 2015-10-07 2017-04-13 Neurovive Pharmaceutical Ab Protected carboxylic acid-based metabolites for the treatment of mitochondrial disorders
WO2017060420A1 (en) * 2015-10-07 2017-04-13 Neurovive Pharmaceutical Ab Protected fumaric acid-based metabolites for the treatment of autoimmune diseases
WO2017096270A1 (en) * 2015-12-03 2017-06-08 The Regents Of The University Of California Methods for treating mitochondrial diseases
KR20210076040A (ko) * 2018-10-11 2021-06-23 임브리아 파마슈티칼스, 인크. Tca 회로 중간체 및 그의 사용 방법
US20210346332A1 (en) * 2018-10-11 2021-11-11 Imbria Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating and preventing leber's hereditary optic neuropathy
CN109675037B (zh) * 2019-01-25 2021-09-14 南方医科大学 Atp及其受体在制备治疗自闭症药物中的应用
IL288990B2 (en) * 2019-06-19 2025-09-01 Abliva Ab Succinate drug meters, preparations containing the succinate drug meters and its uses

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB756422A (en) * 1950-09-14 1956-09-05 Saint Gobain Esters of urethanes of glycols and the manufacture thereof
NL6806584A (tr) * 1965-09-20 1968-11-12
FR2265355B1 (tr) 1974-03-28 1977-11-04 Blum Jean
US5112953A (en) 1989-12-29 1992-05-12 Neorx Corporation Radiolabeled proteins for diagnostic or therapeutic use
DE4101158C2 (de) * 1991-01-14 1994-06-23 Dainippon Ink & Chemicals Wärmehärtbare Reaktionsharzgemische, Verwendung der erfindungsgemäßen Reaktionsharze zur Herstellung von Formkörpern und Beschichtungen
EP0583480A4 (en) 1992-02-07 1994-03-18 Tsumura & Co SIDE EFFECTS MITIGATION AGENT.
JPH07331262A (ja) * 1994-05-31 1995-12-19 Tonen Corp パティキュレート低減用添加剤及び該添加剤を用いたディーゼルエンジン用燃料組成物
GB9612331D0 (en) * 1996-06-13 1996-08-14 Leo Pharm Prod Ltd Chemical compounds
CN1222139A (zh) * 1996-06-13 1999-07-07 里奥药物制品有限公司 多元醇琥珀酸酯及其药物制剂
JP2002525026A (ja) * 1998-07-02 2002-08-13 ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティ ポリケチドを作製するための方法
AUPR059400A0 (en) * 2000-10-06 2000-11-02 Bar-Ilan University Formaldehyde-releasing prodrugs
EP1401850A1 (en) * 2001-06-20 2004-03-31 Nuevolution A/S Nucleoside derivatives for library preparation
US7468383B2 (en) * 2005-02-11 2008-12-23 Cephalon, Inc. Proteasome inhibitors and methods of using the same
KR100791844B1 (ko) 2006-06-30 2008-01-07 주식회사유한양행 메트포르민 또는 그의 염을 함유하는 서방성 제제 및 그의제조방법
KR101069502B1 (ko) 2006-10-31 2011-09-30 (주)아모레퍼시픽 비만 및 당뇨병 개선용 경구용 조성물
US20120308646A1 (en) * 2007-01-18 2012-12-06 Hesheng Zhang Tetracyclic anthraquinones possessing anti-cancer properties
EP2139320A4 (en) 2007-03-26 2010-09-08 Salutria Pharmaceuticals Llc METHODS AND COMPOSITIONS OF PROBUCOL DERIVATIVES FOR THE TREATMENT OF DIABETES
US8410139B2 (en) * 2009-10-07 2013-04-02 Bristol-Myers Squibb Company Prodrugs of a piperidinyl derivative as modulators of chemokine receptor activity
IT1406068B1 (it) 2010-07-22 2014-02-06 Medestea Int Spa Polidesossiribonucleotidi (pdrn) per l'impiego nel trattamento di condizioni di acidosi e composizioni a base di polidesossiribonucleotidi per il suddetto impiego
JP2014024772A (ja) 2012-07-25 2014-02-06 Univ Of Tokyo ミトコンドリアのａｔｐ産生能昂進剤
US9670175B2 (en) * 2012-10-05 2017-06-06 Neurovive Pharmaceuticals AB Protected succinates for enhancing mitochondrial ATP-production
AU2015243345A1 (en) 2014-04-08 2016-10-13 Neurovive Pharmaceutical Ab Prodrugs of succinic acid for increasing ATP production
EA035678B1 (ru) * 2014-04-08 2020-07-24 Ньюроувив Фармасьютикал Аб Новые клеточно-проницаемые сукцинатные соединения
WO2015155238A1 (en) 2014-04-08 2015-10-15 Neurovive Pharmaceutical Ab Succinate prodrugs for use in the treatment of lactic acidosis or drug-induced side-effects due to complex i-related impairment of mitochondrial oxidative phosphorylation

Also Published As

Publication number Publication date
MA39855B1 (fr) 2018-10-31
AU2015243346A1 (en) 2016-10-13
US20170105961A1 (en) 2017-04-20
MX2016012691A (es) 2016-12-16
SI3129016T1 (sl) 2018-10-30
JP2021169519A (ja) 2021-10-28
ES2953522T3 (es) 2023-11-14
IL247904B (en) 2020-08-31
WO2015155231A1 (en) 2015-10-15
KR102322543B1 (ko) 2021-11-04
CA2944565C (en) 2022-11-29
AU2015243346B2 (en) 2018-10-18
LT3391941T (lt) 2023-11-10
AU2018282308A1 (en) 2019-01-17
EP3129016B1 (en) 2018-06-06
BR112016023086A8 (pt) 2021-06-29
HRP20181126T1 (hr) 2018-10-05
PT3129016T (pt) 2018-10-01
AU2015243346C1 (en) 2019-02-07
SMT201800429T1 (it) 2018-09-13
RS57624B1 (sr) 2018-11-30
EP3391941A1 (en) 2018-10-24
AU2018282308B2 (en) 2020-04-30
HK1255109A1 (en) 2019-08-02
IL247904A0 (en) 2016-11-30
CY1120650T1 (el) 2019-12-11
CN106458957B (zh) 2020-08-18
JP2021169518A (ja) 2021-10-28
MA39855A (fr) 2018-10-24
LT3129016T (lt) 2018-09-10
ES2683860T3 (es) 2018-09-28
EA035678B1 (ru) 2020-07-24
JP7229189B2 (ja) 2023-02-27
US12310940B2 (en) 2025-05-27
EP3129016A1 (en) 2017-02-15
US20210401792A1 (en) 2021-12-30
CA2944565A1 (en) 2015-10-15
AU2015243346C9 (en) 2019-03-07
DK3129016T3 (en) 2018-09-03
CN106458957A (zh) 2017-02-22
SG11201607907PA (en) 2016-10-28
EP3391941B1 (en) 2023-06-07
JP7082861B2 (ja) 2022-06-09
MA44092B1 (fr) 2023-08-31
JP2017513829A (ja) 2017-06-01
EA201692017A1 (ru) 2017-02-28
ZA201606608B (en) 2022-10-26
JP7082861B6 (ja) 2023-12-22
JP2020100628A (ja) 2020-07-02
PT3391941T (pt) 2023-08-24
US11147789B2 (en) 2021-10-19
MX378072B (es) 2025-03-10
PL3129016T3 (pl) 2018-10-31
BR112016023086A2 (pt) 2017-08-15
KR20160142861A (ko) 2016-12-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7229189B2 (ja) 新規な細胞透過性サクシネート化合物
JP2017518960A (ja) Ａｔｐ産生を増加するためのコハク酸のプロドラッグ
CN106255509A (zh) 用于在归因于线粒体氧化磷酸化的复合体i相关损伤的乳酸性酸中毒或药物诱导的副作用的治疗中应用的琥珀酸酯前药
WO2017060400A1 (en) Protected carboxylic acid-based metabolites for the treatment of disesases related to mitochondrial dysfunctions
HK1255109B (en) Novel cell-permeable succinate compounds
BR112016023086B1 (pt) Composto, composição, e, uso de um composto
HK1228251A1 (en) Novel cell-permeable succinate compounds
HK1228251B (en) Novel cell-permeable succinate compounds
WO2017060422A1 (en) Protected carboxylic acid-based metabolites for the treatment of mitochondrial disorders