[go: up one dir, main page]

TR201816523T4 - Patolojilerin tedavisine yönelik antisens moleküller ve yöntemler. - Google Patents

Patolojilerin tedavisine yönelik antisens moleküller ve yöntemler. Download PDF

Info

Publication number
TR201816523T4
TR201816523T4 TR2018/16523T TR201816523T TR201816523T4 TR 201816523 T4 TR201816523 T4 TR 201816523T4 TR 2018/16523 T TR2018/16523 T TR 2018/16523T TR 201816523 T TR201816523 T TR 201816523T TR 201816523 T4 TR201816523 T4 TR 201816523T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
skipping
exon
antisense
induce
ability
Prior art date
Application number
TR2018/16523T
Other languages
English (en)
Inventor
Wilton Stephen
Fletcher Sue
Adams Abbie
Meloni Penny
Original Assignee
Univ Western Australia
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from AU2009905549A external-priority patent/AU2009905549A0/en
Application filed by Univ Western Australia filed Critical Univ Western Australia
Publication of TR201816523T4 publication Critical patent/TR201816523T4/tr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/318—Chemical structure of the backbone where the PO2 is completely replaced, e.g. MMI or formacetal
    • C12N2310/3181—Peptide nucleic acid, PNA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
    • C12N2310/3233—Morpholino-type ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
    • C12N2310/3521—Methyl
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/33—Alteration of splicing

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

SEQ ID NO: 1 ila 59'da belirtildiği gibi, distrofin geninde ekzon atlama işlemini indüklemek üzere seçilmiş bir hedef bölgeye bağlanabilen bir antisens molekülüdür.

Description

Tarifname içerisinde belirtilen nükleotid ve aminoasit dizileri, <400 sayisal gösterge alani içerisinde yer alan bilgi ve onu izleyen dizi tanim kodu ile tanimlanmaktadir (örnegin <400 1, <400 2, vb.). Farkli antisens moleküllerini birbirinden ayirt etmek amaciyla bir antisens moleküller terminoloji sistemi tasarlanmis ve yayinlanmistir (bakiniz, Mann et al.. (2002) JG_en M 4, 644-654). Bu terminoloji bilhassa, tümü, asagida gösterildigi gibi ayni hedef bölgeye yönlendirilmis olan, birbirinden biraz farkli birkaç antisens molekülü test edilirken anlamli olmustur: Ilk harf türü belirtir (örnegin H: insan, M: murin, C: Köpek) "#" hedef distrofin ekzon numarasini belirtir. bölgesini gösterir. (x y), tavlama koordinatlarini temsil eder, burada veya ""+ sirasiyla intronik veya ekzonik dizileri belirtir. Örnek olarak, A(-6+18), hedef ekzondan önceki intronun son 6 bazini ve hedef ekzonun ilk 18 bazini gösterir. En yakin uç-birlesme bölgesi alici olacaktir, o nedenle bu koordinatlarin önünde "A" harfi bulunacaktir. Donör uç-birlesme bölgesindeki tavlama koordinatlarinin tanimlanmasi D(+2-18) seklinde olabilir, burada son 2 ekzonik baz ve ilk 18 intronik baz, antisens molekülünün tavlama bölgesine karsilik gelir. A(+65+85) ile temsil edilecek tam ekzonik tavlama bölgesi koordinatlari, bu ekzonun baslangici itibariyle 65. ve 85. nükleotid arasindaki bölgeyi ifade eder. Burada kullanildigi sekliyle "türetilmis" ve den türetilmis" terimi, her ne kadar 0 kaynaktan dogrudan alinmasa da, belirli bir kaynaktan elde edilebilecek spesifik bir tam sayi anlamina gelecektir. Bu tarifname genelinde, baglam aksini gerektirmedikçe, "içerir" terimi ile veya bunun parça grubunun dahil edildigi ancak baska bir tamsayi veya tamsayi grubunun hariç tutulmadigi kastedilmektedir. Burada kullanilan belirli terimlere iliskin diger tanimlar, bulusun ayrintili tarifnamesi içerisinde bulunabilir ve tüm belge genelinde geçerlidir. Aksi tanimlanmadikça, burada kullanilan tüm diger bilimsel ve teknik terimler, bulusun ait oldugu teknikte normal uzmanliga sahip bir kisi tarafindan standart sekilde anlasilacak ayni anlama sahiptir. TERCIH EDILEN UYGULAMANIN AÇIKLAMASI Antisens molekülü(molekülleri), pre-mRNA dizileri içerisindeki ekzonlarda uç-birlestirme sürecine katilan nükleotid dizilerine hedeflendiginde, ekzonun normal uç-birlesmesi inhibe edilerek uç-birlestirme mekanizmasinin, mutasyona ugramis tüm ekzonlari olgun mRNA`dan bypas etmesine neden olabilir. Antisens oligonükleotid tarafindan indüklenen ekzon atlamasi kavrami Sekil 2'de gösterilmektedir. Birçok gende, tüm bir ekzonun delesyonu, önemli fonksiyonel sahalarin kaybi veya okuma çerçevesinin bozulmasi yoluyla fonksiyonel olmayan bir proteinin üretilmesine yol açacaktir. Bununla birlikte, bazi proteinlerde, protein çerçevesinin bir veya daha fazla ekzonu silerek, okuma çerçevesini bozmadan ve proteinin biyolojik aktivitesini ciddi bir sekilde degistirmeden proteini kisaltmak mümkündür. Tipik olarak, bu türlü proteinler yapisal bir role sahiptir ve uçlarinda fonksiyonel sahalara sahiptir. Mevcut bulus, belirtilen distrofin pre-mRNA hedeflerine baglanabilen ve bu genin yeniden yönlendirilmesini saglayan antisens molekülleri tarif eder. Antisens moleküllerine dayanan bir terapinin tercih edilen bir amaci, antisens molekülünün mümkün olan en düsük konsantrasyonunu saglayarak maksimum ekzon atlama elde etmektir. Genel olarak, bir antisens molekülü güçlü, saglam ekzon atlamasina neden olabilir; zayif, sporadik ekzon atlamasina neden olabilir veya hiçbir ekzon atlamasina neden olmaz. Düsük bir terapötik dozda güçlü, saglam tutarli ekzon atlamalarini saglayabilen antisens moleküllerin (tek basina veya kombinasyon halinde) gelistirilmesi tercih edilir. Antisens Molekülleri Bulusun bir birinci yönüne göre, bir insan distrofin pre-mRNA'sinda ekzon 45 atlamasini indükleyen bir antisens oligonükleotid saglar, burada antisens oligonükleotid asagidakilerden olusan gruptan seçilir: i) CAA UGC CAU CCU GGA GUU CCU G veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu içeren 22 baz bir antisens oligonükleotid; ii) CAA UGC CAU CCU GGA GUU CCU G Içeren ve 5-sübstitüe edilmis bir pirimidin bazi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu içeren 22 baz bir antisens oligonükleotid; iii) GCC CAA UGC CAU CCU GGA GUU CCU G veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu içeren 25 baz bir antisens oligonükleotid; iv) GCC CAA UGC CAU CCU GGA GUU CCU G içeren ve 5-sübstitüe edilmis bir pirimidin bazi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu içeren baz bir antisens oligonükleotid; v) GCU GCC CAA UGC CAU CCU GGA GUU CCU G veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu içeren 28 baz bir antisens oligonükleotid; vi) GCU GCC CAA UGC CAU CCU GGA GUU CCU G içeren ve 5-sübstitüe edilmis bir pirimidin bazi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu içeren 28 baz bir antisens oligonükleotid; vii) GCC GCU GCC CAA UGC CAU CCU GGA GUU CCU G veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu içeren 31 baz bir antisens oligonükleotid; ve viii) GCC GCU GCC CAA UGC CAU CCU GGA GUU CCU G içeren ve 5- sübstitüe edilmis bir pirimidin bazi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu içeren 31 baz bir antisens oligonükleotid. Distrofin gen transkripsiyonunun ekzonlarinda ekzon atlamalarini indüklemek için, antisens molekülleri Tablo 1A'da gösterilen bilesikler grubundan seçilebilir. Ayrica, ekzon atlamayi indüklemek için seçilen bir hedefe baglanabilen iki veya daha fazla antisens oligonükleotidden olusan bir kombinasyon veya "kokteyl" de saglanmistir. Distropin gen transkripsiyonunun ekzonlannda ekzon atlamayi indüklemek için, bir "kokteyl" içindeki antisens molekülleri tercihen Tablo 1B'de gösterilen bilesikler grubundan seçilir. Konsensüs uç-birlesme bölgelerini tamamen maskelemek amaciyla antisens moleküllerinin tasarlanmasi, mutlaka hedeflenen ekzonun atlamasina yol açmayabilir. Ayrica bulus sahipleri, antisens oligonükleotidin kendi büyüklügünün veya uzunlugunun, antisens molekülleri tasarlarken her zaman birincil bir faktör olmadigini kesfetti. Ekzon 19 gibi bazi hedeflerde, 12 bazli kisa antisens oligonükleotidler, daha uzun (20-31 bazli) oligonükleotidler kadar etkili olmasa da ekzon atlamasi indükleyebildi. Murin distrofin ekzon 23'ü gibi bazi diger hedeflerde, sadece 17 rezidü uzunlugundaki antisens oligonükleotidler, 25 nükleotidlik diger bir çakisan bilesikten daha etkili bir atlama indükleyebildi. Bununla birlikte, mevcut bulusta, genellikle, daha uzun antisens moleküllerin, kisa moleküllere göre ekzon atlamalarini indüklemede genellikle daha etkili olduklari bulunmustur. Dolayisiyla, tercihen, mevcut bulusun antisens molekülleri, uzunluk olarak 24 ile 30 nükleik asit, tercihen yaklasik 28 nükleotit uzunlugundadir. Örnegin, daha önce 20 baz (H16A(-07+13)) bir antisens oligonükleotidin ekzon 16 ekzon atlanmasini indüklemede etkisiz oldugu, ancak daha kisa oligonükleotidi tamamen içine alan 31 baz bir (H16A(-06+25)) oligonükleotidin atlamayi indüklemede etkili oldugu bulunmustur (Harding et al (2007) Mol Ther 15: 157-166). Bulus sahipleri ayni zamanda, uç-birlestirme prosesini yeniden yönlendirmek için antisens molekülleri tarafindan bloke edilebilen veya maskelenebilen herhangi bir standart motifin olmadigini kesfetti. Fare distrofin ekzon 23'ü gibi bazi ekzonlarda, donör uç-birlesme bölgesi, bu ekzonun atlamasini yeniden yönlendirmek için en elverisli bölge oldu. Donör uç-birlesme bölgesinin çakisan bölgelerine tavlamak için bir ekzon 23 spesifik antisens molekülleri serisinin tasarlanmasinin ve test edilmesinin, indüklenen ekzon atlamasinin etkinliginde ciddi bir farklilik gösterdigi belirtilmelidir. Mann et al., (2002) tarafindan bildirildigi üzere, antisens oligonükleotidin tavlanmasina bagli olarak sens olmayan mutasyonu bypas etme etkinliginde anlamli bir farklilik oldu ("Improved antisense oligonucleotide induced exon skipping in the mdx mouse model of muscular dystrophy". J Gen Med 4: 644-654). Ekzon 23 alici bölgesinin veya çesitli iç sahalarin hedeflenmesinin, istikrarli bir ekzon 23 atlamasi indüklemedigi görüldü. Çikarilmasi hedeflenen diger ekzonlarda, donör birlesme sahasinin maskelenmesi, herhangi bir ekzon atlamayi indüklememistir. Bununla birlikte, antisens moleküllerini alici birlesme sahasina yönlendirmek (asagida tartisildigi gibi insan ekzonu 8), güçlü ve sürekli ekzon atlamayi indüklemistir. Insan ekzonu 8`in çikarilmasinin ekzon 9'un birlikte çikarilmasiyla siki bir sekilde baglantili oldugu belirtilmelidir. Ekzon 8 antisens oligonükleotidleri ve ekzon 9'un karsilik gelen bölgeleri arasinda güçlü bir dizi homolojisi yoktur, bu da bir çapraz reaksiyon durumu olmadigini göstermektedir. Aksine, bu iki ekzonun birlestirilmesi genellikle baglantilidir. Bu, izole bir örnek degildir, çünkü ayni etki, ekzon 9'un atlanmasiyla sonuçlanan ekzon 8'in hedeflendigi köpek hücrelerinde de gözlenmistir. Fare distrofin pre-mRNA'da çikarmak için ekzon 23'ün hedeflenmesi de ekzon 22'nin de siklikla çikarilmasina neden olur. Bu etki doza bagli bir sekilde gerçeklesir ve ayni zamanda 2 bitisik ekzonun yakin koordineli bir sekilde islenmesini gösterir. Diger hedeflenen ekzonlarda, donör veya alici uç-birlesme bölgelerine yönlendirilmis antisens moleküller ekzon atlamasi indüklemezken veya kötü atlama indüklenirken antisens moleküllerin ekzon içi bölgelere (yani insan distrofin ekzon 4'ü içerisindeki ekzon uç-birlestirme pekistireçleri) tavlanmasi, ekzon atlamasinin indüklenmesinde en yüksek etkinligi gösterdi. Bazi ekzonlar, örnegin fare ve insan ekzonu 19, antisens molekülleri çesitli motiflere hedeflendirmek yoluyla kolaylikla atlatilir. Yani, donör ve alici uç-birlesme bölgelerini maskelemek için antisens oligonükleotidler veya ekzon uç- birlestirme pekistireçleri kullanildiktan sonra hedeflenen ekzon atlamasi indüklenir. Antisens moleküllerinin hangi kokteyllerinin ekzon atlamalarini indükleyecegini tahmin etmek de mümkün degildir. Örnegin, tek basina, belirli bir ekzonun atlamasini indüklemede çok iyi olan iki antisens molekülünün kombinasyonu, bir kokteylde birlestirildiginde bir ekzonun atlamasina neden olmayabilir. Örnegin, H50A(+02+30) ve kokteyl olarak kombinasyon halinde, yalnizca iki ekzonun kötü sekilde atlamasini H51A(+61+90) kombinasyonlari, bireysel antisens molekülleri etkili oldugu halde, ekzon 50 ve 51'in etkili bir sekilde atlamasina neden olmamistir. Bununla birlikte, üçüncü bir antisens molekülün ([H51D(+16-O7)] tek basina atlamaya neden olmaz) dahil edilmesi, ekzonlar 50 ve 51'in 1 nM'ye atlamasina neden olabilecek üç elemanli Alternatif olarak, tek basina etkisiz veya sadece orta derecede etkili olan iki veya üç antisens molekülünün kombinasyonu, kombine edildiginde mükemmel atlamaya neden olabilir. Örnegin, bireysel olarak H26A(- [SEQ ayni zamanda çoklu ekzon atlamayi (26-29 veya 27-30) indükler. Bununla birlikte, üç ekzon bir kokteyl olarak birlestirildiginde, yüksek verimli bir sekilde ekzon 26 atlamasi meydana gelir. Yukaridaki örneklerden ve tartismadan, bir kombinasyonun ise yaradigini veya yaramadigini dogru olarak tahmin etmenin bir yolu olmadigi açiktir. Antisens molekülleri, ekzonlarin 'doza bagimli' veya 'doza bagimli olmayan' sekilde atlamasina neden olabilir. Doza bagimli ile antisens molekülün daha büyük bir miktarinin daha iyi ekzon atlamasini indükledigi, buna karsilik doza bagimli olmayan ile antisens moleküllerin çok düsük dozlarda bile atlamayi indükleyebildigi antisens molekül miktarindan bagimsiz olarak (600nM ila 25 nM) ekzon 46 atlamanin esit derecede iyi oldugu görülmektedir. Aksine, H57A(-10+20) [SEO ID NO: 20] (Sekil 24) 100nM'de güçlü bir sekilde ekzon 57 atlamaya neden olur; ancak 50nM'de atlamayi azaltir ve 25nM'de atlamayi daha da azaltir. Bu moleküller çok düsük konsantrasyonlarda verilebildigi ve yine de terapötik bir etki saglayabildigi için, bir doza bagimli olmayan atlama indükleyen antisens moleküllerin seçilmesi tercih edilir. Bununla birlikte, özellikle, bu moleküller, düsük konsantrasyonlarda iyi veya mükemmel atlama indüklediginde, doza bagimli bir sekilde atlama indükleyen antisens molekülleri olarak tercih edilen moleküller olarak seçilmeleri kabul edilebilir. Tercihen, mevcut bulusun antisens molekülleri, 500 nM'den daha az, düsük konsantrasyonlarda iyi veya mükemmel ekzon atlamalari indükleyebilmektedir. En çok tercih edilen haliyle, mevcut bulusun oligonükleotid molekülleri, 100 nM'lik bir konsantrasyonda %30 daha fazla seviyelerde atlama indükleyebilmektedir. Ekzon atlamasinin modülasyonunda kullanilmaya uygun antisens oligonükleotidleri belirlemek ve seçmek için, ilk olarak, islevi modüle edilecek olan bir nükleik asit dizisinin tanimlanmasi gerekir. Bu örnegin, ekspresyonu belirli bir rahatsizlik veya hastalik durumu ile iliskili olan bir gen (veya bu genden transkribe edilen mRNA) veya bir enfeksiyöz ajandan kaynaklanan bir nükleik asit molekülü olabilir. Mevcut bulus baglaminda, tercih edilen hedef bölge(ler), mRNA uç-birlestirme prosesine katilanlardir (yani uç-birlestirme donör bölgeleri, uç-birlestirme alici bölgeleri veya ekzonik uç- birlestirme pekistireç elemanlari). Uç-birlestirici dallanma noktalari ve ekzon tanima dizileri veya uç-birlestirme pekistireçleri de ayrica mRNA uç-birlestirme prosesinin modülasyonu için potansiyel hedef bölgelerdir. Tercihen mevcut bulus, etkili ve istikrarli ekzon atlamasi indüklemek için distrofin pre- mRNAisi içerisindeki seçili bir hedefe baglanabilme özelligine sahip antisens moleküller saglamayi amaçlar. Duchenne kas distrofisi, bir islevsel distrofin geni ürününün sentezine engel olan mutasyonlardan kaynaklanir. Bu Duchenne kas distrofisi gen kusurlari tipik olarak, okuma çerçevesini bozan delesyonlar, duplikasyonlar veya mikro- delesyonlar veya insersiyonlar gibi sens olmayan mutasyonlardir veya genomik yeniden düzenlemelerdir. Insan distrofin geni, (79 ekzonun birbirine eklenerek yaklasik genis ve kompleks bir gen oldugundan, bu mutasyonlarin meydana gelebildigi birçok pozisyon vardir. Sonuç olarak, distrofin geni içerisinde hastaliga neden olan farkli mutasyonlarin çogunu ele alacak antinsens oligonükleotid esasli kapsamli bir terapi, uç-birlestirme prosesinde birçok ekzonun uzaklastirma için hedeflenebilmesini gerektirecektir. Mevcut bulus baglaminda, tercih edilen hedef bölge(ler), mRNA uç-birlestirme prosesine katilanlardir (yani uç-birlestirme donör bölgeleri, uç-birlestirme alici bölgeleri veya ekzonik uç-birlestirme pekistireç elemanlari). Uç-birlestirici dallanma noktalari ve ekzon tanima dizileri veya uç-birlestirme pekistireçleri de ayrica mRNA uç-birlestirme prosesinin modülasyonu için potansiyel hedef bölgelerdir. Oligonükleotid ve DNA veya RNA, her molekül içerisinde yeterli sayida ilgili pozisyon birbiriyle hidrojen bagi kurabilen nükleotidler tarafindan isgal edildiginde birbirini tamamlar. Bu nedenle, "spesifik olarak hibritlesebilen" ve "tamamlayici" terimleri, oligonükleotid ile DNA veya RNA hedefi arasinda stabil ve spesifik baglanma meydana gelecek sekilde yeterli bir tamamlayicilik veya hassas eslesme derecesine isaret etmek için kullanilan terimlerdir. Teknikte, bir antisens molekülün dizisinin, spesifik olarak hibritlesebilir olmak için hedef dizisininkini %100 tamamlamak zorunda olmadigi anlasilir. Bir antisens molekül, bilesigin hedef DNA veya RNA molekülüne baglanmasi, hedef DNA veya RNA'nin normal islevine müdahale ederek fayda kaybina neden oldugunda ve antisens bilesigin, spesifik baglanmanin istendigi durumlar altinda, yani in vivo analizlerin veya terapötik tedavinin yapilmasi durumunda fizyolojik kosullarda ve in vitro analizlerin yapilmasi durumunda analizlerin yapildigi kosullarda, hedef olmayan dizilere spesifik olmayacak sekilde baglanmasini önlemeye yeterli derecede bir tamamlayicilik oldugunda spesifik olarak hibritlesebilir. Yukaridaki yöntem, biyolojik islevini etkilemeden kisaltilabilme özelligine sahip bir protein içerisinden bir ekzonu silebilme özelligine sahip antisens molekülleri seçmek için kullanilabilirken, ekzonun silinmesi, kisaltilan transkribe edilmis mRNA'da bir okuma çerçevesi kaymasina neden olmamalidir. Bu nedenle, eger üç ekzonluk bir lineer dizi içerisinde, birinci ekzonun ucu bir kodon içerisindeki üç nükleotidden ikisini sifrelerse ve bir sonraki ekzon silinirse, lineer dizi içerisindeki üçüncü ekzon, bir kodon için nükleotid üçlüsünü tamamlama özelligine sahip olan bir tekli nükleotid ile baslamalidir. Eger üçüncü ekzon bir tekli nükleotid ile baslamazsa, kesik veya islevsel olmayan bir proteinin olusmasina yol açacak bir okuma çerçevesi kaymasi meydana gelecektir. Yapisal proteinler içerisindeki ekzonlarin ucundaki kodon düzenlemelerinin her zaman kodon ucunda kopmadigi anlasilacaktir. Sonuç olarak mRNA'nin çerçeve içi okunmasini saglamak için pre-mRNA'dan birden fazla ekzonun silinmesinin gerekli olabilir. Böyle durumlarda, bulusa göre olan yöntemle birden fazla antisens oligonükleotidin seçilmesi gerekir, burada bunlardan her biri, silinecek ekzonlarda uç- birlestirme isleminin indüklenmesinden sorumlu farkli bir bölgeye yönlendirilir. Bir antisens molekülün uzunlugu, pre-mRNA molekülü içerisinde hedeflenen konuma Seçici olarak baglanabilme özelligine sahip oldugu müddetçe degisiklik gösterebilir. Bu dizilerin uzunlugu, burada tarif edilen seçim prosedürlerine göre tayin edilebilir. Genel olarak, antisens molekülü, uzunluk olarak yaklasik 10 nükleotid ile uzunluk olarak yaklasik 50 nükleotid arasinda olacaktir. Bununla birlikte, bu araliktaki herhangi bir nükleotid uzunlugunun yöntemde kullanilabilecegi takdir edilecektir. Tercihen; antisens molekülünün uzunlugu 17 ile 30 nükleotit uzunlugundadir. Sasirtici bir sekilde, uzun antisens moleküllerin ekzon atlamalari indüklemede genellikle daha etkili olduklari bulunmustur. Bu nedenle, en çok tercihen antisens molekülü, uzunluk olarak 24 ila 30 nükleotid arasindadir. Bir distrofin geni içerisinde hangi ekzonlarin baglanabildigini tayin etmek için, bir ekzon sinir haritasinin incelenmesi gerekir. Bir ekzonun digerine baglanmasi, ekzonun baglanmakta oldugu 5, sinirinda oldugu gibi 3' sinirinda ayni sayiya sahip ekzonlara dayalidir. Bu nedenle, eger ekzon 7 silinirse, ekzon 6'nin, okuma çerçevesini sürdürmek için ya ekzon 12'ye veya 18'e baglanmasi gerekir. Böylelikle, birinci olusumda ekzonlar 7 ila 11'in veya ikinci olusumda ekzonlar 7 ila 17'nin uç-birlesmesini yönlendirmis olan antisens oligonükleotidlerin seçilmesi gerekecektir. Bir ekzon 7 silme islemi sonrasi okuma çerçevesini eski haline getirmede baska ve bir ölçüde daha basit olan bir yaklasim, iki kuyruk ekzonunun uzaklastirilmasi olacaktir. Ekzonlar 6 ve 8'in atlamasinin indüklenmesi, ekzonlar 5 ila 9`un uç-birlesmesi ile bir çerçeve içi transkript saglayacaktir. Ancak uygulamada, ekzon 8'in pre-mRNA'dan uzaklastirmak için hedeflenmesi, olusan transkriptte ekzon 5 ekzon 10'a birlesmis olacak sekilde ekzon 9lun es-uzaklastirilmasiyla sonuçlanir. Ekzon 9'un dahil edilmesi veya çikarilmasi okuma çerçevesini etkilemez. Test edilecek antisens molekülleri tanimlandiginda, teknikte bilinen standart yöntemlere göre hazirlanir. Antisens moleküller üretmek için en yaygin yöntem, 2' hidroksiriboz pozisyonunun metillenmesidir ve bir fosforotiyoat omurga dahil edilmesidir. Yüzeysel olarak RNA'ya benzeyen ancak nükleaz bozunmasina karsi çok daha dirençli olan moleküller üretir. Pre-mRNA'nin, antisens molekülleri ile dubleks olusumu sirasinda bozunmasini önlemek için, yöntemde kullanilan antisens molekülleri, endojen RNaz H ile bölünmeyi en aza indirmek veya önlemek için adapte edilebilir. Bu özellik, metillenmis olmayan RNA oligonükleotidlerin varliginda oldukça tercih edilir, çünkü bir hücre içi ortamda veya RNaz H içeren ham ekstraktlar ile temas halinde, pre-mRNA: antisens oligonükleotid duplekslerinin bozunmasina yol açacaktir. Bu tür bir bozunmayi by-pass edebilen veya indükleyemeyen herhangi bir modifiye antisens molekülü, mevcut yöntemde kullanilabilir. Nükleaz direnci, bulusun antisens moleküllerini modifiye ederek, kismen doymamis alifatik hidrokarbon zinciri ve karboksilik asit gruplari, ester gruplari ve alkol gruplari içeren bir veya daha fazla polar veya yüklü grup içerecek sekilde gerçeklestirilebilir. RNA ile dublekslendiginde hücresel RNaz H tarafindan parçalanmayan antisens molekülleri örnegi 2'-O-metil türevlerdir. 2'-O-metiI-0Iigoribonükleotidler, bir hücresel ortamda ve hayvansal dokularda oldukça stabildir ve RNA'Ii dubleksleri, ribo veya deoksribo-muadillerinden daha yüksek Trn degerlerine sahiptir. Alternatif olarak, bulusa ait nükleaz dirençli antisens molekülleri, fluorine edilmis son 3'-terminus nükleotidden en az birine sahip olabilir. Yine alternatif olarak, bulusun nükleaz dirençli antisens molekülleri, son 3-terminus nükleotid bazlarinin en azindan ikisi arasinda baglanan fosforotioat baglarina, tercihen son dört 3'-terminal nükleotid bazlari arasinda baglanan fosforotioat baglarina sahiptir. RNaz Hlyi aktive etmeyen antisens moleküller bilinen yöntemlerle göre olusturulabilir (bakiniz, örnegin, U.S. Pat. 5,149,797). Deoksiribonükleotid veya ribonükleotid dizileri olabilen bu antisens molekülleri basit anlamda, bir üyesi olarak oligonükleotid ihtiva eden bir dubleks moleküle Rnaz H'nin baglanmasini sterikal olarak engelleyen veya önleyen bir yapisal modifikasyon içerir, bu yapisal modifikasyon dubleks olusumunu önemli ölçüde engellemez veya bozmaz. Dubleks olusumunda rol oynayan oligonükleotid kisimlari, kendisine Rnaz H baglanmasina katilan kisimlardan önemli ölçüde farkli oldugundan, RNaz H`yi aktive etmeyen çok sayida antisens molekülü mevcuttur. Örnegin, bu antisens molekülleri, nükleotidler arasi bag kuran fosfat rezidülerinden en az birinin veya tümünün metil fosfonatlar, metil fosforotiyoatlar, fosforomorfolidatlar, fosforopiperazidatlar ve fosforamidatlar gibi modifiye fosfatlar oldugu oligonükleotidler olabilir. Örnegin, nükleotidler arasi bag kuran fosfat rezidülerinin her ikisinden biri, tarif edilen sekilde modifiye edilebilir. Sinirlandirici nitelik tasimayan diger bir örnekte, bu antisens moleküller, nükleotidlerin en az birinin veya tümünün bir 2' düsük alkil kismi (örnegin metil, etil, etenil, propil, 1-propenil, 2-pr0penil ve izopropil gibi C1-C4, lineer veya dallanmis, doymus veya doymamis alkil) ihtiva ettigi moleküllerdir. Örnegin, nükleotidlerin her ikisinden biri, tarif edilen sekilde modifiye edilebilir. Antisens oligonükleotidleri, antisens moleküllerin tercih edilen bir formu olurken, mevcut bulus, sadece bunlarla sinirli olmamak üzere, asagida tarif edildigi gibi olan oligonükleotid mimetikleri dahil diger oligomerik antisens molekülleri de kapsar. Bu bulusta kullanilabilir olan tercih edilir antisens bilesiklerin spesifik örnekleri, modifiye omurgalar veya dogal olmayan nükleosit arasi baglar ihtiva eden oligonükleotidleri içerir. Bu tarifnamede tanimlanan modifiye omurgalara sahip oligonükleotidler, omurgada molekülde bir fosfor atomu muhafaza eden ve omurgada fosfor atomu olmayanlari içerir. Bu tarifnamenin amaçlari çerçevesinde ve bazen teknikte atifta bulunuldugu üzere, nükleositler arasi omurgada bir fosfor atomuna sahip olmayan modifiye oligonükleotidler de yine oligonükleotid olarak kabul edilebilir. Diger tercih edilen oligonükleotid mimetiklerinde, nükleotid birimlerinin hem seker hem de nükleosit arasi bagi, yani omurgasi yeni gruplar ile degistirilir. Baz üniteleri, uygun bir nükleik asit hedef bilesigi ile hibridizasyon için muhafaza edilir. Böyle bir oligomerik bilesikte, mükemmel hibridizasyon özelliklerine sahip oldugu ispat edilmis olan bir oligonükleotid mimetigi, peptit nükleik asit (PNA) olarak ifade edilir. PNA bilesiklerinde, bir oligonükleotidin seker omurgasi, bir amid ihtiva eden omurga ile, bilhassa bir aminoetilglisin omurgasi ile degistirilir. Nükleo-bazlar muhafaza edilir ve omurganin amid kismina ait aza nitrojen atomlarina dogrudan veya dolayli olarak baglanir. Modifiye oligonükleotidler ayrica bir veya daha fazla sübstitüe edilmis seker kismini içerebilir. Oligonükleotidler ayrica nükleobazi (genellikle teknikte "baz" olarak anilir) modifikasyonlar veya sübstitüsyonlar olarak da içerebilir. Bazi nükleobazlar, bulusun oligomerik bilesiklerinin baglanma afinitesini arttirmak için özellikle yararlidir. Bunlar arasinda 5-sübstitüe edilmis pirimidinler, 6-azapirimidinler ve 2-aminopropiladenin, 5- propinilurasil ve 5-propinilsitozin dahil N-2, N-6 ve 0-6 sübstitüe edilmis purinler, bulunur. 5-metilsitozin sübstitüsyonlarinin nükleik asit dubleks stabilitesini 0.6-1.2°C arttirdigi ve daha da özellikle 2'-O-met0ksietil seker modifikasyonlari ile kombine edildiginde hali hazirda tercih edilen baz sübstitüsyonlari oldugu gösterilmistir. Bulusa göre olan oligonükleotidlerin baska bir modifikasyonu, oligonükleotide, oligonükleotidin aktivitesini, hücre dagilimini veya hücre alimini gelistiren bir veya daha fazla kismi veya konjügatlarinin kimyasal olarak baglanmasini içerir. Bu kisimlar sadece sunlarla sinirli olmamak üzere bir kolesterol kismi gibi lipid kisimlari kolik asidi, bir tiyoeteri, örnegin heksil-S-tritiltiyolü, bir tiyokolesterolü, bir alifatik zinciri. örnegin dodekandiyolü veya undesil rezidülerini, bir fosfolipidi, örnegin di-heksadesiI-rak- gliserolü veya trietilamonyum 1,2-di-O-heksadesiI-rak-gIiser0-3-H-fosfonati, bir poliamin veya bir polietilen glikol zincirini veya adamantan asetik asidi, bir palmitil kismini veya bir oktadesilamin veya heksilamino-karbonil-oksikolesterol kismini içerir. Belli bir bilesik içerisindeki tüm pozisyonlarin tek tip modifiye edilmesi gerekli degildir ve uygulamada, yukarida belirtilen modifikasyonlardan birinden fazlasi bir tekli bilesige veya bir oligonükleotid içerisindeki bir tekli nükleosite dahil edilebilir. Mevcut bulus ayni zamanda kimerik bilesikler olan antisens bilesikler içerir. Bu bulus baglaminda "kimerik" antisens bilesikler veya "kimeralai", her biri en az bir monomer biriminden, yani bir oligonükleotid bilesigi durumunda bir nükleotidden meydana gelen iki veya daha fazla kimyasal olarak ayrik bölge ihtiva eden antisens moleküller, bilhassa oligonükleotidlerdir. Bu oligonükleotidler tipik olarak, oligonükleotidin, hedef nükleik aside nükleaz bozunmasina karsi daha yüksek direnç, daha yüksek hücre alimi ve daha yüksek baglanma afinitesi için ek bir bölge kazandiracak sekilde modifiye edildigi en az bir bölge ihtiva eder. Antisens Moleküllerinin Üretim Yöntemleri Bu bulusa göre kullanilan antisens moleküller, iyi bilinen kati faz sentezi teknigi vasitasiyla rahat ve rutin bir sekilde olusturulabilir. Bu sentez için kullanilacak ekipmanlar, örnegin Applied Biosystems (Foster City, Calif.) gibi çesitli saticilar tarafindan satilmaktadir. Modifiye edilmis bir kati destek üzerinde oligonükleotidlerin sentezlenmesi için bir yöntem U.S. Pat. No. 4,458,066'da tarif edilmektedir.. Bu sentez için teknikte bilinen baska bir yöntem de ek veya alternatif olarak kullanilabilir. Fosforotiyoatlar ve alkillenmis türevler gibi oligonükleotidlerin hazirlanmasi için benzer tekniklerin kullanilmasi iyi bilinmektedir. Böyle bir otomatize edilmis uygulamasinda, baslangiç materyali olarak dietiI-fosforamiditler kullanilir ve Beaucage, sentezlenebilir. Bulusun antisens molekülleri in vitro olarak sentezlenir ve antisens moleküllerinin in vivo sentezini yönlendirmek için tasarlanmis biyolojik kökenli antisens bilesimlerini veya genetik vektör yapilarini içermez. Bulusa ait moleküller ayrica, tutulum, dagitim ve/veya emilime yardim etmek için örnegin Iipozomlar, reseptör hedefli moleküller, oral, rektal, topikal veya diger formülasyonlar gibi, diger moleküller, molekül yapilari veya bilesiklerin karisimlari ile karistirilabilir, kapsüllenebilir, konjuge edilebilir veya baska sekilde birlestirilebilir. Terapötik Ajanlar Mevcut bulus ayrica, musküler distrofinin tedavisi amaciyla profilaktik veya terapötik olarak da kullanilabilir. Bu çerçevede, bir uygulamasinda mevcut bulus, burada tarif edilen etkin ve sürekli ekzon atlamasi indüklemek amaciyla distrofin pre-mRNA'si içerisindeki bir seçili hedefe baglanan, farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici, dilüent veya eksipiyan ile karistirilmis halde terapötik olarak etkili bir miktarda antisens moleküller saglar. hastaya uygulandiginda mide rahatsizligi gibi bir alejik veya benzeri istenmeyen bir reaksiyon meydana getirmeyen moleküler maddeleri ve bilesimleri ifade eder. eder. Bu farmasötik tasiyicilar su ve petrol, hayvan, bitki veya sentetik kökenli yaglar, örnegin yerfistigi yagi, soya fasülyesi yagi, mineral yag, susam yagi ve benzeri yaglar gibi steril sivilar olabilir. Tercihen su veya tuzlu su solüsyonlari ve sulu dekstroz ve gliserol solüsyonlari, bilhassa enjekte edilebilir solüsyon amaçli tasiyici olarak kullanilir. Uygun farmasötik tasiyicilar Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, (1990) içerisinde tarif edilmektedir. Bulusun daha spesifik bir formunda, farmasötik olarak kabul edilebilir diluentler, koruyucular, çözündürücüler, emülsiyonlastiricilar, adjuvanlar ve/veya tasiyicilar ile birlikte bir antisens molekülünün terapötik olarak etkili miktarlarini içeren farmasötik bilesimler saglanmaktadir. Bu gibi bilesimler, çesitli tampon içerigi (örnegin, Tris-HCI, asetat, fosfat), pH ve iyonik mukavemete sahip diluentler ve deterjanlar ve çözündürücü maddeler (örnegin, Tween 80, Polisorbat 80) gibi katki maddelerini, antioksidanlari (Örnegin, askorbik asit, sodyum metabisülfit), koruyucular (örnegin, Thimersol, benzil alkol) ve hacim arttirici maddeler (örnegin, Iaktoz, mannitol) içerir. Materyal, polilaktik asit, poliglikolik asit, vb. gibi polimerik bilesiklerin veya lipozomlarin parçacikli preparasyonlarina dahil edilebilir. Hiyalunorik asit de kullanilabilir. Bu gibi bilesimler, mevcut proteinlerin ve türevlerin fiziksel durumunu, kararliligini, i'n vivo salim oranini ve in vivo temizlenme hizini etkileyebilir. Bakiniz, örnegin, Martin, Remington's pages 1435-1712, burada referans olarak dahil edilmistir. Bilesimler, sivi formda hazirlanabilir veya Iiyofilize form gibi kurutulmus toz halinde olabilir. Mevcut bulusa göre saglanan farmasötik bilesimlerin, teknikte bilinen herhangi bir yöntemle uygulanabilecegi anlasilacaktir. Tercihen, uygulamaya yönelik farmasötik bilesimler enjeksiyon yoluyla, oral olarak veya pulmoner veya nazal yolla uygulanir. Antisens moleküller daha tercihen intravenöz, intra-arteryel, intraperitoneal, intramüsküler veya subkutan uygulama yollariyla sevk edilir. Mevcut bulus tarafindan ayrica, bir musküler distrofinin modülasyonuna yönelik bir ilacin üretilmesi için, mevcut bulusun antisens moleküllerinin kullanimi da ele alinmaktadir. Antisens moleküllerin terapötik olarak kullanisli bir miktarinin aktarilmasi, daha önceden yayinlanmis olan yöntemlerle gerçeklestirilebilir. Örnegin antisens molekülün hücre içi aktarimi, antisens molekülün ve bir blok kopolimerin etkili bir miktarinin bir karisimini içeren bir bilesim vasitasiyla gerçeklesebilir. Bu yöntemin bir örnegi, US Antisens moleküllerin çekirdege sevk edilmesi için diger yöntemler Mann CJ et al., (2001) ["Antisense-i'nduced exon skippi'ng and the synthesis of dystrophi'n in the mdx Ya çiplak DNA olarak veya Iipid tasiyicilarina k0mplekslenmis halde bir ekspresyon vektörü vasitasiyla bir nükleik asit molekülünün bir hücreye uygulanmasi için bir yöntem, US patent US 6,806,084 içerisinde tarif edilmektedir. Antisens molekülü bir koloidal dispersiyon sistemi içerisinde aktarmak istenebilir. Koloidal dispersiyon sistemleri makromolekül komplekslerini, nanokapsülleri, mikroküreleri, boncuklari ve su içinde yag emülsiyonlari, miseller, karma miseller gibi Liposomlar, in vitro ve in vivo aktarim araçlari olarak kullanisli olan yapay membran vezikülleridir. Bu formülasyonlar net katyonik, anyonik veya nötr yük özelliklerine ve in vitro, in vivo ve ex vivo aktarma yöntemlerinde faydali özelliklere sahip olabilir. Boyut olarak , büyük makromoleküller ihtiva eden bir sulu tamponun önemli bir yüzdesini kapsülleyebildigi ispat edilmistir. RNA ve DNA sulu iç ortam içerisinde kapsüllenebilir ve biyolojik olarak aktif olan bir formda hücrelere aktarilabilir (Fraley, et al., Trends Biochem. Sci., 6:77, 1981). Bir Iiposomun etkin bir gen aktarma araci olabilmesi için asagidaki özelliklerin bulunmasi gereklidir: (1) istenen antisens molekülün, biyolojik aktivitesine zarar vermeden yüksek etkinlikte kapsüllenmesi; (2) hedef disi hücrelere kiyasla bir hedef hücreye tercihli ve önemli düzeyde baglanma; (3) vezikülün sulu muhtevasinin yüksek etkinlikte hedef hücre sitoplazmasina aktarimi; ve (4) genetik bilgilerin dogru ve etkili ekspresyonu (Mannino, et al., Biotechniques, 6:682, 1988). Liposomun bilesimi genellikle fosfolipidlerin, bilhassa yüksek faz geçis sicakligina sahip fosfolipidlerin, genellikle steroidler, bilhassa kolesterol ile kombinasyon halindeki bir kombinasyonudur. Diger fosfolipidler veya diger Iipidler de kullanilabilir. Liposomlarin fiziksel özellikleri pH'ye, iyon gücüne ve divalan katyon varligina baglidir. Alternatif olarak antisens yapisi, bir farmasötik bilesim elde etmek için farmasötik olarak kabul edilebilir olan diger tasiyicilarla veya dilüentlerle kombine edilebilir. Uygun tasiyicilar ve dilüentler izotonik tuzlu su çözeltilerini, örnegin fosfat tamponlu tuzlu suyu içerir. Bilesim, parenteral, intramüsküler, intravenöz, subkutan, intraoküler, oral veya transdermal uygulama için formüle edilebilir. Tarif edilen uygulama yollari sadece bir kilavuz amaci tasimaktadir, çünkü teknikte uzman bir uygulayici, kolaylikla, optimum uygulama seklini ve belirli bir hayvana ve duruma yönelik dozaji tayin edebilecektir. Bulusun antisens molekülleri farmasötik olarak kabul edilebilir herhangi bir tuzu, esteri veya bu esterlerin tuzlarini veya bir insan dahil olmak üzere bir hayvana uygulama sonrasi biyolojik olarak etkin metabolit veya bunun rezidüsünü saglayabilme (dogrudan veya dolayli olarak) özelligine sahip bir bilesigi kapsar. Bu çerçevede, tarifname örnegin, bulusa göre olan bilesiklerin ön ilaçlarini ve farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlarini, bu ön ilaçlarin farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlarini ve diger biyolojik esdegerleri kapsayacak sekilde genisletilir. ve farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlarini: yani ana bilesigin istenen biyolojik etkinligini muhafaza eden ve bunun üzerinde istenmeyen toksikolojik etkiler Oligonükleotidler için, farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlarin tercih edilen örnekleri, sadece bunlarla sinirli olmamak üzere sunlari içerir: (a) sodyum, potasyum, amonyum, magnezyum, kalsiyum gibi katyonlar, spermin ve spermidin, vb. gibi poliaminler ile olusturulan tuzlar; (b) inorganik asitlerle, örnegin hidroklorik asit, hidrobromik asit, sülfürik asit, fosforik asit, nitrik asit ve benzeri ile olusturulan asit ilave tuzlari; (c) örnegin asetik asit, oksalik asit, tartarik asit, süksinik asit, maleik asit, fumarik asit, glukonik asit, sitrik asit, malik asit, askorbik asit, benzoik asit, tanik asit, palmitik asit, alginik asit, poliglutamik asit, naftalinsülfonik asit, metansülfonik asit p-toluensülfonik asit, naftalendisülfonik asit, poligalakturonik asit ve benzeri gibi organik asitler ile olusturulan tuzlar; ve (d) klor, brom ve iyot gibi element anyonlarindan olusturulan tuzlar. Mevcut bulusa göre olan farmasötik bilesimler, lokal veya sistemik tedavi istenip istenmedigine ve tedavi edilecek bölgeye bagli olarak farkli yollarla uygulanabilir. Uygulama topikal (oftalmik ve rektal aktarim dahil olmak üzere mukoza membranlarina), pulmoner, örnegin tozlarin veya aerosollerin inhalasyonu veya insuflasyonu yoluyla (nebulizatör, intratrakeal, intranazal, epidermal ve transdermal yol dahil olmak üzere), oral veya parenteral olabilir. Parenteral uygulama, intravenöz, intra- arteryel, subkutan, intraperitonal veya intramüsküler enjeksiyonu veya infüzyonu; veya intrakranial, örnegin, intratekal veya intraventriküler uygulamayi içerir. En az bir 2'-O- metoksietil modifikasyonuna sahip oligonükleotidlerin oral uygulamaya bilhassa uygun oldugu düsünülmektedir. Mevcut bulusa göre olan, uygun olacak sekilde birim dozaj formunda takdim edilebilecek farmasötik formülasyonlar, ilaç endüstrisinde iyi bilinen geleneksel tekniklere göre hazirlanabilir. Bu teknikler, etken maddelerin farmasötik tasiyici(lar) veya eksipiyan(lar) ile birlestirilmesi adimini içerir. Genellikle formülasyonlar, etken maddeleri sivi tasiyicilar veya çok ince parçaciklar haline getirilmis kati tasiyicilar veya her ikisi ile homojen ve derinlemesine olarak bir araya getirmek ve daha sonra gerekiyorsa Ürünü sekillendirmek suretiyle hazirlanir. Bulus ait Kitler Uygun bir kap Içinde paketlenmis en azindan bir antisens molekülü içeren ve genetik bir hastaligi olan bir hastanin tedavisi için kitler, kullanimi ile ilgili talimatlar ile birlikte burada ögretilmektedir. Kitler, Tablo 1A'da gösterildigi gibi en az bir antisens molekülü veya Tablo 1B'de gösterildigi gibi bir antisens molekülü kokteyli içerebilir. Kitler ayrica tamponlar, stabilizatörler vb. gibi çevresel reaktifler içerebilir. Kitin içerigi Iiyofilize edilebilir ve kit ayrica Iiyofilize bilesenlerin yeniden yapilandirilmasi için uygun bir çözücü içerebilir. Kitin münferit bilesenleri ayri kaplarda paketlenecek ve bu kaplar ile birlikte, insana uygulanmasi için üretim, kullanim veya satis ile ilgili firmanin onayini yansittigini belirten farmasötik ürünlerin veya biyolojik ürünlerin üretimini, kullanimini veya satisini düzenleyen bir devlet dairesi tarafindan reçete edilen formda bir beyan eklenecektir. Kitin bilesenleri bir veya daha fazla sivi çözeltide temin edildiginde, sivi çözelti, sulu bir çözelti, örnegin bir steril sulu çözelti olabilir. In vivo kullanim için, ekspresyon yapisi farmasötik olarak kabul edilebilir bir siringa bilesimi halinde formüle edilebilir. Bu durumda, kap, bir hayvana enjekte edilen, hatta kitin diger bilesenlerine uygulanan ve karistirilan veya akcigerler gibi hayvanin etkilenen bir bölgesine formülasyonun uygulanabilecegi bir inhalasyon, siringa, pipet, göz damlasi veya benzeri bir aparat olabilir. Kitin bilesenleri ayrica kurutulmus veya Iiyofilize formlarda da saglanabilir. Reaktifler veya bilesenler, kurutulmus bir form olarak temin edildiginde, yeniden yapilandirma genel olarak uygun bir çözücünün eklenmesiyle elde edilir. Çözücünün baska bir kap araci içinde de saglanmis olabilecegi düsünülmektedir. Kaplarin sayisi veya türü ne olursa olsun, bulusun kitleri ayrica, bir hayvanin vücudu içinde nihai kompleks bilesimin enjeksiyonu/uygulamasi veya yerlestirilmesine yardimci olan bir aleti içerebilir veya bunlarla birlikte paketlenebilir. Bu tür bir cihaz, bir inhalan, siringa, pipet, forseps, ölçü kasigi, göz damlasi veya tibbi olarak onaylanmis herhangi bir uygulama vehikülü olabilir. Örnekler Asagidaki Örnekler, yukarida tarif edilen bulusun kullanim seklini daha ayrintili açiklama ve ayrica bulusun çesitli özelliklerinin gerçeklestirilmesi için tasarlanan en iyi uygulama sekillerini belirtme amaci tasimaktadir. Bu Örneklerin hiçbir sekilde bu bulusun gerçek kapsamini sinirlandirma amaci olmadigi, bundan ziyade açiklama amaci için sunulduklari anlasilacaktir. Asagidaki örneklerde açik bir sekilde tarif edilmeyen moleküler klonlama, immünoloji ve protein kimyasi yöntemleri literatürde bildirilmektedir ve teknikte uzman kisiler tarafindan bilinmektedir. Geleneksel moleküler biyolojiyi, mikrobiyolojiyi ve rekombinant DNA tekniklerini teknigin uzmanligi kapsaminda tarif etmis olan genel makaleler arasinda örnegin sunlar yer almistir: Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York (1989); Glover ed., DNA Cloning.' A Practice] Approach, Volumes I ve II, MRL Press, Ltd., Oxford, U.K. (1985); ve Ausubel, F., Brent, R., Kingston, R.E., Moore, D.D., Seidman, J.G., Smith, J.A., Struhl, K. Current Protocols in Molecular Bio/ogy. Greene Publishing AssociatesNViley Intersciences, New York (2002). Insan Kas Hücrelerincje Incg'iklenen mon At_lamanin ßelirlenmesi Bulus sahipleri tarafindan antisens molekül tasariminda rasyonel bir yaklasim gelistirme tesebbüsleri, tüm ekzonlara uygulanabilecek istikrarli bir trendin olmadigi görüldügünden tamamen basariya ulasmamistir. Ayni sekilde, en etkili ve bu nedenle en terapötik antisens molekül bilesikleri ampirik çalismalar sonucu çikmistir. Bu ampirik çalismalar, uç-birlestirme prosesinde potansiyel olarak rol oynayan motifleri tanimlamak için bilgisayar programlarinin kullanilmasina yer vermistir. Kapsamli bir ikincil yapiya ve böylelikle antisens moleküllerin tavlanmasina yönelik potansiyel bölgelere sahip olmamis pre-mRNA bölgelerini tanimlamak için ayrica diger bilgisayar programlari da kullanilmistir. Bu yaklasimlarin hiçbiri, ekzon atlamasinin güvenli ve etkin bir sekilde indüklenmesine yönelik antisens oligonükleotidler tasarlamada güvenilirliklerini tamamen ispat etmemistir. Ilk planda uç-birlestirme prosesine katilan bilinen veya tahmin edilen motiflere veya bölgelere dayali olarak inceleme yapmak için insan distrofin pre-mNRA'si üzerinde tavlama bölgeleri seçildi. 20Me antisens oligonükleotidleri, incelenen hedef dizileri tamamlayacak sekilde tasarlandi ve bir Expedite 8909 Nükleik Asit Sentezleyici üzerinde sentezlendi. Sentez tamamlandiktan sonra, oligonükleotidler destek kolonundan ayrildi, amonyum hidroksit içerisinde koruyucu grup uzaklastirildi ve ardindan tuz giderme islemi yapildi. Oligonükleotid sentezinin kalitesi, sentez kaydinda saptandigi sekilde sentez esnasinda her koruyucu grup uzaklastirma Islemi ardindan tritil sinyallerinin büyüklügüyle izlendi. Antisens Oligonükleotid konsantrasyonu, 260 nm'de bir seyreltik alikuotun absorbansi ölçülerek tahmin edildi. Antisens moleküllerinin belirtilen miktarlari daha sonra, asagida tarif edildigi sekilde bir in vitro analizinde ekzon atlamasi indükleyebilme özelligi yönünden test edildi. Kisaca, normal primer miyoblast kültürleri, denek rizasiyla elde edilmis insan kas biyopsilerinden hazirlandi. Hücreler yayildi ve standart kültürleme teknikleri kullanilarak miyotüplere ayrismaya birakildi. Hücreler daha sonra, oligonükleotidlerin katyonik lipopleksler, antisens molekülü karisimlari veya katyonik Iipozom preparatlari olarak aktarilmasi yoluyla antisens oligonükleotidleri ile transfekte edildi. Hücreler daha sonra 24 saat daha büyümeye birakildi ve bu süre sonrasinda toplam RNA ekstrakte edildi ve moleküler analize baslandi. Revers transkriptaz amplifikasyonu (RT-PCR) yapilarak distrofin pre-mRNA'sinin hedeflenen bölgeleri veya indüklenmik ekzonik yeni düzenlemeler incelendi. Örnegin, ekzon 19 atlamasinin indüklenmesi yönünden bir antisens molekülünün test edilmesinde, RT-PCR testi ile çesitli ekzonlar taranarak komsu ekzonlarin rolü saptandi. Örnegin, ekzon 19 atlamasi indüklenirken, ekzonlar 17 ve 21 üzerinde amplifiye olan primerler ile RT-PCR gerçeklestirildi. Indüklenerek atlatilmis daha kisa transkripte dogru minimal düzeyde amplifikasyon yanliligi olmasini saglamak için bu alanda daha bile büyük olan ürünlerin (yani ekzonlar 13-26) amplifikasyonlari yapildi. Kisa veya ekzon atlatilmis ürünler daha etkin amplifiye olma egilimi gösterir ve normal ve indüklenmis transkript tahminini etkileyebilir. Amplifikasyon reaksiyon ürünlerinin büyüklükleri bir agaroz jeli üzerinde tahmin edildi ve ilgili boyut standartlarina göre karsilastirildi. Dogrudan DNA dizileme yöntemiyle bu ürünlerin kimliginin nihai teyidi yapilarak dogru veya beklenen ekzon birlesmelerinin muhafaza edilip edilmedigi anlasildi. Bir antisens molekülü ile etkin ekzon atlamasi indüklendikten sonra, takip eden çakisan antisens molekülleri sentezlenebilir ve daha sonra yukarida tarif edildigi sekilde analiz içerisinde degerlendirilebilir. Etkin antisens molekülü tanimimiz, 300 nM veya alti mertebesindeki transfeksiyon konsantrasyonlarinda güçlü ve sürekli ekzon atlamasi indükleyen bir moleküldür. En çok tercih edilen sekilde, mevcut bulusun oligonükleotid molekülleri, 100 nM'Iik bir konsantrasyonda %30 daha fazla seviyelerde atlama indükleyebilmektedir. Densitometri Yöntemleri Hangi antisens moleküllerinin arzu edilen etkinligi elde ettigini belirlemek için ekzon atlama prosedürlerinin sonuçlarinin densitometri analizi gerçeklestirilmistir. Amplifikasyon ürünleri, %2 agaroz jelleri üzerinde, etidyum bromür ile boyandi ve bir Chemi-Smart 3000 jel dokümantasyon sistemi (Vilber Lourmat, Marne La Vallee) tarafindan yakalanan görüntüler fraksiyone edildi. Bantlar daha sonra jel dokümantasyon sistemi kullanilarak analiz edildi (Bio-Profil, Bio-1D versiyon 11.9, Vilber Lourmat, Marne La Vallee). Asagidaki antisens moleküller üzerinde densitometri gerçeklestirilmistir: Ekzon 14 H14A(+32+61) Ekzon 17 H17A(+10+35) Ekzon 46 H46A(+81+109) Ekzon 47 H47A(+O1+29) Ekzon 49 H49A(+45+70) Ekzon 17'ye Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 17'ye yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Asagidaki Tablo Z'den, iki antisens molekülünün baglanma yeri üst üste binse de, ayni yere (ekzon 17 alici birlestirme sahasi) yönelik antisens moleküllerin etkisinin çok farkli atlamasini indükler. Aksine, intron 16 son 12 bazina ve ekzon 17 ilk 18 bazina baglanan ve dolayisiyla of H17A(-07+23), baglanma yeri ile örtüsen antisens molekülü H17A(-12+18), ekzon atlamyi indükleyemez. Ayrica, intron 16 son 7 bazina ve ekzon atlamasina neden olmustur. Ekzon 17'nin bir ekzon içi ekleme artirici motifine baglanan antisens molekülü H17A(+61+86) [SEQ ID NO:4], ayni zamanda iyi bir atlamaya neden olabilir. Antisens moleküllerinin ekzon atlamalarini indükleme kabiliyetlerinin, baglanma konumlarindan basit bir sekilde tahmin edilemeyecegi ve sert testlerle belirlenebilmesi gerektigi görülebilir. Tablo 2: Ekzon 17 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H17A(-12 +18) GGU GAC AGC CUG UGA AAU Atlama yok H17A(-07+23) GUG GUG GUG ACA GCC UGU 25nM'de atlama H17A(-O7+16) UGA CAG CCU GUG AAA UCU 200nM*de ekzon GUG AG 17+18 atlama H17A(+10 +35) AGU GAU GGC UGA GUG GUG 50nM'de atlama H17A(+31+50) ACA GUU GUC UGU GUU AGU tutarsiz atlama H17A(+61+86) UGU UCC CUU GUG GUC ACC SOnM'de atlama Bu veriler, bazi özel antisens moleküllerinin etkili ekzon atlamalarini indükledigini gösterirken, yakin veya örtüsen bir bölgeyi hedef alan baska bir antisens molekülü daha az etkili olabilir. Titrasyon çalismalari, bir molekülün 20-25 nM'de hedeflenen ekzon atlamalarini indükleyebildigini gösterirken, daha az etkili bir antisens molekülün sadece 300 nM ve üzeri konsantrasyonlarda ekzon atlamalarini indükleyebildigini göstermektedir. Dolayisiyla, antisens moleküllerinin birlestirme prosesine katilan motiflere hedeflenmesinin, bu bilesigin genel etkinliginde çok önemli bir rol oynadigini gösterdik. Etkinlik, bir hedef ekzonun tutarli bir sekilde atlanmasinin indüklenme kabiliyetini ifade eder. Bununla birlikte, bazen hedef ekzonlarin atlanmasi sürekli olarak yan taraftaki bir ekzon ile iliskilidir. Diger bir deyisle bazi ekzonlarin birbirine yapismasinin siki bir sekilde baglantili oldugunu gördük. Örnegin, ekzon 23'ü, ekzonun donör bölgesinde yönlendirilmis antisens molekülleri içeren fare distrofisi modelinde hedef alirken, siklikla 22 ve 23 ekzonlarinin eksik oldugu distrofin transkripsiyonlari tespit edilir. Baska bir örnek olarak, insan distrofin geninin ekzon 8'ine yönelen bir antisens molekülü kullanildiginda, birçok indüklü transkripsiyonda, hem ekzon 8 hem de 9 eksik degildir. Ekzon Z'ye Yönelen Antisens Oliqonükleotidler Ekzon 2'ye yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 3: Ekzon 2 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H2A(-14+10) UCU CUU UCA UCU AAA AUG Atlama yok H2A(-1+23) CUU UUG AAC AUC UUC UCU Atlama yok H2A(+7+38) UUU UGU GAA UGU UUU CUU Atlama yok Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H2A(+16+39) AUU UUG UGA AUG UUU UCU Atlama yok H2A(+30+60) UAG AAA AUU GUG CAU UUA Atlama yok H2D(+19-11) ACC AUU CUU ACC UUA GAA Atlama yok H2D(+03-21) AAA GUA ACA AAC CAU UCU Atlama yok Ekzon 3'e Yönelen Antisens Oliqonükleotidler Ekzon 3'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Her biri tek basina kullanilan, antisens molekülleri H3A(+30+60) [SEQ ID NO: 31] ve H3A(+61+85) [SEO ID NO: 32] ekzon 3 atlamasini indükler. Bununla birlikte, kombinasyon halinde, iki molekül atlamayi indüklemede daha etkilidir (Sekil 3) ve ayrica 300nM ve 600nM'de ekzonlar 4 ve 5 atlamasini indükleyebilirler. Bu tek basina her bir antisens molekülünün kullanim sonuçlari ile görülmeyen veya tahmin edilemeyen bir sonuçtur. Indüklenen transkripsiyon eksik ekzon 3'ün üzerindeki ilave ürünler, RT-PCR'den tasinan dis primerler ve ayrica heterodubleks olusumu kaynakli amplifikasyondan kaynaklanir. Tablo 4: Ekzon 3 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme kabiliyeti Oligonükleotid ismi H3A(+14+38) AGG UCA CUG AAG AGG 10nM'de orta atlama Antisens Oligonükleotid ismi H3A(+20+40) H3A(+25+60) H3A(+45+65) H3A(+48+73) H3A(+61 +85) H3D(+17-08) H3D(+19-02) H3D(+14-10) H3D(+12-07) kokteyller H3A(+30+60) H3A(+61+85) H3A(+61+85) Atlamayi indükleme kabiliyeti 50nM'de güçlü atlama Zayif atlama Atlama yok Atlama yok 300nM'ye atlama Atlama yok Atlama yok Atlama yok Atlama yok 100nM'ye 300nM'e çikaram mükemmel atlama, 50nM'ye çok güçlü atlama Antisens Dizi Atlamayi indükleme kabiliyeti Oligonükleotid ismi H3A(+30+54) ece ccu CCC AUC H3A(+61+85) G CCC UGU CAG GCC 50nM'ye çok güçlü atlama Ekzon 4'e Yönelen Antisens Oliqonükleotidler Ekzon 4'e yönelen antisens Oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 4, ekzon 4'ün bir H4A(+11+40) [SEQ ID NO: 33] ve H4D(+14-11) [SEQ ID NO: 34] kokteyli kullanilarak atlamasini göstermektedir. Tablo 5: Ekzon 4 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme kabiliyeti Oligonükleotid ismi H4A(-O8+17) GAU CCU UUU UCU UUU 10nM'ye zayif atlama H4A(+36+60) CCG CAG UGC CUU 10nM'ye iyi atlama H4D(+14-11) GUA CUA CUU ACA UUA 10nM'ye çok zayif atlama Ekzon 4 Kokteylleri H4A(+11+40) UGU UCA GGG CAU GAA Mükemmel atlama (°/o 100 Antisens Dizi Atlamayi indükleme kabiliyeti Oligonükleotid ismi CUC UUG UGG AUC CUU 100nM'ye) ve 5nM'ye kadar iyi H4D(+14-11) GUA CUA cuu ACA UUA at'ama Ekzon 5'e Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 5'e yönelen antisens oligonükleotidler, yukarida tarif edilen benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlamalarini indükleme kabiliyetleri için hazirlanmis ve test edilmistir. H5D(+26-05), düsük seviyeli ekzon 5 atlamayi bile indüklemediginden, tercih edilmeyen bir antisens molekülü olarak kabul edilecektir. Bununla birlikte, muhtemelen bir ekzonik birlesme arttiriciyi hedefleyen H5A(+35+65) indüklenmesinde yüksek derecede verimli oldugu ve indüklenen ekzon 5 atlama için tercih edilen bilesik olarak kabul edildigi bulunmustur. Tablo 6: Ekzon 5 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H5A(+35+65) AAA CCA AGA GUC AGU UUA 10nM'ye büyük atlama H5D(+26-05) CUU ACC UGC CAG UGG AGG Atlama yok mon 6'va_i Yönelen Antisens Oligonükleoticw Ekzon 6'ya yönelen antisens Oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 7: Ekzon 6 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H6A(-09+17) UUC AUU ACA UUU UUG ACC SOOnM'ye zayif H6A(+32+57) CUU UUC ACU GUU GGU UUG 25nM"de atlama KH9 6A(+66+94) AAU UAC GAG UUG AUU GUC 25nM'de atlama H6A(+69+96) AUA AUU ACG AGU UGA UUG 100nM'ye atlama H6A(+98+123) GGU GAA GUU GAU UAC AUU Atlama yok H6D(+18-06) UCU UAC CUA UGA CUA UGG Atlama yok H6D(+07-15) CAG UAA UCU UCU UAC CUA Atlama yok H6D(+O7-16) UCA GUA AUC UUC UUA CCU Atlama yok H6D(+O4-20) UGU CUC AGU AAU CUU CUU Atlama yok mon 7've Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 7'ye yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 8: Ekzon 7 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H7A(-O7+15) UCA AAU AGG UCU GGC CUA Atlama yok H7A(-03+18) CCA GUC AAA UAG GUC UGG Atlama yok H7A(+41+63) UGU UCC AGU CGU UGU GUG atlama 50nM H7A(+41+67) UGC AUG UUC CAG UCG UUG atlama 25nM H7A(+47+74) UGU UGA AUG CAU GUU CCA atlama 25nM ancak GUC GUU GUG U zayif H7A(+49+71) UGA AUG CAU GUU CCA GUC 25 nM'ye iyi atlama Ekzon 8'e Yönelen Antisens Oliqonükleotidler Ekzon 8'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 6'ya bakiniz. Tablo 9: Ekzon 8 atlamayi indükleyip Indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme kabiliyeti Oligonükleotid ismi H8A(-10+20) AUC AAC AUC UGU AAG 10nM'ye çok zayif 8 + 9 atlama GAUAGGUGGUAUCAA10nM'ye çok çok zayif 8 + 9 H8A -O7+15 ( ) CAU CUG U atlama Antisens Oligonükleotid ismi H8A(-06+24) H8A(-O4+18) H8A(+42+66) H8A(+57+83) H8A(+134+158) Ekzon 8 Kokteylleri H8A(-06+24) H8A(+134+158) H8A(-06+24) H8D(+13-12) H8A(-06+24) Atlamayi indükleme kabiliyeti 10nM'ye zayif 8 + 9 atlama 40nM'ye güçlü çalisir 10nM'ye iyi 8 + 9 atlama 10nM'ye kadar yüksek konsantrasyonda 8 + 9 iyi atlama 300nM'ye zayif 8 + 9 atlama 100nM'ye zayif 8 + 9 atlama 50nM'ye zayif 8 + 9 atlama 10nM'ye (8+9) iyi atlama ancak 8 tek basina 10nM'ye (8+9) iyi atlama ancak 8 tek basina 10nM'ye (8+9) iyi atlama ancak 8 tek basina Antisens Dizi Atlamayi indükleme kabiliyeti Oligonükleotid ismi H8A +57+83 UAA 10nM ye (8+9) iyi atlama ancak 8 tek basina HSA(+96+120) CCA CUU CCU G Ekzon 9'a Yönelen Antisens Oliqonükleotidler Ekzon 9'a yönelen antisens Oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 10: Ekzon 9 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri .Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H9D(+26-04) AGA CCU GUG AAG GAA AUG 200nM'ye güçlü çalisir Ekzon 10'a yönelen antisens Oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tek bir antisens Oligonükleotid molekülü ve ekzon ve çevredeki ekzonlarin atlamasini indükleyen kokteyller için Sekil 7'ye bakiniz. atlamasini indüklerken, H10A(+98+119) [SEQ ID NO: 38] ile kombinasyonu sadece ekzon 10 atlama ve 9-12 ekzonlarin (ve bazi 10-12 ekzonlar) atlamasini indükler. indüklemistir. Tablo 11: Ekzon 10 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri .Antisens Oligonükleotid Dizi Atlamayi indükleme ismi kabiliyeti H10A(-09+16) CAG GAG CUU CCA AAU GCU Atlama yok H10A(+08+27) UGA CUU GUC UUC AGG AGC Atlama yok H10A(+21+42) CAA UGA ACU GCC AAA UGA 100nM`de atlama H10A(+27+51) ACU CUC CAU CAA UGA ACU Atlama yok H10A(+55+79) CUG UUU GAU AAC GGU CCA Atlama yok H10A(+80+103) GCC ACG AUA AUA CUU CUU Atlama yok H10D(+16-09) UUA GUU UAC CUC AUG AGU Atlama yok Ekzon 10 Kokteyller H10A(-05+16) H10A(+98+119) H10A(-05+16) H10A(+130+149) 200nM'de güçlü atlama 200nM5de atlama .Antisens Oligonükleotid Dizi Ekzon 11'e Yönelen Antisens Oligonükleotidler Atlamayi indükleme kabiliyeti Ekzon 11'e yönelen antisens Oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Bakiniz Sekil 37. Tablo 12: Ekzon 11 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen .Antisens Oligonükleotid ismi H11A(-O7+13) H11A+(+134+157) H11A(+20+45) H11A(+46+75) H11A(+50+75) H11A(+50+79) H11A(+80+105) H11A(+106+135) H11A(+110+135) antisens molekül dizileri Atlamayi indükleme kabiliyeti 300nM'de atlama 100nM'de atlama 25nM'ye atlama 25nM'ye güçlü atlama 2.5 nM'de zayif nMiye güçlü atlama 2.5 nM'de zayif nM'ye güçlü atlama 2.5 nM'de zayif 25nM'ye zayif atlama 25nM'ye güçlü atlama (%20) 25nM'ye güçlü atlama .Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti UUG AAU UUA GGA GAU UCA 25nM'ye güçlü atlama H11A(+110+139) UCU GCU cuu GUA (%20) Ekzon 12've Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 12'ye yönelen antisens Oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 38'e bakiniz. Tablo 13: Ekzon 12 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H12D(+06-16) UAU G Atlama yok H12A(+52+75) AGC CAG UCA Güçlü atlama CAG UCA UUC AAC UCU UUC 10nMiye güçlü atlama 2.5 H12A(+30+57) AGU UUC UGA U nM'de zayif UUC CUU GUU CUU UCU 25nM'ye güçlü atlama 5 H12A(+60+87) UCU GUU UUU GUU A nM'de zayif AGA UCA GGU CCA AGA GGC 25nM'ye güçlü atlama H12A(+ UGU UGU UGU ACU UGG 25nM'ye güçlü atlama H12A(+ Ekzon 13'e Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 13'e yönelen antisens Oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 14: Ekzon 13 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Oligonükleotid Dizi Atlamayi indükleme ismi kabiliyeti H13A(-12+12) UUC UUG AAG CAC CUG AAA Atlama yok Ekzon 14'e Yönelen Antisens Oliqonükleotidler Ekzon 14'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 8'e bakiniz. Tablo 15: Ekzon 14 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H14A(+45 +73) GAA GGA UGU CUU GUA AAA 25nMide atlama Ekzon 16'ya yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 16: Ekzon 16 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Oligonükleotid Dizi Atlamayi indükleme ismi kabiliyeti Antisens Oligonükleotid Dizi Atlamayi indükleme ismi kabiliyeti H16A(-07+19) CUA GAU CCG CUU UUA AAA Atlama yok H16A(+09+31) GCU UUU UCU UUU CUA GAU Atlama yok H16D(+18-07) CAC UAA CCU GUG CUG UAC Atlama yok mon 17've Yönelen Antisens Oliqonükleoticw' Ekzon 17'ye yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 64: Ekzon 17 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H17A(+48+78) UGU GGU CAC CGU AGU UAC Atlama yok H17A(+55+85) GUU CCC UUG UGG UCA CCG 100nM'ye atlama Ekzon 18'e Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 18'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 9'a bakiniz. Tablo 17: Ekzon 18 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H18A(-09+11) UG Atlama yok GCG AGU AAU CCA GCU GUG Ekzon 17 + 18'de H18A(+24+43) AA tutarsiz atlama UUC AGG ACU CUG CAA CAG Ekzon 17+18 atlama UUG UCU GUG AAG UUG CCU Ekzon 17+18 atlama H18D(+O4-16) UG Atlama yok mon 19'a Yönelen Antisens Oligonükleotiw Ekzon 19'a yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 18: Ekzon 19 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H19A(+19+48) GGC AUC UUG CAG UUU UCU 25nM'ye atlama H19A(+27+54) UCU GCU GGC AUC UUG CAG 25nM'ye atlama H19D(+3-17) UCA ACU CGU GUA AUU ACC atlama Ekzon 20've Yönelen Antisens OligonükleoticLer Ekzon 20'ye yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 19: Ekzon 20 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Oligonükleotid Dizi Atlamayi indükleme ismi kabiliyeti H20A(+23+47) GUU CAG UUG UUC UGA GGC 600 nM'de zayif atlama H20A(+140+164) AGU AGU UGU CAU CUG CUC Atlama yok Ekzon 23'e Yönelen Ant_isens Oligonükleotidli' Ekzon 23'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Ekzon 23'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. H23(+ Tablo 65: Ekzon 23 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H23(+69+98)-SNP CGG CUA AUU UCA GAG GGC 25nM'ye atlama Ekzon 24'e Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 24'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 20: Ekzon 24 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Oligonükleotid Dizi Atlamayi indükleme ismi kabiliyeti H24A(+51 +73) CAA GGG CAG GCC AUU 25 nM'de güçlü atlama Ekzon 25'e Yönelen Antisens Oliqonükleotidler Ekzon 25'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Oligonükleotid H25A(+95+119)-DupA, hastaya Tablo 21: Ekzon 25 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme kabiliyeti Oligonükleotid ismi UGG GCU GAA UUG UCU 25nM'de güçlü ama tam H25A +10+34 ( ) GAA UAU CAC uzunlukta ürünü azaltmadi GAG AUU GUC UAU ACC 25nM'de çok güçlü atlama H25D(+06-14) UGU UG AGA CUG GGC UGA AUU 5 nM'de güçlü atlama 2.5 H25A +10+38 ( ) GUC UGA AUA UCA CU nM'de zayif UUG AGU UCU GUU CUC 25 nM'de güçlü atlama 5 nM'de H25A(+95+119)-DupA* _ _ AAG UCU CGA AG zayif (hasta spesifik) GAG AUU GUC UAU ACC 10 nM'de güçlü atlama H25D +13-14 Ekzon 26'va Yönelen Antisens Oliqonükleoticß' Ekzon 26'ya yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 10'a bakiniz. Tablo 22: Ekzon 26 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen Antisens Oligonükleotid ismi H26A(-16+09) H26A(-7+23) H26A(-03+27) H26A(+5+35) H26A(+24+50) H26D(+06-19) H26D(+21-04) H26D(+10-10) Ekzon 26 kokteylleri H26A(-07+19) H26A(+24+50) antisens molekül dizileri Atlamayi indükleme kabiliyeti 600 nM &300 nM'de zayif 600, 300nM'de zayif, ekzon 26-29 veya 27-30 600, 300nM'de zayif, ekzon 26-29 veya 27-30 Atlama yok 600, 300nM`de zayif. ekzon 26-29 veya 27-30 600"de zayif, çoklu ekzon 26- 29 veya 27-30 çoklu ekzon 26-29 veya 27-30 26 diger bantta atlama yok 25nM'ye dogru güçlü atlama Antisens Oligonükleotid ismi H26A(+68+92) Dizi Atlamayi indükleme kabiliyeti Ekzon 31'e Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 31'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 23: Ekzon 31 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen Antisens Oligonükleotid ismi H31D(+12-18) H31D(+08-22) H31D(+06-24) H31 D(+02-22) H31D(+01-25) antisens molekül dizileri Dizi Atlamayi indükleme kabiliyeti UUC UGA AAU UUC AUA UAC 100nM'ye atlama UAG UUU CUG AAA UAA CAU 100nM'ye atlama CUU AGU UUC UGA AAU AAC 100nMiye atlama UAG UUU CUG AAA UAA CAU 100nMlye atlama CCU UAG UUU CUG AAA UAA 300nM'de güçlü atlama mon 3g've Yönelen Antisens OliqonükleoticM Ekzon 32'ye yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 24: Ekzon 32 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H32A(+49+78) ACU UUC UUG UAG ACG CUG 100nM`ye atlama mon 34'e Yönelen Antjsens OligonükleoticM Ekzon 34'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 25: Ekzon 34 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H34A(+36+59) UUU CGC AUC UUA CGG GAC 200nM"ye atlama H34A(+41+70) CAU UCA UUU CCU UUC GCA 200nM'ye atlama H34A(+43+72) GAC AUU CAU UUC CUU UCG 100nM'ye atlama H34A(+51+83) UCU GUC AAG ACA UUC AUU 200nM'ye atlama H34A(+92+121) CUG AUC UCU UUG UCA AUU 'IOOnM'ye atlama H34A(+95+120) UGA UCU CUU UGU CAA UUC 25nM'de zayif Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti Ekzon 35'e Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 35'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 26: Ekzon 35 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H35A(+14+43) UCU UCA GGU GCA CCU UCU 100nM`ye atlama H35A(+24+53) UCU GUG AUA CUC UUC AGG 100nM"ye atlama Ekzon 36'ya Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 36'ya yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 11'e bakiniz. Tablo 27: Ekzon 36 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens D' _ Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H36A(-16+09) ACA GAG A Atlama yok Antisens Oligonükleotid ismi H36A(-O1 +19) H36A(+10+39) H36A(+22+51) H36A(+27+51) H36A(+27+56) H36A(+32+61) H36A(+59+78) H36A(+65+94) H36A(+80+109) H36D(+15-10) Ekzon 36 kokteylleri H36A(-16+09) H36A(+22+51) Atlamayi indükleme kabiliyeti 300 nM çok zayif atlama 25nM,ye atlama 100nM'de atlama 100nM'de atlama SOOnM'de atlama 25nM'ye atlama çok zayif atlama GOOnM'de %100 atlama, 25nM'de atlama 600nM'de %100 atlama, 25nM'de atlama çok zayif atlama 25nM,ye iyi atlama Ekzon 38'e Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 38'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 28: Ekzon 38 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Oligonükleotid Dizi Atlamayi indükleme ismi kabiliyeti H38A(-21-01) CUA AAA AAA AAG AUA GUG 25nM'ye atlama H38A(-12+14) AAA GGA AUG GAG GCC UAA 25nM'ye atlama H38D(+14-11) AAC CAA UUU ACC AUA UCU 25nM'ye atlama Ekzon 39'a Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 39'a yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 29: Ekzon 39 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H39A(-O7+23) ACA GUA CCA UCA UUG UCU 600nM'ye atlama H39A(-07+23) ACA GUA ccg UCA UUG UCU GOOnM'ye atlama H39A(+58+87) CUC UCG CUU UCU CUC AUC 100nM'ye atlama Antisens Dizi Oligonükleotid ismi Atlamayi indükleme kabiliyeti H39A(+60+89) UCC UCU CGC UUU CUC UCA 100nM'ye atlama H39A(+102+126) UAU GUU UUG UCU GUA ACA GOOnM'ye atlama mon 41'e Yönelen Antisens OligonükleoticLer Ekzon 41'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 30: Ekzon 41 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Oligonükleotid ismi Ekzon 42'ye Yönelen Antisens Oligonükleotidler Atlamayi indükleme kabiliyeti 200nM'e asagi dogru 100nM'e asagi dogru 10nM'e asagi dogru Görülen bir atlama yok 200nM'e asagi dogru Ekzon 42'ye yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 31: Ekzon 20 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Oligonükleotid Dizi Atlamayi indükleme ismi kabiliyeti H42D(+18-02) ACC UUC AGA GAC UCC Güçlü atlama Ekzon 43,e Yönelen Antisens Oliqonükleotidler Ekzon 43'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 12'ye bakiniz. Tablo 32: Ekzon 20 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H43A(+83+110) Atlama yok H43A(+92 +11?) 10nM'de atlama H43A(+101 +130) Atlama yok UGU GUU ACC UAC CCU UGU 200nM'e asagi dogru H43D(+O8-12) CG atlama H43A(-09+18) CUG UAA UAU Dusuk 25nM'ye atlama Antisens Oligonükleotid ismi H43A(+89+117) H43A(+81+111) H43A(+92+114) H43A(+92+120) H43A(+95+117) Dizi Atlamayi indükleme kabiliyeti GAG AGC UUC CUG UAG CUU 25 nM'de güçlü atlama UUC CUG UAG CUU CAC CCU 50 nM'de güçlü atlama UUC CAC AGG CGU U 2.5 nM'de zayif 2.5 nM'ye zayif atlama GGA GAG AGC UUC CUG UAG 10 nM'de güçlü atlama 5 CUU CAC CCU UU nM'de zayif GAG AGC UUC CUG UAG CUU 25 nM'de güçlü atlama 10 CAC CC nM"de zayif mon 44'e Yönelen Antisens Oligonükleotid& Ekzon 44'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 13 ve Sekil 39'a bakiniz. Tablo 33: Ekzon 44 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen Antisens Oligonükleotid ismi H44A(-13+13) H44A(-06+24) H44A(+44+68) antisens molekül dizileri Dizi Atlamayi indükleme kabiliyeti CUG CAG Atlama yok GCC ACU GAU UAA AUA UCU UUA UAU 100nM"de atlama Antisens Oligonükleotid ismi H44A(+46+75) H44A(+61 +84) H44A(+61 +91) H44A(+65+90) H44A(+68+98) H44A(-09+17) H44A(-06+20) H44A(+56+88) H44A(+59+85) H44A(+59+89) H44A(+61+88) H44A(+65+92) Atlamayi indükleme kabiliyeti 50nM'de atlama 100nM'de atlama 25nM`de atlama 10nM'de atlama 50nM'de zayif 10nM`ye zayif 2.5nM'ye zayif SnM'de güçlü atlama 2.5 nM'de 5nM'de güçlü 10nM'de zayif 25nM`ye zayif 25nM'ye zayif Antisens Dizi Atlamayi Oligonükleotid ismi indükleme kabiliyeti H 4 4A( +6 4 +95) EÜÖFSEMACUFUU CAG :Im-CUG UUA GCCA 25nM`ye zayif UUC UGA GAA ACU GUU CAG CUU 50 nMSye zayif H44A(+70+95) CUG UU atlama mon 45'e Yönelen Antisens Oligonükleotidlj Ekzon 45'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 14 ve Sekil 40'a bakiniz. Tablo 34: Ekzon 45 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi Oligonükleotid indükleme ismi kabiliyeti H45A(-10 +20) CCA AUG CCA UCC UGG AGU UCC 10nM'de atlama H45A(-09+30) Atlama yok Antisens Oligonükleotid H45A (-09+25) H45A(-08 +19) HM45A(-07+25) H45A(+09 +34) H45A(+41 +64) H45A(+76 +98) H45D(+02-18) H45A(-14+25) H45A(-12+22) H45A(-12+13) H45A(-12+16) H45A(-09+16) H45A(-09+19) Atlamayi indükleme kabiliyeti 10nM'de (%100 25nM'de 50nM`de atlama 25nM'de atlama Atlama yok Atlama yok Atlama yok Atlama yok 5nM'de güçlü atlama 2.5 nM zayif Atlama yok nM'de güçlü atlama 5 nM zayif 10nM'ye atlama nMlde güçlü Antisens Oligonükleotid H45A(-09+22) H45A(-09+30) HM45A(-07+25) H45A(-06+22) H45A(-06+28) H45A(-03+19) H45A(-03+22) H45A(-03+25) H45A(-03+28) H4SD(+10-19) Atlamayi indükleme kabiliyeti atlama 2.5 nM zayif nMlde güçlü atlama 5 nM zayif nM'de güçlü atlama 2.5 nM zayif 2.5 nM'de güçlü 5nM'de güçlü atlama 2.5 nM zayif 2.5 nM'de güçlü 5nM'de güçlü atlama 2.5 nM'de nM'de güçlü atlama 2.5 nM'de 2.5 nM'de güçlü nM'de güçlü atlama 2.5 nM'de Atlama yok Antisens Dizi Atlamayi Oligonükleotid indükleme ismi kabiliyeti H45D(+16-11) UGU CGC CCU ACC UCU UUU UUC Atlama yok H45A(-06+25) GCU GCC CAA UGC CAU CCU GGA 2.5 nMide güçlü GUU CCU GUA A atlama H45A(-12+19) CAA UGC CAU CCU GGA GUU CCU 25 nMide güçlü GUA AGA UAC C atlama Ekzon 46'ya Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 46'ya yönelen antisens Oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 15 ve Sekil 44'e bakiniz. Tablo 35: Ekzon 46 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H46A(-05+19) Atlama yok UCU CUU UGA AAU UCU GAC 25nM'ye atlama, diger H46A(+16+42) AAG AUA UUC bantlar H46A(+27+44) CU Atlama yok H46A(+35+60) UCU CUU UG 50 nM'ye çok zayif atlama Antisens Oligonükleotid ismi H46A(+56+77) H46A(+63+87) H46A(+81+109) H46A(+83+103) H46A(+90+109) H46A(+91+118) H46A(+95+122) H46A(+101+128) H46A(+113+136) H46A(+115+134) H46A(+116+145) H46D(+02-18) H46A(+93+122) H46A(+95+124) Atlamayi indükleme kabiliyeti Atlama yok Atlama yok 25nM"de güçlü atlama 25nM"de atlama Atlama yok 25nM'de güçlü atlama 25nM'de güçlü atlama 25nM'de güçlü atlama 100nM'de atlama 100nM'de atlama 25nM'de güçlü atlama Atlama yok nM'de %100 atlama 5 nM'de güçlü nM'de %100 atlama Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti 44 ila 46 Ekzonlara Yönelen Antisens Oligonükleotid Kokteyller Ekzon 44 ila 46'ya yönelen antisens Oligonükleotid kokteylleri hazirlanmis ve yukarida tarif edilen benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlamalarini uyarma yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 36: Ekzon 44 ila 45 atlamayi indükleyen antisens molekül dizisi kokteylleri Antisens Oligonükleotid Dizi Atlamayi indükleme ismi kabiliyeti 44 + 45 atlama için kokteyller H45A(-10 +20) CCA AUG CCA UCC UGG AGU 25nM'de atlama Ekzon 45 ve 46 atlama için kokteyller H46A(+91 +118) CUG CUC UUU UCC AGG UUC 25riM'de atlama H46A(+107 +13?) CAA GCU UUU CUU UUA GUU 25nM'de atlama Antisens Oligonükleotid Dizi 44 + 45 atlama için kokteyller Ekzon 44 !45/46 atlama için Atlamayi indükleme kabiliyeti kokteyller UGG GAU A atlama mon 47'ye Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 47'ye yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 16'ya bakiniz. Tablo 37: Ekzon 47 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Oligonükleotid ismi 100nM'de atlama H47A('07+19) GUA ACU GAA AC H47A(+O1+29) Atlamayi indükleme kabiliyeti 25nM'de güçlü atlama H47A(+44+70) GCA CGG GUC CUC CAG SOOnM'de atlama Antisens Dizi Atlamayi indükleme kabiliyeti Oligonükleotid ismi H47A(+68+92) CUU ACA AGC A Atlama yok H47A(+73+103) Atlama yok CUU GCU CUU CUG GGC 200nM'de zayif atlama, tam H47A(+76+103) UUA UGG GAG CAC U uzunlukta ürün azaltilmadi H47D(+17-10) Atlama yok mon 48'e Yönelen Antisens Oligonükleotidli' Ekzon 48'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 17'ye bakiniz. Tablo 38: Ekzon 48 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens D' _ Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H48A(-09+21) Atlama yok H48A(-08+19) CCU GAA AGG Atlama yok H48A(-05+25) GUU UCU CAG GUA AAG CUC Atlama yok Antisens Oligonükleotid ismi H48A(+01+28) H48A(+07+33) H48A(+40+67) H48A(+75+100) H48A(+96+122) H48D(+17-10) H48D(+16-09) Kokteyl 48 H48A(+O1+28) H48A(+40+67) Ekzon 49'a Yönelen Antisens Oliqonükleotidler Atlamayi indükleme kabiliyeti 50 nM'ye zayif 50 nM'ye zayif Atlama yok (sporadik) 1000 nM'ye zayif Atlama yok Atlama yok Atlama yok nM'de güçlü atlama Ekzon 49'a yönelen antisens Oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 18'e bakiniz. Tablo 39: Ekzon 49 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Oligonükleotid Dizi Atlamayi indükleme ismi kabiliyeti H49A(-07+19) GAA CUG CUA UUU CAG UUU 100nM'ye atlama H49A(+22+47) AUC UCU UCC ACA UCC GGU 25nM'ye atlama H49A(+45+70) ACA AAU GCU GCC CUU UAG 25nM'ye atlama H49D(+18-08) UUC AUU ACC UUC ACU GGC 100nM'ye atlama mon 50've Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 50'ye yönelen antisens Oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 19 ve 33'e bakiniz. Tablo 40: Ekzon 50 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi Oligonükleotid ismi indükleme kabiliyeti H50A(-07+20) Zayif atlama 25 nM H50A(-02+27) CUU CCU CU Zayif atlama 100 nM H50A(+10+36) CGC CUU CCA CUC AGA GCU CAG 25'e zayif atlama Antisens Oligonükleotid ismi H50A(+35+61) H50A(+42+68) H50A(+48+74) H50A(+63+88) H50A(+81+105) H50D(-01-27) H50D(-15-41) H50A(+42+74) H50A(+46+75) H50A(+48+78) H50A(+51 +80) Atlamayi indükleme kabiliyeti 25nM'ye 25nMlye nM'de 25nM'ye Zayif atlama 100 nM Atlama yok 10nMlye 25nM'ye 10nM'ye 25nMlye Antisens Dizi Atlamayi Oligonükleotid ismi indükleme kabiliyeti Hint49(-72-46) CCA Atlama yok mon 51'e Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 51'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 20 ve Sekil 41'e bakiniz. Tablo 41: Ekzon 51 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H51A(-29-10) Atlama yok H51A(-22-01) Atlama yok H51A(-14+10) Atlama yok H51(+26+52) 25nM'ye çok zayif atlama AGU UUG GAG AUG GCA 25nM'ye atlama ayrica 50 H51A(+40+67) GUU UCC UUA GUA A veya 52 atlama H51A(+66+77) UGG CAU UUC UAG Atlama yok H51A(+66+80) AGA UGG CAU UUC UAG Atlama yok Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H51A(+66+83) Atlama yok H51A(+78+95) CUC CAA CAU CAA GGA AGA Atlama yok H51A(+81+95) CUC CAA CAU CAA GGA Atlama yok H51A(+84+95) CUC CAA CAU CAA Atlama yok H51A(+90+116) Atlama yok H51A(+53+79) UUG GAG AUG GCA 25 nM*de guçlu atlama AAG GAA GAU GGC AUU 25 nM'de güçlü atlama 2.5 H51A +57+85 ( ) UCU AGU UUG GAG AU nM'de zayif H51A(+71+100) 5nM'ye atlama H51A(+76+104) CAA GGA AGA UG 25 nM'de güçlü atlama Ekzon 52'ye Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 52'ye yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 42'ye bakiniz. Tablo 42: Ekzon 52 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens _ _ _ _- Oligonukleotid ismi kabiliyeti Atlamayi Antisens Dizi indükleme Oligonükleotid ismi ._ . kabiliyeti H52A(-12+13) Atlama yok H52A(-10+10) GCA UUG UUG CCU GUA AGA AC Atlama yok H52A(+07+33) 50 nM atlama H52A(+17+46) 25 nM atlama H52A(+17+37) ACU GGG GAC GCC UCU GUU CCA 25 nM atlama CCU CUU GAU UGC UGG UCU UGU 25nM'ye çok çok H52A(+67+94) UUU UCA A zayif atlama UUC AGC veya T) AAC UGG GGA CGC CUC UGU UCC 2.5 nM'ye güçlü H52A(+09+38) AAA UCC UGC atlama H52A(+09+41) gggAAüUGGGFACGCCUClJGüýUCüAAAUCCI 5 nM'ye güçlü atlama 5nM'de zayif UCU UCC AAC UGG GGA CGC CUC 10 nM'ye güçlü H52A(+1 5+44) UGU UCC AAA atlama 5nM'de zayif mon 53'e Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 53'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 43'e bakiniz. Tablo 43: Ekzon 53 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi Oligonükleotid ismi indükleme kabiliyeti H53A(-49-26) GAG Atlama yok H53A(-38-13) UG Atlama yok H53A(-32-06) UAG Atlama yok H53A(-15+15) AAG GAA Atlama yok H53A(+39+65) AAG GUG 50 nM atlama H53A(+39+67) UGA AGG UG 100 nM atlama H39A(+39+69)SNP UCU GAA GGU G 25nM'ye atlama H53A(+40+70) UUC UGA AGG U 50 nM atlama H53A(+41+69) UCU GAA GG 50 nM atlama H53A(+43+69) UCU GAA 50 nM atlama H53A(+69+98) UAA CAU UUC 50 nM'de atlama CUG G Atlama yok Antisens Oligonükleotid ismi H53A(+27+56) H53A(+27+59) H53A(+30+59) H53A(+30+64) H53A(+30+69) H53A(+33+63) H53A(+33+67) H53A(+33+65) H53A(+35+67) Atlamayi indükleme kabiliyeti nM'de nM'de nMlde nM'de nM'de 50 nM'de nM'de nMde Antisens Oligonükleotid ismi H53A(+37+67) H53A(+36+70) H53A(+39+71) H53A(+42+71) Dizi Atlamayi indükleme kabiliyeti UUC AAC UGU UGC CUC CGG UUC 25 nMlde güçlü UGA AGG UGU U atlama ueuucý , 5 nM'de makul UUC AUU CAA CUG UUG CCU CCG 25 nM'de güçlü GUU CUG AAG GUG atlama 100 nM'de güçlü atlama 5 nM'de mon 54'e Yönelen A_ntisens Oligonükleotidli Ekzon 54'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 21'e bakiniz. Tablo 44: Ekzon 54 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen Antisens Oligonükleotid ismi H54A(+13+34) H54A(+60+90) antisens molekül dizileri Dizi Atlamayi indükleme kabiliyeti UUG UCU GCC ACU GGC GGA 300nM'de atlama 55+54'ü GGU C ortaya çikarir AUC UGC AGA AUA AUC CCG 25nM`de atlama Antisens Oligonükleotid ismi H54A (+67+89) H54A(+67+97) H54A(+77+106) Ekzonlar 54+55 için kokteyl H54A(+67+97) H55A(-10+14) Ekzon 55'e Yönelen Antisens Oligonükleotidler Atlamayi indükleme kabiliyeti 40nM'de zayif atlama - 54+55 10nM'de atlama 50 nM atlama 54&55 için 10nM'de atlama spesifik Ek bant yok Ekzon 55'e yönelen antisens Oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 22'ye bakiniz. Tablo 45: Ekzon 55 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen Antisens Oligonükleotid ismi H55A(-10+14) H55A(-1O +20) antisens molekül dizileri Atlamayi indükleme kabiliyeti CUC GCU CAC UCA CCC UGC Atlama yok CAG CCU CUC GCU CAC UCA 10nM'de atlama Antisens Oligonükleotid ismi H55A(+39 +61) H55A(+41+71) H55A(+73+93) H55A(+107+137) H55A(+112+136) H55A(+132+161) H55A(+141+160) H55A(+143 +171) mon 56'va Yönelen Antisens Oligonükleotjdler Atlamayi indükleme kabiliyeti Atlama yok Atlama yok Atlama yok Atlama yok 100 nM"de çok zayif 200nM'de atlama 100nM'de atlama Atlama yok Atlama yok Ekzon 56iya yönelen antisens Oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 23'e bakiniz. Tablo 46: Ekzon 56 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Oligonükleotid ismi H56A(-06+23) H56A(-06+15) H56A(+23+44) H56A(+56 +81) H56A(+67+91) H56A(+92+121) H56A(+102+126) H56A(+102+131) H56A(+112+141) H56A(+117+146) H56A(+121+143) H56D(+11-10) Atlamayi indükleme kabiliyeti GCU UCA AUU UCA CCU UGG 25nM'de atlama Ekzon 57've Yönelen Antisens Oligonükleotidler CUA Atlama yok UGU Atlama yok UUU Atlama yok AUC 200nMlde atlama ACA 25 nM'de atlama UUG 100 nM'de atlama CGU 25 nM'de atlama GUU 25 nM'de atlama UUC 25 nM'de zayif atlama AUG Atlama yok GUU GOOnM'de atlama Ekzon 57'ye yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 24`e bakiniz. Tablo 47: Ekzon 57 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi Oligonükleotid ismi indükleme kabiliyeti H57A(-15+18) Atlama yok H57A(-12+18) AAA AAG AAC 50nM'de atlama H57A(-10+20) UGA AAA AGA 300nM'de atlama H57A(-06 +24) GAC CUG AAA 300nM'de atlama H57A(+21+44) CAG Atlama yok H57A(+47 +77) CCU GCA GAG A Atlama yok H57A(+105+131) UAG GUG Atlama yok Ekzon 59'a Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 59'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 25'e bakiniz. Tablo 48: Ekzon 59 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen Antisens Oligonükleotid ismi H59A (-06+16) H59A(+31 +61) H59A(+66+91) H59A(+96 +120) H59A(+96+125) H59A(+101 +132) H59A(+141 +165) H59A(+151+175) H59A(+161 +185) H59A(+161+190) H59A(+171+197) antisens molekül dizileri Atlamayi indükleme kabiliyeti Atlama yok Atlama yok Atlama yok 100nM"de atlama Atlama yok Atlama yok 200 nM'de atlama 300nM"de atlama 200 nM'de zayif 100 nM'de atlama Atlama yok Atlamayi Antisens Dizi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H59A(+181+205) Atlama yok H59A(+200+220) ACG GGC UGC CAG GAU CCC UUG Atlama yok H59A(+221+245) GCC C Atlama yok Ekzon 60'a Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 60'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 26'ya bakiniz. Tablo 49: Ekzon 60 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H60A(-10+20) GCA AUU UCU CCU CGA AGU Atlama yok H60A(-8+19) CAA UUU CUC CUC GAA GUG Atlama yok H60A(+29+58) CAA GGU CAU UGA CGU GGC 50 nM'ye atlama Antisens Oligonükleotid ismi H60A(+37+66) H60A(+37+66) H60A(+39+66) H60A(+51+75) H60A(+72+102) H60A(+75+105) H60A(+80+109) H60A(+87+116) H60D(+25-5) Ekzon 60 kokteylleri H60A(-8+19) Atlamayi indükleme kabiliyeti 50 nM*ye güçlü atlama 100nM'de iyi atlama 100nM'de iyi atlama 100nM'de zayif atlama 100nM'de zayif atlama Atlama yok Atlama yok 100nM'de iyi atlama 100nM'de zayif atlama 600nM'de zayif atlama Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H60A(+37+66) CUG GCG AGC AAG GUC CUU 10nM'de zayif atlama H60A(+37+66) CUG GCG AGC AAG GUC CUU 10nM'de atlama H60A(+43+73) UGG UAA GCU GGC GAG CAA 10nM`de atlama H60A(-10+20) GCA AUU UCU CCU CGA AGU 10nM'de atlama Ekzon 61 'e Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 61'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 50: Ekzon 61 atlamayi Indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H61A(-7+19) CUC GGU CCU CGA CGG CCA Atlama yok Antisens Oligonükleotid ismi H61A(+05+34) H61A(+10+40) H61A(+16+40) H61A(+16+45) H61A(+42+67) H61D(+10-16) Dizi Atlamayi indükleme kabiliyeti CAU GCA GCU GCC UGA CUC 50 nM'ye atlama GGG CUU CAU GCA GCU GCC 100nM'de atlama GGG CUU CAU GCA GCU GCC Atlama yok CCU GUG GGC UUC AUG CAG 50 nM'ye atlama GCU GAG AUG CUG GAC CAA Atlama yok GCU GAA AAU GAC UUA CUG Atlama yok Ekzon 62've Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 62'ye yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 51: Ekzon 62 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen Antisens Oligonükleotid ismi H62A(-15+15) H62A(-10+20) antisens molekül dizileri Dizi Atlamayi indükleme kabiliyeti GAC CCU GGA CAG ACG CUG Atlama yok CCA GGG ACC CUG GAC AGA Atlama yok Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H62A(-05+15) GAC CCU GGA CAG ACG CUG 25nM`ye zayif H62A(-3+25) CUC UCC CAG GGA CCC UGG Atlama yok H62A(+O1+30) UGG CUC UCU CCC AGG GAC 300 nM'ye neredeyse CCU GGA CAG ACG %100 atlama H62A(+8+34) GAG AUG GCU CUC UCC CAG 300nM'de atlama H62A(+13+43) UUG UUU GGU GAG AUG GCU 25nM'ye zayif H62A(23+52) UAG GGC ACU UUG UUU GGC 100nM"de atlama H62D(+17-03) UAC UUG AUA UAG UAG GGC 100nM'ye zayif H62D(+25-5) CUU ACU UGA UAU AGU AGG Atlama yok mon 63'e Yönelen Antisens Oligonükleotidli' Ekzon 63,e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 27'ye bakiniz. Tablo 52: Ekzon 63 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H63A(-14+11) H63A(+11+35) H63A(+20+49) H63A(+33+57) H63A(+40+62) H63D(+8-17) GAG UCU CGU GGC UAA AAC Görünür atlama yok UGG GAU GGU CCC AGC AAG 600nM'de olasi atlama GAG CUC UGU CAU UUU GGG 100nM'ye atlama GAC UGG UAG AGC UCU GUC Görünür atlama yok CUA AAG ACU GGU AGA GCU Atlama yok CAU GGC CAU GUC CUU ACC Görünür atlama yok mon 64'e Yönelen Antisens Oligonükleotid& Ekzon 64'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 28'e bakiniz. Tablo 53: Ekzon 64 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen Antisens Oligonükleotid ismi H64A(-3+27) H64A(+34+62) H64A(+43+72) antisens molekül dizileri Dizi Atlamayi indükleme kabiliyeti CUG AGA AUC UGA CAU UAU Atlama yok CUG CAG UCU UCG GAG UUU 50 nM'de atlama AAA GGG CCU UCU GCA GUC 50 nM'de atlama Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H64A(+47+74) GCA AAG GGC CUU CUG CAG 200nM'de atlama H64D(+15-10) CAA UAC UUA CAG CAA AGG Atlama yok mon 65'e Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 65'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 54: Ekzon 65 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Oligonükleotid Dizi Atlamayi indükleme ismi kabiliyeti H65A(+123+148) UUG ACC AAA UUG UUG UGC Atlama yok Ekzon 66'ya yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 29'e bakiniz. Tablo 55: Ekzon 66 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens D' _ Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H66A(-8+19) 100nM'de atlama H66A(-02+28) Atlama yok H66D(+13-17) Atlama yok Ekzon 66 kokteylleri H66A -O2+28 25nM'de atlama H66D +13-17 Ekzon 67'ye Yönelen Antisens Oliqonükleotidler Ekzon 67'ye yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 30'e bakiniz. Tablo 56: Ekzon 67 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H67A(+17+47) GCG CUG GUC ACA AAA UCC 25 nM'de güçlü atlama H67A(+120+147) AGC UCC GGA CAC UUG GCU Atlama yok Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H67D(+22-08) UAA CUU ACA AAU UGG AAG Atlama yok mon 68'e Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 68'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Sekil 31'e bakiniz. Tablo 57: Ekzon 68 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H68A(-4+21) 100nM'de atlama H68A(+22+48) 200nM'de atlama H68A(+48+72) 200nM'de atlama H68A(+74+103) Atlama yok H68D(+23-03) Atlama yok Ekzon 68 kokteylleri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H68A(+48+72) CAG UCU C nM"de atlama H68D(+23-03) GGA CAC UC mon 69'a Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 69'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Her iki ekzon 69 ve 70 çikarmak için bir Tablo 58: Ekzon 69 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H69A(-12+19) GUG CUU UAG ACU CCU Atlama yok CAA CUC GAC CAG AAA atlama H69D(+O8-16) CUG GCG UCA AAC UUA Atlama yok Antisens Oligonükleotid ismi Dizi Atlamayi kabiliyeti Ekzon 70'e Yönelen Antisens Oligonükleotidler indükleme Ekzon 70"e yönelen antisens Oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 59: Ekzon 70 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen Antisens Oligonükleotid ismi H7OA(-09+15) H70A(-07 +23) H70A(+16 +40) H70A(+25 +48) H7OA(+32+60) H7OA(+64 +93) antisens molekül dizileri Dizi Atlamayi kabiliyeti UUC UCC UGA UGU AGU CUA Atlama yok CGA ACA UCU UCU CCU GAU Atlama yok GUA CCU UGG CAA AGU CUC Atlama yok GUU UUU UAG UAC CUU GGC Atlama yok GGU UCG AAA UUU GUU UUU Atlama yok GCC CAU UCG GGG AUG CUU Atlama yok Ekzon 71'e Yönelen Antisens Oligonükleotidler indükleme Ekzon 71'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 60: Ekzon 71 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Oligonükleotid Dizi Atlamayi indükleme ismi kabiliyeti H71A(+07+30) ACU GGC CAG AAG UUG100nMldezayifatlama H71A(+16+39) GCA GAA UCU ACU GGC 100nM'de atlama Ekzon 72'ye Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 72'ye yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 61: Ekzon 72 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H72A(-8+22) AAG CUG AGG GGA CGA GGC 600 nM'de zayif atlama Antisens Oligonükleotid ismi H72A(+02+28) H72D(+14-10) Dizi Atlamayi indükleme kabiliyeti GUG UGA AAG CUG AGG GGA Atlama yok AGU CUC AUA CCU GCU AGC Atlama yok mon 73'e Yönelen Antisens Oligonükleotidli Ekzon 73'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 62: Ekzon 73 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Oligonükleotid Dizi Atlamayi indükleme ismi kabiliyeti H73A(+24+49) AUG CUA UCA UUU AGA UAA Zayif atlama H73A(-16+10) H73A(+02+26) H73D(+23-02) HM73A(+19+44) UUC UGC UAG CCU GAU AAA 25 nM'ye zayif CAU UGC UGU UUU CCA UUU 25 nM'ye güçlü ACA UGC UCU CAU UAG GAG 25nM'ye atlama UAU CAU UUA GAU AAG AUC 25nM`ye zayif atlama Ekzon 74'e Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 74'e yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 66: Ekzon 74 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Oligonükleotid Dizi Atlamayi indükleme ismi kabiliyeti HM74A(+20+46) GUU CAA ACU UUG GCA GUA 25 nM atlama HM74A(+96+122) GCU CCC CUC UUU CCU CAC 25 nM atlama Ekzon 76'ya Yönelen Antisens Oligonükleotidler Ekzon 76'ya yönelen antisens oligonükleotidler hazirlanmis ve yukarida tarif edilenler gibi benzer yöntemler kullanilarak insan kas hücrelerinde ekzon atlama indükleme yetenekleri açisindan test edilmistir. Tablo 63: Ekzon 76 atlamayi indükleyip indüklemediklerinin belirlenmesi için test edilen antisens molekül dizileri Antisens Dizi Atlamayi indükleme Oligonükleotid ismi kabiliyeti H76A(-02+25) CAU UCA CUU UGG CCU CUG Atlama tespit edilmedi H76A(+80+106) GAC UGC CAA CCA CUC GGA Atlama tespit edilmedi Bu bulusun çesitli uygulamalarini gerçeklestirme konusunda yukarida açiklanan modlarin modifikasyonlari, açiklanan bulus ile ilgili yukaridaki ögretilere dayanarak teknikte uzman kisilerce anlasilacaktir. Bulusun yukaridaki uygulamalari sadece örnek niteligindedir ve herhangi bir sekilde sinirlandirici oldugu düsünülmemelidir. DIZI LISTESI <110 UWA <120 Patolojilerin Tedavisine Yönelik Antisens Moleküller ve Yöntemler <130 203594 <160 59 <170 Patentln versiyonu 3.5 <210 1 < 211› 31 < 212 RNA < 213 Homo sapiens <400 1 <210 2 < 211 24 < 212 RNA < 213› Homo sapiens <400 2 <210 3 < 211 30 < 212 RNA < 213 Homo sapiens <400 3 <210 4 < 211› 26 < 212 RNA < 213 Homo sapiens <400 4 <210 5 < 211› 29 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 5 <210 6 < 211› 30 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 6 <210 7 < 211› 22 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 7 <210 8 < 211› 23 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 8 <210 9 < 211› 26 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 9 <210 10 < 211› 24 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 10 <210 11 < 211› 34 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 11 <210 12 < 211› 29 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 12 <210 13 < 211› 29 < 212› RNA < 213 Homo sapiens <400 13 <210 14 < 211› 26 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 14 <210 15 < 211› 27 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 15 <210 16 < 211› 31 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 16 <210 17 < 211› 30 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 17 <210 18 < 211› 27 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 18 <210 19 < 211 30 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 19 <210 20 < 211› 30 < 212 RNA < 213 Homo sapiens <400 20 <210 21 < 211› 31 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 21 <210 22 < 211› 24 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 22 <210 23 < 211› 25 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 23 <210 24 < 211› 30 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 24 <210 25 < 211› 31 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 25 <210 26 < 211› 30 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 26 <210 27 < 211› 30 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 27 <210 28 < 211› 29 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 28 <210 29 < 211› 27 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 29 <210 30 < 211› 30 < 212› RNA < 213 Homo sapiens <400 30 <210 31 < 211› 31 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 31 <210 32 < 211› 25 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 32 <210 33 < 211› 30 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 33 <210 34 < 211› 25 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 34 <210 35 < 211› 30 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 35 <210 36 < 211 25 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 36 <210 37 < 211› 21 < 212 RNA < 213 Homo sapiens <400 37 <210 38 < 211› 22 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 38 <210 39 < 211› 26 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 39 <210 40 < 211› 27 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 40 <210 41 < 211› 25 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 41 <210› 42 < 211› 25 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400› 42 <210 43 < 211› 30 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 43 <210 44 <211 28 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 44 <210 45 < 211› 28 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 45 <210 46 < 211› 30 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 46 <210 47 < 211› 30 < 212› RNA < 213 Homo sapiens <400 47 <210 48 < 211› 30 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 48 <210 49 < 211› 30 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 49 <210 50 < 211› 25 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 50 <210 51 < 211› 26 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 51 <210 52 < 211› 30 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 52 <210 53 < 211 28 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 53 <210 54 < 211› 27 < 212 RNA < 213 Homo sapiens <400 54 <210 55 < 211› 28 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 55 <210 56 < 211› 30 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 56 <210 57 < 211› 29 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 57 <210 58 < 211› 33 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 58 <210 59 < 211› 33 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 59 <210 60 < 211› 25 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 60 <210 61 < 211› 31 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 61 <210 62 < 211› 31 < 212› RNA < 213› Homo sapiens <400 62 :00 . www .22 .8 . H3A(+ 100" * :unutma 600nM lg" 300 riM 50 ::M 100 nM 100W ›| Mâgiiilt s 5 â S 8 %3 5 EKzonS 100 bu î Hlîlllliül 300 mm 100 nM GOOnM A8+9-:"--- : 2 E G % "â 5: 5 '9 g .8. g g :8. 3 2 S- U 1 H .H 1 ..nn .._ m. nn. E .3 3 m a. 9 . Ol 0 33. :1.. 3..: .::x 10:33.::...203 $23.33; . :7095.: ::ön i' kzon 10 Kokîeynen mom-05016) Ekzon M HHAUSZQM) 88:_ .82: 2: o.. 7: 000 A1? d _- 8 8 8 R 2 ?2 maas. üügv I" 3 Egêîîîêêêgêgsgâ nas-SHPQIIQR g . ~ J 5 .- 4151› ' 3" 3 % % E % % g 5 S 3 .8. 8 g 8 s :1 ,8. mamwzn i7) 3% E& %2 5? H4SA -09-#25 100 hp 200 nM 100 [M H46A(+81+109) ..af .%80 k m A k 0 M .53.3.- %8_ H49A[+4$+70) H51A(+66*95) .w 1 4. 2._ mu H54A(+67+97 i 100%! 600 nM 300nM /25 HS7A(-10+20) _ âiêêêêêsîg 9 en:: SgSmNr v_ HS9A(+96+120) H60A(-OB+19) &i HGOA(+ 11/25 H63A1+20+49) HöâAHJdMZ) 100%› 200 Ml 100 IN 12/25 H67A(+17+47) Hsaatmni) 8; HößDl-03+23) E « 54 *:1 ..i r 4' A: I.' H69A(+ 13/25 HSOÂl+&I`: ' ` .4 wiHSOA(+OZ+30&H51A[l-6l+90i gîêgîîssg Sêêgggs Sâgeunv 2 Sggsgn En iyi 50/51 kokteyli 14/25 Tam uzunluktaki transkripte kiyasla ekzon atlamasi yüzdesi g 80 .- Ekzon 3 3 60 -- Ekzon4 E 50 --i- Ekzon 14 - EKzon 260 Ekzon 36 Ml! A0 konsantrasyonlari 600 nM /25 Tam uzunluktaki transkripte kiyasla ` ekzon atlamasi yüzdesi !I g 50 _Ekzon46g g 40 _ Ekzon 47 l u: 30 -i--i Ekzon 48 1 _ Ekzon 49 A0 konsantrasyonlari ! nM 50nM ioomvi 300nM GOOnM 16/25 H1 1A(+50+79) 17/25 :::. .- âs ..2: md EH12A(+30+57) 18/25 H4I4A(59+8`5) ›. 19/25 /25 H51A(+71+100_)A H52A(+09+38) 21/25 H53A(+33+65) 22/25 H46A(+93+1 22)` 23/25 H46A(+93+122) Sekil 46A 17 +23) H21A(+85+114) +125+1 +92 **117) H49A(+45+70) H50A(+48+74) +67+97) H56A(+92+121) + 7-07) H62A(23+52) H67A(+ 7+4?) + +40) +14-1 1) 24/25 -07+1 +68 +92) + +51) +01 +28) +40+67) 7+1 6) H1 2A(+ H45A(~03+25) +93+1 1 +71+100) H52A(+09+38)› H73A(+02+26) H45A(-06+25) -12+1 /25 TR TR TR TR TR TR TR TR TR

Claims (1)

1.
TR2018/16523T 2009-11-12 2010-11-12 Patolojilerin tedavisine yönelik antisens moleküller ve yöntemler. TR201816523T4 (tr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU2009905549A AU2009905549A0 (en) 2009-11-12 Antisense Molecules and Methods for Treating Pathologies

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201816523T4 true TR201816523T4 (tr) 2018-11-21

Family

ID=43991096

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2018/16523T TR201816523T4 (tr) 2009-11-12 2010-11-12 Patolojilerin tedavisine yönelik antisens moleküller ve yöntemler.

Country Status (23)

Country Link
US (7) US8637483B2 (tr)
EP (2) EP2499249B1 (tr)
JP (6) JP5963678B2 (tr)
KR (9) KR102000762B1 (tr)
CN (2) CN105838714B (tr)
AU (5) AU2010317599B2 (tr)
BR (2) BR122023023194A2 (tr)
CA (1) CA2780563C (tr)
CY (1) CY1121198T1 (tr)
DK (1) DK2499249T3 (tr)
ES (1) ES2693459T3 (tr)
HR (1) HRP20181824T1 (tr)
HU (1) HUE040445T2 (tr)
IL (6) IL314343A (tr)
LT (1) LT2499249T (tr)
NZ (2) NZ626359A (tr)
PL (1) PL2499249T3 (tr)
PT (1) PT2499249T (tr)
RS (1) RS58079B1 (tr)
SI (1) SI2499249T1 (tr)
SM (1) SMT201800579T1 (tr)
TR (1) TR201816523T4 (tr)
WO (1) WO2011057350A1 (tr)

Families Citing this family (102)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2524255C (en) 2003-03-21 2014-02-11 Academisch Ziekenhuis Leiden Modulation of exon recognition in pre-mrna by interfering with the secondary rna structure
USRE48960E1 (en) 2004-06-28 2022-03-08 The University Of Western Australia Antisense oligonucleotides for inducing exon skipping and methods of use thereof
ATE498685T1 (de) 2004-06-28 2011-03-15 Univ Western Australia Antisense-oligonukleotide zur induktion von exon- skipping sowie verfahren zur verwendung davon
AU2006213686A1 (en) 2005-02-09 2006-08-17 Avi Bio Pharma, Inc. Antisense composition and method for treating muscle atrophy
PT2203173E (pt) 2007-10-26 2016-03-15 Academisch Ziekenhuis Leiden Resumo
USRE48468E1 (en) 2007-10-26 2021-03-16 Biomarin Technologies B.V. Means and methods for counteracting muscle disorders
EP2119783A1 (en) 2008-05-14 2009-11-18 Prosensa Technologies B.V. Method for efficient exon (44) skipping in Duchenne Muscular Dystrophy and associated means
TR201902952T4 (tr) 2008-10-24 2019-03-21 Sarepta Therapeutics Inc Dmd için ekson atlama bileşimleri.
CA2780563C (en) 2009-11-12 2025-05-06 Univ Western Australia Antisense Molecules and Methods for Treating Pathologies
AU2010335039B2 (en) 2009-12-24 2015-03-26 Academisch Ziekenhuis Leiden H.O.D.N. Lumc Molecule for treating an inflammatory disorder
TWI541024B (zh) 2010-09-01 2016-07-11 日本新藥股份有限公司 反義核酸
WO2012109296A1 (en) 2011-02-08 2012-08-16 The Charlotte-Mecklenburg Hospital Authority D/B/A Carolinas Medical Center Antisense oligonucleotides
US20130085139A1 (en) 2011-10-04 2013-04-04 Royal Holloway And Bedford New College Oligomers
CN107881175B (zh) 2011-12-28 2022-05-13 日本新药株式会社 反义核酸
NZ627896A (en) 2012-01-27 2016-11-25 Biomarin Technologies B V Rna modulating oligonucleotides with improved characteristics for the treatment of duchenne and becker muscular dystrophy
JP6928025B2 (ja) * 2012-01-27 2021-09-01 バイオマリン テクノロジーズ ベー．フェー． デュシェンヌ型及びベッカー型筋ジストロフィーの治療のための改善された特徴を有するｒｎａ調節オリゴヌクレオチド
DE102012103041A1 (de) * 2012-04-10 2013-10-10 Eberhard-Karls-Universität Tübingen Universitätsklinikum Behandlung der dilativen Kardiomyopathie mittels Antisense-Oligonucleotiden
EP3608407A1 (en) * 2012-07-03 2020-02-12 BioMarin Technologies B.V. Oligonucleotide for the treatment of muscular dystrophy patients
WO2014100714A1 (en) * 2012-12-20 2014-06-26 Sarepta Therapeutics, Inc. Improved exon skipping compositions for treating muscular dystrophy
HUE042218T2 (hu) * 2013-03-14 2019-06-28 Sarepta Therapeutics Inc Exonátugrást elõsegítõ készítmények izomdisztrófia kezelésére
NZ775701A (en) * 2013-03-14 2022-08-26 Sarepta Therapeutics Inc Exon skipping compositions for treating muscular dystrophy
NZ732507A (en) 2013-03-15 2018-08-31 Sarepta Therapeutics Inc Improved compositions for treating muscular dystrophy
MX388221B (es) * 2013-04-20 2025-03-19 Res Institute At Nationwide Children´S Hospital ADMINISTRACIÓN DE VIRUS ADENO-ASOCIADO RECOMBINANTE DE CONSTRUCCIONES DE POLINUCLÉOTIDOS U7snRNA DIRIGIDA AL EXÓN 2.
KR20160036065A (ko) * 2013-08-16 2016-04-01 라나 테라퓨틱스, 인크. Rna를 조정하기 위한 조성물 및 방법
TR201901939T4 (tr) * 2014-03-12 2019-03-21 Nat Center Neurology & Psychiatry Antisens nükleik asit.
GB201410693D0 (en) 2014-06-16 2014-07-30 Univ Southampton Splicing modulation
EP3159409B1 (en) 2014-06-17 2019-12-04 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Antisense nucleic acid for use in the treatment of duchenne's muscular dystrophy
WO2016025339A2 (en) * 2014-08-09 2016-02-18 Research Institute At Nationwide Children's Hospital Methods and materials for activating an internal ribosome entry site in exon 5 of the dmd gene
EP3180034B1 (en) * 2014-08-11 2022-04-20 The Board of Regents of The University of Texas System Prevention of muscular dystrophy by crispr/cas9-mediated gene editing
WO2016037163A1 (en) 2014-09-07 2016-03-10 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuating gene therapy anti-viral transfer vector immune responses
EP3201339A4 (en) * 2014-10-03 2018-09-19 Cold Spring Harbor Laboratory Targeted augmentation of nuclear gene output
WO2016130943A1 (en) 2015-02-13 2016-08-18 Rana Therapeutics, Inc. Hybrid oligonucleotides and uses thereof
MA41795A (fr) 2015-03-18 2018-01-23 Sarepta Therapeutics Inc Exclusion d'un exon induite par des composés antisens dans la myostatine
SMT202000379T1 (it) 2015-09-15 2020-09-10 Nippon Shinyaku Co Ltd Acido nucleico antisenso
EP3359685A1 (en) 2015-10-09 2018-08-15 University Of Southampton Modulation of gene expression and screening for deregulated protein expression
SG10201912902TA (en) 2015-10-09 2020-02-27 Wave Life Sciences Ltd Oligonucleotide compositions and methods thereof
MA45819A (fr) 2015-10-09 2018-08-15 Sarepta Therapeutics Inc Compositions et méthodes pour traiter la dystrophie musculaire de duchenne et troubles associés
AU2016344384A1 (en) 2015-10-26 2018-05-17 Translate Bio Ma, Inc. Nanoparticle formulations for delivery of nucleic acid complexes
FR3044926B1 (fr) 2015-12-09 2020-01-31 Genethon Outils de therapie genique efficaces pour le saut de l'exon 53 de la dystrophine
US11096956B2 (en) 2015-12-14 2021-08-24 Stoke Therapeutics, Inc. Antisense oligomers and uses thereof
KR102604132B1 (ko) 2015-12-14 2023-11-17 콜드스프링하버러보러토리 상염색체 우성 정신 지체 5 및 드라베 증후군의 치료를 위한 안티센스 올리고머
JOP20200228A1 (ar) 2015-12-21 2017-06-16 Novartis Ag تركيبات وطرق لخفض تعبير البروتين tau
MA45328A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Compositions acide nucléique-polypeptide et utilisations de celles-ci
TWI669394B (zh) * 2016-05-03 2019-08-21 臺中榮民總醫院 一種對突變型多巴脫羧酶基因做剪接調整的反義寡核苷酸及其使用方法
MA45362A (fr) 2016-05-24 2019-04-10 Sarepta Therapeutics Inc Procédés de préparation d'oligomères morpholino de phosphorodiamidate
US11472824B2 (en) 2016-05-24 2022-10-18 Sarepta Therapeutics, Inc. Processes for preparing phosphorodiamidate morpholino oligomers
EP3464305B1 (en) 2016-05-24 2024-08-21 Sarepta Therapeutics, Inc. Processes for preparing oligomers
HRP20240583T1 (hr) 2016-05-24 2024-07-19 Sarepta Therapeutics, Inc. Postupci za pripremu fosforodiamidat morfolino oligomera
IL263044B2 (en) 2016-05-24 2024-06-01 Sarepta Therapeutics Inc Processes for preparing phosphorodiamidate morpholino oligomers
KR20190024977A (ko) 2016-06-30 2019-03-08 사렙타 쎄러퓨틱스 인코퍼레이티드 근육 이상증에 대한 엑손 스킵핑 올리고머
SG10201609048RA (en) * 2016-10-28 2018-05-30 Agency Science Tech & Res Antisense oligonucleotides
MD3554553T2 (ro) 2016-12-19 2022-10-31 Sarepta Therapeutics Inc Conjugați de oligomeri de omitere a exonului, pentru distrofie musculară
WO2018118627A1 (en) * 2016-12-19 2018-06-28 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
KR20240006057A (ko) 2016-12-19 2024-01-12 사렙타 쎄러퓨틱스 인코퍼레이티드 근육 이상증에 대한 엑손 스킵핑 올리고머 결합체
WO2018129384A1 (en) 2017-01-06 2018-07-12 Avidity Biosciences Llc Nucleic acid-polypeptide compositions and methods of inducing exon skipping
KR102758434B1 (ko) * 2017-03-30 2025-01-21 고쿠리츠 다이가쿠 호진 교토 다이가쿠 게놈 편집에 의한 엑손 스키핑 유도 방법
EP3655534B1 (en) 2017-07-18 2025-07-16 CSL Behring Gene Therapy, Inc. Compositions and methods for treating beta-hemoglobinopathies
GB201711809D0 (en) 2017-07-21 2017-09-06 Governors Of The Univ Of Alberta Antisense oligonucleotide
SI3673080T1 (sl) 2017-08-25 2024-03-29 Stoke Therapeutics, Inc. Protismiselni oligomeri za zdravljenje bolezenskih stanj in bolezni
EA201991450A1 (ru) 2017-09-22 2019-12-30 Сарепта Терапьютикс, Инк. Конъюгаты олигомеров для пропуска экзона при мышечной дистрофии
US20210145852A1 (en) 2017-09-28 2021-05-20 Sarepta Therapeutics, Inc. Combination Therapies for Treating Muscular Dystrophy
WO2019075360A1 (en) 2017-10-13 2019-04-18 Selecta Biosciences, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR MITIGATING ANTI-VECTOR VIRAL TRANSFER IGM RESPONSES
CN118667812A (zh) 2017-12-06 2024-09-20 艾维迪提生物科学公司 治疗肌萎缩和强直性肌营养不良的组合物和方法
BR112020022512A2 (pt) 2018-05-04 2021-05-04 Stoke Therapeutics, Inc. métodos e composições para tratamento de doença de armazenamento de éster de colesteril
US10765760B2 (en) 2018-05-29 2020-09-08 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
US20220251551A1 (en) * 2018-06-13 2022-08-11 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomers for muscular dystrophy
WO2019241470A2 (en) * 2018-06-14 2019-12-19 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomers and oligomer conjugates for muscular dystrophy
TW202449155A (zh) * 2018-07-27 2024-12-16 美商薩羅塔治療公司 用於肌肉萎縮症之外顯子跳躍寡聚物
JP2021533200A (ja) 2018-08-02 2021-12-02 ダイン セラピューティクス, インコーポレーテッドDyne Therapeutics, Inc. 顔面・肩甲・上腕筋ジストロフィーを処置するための筋標的化複合体およびそれらの使用
US11168141B2 (en) 2018-08-02 2021-11-09 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
US20210308273A1 (en) 2018-08-02 2021-10-07 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
US12018087B2 (en) 2018-08-02 2024-06-25 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle-targeting complexes comprising an anti-transferrin receptor antibody linked to an oligonucleotide and methods of delivering oligonucleotide to a subject
GB201812980D0 (en) 2018-08-09 2018-09-26 Univ Oxford Innovation Ltd Cell-penetrating peptides
GB201812972D0 (en) 2018-08-09 2018-09-26 Univ Oxford Innovation Ltd Cell-penetrating peptides
WO2020089325A1 (en) * 2018-11-02 2020-05-07 Biomarin Technologies B.V. Bispecific antisense oligonucleotides for dystrophin exon skipping
CA3122200A1 (en) 2018-12-07 2020-06-11 Oxford University Innovation Limited Linkers
IL318474A (en) * 2018-12-13 2025-03-01 Sarepta Therapeutics Inc Axon-skipping oligomer complexes for muscular dystrophy
WO2020139796A1 (en) 2018-12-23 2020-07-02 Csl Behring L.L.C. Haematopoietic stem cell-gene therapy for wiskott-aldrich syndrome
CN113543848A (zh) 2018-12-23 2021-10-22 美国杰特贝林生物制品有限公司 具有杀伤开关的供体t细胞
US20200390718A1 (en) 2019-05-28 2020-12-17 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuated anti-viral transfer vector immune response
KR20220038771A (ko) * 2019-08-02 2022-03-29 더 리서치 인스티튜트 앳 네이션와이드 칠드런스 하스피탈 엑손 44-표적화된 핵산 및 상기 핵산을 포함하는 디스트로핀-기반 근병증 치료용 재조합 아데노-관련 바이러스
EP4079329A4 (en) 2019-12-19 2024-04-17 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Antisense nucleic acid enabling exon skipping
CN118109468A (zh) 2019-12-26 2024-05-31 日本新药株式会社 诱导外显子50的跳读的反义核酸
EP4121063A4 (en) 2020-03-19 2024-07-03 Avidity Biosciences, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING FACIO-SCAPULO-HUMERAL MUSCULAR DYSTROPHY
AU2021270720A1 (en) 2020-05-11 2022-12-08 Stoke Therapeutics, Inc. OPA1 antisense oligomers for treatment of conditions and diseases
CN115997015A (zh) 2020-06-26 2023-04-21 美国杰特贝林生物制品有限公司 具有杀伤开关的供体t细胞
CA3211038A1 (en) 2021-02-12 2022-08-18 Oxford University Innovation Limited Cell-penetrating peptide conjugates and methods of their use
AU2022298028A1 (en) 2021-06-23 2023-12-21 National Center Of Neurology And Psychiatry Combination of antisense oligomers
US11638761B2 (en) 2021-07-09 2023-05-02 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating Facioscapulohumeral muscular dystrophy
US11969475B2 (en) 2021-07-09 2024-04-30 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
US11771776B2 (en) 2021-07-09 2023-10-03 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
EP4366784A1 (en) 2021-07-09 2024-05-15 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and formulations for treating dystrophinopathies
KR20240055874A (ko) 2021-09-16 2024-04-29 어비디티 바이오사이언시스 인크. 안면견갑상완 근이영양증을 치료하는 조성물 및 방법
US20230141563A1 (en) 2021-10-12 2023-05-11 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuating anti-viral transfer vector igm responses
JPWO2023127918A1 (tr) 2021-12-27 2023-07-06
EP4215614A1 (en) 2022-01-24 2023-07-26 Dynacure Combination therapy for dystrophin-related diseases
WO2023168427A1 (en) 2022-03-03 2023-09-07 Yale University Compositions and methods for delivering therapeutic polynucleotides for exon skipping
WO2023172624A1 (en) 2022-03-09 2023-09-14 Selecta Biosciences, Inc. Immunosuppressants in combination with anti-igm agents and related dosing
US12071621B2 (en) 2022-04-05 2024-08-27 Avidity Biosciences, Inc. Anti-transferrin receptor antibody-PMO conjugates for inducing DMD exon 44 skipping
WO2025072530A2 (en) * 2023-09-26 2025-04-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods comprising small nuclear rna (snrna) for treating dmd
KR20250054362A (ko) 2023-10-16 2025-04-23 주식회사 엘지에너지솔루션 이차전지
WO2025179121A1 (en) * 2024-02-21 2025-08-28 Research Institute At Nationwide Children's Hospital Exon 17-targeted nucleic acids, compositions, and methods for treatment of dystrophin-based myopathies

Family Cites Families (132)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5138722B1 (tr) 1970-12-30 1976-10-23
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US5190931A (en) 1983-10-20 1993-03-02 The Research Foundation Of State University Of New York Regulation of gene expression by employing translational inhibition of MRNA utilizing interfering complementary MRNA
DE3687030T2 (de) 1985-03-15 1993-03-11 Eugene Stirchak Stereoregulare polynukleotiden bindende polymere.
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5506337A (en) 1985-03-15 1996-04-09 Antivirals Inc. Morpholino-subunit combinatorial library and method
US5217866A (en) 1985-03-15 1993-06-08 Anti-Gene Development Group Polynucleotide assay reagent and method
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US5521063A (en) 1985-03-15 1996-05-28 Antivirals Inc. Polynucleotide reagent containing chiral subunits and methods of use
US5149797A (en) 1990-02-15 1992-09-22 The Worcester Foundation For Experimental Biology Method of site-specific alteration of rna and production of encoded polypeptides
US5138045A (en) 1990-07-27 1992-08-11 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US20020123476A1 (en) 1991-03-19 2002-09-05 Emanuele R. Martin Therapeutic delivery compositions and methods of use thereof
DE69329641T2 (de) 1992-03-31 2001-06-21 Abbott Laboratories, Abbott Park Verfahren zur mehrfachen ligase-kettenreaktion
US5869252A (en) 1992-03-31 1999-02-09 Abbott Laboratories Method of multiplex ligase chain reaction
US6806084B1 (en) 1992-06-04 2004-10-19 The Regents Of The University Of California Methods for compositions for in vivo gene delivery
EP0786522A2 (en) 1992-07-17 1997-07-30 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic RNA molecules for treatment of stenotic conditions
US5985558A (en) 1997-04-14 1999-11-16 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense oligonucleotide compositions and methods for the inibition of c-Jun and c-Fos
PT698092E (pt) 1993-05-11 2007-10-29 Univ North Carolina Oligonucleótidos complementares de uma cadeia codificadora que combatem splicing aberrante e métodos para a sua utilização
US5801154A (en) 1993-10-18 1998-09-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein
US6391636B1 (en) 1994-05-31 2002-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of raf gene expression
US5885613A (en) 1994-09-30 1999-03-23 The University Of British Columbia Bilayer stabilizing components and their use in forming programmable fusogenic liposomes
US5820873A (en) 1994-09-30 1998-10-13 The University Of British Columbia Polyethylene glycol modified ceramide lipids and liposome uses thereof
GB9510718D0 (en) 1995-05-26 1995-07-19 Sod Conseils Rech Applic Antisense oligonucleotides
ES2221039T3 (es) 1996-02-14 2004-12-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotidos abiertos modificados con azucar.
AU2585197A (en) 1996-03-20 1997-10-10 Regents Of The University Of California, The Antisense approach to gene inhibition
US6153436A (en) 1997-01-10 2000-11-28 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Method of gene delivery using wildtype adeno associated viral (AAV) vectors with insertions
US20030114401A1 (en) 2001-12-06 2003-06-19 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of Ship-1 expression
GB9819999D0 (en) 1998-09-14 1998-11-04 Univ London Treatment of cancer
US6210892B1 (en) 1998-10-07 2001-04-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Alteration of cellular behavior by antisense modulation of mRNA processing
WO2000028980A2 (en) 1998-11-13 2000-05-25 Eli Lilly And Company Combination of duloxetine with non-steroidal antiinflammatory drug for treating pain
EP1173561A2 (en) 1999-01-29 2002-01-23 Avi Biopharma, Inc. Non-invasive method for detecting target rna
US20020049173A1 (en) 1999-03-26 2002-04-25 Bennett C. Frank Alteration of cellular behavior by antisense modulation of mRNA processing
JP2000325085A (ja) 1999-05-21 2000-11-28 Masafumi Matsuo デュシェンヌ型筋ジストロフィー治療剤
AU768904B2 (en) 1999-06-21 2004-01-08 Murdoch Childrens Research Institute, The A method for the prophylaxis and/or treatment of medical disorders
EP1242052A4 (en) 1999-12-29 2003-07-02 A James Mixson HISTIDIN COPOLYMER AND METHODS OF USE THEREOF
US7070807B2 (en) 1999-12-29 2006-07-04 Mixson A James Branched histidine copolymers and methods for using same
EP1248813A2 (en) 2000-01-04 2002-10-16 Avi Biopharma, Inc. Antisense antibacterial cell division composition and method
JP2004509604A (ja) 2000-03-28 2004-04-02 アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド ｍＲＮＡプロセッシングのアンチセンスモジュレーションによる、細胞行動の改変
US6653467B1 (en) 2000-04-26 2003-11-25 Jcr Pharmaceutical Co., Ltd. Medicament for treatment of Duchenne muscular dystrophy
CN100422320C (zh) 2000-04-28 2008-10-01 肖啸 编码抗肌萎缩蛋白小基因的dna序列及其使用方法
PT1278761E (pt) 2000-05-01 2005-08-31 Hybridon Inc Modulacao da estimulacao imunitaria mediada por oligonucleotidos de cpg, por modificacao posicional de nucleosidos
JP2003533986A (ja) 2000-05-04 2003-11-18 エイブイアイ バイオファーマ， インコーポレイテッド スプライス領域アンチセンス組成物および方法
JP4836366B2 (ja) 2000-08-25 2011-12-14 雅文 松尾 デュシェンヌ型筋ジストロフィー治療剤
US6727355B2 (en) 2000-08-25 2004-04-27 Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. Pharmaceutical composition for treatment of Duchenne muscular dystrophy
US7264925B2 (en) 2000-08-30 2007-09-04 Avi Biopharma, Inc. Method for analysis of oligonucleotide analogs
US20070037165A1 (en) 2000-09-08 2007-02-15 Applera Corporation Polymorphisms in known genes associated with human disease, methods of detection and uses thereof
US6559279B1 (en) 2000-09-08 2003-05-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Process for preparing peptide derivatized oligomeric compounds
US6900016B1 (en) 2000-09-08 2005-05-31 Applera Corporation Polymorphisms in known genes associated with inflammatory autoimmune disease, methods of detection and uses thereof
WO2002024717A1 (en) 2000-09-20 2002-03-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of flip-c expression
EP1191097A1 (en) 2000-09-21 2002-03-27 Leids Universitair Medisch Centrum Induction of exon skipping in eukaryotic cells
US6689615B1 (en) 2000-10-04 2004-02-10 James Murto Methods and devices for processing blood samples
CN2507125Y (zh) * 2000-10-11 2002-08-21 信一精密株式会社 具有多段时间调节功能的定时器
JP3781687B2 (ja) 2001-02-23 2006-05-31 松下電器産業株式会社 遺伝子診断装置及び遺伝子診断方法
US6656732B1 (en) 2001-05-18 2003-12-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibition of src-c expression
US7499863B2 (en) 2001-07-06 2009-03-03 Dialogic Corporation System and method for constructing phrases for a media server
US20030224353A1 (en) 2001-10-16 2003-12-04 Stein David A. Antisense antiviral agent and method for treating ssRNA viral infection
US7655785B1 (en) 2002-11-14 2010-02-02 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory oligonucleotides and uses thereof
DK2284266T3 (da) 2002-11-14 2014-01-13 Thermo Fisher Scient Biosciences Inc sIRNA-MOLEKYLE MOD TP53
US7250289B2 (en) 2002-11-20 2007-07-31 Affymetrix, Inc. Methods of genetic analysis of mouse
US7314750B2 (en) 2002-11-20 2008-01-01 Affymetrix, Inc. Addressable oligonucleotide array of the rat genome
EP2135948B1 (en) 2002-11-25 2014-09-17 Masafumi Matsuo ENA nucleic acid drugs modifying splicing in mRNA precursor
JP2006507774A (ja) 2002-11-25 2006-03-02 テレセクター リソーシーズ グループ インコーポレイテッド 優先装置への通信の自動転送のための方法およびシステム
CA2524255C (en) 2003-03-21 2014-02-11 Academisch Ziekenhuis Leiden Modulation of exon recognition in pre-mrna by interfering with the secondary rna structure
EP2351844B1 (en) 2003-04-29 2014-06-11 Sarepta Therapeutics, Inc. Compositions for enhancing transport and antisense efficacy of nucleic acid analog into cells
ES2302898T3 (es) 2003-07-11 2008-08-01 Lbr Medbiotech B.V. Transferencia de genes a celulas musculares mediada por el receptor de manosa-6-fosfato.
ATE491791T1 (de) 2003-08-05 2011-01-15 Avi Biopharma Inc Oligonukleotidanalog und verfahren zur behandlung von flavivirusinfektionen
US20050048495A1 (en) 2003-08-29 2005-03-03 Baker Brenda F. Isoform-specific targeting of splice variants
WO2005027833A2 (en) 2003-09-12 2005-03-31 Avi Biopharma, Inc. Compound and method for treating androgen-independent prostate cancer
US20050171044A1 (en) 2003-12-24 2005-08-04 Stein David A. Oligonucleotide compound and method for treating nidovirus infections
CA2566473A1 (en) 2004-05-17 2005-12-08 Board Of Trustees Of The University Of Illinois Uses of bispecific antibody (biab) coated dendritic cells pulsed with antigens
US20050288246A1 (en) 2004-05-24 2005-12-29 Iversen Patrick L Peptide conjugated, inosine-substituted antisense oligomer compound and method
ATE498685T1 (de) 2004-06-28 2011-03-15 Univ Western Australia Antisense-oligonukleotide zur induktion von exon- skipping sowie verfahren zur verwendung davon
FR2873294B1 (fr) 2004-07-26 2008-05-09 Greenpharma Sa Sa Association de medicaments
FR2874384B1 (fr) 2004-08-17 2010-07-30 Genethon Vecteur viral adeno-associe pour realiser du saut d'exons dans un gene codant une proteine a domaines dispensables
US8129352B2 (en) 2004-09-16 2012-03-06 Avi Biopharma, Inc. Antisense antiviral compound and method for treating ssRNA viral infection
US20120122801A1 (en) 2005-01-05 2012-05-17 Prosensa B.V. Mannose-6-phosphate receptor mediated gene transfer into muscle cells
US20060148740A1 (en) 2005-01-05 2006-07-06 Prosensa B.V. Mannose-6-phosphate receptor mediated gene transfer into muscle cells
AU2006213686A1 (en) 2005-02-09 2006-08-17 Avi Bio Pharma, Inc. Antisense composition and method for treating muscle atrophy
US20090312532A1 (en) 2005-04-22 2009-12-17 Van Deutekom Judith Christina Modulation of exon recognition in pre-mrna by interfering with the binding of sr proteins and by interfering with secodary rna structure
US8067571B2 (en) 2005-07-13 2011-11-29 Avi Biopharma, Inc. Antibacterial antisense oligonucleotide and method
WO2007028065A2 (en) 2005-08-30 2007-03-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chimeric oligomeric compounds for modulation of splicing
US8524676B2 (en) 2005-09-08 2013-09-03 Sarepta Therapeutics, Inc. Method for treating enterovirus or rhinovirus infection using antisense antiviral compounds
US8501704B2 (en) 2005-11-08 2013-08-06 Sarepta Therapeutics, Inc. Immunosuppression compound and treatment method
KR101789603B1 (ko) 2005-11-10 2017-11-21 더 유니버시티 오브 노쓰 캐롤라이나 엣 채플 힐 Ｔｎｆ 수퍼패밀리 수용체에 대한 스플라이스 스위칭올리고머 및 염증성 질환 치료용 약제학적 조성물
US20090011004A1 (en) 2005-12-30 2009-01-08 Philadelphia Health & Education Corp., D/B/A/ Drexel University Of College Of Medicine Improved carriers for delivery of nucleic acid agents to cells and tissues
ES2645410T3 (es) 2006-05-10 2017-12-05 Sarepta Therapeutics, Inc. Análogos de oligonucleótidos que tienen enlaces intersubunitarios catiónicos
US8785407B2 (en) 2006-05-10 2014-07-22 Sarepta Therapeutics, Inc. Antisense antiviral agent and method for treating ssRNA viral infection
US20070265215A1 (en) 2006-05-11 2007-11-15 Iversen Patrick L Antisense restenosis composition and method
EP1857548A1 (en) * 2006-05-19 2007-11-21 Academisch Ziekenhuis Leiden Means and method for inducing exon-skipping
US20100016215A1 (en) 2007-06-29 2010-01-21 Avi Biopharma, Inc. Compound and method for treating myotonic dystrophy
JP5864100B2 (ja) 2007-06-29 2016-02-17 サレプタ セラピューティクス インコーポレイテッド 組織特異的ペプチドコンジュゲートおよび方法
PT2203173E (pt) 2007-10-26 2016-03-15 Academisch Ziekenhuis Leiden Resumo
WO2009101399A1 (en) * 2008-02-12 2009-08-20 Isis Innovation Limited Treatment of muscular dystrophy using peptide nucleic acid ( pna)
EP2119783A1 (en) 2008-05-14 2009-11-18 Prosensa Technologies B.V. Method for efficient exon (44) skipping in Duchenne Muscular Dystrophy and associated means
US8084601B2 (en) 2008-09-11 2011-12-27 Royal Holloway And Bedford New College Royal Holloway, University Of London Oligomers
TR201902952T4 (tr) 2008-10-24 2019-03-21 Sarepta Therapeutics Inc Dmd için ekson atlama bileşimleri.
DK2344637T4 (en) 2008-10-27 2018-04-23 Biomarin Tech Bv Methods and means for efficiently skipping exon 45 in Duchenne muscular dystrophy pre-mRNA
WO2010080554A1 (en) 2008-12-17 2010-07-15 Avi Biopharma, Inc. Antisense compositions and methods for modulating contact hypersensitivity or contact dermatitis
WO2010115993A1 (en) 2009-04-10 2010-10-14 Association Institut De Myologie Tricyclo-dna antisense oligonucleotides, compositions, and methods for the treatment of disease
NZ595955A (en) * 2009-04-24 2012-10-26 Prosensa Technologies Bv Oligonucleotide comprising an inosine for treating dmd
EP2258863A1 (en) 2009-05-25 2010-12-08 Universita'Degli Studi di Roma "La Sapienza" miRNA biomarkers for the diagnosis of duchenne muscular dystrophy progression, for monitoring therapeutic interventions, and as therapeutics
WO2010136417A1 (en) 2009-05-25 2010-12-02 Università Degli Studi Di Roma "La Sapienza" miR-31 IN DUCHENNE MUSCULAR DYSTROPHY THERAPY
US20110269665A1 (en) 2009-06-26 2011-11-03 Avi Biopharma, Inc. Compound and method for treating myotonic dystrophy
ITTO20090487A1 (it) 2009-06-26 2010-12-27 Univ Ferrara Oligonucleotidi antisenso atti ad indurre lo skipping esonico e loro impiego come medicamento per il trattamento della distrofia muscolare di duchenne (dmd)
EP2473607A2 (en) 2009-08-31 2012-07-11 INSERM - Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Exon skipping therapy for functional amelioration of semi functional dystrophin in becker and duchenne muscular dystrophy
IT1397011B1 (it) 2009-10-14 2012-12-20 Univ Ferrara Nanoparticella del tipo core-shell idonea per la veicolazione di oligonucleotidi terapeutici in tessuti bersaglio e suo impiego per la preparazione di un medicamento per il trattamento della distrofia muscolare di duchenne.
CA2780563C (en) 2009-11-12 2025-05-06 Univ Western Australia Antisense Molecules and Methods for Treating Pathologies
WO2011060320A1 (en) 2009-11-13 2011-05-19 Avi Biopharma, Inc. Antisense antiviral compound and method for treating influenza viral infection
WO2011124853A1 (fr) 2010-04-08 2011-10-13 France Telecom Procede de controle d'un point d'acces d'une passerelle domestique d'un reseau domestique
US9050373B2 (en) 2010-05-13 2015-06-09 The Charlotte-Mecklenburg Hospital Authority Pharmaceutical compositions comprising antisense oligonucleotides and methods of using same
EP2576574A2 (en) 2010-05-28 2013-04-10 Sarepta Therapeutics, Inc. Oligonucleotide analogues having modified intersubunit linkages and/or terminal groups
CN106994124A (zh) 2010-06-28 2017-08-01 萩原正敏 遗传性疾病的预防/改善剂
TWI541024B (zh) 2010-09-01 2016-07-11 日本新藥股份有限公司 反義核酸
HUE030292T2 (en) 2010-09-30 2017-04-28 Nippon Shinyaku Co Ltd Morpholino-nucleic acid derivatives
WO2012109296A1 (en) 2011-02-08 2012-08-16 The Charlotte-Mecklenburg Hospital Authority D/B/A Carolinas Medical Center Antisense oligonucleotides
US9161948B2 (en) 2011-05-05 2015-10-20 Sarepta Therapeutics, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates
KR102183273B1 (ko) 2011-05-05 2020-11-27 사렙타 쎄러퓨틱스, 인코퍼레이티드 펩타이드 올리고뉴클레오타이드 접합체
EP2750715B1 (en) 2011-08-30 2018-10-31 The Regents of The University of California Identification of small molecules that enhance therapeutic exon skipping
US20140080896A1 (en) 2011-08-30 2014-03-20 The Regents Of The University Of California Identification of small molecules that facilitate therapeutic exon skipping
DK2581448T3 (en) 2011-10-13 2015-04-27 Ass Inst De Myologie Tricyclo-DNA phosphorothioate
CN107881175B (zh) 2011-12-28 2022-05-13 日本新药株式会社 反义核酸
NZ627896A (en) 2012-01-27 2016-11-25 Biomarin Technologies B V Rna modulating oligonucleotides with improved characteristics for the treatment of duchenne and becker muscular dystrophy
US9920085B2 (en) 2012-03-20 2018-03-20 Sarepta Therapeutics, Inc. Boronic acid conjugates of oligonucleotide analogues
EP3608407A1 (en) 2012-07-03 2020-02-12 BioMarin Technologies B.V. Oligonucleotide for the treatment of muscular dystrophy patients
WO2014100714A1 (en) 2012-12-20 2014-06-26 Sarepta Therapeutics, Inc. Improved exon skipping compositions for treating muscular dystrophy
HUE042218T2 (hu) 2013-03-14 2019-06-28 Sarepta Therapeutics Inc Exonátugrást elõsegítõ készítmények izomdisztrófia kezelésére
NZ775701A (en) 2013-03-14 2022-08-26 Sarepta Therapeutics Inc Exon skipping compositions for treating muscular dystrophy
NZ732507A (en) 2013-03-15 2018-08-31 Sarepta Therapeutics Inc Improved compositions for treating muscular dystrophy
MX388221B (es) 2013-04-20 2025-03-19 Res Institute At Nationwide Children´S Hospital ADMINISTRACIÓN DE VIRUS ADENO-ASOCIADO RECOMBINANTE DE CONSTRUCCIONES DE POLINUCLÉOTIDOS U7snRNA DIRIGIDA AL EXÓN 2.
BR112018006445A2 (pt) 2015-09-30 2018-12-11 Sarepta Therapeutics Inc métodos para tratar distrofia muscular
KR20190024977A (ko) 2016-06-30 2019-03-08 사렙타 쎄러퓨틱스 인코퍼레이티드 근육 이상증에 대한 엑손 스킵핑 올리고머

Also Published As

Publication number Publication date
SMT201800579T1 (it) 2019-01-11
US20230063394A1 (en) 2023-03-02
US20190270994A1 (en) 2019-09-05
US9758783B2 (en) 2017-09-12
BR122023023194A2 (pt) 2023-12-26
US10287586B2 (en) 2019-05-14
KR20250005448A (ko) 2025-01-09
AU2016202924A1 (en) 2016-05-26
IL255707A (en) 2018-01-31
WO2011057350A1 (en) 2011-05-19
AU2018202105A1 (en) 2018-04-19
KR20230137491A (ko) 2023-10-04
HUE040445T2 (hu) 2019-03-28
DK2499249T3 (en) 2018-12-03
IL264525A (en) 2019-02-28
CY1121198T1 (el) 2020-05-29
US20160177301A1 (en) 2016-06-23
IL314343A (en) 2024-09-01
US9228187B2 (en) 2016-01-05
KR102000762B1 (ko) 2019-07-16
SI2499249T1 (sl) 2019-02-28
KR102581868B1 (ko) 2023-10-04
US20140350067A1 (en) 2014-11-27
EP2499249B1 (en) 2018-08-08
JP6525449B2 (ja) 2019-06-05
CA2780563A1 (en) 2011-05-19
KR20210041130A (ko) 2021-04-14
US20120270925A1 (en) 2012-10-25
KR20200055161A (ko) 2020-05-20
KR20190084360A (ko) 2019-07-16
RS58079B1 (sr) 2019-02-28
JP5963678B2 (ja) 2016-08-03
NZ626359A (en) 2016-02-26
KR20130084595A (ko) 2013-07-25
IL276947A (en) 2020-10-29
ES2693459T3 (es) 2018-12-11
JP2016198105A (ja) 2016-12-01
AU2010317599A1 (en) 2012-05-31
US20210040482A1 (en) 2021-02-11
CN103003430A (zh) 2013-03-27
NZ716534A (en) 2018-06-29
KR101958491B1 (ko) 2019-03-15
US8637483B2 (en) 2014-01-28
LT2499249T (lt) 2018-12-27
AU2010317599B2 (en) 2016-02-11
EP2499249A4 (en) 2013-06-19
IL297299A (en) 2022-12-01
JP2013510561A (ja) 2013-03-28
CN105838714B (zh) 2020-07-17
CN105838714A (zh) 2016-08-10
KR20220031125A (ko) 2022-03-11
IL255707B (en) 2019-02-28
JP2018082714A (ja) 2018-05-31
KR102113306B1 (ko) 2020-05-21
KR102239374B1 (ko) 2021-04-14
US20180171333A1 (en) 2018-06-21
HRP20181824T1 (hr) 2019-01-25
JP6294393B2 (ja) 2018-03-14
KR102366851B1 (ko) 2022-02-23
EP3431603A1 (en) 2019-01-23
JP6936830B2 (ja) 2021-09-22
KR20230010814A (ko) 2023-01-19
JP2019141073A (ja) 2019-08-29
BR112012011195A2 (pt) 2022-08-02
CA2780563C (en) 2025-05-06
US11447776B2 (en) 2022-09-20
IL219753A0 (en) 2012-07-31
AU2023203103A1 (en) 2023-06-08
AU2020260498A1 (en) 2020-11-26
BR112012011195B1 (pt) 2024-02-15
KR102487132B1 (ko) 2023-01-10
PT2499249T (pt) 2018-11-21
JP2022001053A (ja) 2022-01-06
EP2499249A1 (en) 2012-09-19
IL219753A (en) 2017-11-30
PL2499249T3 (pl) 2019-03-29
KR20180004745A (ko) 2018-01-12
US10781450B2 (en) 2020-09-22
JP2024029262A (ja) 2024-03-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TR201816523T4 (tr) Patolojilerin tedavisine yönelik antisens moleküller ve yöntemler.
HK40001685A (en) Antisense molecules and methods for treating pathologies
HK1227924A1 (zh) 反义分子和治疗疾病的方法
HK1227924B (zh) 反义分子和治疗疾病的方法
HK1184489A (en) Antisense molecules and methods for treating pathologies