SU1708846A1 - Штамм бактерий NeISSeRIa меNINGIтIDIS серогруппы В - продуцент капсульного полисахарида и полисахаридно-белкового комплекса - Google Patents
Штамм бактерий NeISSeRIa меNINGIтIDIS серогруппы В - продуцент капсульного полисахарида и полисахаридно-белкового комплекса Download PDFInfo
- Publication number
- SU1708846A1 SU1708846A1 SU894762342A SU4762342A SU1708846A1 SU 1708846 A1 SU1708846 A1 SU 1708846A1 SU 894762342 A SU894762342 A SU 894762342A SU 4762342 A SU4762342 A SU 4762342A SU 1708846 A1 SU1708846 A1 SU 1708846A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- polysaccharide
- strain
- serogroup
- protein complex
- meningococcal
- Prior art date
Links
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 28
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 13
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 title 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 238000011749 CBA mouse Methods 0.000 claims 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 claims 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 abstract description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 abstract description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 8
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VLSOAXRVHARBEQ-UHFFFAOYSA-N [4-fluoro-2-(hydroxymethyl)phenyl]methanol Chemical compound OCC1=CC=C(F)C=C1CO VLSOAXRVHARBEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000004523 agglutinating effect Effects 0.000 description 1
- XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N ammonia nh3 Chemical compound N.N XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- GOOXRYWLNNXLFL-UHFFFAOYSA-H azane oxygen(2-) ruthenium(3+) ruthenium(4+) hexachloride Chemical compound N.N.N.N.N.N.N.N.N.N.N.N.N.N.[O--].[O--].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Ru+3].[Ru+3].[Ru+4] GOOXRYWLNNXLFL-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- JJWKPURADFRFRB-UHFFFAOYSA-N carbonyl sulfide Chemical compound O=C=S JJWKPURADFRFRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000021018 plums Nutrition 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к биотехноло- '"ии и касаетс получени нового штамма бактерий Neisserla meningitidfs-продуцента капсульного В-полисахарида и полисаха-' ридно-белкового комплекса и может быть использовано в производстве менингокок- ковых препаратов. Целью изобретени в- лйвтс получение штамма бактерий N.meningitidls серогруппы В № 125 (коллекци ГИСК им. Л.А.Тарасевича), активно продуцирующего В-полисахарид. Выход наиболее крупных молекул В-полисахарида, выделенного из биомассы предлагаемого штамма, в 1,5 раза выше, чем при использовании известных штаммов. Уровень антител к полисахариду менингококка серогруппы В в сыворотках животных, полученных к пол- исахаридно-ббелковому комплексу предлагаемого штамма менингококка, в 3 раза превосходит уровень аналогичных антител в сыворотках, полученных к полисахаридно- белковому комплексу известного штамма. 3 табл.Изобретение относитс к биотехнологии и касаетс получени нового штамма бактерий Neisserla menlngltldis - продуцента капсульного! В-полисахарида и полиса- харидно-белкового комплекса и может быть использовано в производстве менин- гококковых препаратов.Большинство диких штаммов менингококка серогруппы В продуцирует группос- пецифический капсульный полисахарид (В-полисахарид)-сиаловую кислоту в незначительных количествах, что не позвол ет ис- пользовать эти штаммы в качествепродуцентов В-полисахарида и полисаха- ридно-белкового комплекса.Известны штаммы бактерий Neisserla meningltidls серогруппы В - продуценты капсульного полисахарида.Недостатком этих штаммов вл етс небольшой выход В-полисахарида, что выражаетс в низком уровне антител к В-пол- исахариду у мышей, иммунизированных 10 мкг полисахаридно-белкового антигена внутрибрюшинно.Цель изобретени - получение штамма бактерий Neisserla menlngltidis серогруппы В NS 125 (коллекци ГИСК им. Л.А.Тарасеви-XIО 0000Ь. о
Description
ча), активно продуцирующего В-полисахарид .
Штамм получен путем селекции из музейного штамма N.menlngitldis ВС-5, хран щегос также в коллекции ГИСК им, Л.А.Тарасевича.
Дл этого из отдельно выросших на чашках Петри с 20%-ным сывороточным агаром Хоттингера колоний отбирали колонии в S-форме . При изучении их в косопровод щем свете и с использованием бинокул рной лупы колонии должны быть ркие радужные с переходом цвета от оранжевого в зелено-голубой с узким оранжевым или зеленым наружным краем.
8 том случае, когда колонии отвечают описанным требовани м, провод т второй пассаж. Дл этого типичные колонии в Sформе (по одной) пересевают в пробирки со скошенным сывороточным агаром Хоттиненгера и инкубируют при +37°С в течение 18-20 ч. Провер ют чистоту и морфологию выросших культур в мазках, окрашенных по Грамму в модификации Калины, а также путем посева культур в среды Гисса, серологические свойства - в реакции агглютинации на стекле с гомологичными и гетерологичнымн агглютинирующими менингококковыми сыворотками.
Отобранный штамм, типичный по всем показател м, смывают с кос ка сахарозо-желатиновой средой и лиофильно высушивают. Штамм хран т в лиофильновысушенном со.сто нии с сахарозо-желатиноаым стабилизатором в ампулах в холодильнике при +4-6°С.
Штамм имеет следующую характеристику .
Культура л ьно-морфологические признаки . Мелкие грамотрицательные парные или одиночные кокки одинакового размера. При изучении под электронным микроскопом отмечены закономерные изменени ультраструктуры клеток в процессе периодического культивировани в ферментере. В экспоненциальной фазе клетки имеют сохранную ультраструктуру, в том числе полисахаридную микрокапсулу, представл ющую соб.ой мелковетвистый гранул рный компонент, определ емый ультрацитохимической реакцией с рутениевым красным, В фазе максимальной концентрации по вл ютс лизированные особи, Q большинстве клеток происход т деструктивные изменени .
При визуальном изучении выросших колон лй на плотной среде (1,5% агара Хоттингера с 20% сыворотки крупного рогатого
скота; рост в атмосфере С02 в термостате
при 37°С) и при использовании бинокул рной лупы в естественном освещении колонии в S-форме не более 2 мм в диаметре, прозрачные с голубоватым оттенком, ровными кра ми и голубоватой поверхностью. При изучении колоний в косопроход щем свете (угол наклона светового луча 30) с использованием бинокул рной лупы колонии обладают рко-оранжевым свечением. Рост штамма возможен на следующих 0 питательных средах: А. Среда Козн-Веллер в модицикации Э.К.Фаньковской, г/л: Кислотный гидролизат казеина18-22
Крахмал растворимый0,5-1,0
5 Однозамещенный
фосфат кали 0,3-0,6
Хлорид магни 0,2-0,5
Сульфат меди0,0005-0,002
Глутаминова кислота0,5-1,0
0 Цистеин.0,02-0,05
Диализат дрожжей80-100 мл
рН среды6,6-6,8
Б. Синтетическа среда,г/л: Хлорид кали 0,08-0,010
5 Хлорид натри 5-7
Хлорид аммони 1,24-1,26
Водный сульфат
магни 0,05-0,07
Двузамещенный
0 фосфат.натри 2,3-2,7
Цитрат натри 0,4-0,6
L-Моноглутамат натри 1,2-1,4
L-цистеин гидрохлорид0 ,02-0,04 6 Сульфат железа0,001 рН среды 7,2-7,4 устанавливают с помощью 1N HCI. Непосредственно перед употреблением добавл ют 40%-ный раствор глюкозы из расчета 1,5-1,6 г/л среды. 0 Физиолого-биохимические признаки. Отношение к источникам углерода: при выращивании на среде Гисса с глюкозой или лактозой, или маннитом, или сахарозой или мальтозой сбраживает только глюкоза и 5 мальтоза с образованием кислоты без газа. Отношение к источникам азота: ассимилирует аммонийный азот.
Генетической особенностью штамма вл етс его ауксотрофность по цистеину. 0 Не нуждаетс в витаминах.
Оптимальна температура роста 3637°С , Рост возможен при рН среды от 6,2 до 7,2, оптимум 7,0.
Аэроб, оптимальный дл роста вл етс 5 концентраци растворенного в среде кислорода 5-20%.
Штамм синтезирует группоспецифический В-полисахарид и большой набор белков с различной молекул рной массой, среди которых преобладает белок с молекул рной массой 41 кд, относ щийс ксеротипу 2, вл етс продуцентом полисахаридбелкового комплекса.
При испытании на белых мышах весом 12-14 г по тесту острой токсичности штамм токсичен. LDso составл ет 4-13 млрд. клеток .
Группова специфичность штамма. Штамм дает положительную реакцию агглютинации на стекле (3-4 креста) с менингококковой гомологичной серогруппы В сывороткой и не агглютинируетс с сыворотками других серогрупп: А. С, D. X, Y, Z, 29Е, W - 135. На основе культуры менингококка серогруппы В предложенного штамма получают кроличьи иммунные сыворотки , группоспецифический полисахарид.
Антигенную активность культур изучают через гру поспецифич.ескую активность сывороток. В табл.1 представлены данные реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) титровани сывороток менингококковых серогруппы В, полученных при иммунизации кроликов культурами менингококка предлагаемого штамма, в сравнеНИИ с аналогичными данными на известных Штаммах. Из таблицы видно, что в зтом тесте наблюдаетс высока специфичность и активность сывороток. Кроме этого, можно отметить значительную разницу з титрах антител между сыворотками, полученными при иммунизации культурами менингококка предложенного штамма, и сыворотками, полученными к известным штаммам.
Результаты реакции агглютинации на стекле и по Ноблю полученных нами сывороток с 46 штаммами различных серогрупп также свидетельствуют о высокой активности и строгой групповой специфичности.
Из культуры менингококка предложенного штамма известным методом выдел ли препараты полисахаридно-белкового комплекса .
В указанных препаратах определ ли пептидный состав с помощью злектрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ) в присутствии додецилсульфата натри . При анализе денситограмм указанных комплексов вы влено, что во всех препаратах присутствует основной пептид с молекул рной массой 41 КД.
Результаты изучени молекул рных параметров и антигенной активности В-полисахарида и полисахаридно-белкового комплекса, выделенных из биомассы менингококка предложенного штамма, выращенного в синтетической питательной среде, приведены в табл.2 и 3.
Из табл.2 видно, что полисахарид, выделенный из предложенного штамма, содержит в 1,5 раза больше высокрмолекул рного вещества, чем полисахарид из известного штамма. В-полисахариды из биомассы менингококка серогруппы В предложенного штамма были использованы дл получени зритроцитарного диагностикума, который характеризовалс высокой специфичностью и активностью. Это еще раз подтверждает, что предлагаемый штамм вл етс продуцентом активного в антигенном отношении группоспецифического В-полисахарида.
Пример. Модифицированную среду Козн-Веллер (см.выше) в обьеме 6 л в ферментере засевают 100 мл инокул та, содержащего 6 X 10 кл/мл. Инокул т получают смыванием с 5 чашек Петри 18-часовой культуры, выросшей на 20%-ном сывороточном агаре Хоттингера.
Культивирование провод т при ,37°С, рН 7,0-7,2 до конца экспоненциальной фазы роста, которую затем поддерживают непрерывно-синхронным способом в течение 72ч.
Последнее осуществл ют следующим образом.
Выращивание штамма ведут при постепенном увеличении частоты вращени мешалки от (70 об/мин в начале процесса до 450 об/мин в конце экспоненциальной фазы роста). Растворенный в среде кислород от первоначального насыщени 50-60% снижаетс к 1-2 ч роста до значений, близких к 10%. В дальнейшем процесс до 5-6 ч роста ведут в данных услови х. К 5-6 ч роста (оптическа плотность (ОД) достигает значений , равных 2±0,2. В этот момент из ферментера сливают половину объема культуры (3 л) и доливают свежую питательную среду до прежнего объема (6 л). После долива питательной среды ОД становитс равной 1 ± 0,1. Через 1 ч ОД культуры достигает уровн , существовавшего до первого слива культуры, т.е. 2 ±0,2. Врем генерации 1 ч. В дальнейшем такие сливы культуры с последующими доливами свежей питательной среды производ т периодически через 1 ч до получени необходимого объема культуры.
В момент долива питательной среды, т.е. в начале каждого цикла уровень растворенного в среде кислорода поднимаетс до 20% от полного насыщени , затем через 1 ч в момент слива уровень растворенного в среде кислорода падает до 10%.
Дл получени 1 г полуочищенндго полисахарида менигококка серогруппы В при
культивировании предложенного штамма в указанных выше услови х необходимо 20 л культуры септической плотностью не менее 2 ± 0,2, которую можно получить за 10 - 12 ч культивировани в ферментере.
Использование предложенного штамма N.menlngltldls позвол ет получить наиболее качественную в антигенном отношении биомассу менингококка и в большем количестве в сравнении с биомассой менингококка известного штамма, так как выход наиболее крупных молекул В-полисахарида, выделенного из биомассы предлагаемого штамма, в 1,5 раза выше, чем при использовании известных штаммов. Кроме того, уровень антител к полисахариду менингококка серогруппы В в сыворотках животных, полученных к полисахаридно-белковому комплексу предлагаемого штамма менингококка, в 3 раза
превосходит уровень аналогичных антител в сыворотках, полученных к полисахариднобелковому комплексу штамма известного. Следовательно, процессы получени на основе предлагаемого штамма сывороток, Вполисахарида , необходимого дл производства эритроцитарного диагностикума , и иммуноферментных тест-систем, а также В-полисахаридно-белкового комплекса , идущего на приготовление менингококковой В-вакцины, будут в 2-3 раза более экономичными.
Claims (1)
- Формула изобретени Штамм бактерий Nelsseria menlngltldisсерогруппы В N2 125 (коллекци ГИСК им.Л.А.Тарасевича) - продуцент капсульногополисахарида и полисахаридно-белковогокомплекса.Таблица 1Таблица 29Титр антител к В-полисахариду в РПГА в сыворотках крови мышей линии СВА, иммурепарат , Nfe низированных препаратом в дозе 2 мкг на мышь (по сиаловой кислоте)129 142 143 146 147170884610 Таблица 3Уровень антител к В-полисахариду в пересчете на мкг иммуноглобулина мл сыворотки1/32016 16 16 64 32 1/320 1/320 1/1280 1/640
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU894762342A SU1708846A1 (ru) | 1989-11-22 | 1989-11-22 | Штамм бактерий NeISSeRIa меNINGIтIDIS серогруппы В - продуцент капсульного полисахарида и полисахаридно-белкового комплекса |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU894762342A SU1708846A1 (ru) | 1989-11-22 | 1989-11-22 | Штамм бактерий NeISSeRIa меNINGIтIDIS серогруппы В - продуцент капсульного полисахарида и полисахаридно-белкового комплекса |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1708846A1 true SU1708846A1 (ru) | 1992-01-30 |
Family
ID=21481171
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU894762342A SU1708846A1 (ru) | 1989-11-22 | 1989-11-22 | Штамм бактерий NeISSeRIa меNINGIтIDIS серогруппы В - продуцент капсульного полисахарида и полисахаридно-белкового комплекса |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1708846A1 (ru) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998008874A1 (en) * | 1996-08-27 | 1998-03-05 | Chiron Corporation | Monoclonal antibodies that define unique meningococcal b epitopes and their use in the preparation of vaccine compositions |
| RU2257412C1 (ru) * | 2004-04-01 | 2005-07-27 | Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова | Штамм haemophilus influenzae b mech №1 - продуцент капсульного полисахарида - полирибозилрибитолфосфата |
| RU2322451C2 (ru) * | 2001-04-17 | 2008-04-20 | Новартис Вэксинс Энд Диагностикс, Инк. | Молекулярные миметики эпитопов менингококка в, которые вызывают выработку функционально активных антител |
| US8034349B2 (en) | 2006-06-15 | 2011-10-11 | Giuseppe Teti | Peptides that mimic non-human cross-reactive protective epitopes of the group B meningococcal capsular polysaccharide |
-
1989
- 1989-11-22 SU SU894762342A patent/SU1708846A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Gotschllch E.G., Glu Т.Х., Artenstein M.S. J. Exp. Med., 1969, v.129. p. 1349-1365.Moreno C,, GIfely M.R., Esdalle I. Infect, and Immun.. 1985, v.47, p. 527-533. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998008874A1 (en) * | 1996-08-27 | 1998-03-05 | Chiron Corporation | Monoclonal antibodies that define unique meningococcal b epitopes and their use in the preparation of vaccine compositions |
| RU2322451C2 (ru) * | 2001-04-17 | 2008-04-20 | Новартис Вэксинс Энд Диагностикс, Инк. | Молекулярные миметики эпитопов менингококка в, которые вызывают выработку функционально активных антител |
| RU2257412C1 (ru) * | 2004-04-01 | 2005-07-27 | Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова | Штамм haemophilus influenzae b mech №1 - продуцент капсульного полисахарида - полирибозилрибитолфосфата |
| US8034349B2 (en) | 2006-06-15 | 2011-10-11 | Giuseppe Teti | Peptides that mimic non-human cross-reactive protective epitopes of the group B meningococcal capsular polysaccharide |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Barry | Colominic acid, a polymer of N-acetylneuraminic acid | |
| CA1230551A (en) | Preparation to be used in diagnosis of chlamydial infections | |
| EP0008969B1 (en) | Vaccine and method of making | |
| SU1708846A1 (ru) | Штамм бактерий NeISSeRIa меNINGIтIDIS серогруппы В - продуцент капсульного полисахарида и полисахаридно-белкового комплекса | |
| Englesberg et al. | STUDIES ON IMMUNIZATION AGAINST PLAGUE VI: Growth of Pasteurella pestis and the Production of the Envelope and Other Soluble Antigens in a Casein Hydrolyzate Mineral Glucose Medium | |
| Collins | The effect of the growth rate on the composition of S. enteritidis cell walls | |
| Anacker et al. | Frequency of occurrence of native hapten among enterobacterial species | |
| Rake et al. | STUDIES ON MENINGOCOCCUS INFECTION: IV. The Antigenic Complex of the Meningococcus—Group-Specific Carbohydrate and Protein Fractions | |
| Formal et al. | The virulence and immunogenicity of Salmonella typhosa grown in continuous culture | |
| SHAW et al. | Physiological properties of Tetrahymena vorax | |
| SU889003A1 (ru) | Способ получени диагностической псевдотуберкулезной сыворотки | |
| Hayano et al. | Distribution and serological specificity of sialidase produced by various groups of streptococci | |
| SU1412306A1 (ru) | Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае еLтоR Серовара OGaWa КМ 1446/рС0107-2, используемый дл получени холерного экзотоксина | |
| US3438862A (en) | Preparation of bacterial lipopolysaccharides | |
| SU1456468A1 (ru) | Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае сноLеRае серовара Огава-продуцент холерного токсина | |
| Stainer et al. | Preparation and properties of diphtheria toxoids in submerged culture. III. Development of a new semisynthetic medium | |
| RU2169187C1 (ru) | Штамм бактерий vibrio cholerae 2414 классического биовара серовара огава - продуцент холерного токсина и токсинкорегулируемых пилей адгезии | |
| Barker et al. | 41. BACTERIAL AND FUNGAL POLYSACCHARIDES | |
| RU2159808C2 (ru) | Штамм бактерий brucella abortus, используемый при получении моноспецифической сыворотки для идентификации бруцелл в r-форме | |
| Li et al. | Relationship between ribosomal activity and age of culture in Escherichia coli B | |
| RU2222594C1 (ru) | Штамм бактерий vibrio cholerae км206 классического биовара серовара огава - продуцент протективных антигенов | |
| RU2241031C2 (ru) | Штамм бактерий shigella sonnei, фаза 1, стабильный продуцент s-липополисахарида | |
| RU2222595C1 (ru) | Штамм бактерий vibrio cholerae км207 классического биовара серовара инаба - продуцент протективных антигенов | |
| RU2257412C1 (ru) | Штамм haemophilus influenzae b mech №1 - продуцент капсульного полисахарида - полирибозилрибитолфосфата | |
| SU1163635A1 (ru) | Штамм @ 125/121 серовара 59,используемый дл получени моноспецифической диагностики сыворотки |