SU1708351A1 - Штамм бактерий SнIGеLLа SoNNeI используемый дл приготовлени живой вакцины против дизентерии Зонне - Google Patents
Штамм бактерий SнIGеLLа SoNNeI используемый дл приготовлени живой вакцины против дизентерии Зонне Download PDFInfo
- Publication number
- SU1708351A1 SU1708351A1 SU904799475A SU4799475A SU1708351A1 SU 1708351 A1 SU1708351 A1 SU 1708351A1 SU 904799475 A SU904799475 A SU 904799475A SU 4799475 A SU4799475 A SU 4799475A SU 1708351 A1 SU1708351 A1 SU 1708351A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- strain
- vaccine
- sonne
- dysentery
- shigella
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 32
- 241000607760 Shigella sonnei Species 0.000 title claims abstract description 15
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 title claims abstract description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title claims 2
- 229940115939 shigella sonnei Drugs 0.000 title abstract description 3
- 241000607768 Shigella Species 0.000 claims abstract description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 239000000902 placebo Substances 0.000 claims description 3
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 claims description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 1
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 14
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 13
- 230000001018 virulence Effects 0.000 abstract description 11
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract description 7
- 230000035772 mutation Effects 0.000 abstract description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 abstract description 4
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N rifampicin Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 abstract description 4
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 abstract description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 abstract description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 206010023332 keratitis Diseases 0.000 description 3
- 201000010666 keratoconjunctivitis Diseases 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 2
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- SYTBZMRGLBWNTM-SNVBAGLBSA-N (R)-flurbiprofen Chemical compound FC1=CC([C@H](C(O)=O)C)=CC=C1C1=CC=CC=C1 SYTBZMRGLBWNTM-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 2-nitrosoguanidine Chemical compound NC(N)=NN=O WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 208000031361 Hiccup Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 206010057071 Rectal tenesmus Diseases 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-NGQZWQHPSA-N d-xylitol Chemical compound OC[C@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-NGQZWQHPSA-N 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N methyl red Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1\N=N\C1=CC=CC=C1C(O)=O CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 1
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 208000012271 tenesmus Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к медицине, в частности к профилактике дизентерии Зон- не. Целью изобретени вл етс штамм Shigella sonnei 13359, обладающий высокой иммуногенностью, стабильным уровнем остаточной вирулентности, маркированный, безопасный дл использовани в качестве живой вакцины против дизентерии Зонне, хорошо растущий на простых питательных средах. Бактерии вакционного штамма несут две мутации - зависимость по пурину и рифампицинрезистентности, св занные с аттенуацией. Наличие оптимального уровн аттенуацйи обеспечивает высокую иммуно- гбнную активность вакцинного штамма, ус- та'новленную как в опытах эффективной защиты лабораторных животных от заражени вирулентным штаммом шигелл Зонне, так и при клиническом испытании при регистрации у вакцинированных высокого титра специфических копроантител. Две мутации у бактерий (pur'/rif*^), св занные с утратой вирулентности, обеспечивают безопасность использовани штамма в качестве живой вакцины и служат маркерами, позвол ющими дифференцировать вакцинный штамм от штаммов шигелл Зонне естественного происхождени . 2 табл.ч^ч*'ЁVJ о00со ел
Description
Изобретение относитс к медицинской микробиологии и касаетс получени вакцинных штаммов, которые могут быть использованы в медицине дл профилактики дизентерии Зонне.
В соответствии с требовани ми вакцинные штаммы должны быть высокоиммуногенными , стабильными по остаточной
вирулентности, безопасными и нести маркеры дл их дифференциации от штаммов естественного происхождени .
Известны вакцинные штаммы Shigella sonnei, полученные путем селекции спонтанных авирулентных клонов.
Однако спонтанные авирулентные мутанты шиггел не отвечают таким требовани м ,как генетическа охарактеризованность в св зи с трудност ми расшифровки их гейотипа , привод щего к утрате вирулентности , что свидетельствует об их нестабильности и небезопасности и делает невозможным повторное выделение такого типа штаммов при утрате исходным вакционным штаммом имг г/ногеннести.
Наиболее близким к предлагаемому вл етс штамм S,sonnet I, зав1 симый от стрептомицина. Шгзмм характеризуетс достаточной иммуногенностью, генетически охарактеризован, маркирован.
Недостатком стрептомицинзйвисимых штаммов вл етс нестабильность, св занна с наличием,одного маркера, приведшего к аттенциации, небезопасность использовани и необходимость добавлени антибиотика в среду вь ращивани , что ограничивает применение таких вакцинных штаммов из-за возможности аллергизации организма.
Целью изобретени вл етс штамм S.sonnei I 3359, обладающий высокой иммуногенностью , стабильным уровнем остаточной вирулентности, маркированный, безопасный дл использовани в качестве живой вакцины дл профилактики дизентерии Зоннё, хорошо растущий на простых питательных средах.
Штамм S.sonnei 3359 получен с использованием традиционных генетико-селекцйонных приемов (путе.м обработки мутагеном i/i отбором) из иггамма S.sonnei 1,180, характер /1зую1цегос низкой частотой утраты плазмиды , варьирующей в пределах 10-10. Бактерии исходного штамма зависимы по ,котиновой кислота. Штамм S.sonnei 3359 депонирован в к&ллекции ГИСК им. Тзрасевича под Мг 192.
Отбор штамма производитс путем первичной селекции зззисимых по пурину мутантов с последующим введение, в зуксотрофный клон мутации устойчивости к рифампицину. Клокы, сохранившие ппаэмтду 120МД, контролирующую ci-iHTea антигена i фазы -л инвазивную активность шиггел, характеризуютс способностью прс - икать в клетки l-iela, обладают высокой иммуногенностью и несут две мутаци , сообщающие бактери м потребность в урине и устойчивость к рифэмпицину, кажда которых ведет к снижению вирулентности, что определ т стабильность аттенуации т безопасность таких штаммов.
Штамм Shigelia sorsnei ГИСК М 192 характеризуетс следующими свойстзамм.
Морфологические признаки. Бзктери5 штамма -, грамотрицательные палочки, средние размеры на фиксированных окрашенных препаратах 2,5-3,0 х 0,5-0,7 мкм. лишены капсул и спор, неподвижны, не обладают жгутиками.
Культуральные признаки. На м сопептонном агаре (МПА), питательном агаре Дифко штамм образует круглые, гладкие колонии в S-форме. Имеютс единичные колонии в R-форме (И фаза, формирующиес с частотой 2x10 - 1x10 . На среде Эндо
клетки штамма дают образование круглых, бледно-розовых прозрачных колоний. В м сопептонном бульоне дает равномерное помутнение с легким осадком. Кип чение в течение 2 ч не вли ет на мутность взвеси и
не ведет к увеличению осадка.
Физиол о го-биохимические признаки. Факультативный анаэроб. Максимальна скорость роста при 37°С и рН 6,8-7.5. Штамм ферментирует глюкозу, фруктозу.
маннозу, мальтозу, маннит. замедленнр лактозу. Декарбоксилирует орнитин. дает положительную реакцию с метиловым красным . Не ферментирует сахарозу, ксилозу. Дульцит, адонит. инозиг, глицерин, салицин , не продуцирует индол, не образует сероводорода , не гидролизует аргинин и желатину.
Антигенна структура. Характеризуетс антигенной специфичностью, типичной дл
шигелл Зонне фазы. Колонии в З-форме дают выраженную агглютинацию на стекле с сывороткой шиггел Зонне I фазы, свидетельствующую о сохранении бактери ми собстЕбнной плазмиды 120 МД. не обусловливают реакции агглютинации с сывороткой i фазы. Колонии R-формы (II фаза), тер ющие плазмиду I фазы с частотой 2x10 1x10 , агглютинируют с сывороткой II фазы и станов тс чувствительными к действию
R-специфического фага Fa.
Вирулентность. Заражение в коньюнктиву глаза морской свинки в дозе 1-2x10 бактерий не приводит к развитию кератоконъюнктивита в течение 2-недельного срока наблюдени .
Заедание в сегмент перев занной тонкой кишки кроликов 10 петлевых единиц по исходному вирулентному штамму шигелл бактерий аттенуированного мутанта
S.sonnei I 3359 дилатации не обусловливает, Уровень остаточной вирулентности, оцениваемый по способности шигелл проникать в цитоплазму клеток Hela, осуществлен при исследовании препаратов с помощью свеТОБОЙ и электронной микроскопии. Бактерии аттенуированного мутанта S.sonnei i 3359 через 6 ч инкубации проникают и обнаружиааютс в 52,3 ±3,8% клеток моносло , однако внутриклеточное их размножение
полностью блокировано и развити цитотоксйческих изменений не наблюдают.
Стабильность остаточной вирулентности (аттенуации). Стабильность остаточной вирулентности и сохранение прежнего генотипа установлено после 10-кратного пассажа бактерий через коньюктиву глаза морских свинок.
Иммуногенность. Трехкратное введение в коньюнктивальный мешок 20 морских свинок 1-2x10 клеток штамма S.sonnel I 3359 с интервалом в 3 дн с последующим через 2 недели заражением животных тем же способом 1,2x10(3LD5o) клеток вирулентного штамма S.sonnel I 1180, обеспечивает защиту 75% (15)х ивотныхот развити кератоконьюктивиТа . Иммуногенность штамма испытана также и на петл х перев занной тонкой кишки кроликов массой 2-2,5 кг после трехкратного введени через зонд в желудрк 5x10 бактерий с интервалами в 3-4 дн и последующим заражением исходной вирулентной культурой S.sonnei I 1180 в дозе 5x10 (5 петлевых доз) через 14 дней после иммунизации в сегменты изолированных петел-ь тонкой кишки. Аттенуированный 2маркерный штамм S.sonnei I 3359 характеризуетс выраженным протективным свойством, защища 43 из 54 (80%) петель от развити энтеросорбции(подавление дилатации петли, вызываемой воспалением и продукцией энтеротоксина).
Дифференциаци вакцинного штамма от штаммов естестзенного происхождени .
Штамм S.sonnei I 3359 может быть легко идентифицирован среди выделенных культур естественного происхождени по устойчивости к 100 мкг/мл рифампицина и по зависимости от пурина.
Клиническа переносимость орально вводимых бактерий вакционного штамма S.sonnei I 3359.
Безвредность и переносимость вакцинного штамма после тщательно выполненных опытов на лабораторных животных была оценена на 6 добровольцах, 3 из которых получали перорально возрастающее количество живых бактерий в дозах 2, 4 и 6x10 с 30 мл молока. За 10 мин до вакцинации давали 2 г бикарбоната натри . 3 добровольца получили плацебо (убитые нагреванием бактерии этого же вакцинного штамма). Реактогенность и безвредность вакцины прослеживалась ежедневно в течение 2 недель посто нным контролем локальных симптомов (тенезмы) и генерализованной реакции на ЛПС О антигена (высока температура и коллапс). Все использованные дозы переносились добровольцами без каких-либо клинических про влений , т.е. вакцина при оральной апппикации побочным действием не обладала.
Пример 1. Исходный штамм Shigella sonnel I 1180, вирулентный по кератоконьюнктивальной пробе на морских свинках, после обработки нитрозогуанидином и пенициллинового обогащени , рассевают на чашках с минимальным агаром, содержащих и не содержащих аденина (пуриновых
0 оснований). Таким образом удаетс получить клоны, зависимые по пурину, среди которых отбирают стабильные мутанты с частотой обратной реверсии к пуриннезависимости , равной 1-2x10®. Суспензию
5 одномаркерного мутанта (Риг) ввод т в коньюнктивальный мешок морских свинок в концентрации 2-4x10 и отбирают клоны, обусловливающие в отличие от исходного родительского штамма развитие отдаленного по времени (не ранее чем через 2-3 дн ) кератоконьюнктивита. В аттенуированный одномаркерный зависимый от пурину клон ввод т вторую мутацию путем высева на чашку с МПА, содержащим 100 мкг/мл ри5 фампицина, в концентрации 10 -10 и отбирают устойчивые к антибиотику мутанты. Колонии отобранных мута-нтов 3 раза рассевают на МПА с рифампицином и у стабилизированных клонов изучают частоту
0 спонтанной утраты плазмиды I фазы,
контролирующей синтез антигена I фазы и
инвазивную активность шиггел, уровень оста-точной вирулентности и Иммуногенность.
Пример 2. Способность вакцинного
5 штамма S.sonnel I 3359 к созданию местного специфического иммунитета.
Выделение и эффективность вакцинного штамма изучена при его клиническом испытании на 97 здоровых дет х в возрасте от
0 2 до 17 лет.
Перед оральной аппликлацией вакцины все дети исследованы с помощью иммуноферментногоанализа (ИФА)на наличие специфических копроантител. Дети с наличием
5 копроантител к шигеллам Зонне к клиническим исследовани м не допускались. Дети принимали вакцину натощак трехкратно с возрастающим числом живых бактерий с 510x10 до 2,5-5,0x10 на 1-. 2- и 4-й день. В
0 клиническое испытание бьто включено 4 опытные и 1 контрольна группы (см. табл.1). 1-ю группу составили 13 детей в возрасте от 4-6 лет, 2-ю - 27 детей в возрасте 6-10 лет, 3-ю- 19 детей в возрасте 11-15
5 лет, 4-ю - 13 детей в возрасте 15-17 лет и 5-ю контрольную - 15 детей в возрасте 6-15 лет, получавшие плацебо.
Клиническое наблюдение показало, что при использовании выбранной схемы иммунизации непереносимых побочных реакций
не наблюдалось. Выделение вакцинного штамма из фекалий не зарегистрировано. Специфический антиген i фазы шигелл Зонне обнаруживали в копрофильтратах с помощью реакции торможени пассивной гемагглютинации (РТПГА) в течение первых 4-5 дней (табл.1). Исследование динамики титров специфических копроантител с помощью ИФА показало наличие защитных титров, особенно выраженных в течение первых 2 мес (28-53 дн ), с сохранением у некоторых привитых детей до 7 (210 дней ) (см. табл.2).
Штамм S.sonnel 13359 по сравнению со штаммом-прототипом, зависимым от стреп
Безвредность и клиническа переносимость вакцинного штамма S. sonnel I 3359
томицина, характеризуетс высокой иммуногенностью и стабильностью, безопасен дл использовани , имеет двё мутации, св занные с аттенуацией, которые одновременно вл ютс маркерами дл дифференциации вакцинного штамма от штаммов естественного происхождени , не требует при его выр1ащивании добаву1ени антибиотика в питательную среду, т.е. вл етс более технологичным.
Ф.о рмула изобретени Штамм бактерий Shigella sonnel ГИСК № 192, используемый дл приготовлени живой вакцины против дизентерии Зонне.
Таблица 1
Динамика образовани специфических копроантител, изученна с помощью ИФА у детей, привитых вакцинным штаммом S. sonnei I 3359 (данные после третьей
вакцинной дозь)
Таблица 2
Claims (1)
- Ф.о рмула изобретенияШтамм бактерий Shigella sonnel ГИСК № 192, используемый для приготовления живой вакцины против дизентерии Зонне.Таблица 1Безвредность и клиническая переносимость вакцинного штамма S. sonnel I 3359
Г руппа Число об- 1 и| 1 тг 1 ...... .......... Доза, 10 , ( в день ) Побочное действие Выделе- (возраст, следован- Появлен - Повыше- ние анти- лет) ных 1-й 2-й 4-й ие тенез- ние тем- гена, день мов пературы, °C 1(4-6) 13 0,5 1,5 2.5 0 0 4 2(6-10) 27 0,5 2,5 2,5 0 0 4 3(11-15) 19 1.0 2,5 5,0 1 1 5 4 (15-17) 5 (6-15) 13 2.5 2.5 5,0 0 0 5 контрольная 15 плацебо 0 0 0 Таблица 2Динамика образования специфических копроантител, изученная с помощью ИФА у детей, привитых вакцинным штаммом S. sonnei I 3359 (данные после третьей вакцинной дозы )Группа детей Количество обследованных Возраст, лет Дни исследования % положительных проб Средние титры антител 1 13 4-6 0 0 1:10 12 67 1:18 53 71 1:40 210 71 1:60 2 27 6-10 0 0 1:10 12 67 1:65 28 50 1:43 53 50 1:60 210 57 Т.57 3 19 11-15 0 0 1:10 • 12 75 1:16 28 83 1:24 53 80 1:48 210 75 1:75 4 13 15-17 0 0 1:10 12 54 1:33 28 60 1:36 210 70 1:50 I 5 (контр.) 15 6-15 0 0 1:10 L 15 0 1:10
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU904799475A SU1708351A1 (ru) | 1990-02-05 | 1990-02-05 | Штамм бактерий SнIGеLLа SoNNeI используемый дл приготовлени живой вакцины против дизентерии Зонне |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU904799475A SU1708351A1 (ru) | 1990-02-05 | 1990-02-05 | Штамм бактерий SнIGеLLа SoNNeI используемый дл приготовлени живой вакцины против дизентерии Зонне |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1708351A1 true SU1708351A1 (ru) | 1992-01-30 |
Family
ID=21500493
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU904799475A SU1708351A1 (ru) | 1990-02-05 | 1990-02-05 | Штамм бактерий SнIGеLLа SoNNeI используемый дл приготовлени живой вакцины против дизентерии Зонне |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1708351A1 (ru) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997005899A3 (en) * | 1995-08-04 | 1997-05-29 | Univ Guelph | Novel vaccines and pharmaceutical compositions using membrane vesicles of microorganisms, and methods for preparing same |
| RU2241031C2 (ru) * | 2001-11-20 | 2004-11-27 | Сергеев Василий Васильевич | Штамм бактерий shigella sonnei, фаза 1, стабильный продуцент s-липополисахарида |
| US6916478B2 (en) | 1995-08-04 | 2005-07-12 | University Of Guelph | Vaccines and pharmaceutical compositions using membrane vesicles of microorganisms, and methods for preparing same |
| RU2467763C2 (ru) * | 2007-04-25 | 2012-11-27 | Те Юнайтид Стейтс Оф Америка Эз Репризентид Бай Те Секретри Оф Те Арми, Уолтер Рид Арми Инститьют Оф Рисерч | Комбинации из делеций генов для живых ослабленных вакцинных штаммов shigella |
-
1990
- 1990-02-05 SU SU904799475A patent/SU1708351A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Бела Ю.А., Бирковский Ю.Е., Милова- нова Л.П. и Д'р. Испытание безвредности, реактивности и имммуногенности живой дизентерийной вакцины Флехснера 2а и Зон- не из спонтанных мутантов. - Жур. микробиол. 1977, № 1, с.20-25. 'Nel. D.M.. Gangarosa E.I., Radoranovlc P. et.al. Studies on vaccination against bacillary dysentery. - Ball. Uno, 1971, Vol. 45. p. 457- 464. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997005899A3 (en) * | 1995-08-04 | 1997-05-29 | Univ Guelph | Novel vaccines and pharmaceutical compositions using membrane vesicles of microorganisms, and methods for preparing same |
| US6916478B2 (en) | 1995-08-04 | 2005-07-12 | University Of Guelph | Vaccines and pharmaceutical compositions using membrane vesicles of microorganisms, and methods for preparing same |
| RU2241031C2 (ru) * | 2001-11-20 | 2004-11-27 | Сергеев Василий Васильевич | Штамм бактерий shigella sonnei, фаза 1, стабильный продуцент s-липополисахарида |
| RU2467763C2 (ru) * | 2007-04-25 | 2012-11-27 | Те Юнайтид Стейтс Оф Америка Эз Репризентид Бай Те Секретри Оф Те Арми, Уолтер Рид Арми Инститьют Оф Рисерч | Комбинации из делеций генов для живых ослабленных вакцинных штаммов shigella |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0368966B1 (en) | Novel non-reverting shigella live vaccines | |
| US5210035A (en) | Non-reventing live vaccines | |
| Tacket et al. | Comparison of the safety and immunogenicity of delta aroC delta aroD and delta cya delta crp Salmonella typhi strains in adult volunteers | |
| Tacket et al. | Initial clinical studies of CVD 112 Vibrio cholerae O139 live oral vaccine: safety and efficacy against experimental challenge | |
| US7887816B2 (en) | Attenuated microorganisms for the treatment of infection | |
| US5643771A (en) | Non-reverting live bacterial vaccines | |
| US5387744A (en) | Avirulent microbes and uses therefor: Salmonella typhi | |
| US7005129B1 (en) | Non-toxic mutants of pathogenic gram-negative bacteria | |
| EP0018154B1 (en) | Vibrio cholerae mutants, vaccine comprising them, method for preparing a subunit therefrom and composition comprising it | |
| Kotloff et al. | Safety, immunogenicity, and efficacy in monkeys and humans of invasive Escherichia coli K-12 hybrid vaccine candidates expressing Shigella flexneri 2a somatic antigen | |
| EP0500699B1 (en) | Cross-protective salmonella vaccines | |
| JPH03117481A (ja) | 生菌ワクチン | |
| CA1241917A (en) | Oral vaccine for immunization against enteric disease | |
| JP2002514398A (ja) | Ｖｉ抗原を構成的に発現するＳａｌｍｏｎｅｌｌａの弱毒化した変異株 | |
| WO1997029768A1 (en) | Salmonella typhimurium vaccine | |
| Ahmed et al. | Protection of adult rabbits and monkeys from lethal shigellosis by oral immunization with a thymine-requiring and temperature-sensitive mutant of Shigella flexneri Y | |
| HU216449B (hu) | Eljárás legyengített baktérium előállítására | |
| KR100628657B1 (ko) | ＡｒｏＣ, ＯｍｐＦ 및 ＯｍｐＣ 유전자 각각에 비복귀돌연변이로 약독화된 백신에 유용한 박테리아 | |
| JP3601602B2 (ja) | 無毒性微生物及びその使用：サルモネラ | |
| Howard | A prototype live oral cholera vaccine | |
| SU1708351A1 (ru) | Штамм бактерий SнIGеLLа SoNNeI используемый дл приготовлени живой вакцины против дизентерии Зонне | |
| Clarke et al. | Galactose epimeraseless mutants of Salmonella typhimurium as live vaccines for calves | |
| Kärnell et al. | An auxotrophic live oral Shigella flexneri vaccine: development and testing | |
| Takasaka et al. | Experimental infection with Shigella sonnei in cynomolgus monkeys (Macaca irus) | |
| Agin et al. | STUDIES ON PREVENTION OF SALMONELLA CARRIAGE BY ORAL IMMUNIZATION OF POULTRY |