[go: up one dir, main page]

SU1700053A1 - Method of cattle leukosis virus cultivation - Google Patents

Method of cattle leukosis virus cultivation Download PDF

Info

Publication number
SU1700053A1
SU1700053A1 SU904811056A SU4811056A SU1700053A1 SU 1700053 A1 SU1700053 A1 SU 1700053A1 SU 904811056 A SU904811056 A SU 904811056A SU 4811056 A SU4811056 A SU 4811056A SU 1700053 A1 SU1700053 A1 SU 1700053A1
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
reproduction
methylcobalamin
virus
concentration
bovine
Prior art date
Application number
SU904811056A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Юозапас Адольфович Рачкус
Даля-Ирена Юозовна Адомайтене
София Ивановна Канопкайте
Original Assignee
Институт биохимии АН ЛитССР
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Институт биохимии АН ЛитССР filed Critical Институт биохимии АН ЛитССР
Priority to SU904811056A priority Critical patent/SU1700053A1/en
Application granted granted Critical
Publication of SU1700053A1 publication Critical patent/SU1700053A1/en
Priority to LTRP1338A priority patent/LT2570B/en

Links

Landscapes

  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относитс  к ветеринарной вирусологии и клеточной биотехнологии . Конкретно к способу культивировани  вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС), который может быть использован и приготовлении им- мунодиагностических и иммунопрофилак-. тических средств, а такгсе при проведении разного рода вирусологических и молекул рно-иммунологических исследований . Цель изобретени  - увеличение репродукции ВЛКРС. Дл  этого в культуралъную среду, содержащую среду Игла с 10% сыворотки крупного рогатого схота ввод т 596-диметилбензи- мицазолил-Сс-метилкобамидк- (метилко- баламин) в концентрации от 0,074-10 до 2, что позвол ет увеличить репродукцию вируса лейкоза на 30-50%. 1 та бл. -,-е о «This invention relates to veterinary virology and cellular biotechnology. Specifically, the method of cultivating bovine leukemia virus (VLKRS), which can be used in the preparation of immunodiagnostics and immunoprofilac-. tics, as well as when conducting various types of virological and molecular immunological studies. The purpose of the invention is to increase the reproduction of VLKRS. To do this, 596-dimethylbenzimizazolyl-Cc-methylcobamide- (methylcobalamin) in a concentration from 0.074-10 to 2 is introduced into the culture medium containing the Needle medium with 10% of the serum of the bovine skull in the concentration from 0.074-10 to 2, which allows increasing the reproduction of leukemia virus by 30-50%. 1 that bl. -, - e o "

Description

Изобретение относитс  к ветеринарной вирусологии к клеточной биотехнологии , в частности к способу культи-- варовани  вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС ),, который может быть использован в приготовлении имму- нодиагностических и иммуноггрофилакти- ческих средств, а также при проведении разного характера вирусологических и молекул рно-иммунологических исследований .The invention relates to veterinary virology to cell biotechnology, in particular, to the method of cultivating the bovine leukemia virus (VLKRS), which can be used in the preparation of immunodiagnostic and immunogroprophylactic agents, as well as when conducting different types of virological and molecular and immunological studies.

Цель изобретени  - увеличение репродукции вируса пейкоза крупного рогатого скота.The purpose of the invention is to increase the reproduction of the cattle peykose virus.

Дл  этого при осуществлении способа репродукции вируса лейкоза в клеточной культуре к питательной среде Игла, содержащей 10% сыворотки крупного рогатого скота, добавл ют 5,6-диметилбекзимидазслил-Со-метилкобамид (метилкобаламин) г- концентрации от 0507i- 2.5- (.To accomplish this, in carrying out the method of reproducing leukemia virus in cell culture, 5,6-dimethyl bezimidazlyl-Co-methylcobamide (methylcobalamin) g - from 0507i-2.5- (.) Is added to the nutrient medium Eagle, containing 10% bovine serum.

П р п м ер. Дл  изучени  стимулгг- рующен активности метилкобаламина на репрод} Ki .iTio вируса лейкоза крупного рогатого скота используют линию клеток FLK.Pr p m er. To study the stimulatory activity of methylcobalamin on the repro} Ki. ITio bovine leukemia virus, the FLK cell line is used.

Перед пассажем нее культуры просматривают под микроскопом и определ ют количество клеток при помощи камеры Горлова. Тп ттого клетки отделчыт. от мочосло  подогретьм до 37 С 0,25%-ным раствором трипсина, содержащим 0,025%-ньй раствор верее- на (1:1 трипсин сливают, а клетки ресуспечдкруюг Б свежей среде роста (2-3 х 10 клеток/матрас), содержащей 10% сыворотки кровч крупного ро-к|Before passage, cultures are examined under a microscope and the number of cells is determined using a Gorlov camera. Tp ctoy cells otdelchyt. warm up to 37 ° C with a 0.25% trypsin solution containing a 0.025% solution of verien (1: 1 trypsin is drained and cells of the resuspension B fresh growth medium (2-3 x 10 cells / mattress) containing 10% serum blood large ro-k |

ОABOUT

ЈЛЈЈ

DODo

гатого скота и антибиотики (пенициллин , 100 ед/мл, стрептомицин, 100 ед/мл). Клетки инкубируют при 37 °С. Перевивки провод т через каж- дые 5-6 дней. Из одной материнской культуры готов т несколько дочерних. Растворы метилкобаламина готов т на физиологическом растворе.; автокла- вируют при 0,5 атм в течение 30 мин и ввод т в культуралънуго среду (обычно 1-2 мл) до конечных концентраций: 0,074-10 6Н; 0}}7-10 бМ; 0374. 2,5 1 11 и 5,0- . Культуры выращивают при 37°С в течение 5-6 дней. chickens and antibiotics (penicillin, 100 units / ml, streptomycin, 100 units / ml). Cells are incubated at 37 ° C. Perevivki carried out every 5-6 days. Several children are prepared from one maternal culture. Methylcobalamin solutions are prepared with physiological saline .; autoclave at 0.5 atm for 30 min and injected into a culture medium (usually 1-2 ml) to final concentrations: 0.074-10 6H; 0}} 7-10 BM; 0374. 2.5 1 11 and 5.0-. Cultures are grown at 37 ° C for 5-6 days.

Параллельно провод т контрольные опыты с той хе культурой по известному способу, без добавлени  метил кобаламипов в среду роста,In parallel, control experiments were carried out with the same culture by a known method, without adding methyl cobalamips to the growth medium,

Через 5 суток культурачьпую жид- кость из всех сосудов сливают, образовавшийс  монослой обрабатывают 0,25%-нмм раствором трипсина, содер- жа щим 0,025%-НЕ 1Й раствор в ер сена, развод т раствором Хенкса и подсчиты- вают количество клеток в камере Го- р ева,After 5 days, the culture liquid was drained from all the vessels, the resulting monolayer was treated with a 0.25% -in-trypsin solution containing 0.025% -NON 1J solution in ersen, diluted with Hanks solution and counted Gorea,

В культуральной жидкости определ ют вируспродуцируницую активность культуры путем измерени  ревертазной активности.In the culture fluid, the virus production activity of the culture is determined by measuring the revertase activity.

Дл  этого культуральную жидкость 1 (обычно в объеме 20-23 мл) осветл ют путем центрифугировани  в течениеFor this, the culture fluid 1 (usually in a volume of 20-23 ml) is clarified by centrifuging for

в сцинтилл ционном счетчике SL-30.in the SL-30 scintillation counter.

tt

Величина полученной радиоактивности характеризует ревертазную активность анализируемого аликвота вирусного лизата. Чем выше радиоактивность, тем более лизат активен в отношении ревертазы. Поскольку из литературы известно, что ревертазна  активность (она определ етс  по величине радиоактивности ) коррелирует с количеством вирусных частиц, то на основании величин радиоактивности можно высчитать и количество образовавшихс  вирусных частиц в контрольных вируспродуцирую- щнх культурах и в культурах, росших в присутствии стимул тора - метилкобаламина в разных концентраци х. Данные так-ix определении приведены в таблице.The magnitude of the radioactivity obtained characterizes the revertase activity of the viral lysate aliquot analyzed. The higher the radioactivity, the more lysate is active against revertase. Since it is known from the literature that the reverse activity (it is determined by the amount of radioactivity) correlates with the number of virus particles, based on the values of radioactivity, it is possible to calculate the number of virus particles generated in control virus-producing cultures and in the presence of the stimulator. methylcobalamin in various concentrations. Data so-ix definitions are given in the table.

Радиоактивность контрольных вирусных лизатов прин та за 100%, т.е. соответствует 39528 имп/мин. Поскольку радиоактивность з вируспродуцирую- щих культурах, росших в присутствии метилкобаламина, выше, то соответственно и процентна  величина вырастает Видно, что стимул ци  образовани  ,вирусных частиц в присутствии в среде метилкобаламина начинаетс  уже при началы-ой концентрации 0,074-1 О М и перестает расти при концентрации 5,. Итак, наиболее эффективные концентрации метилкобаламина з питаThe radioactivity of the control viral lysates was taken as 100%, i.e. corresponds to 39528 imp / min. Since the radioactivity of virus-producing cultures grown in the presence of methylcobalamin is higher, the percentage increases accordingly. It can be seen that stimulation of the formation of viral particles in the presence of methylcobalamin in the medium begins already at the beginning concentration of 0.074-1 O M and stops growing at a concentration of 5 ,. So, the most effective concentrations of methylcobalamin

30 мин при 5000 об/мин при 4 С, Вирус т,- тельной среде при образовании вирусных30 min at 5,000 rpm at 4 ° C, Virus t, an active medium during the formation of viral

10ten

4545

осаждают центрифугированием уже обработанной жидкости в течение 40 мин при 30000 об/мин при 4°С над 20%-ной сахарозой, приготовленной в 0,01 1 буфере, рН 7,5, содержащем 0,1 М NaCl и 0,001 М ЭДТА.precipitated by centrifuging the already treated liquid for 40 minutes at 30,000 rpm at 4 ° C over 20% sucrose prepared in 0.01-1 buffer, pH 7.5, containing 0.1 M NaCl and 0.001 M EDTA.

Собранные вирусы i00 мкл лизируют в течение 20 мин при 2°0 в 0S01 M трис-HCl буфере, рН 7,8, содержащем 0,008 Н дитиотреитол, 0,2% тритона Х-100 и провод т ревертазную реакцию. Дл  этого 10 мкл вирусного лизата прибавл ют 90 мкл смеги, содержащей 0,05 И трио-ИГЛ бусЬер, рН 7,8, 0,002 М дитиотреитол, 0,025% тритон Х-100, ,, 0,25 ед/мл полкА-олигоТу0.(0, 0,008 ММр,СПг ч /3П/тимидинтрифосфат (74 па пробу), инкубируют 30 мин при ЗГ)°С. Ревертазную реакцию останавливают добавле| ием трпхлорукгусной кислоты до к H j4Hon концентрации 7,5%. Осадок нанос т на мембранные ультрафильтры С.ыттор (диаметр пор 0,9 MiO и измер ют радиоактивностьCollected i00 µl viruses were lysed for 20 minutes at 2 ° 0 in 0S01 M Tris-HCl buffer, pH 7.8, containing 0.008 N dithiothreitol, 0.2% Triton X-100, and carried out a revertase reaction. For this, 10 µl of the viral lysate was added 90 µl of smeghe containing 0.05 And trio-IGL beads, pH 7.8, 0.002 M dithiothreitol, 0.025% Triton X-100, ,, 0.25 U / ml polka-oligoTu0. (0, 0.008 MMR, CGH / 3P / thymidine triphosphate (74 pastes sample), incubated for 30 minutes at MH) ° C. Reversal reaction is stopped by addition | The addition of terplochloric acid to a concentration of 7.5% H j4Hon. The precipitate is deposited on the membrane ultrafilters of S. Syttor (pore diameter of 0.9 MiO and radioactivity is measured

частиц  вл ютс  от 0,3/.. 10 °до 2,5 х... За пределами указанных концентраций , т.е. культиваци  вирусной культуры при более высоких концентраци х метилкобаламина нецелесообразна, .поскольку выход вируса не повышаетс , а расходы метилкобаламина повышаютс , что экономически не выгодно.particles are from 0.3 / .. 10 ° to 2.5 x ... Outside of the indicated concentrations, i.e. cultivating a viral culture at higher concentrations of methylcobalamin is impractical, because the virus yield does not increase, and the costs of methylcobalamin increase, which is not economically profitable.

Таким образом, введение метилкобаламина в питательную среду Игла с 10% сыворотки крупного рогатого скота позвол ет увеличить репродукцию вируса лейкоза на 30-50% по сравнению с прототипом , а тем же самым и уменьшить материальные расходы при накоплении вирусного материала.Thus, the introduction of methylcobalamin into the nutrient medium Needle with 10% bovine serum allows an increase in the reproduction of the leukemia virus by 30-50% compared with the prototype, and by the same to reduce the material costs during accumulation of viral material.

ФормулаFormula

и з оand h

б р е тbreet

и  and

5555

Ј. Спссоб культивировани  вчтэуса лейкоза крупного рогатого скота, путем инкуб;ттвани  вируспродуцирующей культуры г питательной среле Пглз с до- бавлел нем сыворотки крови крупногоЈ. By cultivating bovine leukemia in cattle by incubating a virus-producing culture of nutrient medium Pglz with the addition of large-sized blood serum

тельной среде при образовании вирусныхenvironment in the formation of viral

частиц  вл ютс  от 0,3/.. 10 °до 2,5 х... За пределами указанных концентраций , т.е. культиваци  вирусной культуры при более высоких концентраци х метилкобаламина нецелесообразна, .поскольку выход вируса не повышаетс , а расходы метилкобаламина повышаютс , что экономически не выгодно.particles are from 0.3 / .. 10 ° to 2.5 x ... Outside of the indicated concentrations, i.e. cultivating a viral culture at higher concentrations of methylcobalamin is impractical, because the virus yield does not increase, and the costs of methylcobalamin increase, which is not economically profitable.

Таким образом, введение метилкобаламина в питательную среду Игла с 10% сыворотки крупного рогатого скота позвол ет увеличить репродукцию вируса лейкоза на 30-50% по сравнению с прототипом , а тем же самым и уменьшить материальные расходы при накоплении вирусного материала.Thus, the introduction of methylcobalamin into the nutrient medium Needle with 10% bovine serum allows an increase in the reproduction of the leukemia virus by 30-50% compared with the prototype, and by the same to reduce the material costs during accumulation of viral material.

ФормулаFormula

и з оand h

б р е тbreet

и  and

Ј. Спссоб культивировани  вчтэуса лейкоза крупного рогатого скота, путем инкуб;ттвани  вируспродуцирующей культуры г питательной среле Пглз с до- бавлел нем сыворотки крови крупногоЈ. By cultivating bovine leukemia in cattle by incubating a virus-producing culture of nutrient medium Pglz with the addition of large-sized blood serum

рогатого скота, отличагощи й- с   тем, что, с целью увеличени  репродукции вируса, в питательную среду дополнительно ввод т 5,6-ди2 , Способ по п. 1, о т л и ч a re in и и с   тем, что, с целью удешев лени , 5,6-днметиттбензимидазолил-Со метилкобамид ввод т в концентрацииin cattle, the difference is that, in order to increase the reproduction of the virus, 5,6-di2 is additionally introduced into the nutrient medium, the method according to claim 1, and t in order to reduce the cost of idleness, 5,6-dnametitbenzimidazolyl-Co methylcobamide is administered in a concentration of

метилбензимидазолил-Со-метилкобамид. 0,074.,.methylbenzimidazolyl-Co-methylcobamide. 0.074.,.

Репродукци  вирусных частиц лейкоза крупного рогатого скота в контрольных и обработанных метилкобаламином культурах (% по сравнению с известным способом)Reproduction of viral particles of bovine leukemia in controls and treated with methylcobalamin cultures (% compared with the known method)

Радиоактивность, имп/мин39528Radioactivity, counts / min39528

4383743837

Репродукци  вирусных частиц , в %Reproduction of viral particles, in%

100,0110,9100,0110.9

2, Способ по п. 1, о т л и ч a rein и и с   тем, что, с целью удешевлени , 5,6-днметиттбензимидазолил-Со- метилкобамид ввод т в концентрации2, the method according to claim 1, about tl and h a rein, and so that, in order to reduce the cost, 5,6-dimetitbenzimidazolyl-co-methylcobamide is administered in

0,074.,.0.074.,.

52849 54668 59925 5945152849 54668 59925 59451

133,7138,3151,6150,4133,7138,3151,6150,4

Claims (2)

Формула изобретенияClaim I. Способ культивирования вируса лейкоза крупного рогатого скота, путемI. Method of cultivation of bovine leukemia virus, by ин ку бкр о в а н ия в ир у спр од ут «кр утоще й к ул ьтуры в питательной среде Игла с добавлением сыворотки крови крупногоInk bkr ovnIa i ir sph iod u kr utosche k yuli u rutura in a nutrient medium Eagle with the addition of blood serum from a large 5five 17000531700053 66 рогатого скота, отличают и Γιο я тем, что, с целью увеличения репродукции вируса, в питательную среду дополнительно вводят’ 5,6-диметилбензимидазолил-Со-метилкобамид.cattle are also distinguished by the fact that, in order to increase the reproduction of the virus, 5,6-dimethylbenzimidazolyl-Co-methylcobamide is additionally introduced into the nutrient medium. 2. Способ по π. 1, о т л и ч а тощий с я тем, что, с целью удешевления, 5,6-диметилбензимидазолил-Сометилкобамид вводят в концентрации 0,074 1 0~е-2,5 . КГ6М.2. The method according to π. 1, that is, with the fact that, in order to reduce the cost, 5,6-dimethylbenzimidazolyl-Somethylcobamide is administered in a concentration of 0.074 1 0 ~ e -2.5. KG 6 M. Репродукция вирусных частиц лейкоза крупного рогатого скота в контрольных и обработанных метилкобаламином культурах (% по сравнению с известным способом)Reproduction of viral particles of bovine leukemia in control and treated with methylcobalamin cultures (% compared with the known method) Концентрация метилкобаламина,Methylcobalamin concentration Мх10б Mh10 b 0,00 0.00 0,074 0.074 0,37 0.37 0,74 0.74 2,5 2.5 5,0. 5.0. Радиоактивность, имп/мин Radioactivity, counts / min 39528 39528 43837 43837 52849 52849 54668 54668 59925 59925 59451 59451 Репродукция вирусных частиц, в.% Reproduction of viral particles, c.% 100,0 100.0 110,9 110.9 133,7 133.7 138,3 138.3 151,6 151.6 150,4 150.4
SU904811056A 1990-02-23 1990-02-23 Method of cattle leukosis virus cultivation SU1700053A1 (en)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU904811056A SU1700053A1 (en) 1990-02-23 1990-02-23 Method of cattle leukosis virus cultivation
LTRP1338A LT2570B (en) 1990-02-23 1993-09-30 LARGE RAGUOCIU LEUKOSES VIRUS CULTIVATION WAY

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU904811056A SU1700053A1 (en) 1990-02-23 1990-02-23 Method of cattle leukosis virus cultivation

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU1700053A1 true SU1700053A1 (en) 1991-12-23

Family

ID=21506565

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU904811056A SU1700053A1 (en) 1990-02-23 1990-02-23 Method of cattle leukosis virus cultivation

Country Status (1)

Country Link
SU (1) SU1700053A1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2575797C2 (en) * 2014-01-09 2016-02-20 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") Bioadditive to nutrient medium for cultivation of animal cells and reproduction of viruses on thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Методы культивировани клеток,, Л., Наука, 1988, с. 47-62. Интеграционные вирусы,, Рига, Зинатне, 1985, с. 44-49, *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2575797C2 (en) * 2014-01-09 2016-02-20 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") Bioadditive to nutrient medium for cultivation of animal cells and reproduction of viruses on thereof

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4024020A (en) Method of cell culture on polyacrylonitrile surface
Sarma et al. Evidence for the in vitro transfer of defective Rous sarcoma virus genome from hamster tumor cells to chick cells.
CN101979518A (en) Method for preparing pseudorabies virus
CA1175745A (en) Methods of producing hb sag
Gardner The use of tricine buffer in animal tissue cultures
US3887430A (en) Culture medium for tissue culture techniques
CN108866013A (en) A method of large-scale production slow virus
Hohl et al. Nutrition of cellular slime molds I: growth on living and dead bacteria
CN112094814B (en) Method for preparing adenovirus vector vaccine by perfusion culture process
Vonka et al. Some properties of the soluble (S) antigen of cultured lymphoblastoid cell lines
US4169761A (en) Process for the cultivation of viruses
SU1700053A1 (en) Method of cattle leukosis virus cultivation
EP0028567B1 (en) Method of preparing hepatitis b surface antigen
ES2341352T3 (en) PROCEDURE FOR THE PREPARATION OF VIRIC MATERIAL.
CN117070476B (en) Bovine herpesvirus 4 strain and application thereof in preparation of inactivated vaccine
CN106635891A (en) Special rapid mycoplasmabovis culture medium and mycoplasmabovis separation and purification method
Wu et al. Comparisons of microcarrier cell culture processes in one hundred mini-liter spinner flask and fifteen-liter bioreactor cultures
CN102327609A (en) Production method of encephalitis B vaccine
JPH01101882A (en) Cultivation of mammalian cells
RU2837911C1 (en) Serum-free nutrient medium for cultivation of transplantable cells of animal origin and accumulation of mammalian viruses
JP3641123B2 (en) Virus or cell culture method
RU2053294C1 (en) Method of cultivation of bifidobacteria
SU984214A1 (en) Line of re-grafted spleen cells of adult green marmoset 455 used for culturing viruses
SU1691391A1 (en) Method of fibroblast cultivation
SU872547A1 (en) Method o cell culturing