SU1666956A1 - Method for determination of ethanol concentration in biological material and in expired air - Google Patents
Method for determination of ethanol concentration in biological material and in expired air Download PDFInfo
- Publication number
- SU1666956A1 SU1666956A1 SU894658456A SU4658456A SU1666956A1 SU 1666956 A1 SU1666956 A1 SU 1666956A1 SU 894658456 A SU894658456 A SU 894658456A SU 4658456 A SU4658456 A SU 4658456A SU 1666956 A1 SU1666956 A1 SU 1666956A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- ethanol
- biological material
- concentration
- exhaled air
- sensitivity
- Prior art date
Links
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 60
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 239000012620 biological material Substances 0.000 title claims abstract description 7
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims abstract description 7
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims abstract description 5
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 238000004821 distillation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 10
- 238000005375 photometry Methods 0.000 claims description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims 1
- 208000007848 Alcoholism Diseases 0.000 abstract description 2
- 201000007930 alcohol dependence Diseases 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 9
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010020056 Hydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Способ определени концентрации этанола в биологическом материале и выдыхаемом воздухе относитс к области медицины, в частности к судебно-медицинской экспертизе дл определени степени опь нени и диагностики предрасположенности к алкоголизму. С целью повышени чувствительности и точности способа при работе с биологическим материалом его предварительно подвергают микроперегонке, пробу внос т в раствор, содержащий НАД, алкогольдегидрогеназу из сем н пшеницы, иоднитротетразолий фиолетовый с последующим спектрофотометрированием. При определении этанола в выдыхаемом воздухе последний барботируют через указанный раствор. Использование изобретени позвол ет повысить чувствительность определени этанола до 10 - 12 раз. 2 з.п. ф-лы, 2 табл.The method of determining the concentration of ethanol in biological material and exhaled air relates to the field of medicine, in particular, to forensic examination to determine the degree of exertion and diagnose a predisposition to alcoholism. In order to increase the sensitivity and accuracy of the method when working with biological material, it is preliminarily subjected to micro distillation, the sample is introduced into a solution containing NAD, wheat seed alcohol dehydrogenase, iodnitrotetrazolium violet, followed by spectrophotometry. When determining ethanol in exhaled air, the latter is bubbled through the solution. The use of the invention makes it possible to increase the sensitivity of the determination of ethanol up to 10 to 12 times. 2 hp f-ly, 2 tab.
Description
Изобретение относитс к медицине, а именно к способам судеоно-медицинской экспертизы, диагностики предрасположенности к алкоголизму, и может быть использовано наркологической службой.The invention relates to medicine, in particular to methods of medical examination, diagnosis of predisposition to alcoholism, and can be used by the narcological service.
Цель изобретени - повышение чувствительности и точности определени этанола в биологическом материале и выдыхаемом воздухе.The purpose of the invention is to increase the sensitivity and accuracy of the determination of ethanol in biological material and exhaled air.
Способ осуществл ют следующим образом .The method is carried out as follows.
Биологический материал предварительно подвергают микроперегонке. В раствор, содержащий 0,1 М, рН 10, глицин/№ОН-бу- фер, водный раствор НАД (24 Mr/мл) и иоднитротетразолий фиолетовый, внос т перегнанную пробу и раствор алкогольде- гидрогеназы (активность фермента составл ет около 24 ME) из сем н пшеницы сBiological material is pre-subjected to micro-distillation. To a solution containing 0.1 M, pH 10, glycine / NON-buffer, an aqueous solution of NAD (24 M / ml) and iodnitrotetrazolium violet, bring the distilled sample and the solution of alcohol-hydrogenase (the enzyme activity is about 24 ME) from wheat seeds with
последующим фотометрированием при длине волны 510 нМ.subsequent photometry at a wavelength of 510 nM.
При определении этанола в выдыхаемом воздухе последний барботируют через раствор, содержащий 0,1 М глицин/NaOH- буфер, рН 10, алкогольдегидрогеназу из сем н пшеницы, НАД. Затем ввод т иоднитротетразолий фиолетовый. Реакцию останавливают через 10 мин 0,2 М сол ной кислотой и производ т фотометрирование при той же длине волны.In the determination of ethanol in exhaled air, the latter is bubbled through a solution containing 0.1 M glycine / NaOH buffer, pH 10, an alcohol dehydrogenase from wheat seeds, NAD. Then iodnitrotetrazolium violet is administered. After 10 minutes, the reaction is stopped with 0.2 M hydrochloric acid and photometry is performed at the same wavelength.
П р и м е р 1. Определение этанола в сы.юротке крови.PRI me R 1. Determination of ethanol in the syr blood.
Предварительно путем микроперегонки отдеп ют этанол от сыворотки. Дл этого 3 мл сыворотки помещают в пенициллиновый флакон. Туда же помещают стекл нные или пластмассовые открытые капсулы, объемом 0,8-1 мл, так чтобы верхний слой капсулы был на 4-5 мл выше уровн сыворотки воEthanol is then separated from serum by micro-distillation. To do this, 3 ml of serum is placed in a penicillin vial. Glass or plastic open capsules, 0.8-1 ml in volume, are placed there, so that the top layer of the capsule is 4-5 ml above the serum level
ОABOUT
о о ел сoh ate with
флаконе. В капсулы опускают наконечники охлаждающей системы. Нагревают флаконы на вод ной бане при 80°С в течение 1 ч. Пары летучих жидкостей, включа этанол, конденсируютс на охлаждающих наконечниках микроперегонки и стекают в капсулу, объем конденсата в капсуле достигает 0,3- 0,5 мл. При этом достигаетс отделение этанола от белков и многих других веществ сыворотки крови, а также его концентрирование . Измер ют точный объем собранного конденсата в капсуле. Подготовленна проба может хранитьс в закрытой капсуле несколько дней.vial. In the capsules lower tips of the cooling system. The vials are heated in a water bath at 80 ° C for 1 hour. Vapors of volatile liquids, including ethanol, are condensed on micro-distillation cooling tips and flow into the capsule, the volume of condensate in the capsule reaches 0.3-0.5 ml. This achieves the separation of ethanol from proteins and many other substances in the blood serum, as well as its concentration. The exact volume of collected condensate in the capsule is measured. The prepared sample may be stored in a closed capsule for several days.
Стро т калибровочную кривую. Дл этого определ ет зависимость начальной активности приготовленного перед измерением раствора алкогольдегидрогеназы от концентрации стандартных растворов этанола .Build a calibration curve. For this, it determines the dependence of the initial activity of the alcohol dehydrogenase solution prepared before measurement on the concentration of standard ethanol solutions.
Раствор алкогольдегидрогеназы перед употреблением готов т растворением лио- филизированного препарата из расчета 20 мг на 1 мл бидистиллированной воды (активность фермента составл ет около 24 ME).The alcohol dehydrogenase solution before use is prepared by dissolving the lyophilized preparation at the rate of 20 mg per 1 ml of bidistilled water (enzyme activity is about 24 IU).
Активность фермента определ ют следующим образом.Enzyme activity is determined as follows.
В спектрофотометрическую кювету внос т 1,1 мл М, рН 10, глицин/№ОН-буферно- го раствора, 0,1 мл 36 мМ водного раствора НАД (24 мг/мл), 0,1 мл иоднитротетразоли- евого фиолетового с исходной концентрацией 3,8 мг/мл и 0,2 мл раствора этанола с известной концентрацией от 0,75 до 75 мМ. Реакцию инициируют введением 0,2 мл раствора алкогольдегидрогеназы. Измерение оптической плотности фиксируют при длине волны 510 нм на спектрофотометре или фо- тоэлектрокалориметре.1.1 ml of M, pH 10, glycine / NOH-buffer solution, 0.1 ml of 36 mM aqueous solution of NAD (24 mg / ml), 0.1 ml of iodnitrotetrazolium violet with initial concentration of 3.8 mg / ml and 0.2 ml of ethanol solution with a known concentration of from 0.75 to 75 mm. The reaction is initiated by the introduction of a 0.2 ml solution of alcohol dehydrogenase. Measurement of optical density is fixed at a wavelength of 510 nm on a spectrophotometer or photoelectrocalorimeter.
Дл определени содержани этанола в сыворотке крови определ ют активность ал-, коголыидрогеназы аналогично описанному , но вместо раствора этанола с известной концентрацией ввод т в кювету 0,2 мл стю- на из капсулы. По калибровочной кривой наход т концентрацию этанола в кювете. Затем рассчитывают концентрацию этанола в сыворотке крови по формулеTo determine the content of ethanol in the serum, the activity of al-, cohoid hydrogenase is determined in the same way as described, but instead of a solution of ethanol with a known concentration, 0.2 ml of the stean from the capsule is introduced into the cuvette. The calibration curve is the concentration of ethanol in the cuvette. Then calculate the concentration of ethanol in the serum according to the formula
(ЭТАНОЛ)сыворотки С А/В,(ETHANOL) serum C A / B,
(D(D
где А - коэффициент разведени отгона в кювете;where a is the dilution ratio of the distillate in a cuvette;
С - концентраци этанола, определенна по калибровочному графику;C is the concentration of ethanol determined from the calibration graph;
В - коэффициент концентрировани при отгоне этанола из сыворотки равный отношению объема вз той сыворотке к объему отгона в капсуле.B is the concentration coefficient for ethanol distilled off from serum equal to the ratio of the volume of serum taken to the volume of distillate in the capsule.
П р и м е р 2. Определение этанола в выдыхаемом воздухе.PRI mme R 2. Definition of ethanol in exhaled air.
Дл определени этанола в выдыхаемом воздухе последний медленно барботируют через раствор, содержащий 2 мл 0,1 М глицин/МаОН-буфер рН 10, в котором растворены 1 мг алкогольдегидрогеназы и 2 мг НАД. Объем барботируемого воздуха равен 1 литру (можно брать 2 или 3 л). Затем ввод тTo determine the ethanol in the exhaled air, the latter is slowly bubbled through a solution containing 2 ml of 0.1 M glycine / NaOH buffer pH 10, in which 1 mg of alcohol dehydrogenase and 2 mg of NAD are dissolved. The volume of air bubbled is 1 liter (you can take 2 or 3 liters). Then enter
0,05 мл 5,4 мг/мл иоднитротетразолиевого фиолетового. Реакцию останавливают через 10 мин 0,2 М сол ной кислотой. Контролем служит пробирка, содержаща аналогичные реагенты, через которую воздух не барботировали.0.05 ml 5.4 mg / ml iodnitrotetrazolievogo violet. After 10 minutes, the reaction is stopped with 0.2 M hydrochloric acid. The control is a tube containing similar reagents through which air is not sparged.
Расчет концентрации этанола проводили по формулеThe calculation of the concentration of ethanol was carried out according to the formula
2020
(ЭТАНОЛ) ( Рунтр ) 6.57 (ETHANOL) (Runcr) 6.57
мкг/л воздуха,mcg / l of air,
(2),(2)
где Оопыт и Оконтр - оптические плотности раствора в опытной и контрольной пробах при 510 нм;where Oyp and Oktrr - optical density of the solution in the experimental and control samples at 510 nm;
V - общий объем барботируемого через индикаторный раствор выдыхаемого воздуха;V is the total volume of expiratory air bubbled through the indicator solution;
6,57 - коэффициент пересчета 1 мкг этанола на 1 л выдыхаемого воздуха.6.57 - conversion factor of 1 μg of ethanol per 1 liter of exhaled air.
При наличии этанола в выдыхаемом воздухе раствор окрашиваетс в красный цвет, окраска которого при фиксации сол ной кислотой может сохран тьс в течение 4-6 недель при сохранении в темноте при +4°С. Данные приведены в табл. 1-2. Предложенный способ позвол ет повысить чувствительность определени этанола до 10-12 раз.In the presence of ethanol in exhaled air, the solution is colored red, the color of which, when fixed with hydrochloric acid, can be maintained for 4-6 weeks while being kept in the dark at + 4 ° C. The data are given in table. 1-2. The proposed method allows to increase the sensitivity of the determination of ethanol up to 10-12 times.
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU894658456A SU1666956A1 (en) | 1989-01-29 | 1989-01-29 | Method for determination of ethanol concentration in biological material and in expired air |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU894658456A SU1666956A1 (en) | 1989-01-29 | 1989-01-29 | Method for determination of ethanol concentration in biological material and in expired air |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1666956A1 true SU1666956A1 (en) | 1991-07-30 |
Family
ID=21432324
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU894658456A SU1666956A1 (en) | 1989-01-29 | 1989-01-29 | Method for determination of ethanol concentration in biological material and in expired air |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1666956A1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4443142A1 (en) * | 1994-12-03 | 1996-06-05 | Draegerwerk Ag | Procedure for determining the alcohol concentration in exhaled air |
| RU2321846C1 (en) * | 2007-02-06 | 2008-04-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Воронежская государственная технологическая академия (ВГТА) | Method for determining micro-concentrations of ethyl spirits in steam-gas mixtures |
| RU2438131C1 (en) * | 2010-04-27 | 2011-12-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-технический центр "КАСИБ" | Method for secret remote estimation of content of alcohol in blood of subject |
-
1989
- 1989-01-29 SU SU894658456A patent/SU1666956A1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Кочетов Г. А. Практическое руководство по энзимологии.- М.: Высша школа, 1980, с. 179-181. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4443142A1 (en) * | 1994-12-03 | 1996-06-05 | Draegerwerk Ag | Procedure for determining the alcohol concentration in exhaled air |
| DE4443142C2 (en) * | 1994-12-03 | 1998-10-08 | Draegerwerk Ag | Procedure for determining the alcohol concentration in exhaled air |
| RU2321846C1 (en) * | 2007-02-06 | 2008-04-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Воронежская государственная технологическая академия (ВГТА) | Method for determining micro-concentrations of ethyl spirits in steam-gas mixtures |
| RU2438131C1 (en) * | 2010-04-27 | 2011-12-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-технический центр "КАСИБ" | Method for secret remote estimation of content of alcohol in blood of subject |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Foster et al. | A single-reagent manual method for directly determining urea nitrogen in serum | |
| Apstein et al. | Improved automated lactate determination | |
| Neeld Jr et al. | Macro-and micromethods for the determination of serum vitamin A using trifluoroacetic acid | |
| Gottfried et al. | Improved manual spectrophotometric procedure for determination of serum triglycerides | |
| Lundquist | The determination of ethyl alcohol in blood and tissues | |
| Eberts et al. | A simplified, colorimetric micromethod for xylose in serum or urine, with phloroglucinol. | |
| Singer et al. | Determination of fluoride in blood serum | |
| US7772006B2 (en) | Agent detection and/or quantitation in a biological fluid | |
| BOCK et al. | AN EXAMINATION OF THE FOLIN-FARMER METHOD FOR THE COLORIMETRIC ESTIMATION OF NITROGEN. | |
| SU1666956A1 (en) | Method for determination of ethanol concentration in biological material and in expired air | |
| Jain et al. | Analysis of alcohol I. A review of chemical and infrared methods | |
| CN112986166B (en) | Method for detecting quality fluctuation of zedoary turmeric oil injection | |
| Roman et al. | Fluorometric assay for urea in urine, plasma, and tubular fluid | |
| US20070196927A1 (en) | Method For Qualitative And/Or Quantitative Detection Of Polyethylene Glycols In Biological Fluids | |
| CA1279007C (en) | Precipitation reagent and fluorescence polarization immunoassay using same | |
| Kitazima et al. | Determination of serum bile acids and its use as a hepatic function test | |
| Lehmann | A micromethod for the determination of para-aminosalicylic acid (PAS) in blood, urine and other biological fluids | |
| RU2140637C1 (en) | Method of diagnosis of poisoning with narcotics | |
| RU2070720C1 (en) | Method of cerucal quantitative determination | |
| JPH08145991A (en) | Method for determining infection of microbe with urease activity | |
| SU1596249A1 (en) | Method of differential diagnosis of hemorrhagic and ischemic insult | |
| Kynast et al. | Rapid specific determination of amniotic fluid lecithins as a test of fetal lung maturity | |
| SU1399689A1 (en) | Method of diagnosis of hidden hepatic pathology after virus hepatitis | |
| RU2118821C1 (en) | Method of assay of glycaemia level | |
| RU2473902C1 (en) | Gas chromatography method for assessment of oropharyngeal disbiotic conditions in children |