SU1110443A1 - Способ диагностики острой стадии вирусного гепатита - Google Patents
Способ диагностики острой стадии вирусного гепатита Download PDFInfo
- Publication number
- SU1110443A1 SU1110443A1 SU802960884A SU2960884A SU1110443A1 SU 1110443 A1 SU1110443 A1 SU 1110443A1 SU 802960884 A SU802960884 A SU 802960884A SU 2960884 A SU2960884 A SU 2960884A SU 1110443 A1 SU1110443 A1 SU 1110443A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- acute stage
- viral hepatitis
- diagnosis
- enzyme
- virus hepatitis
- Prior art date
Links
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 title claims abstract description 10
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 7
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 claims 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N pyridoxal 5'-phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP(O)(O)=O)C(C=O)=C1O NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 3
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 3
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 235000007682 pyridoxal 5'-phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000011589 pyridoxal 5'-phosphate Substances 0.000 description 2
- 229960001327 pyridoxal phosphate Drugs 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- TYEYBOSBBBHJIV-UHFFFAOYSA-N 2-oxobutanoic acid Chemical compound CCC(=O)C(O)=O TYEYBOSBBBHJIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-STHAYSLISA-N D-threonine Chemical compound C[C@H](O)[C@@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-STHAYSLISA-N 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 101001083553 Homo sapiens Hydroxyacyl-coenzyme A dehydrogenase, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 108090001042 Hydro-Lyases Proteins 0.000 description 1
- 102000004867 Hydro-Lyases Human genes 0.000 description 1
- 102100029107 Long chain 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- BOPGDPNILDQYTO-NDOGXIPWSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2r,3r,4r,5r)-5-(3-carbamoyl-4h-pyridin-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl hydrogen phosphate Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NDOGXIPWSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ОСТРОЙ СТАДИИ ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА путем исследовани ферментативной активности сыворотки крови, отличающийс тем, что, с целью повьшени точности способа, определ ют активность фермента L -треонин- L, -серин-дегидротазы и при её наличии диагностируют острую стадию вирусного гепатита.
Description
в
N( «
00 Изобретение относитс к клинической биохимии, в частности к энзимодиагностике заболеваний печени. Известен способ диагностики острой стадий вирусного гепатита путем исследовани ферментативной активнос ти сьгооротки крови Однако известный способ характери зуетс недостаточной точностью из-за относительной неспецифичности определ емых ферментов, так как они присутствуют и в других органах. Целью изобретени вл етс повышение точности способа. Поставленна цель достигаетс тем, что согласно способу диагностики острой стадии вирусного гепатита путем исследовани ферментативной активности сыворотки крови, определ ют активность фермента L, -треонин- Ц-серин-дегидротазы и при ее наличии диагностируют острую стадию вирусного гепатита. Способ осуществл ют следующим образом . В пробирку с гепарином, калий фосфатным буфером и пиридоксальфосфатом берут кровь из вены и центрифугируют . Супернатант 0,51 мл перенос т в опытную инкубационную среду L-треонин 0,3 М или L-серин, 1 1 ,5 мл 0,1 М трисбуфер, КС пирндоксальфосфат 0,1 мМ.Реакцию останавливают подкислением среды H.j504. (О,1 мл). Затем инкубационные пробир ки перенос т в кип Р1ую вод ную баню. После денатурации белка пробирки охлаждают и центрифугируют. В супернатант (2 - 1,5 мл) добавл ют К-фосфат ный буфер (3,5-3,0). Образовавшуюс В результате реакции fii-кетомасл ную кислоту определ ют ферментативным методом с использованием лактатдегид рогеназы и HADHj. Пример 1. Кровь из вены больного Н. помещают в пробирку с ге парином, калий фосфатным буфером и пир1здоксальфосфатом, центрифугируют. Супернатант (надосадочную кровь) 1 м перенос т в опытную инкубационную среду, содержащую 0,3 М ot-треонин или Ы-серин, трисбуфер О,1 М (рН 9,0) 15 мМ, КС1 0,3 мМ, пиридоксальфосфат в объеме 2 мл. В контрольной пробе субстрат отсутствует. Инкубаци проводитс 1 ч в вод ной бане пр 37. Реакци останавливаетс подкис лением среды О,1 мл концентрированно HjSO. Затем инкубационные пробирки 1 3 перенос т в кип щую вод ную баню. После денатурации белка пробирки охлаждают и центрифугируют. Супернатант из опытной и контрольной проб перенос т в стаканчики и добавл ют 3 мл К-фосфатного буфера 0,5 М ,0. Образовавшуюс в результате d -треониндегидратазной реакции ot-кетомасл ную кислоту определ ют ферментативным методом, использу коммерческий препарат мьш1ечной лактодегидрогеназы . Дл зтого содержимое стаканчика нейтрализуют 10 н КОН. К всему объему нейтрализованной реакционной смеси добавл ют О,1 мл раствора HABHj, имеющего концентрацию 8мг/мл. Из смеси отбирают две аликвоты по 2,4 мл. К одной из них (опытной) добавл ют 0,05 мл суспензии препарата лактатдегидрогеназы. Втора аликвота после добавлени 0,05 мл буфера служит в качестве контрол . Обе пробы инкубируют 15 мин при комнатной температуре . Убыль HADHj определ ют по уменьшению оптической плотности при 340 нм на спектрофотометре. Дл расчета мол рного количества израсходованного HADHj (соответствующего мол рному количеству содержащейс в реакционной смеси о -кетомасл ной кислоты) используют мол рный коэффициент экстенции HADHj, равный 6,22 О. При расчете удельной активности L-трвониндегидратазы учитывают указанные разведени , а также содержание в определенной смеси возможных субстратов лактатдегидрогеназы, веро тно присутствующих в сыворотке крови, дл чего проводили контрольный опыт каждой сыворотки без субстрата 1,-треонина. Относительна ошибка определени составл ет 5%. Удельную активность фермента выражают как количество единиц (Н моль/ч) сыворотки. Расчёт а}стивности. Удельна активность разведение врем -6,22 -10 -объем сыворотки где лТ) - разность экстенции опытной и контрольной (без субстрата ) пробирок, определ ема на спектрофотометре. Пример . Расчет удельной активности исследуемого фермента при острой стадии вирусного гепатита.
uD 0,300 - 0,100 0,200,
5-3 разведение у- 7,5,
инкубаци 1ч,
6,22-10 - коэффициент экстенции
HADH,
объём сыворотки 1 мл,
удельна активность /
240.10-5 моль/МП-ч 240 Н моль/мл-ч.
Результаты испытаний поззол ют утверждать, что способ диагностики острой стадии вирусного гепатита с помощью предлагаемого фермента по сравнению с прототипом вл етс более точным, поскольку по вление фермента в сыворотке крови говорит о поражении только ткани печени, а не еще какого-либо другого органа, свойственного другим ферментным тестам
Claims (1)
- СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ОСТРОЙ СТАДИИ ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА путем исследования ферментативной активности сыворотки крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, определяют активность фермента L-треонин-Ц-серин-дегидротазы и при её наличии диагностируют острую стадию вирусного гепатита.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU802960884A SU1110443A1 (ru) | 1980-07-21 | 1980-07-21 | Способ диагностики острой стадии вирусного гепатита |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU802960884A SU1110443A1 (ru) | 1980-07-21 | 1980-07-21 | Способ диагностики острой стадии вирусного гепатита |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1110443A1 true SU1110443A1 (ru) | 1984-08-30 |
Family
ID=20909953
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU802960884A SU1110443A1 (ru) | 1980-07-21 | 1980-07-21 | Способ диагностики острой стадии вирусного гепатита |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1110443A1 (ru) |
-
1980
- 1980-07-21 SU SU802960884A patent/SU1110443A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 1. Шапот B.C. Биохимические аспекты опухолевого роста. М., 1975, с. 110-150 (прототип). * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4067775A (en) | Process and composition for determining the activity of creatinekinase-MB | |
| TANIUCHI | A new enzymatic method for the determination of sialic acid in serum and its application for a marker of acute phase reactants | |
| Kramer et al. | Clinical enzymology | |
| Ono et al. | Serum-constituents analyses: effect of duration and temperature of storage of clotted blood. | |
| GB2115926A (en) | Method for the quantitative determination of physiological components in biological fluids | |
| US4366242A (en) | Method and agent for the immunological determination of enzymes | |
| US4387160A (en) | Immunochemical assay for creatine kinase-MB isoenzyme | |
| Lundin et al. | Sensitive assay of creatine kinase isoenzymes in human serum using M subunit inhibiting antibody and firefly luciferase | |
| EP0636247B1 (en) | Method and composition for reducing the effects of endogenous alkaline phosphatase | |
| US4237044A (en) | Antibodies against creatinekinase-M8 and process for the production thereof | |
| SU1110443A1 (ru) | Способ диагностики острой стадии вирусного гепатита | |
| Price et al. | Analytical reviews in clinical biochemistry: the measurement of urate | |
| AGNER et al. | Coronary and skeletal muscle enzyme changes during a 14 km run | |
| CA1160942A (en) | Process and reagent for the determination of the activity of creatine kinase-mb | |
| Delahunty et al. | Automated creatine kinase-MB estimation by immuno-inhibition: a clinical evaluation. | |
| CN109097434A (zh) | 一种唾液酸检测试剂盒 | |
| JPH02195900A (ja) | 糖化蛋白の測定法および測定試薬 | |
| Bernstein et al. | Adenylate kinase in human tissue: II. Serum adenylate kinase and myocardial infarction | |
| Frithz et al. | Serum adenylate kinase activity in the early phase of acute myocardial infarction | |
| CN113009151A (zh) | 一种基于化学发光法的糖基化cd59检测试剂盒及其应用 | |
| Nishikawa et al. | Kinetic measurement of guanine deaminase in serum with a centrifugal analyzer. | |
| Lythgoe | The activity of lactate dehydrogenase in cadaver sera: a comparison of different sampling sites | |
| JPH10337198A (ja) | 破骨細胞由来酸性ホスファターゼの測定方法 | |
| US5968756A (en) | Reagent for measuring creatine kinase activity and measuring method thereof | |
| JP3173780B2 (ja) | 総クレアチンキナーゼ，クレアチンキナーゼ―アイソフオーム活性同時測定用試薬 |