SU1194863A1 - Производные дульцита,обладающие ингибирующим действием в отношении злокачественных опухолей - Google Patents

Abstract

Производные дульцита общей формулы CH2--eH-(JH-CJH-CH-CH2 о ОЯ1 OR2 и (I) . где Е и к ьС-СНгСН2.-ССЮН; ,-С-СН7.СН2С-ОСНз и 0 RZ -С-СН СНгСООН; . .« R.-C-СНз 0 йг-С-СН СН СООН; b N -С-СН2СН2СООН QD 4 0 00 R« -С-СН2СН2-СбН5, а со обладающие ингибирутцим действием в отношении злокачественных опухолей. SU.,,, 1194863 C5D4 С 07 D 303/16, 407/12, А 61 К 31/335 ТЕНИЯ /М

Description

Изобретение относитс  к новым химическим биологически активным соединени м р да гекситов, конкретно к производным дульцита, обладающим ингибирующим действием в отношении злокачественных опухолей,

Цель изобретение - повышение терапевтической активности соединений р да дульцита при снижении их токсичности с

Пример Г, Получение катализатора палладий-на-угл8.

0,2 г хлористого паллади  раствор ют в 2 мл дистиллированной 5,7 г хлористо-водородной кислоты при нагревании раствор разбавл ют п тикратно водой, затем добавл ют 0,9 г активированного угл  (Мерк), и суспензию кип т т в течение нескольких минут. Суспензию охлаждают и после этого подщелачивают (до рН«9 с использованием 20%-ного водного раствора гидроокиси натри  при встр хивании так, чтобы раствор над твердым , веществом стал совершенно бесцветным

0,2 хлористого палла1ди  раствор ют в 2 МП дистиллированной 5,7 н хлористо-водородной кислоты при нагревании , раствор разбавл ют 80 мл дистиллированной водь1, и добавл ют 9,0 г активированного угл  (Мерк). Результирующую суспензию подщелачивают описанным вьпие путем.

Суспензии, полученные по методикам пунктов а) и б) , смешивают, тщательно перемешивают и катализатор отфильтровывгиот, промывают до устранени  хлоридов на фильтре, и после этого промывают с использованием 200 мл 1%-ного раствора уксусной кислоты . Мокрый катализатор сушат в эксикаторе над концентрированной сер-ной кислотой.

Приме р 2. Получение 1,2-5,6 диангидро-3 ,4-бис-(-карбокси- пропионйл -дульцита 1,6 г /3 ммоль 1,2-5а6-диангидро-3,4-бис-(|3 -бензипрксикарбонилпропионил ) г-дульцита раствор ют в 150 мл сухого метанола к раствору добавл ют 0,3 г катализатора , полученного по методике примера 1 , и полученную смесь гидрируют д отбора теоретического количества, водрода . На зто требуетс  около 1,5 ч. Катализатор отфильтровывают, раствор испар ют в вакууме, полученное белое кристаллическое вещество суспендирую в эфире, и отфильтровывают сухое вещество . Полученное вещество перекрис-Твилизовывают из смеси диэтилового эфира и петролейного эфира с П9лучением 1,0 г (96%) I,2-5,6-диангидро-3 ,4-бис-(Я -карбоксипропионил)-дульцита (соединение С-2) т.пл. 138139°С . При анализе методом тонкослойной хроматографии (Rf 0,15 с использованием смеси (9:2) бензола и метанола и про влением п -нитробензилпиридином ) продукт однороден.

Вычислено, %: С 48,78; Н 5,73; О 45,49.

СцН,зО,„ (346,29) Найдено, % С 48,35; Н 5,25; О 46,60.

Эквивалентна  масса: Вычислено 173, Найдено, 180.

ИК-спектр: 3350 см (карбоксил), 0 1235 (зпокси), бензильные и гидроксильные полосы отсутствуют.

Растворимость: соединение хорошо раствор етс  в спирте и тетрагидрофуране , плохо растворимо в диэтило5 вом эфире и воде.

Примерз. Получение 1,2-5 ,6-диангидро-З- (/9 -карбоксипропионил ) г4-ацетилдульцита (соединение с-з).

Q 3,78 г (10 ммоль) 1,2-5,6-диaнгидpo-3- /3 -бензилоксикарбонилпропионил )-4-ацетилдульцита гидрируют аналогично примеру 2 до прекращени  отбора водорода. Катализатор отфильтровывают , фильтрат упаривают в вакууме и кристаллический остаток/ перекристаллизовывают из смеси тетрагидрофурана и этилацетата. Получают 3,5 г (88%) 1,2-5,6-диангидро-3- (|3 -карбоксипропионил)-4-ацетилдульцита; т.пл. 134с. По данным тонкослойной хроматографии (Rf 0,2 или 0,6, смесь (б:4) зтилацетата и циклогексана или смесь (8:2) бензола и метанола, про вление п-ниТробензилпиридином) продукт однороден.

Вычислено, %: С 50,00; Н 5,59; О 44,40

(288,26)

° Найдено, %: С 49,48; Н 5,26; О 44,70

Эквивалентна  масса: Вычислено, 288 Найдено 296.

П р и м е р 4. Получение 1,2-5,6-диангидро-3- (р -карбоксипропионил)-4- (/ -карбометоксипропионил)дульцита (сЪединение С-4) 4,50 г .

(10 ммоль) 1,2-5,6-диaнгйдpo-3- (p -бензилоксикарбонилпропионил) (/3 -карбометоксипропионил)-дульцита гидрируют аналогично примеру 2 до отбора расчетного количества водорода . Катализатор отфильтровывают и растворитель отгон ют из фильтрата . Получают 3,1 г (86%) кристаплического 1,2-5,6-диангидро-3-(/3 -кагбрксипропионил )-4- ( -карбометоксипропионил -дульцита , т.гш. 8789с . По данным тонкослойной хроматографии (Rf -0,25 или 0,4, смесь (6:4 ) этилацет ата и цикпогексана или смесь 8:2 бензола и метанола продукт однороден.

Вычислено, %: С 49,72; Н 6,12; О 44,14.

(362,4)

С 49,87; Н 5,39;

Найдено, О 43,91

Эквивалентна  масса:

Вычислено 362

Найдено 363

Примерз. Получение 1,2-5,6-диангидро-3-f -карбоксипропионил -4- (  |-фенилпропионил)-дул|ьцита (соединение С-5).

4,68 г (10 ммоль) 1,2-5,6-диан- гидро-3- (/3 -бензилоксикарбонилпропионилJ-4- (ft -фенилпропионил)-дульцита гидрируют аналогично примеру 2. Катализатор отфильтровывают и растворитель отгон ют от фильтрата с получением 3,3 г (84%) кристаллического 1,2-5,6-диангидро-3-(/ -карбоксипройионил -4- ( |i -фенилпропионил)дульцита , т.пл. 80°С. По данным тонкослойной хроматографии (Rf 0,3 или 0,7, смесь 6:4 этилацетата и циклогексана, или смесь 8:2 бензола и метанола) продукт однороден.

йлчислено, %: С 60,31} Н 5,86; О 33,83

C H zOg378,38

Найдено, %: с 60,60; Н 5,49; О 34,50

Эквивалентна  масса:

Вычислено 378

Найдено 390.

Новые производные дулыщта (соединени  С-2, С-3, С-4 и С-5) были подвергнуты биологическим исследовани м . Их биологическую активность сравнивали с активностью близких структурных аналогов:

Соединение А- 1,2-5,6-диангидро-з -3,4-диацвтилдулы;итол; соединение

В - 1,2-5,6-диангидро-3,4-бис-(Д -карбометоксипропионил )-дульцитол; сое :щнение С - 1,2-5,6-диангидрО -3;4-бис- (f -фенилпропионил)-дульцитол;

Были осуществлены следующие исследовани : усвоение энзима; тест на токсичность; определение дозовой зависимости ингибировани  роста опухоли , гематоксичности и летальных эффектов дл  близких соединений, полученной отдельно на одинаковых модел х; терапевтические индексы, полученные на различных твердых, способных к трансплантации опухол х грызунов; ингибирование роста опухоли в твердой системе Саркома 180; вли ние отдельной и поЬтор еьаох инъций; мутагенность.

Получены следующие экспериментальные разультаты.

Усвоение энзима.

Соединение В пытались превратить в соединение С-2 с помощью энзимного гидролиза лри следующих уелоВИЯХ:

Врем : 0,5, 1,0, 2,0, 4,0, 6,0, 24,0 ч; температура 37°С; буфер 1/15 М фосфат; энзим:-химотрипсин. Трипсин, ацилаза Т, ацилаза П.

Согласно оценке при вышеуказанных услови х все сложноэфирные св зи соединени  В расщепл ютс  с одинаковой скоростью. Следовательно, метиловый эфир не может быть селективно разложен и трансформирован в кислотную форму,

I1II

Ш-0-f СО-|СН2| С-ОСНз

О

Т а б л

и ц а 1 Остра  токсичность , Результаты исследований острой токсичности новых производных дульцита

36

25,5

75

52

150

80

Продолжение табл.1

на нормальных самцах мыши Swiss весом 2731 г.После одной инъекции группа из 6 мышей при одной дозе была прослежена в течение 21 дн . определ ли на крысах Wi st ar-Walker, больных раком. Инъекции лекарства давали через 24 ч после трансплантации опухоли группе из 6 и веЪи наблюдени  в течение IО дней

Дозова  зависимость ингибировани  роста опухоли, гематоксичноЪти и летальных эффектов новых производных дульцита

Бьшо найдено, что соединение С-2 наименее токсично из всех близких по структуре соединений как дл  мышей , так и дл  крыс (табл. 1).

, Дозова  зависимость ингибировани  роста опухоли, гематоксичности и летальных эффектов дл  близких соединений , полученна  отдельно на одинаковых модел х.

Метод. Самцам крысы Wistar лекарства были введены через 24 ч после заражени  2х10 клетками Walker. 5 эффективность определ ли по дозам, вызывающим 50%-ное ингибирование опухоли при взвешивгшии на дес тый день. Дозы, привод пще к 50%-ному уменьшению гранулоцитов, оцененных на четвертый день, служили в качестве основы дл  сравнени  гематоксичности. Отношение минимальной летальной дозы () к минимальной эффективной дозе () рассматривали как терапевтический индекс.

Согласно данным табл.21 как было найдено, соединение С-2 активно против опухоли в такой же.дозовой области , как производные близких по структуре соединений А, В и C/ED Q З 17 ммоль(кг); в то врем  как соединение С-2 более чем в два раза ьюнее токсично, чем все другие вещества, 5 указанные здесь; следовательно, терапевтический индекс С-2 в два раза более предпочтителен, чем индекс любого другого члена группы. ,

Таблица

К25,5

3 7 12,5

В52

С80

5,6 1,3 3,6

Терапевтический индекс относительно соединени  А.и .

Результаты исследовани  терапевтических индексов новых соединенийна раТерапевтические индексы, полученные на различных твердых трансплантируемое опухол х грызунов

Примечание: Величины, « гурирующие в скобках,  вл ютс 

опубликованными величинами, но они были модифицированы за счет повторени  экспери .ментов.

Ингибирование роста опухоли в Метод. Небольшие образцы твердой дои системе.CapKONbt 180 были инокулированы на коСаркома 180: вли ние отдельной ижу самца ьолпи Swiss. Интраперитональповтор емых инъекций,ное применение лекарства к группе

8

1194863 Продолжение табл.2

зличных твердых,способныхк трансплантации опухолейгрызунов,даны в табл.3.

Таблица 3

9119486310

из шести животных начали на следую-удалены дл  оценки. Результаты предщий день , на 11-й день опухоли были Ингибирование роста опухоли в системе саркома 180

8,7

1

П

1

40

1

2.3

8

9,3

8

23

8

10,5

8

2

10

8

3

15

8

4

12,9

8

5

Отсутствие мутагенности соединени  С-2 в анализе салмонелла/микроВсе испытуемые производные алкилирующих сахарных спиртов, за исключением С-2 были мутагенны в штаммах ТА 1535 и ТА 100 по результатам анал за салмонелла микросома. Данные относительно мутагенных и токсичных эффектов 1,6-дибром-дулцитола, 1,2-5,6-диангидро-дулцитола, 1-бром-3 ,6-ангидро-дулцитола и 1,2-эпокси-З .б-ангидро-дулцитола известны и описаны. Даже с использованием микросомных энзимов, полученных не только

ставлены в табл. А.

Таблица

2,4

4,6 5,4 6.7 10 4,3

16,4

15,7

4,5

8,0

6,5

4,8

64 18 2,5 4,0

15,2 4. 16,3 из печени крысы, но также из легкого крысы, почки мыши или печени хом ка, соединение С-2 не про вл ет мутагенности к штаммам ТА 1535 и ТА 100. Соединение С-2 также не про вл ло мутагенности к штаммам ТА 1537, ТА 1538 И ТА 98, в присутствии или отсутствии смеси 3-9, полученной из печени крысы. Мутагенность соединений А, Ъ и С представлена в табл. 5 и 6.

Отсутствие мутагенности соединени  С-2 в штаммах TA-15S5 и ТА 100 т скобка получены после предварительной инкубации (S чешем BepineM части агара) в течение 30 мин при }7с..

Мутагенность соединений А и В

Согласно экспернменту соединенне С-2 оказалось немутагенным.

Это иллюстрируетс  тем фактом, что концентраци  соединени  С-2

Габл а 5

Т а б Л иц а 6

55 вплоть до 10 мк/г,/пластинка не уменьшает числа бактериальных клеток , произрастающих в нормальной среде. смесь вакт«р||Я«С-2 «а  склв

13

Однако соединение В вызывает 1014-кратное увеличение числа бактериальных клеток, произрастающих в нормальной среде.

С другой стороны, соединение В вызывает 10-14-кратное увеличение числа реверантлых пластинок, в то врем  как концентраци  10 мк/г,/пластинка|1 как было ,  вл етс  то1к2,йчной.

лйравнение токсикологических свойЬтв и фармакологических данных и мутагечнрс%% | экспериментов по усовению .энзимов показывает, что наличие свободных карбоксильных групп в соединени х С-2, С-3, С-4 и С-5 позвол ет им про вл ть такие биологические свойства, которыми не обладают молекулы,не содержащие свобоных карбоксильных групп.

Характеристические данные противоопухолевой активности соединений А, В и С, оценные на трансплантированных опухол х,  вл ютс  существенно менее предпрчтителы1ыми по сравнению с характеристическими данными соединений С-2, С-3, С-4 и С-5 содержащих свободную карбокснльнук) группу.

Терапевтические индексы соединени  В, содержащего две карбоксигруппы ,  вл ютс  также менее предпочтительными по сравнению с такими же свойствами соединений С-2, С-3, С-4 и С-5. Из зтого можно предположить , что карбометоксипропионильна  группа, замещающа  1,2-5,6 диангидро-дулцитол (DAD) в З и/или 4 положени  не вызывает увеличени  терапевтической активности, как свободные карбоксильные группы., замещающи DAD в таких же положени х.

Отсутствие мутагенности в случае соединени  С-2, содержащего свобод486314

ные карбоксильные группы, в противоположность другим мутагенным производным бифункционального гексита, особенно соединени  В, содержащего 5 две карбометоксигруппы, показывает, что присутствие карбоксильной группы вносит существенные изменени  в биологическую активность.

Энзимна  система живого органа не to способна к трансформации соедиени  В в соединение С-2, содержащее свободную карбоксильную группу, следовательно , соединение В не может рассматриватьс  как предшественник соtS единени  С-2. Это шшюстрируетс  не только существенным биологическим .различием, но также включенными здесь результатами экспериментов по усвоению энзимов. 20

Терапевтическа  активность соединени  А, содержащего две ацетильные группы, существенно ниже терапевтической активности соединени  С-4, 25 содержащего не только ацетильную, но также и карбоксильную группу.

Соединение С, содержащее две фенилпропионильные группы, обладает менее предпочтительной терапевтической активностью, чем соединение С-5, имеющее одну fb -фенилпропионильную и одну свободную карбоксильную группу.

Предпочтительный терапевтический индекс соединений С-2, С-3, С-4 и 5 С-5 про вл етс  в результате существенного уменьшени  токсичности, котора  св зана с наличием свободных карбоксильных групп. Терапевтический индекс соединений С-2, С-3, С-4 и С-5 0 в 8-15 раз лучше, чем терапевтический индекс соединений А, В и С, что  вл етс  неожиданным и непрогнозируемым дл  соединений подобной структуры .

Claims (1)

1. Производные дульцита общей формулы

   СН₂-С№-^Н-^Н-СН-СН₂ о ОН! ок₂ V (I)

   где в, И к_г-С-СН_гСН_г-СООН; идиЯ,-С-СН_гСН_гС-ОСН₃ и

   Р_г -С—СН_гСН_гС00Н;

   „ х°

   ™^в «,-С-СН₃ И

   ✓о

   «_г-С-СН_гСН_гС00Н;

   или К. _η_с—ск₂сн_гсоон к, -с-сн_гсн_г-с₆н₅₎

   обладающие ингибирующим действием в отношении злокачественных опухолей.

   .зи ш,1194863

   >

   ί

   1194863

   ще ство