SU1017726A1

SU1017726A1 - Штамм @ @ @ 673/67 @ используемый в качестве тест-культуры дл определени тимидина в питательных средах

Info

Publication number: SU1017726A1
Application number: SU813357011A
Authority: SU
Inventors: Марина Ивановна Богданова; Борис Николаевич Мишанькин
Original assignee: Ростовский-На-Дону Государственный Научно-Исследовательский Противочумный Институт
Priority date: 1981-09-07
Filing date: 1981-09-07
Publication date: 1983-05-15

Abstract

ШТАММ VIBRIO CHOtERAE ELTOR :б73/67 {муэей живых культур Всесоюзного НИ противочумного института Микроб используемый в качестве тесткультуры: дл определени тидшдина в питательных средах.

Description

Изобретение относится к области микробиологии, и касается штамма νΐΒτΐο сЬо!егае е1Сог 673/67^^^-который может быть использован дпя микробиологического определения тимидина в различных жидких и плотных питатель-5 ных средах при исследовании качества питательных сред для диагностики холеры.

Целью изобретения является создание штамма νϊότΐο сЬо1егае е11ог 10 673/67^+Ъг*- используёмого в качестве тёст-культуры для определения тимидину в питатепьных средах.

штамм получен путем воздействия супермуТангеном (нитрозоизанидином ) д5 ' На делизогенизированный вариант V.ёНог 673/67 с последующей селекцией на триметоприме. .

Хранится в коллекций Всесоюзного музея живых культур патогенных микроорганизмов института "Микроб." под .номером 673/67ΙΦ*-. ·

Штамм УгЬгхо сЬо1егае еСхрг б?3/67*'^Ьухарактериэуется следующими свойствг.ми. .

Культурально-морфологические признаки. Клетки суточной культуры штамма представляют собой слегка изогнутые грамотрицательные палочки с умеренно выраженным полиморфизмом вели- 30 чиной 1,5-2,0х 9,3 - 0,4 мкм.

Агар Мартена с добавками 10 мг/мл тимидина (рН 7,6-7,8). Через 12-16 ч вырастают округлые плоские колонии с ровным краем, прозрачные в прохо- 35 *цящем и слегка голубоватые в отраженном свете.

Бульон Мартена и 1%-ная пептонная вода со щелочным значением рН. Клетки штамма дают равномерное помутнение дф с нежной пленкой на поверхности.

Глюкозо-минеральные синтетические среды (среда Бхаскарана и Роули М-9) рН 7,8-8,0 с добавлением 10 мкг/мл тимидина, Образуются полупрозрачные ⁴⁵колонии с ровными гладкими краями размером 1,5-2,0 мм с несколько замедленным ростом (24 ч) .

Физиолого-биохимические признаки. , Штамм обладает оксидазной активное- 50 > тьюферментирует до кислоты без газа;:;., глюкозу в среде Хью и Лёйфсона в аэ'робных и анаэробных условиях.

•декарбоксилируют лизин и не обла- I ... дают дигидролазой аргинина. В средах 55 Гисса ферментирует сахарозу, маннозу, маннит. Арабинозу и лактозу не сбра- _:живает» Обладает диагностической активностью. Образует индол и не образует сероводород. Продуцирует ацетил-, метилкарбинол. Не гомолитичен. Растет на среде с добавлением 50 мкг/мп

ВНИИПИ Заказ 3481/28

л

[полимиксина. Образует вибрионы. Не лизогенен.

Лизируется холерным диагностическим бактериофагом эльтор. Агглютинируется до титра видовой холерной О-сыворОткой и типовой "Огава" сывороткой.

Факультативный аэроб.

Особенностью штамма является хромосомальная мутация, обусловливающая его зависимость от экзогенных добавок тимидина (0,1-10 мкг/мл среда).

Определение тимидина осуществляют как в жидких средах пробирочным методом в ряду стандартных растворов тимидина в пределах 0,1-10 мкг/мл, так и в плотных средах чашечным методом в ряду стандартных растворов тимидина 0,5-50 мкг/мл.

Пример. Определение проводят в минимальной солевой среде М-9, Иа^НРС^ (безводного) 6г, КН2РО4 , (безводного) Зг, ЫаС1 0,5 г ΝΗήΰΙ 1 г, 20%-ного раствора глюкозы 20 мл, 0,1 М раствора МдЗО^ 10 мл, 0,01 М раствора £аС1₂ 10 мл, дистиллированной воды до 1000 мл, рН 7,6,

Готовят два параллельных ряда пробирок с последовательными десятикратными разведениями исследуемой питательной среды. Разводят до. 10^-^динимальной средой без добавления· тимидина.

Для построения стандартной кривой роста тест-шгамма два параллельных ряда пробирок заполняют 4,5 мл синтетической средой (4,5 мл) с добавлением тимидина в концентрациях 100, 10, 1, 0,1 и 0,01 мкг/мл. Затем в каждую пробирку как в опытном, так и в стандартном рядах вносят по 0,5 мл суспензий культуры тест-штамма. Посевы выдерживают при 37°С в течение 24 ч,после чеГо прдизводят регистрацию интенсивности роста штамма путем измерения мутности среда с помощью нефелометра. —

Claims

Индикаторную;культуру предварительно инкубируют в питательном бульоне Мартена рН 7,6 в течение 18 ч с добавлением до 10 мкг/мл тимидина и перед началом определения дважды отмывают буфером от бульона е помощью Центрифугирования. Концентрацию клеток доводят до 10^вкл/мл физиологического раствора.

Использование штамма позволяет определять тимидин в концентрации 0,350 мкг/мл среды.

Предложенный штамм может найти применение для решения вопросов бутиминового мутагенеза, выявления причин гибели клеток при бестиминовом голодании, синхронизации деления бактерий и для других целей.