SK5342003A3

SK5342003A3 - Tricyclic derivatives of indole with antiangiogenic activity

Info

Publication number: SK5342003A3
Application number: SK534-2003A
Authority: SK
Inventors: Giuseppe Giannini; Mauro Marzi; Maria Ornella Tinti; Claudio Pisano
Original assignee: Sigma Tau Ind Farmaceuti
Priority date: 2000-11-03
Filing date: 2001-10-16
Publication date: 2003-10-07
Also published as: CA2427568A1; CZ20031042A3; DE60112966T2; HK1061244A1; ITRM20000570A1; US20050124647A1; PL364908A1; ATE302780T1; IT1317926B1; HUP0400546A2; JP2004513130A; ITRM20000570A0; BR0115119A; CN1247589C; EP1343789B1; HUP0400546A3; US6887892B2; WO2002036597A1; CN1471535A; MXPA03003798A

Description

Predkladaný vynález popisuje zlúčeniny obsahujúce tricyklickú štruktúru typu terahydrocyklopent[b]indolu (1), tetrahydrokarbazolu (2) a esahydrocykloept[b] indolu (3), metódy ich príprav a farmaceutické zmesi obsahujúce tieto látky na liečbu tumoru a ochorení súvisiacich s abnormálnou angiogenézou.

Uvedené zlúčeniny majú štruktúru nasledujúceho všeobecného vzorca (I):

kde

X = CH, N x‘ = O, S, N, CH

R a R¹, ktoré môžu byť rovnaké alebo rôzne, sú vybraté zo skupiny obsahujúcej H, OH, OR⁵, kde R⁵ môže byť C1-C4 alkyl alebo benzyl, kde dve skupiny OR⁵ sú vicinálne, R⁵ je metylén; alebo R a R¹ môžu byť nezávisle nitro; amino mono- alebo disubstituované s C1-C4 alkylom; karboxy; alkoxy(Ci-C4)karbonyl;

R a R¹ spoločne môžu tvoriť alifatickú alebo aromatickú cyklickú skupinu obsahujúcu 5 alebo 6 atómov;

ak X¹ = N, CH, potom

R² je vybratý zo skupiny obsahujúcej H, fenyl, benzyl, lineárny alebo rozvetvený C| -Có alkyl;

n je v rozsahu 0 až 4;

R³ môže byť rovnaký alebo odlišný ako R⁴ a je vybratý zo skupiny obsahujúcej H,

OH, OR⁶, pričom

R⁶ je lineárny alebo rozvetvený C1-C4 alkyl alebo v prípade, že R³ = R⁴ = OR⁶ sú vicinálne, R⁶ je izopropylidén

kde A¹ = H

R⁷ je C1-C4 lineárny alebo rozvetvený alkyl, ktorý môže byť substituovaný jednou alebo dvoma skupinami OH, OR⁶, v prípade dvoch skupín OR⁶ vicinálnych, R⁶ je izopropylidén; alebo R⁷ je formyl (CHO), oxím (CH=NOH).

Vynález zahŕňa všetky možné izoméry, stereoizoméry a ich zmesi, metabolity a ich metabolické prekurzory alebo bio-prekurzory (tzv. proliečivá) uvedeného všeobecného vzorca.

Použitie protinádorových liečiv v humánnej liečbe spôsobuje významné množstvo toxických alebo vedľajších efektov, ktoré následne vedú k redukcii množstva podávaného liečiva, čo má v niektorých prípadoch za následok prerušenie liečby. Redukcia množstva podávaného liečiva, alebo prerušenie terapie má za následok rast primárneho tumoru a/alebo výskyt tumorových metastáz.

Rast primárneho tumoru je podporovaný dobrou vaskularizáciou (spôsobenou angiogenézou) tumorového tkaniva. Dostatočný prísun kyslíka a živín spôsobuje urýchlenie rastu samotného tumoru. Bolo dokázané, že stupeň agiogenézy môže byť extrémne negatívny faktor v prognóze nádorových ochorení.

Angiogenéza u dospelého organizmu je vo všeobecnosti utlmená, ale na druhej strane predstavuje normálnu funkciu napríklad pri hojení rán, alebo regenerácie endometria v priebehu ženského reprodukčného cyklu.

Angiogénna odpoveď je fyziologicky stimulovaná v prípade, že sú znížené vaskuláme funkcie a prekrvenie tkaniva je nedostatočné.

Vo všeobecnosti sa dá povedať, že za fyziologických podmienok predstavuje angiogenéza pozitívnu odpoveď na nedostatočné prekrvenie alebo na zníženú dodávku kyslíka a živín, ktoré sa vyskytujú napríklad v dôsledku upchatia tepny, v prípade veľkého rastu tkaniva (napríklad novotvorba ciev, ktorá sprevádza vývoj svalového tkaniva); a v prípade zvýšenej pracovnej záťaže spojenej s požiadavkou zvýšeného prísunu kyslíka a živín.

Rozvoj kolaterálnych (postranných) ciev je nevyhnutný pre zachovanie prekrvenia tkaniva pri rozvíjajúcej sa lokálnej ischémii (nedokrvenia tkaniva) v dôsledku čiastočného alebo úplného upchatia tepny.

Doterajší stav techniky

Ako už bolo spomenuté, ukázalo sa, že stupeň angiogenézy môže byť extrémne negatívnym faktorom v prognózach nádorových ochorení (van Hinsbergh VW, Collen A, Koolwijk P; Ann. Oncol., 10 Suppl., 4:60-3, 1999; Buolamwini JK; Curr. Opin. Chem. Biol., 3(4): 500-9, 1999 Aug.).

V oblasti nádorových ochorení je tiež známe, že dôležitou etapou v biológii tumorovej bunky je získanie schopnosti tvorby metastáz.

Tumorové bunky, ktoré tvoria metastázy, sú schopné stratiť priľnavosť k okolitým štruktúram, dostať sa do krvných a lymfatických ciest a infiltrovať iné vzdialené tkanivá, v ktorých môžu pokračovať vo svojom rozmnožovaní.

Tvorba metastáz je tiež dôležitým javom v klinickom rozvoji ochorenia, čo je hlavnou príčinou úmrtí spôsobených rakovinou. Toto je úzko späté s umožnením prítomnosti cievneho tkaniva na strane tumoru alebo v jeho tesnom okolí.

Migrácia buniek tumoru cez okolité štruktúry umožňuje bunkám dostať sa k vnútrotumorovým krvným cievam, či už k tým, ktoré existovali, alebo boli vytvorené neoangiogenézou, a takýmto spôsobom vniknúť týmto bunkám do krvného riečišťa (Ray JM.,

Stetler-Stevenson WG, Eur. Respir. J., 7(11): 2062-72, 1994; Stetler-Stevenson WG, Liotta

LA, Kleiner DE Jr.; FASEB J„ 7(15): 1434-41, 1993 Dec.).

Existencia spojenia medzi lymfatickým a krvným riečišťom vo vaskulámej oblasti tumoru umožňuje nádorovým bunkám pohybovať sa v oboch vaskulámych systémoch.

Nedávne štúdie dokázali priamy vzťah medzi angiogenézou a artritídou (Koch AE; Arthritis and Rheumatism 41:951-962,1998). Konkrétne bolo ukázané, že neo-vaskularizácia kĺbových chrupaviek zohráva rozhodujúcu úlohu v tvorbe pannusu (granulomatózneho zápalového tkaniva) a rozvoji artritídy. Normálna chrupavka neobsahuje krvné cievy, zatiaľčo kĺbový maz artritických pacientov obsahuje angiogénne stimulujúci faktor, ktorý je tvorený endoteliálnymi bunkami (EASF).

Prítomnosť tohto faktora sa spája s vaskularizáciou a poškodením chrupavky.

S abnormálnou angiogenézou sú tiež spojené ďalšie ochorenia.

Zistilo sa, že neovaskularizácia postihnutých tkanív je spúšťajúcim faktorom pre ochorenia ako napríklad diabetická retinopatia (Histol Histopathol. 1999 Oct; 14(4): 128794), psoriáza (Br J. Dermatol. 1999, Dec; 141(6): 1054-60), chronický zápal a artérioskleróza (Planta Med. 1998 Dec; 64(8): 686-95).

V priebehu posledných tridsiatich rokov sa pripravili a študovali zlúčeniny s cykloalkánindolovou štruktúrou z hľadiska ich možného terapeutického využitia.

Základnou požiadavkou pre tieto zlúčeniny - v polohe 3 substituované indoly - je ich podobnosť s prírodnými zlúčeninami ako napríklad melatomn a tryptofán.

V sedemdesiatych rokoch sa cykloalkánindolové zlúčeniny študovali s ohľadom na ich protizápalové vlastnosti (J. Med. Chem. 1976,19(6): 787-92) alebo kvôli ich antidepresívnym účinkom (J. Med. Chem. 1976,19(6): 792-7).

Tieto štúdie boli základom ďalšieho výskumu (na množstve aminotetrahydrokarbazolov) z hľadiska vplyvu týchto látok na CNS (J. Med. Chem. 1977, 20(4): 487-92), v ktorom predstavovali štruktúru podobnú tryptamínu.

V osemdesiatych rokoch sa našlo množstvo derivátov tetrakarbazolu, ktoré mali antibakteriálne vlastnosti: inhibovali rast bakteriálnych kultúr typu Trypanosoma cruzi (Rev. Argent. Microbiol. 1987, 19(3): 121-4).

V deväťdesiatych rokoch sa študovali zlúčeniny s cykloalkánindolovou štruktúrou z hľadiska ich potenciálne analgetických účinkov (Xenobiotica 1989, 19(9): 991-1002), z hľadiska vplyvu na serotonínové receptory (J. Med. Chem. 1993, 36(13): 1918-9), ako aj ich vplyvu na receptory melatonínu (Eur. J. Pharmacol. 1995, 287(3): 239-43).

V posledných niekoľkých rokoch sa študovali tetrahydrokarbazolové deriváty s ohľadom na ich antiproliferatívne vlastnosti (Farmaco 1998, 53(6): 431-7); konkrétne N5 pyridíniové deriváty môžu slúžiť prostredníctvom mechanizmu zahŕňajúceho inhibíciu topoizomeráz II.

US 5,017,593 popisuje deriváty cyklohept[b]indol alkánových kyselín ako leukotriénových protilátok.

EP 0496237 popisuje N-imidazolylové deriváty tetrahydrokarbazolu a cyklohept[b]indolov ako protilátky tromboxánu (TXA-2), ktoré sú užitočné pri liečbe kardiovaskulárnych porúch (infarkt myokardu a angína), mozgovo-cievnych ochorení (mozgová mŕtvica, prechodné ischemické záchvaty, migréna), periferálnych cievnych ochorení (mikroangiopatia), ochorení ľadvín (glomelurálna skleróza, lupus nefŕitis, diabetická nefŕopatia), ochorení dýchacieho systému (bronchokonštrikcia a astma) a aterosklerózy.

J. Med. Chem. 1998, 41, 451-67 popisuje zlúčeniny stetrahydrocyklopent[b]indolovými (1), tetrahydrokarbazolovými (2), hexahydrocyklohept[b]indolovými (3) štruktúrami, ktoré sa použili na štúdium melatonínových receptorov a ktoré majú vzorec:

(1) n - 0 tetrahydrocyklopent[b]indol (2) n = 1 tetrahydrokarbazol (3) n = 2 hexahydrocyklohept[b]indol

US 5,830,911; US 4,927,842; US 4,616,028 popisujú tetrahydrokarbazolové zlúčeniny s protizápalovým účinkom, ktoré majú štruktúru:

OH

R = CN; R'= H R = F, NO₂, R'= CN R = R'= CN

COX-2 inhibitor antirartritický účinok US 5830911

R = CHjCN; CH₂COCH₃; CH₂CH=N-OCH₃; CH₂CH=N-OH; (CH₂)„-CH=CH₂

US 4927842 protizápalový účinok

R = CH₂CH=CH₂

AY-30068

US 4616028 protizápalový a antiangiogénny účinok

Zlúčeniny citované v horeuvedených publikáciách sú odlišné od tých, ktoré si nárokuje vynález. Napriek pokroku, ktorý sa urobil v posledných rokoch, farmakologický výskum sa stále zameriava na objavenie nových liekov na liečbu tumorových ochorení a ochorení charakterizovaných abnormálnou angiogenézou. Táto orientácia je stále považovaná množstvom odborníkov z oblasti medicíny za jednu z najperspektívnejších oblastí.

Aj v dnešnej dobe je stále silne vnímaná potreba dostupnosti nových liekov, ktoré by blokovali alebo pôsobili na tumorové ochorenia a ochorenia spojené s abnormálnou angiogenézou. Ako už bolo uvedené, tieto ochorenia zahŕňajú tumory, tumorové metastázy, artritické ochorenia, diabetickú retinopatiu, psoriázu, chronický zápal a artériosklerózu.

Podstata vynálezu

Zistili sme, že zlúčeniny vzorca (I), pre ktoré je charakteristická prítomnosť dvoch aromatických báz (indolu alebo jedného z jeho derivátov), kde prvá z nich je prikondenzovaná k nasýtenému cyklu v polohe 2-3, tetrahydrokarbazolového typu a druhá aromatická báza naviazaná v polohe 3, ktorá je prítomná ako substituent v benzylovej polohe nasýteného kruhu, majú neočakávané antirumorové a antiangiogénne vlastnosti.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) sú teda predmetom predkladaného vynálezu.

Ďalším aspektom vynálezu sú zlúčeniny všeobecného vzorca (I) a ich využitie v oblasti medicíny.

Ďalším aspektom predkladaného vynálezu sú zlúčeniny všeobecného vzorca (I) a proces ich prípravy.

Ďalším aspektom predkladaného vynálezu je zloženie farmaceutickej zmesi obsahujúcej ako aktívnu zložku zlúčeninu všeobecného vzorca (I) a prinajmenšom spolu s farmaceutický prijateľným excipientom a/alebo rozpúšťadlom.

Ďalším aspektom predkladaného vynálezu je farmaceutická zmes obsahujúca ako aktívnu zložku zlúčeninu všeobecného vzorca (I) pre liečbu nepriaznivého vplyvu tumoru, kde tumor patrí do skupiny obsahujúcej: sarkóm, karcinóm, karcinoid, tumor kosti, neuroendokrinný tumor, lymfoidnú leukémiu, akútnu promyelocytickú leukémiu, myeloidnú leukémiu, monocytickú leukémiu, megakaryoblastickú leukémiu a Hodgkinsovu chorobu.

Ďalším aspektom tohto vynálezu je využitie zlúčenín vzorca (I) na prípravu liečiv s antiangiogénnou aktivitou.

Ďalším aspektom tohto vynálezu je využitie zlúčenín vzorca (I) na prevenciu sklonu tumoru k metastázam.

Ďalším aspektom tohto vynálezu je využitie zlúčenín vzorca (I) na liečbu artritického ochorenia.

Ďalším aspektom tohto vynálezu je využitie zlúčenín vzorca (I) na liečbu diabetickej retinopatie.

Ďalším aspektom tohto vynálezu je využitie zlúčenín vzorca (I) na liečbu psoriázy.

Ďalším aspektom tohto vynálezu je využitie zlúčenín vzorca (I) na liečbu chronických zápalových ochorení.

Ďalším aspektom tohto vynálezu je využitie zlúčenín vzorca (I) na liečbu artériosklerózy.

Ako už bolo uvedené, rast primárneho tumoru je uľahčený dobrou vaskularizáciou tumorového tkaniva a rozšírenie neo-angiogenézy sa môže považovať za vysoko nepriaznivý faktor v prognóze nádorových ochorení. Dostatočné zásobenie tumoru kyslíkom a živinami uľahčuje rýchly rast samotného tumoru.

Je všeobecne známe, že pre lekárov dostupná liečba tumorov stále nie je schopná zabrániť úmrtiu množstva pacientov trpiacich týmto ochorením. Je všeobecne známe, že väčšina onkologických pacientov sa lieči nielen jedným protirakovinovým liekom, ale kombináciou niekoľkých protirakovinových látok. Potreba podávania kombinácie protirakovinových liekov pramení zo skutočnosti, že ich pôsobením na rôznych metabolických úrovniach v niektorých prípadoch umožní úplnú remisiu tumoru, zatiaľčo v iných prípadoch predĺži život pacientom a/alebo zlepší kvalitu ich života.

Dodnes sa stále silne vníma potreba použiť nové zlúčeniny v kombinácii so známymi látkami v boji proti rakovine.

Zlúčenina obsiahnutá v predkladanom vynáleze sa môže použiť v kombinácii s jedným alebo viacerými protirakovinovými liekmi.

Ďalším aspektom tohto vynálezu je využitie zlúčenín vzorca (I) v kombinácii s jedným, alebo viacerými známymi protirakovinovými liekmi.

Ďalším aspektom tohto vynálezu je farmaceutická zmes obsahujúca kombináciu zlúčenín vzorca (I) s jedným, alebo viacerými známymi protirakovinovými liekmi, a zároveň jedným, alebo viacerými excipientami, alebo nosičmi, ktoré sú farmakologicky akceptovateľné.

Ďalším aspektom tohto vynálezu je farmaceutická zmes obsahujúca aktívnu zložku zlúčeninu vzorca (I) v kombinácii s jedným, alebo viacerými známymi protitumorovými zlúčeninami v ktorých je antitumorová zlúčenina vybraná zo skupiny pozostávajúcej zalkylačných činidiel, inhibítorov topoizomeráz, antitubulínových látok, interkalačných zlúčenín, anti-metabolitov, prírodných produktov takých, ako sú vinea alkaloidy, epipodofylotoxíny, antibiotiká, enzýmy, taxány a cytoselektívne zlúčeniny.

Ďalším aspektom tohto vynálezu je použitie kombinácie zlúčenín vzorca (I) a protirakovinovej zlúčeniny na prípravu liečiva pôsobiaceho proti tumoru, ktoré je charakterizované tým, že zlúčenina vzorca (I) je prítomná ako látka umocňujúca účinok protirakovinovej zlúčeniny.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Nasledujúce príklady objasňujú vynález.

Syntéza cyklických produktov pozostávajúca z dvoch krokov, kde prvým z nich je kondenzácia v geminálnej pozícii hydroxyaldehydu s dvomi aromatickými bázami a druhým krokom jecyklizačná reakcia pomocou DAST (dietyl amino-sulfur trifluoridu). Tento syntetický postup, aj keď s výnimkami, predstavuje syntézu použitú pre prípravu všetkých derivátov, ktoré sa popisujú v tomto vynáleze. Kvôli zjednodušeniu je popísaná príprava zlúčeniny vzorca (I), kde X je CH, X¹ je NH a R³ a R⁴ sú vodíky. Je nadmieru jasné, že znalec v odbore môže pripraviť všetky zlúčeniny vzorca (I), pričom použije vhodné východiskové látky a činidlá, jednoducho pomocou všeobecných odborných znalostí alebo prostredníctvom štandardných dostupných manuálov.

Odborník ľahko odhadne, že prvý krok syntézy zahŕňa prípravu medziproduktov s bisindolovou štruktúrou.

Ich príprava sa môže uskutočniť pomocou rôznych metód.

POSTUP A

Syntéza derivátov s manofuranózou

X = CH,N

R = H. OCHjPh, NOj

1) EtMgBnEtjO i/M°^H

2) : CHjCi,

poznámka: aldhydom môže byť tiež R'CHO (viď schéma 2) (Schéma 1) °x°

Reakcia (Tetahedron Asymmetry, 1997, 8(17), 2905-12): Indol alebo jeho derivát (1 mmol) sa rozpustí v bezvodom éteri (50 ml) a pomaly sa pridá roztok etylmagnéziumbromidu v éteri (3 M) (0,33 ml; 1 mmol). Takto získaný roztok sa nechá miešať za bezvodých podmienok počas niekoľkých minút, pričom sa získa biela soľ horečnatého derivátu. Éter sa odparí a získaná biela zrazenina sa rozpustí v bezvodom dichlórmetáne. Roztok sa nechá stáť pri laboratórnej teplote 36 hodín, alebo sa refluxuje 12 hodín.

Spracovanie: Reakcia sa ukončí pridaním nasýteného roztoku NaHCC^/lO % NH4CI. Organická fáza sa oddelí, vysuší pomocou síranu sodného a odparí. Požadovaný produkt sa čistí flash chromatografiou (hexán/acetón).

POSTUP B

Syntéza hydroxyaldehydových derivátov

r/= 0,1,2 Ŕ ⁼ R*^s H

R = H, O-Bn, NO₂; R’ = H R-R' = O-CH_Z-O

Schéma (2)

Reakcia: Indol alebo jeho derivát (2 mmol) sa rozpustí spolu s aldehydom (5hydroxypentanálom alebo 2-etoxytetrahyrofuránom) (1 mmol) v 15 ml zmesi metanol/voda 2/1. Potom sa pridá dispróziumtriflát a zmes sa nechá reagovať pri laboratórnej teplote 36 hodín (alebo počas 6 hodín pri 80 °C).

Spracovanie: Reakcia sa ukončí pomocou 10 % NaHCCb a reakčná zmes sa extrahuje dichlórmetánom. Organická fáza sa vysuší pomocou síranu sodného a odparí. Surový svyšok sa čistí pomocou preparatívnej HPLC, pričom sa izolujú dva regioizoméry (X, Y).

POSTUP c

Reakcia cyklizácie manofuranózových derivátov

(Schéma 3)

Reakcia: Bisindolylový derivát (476 mg; 1 mmol) sa rozpustí v 80 ml dichlórmetánu. K roztoku sa pridá pri laboratórnej teplote dimetylaminosulfur trifluorid (DAST) (400 μΐ; 3 mmol). Reakcia je rýchla.

Spracovanie: Po 60 minútach sa pridá roztok 10 % NaHCOj a zmes sa extrahuje dichlórmetánom. Organická vrstva sa vysuší pomocou síranu sodného a odparí. Reakčné produkty sa zo surovej zmesi izolujú pomocou preparatívnej TLC alebo výhodne pomocou preparatívnej HPLC RP-18.

POSTUP D

Reakcia cyklizácie derivátov hydroxyaldehydom

(2)

Schéma (4)

Reakcia; Symetrický derivát (1) alebo asymetrický derivát (2) (1 mmol) sa rozpustí v dichlórmetáne (20 ml). K roztoku sa pri teplote v rozsahu 0 °C až laboratórnej pridá DAST (200 μΐ; 1,5 mmol). Reakcia je rýchla. Po 15-20 minútach zreaguje takmer celé množstvo východiskovej látky.

Spracovanie: Po 30 minútach sa k reakčnej zmesi pridá roztok 10 % NaHCCh a takto získaný roztok sa extrahuje dichlórmetánom. Organická vrstva sa vysuší pomocou síranu sodného a odparí. Reakčné produkty sa zo surovej zmesi izolujú pomocou preparatívnej TLC alebo výhodne pomocou preparatívnej HPLC RP-18.

Ak reaguje symetrický alebo nesymetrický východiskový matriál, produktami reakcie sú deriváty s druhým indolovým zvyškom smerom k nižšej časti (3) s výťažkom 30- 60 % a derivát s indolovým zvyškom smerom k vyššej časti (4): tento druhý derivát je prítomný v množstve 10 - 25 % vzhľadom na prvý derivát.

POSTUP E: Reakcia debenzylácie

Reakcia: Benzylovaný derivát (1 mmol) sa rospustí v metanole (50 ml).

K roztoku sa pridá pri laboratórnej teplote katalyzátor (10 % Pd/C; 30 mg).

Takto získaný roztok sa nechá vo vodíkovej atmosfére (60 psi). Po 16 hodinách zreaguje celé množstvo východiskovej látky.

Spracovanie: Odfiltruje sa katalyzátor, organická fáza sa odparí. Nechránený produkt sa čistí flash chromatografiou. Výťažok reakcie je 85 %.

Reakcia: Chránený produkt (1 mmol) sa rozpustí v tetrahydrofuráne (THF) (50 ml). K roztoku sa pridá IN HCI. Takto získaný roztok sa nechá stáť po dobu 1 hodiny pri teplote 20 až 40 °C. Pri týchto podmienkach zreaguje celé množstvo východiskovej látky. Hlavným získaným deblokovaným produktom bola požadovaná látka.

S ohľadom na deblokovaný produkt len v ezocyklickom zvyšku, uvoľnenie chrániacich skupín sa dá dosiahnuť kyslou hydrolýzou pri nízkej teplote (napr. IN HCI pri nízkej teplote po dobu 30-60 minút).

Spracovanie: Získaný produkt (vedi es. 1) sa mieša s nasýteným roztokom NaHCOj. THF sa odparí, potom sa produkt extrahuje etylacetátom. Organická fáza sa odparí a deblokovaný produkt sa čistí flash chromatografiou.

Výťažok 85 %.

POSTUP G: Reakcia oxidácie.

Schéma (7)

Reakcia: Aldehyd (1 mmol) sa rozpustí v 20 ml metanolu. K roztoku sa pridá NaIO₄ (1 mmol) rozpustený v 2 ml vody.

Takto získaný roztok sa nechá stáť pri laboratórnej teplote po dobu 4 hodín.

Spracovanie: 1. krok: pridá sa vodný roztok Na₂S₂O₃. Organické rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa extrahuje etylacetátom.

2. krok: Chránený medziprodukt sa môže deblokovať tak, ako je popísané v schéme 6.

PRÍKLAD 1

ST1345

(R,S)-5-hydroxy-l ,1 -(indol-2-yl, indol-3-yl)-pentán TLC (exán/izopropanol = 97,5/2,5): 0,5

HPLC RP-18 Waters 250 x 4,6 (70 % H₂O, 30 % CH₃CN, prietok 1 ml/min): 6,16 NMR 300 MHz (H-l, CDC1₃): H,(4,301,1H) - H_s(3,5 t, 2H) - H_M( 1,4-1,5-2,1 m, 6H)

- Hr_b-Hr_a (7,8-8,0 s, 2H) - H₄-_b(7,5 m, 1H) - H₇-_a(7,4 d, 1H) - H₇’_b(7,22 d, 1H) - H₄._a.₅-_a.₅’_b.₆-a. ô-_b.(6,9-7,2 m, 5H) —H₂-_a(6,96 d, 1H) - H₃-_b,(6,4 d, 1H).

Iónový spray (M'): 317

Elementárna analýza: (vypočítané) C: 79,21 %, H: 6,96 %, N: 8,79 %, (nájdené) C: 78,64, % H: 7,15 %, N: 8,45 %.

PRÍKLAD 2

ST 1346

HO

H r

5-Hydroxy-l,l-di-(indol-3-yl)-pentán

TLC (exán/iPrOH = 97,5/2,5): 0,43

HPLC RP-18 Waters 250 x 4,6 (40 % H₂O, 60 % CH₃CN, prietok 1 ml/mm): 5,36

H_T(7,8 d, 2H)-H,-(8,15 br.s, 2H).

NMR 300 MHz (C-l3, CDC1₃): Cj(34,2) - C₂(33,0) - C₃(24,6) - C₄(35,7) - C₅(63,2) C₇’(l 11,2) - C₆(l 19,2) - C₄. (119,8) - C₃>(120,4) —C₅<121,6) - C₂(l 22) - C_3bis(127,2) C₇._bis(136,7).

Iónový spray (M‘): 317

Elementárna analýza: C: 79,21 %, H: 6,96 %, N: 8,79 %, nájdené C: 78,70 %, H: 7,29 % N: 8,39%.

Teplota topenia: 190 °C (rozklad)

PRÍKLAD 3

ST 1422

5-hydroxy-l J-di-(5,6-metyléndioxy-indol-3-yl)-pentán

TLC (hexán /iPrOH = 97,5/2,5): 0,55

HPLC RP-18 (50 % H₂O, 50 % CH₃CN, prietok 1 ml/min): 6,7

NMR 300 MHz (H-l, CD₃CN): Hj(4,21, IH) - H₂(2,2 m, 2H) - H₃-H₄ (1,4-1,5 m, 2H)

- H₅(3,4 q, 2H) - H₈-(5,8 s, 4H) - H₄-H₇-(6,8 s, 4H) - H₂· (7,0 s, 2H) - H,· (8,9, brs, 2H). Iónový spray (M⁺): 407

Elementárna analýza: C: 67,97 %, H: 5,46 %, N: 6,89 %, nájdené v zhode s teoretickým výpočtom.

Teplota topenia: 200 °C (rozklad)

PRÍKLAD 4

ST 1423

(R,S)-5-hydroxy-l,l-di-(5’,6’-metyléndioxy-indol-2-yl, 5”,6”-metyléndioxy-indol-3yl )-pentán

TLC (hexán/iPrOH = 97,5/2,5): 0,63

HPLC RP-18 (50 % H₂O, 50 % CH₃CN, prietok 1 ml/min): 8,2

NMR 300 MHz (H-l, CD₃CN): H,(4,31,1H) - H₂(2,2 m, 2H) - H₃-H₄(14-l,6 m, 4H) H₅(3,5 m, 2H) - H₈’_a-₈'b (5,9 s, 4H) - H_rb(6,3 S, 1H) - Η₄·₃-Η₇·₃ (6,8-6,9 d, 2H) - H₄._b-H₇-_b (7,0 d, 2H) - H₂'_a(7,2 s, 1H) - H_ľa.i-_b(8,9-9,1 brs-brs, 2H).

NMR 300 MHz (C-13, CD₃CN): 25,1 - 33,4 - 34,9 - 37,2 - 62,5 - 92,6 - 93,0 - 98,4 99,2-99,7- 101,3 - 101,5- 121,7.

Iónový spray (M⁺): 407

Elementárna analýza: (vypočítané) C: 67,97 %, H: 5,46 %, N: 6,89 % (nájdené) v zhode s teoretickým výpočtom.

Teplota topenia: 220 °C (rozklad)

PRÍKLAD 5

ST1730

4-hydroxy-1,1 -di-(5 ’ ,6‘ -metyléndioxy-indol-3-yl)-bután TLC (hexán/iPrOH = 75/25): 0,44

HPLC RP-18 (60 % H₂0,40 % CH₃CN, prietok 1 ml/min): 17,5

NMR 300 MHz (H-l, CD₃CN): H,(4,31,1H) - H₂(2,3 m, 2H) - H₃(l,6 m, 2H) - ^(3,6 q, 2H) - Hg>(6,0 s, 4H) - Η₄-Η₇· (6,9 s, 4H) - H₂· (7,2 s, 2H) - H_r (9,0 brs, 2H).

Iónový spray (M^4-): 393

Elementárna analýza: C: 67,34 %, H: 5,14 %, N: 7,14 % (nájdené): v zhode s teoretickým výpočtom.

Teplota topenia: 240 °C (rozklad)

PRÍKLAD 6

ST 1731

ľ (R, S)-4-hydroxy-l,l-di-(5’,6’-metyléndioxy-indol-2-yl, 5”,6”-metyléndioxy-indol-3yl)-bután

TLC (hexán/iPrOH = 75/25): 0,41

HPLC RP-18 (60 % H₂0,40 % CH₃CN, prietok 1 ml/min): 23,4

NMR 300 MHz (H-l, CD₃CN): Hi(4,3 t, 1H) - H₂(2,2 m, 2H) - H₃(l,6 m, 4H) -11,(3,7 m, 2H) - H₈._a._{8 b} (6,0 s, 4H) - H₃’_b(6,4 s, 1H) - H^-Hra (6,8-6,9 d, 2H) - H^-fy-b (7,0 d, 2H) H₂’_a(7,2 s, 1H) - H,.a-ľ_b,(8,9-9,l brs-brs, 2H).

NMR 300 MHz (C-13, CD₃CN): 29,8 - 30,4 - 35,5 -60,8 - 90,9 - 91,4 - 96,7 - 97,5 98,1 - 99,6 - 99,9 - 116,6 - 116,9 - 119,9 - 121,6 - 130,9 - 130,9 - 141,3 - 141,5 - 141,6 - 142,9 -143,8.

Iónový spray (M‘): 391

Elementárna analýza: (vypočítané): C: 67,34 %, H: 5,14 %, N: 7,14 % (nájdené): v zhode s teoretickým výpočtom.

Teplota topenia: 205 °C (rozklad)

PRÍKLAD 7

ST 1707

l,l-di(indol-3-yl)-4-hydroxy-bután TLC (hexán/AcOEt = 1/1): 0,26

HPLC RP-18 (50 % H₂O, 50 % CH₃CN, prietok 1 ml/min): 8,3

NMR 300 MHz (H-l, CD₃CN): H,(4,3 t, 1H) - H₂(2,2 m, 2H) - H₃(l,4 m, 2H) - H₄(3,4 t, 2H) - H₂-(7,2 s, 2H) - H₅-(6,8 t, 2H) - H₆-(6,9 t, 2H) - Η₄·(7,2 d, 2H) -Η₇·(7,5 d, 2H) H,-(10,7 br.s, 2H).

NMR 300 MHz (C-13, CD₃CN): C,(61,5) - C₂.₃(32,2) - C₄(34) -C₇-(l12) - C₆ (l 18,5) C₃-C₄-(l 19,5-119,7) - C₅-(121,2) - C₂-(121,6) -C₃-_bis(127,4) - C₇-_bis(l37,1).

Iónový spray (M’): 303

Elementárna analýza: (vypočítané) C: 78,92 %, H: 6,62 %, N: 9,20 % (nájdené) v zhode s teoretickým výpočtom.

Teplota topenia: 110 - 115 °C

4-hydroxy-1,1 -di - (5 ’ ,6’ -metyléndioxy-indol-2-yl)bután

TLC (hexán/iPrOH = 75/25): 0,60

HPLC RP-18 (60 % H₂0,40 % CH₃CN, prietok 1 ml/min): 19,9

NMR 300 MHz (H-l, CD₃CN): H,(4,31,1H) - H₂(2,3 m, 2H) - H₃(l,6 m, 2H) - ^(3,6 q, 2H) - Hg-(6,o s, 4H) - H4-H₇-(6,9-7,0 2s, 4H) - H₃-(6,4 s, 2H) - H_r(9,l brs, 2H)

Iónový spray (M‘): 391

Teplota topenia: 250 °C (rozklad)

PRÍKLAD 9 ST 1866

l,l-di(7’-aza-indol-3-yl)-4-butanol

TLC (hexán/AcOEt = 75/25): 0,18

HPLC RP-18 (60 % H₂0,40 % CH₃CN, prietok 1 ml/min): 4,4

NMR 300 MHz (H-l, CD₃OD): H,(4,41,1H) - H₂(2,3 m, 2H) - H₃(l,6 m, 2H) - H₄(3,6 t, 2H) - H₂<7,3 s, 2H) - H₅-(6,9 m, 2H) - ^-(8,1 t, 2H) - H₆-(7,8 d, 2H).

NMR 300 MHz (C-13, CD₃CN): 30,3 -30,7 - 33,6 - 61,0 - 114,0 - 117,2 - 119,4 121,9- 127,5-140,9-147,7.

Iónový spray (M'): 305

Elementárna analýza: (vypočítané) C: 70,57 %, H: 5,92 %, N: 18,29 % (nájdené) v zhode s teoretickým výpočtom.

Teplota topenia: 221 °C (rozklad)

PRÍKLAD 10

ST 1372

-(indol-3 -yl)-2,3 -O-izopropylidén-4-(2,3 -O-izopropylidénetyl)-tetrahydrokarbazol

TLC (hexán/acetón = 8/2): 0,75

HPLC RP-18 Waters 300 x 3,3(40 % H₂O,60 %CH₃CN, prietok 1 ml/min): 12,8

Racemická zmes

NMR 300 MHz (H-l, CH₃CN): Hi+H₃ (4,52 m, 2H) - H₂(4,64 m,lH) - H₄(3,66 m, 1H) - H₅(4,67 m, 1H) - H₆(3,97 / 3,69 m, 2H) - H₈(l,42 s, 3H) - H₉(l,32 s, 3H) - Hi,(l,46 s, 3H) H₁₂(l,38 s, 3H) - H_2a(6,94 s, 1H) - H₄-_a(7,51 d, 1H) - ^„(7,69 d, 1H) - H₆-_a (7,16 m, 1H) H₆-_b(7,09 m, 1H) - H_{7 a}(7,47 d, 1H) - H₇’_b(7,26 d, 1H) - H_ľa(9,0 s, 1H) - H_ľb(8,3 s, 1H).

NMR 300 MHz (C-13, CH₃CN): Ci(38,15), C₂(80,77), C₃(75,9), C₄(40,77), C₅(78,0), C₆(68,33), C₈(25,5), C₉(26,8), C„(25,9), C_i2(28,3), C₂-_a(124,5), C₂-_b(135,7), C₃-_a(115,9), C₃-„(107,6), C₆-_a(122,7), C₆-_b(121,9), C₇-_a(112,5), C_7b(lll,9), C_8a(127,5), C_8b(128,2), C₉-_b(137,7),C₉._a(137,9).

Iónový spray (M⁺): 459

Elementárna analýza: (vypočítané) C: 73,34 %, H: 6,59 %, N: 6,11 % (nájdené) C: 73,11%, H: 6,63%, N: 5,55%.

Teplota topenia: 204 - 206 °C (rozklad)

PRÍKLAD 11

ST 1381

-(indol-3-yl)-indo [2,3a]-cycloheptán

TLC (hexán/iPrOH - 95/5): 0,22

HPLC RP-18 Waters 300 x 3,3 (40 % H₂O,60 % CH₃CN, prietok 1 ml/min): 22,1

Racemická zmes

NMR 300 MHz (H-l, DMSO-d6): Hi(4,65 br.s,lH) - H₂(l,95 e 2,4 mm, 2H) - H₃(l,7 m, 2H) - H4(l,6 e 1,9 mm, 2H) - H_s(2,75 e 3,0 mm, 2H) - H₂-_a(6,68 s, 1H) - H₅-_a - H₅-_b(6,95 m, 2H) - H₆-a(7,07 t, 1H) - Ηο(7,45 m, 1H) - H₇-_b(7,2 m, 1H) - H₇’_a(7,37 d, 1H) - H₄-_a(7,52 d, 1H) - H_ľa(10,8 s,lH) - H_ľb(10,4 s, 1H).

NMR 300 MHz (C-13, DMSO-d6): C,(36,3), C₂(33,2), C₃(26,5), C₄(28,6), C₅(24,0), C₇-_b(110,5), C₇-_a(lll,4), C₃-_a(115,6), C₄-_b(117,2), C₅-_b(117,7), C_5a(118,2), C_4a(118,5), C₆’_b(119,7), C₆-_a(120,7), C₂-_a(123,5), C₈-_a(125,9), C₈-_b(128,6), C₉-_b(134,2), C₉-_a(136,6), C₂-_b(139,7).

Iónový spray (M'): 299

Elementárna analýza: (vypočítané) C: 83,96 %, H: 6,71 %, N: 9,33 % (nájdené) C: 81,19%, H: 6,50%, N: 9,03%.

Teplota topenia: 206-208 °C

PRÍKLAD 12

ST 1621

5-(indol - 3 -y 1)- indo [2,3 a]-cykloheptán

TLC (hexán/iPrOH = 95/5): 0,15

HPLC RP-18 (40 % H₂O, 60 % CH₃CN, prietok 1 ml/min): 16,6

Racemická zmes

NMR 300 MHz (H-l, DMSO-d6): H₅(4,8 br.s, 1 H) - H₄(l,9 a 2,4 mm, 2H) - H₃(l,5 a 1,7 mm, 2H) - H₂(l,5 a 1,9 mm, 2H) - Hi(2,9 br.s, 2H) - H_{2 a}(6,5 s, 1H) - H₅’_b(6,8 t, 1H) H₆-_b(6,92 t, 1H) - H₅’_a(6,97 t, 1H) - H₆>_a(7,07 t, 1H) - H₄-_b(7,l 3 d, 1H) - H_rb(7,24 d, 1H) H₇-_a(7,3 d, 1H) - H4-_a(7,62 d, 1H) - H_ľa(10,6 s,lH) - H_rb(10,7 s, 1H).

NMR 300 MHz (C-13, DMSO-d6): C₃(25,2) - C₂(27,3)- C,(28,3) - C₅(31,8) - C₄(33,7) - C₇._b(l 10,2) - C_{7 a}(l 11,3) - C₃-„(l 14,5) - C₄-_b(l 17,1) - C₃-_a(117,4) - C₅-_b(l 17,7) - C_{S a}(l 17,9) C₄-a(l 18,6) - C₆._b(l 19,6) - C_6a(120,5) - C₂-_a(123,5) - C₈’_a(126,2) C_{8 b}(128,5) - C₉-_b(134,3) C₉'_a(136,6)-C₂-_b(137,4).

Iónový spray (M’): 299

Elementárna analýza: (vypočítané) C: 83,96 %, H: 6,71 %, N: 9,33 %, v zhode s teoretickým výpočtom.

Teplota topenia: 170 °C

PRÍKLAD 13

ST 1728

l-(lH-indol-3-yl)-tetrahydro-lH-karbazol

TLC (hexán/iPrOH = 9/1): 0,66

HPLC RP-18 (40 % H₂0,60 % CH₃CN, prietok 1 ml/min): 18,4

Racemická zmes

NMR 300 MHz (H-l, CD₃CN): Hj(4,46 t, 1H) - H₂(2,l a 2,3 mm, 2H) - H₃(l,9 a 2,1 mm, 2H) - H₄(2,81 t, 2H) - H₂-_a(6,98 s, 1H) - H₅-_a(6,92 t, 1H) - H_5b - H₆’_b (7,0 m, 2H) H_{Ŕ a}(7,09 m, 1H) - H_rb(7,15 m, 1H) - H_4a(7,29 d, 1H) - Η₇·₃(7,4 dt, 1H) - H₄-_b(7,46 d, 1H) H_ľa(9,l br.s, 1H)-H_ľb(8,6 br,s, 1H).

NMR 300 MHz (C-13, CD₃CN): C₄(21,8) - C₃(23,l) - C₂(33,0) - C,(33,2) C_{3 b}(l 10,6) - C₇._b(l 11,4) - C₇._a(l 12,3) - C_4b(118,5) - C_{3 a}(l 18,7) - C_{5 b}(l 19,4) - C₅-_a(l 19,7) C_{4 a}(l 19,8) - C₆-_b(121,5) - C_{6 a}(122,4) - C_{2 a}(123,9) - C_{8 a}(127,5) - C_{8 b}(128,6) - C₉-_b(137,0) C₉-_a(137,8) - C_{2 b}(137,9).

Iónový spray (M⁺): 287

Elementárna analýza: (vypočítané) C: 83,30 %, H: 6,99 %, N: 9,71 %, v zhode s teoretickým výpočtom.

Teplota topenia: 207 °C

PRÍKLAD 14

ST 1729

4-( lH-indol-3-yl)-tetrahydro-l H-karbazol

TLC (hexán/iPrOH = 9/1): 0,55

HPLC RP-18 (40 % H₂O, 60 % CH₃CN, prietokl ml/min): 12,4

Racemická zmes

NMR 300 MHz (H-l, CD₃CN): H,(2,83 m, 1H) - H₂(l,95 a 1,84 mm, 2H) - H₃(2,17 2,04 mm, 2H) - 11,(4,49 t, 1H) - H₂-_a(6,77 d, 1H) - H₄'_a(7,43 d, 1H) - H_ó'_a(7,06 t, 1H) H₇’_a(7,36 d, 1H) - H₅._a(6,92 m, 1H) - H₇-_b(7,27 d, 1H) - H₄-_b(6,83 d, 1H) - H_Sa(6,71 t, 1H) H₆-_b(6,94 m, 1H) H, _a(8,96 br, 1H) - H_ľb(8,94 br, 1H).

NMR 300 MHz (C-13, CD₃CN): C₂(22,0) - C,(24,0) - C₄(31,0) - C₃(33,0) C₇-_b(l 11,3) - C₇’a(l 12,3) - C_{3 b}(l 12,5) - C_{4 a}(l 19,3) - C_{3 a}(120,9) - C₆._b(121,2)- C₆-_a(122,l) C₂-_a(123,7) C_g-_a(127,7) - Cg>_b(128,5) - C₂-_b(l36,2) - C₉-_b(137,0) - C₉-_a(l37,8).

Iónový spray (M⁺): 287

Elementárna analýza: (vypočítané) C: 83,30 %, H: 6,99 %, N: 9,71 %

Teplota topenia: 182 °C

PRÍKLAD 15

ST 1749

l-(5”,6^,‘-metyléndioxy-indol-3-yl)-5\6’-metyléndioxy-indo [2,3-a]-cykIoeptán

TLC (hexán/AcOEt = 8/2): 0,23

HPLC RP-18 (40 % H₂O, 60 % CH₃CN, prietok 1 ml/min): 15,4

Racemická zmes

NMR 300 MHz (H-l, CD₃CN): H,(4,45 m, IH) - H₂(2,05 a 2,25 mm, 2H) - H₃-H₄ (1,8 m, 4H) - H₅(2,85 m, 2H) - Hi₀-_b(5,85 d, IH) - H₁₀-_a(5,90 s, 2H) - H₇-_b(6,66 s, IH) - H_{2 a}(6,8 d, IH) - Hr_b(8,3 s, IH) -H_4a(6,9 s, IH) - H₇-_a(6,94 s, IH) - H_ľb(8,4s, IH) - H_ľa(9,0 s,lH).

NMR 300 MHz (C-13, CD₃CN): C₅(25.4), C₃-C₄(29,5), C₂(35,3), C,(38, 1), C₇._b(92,4), C₇-_a(93,0), C₄-_a(97,3), C₄-_b(98,4), C_10b(101,l), C₁₀-_a(101,5), C₃-_b(113,4), C₃’_a(118,2), C_g-_a(121,3), C_ra(121,7), C_g._b(124,0), C₉>_b(129,8), C₉._a(132,7), C₂._b(139,3), C₆-_b(142,9), C₆._a(143,3), C₅._b(144,3), C_{5 a}( 145,5).

Iónový spray (M⁺): 389

Elementárna analýza: (vypočítané) C: 71,12 %, H: 5,19 %, N: 7,21 % (nájdené) v zhode s teoretickým výpočtom.

Teplota topenia: 184 °C (rozklad)

PRÍKLAD 16

ST 1751

-(5 ’ ,6‘ -metyléndioxy-1 H-indol-3-yl)-6,7-mety léndioxytetrahydro-1 H-karbazol TLC (hexán/iPrOH = 9/1): 0,31

HPLC RP- 18 (40 % H₂O, 60 % CH₃CN, prietok 1 ml/min): 11,5 Racemická zmes

NMR 300 MHz (H-l, CD₃CN): H,(4,32 t, 1H) - H₂(2,2 a 2,0 mm, 2H) - H₃(2,03 a 1,83 mm, 2H) - H₄(4,3 t, 2H) - H_I0-_a-H₁₀-_b(5,8-5,9 dd, 4H) - H₄'_a(6,65 s, 1H) - H₇-_b(6,72 s, 1H)

- H₂’_a(6,88 d, 1H) - Ηγ,-Ηο^Ο s, 1H) - H_ľb(8,4 s, 1H) - H_ľa(9,0 s, 1H).

NMR 300 MHz (C-13, CD₃CN): C₄(21,8) - C₃(23,2) - C₂(33,0) - C,(33,3) - C₇._b(92,8)

- C₇'_a(93,0) - C₄’_b(97,6) - C₄’_a(98,2) C,_0a(IOl_s2) - C_I0’_b(101,5) - C_{3 b}(l 10,8) - C_ra(l 19,1) Cg’_a(121,4) - C₂’_a-C8'_b(122,4) - C_9b(131,6) - C<r_a(132,6) - C₂-_b(136,6) - C₆-_b(142,9) C_{6 a}(143,2) -C_{5 b}(144,6)-C₅-_a(145,4).

Iónový spray (M⁺): 375

Elementárna analýza: (vypočítané) C: 70,58 %, H: 4,85 %, N: 7,48 %, v zhode s teoretickým výpočtom.

Teplota topenia: 200 °C (rozklad)

PRÍKLAD 17

ST 1765

l-(5”-benzyloxy-indol-3-yl)-5‘-benzyloxy-indo[2,3a] -cykloheptán

TLC (hexán/iPrOH = 9/1): 0,62

HPLC RP-18 (40 % H₂O, 60 % CH₃CN, prietok 1 ml/min): 27,1

Racemická zmes

NMR 300 MHz (H-l, CD₃CN): H,(4,54 d, 1H) - H₂(2,32 a 2,08 mm, 2H) - H₃(l,83 m, 2H) - H₄(l,83 m, 2H) - H_s(2,88 m, 2H) - H₁₀-_a(4,99 s, 2H) - H_10b(5,13 s, 2H) - H₅-_a-H₅-_b(6,95 m, 2H) - Hé’b(6,74 q, 1H) - H₆-_a(6,87 q, 1H) - H₂-_a(6,90 d, 1H) - H₄>_a(6,93 d, 1H) - H₇’_b(7,07 d, 1H) - H₄’_b(7,09 d, 1H) - Hi₄-_a-Hi₄-_b(7,31 -7,27 m, 2H) - H₇-_a(7,34 m, 1H) - H₁₃-_a(7,33 m, 1H) Hi₃>_b(7,38 m, 1H) - H₁₂-_a(7,39 d, 1H) - H₁₂-_b(7,47 d, 1H) - H,-„(8,47 s,lH) - H_ľa(9,0 s, 1H).

NMR 300 MHz (C-13, CD₃CN): C,(38,01), C₂(35,l), C₃(29,5), C₄(29,4), C_s(25,3), Cio’a(71,3), C_I0>_b(71,4), C₄-_b(102,5), C₄-a(103,7), C₆._b(l 11,7), C₇._b(112,0), C₇._a(113,l), C_rbC_6a(l 13,2), C_3a(117,4), C_lľb(139,3), C₂-„(141,7), C₇._a(l 13,0), C₆-_a-C₃-_a( 113,2), C,₄._a-C₁₄-_bC_12b(128,5), C₁₂-_a(128,6).

Iónový spray (M⁺): 513

Elementárna analýza: (vypočítané) C: 82,00 %, H: 6,29 %, N: 5,46 % -(nájdené) v zhode s teoretickým výpočtom.

Teplota topenia: 286 °C (rozklad)

PRÍKLAD 18

ST 1777

4-(5,6’-metyléndioxy-lH-indol-3-yl)-6,7-metyléndioxytetrahydro-lH-karbazol

TLC (hexán/iPrOH = 9/1): 0,20

HPLC RP-18 (40 % H₂O,60 % CH₃CN, prietok lml/min): 7,9

Racemická zmes

NMR 300 MHz (H-l, CD₃CN): H,(2,80, 1H) - H₂(l,96 a 1,84 mm, 2H) - H₃(2,13 a 1 mm, 2H) - H₄(4,31 t, 1H) - H,₀'_b(5,76 d, 2H) - Hi_{O a}(5,86 d, 2H) - H₄._b(6,22 s, 1H) - H₄-_a(6,74 s, 1H) - H_ra(6,75 d, 1H) - H_rb(6,82 s, 1H) - H_7a(6,88 s, 1H) - H_ľb(8,83 s, 1H) - H_la(8,86 s, 1H).

NMR 300 MHz (C-13, CD₃CN): C₂(22,3) - C,(23,9) - C₄(31,7) - C₃(33,l) - C_{7 b}(92,7) - C₇'_a(93,0) - C₄-_b(98,3) - C₄’_a(98,5) - C₁₀-_b(101,l) - «101,4) - C₃-_b(l 12,8) - C_{3 a}(120,9) C_g._a(121,5) - Cg’_b-C₂’_b(122,3) - C_9b(131,6) - «(132,6) - «134,7) - C₆-_b(142,4) C₆._a(142,9)-C₅-_b(144,2)-C₅-_a(145,2).

Iónový spray (M'): 373

Elementárna analýza: (vypočítané) C: 70,20 %, H 5,36 %, N: 7,44 %, v zhode s teoretickým výpočtom.

Teplota topenia: 228 °C (rozklad)

PRÍKLAD 19

ST 1778

5-(5’‘-benzyloxy-indol-3-yl)-5’-benzyloxy-indo[2,3a]cykloheptán

TLC (hexán/iPrOH = 9/1): 0,4

HPLC RP-18 (40 % H₂O, 60 % CH₃CN, prietok 1 ml/min): 18,1

Racemická zmes

NMR 300 MHz (H-1, CD₃CN): Hi(2,89 m,lH) - H₄(2,49 m, 2H) - H₃(l,6 a 1,8 mm, 2H) - H₂(l,6 m, 2H) - H₅(4,721, 1H) - H₁₀-_b(4,89 d, 2H) - H_l0’_a(5,08 s, 2H) - H₂._a(6,54 d, 1H) Hé’b(6,68 q, 1H) - H₄-_b(6,75 d, 1H) - H_{6 a}(6,83 q, 1H) - Η₇·„(7,16 d, 1H) - H₄-_a(7,16 d, 1H) H₇’_a(7,28 d, 1H) - H₁₃’_b(7,29 m, 1H) - H₁₂-_b(7,34 m,lH) - H₁₃-_a(7,37 m, 1H) - Η₁₂·₃(7,47 d, 1H) -H_ľa(8,90 s, lH)-H,-_b(8,93 S, 1H).

NMR 300 MHz (C-13, CD₃CN): C₃(26,6) - C₂(28,5) - C,(29,7) - C₅(33,4) - C₄(34,7) C_10b(71,2) - C,o-_a(71,4) C_4b(U2,5) - C₄-_a(104,0) - C₆-_b(l 11,6) - C₆-_a(lll,8) - C₇-_b(l 12,9) C₇-_a(l 12,9) - C₃-_b(l 16,1) - C_{3 a}(l 19,2) - C₂’_a(125,3) - C_{8 a}(128,1) - C₁₄-_b(128,5) - C₁₄-_a(128,6) C_I2-_b(128,6) - C₁₂’a(128,7) - C₁₃-_a(129,2) - C_l3-_b(129,3) - C_{8 b}(130,5) - C₉-_b(131,0) - C_9a(l33,3) Ci, _a-C,_rb(139,l) - C₂-_b(139,7) - C_{5 a}(l53,3) - C₅-_b(l53,5).

Iónový spray (M'): 511

Elementárna analýza: (vypočítané) C: 82,00 %, H: 6,29 %, N: 5,46 %, v zhode s teoretickým výpočtom.

Teplota topenia: 237 °C (rozklad)

PRÍKLAD 20

ST 1783

l-(5”-hydroxy-lH-indol-3-yl)-5’-hydroxy-indo[2,3a]cykloheptán

TLC (hexán/iPrOH = 9/1): 0,35

HPLC RP-18 Waters 300 x 3,3 (45 % H₂O, 55 % CH₃CN, prietok 1 ml/min): 4,2

Racemická zmes

NMR 300 MHz (H-l, CD₃CN): H,(4,61 d, 1H) - H₂(2,3 a 2,0 mm, 2H) - H₃(l,9 m, 2H) - LL,(1,8 m, 2H) - H₅(2,97 m, 2H) -OH(6,45 br.d, 211) - H₇'_b(6,67 d, 1H) - H₇'_a(6,83 d, 1H) - H₄-_a-H4’b(6,95 s, 2H) - H₂-_a(7,0 s, 1H) - H₆-_b(7,l d, 1H) - H₆-_a(6,4 d, 1H) - H_rb(8,44 s,lH) - H_ľa(9,01 s, 1H).

NMR 300 MHz (C-13, CD₃CN): Cj(36,6), C₂(33,6), C₃(28,l), C₄(28,0), C₅(23,8), C₄-_b(101,l), «102,4), C₆-_b(109,l), C_7b(110,l), C₇-_a(110,7), C_3b_ C_6a (111,0), C_3a(115,3), C₂._a(126,5), C₈-_a(128,4), C_g-_b(128,6), C_{9 b}(129,2), C₉-_a(l31,0), C_{2 b}(140,l), C₅-_a-C₅._b(149,3).

Iónový spray (M⁺): 333

Elementárna analýza: (vypočítané) C: 75,88 %, H: 6,06 %, N: 8,43 % (nájdené) v zhode s teoretickým výpočtom.

PRÍKLAD 21

Podobným spôsobom sa pripravili aj nasledujúce zlúčeniny:

ZLÚČEN ÍNA	POSTUP	POZNÁMKA
ST 1866	A	Bis-7-azaindolyl cez magnézium bromid
ST 1345	B	Bis-indolyl cez kyslú katalýzu
ST 1346	B	II
ST 1422	B	II
ST 1423	B	II
ST 1707	B	II
ST 1750	B	II
ST 1372	C	Cyklizácia cukornatých častí
ST 1381	D	Cyklizácia necukomatých častí
ST 1621	D	II
ST 1728	D	II
ST 1729	D	II
ST 1749	D	II
ST 1751	D	II
ST 1765	D	II
ST 1777	D	n
ST 1778	D	II
ST 1783	E	Debenzylácia
ST 1900	F	Deblokácia
ST 1901	F	Deblokácia
ST (všetky)	G	Oxidácia

Farmakológia

Skratka ST, po ktorej nasleduje číslo, označuje zlúčeninu obsiahnutú v príkladoch uvedených vo farmakologických testoch.

Pre antiangiogénnu aktivitu sa uskutočnila chemotaktická skúška sBoydenovou komorou (Wemer F., Goodwin R.H. a Leonard E.J., Jounal of Immunological Methods 1980; 33, 239-247.) využitím tak kultúr hovädzích aortálnych endotiálnych buniek (BAEC), ako aj hovädzích dreňových endoteliálnych bunkových kultúr (BMEC). Skúšky sa uskutočnili pri ICo (maximálna necytotoxická koncentrácia) a výsledky sa vyjadrili ako percentá inhibície migrácie cez porózny filter v závislosti od chemotaktického podnetu (1 % hovädzie sérum v prostredí DMEM). Tento výsledok sa získal priamym spočítaním buniek pod optickým mikroskopom a percento inhibície migrácie sa vypočítalo podľa vzorca (T-C/C)xl00, kde T znamená počet buniek migrujúcich vo vzorke a C znamená počet buniek migrujúcich v kontrolnej vzorke. Kontrola pozostávala z buniek, ktoré migrovali smerom k séru, neboli ovplyvnené študovanými molekulami a boli zahrnuté v každom chemotaxickom pokuse. Uvedené údaje sa týkajú čítaní piatich mikroskopických polí/jamiek v štyroch nezávislých chemotaxických poliach na vzorku. Získané výsledky sú uvedené v tabuľke č. 4.

Pre cytotoxickú aktivitu sa použili proliferatívne skúšobné testy s rôznymi tumorovými líniami, takými ako MCF-7 (ľudský prsný karcinóm), LoVo (ľudský črevný karcinóm), MES-SA (ľudský maternicový sarkóm) alebo K-562 (ľudská chronická myeloidná leukémia).

Použitý bol sulforodamínový B test využívaný na testovanie protirakovinových produktov Národným rakovinovým ústavom pre (Skehan, 1990). Molekuly v stúpajúcej koncentrácii v rozsahu od 500 μΜ do 0,97 μΜ sa inkubovali paralelne s rôznymi líniami ľudských buniek po dobu 24 hodín. Po odstránení produktov sa NCI testom skúmali bunky, ktoré prežili, po ďalších 48 hodinách. Antiproliferatívna kapacita zlúčenín sa kvantifikovala vo forme IC50 ± SD (koncentrácia molekuly, ktorá inhibuje 50 % bunkového prežitia) použitím metódy programu regresných kriviek (De Lean a kol., 1978). Získané výsledky sú uvedené v tabuľke 1 a tabuľke 2.

Bunkový cyklus a analýza apoptózy na línii tumoru sa uskutočnila inkubáciou produktov v priebehu 24 hodín pri koncentrácii zodpovedajúcej približne hodnote IC50 s MCF-7 bunkami. Molekuly sa odstránili a bunkový cyklus a apoptóza sa stanovili v rôznych časoch (0, 24, 48 hodín). Bunky sa zafarbili propídium jodidom a analyzovali cytofluorimetrom (FACS) (Beckman Dickinsonovým fluorescenciou aktivovaným bunkovým triedičom) pomocou argónového iónového laserového prístroja pri 488 nm pre excitáciu. Pre určenie podielu v percentách buniek v rôznych stupňoch cyklu, sa analyzovali lineárne DNA histogramy pomocou vhodného bunkového programu distribuovaného výrobcom zariadenia. Pre analýzu apoptózy sa vkladala vrstva pod G0/G1 vrchol kontrolnej populácie a dáta sa analyzovali pomocou programu dodaného spoločnosťou (Lysis I1-C32). Získané výsledky sú uvedené v tabuľke 3.

Cytotoxicita molekúl na triedy tumorov rezistentné voči chemosenzibilizačnej aktivite sa stanovila na rôznych triedach tumorových buniek s nadmernou tvorbou P-glykoproteínu a rezistentnému voči doxorubicínu (100-násobne) akrížovo rezistentné voči daunorubicínu, aktinomycínu D, mitoxantrónu, vinkristínu, vinblastínu, taxolu, kolchicínu aetopozidu. Cytotoxicita produktov sa stanovila použitím rovnakého testu prispôsobeného pre citlivé tumorové bunky.

Ďalej sa produkty skúšali pri koncentrácii rovnakej alebo nižšej než je koncentrácia, ktorá inhibuje 10 % bunkového prežitia. Pri tejto koncentrácii sa molekuly testovali paralelne v neprítomnosti a prítomnosti doxorubicínu. MDR pomery sa vypočítali pre hodnoty IC50, aby sa stanovil stupeň schopnosti cytotoxickej aktivity doxorubicínu indukovanej produktom (MDR pomer) (De Lean et al. (1978) A. J. Physiol. 235, E97-102); (Shekan et al. (1990) J. Natl. Cancer Inst. 82, 1107-1112).

Tabuľka 1

Antriproliferatívna aktivita versus citlivá bunka

Séria	Zlúčenina	IC₅₀±SD (μΜ)
MCF-7	L0V0
Tetrahydrokarbazoly	ST 1372	21,1 ±0,3	21,7 ±4,3
II	ST 1728	22 ± 2,8	22,8 ± 2,9
11	ST 1729	35 ±6,1	50,5 ±4,8
II	ST 1777	0,96 ±0,19	0,64 ± 0,003
Ezahydrocykloept[b]indoly	ST 1381	28,5 ± 1,8	22,5 ±2,6
11	ST 1621	22,5 ± 1,3	34,8 ±4,3
II	ST 1765	11,5 ± 1,1	10,5 ±0,07
II	ST 1778	28,5 ± 1,4	54,5 ± 7,4
II	ST 1783	27 ±4	29 ± 0,06

Tabuľka 2

Antiproliferatívna aktivita versus rezistentná bunka

Séria	Zlúčenina	IC₅₀±SD(pM)
MCF-7 / DX	LoVo / DX
T etrahy drokarbazo ly	ST 1372	26,9 ± 1,6	26,3 ± 3,7
II	ST 1751	58,6 ±9
Ezahydrocykloept[b]indoly	ST 1381	28,4 ± 3	25,2 ± 4,2
II	ST 1621	68,3 ± 4,6	23,8 ±3,7
»1	ST 1765	24,8 ±3,8	17,03 ±0,91
II	ST 1778	71 ± 0,4	65,1 ±8,1
II	ST 1783	39 ±0,03

Tabuľka 3

Bunkový cyklus a apoptóza na bunkách MCF-7

Zlúčenina	G0/G1 (%)	S (%)	G2 + M (%)	Apoptóza 48 h (%)
ST 1372	C = 43,7 40 μΜ = 57,8 20 μΜ = 54,4	C = 47,6 40 μΜ = 36,8 20 μΜ = 34,2	C = 8,6 40 μΜ = 5,4 20 μΜ=11,4	C = 3,3 40 μΜ = 16
ST 1381	C = 43,8 30μΜ = 57,7	C = 47,6 30 μΜ = 32,2	C = 8,6 30 μΜ = 10,1	C = 3,3 30μΜ = 3,3

ST 1372 v koncentrácii 40 μΜ zvyšuje a blokuje vGO/Gl 32 % buniek, a v koncentrácii 20 μΜ zvyšuje a blokuje v G0/G1 23 % buniek.

ST 1372 v koncentrácii 11 μΜ zvyšuje 3,5 krát aktivitu doxorubicínu v bunkových líniách MCF-7/Dx a LoVo/Dx.

ST 1381 v koncentrácii 30 μΜ zvyšuje a blokuje v G0/G1 32 % bunkových tried; nie je cytotoxická voči endoteliálnym bunkám (IC > 100 μΜ); a je aktívna pre chemotaxiu.

Tabuľka 4

Cytotoxicita a chemotaxia na BMEC

Séria	Zlúčenina	MEC
IC₅o (μΜ)	IC₀(pM)	% inhibície migrácie pri ICo/D.S.
Ezahydrocykloeptfbjindoly	ST 1381	> 100	30	-61,7 ±6,3
fl	ST 1621	10	0,1	-43 ±4
II	ST 1749	>200	100	-40 ±3
II	ST 1778	50	25	-40 ±4
II	ST 1783	60	10	-46
II	ST 1729	80	25	-40 ±3

Aj keď ST 1381 je lepšia antichemiotaktická zlúčenina, je dôležité poznamenať, že všetky zlúčeniny patriace do tejto skupiny znižujú chemotaxiu endoteliálnych buniek.

Zmes podľa vynálezu obsahuje ako aktívne zložky najmenej jednu zlúčeninu vzorca (I) samotnú alebo v kombinácii s ostatnými aktívnymi prímesami, ktoré sú vhodné pre liečbu ochorení uvedených vo vynáleze v podobe jednotlivých dávok alebo v podobách vhodných pre kombinované liečby. Aktívna zložka podľa vynálezu bude v zmesi s príslušným rozpúšťadlom a/alebo excipientami bežne používanými v lekárnictve, také, aké sú napríklad popísané v poslednom vydaní Remingtonovej farmaceutickej vedeckej príručke „Remngton's Pharmaceutical Sciences Handbook“. Zmes podľa vynálezu bude obsahovať terapeuticky účinné množstvo aktívnej prímesi. Dávky určí príslušný odborník v odbore, napríklad klinický alebo obvodný lekár v závislosti od typu ochorenia, ktoré sa má liečiť a v závislosti od stavu pacienta, alebo s ohľadom na dávkovanie ostatných aktívnych zložiek.

Príklady farmaceutických zmesí zahŕňajú ústne alebo parenterálne, intravenózne, intramuskulárne, podkožné alebo transdermálne podávanie. Farmaceutické zmesi užitočné pre tento účel sú tablety, tuhé alebo mäkké tobolky, prášky, roztoky, suspenzie, sirupy a tuhé formy pre priamu prípravu kvapalných roztokov. Zmesi pre parenterálne podávanie sú napríklad všetky intramuskulárne, intravenózne a podkožné formy v podobe roztokov, suspenzií alebo emulzií. Tiež je potrebné spomenúť lipozomálne prípravky. Vhodné zmesi obsahujú tiež formy založené na pomalom uvoľňovaní aktívnej zložky, či ako formy pre ústne podávanie, tablety potiahnuté vhodnými vrstvami, mikrozapúzdrené prášky, cyklodextrínové komplexy alebo rezervoárové formy, napríklad podkožné ako rezervoárové injekcie alebo implantáty.

Claims

l. Zlúčenina všeobecného vzorca (I):

kde

X = CH, N

X^I = O, S, N, CH

R a R¹, ktoré môžu byť rovnaké alebo rôzne, sú vybraté zo skupiny obsahujúcej H, -OH, OR⁵, kde R⁵ môže byť C1-C4 alkyl alebo benzyl, kde dve skupiny -OR⁵ sú vicinálne, R⁵ je mety lén; alebo R a R¹ môžu byť nezávisle nitro; amino s možnosťou monoalebo disubstituovaných s C1-C4 alkylom; karboxy; alkoxy(Ci-C4)karbonyl;

R a R¹ spoločne môžu tvoriť alifatickú alebo aromatickú cyklickú skupinu obsahujúcu 5 alebo 6 atómov; ak X¹ = N, CH, potom

R je vybratý zo skupiny obsahujúcej H, fenyl, benzyl, lineárny alebo rozvetvený Ci-Cô alkyl;

n je v rozsahu 0 až 4;

R³ môže byť rovnaký alebo odlišný ako R⁴ a je vybratý zo skupiny obsahujúcej H, OH, OR⁶, pričom

R⁶ je lineárny alebo rozvetvený C1-C4 alkyl alebo v prípade, že R³ = R⁴ - OR⁶ vicinálny, R⁶je izopropylidén.

kde A¹ = Η kde A = H, R⁷

R⁷ je C1-C4 lineárny alebo rozvetvený alkyl, ktorý môž byť substituovaný jednou alebo dvoma skupinami OH, OR^{5 6}, v prípade dvoch skupín OR⁶ vicinálnych, R⁶ je izopropylidén; alebo R⁷ je formyl (CHO), oxím (CH=NOH), jej izoméry a ich zmesi, metabolity a ich metabolické prekurzory alebo bio-prekurzory.
2. Zlúčeniny podľa nároku 1, vyznačujúce sa tým, že sú liečivami.
3. Zloženie farmaceutickej zmesi obsahujúcej ako aktívnu zložku zlúčeninu nároku 1 a prinajmenšom spolu s farmaceutický prijateľným excipientom a/alebo rozpúšťadlom.
4. Zloženie podľa nároku 3 pre liečbu nepriaznivého vplyvu tumoru, kde tumor patrí do skupiny obsahujúcej: sarkóm, karcinóm, karcinoid, tumor kosti, neuroendokrinný tumor, lymfoidnú leukémiu, akútnu promyelocytickú leukémiu, myeloidnú leukémiu, monocytickú leukémiu, megakaryoblastickú leukémiu a Hodgkinsovu chorobu.
5. Zloženie podľa nároku 3 vhodné pre liečbu ochorení spôsobených abnormálnou angiogenézou.
6. Zloženie podľa nároku 5, kde patológia spôsobená abnormálnou angiogenézou zahŕňa tumorové metastázy, artritické ochorenia, diabetickú retinopatiu, psoriázu, chronický zápal alebo artériosklerózu.
7. Zloženie obsahujúce zlúčeninu vzorca (I) v kombinácii s jedným, alebo viacerými známymi protitumorovými zlúčeninami, v ktorých je antitumorová zlúčenina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z alkylačných činidiel, inhibítorov topoizomeráz, antitubulínových látok, interkalačných zlúčenín, anti-metabolitov, prírodných produktov takých, ako sú vinkánové alkaloidy, epipodofylotoxíny, antibiotiká, enzýmy, taxány a cytoselektívne zlúčeniny alebo antiangiogénne zlúčeniny.
8. Farmaceutická zmes obsahujúca ako aktívnu zložku kombináciu podľa nároku 7 a j eden alebo viac excipientov alebo farmaceutický prijateľných nosičov.
9. Zloženie podľa nároku 8, vyznačujúce sa tým, že zlúčenina vzorca (I) je prítomná ako koadjuvant protirakovinovej zlúčeniny.
10. Zloženie podľa nároku 8, vyznačujúce sa tým, že zlúčenina vzorca (I) a známe protirakovinové liečivá sa podávajú súčasne alebo postupne.
11. Zloženie podľa nárokov 3 alebo 8 vo forme tabliet, kapsúl, práškov, roztokov, suspenzií, toboliek, sirupov, čípok, klyziem, peny alebo lipozomálnych foriem, požívaných pre orálne, parenterálne alebo rektálne podávanie.
12. Použitie zlúčeniny podľa nároku 1 pre prípravu liečiva pre liečbu nepriaznivého vplyvu tumoru, kde tumor patrí do skupiny obsahujúcej: sarkóm, karcinóm, karcinoid, tumor kosti, neuroendokrinný tumor, lymfoidnú leukémiu, akútnu promyelocytickú leukémiu, myeloidnú leukémiu, monocytickú leukémiu, megakaryoblastickú leukémiu a Hodgkinsovu chorobu.
13. Použitie zlúčeniny podľa nároku 1 pre prípravu liečiva pre liečbu ochorení spôsobených abnormálnou angiogenézou.
14. Použitie podľa nároku 13, pričom ochorenia spôsobené abnormálnou angiogenézou sú vybraté zo skupiny obsahujúcej tumorové metastázy, artritické ochorenia, diabetickú retinopatiu, psoriázu, chronický zápal alebo artériosklerózu.
15. Použitie zlúčeniny podľa nároku 1 v kombinácii s jedným, alebo viacerými známymi protirakovinovými liečivami, pre prípravu liečiva s antitumorovou aktivitou.
16. Použitie podľa nároku 15, v ktorom známa antitumorová zlúčenina je vybraná zo skupiny pozostávajúcej z alkylačných činidiel, inhibítorov topoizomeráz, antitubulínových látok, interkalačných zlúčenín, anti-metabolitov, prírodných produktov takých, ako sú vinkánové alkaloidy, epipodofylotoxíny, antibiotiká, enzýmy, taxány a cytoselektívne zlúčeniny a antiangiogénne zlúčeniny.
17. Použitie podľa nároku 15, v ktorom zlúčenina vzorca (I) a známe protirakovinové liečivá sa podávajú súčasne alebo postupne.