SK252002A3

SK252002A3 - Growth hormone formulations

Info

Publication number: SK252002A3
Application number: SK25-2002A
Authority: SK
Inventors: Bernhard Siebold; John Stevens
Original assignee: Grandis Biotech Gmbh
Priority date: 1999-07-12
Filing date: 2000-07-11
Publication date: 2002-06-04
Also published as: WO2001003741B1; NO20020151L; ES2300268T3; TR200200034T2; CA2378949A1; US20060029635A1; DE60038118T2; HUP0202189A2; JP2003504346A; CN1360506A; AU775107C; TWI247608B; CA2378949C; JP2014208656A; KR20020031388A; AU775107B2; ATE386501T1; JP5941496B2; HK1046358A1; PL353238A1

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka kvapalných formulácii rastového hormónu (GH, Growth Hormone) vhodných na podanie ludskému alebo zvieraciemu telu. Vynález sa týka najmä kvapalných formulácií ľudského rastového hormónu (hGH, human Growth Hormone), ktoré sú farmaceutický prijateľnejšie a výhodnejšie a ešte môžu byť vystavené rôznym spracovateľským procesným stupňom, bez toho, aby došlo k citeľnej strate účinnosti alebo k citeľnej strate stability uvedených formulácií.

Doterajší stav techniky

Natívny hGH je tvorený proteinom s jediným polypeptidovým reťazcom pozostávajúcim zo 191 aminokyselín. Tento proteín je interne zosieťovaný dvoma disulfidovými môstikmi a v monomérnej forme má molekulovú hmotnosť 22 kDa. GH zvieracích druhov je v podstate homológny, ak ide o jeho aminokyselinovú sekvenciu s GH ľudí a má takto veľmi podobné charakteristiky.

Hlavným biologickým účinkom GH je podporovať rast v rade orgánov a tkanív v tele. Orgány a tkanivá, ktoré vykazujú odozvu na GH, zahŕňajú pečeň, črevá, obličky, svaly, spojivové tkanivá a kostru.

Nanizmus spôsobený zníženou činnosťou predného laloka podväzku mozgového je ľahko liečiteľný podaním GH pacientovi trpiacemu týmto stavom. Skôr, ako bola známa produkcia veľkých množstiev hGH rekombinantným mechanizmom, mohli sa získať len velmi obmedzené množstvá hGH prácnou extrakciou slinivkových žliaz pochádzajúcich z ľudských mŕtvol. V rámci tejto praxe tu existovalo riziko prenosu infekčných činidiel, medzi ktoré patri napríklad infekčné činidlo, ktoré je zodpovedné za Creutzfeldt-Jakobové ochorenie (CJD, Creutzfeldt-Jakob Disease), do pacienta, ktorému je podávaný takto získaný hGH. Izolácia génu hGH a konštrukcia transformovaných hostiteľských buniek exprimujúcich hGH v bunkovej kultúre umožňuje nielen spoľahlivejšie, bezpečnejšie a nákladovo účinnejšie liečenie nanizmu spôsobeného zníženou činnosťou predného laloka podväzku mozgového, ale otvára tiež cestu použitia hGH aj pri liečení ďalších ochorení a stavov.

Dlho známym problémom vyskytujúcim sa u vodných kvapalných formulácii farmaceutických proteínov, a teda nielen práve u hGH, je nestabilita týchto formulácií v priebehu skladovania počas určitej časovej periódy. 0 hGH vo vodnom roztoku je známe, že v ňom dochádza k degradačným zmenám. Môže tu dôjsť k chemickým zmenám, čo môže byť spojené s hodnotou pH roztoku v priebehu skladovania. Môže tiež dôjsť k oxidácii metionínových zvyškov. Existuje tiež možnosť štiepenia základného peptidového reťazca, ku ktorému dochádza v dôsledku priebehu hydrolýznych reakcií. Dochádza tu tiež k fyzikálnym zmenám, ktoré môžu zahŕňať agregáciu, ktorá má napríklad za následok tvorbu nerozpustného podielu.

Pôvodný návrh, týkajúci sa riešenia uvedeného problému nestability uvedených formulácií spočíval v lyofilizácii týchto formulácií, čo ale znamenalo, že rezultujúci lyofilizovaný produkt bolo nevyhnutné rekonštituovať bezprostredne alebo krátko pred podaním. Pri bežnej praxi rutinného podania uvedených formulácií doma samotným pacientom to normálne znamenalo, že pacient bol postavený pred úlohu rekonštituovať lyofilizovaný preparát do formy vodného roztoku. Taká úloha je neúmerná možnostiam pacienta a je spojená s rizikom nesprávneho uskutočnenia uvedenej rekonštitúcie v dôsledku nedostatku starostlivosti a pozornosti pacienta venovanej detailným uskutočňovacím inštrukciám alebo len v dôsledku nesprávneho pochopenia takých inštrukcií.

V patentovom dokumente US 4 968 299 (Kabi Pharmacia) je opísané zariadenie, ktoré môže pacient použiť v prípade, ak je pos tavený pred úlohu uskutočniť rekonštitúciu lyofilizovaného produktu, a ktoré znižuje možnosť omylov, ku ktorým by pri uvedenej rekonštitúcii mohlo dôjsť. Avšak aj v tomto prípade samotná rekonštitúcia lyofilizovaného produktu je pre pacienta náročná a takto rekonštituovaný hGH je stabilný len počas 3 týždňov v prípade, ak je skladovaný pri teplote 2 až 8°C. Účinné podávanie formulácie samotným pacientom v priebehu mesiacov takto stále od pacienta požaduje starostlivú pozornosť venovanú uskutočňovacím inštrukciám a je tu teda stále riziko postupu pacienta pripúšťajúceho porušenie liečebného režimu.

V každom prípade spočíva nevýhoda lyofilizácie v tom, že je nákladným a časovo náročným spracovateľským stupňom.

Úsilie zjednodušiť postup podania formulácií samotným pacientom sa preto zameralo na spôsob poskytnutia dostatočne stabilných vodných formulácií hGH v ľahko podateľnej forme.

nestabilite proteínu vo vodnom roztoku je známe, že táto nestabilita predstavuje všeobecný jav, ku ktorému dochádza nielen u hGH.

V patentovom dokumente EP-A-0 131 864 (Hoechst Aktiengesellschaft) sa opisuje spôsob zabránenia agregácii proteínov väčších ako 8,5 kDa vo vodnom roztoku použitím povrchovo aktívnych látok.

Hoci sa patentový dokument EP-A-0 211 601 (International Minerals and Chemical Corporation) predovšetkým týka formulácií s pozvoľným uvoľňovaním účinnej látky, predsa je tu opísané, ako môže byť GH stabilizovaný v roztoku ako kvapalina, formulovaním GH s neionogénnymi povrchovo aktívnymi činidlami, najmä s niektorými polyoxyetylén-polyoxypropylénovými blokovými kopolymérmi, akými sú napríklad blokové kopolyméry Pluronic (ochranná známka spoločnosti BASF) alebo Genapol (ochranná známka spoločnosti Hoechst).

Patentový dokument WO 94/03198 (Genetech) opisuje taktiež riešenie sledujúce pôvodnú inštrukciu týkajúcu sa použitia neionogénneho povrchovo aktívneho činidla ako stabilizátora hGH v kvapalných formuláciách. O množstve neionogénneho povrchovo aktívneho činidla 0,1 až 5% (hmotn./obj .) vo formulácii sa tu uvádza, že umožňuje vystavenie formulácie strihovému a povrchovému namáhaniu bez toho, aby pritom došlo k denaturácii proteínu GH. Formulácie obsahujúce povrchovo aktívne činidlá sú považované za použiteľné v pulmonárnych odmerných a bezihlových injektoroch.

Avšak povrchovo aktívne činidlá sú toxickými látkami, ktoré by sa nemali použiť alebo ktorých použitie by sa malo aspoň obmedziť na pokiaľ možno čo najmenšiu mieru. Je to tak najmä v prípade, keď sú uvedené formulácie podávané denne alebo veľmi často, a najmä v prípade, keď sú pacientmi deti alebo osoby chronicky choré.

Boli navrhnuté aj rôzne rôzne ďalšie spôsoby stabilizácie vodných formulácií hGH.

V patentovom dokumente WO 89/09614 (Genetech) sa opisuje formulácia hGH obsahujúca glycín, manitol a pufor, pričom molárny pomer hGH:glycín sa pohybuje od 1:50 do 1:200.

V patentovom dokumente EP-A-0 303 746 (International Mínerals and Chemical Corporation) sa uvádza, že vodný GH môže byť stabilizovaný formulovaním GH spolu s polyólom, napríklad neredukčnými cukrami, alkoholickými cukrami, cukrovými kyselinami, laktózou, pentaerytritolom, vo vode rozpustnými dextranmi a Ficolom, ďalej s aminokyselinou, napríklad s glycínom, arginínom a betaínom, s aminokyselinovým polymérom majúcim nabitú bočnú skupinu pri fyziologickom pH, a nakoniec aj s cholínovým derivátom, akým je napríklad cholínchlorid, cholínhydrogéncitrát alebo dicholínmukát. Väčšina z uvedených polymérnych materiálov môže pre pacienta pri podaní predstavovať určité riziko. Farmaceutické predpisy nariaďujú vyvarovať sa podaniu všetkých zbytočných prísad, najmä syntetických prísad (napríklad pentaerytritol), s cielom obmedziť riziko, ktoré by pre pacienta tieto prísady predstavovali. 0 mnohých z navrhnutých stabilizátoroch je známe, že nie sú klinicky prijateľné a nie sú takto použiteľné v rámci farmaceutický prijateľných formulácií.

Patentový dokument WO 92/17200 (Genetech) sa týka stabilizácie hGH a to nielen v kvapalných, ale aj v lyofilizovaných prípravkoch. Opísaný návrh spočíva vo vytvorení stabilných zinok:hGH-diméroch. Tieto zinok:hGH-diméry sú tvorené dvoma zinkovými iónmi a dvoma molekulami hGH.

V patentovom dokumente WO 93/12811 (Novo Nordisk) sa opisuje kvapalná formulácia hGH, v ktorej je ako stabilizujúca a pufrujúca látka použitý asparagín.

V patentovom dokumente WO 93/19776 (Kabi Pharmacia) sa uvádza celkom neočakávané zistenie spočívajúce v tom, že v prípade, keď sa vodný produkt hGH formuluje s citrátovým pufrom, potom je stabilnejší ako v prípade, keď sa formuluje s fosfátovým pufrom.

Cieľom vynálezu je poskytnúť dostatočne stabilnú formuláciu hGH okamžite použiteľnú samotným pacientom a to bez použitia akéhokoľvek preparatívneho alebo rekonštitučného postupu. Ďalším cieľom vynálezu je poskytnúť formuláciu, ktorá by mohla byť prechovávaná doma v domácej chladničke počas aspoň dvoch mesiacov. Ešte ďalším cieľom vynálezu je poskytnúť zásobnú kvapalnú formuláciu, ktorá by mohla byť rozdelená a plnená do nádobiek pre pacientovo použitie a to bez toho, aby pritom došlo k neprijateľnému úbytku účinnosti GH, k neprijateľnej nestabilite a najmä bez toho, aby pritom dochádzalo k neprijateľnej agregácii. Ešte ďalším cieľom vynálezu je poskytnúť dostatočne stabilnú kvapalnú formuláciu, v ktorej nie sú použité alebo v ktorej sú použité v minimálnej miere farmaceutický neprijateľné alebo nežiaduce zložky, čo inými slovami znamená poskytnúť dokonca ešte farmaceutický prijateľnejšiu formuláciu.

Ešte ďalším cielom vynálezu je poskytnúť kvapalné formulácie, u ktorých by nedochádzalo k nežiaducej tvorbe kryštálov v prípade, keď sú tieto kvapalné formulácie prechovávané v chladničke počas dlhej časovej periódy, napríklad počas až 6 alebo až 18 mesiacov, alebo keď sú prechovávané počas určitej časovej periódy mimo chladničky, napríklad počas niekoľkých dní, týždňov alebo mesiacov.

Podstata vynálezu

Úplne v rozpore s existujúcimi odbornými vedomosťami, sa teraz s prekvapením zistilo, že v skutočnosti nie je nevyhnutné použiť rôzne dodatočné stabilizačné činidlá v roztoku, okrem samotného hGH a fosfátového pufra, aby. sa dosiahli uvedené ciele. Okrem toho vynález vznikol napriek inštrukciám doterajšieho stavu techniky uvádzajúcim, aký majú povrchovo aktívne činidlá základný význam pre stabilitu vodných roztokov GH a to, že roztoky fosfátového pufra neposkytujú dobrú stabilitu v porovnaní s citrátovým pufrom.

V súlade s jedným aspektom, poskytuje vynález vodnú formuláciu rastového hormónu pozostávajúcu v podstate z rastového hormónu vo fosfátovom pufrovanom roztoku.

Podľa druhého aspektu, vynález poskytuje kvapalnú formuláciu rastového hormónu pozostávajúcu v podstate z rastového hormónu vo fosfátom pufrovanom roztoku a z konzervačného prostriedku.

Podľa tretieho aspektu, poskytuje vynález kvapalnú formuláciu rastového hormónu pozostávajúcu v podstate z rastového hormónu v izotonickom fosfátom pufrovanom roztoku a z konzervačného prostriedku.

V rámci štvrtého aspektu, poskytuje vynález kvapalnú formuláciu rastového hormónu pozostávajúcu v podstate z rastového hormónu v izotonickom fosfátom pufrovanom roztoku.

Uvedené výhodné formulácie neobsahujú konzervačný prostriedok, pri prechovávaní v ampuliach poskytujú vhodný prostriedok pre jednodávkové podanie. Vo formuláciách pre viacdávkované podanie je prítomnosť konzervačného činidla výhodná.

Až doteraz nedosiahnutou a naozaj prekvapujúcou výhodou všetkých uvedených formulácií je, že sú stabilné pri prechovávaní v chladničke pri teplote v rozsahu 2 až 8°C. Na vyhodnotenie stability uvedených formulácií v priebehu času sa môžu použiť rôzne testy stability. Reprezentatívne príklady takýchto testov sú opísané v ďalej uvedenom príklade 3 a tiež v patentovom dokumente WO 94/03198, aj keď tieto testy nevyčerpávajú všetky testy, ktoré sa môžu použiť na vyhodnotenie stability uvedených formulácií.

Zistilo sa, že plnenie dávkovacích zásobníkov formuláciami rastového hormónu neobsahujúcimi neionogénne povrchovo aktívne činidlo s použitím komerčne dostupných plniacich zariadení, viedlo k neprijateľnej miere agregácie rastového hormónu. Avšak za predpokladu, že tlak kvapaliny a strihové namáhanie sú minimalizované v priebehu plniaceho postupu (a to v prípade použitia, alebo bez použitia komerčných plniacich zariadení), potom môže byť obmedzené na minimum' alebo celkom vylúčené použitie povrchovo aktívnych látok. Rovnováha, ktorá sa má dosiahnuť medzi fyzikálnym plniacim namáhaním a koncentráciou povrchovo aktívnej látky, môže byť určená empirickým stanovením, ktorého uskutočnenie je v silách priemerného odborníka v danom odbore.

V závislosti od miery fyzikálneho namáhania alebo od miery strihových síl uplatňujúcich sa v priebehu uvedeného plnenia a v prípade, keď neionogénne povrchovo aktívne činidlo je nevyhnutné na zamedzenie uvedenej agregácie, potom môžu byť koncentrácie neionogénneho povrchovo aktívneho činidla len , asi 0,2% (hmotn./obj.), obvykle nižšie ako 0,05% (hmotn./obj, výhodne nižšie ako 0,04% (hmotn./obj.), výhodnejšie nižšie ako 0,01% (hmotn./obj.) alebo dokonca ešte výhodnejšie nižšie ako 0,001% (hmotn./obj.).

Neionogénne povrchovo aktívne látky môžu zahŕňať polysorbát, napríklad polysorbát 20 alebo 80, atď., a poloxaméry, ako napríklad poloxamér 184 alebo 188, polyóly Pluronic a ďalšie etylén/polypropylénové blokové polyméry.

Neočakávane sa teraz zistilo, že fosfátový pufor sa môže použiť vo formuláciách rastového hormónu a že má prekvapujúco dobrý účinok pri stabilizácii rezultujúcich formulácií a to buď v priebehu spracovateľských stupňov, medzi ktoré patrí napríklad plnenie zásobníkových nádobiek, alebo v priebehu skladovania.

Taktiež sa s prekvapením zistilo, že neprítomnosť alebo použitie len veľmi nízkej koncentrácie neionogénneho povrchovo aktívneho činidla nemá nežiaduci účinok na stabilitu formulácie rastového hormónu v zásobníkových nádobkách pri teplotách bežne sa vyskytujúcich v chladničkách (to znamená pri teplotách v rozsahu 2 až 8°C). Takto je možné skladovanie počas aspoň troch mesiacov a dlhšie, to znamená počas aspoň 6 mesiacov alebo dokonca 12 mesiacov, a to bez toho, aby bola nežiaducim spôsobom ovplyvnená účinnosť alebo farmaceutická prijateľnosť formulácií rastového faktora.

V súlade s piatym aspektom, poskytuje vynález formuláciu rastového hormónu obsahujúcu rastový hormón vo fosfátom pufrovanom roztoku, ktorý pripadne ešte obsahuje konzervačný prostriedok.

V rámci uvedených predmetov vynálezu je fosfátom pufrovaný roztok výhodne izotonickým roztokom. V prípade, ak je uvedený pufrovaný roztok izotonickým roztokom, potom jeho izotonicita sa môže zabezpečiť prostredníctvom neutrálnej soli, ako je napríklad chlorid sodný, alebo monosacharidu, akým je napríklad laktóza, disacharidu, akým je napríklad sacharóza, alebo alkoholického cukru, akým je napríklad manitol.

V rámci vynálezu sa teraz tiež zistilo, že na zabezpečenie izotonity uvedenej formulácie rastového hormónu sa môžu namiesto neutrálnej soli výhodne použiť aj niektoré iné zlúčeniny.

V rámci šiesteho predmetu vynálezu, poskytuje vynález kvapalnú formuláciu rastového hormónu obsahujúcu rastový hormón v izotonickom pufrovanom roztoku, pripadne v izotonickom fosfátom pufrovanom roztoku, pričom zlúčenina, ktorá robí uvedený roztok izotonickým, je zvolená z množiny zahŕňajúcej monosacharidy, napríklad laktózu, disacharidy, napríklad sacharózu, a alkoholické cukry, napríklad manitol.

Ak ide o hodnotu pH, majú výhodné formulácie hodnotu pH v rozsahu od 5,0 do 7,0 a výhodnejšie hodnotu pH v rozsahu od 5, 6 do 6, 5.

S prekvapením sa teraz pre všetky tu opísané formulácie zistilo, že problém kryštalizácie, ku ktorému vo formuláciách obvykle dochádza, môže byť eliminovaný alebo aspoň minimalizovaný zabezpečením hodnoty pH asi 6,2 alebo hodnoty pH vyššej.

Výhodne sa pH uvedených formulácií pohybuje v rozsahu od 6,15 do 7,4, výhodnejšie v rozsahu od 6,2 do 6,5, a to s cielom eliminovať alebo aspoň minimalizovať uvedenú kryštalizáciu.

Vynález takto zahŕňa skôr definované kvapalné formulácie, v ktorých v priebehu skladovania nedochádza k žiadnej detegovateľnej kryštalizácii. Toto skladovanie môže prebiehať počas aspoň jedného mesiaca, výhodne počas šiestich týždňov, výhodnejšie po čas v rozsahu asi 1 až 4 mesiacov a najvýhodnejšie počas 3 mesiacov. Skladovacia teplota sa môže pohybovať okolo 2°C alebo môže byť vyššia, výhodne asi 4°C alebo vyššia; výhodnejšie ide o teplotu v rozsahu od asi 2°C do menej ako 40°C alebo ešte výhodnejšie o teplotu v rozsahu od asi 2°C do 25°C a zvlášť o teplotu 15°C.

Pod pojmom kryštalizácia sa rozumie prípadná kryštalizácia rastového hormónu. Pričom, pokiaľ existuje je výhodne v kvapalnej formulácii detegovateľná priamo okom, výhodnejšie pod optickým mikroskopom pri päťnásobnom zväčšení, alebo dokonca výhodnejšie pod optickým mikroskopom pri desaťnásobnom zväčšení. Pred vlastným pozorovaním pod optickým mikroskopom môžu byť formulácie sfiltrované a prítomnosť alebo absencia kryštálov môže byť detegovaná na filtri. V prípade pozorovania pod optickým mikroskopom, môže mať filter veľkosť pórov asi 5 mikrometrov.

Zvlášť výhodný test, pomocou ktorého sa kryštalizácia vyhodnocuje, spočíva v skladovaní formulácie počas 3 mesiacov pri teplote 15°C a v následnom stanovení prítomnosti alebo absencie kryštálov voľným okom.

Ak ide o konzervačný prostriedok, je tento konzervačný prostriedok výhodne zvolený z množiny zahŕňajúcej fenol, benzylalkohol, metakrezol, metylparabén, propylparabén a benzalkóniumchlorid, aj keď v tomto prípade sa môže použiť ľubovoľná iná konzervačná alebo antibakteriálna zlúčenina v takej vhodnej koncentrácii, aby formulácia ešte zostala farmaceutický prijateľná.

V rámci výhodnej formy uskutočnenia spôsobu podľa vynálezu je fosfátom pufrovaný roztok pripravený s použitím príslušných množstiev príslušne hydratovaných foriem NaH₂PO₄ a Na₂HPO₄, ktoré sú nevyhnutné na dosiahnutie požadovanej koncentrácie a pH pufra, čo je rutinne riešiteľnou úlohou pre odborníka v danom odbore .

V rámci výhodnej formy uskutočnenia vynálezu je rastovým hormónom ľudský rastový hormón.

Vo zvlášť výhodných formuláciách dochádza k menej ako 0,01% agregácii rastového hormónu, výhodne k menej ako 0,1% agregácii rastového hormónu, výhodnejšie k menej ako 1% agregácii rastového hormónu, alebo dokonca ešte výhodnejšie k menej ako 10% agregácii. Táto agregácia sa môže merať štandardnou exkluzívnou vy soko výkonnou kvapalinovou chromatografiou, ktorá bude detailnejšie opísaná ďalej, aj keď na meranie tejto agregácie sa môže použiť ľubovoľná vhodná metóda merania agregácie.

Vynález tiež zahŕňa zariadenie na podanie kvapaliny pacientovi injekciou a vhodné na aplikáciu aspoň jednej dávkovacej jednotky, ľubovoľnej zo skôr opísaných kvapalných formulácii rastového hormónu. Príkladom takého zariadenia je tužkový injektor. Pacientom je výhodne človek.

Vynález tiež poskytuje súpravy obsahujúce vstrekovacie zariadenia a separátny zásobník, ľubovoľnej zo skôr opísaných kvapalných formulácií rastového hormónu. Uvedený zásobník je výhodne prispôsobený na spoločné použitie s injekčným zariadením tak, že pri tomto použití je kvapalná formulácia v zásobníku v prúdovom spojení s výstupom injekčného zariadenia.

V rámci výhodnej formy uskutočnenia je injekčným zariadením tužkový injektor a zásobníkom je vložková patróna.

Vynález ďalej poskytuje vložkovú patrónu obsahujúcu ľubovoľnú zo skôr opísaných formulácií na spoločné použitie s tužkovým injektorovým zariadením.

Ďalšie prekvapujúce zistenie, ktoré sa v rámci vynálezu urobilo, spočíva v tom, že ak sú zásobníkové nádobky formulácie rastového hormónu naplnené a uzatvorené tak, že tu nie je žiadny vzduchový priestor alebo prístup vzduchu, potom sa ľahšie zabezpečuje nielen sterilita obsahu zásobníkovej nádobky, ale táto skutočnosť tiež prispieva k minimalizácii alebo eliminácii agregácie rastového hormónu.

V rámci ešte ďalšieho aspektu, vynález zahŕňa uzatvorenú zásobníkovú nádobku s kvapalnými formuláciami rastového hormónu, pričom v naplnenej zásobníkovej nádobke nie je v podstate žiadny vzduchový priestor.

V prípade, ak pacient, ktorému sa má formulácia podať, je človek, potom je výhodným rastovým hormónom ludský rastový hormón. Zvlášť výhodným ľudským rastovým hormónom je hormón produkovaný rekombinantným mechanizmom, opísaným napríklad v patentovom dokumente EP-A-0-217 822 (SCIOS NOVÁ) . Varianty ľudského rastového hormónu, ktoré sa môžu použiť v rámci vynálezu, a to buď samotné alebo vo vzájomných kombináciách, a s natívnym hormónom, zahŕňajú 191 aminokyselinový variant známy ako somatropín a 192 aminokyselinový N-terminálny metionínový (met) variant, známy ako somatrém. Je tu tiež variant známy ako hGH-V, ktorý sa prirodzene nachádza v placente v priebehu tehotenstva, ktorého gén je známy a ktorého rekombinantný proteín sa pripravil.

Množstvo hGH v kvapalnej formulácii podľa vynálezu závisí od objemu formulácie a počtu dávok hGH, ktorý má tento objem poskytnúť. Výhodným dávkovým objemom je objem 0,4 ml, avšak sa môžu použiť aj objemy pohybujúce sa od 0,01 do 1,0 ml. Inými výhodnými dávkovými objemami môžu byť objemy v rozsahu od 0,1 ml do 0, 6 ml.

Vo výhodnej dávkovej jednotke na denné podávanie je podané 1,3 mg hGH, aj keď presná podaná dávka sa môže meniť v závislosti od faktorov každého špecifického pacienta. Môžu sa použiť dávkové množstvá v rozsahu od 0,033 mg do 3,33 mg hGH, pričom výhodné dávky sa pohybujú v rozsahu od 0,33 do 2,0 mg. V prípade nižšej frekvencie jednotlivých podaní sa príslušným spôsobom zvýšia dávkové množstvá.

Objemy alebo/a dávkové množstvá sa môžu meniť od pacienta k pacientovi a tieto dávkové množstvá určí špecificky ošetrujúci lekár.

Obvykle môžu formulácie podľa vynálezu obsahovať hGH v množstve 0,5 mg/ml až 20 mg/ml, výhodne v množstve 1 mg/ml až 15 mg/ml, výhodnejšie v množstve 2 mg/ml až 10 mg/ml a ešte výhodnejšie v množstve 3 mg/ml až 5 mg/ml.

Vynález tiež zahŕňa súpravy obsahujúce injekčné zariadenia a separátnu zásobníkovú nádobku so skôr opísanou kvapalnou formuláciou rastového hormónu. V prípade, ak aplikačným zariadením je len podkožná injekčná striekačka, potom uvedená súprava môže obsahovať túto striekačku, ihlu a liekovku alebo ampulu obsahujúcu formuláciu hGH na použitie spolu s injekčnou striekačkou. V rámci ešte výhodnejšieho uskutočnenia je injekčné zariadenie iné ako len podkožná injekčná striekačka a v tomto prípade je zásobníková nádobka prispôsobená na spoločné použitie s uvedeným injekčným zariadením tak, že pri vlastnom použití je kvapalná formulácia v zásobníkovej nádobke v prúdovom spojení s výstupom z injekčného zariadenia.

Príklady injekčných zariadení neobmedzujúcim spôsobom zahŕňajú podkožnú injekčnú striekačku a tužkové injekčné zariadenie.

Zvlášť výhodnými injekčnými zariadeniami sú tužkové injektory, pričom v tomto prípade je zásobníková nádobka tvorená vložkovou patrónou, výhodne vložkovou patrónou na jedno použitie.

V rámci ďalšieho predmetu vynálezu, vynález poskytuje vložkovú patrónu obsahujúcu skôr opísanú kvapalnú formuláciu rastového hormónu na spoločné použitie s tužkovým injektorovým zariadením. Táto vložková patróna môže obsahovať buď jedinú dávku alebo množinu dávok rastového hormónu.

V nasledujúcej časti opisu sú výhodné formy uskutočnenia vynálezu opísané v nasledujúcich príkladoch pomocou odkazov na pripojené výkresy. Tieto príklady majú len ilustračný charakter a nijako neobmedzujú rozsah vynálezu, ktorý je jednoznačne vymedzený definíciou patentových nárokov a obsahom opisnej časti. Opis obrázkov na výkresoch

Na pripojených výkresoch obr. 1 znázorňuje graf porovnávacích údajov o stabilite pri teplote 2 až ·8°0 pre formulácie hGH dodatočne obsahujúce fosfátový pufor pri pH 5,6, chlorid sodný a benzylalkohol; sú porov14 nané formulácie obsahujúce a neobsahujúce povrchovo aktívne činidlo Pluronic; čas v týždňoch je tu vynesený proti logaritmu percentuálnej čistoty hGH;

obr. 2 znázorňuje graf porovnávacích údajov o stabilite pri teplote 2 až 8°C pre formulácie hGH dodatočne obsahujúce chlorid sodný a benzylalkohol pri pH 6,0; porovnávané sú formulácie obsahujúce citrátový alebo fosfátový pufor; čas v týždňoch je tu vynesený proti logaritmu percentuálnej čistoty hGH;

obr. 3 znázorňuje graf porovnávacích údajov stability pri teplote 2 až 8°C pre formulácie hGH; porovnávané sú formulácie obsahujúce izotonický citrátový pufor a povrchovo aktívne činidlo Pluronic a formulácie hGH obsahujúce práve izotonický fosfátový pufor a neobsahujúce žiadne povrchovo aktívne činidlo.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Príprava a purifikácia zásobného rekombinantného hGH

Rekombinantný hGH sa produkuje v bunkových kultúrach buniek CHO transformovaných génom hGH s cielom exprimovať proteín hGH za kultivačných podmienok. Detaily týkajúce sa toho, ako sú bunky transformované a kultivované, sú opísané v patentovom dokumente EP-A-0 217 822 (SCIOS NOVÁ). Modifikácia týchto kultivačných podmienok v rámci prechodu na kultiváciu v priemyselnom alebo komerčnom meradle predstavuje rutinne riešiteľnú úlohu pre priemerného odborníka v danom odbore.

Akonáhle je hGH vyprodukovaný bunkami bunkovej kultúry, je potrebné ho extrahovať a prečistiť do formy vhodnej na farmaceutické použitie. To sa uskutočňuje postupmi opísanými v patentovom dokumente AU 629177 (University of New South Wales and Garvan Inštitúte of Medical Research).

Príklad 2

Príprava stabilnej kvapalnej formulácie

Zásobná formulácia sa pripraví spoločným zmiešaním jednotlivých zložiek. Poradie, v ktorom sa zložky k tvoriacej sa zmesi pridávajú, nie je kritické. Tiež presný stav alebo forma jednotlivých zložiek bezprostredne pred pridaním do tvoriacej sa zmesi nie sú kritické. V rámci výhodného uskutočnenia prípravy formulácie sú zložky pred primiešaním k zmesi v najvhodnejšom stave na miešanie, pričom tiež poradie a spôsob pridania jednotlivých zložiek sa zvolí tak, aby boli ak je to možné čo najvhodnejšie na získanie formulácie.

Ďalej sú uvedené zvlášť výhodné príklady uvedených formulácií :

Formulácia 1

HGH	3,33 mg/ml	(10 IU/ml)
NaH₂PO₄	1,05 mg/ml
		(to znamená 10 mM fosfátový pufor)
Na₂HPO₄	0,17 mg/ml
NaCl	5,86 mg/ml	(to znamená 0,59% hmotn./obj.)
Benzylalkohol	9, 00 mg/ml	(to znamená 0,9% hmotn./obj.)
Voda pre injek-	q.s.
cie pH 6,0
Formulácia II
HGH	3,33 mg/ml	(10 IU/ml)
NaH₂PO₄	1,05 mg/ml
		(to znamená 10 mM fosfátový pufor)
Na₂HPO₄	0,17 mg/ml

Voda pre injekq.s.

cie pH 6,0

Formulácia III

HGH	3,33 mg/ml	(10 IU/ml)
NaH₂PO₄	1,05 mg/ml	(to znamená 10 mM	fosfátový pufor)
Na₂HPO₄	0,17 mg/ml
NaCl	5,85 mg/ml	(to znamená 0,59%	hmotn./obj.)
Voda pre injek-	q.s.
cie pH 6,0
Formulácia IV
HGH	3,33 mg/ml	(10 IU/ml)
NaH₂PO₄	1,05 mg/ml	(to znamená 10 mM	fosfátový pufor)
Na₂HPO₄	0,17 mg/ml
Benzylalkohol	9,00 mg/ml	(i.e. 0,9% obj./obj.)
Voda pre injek-	q.s.
cie pH 6,0
Formulácia V
HGH	3,33 mg/ml	(10 IU/ml)
NaH₂PO₄	1,05 mg/ml	(to znamená 10 mM	fosfátový pufor)
Na₂HPO₄	0,17 mg/ml
Manitol	35 mg/ml	(3,5% hmotn./obj.)
Pluronic F-68	2 mg/ml	(0,2% hmotn./obj.)
Benzylalkohol	9 mg/ml	(0,9% obj./obj.)
Voda pre injek-	q.s.

cie pH 6, O

Formulácia VI

HGH 3,33 mg/ml (10 ÍU/ml)

NaH2PC>4.2H2O 0,85 mg/ml (to znamená 10 mM fosfátový pufor)

Na₂HPO4.7H₂O	0,31 mg/ml
Manitol	35 mg/ml	(3,5%	hmotn./obj.)
Pluronic F-68	2 mg/ml	(0,2%	hmotn./obj.)
Benzylalkohol	9 mg/ml	(0,9%	obj./obj.)
Voda pre injek-	q.s.

ciu pH 6,2

Uvedené príkladné formulácie sa pripravili nasledujúcim spôsobom.

1. Roztok pomocných látok s dvojnásobnou koncentráciou sa pripraví rozpustením všetkých požadovaných pomocných látok vo vode pre injekcie a nastavením pH na požadovanú hodnotu s použitím molárneho roztoku kyseliny chlorovodíkovej alebo molárneho roztoku hydroxidu sodného.

2. Zásobný roztok rastového hormónu sa predloží do nádoby, potom sa do nádoby pridá za opatrného miešania roztok pomocných látok.

3. V prípade, ak je to potrebné, sa znova nastaví potrebné pH a roztok sa doplní na výsledný objem. S cieľom plniť ho do vložkových patrón použiteľných v tužkovom injektore sa získaný roztok sfiltruje cez sterilizačný filter a naplní do injekčných patrón uzatvorených na jednom konci plunžerovým piestom a na druhom konci alumíniovým tesnením obsahujúcim kaučukovú prepážku.

Ostatné testované formulácie sa všeobecne pripravili skôr uvedeným spôsobom, pričom detaily týkajúce sa týchto formulácií sú uvedené ďalej.

Príklad 3

Testovanie stability vodných formulácií hGH

Vzorky produktu sa prechovávali za regulovaných podmienok pri teplote 2 až 8°C a analyzovali v rôznych časových intervaloch uplynulých od začiatku skladovania. Stabilita produktu sa stanovila použitím dvoch metód vysoko výkonnej kvapalinovej chromatografie, pričom obidve tieto metódy sú v súlade s Európskym liekopisom pre Somatropín na injekcie. Prvou metódou je chromatografia s reverznou fázou HPLC 4 na stanovenie príbuzných proteinov, to znamená degradačných produktov vytvorených deamidáciou a oxidáciou. Druhou metódou je exklúzna vysoko výkonná kvapalinová chromatografia HPLC na stanovenie diméru a príbuzných látok s vyššou molekulovou hmotnosťou.

Vysoko výkonná kvapalinová chromatografia s reverznou fázou sa použila na vyhodnotenie deamidácie a oxidácie v rade rôznych formulácií v priebehu skladovania až po čas 65 týždňov pri teplote 2 až 8°C. Získané údaje sú uvedené v ďalej uvedených tabuľkách 1 až 3 a graficky vynesené na obr. 1 až obr. 3.

Tabuľka 4 ukazuje výsledky štúdií stability uskutočnených na formulácii V skladovanej pri teplote 2 až 8°C.

Uvedená exklúzna vysoko výkonná kvapalinová chromatografia (dáta nie sú uvedené) sa použila na testovanie agregácie. V priebehu týchto štúdií neboli nájdené merateľné množstvá dimérov a príbuzných látok s vyššou molekulovou hmotnosťou. Vo všetkých formuláciách dochádzalo k menej ako 1% agregácii (v skutočnosti táto hodnota predstavuje pri tomto teste prah spoľahlivého kvantifikovania), čo znamená, že v uvedených formuláciách sa nepozorovala žiadna agregácia.

Získané výsledky jednoznačne ukazujú, že fosfátový pufor je lepší ako citrátový pufor, ak ide o stabilizáciu formulácií, a že neprítomnosť povrchovo aktívneho činidla Pluronic má za následok vyššiu stabilitu uvedených formulácií..

Tabuľka 1

Štúdia stability (2 až 8°C)

Formulácia A (s	činidlom Pluronic a fosfátovým pufrom, pH 5,6)
HGH	3,33 mg/ml
Pluronic	0,8 mg/ml
Fosfátový pufor	10 mM
Chlorid sodný	5,9 mg/ml
Benzylalkohol	9 mg/ml

Čas (týždne)	Čistota hGH (%)	Logaritmus percentuálnej čistoty
0	98,90	1,9952
3	98,35	1,9928
9	97, 84	1,9905
13	97,05	1,9870
30	96, 26	1,9834
k deň^-1 x 10⁴		-1,253

Formulácia B (žiadny Pluronic, fosfátový pufor, pH 5,6)

HGH	3,33 mg/ml
Fosfátový pufor	10 mM
Chlorid sodný	5, 9 mg/ml
Benzylalkohol	9 mg/ml

Čas (týždne)	Čistota hGH (%)	Logaritmus percentuálnej čistoty
0	96,28	1,9835
0	95, 88	1,9817
4	95, 45	1, 9798

4	95, 80	1,9814
15	95, 67	1, 9808
15	95, 89	1,9818
26	94,46	1,9752
26	93, 94	1,9729
39	94,15	1,9738
52	93,21	1,9695
k deň'¹ x 10⁴		- 0,8272

Tabuľka 2

Štúdia stability (2 až 8°C)

HGH	3,33 mg/ml
Pluronic	0,8 mg/ml
Citrátový pufor	10 mM
Chlorid sodný	5,9 mg/ml
Benzylalkohol	9 mg/ml

Formulácia Cl a C2 (pH 5,6; citrátový pufor + Pluronic)

Čas (týždne)	Čistota hGH (%)	Logaritmus percentuálnej čistoty
0	97,89	1,9907
0	97,93	1,9909
4	97, 12	1,9873
4	96, 80	1,9859
13	95, 44	1,9797
13	94,85	1,9770
26	93, 19	1,9694
26	93, 60	1,9713
52	91,32	1,9606
52	91,06	1,9593
0	97,48	1,9889
0	97,71	1,9899
4	96, 93	1,98 65
4	96, 92	1,9864
13	94,89	1,9772
13	95, 38	1,9795
26	92,59	1,9666
26	92, 65	.1,9668
52	90, 69	1,9576
52	91,11	1,9596
k deň'¹ x 10⁴		- 1,954

Tabuľka 3

Štúdia stability (2 až 8°C)

Formulácia D

HGH

Fosfátový pufor

Chlorid sodný

Benzylalkohol

3,33 mg/ml mM, pH 6,0

5, 9 mg/ml mg/ml

Čas (týždne)	Čistota hGH (%)	Logaritmus percentuálnej čistoty
0	98,47	1,9933
4	97, 82	1,9904
9	97,44	1,9887
k deň’¹ x 10⁴		- 1,65

Štúdia stability (2 až 8°C)

Formulácie El, E2 a E3 (citrátový pufor pH 6,0 s povrchovo aktívnym činidlom Pluronic)

HGH	3,33 mg/ml
Pluronic	0,8 mg/ml
Citrátový pufor	10 mM, pH 6,0
Chlorid sodný	5,9 mg/ml
Benzylalkohol	9 mg/ml

Čas (týždne)	Čistota hGH (%)	Logaritmus percentuálnej čistoty
0	97,75	1,9901
0	97,56	1,9893
5	96, 05	1,9825
5	96, 95	1,9865
9	96, 29	1,9836

9	96,12	, 1,9826
0	97, 96 .	1,9910
0	97,93	1,9909
5	97,09	1,9872
9	96, 52	1,9846
9	96, 51	1,9846
0	96, 54	1,9936
0	98,47	1,9933
5	97, 68	1,9898
5	97,43	1,9887
9	96, 67	1,9853
9	96, 77	1,9857
k deň^-1 x 10⁴		- 2,55

Tabuľka 4

Štúdia stability

Formulácia V, 2 až 8°C

Čas (týždne)	Čistota hGH (%)	Logaritmus percentuálnej čistoty
0	97,21	1, 988
0	97,23	1,988
4,5	96, 50	1,985
4,5	96, 65	1,985
9	95, 18	1,979
9	95, 19	1, 979
13	95, 23	1, 979
13	95, 32	1,979 .
26	94, 64	1,976
26	94,41 '	1,975
ku dňu’¹ x 10⁴		- 2,489

Príklad 4

Zabránenie kryštalizácii nastavením hodnoty pH kvapalných formulácii

V rámci tejto štúdie sa pripravili formulácie VI s obmeňovanou hodnotou pH (0,1 jednotkové prírastky) s použitím príslušných množstiev zložiek fosfátového pufra. 1,5 ml alikvóty takto pripravených formulácií sa naplnili do jednotlivých vložkových patrón vhodných na použitie v tužkovom injektore. Tieto vložkové patróny sa skladovali pri teplote 15°C počas 3 mesiacov. Prítomnosť alebo absencia kryštálov v patrónach sa stanovila v priebehu skladovania pozorovaním voľným okom.

Kryštalizácia sa pozorovala vo formuláciách s hodnotou pH nižšou ako 6,2, to znamená s hodnotou 6,1. Žiadna kryštalizácia sa nepozorovala vo formuláciách s hodnotou pH 6,2 a vyššou.

Na porovnanie je možné uviesť, že pri formulácii skladovanej pri teplote 15°C alebo 25°C počas až 6 pozorovala kryštalizácia. Táto- formulácia V (pH vykazovala kryštalizáciu pri skladovaní počas 2 až pri teplote 2 až 8°C.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Kvapalná formulácia rastového hormónu stabilná pri skladovaní, vyznačujúca sa tým, že je v podstate tvorená rastovým hormónom v izotonickom, fosfátom pufrovanom roztoku.
2. Kvapalná formulácia rastového hormónu stabilná pri skladovaní, vyznačujúca sa tým, že je v podstate tvorená rastovým hormónom v izotonickom, fosfátom pufrovanom roztoku a konzervačným prostriedkom.
3. Formulácia podlá nároku 1 alebo 2, vyznačujúca sa tým, že zlúčenina spôsobujúca izotonicitu, zahŕňa jeden alebo viac monosacharidov, disacharidov alebo alkoholických cukrov.
4. Formulácia podľa niektorého z nárokov laž3, vyznaču júca sa tým, že zlúčeninou spôsobujúcou izotonicitu je manitol alebo/a sacharóza, prípadne laktóza.
5. Formulácia podľa niektorého z nárokov 1 až 4, vyznačujúca sa tým, že má hodnotu pH v rozsahu od 5,6 do 6,5 alebo hodnotu pH 6,2 alebo vyššiu.
6. Formulácia podľa niektorého z nárokov 1 až 4, vyznačujúca sa t ý m, že má hodnotu pH v rozsahu od 6,15 do 7,4, výhodne hodnotu pH v rozsahu od 6,2 do 6,5.
7. Formulácia podľa niektorého z nárokov 2 až 6, vyznačujúca sa tým, že konzervačný prostriedok je tvorený jednou alebo viacerými látkami zvolenými z množiny zahŕňajúcej fenol, benzylalkohol, metakrezol, metylparabén, propylparabén, benzalkóniumchlorid a benzetóniumchlorid.
8. Kvapalná formulácia rastového hormónu, stabilná pri skladovaní, vyznačujúca sa tým, že je v podstate tvorená rastovým hormónom vo fosfátom pufrovanom roztoku.
9. Kvapalná formulácia rastového hormónu, stabilná pri skladovaní, vyznačujúca sa tým, že je v podstate tvorená rastovým hormónom vo fosfátom pufrovanom roztoku a konzervačným prostriedkom.
10. Kvapalná formulácia rastového hormónu, stabilná pri skladovaní, vyznačujúca sa tým, že obsahuje rastový hormón vo fosfátom pufrovanom roztoku a neionogénne povrchovo aktívne činidlo v koncentrácii _t nižšej ako' asi 0,01% (hmotn./obj.).
11. Formulácia podľa nároku 10, vyznačuj ú c a sa tým, že neionogénne povrchovo aktívne činidlo je prítomné v koncentrácii nižšej ako asi 0,001% (hmotn./obj.).
12. Formulácia podľa nároku 10 alebo 11, vyznačuj ú c a sa tým, že fosfátom pufrovaný roztok je izotonickým roztokom, pričom tento roztok má prípadne hodnotu pH v rozsahu od 5,6 do 6,5 a výhodne ďalej obsahuje konzervačný prostriedok.
13. Formulácia podľa nároku 12, vyznačujúca sa tým, že konzervačný prostriedok zahŕňa jednu alebo viac látok zvolených z množiny zahŕňajúcej fenol, benzylalkohol, metakrezol, metylparabén, propylparabén, benzalkóniumchlorid a benzetóniumchlorid.
14 .

Formulácia podľa nároku

12, vyznačuj ú c a sa tým, že izotonicitu fosfátom pufrovaného roztoku zabezpečúje neutrálna soľ, napríklad NaCl, alebo zlúčeninou zvolenou z množiny zahŕňajúcej monosacharid, napríklad laktózu, disacharid, napríklad napríklad manitol.

sacharózu, alebo alkoholický cukor,
15.

Formulácia podľa značuj úca niektorého a tým, že predchádzajúcich rastovým hormónom nárokov, je ľuds ký rastový hormón.
16.

Formulácia podľa niektorého predchádzajúcich nárokov, značujúca a tým, že dochádza k nižšej ako

0,01% agregácii, agregácii, výhodnejšie nižšej ako pri rastovom výhodne nižšej

1% agregácii hormóne ako 0,1% a ešte výhodnejšie nižšej ako 10% agregácii.

17. Kvapalná formulácia rastového hormónu, vyznačujú

c a sa t ý m, že má nasledujúce zloženie:

hGH 3,33 mg/ml (10 IU/ml), NaH₂PO₄.2H₂O, Na₂HPO₄.7H₂O v množstve na dosiahnutie 10 mM pufra, manitol 35 mg/ml (3,5% hmotn./obj.), Pluronic F-68 2 mg/ml (0,2% hmotn./obj.), benzylalkohol 9 mg/ml (0,9% obj./obj.), voda pre injekcie q.s .,

pH 6,2.
18. Formulácia podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúca sa tým, že nemá detegovateľnú kryštalizáciu.
19. Formulácia podľa nároku 18, vyznačuj ú c a sa t ý m, že skladovanie prebieha počas aspoň jedného mesiaca, výhodne šiestich týždňov, výhodnejšie počas od asi 1 do 4 mesiacov, najvýhodnejšie počas 3 mesiacov.
20. Formulácia podľa nároku 18 alebo 19, vyznačuj ú c a sa t ý m, že teplota skladovania je 2°C alebo vyššia, vý hodne asi 4°C alebo vyššia, výhodnejšie asi 2°C až menej ako 40°C, ešte výhodnejšie teplota od asi 2 do 25°C a najvýhodnejšie . 15°C. ‘
21. Formulácia podlá niektorého z nárokov 18 až 20, vyznačujúca sa tým, že kryštalizáciou je kryštalizácia rastového hormónu.
22. Formulácia podlá niektorého z nárokov 18 až 21, vyznačujúca sa tým, že kryštalizácia je detegovaná pozorovaním volným okom, výhodne pozorovaním pod optickým mikroskopom pri päťnásobnom, zväčšení a výhodnejšie pozorovaním pod optickým mikroskopom pri desaťnásobnom zväčšení.
23. Zariadenie na podanie kvapaliny pacientovi injekciou prispôsobené na podanie aspoň jednej dávkovej jednotky formulácie podlá niektorého z nárokov 1 až 22.
24.

Zariadenie podľa nároku 23, vyznačuj ú ce sa tým, že je tvorené tužkovým injektorovým zariadením.
25. Zariadenie podľa nároku 23 alebo nároku 24, vyznačujúce sa tým, že pacientom je človek.
26. Súprava, vyznačujúca sa tým, že obsahuje injekčné zariadenie a separátnu zásobníkovú nádobku s formuláciou podľa niektorého z nárokov 1 až 22.
27. Súprava podľa nároku 26, vyznačujúca sa tým, že zásobníková nádobka je prispôsobená injekčnému zariadeniu tak, že pri použití je formulácia v zásobníkovej nádobke v prúdovom spojení s výstupom injekčného zariadenia.
28. Súprava podľa nároku 27, vyznačujúca sa tým, že injekčným zariadením je tužkový injektor a zásobníkovou nádobkou je vložková patróna.
29. Vložková patróna, vyznačujúca sa tým, že obsahuje kvapalnú formuláciu podľa niektorého z nárokov 1 až 22 a je prispôsobená na použitie v tužkovom injektorovom zariadení.
30. Použitie vodnej formulácie rastového hormónu obsahujúceho fosfátový pufor pri pH asi 6,2, ako skladovateľného farmaceutického produktu, u ktorého v podstate nedochádza ku kryštalizácii.
31. Použitie podľa nároku 30, pri ktorom hodnotou pH fosfátového pufra je hodnota pH z rozsahu od 6,15 do 7,4 alebo/a pri ktorom je farmaceutický produkt skladovaný počas aspoň jedného mesiaca alebo/a pri ktorom je teplota skladovania teplotou asi 2°C alebo vyššou.
32. Použitie podľa nároku 30 alebo 31, pri ktorom formulácia obsahuje neionogénne povrchovo aktívne činidlo, výhodne v koncentrácii asi 0,2% (hmotn./obj.).
33. Spôsob zabránenia kryštalizácii pri skladovaní fosfátom puf-

rovanej vodnej formulácie, vyznačuj úc i sa t ý m, že sa rastový hormón formuluje tak, že formulácia má hodnotu PH asi 6,2 alebo vyššiu. 34. Spôsob podľa nároku 32, vyznačuj ú c i sa t ý m, že pH je v rozsahu od 6,15 do 7,4, výhodne v roz sahu od 6,2 do

6,5 alebo/a skladovanie sa uskutočňuje počas aspoň jedného mesiaca alebo/a teplota skladovania je asi 2°C alebo vyššia.
35. Spôsob podľa nároku 33 alebo 34, vyznačuj ú c i sa tým, že formulácia obsahuje neionogénne povrchovo aktívne činidlo, výhodne v koncentrácii asi 0,2% (hmotn./obj.).