SK175299A3 - Process for reducing the concentration of viral and molecular pathogens in a biological material - Google Patents
Process for reducing the concentration of viral and molecular pathogens in a biological material Download PDFInfo
- Publication number
- SK175299A3 SK175299A3 SK1752-99A SK175299A SK175299A3 SK 175299 A3 SK175299 A3 SK 175299A3 SK 175299 A SK175299 A SK 175299A SK 175299 A3 SK175299 A3 SK 175299A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- ion exchanger
- immunoglobulin
- biological material
- pathogens
- concentration
- Prior art date
Links
- 244000052769 pathogen Species 0.000 title claims abstract description 27
- 239000012620 biological material Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 51
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 title abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 12
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 46
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 31
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 31
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 21
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 12
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 8
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims description 6
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 6
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 claims description 5
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 3
- 238000010923 batch production Methods 0.000 claims description 2
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 claims 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 abstract description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 6
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 6
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 6
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 6
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 6
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 6
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 5
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 4
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 3
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 3
- 241000531123 GB virus C Species 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000182 blood factors Drugs 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000710780 Bovine viral diarrhea virus 1 Species 0.000 description 2
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 2
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 description 2
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 2
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 description 2
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 2
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 2
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 description 2
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 2
- 102000029301 Protein S Human genes 0.000 description 2
- 108010066124 Protein S Proteins 0.000 description 2
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 2
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- PPBOKXIGFIBOGK-BDTUAEFFSA-N bvdv Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CN=CN1 PPBOKXIGFIBOGK-BDTUAEFFSA-N 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 description 2
- 229940012413 factor vii Drugs 0.000 description 2
- 229940012426 factor x Drugs 0.000 description 2
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 229910002012 Aerosil® Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000701089 Equid alphaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 108010029144 Factor IIa Proteins 0.000 description 1
- 108010074864 Factor XI Proteins 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 241000724709 Hepatitis delta virus Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000702617 Human parvovirus B19 Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- UEEJHVSXFDXPFK-UHFFFAOYSA-N N-dimethylaminoethanol Chemical compound CN(C)CCO UEEJHVSXFDXPFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000156302 Porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus Species 0.000 description 1
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 1
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 1
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 1
- 239000012614 Q-Sepharose Substances 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 239000002156 adsorbate Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 238000011118 depth filtration Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 244000052637 human pathogen Species 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000002941 microtiter virus yield reduction assay Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 1
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000003253 viricidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
- A61L2/0005—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts
- A61L2/0011—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts using physical methods
- A61L2/0017—Filtration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
- A61L2/0005—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts
- A61L2/0011—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts using physical methods
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J41/00—Anion exchange; Use of material as anion exchangers; Treatment of material for improving the anion exchange properties
- B01J41/20—Anion exchangers for chromatographic processes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- General Factory Administration (AREA)
- Apparatus For Disinfection Or Sterilisation (AREA)
Abstract
Description
Vynález sa týka spôsobu výroby imunoglobulínových preparátov.The invention relates to a process for the production of immunoglobulin preparations.
Doterajší stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION
Výroba terapeutických proteínov a preparátov, obzvlášť imunoglobulínu, extrakciou z ľudského alebo zvieracieho tkaniva alebo tekutín, ako je krv alebo plazma, ako i z kontinuálne rastúcich transformovaných buniek cicavcov, je často spojená s rizikom potenciálnej kontaminácie patogénmi, ako sú vírusy, vírusom podobné častice alebo prióny. Musia sa teda vykonávať opatrenia na to, aby sa prípadne prítomné patogény neprenášali na ľudí.The production of therapeutic proteins and preparations, especially immunoglobulin, by extraction from human or animal tissue or fluids such as blood or plasma, as well as from continuously growing transformed mammalian cells, is often associated with the risk of potential contamination with pathogens such as viruses, virus-like particles or prions . Measures must therefore be taken to ensure that any pathogens present are not transmitted to humans.
Ľudská krv, prípadne plazma, môže obsahovať napríklad vírusy, ktoré spôsobujú ochorenie ako AIDS, hepatitídu B alebo ochorenia inými typmi hepatitídy. U plazmových proteínov z plazmovej banky je riziko prenášania infekčných agens, ako sú vírusy, na základe selekcie darcov krvi alebo plazmy a na základe výrobného postupu veľmi nepatrné. Vhodné opatrenia, ako je vyradenie darcu krvi, ktorý vykazuje zvýšené riziko, z odberu, ako i analýzy darovanej krvi alebo plazmy, ktoré umožňujú zistiť infekčných darcov, a odbery ďalším delením vylúčiť, síce dovoľujú väčšinu infekčných darcov eliminovať, väčšinou ale nie je možné zistiť všetkých. Existujú testovacie systémy na dôkaz infekčných vírusov v biologických materiáloch, nemôžu pochybnosti o ' potenciálnom prenose patogénov vždy vylúčiť, lebo pri širokom spektre infekčných patogénov je nemožné testovať východiskový biologický materiál na všetky vírusy alebo molekulárne patogény, ktoré môžu byť vo vzorke prítomné.Pritom nezisťuje väčšina testov vírus, ale proti vírusu vznikajúce protilátky, takže v období takzvaného „diagnostického okna“ nemôže byť vykonaný dôkaz kontaminácie. Pre niektoré skupiny vírusov okrem toho neexistuje žiadna vhodná, alebo dostatočne citlivá metóda dôkazu. I keď nové objavené testovacie spôsoby, obzvlášť spôsob amplifikácie nukleových kyselín,For example, human blood or plasma may contain viruses that cause diseases such as AIDS, hepatitis B or diseases of other types of hepatitis. For plasma proteins from a plasma bank, the risk of transmitting infectious agents such as viruses due to the selection of blood or plasma donors and the manufacturing process is very low. Appropriate measures, such as the withdrawal of blood donors at increased risk from donation, as well as blood or plasma donation analyzes to identify infectious donors, and to exclude donations by subdivision, while allowing the majority of infectious donors to be eliminated, but mostly not detectable all. There are test systems to detect infectious viruses in biological materials, they cannot always rule out the potential transmission of pathogens because, with a wide range of infectious pathogens, it is impossible to test the starting biological material for any viruses or molecular pathogens that may be present in the sample. tests, but virus-emerging antibodies, so that during the so-called "diagnostic window" there can be no evidence of contamination. Moreover, for some groups of viruses, there is no suitable or sufficiently sensitive method of detection. Although the novel test methods discovered, particularly the nucleic acid amplification method,
31358/H ako napríklad PCR, sú veľmi citlivé a špecifické, môžu byť použité len na patogény, ktorých sekvencie nukleových kyselín sú známe. V prípadoch , v ktorých sú síce ľudské patogény známe, avšak nie je k dispozícii žiadny citlivý spôsob dôkazu, zostáva neistota, že sa negatívny výsledok získa len na základe príliš nepatrného obsahu vírusu, ktorý leží pod hranicou citlivosti testovacieho systému.31358 / H, such as PCR, are very sensitive and specific and can only be used for pathogens whose nucleic acid sequences are known. In cases where human pathogens are known, but no sensitive means of proof are available, there remains uncertainty that a negative result will only be obtained on the basis of too little virus content below the sensitivity of the test system.
Boli preto vyvíjané pre výrobu farmaceutických a terapeutických produktov špecifické postupy odstraňovania a/alebo inaktivácie na zníženie obsahu vírusu, také , aby v konečnom produkte nebolo možné očakávať žiadne infekčné častice.Therefore, specific removal and / or inactivation procedures have been developed for the production of pharmaceutical and therapeutic products to reduce the virus content, such that no infectious particles can be expected in the final product.
Rôzne inaktivačné postupy sú založené na fyzikálno - chemickom spracovaní pomocou tepla a/alebo chemikálií. Ako tieto spôsoby prichádzajú do úvahy hlavne tepelné spracovanie, pasterizácia, spracovanie roztoku proteínu β-propiolaktónom a UV-žiarením, spracovaním kombinácie rozpúšťadla a detergenta (tzv. S/D-postup) alebo ožiarenie roztoku proteínu po prídavku fotodynamickej látky. Pomocou týchto spôsobov bola dosiahnutá inaktivácia vírusov až 106 log-stupňov. Eficiencia spôsobu inaktivácie sa však môže meniť v závislosti na type vírusu. I keď sa krvné produkty, spracované postupom S/D, považujú za bezpečné vo vzťahu k preneseniu HCV, HBV alebo HIV, neinaktivujú sa týmto spôsobom nezapúzdrené vírusy, ako je HAV alebo parvovírus (Prowse C., Cox Sang. 67 (1994), 191 až 196),The various inactivation procedures are based on physico-chemical treatment using heat and / or chemicals. Suitable methods are, in particular, heat treatment, pasteurization, treatment of the protein solution with β-propiolactone and UV-radiation, treatment of the solvent / detergent combination (the so-called S / D procedure) or irradiation of the protein solution after addition of the photodynamic substance. Using these methods, virus inactivation of up to 10 6 log-degrees was achieved. However, the effectiveness of the method of inactivation may vary depending on the type of virus. Although blood products processed by the S / D procedure are considered safe in relation to the transmission of HCV, HBV or HIV, non-encapsulated viruses such as HAV or parvovirus are not inactivated in this way (Prowse C., Cox Sang. 67 (1994), 191 to 196),
Postupy tepelného spracovania sa vykonávajú pri biologických produktoch výhodne buď v roztoku (EP-0 124 506), v suchom stave (EP-0 212 040 alebo WO 82/03871) alebo vo zvlhčenom stave (EP-0 324 729). Často pritom môže dochádzať ku stratám na základe termolability mnohých biologických substancií.The heat treatment processes are carried out for biological products preferably either in solution (EP-0 124 506), in a dry state (EP-0 212 040 or WO 82/03871) or in a humidified state (EP-0 324 729). Frequently, losses can occur due to the thermolability of many biological substances.
Druh inaktivačného spôsobu môže mať ale tiež vplyv na produkty a preto je často nutná stabilizácia pre minimalizáciu straty proteínu. K tomu musia po niektorých inaktivačných postupoch nasledovať čistiace kroky, aby sa odstránili pridávané chemikálie.However, the type of inactivation method may also have an effect on the products and therefore stabilization is often required to minimize protein loss. In addition, some inactivation procedures must be followed by purification steps to remove added chemicals.
Spôsob zníženia obsahu vírusov zahrňuje obzvlášť chromatografické postupy, filtráciu roztokov proteínov cez membránový filter alebo adsorpciuThe method for reducing the virus content comprises in particular chromatographic processes, filtration of protein solutions through a membrane filter or adsorption.
31358/H vírusov na pevnej fáze a nasledujúce odstránenie pevnej fázy, ako je popísané v EP-0 679 405. Bolo však zistené, že spracovanie s pevnou fázou, ako je napríklad Aerosil®, síce dovoľuje odstránenie HIV z až 4 log-stupňov z roztoku obsahujúceho imunoglobulín, strata IgG však môže predstavovať až 42 % (Gao a kol., Vox Sang 64 (1993), 204 až 209). Na veľkovýrobné použitie je pre tieto vysoké hodnoty strát takýto spôsob považovaný za nevhodný.31358 / H solid phase viruses followed by solid phase removal as described in EP-0 679 405. However, solid phase processing such as Aerosil® has been found to allow removal of HIV from up to 4 log-degrees from however, the loss of IgG may be up to 42% (Gao et al., Vox Sang 64 (1993), 204-209). For large-scale applications, such a process is considered unsuitable for these high loss values.
Ďaleko rozšírený chromatografický spôsob pre izoláciu biologických látok je aniónomeničová chromatografia. Tiež možnosť, že sa týmto deliacim spôsobom môže znížiť obsah vírusov, je v literatúre popísaná. Napríklad bolo skúšané zníženie obsahu vírusov pri aniónomeničovej chromatografii na čistenie vWF za podmienok, za ktorých sa na aniónomenič viaže vWF, ale nie vírus (Burnouf-Radosevich, Vox Sang 62 (1992), 1 až 11). Dôkladným premytím stĺpca pred eluovaním je možné získať vWF - v závislosti na víruse so znížením obsahu vírusu 1,5 až 5 mocnín čísla desať.A widespread chromatographic method for the isolation of biologicals is anion exchange chromatography. Also, the possibility that virus content can be reduced by this separation method is described in the literature. For example, virus reduction was tested in anion-exchange chromatography to purify vWF under conditions in which vWF binds to the anion-exchange but not the virus (Burnouf-Radosevich, Vox Sang 62 (1992), 1-11). By thoroughly washing the column before eluting, it is possible to obtain vWF - depending on the virus, reducing the virus content by 1.5 to 5 squares of number ten.
Zolton a kol. (Vox Sang 49 (1985), 381 až 389) skúšali hodnotu zníženia obsahu vírusov pri aniónomeničovej chromatografii na čistenie gama-globulínov za podmienok, pri ktorých sa gama-globulíny neviažu na aniónomenič. Pri tomto spôsobe sa používa ako aniónomenič DEAE-separoza pri hodnote pHZolton et al. (Vox Sang 49 (1985), 381-389) tested the virus reduction value in anion exchange chromatography to purify gamma globulins under conditions in which gamma globulins do not bind to the anion exchanger. In this process DEAE-separose is used as an anion exchanger at pH
7,5. Infekčnosť východiskového roztoku, zmiešaného s vírusom hepatitídy B, je možné pritom pomocou tejto aniónomeničovej chromatografie odstrániť. Pomocou tohto experimentu sa vykoná zníženie obsahu vírusu hepatitídy B o faktor 3000. Potvrdiť hodnotu zníženia obsahu iných vírusov však nebolo pri hodnote pH 7,5 v žiadnom prípade možné. Je zaujímavé, že s pri hodnote pH pod 7,2 vyskytovali vírusy v kvapaline ktorá pretiekla aniónomeničom, takže je možné tento spôsob považovať v neutrálnej alebo slabej kyslej oblasti pH v zásade za nepoužiteľný.7.5. The infectivity of the starting solution mixed with the hepatitis B virus can be removed by this anion exchange chromatography. This experiment reduced the hepatitis B virus content by a factor of 3000. However, it was not possible to confirm a reduction in the content of other viruses at pH 7.5. Interestingly, with a pH below 7.2, viruses were present in the liquid that flowed through the anion exchanger, so this method can be considered essentially unusable in the neutral or weak acidic pH range.
V EP 506 651 je popísaný viacstupňový spôsob získavania preparátu, obsahujúceho IcA, IgG a transferin, pri ktorom sa počas každého jednotlivého pracovného kroku dosiahne redukcia titru vírusu. Počas extrakčného a zrážacieho kroku s 12 % etylalkoholom je možné dosiahnuť redukciu vírusu o faktor 105. Pri adsorpčnom kroku sú viazané proteíny na iónomenič, premyjú sa a znovu sa eluujú. Pritom sa dosiahne redukcia vírusu okolo faktora 103.EP 506 651 discloses a multi-step method for obtaining a preparation comprising IcA, IgG and transferrin, wherein a reduction of the virus titer is achieved during each individual working step. During the extraction and a precipitation step with 12% ethanol can be achieved by reduction of the virus by a factor of 10 5th In the adsorption step, the proteins are bound to the ion exchanger, washed and eluted again. A virus reduction of about 10 3 is achieved.
31358/H31358 / H
V publikácii Dev. Biol. Stand. 81 (1993), 199 až 209 popisuje Burnouf, že sa môže pomocou aniónomeničového kroku pri čistení faktora VIII znížiť obsah parainfluenzavírusu a HIV-1 o 4, prípadne 3 mocniny čísla desať. Pri čistení vWF pomocou aniónomeničovej chromatografie je popísaná hodnota zníženia obsahu PRV (porcine pseudorabies virus 5 log-stupňov).In Dev. Biol. Stand. 81 (1993), 199-209 discloses Burnouf that the anion-exchange step of purifying factor VIII can reduce the parainfluenzavirus and HIV-1 content by 4 and 3 powers of ten, respectively. In the purification of vWF by anion exchange chromatography, the reduction in PRV (porcine pseudorabies virus 5 log-degree) is described.
Mitra a kol. (Curr. Stud. Hematol. Blood Transfus. 56 (1989), 34 a 43) ukazujú, že pri čistení IgG z plazmy pomocou schémy frakcionácie plazmy podľa Cohn-Ocleye je možné v dôsledku zrážacích krokov za prítomnosti určitých koncentrácií etylalkoholu a definovanej hodnoty pH za studená (-5° C) dosiahnuť zníženie obsahu vírusu > 5, prípadne >8 log-stupňov u myšacieho C-vírusu, prípadne HIV. V tejto práci je tiež uvedené, že 25 % etanolický roztok môže pri fyziologickej hodnote pH pôsobiť silne vírusocidne. Spojenie spracovania etylalkoholom s iónomeničovou chromatografiou tu však nie je ani popísané, ani uvažované.Mitra et al. (Curr. Stud. Hematol. Blood Transfus. 56 (1989), 34 and 43) show that when purifying IgG from plasma using the Cohn-Ocley plasma fractionation scheme, precipitation steps are possible in the presence of certain concentrations of ethyl alcohol and a defined pH value cold (-5 ° C) to achieve a virus reduction of> 5 and> 8 log-degrees, respectively, in the mouse C-virus or HIV. It is also stated in this work that a 25% ethanolic solution may have a strong virocidal effect at physiological pH. However, the combination of ethanol treatment with ion exchange chromatography is neither described nor contemplated.
Hamman a kol. (Vox sang 67 (1994), 72 až 77, ukazujú, že sa pomocou iónomeničovej chromatografie pri procese výroby koncentrátu faktora VIII môže dosiahnuť zníženie vírusovej aktivity, prípadne koncentrácie vírusu len 1 až 2 log-stupňov.Hamman et al. (Vox sang 67 (1994), 72-77) show that reduction of viral activity or virus concentration of only 1 to 2 log-degrees can be achieved by ion exchange chromatography in the process of producing Factor VIII concentrate.
Je teda potreba priemyslovo použiteľných metód na bezpečné oddelenie vírusov z roztokov imunoglobulínu, aby sa vylúčili riziká infekcií u pacientov, ktorí sú ošetrovaní farmaceutickými alebo terapeutickými preparátmi zvieracieho alebo ľudského pôvodu alebo vyrobenými génovo technickými postupmi z bunkových kultúr.Thus, there is a need for industrially applicable methods for safely separating viruses from immunoglobulin solutions in order to eliminate the risk of infections in patients who are treated with pharmaceutical or therapeutic preparations of animal or human origin or produced by genetic engineering techniques from cell cultures.
Ďalej je potrebné u imunoglobulínových produktov zabezpečených proti vírusom' a neobsahujúcich patogény, u ktorých je už spôsobom výroby zabezpečené, že sa neprenesie žiadny patogén a že spôsob je dostatočne šetrný, aby zostala prakticky neovplyvnená ich biologická aktivita.In addition, it is necessary for virus-safe and non-pathogen-free immunoglobulin products which have already been produced by the production process to ensure that no pathogen is transferred and that the method is sufficiently gentle that their biological activity remains virtually unaffected.
Úlohou predloženého vynálezu teda je, dať k dispozícii zlepšený spôsob výroby preparátov, obsahujúcich IgG, u ktorých by bol súčasne znížený obsah virálnych a molekulárnych patogénov.It is, therefore, an object of the present invention to provide an improved process for the production of IgG-containing preparations in which viral and molecular pathogens are simultaneously reduced.
31358/H31358 / H
Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION
Uvedená úloha bola podľa predloženého vynálezu vyriešená vypracovaním spôsobu vyššie uvedeného druhu, ktorého podstata spočíva v tom, že sa potenciálne patogénmi kontaminovaný imunoglobulín obsahujúci biologický materiál zmieša s organickým rozpúšťadlom, tento s organickým rozpúšťadlom zmiešaný biologický materiál sa uvedie do kontaktu s iónomeničom, pričom sa patogény adsorbujú na iónomenič a tieto imunoglobulíny, ktoré nevstupujú alebo len nepatrne vstupujú do vzájomného pôsobenia s materiálom iónomeniča sa neadsorbujú a iónomenič s adsorbovanými patogénmi sa od imunoglobulín obsahujúceho biologického materiálu oddelí, pričom sa získa vyčistený preparát imunoglobulín obsahujúci biologické substancie so zníženým obsahom vírusov.The object of the present invention is to provide a method of the aforementioned type, which comprises mixing a potentially pathogen-contaminated immunoglobulin containing biological material with an organic solvent, contacting the organic solvent-mixed biological material with the ion exchanger, wherein the pathogens they adsorb to the ion exchanger and these immunoglobulins that do not enter or only slightly interact with the ion exchanger material are not adsorbed and the ion exchanger with adsorbed pathogens are separated from the immunoglobulin containing biological material to obtain a purified immunoglobulin preparation containing reduced viral content.
Ukázalo sa, že sa prekvapivo spôsobom podľa predloženého vynálezu môžu imunoglobulíny eficientne získať zeluátu. Obzvlášť pre IgG sa môže podľa predloženého vynálezu dosiahnuť výťažok viac ako 70 %.Surprisingly, it has been shown that the immunoglobulins can be efficiently obtained with a succinate by the method of the present invention. Especially for IgG, a yield of more than 70% can be achieved according to the present invention.
Prekvapivo bolo ďalej zistené, že za prítomnosti organického rozpúšťadla je redukčný faktor iónomeničového kroku v porovnaní s faktorom, popísaným v stave techniky, podstatne zvýšený. Tak zistil Hamman a kol. (supra) redukčný faktor len 1 log-stupeň pri iónomeničovom kroku.Surprisingly, it has further been found that in the presence of an organic solvent, the reduction factor of the ion-exchange step is substantially increased compared to that described in the prior art. Thus, Hamman et al. (supra) reduction factor of only 1 log-degree at the ion exchange step.
Nebolo preto možné očakávať, že sa pri jednostupňovom postupe prítomnosťou rozpúšťadla podstatne zmení adsorpčná špecifičnosť iónomeniča, čím sú viazané patogény, zatiaľ čo biologické substancie, obzvlášť proteíny, sa v zásade neviažu. Tak je pomocou spôsobu podľa predloženého vynálezu možné dosiahnuť napríklad pre HAV redukčný faktor > 5,95 logstupňov, čo zodpovedá úplnému odstráneniu, zatiaľ čo na rozdiel od toho dosahuje Hamman a kol. redukčného faktoru len 1 log-stupeň pre HAV pomocou iónomeničového kroku.Therefore, it could not be expected that in the one-step process the presence of a solvent would substantially change the adsorption specificity of the ion exchanger, thereby binding pathogens, while biological substances, especially proteins, did not bind substantially. Thus, with the method of the present invention, for example, a reduction factor of> 5.95 logs can be achieved for HAV, which corresponds to complete elimination, whereas Hamman et al. a reduction factor of only 1 log-degree for HAV using an ion exchange step.
Je síce známe, že spracovanie pre zníženie obsahu s 12 % etylalkoholom môže viesť k redukcii vírusov, je ale nanajvýš prekvapujúce, že je organické rozpúšťadlo vhodné tiež na to, že sa súčasne so spracovaným iónomeničom použije na zníženie obsahu vírusov.While it is known that treatment to reduce the content with 12% ethyl alcohol may lead to virus reduction, it is most surprising that the organic solvent is also suitable for being used simultaneously with the treated ion exchanger to reduce the virus content.
31358/H31358 / H
V rámci predloženého vynálezu sa ukázalo, že sa môžu dosiahnuť zvláštne hodnoty zníženia obsahu pomocou aniónomeničovej chromatografie, prípadne adsorpcie na aniónomeniči, výhodne v spojení s materiálmi, ako je napríklad DEAE-Sephacel® , DEAE-Sephadex® , DEAE-Sepharose CL6B® , DEAE-Sepharose Fast Flow®, QAE-Sephadex®, Q-Sepharose Fast Flow®, QSepharose High Performance® , Q-Sepharose Big Beads® (všetko firma Pharmacia); DEAE-Tris-Acryl®, DEAE-Spherodex® ‘ Q-Hyper-D® (všetko firma Sepracor); Macroprep DEAE®, Macroprep Q® (všetko firma BioRad); DEAEToyopearl®, QAE-Toyopaerl®, Toyopearl Super-Q-® (všetko firma Tosohaas); Protein PAK DEAE® (Waters); Fractogel EMD-TMAE®, Fractogel EMD-DEAE®, Fractogel EMD-DMAE®, Licrospher 1000 TMAE®, Licrospher 1000 DEAE® a Lirospher 4000 DMAE® (všetko firma MERCK).Within the scope of the present invention, it has been shown that particular values of content reduction can be achieved by anion exchange chromatography or anion exchange adsorption, preferably in conjunction with materials such as DEAE-Sephacel®, DEAE-Sephadex®, DEAE-Sepharose CL6B®, DEAE -Sepharose Fast Flow®, QAE-Sephadex®, Q-Sepharose Fast Flow®, QSepharose High Performance®, Q-Sepharose Big Beads® (all Pharmacia); DEAE-Tris-Acryl®, DEAE-Spherodex®-Q-Hyper-D® (all by Sepracor); Macroprep DEAE®, Macroprep Q® (all BioRad); DEAEToyopearl®, QAE-Toyopaerl®, Toyopearl Super-Q-® (all by Tosohaas); PAK DEAE® protein (Waters); Fractogel EMD-TMAE®, Fractogel EMD-DEAE®, Fractogel EMD-DMAE®, Licrospher 1000 TMAE®, Licrospher 1000 DEAE® and Lirospher 4000 DMAE® (all from MERCK).
Obzvlášť výhodný je predovšetkým pri spracovaní imunoglobulínu, aniónomenič typu DEAE, obzvlášť typu DEAE-Sephadexu.Especially preferred in the processing of immunoglobulin is an anion exchanger of the DEAE type, in particular of the DEAE-Sephadex type.
Patogény, adsorbované na iónomenič, sa potom odstránia oddelením komplexu iónomenic/patogén z imunoglobulín obsahujúceho biologického materiálu. Komplex sa oddelí výhodne penetráciou imunoglobulín obsahujúceho biologického materiálu cez priestupný filter, obzvlášť hĺbkový filter. Oddelenie komplexu sa môže tiež vykonať sedimentáciou, obzvlášť odstredením.The pathogens adsorbed to the ion exchanger are then removed by separating the ion exchanger / pathogen complex from the immunoglobulin containing biological material. The complex is preferably separated by penetration of an immunoglobulin containing biological material through a permeable filter, in particular a depth filter. Separation of the complex can also be effected by sedimentation, in particular by centrifugation.
Imunoglobulín obsahujúcimi biologickými substanciami sa v rámci predloženého vynálezu myslia substancie biologického pôvodu, ktoré sa získavajú napríklad z telesných tekutín, ako je krv alebo plazma, alebo sa môžu izolovať z kultivačných tekutín rekombinantných buniek, pričom tieto biologické substancie, ktoré sa v rámci predloženého vynálezu získavajú, prípadne ich kontaminácia vírusmi sa má znižovať, sa môžu používať obzvlášť terapeuticky, profylaktický alebo diagnosticky. U týchto biologických substancií sa môže jednať podľa predloženého vynálezu tiež o imunoglobulíny, ktoré môžu byť tvorené prokaryotickými alebo eukaryotickými bunkami.Immunoglobulin-containing biological substances in the context of the present invention are substances of biological origin which are obtained, for example, from body fluids such as blood or plasma, or can be isolated from culture fluids of recombinant cells, the biological substances which are obtained within the scope of the present invention. or their viral contamination is to be reduced, they may be used particularly therapeutically, prophylactically or diagnostically. These biological substances may also be immunoglobulins according to the present invention, which may consist of prokaryotic or eukaryotic cells.
Získavanie preparátov biologických substancií so zníženým obsahom vírusov zo supernatantu adsorbátu, prípadne z filtrátu sa vykonáva obvykleObtaining preparations of biological substances with reduced virus content from the adsorbate supernatant or from the filtrate is usually carried out
31358/H ďalším spracovaním alebo čistením biologických substancií, prípadne frakciou biologického materiálu, pričom sa okrem iného vykonáva zrážanie, postupy chromatografického čistenia, filtrácia, diafiltrácia a formulovanie.31358 / H by further processing or purification of biological substances, optionally a fraction of biological material, including, but not limited to, precipitation, chromatographic purification procedures, filtration, diafiltration and formulation.
Imunoglobulín obsahujúci biologický materiál pritom môže byť v rámci predloženého vynálezu frakcia plazmy, imunoglobín obsahujúca frakcia plazmy, výhodne Cohnova frakcia 11+111, plazmový proteín obsahujúca frakciu, ktorá obsahuje krvné faktory, ako je faktor II, faktor VII, faktor VIII, faktor IX, faktor X, faktor XI, proteín C, proteín S a vWF, koncentrát obsahujúci niektoré z uvedených krvných faktorov, supernatant kultúry hybridoma-bunkovej línie, supernatant bunkovej kultúry transformovaných alebo infikovaných buniek cicavcov alebo extrakt zvieracieho alebo ľudského tkaniva. Parametre pre vykonávanie spôsobu sa pritom určia vždy podľa druhu a povahy biologického materiálu a podľa možných prítomných kontaminujúcich patogénov. Optimálne parametre, ako je hodnota pH, teplota, doba trvania inkubácie pre uskutočnenie a druh organického rozpúšťadla pri spôsobe podľa predloženého vynálezu, sú pre odborníkov zistiteľné na základe ich všeobecných vedomostí v závislosti na druhu patogénov, špecifickosti iónomeniča a povahe imunoglobulín obsahujúceho biologického materiálu (čistota roztoku, koncentrácia proteínu v roztoku).The immunoglobulin comprising the biological material may, in the context of the present invention, be a plasma fraction, an immunoglobin comprising a plasma fraction, preferably a Cohn fraction 11 + 111, a plasma protein comprising a fraction comprising blood factors such as factor II, factor VII, factor VIII, factor IX, factor X, factor XI, protein C, protein S and vWF, a concentrate comprising any of the aforementioned blood factors, a hybridoma-cell line culture supernatant, a transformed or infected cell culture supernatant of a mammal, or an extract of animal or human tissue. The parameters for carrying out the method are determined according to the type and nature of the biological material and the possible contaminating pathogens present. Optimal parameters such as pH, temperature, incubation time for carrying out and the type of organic solvent in the process of the present invention are readily detectable by those skilled in the art based on their general knowledge depending on the type of pathogens, specificity of the ion exchanger and nature of immunoglobulin containing biological material. solution, protein concentration in solution).
Spôsob podľa predloženého vynálezu je tiež vhodný na odstraňovanie molekulárnych a/alebo virálnych patogénov z imunoglobulín obsahujúcich biologických materiálov, pričom sa efektívne odstraňujú virálne patogény ako zo skupiny lipidmi zapúzdrených, tak zo skupiny nie lipidmi zapúzdrených vírusov. K týmto sa počítajú obzvlášť vírusy ako je HAV, HBV, HCV, HGV, HEV, HDV, HIV, CMV alebo parvovírus. ,The method of the present invention is also suitable for removing molecular and / or viral pathogens from immunoglobulin-containing biological materials, effectively removing viral pathogens from both the lipid encapsulated and non-lipid encapsulated viruses. These include, in particular, viruses such as HAV, HBV, HCV, HGV, HEV, HDV, HIV, CMV or parvovirus. .
Pod organickými rozpúšťadlami sa rozumejú v rámci predloženého vynálezu obzvlášť také rozpúšťadlá, ktoré za zvolených podmienok nevyvolávajú pri zmiešaní s biologickými materiálmi žiadne podstatné denaturačné procesy. K týmto patria obzvlášť rozpúšťadlá, ako je metylalkohol, etylalkohol alebo ostatné biologicky prijateľné alkoholy.In the context of the present invention, organic solvents are in particular those which, under the selected conditions, do not induce any substantial denaturing processes when mixed with the biological materials. These include, in particular, solvents such as methanol, ethyl alcohol or other biologically acceptable alcohols.
Optimálna koncentrácia zodpovedajúceho rozpúšťadla, rovnako ako veľmi malé odchýlky u optimálnych podmienok chromatografie , ktoré môžu byť.The optimum concentration of the corresponding solvent, as well as very small variations under the optimum chromatographic conditions, which may be.
31358/H prípadne spôsobené prítomnými rozpúšťadlami, môžu byť ľahko zistené každým odborníkom pomocou jednoduchého pokusu. Všeobecne sa rozpúšťadlo používa v koncentrácii 5 až 20 % objemových, výhodne v koncentrácii 10 až 15 % objemových a obzvlášť v koncentrácii 12 až 14 % objemových.31358 / H, optionally caused by the solvents present, can be readily ascertained by any person skilled in the art by a simple experiment. In general, the solvent is used in a concentration of 5 to 20% by volume, preferably in a concentration of 10 to 15% by volume and in particular in a concentration of 12 to 14% by volume.
Výhodne sa ako organické rozpúšťadlo použije jednomocný alebo viacmocný alkohol, pričom obzvlášť výhodný je etylalkohol. Obzvlášť výhodne sa koncentrácia etylalkoholu podľa predloženého vynálezu pohybuje v rozmedzí 12 až 14 % objemových, obzvlášť v rozmedzí 13 až 14 % objemových.Preferably, the organic solvent is a mono- or polyhydric alcohol, with ethyl alcohol being particularly preferred. Particularly preferably, the concentration of ethyl alcohol according to the invention is in the range of 12 to 14% by volume, in particular in the range of 13 to 14% by volume.
Spracovanie iónomeničom sa výhodne vykonáva pri nízkych teplotách, pričom výhodné sú teploty pod 10° C alebo pod 5° C. Ako sa ukázalo, je obzvlášť výhodné spracovanie aniónomeničom pri uskutočnení spôsobu podľa predloženého vynálezu pri teplote v rozmedzí 0° C až -10° C.The ion exchange treatment is preferably carried out at low temperatures, with temperatures below 10 ° C or below 5 ° C being preferred. As has been shown, anion exchange treatment in the process of the present invention at a temperature in the range of 0 ° C to -10 ° C is particularly advantageous. .
Ukázalo sa tiež, že spôsob podľa predloženého vynálezu sa môže oproti správam podľa stavu techniky a obzvlášť oproti výsledkom Zoltona a kol. (1985), úspešne vykonávať tiež pri hodnotách pH pod 7,5, prípadne 7,2, teda v neutrálnej, prípadne kyslej oblasti.It has also been shown that the method according to the present invention can be compared to the prior art reports and in particular to the results of Zolton et al. (1985), also successfully performed at pH values below 7.5 and 7.2, i.e. in the neutral or acidic range.
Výhodný prevádzkový variant spôsobu podľa predloženého vynálezu spočíva vtom, že sa spracovanie imunoglobulín obsahujúceho biologického materiálu s iónomeničom, obzvlášť s aniónomeničom, vykonáva pri hodnote pHAn advantageous operating variant of the process according to the invention is that the treatment of the immunoglobulin-containing biological material with the ion exchanger, in particular the anion exchanger, is carried out at a pH value
5,6 až 7,2, výhodne v rozmedzí 6,0 až 6,4, obzvlášť pri pH 6,2.5.6 to 7.2, preferably in the range 6.0 to 6.4, especially at pH 6.2.
Spracovanie vodného roztoku imunoglobulín obsahujúceho biologického materiálu s aniónomeničom sa výhodne vykonáva počas časového obdobia 1 minúta až 20 hodín, obzvlášť počas 4 až 8 hodín, pričom inkubácia sa môže vykonávať buď batch postupom alebo v prietokovom systéme.The treatment of the aqueous solution of the immunoglobulin containing biological material with the anion exchanger is preferably carried out for a period of time of 1 minute to 20 hours, in particular for 4 to 8 hours, whereby the incubation can be carried out either in a batch process or in a flow system.
Spôsobom podľa predloženého vynálezu sa môže získať imunoglobulín obsahujúci biologický materiál, ktorý je bezpečne bez molekulárnych a/alebo virálnych patogénov, pričom patogény sú v podstate úplne odstránené. Tak bolo zistené, v závislosti na pridanej koncentrácií etylalkoholu, v podstate úplné odstránenie vírusov. Jednostupňovým spôsobom podľa predloženého vynálezuThe method of the present invention can provide an immunoglobulin containing biological material that is safely free of molecular and / or viral pathogens, wherein the pathogens are substantially eliminated. Thus, substantially complete virus removal was found, depending on the added concentrations of ethyl alcohol. One-step method according to the present invention
31358/H sa dosiahne redukčný faktor patogénov výhodne > 5,5 log-stupňa, obzvlášť výhodne >7,0 log-stupňa.31358 / H, a pathogen reduction factor of preferably> 5.5 log-degree, particularly preferably> 7.0 log-degree is achieved.
Optimálne adsorpčné podmienky pri iónomeničovej chromatografii môžu odborníci vždy' podľa získavanej biologickej substancie, prípadne podľa adsorbovaného vírusu, v závislosti na zodpovedajúcom organickom rozpúšťadle ľahko optimalizovať s využitím podkladov podľa predloženého vynálezu.Optimum adsorption conditions for ion exchange chromatography can be readily optimized by the skilled person according to the biological substance to be recovered or the adsorbed virus, depending on the corresponding organic solvent, using the substrates of the present invention.
Predložený spôsob je vhodný tiež vo veľkej miere na kombinovanie s ďalšími patogénmi inaktivujúcimi alebo patogénmi znižujúcimi kroky, ako je spracovanie teplom a/alebo detergentami, spracovanie žiarením alebo filtráciou, pričom filtrácia podľa AT A 780/96 sa môže obzvlášť výhodne kombinovať so spôsobom podľa predloženého vynálezu.The present method is also suitable to a large extent for combining with other pathogens inactivating or pathogens reducing steps such as heat and / or detergent treatment, radiation treatment or filtration, whereby the filtration according to AT A 780/96 can be particularly advantageously combined with the method according to the present invention. invention.
Spôsob podľa predloženého vynálezu je obzvlášť vhodný na výrobu imunoglobulínových preparátov, môže sa ale tiež špecificky použiť na získavanie krvných faktorov, ako je faktor II, faktor Ha, faktor Vil, faktor IX, faktor X, proteín S, proteín C alebo vWF.The method of the present invention is particularly suitable for the production of immunoglobulin preparations, but can also be used specifically to obtain blood factors such as factor II, factor IIa, factor VII, factor IX, factor X, protein S, protein C or vWF.
Vynález je bližšie objasnený pomocou nasledujúcich príkladov uskutočnenia, bez toho, že by mal byť týmito príkladmi obmedzený.The invention is illustrated by the following examples, without being limited thereto.
Príklady uskutočnenia vynálezuDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Príklad 1Example 1
Zníženie obsahu vírusov z roztokov, obsahujúcich IgG iReduction of virus content from IgG containing solutions i
Cohnova frakcia ll+lll, obsahujúca imunoglobulín, sa spracuje s etylalkoholom až na konečnú koncentráciu 10 % objemových až 14 % objemových a roztok sa ochladí na teplotu v rozmedzí -3° C až -1° C, na čo sa tento roztok zmieša s testovanými vírusmi, uvedenými v tabuľke 1. Na jeden gram proteínu sa pridá 0,5 g DEAE-Sephadexu A-50, hodnota pH sa nastaví na 6,2 + 0,1 a za miešania sa inkubuje pri udržiavaní uvedenej teploty a hodnoteThe Cohn II + III fraction containing immunoglobulin is treated with ethyl alcohol up to a final concentration of 10% v / v to 14% v / v and the solution is cooled to a temperature between -3 ° C to -1 ° C, after which this solution is mixed with the test of the viruses listed in Table 1. 0.5 g DEAE-Sephadex A-50 is added per gram of protein, the pH is adjusted to 6.2 + 0.1 and incubated with stirring at the indicated temperature and temperature.
31358/H pH počas 6 hodín. Suspenzia iónomeniča sa potom hĺbkovou filtráciou odstráni a určí sa titer vírusu vo filtráte. Hodnoty zníženia obsahu vírusu, vyjadrené ako úbytok infekčných vírusových častíc v mocninách čísla desať, sú zhrnuté v tabuľke 1 a boli stanovené pomocou titrácie vírusu alebo PCR. Ako je z tejto tabuľky viditeľné, vedie tento spôsob - v závislosti na použitom testovanom víruse - ku zníženiu obsahu o 2 až cez 6 mocnín čísla desať. Výťažok IgG vsupernatante predstavuje > 70 %. V kontrolných pokusoch; v ktorých sa vykonávala inkubácia testovaných vírusov analogickým spôsobom bez prídavku aniónomeniča, nebol zistený žiaden vírocidný efekt etylalkoholu za daných podmienok.31358 / H pH for 6 hours. The ion exchanger suspension is then removed by depth filtration and the virus titer in the filtrate is determined. The virus reduction values, expressed as the loss of infectious virus particles in the powers of number ten, are summarized in Table 1 and were determined by virus titration or PCR. As can be seen from this table, this method - depending on the virus used - leads to a reduction in content of 2 to 6 squares of ten. The IgG yield in the supernatant is> 70%. In control experiments; in which the test viruses were incubated in an analogous manner without the addition of an anion exchanger, no viral effect of ethyl alcohol was found under the given conditions.
Tabuľka 1Table 1
Vysvetlenie použitých skratiek:Explanation of abbreviations used:
PRV Pseudorabies vírusPRV Pseudorabies virus
MVM Minuté Vírus of Míce/ParvovírusMVM Minute Virus of the Ball / Parvovirus
31358/H31358 / H
FSME vírus rannej letnej meningoencefalidítyFSME early summer meningoencephaliditis virus
BVDV bovínny diarhea vírusBVDV bovine diarhea virus
HCV hepatitis C vírusHCV hepatitis C virus
HAV hepatitis A vírusHAV hepatitis A virus
HGV hepatitis G vírusHGV hepatitis G virus
HIV-1 vírus 1 humánnej imunodeficiencieHIV-1 human immunodeficiency virus 1
ERV equine rhinopneumonitis vírusERV equine rhinopneumonitis virus
n.d. nevykonávanén.d. not carried
Príklad 2Example 2
Zníženie obsahu parvovírusov z roztokov, obsahujúcich IgGReduction of parvovirus content from IgG containing solutions
Cohnova frakcia III, obsahujúca imunoglobulín, s obsahom 12 % etylalkoholu, sa zmieša s parvovírusom B 19 analogicky ako je popísané v príklade 1. Celkové zaťaženie vo východiskovom materiáli, zmiešanom s B19, predstavuje 1011,3. DNA-kópií/ml. Adsorpčný krok s DEAE-Sephadexom s nasledujúcou filtráciou sa vykonáva rovnako ako je popísané v príklade 1. Pomocou PCR, ako je popísané v AT A 780/96, sa stanoví DNA-kópia vo filtráte. Vo filtráte nemohli byť dokázané žiadne parvovírus-špecifické DNA. Za zohľadnenie hranice dôkazu bol pomocou spôsobu podľa predloženého vynálezu dosiahnutý vírus-redukčný faktor > 7,4 log-stupňa.Cohn's fraction III containing immunoglobulin containing 12% ethyl alcohol is mixed with parvovirus B 19 analogously to Example 1. The total load in the starting material mixed with B19 is 10 11.3 . DNA copies / ml. The adsorption step with DEAE-Sephadex followed by filtration is performed as described in Example 1. A DNA copy in the filtrate is determined by PCR as described in AT A 780/96. No parvovirus-specific DNA could be detected in the filtrate. Taking into account the limit of evidence, a virus reduction factor> 7.4 log-degree was achieved by the method of the present invention.
Claims (10)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT0102997A AT407159B (en) | 1997-06-13 | 1997-06-13 | METHOD FOR DEPOSITING VIRALS AND MOLECULAR PATHOGENS FROM A BIOLOGICAL MATERIAL |
| PCT/AT1998/000143 WO1998057672A2 (en) | 1997-06-13 | 1998-06-10 | Process for reducing the concentration of viral and molecular pathogens in a biological material |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK175299A3 true SK175299A3 (en) | 2000-07-11 |
Family
ID=3505143
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK1752-99A SK175299A3 (en) | 1997-06-13 | 1998-06-10 | Process for reducing the concentration of viral and molecular pathogens in a biological material |
| SK1747-99A SK174799A3 (en) | 1997-06-13 | 1998-06-10 | Process for reducing the concentration of viral and molecular pathogens in a biological material |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK1747-99A SK174799A3 (en) | 1997-06-13 | 1998-06-10 | Process for reducing the concentration of viral and molecular pathogens in a biological material |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (2) | EP1004323A1 (en) |
| JP (1) | JP2002505674A (en) |
| AT (3) | AT407159B (en) |
| AU (1) | AU726808B2 (en) |
| BR (1) | BR9810098A (en) |
| CA (1) | CA2293401C (en) |
| CZ (1) | CZ451699A3 (en) |
| DE (1) | DE59805324D1 (en) |
| DK (1) | DK0988063T4 (en) |
| ES (1) | ES2181227T5 (en) |
| HU (1) | HUP0003610A3 (en) |
| NO (2) | NO996118L (en) |
| PT (1) | PT988063E (en) |
| SI (1) | SI0988063T1 (en) |
| SK (2) | SK175299A3 (en) |
| WO (1) | WO1998057672A2 (en) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000074733A1 (en) * | 1999-06-08 | 2000-12-14 | Octapharma Ag | Process for removing viruses from biological samples |
| ATE555666T1 (en) * | 2002-05-23 | 2012-05-15 | Ortho Clinical Diagnostics Inc | CAPTURE, CONCENTRATION AND QUANTIFICATION OF AN ABNORMAL PRION PROTEIN FROM BIOLOGICAL FLUID USING DEEP FILTRATION |
| PL1711513T3 (en) * | 2003-12-01 | 2014-12-31 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Nanofiltration of factor vii solutions to remove virus |
| US20070049732A1 (en) * | 2005-09-01 | 2007-03-01 | Zurlo Eugene J | Ultra-high yield intravenous immune globulin preparation |
| JP2010515879A (en) * | 2007-01-12 | 2010-05-13 | オールプリオン・アーゲー | Method for removing prion protein |
| WO2009092383A2 (en) | 2008-01-22 | 2009-07-30 | Multimerics Aps | Products and methods to prevent infection |
| DE102021101099A1 (en) | 2020-03-24 | 2021-09-30 | Mecadi GmbH - Chemicals/ Processing | Use and method for reducing the virus, bacterial and / or fungal spore load or other biological contamination in gases |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4540573A (en) † | 1983-07-14 | 1985-09-10 | New York Blood Center, Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| US4590002A (en) * | 1984-12-10 | 1986-05-20 | Ortho Diagnostic Systems, Inc. | Methods for preparation of highly purified, gamma globulins free of hepatitis-B-virus infectivity |
| EP0367840B1 (en) † | 1988-11-05 | 1993-02-03 | Octapharma AG | Process for producing by chromatography a non-infectious antihemophilic factor with high purity |
| AT402789B (en) * | 1991-03-25 | 1997-08-25 | Immuno Ag | PHARMACEUTICAL PREPARATION BASED ON PLASMA PROTEINS |
-
1997
- 1997-06-13 AT AT0102997A patent/AT407159B/en not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-06-10 SI SI9830257T patent/SI0988063T1/en unknown
- 1998-06-10 ES ES98925314T patent/ES2181227T5/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 SK SK1752-99A patent/SK175299A3/en unknown
- 1998-06-10 HU HU0003610A patent/HUP0003610A3/en unknown
- 1998-06-10 EP EP00100420A patent/EP1004323A1/en not_active Withdrawn
- 1998-06-10 AU AU77500/98A patent/AU726808B2/en not_active Expired
- 1998-06-10 JP JP50339699A patent/JP2002505674A/en active Pending
- 1998-06-10 EP EP98925314A patent/EP0988063B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 SK SK1747-99A patent/SK174799A3/en unknown
- 1998-06-10 WO PCT/AT1998/000143 patent/WO1998057672A2/en not_active Ceased
- 1998-06-10 DE DE59805324T patent/DE59805324D1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 DK DK98925314.1T patent/DK0988063T4/en active
- 1998-06-10 PT PT98925314T patent/PT988063E/en unknown
- 1998-06-10 AT AT98925314T patent/ATE222778T1/en active
- 1998-06-10 BR BR9810098-0A patent/BR9810098A/en not_active Application Discontinuation
- 1998-06-10 CA CA002293401A patent/CA2293401C/en not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-05-28 AT AT0095299A patent/AT407744B/en not_active IP Right Cessation
- 1999-12-10 NO NO996118A patent/NO996118L/en not_active Application Discontinuation
- 1999-12-13 CZ CZ19994516A patent/CZ451699A3/en unknown
-
2000
- 2000-07-12 NO NO20003584A patent/NO20003584D0/en not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AT407159B (en) | 2001-01-25 |
| EP1004323A1 (en) | 2000-05-31 |
| HUP0003610A1 (en) | 2001-02-28 |
| SI0988063T1 (en) | 2002-12-31 |
| AU726808B2 (en) | 2000-11-23 |
| DK0988063T3 (en) | 2002-12-16 |
| HUP0003610A3 (en) | 2002-09-30 |
| WO1998057672A2 (en) | 1998-12-23 |
| ES2181227T5 (en) | 2011-01-12 |
| BR9810098A (en) | 2000-08-08 |
| ATA95299A (en) | 2000-10-15 |
| EP0988063B2 (en) | 2010-08-11 |
| EP0988063B1 (en) | 2002-08-28 |
| WO1998057672A3 (en) | 1999-03-18 |
| ES2181227T3 (en) | 2003-02-16 |
| ATE222778T1 (en) | 2002-09-15 |
| EP0988063A2 (en) | 2000-03-29 |
| CA2293401C (en) | 2005-11-08 |
| JP2002505674A (en) | 2002-02-19 |
| NO996118L (en) | 2000-02-10 |
| NO20003584L (en) | 2000-02-10 |
| DK0988063T4 (en) | 2010-12-06 |
| SK174799A3 (en) | 2000-07-11 |
| DE59805324D1 (en) | 2002-10-02 |
| CA2293401A1 (en) | 1998-12-23 |
| ATA102997A (en) | 2000-05-15 |
| NO996118D0 (en) | 1999-12-10 |
| AT407744B (en) | 2001-05-25 |
| PT988063E (en) | 2002-12-31 |
| NO20003584D0 (en) | 2000-07-12 |
| AU7750098A (en) | 1999-01-04 |
| CZ451699A3 (en) | 2000-05-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2337109C2 (en) | PREPARATION OF ANTIBODY IgG AND METHOD OF ITS PRODUCTION | |
| US5886154A (en) | Chromatographic method for high yield purification and viral inactivation of antibodies | |
| JPH0578532B2 (en) | ||
| US5041537A (en) | Method of preparing a high-purity, virus safe, biologically active transferrin preparation | |
| US6465170B2 (en) | Method for depleting viral and molecular pathogens in a biological material | |
| JP2506370B2 (en) | Inactivation of vegetative filterable pathogens | |
| SK175299A3 (en) | Process for reducing the concentration of viral and molecular pathogens in a biological material | |
| FI95778B (en) | A method for inactivating pathogens in a biological or pharmaceutical substance | |
| US5932468A (en) | Method of inactivating viruses in proteins | |
| JP3735137B2 (en) | Use of azoles as virucidal agents in solutions of biologically active proteins | |
| AU726999B2 (en) | Process for reducing the concentration of viral and molecular pathogens in a biological material | |
| CZ451599A3 (en) | Method of reducing content of viral and molecular pathogens in biological materials | |
| EP0973543B1 (en) | Method for inactivating pathogens, especially viruses, in a biological material | |
| MXPA99011516A (en) | Process for reducing the concentration of viral and molecular pathogens in a biological material | |
| Poelsler et al. | Validation of adventitious agent safety in Yimmugo®, a novel IVIG preparation for human use | |
| WO1998009660A1 (en) | Viral inactivation of biological fluids with biomolecule activity retention | |
| Stephan | with ẞ-Propiolactone/UV Irradiation | |
| Burnouf et al. | Strategy of virus removal/inactivation of plasma-derived products: Interest of nanofiltration as a new virus elimination method | |
| DK175644B1 (en) | Process for stabilizing biological and pharmaceutical agents during inactivation of viral and bacterial contaminants |